TW202322789A - 轉移性人類前列腺癌細胞之增殖抑制劑 - Google Patents

轉移性人類前列腺癌細胞之增殖抑制劑 Download PDF

Info

Publication number
TW202322789A
TW202322789A TW111103821A TW111103821A TW202322789A TW 202322789 A TW202322789 A TW 202322789A TW 111103821 A TW111103821 A TW 111103821A TW 111103821 A TW111103821 A TW 111103821A TW 202322789 A TW202322789 A TW 202322789A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
cells
dhmba
prostate cancer
cancer cells
cell
Prior art date
Application number
TW111103821A
Other languages
English (en)
Other versions
TWI814228B (zh
Inventor
渡辺貢
Original Assignee
日商渡邊牡蠣研究所股份有限公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 日商渡邊牡蠣研究所股份有限公司 filed Critical 日商渡邊牡蠣研究所股份有限公司
Publication of TW202322789A publication Critical patent/TW202322789A/zh
Application granted granted Critical
Publication of TWI814228B publication Critical patent/TWI814228B/zh

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/045—Hydroxy compounds, e.g. alcohols; Salts thereof, e.g. alcoholates
    • A61K31/05—Phenols
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/075—Ethers or acetals
    • A61K31/085—Ethers or acetals having an ether linkage to aromatic ring nuclear carbon
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/56—Materials from animals other than mammals
    • A61K35/618—Molluscs, e.g. fresh-water molluscs, oysters, clams, squids, octopus, cuttlefish, snails or slugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Marine Sciences & Fisheries (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

課題：本發明針對DHMBA對於轉移性人類前列腺癌細胞(PC-3及DU-145)產生的作用調查的結果，確認了DHMBA會抑制前列腺癌細胞的增殖，而且也會促進該細胞死亡，發揮出癌細胞的增殖控制作用，而且甚至還會抑制癌細胞的轉移活性，像這樣，DHMBA可成為對人類前列腺癌的治療有用的藥物手段，本發明以提供此為目的。 解決手段：本發明特徵為：以3,5-二羥基-4-甲氧基苄醇(DHMBA)為有效成分，具有轉移性人類前列腺癌細胞的增殖抑制作用。

Description

轉移性人類前列腺癌細胞之增殖抑制劑
本發明關於一種轉移性人類前列腺癌細胞的增殖抑制劑。
人類前列腺癌為轉移性癌，是男性最共通的癌，在癌症相關的男性死因當中排行第2名。 尤其，已知前列腺癌會優先轉移至骨骼。已知在各種癌症當中，骨轉移是共通的併發症，若比較其發生率，則多發性骨髓瘤為70~79%、前列腺癌為65~90%、乳癌為65~75%，肺癌為17~64%、大腸癌為10%。像這樣，可知前列腺癌的骨轉移性極高。前列腺癌的骨轉移會引發劇烈疼痛，骨折、脊髓壓迫、骨髓抑制等的併發症。局部的前列腺癌5年間的生存率為100%，然而轉移性前列腺癌的生存率才只有30%。因此必須有更有效的治療抑制劑。目前的治療法有外科切除、化學療法、荷爾蒙去勢、免疫療法及放射性同位素療法等，然而這些治療抑制劑並不夠，因此一直以來都期待開發出更有效的治療抑制劑。 [先前技術文獻] [專利文獻]
[專利文獻1] 日本特開2017-132753公報
[發明所欲解決的課題]
新穎的酚性抗氧化劑3,5-二羥基-4-甲氧基苄醇(在本說明書中稱為DHMBA)，是由海洋牡蠣分離出來的新穎化合物。已知DHMBA會對於細胞內氧化應激的抑制發揮調節作用。但是，對於轉移性人類前列腺癌細胞的作用完全未知。
所以，本發明人等針對DHMBA對於轉移性人類前列腺癌細胞(PC-3以及DU-145)所產生的作用進行調查。結果發現，DHMBA會抑制前列腺癌細胞的增殖，而且也會促進該細胞死亡，發揮出癌細胞的增殖控制作用，而且甚至還會抑制癌細胞的轉移活性。像這樣，DHMBA被認為可成為對人類前列腺癌的治療有用的藥物手段。 [用於解決課題的手段]
本發明的特徵為： 以3,5-二羥基-4-甲氧基苄醇(DHMBA)為有效成分，具有轉移性人類前列腺癌細胞的增殖抑制作用；或 以3,5-二羥基-4-甲氧基苄醇(DHMBA)為有效成分，具有轉移性人類前列腺癌細胞的細胞死亡誘導作用；或 以3,5-二羥基-4-甲氧基苄醇(DHMBA)為有效成分，具有轉移性人類前列腺癌細胞之移動與浸潤作用的抑制作用。 [發明之效果]
人類前列腺癌為轉移性癌，在與癌症相關的男性死因當中排在前幾名。因此，必須進一步開發更有效的治療抑制劑。在本發明中，針對由海洋牡蠣鑑定出來的新穎化合物3,5-二羥基-4-甲氧基苄醇(DHMBA)以及合成的3,5-二羥基-4-甲氧基苄醇(DHMBA)對於人類前列腺癌細胞(PC-3以及DU-145)所產生的效果進行調查。
結果發現以含有DHMBA(1及10μM)的培養液培養的癌細胞，群落形成與細胞增殖明顯受到抑制。 該作用，在與細胞內訊息傳遞有關的訊息傳遞因子的阻礙劑的存在下並未表現出顯著的抑制效果。
這說明了DHMBA會在細胞內的訊息傳遞路徑發生作用。此外，關於其機制，若調查與促進細胞增殖的訊息傳遞路徑有關的分子Ras、PI3K、Akt、MAPK及mTOR的表現量，則這些分子的表現量會降低。 令人感興趣的是，癌細胞抑制基因蛋白p53、p21、Rb、鈣調素的表現量會增加。 另一方面，DHMBA會促進細胞死亡。抗氧化劑DHMBA會抑制癌細胞內產生活性氧。這說明了DHMBA的癌細胞增殖抑制作用與透過芳香烴受體的基因表現有關。 此外，與癌細胞的轉移有關的蛋白質因子NF-kB、窖蛋白-1、整合素β1的表現量會降低。
像這樣，確認了新穎的天然化合物DHMBA會抑制前列腺癌細胞的增殖，而且也會促進該細胞死亡，發揮出癌細胞的增殖控制作用，甚至還會抑制癌細胞的轉移活性。 像這樣，DHMBA被認為可成為對於人類前列腺癌的治療有用的手段。
在本發明中，針對3,5-二羥基-4-甲氧基苄醇(DHMBA)是否可成為轉移性人類前列腺癌的抑制劑等的有效成分進行了實驗。
(實驗材料與方法) (試藥) 杜爾貝科改良的伊格爾培養液(含有4.5g/L葡萄糖、L-麩醯胺酸･丙酮酸、抗生素(100units/mL青黴素、100μg/mL鏈黴素；1%P/S)的培養液)，是由Corning(Mediatech, Inc. Manassas, VA, USA)得到。牛血清(Fetal bovine serum；FBS)是由Hyclone(Logan, UT, USA)購入。兩性黴素B (fungizone)、凋亡蛋白酶-3阻礙劑(CAS 169332-60-9-Calbiochem)、吉西他濱(gemcitabine)、2-甲基-2H-吡唑-3-羧酸(2-甲基-4-鄰甲苯偶氮苯基)醯胺(CH223191)，是由Selleckchem Com.(Houston, TX, USA)購入。其他所有的試藥類是在Sigma-Aldrich(USA)購入。凋亡蛋白酶-3阻礙劑是溶解於磷酸緩衝液(PBS)，另外，CH223191是溶解於二甲基亞碸(DMSO)。DHMBA以及其他試藥是溶解於100%乙醇，直到使用於實驗之前，都在-20℃下冷凍保存。
(3,5-二羥基-4-甲氧基苄醇(DHMBA)) 3,5-二羥基-4-甲氧基苄醇(DHMBA)是使用純度100%的合成品。實驗時，溶解於100%乙醇來使用。直到使用之前都在-20℃下冷凍保存。此外，由本發明人等所取得的專利已經證明了由牡蠣肉萃取出的牡蠣肉萃取物中富含3,5-二羥基-4-甲氧基苄醇(DHMBA)，確信使用該3,5-二羥基-4-甲氧基苄醇(DHMBA)也會得到同樣的結果。
(人類前列腺癌細胞) 轉移性人類前列腺癌細胞PC-3、DU-145細胞，是由American Type Culture Collection(ATCC CRL-1435 TM, ATCC; Rockville, MD, USA)購入。PC-3細胞是由62歲成人男性的腺癌且發生骨轉移的癌細胞所分離出來。另外，DU-145細胞是由69歲成人男性的腺癌且轉移至腦的癌細胞所分離出來。這些癌細胞是在杜爾貝科改良的伊格爾培養液(含有4.5g/L葡萄糖、L-麩醯胺酸･丙酮酸、抗生素(100units/mL青黴素、100μg/mL鏈黴素；1%P/S、1%fungizone) 中培養。
(群落形成) PC-3及DU-145細胞(使用1×10 3/6孔盤，每孔2ml培養液)是在含DHMBA(1及10μM)的DMEM培養液中(含有10%FBS、1%P/S及1%fungizone)並且在5%CO 2以及37℃下培養9天。培養後，將培養液除去，以PBS將細胞洗淨2次，添加95%甲醇(0.5ml)，固定20分鐘。固定後，以PBS(1ml)將培養皿的各孔洗淨4次後，添加0.5%結晶紫(0.5ml)，在室溫下放置2小時，進行染色。將染色液洗淨除去，乾燥後，以顯微鏡Olympus MTV-3(Olympus Corporation, Tokyo, Japan)計算包含細胞50個以上的群落。
(細胞增殖) PC-3及DU-145細胞(使用1×10 5細胞數/24孔盤，每孔1ml培養液)是在含DHMBA(1及10μM)的DMEM培養液中(含有10%FBS、1%P/S及1%fungizone)並且在5%CO 2以及37℃下培養1、2、3、4及6天。在另一個實驗中，PC-3細胞(1×10 5細胞數/ml per well)是在DMEM培養液中(含有10%FBS、1%P/S及1%fungizone)並且在DHMBA(10μM)、細胞增殖週期阻礙劑羅斯維汀(Roscovitine)(10或100nM)、丁酸鹽(10或100μM)及蘿蔔硫素(sulforaphane)(1或10nM)，另外，在細胞內訊息傳遞阻礙劑渥曼青黴素(wortmannin)(10或100nM)、PD98059(1或10μM)以及星形孢菌素(staurosporine)(1或10nM)、甚至芳香烴受體(AHR)阻礙劑CH223191(1、10或25μM)的存在下培養3天。培養後，對附著於培養皿底面的細胞添加溶解於不含Ca 2+/Mg 2+的PBS(Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA)的0.05%胰蛋白酶-EDTA溶液0.1ml，在37℃下保溫2分鐘，使附著的細胞游離，添加含10%%FBS及1%P/S的DMEM培養液0.9ml，讓反應停止。依照"細胞數測定"的項目所記載的方法計算該細胞懸浮液中的細胞數。
(細胞死亡) PC-3及DU-145細胞(使用1×10 5/24孔盤，每孔1ml培養液)是在DMEM培養液中(含有10%FBS、1%P/S及1%fungizone)並且在5%CO 2且在37℃下培養3天，在細胞達接近鋪滿的時間點，將培養液更換成含DHMBA(0.01、0.1、1、10、100或1000μM)的培養液，培養24及48小時。培養後，將附著於培養皿底面的細胞剝下來，進行計數。在另一個實驗中，培養3天後，在細胞達接近鋪滿的時間點，更換成含DHMBA(1或10μM)以及凋亡蛋白酶-3阻礙劑(10μM)的培養液，培養48小時後，進行細胞計數。此外，培養3天後，在細胞達接近鋪滿的時間點，將含有(1或10μM)或不含DHMBA的DMEM培養液更換成添加了吉西他濱(0.1、1、10、50或100nM)或CH223191(1、10及25μM)的培養液，培養48小時，進行細胞計數。
(細胞計數) 細胞培養後，對附著於培養皿底面的細胞添加溶解於不含Ca 2+/Mg 2+的PBS(Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA)的0.05%胰蛋白酶-EDTA溶液0.1ml，在37℃下保溫2分鐘，使附著的細胞游離，添加含10%%FBS及1%P/S的DMEM培養液0.9ml，讓反應停止。在顯微鏡Olympus MTV-3下對於可看見的細胞使用血球計數盤(Sigma-Aldrich)進行細胞計數。
(細胞內活性氧的測定) 細胞內活性氧(ROS)是使用ROS測定套組(MAK144-1 Kit, Sigma-Aldrich)作測定，該套組使用了前螢光基質H 2DCFDA。PC-3及DU-145細胞(2.5×10 4細胞數/孔、使用96孔盤，每孔0.1ml培養液)是在含DHMBA(0.1、1、10、100或1000μM)的DMEM培養液中(含有10%FBS、1%P/S及1%fungizone)並且在5%CO 2以及37℃下培養24小時。培養後，以PBS將細胞洗淨後，添加25μM H 2DCFDA溶液0.1ml，保溫45分鐘。然後，以PBS洗淨，細胞中產生的活性氧量，是使用螢光測定微孔盤讀取儀，在波長Ex/Em= 485/535nm測定螢光強度。結果是以相對於並未添加DHMBA的對照組的螢光強度的百分比%來表示。
(細胞移動性(migration)的測定) 前列腺癌PC-3及DU-145細胞的移動性，是使用刮傷測試來調查。PC-3及DU-145細胞(使用2×10 5細胞數/24孔盤，每孔1ml培養液)是在含有10%FBS、1%P/S及1%fungizone的DMEM培養液中並且在5%CO 2以及37℃下培養48小時，在細胞達鋪滿的時間點，使用微量吸管尖(200μl)，進行直線的刮傷。將游離的細胞以PBS洗淨除去，添加上述培養液(含有DHMBA 0.1、1、10、100或1000μM)，培養48小時。培養後，測定沒有細胞的部分的間隔。將培養前進行刮傷時的間隔與培養後的間隔作比較，以相對於對照組(不含DHMBA時之值)的百分比%來表示。
(細胞侵入活性(invasion)的測定) 前列腺癌PC-3及DU-145細胞的細胞侵入活性，是使用transwell chambers(Corning Life Sciences 型號CLS3464-48EA, USA)來測定。在24孔盤的各孔放置培養室。在培養室的上面添加基質凝膠Matrigel(Corning Life Sciences, Cat. No 356230, USA)50μl。在凝膠乾燥後，在凝膠的上面添加PC-3或DU-145細胞懸浮液(2.5×10 4細胞數/ml且不含FBS的DMEM)500μl。該細胞懸浮液含DHMBA(0、1、10或100μM)。在培養室中添加細胞懸浮液後，保溫1小時，讓細胞附著。在培養室的下方添加不含FBS的培養液與含有10%FBS的培養液0.75ml。該孔盤是在5%CO 2、95%空氣以及37℃下培養24小時。培養後，將培養室上面的培養液除去，將濾膜回收，在冷的70%乙醇(1ml)中放置30分鐘，將侵入凝膠之後存在於濾膜下面的細胞固定。然後，在含有溶解於0.75ml,20%甲醇的結晶紫0.5%的溶液中浸泡30分鐘，進行染色。染色後，以PBS洗淨，進行乾燥。乾燥後，以顯微鏡(Olympus MTV-3; Olympus Corporation, Tokyo, Japan)計算被染色的細胞的數目。另外，染色後的細胞影像是從顯微鏡拍攝到的照片。
(西方墨點法) PC-3細胞(1×10 6細胞/10ml、100mm培養皿)是在含有10%FBS、1%P/S及1%fungizone的DMEM培養液中並且在5%CO 2以及37℃下培養3天。另外，使培養液含DHMBA (10μM)。培養後，對細胞添加含有蛋白質分解酵素及蛋白質去磷酸酶活性阻礙劑的細胞溶解液cell lysis buffer(Cell Signaling Technology, Danvers, MA, USA)來作調整。將細胞溶解液以17,000×g在4℃下離心分離10分鐘，並回收其上清液。上清液中的蛋白質量，是使用Bio-Rad Protein Assay Dye(Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, CA, USA)並以蛋白素為標準蛋白質來作測定。蛋白質樣品直到使用之前都保存在-80℃的冷凍庫。使用蛋白質試樣液40μg，添加至SDS聚丙烯醯胺膠體電泳(12%SDS-PAGE)，進行分離。然後，將蛋白質分子轉印至尼龍膜。該膜是使用與蛋白質分子特異性地結合的抗體來進行免疫轉漬。Ras(cat. no. 3339, rabbit)、Akt(cat. no. 9272, rabbit)、促分裂原活化蛋白激酶(MAPK; cat. no. 4695, rabbit)、磷酸化MAPK(cat. no. 4370, rabbit)、雷帕黴素作用目標(mTOR, cat. no. 4517, mouse)、Rb(cat. no. 9309, mouse)、p21(cat. no. 2947, rabbit)、窖蛋白-1(cat. no. 3267, rabbit)及β-肌動蛋白(cat. no. 3700, mouse)等的抗體，是由Cell Signaling Technology(Danvers, MA, USA)購入。另外，p53(cat. no. sc-126, mouse)，NF-κB p65(cat. no. sc-109, rabbit)及整合素β1(cat. no. sc-13590, mouse)，是由Santa Cruz Biotechnology, Inc.(Santa Cruz, CA, USA)取得。此外，兔抗鈣調素抗體，是由Sigma-Aldrich(cat. no. HPA029103, rabbit)購入。標的蛋白質是使用上述一級抗體，在低溫下保溫16小時。然後，二級抗體使用結合有辣根過氧化酶的二級抗體(Santa Cruz Biotechnology, Inc., mouse sc-2005 or rabbit sc-2305; diluted 1:1,000)，在室溫下保溫60分鐘。然後，以化學發光基質(cat. no. 34577, Thermo Scientific, Rockford, IL, USA)使蛋白質的條帶發光，在X光底片上使用顯影劑感光來偵測。
(統計的處理) 數據的統計處理是使用GraphPad InStat version 3 for Windows XP(GraphPad Software Inc. La Jolla, CA)來進行。數據是以平均值±標準差來表示。多重比較檢定是以Tukey-Kramer多重比較檢定來進行。將危險率0.05%以下判定為有顯著差異。
(實驗結果) (DHMBA對於人類前列腺癌細胞的增殖所產生的效果) 首先，調查對於轉移性人類前列腺癌的PC-3及DU-145細胞的群落形成所產生的效果。 PC-3細胞及DU-145細胞的群落形成，若在DHMBA(1或10μM)的存在下培養9天，則明顯受到抑制(參考圖1、圖2)。 此外，調查對於細胞增殖所產生的效果的結果，藉由在DHMBA(10μM)的存在下培養1~6天，PC-3細胞及DU-145細胞的增殖會受到抑制。DHMBA對於細胞增殖所產生的顯著效果，即使在0.01μM的低濃度也可觀察到(參考圖1、圖2)。
接下來，為了知道DHMBA的效果的作用機制，調查在DHMBA存在下，各種阻礙劑的共存所產生的效果。 若將PC-3及DU-145細胞在細胞週期阻滯劑羅斯維汀(10或100nM)，丁酸鹽(10或100μM)，及蘿蔔硫素(1或10nM)的存在下培養3天，則細胞增殖會受到抑制(圖3A)。 在這些阻礙劑的存在下，並未觀察到DHMBA(10μM)的細胞增殖抑制效果(圖3B)。 此結果說明了DHMBA會在細胞增殖週期的G1以及G1/M期發生作用。
此外，使用這些阻礙劑來調查DHMBA的前列腺癌細胞的細胞增殖抑制效果是否以對細胞內促進增殖的訊息傳遞過程的作用為基礎。 若在渥曼青黴素(10或100nM)、PD98059(1或10μM)及星形孢菌素(1或10nM)的存在下將前列腺癌細胞(PC-3)培養3天，則細胞增殖會受到抑制(圖3C)。在這些阻礙劑的存在下，DHMBA(10μM)並未表現出顯著的細胞增殖抑制效果(圖3D)。這些結果說明了，DHMBA的細胞增殖抑制作用的表現，會在促進細胞增殖的訊息傳遞過程中有作用。
(DHMBA對於與細胞增殖有關的蛋白質的表現量所產生的效果) 為了判明DHMBA抑制前列腺癌細胞(PC-3)增殖的作用的分子機制，以西方墨點法來調查與促進細胞增殖有關的蛋白質分子的表現量的變動(圖4)。 PC-3細胞是在DHMBA(10μM)的存在下培養3天。有助於促進細胞增殖的Ras、PI3激酶、Akt、MAP激酶、磷酸化MAP激酶以及mTOR的表現量會顯著受到抑制。令人感興趣的是，抑制細胞增殖的分子p53、Rb、p21及鈣調素(regucalcin)的表現量會顯著增加。這些蛋白質分子的變動，說明了DHMBA有助於細胞增殖抑制效果的表現。
(DHMBA對於細胞死亡誘導所產生的效果) 此外還針對DHMBA的前列腺癌細胞的細胞死亡誘導作用作了調查。PC-3及DU-145細胞，在沒有DHMBA的環境下培養3天，在達接近鋪滿的狀態，更換成含DHMBA的培養液，培養24及48小時後，計算附著於培養皿底面的細胞數，調查細胞死亡誘導的作用(圖5)。PC-3(圖5A、5B)及DU-145(圖5D、5E)的細胞死亡，若在DHMBA(1、10、100或1000μM)的存在下進行培養，則會顯著增加。該增加，在凋亡蛋白酶-3阻礙劑(10μM)的存在下並未被引發(圖5C、5F)。
DHMBA(10μM)的培養，增加了凋亡蛋白酶-3及活性凋亡蛋白酶-3(cleaved caspase-3)的量(圖5G)。這些結果說明了DHMBA會誘導細胞凋亡般的細胞死亡。
Gemcitabin在臨床上被使用作為誘發許多種癌細胞死亡的癌症治療藥。此作用是以抑制細胞核DNA合成的作用為基礎。若將PC-3細胞在吉西他濱(1、10、50、100及250nM)的存在下培養3天，則引發明顯的細胞死亡(圖7A)。DHMBA(1及10μM)的PC-3細胞死亡誘導作用(圖7B)，在吉西他濱(1或10nM)的存在下並未被引發。
令人感興趣的是，發現DHMBA(1及10μM)的細胞死亡誘導效果，在吉西他濱(100nM)的共存下會顯著提高(圖7B)。由這些結果說明了DHMBA和吉西他濱的細胞死亡誘導作用的過程的一部分有關係。
(DHMBA對於細胞增殖的抑制效果以及細胞死亡誘導效果會透過芳香烴受體) 關於芳香烴受體(aryl hydrocarbon receptor；AHR)，在細胞質內AHR會與核轉移蛋白質因子結合，發生核轉移，結合於基因，產生藥物代謝酵素以及其他許多的基因表現。推測DHMBA會結合於AHR，發生基因表現作用。為了證實此推測，使用AHR特異的阻礙劑CH223191來調查DHMBA(10μM)的細胞增殖作用以及細胞死亡誘導作用是否被引發(圖8)。
在CH223191(1、10或25μM)的存在下將PC-3細胞培養3天，調查對於細胞增殖所產生的作用，結果並未發現明顯的效果(圖8A)。同樣地，將細胞培養3天，在接近鋪滿的狀態下，添加CH223191(1、10或25μM)，即使培養48小時也並未引發細胞死亡誘導(圖8B)。這些結果顯示，實驗所使用的濃度下的CH223191不會對細胞帶來有害的效果。於是發現，在該CH223191(1、10或25μM)的存在下，DHMBA(10μM)的細胞增殖抑制效果以及細胞死亡誘導效果並沒有表現出來。由此見解推測，DHMBA的作用當中，有一部分與透過AHR的基因表現有關。
(DHMBA對於前列腺癌細胞生成活性氧的抑制效果) 眾所周知DHMBA是抗氧化劑。於是，調查它對於前列腺癌細胞PC-3及DU-145細胞生成活性氧所產生的效果(圖8)。 在DHMBA(1、10、100及1000μM)的存在下將細胞培養24小時，測定細胞內生成的活性氧量，則觀察到明顯的抑制。此結果被推測是起因於DHMBA對於前列腺細胞所產生的效果當中，有一部分是減少活性氧的生成。
(DHMBA會抑制前列腺癌細胞之移動與浸潤作用) 人類前列腺癌細胞的PC-3以及DU-145細胞為轉移性的癌細胞。藉由調查對前列腺癌細胞之移動(migration)與浸潤(invasion)性的效果來評估對該轉移性產生的作用。 若在DHMBA(1、10、100或1000μM)的存在下培養PC-3細胞(圖9A、9C)以及DU-145細胞(圖9B、9D)，則其移動性顯著受到抑制。此外還發現，PC-3細胞(圖10A、10C)以及DU-145細胞(圖10B、10D)的浸潤性也顯著受到抑制。此外，若調查與促進前列腺癌細胞的移動與浸潤性有關的蛋白質分子的表現量，則發現NF-κB p65、窖蛋白-1，以及整合素β1的表現量顯著降低(圖11)。
(針對各圖的說明) 圖1是針對3,5-二羥基-4-甲氧基苄醇(DHMBA)對於人類前列腺癌PC-3細胞的增殖所產生的抑制效果進行實驗之說明圖。 圖1(A)是PC-3細胞(1×10 3細胞數/6孔盤的1孔)在含DHMBA(1或10μM)的DMEM培養液(含有10%FBS、1%P/S及1%fungizone)中並且在5%CO 2以及37℃下培養9天之圖。 圖1(B)為計算群落數之圖。 圖1(C)是PC-3細胞(1×10 5cells/24孔盤的1孔)在含DHMBA(10μM)的DMEM培養液(含有10%FBS、1%P/S及1%fungizone)中並且在5%CO 2以及37℃下培養1~6天之圖。
圖1(D)、(E)是PC-3細胞(1×10 5cells/24孔盤的1孔)在含DHMBA(0.01、0.1、1、10、100、1000μM)的DMEM培養液(含有10%FBS、1%P/S及1%fungizone)中並且在5%CO 2以及37℃下培養3天(D)及6天(E)。培養後，將附著於培養皿底面的細胞剝下來，進行計數。各數據，是以由培養細胞取8個孔作測量所得到之值的平均值與標準差來表示。*代表與對照組(白或灰長條)比較 p＜0.001。1-way ANOVA、Tukey-Kramer post-test.
圖2是針對3,5-二羥基-4-甲氧基苄醇(DHMBA)對於人類前列腺癌DU-145細胞的增殖所產生的抑制效果進行實驗之說明圖。 (A)為DU-145細胞(1×10 3cells/6孔盤的1孔)在含DHMBA(1或10μM)的DMEM培養液(含有10%FBS、1%P/S及1%fungizone)中並且在5%CO 2以及37℃下培養9天之圖。 (B)為計算群落數之圖。 (C)為DU-145細胞(1×10 5cells/24孔盤的1孔)在含DHMBA (10μM)的DMEM培養液(含有10%FBS、1%P/S及1%fungizone)中並且在5%CO 2以及37℃下培養1~6天之圖。 (D)、(E)為DU-145細胞(1×10 5cells/24孔盤的1孔)在含DHMBA(0.01、0.1、1、10、100、1000μM)的DMEM培養液(含有10%FBS、1%P/S及1%fungizone)中並且在5%CO 2以及37℃下培養3天(D)及6天(E)。培養後，將附著於培養皿的細胞剝下來，進行計數。各數據，是以由培養細胞取8個孔作測量所得到之值的平均值與標準差來表示。*代表與對照組(白或灰長條)作比較 p＜0.001。1-way ANOVA、Tukey-Kramer post-test.
圖3為針對3,5-二羥基-4-甲氧基苄醇(DHMBA)在細胞增殖阻礙劑以及細胞內訊息傳遞阻礙劑的存在下對於人類前列腺癌PC-3細胞的增殖所產生的抑制效果進行實驗之說明圖。 (A)、(B)是PC-3細胞(1×10 5cells/ml/24孔盤的1孔)在含有細胞週期阻滯劑羅斯維汀(10、100nM)、丁酸鹽(10、100μM)及蘿蔔硫素(1、10nM)而且含DHMBA(10μM)之DMEM培養液(含有10%FBS、1%P/S及1%fungizone)中並且在5%CO 2以及37℃下培養3天之圖。 (C)、(D)是PC-3細胞(1×10 5cells/ml/24孔盤的1孔)在含有渥曼青黴素(10或100nM)、PD98059(1或10μM)及星形孢菌素(1或10nM)而且含DHMBA(10μM)的DMEM培養液(含有10%FBS、1%P/S及1%fungizone)中並且在5%CO 2以及37℃下培養3天之圖。培養後，將附著於培養皿的細胞剝下來，進行計數。各數據，是以由不同的培養細胞各取8個孔作測量所得到之值的平均值與標準差來表示。*代表與對照組(灰長條)作比較 p＜0.001。1-way ANOVA、Tukey-Kramer post-test.
圖4是針對DHMBA對於與促進前列腺癌細胞的細胞增殖有關的蛋白質分子的表現量所產生的效果進行實驗之說明圖。 PC-3細胞(1×10 6細胞/10ml、100mm培養皿)是在含有10%FBS、1%P/S及1%fungizone的DMEM培養液中並且在5%CO 2以及37℃下培養3天。另外，使培養液含DHMBA (10μM)。培養後，對細胞添加含有蛋白質分解酵素及蛋白質去磷酸酶活性阻礙劑的細胞溶解液cell lysis buffer(Cell Signaling Technology, Danvers, MA, USA)來作調整。使用蛋白質試樣液40μg，以SDS聚丙烯醯胺膠體電泳(12%SDS-PAGE)分離，然後，將蛋白質分子轉印至尼龍膜。該膜是使用與蛋白質分子特異性結合的抗體進行免疫轉漬。 各蛋白質分子的條帶，是由不同的培養細胞各取4個培養皿作測量所得到的條帶當中以具代表性的條帶來表示。 各條帶的濃淡，是以測定值與對照組作比較的比值的平均值與標準差來表示。*代表與對照組作比較 p＜0.01。1-way ANOVA、Tukey-Kramer post-test.
圖5是針對3,5-二羥基-4-甲氧基苄醇(DHMBA)對於人類前列腺癌PC-3及DU-145細胞死亡所產生的效果進行實驗之說明圖。 PC-3(A、B圖)及DU-145(D、E圖)細胞(使用1×10 5/24孔盤，每孔1ml培養液)是在DMEM培養液中(含有10%FBS、1%P/S及1%fungizone)並且在5%CO 2以及37℃下培養3天，在細胞達接近鋪滿的時間點，將培養液更換成含DHMBA(0.01、0.1、1、10、100或1000μM)的培養液，培養24及48小時。培養後，計算附著於培養皿的細胞。
在另一個實驗之中，培養3天後，在細胞達接近鋪滿的時間點，PC-3(C圖)或DU-145(F圖)細胞的培養液更換成含DHMBA(1或10μM)以及凋亡蛋白酶-3阻礙劑(10μM)的培養液，培養48小時，然後進行細胞計數。此外，培養3天後，在細胞達接近鋪滿的時間點，將含有(1或10μM)或不含DHMBA的DMEM培養液更換成添加了吉西他濱(0.1、1、10、50或100nM)或CH223191(1、10及25μM)的培養液，培養48小時，進行細胞計數。培養後，將附著於培養皿的細胞剝下來，進行計數。各數據，是以由不同的培養細胞各取8個孔作測量所得到之值的平均值與標準差來表示。*代表與對照組(灰長條)作比較 p＜0.001。1-way ANOVA、Tukey-Kramer post-test.
在G圖中，PC-3細胞(1×10 6細胞/10ml、100 mm培養皿)是在含有10%FBS、1%P/S及1%fungizone的DMEM培養液中並且在5%CO 2以及37℃下培養3天。另外，使培養液含DHMBA(10μM)。培養後，對細胞添加含有蛋白質分解酵素及蛋白質去磷酸酶活性阻礙劑的細胞溶解液cell lysis buffer(Cell Signaling Technology, Danvers, MA, USA)來作調整。使用蛋白質試樣液40μg，以SDS聚丙烯醯胺膠體電泳(12%SDS-PAGE)進行分離，然後，將蛋白質分子轉印至尼龍膜。該膜是使用與蛋白質分子特異性地結合的抗體進行免疫轉漬。 各蛋白質分子的條帶，是由不同的培養細胞各取4個培養皿所得到的條帶當中以具代表性的條帶來表示。 各條帶的濃淡，是以測定值與對照組作比較的比值的平均值與標準差來表示。*代表與對照組作比較 p＜0.01。1-way ANOVA、Tukey-Kramer post-test.
圖6是說明3,5-二羥基-4-甲氧基苄醇(DHMBA)對於人類前列腺癌PC-3細胞死亡所產生的效果與抗癌劑吉西他濱的比較實驗之說明圖。 PC-3細胞(使用1×10 5/24孔盤，每孔1ml培養液)是在DMEM培養液中(含有10%FBS、1%P/S及1%fungizone)並且在5%CO 2以及37℃下培養3天，在細胞達接近鋪滿的時間點，將培養液更換成含有吉西他濱(1、10、50、100或250nM)的培養液，培養48小時。培養後，計算附著於培養皿的細胞。 培養3天後，在細胞達接近鋪滿的時間點，更換成含DHMBA(1或10μM)以及吉西他濱(1、10、100nM)的培養液，培養48小時，然後進行細胞計數。培養後，將附著於培養皿的細胞剝下來，進行計數。各數據，是以由培養細胞取8個孔作測量所得到之值的平均值與標準差來表示。*代表與對照組(灰長條)作比較 p＜0.001。1-way ANOVA、Tukey-Kramer post-test.
圖7是針對芳香烴受體阻礙劑對於DHMBA的前列腺癌細胞的增殖抑制以及細胞死亡誘導作用所產生的效果進行實驗的說明圖。 PC-3細胞(使用1×10 5/24孔盤，每孔1ml培養液)是在DMEM培養液中(含有10%FBS、1%P/S及1%fungizone)，在5%CO 2以及37℃下，並且在DHMBA(10μM)及芳香烴受體阻礙劑CH223191(1、10或25μM)的存在下培養3天，並調查對細胞增殖所產生的作用。圖中的PC-3細胞(使用1×10 5/24孔盤，每孔1ml培養液)是在DMEM培養液中(含有10%FBS、1%P/S及1%fungizone)，在5%CO 2以及37℃下培養3天，在細胞達接近鋪滿的時間點，將培養液更換成含DHMBA(10μM)以及CH223191(1、10或25μM)的培養液，培養48小時。培養後，將附著於培養皿底面的細胞剝下來，進行計數。各數據，是以由培養細胞取8個孔作測量所得到之值的平均值與標準差來表示。*代表與對照組(不含CH223191a及DHMBA的灰長條)作比較 p＜0.001。1-way ANOVA、Tukey-Kramer post-test.
圖8為針對DHMBA對於前列腺癌細胞生成活性氧的抑制效果進行實驗之說明圖。 PC-3及DU-145細胞(使用2.5×10 4/96孔盤，每孔0.1ml培養液)是在含DHMBA(0.1、1、10、100或1000μM)的DMEM培養液中(含有10%FBS、1%P/S及1%fungizone)並且在5%CO 2以及37℃下培養24小時。培養後，以PBS將細胞洗淨，然後添加25μM H 2DCFDA溶液0.1ml，並保溫45分鐘。以PBS洗淨後，使用螢光測定微孔盤讀取儀，在波長Ex/Em=485/535nm測定細胞的螢光強度。結果是以相對於並未添加DHMBA的對照組的螢光強度的百分比%來表示。各數據是由培養細胞取8個孔作測量所得到之值的平均值與標準差來表示。*代表與對照組(白長條)作比較 p＜0.001。1-way ANOVA、Tukey-Kramer post-test.
圖9是針對DHMBA對於前列腺癌細胞的移動性(migration)產生的抑制效果進行實驗之說明圖。 PC-3及DU-145細胞(使用2×10 5細胞數/24孔盤，每孔1ml培養液)是在含有10%FBS、1%P/S及1%fungizone的DMEM培養液中並且在5%CO 2以及37℃下培養48小時，在細胞達鋪滿的時間點，使用微量吸管尖(200μl)，進行直線的刮傷。將游離的細胞以PBS洗淨除去，添加上述培養液(含DHMBA 0.1、1、10、100或1000μM)，培養48小時。培養後，測定沒有細胞的部分的間隔。 (A)、(B)為結晶紫染色後的細胞之圖。 (C)、(D)是將培養前進行刮傷時的間隔與培養後的間隔作比較，以相對於對照組(不含DHMBA時之值)的百分比%來表示。各數據，是以由培養細胞取8個孔作測量所得到之值的平均值與標準差來表示。*代表與對照組(白長條)作比較 p＜0.001。＃代表與不含DHMBA的對照組(灰長條)作比較 p＜0.001。1-way ANOVA、Tukey-Kramer post-test.
圖10是針對DHMBA對於前列腺癌細胞的浸潤性(invasion)產生的抑制效果進行實驗之說明圖。 前列腺癌PC-3及DU-145細胞的細胞侵入活性，是使用transwell chamber來測定。添加PC-3或DU-145細胞懸浮液(2.5×10 4細胞數/ml不含FBS的DMEM)500μl。該細胞懸浮液含DHMBA(0、1、10或100μM)。在培養室添加細胞懸浮液後，保溫1小時，使細胞附著於凝膠的表面。在培養室的下方添加不含FBS的培養液與含有10%FBS的培養液0.75ml。該孔盤在5%CO 2、95%空氣以及37℃下培養24小時。培養後，將培養室的上面的培養液除去，將濾膜回收，在冷的70%乙醇(1ml)中放置30分鐘，將在濾膜下面侵入凝膠之後的細胞固定。然後，在0.75ml,20%甲醇中含結晶紫0.5%的溶液中浸泡30分鐘，進行染色。染色後，以PBS洗淨，進行乾燥。乾燥後，以顯微鏡(Olympus MTV-3; Olympus Corporation, Tokyo, Japan)計算被染色的細胞的數目。另外，染色後的細胞影像是拍攝到的照片。 (A)、(B)是表示具代表性的影像之圖。 (C)、(D)各數據，是以由培養細胞取8個孔作測量所得到之值的平均值與標準差來表示。*代表與不含FBS的對照組(白長條)作比較 p＜0.001。＃代表與不含DHMBA的對照組(灰長條)作比較 p＜0.001。1-way ANOVA、Tukey-Kramer post-test.
圖11為針對DHMBA對於與促進前列腺癌細胞的移動與浸潤性的有關的蛋白質分子的表現量所產生的效果進行實驗之說明圖。 PC-3細胞(1×10 6細胞數/10ml、100mm培養皿)是在含有10%FBS、1%P/S及1%fungizone的DMEM培養液中並且在5%CO 2以及37℃下培養3天。另外，使培養液含DHMBA (10μM)。培養後，對細胞添加含有蛋白質分解酵素及蛋白質去磷酸酶活性阻礙劑的細胞溶解液cell lysis buffer(Cell Signaling Technology, Danvers, MA, USA)來作調整。使用蛋白質試樣液的40μg，以SDS聚丙烯醯胺膠體電泳(12%SDS-PAGE)進行分離，然後，將蛋白質分子轉印至尼龍膜。該膜是使用與蛋白質分子特異性地結合的抗體進行免疫轉漬。 各蛋白質分子的條帶，是由不同的培養細胞各取4個培養皿所得到的條帶當中以具代表性的條帶來表示。 各條帶的濃淡，是以測定值與對照組作比較的比值的平均值與標準差來表示。*代表與對照組作比較 p＜0.01。1-way ANOVA、Tukey-Kramer post-test.
(考察) 前列腺癌是轉移性癌，在男性癌症相關的死因當中排行第2。因此，必須進一步開發轉移性前列腺癌更有效的治療法。 DHMBA是創始性地由海洋牡蠣分離鑑定的酚性抗氧化劑。
在本發明中，針對DHMBA是否對於轉移性人類前列腺癌細胞PC-3以及DU-145細胞表現出抑制效果進行了實驗。 結果發現，DHMBA會抑制癌細胞的群落形成、細胞增殖、活性氧的生成、與細胞轉移有關的細胞移動性及浸潤性，甚至還會發揮出誘導癌細胞死亡的作用。像這樣，本發明提供了治療轉移性前列腺癌的新方法。
DHMBA的前列腺癌細胞增殖抑制效果，若在細胞週期阻滯劑羅斯維汀、丁酸鹽或蘿蔔硫素的存在下進行培養，則並未表現出來。Butyrate會抑制細胞週期的G1後期的cdc2 mRNA的累積，阻礙G1期早期與後期的進行。羅斯維汀是週期素依賴性激酶(cyclin-dependent kinases) cdc2、cdk2及cdk5高選擇性的阻礙劑。蘿蔔硫素會造成與由檢查點激酶所媒介的細胞週期的磷酸化有關的細胞分裂週期的G2/M期的抑制。
由此認為，DHMBA會引發G1及G2 M期的細胞增殖週期的阻礙。此外，DHMBA對於PC-3細胞增殖的抑制效果，在引發PC-3細胞增殖抑制的PI3K阻礙劑渥曼青黴素、MAPK阻礙劑PD98059、蛋白激酶C阻礙劑星形孢菌素的存在下並未被觀察到。
推測DHMBA的細胞增殖抑制效果，也會在促進細胞增殖的細胞內訊息傳遞過程發生作用而被引發。於是，若調查與細胞增殖有關的Ras、Akt、MAPK、磷酸化MAPK及mTOR的表現量，則發現這些因子會降低。此外還已知，與細胞增殖抑制有關的癌抑制基因p53、p21、Rb及鈣調素的表現量會增加。 像這樣，推測DHMBA的癌細胞增殖抑制效果，會在廣泛的細胞訊息傳遞過程發生作用而發揮出來。
此外還已知，DHMBA會誘導前列腺癌PC-3、DU-145細胞的死亡。由此見解推測，在DHMBA的細胞增殖抑制效果發揮時，細胞死亡誘導效果有部分幫助。DHMBA的細胞死亡誘導作用，被推測和參與細胞核DNA分解的凋亡蛋白酶-3的表現量的降低有關。令人感興趣的是，若在癌症治療臨床使用的吉西他濱的存在下併用DHMBA，則細胞死亡誘導效果顯著提高。由本見解認為，醫療食品因子DHMBA與抗癌劑吉西他濱的併用，對於有效的癌症治療是有用的。
DHMBA的細胞增殖抑制效果與細胞死亡誘導作用，在芳香烴受體(aryl hydrocarbon receptor；AHR)特異的阻礙劑CH223191的共存下並未表現出來。AHR會結合於AHR結合核轉移蛋白質，發生核轉移，結合於DNA，引發多種基因蛋白的誘導。其中存在有參與藥物代謝的酵素蛋白。AHR是從與多氯烴2,3,7,8-四氯二苯并對戴奧辛(TCDD)強力結合的研究創始性地被發現。已知TCDD會發揮大腸癌細胞或肝癌細胞的增殖抑制效果。此外，也會與生物體內的化合物或營養性異黃酮等結合。推測DHMBA的前列腺癌細胞的增殖抑制作用以及細胞死亡誘導效果，有部分是透過與AHR的結合，在基因表現發生作用而發揮出來。
已知DHMBA是抗氧化劑。已發現DHMBA會抑制前列腺癌細胞PC-3以及DU-145細胞產生活性氧。由此見解可推測，對於DHMBA的前列腺癌細胞的增殖抑制以及細胞死亡誘導作用的表現有部分幫助。
此外還已知，DHMBA會抑制轉移性前列腺癌細胞PC-3以及DU-145細胞的移動性與浸潤性。DHMBA會降低與癌細胞的轉移有關的分子的NF-κB p65、窖蛋白-1及整合素β1的表現量。由這些見解，研究出DHMBA會抑制前列腺癌細胞的轉移活性。
(結論) 在本發明中闡明了新的見解，海洋性新穎化合物DHMBA會發揮出轉移性人類前列腺癌細胞的增殖抑制、細胞死亡誘導以及癌細胞的轉移活性的抑制等的作用。
3,5-二羥基-4-甲氧基苄醇(DHMBA)是醫療食品因子，在生物體內的毒性極低。可斷言以DHMBA為有效成分且具有轉移性人類前列腺癌細胞的增殖抑制作用之轉移性人類前列腺癌細胞的增殖抑制劑、或以3,5-二羥基-4-甲氧基苄醇(DHMBA)為有效成分且具有轉移性人類前列腺癌細胞的細胞死亡誘導作用之轉移性人類前列腺癌細胞之細胞死亡誘導劑、或以3,5-二羥基-4-甲氧基苄醇(DHMBA)為有效成分且具有轉移性人類前列腺癌細胞之移動與浸潤作用的抑制作用之轉移性人類前列腺癌細胞之細胞之移動與浸潤作用的抑制劑，作為轉移性前列腺癌細胞的新穎治療藥是有用的。
[圖1]為說明3,5-二羥基-4-甲氧基苄醇對於人類前列腺癌PC-3細胞的增殖所產生的抑制效果之說明圖。 [圖2]為說明3,5-二羥基-4-甲氧基苄醇(DHMBA)對於人類前列腺癌DU-145細胞的增殖所產生的抑制效果之說明圖。 [圖3]為說明3,5-二羥基-4-甲氧基苄醇(DHMBA)在細胞增殖阻礙劑以及細胞內訊息傳遞阻礙劑的存在下對於人類前列腺癌PC-3細胞的增殖所產生的抑制效果之說明圖。 [圖4]為說明DHMBA對於與促進前列腺癌細胞的細胞增殖有關的蛋白質分子的表現量所產生的效果之說明圖。 [圖5]為說明3,5-二羥基-4-甲氧基苄醇(DHMBA)對於人類前列腺癌PC-3及DU-145細胞死亡所產生的效果之說明圖。 [圖6]為說明3,5-二羥基-4-甲氧基苄醇(DHMBA)對於人類前列腺癌PC-3細胞死亡所產生的效果與抗癌劑吉西他濱(gemcitabine)的比較之說明圖。 [圖7]為說明芳香烴受體阻礙劑對於DHMBA的前列腺癌細胞的增殖抑制以及細胞死亡誘導作用所產生的效果之說明圖。 [圖8]為說明DHMBA對於前列腺癌細胞生成活性氧的抑制效果之說明圖。 [圖9]為DHMBA對於說明前列腺癌細胞的移動性(migration)產生的抑制效果之說明圖。 [圖10]為說明DHMBA對於前列腺癌細胞的浸潤性(invasion)產生的抑制效果之說明圖。 [圖11]為說明DHMBA對於與促進前列腺癌細胞的移動與浸潤性有關的蛋白質分子的表現量所產生的效果之說明圖。

Claims (3)

  1. 一種轉移性人類前列腺癌細胞的增殖抑制劑，其特徵為：以3,5-二羥基-4-甲氧基苄醇(DHMBA)為有效成分，具有轉移性人類前列腺癌細胞的增殖抑制作用。
  2. 一種轉移性人類前列腺癌細胞之細胞死亡誘導劑，其特徵為：以3,5-二羥基-4-甲氧基苄醇(DHMBA)為有效成分，具有轉移性人類前列腺癌細胞的細胞死亡誘導作用。
  3. 一種轉移性人類前列腺癌細胞之細胞之移動與浸潤作用的抑制劑，其特徵為：以3,5-二羥基-4-甲氧基苄醇(DHMBA)為有效成分，具有轉移性人類前列腺癌細胞之移動與浸潤作用的抑制作用。
TW111103821A 2021-11-30 2022-01-28 轉移性人類前列腺癌細胞之增殖抑制劑 TWI814228B (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2021194178A JP2023080697A (ja) 2021-11-30 2021-11-30 転移性ヒト前立腺がん細胞の増殖抑制剤
JP2021-194178 2021-11-30

Publications (2)

Publication Number Publication Date
TW202322789A true TW202322789A (zh) 2023-06-16
TWI814228B TWI814228B (zh) 2023-09-01

Family

ID=86611812

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW111103821A TWI814228B (zh) 2021-11-30 2022-01-28 轉移性人類前列腺癌細胞之增殖抑制劑

Country Status (5)

Country Link
JP (1) JP2023080697A (zh)
AU (1) AU2022400336A1 (zh)
CA (1) CA3240244A1 (zh)
TW (1) TWI814228B (zh)
WO (1) WO2023100380A1 (zh)

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5679559B2 (ja) * 2011-01-28 2015-03-04 株式会社渡辺オイスター研究所 抗酸化剤組成物の製造方法
JP6978199B2 (ja) * 2014-07-15 2021-12-08 株式会社渡辺オイスター研究所 体重あたりの肝重量を減少させる肝重量減少剤の製造方法
CN104211633B (zh) * 2014-08-12 2016-06-15 中国科学院微生物研究所 异吲哚类化合物及其应用
JP6937237B2 (ja) * 2014-10-21 2021-09-22 アンク、ライフ、サイエンシズ、リミテッドＡｎｋｈ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｌｉｍｉｔｅｄ ヒト治療薬
JP6791570B2 (ja) 2016-01-27 2020-11-25 株式会社渡辺オイスター研究所 カキ肉より抽出された抗ストレス作用物質

Also Published As

Publication number Publication date
WO2023100380A1 (ja) 2023-06-08
AU2022400336A1 (en) 2024-05-16
JP2023080697A (ja) 2023-06-09
TWI814228B (zh) 2023-09-01
CA3240244A1 (en) 2023-06-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Kuo et al. Mitochondrial oxidative stress by Lon-PYCR1 maintains an immunosuppressive tumor microenvironment that promotes cancer progression and metastasis
David et al. Smurf2 E3 ubiquitin ligase modulates proliferation and invasiveness of breast cancer cells in a CNKSR2 dependent manner
Deng et al. TRAF4 promotes fibroblast proliferation in keloids by destabilizing p53 via interacting with the deubiquitinase USP10
Rafiei et al. Peroxiredoxin 4: a novel secreted mediator of cancer induced osteoclastogenesis
Kim et al. COT phosphorylates prolyl‐isomerase Pin1 to promote tumorigenesis in breast cancer
Liu et al. Generation of the tumor-suppressive secretome from tumor cells
He et al. Protein convertase subtilisin/Kexin type 9 inhibits hepatocellular carcinoma growth by interacting with GSTP1 and suppressing the JNK signaling pathway
Wang et al. The CK1δ/ε-AES axis regulates tumorigenesis and metastasis in colorectal cancer
Zhao et al. BRD7 promotes cell proliferation and tumor growth through stabilization of c-Myc in colorectal cancer
Ozcan et al. Dual actions of the antioxidant chlorophyllin, a glutathione transferase P1‐1 inhibitor, in tumorigenesis and tumor progression
Yamaguchi et al. The marine factor 3, 5-dihydroxy-4-methoxybenzyl alcohol suppresses growth, migration and invasion and stimulates death of metastatic human prostate cancer cells: targeting diverse signaling processes
Chen et al. CIRBP knockdown attenuates Tumourigenesis and improves the Chemosensitivity of pancreatic Cancer via the Downregulation of DYRK1B
Song et al. Hypoxic Microenvironment‐Induced Reduction in PTEN‐L Secretion Promotes Non‐Small Cell Lung Cancer Metastasis through PI3K/AKT Pathway
TWI814228B (zh) 轉移性人類前列腺癌細胞之增殖抑制劑
Obama et al. Role of retinoblastoma protein and E2F-1 transcription factor in the acquisition of 5-fluorouracil resistance by colon cancer cells
Tong et al. 14-3-3ζ promotes esophageal squamous cell carcinoma invasion by repressing S1PR2 protein expression through NF-κB signaling
EP2979708A1 (en) Composition for treatment or metastasis suppression of cancers which includes p34 expression inhibitor or activity inhibitor as active ingredient
KR101135173B1 (ko) Ｓｈ３ｒｆ２ 발현 또는 활성 억제제를 함유하는 암의 예방 또는 치료용 조성물
KR20240090817A (ko) 전이성 인간 전립선 암세포의 증식 억제제
Yao et al. The repression of oncoprotein SET by the tumor suppressor p53 reveals a p53-SET-PP2A feedback loop for cancer therapy
Yamaguchi et al. Overexpression of regucalcin blocks the migration, invasion, and bone metastatic activity of human prostate cancer cells: Crosstalk between cancer cells and bone cells
Li et al. GLIS family zinc finger 3 promotes triple-negative breast cancer progression by inducing cell proliferation, migration and invasion, and activating the NF-κB signaling pathway
KR20190138264A (ko) 인산화된 tfcp2l1을 포함하는 고형암 예후 예측용 바이오마커 조성물 및 이의 용도
Xiang et al. Really interesting new gene finger protein 121 is a tumor suppressor of renal cell carcinoma
CN114010791B (zh) MyD88-IFNγR1二聚体作为靶点在制备预防结肠癌的药物中的应用