CN112341434B - PI3K/mTOR蛋白降解靶向嵌合体类化合物及其制备方法和医药用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种PI3K/mTOR蛋白降解靶向嵌合体(PROTAC)类化合物及其制备方法和医药用途。具体而言，本发明涉及一种通式(I)所示的化合物及其制备方法，以及其作为降解PI3K/mTOR双蛋白激酶的双功能抑制剂的用途，特别是在预防和/或治疗人类疾病包括癌症中的用途。其中，通式(I)中各基团的定义与说明书中的定义相同。

Description

PI3K/mTOR蛋白降解靶向嵌合体类化合物及其制备方法和医 药用途

技术领域

本发明属于医药领域，涉及一种新型蛋白降解靶向嵌合体(PROTAC)类化合物、其制备方法及含有其的药物组合物，以及其作为PI3K/mTOR双激酶抑制剂和蛋白降解剂双功能化合物的用途，特别是在癌症预防和/或治疗中的应用。

背景技术

磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)蛋白家族参与细胞存活、生长、代谢和血糖稳态等多种细胞功能的调控，具有丝氨酸/苏氨酸(Ser/Thr)激酶和磷脂酰肌醇激酶活性。PI3K分为3个类型，其结构与功能各异。其中I型PI3K由催化亚基和调节亚基组成异二聚体，与激活的受体酪氨酸激酶、G蛋白偶联受体或激活的RAS一起在细胞信号传导中发挥重要的作用。调节亚基含有SH2和SH3结构域，与含有相应结合位点的靶蛋白相作用。该亚基通常称为p85。催化亚基有4种，即p110α、β、δ、γ，而δ、γ仅限于白细胞表达，其余则广泛分布于各种细胞中。PI3K激酶活性升高通常与多种人类疾病包括癌症相关联，例如p110α(E542K、E545K、和H1047R)激活突变是临床肿瘤病人中最为常见的高发突变之一。

mTOR(雷帕霉素靶蛋白)是一种丝氨酸/苏氨酸激酶，其介导的信号通路具有促进物质代谢、参与细胞凋亡、自噬和多种疾病包括癌症密切相关。mTOR含有两种复合体，分别为mTORC1和mTORC2。在许多类型人类疾病包括肿瘤中，PI3K/AKT/mTOR信号传导通路被异常的激活(Millis SZ等人,JAMA Oncol.2016；2:1565-1573；Vanhaesebroeck B等人,Nat RevMol Cell Biol.2010；11(5):329-41)。临床前和临床研究发现靶向抑制PI3K或mTOR不但可有效的抑制肿瘤细胞体外和动物体内肿瘤的生长，而切能够有效的应用于癌症的临床治疗，进一步的研究发现同时靶向抑制PI3K和mTOR的双靶点抑制剂呈现良好的肿瘤生长抑制作用,此类双靶点抑制剂正在进行不同阶段的临床试验，尚无被批准上市。

泛素(Ubiquitin)，一种小蛋白分子，由76个氨基酸残基所组成，分子量约8.5kDa，具有高度保守的序列并且广泛存在于真核生物体中。真核生物中编码泛素的基因以串联重复(Tandem repeat)的方式排列，其八个不同的氨基酸残基能够在靶蛋白上形成复杂的多泛素链。泛素化(Ubiquitination)是指泛素分子在一系列特殊的酶作用下，将细胞内的蛋白质分类，从中选出靶蛋白分子，对靶蛋白进行特异性修饰的过程，形成靶蛋白多聚泛素链。这些特殊的酶包括泛素活化酶(E1)、泛素结合酶(E2)、泛素连结酶(E3)等。泛素化是一个三酶级联反应，即需要有由三个酶催化的一系列反应的发生，整个过程也被称为泛素化信号通路。泛素化在蛋白质的定位、代谢、功能、调节和降解中起重要作用，蛋白质泛素化是生物体内一种常见的翻译后修饰，同时参与细胞周期、增殖、凋亡、分化、转移等几乎一切生命活动的调控。泛素化与肿瘤、心血管、自身免疫等疾病的发病密切相关，泛素化成为研究和开发新药物的新靶点。蛋白降解靶向嵌合体(PROTAC)技术是药物研发领域的一个新兴方向。传统小分子的作用是直接调控阻断蛋白质或酶的活性来治疗疾病，往往需要高的靶蛋白结合力和抑制活性，而癌细胞可以通过基因突变引起靶蛋白结构变异或构型改变而出现获得性耐药性。PROTAC平台技术是一个双功能杂合化合物，一边用来结合目标蛋白，另一边用来结合一个E3连接酶，使得目标蛋白可以与E3连接酶结合，把目标蛋白泛素化，从而被蛋白组降解。GSK2126458是一种高选择有效的p110α/β/γ/δ和mTORC1/2双靶点抑制剂，无细胞试验中K_i分别为0.019nM/0.13nM/0.024nM/0.06nM和0.18nM/0.3nM(Knight SD等人,ACSMed Chem Lett.2010；1(1):39-43.)。临床前研究发现GSK2126458具有广谱的抗肿瘤活性，特别是对p110α(E542K、E545K、和H1047R)常见激活突变的肿瘤。然而人体临床I期试验并没有得到令人满意的结果，主要因为其毒副作用和疗效。

本发明人在研究开发新一代PI3K/mTOR双激酶抑制剂的过程中，意外的发现具有双功能的本发明化合物不但能够有效的抑制PI3K或mTOR异常表达肿瘤细胞体外生长，同时可引起两种靶蛋白的降解，特别是与对照母本化合物GSK2126458相比，本发明化合物无论在活性或毒副作用都具有明显的优势，将是一种具有开发价值的PI3K/mTOR双激酶蛋白降解和抑制激酶活性的双功能潜在药物。

发明内容

本发明的目的是提供一种特异性好、活性高、毒性低具有PI3K/mTOR双激酶蛋白降解和激酶活性抑制的双功能的化合物。

因此，本发明的目的是提供一种通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐，

其中：

A选自CQ或N；

A₁、A₂、A₃和A₄各自独立地选自CH或N；

基团-Y₁-Y₂-选自-NHC(O)-或-NHS(O)_q；

R¹选自氢、卤素、氨基、硝基、氰基、羟基、巯基、羧基、酯基、酰基、酰氨基、氧代基、烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，所述氨基、酯基、酰基、酰氨基、烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被选自卤素、氨基、硝基、氰基、羟基、巯基、羧基、酯基、酰基、酰氨基、氧代基、烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基的一个或多个基团所取代；

R²选自氢、卤素、氨基、硝基、氰基、羟基、巯基、羧基、酯基、酰基、酰氨基、氧代基、烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，所述氨基、酯基、酰基、酰氨基、烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被选自卤素、氨基、硝基、氰基、羟基、巯基、羧基、酯基、酰基、酰氨基、氧代基、烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基的一个或多个基团所取代；

J选自单键、杂环基、芳基和杂芳基，所述杂环基、芳基和杂芳基各自独立地任选进一步被选自Q₁基团的一个或多个取代基所取代；

L连接J和E，且选自以下结构：

其中：

Z₁与J基团相连，Z₂与E基团相连；

Z₁和Z₂各自独立地选自CH₂、O、S、NR³、-C(O)NH-、-NHC(O)-、-S(O)_qNH-、-NHS(O)_q-、-OCH₂C(O)NH-和-NHC(O)CH₂O-；

W₁、W₂、W₃和W₄各自独立地选自CH₂、O、S、NR³、C(O)NH-、-NHC(O)-、-S(O)_qNH-和-NHS(O)_q-；

G选自单键、杂环基、芳基和杂芳基，所述杂环基、芳基和杂芳基各自独立地任选进一步被选自选自Q₂基团的一个或多个取代基所取代；

R³选自氢或烷基；

E选自以下结构：

X₁、X₂、X₃和X₄各自独立地选自CQ₃或N；

Q、Q₁、Q₂和Q₃基团各自独立地选自氢、卤素、氨基、硝基、氰基、羟基、巯基、羧基、酯基、酰基、酰氨基、氧代基、烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，所述氨基、酯基、酰基、酰氨基、烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被选自卤素、氨基、硝基、氰基、羟基、巯基、羧基、酯基、酰基、酰氨基、氧代基、烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基的一个或多个基团所取代；

p为0至4的整数；

q为0、1或2；

n₁、n₂、n₃、n₄和n₅各自独立地为0至15的整数；

m₁、m₂、m₃和m₄各自独立地为0至15的整数。

在一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其为通式(II)所示的化合物或其药学上可接受的盐：

其中

A₅和A₆各自独立地选自CH或N；

Q₁选自氢、卤素、氨基、硝基、氰基、羟基、巯基、羧基、酯基、酰基、酰氨基、氧代基、烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，所述氨基、酯基、酰基、酰氨基、烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被选自卤素、氨基、硝基、氰基、羟基、巯基、羧基、酯基、酰基、酰氨基、氧代基、烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基的一个或多个基团所取代；

r为0至4的整数；

A、A₁、A₂、A₃、A₄、-Y₁-Y₂-、R¹、R²、L、E和p如通式(I)中所定义。

在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其为通式(III)所示的化合物或其药学上可接受的盐，

其中，A、A₁、A₂、A₃、A₄、-Y₁-Y₂-、R¹、R²、L、E和p如通式(I)中所定义。

在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中：A选自CH或N。

在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

A₁、A₂、A₃和A₄中的一个或两个选自N，其余选自CH；

基团-Y₁-Y₂-选自-NHC(O)-或-NHS(O)_q；

R¹选自氢、卤素、氨基、硝基、氰基、羟基、巯基、羧基、酯基、酰基、酰氨基、氧代基、烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，所述氨基、酯基、酰基、酰氨基、烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被选自卤素、氨基、硝基、氰基、羟基、巯基、羧基、酯基、酰基、酰氨基、氧代基、烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基的一个或多个基团所取代；

R²选自氢、卤素、氨基、硝基、氰基、羟基、巯基、羧基、酯基、酰基、酰氨基、氧代基、烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，所述氨基、酯基、酰基、酰氨基、烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被选自卤素、氨基、硝基、氰基、羟基、巯基、羧基、酯基、酰基、酰氨基、氧代基、烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基的一个或多个基团所取代；

p为0至2的整数；

q为1或2。

在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

基团

选自以下结构：

其中：

基团-Y₁-Y₂-选自-NHC(O)-或-NHS(O)_q；

R¹选自氢、卤素、氨基、硝基、氰基、羟基、巯基、羧基、酯基、酰基、酰氨基、氧代基、烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，所述氨基、酯基、酰基、酰氨基、烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被选自卤素、氨基、硝基、氰基、羟基、巯基、羧基、酯基、酰基、酰氨基、氧代基、烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基的一个或多个基团所取代；

R²选自氢、卤素、氨基、硝基、氰基、羟基、巯基、羧基、酯基、酰基、酰氨基、氧代基、烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，所述氨基、酯基、酰基、酰氨基、烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基任选进一步被选自卤素、氨基、硝基、氰基、羟基、巯基、羧基、酯基、酰基、酰氨基、氧代基、烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基的一个或多个基团所取代；

p为0至2的整数；

q为1或2。

在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

E选自以下结构：

X₁、X₂、X₃和X₄各自独立地选自CQ₃，优选CH；

Q₃选自氢、卤素、氨基、氰基、羟基、巯基、氧代基、烷基、烷氧基、环烷基和杂环基，所述氨基、烷基、烷氧基、环烷基和杂环基任选进一步被选自卤素、氨基、硝基、氰基、羟基、巯基、羧基、酯基、酰基、酰氨基、氧代基、烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基的一个或多个基团所取代。

在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

L选自以下结构：

Z₁与J基团相连，Z₂与E基团相连；

Z₁和Z₂各自独立地选自O、S、NR³、-C(O)NH-、-NHC(O)-、-S(O)_qNH-、-NHS(O)_q-、-OCH₂C(O)NH-和-NHC(O)CH₂O-；

W₁和W₂各自独立地选自O、S、NR³、C(O)NH-、-NHC(O)-、-S(O)_qNH-和-NHS(O)_q-；

R³选自氢或烷基；

n₁、n₂、n₃、n₄和n₅各自独立地为0至15的整数，优选0至6的整数。

在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

L选自以下结构：

其中：

Z₁与J基团相连，Z₂与E基团相连；

Z₁和Z₂各自独立地选自O、S、NR³、-C(O)NH-、-NHC(O)-、-S(O)_qNH-、-NHS(O)_q-、-OCH₂C(O)NH-和-NHC(O)CH₂O-；

W₃和W₄各自独立地选自O、S、NR³、C(O)NH-、-NHC(O)-、-S(O)_qNH-和-NHS(O)_q-；

G选自杂环基和杂芳基，所述杂环基和杂芳基各自独立地任选进一步被选自选自Q₂基团的一个或多个取代基所取代；

R³选自氢或烷基；

Q₂选自氢、卤素、羟基、巯基、烷基、烷氧基，所述烷基、烷氧基任选进一步被选自卤素、氨基、硝基、氰基、羟基、巯基、羧基、酯基、酰基、酰氨基、氧代基、烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基的一个或多个基团所取代；

m₁、m₂、m₃和m₄各自独立地为0至15的整数，优选0至6的整数。

在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

L选自以下结构：

n₅选自0至15的整数，优选0至6的整数。

在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

L选自以下结构：

n₁、n₂、n₃和n₄各自独立地为0至15的整数，优选0至6的整数。

在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

L选自以下结构：

n₁、n₃和n₄各自独立地为0至15的整数，优选0至6的整数。

在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

L选自以下结构：

其中：

Z₁与J基团相连，Z₂与E基团相连；

Z₁和Z₂各自独立地选自O、S、NR³、-C(O)NH-、-NHC(O)-、-S(O)_qNH-、-NHS(O)_q-、-OCH₂C(O)NH-和-NHC(O)CH₂O-；

W₃和W₄各自独立地选自O、S、NR³、C(O)NH-、-NHC(O)-、-S(O)_qNH-和-NHS(O)_q-；

G选自以下基团：

G任选进一步被选自Q₂基团的一个或多个取代基所取代；

R³选自氢或烷基；

Q₂选自氢、卤素、羟基、巯基、烷基、烷氧基，所述烷基、烷氧基任选进一步被选自卤素、氨基、硝基、氰基、羟基、巯基、羧基、酯基、酰基、酰氨基、氧代基、烷基、烯基、炔基、烷氧基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基的一个或多个基团所取代；

m₁、m₂、m₃和m₄各自独立地为0至15的整数，优选0至6的整数。

本发明典型的化合物包括但不限于以下化合物：

或其药学上可接受的盐。

本发明进一步涉及一种根据本发明所述的通式(II)所示的化合物或其药学可接受的盐的制备方法：

所述方法包括以下步骤：

将化合物IIA与硼酸酯类化合物IIB在溶剂中，在催化剂和碱的存在下通过suzuki反应得到通式(II)化合物；

所述溶剂优选甲苯、N,N-二甲基甲酰胺、二氧六环、水、二甲基亚砜或其混合溶剂；

所述碱优选碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠、叔丁醇钠、叔丁醇钾和氢氧化钠；

所述催化剂优选Pd(PPh₃)₄和Pd(dppf)Cl₂；

其中，A、L、E、A₁、A₂、A₃、A₄、Y₁、Y₂、R¹、R²、p、A₅、A₆、Q₁、r如通式(II)中所定义。

本发明进一步涉及一种根据本发明所述的通式(III)所示的化合物或其药学可接受的盐的制备方法：

所述方法包括以下步骤：

将化合物IIIA与硼酸酯类化合物IIB在溶剂中，在催化剂和碱的存在下通过suzuki反应得到通式(III)化合物；

所述溶剂优选甲苯、N,N-二甲基甲酰胺、二氧六环、水、二甲基亚砜或其混合溶剂；

所述碱优选碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠、叔丁醇钠、叔丁醇钾和氢氧化钠；

所述催化剂优选Pd(PPh₃)₄和Pd(dppf)Cl₂；

其中，A、L、E、A₁、A₂、A₃、A₄、Y₁、Y₂、R¹、R²、p如通式(III)中所定义。

本发明另外涉及一种药物组合物，其包含根据本发明所述的通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。

本发明进一步涉及根据本发明所述的通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐或者包含其的药物组合物，在制备PI3K/mTOR双激酶的双功能抑制剂中的用途。

本发明进一步涉及根据本发明所述的通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐或者包含其的药物组合物，在制备用于预防和/或治疗哺乳动物包括人类中癌症的药物中的用途，所述癌症优选为PI3K和/或mTOR表达异常的非实体瘤如白血病和实体瘤如皮肤癌、黑色素瘤、肺癌、胃癌、乳腺癌、胰腺癌、肝癌或结肠癌。

在一个优选的实施方案中，根据本发明所述的用途，其中根据本发明所述的通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐或者包含其的药物组合物可以与另外一种或多种癌症治疗药物或者癌症治疗方法联合应用。

具体实施方式

除非另有规定，本文使用的所有技术和科学术语具有与本领域技术人员的通常理解相同含义。所有专利、申请、公开的申请和其他出版物均以全部内容并入作为参考。倘若对于本文使用的术语有多个定义，除非另有说明，以本节中的为准。如果任何给定取代基的数量没有规定，则可以存在一个或多个取代基。例如“卤代烷基”可以含有一个或多个相同或不同的卤素。在本文的描述中，如果化学结构和化学名称彼此矛盾时，则是以其化学结构为准。当在本文使用时，对于任何保护基团、氨基酸和其他化合物的缩写，除非另有说明，以其常用的公认缩写表示，或根据IUPAC-IUB Commission on Biochemical Nomenclature表示(参见Biochem.1972,77:942-944)。

除非有相反陈述，否则下列用在说明书和权利要求书中的术语具有下述含义。

术语“烷基”指包括1至20个碳原子的饱和直链或支链脂族烃基团，优选包含1至18个碳原子，更优选包含1至10个碳原子，更优选包含1至6个碳原子，甚至更优选包含1至4个碳原子。烷基的非限定性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基、己基、异己基、正庚基、异庚基、正辛基、异辛基、正壬基、正癸基等。烷基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，优选为一个或多个以下基团，独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、硫醇、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、氨基、卤代烷基、羟烷基、羧基或羧酸酯基。

术语“亚烷基”指包括1至20个碳原子的饱和直链或支链脂肪族烃基团，其具有2个从母体烷的相同碳原子或两个不同的碳原子上除去两个氢原子所衍生的残基，优选含有1至12个碳原子，更优选含有1至6个碳原子。亚烷基的非限制性实例包括但不限于亚甲基(-CH₂-)、1,1-亚乙基(-CH(CH₃)-)、1,2-亚乙基(-CH₂CH₂)-、1,1-亚丙基(-CH(CH₂CH₃)-)、1,2-亚丙基(-CH₂CH(CH₃)-)、1,3-亚丙基(-CH₂CH₂CH₂-)、1,4-亚丁基(-CH₂CH₂CH₂CH₂-)和1,5-亚丁基(-CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂-)等。

术语“烯基”指由碳和氢原子组成的含有至少一个碳-碳双键的直链或支链烃基团，并通过单键或双键与分子的其余部分连接，优选具有2至10个碳原子，更优选具有2至6个碳原子，甚至更优选具有2至4个碳原子。烯基的非限定性实例包括乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基、戊二烯基、己烯基等。烯基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、硫醇、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、氨基、卤代烷基、羟烷基、羧基或羧酸酯基。非限定性实例术语“炔基”指由碳原子和氢原子组成的含有至少一个碳-碳三键的直链或支链烃基团，并通过单键或三键与分子的其余部分连接，优选具有2至10个碳原子，更优选具有2至6个碳原子，甚至更优选具有2至4个碳原子。炔基的非限定性实例包括乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基等。炔基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、硫醇、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、氨基、卤代烷基、羟烷基、羧基或羧酸酯基。

术语“环烷基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃基团，其包括3至20个碳原子，优选包括3至12个碳原子，更优选包含3至10个碳原子，最优选包含3至7个碳原子。单环环烷基的非限定性实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等。多环环烷基包括螺环、稠环和桥环的环烷基。环烷基可以是任选取代的或未取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，优选为一个或多个以下基团，独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、硫醇、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、氨基、卤代烷基、羟烷基、羧基或羧酸酯基。

术语“螺环烷基”指5至20元的单环之间共用一个碳原子(称螺原子)的多环基团，其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷基分为单螺环烷基、双螺环烷基或多螺环烷基，优选为单螺环烷基和双螺环烷基。更优选为4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺环烷基。螺环烷基的非限制性实例包括：

术语“稠环烷基”指5至20元，系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对碳原子的全碳多环基团，其中一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠环烷基，优选为双环或三环，更优选为5元/5元或5元/6元双环烷基。稠环烷基的非限制性实例包括：

术语“桥环烷基”指5至20元，任意两个环共用两个不直接连接的碳原子的全碳多环基团，其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥环烷基，优选为双环、三环或四环，更有选为双环或三环。桥环烷基的非限制性实例包括：

所述环烷基环可以稠合于芳基、杂芳基或杂环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为环烷基，非限制性实例包括茚满基、四氢萘基、苯并环庚烷基等。

术语“烷氧基”指-O-(烷基)和-O-(非取代的环烷基)，其中烷基和环烷基的定义如上所述。烷氧基的非限制性实例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基。烷氧基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、羧基、或羧酸酯基。

术语“杂环基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃基团，其包括3至20个环原子，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)m(其中m是0至2的整数)的杂原子，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的环部分，其余环原子为碳。杂环基环优选包含3至12个环原子，其中1至4个是杂原子；更优选包含3至8个环原子，其中1至3个是杂原子；最优选包含5至7个环原子，其中1至2或1至3个是杂原子。单环杂环基的非限定性实例包含吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌嗪基、吡喃基、四氢呋喃基、氮杂环庚烷基等。多环杂环基包括螺环、稠环和桥环的杂环基。杂环基可以是任选取代的或未取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，优选为一个或多个以下基团，独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、硫醇、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、氨基、卤代烷基、羟烷基、羧基或羧酸酯基。

术语“螺杂环基”指5至20元的单环之间共用一个原子(称螺原子)的多环杂环基团，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)m(其中m是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺杂环基分为单螺杂环基、双螺杂环基或多螺杂环基，优选为单螺杂环基和双螺杂环基。更优选为4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺杂环基。螺杂环基的非限制性实例包括：

术语“稠杂环基”指5至20元，系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对原子的多环杂环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)m(其中m是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠杂环基，优选为双环或三环，更优选为5元/5元或5元/6元双环稠杂环基。稠杂环基的非限制性实例包括：

术语“桥杂环基”指5至14元，任意两个环共用两个不直接连接的原子的多环杂环基团，其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)m(其中m是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥杂环基，优选为双环、三环或四环，更有选为双环或三环。桥杂环基的非限制性实例包括：

所述杂环基环可以稠合于芳基、杂芳基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂环基，其非限制性实例包括：

等。术语“芳基”指具有共轭的π电子体系的全碳单环或稠合多环(也就是共享毗邻碳原子对的环)基团，优选为5至10元，更优选5至7元，甚至更优选苯基和萘基，最优选苯基。芳基可以是完全芳香族的基团，例如苯基、萘基、蒽基、菲基等。芳基也可以含有芳香环与非芳香环的组合，例如，茚、芴和苊等。所述芳基环可以稠合于杂芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为芳基环，非限定性实例包含：

芳基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、硫醇、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氨基、卤代烷基、羟烷基、羧基或羧酸酯基。

术语“杂芳基”指包含1至4个杂原子、5至14个环原子的杂芳族体系，其中杂原子选自氧、硫和氮。杂芳基优选为5至10元，更优选5至7元，甚至更优选为5元或6元，例如噻二唑基、吡唑基、噁唑基、噁二唑基、咪唑基、三唑基、噻唑基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡咯基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、四唑基等。所述杂芳基环可以稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环，其非限制性实例包括：

杂芳基可以是任选取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、硫醇、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氨基、卤代烷基、羟烷基、羧基或羧酸酯基。

术语“卤代烷基”指其中一个或多个氢原子被卤素取代的烷基，其中烷基的定义如上所述。非限定性实例包括氯甲基、三氟甲基、1-氯-2-氟乙基、2,2-二氟乙基、2-氟丙基、2-氟丙-2-基、2,2,2-三氟乙基、1,1-二氟乙基、1,3-二氟-2-甲基丙基、2,2-二氟环丙基、(三氟甲基)环丙基、4,4-二氟环己基和2,2,2-三氟-1,1-二甲基-乙基。

术语“卤代烷氧基”指其中一个或多个氢原子被卤素取代的烷氧基，其中烷氧基的定义如上所述。

术语“卤素”包括氟、氯、溴和碘。

术语“氨基”指-NH₂。

术语“硝基”指-NO₂。

术语“氰基”指-CN。

术语“羟基”指-OH基团。

术语“巯基”指-SH基团。

术语“羟烷基”指被羟基取代的烷基，其中烷基的定义如上所述。

术语“羟烷氧基”指被羟基取代的烷氧基，其中烷氧基的定义如上所述。

术语“氧代基”指＝O基团。

术语“羧基”至-COOH基团。

术语“酰基”指-C(O)R，其中R指烷基、环烷基、烯基、炔基，其中烷基、环烷基、烯基、炔基的定义如上所述。非限定性实例包括乙酰基、丙酰基、丁酰基、戊酰基、己酰基、乙烯酰基、丙烯酰基。

术语“酰氨基”指-NHC(O)R或-C(O)NH₂，其中R指烷基、烯基、炔基，其中烷基、烯基、炔基的定义如上所述。非限定性实例包括甲酰氨基、乙酰氨基、丙酰氨基、丁酰氨基、戊酰氨基、己酰氨基、乙烯酰氨基、丙烯酰氨基。

术语“酯基”指-C(O)OR，其中R指烷基或环烷基，其中烷基、环烷基的定义如上所述。非限定性实例包括乙酯基、丙酯基、丁酯基、戊酯基、环丙酯基、环丁酯基、环戊酯基、环己酯基。

“任选”或“任选地”意味着随后所描述的事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生的场合。例如，“任选被烷基取代的杂环基团”意味着烷基可以但不必须存在，该说明包括杂环基团被烷基取代的情形和杂环基团不被烷基取代的情形。

“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为最多5个，更优选为1～3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。

“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。

“可药用盐”是指本发明化合物的盐，这类盐用于哺乳动物体内时具有安全性和有效性，且具有应有的生物活性。

“联合用药”是指为了达到治疗目的而采用的两种或两种以上药物同时、顺序或相继应用。

本发明化合物的合成方法

为了完成本发明化合物的目的，本发明主要采用如下合成方案制备本发明的通式(I)化合物。

本发明化合物的合成主要有以下两种方案：

方案1

步骤1)喹啉或喹啉类化合物M1与硼酸酯类化合物M2，在适宜的温度和适当的溶剂和碱中，在催化剂作用下通过suzuki反应得到化合物M3。

所述溶剂优选甲苯、N,N-二甲基甲酰胺、二氧六环、水、二甲基亚砜或其混合溶剂；

所述碱优选碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠、叔丁醇钠、叔丁醇钾和氢氧化钠；

所述催化剂优选Pd(PPh₃)₄和Pd(dppf)Cl₂；

步骤2)化合物M3和化合物M6通过亲核取代反应、缩合反应、Suzuki反应、Buchwald反应或Mitsunobu反应等反应生成化合物M4。

步骤3)化合物M4与化合物E’通过亲核取代反应、缩合反应、Suzuki反应、Buchwald反应或Mitsunobu反应等反应生成化合物IIA。

步骤4)化合物IIA与硼酸酯类化合物IIB在适宜的温度和适当的溶剂和碱中，在催化剂作用下通过suzuki反应得到通式(II)化合物。

所述溶剂优选甲苯、N,N-二甲基甲酰胺、二氧六环、水、二甲基亚砜或其混合溶剂；

所述碱优选碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠、叔丁醇钠、叔丁醇钾和氢氧化钠；

所述催化剂优选Pd(PPh₃)₄和Pd(dppf)Cl₂；

A、L、E、A₁、A₂、A₃、A₄、Y₁、Y₂、R¹、R²、p如通式(I)中所定义；

J₁选自卤素；

J₂、J₃和J₄选自卤素、羟基、氨基和羧基；

A₅、A₆、Q₁和r如通式(II)中所定义。

方案2

步骤1)喹啉或喹啉类化合物M1与化合物M6通过亲核取代反应、Suzuki反应或Buchwald反应等反应生成化合物M7。

步骤2)化合物E’和化合物M7通过亲核取代反应、缩合反应、Suzuki反应、Buchwald反应或Mitsunobu反应等反应生成化合物IIIA。

步骤3)化合物IIIA和硼酸酯类化合物IIB在适宜的温度和适当的溶剂和碱中，在催化剂作用下通过suzuki反应得到通式(III)化合物。

所述溶剂优选甲苯、N,N-二甲基甲酰胺、二氧六环、水、二甲基亚砜或其混合溶剂；

所述碱优选碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠、叔丁醇钠、叔丁醇钾和氢氧化钠；

所述催化剂优选Pd(PPh₃)₄和Pd(dppf)Cl₂；

A、L、E、A₁、A₂、A₃、A₄、Y₁、Y₂、R¹、R²、p如通式(III)中所定义；

J₃和J₄选自卤素、羟基、氨基和羧基；

J₁选自卤素。

本发明通式(I)所示的化合物在药学上可接受的盐，可以为酸加成盐或碱加成盐。酸可以为无机酸，包括但不限于：盐酸、硫酸、磷酸、氢溴酸；或可以为有机酸，包括但不限于：柠檬酸、马来酸、草酸，甲酸、乙酸、丙酸、戊酸、乙醇酸、苯甲酸、富马酸、三氟乙酸、琥珀酸、酒石酸、乳酸、谷氨酸、天门冬氨酸、水杨酸、丙酮酸、甲磺酸、苯磺酸、对苯磺酸。碱可以为无机碱，包括但不限于：氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化镁、氢氧化钙；或可以为有机碱，包括但不限于：氢氧化铵、三乙胺、N,N-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、氨、二乙醇胺和其他羟基烷基胺、乙二胺、N-甲基葡糖胺、普鲁卡因、N-苄基苯乙胺、精氨酸或赖氨酸；或可以为碱金属盐，包括但不限于：锂、钾和钠盐；或可以为碱土金属盐，包括但不限于：钡、钙和镁盐；或可以为过渡金属盐，包括但不限于锌盐；或其他金属盐，包括但不限于：磷酸氢钠和磷酸氢二钠。

本发明另一方面将通式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐制备成临床上可使用的药用组合物。根据临床适应症，给药途径与方式，其药用制剂包括但不限于口服制剂如片剂、凝胶剂、软/硬胶囊、乳剂、分散性粉剂、颗粒剂、水/油悬乳剂；注射剂包括静脉注射剂、肌肉注射剂、腹腔注射剂、直肠给药栓剂、颅内注射剂，这些剂型可为水溶液也可为油类溶液；局部制剂包括霜剂、软膏剂、凝胶剂、水/油溶液以及包合物制剂；吸入剂型包括细粉、液体气溶胶以及适合于体内植入的各种剂型。

本发明的药物组合物可以根据需要加入药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。这些载体、稀释剂或赋形剂应符合药物制剂制备工艺规则，与活性成分相兼容。固体口服制剂的载体包括但不限于甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、纤维素、葡萄糖、蔗糖、环糊精以及促进肠吸收分子载体维生素E-PEG1000。口服制剂可加入适当的着色剂、甜味剂、矫味剂及防腐剂。

如本领域技术人员所熟知的，药物的给药剂量依赖于多种因素，包括但并非限定于以下因素：所用具体化合物的活性、患者的年龄、患者的体重、患者的健康状况、患者的行为、患者的饮食、给药时间、给药方式、排泄的速率、药物的组合等；另外，最佳的治疗方式如治疗的模式、本发明化合物的日用量或可药用的盐的种类可以根据传统的治疗方案来验证。

本发明通式(I)所示的化合物或药学上可接受的盐，在上述癌症治疗中，可单独使用，或与临床上常规使用的放射疗法、化学疗法、免疫疗法、肿瘤疫苗、融瘤病毒、RNAi、癌症辅助治疗以及骨髓移植和干细胞移植的一个或多个方法联合治疗，其中包括但不限于以下抗肿瘤类药物和治疗方法：

1)烷化剂如顺铂、顺铂、奥沙利铂、苯丁酸氮芥、卡环磷酰胺，氮芥、美法仑、替莫唑胺、白消安、亚硝基脲类。

2)抗肿瘤抗生素类如阿霉素、博来霉素、多柔比星、道诺霉素、表柔比星、伊达比星、丝裂霉素C、放线菌素、光神霉素；抗有丝分裂药如长春新碱、长春碱、长春地辛、长春瑞滨、紫杉醇、泰索帝、Polo激酶抑制剂。

3)抗代谢和抗叶酸剂如氟嘧啶、雷甲氨蝶呤、阿糖胞苷、阿扎胞苷、地西他滨、替曲塞、羟基脲、IDH1/IDH2突变株抑制剂。

4)拓扑异构酶抑制剂如表鬼臼毒素、喜树碱、伊立替康。

5)细胞生长抑制剂如抗雌激素/抗雄激素类药物，如他莫昔芬、氟维司群、托瑞米芬、雷诺昔芬、屈诺昔芬、碘昔芬、比卡鲁胺、氟他胺、尼鲁米特、醋酸环丙孕酮；

LHRH拮抗剂或LHRH激动剂如戈舍瑞林、亮丙瑞林、和布舍瑞林、孕激素类如醋酸甲地孕酮；

芳香酶抑制剂如阿那曲唑、来曲唑、伏罗唑、伊西美坦、5a-还原酶抑制剂如非那雄胺。

6)抗侵袭剂如c-Src激酶家族抑制剂、金属蛋白酶抑制剂、尿激酶纤溶酶原激活物受体功能的抑制剂或者类肝素酶的抗体。

7)生长功能的抑制剂如生长因子抗体和生长因子受体抗体如抗HER2抗体曲妥珠单抗、抗EGFR抗体帕尼单抗、抗EGFR抗体西妥昔单抗等；这种抑制剂还包括其它酪氨酸激酶抑制剂以及丝氨酸/苏氨酸激酶的抑制剂如Ras/Raf信号传导抑制剂，MEK和/或AKT激酶的细胞信号传导抑制剂、c-kit抑制剂、abl激酶抑制剂、PI3激酶抑制剂、JAKs和STAT3抑制剂、FLT3激酶抑制剂、CSF-1R激酶抑制剂、IGF受体激酶抑制剂，极光激酶抑制剂，NTRKA/B/C激酶抑制剂。

8)抗血管生成剂如抑制血管内皮生长因子作用的药剂贝伐珠单抗以及VEGF受体酪氨酸激酶抑制剂。

9)表观遗传学(epigenetics)抑制剂如组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi)、DNA甲基转移酶抑制剂(DNMTi)、组蛋白乙酰转移酶抑制剂、组蛋白去甲基化酶抑制剂、组蛋白甲基转移酶抑制剂等。

10)聚腺苷二磷酸核糖聚合酶抑制剂(PARPi)如奥拉帕利(Olaparib)、瑞卡帕尼(Rucaparib)和尼拉帕尼(Niraparib)。

11)肿瘤免疫治疗法包括任何提高患者肿瘤细胞的免疫原性的体外和体内方法。如细胞因子IL-2、IL-4或者GM-CSF进行转染；降低T细胞无效能的方法如抗PD-1/PD-L单抗；使用转染的免疫细胞如细胞因子转染的树突状细胞的方法；使用细胞因子转染的肿瘤细胞系的方法；降低免疫抑制性细胞如调节性T细胞、髓源性抑制细胞、或表达吲哚胺2,3-脱氧酶的树突状细胞的功能方法；提高免疫细胞活性的激动剂如STING以及肿瘤相关抗原蛋白类或肽类组成的癌症疫苗的方法。

12)嵌合抗原受体T细胞免疫疗(CART)。

13)肿瘤基因治疗如CRISPR-Cas 9、RNAi、基因转导。

实施例

以下结合实施例进一步描述本发明，但这些实施例并非限制本发明的范围。

化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或/和质谱(MS)来确定的。NMR位移(δ)以10^-6(ppm)的单位给出。NMR的测定是用(Bruker AVANCE-400)核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d₆)、氘代氯仿(CDCl₃)、氘代甲醇(CD₃OD)，内标为四甲基硅烷(TMS)。

MS的测定用液相色谱质谱联用仪(Thermo，Ultimate3000/MSQ)。

HPLC的测定使用高压液相色谱仪(安捷伦1260Infinity，Gemini C18250×4.6mm，5u色谱柱)。

薄层色谱法(TLC)采用烟台黄海硅胶板HSGF245，薄层层析分析产品采用的规格是0.15mm～0.2mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.9mm～1.0mm。

柱层析色谱法一般采用烟台黄海200～300目硅胶为载体。

本发明的已知起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或购买自上海达瑞精细化学品有限公司、上海泰坦科技股份有限公司、上海润捷化学试剂有限公司、TCI、Aldrich Chemical Company。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照原料或商品制造厂商所建议的条件。未注明具体来源的试剂，为市场购买的常规试剂。

实施例中无特殊说明，反应能够均在氩气氛或氮气氛下进行。氩气氛或氮气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氩气或氮气气球。

实施例中无特殊说明，溶液是指水溶液。

实施例中无特殊说明，反应的温度为室温，为20℃～30℃。

实施例1

N-(5-{4-[4-(2-{2-[2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-4-基氨基]-乙氧基}-乙氧基)-苯基]-喹啉-6-基}-2-甲氧基-吡啶-3-基)-2,4-二氟-苯磺酰胺(1)的制备

步骤1：2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-4-氟-异吲哚-1,3-二酮(1a)的制备

于140℃，将3-氟酞酐(28g，168mmol)、3-氨基-2,6-哌啶二酮盐酸盐(27.74g，168mmol)和乙酸钠(16.5g，201.6mml)在420ml乙酸中搅拌14小时。将反应液降至室温，有固体洗出，过滤。滤饼用甲基叔丁基醚洗涤，鼓风干燥(60℃)8小时，得白色固体38g，产品无需纯化，直接用于下一步反应。

步骤2：N-(5-溴-2-甲氧基-吡啶-3-基)-2,4-二氟-苯磺酰胺(1b)的制备

于室温，将3-氨基-5-溴-2-甲氧基吡啶(10g，49mmol)溶解于100ml吡啶中，冰盐浴降温至-5℃-0℃。将2,4-二氟苯磺酰氯慢慢滴加到上述溶液中，过程中控制温度在-5℃-0℃。滴加完毕后移走冰盐浴，将反应液慢慢升温至室温，搅拌过夜。次日，将反应液倒入600ml水中，用二氯甲烷200ml×2萃取，有机相用4M稀盐酸洗涤一次，饱和食盐水洗涤两次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。残余物通过柱层析色谱法(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯10:1-1:1)纯化，得到15.2g黄色固体状产物。

步骤3：2,4-二氟-N-[2-甲氧基-5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼烷-2-基)-吡啶-3-基]-苯磺酰胺(1c)的制备

于100℃，在氮气氛下，将步骤2得到的N-(5-溴-2-甲氧基-吡啶-3-基)-2,4-二氟-苯磺酰胺1b(7g，18.4mmol)、双联频哪醇硼酸酯(5.6g，22.08mmol)、乙酸钾(5.4，55.2mmol)和PdCl₂(PPh₃)₂(1.3g，1.84mmol)于100ml二氧六环中搅拌过夜。次日，将反应液降至室温，然后倒入400ml水中，用乙酸乙酯200ml×2萃取，有机相用饱和食盐水洗涤两次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。残余物通过柱层析色谱法(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯10:1-1:1)纯化，得到7.5g黄色固体状产物。

步骤4：[2-(2-羟基-乙氧基)-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(1d)的制备

将2-(2-氨基-乙氧基)-乙醇(100g，0.952mol)溶解于1L二氯甲烷中，缓慢滴入BOC酸酐(207g，0.952mol)，于室温搅拌45分钟。将反应液倒入500ml饱和食盐水中洗涤，水相用二氯甲烷200ml×2萃取，有机相用饱和食盐水洗涤两次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到190g淡黄色油状粗品产物。

步骤5：甲磺酸2-(2-叔丁氧基羰基氨基-乙氧基)-乙酯(1e)的制备

将步骤4得到的[2-(2-羟基-乙氧基)-乙基]-氨基甲酸叔丁酯1d(170g，0.829mol)溶解于1L二氯甲烷中，加入三乙胺(125.5g，1.243mol)。将混合物降温至小于-5℃，缓慢滴入用200ml二氯甲烷稀释的甲磺酰氯(113.4g，0.995mol)，保持温度小于-5℃，10分钟后滴毕，保持该温度继续搅拌20分钟。将反应液倒入200ml饱和食盐水中，滴入乙酸(1.4eq)，二氯甲烷200ml×2萃取，有机相饱和食盐水洗涤两次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到190g淡黄色油状粗品产物。

步骤6：6-溴-4-碘-喹啉(1f)的制备

将6-溴-4-氯-喹啉(6.2g，25.56mmol)分散于60ml乙酸乙酯中，加热溶解，然后加入50ml盐酸/乙酸乙酯(2N)，有大量固体析出，于室温搅拌2小时。过滤，滤饼用乙酸乙酯洗涤，鼓风干燥(60℃)4小时，得白色固体。将所得固体分散于150ml乙腈中，加入碘化钾(17g，102.3mmol)，于85℃搅拌过夜。将反应液降至室温，然后倒入300ml饱和亚硫酸钠中，析出大量白色固体，过滤，滤饼用水洗涤，鼓风干燥(60℃)4小时，得5.6g白色固体状产物。

步骤7：4-(6-溴-喹啉-4-基)-苯酚(1g)的制备

于100℃，在氮气氛下，将步骤6得到的6-溴-4-碘-喹啉1f(500mg，1.5mmol)、4-羟基苯硼酸频哪醇酯(300mg，1.36mol)、四三苯基膦钯(170mg，0.14mmol)和碳酸钾(620mg，4.49mmol)于20ml二氧六环中搅拌过夜。次日，将反应液降至室温，然后倒入100ml水中，用乙酸乙酯100ml×2萃取，有机相饱和食盐水洗涤两次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。残余物通过柱层析色谱法(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇100：1-50：1)纯化，得到180mg白色固体状产物。

步骤8：(2-{2-[4-(6-溴-喹啉-4-基)-苯氧基]-乙氧基}-乙基)-氨基甲酸叔丁酯(1h)的制备

将步骤7得到的4-(6-溴-喹啉-4-基)-苯酚(1g)(180mg，0.6mmol)和步骤5得到的甲磺酸2-(2-叔丁氧基羰基氨基-乙氧基)-乙酯(1e)(254mg，0.9mmol)溶解于10mlDMF中，于室温加入碳酸钾(249mg，1.8mmol)和催化量碘化钾，于100℃搅拌过夜。次日，将反应液降至室温，然后倒入100ml水中，用乙酸乙酯100ml×2萃取，有机相饱和食盐水洗涤两次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。残余物通过柱层析色谱法(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇100：1-50：1)纯化，得到270mg黄色固体状产物。

步骤9：2-{2-[4-(6-溴-喹啉-4-基)-苯氧基]-乙氧基}-乙基胺(1i)的制备

将步骤8得到的(2-{2-[4-(6-溴-喹啉-4-基)-苯氧基]-乙氧基}-乙基)-氨基甲酸叔丁酯1h(270mg，0.554mmol)溶解于10ml二氯甲烷中，于室温加入3ml三氟乙酸，室温搅拌1小时。然后，将反应液减压浓缩，残余物溶于水中，并用饱和碳酸氢钠水溶液调节PH至大于8，然后用二氯甲烷萃取(50ml×3)，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。残余物通过柱层析色谱法(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇50:1-10:1)纯化，得到164mg黄色固体状产物。

步骤10：4-(2-{2-[4-(6-溴-喹啉-4-基)-苯氧基]-乙氧基}-乙基氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-异吲哚-1,3-二酮(1j)的制备

将步骤9得到的2-{2-[4-(6-溴-喹啉-4-基)-苯氧基]-乙氧基}-乙基胺(1i)(164mg，0.423mmol)、步骤1得到的2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-4-氟-异吲哚-1,3-二酮(1a)(176mg，0.637mmol)和DIPEA(110mg，0.852mmol)溶解于10mlDMF中，于90℃搅拌过夜。次日，将反应液降至室温，然后倒入50ml水中，过滤，滤饼用水洗涤，鼓风干燥(60℃)3小时，得粗品，粗品通过柱层析色谱法(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇100：1-50：1)纯化，得到150mg黄色固体状产物。

步骤11：N-(5-{4-[4-(2-{2-[2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-4-基氨基]-乙氧基}-乙氧基)-苯基]-喹啉-6-基}-2-甲氧基-吡啶-3-基)-2,4-二氟-苯磺酰胺(1)制备

于100℃，氮气氛下，将步骤10得到的4-(2-{2-[4-(6-溴-喹啉-4-基)-苯氧基]-乙氧基}-乙基氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-异吲哚-1,3-二酮(1j)(150，0.234mmol)、步骤3中得到的2,4-二氟-N-[2-甲氧基-5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼烷-2-基)-吡啶-3-基]-苯磺酰胺(1c)(150mg，0.350mmol)、四三苯基膦钯(27mg，0.0234mmol)和碳酸钾(97mg，0.7mmol)于10ml二氧六环中搅拌过夜。次日，将反应液降至室温，然后倒入100ml水中，用乙酸乙酯100ml×2萃取，有机相饱和食盐水洗涤两次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。残余物通过柱层析色谱法(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇100：1-50：1)纯化，得到4mg黄色固体状产物。

¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ:11.09(s,1H),10.32(s,1H),8.93(m,1H),8.34(m,1H),8.19(m,1H),8.04(m,2H),7.87(m,1H),7.71(m,1H),7.48-7.58(m,5H),7.03-7.17(m,5H),6.63-6.66(m,1H),5.05(m,1H),4.30(m,2H),3.85(m,2H),3.73(m,2H),3.66(s,3H),3.51(m,2H),2.85(m,1H),2.52(m,1H),1.99(m,2H)。

LC-MS(ESI):863.2(M+H)⁺。

实施例2

N-(5-{4-[4-(2-{2-[2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-4-基氨基]-乙氧基}-乙氧基)-2-甲基-苯基]-喹啉-6-基}-2-甲氧基-吡啶-3-基)-2,4-二氟-苯磺酰胺(2)的制备

与实施例1的制备方法相同，除了用2-甲基-4-羟基苯硼酸频哪醇酯代替步骤7中的4-羟基苯硼酸频哪醇酯，得到N-(5-{4-[4-(2-{2-[2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-4-基氨基]-乙氧基}-乙氧基)-2-甲基-苯基]-喹啉-6-基}-2-甲氧基-吡啶-3-基)-2,4-二氟-苯磺酰胺(2)。

¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ:11.08(s,1H),10.33(s,1H),9.92-9.93(d,1H),8.34-8.35(d,1H),8.17-8.19(d,1H),8.05-8.07(m,2H),7.87-7.88(d,1H),7.67-7.72(m,1H),7.50-7.57(m,2H),7.43-7.47(m,3H),7.10-7.17(m,3H),7.00-7.02(d,1H),6.64-6.67(m,1H),5.01-5.05(m,1H),4.22-4.24(m,2H),3.86-3.88(m,2H),3.74-3.76(t,2H),3.53(s,3H),3.49-3.53(m,2H),2.82-2.86(m,1H),2.54-2.57(m,1H),2.25(s,3H),1.97-2.02(m,2H)。

LC-MS(ESI):877.2(M+H)⁺。

实施例3

N-(5-{4-[4-(2-{2-[2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-4-基氨基]-乙氧基}-乙氧基)-2-氟-苯基]-喹啉-6-基}-2-甲氧基-吡啶-3-基)-2,4-二氟-苯磺酰胺(3)的制备

与实施例1的制备方法相同，除了用2-氟-4-羟基苯硼酸频哪醇酯代替步骤7中的4-羟基苯硼酸频哪醇酯，得到N-(5-{4-[4-(2-{2-[2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-4-基氨基]-乙氧基}-乙氧基)-2-氟-苯基]-喹啉-6-基}-2-甲氧基-吡啶-3-基)-2,4-二氟-苯磺酰胺(3)。

¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ:11.09(s,1H),10.34(s,1H),8.98(m,1H),8.31(m,1H),8.20(m,1H),8.07(m,2H),7.84(m,1H),7.75(m,1H),7.45-7.60(m,3H),7.03-7.16(m,6H),6.66(m,1H),5.04(m,1H),4.24(m,2H),3.85(m,2H),3.72(m,2H),3.66(s,3H),3.52(m,2H),2.85(m,1H),2.52(m,1H),1.98(m,2H)。

LC-MS(ESI):881.2(M+H)⁺。

实施例4

N-(5-{4-[4-(2-{2-[2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-4-基氨基]-乙氧基}-乙氧基)-3-甲氧基-苯基]-喹啉-6-基}-2-甲氧基-吡啶-3-基)-2,4-二氟-苯磺酰胺(4)的制备

与实施例1的制备方法相同，除了用3-甲氧基-4-羟基苯硼酸频哪醇酯代替步骤7中的4-羟基苯硼酸频哪醇酯，得到N-(5-{4-[4-(2-{2-[2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-4-基氨基]-乙氧基}-乙氧基)-3-甲氧基-苯基]-喹啉-6-基}-2-甲氧基-吡啶-3-基)-2,4-二氟-苯磺酰胺。

¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ:11.08(s,1H),10.33(s,1H),9.93-9.94(d,1H),8.35-8.36(d,1H),8.18-8.20(d,1H),8.05-8.11(m,2H),7.87-7.88(m,1H),7.67-7.72(m,1H),7.50-7.58(m,3H),7.11-7.24(m,5H),7.01-7.02(d,1H),6.63-6.66(m,1H),5.03(m,1H),4.20-4.22(t,2H),3.83-3.86(m,2H),3.72-3.74(t,2H),3.66(s,3H),3.51-3.54(m,2H),2.82-2.86(m,1H),2.54-2.57(m,1H),1.95-2.01(m,2H)。

LC-MS(ESI):893.2(M+H)⁺。

实施例5

N-(5-{4-[3-氯-4-(2-{2-[2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-4-基氨基]-乙氧基}-乙氧基)-苯基]-喹啉-6-基}-2-甲氧基-吡啶-3-基)-2,4-二氟-苯磺酰胺(5)的制备

与实施例1的制备方法相同，除了用3-氯-4-羟基苯硼酸频哪醇酯代替步骤7中的4-羟基苯硼酸频哪醇酯，得到N-(5-{4-[3-氯-4-(2-{2-[2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-4-基氨基]-乙氧基}-乙氧基)-苯基]-喹啉-6-基}-2-甲氧基-吡啶-3-基)-2,4-二氟-苯磺酰胺。

¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ:11.08(s,1H),10.33(s,1H),9.96-9.97(d,1H),8.35(d,1H),8.20-8.22(d,1H),8.07-8.10(m,2H),8.02(m,1H),7.89(d,1H),7.67-7.74(m,2H),7.50-7.60(m,4H),7.36-7.41(d,1H),7.11-7.27(m,2H),7.00-7.02(d,1H),6.64-6.67(m,1H),5.00-5.05(m,1H),4.31-4.33(m,2H),3.86-3.90(m,2H),3.75-3.77(m,2H),3.65(s,3H),3.51-3.53(m,2H),2.81-2.86(m,1H),2.54-2.56(m,1H),1.97-2.02(m,2H)。

LC-MS(ESI):897.2(M+H)⁺。

实施例6

N-(5-{4-[4-(2-{2-[2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-4-基氨基]-乙氧基}-乙氧基)-3-甲基-苯基]-喹啉-6-基}-2-甲氧基-吡啶-3-基)-2,4-二氟-苯磺酰胺(6)的制备

与实施例1的制备方法相同，除了用3-甲基-4-羟基苯硼酸频哪醇酯代替步骤7中的4-羟基苯硼酸频哪醇酯，得到N-(5-{4-[4-(2-{2-[2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-4-基氨基]-乙氧基}-乙氧基)-3-甲基-苯基]-喹啉-6-基}-2-甲氧基-吡啶-3-基)-2,4-二氟-苯磺酰胺。

¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ:11.08(s,1H),9.45(s,1H),8.92-8.92(m,1H),8.27(m,1H),8.16-8.18(d,1H),8.02-8.09(m,2H),7.66-7.74(m,2H),7.42-7.48(m,4H),7.09-7.22(m,4H),7.00-7.04(d,1H),6.66(m,1H),5.01-5.05(m,1H),4.23(m,2H),3.87(m,2H),3.74-3.76(m,2H),3.67(s,3H),3.47(m,2H),2.78-2.89(m,1H),2.54-2.57(m,1H),2.25(s,3H),1.95-2.02(m,2H)。

LC-MS(ESI):877.2(M+H)⁺。

实施例7

N-(5-{4-[4-(2-{2-[2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-4-基氨基]-乙氧基}-乙氧基)-苯基]-喹啉-6-基}-2-甲氧基-吡啶-3-基)-2,4-二氟-苯磺酰胺(7)的制备

与实施例1的制备方法相同，除了用4-氯-6-溴喹啉代替步骤7中6-溴-4-碘-喹啉，得到N-(5-{4-[4-(2-{2-[2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-4-基氨基]-乙氧基}-乙氧基)-苯基]-喹唑啉-6-基}-2-甲氧基-吡啶-3-基)-2,4-二氟-苯磺酰胺。

¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ:11.09(s,1H),10.36(s,1H),9.31(s,1H),8.42(d,1H),8.29-8.31(dd,1H),8.24(m,1H),8.15-8.18(d,1H),7.95(d,1H),7.87-7.89(d,2H),7.70-7.78(m,1H),7.51-7.58(m,2H),7.13-7.21(m,4H),7.00-7.02(d,1H),6.65-6.67(m,1H),5.01-5.06(m,1H),4.24-4.26(m,2H),3.85-3.87(m,2H),3.71-3.74(m,2H),3.66(s,3H),3.50-3.53(m,2H),2.82-2.86(m,1H),2.54-2.56(m,1H),1.97-2.01(m,2H)。

LC-MS(ESI):864.3(M+H)⁺。

实施例8

N-(5-{4-[4-(2-{2-[2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-4-基氨基]-乙氧基}-乙氧基)-3-甲氧基-苯基]-喹唑啉-6-基}-2-甲氧基-吡啶-3-基)-2,4-二氟-苯磺酰胺(8)的制备

与实施例1的制备方法相同，除了用4-氯-6-溴喹唑啉代替步骤7中6-溴-4-碘-喹啉，并用3-甲氧基-4-羟基苯硼酸频哪醇酯代替步骤7中的4-羟基苯硼酸频哪醇酯，得到N-(5-{4-[4-(2-{2-[2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-4-基氨基]-乙氧基}-乙氧基)-3-甲氧基-苯基]-喹唑啉-6-基}-2-甲氧基-吡啶-3-基)-2,4-二氟-苯磺酰胺。

¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ:11.07(s,1H),10.35(s,1H),9.32(s,1H),8.43(d,1H),8.30-8.32(m,2H),8.15-8.18(d,1H),7.96(d,1H),7.69-7.75(m,1H),7.46-7.58(m,4H),7.13-7.28(m,3H),7.00-7.02(d,1H),6.65-6.67(m,1H),5.00-5.05(m,1H),4.23-4.24(m,2H),3.82-3.88(m,5H),3.72-3.75(t,2H),3.66(s,3H),3.51-3.54(m,2H),2.80-2.91(m,1H),2.54-2.56(m,1H),1.97-2.01(m,2H)。

LC-MS(ESI):894.3(M+H)⁺。

实施例9

N-(5-{4-[4-(2-{2-[2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-乙氧基}-乙氧基)-3-甲氧基-苯基]-喹啉-6-基}-2-甲氧基-吡啶-3-基)-2,4-二氟-苯磺酰胺(9)的制备

与实施例1的制备方法相同，除了用4-氟酞酸酐代替步骤1中的3-氟酞酸酐，并用3-甲氧基-4-羟基苯硼酸频哪醇酯代替步骤7中的4-羟基苯硼酸频哪醇酯，得到N-(5-{4-[4-(2-{2-[2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-乙氧基}-乙氧基)-3-甲氧基-苯基]-喹啉-6-基}-2-甲氧基-吡啶-3-基)-2,4-二氟-苯磺酰胺。

¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ:11.05(s,1H),10.32(s,1H),8.93-8.94(d,1H),8.35-8.36(d,1H),8.16-8.19(d,1H),8.10(m,1H),8.04-8.07(m,1H),7.88(d,1H),7.67-7.53(m,1H),7.50-7.57(m,3H),7.24-7.25(d,1H),7.14-7.21(m,5H),7.01(m,1H),6.89-6.92(dd,1H),4.99-5.04(m,1H),4.21-4.23(t,2H),3.84-3.86(m,5H),3.69-3.72(t,2H),3.66(s,3H),3.38-3.42(m,2H),2.81-2.89(m,1H),2.54-2.58(m,1H),1.95-2.02(m,2H)。

LC-MS(ESI):893.3(M+H)⁺。

实施例10

N-{5-[4-(2-{2-[2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-4-基氨基]-乙氧基}-乙氧基)-喹啉-6-基]-2-甲氧基-吡啶-3-基}-2,4-二氟-苯磺酰胺(10)的制备

步骤1：{2-[2-(6-溴-喹啉-4-基氧基)-乙氧基]-乙基}-氨基甲酸叔丁酯(10a)的制备

[2-(2-羟基-乙氧基)-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(1d)(2.54g，12.37mmol)溶解于20mlDMF中，降温至0℃-5℃，缓慢加入NaH(330mg，8.24mmol)，加毕，自然升至室温，搅拌1小时。加入6-溴-4-氯-喹啉(1g，4.12mmol)室温反应过夜。将反应液倒入100ml水中，乙酸乙酯萃取50ml×2，有机相用饱和食盐水洗涤两次，干燥，减压浓缩，得到油状化合物10a，2.45g。

步骤2：[2-(2-{6-[5-(2,4-二氟-苯磺酰氨基)-6-甲氧基-吡啶-3-基]-喹啉-4-基氧基}-乙氧基)-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(10b)的制备

将化合物10a(1.45g，3.52mmol)、化合物1c(1.8g，4.23mmol)、碳酸钾(934mg，7.05mmol)、四三苯基膦钯(407mg，0.3528mmol)溶解于20mL二氧六环中，氮气保护下，升温至100℃，搅拌12小时。将反应液降至室温，然后倒入100ml水中，用乙酸乙酯萃取50ml×2，有机相用饱和食盐水洗涤两次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得0b粗品1.7g，产品无需纯化，直接用于下一步反应。

步骤3：N-(5-{4-[2-(2-氨基-乙氧基)-乙氧基]-喹啉-6-基}-2-甲氧基-吡啶-3-基)-2,4-二氟-苯磺酰胺(10c)的制备

将化合物10b(1.7g，2.7mmol)溶解于30ml二氯甲烷中，于室温加入10ml三氟乙酸，室温搅拌1小时。将反应液减压浓缩，残余物加水，用碳酸氢钠调至PH＝8-9，用二氯甲烷萃取50ml×2，有机相用饱和食盐水洗涤两次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。残余物通过柱层析色谱法(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇50:1-10:1)纯化，得到550mg固体状产物10c。

步骤4：N-{5-[4-(2-{2-[2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-4-基氨基]-乙氧基}-乙氧基)-喹啉-6-基]-2-甲氧基-吡啶-3-基}-2,4-二氟-苯磺酰胺(10)的制备

将化合物10c(550mg，1.038mmol)、化合物1a(430mg，1.557mmol)、DIEA(402mg，3.113mmol)溶解于20mLDMF中，于90℃搅拌过夜。将反应液降至室温，然后倒入100ml水，用乙酸乙酯萃取50ml×2。有机相用饱和食盐水洗涤两次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩。残余物通过柱层析色谱法(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇100:1-50:1)纯化，得到80mg黄色固体状产物。

¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ:11.05(s,1H),10.35(s,1H),8.71(m,1H),8.37(d,1H),8.22(m,1H),8.00(m,2H),7.92(m,1H),7.71(m,1H),7.36-7.39(m,1H),7.19-7.23(m,1H),7.06-7.0 8(m,2H),6.98-6.99(d,1H),6.86-6.88(d,1H),6.63-6.66(m,1H),4.90-4.95(m,1H),4.40(m,2H),4.01(m,2H),3.80(m,2H),3.66(s,3H),3.53(m,2H),2.84(m,1H),2.55(m,1H),1.99(m,2H)。

LC-MS(ESI):787.2(M+H)⁺。

实施例11

N-{5-[4-(4-{5-[2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-4-基氨基]-戊氧基}-3-甲氧基-苯基)-喹啉-6-基]-2-甲氧基-吡啶-3-基}-2,4-二氟-苯磺酰胺(11)的制备

与实施例1的制备方法相同，除了用5-氨基-1-戊醇代替步骤4中的2-(2-氨基-乙氧基)-乙醇，并用3-甲氧基-4-羟基苯硼酸频哪醇酯代替步骤7中的4-羟基苯硼酸频哪醇酯，得到N-{5-[4-(4-{5-[2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-4-基氨基]-戊氧基}-3-甲氧基-苯基)-喹啉-6-基]-2-甲氧基-吡啶-3-基}-2,4-二氟-苯磺酰胺。

¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ:11.08(s,1H),10.33(s,1H),8.92-8.93(d,1H),8.34(br,1H),8.17-8.19(d,1H),8.11(m,1H),8.05-8.07(m,1H),7.88(m,1H),7.69-7.70(m,1H),7.50-7.59(m,3H),7.23(m,1H),7.10-7.20(m,4H),7.00-7.02(m,1H),6.55-6.58(m,1H),5.02-5.06(m,1H),4.06-4.09(t,2H),3.83(s,3H),3.66(s,3H),3.38-3.42(m,2H),2.89(m,1H),2.54-2.58(m,1H),1.95-2.02(m,2H),1.83(m,2H),1.65(m,2H),1.54(m,2H)。

LC-MS(ESI):891.2(M+H)⁺。

实施例12

N-(5-{4-[4-(2-{2-[2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-乙氧基}-乙氧基)-3-甲氧基-苯基]-喹唑啉-6-基}-2-甲氧基-吡啶-3-基)-2,4-二氟-苯磺酰胺(12)的制备

与实施例8的制备方法相同，除了用4-氟酞酸酐代替步骤1中的3-氟酞酸酐，得到N-(5-{4-[4-(2-{2-[2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-5-基氨基]-乙氧基}-乙氧基)-3-甲氧基-苯基]-喹唑啉-6-基}-2-甲氧基-吡啶-3-基)-2,4-二氟-苯磺酰胺。

¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz)δ:11.04(s,1H),10.35(s,1H),9.32(s,1H),8.42(m,1H),8.30-8.32(m,2H),8.16-8.18(d,1H),7.96(d,1H),7.69-7.75(m,1H),7.46-7.55(m,4H),7.07-7.41(m,3H),7.01(m,1H),6.89-6.91(m,1H),4.99-5.03(m,1H),4.24-4.26(m,2H),3.86(m,5H),3.70-3.72(t,2H),3.66(s,3H),3.51-3.54(m,2H),2.80-2.91(m,1H),2.54-2.56(m,1H),1.95-2.01(m,2H)。

LC-MS(ESI):894.2(M+H)⁺。

生物学测试

试验例1本发明化合物的体外肿瘤细胞生长抑制的测定

利用细胞筛选平台测定本发明化合物对细胞包括PI3K和mTOR表达阳性肿瘤细胞系的生长抑制的活性。

实验材料与方法

1.肿瘤细胞系及细胞培养

本发明人选择具有代表性的肿瘤细胞系应用于化合物活性测定。所有使用的细胞系分别来源于ATCC。细胞培养条件与方法按每种细胞系要求进行。每次体外培养不超过3次传代。根据需要，可对细胞系进行单克隆分离与鉴定。

细胞培养基分别选用RPMI1640(Gibco)、DMEM(Gibco)、MEM(Gibco)、L15(Gibco)、IMDM(Gibco)、McCOY'S 5A、William’s E(Gibco)，加入5-20％胎牛血清(Gibco)，1％双抗(10000单位/mL青霉素和10000单位/mL链霉素)，2mM谷氨酰胺或者1mM丙酮酸钠(Gibco)。

所用细胞系名称、种类、主要基因突变特征、培养基和细胞来源见下表1，其中“amp”为基因扩增；“+++”为基因过表达。细胞基因突变特征分别来源于COSMIC Cell LinesProject和相关研究论文。

表1本发明使用的细胞系

2.试验方法

贴壁细胞用0.25％胰酶-EDTA(Gibco)消化。悬浮细胞直接离心收集(1700rpm，3分钟)，弃上清，0.4％台盼蓝染液计数板计数细胞。根据每种细胞生长周期，配制不同的细胞浓度(每毫升5～10×10⁴细胞)，接种到96孔板(Corning)，每孔100微升，37℃，5％CO₂培养过夜。第二天，加入待测化合物到培养细胞中，平行2孔。有机溶剂终浓度不超过千分之一，细胞继续培养3-6天，MTT测定。

本发明化合物与对照化合物(见下表2)用DMSO(Sigma)溶解，化合物纯度达98％以上。化合物贮存浓度为10mM，-20℃保存，使用前1:3系列稀释。

表2对照化合物

3.MTT检测及IC₅₀计算

MTT检测试剂为Dojindo CCK8试剂盒，酶标测定仪为THERMO MULTISKAN FC仪。

将贴壁细胞培养基吸出，立即加入新配制的含10％CCK8的完全培养基(5％FBS)，每孔100ul。悬浮细胞可直接加入CCK8试剂，终浓度为10％，继续培养1至4小时，当溶剂对照孔呈现暗黄色时，用THERMO MULTISKAN FC meter测OD450nm光吸收值，按以下公式计算细胞生长率。

细胞生长率％＝100*(T-T₀)/(C-T₀)

T＝药物处理细胞孔光密度值-空白对照孔光密度值；T₀＝药物处理前细胞孔光密度值-空白对照孔光密度值；C＝溶剂对照组细胞孔光密度-空白对照孔光密度值。

通过GraphPad Prism7软件计算细胞生长50％抑制的药物浓度即IC₅₀。试验重复进行1-3次。

4.实验结果

本发明化合物对PI3K和/或mTOR表达阳性肿瘤细胞体外生长抑制(或诱导细胞凋亡)IC₅₀浓度的测定结果总结于下表3，IC₅₀值小代表化合物活性高。

表3本发明化合物对肿瘤细胞体外生长抑制(或诱导细胞凋亡)的IC₅₀值

"-"代表未测定。

表3结果显示，本发明化合物和对照化合物GSK458分别对RS4:11和H1581癌细胞具有显著的选择性生长抑制(诱导细胞凋亡)作用，IC₅₀值可达亚纳摩尔。与对照化合物GSK458相比，本发明化合物在RS4:11和H1581细胞上呈现明显的生长抑制优势,其IC₅₀值可分别低于对照化合物260倍(化合物12)和12倍(化合物9)。同时本发明化合物对表1所列不同类型肿瘤细胞系具有显著的生长抑制效果。

Claims (14)

1.一种通式(II)所示的化合物或其药学上可接受的盐，

其中：

A选自CH或N；

A₂为N，A₁、A₃和A₄为CH；

A₅和A₆各自独立地选自CH；

r为0或1；

基团-Y₁-Y₂-选自-NHC(O)-或-NHS(O)_q；

R¹选自氢、卤素、氨基、硝基、氰基、羟基、巯基、羧基、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基；

R²选自氢、卤素、氨基、硝基、氰基、羟基、巯基、羧基、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基；

L选自以下结构：

其中：

Z₁与苯基相连，Z₂与E基团相连；

Z₁和Z₂各自独立地选自O、S、NR³；

W₁、W₂各自独立地选自CH₂、O、S；

R³选自氢或C₁-C₆烷基；

E选自以下结构：

X₁、X₂、X₃和X₄各自独立地选自CH；

Q₁选自氢、卤素、氨基、硝基、氰基、羟基、巯基、羧基、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基；

p为0至2的整数；

q为1或2；

n₁、n₂、n₃、n₄和n₅各自独立地为0至6的整数。

2.根据权利要求1所述的通式(II)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其为通式(IV)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中：

基团

选自以下结构：

其中：

基团-Y₁-Y₂-选自-NHC(O)-或-NHS(O)_q；

R¹选自氢、卤素、氨基、硝基、氰基、羟基、巯基、羧基、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基；

R²选自氢、卤素、氨基、硝基、氰基、羟基、巯基、羧基、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基；

p为0至2的整数；

q为1或2。

3.根据权利要求1或2所述的通式(II)所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物选自：

4.一种根据权利要求1至3中任一项所述的通式(II)所示的化合物或其药学上可接受的盐的制备方法，

所述方法包括以下步骤：

将化合物IIA与硼酸酯类化合物IIB在溶剂中，在催化剂和碱的存在下通过suzuki反应得到通式(II)化合物；

其中，A、L、E、A₁、A₂、A₃、A₄、A₅、A₆、Y₁、Y₂、R¹、R²、p、Q₁、r如权利要求1所定义。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其中所述溶剂选自甲苯、N,N-二甲基甲酰胺、二氧六环、水、二甲基亚砜或其混合溶剂。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其中所述碱选自碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠、叔丁醇钠、叔丁醇钾和氢氧化钠。

7.根据权利要求4所述的制备方法，其中所述催化剂选自Pd(PPh₃)₄和Pd(dppf)Cl₂。

8.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至3中任一项所述的通式(II)所示的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。

9.根据权利要求1至3中任一项所述的通式(II)所示的化合物或其药学上可接受的盐或者根据权利要求8所述的药物组合物在制备PI3K/mTOR双激酶的双功能抑制剂中的用途。

10.根据权利要求1至3中任一项所述的通式(II)所示的化合物或其药学上可接受的盐或者根据权利要求8所述的药物组合物在制备用于预防和/或治疗哺乳动物包括人类中癌症的药物中的用途。

11.根据权利要求10所述的用途，其中所述癌症为PI3K和/或mTOR表达异常的非实体瘤和实体瘤。

12.根据权利要求11所述的用途，其中所述非实体瘤为白血病。

13.根据权利要求11所述的用途，其中所述实体瘤为皮肤癌、黑色素瘤、肺癌、胃癌、乳腺癌、胰腺癌、肝癌或结肠癌。

14.根据权利要求10至13中任一项所述的用途，其中根据权利要求1至3中任一项所述的通式(II)所示的化合物或其药学上可接受的盐或者根据权利要求8所述的药物组合物可以与另外一种或多种癌症治疗药物或者癌症治疗方法联合应用。