TW202334115A - N-(4-(4-(環丙基甲基)哌嗪-1-羰基)苯基)喹啉-8-磺醯胺之結晶型 - Google Patents

N-(4-(4-(環丙基甲基)哌嗪-1-羰基)苯基)喹啉-8-磺醯胺之結晶型 Download PDF

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Abstract

本文提供下式之非晶形及結晶半硫酸鹽形式。

Description

N-(4-(4-(環丙基甲基)哌嗪-1-羰基)苯基)喹啉-8-磺醯胺之結晶型
丙酮酸鹽激酶缺乏症(PKD)為因PKLR基因之隱性突變所致的丙酮酸鹽激酶R (PKR)酶缺乏引起的紅血球疾病(Wijk等人 Human Mutation, 2008, 30(3) 446-453)。PKR活化劑可有益於治療PKD、地中海貧血症(例如β-地中海貧血症)、遺傳性橢圓形紅血球增多症、無β脂蛋白血症或巴-科症候群(Bassen-Kornzweig syndrome)、鐮狀細胞疾病、陣發性夜間血紅素尿症、貧血(例如先天性貧血(例如酶病)、溶血性貧血(例如遺傳性及/或先天性溶血性貧血、後天性溶血性貧血、由磷酸甘油酸激酶缺乏引起之慢性溶血性貧血、慢性疾病貧血、非球形溶血性貧血或遺傳性球形紅血球症)。PKD之治療為支持性的，包括輸血、脾切除術、用於解決鐵過載之螯合療法及/或用於其他疾病相關病狀之干預。然而，當前不存在治療PKD之根本原因，且因此治療長期溶血性貧血之病因的批准藥物。
N-(4-(4-(環丙基甲基)哌嗪-1-羰基)苯基)喹啉-8-磺醯胺(本文中稱為化合物 1)為丙酮酸鹽激酶之紅血球同功異型物(PKR)的變構活化劑。參見例如WO 2011/002817及WO 2016/201227，其內容以引用的方式併入本文中。 (化合物 1)
開發化合物 1用於治療PKD且當前正在2期臨床試驗中進行研究。參見例如美國臨床試驗標識符NCT02476916。鑒於其治療效益，致力於促進分離、製造及調配發展，以及增強儲存穩定性，需要開發化合物 1之替代形式。
本文提供具有下式之化合物的非晶形及結晶半硫酸鹽形式： 。
本文亦提供包含非晶形及結晶半硫酸鹽形式之醫藥組合物、其製造方法及其用於治療與丙酮酸鹽激酶相關之病況(諸如PKD)的用途。
相關申請案
本申請要求2017年11月22日申請之美國臨時申請案第62/589,822號及2018年6月29日申請之美國臨時申請案第62/691,709號之優先權，其各自全文併入本文中。 定義
當單獨使用時，術語「形式A」、「形式B」、「形式C」、「形式D」、「形式E」、「形式F」、「形式G」、「形式H」、「形式I」及「形式J」分別係指化合物1之結晶半硫酸鹽形式A、B、C、D、E、F、G、H、I及J。術語「形式A」、「結晶型A」及「化合物 1之結晶半硫酸鹽形式A」可互換地使用。類似地，「形式B」、「結晶型B」及「化合物 1之結晶半硫酸鹽形式B」可互換地使用。類似地，「形式C」、「結晶型C」及「化合物 1之結晶半硫酸鹽形式C」可互換地使用。類似地，「形式D」、「結晶型D」及「化合物 1之結晶半硫酸鹽形式D」可互換地使用。類似地，「形式E」、「結晶型E」及「化合物 1之結晶半硫酸鹽形式E」可互換地使用。類似地，「形式F」、「結晶型F」及「化合物 1之結晶半硫酸鹽形式F」可互換地使用。類似地，「形式G」、「結晶型G」及「化合物 1之結晶半硫酸鹽形式G」可互換地使用。類似地，「形式H」、「結晶型H」及「化合物 1之結晶半硫酸鹽形式H」可互換地使用。類似地，「形式I」、「結晶型I」及「化合物 1之結晶半硫酸鹽形式I」可互換地使用。類似地，「形式J」、「結晶型J」及「化合物 1之結晶半硫酸鹽形式J」可互換地使用。
「圖案A」、「圖案B」、「圖案C」、「圖案D」、「圖案E」、「圖案F」、「圖案G」、「圖案H」、「圖案I」及「圖案J」分別係指結晶半硫酸鹽形式A、B、C、D、E、F、G、H、I及J之X射線粉末繞射圖(XRPD)。
術語「結晶游離鹼」、「化合物 1之游離鹼結晶型」、「化合物 1之結晶游離鹼形式」及「化合物 1之結晶游離鹼」可互換地使用且意謂化合物 1之游離鹼或非鹽形式，其以結晶型存在。
如本文所用，「無水」意謂參考結晶型在晶格中基本上不具有水，例如小於0.1重量%，如藉由卡爾費雪(Karl Fisher)分析所測定。
術語「非晶形」意謂以非結晶狀態或形式存在之固體。非晶形固體為分子之無序排列且因此不具有可辨別晶格或單位晶胞且因此不具有可定義長程有序。固體之固態有序可藉由此項技術中已知之標準技術測定，例如藉由X射線粉末繞射(XRPD)或差示掃描熱量測定(DSC)。非晶形固體亦可例如藉由使用偏光顯微術之雙折射率與結晶固體區分。
如本文所用，化學純度係指所揭示之形式不含具有不同化學結構之材料的程度。所揭示晶型之化合物的化學純度意謂化合物之重量除以化合物之重量加上具有不同化學結構之物質/雜質的總和乘以100%，亦即重量%。在一個實施例中，所揭示結晶型之化合物的化學純度為至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%重量。
如本文所用，「結晶」係指化合物之固體形式，其中在原子位置中存在長程原子有序。固體之結晶性質可例如藉由檢查X射線粉末繞射圖來確認。若XRPD顯示XRPD中之尖銳強度峰，則化合物為結晶的。
術語「溶劑合物」係指其中化學計量或非化學計量之溶劑或溶劑混合物併入至晶體結構中的結晶化合物。
術語「水合物」係指其中化學計量或非化學計量之水併入至晶體結構中的結晶化合物。水合物為其中併入至晶體結構中之溶劑為水的溶劑合物。術語「無水」當關於化合物使用時意謂基本上無溶劑併入至晶體結構中。
所揭示結晶半硫酸鹽之單一結晶型意謂N-(4-(4-(環丙基甲基)哌嗪-1-羰基)苯基)喹啉-8-磺醯胺半硫酸鹽呈現為單晶體或複數個晶體，其中各晶體具有相同晶型(亦即，形式A、B、C、D、E、F、G、H、I或J)。當晶型定義為化合物之一種特定單晶型之指定百分比時，剩餘部分由除指定之一或多種特定形式以外的非晶型及/或結晶型構成。在一個實施例中，結晶型為按重量計之至少60%單結晶型、至少70%單結晶型、至少80%單結晶型、至少90%單結晶型、至少95%單結晶型或至少99%單結晶型。特定晶型之重量%係藉由特定晶型之重量除以特定晶體之總重量加上存在之其他晶型之重量加上存在之非晶型之重量乘以100%測定。
如本文所用，「N-(4-(4-(環丙基甲基)哌嗪-1-羰基)苯基)喹啉-8-磺醯胺」可與「化合物 1」、「化合物 1之游離鹼」互換使用，具有以下結構： 。
本文所述之結晶型之X射線粉末繞射圖的2θ值可在儀器之間略微變化且亦取決於樣品製備之變化及批次間變化。因此，除非另外定義，否則本文中所列舉之XRPD圖案/不應理解為絕對的且可變化±0.2度。本文提供之2θ值係使用Cu Kα1輻射獲得。
例如本文中之DSC峰之溫度值可在儀器之間略微變化且亦取決於樣品製備之變化、批次間變化及環境因素。因此，除非另外定義，否則本文中所列舉之溫度值不應理解為絕對的且可變化±5度或±2度。
「基本上相同XRPD圖」或「與」界定圖「基本上類似之X射線粉末繞射圖」意謂出於比較目的，存在至少90%所顯示之峰。另外應理解，出於比較目的，允許峰值強度與所顯示之彼等的一些變化性，諸如±0.2度。
本文所述之化合物的「治療有效量」為足以在病況之治療中提供治療益處或足以延緩或使與病況相關之一或多個症狀減至最少的量。術語「治療有效量」及「有效量」可互換地使用。在一個態樣中，治療有效量之化合物意謂單獨或與其他療法組合之一定量治療劑，其在病況治療中提供治療效益。術語「治療有效量」可涵蓋改善整體療法，減少或避免病況之症狀、病徵或病因，及/或增強另一種治療劑之治療功效的量。在某些實施例中，治療有效量為足以引發野生型或突變型PKR之可量測活化的量。在某些實施例中，治療有效量為足以調節有需要之血液中的2,3-二磷甘油酸酯水準或用於治療丙酮酸鹽激酶缺乏症(PKD)、溶血性貧血(例如慢性溶血性貧血、遺傳性非球形貧血)、鐮狀細胞疾病、地中海貧血症(例如α地中海貧血症、β-地中海貧血症或非輸血依賴性地中海貧血症)、遺傳性球形紅血球症、遺傳性橢圓形紅血球增多症、無β脂蛋白血症(或巴-科症候群(Bassen-Kornzweig syndrome))、陣發性夜間血紅素尿症、後天性溶血性貧血(例如先天性貧血(例如酶病))、慢性疾病貧血或治療與2,3-二磷甘油酸酯水準升高相關之疾病或病況(例如肝病)的量。在某些實施例中，治療有效量為足以野生型或突變型PKR之可量測活化及調節有需要之血液中的2,3-二磷甘油酸酯水準或用於治療丙酮酸鹽激酶缺乏症(PKD)、溶血性貧血(例如慢性溶血性貧血、遺傳性非球形貧血)、鐮狀細胞疾病、地中海貧血症(例如α地中海貧血症、β-地中海貧血症或非輸血依賴性地中海貧血症)、遺傳性球形紅血球症、遺傳性橢圓形紅血球增多症、無β脂蛋白血症(或巴-科症候群)、陣發性夜間血紅素尿症、後天性溶血性貧血(例如先天性貧血(例如酶病))、慢性疾病貧血或治療與2,3-二磷甘油酸酯水準升高相關之疾病或病況(例如肝病)的量。在一個態樣中，治療有效量為產生Hb濃度相比於基線之≥1.0 g/dL(諸如≥1.5 g/dL或≥2.0 g/dL)增加之受試者之血紅素反應所需的量。在一個態樣中，受試者之基線Hb濃度為在用本文所描述之化合物處理之前的所有可用Hb濃度之平均值。在某些態樣中，治療有效量為減輕患者之輸血負擔所需的量。在一個態樣中，治療有效量為每天每kg體重0.01-100 mg，諸如每天每kg體重0.1-100 mg所提供之化合物。
如本文所用，輸血負擔之減輕意謂在至少5週之治療內輸注之RBC單元數量減少至少20%。在某些實施例中，輸血負擔之減輕為在至少5週之治療內輸注之RBC單元數量減少≥33%。在某些實施例中，輸血負擔之減輕為在至少10週(例如至少20週或至少24週)之治療內輸注之RBC單元數量減少≥33%。
如本文所用，鐮狀細胞疾病(SCD)、血紅素SS疾病及鐮狀細胞貧血可互換使用。鐮狀細胞疾病(SCD)為由鐮狀血紅素(HbS)之存在引起之遺傳性血液病症。在某些實施例中，患有SCD之受試者在其紅血球中具有異常血紅素，稱為血紅素S或鐮狀血紅素。在某些實施例中，患有SCD之人具有至少一種導致身體產生血紅素S之異常基因。在某些實施例中，患有SCD之人具有兩種血紅素S基因，即血紅素SS。
地中海貧血症為遺傳性血液病症，其中α與β-血球蛋白產生之正常比率由於1或多個血球蛋白基因中之致病變異體而遭到破壞。在某些實施例中，α-血球蛋白集合體(如β-地中海貧血中所發現)易於沈澱，其破壞紅細胞(RBC)膜且導致氧化應激。在某些實施例中，β-血球蛋白四聚體(Hb H，發現於α-地中海貧血症中)一般更可溶，但仍不穩定且可形成沈澱。血球蛋白鏈合成之不平衡可導致Hb濃度之淨降低且對RBC前驅體之存活率具有顯著影響，最終導致其在骨髓及髓外部位中過早破壞(Cappellini等人, 2014)。在某些實施例中，該病症導致大量紅血球被破壞，其導致貧血。在某些實施例中，地中海貧血症為α地中海貧血症。在某些實施例中，地中海貧血症為β地中海貧血症。在其他實施例中，地中海貧血症為非輸血依賴性地中海貧血症。在其他實施例中，地中海貧血症為中度β地中海貧血症。在其他實施例中，地中海貧血症為Hb E β地中海貧血症。在其他實施例中，地中海貧血症為具有1或多個α基因突變之β地中海貧血症。
如本文所用，術語「活化」意謂(可量測地)增加野生型丙酮酸鹽激酶R (wt PKR)活性或使野生型丙酮酸鹽激酶R (wt PKR)活性水準增加至大於wt PKR之基礎活性水準的藥劑，或(可量測地)增加突變型丙酮酸鹽激酶R (mPKR)活性或使突變型丙酮酸鹽激酶R (mPKR)活性水準增加至大於突變型PKR之基礎活性水準，例如增加至野生型PKR活性之20%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或100%之水準的藥劑。
如本文所用，術語「紅血球濃厚液」或PRBC係指藉由離心及移除大部分血漿而由全血單位製成的紅血球。在某些實施例中，PRBC單元具有至少約95%之血容比。在某些實施例中，PRBC單元具有至少約90%之血容比。在某些實施例中，PRBC單元具有至少約80%之血容比。在某些實施例中，PRBC單元具有至少約70%之血容比。在某些實施例中，PRBC單元具有至少約60%之血容比。在某些實施例中，PRBC單元具有至少約50%之血容比。在某些實施例中，PRBC單元具有至少約40%之血容比。在某些實施例中，PRBC單元具有至少約30%之血容比。在某些實施例中，PRBC單元具有至少約20%之血容比。在某些實施例中，PRBC單元具有至少約10%之血容比。
術語「治療(treatment/treat/treating)」係指逆轉、緩解疾病或病症或其一或多種症狀、降低罹患其之可能性或抑制其進展(如本文所述)。在一些實施例中，治療可在已出現一或多種症狀之後投與，亦即治療性治療。在其他實施例中，治療可在不存在症狀之情況下投與。舉例而言，治療可在症狀發作之前向易感個體投與(例如，根據症狀病史及/或根據遺傳性或其他易感性因素)，亦即預防性治療。治療亦可在症狀已消退之後繼續，例如以降低其復發可能性或延緩其復發。
如本文所用，術語「受試者」及「患者」可互換使用，且意謂需要治療之哺乳動物，例如伴侶動物(例如狗、貓及其類似物)、農畜(例如母牛、豬、馬、綿羊、山羊及其類似物)及實驗室動物(例如大鼠、小鼠、天竺鼠及其類似物)。通常，受試者為需要治療之人類。在某些實施例中，術語「受試者」係指需要治療疾病之人類受試者。在某些實施例中，術語「受試者」係指需要治療PKD之人類受試者。在某些實施例中，術語「受試者」係指需要治療地中海貧血症之人類受試者。在某些實施例中，術語「受試者」係指需要治療鐮狀細胞疾病之人類受試者。在某些實施例中，術語「受試者」係指需要治療疾病之18歲以上的人類成人。在某些實施例中，術語「受試者」係指需要治療疾病之不超過18歲的人類兒童。在某些實施例中，受試者為需要定期輸血之患者。如此處所使用，定期輸血係指在治療之前的52週時段內的至少4個輸血事件。在某些實施例中，定期輸血係指在治療之前的52週時段內的至少5個輸血事件。在某些實施例中，定期輸血係指在治療之前的52週時段內的至少6個輸血事件。在某些實施例中，定期輸血係指在治療之前的52週時段內的至少7個輸血事件。在某些實施例中，具有選自鐮狀細胞疾病、地中海貧血症、定期輸血下之PKD及非輸血依賴性PKD之至少一種適應症的受試者尚未暴露於索塔西普(sotatercept)(ACE-011)、盧帕西普(luspatercept)(ACE-536)、蘆可替尼(ruxolitinib)或基因療法。在某些實施例中，此類受試者未服用細胞色素P450 (CYP)3A4之抑制劑、CYP3A4之強力誘導劑、P-醣蛋白(P-gp)之強力抑制劑或地高辛。在某些實施例中，此類受試者未接受慢性抗凝劑療法、合成代謝類固醇、造血刺激劑(例如紅細胞生成素、粒細胞集落刺激因子、血小板生成素)，或不對磺醯胺過敏。
術語「醫藥學上可接受之載劑」係指不有害地影響經調配且對人類使用亦安全的化合物之藥理學活性的無毒性載劑、佐劑或媒劑。
如本文所用，當與數值或數值範圍組合使用時，用於表徵化合物之特定晶型、非晶型或其混合物之術語「約」及「大致」意謂數值或數值範圍可在描述特定晶型、非晶型或其混合物時在一般熟習此項技術者認為合理的程度上偏離。 化合物
本文提供具有式(I)之化合物之半硫酸鹽的結晶型A： ； 其中呈結晶型A之化合物之半硫酸鹽為倍半水合物。
如本文所用，結晶型A為化合物1，N-(4-(4-(環丙基甲基)哌嗪-1-羰基)苯基)喹啉-8-磺醯胺之半硫酸鹽倍半水合物。應理解，結晶型A可稱為具有式A之「1-(環丙基甲基)-4-(4-(喹啉-8-磺醯胺基)苯甲醯基)哌嗪-1-鎓半硫酸鹽倍半水合物」，或者具有式B之「1-(環丙基甲基)-4-(4-(喹啉-8-磺醯胺基)苯甲醯基)哌嗪-1-鎓硫酸鹽三水合物」，如下文所示： 式A 式B。
應理解，結晶型A可互換地指式A或式B。
如本文所用，「半硫酸鹽」意謂化合物1與H 2SO 4之化學計量比在結晶型中為2:1 (亦即結晶型含有兩個分子之化合物1/一個分子之H 2SO 4)。
如本文所用，「倍半水合物」或「三水合物」意謂化合物1與H 2O之化學計量比在結晶型A中為2:3 (亦即結晶型A含有兩個分子之化合物1/三個分子之水)。
在一個態樣中，結晶型A係藉由2Θ角(±0.2°)9.9°、15.8°及22.6°處之X射線粉末繞射峰表徵。在某些實施例中，結晶型A係藉由2Θ角(±0.2°)9.9°、15.8°及22.6°處之X射線粉末繞射峰及選自15.0°、17.1°、21.3°及21.9°之2Θ角(±0.2°)處之至少一個額外X射線粉末繞射峰表徵。在某些實施例中，結晶型A係藉由2Θ角(±0.2°)9.9°、15.8°及22.6°處之X射線粉末繞射峰及選自15.0°、17.1°、21.3°及21.9°之2Θ角(±0.2°)處之至少二個額外X射線粉末繞射峰表徵。在另一替代方案中，結晶型A係藉由2Θ角(±0.2°)9.9°、15.8°及22.6°處之X射線粉末繞射峰及選自15.0°、17.1°、21.3°及21.9°之2Θ角(±0.2°)處之至少三個額外X射線粉末繞射峰表徵。在某些實施例中，結晶型A係藉由2Θ角(±0.2°)9.9°、15.0°、15.8°、17.1°、21.3°、21.9°及22.6°處之X射線粉末繞射峰表徵。在某些實施例中，結晶型A係藉由2Θ角(±0.2°)9.9°、11.4°、15.0°、15.3°、15.8°、17.1°、17.7°、21.3°、21.9°、22.6°及23.5°處之X射線粉末繞射峰表徵。在某些實施例中，結晶型A係藉由2Θ角(±0.2°)4.9°、9.9°、11.0°、11.4°、11.7°、12.3°、12.8°、13.6°、13.9°、14.2°、15.0°、15.3°、15.8°、17.1°、17.4°、17.7°、18.8°、19.1°、19.8°、21.3°、21.9°、22.6°、23.0°、23.2°、23.5°、23.8°、24.1°、24.5°、25.3°、25.6°、26.1°、27.1°、28.1°及29.8°處之X射線粉末繞射峰表徵。在某些實施例中，結晶型A係藉由基本上與 圖 1類似之X射線粉末繞射圖表徵。在另一替代方案中，結晶型A係藉由包含約159℃±5℃及199℃±5℃處之吸熱峰的差示掃描熱量測定(DSC)熱分析圖表徵。在另一替代方案中，結晶型A係藉由基本上與 圖 2中所描繪類似之差示掃描熱量測定(DSC)熱分析圖表徵。在另一替代方案中，結晶型A係藉由包含約4.5±0.5%之重量損失直至180℃±2℃的熱解重量分析(TGA)熱分析圖表徵。在另一替代方案中，結晶型A係藉由基本上與 圖 2中所描繪類似之熱解重量分析(TGA)熱分析圖表徵。在另一替代方案中，結晶型A係藉由基本上與 圖 3中所描繪類似之DSC表徵。
如實例中更詳細地論述，發現具有式(I)之化合物之半硫酸鹽的結晶型A具有多種有利物理化學特性，包括高結晶度、在多個溶劑系統(例如尤其含有水)中之穩定性、相對較小粒度(例如在顯微鏡下低於20 µm以潛在地避免後續微粉化)及濕度穩定性(例如至少20% RH或至少0.2之水活度)，且展示有利的血漿濃度-時間概況及藥物動力學參數。
本文亦提供具有下式之化合物之半硫酸鹽的結晶型B： ； 其中呈結晶型B之化合物之半硫酸鹽為乙醇溶劑合物。
在一個態樣中，結晶型B係藉由選自9.9°、10.6°、12.7°、15.7°、16.9°、22.0°及22.5°之2Θ角(±0.2°)處之至少三個X射線粉末繞射峰表徵。或者，結晶型B係藉由選自9.9°、10.6°、12.7°、15.7°、16.9°、22.0°及22.5°之2Θ角(±0.2°)處之至少四個X射線粉末繞射峰表徵。在另一替代方案中，結晶型B係藉由選自9.9°、10.6°、12.7°、15.7°、16.9°、22.0°及22.5°之2Θ角(±0.2°)處之至少五個X射線粉末繞射峰表徵。在另一替代方案中，結晶型B係藉由選自9.9°、10.6°、12.7°、15.7°、16.9°、22.0°及22.5°之2Θ角(±0.2°)處之至少六個X射線粉末繞射峰表徵。在另一替代方案中，結晶型B係藉由9.9°、10.6°、12.7°、15.7°、16.9°、22.0°及22.5°之2Θ角(±0.2°)處之X射線粉末繞射峰表徵。在另一替代方案中，結晶型B係藉由選自9.9°、10.6°、12.7°、13.9°、14.6°、15.7°、16.9°、22.0°、22.5°及27.6°之2Θ角(±0.2°)處之X射線粉末繞射峰表徵。在另一替代方案中，結晶型B係藉由選自7.0°、7.8°、9.9°、10.6°、11.7°、12.7°、13.1°、13.5°、13.9°、14.6°、14.9°、15.3°、15.7°、16.1°、16.9°、17.6°、19.3°、19.7°、20.7°、21.2°、22.0°、22.5°、23.3°、24.0°、24.7°、25.1°、25.7°、26.1°、27.2°、27.6°、28.4°、29.3°及29.8°之2Θ角(±0.2°)處之X射線粉末繞射峰表徵。在另一替代方案中，結晶型B係藉由基本上與 圖 6類似之X射線粉末繞射圖表徵。在另一替代方案中，結晶型B係藉由基本上與 圖 7類似之TGA或DSC圖表徵。在另一替代方案中，結晶型B係藉由包含約154±5℃處之吸熱峰的差示掃描熱量測定(DSC)熱分析圖表徵。在另一替代方案中，結晶型B係藉由包含約4.3±0.5%之重量損失直至200℃±2℃之TGA表徵。
本文亦提供具有下式之化合物之半硫酸鹽的結晶型C： 。
在一個態樣中，結晶型C係藉由2Θ角(±0.2°)6.9°、10.4°及12.0°處之X射線粉末繞射峰表徵。
本文亦提供具有下式之化合物之半硫酸鹽的結晶型D： ； 其中呈形式D之化合物之半硫酸鹽為無水的。
在一個態樣中，結晶型D係藉由選自5.8°、10.0°、10.2°、19.3°、22.9°、23.3°及25.2°之2Θ角(±0.2°)處之至少三個X射線粉末繞射峰表徵。或者，結晶型D係藉由選自5.8°、10.0°、10.2°、19.3°、22.9°、23.3°及25.2°之2Θ角(±0.2°)處之至少四個X射線粉末繞射峰表徵。在另一替代方案中，結晶型D係藉由選自5.8°、10.0°、10.2°、19.3°、22.9°、23.3°及25.2°之2Θ角(±0.2°)處之至少五個X射線粉末繞射峰表徵。在另一替代方案中，結晶型D係藉由選自5.8°、10.0°、10.2°、19.3°、22.9°、23.3°及25.2°之2Θ角(±0.2°)處之至少六個X射線粉末繞射峰表徵。在另一替代方案中，結晶型D係藉由5.8°、10.0°、10.2°、19.3°、22.9°、23.3°及25.2°之2Θ角(±0.2°)處之X射線粉末繞射峰表徵。在另一替代方案中，結晶型D係藉由2Θ角(±0.2°)5.8°、10.0°、10.2°、12.2°、17.3°、17.6°、19.3°、22.9°、23.3°、23.6°及25.2°處之X射線粉末繞射峰表徵。在另一替代方案中，結晶型D係藉由2Θ角(±0.2°)5.8°、10.0°、10.2°、11.3°、11.5°、12.2°、13.6°、14.1°、14.7°、15.4°、16.0°、17.3°、17.6°、19.3°、20.0°、20.8°、22.1°、22.9°、23.3°、23.6°、24.4°、25.2°、26.4°、27.4°、28.3°及29.6°處之X射線粉末繞射峰表徵。在另一替代方案中，結晶型D係藉由基本上與 圖 8類似之X射線粉末繞射圖表徵。在另一替代方案中，結晶型D係藉由具有239.0℃±2℃處之峰的差示掃描熱量測定(DSC)圖表徵。在另一替代方案中，結晶型D係藉由基本上與 圖 9類似之DSC表徵。在另一替代方案中，結晶型D係藉由包含約0.62±0.5%之重量損失直至220℃±2℃之TGA表徵。在另一替代方案中，結晶型D係藉由基本上與 圖 9類似之TGA表徵。
亦提供具有下式之化合物之半硫酸鹽的結晶型E： 。
在一個態樣中，結晶型E係藉由選自4.6°、9.0°、13.5°及22.5°之2Θ角(±0.2°)處之X射線粉末繞射峰表徵。在一個態樣中，結晶型E係藉由2Θ角(±0.2°)4.6°、9.0°、13.5°、15.1°、18.5°、21.7°及22.5°處之X射線粉末繞射峰表徵。在一個態樣中，結晶型E係藉由2Θ角(±0.2°)4.6°、9.0°、9.9°、11.0°、13.5°、15.1°、15.8°、18.5°、19.8°、20.4°、21.7°、22.5°及28.1°處之X射線粉末繞射峰表徵。在另一替代方案中，結晶型E係藉由基本上與 圖 11類似之X射線粉末繞射圖表徵。
本文亦提供具有下式之化合物之半硫酸鹽的結晶型F： 。
在一個態樣中，結晶型F係藉由選自5.0°、9.9°及14.7°之2Θ角(±0.2°)處之X射線粉末繞射峰表徵。或者，結晶型F係藉由選自5.0°、9.9°、14.7°、16.5°、19.6°、21.6°及24.4°之2Θ角(±0.2°)處之X射線粉末繞射峰表徵。在另一替代方案中，結晶型F係藉由2Θ角(±0.2°)5.0°、9.9°、11.1°、14.7°、16.5°、19.6°、21.6°、22.8°及24.4°處之X射線粉末繞射峰表徵。在另一替代方案中，結晶型F係藉由基本上與 圖 12類似之X射線粉末繞射圖表徵。在另一替代方案中，結晶型F係藉由具有101.0℃±2℃處之峰的DSC圖表徵。在另一替代方案中，結晶型F係藉由包含約8.8±0.5%之重量損失直至182℃±2℃之TGA表徵。在另一替代方案中，結晶型F係藉由基本上與 圖 13類似之TGA或DSC表徵。
亦提供具有下式之化合物之半硫酸鹽的結晶型G： 。
在一個態樣中，結晶型G係藉由選自4.7°、9.4°及14.1°之2Θ角(±0.2°)處之X射線粉末繞射峰表徵。或者，結晶型G係藉由選自4.7°、9.4°、11.0°、14.1°、18.9°、21.2°及23.8°之2Θ角(±0.2°)處之X射線粉末繞射峰表徵。在另一替代方案中，結晶型G係藉由2Θ角(±0.2°)4.7°、9.4°、11.0°、13.3°、14.1°、15.9°、16.2°、18.9°、21.2°、22.8°、23.8°、26.7°及28.5°處之X射線粉末繞射峰表徵。在另一替代方案中，結晶型G係藉由基本上與 圖 14類似之X射線粉末繞射圖表徵。在另一替代方案中，結晶型G係藉由具有156.7℃±2℃處之峰的DSC圖表徵。在另一替代方案中，結晶型G係藉由包含約2.6±0.5%之重量損失直至176℃±2℃之TGA表徵。在另一替代方案中，結晶型G係藉由基本上與 圖 15類似之TGA或DSC表徵。
亦提供具有下式之化合物之半硫酸鹽的結晶型H： 。
在一個態樣中，結晶型H係藉由選自4.6°、7.4°、9.2°、11.1°、13.5°、14.9°及22.3°之2Θ角(±0.2°)處之至少三個X射線粉末繞射峰表徵。或者，結晶型H係藉由選自4.6°、7.4°、9.2°、11.1°、13.5°、14.9°及22.3°之2Θ角(±0.2°)處之至少四個X射線粉末繞射峰表徵。在另一替代方案中，結晶型H係藉由選自4.6°、7.4°、9.2°、11.1°、13.5°、14.9°及22.3°之2Θ角(±0.2°)處之至少五個X射線粉末繞射峰表徵。在另一替代方案中，結晶型H係藉由選自4.6°、7.4°、9.2°、11.1°、13.5°、14.9°及22.3°之2Θ角(±0.2°)處之至少六個X射線粉末繞射峰表徵。在另一替代方案中，結晶型H係藉由2Θ角(±0.2°)4.6°、7.4°、9.2°、11.1°、13.5°、14.9°及22.3°處之X射線粉末繞射峰表徵。在另一替代方案中，結晶型H係藉由2Θ角(±0.2°)4.6°、5.4°、7.4°、9.2°、10.3°、11.1°、13.5°、13.8°、14.9°、16.9°、17.6°、18.4°、19.5°、20.7°、22.3°、22.9°、23.4°、24.1°、24.8°、26.5°、27.2°及29.5°處之X射線粉末繞射峰表徵。在另一替代方案中，結晶型H係藉由基本上與 圖 16類似之X射線粉末繞射圖表徵。
亦提供具有下式之化合物之半硫酸鹽的結晶型I： ； 其中呈結晶型I之化合物之半硫酸鹽為乙醇溶劑合物。
在一個態樣中，結晶型I係藉由2Θ角(±0.2°)6.7°、9.5°及19.7°處之X射線粉末繞射峰表徵。或者，結晶型I係藉由2Θ角(±0.2°)6.7°、9.5°及19.7°處之X射線粉末繞射峰；及選自9.9°、12.6°、15.8°、21.9°及22.3°之2Θ角(±0.2°)處之至少一個額外X射線粉末繞射峰表徵。在另一替代方案中，結晶型I係藉由2Θ角(±0.2°)6.7°、9.5°及19.7°處之X射線粉末繞射峰；及選自9.9°、12.6°、15.8°、21.9°及22.3°之2Θ角(±0.2°)處之至少兩個額外X射線粉末繞射峰表徵。在另一替代方案中，結晶型I係藉由2Θ角(±0.2°)6.7°、9.5°及19.7°處之X射線粉末繞射峰；及選自9.9°、12.6°、15.8°、21.9°及22.3°之2Θ角(±0.2°)處之至少三個額外X射線粉末繞射峰表徵。在另一替代方案中，結晶型I係藉由2Θ角(±0.2°)6.7°、9.5°、9.9°、12.6°、15.8°、19.7°、21.9°及22.3°處之X射線粉末繞射峰表徵。在另一替代方案中，結晶型I係藉由2Θ角(±0.2°)6.7°、7.7°、9.5°、9.9°、10.5°、11.6°、12.6°、13.4°、13.8°、14.3°、15.2°、15.8°、16.8°、17.2°、19.0°、19.7°、20.5°、20.9°、21.9°、22.3°、23.9°、24.6°、25.5°、26.0°、27.5°、28.3°及29.3°處之X射線粉末繞射峰表徵。在另一替代方案中，結晶型I係藉由基本上與 圖 17類似之X射線粉末繞射圖表徵。在另一替代方案中，結晶型I係藉由具有134.7℃±2℃處之峰的DSC圖表徵。在另一替代方案中，結晶型I係藉由包含約6.9±0.5%之重量損失直至180℃±2℃之TGA表徵。在另一替代方案中，結晶型I係藉由基本上與 圖 18類似之TGA或DSC表徵。
亦提供具有下式之化合物之半硫酸鹽的結晶型J： 。
在一個態樣中，結晶型J係藉由選自12.4°、13.2°、14.6°、20.4°及23.7°之2Θ角(±0.2°)處之X射線粉末繞射峰表徵。或者，結晶型J係藉由選自12.4°、13.2°、14.6°、15.7°、20.4°、23.3°及23.7°之2Θ角(±0.2°)處之X射線粉末繞射峰表徵。在另一替代方案中，結晶型J係藉由2Θ角(±0.2°)12.4°、13.2°、14.6°、15.7°、20.4°、22.0°、23.3°、23.7°及28.0°處之X射線粉末繞射峰表徵。在另一替代方案中，結晶型J係藉由基本上與 圖 19類似之X射線粉末繞射圖表徵。
本文亦提供具有下式之化合物 1之游離鹼結晶型： 。
在一個態樣中，化合物 1之游離鹼結晶型係藉由選自6.9°、13.5°、19.8°及20.3°之2Θ角(±0.2°)處之X射線粉末繞射峰表徵。或者，化合物 1之游離鹼結晶型係藉由選自6.9°、13.5°、19.8°、20.3°及25.7°之2Θ角(±0.2°)處之X射線粉末繞射峰表徵。在另一替代方案中，化合物 1之游離鹼結晶型係藉由2Θ角(±0.2°)6.9°、13.5°、15.7°、15.9°、19.8°、20.3°、23.6°及25.7°處之X射線粉末繞射峰表徵。在另一替代方案中，化合物 1之游離鹼結晶型係藉由基本上與 圖 25類似之X射線粉末繞射圖表徵。
本文亦提供具有下式之化合物之半硫酸鹽的非晶型： 。
在一個態樣中，本文所描述之化合物為按重量計之至少60%單結晶型、至少70%單結晶型、至少80%單結晶型、至少90%單結晶型、至少95%單結晶型或至少99%單結晶型。
在一個態樣中，本文所描述之化合物具有按重量計至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%或至少99%之化學純度。
在一個態樣中，本文所描述之化合物基本上不含非晶型，亦即存在小於10%之非晶型，例如存在小於5%、小於3%、小於2%或小於1%之非晶型。
亦提供製造所揭示之結晶型及非晶型的方法。
在一個態樣中，本文提供形成結晶型A之方法，該方法包含使化合物 1： ； 與H 2SO 4在醇溶液中反應。在一個態樣中，式1化合物與H 2SO 4之莫耳比為約2:1。在另一態樣中，醇溶液進一步包含水。在一個態樣中，形成上文所述之結晶型A之方法進一步包含在與H 2SO 4反應之後，添加足夠量的水以使結晶型沈澱之步驟。在一個態樣中，醇為甲醇或乙醇。在另一態樣中，溶液進一步包含芳族溶劑。在另一態樣中，芳族溶劑為甲苯。
在一個替代方案中，結晶型A係藉由使化合物 1與H 2SO 4在包含丙酮及水之溶液中反應來製備。在一個態樣中，溶液為丙酮:水(9:1/v:v)。
亦提供形成具有下式之化合物之半硫酸鹽的方法： ； 該方法包含使化合物1之非結晶游離鹼與硫酸於EtOAc中之溶液反應。在一個態樣中，EtOAc中硫酸之濃度為約15 wt%至約30 wt%。在某些實施例中，EtOAc中硫酸之濃度為約24 wt%。
在一個替代方案中，半硫酸鹽係藉由使化合物 1與H 2SO 4在包含水及醇(諸如MeOH或EtOH)之溶液中反應來製備。
亦提供形成下式化合物之半硫酸鹽之非晶型的方法： ； 該方法包含經由自MeOH蒸發使具有下式之化合物之半硫酸鹽的形式A結晶： 。 或者，半硫酸鹽之非晶型可藉由使半硫酸鹽之結晶型A自THF結晶來製備。在一個態樣中，蒸發結晶係在甲醇或THF中在約50℃下進行。 組合物及投與
本文提供包含一或多種所揭示之結晶型(例如結晶型A)，或所揭示之非晶型，連同醫藥學上可接受之載劑的醫藥組合物。所提供組合物中之結晶型或非晶型的量使得有效地可量測調節受試者之PKR。
本文所述之醫藥組合物可藉由藥理學技術中已知之任何方法製備。一般而言，此類製備方法包括使一或多種所揭示之結晶型(例如結晶型A)與載劑及/或一或多種其他附屬成分締合，且接著在必要及/或需要時將產物成形及/或包裝為所需單劑量或多劑量單元之步驟。
用於製造所提供醫藥組合物之醫藥學上可接受之載劑包括惰性稀釋劑、分散劑及/或成粒劑、表面活性劑及/或乳化劑、崩解劑、黏結劑、防腐劑、緩衝劑、潤滑劑及/或油。載劑，諸如可可脂及栓劑蠟、著色劑、包衣劑、甜味劑、調味劑及芳香劑亦可存在於組合物中。
例示性稀釋劑包括碳酸鈣、碳酸鈉、磷酸鈣、磷酸二鈣、硫酸鈣、磷酸氫鈣、磷酸鈉、乳糖、蔗糖、纖維素、微晶纖維素、高嶺土、甘露醇、山梨醇、肌醇、氯化鈉、乾澱粉、玉米澱粉、糖粉及其混合物。
例示性成粒劑及/或分散劑包括馬鈴薯澱粉、玉米澱粉、木薯澱粉、羥基乙酸澱粉鈉、黏土、褐藻酸、瓜爾膠、柑桔渣、瓊脂、膨潤土、纖維素及木製品、天然海綿、陽離子交換樹脂、碳酸鈣、矽酸鹽、碳酸鈉、交聯聚(乙烯基吡咯啶酮)(交聯聚維酮)、羧甲基澱粉鈉(羥基乙酸澱粉鈉)、羧甲基纖維素、交聯羧甲基纖維素鈉(交聯羧甲纖維素)、甲基纖維素、預膠凝化澱粉(澱粉1500)、微晶澱粉、水不溶性澱粉、羧甲基纖維素鈣、矽酸鎂鋁(維格姆(Veegum))、月桂基硫酸鈉、四級銨化合物及其混合物。
例示性表面活性劑及/或乳化劑包括天然乳化劑(例如阿拉伯膠、瓊脂、褐藻酸、海藻酸鈉、黃蓍、角叉菜屬(chondrux)、膽固醇、三仙膠、果膠、明膠、卵黃、酪蛋白、羊毛脂、膽固醇、蠟及卵磷脂)、膠質黏土(例如膨潤土(矽酸鋁)及維格姆(矽酸鎂鋁))、長鏈胺基酸衍生物、高分子量醇(例如十八烷醇、鯨蠟醇、油醇、三乙酸甘油酯單硬脂酸酯、二硬脂酸乙二醇酯、單硬脂酸甘油酯及單硬脂酸丙二醇酯、聚乙烯醇)、卡波姆(例如羧基聚亞甲基、聚丙烯酸、丙烯酸聚合物及羧基乙烯基聚合物)、角叉菜膠、纖維素衍生物(例如羧甲基纖維素鈉、粉末纖維素、羥甲基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、甲基纖維素)、脫水山梨醇脂肪酸酯(例如聚氧乙烯脫水山梨醇單月桂酸酯(Tween 20)、聚氧乙烯脫水山梨醇(Tween 60)、聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯(Tween 80)、脫水山梨醇單棕櫚酸酯(Span 40)、單硬脂酸脫水山梨醇酯(Span 60)、三硬酯酸脫水山梨醇酯(Span 65)、單油酸甘油酯、單油酸脫水山梨醇酯(Span 80))、聚氧乙烯酯(例如聚氧乙烯單硬脂酸酯(Myrj 45)、聚氧乙烯氫化蓖麻油、聚乙氧基化蓖麻油、聚甲醛硬脂酸酯及Solutol)、蔗糖脂肪酸酯、聚乙二醇脂肪酸酯(例如Cremophor™)、聚氧乙烯醚(例如聚氧乙烯月桂基醚(Brij 30))、聚(乙烯基吡咯啶酮)、二乙二醇單月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯、油酸鈉、油酸鉀、油酸乙酯、油酸、月桂酸乙酯、月桂基硫酸鈉、Pluronic F-68、Poloxamer-188、溴化十六烷基三甲基銨、氯化十六烷基吡錠、苯紮氯銨、多庫酯鈉及/或其混合物。
例示性黏結劑包括澱粉(例如玉米澱粉及澱粉糊)、明膠、糖(例如蔗糖、葡萄糖、右旋糖、糊精、糖蜜、乳糖、乳糖醇、甘露醇等)、天然及合成膠(例如阿拉伯膠、海藻酸鈉、角叉菜提取物、龐沃膠(panwar gum)、哥地膠(ghatti gum)、皂莢皮黏液、羧甲基纖維素、甲基纖維素、乙基纖維素、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、微晶纖維素、乙酸纖維素、聚(乙烯基吡咯啶酮)、矽酸鎂鋁(維格姆)及松木多醣)、海藻酸鹽、聚氧化乙烯、聚乙二醇、無機鈣鹽、矽酸、聚甲基丙烯酸酯、蠟、水、醇及/或其混合物。
例示性防腐劑包括抗氧化劑、螯合劑、抗微生物防腐劑、抗真菌防腐劑、醇防腐劑、酸性防腐劑及其他防腐劑。在某些實施例中，防腐劑為抗氧化劑。在其他實施例中，防腐劑為螯合劑。
例示性抗氧化劑包括α生育酚、抗壞血酸、抗壞血酸棕櫚酸酯、丁基化羥基大茴香醚、丁基化羥基甲苯、單硫代甘油、偏亞硫酸氫鉀、丙酸、沒食子酸丙酯、抗壞血酸鈉、亞硫酸氫鈉、偏亞硫酸氫鈉及亞硫酸鈉。
例示性螯合劑包括乙二胺四乙酸(EDTA)及其鹽及水合物(例如乙二胺四乙酸鈉、乙二胺四乙酸二鈉、乙二胺四乙酸三鈉、乙二胺四乙酸鈣二鈉、乙二胺四乙酸二鉀及其類似物)、檸檬酸及其鹽及水合物(例如單水合檸檬酸)、反丁烯二酸及其鹽及水合物、蘋果酸及其鹽及水合物、磷酸及其鹽及水合物以及酒石酸及其鹽及水合物。例示性抗微生物防腐劑包括苯紮氯銨、苄索氯銨、苯甲醇、溴硝丙二醇、西曲溴銨、氯化十六烷基吡錠、氯己定、氯丁醇、氯甲酚、氯二甲酚、甲酚、乙醇、甘油、海克替啶、咪唑啶基脲、酚、苯氧基乙醇、苯乙醇、苯汞基硝酸鹽、丙二醇及硫柳汞。
例示性抗真菌防腐劑包括對羥基苯甲酸丁酯、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、苯甲酸、羥基苯甲酸、苯甲酸鉀、山梨酸鉀、苯甲酸鈉、丙酸鈉及山梨酸。
例示性醇防腐劑包括乙醇、聚乙二醇、酚、酚化合物、雙酚、氯丁醇、羥基苯甲酸酯及苯乙醇。
例示性酸性防腐劑包括維生素A、維生素C、維生素E、β-胡蘿蔔素、檸檬酸、乙酸、去氫乙酸、抗壞血酸、山梨酸及植酸。
其他防腐劑包括生育酚、生育酚乙酸酯、甲磺酸去甲肟、西曲溴銨、丁基化羥基茴香醚(BHA)、丁基化羥基甲苯(BHT)、乙二胺、月桂基硫酸鈉(SLS)、月桂基醚硫酸鈉(SLES)、亞硫酸氫鈉、偏亞硫酸氫鈉、亞硫酸鉀、偏亞硫酸氫鉀、Glydant Plus、Phenonip、對羥基苯甲酸甲酯、Germall 115、Germaben II、Neolone、Kathon及Euxyl。
例示性緩衝劑包括檸檬酸鹽緩衝溶液、乙酸鹽緩衝溶液、磷酸鹽緩衝溶液、氯化銨、碳酸鈣、氯化鈣、檸檬酸鈣、葡乳醛酸鈣、葡庚糖酸鈣、葡糖酸鈣、D-葡萄糖酸、甘油磷酸鈣、乳酸鈣、丙酸、乙醯丙酸鈣、戊酸、磷酸氫二鈣、磷酸、磷酸三鈣、氫氧化鈣磷酸鹽、乙酸鉀、氯化鉀、葡糖酸鉀、鉀混合物、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、磷酸鉀混合物、乙酸鈉、碳酸氫鈉、氯化鈉、檸檬酸鈉、乳酸鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、磷酸鈉混合物、緩血酸胺、氫氧化鎂、氫氧化鋁、褐藻酸、無熱原質水、等滲生理鹽水、林格氏溶液(Ringer's solution)、乙醇及其混合物。
例示性潤滑劑包括硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、硬脂酸、二氧化矽、滑石、麥芽、山崳酸甘油酯、氫化植物油、聚乙二醇、苯甲酸鈉、乙酸鈉、氯化鈉、白胺酸、月桂基硫酸鎂、月桂基硫酸鈉、硬脂醯反丁烯二酸鈉及其混合物。
例示性天然油包括杏仁、杏核、鱷梨、巴巴蘇(babassu)、香檸檬、黑加侖籽、琉璃苣、杜松、洋甘菊、芥花、葛縷子、棕櫚蠟、蓖麻、肉桂、可可脂、椰子、鱈魚肝、咖啡、玉米、棉籽、鴯鶓、桉樹、晚櫻草、魚、亞麻籽、香草醇、葫蘆、葡萄籽、榛子、牛膝草、十四烷酸異丙酯、荷荷芭、夏威夷胡桃、醒目薰衣草、薰衣草、檸檬、山蒼子、夏威夷果仁、錦葵、芒果籽、白芒花籽、貂、肉豆蔻、橄欖、橙子、大西洋胸棘鯛、棕櫚、棕櫚仁、桃仁、花生、罌粟籽、南瓜籽、油菜籽、米糠、迷迭香、紅花、檀香木、山茶花、香薄荷、沙棘、芝麻、牛油樹油、聚矽氧、大豆、向日葵、茶樹、薊、椿本、岩蘭草、胡桃及小麥胚油。例示性合成油包括但不限於十八酸丁酯、辛酸三甘油酯、癸酸三甘油酯、環甲聚矽氧烷、癸二酸二乙酯、二甲聚矽氧烷360、十四烷酸異丙酯、礦物油、辛基十二烷醇、油醇、聚矽氧油及其混合物。
本文中所描述之組合物可經口、非經腸、藉由吸入噴霧、局部、經直腸、經鼻、頰內、經黏膜或以眼用製劑投與。如本文所使用之術語「非經腸」包括皮下、靜脈內、肌肉內、關節內、滑膜內、胸骨內、鞘內、肝內、病灶內及顱內注射或輸注技術。在一個態樣中，特此提供之醫藥組合物係以包括但不限於膠囊、錠劑、乳液及水性懸浮液、分散液及溶液之口服可接受劑型經口投與。在用於經口使用之錠劑的情況下，常用載劑包括乳糖及玉米澱粉。亦典型地添加潤滑劑，諸如硬脂酸鎂。對以膠囊形式經口投與，適用的稀釋劑包括乳糖及乾燥玉米澱粉。當經口投與水性懸浮液及/或乳液時，活性成分可懸浮或溶解於油相中，與乳化劑及/或懸浮劑組合。必要時，亦可添加某些甜味劑及/或調味劑及/或著色劑。
可與載劑材料組合以產生單一劑型組合物之所提供結晶型或非晶型的量將視待治療之受試者及特定投藥模式而變化。舉例而言，任何特定受試者之特定劑量及治療方案將取決於多種因素，包括年齡、體重、一般健康、性別、飲食、投藥時間、排泄率、藥物組合、治療醫師之判斷及所治療之特定疾病的嚴重度。組合物中之所提供結晶型的量亦將取決於組合物中之特定形式(例如形式A、B、C、D、E、F、G、H、I或J)。在一個態樣中，所提供組合物可經調配以使得等效於約0.001至約100 mg/kg體重/天之化合物1(例如約0.5至約100 mg/kg化合物1)可投與至接收此等組合物之受試者。或者，等效於每4至120小時1 mg/kg及1000 mg/kg化合物1之劑量亦可接受。如本文所用，劑量係指特定結晶型中之化合物1的量。特定結晶型的量將基於相對於化合物1之游離鹼形式的當量計算。
在一個態樣中，所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配而以等效於約2 mg至約3000 mg化合物1之劑量進行投與。在某些實施例中，劑量為口服劑量。在某些實施例中，所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配以等效於約2 mg至約3000 mg化合物1。在某些實施例中，所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配以等效於約5 mg至約350 mg化合物1。在某些實施例中，所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配以等效於約5 mg至約200 mg化合物1。在某些實施例中，所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配以等效於約5 mg至約100 mg化合物1。在某些實施例中，所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配以等效於約5 mg化合物1。在某些實施例中，所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配以等效於約10 mg化合物1。在某些實施例中，所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配以等效於約15 mg化合物1。在某些實施例中，所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配以等效於約20 mg化合物1。在某些實施例中，所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配以等效於約25 mg化合物1。在某些實施例中，所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配以等效於約30 mg化合物1。在某些實施例中，所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配以等效於約40 mg化合物1。在某些實施例中，所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配以等效於約45 mg化合物1。在某些實施例中，所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配以等效於約50 mg化合物1。在某些實施例中，所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配以等效於約60 mg化合物1。在某些實施例中，所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配以等效於約70 mg化合物1。在某些實施例中，所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配以等效於約80 mg化合物1。在某些實施例中，所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配以等效於約90 mg化合物1。在某些實施例中，所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配以等效於約100 mg化合物1。在某些實施例中，所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配以等效於約110 mg化合物1。在某些實施例中，所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配以等效於約120 mg化合物1。
在某些實施例中，所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配而以等效於每天約2 mg至約3000 mg化合物1之劑量投與。在某些實施例中，所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配而以等效於每天約5 mg至約500 mg化合物1之劑量投與。在某些實施例中，所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配而以等效於每天約5 mg至約200 mg化合物1之劑量投與。在某些實施例中，所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配而以等效於每天約5 mg化合物1之劑量投與。在某些實施例中，所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配而以等效於每天約5 mg至約10 mg化合物1之劑量投與。在某些實施例中，所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配而以等效於每天約15 mg化合物1之劑量投與。在某些實施例中，所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配而以等效於每天約20 mg化合物1之劑量投與。在某些實施例中，所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配而以等效於每天約25 mg化合物1之劑量投與。在某些實施例中，所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配而以等效於每天約30 mg化合物1之劑量投與。在某些實施例中，所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配而以等效於每天約35 mg化合物1之劑量投與。在某些實施例中，所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配而以等效於每天約40 mg化合物1之劑量投與。在某些實施例中，所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配而以等效於每天約45 mg化合物1之劑量投與。在某些實施例中，所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配而以等效於每天約50 mg化合物1之劑量投與。在某些實施例中，所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配而以等效於每天約60 mg化合物1之劑量投與。在某些實施例中，所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配而以等效於每天約70 mg化合物1之劑量投與。在某些實施例中，所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配而以等效於每天約80 mg化合物1之劑量投與。在某些實施例中，所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配而以等效於每天約90 mg化合物1之劑量投與。在某些實施例中，所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配而以等效於每天約100 mg化合物1之劑量投與。在某些實施例中，所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配而以等效於每天約110 mg化合物1之劑量投與。在某些實施例中，所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配而以等效於每天約120 mg化合物1之劑量投與。在某些實施例中，所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配而以等效於每天約130 mg化合物1之劑量投與。在某些實施例中，所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配而以等效於每天約140 mg化合物1之劑量投與。在某些實施例中，所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配而以等效於每天約150 mg化合物1之劑量投與。給藥可為每天一次、兩次或三次。在一個態樣中，例如所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配而以等效於每天兩次約5 mg化合物1之劑量投與。在一個態樣中，例如所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配而以等效於每天兩次約20 mg化合物1之劑量投與。在一個態樣中，例如所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配而以等效於每天兩次約50 mg化合物1之劑量投與。在一個態樣中，例如所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配而以等效於每天兩次約100 mg化合物1之劑量投與。在一個態樣中，例如所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配而以等效於每隔一天一次約5 mg化合物1之劑量投與。在一個態樣中，例如所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配而以等效於每隔一天一次約20 mg化合物1之劑量投與。在一個態樣中，例如所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配而以等效於每隔一天一次約50 mg化合物1之劑量投與。在一個態樣中，例如所揭示結晶型(例如結晶型A)或非晶型經調配而以等效於每隔一天一次約100 mg化合物1之劑量投與。
在一個態樣中，所揭示形式(結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、結晶游離鹼或非晶型)調配為連同醫藥學上可接受之載劑的錠劑組合物。在一個態樣中，載劑選自微晶纖維素、甘露醇、交聯羧甲纖維素鈉及硬脂醯反丁烯二酸鈉中之一或多者。在一個態樣中，載劑為微晶纖維素，例如以50% w/w至70% w/w (±2%)、55% w/w至65% w/w (±2%)、58% w/w至62% w/w (±2%)、59% w/w (±2%)、60% w/w (±2%)、61% w/w (±2%)、62% w/w (±2%)、61% w/w或62% w/w之量存在。在另一態樣中，載劑為甘露醇，例如以15% w/w (±2%)至35% w/w (±2%)、20% w/w (±2%)至30% w/w (±2%)、22% w/w (±2%)至26% w/w (±2%)、22% w/w (±2%)、23% w/w (±2%)、24% w/w (±2%)或23% w/w之量存在。在另一態樣中，載劑為交聯羧甲纖維素鈉，例如以1% w/w至5% w/w (±2%)、2% w/w至4% w/w (±2%)、2% w/w (±2%)、3% w/w (±2%)、4% w/w (±2%)或3% w/w之量存在。在另一態樣中，載劑為反丁烯二酸硬脂醯酯，例如以1% w/w至5% w/w (±2%)、2% w/w至4% w/w (±2%)、1% w/w (±2%)、2% w/w (±2%)、3% w/w (±2%)或2% w/w之量存在。在一些實施例中，結晶型A係以等效於約1至約200 mg化合物1之量存在於錠劑組合物中。在一些實施例中，結晶型A係以等效於約1至約150 mg化合物1之量存在於錠劑組合物中。在一些實施例中，結晶型A係以等效於約1至約100 mg化合物1之量存在於錠劑組合物中。在一些實施例中，結晶型A係以等效於約5 mg化合物1之量存在於錠劑組合物中。在一些實施例中，結晶型A係以等效於約20 mg化合物1之量存在於錠劑組合物中。在一些實施例中，結晶型A係以等效於約50 mg化合物1之量存在於錠劑組合物中。在一些實施例中，結晶型A係以等效於約75 mg化合物1之量存在於錠劑組合物中。在一些實施例中，結晶型A係以等效於約100 mg化合物1之量存在於錠劑組合物中。
如本文所用，結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I、J或非晶型之劑量係基於相對於化合物1之游離鹼形式的當量。舉例而言，「結晶型A以等效於約1.0 mg化合物1之量存在於組合物中」意謂約1.18 mg結晶型A存在於組合物中且等效於約1.0 mg游離鹼化合物1。
在一個態樣中，錠劑組合物包含10% w/w ((±1%)結晶游離鹼；62% w/w (±2%)微晶纖維素；23% w/w (±2%)甘露醇、3% w/w (±2%)交聯羧甲纖維素鈉及2% w/w (±2%)反丁烯二酸硬脂醯酯。
在一個態樣中，錠劑組合物包含11.78% w/w (±1%)結晶型A；62% w/w (±2%)微晶纖維素；23% w/w (±2%)甘露醇；3% w/w (±2%)交聯羧甲纖維素鈉；及2% w/w (±2%)反丁烯二酸硬脂醯酯。
在某些實施例中，提供包含結晶型A及醫藥學上可接受之載劑之醫藥組合物。在某些實施例中，提供包含結晶型A之醫藥組合物，其基本上不含化合物IM-1及/或化合物IM-2 (參見範例)。在某些實施例中，包含形式A之醫藥組合物基本上不含化合物1之半硫酸鹽之其他晶型。在某些實施例中，一或多種載劑經處理以產生相同尺寸之粒子。在某些實施例中，處理粉末(亦即，結晶型A)包含持續適合於產生所需粒度(「研磨粉末」)之時間量研磨粉末。在一些實施例中，研磨粉末之粒度小於約400 µm。在一些實施例中，研磨粉末之粒度小於約300 µm。在一些實施例中，研磨粉末之粒度小於約200 µm。在一些實施例中，研磨粉末之粒度小於約100 µm。在一些實施例中，研磨粉末之粒度小於約90 µm。在一些實施例中，研磨粉末之粒度小於約80 µm。在一些實施例中，研磨粉末之粒度小於約70 µm。在一些實施例中，研磨粉末之粒度小於約60 µm。在一些實施例中，研磨粉末之粒度小於約50 µm。在一些實施例中，研磨粉末之粒度小於約40 µm。在一些實施例中，研磨粉末之粒度小於約30 µm。在一些實施例中，研磨粉末之粒度小於約20 µm。在一些實施例中，研磨粉末之粒度在約10 µm至約400 µm範圍內。在一些實施例中，研磨粉末之粒度在約10 µm至約300 µm範圍內。在一些實施例中，研磨粉末之粒度在約10 µm至約200 µm範圍內。在一些實施例中，研磨粉末之粒度在約10 µm至約100 µm範圍內。在一些實施例中，研磨粉末之粒度在約10 µm至約80 µm範圍內。在一些實施例中，研磨粉末之粒度在約10 µm至約70 µm範圍內。在一些實施例中，研磨粉末之粒度在約10 µm至約60 µm範圍內。在一些實施例中，研磨粉末之粒度在約20 µm至約60 µm範圍內。如本文針對粒度所用之術語「約」意謂+/-5 µm。
在一些實施例中，至少90%之代表性研磨粉末樣品的粒度為小於約100、約80、約70、約60、約50、約40、約30、約20或約10 µm。在一些實施例中，至少約90%之代表性研磨粉末樣品的粒度為小於約60 µm。 治療方法及化合物及組合物之用途
在一個態樣中，本文所述之結晶型及非晶型及其組合物為PKR之變構活化劑，且一般適用於治療PKD之潛在病況。
因此，本文提供治療有需要之受試者之丙酮酸鹽激酶缺乏症(PKD)的方法，其包含向受試者投與有效量的式(I)化合物之結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I或J或非晶型，或其醫藥組合物。亦提供式(I)化合物之結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I或J或非晶型；或其醫藥組合物，用於治療有需要之受試者之丙酮酸鹽激酶缺乏症(PKD)。另外提供結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I或J或非晶型，或其醫藥組合物用於製造治療丙酮酸鹽激酶缺乏症(PKD)之藥物的用途。與PKD相關之例示性病況包括但不限於貧血、膽囊結石、膽石、心搏過速、血色沉著病、鞏膜黃染、脾腫大、腿部潰瘍、黃疸、疲勞及呼吸短促。如本文所述，PKD為PKR缺乏症。在某些實施例中，PKR缺乏症與PKR突變相關聯。
丙酮酸鹽激酶缺乏症(PKD)為導致長期溶血性貧血之糖酵解酶病。在某些實施例中，患有PKD之受試者為PKLR基因中具有至少2個突變對偶基因之患者。在某些實施例中，患有PKD之受試者為PKLR基因中具有至少2個突變對偶基因之患者且至少一個突變對偶基因為錯義突變。參見Canu.等人, Blood Cells, Molecules and Diseases 2016, 57, 第100-109頁。在某些實施例中，患有PKD之受試者之Hb濃度小於或等於10.0 g/dL。在某些實施例中，患有PKD之受試者為未接受定期輸血之成人(例如在直至治療之12個月時段內具有不超過4個輸血事件)。在某些實施例中，患有PKD之受試者為輸血獨立性成人(例如在治療之前的12個月時段內輸注不超過3個單元之RBC)。在某些實施例中，患有PKD之受試者為接受定期輸血之成人(例如在治療之前的12個月時段內具有至少4個輸注事件(例如至少6個輸血事件))。在某些實施例中，患有PKD之受試者在受試者之壽命期間具有總共至少5個輸血事件。在某些實施例中，患有PKD之受試者在受試者之壽命期間具有總共至少10個輸血事件。在某些實施例中，患有PKD之受試者在受試者之壽命期間具有總共至少15個輸血事件。在某些實施例中，患有PKD之受試者在受試者之壽命期間具有總共至少20個輸血事件。在某些實施例中，患有PKD之受試者在受試者之壽命期間具有總共至少25個輸血事件。在某些實施例中，患有PKD之受試者在受試者之壽命期間具有總共至少30個輸血事件。在某些實施例中，患有PKD之受試者在受試者之壽命期間具有總共至少40個輸血事件。在某些實施例中，患有PKD之受試者在受試者之壽命期間具有總共至少50個輸血事件。在某些實施例中，患有PKD之受試者在受試者之壽命期間具有總共至少60個輸血事件。在某些實施例中，患有PKD之受試者在受試者之壽命期間具有總共至少70個輸血事件。在某些實施例中，患有PKD之受試者對於R479H突變並非同型接合或在PKLR基因中不具有2個非錯義突變。在某些實施例中，定期輸血之患有PKD之受試者在治療之前具有血紅素(Hb)≤12.0 g/dL (若為男性)或≤11.0 g/dL (若為女性)。在某些實施例中，定期輸血之患有PKD之受試者平均每三週進行輸血小於或等於一次。在某些實施例中，患有PKD之受試者在治療之前已每天接受至少0.8 mg (例如至少1.0mg)葉酸(例如持續至少21天)。在某些實施例中，定期輸血之患有PKD之受試者在5週、10週、15週、20週、或24週、28週、或32週治療期間達成輸血負擔之減輕(例如輸注之RBC單元的數目減少至少33%)。在某些實施例中，未定期輸血(在治療之前的12個月時段內具有不超過4個輸血事件及/或在治療之前的3個月內未輸血)之患有PKD之受試者在治療之前不管性別均具有血紅素(Hb)≤10.0 g/dL。在某些實施例中，患有PKD之受試者已進行脾切除術。
在某些實施例中，相比於治療之前的基線，患有PKD之受試者在治療之後達成Hb濃度之至少1.0 g/dL增加的血紅素反應。在某些實施例中，相比於治療之前的基線，患有PKD之受試者達成Hb濃度之至少1.5 g/dL增加的血紅素反應。在某些實施例中，相比於治療之前的基線，患有PKD之受試者達成Hb濃度之至少2.0 g/dL增加的血紅素反應。
在一實施例中，突變型PKR選自由以下組成之群：A31V、A36G、G37Q、R40W、R40Q、L73P、S80P、P82H、R86P、I90N、T93I、G95R、M107T、G111R、A115P、S120F、H121Q、S130P、S130Y、V134D、R135D、A137T、G143S、I153T、A154T、L155P、G159V、R163C、R163L、T164N、G165V、L167M、G169G、E172Q、W201R、I219T、A221Y、D221N、G222A、I224T、G232C、N253D、G263R、G263W、E266K、V269F、L272V、L272P、G275R、G275R、E277K、V280G、D281N、F287V、F287L、V288L、D293N、D293V、A295I、A295V、I310N、I314T、E315K、N316K、V320L、V320M、S330R、D331N、D331G、D331E、G332S、V335M、A336S、R337W、R337P、R337Q、D339N、D339Q、G341A、G341D、I342F、K348N、A352D、I357T、G358R、G358E、R359C、R359H、C360Y、N361D、G364D、K365M、V368F、T371I、L374P、S376I、T384M、R385W、R385K、E387G、D390N、A392T、N393D、N393S、N393K、A394S、A394D、A394V、V395L、D397V、G398A、M403I、G406R、E407K、E407G、T408P、T408A、T408I、K410E、G411S、G411A、Q421K、A423A、A423A、R426W、R426Q、E427A、E427N、A431T、R449C、I457V、G458D、A459V、V460M、A468V、A468G、A470D、T477A、R479C、R479H、S485F、R486W、R486L、R488Q、R490W、I494T、A495T、A495V、R498C、R498H、A503V、R504L、Q505E、V506I、R510Q、G511R、G511E、R518S、R531C、R532W、R532Q、E538D、G540R、D550V、V552M、G557A、R559G、R559P、N566K、M568V、R569Q、R569L、Q58X、E174X、W201X、E241X、R270X、E440X、R486X、Q501X、L508X、R510X、E538X、R559X。此等突變描述於Canu等人, Blood Cells, Molecules and Diseases 2016, 57, 第100-109頁中。在一個實施例中，突變型PKR係選自G332S、G364D、T384M、K410E、R479H、R479K、R486W、R532W、R510Q及R490W。在某些實施例中，突變型PKR係選自A468V、A495V、I90N、T408I、Q421K及R498H。在某些實施例中，突變型PKR為R532W、K410E或R510Q。在某些實施例中，突變型PKR為R510Q、R486W或R479H。
在其他態樣中，提供治療有需要之受試者之選自溶血性貧血、鐮狀細胞疾病、地中海貧血症、遺傳性球形紅血球症、遺傳性橢圓形紅血球增多症、無β脂蛋白血症、巴-科症候群及陣發性夜間血紅素尿症之疾病的方法，其包含向受試者投與有效量的式(I)化合物之結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I或J或非晶型，或其醫藥組合物。亦提供式(I)化合物之結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I或J或非晶型，或其醫藥組合物，用於治療受試者之選自溶血性貧血、鐮狀細胞疾病、地中海貧血症、遺傳性球形紅血球症、遺傳性橢圓形紅血球增多症、無β脂蛋白血症、巴-科症候群及陣發性夜間血紅素尿症之疾病。另外提供式(I)化合物之結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I或J或非晶型，或其醫藥組合物之用途，其用於製造治療有需要之受試者之選自溶血性貧血、鐮狀細胞疾病、地中海貧血症、遺傳性球形紅血球症、遺傳性橢圓形紅血球增多症、無β脂蛋白血症、巴-科症候群及陣發性夜間血紅素尿症之疾病的藥物。在一個態樣中，待治療之疾病為溶血性貧血。
在其他態樣中，本文提供治療有需要之受試者之地中海貧血症(例如β-地中海貧血症或非輸血依賴性地中海貧血症)的方法，其包含向受試者投與有效量的式(I)化合物之結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I或J或非晶型，或其醫藥組合物。亦提供式(I)化合物之結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I或J或非晶型，或其醫藥組合物，用於治療地中海貧血症(例如β-地中海貧血症或非輸血依賴性地中海貧血症)。另外提供式(I)化合物之結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I或J或非晶型，或其醫藥組合物之用途，其用於製造治療地中海貧血症(例如β-地中海貧血症或非輸血依賴性地中海貧血症)的藥物。
在其他態樣中，本文提供治療有需要之受試者之地中海貧血症(例如β-地中海貧血症或非輸血依賴性地中海貧血症)之方法，其包含向受試者投與有效量的結晶型A，或其醫藥組合物。亦提供結晶型A或其醫藥組合物，用於治療地中海貧血症(例如β-地中海貧血症或非輸血依賴性地中海貧血症)。另外提供結晶型A或其醫藥組合物之用途，其用於製造治療地中海貧血症(例如β-地中海貧血症或非輸血依賴性地中海貧血症)之藥物。
在其他態樣中，本文提供治療有需要之受試者之地中海貧血症(例如β-地中海貧血症或非輸血依賴性地中海貧血症)之方法，其包含向受試者投與有效量的結晶型D，或其醫藥組合物。亦提供結晶型D或其醫藥組合物，用於治療地中海貧血症(例如β-地中海貧血症或非輸血依賴性地中海貧血症)。另外提供結晶型D或其醫藥組合物之用途，其用於製造治療地中海貧血症(例如β-地中海貧血症或非輸血依賴性地中海貧血症)之藥物。
在某些實施例中，受試者為患有地中海貧血症之成年受試者。在某些實施例中，受試者患有地中海貧血症，諸如中度β-地中海貧血症、Hb E β-地中海貧血症、α-地中海貧血症(Hb H疾病)或具有1或多個α基因突變之β-地中海貧血症。在某些實施例中，受試者患有β-地中海貧血症或非輸血依賴性地中海貧血症。在某些實施例中，受試者為患有諸如β-地中海貧血症或非輸血依賴性地中海貧血症之地中海貧血症的成年男性受試者。在某些實施例中，受試者為患有諸如β-地中海貧血症或非輸血依賴性地中海貧血症之地中海貧血症的女性受試者。在某些實施例中，受試者為患有諸如β-地中海貧血症或非輸血依賴性地中海貧血症之地中海貧血症的成年女性受試者。在某些實施例中，受試者之血紅素濃度為小於或等於6.0 g/dL。在某些實施例中，受試者之血紅素濃度為小於或等於7.0 g/dL。在某些實施例中，受試者之血紅素濃度為小於或等於8.0 g/dL。在某些實施例中，受試者之血紅素濃度為小於或等於9.0 g/dL。在某些態樣中，患有非輸血依賴性地中海貧血症之受試者不具有地中海貧血症之Hb S或Hb C形式之已知病史(例如已在過去診斷)。在某些實施例中，術語「非輸血依賴性」地中海貧血症係指患有地中海貧血症之受試者在直至投與本文所述之結晶型或非晶型之第一天的24週時段期間輸注不大於4個(例如五個)RBC單元及/或在投與本文所述之結晶型或非晶型之第一天之前的8週內未輸注RBC。
在其他態樣中，本文提供增加有需要之受試者之紅血球(RBC)壽命的方法，其包含向受試者投與有效量的式(I)化合物之結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I或J或非晶型，或其醫藥組合物。亦提供式(I)化合物之結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I或J或非晶型，或其醫藥組合物，用於增加有需要之受試者之紅血球(RBC)壽命。另外提供式(I)化合物之結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I或J或非晶型，或其醫藥組合物之用途，其用於製造增加紅血球(RBC)壽命之藥物。在一個態樣中，式(I)化合物之結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I或J或非晶型，或其醫藥組合物係直接體外添加至全血或紅血球濃厚液。
在其他態樣中，本文提供調節有需要之受試者之血液中之2,3-二磷甘油酸酯水準的方法，其包含使血液與有效量的式(I)化合物之結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I或J或非晶型，或其醫藥組合物接觸。亦提供式(I)化合物之結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I或J或非晶型，或其醫藥組合物，用於調節有需要之受試者之血液中之2,3-二磷甘油酸酯水準。另外提供式(I)化合物之結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I或J或非晶型，或其醫藥組合物之用途，其用於製造調節血液中之2,3-二磷甘油酸酯水準的藥物。
在其他態樣中，本文提供用於治療有需要之受試者之貧血的方法，其包含向受試者投與有效量的式(I)化合物之結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I或J或非晶型，或其醫藥組合物。亦提供式(I)化合物之結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I或J或非晶型，或其醫藥組合物，用於治療有需要之受試者之貧血。另外提供式(I)化合物之結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I或J或非晶型，或其醫藥組合物之用途，其用於製造治療貧血之藥物。在一個態樣中，待治療之貧血為紅血球生成障礙性貧血。
在某些實施例中，貧血為紅血球生成障礙性貧血，諸如I型、II型、III型或IV型先天性紅血球生成障礙性貧血。在某些實施例中，貧血為溶血性貧血。在某些實施例中，溶血性貧血為先天性及/或遺傳性形式之溶血性貧血，諸如PKD、鐮狀細胞疾病、地中海型貧血(例如α或β或非輸血依賴性地中海貧血症)、遺傳性球形紅血球症、遺傳性橢圓形紅血球增多症)、陣發性夜間血紅素尿症、無β脂蛋白血症(或巴-科症候群)。在某些實施例中，溶血性貧血為後天性溶血性貧血，諸如自體免疫溶血性貧血、藥物誘導之溶血性貧血。在某些實施例中，溶血性貧血為作為多系統疾病之一部分的貧血，諸如先天性紅血球生成性紫癜之貧血、範可尼(Fanconi)貧血、戴-布二氏(Diamond-Blackfan)貧血。
如本文所用，術語「貧血」係指紅血球(RBC)及/或血紅素缺乏症。如本文所用，貧血包括所有類型之臨床貧血，例如(但不限於)：小紅血球性貧血、缺鐵性貧血、血紅素病、血紅素合成缺陷、血球蛋白合成缺陷、鐵粒幼細胞性缺陷、正常紅血球性貧血、慢性疾病貧血、再生不全性貧血、溶血性貧血、大紅血球性貧血、巨紅血球貧血、惡性貧血、二形性貧血、早產性貧血、範可尼貧血、遺傳性球形紅血球症、鐮狀細胞疾病、溫抗體型自體免疫溶血性貧血、冷凝集素溶血性貧血、骨質石化病、地中海貧血症及骨髓發育不良症候群。
在某些實施例中，可在全血球計數上診斷貧血。在某些實施例中，貧血可基於一或多種溶血標記物(例如RBC計數、血紅素、網狀紅血球、裂血球、乳酸脫氫酶(LDH)、結合球蛋白、膽紅素及鐵蛋白)及/或含鐵血黃素尿症平均紅血球體積(MCV)及/或紅血球分佈寬度(RDW)之量測來診斷。在本發明之上下文中，若個體之血紅素(Hb)小於期望水準，例如Hb濃度小於14 g/dL，更佳小於13 g/dL，更佳小於12 g/dL，更佳小於11 g/dL或最佳小於10 g/dL，則存在貧血。
在某些實施例中，本文提供藉由投與有效量的如本文所述之式(I)化合物之結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I或J或非晶型，或其醫藥組合物來增加受試者之血紅素量的方法。在某些實施例中，本文亦提供增加患有地中海貧血症之受試者之血紅素量的方法，其包含向受試者投與有效量的式(I)化合物之結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I或J，或結晶游離鹼，或非晶型，或其醫藥組合物。另外提供增加具有非輸血依賴性地中海貧血症之受試者之血紅素量的方法，其包含向受試者投與有效量的如本文所述之式(I)化合物之結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I或J，或結晶游離鹼，或非晶型，或其醫藥組合物。在某些實施例中，所提供之方法增加受試者之血紅素濃度。在某些實施例中，所提供方法將Hb濃度增加至所需水準，例如高於10 g/dL，更佳高於11 g/dL，更佳高於12 g/dL，更佳高於13 g/dL，或最佳高於14 g/dL。在某些實施例中，所提供方法增加Hb濃度至少約0.5 g/dL。在某些實施例中，所提供方法增加Hb濃度至少約1.0 g/dL。在某些實施例中，所提供方法增加Hb濃度至少約1.5 g/dL。在某些實施例中，所提供方法增加Hb濃度至少約2.0 g/dL。在某些實施例中，所提供方法增加Hb濃度至少約2.5 g/dL。在某些實施例中，所提供方法增加Hb濃度至少約3.0 g/dL。在某些實施例中，所提供方法增加Hb濃度至少約3.5 g/dL。在某些實施例中，所提供方法增加Hb濃度至少約4.0 g/dL。在某些實施例中，所提供方法增加Hb濃度至少約4.5 g/dL。在某些實施例中，所提供方法增加Hb濃度至少約5.0 g/dL。在某些實施例中，所提供方法增加Hb濃度至少約5.5 g/dL。在某些實施例中，所提供方法增加Hb濃度至少約6.0 g/dL。在某些實施例中，Hb濃度之增加係在用有效量的如本文所述之式(I)化合物之結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I或J，或結晶游離鹼或非晶型，或其醫藥組合物治療之第1週與第20週之間(例如第2週與第15週之間、第3週與第15週之間及第4週與第12週之間)的一或多個評估處測定自基線。在某些實施例中，提供之方法在患有地中海貧血症(例如β-地中海貧血症或非輸血依賴性地中海貧血症)之女性受試者中增加Hb濃度(如上文所述)。在某些實施例中，提供之方法在患有地中海貧血症(例如β-地中海貧血症或非輸血依賴性地中海貧血症)之女性受試者中將Hb濃度自基線增加至約12 g/dL。在某些實施例中，提供之方法在患有地中海貧血症(例如β-地中海貧血症或非輸血依賴性地中海貧血症)之男性受試者中增加Hb濃度(如上文所述)。在某些實施例中，提供之方法在患有地中海貧血症(例如β-地中海貧血症或非輸血依賴性地中海貧血症)之男性受試者中將Hb濃度自基線增加至約13 g/dL。
在一些態樣中，本文提供治療有需要之受試者之溶血性貧血的方法，其包含向受試者投與有效量的式(I)化合物之結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I或J或非晶型，或其醫藥組合物。亦提供式(I)化合物之結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I或J或非晶型，或其醫藥組合物，用於治療有需要之受試者之溶血性貧血。另外提供式(I)化合物之結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I或J或非晶型，或其醫藥組合物在製造用於治療溶血性貧血之藥物中的用途。在一個態樣中，待治療之溶血性貧血為遺傳性及/或先天性溶血性貧血、後天性溶血性貧血或作為多系統疾病之一部分的貧血。
在一些態樣中，本文提供治療有需要之受試者之鐮狀細胞疾病的方法，其包含向受試者投與有效量的式(I)化合物之結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I或J或非晶型，或其醫藥組合物。亦提供式(I)化合物之結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I或J或非晶型，或其醫藥組合物，用於治療有需要之受試者之鐮狀細胞疾病。另外提供式(I)化合物之結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I或J或非晶型，或其醫藥組合物在製造用於治療鐮狀細胞疾病之藥物中的用途。
在一些態樣中，本文提供治療有需要之受試者之地中海貧血症、遺傳性球形紅血球症、遺傳性橢圓形紅血球增多症、無β脂蛋白血症或巴-科症候群、鐮狀細胞疾病、陣發性夜間血紅素尿症、後天性溶血性貧血或慢性疾病貧血的方法，其包含向受試者投與有效量的式(I)化合物之結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I或J或非晶型，或其醫藥組合物。亦提供式(I)化合物之結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I或J或非晶型，或其醫藥組合物，用於治療有需要之受試者之地中海貧血症、遺傳性球形紅血球症、遺傳性橢圓形紅血球增多症、無β脂蛋白血症或巴-科症候群、鐮狀細胞疾病、陣發性夜間血紅素尿症、後天性溶血性貧血或貧血。另外提供式(I)化合物之結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I或J或非晶型，或其醫藥組合物在製造用於治療地中海貧血症、遺傳性球形紅血球症、遺傳性橢圓形紅血球增多症、無β脂蛋白血症或巴-科症候群、鐮狀細胞疾病、陣發性夜間血紅素尿症、後天性溶血性貧血或貧血之藥物中的用途。
在一些態樣中，本文提供活化有需要之受試者之紅血球中之野生型或突變型PKR的方法，其包含向受試者投與有效量的式(I)化合物之結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I或J或非晶型，或其醫藥組合物。亦提供式(I)化合物之結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I或J或非晶型，或其醫藥組合物，用於活化有需要之受試者之紅血球中之野生型或突變型PKR。另外提供式(I)化合物之結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I或J或非晶型，或其醫藥組合物在製造用於活化紅血球中之野生型或突變型PKR之藥物中的用途。
本文所述的提供之式(I)化合物之結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I或J或非晶型，及醫藥組合物為相比於野生型具有較低活性，因此適用於本發明之方法的PKR突變體之活化劑。PKR中之此類突變可影響酶之酶活性(催化效率)、調節特性(藉由果糖二磷酸(FBP)/ATP調節)及/或熱穩定性。此類突變之實例描述於Valentini等人, JBC 2002中。由本文所述之化合物活化之突變體的一些實例包括G332S、G364D、T384M、R479H、R479K、R486W、R532W、R510Q及R490W。在不受理論束縛的情況下，在某些實施例中，本文所述之化合物藉由活化FBP非反應性PKR突變體、恢復穩定性降低之突變體的熱穩定性或恢復受損突變體之催化效率來影響PKR突變體的活性。可按照實例中所述之方法測試本發明化合物對PKR突變體之活化活性。本文所述之化合物亦為野生型PKR之活化劑。
在某些實施例中，本文所述的提供之式(I)化合物之結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I或J或非晶型，及醫藥組合物增加PKR對磷酸烯醇丙酮酸(PEP)之親和力。在某些實施例中，本文所述的提供之式(I)化合物之結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I或J或非晶型，及醫藥組合物恢復RBC將PEP及ADP覆蓋為丙酮酸鹽及ATP之能力。
在某些實施例中，本文提供降低患有PKD之受試者之輸血頻率的方法，其包含向受試者投與本文所述之式(I)化合物之結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I或J或非晶型，及醫藥組合物。在某些實施例中，投與結晶型A。在某些實施例中，輸血頻率在經至少15週輸注之RBC單元的數目中降低至少5%。在某些實施例中，輸血頻率在經至少15週輸注之RBC單元的數目中降低至少10%。在某些實施例中，輸血頻率在經至少15週輸注之RBC單元的數目中降低至少15%。在某些實施例中，輸血頻率在經至少15週輸注之RBC單元的數目中降低至少20%。在某些實施例中，輸血頻率在經至少15週輸注之RBC單元的數目中降低至少25%。在某些實施例中，輸血頻率在經至少15週輸注之RBC單元的數目中降低至少30%。在某些實施例中，輸血頻率在經至少15週輸注之RBC單元的數目中降低至少35%。在某些實施例中，輸血頻率在經至少20週輸注之RBC單元的數目中降低至少40%。在某些實施例中，輸血頻率在經至少20週輸注之RBC單元的數目中降低至少5%。在某些實施例中，輸血頻率在經至少20週輸注之RBC單元的數目中降低至少10%。在某些實施例中，輸血頻率在經至少20週輸注之RBC單元的數目中降低至少15%。在某些實施例中，輸血頻率在經至少20週輸注之RBC單元的數目中降低至少20%。在某些實施例中，輸血頻率在經至少20週輸注之RBC單元的數目中降低至少25%。在某些實施例中，輸血頻率在經至少20週輸注之RBC單元的數目中降低至少30%。在某些實施例中，輸血頻率在經至少20週輸注之RBC單元的數目中降低至少35%。在某些實施例中，輸血頻率在經至少20週輸注之RBC單元的數目中降低至少40%。
在一些態樣中，本文提供評估受試者之方法，該方法包含：向受試者投與式(I)化合物之結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I或J或非晶型，或其醫藥組合物；及獲取受試者中之結晶型或非晶型之水準、2,3-二磷甘油酸酯(2,3-DPG)之水準、三磷酸腺苷(ATP)之水準或PKR之活性的值，從而評估受試者。在一些態樣中，水準值係藉由分析結晶型或非晶型之血漿濃度而獲得。在一些態樣中，2,3-DPG之水準係藉由分析2,3-DPG之血液濃度而獲得。在一些態樣中，ATP之水準係藉由分析ATP之血液濃度而獲得。在一些態樣中，PKR之活性係藉由分析血液在之 13C-標記之血液濃度而獲得。在一些態樣中，分析係藉由對體液之樣品分析進行。在一些態樣中，體液為血液。在一些態樣中，分析係藉由質譜進行。在一些態樣中，分析係藉由LC-MS進行。
在一些態樣中，本文提供評估受試者之方法，該方法包含在已用式(I)化合物之結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I或J或非晶型，或其醫藥組合物治療之受試者中獲取式(I)化合物之結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I或J或非晶型，或其醫藥組合物之水準、2,3-DPG之水準、ATP之水準或PKR之活性的值，從而評估受試者。在一些態樣中，獲取包含自受試者接收樣品。在一些態樣中，獲取包含將值傳輸至另一方。在一些態樣中，另一方為投與式(I)化合物之結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I或J或非晶型，或其醫藥組合物的一方。
在一些態樣中，本文提供治療受試者之方法，該方法包含：向受試者投與治療有效量之式(I)化合物之結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I或J或非晶型，或其醫藥組合物；及獲取受試者中之結晶型或非晶型之水準、2,3-二磷甘油酸酯(2,3-DPG)之水準、三磷酸腺苷(ATP)之水準或PKR之活性的值，從而治療受試者。
在另一態樣中，本文提供治療有需要之受試者之丙酮酸鹽激酶缺乏症(PKD)的方法，其包含向受試者投與有效量的化合物1之結晶游離鹼形式或其醫藥組合物。在某些實施例中，PKR缺乏症與PKR突變相關聯。亦提供化合物1之結晶游離鹼形式，或其醫藥組合物，用於治療有需要之受試者之丙酮酸鹽激酶缺乏症(PKD)。另外提供化合物1之結晶游離鹼形式，或其醫藥組合物在製造用於治療丙酮酸鹽激酶缺乏症(PKD)之藥物中的用途。
在其他態樣中，提供治療有需要之受試者之選自溶血性貧血、鐮狀細胞貧血、地中海貧血症、遺傳性球形紅血球症、遺傳性橢圓形紅血球增多症、無β脂蛋白血症、巴-科症候群及陣發性夜間血紅素尿症之疾病的方法，其包含向受試者投與有效量的化合物1之結晶游離鹼形式，或其醫藥組合物。在一個態樣中，待治療之疾病為溶血性貧血。
在其他態樣中，本文提供治療溶血性貧血之方法，其包含向受試者投與有效量的化合物1之結晶游離鹼形式，或其醫藥組合物。亦提供化合物1之結晶游離鹼形式，或其醫藥組合物，用於治療有需要之受試者之溶血性貧血。另外提供化合物1之結晶游離鹼形式，或其醫藥組合物在製造用於治療溶血性貧血之藥物中的用途。
在其他態樣中，本文提供治療鐮狀細胞疾病之方法，其包含向受試者投與有效量的化合物1之結晶游離鹼形式，或其醫藥組合物。亦提供化合物1之結晶游離鹼形式，或其醫藥組合物，用於治療有需要之受試者之鐮狀細胞疾病。另外提供化合物1之結晶游離鹼形式，或其醫藥組合物在製造用於治療鐮狀細胞疾病之藥物中的用途。
在其他態樣中，本文提供治療地中海貧血症(例如β-地中海貧血症)之方法，其包含向受試者投與有效量的化合物1之結晶游離鹼形式，或其醫藥組合物。亦提供化合物1之結晶游離鹼形式，或其醫藥組合物，用於治療有需要之受試者之地中海貧血症(例如β-地中海貧血症)。另外提供化合物1之結晶游離鹼形式，或其醫藥組合物在製造用於治療地中海貧血症(例如β-地中海貧血症)之藥物中的用途。
在其他態樣中，本文提供增加有需要之受試者之紅血球(RBC)壽命之方法，其包含向受試者投與有效量的化合物1之結晶游離鹼形式，或其醫藥組合物。在一個態樣中，化合物1之結晶游離鹼形式，或其醫藥組合物係直接體外添加至全血或紅血球濃厚液。亦提供化合物1之結晶游離鹼形式，或其醫藥組合物，用於增加有需要之受試者之紅血球(RBC)壽命。另外提供化合物1之結晶游離鹼形式，或其醫藥組合物在製造用於增加紅血球(RBC)壽命之藥物中的用途。
在其他態樣中，本文提供調節有需要之受試者之血液中之2,3-二磷甘油酸酯水準的方法，其包含使血液與有效量的化合物1之結晶游離鹼形式，或其醫藥組合物接觸。亦提供化合物1之結晶游離鹼形式，或其醫藥組合物，用於調節有需要之受試者之血液中之2,3-二磷甘油酸酯水準。另外提供化合物1之結晶游離鹼形式，或其醫藥組合物在製造用於調節血液中之2,3-二磷甘油酸酯水準之藥物中的用途。
在其他態樣中，本文提供治療有需要之受試者之貧血的方法，其包含向受試者投與有效量的化合物1之結晶游離鹼形式，或其醫藥組合物。在一個態樣中，待治療之貧血為紅血球生成障礙性貧血。亦提供化合物1之結晶游離鹼形式，或其醫藥組合物，用於治療有需要之受試者之血液中之貧血。另外提供化合物1之結晶游離鹼形式，或其醫藥組合物在製造用於治療貧血之藥物中的用途。
在某些實施例中，本文提供藉由投與有效量的化合物1之結晶游離鹼形式，或其醫藥組合物來增加受試者之血紅素量的方法。亦提供化合物1之結晶游離鹼形式，或其醫藥組合物，用於增加有需要之受試者之血紅素量。另外提供化合物1之結晶游離鹼形式，或其醫藥組合物在製造用於增加血紅素量之藥物中的用途。
在一些態樣中，治療有效量之所揭示形式(結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、結晶游離鹼或非晶型)可投與至培養物中之細胞(例如活體外或離體)，或投與至受試者(例如活體內)以治療、預防及/或診斷多種病症，包括下文所述之彼等。
在一個態樣中，包含所揭示形式(結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、結晶游離鹼或非晶型)之所揭示之組合物、治療方法及其用途進一步包含投與或使用葉酸。投與或使用葉酸可在在投與或使用本文所述之結晶型或非晶型之前、期間及/或之後。然而，在一個態樣中，葉酸係在所揭示形式(結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、結晶游離鹼或非晶型)之前及/或與其同時投與或使用。因此，在一個態樣中，本文提供一種在有需要之受試者中治療本文所述之病況(例如PKD，貧血，諸如溶血性貧血、後天性溶血性貧血、及鐮狀細胞貧血、地中海貧血症(例如β-地中海貧血症、α-地中海貧血症、非輸血依賴性地中海貧血症等)、鐮狀細胞疾病、遺傳性球形紅血球症、遺傳性橢圓形紅血球增多症、無β脂蛋白血症、巴-科症候群及陣發性夜間血紅素尿症)；增加RBC之壽命；調節血液中之2,3-二磷甘油酸酯水準；活化紅血球中之野生型或突變型PKR；增加血紅素的量；評估2,3-二磷甘油酸酯(2,3-DPG)水準、三磷酸腺苷(ATP)水準或PKR活性；評估2,3-二磷甘油酸酯(2,3-DPG)水準、三磷酸腺苷(ATP)水準或PKR活性之方法，其包含向受試者投與有效量的所揭示形式(結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、結晶游離鹼或非晶型)及葉酸。
在葉酸在所揭示形式(結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、結晶游離鹼或非晶型)之前投與或使用之態樣中，葉酸可在投與或使用所揭示形式之前使用至少5天、至少10天、至少15天、至少20天或至少25天。在一個態樣中，葉酸在投與或使用所揭示形式之前投與或使用至少20、至少21、至少22、至少23、至少24或至少25天。在另一態樣中，葉酸在投與或使用所揭示形式之前投與至少21天。在另一態樣中，葉酸在投與或使用所揭示形式之前投與或使用1至30天。在另一態樣中，葉酸在投與或使用所揭示形式之前投與或使用5至25天。在另一態樣中，葉酸在投與或使用所揭示形式之前投與或使用10至30天。在另一態樣中，葉酸在投與或使用所揭示形式之前投與或使用10至25天。在另一態樣中，葉酸在投與或使用所揭示形式之前投與或使用15至25天。在另一態樣中，葉酸在投與或使用所揭示形式之前投與或使用20至25天。
待投與或與所揭示形式一起使用之葉酸的特定量將視待治療之受試者及特定投藥模式而變化。在某些態樣中，葉酸之有效量為每天約0.1 mg至約10 mg。在某些態樣中，葉酸之有效量為每天至少0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或1.0 mg。在一個態樣中，葉酸之有效量為每天至少0.8 mg或每天至少1.0 mg。
葉酸的量意欲與本文所述之所揭示形式的任何量組合。因此，在某些態樣中，本文提供一種在有需要之受試者中治療本文所述之病況(例如PKD，貧血，諸如溶血性貧血、後天性溶血性貧血、及鐮狀細胞貧血、地中海貧血症(例如β-地中海貧血症、α-地中海貧血症、非輸血依賴性地中海貧血症等)、鐮狀細胞疾病、遺傳性球形紅血球症、遺傳性橢圓形紅血球增多症、無β脂蛋白血症、巴-科症候群及陣發性夜間血紅素尿症)；增加RBC之壽命；調節血液中之2,3-二磷甘油酸酯水準；活化紅血球中之野生型或突變型PKR；增加血紅素的量；評估2,3-二磷甘油酸酯(2,3-DPG)水準、三磷酸腺苷(ATP)水準或PKR活性；評估2,3-二磷甘油酸酯(2,3-DPG)水準、三磷酸腺苷(ATP)水準或PKR活性之方法，其包含向受試者投與有效量的本文所述之所揭示形式(結晶型A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、結晶游離鹼或非晶型)及葉酸，其中葉酸係在所揭示形式之前(例如預先至少21天)及/或與其同時投與，所揭示形式(例如形式A)係以5、20或50 mg BID之量投與且其中葉酸係以至少0.8毫克/天之量投與。 實例
如以下實例中所描繪，結晶型及非晶型係根據以下通用程序製備。
使用之典型縮寫概述於下文。
溶劑
名稱 縮寫
1-丙醇 1-PA
2-丙醇 IPA
乙腈 ACN
苯甲醇 BA
二氯甲烷 DCM
二甲亞碸 DMSO
乙醇 EtOH
乙酸乙酯 EtOAc
乙酸異丙酯 IPAc
甲醇 MeOH
乙酸甲酯 MeOAc
甲基丁基酮 MBK
甲基乙基酮 MEK
甲基異丁基酮 MIBK
N,N-二甲基乙醯胺 DMAc
N,N-二甲基甲醯胺 DMF
N-甲基吡咯啶酮 NMP
第三丁基甲基醚 MtBE
四氫呋喃 THF
三氟乙酸 TFA
三氟乙醇 TFE
單位
名稱 縮寫
攝氏度 C
度 o
當量 eq.
公克 g
小時 hr
克耳文 K
公升 L
毫克 mg
毫升 mL
分鐘 min
秒 sec
體積 vol.
瓦特 W
重量 wt.
粉末X射線繞射係使用Rigaku MiniFlex 600進行。樣品係製備於Si歸零晶圓上。典型掃描為4至30度之2θ，以步長0.05度歷時五分鐘(在40 kV及15 mA下)。高解析度掃描為4至40度之2θ，以步長0.05度歷時三十分鐘(在40 kV及15 mA下)。XRPD之典型參數列於以下。
反射模式之參數
X射線波長 Cu Kα1，1.540598 Å
X射線管設定 40 kV，15 mA
狹縫狀況 可變+固定狹縫系統
掃描模式 連續
掃描範圍(°2TH) 4 - 30
步長(°2TH) 0.05
掃描速度(°/min) 5
差示掃描熱量測定係使用Mettler Toledo DSC 3 +進行。所需量之樣品直接在具有針孔之密閉式鋁盤中稱重。典型樣品質量為3-5 mg。典型溫度範圍為30℃至300℃，加熱速率為10℃/min(總時間27分鐘)。DSC之典型參數列於以下。
參數
方法 勻變
樣品大小 3-5 mg
加熱速率 10.0℃/min
溫度範圍 30至300℃
方法氣體 60.00 mL/min之N 2
熱解重量分析及差示掃描熱量測定係使用Mettler Toledo TGA/DSC 3 +進行。所需量之樣品直接在具有針孔之密閉式鋁盤中稱重。用於量測之典型樣品質量為5-10 mg。典型溫度範圍為30℃至300℃，加熱速率為10℃/min(總時間27分鐘)。保護性及吹掃氣體為氮氣(20-30 mL/min及50-100 mL/min)。DSC/TGA之典型參數列於以下。
參數
方法 勻變
樣品大小 5-10 mg
加熱溫度 10.0℃/min
溫度範圍 30至300℃
動態氣相吸附(DVS)係使用DVS Intrinsic 1進行。樣品裝載至樣品盤中且自測微天平懸浮。用於DVS量測之典型樣品質量為25 mg。鼓泡通過蒸餾水之氮氣提供所需相對濕度。典型量測包含以下步驟： 1.  平衡於50% RH處 2.  50%至2% (50%、40%、30%、20%、10%及2%) a.    在各濕度下保持最少5 min及最多60 min。通過標準為小於0.002%變化 3.  2%至95% (2%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%) b.    在各濕度下保持最少5 min及最多60 min。通過標準為小於0.002%變化 4.  95%至2% (95%、80%、70%、60%、50%、40%、30%、20%、10%、2%) c.    在各濕度下保持最少5 min及最多60 min。通過標準為小於0.002%變化 5.  2%至50% (2%、10%、20%、30%、40%、50%) d.    在各濕度下保持最少5 min及最多60 min。通過標準為小於0.002%變化
質子NMR係在Bruker Avance 300 MHz光譜儀上進行。固體在4 mL小瓶中溶解於0.75 mL氘化溶劑中且轉移至NMR管(Wilmad 5 mm薄壁8'' 200 MHz，506-PP-8)。典型量測通常為16次掃描。NMR之典型參數列於以下。
參數
儀器 Bruker Avance 300 MHz光譜儀 Bruker Avance 500 MHz光譜儀
溫度 300 K
探針 5 mm PABBO BB-1H/DZ-GRD Z104275/0170
掃描數目 16
弛豫延遲 1.000 s
脈衝寬度 14.2500 μs
採集時間 2.9999 s
光譜儀頻率 300.15 Hz 500.13 Hz
核 1H
用於水測定之Karl Fischer滴定係使用裝備有6.0338.100雙鉑絲電極之785 DMP Titrino及703 Ti Stand進行。樣品溶解於HPLC級或無水甲醇中且用Hydranal-Composite 5滴定。用於量測之典型樣品質量為0.03-0.10 g。Hydranal 1重量%水標準品用於校準。
化合物 1，亦即非結晶游離鹼可遵循下文所述之程序製備。 製備 4 -( 喹啉 - 8 - 磺醯胺基 ) 苯甲酸乙酯
含有4-胺基苯甲酸乙酯(16.0 g，97 mmol)及吡啶(14.0 g，177 mmol)於乙腈(55 mL)中之溶液在65℃下經1.2小時添加至喹啉-8-磺醯氯(20.0 g，88 mmol)於無水乙腈(100 mL)中之攪拌懸浮液中。在65℃下攪拌混合物3.5小時，經1.5小時冷卻至20℃且保持直至經1小時添加水(140 mL)。藉由過濾回收固體，用乙腈/水(40/60 wt./wt.)洗滌2次(各100 mL)且在真空烘箱中於85℃下乾燥至恆重。對白色固體(30.8 g，87 mmol)之分析的實驗值：(A) HPLC純度=99.4% 4-(喹啉-8-磺醯胺基)苯甲酸乙酯，(B)與結構一致之LC-MS，(M+1)= 357 (C18管柱溶離95-5，CH3CN/水，經甲酸修飾，經2分鐘)，及(C)與結構一致之 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) = δ 10.71 (s, 1H), 9.09 (dd, J= 4.3, 1.6 Hz, 1H), 8.46 (ddt, J= 15.1, 7.3, 1.5 Hz, 2H), 8.26 (dd, J= 8.3, 1.4 Hz, 1H), 7.84 - 7.54 (m, 4H), 7.18 (dd, J= 8.6, 1.3 Hz, 2H), 4.26 - 4.07 (m, 2H), 1.19 (td, J= 7.1, 1.2 Hz, 3H)。 製備 4 -( 喹啉 - 8 - 磺醯胺 ) 苯甲酸
NaOH溶液(16.2 g，122 mmol)在75℃下經30分鐘添加至4-(喹啉-8-磺醯胺基)苯甲酸乙酯(20.0 g，56.2 mmol)於水(125 mL)中之攪拌懸浮液中。將混合物在75℃-80℃下攪拌3小時，冷卻至20℃且保持直至添加THF (150 mL)。經＞1小時添加鹽酸(11% HCL，81 mL，132 mmol)直至3.0之pH。固體藉由在5℃下過濾回收，用水(2× 100 mL)洗滌且在真空烘箱中於85℃下乾燥至恆重。對白色固體(16.7 g，51 mmol)之分析的實驗值：(A) HPLC純度=＞99.9% 4-(喹啉-8-磺醯胺)苯甲酸，與結構一致之LC-MS，(M+1) = 329 (C18管柱溶離95-5 CH3CN/水，經甲酸修飾，經2分鐘)及與結構一致之 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) =  δ 12.60 (s, 1H), 10.67 (s, 1H), 9.09 (dd, J= 4.2, 1.7 Hz, 1H), 8.46 (ddt, J= 13.1, 7.3, 1.5 Hz, 2H), 8.26 (dd, J= 8.2, 1.5 Hz, 1H), 7.77 - 7.62 (m, 3H), 7.64 (d, J= 1.3 Hz, 1H), 7.16 (dd, J= 8.7, 1.4 Hz, 2H)。 製備 1 -( 環丙基甲基 ) 哌嗪 二鹽酸鹽 ( 4 )
向N 2下之1 L反應器中饋入哌嗪-1-甲酸第三丁酯(2)(100.0 g，536.9 mmol)、環丙烷甲醛(3)(41.4 g，590.7 mmol)、甲苯(500.0 mL)及2-丙醇(50.0 mL)。在25-35℃下向獲得之溶液中逐份添加NaBH(OAc) 3(136.6 g，644.5 mmol)且將混合物在25℃下攪拌2小時。添加水(300.0 mL)，接著添加NaOH溶液(30%，225.0 mL)直至pH 12。分離各層且將有機層用水(100.0 mL×2)洗滌。向有機層添加鹽酸(37%，135.0 mL，1.62 mol)且將混合物在25℃下攪拌6 h。分離各層且將水層在25℃下在1 h內添加至丙酮(2.0 L)。將所得懸浮液冷卻至0℃。固體在0℃下過濾，用丙酮(100.0 mL×2)洗滌且乾燥，獲得92%分離產率之4 (105.0 g)。LC-MS (C18管柱溶離90-10 CH 3CN/水經2分鐘)實驗值(M+1) =141。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 11.93 (br.s, 1H), 10.08 (br., 2H), 3.65 (br.s, 2H), 3.46 (br.s, 6H), 3.04 (d, J= 7.3 Hz, 2H), 1.14 - 1.04 (m, 1H), 0.65 - 0.54 (m, 2H), 0.45 - 0.34 (m, 2H) ppm。 製備 N -( 4 -( 4 -( 環丙基甲基 ) 哌嗪 - 1 - 羰基 ) 苯基 ) 喹啉 - 8 - 磺醯胺 ( 1 )
向N 2下之2 L反應器中饋入4-(喹啉-8-磺醯胺基)苯甲酸(5)(100.0 g，304.5 mmol)及DMA (500.0 mL)。在25℃下向所得懸浮液中逐份添加CDI (74.0 g，456.4 mmol)且將混合物在25℃下攪拌2 h。在25℃下向所得懸浮液中一次性添加1-(環丙基甲基)哌嗪二鹽酸鹽(4) (97.4 g，457.0 mmol)且將混合物在25℃下攪拌4 h。在2 h內添加水(1.0 L)。固體在25℃下過濾，用水洗滌且在真空中於65℃下乾燥，獲得90%分離產率之 1(124.0 g)。LC-MS (C18管柱溶離90-10 CH 3CN/水經2分鐘)實驗值(M+1) =451。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.40 (br.s, 1H), 9.11 (dd, J= 4.3, 1.6 Hz, 1H), 8.48 (dd, J= 8.4, 1.7 Hz, 1H), 8.40 (dt, J= 7.4, 1.1 Hz, 1H), 8.25 (dd, J= 8.3, 1.3 Hz, 1H), 7.76 - 7.63 (m, 2H), 7.17 - 7.05 (m, 4H), 3.57 - 3.06 (m, 4H), 2.44 - 2.23 (m, 4H), 2.13 (d, J= 6.6 Hz, 2H), 0.79 - 0.72 (m, 1H), 0.45 - 0.34 (m, 2H), 0.07 - 0.01 (m, 2H) ppm。
亦自此合成步驟鑑定兩種雜質。第一雜質為具有以下結構之化合物IM-1 (基於代表性HPLC，約0.11%面積%)： (化合物IM-1) 化合物IM-1係由於存在N-甲基哌嗪(化合物2中之雜質)而產生，且攜載至與化合物5反應。LC-MS實驗值(M+1) =411.2; (M-1)= 409.2。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ  10.43 (brs, 1H) 9.13-9.12 (m, 1H), 8.52-8.50 (m, 1H),  8.43-8.41 (m, 1H), 8.26 (d, J=4.0 Hz, 1 H), 7.73-7.70 (m, 2H), 7.15-7.097.69 (m, 4H), 3.60-3.25 (brs, 4H), 2.21 (brs, 4H), 2.13 (s, 3H)。
第二雜質為具有以下結構之化合物IM-2 (基於代表性HPLC，約0.07%面積%)： (化合物IM-2) 化合物IM-2係由於存在哌嗪，由化合物2之脫除保護基產生的雜質。哌嗪殘餘物攜載至與化合物5之兩個分子反應，得到化合物IM-2。LC-MS實驗值(M+1) =707。 1H NMR (400 MHz, CF 3COOD) δ  9.30-9.23 (m, 4H), 8.51 (s, 4H), 8.20-8.00 (m, 4H), 7.38-7.28 (m, 8H), 4.02-3.54 (m, 8H)。 溶解度實驗
溶解度量測係藉由在兩個溫度(23℃及50℃)下於20種不同溶劑種之重量方法進行。約20-30 mg形式A (其合成在下文描述)經稱重且添加0.75 mL溶劑以形成漿料。漿料接著在指定溫度下攪拌兩天。小瓶經離心且收集上清液用於經由重量方法進行溶解度量測。飽和上清液轉移至預稱重2 mL HPLC小瓶中且再次稱重(小瓶+液體)。未加蓋小瓶接著置於50℃熱板上以緩慢蒸發溶劑隔夜。小瓶接著置於50℃及真空下之烘箱中以移除殘餘溶劑，以使得僅保留溶解固體。小瓶接著經稱重(小瓶+固體)。自此三個重量：小瓶、小瓶+液體及小瓶+固體計算溶解固體及溶劑之重量。接著使用溶劑密度將溶解度計算為mg固體/mL溶劑。溶解度資料概述於 表 1中。 表 1
溶劑 ( 比率為體積比 ) 溶解度，mg 固體 /mL 溶劑
23 ℃ 50 ℃
MeOH 393 ＞765
EtOH 0 1
IPA 0 2
丙酮 1 6
MtBE 1 3
EtOAc 0 2
乙腈 4 6
環己烷 1 1
MEK:水(20:1) 0 2
甲苯:EtOH:水(10:5:1) 不可混溶 不可混溶
甲苯:EtOH:水(10:5:0.5) 1 4
甲苯 0 2
THF 2 26
IPAc 0 1
丙酮:水(8:2) 5 16
THF:水(8:2) 14 77
IPA:DMSO (8:2) 11 28
IPA:DMSO:水(80:18:2) 1 6
IPA:DMSO:水(70:25:5) 2 9
IPA:DMSO:水(70:20:10) 1 8
DCM 2 N/A
由於甲醇中之溶解度顯著較高，量測擴展至與甲醇混合之更多溶劑系統。結果展示於 表 2中。20-30 mg形式A稱重至2 mL小瓶中且添加500 µL如表中所概述之MeOH溶劑系統。若溶解，則添加更多固體以形成漿料。接著攪拌漿料兩天。小瓶經離心且收集上清液用於經由重量方法，藉由在50℃下蒸發來進行溶解度量測。在過濾漿料之後對固體進行XRPD分析。
水對形式A之溶解度具有顯著影響。舉例而言，在MeOH:水(1:1)系統中，針對0 vol%、1%、2.5%及5%，室溫溶解度分別為208、118、39及5 mg/mL。因此，僅添加5體積%水便降低溶解度42倍。三種溶劑組合物以MeOH:水(99:1 vol)、(98:2)及(95:5)形式使用。約25 mg形式A稱重至2 mL小瓶中且添加6體積溶劑，接著緩慢加熱至溶解。對於5%水之實驗，用8 vol溶劑進行額外測試。參見 表 3。 表2
溶劑 ( 比率為體積比 ) 溶解度， mg 固體 / mL 溶劑
23 ℃ 50 ℃
MeOH:水(1:1) 7 27
MeOH:水(8:2) 10 59
EtOAc:MeOH (1:1) 21 240
EtOAc:MeOH (9:1) 0 9
EtOAc:MeOH (1:9) 359 531
EtOH:MeOH (1:1) 2 11
EtOAc:MeOH (1:1)及5 vol%水 3 12
MeOAc:MeOH (1:1)及5 vol%水 5 26
MeOAc:MeOH (1:1) 208 340
MeOAc:MeOH (1:1)及1 vol%水 118 236
MeOAc:MeOH (1:1)及2.5 vol%水 39 143
表3
溶劑 溶劑 vol 溶解時之溫度，℃ 溶解度， mg 固體 / mL 溶劑 額外水 XRPD 圖
MeOH:水(99:1) 6 vol 23 ＞167 N/A B +額外
MeOH:水(98:2) 6 vol 35 167 N/A B
MeOH:水(95:5) 6 vol 60 167 4 vol A
MeOH:水(95:5) 8 vol 50 125 4 vol A
出於比較起見，亦在兩個溶劑系統中量測化合物 1(亦即非結晶游離鹼)之溶解度醫查看水之作用。2.5體積%水對化合物1之溶解度不具有任何影響。參見 表 4。 表4
溶劑 溶解度，mg 固體 /mL 溶劑
23 ℃ 50 ℃
MeOAc:MeOH (1:1) 15 34
MeOAc:MeOH (1:1)及2.5 vol%水 15 36
篩選實驗 1. 短期漿料
來自溶解度量測實驗之漿料的固體收集用於XRPD分析，顯示於 表 5中。圖案A在大部分溶劑系統中在兩天漿化過程中保持不變。在一些情況下，其損失結晶度，指示攪拌較長時間將可能改變形式。觀測到三種新圖案：在室溫及50℃下於EtOH中之圖案B；在室溫下於IPA中之圖案A+C；在50℃下於IPA及乙腈中之圖案D。圖案D+含結晶游離鹼之IPA:DMSO (8:2)，在50℃下。
另外，在甲醇溶劑混合物中進行2天漿料且結果呈現於 表 6中。其中存在至少2.5體積%水，圖案A保持不變。當僅存在1%水時，圖案A在兩天漿化內於50℃下損失其結晶度，而在室溫下保持不變。在存在大量甲醇之無水混合物中，圖案A不穩定。 表 5
溶劑 2 天 漿料之後的 XRPD 圖
23 ℃ 50 ℃
MeOH A 低結晶A
EtOH B B
IPA A + C D
丙酮 A A (約5.8處之額外峰)
MtBE A A
EtOAc A A
乙腈 A D
環己烷 A A
MEK:水(20:1) A A
甲苯:EtOH:水(10:5:0.5) A A
甲苯 A A
THF A A
IPAc A A
丙酮:水(8:2) A A
THF:水(8:2) A A
IPA:DMSO (8:2) A D + 結晶游離鹼
IPA:DMSO:水(80:18:12) A A
IPA:DMSO:水(70:25:5) A A
IPA:DMSO:水(70:20:10) A A
DCM A N/A
表6
溶劑 漿化之後的 XPRD 圖
RT 50 ℃
MeOH:水(1:1) A A
MeOH:水(8:2) A A
EtOAc:MeOH (1:1) B D
EtOAc:MeOH (9:1) A A
EtOAc:MeOH (1:9) A 低結晶A
EtOH:MeOH (1:1) B B
EtOAc:MeOH (1:1)及5 vol%水 A A
MeOAc:MeOH (1:1)及5 vol%水 A A
MeOAc:MeOH (1:1) A 低結晶A
MeOAc:MeOH (1:1)及1 vol%水 A 低結晶A
MeOAc:MeOH (1:1)及2.5 vol%水 A A
2. 結晶游離鹼漿料實驗
出於比較起見，化合物 1(亦即結晶游離鹼)亦在其中半硫酸鹽顯示不同XRPD圖之一些溶劑系統中漿化。游離鹼在兩天漿化之後保持不變。結果展示在 表 7中。 表7
溶劑 漿化之後的 XPRD 圖
23 ℃ 50 ℃
MeOAc:MeOH (1:1) FB-A FB-A
MeOAc:MeOH (1:1)及2.5 vol%水 FB-A FB-A
EtOH 未進行 FB-A
ACN 未進行 FB-A
IPA:水(8:2) 未進行 FB-A
FB-A係指化合物 1之結晶游離鹼形式 3.   非晶形產生實驗
進行於ACN:水(2:1體積)中之凍乾以產生非晶形材料。約250 mg形式A稱重至20 mL小瓶中且添加6 mL溶劑混合物，接著將混合物加熱至40℃且保持0.5 h，接著放入冷凍器(-20℃)中。一部分冷凍混合物(約一半)收集於過濾器上，隨後熔融進行分析。另一半經熔融，接著添加1 mL ACN:水(2:1 vol)及1 mL水，且將其再次放入冷凍器中。最後將此混合物置於冷凍乾燥器中隔夜。對所得固體進行XRPD分析。參見 表 8。 表8
溶劑 XRPD 圖 方法
6 mL ACN:水(2:1) 形式E (濕式，過濾及緊接著XRD，57-1-濕式) 形式F (乾燥真空烘箱，57-1-乾式) 當形式E之濕濾餅置於小瓶中隔夜時，形式E轉化為形式A 過濾
1 mL ACN:水(2:1) + 2 mL水 形式A 冷凍乾燥
基於蒸發結晶結果，針對THF中之樣品觀測到非晶形物質。重複此實驗，但替代地觀測到圖案D。參見 表 9。 表9
溶劑 溶劑 vol ， µL XRPD 圖
THF 13380 形式D
MeOH溶劑中之蒸發結晶產生非晶形物質。藉由添加1.5 vol甲醇以溶解形式A而在55℃下重複此實驗。接著降溶液置於50℃真空烘箱中隔夜。XPRD顯示所得固體為非晶形。TGA/DSC亦顯示伴有2.7%逐漸重量損失之小吸熱事件。參見 表 10。 表10
溶劑 溶劑 vol ， µL XRPD 圖
MeOH 70 非晶形
發現形成化合物1之游離鹼非晶形式之方法且描述如下。
約4 mL乙腈與2 mL水合併。在20 mL閃爍瓶中，將過量化合物1之固體懸浮於溶劑混合物中，使得固體不完全溶解。閃爍瓶經加蓋且將系統置於室溫超音波浴中10-15分鐘。懸浮液經由0.45 μm針筒過濾器過濾至100 mL圓底燒瓶中以獲得澄清溶液。溶液使用乾冰/丙酮浴冷凍且將冷凍溶液置於凍乾器中至少18 h以獲得化合物1之非晶型。所獲得非晶型之XRPD顯示於 圖 23中。化合物1之非晶形游離鹼之TGA及DSC熱分析圖展示於 圖 24中。 4.   蒸發結晶
各種溶劑系統中之約0.3 mL至0.5 mL飽和溶液形式A蒸發至乾燥且進行XRPD分析。在50℃及大氣壓下進行蒸發( 表 11)。由於低溶解度，固體在許多情況下極少。對於室溫下之MeOH、室溫下及50℃下之丙酮:水(8:2)中之樣品，XPRD圖保持圖案A；在室溫及50℃下之ACN中觀測到低結晶游離鹼；在50℃下之MeOH及50℃下之THF中產生非晶形。 表11
溶劑 藉由蒸發結晶之 XRPD 圖
漿化於 23 ℃下 漿化於 50 ℃下
MeOH 形式A 非晶形
EtOH 極少固體 極少固體
IPA 極少固體 極少固體
丙酮 極少固體 極少固體
MeBE 極少固體 極少固體
EtOAc 極少固體 極少固體
ACN 低結晶游離鹼 低結晶游離鹼
環己烷 極少固體 極少固體
MEK:水(20:1) 極少固體 極少固體
甲苯:EtOH:水(10:5:1) 極少固體 極少固體
甲苯 極少固體 極少固體
THF 極少固體 非晶形
IPAc 極少固體 極少固體
丙酮:水(8:2) 形式A 形式A
THF:水(8:2) 極少固體 低結晶型A
IPA:DMSO(8:2) 極少固體 極少固體
IPA:DMSO:水(80:18:12) 極少固體 極少固體
IPA:DMSO:水(70:25:5) 極少固體 極少固體
IPA:DMSO:水(70:20:10) 極少固體 極少固體
DCM 極少固體 N/A
在溶解度量測之後在MeOH溶劑系統中進行蒸發結晶。結果展示於 表 12中。由於低溶解度，固體在一些情況下極少。對於50℃下之MeOH:水(1:1)、室溫及50℃下之MeOH:水(8:2)及50℃下之EtOAc:MeOH:水(1:1:0.05)中之樣品，XRPD圖保持圖案A；圖案B發現於50℃下之EtOH:MeOH (1:1)中；圖案F觀測於50℃下之MeOAc:MeOH (1:1:0.05)中；非晶形產生於50℃下之EtOAc:MeOH (1:1)以及室溫及50℃下之MeOAc:MeOH (1:9)中。 表 12
溶劑 藉由蒸發結晶之 XRPD 圖
漿化於 23 ℃下 漿化於 50 ℃下
MeOH:水(1:1) 極少固體 形式A
MeOH:水(8:2) 形式A 形式A
EtOAc:MeOH (1:1) 極少固體 非晶形
EtOAc:MeOH (9:1) 極少固體 極少固體
EtOAc:MeOH (1:9) 非晶形 非晶形
EtOH:MeOH (1:1) 極少固體 形式B
EtOAc:MeOH (1:1)及5vol%水 極少固體 形式A
MeOAc:MeOH (1:1)及5vol%水 極少固體 形式F
5.   緩慢及快速冷卻結晶
進行緩慢及快速冷卻實驗以研究形式A之多態特性。在緩慢冷卻實驗中，約20-35 mg形式A在55℃下溶解於各種溶劑系統中且接著經5小時冷卻至室溫(23℃)，且若未觀測到沈澱，則樣品經1小時冷卻至5℃。在快速冷卻實驗中，55℃下之形式A溶液藉由將小瓶置於冰水浴中而快速冷卻至0℃且若無沈澱，則將樣品在不混合以進一步冷卻的情況下置於-20℃冷凍器中。
在快速及緩慢冷卻實驗中，在IPA:DMSO (7:3)及IPA:DMSO:水(65:30:5)中均未觀測到沈澱。形式A不溶解於77體積MeOH:EtOH (3:7)中。MeOH:EtOH (3:7)中之漿料經過濾及分析，其顯示轉化為圖案B。在快速冷卻實驗中，獲得兩種新圖案：丙酮:水(8:2)中之圖案G及MeOH:EtOAc (1:1)中之圖案H。在緩慢冷卻實驗中，所得固體圖案為丙酮:水(8:2)中之圖案A，及MeOH:EtOAc (1:1)中之圖案B。參見 表 13。 表13
溶劑 溶劑 vol 藉由冷卻結晶之 XRPD 圖
快速 緩慢
丙酮:水(8:2) 72 形式G 形式A
IPA:DMSO (7:3) 14 未沈澱 未沈澱
MeOH:EtOAc (1:1) 17 形式H 形式B
IPA:DMSO:水(65:30:5) 196 未沈澱 未沈澱
MeOH:EtOH (3:7) 77 未溶解 未溶解(漿料為圖案B)
6.   反溶劑結晶
進行反溶劑實驗以進一步研究形式A之多態特性。在直接反溶劑實驗中，反溶劑添加至20-25 mg形式A溶解於3體積MeOH中之溶液中(每次遞增25 µL)。在反向添加實驗中，溶液立即添加至6體積反溶劑。實驗在室溫下進行。結果展示於 表 14中。僅在MeOH/EtOH系統中，固體產生於實驗過程期間。 表14
溶劑 (3 vol) 反溶劑 (6 vol) 反溶劑結晶 XRPD 圖
直接 反向 直接 反向
MeOH EtOAc 快速沈澱及溶解(無固體) 快速沈澱及溶解(無固體) N/A N/A
MeOH IPAc 沈澱及稀漿料，在過濾之後極少固體 沈澱及膠著 N/A N/A
MeOH 丙酮 未沈澱 未沈澱 N/A N/A
MeOH 乙醇 沈澱 膠著 形式B 低結晶度形式B
MeOH 水 未沈澱 未沈澱 N/A N/A
7.   鹽圖案A之溶劑滴加研磨實驗
進行溶劑滴加研磨實驗以評估形式A之多態特性。約25 mg形式A稱重於球磨機囊中，接著添加25 μL溶劑。研磨固體三次，每次30 s。每次將固體刮離囊壁以防止結塊。另外，設計無溶劑之形式A之乾燥研磨作為參考。XRPD顯示所得固體在溶劑滴加研磨過程之後保持不變，除了乾燥研磨樣品，其導致形式A之低結晶度，幾乎非晶形。參見 表 15。 表15
溶劑 溶劑 vol ， µL XRPD 圖
MeOH:水(95:5) 25 形式A
Actone:水(8:2) 25 形式A
MeOH:MeOAc (1:1) 25 形式A
IPAc 25 低結晶型A
苯甲醚 25 形式A
乾燥固體 無溶劑 幾乎非晶形
8.   半硫酸鹽形成
鹽形成係藉由在各種溶劑中漿化化合物 1，亦即非結晶游離鹼，接著添加硫酸於EtOAc中之溶液來進行。首先，製備硫酸於EtOAc中之溶液(濃度大致24重量%)。接著將25至30 mg化合物 1之非結晶游離鹼稱重於2 mL小瓶中，接著添加15 vol溶劑。接著添加所需當量之硫酸。漿料加熱至45℃且保持1小時且接著經2小時冷卻至室溫，接著保持隔夜。漿料經過濾且接著藉由XRPD分析。結果顯示於 表 16中。 表16
溶劑 觀測結果 XRPD 圖
0.5 eq 硫酸 1.0 eq. 硫酸 0.5 eq. 硫酸 1.0 eq. 硫酸
IPA 稀漿料及少量膠狀物 稀漿料及少量膠狀物 低結晶度FB-A 低結晶度FB-A
乙腈 稀漿料及少量膠狀物 溶液至漿料 低結晶度形式A 形式D
MeOAc:MeOH (1:1) 溶液* 溶液* 非晶形 非晶形
EtOAc:MeOH (1:1) 溶液* 溶液* 非晶形 非晶形
MeOAc:MeOH (1:1)；5%水 溶液* 溶液* 低結晶度形式A 非晶形
EtOAc:MeOH (1:1)；5%水 溶液至漿料 溶液* 形式A 非晶形
MeOAc:MeOH (1:1)；10%水 溶液* 溶液* 形式A 非晶形
丙酮 漿料 稀漿料及少量膠狀物 低結晶度FB-A 形式D
THF 漿料 漿料 低結晶度FB-A 低結晶度FB-A
乙醇 漿料 溶液至漿料 形式I 形式D
IPAc 稀漿料及少量膠狀物 稀漿料及少量膠狀物 FB-A 低結晶度FB-A
MeOAc:MeOH (1:1)；1%水 溶液* 溶液* 低結晶度FB-A 非晶形
* 在攪拌3-4 h之後無沈澱，接著蒸發溶劑。FB-A係指化合物 1之結晶游離鹼形式
半硫酸鹽亦在具有或不具有水之MeOAc:MeOH (1:1)混合物中形成。製備43重量% (密度：1.3072 g/mL)之硫酸水溶液且用於半鹽形成。參見 表 17。 表17-具有0.52 eq硫酸水溶液(40至50重量%)之MeOAc:MeOH溶劑系統中之鹽形成
硫酸 ， eq 硫酸水溶液 ， µ L 硫酸， µL 實驗描述 XPRD 圖 - 濕固體
0.52 19.4 578.4 在室溫下添加6體積MeOAc:MeOH (1:1)； 添加0.52當量酸；溶液藉由一些規格之固體達成 添加圖案A作為晶種。   添加圖案B作為晶種 保持1小時。變濃稠。取樣用於XRPD。 加熱至50℃ 形式J
0.52 18.6 555 在室溫下添加6體積MeOAc:MeOH (1:1) 添加0.52當量酸；溶液藉由一些規格之固體達成 逐滴添加0.4 vol水 保持2小時。變濃稠。過濾用於XRPD 形式A
0.52 19.8 591 在室溫下添加6體積MeOAc:MeOH (1:1) 加熱至45℃ 添加0.52當量酸；溶液藉由一些規格之固體達成 逐滴添加0.4 vol水 保持30 min且經1小時冷卻至室溫 保持1小時。變濃稠。過濾用於XRPD 形式A
0.52 18.6 555.6 在室溫下添加6體積MeOAc:MeOH (1:1) 添加0.52當量酸；溶液藉由一些規格之固體達成 經2小時添加1 vol水 保持1小時。變濃稠。過濾用於XRPD 形式A
亦藉由在甲醇中漿化化合物 1，接著添加硫酸水溶液(43重量%水溶液)進行半硫酸鹽形成。約100 mg 化合物 1(非結晶游離鹼)稱重於4 mL小瓶中，接著添加6 vol溶劑。接著添加0.52當量硫酸水溶液(濃度大致43重量%)，其導致在室溫下完全溶解。對於實驗1，首先逐滴添加一體積水，添加少量圖案A作為晶種，接著經1小時添加5體積水；對於實驗2，未添加水，添加圖案A及B兩者作為晶種；對於實驗3，經2小時添加六體積水，無晶種。所有小瓶攪拌隔夜(O/N)。漿料經過濾且接著藉由XRPD分析。對於添加水之實驗，產率為約80%，且對於不添加水之實驗，產率為約60%，參看 表 18。 表18
溶劑 溶劑 vol ， µL 含硫酸之水 ， µ L 添加之水 ， µ L 最終組合物 添加之晶種 XRPD 圖 產率
MeOH 572 19.2 595 MeOH:水(50:50) 形式A 形式A 84%
MeOH 552 18.4 無水 MeOH:水(98.5:1.5) 形式A+B 形式B 63%
MeOH 577 19.4 600 MeOH:水(50:50) 無晶種 形式A 82%
亦藉由使用游離鹼及硫酸在甲醇:水(95:5)中進行半硫酸鹽形成。約150 mg化合物 1稱重至4 mL小瓶中且添加8體積溶劑。將混合物在500 rpm下攪拌且接著添加0.52 eq.硫酸水溶液(濃度大致43重量%)。將此混合物加熱至45℃，其導致完全溶解，接著添加0.5體積水，接著冷卻至室溫且保持隔夜。此產生可流動漿料。接著添加3.5 vol水且過濾。XRPD分析顯示圖案A。產率為約84%。參看 表 19。 表19
溶劑 溶劑 µL 含硫酸之水 ， µ L ( 加熱至之 ) 溫度，℃ 最終組合物 XRPD 圖 產率
MeOH:水(95:5) 1200 30.2 45 MeOH:水(63:37) 形式A 84%
如下進行形式A之規模放大實驗。
將約1.0253 g化合物 1添加至100 mL燒瓶。接著添加8 vol MeOH:水(95:5 vol)溶劑(8.2 mL)且使用具有3.5 cm直徑之4間距葉片渦輪機(4-PBT)葉輪將混合物在300 rpm下攪拌。手動添加含0.52當量硫酸之水(約43重量%)(206 µL)且經10 min將混合物自23℃加熱至45℃，其導致完全溶解。添加0.5 vol水(0.512 mL)且將溶液保持10 min，經1小時冷卻至23℃且在攪拌時保持隔夜。未觀察到沈澱。添加4 vol水接著經1小時攪拌且剩餘的溶液在室溫下添加水之整個過程中保持澄清。在完成水後不久(15-30 min)開始沈澱。經由XRPD分析樣品，其顯示圖案A。混合物接著經1小時冷卻至15℃，在攪拌時保持3小時，且接著過濾及藉由2 vol MeOH:水(1:1)洗滌。濕濾餅之XRPD顯示圖案A。產物在50℃之真空烘箱中乾燥隔夜。根據XRPD產生1.1143 g鹽圖案A。根據NMR，殘餘甲醇為0.18重量%。濾液之pH係使用pH計來量測且顯示2.63之值。 9.   半硫酸鹽規模放大
如下詳述地在2公克規模下產生半硫酸鹽。所得固體為半硫酸鹽形式A。產率為約88%。
將約1.9581 g化合物 1添加至100 mL燒瓶。添加8 vol MeOH:水(95:5 vol)溶劑(15.9mL)且使用具有3.5 cm直徑之4-PBT葉輪將混合物在300 rpm下攪拌。手動添加含0.52當量硫酸之水(約43重量%)(399 µL)。混合物經10 min自23℃加熱至45℃，其導致完全溶解。添加0.5 vol水(0.993 mL)，且將溶液保持10 min且經1小時冷卻至23℃。經1小時添加4 vol水且在攪拌時保持約45 min之後觀測到成核。將混合物經1小時冷卻至15℃，在攪拌時保持約30 min，且過濾且藉由2 vol MeOH:水(1:1)洗滌。濕濾餅之XRPD顯示圖案A。產物在50℃之真空烘箱中乾燥隔夜。根據XRPD，此產生2.04 g (88%)鹽圖案A。根據NMR，殘餘甲醇為0.16重量%。 10. 最佳化結晶型 A 半硫酸鹽規模放大程序
具有或不具有接種之半硫酸鹽倍半水合物鹽形式之形式A的最佳化製備提供於下。 具有接種之 1 -( 環丙基甲基 )- 4 -( 4 -( 喹啉 - 8 - 磺醯胺基 ) 苯甲醯基 ) 哌嗪 - 1 - 鎓硫酸鹽三水合物 ( 形式 A ) 之製備
向N 2下之2 L反應器中饋入N-(4-(4-(環丙基甲基)哌嗪-1-羰基)苯基)喹啉-8-磺醯胺(5) (111.0 g，246.4 mmol)，以及乙醇(638.6 g)、甲苯(266.1 g)及水(159.6 g)之預混製程溶劑。懸浮液經攪拌且加熱至高於60℃以溶解固體，且接著將所得溶液冷卻至50℃。向溶液中添加H 2SO 4水溶液(2.4 M，14.1 mL，33.8 mmol)，接著添加1-(環丙基甲基)-4-(4-(喹啉-8-磺醯胺基)苯甲醯基)哌嗪-1-鎓硫酸鹽三水合物(6)(1.1 g，2.1 mmol)。在1 h攪拌之後，經5 h向懸浮液中添加H 2SO 4水溶液(2.4 M，42.3 mL，101.5 mmol)。將懸浮液冷卻至22℃且攪拌8小時。在22℃下濾出固體，用新鮮製程溶劑(2×175 g)洗滌且乾燥，得到94%分離產率之產物(121.6 g)。LC-MS (C18管柱溶離90-10 CH 3CN/水經2分鐘)實驗值(M+1) =451。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.45 (s, 1H), 9.11 (dd, J= 4.2, 1.7 Hz, 1H), 8.50 (dd, J= 8.4, 1.7 Hz, 1H), 8.41 (dd, J= 7.3, 1.5 Hz, 1H), 8.27 (dd, J= 8.2, 1.5 Hz, 1H), 7.79 - 7.60 (m, 2H), 7.17 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.11 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 3.44 (d, J= 8.9 Hz, 5H), 3.03 - 2.50 (m, 6H), 0.88 (p, J= 6.3 Hz, 1H), 0.50 (d, J= 7.6 Hz, 2H), 0.17 (d, J= 4.9 Hz, 2H)。 不具有接種之 1 -( 環丙基甲基 )- 4 -( 4 -( 喹啉 - 8 - 磺醯胺基 ) 苯甲醯基 ) 哌嗪 - 1 - 鎓硫酸鹽三水合物 ( 形式 A ) 之製備
在28℃下向50 L反應器中饋入N-(4-(4-(環丙基甲基)哌嗪-1-羰基)苯基)喹啉-8-磺醯胺(5)(1.20 kg，2.66 mol)及水(23.23 L)。在攪拌懸浮液時，經2 h逐滴添加H2SO4水溶液(1.0 M，261 g)。將反應物在25-30℃下攪拌24 h。濾出固體，且在真空下在低於30℃下乾燥96 h，得到90%分離產率之產物(1.26 kg)。 11. 再現及製備各種圖案
再現在前述實驗期間觀測到的圖案以進行表徵。圖案B、D、E、F為可再現的。圖案G在較低結晶度下再現。圖案I經再現，儘管其缺失一些峰。參看 表 20。 表20
目標圖案 實際圖案 溶劑 方法 描述
形式B 形式B EtOH 漿化於室溫下 保持甲醇或乙醇。在乾燥後失去結晶度
形式C+A 形式A IPA 漿化於室溫下 圖案C不可再現，因為其可十分不穩定且轉化為圖案A
形式D 形式A+D ACN 漿化於50℃下 圖案D為無水的
形式B 形式B EtOH:MeOH (3:7) 漿化於55℃下 獲得圖案B
形式E 形式E ACN:水(2:1) -20℃冷卻結晶 極低產率(5%) 在乾燥後不穩定且轉化為F
形式F 形式F N/A 藉由在50℃及真空下乾燥圖案E獲得 TGA之約8 wt%損失，其應為水(基於NMR)
形式G 低結晶型G ACN:水(8:2) 快速冷卻結晶及-20℃ TGA之約5 wt%損失，其應為水(基於NMR)
形式H 幾乎非晶形固體。大部分峰缺失 MeOH:EtOAc (1:1) 快速冷卻結晶及-20℃ 可能的溶劑合物極低結晶
形式B 形式B MeOH:水(99:1) 在室溫下溶解且晶種具有圖案A及B 獲得圖案B。
形式I 形式I - 缺失一些峰 EtOH 含游離鹼及硫酸之EtOAc之情況下的鹽形成 含有8.5重量% EtOH。可能的溶劑合物
形式D 形式D ACN 含游離鹼及硫酸之EtOAc之情況下的鹽形成 圖案D為無水的
形式B
形式B可藉由在室溫下在約10體積乙醇中漿化形式A多天直至獲得形式B來製備。形式B通常乾燥，在50℃下於真空中乾燥。其他形成形式B之方法描述於上文，例如表 5、 6、 12 - 14、 18及 20中。 形式 C
在IPA中於約23℃下漿化形式A 2天之後，形式C形成為與形式A之混合物。參見例如表5。形式C之XRPD峰獲自減去形式A峰。 形式 D
形式D係藉由添加15 vol乙腈且接著添加0.52當量硫酸至化合物 1及加熱混合物至50℃。混合物接著在50℃下保持30 min且冷卻至室溫。所得產物(形式D)接著經過濾及乾燥。在替代方案中，形式A可在IPA或乙腈中於大於50℃下漿化至少2天以轉化為形式D。後一種方法不如使用游離鹼之第一程序穩定。額外方法描述於上文，例如表 5、 6、 9、 16及 20中。 形式 E
形式E可藉由添加24體積乙腈:水(2:1)至形式A及加熱混合物至50℃以溶解物質來製備。溶液接著冷卻至-20℃且靜置隔夜。接著過濾所得產物，形式E。參見例如表 8及 20。 形式 F
形式F可藉由在50℃下於真空中乾燥形式E來製備。參見例如表 20。額外方法描述於上文，例如表 8及 12中。 形式 G
形式G可藉由添加72體積乙腈:水(8:2)至形式A且接著加熱混合物至50℃以溶解固體來製備。溶液接著快速冷卻至-20℃且靜置隔夜以產生形式G。參見例如表 20。額外方法描述於上文，例如表 13中。 形式 H
形式H可藉由將形式A在50℃下溶解於40體積MeOH:EtOAc (1:1)中，且接著將溶液置於冰水中以急速冷卻溶液且接著將溶液冷卻至-20℃來製備。接著過濾所得沈澱(形式H)且以濕濾餅形式分析。參見例如表 20。再現圖案H產生非晶形樣固體，其不具有形式H之峰。額外方法描述於上文，例如表 13中。 形式 I
形式I為可能的溶劑合物，其可藉由添加15體積乙醇至化合物1及加熱混合物至45℃以獲得漿料來製備。接著添加含0.52當量硫酸之EtOAc且將混合物保持1小時，接著經2小時冷卻至室溫，保持1小時且過濾。產物(形式I)接著在50℃及真空下乾燥。參見例如表 16及 20。 形式 J
形式J可藉由在室溫下添加化合物1及6體積MeOAc:MeOH (1:1)而形成。接著添加0.52當量於水中稀釋至43重量%之硫酸。漿料接著加熱至60℃以溶解混合物，且溶液冷卻至室溫且過濾。獲得濕濾餅形式之形式J，其在乾燥後轉化為形式A。參見例如表 17。 化合物 1 之結晶游離鹼形式
化合物 1之結晶游離鹼形式可經由以下方法製備。
14.8 kg S-1及120 kg DMAc在N2保護下饋入圓底瓶中且將反應物在30℃下於N2保護下攪拌40 min，以獲得透明黃色溶液。添加7.5 kg CDI (1.02當量)且將反應物在30℃下於N2保護下攪拌2.5 h。在30℃下添加0.6 kg CDI (0.08當量)且將混合物在30℃下於N2保護下攪拌2小時。關於材料消耗再次測試反應物。11.0 kg (1.14當量)1-(環丙基甲基)哌嗪氯化物在30℃下饋入圓底瓶中且於N2保護下攪拌反應物6 h (澄清溶液)。經2小時逐滴添加7.5× H2O，形成一些固體且在30℃下攪拌反應物1 h。經2.5 h添加16.8× H2O且攪拌反應物2.5 h。添加3.8 kg (0.25 ×)NaOH (30% w/w，0.6當量)且在30℃下攪拌反應物3 h。過濾反應物且用H2O/DMAc=44 kg/15 kg沖洗濕濾餅。獲得23.35 kg濕濾餅(KF：4%)。樣品藉由添加10.0× DMAc再結晶且在70℃下攪拌1 h，澄清溶液；在70℃下經2 h添加4.7× H2O且在70℃下攪拌反應物2 h；經3 h逐滴添加12.8× H2O且在70℃下攪拌2 h；將反應物經5 h調節至30℃且在30℃下攪拌2 h；過濾反應物且用DMAc / H2O=15 kg / 29 kg及150 kg H2O沖洗濕濾餅。獲得19.2 kg濕濾餅。物質如下地再次再結晶。向濕濾餅中添加10.0× DMAc且在70℃下攪拌反應物1 h，澄清溶液。在70℃下逐滴添加16.4× H2O且在70℃下攪拌反應物2 h。將反應物經5.5 h調節至30℃且在30℃下攪拌2 h。反應物經離心且獲得21.75 kg濕濾餅。將物質在70℃下於真空中乾燥25 h。獲得16.55 kg化合物 1之結晶游離鹼形式。99.6%純度。 12. 水及模擬流體中之溶解度
在水中量測圖案A、B及D之溶解度。固體在流體中及37℃下漿化兩天。上清液經注射器過濾且用於HPLC分析。對於圖案A及D，重複溶解度量測且在1小時漿化之後獲取樣品。使用圖案A產生校準曲線。此未經分析校正且因此溶解度值係基於半硫酸鹽、倍半水合物鹽。
圖案B及D均在兩天漿化之後轉化為圖案A。圖案D亦在1小時漿化內在禁食狀態模擬胃液(FaSSGF)或水中轉化為圖案A。僅在禁食狀態模擬腸液(FaSSIF)中，圖案A及B在兩天漿化之後岐化為結晶游離鹼且顯示較低溶解度。然而，圖案D不在FaSSIF中歧化且替代地轉化為圖案D。三種圖案在水及模擬流體中之溶解度並非顯著不同。此可歸因於圖案B及D轉化為圖案A。量測之後的溶解度資料及所得XRPD圖報導於 表 21中。 表 21 - 在 模擬流體中於 37 ℃下之溶解度
圖案 溶解度，mg 固體 /mL 溶劑 圖案 漿化時間
水 A 2.69 A 2天
水 B 3.02 A 2天
水 D 2.71 A 2天
FaSSIF A 0.24 FB 2天
FaSSIF B 0.20 FB 2天
FaSSIF D 3.49 A 2天
FaSSGF A 6.80 固體不足以進行XRPD 2天
FaSSGF B 6.53 A 2天
FaSSGF D 5.94 A 2天
水 A 3.05 A 1 h
FaSSGF A 7.07 A 1 h
水 D 2.62 A 1 h
FaSSGF D 5.43 A 1 h
FB意謂化合物1之結晶游離鹼。 13. 競爭性漿化
四種不同溶劑用於競爭性漿化實驗。選擇四種溶劑系統用於在兩種不同溫度下之競爭性漿化。溶劑為丙酮、丙酮:水(9:1)、IPA及MeOH:水(95:5)且溫度為23℃及50℃。所有溶劑起初藉由在目標溫度下漿化圖案A約2小時飽和，接著移除攪拌棒且將小瓶保持於目標溫度下，允許固體沈降。接著將飽和上清液轉移至新的空小瓶中，該等小瓶已在熱板上加熱至目標溫度。接著將5-10 mg圖案A、B及D中之每一者添加至此等飽和溶液。固體混合物使用攪拌棒漿化且在2天漿化之後獲取第一樣品。在1週之後獲取第二樣品。圖案A在含有水之溶劑中穩定。圖案D在無水系統中，尤其在較高溫度下穩定。似乎當使用無水有機溶劑時，圖案D (其為無水固體)為最穩定固體。參見 表 22。 表 22
溶劑 初始圖案 XPRD 圖案 -2 天 XPRD 圖案 -1 週
RT 50 ℃ RT 50 ℃
丙酮 A + B + D A+D D A+D D
丙酮:水(9:1) A + B + D A A A A
IPA A + B + D D D D D
MeOH:水(95:5) A + B + D A 樣品不足以進行XRPD A ---
14. 穩定性研究  在以下三種條件下未在形式A之穩定性研究中觀測到降解：在40±2℃/75±5% RH下一個月，在25±2℃/60±5% RH下三個月，在30±2℃/65±5% RH下三個月，在40±2℃/75% RH下三個月，在25±2℃/60±5% RH下十二個月。 15. 例示性錠劑組合物     形式A已經由直接摻合調配物之直接壓錠或經由乾式造粒或濕式造粒方法調配為錠劑。可添加其他賦形劑，諸如黏結劑，及/或界面活性劑，及塗膜以幫助錠劑完整性、味覺掩蔽及美觀性。例示性錠劑組合物為如下：
組分 組分之 % w /w
形式A 11.70%
微晶纖維素NF 60.18%
甘露醇 23.12%
交聯羧甲纖維素鈉 3.00%
硬脂醯反丁烯二酸鈉 2.00%
總計% 100.00%
15. 表徵概述 i). 形式 A
形式A之XRPD係藉由 圖 1顯示且峰值清單展示於 表 23中。 表 23
角度，2-θ d間距(A°) 高度(計數) 相對強度
4.9 17.8305 40 0.28%
9.9 8.9545 9363 66.02%
11.0 8.02613 2418 17.05%
11.4 7.7313 4177 29.45%
11.7 7.56421 3209 22.63%
12.3 7.16163 635 4.48%
12.8 6.93632 2500 17.63%
13.6 6.51539 2286 16.12%
13.9 6.38771 1644 11.59%
14.2 6.23136 3520 24.82%
15.0 5.88897 5689 40.11%
15.3 5.78752 4085 28.80%
15.8 5.60806 12313 86.82%
17.1 5.17018 7400 52.18%
17.4 5.07818 2144 15.12%
17.7 4.99463 4146 29.23%
18.8 4.71113 2437 17.18%
19.1 4.63884 1177 8.30%
19.8 4.49007 3657 25.79%
21.3 4.17694 6577 46.38%
21.9 4.04794 6503 45.85%
22.6 3.92853 14182 100.00%
23.0 3.86945 1915 13.50%
23.2 3.82274 2764 19.49%
23.5 3.78695 4288 30.24%
23.8 3.73813 2177 15.35%
24.1 3.68699 1723 12.15%
24.5 3.63374 2387 16.83%
25.3 3.51767 3957 27.90%
25.6 3.47637 2258 15.92%
26.1 3.41137 1463 10.32%
27.1 3.28258 3975 28.03%
28.1 3.17265 2581 18.20%
29.8 3.00049 2969 20.93%
形式A之TGA顯示約4.5%重量損失直至180℃。參見 圖 2。根據卡爾費雪之含水量為約5.3%。在DSC熱分析圖中觀測到兩個熱事件，其中第一峰在159.9℃處且第二峰在199.1℃處。參見 圖 3。第一峰亦顯示峰肩。鹽形式A在25℃下之動態氣相吸附顯示固體自2%至95%相對濕度吸收約1.3%水分。參見 圖 4。DVS顯示在小於10%之濕度下之快速重量損失，其在吸附循環後為可逆的。40℃處獲取之DVS等溫線基本上與25℃處之DVS等溫線相同。XRPD在兩種溫度下之DVS之後保持不變。藉由在40℃下暴露於11%、48%及75%相對濕度2週，接著進行XRPD分析而對形式A進行濕度測試。XRPD在兩週測試之後保持不變。參見 圖 5。形式A之晶體學資料為如下： 經驗式：C 48H 6N 8O 13S3 分子量：1053.22 溫度：173(2) K 波長：1.54178 Å 晶體系統，空間群：單斜晶， C 2 / c單位晶胞尺寸： a= 3.0748(5) Å b=10.2638(4) Å c= 36.1371(12) Å α= 90 deg. β= 97.340(3) deg. γ= 90 deg. 體積：4809.8(3) Å 3 Z= 4 計算之密度：1.454 Mg/m 3吸收係數：2.046 mm - 1 F(000)：2224 晶體尺寸：0.171×0.156×0.061 mm 3資料集之θ範圍：2.47至72.03°. deg. 限制指數： -15 ≤ h ≤ 16 -12 ≤ k ≤ 12 -43 ≤ l ≤ 44 收集之反射/獨特：16676 / 4532 [R(int) = 0.0767]完整性：95.6% 精修方法：F 2之全矩陣最小二乘 資料/約束/參數：4532/0/336 F 2之擬合優度：1.096 ii). 形式 B
形式B之XRPD係藉由 圖 6顯示且峰值清單展示於 表 24中。 表 24
角度，2-θ d間距(A°) 高度(計數) 相對強度
7.0 12.57535 1083 8.57%
7.8 11.27583 1748 13.83%
9.9 8.89921 10912 86.36%
10.6 8.33283 3619 28.64%
11.7 7.55341 2313 18.31%
12.7 6.95632 7739 61.25%
13.1 6.7694 1609 12.73%
13.5 6.53423 2490 19.71%
13.9 6.38636 3216 25.45%
14.6 6.06413 3446 27.27%
14.9 5.94981 2751 21.77%
15.3 5.79313 2471 19.56%
15.7 5.62485 4393 34.77%
16.1 5.51086 1536 12.16%
16.9 5.2332 7462 59.06%
17.6 5.02985 2722 21.54%
19.3 4.60381 2787 22.06%
19.7 4.50087 2503 19.81%
20.7 4.29561 2454 19.42%
21.2 4.18049 1540 12.19%
22.0 4.03572 8193 64.84%
22.5 3.95619 12635 100.00%
23.3 3.81776 1530 12.11%
24.0 3.70488 985 7.80%
24.7 3.60111 2053 16.25%
25.1 3.54205 2015 15.95%
25.7 3.46451 521 4.12%
26.1 3.41725 1020 8.07%
27.2 3.27757 1417 11.21%
27.6 3.23088 3271 25.89%
28.4 3.1406 1887 14.93%
29.3 3.04578 1720 13.61%
29.8 2.99111 750 5.94%
形式B傾向於保持大量溶劑。然而，TGA資料不對應於有機溶劑之NMR資料，其可歸因於形式B之吸濕性質。參見例如 圖 7。形式B之DVS顯示固體在2%與95%相對濕度之間吸收約14%水分。 iv). 形式 D
形式D之XRPD係藉由 圖 9顯示且峰值清單展示於 表 26中。 表 26
角度，2-θ d間距(A°) 高度(計數) 相對強度
5.8 15.28058 4971 70.74%
10.0 8.87509 4389 62.46%
10.2 8.65751 6043 86.00%
11.3 7.82263 2566 36.52%
11.5 7.66971 749 10.66%
12.2 7.27684 3233 46.01%
13.6 6.51388 2448 34.84%
14.1 6.28225 1365 19.43%
14.7 6.01924 2881 41.00%
15.4 5.74733 250 3.56%
16.0 5.52579 1652 23.51%
17.3 5.13037 3250 46.25%
17.6 5.03792 3136 44.63%
19.3 4.59918 5083 72.34%
20.0 4.42807 1495 21.28%
20.8 4.26377 1928 27.44%
22.1 4.01598 1363 19.40%
22.9 3.88059 4961 70.60%
23.3 3.81849 7027 100.00%
23.6 3.76707 3176 45.20%
24.4 3.6518 1755 24.98%
25.2 3.52644 4136 58.86%
26.4 3.37296 1305 18.57%
27.4 3.25211 610 8.68%
28.3 3.15078 553 7.87%
29.6 3.01482 615 8.75%
形式D經測定為無水的，在239℃處具有熔融峰。參見例如 圖 9。進行圖案D之DVS且固體自2%至95%相對濕度吸收約2%水分。參見 圖 10。XRPD圖在DVS之後保持不變且在40℃下暴露於75%相對濕度一週亦不改變形式。 v). 形式 E
形式E之XRPD係藉由 圖 11顯示且峰值清單展示於 表 27中。 表 27
角度，2-θ d間距(A°) 高度(計數) 相對強度
4.6 19.33569 1738.68 42.25%
9.0 9.8034 4115.26 100.00%
9.9 8.90634 170.17 4.14%
11.0 8.05091 182.67 4.44%
13.5 6.56847 2221.93 53.99%
15.1 5.86939 909.83 22.11%
15.8 5.59154 280.55 6.82%
18.5 4.78855 309.99 7.53%
19.8 4.48316 260.12 6.32%
20.4 4.34963 461.71 11.22%
21.7 4.09107 862.85 20.97%
22.5 3.94718 1259.97 30.62%
28.1 3.1714 143.14 3.48%
vi). 形式 F
形式F之XRPD係藉由 圖 12展示且峰值清單展示於 表 28中。組合之TGA及DSC係藉由 圖 13顯示。 表 28
角度，2-θ d間距(A°) 高度(計數) 相對強度
5.0 17.63127 3501.15 68.88%
9.9 8.953 5083.17 100.00%
11.1 7.95783 175.54 3.45%
14.7 6.02129 1144.71 22.52%
16.5 5.3774 319.64 6.29%
19.6 4.52559 557.84 10.97%
21.6 4.11341 625.78 12.31%
22.8 3.89996 383.12 7.54%
24.4 3.64257 313.08 6.16%
vii). 形式 G
形式G之XRPD係藉由 圖 14顯示且峰值清單展示於 表 29中。組合之TGA及DSC係藉由 圖 15顯示。 表 29
角度，2-θ d間距(A°) 高度(計數) 相對強度
4.7 18.70556 1242.62 59.33%
9.4 9.36302 2094.33 100.00%
11.0 8.02324 393.11 18.77%
13.3 6.67148 95.37 4.55%
14.1 6.2664 1061.57 50.69%
15.9 5.58681 287.25 13.72%
16.2 5.46454 135.26 6.46%
18.9 4.69155 302.27 14.43%
21.1 4.20095 210.62 10.06%
21.2 4.17959 623.95 29.79%
22.8 3.89083 287.75 13.74%
23.8 3.74261 339.41 16.21%
26.7 3.3332 36.96 1.76%
28.5 3.12882 200.93 9.59%
viii). 形式 H
形式H之XRPD係藉由 圖 16顯示且峰值清單展示於 表 30中。 表 30
角度，2-θ d間距(A°) 高度(計數) 相對強度
4.6 19.00577 2892.58 100.00%
5.4 16.21955 656.39 22.69%
7.4 11.92606 1637.2 56.60%
9.2 9.58199 2031.32 70.23%
10.3 8.60629 244.93 8.47%
11.1 7.96834 1041.86 36.02%
13.5 6.53326 1064.3 36.79%
13.8 6.3908 495.71 17.14%
14.9 5.92137 1640.91 56.73%
16.9 5.24557 238.8 8.26%
17.6 5.03079 330.16 11.41%
18.4 4.82818 764.47 26.43%
19.5 4.55426 201.62 6.97%
20.7 4.28199 421.57 14.57%
22.3 3.98173 914.58 31.62%
22.9 3.88793 641.59 22.18%
23.4 3.80422 445.25 15.39%
24.1 3.68517 219.37 7.58%
24.8 3.58024 766.52 26.50%
26.5 3.36223 292.29 10.10%
27.2 3.27175 129.95 4.49%
29.5 3.0237 272.48 9.42%
ix). 形式 I
形式I之XRPD係藉由 圖 17顯示且峰值清單展示於 表 31中。組合之TGA及DSC係藉由 圖 18顯示。NMR分析顯示存在約4.6% EtOH，指示可能的溶劑合物。 表 31
角度，2-θ d間距(A°) 高度(計數) 相對強度
6.7 13.16055 3581.49 96.93%
7.7 11.44901 740.16 20.03%
9.5 9.319 1710.55 46.29%
9.9 8.97128 3519.19 95.24%
10.5 8.45555 1052.24 28.48%
11.6 7.61244 855.25 23.15%
12.6 7.01279 1799.14 48.69%
13.4 6.60237 1385.62 37.50%
13.8 6.43395 850.03 23.00%
14.3 6.19667 516.23 13.97%
15.2 5.8277 722.04 19.54%
15.8 5.59406 1926.11 52.13%
16.8 5.26642 1316.92 35.64%
17.2 5.1627 745.55 20.18%
19.0 4.65907 716.28 19.39%
19.7 4.50851 3694.98 100.00%
20.5 4.32796 526.56 14.25%
20.9 4.25526 540.88 14.64%
21.9 4.05301 2830.08 76.59%
22.3 3.97817 2205.69 59.69%
23.9 3.71963 1226.09 33.18%
24.6 3.61051 976.08 26.42%
25.5 3.48946 531.17 14.38%
26.0 3.42073 440.36 11.92%
27.5 3.24167 511.68 13.85%
28.3 3.15203 747.77 20.24%
29.3 3.0427 455.27 12.32%
x). 形式 J
形式J之XRPD係藉由 圖 19顯示且峰值清單展示於 表 32中。 表 32
角度，2-θ d間距(A°) 高度(計數) 相對強度
12.4 7.14209 722.37 100.00%
13.2 6.69075 254.54 35.24%
14.6 6.06522 348.12 48.19%
15.7 5.64077 168.89 23.38%
20.4 4.34313 213.59 29.57%
22.0 4.0429 79.01 10.94%
23.3 3.8076 179.4 24.83%
23.7 3.74601 213.97 29.62%
28.0 3.18475 87.25 12.08%
xi). 化合物 1 之結晶游離鹼
化合物1之結晶游離鹼形式之XRPD係藉由 圖 25顯示且峰值清單展示於 表 33中。 表 33
角度，2-θ d間距(A°) 相對強度(%)
6.9 12.8 46.1
10.6 8.4 1.9
12.1 7.3 0.8
13.5 6.5 100
14.3 6.2 2.2
15.7 5.6 10.3
15.9 5.6 10.1
17.3 5.1 5.9
17.9 4.9 2.9
19.8 4.5 32.6
20.3 4.4 44.0
21.0 4.2 3.0
21.7 4.1 2.8
22.2 4.0 1.0
23.6 3.8 13.5
24.0 3.7 7.8
24.8 3.6 10.6
25.7 3.5 23.1
26.0 3.4 2.2
26.7 3.3 1.7
27.1 3.3 2.9
27.6 3.2 0.6
28.4 3.1 4.0
29.7 3.0 9.7
30.6 2.9 3.3
31.0 2.9 0.7
31.5 2.8 1.4
32.1 2.8 5.8
33.9 2.6 2.2
35.6 2.5 0.4
36.3 2.5 0.7
37.1 2.4 0.8
39.0 2.3 0.6
39.5 2.3 2.9
藥物動力學評估
方法：
使用微粉化及未微粉化結晶型A及化合物1之結晶游離鹼之懸浮液中之單次劑量係以200 mg/kg投與至雄性史泊格-多利(Sprague-Dawley)大鼠。在K 2EDTA存在下收集血液樣品，且離心以獲得血漿。接著藉由LC/MS關於此等化合物對血漿進行分析。
製備用於大鼠之懸浮給藥的測試品：
對所有參與給藥時程之動物稱重且指定編號。所有懸浮調配物在使用之前新製。各溶液在0.5%甲基-纖維素水溶液中以40 mg/mL製備。管經渦旋2 min且音波處理30 min，以獲得白色均質懸浮液。
所有動物(n=6/組)以5 mL/kg之體積經口給藥。在給藥之後，在各指示的時間點下對各大鼠進行放血。自尾靜脈收集血液樣品。血液等分試樣(150 µl)收集於塗佈有K 2EDTA之管中，輕輕地混合，接著保持於冰上且在4℃下於2,000 g下離心5分鐘(在15分鐘收集內)。血漿層經收集且在-70℃下維持冷凍直至進一步處理。
生物分析方法
使用HPLC/三重四極質譜分析(HPLC-MS)進行生物分析定量。計算且報導血漿濃度及T1/2。
血漿分析：
DMSO:甲醇(20:80，v/v)中之1 mg/mL標準溶液經稀釋50倍且隨後在50%甲醇水中連續稀釋。將連續稀釋液之等分試樣(10 µl)與190 μl對照血漿混合用作標準曲線。血漿樣品(50 µl)及標準樣品(非稀釋)用含有40 ng/ml地塞米松作為內標之冰冷乙腈稀釋10×。乙腈沈澱樣品及標準品在5 g下渦旋2 min (IKA vortex)，接著在5000 g下離心10 min。
對於10倍稀釋標準樣品：5 µL樣品之等分試樣與45 µL對照血漿一起添加以獲得稀釋樣品。若需要50倍稀釋標準樣品，則10 µL10倍稀釋樣品之等分試樣與40 µL空白血漿一起添加以獲得最終稀釋樣品。接著，稀釋樣品之萃取程序與非稀釋樣品之萃取程序相同。
如下文所描述，將樣品及標準品(10 µl)注入LC-MS系統中。以mg/mL報導給藥溶液之濃度。
LC - MS 分析：
LC：7.5 µl之各樣品及標準品以0.6 mL/min (根據UPLC)注射至Waters BEH C18 (2.1×50 mm，1.7 µm，維持於60℃下)上。以10%乙腈平衡管柱。用95%乙腈之梯度溶離化合物。所有移動相含有0.025% (v/v)甲酸與1 mM乙酸銨。 表 34 .層析溶離條件。
時間(min) 移動相B (%)
  初始 10
  0.20 10
  0.60 95
  1.10 95
  1.15 10
  1.50 10
MS：管柱n溶離劑係藉由電噴霧電離至三重四極質譜儀系統中來進行分析。分別分析溶離劑組合物對內標及分析物之離子對特性。
藥物動力學分析
將實驗樣品與標準曲線樣品相比以確定化合物濃度。報導各時間點之平均化合物濃度(以ng/mL±標準差計)。偵測之極限(LLOQ)被報導為最低標準曲線樣品，表明小於20%之標稱濃度之偏差。在Phoenix Winnonlin中執行PK分析；確定C max為在給定時間點觀測的最大平均濃度，報導t 0至t 最後小時之曲線下面積(AUC)。
如 圖 22及 表 35中所示，結晶型A (微粉化)及結晶型A (未微粉化)展示為相比於化合物 1之結晶游離鹼更可溶於磷酸鹽緩衝液pH 7.4中。當在以懸浮液形式經口給藥至禁食雄性史泊格多利大鼠之後將結晶型A (微粉化及未微粉化)之血漿濃度-時間概況及藥物動力學參數相比於化合物1之結晶游離鹼時，AUC及Cmax顯著不同。微粉化及未微粉化結晶型A分別顯示相比於化合物 1之結晶游離鹼高3.8及2.7倍之AUC。類似地，微粉化及未微粉化結晶型A分別顯示相比於化合物1之結晶游離鹼高2及1.6倍之Cmax。相比之下，在結晶型A之微粉化與未微粉化形式之間不可觀測到顯著差異。 表 35：用於藥物動力學研究之化合物的表徵概述
材料 PSD
結晶型A (微粉化) D90: 10 / D50= 4.6 / D10 = 1
結晶型A (未微粉化) D90= 71 / D50= 32.6 / D10 =11.55
化合物 1之結晶游離鹼 D90= 521 / D50=206/ D10 =32
表 36：在經口投與至史泊格多利大鼠之後的藥物動力學參數
化合物形式 結晶型A (微粉化) 結晶型A (未微粉化) 化合物 1之結晶游離鹼
口服劑量(mg/kg)* 200 200 200
Cmax (ng/mL) 36700 ± 6800 29800 ± 5300 17900 ± 3600
AUC 0-最後(ng/h/mL) 478000 ± 87900 355900 ± 82900 124800 ± 85800
*劑量顯示相對於化合物1之游離鹼形式之當量。
儘管已描述多個實施例，但本發明之範疇應由所附申請專利範圍定義，且不由已藉助於實例表示之特定實施例定義。貫穿本申請案所引用之所有參考文獻(包括文獻參考、頒予之專利、公開之專利申請案及同在申請中之專利申請案)之全部內容在此以全文引用之方式明確地併入本文中。除非另外定義，否則本文所用之所有技術術語及科學術語與一般熟悉此項技術者通常已知之含義一致。
圖 1描繪結晶半硫酸鹽形式A之X射線粉末繞射圖(XRPD)。
圖 2描繪結晶半硫酸鹽形式A之組合之熱解重量分析(TGA)熱分析圖及差示掃描熱量測定(DSC)熱分析圖。
圖 3描繪結晶半硫酸鹽形式A之差示掃描熱量測定(DSC)熱分析圖。
圖 4描繪結晶半硫酸鹽形式A之動態氣相吸附(DVS)等溫線。
圖 5 ( i )描繪結晶半硫酸鹽形式A及在暴露於11%、48%及75%相對濕度及40℃兩週之後的X射線粉末繞射圖(XRPD)覆蓋圖。在此三種濕度條件下測試兩週之後，XRPD保持不變。圖5(ii)描繪結晶半硫酸鹽形式A及在室溫及50℃下暴露於五氧化磷(P 2O 5)顆粒一週，以及在小瓶中暴露於環境溫度24小時之後的XRPD覆蓋圖。觀測到在一週之後，在室溫下之XRPD圖無變化，但一些峰在50℃下略微移動。然而，此等峰在暴露於環境24小時之後移動返回原始位置，指示此等變化為可逆的。
圖 6描繪在MeOH:EtOH (3:7)中獲得之結晶半硫酸鹽形式B之X射線粉末繞射圖(XRPD)。
圖 7 ( i )描繪結晶半硫酸鹽形式B之組合之熱解重量分析(TGA)熱分析圖及差示掃描熱量測定(DSC)熱分析圖。 圖 7 ( ii )描繪動態氣相吸附(DVS)之前及之後的結晶半硫酸鹽形式B之XRPD。在DVS之後，形式B轉化為不同形式K。
圖 8描繪結晶半硫酸鹽形式D之X射線粉末繞射圖(XRPD)。
圖 9描繪結晶半硫酸鹽形式D之熱解重量分析(TGA)熱分析圖及差示掃描熱量測定(DSC)熱分析圖。
圖 10描繪動態氣相吸附(DVS)之前及之後的結晶半硫酸鹽形式D之X射線粉末繞射圖(XRPD)。
圖 11描繪結晶半硫酸鹽形式E之X射線粉末繞射圖(XRPD)。
圖 12描繪結晶半硫酸鹽形式F之X射線粉末繞射圖(XRPD)。
圖 13描繪結晶半硫酸鹽形式F之熱解重量分析(TGA)熱分析圖及差示掃描熱量測定(DSC)熱分析圖。
圖 14描繪結晶半硫酸鹽形式G之X射線粉末繞射圖(XRPD)。
圖 15描繪結晶半硫酸鹽形式G之熱解重量分析(TGA)熱分析圖及差示掃描熱量測定(DSC)熱分析圖。
圖 16描繪結晶半硫酸鹽形式H之X射線粉末繞射圖(XRPD)。
圖 17描繪結晶半硫酸鹽形式I之X射線粉末繞射圖(XRPD)。
圖 18描繪結晶半硫酸鹽形式I之熱解重量分析(TGA)熱分析圖及差示掃描熱量測定(DSC)熱分析圖。
圖 19描繪結晶半硫酸鹽形式J之X射線粉末繞射圖(XRPD)。
圖 20描繪化合物 1之非晶形半硫酸鹽形式之X射線粉末繞射圖(XRPD)。
圖 21描繪在50℃之真空烘箱中乾燥隔夜之化合物 1之非晶形半硫酸鹽之熱解重量分析(TGA)熱分析圖及差示掃描熱量測定(DSC)熱分析圖。
圖 22描繪SD大鼠(N=6)中200 mg/kg之不同形式之PO劑量之後的結晶型A之平均血漿濃度-時間概況。結晶型A之劑量係基於相對於200 mg/kg化合物1之當量計算。
圖 23描繪化合物 1之非晶形游離鹼形式之X射線粉末繞射圖(XRPD)。
圖 24描繪化合物 1之非晶形游離鹼形式之TGA及DSC熱分析圖。
圖 25描繪化合物 1之結晶游離鹼形式之X射線粉末繞射圖(XRPD)。

Claims (18)

  1. 一種具有下式之化合物之結晶型， ， 其中該結晶型為： 藉由選自9.9°、10.6°、12.7°、15.7°、16.9°、22.0°及22.5°之2Θ角(±0.2°)處之至少三個、至少四個、至少五個或至少六個X射線粉末繞射峰表徵之結晶型B；或 藉由2Θ角(±0.2°)6.9°、10.4°及12.0°處之X射線粉末繞射峰表徵之結晶型C；或 藉由選自5.8°、10.0°、10.2°、19.3°、22.9°、23.3°及25.2°之2Θ角(±0.2°)處之至少三個、至少四個、至少五個或至少六個X射線粉末繞射峰表徵之結晶型D；或 藉由選自4.6°、9.0°、13.5°及22.5°之2Θ角(±0.2°)處之X射線粉末繞射峰表徵之結晶型E；或 藉由選自5.0°、9.9°及14.7°之2Θ角(±0.2°)處之X射線粉末繞射峰表徵之結晶型F；或 藉由選自4.7°、9.4°及14.1°之2Θ角(±0.2°)處之X射線粉末繞射峰表徵之結晶型G；或 藉由選自4.6°、7.4°、9.2°、11.1°、13.5°、14.9°及22.3°之2Θ角(±0.2°)處之至少三個、至少四個、至少五個或至少六個X射線粉末繞射峰表徵之結晶型H；或 藉由2Θ角(±0.2°)6.7°、9.5°及19.7°處之X射線粉末繞射峰表徵之結晶型I；或 藉由選自12.4°、13.2°、14.6°、20.4°及23.7°之2Θ角(±0.2°)處之X射線粉末繞射峰表徵之結晶型J。
  2. 如請求項1之結晶型，其係結晶型I，其係藉由2Θ角(±0.2°)6.7°、9.5°及19.7°處之X射線粉末繞射峰；及選自9.9°、12.6°、15.8°、21.9°及22.3°之2Θ角(±0.2°)處之至少一個、至少二個或至少三個額外X射線粉末繞射峰表徵。
  3. 一種具有下式之化合物之結晶游離鹼， 。
  4. 如請求項3之結晶游離鹼，其中該結晶型係藉由選自6.9°、13.5°、19.8°及20.3°之2Θ角(±0.2°)處之X射線粉末繞射峰表徵。
  5. 如請求項1至4中任一項之結晶型或結晶游離鹼，其中該化合物為按重量計之至少60%單結晶型、至少70%單結晶型、至少80%單結晶型、至少90%單結晶型、至少95%單結晶型或至少99%單結晶型。
  6. 如請求項1至4中任一項之結晶型或結晶游離鹼，其中該化合物形式基本上不含該化合物之非晶型。
  7. 一種具有下式之化合物之半硫酸鹽的非晶型， 。
  8. 如請求項7之非晶型，其中該化合物基本上不含該化合物之結晶型。
  9. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至6中任一項之結晶型或結晶游離鹼、或如請求項7或8之非晶型；及醫藥學上可接受之載劑。
  10. 如請求項9之醫藥組合物，其中該醫藥組合物係錠劑。
  11. 如請求項9或10之醫藥組合物，其中該載劑選自微晶纖維素、甘露醇、交聯羧甲纖維素鈉及硬脂醯反丁烯二酸鈉中之一或多者。
  12. 如請求項11之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含約5.7至約5.9 mg、約23.4至約23.6 mg或約58.7至約58.9 mg結晶型B、C、D、E、F、G、H、I、J或結晶游離鹼；62% w/w (±2%)微晶纖維素；23% w/w (±2%)甘露醇、3% w/w (±2%)交聯羧甲纖維素鈉，及2% w/w (±2%)硬脂醯反丁烯二酸鈉。
  13. 一種如請求項1至6中任一項之結晶型或結晶游離鹼、如請求項7或8之非晶型、或如請求項9至12中任一項之醫藥組合物之用途，其係用以製備用於治療丙酮酸鹽激酶缺乏症(PKD)之藥物。
  14. 一種如請求項1至6中任一項之結晶型或結晶游離鹼、如請求項7或8之非晶型、或如請求項9至12中任一項之醫藥組合物之用途，其係用以製備用於治療鐮狀細胞疾病(SCD)之藥物。
  15. 一種如請求項1至6中任一項之結晶型或結晶游離鹼、如請求項7或8之非晶型、或如請求項9至12中任一項之醫藥組合物之用途，其係用以製備用於治療地中海貧血症(諸如α-地中海貧血症、β-地中海貧血症、非輸血依賴性地中海貧血症及輸血依賴性地中海貧血症)之藥物。
  16. 一種如請求項1至6中任一項之結晶型或結晶游離鹼、如請求項7或8之非晶型、或如請求項9至12中任一項之醫藥組合物之用途，其係用以製備用於治療溶血性貧血之藥物。
  17. 一種如請求項1至6中任一項之結晶型或結晶游離鹼、如請求項7或8之非晶型、或如請求項9至12中任一項之醫藥組合物之用途，其係用以製備用於治療選自遺傳性球形紅血球症、遺傳性橢圓形紅血球增多症、無β脂蛋白血症、巴-科症候群及陣發性夜間血紅素尿症之疾病之藥物。
  18. 一種如請求項1至6中任一項之結晶型或結晶游離鹼、如請求項7或8之非晶型、或如請求項9至12中任一項之醫藥組合物之用途，其係用以製備用於增加受試者之血紅素量之藥物。
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