TW202321444A - 靶向pcsk9之聚核酸分子及其用途 - Google Patents

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Abstract

本文揭示抑制前蛋白轉化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin 9型絲胺酸蛋白酶(PCSK9)之表現的siRNA雙螺旋體、醫藥組合物及方法。

Description

靶向PCSK9之聚核酸分子及其用途
RNA干擾(RNAi)作為選擇性降解mRNA之細胞機制的發現既允許靶向操縱細胞培養物中之細胞表型，又允許潛在地開發定向療法 (Behlke, 2006, Mol. Ther. 13, 644-670; Xie等人, 2006, Drug Discov. Today 11, 67-73)。作為另一RNA治療劑，反義寡核苷酸(ASO)參與RNA加工且調節蛋白質表現(Rinaldi及Wood, 2018, Nature Reviews Neurology第14卷, 9-21)。
前蛋白轉化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin 9型絲胺酸蛋白酶(PCSK9)基因為哺乳動物絲胺酸家族的第九個成員。PCSK9在低密度脂蛋白(LDL)代謝、神經疾病(包括神經發炎、阿茲海默症(Alzheimer's Disease)、酒精使用障礙(AUD)、中風等)的發展及進展中發揮重要作用。因此，需要開發無細胞毒性之有效PCSK9抑制劑。本文所描述之聚核酸分子、其結合物及方法滿足此需求且提供相關優勢。 以引用的方式併入
本說明書中所提及之所有公開案、專利及專利申請案均以引用的方式併入本文中，其引用的程度如同各個別公開案、專利或專利申請案經具體且個別地指示以引用的方式併入一般。
在某些態樣中，本文揭示用於調節PCSK9基因之表現的聚核酸分子，其中該聚核酸分子包含表1、表2及表3中之核酸序列。
在一些態樣中，聚核酸分子為單股核酸分子。在一些情況下，單股核酸分子包含至少14、15、16、17、18個與選自SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、25-127及437-539之序列互補的連續核苷酸，具有不超過1、2、3、4個錯配。在其他情況下，單股核酸分子包含與選自SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、25-127及437-539之序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%互補的序列。在一些情況下，單股核酸分子包含至少14、15、16、17、18個與選自SEQ ID NO: 1、3、5、7及9之序列互補的連續核苷酸，具有不超過1、2、3、4個錯配。在其他情況下，單股核酸分子包含與選自SEQ ID NO: 1、3、5、7及9之序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%互補的序列。
在一些態樣中，聚核酸分子為包含有義股及反義股之雙股核酸分子。在一些情況下，有義股包含與選自SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、25-127及437-539之序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%一致。在一些情況下，反義股包含與選自SEQ ID NO: 2、4、6、8、10及231-333之序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%一致。在一些情況下，有義股包含有包含選自SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、25-127及437-539之序列之至少14、15、16、17、18、19或20個連續核苷酸且具有不超過1、2、3或4個錯配的核酸序列。在其他情況下，反義股包含有包含選自SEQ ID NO: 2、4、6、8、10及231-333之序列之至少14、15、16、17、18、19或20個連續核苷酸且具有不超過1、2、3或4個錯配的核酸序列。在一些情況下，有義股包含SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、25-127及437-539中之一者且反義股包含SEQ ID NO: 2、4、6、8、10及231-333中之一者。在一些情況下，有義股包含與選自SEQ ID NO: 1、3、5、7及9之序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%一致。在一些情況下，反義股包含與選自SEQ ID NO: 2、4、6、8及10之序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%一致。在一些情況下，有義股包含有包含選自SEQ ID NO: 1、3、5、7及9之序列之至少14、15、16、17、18、19或20個連續核苷酸且具有不超過1、2、3或4個錯配的核酸序列。在其他情況下，反義股包含有包含選自SEQ ID NO: 2、4、6、8及10之序列之至少14、15、16、17、18、19或20個連續核苷酸且具有不超過1、2、3或4個錯配的核酸序列。在一些情況下，有義股包含SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、25-127及437-539中之一者且反義股包含SEQ ID NO: 2、4、6、8及10中之一者。
在一些情況下，有義股包含與選自SEQ ID NO: 1、3、5、7及9之序列至少90%、至少95%一致。在一些情況下，反義股包含與選自SEQ ID NO: 2、4、6、8及10之序列至少90%、至少95%一致。在其他情況下，有義股包含有包含選自SEQ ID NO: 1、3、5、7、9之序列之至少14、15、16、17、18、19或20個連續核苷酸且具有不超過1、2、3或4個錯配的核酸序列。在其他情況下，反義股包含有包含選自SEQ ID NO: 2、4、6、8及10之序列之至少14、15、16、17、18、19或20個連續核苷酸且具有不超過1、2、3或4個錯配的核酸序列。在其他情況下，有義股包含SEQ ID NO: 1、3、5、7及9中之一者且反義股包含2、4、6、8及10中之一者。
在一些態樣中，聚核酸分子包含(1)經2'-氟修飾之核苷酸；(2)經2'-O-甲基修飾之核苷酸；或(3)經修飾之核苷酸間鍵。在一些情況下，聚核酸分子在5'端包含至少兩個經修飾之連續核苷酸間鍵。在一些情況下，聚核酸分子在3'端包含三個核苷酸間鍵中至少兩個被經修飾之核苷酸間鍵取代的核苷酸間鍵。
在一些情況下，有義股包含『5-NfsnsNfnNfnNfnNfNfNfnNfnNfnNfnNfnNf-3』，其中反義股包含『5-nsNfsnNfnNfnNfnNfnnnNfnNfnNfnNfnsnsn-3』，其中「Nf」表示經2'-氟修飾之核苷酸，「n」表示經2'-O-甲基修飾之核苷酸，「s」表示3'-硫代磷酸酯。在一些情況下，有義股包含『5-nsnsnnnnNfnNfNfNfnnnnnnnnnn-3』，其中反義股包含『5-nsNfsnnnNfnNfNfnnnnNfnNfnnnnnsnsn-3』，其中「Nf」表示經2'-氟修飾之核苷酸，「n」表示經2'-O-甲基修飾之核苷酸，「s」表示3'-硫代磷酸酯。在一些情況下，有義股包含『5-nsnsnnnnnnNfnNfnnnnnnnnnn-3』，其中反義股包含『5-nsNfsnnnnnnnnnNfnNfnnnnnnnsnsn-3』，其中「Nf」表示經2'-氟修飾之核苷酸，「n」表示經2'-O-甲基修飾之核苷酸，「s」表示3'-硫代磷酸酯。在一些情況下，有義股包含『5-nsnsnnnnNfnNfnNfnnnnnnnnnn-3』，其中反義股包含『5-nsNfsnnnnnnnnnNfnNfnNfnnnnnsnsn-3』，其中「Nf」表示經2'-氟修飾之核苷酸，「n」表示經2'-O-甲基修飾之核苷酸，「s」表示3'-硫代磷酸酯。
在一些情況下，經修飾之核苷酸間鍵為硫代磷酸酯鍵。在一些情況下，經修飾之核苷酸間鍵包含立體化學富集之硫代磷酸酯核苷酸間鍵。在一些情況下，經修飾之核苷酸間鍵為S P掌性核苷酸間硫代磷酸酯鍵。在一些情況下，聚核酸包含複數個經修飾之核苷酸間鍵，且複數個經修飾之核苷酸間鍵中之至少1、2、3或4個為立體化學富集之硫代磷酸酯核苷酸間鍵。在一些情況下，立體化學富集之硫代磷酸酯核苷酸間鍵包含R-異構物及S-異構物。在一些情況下，至少一個立體化學富集之硫代磷酸酯安置於兩個連續核苷之間，該兩個連續核苷為有義股或反義股之六個5'或3'端核苷中的兩個。
在一些情況下，聚核酸分子包含含次黃嘌呤核鹼基之核苷取代。在一些情況下，該含次黃嘌呤核鹼基之核苷取代係肌苷取代。在一些情況下，肌苷取代位於反義股之種子區內。在一些情況下，肌苷取代位於反義股之5'端的7個核苷酸內。在一些情況下，聚核酸分子包含無鹼基取代。在一些情況下，無鹼基取代位於5'端之第5或第7個核苷酸處。
在一些情況下，與未經修飾之聚核酸相比，聚核酸分子之細胞毒性降低。
在一些情況下，有義股包含與選自SEQ ID NO: 13、15、17、19、21及128-230之序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%一致的核酸序列。在一些情況下，有義股包含有包含選自SEQ ID NO: 13、15、17、19、21及128-230之序列之至少14、15、16、17、18、19或20個連續核苷酸且具有不超過1、2、3或4個錯配的核酸序列。在其他情況下，反義股包含與選自SEQ ID NO: 14、16、18、20、22及334-436之序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%一致的核酸序列。在其他情況下，反義股包含有包含選自SEQ ID NO: 14、16、18、20、22及334-436之序列之至少14、15、16、17、18、19或20個連續核苷酸且具有不超過1、2、3或4個錯配的核酸序列。在一些情況下，有義股包含選自SEQ ID NO: 13、15、17、19、21及128-230之核酸序列的序列且反義股包含選自SEQ ID NO: 14、16、18、20、22及334-436之核酸序列的序列。在一些情況下，有義股包含與選自SEQ ID NO: 13、15、17、19及21之序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%一致的核酸序列。在一些情況下，有義股包含有包含選自SEQ ID NO: 13、15、17、19及21之序列之至少14、15、16、17、18、19或20個連續核苷酸且具有不超過1、2、3或4個錯配的核酸序列。在其他情況下，反義股包含與選自SEQ ID NO: 14、16、18、20及22之序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%一致的核酸序列。在其他情況下，反義股包含有包含選自SEQ ID NO: 14、16、18、20及22之序列之至少14、15、16、17、18、19或20個連續核苷酸且具有不超過1、2、3或4個錯配的核酸序列。在一些情況下，有義股包含選自SEQ ID NO: 13、15、17、19及21之核酸序列的序列且反義股包含選自SEQ ID NO: 14、16、18、20及22之核酸序列的序列。
在一些情況下，聚核酸分子具有19-25個鹼基對長度。在一些情況下，聚核酸分子具有16-30個鹼基對長度。在一些情況下，聚核酸分子具有21-23個鹼基對長度。在其他情況下，聚核酸分子具有19-25個鹼基對長度。
一種用於調節前蛋白轉化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin 9型絲胺酸蛋白酶(PCSK9)基因之表現的聚核酸分子，其中聚核酸分子包含：(a)包含核苷酸序列usUfsacaaaagcaAfaAfcAfggucusasg (SEQ ID NO: 14)之反義股及包含核苷酸序列asgsaccuGfuUfuUfgcuuuuguaa (SEQ ID NO: 13)之有義股；或(b)包含核苷酸序列usUfsucaaguuacAfaAfaGfcaaaascsa (SEQ ID NO: 16)之反義股及包含核苷酸序列ususuugcUfuUfuGfuaacuugaaa (SEQ ID NO: 15)之有義股；其中小寫字母「n」表示經2'-O-甲基修飾之核苷酸，大寫字母後跟「f」(亦即，「Nf」)表示經2'-氟修飾之核苷酸，且「s」表示3'-硫代磷酸酯。
在一些態樣中，本文揭示用於調節PCSK9基因表現的聚核酸分子結合物，其中聚核酸分子結合物包含本文所描述之聚核酸分子及去唾液酸糖蛋白受體靶向部分。在一些情況下，聚核酸分子及去唾液酸糖蛋白受體靶向部分經由連接子偶合。在一些情況下，連接子包含下式(IV)，
Figure 02_image001
，其中Y1及Y2中之至少一者為聚核酸分子中之核苷酸。在一些情況下，Y1為聚核酸分子之有義股之3'端上的最末核苷酸。在其他情況下，Y1及Y2為聚核酸分子中之兩個連續核苷酸。在一些情況下，去唾液酸糖蛋白受體靶向部分包含N-乙醯基半乳胺糖(GalNAc)。在一些情況下，連接子及去唾液酸糖蛋白受體靶向部分與聚核酸分子之有義股之3'端上的最末核苷酸展示於式(V')中：
Figure 02_image003
(V')，其中式(V')中之Z為-H、-OH、-O-甲基、-F或-O-甲氧基乙基，且式(V')中之R為腺嘌呤、尿嘧啶、鳥嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶、無鹼基或其他。
在一些態樣中，本文提供醫藥組合物，其包含本文所描述之聚核酸分子或本文所描述之聚核酸分子結合物及醫藥學上可接受之賦形劑。在一些情況下，醫藥組合物調配為奈米粒子調配物。在一些情況下，醫藥組合物經調配用於非經腸、經口、鼻內、頰內、直腸、經皮、靜脈內、皮下或鞘內投與。
在一些態樣中，本文提供調節個體之PCSK9基因之表現的方法，其包含：向個體投與本文所描述之聚核酸分子、本文所描述之聚核酸分子結合物或本文所描述之醫藥組合物，藉此調節個體之PCSK9基因之表現。
在其他態樣中，本文提供調節有需要之個體之低密度脂蛋白(LDL)的方法，其包含：向個體投與本文所描述之聚核酸分子、本文所描述之聚核酸分子結合物或本文所描述之醫藥組合物，其中本文所描述之聚核酸分子、本文所描述之聚核酸分子結合物或本文所描述之醫藥組合物降低個體中之PCSK9基因表現。在一些情況下，有需要之個體罹患高膽固醇血症、家族性高膽固醇血症或其他高膽固醇相關疾病。
在一些態樣中，本文提供調節有需要之個體之膽固醇的方法，其包含：向個體投與本文所描述之聚核酸分子、本文所描述之聚核酸分子結合物或本文所描述之醫藥組合物，其中本文所描述之聚核酸分子、本文所描述之聚核酸分子結合物或本文所描述之醫藥組合物降低個體中之PCSK9基因表現。在一些情況下，有需要之個體罹患高膽固醇血症、家族性高膽固醇血症或其他高膽固醇相關疾病。
交互參考
本申請案主張2021年9月23日申請之美國臨時申請案第63/247,677號及2022年5月3日申請之美國臨時申請案第63/337,958號之權益，其以全文引用之方式併入本文中。
PCSK9為哺乳動物絲胺酸蛋白酶家族(將非活性分泌性前驅體分解成生物活性蛋白及肽的一組蛋白質轉化酶)的第九個成員。人類PCSK9基因位於染色體1p32.3上且轉譯成內質網中之約82 kDa的酶原(參見Abifadel 等人, 2003, Nat. Genet. 34, 154-156.; Piper等人, 2007, Structure 15, 545-552)。PCSK9主要由肝細胞分泌至血流中且存在於血漿中。
已展示PCSK9參與LDL-膽固醇(LDL-C)降解及後續病狀高膽固醇血症(參見Abifadel 等人, 2003, Nat. Genet. 34, 154-156)。高膽固醇血症由於高脂肪飲食、不活動及與某些遺傳風險因子組合而出現。高含量之LDL為很好辨識之風險因子。與高膽固醇血症有關之例示性遺傳風險因子包括編碼影響血液中LDL含量之蛋白質的基因的突變。舉例而言，編碼PCSK9之基因中之功能獲得型突變與高膽固醇血症相關。在PCSK9與LDLR結合之後，LDLR經歷降解，結果減少對血流中之LDL-C的吸收，由此產生高膽固醇血症。因此，PCSK9之抑制被視為治療高膽固醇血症、尤其家族性高膽固醇血症及其他膽固醇相關疾病之潛在治療策略。
除肝臟以外，PCSK9表現於小腸、腎及腦中。特定言之，PCSK9已參與神經發炎(參見Apaijai等人, 2019, J. Am. Heart Assoc. 8:e010838)。另外，PCSK9與阿茲海默症之致病機制相關。腦剖檢揭露，遲發性AD患者之額葉皮質中PCSK9 mRNA及蛋白質含量與對照組相比升高(參見Picard等人, 2019, PLoS One 14:e0220254)。此外，PCSK9參與AUD，觀測到AUD患者之CSF中的PCSK9含量顯著高於對照組(參見Chen等人, 2014, Lipids 49, 445-455)。此外，缺血性中風與PCSK9基因中導致血漿LDL-C增加之若干功能獲得型突變相關(參見Rousselet等人, 2011, J. Lipid Res. 52, 1383-1391)。因此，研發靶向PCSK9之治療劑可有助於以上提及之神經元病症。
本文描述一種用於調節PCSK9基因之表現的聚核酸分子，其中該聚核酸分子包含有義股及反義股，且其中該聚核酸分子包含表1、表2及表3中之核酸序列。因此，本文提供與本文所描述之聚核酸分子雜交之人類PCSK9 mRNA的各種目標區域。在一些實施例中，本文提供本文所描述之聚核酸分子的序列。在一些實施例中，本文提供本文所描述之聚核酸分子之可能修飾。在一些實施例中，本文提供本文所描述之聚核酸分子之可能結合物。
本文亦描述調節個體之前蛋白轉化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin 9型絲胺酸蛋白酶(PCSK9)基因之表現的方法。本文中進一步描述調節有需要之個體之LDL及/或膽固醇的方法。 聚核酸分子 聚核酸分子之目標區域
本文描述用於調節PCSK9基因之表現的聚核酸分子。在一些態樣中，聚核酸分子為與mRNA之某些區域雜交的單股核酸分子。在一些態樣中，聚核酸分子為雙股核酸分子。在一些情況下，聚核酸分子包含有義股及反義股，且其中反義股與PCSK9 mRNA之某些區域雜交。
在一些態樣中，本文所描述之聚核酸分子與人類PCSK9 mRNA之某些區域雜交。在一些態樣中，本文所描述之聚核酸分子與非人類PCSK9 mRNA之某些區域雜交。
在一些態樣中，本文所描述之聚核酸分子與人類PCSK9 mRNA之5' UTR區域雜交。在一些態樣中，本文所描述之聚核酸分子與人類PCSK9 mRNA之編碼區域雜交。在一些態樣中，本文所描述之聚核酸分子與人類PCSK9 mRNA之3' UTR區域雜交。在一些特定態樣中，本文所描述之聚核酸分子與人類PCSK9 mRNA (NCBI參考序列：NM_174936.3)之3' UTR的子集雜交，其中轉錄起始位點範圍為自2342至2441、自2442至2541、自2542至2641、自2642至2741、自2742至2841、自2842至2941、自2942至3041、自3042至3141、自3142至3241、自3242至3341、自3342至3441、自3442至3541、自3542至3641、自3642至3731。
在一些態樣中，與本文所描述之聚核酸分子雜交的目標區域係藉由預測最大PCSK9緘默有效性及最低可能之脫靶效應的算法來判定。在一些特定實施例中，算法揭示於He等人, 2017, Scientific Reports, 7, 44836中。在一些特定實施例中，算法揭示於Han等人, 2018, BMC Genomics 19, 669中。在一些特定實施例中，算法為siRNArules、siRNA-Finder、siRNA Wizard™、siDirect、sirna wizard、Dharmacon siRNA設計工具、White head siRNA設計工具或Genscript siRNA軟體。 聚核酸分子之結構 單股核酸分子
本文描述用於調節PCSK9基因之表現的聚核酸分子，其中該聚核酸分子為與如上文所描述之PCSK9 mRNA之目標區域反向互補的單股核酸分子。
在一些態樣中，本文所描述之聚核酸分子與PCSK9 mRNA之目標區域不100%互補。因此，在一些情況下，本文所描述之聚核酸分子與PCSK9 mRNA之目標區域約95%互補。在一些特定態樣中，本文所描述之聚核酸分子與PCSK9 mRNA之目標區域約90%互補。在一些特定態樣中，本文所描述之聚核酸分子與PCSK9 mRNA之目標區域約85%互補。在一些特定態樣中，本文所描述之聚核酸分子與PCSK9 mRNA之目標區域約80%互補。在一些特定態樣中，本文所描述之聚核酸分子與PCSK9 mRNA之目標區域約75%互補。在一些特定態樣中，本文所描述之聚核酸分子與PCSK9 mRNA之目標區域約70%互補。
在一些態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含表1、表2及表3中之核酸序列。在其他態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含與表1、表2及表3中之序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%一致的核酸序列。在一些情況下，本文所描述之聚核酸分子包含與選自SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、25-127及437-539之序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%互補。在一些情況下，本文所描述之聚核酸分子包含與選自SEQ ID NO: 1、3、5、7及9之序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%互補。
在其他態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含表1、表2及表3中之序列中之15個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過2、3或4個錯配。在特定態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含與SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、25-127及437-539之核酸序列互補之15個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過2、3或4個錯配。在其他態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含表1、表2及表3中之序列中之16個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過2、3或4個錯配。在特定態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含與SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、25-127及437-539之核酸序列互補之16個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過2、3或4個錯配。在其他態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含表1、表2及表3中之序列中之17個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過2、3或4個錯配。在特定態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含與SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、25-127及437-539之核酸序列互補之17個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過2、3或4個錯配。在其他態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含表1、表2及表3中之序列中之18個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過2、3或4個錯配。在特定態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含與SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、25-127及437-539之核酸序列互補之18個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過2、3或4個錯配。在其他態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含表1、表2及表3中之序列中之19個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過2、3或4個錯配。在特定態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含與SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、25-127及437-539之核酸序列互補之19個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過2、3或4個錯配。在其他態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含表1、表2及表3中之序列中之20個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過2、3或4個錯配。在特定態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含與SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、25-127及437-539之核酸序列互補之20個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過2、3或4個錯配。在其他態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含表1、表2及表3中之序列中之21個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過2、3或4個錯配。在特定態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含與SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、25-127及437-539之核酸序列互補之21個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過2、3或4個錯配。在其他態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含表1、表2及表3中之序列中之22個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過2、3或4個錯配。在特定態樣中，本文所描述之有義股包含與SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、25-127及437-539之核酸序列互補之22個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過2、3或4個錯配。
在特定態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含與SEQ ID NO: 1、3、5、7及9之核酸序列互補之15個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2或3個錯配。在特定態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含與SEQ ID NO: 1、3、5、7及9之核酸序列互補之16個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2或3個錯配。在特定態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含與SEQ ID NO: 1、3、5、7及9之核酸序列互補之17個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2或3個錯配。在特定態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含與SEQ ID NO: 1、3、5、7及9之核酸序列互補之18個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2或3個錯配。在特定態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含與SEQ ID NO: 1、3、5、7及9之核酸序列互補之19個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2或3個錯配。在特定態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含與SEQ ID NO: 1、3、5、7及9之核酸序列互補之20個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2或3個錯配。在特定態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含與SEQ ID NO: 1、3、5、7及9之核酸序列互補之21個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2或3個錯配。在特定態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含與SEQ ID NO: 1、3、5、7及9之核酸序列互補之22個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2或3個錯配。
在一些態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含約15-30、16-30、17-30、18-30、18-27、18-25、18-23、19-23、20-23或21-23個核苷酸長。在一些態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含約15、16、17、18、19、20個核苷酸長。在一些態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含約21、22、23、24、25個核苷酸長。在一些態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含約26、27、28、29、30個核苷酸長。在一些特定態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含19個核苷酸長。在一些特定態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含21個核苷酸長。在一些特定態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含23個核苷酸長。 雙股核酸分子
本文描述一種用於調節PCSK9基因之表現的聚核酸分子，其中該聚核酸分子為包含有義股及反義股之雙股分子，且其中該反義股與如上文所描述之PCSK9 mRNA的目標區域反向互補。
在一些態樣中，本文所描述之反義股與PCSK9 mRNA之目標區域100%互補。在一些態樣中，本文所描述之反義股與PCSK9 mRNA之目標區域不100%互補。因此，在一些情況下，本文所描述之反義股與PCSK9 mRNA之目標區域約95%互補。在一些特定態樣中，本文所描述之反義股與PCSK9 mRNA之目標區域約90%互補。在一些特定態樣中，本文所描述之反義股與PCSK9 mRNA之目標區域約85%互補。在一些特定態樣中，本文所描述之反義股與PCSK9 mRNA之目標區域約80%互補。在一些特定態樣中，本文中所描述之反義股與PCSK9 mRNA之目標區域約75%互補。在一些特定態樣中，本文所描述之反義股與PCSK9 mRNA之目標區域約70%互補。
在一些態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含表1、表2及表3中之核酸序列。在其他態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含與表1、表2及表3中之序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%一致的核酸序列。在一些情況下，本文所描述之有義股包含與選自SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、25-127及437-539之序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%一致。在一些情況下，本文所描述之反義股包含與選自SEQ ID NO: 2、4、6、8、10及231-333之序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%一致。在一些情況下，本文所描述之有義股包含與選自SEQ ID NO: 1、3、5、7及9之序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%一致。在一些情況下，本文所描述之反義股包含與選自SEQ ID NO: 2、4、6、8及10之序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%一致。
在其他態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含表1、表2及表3中之序列中之14個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2、3或4個錯配。在特定態樣中，本文所描述之有義股包含SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、25-127及437-539之14個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2、3或4個錯配。在特定態樣中，本文所描述之反義股包含SEQ ID NO: 2、4、6、8、10及231-333之14個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2、3或4個錯配。在其他態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含表1、表2及表3中之序列中之15個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2、3或4個錯配。在特定態樣中，本文所描述之有義股包含SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、25-127及437-539之15個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2、3或4個錯配。在特定態樣中，本文所描述之反義股包含SEQ ID NO: 2、4、6、8、10及231-333之15個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2、3或4個錯配。在其他態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含表1、表2及表3中之序列中之16個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2、3或4個錯配。在特定態樣中，本文所描述之有義股包含SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、25-127及437-539之16個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2、3或4個錯配。在特定態樣中，本文所描述之反義股包含SEQ ID NO: 2、4、6、8、10及231-333之16個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2、3或4個錯配。在其他態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含表1、表2及表3中之序列中之17個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2、3或4個錯配。在特定態樣中，本文所描述之有義股包含SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、25-127及437-539之17個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2、3或4個錯配。在特定態樣中，本文所描述之反義股包含SEQ ID NO: 2、4、6、8、10及231-333之17個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2、3或4個錯配。在其他態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含表1、表2及表3中之序列中之18個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2、3或4個錯配。在特定態樣中，本文所描述之有義股包含SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、25-127及437-539之18個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2、3或4個錯配。在特定態樣中，本文所描述之反義股包含SEQ ID NO: 2、4、6、8、10及231-333之18個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2、3或4個錯配。在其他態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含表1、表2及表3中之序列中之19個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2、3或4個錯配。在特定態樣中，本文所描述之有義股包含SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、25-127及437-539之19個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2、3或4個錯配。在特定態樣中，本文所描述之反義股包含SEQ ID NO: 2、4、6、8、10及231-333之19個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2、3或4個錯配。在其他態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含表1、表2及表3中之序列中之20個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2、3或4個錯配。在特定態樣中，本文所描述之有義股包含SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、25-127及437-539之20個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2、3或4個錯配。在特定態樣中，本文所描述之反義股包含SEQ ID NO: 2、4、6、8、10及231-333之20個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2、3或4個錯配。在其他態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含表1、表2及表3中之序列中之21個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2、3或4個錯配。在特定態樣中，本文所描述之有義股包含SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、25-127及437-539之21個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2、3或4個錯配。在特定態樣中，本文所描述之反義股包含SEQ ID NO: 2、4、6、8、10及231-333之21個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2、3或4個錯配。在其他態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含表1、表2及表3中之序列中之22個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2、3或4個錯配。在特定態樣中，本文所描述之有義股包含SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、25-127及437-539之22個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2、3或4個錯配。在特定態樣中，本文所描述之反義股包含SEQ ID NO: 2、4、6、8、10及231-333之22個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2、3或4個錯配。
在特定態樣中，本文所描述之有義股包含SEQ ID NO: 1、3、5、7及9之14個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2或3個錯配。在特定態樣中，本文所描述之反義股包含SEQ ID NO: 2、4、6、8及10之14個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2或3個錯配。在特定態樣中，本文所描述之有義股包含SEQ ID NO: 1、3、5、7及9之15個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2或3個錯配。在特定態樣中，本文所描述之反義股包含SEQ ID NO: 2、4、6、8及10之15個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2或3個錯配。在特定態樣中，本文所描述之有義股包含SEQ ID NO: 1、3、5、7及9之16個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2或3個錯配。在特定態樣中，本文所描述之反義股包含SEQ ID NO: 2、4、6、8及10之16個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2或3個錯配。在特定態樣中，本文所描述之有義股包含SEQ ID NO: 1、3、5、7及9之17個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2或3個錯配。在特定態樣中，本文所描述之反義股包含SEQ ID NO: 2、4、6、8及10之17個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2或3個錯配。在特定態樣中，本文所描述之有義股包含SEQ ID NO: 1、3、5、7及9之18個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2或3個錯配。在特定態樣中，本文所描述之反義股包含SEQ ID NO: 2、4、6、8及10之18個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2或3個錯配。在特定態樣中，本文所描述之有義股包含SEQ ID NO: 1、3、5、7及9之19個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2或3個錯配。在特定態樣中，本文所描述之反義股包含SEQ ID NO: 2、4、6、8及10之19個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2或3個錯配。在特定態樣中，本文所描述之有義股包含SEQ ID NO: 1、3、5、7及9之20個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2或3個錯配。在特定態樣中，本文所描述之反義股包含SEQ ID NO: 2、4、6、8及10之20個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2或3個錯配。在特定態樣中，本文所描述之有義股包含SEQ ID NO: 1、3、5、7及9之21個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2或3個錯配。在特定態樣中，本文所描述之反義股包含SEQ ID NO: 2、4、6、8及10之21個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2或3個錯配。在特定態樣中，本文所描述之有義股包含SEQ ID NO: 1、3、5、7及9之22個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2或3個錯配。在特定態樣中，本文所描述之反義股包含SEQ ID NO: 2、4、6、8及10之22個連續核苷酸的核酸序列，其具有不超過1、2或3個錯配。
在一些態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含約15-30、16-30、17-30、18-30、18-27、18-25、18-23、19-23、20-23或21-23個核苷酸長的有義股及反義股。在一些態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含約15、16、17、18、19、20個核苷酸長的有義股及反義股。在一些態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含約21、22、23、24、25個核苷酸長的有義股及反義股。在一些態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含約26、27、28、29、30個核苷酸長的有義股及反義股。在一些特定態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含19個核苷酸長的有義股及約21個核苷酸長的反義股。在一些特定態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含21個核苷酸長的有義股及約23個核苷酸長的反義股。
在一些態樣中，本文中所描述之有義股及反義股彼此反向互補且形成在反義股上具有3'突出端的雙螺旋體。在一些態樣中，本文中所描述之有義股及反義股彼此反向互補且形成在反義股上具有5'突出端的雙螺旋體。在一些態樣中，本文中所描述之有義股及反義股彼此反向互補且形成在有義股上具有3'突出端的雙螺旋體。在一些態樣中，本文中所描述之有義股及反義股彼此反向互補且形成在有義股上具有5'突出端的雙螺旋體。 聚核酸分子之修飾
在一些態樣中，本文描述具有修飾之本文所描述的聚核酸分子。在一些態樣中，本文所描述之修飾發生於本文所描述之聚核苷酸分子之一或多種不同結構(例如糖環、主鏈、鹼基上之修飾)中。在一些態樣中，本文所描述之修飾包含本文所描述之聚核酸分子中一或多個核苷酸的取代。在一些態樣中，本文所描述之聚核酸分子的不同百分比包含本文所描述之修飾。在一些態樣中，本文所描述之聚核酸分子的不同位置包含本文所描述之修飾。WO/2018/035380以全文引用的方式併入本文中。 修飾類型
在一些態樣中，本文所描述之聚核苷酸酸分子包含一或多個經糖修飾之核苷酸。在一些態樣中，經糖修飾之核苷酸為經2'-氟修飾之核苷酸。在一些情況下，經糖修飾之核苷酸包括在核糖部分之2'羥基處之修飾。在一些情況下，經糖修飾之核苷酸包括用H、OR、R、鹵基、SH、SR、NH2、NHR、NR2或CN修飾，其中R為烷基部分。在一些態樣中，經糖修飾之核苷酸為經2'-O-甲基修飾之核苷酸或經2'-烷氧基修飾之核苷酸(例如經2'-甲氧基修飾之核苷酸)。在一些情況下，2'羥基修飾包括2'-去氧、2'-去氧-2'-氟、2'-O-胺基丙基(2'-O-AP)、2'-O-二甲胺基乙基(2'-O-DMAOE)、2'-O-二甲胺基丙基(2'-O-DMAP)、2'-O-二甲基胺基乙氧基乙基(2'-O-DMAEOE)或2'-O-N-甲基乙醯胺基(2'-O-NMA)。在一些情況下，烷基部分包含雜取代。在一些情況下，雜環基之碳經氮、氧或硫取代。在一些態樣中，經糖修飾之核苷酸為經2'-胺基修飾之核苷酸。在一些態樣中，經糖修飾之核苷酸為經2'-疊氮基修飾之核苷酸。在一些態樣中，經糖修飾之核苷酸為經2'-去氧修飾之核苷酸。在一些態樣中，經糖修飾之核苷酸為經2'-O-甲氧基乙基(2'-MOE)修飾之核苷酸。在一些態樣中，經糖修飾之核苷酸為鎖定核酸(LNA)。在一些態樣中，經糖修飾之核苷酸為伸乙基橋聯核酸(ENA)。在一些態樣中，經糖修飾之核苷酸為(S)約束之乙基(cEt)。在一些態樣中，經糖修飾之核苷酸為三環DNA (tcDNA)。在一些態樣中，經糖修飾之核苷酸為2'-NH2核酸。
在一些態樣中，本文所描述之聚核苷酸分子包含一或多個經磷酸糖修飾之核苷酸。在一些態樣中，經修飾之磷酸糖為二胺基磷酸酯N-𠰌啉基(PMO)。在一些態樣中，經修飾之磷酸糖為胺基磷酸酯。在一些情況下，雜環取代包括咪唑及吡咯啶基。在一些態樣中，經修飾之磷酸糖為硫代胺基磷酸酯。在一些態樣中，經修飾之磷酸糖為肽核酸(PNA)。
在一些態樣中，本文所描述之聚核苷酸分子包含一或多個主鏈經修飾之核苷酸。在一些特定態樣中，經修飾之主鏈為膦酸甲酯。在一些特定態樣中，經修飾之主鏈為硫代磷酸酯。在一些特定態樣中，經修飾之主鏈為胺基磷酸胍基丙酯。在一些特定態樣中，經修飾之主鏈為胺基磷酸甲磺醯酯(MsPA)鍵。在一些情況下，經修飾之主鏈包含二硫代磷酸酯、膦酸甲酯、5'-膦酸伸烷酯、5'-膦酸甲酯、3'-膦酸伸烷酯、三氟化硼、3'-5'鍵或2'-5'鍵的磷酸硼烷酯及硒代磷酸酯(selenophosphates)、磷酸三酯、硫代烷基磷酸三酯、膦酸氫酯鍵、膦酸烷酯、硫代膦酸烷酯、硫代膦酸芳酯、硒代磷酸酯(phosphoroselenoates)、胺基磷酸酯中的一或多者。
在一些態樣中，經修飾之核苷酸包含經修飾之鳥嘌呤(例如，肌苷)或一或多個任何類型之非天然核酸。
在一些特定態樣中，經修飾之主鏈為硫代磷酸酯，且硫代磷酸酯為立體化學富集之硫代磷酸酯。在某些態樣中，股含有至少一種立體化學富集之硫代磷酸酯。在一些態樣中，股包含至少1、2、3個立體化學富集之硫代磷酸酯。在一些態樣中，股僅包含1、2、3或4個立體化學富集之硫代磷酸酯。在其他態樣中，至少一個(例如，一或兩個)立體化學富集之硫代磷酸酯安置於兩個連續核苷之間，該兩個連續核苷為股之六個5'端核苷中的兩個。在又其他態樣中，至少一個(例如，一或兩個)立體化學富集之硫代磷酸酯安置於兩個連續核苷之間，該兩個連續核苷為股之六個3'端核苷中的兩個。在又另外態樣中，一個立體化學富集之硫代磷酸酯共價鍵結至股內5'端之第一核苷及第二核苷。在一些態樣中，一個立體化學富集之硫代磷酸酯共價鍵結至股內5'端之第二十一核苷及第二十二核苷。在某些態樣中，一個立體化學富集之硫代磷酸酯共價鍵結至股內5'端之第二十二核苷及第二十三核苷。在特定態樣中，立體化學富集之硫代磷酸酯具有 R P立體化學一致性。在某些態樣中，立體化學富集之硫代磷酸酯具有 S P立體化學特性。
在一些態樣中，本文所描述之聚核苷酸分子包含一或多個(例如，1至20、1至10、1至5)立體化學富集(例如，核苷間)之硫代磷酸酯(例如，對於P立體異構源中心而言，具有至少10%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%或至少90% (例如至多約99%)的非鏡像異構體過量)。本文所描述之聚核苷酸分子包含一或多個(例如，1至20、1至10或1至5個；例如，核苷間)二硫代磷酸酯。二硫代磷酸酯在本文所描述之聚核苷酸分子中可為非P立體異構源。硫代磷酸酯及二硫代磷酸酯可增強本文所描述之聚核苷酸分子對血清之外切核酸酶活性的穩定性。非P立體異構源二硫代磷酸酯可藉由減少可能的非鏡像異構物之數目簡化本文所描述之聚核苷酸分子的合成。通常，硫代磷酸酯或二硫代磷酸酯可連接本文所描述之聚核苷酸分子之六個3'端核苷及六個5'端核苷內的兩個連續核苷。在一些態樣中，立體化學富集之硫代磷酸酯(例如 R P富集之硫代磷酸酯)可共價鍵結至反義股之5'端的第一核苷(例如第一核苷之3'碳原子)及第二核苷(例如第二核苷之5'碳原子)。另外或可替代地，立體化學富集之硫代磷酸酯(例如 S P富集之硫代磷酸酯)可共價鍵結至反義股之5'端之第21核苷(例如，第21核苷之3'碳原子)及第22核苷(例如，第22核苷之5'碳原子)  此外，另外或可替代地，立體化學富集之硫代磷酸酯(例如 S P富集之硫代磷酸酯)可共價鍵結至反義股之5'端的第22核苷(例如第22核苷之3'碳原子)及第23核苷(例如第23核苷之5'碳原子)。反義股中5' R P富集之硫代磷酸酯(例如，共價鍵結至5'端之第一核苷(例如，第一核苷之3'碳原子)及第二核苷(例如，第二核苷之5'碳原子)的 R P富集之硫代磷酸酯)與3' S P富集之硫代磷酸酯(例如，共價鍵結至5'端之第21核苷(例如，第21核苷之3'碳原子)及第22核苷(例如，第22核苷之5'碳原子)的 S P富集之硫代磷酸酯)之組合可產生優良療效及/或作用持續時間，例如，如根據目標之活性相對於參考引導股減少所量測，該參考引導股不具有5' R P富集之硫代磷酸酯與3' S P富集之硫代磷酸酯的組合。
在一些態樣中，本文所描述之聚核苷酸分子包含一或多種嘌呤修飾。在一些特定態樣中，本文所描述之嘌呤修飾為2,6-二胺基嘌呤。在一些特定態樣中，本文所描述之嘌呤修飾為3-去氮-腺嘌呤。在一些特定態樣中，本文所描述之嘌呤修飾為7-去氮-鳥嘌呤。在一些特定態樣中，本文所描述之嘌呤修飾為8-疊氮基-腺嘌呤。
在一些態樣中，本文所描述之聚核苷酸分子包含一或多個嘧啶修飾。在一些特定態樣中，本文所描述之嘧啶修飾為2-硫基-胸苷。在一些特定態樣中，本文所描述之嘧啶修飾為5-甲醯胺-尿嘧啶。在一些特定態樣中，本文所描述之嘧啶修飾為5-甲基-胞嘧啶。在一些特定態樣中，本文中描述之嘧啶修飾為5-乙炔基尿嘧啶。
在一些實施例中，本文所描述之聚核酸分子包含無鹼基取代。在考慮雜交聚核苷酸構築體用作siRNA之彼等情況下，需要降低類miRNA脫靶效應。在雜交聚核苷酸構築體中包括一或多個(例如一個或兩個)無鹼基取代可減少或甚至消除類miRNA脫靶效應，此係由於無鹼基取代缺乏能夠參與鹼基配對互動作用且緩解位阻的核鹼基。因此，本文所揭示之聚核苷酸分子可包括一或多個(例如一個或兩個)無鹼基取代。在特定態樣中，無鹼基取代位於來自本文所描述之反義股之5'端的第5核苷酸處。在特定態樣中，無鹼基取代位於來自本文所描述之反義股之5'端的第7核苷酸處。
當本文所揭示之聚核苷酸分子包括兩個或更多個無鹼基取代時，其結構可相同或不同。在某些態樣中，有義股含有一個無鹼基取代(例如反義股可不含無鹼基取代)。在其他態樣中，反義股含有一個無鹼基取代(例如有義股可不含無鹼基取代)。在其他態樣中，反義股含有一個無鹼基取代，且有義股含有一個無鹼基取代。在其他態樣中，有義股包括核苷編號(x)與核苷編號(x+1)之間的無鹼基取代，其中x為2至7之整數。在其他態樣中，反義股包括核苷編號(x)與核苷編號(x+1)之間的無鹼基取代，其中x為2至7之整數。
無鹼基取代可具有式(III)：
Figure 02_image005
， 其中 L為糖類似物或經A、U、C、G之雜醯基取代，或為任何其他經取代核酸(例如鎖定或解鎖核酸、乙二醇核酸等)； 各X 4獨立地為O或S； 各X 5獨立地為O、S、NH或鍵； 各R 9獨立地為H、視情況經取代之C 1 - 6烷基、視情況經取代之C 2 - 6烯基、視情況經取代之C 2 - 6炔基、視情況經取代之(C 1 - 9雜環基)-C 1 - 6烷基、視情況經取代之(C 6 - 10芳基)-C 1 - 6烷基、視情況經取代之(C 3 - 8環烷基)-C 1 - 6烷基、-連接基團A (-T) p或結合部分； 各連接基團A獨立地為多價連接子(例如，包括-C(O)-N(H)-)； 各T獨立地為輔助部分； R 10為股中之核苷(x)之3'碳原子上的鍵； R 11為股中之核苷(x+1)之5'氧原子上的鍵； p為1至6之整數；及 t為1至6之整數。
在一些態樣中，本文所描述之無鹼基取代連接至本文所描述之聚核酸分子之反義股。在特定態樣中，無鹼基取代(例如式(III)之核苷酸間、無鹼基間隔基，其中t為1)可包括於本文所描述之反義股中(例如在引導股之種子區內)。在一些態樣中，無鹼基取代(例如式(III)之核苷酸間、無鹼基間隔基，其中t為1)可鍵結至本文所描述之反義股之5'端的第二、第三、第四或第五核苷之3'碳原子。在某些態樣中，無鹼基取代(例如式(III)之核苷酸間、無鹼基間隔基，其中t為1)可鍵結至本文所描述之反義股之5'端的第十三、第十四、第十五或第十六核苷之3'碳原子。在一些態樣中，無鹼基取代可鍵結至本文所描述之反義股之5'端的第四、第五、第六、第七、第八及/或第九核苷。
本文所描述之聚核苷酸分子可含有包括種子區之股，該種子區包括含次黃嘌呤核鹼基之核苷(例如肌苷)。
在某些態樣中，含次黃嘌呤核鹼基之核苷為股中5'端的第二核苷。在其他態樣中，含次黃嘌呤核鹼基之核苷為股中之5'端的第三核苷。在又其他態樣中，含次黃嘌呤核鹼基之核苷為股中之5'端的第四核苷。在又另外態樣中，含次黃嘌呤核鹼基之核苷為股中之5'端的第五核苷。在特定態樣中，含次黃嘌呤核鹼基之核苷為股中之第六核苷。在特定態樣中，含次黃嘌呤核鹼基之核苷為股中之第七核苷。 修飾之量及位置
在一些態樣中，本文所描述之聚核苷酸分子包含一或多種類型之如上文所描述的修飾。因此，在一些態樣中，本文所描述之聚核苷酸分子中的約10%核苷酸經修飾，其中一或多種類型的修飾如上文所描述。在其他態樣中，本文所描述之聚核苷酸分子中的約20%核苷酸經修飾，其中一或多種類型的修飾如上文所描述。在其他態樣中，本文所描述之聚核苷酸分子中的約30%核苷酸經修飾，其中一或多種類型的修飾如上文所描述。在其他態樣中，本文所描述之聚核苷酸分子中的約40%核苷酸經修飾，其中一或多種類型的修飾如上文所描述。在其他態樣中，本文所描述之聚核苷酸分子中的約50%核苷酸經修飾，其中一或多種類型的修飾如上文所描述。在其他態樣中，本文所描述之聚核苷酸分子中的約60%核苷酸經修飾，其中一或多種類型的修飾如上文所描述。在其他態樣中，本文所描述之聚核苷酸分子中的約70%核苷酸經修飾，其中一或多種類型的修飾如上文所描述。在其他態樣中，本文所描述之聚核苷酸分子中的約80%核苷酸經修飾，其中一或多種類型的修飾如上文所描述。在其他態樣中，本文所描述之聚核苷酸分子中的約90%核苷酸經修飾，其中一或多種類型的修飾如上文所描述。在其他態樣中，本文所描述之聚核苷酸分子中的約100%核苷酸經修飾，其中一或多種類型的修飾如上文所描述。
在一些態樣中，本文所描述之一或多種類型之修飾發生在本文所描述之聚核苷酸分子內的不同位置。在特定態樣中，本文所描述之一或多種類型之修飾發生於本文所描述之聚核苷酸分子內的種子區中。在特定態樣中，本文所描述之一或多種類型之修飾發生在本文所描述之聚核苷酸分子的3'端。在特定態樣中，本文所描述之一或多種類型之修飾發生在本文所描述之聚核苷酸分子的5'端。在特定態樣中，本文所描述之一或多種類型之修飾以分散方式發生在本文所描述之聚核苷酸分子內。在特定態樣中，本文所描述之一或多種類型修飾以叢集形式發生於本文所描述之聚核苷酸分子內。 特定修飾模式
在一些態樣中，本文描述作為雙股核酸分子之聚核酸分子的特定修飾模式，該雙股核酸分子包含有義股及反義股，其中該有義股包含約十二個經2'-氟修飾之核苷酸及約九個經2'-O-甲基修飾之核苷酸，且其中該反義股包含約九個經2'-氟修飾之核苷酸及約十四個經2'-O-甲基修飾之核苷酸。
在一些態樣中，本文描述特定修飾模式，其中有義股完全經修飾且包含十二個經2'-氟修飾之核苷酸、九個經2'-O-甲基修飾之核苷酸，且其中反義股完全經修飾且包含九個經2'-氟修飾之核苷酸及十四個經2'-O-甲基修飾之核苷酸。
在一些態樣中，本文中描述特定修飾模式，其中有義股包含『5-NfnNfnNfnNfnNfNfNfnNfnNfnNfnNfnNf-3』，其中反義股包含『5-nNfnNfnNfnNfnNfnnnNfnNfnNfnNfnnn-3』，其中「Nf」表示經2'-氟修飾之核苷酸，且其中「n」表示經2'-O-甲基修飾之核苷酸。
在一些態樣中，本文中描述特定修飾模式，其中有義股包含『5-NfnNfnNfnNfnNfNfNfnNfnNfnNfnNfnNf-3』，其中反義股包含『5-nNfnNfnNfnNfnNfnnnNfnNfnNfnNfnnn-3』，其中有義及/或反義股包含一或多個硫代磷酸酯鍵，其中「Nf」表示經2'-氟修飾之核苷酸，且其中「n」表示經2'-O-甲基修飾之核苷酸。在其他態樣中，本文中描述特定修飾模式，其中有義股包含『5-NfnNfnNfnNfnNfNfNfnNfnNfnNfnNfnNf-3』，其中反義股包含『5-nNfnNfnNfnNfnNfnnnNfnNfnNfnNfnnn-3』，其中有義股包含兩個硫代磷酸酯鍵，其中反義股包含四個硫代磷酸酯鍵，其中「Nf」表示經2'-氟修飾之核苷酸，且其中「n」表示經2'-O-甲基修飾之核苷酸。
在一些態樣中，本文中描述特定修飾模式，其中有義股及/或反義股修飾為 表 4中I型。 表 4 各種修飾模式
模式名稱 模式
有義股之I型 『5-NfsnsNfnNfnNfnNfNfNfnNfnNfnNfnNfnNf-3』
反義股之I型 『5-nsNfsnNfnNfnNfnNfnnnNfnNfnNfnNfnsnsn-3』
有義股之II型 『5-nsnsnnnnNfnNfNfNfnnnnnnnnnn -3』
反義股之II型 『5-nsNfsnnnNfnNfNfnnnnNfnNfnnnnnsnsn -3』
有義股之III型 『5-nsnsnnnnnnNfnNfnnnnnnnnnn -3』
反義股之III型 『5-nsNfsnnnnnnnnnNfnNfnnnnnnnsnsn -3』
有義股之IV型 『5-nsnsnnnnNfnNfnNfnnnnnnnnnn -3』
反義股之IV型 『5-nsNfsnnnnnnnnnNfnNfnNfnnnnnsnsn -3』
備註：「Nf」表示經2'-氟修飾之核苷酸，「n」表示經2'-O-甲基修飾之核苷酸，「s」表示3'-硫代磷酸酯。
在一些態樣中，本文所提供之聚核苷酸分子包含來自SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、25-127及437-539中之一者的有義股，且反義股包含SEQ ID NO: 2、4、6、8、10及231-333中之一者。在其他態樣中，本文所提供之聚核苷酸分子包含來自SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、25-127及437-539中之一者的有義股，反義股包含SEQ ID NO: 2、4、6、8、10及231-333中之一者，且其中有義及/或反義股以 表 4中所指定之I型修飾模式修飾。在一些態樣中，本文所提供之聚核苷酸分子包含來自SEQ ID NO: 1、3、5、7及9中之一者的有義股，且反義股包含SEQ ID NO: 2、4、6、8及10中之一者。在其他態樣中，本文所提供之聚核苷酸分子包含來自SEQ ID NO: 1、3、5、7及9中之一者的有義股，反義股包含SEQ ID NO: 2、4、6、8及10中之一者，且其中有義及/或反義股以 表 4中所指定之I型修飾模式修飾。
在一些態樣中，本文描述特定修飾模式，其中有義股包含約四個經2'-氟修飾之核苷酸及約十七個經2'-O-甲基修飾之核苷酸，且其中反義股包含約六個經2'-氟修飾之核苷酸及約十七個經2'-O-甲基修飾之核苷酸。
在一些態樣中，本文描述特定修飾模式，其中有義股包含四個經2'-氟修飾之核苷酸、十七個經2'-O-甲基修飾之核苷酸且無其他核苷酸，且其中反義股包含六個經2'-氟修飾之核苷酸及十七個經2'-O-甲基修飾之核苷酸且無其他核苷酸。
在一些態樣中，本文中描述特定修飾模式，其中有義股包含『5-nnnnnnNfnNfNfNfnnnnnnnnnn-3』，其中反義股包含『5-nNfnnnNfnNfNfnnnnNfnNfnnnnnnn-3』，其中「Nf」表示經2'-氟修飾之核苷酸，且其中「n」表示經2'-O-甲基修飾之核苷酸。
在一些態樣中，本文中描述特定修飾模式，其中有義股包含『5-nnnnnnNfnNfNfNfnnnnnnnnnn-3』，其中反義股包含『5-nNfnnnNfnNfNfnnnnNfnNfnnnnnnn-3』，其中有義股及/或反義股包含一或多個硫代磷酸酯鍵，其中「Nf」表示經2'-氟修飾之核苷酸，且其中「n」表示經2'-O-甲基修飾之核苷酸。在其他態樣中，本文中描述特定修飾模式，其中有義股包含『5-nnnnnnNfnNfNfNfnnnnnnnnnn-3』，其中反義股包含『5-nNfnnnNfnNfNfnnnnNfnNfnnnnnnn-3』，其中有義股包含兩個硫代磷酸酯鍵，其中反義股包含四個硫代磷酸酯鍵，其中「Nf」表示經2'-氟修飾之核苷酸，且其中「n」表示經2'-O-甲基修飾之核苷酸。
在一些態樣中，本文中描述特定修飾模式，其中有義股及/或反義股修飾為 表 4中之II型。
在一些態樣中，本文所提供之聚核苷酸分子包含含有SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、25-127及437-539中之一者的有義股，及/或含有SEQ ID NO: 2、4、6、8、10及231-333中之一者的反義股，且其中有義股及/或反義股以 表 4中所指定之II型修飾模式修飾。在其他態樣中，本文所提供之聚核苷酸分子包含含有SEQ ID NO: 1、3、5、7及9中之一者的有義股，及/或含有SEQ ID NO: 2、4、6、8及10中之一者的反義股，且其中有義股及/或反義股以 表 4中所指定之II型修飾模式修飾。
在一些態樣中，本文描述特定修飾模式，其中有義股包含約兩個經2'-氟修飾之核苷酸及約十九個經2'-O-甲基修飾之核苷酸，且其中反義股包含約三個經2'-氟修飾之核苷酸及約二十個經2'-O-甲基修飾之核苷酸。
在一些態樣中，本文描述特定修飾模式，其中有義股包含兩個經2'-氟修飾之核苷酸、十九個經2'-O-甲基修飾之核苷酸，且無其他核苷酸，且其中反義股包含三個經2'-氟修飾之核苷酸及二十個經2'-O-甲基修飾之核苷酸且無其他核苷酸。
在一些態樣中，本文中描述特定修飾模式，其中有義股包含『5-nnnnnnnnNfnNfnnnnnnnnnn-3』，其中反義股包含『5-nNfnnnnnnnnnNfnNfnnnnnnnnn-3』，其中「Nf」表示經2'-氟修飾之核苷酸，且其中「n」表示經2'-O-甲基修飾之核苷酸。
在一些態樣中，本文中描述特定修飾模式，其中有義股包含『5-nnnnnnnnNfnNfnnnnnnnnnn-3』，其中反義股包含『5-nNfnnnnnnnnnNfnNfnnnnnnnnn-3』，其中有義股及/或反義股包含一或多個硫代磷酸酯鍵，其中「Nf」表示經2'-氟修飾之核苷酸，且其中「n」表示經2'-O-甲基修飾之核苷酸。在其他態樣中，本文中描述特定修飾模式，其中有義股包含『5-nnnnnnnnNfnNfnnnnnnnnnn-3』，其中反義股包含『5-nNfnnnnnnnnnNfnNfnnnnnnnnn-3』，其中有義股包含兩個硫代磷酸酯鍵，其中反義股包含四個硫代磷酸酯鍵，其中「Nf」表示經2'-氟修飾之核苷酸，且其中「n」表示經2'-O-甲基修飾之核苷酸。
在一些態樣中，本文中描述特定修飾模式，其中有義股及/或反義股修飾為 表 4中之III型。
在一些態樣中，本文所提供之聚核苷酸分子包含來自SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、25-127及437-539中之一者的有義股，反義股包含SEQ ID NO: 2、4、6、8、10及231-333中之一者，且其中有義股及/或反義股以 表 4中所指定之III型修飾模式修飾。在其他態樣中，本文所提供之聚核苷酸分子包含來自SEQ ID NO: 1、3、5、7及9中之一者的有義股，反義股包含SEQ ID NO: 2、4、6、8及10中之一者，且其中有義及/或反義股以 表 4中所指定之III型修飾模式修飾。
在一些態樣中，本文描述特定修飾模式，其中有義股包含約三個經2'-氟修飾之核苷酸及約十八個經2'-O-甲基修飾之核苷酸，且其中反義股包含約四個經2'-氟修飾之核苷酸及約十九個經2'-O-甲基修飾之核苷酸。
在一些態樣中，本文描述特定修飾模式，其中有義股包含三個經2'-氟修飾之核苷酸、十八個經2'-O-甲基修飾之核苷酸，且無其他核苷酸，且其中反義股包含四個經2'-氟修飾之核苷酸及十九個經2'-O-甲基修飾之核苷酸且無其他核苷酸。
在一些態樣中，本文中描述特定修飾模式，其中有義股包含『5-nnnnnnNfnNfnNfnnnnnnnnnn-3』，其中反義股包含『5-nNfnnnnnnnnnNfnNfnNfnnnnnnn-3』，其中「Nf」表示經2'-氟修飾之核苷酸，且其中「n」表示經2'-O-甲基修飾之核苷酸。
在一些態樣中，本文中描述特定修飾模式，其中有義股包含『5-nnnnnnNfnNfnNfnnnnnnnnnn-3』，其中反義股包含『5-nNfnnnnnnnnnNfnNfnNfnnnnnnn-3』，其中有義股及/或反義股包含一或多個硫代磷酸酯鍵，其中「Nf」表示經2'-氟修飾之核苷酸，且其中「n」表示經2'-O-甲基修飾之核苷酸。在其他態樣中，本文中描述特定修飾模式，其中有義股包含『5-nnnnnnNfnNfnNfnnnnnnnnnn-3』，其中反義股包含『5-nNfnnnnnnnnnNfnNfnNfnnnnnnn-3』，其中有義股包含兩個硫代磷酸酯鍵，其中反義股包含四個硫代磷酸酯鍵，其中「Nf」表示經2'-氟修飾之核苷酸，且其中「n」表示經2'-O-甲基修飾之核苷酸。
在一些態樣中，本文中描述特定修飾模式，其中有義股及/或反義股修飾為 表 4中之IV型。
在一些態樣中，本文所提供之聚核苷酸分子包含含有SEQ ID NO: 1、3、5、7、9、25-127及437-539中之一者的有義股，及/或含有SEQ ID NO: 2、4、6、8、10及231-333中之一者的反義股，且其中有義股及/或反義股以 表 4中所指定之IV型修飾模式修飾。在其他態樣中，本文所提供之聚核苷酸分子包含含有SEQ ID NO: 1、3、5、7及9中之一者的有義股，及/或含有SEQ ID NO: 2、4、6、8及10中之一者的反義股，且其中有義股及/或反義股以 表 4中所指定之IV型修飾模式修飾。
用於調節PCSK9基因之表現的聚核酸分子，其中聚核酸分子包含：反義股，其包含核苷酸序列usUfsacaaaagcaAfaAfcAfggucusasg (SEQ ID NO: 14)；及有義股，其包含核苷酸序列asgsaccuGfuUfuUfgcuuuuguaa (SEQ ID NO: 13)，其中「Nf」表示經2'-氟修飾之核苷酸，「n」表示經2'-O-甲基修飾之核苷酸，且「s」係指3'-硫代磷酸酯。
用於調節PCSK9基因之表現的聚核酸分子，其中聚核酸分子包含：反義股，其包含核苷酸序列usUfsucaaguuacAfaAfaGfcaaaascsa (SEQ ID NO: 16)；及有義股，其包含核苷酸序列ususuugcUfuUfuGfuaacuugaaa (SEQ ID NO: 15)，其中「Nf」表示經2'-氟修飾之核苷酸，「n」表示經2'-O-甲基修飾之核苷酸，且「s」係指3'-硫代磷酸酯。
用於調節PCSK9基因之表現的聚核酸分子，其中聚核酸分子包含：反義股，其包含核苷酸序列asAfsuaucuucaaGfuUfaCfaaaagscsa (SEQ ID NO: 18)；及有義股，其包含核苷酸序列csusuuugUfaAfcUfugaagauauu (SEQ ID NO: 17)，其中「Nf」表示經2'-氟修飾之核苷酸，「n」表示經2'-O-甲基修飾之核苷酸，且「s」係指3'-硫代磷酸酯。
用於調節PCSK9基因之表現的聚核酸分子，其中聚核酸分子包含：反義股，其包含核苷酸序列asUfsuaauaaaaaUfgCfuAfcaaaascsc (SEQ ID NO: 20)；及有義股，其包含核苷酸序列ususuuguAfgCfaUfuuuuauuaau (SEQ ID NO: 19)，其中「Nf」表示經2'-氟修飾之核苷酸，「n」表示經2'-O-甲基修飾之核苷酸，且「s」係指3'-硫代磷酸酯。
用於調節PCSK9基因之表現的聚核酸分子，其中聚核酸分子包含：反義股，其包含核苷酸序列asUfsauuaauaaaAfaUfgCfuacaasasa (SEQ ID NO: 22)；及有義股，其包含核苷酸序列ususguagCfaUfuUfuuauuaauau (SEQ ID NO: 21)，其中「Nf」表示經2'-氟修飾之核苷酸，「n」表示經2'-O-甲基修飾之核苷酸，且「s」係指3'-硫代磷酸酯。 結合 結合部分
在某些態樣中，本文所描述之聚核苷酸分子與一或多個靶向部分偶合或結合以形成聚核苷酸靶向部分結合物分子。在一些情況下，靶向部分選擇性地或較佳基於其將本文所描述之結合物分子靶向所需細胞群體、組織或器官的能力選擇。在一些情況下，靶向部分靶向細胞、組織或器官，該細胞、組織或器官表現靶向部分之對應結合搭配物(例如，對應受體或配位體)。舉例而言，藉由選擇含有N-乙醯基半乳胺糖(GalNAc)之靶向部分作為靶向部分可使本文所描述之聚核苷酸分子靶向表現去唾液酸糖蛋白(ASGP-R)的肝細胞。靶向細胞內之所需位點(例如內質網、高基氏體(Golgi apparatus)、細胞核或粒線體)之靶向部分(亦即，細胞內靶向部分)可包括於本文所揭示之雜交聚核苷酸構築體中。細胞內靶向部分之非限制性實例提供於WO 2015/069932及WO 2015/188197中；WO 2015/069932及WO 2015/188197中之細胞內靶向部分的揭示內容以引用的方式併入本文中。
因此，本文所描述之聚核苷酸分子可包括一或多種選自由以下組成之群的靶向部分：細胞內靶向部分、細胞外靶向部分及其組合。因此，在本文所描述之聚核苷酸分子中包括一或多個靶向部分(例如細胞外靶向部分，包括獨立地選自由以下組成之群的靶向部分：葉酸、甘露糖、N-乙醯基半乳糖胺及前列腺特異性膜抗原)及一或多個細胞內靶向部分(例如靶向內質網、高基氏體、細胞核或粒線體之部分)可有助於將聚核苷酸遞送至特定細胞群體內之特定位點。在一些態樣中，靶向部分含有一或多個甘露糖碳水化合物。甘露糖靶向甘露糖受體，甘露糖受體為表現於肝竇細胞及抗原呈遞細胞(例如巨噬細胞及樹突狀細胞)上之175 KDa膜相關受體。其為結合且內化甘露糖基化病原體及蛋白質的高效內吞/再循環受體(Lennartz等人 J. Biol. Chem. 262:9942-9944,1987; Taylor等人 J. Biol. Chem. 265:12156-62, 1990)。
一些靶向部分描述於本文中。在一些態樣中，靶向部分含有或特異性結合於選自包括以下之群組之蛋白質：胰島素、類胰島素生長因子受體1 (IGF1R)、IGF2R、類胰島素生長因子(IGF；例如，IGF 1或2)、間葉細胞上皮轉變因子受體(c-met；亦稱為肝細胞生長因子受體(HGFR))、肝細胞生長因子(HGF)、表皮生長因子受體(EGFR)、表皮生長因子(EGF)、調蛋白、纖維母細胞生長因子受體(FGFR)、血小板衍生生長因子受體(PDGFR)、血小板衍生生長因子(PDGF)、血管內皮生長因子受體(VEGFR)、血管內皮生長因子(VEGF)、腫瘤壞死因子受體(TNFR)、腫瘤壞死因子α (TNF-α)、TNF-β、葉酸受體(FOLR)、葉酸、運鐵蛋白、運鐵蛋白受體(TfR)、間皮素、Fc受體、c-kit受體、c-kit、整合素(例如，α4整合素或β-1整合素)、P-選擇蛋白、神經鞘胺醇-1-磷酸酯受體-1 (S1PR)、玻尿酸受體、白血球功能抗原-1 (LFA-1)、CD4、CD11、CD18、CD20、CD25、CD27、CD52、CD70、CD80、CD85、CD95 (Fas受體)、CD106 (血管細胞黏附分子1 (VCAM1))、CD166 (活化白血球細胞黏附分子(ALCAM))、CD178 (Fas配位體)、CD253 (TNF相關細胞凋亡誘導配位體(TRAIL))、ICOS配位體、CCR2、CXCR3、CCR5、CXCL12 (基質細胞衍生因子1 (SDF-1))、介白素1 (IL-1)、IL-1ra、IL-2、IL-3、IL-4、IL-6、IL-7、IL-8、CTLA-4、MART-1、gp100、MAGE-1、肝配蛋白(Eph)受體、黏膜定址素細胞黏附分子1 (MAdCAM-1)、癌胚抗原(CEA)、LewisY、MUC-1、上皮細胞黏附分子(EpCAM)、癌症抗原125 (CA125)、前列腺特異性膜抗原(PSMA)、TAG-72抗原及其片段。在其他態樣中，靶向部分含有核紅血球白血病病毒致癌基因同源物(ErbB)受體(例如ErbB1受體；ErbB2受體；ErbB3受體；及ErbB4受體)。在一些態樣中，靶向部分含有一或多個(例如1至6個) N-乙醯基半乳糖(GalNAc)。在某些態樣中，靶向部分含有一或多個(例如1至6個)甘露糖。在其他態樣中，靶向部分含有葉酸配位體。葉酸配位體具有以下結構：
Figure 02_image007
。
某些靶向部分可包括鈴蟾素、胃泌素、胃泌素釋放肽、腫瘤生長因子(TGF)(例如，TGF-α或TGF-β)或痘瘡病毒生長因子(VVGF)。非肽基靶向部分亦可用於靶向部分且可包括例如類固醇、碳水化合物、維生素及凝集素。一些靶向部分可包括多肽，諸如生長抑制素或生長抑制素類似物(例如，奧曲肽(octreotide)或蘭瑞肽(lanreotide))、鈴蟾素或抗體或其抗原結合片段。抗體可為任何公認類別或子類，例如IgG、IgA、IgM、IgD或IgE。典型地為屬於IgG類之彼等抗體。抗體可根據此項技術中已知之技術來源於任何物種。然而，通常，抗體來源於人類、鼠類或兔。另外，抗體可為多株或單株抗體，但通常為單株抗體。人類或嵌合(例如人類化)抗體可用於靶向部分。靶向部分可包括抗體之抗原結合片段。此類抗體片段可包括例如Fab'、F(ab')2、Fv或Fab片段、單結構域抗體、ScFv或其他抗原結合片段。Fc片段亦可用於靶向部分中。此類抗體片段可例如藉由蛋白分解酶消化(例如藉由胃蛋白酶或番木瓜蛋白酶消化)、還原性烷基化或重組技術來製備。用於製備抗體片段之材料及方法為熟習此項技術者熟知。參見例如Parham, J. Immunology, 131:2895, 1983; Lamoyi等人, J. Immunological Methods, 56:235, 1983。
在本文所描述之聚核苷酸分子中用作靶向輔助部分的其他肽可選自KiSS肽及類似物、尿加壓素II肽及類似物、GnRH I及II肽及類似物、地普奧肽(depreotide)、伐普肽(vapreotide)、血管活性腸肽(VIP)、膽囊收縮素(CCK)、含RGD肽、黑色素細胞刺激激素(MSH)肽、神經調壓素、降鈣素、麩胱甘肽、YIGSR (白血球親合肽，例如，P483H，其含有血小板因子-4 (PF-4)之肝素結合區及富離胺酸序列)、心房利鈉肽(ANP)、β-類澱粉蛋白肽、δ-類鴉片拮抗劑(諸如ITIPP(psi))、磷脂結合蛋白-V、內皮素、白三烯B4 (LTB4)、趨化肽(例如，N-甲醯基-甲硫胺醯基-白胺醯基-苯丙胺酸-離胺酸(fMLFK)、GP IIb/IIIa受體拮抗劑(例如，DMP444)、人類嗜中性球彈性蛋白酶抑制劑(EPI-HNE-2及EPI-HNE-4)、纖維蛋白溶酶抑制劑、抗微生物肽、艾普提賽德(apticide)(P280及P274)、凝血酶致敏蛋白受體(包括類似物，諸如TP-1300)、扁頭腹蛇素、垂體腺苷酸環化酶I型受體(PAC1)、纖維蛋白α鏈、衍生自噬菌體呈現庫之肽及其保守性取代。
一或多個(例如1至6個)靶向部分可經由-連接基團A-連接至式(V'、V''或V''')中之MOIETY或X2。
在一些態樣中，靶向部分包括一或多個(例如，1至6個或1至3個)去唾液酸糖蛋白受體配位體(例如，GalNAc)。在一些態樣中，去唾液酸糖蛋白受體配位體(例如GalNAc)配位體經由變旋異構碳(例如其中變旋異構碳為縮乙醛或半胺醛中之碳原子)連接至-連接基團A-。在一些態樣中，去唾液酸糖蛋白受體配位體(例如GalNAc)包含鍵結至三價、四價連接子、五價或六價連接子之變旋異構碳，其中變旋異構碳為半胺醛基之一部分。與其中去唾液酸糖蛋白受體配位體經由縮乙醛連接至連接子的雜交聚核苷酸構築體相比，經由半胺醛連接至連接子的去唾液酸糖蛋白受體配位體(例如，GalNAc)可產生在基因緘默方面具有優良功效的雜交聚核苷酸構築體。
在一些態樣中，連接子及三個去唾液酸糖蛋白受體靶向部分(其各自包含GalNAc)如式(V)中所示。在一些情況下，本文所描述之結合物僅包含一個去唾液酸糖蛋白受體靶向部分，因此結合物包含其中任何兩個靶向部分經移除的式(V)之結構。在一些情況下，本文所描述之結合物僅包含兩個去唾液酸糖蛋白受體靶向部分，因此本文所描述之結合物包含其中任一個靶向部分經移除的式(V)之結構。
Figure 02_image009
， 其中Y1及Y2中之一者為核苷酸，或其中Y1及Y2均為核苷酸，且Y1及Y2為來自本文所描述之聚核酸分子的連續或相鄰核苷酸。
在一些態樣中，本文所描述之連接子及靶向部分結合至有義股之3'端(例如如式(V')中所示)。在一些態樣中，本文中所描述之連接子及靶向部分結合至有義股之5'端(例如如式(V'')或(V''')中所示)。在一些態樣中，本文中所描述之連接子及靶向部分結合至反義股之3'端(例如如式(V')中所示)。在一些態樣中，本文中所描述之連接子及靶向部分結合至反義股之5'端(例如如式(V'')或(V''')中所示)。
Figure 02_image011
，其中式(V')中之Z對應於本文所描述之糖修飾中之一者(例如-H、-OH、-O-甲基、-F或-O-甲氧基乙基)，且式(V')中之R為腺嘌呤、尿嘧啶、鳥嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶、無鹼基或其他。
Figure 02_image013
， 其中式(V'')中之Z為對應於本文所描述之糖修飾中之一者的部分(例如-H、-OH、-O-甲基、-F或-O-甲氧基乙基)，且式(V'')中之R為腺嘌呤、尿嘧啶、鳥嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶、無鹼基或其他。
Figure 02_image015
， 其中式(V''')中之Z為對應於本文所描述之糖修飾中之一者的部分(例如-H、-OH、-O-甲基、-F或-O-甲氧基乙基)，且式(V''')中之R為腺嘌呤、尿嘧啶、鳥嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶、無鹼基或其他。
在一些情況下，來自表1、表2或表3之隨從/有義股的3'端與X2-GalNAc (參見式(V)或(V'))結合。在一些情況下，來自表1、表2或表3之隨從/有義股的5'端與X2-GalNAc (參見式(V)、(V'')或(V'''))結合。在一些情況下，來自表1、表2或表3之隨從/有義股內的核酸(不在5'或3'端)與X2-GalNAc (參見式(V))結合。在一些情況下，來自表1、表2或表3之引導/反義股的3'端與X2-GalNAc (參見式(V)或(V'))結合。在一些情況下，來自表1、表2或表3之引導/反義股的5'端與X2-GalNAc (參見式(V)、(V'')或(V'''))結合。在一些情況下，來自表1、表2或表3之引導/反義股內的核酸(不在5'或3'端)與X2-GalNAc (參見式(V))結合。
一或多個胞內體逃脫部分(例如1至6個或1至3個)可作為輔助部分連接至本文揭示之聚核苷酸構築體或雜交聚核苷酸構築體。例示性胞內體逃脫部分包括化學治療劑(例如喹啉酮，諸如氯喹)；促融脂質(例如二油醯基磷脂醯乙醇胺(DOPE))；及聚合物，諸如聚伸乙亞胺(PEI)；聚(β-胺基酯)；多肽，諸如聚精胺酸(例如八精胺酸)及聚離胺酸(例如八離胺酸)；質子海綿、病毒衣殼及肽轉導結構域，如本文所描述。例如，促融肽可衍生自A型流感病毒之M2蛋白；流感病毒紅血球凝集素之肽類似物；C型流感病毒之HEF蛋白；絲狀病毒之跨膜糖蛋白；狂犬病病毒之跨膜糖蛋白；水泡性口炎病毒之跨膜糖蛋白(G)；仙台病毒(Sendai virus)之融合蛋白；勝利基森林病毒(Semliki forest virus)之跨膜糖蛋白；人類呼吸道融合病毒(RSV)之融合蛋白；麻疹病毒之融合蛋白；新城雞瘟之融合蛋白；綿羊髓鞘脫落病毒(visna virus)之融合蛋白；鼠白血病病毒之融合蛋白；HTL病毒之融合蛋白；及猿猴免疫缺乏病毒(SIV)之融合蛋白。可用於促進胞內體逃脫之其他部分描述於Dominska等人, Journal of Cell Science, 123(8):1183-1189, 2010中。胞內體逃脫部分的特定實例(包括適合與本文所揭示之雜交聚核苷酸構築體結合之部分)提供於例如WO 2015/188197中；此等胞內體逃脫部分之揭示內容以引用的方式併入本文中。
如本文中所描述，一或多個胞內體逃脫部分(例如1至6個或1至3個)可經由-連接基團A-連接至式(V'、V''或V''')中之MOIETY或X2。
一或多個細胞穿透肽(CPP)(例如，1至6個或1至3個)可作為輔助部分連接至本文揭示之聚核苷酸構築體或雜交聚核苷酸構築體。如本文所揭示，CPP可經由二硫鍵生物可逆地鍵聯至雜交聚核苷酸。因此，在遞送至細胞後，CPP可在細胞內裂解，例如藉由細胞內酶(例如蛋白質二硫鍵異構酶、硫化還原蛋白或硫酯酶)裂解且藉此釋放聚核苷酸。
CPP為此項技術中已知的(例如，TAT或Arg8)(Snyder及Dowdy, 2005, Expert Opin. Drug Deliv. 2, 43-51)。CPP之特定實例(包括適合與本文所揭示之雜交聚核苷酸構築體結合的部分)提供於例如WO 2015/188197中；此等CPP之揭示內容以引用之方式併入本文中。
CPP係能夠促進生物載物遞送至細胞的帶正電的肽。咸信，CPP之陽離子電荷對於其功能而言為必要的。此外，此等蛋白質之轉導似乎不受細胞類型影響，且此等蛋白質可在無明顯毒性之情況下有效地轉導幾乎所有培養細胞(Nagahara等人, Nat. Med. 4:1449-52, 1998)。除全長蛋白質以外，CPP亦已成功用於誘導DNA (Abu-Amer, 前述)、反義聚核苷酸(Astriab-Fisher等人, Pharm. Res, 19:744-54, 2002)、小分子(Polyakov等人, Bioconjug. Chem. 11:762-71, 2000)以及甚至40 nm無機鐵粒子(Dodd等人, J. Immunol. Methods 256:89-105, 2001; Wunderbaldinger等人, Bioconjug. Chem. 13:264-8, 2002; Lewin等人, Nat. Biotechnol. 18:410-4, 2000; Josephson等人, Bioconjug. Chem. 10:186-91, 1999)的細胞內吸收，表明在此過程中存在相當大的粒度靈活性。
在一個實施例中，適用於如本文所描述之方法及組合物中之CPP包括特徵基本上為α螺旋形之肽。已發現，在CPP展現顯著α螺旋形時，轉染最佳化。在另一實施例中，CPP包括含有鹼性胺基酸殘基的序列，該等鹼性胺基酸殘基基本上沿肽之至少一個面對準。本文所描述之CPP可為天然存在之肽或合成肽。
如本文中所描述，一或多個細胞穿透肽(例如1至6個或1至3個)可經由-連接基團A-連接至式(V'、V''或V''')中之MOIETY或X2。
本文揭示之聚核苷酸構築體及雜交聚核苷酸構築體亦可包括共價連接之基於中性聚合物之輔助部分。中性聚合物包括聚(C1-6環氧烷)，例如聚(乙二醇)及聚(丙二醇)及其共聚物，例如二嵌段及三嵌段共聚物。聚合物之其他實例包括酯化聚(丙烯酸)、酯化聚(麩胺酸)、酯化聚(天冬胺酸)、聚(乙烯醇)、聚(乙烯-共-乙烯醇)、聚(N-乙烯吡咯啶酮)、聚(乙基㗁唑啉)、聚(丙烯酸烷基酯)、聚(丙烯醯胺)、聚(N-烷基丙烯醯胺)、聚(N-丙烯基𠰌啉)、聚(乳酸)、聚(乙醇酸)、聚(二氧環己酮)、聚(己內酯)、苯乙烯-順丁烯二酸酐共聚物、聚(L-丙交酯-共-乙交酯)共聚物、二乙烯醚-順丁烯二酸酐共聚物、N-(2-羥丙基)甲基丙烯醯胺共聚物(HMPA)、聚胺基甲酸酯、N-異丙基丙烯醯胺聚合物及聚(N,N-二烷基丙烯醯胺)。例示性聚合物輔助部分可具有小於100、300、500、1000或5000 Da (例如大於100 Da)的分子量。其他聚合物為此項技術中已知。
如本文中所描述，一或多個聚合物(例如1至6個或1至3個)可經由-連接基團A-連接至式(V'、V''或V''')中之MOIETY或X2。 結合連接子
在一些態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含鍵結至至少一個式(I)基團之有義股或反義股
Figure 02_image017
或其鹽，或其立體異構物， 其中 各X 1獨立地為O或S； 各X 2獨立地為O、S、NH或鍵； MOIETY為視情況經取代之C 2 - 10烷-四基或基團-M 1-M 2-M 3，其中各M 1及各M 3獨立地為不存在或視情況經取代之C 1 - 6伸烷基，且M 2為視情況經取代之C 3 - 9雜環-四基、視情況經取代之C 6 - 10芳烴-四基，或視情況經取代之C 3 - 8環烷-四基； 各R 1及各R 2獨立地為H、視情況經取代之C 1 - 16烷基、視情況經取代之C 2 - 16雜烷基、結合部分或-連接基團A(-T) p，其限制條件為至少一個R 1或至少一個R 2為結合部分或-連接基團A(-T) p； 各R 3獨立地為H、視情況經取代之C 1 - 16烷基、視情況經取代之C 2 - 16雜烷基、視情況經取代之C 2 - 16烯基、視情況經取代之C 2 - 16炔基、視情況經取代之(C 1 - 9雜環基)-C 1 - 6烷基、視情況經取代之(C 6 - 10芳基)-C 1 - 6烷基、視情況經取代之(C 3 - 8環烷基)-C 1 - 6烷基、結合部分或-連接基團A(-T) p； R 4係H、視情況經取代之C 1 - 6烷基、-連接基團A(-T) p或-Sol； 各連接基團A獨立地為多價連接子(例如包括-C(O)-N(H)- (例如至少一個多價連接子，包括鍵結至T的-C(O)-N(H)-))； 各T獨立地為輔助部分； Sol為固體載體； m為1至6之整數； 各n獨立地為0或1； 各p獨立地為1至6之整數；且 q為0至3之整數。 至少一個式(I)之基團可鍵結至聚核苷酸之5'端、3'端、核苷間磷酸酯、核苷間硫代磷酸酯或核苷間二硫代磷酸酯。當至少一個式(I)之基團鍵結至核苷間磷酸酯、核苷間硫代磷酸酯或核苷間二硫代磷酸酯時，q為0。聚核苷酸構築體含有不超過一種Sol。
基團-連接基團A-可包括0至3個多價單體(例如，視情況經取代之C 1 - 6烷-三基、視情況經取代之C 1 - 6烷-四基、或三價氮原子)及一或多個二價單體(例如，1至40個)，其中各二價單體獨立地為視情況經取代之C 1 - 6伸烷基；視情況經取代之C 2 - 6伸烯基；視情況經取代之C 2 - 6伸炔基；視情況經取代之C 3 - 8伸環烷基；視情況經取代之C 3 - 8伸環烯基；視情況經取代之C 6 - 14伸芳基；具有1至4個選自N、O及S之雜原子的視情況經取代之C 1 - 9伸雜芳基；具有1至4個選自N、O及S之雜原子的視情況經取代之C 1 - 9伸雜環基；亞胺基；視情況經取代之N；O；或S(O)m，其中m為0、1或2。在一些態樣中，各單體獨立地為視情況經取代之C 1 - 6伸烷基；視情況經取代之C 3 - 8伸環烷基；視情況經取代之C 3 - 8伸環烯基；視情況經取代之C 6 - 14伸芳基；具有1至4個選自N、O及S之雜原子的視情況經取代之C 1 - 9伸雜芳基；具有1至4個選自N、O及S之雜原子的視情況經取代之C 1 - 9伸雜環基；亞胺基；視情況經取代之N；O；或S(O)m，其中m為0、1或2 (例如，m為2)。在某些態樣中，各單體獨立地為視情況經取代之C 1 - 6伸烷基；視情況經取代之C 3 - 8伸環烷基；視情況經取代之C 3 - 8伸環烯基；視情況經取代之C 6 - 14伸芳基；具有1至4個選自N、O及S之雜原子的視情況經取代之C 1 - 9伸雜芳基；具有1至4個選自N、O及S之雜原子的視情況經取代之C 1 - 9伸雜環基；視情況經取代之N；O；或S(O)m，其中m為0、1或2 (例如，m為2)。將輔助部分連接至結合部分或連接至其反應產物的非生物可逆連接子可包括2至500個(例如2至300或2至200個)此類單體。基團-連接基團A-可包括聚(環氧烷)(例如，聚環氧乙烷、聚環氧丙烷、聚(1,3-環氧丙烷)、聚環氧丁烷、聚(四氫呋喃)及其二嵌段或三嵌段共聚物)。在一些態樣中，非生物可逆連接子包括聚環氧乙烷(例如分子量小於1 kDa之聚(環氧乙烷))。
式(I)中之基團-連接基團A(-T)p可藉由以下部分中所描述之方法來製備。在一些情況下，-連接基團A(-T)p具有式(II)： -Q 1-Q 2([-Q 3-Q 4-Q 5] s-Q 6-T) p， (II) 其中 各s獨立地為0至20 (例如0至10)之整數，其中重複單元相同或不同； Q 1為結合連接子(例如，-Q 3-Q 4-Q 5] s-Q C-，其中Q C為視情況經取代之C 2 - 12伸雜烷基(例如，含有-C(O)-N(H)-、-N(H)-C(O)-、-S(O) 2-N(H)-或-N(H)-S(O) 2-)、視情況經取代之C 1 - 12硫代伸雜環基(例如，
Figure 02_image019
Figure 02_image021
)、視情況經取代之C 1 - 12伸雜環基(例如，1,2,3-三唑-1,4-二基或
Figure 02_image023
)、環丁-3-烯-1,2-二酮-3,4-二基或吡啶-2-基腙)； 若p為1，則Q 2為直鏈基團(例如，[-Q 3-Q 4-Q 5] s-)，或若p為2至6之整數，則為分支鏈基團(例如，[-Q 3-Q 4-Q 5] s-Q 7([-Q 3-Q 4-Q 5] s-(Q 7) p1) p2，其中p1為0或1，p2為0、1、2或3)； 各Q 3及各Q 6獨立地為不存在、-CO-、-NH-、-O-、-S-、-SO 2-、-OC(O)-、-COO-、-NHC(O)-、-C(O)NH-、-CH 2-、-CH 2NH-、-NHCH 2-、-CH 2O-或-OCH 2-； 各Q 4獨立地為不存在、視情況經取代之C 1 - 12伸烷基、視情況經取代之C 2 - 12伸烯基、視情況經取代之C 2 - 12伸炔基、視情況經取代之C 2 - 12伸雜烷基、視情況經取代之C 6 - 10伸芳基、視情況經取代之C 1 - 9伸雜芳基或視情況經取代之C 1 - 9伸雜環基； 各Q 5獨立地為不存在、-CO-、-NH-、-O-、-S-、-SO 2-、-CH 2-、-C(O)O-、-OC(O)-、-C(O)NH-、-NH-C(O)-、-NH-CH(R a)-C(O)-或-C(O)-CH(R a)-NH-； 各Q 7獨立地為視情況經取代之C 1 - 6烷-三基、視情況經取代之C 1 - 6烷-四基、視情況經取代之C 2 - 6雜烷-三基或視情況經取代之C 2 - 6雜烷-四基；且 各R a獨立地為H或胺基酸側鏈； 其限制條件為存在Q 3、Q 4及Q 5中之至少一者。
在一些態樣中，各Q 4獨立地為不存在、視情況經取代之C 1 - 12伸烷基、視情況經取代之C 2 - 12伸烯基、視情況經取代之C 2 - 12伸炔基、視情況經取代之C 2 - 12伸雜烷基或視情況經取代之C 1 - 9伸雜環基。在某些態樣中，s為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20。
因此，在式(II)中，若各p1為0，則連接基團A可包括單個分支點，或若至少一個p1為1，則包括多個分支點。
在式(II)中，Q 1可為-O-Q L-Q C-，其中Q L為視情況經取代之C 2 - 12伸雜烷基、視情況經取代之C 1 - 12伸烷基或-(視情況經取代之C 1 - 6伸烷基)-(視情況經取代之C 6 - 10伸芳基)-。在一些態樣中，Q L為視情況經取代之C 2 - 12伸雜烷基或視情況經取代之C 1 - 12伸烷基。在式(II)中，Q C可為：
Figure 02_image025
。
在式(II)中，Q 2可為式[-Q 3-Q 4-Q 5] s-之直鏈基團，其中Q 3、Q 4及Q 5如針對式(II)所定義。替代地，Q 2可為分支鏈基團[-Q 3-Q 4-Q 5] s-Q 7([-Q 3-Q 4-Q 5] s-(Q 7) p1) p2，其中各Q 7獨立地為視情況經取代之C 1 - 6烷-三基、視情況經取代之C 1 - 6烷-四基、視情況經取代之C 2 - 6雜烷-三基或視情況經取代之C 2 - 6雜烷-四基； 其中 p1為0或1； p2為0、1、2或3； 其中， 當p1為0時，連接基團A為三價或四價連接子，且 當p1為1時，連接基團A為四價、五價或六價連接子。 在某些態樣中，p1為0。 在一些態樣中，Q 7為：
Figure 02_image027
。
可用於製備式(I)中之基團-連接基團A(-T)p之化合物描述於本文以及WO 2015/188197中。-連接基團A之非限制性實例包括：
Figure 02_image029
Figure 02_image031
Figure 02_image033
Figure 02_image035
其中 R 18為連至MOIETY之一鍵， 各R 19獨立地為連至輔助部分之一鍵， 各m5獨立地為1至20之整數， 各m6獨立地為1至10之整數， m7為1至6之整數，且 各X 6獨立地為O或S。 在式(II)中，當結合連接子具有式[-Q 3-Q 4-Q 5] s-Q C-時，-Q 2([-Q 3-Q 4-Q 5] s-Q 6-T) p可為：
Figure 02_image037
Figure 02_image039
Figure 02_image041
其中 R 20為Q 1中連至Q C之一鍵， 各R 19獨立地為連至輔助部分之一鍵， 各m5獨立地為1至20之整數， 各m6獨立地為1至10之整數， m7為1至6之整數，且 各X 6獨立地為O或S。
在一些態樣中，本文所描述之連接子為可裂解的。在一些態樣中，本文中所描述之連接子為不可裂解的。
在一些態樣中，本文所描述之聚核酸分子包含鍵結至至少一個式(IV)基團的有義股或反義股，
Figure 02_image043
， 其中Y1或Y2中之至少一者為來自該聚核酸分子之核苷酸。
在一些情況下，Y1為聚核酸分子中之一個股之3'端上的最末核苷酸或5'端上的第一核苷酸。在一些情況下，Y1為聚核酸分子之有義股之3'端上的最末核苷酸或5'端上的第一核苷酸。在一些情況下，Y1為聚核酸分子之有義股之3'端上的最末核苷酸或5'端上的第一核苷酸，且Y2為3-羥基-丙氧基基團。在一些情況下，Y2為聚核酸分子中之一個股之5'端上的第一核苷酸或3'端上的最末核苷酸。在一些情況下，Y2為聚核酸分子之有義股之5'端上的第一核苷酸或3'端上的最末核苷酸。在一些情況下，Y2為聚核酸分子之有義股之5'端上的第一核苷酸或3'端上的最末核苷酸，且Y1為3-羥基-丙氧基基團。在其他情況下，Y1及Y2為聚核酸分子之一個股中的兩個連續核苷酸。
在一些態樣中，本文中所描述之靶向部分與有義股(例如，式(IV'))之3'端結合。在一些態樣中，本文中所描述之靶向部分與有義股(例如，式(IV'')或(IV'''))之5'端結合。在一些態樣中，本文中所描述之靶向部分與反義股(例如，式(IV'))之3'端結合。在一些態樣中，本文中所描述之靶向部分與反義股(例如，式(IV'')或(IV'''))之5'端結合。
Figure 02_image045
， 其中式(IV')中之Z為對應於本文所描述之糖修飾中之一者的部分(例如-H、-OH、-O-甲基、-F或-O-甲氧基乙基)且式(IV')中之R為腺嘌呤、尿嘧啶、鳥嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶、無鹼基或其他。
Figure 02_image047
， 其中式(IV'')中之Z為對應於本文所描述之糖修飾中之一者的部分(例如-H、-OH、-O-甲基、-F或-O-甲氧基乙基)且式(IV'')中之R為腺嘌呤、尿嘧啶、鳥嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶、無鹼基或其他。
Figure 02_image049
， 其中式(IV''')中之Z為對應於本文所描述之糖修飾中之一者的部分(例如-H、-OH、-O-甲基、-F或-O-甲氧基乙基)且式(IV''')中之R為腺嘌呤、尿嘧啶、鳥嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶、無鹼基或其他。 醫藥組合物
本文所描述之聚核苷酸分子的遞送可藉由使用多種方法使細胞與構築體接觸來達成。在特定態樣中，本文所描述之聚核苷酸分子用各種賦形劑、媒劑及載劑調配，如本文中其他地方更充分所描述。
本文所描述之醫藥組合物可經製備以將本文所揭示之雜交聚核苷酸構築體包括於適於使用載劑、賦形劑及媒劑投與個體之形式中。頻繁使用之賦形劑包括碳酸鎂、二氧化鈦、乳糖、甘露糖醇及其他糖、滑石、乳蛋白、明膠、澱粉、維生素、纖維素及其衍生物、動物油及植物油、聚乙二醇及溶劑，諸如無菌水、醇、甘油及多元醇。靜脈內媒劑包括流體及營養補充劑。防腐劑包括抗微生物劑、抗氧化劑、螯合劑及惰性氣體。醫藥學上可接受之其他媒劑包括水溶液、無毒賦形劑，包括鹽、防腐劑、緩衝劑及其類似物，如例如以下文獻中所描述：Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 第21版, Gennaro編, Lippencott Williams & Wilkins (2005)及The United States Pharmacopeia: The National Formulary (USP 36 NF31)，出版於2013年。根據此項技術中之常規技術調節醫藥組合物之各種組分之pH及精確濃度。參見Goodman及Gilman的The Pharmacological Basis for Therapeutics。
本文所描述之醫藥組合物可局部或全身性投與。治療有效量將根據以下因素而變化：諸如個體之感染程度、個體之年齡、性別及體重。可調整劑量方案以提供最佳治療反應。舉例而言，可每天投與若干分次劑量，或可如治療情況之緊急程度所指示按比例減少劑量。
醫藥組合物可以適宜方式投與，諸如藉由注射(例如皮下、靜脈內、眶內及其類似方式)、經口投與、經眼施用、吸入、體表施用或直腸投與。視投與途徑而定，醫藥組合物可用保護醫藥組合物免受酶、酸及其他可能使醫藥組合物不活化之天然條件之影響的材料包覆。醫藥組合物亦可非經腸或腹膜內投與。亦可在甘油、液態聚乙二醇及其混合物中及在油中製備分散液。在普通的儲存及使用條件下，此等製劑可以含有防腐劑以防止微生物生長。
適於可注射使用之醫藥組合物包括無菌水溶液(當水溶性時)或分散液及用於臨時製備無菌可注射溶液或分散液之無菌粉末。組合物通常將為無菌的且就存在易注射能力而言為流體。通常，組合物在製造及儲存條件下將為穩定的，且經保藏以防止諸如細菌及真菌之微生物的污染作用。媒劑可為含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇及液體聚乙二醇及其類似物)、其適合混合物以及植物油的溶劑或分散介質。舉例而言，可藉由使用包衣(諸如卵磷脂)、藉由維持所需粒度(就分散而言)及藉由使用界面活性劑來維持適當流動性。防止微生物作用可藉由例如對羥苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗壞血酸、乙汞硫柳酸鈉及其類似物之各種抗細菌劑及抗真菌劑來達成。在許多情況下，組合物中使用等張劑，例如糖、多元醇(諸如甘露糖醇、山梨糖醇)或氯化鈉。可注射組合物之延長吸收可藉由在組合物中包括延遲吸收劑(例如單硬脂酸鋁及明膠)來達成。
無菌可注射溶液可如下製備：將所需量之醫藥組合物併入適當溶劑中，必要時，該溶劑中具有上述所列舉成分之一或組合，繼之過濾殺菌。一般而言，藉由將醫藥組合物併入含有鹼性分散介質及選自上列成分之所需其他成分的無菌媒劑中來製備分散液。
為了易於投與及劑量之均勻性，將非經腸組合物調配成單位劑型尤其有利。如本文中所使用，單位劑型係指適合作為單一劑量用於待治療個體之實體不連續單元；含有預定量之醫藥組合物之各單元經計算以與所需醫藥媒劑結合而產生所需治療作用。單位劑型之規格與醫藥組合物之特徵及欲達成之特定治療效果相關。主要醫藥組合物以有效量與醫藥學上可接受之適合媒劑混配，以便以可接受的劑量單元進行方便且有效之投與。在含有補充活性成分之組合物之情況下，參考常見劑量及該等成分之投與方式決定劑量。
醫藥組合物可經口投與，例如在載劑中，例如以包覆腸溶包衣之單位劑型經口投與。醫藥組合物及其他成分亦可封閉於硬殼或軟殼明膠膠囊中或壓縮成錠劑。對於經口治療性投與，可將醫藥組合物與賦形劑合併且以可攝取之錠劑、糖衣錠、膠囊、丸劑、粉片及其類似形式使用。此類組合物及製劑應含有至少1重量%之活性化合物。組合物及製劑之百分比當然可變化且宜在單元之重量之約5%至約80%之間。錠劑、糖衣錠、丸劑、膠囊及類似者亦可含有以下物質：黏合劑，諸如黃蓍膠、阿拉伯膠、玉米澱粉或明膠；賦形劑，諸如磷酸二鈣；崩解劑，諸如玉米澱粉、馬鈴薯澱粉、褐藻酸及類似者；潤滑劑，諸如硬脂酸鎂；及甜味劑，諸如蔗糖、乳糖或糖精；或調味劑，諸如胡椒薄荷、冬青油或櫻桃調味劑。當單位劑型為膠囊時，其可含有除以上類型之材料之外的液體載劑。各種其他材料可以包衣形式存在或以其他方式改變劑量單元之實體形式。舉例而言，錠劑、丸劑或膠囊可塗有蟲膠、糖或兩者。糖漿或酏劑可含有藥劑、作為甜味劑之蔗糖、作為防腐劑之對羥基苯甲酸甲酯及對羥基苯甲酸丙酯、染料及調味劑，諸如櫻桃或橙調味劑。用於製備任何單位劑型之任何材料應具有醫藥學上可接受之純度且在所用量下基本上無毒。此外，醫藥組合物可併入持續釋放製劑及調配物中。
本文所描述之醫藥組合物可包含一或多種促進本文所描述之聚核苷酸分子之生物可用性的滲透增強劑。WO 2000/67798，Muranishi, 1990, Crit. Rev. Ther. Drug Carrier Systems, 7, 1, Lee等人, 1991, Crit. Rev. Ther. Drug Carrier Systems, 8, 91以全文引用之方式併入本文中。在一些態樣中，滲透增強劑係腸道滲透增強劑。在一些態樣中，滲透增強劑為經皮滲透增強劑。在一些態樣中，滲透增強劑有助於穿過腦血障壁。在一些態樣中，滲透增強劑改良經口、鼻、頰內、肺、陰道或角膜遞送模型之滲透性。在一些態樣中，滲透增強劑係脂肪酸或其衍生物。在一些態樣中，滲透增強劑係界面活性劑或其衍生物。在一些態樣中，滲透增強劑為膽汁鹽或其衍生物。在一些態樣中，滲透增強劑為螯合劑或其衍生物。在一些態樣中，滲透增強劑為非螯合非界面活性劑或其衍生物。在一些態樣中，滲透增強劑為酯或其衍生物。在一些態樣中，滲透增強劑為醚或其衍生物。在一些特定態樣中，滲透增強劑為二十碳四烯酸、十一酸、油酸、月桂酸、辛酸、癸酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、亞麻油酸、次亞麻油酸、二癸酸酯、三癸酸酯、單油酸甘油酯、二月桂酸甘油酯、1-單癸酸甘油酯、1-十二烷基氮雜環庚-2-酮、醯基肉鹼、醯基膽鹼或單甘油酯、二甘油酯或其醫藥學上可接受之鹽。在一個特定態樣中，滲透增強劑為癸酸鈉(C10)。在一些特定態樣中，滲透增強劑為鵝去氧膽酸(CDCA)、熊去氧鵝去氧膽酸(UDCA)、膽酸、去氫膽酸、去氧膽酸、麩胺膽酸、甘胺膽酸、甘胺去氧膽酸、牛膽酸、牛去氧膽酸、牛磺酸-24,25-二氫-褐黴酸鈉或二醇二氫褐黴酸鈉。在一些特定態樣中，滲透增強劑為聚氧伸乙基-9-十二基醚或聚氧伸乙基-20-十六基醚。
對於本文所描述之聚核苷酸分子，醫藥學上可接受之適合鹽包括(i)與陽離子(諸如鈉、鉀、銨、鎂、鈣)、多元胺(諸如精胺及亞精胺)等形成之鹽；(ii)與以下無機酸形成之酸加成鹽，例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸及其類似者；及(iii)與有機酸形成之鹽，諸如乙酸、草酸、酒石酸、丁二酸、順丁烯二酸、反丁烯二酸、葡萄糖酸、檸檬酸、蘋果酸、抗壞血酸、苯甲酸、鞣酸、棕櫚酸、褐藻酸、聚麩胺酸、萘磺酸酸、甲磺酸、對甲苯磺酸、萘二磺酸、聚半乳糖醛酸及其類似者。
雖然本文所描述之雜交聚核苷酸構築體可能不需要使用賦形劑來遞送至靶細胞，但賦形劑之使用在一些態樣中可為有利的。因此，為遞送至靶細胞，本文所描述之雜交聚核苷酸分子可非共價結合賦形劑以形成複合物。賦形劑可用於在遞送之後改變生物分佈、增強吸收、提高雜交聚核苷酸構築體中之股的半衰期或穩定性(例如提高核酸酶抗性)及/或提高對特定細胞或組織類型之靶向。
例示性賦形劑包括縮合劑(例如能夠經由離子或靜電相互作用吸引或結合核酸之試劑)；促融劑(例如能夠經由細胞膜融合及/或運輸之試劑)；靶向特定細胞或組織類型之蛋白質(例如促甲狀腺素、促黑素、凝集素、糖蛋白、界面活性劑蛋白A或任何其他蛋白質)；脂質；脂多糖；脂質微胞或脂質體((例如，由磷脂形成，諸如磷脂醯膽鹼、脂肪酸、糖脂、腦醯胺、甘油酯、膽固醇或其任何組合)；奈米粒子(例如二氧化矽、脂質、碳水化合物或其他醫藥學上可接受之聚合物奈米粒子)；由陽離子聚合物及陰離子劑(例如CRO)形成之聚合複合體，其中例示性陽離子聚合物包括多元胺(例如聚離胺酸、聚精胺酸、聚醯胺基胺及聚乙烯亞胺)；膽固醇；樹枝狀聚合物(例如聚醯胺基胺(PAMAM)樹枝狀聚合物)；血清蛋白質(例如人類血清白蛋白(HSA)或低密度脂蛋白(LDL))；碳水化合物(例如聚葡萄糖、普魯蘭(pullulan)、幾丁質(chitin)、聚葡萄胺糖、菊糖、環糊精或玻尿酸)；脂質；合成聚合物(例如聚離胺酸(PLL)、聚伸乙亞胺、聚-L-天冬胺酸、聚-L-麩胺酸、苯乙烯-順丁烯二酸酐共聚物、聚(L-丙交酯-共-乙醇酸)共聚物、二乙烯醚-順丁烯二酸酐共聚物、N-(2-羥丙基)甲基丙烯醯胺共聚物(HMPA)、聚乙二醇(PEG)、聚乙烯醇(PVA)、聚胺基甲酸酯、聚(2-乙基丙烯酸)、N-異丙基丙烯醯胺聚合物、偽肽-多元胺、 肽模擬物多元胺或多元胺)；陽離子部分(例如，陽離子型脂質、陽離子卟啉(porphyrin)、多元胺之四級鹽或α螺旋肽)；多價糖(例如，多價乳糖、多價半乳糖、N-乙醯基-半乳胺糖、N-乙醯基-葡糖胺、多價甘露糖或多價岩藻糖)；維生素(例如，維生素A、維生素E、維生素K、維生素B、葉酸、維生素B12、核黃素、生物素或吡哆醛)；輔因子；或破壞細胞骨架以增加吸收之藥物(例如，紫杉醇、長春新鹼、長春鹼、細胞遲緩素、諾考達唑(nocodazole)、傑普肯立德(japlakinolide)、紅海海綿素A (latrunculin A)、鬼筆環肽(phalloidin)、斯文霍立德A (swinholide A)、引達喏新(indanocine)或美瑟文(myoservin))。
如本文所描述之其他治療劑可與本文所描述之聚核苷酸分子組合包括於本文所描述之醫藥組合物中。 治療方法
在一些態樣中，本文描述調節個體之PCSK9基因之表現的方法，其包含：向該個體投與本文所描述之聚核酸分子、本文所描述之聚核酸分子結合物或本文所描述之醫藥組合物，藉此調節個體中PCSK9基因之表現。
在一些特定態樣中，相比於陰性對照，本文所描述之方法將個體中PCSK9基因之表現減少約或至少10%。在一些特定態樣中，相比於陰性對照，本文所描述之方法將個體中PCSK9基因之表現減少約或至少20%。在一些特定態樣中，相比於陰性對照，本文所描述之方法將個體中PCSK9基因之表現減少約或至少30%。在一些特定態樣中，相比於陰性對照，本文所描述之方法將個體中PCSK9基因之表現減少約或至少40%。在一些特定態樣中，相比於陰性對照，本文所描述之方法將個體中PCSK9基因之表現減少約或至少50%。在一些特定態樣中，相比於陰性對照，本文所描述之方法將個體中PCSK9基因之表現減少約或至少60%。在一些特定態樣中，相比於陰性對照，本文所描述之方法將個體中PCSK9基因之表現減少約或至少70%。在一些特定態樣中，相比於陰性對照，本文所描述之方法將個體中PCSK9基因之表現減少約或至少80%。在一些特定態樣中，相比於陰性對照，本文所描述之方法將個體中PCSK9基因之表現減少約或至少90%。在一些特定態樣中，相比於陰性對照，本文所描述之方法將個體中PCSK9基因之表現減少約100%。
在一些特定態樣中，本文所描述之方法達成約5 nM之IC50值。在一些特定態樣中，本文所描述之方法達成約10 nM之IC50值。在一些特定態樣中，本文所描述之方法達成約15 nM之IC50值。在一些特定態樣中，本文所描述之方法達成約20 nM之IC50值。在一些特定態樣中，本文所描述之方法達成約25 nM之IC50值。在一些特定態樣中，本文所描述之方法達成約30 nM之IC50值。在一些特定態樣中，本文所描述之方法達成約35 nM之IC50值。在一些特定態樣中，本文所描述之方法達成約40 nM之IC50值。在一些特定態樣中，本文所描述之方法達成約45 nM之IC50值。在一些特定態樣中，本文所描述之方法達成約50 nM之IC50值。在一些特定態樣中，本文所描述之方法達成約55 nM之IC50值。在一些特定態樣中，本文所描述之方法達成約60 nM之IC50值。在一些特定態樣中，本文所描述之方法達成約65 nM之IC50值。在一些特定態樣中，本文所描述之方法達成約70 nM之IC50值。在一些特定態樣中，本文所描述之方法達成約75 nM之IC50值。在一些特定態樣中，本文所描述之方法達成約80 nM之IC50值。在一些特定態樣中，本文所描述之方法達成約85 nM之IC50值。在一些特定態樣中，本文所描述之方法達成約90 nM之IC50值。在一些特定態樣中，本文所描述之方法達成約95 nM之IC50值。在一些特定態樣中，本文所描述之方法達成約100 nM之IC50值。
在一些態樣中，本文描述調節有需要之個體之LDL的方法，其包含向個體投與本文所描述之聚核酸分子、本文所描述之聚核酸分子結合物或本文所描述之醫藥組合物，其中本文所描述之聚核酸分子、本文所描述之聚核酸分子結合物或本文所描述之醫藥組合物降低個體中之PCSK9基因表現。
在一些特定態樣中，本文所描述之方法與陰性對照相比將個體中之LDL含量降低約或至少10%。在一些特定態樣中，本文所描述之方法與陰性對照相比將個體中之LDL含量降低約或至少20%。在一些特定態樣中，本文所描述之方法與陰性對照相比將個體中之LDL含量降低約或至少30%。在一些特定態樣中，本文所描述之方法與陰性對照相比將個體中之LDL含量降低約或至少40%。在一些特定態樣中，本文所描述之方法與陰性對照相比將個體中之LDL含量降低約或至少50%。在一些特定態樣中，本文所描述之方法與陰性對照相比將個體中之LDL含量降低約或至少60%。在一些特定態樣中，本文所描述之方法與陰性對照相比將個體中之LDL含量降低約或至少70%。在一些特定態樣中，本文所描述之方法與陰性對照相比將個體中之LDL含量降低約或至少80%。在一些特定態樣中，本文所描述之方法與陰性對照相比將個體中之LDL含量降低約或至少90%。在一些特定態樣中，本文所描述之方法與陰性對照相比將個體中之LDL含量降低約100%。
在一些態樣中，接受本文所描述之方法之個體罹患高膽固醇血症。在一些特定實施例中，接受本文所描述之方法之個體罹患家族性高膽固醇血症。在其他態樣中，接受本文所描述之方法之個體罹患其他高膽固醇相關疾病。在其他態樣中，接受本文所描述之方法之個體罹患神經發炎。在其他態樣中，接受本文所描述方法之個體罹患阿茲海默症。在其他態樣中，接受本文所描述之方法之個體罹患AUD。在其他態樣中，接受本文所描述之方法之個體罹患中風。
在一些態樣中，本文描述調節有需要之個體之膽固醇的方法，其包含向個體投與本文所描述之聚核酸分子、本文所描述之聚核酸分子結合物或本文所描述之醫藥組合物，其中本文所描述之聚核酸分子、本文所描述之聚核酸分子結合物或本文所描述之醫藥組合物降低個體中之PCSK9基因表現。
在一些特定態樣中，本文所描述之方法與陰性對照相比將個體中之膽固醇含量降低約或至少10%。在一些特定態樣中，本文所描述之方法與陰性對照相比將個體中之膽固醇含量降低約或至少20%。在一些特定態樣中，本文所描述之方法與陰性對照相比將個體中之膽固醇含量降低約或至少30%。在一些特定態樣中，本文所描述之方法與陰性對照相比將個體中之膽固醇含量降低約或至少40%。在一些特定態樣中，本文所描述之方法與陰性對照相比將個體中之膽固醇含量降低約或至少50%。在一些特定態樣中，本文所描述之方法與陰性對照相比將個體中之膽固醇含量降低約或至少60%。在一些特定態樣中，本文所描述之方法與陰性對照相比將個體中之膽固醇含量降低約或至少70%。在一些特定態樣中，本文所描述之方法與陰性對照相比將個體中之膽固醇含量降低約或至少80%。在一些特定態樣中，本文所描述之方法與陰性對照相比將個體中之膽固醇含量降低約或至少90%。在一些特定態樣中，本文所描述之方法與陰性對照相比將個體中之膽固醇含量降低約100%。
在一些態樣中，接受本文所描述之方法之個體罹患高膽固醇血症。在一些特定實施例中，接受本文所描述之方法之個體罹患家族性高膽固醇血症。在其他態樣中，接受本文所描述之方法之個體罹患其他高膽固醇相關疾病。在其他態樣中，接受本文所描述之方法之個體罹患神經發炎。在其他態樣中，接受本文所描述方法之個體罹患阿茲海默症。在其他態樣中，接受本文所描述之方法之個體罹患AUD。在其他態樣中，接受本文所描述之方法之個體罹患中風。 實例
此等實例僅出於說明之目的提供且不限制本文所提供之申請專利範圍之範疇。 實例 1 - 在非人類靈長類中測試 PCSK9 siRNA
在非人類靈長類動物研究中測試五種PCSK9 siRNA (在 表 1中表示為「SRS-001」至「SRS-005」)，其中靶向PCSK9之已知siRNA (在 表 1中表示為「SRS-006」)作為基準。 表 1 在非人類靈長類動物中測試之 siRNA 序列
在 siRNA 轉染之後剩餘的 % GalNAc - siRNA 之後剩餘的 %
siRNA ID# 股 SEQ ID # 未經修飾之序列 (5' — 3') 100pM 1nM 10nM 10nM 100nM 500nM SEQ ID # 經修飾之序列 (5 ' — 3 ' )
SRS-001 有義 1          AGACCUGUUUUGCUUUUGUAA 30 8 7 69 72 48 13       asgsaccuGfuUfuUfgcuuuuguaa
SRS-001 反義 2          UUACAAAAGCAAAACAGGUCUAG                   14       usUfsacaaaagcaAfaAfcAfggucusasg
SRS-002 有義 3          UUUUGCUUUUGUAACUUGAAA 25 8 4 15       ususuugcUfuUfuGfuaacuugaaa
SRS-002 反義 4          UUUCAAGUUACAAAAGCAAAACA 16       usUfsucaaguuacAfaAfaGfcaaaascsa
SRS-003 有義 5          CUUUUGUAACUUGAAGAUAUU 14 7 3 63 36 35 17       csusuuugUfaAfcUfugaagauauu
SRS-003 反義 6          AAUAUCUUCAAGUUACAAAAGCA    18       asAfsuaucuucaaGfuUfaCfaaaagscsa
SRS-004 有義 7          UUUUGUAGCAUUUUUAUUAAU 27 8 6 68 63 68 19       ususuuguAfgCfaUfuuuuauuaau
SRS-004 反義 8          AUUAAUAAAAAUGCUACAAAACC 20       asUfsuaauaaaaaUfgCfuAfcaaaascsc
SRS-005 有義 9          UUGUAGCAUUUUUAUUAAUAU 26 4 3 21       ususguagCfaUfuUfuuauuaauau
SRS-005 反義 10       AUAUUAAUAAAAAUGCUACAAAA 22       asUfsauuaauaaaAfaUfgCfuacaasasa
SRS-006 有義 11       CUAGACCUGUTUUGCUUUUGU 83 64 52 23       csusagacCfuGfudTuugcuuuugu
SRS-006 反義 12       ACAAAAGCAAAACAGGUCUAGAA 24       asCfsaAfAfAfgCfaAfaAfcAfgGfuCfuagsasa
關於「經修飾之序列」欄的備註：「A」係指腺苷-3'-磷酸酯；「a」係指2'-O-甲基腺苷-3'-磷酸酯；「Af」係指2'-氟腺苷-3'-磷酸酯；「dA」係指2'-去氧腺苷-3-磷酸酯；「C」係指胞苷-3'-磷酸酯；「c」係指2'-O-甲基胞啶-3'-磷酸酯；「Cf」係指2'-氟胞苷-3'-磷酸酯；「dC」係指2'-去氧胞苷-3'-磷酸酯；「G」係指鳥苷-3'-磷酸酯；「g」係指2'-O-甲基鳥苷-3'-磷酸酯；「Gf」係指2'-氟鳥苷-3'-磷酸酯；「dG」係指2'-去氧鳥苷-3'-磷酸酯；「U」係指尿苷-3'-磷酸酯；「u」係指2'-O-甲基尿苷-3'-磷酸酯；「Uf」係指2'-氟尿苷-3'-磷酸酯；「T」係指5-甲基尿苷-3'-磷酸酯；「t」係指2'-O-甲基-5-甲基尿苷-3'-磷酸酯；「Tf」係指2'-氟-5-甲基尿苷-3'-磷酸酯；「dT」係指2'-去氧胸苷-3'-磷酸酯；「s」係指3'-硫代磷酸酯。
如 圖 1A至 圖 1J中所繪示，以SRS-006作為對照，對SRS-001至SRS-005進行測試，且監測血清PCSK9表現量、LDL-c含量、總膽固醇含量、三酸甘油酯含量及HDL-c含量且相較於給藥前含量進行量化。亦監測其他臨床標記(例如體重、食物攝入、總能量攝入、臨床化學、全血球計數(CBC)、動物訓練、籠側觀察及臨床行為檢查等)。特定言之，臨床化學用以下參數剖析：GLU、INS、Cr、BUN、AST、ALT、ALB、BIL、Ca、PHOS、ALP、GGT、TP、CO2、CK、Na、K、CL、GLB及A/G。對於WBC、RBC、HGB、HCT、MCV、MCH、MCHC、PLT、RDW-CV、MPV、NEUT、NEUT%、LYMP、LYMP%、MONO、MONO%、EO、EO%、BASO及BASO%進行CBC。臨床行為檢查之例示性項目包括全身性外觀、呼吸情況、尿情況、牙齒情況、眼睛情況、消化系統情況、生殖器及會陰情況、皮膚及毛皮情況、行為及神經徵象、口腔情況、嘴部情況、耳情況、鼻情況、攝入情況、肌肉情況、背部情況、關節情況、骨骼情況及四肢。觀測到血清PCSK9蛋白質含量、LDL-c含量及總膽固醇含量之降低。具體而言，SRS-001及SRS-002有效地降低PCSK9蛋白質含量、LDLc含量及總膽固醇含量。 實例 2 - 靶向 PCSK9 之 siRNA 的活體外功效
將來自BioreclamationIVT之初代非人類肝細胞解凍且以5.4×10 5個細胞/孔之密度接種於膠原蛋白塗佈之96孔盤上。肝細胞在轉染試劑不存在下用結合之siRNA處理(自由吸收)。用濃度為10 nM、100 nM或500 nM之siRNA處理細胞。細胞在37℃、5% CO 2下培育48小時。在培育期結束時，溶解細胞，分離mRNA，且靶基因之表現藉由qPCR量測且使用標準方案針對管家基因標準化。
所測試之siRNA之有義股及反義股的修飾列於 表 2中。siRNA之活體外效力列於 表 3中。 表 2 所測試之 siRNA 之序列及修飾
Cmpd ID SEQ ID No. 有義 (5'-＞3') 未經修飾之序列 SEQ ID No. 有義 (5'-＞3') 經修飾之序列： SEQ ID No. 反義 (5'-＞3') 未經修飾之序列 SEQ ID No. 反義 (5'-＞3') 經修飾之序列
PCSK9-1727-23 25          CCUCACCAAGAUCCUGCAUGU 128       cscsucacCaAGAuccugcaugu 231       ACAUGCAGGAUCUUGGUGAGGUA 334       asCsaugcAggauCuUgGugaggsusa
PCSK9-1397-23 26          CACCAAGAUCCUGCAUGUCUU 129       csasccaaGaUCCugcaugucuu 232       AAGACAUGCAGGAUCUUGGUGAG 335       asAsgacaUgcagGaUcUuggugsasg
PCSK9-1130-23 27          CAAGAUCCUGCAUGUCUUCCA 130       csasagauCcUGCaugucuucca 233       UGGAAGACAUGCAGGAUCUUGGU 336       usGsgaagAcaugCaGgAucuugsgsu
PCSK9-640-23 28          UCCUGGCUUCCUGGUGAAGAU 131       uscscuggCuUCCuggugaagau 234       AUCUUCACCAGGAAGCCAGGAAG 337       asUscuucAccagGaAgCcaggasasg
PCSK9-5061-23 29          CUGGCUUCCUGGUGAAGAUGA 132       csusggcuUcCUGgugaagauga 235       UCAUCUUCACCAGGAAGCCAGGA 338       usCsaucuUcaccAgGaAgccagsgsa
PCSK9-1632-23 30          GGCUUCCUGGUGAAGAUGAGU 133       gsgscuucCuGGUgaagaugagu 236       ACUCAUCUUCACCAGGAAGCCAG 339       asCsucauCuucaCcAgGaagccsasg
PCSK9-4248-23 31          GCUUCCUGGUGAAGAUGAGUG 134       gscsuuccUgGUGaagaugagug 237       CACUCAUCUUCACCAGGAAGCCA 340       csAscucaUcuucAcCaGgaagcscsa
PCSK9-3564-23 32          UGGAGCUGGCCUUGAAGUUGC 135       usgsgagcUgGCCuugaaguugc 238       GCAACUUCAAGGCCAGCUCCAGC 341       gsCsaacuUcaagGcCaGcuccasgsc
PCSK9-3165-23 33          AGUUGCCCCAUGUCGACUACA 136       asgsuugcCcCAUgucgacuaca 239       UGUAGUCGACAUGGGGCAACUUC 342       usGsuaguCgacaUgGgGcaacususc
PCSK9-1933-23 34          UGCCCCAUGUCGACUACAUCG 137       usgsccccAuGUCgacuacaucg 240       CGAUGUAGUCGACAUGGGGCAAC 343       csGsauguAgucgAcAuGgggcasasc
PCSK9-4901-23 35          CGGUACCGGGCGGAUGAAUAC 138       csgsguacCgGGCggaugaauac 241       GUAUUCAUCCGCCCGGUACCGUG 344       gsUsauucAuccgCcCgGuaccgsusg
PCSK9-1021-23 36          GGUACCGGGCGGAUGAAUACC 139       gsgsuaccGgGCGgaugaauacc 242       GGUAUUCAUCCGCCCGGUACCGU 345       gsGsuauuCauccGcCcGguaccsgsu
PCSK9-1977-23 37          GGCAGCCUGGUGGAGGUGUAU 140       gsgscagcCuGGUggagguguau 243       AUACACCUCCACCAGGCUGCCUC 346       asUsacacCuccaCcAgGcugccsusc
PCSK9-727-23 38          CAGCCUGGUGGAGGUGUAUCU 141       csasgccuGgUGGagguguaucu 244       AGAUACACCUCCACCAGGCUGCC 347       asGsauacAccucCaCcAggcugscsc
PCSK9-2305-23 39          AGCCUGGUGGAGGUGUAUCUC 142       asgsccugGuGGAgguguaucuc 245       GAGAUACACCUCCACCAGGCUGC 348       gsAsgauaCaccuCcAcCaggcusgsc
PCSK9-1330-23 40          GCCUGGUGGAGGUGUAUCUCC 143       gscscuggUgGAGguguaucucc 246       GGAGAUACACCUCCACCAGGCUG 349       gsGsagauAcaccUcCaCcaggcsusg
PCSK9-2942-23 41          GUAUCUCCUAGACACCAGCAU 144       gsusaucuCcUAGacaccagcau 247       AUGCUGGUGUCUAGGAGAUACAC 350       asUsgcugGugucUaGgAgauacsasc
PCSK9-3862-23 42          AUCUCCUAGACACCAGCAUAC 145       asuscuccUaGACaccagcauac 248       GUAUGCUGGUGUCUAGGAGAUAC 351       gsUsaugcUggugUcUaGgagausasc
PCSK9-1225-23 43          UCCUAGACACCAGCAUACAGA 146       uscscuagAcACCagcauacaga 249       UCUGUAUGCUGGUGUCUAGGAGA 352       usCsuguaUgcugGuGuCuaggasgsa
PCSK9-2328-23 44          CUAGACACCAGCAUACAGAGU 147       csusagacAcCAGcauacagagu 250       ACUCUGUAUGCUGGUGUCUAGGA 353       asCsucugUaugcUgGuGucuagsgsa
PCSK9-4494-23 45          AUGGUCACCGACUUCGAGAAU 148       asusggucAcCGAcuucgagaau 251       AUUCUCGAAGUCGGUGACCAUGA 354       asUsucucGaaguCgGuGaccausgsa
PCSK9-2108-23 46          UCACCGACUUCGAGAAUGUGC 149       uscsaccgAcUUCgagaaugugc 252       GCACAUUCUCGAAGUCGGUGACC 355       gsCsacauUcucgAaGuCggugascsc
PCSK9-1532-23 47          CCUCAUAGGCCUGGAGUUUAU 150       cscsucauAgGCCuggaguuuau 253       AUAAACUCCAGGCCUAUGAGGGU 356       asUsaaacUccagGcCuAugaggsgsu
PCSK9-3158-23 48          GGCCUGGAGUUUAUUCGGAAA 151       gsgsccugGaGUUuauucggaaa 254       UUUCCGAAUAAACUCCAGGCCUA 357       usUsuccgAauaaAcUcCaggccsusa
PCSK9-2966-23 49          GCCUGGAGUUUAUUCGGAAAA 152       gscscuggAgUUUauucggaaaa 255       UUUUCCGAAUAAACUCCAGGCCU 358       usUsuuccGaauaAaCuCcaggcscsu
PCSK9-3514-23 50          UUGUGUCACAGAGUGGGACAU 153       ususguguCaCAGagugggacau 256       AUGUCCCACUCUGUGACACAAAG 359       asUsguccCacucUgUgAcacaasasg
PCSK9-3369-23 51          CUGAUCCACUUCUCUGCCAAA 154       csusgaucCaCUUcucugccaaa 257       UUUGGCAGAGAAGUGGAUCAGUC 360       usUsuggcAgagaAgUgGaucagsusc
PCSK9-109-23 52          AUCCACUUCUCUGCCAAAGAU 155       asusccacUuCUCugccaaagau 258       AUCUUUGGCAGAGAAGUGGAUCA 361       asUscuuuGgcagAgAaGuggauscsa
PCSK9-821-23 53          UCUCUGCCAAAGAUGUCAUCA 156       uscsucugCcAAAgaugucauca 259       UGAUGACAUCUUUGGCAGAGAAG 362       usGsaugaCaucuUuGgCagagasasg
PCSK9-4228-23 54          UGUCAUCAAUGAGGCCUGGUU 157       usgsucauCaAUGaggccugguu 260       AACCAGGCCUCAUUGAUGACAUC 363       asAsccagGccucAuUgAugacasusc
PCSK9-4399-23 55          AGCUGUUUUGCAGGACUGUAU 158       asgscuguUuUGCaggacuguau 261       AUACAGUCCUGCAAAACAGCUGC 364       asUsacagUccugCaAaAcagcusgsc
PCSK9-4785-23 56          CUGUUUUGCAGGACUGUAUGG 159       csusguuuUgCAGgacuguaugg 262       CCAUACAGUCCUGCAAAACAGCU 365       csCsauacAguccUgCaAaacagscsu
PCSK9-1885-23 57          GGACUGUAUGGUCAGCACACU 160       gsgsacugUaUGGucagcacacu 263       AGUGUGCUGACCAUACAGUCCUG 366       asGsugugCugacCaUaCaguccsusg
PCSK9-3131-23 58          ACUGUAUGGUCAGCACACUCG 161       ascsuguaUgGUCagcacacucg 264       CGAGUGUGCUGACCAUACAGUCC 367       csGsagugUgcugAcCaUacaguscsc
PCSK9-3374-23 59          CCCAGGUCUGGAAUGCAAAGU 162       cscscaggUcUGGaaugcaaagu 265       ACUUUGCAUUCCAGACCUGGGGC 368       asCsuuugCauucCaGaCcugggsgsc
PCSK9-4465-23 60          UCUGGAAUGCAAAGUCAAGGA 163       uscsuggaAuGCAaagucaagga 266       UCCUUGACUUUGCAUUCCAGACC 369       usCscuugAcuuuGcAuUccagascsc
PCSK9-4027-23 61          UAGACAACACGUGUGUAGUCA 164       usasgacaAcACGuguguaguca 267       UGACUACACACGUGUUGUCUACG 370       usGsacuaCacacGuGuUgucuascsg
PCSK9-1571-23 62          CUGGGGCUGAGCUUUAAAAUG 165       csusggggCuGAGcuuuaaaaug 268       CAUUUUAAAGCUCAGCCCCAGCC 371       csAsuuuuAaagcUcAgCcccagscsc
PCSK9-1750-23 63          UGGGGCUGAGCUUUAAAAUGG 166       usgsgggcUgAGCuuuaaaaugg 269       CCAUUUUAAAGCUCAGCCCCAGC 372       csCsauuuUaaagCuCaGccccasgsc
PCSK9-4079-23 64          GGGGCUGAGCUUUAAAAUGGU 167       gsgsggcuGaGCUuuaaaauggu 270       ACCAUUUUAAAGCUCAGCCCCAG 373       asCscauuUuaaaGcUcAgccccsasg
PCSK9-3172-23 65          GGGCUGAGCUUUAAAAUGGUU 168       gsgsgcugAgCUUuaaaaugguu 271       AACCAUUUUAAAGCUCAGCCCCA 374       asAsccauUuuaaAgCuCagcccscsa
PCSK9-4788-23 66          GGCUGAGCUUUAAAAUGGUUC 169       gsgscugaGcUUUaaaaugguuc 272       GAACCAUUUUAAAGCUCAGCCCC 375       gsAsaccaUuuuaAaGcUcagccscsc
PCSK9-4139-23 67          AGCUUUAAAAUGGUUCCGACU 170       asgscuuuAaAAUgguuccgacu 273       AGUCGGAACCAUUUUAAAGCUCA 376       asGsucggAaccaUuUuAaagcuscsa
PCSK9-5009-23 68          GCUUUAAAAUGGUUCCGACUU 171       gscsuuuaAaAUGguuccgacuu 274       AAGUCGGAACCAUUUUAAAGCUC 377       asAsgucgGaaccAuUuUaaagcsusc
PCSK9-317-23 69          UUUAAAAUGGUUCCGACUUGU 172       ususuaaaAuGGUuccgacuugu 275       ACAAGUCGGAACCAUUUUAAAGC 378       asCsaaguCggaaCcAuUuuaaasgsc
PCSK9-3286-23 70          UGCUGGCCUGGCCCUUGAGUG 173       usgscuggCcUGGcccuugagug 276       CACUCAAGGGCCAGGCCAGCAGC 379       csAscucaAgggcCaGgCcagcasgsc
PCSK9-2619-23 71          GCUGGCCUGGCCCUUGAGUGG 174       gscsuggcCuGGCccuugagugg 277       CCACUCAAGGGCCAGGCCAGCAG 380       csCsacucAagggCcAgGccagcsasg
PCSK9-3186-23 72          CCCUCACUGUGGGGCAUUUCA 175       cscscucaCuGUGgggcauuuca 278       UGAAAUGCCCCACAGUGAGGGAG 381       usGsaaauGccccAcAgUgagggsasg
PCSK9-11-23 73          CACUGUGGGGCAUUUCACCAU 176       csascuguGgGGCauuucaccau 279       AUGGUGAAAUGCCCCACAGUGAG 382       asUsggugAaaugCcCcAcagugsasg
PCSK9-840-23 74          CUGUGGGGCAUUUCACCAUUC 177       csusguggGgCAUuucaccauuc 280       GAAUGGUGAAAUGCCCCACAGUG 383       gsAsauggUgaaaUgCcCcacagsusg
PCSK9-404-23 75          UGGGGCAUUUCACCAUUCAAA 178       usgsgggcAuUUCaccauucaaa 281       UUUGAAUGGUGAAAUGCCCCACA 384       usUsugaaUggugAaAuGccccascsa
PCSK9-26-23 76          GCAUUUCACCAUUCAAACAGG 179       gscsauuuCaCCAuucaaacagg 282       CCUGUUUGAAUGGUGAAAUGCCC 385       csCsuguuUgaauGgUgAaaugcscsc
PCSK9-4467-23 77          UUUAUUGAGCUCUUGUUCCGU 180       ususuauuGaGCUcuuguuccgu 283       ACGGAACAAGAGCUCAAUAAAAG 386       asCsggaaCaagaGcUcAauaaasasg
PCSK9-1934-23 78          CCCUCAUCUCCAGCUAACUGU 181       cscscucaUcUCCagcuaacugu 284       ACAGUUAGCUGGAGAUGAGGGCC 387       asCsaguuAgcugGaGaUgagggscsc
PCSK9-1370-23 79          ACUGAGCCAGAAACGCAGAUU 182       ascsugagCcAGAaacgcagauu 285       AAUCUGCGUUUCUGGCUCAGUUC 388       asAsucugCguuuCuGgCucagususc
PCSK9-3338-23 80          UGAGCCAGAAACGCAGAUUGG 183       usgsagccAgAAAcgcagauugg 286       CCAAUCUGCGUUUCUGGCUCAGU 389       csCsaaucUgcguUuCuGgcucasgsu
PCSK9-4804-23 81          GAAGCCAAGCCUCUUCUUACU 184       gsasagccAaGCCucuucuuacu 287       AGUAAGAAGAGGCUUGGCUUCAG 390       asGsuaagAagagGcUuGgcuucsasg
PCSK9-1098-23 82          AGCCAAGCCUCUUCUUACUUC 185       asgsccaaGcCUCuucuuacuuc 288       GAAGUAAGAAGAGGCUUGGCUUC 391       gsAsaguaAgaagAgGcUuggcususc
PCSK9-1350-23 83          CCCAAGCAAGCAGACAUUUAU 186       cscscaagCaAGCagacauuuau 289       AUAAAUGUCUGCUUGCUUGGGUG 392       asUsaaauGucugCuUgCuugggsusg
PCSK9-5305-23 84          CCAAGCAAGCAGACAUUUAUC 187       cscsaagcAaGCAgacauuuauc 290       GAUAAAUGUCUGCUUGCUUGGGU 393       gsAsuaaaUgucuGcUuGcuuggsgsu
PCSK9-478-23 85          UUUUGGGUCUGUCCUCUCUGU 188       ususuuggGuCUGuccucucugu 291       ACAGAGAGGACAGACCCAAAAGA 394       asCsagagAggacAgAcCcaaaasgsa
PCSK9-4369-23 86          UCUGUCCUCUCUGUUGCCUUU 189       uscsugucCuCUCuguugccuuu 292       AAAGGCAACAGAGAGGACAGACC 395       asAsaggcAacagAgAgGacagascsc
PCSK9-2723-23 87          CUGUCCUCUCUGUUGCCUUUU 190       csusguccUcUCUguugccuuuu 293       AAAAGGCAACAGAGAGGACAGAC 396       asAsaaggCaacaGaGaGgacagsasc
PCSK9-1688-23 88          UGUCCUCUCUGUUGCCUUUUU 191       usgsuccuCuCUGuugccuuuuu 294       AAAAAGGCAACAGAGAGGACAGA 397       asAsaaagGcaacAgAgAggacasgsa
PCSK9-84-23 89          GUCCUCUCUGUUGCCUUUUUA 192       gsusccucUcUGUugccuuuuua 295       UAAAAAGGCAACAGAGAGGACAG 398       usAsaaaaGgcaaCaGaGaggacsasg
PCSK9-3495-23 90          CCUCUCUGUUGCCUUUUUACA 193       cscsucucUgUUGccuuuuuaca 296       UGUAAAAAGGCAACAGAGAGGAC 399       usGsuaaaAaggcAaCaGagaggsasc
PCSK9-2744-23 91          GUUGCCUUUUUACAGCCAACU 194       gsusugccUuUUUacagccaacu 297       AGUUGGCUGUAAAAAGGCAACAG 400       asGsuuggCuguaAaAaGgcaacsasg
PCSK9-5036-23 92          UGCCUUUUUACAGCCAACUUU 195       usgsccuuUuUACagccaacuuu 298       AAAGUUGGCUGUAAAAAGGCAAC 401       asAsaguuGgcugUaAaAaggcasasc
PCSK9-1674-23 93          CCUUUUUACAGCCAACUUUUC 196       cscsuuuuUaCAGccaacuuuuc 299       GAAAAGUUGGCUGUAAAAAGGCA 402       gsAsaaagUuggcUgUaAaaaggscsa
PCSK9-4557-23 94          UUUUACAGCCAACUUUUCUAG 197       ususuuacAgCCAacuuuucuag 300       CUAGAAAAGUUGGCUGUAAAAAG 403       csUsagaaAaguuGgCuGuaaaasasg
PCSK9-1813-23 95          GCCAACUUUUCUAGACCUGUU 198       gscscaacUuUUCuagaccuguu 301       AACAGGUCUAGAAAAGUUGGCUG 404       asAscaggUcuagAaAaGuuggcsusg
PCSK9-4497-23 96          CCAACUUUUCUAGACCUGUUU 199       cscsaacuUuUCUagaccuguuu 302       AAACAGGUCUAGAAAAGUUGGCU 405       asAsacagGucuaGaAaAguuggscsu
PCSK9-2871-23 97          CAACUUUUCUAGACCUGUUUU 200       csasacuuUuCUAgaccuguuuu 303       AAAACAGGUCUAGAAAAGUUGGC 406       asAsaacaGgucuAgAaAaguugsgsc
PCSK9-2000-23 98          ACUUUUCUAGACCUGUUUUGC 201       ascsuuuuCuAGAccuguuuugc 304       GCAAAACAGGUCUAGAAAAGUUG 407       gsCsaaaaCagguCuAgAaaagususg
PCSK9-47-23 99          UUUUCUAGACCUGUUUUGCUU 202       ususuucuAgACCuguuuugcuu 305       AAGCAAAACAGGUCUAGAAAAGU 408       asAsgcaaAacagGuCuAgaaaasgsu
PCSK9-1000-23 100       UUUCUAGACCUGUUUUGCUUU 203       ususucuaGaCCUguuuugcuuu 306       AAAGCAAAACAGGUCUAGAAAAG 409       asAsagcaAaacaGgUcUagaaasasg
PCSK9-4329-23 101       UCUAGACCUGUUUUGCUUUUG 204       uscsuagaCcUGUuuugcuuuug 307       CAAAAGCAAAACAGGUCUAGAAA 410       csAsaaagCaaaaCaGgUcuagasasa
PCSK9-4826-23 102       CUAGACCUGUUUUGCUUUUGU 205       csusagacCuGUUuugcuuuugu 308       ACAAAAGCAAAACAGGUCUAGAA 411       asCsaaaaGcaaaAcAgGucuagsasa
PCSK9-460-23 103       UAGACCUGUUUUGCUUUUGUA 206       usasgaccUgUUUugcuuuugua 309       UACAAAAGCAAAACAGGUCUAGA 412       usAscaaaAgcaaAaCaGgucuasgsa
PCSK9-2614-23 104       AGACCUGUUUUGCUUUUGUAA 207       asgsaccuGuUUUgcuuuuguaa 310       UUACAAAAGCAAAACAGGUCUAG 413       usUsacaaAagcaAaAcAggucusasg
PCSK9-3284-23 105       GACCUGUUUUGCUUUUGUAAC 208       gsasccugUuUUGcuuuuguaac 311       GUUACAAAAGCAAAACAGGUCUA 414       gsUsuacaAaagcAaAaCaggucsusa
PCSK9-1766-23 106       ACCUGUUUUGCUUUUGUAACU 209       ascscuguUuUGCuuuuguaacu 312       AGUUACAAAAGCAAAACAGGUCU 415       asGsuuacAaaagCaAaAcagguscsu
PCSK9-3250-23 107       CUGUUUUGCUUUUGUAACUUG 210       csusguuuUgCUUuuguaacuug 313       CAAGUUACAAAAGCAAAACAGGU 416       csAsaguuAcaaaAgCaAaacagsgsu
PCSK9-2699-23 108       GUUUUGCUUUUGUAACUUGAA 211       gsusuuugCuUUUguaacuugaa 314       UUCAAGUUACAAAAGCAAAACAG 417       usUscaagUuacaAaAgCaaaacsasg
PCSK9-2531-23 109       UUUGCUUUUGUAACUUGAAGA 212       ususugcuUuUGUaacuugaaga 315       UCUUCAAGUUACAAAAGCAAAAC 418       usCsuucaAguuaCaAaAgcaaasasc
PCSK9-1601-23 110       UUGCUUUUGUAACUUGAAGAU 213       ususgcuuUuGUAacuugaagau 316       AUCUUCAAGUUACAAAAGCAAAA 419       asUscuucAaguuAcAaAagcaasasa
PCSK9-1877-23 111       CUUUUGUAACUUGAAGAUAUU 214       csusuuugUaACUugaagauauu 317       AAUAUCUUCAAGUUACAAAAGCA 420       asAsuaucUucaaGuUaCaaaagscsa
PCSK9-4491-23 112       UUUUGUAACUUGAAGAUAUUU 215       ususuuguAaCUUgaagauauuu 318       AAAUAUCUUCAAGUUACAAAAGC 421       asAsauauCuucaAgUuAcaaaasgsc
PCSK9-3424-23 113       UUUGUAACUUGAAGAUAUUUA 216       ususuguaAcUUGaagauauuua 319       UAAAUAUCUUCAAGUUACAAAAG 422       usAsaauaUcuucAaGuUacaaasasg
PCSK9-2041-23 114       UAACUUGAAGAUAUUUAUUCU 217       usasacuuGaAGAuauuuauucu 320       AGAAUAAAUAUCUUCAAGUUACA 423       asGsaauaAauauCuUcAaguuascsa
PCSK9-3270-23 115       AACUUGAAGAUAUUUAUUCUG 218       asascuugAaGAUauuuauucug 321       CAGAAUAAAUAUCUUCAAGUUAC 424       csAsgaauAaauaUcUuCaaguusasc
PCSK9-976-23 116       AAGAUAUUUAUUCUGGGUUUU 219       asasgauaUuUAUucuggguuuu 322       AAAACCCAGAAUAAAUAUCUUCA 425       asAsaaccCagaaUaAaUaucuuscsa
PCSK9-1652-23 117       AGAUAUUUAUUCUGGGUUUUG 220       asgsauauUuAUUcuggguuuug 323       CAAAACCCAGAAUAAAUAUCUUC 426       csAsaaacCcagaAuAaAuaucususc
PCSK9-4408-23 118       AUAUUUAUUCUGGGUUUUGUA 221       asusauuuAuUCUggguuuugua 324       UACAAAACCCAGAAUAAAUAUCU 427       usAscaaaAcccaGaAuAaauauscsu
PCSK9-1023-23 119       UAUUUAUUCUGGGUUUUGUAG 222       usasuuuaUuCUGgguuuuguag 325       CUACAAAACCCAGAAUAAAUAUC 428       csUsacaaAacccAgAaUaaauasusc
PCSK9-998-23 120       UUCUGGGUUUUGUAGCAUUUU 223       ususcuggGuUUUguagcauuuu 326       AAAAUGCUACAAAACCCAGAAUA 429       asAsaaugCuacaAaAcCcagaasusa
PCSK9-2616-23 121       GGUUUUGUAGCAUUUUUAUUA 224       gsgsuuuuGuAGCauuuuuauua 327       UAAUAAAAAUGCUACAAAACCCA 430       usAsauaaAaaugCuAcAaaaccscsa
PCSK9-4780-23 122       GUUUUGUAGCAUUUUUAUUAA 225       gsusuuugUaGCAuuuuuauuaa 328       UUAAUAAAAAUGCUACAAAACCC 431       usUsaauaAaaauGcUaCaaaacscsc
PCSK9-1644-23 123       UUUUGUAGCAUUUUUAUUAAU 226       ususuuguAgCAUuuuuauuaau 329       AUUAAUAAAAAUGCUACAAAACC 432       asUsuaauAaaaaUgCuAcaaaascsc
PCSK9-4430-23 124       AUUUUUAUUAAUAUGGUGACU 227       asusuuuuAuUAAuauggugacu 330       AGUCACCAUAUUAAUAAAAAUGC 433       asGsucacCauauUaAuAaaaausgsc
PCSK9-1274-23 125       UUUUUAUUAAUAUGGUGACUU 228       ususuuuaUuAAUauggugacuu 331       AAGUCACCAUAUUAAUAAAAAUG 434       asAsgucaCcauaUuAaUaaaaasusg
PCSK9-2790-23 126       UUUUGCUUUUGUAACUUGAAG 229       ususuugcUuUUGuaacuugaag 332       CUUCAAGUUACAAAAGCAAAACA 435       csUsucaaGuuacAaAaGcaaaascsa
PCSK9-5328-23 127       UUGUAGCAUUUUUAUUAAUAU 230       ususguagCaUUUuuauuaauau 333       AUAUUAAUAAAAAUGCUACAAAA 436       asUsauuaAuaaaAaUgCuacaasasa
備註(僅應用於表2中經修飾之序列)：(s)=3'-硫代磷酸酯；小寫字母=經2' O-甲基修飾之核苷酸；大寫字母=經2'-氟修飾之核苷酸
表 3 siRNA 之 活體外功效
ID 序列背景 siRNA 資訊
500nM 100nM 10nM SEQ ID NO. 有義(5'-＞3') 在人類轉錄本之位置 區域
PCSK9-1727-23 39.4 48 9.1 437       CCUCACCAAGAUCCUGCAUGU 609 CDS
PCSK9-1397-23 38 38.7 38.3 438       CACCAAGAUCCUGCAUGUCUU 612 CDS
PCSK9-1130-23 34.2 36.1 26.8 439       CAAGAUCCUGCAUGUCUUCCA 615 CDS
PCSK9-640-23 18.5 34.4 30.1 440       UCCUGGCUUCCUGGUGAAGAU 645 CDS
PCSK9-5061-23 18.7 29.1 18.9 441       CUGGCUUCCUGGUGAAGAUGA 647 CDS
PCSK9-1632-23 24.6 31.2 34.8 442       GGCUUCCUGGUGAAGAUGAGU 649 CDS
PCSK9-4248-23 71.1 36.8 17.3 443       GCUUCCUGGUGAAGAUGAGUG 650 CDS
PCSK9-3564-23 -21 1.9 15.3 444       UGGAGCUGGCCUUGAAGUUGC 680 CDS
PCSK9-3165-23 14.8 28.2 27.4 445       AGUUGCCCCAUGUCGACUACA 695 CDS
PCSK9-1933-23 74.6 64.7 33.4 446       UGCCCCAUGUCGACUACAUCG 698 CDS
PCSK9-4901-23 68.7 56.2 22.5 447       CGGUACCGGGCGGAUGAAUAC 781 CDS
PCSK9-1021-23 11.5 32.6 30.8 448       GGUACCGGGCGGAUGAAUACC 782 CDS
PCSK9-1977-23 19.5 24.9 13.5 449       GGCAGCCUGGUGGAGGUGUAU 817 CDS
PCSK9-727-23 9.2 28.4 32.4 450       CAGCCUGGUGGAGGUGUAUCU 819 CDS
PCSK9-2305-23 26 31.7 23.5 451       AGCCUGGUGGAGGUGUAUCUC 820 CDS
PCSK9-1330-23 28.8 38 17.3 452       GCCUGGUGGAGGUGUAUCUCC 821 CDS
PCSK9-2942-23 38.6 25.4 13.8 453       GUAUCUCCUAGACACCAGCAU 834 CDS
PCSK9-3862-23 0.4 20.2 21.9 454       AUCUCCUAGACACCAGCAUAC 836 CDS
PCSK9-1225-23 19.1 2.5 -19.6 455       UCCUAGACACCAGCAUACAGA 839 CDS
PCSK9-2328-23 54.9 41.2 17.1 456       CUAGACACCAGCAUACAGAGU 841 CDS
PCSK9-4494-23 44.2 31.1 31.2 457       AUGGUCACCGACUUCGAGAAU 889 CDS
PCSK9-2108-23 42.7 32.7 30.8 458       UCACCGACUUCGAGAAUGUGC 893 CDS
PCSK9-1532-23 35.9 35.7 22 459       CCUCAUAGGCCUGGAGUUUAU 1080 CDS
PCSK9-3158-23 33.6 42.2 32.7 460       GGCCUGGAGUUUAUUCGGAAA 1087 CDS
PCSK9-2966-23 -54.6 -45.4 -20.7 461       GCCUGGAGUUUAUUCGGAAAA 1088 CDS
PCSK9-3514-23 -9.1 -23.5 0 462       UUGUGUCACAGAGUGGGACAU 1424 CDS
PCSK9-3369-23 7.6 9.2 -0.5 463       CUGAUCCACUUCUCUGCCAAA 1531 CDS
PCSK9-109-23 3.1 -3.4 -0.4 464       AUCCACUUCUCUGCCAAAGAU 1534 CDS
PCSK9-821-23 -12.2 -20.43 -17.5 465       UCUCUGCCAAAGAUGUCAUCA 1541 CDS
PCSK9-4228-23 -22.4 -3 -5.8 466       UGUCAUCAAUGAGGCCUGGUU 1554 CDS
PCSK9-4399-23 9.6 14.8 10.8 467       AGCUGUUUUGCAGGACUGUAU 1649 CDS
PCSK9-4785-23 -4.7 -29.7 10 468       CUGUUUUGCAGGACUGUAUGG 1651 CDS
PCSK9-1885-23 -45.3 2.2 -18.9 469       GGACUGUAUGGUCAGCACACU 1661 CDS
PCSK9-3131-23 -8.2 6.8 6.4 470       ACUGUAUGGUCAGCACACUCG 1663 CDS
PCSK9-3374-23 -14.7 5.8 11.3 471       CCCAGGUCUGGAAUGCAAAGU 2097 CDS
PCSK9-4465-23 -8.3 -5.1 15.9 472       UCUGGAAUGCAAAGUCAAGGA 2103 CDS
PCSK9-4027-23 17.5 14 9.1 473       UAGACAACACGUGUGUAGUCA 2237 CDS
PCSK9-1571-23 -3.7 11.8 11.7 474       CUGGGGCUGAGCUUUAAAAUG 2408 3UTR
PCSK9-1750-23 -22.4 2.7 6.6 475       UGGGGCUGAGCUUUAAAAUGG 2409 3UTR
PCSK9-4079-23 -76.6 -19.6 -10 476       GGGGCUGAGCUUUAAAAUGGU 2410 3UTR
PCSK9-3172-23 -1.9 15 -24.2 477       GGGCUGAGCUUUAAAAUGGUU 2411 3UTR
PCSK9-4788-23 1.6 13 2.9 478       GGCUGAGCUUUAAAAUGGUUC 2412 3UTR
PCSK9-4139-23 21.7 27.5 15.3 479       AGCUUUAAAAUGGUUCCGACU 2417 3UTR
PCSK9-5009-23 19 15 -2 480       GCUUUAAAAUGGUUCCGACUU 2418 3UTR
PCSK9-317-23 -2 16.9 3 481       UUUAAAAUGGUUCCGACUUGU 2420 3UTR
PCSK9-3286-23 9.5 3.4 -0.9 482       UGCUGGCCUGGCCCUUGAGUG 2503 3UTR
PCSK9-2619-23 12.7 15.4 5.2 483       GCUGGCCUGGCCCUUGAGUGG 2504 3UTR
PCSK9-3186-23 -0.14 22 4.4 484       CCCUCACUGUGGGGCAUUUCA 2597 3UTR
PCSK9-11-23 37.9 43.2 30.1 485       CACUGUGGGGCAUUUCACCAU 2601 3UTR
PCSK9-840-23 28.5 17.8 1.4 486       CUGUGGGGCAUUUCACCAUUC 2603 3UTR
PCSK9-404-23 7.6 9.8 -24.7 487       UGGGGCAUUUCACCAUUCAAA 2606 3UTR
PCSK9-26-23 -3.8 11.5 13.3 488       GCAUUUCACCAUUCAAACAGG 2610 3UTR
PCSK9-4467-23 46.6 42.8 10.6 489       UUUAUUGAGCUCUUGUUCCGU 2694 3UTR
PCSK9-1934-23 28.6 26.6 6.7 490       CCCUCAUCUCCAGCUAACUGU 2838 3UTR
PCSK9-1370-23 36.3 38.1 5 491       ACUGAGCCAGAAACGCAGAUU 3196 3UTR
PCSK9-3338-23 35 36.6 20 492       UGAGCCAGAAACGCAGAUUGG 3198 3UTR
PCSK9-4804-23 13.8 19.9 27.2 493       GAAGCCAAGCCUCUUCUUACU 3228 3UTR
PCSK9-1098-23 34.9 32.4 20.8 494       AGCCAAGCCUCUUCUUACUUC 3230 3UTR
PCSK9-1350-23 23.2 40.8 29.8 495       CCCAAGCAAGCAGACAUUUAU 3464 3UTR
PCSK9-5305-23 -19.6 13.9 5.8 496       CCAAGCAAGCAGACAUUUAUC 3465 3UTR
PCSK9-478-23 21 -0.4 7.2 497       UUUUGGGUCUGUCCUCUCUGU 3486 3UTR
PCSK9-4369-23 47.8 34.6 28.9 498       UCUGUCCUCUCUGUUGCCUUU 3493 3UTR
PCSK9-2723-23 32.2 44.3 41.9 499       CUGUCCUCUCUGUUGCCUUUU 3494 3UTR
PCSK9-1688-23 47.1 50.7 46.2 500       UGUCCUCUCUGUUGCCUUUUU 3495 3UTR
PCSK9-84-23 23.5 34.6 28.9 501       GUCCUCUCUGUUGCCUUUUUA 3496 3UTR
PCSK9-3495-23 21 24.9 35 502       CCUCUCUGUUGCCUUUUUACA 3498 3UTR
PCSK9-2744-23 29.1 41.5 45 503       GUUGCCUUUUUACAGCCAACU 3505 3UTR
PCSK9-5036-23 51.1 43.7 20.4 504       UGCCUUUUUACAGCCAACUUU 3507 3UTR
PCSK9-1674-23 47.2 23.2 -10.5 505       CCUUUUUACAGCCAACUUUUC 3509 3UTR
PCSK9-4557-23 47.5 39.4 4.7 506       UUUUACAGCCAACUUUUCUAG 3512 3UTR
PCSK9-1813-23 53.2 49.6 26.2 507       GCCAACUUUUCUAGACCUGUU 3519 3UTR
PCSK9-4497-23 57.2 59.5 37.2 508       CCAACUUUUCUAGACCUGUUU 3520 3UTR
PCSK9-2871-23 50.7 51.1 31.4 509       CAACUUUUCUAGACCUGUUUU 3521 3UTR
PCSK9-2000-23 20.8 28.7 25 510       ACUUUUCUAGACCUGUUUUGC 3523 3UTR
PCSK9-47-23 44.1 44.8 32.1 511       UUUUCUAGACCUGUUUUGCUU 3525 3UTR
PCSK9-1000-23 62.7 54.8 31.4 512       UUUCUAGACCUGUUUUGCUUU 3526 3UTR
PCSK9-4329-23 26.1 9.8 14 513       UCUAGACCUGUUUUGCUUUUG 3528 3UTR
PCSK9-4826-23 48.4 35.9 17.4 514       CUAGACCUGUUUUGCUUUUGU 3529 3UTR
PCSK9-460-23 28.8 29.2 20 515       UAGACCUGUUUUGCUUUUGUA 3530 3UTR
PCSK9-2614-23 52.4 27.8 31 516       AGACCUGUUUUGCUUUUGUAA 3531 3UTR
PCSK9-3284-23 11.1 1.9 11.9 517       GACCUGUUUUGCUUUUGUAAC 3532 3UTR
PCSK9-1766-23 43.8 17 6 518       ACCUGUUUUGCUUUUGUAACU 3533 3UTR
PCSK9-3250-23 32.9 31.1 13.3 519       CUGUUUUGCUUUUGUAACUUG 3535 3UTR
PCSK9-2699-23 47.7 29 20.6 520       GUUUUGCUUUUGUAACUUGAA 3537 3UTR
PCSK9-2790-23 8.9 5.4 -0.8 521       UUUUGCUUUUGUAACUUGAAG 3538 3UTR
PCSK9-2531-23 22.4 15.1 -18.8 522       UUUGCUUUUGUAACUUGAAGA 3539 3UTR
PCSK9-1601-23 48.1 45 22.4 523       UUGCUUUUGUAACUUGAAGAU 3540 3UTR
PCSK9-1877-23 65.6 64.2 37.4 524       CUUUUGUAACUUGAAGAUAUU 3543 3UTR
PCSK9-4491-23 58 59 35.2 525       UUUUGUAACUUGAAGAUAUUU 3544 3UTR
PCSK9-3424-23 58.4 50.8 29.7 526       UUUGUAACUUGAAGAUAUUUA 3545 3UTR
PCSK9-2041-23 62.2 58.7 28.4 527       UAACUUGAAGAUAUUUAUUCU 3549 3UTR
PCSK9-3270-23 42.7 36.9 33.7 528       AACUUGAAGAUAUUUAUUCUG 3550 3UTR
PCSK9-976-23 40 44 23.5 529       AAGAUAUUUAUUCUGGGUUUU 3556 3UTR
PCSK9-1652-23 18 1.1 -21.9 530       AGAUAUUUAUUCUGGGUUUUG 3557 3UTR
PCSK9-4408-23 14.9 23.6 18 531       AUAUUUAUUCUGGGUUUUGUA 3559 3UTR
PCSK9-1023-23 22.9 25.6 12.5 532       UAUUUAUUCUGGGUUUUGUAG 3560 3UTR
PCSK9-998-23 55.3 51.1 35.3 533       UUCUGGGUUUUGUAGCAUUUU 3566 3UTR
PCSK9-2616-23 32.8 43.9 24.2 534       GGUUUUGUAGCAUUUUUAUUA 3571 3UTR
PCSK9-4780-23 38.9 41 36.2 535       GUUUUGUAGCAUUUUUAUUAA 3572 3UTR
PCSK9-1644-23 31.5 37.2 31.7 536       UUUUGUAGCAUUUUUAUUAAU 3573 3UTR
PCSK9-5328-23 24 9.6 26.7 537       UUGUAGCAUUUUUAUUAAUAU 3575 3UTR
PCSK9-4430-23 28 30.1 19.8 538       AUUUUUAUUAAUAUGGUGACU 3582 3UTR
PCSK9-1274-23 13.8 29.5 -1.2 539       UUUUUAUUAAUAUGGUGACUU 3583 3UTR
雖然本文已展示及描述本發明之較佳態樣，但熟習此項技術者應顯而易見，此等態樣僅藉助於實例提供。熟習此項技術者將在不脫離本發明之情況下想到眾多變化、改變及取代。應理解，本文中所描述之本發明態樣的各種替代方案可用於實施本發明。預期以下申請專利範圍界定本發明之範疇，且由此涵蓋此等申請專利範圍及其等效物之範疇內的方法及結構。
本發明之各種態樣在隨附申請專利範圍中細緻闡述。參考闡述其中利用本發明原理之說明性態樣的以下實施方式及下文附圖將更好地瞭解本發明之特徵及優勢。
圖 1A 至圖 1J顯示多種siRNA對非人類靈長類動物中之PCSK9含量、LDL-c含量、三酸甘油酯(TG)含量、HDL-c含量及總膽固醇(T-Chol)含量的影響。
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Claims (29)

  1. 一種調節前蛋白轉化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin 9型絲胺酸蛋白酶(PCSK9)基因之表現的聚核酸分子，其中該聚核酸分子為包含有義股及反義股之雙股核酸分子，其中該有義股包含與選自SEQ ID NO: 1、3、5、7及9之序列至少85%、至少90%、至少95%一致，或該有義股包含有包含選自SEQ ID NO: 1、3、5、7及9之序列之至少16、17、18、19或20個連續序列且具有不超過1、2、3或4個錯配的核酸序列。
  2. 如請求項1之聚核酸分子，其中該反義股包含與選自SEQ ID NO: 2、4、6、8及10之序列至少85%、至少90%、至少95%一致，或其中該反義股包含有包含選自SEQ ID NO:2、4、6、8及10之序列之至少16、17、18、19或20個連續序列且具有不超過1、2、3或4個錯配的核酸序列。
  3. 如請求項1之聚核酸分子，其中該有義股包含SEQ ID NO: 1、3、5、7及9中之一者，且該反義股包含SEQ ID NO: 2、4、6、8及10中之一者。
  4. 如請求項1之聚核酸分子，其中該聚核酸分子包含(1)經2'-氟修飾之核苷酸；(2)經2'-O-甲基修飾之核苷酸；或(3)經修飾之核苷酸間鍵。
  5. 如請求項4之聚核酸分子，其中該聚核酸分子在5'端包含至少兩個經修飾之連續核苷酸間鍵。
  6. 如請求項4之聚核酸分子，其中該聚核酸分子在3'端包含三個核苷酸間鍵中至少兩個被經修飾之核苷酸間鍵取代的核苷酸間鍵。
  7. 如請求項4之聚核酸分子，其中該有義股包含『5-NfsnsNfnNfnNfnNfNfNfnNfnNfnNfnNfnNf-3』、『5-nsnsnnnnNfnNfNfNfnnnnnnnnnn-3』、『5-nsnsnnnnnnNfnNfnnnnnnnnnn-3』或『5-nsnsnnnnNfnNfnNfnnnnnnnnnn-3』，其中該反義股包含『5-nsNfsnNfnNfnNfnNfnnnNfnNfnNfnNfnsnsn-3』、『5-nsNfsnnnNfnNfNfnnnnNfnNfnnnnnsnsn-3』、『5-nsNfsnnnnnnnnnNfnNfnnnnnnnsnsn-3』、或『5-nsNfsnnnnnnnnnNfnNfnNfnnnnnsnsn-3』，其中「Nf」表示經2'-氟修飾之核苷酸，「n」表示經2'-O-甲基修飾之核苷酸，「s」表示3'-硫代磷酸酯。
  8. 如請求項4之聚核酸分子，其中該經修飾之核苷酸間鍵為硫代磷酸酯鍵，且視情況其中該硫代磷酸酯鍵為立體化學富集之硫代磷酸酯核苷酸間鍵。
  9. 如請求項8之聚核酸分子，其中該聚核酸包含複數個經修飾之核苷酸間鍵，且該複數個經修飾之核苷酸間鍵中之至少1、2、3或4個為立體化學富集之硫代磷酸酯核苷酸間鍵，且視情況，該立體化學富集之硫代磷酸酯核苷酸間鍵包含R-異構物及S-異構物。
  10. 如請求項8或9之聚核酸分子，其中該立體化學富集之硫代磷酸酯核苷酸間鍵安置於兩個連續核苷之間，該兩個連續核苷為該有義股或該反義股之六個5'或3'端核苷中的兩個。
  11. 如請求項1之聚核酸分子，其中該聚核酸分子包含含次黃嘌呤核鹼基之核苷取代，且視情況其中該含次黃嘌呤核鹼基之核苷取代係肌苷取代。
  12. 如請求項11之聚核酸分子，其中該肌苷取代位於該反義股之種子區內或位於該反義股之5'端之7個核苷酸內。
  13. 如請求項1之聚核酸分子，其中該聚核酸分子包含無鹼基取代，且視情況其中該無鹼基取代位於該5'端之第5或第7核苷酸。
  14. 如請求項4之聚核酸分子，其中該聚核酸分子之細胞毒性相較於未經修飾之聚核酸降低。
  15. 如請求項4之聚核酸分子，其中該有義股包含與選自SEQ ID NO: 13、15、17、19及21之序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%一致的核酸序列，或其中該有義股包含有包含選自SEQ ID NO: 13、15、17、19及21之序列之至少15、16、17、18、19或20個連續序列且具有不超過1、2、3或4個錯配的核酸序列。
  16. 如請求項4之聚核酸分子，其中該反義股包含與選自SEQ ID NO: 14、16、18、20及22之序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%一致的核酸序列，或其中該反義股包含有包含選自SEQ ID NO: 14、16、18、20及22之序列之至少15、16、17、18、19或20個連續序列且具有不超過1、2、3或4個錯配的核酸序列。
  17. 如請求項4之聚核酸分子，其中該有義股包含選自SEQ ID NO: 13、15、17、19及21之核酸序列的序列，且該反義股包含選自SEQ ID NO: 14、16、18、20及22之核酸序列的序列。
  18. 如請求項1之聚核酸分子，其中該聚核酸分子具有19-25個鹼基對長度。
  19. 一種用於調節前蛋白轉化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin 9型絲胺酸蛋白酶(PCSK9)基因之表現的聚核酸分子，其中該聚核酸分子包含： (a)包含核苷酸序列usUfsacaaaagcaAfaAfcAfggucusasg (SEQ ID NO: 14)之反義股及包含核苷酸序列asgsaccuGfuUfuUfgcuuuuguaa (SEQ ID NO: 13)之有義股；或 (b)包含核苷酸序列usUfsucaaguuacAfaAfaGfcaaaascsa (SEQ ID NO: 16)之反義股及包含核苷酸序列ususuugcUfuUfuGfuaacuugaaa (SEQ ID NO:15)之有義股； 其中小寫字母「n」表示經2'-O-甲基修飾之核苷酸，大寫字母後跟「f」(亦即，「Nf」)表示經2'-氟修飾之核苷酸，且「s」表示3'-硫代磷酸酯。
  20. 一種用於調節前蛋白轉化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin 9型絲胺酸蛋白酶(PCSK9)基因之表現的聚核酸分子結合物，其中該聚核酸分子結合物包含如請求項1之聚核酸分子及去唾液酸糖蛋白受體靶向部分，且其中該聚核酸分子及該去唾液酸糖蛋白受體靶向部分經由連接子偶合。
  21. 如請求項20之聚核酸分子結合物，其中該連接子包含下式(IV)，
    Figure 03_image051
    ，其中Y1及Y2中之至少一者為該聚核酸分子中之核苷酸。
  22. 如請求項21之聚核酸分子結合物，其中Y1為該聚核酸分子之該有義股之3'端上的最末核苷酸，或其中Y1及Y2為該聚核酸分子中之兩個連續核苷酸。
  23. 如請求項20之聚核酸分子結合物，其中該去唾液酸糖蛋白受體靶向部分包含N-乙醯基半乳糖胺(GalNAc)。
  24. 如請求項20之聚核酸分子結合物，其中該連接子及該去唾液酸糖蛋白受體靶向部分以及位於該聚核酸分子之該有義股之3'端上之最末核苷酸展示於式(V')中：
    Figure 03_image053
    (V')，其中式(V')中之Z為-H、-OH、-O-甲基、-F或-O-甲氧基乙基，且式(V')中之R為腺嘌呤、尿嘧啶、鳥嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶、無鹼基或其他。
  25. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1之聚核酸分子或如請求項20之聚核酸分子結合物及醫藥學上可接受之賦形劑。
  26. 如請求項25之醫藥組合物，其中該醫藥組合物調配為奈米粒子調配物，且視情況其中該醫藥組合物經調配用於非經腸、經口、鼻內、頰內、直腸、經皮、靜脈內、皮下或鞘內投與。
  27. 一種如請求項1之聚核酸分子、如請求項20之聚核酸分子結合物或如請求項25之醫藥組合物之用途，其係用於製造用以調節個體中之前蛋白轉化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin 9型絲胺酸蛋白酶(PCSK9)基因表現的藥劑。
  28. 一種如請求項1之聚核酸分子、如請求項20之聚核酸分子結合物或如請求項25之醫藥組合物的用途，其用於製造用以調節有需要之個體之低密度脂蛋白(LDL)的藥劑，且視情況其中該有需要之個體罹患高膽固醇血症、家族性高膽固醇血症或其他高膽固醇相關疾病。
  29. 一種如請求項1之聚核酸分子、如請求項20之聚核酸分子結合物或如請求項25之醫藥組合物的用途，其用於製造用以調節有需要之個體之膽固醇的藥劑，且視情況其中該有需要之個體罹患高膽固醇血症、家族性高膽固醇血症或其他高膽固醇相關疾病。
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