TW202333801A - 以結合至191p4d12蛋白質之抗體藥物結合物(adc)治療肌肉侵襲性尿路上皮癌或肌肉侵襲性膀胱癌之方法 - Google Patents

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Abstract

本發明提供以結合至191P4D12蛋白質(連接素(Nectin)-4)之抗體藥物結合物(antibody drug conjugate；ADC)治療尿路上皮癌或膀胱癌之方法。

Description

以結合至191P4D12蛋白質之抗體藥物結合物(ADC)治療肌肉侵襲性尿路上皮癌或肌肉侵襲性膀胱癌之方法
本文提供用於使用結合至191P4D12蛋白質(連接素-4)之抗體藥物結合物(ADC)治療尿路上皮癌或膀胱癌，諸如肌肉侵襲性尿路上皮癌(MIUC)或肌肉侵襲性膀胱癌(MIBC)之方法。
191P4D12 (其亦稱為連接素(Nectin)-4)為一種66 kDa的I型跨膜蛋白，屬於黏附分子之連接素家族。其由含有3個免疫球蛋白(Ig)樣亞域的胞外域(ECD)、跨膜螺旋及胞內區域構成(Takai等人, Annu Rev Cell Dev Biol (2008); 24: 309-42)。連接素被認為經由黏著連接(adherens junction)處的嗜同性與嗜異性反式相互作用介導Ca 2+非依賴性細胞-細胞黏附，在該等黏著連接處其可募集鈣黏蛋白(cadherin)且調節細胞骨架重排(Rikitake等人, Cell Mol Life Sci (2008); 65(2): 253-63.)。連接素-4與其他連接素家族成員的序列一致性較低，且在ECD中，該序列一致性的範圍在25%-30%之間(Reymond等人, Biol Chem (2001); 276(46): 43205-15)。
連接素-4之ECD中的3個Ig樣亞域稱為V、C1及C2。C1域負責順式相互作用(均二聚)，而大部分連接素分子的V域促成反式相互作用及細胞-細胞黏附(Mandai等人, Curr Top Dev Biol (2015);112: 197-231；Takai等人, Nat Rev Mol Cell Biol (2008); 9(8): 603-15.)。
連接素-4最初係根據生物資訊學鑑別且自人類氣管中選殖出來(Reymond等人, J Biol Chem (2001) 276(46): 43205-15.)。藉由對尿路上皮癌試樣池使用抑制消減雜交術而鑑別出連接素-4在尿路上皮癌中明顯上調。在核糖核酸(RNA)層面上且根據免疫組織化學(IHC)對多個腫瘤試樣中之表現進行的表徵亦表明，乳癌、胰臟癌、肺癌及其他癌症中存在較高含量的連接素-4 (Challita-Eid等人, Cancer Res (2016); 76(10): 3003-13.)。
已發現，連接素-4表現於多種癌症中，特定言之，尿路上皮癌、乳癌、肺癌、胰臟癌及卵巢癌。較高的表現量與疾病惡化及/或不良預後相關(Fabre-Lafay等人, BMC Cancer (2007); 7: 73)。
尿路上皮癌
尿路上皮癌係在泌尿生殖道內出現之癌症的最常見形式，其為發病率及死亡率之主要原因。歐洲每年診斷出約151,000例新的膀胱癌病例，膀胱癌為尿路上皮癌最常見的原發部位(Ervik 2016)。在美國，國家癌症研究所估計2017年診斷出超過79,000例新的膀胱癌病例，且超過16,800人死於該病(National Cancer Institute 2018) 。
膀胱癌
在美國所有新癌症病例中，膀胱癌在男性中佔約5% (第五大最常見贅瘤)且在女性中佔3% (第八大最常見贅瘤)。隨著老年群體增加，發病率正緩慢增加。美國癌症學會(cancer.org)估計每年新增81,400個病例，包括男性62,100例及女性19,300例，在所有癌症病例中佔4.5%。在美國，男性及女性按年齡調整的發病率為20/100,000。估計每年因膀胱癌死亡17,980例(男性13,050例及女性4,930例)，佔癌症相關死亡數的3%。膀胱癌發病率及死亡率隨著年齡而大幅度增加且隨著人群變得更加老年化時，將成為日益嚴重的問題。在全球範圍內，2020年約580,000人經診斷患有膀胱癌，且膀胱癌在全世界範圍內將造成約210,000例死亡。
大部分膀胱癌在膀胱中復發。膀胱癌係經由膀胱之經尿道切除(TUR)與膀胱內化學療法或免疫療法之組合加以管理。膀胱癌之多病灶及復發性質指出了TUR之侷限性。僅TUR無法治癒大部分肌肉侵襲性癌症。根治性膀胱切除術及尿路分流術為消除癌症的最有效手段，但對泌尿及性功能產生不可否認的影響。對有益於膀胱癌患者之治療模式繼續存在重大需求。
對尿路上皮癌及膀胱癌之其他治療方法存在重大需求。此等方法包括使用抗體及抗體藥物結合物作為治療模式。
肌肉侵襲性膀胱癌 (MIBC) 及 肌肉侵襲性尿路上皮癌 (MIUC)
肌肉侵襲性尿路上皮癌(MIUC)包括起源於泌尿道所有部位(腎盂或上尿路、膀胱及下尿路(尿道))之癌症。肌肉侵襲性膀胱癌(MIBC)係指膀胱之癌症，不包括上尿路及下尿路。在所有被診斷患有尿路上皮癌之患者中，高達25%的患者患有肌肉侵襲性疾病，對此等患者來說，惡化或癌轉移的風險極大。肌肉侵襲性膀胱癌(MIBC)之五年死亡率為約69% (American Cancer Society (ACS), Survival rates for bladder cancer, 2019, www.cancer.org/cancer/bladder-cancer/detection-diagnosis-staging/survival-rates.html. 存取: 2018年2月23日)。預後及復發因疾病分期以及其他預後特徵而異，包括淋巴結受累、淋巴血管浸潤、腫瘤分期、存在變異組織學及分子亞型(Lotan等人., J. Clin. Oncol., 2005, 23(27):6533-9; Karakiewicz等人., J Urol., 2006, 176(4 Pt 1):1354-61; Choi 2014)。
MIBC的治療為複雜的，且需要外科醫生、放射治療師及內科腫瘤學家的多學科協作(Aragon-Ching等人., Am Soc Clin Oncol Educ Book, 2018, 38:307-18)。基於順鉑之新輔助化學治療(NAC)，繼之以根治性膀胱切除術(RC)及淋巴結擴清術，在近20年來一直為MIBC中之SOC，以根據若干項隨機化試驗及大型綜合分析的證據所確定，該大型綜合分析最初由晚期膀胱癌綜合分析協作組織於2003年發表且於2005年更新(Advanced Bladder Cancer Meta-analysis, Eur Urol., 2005, 48(2):202-5)。綜合分析之最終版本包括11項隨機化試驗及3005名患者，且將基於鉑之NAC (所有試驗中只有一項試驗涉及順鉑)加確定性局部治療(膀胱切除術或放射)與單獨相同局部治療進行了比較。結果顯示，接受基於順鉑之組合NAC的患者顯著受益，且死亡風險降低14% (HR，0,86；95%信賴區間[CI]，0.77-0.95；P=0.003)，其轉化為5年時OS改善5%且無疾病存活期(DFS)改善9%。對於接受基於順鉑之NAC的患者，5年OS為50%，而僅接受確定性局部治療的患者為45%。對於接受基於卡鉑(carboplatin)之組合的患者，尚未展現出存活期益處。最近，已研究額外NAC方案，包括加速或劑量密集型MVAC及吉西他濱與順鉑(GC)之組合，其目的在於提高患者耐受性，且縮短治療持續時間，且具有類似病理性反應率。在加速或劑量密集型MVAC下，約30%到40%的患者達成pCR率，且50%之患者有病理降期(Choueiri等人., J Clin Oncol, 2014, 32(18):1889-94; Plimack等人., J Clin Oncol., 2014, 32(18):1895-901)。
儘管RC之前的NAC有效，但仍有超過50%之患者存在殘留的高危疾病(≥ pT2)，且與不良預後相關。此外，許多患者不適合手術或不符合順鉑條件，且考慮保留膀胱的策略不僅越來越被認為係最佳治療選擇，且亦應體現於診斷時向患者提供的一系列管理方案中(Aragon-Ching等人., Am Soc Clin Oncol Educ Book, 2018, 38:307-18)。然而，此等研究限於預期對新輔助治療反應良好之生物標記物選擇患者。
除化學療法之外，免疫療法已成功地用於局部晚期及轉移性膀胱癌，且作為單藥療法或與化學治療劑之組合進入MIBC領域。最近研究者發起的兩項研究旨在獲得生物標記物結果，且評估單藥劑計劃性細胞死亡1/計劃性細胞死亡-配位體1 (PD 1/PD L1)抑制劑在新輔助環境下對MIBC患者的療效。兩者已公開了初步資料。在PURE-01研究中，患有T2 T3bN0M0疾病之患者，無論是否符合順鉑條件，在RC前接受3個週期之200 mg帕博利珠單抗(pembrolizumab)(Necchi等人., J Clin Oncol., 2018, 36(34):3353-60)。帕博利珠單抗經安全地投與，且50名經治療的患者之pCR率為42%，其中PD L1陽性疾病患者的pCR率為54.3%及病理降期率為65.7%。報導免疫介導性不良事件(imAE)，但未延遲計劃性手術。手術後併發症類似於文獻中報導之彼等併發症，且與開放性或機器人手術相關。新輔助帕博利珠單抗未影響手術中效能量度，例如移除之淋巴結數量、手術切緣及手術時間。在ABACUS研究中，69名不符合順鉑條件的T2 T4N0M0 MIBC患者在RC前接受了2個週期之1200 mg新輔助帕博利珠單抗治療，未發現明顯的安全性(Powles等人., 2018, J Clin Oncol., 36(Suppl 15):Abstract 4506)。
在29%的患者及40%的PD-L1陽性疾病患者中觀測到pCR，而在PD-L1陰性組中僅為16%。總計39%之患者經降期至非肌肉侵襲性疾病。兩項研究均缺乏評估接受新輔助免疫療法之患者在圍手術期環境中之PFS及OS所需的長期追蹤資料。
對於不符合順鉑條件的MIBC患者，目前無標準新輔助或圍手術期治療方案。因此，此患者群體需要更新的治療方法，包括新的藥物組合策略。
本文提供用於使用結合191P4D12之抗體藥物結合物(ADC)治療人類個體之各種癌症，諸如尿道上皮及膀胱癌的方法，包括不符合順鉑條件的患有肌肉侵襲性膀胱癌(MIBC)及肌肉侵襲性尿路上皮癌(MIUC)之個體。
實施例1.一種治療人類個體之肌肉侵襲性尿路上皮癌(MIUC)或肌肉侵襲性膀胱癌(MIBC)的方法，其包含(a)向該個體投與有效量之抗體藥物結合物(ADC)；其中該ADC包含結合至191P4D12 (連接素-4)之抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段與一或多個單位的單甲基奧瑞他汀E (MMAE)結合；其中該個體不適合接受順鉑治療(不符合順鉑條件)；及其中該病理完全反應率(pCRR)為至少30%。
實施例2.一種治療人類個體之肌肉侵襲性尿路上皮癌(MIUC)或肌肉侵襲性膀胱癌(MIBC)的方法，其包含向該個體投與有效量之抗體藥物結合物(ADC)；其中該ADC包含結合至191P4D12 (連接素-4)之抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段與一或多個單位的單甲基奧瑞他汀E (MMAE)結合；其中該個體不適合接受順鉑治療(不符合順鉑條件)；及其中病理降期率(pDSR)為至少50%。
實施例3.如實施例1或實施例2之方法，其中該方法包含向該個體投與3個週期之該ADC。
實施例4.如實施例1至3中任一項之方法，其中該癌症之治療進一步包含根治性膀胱切除術及骨盆淋巴結擴清術(RC+PLND)。
實施例5.如實施例4之方法，其中該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約四(4)至約十二(12)週接受該RC+PLND。
實施例6.如實施例1或2之方法，其進一步包含(b)對該個體進行根治性膀胱切除術及骨盆淋巴結擴清術(RC+PLND)。
實施例7.如實施例6之方法，其中(b)在(a)之後約四(4)至約十二(12)週進行。
實施例8.一種治療人類個體之肌肉侵襲性尿路上皮癌(MIUC)或肌肉侵襲性膀胱癌(MIBC)的方法，其包含：向該個體投與多個週期之有效量之抗體藥物結合物(ADC)，其中 (a)該ADC包含結合至191P4D12 (連接素-4)之抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段與一或多個單位的單甲基奧瑞他汀E (MMAE)結合； (b)該個體不適合接受順鉑治療(不符合順鉑條件)；及 (c)向不符合順鉑條件的個體投與之ADC治療的週期數目等於或低於用於治療患有MIUC或MIBC之符合順鉑條件的個體之標準照護(SOC)療法的週期數目。
實施例9.如實施例‎8之方法，其中針對符合順鉑條件的個體之該SOC療法包含順鉑。
實施例10.如實施例8之方法，其中針對該符合順鉑條件的個體之該SOC療法包含(i)甲胺喋呤、長春鹼、小紅莓及順鉑(MVAC)，或(ii)吉西他濱(gemcitabine)加順鉑。
實施例11.如實施例8之方法，其中針對該符合順鉑條件的個體之該SOC療法包含投與計劃性細胞死亡1 (PD-1)抑制劑；或計劃性細胞死亡-配位體1 (PD-L1)抑制劑。
實施例12.如實施例8至‎11中任一項之方法，其中向該不符合順鉑條件的個體投與之ADC治療的週期數目為3或4。
實施例13.如實施例8至‎11中任一項之方法，其中向該不符合順鉑條件的個體投與之ADC治療的週期數目為3。
實施例14.一種投與新輔助或圍手術期療法以治療人類個體之肌肉侵襲性尿路上皮癌(MIUC)或肌肉侵襲性膀胱癌(MIBC)的方法，其包含：向該個體投與多個週期之有效量之抗體藥物結合物(ADC)，其中 (a)該ADC包含結合至191P4D12 (連接素-4)之抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段與一或多個單位的單甲基奧瑞他汀E (MMAE)結合； (b)該個體不適合接受順鉑治療(不符合順鉑條件)；及 (c)在用該ADC治療之多個週期之後，該個體保持符合根治性膀胱切除術及骨盆淋巴結擴清術(RC+PLND)的條件。
實施例15.如實施例14之方法，其中該ADC係以新輔助療法在該手術之前投與。
實施例16.如實施例14之方法，其中該ADC係在該手術之前及之後投與。
實施例17.一種治療人類個體之肌肉侵襲性尿路上皮癌(MIUC)或肌肉侵襲性膀胱癌(MIBC)的方法，其包含：向該個體投與多個週期之有效量之抗體藥物結合物(ADC)，其中 (a)該ADC包含結合至191P4D12 (連接素-4)之抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段與一或多個單位的單甲基奧瑞他汀E (MMAE)結合； (b)該個體不適合接受順鉑治療(不符合順鉑條件)；及 (c)使用有效量之ADC治療該個體之功效類似於在符合順鉑條件的患者上觀測到之治療功效，該等符合順鉑條件的患者經用於治療患有MIUC或MIBC之符合順鉑條件的個體之標準照護(SOC)療法治療。
實施例18.如實施例‎17之方法，其中該治療功效至少與針對符合順鉑條件的個體在SOC下所觀測到之該治療功效一樣有效。
實施例19.如實施例17或‎18之方法，其中治療功效之量測為以下中之一或多者：病理完全反應率(pCRR)、病理降期率(pDSR)、無疾病存活期(DFS)、無事件存活期(EFS)、總存活期(OS)、無進展存活期(PFS)及反應持續時間(DoR)。
實施例20.如實施例19之方法，其中針對該不符合順鉑條件的個體之該pCRR為至少30%。
實施例21.如實施例19之方法，其中針對該不符合順鉑條件的個體之該pCRR為至少50%。
實施例22.如實施例‎18至21中任一項之方法，其中針對符合順鉑條件的個體之該SOC療法包含順鉑。
實施例23.如實施例‎22之方法，其中針對該符合順鉑條件的個體之該SOC療法包含(i)甲胺喋呤、長春鹼、小紅莓及順鉑(MVAC)，或(ii)吉西他濱(gemcitabine)加順鉑。
實施例24.如實施例18之方法，其中針對該符合順鉑條件的個體之該SOC療法包含計劃性細胞死亡1 (PD-1)抑制劑或計劃性細胞死亡-配位體1 (PD-L1)抑制劑。
實施例25.如實施例24之方法，其中該PD-1抑制劑為納武單抗或帕博利珠單抗。
實施例26.如實施例24之方法，其中該PD-L1抑制劑係選自由以下組成之群：阿特珠單抗(atezolizumab)、阿維魯單抗(avelumab)及德瓦魯單抗(durvalumab)。
實施例27.如實施例1至‎26中任一項之方法，其中該抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區及輕鏈可變區，該重鏈可變區包含互補決定區(CDR)，其包含SEQ ID NO: 22中所闡述之該重鏈可變區之該等CDR的該等胺基酸序列，且該輕鏈可變區包含CDR，其包含SEQ ID NO: 23中所闡述之該輕鏈可變區之該等CDR的該等胺基酸序列。
實施例28.如實施例1至27中任一項之方法，其中該抗體或其抗原結合片段包含：包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列的CDR-H2、包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列的CDR-H3；包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列的CDR-L2，及包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列的CDR-L3，或 其中該抗體或其抗原結合片段包含：包含SEQ ID NO:16之胺基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO:17之胺基酸序列的CDR-H2、包含SEQ ID NO:18之胺基酸序列的CDR-H3；包含SEQ ID NO:19之胺基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO:20之胺基酸序列的CDR-L2，及包含SEQ ID NO:21之胺基酸序列的CDR-L3。
實施例29.如實施例1至‎27中任一項之方法，其中該抗體或其抗原結合片段包含：由SEQ ID NO: 9之胺基酸序列組成的CDR-H1、由SEQ ID NO: 10之胺基酸序列組成的CDR-H2、由SEQ ID NO: 11之胺基酸序列組成的CDR-H3；由SEQ ID NO: 12之胺基酸序列組成的CDR-L1、由SEQ ID NO: 13之胺基酸序列組成的CDR-L2及由SEQ ID NO: 14之胺基酸序列組成的CDR-L3，或 其中該抗體或其抗原結合片段包含：由胺基酸序列SEQ ID NO: 16組成的CDR-H1、由胺基酸序列SEQ ID NO: 17組成的CDR-H2、由胺基酸序列SEQ ID NO: 18組成的CDR-H3；由胺基酸序列SEQ ID NO: 19組成的CDR-L1、由胺基酸序列SEQ ID NO: 20組成的CDR-L2，及由胺基酸序列SEQ ID NO: 21組成的CDR-L3。
實施例30.如實施例1至‎29中任一項之方法，其中該抗體或其抗原結合片段包含含有SEQ ID NO: 22之胺基酸序列的重鏈可變區及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列的輕鏈可變區。
實施例31.如實施例1至‎30中任一項之方法，其中該抗體包含重鏈及輕鏈，該重鏈包含SEQ ID NO: 7之第20個胺基酸(麩胺酸)至第466個胺基酸(離胺酸)範圍之胺基酸序列，且該輕鏈包含SEQ ID NO: 8之第23個胺基酸(天冬胺酸)至第236個胺基酸(半胱胺酸)範圍之胺基酸序列。
實施例32.如實施例1至‎30中任一項之方法，其中該抗原結合片段為Fab、F(ab')2、Fv或scFv。
實施例33.如實施例1至‎31中任一項之方法，其中該抗體為完全人類抗體。
實施例34.如實施例1至31及33中任一項之方法，其中該抗體為IgG1，且該輕鏈為κ輕鏈。
實施例35.如實施例1至‎34中任一項之方法，其中該抗體或其抗原結合片段係以重組方式產生。
實施例36.如實施例1至‎35中任一項之方法，其中該抗體或抗原結合片段經由連接子與各單位之MMAE結合。
實施例37.如實施例‎36之方法，其中該連接子為可酶裂解連接子，且其中該連接子與該抗體或其抗原結合片段之硫原子形成一鍵。
實施例38.如實施例‎36或‎37之方法，其中該連接子具有-Aa-Ww-Yy-之式；其中-A-為延伸子單元，a為0或1；-W-為胺基酸單元，w為在0至12範圍內之整數；及-Y-為間隔子單元，y為0、1或2。
實施例39.如實施例38之方法，其中該延伸子單元具有下式(1)之結構；該胺基酸單元為纈胺酸-瓜胺酸；且該間隔子單元為包含下式(2)之結構的PAB基團： 式(1) 式(2)。
實施例40.如實施例‎38或‎39之方法，其中該延伸子單元與該抗體或其抗原結合片段之硫原子形成鍵；且其中該間隔子單元經由胺基甲酸酯基與MMAE連接。
實施例41.如實施例1至‎40中任一項之方法，其中該ADC包含1至20個單位的MMAE/抗體或其抗原結合片段。
實施例42.如實施例1至‎41中任一項之方法，其中該ADC包含1至10個單位的MMAE/抗體或其抗原結合片段。
實施例43.如實施例1至‎42中任一項之方法，其中該ADC包含2至8個單位的MMAE/抗體或其抗原結合片段。
實施例44.如實施例1至‎43中任一項之方法，其中該ADC包含3至5個單位的MMAE/抗體或其抗原結合片段。
實施例45.如實施例1至‎42中任一項之方法，其中該ADC具有以下結構： 其中L-表示該抗體或其抗原結合片段，且p為1至10。
實施例46.如實施例‎45之方法，其中p為2至8。
實施例47.如實施例‎45或‎46之方法，其中p為3至5。
實施例48.如實施例‎45至‎47中任一項之方法，其中p為3至4。
實施例49.如實施例45至‎48中任一項之方法，其中p為約4。
實施例50.如實施例‎45至‎48中任一項之方法，其中該有效量之該等抗體藥物結合物的平均p值為約3.8。
實施例51.如實施例1至‎50中任一項之方法，其中該ADC係調配於包含L-組胺酸、聚山梨醇酯-20 (TWEEN-20)及脫水海藻糖之醫藥組合物中。
實施例52.如實施例1至‎51中任一項之方法，其中該ADC調配在包含約20 mM L-組胺酸、約0.02% (w/v) TWEEN-20、約5.5% (w/v)二水合海藻糖及鹽酸鹽之醫藥組合物中，且其中該醫藥組合物之pH在25℃下為約6.0。
實施例53.如實施例1至‎51中任一項之方法，其中該ADC調配在包含約9 mM組胺酸、約11 mM組胺酸鹽酸鹽單水合物、約0.02% (w/v) TWEEN-20及約5.5% (w/v)二水合海藻糖之醫藥組合物中，且其中該醫藥組合物之pH在25℃下為約6.0。
實施例54.如實施例1至‎53中任一項之方法，其中該ADC具有以下結構： 其中L-表示該抗體或其抗原結合片段且p為約3至約4，該抗體包含重鏈及輕鏈，該重鏈包含SEQ ID NO: 7之第20個胺基酸(麩胺酸)至第466個胺基酸(離胺酸)範圍之胺基酸序列，且該輕鏈包含SEQ ID NO: 8之第23個胺基酸(天冬胺酸)至第236個胺基酸(半胱胺酸)範圍之胺基酸序列，其中該ADC以約1.25 mg/該個體體重kg的劑量投與，且其中該劑量係在每三週週期之第1天及第8天藉由IV輸注投與。
實施例55.如實施例1至‎54中任一項之方法，其中該個體具有cT2-T4aN0M0期MIBC。
實施例56.如實施例1至‎55中任一項之方法，其中若該個體滿足以下準則中之一或多者，則其被視為不符合順鉑條件：(a) GFR ＜60 mL/min但≥30 mL/min，(其中該GFR係藉由柯克勞夫-高爾特公式(Cockcroft-Gault formula)、腎病飲食改進方程式(MDRD)或24小時尿液收集量測)；(b) ECOG體能狀態為2；(c) NCI CTCAE 4.03版本≥2級聽覺損失；及(d) NYHA III級心臟衰竭。
實施例57.如實施例1至‎56中任一項之方法，其中該個體尚未接受針對MIBC之先前全身性治療、化學輻射及/或輻射療法。
實施例58.如實施例1至‎57中任一項之方法，其中該個體尚未接受免疫檢查點抑制劑(CPI)。
實施例59.如實施例‎58之方法，其中該CPI為計劃性細胞死亡1 (PD-1)抑制劑或計劃性細胞死亡-配位體1 (PD-L1)抑制劑。
實施例60.如實施例1至‎59中任一項之方法，其中該個體尚未接受CD137促效劑、CTLA-4抑制劑或OX-40促效劑。
實施例61.如實施例1至‎60中任一項之方法，其中該ADC之有效量為每公斤該個體之體重的約1至約10 mg、每公斤該個體之體重的約1至約5 mg、每公斤該個體之體重的約1至約2.5 mg或每公斤該個體之體重的約1至約1.25 mg。
實施例62.如實施例1至‎60中任一項之方法，其中該ADC之有效量為每公斤該個體之體重的約0.25 mg、約0.5 mg、約0.75 mg、約1.0 mg、約1.25 mg、約1.5 mg、約1.75 mg、約2.0 mg、約2.25 mg或約2.5 mg。
實施例63.如實施例1至60中任一項之方法，其中該ADC之有效量為約1 mg/該個體體重kg。
實施例64.如實施例1至‎60中任一項之方法，其中該ADC之有效量為約1.25 mg/該個體體重kg。
實施例65.如實施例1至‎60中任一項之方法，其中在(a)中，在每3週週期之第1天及第8天向該個體投與該有效量ADC，總共3個週期。
實施例66.如實施例65之方法，其中該ADC有效量為約1.25 mg/該個體體重kg。
實施例67.如實施例4或5之方法，其中在(a)中，在每3週週期之第1天及第8天向該個體投與該有效量ADC，總共3個週期。
實施例68.如實施例4、5或67中任一項之方法，其中該方法進一步包含(b)在該個體接受該RC+PLND之後約8週，在每3週週期之第1天及第8天向該個體投與該有效量ADC，總共6個週期。
實施例69.如實施例67或68之方法，其中該ADC之有效量為約1.25 mg/該個體體重kg。
實施例70.如實施例6或7之方法，其中在(a)中，在每3週週期之第1天及第8天向該個體投與該有效量ADC，總共3個週期。
實施例71.如實施例5、7或70中任一項之方法，其進一步包含(c)在(b)之後約8週，在每3週週期之第1天及第8天向該個體投與該有效量ADC，總共3個週期。
實施例72.如實施例70或71之方法，其中該ADC之有效量為約1.25 mg/該個體體重kg。
實施例73.如實施例8至64中任一項之方法，其中在3週週期之第1天及第8天向該人類個體投與該有效量ADC，總共3個週期。
實施例74.如實施例1至73中任一項之方法，其中該ADC係藉由靜脈內(IV)注射或輸注投與。
實施例75.如實施例1至74中任一項之方法，其中該癌症為肌肉侵襲性尿路上皮癌(MIUC)。
實施例76.如實施例1至‎74中任一項之方法，其中該癌症為肌肉侵襲性膀胱癌(MIBC)。
實施例77.如實施例1至‎76中任一項之方法，其中該ADC為恩諾單抗維多汀(enfortumab vedotin，EV)。
實施例78.如實施例1至77中任一項之方法，其中該個體之總存活期延長至少2個月、至少4個月、至少6個月、至少8個月、至少10個月或至少12個月。
實施例79.如實施例1至78中任一項之方法，其中該ADC係以單一療法形式投與。
相關申請之交叉引用
本申請案主張2022年1月5日申請之美國申請案第63/296,831號及2022年1月28日申請之美國申請案第63/304,136號，該等申請案之每一者的揭示內容以全文引用之方式併入本文中。 序列表
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在進一步描述本發明之前，應瞭解，本發明不限於本文所闡述之特定實施例，且亦應瞭解，本文所用之術語係僅出於描述特定實施例之目的且不希望具有限制性。 5.1 定義
本文中描述或參考之技術及程序包括熟習此項技術者使用習知方法，諸如Sambrook等人, Molecular Cloning: A Laboratory Manual (第3版2001)；Current Protocols in Molecular Biology (Ausubel等人編, 2003)；Therapeutic Monoclonal Antibodies: From Bench to Clinic (An編2009)；Monoclonal Antibodies: Methods and Protocols (Albitar編2010)；及Antibody Engineering第1及2卷(Kontermann and Dübel編, 第2版2010)中所描述之廣泛使用之方法而總體上充分理解及/或通常使用之技術及程序。
除非本文中另外定義，否則本說明書中所使用之技術及科學術語應具有一般熟習此項技術者通常所理解之含義。出於解釋本說明書之目的，將應用以下術語說明且只要合適，以單數形式使用之術語亦將包括複數且反之亦然。在所闡述之術語之任何說明與以引用之方式併入本文中之任何文獻存在衝突之情況下，以下文闡述之術語說明為準。
術語「抗體」、「免疫球蛋白」或「Ig」在本文中可互換使用，且在最廣泛意義上使用且特定涵蓋例如單株抗體(包括促效劑、拮抗劑、中和抗體、全長或完整單株抗體)、具有多抗原決定基或單抗原決定基特異性之抗體組合物、多株或一價抗體、多價抗體、由至少兩種完整抗體形成之多特異性抗體(例如雙特異性抗體，只要其呈現所需生物活性即可)、單鏈抗體及其片段，如下文所描述。抗體可為人類抗體、人源化抗體、嵌合抗體及/或親和力成熟抗體，以及來自其他物種(例如小鼠及兔等)之抗體。術語「抗體」意欲包括免疫球蛋白類別之多肽內的B細胞之多肽產物，其能夠與特異性分子抗原結合且由兩對相同的多肽鏈構成，其中每一對具有一條重鏈(約50-70 kDa)及一條輕鏈(約25 kDa)，各鏈之各胺基端部分包括具有約100至約130個或更多個胺基酸之可變區，且各鏈之各羧基端部分包括恆定區。參見例如Antibody Engineering (Borrebaeck編, 第2版，1995)；及Kuby, Immunology (第3版，1997)。在特定實施例中，特定分子抗原可由本文提供之抗體(包括多肽或抗原決定基)結合。抗體亦包括(但不限於)合成抗體、以重組方式製造之抗體、駱駝化抗體、胞內抗體、抗個體基因型(抗Id)抗體，及以上任一種之功能片段(例如抗原結合片段)，該等功能片段係指抗體重鏈或輕鏈多肽的保留作為片段來源之抗體的一些或全部結合活性的部分。功能片段(例如抗原結合片段)之非限制性實例包括單鏈Fv (scFv) (例如包括單特異性、雙特異性等)、Fab片段、F(ab')片段、F(ab) 2片段、F(ab') 2片段、二硫鍵連接的Fv (dsFv)、Fd片段、Fv片段、雙功能抗體、三功能抗體、四功能抗體及微型抗體。特定言之，本文所提供之抗體包括免疫球蛋白分子及免疫球蛋白分子之免疫活性部分，例如含有結合於抗原之抗原結合位點的抗原結合域或分子(例如抗體之一或多個CDR)。此類抗體片段可見於例如Harlow及Lane, Antibodies: A Laboratory Manual (1989)；Mol. Biology and Biotechnology: A Comprehensive Desk Reference (Myers編, 1995)；Huston等人, 1993, Cell Biophysics 22:189-224；Plückthun及Skerra, 1989, Meth. Enzymol. 178:497-515；及Day, Advanced Immunochemistry (第2版1990)。本文所提供之抗體可屬於免疫球蛋白分子之任何類別(例如IgG、IgE、IgM、IgD及IgA)或任何子類別(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2)。抗體可為促效抗體或拮抗抗體 。
術語「單株抗體」係指自基本上均質的抗體群獲得的抗體，亦即，構成該群體之個別抗體為相同的，除了可以少量存在的可能天然存在之突變外。單株抗體為高度特異性的，其針對單一抗原位點。與可包括針對不同決定子(抗原決定基)之不同抗體的多株抗體製劑相比，各單株抗體針對抗原上之單一決定子。
「抗原」為抗體可以選擇性結合的結構。目標抗原可為多肽、碳水化合物、核酸、脂質、半抗原或其他天然存在的或合成的化合物。在一些實施例中，目標抗原係多肽。在某些實施例中，抗原與細胞相關，例如存在於細胞(例如癌細胞)上或中。
「完整」抗體為包含抗原結合位點以及CL及至少重鏈恆定區CH1、CH2及CH3之抗體。恆定區可包括人類恆定區或其胺基酸序列變異體。在某些實施例中，完整抗體具有一或多種效應功能。
術語「抗原結合片段」、「抗原結合域」、「抗原結合區」及類似術語係指抗體中包含與抗原相互作用之胺基酸殘基且賦予結合劑其針對抗原(例如CDR)之特異性及親和力的部分。如本文所用，「抗原結合片段」包括「抗體片段」，其包含完整抗體之一部分，諸如完整抗體之抗原結合區或可變區。抗體片段之實例包括(但不限於) Fab、Fab'、F(ab') 2及Fv片段；雙功能抗體及二-雙功能抗體(參見例如Holliger等人, 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. 90:6444-48；Lu等人, 2005, J. Biol. Chem. 280:19665-72；Hudson等人, 2003, Nat. Med. 9:129-34；WO 93/11161；及美國專利第5,837,242號及第6,492,123號)；單鏈抗體分子(參見例如美國專利第4,946,778號；第5,260,203號；第5,482,858號；及第5,476,786號)；雙可變域抗體(參見例如美國專利第7,612,181號)；單可變域抗體(sdAb) (參見例如Woolven等人, 1999, Immunogenetics 50: 98-101；及Streltsov等人, 2004, Proc Natl Acad Sci USA. 101:12444-49)；及由抗體片段形成之多特異性抗體。
術語「結合(binds/binding)」係指分子之間的相互相用，包括例如形成複合物。相互作用可為例如非共價相互作用，包括氫鍵、離子鍵、疏水相互作用及/或凡得瓦爾相互作用。複合物亦可包括藉由共價或非共價鍵、相互作用或力保持在一起的兩個或更多個分子之結合。抗體上之單一抗原結合位點與目標分子之單一抗原決定基(諸如抗原)之間的總非共價相互作用力為抗體或功能片段針對該抗原決定基之親和力。結合分子相對於單價抗原之解離速率(k off)對結合速率(k on)的比率(k off/k on)為解離常數K D，該解離常數與親和力逆相關。K D值愈低，則抗體親和力愈高。K D值因抗體與抗原之不同複合物而變且視k on與k off而定。本文所提供之抗體的解離常數K D可使用本文所提供之任何方法或熟習此項技術者熟知之任何其他方法測定。一個結合位點處之親和力並不始終反映抗體與抗原之間的相互相用的真實強度。當含有多個重複抗原決定子之複合抗原(諸如多價抗原)與含有多個結合位點之抗體接觸時，抗體與抗原在一個位點處之相互相用將增加第二個位點處的反應機率。多價抗體與抗原之間的此類多重相互作用之強度稱為親合力。
結合本文所描述之抗體或其抗原結合片段，諸如「結合(bind to)」、「特異性結合(that specifically bind to)」之術語及類似術語在本文中亦可互換使用，且係指具有特異性結合抗原(諸如多肽)之抗原結合域的結合分子。結合至或特異性結合至抗原之抗體或抗原結合片段可具有與相關抗原的交叉反應性。在某些實施例中，結合或特異性結合抗原之抗體或抗原結合片段不具有與其他抗原之交叉反應性。結合至或特異性結合至抗原的抗體或抗原結合片段可藉由例如免疫分析、Octet ®、Biacore ®或熟習此項技術者已知之其他技術來鑑別。在一些實施例中，在抗體或抗原結合片段以比與任何交叉反應性抗原更高之親和力結合抗原時，如使用實驗技術(諸如放射免疫分析(RIA)及酶聯免疫吸附分析(ELISA))所確定，該抗體或抗原結合片段結合或特異性結合抗原。通常，特異性或選擇性反應將為背景訊號或雜訊的至少兩倍且可超過背景的10倍。關於結合特異性之論述，參見例如Fundamental Immunology 332-36 (Paul編, 第2版, 1989)。在某些實施例中，抗體或抗原結合片段與「非目標」蛋白質結合之程度小於約結合分子或抗原結合域與其特定目標抗原之結合之10%，例如如藉由螢光活化細胞分選(fluorescence activated cell sorting；FACS)分析或RIA所確定。諸如「特異性結合(specific binding)」、「與……特異性結合(specifically binds to)」或「對……具有特異性(is specific for)」之術語意謂可量測地不同於非特異性相互作用之結合。特異性結合可例如藉由測定分子之結合、與對照分子之結合對比來量測，對照分子通常為結構類似、不具有結合活性的分子。例如，特異性結合可以藉由與類似於目標之對照分子的競爭來確定，例如過量的未標記目標。在此情況下，若經標記之目標與探針之結合受到過量的未標記目標之競爭性抑制，則指示特異性結合。結合至抗原之抗體或抗原結合片段包括能夠以足夠親和力結合抗原的抗體或抗原結合片段，使得結合分子適用作例如靶向抗原之診斷劑。在某些實施例中，結合至抗原的抗體或抗原結合片段具有小於或等於1000 nM、800 nM、500 nM、250 nM、100 nM、50 nM、10 nM、5 nM、4 nM、3 nM、2 nM、1 nM、0.9 nM、0.8 nM、0.7 nM、0.6 nM、0.5 nM、0.4 nM、0.3 nM、0.2 nM或0.1 nM的解離常數(K D)。在某些實施例中，抗體或抗原結合片段結合至抗原之抗原決定基，該抗原決定基在來自不同物種之抗原間(例如在人類與食蟹獼猴物種之間)為保守的。
「結合親和力」通常指分子(例如結合蛋白，諸如抗體)之單一結合位點與其結合搭配物(例如抗原)之間的非共價相互作用之總強度。除非另外指示，否則如本文所用，「結合親和力」係指反映結合對(例如，抗體與抗原)成員之間1:1相互作用之固有結合親和力。結合分子X針對其結合搭配物Y之親和力一般可由解離常數(K D)表示。可藉由此項技術中已知之常用方法(包括本文所描述之彼等方法)來量測親和力。低親和力抗體一般緩慢結合抗原且傾向於容易解離，而高親和力抗體一般較快結合抗原且傾向於較長時間保持結合狀態。此項技術中已知多種量測結合親和力的方法，其中之任一者可用於本發明之目的。特定說明性實施例包括以下。在一個實施例中，「K D」或「K D值」可藉由此項技術中已知的分析法量測，例如藉由結合分析法。K D可以利用RIA量測，例如使用所關注抗體之Fab形式及其抗原進行(Chen等人, J. Mol Biol, 1999, 293:865-81)。K D或K D值亦可藉由使用生物層干涉術(biolayer interferometry；BLI)或表面電漿子共振(surface plasmon resonance；SPR)分析，藉由Octet®，使用例如Octet®QK384系統，或藉由Biacore®，使用例如Biacore®TM-2000或Biacore®TM-3000來量測。「結合速率(on-rate/rate of association/association rate)」或「kon」亦可用上文所描述之相同生物層干涉術(BLI)或表面電漿子共振(SPR)技術，使用例如Octet®QK384、Biacore®TM-2000或Biacore®TM-3000系統來確定。
在某些實施例中，抗體或抗原結合片段可包含「嵌合」序列，其中重鏈及/或輕鏈之一部分與來源於特定物種或屬於特定抗體類別或子類別之抗體中之對應序列一致或與其同源，而該(等)鏈之其餘部分與來源於另一物種或屬於另一抗體類別或子類別之抗體以及此類抗體之片段中之對應序列一致或與其同源，只要其呈現所需生物活性即可(參見美國專利第4,816,567號；及Morrison等人, 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-55)。
在某些實施例中，抗體或抗原結合片段可包含作為嵌合抗體之非人類(例如鼠類)抗體「人類化」形式的一部分，該等嵌合抗體包括人類免疫球蛋白(例如受者抗體)，其中原生CDR殘基經來自非人類物種(諸如小鼠、大鼠、兔或非人類靈長類動物)之包含所需特異性、親和力及能力之相應CDR (例如供者抗體)的殘基置換。在一些情況下，人類免疫球蛋白之一或多個FR區殘基由相應的非人類殘基置換。此外，人類化抗體可包含在受體抗體或供者抗體中未發現之殘基。進行此等修飾以進一步改進抗體效能。人類化抗體重鏈或輕鏈可包含實質上所有至少一或多種可變區，其中所有或實質上所有CDR對應於非人類免疫球蛋白之CDR且所有或實質上所有FR係人類免疫球蛋白序列之FR。在某些實施例中，人類化抗體將包含免疫球蛋白恆定區(Fc)之至少一部分，通常人類免疫球蛋白之至少一部分。關於其他細節，參見Jones等人, 1986, Nature 321:522-25；Riechmann等人, 1988, Nature 332:323-29；Presta, 1992, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-96；Carter等人, 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:4285-89；美國專利第6,800,738號；第6,719,971號；第6,639,055號；第6,407,213號；及第6,054,297號。
在某些實施例中，抗體或抗原結合片段可包含「完全人類抗體」或「人類抗體」之部分，其中該等術語在本文中可互換使用且係指包含人類可變區及例如人類恆定區之抗體。在特定實施例中，該等術語係指包含人類來源之可變區及恆定區之抗體。在某些實施例中，「完全人類」抗體亦可涵蓋結合多肽且由核酸序列編碼之抗體，該等核酸序列為人類生殖系免疫球蛋白核酸序列之天然存在之體細胞變體。術語「完全人類抗體」包括含對應於如由Kabat等人所描述之人類生殖系免疫球蛋白序列之可變區及恆定區的抗體(參見Kabat等人(1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第五版, 美國衛生與人群服務部(U.S. Department of Health and Human Services), NIH公開案第91-3242號)。「人類抗體」為胺基酸序列對應於由人類產生之抗體之胺基酸序列及/或已使用任何製備人類抗體之技術製得之抗體。人類抗體之此定義特定排除包含非人類抗原結合殘基之人源化抗體。人類抗體可以使用此項技術中已知的各種技術產生，包括噬菌體呈現文庫(Hoogenboom及Winter, 1991, J. Mol. Biol. 227:381；Marks等人, 1991, J. Mol. Biol. 222:581)及酵母呈現文庫(Chao等人, 2006, Nature Protocols 1: 755-68)。亦可利用以下文獻中所描述的方法於製備人類單株抗體：Cole等人, Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy 77 (1985)；Boerner等人, 1991, J. Immunol. 147(1):86-95；以及van Dijk及van de Winkel, 2001, Curr. Opin. Pharmacol. 5: 368-74。人類抗體可藉由向已經修飾以回應於抗原刺激而產生此類抗體，但其內源性基因座已失能之轉殖基因動物(例如小鼠)投與抗原來製備(參見例如Jakobovits, 1995, Curr. Opin. Biotechnol. 6(5):561-66；Brüggemann及Taussing, 1997, Curr. Opin. Biotechnol. 8(4):455-58；及美國專利第6,075,181號及第6,150,584號，關於XENOMOUSE TM技術)。關於經由人類B細胞融合瘤技術產生的人類抗體，亦參見例如Li等人, 2006, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-62。
在某些實施例中，抗體或抗原結合片段可包含「重組型人類抗體」之一部分，其中該片語包括藉由重組工具製備、表現、產生或分離之人類抗體，諸如使用轉染至宿主細胞中之重組型表現載體表現之抗體；自重組型、組合型人類抗體文庫分離之抗體；自人類免疫球蛋白基因之轉殖基因及/或轉殖染色體動物(例如小鼠或牛)分離之抗體(參見例如Taylor, L. D.等人(1992) Nucl. Acids Res. 20:6287-6295)或藉由任何其他將人類免疫球蛋白基因序列剪接至其他DNA序列之方式製備、表現、產生或分離之抗體。此類重組人類抗體可具有衍生自人類生殖系免疫球蛋白序列之可變區及恆定區(參見Kabat, E. A.等人(1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第五版, U.S. Department of Health and Human Services, NIH公開號91-3242)。然而，在某些實施例中，該等重組人類抗體可經受活體外突變誘發(或當使用人類Ig序列之動物轉殖基因時，為活體內體細胞突變誘發)，且因此重組抗體之VH及VL區之胺基酸序列雖然衍生自且關於人類生殖系VH及VL序列，但該等胺基酸序列為可不活體內天然存在於人類抗體生殖系抗體庫內之序列。
在某些實施例中，抗體或抗原結合片段可包含「單株抗體」之一部分，其中如本文所用，該術語係指自基本上均質抗體之群體獲得之抗體，例如除可能少量存在的可天然存在之突變以外，組成該群體之個別抗體為一致的，且各單株抗體典型地將識別抗原上之單一抗原決定基。在特定實施例中，如本文所用，「單株抗體」為由單一融合瘤或其他細胞產生之抗體。術語「單株」不限於任何用於製備抗體之特定方法。舉例而言，適用於本發明之單株抗體可藉由首次由Kohler等人, 1975, Nature 256:495所描述之融合瘤方法製備，或可在細菌或真核動物或植物細胞中使用重組DNA方法製備(參見例如美國專利第4,816,567號)。「單株抗體」亦可使用例如Clackson等人, 1991, Nature 352:624-28及Marks等人, 1991, J. Mol. Biol., 222:581-97中所描述之技術，自噬菌體抗體文庫中分離。用於製備殖株細胞株及由其表現之單株抗體的其他方法為此項技術中熟知的。參見例如Short Protocols in Molecular Biology (Ausubel等人編, 第5版. 2002)。
典型的4鏈抗體單元為雜四聚醣蛋白，其由兩條相同輕(L)鏈及兩條相同重(H)鏈構成。在IgG之情況下，該4鏈單元一般係約150,000道爾頓。各L鏈藉由一個共價二硫鍵連接至H鏈，而兩條H鏈視H鏈同型而藉由一或多個二硫鍵彼此連接。各H鏈及L鏈亦具有有規律地隔開之鏈內二硫橋鍵。各H鏈在N端具有可變域(VH)，接著為各α及γ鏈之三個恆定域(CH)以及μ及ε同型之四個CH域。各L鏈在N端具有可變域(VL)，繼之為位於其另一端的恆定域(CL)。將VL與VH比對，且將CL與重鏈之第一恆定域(CH1)比對。咸信特定胺基酸殘基在輕鏈可變域與重鏈可變域之間形成界面。VH與VL配對在一起而形成單一抗原結合位點。關於不同類別之抗體的結構及特性，參見例如Basic and Clinical Immunology 71 (Stites等人編, 第8版1994)；及Immunobiology (Janeway等人編, 第5版2001)。
術語「Fab」或「Fab區」係指與抗原結合之抗體區域。習知IgG通常包含兩個Fab區，各駐存於Y形IgG結構之兩個臂中之一者上。各Fab區典型地由重鏈及輕鏈中之每一者之一個可變區及一個恆定區構成。更特定言之，Fab區中之重鏈可變區及恆定區為VH及CH1區，且Fab區中之輕鏈可變區及恆定區為VL及CL區。Fab區中之VH、CH1、VL及CL可以各種方式排列以根據本發明賦予抗原結合能力。舉例而言，VH及CH1區可位於一個多肽上，且VL及CL區可位於各別多肽上，類似於習知IgG之Fab區域。或者，VH、CH1、VL及CL區皆可位於同一多肽上且以不同次序定向，如下文章節中更詳細地描述。
術語「可變區」、「可變域」、「V區」或「V域」係指抗體之輕鏈或重鏈之一部分，其通常位於輕鏈或重鏈之胺基端且在重鏈中長度為約120至130個胺基酸且在輕鏈中長度為約100至110個胺基酸，且用於各特定抗體對其特定抗原之結合及特異性。重鏈之可變區可稱為「VH」。輕鏈之可變區可稱為「VL」。術語「可變」係指可變區之某些區段在抗體中之序列方面廣泛不同之事實。V區介導抗原結合且定義特定抗體對其特定抗原之特異性。然而，可變性不均勻分佈於可變區之110個胺基酸跨距內。實情為，V區由以下組成：約15-30個胺基酸之弱可變(例如相對恆定)延伸部分(稱為骨架區(FR))，該等延伸部分被較短的可變性更大的(例如極端可變性)區域(稱為「高變區」，各自長度為約9-12個胺基酸)分隔。重鏈及輕鏈之可變區各自包含基本上採用β片組態之四個FR，該等FR由三個高變區連接，該等高變區形成連接β片結構之環且在一些情況下形成β片結構之一部分。各鏈中之高變區藉由FR與來自其他鏈之高變區緊密結合在一起，促進形成抗體之抗原結合位點(參見例如Kabat等人, Sequences of Proteins of Immunological Interest (第5版, 1991))。恆定區不直接涉及抗體與抗原之結合，但呈現多種效應功能，諸如使抗體參與抗體依賴性細胞細胞毒性(ADCC)及補體依賴性細胞毒性(CDC)。可變區在不同抗體之間的序列方面廣泛不同。在特定實施例中，可變區係人類可變區。
術語「根據Kabat的可變區殘基編號」或「如Kabat中的胺基酸位置編號」及其變化形式，係指Kabat等人(同上)用於編譯抗體重鏈可變區或輕鏈可變區的編號系統。使用此編號系統，實際線性胺基酸序列可含有對應於可變域之FR或CDR之縮短或向其中之插入的較少或額外胺基酸。舉例而言，重鏈可變域可包括位於殘基52之後的單一胺基酸插入(殘基52a，根據Kabat)及位於殘基82之後的三個插入殘基(例如殘基82a、82b及82c等，根據Kabat)。對於既定抗體，可藉由將抗體序列之同源區與「標準」Kabat編號序列比對來確定殘基之Kabat編號。Kabat編號系統一般在提及可變域中之殘基(大致輕鏈之殘基1-107及重鏈之殘基1-113)時使用(例如Kabat等人, 見上文)。通常在提及免疫球蛋白重鏈恆定區中之殘基時使用「EU或Kabat編號系統」或「EU索引」(例如，Kabat等人之同前文獻中所報導之EU索引)。「如Kabat中之EU指數」係指人類IgG1 EU抗體之殘基編號。已藉由例如AbM、Chothia、Contact、IMGT及AHon描述其他編號系統。
當關於抗體使用時，術語「重鏈」係指約50-70 kDa之多肽鏈，其中胺基端部分包括具有約120至130個或更多個胺基酸之可變區，且羧基端部分包括恆定區。基於重鏈恆定區之胺基酸序列，恆定區可為五種不同類型中之一種(例如同型)，稱為alpha (α)、delta (δ)、epsilon (ε)、gamma (γ)及mu (μ)。不同重鏈之大小不同：α、δ及γ含有約450個胺基酸，而µ及ε含有約550個胺基酸。當與輕鏈組合時，此等不同類型之重鏈產生五種熟知類別(例如同型)之抗體，分別為IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，包括IgG之四個子類，即IgG1、IgG2、IgG3及IgG4。
當參考抗體使用時，術語「輕鏈」係指約25 kDa之多肽鏈，其中胺基端部分包括約100至約110個或更多個胺基酸之可變區，且羧基端部分包括恆定區。輕鏈之大致長度係211至217個胺基酸。基於恆定域之胺基酸序列，存在兩種不同類型，稱為卡帕(κ)或拉姆達(λ)。
如本文所用，術語「高變區」、「HVR」、「互補決定區」及「CDR」可互換地使用。「CDR」係指免疫球蛋白(Ig或抗體)VH β-片狀骨架之非骨架區內的三個高變區(H1、H2或H3)之一，或抗體VL β-片狀骨架之非骨架區內的三個高變區(L1、L2或L3)之一。因此，CDR為骨架區序列內穿插之可變區序列。
CDR區已為熟習此項技術者熟知且已藉由熟知編號系統定義。舉例而言，Kabat互補決定區(CDR)係基於序列可變性且最常用(參見例如Kabat等人, 見上文)。Chothia實際上係指結構環之位置(參見例如Chothia及Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196:901-17)。在使用Kabat編號規約進行編號時，Chothia CDR-H1環之末端在H32與H34之間變化，此視環之長度而定(此係因為Kabat編號方案將插入置於H35A及H35B；若既不存在35A，亦不存在35B，則環末端位於32；若僅存在35A，則環末端位於33；若35A與35B均存在，則環末端位於34)。AbM高變區代表Kabat CDR與Chothia結構環之間的折衷，且由Oxford Molecular之AbM抗體模型化軟體使用(參見例如Antibody Engineering第2卷(Kontermann及Dübel編, 第2版, 2010))。「接觸」高變區係基於可利用的複雜晶體結構之分析。已開發及廣泛採用之另一通用編號系統為ImMunoGeneTics (IMGT) Information System ®(Lafranc等人, 2003, Dev. Comp. Immunol. 27(1):55-77)。IMGT為專用於人類及其他脊椎動物之免疫球蛋白(IG)、T細胞受體(TCR)及主要組織相容複合物(MHC)的整合式資訊系統。本文中，依據胺基酸序列及輕鏈或重鏈內的位置提及CDR。由於免疫球蛋白可變域之結構內之CDR的「位置」在物種之間為保守的且存在於稱為環的結構中，因此使用根據結構特徵來比對可變域序列的編號系統容易鑑別CDR及骨架殘基。此資訊可用於將來自一個物種之免疫球蛋白之CDR殘基移植及置換至通常來自人類抗體之受體骨架中。Honegger及Plückthun, 2001, J. Mol. Biol. 309: 657-70已開發出另一種編號系統(AHon)。編號系統(包括例如Kabat編號及IMGT獨特編號系統)之間的對應性已為熟習此項技術者熟知(參見例如Kabat, 見上文；Chothia及Lesk, 見上文；Martin, 見上文；Lefranc等人, 見上文)。來自此等高變區或CDR中之每一者的殘基標示於下表1中 表1
Kabat AbM Chothia Contact IMGT
CDR-L1 L24--L34 L24--L34 L24--L34 L30--L36 L27--L38
CDR-L2 L50--L56 L50--L56 L50--L56 L46--L55 L56--L65
CDR-L3 L89--L97 L89--L97 L89--L97 L89--L96 L105-L117
CDR-H1 H31--H35B H26--H35B H26--H32..34 H30--H35B H27--H38
(Kabat編號)
CDR-H1 H31--H35 H26--H35 H26--H32 H30--H35
(Chothia編號)
CDR-H2 H50--H65 H50--H58 H52--H56 H47--H58 H56--H65
CDR-H3 H95--H102 H95--H102 H95--H102 H93--H101 H105-H117
既定CDR之邊界可視用於鑑別之方案而變化。因此，除非另外說明，否則術語所指定抗體之「CDR」及「互補決定區」或其區域，諸如可變區，以及抗體之個別CDR (例如CDR-H1、CDR-H2)或其區域，應理解為涵蓋如依據任一上述已知方案定義之互補決定區。在一些情況下，指定用於鑑別一或多個特定CDR之流程，諸如藉由Kabat、Chothia或Contact方法所定義之CDR。在其他情況下，明示CDR的特定胺基酸序列。
高變區可以包含如下「延伸的高變區」：VL中的24-36或24-34 (L1)、46-56或50-56 (L2)，及89-97或89-96 (L3)；以及VH中的26-35或26-35A (H1)、50-65或49-65 (H2)及93-102、94-102或95-102 (H3)。
術語「恆定區」或「恆定域」係指輕鏈及重鏈之羧基端部分，其不直接涉及抗體與抗原之結合，但展現多種效應功能，諸如與Fc受體之相互相用。該術語係指免疫球蛋白分子的一部分，該部分包含的胺基酸序列比免疫球蛋白之含有抗原結合位點的其他部分(可變區)更保守。恆定區可含有重鏈之CH1、CH2及CH3區以及輕鏈之CL區。
術語「骨架」或「FR」係指側接CDR之彼等可變區殘基。FR殘基存在於例如嵌合、人類化、人類、域抗體、雙功能抗體、線形抗體及雙特異性抗體中。FR殘基係除高變區殘基或CDR殘基以外的可變域殘基。
在本文中，術語「Fc區」用於定義免疫球蛋白重鏈之C端區，包括例如原生序列Fc區、重組型Fc區及變體Fc區。儘管免疫球蛋白重鏈之Fc區之邊界可變化，但人類IgG重鏈Fc區通常定義為自位置Cys226處之胺基酸殘基或自Pro230延伸至其羧基端。可移除Fc區之C端離胺酸(殘基447，根據EU編號系統)，例如在抗體之製備或純化期間，或藉由以重組方式工程改造編碼抗體之重鏈的核酸。因此，完整抗體之組合物可包含所有K447殘基均被移除之抗體群、K447殘基未移除之抗體群，以及含有具有K447殘基之抗體與不具有該殘基之抗體之混合物的抗體群。「功能性Fc區」具有原生序列Fc區之「效應功能」。例示性「效應功能」包括C1q結合；CDC；Fc受體結合；ADCC；吞噬；細胞表面受體(例如B細胞受體)之下調等。此類效應功能通常需要Fc區與結合區或結合域(例如抗體可變區或域)組合，且可使用熟習此項技術者已知之各種分析法評估。「變體Fc區」包含與原生序列Fc區相差至少一個胺基酸修飾(例如取代、添加或缺失)的胺基酸序列。在某些實施例中，變異型Fc區相較於原生序列Fc區或相較於親本多肽之Fc區，在原生序列Fc區中或在親本多肽之Fc區中具有至少一個胺基酸取代，例如約一個至約十個胺基酸取代，或約一個至約五個胺基酸取代。本文中之變異型Fc區將較佳與原生序列Fc區及/或親本多肽之Fc區具有至少約80%同源性，且更佳與其具有至少約90%同源性，例如與其具有至少約95%同源性。
如本文所使用，「抗原決定基」係此項技術中之術語且係指結合分子(例如抗體)所能特異性結合之抗原的局部區域。抗原決定基可為線性抗原決定基或構形、非線性或不連續之抗原決定基。舉例而言，在多肽抗原之情況下，抗原決定基可為多肽之連續胺基酸(「線形」抗原決定基)，或抗原決定基可包含來自多肽之兩個或更多個非連續區的胺基酸(「構形」、「非線形」或「不連續」抗原決定基)。熟習此項技術者應瞭解，一般而言，線形抗原決定基可或可不依賴於二級、三級或四級結構。舉例而言，在一些實施例中，結合分子結合至一組胺基酸，不論其是否摺疊成天然三維蛋白質結構。在其他實施例中，結合分子需要構成抗原決定基之胺基酸殘基展現特定構形(例如彎曲、扭轉、轉角或摺疊)以識別及結合抗原決定基。
術語「多肽」及「肽」及「蛋白質」在本文中可互換使用且係指任何長度之胺基酸聚合物。聚合物可為線性或分支的，其可以包含經修飾之胺基酸，且其可以間雜有非胺基酸。該等術語亦涵蓋已經天然修飾或藉由干預(例如二硫鍵形成、糖基化、脂質化、乙醯化、磷酸化，或任何其他操作或修飾)修飾之胺基酸聚合物。該定義內亦包括例如含有一或多種胺基酸類似物(包括(但不限於)非天然胺基酸)以及此項技術中已知之其他修飾之多肽。應理解，由於本發明之多肽可基於抗體或免疫球蛋白超家族之其他成員，因此在某些實施例中，「多肽」可以單鏈或作為兩條或更多條結合的鏈存在。
如本文所使用，術語「醫藥學上可接受」意謂由聯邦或州政府之監管機構批准或列於美國藥典(United States Pharmacopeia)、歐洲藥典(European Pharmacopeia)或其他公認藥典中用於動物，且更特定言之，用於人類。
「賦形劑」意謂醫藥學上可接受之材料、組合物或媒劑，諸如液體或固體填充劑、稀釋劑、溶劑或囊封材料。賦形劑包括例如囊封材料或添加劑，諸如吸收加速劑、抗氧化劑、黏合劑、緩衝劑、載劑、包衣劑、著色劑、稀釋劑、崩解劑、乳化劑、增效劑、填充劑、調味劑、保濕劑、潤滑劑、香料、防腐劑、推進劑、釋放劑、滅菌劑、甜味劑、增溶劑、潤濕劑及其混合物。術語「賦形劑」亦可指稀釋劑、佐劑(例如弗氏佐劑(Freunds' adjuvant) (完全或不完全)或媒劑。
在一個實施例中，各組分在以下意義上為「醫藥學上可接受的」：與醫藥調配物之其他成分相容且適合用於與人類及動物之組織或器官接觸而無過度毒性、刺激、過敏反應、免疫原性或其他問題或併發症，與合理益處/風險比相匹配。參見例如Lippincott Williams & Wilkins: Philadelphia, PA, 2005; Handbook of Pharmaceutical Excipients, 第6版; Rowe等人編；The Pharmaceutical Press and the American Pharmaceutical Association: 2009；Handbook of Pharmaceutical Additives, 第3版; Ash及Ash編; Gower Publishing Company: 2007；Pharmaceutical Preformulation and Formulation, 第2版; Gibson編; CRC Press LLC: Boca Raton, FL, 2009。在一些實施例中，醫藥學上可接受之賦形劑在所使用之劑量及濃度下對暴露於其之細胞或哺乳動物無毒。在一些實施例中，醫藥學上可接受之賦形劑為水性pH緩衝溶液。
縮寫「MMAE」係指單甲基奧瑞他汀E。
除非上下文另外指示，否則連字符(-)表示與連至側接分子之連接點。
術語「化學治療劑」係指有效抑制腫瘤生長之所有化合物。化學治療劑之非限制性實例包括：烷基化劑，例如氮芥、伸乙亞胺化合物及磺酸烷基酯；抗代謝物，例如葉酸、嘌呤或嘧啶拮抗劑；有絲分裂抑制劑，例如抗微管蛋白劑，諸如長春花生物鹼、奧瑞他汀(auristatin)及鬼臼毒素(podophyllotoxin)之衍生物；細胞毒性抗生素；損傷或干擾DNA表現或複製之化合物，例如DNA小溝結合劑；及生長因子受體拮抗劑。另外，化學治療劑包括細胞毒素劑(如本文所定義)、抗體、生物分子及小分子。
如本文所用，術語「保守取代」係指胺基酸取代已為熟習此項技術者所知且通常不會改變所得分子之生物活性。熟習此項技術者認識到，一般而言，在多肽之非必需區域中之單胺基酸取代實質上不改變生物活性(參見例如Watson等人, MOLECULAR BIOLOGY OF THE GENE, The Benjamin/Cummings Pub. Co., 第224頁(第4版1987))。此類例示性取代較佳根據表2及表3中所闡述之彼等取代進行。舉例而言，此類變化包括異白胺酸(I)、纈胺酸(V)及白胺酸(L)中之任一個取代此等疏水性胺基酸中之任何其他胺基酸；天冬胺酸(D)取代麩胺酸(E)且反之亦然；麩醯胺酸(Q)取代天冬醯胺(N)且反之亦然；及絲胺酸(S)取代蘇胺酸(T)且反之亦然。視特定胺基酸之環境及其在蛋白質三維結構中之作用而定，其他取代亦可視為保守的。舉例而言，甘胺酸(G)與丙胺酸(A)時常為可互換的，且丙胺酸(A)與纈胺酸(V)亦可為可互換的。相對呈疏水性之甲硫胺酸(M)常常可與白胺酸及異白胺酸互換，且有時可與纈胺酸互換。離胺酸(K)與精胺酸(R)在胺基酸殘基之顯著特徵為其電荷之位置中常常為可互換的且該兩個胺基酸殘基之pK差異不顯著。在特定環境中，仍有其他變化可視為「保守的」(參見例如本文中之表3；「Biochemistry」第2版的第13-15頁, Lubert Stryer編(Stanford University)；Henikoff等人, PNAS 1992第89卷10915-10919；Lei等人, J Biol Chem 1995年5月19日; 270(20):11882-11886)。其他取代亦可容許且可憑經驗或根據已知之保守取代確定。 表2.胺基酸縮寫
單字母 三字母 全名
        
F Phe 苯丙胺酸
L Leu 白胺酸
S Ser 絲胺酸
Y Tyr 酪胺酸
C Cys 半胱胺酸
W Trp 色胺酸
P Pro 脯胺酸
H His 組胺酸
Q Gln 麩醯胺酸
R Arg 精胺酸
I Ile 異白胺酸
M Met 甲硫胺酸
T Thr 蘇胺酸
N Asn 天冬醯胺
K Lys 離胺酸
V Val 纈胺酸
A Ala 丙胺酸
D Asp 天冬胺酸
E Glu 麩胺酸
G Gly 甘胺酸
表3.胺基酸取代或相似性矩陣 改編自GCG軟體9.0 BLOSUM62胺基酸取代矩陣(區塊取代矩陣)。值愈高，則在相關天然蛋白質中發現取代之可能性愈大。
術語「同源性」或「同源」欲意謂兩個聚核苷酸之間或兩個多肽之間的序列相似性。相似性可藉由對出於比較目的而比對之各序列中的位置進行比較來判定。若兩種多肽序列之給定位置不一致，則該位置之相似性或保守性可藉由評估該位置之胺基酸的相似性(例如根據表3)來確定。各序列之間之相似性程度隨該等序列共有之相配或同源位置的數量而變化。比對兩個序列以判定其百分比序列相似性可使用此項技術中已知之軟體程式進行，諸如Ausubel等人, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, Baltimore, MD(1999)中描述之軟體程式。較佳地，使用預設參數進行比對，其實例闡述如下。此項技術中熟知之可使用的一種比對程式為設定成預設參數之BLAST。特定言之，程式為BLASTN及BLASTP，其使用以下預設參數：遺傳密碼=標準；過濾器=無；股=兩條；截止值=60；期望值=10；矩陣=BLOSUM62；描述=50個序列；分選方式=高分；資料庫=非冗餘，GenBank + EMBL + DDBJ + PDB + GenBank CDS轉換+ Swissprotein + SPupdate + PIR。此等程式之詳情可見於國家生物技術資訊中心(National Center for Biotechnology Information)。
指定胺基酸序列或核酸序列之術語「同源物」意指「同源物」之相應序列與指定胺基酸序列或核酸序列具有實質上的一致性或同源性。
測定兩個序列(例如胺基酸序列或核酸序列)之間的百分比一致性可使用數學算法來實現。用於比較兩個序列之數學算法的較佳非限制性實例為Karlin及Altschul, 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 87:2264 2268之算法，如Karlin及Altschul, 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90:5873 5877中所修改。將此類算法併入Altschul等人, 1990, J. Mol. Biol. 215:403之NBLAST及XBLAST程式中。可利用NBLAST核苷酸程式參數集(例如對於分數=100而言，字長=12)進行BLAST核苷酸檢索，以獲得與本文所描述之核酸分子同源的核苷酸序列。BLAST蛋白質搜尋可利用XBLAST程式參數集執行，例如對於分數50，字長=3，以獲得與本文所描述之蛋白質分子同源的胺基酸序列。為得到間隙式比對以達成比較目的，可如Altschul等人., 1997, Nucleic Acids Res. 25:3389 3402中所描述利用間隙式BLAST。或者，PSI BLAST可用於進行迭代搜尋，其偵測分子間之遠距離關係(同上)。當利用BLAST、間隙式BLAST及PSI Blast程式時，可使用相應程式(例如XBLAST及NBLAST)之默認參數(參見例如，全球資訊網上之國家生物技術資訊中心(NCBI)，ncbi.nlm.nih.gov)。用於序列比較之數學演算法的另一個非限制實例為Myers及Miller, 1988, CABIOS 4:11 17之演算法。此類演算法併入ALIGN程式(2.0版)中，該ALIGN程式為GCG序列比對套裝軟體之一部分。當利用ALIGN程式來比較胺基酸序列時，可使用PAM120權重殘基表、空位長度罰分12及空位罰分4。
兩個序列之間的一致性百分比可在允許有空隙或不允許有空隙的情況下，使用與上文所描述類似的技術來確定。在計算一致性百分比時，通常僅對精確匹配進行計數。
術語「細胞毒性劑」係指抑制或阻止細胞表現活性、細胞功能及/或引起細胞破壞之物質。該術語意欲包括放射性同位素、化學治療劑，及毒素，諸如小分子毒素或源自細菌、真菌、植物或動物之酶活性毒素，包括其片段及/或變異體。細胞毒性劑之實例包括(但不限於)奧瑞他汀(例如奧瑞他汀E、奧瑞他汀F、MMAE及MMAF)、金黴素(auromycins)、類美登素(maytansinoids)、蓖麻毒素(ricin)、蓖麻毒素A鏈、康普瑞汀(combrestatin)、倍癌黴素(duocarmycins)、海兔毒素(dolastatins)、阿黴素(doxorubicin)、道諾黴素(daunorubicin)、紫杉醇(taxols)、順鉑(cisplatin)、cc1065、溴化乙錠(ethidium bromide)、絲裂黴素(mitomycin)、依託泊苷(etoposide)、替尼泊苷(tenoposide)、長春新鹼(vincristine)、長春鹼(vinblastine)、秋水仙鹼(colchicine)、二羥基炭疽菌素二酮(dihydroxy anthracin dione)、放線菌素(actinomycin)、白喉毒素(diphtheria toxin)、綠膿桿菌外毒素(PE) A、PE40、相思子毒素(abrin)、相思子毒素A鏈、莫迪素A鏈(modeccin A chain)、α-帚麴黴素(alpha-sarcin)、白樹素(gelonin)、有絲分裂素(mitogellin)、侷限麴菌素(retstrictocin)、酚黴素(phenomycin)、伊諾黴素(enomycin)、麻瘋樹逆境蛋白(curicin)、巴豆毒素(crotin)、卡奇黴素(calicheamicin)、肥皂草抑制劑，及糖皮質激素及其他化學治療劑，以及放射性同位素，諸如At 211、I 131、I 125、Y 90、Re 186、Re 188、Sm 153、Bi 212或Bi 213、P 32及Lu放射性同位素，包括Lu 177。抗體亦可與能夠將前藥轉化成其活性形式的抗癌前藥活化酶結合。
如本文所使用，術語「有效量」或「治療有效量」係指足以引起所需結果的本文所提供之結合分子(例如抗體)或醫藥組合物的量。
術語「個體」與「患者」可互換使用。如本文所用，在某些實施例中，個體為哺乳動物，諸如非靈長類動物(例如乳牛、豬、馬、貓、犬、大鼠等)或靈長類動物(例如猴及人類)。在特定實施例中，個體為人類。在一個實施例中，個體為哺乳動物，例如診斷患有病狀或病症的人類。在另一實施例中，個體為處於發展病狀或病症之風險下的哺乳動物，例如人類。
「投與(administer/administration)」係指將存在於體外的物質注射或另外物理遞送至患者體內之操作，諸如藉由經黏膜、皮內、靜脈內、肌肉內遞送，及/或本文所描述或此項技術中已知之任何其他物理遞送方法。
如本文所用，術語「治療(treat/treatment/treating)」係指由投與一或多種療法產生的疾病或病狀之進展、嚴重程度及/或持續時間的降低或改善。治療可如下確定：評估與潛在病症相關之一或多種症狀是否已減少、緩解及/或緩和，從而觀測到患者之改善，儘管患者可能仍罹患該潛在病症。術語「治療」包括管理與改善疾病。術語「控制(manage/managing/management)」係指個體自療法獲得之有利效果，其未必引起治癒疾病。
術語「預防(prevent/preventing/prevention)」係指降低疾病、病症、病狀或相關症狀(例如糖尿病或癌症)之發作(或復發)的可能性。
術語「癌症」或「癌細胞」在本文中用於表示發現贅瘤之組織或細胞，其具有將其與正常組織或組織細胞區分開的特徵。此類特徵中包括(但不限於)：退行發育程度、形狀之不規則性、細胞輪廓不清晰、細胞核尺寸、細胞核或細胞質結構的變化、其他表型變化、指示癌性或癌前狀態之細胞蛋白質的存在、增加數目之有絲分裂及轉移能力。關於「癌症」之詞包括癌瘤、肉瘤、腫瘤、上皮瘤、白血病、淋巴瘤、息肉及硬癌、轉形、贅瘤及其類似者。
如本文所用，「局部晚期」癌症係指已自其開始處擴散至附近組織或淋巴結的癌症。
如本文所用，「轉移」癌症係指已自其開始處擴散至身體之不同部分的癌症。
如本文中所用，「幾乎有效」意謂治療為與SOC療法一樣至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%有效。
術語「約」及「約」意謂在既定值或範圍的20%以內、15%以內、10%以內、9%以內、8%以內、7%以內、6%以內、5%以內、4%以內、3%以內、2%以內、1%以內或更小。
除非上下文另有明確規定，否則如本發明及申請專利範圍中所用，單數形式「一(a/an)」及「該(the)」包括複數形式。
應理解，當本文中用術語「包含」描述實施例時，亦提供用術語「由……組成」及/或「基本上由……組成」描述之其他類似實施例。亦應理解，當在本文中用片語「基本上由……組成」描述實施例時，亦提供用術語「由……組成」描述之其他類似的實施例。
如在諸如「A及/或B」之片語中所使用的術語「及/或」在本文中意欲包括A及B；A或B；A (單獨)；及B (單獨)。同樣，如「A、B及/或C」之片語中所使用之術語「及/或」意欲涵蓋以下實施例中之每一個：A、B及C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A及C；A及B；B及C；A (單獨)；B (單獨)；及C (單獨)。
術語「變體」係指與所述類型或規範展現不同的分子，諸如在具體描述蛋白質(例如 圖 1A中所示之191P4D12蛋白)之對應位置中具有一或多個不同胺基酸殘基的蛋白質。類似物為變異蛋白之一個實例。剪接同功型及單一核苷酸多型性(single nucleotides polymorphism；SNP)為變體之其他實例。
本發明之「191P4D12蛋白質」及/或「191P4D12相關蛋白質」包括本文中特別標識之彼等蛋白質(參見 圖 1A)，以及遵循本文中概述或此項技術中易於得到的方法，無需過度實驗即可分離/產生及表徵的對偶基因變體、保守取代變體、類似物及同源物。組合不同191P4D12蛋白質或其片段之部分的融合蛋白質、以及191P4D12蛋白質與異源多肽之融合蛋白質亦包括在內。此類191P4D12蛋白統稱為191P4D12相關蛋白質、本發明之蛋白質或191P4D12。術語「191P4D12相關蛋白質」係指4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或超過25個胺基酸；或至少30、35、40、45、50、55、60、65、70、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、225、250、275、300、325、330、335、339或更多個胺基酸之多肽片段或191P4D12蛋白質序列。術語「191P4D12」可與連接素-4互換使用。 5.2 癌症治療之方法
不符合順鉑條件的患者之尿路上皮癌及膀胱癌，包括肌肉侵襲性尿路上皮癌(MIUC)或肌肉侵襲性膀胱癌(MIBC)為尤其難以治療之疾病。通常，不符合順鉑條件的MIUC及MIBC患者略微虛弱，且除了尿路上皮癌/膀胱癌之外，亦患有多種合併症。如以上先前技術部分中所描述，目前尚無針對不符合順鉑條件的MIBC或MIUC患者之標準新輔助治療方案。實際上，此等患者通常用手術直接治療。本發明提供有效及安全的新輔助及圍手術期方法來治療患有尿路上皮癌及/或膀胱癌，且特定言之肌肉侵襲性尿路上皮癌(MIUC)或肌肉侵襲性膀胱癌(MIBC)之患者，該等患者在此環境下不符合順鉑條件。
舉例而言，本文所描述之結果表明，在一些實施例中使用有效量之如本文所描述之ADC治療個體之功效與在經用於治療患有MIUC或MIBC之符合順鉑條件的個體之標準照護(SOC)療法治療之符合順鉑條件的患者(亦即，更健康患者)下觀測到的治療功效類似。本文所描述之結果進一步表明，在某些實施例中，甚至在用本文所描述之ADC治療的多個週期之後，個體仍然符合根治性膀胱切除術及骨盆淋巴結擴清術(RC+PLND)條件，亦即該方法具有充分耐受性以使得該個體在新輔助治療之後保持足夠健康以接受手術。最後，本文所描述之結果進一步表明，在某些實施例中，使用向不符合順鉑條件的個體投與之本文所描述之ADC的治療之週期數目可等於或低於用於治療患有MIUC或MIBC之符合順鉑條件的個體(亦即，更健康個體)之SOC療法之週期數目。在本文所描述之結果之前，鑒於此患者群體在歷史上已證實為難以治療，且鑒於當前尚無針對符合順鉑條件的MIBC及MIBC患者之標準治療，本文所提供之方法是否將有效及耐受存在相當大的不確定性。因此，使用本文所描述之方法獲得的功效及安全性水準尤其值得注意且出人意料。 5.2.1治療一般患者及所選患者之癌症的方法
本文提供用於使用結合191P4D12 (連接素-4)之抗體藥物結合物(ADC)來治療個體，包括患有尿路上皮癌之個體之各種癌症的方法。
在一個態樣中，本文提供使用結合191P4D12 (連接素-4)之ADC治療人類個體之癌症的方法。在一些實施例中，癌症為肌肉侵襲性尿路上皮癌(MIUC)或肌肉侵襲性膀胱癌(MIBC)。在一些實施例中，該方法包含向該個體投與有效量之抗體藥物結合物(ADC)。在一些實施例中，ADC包含結合至191P4D12 (連接素-4)之抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，該ADC包含結合至191P4D12 (連接素-4)之抗體或其抗原結合片段，該抗體或抗原結合片段與一或多個單位的細胞毒性或細胞生長抑制劑結合。在一些實施例中，該ADC包含結合至191P4D12 (連接素-4)之抗體或其抗原結合片段，該抗體或抗原結合片段與一或多個單位的奧瑞他汀藥劑結合。在一些實施例中，該ADC包含結合至191P4D12 (連接素-4)之抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段與一或多個單位的單甲基奧瑞他汀E (MMAE)結合。可用於本文所揭露之方法中之適合之ADC的額外實例提供於章節5.3.2中。在一些實施例中，該個體不適合接受順鉑療法(順鉑不適合)。在一些實施例中，該病理降期率(pDSR)為至少50%。在一些實施例中，該病理降期率(pDSR)為至少50%。在一些實施例中，在每3週週期之第1天及第8天向該個體投與該有效量ADC，總共3個週期。在一些實施例中，該ADC之有效量為約1.25 mg/該個體體重kg。在一些實施例中，該ADC之有效量為每公斤該個體之體重的約1.0 mg。
在一些實施例中，在投與步驟之後，該個體接受作為癌症(亦即，癌症治療進一步包含根治性膀胱切除術及骨盆淋巴結擴清術(RC+PLND))之治療的一部分之根治性膀胱切除術及骨盆淋巴結擴清術(RC+PLND)。在一些實施例中，該方法包含向該個體投與2或3個週期之有效量之抗體藥物結合物(ADC)。在一些實施例中，該方法包含向該個體投與2個週期之有效量之抗體藥物結合物(ADC)。在一些實施例中，該方法包含向該個體投與3個週期之有效量之抗體藥物結合物(ADC)。在一些實施例中，該個體患有尿路上皮癌或膀胱癌。在一些實施例中，該個體患有肌肉侵襲性尿路上皮癌(MIUC)或肌肉侵襲性膀胱癌(MIBC)。在一些實施例中，該個體不適合接受順鉑療法(順鉑不適合)。
在一個態樣中，該方法包含向該個體投與3個週期之有效量之抗體藥物結合物(ADC)；其中在投與步驟之後，該個體接受作為癌症之治療的一部分之根治性膀胱切除術及骨盆淋巴結擴清術(RC+PLND)；其中該ADC包含結合至191P4D12 (連接素-4)之抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段與一或多個單位的單甲基奧瑞他汀E (MMAE)結合；其中該個體患有肌肉侵襲性尿路上皮癌(MIUC)或肌肉侵襲性膀胱癌(MIBC)；其中該個體不適合接受順鉑治療(順鉑不適合)。
在一個態樣中，該方法包含(i)在每3週週期之第1天及第8天向該個體投與有效量之ADC，其中該ADC包含結合至191P4D12 (連接素-4)之抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段與一或多個單位的單甲基奧瑞他汀E (MMAE)結合；(ii)對該個體進行根治性膀胱切除術及骨盆淋巴結擴清術(RC+PLND)；及(iii)在步驟(ii)之後約8週，在每3週週期之第1天及第8天向該個體投與有效量之ADC總共6個週期；其中該個體不適合接受順鉑治療(順鉑不適合)。在一些實施例中，該ADC有效量為1.25 mg/kg。在一些實施例中，在步驟(iii)中，投與有效量之ADC持續總共5個週期。在一些實施例中，在步驟(iii)中，投與有效量之ADC持續總共4個週期。在一些實施例中，在步驟(iii)中，投與有效量之ADC持續總共3個週期。在一些實施例中，在步驟(iii)中，投與有效量之ADC持續總共2個週期。在一些實施例中，在步驟(iii)中，投與有效量之ADC持續總共1個週期。
在一個態樣中，該方法包含(i)在每3週週期之第1天及第8天向該個體投與有效量之ADC，其中該ADC包含結合至191P4D12 (連接素-4)之抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段與一或多個單位的單甲基奧瑞他汀E (MMAE)結合，其中在投與步驟之後，該個體接受作為癌症治療之一部分的RC+PLND；及(ii)在該個體接受RC+PLND之後，在每3週週期之第1天及第8天向該個體投與有效量之ADC，持續在該個體接受RC+PLND之後約8週總共6個週期；其中該個體不適合接受順鉑治療(順鉑不適合)。在一些實施例中，該ADC有效量為1.25 mg/kg。在一些實施例中，在步驟(ii)中，投與有效量之ADC持續總共5個週期。在一些實施例中，在步驟(ii)中，投與有效量之ADC持續總共4個週期。在一些實施例中，在步驟(ii)中，投與有效量之ADC持續總共3個週期。在一些實施例中，在步驟(ii)中，投與有效量之ADC持續總共2個週期。在一些實施例中，在步驟(ii)中，投與有效量之ADC持續總共1個週期。
在本文所提供之方法的一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與ADC之後約四(4)至約十二(12)週接受RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約五(5)至約十二(12)週接受該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約六(6)至約十二(12)週接受該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約七(7)至約十二(12)週接受該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約八(8)至約十二(12)週接受該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約九(9)至約十二(12)週接受該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約十(10)至約十二(12)週接受該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約十一(11)至約十二(12)週接受該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約四(4)至約十一(11)週接受該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約四(4)至約十(10)週接受該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約四(4)至約九(9)週接受該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約四(4)至約八(8)週接受該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約四(4)至約七(7)週接受該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約四(4)至約六(6)週接受該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約四(4)至約五(5)週接受該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約六(6)至約八(8)週接受該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約七(7)至約九(9)週接受該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約八(8)至約十(10)週接受該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約九(9)至約十一(11)週接受該RC+PLND。
在本文所提供之方法的一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與ADC之後約四(4)週接受RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約五(5)週接受該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約六(6)週接受該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約七(7)週接受該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約八(8)週接受該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約九(9)週接受該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約十(10)週接受該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約十一(11)週接受該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約十二(12)週接受該RC+PLND。
在一些實施例中，該方法進一步包含步驟(b)對該個體進行根治性膀胱切除術及骨盆淋巴結擴清術(RC+PLND)。在一些實施例中，步驟(b)在步驟(a)之後約四(4)至約十二(12)週進行。在一些實施例中，步驟(b)在步驟(a)之後約五(5)至約十二(12)週進行。在一些實施例中，步驟(b)在步驟(a)之後約六(6)至約十二(12)週進行。在一些實施例中，步驟(b)在步驟(a)之後約七(7)至約十二(12)週進行。在一些實施例中，步驟(b)在步驟(a)之後約八(8)至約十二(12)週進行。在一些實施例中，步驟(b)在步驟(a)之後約九(9)至約十二(12)週進行。在一些實施例中，步驟(b)在步驟(a)之後約十(10)至約十二(12)週進行。在一些實施例中，步驟(b)在步驟(a)之後約十一(11)至約十二(12)週進行。在一些實施例中，步驟(b)在步驟(a)之後約四(4)至約十一(11)週進行。在一些實施例中，步驟(b)在步驟(a)之後約四(4)至約十(10)週進行。在一些實施例中，步驟(b)在步驟(a)之後約四(4)至約九(9)週進行。在一些實施例中，步驟(b)在步驟(a)之後約四(4)至約八(8)週進行。在一些實施例中，步驟(b)在步驟(a)之後約四(4)至約七(7)週進行。在一些實施例中，步驟(b)在步驟(a)之後約四(4)至約六(6)週進行。在一些實施例中，步驟(b)在步驟(a)之後約四(4)至約五(5)週進行。在一些實施例中，步驟(b)在步驟(a)之後約六(6)至約八(8)週進行。在一些實施例中，步驟(b)在步驟(a)之後約七(7)至約九(9)週進行。在一些實施例中，步驟(b)在步驟(a)之後約八(8)至約十(10)週進行。在一些實施例中，步驟(b)在步驟(a)之後約九(9)至約十一(11)週進行。
在本文所提供之方法的一些實施例中，步驟(b)在步驟(a)之後約四(4)週進行。在一些實施例中，步驟(b)在步驟(a)之後約五(5)週進行。在一些實施例中，步驟(b)在步驟(a)之後約六(6)週進行。在一些實施例中，步驟(b)在步驟(a)之後約七(7)週進行。在一些實施例中，步驟(b)在步驟(a)之後約八(8)週進行。在一些實施例中，步驟(b)在步驟(a)之後約九(9)週進行。在一些實施例中，步驟(b)在步驟(a)之後約十(10)週進行。在一些實施例中，步驟(b)在步驟(a)之後約十一(11)週進行。在一些實施例中，步驟(b)在步驟(a)之後約十二(12)週進行。
在本文所提供之方法的一些實施例中，該個體之病理完全反應率(pCRR)為至少30%。在一些實施例中，該個體之病理完全反應率(pCRR)為至少35%。在一些實施例中，該個體之病理完全反應率(pCRR)為至少40%。在一些實施例中，該個體之病理完全反應率(pCRR)為至少45%。在一些實施例中，該個體之病理完全反應率(pCRR)為至少50%。在一些實施例中，該個體之病理完全反應率(pCRR)為至少55%。在一些實施例中，該個體之病理完全反應率(pCRR)為至少60%。在一些實施例中，該個體之病理完全反應率(pCRR)為至少65%。在一些實施例中，該個體之病理完全反應率(pCRR)為至少70%。在一些實施例中，該個體之病理完全反應率(pCRR)為至少75%。
在本文所提供之方法的一些實施例中，藉由該等方法治療個體群體，且經治療群體中之病理完全反應率(pCRR)為至少30%。在一些實施例中，藉由該等方法治療個體群體，且經治療群體中之病理完全反應率(pCRR)為至少35%。在一些實施例中，藉由該等方法治療個體群體，且經治療群體中之病理完全反應率(pCRR)為至少40%。在一些實施例中，藉由該等方法治療個體群體，且經治療群體中之病理完全反應率(pCRR)為至少45%。在一些實施例中，藉由該等方法治療個體群體，且經治療群體中之病理完全反應率(pCRR)為至少50%。在一些實施例中，藉由該等方法治療個體群體，且經治療群體中之病理完全反應率(pCRR)為至少55%。在一些實施例中，藉由該等方法治療個體群體，且經治療群體中之病理完全反應率(pCRR)為至少60%。在一些實施例中，藉由該等方法治療個體群體，且經治療群體中之病理完全反應率(pCRR)為至少65%。在一些實施例中，藉由該等方法治療個體群體，且經治療群體中之病理完全反應率(pCRR)為至少70%。在一些實施例中，藉由該等方法治療個體群體，且經治療群體中之病理完全反應率(pCRR)為至少75%。
在本文所提供之方法的一些實施例中，用ADC治療之個體群體的病理完全反應率(pCRR)為至少30%。在一些實施例中，用ADC治療之個體群體的病理完全反應率(pCRR)為至少35%。在一些實施例中，用ADC治療之個體群體的病理完全反應率(pCRR)為至少40%。在一些實施例中，用ADC治療之個體群體的病理完全反應率(pCRR)為至少45%。在一些實施例中，用ADC治療之個體群體的病理完全反應率(pCRR)為至少50%。在一些實施例中，用ADC治療之個體群體的病理完全反應率(pCRR)為至少55%。在一些實施例中，用ADC治療之個體群體的病理完全反應率(pCRR)為至少60%。在一些實施例中，用ADC治療之個體群體的病理完全反應率(pCRR)為至少65%。在一些實施例中，用ADC治療之個體群體的病理完全反應率(pCRR)為至少70%。在一些實施例中，用ADC治療之個體群體的病理完全反應率(pCRR)為至少75%。
在本文所提供之方法的一些實施例中，該個體之病理降期率(pDSR)為至少50%。在一些實施例中，該個體之病理降期率(pDSR)為至少55%。在一些實施例中，該個體之病理降期率(pDSR)為至少60%。在一些實施例中，該個體之病理降期率(pDSR)為至少65%。在一些實施例中，該個體之病理降期率(pDSR)為至少70%。在一些實施例中，該個體之病理降期率(pDSR)為至少75%。在一些實施例中，該個體之病理降期率(pDSR)為至少80%。在一些實施例中，該個體之病理降期率(pDSR)為至少85%。在一些實施例中，該個體之病理降期率(pDSR)為至少90%。
在本文所提供之方法的一些實施例中，藉由該等方法治療個體群體，且經治療群體中之病理降期率(pDSR)為至少50%。在一些實施例中，藉由該等方法治療個體群體，且經治療群體中之病理降期率(pDSR)為至少55%。在一些實施例中，藉由該等方法治療個體群體，且經治療群體中之病理降期率(pDSR)為至少60%。在一些實施例中，藉由該等方法治療個體群體，且經治療群體中之病理降期率(pDSR)為至少65%。在一些實施例中，藉由該等方法治療個體群體，且經治療群體中之病理降期率(pDSR)為至少70%。在一些實施例中，藉由該等方法治療個體群體，且經治療群體中之病理降期率(pDSR)為至少75%。在一些實施例中，藉由該等方法治療個體群體，且經治療群體中之病理降期率(pDSR)為至少80%。在一些實施例中，藉由該等方法治療個體群體，且經治療群體中之病理降期率(pDSR)為至少85%。在一些實施例中，藉由該等方法治療個體群體，且經治療群體中之病理降期率(pDSR)為至少90%。
在本文所提供之方法的一些實施例中，用ADC治療之個體群體的病理降期率(pDSR)為至少50%。在一些實施例中，用ADC治療之個體群體的病理降期率(pDSR)為至少55%。在一些實施例中，用ADC治療之個體群體的病理降期率(pDSR)為至少60%。在一些實施例中，用ADC治療之個體群體的病理降期率(pDSR)為至少65%。在一些實施例中，用ADC治療之個體群體的病理降期率(pDSR)為至少70%。在一些實施例中，用ADC治療之個體群體的病理降期率(pDSR)為至少75%。
在一個態樣中，本文提供治療人類個體之尿路上皮癌或膀胱癌的方法，其包含：向該個體投與多個週期之有效量之抗體藥物結合物(ADC)，其中(a)該ADC包含結合至191P4D12 (連接素-4)之抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段與一或多個單位的單甲基奧瑞他汀E (MMAE)結合；(b)該個體不適合接受順鉑治療(不符合順鉑條件)；及(c)向不符合順鉑條件的個體投與之ADC治療的週期數目等於或低於用於治療患有MIUC或MIBC之符合順鉑條件的個體之標準照護(SOC)療法的週期數目。在一些實施例中，在每3週週期之第1天及第8天向該個體投與該有效量ADC，總共3個週期。在一些實施例中，該ADC之有效量為約1.25 mg/該個體體重kg。在一些實施例中，該ADC之有效量為每公斤該個體之體重的約1.0 mg。
在一個態樣中，本文提供治療人類個體之肌肉侵襲性尿路上皮癌(MIUC)或肌肉侵襲性膀胱癌(MIBC)的方法，其包含：向該個體投與多個週期之有效量之抗體藥物結合物(ADC)，其中(a)該ADC包含結合至191P4D12 (連接素-4)之抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段與一或多個單位的單甲基奧瑞他汀E (MMAE)結合；(b)該個體不適合接受順鉑治療(不符合順鉑條件)；及(c)向不符合順鉑條件的個體投與之ADC治療的週期數目等於或低於用於治療患有MIUC或MIBC之符合順鉑條件的個體之標準照護(SOC)療法的週期數目。
在本文所提供之方法的一些實施例中，針對符合順鉑條件的個體之該SOC療法包含順鉑。在一些實施例中，針對符合順鉑條件的個體之該SOC療法包含(i)甲胺喋呤、長春鹼、小紅莓及順鉑(MVAC)，或(ii)吉西他濱(gemcitabine)加順鉑。在一些實施例中，針對符合順鉑條件的個體之該SOC療法包含甲胺喋呤、長春鹼、小紅莓及順鉑(MVAC)。在一些實施例中，針對符合順鉑條件的個體之該SOC療法包含吉西他濱(gemcitabine)加順鉑。在一些實施例中，針對該符合順鉑條件的個體之該SOC療法包含投與計劃性細胞死亡1 (PD-1)抑制劑；或計劃性細胞死亡-配位體1 (PD-L1)抑制劑。在一些實施例中，針對該符合順鉑條件的個體之該SOC療法包含：i.順鉑；ii.甲胺喋呤、長春鹼、小紅莓及順鉑(MVAC)；iii.吉西他濱(gemcitabine)加順鉑；iv.投與計劃性細胞死亡1 (PD-1)抑制劑；或v.投與計劃性細胞死亡-配位體1 (PD-L1)抑制劑。
在本文所提供之方法的一些實施例中，向該不符合順鉑條件的個體投與之ADC治療的週期數目為1、2、3或4。在一些實施例中，向該不符合順鉑條件的個體投與之ADC治療的週期數目為3或4。在一些實施例中，向該不符合順鉑條件的個體投與之ADC治療的週期數目為4。在一些實施例中，向該不符合順鉑條件的個體投與之ADC治療的週期數目為3。在一些實施例中，向該不符合順鉑條件的個體投與之ADC治療的週期數目為2。在一些實施例中，向該不符合順鉑條件的個體投與之ADC治療的週期數目為1。
在本文所提供之方法的一些實施例中，該方法進一步包含對該個體進行根治性膀胱切除術及骨盆淋巴結擴清術(RC+PLND)。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約四(4)至約十二(12)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約五(5)至約十二(12)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約六(6)至約十二(12)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約七(7)至約十二(12)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約八(8)至約十二(12)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約九(9)至約十二(12)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約十(10)至約十二(12)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約十一(11)至約十二(12)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約四(4)至約十一(11)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約四(4)至約十(10)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約四(4)至約九(9)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約四(4)至約八(8)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約四(4)至約七(7)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約四(4)至約六(6)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約四(4)至約五(5)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約六(6)至約八(8)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約七(7)至約九(9)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約八(8)至約十(10)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約九(9)至約十一(11)週進行該RC+PLND。
在一些實施例中，在向該人類個體投與該ADC之後約四(4)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，在向該人類個體投與該ADC之後約五(5)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，在向該人類個體投與該ADC之後約六(6)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，在向該人類個體投與該ADC之後約七(7)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，在向該人類個體投與該ADC之後約八(8)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，在向該人類個體投與該ADC之後約九(9)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，在向該人類個體投與該ADC之後約十(10)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，在向該人類個體投與該ADC之後約十一(11)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，在向該人類個體投與該ADC之後約十二(12)週進行該RC+PLND。
在一個態樣中，本文提供投與新輔助或圍手術期療法以治療人類個體之肌肉侵襲性尿路上皮癌(MIUC)或肌肉侵襲性膀胱癌(MIBC)的方法，其包含：向該個體投與多個週期之有效量之抗體藥物結合物(ADC)，其中(a)該ADC包含結合至191P4D12 (連接素-4)之抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段與一或多個單位的單甲基奧瑞他汀E (MMAE)結合；(b)該個體不適合接受順鉑治療(不符合順鉑條件)；及(c)在用該ADC治療之多個週期之後，該個體保持符合根治性膀胱切除術及骨盆淋巴結擴清術(RC+PLND)的條件。在一些實施例中，在每3週週期之第1天及第8天向該個體投與該有效量ADC，總共3個週期。在一些實施例中，該ADC之有效量為約1.25 mg/該個體體重kg。在一些實施例中，該ADC之有效量為每公斤該個體之體重的約1.0 mg。
在一些實施例中，該方法進一步包含對該個體進行根治性膀胱切除術及骨盆淋巴結擴清術(RC+PLND)。在一些實施例中，該ADC係以新輔助療法在該手術之前投與。在一些實施例中，該ADC係在該手術之前及之後投與。在一些實施例中，該ADC係作為新輔助療法(i)在該手術之前或(ii)在該手術之前及之後投與。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約四(4)至約十二(12)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約五(5)至約十二(12)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約六(6)至約十二(12)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約七(7)至約十二(12)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約八(8)至約十二(12)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約九(9)至約十二(12)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約十(10)至約十二(12)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約十一(11)至約十二(12)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約四(4)至約十一(11)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約四(4)至約十(10)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約四(4)至約九(9)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約四(4)至約八(8)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約四(4)至約七(7)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約四(4)至約六(6)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約四(4)至約五(5)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約六(6)至約八(8)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約七(7)至約九(9)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約八(8)至約十(10)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，該人類個體在向該人類個體投與該ADC之後約九(9)至約十一(11)週進行該RC+PLND。
在一些實施例中，在向該人類個體投與該ADC之後約四(4)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，在向該人類個體投與該ADC之後約五(5)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，在向該人類個體投與該ADC之後約六(6)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，在向該人類個體投與該ADC之後約七(7)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，在向該人類個體投與該ADC之後約八(8)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，在向該人類個體投與該ADC之後約九(9)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，在向該人類個體投與該ADC之後約十(10)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，在向該人類個體投與該ADC之後約十一(11)週進行該RC+PLND。在一些實施例中，在向該人類個體投與該ADC之後約十二(12)週進行該RC+PLND。
在一些實施例中，在手術之後約一(1)週投與ADC。在一些實施例中，在手術之後約兩(2)週投與ADC。在一些實施例中，在手術之後約三(3)週投與ADC。在一些實施例中，在手術之後約四(4)週投與ADC。在一些實施例中，在手術之後約五(5)週投與ADC。在一些實施例中，在手術之後約六(6)週投與ADC。在一些實施例中，在手術之後約兩個(2)月投與ADC。在一些實施例中，在手術之後約三個(3)月投與ADC。在一些實施例中，在手術之後約四個(4)月投與ADC。在一些實施例中，在手術之後約五個(5)月投與ADC。在一些實施例中，在手術之後約六個(6)月投與ADC。在一些實施例中，在手術之後約七個(7)月投與ADC。在一些實施例中，在手術之後約八個(8)月投與ADC。在一些實施例中，在手術之後約九個(9)月投與ADC。在一些實施例中，在手術之後約十個(10)月投與ADC。在一些實施例中，在手術之後約十一個(11)月投與ADC。在一些實施例中，在手術之後約十二個(12)月投與ADC。
治療肌肉侵襲性膀胱癌(MIBC)之標準照護(SOC)療法包括基於順鉑之新輔助化學治療(NAC) (加上確定性局部治療(膀胱切除術或放射)) (參見例如Advanced Bladder Cancer Meta-analysis, Eur Urol., 2005, 48(2):202-5)、加速或劑量密集型甲胺喋呤、長春鹼、小紅莓及順鉑(MVAC) (參見例如Choueiri等人., J Clin Oncol, 2014, 32(18):1889-94; Plimack等人., J Clin Oncol., 2014, 32(18):1895-901)、吉西他濱加順鉑、計劃性細胞死亡1 (PD-1)抑制劑(參見例如Necchi等人., J Clin Oncol., 2018, 36(34):3353-60)及計劃性細胞死亡-配位體1 (PD-L1)抑制劑(參見例如Powles等人., 2018, J Clin Oncol., 36(Suppl 15):Abstract 4506)。治療功效之例示性量測包括病理完全反應率(pCRR)、病理降期率(pDSR)、無疾病存活期(DFS)、無事件存活期(EFS)、總存活期(OS)、無進展存活期(PFS)及/或反應持續時間(DoR)。舉例而言，相比於僅接受確定性局部治療之患者的45% OS，觀測到用基於順鉑之NAC治療之患者的5年OS為50%(參見例如Advanced Bladder Cancer Meta-analysis, Eur Urol., 2005, 48(2):202-5)。對於經加速或劑量密集型MVAC治療的患者，約30%至40%之患者達到pCR率，50%之患者發生病理性降期(Choueiri 2014; Plimack 2014)。對於用帕博利珠單抗(其為PD-1抑制劑)治療之患者，已觀測到50名經治療之患者的pCR率為42%，且PD L1陽性疾病患者之pCR率為54.3%及病理降期率為65.7%(Necchi 2018)。對於用帕博利珠單抗(其為PD-1抑制劑)治療之患者，在29%的患者及40%的PD-L1陽性疾病患者中觀測到pCR，而在PD-L1陰性組中僅有16%，且總計39%之患者被降期為非肌肉侵襲性疾病(Powles 2018)。
在一個態樣中，本文提供治療人類個體之肌肉侵襲性尿路上皮癌(MIUC)或肌肉侵襲性膀胱癌(MIBC)的方法，其包含：向該個體投與多個週期之有效量之抗體藥物結合物(ADC)，其中(a)該ADC包含結合至191P4D12 (連接素-4)之抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段與一或多個單位的單甲基奧瑞他汀E (MMAE)結合；(b)該個體不適合接受順鉑治療(不符合順鉑條件)；及(c)使用有效量之ADC治療該個體之功效幾乎類似於在經用於治療患有MIUC或MIBC之符合順鉑條件的個體之標準照護(SOC)療法治療之符合順鉑條件的患者上觀測到之治療功效。
在一個態樣中，本文提供治療人類個體之肌肉侵襲性尿路上皮癌(MIUC)或肌肉侵襲性膀胱癌(MIBC)的方法，其包含：向該個體投與多個週期之有效量之抗體藥物結合物(ADC)，其中(a)該ADC包含結合至191P4D12 (連接素-4)之抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段與一或多個單位的單甲基奧瑞他汀E (MMAE)結合；(b)該個體不適合接受順鉑治療(不符合順鉑條件)；及(c)使用有效量之ADC治療該個體之功效與在經用於治療患有MIUC或MIBC之符合順鉑條件的個體之標準照護(SOC)療法治療之符合順鉑條件的患者上觀測到之治療功效相同。
在一個態樣中，本文提供治療人類個體之肌肉侵襲性尿路上皮癌(MIUC)或肌肉侵襲性膀胱癌(MIBC)的方法，其包含：向該個體投與多個週期之有效量之抗體藥物結合物(ADC)，其中(a)該ADC包含結合至191P4D12 (連接素-4)之抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段與一或多個單位的單甲基奧瑞他汀E (MMAE)結合；(b)該個體不適合接受順鉑治療(不符合順鉑條件)；及(c)使用有效量之ADC治療該個體之功效類似於在符合順鉑條件的患者上觀測到之治療功效，該等符合順鉑條件的患者經用於治療患有MIUC或MIBC之符合順鉑條件的個體之標準照護(SOC)療法治療。在一些實施例中，在每3週週期之第1天及第8天向該個體投與該有效量ADC，總共3個週期。在一些實施例中，該ADC之有效量為約1.25 mg/該個體體重kg。在一些實施例中，該ADC之有效量為每公斤該個體之體重的約1.0 mg。
在一些實施例中，該治療功效至少與用用於符合順鉑條件的個體之SOC所觀測到之該治療功效一樣有效。在一些實施例中，治療功效之量測為以下中之一或多者：病理完全反應率(pCRR)、病理降期率(pDSR)、無疾病存活期(DFS)、無事件存活期(EFS)、總存活期(OS)、無進展存活期(PFS)及反應持續時間(DoR)。在一些實施例中，治療功效之量測為病理完全反應率(pCRR)。在一些實施例中，治療功效之量測為病理降期率(pDSR)。在一些實施例中，治療功效之量測為無疾病存活期(DFS)。在一些實施例中，治療功效之量測為無事件存活期(EFS)。在一些實施例中，治療功效之量測為總存活期(OS)。在一些實施例中，治療功效之量測為無進展存活期(PFS)。在一些實施例中，治療功效之量測為反應持續時間(DoR)。
在本文所提供之方法的一些實施例中，該個體之病理完全反應率(pCRR)為至少30%。在一些實施例中，該個體之病理完全反應率(pCRR)為至少35%。在一些實施例中，該個體之病理完全反應率(pCRR)為至少40%。在一些實施例中，該個體之病理完全反應率(pCRR)為至少45%。在一些實施例中，該個體之病理完全反應率(pCRR)為至少50%。在一些實施例中，該個體之病理完全反應率(pCRR)為至少55%。在一些實施例中，該個體之病理完全反應率(pCRR)為至少60%。在一些實施例中，該個體之病理完全反應率(pCRR)為至少65%。在一些實施例中，該個體之病理完全反應率(pCRR)為至少70%。在一些實施例中，該個體之病理完全反應率(pCRR)為至少75%。
在本文所提供之方法的一些實施例中，用ADC治療之個體群體的病理完全反應率(pCRR)為至少30%。在一些實施例中，用ADC治療之個體群體的病理完全反應率(pCRR)為至少35%。在一些實施例中，用ADC治療之個體群體的病理完全反應率(pCRR)為至少40%。在一些實施例中，用ADC治療之個體群體的病理完全反應率(pCRR)為至少45%。在一些實施例中，用ADC治療之個體群體的病理完全反應率(pCRR)為至少50%。在一些實施例中，用ADC治療之個體群體的病理完全反應率(pCRR)為至少55%。在一些實施例中，用ADC治療之個體群體的病理完全反應率(pCRR)為至少60%。在一些實施例中，用ADC治療之個體群體的病理完全反應率(pCRR)為至少65%。在一些實施例中，用ADC治療之個體群體的病理完全反應率(pCRR)為至少70%。在一些實施例中，用ADC治療之個體群體的病理完全反應率(pCRR)為至少75%。
在一些實施例中，該個體之病理降期率(pDSR)為至少50%。在一些實施例中，該個體之病理降期率(pDSR)為至少55%。在一些實施例中，該個體之病理降期率(pDSR)為至少60%。在一些實施例中，該個體之病理降期率(pDSR)為至少65%。在一些實施例中，該個體之病理降期率(pDSR)為至少70%。在一些實施例中，該個體之病理降期率(pDSR)為至少75%。在一些實施例中，該個體之病理降期率(pDSR)為至少80%。在一些實施例中，該個體之病理降期率(pDSR)為至少85%。在一些實施例中，該個體之病理降期率(pDSR)為至少90%。
在本文所提供之方法的一些實施例中，用ADC治療之個體群體的病理降期率(pDSR)為至少50%。在一些實施例中，用ADC治療之個體群體的病理降期率(pDSR)為至少55%。在一些實施例中，用ADC治療之個體群體的病理降期率(pDSR)為至少60%。在一些實施例中，用ADC治療之個體群體的病理降期率(pDSR)為至少65%。在一些實施例中，用ADC治療之個體群體的病理降期率(pDSR)為至少70%。在一些實施例中，用ADC治療之個體群體的病理降期率(pDSR)為至少75%。
在本文所提供之方法的一些實施例中，針對符合順鉑條件的個體之該SOC療法包含順鉑。在一些實施例中，針對符合順鉑條件的個體之該SOC療法包含(i)甲胺喋呤、長春鹼、小紅莓及順鉑(MVAC)，或(ii)吉西他濱(gemcitabine)加順鉑。在一些實施例中，針對符合順鉑條件的個體之該SOC療法包含甲胺喋呤、長春鹼、小紅莓及順鉑(MVAC)。在一些實施例中，針對符合順鉑條件的個體之該SOC療法包含吉西他濱(gemcitabine)加順鉑。在一些實施例中，針對該符合順鉑條件的個體之該SOC療法包含計劃性細胞死亡1 (PD-1)抑制劑；或計劃性細胞死亡-配位體1 (PD-L1)抑制劑。在一些實施例中，針對該符合順鉑條件的個體之該SOC療法包含：i.順鉑；ii.甲胺喋呤、長春鹼、小紅莓及順鉑(MVAC)；iii.吉西他濱(gemcitabine)加順鉑；iv.計劃性細胞死亡1 (PD-1)抑制劑；或v.計劃性細胞死亡-配位體1 (PD-L1)抑制劑。在一些實施例中，針對該符合順鉑條件的個體之該SOC療法包含計劃性細胞死亡1 (PD-1)抑制劑。在一些實施例中，針對該符合順鉑條件的個體之該SOC療法包含計劃性細胞死亡-配位體1 (PD-L1)抑制劑。在一些實施例中，該PD-1抑制劑為納武單抗或帕博利珠單抗。在一些實施例中，PD-1抑制劑為尼沃魯單抗。在一些實施例中，PD-1抑制劑為帕博利珠單抗。在一些實施例中，PD-L1抑制劑選自由阿特珠單抗(atezolizumab)、阿維魯單抗(avelumab)及德瓦魯單抗(durvalumab)組成之群。在一些實施例中，該PD-L1抑制劑為阿特珠單抗、阿維魯單抗或度伐魯單抗。在一些實施例中，PD-L1抑制劑為阿特珠單抗。在一些實施例中，PD-L1抑制劑為阿維魯單抗。在一些實施例中，PD-L1抑制劑為德瓦魯單抗。在一些實施例中，(i)該PD-1抑制劑為納武單抗(nivolumab)或帕博利珠單抗(pembrolizumab)；或(ii)該PD-L1抑制劑係選自由阿特珠單抗(atezolizumab)、阿維魯單抗(avelumab)及度伐魯單抗(durvalumab)組成之群。在本文所提供之方法的一些實施例中，該個體患有cT2-T4aN0M0期MIBC期MIBC。
在本文所提供之方法的一些實施例中，ADC之有效量為約1.25 mg/kg。
在本文所提供之方法之一些實施例中，癌症為尿路上皮癌或膀胱癌。在一些實施例中，癌症為尿路上皮癌。在一些實施例中，癌症為膀胱癌。在一些實施例中，該癌症為肌肉侵襲性尿路上皮癌(MIUC)。在一些實施例中，該癌症為肌肉侵襲性膀胱癌(MIBC)。 5.2.1.1不符合順鉑條件患者
對於本文所提供之方法，包括(但不限於)前述段落中的方法，可利用不同條件確定人類個體之順鉑不適合性。
在一些實施例中，用於確定順鉑不適合性的條件包含或由GFR ＜60 mL/min但≥30 mL/min組成，其中該GFR藉由柯克勞夫-高爾特公式(Cockcroft-Gault formula)、腎病飲食改進方程式(MDRD)或24小時尿液收集量測。在一些實施例中，用於確定順鉑不適合性的條件包含或由2分的ECOG體能狀態組成。在一些實施例中，用於確定順鉑不適合性的條件包含或由NCI CTCAE 4.03版本≥2級聽覺損失組成。在一些實施例中，用於確定順鉑不適合性的條件包含或由NYHA III級心臟衰竭組成。在一些實施例中，若該個體滿足以下準則中之一或多者，則其被視為不符合順鉑條件：(a) GFR ＜60 mL/min但≥30 mL/min，(其中該GFR係藉由柯克勞夫-高爾特公式(Cockcroft-Gault formula)、腎病飲食改進方程式(MDRD)或24小時尿液收集量測)；(b) ECOG體能狀態為2；(c) NCI CTCAE 4.03版本≥2級聽覺損失；及(d) NYHA III級心臟衰竭。在一些實施例中，用於確定順鉑不適合性的條件包含或由GFR ＜60 mL/min但≥30 mL/min組成，其中該GFR藉由柯克勞夫-高爾特公式(Cockcroft-Gault formula)、腎病飲食改進方程式(MDRD)或24小時尿液收集及2分的ECOG體能狀態量測。在一些實施例中，用於確定順鉑不適合性的條件包含或由GFR ＜60 mL/min但≥30 mL/min組成，其中該GFR藉由柯克勞夫-高爾特公式(Cockcroft-Gault formula)、腎病飲食改進方程式(MDRD)或24小時尿液收集及NCI CTCAE 4.03版本≥2級聽覺損失量測。在一些實施例中，用於確定順鉑不適合性的條件包含或由GFR ＜60 mL/min但≥30 mL/min組成，其中該GFR藉由柯克勞夫-高爾特公式(Cockcroft-Gault formula)、腎病飲食改進方程式(MDRD)或24小時尿液收集及NYHA III級心臟衰竭量測。在一些實施例中，用於確定順鉑不適合性的條件包含或由2分的ECOG體能狀態及NCI CTCAE 4.03版本≥2級聽覺損失組成。在一些實施例中，用於確定順鉑不適合性的條件包含或由2分的ECOG體能狀態及NYHA III級心臟衰竭組成。在一些實施例中，用於確定順鉑不適合性的條件包含或由NCI CTCAE 4.03版本≥2級聽覺損失及NYHA III級心臟衰竭組成。在一些實施例中，本文所提供之方法的人類個體可具有以下中之任何三者：GFR ＜60 mL/min但≥30 mL/min，其中該GFR係藉由柯克勞夫-高爾特公式(Cockcroft-Gault formula)、腎病飲食改進方程式(MDRD)或24小時尿液收集量測；ECOG體能狀態為2分，NCI CTCAE 4.03版本≥2級聽覺損失；及NYHA III級心臟衰竭。在一些實施例中，若該個體滿足以下準則中之一或多者，則其被視為不符合順鉑條件：(a) GFR ＜60 mL/min但≥30 mL/min，其中該GFR係藉由柯克勞夫-高爾特公式(Cockcroft-Gault formula)、腎病飲食改進方程式(MDRD)或24小時尿液收集量測；(b) ECOG體能狀態為2分，(c) NCI CTCAE 4.03版本≥2級聽覺損失，及(d) NYHA III級心臟衰竭。在一些實施例中，本文所提供之方法的人類個體可具有以下中之一或多者：GFR ＜60 mL/min但≥30 mL/min，其中該GFR係藉由柯克勞夫-高爾特公式(Cockcroft-Gault formula)、腎病飲食改進方程式(MDRD)或24小時尿液收集量測；ECOG體能狀態為2分，NCI CTCAE 4.03版本≥2級聽覺損失；及NYHA III級心臟衰竭。
在其他實施例中，用於確定順鉑不適合性的條件包含或由2分的ECOG體能狀態組成。在一些實施例中，用於確定順鉑不適合性的條件包含或由腎功能受損組成。在某些實施例中，用於確定順鉑不適合性的條件包含或由不小於級2的聽力損失組成。在一個實施例中，用於確定順鉑不適合性的條件包含或由2分的ECOG體能狀態及腎功能受損組成。在一些實施例中，用於確定順鉑不適合性的條件包含或由2分的ECOG體能狀態及不小於2級的聽力損失組成。在某些實施例中，用於確定順鉑不適合性的條件包含或由腎功能受損及不小於級2的聽力損失組成。在又其他實施例中，用於確定順鉑不適合性的條件包含或由2分的ECOG體能狀態、腎功能受損及不小於2級的聽力損失組成。在一些實施例中，用於確定順鉑不適合性的條件包含或由2分的ECOG體能狀態、腎功能受損及不小於2級的聽力損失中的任一者組成。在一些實施例中，用於確定順鉑不適合性的條件包含或由2分的ECOG體能狀態、腎功能受損及不小於2級的聽力損失中之任兩者的任何組合或排列組成。在一些實施例中，用於確定順鉑不適合性的條件包含或由2分的ECOG體能狀態、腎功能受損及不小於2級的聽力損失中的所有三者組成。
可利用此項技術中已知及可獲得的不同方式確定腎功能受損。對於本文所提供之方法，包括(但不限於)前述段落中的方法，本文提供了各種實施例來確定人類個體的腎功能受損。在一個實施例中，根據小於60 mL/min的肌酐清除(CrCl)來確定腎功能受損。在一些實施例中，根據小於60 mL/min、但不小於30 mL/min的CrCl來確定腎功能受損。在某些實施例中，根據小於30 mL/min、但不小於15 mL/min的CrCl來確定腎功能受損。在本段落所提供之方法的一些實施例中，藉由24小時尿液收集來量測CrCl。在本段落所提供之方法的其他實施例中，根據科克羅夫特-高爾特準則來估計CrCl。
因此，對於本文所提供之方法，包括(但不限於)前述段落中的方法，可利用基於肌酐清除的一些特定條件來確定人類個體的順鉑不適合性。在一些實施例中，用於確定順鉑不適合性的條件包含或由小於60 mL/min的CrCl組成。在一個實施例中，用於確定順鉑不適合性的條件包含或由2分的ECOG體能狀態及小於60 mL/min的CrCl組成。在其他實施例中，用於確定順鉑不適合性的條件包含或由小於60 mL/min的CrCl及不小於級2的聽力損失組成。在又其他實施例中，用於確定順鉑不適合性的條件包含或由2分的ECOG體能狀態、小於60 mL/min的CrCl及不小於2級的聽力損失組成。在一些實施例中，用於確定順鉑不適合性的條件包含或由2分的ECOG體能狀態、小於60 mL/min的CrCl及不小於2級的聽力損失中的任一者組成。在一些實施例中，用於確定順鉑不適合性的條件包含或由2分的ECOG體能狀態、小於60 mL/min的CrCl及不小於2級的聽力損失中之任兩者的任何組合或排列組成。在一些實施例中，用於確定順鉑不適合性的條件包含或由2分的ECOG體能狀態、小於60 mL/min的CrCl及不小於2級的聽力損失中的所有三者組成。在本段落所提供之方法的一些實施例中，藉由24小時尿液收集來量測CrCl。在本段落所提供之方法的其他實施例中，根據科克羅夫特-高爾特準則來估計CrCl。
或者，對於本文所提供之方法，包括(但不限於)前述段落中的方法，可利用基於肌酐清除的其他特定條件來確定人類個體的順鉑不適合性。在一些實施例中，用於確定順鉑不適合性的條件包含或由小於60 mL/min、但不小於30 mL/min的CrCl組成。在一個實施例中，用於確定順鉑不適合性的條件包含或由2分的ECOG體能狀態及小於60 mL/min、但不小於30 mL/min的CrCl組成。在其他實施例中，用於確定順鉑不適合性的條件包含或由小於60 mL/min、但不小於30 mL/min的CrCl及不小於級2的聽力損失組成。在又其他實施例中，用於確定順鉑不適合性的條件包含或由2分的ECOG體能狀態、小於60 mL/min、但不小於30 mL/min的CrCl及不小於2級的聽力損失組成。在一些實施例中，用於確定順鉑不適合性的條件包含或由2分的ECOG體能狀態、小於60 mL/min、但不小於30 mL/min的CrCl及不小於2級的聽力損失中的任一者組成。在一些實施例中，用於確定順鉑不適合性的條件包含或由2分的ECOG體能狀態、小於60 mL/min、但不小於30 mL/min的CrCl及不小於2級的聽力損失中之任兩者的任何組合或排列組成。在一些實施例中，用於確定順鉑不適合性的條件包含或由2分的ECOG體能狀態、小於60 mL/min、但不小於30 mL/min的CrCl及不小於2級的聽力損失中的所有三者組成。在本段落所提供之方法的一些實施例中，藉由24小時尿液收集來量測CrCl。在本段落所提供之方法的其他實施例中，根據科克羅夫特-高爾特準則來估計CrCl。
類似地，對於本文所提供之方法，包括(但不限於)前述段落中的方法，可利用基於肌酐清除的其他特定條件來確定人類個體的順鉑不適合性。在一些實施例中，用於確定順鉑不適合性的條件包含或由小於30 mL/min、但不小於15 mL/min的CrCl組成。在一個實施例中，用於確定順鉑不適合性的條件包含或由2分的ECOG體能狀態及小於30 mL/min、但不小於15 mL/min的CrCl組成。在其他實施例中，用於確定順鉑不適合性的條件包含或由小於30 mL/min、但不小於15 mL/min的CrCl及不小於級2的聽力損失組成。在又其他實施例中，用於確定順鉑不適合性的條件包含或由2分的ECOG體能狀態、小於30 mL/min、但不小於15 mL/min的CrCl及不小於2級的聽力損失組成。在一些實施例中，用於確定順鉑不適合性的條件包含或由2分的ECOG體能狀態、小於30 mL/min、但不小於15 mL/min的CrCl及不小於2級的聽力損失中的任一者組成。在一些實施例中，用於確定順鉑不適合性的條件包含或由2分的ECOG體能狀態、小於30 mL/min、但不小於15 mL/min的CrCl及不小於2級的聽力損失中之任兩者的任何組合或排列組成。在一些實施例中，用於確定順鉑不適合性的條件包含或由2分的ECOG體能狀態、小於30 mL/min、但不小於15 mL/min的CrCl及不小於2級的聽力損失中的所有三者組成。在本段落所提供之方法的一些實施例中，藉由24小時尿液收集來量測CrCl。在本段落所提供之方法的其他實施例中，根據科克羅夫特-高爾特準則來估計CrCl。 5.2.1.2 其他患者人口統計資料
另外，可使用本文所提供之方法的人類個體為符合多種其他條件的人類個體。在一個實施例中，本文所提供之方法的人類個體可具有組織學上確認之MIBC，主要＞50%尿道上皮組織學(先前稱為移行細胞癌)。在其他實施例中，該人類個體具有cT2-T4aN0M0期MIBC。在其他實施例中，本文所提供之方法的人類個體可具有臨床期cT2-T4aN0M0，其在第一劑量之治療之前90天內藉由TURBT及藉由使用胸部IV造影劑之CT及腹部及骨盆的CT尿路造影確定。在其他實施例中，本文所提供之方法的人類個體可具有混合的細胞類型，其中尿路上皮癌為主要的(＞50%)。在其他實施例中，本文所提供之方法的人類個體可具有0、1或2之ECOG體能狀態。在其他實施例中，本文所提供之方法的人類個體可具有≥3個月之預期壽命。在其他實施例中，本文所提供之方法的人類個體可藉由他/她的泌尿科醫生及/或腫瘤科醫生而被視為符合RC+PLND條件。在一些實施例中，本文所提供之方法的人類個體可具有以下中之任何兩者：組織學上確認之MIBC，主要＞50%尿道上皮組織學(先前稱為移行細胞癌)；臨床期cT2-T4aN0M0，其在第一劑量之治療之前90天內藉由TURBT及藉由使用胸部IV造影劑之CT及腹部及骨盆的CT尿路造影確定；混合的細胞類型，其中尿路上皮癌為主要的(＞50%)；0、1或2之ECOG體能狀態；≥3個月之預期壽命；及藉由他/她的泌尿科醫生及/或腫瘤科醫生而被視為符合RC+PLND條件。在一些實施例中，本文所提供之方法的人類個體可具有以下中之任何三者：組織學上確認之MIBC，主要＞50%尿道上皮組織學(先前稱為移行細胞癌)；臨床期cT2-T4aN0M0，其在第一劑量之治療之前90天內藉由TURBT及藉由使用胸部IV造影劑之CT及腹部及骨盆的CT尿路造影確定；混合的細胞類型，其中尿路上皮癌為主要的(＞50%)；0、1或2之ECOG體能狀態；≥3個月之預期壽命；及藉由他/她的泌尿科醫生及/或腫瘤科醫生而被視為符合RC+PLND條件。在一些實施例中，本文所提供之方法的人類個體可具有以下中之任何四者：組織學上確認之MIBC，主要＞50%尿道上皮組織學(先前稱為移行細胞癌)；臨床期cT2-T4aN0M0，其在第一劑量之治療之前90天內藉由TURBT及藉由使用胸部IV造影劑之CT及腹部及骨盆的CT尿路造影確定；混合的細胞類型，其中尿路上皮癌為主要的(＞50%)；0、1或2之ECOG體能狀態；≥3個月之預期壽命；及藉由他/她的泌尿科醫生及/或腫瘤科醫生而被視為符合RC+PLND條件。在一些實施例中，本文所提供之方法的人類個體可具有以下中之任何五者：組織學上確認之MIBC，主要＞50%尿道上皮組織學(先前稱為移行細胞癌)；臨床期cT2-T4aN0M0，其在第一劑量之治療之前90天內藉由TURBT及藉由使用胸部IV造影劑之CT及腹部及骨盆的CT尿路造影確定；混合的細胞類型，其中尿路上皮癌為主要的(＞50%)；0、1或2之ECOG體能狀態；≥3個月之預期壽命；及藉由他/她的泌尿科醫生及/或腫瘤科醫生而被視為符合RC+PLND條件。在一些實施例中，本文所提供之方法的人類個體可具有以下中之所有五者：組織學上確認之MIBC，主要＞50%尿道上皮組織學(先前稱為移行細胞癌)；臨床期cT2-T4aN0M0，其在第一劑量之治療之前90天內藉由TURBT及藉由使用胸部IV造影劑之CT及腹部及骨盆的CT尿路造影確定；混合的細胞類型，其中尿路上皮癌為主要的(＞50%)；0、1或2之ECOG體能狀態；≥3個月之預期壽命；及藉由他/她的泌尿科醫生及/或腫瘤科醫生而被視為符合RC+PLND條件。在一些實施例中，本文所提供之方法的人類個體可具有以下中之一或多者：組織學上確認之MIBC，主要＞50%尿道上皮組織學(先前稱為移行細胞癌)；臨床期cT2-T4aN0M0，其在第一劑量之治療之前90天內藉由TURBT及藉由使用胸部IV造影劑之CT及腹部及骨盆的CT尿路造影確定；混合的細胞類型，其中尿路上皮癌為主要的(＞50%)；0、1或2之ECOG體能狀態；≥3個月之預期壽命；及藉由他/她的泌尿科醫生及/或腫瘤科醫生而被視為符合RC+PLND條件。
在一些實施例中，本文所提供之方法的人類個體可已接受先前膀胱內芽孢桿菌卡莫特-蓋蘭(BCG)或NMIBC之膀胱內化學治療。
在本文所提供之方法的其他實施例中，包括前述段落中的方法，可使用本文所提供之方法的人類個體為符合多種其他條件的人類個體。在一個實施例中，可使用本文所提供之方法的人類個體亦具有絕對嗜中性白血球計數(ANC)不低於1500/µL的條件。在一些實施例中，可使用本文所提供之方法的人類個體亦具有血小板計數不低於100,000/µL的條件。在一些實施例中，可使用本文所提供之方法的人類個體亦具有血紅蛋白不低於9.0 g/dL或5.6 mmol/L的條件。在其他實施例中，可使用本文所提供之方法的人類個體亦具有CrCl不超過1.5倍正常上限(ULN)的條件。在其他實施例中，可使用本文所提供之方法的人類個體亦具有肌酐不超過1.5倍正常上限(ULN)的條件。在一些實施例中，可使用本文所提供之方法的人類個體亦具有CrCl不低於30 mL/min的條件。在一些實施例中，可使用本文所提供之方法的人類個體亦具有以下條件：(i)血清總膽紅素不超過1.5倍正常上限(ULN)，(ii)對於總膽紅素含量大於1.5倍ULN的患者，直接膽紅素不超過ULN，或(iii)吉爾伯氏病患者之血清總膽紅素不超過3倍ULN。在一些實施例中，可使用本文所提供之方法的人類個體亦具有AST (SGOT)及ALT (SGPT)不超過3倍ULN的條件。在一些實施例中，可使用本文所提供之方法的人類個體亦具有INR或PT不超過1.5倍正常上限(ULN)的條件。在一些實施例中，可使用本文所提供之方法的人類個體亦具有aPTT或PTT不超過1.5倍正常上限(ULN)的條件。在一些實施例中，可使用本文所提供之方法的人類個體亦具有以下中之任何兩者：絕對嗜中性白血球計數(ANC)不低於1500/µL；血小板計數不低於100,000/µL；血紅蛋白不低於9.0 g/dL或5.6 mmol/L；CrCl不超過1.5倍正常上限(ULN)；肌酐不超過1.5倍正常上限(ULN)；CrCl不低於30 mL/min；(i)血清總膽紅素不超過1.5倍正常上限(ULN)，(ii)對於總膽紅素含量大於1.5倍ULN的患者，直接膽紅素不超過ULN，或(iii)吉爾伯氏病患者之血清總膽紅素不超過3倍ULN；AST (SGOT)及ALT (SGPT)不超過3倍ULN；INR或PT不超過1.5倍正常上限(ULN)；及aPTT或PTT不超過1.5倍正常上限(ULN)。在一些實施例中，可使用本文所提供之方法的人類個體亦具有以下中之任何三者：絕對嗜中性白血球計數(ANC)不低於1500/µL；血小板計數不低於100,000/µL；血紅蛋白不低於9.0 g/dL或5.6 mmol/L；CrCl不超過1.5倍正常上限(ULN)；肌酐不超過1.5倍正常上限(ULN)；CrCl不低於30 mL/min；(i)血清總膽紅素不超過1.5倍正常上限(ULN)，(ii)對於總膽紅素含量大於1.5倍ULN的患者，直接膽紅素不超過ULN，或(iii)吉爾伯氏病患者之血清總膽紅素不超過3倍ULN；AST (SGOT)及ALT (SGPT)不超過3倍ULN；INR或PT不超過1.5倍正常上限(ULN)；及aPTT或PTT不超過1.5倍正常上限(ULN)。在一些實施例中，可使用本文所提供之方法的人類個體亦具有以下中之任何四者：絕對嗜中性白血球計數(ANC)不低於1500/µL；血小板計數不低於100,000/µL；血紅蛋白不低於9.0 g/dL或5.6 mmol/L；CrCl不超過1.5倍正常上限(ULN)；肌酐不超過1.5倍正常上限(ULN)；CrCl不低於30 mL/min；(i)血清總膽紅素不超過1.5倍正常上限(ULN)，(ii)對於總膽紅素含量大於1.5倍ULN的患者，直接膽紅素不超過ULN，或(iii)吉爾伯氏病患者之血清總膽紅素不超過3倍ULN；AST (SGOT)及ALT (SGPT)不超過3倍ULN；INR或PT不超過1.5倍正常上限(ULN)；及aPTT或PTT不超過1.5倍正常上限(ULN)。在一些實施例中，可使用本文所提供之方法的人類個體亦具有以下中之任何五者：絕對嗜中性白血球計數(ANC)不低於1500/µL；血小板計數不低於100,000/µL；血紅蛋白不低於9.0 g/dL或5.6 mmol/L；CrCl不超過1.5倍正常上限(ULN)；肌酐不超過1.5倍正常上限(ULN)；CrCl不低於30 mL/min；(i)血清總膽紅素不超過1.5倍正常上限(ULN)，(ii)對於總膽紅素含量大於1.5倍ULN的患者，直接膽紅素不超過ULN，或(iii)吉爾伯氏病患者之血清總膽紅素不超過3倍ULN；AST (SGOT)及ALT (SGPT)不超過3倍ULN；INR或PT不超過1.5倍正常上限(ULN)；及aPTT或PTT不超過1.5倍正常上限(ULN)。在一些實施例中，可使用本文所提供之方法的人類個體亦具有以下中之任何六者：絕對嗜中性白血球計數(ANC)不低於1500/µL；血小板計數不低於100,000/µL；血紅蛋白不低於9.0 g/dL或5.6 mmol/L；CrCl不超過1.5倍正常上限(ULN)；肌酐不超過1.5倍正常上限(ULN)；CrCl不低於30 mL/min；(i)血清總膽紅素不超過1.5倍正常上限(ULN)，(ii)對於總膽紅素含量大於1.5倍ULN的患者，直接膽紅素不超過ULN，或(iii)吉爾伯氏病患者之血清總膽紅素不超過3倍ULN；AST (SGOT)及ALT (SGPT)不超過3倍ULN；INR或PT不超過1.5倍正常上限(ULN)；及aPTT或PTT不超過1.5倍正常上限(ULN)。在一些實施例中，可使用本文所提供之方法的人類個體亦具有以下中之任何七者：絕對嗜中性白血球計數(ANC)不低於1500/µL；血小板計數不低於100,000/µL；血紅蛋白不低於9.0 g/dL或5.6 mmol/L；CrCl不超過1.5倍正常上限(ULN)；肌酐不超過1.5倍正常上限(ULN)；CrCl不低於30 mL/min；(i)血清總膽紅素不超過1.5倍正常上限(ULN)，(ii)對於總膽紅素含量大於1.5倍ULN的患者，直接膽紅素不超過ULN，或(iii)吉爾伯氏病患者之血清總膽紅素不超過3倍ULN；AST (SGOT)及ALT (SGPT)不超過3倍ULN；INR或PT不超過1.5倍正常上限(ULN)；及aPTT或PTT不超過1.5倍正常上限(ULN)。在一些實施例中，可使用本文所提供之方法的人類個體亦具有以下中之任何八者：絕對嗜中性白血球計數(ANC)不低於1500/µL；血小板計數不低於100,000/µL；血紅蛋白不低於9.0 g/dL或5.6 mmol/L；CrCl不超過1.5倍正常上限(ULN)；肌酐不超過1.5倍正常上限(ULN)；CrCl不低於30 mL/min；(i)血清總膽紅素不超過1.5倍正常上限(ULN)，(ii)對於總膽紅素含量大於1.5倍ULN的患者，直接膽紅素不超過ULN，或(iii)吉爾伯氏病患者之血清總膽紅素不超過3倍ULN；AST (SGOT)及ALT (SGPT)不超過3倍ULN；INR或PT不超過1.5倍正常上限(ULN)；及aPTT或PTT不超過1.5倍正常上限(ULN)。在一些實施例中，可使用本文所提供之方法的人類個體亦具有以下中之任何九者：絕對嗜中性白血球計數(ANC)不低於1500/µL；血小板計數不低於100,000/µL；血紅蛋白不低於9.0 g/dL或5.6 mmol/L；CrCl不超過1.5倍正常上限(ULN)；肌酐不超過1.5倍正常上限(ULN)；CrCl不低於30 mL/min；(i)血清總膽紅素不超過1.5倍正常上限(ULN)，(ii)對於總膽紅素含量大於1.5倍ULN的患者，直接膽紅素不超過ULN，或(iii)吉爾伯氏病患者之血清總膽紅素不超過3倍ULN；AST (SGOT)及ALT (SGPT)不超過3倍ULN；INR或PT不超過1.5倍正常上限(ULN)；及aPTT或PTT不超過1.5倍正常上限(ULN)。在一些實施例中，可使用本文所提供之方法的人類個體亦具有以下中之一或多者：絕對嗜中性白血球計數(ANC)不低於1500/µL；血小板計數不低於100,000/µL；血紅蛋白不低於9.0 g/dL或5.6 mmol/L；CrCl不超過1.5倍正常上限(ULN)；肌酐不超過1.5倍正常上限(ULN)；CrCl不低於30 mL/min；(i)血清總膽紅素不超過1.5倍正常上限(ULN)，(ii)對於總膽紅素含量大於1.5倍ULN的患者，直接膽紅素不超過ULN，或(iii)吉爾伯氏病患者之血清總膽紅素不超過3倍ULN；AST (SGOT)及ALT (SGPT)不超過3倍ULN；INR或PT不超過1.5倍正常上限(ULN)；及aPTT或PTT不超過1.5倍正常上限(ULN)。
在本文所提供之方法的其他實施例中，包括前述段落中的方法，可使用本文所提供之方法的人類個體為不符合某些條件的人類個體。在一個實施例中，本文所提供之方法的人類個體之前未接受過針對MIBC之全身性治療、化學放射或放射治療。在一個實施例中，本文所提供之方法的人類個體未接受過使用免疫檢查點抑制劑(CPI) (例如，PD-1抑制劑、PD-L1抑制劑或PD-L2抑制劑，諸如阿特珠單抗、帕博利珠單抗、納武單抗、度伐魯單抗或阿維魯單抗)之任何先前處理。在一個實施例中，本文所提供之方法的人類個體未接受過使用導向另一刺激性或共抑制性T細胞受體之藥劑(例如，CD137促效劑、CTLA-4抑制劑或OX-40促效劑)的任何先前處理。在一個實施例中，本文所提供之方法的人類個體在成像學上不具有淋巴結疾病的證據。在一個實施例中，本文所提供之方法的人類個體在成像學上不具有轉移性疾病的證據。在一個實施例中，本文所提供之方法的人類個體尚未進行膀胱的部分切除術以移除任何NMIBC或MIBC。在一個實施例中，本文所提供之方法的人類個體不具有持續的2級或更高級的感官或運動神經病。在一個實施例中，本文所提供之方法的人類個體不具有需要較高劑量類固醇(＞10 mg/天普賴松或等效物)或其他免疫抑制性藥劑的病症。在一個實施例中，本文所提供之方法的人類個體尚未接受使用恩諾單抗維多汀或其他基於MMAE之ADC以用於尿路上皮癌的任何先前處理。在一個實施例中，本文所提供之方法的人類個體尚未具有在第一劑量之恩諾單抗維多汀(EV)之前3年內其他侵襲性惡性腫瘤的病史，或先前診斷的惡性腫瘤殘留疾病的任何證據。在一個實施例中，本文所提供之方法的人類個體。在一個實施例中，本文所提供之方法的人類個體在第一劑量之恩諾單抗維多汀時當前未接受針對活動性感染(亦即，病毒、細菌或真菌)之全身性抗菌處理。在一個實施例中，本文所提供之方法的人類個體未對B型肝炎表面抗原及/或抗B型肝炎核心抗體呈陽性。在一個實施例中，本文所提供之方法的人類個體不具有活動性C型肝炎感染或已知HIV感染。在一個實施例中，本文所提供之方法的人類個體不具有活動性肺結核。在一個實施例中，本文所提供之方法的人類個體在第一劑量之恩諾單抗維多汀之前6個月內，不具有符合NYHA IV類之腦血管事件(中風或短暫局部缺血發作)、不穩定型心絞痛、心肌梗塞或心臟症狀(包括充血性心臟衰竭)的病史記錄。在一個實施例中，本文所提供之方法的人類個體不具有活動性角膜炎或角膜潰瘍。在一個實施例中，本文所提供之方法的人類個體在過去2年中不具有需要全身性治療的活動性自體免疫性疾病(亦即，使用疾病調節劑、皮質類固醇或免疫抑制性藥物)。在一個實施例中，本文所提供之方法的人類個體不具有特發性肺部纖維化病史；機化性肺炎、藥物誘導之肺炎、特發性肺炎或胸部CT掃描篩選活動性肺炎之證據。在一個實施例中，本文所提供之方法的人類個體未接受先前同種異體幹細胞或實體器官移植。在一個實施例中，本文所提供之方法的人類個體尚未在第一劑量之研究藥物之前30天內投與活性減毒疫苗。在一個實施例中，本文所提供之方法的人類個體不具有不受控之糖尿病，其中不受控之糖尿病經定義為HbA1c ≥8%或HbA1c 7%至＜8%，伴隨未以其他方式解釋之相關糖尿病症狀(多尿症或煩渴症)。
在本文所提供之所有方法及前述段落具體描述的彼等方法中：章節3、5.2、5.3、5.4、5.5及6中描述了可使用的ADC，本文中且本章節(章節5.2)及章節3及6中舉例說明了選擇用於治療的患者，本章節(章節5.2)、下述章節5.4、5.7及6中描述了投與治療劑的給藥方案及醫藥組合物，本文中描述了且本章節(章節5.2，包括5.2.1及5.2.2)及章節6中舉例說明了可用於鑑別治療劑、選擇患者、測定此等方法之結果及/或以任何方式充當此等方法之準則的生物標記物，生物標記物可如章節5.8中所描述或如此項技術中所知來測定，本章節(章節5.2，包括章節5.2.1.4)及章節3及6中描述了本文所提供之方法的治療結果，本文所提供之方法的其他治療結果可為本文所描述之生物標記物的改良，例如本章節(章節5.2，包括5.2.2)及章節3及6中所描述且舉例說明的彼等生物標記物，且本章節(章節5.2)及章節5.5中描述了包括ADC及其他治療劑的組合療法。因此，熟習此項技術者應瞭解，本文所提供之方法包括如上文及下文所描述之患者、治療劑、給藥方案、生物標記物及治療結果的所有排列及組合。
在某些實施例中，使用本文所提供之方法來治療患有尿路上皮癌症之個體，該等尿路上皮癌症表現191P4D12 RNA、表現191P4D12蛋白或表現191P4D12 RNA及191P4D12蛋白兩者。在一個實施例中，使用本文所提供之方法來治療患有尿路上皮癌症之個體，該等尿路上皮癌症表現191P4D12 RNA，或表現191P4D12蛋白質。
在某些實施例中，使用本文所提供之方法來治療患有尿路上皮癌症之個體，該等尿路上皮癌症表現191P4D12 RNA、表現191P4D12蛋白或表現191P4D12 RNA及191P4D12蛋白兩者。在一個實施例中，使用本文所提供之方法來治療患有尿路上皮癌症之個體，該等尿路上皮癌症表現191P4D12 RNA，或表現191P4D12蛋白質。
在一些實施例中，癌症中之191P4D12 RNA表現係藉由聚核苷酸雜交、定序(評估序列之相對豐度)及/或PCR (包括RT-PCR)來確定。在一些實施例中，癌症中之191P4D12蛋白表現係藉由IHC、螢光活化細胞分選(FACS)分析及/或西方墨點法確定。在一些實施例中，藉由超過一種方法來確定癌症中之191P4D12蛋白質表現。在一些實施例中，藉由兩種IHC方法來確定癌症中之191P4D12蛋白表現。
在一些實施例中，在本文所提供之方法中可治療之個體具有某些表型或基因型特徵。在一些實施例中，個體具有本文所描述之表型或基因型特徵的任何排列及組合。
在一些實施例中，組織學、細胞學上或組織學及細胞學上兩者判定表型或基因型特徵。在本文所提供之方法的一些實施例中，基於最近分析的組織，如美國臨床腫瘤學會/美國病理學家學會(ASCO/CAP)準則中所描述對表型及/或基因型特徵進行組織學及/或細胞學測定，該等準則以全文引用的方式併入本文中。在一些實施例中，藉由包括下一代定序(例如Illumina, Inc之NGS)在內之定序、DNA雜交及/或RNA雜交來測定表型或基因型特徵。 5.2.1.3使用先前檢查點抑制劑(CPI)處理視情況篩除患者
在本文所提供之方法的各種態樣或實施例中，包括此章節(章節5.2)中提供之方法，諸如此段落及前述段落中提供之方法，該等方法可指尚未接受使用免疫檢查點抑制劑之任何先前處理的個體(例如，本文所提供之方法的人類個體未接受過使用免疫檢查點抑制劑(CPI) (例如，PD-1抑制劑、PD-L1抑制劑或PD-L2抑制劑，諸如阿特珠單抗、帕博利珠單抗、納武單抗、度伐魯單抗或阿維魯單抗)之任何先前處理)。
如本文中所使用，術語「免疫檢查點抑制劑」或「檢查點抑制劑」係指整體或部分減小、抑制、干擾或調整一或多個檢查點蛋白質之分子。已知多種檢查點蛋白質，諸如CTLA-4及其配位體CD80及CD86；及PD-1與其配位體PD-Ll及PD-L2 (Pardoll, Nature Reviews Cancer, 2012, 12, 252-264)。其他例示性檢查點蛋白質包括LAG-3、B7、TIM3 (HAVCR2)、OX40 (CD134)、GITR、CD137、CD40、VTCN1、IDO1、CD276、PVRIG、TIGIT、CD25 (IL2RA)、IFNAR2、IFNAR1、CSF1R、VSIR (VISTA)或HLA。此等蛋白質似乎為T細胞反應之共刺激或抑制性相互作用的原因。免疫檢驗點蛋白質似乎調節及維持自身耐受性及生理免疫反應之持續時間及幅度。免疫檢查點抑制劑包括抗體或衍生自抗體。
在某些實施例中，檢查點抑制劑可為針對癌症中上調之檢查點蛋白質的抑制劑或活化劑。在一些特定實施例中，檢查點抑制劑可為針對檢查點蛋白質的抑制劑或活化劑，該檢查點蛋白質包括LAG-3、B7、TIM3 (HAVCR2)、OX40 (CD134)、GITR、CD137、CD40、VTCN1、IDO1、CD276、PVRIG、TIGIT、CD25 (IL2RA)、IFNAR2、IFNAR1、CSF1R、VSIR (VISTA)或HLA。在一些實施例中，本文所提供之方法用的檢查點抑制劑可為選自由以下組成之群的抑制劑或活化劑：PD-1抑制劑、PD-L1抑制劑、PD-L2抑制劑、CTLA-4抑制劑、LAG-3抑制劑、B7抑制劑、TIM3 (HAVCR2)抑制劑、OX40 (CD134)抑制劑、GITR促效劑、CD137促效劑、或CD40促效劑、VTCN1抑制劑、IDO1抑制劑、CD276抑制劑、PVRIG抑制劑、TIGIT抑制劑、CD25 (IL2RA)抑制劑、IFNAR2抑制劑、IFNAR1抑制劑、CSF1R抑制劑、VSIR (VISTA)抑制劑或靶向HLA之治療劑。此類抑制劑、活化劑或治療劑進一步提供於下文中。
在一些實施例中，檢查點抑制劑為CTLA-4抑制劑。在一個實施例中，CTLA-4抑制劑為抗CTLA-4抗體。抗CTLA-4抗體之實例包括(但不限於)描述於美國專利第5,811,097號、第5,811,097號、第5,855,887號、第6,051,227號、第6,207,157號、第6,682,736號、第6,984,720號及第7,605,238號中之彼等者，該等專利中之所有以其全文引用之方式併入本文中。在一個實施例中，抗CTLA-4抗體為曲美單抗(tremelimumab) (亦稱為替西單抗(ticilimumab)或CP-675,206)。在另一實施例中，抗CTLA-4抗體為伊派利單抗(ipilimumab) (亦被稱作MDX-010或MDX-101)。伊匹單抗係結合至CTLA-4之完全人類單株IgG抗體。伊匹單抗以商標名Yervoy™出售。
在某些實施例中，檢查點抑制劑為PD-1/PD-L1抑制劑。PD-l/PD-L1抑制劑之實例包括(但不限於)美國專利第7,488,802號、第7,943,743號、第8,008,449號、第8,168,757號、第8,217,149號，以及PCT專利申請公開案第WO2003042402號、第WO2008156712號、第WO2010089411號、第WO2010036959號、第WO2011066342號、第WO2011159877號、第WO2011082400號及第WO2011161699中所描述之抑制劑，所有文獻以全文引用之方式併入本文中。
在一些實施例中，檢查點抑制劑為PD-1抑制劑。在一個實施例中，PD-1抑制劑為抗PD-1抗體。在一個實施例中，抗PD-1抗體為BGB-A317、尼沃單抗(nivolumab) (亦稱為ONO-4538、BMS-936558或MDX1106)或派立珠單抗(pembrolizumab) (亦稱為MK-3475、SCH 900475，或蘭利珠單抗(lambrolizumab))。在一個實施例中，抗PD-1抗體為納武單抗。納武單抗為人類IgG4抗PD-1單株抗體，且以商標名Opdivo™出售。在另一實施例中，抗PD-1抗體為派立珠單抗。帕博利珠單抗為人類化單株IgG4抗體，且以商標名Keytruda™出售。在又一實施例中，抗PD-1抗體為人類化抗體CT-011。在復發情況下單獨投與CT-011未能顯示治療急性骨髓白血病(AML)之反應。在又另一實施例中，抗PD-1抗體為融合蛋白AMP-224。在另一個實施例中，PD-1抗體係BGB-A317。BGB-A317為一種單株抗體，其中特異性地工程改造出結合Fc γ受體I之能力，且其具有以高親和力及優良目標特異性與PD-1獨特結合之特徵。在一個實施例中，PD-1抗體為賽咪單抗。在另一實施例中，PD-1抗體為卡瑞利珠單抗。在另一實施例中，PD-1抗體為信迪利單抗。在一些實施例中，PD-1抗體為替雷利珠單抗。在某些實施例中，PD-1抗體為TSR-042。在又另一實施例中，PD-1抗體為PDR001。在又一實施例中，PD-1抗體為特瑞普利單抗。
在某些實施例中，檢查點抑制劑為PD-L1抑制劑。在一個實施例中，PD-L1抑制劑為抗PD-L1抗體。在一個實施例中，抗PD-L1抗體為MEDI4736 (德瓦魯單抗(durvalumab))。在另一實施例中，抗PD-L1抗體為BMS-936559 (亦稱為MDX-1105-01)。在又另一實施例中，PD-L1抑制劑為阿特珠單抗(atezolizumab) (亦稱為MPDL3280A及Tecentriq®)。在另一實施例中，PD-L1抑制劑為阿維魯單抗。
在一個實施例中，檢查點抑制劑為PD-L2抑制劑。在一個實施例中，PD-L2抑制劑為抗PD-L2抗體。在一個實施例中，抗PD-L2抗體為rHIgM12B7A。
在一個實施例中，檢查點抑制劑為淋巴細胞活化基因-3 (LAG-3)抑制劑。在一個實施例中，LAG-3抑制劑為可溶Ig融合蛋白IMP321 (Brignone等人, J. Immunol., 2007, 179, 4202-4211)。在另一實施例中，LAG-3抑制劑為BMS-986016。
在一個實施例中，檢查點抑制劑為B7抑制劑。在一個實施例中，B7抑制劑為B7-H3抑制劑或B7-H4抑制劑。在一個實施例中，B7-H3抑制劑為抗B7-H3抗體MGA271 (Loo等人, Clin . Cancer Res ., 2012, 3834)。
在一個實施例中，檢查點抑制劑為TIM3 (T細胞免疫球蛋白域及黏蛋白域3)抑制劑(Fourcade等人, J. Exp. Med., 2010, 207, 2175-86；Sakuishi等人, J. Exp. Med., 2010, 207, 2187-94)。
在一個實施例中，檢查點抑制劑為OX40 (CD134)促效劑。在一個實施例中，檢查點抑制劑為抗OX40抗體。在一個實施例中，抗OX40抗體為抗OX-40。在另一實施例中，抗OX40抗體為MEDI6469。
在一個實施例中，檢查點抑制劑為GITR促效劑。在一個實施例中，檢查點抑制劑為抗GITR抗體。在一個實施例中，抗GITR抗體為TRX518。
在一個實施例中，檢查點抑制劑為CD137促效劑。在一個實施例中，檢查點抑制劑為抗CD137抗體。在一個實施例中，抗CD137抗體為烏瑞魯單抗(urelumab)。在另一實施例中，抗CD137抗體為PF-05082566。
在一個實施例中，檢查點抑制劑為CD40促效劑。在一個實施例中，檢查點抑制劑為抗CD40抗體。在一個實施例中，抗CD40抗體為CF-870,893。
在一個實施例中，檢查點抑制劑為重組人介白素-15 (rhIL-15)。
在一個實施例中，檢查點抑制劑為VTCN抑制劑。在一個實施例中，VTCN抑制劑為FPA150。
在一個實施例中，檢查點抑制劑為IDO抑制劑。在一個實施例中，IDO抑制劑為INCB024360。在另一實施例中，IDO抑制劑為因多莫得(indoximod)。在一個實施例中，IDO抑制劑為艾卡哚司他(epacadostat)。在另一實施例中，IDO抑制劑為BMS986205。在又另一實施例中，IDO抑制劑為那沃莫德(Navoximod)。在一個實施例中，IDO抑制劑為PF-06840003。在另一實施例中，IDO抑制劑為KHK2455。在又另一實施例中，IDO抑制劑為RG70099。在一個實施例中，IDO抑制劑為IOM-E。在另一實施例中，IDO抑制劑為IOM-D。
在一些實施例中，檢查點抑制劑為TIGIT抑制劑。在某些實施例中，TIGIT抑制劑為抗TIGIT抗體。在一個實施例中，TIGIT抑制劑為MTIG7192A。在另一實施例中，TIGIT抑制劑為BMS-986207。在又另一實施例中，TIGIT抑制劑為OMP-313M32。在一個實施例中，TIGIT抑制劑為MK-7684。在另一實施例中，TIGIT抑制劑為AB154。在又另一實施例中，TIGIT抑制劑為CGEN-15137。在一個實施例中，TIGIT抑制劑為SEA-TIGIT。在另一實施例中，TIGIT抑制劑為ASP8374。在又另一實施例中，TIGIT抑制劑為AJUD008。
在一些實施例中，檢查點抑制劑為VSIR抑制劑。在某些實施例中，VSIR抑制劑為抗VSIR抗體。在一個實施例中，VSIR抑制劑為MTIG7192A。在另一實施例中，VSIR抑制劑為CA-170。在又另一實施例中，VSIR抑制劑為JNJ 61610588。在一個實施例中，VSIR抑制劑為HMBD-002。
在一些實施例中，檢查點抑制劑為TIM3抑制劑。在某些實施例中，TIM3抑制劑為抗TIM3抗體。在一個實施例中，TIM3抑制劑為AJUD009。
在一些實施例中，檢查點抑制劑為CD25 (IL2RA)抑制劑。在某些實施例中，CD25 (IL2RA)抑制劑為抗CD25 (IL2RA)抗體。在一個實施例中，CD25 (IL2RA)抑制劑為達利珠單抗(daclizumab)。在另一實施例中，CD25 (IL2RA)抑制劑為巴利昔單抗(basiliximab)。
在一些實施例中，檢查點抑制劑為IFNAR1抑制劑。在某些實施例中，IFNAR1抑制劑為抗IFNAR1抗體。在一個實施例中，IFNAR1抑制劑為阿尼富路單抗(anifrolumab)。在另一實施例中，IFNAR1抑制劑為絲法力單抗(sifalimumab)。
在一些實施例中，檢查點抑制劑為CSF1R抑制劑。在某些實施例中，CSF1R抑制劑為抗CSF1R抗體。在一個實施例中，CSF1R抑制劑為吡昔替尼(pexidartinib)。在另一實施例中，CSF1R抑制劑為艾瑪圖單抗(emactuzumab)。在又另一實施例中，CSF1R抑制劑為卡比拉單抗(cabiralizumab)。在一個實施例中，CSF1R抑制劑為ARRY-382。在另一實施例中，CSF1R抑制劑為BLZ945。在又另一實施例中，CSF1R抑制劑為AJUD010。在一個實施例中，CSF1R抑制劑為AMG820。在另一實施例中，CSF1R抑制劑為IMC-CS4。在又另一實施例中，CSF1R抑制劑為JNJ-40346527。在一個實施例中，CSF1R抑制劑為PLX5622。在另一實施例中，CSF1R抑制劑為FPA008。
在一些實施例中，檢查點抑制劑為靶向HLA之治療劑。在某些實施例中，靶向HLA之治療劑為抗HLA抗體。在一個實施例中，靶向HLA之治療劑為GSK01。在另一實施例中，靶向HLA之治療劑為IMC-C103C。在又另一實施例中，靶向HLA之治療劑為IMC-F106C。在一個實施例中，靶向HLA之治療劑為IMC-G107C。在另一實施例中，靶向HLA之治療劑為ABBV-184。
在某些實施例中，本文所提供之免疫檢查點抑制劑包括本文所描述之兩種或更多種檢查點抑制劑(包括相同或不同類別之檢查點抑制劑)。
在一些實施例中，可以本文所提供之方法治療的個體為哺乳動物。在一些實施例中，可以本文所提供之方法治療的個體為人類。 5.2.1.4本文所提供之方法的治療結果
儘管不符合順鉑條件的人類個體預後不良，但如上文所描述其身體虛弱，患有除尿路上皮癌/膀胱癌以外的多種合併症(例如，肌肉侵襲性尿路上皮癌(MIUC)和肌肉侵襲性膀胱癌(MIBC))且無法耐受免疫療法以外的額外處理，本文所提供之方法，包括此章節(章節5.2)及章節3及6中所描述之方法中，可提供此等不符合順鉑條件的人類個體之有益治療結果。在一個實施例中，人類個體在藉由本文提供之方法治療之後出現完全反應。在另一實施例中，人類個體在藉由本文提供之方法治療之後出現部分反應。
在一些實施例中，藉由評價腫瘤或癌症位點(病灶)來確定反應(完全或部分反應)。用於確定完全反應(CR)、部分反應(PR)、漸進性疾病(PD)及穩定疾病(SD)的準則描述於表15中。
在本文所提供之方法的一些實施例中，該個體之病理完全反應率(pCRR)為至少30%。在一些實施例中，該個體之病理完全反應率(pCRR)為至少35%。在一些實施例中，該個體之病理完全反應率(pCRR)為至少40%。在一些實施例中，該個體之病理完全反應率(pCRR)為至少45%。在一些實施例中，該個體之病理完全反應率(pCRR)為至少50%。在一些實施例中，該個體之病理完全反應率(pCRR)為至少55%。在一些實施例中，該個體之病理完全反應率(pCRR)為至少60%。在一些實施例中，該個體之病理完全反應率(pCRR)為至少65%。在一些實施例中，該個體之病理完全反應率(pCRR)為至少70%。在一些實施例中，該個體之病理完全反應率(pCRR)為至少75%。
在本文所提供之方法的一些實施例中，該病理完全反應率(pCRR)為至少30%。在一些實施例中，該病理完全反應率(pCRR)為至少35%。在一些實施例中，該病理完全反應率(pCRR)為至少40%。在一些實施例中，該病理完全反應率(pCRR)為至少45%。在一些實施例中，該病理完全反應率(pCRR)為至少50%。在一些實施例中，該病理完全反應率(pCRR)為至少55%。在一些實施例中，該病理完全反應率(pCRR)為至少60%。在一些實施例中，該病理完全反應率(pCRR)為至少65%。在一些實施例中，該病理完全反應率(pCRR)為至少70%。在一些實施例中，該病理完全反應率(pCRR)為至少75%。
在本文所提供之方法的一些實施例中，用ADC治療之個體群體的病理完全反應率(pCRR)為至少30%。在一些實施例中，用ADC治療之個體群體的病理完全反應率(pCRR)為至少35%。在一些實施例中，用ADC治療之個體群體的病理完全反應率(pCRR)為至少40%。在一些實施例中，用ADC治療之個體群體的病理完全反應率(pCRR)為至少45%。在一些實施例中，用ADC治療之個體群體的病理完全反應率(pCRR)為至少50%。在一些實施例中，用ADC治療之個體群體的病理完全反應率(pCRR)為至少55%。在一些實施例中，用ADC治療之個體群體的病理完全反應率(pCRR)為至少60%。在一些實施例中，用ADC治療之個體群體的病理完全反應率(pCRR)為至少65%。在一些實施例中，用ADC治療之個體群體的病理完全反應率(pCRR)為至少70%。在一些實施例中，用ADC治療之個體群體的病理完全反應率(pCRR)為至少75%。
在本文所提供之方法的一些實施例中，該人類個體具有在治療之後至少或約2個月的無疾病存活期。在另一實施例中，該人類個體具有在治療之後至少或約3個月的無疾病存活期。在另一實施例中，該人類個體具有在治療之後至少或約4個月的無疾病存活期。在另一實施例中，該人類個體具有在治療之後至少或約5個月的無疾病存活期。在另一實施例中，該人類個體具有在治療之後至少或約6個月的無疾病存活期。在另一實施例中，該人類個體具有在治療之後至少或約7個月的無疾病存活期。在又一實施例中，該人類個體具有在治療之後至少或約8個月的無疾病存活期。在一個實施例中，該人類個體具有在治療之後至少或約9個月的無疾病存活期。在另一實施例中，該人類個體具有在治療之後至少或約10個月的無疾病存活期。在另一實施例中，該人類個體具有在治療之後至少或約11個月的無疾病存活期。在又一實施例中，該人類個體具有在治療之後至少或約12個月的無疾病存活期。在一個實施例中，該人類個體具有在治療之後至少或約13個月的無疾病存活期。在另一實施例中，該人類個體具有在治療之後至少或約14個月的無疾病存活期。在又一實施例中，該人類個體具有在治療之後至少或約15個月的無疾病存活期。在一些實施例中，個體之總存活期延長至少2個月、至少4個月、至少6個月、至少8個月、至少10個月或至少12個月。
在一個實施例中，人類個體具有在治療之後2至15個月範圍內之無疾病存活期。在另一實施例中，人類個體具有在治療之後2至14個月之範圍內的無疾病存活期。在另一實施例中，人類個體具有在治療之後2至13個月範圍內的無疾病存活期。在一個實施例中，人類個體具有在治療之後2至12個月範圍內之無疾病存活期。在另一實施例中，人類個體具有在治療之後3至12個月之範圍內的無疾病存活期。在另一實施例中，人類個體具有在治療之後3至11個月之範圍內的無疾病存活期。在又一實施例中，人類個體具有在治療之後4至11個月之範圍內的無疾病存活期。在一個實施例中，人類個體具有在治療之後4至10個月範圍內之無疾病存活期。在另一實施例中，人類個體具有在治療之後5至10個月之範圍內的無疾病存活期。在另一實施例中，人類個體具有在治療之後5至9個月之範圍內的無疾病存活期。在又一實施例中，人類個體具有在治療之後5至8個月之範圍內的無疾病存活期。在一個實施例中，人類個體具有在治療之後5至7個月範圍內之無疾病存活期。在一個實施例中，人類個體具有在治療之後5至6個月範圍內之無疾病存活期。在一個實施例中，人類個體具有在治療之後6至7個月範圍內之無疾病存活期。在另一實施例中，人類個體具有在治療之後6至8個月之範圍內的無疾病存活期。
另外，在一些實施例中，藉由評價所治療群體的中值或平均無疾病存活期來評價經本文所提供之方法治療之人類個體群體的無疾病存活期。在一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中經治療群體中之中值或平均無疾病存活期為至少或約2個月。在另一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中經治療群體中之中值或平均無疾病存活期為至少或約3個月。在另一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中經治療群體中之中值或平均無疾病存活期為至少或約4個月。在另一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中經治療群體中之中值或平均無疾病存活期為至少或約5個月。在另一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中經治療群體中之中值或平均無疾病存活期為至少或約6個月。在另一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中經治療群體中之中值或平均無疾病存活期為至少或約7個月。在一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中經治療群體中之中值或平均無疾病存活期為至少或約8個月。在一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中經治療群體中之中值或平均無疾病存活期為至少或約9個月。在另一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中經治療群體中之中值或平均無疾病存活期為至少或約10個月。在另一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中經治療群體中之中值或平均無疾病存活期為至少或約11個月。在又一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中經治療群體中之中值或平均無疾病存活期為至少或約12個月。在一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中經治療群體中之中值或平均無疾病存活期為至少或約13個月。在另一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中經治療群體中之中值或平均無疾病存活期為至少或約14個月。在又一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中經治療群體中之中值或平均無疾病存活期為至少或約15個月。
在一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的無疾病存活期在2至15個月範圍內。在一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的無疾病存活期在2至14個月範圍內。在另一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的無疾病存活期在2至13個月範圍內。在又一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的無疾病存活期在2至12.32個月範圍內。在一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的無疾病存活期在2至12個月範圍內。在另一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的無疾病存活期在3至12個月範圍內。在另一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的無疾病存活期在3至11個月範圍內。在又一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的無疾病存活期在4至11個月範圍內。在一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的無疾病存活期在4至10個月範圍內。在一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的無疾病存活期在5至10個月範圍內。在另一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的無疾病存活期在5至9個月範圍內。在一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的無疾病存活期在5至8個月範圍內。在另一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的無疾病存活期在5至7個月範圍內。在另一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的無疾病存活期在5至6個月範圍內。在一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的無疾病存活期在6至7個月範圍內。在又一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的無疾病存活期在6至8個月範圍內。
在本文所提供之方法的一些實施例中，該人類個體具有在治療之後至少或約2個月的無事件存活期。在另一實施例中，該人類個體具有在治療之後至少或約2.6個月的無事件存活期。在另一實施例中，該人類個體具有在治療之後至少或約3個月的無事件存活期。在另一實施例中，該人類個體具有在治療之後至少或約4個月的無事件存活期。在另一實施例中，該人類個體具有在治療之後至少或約5個月的無事件存活期。在另一實施例中，該人類個體具有在治療之後至少或約6個月的無事件存活期。在另一實施例中，該人類個體具有在治療之後至少或約6.54個月的無事件存活期。在另一實施例中，該人類個體具有在治療之後至少或約7個月的無事件存活期。在又一實施例中，該人類個體具有在治療之後至少或約8個月的無事件存活期。在一個實施例中，該人類個體具有在治療之後至少或約9個月的無事件存活期。在另一實施例中，該人類個體具有在治療之後至少或約10個月的無事件存活期。在另一實施例中，該人類個體具有在治療之後至少或約11個月的無事件存活期。在又一實施例中，該人類個體具有在治療之後至少或約12個月的無事件存活期。在又一實施例中，該人類個體具有在治療之後至少或約12.32個月的無事件存活期。在一個實施例中，該人類個體具有在治療之後至少或約13個月的無事件存活期。在另一實施例中，該人類個體具有在治療之後至少或約14個月的無事件存活期。在又一實施例中，該人類個體具有在治療之後至少或約15個月的無事件存活期。
在一個實施例中，人類個體具有在治療之後2至15個月範圍內之無事件存活期。在另一實施例中，人類個體具有在治療之後2至14個月之範圍內的無事件存活期。在另一實施例中，人類個體具有在治療之後2至13個月範圍內的無事件存活期。在又一實施例中，人類個體具有在治療之後2至12.32個月範圍內之無事件存活期。在一個實施例中，人類個體具有在治療之後2至12個月範圍內之無事件存活期。在另一實施例中，人類個體具有在治療之後3至12個月之範圍內的無事件存活期。在另一實施例中，人類個體具有在治療之後3至11個月範圍內的無事件存活期。在又一實施例中，人類個體具有在治療之後4至11個月範圍內之無事件存活期。在一個實施例中，人類個體具有在治療之後4至10個月範圍內之無事件存活期。在另一實施例中，人類個體具有在治療之後5至10個月之範圍內的無事件存活期。在另一實施例中，人類個體具有在治療之後5至9個月範圍內的無事件存活期。在又一實施例中，人類個體具有在治療之後5至8個月範圍內之無事件存活期。在一個實施例中，人類個體具有在治療之後5至7個月範圍內之無事件存活期。在一個實施例中，人類個體具有在治療之後5至6個月範圍內之無事件存活期。在一個實施例中，人類個體具有在治療之後6至7個月範圍內之無事件存活期。在另一實施例中，人類個體具有在治療之後6至8個月範圍內之無事件存活期。
另外，在一些實施例中，藉由評價所治療群體的中值或平均無事件存活期來評價經本文所提供之方法治療之人類個體群體的無事件存活期。在一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的中值或平均無事件存活期為至少或約2個月。在另一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的中值或平均無事件存活期為至少或約2.6個月。在另一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的中值或平均無事件存活期為至少或約3個月。在另一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的中值或平均無事件存活期為至少或約4個月。在另一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的中值或平均無事件存活期為至少或約5個月。在另一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的中值或平均無事件存活期為至少或約6個月。在另一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的中值或平均無事件存活期為至少或約7個月。在又一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的中值或平均無事件存活期為至少或約8個月。在一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的中值或平均無事件存活期為至少或約9個月。在另一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的中值或平均無事件存活期為至少或約10個月。在另一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的中值或平均無事件存活期為至少或約11個月。在又一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的中值或平均無事件存活期為至少或約12個月。在又一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的中值或平均無事件存活期為至少或約12.32個月。在一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的中值或平均無事件存活期為至少或約13個月。在另一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的中值或平均無事件存活期為至少或約14個月。在又一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的中值或平均無事件存活期為至少或約15個月。
在一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的無事件存活期在2至15個月範圍內。在另一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的無事件存活期在2至14個月範圍內。在另一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的無事件存活期在2至13個月範圍內。在又一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的無事件存活期在2至12.32個月範圍內。在一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的無事件存活期在2至12個月範圍內。在另一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的無事件存活期在3至12個月範圍內。在另一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的無事件存活期在3至11個月範圍內。在另一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的無事件存活期在4至11個月範圍內。在一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的無事件存活期在4至10個月範圍內。在另一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的無事件存活期在5至10個月範圍內。在另一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的無事件存活期在5至9個月範圍內。在一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的無事件存活期在5至8個月範圍內。在另一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的無事件存活期在5至7個月範圍內。在另一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的無事件存活期在5至6個月範圍內。在一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的無事件存活期在6至7個月範圍內。在又一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的無事件存活期在6至8個月範圍內。
在本文所提供之方法的一些實施例中，該人類個體具有在治療之後至少或約5個月的總存活期。在另一個實施例中，人類個體在治療之後的總存活期為至少或約6個月。在另一實施例中，人類個體在治療之後的總存活期為至少或約7個月。在又另一個實施例中，人類個體在治療之後的總存活期為至少或約8個月。在一個實施例中，人類個體在治療之後的總存活期為至少或約9個月。在另一個實施例中，人類個體在治療之後的總存活期為至少或約10個月。在另一實施例中，人類個體在治療之後的總存活期為至少或約11個月。在又一實施例中，人類個體在治療之後的總存活期為至少或約12個月。在一個實施例中，人類個體在治療之後的總存活期為至少或約13個月。在另一個實施例中，人類個體在治療之後的總存活期為至少或約14個月。在又另一個實施例中，人類個體在治療之後的總存活期為至少或約15個月。在一個實施例中，人類個體在治療之後的總存活期為至少或約16個月。在另一實施例中，人類個體在治療之後的總存活期為至少或約17個月。在另一實施例中，人類個體在治療之後的總存活期為至少或約18個月。在又一實施例中，人類個體在治療之後的總存活期為至少或約19個月。在一個實施例中，人類個體在治療之後的總存活期為至少或約20個月。在另一實施例中，人類個體在治療之後的總存活期為至少或約21個月。在另一實施例中，人類個體在治療之後的總存活期為至少或約22個月。在另一實施例中，人類個體在治療之後的總存活期為至少或約23個月。在又一實施例中，人類個體在治療之後的總存活期為至少或約24個月。在一個實施例中，人類個體在治療之後的總存活期為至少或約25個月。在另一實施例中，人類個體在治療之後的總存活期為至少或約26個月。在另一實施例中，人類個體在治療之後的總存活期為至少或約27個月。在一個實施例中，人類個體在治療之後的總存活期為至少或約28個月。在另一實施例中，人類個體在治療之後的總存活期為至少或約29個月。在另一實施例中，人類個體在治療之後的總存活期為至少或約30個月。
在一個實施例中，人類個體具有在治療之後10至19個月範圍內之總存活期。在另一實施例中，人類個體在治療之後具有10至18個月範圍內的總存活期。在另一實施例中，人類個體在治療之後具有10至17個月範圍內的總存活期。在又一實施例中，人類個體具有在治療之後10至16個月範圍內之總存活期。在一個實施例中，人類個體在治療之後具有10至15個月範圍內的總存活期。在另一個實施例中，人類個體在治療之後具有10至14個月範圍內的總存活期。在另一實施例中，人類個體在治療之後具有10至13個月範圍內的總存活期。在又一實施例中，人類個體具有在治療之後10至12個月範圍內之總存活期。在一個實施例中，人類個體具有在治療之後10至11個月範圍內之總存活期。在另一實施例中，人類個體在治療之後具有11至19個月範圍內的總存活期。在另一實施例中，人類個體在治療之後具有12至19個月範圍內的總存活期。在又一實施例中，人類個體在治療之後具有13至19個月範圍內的總存活期。在一個實施例中，人類個體在治療之後具有14至18個月範圍內之總存活期。在一個實施例中，人類個體在治療之後具有14至19個月範圍內之總存活期。在一個實施例中，人類個體在治療之後具有15至18個月範圍內之總存活期。在另一實施例中，人類個體在治療之後具有15至19個月範圍內的總存活期。在另一實施例中，人類個體在治療之後具有16至19個月範圍內的總存活期。在又一實施例中，人類個體具有在治療之後17至19個月範圍內之總存活期。在一個實施例中，人類個體在治療之後具有18至19個月範圍內之總存活期。在另一實施例中，人類個體在治療之後具有11至18個月範圍內的總存活期。在另一實施例中，人類個體在治療之後具有12至17個月範圍內的總存活期。在另一實施例中，人類個體在治療之後具有13至16個月範圍內的總存活期。在又一實施例中，人類個體具有在治療之後14至15個月範圍內之總存活期。在一個實施例中，人類個體在治療之後具有10至20個月範圍內之總存活期。在另一實施例中，人類個體在治療之後具有11至20個月範圍內的總存活期。在一個實施例中，人類個體在治療之後具有11至24個月範圍內之總存活期。在一個實施例中，人類個體在治療之後具有11至25個月範圍內之總存活期。在一個實施例中，人類個體在治療之後具有12至24個月範圍內之總存活期。在一個實施例中，人類個體在治療之後具有12至25個月範圍內之總存活期。在另一實施例中，人類個體在治療之後具有12至20個月範圍內的總存活期。在一個實施例中，人類個體在治療之後具有13至20個月範圍內之總存活期。在另一實施例中，人類個體在治療之後具有14至20個月範圍內的總存活期。在另一實施例中，人類個體在治療之後具有15至20個月範圍內的總存活期。在又一實施例中，人類個體具有在治療之後16至20個月範圍內之總存活期。在一個實施例中，人類個體在治療之後具有17至20個月範圍內之總存活期。在另一實施例中，人類個體在治療之後具有18至20個月範圍內的總存活期。在另一實施例中，人類個體在治療之後具有19至20個月範圍內的總存活期。在一個實施例中，人類個體在治療之後具有9至20個月範圍內之總存活期。在另一實施例中，人類個體在治療之後具有9至19個月範圍內的總存活期。在另一實施例中，人類個體在治療之後具有9至18個月範圍內的總存活期。在一個實施例中，人類個體在治療之後具有9至17個月範圍內的總存活期。在另一個實施例中，人類個體在治療之後具有9至16個月範圍內的總存活期。在另一實施例中，人類個體在治療之後具有9至15個月範圍內的總存活期。在一個實施例中，人類個體在治療之後具有9至14個月範圍內之總存活期。在另一實施例中，人類個體在治療之後具有9至13個月範圍內的總存活期。在另一實施例中，人類個體在治療之後具有9至12個月範圍內的總存活期。在一個實施例中，人類個體在治療之後具有9至11個月範圍內之總存活期。在另一實施例中，人類個體在治療之後具有9至10個月範圍內的總存活期。
另外，在一些實施例中，藉由評價所治療群體的中值或平均總存活期來評價經本文所提供之方法治療之人類個體群體的總存活期。在一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的中值或平均總存活期為至少或約5個月。在另一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的中值或平均總存活期為至少或約6個月。在另一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的中值或平均總存活期為至少或約7個月。在又另一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的中值或平均總存活期為至少或約8個月。在一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的中值或平均總存活期為至少或約9個月。在另一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的中值或平均總存活期為至少或約10個月。在另一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的中值或平均總存活期為至少或約11個月。在又另一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的中值或平均總存活期為至少或約12個月。在一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的中值或平均總存活期為至少或約13個月。在另一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的中值或平均總存活期為至少或約14個月。在又另一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的中值或平均總存活期為至少或約15個月。在一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的中值或平均總存活期為至少或約16個月。在另一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的中值或平均總存活期為至少或約17個月。在另一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的中值或平均總存活期為至少或約18個月。在又另一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的中值或平均總存活期為至少或約19個月。在一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的中值或平均總存活期為至少或約20個月。在另一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的中值或平均總存活期為至少或約21個月。在另一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的中值或平均總存活期為至少或約22個月。在又另一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的中值或平均總存活期為至少或約23個月。在一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的中值或平均總存活期為至少或約24個月。在另一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的中值或平均總存活期為至少或約25個月。在另一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的中值或平均總存活期為至少或約26個月。在又另一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的中值或平均總存活期為至少或約27個月。在一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的中值或平均總存活期為至少或約28個月。在另一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的中值或平均總存活期為至少或約29個月。在另一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的中值或平均總存活期為至少或約30個月。
在一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的總存活期在10至19個月範圍內。在另一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的總存活期在10至18個月範圍內。在另一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的總存活期在10至17個月範圍內。在又一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的總存活期在10至16個月範圍內。在一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的總存活期在10至15個月範圍內。在另一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的總存活期在10至14個月範圍內。在另一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的總存活期在10至13個月範圍內。在又另一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的總存活期在10至12個月範圍內。在一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的總存活期在10至11個月範圍內。在另一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的總存活期在10至19個月範圍內。在另一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的總存活期在11至19個月範圍內。在一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的總存活期在11至24個月範圍內。在另一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的總存活期在11至25個月範圍內。在另一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的總存活期在12至24個月範圍內。在一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的總存活期在12至25個月範圍內。在又另一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的總存活期在12至19個月範圍內。在一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的總存活期在13至19個月範圍內。在另一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的總存活期在14至19個月範圍內。在另一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的總存活期在15至19個月範圍內。在又另一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的總存活期在16至19個月範圍內。在一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的總存活期在17至19個月範圍內。在另一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的總存活期在18至19個月範圍內。在另一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的總存活期在11至18個月範圍內。在又另一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的總存活期在12至17個月範圍內。在一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的總存活期在13至16個月範圍內。在另一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的總存活期在14至15個月範圍內。在另一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的總存活期在10至20個月範圍內。在又一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的總存活期在11至20個月範圍內。在一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的總存活期在12至20個月範圍內。在另一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的總存活期在13至20個月範圍內。在另一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的總存活期在14至20個月範圍內。在又一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的總存活期在15至20個月範圍內。在一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的總存活期在16至20個月範圍內。在另一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的總存活期在17至20個月範圍內。在另一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的總存活期在18至20個月範圍內。在又另一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的總存活期在19至20個月範圍內。在一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的總存活期在9至20個月範圍內。在另一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的總存活期在9至19個月範圍內。在另一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的總存活期在9至18個月範圍內。在又另一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的總存活期在9至17個月範圍內。在一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的總存活期在9至16個月範圍內。在另一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的總存活期在9至15個月範圍內。在另一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的總存活期在9至14個月範圍內。在又另一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的總存活期在9至13個月範圍內。在一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的總存活期在9至12個月範圍內。在另一個實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的總存活期在9至11個月範圍內。在另一實施例中，人類個體群體藉由本文所提供之方法治療，其中所治療群體的總存活期在9至10個月範圍內。
在本文所提供之方法的一些實施例中，該個體之病理降期率(pDSR)為至少50%。在一些實施例中，該個體之病理降期率(pDSR)為至少55%。在一些實施例中，該個體之病理降期率(pDSR)為至少60%。在一些實施例中，該個體之病理降期率(pDSR)為至少65%。在一些實施例中，該個體之病理降期率(pDSR)為至少70%。在一些實施例中，該個體之病理降期率(pDSR)為至少75%。在一些實施例中，該個體之病理降期率(pDSR)為至少80%。在一些實施例中，該個體之病理降期率(pDSR)為至少85%。在一些實施例中，該個體之病理降期率(pDSR)為至少90%。
在本文所提供之方法的一些實施例中，該病理降期率(pDSR)為至少50%。在一些實施例中，該病理降期率(pDSR)為至少55%。在一些實施例中，該病理降期率(pDSR)為至少60%。在一些實施例中，該病理降期率(pDSR)為至少65%。在一些實施例中，該病理降期率(pDSR)為至少70%。在一些實施例中，該病理降期率(pDSR)為至少75%。在一些實施例中，該病理降期率(pDSR)為至少80%。在一些實施例中，該病理降期率(pDSR)為至少85%。在一些實施例中，該病理降期率(pDSR)為至少90%。
在本文所提供之方法的一些實施例中，用ADC治療之個體群體的病理降期率(pDSR)為至少50%。在一些實施例中，用ADC治療之個體群體的病理降期率(pDSR)為至少55%。在一些實施例中，用ADC治療之個體群體的病理降期率(pDSR)為至少60%。在一些實施例中，用ADC治療之個體群體的病理降期率(pDSR)為至少65%。在一些實施例中，用ADC治療之個體群體的病理降期率(pDSR)為至少70%。在一些實施例中，用ADC治療之個體群體的病理降期率(pDSR)為至少75%。
在一些實施例中，人類個體與患者可互換使用。因此，熟習此項技術者應瞭解，在本文所提供之任一種方法中，人類個體與患者可互換。 5.2.2基於其他選擇準則治療患者群體之癌症的方法
本文提供用於治療個體之多種癌症的方法，其中該等癌症具有如章節6中所提供的任一種適合之標記物及/或特徵。本文亦提供用於治療個體之各種癌症之方法，其中該等個體具有如章節6中提供之合適特徵中之任一者。
在一個態樣中，本文提供一種預防或治療個體之癌症的方法，其包含向該個體投與有效量之抗體藥物結合物，其中該抗體藥物結合物包含結合至191P4D12之抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段與一或多個單位的單甲基奧瑞他汀E (MMAE)結合，其中該抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有SEQ ID NO: 22中所闡述之重鏈可變區之該等CDR之該等胺基酸序列的互補決定區(CDR)；及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有SEQ ID NO: 23中所闡述之輕鏈可變區之該等CDR之該等胺基酸序列的CDR；且其中該個體具有如章節6中所提供的適合特徵中之任一者。
在一些態樣中，本文提供一種預防或治療個體之癌症的方法，其包含向該個體投與有效量之抗體藥物結合物，其中該抗體藥物結合物包含結合至191P4D12之抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段與一或多個單位的單甲基奧瑞他汀E (MMAE)結合，其中該抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含含有SEQ ID NO: 22中所闡述之重鏈可變區之該等CDR之該等胺基酸序列的互補決定區(CDR)；及輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含含有SEQ ID NO: 23中所闡述之輕鏈可變區之該等CDR之該等胺基酸序列的CDR；且其中該個體具有如章節6中所提供的適合之標記物及/或特徵中之任一者。
在另一態樣中，本文提供一種預防或治療個體之癌症的方法，其包含向該個體投與有效量之抗體藥物結合物，其中該抗體藥物結合物包含與一或多個單甲基奧瑞他汀E (MMAE)單元結合的結合至191P4D12之抗體或其抗原結合片段，且其中該個體具有如章節6中所提供之適合之特徵中之任一者。在另一態樣中，本文提供一種預防或治療個體之癌症的方法，其包含向該個體投與有效量之抗體藥物結合物，其中該抗體藥物結合物包含與一或多個單甲基奧瑞他汀E (MMAE)單元結合的結合至191P4D12之抗體或其抗原結合片段，且其中該癌症具有如章節6中所提供之適合之標記物及/或特徵中之任一者。
在本文(包括章節5.2，包括章節5.2.1及5.2.2及章節3及6)所提供之方法的一些實施例中，個體為人類個體。
在本文所提供之所有方法及章節5.2.1及5.2.2具體描述的彼等方法中：章節3、5.2、5.3、5.4、5.5及6中描述了可使用的治療劑(不包括ADC)，本文中且章節5.2 (包括章節5.2.1及5.2.2)及章節3及6中舉例說明了選擇用於治療的患者，章節5.4、5.7及下述章節6中描述了投與治療劑的給藥方案及醫藥組合物，本文中描述了且章節5.2 (包括章節5.2.1及5.2.2)及章節3及6中舉例說明了可用於鑑別治療劑、選擇患者、測定此等方法之結果及/或以任何方式充當此等方法之準則的生物標記物，生物標記物可如章節5.8中所描述或如此項技術中所知來測定，本章節(章節5.2，包括章節5.2.1.4)及章節3及6中描述了本文所提供之方法的治療結果，本文所提供之方法的其他治療結果可為本文所描述之生物標記物的改良，例如章節5.2 (包括章節5.2.1及5.2.2)及章節3及6中所描述且舉例說明的彼等生物標記物，且本章節(章節5.2)及章節5.5中描述了包括ADC及其他治療劑的組合療法。因此，熟習此項技術者應瞭解，本文所提供之方法包括如上文及下文所描述之患者、治療劑、給藥方案、生物標記物及治療結果的所有排列及組合。 5.3 用於該等方法之抗體藥物結合物
在本文所提供之方法(包括章節5.2中所提供之方法)的各種實施例中，該等方法中所用的ADC包含或為本文及/或美國專利第8,637,642號所描述之抗191P4D12 ADC，該專利以全文引用的方式併入本文中。在一些實施例中，本文向該等方法提供的抗191P4D12抗體藥物結合物包含如本文(包括章節3、5.3.1，及6)所提供之結合至191P4D12的抗體或其抗原結合片段與如本文(包括章節3及6，及本章節(章節5.3))所提供之一或多個單位的細胞毒性劑(藥物單元，或D)的結合物，其他內容揭示於章節5.3.2及5.3.4中。在某些實施例中，細胞毒性劑(藥物單元，或D)可直接或經由如本文(包括章節3及6，及本章節(章節5.3))所提供的連接單元(LU)共價連接，其他內容揭示於章節5.3.3中。
在一些實施例中，抗體藥物結合物化合物具有下式： L - (LU-D) p (I)或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物；其中： L為抗體單元，例如抗連接素-4抗體或其抗原結合片段，例如如章節3、5.3.1及6所提供，且 (LU-D)為連接子單元-藥物單元部分，其中： LU-為連接單元，例如章節3及6及本章節(章節5.3)中所提供，其他內容揭示於章節5.3.3中，且 D為具有針對目標細胞之細胞抑制或細胞毒性活性的藥物單元，例如章節3及6及本章節(章節5.3)中所提供，其他內容揭示於章節5.3.2及5.3.4中；且 p為整數1至20，其他實例提供於章節3及6及本章節(章節5.3)中。
在一些實施例中，p在以下範圍內：1至20、1至19、1至18、1至17、1至16、1至15、1至14、1至13、1至12、1至11、1至10、1至9、1至8、1至7、1至6、1至5、1至4、1至3或1至2。在一些實施例中，p在以下範圍內：2至20、2至19、2至18、2至17、2至16、2至15、2至14、2至13、2至12、2至11、2至10、2至9、2至8、2至7、2至6、2至5、2至4或2至3。在一些實施例中，p在以下範圍內：3至20、3至19、3至18、3至17、3至16、3至15、3至14、3至13、3至12、3至11、3至10、3至9、3至8、3至7、3至6、3至5或3至4。在一些實施例中，p為約1。在一些實施例中，p為約2。在一些實施例中，p為約3。在一些實施例中，p為約4。在一些實施例中，p為約3.8。在一些實施例中，p為約5。在一些實施例中，p為約6。在一些實施例中，p為約7。在一些實施例中，p為約8。在一些實施例中，p為約9。在一些實施例中，p為約10。在一些實施例中，p為約11。在一些實施例中，p為約12。在一些實施例中，p為約13。在一些實施例中，p為約14。在一些實施例中，p為約15。在一些實施例中，p為約16。在一些實施例中，p為約17。在一些實施例中，p為約18。在一些實施例中，p為約19。在一些實施例中，p為約20。
在一些實施例中，抗體藥物結合物化合物具有下式： L - (A a-W w-Y y-D) p (II)或其醫藥學上可接受之鹽或溶劑合物，其中： L為抗體單元，例如抗連接素-4抗體或其抗原結合片段，例如如章節3、5.3.1及6所提供；且 -A a-W w-Y y-為連接單元(LU)，其中： -A-為延伸子單元， a為0或1， 各-W-獨立地為胺基酸單元， w為0至12範圍內之整數， -Y-為自我分解型間隔子單元， y為0、1或2， 各如例如章節3及6及本章節(章節5.3)所提供，其他內容揭示於章節5.3.3中； D為具有針對目標細胞之細胞抑制或細胞毒性活性的藥物單元，例如章節3及6及本章節(章節5.3)中所提供，其他內容揭示於章節5.3.2及5.3.4中；且 p為整數1至20，其他實例提供於章節3及6及本章節(章節5.3)中。
在一些實施例中，a為0或1，w為0或1，且y為0、1或2。在一些實施例中，a為0或1，w為0或1，且y為0或1。在一些實施例中，p在以下範圍內：1至20、1至19、1至18、1至17、1至16、1至15、1至14、1至13、1至12、1至11、1至10、1至9、1至8、1至7、1至6、1至5、1至4、1至3或1至2。在一些實施例中，p在以下範圍內：2至20、2至19、2至18、2至17、2至16、2至15、2至14、2至13、2至12、2至11、2至10、2至9、2至8、2至7、2至6、2至5、2至4或2至3。在一些實施例中，p在以下範圍內：3至20、3至19、3至18、3至17、3至16、3至15、3至14、3至13、3至12、3至11、3至10、3至9、3至8、3至7、3至6、3至5或3至4。在一些實施例中，p為約1。在一些實施例中，p為約2。在一些實施例中，p為約3。在一些實施例中，p為約4。在一些實施例中，p為約3.8。在一些實施例中，p為約5。在一些實施例中，p為約6。在一些實施例中，p為約7。在一些實施例中，p為約8。在一些實施例中，p為約9。在一些實施例中，p為約10。在一些實施例中，p為約11。在一些實施例中，p為約12。在一些實施例中，p為約13。在一些實施例中，p為約14。在一些實施例中，p為約15。在一些實施例中，p為約16。在一些實施例中，p為約17。在一些實施例中，p為約18。在一些實施例中，p為約19。在一些實施例中，p為約20。在一些實施例中，當w不為零時，y為1或2。在一些實施例中，當w為1至12時，y為1或2。在一些實施例中，w為2至12且y為1或2。在一些實施例中，a為1且w及y為0。
在本文所提供之方法(包括章節5.2中所提供之方法)之一些具體實施例中，作為本文向該等方法提供之任一種ADC之一部分的細胞毒性劑包含MMAE、由MMAE組成或為MMAE。
對於包含複數種抗體或其抗原結合片段之組合物而言，藥物負載由p (藥物分子之平均數目/抗體單元)表示。藥物負載可在1至20個藥物(D)/抗體之範圍內。製備結合反應物時之每個抗體的平均藥物數目可藉由諸如質譜法、ELISA分析及HPLC之習知方式來表徵。亦可就p而言來判定抗體藥物結合物之定量分佈。在一些情況下，均質抗體藥物結合物(其中p為具有其他藥物負載之抗體藥物結合物的特定值)的分離、純化及表徵可藉由諸如逆相HPLC或電泳之方式來達成。在某些例示性實施例中，p為2至8。
用於本文所提供之方法之ADC的其他實施例已描述於美國專利第8,637,642號及國際申請案第PCT/US2019/056214號(公開案第WO2020/117373號)，該兩者以其全文引用之方式併入本文中。
在本文(包括章節3、5.2及6及此章節(章節5.3)中)所提供之方法之一些實施例中，ADC為恩諾單抗維多汀。在本文(包括章節3、5.2及6及此章節(章節5.3))所提供之方法的某些實施例中，ADC為恩諾單抗維多汀之生物類似物。
在本文所提供之方法之一些實施例中，ADC以單藥療法形式投與。 5.3.1抗191P4D12抗體或抗原結合片段
在一個實施例中，結合連接素-4相關蛋白之抗體或其抗原結合片段為特異性結合包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列之連接素-4蛋白的抗體或抗原結合片段(參見 圖 1A)。編碼191P4D12蛋白之對應cDNA具有SEQ ID NO:1之序列(參見圖1A)。
特異性結合至包含胺基酸序列SEQ ID NO: 2之連接素-4蛋白的抗體包括可結合至其他連接素-4相關蛋白之抗體。舉例而言，結合包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列之連接素-4蛋白的抗體可結合連接素-4相關蛋白，諸如連接素-4變體以及其同源物或類似物。
在一些實施例中，本文提供之抗連接素-4抗體為單株抗體。
在一些實施例中，抗原結合片段為Fab、F(ab')2、Fv或scFv。在一些實施例中，抗體為完全人類抗體。在一些實施例中，抗體為IgG1，且輕鏈為κ輕鏈。在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段係以重組方式產生。
在一些實施例中，抗體包含胺基酸序列為SEQ ID NO: 4 (cDNA序列為SEQ ID NO: 3)的重鏈及/或胺基酸序列為SEQ ID NO: 6 (cDNA序列為SEQ ID NO: 5)的輕鏈，如圖1B及1C中所示。
在一些實施例中，抗連接素-4抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區及輕鏈可變區，該重鏈可變區包含互補決定區(CDR)，其包含SEQ ID NO: 22中所闡述之該重鏈可變區之該等CDR的該等胺基酸序列(其為在SEQ ID NO: 7之第20個胺基酸(麩胺酸)至第136個胺基酸(絲胺酸)範圍內的胺基酸序列)，且該輕鏈可變區包含CDR，其包含SEQ ID NO: 23中所闡述之該輕鏈可變區之該等CDR的該等胺基酸序列(其為在SEQ ID NO: 8之第23個胺基酸(天冬胺酸)至第130個胺基酸(精胺酸)範圍內的胺基酸序列)。在某些實施例中，抗連接素-4抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其包含含SEQ ID NO:22 (其為SEQ ID NO:7之第20個胺基酸(麩胺酸)至第136個胺基酸(絲胺酸)範圍內的胺基酸序列)中所闡述之重鏈可變區序列中之對應CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3之胺基酸序列的互補決定區1 (CDR-H1)、CDR-H2及CDR-H3；及輕鏈可變區，其包含含SEQ ID NO:23 (其為SEQ ID NO:8之第23個胺基酸(天冬胺酸)至第130個胺基酸(精胺酸)範圍內的胺基酸序列)中所闡述之輕鏈可變區序列之對應CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3之胺基酸序列的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3。在一些實施例中，抗連接素-4抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區及輕鏈可變區，該重鏈可變區包含互補決定區(CDR)，其由SEQ ID NO: 22中所闡述之該重鏈可變區之該等CDR的該等胺基酸序列(其為在SEQ ID NO: 7之第20個胺基酸(麩胺酸)至第136個胺基酸(絲胺酸)範圍內的胺基酸序列)組成，且該輕鏈可變區包含CDR，其由SEQ ID NO: 23中所闡述之該輕鏈可變區之該等CDR之該等胺基酸序列(其為在SEQ ID NO: 8之第23個胺基酸(天冬胺酸)至第130個胺基酸(精胺酸)範圍內的胺基酸序列)組成。在某些實施例中，抗連接素-4抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其包含由SEQ ID NO:22 (其為SEQ ID NO:7之第20個胺基酸(麩胺酸)至第136個胺基酸(絲胺酸)範圍內的胺基酸序列)中所闡述之重鏈可變區序列中之對應CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3之胺基酸序列組成的互補決定區1 (CDR-H1)、CDR-H2及CDR-H3；及輕鏈可變區，其包含由SEQ ID NO:23 (其為SEQ ID NO:8之第23個胺基酸(天冬胺酸)至第130個胺基酸(精胺酸)範圍內的胺基酸序列)中所闡述之輕鏈可變區序列之對應CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3之胺基酸序列組成的CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3。SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 23、SEQ ID NO: 7及SEQ ID NO: 8如 圖 1D及 1E中所示且列舉如下：
可根據熟知編號系統判定CDR序列。如上文所描述，CDR區已為熟習此項技術者熟知且已由熟知編號系統定義。舉例而言，Kabat互補決定區(CDR)係基於序列可變性且最常用(參見例如Kabat等人, 見上文)。Chothia實際上係指結構環之位置(參見例如Chothia及Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196:901-17)。在使用Kabat編號規約進行編號時，Chothia CDR-H1環之末端在H32與H34之間變化，此視環之長度而定(此係因為Kabat編號方案將插入置於H35A及H35B；若既不存在35A，亦不存在35B，則環末端位於32；若僅存在35A，則環末端位於33；若35A與35B均存在，則環末端位於34)。AbM高變區代表Kabat CDR與Chothia結構環之間的折衷，且由Oxford Molecular之AbM抗體模型化軟體使用(參見例如Antibody Engineering第2卷(Kontermann及Dübel編, 第2版, 2010))。「接觸」高變區係基於可利用的複雜晶體結構之分析。已開發及廣泛採用之另一通用編號系統為ImMunoGeneTics (IMGT) Information System ®(Lafranc等人, 2003, Dev. Comp. Immunol. 27(1):55-77)。IMGT為專用於人類及其他脊椎動物之免疫球蛋白(IG)、T細胞受體(TR)及主要組織相容複合物(MHC)的整合式資訊系統。本文中，依據胺基酸序列及輕鏈或重鏈內的位置提及CDR。由於免疫球蛋白可變域之結構內之CDR的「位置」在物種之間為保守的且存在於稱為環的結構中，因此使用根據結構特徵來比對可變域序列的編號系統容易鑑別CDR及骨架殘基。此資訊可用於將來自一個物種之免疫球蛋白之CDR殘基移植及置換至通常來自人類抗體之受體骨架中。Honegger及Plückthun, 2001, J. Mol. Biol. 309: 657-70已開發出另一種編號系統(AHon)。編號系統(包括例如Kabat編號及IMGT獨特編號系統)之間的對應性已為熟習此項技術者熟知(參見例如Kabat, 見上文；Chothia及Lesk, 見上文；Martin, 見上文；Lefranc等人, 見上文)。來自此等高變區或CDR中之每一者的殘基標示於上表1中。
在一些實施例中，抗連接素-4抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其包含含根據Kabat編號之SEQ ID NO:22中所闡述之重鏈可變區之CDR之胺基酸序列的CDR (CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3)；及輕鏈可變區，其包含含根據Kabat編號之SEQ ID NO:23中所闡述之輕鏈可變區之CDR之胺基酸序列的CDR。
在一些實施例中，抗連接素-4抗體或其抗原結合片段包含：含有CDR (CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3)的重鏈可變區，該等CDR包含根據AbM編號之SEQ ID NO: 22中所示之重鏈可變區CDR的胺基酸序列；以及包含CDR的輕鏈可變區，該等CDR包含根據AbM編號之SEQ ID NO: 23中所示之輕鏈可變區CDR的胺基酸序列。
在其他實施例中，抗連接素-4抗體或其抗原結合片段包含：含有CDR (CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3)的重鏈可變區，該等CDR包含根據Chothia編號之SEQ ID NO: 22中所示之重鏈可變區CDR的胺基酸序列；以及含有CDR的輕鏈可變區，該等CDR包含根據Chothia編號之SEQ ID NO: 23中所示之輕鏈可變區CDR的胺基酸序列。
在其他實施例中，抗連接素-4抗體或其抗原結合片段包含：含有CDR (CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3)的重鏈可變區，該等CDR包含根據Contact編號之SEQ ID NO: 22中所闡述之重鏈可變區CDR的胺基酸序列；以及含有CDR的輕鏈可變區，該等CDR包含根據Contact編號之SEQ ID NO: 23中所闡述之輕鏈可變區CDR的胺基酸序列。
在又其他實施例中，抗連接素-4抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其包含含根據IMGT編號之SEQ ID NO:22中所闡述之重鏈可變區之CDR之胺基酸序列的CDR (CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3)；及輕鏈可變區，其包含含根據IMGT編號之SEQ ID NO:23中所闡述之輕鏈可變區之CDR之胺基酸序列的CDR。
在一些實施例中，抗連接素-4抗體或其抗原結合片段包含：含有CDR (CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3)的重鏈可變區，該等CDR由根據Kabat編號之SEQ ID NO: 22中所示之重鏈可變區CDR的胺基酸序列組成；以及含有CDR的輕鏈可變區，該等CDR由根據Kabat編號之SEQ ID NO: 23中所示之輕鏈可變區CDR的胺基酸序列組成。
在一些實施例中，抗連接素-4抗體或其抗原結合片段包含：含有CDR (CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3)的重鏈可變區，該等CDR由根據AbM編號之SEQ ID NO: 22中所示之重鏈可變區CDR的胺基酸序列組成；以及含有CDR的輕鏈可變區，該等CDR由根據AbM編號之SEQ ID NO: 23中所示之輕鏈可變區CDR的胺基酸序列組成。
在其他實施例中，抗連接素-4抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其包含由根據Chothia編號之SEQ ID NO:22中所闡述之重鏈可變區之CDR之胺基酸序列組成的CDR (CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3)；及輕鏈可變區，其包含由根據Chothia編號之SEQ ID NO:23中所闡述之輕鏈可變區之CDR之胺基酸序列組成的CDR。
在其他實施例中，抗連接素-4抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其包含由根據Contact編號之SEQ ID NO:22中所闡述之重鏈可變區之CDR之胺基酸序列組成的CDR (CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3)；及輕鏈可變區，其包含由根據Contact編號之SEQ ID NO:23中所闡述之輕鏈可變區之CDR之胺基酸序列組成的CDR。
在又其他實施例中，抗連接素-4抗體或其抗原結合片段包含：重鏈可變區，其包含由根據IMGT編號之SEQ ID NO:22中所闡述之重鏈可變區之CDR之胺基酸序列組成的CDR (CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3)；及輕鏈可變區，其包含由根據IMGT編號之SEQ ID NO:23中所闡述之輕鏈可變區之CDR之胺基酸序列組成的CDR。
如上文所述，根據不同編號系統之CDR序列可容易測定，例如使用線上工具，諸如根據抗原受體編號及受體分類(Antigen receptor Numbering And Receptor ClassificatIon；ANARCI)提供之線上工具。舉例而言，如藉由ANARCI所測定，根據Kabat編號之SEQ ID NO:22內之重鏈CDR序列及SEQ ID NO:23內之輕鏈CDR序列列於下表4中。 表4
SEQ ID NO :22 之VH SEQ ID NO:23 之 VL
CDR1 SYNMN (SEQ ID NO:9) RASQGISGWLA (SEQ ID NO:12)
CDR2 YISSSSSTIYYADSVKG (SEQ ID NO:10) AASTLQS (SEQ ID NO:13)
CDR3 AYYYGMDV (SEQ ID NO:11) QQANSFPPT (SEQ ID NO:14)
對於另一實例，如藉由ANARCI所測定，根據IMGT編號之SEQ ID NO:22內之重鏈CDR序列及SEQ ID NO:23內之輕鏈CDR序列列於下表5中。 表5
SEQ ID NO :22 之VH SEQ ID NO:23 之 VL
CDR1 GFTFSSYN (SEQ ID NO:16) QGISGW (SEQ ID NO:19)
CDR2 ISSSSSTI (SEQ ID NO:17) AAS (SEQ ID NO:20)
CDR3 ARAYYYGMDV (SEQ ID NO:18) QQANSFPPT (SEQ ID NO:21)
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列；CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列；CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列；CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列；CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列；及CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：CDR-H1，其包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列；CDR-H2，其包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列；CDR-H3，其包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列；CDR-L1，其包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列；CDR-L2，其包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列；及CDR-L3，其包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：CDR-H1，其由SEQ ID NO: 9之胺基酸序列組成；CDR-H2，其由SEQ ID NO: 10之胺基酸序列組成；CDR-H3，其由SEQ ID NO: 11之胺基酸序列組成；CDR-L1，其由SEQ ID NO: 12之胺基酸序列組成；CDR-L2，其由SEQ ID NO: 13之胺基酸序列組成；及CDR-L3，其由SEQ ID NO: 14之胺基酸序列組成。
在一些實施例中，抗體或其抗原結合片段包含：CDR-H1，其由SEQ ID NO: 16之胺基酸序列組成；CDR-H2，其由SEQ ID NO: 17之胺基酸序列組成；CDR-H3，其由SEQ ID NO: 18之胺基酸序列組成；CDR-L1，其由SEQ ID NO: 19之胺基酸序列組成；CDR-L2，其由SEQ ID NO: 20之胺基酸序列組成；及CDR-L3，其由SEQ ID NO: 21之胺基酸序列組成。
在一些實施例中，該抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區及輕鏈可變區，該重鏈可變區包含SEQ ID NO:22之胺基酸序列，且該輕鏈可變區包含SEQ ID NO:23之胺基酸序列。
在一些實施例中，該抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區及輕鏈可變區，該重鏈可變區由SEQ ID NO:22之胺基酸序列組成，且該輕鏈可變區由SEQ ID NO:23之胺基酸序列組成。
在一些實施例中，該抗體包括含範圍自SEQ ID NO: 7之第20位胺基酸(麩胺酸)至第466位胺基酸(離胺酸)之胺基酸序列的重鏈及含範圍自SEQ ID NO: 8之第23位胺基酸(天冬胺酸)至第236位胺基酸(半胱胺酸)之胺基酸序列的輕鏈。
在一些實施例中，該抗體包含：由SEQ ID NO: 7之第20個胺基酸(麩胺酸)至第466個胺基酸(離胺酸)範圍內之胺基酸序列組成的重鏈；及由SEQ ID NO: 8之第23個胺基酸(天冬胺酸)至第236個胺基酸(半胱胺酸)範圍內之胺基酸序列組成的輕鏈。
在一些實施例中，涵蓋本文所描述之抗體的胺基酸序列修飾。舉例而言，可能需要最佳化抗體之結合親和力及/或其他生物特性，包括(但不限於)特異性、熱穩定性、表現量、效應功能、糖基化、減小之免疫原性，或溶解性。因此，除本文所描述之抗體之外，考慮可以製備抗體變異體。舉例而言，抗體變體可藉由將適當核苷酸變化引入至編碼DNA中及/或藉由合成所需抗體或多肽來製備。熟習此項技術者瞭解，胺基酸變化可以改變抗體之轉譯後過程，諸如改變糖基化位點之數目或位置或改變膜錨定特徵。
在一些實施例中，本文所提供之抗體經化學修飾，例如藉由使任何類型的分子共價連接至抗體。抗體衍生物可包括如下經化學修飾之抗體：例如糖基化、乙醯化、聚乙二醇化、磷酸化、醯胺化、藉由已知保護/封端基團之衍生化、蛋白質裂解、與細胞配位體或其他蛋白質之連接等。許多化學修飾中之任一者可藉由包括(但不限於)以下之已知技術來進行：特異性化學裂解、乙醯化、調配、衣黴素之代謝合成等。另外，該抗體可含有一或多種非典型胺基酸。
變異可為編碼單域抗體或多肽之一或多個密碼子的取代、缺失或插入，與原始抗體或多肽相比，其會引起胺基酸序列變化。胺基酸取代可為一個胺基酸被包含類似結構及/或化學特性之另一胺基酸置換的結果，諸如白胺酸被絲胺酸置換，例如保守胺基酸置換。熟習此項技術者已知的標準技術可用於將突變引入編碼本文中提供之分子的核苷酸序列中，包括例如引起胺基酸取代的定點突變誘發及PCR介導突變誘發。插入或缺失視情況約1至5個胺基酸範圍內。在某些實施例中，相對於初始分子，取代、缺失或插入包括少於25個胺基酸取代、少於20個胺基酸取代、少於15個胺基酸取代、少於10個胺基酸取代、少於5個胺基酸取代、少於4個胺基酸取代、少於3個胺基酸取代或少於2個胺基酸取代。在特定實施例中，取代為在一或多個所預測之非必需胺基酸殘基處產生的保守性胺基酸取代。允許發生的變異可如下測定：在序列中系統地產生胺基酸插入、缺失或取代且測試所得變異體是否具有親本抗體所展現的活性。
胺基酸序列插入包括長度在一個殘基至含有多個殘基之多肽範圍內的胺基端及/或羧基端融合體，以及單一或多個胺基酸殘基之序列內插入。末端插入之實例包括具有N端甲硫胺醯基殘基之抗體。
本發明包括藉由保守胺基酸取代產生之抗體。在保守胺基酸取代中，胺基酸殘基經包含具有類似電荷之側鏈的胺基酸殘基置換。如上文所述，包含具有類似電荷之側鏈的胺基酸殘基家族在此項技術中已定義。此等家族包括具有鹼性側鏈(例如，離胺酸、精胺酸、組胺酸)、酸性側鏈(例如，天冬胺酸、麩胺酸)、不帶電極性側鏈(例如，甘胺酸、天冬醯胺、麩醯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、半胱胺酸)、非極性側鏈(例如，丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸、色胺酸)、β分支鏈側鏈(例如，蘇胺酸、纈胺酸、異白胺酸)及芳族側鏈(例如，酪胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、組胺酸)之胺基酸。或者，突變可沿著編碼序列之全部或一部分隨機引入，諸如藉由飽和突變誘發，且可根據生物活性篩選所得突變體以鑑別保持活性的突變體。在突變誘發之後，可表現所編碼蛋白質，且可測定蛋白質之活性，可進行保守性(例如在具有類似特性及/或側鏈之胺基酸群組內)取代，以便維持或不顯著地改變特性。
胺基酸可根據其側鏈特性之相似性分組(參見例如Lehninger, Biochemistry 73-75 (第2版, 1975))：(1)非極性：Ala (A)、Val (V)、Leu (L)、Ile (I)、Pro (P)、Phe (F)、Trp (W)、Met (M)；(2)不帶電荷的極性：Gly (G)、Ser (S)、Thr (T)、Cys (C)、Tyr (Y)、Asn (N)、Gln (Q)；(3)酸性：Asp (D)、Glu (E)；及(4)鹼性：Lys (K)、Arg (R)、His (H)。或者，天然存在的殘基可以基於共同的側鏈特性來分組：(1)疏水性：正白胺酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile；(2)中性、親水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；(3)酸性：Asp、Glu；(4)鹼性：His、Lys、Arg；(5)影響鏈取向的殘基：Gly、Pro；及(6)芳族：Trp、Tyr、Phe。
舉例而言，不參與維持抗體適當構形的任何半胱胺酸殘基亦可用例如另一胺基酸(諸如丙胺酸或絲胺酸)取代，以改良分子的氧化穩定性及防止異常交聯。
可以使用此項技術中已知之方法產生變異，諸如寡核苷酸介導(定點)突變誘發、丙胺酸掃描及PCR誘變。可對所選殖的DNA進行定點突變誘發(參見例如Carter, 1986, Biochem J. 237:1-7；及Zoller等人, 1982, Nucl. Acids Res. 10:6487-500)、卡匣突變誘發(參見例如Wells等人, 1985, Gene 34:315-23)或其他已知技術，以產生抗MSLN抗體變體DNA。
本發明之範疇內包括抗體的共價修飾.共價修飾包括使抗體之目標胺基酸殘基與有機衍生劑反應，該有機衍生劑能夠與抗體之所選側鏈或N端或C端殘基反應。其他修飾包括麩醯胺醯基及天冬醯胺醯基殘基分別去醯胺化而形成相應的麩胺醯基及天冬胺醯基殘基、脯胺酸及離胺酸之羥基化、絲胺醯基或蘇胺醯基殘基之羥基磷酸化、離胺酸、精胺酸及組胺酸側鏈之α-胺基甲基化(參見例如Creighton, Proteins: Structure and Molecular Properties 79-86 (1983))、N端胺之乙醯化，及任何C端羧基之醯胺化。
本發明範疇內所包括之抗體之其他類型的共價修飾包括改變抗體或多肽之原生糖基化模式(參見例如Beck等人, 2008, Curr. Pharm. Biotechnol. 9:482-501；及Walsh, 2010, Drug Discov. Today 15:773-80)，及以例如以下文獻中所闡述之方式使抗體與多種非蛋白性聚合物(例如聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇或聚氧化烯)之一連接：美國專利第4,640,835號、第4,496,689號、第4,301,144號、第4,670,417號、第4,791,192號或第4,179,337號。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或抗原結合片段包含與如SEQ ID NO: 7所示之重鏈具有一定同源性或一致性的重鏈及與如SEQ ID NO: 8所示之輕鏈具有一定同源性或一致性的輕鏈。具有同源性或一致性之重鏈/輕鏈的此類實施例進一步提供如下。在一些實施例中，本文所提供之抗體或抗原結合片段包含與如SEQ ID NO: 7中所示之重鏈具有超過70%同源性或一致性的重鏈。在一些實施例中，本文所提供之抗體或抗原結合片段包含與如SEQ ID NO: 7中所示之重鏈具有超過75%同源性或一致性的重鏈。在一些實施例中，本文所提供之抗體或抗原結合片段包含與如SEQ ID NO: 7中所示之重鏈具有超過80%同源性或一致性的重鏈。在一些實施例中，本文所提供之抗體或抗原結合片段包含與如SEQ ID NO: 7中所示之重鏈具有超過85%同源性或一致性的重鏈。在一些實施例中，本文所提供之抗體或抗原結合片段包含與如SEQ ID NO: 7中所示之重鏈具有超過90%同源性或一致性的重鏈。在一些實施例中，本文所提供之抗體或抗原結合片段包含與如SEQ ID NO: 7中所示之重鏈具有超過95%同源性或一致性的重鏈。在某些實施例中，本文所提供之抗體或抗原結合片段包含與如SEQ ID NO: 7中所示之重鏈具有所提供之任一種同源性或一致性的重鏈，其中CDR (CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3)與如SEQ ID NO: 7所示之重鏈中的CDR一致。在一些實施例中，本文所提供之抗體或抗原結合片段包含與如SEQ ID NO: 8中所闡述之輕鏈具有超過70%同源性或一致性的輕鏈。在一些實施例中，本文所提供之抗體或抗原結合片段包含與如SEQ ID NO: 8中所闡述之輕鏈具有超過75%同源性或一致性的輕鏈。在一些實施例中，本文所提供之抗體或抗原結合片段包含與如SEQ ID NO: 8中所闡述之輕鏈具有超過80%同源性或一致性的輕鏈。在一些實施例中，本文所提供之抗體或抗原結合片段包含與如SEQ ID NO: 8中所闡述之輕鏈具有超過85%同源性或一致性的輕鏈。在一些實施例中，本文所提供之抗體或抗原結合片段包含與如SEQ ID NO: 8中所闡述之輕鏈具有超過90%同源性或一致性的輕鏈。在一些實施例中，本文所提供之抗體或抗原結合片段包含與如SEQ ID NO: 8中所闡述之輕鏈具有超過95%同源性或一致性的輕鏈。在某些實施例中，本文所提供之抗體或抗原結合片段包含與如SEQ ID NO: 8所示之輕鏈具有所提供之任一種同源性或一致性的輕鏈，其中CDR (CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3)與如SEQ ID NO: 8所示之輕鏈中的CDR一致。在某些實施例中，本文所提供之抗體或抗原結合片段包含如本段落中所提供之任何同源輕鏈與任何同源重鏈的任何組合或排列。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或抗原結合片段包含與如SEQ ID NO: 22中所闡述之重鏈可變區具有一定同源性或一致性的重鏈可變區及與如SEQ ID NO: 23中所闡述之輕鏈可變區具有一定同源性或一致性的輕鏈可變區。具有同源性或一致性之重鏈可變區及輕鏈可變區的此類實施例進一步提供如下。在一些實施例中，本文所提供之抗體或抗原結合片段包含與如SEQ ID NO: 22中所闡述之重鏈可變區具有超過70%同源性或一致性的重鏈可變區。在一些實施例中，本文所提供之抗體或抗原結合片段包含與如SEQ ID NO: 22中所闡述之重鏈可變區具有超過75%同源性或一致性的重鏈可變區。在一些實施例中，本文所提供之抗體或抗原結合片段包含與如SEQ ID NO: 22中所闡述之重鏈可變區具有超過80%同源性或一致性的重鏈可變區。在一些實施例中，本文所提供之抗體或抗原結合片段包含與如SEQ ID NO: 22中所闡述之重鏈可變區具有超過85%同源性或一致性的重鏈可變區。在一些實施例中，本文所提供之抗體或抗原結合片段包含與如SEQ ID NO: 22中所闡述之重鏈可變區具有超過90%同源性或一致性的重鏈可變區。在一些實施例中，本文所提供之抗體或抗原結合片段包含與如SEQ ID NO: 22中所闡述之重鏈可變區具有超過95%同源性或一致性的重鏈可變區。在某些實施例中，本文所提供之抗體或抗原結合片段包含與如SEQ ID NO: 22所示之重鏈可變區具有所提供之任一種同源性或一致性的重鏈可變區，其中CDR (CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3)與如SEQ ID NO: 22所示之重鏈可變區中的CDR一致。在一些實施例中，本文所提供之抗體或抗原結合片段包含與如SEQ ID NO: 23中所闡述之輕鏈可變區具有超過70%同源性或一致性的輕鏈可變區。在一些實施例中，本文所提供之抗體或抗原結合片段包含與如SEQ ID NO: 23中所闡述之輕鏈可變區具有超過75%同源性或一致性的輕鏈可變區。在一些實施例中，本文所提供之抗體或抗原結合片段包含與如SEQ ID NO: 23中所闡述之輕鏈可變區具有超過80%同源性或一致性的輕鏈可變區。在一些實施例中，本文所提供之抗體或抗原結合片段包含與如SEQ ID NO: 23中所闡述之輕鏈可變區具有超過85%同源性或一致性的輕鏈可變區。在一些實施例中，本文所提供之抗體或抗原結合片段包含與如SEQ ID NO: 23中所闡述之輕鏈可變區具有超過90%同源性或一致性的輕鏈可變區。在一些實施例中，本文所提供之抗體或抗原結合片段包含與如SEQ ID NO: 23中所闡述之輕鏈可變區具有超過95%同源性或一致性的輕鏈可變區。在某些實施例中，本文所提供之抗體或抗原結合片段包含與如SEQ ID NO: 23所示之輕鏈可變區具有所提供之任一種同源性或一致性的輕鏈可變區，其中CDR (CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3)與如SEQ ID NO: 23所示之輕鏈可變區中的CDR一致。在某些實施例中，本文所提供之抗體或抗原結合片段包含如本段落中所提供之任何同源輕鏈可變區與任何同源重鏈可變區的任何組合或排列。
在一些實施例中，本文所提供之抗連接素-4抗體包含寄存於美國菌種保藏中心(American Type Culture Collection，ATCC)登錄號：PTA-11267之融合瘤所產生的稱為Ha22-2(2,4)6.1之抗體的重鏈及輕鏈CDR區，或胺基酸序列與Ha22-2(2,4)6.1之重鏈及輕鏈CDR區之胺基酸序列同源的重鏈及輕鏈CDR區，且其中抗體保持寄存於美國菌種保藏中心(ATCC)登錄號：PTA-11267之融合瘤所產生之稱為Ha22-2(2,4)6.1之抗連接素-4抗體的所需功能特性。
在一些實施例中，本文所提供之抗連接素-4抗體包含以登錄號：PTA-11267寄存於美國菌種保藏中心(ATCC)之融合瘤所產生之稱為Ha22-2(2,4)6.1之抗體的重鏈及輕鏈CDR區(CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3)，或由與Ha22-2(2,4)6.1之重鏈及輕鏈CDR區之胺基酸序列同源的胺基酸序列組成的重鏈及輕鏈CDR區，且其中抗體保持以登錄號：PTA-11267寄存於美國菌種保藏中心(ATCC)之融合瘤所產生之稱為Ha22-2(2,4)6.1之抗連接素-4抗體的所需功能特性。
在一些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含人類化重鏈可變區及人類化輕鏈可變區，其中： (a)重鏈可變區包含CDR (CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3)，該等CDR包含以登錄號：PTA-11267寄存於美國菌種保藏中心(ATCC)之融合瘤所產生之抗體中所示的重鏈可變區CDR胺基酸序列； (b)輕鏈可變區包含CDR (CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3)，該等CDR包含以登錄號：PTA-11267寄存於美國菌種保藏中心(ATCC)之融合瘤所產生之抗體中所示的輕鏈可變區CDR胺基酸序列。
在一些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含人類化重鏈可變區及人類化輕鏈可變區，其中： (a)重鏈可變區包含CDR (CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3)，該等CDR由以登錄號：PTA-11267寄存於美國菌種保藏中心(ATCC)之融合瘤所產生之抗體中所示的重鏈可變區CDR胺基酸序列組成； (b)輕鏈可變區包含CDR (CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3)，該等CDR由以登錄號：PTA-11267寄存於美國菌種保藏中心(ATCC)之融合瘤所產生之抗體中所示的輕鏈可變區CDR胺基酸序列組成。
在一些實施例中，本文所提供之抗連接素-4抗體包含以登錄號：PTA-11267寄存於美國菌種保藏中心(ATCC)之融合瘤所產生之稱為Ha22-2(2,4)6.1之抗體的重鏈及輕鏈可變區，或胺基酸序列與Ha22-2(2,4)6.1之重鏈及輕鏈可變區之胺基酸序列同源的重鏈及輕鏈可變區，且其中該等抗體保持本文所提供之抗連接素-4抗體的所需功能特性。在一些實施例中，本文所提供之抗連接素-4抗體包含以登錄號：PTA-11267寄存於美國菌種保藏中心(ATCC)之融合瘤所產生之稱為Ha22-2(2,4)6.1之抗體的重鏈及輕鏈可變區，或由與Ha22-2(2,4)6.1之重鏈及輕鏈可變區之胺基酸序列同源之胺基酸序列組成的重鏈及輕鏈可變區，且其中該等抗體保持本文所提供之抗連接素-4抗體的所需功能特性。可選擇恆定區之任何子類作為本發明抗體之恆定區。在一個實施例中，可使用人類IgG1恆定區作為重鏈恆定區且使用人類Igκ恆定區作為輕鏈恆定區。
在一些實施例中，本文所提供之抗連接素-4抗體包含以登錄號：PTA-11267寄存於美國菌種保藏中心(ATCC)之融合瘤所產生之稱為Ha22-2(2,4)6.1之抗體的重鏈及輕鏈，或胺基酸序列與Ha22-2(2,4)6.1之重鏈及輕鏈之胺基酸序列同源的重鏈及輕鏈，且其中該等抗體保持本文所提供之抗連接素-4抗體的所需功能特性。在一些實施例中，本文所提供之抗連接素-4抗體包含以登錄號：PTA-11267寄存於美國菌種保藏中心(ATCC)之融合瘤所產生之稱為Ha22-2(2,4)6.1之抗體的重鏈及輕鏈，或由與Ha22-2(2,4)6.1之重鏈及輕鏈胺基酸序列同源之胺基酸序列組成的重鏈及輕鏈，且其中該等抗體保持本文所提供之抗連接素-4抗體的所需功能特性。
在一些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區及輕鏈可變區，其中： (a)重鏈可變區包含與藉由寄存於美國菌種保藏中心(ATCC)登錄號：PTA-11267下之融合瘤產生之抗體的重鏈可變區胺基酸序列至少80%同源或一致的胺基酸序列；及 (b)輕鏈可變區包含與藉由寄存於美國菌種保藏中心(ATCC)登錄號：PTA-11267下之融合瘤產生之抗體的輕鏈可變區胺基酸序列至少80%同源或一致的胺基酸序列。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或抗原結合片段包含與以登錄號：PTA-11267寄存於美國菌種保藏中心(ATCC)之融合瘤所產生之抗體的重鏈可變區胺基酸序列具有一定同源性或一致性的重鏈可變區，及與以登錄號：PTA-11267寄存於美國菌種保藏中心(ATCC)之融合瘤所產生之抗體的輕鏈可變區胺基酸序列具有一定同源性或一致性的輕鏈可變區。具有同源性或一致性之重鏈可變區及輕鏈可變區的此類實施例進一步提供如下。在一些實施例中，重鏈可變區包含與藉由寄存於美國菌種保藏中心(ATCC)登錄號：PTA-11267下之融合瘤產生之抗體的重鏈可變區胺基酸序列至少85%同源或一致的胺基酸序列。在其他實施例中，重鏈可變區包含與以登錄號：PTA-11267寄存於美國菌種保藏中心(ATCC)之融合瘤所產生之抗體的重鏈可變區胺基酸序列至少90%同源或一致的胺基酸序列。在又其他實施例中，重鏈可變區包含與藉由寄存於美國菌種保藏中心(ATCC)登錄號：PTA-11267下之融合瘤產生之抗體的重鏈可變區胺基酸序列至少95%同源或一致的胺基酸序列。在其他實施例中，重鏈可變區可與以登錄號：PTA-11267寄存於美國菌種保藏中心(ATCC)之融合瘤所產生之抗體的重鏈可變區胺基酸序列85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同源或一致。在一些實施例中，輕鏈可變區包含與以登錄號：PTA-11267寄存於美國菌種保藏中心(ATCC)之融合瘤所產生之抗體的輕鏈可變區胺基酸序列至少85%同源或一致的胺基酸序列。在其他實施例中，輕鏈可變區包含與以登錄號：PTA-11267寄存於美國菌種保藏中心(ATCC)之融合瘤所產生之抗體的輕鏈可變區胺基酸序列至少90%同源或一致的胺基酸序列。在又其他實施例中，輕鏈可變區包含與以登錄號：PTA-11267寄存於美國菌種保藏中心(ATCC)之融合瘤所產生之抗體的輕鏈可變區胺基酸序列至少95%同源或一致的胺基酸序列。在其他實施例中，輕鏈可變區可與以寄存編號：PTA-11267寄存於美國菌種保藏中心(ATCC)之融合瘤所產生之抗體的輕鏈可變區胺基酸序列85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同源或一致。在某些實施例中，本文所提供之抗體或抗原結合片段包含如本段落中所提供之任何同源輕鏈可變區與任何同源重鏈可變區的任何組合或排列。
在其他實施例中，本文提供之抗體或其抗原結合片段包含重鏈及輕鏈，其中： (a)重鏈包含與藉由寄存於美國菌種保藏中心(ATCC)登錄號：PTA-11267下之融合瘤產生之抗體的重鏈胺基酸序列至少80%同源或一致的胺基酸序列；及 (b)輕鏈包含與藉由寄存於美國菌種保藏中心(ATCC)登錄號：PTA-11267下之融合瘤產生之抗體的輕鏈胺基酸序列至少80%同源或一致的胺基酸序列。
在某些實施例中，本文所提供之抗體或抗原結合片段包含與以登錄號：PTA-11267寄存於美國菌種保藏中心(ATCC)之融合瘤所產生之抗體的重鏈胺基酸序列具有一定同源性或一致性的重鏈，及與以登錄號：PTA-11267寄存於美國菌種保藏中心(ATCC)之融合瘤所產生之抗體的輕鏈胺基酸序列具有一定同源性或一致性的輕鏈。具有同源性或一致性之重鏈及輕鏈的此類實施例進一步提供如下。在一些實施例中，重鏈包含與以寄存編號：PTA-11267寄存於美國菌種保藏中心(ATCC)之融合瘤所產生之抗體的重鏈胺基酸序列至少85%同源或一致的胺基酸序列。在其他實施例中，重鏈包含與藉由寄存於美國菌種保藏中心(ATCC)登錄號：PTA-11267下之融合瘤產生之抗體的重鏈胺基酸序列至少90%同源或一致的胺基酸序列。在又其他實施例中，重鏈包含與藉由以美國典型培養物保藏中心(ATCC)登錄號：PTA-11267保藏之融合瘤產生之抗體的重鏈胺基酸序列至少95%同源或一致的胺基酸序列。在其他實施例中，重鏈可與以登錄號：PTA-11267寄存於美國菌種保藏中心(ATCC)之融合瘤所產生之抗體的重鏈胺基酸序列85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同源或一致。在一些實施例中，輕鏈包含與以登錄號：PTA-11267寄存於美國菌種保藏中心(ATCC)之融合瘤所產生之抗體的輕鏈胺基酸序列至少85%同源或一致的胺基酸序列。在其他實施例中，輕鏈包含與藉由寄存於美國菌種保藏中心(ATCC)寄存編號：PTA-11267下之融合瘤產生之抗體的輕鏈胺基酸序列至少90%同源或一致的胺基酸序列。在又其他實施例中，輕鏈包含與以登錄號：PTA-11267寄存於美國菌種保藏中心(ATCC)之融合瘤所產生之抗體的輕鏈胺基酸序列至少95%同源或一致的胺基酸序列。在其他實施例中，輕鏈可與以寄存編號：PTA-11267寄存於美國菌種保藏中心(ATCC)之融合瘤所產生之抗體的輕鏈胺基酸序列85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同源或一致。在某些實施例中，本文所提供之抗體或抗原結合片段包含如本段落中所提供之任何同源輕鏈與任何同源重鏈的任何組合或排列。
在一些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段結合至191P4D12中之特定抗原決定基。在一些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段結合至191P4D12之VC1域。在一些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段結合至191P4D12之VC1域，但不結合至C1C2域。在一些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段結合至191P4D12之第1個至第147個胺基酸殘基。在一些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段結合至位於191P4D12之第1個至第147個胺基酸殘基中的抗原決定基。在一些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段結合至191P4D12之第1個至第10個胺基酸殘基。在一些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段結合至191P4D12之第11個至第20個胺基酸殘基。在一些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段結合至191P4D12之第21個至第30個胺基酸殘基。在一些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段結合至191P4D12之第31個至第40個胺基酸殘基。在一些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段結合至191P4D12之第41個至第50個胺基酸殘基。在一些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段結合至191P4D12之第51個至第60個胺基酸殘基。在一些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段結合至191P4D12之第61個至第70個胺基酸殘基。在一些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段結合至191P4D12之第71個至第80個胺基酸殘基。在一些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段結合至191P4D12之第81個至第90個胺基酸殘基。在一些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段結合至191P4D12之第91個至第100個胺基酸殘基。在一些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段結合至191P4D12之第101個至第110個胺基酸殘基。在一些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段結合至191P4D12之第111個至第120個胺基酸殘基。在一些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段結合至191P4D12之第121個至第130個胺基酸殘基。在一些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段結合至191P4D12之第131個至第140個胺基酸殘基。在一些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段結合至191P4D12之第141個至第147個胺基酸殘基。本文提供之抗體或其抗原結合片段之某些實施例之結合抗原決定基已在WO 2012/047724中所測定及描述，該案以全文引用之方式併入本文中。
在一些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段結合至191P4D12中之抗原決定基，該等抗原決定基為人體中所觀測之191P4D12變異體之間共同的抗原決定基。在一些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段結合至191P4D12中的抗原決定基，該等抗原決定基為人體中所觀測到之191P4D12多態性之間共同的抗原決定基。在一些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段結合至191P4D12中的抗原決定基，該等抗原決定基為人類癌症中所觀測到之191P4D12多態性之間共同的抗原決定基。在一些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段結合至191P4D12中的抗原決定基，從而結合、內化、破壞或調節191P4Dl2或191P4D12變異體的生物功能。在一些實施例中，本文所提供之抗體或其抗原結合片段結合至191P4D12中的抗原決定基，從而破壞191P4D12與配位體、受質及結合搭配物之間的相互作用。
本文所提供的工程化抗體包括VH及/或VL內之骨架殘基已修飾(例如為了改進抗體之特性)的彼等抗體。通常，進行此類骨架修飾以降低抗體之免疫原性。舉例而言，一種方法係使一或多個骨架殘基「回復突變」成相應生殖系序列。更特定而言，已經歷體細胞突變之抗體可含有與衍生抗體之生殖系序列不同的骨架殘基。此類殘基可藉由比較抗體骨架序列與獲得抗體之生殖系序列來鑑別。為了使骨架區序列恢復其生殖系組態，體細胞突變可藉由例如定點突變誘發或PCR介導之突變誘發而「回復突變」成生殖系序列(例如白胺酸「回復突變」成甲硫胺酸)。本發明亦意欲涵蓋此類「回復突變」抗體。
另一類型之骨架修飾涉及使骨架區內或甚至一或多個CDR區內之一或多個殘基突變，以移除T細胞抗原決定基，以藉此降低抗體之潛在免疫原性。此方法亦稱為「去免疫」，且進一步詳細描述於Carr等人之美國專利公開案第2003/0153043號中。
除在骨架或CDR區內達成修飾之外或作為其替代方式，可對本發明之抗體進行工程改造以將修飾納入Fc區內，從而典型地改變抗體的一或多種功能特性，諸如血清半衰期、補體結合、Fc受體結合，及/或抗原依賴性細胞的細胞毒性。另外，本文所提供之抗191P4D12抗體可經化學修飾(例如一或多個化學部分可連接至抗體)或經修飾以改變其糖基化，以再次改變抗體之一或多種功能特性。此等實施例中之每一者進一步詳細描述於下文中。
在一個實施例中，CH1之鉸鏈區經修飾以使得鉸鏈區中的半胱胺酸殘基之數目改變，例如增加或減少。此方法進一步描述於Bodmer等人之美國專利第5,677,425號中。改變CH1鉸鏈區中之半胱胺酸殘基數目，以例如促進輕鏈及重鏈之組裝或增加或降低抗191P4D12抗體之穩定性。
在另一個實施例中，抗體之Fc鉸鏈區經突變以縮短抗191P4D12抗體之生物半衰期。更特定言之，將一或多個胺基酸突變引入Fc鉸鏈片段之CH2-CH3域界面區以使得抗體對葡萄球菌蛋白A (SpA)的結合相對於原生Fc鉸鏈域SpA結合減弱。此方法進一步詳細描述於Ward等人之美國專利第6,165,745號中。
在另一實施例中，抗191P4D12抗體經修飾以延長其生物半衰期。可進行多種方法。舉例而言，可如Ward之美國專利第6,277,375號中所描述，引入突變。可替代地，為了增加生物半衰期，抗體可在CH1或CL區內改變以含有獲自IgG之Fc區之CH2域之兩個環的救助受體結合抗原決定基，如Presta等人之美國專利第5,869,046號及第6,121,022號中所描述。
在又其他實施例中，Fc區藉由用不同胺基酸殘基置換至少一個胺基酸殘基來改變，以改變抗體之效應功能。舉例而言，選自特定胺基酸殘基之一或多個胺基酸可經不同胺基酸殘基置換，使得抗體針對效應配體之親和力改變但保留親本抗體之抗原結合能力。親和力改變之效應配位體可為例如Fc受體或補體之C1組分。此方法進一步詳細描述於例如Winter等人之美國專利第5,624,821號與第5,648,260號中。
抗191P4D12抗體與191P4D12相關蛋白之反應性可藉由多種熟知方式(包括西方墨點法、免疫沈澱、ELISA及FACS分析)，適當時使用191P4D12相關蛋白、191P4D12表現細胞或其提取物來確立。191P4D12抗體或其片段可用可偵測標記物加以標記或與第二分子結合。適合的可偵測標記物包括(但不限於)放射性同位素、螢光化合物、生物發光化合物、化學發光化合物、金屬螯合劑或酶。另外，使用此項技術中通常已知之方法來產生對兩種或更多種191P4D12抗原決定基具有特異性之雙特異性抗體。亦可藉由此項技術中已知之交聯技術(例如Wolff等人, Cancer Res. 53: 2560-2565)來產生均二聚抗體。
在又另一個特定實施例中，本文所提供之抗191P4D12抗體為包含稱為Ha22-2(2,4)6.1之抗體之重鏈及輕鏈的抗體。Ha22-2(2,4)6.1之重鏈由SEQ ID NO: 7之第20個殘基E至第466個殘基K範圍內的胺基酸序列組成；且Ha22-2(2,4)6.1之輕鏈由SEQ ID NO: 8序列之第23個殘基D至第236個殘基C範圍內的胺基酸序列組成。
2010年8月18日，將產生稱為Ha22-2(2,4)6.1之抗體的融合瘤送達(經由Federal Express)美國菌種保藏中心(ATCC)(P.O. Box 1549, Manassas, VA 20108)，且指定登錄號PTA-11267。
抗連接素-4抗體之額外實施例已描述於以下中：美國專利案第8,637,642號及國際申請案第PCT/US2019/056214號(公開案第WO2020/117373號)，該兩者以其全文引用之方式併入本文中。 5.3.2細胞毒性劑(藥物單元)
由於本文提供之方法中使用的ADC包含與細胞毒性劑結合的抗體或其抗原結合片段，因此本發明進一步提供細胞毒性劑之各種實施例作為該等方法中使用之ADC的一部分。在本文所提供之方法(包括章節5.2中所提供之方法)之各種實施例中，作為本文向該等方法提供之任一種ADC之一部分的細胞毒性劑包含微管蛋白破裂劑、由微管蛋白破裂劑組成或為微管蛋白破裂劑。在一個實施例中，細胞毒性劑為微管蛋白破裂劑。在一些實施例中，微管蛋白破裂劑選自由以下組成之群：海兔毒素(dolastatin)、奧瑞他汀(auristatin)、哈米特林(hemiasterlin)、長春花生物鹼(vinca alkaloid)、類美登素(maytansinoid)、艾瑞布林(eribulin)、秋水仙鹼(colchicine)、普羅布林(plocabulin)、福莫普辛(phomopsin)、埃坡黴素(epothilone)、念珠藻素(cryptophycin)及紫杉烷(taxane)。在一個具體實施例中，微管蛋白破裂劑為奧瑞他汀。在另一具體實施例中，奧瑞他汀為單甲基奧瑞他汀E (MMAE)、單甲基奧瑞他汀F (MMAF)、AFP或奧瑞他汀T。在又另一具體實施例中，奧瑞他汀為單甲基奧瑞他汀E (MMAE)。
在本文所提供之方法(包括章節5.2中所提供之方法)的各種實施例中，作為本文向該等方法提供之任一種ADC之一部分的細胞毒性劑包含選自以下的任何藥劑、由選自以下的任何藥劑組成或為選自以下的任何藥劑：美國專利第8,637,642號及國際申請案第PCT/US2019/056214號(公開案第WO2020/117373號)中所描述的細胞毒性劑，該兩者以全文引用之方式併入本文中。
在一些實施例中，奧瑞他汀為MMAE (其中波浪線指示與抗體藥物結合物之連接子的共價連接)。
在一些實施例中，包含MMAE及連接子組分(本文中進一步描述)的一個例示性實施例具有以下結構(其中L表示抗體(例如抗連接素-4抗體或其抗原結合片段)且p在1至12範圍內)：
在前一段落所述之式的一些實施例中，p的範圍為1至20、1至19、1至18、1至17、1至16、1至15、1至14、1至13、1至12、1至11、1至10、1至9、1至8、1至7、1至6、1至5、1至4、1至3或1至2。在前一段落所描述之式的一些實施例中，p的範圍為2至20、2至19、2至18、2至17、2至16、2至15、2至14、2至13、2至12、2至11、2至10、2至9、2至8、2至7、2至6、2至5、2至4或2至3。在前述段落中所描述之式之一些實施例中，p在以下之範圍內：3至20、3至19、3至18、3至17、3至16、3至15、3至14、3至13、3至12、3至11、3至10、3至9、3至8、3至7、3至6、3至5或3至4。在前一段落中所描述之式的一些實施例中，p為約1。在前一段落中所描述之式的一些實施例中，p為約2。在前一段落中所描述之式的一些實施例中，p為約3。在前一段落中所描述之式的一些實施例中，p為約4。在前一段落中所描述之式的一些實施例中，p為約3.8。在前一段落中所描述之式的一些實施例中，p為約5。在前一段落中所描述之式的一些實施例中，p為約6。在前一段落中所描述之式的一些實施例中，p為約7。在前一段落中所描述之式的一些實施例中，p為約8。在前一段落中所描述之式的一些實施例中，p為約9。在前一段落中所描述之式的一些實施例中，p為約10。在前一段落中所描述之式的一些實施例中，p為約11。在前一段落中所描述之式的一些實施例中，p為約12。在前一段落中所描述之式的一些實施例中，p為約13。在前一段落中所描述之式的一些實施例中，p為約14。在前一段落中所描述之式的一些實施例中，p為約15。在前一段落中所描述之式的一些實施例中，p為約16。在前一段落中所描述之式的一些實施例中，p為約17。在前一段落中所描述之式的一些實施例中，p為約18。在前一段落中所描述之式的一些實施例中，p為約19。在前一段落中所描述之式的一些實施例中，p為約20。
典型地，基於肽之藥物單元可藉由在兩個或更多個胺基酸及/或肽片段之間形成肽鍵來製備。此類肽鍵可例如根據肽化學領域中熟知的液相合成方法(參見E. Schröder及K. Lübke, 「The Peptides」, 第1卷, 第76-136頁, 1965, Academic Press)製備。奧瑞他汀/海兔毒素藥物單元可根據以下文獻之方法製備：US 5635483；US 5780588；Pettit等人(1989) J. Am. Chem. Soc. 111:5463-5465；Pettit等人(1998) Anti-Cancer Drug Design 13:243-277；Pettit, G. R.等人, Synthesis, 1996, 719-725；Pettit等人(1996) J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1 5:859-863；及Doronina (2003) Nat Biotechnol 21(7):778-784。
細胞毒性劑之額外實施例已描述於以下中：美國專利案第8,637,642號及國際申請案第PCT/US2019/056214號(公開案第WO2020/117373號)，該兩者以其全文引用之方式併入本文中。 5.3.3連接子
典型地，抗體藥物結合物包含介於藥物單元(例如MMAE)與抗體單元(例如抗191P4D12抗體或其抗原結合片段)之間的連接單元。在一些實施例中，連接子在胞內條件下可裂解，使得連接子在胞內環境中裂解而自抗體釋放藥物單元。在又其他實施例中，連接子單元不可裂解且(例如)藉由抗體降解來釋放藥物。在一些實施例中，連接子為可藉由胞內環境(例如，溶酶體或核內體或胞膜窖內)中存在之裂解劑裂解的。連接子可為例如可由細胞內肽酶或蛋白酶(包括(但不限於)溶酶體或內體蛋白酶)裂解之肽基連接子。舉例而言，可使用可由硫醇依賴性蛋白酶組織蛋白酶B裂解的肽基連接子(例如Phe-Leu或Gly-Phe-Leu-Gly連接子(SEQ ID NO:15))，該組織蛋白酶B在癌組織中高度表現。在一些實施例中，肽基連接子為至少兩個胺基酸長或至少三個胺基酸長。在其他實施例中，可裂解連接子為pH敏感的，亦即在某些pH值下對水解敏感。通常，pH敏感性連接子可在酸性條件下水解。例如，可使用在溶酶體中可水解之酸不穩定連接子(例如，腙、半卡巴腙、硫半卡巴肼、順式烏頭醯胺、原酸酯、縮醛、縮酮或類似者)。在又其他實施例中，連接子在還原條件下可裂解(例如二硫化物連接子)。各種二硫化物連接子係此項技術中已知的，包括例如可使用N-琥珀醯亞胺基-S-乙醯基硫基乙酸酯(SATA)、N-琥珀醯亞胺基-3-(2-吡啶基二硫基)丙酸酯(SPDP)、N-琥珀醯亞胺基-3-(2-吡啶基二硫基)丁酸酯(SPDB)及N-琥珀醯亞胺基氧基羰基-α-甲基-α-(2-吡啶基-二硫基)甲苯(SMPT)、SPDB及SMPT形成之連接子。
「連接單元」(LU)為可用於將藥物單元與抗體單元連接以形成抗體藥物結合物之雙官能化合物。在一些實施例中，連接單元具有下式： -A a-W w-Y y- 其中：-A-為延伸子單元， a為0或1， 各-W-獨立地為胺基酸單元， w為0至12範圍內之整數， -Y-為自我分解型間隔子單元，且 y為0、1或2。
在一些實施例中，a為0或1，w為0或1，且y為0、1或2。在一些實施例中，a為0或1，w為0或1，且y為0或1。在一些實施例中，當w為1至12時，y為1或2。在一些實施例中，w為2至12且y為1或2。在一些實施例中，a為1且w及y為0。連接子以及延伸子單元、胺基酸單元與間隔子單元中之每一者已描述於美國專利第8,637,642號及國際申請案第PCT/US2019/056214號(公開案第WO2020/117373號)中，該兩者以全文引用之方式併入本文中。
抗體-藥物結合物之實施例可包括： 其中w及y各自為0、1或2；以及 其中w及y各自為0， 5.3.4藥物負載
藥物負載由p表示且為分子中每個抗體之藥物單元平均數目。藥物負載可在每個抗體1至20個藥物單元(D)範圍內。本文所提供之ADC包括與多個(例如1至20個)藥物單元結合的抗體或抗原結合片段之集合。在由結合反應製備ADC時，平均藥物單元數目/抗體可藉由諸如質譜分析及ELISA分析之習知手段表徵。亦可根據p來測定ADC之定量分佈。在一些情況下，其中p為特定值的均質ADC自具有其他藥物負載之ADC之分離、純化及表徵可藉由諸如電泳之手段來達成。
在某些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載在1至20個之範圍內。在某些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載在1至18個之範圍內。在某些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載在1至15個之範圍內。在某些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載在1至12個之範圍內。在某些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載在1至10個之範圍內。在某些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載在1至9個之範圍內。在某些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載在1至8個之範圍內。在某些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載在1至7個之範圍內。在某些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載在1至6個之範圍內。在某些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載在1至5個之範圍內。在某些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載在1至4個之範圍內。在某些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載在1至3個之範圍內。在某些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載在2至12個之範圍內。在某些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載在2至10個之範圍內。在某些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載在2至9個之範圍內。在某些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載在2至8個之範圍內。在某些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載在2至7個之範圍內。在某些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載在2至6個之範圍內。在某些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載在2至5個之範圍內。在某些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載在2至4個之範圍內。在某些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載在3至12個之範圍內。在某些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載在3至10個之範圍內。在某些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載在3至9個之範圍內。在某些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載在3至8個之範圍內。在某些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載在3至7個之範圍內。在某些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載在3至6個之範圍內。在某些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載在3至5個之範圍內。在某些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載在3至4個之範圍內。
在某些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載範圍為1至約8；約2至約6；約3至約5；約3至約4；約3.1至約3.9；約3.2至約3.8；約3.2至約3.7；約3.2至約3.6；約3.3至約3.8；或約3.3至約3.7。
在某些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載為約1、約2、約3、約4、約5、約6、約7、約8、約9、約10、約11、約12或更多。在一些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載為約3.1、約3.2、約3.3、約3.4、約3.5、約3.6、約3.7、約3.8或約3.9。
在一些實施例中，本文提供之ADC之藥物負載在以下之範圍內：2至20、2至19、2至18、2至17、2至16、2至15、2至14或2至13。在一些實施例中，本文提供之ADC之藥物負載在以下之範圍內：3至20、3至19、3至18、3至17、3至16、3至15、3至14或3至13。在一些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載為約1。在一些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載為約2。在一些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載為約3。在一些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載為約4。在一些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載為約3.8。在一些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載為約5。在一些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載為約6。在一些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載為約7。在一些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載為約8。在一些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載為約9。在一些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載為約10。在一些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載為約11。在一些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載為約12。在一些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載為約13。在一些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載為約14。在一些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載為約15。在一些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載為約16。在一些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載為約17。在一些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載為約18。在一些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載為約19。在一些實施例中，本文所提供之ADC的藥物負載為約20。
在某些實施例中，在結合反應期間，使少於理論最大值之藥物單元與抗體結合。抗體可含有例如與藥物-連接子中間物或連接子試劑不反應的離胺酸殘基。一般而言，抗體不含有可與藥物單元連接之許多游離的反應性半胱胺酸硫醇基；實際上，抗體中之大部分半胱胺酸硫醇殘基以二硫橋鍵形式存在。在某些實施例中，抗體可用諸如二硫蘇糖醇(DTT)或三羰基乙基膦(TCEP)之還原劑在部分或完全還原條件下還原，產生反應性半胱胺酸硫醇基。在某些實施例中，抗體經歷變性條件，以顯出反應性親核基團，諸如離胺酸或半胱胺酸。在一些實施例中，連接單元或藥物單元經由抗體單元上之離胺酸殘基來結合。在一些實施例中，連接單元或藥物單元經由抗體單元上之半胱胺酸殘基來結合。
在一些實施例中，與連接單元或藥物單元連接之胺基酸存在於抗體或其抗原結合片段之重鏈中。在一些實施例中，與連接單元或藥物單元連接之胺基酸存在於抗體或其抗原結合片段之輕鏈中。在一些實施例中，與連接單元或藥物單元連接之胺基酸存在於抗體或其抗原結合片段之鉸鏈區中。在一些實施例中，與連接單元或藥物單元連接之胺基酸存在於抗體或其抗原結合片段之Fc區中。在其他實施例中，與連接子單元或藥物單元連接之胺基酸係在抗體或其抗原結合片段之恆定區(例如重鏈之CH1、CH2或CH3，或輕鏈之CH1)中。在又其他實施例中，與連接單元或藥物單元連接之胺基酸存在於抗體或其抗原結合片段之VH骨架區中。在又其他實施例中，與連接單元或藥物單元連接之胺基酸存在於抗體或其抗原結合片段之VL骨架區中。
ADC之負載(藥物/抗體比率)可以不同方式控制，例如：(i)限制藥物-連接子中間物或連接子試劑相對於抗體之莫耳濃度過量；(ii)限制結合反應時間或溫度；(iii)用於半胱胺酸硫醇修飾之部分或限制性還原條件；(iv)藉由重組技術對抗體之胺基酸序列進行工程改造，使得半胱胺酸殘基之數目及位置經修改以控制連接子-藥物連接之數目及/或位置(諸如本文及WO2006/034488 (以全文引用的方式併入本文中)所揭示而製備之thioMab或thioFab)。
應瞭解，若超過一個親核基團與藥物-連接子中間物或連接子試劑反應，隨後與藥物單元試劑反應，則所得產物為ADC化合物的混合物，其中存在一或多個連接至抗體單元之藥物單元的分佈。混合物中每個抗體的藥物平均數目可藉由對抗體具有特異性且對藥物具有特異性之雙重ELISA抗體分析來計算。個別ADC分子可藉由質譜法在混合物中鑑別出來且藉由HPLC (例如疏水相互作用層析)來分離(參見例如Hamblett, K.J.等人「Effect of drug loading on the pharmacology, pharmacokinetics, and toxicity of an anti-CD30 antibody-drug conjugate」, 摘要編號624, American Association for Cancer Research, 2004年年度會議, 2004年3月27-31日,  AACR會議論文, 第45卷, 2004年3月；Alley, S.C.等人「Controlling the location of drug attachment in antibody-drug conjugates」, 摘要編號627, 美國癌症研究學會(American Association for Cancer Research), 2004年年度會議, 2004年3月27-31日, AACR會議論文, 第45卷, 2004年3月)。在某些實施例中，具有單一負載值之均質ADC可藉由電泳或層析自結合混合物分離。
用於製備、篩選及表徵抗體藥物結合物方法係一般熟習此項技術者已知的，例如美國專利案第8,637,642號中所描述，該案以全文引用之方式併入本文中。
在一些實施例中，用於本文所提供之方法的抗體藥物結合物係AGS-22M6E，其係根據美國專利案第8,637,642號中所描述之方法製備且具有下式： 其中L係Ha22-2(2,4)6.1，且p係1至20。
在一些實施例中，p在以下範圍內：1至20、1至10、1至9、1至8、1至7、1至6、1至5、1至4、1至3或1至2。在一些實施例中，p在以下範圍內：2至10、2至9、2至8、2至7、2至6、2至5、2至4或2至3。在其他實施例中，p為約1。在其他實施例中，p為約2。在其他實施例中，p為約3。在其他實施例中，p為約4。在其他實施例中，p為約5。在其他實施例中，p為約6。在其他實施例中，p為約7。在其他實施例中，p為約8。在其他實施例中，p為約9。在其他實施例中，p為約10。在一些實施例中，p為約3.1。在一些實施例中，p為約3.2。在一些實施例中，p為約3.3。在一些實施例中，p為約3.4。在一些實施例中，p為約3.5。在其他實施例中，p為約3.6。在一些實施例中，p為約3.7。在一些實施例中，p為約3.8。在一些實施例中，p為約3.9。在一些實施例中，p為約4.0。在一些實施例中，p為約4.1。在一些實施例中，p為約4.2。在一些實施例中，p為約4.3。在一些實施例中，p為約4.4。在一些實施例中，p為約4.5。在其他實施例中，p為約4.6。在一些實施例中，p為約4.7。在一些實施例中，p為約4.8。在一些實施例中，p為約4.9。在一些實施例中，p為約5.0.
在一些實施例中，本文所提供之方法中使用的ADC為恩諾單抗維多汀(enfortumab vedotin)。恩諾單抗維多汀為一種ADC，其包含經由蛋白酶可裂解連接子與微管破壞劑(MMAE)結合的完全人類免疫球蛋白G1κ (IgG1 Κ)抗體(Challita-Eid PM等人, Cancer Res. 2016;76(10):3003-13)。恩諾單抗維多汀如下誘導抗腫瘤活性：結合至細胞表面上之191P4D12蛋白質，引起ADC-191P4D12複合物內化，接著運輸至溶酶體隔室，在該隔室中經由蛋白水解裂解連接子而釋放MMAE。細胞內釋放MMAE隨後干擾微管蛋白聚合作用，導致G2/M期細胞週期停滯及細胞凋亡性細胞死亡(Francisco JA等人, Blood. 2003 Aug 15;102(4):1458-65)。
如上文及美國專利第8,637,642號中所描述，AGS-22M6E為來源於鼠類融合瘤細胞株之ADC。恩諾單抗維多汀為中國倉鼠卵巢(CHO)細胞株來源的AGS-22M6E ADC等效物且為用於人類療法之例示性產品。恩諾單抗維多汀具有與AGS-22M6E相同的胺基酸序列、連接子及細胞毒性藥物。恩諾單抗維多汀與AGS-22M6E之間的可比較性係經由深入分析及生物表徵研究，諸如與191P4D12之結合親和力、活體外細胞毒性及活體內抗腫瘤活性確定。
在一個實施例中，本文所提供之ADC為恩諾單抗維多汀，亦稱為EV、PADCEV、AGS-22M6E、AGS-22C3E、ASG-22C3E。恩諾單抗維多汀包括抗191P4D12抗體，其中該抗體或其抗原結合片段包含含有SEQ ID NO: 7之胺基酸殘基20至胺基酸殘基466的重鏈及含有SEQ ID NO: 8之胺基酸殘基23至胺基酸殘基236的輕鏈。
恩諾單抗維多汀為針對連接素-4之抗體-藥物結合物(ADC)，其由經由蛋白酶可裂解之順丁烯二醯亞胺基己醯基纈胺酸-瓜胺酸(vc)連接子(SGD-1006)與小分子微管破裂劑單甲基奧瑞他汀E (MMAE)結合的完全人類抗連接素-4 IgG1κ單株抗體(AGS-22C3)構成。結合發生在包含抗體之鏈間二硫鍵的半胱胺酸殘基上，產生了藥物:抗體比率為約3.8:1的產物。分子量為約152 kDa。
恩諾單抗維多汀具有以下結構式：
約4個MMAE分子與每個抗體分子連接。藉由化學結合抗體及小分子組分，產生恩諾單抗維多汀。抗體由哺乳動物(中國倉鼠卵巢)細胞產生，且小分子組分藉由化學合成產生。
恩諾單抗維多汀注射劑係以無菌、不含防腐劑的白色至灰白色凍乾粉末形式提供於單次劑量小瓶中供靜脈內使用。供應呈20 mg/小瓶及30 mg/小瓶形式之恩諾單抗維多汀，且需要用USP注射用無菌水(分別2.3 mL及3.3 mL)復原，產生最終濃度為10 mg/mL的透明至略微乳白色、無色至略微黃色的溶液。復原之後，各小瓶允許抽取2 mL (20 mg)及3 mL (30 mg)。每一mL之復原溶液含有10 mg恩諾單抗維多汀、組胺酸(1.4 mg)、單水合組胺酸鹽酸鹽(2.31 mg)、聚山梨醇酯20 (0.2 mg)及二水合海藻糖(55 mg)，pH為6.0。 5.4 醫藥組合物
在本文所提供之方法的某些實施例中，該等方法中使用之ADC係以「醫藥組合物」形式提供。此類醫藥組合物包括本文所提供之抗體藥物結合物，及醫藥學上可接受或生理學上可接受之一或多種賦形劑。在某些實施例中，抗體藥物結合物與一或多種其他藥劑組合提供或分開提供。亦提供一種組合物，其包含一或多種此類其他藥劑及醫藥學上可接受或生理學上可接受之一或多種賦形劑。在特定實施例中，抗體藥物結合物及其他藥劑以治療上可接受的量存在。可根據本文提供之方法及用途來使用醫藥組合物。因此，舉例而言，可向個體離體或活體內投與醫藥組合物，以便實施本文提供之治療方法及用途。本文所提供之醫藥組合物可經調配以與預期投藥方法或途徑相容；例示性投藥途徑在本文中闡述。
在一些實施例中，提供調節癌症或腫瘤之抗體藥物結合物的醫藥組合物。
在本文所提供之方法的某些實施例中，包含ADC之醫藥組合物可進一步包含本文所揭示或熟習此項技術者已知之其他治療活性劑或化合物，該等其他治療活性劑或化合物可用於治療或預防如本文所闡述之各種疾病及病症(例如癌症)。如上文所述，其他治療活性劑或化合物可存在於各別的醫藥組合物中。
醫藥組合物典型地包含治療有效量之本文所提供的至少一種抗體藥物結合物及醫藥學上可接受之一或多種調配劑。在某些實施例中，醫藥組合物進一步包含本文所描述之一或多種其他藥劑。
在一個實施例中，醫藥組合物包含本文所提供之抗體藥物結合物。在一些實施例中，醫藥組合物包含治療有效量之本文所提供的抗體藥物結合物。在某些實施例中，醫藥組合物包含醫藥學上可接受之賦形劑。
在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物中的抗體藥物結合物係選自上述章節5.3中所描述的抗體藥物結合物。
在某些實施例中，醫藥組合物包含濃度為0.1-100 mg/mL之抗體藥物結合物。在一些實施例中，醫藥組合物包含濃度為1至20 mg/mL之抗體藥物結合物。在其他實施例中，醫藥組合物包含濃度為5至15 mg/mL之抗體藥物結合物。在其他實施例中，醫藥組合物包含濃度為8至12 mg/mL之抗體藥物結合物。在其他實施例中，醫藥組合物包含濃度為9至11 mg/mL之抗體藥物結合物。在一些實施例中，醫藥組合物包含濃度為約9.5 mg/mL之抗體藥物結合物。在一些實施例中，醫藥組合物包含濃度為約9.6 mg/mL之抗體藥物結合物。在一些實施例中，醫藥組合物包含濃度為約9.7 mg/mL之抗體藥物結合物。在一些實施例中，醫藥組合物包含濃度為約9.8 mg/mL之抗體藥物結合物。在一些實施例中，醫藥組合物包含濃度為約9.9 mg/mL之抗體藥物結合物。在又其他實施例中，醫藥組合物包含濃度為約10 mg/mL之抗體藥物結合物。在又其他實施例中，醫藥組合物包含濃度為約10.1 mg/mL之抗體藥物結合物。在一些實施例中，醫藥組合物包含濃度為約10.2 mg/mL之抗體藥物結合物。在一些實施例中，醫藥組合物包含濃度為約10.3 mg/mL之抗體藥物結合物。在一些實施例中，醫藥組合物包含濃度為約10.3 mg/mL之抗體藥物結合物。在一些實施例中，醫藥組合物包含濃度為約10.4 mg/mL之抗體藥物結合物。在一些實施例中，醫藥組合物包含濃度為約10.5 mg/mL之抗體藥物結合物。
在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物包含L-組胺酸、TWEEN-20，及二水合海藻糖或蔗糖中的至少一者。在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物進一步包含鹽酸(HCl)或丁二酸。
在一些實施例中，適用於本文所提供之醫藥組合物中的L-組胺酸濃度在5與50 mM之間的範圍內。在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物中之L-組胺酸之濃度在10至40 mM的範圍之間。在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物中之L-組胺酸之濃度在15至35 mM的範圍之間。
在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物中之L-組胺酸之濃度在15至30 mM的範圍之間。在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物中之L-組胺酸之濃度在15至25 mM的範圍之間。在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物中之L-組胺酸之濃度在15至35 mM的範圍之間。在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物中之L-組胺酸之濃度為約16 mM。在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物中L-組胺酸之濃度係約17 mM。在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物中L-組胺酸之濃度係約18 mM。在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物中L-組胺酸之濃度係約19 mM。在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物中L-組胺酸之濃度係約20 mM。在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物中L-組胺酸之濃度係約21 mM。在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物中L-組胺酸之濃度係約22 mM。在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物中L-組胺酸之濃度係約23 mM。在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物中L-組胺酸之濃度係約24 mM。在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物中L-組胺酸之濃度係約25 mM。
在一些實施例中，適用於本文提供之醫藥組合物中之TWEEN-20之濃度在0.001至0.1% (v/v)之範圍內。在另一個實施例中，TWEEN-20之濃度在0.0025至0.075% (v/v)之範圍內。在一個實施例中，TWEEN-20之濃度在0.005至0.05% (v/v)之範圍內。在另一個實施例中，TWEEN-20之濃度在0.0075至0.025% (v/v)之範圍內。在另一實施例中，TWEEN-20之濃度在0.0075至0.05% (v/v)之範圍內。在另一個實施例中，TWEEN-20之濃度在0.01至0.03% (v/v)之範圍內。在一個特定實施例中，TWEEN-20之濃度係約0.01% (v/v)。在一個特定實施例中，TWEEN-20之濃度為約0.015% (v/v)。在一個特定實施例中，TWEEN-20之濃度為約0.016% (v/v)。在一個特定實施例中，TWEEN-20之濃度為約0.017% (v/v)。在一個特定實施例中，TWEEN-20之濃度為約0.018% (v/v)。在一個特定實施例中，TWEEN-20之濃度為約0.019% (v/v)。在一個特定實施例中，TWEEN-20之濃度為約0.02% (v/v)。在一個特定實施例中，TWEEN-20之濃度為約0.021% (v/v)。在一個特定實施例中，TWEEN-20之濃度為約0.022% (v/v)。在一個特定實施例中，TWEEN-20之濃度為約0.023% (v/v)。在一個特定實施例中，TWEEN-20之濃度為約0.024% (v/v)。在一個特定實施例中，TWEEN-20之濃度為約0.025% (v/v).
在一個實施例中，適用於本文提供之醫藥組合物中之二水合海藻糖之濃度在1%至20% (w/v)的範圍之間。在另一實施例中，二水合海藻糖之濃度在2%至15% (w/v)之範圍內。在一個實施例中，二水合海藻糖之濃度在3%至10% (w/v)之範圍內。在另一實施例中，二水合海藻糖之濃度在4%及9% (w/v)之範圍內。在另一實施例中，二水合海藻糖之濃度在4%及8% (w/v)之範圍內。在另一實施例中，二水合海藻糖之濃度在4%及7% (w/v)之範圍內。在另一實施例中，二水合海藻糖之濃度在4%及6% (w/v)之範圍內。在另一實施例中，二水合海藻糖之濃度在4.5%及6% (w/v)之範圍內。在另一實施例中，二水合海藻糖之濃度為約4.6% (w/v)。在另一實施例中，二水合海藻糖之濃度為約4.7% (w/v)。在另一實施例中，二水合海藻糖之濃度為約4.8% (w/v)。在另一實施例中，二水合海藻糖之濃度為約4.9% (w/v)。在另一實施例中，二水合海藻糖之濃度為約5.0% (w/v)。在另一實施例中，二水合海藻糖之濃度為約5.1% (w/v)。在另一實施例中，二水合海藻糖之濃度為約5.2% (w/v)。在另一實施例中，二水合海藻糖之濃度為約5.3% (w/v)。在另一實施例中，二水合海藻糖之濃度為約5.4% (w/v)。在另一實施例中，二水合海藻糖之濃度為約5.5% (w/v)。在另一實施例中，二水合海藻糖之濃度為約5.6% (w/v)。在另一實施例中，二水合海藻糖之濃度為約5.7% (w/v)。在另一實施例中，二水合海藻糖之濃度為約5.8% (w/v)。在另一實施例中，二水合海藻糖之濃度為約5.9% (w/v)。在另一實施例中，二水合海藻糖之濃度為約6.0% (w/v)。在另一實施例中，二水合海藻糖之濃度為約6.1% (w/v)。在另一實施例中，二水合海藻糖之濃度為約6.2% (w/v)。在另一實施例中，二水合海藻糖之濃度為約6.3% (w/v)。在另一實施例中，二水合海藻糖之濃度為約6.4% (w/v)。在另一實施例中，二水合海藻糖之濃度為約6.5% (w/v)。
在某些實施例中，二水合海藻糖之莫耳濃度為50至300 mM。在其他實施例中，二水合海藻糖之莫耳濃度為75至250 mM。在一些實施例中，二水合海藻糖之莫耳濃度係100至200 mM。在其他實施例中，二水合海藻糖之莫耳濃度為130至150 mM。在一些實施例中，二水合海藻糖之莫耳濃度為135至150 mM。在某些實施例中，二水合海藻糖之莫耳濃度為約135 mM。在某些實施例中，二水合海藻糖之莫耳濃度為約136 mM。在某些實施例中，二水合海藻糖之莫耳濃度為約137 mM。在某些實施例中，二水合海藻糖之莫耳濃度為約138 mM。在某些實施例中，二水合海藻糖之莫耳濃度為約139 mM。在某些實施例中，二水合海藻糖之莫耳濃度為約140 mM。在某些實施例中，二水合海藻糖之莫耳濃度為約141 mM。在某些實施例中，二水合海藻糖之莫耳濃度為約142 mM。在某些實施例中，二水合海藻糖之莫耳濃度為約143 mM。在某些實施例中，二水合海藻糖之莫耳濃度為約144 mM。在某些實施例中，二水合海藻糖之莫耳濃度為約145 mM。在某些實施例中，二水合海藻糖之莫耳濃度為約146 mM。在某些實施例中，二水合海藻糖之莫耳濃度為約150 mM。在某些實施例中，二水合海藻糖之莫耳濃度為約151 mM。在某些實施例中，二水合海藻糖之莫耳濃度為約151 mM。在某些實施例中，二水合海藻糖之莫耳濃度為約152 mM。在某些實施例中，二水合海藻糖之莫耳濃度為約153 mM。在某些實施例中，二水合海藻糖之莫耳濃度為約154 mM。在某些實施例中，二水合海藻糖之莫耳濃度為約155 mM。
在一個實施例中，適用於本文所提供之醫藥組合物中的蔗糖濃度在1%與20% (w/v)之間的範圍內。在另一個實施例中，蔗糖之濃度在2%至15% (w/v)之範圍內。在一個實施例中，蔗糖之濃度在3%至10% (w/v)之範圍內。在另一個實施例中，蔗糖之濃度在4%及9% (w/v)之範圍內。在另一個實施例中，蔗糖之濃度在4%及8% (w/v)之範圍內。在另一個實施例中，蔗糖之濃度在4%及7% (w/v)之範圍內。在另一個實施例中，蔗糖之濃度在4%及6% (w/v)之範圍內。在另一個實施例中，蔗糖之濃度在4.5%及6% (w/v)之範圍內。在另一實施例中，蔗糖之濃度為約4.6% (w/v)。在另一實施例中，蔗糖之濃度為約4.7% (w/v)。在另一實施例中，蔗糖之濃度為約4.8% (w/v)。在另一實施例中，蔗糖之濃度為約4.9% (w/v)。在另一實施例中，蔗糖之濃度為約5.0% (w/v)。在另一實施例中，蔗糖之濃度為約5.1% (w/v)。在另一實施例中，蔗糖之濃度為約5.2% (w/v)。在另一實施例中，蔗糖之濃度為約5.3% (w/v)。在另一實施例中，蔗糖之濃度為約5.4% (w/v)。在另一實施例中，蔗糖之濃度為約5.5% (w/v)。在另一實施例中，蔗糖之濃度為約5.6% (w/v)。在另一實施例中，蔗糖之濃度為約5.7% (w/v)。在另一實施例中，蔗糖之濃度為約5.8% (w/v)。在另一實施例中，蔗糖之濃度為約5.9% (w/v)。在另一實施例中，蔗糖之濃度為約6.0% (w/v)。在另一實施例中，蔗糖之濃度為約6.1% (w/v)。在另一實施例中，蔗糖之濃度為約6.2% (w/v)。在另一實施例中，蔗糖之濃度為約6.3% (w/v)。在另一實施例中，蔗糖之濃度為約6.4% (w/v)。在另一實施例中，蔗糖之濃度為約6.5% (w/v)。
在某些實施例中，蔗糖之莫耳濃度為50至300 mM。在其他實施例中，蔗糖之莫耳濃度為75至250 mM。在一些實施例中，蔗糖之莫耳濃度為100至200 mM。在其他實施例中，蔗糖之莫耳濃度為130至150 mM。在一些實施例中，蔗糖之莫耳濃度為135至150 mM。在某些實施例中，蔗糖之莫耳濃度為約135 mM。在某些實施例中，蔗糖之莫耳濃度為約136 mM。在某些實施例中，蔗糖之莫耳濃度為約137 mM。在某些實施例中，蔗糖之莫耳濃度為約138 mM。在某些實施例中，蔗糖之莫耳濃度為約139 mM。在某些實施例中，蔗糖之莫耳濃度為約140 mM。在某些實施例中，蔗糖之莫耳濃度為約141 mM。在某些實施例中，蔗糖之莫耳濃度為約142 mM。在某些實施例中，蔗糖之莫耳濃度為約143 mM。在某些實施例中，蔗糖之莫耳濃度為約144 mM。在某些實施例中，蔗糖之莫耳濃度為約145 mM。在某些實施例中，蔗糖之莫耳濃度為約146 mM。在某些實施例中，蔗糖之莫耳濃度為約150 mM。在某些實施例中，蔗糖之莫耳濃度為約151 mM。在某些實施例中，蔗糖之莫耳濃度為約151 mM。在某些實施例中，蔗糖之莫耳濃度為約152 mM。在某些實施例中，蔗糖之莫耳濃度為約153 mM。在某些實施例中，蔗糖之莫耳濃度為約154 mM。在某些實施例中，蔗糖之莫耳濃度為約155 mM。
在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物包含HCl。在其他實施例中，本文所提供之醫藥組合物包含丁二酸。
在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物的pH在5.5至6.5之範圍內。在其他實施例中，本文所提供之醫藥組合物的pH在5.7至6.3之範圍內。在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物的pH為約5.7。在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物的pH為約5.8。在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物的pH為約5.9。在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物的pH為約6.0。在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物的pH為約6.1。在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物的pH為約6.2。在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物的pH為約6.3.
在一些實施例中，在室溫下獲取pH。在其他實施例中，pH係在15℃至27℃下獲得。在又其他實施例中，pH係在4℃下獲取。在又其他實施例中，pH係在25℃下獲得。
在一些實施例中，藉由HCl調節pH。在一些實施例中，醫藥組合物包含HCl，且醫藥組合物在室溫下具有在5.5至6.5之範圍內的pH值。在一些實施例中，醫藥組合物包含HCl，且醫藥組合物在室溫下具有5.7至6.3範圍內的pH。在一些更具體實施例中，醫藥組合物包含HCl，且在室溫下醫藥組合物具有約5.7之pH。在一些更具體實施例中，醫藥組合物包含HCl，且在室溫下醫藥組合物具有約5.8之pH。在一些更特定實施例中，醫藥組合物包含HCl，且在室溫下醫藥組合物具有約5.9之pH。在一些更特定實施例中，醫藥組合物包含HCl，且在室溫下醫藥組合物具有約6.0之pH。在一些更特定實施例中，醫藥組合物包含HCl，且醫藥組合物在室溫下具有約6.1之pH。在一些更特定實施例中，醫藥組合物包含HCl，且醫藥組合物在室溫下具有約6.2之pH。在一些更特定實施例中，醫藥組合物包含HCl，且在室溫下醫藥組合物具有約6.3之pH。
在一些實施例中，醫藥組合物包含HCl，且醫藥組合物在15℃至27℃下具有5.5至6.5範圍內的pH。在一些實施例中，醫藥組合物包含HCl，且在15℃至27℃下醫藥組合物具有在5.7至6.3之範圍內之pH。在一些更特定的實施例中，醫藥組合物包含HCl，且醫藥組合物在15℃至27℃下具有約5.7之pH。在一些更特定實施例中，醫藥組合物包含HCl，且在15℃至27℃下醫藥組合物具有約5.8之pH。在一些更特定實施例中，醫藥組合物包含HCl，且醫藥組合物在15℃至27℃下具有約5.9之pH。在一些更特定實施例中，醫藥組合物包含HCl，且在15℃至27℃下醫藥組合物具有約6.0之pH。在一些更特定實施例中，醫藥組合物包含HCl，且醫藥組合物在15℃至27℃下具有約6.1之pH。在一些更特定實施例中，醫藥組合物包含HCl，且在15℃至27℃下醫藥組合物具有約6.2之pH。在一些更特定實施例中，醫藥組合物包含HCl，且醫藥組合物在15℃至27℃下具有約6.3之pH。
在一些實施例中，藉由丁二酸調節pH。在一些實施例中，醫藥組合物包含丁二酸，且醫藥組合物在室溫下具有5.5至6.5範圍內之pH。在一些實施例中，醫藥組合物包含丁二酸，且在室溫下醫藥組合物具有在5.7至6.3之範圍內之pH。在一些更特定實施例中，醫藥組合物包含丁二酸，且在室溫下醫藥組合物具有約5.7之pH。在一些更特定實施例中，醫藥組合物包含丁二酸，且在室溫下醫藥組合物具有約5.8之pH。在一些更特定實施例中，醫藥組合物包含丁二酸，且在室溫下醫藥組合物具有約5.9之pH。在一些更特定實施例中，醫藥組合物包含丁二酸，且在室溫下醫藥組合物具有約6.0之pH。在一些更特定實施例中，醫藥組合物包含丁二酸，且在室溫下醫藥組合物具有約6.1之pH。在一些更特定實施例中，醫藥組合物包含丁二酸，且在室溫下醫藥組合物具有約6.2之pH。在一些更特定實施例中，醫藥組合物包含丁二酸，且在室溫下醫藥組合物具有約6.3之pH。
在一些實施例中，醫藥組合物包含丁二酸，且醫藥組合物在15℃至27℃下具有5.5至6.5範圍內之pH。在一些實施例中，醫藥組合物包含丁二酸，且在15℃至27℃下醫藥組合物具有在5.7至6.3之範圍內之pH。在一些更特定的實施例中，醫藥組合物包含丁二酸，且醫藥組合物在15℃至27℃下具有約5.7之pH。在一些更特定實施例中，醫藥組合物包含丁二酸，且在15℃至27℃下醫藥組合物具有約5.8之pH。在一些更特定的實施例中，醫藥組合物包含丁二酸，且醫藥組合物在15℃至27℃下具有約5.9之pH。在一些更特定的實施例中，醫藥組合物包含丁二酸，且醫藥組合物在15℃至27℃下具有約6.0之pH。在一些更特定的實施例中，醫藥組合物包含丁二酸，且醫藥組合物在15℃至27℃下具有約6.1之pH。在一些更特定的實施例中，醫藥組合物包含丁二酸，且醫藥組合物在15℃至27℃下具有約6.2之pH。在一些更特定的實施例中，醫藥組合物包含丁二酸，且醫藥組合物在15℃至27℃下具有約6.3之pH。
在一些特定實施例中，本文所提供之醫藥組合物包含約20 mM L-組胺酸、約0.02% (w/v) TWEEN-20，及約5.5% (w/v)二水合海藻糖或約5% (w/v)蔗糖中之至少一者。在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物進一步包含HCl或丁二酸。在一些實施例中，pH值在室溫下係約6.0。在一些實施例中，在25℃下pH為約6.0。
在一些具體實施例中，本文所提供之醫藥組合物包含約20 mM L-組胺酸、約0.02% (w/v) TWEEN-20、約5.5% (w/v)二水合海藻糖及HCl。在一些實施例中，pH值在室溫下係約6.0。在一些實施例中，在25℃下pH為約6.0。
在一些具體實施例中，本文所提供之醫藥組合物包含約20 mM L-組胺酸、約0.02% (w/v) TWEEN-20、約5% (w/v)蔗糖及HCl。在一些實施例中，pH值在室溫下係約6.0。在一些實施例中，在25℃下pH為約6.0。
在其他具體實施例中，本文所提供之醫藥組合物包含約20 mM L-組胺酸、約0.02% (w/v) TWEEN-20、約5.5% (w/v)二水合海藻糖及丁二酸。在一些實施例中，pH值在室溫下係約6.0。在一些實施例中，在25℃下pH為約6.0。
在一些具體實施例中，本文所提供之醫藥組合物包含約20 mM L-組胺酸、約0.02% (w/v) TWEEN-20、約5% (w/v)蔗糖及丁二酸。在一些實施例中，pH值在室溫下係約6.0。在一些實施例中，在25℃下pH為約6.0。
在一些特定實施例中，ADC係調配於(i)醫藥組合物，其包含約20 mM L-組胺酸、約0.02% (w/v) TWEEN-20、約5.5% (w/v)二水合海藻糖及鹽酸鹽，且其中該醫藥組合物在25℃下之pH為約6.0；或(ii)醫藥組合物，其包含約9 mM組胺酸、約11 mM組胺酸鹽酸鹽單水合物、約0.02% (w/v) TWEEN-20及約5.5% (w/v)二水合海藻糖，且其中該醫藥組合物之pH在25℃下為約6.0。
在一個特定實施例中，本文所提供的包含 (a)抗體藥物結合物，其包含以下結構： 其中L-表示抗體或其抗原結合片段(例如抗連接素-4抗體或其抗原結合片段)且p為1至10；且 (b)醫藥學上可接受之賦形劑，其包含約20 mM L-組胺酸、約0.02% (w/v) TWEEN-20、約5.5%(w/v)二水合海藻糖及HCl，其中抗體藥物結合物之濃度係約10 mg/mL，且其中pH值在25℃下係約6.0。
在另一個特定實施例中，本文所提供之醫藥組合物包含： (a)抗體藥物結合物，其包含以下結構： 其中L-表示抗體或其抗原結合片段(例如抗連接素-4抗體或其抗原結合片段)且p為1至10；及 (b)醫藥學上可接受之賦形劑，其包含約20 mM L-組胺酸、約0.02% (w/v) TWEEN-20、約5.5% (w/v)二水合海藻糖及琥珀酸， 其中抗體藥物結合物之濃度為約10 mg/mL，且其中在25℃下pH為約6.0。
在又另一特定實施例中，本文所提供之醫藥組合物包含： (a)抗體藥物結合物，其包含以下結構： 其中L-表示抗體或其抗原結合片段(例如抗連接素-4抗體或其抗原結合片段)且p為1至10；及 (b)醫藥學上可接受之賦形劑，其包含約20 mM L-組胺酸、約0.02% (w/v) TWEEN-20、約5.0% (w/v)蔗糖及HCl， 其中抗體藥物結合物之濃度為約10 mg/mL，且其中在25℃下pH為約6.0。
儘管提供某些數字(及其數值範圍)，但應理解，在某些實施例中，亦涵蓋在該數字(或數值範圍)之例如2%、5%、10%、15%或20%以內的數值。
媒劑中之主溶劑在本質上可為水性或非水性的。另外，媒劑可含有用於調節或維持醫藥組合物之pH、容積滲透濃度、黏度、無菌或穩定性的醫藥學上可接受之其他賦形劑。在某些實施例中，醫藥學上可接受之媒劑為水性緩衝液。在其他實施例中，媒劑包含例如氯化鈉及/或檸檬酸鈉。
本文所提供之醫藥組合物可含有用於調節或維持如本文所描述之抗體藥物結合物及/或另一種藥劑之釋放速率的醫藥學上可接受之又其他調配劑。此類調配劑包括熟習製備持續釋放型調配物之技術者已知之彼等物質。關於醫藥學上及生理學上可接受之調配劑的其他參考文獻，參見例如Remington's Pharmaceutical Sciences, 第18版(1990, Mack Publishing Co., Easton, Pa. 18042), 第1435-1712頁, The Merck Index, 第12版(1996, Merck Publishing Group, Whitehouse, NJ)；及Pharmaceutical Principles of Solid Dosage Forms (1993, Technonic Publishing Co., Inc., Lancaster, Pa.)。適合於投與之額外醫藥組合物為此項技術中已知的，且可應用於本文提供之方法及組合物中。
在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物呈液體形式。在其他實施例中，本文所提供之醫藥組合物被凍乾。
醫藥組合物經調配可與其預定的投藥途徑相容。因此，醫藥組合物包括適合於藉由包括以下之途徑投與之賦形劑：非經腸(例如皮下(s.c.)、靜脈內、肌肉內或腹膜內)、皮內、經口(例如攝取)、吸入、腔內、顱內及經皮(局部)。本文闡述其他例示性投與途徑。
醫藥組合物可呈無菌可注射水性或油性懸浮液形式。此懸浮液可使用本文所揭示或熟習此項技術者已知之適合分散劑或濕潤劑及懸浮劑調配。無菌可注射製劑亦可為存在於非經腸可接受之無毒稀釋劑或溶劑中的無菌可注射溶液或懸浮液，例如1,3-丁二醇中之溶液。可採用的可接受之稀釋劑、溶劑及分散介質包括水、林格氏溶液(Ringer's solution)、等張氯化鈉溶液、Cremophor EL™ (BASF，Parsippany，NJ)或磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)、乙醇、多元醇(例如丙三醇、丙二醇及液體聚乙二醇)及其適合混合物。另外，無菌不揮發性油習用作溶劑或懸浮介質。出於此目的，可採用任何溫和的不揮發性油，包括合成單甘油酯或二甘油酯。此外，諸如油酸之脂肪酸可用於製備可注射劑。特定可注射調配物之延長吸收可藉由包括延遲吸收之藥劑(例如單硬脂酸鋁或明膠)來達成。
在一個實施例中，本文所提供之醫藥組合物可藉由注射、輸注或植入、以非經腸方式投與，用於局部或全身投與。如本文所用，非經腸投藥包括靜脈內、動脈內、腹膜內、鞘內、腦室內、尿道內、胸骨內、顱內、肌肉內、滑膜內及皮下投藥。
在一個實施例中，本文所提供之醫藥組合物可以調配成適於非經腸投與之任何劑型，包括溶液、懸浮液、乳液、微胞、脂質體、微球體、奈米系統，及適於在注射之前溶解於或懸浮於液體中的固體形式。此類劑型可根據熟習醫藥科學技術者已知之習知方法製備(參見例如Remington, The Science and Practice of Pharmacy, 同上)。
在一個實施例中，意欲非經腸投與之醫藥組合物可包括一或多種醫藥學上可接受之載劑及賦形劑，包括(但不限於)水性媒劑、水混溶性媒劑、非水性媒劑、對抗微生物生長之抗微生物劑或防腐劑、穩定劑、溶解度增強劑、等張劑、緩衝劑、抗氧化劑、局部麻醉劑、懸浮劑及分散劑、濕潤劑或乳化劑、錯合劑、鉗合劑或螯合劑、低溫保護劑、凍乾保護劑、增稠劑、pH調節劑及惰性氣體。
在一個實施例中，適合的水性媒劑包括(但不限於)水、鹽水、生理鹽水或磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)、氯化鈉注射液、林格氏注射液、等張右旋糖注射液、無菌水注射液、右旋糖及乳酸化林格氏注射液。非水性媒劑包括(但不限於)植物來源之不揮發油，蓖麻油、玉米油、棉籽油、橄欖油、花生油、薄荷油、紅花油、芝麻油、大豆油、氫化植物油、氫化大豆油，及椰子油之中鏈三酸甘油酯，及棕櫚籽油。水混溶性媒劑包括(但不限於)乙醇、1,3-丁二醇、液體聚乙二醇(例如聚乙二醇300及聚乙二醇400)、丙二醇、甘油、N-甲基-2-吡咯啶酮、N,N-二甲基乙醯胺及二甲亞碸。
在一個實施例中，適合的抗微生物劑或防腐劑包括(但不限於)苯酚、甲酚、汞劑、苯甲醇、氯丁醇、對羥基苯甲酸甲酯及對羥基苯甲酸丙酯、硫柳汞(thimerosal)、苯紮氯銨(benzalkonium chloride)(例如苄索氯銨(benzethonium chloride))、對羥基苯甲酸甲酯及對羥基苯甲酸丙酯，以及山梨酸。適合之等滲劑包括但不限於氯化鈉、甘油及右旋糖。合適之緩衝劑包括(但不限於)磷酸鹽及檸檬酸鹽。合適之抗氧化劑為如本文所描述之彼等抗氧化劑，包括亞硫酸氫鹽及偏亞硫酸氫鈉。合適之局部麻醉劑包括(但不限於)鹽酸普魯卡因(procaine hydrochloride)。合適之懸浮劑及分散劑為如本文所描述之彼等懸浮劑及分散劑，包括羧甲基纖維素鈉、羥丙基甲基纖維素及聚乙烯吡咯啶酮。適合的乳化劑包括本文中所描述之彼等物，包括聚氧化乙烯去水山梨醇單月桂酸酯、聚氧化乙烯去水山梨醇單油酸酯80及油酸三乙醇胺。合適之鉗合劑或螯合劑包括(但不限於) EDTA。合適之pH值調節劑包括(但不限於)氫氧化鈉、鹽酸、檸檬酸及乳酸。適合的錯合劑包括(但不限於)環糊精，包括α-環糊精、β-環糊精、羥丙基-β-環糊精、磺基丁醚-β-環糊精及磺基丁醚7-β-環糊精(CAPTISOL ®, CyDex, Lenexa, KS)。
在一個實施例中，本文所提供之醫藥組合物可調配成以單次劑量或多次劑量投與。單次劑量調配物係封裝於安瓿、小瓶或注射器中。多次劑量非經腸調配物可含有抑制細菌或抑制真菌濃度之抗微生物劑。如此項技術中已知及實踐，所有非經腸調配物必須為無菌的。
在一個實施例中，醫藥組合物係以即用型無菌溶液形式提供。在另一個另一實施例中，醫藥組合物以待在使用之前用媒劑復水之無菌乾式可溶產品形式提供，包括凍乾粉末及皮下錠劑。在又一實施例中，醫藥組合物係以即用型無菌懸浮液形式提供。在又一實施例中，醫藥組合物係以待在使用之前用媒劑復水之無菌乾式不可溶產品形式提供。在再一實施例中，醫藥組合物係以即用型無菌乳液形式提供。
在一個實施例中，本文所提供之醫藥組合物可調配為速釋型或調節釋放劑型，包括延遲釋放、持續釋放、脈衝釋放、控制釋放、靶向釋放及程式化釋放形式。
適於藉由添加水來製備水性懸浮液之可分散散劑及粒劑提供與分散劑或濕潤劑、懸浮劑及一或多種防腐劑摻合之活性成分。適合的分散劑或潤濕劑及懸浮劑例示於本文中。
醫藥組合物亦可包括賦形劑以保護組合物免於快速降解或自身體排出，諸如控制釋放型調配物，包括植入物、脂質體、水凝膠、前藥及微囊封遞送系統。舉例而言，時間延遲材料，諸如單硬脂酸甘油酯或硬脂酸甘油酯，可單獨或與蠟組合使用。可注射醫藥組合物之延長吸收可藉由包括吸收延遲劑(例如單硬脂酸鋁或明膠)來達成。可藉由例如對羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗壞血酸、硫柳汞及其類似物之各種抗微生物及抗真菌劑來實現阻止微生物作用。
本文所提供之醫藥組合物可在-80℃、4℃、25℃或37℃下儲存。
可藉由冷凍乾燥本文所提供之液體醫藥組合物來製備凍乾組合物。在一個特定實施例中，本文所提供之醫藥組合物為凍乾醫藥組合物。在一些實施例中，醫藥調配物為凍乾粉末，其可經復原以便作為溶液、乳液及其他混合物投與。其亦可復原且調配成固體或凝膠形式。
在一些實施例中，本文所提供之凍乾調配物的製備包括將經調配的本體溶液(bulk solution)分批凍乾、無菌過濾，裝填於小瓶中，將小瓶在冷凍乾燥室中冷凍，隨後凍乾、塞緊及蓋緊。
凍乾器可用於製備凍乾調配物。舉例而言，可採用VirTis Genesis型號EL試驗單元。該單元併有腔室，該腔室具有三個處理擱架(至約0.4平方公尺之總可用擱架面積)、外部冷凝器及機械真空泵系統。級聯的機械製冷允許擱板冷卻至-70℃或更低，且允許外部冷凝器冷卻至-90℃或更低。自動地將擱板溫度及箱壓力分別控制至+/- 0.5℃及+/- 2微米(毫托)。該單元配備有真空電容壓力計、Pirani真空計、壓力轉換器(量測範圍：0至1個大氣壓)及相對濕度感測器。
凍乾粉末可藉由將本文所提供的抗體藥物結合物或其醫藥學上可接受的衍生物溶解於適合溶劑中來製備。在一些實施例中，凍乾粉末為無菌的。隨後無菌過濾溶液，繼而在熟習此項技術者已知之標準條件下凍乾，以提供所要調配物。在一個實施例中，將所得溶液分配至小瓶中凍乾。各小瓶含有單次劑量或多次劑量之抗體藥物結合物。凍乾粉末可在適當條件下儲存，諸如在約4℃至室溫下儲存。
用注射用水復原此凍乾粉末得到用於非經腸投藥之調配物。復原時，將凍乾粉末添加至無菌水或其他適合賦形劑中。此量可憑經驗確定且根據特定需要進行調整。
例示性復原程序說明如下：(1)將5 mL或3 mL注射器裝配一個18或20號針並用注射用水(WFI)級水填充該注射器；(2)使用注射器刻度量測適量之WFI，確保注射器不含氣泡；(3)將針插入穿過橡膠塞；(4)將注射器之全部內容物沿瓶壁向下分配至容器中，移出注射器及針且放入利器容器中；(4)持續渦旋小瓶以小心地溶解整個小瓶內容物直至完全復原為止(例如約20-40秒)，並使可導致起泡的對蛋白質溶液之過多攪動減到最少。
在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物係以無菌乾燥凍乾粉末或無水濃縮物形式、於氣密密封式容器中供應且可以用例如水或鹽水復原至適於投與個體的濃度。在某些實施例中，抗體藥物結合物係以乾燥無菌凍乾粉末形式以以下之單位劑量在氣密密封式容器中供應：至少0.1 mg、至少0.5 mg、至少1 mg、至少2 mg或至少3 mg，諸如至少5 mg、至少10 mg、至少15 mg、至少25 mg、至少30 mg、至少35 mg、至少45 mg、至少50 mg、至少60 mg、至少75 mg、至少80 mg、至少85 mg、至少90 mg、至少95 mg或至少100 mg。凍乾之抗體藥物結合物可在2與8℃之間儲存於其初始容器中，且抗體藥物結合物可在復原後12小時內，諸如6小時內、5小時內、3小時內或1小時內投與。在一替代實施例中，包含本文提供之抗體藥物結合物之醫藥組合物以液體形式在氣密密封式容器中供應，該容器指示抗體藥物結合物之數量及濃度。在某些實施例中，抗體藥物結合物之液體形式係以至少0.1 mg/ml、至少0.5 mg/ml、至少1 mg/ml、至少5 mg/ml、至少10 mg/ml、至少15 mg/ml、至少25 mg/ml、至少30 mg/ml、至少40 mg/ml、至少50 mg/ml、至少60 mg/ml、至少70 mg/ml、至少80 mg/ml、至少90 mg/ml或至少100 mg/ml、在氣密密封式容器中供應。
醫藥組合物的其他實施例已描述於美國專利第8,637,642號及國際申請案第PCT/US2019/056214號(公開案第WO2020/117373號)，該兩者以其全文引用之方式併入本文中。 5.5 組合治療方法
將本文所提供之醫藥組合物與化學療法或輻射或兩者組合使用來抑制腫瘤細胞生長的方法包含在開始化學療法或輻射療法以及其任何組合之前、期間或之後(亦即，在開始化學療法及/或輻射療法之前及期間、之前及之後、期間及之後，或之前、期間及之後)，投與本發明醫藥組合物。視治療方案及特定患者需要而定，以將提供最有效治療且最終延長患者生命之方式執行該方法。此類組合療法的其他實施例已描述於美國專利第8,637,642號及國際申請案第PCT/US2019/056214號(公開案第WO2020/117373號)，該兩者以其全文引用之方式併入本文中。 5.6 免疫檢查點抑制劑之劑量
在一些實施例中，使用本文所描述之醫藥組合物治療之患者尚未用檢查點抑制劑治療。檢查點抑制劑之排除量可藉由標準臨床技術確定。 5.7  ADC 用於該等方法的劑量
在一些實施例中，預防劑或治療劑(例如本文所提供之抗體藥物結合物)或本文所提供之醫藥組合物之有效預防及/或治療癌症的量可藉由標準臨床技術確定。
在一些實施例中，方法中的ADC (其各種劑量描述於本章節(章節5.7))為恩諾單抗維多汀(EV)。
相應地，為了預防及/或治療癌症，可向人類投與一定劑量之含有抗體藥物結合物的醫藥組合物，該劑量產生的血清效價為約0.1 μg/ml至約450 μg/ml且在一些實施例中為至少0.1 μg/ml、至少0.2 μg/ml、至少0.4 μg/ml、至少0.5 μg/ml、至少0.6 μg/ml、至少0.8 μg/ml、至少1 μg/ml、至少1.5 μg/ml，諸如至少2 μg/ml、至少5 μg/ml、至少10 μg/ml、至少15 μg/ml、至少20 μg/ml、至少25 μg/ml、至少30 μg/ml、至少35 μg/ml、至少40 μg/ml、至少50 μg/ml、至少75 μg/ml、至少100 μg/ml、至少125 μg/ml、至少150 μg/ml、至少200 μg/ml、至少250 μg/ml、至少300 μg/ml、至少350 μg/ml、至少400 μg/ml或至少450 μg/ml。應瞭解，調配物的精確使用劑量亦視投藥途徑及個體之癌症嚴重程度而定，且應根據從醫者之判斷及各患者的情形決定。
有效劑量可自來源於活體外或動物模型測試系統之劑量反應曲線外推得到。
對於包含本文提供之抗體藥物結合物之醫藥組合物，向患者投與之抗體藥物結合物之劑量通常為0.1 mg/kg至100 mg/kg個體之體重。在一些實施例中，向患者投與之劑量為約1 mg/kg至約75 mg/kg個體體重。在一些實施例中，投與患者的劑量在每公斤個體體重1 mg與20 mg之間，諸如每公斤個體體重1 mg至5 mg。在一些實施例中，投與患者之劑量為每公斤個體體重約0.5 mg。在一些實施例中，投與患者之劑量為每公斤個體體重約0.75 mg。在一些實施例中，向患者投與之劑量為約1 mg/kg個體之體重。在一些實施例中，投與患者之劑量為每公斤個體體重約1.25 mg。在一些實施例中，投與患者之劑量為每公斤個體體重約1.5 mg。在一些實施例中，投與患者之劑量為每公斤個體體重約2 mg。在一些實施例中，投與患者之劑量為每公斤個體體重約2.5 mg。在一些實施例中，投與患者之劑量為每公斤個體體重約3 mg。在一些實施例中，投與患者之劑量為每公斤個體體重約3.5 mg。在一些實施例中，投與患者之劑量為每公斤個體體重約4 mg。在一些實施例中，投與患者之劑量為每公斤個體體重約4.5 mg。在一些實施例中，投與患者之劑量為每公斤個體體重約5 mg。在一些實施例中，投與患者之劑量為每公斤個體體重約5.5 mg。在一些實施例中，投與患者之劑量為每公斤個體體重約6 mg。在一些實施例中，投與患者之劑量為每公斤個體體重約6.5 mg。在一些實施例中，投與患者之劑量為每公斤個體體重約7 mg。在一些實施例中，投與患者之劑量為每公斤個體體重約7.5 mg。在一些實施例中，向患者投與之劑量為約8 mg/kg個體體重。在一些實施例中，投與患者之劑量為每公斤個體體重約8.5 mg。
在一些實施例中，調配成本文所提供之醫藥組合物的抗體藥物結合物係基於患者在基線時之實際體重投與，且除非患者體重相對於前一週期之基線變化≥10%或滿足劑量調整準則，否則劑量將不變。在一些實施例中，除非患者體重大於100 kg，否則將使用實際體重，在此類情況下，劑量將基於100 kg體重計算。在一些實施例中，對於接受1.00 mg/kg劑量水準之患者而言，最大劑量係100 mg；且對於接受1.25 mg/kg劑量水準之患者而言，最大劑量係125 mg。
在一個實施例中，將約100 mg/kg或更低、約75 mg/kg或更低、約50 mg/kg或更低、約25 mg/kg或更低、約10 mg/kg或更低、約5 mg/kg或更低、約1.5 mg/kg或更低、約1.25 mg/kg或更低、約1 mg/kg或更低、約0.75 mg/kg或更低、約0.5 mg/kg或更低、或約0.1 mg/kg或更低的調配成本發明醫藥組合物之抗體藥物結合物投與5次、4次、3次、2次或1次以治療癌症。在一些實施例中，包含本文所提供之抗體藥物結合物的醫藥組合物投與約1至約12次，其中該等劑量可視需要投與，例如每週一次、兩週一次、每月一次、兩月一次、三月一次等，如醫師所決定。在一些實施例中，可以較大頻率(例如3-6次)投與較低劑量(例如0.1-15 mg/kg)。在其他實施例中，較高劑量(例如25-100 mg/kg)可以不大頻繁地投與(例如1-3次)。
在一些實施例中，對每一個兩週週期(例如約14天)持續一定時段(例如一年)，向患者投與單次劑量之調配於本文所提供之醫藥組合物中之抗體藥物結合物1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或26次，以預防及/或治療癌症，其中劑量係選自由以下組成之群：約0.1 mg/kg、約0.5 mg/kg、約0.75 mg/kg、約1 mg/kg、約1.25 mg/kg、約1.5 mg/kg、約2 mg/kg、約2.5 mg/kg、約3 mg/kg、約4 mg/kg、約5 mg/kg、約10 mg/kg、約15 mg/kg、約20 mg/kg、約25 mg/kg、約30 mg/kg、約35 mg/kg、約40 mg/kg、約45 mg/kg、約50 mg/kg、約55 mg/kg、約60 mg/kg、約65 mg/kg、約70 mg/kg、約75 mg/kg、約80 mg/kg、約85 mg/kg、約90 mg/kg、約95 mg/kg、約100 mg/kg或其組合(亦即，每一個每月一次劑量可相同或可不相同)。
在一些實施例中，對每一個三週週期(例如約21天)持續一定時段(例如一年)，向患者投與單次劑量之調配於本文所提供之醫藥組合物中之抗體藥物結合物1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或26次以預防及/或治療癌症，其中劑量係選自由以下組成之群：約0.1 mg/kg、約0.5 mg/kg、約0.75 mg/kg、約1 mg/kg、約1.25 mg/kg、約1.5 mg/kg、約2 mg/kg、約2.5 mg/kg、約3 mg/kg、約4 mg/kg、約5 mg/kg、約10 mg/kg、約15 mg/kg、約20 mg/kg、約25 mg/kg、約30 mg/kg、約35 mg/kg、約40 mg/kg、約45 mg/kg、約50 mg/kg、約55 mg/kg、約60 mg/kg、約65 mg/kg、約70 mg/kg、約75 mg/kg、約80 mg/kg、約85 mg/kg、約90 mg/kg、約95 mg/kg、約100 mg/kg或其組合(亦即，每一個每月一次劑量可相同或可不相同)。
在一些實施例中，對每一個四週週期(例如約28天)持續一定時段(例如一年)，向患者投與單次劑量之調配於本文所提供之醫藥組合物中之抗體藥物結合物1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或26次以預防及/或治療癌症，其中劑量係選自由以下組成之群：約0.1 mg/kg、約0.5 mg/kg、約0.75 mg/kg、約1 mg/kg、約1.25 mg/kg、約1.5 mg/kg、約2 mg/kg、約2.5 mg/kg、約3 mg/kg、約4 mg/kg、約5 mg/kg、約10 mg/kg、約15 mg/kg、約20 mg/kg、約25 mg/kg、約30 mg/kg、約35 mg/kg、約40 mg/kg、約45 mg/kg、約50 mg/kg、約55 mg/kg、約60 mg/kg、約65 mg/kg、約70 mg/kg、約75 mg/kg、約80 mg/kg、約85 mg/kg、約90 mg/kg、約95 mg/kg、約100 mg/kg或其組合(亦即，每一個每月一次劑量可相同或可不相同)。
在另一實施例中，以約每月一次(例如約30天)間隔持續一定時段(例如一年)，向患者投與單次劑量之調配於本文所提供之醫藥組合物中之抗體藥物結合物1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12次以預防及/或治療癌症，其中劑量係選自由以下組成之群：約0.1 mg/kg、約0.5 mg/kg、約0.75 mg/kg、約1 mg/kg、約1.25 mg/kg、約1.5 mg/kg、約2 mg/kg、約2.5 mg/kg、約3 mg/kg、約4 mg/kg、約5 mg/kg、約10 mg/kg、約15 mg/kg、約20 mg/kg、約25 mg/kg、約30 mg/kg、約35 mg/kg、約40 mg/kg、約45 mg/kg、約50 mg/kg、約55 mg/kg、約60 mg/kg、約65 mg/kg、約70 mg/kg、約75 mg/kg、約80 mg/kg、約85 mg/kg、約90 mg/kg、約95 mg/kg、約100 mg/kg或其組合(亦即，每一個每月一次劑量可相同或可不相同)。
在另一實施例中，以約兩個月(例如約60天)時間間隔持續一定時段(例如一年)，向患者投與單次劑量之調配於本文所提供之醫藥組合物中之抗體藥物結合物1、2、3、4、5或6次以預防及/或治療癌症，其中劑量係選自由以下組成之群：約0.1 mg/kg、約0.5 mg/kg、約0.75 mg/kg、約1 mg/kg、約1.25 mg/kg、約1.5 mg/kg、約2 mg/kg、約2.5 mg/kg、約3 mg/kg、約4 mg/kg、約5 mg/kg、約10 mg/kg、約15 mg/kg、約20 mg/kg、約25 mg/kg、約30 mg/kg、約35 mg/kg、約40 mg/kg、約45 mg/kg、約50 mg/kg、約55 mg/kg、約60 mg/kg、約65 mg/kg、約70 mg/kg、約75 mg/kg、約80 mg/kg、約85 mg/kg、約90 mg/kg、約95 mg/kg、約100 mg/kg或其組合(亦即，每一個每月一次劑量可相同或可不相同)。
在又另一實施例中，以約三個月(例如約120天)時間間隔持續一定時段(例如一年)，向患者投與單次劑量之調配於本文所提供之醫藥組合物中之抗體藥物結合物1、2、3或4次以預防及/或治療癌症，其中劑量係選自由以下組成之群：約0.1 mg/kg、約0.5 mg/kg、約0.75 mg/kg、約1 mg/kg、約1.25 mg/kg、約1.5 mg/kg、約2 mg/kg、約2.5 mg/kg、約3 mg/kg、約4 mg/kg、約5 mg/kg、約10 mg/kg、約15 mg/kg、約20 mg/kg、約25 mg/kg、約30 mg/kg、約35 mg/kg、約40 mg/kg、約45 mg/kg、約50 mg/kg、約55 mg/kg、約60 mg/kg、約65 mg/kg、約70 mg/kg、約75 mg/kg、約80 mg/kg、約85 mg/kg、約90 mg/kg、約95 mg/kg、約100 mg/kg或其組合(亦即，每一個每月一次劑量可相同或可不相同)。
在某些實施例中，向患者投與一定劑量之在本文所提供之醫藥組合物中調配的抗體藥物結合物的途徑為鼻內、肌肉內、靜脈內(IV)或其組合，但本文所描述之其他途徑亦為可接受的。各劑量可或可不藉由相同投與途徑與。在一些實施例中，調配成本文所提供之醫藥組合物的抗體藥物結合物可在一或多種其他治療劑之其他劑量的同時或之後，經由多種投藥途徑投與。
在一些更具體實施例中，調配於本文所提供之醫藥組合物中之抗體藥物結合物係以約0.5 mg/kg、約0.75 mg/kg、約1 mg/kg、約1.25 mg/kg或約1.5 mg/kg個體之體重之劑量藉由靜脈內(IV)注射或輸注投與。
在一些更特定的實施例中，調配成本文所提供之醫藥組合物的抗體藥物結合物係按每三週之週期，以每公斤個體之體重約0.5 mg、約0.75 mg、約1 mg、約1.25 mg或約1.5 mg劑量藉由靜脈內(IV)注射或輸注投與。
在一些實施例中，調配於醫藥組合物中之抗體藥物結合物係藉由在每三週週期之第1及8天進行靜脈內(IV)注射或輸注投與。在一些實施例中，調配於醫藥組合物中之抗體藥物結合物係在每三週週期之第1天及第8天藉由靜脈內(IV)注射投與。在一些實施例中，調配於醫藥組合物中之抗體藥物結合物在每三週週期之第1天及第8天藉由靜脈內(IV)輸注投與。在一些實施例中，調配於醫藥組合物中之抗體藥物結合物係在每三週週期之第1天及第8天藉由靜脈內(IV)注射或輸注投與3個週期。在一些實施例中，調配於醫藥組合物中之抗體藥物結合物係在每三週週期之第1天及第8天藉由靜脈內(IV)注射投與3個週期。在一些實施例中，調配於醫藥組合物中之抗體藥物結合物係在每三週週期之第1天及第8天藉由靜脈內(IV)輸注投與3個週期。
在一些更特定的實施例中，調配成本文所提供之醫藥組合物的抗體藥物結合物係以每公斤個體體重約0.5 mg、約0.75 mg、約1 mg、約1.25 mg或約1.5 mg劑量，藉由靜脈內(IV)注射或輸注約30分鐘投與，每三週循環投與兩次。在一些實施例中，調配成本文所提供之醫藥組合物的抗體藥物結合物係在每三週之週期的第1天及第8天，藉由靜脈內(IV)注射或輸注經約30分鐘投與。在一些實施例中，向在以另外癌症療法治療期間或之後已顯示疾病進展或復發之患有尿路上皮癌或膀胱癌之患者投與抗體藥物結合物。在一些實施例中，向在以另外癌症療法治療期間或之後已顯示疾病進展或復發之患有尿路上皮癌或膀胱癌之患者投與抗體藥物結合物。在一些實施例中，向在以另外癌症療法治療期間或之後已顯示疾病進展或復發之患有尿路上皮癌或膀胱癌之患者投與抗體藥物結合物。在一些實施例中，方法中的ADC (其各種劑量描述於本段落)為恩諾單抗維多汀(EV)。
在其他更特定的實施例中，調配成本文所提供之醫藥組合物的抗體藥物結合物係在每四週循環期間、以每公斤個體體重約0.5 mg、約0.75 mg、約1 mg、約1.25 mg或約1.5 mg的劑量、藉由靜脈內(IV)注射或輸注約30分鐘投與三次。在一些實施例中，調配於醫藥組合物中之抗體藥物結合物係在每28天(四週)週期之第1、8及15天投與。在一些實施例中，調配成醫藥組合物之抗體藥物結合物係在每28天(四週)週期之第1天、第8天及第15天，藉由靜脈內(IV)注射或輸注約30分鐘來投與。在一些實施例中，向在以另外癌症療法治療期間或之後已顯示疾病進展或復發之患有尿路上皮癌或膀胱癌之患者投與抗體藥物結合物。在一些實施例中，方法中的ADC (其各種劑量描述於本段落)為恩諾單抗維多汀(EV)。
在本文所提供之各種方法之一些實施例中，ADC係以以下之劑量投與：約0.25至約10 mg/kg個體體重、約0.25至約5 mg/kg個體體重、約0.25至約2.5 mg/kg個體體重、約0.25至約1.25 mg/kg個體體重、約0.5至約10 mg/kg個體體重、約0.5至約5 mg/kg個體體重、約0.5至約2.5 mg/kg個體體重、約0.5至約1.25 mg/kg個體體重、約0.75至約10 mg/kg個體體重、約0.75至約5 mg/kg個體體重、約0.75至約2.5 mg/kg個體體重或約0.75至約1.25 mg/kg個體體重。在一些實施例中，ADC係以約1至約10 mg/kg個體體重之劑量投與。在某些實施例中，ADC係以每公斤個體體重約1至約5 mg之劑量投與。在一些實施例中，ADC係以每公斤個體體重約1至約2.5 mg的劑量投與。在其他實施例中，ADC係以每公斤個體體重約1至約1.25 mg的劑量投與。在一些實施例中，ADC係以每公斤個體體重約0.25 mg的劑量投與。在一些實施例中，ADC係以每公斤個體體重約0.5 mg的劑量投與。在一些實施例中，ADC係以每公斤個體體重約0.75 mg的劑量投與。在一些實施例中，ADC係以每公斤個體體重約1.0 mg的劑量投與。在一些實施例中，ADC係以每公斤個體體重約1.25 mg的劑量投與。在一些實施例中，ADC係以每公斤個體體重約1.5 mg的劑量投與。在一些實施例中，ADC係以每公斤個體體重約1.75 mg的劑量投與。在一些實施例中，ADC係以每公斤個體體重約2.0 mg的劑量投與。在一些實施例中，ADC係以每公斤個體體重約2.25 mg的劑量投與。在一些實施例中，ADC係以每公斤個體體重約2.5 mg的劑量投與。
在本文所提供之各種方法之某些實施例中，ADC係以以下之劑量投與：0.25至10 mg/kg個體體重、0.25至5 mg/kg個體體重、0.25至2.5 mg/kg個體體重、0.25至1.25 mg/kg個體體重、0.5至10 mg/kg個體體重、0.5至5 mg/kg個體體重、0.5至2.5 mg/kg個體體重、0.5至1.25 mg/kg個體體重、0.75至10 mg/kg個體體重、0.75至5 mg/kg個體體重、0.75至2.5 mg/kg個體體重或0.75至1.25 mg/kg個體體重。在一些實施例中，ADC係以1至10 mg/kg個體體重之劑量投與。在某些實施例中，ADC係以每公斤個體體重1至5 mg之劑量投與。在其他實施例中，ADC係以每公斤個體體重1至2.5 mg的劑量投與。在其他實施例中，ADC係以每公斤個體體重1至1.25 mg的劑量投與。在一些實施例中，ADC係以每公斤個體體重0.25 mg的劑量投與。在一些實施例中，ADC係以每公斤個體體重0.5 mg的劑量投與。在一些實施例中，ADC係以每公斤個體體重0.75 mg的劑量投與。在一些實施例中，ADC係以每公斤個體體重1.0 mg的劑量投與。在一些實施例中，ADC係以每公斤個體體重1.25 mg的劑量投與。在一些實施例中，ADC係以每公斤個體體重1.5 mg的劑量投與。在一些實施例中，ADC係以每公斤個體體重1.75 mg的劑量投與。在一些實施例中，ADC係以每公斤個體體重2.0 mg的劑量投與。在一些實施例中，ADC係以每公斤個體體重2.25 mg的劑量投與。在一些實施例中，ADC係以每公斤個體體重2.5 mg的劑量投與。
在本文所提供之各種方法(包括需要第一及第二劑量之彼等方法)之一些實施例中，第一ADC劑量為以下之劑量：約0.25至約10 mg/kg個體體重、約0.25至約5 mg/kg個體體重、約0.25至約2.5 mg/kg個體體重、約0.25至約1.25 mg/kg個體體重、約0.5至約10 mg/kg個體體重、約0.5至約5 mg/kg個體體重、約0.5至約2.5 mg/kg個體體重、約0.5至約1.25 mg/kg個體體重、約0.75至約10 mg/kg個體體重、約0.75至約5 mg/kg個體體重、約0.75至約2.5 mg/kg個體體重或約0.75至約1.25 mg/kg個體體重。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，ADC的第一次劑量為每公斤個體體重約1至約10 mg的劑量。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，ADC的第一次劑量為每公斤個體體重約1至約5 mg的劑量。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，ADC的第一次劑量為每公斤個體體重約1至約2.5 mg的劑量。在本文所提供之各種方法(包括需要第一及第二劑量之彼等方法)之一些實施例中，第一ADC劑量為約1至約1.25 mg/kg個體體重之劑量。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，ADC的第一次劑量為每公斤個體體重約0.25 mg的劑量。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，ADC的第一次劑量為每公斤個體體重約0.5 mg的劑量。在一些實施例中，第一ADC劑量為約0.75 mg/kg個體體重之劑量。在一些實施例中，ADC的第一次劑量為每公斤個體體重約1.0 mg的劑量。在一些實施例中，ADC的第一次劑量為每公斤個體體重約1.25 mg的劑量。在一些實施例中，ADC的第一次劑量為每公斤個體體重約1.5 mg的劑量。在一些實施例中，ADC的第一次劑量為每公斤個體體重約1.75 mg的劑量。在一些實施例中，ADC的第一次劑量為每公斤個體體重約2.0 mg的劑量。在一些實施例中，ADC的第一次劑量為每公斤個體體重約2.25 mg的劑量。在一些實施例中，ADC的第一次劑量為每公斤個體體重為或約2.5 mg的劑量。
在本文所提供之各種方法(包括需要第一及第二劑量之彼等方法)之某些實施例中，第一ADC劑量為以下之劑量：0.25至10 mg/kg個體體重、0.25至5 mg/kg個體體重、0.25至2.5 mg/kg個體體重、0.25至1.25 mg/kg個體體重、0.5至10 mg/kg個體體重、0.5至5 mg/kg個體體重、0.5至2.5 mg/kg個體體重、0.5至1.25 mg/kg個體體重、0.75至10 mg/kg個體體重、0.75至5 mg/kg個體體重、0.75至2.5 mg/kg個體體重或0.75至1.25 mg/kg個體體重。在本文所提供之各種方法(包括需要第一及第二劑量之彼等方法)之某些實施例中，第一ADC劑量為1至10 mg/kg個體體重之劑量。在本文所提供之各種方法(包括需要第一及第二劑量之彼等方法)之一些實施例中，第一ADC劑量為1至5 mg/kg個體體重之劑量。在本文所提供之各種方法(包括需要第一及第二劑量之彼等方法)之一些實施例中，第一ADC劑量為1至2.5 mg/kg個體體重之劑量。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，ADC的第一次劑量為每公斤個體體重1至1.25 mg的劑量。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，ADC的第一次劑量為每公斤個體體重0.25 mg的劑量。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，ADC的第一次劑量為每公斤個體體重0.5 mg的劑量。在一些實施例中，ADC的第一次劑量為每公斤個體體重0.75 mg的劑量。在一些實施例中，ADC的第一次劑量為每公斤個體體重1.0 mg的劑量。在一些實施例中，ADC的第一次劑量為每公斤個體體重1.25 mg的劑量。在一些實施例中，ADC的第一次劑量為每公斤個體體重1.5 mg的劑量。在一些實施例中，ADC的第一次劑量為每公斤個體體重1.75 mg的劑量。在一些實施例中，ADC的第一次劑量為每公斤個體體重2.0 mg的劑量。在一些實施例中，ADC的第一次劑量為每公斤個體體重2.25 mg的劑量。在一些實施例中，ADC的第一次劑量為每公斤個體體重2.5 mg的劑量。
在本文所提供之各種方法(包括需要第一及第二劑量之彼等方法)之一些實施例中，第二ADC劑量比第一劑量低約0.1 mg/kg至約2 mg/kg個體體重。在本文所提供之各種方法(包括需要第一及第二劑量之彼等方法)之一些實施例中，第二ADC劑量比第一劑量低約0.1 mg/kg個體體重。在本文所提供之各種方法(包括需要第一及第二劑量之彼等方法)之一些實施例中，第二ADC劑量比第一劑量低約0.2 mg/kg個體體重。在本文所提供之各種方法(包括需要第一及第二劑量之彼等方法)之一些實施例中，第二ADC劑量比第一劑量低約0.25 mg/kg個體體重。在本文所提供之各種方法(包括需要第一及第二劑量之彼等方法)之一些實施例中，第二ADC劑量比第一劑量低約0.3 mg/kg個體體重。在本文所提供之各種方法(包括需要第一及第二劑量之彼等方法)之一些實施例中，第二ADC劑量比第一劑量低約0.4 mg/kg個體體重。在本文所提供之各種方法(包括需要第一及第二劑量之彼等方法)之一些實施例中，第二ADC劑量比第一劑量低約0.5 mg/kg個體體重。在本文所提供之各種方法(包括需要第一及第二劑量之彼等方法)之一些實施例中，第二ADC劑量比第一劑量低約0.6 mg/kg個體體重。在本文所提供之各種方法(包括需要第一及第二劑量之彼等方法)之一些實施例中，第二ADC劑量比第一劑量低約0.7 mg/kg個體體重。在本文所提供之各種方法(包括需要第一及第二劑量之彼等方法)之一些實施例中，第二ADC劑量比第一劑量低約0.75 mg/kg個體體重。在本文所提供之各種方法(包括需要第一及第二劑量之彼等方法)之一些實施例中，第二ADC劑量比第一劑量低約0.8 mg/kg個體體重。在本文所提供之各種方法(包括需要第一及第二劑量之彼等方法)之一些實施例中，第二ADC劑量比第一劑量低約0.9 mg/kg個體體重。在本文所提供之各種方法(包括需要第一及第二劑量之彼等方法)之一些實施例中，第二ADC劑量比第一劑量低約1 mg/kg個體體重。在本文所提供之各種方法(包括需要第一及第二劑量之彼等方法)之一些實施例中，第二ADC劑量比第一劑量低約1.1 mg/kg個體體重。在本文所提供之各種方法(包括需要第一及第二劑量之彼等方法)之一些實施例中，第二ADC劑量比第一劑量低約1.2 mg/kg個體體重。在本文所提供之各種方法(包括需要第一及第二劑量之彼等方法)之一些實施例中，第二ADC劑量比第一劑量低約1.25 mg/kg個體體重。在本文所提供之各種方法(包括需要第一及第二劑量之彼等方法)之一些實施例中，第二ADC劑量比第一劑量低約1.3 mg/kg個體體重。在本文所提供之各種方法(包括需要第一及第二劑量之彼等方法)之一些實施例中，第二ADC劑量比第一劑量低約1.4 mg/kg個體體重。在本文所提供之各種方法(包括需要第一及第二劑量之彼等方法)之一些實施例中，第二ADC劑量比第一劑量低約1.5 mg/kg個體體重。在本文所提供之各種方法(包括需要第一及第二劑量之彼等方法)之一些實施例中，第二ADC劑量比第一劑量低約1.6 mg/kg個體體重。在本文所提供之各種方法(包括需要第一及第二劑量之彼等方法)之一些實施例中，第二ADC劑量比第一劑量低約1.7 mg/kg個體體重。在本文所提供之各種方法(包括需要第一及第二劑量之彼等方法)之一些實施例中，第二ADC劑量比第一劑量低約1.75 mg/kg個體體重。在本文所提供之各種方法(包括需要第一及第二劑量之彼等方法)之一些實施例中，第二ADC劑量比第一劑量低約1.8 mg/kg個體體重。在本文所提供之各種方法(包括需要第一及第二劑量之彼等方法)之一些實施例中，第二ADC劑量比第一劑量低約1.9 mg/kg個體體重。在本文所提供之各種方法(包括需要第一及第二劑量之彼等方法)之一些實施例中，第二ADC劑量比第一劑量低約2 mg/kg個體體重。
在本文所提供之各種方法(包括需要第一及第二劑量之彼等方法)之某些實施例中，第二ADC劑量比第一劑量低0.1 mg/kg至2 mg/kg個體體重。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，ADC的第二次劑量比第一次劑量低每公斤個體體重0.1 mg。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，ADC的第二次劑量比第一次劑量低每公斤個體體重0.2 mg。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，ADC的第二次劑量比第一次劑量低每公斤個體體重0.25 mg。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，ADC的第二次劑量比第一次劑量低每公斤個體體重0.3 mg。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，ADC的第二次劑量比第一次劑量低每公斤個體體重0.4 mg。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，ADC的第二次劑量比第一次劑量低每公斤個體體重0.5 mg。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，ADC的第二次劑量比第一次劑量低每公斤個體體重0.6 mg。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，ADC的第二次劑量比第一次劑量低每公斤個體體重0.7 mg。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，ADC的第二次劑量比第一次劑量低每公斤個體體重0.75 mg。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，ADC的第二次劑量比第一次劑量低每公斤個體體重0.8 mg。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，ADC的第二次劑量比第一次劑量低每公斤個體體重0.9 mg。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，ADC的第二次劑量比第一次劑量低每公斤個體體重1 mg。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，ADC的第二次劑量比第一次劑量低每公斤個體體重1.1 mg。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，ADC的第二次劑量比第一次劑量低每公斤個體體重1.2 mg。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，ADC的第二次劑量比第一次劑量低每公斤個體體重1.25 mg。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，ADC的第二次劑量比第一次劑量低每公斤個體體重1.3 mg。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，ADC的第二次劑量比第一次劑量低每公斤個體體重1.4 mg。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，ADC的第二次劑量比第一次劑量低每公斤個體體重1.5 mg。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，ADC的第二次劑量比第一次劑量低每公斤個體體重1.6 mg。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，ADC的第二次劑量比第一次劑量低每公斤個體體重1.7 mg。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，ADC的第二次劑量比第一次劑量低每公斤個體體重1.75 mg。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，ADC的第二次劑量比第一次劑量低每公斤個體體重1.8 mg。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，ADC的第二次劑量比第一次劑量低每公斤個體體重1.9 mg。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，ADC的第二次劑量比第一次劑量低每公斤個體體重2 mg。
在本文所提供之各種方法(包括需要第一及第二劑量之彼等方法)之一些實施例中，第二ADC劑量為以下之劑量：約0.25至約10 mg/kg個體體重、約0.25至約5 mg/kg個體體重、約0.25至約2.5 mg/kg個體體重、約0.25至約1.25 mg/kg個體體重、約0.5至約10 mg/kg個體體重、約0.5至約5 mg/kg個體體重、約0.5至約2.5 mg/kg個體體重、約0.5至約1.25 mg/kg個體體重、約0.75至約10 mg/kg個體體重、約0.75至約5 mg/kg個體體重、約0.75至約2.5 mg/kg個體體重或約0.75至約1.25 mg/kg個體體重。在本文所提供之各種方法(包括需要第一及第二劑量之彼等方法)之一些實施例中，第二ADC劑量為約1至約10 mg/kg個體體重之劑量。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，ADC的第二次劑量為每公斤個體體重約1至約5 mg的劑量。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，第二ADC劑量為每公斤個體體重約1至約2.5 mg的劑量。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，第二ADC劑量為每公斤個體體重約1至約1.25 mg的劑量。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，第二ADC劑量為每公斤個體體重約0.25 mg的劑量。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，第二ADC劑量為每公斤個體體重約0.5 mg的劑量。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，第二ADC劑量為每公斤個體體重約0.75 mg的劑量。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，第二ADC劑量為每公斤個體體重約1.0 mg的劑量。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，第二ADC劑量為每公斤個體體重約1.25 mg的劑量。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，第二ADC劑量為每公斤個體體重約1.5 mg的劑量。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，第二ADC劑量為每公斤個體體重約1.75 mg的劑量。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，第二ADC劑量為每公斤個體體重約2.0 mg的劑量。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，第二ADC劑量為每公斤個體體重約2.25 mg的劑量。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，第二ADC劑量為每公斤個體體重約2.5 mg的劑量。
在本文所提供之各種方法(包括需要第一及第二劑量之彼等方法)之某些實施例中，第二ADC劑量為以下之劑量：0.25至10 mg/kg個體體重、0.25至5 mg/kg個體體重、0.25至2.5 mg/kg個體體重、0.25至1.25 mg/kg個體體重、0.5至10 mg/kg個體體重、0.5至5 mg/kg個體體重、0.5至2.5 mg/kg個體體重、0.5至1.25 mg/kg個體體重、0.75至10 mg/kg個體體重、0.75至5 mg/kg個體體重、0.75至2.5 mg/kg個體體重或0.75至1.25 mg/kg個體體重。在本文所提供之各種方法(包括需要第一及第二劑量之彼等方法)之某些實施例中，第二ADC劑量為1至10 mg/kg個體體重之劑量。在本文所提供之各種方法(包括需要第一及第二劑量之彼等方法)之一些實施例中，第二ADC劑量為1至5 mg/kg個體體重之劑量。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，第二ADC劑量為每公斤個體體重1至2.5 mg的劑量。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，第二ADC劑量為每公斤個體體重1至1.25 mg的劑量。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，第二ADC劑量為每公斤個體體重0.25 mg的劑量。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，第二ADC劑量為每公斤個體體重0.5 mg的劑量。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，第二ADC劑量為每公斤個體體重0.75 mg的劑量。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，第二ADC劑量為每公斤個體體重1.0 mg的劑量。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，第二ADC劑量為每公斤個體體重1.25 mg的劑量。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，第二ADC劑量為每公斤個體體重1.5 mg的劑量。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，第二ADC劑量為每公斤個體體重1.75 mg的劑量。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，第二ADC劑量為每公斤個體體重2.0 mg的劑量。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，第二ADC劑量為每公斤個體體重2.25 mg的劑量。在本文所提供之各種方法(包括需要第一次及第二次劑量的彼等方法)的一些實施例中，第二ADC劑量為每公斤個體體重2.5 mg的劑量。
在本文所提供之各種方法(包括需要第一及第二劑量之彼等方法)之某些實施例中，第二ADC劑量與第一ADC劑量相同。
在本文所提供之方法的一些實施例中，ADC係藉由靜脈內(IV)注射或輸注投與。在一個實施例中，第一ADC劑量係藉由IV注射投與。在另一實施例中，第一ADC劑量係藉由IV輸注投與。在又另一實施例中，第二ADC劑量係藉由IV注射投與。在又另一個實施例中，ADC的第二次劑量係藉由靜脈內注射輸注投與。在一個實施例中，ADC的第一次劑量係藉由靜脈內注射投與且ADC的第二次劑量係藉由靜脈內注射投與。在另一個實施例中，ADC的第一次劑量係藉由靜脈內輸注投與且ADC的第二次劑量係藉由靜脈內注射投與。在又另一實施例中，第二ADC劑量係藉由IV注射投與且第二ADC劑量係藉由IV注射輸注投與。在又另一個實施例中，ADC的第二次劑量係藉由靜脈內注射輸注投與且ADC的第二次劑量係藉由靜脈內注射輸注投與。在一些實施例中，方法中的ADC (其各種劑量描述於本段落)為恩諾單抗維多汀(EV)。
在本文所提供之方法的某些實施例中，ADC係藉由靜脈內注射或輸注、每四週週期投與三次。在本文所提供之方法的一些實施例中，ADC的第一次劑量係藉由靜脈內注射或輸注、每四週週期投與三次。在本文所提供之方法的一些實施例中，ADC的第二次劑量係藉由靜脈內注射或輸注、每四週週期投與三次。在本文所提供之方法的一些實施例中，ADC的第一次劑量係藉由靜脈內注射或輸注、每四週週期投與三次，且ADC的第二次劑量係藉由靜脈內注射或輸注、每四週週期投與三次。在一些實施例中，方法中的ADC (其各種劑量描述於本段落)為恩諾單抗維多汀(EV)。
在本文所提供之方法的一些實施例中，ADC係藉由靜脈內注射或輸注、在每四週週期的第1、8及15天投與。在一些實施例中，ADC的第一次劑量係藉由靜脈內注射或輸注、在每四週週期的第1、8及15天投與。在一些實施例中，ADC的第二次劑量係藉由靜脈內注射或輸注、在每四週週期的第1、8及15天投與。在一些實施例中，ADC的第一次劑量係藉由靜脈內注射或輸注、在每四週週期的第1、8及15天投與，且ADC的第二次劑量係藉由靜脈內注射或輸注、在每四週週期的第1、8及15天投與。在一些實施例中，方法中的ADC (其各種劑量描述於本段落)為恩諾單抗維多汀(EV)。
在本文所提供之方法的某些實施例中，ADC係藉由靜脈內注射或輸注約30分鐘、每四週週期投與三次。在一些實施例中，ADC的第一次劑量係藉由靜脈內注射或輸注約30分鐘、每四週週期投與三次。在一些實施例中，ADC的第二次劑量係藉由靜脈內注射或輸注約30分鐘、每四週週期投與三次。在一些實施例中，ADC的第一次劑量係藉由靜脈內注射或輸注約30分鐘、每四週週期投與三次，且ADC的第二次劑量係藉由靜脈內注射或輸注約30分鐘、每四週週期投與三次。在一些實施例中，方法中的ADC (其各種劑量描述於本段落)為恩諾單抗維多汀(EV)。
在本文所提供之方法的一些實施例中，ADC係藉由靜脈內注射或輸注約30分鐘、在每四週週期的第1、8及15天投與。在本文所提供之方法的一些實施例中，ADC的第一次劑量係靜脈內注射或輸注約30分鐘、在每四週週期的第1、8及15天投與。在本文所提供之方法的一些實施例中，ADC的第二次劑量係藉由靜脈內注射或輸注約30分鐘、在每四週週期的第1、8及15天投與。在本文所提供之方法的一些實施例中，ADC的第一次劑量係藉由靜脈內注射或輸注約30分鐘、在每四週週期的第1、8及15天投與，且ADC的第二次劑量係藉由靜脈內注射或輸注約30分鐘、在每四週週期的第1、8及15天投與。在一些實施例中，方法中的ADC (其各種劑量描述於本段落)為恩諾單抗維多汀(EV)。
在其他更特定實施例中，調配成本文所提供之醫藥組合物的抗體藥物結合物係以每公斤個體體重約1 mg、1.25 mg或約1.5 mg之劑量、藉由靜脈內(IV)注射或輸注約30分鐘、每28天週期投與三次。在一些實施例中，調配成醫藥組合物之抗體藥物結合物係藉由靜脈內(IV)注射或輸注約30分鐘、在每28天週期的第1、8及15天投與。在一些實施例中，該方法進一步包含藉由在每個四週週期中靜脈內(IV)注射或輸注一或多次來投與免疫檢查點抑制劑。在本文所提供之方法的一些實施例中，在28天週期內投與ADC三次。在本文所提供之方法的一些實施例中，在28天週期之第1、8及15天投與ADC。在一些實施例中，方法中的ADC (其各種劑量描述於本段落)為恩諾單抗維多汀(EV)。
在本文所提供之方法的一個特定實施例中，ADC具有以下結構： 其中L-表示該抗體或其抗原結合片段且p為約3至約4，該抗體包含重鏈及輕鏈，該重鏈包含SEQ ID NO: 7之第20個胺基酸(麩胺酸)至第466個胺基酸(離胺酸)範圍之胺基酸序列，且該輕鏈包含SEQ ID NO: 8之第23個胺基酸(天冬胺酸)至第236個胺基酸(半胱胺酸)範圍之胺基酸序列，其中該ADC以約1.25 mg/該個體體重kg的劑量投與，且其中該劑量係在每四週週期之第1、8及15天藉由IV注射或輸注經約30分鐘投與。
在本文所提供之方法的一個特定實施例中，ADC具有以下結構： 其中L-表示該抗體或其抗原結合片段且p為約3至約4，該抗體包含重鏈及輕鏈，該重鏈包含SEQ ID NO: 7之第20個胺基酸(麩胺酸)至第466個胺基酸(離胺酸)範圍之胺基酸序列，且該輕鏈包含SEQ ID NO: 8之第23個胺基酸(天冬胺酸)至第236個胺基酸(半胱胺酸)範圍之胺基酸序列，其中該ADC以約1.25 mg/該個體體重kg的劑量投與，且其中該劑量係在每三週週期之第1天及第8天藉由IV輸注投與。 5.8 生物標記物測定方法
本發明規定，本文所提供之任一種標記物的表現可藉由本領域中已知之各種方法測定。在一些實施例中，標記物的表現可根據自標記物基因轉錄之mRNA的量或相對量測定。在一個實施例中，標記物基因之表現可根據由標記物基因編碼之蛋白質產物的量或相對量測定。在另一實施例中，標記物基因之表現可根據由標記物基因編碼之蛋白質產物所誘導的生物學或化學反應水準來測定。另外，在某些實施例中，標記物基因之表現可根據與標記物基因之表現相關之一或多種基因的表現來測定。
如上文所描述，標記物基因之基因轉錄本(例如mRNA)的水準或量可用作標記物基因之表現量的指示。此項技術中已知多種不同的PCR或qPCR方案，包括本文中例示的彼等方案。在一些實施例中，多種PCR或qPCR方法應用於或經調適而用於測定各種標記物基因的mRNA含量。定量PCR (qPCR)(亦稱為即時PCR)應用於且經調適而用於一些實施例中，原因在於其不僅提供定量的量測結果，而且減少時間及污染。如本文所用，「定量PCR」(或「qPCR」)係指如正發生之PCR擴增進度之直接監測，而無需對反應產物重複取樣。在定量PCR中，反應產物在其產生時可以經由傳訊機制(例如螢光)加以監測且在訊號上升而高於背景水準、但在反應達到平穩階段之前加以追蹤。為達成可偵測或「臨限」螢光水準所需的循環數目在PCR過程開始時直接隨著可擴增的目標濃度而變化，從而允許量測訊號強度，以便即時量測樣品中之靶核酸含量。當應用qPCR測定mRNA表現量時，mRNA逆轉錄為DNA之額外步驟係在qPCR分析之前執行。PCR方法之實例可見於文獻中(Wong等人, BioTechniques 39:75-85 (2005)；D'haene等人, Methods 50:262-270 (2010))，該文獻以全文引用的方式併入本文中。PCR分析之實例亦可見於美國專利第6,927,024號中，其以全文引用的方式併入本文中。RT-PCR方法之實例可見於美國專利第7,122,799號中，其以全文引用的方式併入本文中。螢光原位PCR方法描述於美國專利第7,186,507號中，其以全文引用的方式併入本文中。
在一個特定實施例中，可如下進行qPCR以測定或量測標記物基因之mRNA水準。簡言之，測定標記物基因及一或多種管家基因之複製qPCR反應的平均Ct (循環臨限)值(或在本文中可互換地稱為Cq (定量循環))。標記物基因之平均Ct值接著可以利用以下例示公式以管家基因之Ct值標準化：標記物基因ΔCt = (標記物基因之平均Ct - 管家基因A之平均Ct)。接著可以利用相對標記物基因-ΔCt測定標記物基因mRNA的相對水準，例如使用mRNA表現公式= 2 -ΔCt。關於Ct及Cq值之概述，參見MIQE指南(Bustin等人, The MIQE Guidelines: Minimum Information for Publication of Quantitative Real-Time PCR Experiments, Clinical Chemistry 55:4 (2009))。
為了定量樣本中之標記物基因的RNA轉錄本作為標記物基因之表現的指示，亦可使用此項技術中已知之其他常用方法，包括北方墨點法及原位雜交法(Parker及Barnes, Methods in Molecular Biology 106:247-283 (1999))；RNA酶保護分析(Hod, Biotechniques 13:852-854 (1992))；微陣列法(Hoheisel等人, Nature Reviews Genetics 7:200-210 (2006)；Jaluria等人, Microbial Cell Factories 6:4 (2007))；及聚合酶鏈反應(PCR) (Weis等人, Trends in Genetics 8:263-264 (1992))。RNA原位雜交(ISH)為一種分子生物學技術，其廣泛用於量測及定位細胞(諸如循環腫瘤細胞(CTC))或組織切片內的特定RNA序列，例如信使RNA (mRNA)、非編碼長RNA (lncRNA)，及微RNA (miRNA)，同時保持細胞及組織環境。ISH為一種雜交類型，其使用直接或間接標記之互補DNA或RNA股(諸如探針)結合及定位樣品(特定而言，組織或細胞(原位)的一部分或切片)中的特定核酸，諸如DNA或RNA。探針類型可為雙股DNA (dsDNA)、單股DNA (ssDNA)、單股互補RNA (sscRNA)、信使RNA (mRNA)、微RNA (miRNA)、核糖體RNA、粒線體RNA及/或合成寡核苷酸。術語「螢光原位雜交」或「FISH」係指使用螢光標記的ISH類型。術語「顯色原位雜交」或「CISH」係指使用顯色標記的ISH類型。ISH、FISH及CISH方法已為熟習此項技術者所熟知(參見例如Clinics in Laboratory Medicine 10(1):215-236 (1990)；In situ hybridization. A practical approach, Wilkinson編, IRL Press, Oxford (1992)；Schwarzacher及Heslop-Harrison, Practical in situ hybridization, BIOS Scientific Publishers Ltd, Oxford (2000))。RNA ISH因此對細胞及組織內的基因表現提供空間-時間可視化以及定量。其在研究及診斷方面具有廣泛應用(Hu等人, Biomark. Res. 2(1):1-13, doi：10.1186/2050-7771-2-3 (2014)；Ratan等人, Cureus 9(6):e1325. doi：10.7759/cureus.1325 (2017)；Weier等人, Expert Rev. Mol. Diagn. 2(2):109-119 (2002))。螢光RNA ISH分別使用螢光染料及螢光顯微鏡進行RNA標記及偵測。螢光RNA ISH可提供四種至五種目標序列的多工處理。
替代地，樣本中之標記物基因的RNA轉錄本作為標記物基因表現的指示，可藉由定序技術測定。用於基於定序之基因表現分析的代表性方法包括基因表現系列分析(SAGE)及藉由大規模並行標誌定序(MPSS)進行之基因表現分析。
在一些實施例中，標記物基因之表現可根據標記物基因之RNA轉錄本(包括例如mRNA)在總轉錄RNA池中之相對豐度來測定。標記物基因之RNA轉錄本的此類相對豐度可藉由稱為RNA-seq的下一代定序測定。在RNA-seq程序的一個實例中，將來自不同來源(血液、組織、細胞)的RNA純化，視情況增濃(例如利用寡核苷酸(dT)引子)，轉化為cDNA且片段化。利用隨機片段化cDNA文庫產生數百萬或甚至數十億個短序列讀段。參見Zhao等人, BMC genomics 16: 97 (2015)；Zhao等人,Scientific Reports 8: 4781 (2018)；Shanrong Zhao等人, RNA, 在2020年4月13日提前公開, doi：10.1261/rna.074922.120，其均以全文引用的方式併入本文中。標記物基因之各mRNA轉錄本的表現量係根據標準化後定位之片段總數目測定，該總數目與其豐度水準成正比。幾種標準化方案已知且用於促進使用RNA轉錄本豐度作為用於測定基因表現的參數，包括每百萬每千鹼基的讀段數(RPKM)、每百萬每千鹼基的片段數(FPKM)及/或每百萬每千鹼基的轉錄本數(TPM)。簡言之，RPKM可計算如下：對樣本中之總讀段進行計數且將該數目除以1,000,000 (其為「每百萬」比例因子)；將讀段計數除以「每百萬」比例因子，其針對定序深度進行標準化，得到每百萬讀段數(RPM)；及將RPM值除以基因長度(以千鹼基為單位)，得到RPKM。除用片段置換讀段之外，FPKM與RPKM密切相關。根據單端RNA-seq產生RPKM，其中每個讀段對應於定序的單個片段。根據成對端RNA-seq產生FPKM，其中兩個讀段可對應於單個片段，或若一對中的一個讀段未定位，則一個讀段可對應於單個片段。TPM非常類似於RPKM及FPKM且如下計算：將讀段計數除以各基因之長度(千鹼基)，得到每千鹼基之讀段數(RPK)；對樣品的所有RPK值計數且將此數除以1,000,000，得到「每百萬」比例因子；將RPK值除以「每百萬」比例因子，得到TPM。參見Zhao等人, BMC genomics 16: 97 (2015)；Zhao等人,Scientific Reports 8: 4781 (2018)；Shanrong Zhao等人, RNA, 在2020年4月13日提前公開, doi：10.1261/rna.074922.120，其均以全文引用的方式併入本文中。
在一個實施例中，標記物基因的表現係藉由RNA-seq (例如TPM、RPKM及/或FPKM)測定。在一些實施例中，標記物基因的表現係藉由TPM測定。在一些實施例中，標記物基因的表現係藉由RPKM測定。在一些實施例中，標記物基因的表現係藉由FPKM測定。
如早先所描述，可測定來自個體之樣本中之標記物基因的表現。在一些實施例中，樣品為血液樣品、血清樣品、血漿樣品、體液(例如組織液，包括癌症組織液)，或組織(例如癌症組織或癌症周圍的組織)。在一些實施例中，該樣品為組織樣品。在一些實施例中，組織樣品為自哺乳動物(特定言之，人類)分離或提取之組織部分。在一些實施例中，組織樣品為自哺乳動物(特定言之，人類)分離或提取之細胞群。在一些實施例中，組織樣品為獲自活組織檢查之樣品。在某些實施例中，組織樣品可以獲自個體(包括人類個體)之多種器官。在一些實施例中，樣品獲自患有癌症之個體的器官。在一些實施例中，樣品獲自患有癌症之個體的患癌器官。在其他實施例中，樣品，例如參考樣品獲自患者或第二人類個體之正常器官。
在本文所提供之方法的某些實施例中，組織包括來自膀胱、輸尿管、乳房、肺、大腸、直腸、卵巢、輸卵管、食道、子宮頸、子宮內膜、皮膚、喉、骨髓、唾液腺、腎臟、前列腺、腦、脊髓、胎盤、腎上腺、胰臟、副甲狀腺、腦垂體、睪丸、甲狀腺、脾、扁桃體、胸腺、心臟、胃、小腸、肝臟、骨骼肌、周邊神經、間皮或眼的組織。
在本文所提供之方法的其他實施例中，不同標記物基因的表現可藉由此項技術中已知的多種免疫分析加以偵測，包括免疫組織化學(IHC)分析、免疫墨點法分析、FACS分析及ELISA。
在多種IHC分析中，各種標記物基因之表現可藉由針對由標記物基因編碼之蛋白質產物的抗體偵測。組織切片之IHC染色已表明為評估或偵測樣品中蛋白質之存在的可靠方法。IHC技術利用抗體探測及可視化原位細胞抗原，通常藉由顯色或螢光方法來探測及可視化。初級抗體或抗血清，諸如特異性地靶向由標記物基因編碼之蛋白質產物的多株抗血清及單株抗體，可在IHC分析中用於偵測標記物基因的表現。在一些實施例中，使組織樣品與針對特定目標的初級抗體接觸足以使抗體-目標結合發生的時間。如早先更詳細地論述，該等抗體可藉由用例如放射性標記、螢光標記、半抗原標記(諸如生物素)或酶(諸如辣根過氧化酶或鹼性磷酸酶)直接標記抗體本身來偵測。或者，未標記之初級抗體與對該初級抗體具有特異性的經標記之二級抗體(包含抗血清、多株抗血清或單株抗體)結合使用。IHC方案及套組在此項技術中已熟知且可商購。用於載片製備及IHC處理之自動化系統係可商購的。Leica BOND自動染色儀及Leica Bond Refine偵測系統為此類自動化系統之實例。
在一些實施例中，使用未標記之初級抗體，聯合間接分析中之經標記之二級抗體來執行IHC分析。間接分析係使用兩種抗體偵測組織樣品中由標記物基因編碼的蛋白質產物。首先，將未結合的初級抗體施加至組織(第一層)，與組織樣品中的目標抗原反應。接著，施加經酶標記之二級抗體，其特異性識別初級抗體之抗體同型(第二層)。二級抗體與初級抗體反應，隨後施加受質-色素原。第二層抗體可以用酶(過氧化酶)標記，該過氧化酶與色素原3,3'-二胺基聯苯胺(DAB)反應，在反應位點產生棕色沈澱物。此方法由於潛在的訊號經由訊號放大系統放大而靈敏且通用。
在某些實施例中，為了增加偵測靈敏性，可以使用訊號放大系統。如本文所用，「訊號放大系統」意謂試劑與方法之系統，其可以用於增強來自偵測所結合之初級或二級抗體的訊號。訊號放大系統增強目標蛋白偵測靈敏性、增強所偵測訊號，且減少偵測極限之下邊界。存在若干類型的訊號放大系統，包括酶標記系統及宏觀標記系統。此等系統/方法互不排斥且可以組合使用以得到相加效應。
宏觀標記系統(Macrolabels/macrolabeling)為連接至或併入共同支架中的標記集合，其數目為數十(例如，藻膽蛋白)至數百萬(例如螢光微球體)。支架可以與目標特異性親和試劑(諸如抗體)偶聯，且併入的標記在結合後藉此一起與目標關聯。宏觀標記中的標記可為本文所描述之任一種標記，諸如螢光團、半抗原、酶及/或放射性同位素。在訊號放大系統之一個實施例中，使用經標記之鏈聚合物所結合的二級抗體。聚合物技術係利用可與1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、50個或更多個二級抗體分子連接之經HRP酶標記的惰性「棘」聚葡萄糖分子，從而使系統甚至更靈敏。
基於酶標記系統之訊號放大系統係利用酶(諸如辣根過氧化酶(HRP)或鹼性磷酸酶)之催化活性來原位產生目標蛋白或核酸序列之高密度標記。在一個實施例中，可以使用酪醯胺增強HRP訊號。在此系統中，HRP以酶方式使經標記之酪醯胺衍生物轉化成反應性高、壽命短的酪醯胺基團。經標記之活性酪醯胺基團接著與HRP抗體-目標相互作用位點附近的殘基(主要為蛋白質酪胺酸殘基之苯酚部分)共價偶聯，引起該位點處之標記數目擴增且與擴散相關的訊號局域化損失最小。因此，訊號可以擴增1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、50、75或100倍。如熟習此項技術者所知，酪醯胺上之標記可為本文所描述之任何標記，包括螢光團、酶、半抗原、放射性同位素及/或發光器。亦可利用基於酶之其他反應產生訊號放大。舉例而言，經酶標記之螢光(ELF)訊號放大可利用於鹼性磷酸酶，其中鹼性磷酸酶以酶方式使弱藍色螢光受質(ELF 97磷酸酯)裂解且將其轉化成亮黃色-綠色螢光沈澱物，該沈澱物展現異常大的斯托克位移(Stokes shift)及優良的光穩定性。基於酪醯胺之訊號放大系統與ELF訊號放大可購自例如ThermoFisher Scientific (Waltham, MA USA 02451)。
因此，在本文所提供之方法的一些實施例中，經由使用訊號放大系統的IHC偵測標記物基因之表現量。在一些實施例中，接著對試樣進行對比染色，以鑑別細胞及次細胞元件。
在一些實施例中，由標記物基因編碼之蛋白質產物的表現量亦可經由針對標記物基因所編碼之蛋白質產物的抗體、使用免疫墨點分析加以偵測。在免疫墨點分析之一些實施例中，通常(但不一定)藉由電泳分離出蛋白質且轉印至膜(通常為硝化纖維素或PVDF膜)上。類似於IHC分析，初級抗體或抗血清，諸如特異性地靶向由標記物基因編碼之蛋白質產物的多株抗血清及單株抗體，可用於偵測標記物基因的表現。在一些實施例中，使膜與針對特定目標之初級抗體接觸足以發生抗體-抗原結合的時間且所結合的抗體可以藉由用例如放射性標記、螢光標記、半抗原標記(諸如生物素)或酶(諸如辣根過氧化酶或鹼性磷酸酶)直接標記初級抗體本身來偵測。在其他實施例中，在如上文所描述之間接分析中，結合對初級抗體具有特異性之經標記之二級抗體來使用未標記之初級抗體。如本文所描述，二級抗體可以用例如酶或其他可偵測標記(諸如螢光標記、發光標記、比色標記，或放射性同位素)標記。免疫墨點方案及套組在此項技術中已熟知且可商購。用於免疫墨點法的自動化系統，例如用於西方墨點法的iBind Western系統(ThermoFisher, Waltham, MA USA 02451)可市購。免疫墨點法包括但不限於西方墨點法、細胞內西方墨點法及點漬墨法。點漬墨法為一種簡化程序，其中蛋白質樣品並非藉由電泳分離，而是直接點樣至膜上。細胞內西方墨點法包括將細胞接種於微量滴定盤中、固定/滲透細胞，及隨後用初級經標記之初級抗體或未標記之初級抗體偵測，隨後用經標記之二級抗體偵測，如本文所描述。
在其他實施例中，由標記物基因編碼之蛋白質產物的表現量亦可使用本文在流式細胞術分析(包括螢光活化細胞分選(FACS)分析)中所描述之抗體偵測。類似於IHC或免疫墨點分析，可以在FACS分析中使用初級抗體或抗血清(諸如特異性靶向由標記物基因編碼之蛋白質產物的多株抗血清及單株抗體)偵測蛋白質表現。在一些實施例中，細胞用針對特定目標蛋白的初級抗體染色足以發生抗體-抗原結合的時間且所結合的抗體可以藉由初級抗體上的直接標記(例如螢光標記或半抗原標記，諸如初級抗體上的生物素)來偵測。在其他實施例中，在如上文所述的間接分析中，未標記之初級抗體聯合對初級抗體具有特異性之經螢光標記之二級抗體來使用。FACS提供一種基於各種細胞之特定光散射及螢光特徵來分選或分析經螢光標記之生物細胞之混合物的方法(一次一種細胞)。因此，流式細胞儀偵測且報導經螢光染料標記之抗體的強度，其指示目標蛋白之表現量。因此，由標記物基因編碼之蛋白質產物的表現量可使用針對此類蛋白質產物之抗體偵測。亦可藉由對所滲透細胞染色來觀察非螢光細胞質蛋白質。用於執行FACS染色及分析之方法已為熟習此項技術者熟知且描述於Teresa S. Hawley及Robert G. Hawley in Flow Cytometry Protocols, Humana Press, 2011 (ISBN 1617379506, 9781617379505)中。
在其他實施例中，由標記物基因編碼之蛋白質產物的表現量亦可使用免疫分析法偵測，諸如酶免疫分析(EIA)或ELISA。EIA與ELISA分析在此項技術中已知，例如，用於分析多種組織及樣品，包括血液、血漿、血清或骨髓。有多種ELISA分析形式可供利用，參見例如美國專利第4,016,043號、第4,424,279號及第4,018,653號，該等專利以全文引用的方式併入本文中。此等分析包括非競爭型單點及兩點或「夾心」分析，以及傳統競爭性結合分析。此等分析亦包括經標記之抗體對目標蛋白的直接結合。夾心分析為常用的分析形式。存在夾心分析技術之多種變化形式。舉例而言，在典型正向分析中，將未經標記之抗體固定於固體基質上，且使待測試之樣品與經結合分子接觸。在培育適合時間段，即足以允許形成抗體-抗原錯合物之時間段之後，隨後添加用能夠產生可偵測訊號之報導體分子標記的對抗原具有特異性之第二抗體且培育，給予足夠的時間以形成抗體-抗原-經標記抗體之另一錯合物。洗掉任何未反應之物質，且藉由觀察由報導體分子產生之訊號來確定抗原之存在。結果可藉由簡單地觀測可見訊號來定性，或可藉由與含有已知量之目標蛋白的對照樣品比較來定量。
在EIA或ELISA分析之一些實施例中，使酶與第二抗體結合。在其他實施例中，可以在ELISA分析形式中使用經螢光標記之二級抗體來代替經酶標記之二級抗體產生可偵測訊號。當在特定波長之光照射下活化時，螢光染料標記之抗體吸附光能，誘導分子之可激發性狀態，隨後發射可用光學顯微鏡目測偵測之特徵性顏色的光。如同EIA及ELISA，允許經螢光標記之抗體結合第一抗體-目標蛋白複合物。在洗掉未結合之試劑之後，接著使殘留三元複合物暴露於適當波長之光，觀測到的螢光指示存在所關注之目標蛋白。免疫螢光與EIA技術在此項技術中均沿用已久且揭示於本文中。
對於本文所描述之免疫分析而言，可以使用多種酶或非酶標記中之任一者，只要可以分別偵測到酶活性或非酶標記即可。酶藉此產生可偵測訊號，該訊號可以用於偵測目標蛋白。特別適用的可偵測訊號為顯色或螢光訊號。因此，用作標記的特別適用酶包括可利用顯色或螢光受質的酶。此類顯色或螢光受質可以藉由酶反應轉化為容易偵測的顯色或螢光產物，該產物可以容易利用顯微法或光譜法偵測及/或定量。此類酶已為熟習此項技術者熟知，包括(但不限於)辣根過氧化酶、鹼性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、葡萄糖氧化酶及其類似物(參見Hermanson, Bioconjugate Techniques, Academic Press, San Diego (1996))。利用熟知顯色或螢光受質的其他酶包括各種肽酶，其中顯色或螢光肽受質可以用於偵測蛋白分解裂解反應。顯色及螢光受質在細菌診斷中的用途亦熟知，包括(但不限於)使用α-半乳糖苷酶及β-半乳糖苷酶、β-葡糖醛酸酶、6-磷酸化-β-D-半乳糖苷6-磷酸化半乳糖水解酶、β-葡糖苷酶、α-葡糖苷酶、澱粉酶、神經胺糖酸苷酶、酯酶、脂肪酶及其類似物(Manafi等人, Microbiol. Rev. 55:335-348 (1991))，且顯色或螢光受質已知的此類酶可容易調適以用於本發明方法中。
產生可偵測訊號的各種顯色或螢光受質已為熟習此項技術者熟知且可商購。可用於產生可偵測訊號的例示性受質包括(但不限於)辣根過氧化酶用的3,3'-二胺基聯苯胺(DAB)、3,3',5,5'-四甲基聯苯胺(TMB)、氯萘酚(Chloronaphthol)(4-CN)(4-氯-1-萘酚)、2,2'-次偶氮基-雙(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)(ABTS)、鄰苯二胺二鹽酸鹽(OPD)，及3-胺基-9-乙基咔唑(AEC)；鹼性磷酸酶用的5-溴-4-氯-3-吲哚基-1-磷酸酯(BCIP)、硝基藍四唑鎓(NBT)、快速紅(快速紅TR/AS-MX)，及對硝基苯基磷酸酯(PNPP)；β-半乳糖用的1-甲基-3-吲哚基-β-D-哌喃半乳糖苷及2-甲氧基-4-(2-硝基乙烯基)苯基β-D-哌喃半乳糖苷；α-葡糖苷酶用的2-甲氧基-4-(2-硝基乙烯基)苯基β-D-哌喃葡萄糖苷；及其類似物。例示性螢光受質包括但不限於鹼性磷酸酶用的4-(三氟甲基)傘形酮基磷酸酯；磷酸酶用的4-甲基傘形酮基磷酸酯雙(2-胺基-2-甲基-1,3-丙二醇)、4-甲基傘形酮基磷酸酯雙(環己基銨)及4-甲基傘形酮基磷酸酯；辣根過氧化酶用的QuantaBlu TM及QuantaRed TM；β-半乳糖苷酶用的4-甲基傘形酮基β-D-哌喃半乳糖苷、螢光素二(β-D-哌喃半乳糖苷)及萘并螢光素二-(β-D-哌喃半乳糖苷)；β-葡糖苷酶用的3-乙醯基傘形酮基β-D-哌喃葡萄糖苷及4-甲基傘形酮基-β-D-哌喃葡萄糖苷；及α-半乳糖苷酶用的4-甲基傘形酮基-α-D-哌喃半乳糖苷。用於產生可偵測訊號的例示性酶及受質亦描述於例如US公開案2012/0100540中。各種可偵測酶受質(包括顯色或螢光受質)已熟知且可市購(Pierce, Rockford IL; Santa Cruz Biotechnology, Dallas TX; Invitrogen, Carlsbad CA; 42 Life Science; Biocare)。一般而言，將受質轉化成產物，形成沈澱物，其沈積於目標核酸位點處。其他例示性受質包括(但不限於) HRP-綠(42 Life Science)、Betazoid DAB、Cardassian DAB、Romulin AEC、Bajoran紫、Vina綠、Deep Space Black™、Warp Red™、Biocare的Vulcan速紅及Ferangi藍(Concord CA；biocare.net/products/detection/chromogens)。
在免疫分析之一些實施例中，可偵測標記可與可具有的初級抗體或偵測未標記之初級抗體的二級抗體直接偶聯。熟習此項技術者已熟知例示性可偵測標記，包括但不限於顯色或螢光標記(參見Hermanson, Bioconjugate Techniques, Academic Press, San Diego (1996))。適用作標記的例示性螢光團包括(但不限於)若丹明(rhodamine)衍生物，例如四甲基若丹明、若丹明B、若丹明6G、磺醯若丹明B、德克薩斯紅(Texas Red)(磺醯若丹明101)、若丹明110及其衍生物，諸如四甲基若丹明-5-(或6)、麗絲胺若丹明B (lissamine rhodamine B)及其類似物；7-硝基苯并-2-氧雜-1,3-二唑(NBD)；螢光素及其衍生物；萘，諸如丹醯基(5-二甲胺基萘-1-磺醯基)；香豆素衍生物，諸如7-胺基-4-甲基香豆素-3-乙酸(AMCA)、7-二乙基胺基-3-[(4'-(碘乙醯基)胺基)苯基]-4-甲基香豆素(DCIA)、Alexa fluor染料(Molecular Probes)，及其類似物；4,4-二氟-4-硼雜-3a,4a-二氮雜-s-二環戊二烯并苯(BODIPY TM)及其衍生物(Molecular Probes; Eugene Oreg.)；芘及磺化芘，諸如Cascade Blue TM及其衍生物，包括8-甲氧基芘-1,3,6-三磺酸，及其類似物；吡啶基噁唑衍生物及達珀西(dapoxyl)衍生物(Molecular Probes)；螢光黃(3,6-二磺酸酯-4-胺基-萘二甲醯亞胺)及其衍生物；CyDye TM螢光染料(Amersham/GE Healthcare Life Sciences；Piscataway NJ)，及其類似物。例示性發色團包括(但不限於)酚酞、孔雀綠(malachite green)、硝基芳族烴(諸如硝基苯基)、重氮染料、達波希(dabsyl)(4-二甲胺基偶氮苯-4'-磺醯基)，及其類似物。
可以利用熟習此項技術者熟知的方法(諸如顯微法或光譜法)使與所結合之初級或二級抗體結合的顯色或螢光可偵測訊號可視化。
此章節(章節5.8)中所提供的方法可結合此項技術中已知的各種癌症模型使用。在一個實施例中，使用小鼠異種移植癌症模型。簡言之，T-24及UM-UC-3細胞購自ATCC且使用推薦的培養基條件培養。使用pRCDCMEP-CMV-hNectin-4 EF1-Puro構築體，藉由用含有人類連接素-4的慢病毒轉導親代細胞來產生T-24 hNectin-4 (人類連接素-4)及UM-UC-3連接素-4細胞，且使用嘌呤黴素加以選擇。將T-24連接素-4 (純系1A9)細胞植入裸小鼠且經由套針繼代，允許達到約200 mm 3腫瘤體積，且隨後用腹膜內(IP)單次劑量的恩諾單抗維多汀(3mg/kg)或非結合ADC (3 mg/kg)處理，每個處理組7隻動物。使用此模型的追蹤ICD研究涉及處理後的第5天收集腫瘤用於藉由RNA-seq、流式、免疫組織化學(IHC)及Luminex進行下游分析。將腫瘤於福馬林中固定且製備成FFPE組織塊。切割4 μm塊且使用F4/80、CD11c執行免疫組織化學。免疫組織化學染色的載片切片用Leica AT2數位完整載片掃描儀掃描，且藉由使用針對連接素4、CD11c及F4/80染色定製的演算法、用Visiopharm軟體分析成像。基於染色強度及背景染色，使算法最佳化。計算連接素4的陽性染色百分比，且計算F480及CD11c的每平方毫米陽性細胞數。
將腫瘤切片溶解於細胞溶解緩衝液2 (R&D Systems®，目錄號895347)。使用MILLIPLEX MAP小鼠細胞介素/趨化介素磁珠集合(Millipore)量測腫瘤樣品中的細胞介素及趨化介素且在LUMINEX MAGPIX系統上讀取。
在RNA-seq分析中，使用TRIZOL Plus RNA純化套組(Life Technologies)，根據製造商方案自急驟冷凍的腫瘤中分離出RNA，從而產生高品質RNA (平均RNA完整數＞ 8)。RNA選擇方法係使用Poly(A)選擇及Illumina的mRNA文庫Prep套組且在單指數Hi-Seq 2×150 bp (Illumina)上讀取。使序列讀段相對於人類及小鼠總轉錄本定位且測定每百萬總讀段數。
使用肯定語言描述多個實施例來大體提供揭示內容。本發明亦特別包括其中特定標的物被完全或部分排除的實施例，諸如物質或材料、方法步驟及條件、方案、程序、分析法或分析。因此，儘管本文中未依本發明不包括的內容來大體表述本發明，但本文揭示了未明確包括於本發明中的態樣。
本文中描述本發明之特定實施例，包括本發明人已知之實施本發明的最佳方式。在閱讀前述描述後，所揭示實施例之變體可對於在此項技術中工作之個體變得顯而易見，且吾人預期，彼等熟習此項技術者可按需要採用此類變體。因此，希望本發明可以除本文具體描述之外的方式實施，且本發明包括隨附申請專利範圍中所描述之標的物的所有變型及等效物，如適用的法律所允許。此外，除非本文另外指出或另外明顯與上下文矛盾，否則本發明涵蓋上述要素呈其所有可能變化形式的任何組合。
本說明書所列舉之所有公開案、專利申請案、登錄號及其他參考文獻均以全文引用之方式併入本文中，如同各個別公開案或專利申請案具體地且個別地指示以引用之方式併入一般。
已描述本發明之許多實施例。然而，應瞭解可進行各種修改而不背離本發明之精神及範疇。 6. 實例
以下為用於研究之各種方法及材料的描述，且為了向一般熟習此項技術者完整揭示及描述如何製造及使用本發明而提出，且不希望限制本發明人視為其發明的範疇，亦不希望其表示以下進行的實驗為可進行之所有實驗。應瞭解，不一定執行以現在時態書寫之例示性說明，而是該等說明經執行可產生與本發明之教示內容相關的資料及其類似者。已努力確保關於所使用之數量(例如量、溫度等)的準確性，但應當說明存在一些實驗性誤差及偏差。 6.1 實例 1 - 用於治療患有 肌肉侵襲性尿路上皮癌 ( MIUC ) 之不 符合順鉑條件的患者 ( H 組 ) 之新輔助恩諾單抗維多汀 ( ASG - 22CE ) 單一療法接著根治性膀胱切除術及 骨盆 淋巴結擴清術 ( RC + PLND ) 的 1b / 2 期 研究 .6.1.1臨床研究中使用的藥物
恩諾單抗維多汀為與微管破裂劑單甲基奧瑞他汀E (MMAE)共價連接的靶向連接素-4之單株抗體(AGS-22C3)。恩諾單抗維多汀由三種功能亞單元組成： ●完全人類IgG1Κ抗體(AGS-22C3)； ●微管破裂劑MMAE； ●使MMAE與AGS-22C3共價連接的蛋白酶可裂解順丁烯二醯亞胺基己醯基-纈胺酸-瓜胺酸(vc)連接子。
恩諾單抗維多汀結合連接素-4之V域(Challita-Eid等人, Cancer Res (2016); 76(10): 3003-13)。在推測的作用機制中，藥物結合細胞表面上的連接素-4蛋白且內化，從而引起vc連接子發生蛋白分解裂解及MMAE的細胞內釋放。游離的MMAE隨後破壞微管蛋白聚合且導致有絲分裂阻滯。 6.1.2研究概述 6.1.2.1概要 (i) 研究藥物名稱
恩諾單抗維多汀(ASG-22CE) (ii) 研發期
1b/2期 (iii) 研究標題
用於治療患有肌肉侵襲性尿路上皮癌(MIUC)之不符合順鉑條件的患者之新輔助恩諾單抗維多汀(ASG-22CE)作為單一療法接著根治性膀胱切除術及骨盆淋巴結擴清術(RC+PLND)的1b/2期研究。 (iv) 研究目標
主要 ●為了評估新輔助恩諾單抗維多汀單一療法之抗腫瘤活性，如藉由病理性完全反應(PCR)率所量測，定義為藉由中央病理學審查在來自根治性膀胱切除術(RC)及骨盆淋巴結擴清術(PLND)之所檢測組織中不存在活腫瘤(pT0N0)。
次要 ●藉由研究者評估研究療法的無事件存活期(EFS) ●評估病理性降期(pDS)率，定義為具有腫瘤＜pT2 (包括pT0、pTis、pTa、pT1)及藉由中央病理學審查在來自RC+PLND之所檢測組織中之N0的患者 ●藉由研究者評估無疾病存活期(DFS) ●評估總存活期(OS) ●評估恩諾單抗維多汀單一療法之安全性及耐受性 ●評估歸因於治療相關不良事件(AE)之計劃RC+PLND遲發型的百分比
另外 ●評估連接素-4及PD-L1表現量 ●評估生物活性及疾病抗性之生物標記物及其與臨床結果量測之潛在關聯 ●評估PK及ATA之發生率 ●評估患者報導之經歷及患者報導之治療耐受性 (v) 研究群體
符合條件的患者包括如下≥18歲患者：患有組織學上確認之肌肉侵襲性膀胱癌(MIBC)(主要尿道上皮類型[亦即，＞50%])，其中ECOG體能狀態為0、1或2，其被認為符合治療性意圖的RC+PLND的條件且同意接受治療性意圖的RC+PLND。
符合條件的患者應藉由病理學及成像審查，臨床分期為cT2 T4aN0M0。在篩選時，患者需要使用電腦斷層攝影術(CT)及胸部靜脈內(IV)造影以及腹部和骨盆的CT尿路造影進行成像。
應在參與前≤28天進行成像(如前一句中所描述)[美國癌症聯合委員會，第六版]。在參與之前必須獲得具有來自診斷性膀胱腫瘤之經尿道切除(TURBT)之相關病理學報導的腫瘤樣品，且確定其足以進行病理學審查及生物標記物分析。患者應具有充分的血液及器官功能測試。
符合條件的患者必須為在參與時由於至少1項以下準則不符合基於順鉑之化學治療條件的個體：GFR ＜60 mL/min但≥30 mL/min，ECOG體能狀態為2，NCI CTCAE 4.03版≥2級聽覺損失或NYHA III級心臟衰竭。患者必須尚未接受先前針對MIBC之全身性治療、化學放射或放射治療。患者可已接受先前膀胱內芽孢桿菌卡莫特-蓋蘭(BCG)或針對非肌肉侵襲性膀胱癌(NMIBC)之膀胱內化學治療。 (vi) 計劃的患者數目
在此研究中招募約20名患者。 (vii) 研究設計
此研究經設計以評估在新輔助及圍手術期環境中恩諾單抗維多汀作為單一療法用於治療患有MIBC之不符合順鉑條件的患者之安全性及抗腫瘤活性。研究設計描繪於 圖 2中。
在患有MIBC之患者中評估用恩諾單抗維多汀單一療法處理。此研究招募約20名患有cT2-T4aN0M0 MIBC之患者。在RC+PLND之前，所有患者在每3週週期之第1天及第8天用作為靜脈內輸注投與之新輔助恩諾單抗維多汀(1.25 mg/kg)處理持續3個週期。
藉由SMC在持續性基礎上監測安全性。若SMC推薦且經研究發起人批准，將允許將恩諾單抗維多汀的劑量含量(至多2個含量)降低到1.25 mg/kg之劑量以下。
所有患者在第一處理劑量之前90天內應具有膀胱腫瘤之經尿道切除(TURBT)且來自診斷TURBT之組織必須在參與前確認為可用的，且被認為足以進行病理學審查及生物標誌物分析。所有患者都用使用胸部IV造影劑之CT及腹部及骨盆的CT尿路造影進行臨床分期的基線TURBT後放射線篩選評估。
在新輔助處理之後，在RC+PLND之前≤4週經由相同放射性模式進行再分期以排除疾病進展，其將妨礙治癒性手術。手術由以下組成：具有治療性意圖之RC+PLND，根據美國泌尿外科協會(AUA)/美國臨床腫瘤學會(ASCO)/美國放射腫瘤學會(ASTRO)/泌尿腫瘤學會(SUO)指南(Chang 2017)。具有治療性意圖之RC+PLND必須在最後一次劑量之新輔助處理後4至12週內進行。
任何拒絕RC+PLND之患者都會根據事件計劃表進行疾病評估觀測。
pCR為主要終點且定義為來自RC+PLND之所檢測組織中不存在活腫瘤(pT0N0)。在具有治療性意圖之RC+PLND之後藉由中央病理學審查評估pCR。在第一次追蹤疾病評估掃描時(在RC+PLND之後12週)經由相同放射線方式進行RC後再分期。在研究之前2年期間，每12週(±14天)自RC+PLND直至疾病進展/復發、患者死亡、研究結束或撤回同意書(以先發生者為準)進行追蹤。在研究之2年後，包括反應評估之訪視頻率降低至每24週(±14天)。每當懷疑疾病惡化時，亦應執行腫瘤成像。
在RC+PLND之前注意到的妨礙治癒性意圖目標手術的放射線疾病進展、未能對存在殘餘肌肉侵襲性疾病及/或任何放射性疾病的患者進行RC+PLND、在RC+PLND時留下總體殘留疾病、經成像學評估及/或經活組織檢查確認的RC後局部或遠處復發(局部病理學復查)或任何原因引起的死亡都被視為EFS事件。被發現具有EFS事件但仍然活著的患者將轉移為長期追蹤。
RC+PLND後，根據當地指南或標準照護(SOC)管理具有殘餘疾病及/或病理地淋巴結陽性疾病證據的患者。對於不具有EFS事件但在RC + PNLD之後開始新穎抗癌治療的患者，根據經方案定義之時程表繼續成像評估，直至疾病進展/復發、患者死亡、研究結束或撤回同意書(以先發生者為準)。
在長期追蹤期間，每24週(±14天)聯繫患者瞭解其存活狀態及收集後續抗癌療法資訊，直至死亡、研究結束或撤回同意書(以先發生者為準)。
任何額外研究性成像(例如尿路造影)之結果應報導於電子性CRF (eCRF)中。 (viii) 測試產品、劑量及投與模式
在RC+PLND之前，在每3週週期之第1天及第8天以1.25 mg/kg經約30分鐘投與作為靜脈內輸注之恩諾單抗維多汀持續3個週期。
在輸注相關反應(IRR)不存在的情況下，計算所有患者的輸注速率以達成約30分鐘的輸注時段。恩諾單抗維多汀不得以靜脈內推注或彈丸注射投與。恩諾單抗維多汀不應與其他藥物混合。恩諾單抗維多汀的劑量必須間隔至少1週(7天)。
基於在基線處之患者實際體重計算恩諾單抗維多汀劑量。當患者體重變化≥基線或前一個週期的10%，或滿足劑量調整準則時，應重新計算劑量。除體重＞100 kg之患者外，使用實際重量；在此類情況下，將基於100 kg之體重計算劑量。此研究中允許之最大劑量為125 mg。
表6顯示肌肉侵襲性膀胱癌之恩諾單抗維多汀步降劑量含量。
劑量含量 恩諾單抗維多汀劑量(mg/kg)
1 1.25
-1 1
-2 0.75
(ix) 治療持續時間
患者接受3個週期之恩諾單抗維多汀單一療法，接著RC+PLND。手術由以下組成：具有治癒性意圖目標之RC +雙側PLND，根據AUA/ASCO/ASTRO/SUO準則。
最後一個患者參與之後的第5年或當無患者保持長期追蹤時(以先發生者為準)，結束研究。另外，發起人可在任何時間終止研究。 (x) 功效評估
初始分期主要根據診斷性TURBT之病理性發現確定且藉由當地實驗室審查，以根據RECIST版本1.1之放射研究的分期成像補充。患者需要在篩選時(在參與之前≤28天)使用胸部IV造影劑之CT及腹部及骨盆的CT尿路造影進行成像以進行臨床分期。患者必須在整個研究中接受相同成像模態以進行反應評估。
在第一劑量之研究治療之前90天內從診斷性TURBT患者收集的腫瘤組織樣品被送去進行中央病理學審查。亦將來自RC+PLND之組織樣品將送至病理性反應評估之中央病理學審查。腫瘤反應在具有治癒性意圖目標之RC+PLND之後藉由病理學審查分析評估。病理性分期資訊包括TNM分類、組織學、淋巴結計數及手術邊緣。
如概要之研究設計分章中所概述，亦使用連續成像追蹤患者之疾病復發。根據RECIST版本1.1 (研究者評估)藉由放射線確認之疾病進展確定疾病復發。若可用，則在疾病進展時進行之視情況腫瘤活檢體亦可用於記錄疾病進展。
由於處理相關AE導致具有治癒性意圖目標之計劃RC+PLND的延遲(定義為在研究治療之最後一次劑量之後＞12週)係經紀錄。 (xi) 藥物動力學及 ATA 評估
在整個研究中在特定時間點收集用於PK及ATA之血液樣品。經驗證或合格的分析用於量測血清或血漿中之恩諾單抗維多汀ADC、總抗體(TAb)及MMAE的濃度。收集PK樣品且歸檔以便對其他恩諾單抗維多汀相關物質(諸如，MMAE的循環代謝物)進行可能的分析。 (xii) 生物標記物評估
在方案指定時間點收集末梢血液、尿液及腫瘤活檢體。在研究治療之前及期間監測與反應、抗性或安全性觀測結果相關之探索性、預測性及預後生物標記物。使用在RC+PLND獲得之腫瘤樣品表徵臨床作用機制及抗性。
需要來自診斷性TURBT樣本及RC+PLND之腫瘤組織(細針抽吸不充分)鑑別新穎生物標記物。若進行額外處理後活檢體作為SOC之部分，則樣品亦可用於進一步鑑別反應之生物標記物及作用機制及對治療之抗性。
腫瘤組織中之生物標記物評估可包括(但不限於)基因表現(GE)及突變負荷之量測、腫瘤微環境(TME)及腫瘤亞型之表徵及藥物效應。分析可包括但不限於連接素-4及PD-L1之免疫組織化學(IHC)及RNA及DNA之下一代定序(NGS)。血液樣品中之生物標記物評估可包括(但不限於)量測循環血細胞亞群中之基線及藥物誘導之變化、免疫分析及循環疾病標記物。血液及尿液分析可包括(但不限於)循環腫瘤DNA、蛋白質體方法(諸如，酶聯結免疫吸附分析(ELISA))、免疫分析作為腫瘤反應或療法抗性之標記物，及免疫功能之標記物，包括免疫細胞亞群及細胞介素之豐度。
可分析視情況組織樣品提交之其他組織(例如，皮膚)中之生物標記物，包括藥物及藥品之組織含量、核酸及蛋白質，以研究與對治療之抗性機制或敏感性以及與治療相關之動態變化的可能關聯。分析方法包括IHC、DNA及RNA之NGS、T細胞受體β鏈定序、聚合酶鏈反應、流式細胞量測術及免疫分析。 (xiii) 安全性評估
安全評估係基於經由安全監督方法所收集的資訊且將包括來自所記錄AE (包括嚴重不良事件(SAE))、同時用藥記錄、體檢結論、心臟監測及實驗室測試的資料。經由研究過程藉由SMC監測安全性。 (xiv) 統計方法(a)用於關鍵安全性終點之分析
安全性分析評估AE之類型、發生率、嚴重程度、嚴重性及相關性，以及實驗室異常之類型、發生率及嚴重程度。概述尤其受關注之AE (AESI)的發生率、持續時間及消退。 (b)用於關鍵功效終點之分析
觀測到之病理完全反應率(pCRR)及95% CI將按組使用Clopper-Pearson方法提供。 (c)樣品大小
可招募約20名患者。
樣品大小並非基於用於正式假設測試之功效計算，而是基於如藉由95% CI表徵的pCRR之估計的精確度而選擇。
出於說明的目的，下表7為2側95% CI之概述，假定pCRR為30%或40%，且對於20名患者之樣品大小： 表7
pCRR 95%精確CI(n=20) 95%精確CI (n=50)
30% (12%，54%) (18%，45%)
40% (19%，64%) (26%，55%)
6.1.3目標
主要目標
主要目標為評估新輔助及圍手術期恩諾單抗維多汀單一療法或新輔助恩諾單抗維多汀之抗腫瘤活性，如藉由pCR率所量測，定義為藉由中央病理學審查在來自RC及PLND之所檢測組織中不存在活腫瘤(pT0N0)。
次要目標包括：●藉由研究者評估研究療法的EFS， ●評估pDS率，定義為具有腫瘤＜pT2 (包括pT0、pTis、pTa、pT1)及藉由中央病理學審查在來自RC+PLND之所檢測組織中之N0的患者 ●藉由研究者評估DFS， ●評估OS， ●評估恩諾單抗維多汀單一療法之安全性及耐受性，及 ●評估歸因於治療相關AE之計劃RC+PLND遲發型的百分比。
其他目標包括：●評估連接素-4及PD-L1表現量， ●評估生物活性及疾病抗性之生物標記物及其與臨床結果量測之潛在關聯， ●評估PK及ATA之發生率，及 ●評估患者報導之經歷及患者報導之治療耐受性。
終點
主要終點
此研究之主要功效終點為藉由中央病理學審查之pCR率。
次要終點●藉由研究者評估之EFS， ●藉由中央病理學審查之pDS率 ●藉由研究者評估之DFS， ●OS， ● AE的類型、發生率、嚴重度、嚴重性及相關性， ●實驗室異常之類型、發生率及嚴重度，及 ●歸因於治療相關AE之計劃RC+PLND遲發型(在治療之最後一次劑量之後＞12週)的百分比
其他終點●臨床活性之探索性生物標誌物，包括連接素-4表現狀態與反應的關係 ●恩諾單抗維多汀、MMAE及TAb的所選血漿或血清PK參數 ●針對恩諾單抗維多汀之ATA的發生率 ●藉由離開訪問評估之患者體驗 6.1.4研究計劃 6.1.4.1研究設計之概述
此研究經設計以評估在新輔助及圍手術期環境中恩諾單抗維多汀作為單一療法用於治療患有MIBC之不符合順鉑條件的患者之安全性及抗腫瘤活性。
在患有MIBC之患者中評估用恩諾單抗維多汀單一療法處理。該研究招募約20名患有cT2-T4aN0M0 MIBC之患者。在RC+PLND之前，所有患者在每3週週期之第1天及第8天用作為靜脈內輸注投與之新輔助恩諾單抗維多汀(1.25 mg/kg)處理持續3個週期。
藉由SMC在持續性基礎上監測安全性。若SMC推薦且經研究發起人批准，允許將恩諾單抗維多汀的劑量含量(至多2個含量)降低到1.25 mg/kg之劑量以下。肌肉侵襲性膀胱癌之恩諾單抗維多汀步降劑量含量繪示於下表8中。 表8
劑量含量 恩諾單抗維多汀劑量 ( mg / kg )
1 1.25
-1 1
-2 0.75
所有患者在第一處理劑量之前90天內應具有TURBT且來自診斷TURBT之組織必須在參與前確認為可用的，且被認為足以進行病理學審查及生物標誌物分析。所有患者都用使用胸部IV造影劑之CT及腹部及骨盆的CT尿路造影進行臨床分期的基線TURBT後放射線篩選評估。CT尿路造影或MRI尿路造影為可接受的成像方法，以滿足方案中指定之MIBC患者的腹部及骨盆掃描要求。
在新輔助處理之後，在RC+PLND之前≤4週經由相同放射性模式進行再分期以排除疾病進展，其將妨礙治癒性手術。手術由以下組成：具有治癒性意圖目標之RC+PLND，根據AUA/ASCO/ASTRO/SUO準則(Chang 2017)。具有治療性意圖目標之RC+PLND必須在最後一次劑量之新輔助處理後4至12週內進行。
任何拒絕RC+PLND之患者都會根據評估計劃表進行疾病評估觀測。
pCR為主要終點且定義為來自RC+PLND之所檢測組織中不存在活腫瘤(pT0N0)。在具有治療性意圖之RC+PLND之後藉由中央病理學審查評估pCR。在第一次追蹤疾病評估掃描時(在RC+PLND之後12週)經由相同放射線方式進行RC後再分期。在研究之前2年期間，每12週(±14天)自RC+PLND直至疾病進展/復發、患者死亡、研究結束或撤回同意書(以先發生者為準)進行追蹤。在研究之2年後，包括反應評估之訪視頻率降低至每24週(±14天)。每當懷疑疾病惡化時，亦應執行腫瘤成像。
在RC+PLND之前注意到的妨礙治癒性意圖目標手術的放射線疾病進展、未能對存在殘餘肌肉侵襲性疾病及/或任何放射性疾病的患者進行RC+PLND、在RC+PLND時留下總體殘留疾病、經成像學評估及/或經活組織檢查確認的RC後局部或遠處復發(局部病理學復查)或任何原因引起的死亡都被視為EFS事件。被發現具有EFS事件但仍然活著的患者轉移為長期追蹤。
RC+PLND後，根據當地指南或標準照護(SOC)管理具有殘餘疾病及/或病理地淋巴結陽性疾病證據的患者。對於不具有EFS事件但在RC + PNLD之後開始新穎抗癌治療的患者，根據經方案定義之時程表繼續成像評估，直至疾病進展/復發、患者死亡、研究結束或撤回同意書(以先發生者為準)。
在長期追蹤期間，每24週(±14天)聯繫患者瞭解其存活狀態及收集後續抗癌療法資訊，直至死亡、研究結束或撤回同意書(以先發生者為準)。
任何額外研究性成像(例如尿路造影)之結果應報導於電子性CRF (eCRF)中。 6.1.4.2研究設計之論述及基本原理
此研究提供在新輔助MIBC環境中恩諾單抗維多汀單一療法之安全性及功效資料。已確定此等患者在每3週週期之第1天及第8天IV恩諾單抗維多汀1.25 mg/kg的劑量含量。若由SMC推薦且由發起人同意，則劑量遞減為可能的。
SMC監測整個研究中之安全性。安全性終點適合於評估治療方案之安全性。此研究組分之關鍵功效終點(pCR率藉由中央審查)為抗腫瘤活性之直接量測。此為在基線、RC前以及輔助及RC後期的造影增強成像的補充。為了進一步評估此研究中pCR率之顯著性，將EFS、DFS及OS評估為次要終點。 (i)將患者分配至處理組之方法
此研究依序招募患者。 (ii)盲化
此為開放標記、單臂研究。 6.1.5研究群體 6.1.5.1納入準則
患者必須具有組織學確認之MIBC，其中主要＞50%尿道上皮組織學(先前稱為移行細胞癌)。 ●在第一劑量之處理之前90天內藉由TURBT及≤參與之28天藉由使用胸部IV造影劑之CT及腹部及骨盆的CT尿路造影確定之臨床期cT2-T4aN0M0。 ●只要尿路上皮癌為主要：＞50%，則混合式細胞類型符合條件。 ●患有漿細胞樣及/或神經內分泌腫瘤之患者不符合條件，無論組分百分比如何。 ●未源自膀胱中之尿道上皮腫瘤(例如上尿路、尿道腫瘤)不符合條件。 ●短軸上＜10 mm的淋巴結被認為正常的。 患者必須為不符合順鉑條件的。若患者符合以下準則中之至少1者，則將其被視為不符合順鉑條件的。 ●GFR ＜60 mL/min但≥30 mL/min (藉由科克羅夫特-高爾特式、MDRD或24小時尿液量測)。 ● ECOG體能狀態為2。 ● NCI CTCAE版本4.03 ≥2級聽覺損失。 ● NYHA III級心臟衰竭。 ●符合參與條件的患者必須尚未接受先前針對MIBC之全身性治療、化學放射或放射治療。患者可已接受先前膀胱內芽孢桿菌卡莫特-蓋蘭(BCG)或針對NMIBC之膀胱內化學治療。
最小年齡為18歲。
ECOG體能狀態為0、1或2。
如研究者所評估，≥3個月的預期壽命。
在參與之前必須獲得具有來自在第一劑量之研究治療之前90天進行之診斷性TURBT之相關病理學報導的腫瘤樣品，且確定其足以進行病理學審查及生物標記物分析。注意：提交的TURBT活組織檢查必須含有逼尿肌以確認疾病期。
患者必須由他/她的泌尿學家及/或腫瘤學家視為符合RC+PLND之條件且同意根據AUA/ASTRO/ASCO/SUO準則接受治療性意圖標準RC+PLND (包括前列腺切除術，若適用)。
具有如下文表9中所定義之足夠的器官功能。必須在開始研究處理之前7天內收集樣本。 表9
系統 實驗室值
血液：   
ANC ≥1500/µL
血小板 ≥100,000/µL
血紅蛋白 ≥9.0 g/dL或≥5.6 mmol/L a
腎：   
量測或計算 bCrCl及/或肌酐≤1.5 × ULN。當本地指南需要評估時，肌酐含量及肌酐清除均適用 (亦可使用GFR代替CrCl) 對於肌酐含量之參與者為≥30 mL/min ＞1.5×機構性ULN及/或肌酐含量 ≤1.5×正常上限(ULN)
肝：   
血清總膽紅素 ≤1.5× ULN或直接膽紅素≤ ULN，對於總膽紅素含量＞1.× ULN之參與者 ≤3× ULN，對於具有吉爾伯氏病之患者
AST (SGOT)及ALT (SGPT) ≤3× ULN
凝血：   
INR或PT aPTT或 PTT ≤1.5× ULN，除非參與者正在接受抗凝血劑療法，只要PT或aPTT在預期使用抗凝劑之治療性範圍內
注意：表9包括定義合格性之用於治療的實驗室值要求；實驗室值要求應根據用於投與特定化學療法之本地法規及指南來調適。 ALT (SGPT)=丙胺酸胺基轉移酶(血清麩胺酸丙酮酸轉胺酵素)；ANC=絕對嗜中性白血球計數；aPTT=活化部分凝血活酶時間；AST (SGOT)=天冬胺酸胺基轉移酶(血清麩胺酸草醯乙酸轉胺酵素)；CrCl=肌酐清除；GFR=腎小球濾過率 a必須滿足不具有紅血球生成素依賴性且在後2週內無紅血球濃厚液(pRBC)輸注之準則。 b肌酐清除(CrCl)應根據機構標準物使用柯克勞夫-高爾特方法、腎病飲食改進方程式(MDRD)或藉由24小時尿液收集計算。
具有生育潛力之女性個體係已經歷初潮且未進行手術絕育(例如，子宮切除術、雙側輸卵管切除術、雙側卵巢切除術)或尚未完成停經之任何出生為女性的人。閉經在臨床上定義為45歲以上的人在不存在其他生物學、生理或藥理學病因之情況下閉經12個月。具有生育潛力之女性個體必須符合以下條件：
●同意在研究期間及投與最後一劑研究藥物之後的至少6個月內不嘗試妊娠。 ●在第1天之前3天內必須具有陰性尿液或血清妊娠測試(最小敏感性25 mIU/mL或β人類絨毛膜激性腺素[β-hCG]之等效單元)。具有假陽性結果且陰性妊娠狀態記錄驗證的女性個體有資格入選。 ●若異性戀活躍，則必須始終使用高效的生育控制方法，其中在篩選開始、整個研究時段且在最後一次劑量之研究藥物之後至少6個月失敗率低於1%。 ●女性個體必須同意在篩選開始及整個研究時段且在最後一次劑量之研究藥物之後至少6個月未哺乳或供給卵。
可生育兒童之男性個體係具有睪丸且尚未進行手術絕育(例如，輸精管結紮，接著進行臨床測試證明該程序有效)之任何出生為男性的人。可生育兒童之男性個體必須符合以下條件： ●在篩選時開始及整個研究階段，以及最後一次劑量之研究藥物之後至少6個月，不得捐獻精子。男性個體將告知來自研究治療之生殖功能及生育力的陰性風險。在治療之前，應建議男性個體尋求關於生育力保存及精子低溫保存之資訊。 ●必須始終使用高效的生育控制方法，在篩選時開始失敗率低於1%，且在整個研究期間繼續，且在最終劑量之研究藥物之後至少6個月。 ●具有妊娠或哺乳配偶之男性個體必須始終使用2個避孕選項中之一者，以防止在妊娠期間或時間配偶在整個研究期間及最後一次劑量之研究藥物之後持續至少6個月再次暴露於精液。
患者必須提供書面知情同意書。 6.1.5.2排除準則
接受先前針對MIBC之全身性治療、化學放射及/或放射治療。
接受CPI之任何先前處理。CPI經定義為PD-1抑制劑、PD-L1抑制劑或PD-L2抑制劑(包括(但不限於)阿特珠單抗、帕博利珠單抗、納武單抗、度伐魯單抗或阿維魯單抗)。
接受用導向另一刺激性或共抑制性T細胞受體之藥劑(包括(但不限於) CD137促效劑、CTLA 4抑制劑或OX-40促效劑)的任何先前處理。
成像上淋巴結疾病之證據。
成像上淋巴結疾病之證據。
經歷膀胱之部分膀胱切除術以移除任何NMIBC或MIBC。
持續的2級或更高的感官或運動神經病變。
不包括患有需要高劑量類固醇(＞10 mg/天普賴松或等效物)或其他免疫抑制性藥物治療之病狀的患者。在不存在活動性自體免疫性疾病下允許吸入或局部類固醇。
先前使用恩諾單抗維多汀或其他基於MMAE之ADC處理尿路上皮癌。
個體在第一劑量之研究藥物之前的3年內具有另一侵襲性惡性腫瘤的病史，或先前診斷之惡性疾病之殘留疾病的任何證據。允許患有非黑色素瘤皮膚癌或任何類型之原位癌(若進行完全切除術)之個體。
在進入研究前至少1年以明確意圖(以手術方式或用放射療法)治療之前列腺癌(T2NXMX或更低，其中格里森分數≤7)的病史為可接受的，其限制條件為個體視為無前列腺癌，且滿足以下準則： ●經歷根除性前列腺切除術之參與者必須具有不可偵測之PSA持續＞1年及篩選。 ●接受過輻射之參與者的PSA倍增時間必須＞1年(基於至少3個確定的值間隔＞1個月)且總PSA值不符合Phoenix生物化學復發準則(亦即，＜2.0 ng/mL以上最低點)。
主動監測的患有未處理低風險前列腺癌(格里森分數≤6)且PSA倍增時間＞1年(基於至少3個相隔＞1個月的值)的參與者亦符合條件。
在恩諾單抗維多汀之第一次劑量時，當前針對活動性感染(病毒、細菌或真菌)接受全身抗微生物治療。允許常規的抗微生物防治。
B型肝炎表面抗原及/或抗B型肝炎核心抗體陽性患者；允許PCR分析呈陰性的患者進行普遍預防或使用先發制人的方法。該方法根據接受抗癌治療之患者的區域或國家指南選擇的。
活性C型肝炎感染或已知HIV感染。若已針對C型肝炎感染接受治療的患者已記錄有12週的持久病毒反應，則其為允許的。除非由局部健康授權機構授權，否則不需要HIV測試。
具有活性肺結核之患者。
在恩諾單抗維多汀之第一次劑量之前的6個月內記錄有腦血管事件(中風或短暫局部缺血發作)、不穩定型心絞痛、心肌梗塞或符合NYHA IV類(參見附錄E)之心臟症狀(包括充血性心臟衰竭)的病史。
出現活動性角膜炎或角膜潰瘍的患者。出現淺表性點狀角膜炎的患者若在研究者看來，其病症得到充分治療，則係允許的。
具有在過去2年內需要進行全身性治療(亦即，使用疾病調節劑、皮質類固醇或免疫抑制藥物)之活動性自體免疫疾病。替代療法(例如，針對腎上腺或垂體不足之甲狀腺素、胰島素或生理學皮質類固醇替代療法)可不考慮為全身性治療形式且允許。
特發性肺纖維化；機化性肺炎、藥物誘導之肺炎、特發性肺炎病史或篩檢胸部CT掃描上活性肺炎跡象
先前同種異體幹細胞或實體器官移植。
在第一劑量之研究藥物之前的30天內投與活的減毒疫苗。活毒疫苗之實例包括(但不限於)以下：麻疹、流行性腮腺炎、風疹、水痘/帶狀疱疹(雞痘)、黃熱病、狂犬病、BCG及傷寒疫苗。用於注射之季節性流感疫苗一般為滅活病毒疫苗且予以允許；然而，鼻內流感疫苗(例如FluMist®)為減毒活疫苗且不予允許。
在研究者看來，損害患者接受或耐受計劃處理及追蹤能力的其他基礎醫學病況；任何已知的會干擾配合研究要求的精神或物質濫用障礙。
糖尿病不可控的患者。不可控的糖尿病定義為HbA1c ≥8%或HbA1c 7%至＜8%及否則無法解釋的相關糖尿病症狀(多尿症或煩渴症)。 6.1.6處理 6.1.6.1所投與之治療
在RC+PLND之前3個週期期間，在此研究中之患者在每3週週期之第1天及第8天將接受作為靜脈內輸注投與之恩諾單抗維多汀1.25 mg/kg。手術將由以下組成：具有治癒性意圖目標之RC +雙側PLND，根據AUA/ASCO/ASTRO/SUO準則。
若SMC推薦且經研究發起人批准，將允許將恩諾單抗維多汀的劑量含量(至多2個含量)降低到1.25 mg/kg以下。 6.1.6.2研究性的研究藥物 (i) 描述
藉由使含有MMAE與連接子亞單元的化學中間物與抗體之半胱胺酸殘基結合來產生恩諾單抗維多汀。所得ADC含有平均3.8個藥物分子/抗體。恩諾單抗維多汀藥品為無菌、無防腐劑的白色至灰白色凍乾粉末，其復原後靜脈內投與。恩諾單抗維多汀於30 mg單次劑量小瓶中供應。 (ii) 劑量及投與
在RC+PLND之前，恩諾單抗維多汀將以1.25 mg/kg經大約30分鐘在每3週週期之第1天及第8天作為靜脈內輸注投與3個週期。
在不存在IRR下，應計算所有患者之輸注速率，以達成大致30分鐘輸注時段。恩諾單抗維多汀不得以靜脈內推注或彈丸注射投與。恩諾單抗維多汀不應與其他藥物混合。恩諾單抗維多汀的劑量必須間隔至少1週(7天)。
基於在基線處之患者實際體重計算恩諾單抗維多汀劑量。當患者體重變化≥基線或前一個週期的10%，或滿足劑量調整準則時，應重新計算劑量。除體重＞100 kg之患者外，使用實際重量；在此類情況下，將基於100 kg之體重計算劑量。此研究中允許之最大劑量為125 mg。
在恩諾單抗維多汀投與期間應觀測患者，且在前3個週期期間，在輸注之後觀測至少60分鐘。在整個研究期間，應根據機構標準給與符合最佳患者照護的所有支援性措施。
在投與期間及投與後之任何時間，密切監測輸注部位之發紅、腫脹、疼痛及感染情況。應建議患者在投與時或輸注之後即時報導發紅或不適。將遵循機構指南投與化學治療劑，且按照機構標準採取預防措施防止外滲，及如「化學治療及生物治療指南及實踐建議」(Polovich 2014)及「化學治療外滲之管理：ESMO-EONS臨床實踐指南」(Perez Fidalgo 2012)中所描述。在恩諾單抗維多汀外滲之情況下，應保持組合藥物，直至與醫療監測者/發起人一起協商及進一步討論。 (iii) 恩諾單抗維多汀之劑量修改
視毒性之類型及嚴重程度而定，將允許患者內劑量降低1或2個劑量含量(參見表8)。需要劑量降低的患者可以重新增加1個劑量含量(亦即，降低至0.75 mg/kg的患者可能只能重新增加至1 mg/kg)，其限制條件為毒性不需要停用研究藥物且已經恢復到基線或≤1級。若毒性重現，則將不允許重新增加。出現≥2級角膜AE的患者不允許再遞增劑量。
針對恩諾單抗維多汀相關毒性的劑量修正建議展現於表10及表11中。
在現場研究者的判斷下，允許因其他恩諾單抗維多汀相關毒性而降低或中斷患者內劑量。在每位患者的基礎上，可能允許降低毒性劑量，包括DLT。DLT評價期為第一治療週期。在DLT評價期經歷DLT之患者不應接受進一步治療，除非在充分管理毒性的情況下展現出臨床益處且經醫學監測者批准。後續劑量含量將由醫學監測者根據現場研究者所論述來定義；將考慮觀測到之AE之類型及嚴重程度以告知決策。
若患者毒性不另外需要永久中斷，則在醫學監測者批准下，對於先前未降低劑量且對治療有反應之患者，可中斷劑量超過3週。在劑量延遲期間，患者可以不接受其他研究性藥物、放射療法(除症狀性和非進展性非目標骨骼病變的姑息性放射療法之外)，或全身性抗贅瘤療法。若在第1天給藥後出現需要劑量延遲的毒性，且在第8天給藥(直至第10天)之前未消退，則必須跳過而非延遲第8天恩諾單抗維多汀投與。若患者由於隨後消退之毒性而降低劑量，則患者可由醫學監測及現場調查員酌情處理在初始劑量下恢復治療。若存在劑量中斷，則將不調整用於反應評估之時程且仍應自第1週期第1天計算。
在與治療相關的AE以外的情況下，可能允許劑量中斷，例如醫療/手術事件或與研究治療無關的物流原因。除非發起人另外論述，否則參與者應在排定間斷之3週內恢復研究療法。中斷之原因應記載於患者之研究記錄中。 表10針對恩諾單抗維多汀相關血液毒性的建議劑量修改
1 級 2 級 3 級 4 級
在相同劑量含量下繼續。 在相同劑量含量下繼續。    對於2級血小板減少症而言，停止劑量，直至毒性≤1級或已回至基線，隨後以相同劑量含量恢復治療。 停止給藥直至毒性≤1級或已返回至基線，隨後以相同劑量含量重新開始治療或考慮劑量降低1個劑量含量。 如根據機構指南所指示，可使用輸注或生長因子。 停止給藥直至毒性≤1級或已返回至基線，隨後將劑量降低1個劑量含量且恢復治療，或由研究人員酌情終止治療。如根據機構指南所指示，可使用輸注或生長因子。 對於貧血而言，應強烈考慮中斷治療。
注意：血液毒性係指貧血、血小板減少症、嗜中性白血球減少症及發熱性嗜中性球減少症。 表11針對恩諾單抗維多汀相關非血液毒性的建議劑量修改
1 2 級 3 級 4 級
在相同劑量含量下繼續。    對於1級皮疹或皮膚反應，可在相同劑量含量下繼續。    若鑑別出眼症狀及/或視力變化，則應由合格的驗光師或眼科醫師評價患者。 以相同劑量繼續，但2級神經病變或角膜AE之情形除外。    對於惡化的皮疹或皮膚反應，考慮停用恩諾單抗維多汀，直至毒性≤1級或已返回至基線，隨後以相同劑量含量恢復治療或考慮將劑量減少1個含量。    對於2級神經病變或角膜AE而言，停止劑量，直至毒性≤1級或已返回至基線，隨後以相同劑量含量恢復治療。對於第二次發生的2級神經病變或角膜AE而言，停止給藥直至毒性≤1級，隨後將劑量降低1個劑量含量且恢復治療。    若鑑別出眼症狀及/或視力變化，則應由合格的驗光師或眼科醫師評價患者。 停止給藥直至毒性≤1級或已返回至基線，隨後以相同劑量含量重新開始治療或考慮劑量降低1個劑量含量 a對於3級皮疹或皮膚反應，考慮停用恩諾單抗維多汀，直至毒性≤1級或已返回至基線，隨後以相同劑量含量恢復治療或考慮將劑量減少1個含量。    對於疑似史蒂芬斯強森症候群(SJS)或疑似中毒性表皮壞死溶解(TEN)，停用恩諾單抗維多汀。考慮將個體轉診至皮膚科醫生/專家進行診斷及專門護理。已確認SJS或復發性3級皮疹事件的個體應永久停止治療。    對於3級神經病變或角膜AE而言，中斷治療。    對於3級高血糖症或血糖＞250 mg/dL，停止恩諾單抗維多汀治療。一旦高血糖症/血糖≤250 mg/dL且患者在臨床及代謝上穩定，則恢復治療。 若鑑別出眼症狀及/或視力變化，則應由合格的驗光師或眼科醫師評價患者。 對於4級AE而言，中斷治療。 a對於確認之SJS或TEN，或4級皮疹，永久停止治療。    在支援性管理下，在72小時內，4級嘔吐及/或腹瀉改善至≤2級，不需要中斷治療。    對於4級高血糖症或血糖＞500 mg/dL，停止恩諾單抗維多汀治療且對高血糖症進行全面評估以確定潛在診斷。一旦血糖≤250 mg/dL且患者在臨床及代謝上穩定，可在諮詢醫學監測者後密切監測且恢復給藥。
a.不伴隨臨床後遺症或在發作之72小時內藉由補充/適當管理校正之3/4級電解質不平衡/實驗室異常不需要中止治療(例如，4級高尿酸血症)。與臨床後遺症無關的4級澱粉酶/脂肪酶升高不需要中止；停止給藥直至毒性≤3級或已返回至基線，隨後以相同劑量含量恢復治療。不與臨床後遺症相關的3級澱粉酶/脂肪酶升高可以相同劑量含量繼續治療。停止治療≥3級澱粉酶/脂肪酶且伴有臨床後遺症，直至評估完成。
關於輸注反應的管理建議，參見章節6.1.6.4(i)。關於高血糖症的管理建議，參見章節6.1.6.4(ii)。關於皮疹管理建議，參見章節6.1.6.4(iii)。
經歷僅歸因於恩諾單抗維多汀之不可接受毒性的患者應停止使用研究藥物。 (a)與肝臟安全相關之治療中斷建議
在沒有解釋增強型肝功能測試(LFT)(諸如病毒性肝炎、先前存在的肝病或急性肝病，或暴露於與肝臟損傷相關的其他藥劑)的情況下，可中斷患者的研究治療。研究者可判定，繼續研究治療不符合患者的最佳利益。
若出現以下情況，則應考慮中斷治療： ● ALT或AST ＞8 ×正常上限(ULN) ● ALT或AST＞5 × ULN，超過2週 ● ALT或AST＞3×ULN及總膽紅素＞2×ULN或國際標準化比值(INR)＞1.5 (若INR測試適用/予以評價) ● ALT或AST＞3×ULN，出現暗示肝臟損傷(例如右上腹疼痛或觸痛)及/或嗜酸性球增多症(＞5%)的症狀
此等治療中斷建議係基於FDA行業指南(藥物誘發性肝臟損傷：市售前的臨床評價(Drug-Induced Liver Injury: Premarketing Clinical Evaluation)，2009年7月)。該等建議為對研究者的基本指導，其基於藥物開發中積累的臨床經驗，而非特指恩諾單抗維多汀的臨床經驗。
關於針對ALT、AST或膽紅素為2級或更高之患者的肝臟安全監測及評估準則建議，參見6.1.11。 6.1.6.3伴隨療法
從第1天(劑量前)至安全報導期(EOT訪視或最後一次研究治療後30天，以較晚者為準)記錄所有同時用藥記錄及血液產品。應記錄自知情同意書籤署時針對研究方案相關之AE所給與的任何伴隨藥物。 (i)必需的伴隨療法
不存在必需的伴隨療法。 (ii)允許的伴隨療法
允許使用鎮吐藥。允許使用胰島素作為SOC之部分。允許根據第6.1.6.4(i)章對IRR進行術前用藥；然而，可能不會在第1週期第1天的研究治療之前進行預防IRR的預防性術前用藥。
允許使用如章節6.1.6.2(iii)中所建議之管理恩諾單抗維多汀相關毒性的療法，包括生長因子，及輸注。
對於正接受伴隨恩諾單抗維多汀服用的強CYP3A4抑制劑或P-gp抑制劑的患者，應密切監測其不良反應。
允許用疫苗進行常規預防；然而，在研究期間患者可不用活的減毒疫苗治療。
可如臨床上所指示使用類固醇。 (iii)禁止的伴隨療法
在進行中的試驗期間不允許排除準則中專門禁止的藥品或疫苗接種。若存在在試驗期間特別禁止之任何藥品或疫苗接種之臨床適應症，則可能需要中斷試驗療法或疫苗接種。
下文列出在研究過程期間用於伴隨療法或疫苗接種之特定限制： ●抗腫瘤全身性化學治療或生物療法。 ●此方案中未規定之免疫療法。 ●此方案中未指定之化學療法。 ●除恩諾單抗維多汀外之研究性藥劑。 ●放射線療法。 ●在第一劑量之研究治療之前30天內及在參與研究時的活疫苗。活毒疫苗之實例包括(但不限於)以下：麻疹、流行性腮腺炎、風疹、水痘/帶狀疱疹、黃熱病、狂犬病、BCG及傷寒疫苗。用於注射之季節性流感疫苗一般為滅活病毒疫苗且予以允許；然而，鼻內流感疫苗(例如FluMist®)為減毒活疫苗且不予允許。 ●吡格列酮。
需要使用任何上述治療進行臨床管理的參與者應從研究中移除。 6.1.6.4不良反應的管理 (i)輸液反應之管理
在研究治療輸注期間可能發生輸注相關之反應(IRR)。輸注應在配備適當設備及人員之場所投與，以便在過敏症發生時對其進行管理。在整個研究期間，應根據機構標準給與符合最佳患者照護的所有支援性措施。支援性措施可包括投與針對IRR之藥物。
允許如下文所描述對IRR進行術前用藥；然而，可能不會在第1週期第1天的研究治療之前進行預防IRR的預防性術前用藥。可向已經歷IRR的患者進行前驅用藥以便隨後輸注。前驅用藥可包括止痛藥(例如乙醯胺苯酚或等效物)、抗組織胺(例如苯海拉明鹽酸鹽(diphenhydramine hydrochloride))，及在每次輸注之前投與約30至60分鐘或根據機構標準投與的皮質類固醇。若患者在前驅用藥的背景中經歷IRR，則在下一次計劃劑量之前，必須繼續治療與醫學監測者討論。
若發生過敏症，則應立即且永久地中斷研究治療劑投與。
若患者在接受研究治療後經歷IRR，且無法確定IRR之單一原因，則必須遵循適用的IRR指南。 (ii)高血糖症之管理
研究者應監測血糖含量，且若觀測到高血糖症之任何症狀，則最好執行其他評估，包括針對感染的充分評價。另外，若使用類固醇治療任何其他病狀，則需要對血糖含量進行額外的監測。若觀測到血糖含量升高，則患者應根據當地SOC進行治療且考慮轉診至內分泌科。
患者，尤其是有糖尿病或高血糖症病史或正在發生的糖尿病或高血糖症的患者，若其葡萄糖含量變得難以控制或若其經歷了暗示高血糖症的症狀，諸如尿頻、口渴加劇、視力模糊、疲勞及頭痛，則最好立即告知其醫師。
在基線時HbA1c升高(≥6.5%)之進入研究的患者應在第1週期期間轉診至進行葡萄糖管理的適當提供者。應在各給藥之前檢查血糖且劑量應保留血糖＞250 mg/dL。一旦患者之血糖已改善至≤250 mg/dL且患者在臨床及代謝上穩定，則給藥可繼續。允許使用胰島素作為SOC之部分。認為與恩諾單抗維多汀相關之血糖＞500 mg/dL需要藥物中斷且完全評估高血糖症，以確定潛在診斷。高血糖症/升高之血糖改進至≤250 mg/dL後，給藥可在與醫學監測者協商之後重新開始密切監測。若患者經歷新發作型糖尿病，則用代謝組、尿酮、HbA1c、C-肽評估個體以評估在與CPI組合之環境中之新發作型1型糖尿病。 (iii)皮疹管理
恩諾單抗維多汀為連接素-4引導之抗體藥物結合物。連接素-4為高度表現於尿路上皮癌中之細胞黏附分子。低至中等含量之連接素-4亦表現於正常組織上，包括皮膚角質細胞、汗腺及毛囊；因此，皮膚反應為預期事件。因此，皮膚反應為在與恩諾單抗維多汀之所有臨床研究中所關注之AE。
在15名接受恩諾單抗維多汀之患者中鑑別出嚴重皮膚不良反應的報導，其中一些患者出現了致命後果。此等反應主要在第一治療週期期間發生。報導於此等案例中之AE包括史蒂芬斯-強森症候群(SJS) (5個案例)、水皰(3個案例)、大皰性皮炎(3個案例)、對稱藥物相關彌漫性及播散性紅斑(SDRIFE；2個案例)及剝脫性皮炎、剝脫性皮疹、表皮壞死、口咽起泡、口腔炎及中毒性表皮壞死溶解(TEN)中之各者的1個案例。
在尿路上皮癌之恩諾單抗維多汀單一療法研究中，重度皮膚不良反應之SAE報導於749名個體中之11名(1.5%)中且包括大皰性皮炎(0.4%)、藥疹(0.4%)、水皰(0.1%)、結膜炎(0.1%)、SJS (0.1%)、口腔炎(0.1%)及毒性皮疹(0.1%)。
若個體具有皮膚反應、口腔黏膜及眼部異常(包括，黏膜炎或結膜炎)之病徵及症狀，則應建議該等個體立即接觸研究者。第一週期及整個治療中開始，密切監測個體之皮膚反應。對於輕度至中度皮膚反應，考慮適當治療，諸如臨床上指示之局部皮質類固醇及抗組織胺。對於惡化2級皮疹或皮膚反應，考慮停止恩諾單抗維多汀。對於重度(3級)皮疹或皮膚反應或疑似SJS或TEN，停止恩諾單抗維多汀且考慮轉診接受專門照護。在具有確診之SJS或TEN或4級或復發性3級皮膚反應之患者中永久地中斷恩諾單抗維多汀。 6.1.6.5治療依從性
研究藥物的投與將由研究現場的人員執行且記錄於源文件及CRF中。 6.1.7研究評估 6.1.7.1篩選/基線評估
此研究將招募僅滿足章節6.1.5中所指定之所有納入及排除準則的患者。招募情況及日期將記錄於CRF中。
患者病史包括對重要的既往病史、當前狀況、先前惡性腫瘤的任何治療及對先前治療之反應以及任何同時用藥記錄的全面回顧。
對於所有患者，需要在篩選時自TURBT(組織必須在計劃第1週期第1天之90天內收集)、全眼檢查、腦部掃描(若臨床上指示) (較佳使用釓造影劑之MRI)、骨骼掃描(若臨床上指示)、用於基線腫瘤成像之使用胸部IV造影劑之CT及腹部及骨盆的CT尿路造影、B型肝炎表面抗原及抗B型肝炎核心抗體之血清學、抗C型肝炎抗體血清學、HbA1c、反射顯微鏡分析尿液分析及甲狀腺功能檢查中獲取新鮮腫瘤樣本。
在基線時需要INR/PT/PTT、妊娠測試(尿液或血清，適用於有生育能力的女性)、身體檢查(包括體重)、收集高度、生命跡象、具有差異之CBC、血清化學組、CrCl、ECOG體能狀態評估和ECG。對於患有NYHA III級心臟衰竭或冠心病、心律不整或其他嚴重心臟病史的個體，需要在基線時進行ECHO。 6.1.7.2反應/功效評估
初始分期將主要根據診斷性TURBT之病理性發現確定且藉由當地實驗室審查，以根據RECIST版本1.1之放射研究的分期成像補充。將在參與前≤28天使用胸部IV造影劑之CT及腹部及骨盆的CT尿路造影進行初始臨床分期。患者必須在整個研究中接受相同成像模態以進行反應評估。
RC預先掃描應在RC+PLND之前≤28天完成，以排除疾病進展，這避免治癒性手術(RC+PLND必須在新輔助治療之最後一次劑量後4至12週之間進行)。應在RC+PLND之前審視RC預先掃描結果。RC後掃描應在前2年每12週(±14天)(基於RC+PLND之日期進行一次)執行，且隨後每24週(±14天)一次，直至疾病進展/復發、患者死亡、撤回同意書或研究結束(以先發生者為準)。每當懷疑疾病進展時，亦應進行腫瘤成像(使用RECIST版本1.1準則)。
對於不具有EFS事件但在RC + PNLD之後開始新穎抗癌治療的患者，在治療後追蹤訪視時繼續成像評估，直至疾病進展/復發、患者死亡、撤回同意書或研究結束(以先發生者為準)。
在第一劑量之研究治療之前90天內從診斷性TURBT患者收集的腫瘤組織樣品被送去進行中央病理學審查。亦將來自RC+PLND之組織樣品送至病理性反應評估之中央病理學審查。腫瘤反應在RC+PLND之後透過病理學審查分析治癒性意圖目標。病理性分期資訊包括TNM分類、組織學、淋巴結計數及手術邊緣。作為主要終點之pCR係藉由中央病理學審查評估。
患者亦將使用連續成像追蹤疾病復發。疾病復發將根據RECIST版本1.1 (研究者評估)藉由放射線確認之疾病進展加以確定。疾病進展時之視情況腫瘤活檢體(如果可用)亦可用於記錄疾病進展。
由於處理相關AE導致具有治癒性意圖目標之計劃RC+PLND的延遲(定義為在研究治療之最後一次劑量之後＞12週)係經紀錄。
關於研究終點之定義參見章節6.1.8.2。 6.1.7.3藥物動力學及ATA評估
根據表12中提供之樣品收集時程，在整個研究期間收集用於PK及ATA的血液樣品。經驗證或合格的分析用於量測血清或血漿中之恩諾單抗維多汀ADC、TAb及MMAE的濃度。收集PK樣品且歸檔以便對其他恩諾單抗維多汀相關物質(諸如，MMAE的循環代謝物)進行可能的分析。驗證之分析用於確定血漿中之恩諾單抗維多汀的ATA含量。若中斷恩諾單抗維多汀輸注，則不再需要收集相應的研究樣品。若在某個時間點不再需要前瞻性PK血液樣品收集，則會通知站點。 6.1.7.4生物標記物研究
在方案指定之時間點收集探索性生物標記物之樣品(參見表12)。對於患者選擇，不使用生物標記物評估。
分析方法可包括：免疫組織化學(IHC)、DNA及RNA之下一代定序(NGS)、T細胞受體β鏈定序、PCR、流式細胞測量術及免疫分析。
所有患者應提供用於自存檔組織樣品或新獲得之核心或腫瘤病變之切除活組織檢查進行生物標記物分析的組織。需要福馬林固定之石蠟包埋的腫瘤組織塊。核心針及自腫瘤組織(非骨骼部位)切除活檢體為較佳的。若可行，則可提供腫瘤病變之新鮮基線核心針活檢體。在臨床上需要活檢體作為SOC之一部分的情況下，應使得組織可用於生物標記物評估。
在用恩諾單抗維多汀治療之前及期間監測與反應、抗性或安全性觀測結果相關之探索性、預測性及預後生物標記物。腫瘤組織中之生物標誌物評估可包括(但不限於)恩諾單抗維多汀及其代謝物之量測，以及腫瘤微環境(TME)之表徵及藥物效應。分析可包括(但不限於) IHC及RNA及DNA之下一代定序。 (i) 血液中之生物標記物
恩諾單抗維多汀對腫瘤細胞的主要作用可使得局部的腫瘤相關及周邊免疫細胞的活化狀態發生變化。血液及尿液樣品之生物標記物評估可包括(但不限於)循環腫瘤DNA、蛋白質體方法(諸如，酶聯結免疫吸附分析(ELISA))、免疫分析作為腫瘤反應或療法抗性之標記物，及免疫功能之標記物，包括免疫細胞亞群及細胞介素之豐度。此等可能有助於深入瞭解與恩諾單抗維多汀相關的治療相關變化。 表12藥物動力學、免疫原性及生物標記物樣品收集時間點
   研究日 時間 窗 相對時間 藥代動力學及免疫原性 血液生物標記物 尿液生物標記物 組織生物標記物
EV PK ATA EV PBMC-1 H PBMC-2 H 血清 血漿-1 血漿-2 E 血漿-3 尿液 腫瘤組織 A
篩選 第-28天至第1天 N/A N/A N/A                            X B
第1週期及第2週期 第1天 劑量前 24小時內 EV輸注開始 X X X X X X X X X   
EV IV輸注結束 15分鐘內 EV輸注結束 X                           
第8天 劑量前 4小時內 EV輸注開始 X    X X X X X X X   
EV IV輸注結束 15分鐘內 EV輸注結束 X                           
第3週期 第1天 劑量前 24小時內 輸注開始 X X X X X X X X X   
根治性膀胱切除術 C    X X F    X F X F X F X F X F X D
EOT在根治性膀胱切除術後30-37天發生             X X X X X   
追蹤 前2年每12週(±14 d)及隨後每24週(±14 d) N/A ±7天 N/A             X X X X X X G
ATA=抗治療抗體；EV=恩諾單抗維多汀；IV=靜脈內；N/A=不適用；PBMC=末梢血液單核球；PK=藥物動力學。 注意：對於永久地中斷恩諾單抗維多汀之個體，將不收集PK樣品。若在某個時間點不再需要前瞻性PK血液樣品收集，則會通知站點。 A若收集非協定規定的腫瘤組織作為標準照護之一部分，則可提交組織進行進一步生物標誌物分析。 B自TURBT獲得組織樣品(必須在計劃的第1週期第1天之90天內通過TURBT收集組織) C將在新輔助治療之最後一次劑量後4至12週之間進行具有治癒性意圖目標之根治性膀胱切除術+雙側PLND。除腫瘤組織之外的所有樣品應在RC之前7天內收集。應在RC當天獲得腫瘤組織。 D關於RC之組織收集要求參見章節6.1.7.4。 E細胞集結粒將從血漿-2收集管中產生。 F在RC之前7天內獲取血液及尿液樣品。 G若在追蹤訪視時收集到非方案規定之組織，則提交活檢體。 H同意SGN22E-002方案之修正7及後續修正的患者不再需要PBMC樣本收集。 (ii) 腫瘤組織中之生物標誌物
為理解治療之前腫瘤之生物學特徵與患者結果之間的關係，檢驗來自TURBT之組織(腫瘤活體組織切片)。針對腫瘤中之特定藥力學、預測性及預後生物標記物評估活體組織切片。若組織可從參與後收集之標準護理活檢體中獲得(直至使用恩諾單抗維多汀處理後疾病進展)，則可對其進行檢查。
需要來自診斷性TURBT樣本及RC+PLND之腫瘤組織(細針抽吸不充分)鑑別新穎生物標記物。若進行額外處理後活檢體作為SOC之部分，則樣品亦可用於進一步鑑別反應之生物標記物及作用機制及對治療之抗性。
腫瘤組織中之生物標記物評估可包括(但不限於)：藉由IHC及下一代定序對連接素-4表現進行中央評估、腫瘤亞型分析、腫瘤微環境分析及對體細胞突變或通常在癌症中變化之基因或RNA的變化進行分析。
可分析其他組織(例如，皮膚)之生物標誌物，包括藥物及藥物產品之組織含量、核酸及蛋白質，以研究與耐藥機制或治療敏感性的可能關聯以及與處理相關的動態變化。若進行其他組織之非方案指定活檢體作為標準護理之一部分，則可提供組織用於進一步生物標記物分析。 6.1.7.5生物樣本庫
在美國，對於提供同意書的患者而言，去標識化、未使用的剩餘血液、尿液及/或組織由研究試驗委託者保留且用於將來的研究，包括(但不限於)評價目標以獲得新穎治療劑、ADC敏感性及抗性機制的生物學及ADC的生物標記物標識。捐贈給將來研究用的血液、尿液及組織樣品將保留長達25年的時段。若未提供額外同意書，則在研究完成之後將破壞任何剩餘生物樣品。 (i) EORTC 核心生活品質問卷 QLQ-C30
開發EORTC核心生活品質(QLQ-C-30)評估以量測與參與臨床試驗之多種癌症患者相關的QoL態樣(Aaronson 1993)；(Sneeuw 1998)。核心儀器之現行版本(QLQ-C30，第3版)描繪於 圖 3中且為由以下組成之30項評估： ●5項功能域(身體、角色、認知、情感及社交)； ●3項症狀量表(疲乏、疼痛、噁心及嘔吐)； ●單項症狀(呼吸短促、食慾不振、睡眠障礙、便秘、腹瀉)及疾病之財務影響；及 ●2項整體項目(健康、總體QoL)
各領域評分為0至100。對於整體健康狀況/QoL及功能域評分，評分愈高分別表示QoL及功能愈佳。對於症狀量表，評分愈高表示症狀愈明顯。 (ii) EuroQoL - 5 維 ( EQ - 5D - 5L )
EQ-5D為EuroQOL Group開發的標準化儀器，其用作健康結果的通用、基於偏好的量度。其適用於大範圍的健康狀況及療法且針對健康狀況提供簡單的描述性概況及單一指標值。EQ-5D為功能及健康的5項自報導量度，其評估健康的5個維度，包括活動能力、自行照護、日常活動、疼痛/不適，及焦慮/抑鬱(參見 圖 4)。每個維度包含3種程度(沒有問題、一些/中度問題、極大問題)。獨特的EQ-5D健康狀態係根據5個維度中之每一者的1種程度的組合來定義。對5個項目之反應基於來源於一般群體樣品之值隨後轉化成加權健康狀態指數(效用分數)(Herdman 2011)。健康效用評分在0與1之間，其中0為死亡且1為完美健康。除效用評分之外，此評估亦記錄調查對象在帶垂直刻度(0至100)之視覺類比量表上自評分之健康狀況。 6.1.7.6安全性評估
此研究過程中的安全評估將由以下組成：AE (包括SAE)的監督及記錄、伴隨藥物的記錄，及方案指定之體檢結論的量測、心臟監測及實驗室測試。
在研究過程中，安全將由SMC監測，如章節6.1.4.1中所描述。 (i) 不良事件(a)近似不良事件
不良事件
根據國際協調委員會(International Council for Harmonisation，ICH) E2A指南速報(Expedited Reporting)之定義及標準，以及美國聯邦法規(CFR) 21 312.32，研究性新藥(IND)安全報導，AE為投與藥品之患者或臨床研究個體中發生的任何不良醫學事件，其未必與此治療有因果關係。
當確定是否記錄測試結果、醫學病況或關於AE及預先存在條件CRF之其他事件時，應考慮以下資訊： ●自知情同意書籤署時直至研究第1天的前一天，應僅記錄與研究方案相關之AE。方案相關的AE定義為作為方案授權之程序的結果發生的不良醫學事件。 ●應記錄研究第1天存在的或不間斷給藥前的所有醫學病狀。 ●應記錄自研究第1天(劑量前)至安全性報導期結束之所有AE (無論與研究藥物之關係如何)(參見章節6.1.7.6(i)(c))。與任何程序(例如，活組織檢查)相關而發生的併發症應記錄為AE，無論該程序是否經方案授權。 ●在安全報導期期間發生的醫學病狀及AE (包括嚴重度、頻率或特徵)變化應予以記錄。 ●一般而言，異常實驗值不應記錄為AE，除非其與臨床徵象或症狀有關，需要干預，導致SAE，或導致研究終止或研究治療劑中斷/中止。當記錄由實驗室異常引起之AE時，應記錄所產生的醫學病況而非異常本身(例如，記錄「貧血」，而非「低血紅素」)。
嚴重不良事件
若AE滿足以下準則中之一者，則將其歸類為SAE： ●致命的：AE引起死亡。 ●危及生命的：AE將患者置於直接的死亡風險中。此分類不適用於假設若更嚴重則會引起死亡之AE。 ●住院：AE導致住院或延長現有住院患者的住院。根據此準則，在研究中簽署知情同意書或常規體檢之前計劃的為了選擇性醫學或手術程序或治療的住院不為SAE。入住姑息治療單位或臨終關懷照護機構不視為住院。在臨床試驗期間未惡化之潛在癌症或研究目標疾病之治療性、診斷性或手術程序的計劃前住院不必記為SAE。 ●失能/無力：導致個體執行正常生命功能之能力出現持久性或顯著失能或實質性中斷的AE。 ●先天性異常或生育缺陷：懷孕之前或妊娠期間暴露於分子或研究治療方案之患者之孩子或胎兒的不良結果。 ●醫藥學上顯著的：AE不滿足以上準則中之任一者，但可能危及患者且可能需要醫療或手術干預來預防上文所列之結果中之一者，或涉及疑似經由感染物藥品傳播。
不良事件嚴重度
AE嚴重度應利用美國國家癌症研究所(National Cancer Institute)關於不良事件之常見術語準則(NCI CTCAE) 4.03版分級。
獨立地評估AE嚴重度及嚴重性。『嚴重度』表徵AE之強度。『嚴重性』為法規定義且充當試驗委託者界定法規報導義務的指導(參見上述SAE定義)。
不良事件與研究治療之關係
各AE與恩諾單抗維多汀的關係應由研究者利用以下準則評價： ●相關：有證據表明藥物與AE之間存在因果關係，諸如： o不常見且已知與藥物暴露強烈相關的事件(例如血管性水腫、肝損傷、史蒂芬斯-強森症候群(Stevens-Johnson Syndrome))發生了一次 o通常與藥物暴露無關、但在暴露於藥物之群體中另外不常見的事件(例如肌腱斷裂)發生一或多次 ●不相關：AE之另一原因似乎更合理(例如歸因於基礎疾病或在研究群體中普遍發生)，或AE發作及研究治療投與無法建立時間順序，或因果關係被視為生物學上不可行 (b)引發及記錄不良事件的程序
適當時，研究者及研究人員藉由將所有AE及SAE記錄於CRF及/或SAE表格上來報導所有AE及SAE，不論其是否在患者問卷調查期間促成、在體檢、實驗室試驗期間發現及/或藉由其他方式發現。
引發報導不良事件
每次研究訪視時應使用開放式或非導引式問卷調查方法來引發報導AE。
記錄不良事件
以下資訊應記錄於AE及預先存在病狀CRF上： ●包括發生及消退日期在內的說明 ●其是否符合SAE準則 ●嚴重度 ●與研究治療劑的關係或其他因果關係 ●結果
針對 病徵或症狀 的診斷
一般而言，較佳對個別症狀的清單使用統一診斷。若徵象及/或症狀的各分量為醫學上確認的診斷分量(如標準醫學教科書所證明)，則應僅將症狀分類納入診斷。若徵象或症狀的任何方面不符合經典的診斷模式，則個別症狀作為各別AE報導。
此研究的重要異常為與研究藥物輸注相關的不良反應。對於IRR而言，NCI CTCAE術語『輸注相關反應』按照嚴重度的總體程度(根據NCI CTCAE)來記錄。另外，反應的各徵象或症狀作為個別AE記錄。若多種徵象或症狀發生指定的輸注相關事件，則各種徵象或症狀應分別根據其嚴重度的程度來記錄。
記錄嚴重不良事件
對於SAE而言，將事件記錄於CRF與SAE表格上。
當記錄SAE時，應考慮以下內容： ●死亡為事件的結果。導致死亡的事件應記錄且報導於SAE表格與CRF。 ●對於住院、手術或診斷程序而言，引起手術或診斷程序的病痛應記錄為SAE，而非程序自身。程序應作為回應於病痛而採取的一部分行動記於敍述內容中。
潛在癌症惡化
由於潛在惡性病之進展以功效變化形式評估，因此其不應報導為AE或SAE。疾病進展之放射線標識(例如，「腫瘤進展」或「癌轉移」)不應報導為AE或SAE (此等資料在功效評估中捕捉)。若不能確定症狀完全由於潛在惡性腫瘤之進展或不符合疾病之預期進展模式，則疾病進展之臨床症狀及體徵(例如「疲乏」、「呼吸困難」)可能會報導為AE或SAE正在研究中；不將疾病進展報導為AE術語。此外，發生潛在惡性病之進展的併發症應報導為AE或SAE。
死亡為事件的結果。導致死亡的事件應記錄且報導於SAE表格與CRF。
妊娠
注意藥物安全：對於自研究藥物第一劑量時直至研究藥物之最後一次給藥之後的6個月發生的所有妊娠，包括男性研究患者之伴侶發生的任何妊娠，均完成妊娠報導表格。若估算的懷孕日期在男性患者之第一次劑量研究藥物之後，則僅報導男性患者伴侶發生的妊娠。在得知懷孕後48小時內通過電子郵件或傳真發送至藥物安全部門(參見SAE報導表格中指定之電子郵件或傳真號碼)。監測所有妊娠的完整持續時間；應報導所有圍產期及新生兒結果。嬰兒應追蹤最少8週。
CRF資料的收集：在研究藥物最後一次給與的30天內發生的所有妊娠(如上文所述)亦記錄於AE及預存病狀CRF上。
不論意外、治療或自發引起的流產應作為SAE報導。如根據上述『嚴重性』準則定義(參見章節6.1.7.6(i)(a)的定義)的先天性異常或出生缺陷應作為SAE報導。
角膜不良事件
角膜潰爛或角膜炎AE≥2級應在其相應NCI CTCAE類別內分級。1級角膜潰爛或角膜炎AE應根據「眼病-其他，詳細說明(Eye disorders - Other, specify)」準則分級。其他角膜AE應記錄且根據「眼病-其他，詳細說明」準則分級。
糖尿病及高血糖症
糖尿病之定級應基於葡萄糖不耐之NCI CTCAE v4.03事件術語。高血糖症之定級應基於高血糖症之NCI CTCAE v4.03事件術語。
可能的肝源不良事件
若AE伴有LFT值(例如AST、ALT、膽紅素等)增加或懷疑歸因於肝功能異常，則關於肝臟異常監測及評估建議的詳細資訊參見6.1.11。關於與肝安全有關的治療中斷建議，參見章節6.1.6.2(iii)(a)。
應謹慎地監測肝源AE伴有LFT異常的患者。 (c)不良事件及嚴重不良事件報導期
所有群組之AE及SAE的安全性報導期係自研究第1天(劑量前)至EOT訪視或最後研究治療之後30天(以較晚者為準)。自知情同意書籤署時記錄與研究方案相關的所有AE。安全報導期之後發生且在研究者看來被認為與研究治療劑相關的所有SAE亦應報導給試驗委託者。研究者將盡一切努力追蹤所有非嚴重AE患者之結果。
滿足任何嚴重性準則之AE的報導時間範圍描述於章節6.1.7.7.(i)(d)中。
AE及SAE應自研究第1天至RC+PLND、至新輔助週期治療之最後一次劑量後90天或RC+PLND (若為延遲)(以較晚者為準)、在治療停止時或至EOT訪視(若參與者起始新穎抗癌療法)(以較晚者為準)報導。自RC+PLND當天至EOT訪視，報導所有相關的3級事件或相關的SAE。報導在安全性報導期之後發生的SAE，評估為與RC+PLND相關。
新輔助之AE及SAE應從研究第1天至EOT或研究干預後30天報導，以較晚者為準。在安全性報導期後發生的SAE被評估為與恩諾單抗維多汀或RC+PLND相關。 (d)嚴重不良事件需要立即報導
在SAE觀測或學習的24小時內，研究者應將事件報導給試驗委託者，不論事件與研究治療劑療法的關係。
對於初始SAE報導而言，應將可獲得的個案詳情記錄於SAE表格上。最少應包括以下內容： ●患者編號 ●事件發生日期 ●事件描述 ●研究者之因果關係評估 ●研究治療(若已知)
完成的SAE表格及SAE傳真封面在24小時內藉由電子郵件或傳真發送至試驗委託者藥物安全部門。
一旦相關追蹤資訊變得可用，將相關追蹤資訊提交至研究發起人。 (ii) 臨床實驗室測試
取樣交給中央實驗室及本地實驗室。
當地實驗室測試包括用於研究合格性、評估安全性及制定臨床決策之機構標準測試。為了確定是否繼續給藥或是否需要修正劑量，研究藥物投與之前，必須評審所有的本地實驗室結果。
以下實驗室評估將由當地實驗室進行，以評估在研究時程期間排定時間點(參見表14)之安全性： ●血清化學組包括以下測試：白蛋白、鹼性磷酸酶、ALT、AST、碳酸氫鹽、血尿素氮、鈣、肌酸酐、氯離子、乳酸脫氫酶、磷、鉀、鈉、總膽紅素、澱粉酶、脂肪酶、尿酸及GFR。 o在給藥之前驗證血糖＜250 mg/dL (參見章節6.1.6.4)。糖尿病患者必須在臨床中進行測試，且在給藥前血糖必須＜250 mg/dL。允許使用胰島素作為SOC之部分。 ●有差異的CBC包括以下測試：分五種部分差異的白血細胞計數(嗜中性球、淋巴球、單核球、嗜伊紅血球及嗜鹼性球)、血小板計數、血紅蛋白及血容比。 ●如根據機構標準所確定，基線處之CrCl。 ●甲狀腺功能測試，包括： o三碘甲狀腺素或不含三碘甲狀腺素 o不含甲狀腺素 o促甲狀腺激素 ●標準尿樣分析(使用反射性顯微鏡) ●INR/PT/PTT。 ● B型肝炎表面抗原及抗B型肝炎核心抗體的血清學。 ●抗肝炎C抗體的血清學。若為陽性，則追蹤進行聚合酶連鎖反應/病毒負荷測試。 ●針對有生育潛力女性的血清或尿液β人類絨毛膜激性腺素妊娠測試。 ● HbA1c.若HbA1c升高(≥6.5%)，則在第1週期期間將患者轉診至適當提供者以進行葡萄糖管理。 (iii) 包括體重在內的身體檢查
身體檢查應包括評估以下身體部分/系統：腹部、肢體、頭部、心臟、肺、頸部及神經。將僅在基線訪視時收集身高。在指定時間點(參見表14)，且另外在適用時根據機構標準收集體重，但在EOT之後訪視時不需要收集體重。 (iv) ECOG 體能狀態
在方案指定時間點評估ECOG體能狀態(表16) (參見表14)。 (v) 心臟監測
在基線及EOT訪視時執行ECG。若臨床上指示，則應執行額外的ECG。患者以仰臥姿勢維持至少5分鐘之後，執行常規12導程ECG。若可能，則應在獲得PK及生物標記物樣品之前執行ECG評估。對於患有NYHA III級心臟衰竭(參見章節6.1.10)或冠心病、心律不整或其他嚴重心臟病史的個體，需要在基線時進行經胸ECHO。若臨床上指示，則將來測試應使用相同模態。 (vi) 全面眼部檢查
進行由合格的驗光師或眼科醫師進行之完整眼睛檢查的患者，包括(但不限於)視力、裂隙燈、壓力測定檢查及擴張眼底檢查。後續眼睛檢查如臨床上指示進行。在研究期間，經歷角膜AE的患者需要進行EOT裂隙燈檢查。EOT狹縫燈檢查(僅在研究期間經歷角膜AE的患者所需)必須自最後一次給藥至少4週進行。 6.1.7.7處理後評估 (i) 追蹤評估
在先前反應評估掃描之後前2年每12週(±14天)及隨後每24週(±14天)進行列於如下之評估，直至疾病進展/復發、患者死亡、撤回同意書或研究結束(以先發生者為準)。 ●身體檢查(包括體重) ●ECOG體能狀態 ●使用胸部IV造影劑之CT以及腹部及骨盆的尿路造影。若造影劑被禁止，則參閱當前的圖像採集指南(章節6.1.12)以獲得較佳掃描和造影選擇。後續掃描經由相同放射性模式進行。 ● QoL PRO評估(EQ-5D-5L) ●大腦掃描(若臨床上指示) ●骨骼掃描(若臨床上指示) (ii) 長期追蹤評估
在長期追蹤期間，每24週(±14天)聯繫患者瞭解其存活狀態及收集後續抗癌療法資訊，直至死亡、研究結束或撤回同意書(以先發生者為準)。 6.1.7.8量測的適當性
此試驗中使用的安全措施視為評價研究藥物之潛在不良作用的標準程序。
抗腫瘤活性的測定將基於經驗證的如根據RECIST 1.1版所定義之客觀反應評估(Eisenhauer 2009) (參見表15)(Eisenhauer等人, Eur J Cancer (2009); 45(2): 228-47.)且研究者的治療決策將基於RECIST版本1.1。RECIST準則在此類型贅瘤的腫瘤學實務中被視為標準，且此方案中的評價時間間隔適於疾病管理。
通常針對生物製劑，共同評估免疫原性；因此，將執行標準測試以偵測針對恩諾單抗維多汀之特異性抗體的可能存在。
藥物動力學評估亦常見於臨床研究中以有助於表徵劑量暴露反應關係。
周邊血液樣品中的探究性生物標記物量測能夠與PK評估建立相關性且常見於臨床研究中。類似常見的是，對處理前腫瘤組織執行評估。周邊血液與腫瘤生物標記物樣品利用常用的標準測試加以評估。
具有治癒性意圖目標之RC+PLND通常在MIBC診斷之後8至12週發生，提供測試新圍手術期治療方法之獨特機會。
回應於NAC之非肌肉侵襲性疾病的病理性降期(≤ pT1)為公認的改善OS之生物標誌物，且將被視為新輔助試驗的適合之終點(Sonpavde 2009; Chism 2013)。 6.1.8資料分析方法 6.1.8.1樣品大小之確定
在此研究中可招募約20名患者。
樣品大小並非基於用於正式假設測試之功效計算，而是基於如藉由95% CI表徵的pCRR之估計的精確度而選擇。
對於20名患者之樣品大小，且假定pCRR為30%或40%，下文表13中概述2側95% CI。 表13
pCRR 95% 精確 CI (n=20) 95% 精確 CI (n=50)
30% (12%，54%) (18%，45%)
40% (19%，64%) (26%，55%)
6.1.8.2研究終點定義 (i) 病理完全反應率 ( pCRR )
pCRR經定義為具有pCR之患者的比例。pCR經定義為來自RC+PLND之檢測組織中不存在活腫瘤(pT0N0)。 (ii) 病理降期率 ( pDSR )
pDSR經定義為具有pDS之患者的比例。pDS經定義為具有＜pT2 (包括pT0、pTis、pTa、pT1)及在來自RC+PLND之檢測組織中之N0的患者。 (iii) 無疾病存活期 (DFS)
DFS經定義為自RC後基線掃描至以下任一者第一次出現的時間： ●如CT或MRI及/或活組織檢查所評估之局部或遠端復發；或 ●由任何原因所致的死亡。
僅針對RC後基線掃描確認無疾病之患者計算DFS。 (iv) 無事件存活期 (EFS)
EFS經定義為自研究治療開始至以下事件中之任一者第一次出現的時間： ●放射線疾病進展排除RC+PLND之前的治癒性意圖目標手術 ●未能對存在殘餘肌肉侵襲性疾病及/或任何放射線疾病的參與者進行RC+PLND ● RC+PLND時留下的總體殘留疾病(由於腫瘤無法切除或新發現轉移性疾病，外科醫生無法完成根治性手術) ●如CT或MRI及/或活組織檢查所評估之局部或遠端RC後復發。若活組織檢查由於參與者安全性不可行，則單獨CT/MRI為足夠的 ●因任何原因之死亡
注意：非尿道上皮第二原發性惡性腫瘤不被視為事件。
如下文所描述檢查EFS資料用於EFS之主要分析： ●在最後疾病評估當天檢查未拒絕手術且不具有任何EFS事件之患者； ●無疾病、患有NMIBC或評估不完全的拒絕手術之患者在拒絕手術前的最後一次疾病評估時檢查； ●將患有殘餘MIBC或拒絕手術之進行性疾病的患者視為事件。在研究第1天檢查拒絕手術但無篩選後掃描之患者。 (v) 總存活期
OS定義為自研究治療開始至因任何原因所致之死亡日期的時間。在不存在死亡確認之情況下，OS在已知患者存活之最後一天檢查。 6.1.8.3統計及分析計劃
下文所呈現之統計及分析計劃對統計分析計劃(statistical analysis plan，SAP)中所詳述的更完整計劃進行了概述。改變方案中所描述的資料分析方法僅當其改變方案的主要特點時才需要修正方案。SAP在資料庫鎖定之前完成。對最終SAP中所描述之方法的任何改變將在臨床研究報導中描述且證明。 (i) 一般考慮因素
在RC+PLND時藉由中央病理學審查基於病理性腫瘤反應概述疾病反應。
一般而言，所呈現的描述性統計資料包括觀測次數、平均值、標準差、中值、連續變數的最小值及最大值，及分類變數的數目及(非遺漏)百分比(根據類別)。
除非另外說明，將計算兩側95%含量的CI。
適用時，使用Clopper-Pearson方法論(Clopper 1934)，針對反應率(例如，ORR、DCR、pCRR及pDSR)計算雙側95%精確CI。
對於時間與事件終點，使用Kaplan Meier方法估計中值存活時間；相關的95% CI根據互補對數-對數轉換計算(Collett 1994)。
資料變換及推導
除非在計劃分析部分中另外指定，否則基於2個日期(例如開始日期及結束日期)之時間變數計算為(結束日期-開始日期1)(以天為單位)。
除非在分析計劃中另外規定，否則所有分析中使用之基線值係在第一劑量之研究藥物之前的最新非遺漏量測。
分析集
安全性分析集包括接受任何量之研究藥物的所有患者。安全性分析集用於所有安全性分析。
全分析集(FAS)包括參與研究且接受任何量之研究藥物(恩諾單抗維多汀或組合藥劑)的所有患者。FAS用於分析功效終點。應注意，pCR之分析群體包括FAS中之所有患者，除拒絕手術之無疾病患者之外。pDS之分析群體包括FAS中經歷手術且具有自RC+PLND中檢測之組織樣品的所有患者。基於FAS概述患者人口統計資料及基線疾病特徵。
可評估有效性之分析集包括FAS中具有至少2個基線後反應評估或出於任何原因之中斷治療的所有患者。可評估有效性之分析集用於功效終點之額外分析。
PK分析集包括接受恩諾單抗維多汀的所有患者，自該等患者收集至少1個血液樣品且分析其中的恩諾單抗維多汀、MMAE或TAb濃度。給藥及樣品收集時間的相應記錄亦須可供所有恩諾單抗維多汀、MMAE及TAb濃度利用。PK分析集用於PK參數之分析。
患者的其他分析集可在SAP中定義。
小組檢查
作為探究分析，可對所選終點執行小組分析。
分析時序
在所有經治療患者已完成其指派之研究干預之後進行主要分析，且已進行研究之充分追蹤。
可定義其他截止日期且可鎖定相應資料庫以允許更精確地估算時間對事件終點。 (ii) 患者分配
按處置對研究患者之核算製成表格，且按分組及總體概述各分析集中之患者數量。出於中斷或退出所有參與患者之原因，概述中斷研究治療之患者及自研究退出之患者。 (iii) 患者特徵
使用FAS按分組及總體概述人口統計資料及其他基線特徵。細節提供於SAP中。 (iv) 功效分析
使用如章節6.1.8.3所定義之FAS分析功效終點之主要分析。功效終點之補充分析可使用可評估有效性之分析集呈現。
進行pCRR、pDSR、DFS、EFS及OS的分析。
此研究組分之關鍵功效終點為藉由中央病理學審查之pCRR。觀測到之pCRR及95% CI係使用Clopper-Pearson方法按分組提供的。
pDSR藉由中央病理學審查為次要終點且類似於上文所提及進行分析。
諸如研究者之DFS、研究者之EFS及OS之其他次要終點為時間與事件終點，且其使用卡本-麥爾方法分析且卡本-麥爾圖表由群組提供。檢閱算法的詳情提供於SAP中。 (v) 藥物動力學及 ATA 分析
在各PK取樣時間點，以描述性統計概述恩諾單抗維多汀ADC、MMAE及TAb濃度。PK參數，包括(但不限於) AUC、Cmax及Tmax，藉由非隔室分析估計且藉由描述性統計資料概述。可研究PK及藥力學終點、安全性或功效之間的關係。
使用安全分析集，將按照訪視及分組來概述ATA的發生率。 (vi) 患者報導結果分析
彙總各評估之完成及順應性率。對FAS群體進行PRO分析。若計劃出任何額外分析，則其詳述於補充SAP中。 (vii) 生物標記物分析
研究生物標記物參數(例如，處理前值、相對於處理前之絕對及相對變化)與有效性、安全性及PK參數之關係。概述經確定所關注之關係及相關資料。分別描述此等分析之細節。 (viii) 安全性分析
安全分析集將用於概述所有安全終點。 (a)暴露程度
彙總治療持續時間、週期數、總劑量及劑量強度。劑量修改亦以類似方式概述。細節提供於SAP中。 (b)不良事件
AE綜述按分組及總體提供列表：所有AE的發生率、TEAE、治療相關的AE、3級及更高級AE、SAE、治療相關的SAE、死亡，及引起研究治療中斷的AE。AE定義為治療意外(若其新近發生或在研究治療之後惡化)。
AE係藉由用於法規活動之醫學詞典(MedDRA)、較佳術語、嚴重性及與研究藥物之關係概述。在1名患者中多次出現具有相同較佳術語之相同AE的情況下，對AE計數為發生一次。AE之發生率按較佳術語及分組製成表。導致研究藥物過早中斷的AE以相同方式概述及列舉。 (c)死亡及嚴重不良事件
SAE以與所有AE相同之方式列出及彙總。列出具有致命結果之事件。 (d)臨床實驗室結果
實驗室值(例如，在反射性顯微鏡分析下之化學、血液學及尿樣分析)可藉由訪視以圖形方式呈現。可以根據需要藉由預定訪視將概述統計資料製成表。根據NCI CTCAE版本4.03列舉實驗室值且當值處於正常參考範圍外部時加以標記。 (e) 其他安全性分析
生命體徵
在適當時可將概述統計資料及相對於基線的變化及/或劑量前至劑量後製成表。
ECOG 狀態
概述各訪視時之ECOG狀態。可按分組及總體對自基線變化至最佳及最差基線後評分。
ECG
可根據排定及非排定的每個ECG來概述ECG狀態(正常、臨床上的異常顯著，或臨床上的異常不顯著)，且可按分組及總體將相對於基線的轉變製成表。 (ix) 中期分析
未計劃正式期中分析 6.1.9縮寫清單及術語描述
ACS　　美國癌症協會
ADC　　抗體藥物結合物
AE　　不良事件
AESI　　特別受關注之不良事件
ALT　　丙胺酸胺基轉移酶
ANC　　絕對嗜中性球計數
aPTT　　活化部分凝血活酶時間
ASCO　　美國臨床腫瘤學協會
AST　　天冬胺酸胺基轉移酶
ASTRO　　美國放射腫瘤學會
ATA　　抗治療抗體
AUA　　美國泌尿協會
AUC　　曲線下面積
BCG　　芽孢桿菌卡莫特-蓋蘭
BICR　　盲態獨立中央審查(Blinded Independent Central Review)
BPI-SF　　簡要疼痛量表簡表
BSA　　體表面積
卡鉑(carboplatin)　　順式-二胺(環丁烷1,1二羧酸)鉑
CBC　　全血球計數
cCR　　臨床完全反應
CFR　　美國聯邦法規
CI　　信賴區間
順鉑　　順式-二胺二氯鉑(II)
CNS　　中樞神經系統
CPI　　檢查點抑制劑
CR　　完全反應
CrCl　　肌酐清除
CRF　　病例報告表
CT　　電腦斷層攝影術
CTLA-4　　細胞毒性T淋巴球相關蛋白質4
DE　　可評估DLT
DCR　　疾病控制率
DFS　　無疾病存活期
DLT　　劑量限制性毒性
DOR　　反應持續時間
ECD　　胞外域
ECG　　心電圖
ECHO　　經胸心動迴聲圖
ECOG　　東部腫瘤協作組
eCRF　　電子病例報導表
EFS　　無事件存活期
EORTC　　歐洲癌症研究及治療組織
EOT　　治療結束
EQ-5D　　EuroQOL 5-維
EV　　恩諾單抗維多汀(Enfortumab vedotin)
EV　　單恩諾單抗維多汀單一療法
FAS　　全分析集
HbA1c　　血紅蛋白A1c
HIV　　人類免疫不全病毒
HRU　　健康資源採用
ICH　　國際協調委員會
iCPD　　基於iRECIST指南確認之進行性疾病
IEC　　獨立倫理學委員會
Ig　　免疫球蛋白
IHC　　免疫組織化學
imAE　　免疫介導之不良事件
IND　　試驗用新藥
INR　　國際標準化比率
IRB　　機構審查委員會
iRECIST　　基於免疫之治療劑的經修飾之RECIST 1.1
IRR　　輸注相關之反應
iUPD　　未確認進行性疾病(基於iRECIST指南)
IV　　靜脈內
LFT　　肝功能測試
M-CAVI　　甲胺喋呤/卡鉑/長春鹼
MDRD　　腎病之膳食改良
MIBC　　肌肉侵襲性膀胱癌
MMAE　　單甲基奧瑞他汀E
MRI　　磁共振成像
MTD　　最大耐受劑量
MVAC　　甲胺喋呤、長春鹼、小紅莓及順鉑
NAC　　新輔助化學治療
NCI CTCAE　　國家癌症研究所不良事件常見術語準則(National Cancer Institute's Common Terminology Criteria for Adverse Events)
NGS　　下一代定序
NMIBC　　非肌肉侵襲性膀胱癌
NYHA　　紐約心臟協會
ORR　　客觀反應率(objective response rate)
OS　　總存活期
PBMC　　外周血液單核球
pCR　　病理性完全反應
pCRR　　病理完全反應率
PD　　進行性疾病
PD-1　　計劃性細胞死亡1
PD-L1　　計劃性死亡配位體1
PD-L2　　計劃性死亡配位體2
pDS　　病理性降期
pDSR　　病理降期率
Pembro　　帕博利珠單抗
PFS　　無進展存活期
PFS2　　後續療法之無進展存活期
PK　　藥物動力學
PLND　　骨盆淋巴結擴清術
PR　　部分反應
PRO　　患者報導結果
PSA　　前列腺特異性抗原
PT　　凝血酶原時間
PTT　　部分凝血活酶時間
QLQ-C30　　核心QoL評估
QoL　　生活品質
Q2W　　每2週
Q3W　　每3週
RC　　根治性膀胱切除術
RC+PLND　　根治性膀胱切除術及骨盆淋巴結擴清術
RECIST　　實體腫瘤反應評估準則1.1版
SAE　　嚴重不良事件
SAP　　統計分析計劃
SD　　穩定疾病
SDRIFE　　對稱藥物相關彌漫性及播散性紅斑
SJS　　史蒂芬斯-強森症候群
SMC　　安全性監測委員會
SOC　　標準照護
SUO　　泌尿腫瘤學會
TAb　　總抗體
T1DM　　1型糖尿病
TEAE　　治療引發之不良事件
TEN　　中毒性表皮壞死溶解
TME　　腫瘤微環境
TURBT　　膀胱腫瘤之經尿道切除
ULN　　正常上限
USP　　美國藥典 表14事件計劃表
   天數 篩選/基線 參與 每3週週期 RC EOT 追蹤 W 長期追蹤 X
D-28至1 D-7至1 在第一劑量之1至2 d內 D1 D8 D15 RC前    RC後30-37天 B 前2年每12週及隨後每24週 每24週
訪視窗          ±2 d C +1 d ±1 d ≤RC之前4 wk       ±14 d ±14 d
篩選/基線評估 納入/排除，病史 X    在治療之前提交確認                        
知情同意書 X                           
起始收集來自TURBT之腫瘤樣本 D,E X                           
完全眼睛檢查 X                           
大腦掃描(若臨床上指示) F X             X       X   
骨骼掃描(若臨床上指示) F X             X       X   
INR/PT/PTT    X                        
B型肝炎表面抗原及抗B型肝炎核心抗體的血清學 X                           
抗C型肝炎抗體之血清學 X                           
HbA1c G X                           
用反射性顯微鏡分析進行分析 X                           
妊娠測試(尿液或血清；僅適用於有生育能力的女性) H    X X J             X      
安全性評估 身體檢查(包括體重)    X X I,J             X X K   
身高    X                        
生命體徵    X X I,J X J          X      
有差異的CBC L,M    X X I,J X J X       X      
血清化學組 L,M    X X I,J,N X J,N X       X      
CrCl    X                        
甲狀腺功能測試 X    X I,J             X      
ECOG體能狀態    X X I,J             X X   
ECG O    X                X      
經胸ECHO Z    X                        
裂隙燈檢查                      X P      
同時用藥記錄 與研究程序相關 Q 對於AE：自第1天(劑量前)至RC、最後一次劑量後90天、提前中斷時或EOT訪視時(以較晚者為準)收集。自RC當天至EOT訪視，報導所有相關的3級事件或相關的SAE。將報導在安全性報導期之後出現的SAE，評估為與研究性藥劑或RC+PLND相關。可追蹤某些臨床相關之非嚴重AE (AECI)，直至消退、返回至基線或研究結束(以較晚者為準)。      
不良事件收集
處理 Y 恩諾單抗維多汀投與 R          X X                  
PK/免疫原性/生物標記物 血液、尿液、組織樣品收集 關於樣品收集細節，參見PK、ATA及生物標記物表 A
反應評估 成像 S X                X S    X AA X S   
RC時之病理性評估                      X         
存活狀態 T                               X T
其他評估 患者退出訪問                   X U    X V      
A關於PK、ATA及生物標記物取樣參見表19。 B  EOT訪視應在患者完成所有必需研究干預(研究干預包括RC+PLND)後30-37天內進行，或在完成所有必需的研究干預之前停止。EOT評估必須在開始新的癌症治療之前進行，裂隙燈檢查除外(裂隙燈檢查必須在最後劑量之後≥4週進行)。若EOT評估在最後研究干預後30天之前完成，則將在最後研究干預日期後30至37天電話聯繫患者，以完成安全性追蹤且評估AE。 C窗適用於週期2+。 D在第1週期第1天之前90天內。此組織亦將送至用於藉由免疫組織化學(IHC)進行之PD-L1確定。 E在患者之初始診斷時獲得用於生物標記物研究之侵襲性腫瘤組織。樣品必須可用於參與研究。腫瘤塊為較佳的。若腫瘤塊不可用，則片材為可接受的。 F在整個研究期間，如臨床上所指示來重複執行。 G若HbA1c升高(≥6.5%)，則在第1週期期間將患者轉診至適當提供者以進行葡萄糖管理。 H針對有生育潛力之女性的血清或尿液妊娠測試。第-3天至第1天基線評估。血清或尿液妊娠測試。若在7天內執行基線評估，則第1週期不需要執行。在EOT之後每月(±1週)重複6個月。妊娠測試可在投與研究藥物前1天內進行。 I若在1天內進行基線評估，則不需要第1週期。 J程序應在給藥前進行。對於永久地停止恩諾單抗維多汀處理之患者，將不會收集第8天的生命體徵。 K追蹤體檢將不包括重量量測。 L臨床上顯著之異常實驗室值將在第1週期期間的1天內確認，如臨床上所指示。 M安全性實驗室可在給藥之前至多1天收集。 N在給藥之前驗證血糖＜250 mg/dL。糖尿病患者必須在臨床中進行測試，且在給藥前血糖必須＜250 mg/dL。允許胰島素之使用作為標準照護之一部分。 O將對所有患者進行標準基線/EOT ECG評估。 P僅對在研究期間經歷過角膜AE的患者需要；必須在最後一次給藥後≥4週進行。 Q自知情同意書之時間。 R恩諾單抗維多汀的劑量必須間隔至少1週。 S將使用胸部IV造影劑之CT及腹部及骨盆的CT尿路造影進行基線放射篩選評估。若造影劑被禁止，則參閱當前的圖像採集指南(章節6.1.12)以獲得較佳掃描和造影選擇。再分期將在RC之前≤4週經由相同放射性模式進行。應在RC+PLND之前審查RC預先掃描結果。具有治癒性意圖目標之RC+PLND必須在研究治療之最後一次劑量後4至12週之間發生。後續掃描應每12週(±14天) (基於RC+PLND之日期)進行持續前2年，且隨後每24週(±14天)，直至疾病進展/復發、患者死亡、撤回同意書或研究結束(以先發生者為準)。 T瞭解患者之存活狀態、疾病狀態及收集後續抗癌治療資訊，直至死亡、研究結束或患者撤回同意書(以先發生者為準)。 U當患者結束最後週期時但在手術前進行訪問(視情況)。 V訪問(視情況)將在EOT或提前停止時進行(以先發生者為準)。 W在前2年(基於RC+PLND之日期)每12週(±14天)進行追蹤，直至疾病進展/復發、患者死亡、研究結束或撤回同意書(以先發生者為準)。在研究之2年後，包括反應評估之訪視頻率將降低至每24週(±14天)。在RC+PLND後每24週(±14天)聯繫患者瞭解其生存狀態且收集後續抗癌療法資訊，直至死亡、研究結束或撤回同意書(以先發生者為準)。 X在RC+PLND後每24週(±14天)聯繫患者瞭解其生存狀態且收集後續抗癌療法資訊，直至死亡、研究結束或撤回同意書(以先發生者為準)。 Y為了確定是否繼續給藥或是否需要劑量修改，研究藥物投與之前，審查所有本地實驗室測試結果。若在任何週期(週期2+)之第1天存在阻止給藥之AE，則應延遲給藥且不消除給藥。除非藥物永久地停止，否則若持有一種藥物，則所有藥物都需要持有。若任何週期之第8天出現計劃劑量之2天內未消除AE，則應消除該劑量。若消除第8天劑量，則仍應獲取PK樣品(適用週期)。對於永久地停止恩諾單抗維多汀處理之患者，將不會收集第8天的生命體徵。 Z對於患有NYHA III級心臟衰竭或冠心病、心律不整或其他嚴重心臟病史的個體，需要進行經胸心動迴聲圖。 AA在RC+PLND之後未進入追蹤(但進入長期追蹤)之患者的EOT成像應在最後一次研究干預之4週內進行。若EOT成像完成，則後續掃描應基於方案指定之成像時間表。 表15  RECIST準則概述(版本1.1)
實體腫瘤之反應評估準則
術語 定義
完全反應(CR) 所有目標病灶消失。任何病理性淋巴結之短軸必須減小至＜ 10 mm。
部分反應(PR) 採用基線直徑總和作為參照，目標病灶的直徑總和減小≥30%。
進展性疾病(PD) 目標病變之直徑總和的至少20%增加，採用研究時之最小總和直徑作為參考(若基線總和為研究時之最小值，則此包括基線總和)。除20%之相對增加以外，該總和亦須展示至少5 mm之絕對增加。一或多個新病灶的出現亦視為惡化。
穩定疾病(SD) 研究時採用最小直徑總和作為參照，既不充分萎縮以符合PR，亦不充分增加以符合PD。
可量測病灶 必須通過CT/MRI掃描(CT片層厚度不超過5 mm)在至少1個維度(要記錄量測平面中的最長直徑)進行精確量測，最小尺寸為10 mm (最多5個病灶，各部位不超過2個，長軸至少10 mm [或對於結節病變15 mm的短軸])。 當藉由CT/MRI掃描評估時，視為可量測，淋巴結的短軸必須≥15 mm。
來自RECIST版本1.1 (Eisenhauer 2009)。
若以下疾病評估(初始反應之後的至少4-5週)仍顯示反應(CR或PR)，則反應(CR或PR)視為經確認。在初始反應之後出現SD的情況下，若SD之後出現PR或CR，則其視為經確認。舉例而言，若患者在第9週出現PR，在第14週出現SD，且在第18週出現PR，則此PR將視為經確認。
基線病變鑑別
若在基線時存在超過一個可量測病變，所有病變至多總共五個至多(每個器官最多兩個病變)代表所有受涉及器官，應被確定為目標病變，且在基線時記錄及量測。目標病變應基於其大小進行選擇(具有最長直徑之病變)，代表所有受涉及器官，但另外應為適宜於可再現重複量測之彼等病變(不應選擇骨骼病變為目標病變)。有時，最大病變可能無法進行可再現量測，在這種情況下，應選擇下一可重複地量測之最大病變。在CT/MRI掃描中偵測到之膀胱病變可選擇為目標病變，其限制條件為放射科醫師認為病變可在基線後時間點進行可再現量測，且病變已藉由充分的膀胱擴張進行量測。在整個研究治療過程中應使用相同的成像方式。
定義為可量測且可標識為目標病灶之病理性淋巴結必須滿足藉由CT或MRI掃描得到之短軸為≥15 mm的標準。所有其他病理性結節(短軸≥ 10 mm但＜ 15 mm之彼等結節)應視為非目標病變。短軸＜10 mm之淋巴節視為非病理性結節且不應對其進行記錄或跟蹤。包括病理性淋巴結之所有其他病變(或疾病位點)應鑑別為非目標病變，且亦應在基線時對其進行記錄。 表16.體能狀態轉換量表
卡諾斯基(Karnofsky) 蘭斯基(Lansky) ECOG
百分比 描述 百分比 描述 評分 描述
100 正常，無不適，無疾病證據。 100 完全活躍，正常。 0 正常活性。具有完全活性，能夠在無限制之情況下進行所有疾病前效能。
90 能夠進行正常活動；少量疾病之徵象或症狀。 90 身體上費勁的活動受到輕微限制。
80 正常活動費力；出現疾病的一些徵象或症狀。 80 活躍，但很快疲勞。 1 出現症狀，但能走動。劇烈的體力活動受限，但能走動，且能夠從事輕度或久坐性質之工作(例如輕體力家務、辦公室工作)。
70 照護自己；不能進行正常活動或進行活躍工作。 70 玩樂活動時受到較大限制且度過的時間較短。
60 需要偶爾幫助，但能夠照護其大部分需求。 60 能起床走動，但活躍活動程度最低；忙於較安靜的活動。 2 臥床時間＜50%。走動且能夠完全自我照護，但無法從事任何工作活動。超過50%之清醒時間能起床走動。
50 需要大量幫助及頻繁的醫療照護。 50 愛修邊幅，但整天的大部分時間無所事事；不能活躍玩樂；能夠參與所有安靜的活躍玩樂及活動。
40 失能，需要特殊照護及幫助。 40 大部分臥床，參與安靜活動。 3 臥床時間＞50%。僅能有限地自我照護，超過50%清醒時間侷限於床或椅子。
30 嚴重失能，指示住院。不會即將發生死亡。 30 臥床，需要幫助，即使是安靜活樂。
20 病情嚴重，指示住院。不會即將發生死亡。 20 常常睡眠，玩樂完全受限於非常被動的活動。 4 100%臥床。完全失能。無法進行任何自我照護。完全受限於床或椅子。
10 快速進行的瀕死、致死過程。 10 不能玩樂，不能離床。
0 死亡。 0 死亡。 5 死亡。
6.1.10紐約心臟學會分類
心臟病患者體能活動處方的功能及治療分類
I類：活動不受限制的患者；其受日常活動中不顯示症狀的困擾。
II類：活動受到輕微、輕度限制的患者；其在休息時或在輕度施力時感到舒適。
III類：活動明顯受限的患者；其僅在休息時感到舒適。
IV類：在充分休息時應侷限於床或椅子的患者；帶來不適的任何體能活動且在休息時出現症狀。
線上來源：線上來源：http://www.heart.org/HEARTORG/Conditions/HeartFailure/AboutHeartFailure/Classes-of-Heart-Failure_UCM_306328_Article.jsp 6.1.11肝臟安全監測及評估
以下建議來自2009年7月頒佈、標題為「藥物誘發肝臟損傷：市售前的臨床評價(Drug-Induced Liver Injury: Premarketing Clinical Evaluation)」的美國食品及藥物管理局(FDA)行業指南。
血清胺基轉移酶增加至＞3×正常值上限(ULN)或膽紅素＞2×ULN的任何患者應經歷肝酶(至少包括丙胺酸轉胺酶(ALT)、天冬胺酸轉胺酶(AST)、鹼性磷酸酶(ALP)及總膽紅素(TBL))的詳細測試。為了確認異常，應在告知測試結果的72小時內重複進行測試。
肝臟異常的描述：
經確認的肝臟異常按照中度及重度表徵：
中度：● ALT或AST ＞3 × ULN 或總膽紅素＞2 × ULN
重度：● ALT或AST＞3×ULN 及總膽紅素＞2×ULN (*參見下文關於哈依定律(Hy's Law)的描述) ● ALT或AST ＞8 × ULN ● ALT或AST＞5 × ULN，超過2週 ● ALT或AST＞3×ULN及國際標準化比值(INR)＞1.5 (若INR測試適用/予以評價) ● ALT或AST＞3×ULN，出現暗示肝臟損傷(例如右上腹疼痛或觸痛)及/或嗜酸性球增多症(＞5%)的症狀
研究者可確定除如上文所述之外的異常肝功能結果可當作中度或重度異常且需要額外的監測及追蹤。
*哈依定律：藥物誘導肝細胞損傷引起的黃疸，無顯著阻塞性組分，所致壞結果的比率較高：10至50%死亡率(或移植)。哈依定律的2個「要求」為：1)藥物可導致肝細胞型損傷的證據，通常顯示為轉胺酶升幅增加的更高：3×ULN (「2×ULN升幅在經治療及未治療之患者中太常見而無法區分」)。2)膽紅素增加(至少2×ULN)伴轉胺酶並行升高至少3×ULN且無證據證明肝內或肝外膽紅素阻塞(ALP升高)或吉伯特氏症候群(Gilbert's syndrome)的個案(Temple等人, Pharmacoepidemiol Drug Saf (2006);15(4): 241-3.)。
追蹤程序
經確認之中度及重度肝功能異常應藉由獲得適當專家會診、詳細相關病史、身體檢查及實驗室測試來充分表徵。肝功能測試經確認異常的患者應如下文所述追蹤。
若異常出現穩定或研究藥物已中斷且患者無症狀，則確認的中度異常肝功能測試(LFT)應每週重複執行2至3次，接著每週或更短時間重複執行。
在不存在另一病因下，如上文所定義之重度肝功能異常可視為重要醫學事件且可報導為SAE。所有患者當其可能歸因於研究藥物的重度肝功能異常被觀測到時，應聯繫試驗委託者且告知所有患者。
為了進一步評估實驗室的異常肝結果，建議研究者： ●獲得症狀及先前或並行疾病的更詳細病史。應注意可能導致繼發性肝異常之疾病及病狀，諸如低血壓事件及失代償性心臟疾病。非酒精性脂肝炎發現於肥胖高脂蛋白症及/或糖尿病患者中，且可能與波動的胺基轉移酶含量相關。 ●獲得伴隨藥物使用(包括非處方藥物、互補及替代藥物)、飲酒、麻醉藥品使用及特殊膳食 ●獲得暴露於環境化學劑之病史。 ●基於患者的病史，其他測試可為適當的，包括： o急性病毒性肝炎(A、B、C、D、E或其他感染物)， o評估膽道疾病的超音波成像或其他成像， o其他實驗室測試，包括INR、直接膽紅素。 ●考慮胃腸病學或肝病學會診。
執行由研究者確定的其他測試以進一步評價可能的病因。關於與肝安全有關的治療中斷建議，參見章節6.1.6.2(iii)。 6.1.12圖像獲取準則
以下按降低的優先次序之篩選掃描：1.使用IV造影之CT胸部及腹部及骨盆之CT尿路造影。 2.不使用IV造影劑之CT胸部以及使用IV釓造影劑之腹部及骨盆之MRI尿路造影(若碘造影劑在醫學上為禁忌的)
以下按降低的優先次序之膀胱切除術後掃描 ：1.使用經口及IV造影劑之胸部-腹部-骨盆CT 2.不使用IV造影劑之CT胸部以及使用IV釓造影劑之MRI腹部-骨盆(若碘造影劑在醫學上為禁忌的) 3.不使用IV造影劑之CT胸部以及不使用IV釓造影劑之MRI腹部及骨盆(若碘造影劑及釓造影劑在醫學上為禁忌的) 4.使用IV釓造影劑之MRI胸部-腹部及骨盆 5.不使用IV造影劑之胸部-腹部-骨盆CT(推薦經口造影劑) (若患者對碘造影劑及MRI掃描具有禁忌)
以下按降低的優先次序 之 大腦掃描 ( 若臨床上指示 ) ：1.使用IV釓之大腦MRI 2.使用IV造影劑之大腦CT (若釓及/或MRI為醫學上禁忌) 3.不使用IV釓之大腦MRI (若釓為醫學上禁忌的) 4.不使用IV造影劑之大腦CT (若釓為醫學上禁忌)
成像模式、解剖覆蓋及獲取參數應在各患者之所有成像訪視中保持一致。 6.1.13手術
手術指南：
RC+PLND (例如，開放式、機器人輔助腹腔鏡)及尿路分流術(例如，回腸導管、新膀胱)之手術方法由治療泌尿學家及參與者自行決定。
RC+PLND根據AUA/ASCO/ASTRO/SUO指南*進行，如下：
「在進行標準的根治性膀胱切除術時，臨床醫生應切除男性的膀胱、前列腺及精囊，且女性應切除膀胱、子宮、輸卵管、卵巢及陰道前壁。當進行兩側骨盆淋巴結切除術時，臨床醫師應最低限度地切除外部及內部髂及閉孔淋巴結(標準淋巴結切除術)。」在新膀胱重建之情況下，根據標準照護及治療泌尿學家的判斷，可允許保留女性性器官。此指南之任何偏差應記載於醫療記錄及eCRF中。
所有手術後併發症以與其他AE (CTCAE版本4.0)相同的方式報導且分級，且由研究者及/或外科醫生鑑別為手術後併發症。
* https://www.auanet.org/guidelines/bladder-cancer-non-metastatic-muscle-invasive-(2017) 。6.1.14關於避孕之指南
出於此指導之目的，若與患者較佳生活方式一致，則完全禁慾為可接受的避孕形式。完全禁慾定義為自知情同意書之時間開始且在整個研究中繼續，直至全身性暴露結束(在研究藥物之最後一次劑量之後至少6個月)進行禁慾。
可接受之高效節育方法 ( 預防懷孕 )
有生育潛力或其伴侶具有生育潛力且性活躍可能引起妊娠的患者可選擇以下任何兩種方法(請參見以下可接受之組合)： ●除非禁忌，否則激素避孕方法(不包括僅孕激素丸劑；方法必須與抑制排卵相關) ●失敗率＜1的宮內節育器 ●輸卵管結紮 ●輸精管結紮(自手術之日起至少90天，精液分析證明無精子症) ●障壁方法(具有或不具有殺精子劑之男性或女性避孕套、具有或不具有殺精子劑之子宮頸帽、具有或不具有殺精子劑之隔膜) ●具有生育潛力之個體係已經歷初潮且未進行手術絕育(例如，子宮切除術、雙側輸卵管切除術、雙側卵巢切除術)或尚未完成停經之任何出生為女性的人。閉經在臨床上定義為45歲以上出生為女性的人在不存在其他生物學、生理或藥理學病因之情況下閉經12個月。 ●障壁方法只能與並非障壁方法之高效避孕方法一起使用。單獨的障壁方法，包括雙重障壁方法，不被認為高效避孕措施(參見不可接受的避孕方法)。
避孕方法之可接受組合包括激素方法及輸精管結紮、激素方法及障壁方法、子宮內裝置及輸精管結紮、子宮內裝置及障壁方法、輸卵管結紮及輸精管結紮及輸卵管結紮及障壁方法。
防止二次接觸精液的可接受方法如下：選項1 -男性避孕套(具有或不具有殺精子劑)及子宮頸帽，及選項2 -男性避孕套(具有或不具有殺精子劑)及隔膜。生為男性且與懷孕或哺乳者有性行為的個體必須使用選項1或2中的避孕藥具。
不可接受的避孕方法包括週期性禁慾、僅殺精子劑、無方法、僅含孕激素的避孕藥、停藥、同時使用女性及男性避孕套、節律及單獨使用障壁法(包括雙重障壁法)。 6.2 實例 2 - 在 1b / 2 期 ( 組 H ) 中具有肌肉侵襲性尿路上皮癌 ( MIUC ) 之不符合順鉑條件的患者之新輔助恩諾單抗維多汀 ( EV ) 單一療法的抗腫瘤活性6.2.1背景
在所有被診斷患有尿路上皮癌之患者中，高達25%的患者患有肌肉侵襲性疾病，對此等患者來說，癌進展或癌轉移的風險極大。在根治性膀胱切除術及骨盆淋巴結擴清術(RC+PLND)之前的新輔助化學治療已顯示延長符合順鉑條件的患者之總存活期。針對經歷手術之不符合順鉑條件的患者之標準照護(SOC)不包括新輔助療法。安全有效的新輔助療法為不符合順鉑條件的患者之肌肉侵襲性尿路上皮癌(MIBC)的未滿足之需求。恩諾單抗維多汀(EV)為一種針對連接素-4之抗體藥物結合物，連接素-4在尿路上皮癌中高度表現，在II及III期試驗中已證明可使局部晚期或轉移性尿路上皮癌患者受益，包括不符合順鉑條件的患者。 6.2.2方法
針對此章節6.2 (實例2)之方法如章節6.1 (實例1)中所描述。簡言之，如章節6.1 (實例1)中所描述，符合RC+PLND且ECOG為0-2之不符合順鉑條件的cT2-T4aN0M0 MIBC患者被招募進1b/2期試驗。患者在RC+PLND之前的每3週週期之第1天及第8天接受3個週期之新輔助EV (1.25 mg/kg)。研究之主要終點為藉由中央審查之病理完全反應率(pCRR；ypT0N0)。關鍵次要終點包括病理性降期(pDS)率(yp T0、Tis、Ta、T1、N0)及安全性。 6.2.3結果
結果係來自22名患者之初步分析。研究中之個體的處置展示於表17中。 表17.個體之安置 a
EV 單 (N=22) N (%)
完成RC+PLND之個體數目 21 (95.5)
進行研究之個體數目 19 (86)
●追蹤之個體 14 (64)
●長期追蹤之個體 b 5 (23)
中斷研究之個體數目 3 (14)
研究中斷原因   
死亡 3 (14)
a.研究治療包括恩諾單抗維多汀及/或RC+PLND。 b.一名(1)個體患有部分膀胱切除術。 c.具有疾病復發或進展或開始後續抗癌療法之個體。
患者人口統計資料展示於表18中。 表18.人口資料
EV 單 (N=22) n (%)
年齡組
＜65歲 1 (5)
≥ 65及＜ 75歲 10 (45)
≥ 75歲 11 (50)
性別
女性 2 (9)
男性 20 (91)
ECOG 體能狀態
0 13 (59)
1 8 (36)
2 1 (5)
BMI ≥ 30 kg/m 2 6 (27)
HbA1c ≥ 6.5% 1 (5)
血紅蛋白＜ 10 g/dL 0
基線時患者之疾病特徵展示於表19中。特定言之，患者具有T2 (68.2%)、T3 (27.3%)及T4 (4.5%)分期。68.2%患者具有主要尿路上皮癌，且31.8%患者具有混合組織學。 圖 5描繪相對於膀胱及骨盆區域的解剖結構之MIUC疾病期( 圖 5中展示為T is、T a、T1、T2a、T2b、T3a、T3b、T4a及T4b) (參見例如，www.cancer.org/cancer/bladder-cancer/detection-diagnosis-staging/staging.html，其描述MIUC疾病期)。 表19.基線處之疾病特徵
EV 單 (N=22) n (%)
疾病程度
多病灶(多個病變) 8 (36)
單病灶(單個病變) 14 (64)
臨床期 a
T2 13 (59)
T2a 1 (4.5)
T2b 1 (4.5)
T3a 2 (9)
T3b 4 (18)
T4a 1 (4.5)
組織學
轉移細胞癌(TCC) 15 (68)
TCC +鱗狀 3 (14)
TCC +微乳頭狀 2 (9)
TCC +腺癌 1 (4.5)
TCC +肉瘤樣 1 (4.5)
a.個體在研究之前使用最近期概述
患者之研究藥物暴露的概述提供於表20中。特定言之，19名患者完成EV之全部3個週期。21名患者經歷RC+PLND且1名患者經歷部分膀胱切除術。 表20.研究藥物暴露
新輔助處理之持續時間 a ( 月份 )
中值 2.07
Min，Max 0.7，2.3
週期數目 b
完成3個EV週期之個體 19
完成2個EV週期之個體 1
完成1個EV週期之個體 2
新輔助 EV 結束至 RC + PLND 之 時間 c ( 週數 )
中值 8
Min，Max 4.1，11.6
a.治療持續時間為自第一劑量之研究藥物至以下最早的時間：最後處理週期之第21天、死亡日期、隨後抗癌療法開始或分析資料快照日期(若個體在分析時仍進行治療)。 b.具有任何量(＞0)之所接收之恩諾單抗維多汀或組合藥劑的週期。 c.自新輔助EV結束至手術之持續時間為自最後一個劑量之新輔助EV至手術日期的時間。
與病理性完全反應(pCR)及病理性降期(pDS)相關之結果如下。特定言之，36%患者具有病理性完全反應(pCR)。在50%患者中(n=11)觀測到病理性降期(pDS) (如ypT0、ypTis、ypTa及ypT1及N0之存在所定義)。
在此研究中，殘餘疾病定義為在手術樣本(RC+PLND)中患有殘餘肌肉侵襲性UC之個體。患有殘餘疾病之患者概述於表21中。 表21.患有殘餘疾病之患者的概述
殘餘疾病 * N(%)
ypT2N0 3 (14%)
ypT3-4N0 2 (9%)
ypT任何N+ 6 (27%)
MIUC之其他處理之病理性反應率概述於表22中。 表22. MIUC中其他處理之病理性反應結果的概述
試驗 研究群體 方案 樣品大小 pCR ( 手術時無活腫瘤 ) pDS ( 手術時無肌肉侵襲性疾病 )
本研究 不符合順鉑條件 EV單一療法x 3個週期 22 32% (僅ypT0) 45.5% (ypT0及ypTis) 50% (包括pCR)
回溯性(Dash等人2008) 符合順鉑條件 Gem+Cis x 4個週期 42 26% 36%
MVAC vs RC (Grossman，2003) 符合順鉑條件 MVAC 153 38%   
綜合分析 (Yin等人2016) 符合順鉑條件 GC 1067 25.7% 44.8%
綜合分析 (Yin等人2016) 符合順鉑條件 MVAC 667 24.3% 46.5%
PURE-01研究 符合順鉑條件 (n=42)及不符合順鉑條件(n=8) 帕博利珠單抗x 3 50 42% 54% (包括pCR)
ABACUS 不符合順鉑條件 阿替利珠單抗x 2 88 31% (ypT0+ypTis)   
BLASST-1 符合順鉑條件 Nivo+Gem+Cis x 4 41 49% 66%
本文所描述之臨床研究中觀測到的無事件存活期(EFS)展示於 圖 6中。未達到EFS中值，如 圖 6中所展示。來自 圖 6中所示之資料的結果概述於表23中。 表23.研究者評估的無事件存活期(EFS)
   EV 單 (N=22)
復發或死亡之個體數目 a 5 (22.7)
無事件存活期 ( EFS ) ( 月 )   
中值(95% CI) - (6.54，-)
第25、第75百分位 6.7，-
觀測到之最小值，最大值 2.60，12.32+
以下時間點之 EFS 率(%)   
6個月(95% CI) 88.2 (59.86，96.98)
12個月(95% CI) b 60.5 (27.96，82.01)
a.一個PD歸因於放射線成像掃描，1個PD歸因於活組織檢查及放射線成像掃描且3例死亡。 b.一名個體在研究第190天(92天之前)檢查，此歸因於在膀胱切除術後第6個月訪視時在反應評估時進入的資料問題。12個月EFS率將在資料校正之後更新為63.2(31.69，83.21)。
亦評估用EV單一療法及RC+PLND治療MIUC患者之安全性。表24概述研究中治療引發之不良事件(TEAE之)的觀測結果。另外，59.1%患者具有3級或更高TEAE的不良事件。 表24.治療引發之不良事件的概述(TEAE的不良事件)
   EV 單 (N=22) n (%)
任何 TEAE 22 (100)
EV相關之TEAE 22 (100)
RC相關之TEAE 7(32)
任何嚴重 TEAE 7 (32)
EV相關之嚴重TEAE 3 (13.6)
RC相關之嚴重TEAE 2 (9)
表25概述引起EV中斷、未進行膀胱手術及死亡之TEAE的觀測結果。 表25.治療引發之不良事件的概述(TEAE's)
   EV 單 (N=22) n (%)
導致 EV 中斷的任何 TEAE 3 (14)
導致EV中斷之EV相關TEAE 3 (14)
未進行任何引起膀胱手術之 TEAE 0
未進行任何引起膀胱手術之EV相關的TEAE 0
引起死亡之任何 TEAE a 1 (4.5)
引起死亡的EV相關TEAE 0
引起死亡的RC相關TEAE 0
a.個體死亡發生在RC+PLND之後因與EV或RC+PLND無關之心跳驟停。
表26列出研究中之患者中觀測到的特定TEAE。 表26.在研究中之患者中觀測到的TEAE
較佳術語 EV 單 (N=22) n (%)
總體 22 (100)
疲乏 12 (55)
腹瀉 9 (41)
噁心 8 (36)
禿頭症 7 (32)
味覺障礙 7 (32)
泌尿道感染 7 (32)
貧血症 6 (27)
高血氧症 6 (27)
腹痛 5 (23)
斑丘疹 5 (23)
表27列出研究中之患者中觀測到的特定TEAE。 表27.在研究中之患者中觀測到的TEAE
較佳術語 EV 單 (N=22) n (%)
總體 11 (50)
高血糖症 3 (13.6)
急性腎損傷 2 (9.1)
小腸梗阻 2 (9.1)
泌尿道感染 2 (9.1)
貧血 1 (4.5)
乏力 1 (4.5)
心房微顫 1 (4.5)
心房撲動 1 (4.5)
失血型貧血 1 (4.5)
心跳驟停 1 (4.5)
意識模糊狀態 1 (4.5)
脫水 1 (4.5)
多形性紅斑 1 (4.5)
高鉀血症 1 (4.5)
低血壓 1 (4.5)
腸梗阻 1 (4.5)
脂肪酶增加 1 (4.5)
術後漏尿 1 (4.5)
斑丘疹 1 (4.5)
坐骨神經痛 1 (4.5)
傷口感染 1 (4.5)
最常見TEAE為高血糖症(13.6%) (上表中未展示)、小腸堵塞(9.1%)、泌尿道感染(9.1%)。
表28列出引起EV中斷之TEAE。 表28.引起EV中斷之TEAE.
較佳術語 EV 單 (N=22) n (%)
總體 3 (14)
脫水 a 1 (5)
多形性紅斑 b 1 (5)
斑丘疹 c 1 (5)
a.個體完成第1週期。AE發作出現在最後EV劑量之後6天。(Gr3) b.個體完成第1週期。AE發作出現在最後EV劑量之後4天。(Gr3) c.個體完成第2週期。AE發作出現在最後EV劑量之後4天。(Gr3)
表29列出引起劑量修飾之TEAE。 表29.引起劑量修飾之TEAE
較佳術語 EV 單 (N=22) n (%)
引起劑量中斷之任何 TEAE a,b 3 (14)
引起劑量中斷之EV相關的TEAE a 2 (9)
引起劑量降低之任何 TEAE c 2 (9)
引起劑量降低之EV相關的TEAE 2 (9)
a劑量中斷包括如CRF上所收集之劑量消除及劑量延遲。劑量消除係在跳過預定劑量時。劑量延遲係在預定給藥週期時不出現劑量時。 b劑量延遲歸因於Gr2疲乏及Gr1腹瀉(兩者均與EV相關)。一個不相關延遲係歸因於現場的惡劣氣象。 c劑量降低係歸因於Gr2味覺障礙及Gr2腹瀉(兩者均與EV相關)。
表30提供引起死亡之TEAE。 表30.引起死亡之TEAE
較佳術語 EV 單 (N=22) n (%)
總體 2 (9)
心跳驟停 a 1 (4.5)
a在最後EV劑量之後45天及在RC+PLND之後15天出現死亡。與EV或RC+PLND無關。
表31列出在研究中之患者中觀測到的5級不良事件。三(3)名患者具有5級不良事件，同時進行與RC+PLND相關之研究；在2名患者中，此等AE發生在研究治療結束後＞30天。 表31. 5級不良事件
5 級 AE EV 之最後一次劑量的天數 RC+PLND 的天數 相關性
心跳驟停 45 15 與EV或RC+PLND無關
急性腎損傷 142 62 與RC+PLND相關
鞍狀PE 127 55 與RC+PLND相關
表32列出了特別關注之TEAE。 表32.特別關注之TEAE
AECI ： 按相關 MedDRA 術語分類 EV 單 N=22
任何級 n (%) ≥ 3 級 n (%)
任何外周神經病變 5(23) 0
任何皮膚反應 12 (55) 2 (9)
任何皮疹 12 (55) 2 (9)
任何SCAR 1 (5) 1 (5)
任何高血糖症(非禁食) 5 (23) 3 (7)
任何眼部病症      
乾眼 5 (23) 0
視力模糊 2 (9) 0
角膜病症 0 0
任何輸注相關反應 2 (9) 0
6.2.4結論
用新輔助EV治療之不符合順鉑條件的MIBC患者中觀測到之病理性完全反應(pCRR)有利地與在符合順鉑條件的MIUC患者中之化學療法中所見的反應率進行比較。在此研究中在患者中觀測到之新輔助EV單一療法之安全概況與EV之已知安全概況一致。特定言之，3個新輔助治療週期在患者中為良好耐受的。 6.3 實例 3 - 用於治療患有肌肉侵襲性膀胱癌 (MIBC) 之不符合順鉑條件的患者 ( 組 L) 之新輔助恩諾單抗維多汀 (ASG-22CE) 單一療法接著根治性膀胱切除術及骨盆淋巴結擴清術 (RC+PLND) 接著輔助恩諾單抗維多汀 ( 亦即，圍手術期環境中 ) 的所提議的 1b/2 期研究 . 6.3.1 臨床研究中使用的藥物
此實例使用恩諾單抗維多汀，其描述於上文。此實例中所描述之方案可有效地治療患有肌肉侵襲性膀胱癌(MIBC)之不符合順鉑條件的患者。 6.3.2 研究概述6.3.2.1 概要(i) 研究藥物名稱
恩諾單抗維多汀(ASG-22CE) (ii) 研發期
1b/2期 (iii) 研究標題
用於治療患有肌肉侵襲性尿路上皮癌(MIUC)之不符合順鉑條件的患者之新輔助恩諾單抗維多汀(ASG-22CE)作為單一療法接著根治性膀胱切除術及骨盆淋巴結擴清術(RC+PLND)的1b/2期研究。 (iv) 研究目標
主要 ●為了評估新輔助及圍手術期恩諾單抗維多汀單一療法之抗腫瘤活性，如藉由病理學完全反應(pCR)率所量測，定義為藉由中央病理學審查在來自根治性膀胱切除術(RC)及骨盆淋巴結擴清術(PLND)之所檢測組織中不存在活腫瘤(pT0N0)。
次要 ●藉由盲法獨立中央審查(BICR)評估研究療法的無事件存活期(EFS) ●藉由研究者評估研究療法的無事件存活期(EFS) ●評估病理性降期(pDS)率，定義為具有腫瘤＜pT2 (包括pT0、pTis、pTa、pT1)及藉由中央病理學審查在來自RC+PLND之所檢測組織中之N0的患者 ●藉由BICR評估無疾病存活期(DFS) ●藉由研究者評估無疾病存活期(DFS) ●評估總存活期(OS) ●評估恩諾單抗維多汀單一療法之安全性及耐受性 ●評估歸因於治療相關不良事件(AE)之計劃RC+PLND遲發型的百分比
另外 ●評估連接素-4及PD-L1表現量 ●評估生物活性及疾病抗性之生物標記物及其與臨床結果量測之潛在關聯 ●評估PK及ATA之發生率 ●評估患者報導之經歷及患者報導之治療耐受性 (v) 研究群體
符合條件的患者包括如下≥18歲患者：患有組織學上確認之肌肉侵襲性膀胱癌(MIBC)(主要尿道上皮類型[亦即，＞50%])，其中ECOG體能狀態為0、1或2，其被認為符合治療性意圖的RC+PLND的條件且同意接受治療性意圖的RC+PLND。
符合條件的患者應藉由病理學及成像審查，臨床分期為cT2 T4aN0M0。在篩選時，患者需要使用以下進行成像：使用胸部之靜脈內(IV)造影劑的電腦斷層攝影術(CT)及腹部及骨盆之CT尿路造影。
應在參與前≤28天進行成像(如前一句中所描述)[美國癌症聯合委員會，第六版]。在參與之前必須獲得具有來自診斷性膀胱腫瘤之經尿道切除(TURBT)之相關病理學報導的腫瘤樣品，且確定其足以進行病理學審查及生物標記物分析。患者應具有充分的血液及器官功能測試。
符合條件的患者必須為在參與時由於至少1項以下準則不符合基於順鉑之化學治療條件的個體：GFR ＜60 mL/min但≥30 mL/min，ECOG體能狀態為2，NCI CTCAE 4.03版≥2級聽覺損失或NYHA III級心臟衰竭。患者必須尚未接受先前針對MIBC之全身性治療、化學放射或放射治療。患者可已接受先前膀胱內芽孢桿菌卡莫特-蓋蘭(BCG)或針對非肌肉侵襲性膀胱癌(NMIBC)之膀胱內化學治療。 (vi) 計劃的患者數目
在此研究中招募約50名患者。 (vii) 研究設計
此研究經設計以評估在新輔助及圍手術期環境中恩諾單抗維多汀作為單一療法用於治療患有MIBC之不符合順鉑條件的患者之安全性及抗腫瘤活性。研究設計描繪於 圖 7中。
在患有MIBC之患者中評估用恩諾單抗維多汀單一療法處理。此研究招募約50名患有cT2-T4aN0M0或cT1-T4aN1M0 MIBC之患者。在RC+PLND之前，所有患者在每3週週期之第1天及第8天用新輔助恩諾單抗維多汀(1.25 mg/kg)處理持續總共3個週期，接著在每3週週期之第1天及第8天用輔助恩諾單抗維多汀(1.25 mg/kg)處理RC後8週開始總計6個週期。
藉由SMC在持續性基礎上監測安全性。若SMC推薦且經研究發起人批准後，允許將恩諾單抗維多汀的劑量含量(至多2個含量)降低到1.25 mg/kg之已確立擴增(la/mUC組)劑量以下。
所有患者在第一處理劑量之前90天內應具有膀胱腫瘤之經尿道切除(TURBT)且來自診斷TURBT之組織必須在參與前確認為可用的，且被認為足以進行病理學審查及生物標誌物分析。所有患者都用使用胸部IV造影劑之CT及腹部及骨盆的CT尿路造影進行臨床分期的基線TURBT後放射線篩選評估。
在新輔助處理之後，在RC+PLND之前≤4週經由相同放射性模式進行再分期以排除疾病進展，其將妨礙治癒性手術。在研究治療開始後的第12週(84天±7天)，放射線上仍無遠端癌轉移的患者繼續RC+PLND。若歸因於AE延遲，則可允許患者在此時間範圍外經歷RC+PLND。具有除AE以外之延遲的患者可考慮接受醫學監測者諮詢。手術由以下組成：具有治療性意圖之RC+PLND，根據美國泌尿外科協會(AUA)/美國臨床腫瘤學會(ASCO)/美國放射腫瘤學會(ASTRO)/泌尿腫瘤學會(SUO)指南(Chang 2017)。
任何拒絕RC+PLND之患者不再接受任何研究干預；拒絕RC+PLND且已達成臨床完全反應(cCR)、已降期至非MIBC或評估不完全的患者將進入研究追蹤，且將根據方案定義之時間表進行疾病評估觀測，直至疾病進展/復發、患者死亡、研究結束或撤回同意書(以先發生者為準)。
藉由中央病理學審查在具有治癒性意圖目標之RC+PLND之後評估病理性CR作為主要終點。在RC+PLND之前注意到的妨礙治癒性意圖目標手術的放射線疾病進展、未能對存在殘餘肌肉侵襲性疾病及/或任何放射性疾病的患者進行RC+PLND、在RC+PLND時留下總體殘留疾病、經放射線評估及/或經活組織檢查確認的RC後局部或遠處復發(局部病理學復查)或任何原因引起的死亡都被視為EFS事件，且此類患者不接受進一步研究干預，而是過渡到長期追蹤。
在RC+PLND之後6週(±14天)，所有患者均重複成像(經由與其RC後基線掃描相同的放射性模式)。此時，注意到患有新復發性或轉移性疾病之患者被認為已經歷事件且不接受對研究之進一步干預，而是過渡到長期追蹤。在放射線上無疾病之患者繼續進行至輔助期。輔助治療應在RC後8週(±14天)開始，患者接受總共6個週期的輔助恩諾單抗維多汀。
在RC後基線成像之後，經由相同放射線模式每12週(±7天)進行成像，直至自其RC後基線掃描2年結束。在研究週期後，包括反應評估之訪視頻率降低至每24週(±14天)。每當懷疑疾病進展時，亦應進行腫瘤成像(使用RECIST版本1.1準則)。L組中之所有成像掃描藉由盲法獨立中央審查(BICR)回顧性評估。成像持續，直至疾病進展/復發、患者死亡、研究結束或撤回同意書(以先發生者為準)。對於不具有EFS事件但在RC + PNLD之後任何時間開始新穎抗癌治療的患者，根據經方案定義之時程表繼續成像評估，直至疾病進展/復發、患者死亡、研究結束或撤回同意書(以先發生者為準)。
應在處理中斷或治療結束之±4週內執行成像(EOT)。若在中斷治療4週內進行成像，則不需要在中斷治療時進行成像。任何額外研究性成像(例如，尿路造影)之結果應報導於電子性CRF (eCRF)中且由BICR提交中央放射線評估。
患者在電子裝置(較佳報導媒介)上完成EuroQOL-5 Dimensions (EQ 5D-5L)患者報導結果(PRO)評估。僅當無法使用電子裝置時，評估才可以書面形式或由臨床工作人員藉由電話進行報導。(請參見針對PRO評估之細節的概要之其他評估子部分。) (viii) 測試產品、劑量及投與模式
在RC+PLND之前，在每3週週期之第1天及第8天以1.25 mg/kg經約30分鐘投與作為靜脈內輸注之恩諾單抗維多汀持續3個週期。
患者在每3週週期之第1天及第8天接受恩諾單抗維多汀持續RC後總計6個週期。
在輸注相關反應(IRR)不存在的情況下，計算所有患者的輸注速率以達成約30分鐘的輸注時段。恩諾單抗維多汀不得以靜脈內推注或彈丸注射投與。恩諾單抗維多汀不應與其他藥物混合。恩諾單抗維多汀的劑量必須間隔至少1週(7天)。
基於在基線處之患者實際體重計算恩諾單抗維多汀劑量。當患者之體重變化≥基線或前一個週期的10%，或滿足劑量調整準則時，應重新計算劑量。除體重＞100 kg之患者外，使用實際重量；在此類情況下，基於100 kg之體重計算劑量。此研究中允許之最大劑量為125 mg。
表33顯示肌肉侵襲性膀胱癌之恩諾單抗維多汀步降劑量含量： 表33
劑量含量 恩諾單抗維多汀劑量(mg/kg)
1 1.25
-1 1
-2 0.75
(ix) 治療持續時間
患者在具有治癒性意圖目標之RC+PLND之後接受3個週期之恩諾單抗維多汀單一療法，接著在RC+PLND之後6個週期之恩諾單抗維多汀單一療法。
最後一個患者參與之後的第5年或當無患者保持長期追蹤時(以先發生者為準)，結束研究。另外，發起人可在任何時間終止研究。 (x) 功效評估
初始分期主要根據診斷性TURBT之病理性發現確定且藉由當地實驗室審查，以根據RECIST版本1.1之放射研究的分期成像補充。患者需要在篩選時(在參與之前≤28天)使用胸部IV造影劑之CT及腹部及骨盆的CT尿路造影進行成像以進行臨床分期。患者必須在整個研究中接受相同成像模態以進行反應評估。
在第一劑量之研究治療之前90天內從診斷性TURBT患者收集的腫瘤組織樣品被送去進行中央病理學審查。亦將來自RC+PLND之組織樣品送至病理性反應評估之中央病理學審查。在具有治癒性意圖目標之RC+PLND之後藉由病理學審查分析評估腫瘤反應。病理性分期資訊包括TNM分類、組織學、淋巴結計數及手術邊緣。
如概要之研究設計分章中所概述，亦使用連續成像追蹤患者之疾病復發。根據RECIST版本1.1 (研究者評估)藉由放射線確認之疾病進展確定疾病復發。若可用，則在疾病進展時進行之視情況腫瘤活檢體亦可用於記錄疾病進展。
由於處理相關AE導致具有治癒性意圖之計劃RC+PLND的延遲(定義為在研究治療之最後一次劑量之後＞12週)係經紀錄。 (xi) 藥物動力學及 ATA 評估
在整個研究期間在特定時間點收集血液樣品之藥物動力學(PK)及(抗治療抗體) ATA。經驗證或合格的分析用於量測血清或血漿中之恩諾單抗維多汀ADC、總抗體(TAb)及MMAE的濃度。收集PK樣品且歸檔以便對其他恩諾單抗維多汀相關物質(諸如，MMAE的循環代謝物)進行可能的分析。 (xii) 生物標記物評估
在方案指定時間點收集末梢血液、尿液及腫瘤活檢體。在研究治療之前及期間監測與反應、抗性或安全性觀測結果相關之探索性、預測性及預後生物標記物。使用在RC+PLND獲得之腫瘤樣品(MIBC組分)以表徵臨床作用機制及抗性。
需要來自診斷性TURBT樣本及RC+PLND之腫瘤組織(細針抽吸不充分)鑑別新穎生物標記物。若進行額外處理後活檢體作為SOC之部分，則樣品亦可用於進一步鑑別反應之生物標記物及作用機制及對治療之抗性。
腫瘤組織中之生物標記物評估可包括(但不限於)基因表現(GE)及突變負荷之量測、腫瘤微環境(TME)及腫瘤亞型之表徵及藥物效應。分析可包括但不限於連接素-4及PD-L1之免疫組織化學(IHC)及RNA及DNA之下一代定序(NGS)。血液樣品中之生物標記物評估可包括(但不限於)量測循環血細胞亞群中之基線及藥物誘導之變化、免疫分析及循環疾病標記物。血液及尿液分析可包括(但不限於)循環腫瘤DNA、蛋白質體方法(諸如，酶聯結免疫吸附分析(ELISA))、免疫分析作為腫瘤反應或療法抗性之標記物，及免疫功能之標記物，包括免疫細胞亞群及細胞介素之豐度。
可分析視情況組織樣品提交之其他組織(例如，皮膚)中之生物標記物，包括藥物及藥品之組織含量、核酸及蛋白質，以研究與對治療之抗性機制或敏感性以及與治療相關之動態變化的可能關聯。分析方法包括IHC、DNA及RNA之NGS、T細胞受體β鏈定序、聚合酶鏈反應、流式細胞量測術及免疫分析。 (xiii) 其他評估
PRO評估使用EQ 5D 5L完成。在新輔助週期1至3第1天及第8天時給藥之前2天內，在電子裝置(較佳報導媒介)上完成評估。在新輔助週期完成之後，患者在RC+PLND (若適用)時及EOT時完成ePRO一次。在RC+PLND(若適用)及EOT之後，患者在2年內每12週完成一次PRO評估(對於追蹤期)，此後每24週完成一次(對於長期追蹤期)。在給藥訪視日時，應在研究藥物投與之前完成評估。當無法使用電子裝置時，評估才可以書面形式或由臨床工作人員藉由電話進行報導。 (xiv) 安全性評估
安全評估係基於經由安全監督方法所收集的資訊且包括來自所記錄AE (包括嚴重不良事件(SAE))、同時用藥記錄、體檢結論、心臟監測及實驗室測試的資料。將經由研究過程藉由SMC監測安全性。 (xv) 統計方法(a)用於關鍵安全性終點之分析
安全性分析評估AE之類型、發生率、嚴重程度、嚴重性及相關性，以及實驗室異常之類型、發生率及嚴重程度。概述尤其受關注之AE (AESI)的發生率、持續時間及消退。 (b)用於關鍵功效終點之分析
觀測到之病理完全反應率(pCRR)及95% CI按組使用Clopper-Pearson方法提供。 (c)樣品大小
招募約50名患者。
樣品大小並非基於用於正式假設測試之功效計算，而是基於如藉由95% CI表徵的pCRR之估計的精確度而選擇。
出於說明的目的，表34為2側95% CI之概述，假定pCRR為30%或40%，且對於50名患者之樣品大小： 表34
pCRR 95%精確CI (n=20) 95%精確CI (n=50)
30% (12%，54%) (18%，45%)
40% (19%，64%) (26%，55%)
6.3.3 目標
主要目標
主要目標為評估新輔助及圍手術期恩諾單抗維多汀單一療法或新輔助恩諾單抗維多汀之抗腫瘤活性，如藉由pCR率所量測，定義為藉由中央病理學審查在來自RC及PLND之所檢測組織中不存在活腫瘤(pT0N0)。
次要目標包括：●藉由BICR評估研究療法的EFS， ●藉由研究者評估研究療法的EFS， ●評估pDS率，定義為具有腫瘤＜pT2 (包括pT0、pTis、pTa、pT1)及藉由中央病理學審查在來自RC+PLND之所檢測組織中之N0的患者 ●藉由BICR評估DFS， ●藉由研究者評估DFS， ●評估OS， ●評估恩諾單抗維多汀單一療法之安全性及耐受性，及 ●評估歸因於治療相關AE之計劃RC+PLND遲發型的百分比。 其他目標包括：●評估連接素-4及PD-L1表現量， ●評估生物活性及疾病抗性之生物標記物及其與臨床結果量測之潛在關聯， ●評估PK及ATA之發生率，及 ●評估患者報導之經歷及患者報導之治療耐受性。
終點
主要終點
此研究之主要功效終點為藉由中央病理學審查之pCR率。
次要終點● 藉由 BICR 之 EFS ， ● 藉由研究者評估之 EFS ，● 藉由中央病理學審查之 pDS 率 ，● 藉由 BICR 之 DFS ，● 藉由研究者評估之 DFS ， ●OS ，● AE 的類型、發生率、嚴重度、嚴重性及相關性 ，● 實驗室異常之類型、發生率及嚴重度 ， 及●歸因於治療相關AE之計劃RC+PLND遲發型(在治療之最後一次劑量之後＞12週)的百分比
其他終點●臨床活性之探索性生物標誌物，包括連接素-4表現狀態與反應的關係， ●恩諾單抗維多汀、MMAE及Tab的所選血漿或血清PK參數， ●針對恩諾單抗維多汀之ATA的發生率，及 EQ - 5D - 5L 之 PRO 評估的 相對於基線的變化 6.3.4 研究計劃 6.3.4.1 研究設計之概述
此研究經設計以評估在新輔助及圍手術期環境中恩諾單抗維多汀作為單一療法用於治療患有MIBC之不符合順鉑條件的患者之安全性及抗腫瘤活性。
在患有MIBC之患者中評估用恩諾單抗維多汀單一療法處理。此研究招募約50名患有cT2-T4aN0M0或cT1T4aN1M0 MIBC之患者。在RC+PLND之前，患者在每3週週期之第1天及第8天用新輔助恩諾單抗維多汀(1.25 mg/kg)處理持續總共3個週期，接著在每3週週期之第1天及第8天用輔助恩諾單抗維多汀(1.25 mg/kg)處理RC後8週開始總計6個週期。
藉由SMC在持續性基礎上監測安全性。若SMC推薦且經研究發起人批准，允許將恩諾單抗維多汀的劑量含量(至多2個含量)降低到1.25 mg/kg之已確立擴增(la/mUC組)劑量以下。肌肉侵襲性膀胱癌之恩諾單抗維多汀步降劑量含量繪示於下表35中： 表35
劑量含量 恩諾單抗維多汀劑量 (mg/kg)
1 1.25
-1 1
-2 0.75
所有患者在第一處理劑量之前90天內應具有TURBT且來自診斷TURBT之組織必須在參與前確認為可用的，且被認為足以進行病理學審查及生物標誌物分析。所有患者都用使用胸部IV造影劑之CT及腹部及骨盆的CT尿路造影進行臨床分期的基線TURBT後放射線篩選評估。CT尿路造影或MRI尿路造影為可接受的成像方法，以滿足方案中指定之MIBC患者的腹部及骨盆掃描要求。
在新輔助處理之後，在RC+PLND之前≤4週經由相同放射性模式進行再分期以排除疾病進展，其將妨礙治癒性手術。在研究治療開始後的第12週(84天±7天)，放射線上仍無遠端癌轉移的患者繼續RC+PLND。若歸因於AE延遲，則可允許患者在此時間範圍外經歷RC+PLND。具有除AE以外之延遲的患者可考慮接受醫學監測者諮詢。手術將由以下組成：具有治癒性意圖目標之RC+PLND，根據AUA/ASCO/ASTRO/SUO準則(Chang 2017)。
任何拒絕RC+PLND之患者不再接受任何研究干預；拒絕RC+PLND且已達成cCR、已降期至非MIBC或評估不完全的患者進入研究追蹤，且根據方案定義之時間表進行疾病評估觀測，直至疾病進展/復發、患者死亡、研究結束或撤回同意書(以先發生者為準)。
pCR為主要終點且定義為來自RC+PLND之所檢測組織中不存在活腫瘤(pT0N0)。在具有治療性意圖之RC+PLND之後藉由中央病理學審查評估pCR。在RC+PLND之前注意到的妨礙治癒性意圖目標手術的放射線疾病進展、未能對存在殘餘肌肉侵襲性疾病及/或任何放射性疾病的患者進行RC+PLND、在RC+PLND時留下總體殘留疾病、經放射線評估及/或經活組織檢查確認的RC後局部或遠處復發(局部病理學復查)或任何原因引起的死亡都被視為EFS事件，且此類患者不接受進一步研究干預，而將過渡到長期追蹤。
在RC+PLND之後6週(±14天)，所有患者均重複成像(經由與其RC後基線掃描相同的放射性模式)。此時，注意到患有新復發性或轉移性疾病之患者被認為已經歷事件且不接受對試驗之進一步干預，而是過渡到長期追蹤。在放射線上無疾病之患者繼續進行至輔助期。輔助治療應在RC後8週(±14天)開始，患者將接受總共6個週期的輔助恩諾單抗維多汀。
在RC後基線成像之後，經由相同放射線模式每12週(±7天)進行成像，直至自其RC後基線掃描2年結束。在研究週期後，包括反應評估之訪視頻率降低至每24週(±14天)。每當懷疑疾病進展時，亦應進行腫瘤成像(使用RECIST版本1.1準則)。藉由BICR回顧性地評估患者中之所有成像掃描。成像將持續，直至疾病進展/復發、患者死亡、研究結束或撤回同意書(以先發生者為準)。對於不具有EFS事件但在RC + PNLD之後任何時間開始新穎抗癌治療的患者，根據經方案定義之時程表繼續成像評估，直至疾病進展/復發、患者死亡、研究結束或撤回同意書(以先發生者為準)。
EOT訪視應在患者完成所有必需研究干預(研究干預包括RC+PLND)後30-37天內進行，或在完成所有必需的研究干預之前停止。EOT評估必須在開始新的癌症治療之前進行，裂隙燈檢查除外(裂隙燈檢查必須在最後劑量之後≥4週進行)。
應在處理中斷或EOT之±4週內執行成像。若在中斷治療4週內進行成像，則不需要在中斷治療時進行成像。任何額外研究性成像(例如，尿路造影)之結果應報導於eCRF中且由BICR提交中央放射線評估。
患者在電子裝置(較佳報導媒介)上完成EQ 5D-5L PRO評估。當無法使用電子裝置時，評估才可以書面形式或由臨床工作人員藉由電話進行報導。 6.3.4.2 研究設計之論述及基本原理
此研究提供在患有MIBC之患者中在圍手術期環境中(亦即，新輔助，接著輔助)恩諾單抗維多汀單一療法之安全性及功效資料。在具有治癒性意圖目標之RC+PLND之前，恩諾單抗維多汀1.25 mg/kg IV在每3週週期之第1天及第8天投與持續3個週期。RC後，患者在每3週週期之第1天及第8天接受恩諾單抗維多汀1.25 mg/kg IV持續6個週期。
SMC監測整個研究中之安全性。安全性終點適合於評估治療方案之安全性。此研究組分之關鍵功效終點(pCR率藉由中央審查)為抗腫瘤活性之直接量測。此為在基線、RC前以及輔助及RC後期的造影增強成像的補充。為了進一步評估此研究中pCR率之顯著性，將EFS、DFS及OS評估為次要終點。 (i) 將患者分配至處理組之方法
此研究依序招募患者。 (ii) 盲化
此為開放標記研究。 6.3.5 研究群體 6.3.5.1 納入準則
患者必須具有組織學確認之MIBC，其中主要＞50%尿道上皮組織學(先前稱為移行細胞癌)。 ●在第一劑量之處理之前90天內藉由TURBT及≤28天參與藉由使用胸部IV造影劑之CT及腹部及骨盆的CT尿路造影確定之臨床期cT2-T4aN0M0或cT1-T4aN1M0。患有pT1疾病之參與者僅當在成像上患有N1疾病時才符合條件。 ●只要尿路上皮癌為主要：＞50%，則混合式細胞類型符合條件 ●患有漿細胞樣及/或神經內分泌腫瘤之患者不符合條件，無論組分百分比如何。 ●未源自膀胱中之尿道上皮腫瘤(例如上尿路、尿道腫瘤)不符合條件。 ●短軸上＜10 mm的淋巴結將被認為正常的。
患者必須為不符合順鉑條件的。若患者符合以下準則中之至少1者，則將其被視為不符合順鉑條件的。 ● GFR ＜60 mL/min但≥30 mL/min (藉由科克羅夫特-高爾特式、MDRD或24小時尿液量測)。 ● ECOG體能狀態為2。 ● NCI CTCAE版本4.03 ≥2級聽覺損失。 ● NYHA III級心臟衰竭。 ●符合參與條件的患者必須尚未接受先前針對MIBC之全身性治療、化學放射或放射治療。患者可已接受先前膀胱內芽孢桿菌卡莫特-蓋蘭(BCG)或針對NMIBC之膀胱內化學治療。
最小年齡為18歲。
ECOG體能狀態為0、1或2。
如研究者所評估，≥3個月的預期壽命。
在參與之前必須獲得具有來自在第一劑量之研究治療之前90天進行之診斷性TURBT之相關病理學報導的腫瘤樣品，且確定其足以進行病理學審查及生物標記物分析。注意：提交的TURBT活組織檢查必須含有逼尿肌以確認疾病期。
患者必須由他/她的泌尿學家及/或腫瘤學家視為符合RC+PLND之條件且同意根據AUA/ASTRO/ASCO/SUO準則接受治療性意圖標準RC+PLND (包括前列腺切除術，若適用)(章節6.3.13中所提及)。
具有如下表中所定義之充分的血液及器官功能。必須在開始研究處理之前7天內收集樣本。 表36
系統 實驗室值
血液：   
ANC ≥1500/µL
血小板 ≥100,000/µL
血紅蛋白 ≥9.0 g/dL或≥5.6 mmol/L a
腎：   
量測或計算 bCrCl及/或肌酐≤1.5 × ULN。當本地指南需要評估時，肌酐含量及肌酐清除均適用 (亦可使用GFR代替CrCl) 對於肌酐含量之參與者為≥30 mL/min ＞1.5×機構性ULN及/或肌酐含量 ≤1.5×正常上限(ULN)
肝：   
血清總膽紅素 ≤1.5× ULN或直接膽紅素≤ ULN，對於總膽紅素含量＞1. × ULN之參與者 ≤3× ULN，對於具有吉爾伯氏病之患者
AST (SGOT)及ALT (SGPT) ≤3× ULN
凝血：   
INR或PT aPTT或 PTT ≤1.5× ULN，除非參與者正在接受抗凝血劑療法，只要PT或aPTT在預期使用抗凝劑之治療性範圍內
注意：表36包括定義合格性之用於治療的實驗室值要求；實驗室值要求應根據用於投與特定化學療法之本地法規及指南來調適。 ALT (SGPT)=丙胺酸胺基轉移酶(血清麩胺酸丙酮酸轉胺酵素)；ANC=絕對嗜中性白血球計數；aPTT=活化部分凝血活酶時間；AST (SGOT)=天冬胺酸胺基轉移酶(血清麩胺酸草醯乙酸轉胺酵素)；CrCl=肌酐清除；GFR=腎小球濾過率 a必須滿足不具有紅血球生成素依賴性且在後2週內無紅血球濃厚液(pRBC)輸注之準則。 b肌酐清除(CrCl)應根據機構標準物使用柯克勞夫-高爾特方法、腎病飲食改進方程式(MDRD)或藉由24小時尿液收集計算。
具有生育潛力之女性個體係已經歷初潮且未進行手術絕育(例如，子宮切除術、雙側輸卵管切除術、雙側卵巢切除術)或尚未完成停經之任何出生為女性的人。閉經在臨床上定義為45歲以上的人在不存在其他生物學、生理或藥理學病因之情況下閉經12個月。具有生育潛力之女性個體必須符合以下條件： ●同意在研究期間及投與最後一劑研究藥物之後的至少6個月內不嘗試妊娠。 ●在第1天之前3天內必須具有陰性尿液或血清妊娠測試(最小敏感性25 mIU/mL或β人類絨毛膜激性腺素[β-hCG]之等效單元)。具有假陽性結果且陰性妊娠狀態記錄驗證的女性個體有資格入選。 ●若異性戀活躍，則必須始終使用高效的生育控制方法，其中在篩選開始、整個研究時段且在最後一次劑量之研究藥物之後至少6個月失敗率低於1% (如章節6.3.14中所描述)。 ●女性個體必須同意在篩選開始及整個研究時段且在最後一次劑量之研究藥物之後至少6個月未哺乳或供給卵。
可生育兒童之男性個體係具有睪丸且尚未進行手術絕育(例如，輸精管結紮，接著進行臨床測試證明該程序有效)之任何出生為男性的人。可生育兒童之男性個體必須符合以下條件： ●在篩選時開始及整個研究階段，以及最後一次劑量之研究藥物之後至少6個月，不得捐獻精子。男性個體告知來自研究治療之生殖功能及生育力的陰性風險。在治療之前，應建議男性個體尋求關於生育力保存及精子低溫保存之資訊。 ●必須始終使用高效的生育控制方法，在篩選時開始失敗率低於1% (如附錄M中所描述)，且在整個研究期間繼續，且在最終劑量之研究藥物之後至少6個月。 ●具有妊娠或哺乳配偶之男性個體必須始終使用2個避孕選項中之一者，以防止在妊娠期間或時間配偶在整個研究期間及最後一次劑量之研究藥物之後持續至少6個月再次暴露於精液(如附錄M中所描述)。
患者必須提供書面知情同意書。 6.3.5.2 排除準則
接受先前針對MIBC之全身性治療、化學放射及/或放射治療。
接受CPI之任何先前處理。CPI經定義為PD-1抑制劑、PD-L1抑制劑或PD-L2抑制劑(包括(但不限於)阿特珠單抗、帕博利珠單抗、納武單抗、度伐魯單抗或阿維魯單抗)。
接受用導向另一刺激性或共抑制性T細胞受體之藥劑(包括(但不限於) CD137促效劑、CTLA 4抑制劑或OX-40促效劑)的任何先前處理。
成像上≥N2淋巴結疾病之證據。
成像上轉移性疾病之證據。
經歷膀胱之部分膀胱切除術以移除任何NMIBC或MIBC。
持續的2級或更高的感官或運動神經病變。
不包括患有需要高劑量類固醇(＞10 mg/天普賴松或等效物)或其他免疫抑制性藥物治療之病狀的患者。在不存在活動性自體免疫性疾病下允許吸入或局部類固醇。
先前使用恩諾單抗維多汀或其他基於MMAE之ADC處理尿路上皮癌。
個體在第一劑量之研究藥物之前的3年內具有另一侵襲性惡性腫瘤的病史，或先前診斷之惡性疾病之殘留疾病的任何證據。允許患有非黑色素瘤皮膚癌或任何類型之原位癌(若進行完全切除術)之個體。
在進入研究前至少1年以明確意圖(以手術方式或用放射療法)治療之前列腺癌(T2NXMX或更低，其中格里森分數≤7)的病史為可接受的，其限制條件為個體視為無前列腺癌，且滿足以下準則： ●經歷根除性前列腺切除術之參與者必須具有不可偵測之PSA持續＞1年及篩選。 ●接受過輻射之參與者的PSA倍增時間必須＞1年(基於至少3個確定的值間隔＞1個月)且總PSA值不符合Phoenix生物化學復發準則(亦即，＜2.0 ng/mL以上最低點)。
主動監測的患有未處理低風險前列腺癌(格里森分數≤6)且PSA倍增時間＞1年(基於至少3個相隔＞1個月的值)的參與者亦符合條件。
在恩諾單抗維多汀之第一次劑量時，當前針對活動性感染(病毒、細菌或真菌)接受全身抗微生物治療。允許常規的抗微生物防治。
B型肝炎表面抗原及/或抗B型肝炎核心抗體陽性患者；允許PCR分析呈陰性的患者進行普遍預防或使用先發制人的方法。該方法將根據接受抗癌治療之患者的區域或國家指南選擇的。
活性C型肝炎感染或已知HIV感染。若已針對C型肝炎感染接受治療的患者已記錄有12週的持久病毒反應，則其為允許的。除非由局部健康授權機構授權，否則不需要HIV測試。
具有活性肺結核之患者。
在恩諾單抗維多汀之第一次劑量之前的6個月內記錄有腦血管事件(中風或短暫局部缺血發作)、不穩定型心絞痛、心肌梗塞或符合NYHA IV類(參見附錄E)之心臟症狀(包括充血性心臟衰竭)的病史。
出現活動性角膜炎或角膜潰瘍的患者。出現淺表性點狀角膜炎的患者若在研究者看來，其病症得到充分治療，則係允許的。
具有在過去2年內需要進行全身性治療(亦即，使用疾病調節劑、皮質類固醇或免疫抑制藥物)之活動性自體免疫疾病。替代療法(例如，針對腎上腺或垂體不足之甲狀腺素、胰島素或生理學皮質類固醇替代療法)可不考慮為全身性治療形式且允許。
特發性肺纖維化；機化性肺炎、藥物誘導之肺炎、特發性肺炎病史或篩檢胸部CT掃描上活性肺炎跡象
先前同種異體幹細胞或實體器官移植。
在第一劑量之研究藥物之前的30天內投與活的減毒疫苗。活毒疫苗之實例包括(但不限於)以下：麻疹、流行性腮腺炎、風疹、水痘/帶狀疱疹(雞痘)、黃熱病、狂犬病、BCG及傷寒疫苗。用於注射之季節性流感疫苗一般為滅活病毒疫苗且予以允許；然而，鼻內流感疫苗(例如FluMist®)為減毒活疫苗且不予允許。
在研究者看來，損害患者接受或耐受計劃處理及追蹤能力的其他基礎醫學病況；任何已知的會干擾配合研究要求的精神或物質濫用障礙。
糖尿病不可控的患者。不可控的糖尿病定義為HbA1c ≥8%或HbA1c 7%至＜8%及否則無法解釋的相關糖尿病症狀(多尿症或煩渴症)。 6.3.6 治療 6.3.6.1 所投與之治療
在RC+PLND之前3個週期期間，在此研究中之患者在每3週週期之第1天及第8天將接受作為靜脈內輸注投與的1.25 mg/kg恩諾單抗維多汀之劑量。手術由以下組成：具有治癒性意圖目標之RC +雙側PLND，根據AUA/ASCO/ASTRO/SUO準則(Chang 2017)。患者亦在每3週週期之第1天及第8天接受恩諾單抗維多汀持續RC+PLND後總計6個週期。
若SMC推薦且經研究發起人批准，將允許將恩諾單抗維多汀的劑量含量(至多2個含量)降低到1.25 mg/kg之已確立擴增群組劑量以下。 6.3.6.2 研究性的研究藥物(i) 描述
藉由使含有MMAE與連接子亞單元的化學中間物與抗體之半胱胺酸殘基結合來產生恩諾單抗維多汀。所得ADC含有平均3.8個藥物分子/抗體。恩諾單抗維多汀藥品為無菌、無防腐劑的白色至灰白色凍乾粉末，其復原後靜脈內投與。恩諾單抗維多汀於30 mg單次劑量小瓶中供應。 (ii) 劑量及投與
在RC+PLND之前，在每3週週期之第1天及第8天以1.25 mg/kg經約30分鐘投與作為靜脈內輸注之恩諾單抗維多汀持續3個週期。另外，患者在每3週週期之第1天及第8天接受恩諾單抗維多汀持續RC後總計6個週期。
在不存在IRR下，應計算所有患者之輸注速率，以達成大致30分鐘輸注時段。恩諾單抗維多汀不得以靜脈內推注或彈丸注射投與。恩諾單抗維多汀不應與其他藥物混合。恩諾單抗維多汀的劑量必須間隔至少1週(7天)。
基於在基線處之患者實際體重計算恩諾單抗維多汀劑量。當患者之體重變化≥基線或前一個週期的10%，或滿足劑量調整準則時，應重新計算劑量。除體重＞100 kg之患者外，使用實際重量；在此類情況下，基於100 kg之體重計算劑量。此研究中允許之最大劑量為125 mg。
在恩諾單抗維多汀投與期間應觀測患者，且在前3個週期期間，在輸注之後觀測至少60分鐘。在整個研究期間，應根據機構標準給與符合最佳患者照護的所有支援性措施。
在投與期間及投與後之任何時間，密切監測輸注部位之發紅、腫脹、疼痛及感染情況。應建議患者在投與時或輸注之後即時報導發紅或不適。將遵循機構指南投與化學治療劑，且按照機構標準採取預防措施防止外滲，及如「化學治療及生物治療指南及實踐建議」(Polovich 2014)及「化學治療外滲之管理：ESMO-EONS臨床實踐指南」(Perez Fidalgo 2012)中所描述。在恩諾單抗維多汀外滲之情況下，應保持組合藥物，直至與醫療監測者/發起人一起協商及進一步討論。 (iii) 恩諾單抗維多汀之劑量修改
視毒性之類型及嚴重程度而定，允許患者內劑量降低1或2個劑量含量(參見表35)。需要劑量降低的患者可以重新增加1個劑量含量(亦即，降低至0.75 mg/kg的患者可能只能重新增加至1 mg/kg)，其限制條件為毒性不需要停用研究藥物且已經恢復到基線或≤1級。若毒性重現，則將不允許重新增加。出現≥2級角膜AE的患者不允許再遞增劑量。
針對恩諾單抗維多汀相關毒性的劑量修正建議展現於表37及表38中。
在現場研究者的判斷下，允許因其他恩諾單抗維多汀相關毒性而降低或中斷患者內劑量。在每位患者的基礎上，可能允許降低毒性劑量，包括DLT。DLT評價期為第一治療週期。在DLT評價期經歷DLT之患者不應接受進一步治療，除非在充分管理毒性的情況下展現出臨床益處且經醫學監測者批准。後續劑量含量將由醫學監測者根據現場研究者所論述來定義；將考慮觀測到之AE之類型及嚴重程度以告知決策。
若患者毒性不另外需要永久中斷，則在醫學監測者批准下，對於先前未降低劑量且對治療有反應之患者，可中斷劑量超過3週。在劑量延遲期間，患者可以不接受其他研究性藥物、放射療法(除症狀性和非進展性非目標骨骼病變的姑息性放射療法之外)，或全身性抗贅瘤療法。若在第1天給藥後出現需要劑量延遲的毒性，且在第8天給藥(直至第10天)之前未消退，則必須跳過而非延遲第8天恩諾單抗維多汀投與。若患者由於隨後消退之毒性而降低劑量，則患者可由醫學監測及現場調查員酌情處理在初始劑量下恢復治療。若存在劑量中斷，則將不調整用於反應評估之時程且仍應自第1週期第1天計算。
在與治療相關的AE以外的情況下，例如醫療/手術事件或與研究治療無關的物流原因，可能允許劑量中斷(恩諾單抗維多汀、帕博利珠單抗及/或化學治療)。除非發起人另外論述，否則參與者應在排定間斷之3週內恢復研究療法。中斷之原因應記載於患者之研究記錄中。 表37：針對恩諾單抗維多汀相關血液毒性的建議劑量修改
1 級 2 級 3 級 4 級
在相同劑量含量下繼續。 在相同劑量含量下繼續。    對於2級血小板減少症而言，停止劑量，直至毒性≤1級或已回至基線，隨後以相同劑量含量恢復治療。 停止給藥直至毒性≤1級或已返回至基線，隨後以相同劑量含量重新開始治療或考慮劑量降低1個劑量含量。 如根據機構指南所指示，可使用輸注或生長因子。 停止給藥直至毒性≤1級或已返回至基線，隨後將劑量降低1個劑量含量且恢復治療，或由研究人員酌情終止治療。如根據機構指南所指示，可使用輸注或生長因子。 對於貧血而言，應強烈考慮中斷治療。
注意：血液毒性係指貧血、血小板減少症、嗜中性白血球減少症及發熱性嗜中性球減少症。 表38：針對恩諾單抗維多汀相關非血液毒性的建議劑量修改
1 級 2 級 3 級 4 級
在相同劑量含量下繼續。    對於1級皮疹或皮膚反應，可在相同劑量含量下繼續。    若鑑別出眼症狀及/或視力變化，則應由合格的驗光師或眼科醫師評價患者。 以相同劑量繼續，但2級神經病變或角膜AE之情形除外。    對於惡化的皮疹或皮膚反應，考慮停用恩諾單抗維多汀，直至毒性≤1級或已返回至基線，隨後以相同劑量含量恢復治療或考慮將劑量減少1個含量。    對於2級神經病變或角膜AE而言，停止劑量，直至毒性≤1級或已返回至基線，隨後以相同劑量含量恢復治療。對於第二次發生的2級神經病變或角膜AE而言，停止給藥直至毒性≤1級，隨後將劑量降低1個劑量含量且恢復治療。    若鑑別出眼症狀及/或視力變化，則應由合格的驗光師或眼科醫師評價患者。 停止給藥直至毒性≤1級或已返回至基線，隨後以相同劑量含量重新開始治療或考慮劑量降低1個劑量含量 a對於3級皮疹或皮膚反應，考慮停用恩諾單抗維多汀，直至毒性≤1級或已返回至基線，隨後以相同劑量含量恢復治療或考慮將劑量減少1個含量。    對於疑似史蒂芬斯強森症候群(SJS)或疑似中毒性表皮壞死溶解(TEN)，停用恩諾單抗維多汀。考慮將個體轉診至皮膚科醫生/專家進行診斷及專門護理。已確認SJS或復發性3級皮疹事件的個體應永久停止治療。    對於3級神經病變或角膜AE而言，中斷治療。    對於3級高血糖症或血糖＞250 mg/dL，停止恩諾單抗維多汀治療。一旦高血糖症/血糖≤250 mg/dL且患者在臨床及代謝上穩定，則恢復治療。 若鑑別出眼症狀及/或視力變化，則應由合格的驗光師或眼科醫師評價患者。 對於4級AE而言，中斷治療。 a對於確認之SJS或TEN，或4級皮疹，永久停止治療。    在支援性管理下，在72小時內，4級嘔吐及/或腹瀉改善至≤2級，不需要中斷治療。    對於4級高血糖症或血糖＞500 mg/dL，停止恩諾單抗維多汀治療且對高血糖症進行全面評估以確定潛在診斷。一旦血糖≤250 mg/dL且患者在臨床及代謝上穩定，可在諮詢醫學監測者後密切監測且恢復給藥。
a.不伴隨臨床後遺症或在發作之72小時內藉由補充/適當管理校正之3/4級電解質不平衡/實驗室異常不需要中止治療(例如，4級高尿酸血症)。與臨床後遺症無關的4級澱粉酶/脂肪酶升高不需要中止；停止給藥直至毒性≤3級或已返回至基線，隨後以相同劑量含量恢復治療。不與臨床後遺症相關的3級澱粉酶/脂肪酶升高可以相同劑量含量繼續治療。停止治療≥3級澱粉酶/脂肪酶且伴有臨床後遺症，直至評估完成。
關於輸注反應的管理建議，參見章節6.3.6.4 (i)。關於高血糖症的管理建議，參見章節6.3.6.4 (ii)。關於皮疹管理建議，參見章節6.3.6.4 (iii)。
經歷僅歸因於恩諾單抗維多汀之不可接受毒性的患者應停止使用研究藥物。 (a)與肝臟安全相關之治療中斷建議
在沒有解釋增強型肝功能測試(LFT)(諸如病毒性肝炎、先前存在的肝病或急性肝病，或暴露於與肝臟損傷相關的其他藥劑)的情況下，可中斷患者的研究治療。研究者可判定，繼續研究治療不符合患者的最佳利益。
若出現以下情況，則應考慮中斷治療： ●ALT或天冬胺酸胺基轉移酶(AST) ＞8×正常上限(ULN) ● ALT或AST＞5 × ULN，超過2週 ● ALT或AST＞3×ULN及總膽紅素＞2×ULN或國際標準化比值(INR)＞1.5 (若INR測試適用/予以評價) ● ALT或AST＞3×ULN，出現暗示肝臟損傷(例如右上腹疼痛或觸痛)及/或嗜酸性球增多症(＞5%)的症狀
此等治療中斷建議係基於FDA行業指南(藥物誘發性肝臟損傷：市售前的臨床評價(Drug-Induced Liver Injury: Premarketing Clinical Evaluation)，2009年7月)。該等建議為對研究者的基本指導，其基於藥物開發中積累的臨床經驗，而非特指恩諾單抗維多汀的臨床經驗。
關於針對ALT、AST或膽紅素為2級或更高之患者的肝臟安全監測及評估準則建議，參見6.3.11。 6.3.6.3 伴隨療法
從第1天(劑量前)至安全報導期(EOT訪視或最後一次研究治療後30天，以較晚者為準)記錄所有同時用藥記錄及血液產品。應記錄自知情同意書籤署時針對研究方案相關之AE所給與的任何伴隨藥物。 (i)必需的伴隨療法
不存在必需的伴隨療法。 (ii)允許的伴隨療法
允許使用鎮吐藥。允許使用胰島素作為SOC之部分。允許根據第6.3.6.4章對IRR進行術前用藥；然而，可能不會在第1週期第1天的研究治療之前進行預防IRR的預防性術前用藥。
允許使用如章節6.3.6.2(iii)中所建議之管理恩諾單抗維多汀相關毒性的療法，包括生長因子，及輸注。
對於正接受伴隨恩諾單抗維多汀服用的強CYP3A4抑制劑或P-gp抑制劑的患者，應密切監測其不良反應。
允許用疫苗進行常規預防；然而，在研究期間患者可不用活的減毒疫苗治療。
可如臨床上所指示使用類固醇。 (iii)禁止的伴隨療法
在進行中的試驗期間不允許排除準則中專門禁止的藥品或疫苗接種。若存在在試驗期間特別禁止之任何藥品或疫苗接種之臨床適應症，則可能需要中斷試驗療法或疫苗接種。
下文列出在研究過程期間用於伴隨療法或疫苗接種之特定限制： ●抗腫瘤全身性化學治療或生物療法 ●此方案中未規定之免疫療法 ●此方案中未指定之化學療法 ●除帕博利珠單抗或恩諾單抗維多汀外之研究性藥劑 ●輻射療法 ●在第一劑量之研究治療之前30天內及在參與研究時的活疫苗。活毒疫苗之實例包括(但不限於)以下：麻疹、流行性腮腺炎、風疹、水痘/帶狀疱疹、黃熱病、狂犬病、BCG及傷寒疫苗。用於注射之季節性流感疫苗一般為滅活病毒疫苗且予以允許；然而，鼻內流感疫苗(例如FluMist®)為減毒活疫苗且不予允許。 ●吡格列酮
應自研究中移除參與者，該等參與者在研究者之評估中需要使用前述治療中之任一者用於臨床管理。 6.3.6.4 不良反應的管理(i)不良反應的管理
在研究治療輸注期間可能發生輸注相關之反應(IRR)。輸注應在配備適當設備及人員之場所投與，以便在過敏症發生時對其進行管理。在整個研究期間，應根據機構標準給與符合最佳患者照護的所有支援性措施。支援性措施可包括投與針對IRR之藥物。
允許如下文所描述對IRR進行術前用藥；然而，可能不會在第1週期第1天的研究治療之前進行預防IRR的預防性術前用藥。可向已經歷IRR的患者進行前驅用藥以便隨後輸注。前驅用藥可包括止痛藥(例如乙醯胺苯酚或等效物)、抗組織胺(例如，苯海拉明鹽酸鹽(diphenhydramine hydrochloride))，及在每次輸注之前投與約30至60分鐘或根據機構標準投與的皮質類固醇。若患者在前驅用藥的背景中經歷IRR，則在下一次計劃劑量之前，必須繼續治療與醫學監測者討論。
若發生過敏症，則應立即且永久地中斷研究治療劑投與。
若患者在接受研究治療後經歷IRR，且無法確定IRR之單一原因，則必須遵循適用的IRR指南。 (ii)高血糖症之管理
研究者應監測血糖含量，且若觀測到高血糖症之任何症狀，則最好執行其他評估，包括針對感染的充分評價。另外，若使用類固醇治療任何其他病狀，則需要對血糖含量進行額外的監測。若觀測到血糖含量升高，則患者應根據當地局部標準照護(SOC)進行治療且考慮轉診至內分泌科。
患者，尤其是有糖尿病或高血糖症病史或正在發生的糖尿病或高血糖症的患者，若其葡萄糖含量變得難以控制或若其經歷了暗示高血糖症的症狀，諸如尿頻、口渴加劇、視力模糊、疲勞及頭痛，則最好立即告知其醫師。
在基線時HbA1c升高(≥6.5%)之進入研究的患者應在第1週期期間轉診至進行葡萄糖管理的適當提供者。應在各給藥之前檢查血糖且劑量應保留血糖＞250 mg/dL。一旦患者之血糖已改善至≤250 mg/dL且患者在臨床及代謝上穩定，則給藥可繼續。允許使用胰島素作為SOC之部分。認為與恩諾單抗維多汀相關之血糖＞500 mg/dL需要藥物中斷且完全評估高血糖症，以確定潛在診斷。高血糖症/升高之血糖改進至≤250 mg/dL後，給藥可在與醫學監測者協商之後重新開始密切監測。若患者經歷新發作型糖尿病，則用代謝組、尿酮、HbA1c、C-肽評估個體以評估在與CPI組合之環境中之新發作型1型糖尿病。 (iii) 皮疹管理
恩諾單抗維多汀為連接素-4引導之抗體藥物結合物。連接素-4為高度表現於尿路上皮癌中之細胞黏附分子。低至中等含量之連接素-4亦表現於正常組織上，包括皮膚角質細胞、汗腺及毛囊；因此，皮膚反應為預期事件。因此，皮膚反應為在與恩諾單抗維多汀之所有臨床研究中所關注之AE。
在15名接受恩諾單抗維多汀之患者中鑑別出嚴重皮膚不良反應的報導，其中一些患者出現了致命後果。此等反應主要在第一治療週期期間發生。報導於此等案例中之AE包括史蒂芬斯-強森症候群(SJS) (5個案例)、水皰(3個案例)、大皰性皮炎(3個案例)、對稱藥物相關彌漫性及播散性紅斑(SDRIFE；2個案例)及剝脫性皮炎、剝脫性皮疹、表皮壞死、口咽起泡、口腔炎及中毒性表皮壞死溶解(TEN)中之各者的1個案例。
在尿路上皮癌之恩諾單抗維多汀單一療法研究中，重度皮膚不良反應之SAE報導於749名個體中之11名(1.5%)中且包括大皰性皮炎(0.4%)、藥疹(0.4%)、水皰(0.1%)、結膜炎(0.1%)、SJS (0.1%)、口腔炎(0.1%)及毒性皮疹(0.1%)。
若個體具有皮膚反應、口腔黏膜及眼部異常(包括，黏膜炎或結膜炎)之病徵及症狀，則應建議該等個體立即接觸研究者。第一週期及整個治療中開始，密切監測個體之皮膚反應。對於輕度至中度皮膚反應，考慮適當治療，諸如臨床上指示之局部皮質類固醇及抗組織胺。對於惡化2級皮疹或皮膚反應，考慮停止恩諾單抗維多汀。對於重度(3級)皮疹或皮膚反應或疑似SJS或TEN，停止恩諾單抗維多汀且考慮轉診接受專門照護。在具有確診之SJS或TEN或4級或復發性3級皮膚反應之患者中永久地中斷恩諾單抗維多汀。 6.3.6.5 治療依從性
研究藥物的投與將由研究現場的人員執行且記錄於源文件及病例報導表(CRF)中。 6.3.7 研究評估 6.3.7.1 篩選 / 基線評估
此研究將招募僅滿足章節6.3.5中所指定之所有納入及排除準則的患者。招募情況及日期記錄於CRF中。
患者病史包括對重要的既往病史、當前狀況、先前惡性腫瘤的任何治療及對先前治療之反應以及任何同時用藥記錄的全面回顧。
對於所有患者，需要在篩選時自TURBT(組織必須在計劃第1週期第1天之90天內收集)、全眼檢查、腦部掃描(若臨床上指示) (較佳使用釓造影劑之MRI)、骨骼掃描(若臨床上指示)、用於基線腫瘤成像之使用胸部IV造影劑之CT及腹部及骨盆的CT尿路造影、B型肝炎表面抗原及抗B型肝炎核心抗體之血清學、抗C型肝炎抗體血清學、HbA1c、反射顯微鏡分析尿液分析及甲狀腺功能檢查中獲取新鮮腫瘤樣本。
在基線時需要INR/PT/PTT、妊娠測試(尿液或血清，適用於有生育能力的女性)、身體檢查(包括體重)、收集高度、生命跡象、具有差異之CBC、血清化學組、CrCl、ECOG體能狀態評估和ECG。對於患有NYHA III級心臟衰竭或冠心病、心律不整或其他嚴重心臟病史的個體，需要在基線時進行ECHO。 6.3.7.2 反應 / 功效評估
初始分期主要根據診斷性TURBT之病理性發現確定且藉由當地實驗室審查，以根據RECIST版本1.1之放射研究的分期成像補充。將在參與前≤28天使用胸部IV造影劑之CT及腹部及骨盆的CT尿路造影進行初始臨床分期。患者必須在整個研究中接受相同成像模態以進行反應評估。
RC預先掃描應在RC+PLND之前≤4週完成，以排除疾病進展，這排除治癒性手術(RC+PLND必須在研究治療開始12週進行)。應在RC+PLND之前審查RC預先掃描結果。RC後基線掃描應在RC+PLND之後6週(±14天)進行。在RC後基線成像後，患者應每12週(±7天)進行一次成像，直至RC後基線掃描後2年結束。在研究之此期間後，訪視(包括反應評估)頻率將降低至每24週(±14天)。成像將持續，直至疾病進展/復發、患者死亡、撤回同意書或研究結束(以先發生者為準)。
對於不具有EFS事件但在RC + PNLD之後開始新穎抗癌治療的患者，在處理後追蹤訪視時將繼續成像評估，直至疾病進展/復發、患者死亡、撤回同意書或研究結束(以先發生者為準)。每當懷疑疾病進展時，亦應進行腫瘤成像(使用RECIST版本1.1準則)。
在第一劑量之研究治療之前90天內從診斷性TURBT患者收集的腫瘤組織樣品被送去進行中央病理學審查。亦將來自RC+PLND之組織樣品送至病理性反應評估之中央病理學審查。在具有治癒性意圖目標之RC+PLND之後藉由病理學審查分析評估腫瘤反應。病理性分期資訊包括TNM分類、組織學、淋巴結計數及手術邊緣。作為主要終點pCR係藉由中央病理學審查評估。
患者亦使用連續成像追蹤疾病復發。根據RECIST版本1.1 (研究者評估)藉由放射線確認之疾病進展確定疾病復發。若可用，則在疾病進展時進行之視情況腫瘤活檢體亦可用於記錄疾病進展。
由於處理相關AE導致具有治癒性意圖目標之計劃RC+PLND的延遲(定義為在研究治療之最後一次劑量之後＞12週)係經紀錄。
關於研究終點之定義參見章節6.3.8.2。 6.3.7.3 藥物動力學及 ATA 評估
根據表39中之樣品收集時程，在整個研究期間收集用於PK及ATA的血液樣品。經驗證或合格的分析用於量測血清或血漿中之恩諾單抗維多汀ADC、Tab及MMAE的濃度。收集PK樣品且歸檔以便對其他恩諾單抗維多汀相關物質(諸如，MMAE的循環代謝物)進行可能的分析。驗證之分析用於確定血漿中之恩諾單抗維多汀的ATA含量。若中斷恩諾單抗維多汀輸注，則不再需要收集相應的研究樣品。若在某個時間點不再需要前瞻性PK血液樣品收集，則會通知站點。 6.3.7.4 生物標記物研究
在方案規定之時間點收集用於探測性生物標記物分析之樣品(參見表39)。對於患者選擇，不使用生物標記物評估。
分析方法可包括：免疫組織化學(IHC)、DNA及RNA之下一代定序(NGS)、T細胞受體β鏈定序、PCR、流式細胞測量術及免疫分析。
所有患者應提供用於自存檔組織樣品或新獲得之核心或腫瘤病變之切除活組織檢查進行生物標記物分析的組織。需要福馬林固定之石蠟包埋的腫瘤組織塊(請參考腫瘤組織要求之中央實驗室手冊)。核心針及自腫瘤組織(非骨骼部位)切除活檢體為較佳的。若可行，則可提供腫瘤病變之新鮮基線核心針活檢體。在臨床上需要活檢體作為SOC之一部分的情況下，應使得組織可用於生物標記物評估。
在用恩諾單抗維多汀治療之前及期間監測與反應、抗性或安全性觀測結果相關之探索性、預測性及預後生物標記物。腫瘤組織中之生物標誌物評估可包括(但不限於)恩諾單抗維多汀及其代謝物之量測，以及腫瘤微環境(TME)之表徵及藥物效應。分析可包括(但不限於) IHC及RNA及DNA之下一代定序。 (i) 血液中之生物標記物
恩諾單抗維多汀對腫瘤細胞的主要作用可使得局部的腫瘤相關及周邊免疫細胞的活化狀態發生變化。血液及尿液樣品之生物標記物評估可包括(但不限於)循環腫瘤DNA、蛋白質體方法(諸如，酶聯結免疫吸附分析(ELISA))、免疫分析作為腫瘤反應或療法抗性之標記物，及免疫功能之標記物，包括免疫細胞亞群及細胞介素之豐度。此等可能有助於深入瞭解與恩諾單抗維多汀或恩諾單抗維多汀與帕博利珠單抗組合相關的治療相關變化。 表39：藥物動力學、免疫原性及生物標記物樣品收集時間點
   研究日 時間 窗 相對時間 藥代動力學及免疫原性 血液生物標記物    尿液生物標記物 組織生物標記物
EV PK ATA EV 血清 血漿-1 血漿-2 E 血漿3 尿液 腫瘤組織 A
篩選 第-28天至第1天 N/A N/A N/A                      X B
週期N1 第1天 劑量前 24小時內 EV輸注開始 X X X X X X X   
EV IV輸注結束 15分鐘內 EV輸注結束 X                     
第8天 劑量前 4小時內 EV輸注開始 X    X X X X X   
EV IV輸注結束 15分鐘內 EV輸注結束 X                     
週期N2 第1天 劑量前 24小時內 EV輸注開始 X X X X X X X   
週期N3 第1天 劑量前 24小時內 輸注開始    X X X X X X   
根治性膀胱切除術 C    X X F X F X F X F X F X D
週期A1 第1天 劑量前 24小時內 EV輸注開始 X X X X X X X   
EV IV輸注結束 15分鐘內 EV輸注結束 X                     
第8天 劑量前 4小時內 EV輸注開始 X    X X X X X   
EV IV輸注結束 15分鐘內 EV輸注結束 X                     
週期A2 第1天 劑量前 24小時內 輸注開始 X    X X X X X   
週期A3 第1天 劑量前 24小時內 輸注開始    X X X X X X            
週期A6 第1天 劑量前 24小時內 EV輸注開始 X X X X X X X   
EV IV輸注結束 15分鐘內 EV輸注結束 X                     
第8天 劑量前 4小時內 EV輸注開始 X    X X X X X   
EV IV輸注結束 15分鐘內 EV輸注結束 X                     
追蹤 每12週(±7d)直至2年結束，隨後每24週(±14d) N/A ±7天 N/A       X X X X X X G
ATA=抗治療抗體；EV=恩諾單抗維多汀；N/A=不適用；PK=藥物動力學。 週期N1等=新輔助週期1等；週期A1等=輔助週期1等。若在某個時間點不再需要前瞻性PK血液樣品收集，將會通知站點。 注意：對於永久地中斷恩諾單抗維多汀之個體，將不收集PK樣品。 A若收集非協定規定的腫瘤組織作為標準照護之一部分，則可提交組織進行進一步生物標誌物分析。 B自TURBT獲得組織樣品(必須在計劃的第1週期第1天之90天內通過TURBT收集組織) C自研究治療之開始時，在第12週(±7天)時進行具有治癒性意圖目標之根治性膀胱切除術+雙側PLND。除腫瘤組織之外的所有樣品應在RC之前7天內收集。應在RC當天獲得腫瘤組織。 D關於RC之組織收集要求參見章節6.3.7.4及實驗室手冊。 E細胞集結粒將從血漿-2收集管中產生。在實驗室手冊中記錄其他位點處理指令。 F在RC之前7天內獲取血液及尿液樣品。 G在追蹤或EOT訪視時收集到非方案規定之組織的情況下，提交活檢體。 (ii) 腫瘤組織中之生物標誌物
為理解治療之前腫瘤之生物學特徵與患者結果之間的關係，檢驗來自TURBT之組織(腫瘤活體組織切片)。針對腫瘤中之特定藥力學、預測性及預後生物標記物評估活體組織切片。若組織可從參與後收集之標準護理活檢體中獲得(直至使用恩諾單抗維多汀處理後疾病進展)，則可對其進行檢查。
需要來自診斷性TURBT樣本及RC+PLND之腫瘤組織(細針抽吸不充分)鑑別新穎生物標記物。若進行額外處理後活檢體作為SOC之部分，則樣品亦可用於進一步鑑別反應之生物標記物及作用機制及對治療之抗性。
腫瘤組織中之生物標記物評估可包括(但不限於)：藉由IHC及下一代定序對連接素-4表現進行中央評估、腫瘤亞型分析、腫瘤微環境分析及對體細胞突變或通常在癌症中變化之基因或RNA的變化進行分析。 6.3.7.5 生物樣本庫
在美國，對於提供同意書的患者而言，去標識化、未使用的剩餘血液、尿液及/或組織將由研究試驗委託者保留且用於將來的研究，包括(但不限於)評價目標以獲得新穎治療劑、ADC敏感性及抗性機制的生物學及ADC的生物標記物標識。捐贈給將來研究用的血液、尿液及組織樣品保留長達25年的時段。若未提供額外同意書，則在研究完成之後破壞任何剩餘生物樣品。 6.3.7.6 患者報導結果 (PRO)
PRO評估使用EQ 5D 5L完成(細節參見章節6.3.7.6 ii)。在新輔助週期1至3第1天及第8天給藥之前2天內完成評估。在新輔助週期完成之後，患者在RC+PLND (若適用)時及EOT時完成ePRO一次。在RC+PLND(若適用)及EOT之後，患者在2年內每12週完成一次PRO評估(對於追蹤期)，此後每24週完成一次(對於長期追蹤期)。在給藥訪視日時，應在研究藥物投與之前完成評估。
評估由患者在家中使用電子裝置(較佳報導媒介)完成，該電子裝置在第一次臨床訪視時向各患者提供。該裝置有預設提示，讓患者在預先指定的時間點填寫其評估。站點需要經由在線門戶監測患者對ePRO裝置的依從性。僅當電子裝置之使用不可行時，評估才可在紙上或由臨床工作人員通過電話(使用將提供給站點的批准腳本)進行報導。當使用紙張或訪問方法時，患者提供有用於在臨床訪視時、在給藥之前及在預定時間點進行評估之說明書。研究者或現場指定人員在收集時應審查用於正確完成之評估資料。調查員或現場指定人員及現場人員接受了如何為各患者提供PRO裝置之使用支援的培訓(或僅當使用電子裝置不可行時才進行紙張評估)。 (i) EORTC 核心生活品質問卷 QLQ - C30
開發EORTC核心生活品質(QLQ-C-30)評估以量測與參與臨床試驗之多種癌症患者相關的QoL態樣(Aaronson 1993)；(Sneeuw 1998)。核心儀器之現行版本(QLQ-C30，第3版)描繪於 圖 3中且為由以下組成之30項評估： ●5項功能域(身體、角色、認知、情感及社交)； ●3項症狀量表(疲乏、疼痛、噁心及嘔吐)； ●單項症狀(呼吸短促、食慾不振、睡眠障礙、便秘、腹瀉)及疾病之財務影響；及 ●2項整體項目(健康、總體QoL)
各領域評分為0至100。對於整體健康狀況/QoL及功能域評分，評分愈高分別表示QoL及功能愈佳。對於症狀量表，評分愈高表示症狀愈明顯。 (ii) EuroQoL - 5 維 ( EQ - 5D - 5L )
EQ-5D為EuroQOL Group開發的標準化儀器，其用作健康結果的通用、基於偏好的量度。其適用於大範圍的健康狀況及療法且針對健康狀況提供簡單的描述性概況及單一指標值。EQ-5D為功能及健康的5項自報導量度，其評估健康的5個維度，包括活動能力、自行照護、日常活動、疼痛/不適，及焦慮/抑鬱(參見 圖 4)。每個維度包含3種程度(沒有問題、一些/中度問題、極大問題)。獨特的EQ-5D健康狀態係根據5個維度中之每一者的1種程度的組合來定義。對5個項目之反應基於來源於一般群體樣品之值隨後轉化成加權健康狀態指數(效用分數)(Herdman 2011)。健康效用評分在0與1之間，其中0為死亡且1為完美健康。除效用評分之外，此評估亦記錄調查對象在帶垂直刻度(0至100)之視覺類比量表上自評分之健康狀況。 6.3.7.7 安全性評估
此研究過程中的安全評估由以下組成：AE (包括SAE(嚴重不良事件))的監督及記錄、伴隨藥物的記錄，及方案指定之體檢結論的量測、心臟監測及實驗室測試。
在研究過程中，安全將由SMC監測，如章節6.3.4.1中所描述。 (i) 不良事件(a)近似不良事件
不良事件
根據國際協調委員會(International Council for Harmonisation，ICH) E2A指南速報(Expedited Reporting)之定義及標準，以及美國聯邦法規(CFR) 21 312.32，研究性新藥(IND)安全報導，AE為投與藥品之患者或臨床研究個體中發生的任何不良醫學事件，其未必與此治療有因果關係。
當確定是否記錄測試結果、醫學病況或關於AE及預先存在條件CRF之其他事件時，應考慮以下資訊： ●自知情同意書籤署時直至研究第1天的前一天，應僅記錄與研究方案相關之AE。方案相關的AE定義為作為方案授權之程序的結果發生的不良醫學事件。 ●應記錄研究第1天存在的或不間斷給藥前的所有醫學病狀。 ●應記錄自研究第1天(劑量前)至安全性報導期結束之所有AE (無論與研究藥物之關係如何)(參見章節6.3.7.7 (i)(c))。與任何程序(例如，活組織檢查)相關而發生的併發症應記錄為AE，無論該程序是否經方案授權。 ●在安全報導期期間發生的醫學病狀及AE (包括嚴重度、頻率或特徵)變化應予以記錄。 ●一般而言，異常實驗值不應記錄為AE，除非其與臨床徵象或症狀有關，需要干預，導致SAE，或導致研究終止或研究治療劑中斷/中止。當記錄由實驗室異常引起之AE時，應記錄所產生的醫學病況而非異常本身(例如，記錄「貧血」，而非「低血紅素」)。
嚴重不良事件
若AE滿足以下準則中之一者，則將其歸類為SAE： ●致命的：AE引起死亡。 ●危及生命的：AE將患者置於直接死亡風險下。此分類不適用於假設若更嚴重則會引起死亡之AE。 ●住院：AE導致住院或延長現有住院患者的住院。根據此準則，在研究中簽署知情同意書或常規體檢之前計劃的為了選擇性醫學或手術程序或治療的住院不為SAE。入住姑息治療單位或臨終關懷照護機構不視為住院。在臨床試驗期間未惡化之潛在癌症或研究目標疾病之治療性、診斷性或手術程序的計劃前住院不必記為SAE。 ●失能/無力：導致持續或顯著失能或實質性破壞患者進行正常生活功能之能力的AE。 ●先天性異常或生育缺陷：懷孕之前或妊娠期間暴露於分子或研究治療方案之患者之孩子或胎兒的不良結果。 ●醫藥學上顯著的：AE不滿足以上準則中之任一者，但可能危及患者且可能需要醫療或手術干預來預防上文所列之結果中之一者，或涉及疑似經由感染物藥品傳播。
不良事件嚴重度
應使用NCI CTCAE版本4.03對AE嚴重程度分級。此等準則提供於操作結合劑中。
獨立地評估AE嚴重度及嚴重性。『嚴重度』表徵AE之強度。『嚴重性』為法規定義且充當試驗委託者界定法規報導義務的指導(參見上述SAE定義)。
不良事件與研究治療之關係
各AE與恩諾單抗維多汀及/或帕博利珠單抗及/或卡鉑/順鉑/吉西他濱的關係應由研究者利用以下準則評價： ●相關：有證據表明藥物與AE之間存在因果關係，諸如：不常見且已知與藥物暴露強烈相關的事件(例如血管性水腫、肝損傷、史蒂芬斯-強森症候群(Stevens-Johnson Syndrome))發生了一次或通常與藥物暴露無關、但在暴露於藥物之群體中另外不常見的事件(例如肌腱斷裂)發生一或多次 ●不相關：AE之另一原因似乎更合理(例如歸因於基礎疾病或在研究群體中普遍發生)，或AE發作及研究治療投與無法建立時間順序，或因果關係被視為生物學上不可行 (b)引發及記錄不良事件的程序
適當時，研究者及研究人員藉由將所有AE及SAE記錄於CRF及/或SAE表格上來報導所有AE及SAE，不論其是否在患者問卷調查期間促成、在體檢、實驗室試驗期間發現及/或藉由其他方式發現。
引發報導不良事件
每次研究訪視時應使用開放式或非導引式問卷調查方法來引發報導AE。
記錄不良事件
以下資訊應記錄於AE及預先存在病狀CRF上： ●包括發生及消退日期在內的說明 ●其是否符合SAE準則 ●嚴重度 ●與研究治療劑的關係或其他因果關係 ●結果
針對 病徵或症狀 的診斷
一般而言，較佳對個別症狀的清單使用統一診斷。若徵象及/或症狀的各分量為醫學上確認的診斷分量(如標準醫學教科書所證明)，則應僅將症狀分類納入診斷。若徵象或症狀的任何方面不符合經典的診斷模式，則個別症狀作為各別AE報導。
此研究的重要異常為與研究藥物輸注相關的不良反應。對於IRR而言，NCI CTCAE術語『輸注相關反應』按照嚴重度的總體程度(根據NCI CTCAE)來記錄。另外，反應的各徵象或症狀作為個別AE記錄。若多種徵象或症狀發生指定的輸注相關事件，則各種徵象或症狀應分別根據其嚴重度的程度來記錄。
記錄嚴重不良事件
對於SAE而言，將事件記錄於CRF與SAE表格上。
當記錄SAE時，應考慮以下內容： ●死亡為事件的結果。導致死亡的事件應記錄且報導於SAE表格與CRF。 ●對於住院、手術或診斷程序而言，引起手術或診斷程序的病痛應記錄為SAE，而非程序自身。程序應作為回應於病痛而採取的一部分行動記於敍述內容中。
潛在癌症惡化
由於潛在惡性病之進展以功效變化形式評估，因此其不應報導為AE或SAE。疾病進展之放射標識(例如，「腫瘤進展」或「癌轉移」)不應報導為AE或SAE (此等資料在功效評估中捕捉)。若不能確定症狀完全由於潛在惡性腫瘤之進展或不符合疾病之預期進展模式，則疾病進展之臨床症狀及體徵(例如「疲乏」、「呼吸困難」)可能會報導為AE或SAE正在研究中；不將疾病進展報導為AE術語。此外，發生潛在惡性病之進展的併發症應報導為AE或SAE。
死亡為事件的結果。導致死亡的事件應記錄且報導於SAE表格與CRF。
妊娠
注意藥物安全：對於自研究藥物第一劑量時直至研究藥物之最後一次給藥之後的6個月發生的所有妊娠，包括男性研究患者之伴侶發生的任何妊娠，均完成妊娠報導表格。若估算的懷孕日期在男性患者之第一次劑量研究藥物之後，則僅報導男性患者伴侶發生的妊娠。在得知懷孕後48小時內通過電子郵件或傳真發送至藥物安全部門(參見SAE報導表格中指定之電子郵件或傳真號碼)。監測所有妊娠的完整持續時間；應報導所有圍產期及新生兒結果。嬰兒應追蹤最少8週。
CRF資料的收集：在研究藥物最後一次給與的30天內發生的所有妊娠(如上文所述)亦記錄於AE及預存病狀CRF上。
不論意外、治療或自發引起的流產應作為SAE報導。如根據上述『嚴重性』準則定義(參見章節6.3.7.7(i)(a)的定義)的先天性異常或出生缺陷應作為SAE報導。
角膜不良事件
角膜潰爛或角膜炎AE≥2級應在其相應NCI CTCAE類別內分級。1級角膜潰爛或角膜炎AE應根據「眼病-其他，詳細說明(Eye disorders - Other, specify)」準則分級。其他角膜AE應記錄且根據「眼病-其他，詳細說明」準則分級。
糖尿病及高血糖症
糖尿病之定級應基於葡萄糖不耐之NCI CTCAE v4.03事件術語。高血糖症之定級應基於高血糖症之NCI CTCAE v4.03事件術語。
可能的肝源不良事件
若AE伴有LFT值(例如AST、ALT、膽紅素等)增加或懷疑歸因於肝功能異常，則關於肝臟異常監測及評估建議的詳細資訊參見6.3.11。關於與肝安全有關的治療中斷建議，參見章節6.3.6.2(iii)(a)。
應謹慎地監測肝源AE伴有LFT異常的患者。 (c)不良事件及嚴重不良事件報導期
新輔助及輔助之AE及SAE應從研究第1天至EOT或研究干預後30天報導，以較晚者為準。將報導在安全性報導期後發生的SAE被評估為與恩諾單抗維多汀或RC+PLND相關。 (d)嚴重不良事件需要立即報導
在SAE觀測或學習的24小時內，研究者應將事件報導給試驗委託者，不論事件與研究治療劑療法的關係。
對於初始SAE報導而言，應將可獲得的個案詳情記錄於SAE表格上。最少應包括以下內容： ●患者編號 ●事件發生日期 ●事件描述 ●研究者之因果關係評估 ●研究治療(若已知)
完成的SAE表格及SAE傳真封面在24小時內藉由電子郵件或傳真發送至試驗委託者藥物安全部門。
一旦相關追蹤資訊變得可用，將相關追蹤資訊提交至發起人。 (ii) 臨床實驗室測試
取樣交給中央實驗室及本地實驗室。
當地實驗室測試包括用於研究合格性、評估安全性及制定臨床決策之機構標準測試。為了確定是否繼續給藥或是否需要修正劑量，研究藥物投與之前，必須評審所有的本地實驗室結果。
以下實驗室評估由當地實驗室進行，以評估在研究時程期間排定時間點(參見表41)之安全性： ●血清化學組包括以下測試：白蛋白、鹼性磷酸酶、ALT、AST、碳酸氫鹽、血尿素氮、鈣、肌酸酐、氯離子、乳酸脫氫酶、磷、鉀、鈉、總膽紅素、澱粉酶、脂肪酶、尿酸及GFR。注意：在給藥之前驗證血糖＜250 mg/dL(參見章節6.3.6.4)。糖尿病患者必須在臨床中進行測試，且在給藥前血糖必須＜250 mg/dL。允許使用胰島素作為SOC之部分。 ●有差異的CBC包括以下測試：分五種部分差異的白血細胞計數(嗜中性球、淋巴球、單核球、嗜伊紅血球及嗜鹼性球)、血小板計數、血紅蛋白及血容比。 ●如根據機構標準所確定，基線處之CrCl。 ●甲狀腺功能測試，包括：三碘甲狀腺素或不含三碘甲狀腺素、不含甲狀腺素及促甲狀腺激素 ●標準尿樣分析(使用反射性顯微鏡) ●INR/PT/PTT ●B型肝炎表面抗原及抗B型肝炎核心抗體的血清學。 ●抗肝炎C抗體的血清學。若為陽性，則追蹤進行聚合酶連鎖反應/病毒負荷測試。 ●針對有生育潛力女性的血清或尿液β人類絨毛膜激性腺素妊娠測試。 ● HbA1c.若HbA1c升高(≥6.5%)，則在第1週期期間將患者轉診至適當提供者以進行葡萄糖管理。 (iii) 包括體重在內的身體檢查
身體檢查應包括評估以下身體部分/系統：腹部、肢體、頭部、心臟、肺、頸部及神經。僅在基線訪視時收集身高。在指定時間點(參見表41)，且另外在適用時根據機構標準收集體重，但在EOT之後訪視時不需要收集體重。 (iv) ECOG 體能 狀態
在方案規定之時間點評估ECOG (東部腫瘤協作組)體能狀態(表43)(參見表41)。 (v) 心臟監測
在基線及EOT訪視時執行ECG。若臨床上指示，則應執行額外的ECG。患者以仰臥姿勢維持至少5分鐘之後，執行常規12導程ECG。若可能，則應在獲得PK及生物標記物樣品之前執行ECG評估。對於患有NYHA III級心臟衰竭(參見章節6.3.10)或冠心病、心律不整或其他嚴重心臟病史的個體，需要在基線時進行經胸ECHO。若臨床上指示，則將來測試應使用相同模態。 (vi) 全面眼部檢查
進行由合格的驗光師或眼科醫師進行之完整眼睛檢查的患者，包括(但不限於)視力、裂隙燈、壓力測定檢查及擴張眼底檢查。後續眼睛檢查打算如臨床上指示進行。在研究期間，經歷角膜AE的患者需要進行EOT裂隙燈檢查。EOT狹縫燈檢查(僅在研究期間經歷角膜AE的患者所需)必須自最後一次給藥至少4週進行。 6.3.7.8 處理後評估(i) 追蹤評估
每12週(±7天)進行列於如下之評估，直至RC後基線掃描結束2年，及隨後每24週(±14天)，直至疾病進展/復發、患者死亡、撤回同意書或研究結束(以先發生者為準)。 ●身體檢查(包括體重) ●ECOG體能狀態 ●使用胸部IV造影劑之CT以及腹部及骨盆的尿路造影。若造影劑被禁止，則參閱當前的圖像採集指南(參見章節6.3.12)以獲得較佳掃描和造影選擇。後續掃描經由相同放射性模式進行。 ● QoL PRO評估(EQ-5D-5L) ●大腦掃描(若臨床上指示) ●骨骼掃描(若臨床上指示) (ii) 長期追蹤評估
在長期追蹤期間，每24週(±14天)聯繫患者瞭解其存活狀態、QoL PRO評估(EQ-5D-5L) (對於組L)及收集後續抗癌療法資訊，直至死亡、研究結束或撤回同意書(以先發生者為準)。 6.3.7.9 量測的適當性
此試驗中使用的安全措施視為評價研究藥物之潛在不良作用的標準程序。
抗腫瘤活性的確定將基於經驗證的如根據RECIST 1.1版所定義之客觀反應評估(Eisenhauer 2009) (參見表42)且研究者的治療決策將基於RECIST版本1.1。RECIST準則在此類型贅瘤的腫瘤學實務中被視為標準，且此方案中的評價時間間隔適於疾病管理。
通常針對生物製劑，共同評估免疫原性；因此，將執行標準測試以偵測針對恩諾單抗維多汀之特異性抗體的可能存在。
藥物動力學評估亦常見於臨床研究中以有助於表徵劑量暴露反應關係。
周邊血液樣品中的探究性生物標記物量測能夠與PK評估建立相關性且常見於臨床研究中。類似常見的是，對處理前腫瘤組織執行評估。周邊血液與腫瘤生物標記物樣品利用常用的標準測試加以評估。
具有治癒性意圖目標之RC+PLND通常在MIBC診斷之後8至12週發生，提供測試新圍手術期治療方法之獨特機會。
回應於NAC之非肌肉侵襲性疾病的病理性降期(≤ pT1)為公認的改善OS之生物標誌物，且將被視為新輔助試驗的適合之終點(Sonpavde 2009；Chism 2013) 。 6.3.8 資料分析方法 6.3.8.1 樣品大小之確定
在此研究中可招募約50名患者。
樣品大小並非基於用於正式假設測試之功效計算，而是基於如藉由95% CI表徵的pCRR之估計的精確度而選擇。
對於50名患者之樣品大小，且假定pCRR (病理完全反應率)為30%或40%，下文表40中概述2側95% CI。 表40
pCRR 95% 精確 CI (n=20) 95% 精確 CI (n=50)
30% (12%，54%) (18%，45%)
40% (19%，64%) (26%，55%)
6.3.8.2 研究終點定義(i) 病理完全反應率 (pCRR)
pCRR經定義為具有pCR之患者的比例。pCR經定義為來自RC+PLND之檢測組織中不存在活腫瘤(pT0N0)。 (ii) 病理降期率 (pDSR)
pDSR經定義為具有pDS之患者的比例。pDS經定義為具有＜pT2 (包括pT0、pTis、pTa、pT1)及在來自RC+PLND之檢測組織中之N0的患者。 (iii) 無疾病存活期 (DFS)
DFS經定義為自RC後基線掃描至以下任一者第一次出現的時間： ●如CT或l\1RI及/或活組織檢查所評估之局部或遠端復發；或 ●由任何原因所致的死亡。 (iv) 無事件存活期(EFS)
EFS經定義為自研究治療開始至以下事件中之任一者第一次出現的時間： ●放射線疾病進展排除RC+PLND之前的治癒性意圖目標手術 ●未能對存在殘餘肌肉侵襲性疾病及/或任何放射線疾病的參與者進行RC+PLND ● RC+PLND時留下的總體殘留疾病(由於腫瘤無法切除或新發現轉移性疾病，外科醫生無法完成根治性手術) ●如CT或MRI及/或活組織檢查所評估之局部或遠端RC後復發。若活組織檢查由於參與者安全性不可行，則單獨CT/MRI將為足夠的 ●因任何原因之死亡
注意：非尿道上皮第二原發性惡性腫瘤不被視為事件。
將如下文所描述檢查EFS資料以用於EFS之主要分析： ●在最後疾病評估當天檢查未拒絕手術且不具有任何EFS事件之患者； ●無疾病、患有NMIBC或評估不完全的拒絕手術之患者在拒絕手術前的最後一次疾病評估時檢查； ●將患有殘餘MIBC或拒絕手術之進行性疾病的患者視為事件。將在研究第1天檢查拒絕手術但無篩選後掃描之患者。 (v) 總存活期
OS定義為自研究治療開始至因任何原因所致之死亡日期的時間。在不存在死亡確認之情況下，OS在已知患者存活之最後一天檢查。 6.3.8.3 統計及分析計劃
下文所呈現之統計及分析計劃對統計分析計劃(statistical analysis plan，SAP)中所詳述的更完整計劃進行了概述。改變方案中所描述的資料分析方法僅當其改變方案的主要特點時才需要修正方案。SAP在資料庫鎖定之前完成。對最終SAP中所描述之方法的任何改變將在臨床研究報導中描述且證明。 (i) 一般考慮因素
在RC+PLND時藉由中央病理學審查基於病理性腫瘤反應概述疾病反應。亦根據RECIST版本1.1準則概述基於成像之腫瘤反應，如研究者及BICR所評定。
一般而言，所呈現的描述性統計資料包括觀測次數、平均值、標準差、中值、連續變數的最小值及最大值，及分類變數的數目及(非遺漏)百分比(根據類別)。
除非另外說明，計算兩側95%含量的CI。
適用時，使用Clopper-Pearson方法論(Clopper 1934)，針對反應率(例如，ORR、DCR、pCRR及pDSR)計算雙側95%精確CI。
對於時間與事件終點，使用Kaplan Meier方法估計中值存活時間；相關的95% CI根據互補對數-對數轉換計算(Collett 1994)。
資料變換及推導
除非在計劃分析部分中另外指定，否則基於2個日期(例如開始日期及結束日期)之時間變數計算為(結束日期-開始日期1)(以天為單位)。
除非在分析計劃中另外規定，否則所有分析中使用之基線值係在第一劑量之研究藥物之前的最新非遺漏量測。
分析集
安全性分析集包括接受任何量之研究藥物(恩諾單抗維多汀或組合藥劑)的所有患者。安全性分析集用於所有安全性分析。
全分析集(FAS)包括參與研究且接受任何量之研究藥物(恩諾單抗維多汀或組合藥劑)的所有患者。FAS用於分析功效終點。應注意，pCR之分析群體包括FAS中之所有患者，除拒絕手術之無疾病患者之外。pDS之分析群體包括FAS中經歷手術且具有自RC+PLND中檢測之組織樣品的所有患者。基於FAS概述患者人口統計資料及基線疾病特徵。
可評估有效性之分析集包括FAS中具有至少2個基線後反應評估或出於任何原因之中斷治療的所有患者。可評估有效性之分析集用於功效終點之額外分析。
PK分析集包括接受恩諾單抗維多汀的所有患者，自該等患者收集至少1個血液樣品且分析其中的恩諾單抗維多汀、MMAE或TAb濃度。給藥及樣品收集時間的相應記錄亦須可供所有恩諾單抗維多汀、MMAE及TAb濃度利用。PK分析集用於PK參數之分析。
患者的其他分析集可在SAP中定義。
小組檢查
作為探究分析，可對所選終點執行小組分析。
分析時序
在所有經治療患者已完成其指派之研究干預之後進行主要分析，且已進行研究之充分追蹤。
可定義其他截止日期且可鎖定相應資料庫以允許更精確地估算時間對事件終點。 (ii) 患者分配
按處置對研究患者之核算製成表格，且按分組及總體概述各分析集中之患者數量。出於中斷或退出所有參與患者之原因，概述中斷研究治療之患者及自研究退出之患者。 (iii) 患者特徵
使用FAS按分組及總體概述人口統計資料及其他基線特徵。細節提供於SAP中。 (iv) 功效分析
使用如章節6.3.8.3所定義之FAS分析功效終點之主要分析。功效終點之補充分析可使用可評估有效性之分析集呈現。
進行pCRR、pDSR、DFS、EFS及OS的分析。
此研究組分之關鍵功效終點為藉由中央病理學審查之pCRR。觀測到之pCRR及95% CI係使用Clopper-Pearson方法按分組提供的。
pDSR藉由中央病理學審查為次要終點且類似於上文所提及進行分析。
諸如研究者之DFS、BICR之DFS、研究者之EFS、BICR之EFS及OS之其他次要終點為時間與事件終點，且其使用卡本-麥爾方法分析且卡本-麥爾圖表由群組提供。檢閱算法的詳情提供於SAP中。 (v) 藥物動力學及 ATA 分析
在各PK取樣時間點，以描述性統計概述恩諾單抗維多汀ADC、MMAE及Tab濃度。PK參數，包括(但不限於) AUC、Cmax及Tmax，藉由非隔室分析估計且藉由描述性統計資料概述。可研究PK及藥力學終點、安全性或功效之間的關係。
使用安全分析集，按照訪視及分組來概述ATA的發生率。 (vi) 患者報導結果分析
彙總各評估之完成及順應性率。對FAS群體進行PRO分析。若計劃出任何額外分析，則其詳述於補充SAP中。 (vii) 生物標記物分析
研究生物標記物參數(例如，處理前值、相對於處理前之絕對及相對變化)與有效性、安全性及PK參數之關係。概述經確定所關注之關係及相關資料。分別描述此等分析之細節。 (viii) 安全性分析
安全性分析集用於概述所有安全性終點。 (a)暴露程度
藉由擴增組彙總治療持續時間、週期數、總劑量及劑量強度。劑量修改亦以類似方式概述。細節提供於SAP中。 (b)不良事件
AE綜述按分組及總體提供列表：所有AE的發生率、TEAE、治療相關的AE、3級及更高級AE、SAE、治療相關的SAE、死亡，及引起研究治療中斷的AE。AE定義為治療意外(若其新近發生或在研究治療之後惡化)。
AE係藉由用於法規活動之醫學詞典(MedDRA)、較佳術語、嚴重性及與研究藥物之關係概述。在1名患者中多次出現具有相同較佳術語之相同AE的情況下，對AE計數為發生一次。AE之發生率按較佳術語及分組製成表。導致研究藥物過早中斷的AE以相同方式概述及列舉。 (c)死亡及嚴重不良事件
SAE以與所有AE相同之方式列出及彙總。列出具有致命結果之事件。 (d)臨床實驗室結果
實驗室值(例如，在反射性顯微鏡分析下之化學、血液學及尿樣分析)可藉由訪視以圖形方式呈現。可以根據需要藉由預定訪視將概述統計資料製成表。根據NCI CTCAE版本4.03列舉實驗室值且當值處於正常參考範圍外部時加以標記。 (e) 其他安全性分析
生命體徵
在適當時可將概述統計資料及相對於基線的變化及/或劑量前至劑量後製成表。
ECOG 狀態
概述各訪視時之ECOG狀態。可按分組及總體對自基線變化至最佳及最差基線後評分。
ECG
可根據排定及非排定的每個ECG來概述ECG狀態(正常、臨床上的異常顯著，或臨床上的異常不顯著)，且可按分組及總體將相對於基線的轉變製成表。 (ix) 中期分析
未計劃正式期中分析 表41事件計劃表
   天數 篩選/基線 參與 新輔助期間每3週週期(3個週期) RC RC後基線掃描 S 輔助期間每3週週期(6個週期)，在RC ±14天之後8週開始 EOT B,Z 追蹤 U, Z 長期追蹤 V, Z
D-28至1 D-7至1 在第一劑量之1至2 d內 D1 D8 D15 RC前≤4 wk在RC之前 第12週 在RC之後6週 D1 D8 D15    每12週直至2年結束，隨後每24週 每24週
訪視窗          ±2 d C +1 d ±1 d    ±7 d ±14 d ±2 d C +1 d ±1 d    ±7 d (直至2年結束)，隨後±14 d ±14 d
篩選/基線評估 納入/排除，病史 X    在治療之前提交確認                                       
知情同意書 X                                       
起始收集來自TURBT之腫瘤樣本 D,E X                                       
完全眼睛檢查 X                                       
大腦掃描(若臨床上指示) F X             X    X             X   
骨骼掃描(若臨床上指示) F X             X    X             X   
INR/PT/PTT    X                                    
B型肝炎表面抗原及抗B型肝炎核心抗體的血清學 X                                       
抗C型肝炎抗體之血清學 X                                       
HbA1c G X                                       
用反射性顯微鏡分析進行分析 X                                  X   
妊娠測試(尿液或血清；僅適用於有生育能力的女性) H    X X J                X J       X      
安全性評估 身體檢查(包括體重)    X X I,J                X J       X X K   
身高    X                                    
生命跡象    X X I,J X J             X J X J    X      
具有差異之CBC L,M,W    X X I,J X J X          X J X J X X      
血清化學組 L,M,W    X X I,J,N X J,N X          X J,N X J,N X X      
CrCl    X                                    
甲狀腺功能測試 X    X I,J                X J       X      
ECOG體能狀態    X X I,J                X J       X X   
ECG O    X                            X      
經胸ECHO X    X                                    
狹縫燈檢查                                  X P      
同時用藥記錄 與研究程序相關 Q 新輔助及輔助組L之AE及SAE應從研究第1天至EOT或研究干預後30天報導，以較晚者為準。將報導在安全性報導期後發生的SAE被評估為與恩諾單抗維多汀或RC+PLND相關。      
不良事件收集
處理 W 恩諾單抗維多汀投與 R          X X             X X            
PK/免疫原性/生物標記物 血液、尿液、組織樣品收集 關於樣品收集細節，參見PK、ATA及生物標記物表 A
反應評估 成像 S   X S                X S    X S          X AA X S   
RC時之病理性評估                      X                     
存活狀態 T                                           X T
尿液細胞 Y                                     X X   
患者報導之結果評估 生活品質評估 Z          X J,Z X J,Z       X Z             X Z X Z X Z
A關於PK、ATA及生物標記物取樣參見表20。 B  EOT訪視應在患者完成所有必需研究干預(研究干預包括RC+PLND)後30-37天內進行，或在完成所有必需的研究干預之前停止。EOT評估必須在開始新的癌症治療之前進行，裂隙燈檢查除外(裂隙燈檢查必須在最後劑量之後≥4週進行)。若EOT評估在最後研究干預後30天之前完成，則將在最後研究干預日期後30至37天電話聯繫患者，以完成安全性追蹤且評估AE。 C窗適用於新輔助週期2及3及輔助週期1至6。 D在第1週期第1天之前90天內。此組織亦將送至用於藉由免疫組織化學(IHC)進行之PD-L1確定。 E在患者之初始診斷時獲得用於生物標記物研究之侵襲性腫瘤組織。樣品必須確認為可用於參與研究。腫瘤塊為較佳的。若腫瘤塊不可用，則片材為可接受的。 F在整個研究期間，如臨床上所指示來重複執行。 G若HbA1c升高(≥6.5%)，則在第1週期期間將患者轉診至適當提供者以進行葡萄糖管理。 H針對有生育潛力之女性的血清或尿液妊娠測試。第-3天至第1天基線評估。血清或尿液妊娠測試。若在7天內執行基線評估，則第1週期不需要執行。在EOT之後每月(±1週)重複6個月。妊娠測試可在投與研究藥物前1天內進行。 I若在1天內進行基線評估，則不需要第1週期。 J程序應在給藥前進行。 K追蹤體檢將不包括重量量測。 L臨床上顯著之異常實驗室值將在新輔助第1週期期間的1天內確認，如臨床上所指示。 M安全性實驗室可在給藥之前至多1天收集。 N在給藥之前驗證血糖＜250 mg/dL。糖尿病患者必須在臨床中進行測試，且在給藥前血糖必須＜250 mg/dL。允許胰島素之使用作為標準照護之一部分。 O將對所有患者進行標準基線/EOT ECG評估。 P僅對在研究期間經歷過角膜AE的患者需要；必須在最後一次給藥後≥4週進行。 Q自知情同意書之時間。 R恩諾單抗維多汀的劑量必須間隔至少1週。 S將使用胸部IV造影劑之CT及腹部及骨盆的CT尿路造影進行基線放射篩選評估。若造影劑被禁止，則參閱當前的圖像採集指南(章節6.3.12)以獲得較佳掃描和造影選擇。RC預先掃描應在RC+PLND之前≤4週完成(RC+PLND必須在研究治療開始12週進行)。應在RC+PLND之前審查RC預先掃描結果。RC後基線掃描應在RC+PLND之後6週(±14天)進行。在RC後基線成像後，患者將每12週(±7天)進行一次成像，直至RC後基線掃描後2年結束。在研究週期後，包括反應評估之訪視頻率將降低至每24週(±14天)。成像將持續，直至疾病進展/復發、患者死亡、研究結束或撤回同意書(以先發生者為準)。 T瞭解患者之存活狀態、疾病狀態及收集後續抗癌治療資訊，直至死亡、研究結束或患者撤回同意書(以先發生者為準)。 U追蹤將每12週(±7天)進行，直至RC後基線掃描結束2年。成像將持續，直至疾病進展/復發、患者死亡、研究結束或撤回同意書(以先發生者為準)。在研究之此期間後，訪視(包括反應評估)頻率將降低至每24週(±14天)。 V在RC+PLND後每24週(±14天)聯繫患者瞭解其生存狀態且收集後續抗癌療法資訊，直至死亡、研究結束或撤回同意書(以先發生者為準)。 W為了確定是否繼續給藥或是否需要劑量修改，研究藥物投與之前，審查所有本地實驗室測試結果。若在任何週期(新輔助週期2及3及輔助週期1至6)之第1天存在阻止給藥之AE，則應延遲給藥且不消除給藥。若任何週期之第8天出現計劃劑量之2天內未消除AE，則應消除該劑量。若消除第8天劑量，則仍應獲取研究樣品(適用週期)。若已永久地中斷恩諾單抗維多汀，則患者應仍完成安全性實驗室，持續第8天及第15天訪視。 X對於患有NYHA III級心臟衰竭或冠心病、心律不整或其他嚴重心臟病史的個體，需要進行經胸心動迴聲圖。 Y僅適用於未接受RC及PLND手術的患者(參見章節7.2.2.2)。 Z患者報導結果(PRO)評估將使用EQ 5D 5L完成。將在新輔助週期1至3第1天及第8天給藥之前2天內完成評估。在新輔助週期完成之後，患者將在RC+PLND (若適用)時及EOT時完成ePRO一次。在RC+PLND(若適用)及EOT之後，患者將在2年內每12週完成一次PRO評估(對於追蹤期)，及此後每24週完成一次(對於長期追蹤期)。若訪視發生在評定窗之外，則仍應完成評估。 AA對於中斷研究干預之患者，EOT成像應在最後研究干預之4週內進行。若在中斷研究干預之4週內進行成像，則不需要。若EOT成像完成，則後續掃描應基於方案指定之成像時間表。 表42  RECIST準則概述(版本1.1)
實體腫瘤之反應評估準則
術語 定義
完全反應(CR) 所有目標病灶消失。任何病理性淋巴結之短軸必須減小至＜ 10 mm。
部分反應(PR) 採用基線直徑總和作為參照，目標病灶的直徑總和減小≥30%。
進展性疾病(PD) 目標病變之直徑總和的至少20%增加，採用研究時之最小總和直徑作為參考(若基線總和為研究時之最小值，則此包括基線總和)。除20%之相對增加以外，該總和亦須展示至少5 mm之絕對增加。一或多個新病灶的出現亦視為惡化。
穩定疾病(SD) 研究時採用最小直徑總和作為參照，既不充分萎縮以符合PR，亦不充分增加以符合PD。
可量測病灶 必須通過CT/MRI掃描(CT片層厚度不超過5 mm)在至少1個維度(要記錄量測平面中的最長直徑)進行精確量測，最小尺寸為10 mm (最多5個病灶，各部位不超過2個，長軸至少10 mm [或對於結節病變15 mm的短軸])。 當藉由CT/MRI掃描評估時，視為可量測，淋巴結的短軸必須≥15 mm。
來自RECIST版本1.1 (Eisenhauer 2009)
若以下疾病評估(初始反應之後的至少4-5週)仍顯示反應(CR或PR)，則反應(CR或PR)視為經確認。在初始反應之後出現SD的情況下，若SD之後出現PR或CR，則其視為經確認。舉例而言，若患者在第9週出現PR，在第14週出現SD，且在第18週出現PR，則此PR將視為經確認。
基線病變鑑別
若在基線時存在超過一個可量測病變，所有病變至多總共五個至多(每個器官最多兩個病變)代表所有受累器官，應被確定為目標病變，且在基線時記錄及量測。目標病變應基於其大小進行選擇(具有最長直徑之病變)，代表所有受涉及器官，但另外應為適宜於可再現重複量測之彼等病變(不應選擇骨骼病變為目標病變)。有時，最大病變可能無法進行可再現量測，在這種情況下，應選擇下一可重複地量測之最大病變。在CT/MRI掃描中偵測到之膀胱病變可選擇為目標病變，其限制條件為放射科醫師認為病變可在基線後時間點進行可再現量測，且病變已藉由充分的膀胱擴張進行量測。在整個研究治療過程中應使用相同的成像方式。
定義為可量測且可標識為目標病灶之病理性淋巴結必須滿足藉由CT或MRI掃描得到之短軸為≥15 mm的標準。所有其他病理性結節(短軸≥ 10 mm但＜ 15 mm之彼等結節)應視為非目標病變。短軸＜10 mm之淋巴節視為非病理性結節且不應對其進行記錄或跟蹤。包括病理性淋巴結之所有其他病變(或疾病位點)應鑑別為非目標病變，且亦應在基線時對其進行記錄。 表43.體能狀態轉換量表
卡諾斯基 蘭斯基 ECOG
百分比 描述 百分比 描述 評分 描述
100 正常，無不適，無疾病證據。 100 完全活躍，正常。 0 正常活性。具有完全活性，能夠在無限制之情況下進行所有疾病前效能。
90 能夠進行正常活動；少量疾病之徵象或症狀。 90 身體上費勁的活動受到輕微限制。
80 正常活動費力；出現疾病的一些徵象或症狀。 80 活躍，但很快疲勞。 1 有症狀但可走動。劇烈的體力活動受限，但能走動，且能夠從事輕度或久坐性質之工作(例如輕體力家務、辦公室工作)。
70 照護自己；不能進行正常活動或進行活躍工作。 70 玩樂活動時受到較大限制且度過的時間較短。
60 需要偶爾幫助，但能夠照護其大部分需求。 60 能起床走動，但活躍活動程度最低；忙於較安靜的活動。 2 臥床時間＜50%。走動且能夠完全自我照護，但無法從事任何工作活動。超過50%之清醒時間能起床走動。
50 需要大量幫助及頻繁的醫療照護。 50 愛修邊幅，但整天的大部分時間無所事事；不能活躍玩樂；能夠參與所有安靜的活躍玩樂及活動。
40 失能，需要特殊照護及幫助。 40 大部分臥床，參與安靜活動。 3 臥床時間＞50%。僅能有限地自我照護，超過50%清醒時間侷限於床或椅子。
30 嚴重失能，指示住院。不會即將發生死亡。 30 臥床，需要幫助，即使是安靜活樂。
20 病情嚴重，指示住院。不會即將發生死亡。 20 常常睡眠，玩樂完全受限於非常被動的活動。 4 100%臥床。完全失能。無法進行任何自我照護。完全受限於床或椅子。
10 快速進行的瀕死、致死過程。 10 不能玩樂，不能離床。
0 死亡。 0 死亡。 5 死亡。
6.3.10 紐約健康學會分類
心臟病患者體能活動處方的功能及治療分類。
I類：活動不受限制的患者；其受日常活動中不顯示症狀的困擾。
II類：活動受到輕微、輕度限制的患者；其在休息時或在輕度施力時感到舒適。
III類：活動明顯受限的患者；其僅在休息時感到舒適。
IV類：在充分休息時應侷限於床或椅子的患者；帶來不適的任何體能活動且在休息時出現症狀。
線上來源：www.heart.org/HEARTORG/Conditions/HeartFailure/ AboutHeartFailure/Classes-of-Heart-Failure_UCM_306328_Article.jsp 6.3.11 肝臟安全監測及評估
此等建議係基於FDA行業指南(藥物誘發性肝臟損傷：市售前的臨床評價(Drug-Induced Liver Injury: Premarketing Clinical Evaluation)，2009年7月)。
血清胺基轉移酶增加至＞3×正常值上限(ULN)或膽紅素＞2×ULN的任何患者應經歷肝酶(至少包括丙胺酸轉胺酶[ALT]、天冬胺酸轉胺酶[AST]、鹼性磷酸酶[ALP]及總膽紅素[TBL])的詳細測試。為了確認異常，應在告知測試結果的72小時內重複進行測試。
肝異常之定義
經確認的肝臟異常按照中度及重度表徵：
中度： ● ALT或AST ＞3× ULN或總膽紅素＞2× ULN
重度： ●ALT或AST ＞3× ULN及總膽紅素＞2× ULN (*參見哈依定律) ●ALT或AST ＞8× ULN ● ALT或AST＞5 × ULN，超過2週 ● ALT或AST ＞3× ULN及INR ＞1.5 (若INR測試為可適用/評估的) ● ALT或AST＞3×ULN，出現暗示肝臟損傷(例如右上腹疼痛或觸痛)及/或嗜酸性球增多症(＞5%)的症狀
研究者可確定除如上文所述之外的異常肝功能結果可當作中度或重度異常且需要額外的監測及追蹤。
*哈依定律：藥物誘導肝細胞損傷引起的黃疸，無顯著阻塞性組分，所致壞結果的比率較高：10至50%死亡率(或移植)。哈依定律的2個「要求」為：1)藥物可導致肝細胞型損傷的證據，通常顯示為轉胺酶升幅增加的更高：3×ULN (「2×ULN升幅在經治療及未治療之患者中太常見而無法區分」)。2)膽紅素增加(至少2×ULN)伴轉胺酶並行升高至少3×ULN且無證據證明肝內或肝外膽紅素阻塞(ALP升高)或吉伯特氏症候群(Gilbert's syndrome)的個案(Temple等人, Pharmacoepidemiol Drug Saf (2006);15(4): 241-3.)。
追蹤程序
經確認之中度及重度肝功能異常應藉由獲得適當專家會診、詳細相關病史、身體檢查及實驗室測試來充分表徵。肝功能測試經確認異常的患者應如下文所述追蹤。
若異常出現穩定或研究藥物已中斷且患者無症狀，則確認的中度異常LFT應每週重複執行2至3次，接著每週或更短時間重複執行。
在不存在另一病因下，如上文所定義之重度肝功能異常可視為重要醫學事件且可報導為SAE。所有患者當其可能歸因於研究藥物的重度肝功能異常被觀測到時，應聯繫試驗委託者且告知所有患者。
為了進一步評估實驗室的異常肝結果，建議研究者： ●獲得症狀及先前或並行疾病的更詳細病史。應注意可能導致繼發性肝異常之疾病及病狀，諸如低血壓事件及失代償性心臟疾病。非酒精性脂肝炎發現於肥胖高脂蛋白症及/或糖尿病患者中，且可能與波動的胺基轉移酶含量相關。 ●獲得伴隨藥物使用(包括非處方藥物、互補及替代藥物)、飲酒、麻醉藥品使用及特殊膳食。 ●獲得暴露於環境化學劑之病史。 ●基於患者的病史，其他測試可為適當的，包括：急性病毒性肝炎(A、B、C、D、E或其他感染物)、評估膽道疾病的超音波成像或其他成像或其他實驗室測試(包括國際標準化比值(INR))、直接膽紅素。 ●考慮胃腸病學或肝病學會診。
執行由研究者確定的其他測試以進一步評價可能的病因。 6.3.12 圖像獲取準則
以下按降低的優先次序之篩選掃描： 1.使用IV造影之CT胸部及腹部及骨盆之CT尿路造影。 2.不使用IV造影劑之CT胸部以及使用IV釓造影劑之腹部及骨盆之MRI尿路造影(若碘造影劑在醫學上為禁忌的)
以下按降低的優先次序之膀胱切除術後掃描 ：1.使用經口及IV造影劑之胸部-腹部-骨盆CT 2.不使用IV造影劑之CT胸部以及使用IV釓造影劑之MRI腹部-骨盆(若碘造影劑在醫學上為禁忌的) 3.不使用IV造影劑之CT胸部以及不使用IV釓造影劑之MRI腹部及骨盆(若碘造影劑及釓造影劑在醫學上為禁忌的) 4.使用IV釓造影劑之MRI胸部-腹部及骨盆 5.不使用IV造影劑之胸部-腹部-骨盆CT(推薦經口造影劑) (若患者對碘造影劑及MRI掃描具有禁忌)
以下按降低的優先次序 之 大腦掃描 ( 若臨床上指示 ) ：1.使用IV釓之大腦MRI 2.使用IV造影劑之大腦CT (若釓及/或MRI為醫學上禁忌) 3.不使用IV釓之大腦MRI (若釓為醫學上禁忌的) 4.不使用IV造影劑之大腦CT (若釓為醫學上禁忌)
成像模式、解剖覆蓋及獲取參數應在各患者之所有成像訪視中保持一致。 6.3.13 手術
手術指南：
RC+PLND (例如，開放式、機器人輔助腹腔鏡)及尿路分流術(例如，回腸導管、新膀胱)之手術方法由治療泌尿學家及參與者自行決定。
RC+PLND根據AUA/ASCO/ASTRO/SUO指南*進行，如下：
「在進行標準的根治性膀胱切除術時，臨床醫生應切除男性的膀胱、前列腺及精囊，且女性應切除膀胱、子宮、輸卵管、卵巢及陰道前壁。當進行兩側骨盆淋巴結切除術時，臨床醫師應最低限度地切除外部及內部髂及閉孔淋巴結(標準淋巴結切除術)。」在新膀胱重建之情況下，根據標準照護及治療泌尿學家的判斷，可允許保留女性性器官。此指南之任何偏差應記載於醫療記錄及eCRF中。
所有手術後併發症以與其他AE (CTCAE版本4.0)相同的方式報導且分級，且由研究者及/或外科醫生鑑別為手術後併發症。
* https://www.auanet.org/guidelines/bladder-cancer-non-metastatic-muscle-invasive-(2017) 6.3.14 關於避孕之指南
出於此指導之目的，若與患者較佳生活方式一致，則完全禁慾為可接受的避孕形式。完全禁慾定義為自知情同意書之時間開始且在整個研究中繼續，直至全身性暴露結束(在研究藥物之最後一次劑量之後至少6個月)進行禁慾。
可接受之高效節育方法 ( 預防懷孕 )
有生育潛力或其伴侶具有生育潛力且性活躍可能引起懷孕的患者可選擇以下任何兩種方法(請參見以下可接受之組合)： ●除非禁忌，否則激素避孕方法(不包括僅孕激素丸劑；方法必須與抑制排卵相關) ●失敗率＜1%的宮內節育器 ●輸卵管結紮 ●輸精管結紮(自手術之日起至少90天，精液分析證明無精子症) ●障壁方法(具有或不具有殺精子劑之男性或女性避孕套、具有或不具有殺精子劑之子宮頸帽、具有或不具有殺精子劑之隔膜) ●具有生育潛力之個體係已經歷初潮且未進行手術絕育(例如，子宮切除術、雙側輸卵管切除術、雙側卵巢切除術)或尚未完成停經之任何出生為女性的人。閉經在臨床上定義為45歲以上出生為女性的人在不存在其他生物學、生理或藥理學病因之情況下閉經12個月。 ●障壁方法只能與並非障壁方法之高效避孕方法一起使用。單獨的障壁方法，包括雙重障壁方法，不被認為高效避孕措施(參見不可接受的避孕方法)。
避孕方法之可接受組合包括：激素方法及輸精管結紮、激素方法及障壁方法、子宮內裝置及輸精管結紮、子宮內裝置及障壁方法、輸卵管結紮及輸精管結紮及輸卵管結紮及障壁方法。
防止二次接觸精液的可接受方法如下：選項1 -男性避孕套(具有或不具有殺精子劑)及子宮頸帽，及選項2 -男性避孕套(具有或不具有殺精子劑)及隔膜。生為男性且與懷孕或哺乳者有性行為的個體必須使用選項1或2中的避孕藥具。
不可接受的避孕方法包括週期性禁慾、僅殺精子劑、無方法、僅含孕激素的避孕藥、停藥、同時使用女性及男性避孕套、節律及單獨使用障壁法(包括雙重障壁法)。
圖 1A至 圖 1E描繪連接素-4蛋白質之核苷酸及胺基酸序列( 圖 1A)、Ha22-2(2.4)6.1之重鏈( 圖 1B)及輕鏈( 圖 1C)的核苷酸及胺基酸序列，以及Ha22-2(2.4)6.1之重鏈( 圖 1D)及輕鏈( 圖 1E)的胺基酸序列。
圖 2描繪章節6.1中所描述之臨床研究的總體研究設計。TURBT，膀胱腫瘤之反式尿道切除。
圖 3描繪歐洲癌症治療研究組織(European Organization for the Research and Treatment，EORTC)核心生活品質(QLQ-C-30)評估(EORTC-QLQ-C-30，當前版本，版本3)，如章節6.1中所描述。
圖 4描繪章節6.1中所描述之EuroQol-5尺寸(EQ-5D-5L)。
圖 5描繪相對於章節6.2中所描述之膀胱及骨盆區域的解剖結構之MIUC疾病期( 圖 5中展示為Tis、Ta、T1、T2a、T2b、T3a、T3b、T4a及T4b) (參見例如www.cancer.org/cancer/bladder-cancer/detection-diagnosis-staging/staging.html) 。
圖 6描繪在章節6.2中所描述之臨床研究中觀測到的無事件存活期(EFS)。MIBC EV單、肌肉侵襲性膀胱癌恩諾單抗維多汀單一療法-治療之個體。
圖 7描繪章節6.3中所描述之臨床研究的總體研究設計。TURBT，膀胱腫瘤之反式尿道切除。
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Claims (59)

  1. 一種治療人類個體之肌肉侵襲性尿路上皮癌(muscle invasive urothelial cancer；MIUC)或肌肉侵襲性膀胱癌(muscle invasive bladder cancer；MIBC)的方法，該方法包含(a)向該個體投與有效量之抗體藥物結合物(antibody drug conjugate；ADC)； 其中該ADC包含結合至191P4D12 (連接素(Nectin)-4)之抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段與一或多個單位的單甲基奧瑞他汀E (monomethyl auristatin E，MMAE)結合； 其中該個體不適合接受順鉑治療(不符合順鉑條件)；及 其中病理完全反應率(pathological complete response rate；pCRR)為至少30%。
  2. 一種治療人類個體之肌肉侵襲性尿路上皮癌(MIUC)或肌肉侵襲性膀胱癌(MIBC)的方法，其包含(a)向該個體投與有效量之抗體藥物結合物(ADC)； 其中該ADC包含結合至191P4D12 (連接素-4)之抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段與一或多個單位的單甲基奧瑞他汀E (MMAE)結合； 其中該個體不適合接受順鉑治療(不符合順鉑條件)；及 其中病理降期率(pathological downstaging rate；pDSR)為至少50%。
  3. 如請求項1或請求項2之方法，其中該方法包含向該個體投與3個週期之該ADC。
  4. 如請求項1至3中任一項之方法，其中該癌症之治療進一步包含根治性膀胱切除術及骨盆淋巴結擴清術(RC+PLND)。
  5. 如請求項4之方法，其中該人類個體係於向該人類個體投與該ADC之後約四(4)至約十二(12)週接受該RC+PLND。
  6. 如請求項1或2之方法，其進一步包含(b)對該個體進行根治性膀胱切除術及骨盆淋巴結擴清術(RC+PLND)。
  7. 如請求項6之方法，其中(b)在(a)之後約四(4)至約十二(12)週進行。
  8. 一種治療人類個體之肌肉侵襲性尿路上皮癌(MIUC)或肌肉侵襲性膀胱癌(MIBC)的方法，其包含向該個體投與多個週期之有效量之抗體藥物結合物(ADC)，其中 (a)該ADC包含結合至191P4D12 (連接素-4)之抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段與一或多個單位之單甲基奧瑞他汀E (MMAE)結合； (b)該個體不適合接受順鉑治療(不符合順鉑條件)；及 (c)向不符合順鉑條件的個體投與之ADC治療的週期數目等於或低於用於治療患有MIUC或MIBC之符合順鉑條件的個體之標準照護(standard-of-care；SOC)療法的週期數目。
  9. 如請求項8之方法，其中針對符合順鉑條件的個體之該SOC療法包含： i.順鉑(cisplatin)； ii.甲胺喋呤(methotrexate)、長春鹼(vinblastine)、小紅莓(doxorubicin)及順鉑(cisplatin)(MVAC)； iii.吉西他濱(gemcitabine)加順鉑； iv.投與計劃性細胞死亡1 (programmed cell death 1；PD-1)抑制劑；或 v.投與計劃性細胞死亡-配位體1 (programmed cell death-ligand 1；PD-L1)抑制劑。
  10. 如請求項8或9之方法，其中向該不符合順鉑條件的個體投與之ADC治療的週期數目為3或4。
  11. 一種投與新輔助或圍手術期療法以治療人類個體之肌肉侵襲性尿路上皮癌(MIUC)或肌肉侵襲性膀胱癌(MIBC)的方法，其包含向該個體投與多個週期之有效量之抗體藥物結合物(ADC)，其中： (a)該ADC包含結合至191P4D12 (連接素-4)之抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段與一或多個單位之單甲基奧瑞他汀E (MMAE)結合； (b)該個體不適合接受順鉑治療(不符合順鉑條件)；及 (c)該個體用該ADC治療多個週期後，仍保持符合根治性膀胱切除術及骨盆淋巴結擴清術(RC+PLND)的條件。
  12. 如請求項11之方法，其中該ADC係作為新輔助療法(i)在該手術之前或(ii)在該手術之前及之後投與。
  13. 一種治療人類個體之肌肉侵襲性尿路上皮癌(MIUC)或肌肉侵襲性膀胱癌(MIBC)的方法，其包含向該個體投與多個週期之有效量之抗體藥物結合物(ADC)，其中： (a)該ADC包含結合至191P4D12 (連接素-4)之抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段與一或多個單位之單甲基奧瑞他汀E (MMAE)結合； (b)該個體不適合接受順鉑治療(不符合順鉑條件)；及 (c)使用該有效量之該ADC治療該個體之功效類似於用標準照護(SOC)療法治療符合順鉑條件的患者上所觀測到之治療功效，該標準照護(SOC)療法係用於治療符合順鉑條件的之MIUC或MIBC個體。
  14. 如請求項‎13之方法，其中該治療功效至少與針對符合順鉑條件的個體在SOC下所觀測到之該治療功效一樣有效。
  15. 如請求項13或‎14之方法，其中治療功效之量測為以下中之一或多者：病理完全反應率(pCRR)、病理降期率(pDSR)、無疾病存活期(disease free survival；DFS)、無事件存活期(event-free survival；EFS)、總存活期(overall survival；OS)、無進展存活期(progression free survival；PFS)及反應持續時間(duration of response；DoR)。
  16. 如請求項15之方法，其中針對該不符合順鉑條件的個體之該pCRR為至少30%。
  17. 如請求項15之方法，其中針對該不符合順鉑條件的個體之該pDSR為至少50%。
  18. 如請求項‎14至17中任一項之方法，其中針對該符合順鉑條件的個體之該SOC療法包含： (i)順鉑； (ii)甲胺喋呤、長春鹼、小紅莓及順鉑(MVAC)； (iii)吉西他濱(gemcitabine)加順鉑； (iv)計劃性細胞死亡1 (PD-1)抑制劑；或 (v)計劃性細胞死亡-配位體1 (PD-L1)抑制劑。
  19. 如請求項18之方法，其中(i)該PD-1抑制劑為納武單抗(nivolumab)或帕博利珠單抗(pembrolizumab)；或(ii)該PD-L1抑制劑係選自由阿特珠單抗(atezolizumab)、阿維魯單抗(avelumab)及度伐魯單抗(durvalumab)組成之群。
  20. 如請求項1至‎19中任一項之方法，其中該抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區及輕鏈可變區，該重鏈可變區包含互補決定區(complementarity determining region；CDR)，其包含SEQ ID NO: 22中所闡述之該重鏈可變區之該等CDR的該等胺基酸序列，且該輕鏈可變區包含CDR，其包含SEQ ID NO: 23中所闡述之該輕鏈可變區之該等CDR的該等胺基酸序列。
  21. 如請求項1至20中任一項之方法，其中： (i)該抗體或其抗原結合片段包含：包含SEQ ID NO: 9之胺基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO: 10之胺基酸序列的CDR-H2、包含SEQ ID NO: 11之胺基酸序列的CDR-H3；包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO: 13之胺基酸序列的CDR-L2，及包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列的CDR-L3； (ii)該抗體或其抗原結合片段包含：包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列的CDR-H1、包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列的CDR-H2、包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列的CDR-H3；包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列的CDR-L1、包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列的CDR-L2，及包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列的CDR-L3； (iii)該抗體或其抗原結合片段包含：由SEQ ID NO: 9之胺基酸序列組成的CDR-H1、由SEQ ID NO: 10之胺基酸序列組成的CDR-H2、由SEQ ID NO: 11之胺基酸序列組成的CDR-H3；由SEQ ID NO: 12之胺基酸序列組成的CDR-L1、由SEQ ID NO: 13之胺基酸序列組成的CDR-L2，及由SEQ ID NO: 14之胺基酸序列組成的CDR-L3，或 (iv)該抗體或其抗原結合片段包含：由SEQ ID NO: 16之胺基酸序列組成的CDR-H1、由SEQ ID NO: 17之胺基酸序列組成的CDR-H2、由SEQ ID NO: 18之胺基酸序列組成的CDR-H3；由SEQ ID NO: 19之胺基酸序列組成的CDR-L1、由SEQ ID NO: 20之胺基酸序列組成的CDR-L2，及由SEQ ID NO: 21之胺基酸序列組成的CDR-L3。
  22. 如請求項1至‎21中任一項之方法，其中該抗體或其抗原結合片段包含含有SEQ ID NO: 22之胺基酸序列的重鏈可變區及含有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列的輕鏈可變區。
  23. 如請求項1至‎22中任一項之方法，其中該抗體包含重鏈及輕鏈，該重鏈包含SEQ ID NO: 7之第20個胺基酸(麩胺酸)至第466個胺基酸(離胺酸)範圍之胺基酸序列，且該輕鏈包含SEQ ID NO: 8之第23個胺基酸(天冬胺酸)至第236個胺基酸(半胱胺酸)範圍之胺基酸序列。
  24. 如請求項1至‎22中任一項之方法，其中該抗原結合片段為Fab、F(ab')2、Fv或scFv。
  25. 如請求項1至‎23中任一項之方法，其中該抗體為完全人類抗體。
  26. 如請求項1至23及25中任一項之方法，其中該抗體為IgG1，且該輕鏈為κ輕鏈。
  27. 如請求項1至26中任一項之方法，其中該抗體或其抗原結合片段係以重組方式產生。
  28. 如請求項1至27中任一項之方法，其中該抗體或抗原結合片段經由連接子與各單位之MMAE結合；視情況其中該連接子為可酶裂解連接子，且其中該連接子與該抗體或其抗原結合片段之硫原子形成一鍵；且視情況其中該連接子具有下式：-Aa-Ww-Yy-；其中-A-為延伸子單元，a為0或1；-W-為胺基酸單元，w為介於0至12範圍內之整數；且-Y-為間隔子單元，y為0、1或2。
  29. 如請求項28之方法，其中該延伸子單元具有下式(1)之結構；該胺基酸單元為纈胺酸-瓜胺酸；且該間隔子單元為包含下式(2)之結構的PAB基團： 式(1) 式(2)； 其中視情況該延伸子單元與該抗體或其抗原結合片段之硫原子形成一鍵；且其中該間隔子單元經由胺基甲酸酯基連接至MMAE。
  30. 如請求項1至‎29中任一項之方法，其中該ADC包含： (i)每個抗體或其抗原結合片段1至20個單位的MMAE； (ii)每個抗體或其抗原結合片段1至10個單位的MMAE； (iii)每個抗體或其抗原結合片段2至8個單位的MMAE；或 (iv)每個抗體或其抗原結合片段3至5個單位的MMAE。
  31. 如請求項1至‎30中任一項之方法，其中該ADC具有以下結構： 其中L-表示該抗體或其抗原結合片段，且p為1至10。
  32. 如請求項‎31之方法，其中： (i)  p為2至8； (ii)  p為3至5； (iii)  p為3至4；或 (iv)  p為約4。
  33. 如請求項31或32之方法，其中該有效量抗體藥物結合物的平均p值為約3.8。
  34. 如請求項1至33中任一項之方法，其中該ADC調配在包含L-組胺酸、聚山梨醇酯-20 (TWEEN-20)及二水合海藻糖的醫藥組合物中。
  35. 如請求項1至‎34中任一項之方法，其中該ADC調配(i)在包含約20 mM L-組胺酸、約0.02% (w/v) TWEEN-20、約5.5% (w/v)二水合海藻糖及鹽酸鹽之醫藥組合物中，且其中該醫藥組合物之pH在25℃下為約6.0；或(ii)在包含約9 mM組胺酸、約11 mM組胺酸鹽酸鹽單水合物、約0.02% (w/v) TWEEN-20及約5.5% (w/v)二水合海藻糖之醫藥組合物中，且其中該醫藥組合物之pH在25℃下為約6.0。
  36. 如請求項1至‎35中任一項之方法，其中該ADC具有以下結構： 其中L-表示該抗體或其抗原結合片段且p為約3至約4，該抗體包含重鏈及輕鏈，該重鏈包含SEQ ID NO: 7之第20個胺基酸(麩胺酸)至第466個胺基酸(離胺酸)範圍之胺基酸序列，且該輕鏈包含SEQ ID NO: 8之第23個胺基酸(天冬胺酸)至第236個胺基酸(半胱胺酸)範圍之胺基酸序列，其中該ADC以約1.25 mg/該個體體重kg的劑量投與，且其中該劑量係在每三週週期之第1天及第8天藉由IV輸注投與。
  37. 如請求項1至‎36中任一項之方法，其中該個體具有cT2-T4aN0M0期MIBC。
  38. 如請求項1至37中任一項之方法，其中若該個體滿足以下準則中之一或多者，則其被視為不符合順鉑條件：(a) GFR ＜60 mL/min但≥30 mL/min，(其中該GFR係藉由柯克勞夫-高爾特公式(Cockcroft-Gault formula)、腎病飲食改進方程式(Modification of Diet in Renal Disease equatio；MDRD)或24小時尿液收集量測)；(b) ECOG體能狀態為2；(c) NCI CTCAE 4.03版本≥2級聽覺損失；及(d) NYHA III級心臟衰竭。
  39. 如請求項1至38中任一項之方法，其中該個體之前尚未接受針對MIBC之全身性治療、化學輻射及/或輻射療法。
  40. 如請求項1至‎39中任一項之方法，其中該個體尚未接受免疫檢查點抑制劑(immune checkpoint inhibitor；CPI)；其中視情況該CPI為計劃性細胞死亡1 (PD-1)抑制劑或計劃性細胞死亡-配位體1 (PD-L1)抑制劑。
  41. 如請求項1至‎40中任一項之方法，其中該個體尚未接受CD137促效劑、CTLA-4抑制劑或OX-40促效劑。
  42. 如請求項1至41中任一項之方法，其中該ADC有效量為每公斤該個體體重約1至約10 mg、約1至約5 mg、約1至約2.5 mg、約1至約1.25 mg、約0.25 mg、約0.5 mg、約0.75 mg、約1.0 mg、約1.25 mg、約1.5 mg、約1.75 mg、約2.0 mg、約2.25 mg或約2.5 mg。
  43. 如請求項1至41中任一項之方法，其中該ADC有效量為約1 mg/該個體體重kg。
  44. 如請求項1至41中任一項之方法，其中該ADC有效量為約1.25 mg/該個體體重kg。
  45. 如請求項1或請求項2之方法，其中在(a)中，在每3週週期之第1天及第8天向該個體投與該有效量ADC，持續總共3個週期。
  46. 如請求項45之方法，其中該ADC有效量為約1.25 mg/該個體體重kg。
  47. 如請求項4或請求項5之方法，其中在(a)中，在每3週週期之第1天及第8天向該個體投與該有效量ADC，持續總共3個週期。
  48. 如請求項4、5或47中任一項之方法，其中該方法進一步包含(b)在該個體接受該RC+PLND之後約8週，在每3週週期之第1天及第8天向該個體投與該有效量ADC，持續總共6個週期。
  49. 如請求項47或請求項48之方法，其中該ADC有效量為約1.25 mg/該個體體重kg。
  50. 如請求項6或請求項7之方法，其中在(a)中，在每3週週期之第1天及第8天向該個體投與該有效量ADC，持續總共3個週期。
  51. 如請求項6、7或50中任一項之方法，其進一步包含(c)在(b)之後約8週，在每3週週期之第1天及第8天向該個體投與該有效量ADC，總共3個週期。
  52. 如請求項50或請求項51之方法，其中該ADC有效量為約1.25 mg/該個體體重kg。
  53. 如請求項8至‎44中任一項之方法，其中在3週週期之第1天及第8天向該人類個體投與該有效量ADC，持續總共3個週期。
  54. 如請求項1至‎53中任一項之方法，其中該ADC係藉由靜脈內(IV)注射或輸注投與。
  55. 如請求項1至54中任一項之方法，其中該癌症為肌肉侵襲性尿路上皮癌(MIUC)。
  56. 如請求項1至54中任一項之方法，其中該癌症為肌肉侵襲性膀胱癌(MIBC)。
  57. 如請求項1至‎56中任一項之方法，其中該ADC為恩諾單抗維多汀(enfortumab vedotin，EV)。
  58. 如請求項1至57中任一項之方法，其中該個體總存活期延長至少2個月、至少4個月、至少6個月、至少8個月、至少10個月或至少12個月。
  59. 如請求項1至58中任一項之方法，其中該ADC係以單一療法形式投與。
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