TW202334085A - 四氫咔唑類化合物、其藥物組成物及用途 - Google Patents
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Abstract
本發明涉及一種四氫咔唑類化合物、其藥物組成物及用途，所述四氫咔唑類化合物為式(I)所示化合物、其光學異構體或其藥學上可接受的鹽。所提供的四氫咔唑類化合物一方面能夠透過標靶OCT4和JAKOCT4和JAK在轉錄和功能位準共同抑制OCT4以促進CSC分化，另一方面透過抑制JAK/STAT途徑阻抑分化的腫瘤細胞。本發明提供的化合物在腫瘤細胞內作用於OCT4和JAK/STAT兩個藥物標的，透過雙標靶作用以協同抑制腫瘤增殖與轉移，可用於製備治療和/或預防癌症的藥物。
Description
本發明涉及醫藥技術領域，具體涉及一種四氫咔唑類化合物、其藥物組成物及用途。
腫瘤幹細胞(Cancer Stem Cell，CSC)是腫瘤細胞的一個小亞群，只占腫瘤組織的一小部分(通常為1%或更少)，其具有幾個和正常幹細胞相似的關鍵特徵。第一個特徵是自我更新，CSC始終保持其自身可不斷進行細胞分裂、並分化成多種類型腫瘤細胞的能力；第二個特徵是可進行不對稱分裂，即在分裂產生一個與母代CSC具有相同特性的子代CSC的同時，還產生一個分化的子代細胞，這些子代細胞快速增殖以佔據大部分的腫瘤體積，最終CSC及其分化的子代細胞一起構成具有自我更新和快速增殖能力的腫瘤組織(Clevers H. The cancer stem cell: premises, promises and challenges. Nat Med 011,17:313 -319)。這意味著CSC對腫瘤長期生存的貢獻遠大於其子代分化的腫瘤細胞。
近年來，成體幹細胞(Adult Stem Cell，ASC)和CSC之間的轉化也受到了廣泛關注。正常ASC的突變使其自我更新失調，誘發細胞向CSC轉化。這些突變後的CSC具有更強的增殖能力、抗凋亡能力和免疫逃脫能力等典型的惡性腫瘤特徵，是腫瘤抗藥復發的重要原因。
CSC被報導具有廣泛的轉移潛能，可再生腫瘤並形成播散性轉移瘤(Wang YJ, Herlyn M. The emerging roles of OCT4 in tumor-initiating cells. Am J Physiol Cell Physiol 2015, 309:C709-718)。目前，幾乎所有的藥物治療和放射治療手段都僅能殺死或抑制快速增殖的分化腫瘤細胞，而無法有效清除或抑制CSC。由於CSC和分化腫瘤細胞之間在特定條件下可以相互轉化，因而只有同時標靶抑制或殺滅CSC和分化腫瘤細胞的聯合治療、徹底阻斷兩者間的雙向轉化才有可能根除腫瘤。
迄今尚無特異性標靶CSC的藥物上市，一系列能促進CSC分化或抑制其增殖的候選藥物(如Notch，Wnt抑制劑)正在臨床試驗的各個階段(Maucort C et al. Differentiation of cancer stem cells by using synthetic small molecules: toward new therapeutic strategies against therapy resistance. ChemMedChem. 2021, 16:14-29)。CSC對傳統的放療、化療、分子標靶治療藥物具有抗藥性，使得特異性標靶CSC成為腫瘤治療和抗腫瘤抗藥研究的重要策略。
核心幹性轉錄因子OCT4是POU轉錄因子家族中的一員，其編碼基因POU5F1具有多個轉錄起始位點，可轉錄不同的mRNA亞型，從而翻譯成多種OCT4亞型蛋白。OCT4A(通常簡稱為OCT4)作為一個經典的轉錄因子，其POU結構域能特異性辨識並結合到眾多標的基因啟動子區的octamer基序(ATGC(A/T)AAT)上。OCT4蛋白透過與SOX2等互作蛋白的協作調控數百個下游標的基因的轉錄，這些標的基因通常可分為兩大類：一類是由OCT4/SOX2正向活化其轉錄的幹性因子如NANOG基因，另一類是由OCT4/SOX2負向抑制其轉錄的各個胚層分化的特異性基因。因此，OCT4/SOX2透過同時促進幹性基因表現和關閉胚層基因表現來維持多能幹細胞(Pluripotent Stem Cell，PSC)的自我更新和多能性，處於PSC穩態調控網絡的中心位置(Jerabek S et al. OCT4: dynamic DNA binding pioneers stem cell pluripotency. Biochim Biophys Acta 2014, 1839:138-154)。
OCT4的表現在正常的分化組織中處於關閉狀態，但在肝癌、肺癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌、子宮頸癌、卵巢癌、頭頸部腫瘤等多種固態腫瘤組織及其細胞株中均有不同程度的少量表現。並且在一些生長因子和缺氧條件的刺激下，其表現會顯著向上調控，這進一步暗示了這些細胞中OCT4表現的可塑性。OCT4在腫瘤組織和腫瘤細胞中的表現呈現異質性：相對於大部分分化的腫瘤細胞，OCT4主要表現在一小部分CSC中，因而近年來逐漸被認為是CSC的一種生物標誌物(Wang YJ, Herlyn M. The emerging roles of OCT4 in tumor-initiating cells. Am J Physiol Cell Physiol 2015, 309:C709-718)。
申請人實驗室的研究表明，在肝癌和子宮頸癌等腫瘤細胞中用CRISPR/Cas9剔除OCT4基因後，會顯著抑制CSC的增殖和轉移，促進其分化和凋亡，從而證實OCT4是一個抗腫瘤細胞尤其是抗CSC的潛在藥物標的(Zhou Y et al. Endogenous authentic OCT4A proteins directly regulate FOS/AP-1 transcription in somatic cancer cells. Cell Death Dis. 2018, 9:585；Ye C et al. Multiple novel hepatocellular carcinoma signature genes are commonly controlled by the master pluripotency factor OCT4. Cell Oncol (Dordr). 2020 , 43:279-295)。儘管OCT4在CSC的自我更新和存活、腫瘤轉移、腫瘤抗藥等過程中均發揮著關鍵的作用，但是能夠特異性標靶抑制OCT4的小分子化合物幾乎未見報導。
已知維生素A酸(retinoic acid)等化合物可透過抑制OCT4基因轉錄而促進PSC分化，但這類化合物有多個作用標的和機制，並非特異性標靶抑制OCT4。迄今報導的唯一一個能特異性標靶作用於OCT4蛋白的小分子化合物KRIBB53，其透過促進OCT4蛋白的泛素化降解而向下調控細胞內OCT4蛋白的位準，但具體的作用位點和機制仍不清楚。而且，KRIBB53對NCCIT和TERA1兩種PSC增殖抑制的IC
50為10-20μM，藥效較弱(Jung J et al. KRIBB53 binds to OCT4 and enhances its degradation through the proteasome, causing apoptotic cell death of OCT4-positive testicular germ cell tumors. Carcinogenesis. 2018, 39:838-849)。
此外，由於OCT4在腫瘤細胞中的平均表現量較低、藥物作用效果有限、腫瘤信號途徑具有負反饋代償機制等原因，單獨標靶OCT4的表現和轉錄因子功能難以完全抑制OCT4在腫瘤細胞中的作用。在OCT4的調控途徑中，JAK/STAT途徑不僅可以直接調控OCT4和NANOG的轉錄以維持CSC的多功能性，還因其在多種腫瘤中高度活化、參與腫瘤細胞的惡性轉化，使其成為重要的分化腫瘤細胞的治療標的。而目前臨床上常用的針對JAK/STAT途徑的分子標靶藥物主要用於治療自體免疫性疾病和骨髓纖維化，其標靶治療腫瘤的效果還有待確定。因此，開發具有腫瘤抑制效果的JAK/STAT抑制劑具有良好的應用前景。
鑒於以上所述現有技術的全部或部分不足，本發明提供一種四氫咔唑類化合物、其藥物組成物及用途，所提供的四氫咔唑類化合物一方面能夠透過標靶OCT4和JAK在轉錄和功能位準共同抑制OCT4以促進CSC分化，另一方面透過抑制JAK/STAT途徑阻抑分化的腫瘤細胞。本發明提供的化合物在腫瘤細胞內作用於OCT4和JAK/STAT兩個藥物標的，透過雙標靶作用以協同抑制腫瘤增殖與轉移，可用於製備治療和/或預防癌症的藥物。
在本發明的第一方面，提供了一種如式(I)所示的化合物、其光學異構體或其藥學上可接受的鹽：
(I)
其中，
為單鍵或雙鍵；
R
2為未被取代或被一個或多個R
c取代的選自下組的基團：苯基、5-7元雜芳基、8-12元稠合雜芳基；
M
1、M
2、M
3、M
4各自獨立選自下組：CH、CD、N；並且，當M
1、M
2、M
3或M
4為CH時，所述的CH上的氫原子可以被R
a任意取代；
M
5選自下組：CH
2、CHD、CD
2、NH、S、S(=O)、S(=O)
2、S(=O)(=NH)；並且，當M
5為CH
2或NH時，所述的CH
2或NH上的氫原子可以被R
b任意取代；
所述的R
a選自下組：氫、氘、鹵素、羥基、羧基、氨基、氰基、磺醯基、C(O)NH
2、C
1-5烷基、C
2-5烯基、C
2-5炔基、C
1-5烷氧基、C
1-5鹵代烷基、C
2-5鹵代烯基、C
2-5鹵代炔基、C
1-5鹵代烷氧基、C
2-5酯基、C
1-5羰基、C(O)NH(C
1-5烷基)、C
3-8飽和或部分不飽和碳環基、3-10元飽和或部分不飽和雜環基、C
6-10芳基、5-12元雜芳基；並且，所述的烷基、烯基、炔基、烷氧基、鹵代烷基、鹵代烯基、鹵代炔基、鹵代烷氧基、酯基、羰基、碳環基、雜環基、芳基、雜芳基各自獨立任選地被一個或多個選自下組的取代基取代：鹵素、氘、羥基、羧基、氨基、硝基、氰基、磺醯基、C
1-3烷基、C
1-3胺基；
所述的R
b選自下組：氫、氘、鹵素、羥基、羧基、氰基、磺醯基、C
1-5烷基、C
2-5烯基、C
2-5炔基、C
1-5烷氧基、C
1-5鹵代烷基、C
2-5鹵代烯基、C
2-5鹵代炔基、C
1-5鹵代烷氧基、C
2-5酯基、C
1-5羰基、C
3-8飽和或部分不飽和碳環基、3-10元飽和或部分不飽和雜環基、C
6-10芳基、5-12元雜芳基；並且，所述的烷基、烯基、炔基、烷氧基、鹵代烷基、鹵代烯基、鹵代炔基、鹵代烷氧基、酯基、羰基、碳環基、雜環基、芳基、雜芳基各自獨立任選地被一個或多個選自下組的取代基取代：鹵素、氘、羥基、羧基、硝基、氰基、磺醯基、C
1-3烷基、C
1-3胺基；
所述的R
c選自下組：氫、氘、鹵素、羥基、羧基、氨基、硝基、氰基、磺醯基、C
1-5烷基、C
2-5烯基、C
2-5炔基、C
1-5烷氧基、C
1-5鹵代烷基、C
2-5鹵代烯基、C
2-5鹵代炔基、C
1-5鹵代烷氧基、C
1-5胺基、C
2-5酯基、C
1-5羰基、C
3-8飽和或部分不飽和碳環基、3-10元飽和或部分不飽和雜環基、C
6-10芳基、5-12元雜芳基；並且，所述的烷基、烯基、炔基、烷氧基、鹵代烷基、鹵代烯基、鹵代炔基、鹵代烷氧基、胺基、酯基、羰基、碳環基、雜環基、芳基、雜芳基各自獨立任選地被一個或多個選自下組的取代基取代：鹵素、氘、羥基、羧基、氨基、硝基、氰基、磺醯基、C
1-3烷基；
n為0、1、2或3；
x為0、1、2或3；
y為0、1或2。
較佳地，所述的化合物不包括選自下組的化合物：
、
、
、
、
、
、
。
在部分實施方式中，所述的化合物具有如式(II)或式(III)所示的結構：
(II) (III)
其中，R
2、M
1、M
5、R
a、R
b、n、x、y的定義如請求項1中所述。
在另一優選例中，所述的化合物具有選自下組的結構：
。
在另一優選例中，所述的化合物具有選自下組的結構：
。
在部分實施方式中，所述的R
2為未被取代或被一個或多個R
c取代的苯基，或未被取代或被一個或多個R
c取代的5-10元雜芳基；
所述的R
c選自下組：氫、鹵素、羥基、羧基、氨基、硝基、氰基、磺醯基、C
1-5烷基、C
2-5烯基、C
2-5炔基、C
1-5烷氧基、C
1-5鹵代烷基、C
2-5鹵代烯基、C
2-5鹵代炔基、C
1-5鹵代烷氧基、C
1-5胺基、C
2-5酯基。
在另一優選例中，所述的R
2選自下組：苯基、
、
、
、
。
在部分實施方式中，所述的R
b選自下組：氫、鹵素、羥基、羧基、氰基、磺醯基、C
1-4烷基、C
1-4烷氧基、C
1-4鹵代烷基、C
1-4鹵代烷氧基、C
2-4酯基、C
1-4羰基；並且，所述的烷基、烷氧基、鹵代烷基、鹵代烷氧基、酯基、羰基各自獨立任選地被一個或多個選自下組的取代基取代：鹵素、羥基、羧基、硝基、氰基、磺醯基、C
1-3烷基、C
1-3胺基。
在部分實施方式中，所述的R
a選自下組：氫、鹵素、羥基、羧基、氰基、C
1-4烷基、C
2-4烯基、C
2-4炔基、C
1-4烷氧基、C
2-4酯基、C
1-4羰基、3-8元飽和或部分不飽和雜環基、C
6-10芳基、5-12元雜芳基；並且，所述的烷基、烯基、炔基、烷氧基、酯基、羰基、雜環基、芳基、雜芳基各自獨立任選地被一個或多個選自下組的取代基取代：鹵素、羥基、羧基、氨基、硝基、氰基、磺醯基、C
1-3烷基、C
1-3胺基。
在本發明的第二方面，提供了一種式(IA)所示化合物、其光學異構體或其藥學上可接受的鹽：
(IA)
其中，
R
1為羥基且與1位碳原子以單鍵相連，或者，R
1為氧原子或-N(CH
2)
nOH且與1位碳原子以雙鍵相連，其中，n為1或2；
2位碳原子與3位碳原子之間透過單鍵或雙鍵相連；R
2選自無取代或取代的單環基或單雜環基、無取代或取代的稠環基或稠雜環基中的任一種；
X、Y、Z各自獨立地選自氫、鹵素、羥基、羧基、氨基、硝基、氰基、磺醯基、C
1~5烷基、C
1~5烷氧基、C
1~5鹵代烷基、C
1~5鹵代烷氧基中的任一種。
在部分實施方式中，式Ⅰ所示化合物中，R
1為氧原子，且與1位碳原子以碳氧雙鍵相連；2位碳原子與3位碳原子之間透過碳碳雙鍵相連，包括如下式(IIA)所示化合物：
(IIA)
式Ⅱ中：
R
2選自無取代或取代的單環基或單雜環基、無取代或取代的稠環基或稠雜環基中的任一種；所述單環基、單雜環基、稠環基或稠雜環基上的取代基選自鹵素、羥基、羧基、氨基、硝基、氰基、磺醯基、C
1~5烷基、C
1~5烷氧基、C
1~5鹵代烷基、C
1~5鹵代烷氧基中的一種或幾種。
在部分實施方式中，式Ⅱ所示化合物中，R
2為苯環，且苯環上至少一個氫原子被羥基取代。
在部分實施方式中，所述的化合物選自下組：
。
在本發明的第二方面，提供了一種藥物組成物，包括(1)如本發明第一方面所述的化合物、其光學異構體或其藥學上可接受的鹽；和任選的(2)藥學上可接受的載劑、佐劑或其他活性藥物。
在部分實施方式中，所述的藥物組成物還包括第二治療組分，且所述的第二治療組分為DNA甲基轉移酶抑制劑；較佳地，所述的DNA甲基轉移酶抑制劑為SGI-1027。
在本發明的第三方面，提供了一種如本發明第一方面所述的化合物、其光學異構體或其藥學上可接受的鹽，或者如本發明第二方面所述的藥物組成物在製備用於治療和/或預防癌症的藥物中的用途。
在部分實施方式中，所述的癌症選自下組：肝癌、肺癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌、子宮頸癌、卵巢癌、頭頸部腫瘤。
在部分實施方式中，所述的治療和/或預防癌症包括：用請求項1-9任一項所述的式Ⅰ所示化合物、其光學異構體或其藥學上可接受的鹽，或者請求項7所述的藥物組成物與DNA甲基轉移酶抑制劑聯用。
在部分實施方式中，所述的DNA甲基轉移酶抑制劑為SGI-1027。
應理解，在本發明範圍內中，本發明的上述各技術特徵和在下文(如實施例)中具體描述的各技術特徵之間都可以互相組合，從而構成新的或優選的技術方案。限於篇幅，在此不再一一累述。
具體實施方式
術語
如本文所用，術語“烷基”包括直鏈或支鏈的烷基。例如C
1-
6烷基表示具有1-6個碳原子的直鏈或支鏈的烷基，例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、環丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、環丁基、正戊基、異戊基、新戊基等。
如本文所用，術語“烯基”包括直鏈或支鏈的烯基。例如C
2-
6烯基指具有2-6個碳原子的直鏈或支鏈的烯基，例如乙烯基、烯丙基、1-丙烯基、異丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、或類似基團。
如本文所用，術語“炔基”包括直鏈或支鏈的炔基。例如C
2-
6炔基是指具有2-6個碳原子的直鏈或支鏈的炔基，例如乙炔基、丙炔基、丁炔基、或類似基團。
如本文所用，術語“環烷基”是指具有特定碳原子數目的環狀飽和脂肪烴基。例如C
3-C
10烯基指具有3-10個碳原子的環狀飽和脂肪烴基。其可以是單環，例如環丙基、環丁基、環戊基、環己基、或類似基團。“環烷基”也可以是雙環形式，例如橋環或螺環形式。
如本文所用，術語“烷胺基”是指被烷基所取代的胺基。例如，“C
1-
6烷胺基”是指被C
1-6烷基所取代的胺基，其可以是單取代或雙取代的；例如，甲胺基、乙胺基、丙胺基、異丙胺基、丁胺基、異丁胺基、叔丁胺基、二甲胺基、二乙胺基、二丙胺基、二異丙胺基、二丁胺基、二異丁胺基、二叔丁胺基等。
如本文所用，術語“烷氧基”是指具有烷基-氧基結構的基團。例如，“C
1-8烷氧基”是指具有1-8個碳原子的直鏈或支鏈的烷氧基，包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、異丁氧基、叔丁氧基、仲丁氧基、戊氧基、新戊氧基等。
如本文所用，術語“鹵代烷基”代表其中有一個或多個氫原子被鹵素取代的烷基基團，其中烷基的定義如上所述。
如本文所用，術語“鹵代烷氧基”代表有一個或多個氫原子被鹵素取代的烷氧基基團，其中烷氧基的定義如上所述。
如本文所用，術語“羰基”代表包含特定碳原子數、具有烷基-C(=O)-或烷基-C(=O)-烷基-結構的基團。
如本文所用，術語“雜環基”或者“雜環烷基”是指具有特定的環原子數(如3-10個環原子)的，且其中1-3個原子為選自N、S和O的雜原子的飽和或部分飽和的環狀基團。其可以是單環，也可以是雙環或多環形式，例如橋環或螺環形式。具體的實例可以為氧雜環丁烷基、氮雜環丁烷基、四氫-2H-吡喃基、呱啶基、四氫呋喃基、嗎啉基和吡咯烷基等。
如本文所用，術語“芳基”、“芳環”或“芳香環”是指具有芳香性的環狀基團，例如術語“C6-C10芳基”是指具有6-10個碳原子的芳基，如苯基或萘基等類似基團。“芳基”也可以是稠合芳基。
如本文所用，術語“雜芳基”或“雜芳環”指其中1-3個原子為選自下組N、S和O的雜原子的環狀芳香基團；例如術語“5-12元雜芳基”指具有5-12個原子的雜芳基。其可以是單環，也可以是稠環形式。具體的實例可以為呋喃基、噻吩基、吡咯基、噻唑基、噻二唑基、唑基、二唑基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、1,4-二氧雜環己二烯基、2H-1,2-嗪基、4H-1,2-嗪基、6H-1,2-嗪基、4H-1,3-嗪基、6H-1,3-嗪基、4H-1,4-嗪基、噠嗪基、吡嗪基、1,2,3-三嗪基、1,2,4-三嗪基、1,3,5-三嗪基、1,2,4,5-四嗪基、氧雜環庚三烯基、硫雜環庚三烯基、氮雜環庚三烯基、1,3-二氮雜環庚三烯基、氮雜環辛四烯基、苯并呋喃基、苯并異呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、苯并唑基、苯并咪唑基、吲唑基、苯并三唑基、喹啉基、異喹啉基、吡啶并吡唑基、吡啶并吡咯基、嘧啶并吡唑基、嘧啶并吡咯基、噠嗪并吡唑基、噠嗪并吡咯基、吖啶基、菲啶基、苯并噠嗪基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、酚嗪基、喋啶基、嘌呤基、萘啶基等。
如本文所用，“鹵素”或“鹵原子”指F、Cl、Br、和I。更佳地，鹵素或鹵原子選自F、Cl和Br。“鹵代的”是指被選自F、Cl、Br、和I的原子所取代。
除非特別說明，本發明所描述的結構式意在包括所有的同分異構形式(如對映異構，非對映異構和幾何異構體(或構形異構體)：例如含有不對稱中心的R、S構型，雙鍵的(Z)、(E)異構體等。因此，本發明化合物的單個立體化學異構體或其對映異構體、非對映異構體或幾何異構體(或構形異構體)的混合物都屬本發明的範圍。
如本文所用，術語“互變異構體”表示具有不同能量的結構同分異構體可以越過低能壘，從而互相轉化。比如，質子互變異構體(即質子移變)包括透過質子遷移進行互變，如1H-吲唑與2H-吲唑。化合價互變異構體包括透過一些鍵結電子重組而進行互變。
如本文所用，術語“溶劑合物”是指本發明化合物與溶劑分子配位形成特定比例的配合物。
如本文所用，術語“水合物”是指本發明化合物與水進行配位形成的配合物。
發明人經過廣泛而深入的研究，出乎意料地發現一種四氫咔唑類化合物，從而對其進行了一系列生物活性測試，發現其可以透過標靶OCT4和JAK在轉錄和功能位準共同抑制OCT4以促進CSC分化，另一方面可以透過抑制JAK/STAT途徑阻抑分化的腫瘤細胞。在此基礎上完成了本發明。
本發明的主要優點在於：
1、本發明的四氫咔唑類化合物能夠透過標靶OCT4和JAK在基因轉錄和功能位準共同抑制OCT4以促進CSC分化，同時透過抑制JAK/STAT途徑以阻抑分化的腫瘤細胞，從而特異性標靶清除CSC及分化的腫瘤細胞，克服對現有抗腫瘤藥的抗藥性，高效抑制腫瘤增殖和侵襲轉移。
2、本發明的四氫咔唑類化合物安全性好、毒副作用低，製備得到的藥物可口服。
3、本發明的四氫咔唑類化合物與其他標靶藥或化療藥等聯合使用，可以達到協同增效的目標，有大幅提升癌症病人生存期甚至根治某些類型癌症的潛力。
4、本發明涉及到的四氫咔唑類化合物是一流的OCT4抑制劑，也是首個雙標靶OCT4和JAK1/2的抑制劑。
下面將結合實施例對本發明的方案進行解釋。本領域技術人員將會理解，下面的實施例僅用於說明本發明，而不應視為限定本發明的範圍。實施例中未註明具體技術或條件的，按照本領域內的文獻所描述的技術或條件或者按照產品說明書進行。所用試劑或儀器未註明生產廠商者，均為可以透過市購獲得的常規產品。
實施例 實施例 1 ：化合物 1 的合成
向25 mL單口瓶中依次加入
KZT(200 mg, 1.0 mmol)，
1-1(1.5 mmol)，濃鹽酸(10 mL)，甲醇(5 mL)，迴流反應10小時至
KZT消失，反應液冷卻至室溫倒入碎冰中，析出固體，過濾，純水洗滌濾餅，乾燥的粗產物經矽膠管柱層析純化(石油醚:乙酸乙酯:甲醇= 100:10:1)得到黃綠色固體化合物
1，產率：53.6%, m.p. = 191-193℃。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d 6) δ 11.60 (s, 1H), 9.39 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.33 (d,
J= 8.4 Hz, 1H), 7.17 (dd,
J= 8.5, 1.4 Hz, 1H), 7.11 (d,
J= 1.8 Hz, 1H), 7.03 (dd,
J= 8.4, 1.7 Hz, 1H), 6.89 (d,
J= 8.2 Hz, 1H), 4.09 (q,
J= 7.0 Hz, 2H), 3.23 (t,
J= 5.7 Hz, 2H), 3.01 (t,
J= 6.3 Hz, 2H), 2.40 (s, 3H), 1.37 (t,
J= 7.0 Hz, 3H);
13C NMR (101 MHz, DMSO-
d 6)
δ180.24, 148.08, 147.05, 137.59, 135.11, 134.52, 132.77, 129.04, 128.87, 127.40, 126.69, 125.86, 123.91, 120.80, 116.05, 115.95, 113.03, 64.43, 27.72, 21.55, 20.61, 15.22. HRMS (ESI) calcd for C
22H
20NO
3 -(M-H)
－346.1449, found 346.1455。
實施例 2 ：化合物
2的合成
向25 mL單口瓶中依次加入
KZT(200 mg, 1.0 mmol)，
2-1(1.5 mmol)，濃鹽酸(10 mL)，甲醇(5 mL)，迴流反應10小時至
KZT消失，反應液冷卻至室溫倒入碎冰中，析出固體，過濾，純水洗滌濾餅，乾燥的粗產物經矽膠管柱層析純化(石油醚:乙酸乙酯:甲醇=100:10:1)得到褐色膠狀物
2，產率：43.7%。
1H NMR (400 MHz, CDCl
3)
δ9.53 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.43 (s, 1H), 7.36 (d,
J= 8.4 Hz, 1H), 7.21 (d,
J= 8.4 Hz, 1H), 6.72 (s, 2H), 3.93 (s, 6H), 3.29 (t,
J= 5.9 Hz, 2H), 3.06 (t,
J= 6.2 Hz, 2H), 2.45 (s, 3H).
13C NMR (101 MHz, CDCl
3)
δ176.72, 145.48, 144.40, 135.13, 132.61, 132.08, 130.15, 126.38, 126.30, 124.91, 124.10, 123.01, 121.24, 119.34, 112.50, 112.26, 110.14, 55.66, 27.15, 21.00, 20.06. HRMS (ESI) calcd for C
22H
20NO
4 -(M-H)
－362.1398, found 362.1405。
實施例 3 ：化合物
3的合成
向25 mL單口瓶中依次加入
KZT(200 mg, 1.0 mmol)，
3-1(1.5 mmol)，濃鹽酸(10 mL)，甲醇(5 mL)，迴流反應10小時至
KZT消失，反應液冷卻至室溫倒入碎冰中，析出固體，過濾，純水洗滌濾餅，乾燥的粗產物經矽膠管柱層析純化(石油醚:乙酸乙酯:甲醇 = 100:10:1)得到褐色油狀物
3，產率：43.5%。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d 6) δ 11.58 (s, 1H), 7.47 (d,
J= 6.8 Hz, 2H), 7.32 (d,
J= 8.4 Hz, 1H), 7.16 (d,
J= 8.6 Hz, 1H), 6.99 (s, 1H), 6.91~6.77 (m, 2H), 3.20 (d,
J= 6.4 Hz, 2H), 3.00 (t,
J= 6.3 Hz, 2H), 2.39 (s, 3H).
13C NMR (101 MHz, DMSO-
d 6) δ 172.87, 145.69, 137.55, 135.12, 134.08, 132.84, 128.91, 128.74, 126.46, 126.46, 125.86, 122.91, 120.80, 117.64, 117.48, 116.20, 113.00, 27.73, 21.57, 20.62. HRMS (ESI) calcd for C
20H
16NO
3 -(M-H)
－318.1136, found 3118.1140。
實施例 4 ：化合物
4的合成
向25 mL單口瓶中依次加入
KZT(200 mg, 1.0 mmol)，
4-1(1.5 mmol)，濃鹽酸(10 mL)，甲醇(5 mL)，迴流反應10小時至
KZT消失，反應液冷卻至室溫倒入碎冰中，析出固體，過濾，純水洗滌濾餅，乾燥的粗產物經矽膠管柱層析純化(石油醚：乙酸乙酯：甲醇=100:10:1)得到褐色固體
4，產率：52.7%, m.p. = 195-197℃。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d 6) δ 11.56 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.43 (s, 1H), 7.31 (d,
J= 8.5 Hz, 1H), 7.17~7.12 (m, 3H), 3.20 (t,
J= 5.6 Hz, 2H), 2.97 (t,
J= 6.3 Hz, 2H), 2.38 (s, 3H), 2.21 (s, 6H).
13C NMR (101 MHz, DMSO-
d 6)
δ180.35, 154.51, 137.59, 135.05, 134.32, 132.82, 130.91, 129.02, 128.83, 127.07, 126.61, 125.88, 124.80, 120.80, 113.04, 27.76, 21.56, 20.64, 17.15. HRMS (ESI) calcd for C
22H
20NO
2 -(M-H)
－330.1500, found 330.1505。
實施例 5 ：化合物
5的合成
向25 mL單口瓶中依次加入
KZT(200 mg, 1.0 mmol)，
5-1(1.5 mmol)，濃鹽酸(10 mL)，甲醇(5 mL)，迴流反應10小時至
KZT消失，反應液冷卻至室溫倒入碎冰中，析出固體，過濾，純水洗滌濾餅，乾燥的粗產物經矽膠管柱層析純化(石油醚:乙酸乙酯:甲醇=100:10:1)得到黃色固體
5，產率：45.7%, m.p. = 169-171℃。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d 6)
δ11.60 (s, 1H), 9.46 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.46~7.42 (m, 1H), 7.31 (d,
J= 8.4 Hz, 1H), 7.15 (dd,
J= 8.5, 1.3 Hz, 1H), 7.11 (d,
J= 1.8 Hz, 1H), 7.02 (dd,
J= 8.3, 1.6 Hz, 1H), 6.87 (d,
J= 8.1 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.27~3.16 (m, 2H), 2.99 (t,
J= 6.3 Hz, 2H), 2.38 (s, 3H).
13C NMR (101 MHz, DMSO-
d 6)
δ180.18, 147.94, 147.86, 137.59, 135.07, 134.54, 132.81, 128.94, 128.79, 127.41, 126.56, 125.87, 123.80, 120.80, 115.96, 114.82, 113.00, 55.68, 27.25, 21.10, 20.16. HRMS (ESI) calcd for C
21H
18NO
3 -(M-H)
－332.1292, found 332.1296。
實施例 6 ：化合物
8的合成
氫氣氛圍下室溫向化合物
8-1(300 mg，0.900 mmol)的乙酸乙酯(1 mL)溶液中加入氫氧化鈀炭(25 mg，0.180 mmol)。反應在室溫下攪拌過夜後抽濾，濾餅用乙酸乙酯(2 × 10 mL)洗滌。濾液濃縮後經反相製備管柱(流動相A：水(10 mmol/L碳酸氫銨)，流動相B：乙腈)分離得到白色固體化合物
8(54.8 mg，17.85%)。ESI/MS (m/z): 366.1 [M+H]
+。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d6): δ 11.46 (s, 1H), 8.72 (s, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.29 (d,
J= 8.4 Hz, 1H), 7.16–7.08 (m, 1H), 6.82 (d,
J= 1.6 Hz, 1H), 6.70 (d,
J= 7.9 Hz, 1H), 6.63 (dd,
J= 8.0, 1.7 Hz, 1H), 3.75 (s, 3H), 3.19 (dd,
J= 13.7, 3.9 Hz, 1H), 2.99 (dt,
J= 16.4, 4.4 Hz, 1H), 2.85–2.71 (m, 2H), 2.59–2.52 (m, 1H), 2.37 (s, 3H), 2.15–2.01 (m, 1H), 1.78 (m, 1H)。
實施例 7 ：化合物
10的合成
室溫下向化合物
KZT(150 mg，0.753 mmol)和
10-1(95 mg，0.904 mmol) 的甲醇(2 mL)混合物中加入濃硫酸(0.2 mL, 3.752 mmol)。反應液在60℃攪拌過夜後使用氫氧化鈉調節pH到8。濃縮後粗產物經反相製備管柱(流動相A：水(10 mmol/L碳酸氫銨)，流動相B：乙腈)分離得到黃色固體化合物
10(49.3 mg，22.79%)。ESI/MS (m/z): 288.2 [M+H]
+。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d
6 ): δ 11.66 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.52 (d,
J= 7.3 Hz, 2H), 7.49 (s, 1H), 7.46 (d,
J= 7.3 Hz, 2H), 7.39 (t,
J= 7.2 Hz, 1H), 7.33 (d,
J= 8.5 Hz, 1H), 7.17 (dd,
J= 8.5, 1.3 Hz, 1H), 3.23–3.14 (m, 2H), 3.00 (t,
J= 6.2 Hz, 2H), 2.38 (s, 3H)。
實施例 8 ：化合物
11的合成
室溫下向化合物
KZT(150 mg，0.753 mmol)和
11-1(135 mg，0.904 mmol)的甲醇(2 mL)混合物中加入濃硫酸(0.2 mL，3.752 mmol)反應液在60℃攪拌過夜後使用氫氧化鈉調節pH到8。濃縮後粗產物經反相製備管柱(流動相A：水(10 mmol/L碳酸氫銨)，流動相B：乙腈)分離得到黃色固體化合物
11(8.9 mg，3.57%)。ESI/MS (m/z): 332.1 [M+H]
+。ESI/MS (m/z):332.1 [M+H]
+。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d
6 ) δ 11.61 (s, 1H), 7.57 (d,
J= 2.1 Hz, 1H), 7.52 – 7.46 (m, 2H), 7.45 (s, 1H), 7.32 (d,
J= 8.4 Hz, 1H), 7.16 (dd,
J= 8.5, 1.7 Hz, 1H), 7.05–6.95 (m, 2H), 4.08 (q,
J= 7.0 Hz, 2H), 3.20 (td,
J= 6.4, 1.8 Hz, 2H), 3.00 (t,
J= 6.3 Hz, 2H), 2.38 (s, 3H), 1.35 (t,
J= 7.0 Hz, 3H)。
實施例 9 ：化合物
12的合成
向25 mL單口瓶中依次加入
KZT(200 mg, 1.0 mmol），
12-1(1.5 mmol)，濃鹽酸(10 mL)，甲醇(5 mL)，迴流反應10小時至
KZT消失，反應液冷卻至室溫倒入碎冰中，析出固體，過濾，純水洗滌濾餅，乾燥的粗產物經矽膠管柱層析純化(石油醚:乙酸乙酯:甲醇= 100:10:1)得到黃綠色固體化合物
12，產率：46.7%, m.p. = 200-202℃。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d 6) δ 11.66 (s, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.40 (t,
J= 7.9 Hz, 1H), 7.34 (d,
J= 8.4 Hz, 1H), 7.21~7.15 (m, 1H), 7.11 (d,
J= 7.8 Hz, 1H), 7.08 (s, 1H), 6.98 (dd,
J= 8.2, 2.4 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.24~3.16 (m, 2H), 3.02 (t,
J= 6.3 Hz, 2H), 2.40 (s, 3H).
13C NMR (101 MHz, DMSO-
d6)
δ180.08, 148.14, 138.09, 135.47, 134.84, 132.61, 128.64, 128.99, 127.81, 126.86, 124.87, 122.60, 120.60, 118.17, 115.26, 114.42, 113.02, 55.66, 27.21, 21.08, 20.06. HRMS (ESI) calcd for C
21H
18NO
2 -(M-H)
-316.1343, found 316.1346。
實施例 10 ：化合物
13的合成
室溫下向化合物
KZT(150 mg，0.753 mmol)和
13-1(132 mg，0.904 mmol)的甲醇(3 mL)溶液中加入氫氧化鉀(211 mg，3.765 mmol)。反應液在65℃攪拌過夜後使用2M的鹽酸調節pH到8，濃縮後粗產物經反相製備管柱(流動相A：水(10 mmol/L+0.1%氨水)，流動相B：乙腈)分離得到黃色固體化合物
13(5.0 mg，2.03%)。ESI/MS (m/z): 328.1 [M+H]
+。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d
6 ): δ 11.65 (s, 1H), 11.61 (s, 1H), 8.84 (s, 1H), 8.83 (d,
J= 7.2 Hz, 1H), 8.74 (d,
J= 6.9 Hz, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.71 (d,
J= 9.1 Hz, 1H), 7.66 (d,
J= 9.0 Hz, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.47–7.45 (m, 1H), 7.45–7.40 (m, 1H), 7.40–7.36 (m, 1H), 7.34 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.19–7.13 (m, 2H), 7.12–7.06 (m, 2H), 3.31 (s, 2H), 3.18 (t,
J= 5.6 Hz, 2H), 3.10 (d,
J= 6.4 Hz, 2H), 3.07 (d,
J= 6.1 Hz, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.39 (s, 3H)。
實施例 11 ：化合物
14的合成
室溫下向化合物
KZT(409 mg，2.053 mmol))和
14-1(300 mg，2.053 mmol)的甲醇(4 mL)溶液中加入濃硫酸(0.4 mL，7.504 mmol)。反應液在65℃攪拌過夜後使用飽和碳酸氫鈉水溶液調節pH到8，濃縮後粗產物經反相製備管柱(流動相A：水(10 mmol/L)，流動相B：乙腈)分離得到棕色固體化合物
14(6.3 mg，0.94%)。ESI/MS (m/z): 328.0 [M+H]
+。
實施例 12 ：化合物
15的合成
室溫下向化合物
KZT(311 mg，1.561 mmol)和
15-1(150 mg，1.561 mmol)的甲醇(4 mL)溶液中加入氫氧化鉀(437 mg，7.805 mmol)。反應液在65℃攪拌過夜後用2M鹽酸調節pH到8，反應液濃縮後經反相製備管柱(流動相A：水(10 mmol/L碳酸氫銨+0.1%氨水)，流動相B：乙腈)分離得黃色固體化合物
15(32.3 mg，7.41%）。ESI/MS (m/z): 278.1 [M-H]
-。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d
6 ): δ 13.21 (s, 1H), 11.61 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 7.32 (d,
J= 8.5 Hz, 1H), 7.17 (dd,
J= 8.5, 1.3 Hz, 1H), 6.66 (s, 1H), 3.53–3.37 (m, 2H), 3.04 (t,
J= 6.2 Hz, 2H), 2.39 (s, 3H)。
實施例 13 ：化合物
16的合成
室溫條件下向
KZT(37.0 mg, 0.253 mmol)和
16-1(60.5 mg, 0.303 mmol)的1,4-二氧六環(2 mL)混合物中加入氫氧化鉀(42.5 mg, 0.759 mmol)。反應升溫至100℃反應3小時。加入水淬滅反應，所得混合物經乙酸乙酯(3 × 20 mL)萃取。合併的有機層經飽和食鹽水(5 mL)洗滌、無水硫酸鈉乾燥、過濾和減壓濃縮。所得粗產物經矽膠管柱層析分離純化(甲醇:二氯甲烷=1:20)得到黃色固體化合物
16(2.0 mg，2.41%)。ESI/MS (m/z) 327.9 [M+H]
+。
實施例 14 ：化合物
17的合成
零度條件下向化合物
17-1(1 g，9.081 mmol)和濃鹽酸(2.70 mL，88.903 mmol)的水(83 mL)溶液中緩慢加入亞硝酸鈉(1.25 g，18.162 mmol)的水溶液(20 mL)。反應液在0℃攪拌30分鐘，隨後在該反應液中緩慢加入化合物
17-2(1.15 g，9.081 mmol)和醋酸鈉(1.64 g，19.978 mmol)的甲醇和水溶液(80 mL，1:1)。反應液繼續在0℃條件下攪拌0.5小時後用飽和碳酸氫鈉水溶液調節pH到8，濃縮後粗產物經矽膠管柱層析(二氯甲烷:甲醇=5:1)得到黃色固體化合物
17-3(400 mg，20.09%)。ESI/MS (m/z): 220.1 [M+H]
+。
室溫下向化合物
17-3的甲醇(3 mL)溶液中加入醋酸(12 mL，209.359 mmol)和濃硫酸(1.20 mL,22.508 mmol)。反應液在65℃迴流攪拌2小時。飽和碳酸氫鈉水溶液調節pH到8，濃縮後粗產物經矽膠管柱層析(二氯甲烷:甲醇=5:1)分離得到黃色固體化合物
17-4(300 mg，43.42%)。ESI/MS (m/z): 203.1[M+H]
+。
室溫下向化合物
17-4(300 mg，1.484 mmol)的二氯甲烷(10 mL)混合物中加入吡啶(587 mg，7.420 mmol)和三氟甲磺酸酐(935 mg，4.452 mmol)並攪拌2小時。濃縮後粗產物經矽膠管柱層析(石油醚:乙酸乙酯=1:1)得到黃色固體化合物
17-5(210 mg，42.35%)。ESI/MS (m/z): 334.8 [M+H]
+。
氮氣氛圍條件下，0℃向化合物
17-5(150 mg，0.449 mmol)，Pd(PPh
3)
4(52 mg，0.045 mmol)的四氫呋喃(5 mL)混合物中緩慢加入三甲基鋁(226 mg，3.143 mmol)。反應液80℃迴流1小時。反應液濃縮後經矽膠管柱層析(石油醚:乙酸乙酯=1:1)得到黃色固體化合物
17-6(70 mg，77.90%)。ESI/MS (m/z): 200.9 [M+H]
+。
室溫條件下向化合物
17-6(60 mg，0.300 mmol)，
17-7(50 mg，0.330 mmol)的甲醇(1 mL)混合物中加入濃硫酸(0.1 mL)。反應液在65℃攪拌迴流過夜。用飽和碳酸氫鈉水溶液調節pH到8，濃縮後粗產物經反相製備管柱分離得到黃色固體化合物
17(43.8 mg，42.54%)。ESI/MS (m/z): 335.0 [M+H]
+。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d
6 ): δ 11.86 (s, 1H), 9.54 (s, 1H), 7.72 (d,
J= 8.5 Hz, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.20 (dd,
J= 8.4, 3.8 Hz, 1H), 7.15 (s, 1H), 7.06 (d,
J= 8.3 Hz, 1H), 6.90 (d,
J= 8.1 Hz, 1H), 3.84 (s, 3H), 3.26 (t,
J= 6.0 Hz, 2H), 3.07 (t,
J= 6.2 Hz, 2H), 2.57 (s, 3H)。
實施例 15 ：化合物
18的合成
室溫下向化合物
18-1(1 g，7.237 mmol)和
18-2(0.97 g，8.684 mmol)的醋酸(10 mL)溶液中加入濃鹽酸(1 mL)。反應液在65℃攪拌2小時後直接濃縮，經矽膠管柱層析(石油醚:乙酸乙酯=8:1)分離得到淺棕色固體化合物
18-3(110 mg，7.06%)。ESI/MS (m/z): 216.2 [M+H]
+。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d 6): δ 11.44 (s, 1H), 7.30 (d,
J= 8.8 Hz, 1H), 7.10 (s, 1H), 6.97 (d,
J= 8.8 Hz, 1H), 3.78 (s, 3H), 2.92 (s, 2H), 2.54 (s, 2H), 2.14 (s, 2H)。
室溫下向化合物
18-3(110 mg，0.511 mmol)和
18-4(93 mg，0.613 mmol)的甲醇(3 mL)溶液中加入濃硫酸(0.3 mL，5.628mmol）。反應液在65℃攪拌過夜後使用飽和碳酸氫鈉水溶液調節pH到8。乙酸乙酯(3 × 20mL)萃取，飽和食鹽水(30 mL)洗滌有機相。無水硫酸鈉乾燥，濃縮後粗產物經反相製備管柱(流動相A：水(10 mmol/L碳酸氫銨)，流動相B：乙腈)分離得到黃色固體化合物
18(5.9 mg，3.30%)。ESI/MS (m/z): 350.0 [M+H]
+。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d
6 ): δ 11.58 (s, 1H), 9.44 (s, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.32 (d,
J= 8.9 Hz, 1H), 7.11 (t,
J= 2.4 Hz, 2H), 7.03 (dd,
J= 8.3, 1.5 Hz, 1H), 6.98 (dd,
J= 9.0, 2.5 Hz, 1H), 6.86 (d,
J= 8.1 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 3.22 (t,
J= 5.8 Hz, 2H), 3.00 (t,
J= 6.3 Hz, 2H)。
實施例 16 ：化合物
19的合成
室溫下向化合物
19-1(5 g，22.371 mmol)和
19-2(3.01 g，26.845 mmol)的甲醇(60 mL)溶液中加入醋酸AcOH(15 mL)和濃鹽酸(3 mL)。反應液在65℃攪拌過夜後使用飽和碳酸氫鈉水溶液調節pH到8。濃縮後經矽膠管柱層析(石油醚:乙酸乙酯=5:1)分離得到淺黃色化合物
19-3(700 mg，11.85%)。ESI/MS (m/z): 263.8 [M+H]
+。
室溫下向化合物
19-3(300 mg，1.136 mmol)和
19-4(259 mg，1.704 mmol)的MeOH(15 mL)混合物中加入濃硫酸(1.5 mL，28.143 mmol)，反應液在80℃條件下攪拌過夜。反應液冷卻到室溫後用飽和碳酸氫鈉水溶液調節pH到8，用乙酸乙酯萃取後濃縮得到粗產物，經反相製備管柱分離得到黃色固體化合物
19(66.8 mg，14.80%)。ESI/MS (m/z): 398.0 [M+H]
+。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d
6 ): δ 11.94 (s, 1H), 9.48 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.43 (dd,
J= 8.8, 1.9 Hz, 1H), 7.38 (d,
J= 8.6 Hz, 1H), 7.12 (d,
J= 1.7 Hz, 1H), 7.04 (dd,
J= 8.2, 1.6 Hz, 1H), 6.87 (d,
J= 8.1 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.28–3.19 (m, 2H), 3.02 (t,
J= 6.3 Hz, 2H)。
實施例 17 ：化合物
20的合成
室溫下向
20-1(2.5 g，15.020 mmol)和
20-2(2.02 g，18.024 mmol)的醋酸(11.8 mL)溶液中加入濃鹽酸(2.4 mL，78.991 mmol)。反應液在120℃迴流1小時。反應液濃縮後經矽膠管柱(石油醚:乙酸乙酯=1:1)分離得到黃色固體化合物
20-3(400 mg，12.67%)。ESI/MS (m/z): 211.1 [M+H]
+。
室溫下向
20-3(200 mg，0.951 mmol)和
20-4(173.69 mg，1.141 mmol)的甲醇(5 mL)溶液中加入濃硫酸(0.5 mL，9.381 mmol)。反應液在65℃攪拌過夜。反應液用飽和碳酸氫鈉水溶液調節pH到8。乙酸乙酯萃取(3 × 20 mL)，飽和食鹽水洗滌有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮後粗產物經反相管柱製備(流動相A：0.05%氨水，流動相B：乙腈)分離得到黃色固體化合物
20(15.6 mg，4.65%)。ESI/MS (m/z): 345.0 [M+H]
+。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d
6 ): δ 12.28 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.64 (dd,
J= 8.6, 1.4 Hz, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.56 (d,
J= 8.6 Hz, 1H), 7.15–7.10 (m, 1H), 7.09–6.99 (m, 1H), 6.87 (d,
J= 8.2 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.28–3.25 (m, 2H), 3.07 (t,
J= 6.8 Hz, 2H)。
實施例 18 ：化合物
21的合成
室溫下向化合物
21-1(920 mg，4.540 mmol)和
21-2(610 mg，5.448 mmol)的醋酸(10 mL)溶液中加入濃硫酸(1 mL，18.762 mmol)。反應液在65℃攪拌2小時後使用飽和碳酸氫鈉水溶液調節pH到8。乙酸乙酯(3 × 50 mL)萃取後，無水硫酸鈉乾燥，濃縮後粗產物經矽膠管柱層析(石油醚:乙酸乙酯=2:1)分離得到棕色固體化合物
21-3(480 mg，43.46%)。ESI/MS (m/z): 244.2 [M+H]
+。
室溫下向化合物
21-3(150 mg，0.617 mmol)和
21-4(112 mg，0.740 mmol)的甲醇(4 mL)溶液中加入濃硫酸(0.4 mL，7.505 mmol)。反應液在80℃攪拌過夜後使用飽和碳酸氫鈉水溶液調節pH到8。濃縮後粗產物經反相製備管柱(流動相A：水(0.05%甲酸)，流動相B：乙腈)分離得到黃色固體化合物
21(20.04 mg，8.35%)。ESI/MS (m/z): 378.2 [M+H]
+。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d 6): δ 12.16 (s, 1H), 9.50 (s, 1H), 8.4–8.31 (m, 1H), 7.92 (dd,
J= 8.7, 1.6 Hz, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.50 (d,
J= 8.8 Hz, 1H), 7.13 (d,
J= 1.8 Hz, 1H), 7.05 (dd,
J= 8.2, 1.6 Hz, 1H), 6.87 (d,
J= 8.1 Hz, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.83 (s, 3H), 3.26 (t,
J= 5.2 Hz, 2H), 3.10 (t,
J= 6.3 Hz, 2H)。
實施例 19 ：化合物
22的合成
氮氣氛圍下，0℃向化合物
22-1(300 mg,1.136 mmol)和
22-2(162 mg，1.136 mmol)的DMF(5 mL)溶液中加入氫化鈉NaH(29.9 mg，1.250 mmol)。反應液在室溫下攪拌4小時。水淬滅反應，乙酸乙酯(3 × 20 mL)萃取，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，濃縮後粗產物經矽膠管柱層析(石油醚:乙酸乙酯=5:1)分離得到白色固體化合物
22-3(300 mg，68.73%)。ESI/MS (m/z): 384.0 [M+H]
+。
氮氣氛圍下，室溫向化合物
22-3(300 mg，0.781 mmol)，Cs
2CO
3(763 mg，2.343 mmol)和
22-4(236.9 mg，2.343 mmol)的1,4-二氧六環(8 mL)溶液中加入催化劑Pd-PEPPSI-IHeptCl
3-chloropyridine(76 mg，0.078 mmol)，氮氣氛圍下反應液在100℃攪拌過夜。冷卻後濃縮得到的粗產物經矽膠管柱層析(二氯甲烷:甲醇=1:1)分離得到淺黃色固體化合物
22-5(150 mg，47.50%)。ESI/MS (m/z): 405.2 [M+H]
+。
室溫下，向化合物
22-5(150 mg，0.371 mmol)和
22-6(68 mg，0.445 mmol)的甲醇(5 mL)溶液中加入濃硫酸(0.5 mL，9.381 mmol)。反應液在65℃攪拌過夜後使用飽和碳酸氫鈉水溶液調節pH到8。乙酸乙酯(3 × 20 mL)萃取，飽和食鹽水(30 mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，濃縮後粗產物經反相製備管柱(流動相A：水(0.05%甲酸)，流動相B：乙腈)分離得到黃色固體化合物
22(25.3 mg，15.99%)。ESI/MS (m/z): 419.1 [M+H]
+。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d
6 ): δ 11.46 (s, 1H), 9.43 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.28 (d,
J= 9.0 Hz, 1H), 7.15 (dd,
J= 9.1, 2.2 Hz, 1H), 7.10 (d,
J= 1.5 Hz, 1H), 7.03 (s, 1H), 7.02–6.99 (m, 1H), 6.86 (d,
J= 8.1 Hz, 1H), 4.66 (d,
J= 3.8 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.59 (dq,
J= 8.9, 4.4 Hz, 1H), 3.47–3.36 (m, 2H), 3.21 (t,
J= 5.6 Hz, 2H), 2.98 (t,
J= 6.1 Hz, 2H), 2.81–2.71 (m, 2H), 1.91–1.79 (m, 2H), 1.55 (q,
J= 10.9, 9.2 Hz, 2H)。
實施例 20 ：化合物
23的合成
氮氣氛圍下，室溫向化合物
23-1(200 mg，0.520 mmol)，碳酸銫(508 mg，1.560 mmol)，催化劑EPhosPdG
4(47 mg，0.052 mmol)，配體EPhos(28 mg，0.052 mmol)和
23-2(116 mg，0.624 mmol)的1,4-二氧六環(5 mL)溶液中。氮氣氛圍下，反應液在100℃攪拌4小時後加水淬滅。乙酸乙酯(3 × 10 mL)萃取，飽和食鹽水(10 mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，濃縮後粗產物經矽膠管柱層析(石油醚:乙酸乙酯=1:1)分離得到白色固體化合物
23-3(182 mg, 71.42%）。ESI/MS (m/z): 490.3 [M+H]
+。
室溫下向化合物
23-3(150 mg，0.286 mmol)和
23-4(56 mg，0.367 mmol)的甲醇(5 mL)混合物中加入濃硫酸(0.5 mL，9.381 mmol)。反應液在65℃攪拌過夜後使用飽和碳酸氫鈉水溶液調節pH到7。乙酸乙酯(3 × 20 mL)萃取，飽和食鹽水(20 mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，濃縮後粗產物經反相製備管柱(流動相A：水(10 mmol/L碳酸氫銨)，流動相B：乙腈)分離得到淺黃色固體化合物
23(10.1 mg，8.17%)。ESI/MS (m/z): 404.0 [M+H]
+。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d
6 ): δ 11.47 (s, 1H), 7.55 (s, 1H), 7.29 (d,
J= 9.0 Hz, 1H), 7.15 (dd,
J= 9.0, 2.0 Hz, 1H), 7.10 (d,
J= 1.5 Hz, 1H), 7.03 (d,
J= 1.6 Hz, 1H), 7.01 (s, 1H), 6.86 (d,
J= 8.1 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.21 (t,
J= 5.8 Hz, 2H), 2.98 (t,
J= 4.6 Hz, 6H), 2.86 (s, 4H)。
實施例 21 ：化合物
24的合成
氮氣氛圍下，室溫向化合物
24-1(500 mg，1.893 mmol)，
24-2(734 mg，3.786 mmol)，催化劑Pd(dppf)Cl
2CH
2Cl
2(231 mg，0.284 mmol)的1,4-二氧六環(10 mL)和水(2 mL)溶液中加入乙酸鉀(371 mg，3.786 mmol)。氮氣氛圍下，反應液在100℃攪拌過夜後，加水淬滅，乙酸乙酯萃取(3 × 20 mL)，飽和食鹽水(20 mL)洗滌。無水硫酸鈉乾燥，濃縮後粗產物經矽膠管柱層析(石油醚:乙酸乙酯=1:1)分離得到棕色固體化合物
24-3(100 mg，21.02%)。ESI/MS (m/z): 252.2 [M+H]
+。
室溫下向化合物
24-3(100 mg，0.398 mmol) 和
24-4(72 mg，0.478 mmol)的甲醇(5 mL)溶液中加入濃硫酸(0.5 mL，9.381mmol)。反應液在 65℃攪拌過夜後使用飽和碳酸氫鈉水溶液調節pH到8，濃縮後粗產物經反相製備管柱(流動相A：水(10 mmol/L碳酸氫銨)，流動相B：乙腈)分離得到棕色化合物
24(12.2 mg，7.80%)。ESI/MS (m/z): 386.1[M+H]
+。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d 6): δ 12.86 (s, 1H), 11.69 (s, 1H), 9.41 (s, 1H), 8.04 (s, 2H), 7.90 (s, 1H), 7.61 (dd,
J= 8.7, 1.6 Hz, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.40 (d,
J= 8.6 Hz, 1H), 7.13 (d,
J= 1.6 Hz, 1H), 7.04 (dd,
J= 8.2, 1.5 Hz, 1H), 6.88 (d,
J= 8.1 Hz, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.26 (t,
J= 5.7 Hz, 2H), 3.07 (t,
J= 6.2 Hz, 2H)。
實施例 22 ：化合物
25的合成
室溫氮氣氛圍下向化合物
25-1(300 mg，0.753 mmol)，Pd(dppf)Cl
2CH
2Cl
2(123 mg，0.151 mmol) 和碘化亞銅(14 mg，0.075 mmol)的DMF(5 mL)混合物中加入三乙胺(228.6 mg，2.259 mmol)和
25 -2(222 mg，2.259 mmol)。反應液在80℃攪拌2小時。反應液使用水(1 mL)淬滅，乙酸乙酯(3 × 10 mL)萃取，飽和食鹽水(15 mL)洗滌有機相，無水硫酸鈉乾燥，濃縮後粗產物經矽膠管柱(石油醚:乙酸乙酯=1:1)分離得到黃色固體化合物
25-3（150 mg，47.92%）。ESI/MS (m/z): 416.0 [M+H]
+。
室溫下向化合物
25-3(150 mg，0.361 mmol)的DMF(5 mL)混合物中加入碳酸鉀(100 mg，0.722 mmol)。反應液在60℃攪拌2小時後，加水(1 mL)淬滅反應，乙酸乙酯(3 × 10 mL)萃取，飽和食鹽水(15 mL)洗滌有機相，無水硫酸鈉乾燥，濃縮後粗產物經反相製備管柱分離得到黃色固體化合物
25(20.3 mg，16.38%)。ESI/MS (m/z): 344.0[M+H]
+。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d 6): δ 11.93 (s, 1H), 7.88 (d,
J= 1.2 Hz, 1H), 7.59 (d,
J= 1.9 Hz, 1H), 7.42 (d,
J= 8.6 Hz, 1H), 7.38 (dd,
J= 8.6, 1.4 Hz, 1H), 7.12 (d,
J= 1.7 Hz, 1H), 7.04 (dd,
J= 8.3, 1.5 Hz, 1H), 6.86 (d,
J= 8.2 Hz, 1H), 4.03 (s, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.24 (t,
J= 5.8 Hz, 2H), 3.04 (t,
J= 6.3 Hz, 2H)。
實施例 23 ：化合物
26的合成
室溫下向化合物
26-1(10 mg，0.026 mmol)的甲醇(1 mL)溶液中加入氫氧化鋰(3 mg，0.130 mmol)。反應液在65℃攪拌過夜後使用2M鹽酸調節pH到8，濃縮粗產物經反相製備管柱(流動相A：水(0.05%甲酸)，流動相B：乙腈)分離得到棕色固體化合物
26(2 mg，20.77%)。ESI/MS (m/z): 364.0 [M+H]
+。
實施例 24 ：化合物
27的合成
室溫下向化合物
27-1(300 mg，1.845 mmol)和
27-2(248 mg，2.214 mmol)的水(12 mL)溶液中加入濃鹽酸(0.3 mL, 9.874 mmol)。反應液在120℃攪拌過夜。收集生成的固體並用水(30 mL)洗滌後得到棕色固體化合物
27-3(180 mg，48.01%)。ESI/MS (m/z): 204.0 [M+H]
+。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d 6): δ 11.69 (s, 1H), 7.45 (dd,
J= 9.5, 2.2 Hz, 1H), 7.40 (dd,
J= 9.0, 4.5 Hz, 1H), 7.17 (td,
J= 9.2, 2.3 Hz, 1H), 2.92 (t,
J= 5.9 Hz, 2H), 2.62–2.53 (m, 2H), 2.15 (p,
J= 6.0 Hz, 2H)。
室溫下向化合物
27-3(180 mg，0.886 mmol)和
27-4(594 mg，5.302 mmol)的甲醇(3 mL)混合溶液中加入濃硫酸(0.3 mL，5.628 mmol)。反應液在65℃攪拌過夜後使用飽和碳酸氫鈉水溶液調節pH到8，,濃縮後粗產物經反相製備管柱(流動相A：水(0.1%甲酸)，流動相B：乙腈)分離得到黃色固體化合物
27(20.4 mg，6.83%)。ESI/MS (m/z): 338.0 [M+H]
+。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d 6): δ 11.83 (s, 1H), 9.48 (s, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.48 (dd,
J= 9.5, 2.5 Hz, 1H), 7.42 (dd,
J= 9.0, 4.5 Hz, 1H), 7.19 (td,
J= 9.2, 2.6 Hz, 1H), 7.12 (d,
J= 1.8 Hz, 1H), 7.04 (dd,
J= 8.3, 1.7 Hz, 1H), 6.87 (d,
J= 8.1 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.27 – 3.20 (m, 2H), 3.01 (t,
J= 6.3 Hz, 2H)。
實施例 25 ：化合物
28的合成
室溫向化合物
28-1(150 mg，0.449 mmol)和催化劑Pd(dppf)Cl
2.CH
2Cl
2(73 mg，0.090 mmol)的甲醇(20 mL)中加入三乙胺(0.19 mL，1.347 mmol)。一氧化碳氣體氛圍下，反應液在80℃攪拌過夜。反應液濃縮後經矽膠管柱層析(二氯甲烷:甲醇=20:1)分離得到淺黃色固體化合物
28-2(70 mg，63.87%)。ESI/MS (m/z): 245.0 [M+H]
+。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d
6 ): δ 12.19 (s, 1H), 8.02 (d,
J= 8.7 Hz, 1H), 7.92 (d,
J= 8.7 Hz, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.05 (t,
J= 5.7 Hz, 2H), 2.66 (t,
J= 6.2 Hz, 2H), 2.21 (p,
J= 5.8 Hz, 2H)。
室溫下向化合物
28-2(50 mg，0.205 mmol)和
28-3(37 mg，0.246 mmol)的甲醇(3 mL)混合物中加入濃硫酸(0.3 mL)。反應液在65℃攪拌過夜後使用飽和碳酸氫鈉水溶液調節pH到8。濃縮後粗產物經反相製備管柱(流動相A：水(0.1%甲酸)，流動相B：乙腈)分離得到黃色固體化合物
28(12.5 mg，16.14%)。ESI/MS (m/z): 379.0 [M+H]
+。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d
6 ): δ 12.07 (s, 1H), 8.04 (d,
J= 8.6 Hz, 1H), 7.94 (d,
J= 8.7 Hz, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.15 (s, 1H), 7.08 (d,
J= 8.3 Hz, 1H), 6.89 (d,
J= 8.2 Hz, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.83 (s, 3H), 3.31 (s, 2H), 3.13 (d,
J= 6.3 Hz, 2H)。
實施例 26 ：化合物
29的合成
室溫下向化合物
29-1(300 mg，1.309 mmol)和碳酸氫銨(310 mg，3.927 mmol)的DMF(10 mL)溶液中加入三乙胺(397 mg，3.927 mmol)和HATU(746.42 mg，1.963 mmol)。反應液在室溫下攪拌2小時，飽和氯化銨水溶液淬滅反應後乙酸乙酯萃取，無水硫酸鈉乾燥，濃縮後粗產物經矽膠管柱層析(石油醚:乙酸乙酯=1:1)分離得到灰色固體化合物
29-2(150 mg，50.22%)。ESI/MS (m/z): 226.9 [M-H]
-。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d 6): δ 11.82 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.40 (d,
J= 8.7 Hz, 1H), 7.20 (s, 1H), 2.99 (t,
J= 5.9 Hz, 2H), 2.64–2.55 (m, 2H), 2.19 (q,
J= 6.0 Hz, 2H)。
室溫下，向化合物
29-2(150 mg，0.657 mmol)和
29-3(120 mg，0.788 mmol)的甲醇(3 mL)溶液中加入濃硫酸(0.3 mL，5.628 mmol)。反應液在65℃攪拌過夜後使用飽和碳酸氫鈉水溶液調節pH到8。濃縮後粗產物經反相製備管柱(流動相A：水(0.1%甲酸)，流動相B：乙腈)分離得到棕色固體化合物
29(8.5 mg，3.57%)。ESI/MS (m/z): 361.0 [M-H]
-。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d
6 ): δ 11.97 (s, 1H), 9.50 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.88 (dd,
J= 8.7, 1.4 Hz, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.44 (d,
J= 8.7 Hz, 1H), 7.22 (s, 1H), 7.14 (d,
J= 1.8 Hz, 1H), 7.05 (dd,
J= 8.3, 1.6 Hz, 1H), 6.88 (d,
J= 8.1 Hz, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.28 (t,
J= 5.7 Hz, 2H), 3.08 (t,
J= 6.3 Hz, 2H)。
實施例 27 ：化合物
30的合成
室溫下向化合物
30-1(300 mg，1.309 mmol)和
30-2(106 mg，1.571 mmol)的DMF(3 mL)溶液中加入DIEA(1.14 mL，6.545 mmol)和HATU(597 mg，1.571 mmol)，反應液在室溫下攪拌2小時。加水淬滅後，乙酸乙酯萃取(3 × 10 mL)，濃縮後粗產物經矽膠管柱層析(二氯甲烷:甲醇=10:1)分離得到棕色化合物
30-3(180 mg，56.77%)。ESI/MS (m/z): 243.0 [M+H]
+。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d 6): δ 11.84 (s, 1H), 8.39 (d,
J= 4.4 Hz, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.83 (dd,
J= 8.7, 1.4 Hz, 1H), 7.43 (d,
J= 8.7 Hz, 1H), 2.99 (t,
J= 5.9 Hz, 2H), 2.82 (d,
J= 4.5 Hz, 3H), 2.66–2.55 (m, 2H), 2.18 (p,
J= 5.9 Hz, 2H)。
室溫下向化合物
30-3(180 mg，0.743 mmol)和
30-4(135 mg，0.892 mmol)的甲醇(3 mL)溶液中加入濃硫酸(0.3 mL，5.629 mmol)。反應液在80℃攪拌過夜後使用飽和碳酸氫鈉水溶液調節pH到8，濃縮後粗產物經反相製備管柱(流動相A:水(0.1%甲酸)，流動相B：乙腈)分離得到黃色固體化合物
30(11.3 mg，4.04%)。ESI/MS (m/z): 377.1 [M+H]
+。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d
6 ): δ 11.96 (s, 1H), 9.47 (s, 1H), 8.39 (d,
J= 4.6 Hz, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.83 (d,
J= 10.4 Hz, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.42 (s, 1H), 7.13 (s, 1H), 7.05 (d,
J= 10.1 Hz, 1H), 6.87 (d,
J= 8.1 Hz, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.27 (t,
J= 6.4 Hz, 2H), 3.07 (t,
J= 6.3 Hz, 2H), 2.80 (d,
J= 4.5 Hz, 3H)。
實施例 28 ：化合物
31的合成
室溫下向化合物
31-1(1.2 g，5.945 mmol)，
31-2(1 g，8.918 mmol)的水(100 mL)溶液中加入濃鹽酸(5 mL)。反應液在120℃迴流過夜。冷卻到室溫後過濾收集生成的固體，並用冰水洗滌，經矽膠管柱層析(石油醚:乙酸乙酯=1:1)後得到黃色固體化合物
31-3(120 mg，8.23%)。ESI-MS (m/z): 245.95 [M+H]
+。
室溫下向化合物
31-3(120 mg，0.489 mmol)，
31-4(89 mg，0.587 mmol)的甲醇(5 mL)溶液中加入濃硫酸(0.5 mL，9.381 mmol)。反應液65℃攪拌過夜後用飽和碳酸鈉水溶液調節pH到8，濃縮後粗產物經反相製備管柱分離得到黃色固體化合物
31(74.0 mg，38.31%)。ESI/MS (m/z): 380.0 [M+H]
+。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d
6 ): δ 11.49 (s, 1H), 9.42 (s, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.10 (s, 2H), 7.01 (d,
J= 8.0 Hz, 1H), 6.86 (d,
J= 8.0 Hz, 1H), 6.85 (s, 1H), 3.82 (s, 6H), 3.79 (s, 3H), 3.19 (t,
J= 6.4 Hz, 2H), 2.98 (t,
J= 6.3 Hz, 2H)。
實施例 29 ：化合物
32的合成
室溫下向化合物
32-1(300 mg，1.695 mmol)和
32-2(228 mg，2.034 mmol)的水(20 mL)溶液中加入濃鹽酸(0.5 mL，16.456 mmol)。反應液在120℃攪拌過夜。收集生成的固體並使用水(30 mL)洗滌得到棕色固體化合物
32-3(170 mg, 39.48%)。ESI/MS (m/z): 255.1 [M+H]
+。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d 6): δ 12.17 (s, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 2.94 (d,
J= 11.7 Hz, 2H), 2.64-2.54 (m, 2H), 2.15 (p,
J= 5.9 Hz, 2H)。
室溫下向化合物
32-3(170 mg，0.669 mmol)和
32-4(122 mg，0.803 mmol)的甲醇(3 mL)溶液中加入濃硫酸(0.3 mL，5.629 mmol)。反應液在65℃攪拌過夜後使用飽和碳酸氫鈉水溶液調節pH到8。濃縮後粗產物經反相製備管柱(流動相A：水(0.1%甲酸)，流動相B：乙腈)分離得到黃色固體化合物
32(27 mg，10.40%)。ESI/MS (m/z): 388.1 [M+H]
+。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d
6 ): δ 12.30 (s, 1H), 9.51 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.50 (d,
J= 1.6 Hz, 1H), 7.13 (s, 1H), 7.05 (d,
J= 8.1 Hz, 1H), 6.88 (d,
J= 8.1 Hz, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.24 (t,
J= 5.8 Hz, 2H), 3.02 (t,
J= 6.2 Hz, 2H)。
實施例 30 ：化合物
33的合成
室溫下向化合物
33-1(1.2 g，6.833 mmol)和
33-2(0.92 g，8.200 mmol)的水(100 mL)溶液中加入濃鹽酸(2.40 mL，78.989 mmol)。反應液在120℃攪拌過夜，濃縮後粗產物經矽膠管柱層析(石油醚：乙酸乙酯=1:1)得到黃色固體化合物
33-3(400 mg，27.07%)。ESI/MS (m/z): 217.1 [M+H]
+。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d
6 ) δ 11.46 (s, 1H), 7.73 (d,
J= 8.9 Hz, 1H), 6.79 (d,
J= 8.9 Hz, 1H), 3.91 (s, 3H), 2.94 (t,
J= 6.0 Hz, 2H), 2.63–2.54 (m, 2H), 2.14 (p,
J= 6.2 Hz, 2H)。
室溫下向化合物
33-3(400 mg，1.850 mmol)和
33-4(309 mg，2.035 mmol)的甲醇(5 mL)溶液中加入濃硫酸(0.40 mL，7.511 mmol)。反應液在65℃攪拌過夜後用飽和碳酸氫鈉水溶液調節pH到8，濃縮後粗產物經反相製備管柱(流動相A：水(10 mmol/L碳酸氫銨)，流動相B：乙腈)分離得到黃色固體化合物
33(110 mg，16.43%)。ESI/MS (m/z): 351.0 [M+H]
+。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d
6 ): δ 11.87 (s, 1H), 9.48 (s, 1H), 7.75 (d,
J= 8.9 Hz, 1H),7.61 (s, 1H), 7.13 (s, 1H), 7.03 (s, 1H), 6.89 (d,
J= 8.1 Hz, 1H), 6.81 (d,
J= 8.9 Hz,1H), 3.91 (s, 3H), 3.84 (s, 3H), 3.23 (t,
J= 5.7 Hz, 2H), 3.01 (t,
J= 6.2 Hz, 2H)。
實施例 31 ：化合物
34的合成
0℃下向化合物
34-1(1 g，7.924 mmol)和甲酸乙酯(880 mg，11.886 mmol)的1,4-二氧六環(10 mL)溶液中加入乙醇鈉(1 g，15.848 mmol)。反應液在室溫下攪拌1小時後使用2 M的鹽酸調節pH 到2，乙酸乙酯萃取，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，濃縮後粗產物經矽膠管柱層析(石油醚:乙酸乙酯=5:1)分離得到棕色油狀液體
34-2(600 mg，49.10%)。ESI/MS (m/z): 153.2 [M-H]
-。
0℃下向化合物對甲基苯胺(500 mg，4.666 mmol)和濃鹽酸(3.7 mL，123.416 mmol)的水(20 mL)溶液中加入亞硝酸鈉(643 mg，9.332 mmol)的水(10 mL)溶液。0℃下向該反應液中繼續加入化合物
34-2(719 mg，4.666 mmol)和乙酸鈉(842 mg，10.265 mmol)的甲醇和水混合溶液(40 mL，1:1)。反應液繼續在室溫下攪拌2小時。收集生成的固體並用水(30 mL)洗滌得到黃色固體化合物
34-3(255 mg，22.37%)。ESI-MS (m/z): 245.0 [M+H]
+。
室溫下向化合物
34-3(250 mg，1.023 mmol)和醋酸(0.1 mL)的甲醇(1 mL)溶液中加入濃硫酸 MeOH(0.1 mL)反應液在65℃攪拌24小時後使用飽和碳酸氫鈉水溶液調節pH到8。乙酸乙酯(2 × 10 mL)萃取，濃縮後粗產物經矽膠管柱層析(石油醚:乙酸乙酯=3:1)分離得到黃色固體化合物
34-4(88 mg, 37.84%)。ESI/MS (m/z): 228.3 [M+H]
+。
室溫下向化合物
34-4(80 mg，0.352 mmol)和
34-5(64 mg，0.422 mmol)的甲醇(2 mL)混合溶液中加入濃硫酸(0.2 mL，3.752 mmol)。反應液在65℃攪拌過夜後使用飽和碳酸氫鈉水溶液調節pH到8。濃縮後粗產物經反相製備管柱(流動相A:水(10 mmol/L碳酸氫銨)，流動相B：乙腈)分離得到黃色固體化合物
34(28 mg，22.01%)。ESI/MS (m/z): 362.1 [M+H]
+。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d
6 ): δ 11.60 (s, 1H), 9.47 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.33 (d,
J= 8.5 Hz, 1H), 7.16–7.11 (m, 1H), 7.11 (d,
J= 1.6 Hz, 1H), 7.04 (dd,
J= 8.2, 1.5 Hz, 1H), 6.87 (d,
J= 8.1 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.07 (s, 2H), 2.39 (s, 3H), 1.47 (s, 6H)。
實施例 32 ：化合物
35的合成
0℃下向化合物
35-1(2 g，23.776 mmol)和甲酸乙酯(6.28 g，71.328 mmol)的甲苯(23 mL)溶液中加入氫化鈉(1.71 g，71.328 mmol)。反應液在室溫下攪拌2小時後使用2 M鹽酸調節pH到2。乙酸乙酯(3 × 50mL)萃取，濃縮後得到無色油狀液體
35-2(1.5 g，56.26%)。ESI/MS (m/z): 113.1 [M+H]
+。
0℃下向化合物對甲基苯胺(477 mg, 4.459 mmol)和濃鹽酸(1 mL)的水(20 mL)溶液中加入亞硝酸鈉(615 mg, 8.918 mmol)的水(10 mL)溶液。0℃下向上述混合物中加入化合物
35-2(500 mg, 4.459 mmol)和乙酸鈉(804 mg, 9.810 mmol)的甲醇和水混合溶液(40 mL，1:1)。反應液在0 ℃攪拌1小時。收集生成的固體並用水(3 × 50 mL)洗滌得到黃色固體化合物
35-3(800 mg, 88.70%)。ESI/MS (m/z): 203.0 [M+H]
+。
室溫下向化合物
35-3(400 mg, 1.978 mmol)的乙腈(10 mL)溶液中加入濃硫酸(0.4 mL, 7.504 mmol)。反應液在65℃攪拌2小時後使用飽和碳酸氫鈉水溶液調節pH 到7。乙酸乙酯(3 × 30 mL)萃取，濃縮後粗產物經矽膠管柱層析(石油醚:乙酸乙酯=5:1)分離得到黃色固體化合物
35-4(150 mg, 40.95%)。ESI/MS (m/z): 186.2 [M+H]
+。
室溫下向化合物
35-4(150 mg, 0.810 mmol)和
35-5(147 mg, 0.972 mmol)的甲醇混合溶液中加入濃硫酸(0.4 mL, 7.504 mmol)。反應液在65℃攪拌過夜後使用飽和碳酸氫鈉水溶液調節pH 到8。濃縮後粗產物經反相製備管柱(流動相A:水(10 mmol/L碳酸氫銨)，流動相B：乙腈)分離得到黃色固體化合物
35(22 mg，8.51%)。ESI/MS (m/z): 320.0 [M+H]
+。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d
6 ): δ 11.72 (s, 1H), 9.62 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.36 (d,
J= 8.5 Hz, 1H), 7.32 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.23 (d,
J= 8.3 Hz, 1H), 7.20 (d,
J= 8.5 Hz, 1H), 6.90 (d,
J= 8.1 Hz, 1H), 3.99 (s, 2H), 3.89 (s, 3H), 2.41 (s, 3H)。
實施例 33 ：化合物
36的合成
0℃下向化合物
36-1(1 g，8.607 mmol)和甲酸乙酯(0.64 g， 8.607 mmol)的二氧六環(10 mL)混合物中加入甲醇鈉(0.47 g，8.607 mmol)。反應液在室溫下攪拌2小時後使用2 M鹽酸調節pH到7，乙酸乙酯(3 × 30mL)萃取，飽和食鹽水(30 mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，濃縮後粗產物經矽膠管柱層析(石油醚:乙酸乙酯=5:1）分離得到淺棕色固體化合物
36-2(490 mg，39.48%)。ESI/MS (m/z): 145.0 [M+H]
+。
0℃下向化合物對甲基苯胺(334 mg，3.121 mmol)和濃鹽酸(1.5 mL)的水(10 mL)溶液中加入亞硝酸鈉(431 mg，6.242 mmol)的水(10 mL)溶液。在該反應液中加入化合物
36-2(450 mg，3.121 mmol)和乙酸鈉（563 mg，6.242 mmol）的水和甲醇溶液中(20 mL，1:1)。反應液在室溫下攪拌2小時。收集生成的固體並使用水(3 × 100mL)得到黃色固體化合物
36-3(180 mg，24.61%)。ESI/MS (m/z): 235.0 [M+H]
+。
室溫下向化合物
36-3(160 mg，0.683 mmol)和醋酸(0.1 mL)的甲醇(1 mL)溶液中加入濃硫酸(0.2 mL，3.005 mmol)。反應液在65 ℃攪拌過夜。反應液濃縮後經矽膠管柱層析(石油醚:乙酸乙酯=5:1)分離得到黃色固體化合物
36-4(100 mg，67.40%)。ESI-MS(m/z): 218.2 [M+H]
+。
室溫下向化合物
36-4(80 mg，0.390 mmol)和
36-5(71 mg，0.468 mmol)的甲醇(1 mL)混合物中加入濃硫酸(0.1 mL，1.876mmol)。反應液在65℃攪拌過夜後使用飽和碳酸氫鈉水溶液調節pH到8，濃縮後粗產物經反相製備管柱(流動相A:水(0.1%甲酸)，流動相B：乙腈)分離得到黃色固體化合物
36(8.1 mg，5.91%)。ESI/MS (m/z): 352.0 [M+H]
+。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d
6 ): δ 11.85 (s, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.33 (d,
J= 8.7 Hz, 1H), 7.31 (s, 1H), 7.22–7.16 (m, 1H), 7.11 (d,
J= 1.5 Hz, 1H), 7.06–7.01 (m, 1H), 6.89 (d,
J= 8.1 Hz, 1H), 4.39 (s, 2H), 3.83 (s, 3H), 2.38 (s, 3H)。
實施例 34 ：化合物
37的合成
0℃下向化合物
37-1(1 g，8.915 mmol)和甲酸乙酯(1.32 g，17.830 mmol)的二氧六環(10 mL)混合溶液中加入乙醇鈉(1.21 g，17.830 mmol)。0℃下反應液繼續攪拌1小時後使用2 M鹽酸調節pH到7，乙酸乙酯萃取後，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，濃縮後粗產物經矽膠管柱層析(石油醚:乙酸乙酯=10:1)分離得到淺棕色固體油狀液體
37-2(700 mg，56.01%)。ESI/MS (m/z): 141.1 [M+H]
+。
0℃下向化合物對甲基苯胺(458 mg，4.280 mmol)和濃鹽酸(1.50 mL，48.382 mmol)的水(20 mL)溶液中加入亞硝酸鈉(590 mg，8.560 mmol)的水(5mL)溶液。保持0℃，向該混合物中加入化合物
37-2(600 mg，4.280 mmol)和乙酸鈉(772 mg， 9.416 mmol)的甲醇和水(40 mL，1:1)混合溶液。反應液在室溫下繼續攪拌2小時。收集生成的固體並使用水(3×50 mL)洗滌後經矽膠管柱層析(石油醚:乙酸乙酯=2:1)分離得到棕色固體化合物
37-3(300 mg，30.43%)。ESI/MS (m/z): 231.0 [M+H]
+。
室溫下向化合物
37-3(280 mg，1.216 mmol)和醋酸(1 mL，24.320 mmol)的甲醇(5 mL)溶液中加入濃硫酸(0.5 mL，10.944 mmol)。反應液在65℃攪拌過夜後使用飽和碳酸氫鈉水溶液調節pH到8，乙酸乙酯萃取，飽和食鹽水洗滌，濃縮後粗產物經矽膠管柱層析(石油醚:乙酸乙酯=1:1)分離得到棕色固體化合物
37-4(135 mg，52.06%)。ESI-MS (m/z): 214.2 [M+H]
+。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d
6 ): δ 11.19 (s, 1H), 7.43 (s, 1H), 7.28 (d,
J= 8.4 Hz, 1H), 7.14 – 7.05 (m, 1H), 3.12 – 2.96 (m, 2H), 2.79 – 2.68 (m, 2H), 2.37 (s, 3H), 1.96 (p,
J= 6.1 Hz, 2H), 1.86 (p,
J= 5.7, 5.0 Hz, 2H)。
室溫下向化合物
37-4(100 mg，0.469 mmol)和
37-5(85 mg，0.563 mmol)的甲醇(3 mL)混合物中加入濃硫酸(0.3 mL，5.628 mmol)。反應液在65℃攪拌過夜後使用飽和碳酸氫鈉水溶液調節pH到8，濃縮後粗產物經反相製備管柱(流動相A:水(10 mmol/L碳酸氫銨+0.1%氨水)，流動相B：乙腈)分離得到黃色固體化合物
37(32.6 mg，19.81%)。ESI/MS (m/z): 348.1 [M+H]
+。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d
6 ): δ 11.27 (s, 1H), 9.38 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.44 (s, 1H), 7.32 (d,
J= 8.4 Hz, 1H), 7.12 (dd,
J= 8.4, 1.2 Hz, 1H), 7.07 (d,
J= 1.7 Hz, 1H), 6.98 (dd,
J= 8.2, 1.6 Hz, 1H), 6.87 (d,
J= 8.1 Hz, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.11 (t,
J= 6.3 Hz, 2H), 2.90–2.81 (m, 2H), 2.39 (s, 3H), 2.12 (dt,
J= 11.9, 6.2 Hz, 2H)。
實施例 35 ：化合物
38的合成
室溫條件下向化合物
38-1(78.5 mg，0.400 mmol)和
KZT(159.4 mg，0.800 mmol)的1,4-二氧六環(3 mL)混合物中加入氫氧化鉀(89.8 mg，1.600 mmol)。反應升溫至100 ℃攪拌2小時。反應混合物冷卻到室溫，加入水淬滅反應，所得混合物經乙酸乙酯(3 × 30 mL)萃取。合併的有機層經無水硫酸鈉乾燥、過濾和減壓濃縮。所得粗產物經矽膠管柱層析分離純化(乙酸乙酯:石油醚=1:5)得到黃色固體
38(21.8mg，14.44%)。ESI/MS (m/z) 377.9 [M+H]
+。
1H NMR (400 MHz, DMSO-
d
6 ) δ 11.62 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.45 (s, 1H), 7.32 (d,
J= 8.5 Hz, 1H), 7.17 (dd,
J= 8.4Hz,
J= 1.3Hz, 1H), 6.83 (s, 2H), 3.82 (s, 6H), 3.71 (s, 3H), 3.23 (t,
J= 4.8 Hz, 2H), 3.01 (t,
J= 6.2 Hz, 2H), 2.38 (s, 3H)。
實施例 36 ：化合物
39的合成
室溫條件下向
KZT(200.0 mg，1.004 mmol)和化合物
39-1(149.8 mg，1.004 mmol)的1,4-二氧六環(4 mL)混合物中加入氫氧化鉀(168.6 mg，3.011 mmol)。反應升溫至100°C反應6小時。加入水淬滅反應，所得混合物經乙酸乙酯(3 × 30 mL)萃取。合併的有機層經飽和食鹽水(5 mL)洗滌、無水硫酸鈉乾燥、過濾和減壓濃縮。所得粗產物經矽膠管柱層析分離純化(甲醇:二氯甲烷=1:20)得到橙色固體化合物
39(20.87 mg，6.29%)。ESI/MS (m/z) 330.9 [M+H]
+。
1H NMR (400 MHz, CDCl
3) δ 8.77 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.49-7.43 (m, 3H), 7.34 (d,
J= 8.5 Hz, 1H), 7.22 (dd,
J= 8.5, 1.4 Hz, 1H), 6.77 (d,
J= 8.4 Hz, 2H), 3.34 (t,
J= 6.4 Hz, 2H), 3.09-3.03 (m, 8H), 2.48 (s, 3H)。
實施例 37 ：化合物
40的合成
室溫條室溫條件下向
KZT(200.0 mg，1.004 mmol)和
40-1(175.9 mg，1.004 mmol)的1,4-二氧六環(4 mL)混合物中加入氫氧化鉀(168.6 mg，3.011 mmol)。反應升溫至100°C反應6小時。加入水淬滅反應，所得混合物經乙酸乙酯(3 × 30 mL)萃取。合併的有機層經飽和食鹽水(5 mL)洗滌、無水硫酸鈉乾燥、過濾和減壓濃縮。所得粗產物經矽膠管柱層析分離純化(甲醇:二氯甲烷=1:20)得到橙色固體化合物
40(30.79 mg，8.60%)。ESI/MS (m/z) 357.0 [M+H]
+。
1H NMR (400 MHz, CDCl
3) δ 8.88 (s, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.47-7.45 (m, 3H), 7.34 (d,
J= 8.4 Hz, 1H), 7.21 (dd,
J= 8.4, 1.4 Hz, 1H), 6.62 (d,
J= 8.8 Hz, 2H), 3.40-3.33 (m, 6H), 3.06 (t,
J= 6.4 Hz, 2H), 2.48 (s, 3H), 2.09-2.02 (m, 4H)。
實施例 38 ：化合物
41的合成
室溫條件下向
KZT(200.0 mg，1.004 mmol)和
41-1(205.1 mg，1.004 mmol)的1,4-二氧六環(4 mL)混合物中加入氫氧化鉀(168.6 mg，3.011 mmol)。反應升溫至100°C反應6小時。加入水淬滅反應，所得混合物經乙酸乙酯(3 × 30 mL)萃取。合併的有機層經飽和食鹽水(5 mL)洗滌、無水硫酸鈉乾燥、過濾和減壓濃縮。所得粗產物經矽膠管柱層析分離純化(甲醇:二氯甲烷=1:20)得到深黃色固體化合物
41(120 mg，31.0%)。ESI/MS (m/z) 385.9 [M+H]
+。
1H NMR (400 MHz, CDCl
3) δ 8.94 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.45 (d,
J= 8.5 Hz, 3H), 7.35 (d,
J= 8.4 Hz, 1H), 7.23 (dd,
J= 8.5, 1.4 Hz, 1H), 6.97 (d,
J= 8.8 Hz, 2H), 3.40-3.26 (m, 6H), 3.06 (t,
J= 6.4 Hz, 2H), 2.67-2.54 (m, 4H), 2.48 (s, 3H), 2.39 (s, 3H)。
生物測試例 1 化合物作用機制驗證 1. 化合物的雙標的抑制機制驗證： (1) 化合物對腫瘤幹細胞 (CSC) 中 OCT4 蛋白的抑制作用
受試化合物：KZT、EKZT、KZT-A1(化合物10)、KZT-A3(化合物11)、KZT-A5(化合物5)、KZT-A6(化合物2)、KZT-A7(化合物12)
表1：對OCT4蛋白抑制的受試化合物及其結構式
1. 試驗步驟
| 化合物命名 | 結構式 |
| KZT | |
| EKZT | |
| KZT-A1 (化合物10) | |
| KZT-A3 (化合物11) | |
| KZT-A5 (化合物5) | |
| KZT-A6 (化合物2) | |
| KZT-A7 (化合物12) |
1)細胞來源：內源高表現OCT4的HeLa細胞株3A11，由發明人實驗室建構(Zhou Y et al. Endogenous authentic OCT4A proteins directly regulate FOS/AP-1 transcription in somatic cancer cells. Cell Death Dis. 2018, 9:585)。
2)細胞培養和繼代：上述細胞均貼壁培養於含完全培養基[含DMEM高糖基礎培養液(#SH30243.01B，HyClone)加入終濃度為10% FBS(#1101-500，上海普飛)和Penicillin-Streptomycin雙抗(#SV30010，HyClone)]的6 cm培養皿(#430166，Corning）或T75培養瓶(#3276，Corning)中，培養皿(瓶)置於37℃，5% CO
2，飽和濕度的細胞培養箱(#3111，Thermo Fisher Scientific)中培養。繼代時，先吸走培養基，用PBS磷酸緩衝鹽溶液(#GNM-10944，杭州吉諾)洗滌2次，然後加入適量0.25%胰蛋白酶-0.02% EDTA(#25200-072，Gibco)，搖晃培養皿(瓶)使之均勻覆蓋細胞，置於相差顯微鏡下觀察。待大多數細胞回縮變圓，輕搖即脫落時，迅速加入兩倍胰蛋白酶體積的完全培養基終止，並輕輕將細胞吸沖成單細胞。將細胞懸浮液移到合適大小的離心管內，800rpm離心5min。棄上清液，用新鮮的完全培養基重新懸浮細胞團塊，重新吸沖成單細胞，以1:3-1:6的比率繼代接種至新的培養皿(瓶)並補足完全培養基。置於37℃，5% CO
2的細胞培養箱中培養。
3)細胞加藥處理：將上述HeLa細胞消化酶處理、計數，均按5000細胞/200μl培養液的密度接種至96孔細胞培養盤(#3988，Corning)的每個孔中，置於37℃，5% CO
2的細胞培養箱中培養24 h使細胞充分貼壁。然後分別將含梯度稀釋後(如100μM、10μM等)的各種待測化合物(每種化合物每個濃度設置3個重複孔)以及DMSO(#D5879，Sigma-Aldrich)溶劑對照的完全培養液替換掉原來的培養液，繼續培養48-72 h。
4)檢測樣品製備：收集上述化合物處理48-72h後的HeLa細胞，離心後吸去上清液培養液，用冰浴預冷的PBS洗2次，吸乾液體。加入200μl細胞裂解液(#P0013，碧雲天)，劇烈震盪30s，冰上靜置5min，重複3次。細胞裂解樣品13000 rpm，4℃離心6min，取上清液與4×Laemmli樣品加載緩衝液(#161-0747，Bio-Rad)3:1體積混合成為細胞裂解液蛋白樣品，100℃金屬浴變性6min，樣品用於下列Western blot檢測。
5)OCT4蛋白生物標誌物檢測：將4-15%預製梯度膠(456-8084，Bio-Rad)安裝到電泳槽中，加入足量1×SDS-PAGE電泳緩衝液。使用20μl的移液槍加入20μl上述細胞裂解液蛋白樣品。將電泳槽蓋子蓋上，並接通電源，先以80 V電壓電泳約30 min，待樣品中溴酚藍在濃縮膠與分離膠分界線壓成一條細線時將電壓調至120V，根據目標蛋白以及內參蛋白條帶的大小調整電泳持續時間。將預冷1×轉膜緩衝液倒入合適大小的容器中，按照說明書組裝好泡沫墊-濾紙-膠-PVDF膜-濾紙-泡沫墊的“三明治”結構，裝入電泳槽中。加入冰塊且整個電泳槽冰浴，連通電源進行轉膜，250mA，2h。將PVDF膜(IPVH00010，Millipore)放入由1×TBST配製的5%脫脂奶粉中室溫封阻1h。然後依次進行不同一抗(anti-OCT4A，#2890S，CST； anti-GAPDH [HRP]，#A00191-40，GenScript)和二抗(anti-Mouse IgG HRP-linked antibody，#7076，CST；anti-Rabbit IgG HRP-linked antibody，#7074，CST)的培育(分別室溫培育1h)與洗膜(1×TBST洗膜3次，每次5min)。最後，將PVDF膜放至塑料膜中間，加入ECL膜上反應3 min，蓋上另一層塑料膜，在全自動化學發光/螢光圖像分析系統(5200-Multi，天能)中曝光。
2. 試驗結果
圖2是受試化合物對HeLa細胞中OCT4蛋白的抑制作用。如圖2所示，各受試化合物對OCT4蛋白均有不同程度的抑制作用，其中KZT-A5向下調控OCT4蛋白的效果最明顯。而且，與KZT-A5給藥濃度為10μM相比，KZT-A5給藥濃度為100μM對OCT4蛋白的抑制作用更加明顯，表明KZT-A5能夠劑量依賴型抑制HeLa細胞中OCT4蛋白的表現。
(2) 化合物對腫瘤幹細胞 (CSC) 中 OCT4 標的基因 NANOG 轉錄的抑制作用
受試化合物：KZT-A5(化合物5)、AH057(AH057的結構式如下式A所示，以下均以AH057來代指此化合物)
1.試驗步驟
1)細胞來源：內源高表現OCT4的HeLa細胞株3A11，由發明人實驗室製備。
2)細胞培養和繼代：與上述“化合物對腫瘤幹細胞(CSC)中OCT4蛋白的抑制作用”中的細胞培養和繼代方法相同。
3)細胞加藥處理：與上述“化合物對腫瘤幹細胞(CSC)中OCT4蛋白的抑制作用”中的細胞加藥處理方法相同。將子宮頸癌細胞HeLa-3A11分別用DMSO(NC，空白對照)、20 μM AH057、20 μM KZT-A5處理3、6、12小時。細胞樣品提取RNA後，用螢光定量PCR(qRT-PCR)檢測所示基因的mRNA位準。
2.試驗結果
圖3是KZT-A5和對照化合物(AH057)對HeLa細胞中OCT4標的基因NANOG轉錄的抑制作用，反應了對OCT4蛋白的抑制作用。如圖3所示，經過20μM KZT-A5處理不同時間後，OCT4和NANOG的mRNA位準均有不同程度的向下調控，此結果暗示KZT-A5可透過競爭性破壞OCT4/SOX2/DNA複合體形成，抑制OCT4蛋白與NANOG等標的基因啟動子區的結合，進而抑制其轉錄。KZT-A5在抑制NANOG基因轉錄方面的效果與AH057基本相當，暗示KZT-A5可能與AH057具有相同的作用標的和作用機制，即透過競爭性破壞OCT4/SOX2/DNA複合體形成，抑制OCT4蛋白與標的基因結合，進而促進PSC和CSC分化。值得注意的是，在經過6個小時的處理後，NANOG的mRNA位準向下調控效果最為明顯，且細胞在處理6小時和12小時的情況下，KZT-A5對NANOG的mRNA位準向下調控的能力均優於AH057。
(3) 化合物對 JAK/STAT 信號途徑的抑制作用
受試化合物：KZT-A5(化合物5)、AH057
1.試驗步驟
1)細胞來源：內源高表現OCT4的HeLa細胞株3A11，由發明人實驗室製備。
2)細胞培養和繼代：與上述“化合物對腫瘤幹細胞(CSC)中OCT4蛋白的抑制作用”中的細胞培養和繼代方法相同。
3)細胞加藥處理：將上述HeLa細胞消化酶處理、計數，均按5000細胞/200μl培養液的密度接種至96孔細胞培養盤(#3988，Corning)的每個孔中，置於37℃，5% CO
2的細胞培養箱中培養24 h使細胞充分貼壁。然後分別將1μM、10μM、100μM的KZT化合物和AH057(每種化合物每個濃度設置3個重複孔)以及DMSO(#D5879，Sigma-Aldrich)溶劑對照的完全培養液替換掉原來的培養液，繼續培養72h。
4)檢測樣品製備：與上述“化合物對腫瘤幹細胞(CSC)中OCT4蛋白的抑制作用”中的檢測樣品製備方法相同。
5) JAK/STAT信號途徑生物標誌物檢測：HeLa細胞已被報導可透過IL-6自分泌途徑持續活化JAK1/2並進一步活化STAT3。與上述“化合物對腫瘤幹細胞(CSC)中OCT4蛋白的抑制作用”中的信號途徑生物標誌物檢測方法相同，其中抗體為：一抗(anti-OCT4A，#2890S，CST； anti-AKT(Pan)，#4821，CST；anti-pAKT-S473，#4060，CST；anti-STAT3，#4904，CST；anti-pSTAT3-Y705, #9145, CST; anti-GAPDH [HRP]，#A00191-40，GenScript)和二抗(anti-Mouse IgG HRP-linked antibody，#7076，CST；anti-Rabbit IgG HRP-linked antibody，#7074，CST)。
2.試驗結果
圖4是KZT-A5與對照化合物(AH057)對HeLa細胞中JAK/STAT信號途徑生物標誌物的抑制作用，還反應了對OCT4蛋白的抑制作用。如圖4所示，STAT3活性受到抑制，說明KZT-A5能劑量依賴性地有效抑制JAK1/2-STAT3信號途徑的活化。透過抑制JAK1/2的激酶活性，抑制STAT3的活化，進而抑制其標的基因OCT4的轉錄。由於STAT3可部分介導OCT4等幹性基因的轉錄(Kim SY et al. Role of the IL-6-JAK1-STAT3-Oct-4 pathway in the conversion of non-stem cancer cells into cancer stem-like cells. Cell Signal. 2013, 25:961-9)，KZT-A5可透過不同路徑協同阻斷OCT4和NANOG等幹性基因的轉錄，促進腫瘤幹細胞分化並抑制其增殖。
以上化合物對HeLa細胞的OCT4蛋白以及JAK1/2-STAT3信號途徑的抑制作用結果表明，KZT系列化合物能同時標靶OCT4蛋白和JAK1/2。一方面透過阻斷OCT4/SOX2/DNA複合體形成而抑制OCT4和NANOG幹性因子的轉錄，另一方面透過抑制JAK1/2激酶活性而抑制其下游的STAT3轉錄活性，是一類在OCT4自身轉錄和OCT4轉錄活性兩個環節上同時發揮抑制作用的一藥雙標的的候選藥物。這樣的雙標的抑制機制能夠同時標靶抑制、清除CSC和分化腫瘤細胞，為徹底阻斷CSC和分化腫瘤細胞之間的雙向轉化提供可能，在根除腫瘤方面具有良好的潛在應用前景。
生物測試例 2 化合物體外藥效學試驗(1)化合物對腫瘤細胞形成腫瘤微球的抑制作用
受試化合物：KZT-A5(化合物5)、AH057
1.試驗步驟
1)細胞來源：子宮頸癌細胞HeLa和Caski，肝癌細胞Hep3B和Huh7，均購自中科院細胞庫(上海)。
2)腫瘤微球培養：腫瘤微球的具體培養方法參見文獻(Cheng J et al. Tryptophan derivatives regulate the transcription of Oct4 in stem-like cancer cells. Nat Commun. 2015，6:7209.)將各腫瘤細胞分別培養在添加了2% B27、10 ng/ml BFGF、5 ng/ml EGF、10 ng/ml LIF的培養基中，以形成富含CSC的腫瘤微球。
3)細胞加藥處理：HeLa細胞株和Huh7細胞株以每孔200個細胞的密度接種在添加有上述培養基的6孔盤中，Hep3B細胞株和Caski細胞株以每孔2000個細胞的密度接種在添加有上述培養基的6孔盤中。再加入濃度為1μM、10μM的KZT-A5和AH057，處理48小時後觀察腫瘤微球的形態、拍照記錄。
2.試驗結果
圖5為KZT-A5和對照化合物(AH057)對腫瘤微球處理48小時後的細胞形態學表徵。如圖5所示，用KZT-A5處理過的腫瘤微球呈散在分佈，且KZT-A5給藥濃度為10μM相比於KZT-A5給藥濃度為1μM具有更好的抑制腫瘤微球形成的效果，說明KZT-A5能劑量依賴型地抑制腫瘤微球的形成，證實其具有促進CSC分化和/或抑制CSC增殖的能力。根據腫瘤微球體系的實驗結果可知，KZT-A5能促進CSC和腫瘤細胞的分化和凋亡，抑制腫瘤細胞增殖和侵襲遷移。
透過對比AH057和KZT-A5對Huh7細胞培養的腫瘤微球的作用效果可知，1μM的KZT-A5相比於同濃度的AH057具有更明顯的抑制效果，說明KZT-A5有希望在抑制肝癌細胞增殖、分化方面具有比AH057更好的藥效。
透過對比AH057和KZT-A5對HeLa和Caski細胞培養的腫瘤微球的作用效果可知，KZT-A5濃度在達到10μM時，其對子宮頸癌細胞培養的腫瘤微球的抑制作用比對照化合物AH057的抑制作用更明顯。
(2) 化合物對不同組織來源的人源腫瘤細胞株的抑制作用 ( 一 )
受試化合物：KZT-A5(化合物5)
1.試驗步驟
1)細胞來源：HeLa(人子宮頸癌細胞)、CaSki(人子宮頸癌腸轉移細胞)、Huh7(人肝癌細胞)、HepG2(人肝癌細胞)、Hep3B(人肝癌細胞)均購自中科院細胞庫(上海)；LO2(人正常肝細胞)、HcerEpic(人正常子宮上皮細胞)來自ATCC。
2)細胞培養和繼代：與上述“化合物對腫瘤幹細胞(CSC)中OCT4蛋白的抑制作用”中的細胞培養和繼代方法相同。
3)細胞加藥處理：將上述每種細胞消化酶處理、計數，均按5000細胞/200μl培養液的密度接種至96孔細胞培養盤(#3988，Corning)的每個孔中，置於37℃，5%CO
2的細胞培養箱中培養24h使細胞充分貼壁。然後分別將含梯度稀釋後的KZT-A5(每個濃度設置3個重複孔)以及DMSO(#D5879，Sigma-Aldrich)溶劑對照的完全培養液替換掉原來的培養液，繼續培養72 h。
4)藥效學測定和統計：先用倒置相差顯微鏡(X71，Olympus)對上述化合物處理後的細胞進行形態觀察和拍照記錄。然後分別將含CCK-8檢測試劑(#E606335，上海生工)的無酚紅培養液替換掉原來的培養液，培養箱中繼續培養2h。然後在多功能酶標儀(168-1130，Bio-Rad)上測量OD450nm吸光值(OD值)。受試化合物處理細胞後，細胞存活率(cell survival rate)或細胞增殖率(cell growth rate)的計算公式為：存活率=加藥組OD值/對照組OD值×100%；化合物對細胞增殖的抑制率(growth inhibition rate)計算公式為：抑制率=(對照組OD值-加藥組OD值)/對照組OD 值×100% 。進一步根據抑制率數值在SPSS中計算出各化合物的IC
50。化合物對每種腫瘤細胞的IC
50值數據為一次實驗中三個複孔的平均值。
2. 試驗結果
表2 KZT-A5對多種人源腫瘤細胞株體外增殖的抑制活性
| 細胞株 | IC 50(μM) |
| HeLa(人子宮頸癌細胞) | 0.57 |
| CaSki(人子宮頸癌腸轉移細胞) | 6.38 |
| Huh7(人肝癌細胞) | 0.80 |
| HepG2(人肝癌細胞) | 3.13 |
| Hep3B(人肝癌細胞) | 36.56 |
| LO2(人正常肝細胞) | 82.08 |
| HcerEpic(人正常子宮上皮細胞) | ＞100 |
由表2可知，KZT-A5對人肝癌細胞中的Huh7細胞株以及人子宮頸癌細胞中的HeLa細胞株的IC
50值較小，均低於1μM，說明其具有較優的抑制肝癌細胞和子宮頸癌細胞增殖的能力。此外，化合物8、14、16、18、19、20、21、22、23、24、25、27、28、31、32、33、34、35、36、37和38對人子宮頸癌細胞中的HeLa細胞株的IC
50值均小於50μM。
(3) 化合物對不同組織來源的人源腫瘤細胞株的抑制作用 ( 二 )
受試化合物：KZT-A5(化合物5)、AH057
1. 試驗步驟
1)細胞來源：Huh7(人肝癌細胞)、HepG2(人肝癌細胞)、Hep3B(人肝癌細胞)、HeLa(人子宮頸癌細胞)均購自中科院細胞庫(上海)， LO2(人正常肝細胞)來自ATCC。
2)細胞培養和繼代：與上述“化合物對不同組織來源的人源腫瘤細胞株的抑制作用(一)”中的細胞培養和繼代方法相同。
3)細胞加藥處理：與上述“化合物對不同組織來源的人源腫瘤細胞株的抑制作用(一)”中的細胞加藥處理方法相同。
4)藥效學測定和統計：與上述“化合物對不同組織來源的人源腫瘤細胞株的抑制作用(一)”中的藥效學測定和統計方法相同。化合物對每種腫瘤細胞的IC
50值數據為一次實驗中三個複孔的平均值±標準差。
2. 試驗結果
圖6是KZT-A5和AH057對不同腫瘤細胞可活性的影響。如圖6所示，與AH057相比，KZT-A5對肝癌細胞中的Huh7和HepG2細胞可活性的抑制作用更加明顯。
表3 KZT-A5與AH057對人源腫瘤細胞的體外抗腫瘤活性
| 細胞株 | IC 50(μM) | ||||
| KZT-A5 | AH057 | P值 | |||
| Huh7(人肝癌細胞) | 1.42 ± 0.12 | 44.21 ± 1.61 | 0.0004 | ||
| HepG2(人肝癌細胞) | 3.16 ± 0.08 | 40.02 ± 0.08 | 0.0017 | ||
| Hep3B(人肝癌細胞) | 23.52 ± 1.51 | 18.02 ± 1.20 | 0.0090 | ||
| LO2(人正常肝細胞) | 96.52 ± 13.04 | 85.53 ± 2.92 | 0.279 | ||
| HeLa(人子宮頸癌細胞) | 0.70 ± 0.01 | 0.63 ± 0.03 | 0.026 | ||
由表3可知，以AH057作為對照，對比KZT-A5和AH057對人肝癌細胞和子宮頸癌細胞的體外藥效。可知KZT-A5對Hep3B和HeLa細胞株的抑制作用與AH057相當。而與AH057相比，KZT-A5對肝癌細胞中的Huh7和HepG2細胞株具有更低的IC
50值，且具有很高的顯著性。這一結果證實KZT-A5對肝癌細胞增殖抑制的效果顯著優於AH057，具有更優的體外藥效。
生物測試例 3 KZT-A5 與 SGI-1027 協同抑制 HeLa 細胞的體外增殖
受試化合物：KZT-A5
SGI-1027是一種DNA甲基轉移酶的抑制劑(DNA Methyltransferase Inhibitor II)，其CAS號為1020149-73-8。依靠Bliss獨立模型篩選確定SGI-1027作為與KZT-A5藥物聯用的化合物，其篩選過程按照以下文獻中的方法進行：Goldoni M, Johansson C. A mathematical approach to study combined effects of toxicants in vitro: evaluation of the Bliss independence criterion and the Loewe additivity model. Toxicol In Vitro. 2007, 21:759-69。
1.試驗步驟
1)細胞來源：HeLa細胞，購自中科院細胞庫(上海)。
2)細胞培養和繼代：與上述“化合物對腫瘤幹細胞(CSC)中OCT4蛋白的抑制作用”中的細胞培養和繼代方法相同。
3)細胞加藥處理：以每孔200個細胞的密度接種在上述培養基的6孔盤中。分為四組，分別加入DMSO(作為空白對照組)，700nM KZT-A5(作為KZT-A5單藥組)，100nM SGI-1027(作為SGI-1027單藥組)，700nM KZT-A5+100nM SGI-1027(作為聯合給藥組)，兩周後分別拍照並統計各組轉殖株數目。
2.試驗結果
圖7是空白對照組、KZT-A5單藥組、SGI-1027單藥組和聯合給藥組對HeLa細胞增殖的抑制作用。圖7A、圖7B和圖7C分別表示三次技術重複的細胞增殖情況。如圖7所示，與DMSO對照組相比，SGI-1027單藥僅小幅抑制了轉殖株形成，KZT-A5單藥顯著抑制了轉殖株形成，而KZT-A5和SGI-1027雙藥聯用幾乎完全抑制了轉殖株形成。
圖8為3次技術重複的轉殖株數均值統計結果，是DMSO、KZT-A5單藥、SGI-1027單藥、KZT-A5+ SGI-1027聯合給藥處理後的細胞轉殖株數統計圖。根據圖8的統計結果，KZT-A5與SGI-1027雙藥聯用後形成的轉殖株數遠低於KZT-A5單藥和SGI-1027單藥所形成的轉殖株數。這是由於KZT-A5和SGI-1027能夠聯合發揮作用，同時抑制JAK/STAT/OCT4和DNMT1途徑，因此具有很強的抑制腫瘤細胞增殖、誘導細胞週期阻滯和凋亡的作用。KZT-A5等化合物和SGI-1027具有高效協同抑制腫瘤細胞增殖的功效。可見，KZT-A5與DNMT抑制劑的聯用方案為同時阻斷多種相互作用的信號途徑/生存途徑的聯合治療提供了新的思路，可在減少劑量的情況下達到治療效果，從而使高劑量單一藥物的毒性和其他副作用最小化，同時降低抗藥的可能性和減少重疊毒性，具有良好的開發前景。
本發明在分子位準上探究了四氫咔唑類化合物的作用機制，驗證了其具有對腫瘤幹細胞(CSC)的雙標的抑制作用，從而能夠同時標靶促進CSC分化和殺滅分化的腫瘤細胞，為徹底阻斷CSC和分化腫瘤細胞之間的雙向轉化提供可能，在根除腫瘤方面具有良好的潛在應用前景。本發明提供的四氫咔唑類化合物對子宮頸癌、肝癌等腫瘤具有顯著的抑制作用，其中針對肝癌的抑制作用更為顯著，與其他對照物相比，對肝癌的抑制作用十分突出且出乎預料，在肝癌治療領域具有非常好的研究與應用前景。
在本發明提及的所有文獻都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻被單獨引用作為參考那樣。此外應理解，在閱讀了本發明的上述講授內容之後，本領域技術人員可以對本發明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落於本申請所附申請專利範圍所限定的範圍。
圖1是本發明提供的部分化合物的合成方法示意圖。
圖2表示的是部分化合物對HeLa細胞中OCT4蛋白的抑制作用。
圖3表示的是化合物KZT-A5和AH057對HeLa細胞中OCT4標的基因NANOG轉錄的抑制作用。
圖4表示的是化合物KZT-A5和AH057對HeLa細胞中JAK1/2-STAT3信號途徑的抑制作用。
圖5表示的是化合物KZT-A5和AH057對腫瘤細胞形成腫瘤微球的抑制作用。
圖6表示的是化合物KZT-A5和AH057對不同組織來源的人源腫瘤細胞株細胞可活性的影響，其中，圖6A為AH057對不同組織來源的人源腫瘤細胞株細胞可活性的影響，圖6B為KZT-A5對不同組織來源的人源腫瘤細胞株細胞可活性的影響。
圖7是化合物KZT-A5單藥、SGI-1027單藥以及KZT-A5+ SGI-1027協同抑制HeLa細胞的體外增殖效果圖，其中，圖7A、圖7B和圖7C是3次技術重複的照片。
圖8是化合物KZT-A5單藥、SGI-1027單藥以及KZT-A5+ SGI-1027協同抑制HeLa細胞的體外增殖轉殖株數的均值統計結果。
Claims (15)
- 一種如式(I)所示的化合物、其光學異構體或其藥學上可接受的鹽： (I) 其中， 為單鍵或雙鍵； R 2為未被取代或被一個或多個R c取代的選自下組的基團：苯基、5-7元雜芳基、8-12元稠合雜芳基； M 1、M 2、M 3、M 4各自獨立選自下組：CH、CD、N；並且，當M 1、M 2、M 3或M 4為CH時，所述的CH上的氫原子可以被R a任意取代； M 5選自下組：CH 2、CHD、CD 2、NH、S、S(=O)、S(=O) 2、S(=O)(=NH)；並且，當M 5為CH 2或NH時，所述的CH 2或NH上的氫原子可以被R b任意取代； 所述的R a選自下組：氫、氘、鹵素、羥基、羧基、氨基、氰基、磺醯基、C(O)NH 2、C 1-5烷基、C 2-5烯基、C 2-5炔基、C 1-5烷氧基、C 1-5鹵代烷基、C 2-5鹵代烯基、C 2-5鹵代炔基、C 1-5鹵代烷氧基、C 2-5酯基、C 1-5羰基、C(O)NH(C 1-5烷基)、C 3-8飽和或部分不飽和碳環基、3-10元飽和或部分不飽和雜環基、C 6-10芳基、5-12元雜芳基；並且，所述的烷基、烯基、炔基、烷氧基、鹵代烷基、鹵代烯基、鹵代炔基、鹵代烷氧基、酯基、羰基、碳環基、雜環基、芳基、雜芳基各自獨立任選地被一個或多個選自下組的取代基取代：鹵素、氘、羥基、羧基、氨基、硝基、氰基、磺醯基、C 1-3烷基、C 1-3胺基； 所述的R b選自下組：氫、氘、鹵素、羥基、羧基、氰基、磺醯基、C 1-5烷基、C 2-5烯基、C 2-5炔基、C 1-5烷氧基、C 1-5鹵代烷基、C 2-5鹵代烯基、C 2-5鹵代炔基、C 1-5鹵代烷氧基、C 2-5酯基、C 1-5羰基、C 3-8飽和或部分不飽和碳環基、3-10元飽和或部分不飽和雜環基、C 6-10芳基、5-12元雜芳基；並且，所述的烷基、烯基、炔基、烷氧基、鹵代烷基、鹵代烯基、鹵代炔基、鹵代烷氧基、酯基、羰基、碳環基、雜環基、芳基、雜芳基各自獨立任選地被一個或多個選自下組的取代基取代：鹵素、氘、羥基、羧基、硝基、氰基、磺醯基、C 1-3烷基、C 1-3胺基； 所述的R c選自下組：氫、氘、鹵素、羥基、羧基、氨基、硝基、氰基、磺醯基、C 1-5烷基、C 2-5烯基、C 2-5炔基、C 1-5烷氧基、C 1-5鹵代烷基、C 2-5鹵代烯基、C 2-5鹵代炔基、C 1-5鹵代烷氧基、C 1-5胺基、C 2-5酯基、C 1-5羰基、C 3-8飽和或部分不飽和碳環基、3-10元飽和或部分不飽和雜環基、C 6-10芳基、5-12元雜芳基；並且，所述的烷基、烯基、炔基、烷氧基、鹵代烷基、鹵代烯基、鹵代炔基、鹵代烷氧基、胺基、酯基、羰基、碳環基、雜環基、芳基、雜芳基各自獨立任選地被一個或多個選自下組的取代基取代：鹵素、氘、羥基、羧基、氨基、硝基、氰基、磺醯基、C 1-3烷基； n為0、1、2或3； x為0、1、2或3； y為0、1或2。 較佳地，所述的化合物不包括選自下組的化合物： 、 、 、 、 、 、 。
- 如請求項1所述的化合物、其光學異構體或其藥學上可接受的鹽，其特徵在於，所述的化合物具有如式(II)或式(III)所示的結構： (II) (III) 其中，R 2、M 1、M 5、R a、R b、n、x、y的定義如請求項1中所述。 在另一優選例中，所述的化合物具有選自下組的結構： 。
- 如請求項1所述的化合物、其光學異構體或其藥學上可接受的鹽，其特徵在於，所述的R 2為未被取代或被一個或多個R c取代的苯基，或未被取代或被一個或多個R c取代的5-10元雜芳基； 所述的R c選自下組：氫、鹵素、羥基、羧基、胺基、硝基、氰基、磺醯基、C 1-5烷基、C 2-5烯基、C 2-5炔基、C 1-5烷氧基、C 1-5鹵代烷基、C 2-5鹵代烯基、C 2-5鹵代炔基、C 1-5鹵代烷氧基、C 1-5胺基、C 2-5酯基。 在另一優選例中，所述的R 2選自下組：苯基、 、 、 、 。
- 如請求項1所述的化合物、其光學異構體或其藥學上可接受的鹽，其特徵在於，所述的R b選自下組：氫、鹵素、羥基、羧基、氰基、磺醯基、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、C 1-4鹵代烷基、C 1-4鹵代烷氧基、C 2-4酯基、C 1-4羰基；並且，所述的烷基、烷氧基、鹵代烷基、鹵代烷氧基、酯基、羰基各自獨立任選地被一個或多個選自下組的取代基取代：鹵素、羥基、羧基、硝基、氰基、磺醯基、C 1-3烷基、C 1-3胺基。
- 如請求項1所述的化合物、其光學異構體或其藥學上可接受的鹽，其特徵在於，所述的R a選自下組：氫、鹵素、羥基、羧基、氰基、C 1-4烷基、C 2-4烯基、C 2-4炔基、C 1-4烷氧基、C 2-4酯基、C 1-4羰基、3-8元飽和或部分不飽和雜環基、C 6-10芳基、5-12元雜芳基；並且，所述的烷基、烯基、炔基、烷氧基、酯基、羰基、雜環基、芳基、雜芳基各自獨立任選地被一個或多個選自下組的取代基取代：鹵素、羥基、羧基、氨基、硝基、氰基、磺醯基、C 1-3烷基、C 1-3胺基。
- 一種式(IA)所示化合物、其光學異構體或其藥學上可接受的鹽： (IA) 其中， R 1為羥基且與1位碳原子以單鍵相連，或者，R 1為氧原子或-N(CH 2) nOH且與1位碳原子以雙鍵相連，其中，n為1或2； 2位碳原子與3位碳原子之間透過單鍵或雙鍵相連；R 2選自無取代或取代的單環基或單雜環基、無取代或取代的稠環基或稠雜環基中的任一種； X、Y、Z各自獨立地選自氫、鹵素、羥基、羧基、氨基、硝基、氰基、磺醯基、C 1~5烷基、C 1~5烷氧基、C 1~5鹵代烷基、C 1~5鹵代烷氧基中的任一種。
- 如請求項6所述的化合物、其光學異構體或其藥學上可接受的鹽，其特徵在於，式Ⅰ所示化合物中，R 1為氧原子，且與1位碳原子以碳氧雙鍵相連；2位碳原子與3位碳原子之間透過碳碳雙鍵相連，包括如下式(IIA)所示化合物： (IIA) 式Ⅱ中： R 2選自無取代或取代的單環基或單雜環基、無取代或取代的稠環基或稠雜環基中的任一種；所述單環基、單雜環基、稠環基或稠雜環基上的取代基選自鹵素、羥基、羧基、氨基、硝基、氰基、磺醯基、C 1~5烷基、C 1~5烷氧基、C 1~5鹵代烷基、C 1~5鹵代烷氧基中的一種或幾種。
- 如請求項7所述的化合物、其光學異構體或其藥學上可接受的鹽，其特徵在於，式Ⅱ所示化合物中，R 2為苯環，且苯環上至少一個氫原子被羥基取代。
- 如請求項1所述的化合物、其光學異構體或其藥學上可接受的鹽，其特徵在於，所述的化合物選自下組： 。
- 一種藥物組成物，包括(1)如請求項1-9任一項所述的化合物、其光學異構體或其藥學上可接受的鹽；和任選的(2)藥學上可接受的載劑、佐劑或其他活性藥物。
- 如請求項10所述的藥物組成物，其特徵在於，所述的藥物組成物還包括第二治療組分，且所述的第二治療組分為DNA甲基轉移酶抑制劑；較佳地，所述的DNA甲基轉移酶抑制劑為SGI-1027。
- 一種如請求項1-9任一項所述的化合物、其光學異構體或其藥學上可接受的鹽，或者如請求項10所述的藥物組成物在製備用於治療和/或預防癌症的藥物中的用途。
- 如請求項12所述的用途，其特徵在於，所述的癌症選自下組：肝癌、肺癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌、子宮頸癌、卵巢癌、頭頸部腫瘤。
- 請求項12所述的用途，其特徵在於，所述的治療和/或預防癌症包括：用請求項1-9任一項所述的式Ⅰ所示化合物、其光學異構體或其藥學上可接受的鹽，或者請求項7所述的藥物組成物與DNA甲基轉移酶抑制劑聯用。
- 如請求項14所述的用途，其特徵在於，所述的DNA甲基轉移酶抑制劑為SGI-1027。
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