TW202313979A - 特異性靶向間皮素的ｃａｒ表現免疫細胞及其用途 - Google Patents

特異性靶向間皮素的ｃａｒ表現免疫細胞及其用途 Download PDF

Info

Publication number
TW202313979A
TW202313979A TW111128457A TW111128457A TW202313979A TW 202313979 A TW202313979 A TW 202313979A TW 111128457 A TW111128457 A TW 111128457A TW 111128457 A TW111128457 A TW 111128457A TW 202313979 A TW202313979 A TW 202313979A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
seq
nucleic acid
sequence
acid molecule
sequence identity
Prior art date
Application number
TW111128457A
Other languages
English (en)
Inventor
武千央
蓋瑞 沙畢羅
葛西義明
星玥 何
湘塔爾 庫函
Original Assignee
日商武田藥品工業股份有限公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 日商武田藥品工業股份有限公司 filed Critical 日商武田藥品工業股份有限公司
Publication of TW202313979A publication Critical patent/TW202313979A/zh

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
    • A61K39/4631—Chimeric Antigen Receptors [CAR]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4643—Vertebrate antigens
    • A61K39/4644—Cancer antigens
    • A61K39/464466—Adhesion molecules, e.g. NRCAM, EpCAM or cadherins
    • A61K39/464468—Mesothelin [MSLN]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/521—Chemokines
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/521—Chemokines
    • C07K14/523—Beta-chemokines, e.g. RANTES, I-309/TCA-3, MIP-1alpha, MIP-1beta/ACT-2/LD78/SCIF, MCP-1/MCAF, MCP-2, MCP-3, LDCF-1, LDCF-2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/54—Interleukins [IL]
    • C07K14/5443—IL-15
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70578—NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0636—T lymphocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/31—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterized by the route of administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/38—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the dose, timing or administration schedule
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/53—Hinge
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

本文揭示特異性識別間皮素並表現IL-15及視情況CCL19的經工程改造之免疫細胞。本文亦揭示：一種分離核酸分子，其包含編碼包含特異性識別間皮素之抗體及4-1BB胞內區之嵌合抗原受體(CAR)之多核苷酸、及編碼IL-15之多核苷酸、及視情況編碼CCL19之多核苷酸；包含該等核酸分子之載體、醫藥組成物；及使用該等經工程改造之免疫細胞的方法。

Description

特異性靶向間皮素的CAR表現免疫細胞及其用途
本發明係關於：一種免疫細胞，其表現特異性識別人類間皮素之細胞表面分子、介白素15 (IL-15)及視情況趨化因子(C-C模體)配體19 (CCL19)；一種醫藥組成物，其包含該免疫細胞；一種表現載體，其包含編碼特異性識別間皮素之細胞表面分子之多核苷酸、編碼IL-15之多核苷酸及視情況編碼CCL19之多核苷酸；一種使用方法；及一種用於產生表現特異性識別人類間皮素之細胞表面分子、IL-15及視情況CCL19之免疫細胞的方法，其包含將編碼特異性識別人類間皮素之細胞表面分子之多核苷酸、編碼IL-15之多核苷酸及視情況編碼CCL19之多核苷酸引入免疫細胞。
惡性腫瘤為影響世界上許多人的疾病，且通常藉由化學療法、放射療法或手術療法廣泛治療。但是，存在各種問題，諸如不良反應之發生、一些功能之喪失及無法治療的復發或轉移。因此，近年來推進了免疫細胞療法之發展，以維持患者之更高生活品質(QOL)。免疫細胞療法包括自患者採集免疫細胞，執行增強所採集免疫細胞之免疫功能的程序，擴增細胞以及將細胞重新投與回患者。例如，免疫細胞療法可以包括自患者收集T細胞，將編碼嵌合抗原受體(組成型雄甾烷受體：在下文中亦稱為「CAR」)的核酸引入T細胞以及將T細胞重新投與回患者。儘管使用CAR-T療法已經觀察到在血癌中的早期成功，但是亦觀察到危及生命的毒性及在治療實性瘤中實質上缺乏效力。因此，需要經改良之CAR-T療法。 先前技術文件 專利文件
專利文件1：WO2020/045610
專利文件2：US2020/0101142
專利文件3：WO2013/063419
本發明待解決之客觀技術問題
T細胞免疫療法存在許多挑戰，諸如向實性瘤之運輸不足、對正常組織之毒性高、無法克服免疫抑制性腫瘤微環境以及內源性免疫反應之活化不足。此外，已顯示經修飾以表現特異性識別間皮素之CAR的免疫細胞展示出最小的治療效力。因此，待解決之客觀技術問題為提供經最佳化之修飾免疫細胞以靶向表現間皮素之癌症。 解決客觀技術問題之手段
本發明人已經發現，經修飾以表現特異性識別間皮素之CAR、IL-15及視情況CCL19的免疫細胞可以提高免疫療法之治療效力並提高存活率。
一種分離核酸分子，其包含：第一多核苷酸，其編碼包含特異性識別人類間皮素之抗體及4-1BB胞內區之嵌合抗原受體(CAR)；及第二多核苷酸，其編碼介白素15 (IL-15)。在一些實施例中，CAR進一步包含CD8鉸鏈區、CD8跨膜區及及CD3ζ胞內區。在一些實施例中，分離核酸分子包含編碼CAR之第一多核苷酸及編碼IL-15之第二多核苷酸。在一些實施例中，分離核酸分子進一步包含編碼CCL19之第三多核苷酸。在一些實施例中，IL-15為人類IL-15。在一些實施例中，CCL19為人類CCL19。在一些實施例中，抗體包含重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)，其中VH包含有包含SEQ ID NO: 16-18之三個互補決定區(CDR)，且其中VL包含有包含SEQ ID NO: 19-21之三個CDR。在一些實施例中，VH包含SEQ ID NO: 22，且VL包含SEQ ID NO: 23。在一些實施例中，抗體包含單鏈可變片段(scFv)形式。在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO: 1。在一些實施例中，4-1BB胞內區包含SEQ ID NO: 24。在一些實施例中，CD3ζ胞內區包含SEQ ID NO: 25。在一些實施例中，4-1BB胞內區在分離核酸分子中在CD3ζ胞內區的上游。在一些實施例中，CD8鉸鏈區包含SEQ ID NO: 26。在一些實施例中，CD8跨膜區包含SEQ ID NO: 27。在一些實施例中，CAR進一步包含連接抗體及CD8鉸鏈區的3至10個胺基酸殘基長度之肽連接子。在一些實施例中，肽連接子包含SEQ ID NO: 4。在一些實施例中，CAR分子進一步包含傳訊肽。在一些實施例中，傳訊肽在分離核酸分子中位於特異性識別人類間皮素之抗體的上游。在一些實施例中，傳訊肽包含SEQ ID NO: 2。在一些實施例中，編碼IL-15之第二多核苷酸及視情況編碼CCL19之第三多核苷酸各自獨立地在包含編碼自身裂解2A肽(2A肽)之多核苷酸的啟動子下轉錄。在一些實施例中，2A肽包含SEQ ID NO: 5。在一些實施例中，IL-15包含選自SEQ ID NO: 8-11之序列。在一些實施例中，IL-15包含選自SEQ ID NO: 28或29之序列。在一些實施例中，CCL19包含SEQ ID NO: 13。在一些實施例中，編碼CAR之第一多核苷酸及編碼IL-15之第二多核苷酸自5'末端至3'末端呈編碼CAR之第一多核苷酸-編碼IL-15之第二多核苷酸排列在核酸分子中。在一些實施例中，編碼CAR之第一多核苷酸、編碼IL-15之第二多核苷酸及編碼CCL19之第三多核苷酸自5'末端至3'末端呈編碼CAR之第一多核苷酸-編碼IL-15之第二多核苷酸–編碼CCL19之第三多核苷酸排列在核酸分子中。在一些實施例中，分離核酸分子編碼包含SEQ ID NO: 14或31之多肽。在一些實施例中，分離核酸分子編碼包含SEQ ID NO: 34、35、36或15之多肽。在一些實施例中，分離核酸分子包含SEQ ID NO: 37、38、39或40。
在某些實施例中，本文揭示一種包括本文所述之核酸分子的載體。在一些實施例中，載體為病毒載體，視情況表現載體。在一些實施例中，病毒載體選自反轉錄病毒載體、慢病毒載體、腺病毒載體及腺病毒相關病毒(AAV)載體。在一些實施例中，病毒載體為pSFG載體、pMSGV載體或pMSCV載體。在一些實施例中，載體為質體。
在某些實施例中，本文揭示一種免疫細胞，其包含本文所述之核酸分子或本文所述之載體。在一些實施例中，免疫細胞進一步包含編碼γ-TCR (γTCR)之多核苷酸及編碼δ-TCR (δTCR)之多核苷酸。在一些實施例中，γTCR為Vγ9 TCR，且δTCR為Vδ2 TCR。
在某些實施例中，本文揭示一種免疫細胞，其表現：a)嵌合抗原受體(CAR)，其包含特異性識別人類間皮素之抗體、CD8鉸鏈區、CD8跨膜區、4-1BB胞內區及CD3ζ胞內區；及b) IL-15；及c)視情況CCL19。在一些實施例中，免疫細胞為T細胞、自然殺手(NK)細胞、B細胞、抗原呈現細胞或顆粒球，視情況T細胞或NK細胞。在一些實施例中，免疫細胞衍生自誘導性多能幹細胞(iPSC)。在一些實施例中，免疫細胞不表現αTCR及/或βTCR，視情況αβTCR。在一些實施例中，免疫細胞表現γδTCR。在一些實施例中，γδTCR包含Vγ9 TCR及Vδ2TCR。
在某些實施例中，本文揭示一種醫藥組成物，其包含本文所述之免疫細胞及醫藥學上可接受之添加劑。
在某些實施例中，本文揭示一種治療表現間皮素之癌症的方法，其包含向有需要之個體投與本文所述之免疫細胞或本文所述之醫藥組成物。在一些實施例中，表現間皮素之癌症為實性瘤，視情況選自間皮瘤、結直腸癌、胰腺癌、胸腺癌、膽管癌、肺癌、皮膚癌、乳癌、前列腺癌、膀胱癌、陰道癌、頸癌、子宮癌、肝癌、腎癌、脾癌、氣管癌、支氣管癌、胃癌、食道癌、膽囊癌、睪丸癌、卵巢癌及骨癌。在一些實施例中，表現間皮素之癌症為造血癌症。在一些實施例中，表現間皮素之癌症為肉瘤，視情況選自軟骨肉瘤、尤因肉瘤、惡性血管內皮瘤、惡性神經鞘瘤、骨肉瘤及軟組織肉瘤。在一些實施例中，表現間皮素之癌症為轉移性癌症。在一些實施例中，表現間皮素之癌症為復發癌症或難治性癌症。在一些實施例中，該方法進一步包含向個體投與額外治療劑或額外治療方案。在一些實施例中，額外治療劑包含化學治療劑、免疫治療劑、靶向療法、輻射療法或其組合。在一些實施例中，額外治療方案包含第一線療法。在一些實施例中，額外治療方案包含手術。在一些實施例中，本文所述之免疫細胞或本文所述之醫藥組成物及額外治療劑同時投與。在一些實施例中，本文所述之免疫細胞或本文所述之醫藥組成物及額外治療劑依序投與。在一些實施例中，在投與額外治療劑之前，將本文所述之免疫細胞或本文所述之醫藥組成物投與至個體。在一些實施例中，在投與額外治療劑之後，將本文所述之免疫細胞或本文所述之醫藥組成物投與至個體。在一些實施例中，個體為人類。
在某些實施例中，本文揭示一種減少腫瘤細胞增殖之方法，其包含使腫瘤細胞與上文所述之免疫細胞接觸，由此減少腫瘤細胞增殖。在一些實施例中，該方法為體外方法。在一些實施例中，該方法為體內方法。
在某些實施例中，本文揭示一種用於產生表現特異性識別人類間皮素之細胞表面分子、IL-15及視情況CCL19的免疫細胞的方法，該方法包含：向免疫細胞引入上文所述之核酸分子或上文所述之載體以誘導免疫細胞表現特異性識別人類間皮素之細胞表面分子、IL-15及視情況CCL19。在一些實施例中，免疫細胞為T細胞、自然殺手(NK)細胞、B細胞、抗原呈現細胞或顆粒球，視情況T細胞或NK細胞。
在某些實施例中，本文揭示一種套組，其包含上文所述之核酸分子、上文所述之載體、上文所述之免疫細胞或上文所述之醫藥組成物及使用說明書。 本發明之效應
本發明之免疫細胞具有針對表現間皮素(例如，人類間皮素)之癌細胞的細胞毒性活性且能夠抑制表現間皮素(例如，人類間皮素)之腫瘤的形成。另外，本發明之免疫細胞對癌細胞之復發具有抑制效應。
相關申請案之交叉參考
本申請案根據35 U.S.C § 119(e)主張2022年2月4日提交之美國臨時申請案第63/306,862號及2021年7月29日提交之美國臨時申請案第63/227,115號之優先權，該等申請案以引用方式整體併入本文。 經工程改造之免疫細胞
在某些實施例中，本文揭示經工程改造之免疫細胞，其表現特異性結合至間皮素的經工程改造之細胞表面分子、介白素15 (IL-15)及視情況趨化因子(C-C模體)配體19 (CCL19)。在一些實施例中，經工程改造之細胞表面分子包含特異性識別間皮素之嵌合抗原受體(CAR)或特異性結合至間皮素之T細胞受體(TCR)。
在一些實施例中，經工程改造之免疫細胞含有編碼經工程改造之細胞表面分子之外源核酸、編碼IL-15之外源核酸及視情況編碼CCL19之外源核酸。在一些實施例中，經工程改造之免疫細胞表現特異性識別間皮素之表面分子、IL-15及視情況CCL19。
間皮素(MSLN)為細胞表面結合多醣磷脂肌醇(glycosylphosphatidylinositol；GPI)錨定蛋白，其正常的表現限於諸如來自胸膜、圍心膜、腹膜、鞘膜、卵巢或輸卵管之間皮細胞。然而，亦展示MSLN在大量的癌症中過度表現，諸如惡性間皮瘤、卵巢癌、乳癌(例如，三陰性乳癌，TNBC)、胰腺癌、肺癌、胃癌、子宮內膜癌、宮頸癌、膽道癌、子宮漿液癌、膽管癌及小兒急性骨髓性白血病。此外，增加之MSLN表現與患有TNBC、卵巢癌、肺腺癌、膽管癌及胰腺癌之患者之較差預後相關。
MSLN之生理及生物功能尚未完全闡明。然而，MSLN已被證明涉及多個癌症發病機制。例如，在上皮卵巢癌中，當與表現較低 MSLN水準之化學敏感患者相比時，在手術切除之卵巢癌組織中展現出較高水準 MSLNmRNA表現的患者展示對於使用鉑及環磷醯胺之化學療法的抗性(Tang等人, 「The role of mesothelin in tumor progression and targeted therapy,」 Anticancer Agents Med Chem. 13(2): 276-280 (2013))。亦發現MSLN以高親和力結合至表面黏蛋白MUC16 (或CA125)，且提出了該結合介導卵巢癌細胞黏附至間皮細胞並促進轉移(Rump等人, 「Binding of ovarian cancer antigen CA125/MUC16 to mesothelin mediates cell adhesion,」 J Biol Chem 279(10): 9190-9198, 2004；Gubbels等人, 「Mesothelin-MUC16 binding is a high affinity, N-glycan dependent interaction that facilitates peritoneal metastasis of ovarian tumors,」 Mol Cancer 5(1): 50, 2006)。此外，MSLN已被證明在體外及體內涉及胰腺癌之腫瘤進展、細胞存活及增殖(Li，等人, 「Mesothelin is a malignant factor and therapeutic vaccine target for pancreatic cancer,」 Mol Cancer Ther. 7(2): 286-296, 2008)。 嵌合抗原受體(CAR) A. 抗間皮素抗體
在一些實施例中，經工程改造之細胞表面分子包含有包含特異性識別間皮素之抗體的嵌合抗原受體(CAR)。在一些實施例中，該抗體特異性識別哺乳動物間皮素，例如，齧齒動物間皮素、非人類靈長類動物間皮素或人類間皮素。
人類間皮素為一種40 kDa蛋白質，由 MSLN基因編碼。關於人類間皮素之序列資訊可適當地藉由搜尋公開已知文件或資料庫諸如NCBI (www.ncbi.nlm.nih.gov/guide/)來獲得。關於人類間皮素之胺基酸序列資訊之實例可包括GenBank登錄號NP_037536.2、AAV87530.1及其同功型。
在一些實施例中，抗間皮素抗體包含：重鏈可變區(VH)，其包含如SEQ ID NO: 16中所示之CDRH1、如SEQ ID NO: 17中所示之CDRH2及如SEQ ID NO: 18中所示之CDRH3或由其組成；及輕鏈可變區(VL)，其包含如SEQ ID NO: 19中所示之CDRL1、如SEQ ID NO: 20中所示之CDRL2及如SEQ ID NO: 21中所示之CDRL3或由其組成。 參見表1。  表1
P4* 序列 SEQ ID NO:
HCDR1 GDSVSSNSAT 16
HCDR2 TYYRSKWYN 17
HCDR3 ARGMMTYYYGMDV 18
LCDR1 SGINVGPYR 19
LCDR2 YKSDSDK 20
LCDR3 MIWHSSAAV 21
VH QVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSSGILGS 22
VL QPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLS 23
*抗間皮素抗體在本文中亦稱為P4。
在一些實施例中，抗間皮素抗體包含：重鏈可變區(VH)，其包含與SEQ ID NO: 22具有約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的序列；及輕鏈可變區(VL)，其包含與SEQ ID NO: 23具有約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的序列。在一些實施例中，抗間皮素抗體包含重鏈可變區(VH)，其包含與SEQ ID NO: 22具有約80%序列一致性的序列；及輕鏈可變區(VL)，其包含與SEQ ID NO: 23具有約80%序列一致性的序列。在一些實施例中，抗間皮素抗體包含重鏈可變區(VH)，其包含與SEQ ID NO: 22具有約85%序列一致性的序列；及輕鏈可變區(VL)，其包含與SEQ ID NO: 23具有約85%序列一致性的序列。在一些實施例中，抗間皮素抗體包含重鏈可變區(VH)，其包含與SEQ ID NO: 22具有約90%序列一致性的序列；及輕鏈可變區(VL)，其包含與SEQ ID NO: 23具有約90%序列一致性的序列。在一些實施例中，抗間皮素抗體包含重鏈可變區(VH)，其包含與SEQ ID NO: 22具有約95%序列一致性的序列；及輕鏈可變區(VL)，其包含與SEQ ID NO: 23具有約95%序列一致性的序列。在一些實施例中，抗間皮素抗體包含重鏈可變區(VH)，其包含與SEQ ID NO: 22具有約96%序列一致性的序列；及輕鏈可變區(VL)，其包含與SEQ ID NO: 23具有約96%序列一致性的序列。在一些實施例中，抗間皮素抗體包含重鏈可變區(VH)，其包含與SEQ ID NO: 22具有約97%序列一致性的序列；及輕鏈可變區(VL)，其包含與SEQ ID NO: 23具有約97%序列一致性的序列。在一些實施例中，抗間皮素抗體包含重鏈可變區(VH)，其包含與SEQ ID NO: 22具有約98%序列一致性的序列；及輕鏈可變區(VL)，其包含與SEQ ID NO: 23具有約98%序列一致性的序列。在一些實施例中，抗間皮素抗體包含重鏈可變區(VH)，其包含與SEQ ID NO: 22具有約99%序列一致性的序列；及輕鏈可變區(VL)，其包含與SEQ ID NO: 23具有約99%序列一致性的序列。抗間皮素抗體可包含有包含SEQ ID NO: 22之重鏈可變區(VH)及包含SEQ ID NO: 23之輕鏈可變區(VL)。抗間皮素抗體可包含由SEQ ID NO: 22組成之重鏈可變區(VH)及由SEQ ID NO: 23組成之輕鏈可變區(VL)。
在一些實施例中，在抗間皮素抗體中，框架區內之一或多個殘基經修飾，在VH或VL區中產生80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性。術語「框架區」係指排除互補決定區(CDR)之抗體區域。在一些實施例中，抗間皮素抗體包含框架區內之一或多個修飾且具有包含與SEQ ID NO: 22之80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的序列。在一些實施例中，抗間皮素抗體包含框架區內之一或多個修飾且具有包含與SEQ ID NO: 22之85%序列一致性的序列。在一些實施例中，抗間皮素抗體包含框架區內之一或多個修飾且具有包含與SEQ ID NO: 22之90%序列一致性的序列。在一些實施例中，抗間皮素抗體包含框架區內之一或多個修飾且具有包含與SEQ ID NO: 22之95%序列一致性的序列。在一些實施例中，抗間皮素抗體包含框架區內之一或多個修飾且具有包含與SEQ ID NO: 22之96%序列一致性的序列。在一些實施例中，抗間皮素抗體包含框架區內之一或多個修飾且具有包含與SEQ ID NO: 22之97%序列一致性的序列。在一些實施例中，抗間皮素抗體包含框架區內之一或多個修飾且具有包含與SEQ ID NO: 22之98%序列一致性的序列。在一些實施例中，抗間皮素抗體包含框架區內之一或多個修飾且具有包含與SEQ ID NO: 22之99%序列一致性的序列。在一些實施例中，抗間皮素抗體包含框架區內之一或多個修飾且具有包含與SEQ ID NO: 23之80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的序列。在一些實施例中，抗間皮素抗體包含框架區內之一或多個修飾且具有包含與SEQ ID NO: 23之85%序列一致性的序列。在一些實施例中，抗間皮素抗體包含框架區內之一或多個修飾且具有包含與SEQ ID NO: 23之90%序列一致性的序列。在一些實施例中，抗間皮素抗體包含框架區內之一或多個修飾且具有包含與SEQ ID NO: 23之95%序列一致性的序列。在一些實施例中，抗間皮素抗體包含框架區內之一或多個修飾且具有包含與SEQ ID NO: 23之96%序列一致性的序列。在一些實施例中，抗間皮素抗體包含框架區內之一或多個修飾且具有包含與SEQ ID NO: 23之97%序列一致性的序列。在一些實施例中，抗間皮素抗體包含框架區內之一或多個修飾且具有包含與SEQ ID NO: 23之98%序列一致性的序列。在一些實施例中，抗間皮素抗體包含框架區內之一或多個修飾且具有包含與SEQ ID NO: 23之99%序列一致性的序列。
在一些實施例中，抗間皮素抗體包含單鏈可變片段(scFv)形式。在一些實施例中，抗間皮素scFv抗體包含：VH，其包含如SEQ ID NO: 16中所示之CDRH1、如SEQ ID NO: 17中所示之CDRH2及如SEQ ID NO: 18中所示之CDRH3或由其組成；及VL，其包含如SEQ ID NO: 19中所示之CDRL1、如SEQ ID NO: 20中所示之CDRL2及如SEQ ID NO: 21中所示之CDRL3或由其組成。在一些實施例中，抗間皮素scFv抗體包含：VH，其包含與SEQ ID NO: 22具有約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的序列；及VL，其包含與SEQ ID NO: 23具有約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的序列。
在一些實施例中，抗間皮素scFv抗體之VH及VL通過肽連接子來連接。肽連接子可包括3或更多個胺基酸殘基，例如，約3至約30個、約3至約25個、3至約20個、約4至約30個、約4至約20個、約4至約10個、約5至約30個、約5至約20個或約5至約10個。肽連接子可包括3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或30個胺基酸殘基。
肽連接子可包括複數個聚丙胺酸、聚甘胺酸或丙胺酸及甘胺酸殘基之混合物。肽連接子可包括(Gly 4Ser)n連接子，其中n為1至30之整數，較佳1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30，進一步較佳15、16、17、18、19或20。在一些情況下，肽連接子包含GILGSGGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 45)，肽連接子包含GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 30)。在一些情況下，肽連接子包含GSGGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 41)。在一些情況下，肽連接子包含SEQ ID NO: 45。
在一些實施例中，抗間皮素scFv抗體包含有包含與QVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSS GILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLS (SEQ ID NO: 1)之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性的序列，其中連接子呈斜體。抗間皮素scFv在本文中亦稱為P4。在一些實施例中，抗間皮素scFv抗體包含有包含與SEQ ID NO: 1之約85%序列一致性的序列。在一些實施例中，抗間皮素scFv抗體包含有包含與SEQ ID NO: 1之約90%序列一致性的序列。在一些實施例中，抗間皮素scFv抗體包含有包含與SEQ ID NO: 1之約95%序列一致性的序列。在一些實施例中，抗間皮素scFv抗體包含包括與SEQ ID NO: 1之約96%序列一致性的序列。在一些實施例中，抗間皮素scFv抗體包含有包含與SEQ ID NO: 1之約97%序列一致性的序列。在一些實施例中，抗間皮素scFv抗體包含有包含與SEQ ID NO: 1之約98%序列一致性的序列。在一些實施例中，抗間皮素scFv抗體包含有包含與SEQ ID NO: 1之約99%序列一致性的序列。在一些實施例中，抗間皮素scFv抗體包含SEQ ID NO: 1。在一些實施例中，抗間皮素scFv抗體由SEQ ID NO: 1組成。 B. CAR 之傳訊肽
在一些實施例中，本文所揭示之嵌合抗原受體(CAR)包含傳訊肽(例如，作為前導序列)。傳訊肽可將CAR定位至細胞表面。傳訊肽可包括免疫球蛋白重鏈、免疫球蛋白輕鏈、CD8、T細胞受體α及β鏈、CD3ζ、CD28、CD3E、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、ICOS、CD154或GITR衍生之訊息肽(前導序列)之多肽。
在一些實施例中，傳訊肽可包括免疫球蛋白重鏈之多肽。在一些實施例中，傳訊肽包含有包含與MDWTWRILFLVAAATGAHS (SEQ ID NO: 2)之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的序列。在一些實施例中，傳訊肽包含有包含與SEQ ID NO: 2之約85%序列一致性的序列。在一些實施例中，傳訊肽包含有包含與SEQ ID NO: 2之約90%序列一致性的序列。在一些實施例中，傳訊肽包含有包含與SEQ ID NO: 2之約95%序列一致性的序列。在一些實施例中，傳訊肽包含有包含與SEQ ID NO: 2之約96%序列一致性的序列。在一些實施例中，傳訊肽包含有包含與SEQ ID NO: 2之約97%序列一致性的序列。在一些實施例中，傳訊肽包含有包含與SEQ ID NO: 2之約98%序列一致性的序列。在一些實施例中，傳訊肽包含有包含與SEQ ID NO: 2之約99%序列一致性的序列。在一些實施例中，傳訊肽包含SEQ ID NO: 2。在一些實施例中，傳訊肽由SEQ ID NO: 2組成。 C. 跨膜區
在一些實施例中，抗間皮素抗體連接至一或多個跨膜及胞內傳訊域。跨膜區可衍生自天然或合成來源。示範性跨膜區可包括衍生自以下各者之跨膜區之多肽：CD8、T細胞受體α及β鏈、CD3ζ、CD28、CD3E (CD3ε)、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、ICOS、CD154及GITR。在一些實施例中，跨膜區包含CD8跨膜區(例如，人類CD8跨膜區)。
在一些實施例中，跨膜區衍生自CD8。在一些實施例中，跨膜區包含有包含與IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCN (SEQ ID NO: 27)之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的序列。在一些實施例中，跨膜區包含有包含與SEQ ID NO: 27之約85%序列一致性的序列。在一些實施例中，跨膜區包含有包含與SEQ ID NO: 27之約90%序列一致性的序列。在一些實施例中，跨膜區包含有包含與SEQ ID NO: 27之約95%序列一致性的序列。在一些實施例中，跨膜區包含有包含與SEQ ID NO: 27之約96%序列一致性的序列。在一些實施例中，跨膜區包含有包含與SEQ ID NO: 27之約97%序列一致性的序列。在一些實施例中，跨膜區包含有包含與SEQ ID NO: 27之約98%序列一致性的序列。在一些實施例中，跨膜區包含有包含與SEQ ID NO: 27之約99%序列一致性的序列。在一些實施例中，跨膜區包含SEQ ID NO: 27。在一些實施例中，跨膜區由SEQ ID NO: 27組成。在一些實施例中，跨膜區包含有包含與IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYC (SEQ ID NO: 63)約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的序列。在一些實施例中，跨膜區包含有包含與SEQ ID NO: 63約85%序列一致性的序列。在一些實施例中，跨膜區包含有包含與SEQ ID NO: 63約90%序列一致性的序列。在一些實施例中，跨膜區包含有包含與SEQ ID NO: 63約95%序列一致性的序列。在一些實施例中，跨膜區包含有包含與SEQ ID NO: 63約96%序列一致性的序列。在一些實施例中，跨膜區包含有包含與SEQ ID NO: 63約97%序列一致性的序列。在一些實施例中，跨膜區包含有包含與SEQ ID NO: 63約98%序列一致性的序列。在一些實施例中，跨膜區包含有包含與SEQ ID NO: 63約99%序列一致性的序列。在一些實施例中，跨膜區包含SEQ ID NO: 63。在一些實施例中，跨膜區由SEQ ID NO: 63組成。 D. 胞外鉸鏈區
包含任意寡肽或多肽或由其組成之胞外鉸鏈區可位於識別間皮素之細胞表面分子與跨膜區之間。胞外鉸鏈區之長度之實例可包括1至100個胺基酸殘基，較佳10至70個、10至50個或10至30個胺基酸殘基。示範性胞外鉸鏈區可包括衍生自CD8、CD28及CD4之鉸鏈區及免疫球蛋白鉸鏈區。在一些實施例中，鉸鏈區包含人類CD8之鉸鏈區。
在一些實施例中，胞外鉸鏈區為CD8鉸鏈區，其包含與PTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD (SEQ ID NO: 26)具有約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的序列。在一些實施例中，CD8鉸鏈區包含與SEQ ID NO: 26具有約85%序列一致性的序列。在一些實施例中，CD8鉸鏈區包含與SEQ ID NO: 26具有約90%序列一致性的序列。在一些實施例中，CD8鉸鏈區包含與SEQ ID NO: 26具有約95%序列一致性的序列。在一些實施例中，CD8鉸鏈區包含與SEQ ID NO: 26具有約96%序列一致性的序列。在一些實施例中，CD8鉸鏈區包含與SEQ ID NO: 26具有約97%序列一致性的序列。在一些實施例中，CD8鉸鏈區包含與SEQ ID NO: 26具有約98%序列一致性的序列。在一些實施例中，CD8鉸鏈區包含與SEQ ID NO: 26具有約99%序列一致性的序列。在一些實施例中，CD8鉸鏈區包含SEQ ID NO: 26。在一些實施例中，CD8鉸鏈區由SEQ ID NO: 26組成。在一些實施例中，CD8鉸鏈區包含與TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD (SEQ ID NO: 64)具有約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的序列。在一些實施例中，CD8鉸鏈區包含與SEQ ID NO: 64具有約85%序列一致性的序列。在一些實施例中，CD8鉸鏈區包含與SEQ ID NO: 64具有約90%序列一致性的序列。在一些實施例中，CD8鉸鏈區包含與SEQ ID NO: 64具有約95%序列一致性的序列。在一些實施例中，CD8鉸鏈區包含與SEQ ID NO: 64具有約96%序列一致性的序列。在一些實施例中，CD8鉸鏈區包含與SEQ ID NO: 64具有約97%序列一致性的序列。在一些實施例中，CD8鉸鏈區包含與SEQ ID NO: 64具有約98%序列一致性的序列。在一些實施例中，CD8鉸鏈區包含與SEQ ID NO: 64具有約99%序列一致性的序列。在一些實施例中，CD8鉸鏈區包含SEQ ID NO: 64。在一些實施例中，CD8鉸鏈區由SEQ ID NO: 64組成。
在一些實施例中，抗間皮素scFv抗體通過肽連接子來連接至鉸鏈區。肽連接子可包括3或更多個胺基酸殘基，例如，約3至約30個、約3至約20個、3至約10個、約4至約30個、約4至約20個、約4至約10個、約5至約30個、約5至約20個或約5至約10個。肽連接子可包括3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或30個胺基酸殘基。
肽連接子可包括複數個聚丙胺酸、聚甘胺酸、丙胺酸及甘胺酸殘基之混合物或者丙胺酸或甘胺酸與一或多種額外胺基酸之混合物。在一些實施例中，肽連接子包含ArgAlaAlaAla (「RAAA」) (SEQ ID NO: 4)。在一些實施例中，肽連接子為ArgAlaAlaAla (「RAAA」) (SEQ ID NO: 4)。在一些實施例中，肽連接子包含AlaAlaAla (「AAA」)。在一些實施例中，肽連接子為三重丙胺酸連接子或AlaAlaAla (「AAA」)。
在一些實施例中，抗間皮素scFv抗體在沒有連接子的情況下連接至鉸鏈區。 E. 胞內傳訊區(共刺激域)
在一些實施例中，CAR包含一或多個胞內傳訊區。胞內傳訊區(注意，胞內傳訊區在本文中亦稱為「共刺激域」)可包含能夠在細胞表面分子識別間皮素時將訊息轉導至細胞中的區域。胞內傳訊區可包含至少一個或更多個選自以下多肽之胞內區的成員：CD28、4-1BB(CD137)、GITR、CD27、OX40、HVEM、CD3ζ或Fc受體相關γ鏈。在一些實施例中，胞內傳訊區包含CD28胞內區(共刺激域)之多肽、4-1BB胞內區(共刺激域)之多肽、CD3胞內區之多肽或其組合。
在一些實施例中，CAR包含4-1BB胞內區(共刺激域)。在一些實施例中，4-1BB胞內區(共刺激域)包含有包含與KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL (SEQ ID NO: 24)之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的序列。在一些實施例中，4-1BB胞內區包含有包含與SEQ ID NO: 24之約85%序列一致性的序列。在一些實施例中，4-1BB胞內區包含有包含與SEQ ID NO: 24之約90%序列一致性的序列。在一些實施例中，4-1BB胞內區包含有包含與SEQ ID NO: 24之約95%序列一致性的序列。在一些實施例中，4-1BB胞內區包含有包含與SEQ ID NO: 24之約96%序列一致性的序列。在一些實施例中，4-1BB胞內區包含有包含與SEQ ID NO: 24之約97%序列一致性的序列。在一些實施例中，4-1BB胞內區包含有包含與SEQ ID NO: 24之約98%序列一致性的序列。在一些實施例中，4-1BB胞內區包含有包含與SEQ ID NO: 24之約99%序列一致性的序列。在一些實施例中，4-1BB胞內區包含SEQ ID NO: 24。在一些實施例中，4-1BB胞內區由SEQ ID NO: 24組成。
在一些實施例中，CAR進一步包含CD3ζ胞內區。在一些實施例中，CD3ζ胞內區包含有包含與RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (SEQ ID NO: 25)之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的序列。在一些實施例中，CD3ζ胞內區包含有包含與SEQ ID NO: 25之約85%序列一致性的序列。在一些實施例中，CD3ζ胞內區包含有包含與SEQ ID NO: 25之約90%序列一致性的序列。在一些實施例中，CD3ζ胞內區包含有包含與SEQ ID NO: 25之約95%序列一致性的序列。在一些實施例中，CD3ζ胞內區包含有包含與SEQ ID NO: 25之約96%序列一致性的序列。在一些實施例中，CD3ζ胞內區包含有包含與SEQ ID NO: 25之約97%序列一致性的序列。在一些實施例中，CD3ζ胞內區包含有包含與SEQ ID NO: 25之約98%序列一致性的序列。在一些實施例中，CD3ζ胞內區包含有包含與SEQ ID NO: 25之約99%序列一致性的序列。在一些實施例中，CD3ζ胞內區包含SEQ ID NO: 25。在一些實施例中，CD3ζ胞內區由SEQ ID NO: 25組成。 IL-15
介白素15 (IL-15)涉及淋巴球發育、分化及穩態。IL-15亦刺激CD8 T細胞並誘導自然殺手(NK)細胞活化。在腫瘤微環境中，IL-15之表現與增強之抗腫瘤反應相關。此外，IL-15之表現在T細胞之 離體擴增期間展示益處且增強CAR-T細胞之效力。
如本文使用，術語「IL-15」不僅涵蓋全長IL-15蛋白，且亦涵蓋片段，只要在本發明之效果中，IL-15之功能得以保留即可。此外，術語「IL-15」涵蓋野生型IL-15及其包含一或多個突變的變異體。在一些情況下，突變包含缺失、取代及/或添加。例如，IL-15可包含一或多個取代。IL-15亦可包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20或更多個胺基酸殘基之截斷，其中截斷可位於IL-15之N末端、C末端或內部區域。此外，IL-15或其變異體可連接至另一蛋白質以形成融合蛋白(例如，連接至IL-15Rα之全部或部分)。IL-15可為膜結合蛋白或分泌蛋白。 A. mIL15/Ra
在一些情況下，IL-15包含融合至IL-15受體α鏈(IL-15Rα)的膜結合IL-15。融合IL-15蛋白在本文中稱為mIL15/Ra。IL-15Rα涵蓋整個野生型IL-15Rα (沒有訊息肽)，且亦涵蓋其功能片段(例如，IL-15Rα之胞外域或sushi域)及視情況包括一或多個取代、缺失或添加的IL-15Rα之變異體。
在一些情況下，mIL15/Ra融合蛋白包含直接或經由連接子間接地融合至膜結合IL-15多肽之C末端的IL-15Rα多肽。肽連接子可包括1或更多個胺基酸殘基，例如，約1至約30個、約3至約20個、3至約10個、約4至約30個、約4至約20個、約4至約10個、約5至約30個、約5至約20個或約5至約10個。肽連接子可包括3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或30個胺基酸殘基。
肽連接子可包括複數個聚丙胺酸、聚甘胺酸或丙胺酸及甘胺酸殘基之混合物。肽連接子可包括(Gly 4Ser)n連接子，其中n為1至30之整數，較佳1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30，進一步較佳15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30。在一些情況下，肽連接子包含SGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQ (SEQ ID NO: 32)。在一些情況下，肽連接子包含SGGSGGGGSGGGSGGGGSLQ (SEQ ID NO: 33)。在一些情況下，肽連接子包含GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 30)。在一些情況下，肽連接子包含GSGGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 41)。在一些情況下，肽連接子包含SEQ ID NO: 45。
在一些實施例中，本文所述之免疫細胞表現mIL15/Ra。在一些實施例中，mIL15/Ra包含有包含與NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS SGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSPSSNNTAATTAAIVPGSQLMPSKSPSTGTTEISSHESSHGTPSQTTAKNWELTASASHQPPGVYPQGHSDTTVAISTSTVLLCGLSAVSLLACYLKSRQTPPLASVEMEAMEALPVTWGTSSRDEDLENCSHHL (SEQ ID NO: 8)之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的序列。在一些實施例中，mIL15/Ra包含有包含與SEQ ID NO: 8之約85%序列一致性的序列。在一些實施例中，mIL15/Ra包含有包含與SEQ ID NO: 8之約90%序列一致性的序列。在一些實施例中，mIL15/Ra包含有包含與SEQ ID NO: 8之約95%序列一致性的序列。在一些實施例中，mIL15/Ra包含有包含與SEQ ID NO: 8之約96%序列一致性的序列。在一些實施例中，mIL15/Ra包含有包含與SEQ ID NO: 8之約97%序列一致性的序列。在一些實施例中，mIL15/Ra包含有包含與SEQ ID NO: 8之約98%序列一致性的序列。在一些實施例中，mIL15/Ra包含有包含與SEQ ID NO: 8之約99%序列一致性的序列。在一些實施例中，mIL15/Ra包含SEQ ID NO: 8。在一些實施例中，mIL15/Ra由SEQ ID NO: 8組成。
在一些情況下，mIL15/Ra進一步包含IL-2訊息肽(IL2sp)。在一些情況下，IL2sp包含MYRMQLLSCIALSLALVTNS (SEQ ID NO: 6)。在一些情況下，IL2sp由SEQ ID NO: 6組成。
在一些情況下，本文所述之免疫細胞表現IL2sp-mIL15/Ra多肽，其包含與MYRMQLLSCIALSLALVTNSATSNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS SGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSPSSNNTAATTAAIVPGSQLMPSKSPSTGTTEISSHESSHGTPSQTTAKNWELTASASHQPPGVYPQGHSDTTVAISTSTVLLCGLSAVSLLACYLKSRQTPPLASVEMEAMEALPVTWGTSSRDEDLENCSHHL (SEQ ID NO: 28)之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性。在一些情況下，IL2sp-mIL15/Ra多肽包含與SEQ ID NO: 28之約85%序列一致性。在一些情況下，IL2sp-mIL15/Ra多肽包含與SEQ ID NO: 28之約90%序列一致性。在一些情況下，IL2sp-mIL15/Ra多肽包含與SEQ ID NO: 28之約95%序列一致性。在一些情況下，IL2sp-mIL15/Ra多肽包含與SEQ ID NO: 28之約96%序列一致性。在一些情況下，IL2sp-mIL15/Ra多肽包含與SEQ ID NO: 28之約97%序列一致性。在一些情況下，IL2sp-mIL15/Ra多肽包含與SEQ ID NO: 28之約98%序列一致性。在一些情況下，IL2sp-mIL15/Ra多肽包含與SEQ ID NO: 28之約99%序列一致性。在一些情況下，IL2sp-mIL15/Ra多肽包含SEQ ID NO: 28。在一些情況下，IL2sp-mIL15/Ra多肽由SEQ ID NO: 28組成。 B. sushi15
在一些情況下，IL-15包含融合至IL-15的IL-15受體α鏈(IL-15Rα) sushi域。此融合IL-15蛋白在本文中稱為sushi15。IL-15Rα sushi域直接或經由連接子間接地融合至IL-15多肽之C末端。
在一些情況下，IL-15Rα之sushi域經由連接子間接地融合至IL-15多肽。肽連接子可包括1或更多個胺基酸殘基，例如，約1至約30個、約3至約20個、3至約10個、約4至約30個、約4至約20個、約4至約10個、約5至約30個、約5至約20個或約5至約10個。肽連接子可包括3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或30個胺基酸殘基。
肽連接子可包括複數個聚丙胺酸、聚甘胺酸或丙胺酸及甘胺酸殘基之混合物。肽連接子可包括(Gly 4Ser)n連接子，其中n為1至30之整數，較佳1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30，進一步較佳15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30。在一些情況下，肽連接子包含SEQ ID NO: 32。在一些情況下，肽連接子包含SEQ ID NO: 33。在一些情況下，肽連接子包含SEQ ID NO: 30。在一些情況下，肽連接子包含SEQ ID NO: 41。在一些情況下，肽連接子包含SEQ ID NO: 45。
在一些實施例中，本文所述之免疫細胞表現sushi15。在一些實施例中，sushi15包含有包含與ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR SGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS (SEQ ID NO: 10)之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的序列。在一些情況下，sushi15包含有包含與SEQ ID NO: 10之約85%序列一致性的序列。在一些情況下，sushi15包含有包含與SEQ ID NO: 10之約90%序列一致性的序列。在一些情況下，sushi15包含有包含與SEQ ID NO: 10之約95%序列一致性的序列。在一些情況下，sushi15包含有包含與SEQ ID NO: 10之約96%序列一致性的序列。在一些情況下，sushi15包含有包含與SEQ ID NO: 10之約97%序列一致性的序列。在一些情況下，sushi15包含有包含與SEQ ID NO: 10之約98%序列一致性的序列。在一些情況下，sushi15包含有包含與SEQ ID NO: 10之約99%序列一致性的序列。在一些情況下，sushi15包含SEQ ID NO: 10。在一些情況下，sushi15由SEQ ID NO: 10組成。
在一些情況下，sushi15進一步包含IL-15Rα訊息肽(IL15Rasp)。在一些情況下，IL15Rasp包含MAPRRARGCRTLGLPALLLLLLLRPPATRG (SEQ ID NO: 7)。在一些情況下，IL15Rasp由SEQ ID NO: 7組成。
在一些情況下，本文所述之免疫細胞表現IL15Rasp-sushi15肽，其包含與MAPRRARGCRTLGLPALLLLLLLRPPATRGITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR SGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS (SEQ ID NO: 29)之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性。在一些情況下，IL15Rasp-sushi15多肽包含與SEQ ID NO: 29之約85%序列一致性。在一些情況下，IL15Rasp-sushi15多肽包含與SEQ ID NO: 29之約90%序列一致性。在一些情況下，IL15Rasp-sushi15多肽包含與SEQ ID NO: 29之約95%序列一致性。在一些情況下，IL15Rasp-sushi15多肽包含與SEQ ID NO: 29之約96%序列一致性。在一些情況下，IL15Rasp-sushi15多肽包含與SEQ ID NO: 29之約97%序列一致性。在一些情況下，IL15Rasp-sushi15多肽包含與SEQ ID NO: 29之約98%序列一致性。在一些情況下，IL15Rasp-sushi15多肽包含與SEQ ID NO: 29之約99%序列一致性。在一些情況下，IL15Rasp-sushi15多肽包含SEQ ID NO: 29。在一些情況下，IL15Rasp-sushi15多肽由SEQ ID NO: 29組成。 C. mIL15/Ra-LSP
在一些情況下，IL-15包含融合至IL-15受體α鏈(IL-15Rα)之膜結合IL-15、IL15前肽與IL-15之長訊息肽(LSP)融合蛋白。此融合IL-15蛋白在本文中稱為mIL15/Ra-LSP。IL-15Rα多肽包含沒有訊息肽的全長IL-15Rα鏈。IL-15Ra直接或經由連接子間接地融合至IL-15多肽之C末端。IL15前肽直接或間接地融合至LSP之C末端。IL15前肽直接或間接地融合至IL-15Rα多肽之C末端。在一些情況下，IL15前肽包含GIHVFILGCFSAGLPKTEA (SEQ ID NO: 48)。在一些情況下，IL15前肽由SEQ ID NO: 48組成。在一些情況下，LSP包含MRISKPHLRSISIQCYLCLLLNSHFLTEA (SEQ ID NO: 47)。在一些情況下，LSP由SEQ ID NO: 47組成。
在一些情況下，IL-15Ra經由連接子間接地融合至IL-15多肽之C末端。肽連接子可包括1或更多個胺基酸殘基，例如，約1至約30個、約3至約20個、3至約10個、約4至約30個、約4至約20個、約4至約10個、約5至約30個、約5至約20個或約5至約10個。肽連接子可包括3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25或30個胺基酸殘基。
肽連接子可包括複數個聚絲胺酸、聚甘胺酸或絲胺酸及甘胺酸殘基之混合物。肽連接子可包括(Gly 4Ser)n連接子，其中n為1至30之整數，較佳1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30，進一步較佳15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30。在一些情況下，肽連接子包含SEQ ID NO: 32。在一些情況下，肽連接子包含SEQ ID NO: 33。在一些情況下，肽連接子包含SEQ ID NO: 30。在一些情況下，肽連接子包含SEQ ID NO: 41。在一些情況下，肽連接子包含SEQ ID NO: 45。
在一些實施例中，本文所述之免疫細胞表現mIL15/Ra-LSP。在一些實施例中，mIL15/Ra-LSP包含有包含與MRISKPHLRSISIQCYLCLLLNSHFLTEAGIHVFILGCFSAGLPKTEANWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSSGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSPSSNNTAATTAAIVPGSQLMPSKSPSTGTTEISSHESSHGTPSQTTAKNWELTASASHQPPGVYPQGHSDTTVAISTSTVLLCGLSAVSLLACYLKSRQTPPLASVEMEAMEALPVTWGTSSRDEDLENCSHHL (SEQ ID NO: 9)之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的序列。在一些情況下，mIL15/Ra-LSP包含有包含與SEQ ID NO: 9之約85%序列一致性的序列。在一些情況下，mIL15/Ra-LSP包含有包含與SEQ ID NO: 9之約90%序列一致性的序列。在一些情況下，mIL15/Ra-LSP包含有包含與SEQ ID NO: 9之約95%序列一致性的序列。在一些情況下，mIL15/Ra-LSP包含有包含與SEQ ID NO: 9之約96%序列一致性的序列。在一些情況下，mIL15/Ra-LSP包含有包含與SEQ ID NO: 9之約97%序列一致性的序列。在一些情況下，mIL15/Ra-LSP包含有包含與SEQ ID NO: 9之約98%序列一致性的序列。在一些情況下，mIL15/Ra-LSP包含有包含與SEQ ID NO: 9之約99%序列一致性的序列。在一些情況下，mIL15/Ra-LSP包含SEQ ID NO: 9。在一些情況下，mIL15/Ra-LSP由SEQ ID NO: 9組成。
在一些情況下，mIL15/Ra-LSP進一步包含IL-2訊息肽(IL2sp)。在一些情況下，IL2sp包含SEQ ID NO: 6。在一些情況下，IL2sp由SEQ ID NO: 6組成。 D. sIL15-LSP
在一些實施例中，IL-15包含IL-15多肽、IL-15前肽與IL-15之長訊息肽(LSP)融合蛋白。此融合IL-15蛋白在本文中稱為sIL15。IL15前肽直接或間接地融合至LSP之C末端。IL-15多肽直接或間接地融合至IL-15前肽之C末端。在一些情況下，IL15前肽包含SEQ ID NO: 48。在一些情況下，IL15前肽由SEQ ID NO: 48組成。在一些情況下，LSP包含SEQ ID NO: 47。在一些情況下，LSP由SEQ ID NO: 47組成。在一些情況下，本文所述之免疫細胞表現sIL15。在一些實施例中，sIL15包含有包含與MRISKPHLRSISIQCYLCLLLNSHFLTEAGIHVFILGCFSAGLPKTEANWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS (SEQ ID NO: 11)之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的序列。在一些情況下，sIL15包含有包含與SEQ ID NO: 11之約85%序列一致性的序列。在一些情況下，sIL15包含有包含與SEQ ID NO: 11之約90%序列一致性的序列。在一些情況下，sIL15包含有包含與SEQ ID NO: 11之約95%序列一致性的序列。在一些情況下，sIL15包含有包含與SEQ ID NO: 11之約96%序列一致性的序列。在一些情況下，sIL15包含有包含與SEQ ID NO: 11之約97%序列一致性的序列。在一些情況下，sIL15包含有包含與SEQ ID NO: 11之約98%序列一致性的序列。在一些情況下，sIL15包含有包含與SEQ ID NO: 11之約99%序列一致性的序列。在一些情況下，sIL15包含SEQ ID NO: 11。在一些情況下，sIL15由SEQ ID NO: 11組成。 CCL19
趨化因子(C-C模體)配體19 (CCL19)，亦稱為EBl1配體趨化因子(ELC)及巨噬細胞發炎性蛋白-3-β (MIP-3-β)，在淋巴球再循環及歸巢中發揮作用。CCL19由淋巴結之樹突細胞或巨噬細胞表現，且具有經由其受體CCR7來起始T細胞、B細胞或成熟樹突細胞之遷移的功能。
在某些實施例中，本文所述之免疫細胞進一步表現CCL19。在一些實施例中，CCL19包含有包含與GTNDAEDCCLSVTQKPIPGYIVRNFHYLLIKDGCRVPAVVFTTLRGRQLCAPPDQPWVERIIQRLQRTSAKMKRRSS (SEQ ID NO: 13)之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的序列。在一些實施例中，CCL19包含有包含與SEQ ID NO: 13之約85%序列一致性的序列。在一些實施例中，CCL19包含有包含與SEQ ID NO: 13之約90%序列一致性的序列。在一些實施例中，CCL19包含有包含與SEQ ID NO: 13之約95%序列一致性的序列。在一些實施例中，CCL19包含有包含與SEQ ID NO: 13之約96%序列一致性的序列。在一些實施例中，CCL19包含有包含與SEQ ID NO: 13之約97%序列一致性的序列。在一些實施例中，CCL19包含有包含與SEQ ID NO: 13之約98%序列一致性的序列。在一些實施例中，CCL19包含有包含與SEQ ID NO: 13之約99%序列一致性的序列。在一些實施例中，CCL19包含SEQ ID NO: 13。在一些實施例中，CCL19由SEQ ID NO: 13組成。
在一些實施例中，CCL19進一步包含訊息肽MALLLALSLLVLWTSPAPTLS (SEQ ID NO: 12) (在本文中亦稱為endosp)。在一些情況下，本文所述之免疫細胞表現訊息肽SEQ ID NO: 12及包含有包含與SEQ ID NO: 13之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的序列之CCL19。在一些情況下，CCL19融合至endosp之C末端。 額外免疫功能控制因子
本發明之免疫細胞可進一步表現額外免疫功能控制因子，諸如CCL21、IL-2、IL-4、IL-7、IL-12、IL-13、IL-17、IL-18、IP-10、干擾素-γ、MIP-1α、GM-CSF、M-CSF、TGF-β、XCL1、FLT3L或TNF-α。在一些實施例中，額外免疫功能控制因子包含IL-2。在一些實施例中，額外免疫功能控制因子包含IL-7。在一些實施例中，額外免疫功能控制因子包含干擾素-γ。在一些實施例中，額外免疫功能控制因子包含GM-CSF。在一些實施例中，額外免疫功能控制因子包含TGF-β。在一些實施例中，額外免疫功能控制因子包含TNF-α。在一些實施例中，額外免疫功能控制因子較佳為除了IL-12以外的免疫功能控制因子。 各區域之排列
在某些實施例中，本文揭示一種分離核酸分子，其包含編碼特異性結合至間皮素之經工程改造之細胞表面分子(例如，特異性結合至間皮素之CAR)、IL-15及視情況CCL19的一或多個多核苷酸。在一些實施例中，分離核酸分子包含：編碼CAR之第一多核苷酸，該CAR包含特異性識別人類間皮素之抗體、CD8鉸鏈區、CD8跨膜區、4-1BB胞內區及CD3ζ胞內區；及編碼IL-15之第二多核苷酸。在一些情況下，分離核酸分子包含：編碼CAR之第一多核苷酸，該CAR包含特異性識別人類間皮素之抗體、CD8鉸鏈區、CD8跨膜區、4-1BB胞內區及CD3ζ胞內區；編碼IL-15之第二多核苷酸；及編碼CCL19之第三多核苷酸。在一些實施例中，編碼CAR、IL-15及CCL19之多核苷酸位於核酸分子中之二或更多個不同多核苷酸上。在其他實施例中，分離核酸分子包含編碼CAR及IL-15之多核苷酸、編碼CAR及CCL19之多核苷酸或編碼CAR、IL-15或CCL19之多核苷酸。
在一些實施例中，編碼CAR之多核苷酸包含在特異性識別人類間皮素之抗體的上游的傳訊肽。在一些實施例中，抗體藉由肽連接子(例如，SEQ ID NO: 41)連接至CD8鉸鏈區。在一些實施例中，4-1BB胞內區在多核苷酸中位於CD3ζ胞內區的上游。
多核苷酸可編碼包含與MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSS GILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLS(SEQ ID NO: 3) (在本文中亦稱為ssVH-P4)具有約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的序列之CAR。CAR可包含與SEQ ID NO: 3具有約85%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 3具有約90%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 3具有約95%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 3具有約96%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 3具有約97%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 3具有約98%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 3具有約99%序列一致性的序列。CAR可包含SEQ ID NO: 3。CAR可由SEQ ID NO: 3組成。
多核苷酸可編碼包含與MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSS GIL GSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLS RAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (SEQ ID NO: 46) (在本文中亦稱為ssVH-P4-CAR)具有約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的序列之CAR。CAR可包含與SEQ ID NO: 46具有約85%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 46具有約90%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 46具有約95%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 46具有約96%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 46具有約97%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 46具有約98%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 46具有約99%序列一致性的序列。CAR可包含SEQ ID NO: 46。CAR可由SEQ ID NO: 46組成。
多核苷酸可編碼包含與MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSS GILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLS RAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (SEQ ID NO: 43) (在本文中亦稱為ssVHsp-P4-CD8鉸鏈-TM-41BB-CD3z)具有約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的序列之CAR。CAR可包含與SEQ ID NO: 43具有約85%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 43具有約90%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 43具有約95%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 43具有約96%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 43具有約97%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 43具有約98%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 43具有約99%序列一致性的序列。CAR可包含SEQ ID NO: 43。CAR可由SEQ ID NO: 43組成。
該多核苷酸可編碼包含與MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSS GILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLSPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (SEQ ID NO: 65)具有約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的序列的CAR。CAR可包含與SEQ ID NO: 65具有約85%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 65具有約90%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 65具有約95%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 65具有約96%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 65具有約97%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 65具有約98%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 65具有約99%序列一致性的序列。CAR可包含SEQ ID NO: 65。CAR可由SEQ ID NO: 65組成。
該多核苷酸可編碼包含與MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSS GILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (SEQ ID NO: 66)具有約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的序列的CAR。CAR可包含與SEQ ID NO: 66具有約85%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 66具有約90%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 66具有約95%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 66具有約96%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 66具有約97%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 66具有約98%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 66具有約99%序列一致性的序列。CAR可包含SEQ ID NO: 66。CAR可由SEQ ID NO: 66組成。
該多核苷酸可編碼包含與MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSS GILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLSPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (SEQ ID NO: 67)具有約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的序列的CAR。CAR可包含與SEQ ID NO: 67具有約85%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 67具有約90%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 67具有約95%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 67具有約96%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 67具有約97%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 67具有約98%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 67具有約99%序列一致性的序列。CAR可包含SEQ ID NO: 67。CAR可由SEQ ID NO: 67組成。
該多核苷酸可編碼包含與MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSS GILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (SEQ ID NO: 68)具有約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的序列的CAR。CAR可包含與SEQ ID NO: 68具有約85%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 68具有約90%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 68具有約95%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 68具有約96%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 68具有約97%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 68具有約98%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 68具有約99%序列一致性的序列。CAR可包含SEQ ID NO: 68。CAR可由SEQ ID NO: 68組成。
該多核苷酸可編碼包含與MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSS GILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLS AAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (SEQ ID NO: 69)具有約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的序列的CAR。CAR可包含與SEQ ID NO: 69具有約85%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 69具有約90%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 69具有約95%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 69具有約96%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 69具有約97%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 69具有約98%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 69具有約99%序列一致性的序列。CAR可包含SEQ ID NO: 69。CAR可由SEQ ID NO: 69組成。
該多核苷酸可編碼包含與MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSS GILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLS AAATTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (SEQ ID NO: 70)具有約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的序列的CAR。CAR可包含與SEQ ID NO: 70具有約85%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 70具有約90%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 70具有約95%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 70具有約96%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 70具有約97%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 70具有約98%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 70具有約99%序列一致性的序列。CAR可包含SEQ ID NO: 70。CAR可由SEQ ID NO: 70組成。
該多核苷酸可編碼包含與MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSS GILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLS AAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (SEQ ID NO: 71)具有約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的序列的CAR。CAR可包含與SEQ ID NO: 71具有約85%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 71具有約90%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 71具有約95%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 71具有約96%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 71具有約97%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 71具有約98%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 71具有約99%序列一致性的序列。CAR可包含SEQ ID NO: 71。CAR可由SEQ ID NO: 71組成。
該多核苷酸可編碼包含與MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSS GILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLS RAAATTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (SEQ ID NO: 72)具有約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的序列的CAR。CAR可包含與SEQ ID NO: 72具有約85%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 72具有約90%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 72具有約95%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 72具有約96%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 72具有約97%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 72具有約98%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 72具有約99%序列一致性的序列。CAR可包含SEQ ID NO: 72。CAR可由SEQ ID NO: 72組成。
該多核苷酸可編碼包含與MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSS GILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLS RAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (SEQ ID NO: 73)具有約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的序列的CAR。CAR可包含與SEQ ID NO: 73具有約85%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 73具有約90%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 73具有約95%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 73具有約96%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 73具有約97%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 73具有約98%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 73具有約99%序列一致性的序列。CAR可包含SEQ ID NO: 73。CAR可由SEQ ID NO: 73組成。
該多核苷酸可編碼包含與MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSS GILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLS RAAATTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (SEQ ID NO: 74)具有約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的序列的CAR。CAR可包含與SEQ ID NO: 74具有約85%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 74具有約90%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 74具有約95%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 74具有約96%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 74具有約97%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 74具有約98%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 74具有約99%序列一致性的序列。CAR可包含SEQ ID NO: 74。CAR可由SEQ ID NO: 74組成。
該多核苷酸可編碼包含與MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSS GILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLS AAATTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (SEQ ID NO: 75)具有約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的序列的CAR。CAR可包含與SEQ ID NO: 75具有約85%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 75具有約90%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 75具有約95%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 75具有約96%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 75具有約97%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 75具有約98%序列一致性的序列。CAR可包含與SEQ ID NO: 75具有約99%序列一致性的序列。CAR可包含SEQ ID NO: 43。CAR可由SEQ ID NO: 75組成。
編碼本文所述之CAR之多核苷酸可包含與以下序列具有約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的核酸序列：ATGGACTGGACATGGCGGATACTCTTCCTCGTCGCTGCTGCAACCGGAGCCCACAGCCAGGTGCAGCTCCAGCAGTCTGGGCCAGGTTTGGTGACTCCTAGTCAGACATTGAGCTTGACTTGTGCTATCAGCGGAGACTCTGTTTCATCTAATTCTGCAACTTGGAACTGGATTCGGCAGTCCCCCAGCCGGGGGCTCGAGTGGTTGGGTCGGACCTACTATCGGAGCAAATGGTACAATGACTATGCAGTGAGCGTCAAATCAAGAATGAGCATCAATCCTGACACAAGCAAGAACCAGTTTAGCCTTCAGCTTAATAGCGTGACTCCAGAGGACACAGCTGTGTACTATTGCGCGAGAGGCATGATGACATACTATTACGGAATGGACGTGTGGGGCCAGGGAACTACTGTTACAGTGTCAAGCGGAATCCTCGGTAGCGGAGGCGGCGGTTCCGGCGGAGGGGGTAGTGGTGGCGGGGGTAGTCAACCTGTGCTGACCCAGAGCAGCTCTCTTAGTGCTAGCCCAGGTGCAAGTGCAAGTCTTACCTGTACACTGCGCTCCGGTATTAATGTGGGCCCTTACCGAATTTACTGGTACCAGCAGAAACCAGGCTCCCCTCCCCAGTATCTGCTGAACTATAAGTCTGACTCAGACAAACAGCAGGGCTCCGGTGTGCCATCCCGATTTAGTGGCTCAAAGGATGCTAGTGCAAATGCCGGTGTTCTCCTGATCAGCGGACTCAGATCAGAGGACGAAGCAGACTATTACTGTATGATTTGGCATAGCAGCGCTGCTGTCTTCGGAGGAGGGACTCAGCTCACTGTCTTGAGTCGGGCCGCTGCACCTACCACTACCCCTGCCCCTCGACCCCCTACTCCCGCCCCAACTATCGCATCCCAACCACTCTCTCTCAGACCCGAAGCCTGTAGACCCGCAGCCGGTGGCGCTGTGCATACTCGCGGACTTGATTTTGCTTGTGATATTTATATCTGGGCCCCCCTTGCCGGAACTTGTGGAGTTCTCCTGCTGTCTCTCGTAATCACCCTTTATTGTAACAAACGGGGGCGCAAAAAACTTCTTTACATTTTCAAGCAGCCCTTTATGCGGCCCGTGCAGACCACACAGGAAGAAGATGGCTGCAGCTGCAGGTTCCCAGAGGAAGAAGAGGGCGGCTGCGAGCTGCGAGTAAAGTTCAGCCGGAGCGCCGATGCACCTGCATACCAGCAGGGTCAGAACCAGCTCTACAATGAGCTGAACCTGGGCAGAAGAGAGGAATATGATGTACTCGACAAGAGAAGGGGACGCGATCCAGAGATGGGCGGCAAACCACGGCGGAAAAATCCGCAGGAGGGGCTCTATAACGAGCTCCAGAAGGACAAGATGGCAGAAGCCTACTCAGAAATTGGCATGAAAGGAGAGAGAAGGAGGGGAAAGGGCCATGATGGCCTTTACCAAGGGTTGTCTACTGCCACCAAGGATACGTACGATGCACTCCATATGCAGGCTCTTCCTCCCCGA (SEQ ID NO: 50)，ATGGACTGGACATGGCGGATACTCTTCCTCGTCGCTGCTGCAACCGGAGCCCACAGCCAGGTGCAGCTCCAGCAGTCTGGGCCAGGTTTGGTGACTCCTAGTCAGACATTGAGCTTGACTTGTGCTATCAGCGGAGACTCTGTTTCATCTAATTCTGCAACTTGGAACTGGATTCGGCAGTCCCCCAGCCGGGGGCTCGAGTGGTTGGGTCGGACCTACTATCGGAGCAAATGGTACAATGACTATGCAGTGAGCGTCAAATCAAGAATGAGCATCAATCCTGACACAAGCAAGAACCAGTTTAGCCTTCAGCTTAATAGCGTGACTCCAGAGGACACAGCTGTGTACTATTGCGCGAGAGGCATGATGACATACTATTACGGAATGGACGTGTGGGGCCAGGGAACTACTGTTACAGTGTCAAGCGGAATCCTCGGTAGCGGAGGCGGCGGTTCCGGCGGAGGGGGTAGTGGTGGCGGGGGTAGTCAACCTGTGCTGACCCAGAGCAGCTCTCTTAGTGCTAGCCCAGGTGCAAGTGCAAGTCTTACCTGTACACTGCGCTCCGGTATTAATGTGGGCCCTTACCGAATTTACTGGTACCAGCAGAAACCAGGATCCCCTCCCCAGTATCTGCTGAACTATAAGTCTGACTCAGACAAACAGCAGGGCTCCGGTGTGCCATCCCGATTTAGTGGCTCAAAGGATGCTAGTGCAAATGCCGGTGTTCTCCTGATCAGCGGACTCAGATCAGAGGACGAAGCAGACTATTACTGTATGATTTGGCATAGCAGCGCTGCTGTCTTCGGAGGAGGGACTCAGCTCACTGTCTTGAGTCGGGCCGCTGCACCTACCACTACCCCTGCCCCTCGACCCCCTACTCCCGCCCCAACTATCGCATCCCAACCACTCTCTCTCAGACCCGAAGCCTGTAGACCCGCAGCCGGTGGCGCTGTGCATACTCGCGGACTTGATTTTGCTTGTGATATTTATATCTGGGCCCCCCTTGCCGGAACTTGTGGAGTTCTCCTGCTGTCTCTCGTAATCACCCTTTATTGTAACAAACGGGGGCGCAAAAAACTTCTTTACATTTTCAAGCAGCCCTTTATGCGGCCCGTGCAGACCACACAGGAAGAAGATGGCTGCAGCTGCAGGTTCCCAGAGGAAGAAGAGGGCGGCTGCGAGCTGCGAGTAAAGTTCAGCCGGAGCGCCGATGCACCTGCATACCAGCAGGGTCAGAACCAGCTCTACAATGAGCTGAACCTGGGCAGAAGAGAGGAATATGATGTACTCGACAAGAGAAGGGGACGCGATCCAGAGATGGGCGGCAAACCACGGCGGAAAAATCCGCAGGAGGGGCTCTATAACGAGCTCCAGAAGGACAAGATGGCAGAAGCCTACTCAGAAATTGGCATGAAAGGAGAGAGAAGGAGGGGAAAGGGCCATGATGGCCTTTACCAAGGGTTGTCTACTGCCACCAAGGATACGTACGATGCACTCCATATGCAGGCTCTTCCTCCCCGA (SEQ ID NO: 51)，或ATGGATTGGACCTGGCGAATACTCTTCCTCGTCGCAGCGGCCACTGGTGCCCATTCACAAGTCCAACTGCAGCAGAGCGGACCTGGCCTGGTGACACCCAGTCAGACTCTCAGCCTGACTTGTGCAATCAGCGGCGATAGTGTGTCTAGTAATTCTGCAACATGGAACTGGATCAGACAATCACCAAGTCGGGGACTGGAGTGGCTCGGTAGAACCTATTATAGGTCCAAATGGTATAACGATTATGCAGTGTCCGTGAAGTCCCGAATGTCTATCAACCCTGATACTAGTAAGAATCAATTCAGTCTGCAGCTTAACAGCGTAACCCCCGAAGATACTGCTGTGTATTACTGTGCCCGGGGTATGATGACTTACTACTACGGAATGGATGTGTGGGGGCAGGGAACAACCGTTACTGTTTCATCCGGCATTCTCGGGAGCGGAGGCGGTGGAAGCGGTGGGGGAGGGTCCGGGGGAGGAGGATCTCAGCCTGTTCTTACTCAATCTTCTTCCCTCTCCGCCTCACCCGGGGCCTCCGCCTCACTGACCTGCACTCTGCGATCAGGCATCAACGTTGGGCCTTATAGAATCTACTGGTACCAGCAAAAGCCTGGATCACCGCCCCAGTACCTGCTGAACTATAAATCAGACTCAGACAAGCAGCAGGGCTCCGGCGTGCCGAGTCGATTTAGCGGGAGCAAGGACGCGTCTGCTAATGCCGGCGTGCTTCTCATCAGCGGGCTCCGCAGTGAGGATGAGGCAGATTACTACTGCATGATTTGGCATAGCAGTGCAGCCGTATTTGGCGGAGGAACACAGCTGACTGTCCTCTCTCGCGCCGCCGCTCCGACCACCACCCCTGCACCACGCCCACCTACTCCTGCGCCAACCATTGCCAGCCAGCCTCTCTCTCTCCGACCCGAGGCCTGTAGACCTGCCGCTGGCGGTGCAGTTCATACTCGGGGTCTCGATTTCGCCTGCGACATCTACATCTGGGCACCACTGGCTGGCACTTGTGGCGTTTTGCTCCTGTCCCTGGTGATCACTCTCTACTGTAATAAGAGGGGGAGGAAGAAACTCCTGTATATTTTCAAACAACCCTTTATGCGCCCTGTCCAAACCACCCAGGAAGAAGATGGATGTAGTTGCAGATTCCCAGAAGAAGAGGAGGGTGGGTGTGAACTTAGGGTGAAGTTTAGTCGCAGTGCCGACGCTCCCGCTTACCAACAGGGTCAGAACCAACTCTACAATGAGCTGAATCTGGGGAGGCGCGAAGAATACGACGTTCTGGATAAAAGACGCGGCCGCGACCCCGAGATGGGCGGGAAACCGCGGAGAAAGAACCCACAGGAAGGATTGTACAATGAGCTCCAGAAAGATAAGATGGCAGAAGCCTACTCCGAGATCGGCATGAAGGGGGAGCGAAGGCGCGGGAAAGGACACGATGGGCTGTACCAGGGTCTTTCAACCGCGACAAAGGACACCTATGATGCTCTCCATATGCAGGCCCTCCCGCCACGC (SEQ ID NO: 52)。多核苷酸可包含與SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 51或SEQ ID NO: 52具有約85%序列一致性的核酸序列。多核苷酸可包含與SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 51或SEQ ID NO: 52具有約90%序列一致性的核酸序列。多核苷酸可包含與SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 51或SEQ ID NO: 52具有約95%序列一致性的核酸序列。多核苷酸可包含與SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 51或SEQ ID NO: 52具有約96%序列一致性的核酸序列。多核苷酸可包含與SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 51或SEQ ID NO: 52具有約97%序列一致性的核酸序列。多核苷酸可包含與SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 51或SEQ ID NO: 52具有約98%序列一致性的核酸序列。多核苷酸可包含與SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 51或SEQ ID NO: 52具有約99%序列一致性的核酸序列。多核苷酸可包含SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 51或SEQ ID NO: 52。多核苷酸可由SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 51或SEQ ID NO: 52組成。
在一些實施例中，編碼CAR之多核苷酸、編碼IL-15之多核苷酸及視情況編碼CCL19之多核苷酸各自獨立地在包含編碼自身裂解2A肽(2A肽)或內部核糖體進入位點(IRES)之多核苷酸的啟動子下轉錄。在一些實施例中，編碼IL-15之多核苷酸及編碼CCL19之多核苷酸各自獨立地在包含編碼2A肽或IRES之多核苷酸的啟動子下轉錄。在一些實施例中，編碼IL-15之多核苷酸在包含編碼2A肽或IRES之多核苷酸的啟動子下轉錄。
在一些實施例中，編碼CAR之多核苷酸、編碼IL-15之多核苷酸及視情況編碼CCL19之多核苷酸各自獨立地在包含編碼2A肽之多核苷酸的啟動子下轉錄。2A肽家族中有四個成員：P2A、E2A、F2A及T2A。P2A衍生自豬鐵士古病毒-1 2A。E2A衍生自馬鼻炎A病毒。F2A衍生自口蹄疫病毒18。T2A衍生自thosea asigna病毒2A。2A肽成員之示範性序列包括： P2A - ATNFSLLKQAGDVEENPGP； E2A - QCTNYALLKLAGDVESNPGP； F2A - VKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP；及 T2A – EGRGSLLTCGDVEENPGP。
在一些實施例中，肽連接子進一步添加至2A肽之末端，例如，N末端。在一些實施例中，肽連接子包含GSG。在一些情況下，P2A包含GSGATNFSLLKQAGDVEENPGP (SEQ ID NO: 5)。
在一些實施例中，編碼CAR之多核苷酸、編碼IL-15之多核苷酸及視情況編碼CCL19之多核苷酸各自獨立地在包含編碼2A肽之多核苷酸的啟動子下轉錄。在一些情況下，編碼IL-15之多核苷酸及編碼CCL19之多核苷酸各自在包含相同2A肽之啟動子下轉錄。在一些情況下，編碼IL-15之多核苷酸及編碼CCL19之多核苷酸各自在包含兩個不同2A肽的啟動子下轉錄。在一些情況下，編碼CAR之多核苷酸、編碼IL-15之多核苷酸及編碼CCL19之多核苷酸各自獨立地在包含不同2A肽的啟動子下轉錄。
在一些實施例中，編碼CAR之多核苷酸、編碼IL-15之多核苷酸及視情況編碼CCL19之多核苷酸各自獨立地在包含編碼P2A肽之多核苷酸的啟動子下轉錄。P2A肽可包含ATNFSLLKQAGDVEENPGP。P2A肽亦可包含SEQ ID NO: 5。
在一些實施例中，編碼CAR之多核苷酸及編碼IL-15之多核苷酸自5'末端至3'末端呈以下排列在核酸分子中：
編碼CAR之多核苷酸-編碼IL-15之多核苷酸；或
編碼IL-15之多核苷酸-編碼CAR之多核苷酸。
在一些實施例中，編碼CAR之多核苷酸、編碼IL-15之多核苷酸及編碼CCL19之多核苷酸自5'末端至3'末端呈以下排列在核酸分子中：
編碼CAR之多核苷酸-編碼IL-15之多核苷酸–編碼CCL19之多核苷酸；
編碼CAR之多核苷酸-編碼CCL19之多核苷酸–編碼IL-15之多核苷酸；
編碼IL-15之多核苷酸–編碼CAR之多核苷酸–編碼CCL19之多核苷酸；
編碼CCL19之多核苷酸–編碼CAR之多核苷酸-編碼IL-15之多核苷酸；
編碼IL-15之多核苷酸–編碼CCL19之多核苷酸-編碼CAR之多核苷酸；或
編碼CCL19之多核苷酸–編碼IL-15之多核苷酸-編碼CAR之多核苷酸。
在一些實施例中，分離核酸分子包含編碼mIL-15/Ra之多核苷酸及編碼CCL19之多核苷酸。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與MYRMQLLSCIALSLALVTNSATSNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS SGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSPSSNNTAATTAAIVPGSQLMPSKSPSTGTTEISSHESSHGTPSQTTAKNWELTASASHQPPGVYPQGHSDTTVAISTSTVLLCGLSAVSLLACYLKSRQTPPLASVEMEAMEALPVTWGTSSRDEDLENCSHHLGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMALLLALSLLVLWTSPAPTLSGTNDAEDCCLSVTQKPIPGYIVRNFHYLLIKDGCRVPAVVFTTLRGRQLCAPPDQPWVERIIQRLQRTSAKMKRRSS (SEQ ID NO: 14) (在本文中亦稱為mIL15/Ra-P2A-CCL19)之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 14之約85%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 14之約90%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 14之約95%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 14之約96%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 14之約97%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 14之約98%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 14之約99%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包括SEQ ID NO: 14之多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼由SEQ ID NO: 14組成之多肽。
在一些實施例中，分離核酸分子包含編碼sushi15之多核苷酸及編碼CCL19之多核苷酸。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與MAPRRARGCRTLGLPALLLLLLLRPPATRGITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR SGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMALLLALSLLVLWTSPAPTLSGTNDAEDCCLSVTQKPIPGYIVRNFHYLLIKDGCRVPAVVFTTLRGRQLCAPPDQPWVERIIQRLQRTSAKMKRRSS (SEQ ID NO: 31) (在本文中亦稱為IL15Rasp-sushi15-P2A-endosp-CCL19或sushi15-CCL19)之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 31之約85%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 31之約90%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 31之約95%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 31之約96%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 31之約97%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 31之約98%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 31之約99%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包括SEQ ID NO: 31之多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼由SEQ ID NO: 31組成之多肽。
在一些實施例中，分離核酸分子包含編碼特異性結合至間皮素之CAR之多核苷酸及編碼mIL-15/Ra之多核苷酸。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSSGILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLSRAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMYRMQLLSCIALSLALVTNSATSNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSSGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSPSSNNTAATTAAIVPGSQLMPSKSPSTGTTEISSHESSHGTPSQTTAKNWELTASASHQPPGVYPQGHSDTTVAISTSTVLLCGLSAVSLLACYLKSRQTPPLASVEMEAMEALPVTWGTSSRDEDLENCSHHL (SEQ ID NO: 34) (在本文中亦稱為ssVH-P4-CAR-P2A-IL2sp-mIL15/Ra或P4-BB-mIL15/Ra)之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 34之約85%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 34之約90%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 34之約95%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 34之約96%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 34之約97%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 34之約98%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 34之約99%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包括SEQ ID NO: 34之多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼由SEQ ID NO: 34組成之多肽。
在一些實施例中，編碼ssVH-P4-CAR-P2A-IL2sp-mIL15/Ra或P4-BB-mIL15/Ra之分離核酸分子包含有包含與ATGGACTGGACATGGCGGATACTCTTCCTCGTCGCTGCTGCAACCGGAGCCCACAGCCAGGTGCAGCTCCAGCAGTCTGGGCCAGGTTTGGTGACTCCTAGTCAGACATTGAGCTTGACTTGTGCTATCAGCGGAGACTCTGTTTCATCTAATTCTGCAACTTGGAACTGGATTCGGCAGTCCCCCAGCCGGGGGCTCGAGTGGTTGGGTCGGACCTACTATCGGAGCAAATGGTACAATGACTATGCAGTGAGCGTCAAATCAAGAATGAGCATCAATCCTGACACAAGCAAGAACCAGTTTAGCCTTCAGCTTAATAGCGTGACTCCAGAGGACACAGCTGTGTACTATTGCGCGAGAGGCATGATGACATACTATTACGGAATGGACGTGTGGGGCCAGGGAACTACTGTTACAGTGTCAAGCGGAATCCTCGGTAGCGGAGGCGGCGGTTCCGGCGGAGGGGGTAGTGGTGGCGGGGGTAGTCAACCTGTGCTGACCCAGAGCAGCTCTCTTAGTGCTAGCCCAGGTGCAAGTGCAAGTCTTACCTGTACACTGCGCTCCGGTATTAATGTGGGCCCTTACCGAATTTACTGGTACCAGCAGAAACCAGGCTCCCCTCCCCAGTATCTGCTGAACTATAAGTCTGACTCAGACAAACAGCAGGGCTCCGGTGTGCCATCCCGATTTAGTGGCTCAAAGGATGCTAGTGCAAATGCCGGTGTTCTCCTGATCAGCGGACTCAGATCAGAGGACGAAGCAGACTATTACTGTATGATTTGGCATAGCAGCGCTGCTGTCTTCGGAGGAGGGACTCAGCTCACTGTCTTGAGTCGGGCCGCTGCACCTACCACTACCCCTGCCCCTCGACCCCCTACTCCCGCCCCAACTATCGCATCCCAACCACTCTCTCTCAGACCCGAAGCCTGTAGACCCGCAGCCGGTGGCGCTGTGCATACTCGCGGACTTGATTTTGCTTGTGATATTTATATCTGGGCCCCCCTTGCCGGAACTTGTGGAGTTCTCCTGCTGTCTCTCGTAATCACCCTTTATTGTAACAAACGGGGGCGCAAAAAACTTCTTTACATTTTCAAGCAGCCCTTTATGCGGCCCGTGCAGACCACACAGGAAGAAGATGGCTGCAGCTGCAGGTTCCCAGAGGAAGAAGAGGGCGGCTGCGAGCTGCGAGTAAAGTTCAGCCGGAGCGCCGATGCACCTGCATACCAGCAGGGTCAGAACCAGCTCTACAATGAGCTGAACCTGGGCAGAAGAGAGGAATATGATGTACTCGACAAGAGAAGGGGACGCGATCCAGAGATGGGCGGCAAACCACGGCGGAAAAATCCGCAGGAGGGGCTCTATAACGAGCTCCAGAAGGACAAGATGGCAGAAGCCTACTCAGAAATTGGCATGAAAGGAGAGAGAAGGAGGGGAAAGGGCCATGATGGCCTTTACCAAGGGTTGTCTACTGCCACCAAGGATACGTACGATGCACTCCATATGCAGGCTCTTCCTCCCCGAGGTTCAGGCGCAACAAATTTTTCACTTCTTAAACAAGCTGGCGATGTCGAGGAAAACCCAGGTCCCATGTATAGAATGCAGCTTCTGTCATGTATCGCACTGAGTCTGGCCCTGGTGACCAACAGTGCCACCAGCAACTGGGTGAATGTGATAAGCGACCTTAAGAAAATAGAAGACCTTATTCAGTCCATGCACATAGATGCCACACTGTACACCGAGAGCGATGTGCACCCTTCCTGCAAAGTGACAGCTATGAAATGCTTCCTTCTGGAACTGCAAGTAATTTCATTGGAATCTGGCGATGCTTCCATACATGACACCGTGGAAAACCTTATTATTTTGGCTAACAATTCATTGAGCTCAAATGGAAACGTGACAGAATCCGGTTGTAAGGAATGTGAAGAGCTGGAAGAAAAAAATATCAAGGAATTCCTGCAGAGCTTTGTTCACATTGTGCAAATGTTTATTAATACATCCTCAGGGGGCGGTTCCGGAGGCGGGGGAAGTGGCGGAGGAGGAAGCGGCGGAGGAGGAAGCGGAGGAGGATCACTTCAAATCACATGTCCCCCCCCTATGAGTGTTGAACATGCTGACATCTGGGTGAAATCCTATTCCCTTTATTCAAGAGAACGATACATATGTAATTCCGGGTTTAAGAGGAAAGCAGGCACATCATCTCTCACCGAATGTGTCCTGAATAAGGCGACAAACGTAGCTCACTGGACTACGCCCTCCCTCAAATGCATTAGAGACCCAGCACTCGTGCACCAAAGGCCAGCCCCCCCAAGCACCGTCACTACTGCAGGTGTAACCCCGCAACCAGAATCCCTCTCACCAAGCGGAAAAGAGCCAGCCGCATCTTCTCCTAGTTCCAATAATACAGCCGCGACAACAGCCGCAATTGTCCCTGGAAGCCAGTTGATGCCATCAAAGTCCCCAAGTACGGGTACGACCGAAATCTCCTCCCACGAAAGCAGCCACGGAACACCAAGCCAGACTACCGCCAAGAACTGGGAGCTGACCGCTTCTGCATCACATCAGCCGCCGGGAGTGTATCCACAGGGGCACTCTGATACCACAGTAGCAATCTCAACCTCCACCGTCCTGCTGTGTGGCCTTAGCGCTGTGTCTCTCCTCGCATGTTACCTCAAATCCAGGCAGACCCCCCCCCTTGCTAGTGTCGAAATGGAGGCAATGGAAGCACTTCCCGTGACATGGGGCACTTCTAGCAGAGATGAGGACCTTGAAAACTGCTCACACCACCTC (SEQ ID NO: 37)之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 37之約85%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 37之約90%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 37之約95%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 37之約96%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 37之約97%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 37之約98%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 37之約99%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含SEQ ID NO: 37。在一些情況下，分離核酸分子由SEQ ID NO: 37組成。
在一些實施例中，分離核酸分子包含編碼特異性結合至間皮素之CAR之多核苷酸及編碼sushi15之多核苷酸。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSSGILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLSRAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMAPRRARGCRTLGLPALLLLLLLRPPATRGITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRSGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO: 35) (在本文中亦稱為ssVH-P4-CAR-P2A-sushi15或P4-BB-sushi15)之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 35之約85%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 35之約90%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 35之約95%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 35之約96%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 35之約97%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 35之約98%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 35之約99%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包括SEQ ID NO: 35之多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼由SEQ ID NO: 35組成之多肽。
在一些實施例中，編碼ssVH-P4-CAR-P2A-sushi15或P4-BB-sushi15之分離核酸分子包含與ATGGACTGGACATGGCGGATACTCTTCCTCGTCGCTGCTGCAACCGGAGCCCACAGCCAGGTGCAGCTCCAGCAGTCTGGGCCAGGTTTGGTGACTCCTAGTCAGACATTGAGCTTGACTTGTGCTATCAGCGGAGACTCTGTTTCATCTAATTCTGCAACTTGGAACTGGATTCGGCAGTCCCCCAGCCGGGGGCTCGAGTGGTTGGGTCGGACCTACTATCGGAGCAAATGGTACAATGACTATGCAGTGAGCGTCAAATCAAGAATGAGCATCAATCCTGACACAAGCAAGAACCAGTTTAGCCTTCAGCTTAATAGCGTGACTCCAGAGGACACAGCTGTGTACTATTGCGCGAGAGGCATGATGACATACTATTACGGAATGGACGTGTGGGGCCAGGGAACTACTGTTACAGTGTCAAGCGGAATCCTCGGTAGCGGAGGCGGCGGTTCCGGCGGAGGGGGTAGTGGTGGCGGGGGTAGTCAACCTGTGCTGACCCAGAGCAGCTCTCTTAGTGCTAGCCCAGGTGCAAGTGCAAGTCTTACCTGTACACTGCGCTCCGGTATTAATGTGGGCCCTTACCGAATTTACTGGTACCAGCAGAAACCAGGATCCCCTCCCCAGTATCTGCTGAACTATAAGTCTGACTCAGACAAACAGCAGGGCTCCGGTGTGCCATCCCGATTTAGTGGCTCAAAGGATGCTAGTGCAAATGCCGGTGTTCTCCTGATCAGCGGACTCAGATCAGAGGACGAAGCAGACTATTACTGTATGATTTGGCATAGCAGCGCTGCTGTCTTCGGAGGAGGGACTCAGCTCACTGTCTTGAGTCGGGCCGCTGCACCTACCACTACCCCTGCCCCTCGACCCCCTACTCCCGCCCCAACTATCGCATCCCAACCACTCTCTCTCAGACCCGAAGCCTGTAGACCCGCAGCCGGTGGCGCTGTGCATACTCGCGGACTTGATTTTGCTTGTGATATTTATATCTGGGCCCCCCTTGCCGGAACTTGTGGAGTTCTCCTGCTGTCTCTCGTAATCACCCTTTATTGTAACAAACGGGGGCGCAAAAAACTTCTTTACATTTTCAAGCAGCCCTTTATGCGGCCCGTGCAGACCACACAGGAAGAAGATGGCTGCAGCTGCAGGTTCCCAGAGGAAGAAGAGGGCGGCTGCGAGCTGCGAGTAAAGTTCAGCCGGAGCGCCGATGCACCTGCATACCAGCAGGGTCAGAACCAGCTCTACAATGAGCTGAACCTGGGCAGAAGAGAGGAATATGATGTACTCGACAAGAGAAGGGGACGCGATCCAGAGATGGGCGGCAAACCACGGCGGAAAAATCCGCAGGAGGGGCTCTATAACGAGCTCCAGAAGGACAAGATGGCAGAAGCCTACTCAGAAATTGGCATGAAAGGAGAGAGAAGGAGGGGAAAGGGCCATGATGGCCTTTACCAAGGGTTGTCTACTGCCACCAAGGATACGTACGATGCACTCCATATGCAGGCTCTTCCTCCCCGAGGGTCTGGCGCTACGAATTTCTCTCTCCTTAAACAGGCCGGAGACGTGGAAGAAAATCCCGGCCCGATGGCGCCCCGCAGGGCCCGCGGGTGTCGAACATTGGGTCTGCCTGCTCTCTTGCTGCTGTTGCTTCTCAGACCTCCCGCCACACGCGGAATTACGTGCCCTCCCCCCATGTCTGTGGAACATGCCGACATATGGGTCAAGTCTTACAGTCTTTACTCTAGAGAACGGTATATCTGCAATAGCGGGTTCAAAAGAAAAGCAGGGACTTCCAGCCTGACAGAGTGCGTACTGAATAAGGCCACTAACGTTGCTCACTGGACCACCCCATCATTGAAGTGTATTCGATCAGGAGGCGGAAGCGGTGGTGGGGGCTCAGGGGGTGGCGGTAGTGGAGGCGGGGGCAGCGGAGGGGGCTCTTTGCAAAACTGGGTTAATGTTATTAGCGACCTTAAGAAAATCGAGGACCTGATACAGTCCATGCACATCGATGCGACCCTGTACACTGAGAGCGATGTGCATCCCAGTTGCAAAGTGACTGCTATGAAATGCTTTCTGCTCGAGTTGCAGGTGATCTCCCTGGAAAGCGGCGACGCCTCAATACACGACACGGTCGAAAATCTGATCATTCTCGCCAACAACTCTCTCTCAAGTAACGGGAATGTGACAGAAAGTGGATGCAAAGAATGCGAGGAACTTGAGGAGAAAAACATTAAAGAATTCCTCCAGTCCTTCGTCCACATCGTGCAGATGTTTATCAATACTTCC (SEQ ID NO: 38)之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 38之約85%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 38之約90%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 38之約95%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 38之約96%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 38之約97%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 38之約98%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 38之約99%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含SEQ ID NO: 38。在一些情況下，分離核酸分子由SEQ ID NO: 38組成。
在一些實施例中，分離核酸分子包含編碼特異性結合至間皮素之CAR之多核苷酸、編碼mIL-15/Ra之多核苷酸及編碼CCL19之多核苷酸。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSSGILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLSRAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMYRMQLLSCIALSLALVTNSATSNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSSGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSPSSNNTAATTAAIVPGSQLMPSKSPSTGTTEISSHESSHGTPSQTTAKNWELTASASHQPPGVYPQGHSDTTVAISTSTVLLCGLSAVSLLACYLKSRQTPPLASVEMEAMEALPVTWGTSSRDEDLENCSHHLGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMALLLALSLLVLWTSPAPTLSGTNDAEDCCLSVTQKPIPGYIVRNFHYLLIKDGCRVPAVVFTTLRGRQLCAPPDQPWVERIIQRLQRTSAKMKRRSS (SEQ ID NO: 36) (在本文中亦稱為ssVH-P4-CAR-P2A-IL2sp-mIL15/Ra-P2A-CCL19或P4-BB-mIL15-CCL19)之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 36之約85%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 36之約90%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 36之約95%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 36之約96%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 36之約97%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 36之約98%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 36之約99%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包括SEQ ID NO: 36之多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼由SEQ ID NO: 36組成之多肽。
在一些實施例中，編碼ssVH-P4-CAR-P2A-IL2sp-mIL15/Ra-P2A-CCL19或P4-BB-mIL15-CCL19之分離核酸分子包含有包含與ATGGATTGGACCTGGCGAATACTCTTCCTCGTCGCAGCGGCCACTGGTGCCCATTCACAAGTCCAACTGCAGCAGAGCGGACCTGGCCTGGTGACACCCAGTCAGACTCTCAGCCTGACTTGTGCAATCAGCGGCGATAGTGTGTCTAGTAATTCTGCAACATGGAACTGGATCAGACAATCACCAAGTCGGGGACTGGAGTGGCTCGGTAGAACCTATTATAGGTCCAAATGGTATAACGATTATGCAGTGTCCGTGAAGTCCCGAATGTCTATCAACCCTGATACTAGTAAGAATCAATTCAGTCTGCAGCTTAACAGCGTAACCCCCGAAGATACTGCTGTGTATTACTGTGCCCGGGGTATGATGACTTACTACTACGGAATGGATGTGTGGGGGCAGGGAACAACCGTTACTGTTTCATCCGGCATTCTCGGGAGCGGAGGCGGTGGAAGCGGTGGGGGAGGGTCCGGGGGAGGAGGATCTCAGCCTGTTCTTACTCAATCTTCTTCCCTCTCCGCCTCACCCGGGGCCTCCGCCTCACTGACCTGCACTCTGCGATCAGGCATCAACGTTGGGCCTTATAGAATCTACTGGTACCAGCAAAAGCCTGGATCACCGCCCCAGTACCTGCTGAACTATAAATCAGACTCAGACAAGCAGCAGGGCTCCGGCGTGCCGAGTCGATTTAGCGGGAGCAAGGACGCGTCTGCTAATGCCGGCGTGCTTCTCATCAGCGGGCTCCGCAGTGAGGATGAGGCAGATTACTACTGCATGATTTGGCATAGCAGTGCAGCCGTATTTGGCGGAGGAACACAGCTGACTGTCCTCTCTCGCGCCGCCGCTCCGACCACCACCCCTGCACCACGCCCACCTACTCCTGCGCCAACCATTGCCAGCCAGCCTCTCTCTCTCCGACCCGAGGCCTGTAGACCTGCCGCTGGCGGTGCAGTTCATACTCGGGGTCTCGATTTCGCCTGCGACATCTACATCTGGGCACCACTGGCTGGCACTTGTGGCGTTTTGCTCCTGTCCCTGGTGATCACTCTCTACTGTAATAAGAGGGGGAGGAAGAAACTCCTGTATATTTTCAAACAACCCTTTATGCGCCCTGTCCAAACCACCCAGGAAGAAGATGGATGTAGTTGCAGATTCCCAGAAGAAGAGGAGGGTGGGTGTGAACTTAGGGTGAAGTTTAGTCGCAGTGCCGACGCTCCCGCTTACCAACAGGGTCAGAACCAACTCTACAATGAGCTGAATCTGGGGAGGCGCGAAGAATACGACGTTCTGGATAAAAGACGCGGCCGCGACCCCGAGATGGGCGGGAAACCGCGGAGAAAGAACCCACAGGAAGGATTGTACAATGAGCTCCAGAAAGATAAGATGGCAGAAGCCTACTCCGAGATCGGCATGAAGGGGGAGCGAAGGCGCGGGAAAGGACACGATGGGCTGTACCAGGGTCTTTCAACCGCGACAAAGGACACCTATGATGCTCTCCATATGCAGGCCCTCCCGCCACGCGGAAGTGGAGCAACTAATTTTAGCCTTCTGAAACAAGCTGGCGATGTTGAGGAAAATCCTGGGCCGATGTACAGGATGCAGCTGCTTTCTTGCATTGCACTGAGTTTGGCACTCGTCACCAACTCTGCCACATCAAATTGGGTTAACGTTATCAGCGATCTGAAGAAAATCGAGGATTTGATCCAGAGTATGCATATTGACGCAACCTTGTATACAGAATCTGATGTGCACCCAAGCTGTAAAGTCACAGCTATGAAATGCTTTTTGCTGGAACTCCAAGTGATCTCCCTCGAATCCGGCGATGCATCCATCCACGATACTGTCGAAAACCTTATAATTTTGGCCAATAACAGCCTCAGCAGCAATGGCAACGTGACAGAGTCTGGGTGTAAGGAGTGTGAAGAACTGGAGGAGAAAAATATTAAAGAATTCCTGCAGTCCTTTGTACACATTGTGCAAATGTTCATTAACACTTCAAGTGGCGGCGGGAGCGGCGGGGGTGGTTCAGGTGGTGGCGGCAGCGGTGGTGGGGGGTCTGGCGGGGGTAGTCTCCAAATTACTTGTCCTCCCCCAATGAGCGTTGAACACGCCGACATTTGGGTCAAGTCTTATTCACTGTACAGCCGAGAAAGATATATCTGTAACTCTGGATTTAAGCGCAAGGCCGGAACGTCTAGTCTGACTGAGTGCGTGCTGAATAAGGCCACTAATGTTGCCCACTGGACTACCCCCAGCCTGAAGTGTATTCGCGATCCTGCCTTGGTGCACCAACGACCCGCGCCACCCAGCACAGTCACTACTGCCGGTGTGACTCCACAGCCCGAGTCTTTGTCCCCGAGCGGAAAGGAGCCCGCCGCATCTTCACCTTCTTCAAATAACACGGCCGCCACAACCGCTGCAATCGTCCCAGGTAGTCAACTGATGCCCTCTAAAAGCCCCTCTACGGGGACAACTGAGATAAGCAGCCACGAGTCTAGTCACGGCACACCAAGCCAGACTACCGCCAAAAACTGGGAGCTGACCGCCTCTGCCTCACACCAACCACCAGGCGTGTATCCCCAGGGGCACAGCGACACCACTGTGGCAATCAGCACCAGCACGGTACTGTTGTGCGGACTCTCTGCCGTCAGTCTGCTGGCCTGCTACCTGAAATCCAGACAGACTCCCCCCCTGGCCAGCGTGGAAATGGAAGCTATGGAGGCTCTGCCCGTGACCTGGGGGACTAGCTCCAGAGATGAAGACTTGGAGAACTGCAGTCACCATCTCGGGTCCGGAGCCACGAATTTCTCTCTCCTCAAACAAGCTGGGGATGTTGAGGAGAACCCTGGGCCAATGGCCCTCTTGCTCGCACTGTCCCTCCTGGTCCTGTGGACATCACCCGCCCCCACCCTGTCCGGCACGAATGACGCAGAAGACTGCTGCCTGTCTGTCACGCAGAAACCCATCCCCGGCTATATAGTGCGGAACTTCCATTACCTGCTGATCAAGGACGGATGTAGGGTGCCAGCCGTCGTCTTCACCACCCTGCGAGGGCGCCAGCTGTGCGCTCCTCCTGACCAGCCCTGGGTGGAGCGGATCATTCAACGCTTGCAGCGCACCTCAGCAAAAATGAAAAGAAGAAGTAGT (SEQ ID NO: 39)之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 39之約85%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 39之約90%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 39之約95%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 39之約96%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 39之約97%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 39之約98%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 39之約99%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含SEQ ID NO: 39。在一些情況下，分離核酸分子由SEQ ID NO: 39組成。
在一些實施例中，分離核酸分子包含編碼特異性結合至間皮素之CAR之多核苷酸、編碼sushi15之多核苷酸及編碼CCL19之多核苷酸。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSSGILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLSRAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMAPRRARGCRTLGLPALLLLLLLRPPATRGITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRSGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMALLLALSLLVLWTSPAPTLSGTNDAEDCCLSVTQKPIPGYIVRNFHYLLIKDGCRVPAVVFTTLRGRQLCAPPDQPWVERIIQRLQRTSAKMKRRSS (SEQ ID NO: 15) (在本文中亦稱為ssVH-P4-CAR-P2A-sushi15-P2A-CCL19或P4-BB-sushi15-CCL19)之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 15之約85%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 15之約90%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 15之約95%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 15之約96%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 15之約97%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 15之約98%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 15之約99%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包括SEQ ID NO: 15之多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼由SEQ ID NO: 15組成之多肽。
在一些實施例中，編碼ssVH-P4-CAR-P2A-sushi15-P2A-CCL19或P4-BB-sushi15-CCL19之分離核酸分子包含有包含與ATGGATTGGACCTGGCGAATACTCTTCCTCGTCGCAGCGGCCACTGGTGCCCATTCACAAGTCCAACTGCAGCAGAGCGGACCTGGCCTGGTGACACCCAGTCAGACTCTCAGCCTGACTTGTGCAATCAGCGGCGATAGTGTGTCTAGTAATTCTGCAACATGGAACTGGATCAGACAATCACCAAGTCGGGGACTGGAGTGGCTCGGTAGAACCTATTATAGGTCCAAATGGTATAACGATTATGCAGTGTCCGTGAAGTCCCGAATGTCTATCAACCCTGATACTAGTAAGAATCAATTCAGTCTGCAGCTTAACAGCGTAACCCCCGAAGATACTGCTGTGTATTACTGTGCCCGGGGTATGATGACTTACTACTACGGAATGGATGTGTGGGGGCAGGGAACAACCGTTACTGTTTCATCCGGCATTCTCGGGAGCGGAGGCGGTGGAAGCGGTGGGGGAGGGTCCGGGGGAGGAGGATCTCAGCCTGTTCTTACTCAATCTTCTTCCCTCTCCGCCTCACCCGGGGCCTCCGCCTCACTGACCTGCACTCTGCGATCAGGCATCAACGTTGGGCCTTATAGAATCTACTGGTACCAGCAAAAGCCTGGATCACCGCCCCAGTACCTGCTGAACTATAAATCAGACTCAGACAAGCAGCAGGGCTCCGGCGTGCCGAGTCGATTTAGCGGGAGCAAGGACGCGTCTGCTAATGCCGGCGTGCTTCTCATCAGCGGGCTCCGCAGTGAGGATGAGGCAGATTACTACTGCATGATTTGGCATAGCAGTGCAGCCGTATTTGGCGGAGGAACACAGCTGACTGTCCTCTCTCGCGCCGCCGCTCCGACCACCACCCCTGCACCACGCCCACCTACTCCTGCGCCAACCATTGCCAGCCAGCCTCTCTCTCTCCGACCCGAGGCCTGTAGACCTGCCGCTGGCGGTGCAGTTCATACTCGGGGTCTCGATTTCGCCTGCGACATCTACATCTGGGCACCACTGGCTGGCACTTGTGGCGTTTTGCTCCTGTCCCTGGTGATCACTCTCTACTGTAATAAGAGGGGGAGGAAGAAACTCCTGTATATTTTCAAACAACCCTTTATGCGCCCTGTCCAAACCACCCAGGAAGAAGATGGATGTAGTTGCAGATTCCCAGAAGAAGAGGAGGGTGGGTGTGAACTTAGGGTGAAGTTTAGTCGCAGTGCCGACGCTCCCGCTTACCAACAGGGTCAGAACCAACTCTACAATGAGCTGAATCTGGGGAGGCGCGAAGAATACGACGTTCTGGATAAAAGACGCGGCCGCGACCCCGAGATGGGCGGGAAACCGCGGAGAAAGAACCCACAGGAAGGATTGTACAATGAGCTCCAGAAAGATAAGATGGCAGAAGCCTACTCCGAGATCGGCATGAAGGGGGAGCGAAGGCGCGGGAAAGGACACGATGGGCTGTACCAGGGTCTTTCAACCGCGACAAAGGACACCTATGATGCTCTCCATATGCAGGCCCTCCCGCCACGCGGAAGTGGAGCAACTAATTTTAGCCTTCTGAAACAAGCTGGCGATGTTGAGGAAAATCCTGGGCCGATGGCACCTAGACGGGCACGCGGGTGTAGAACGCTGGGCCTCCCCGCACTGTTGTTGCTCTTGCTTCTGAGACCTCCCGCTACAAGGGGGATAACTTGCCCTCCACCTATGAGCGTCGAGCATGCTGACATTTGGGTGAAGTCCTATTCACTCTATTCCCGGGAGCGGTACATCTGTAACTCTGGATTCAAGAGGAAAGCCGGCACCAGCAGTCTGACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCCACCAATGTGGCCCACTGGACAACCCCTAGCCTTAAATGTATACGGTCAGGGGGCGGATCTGGAGGCGGCGGCTCCGGTGGAGGCGGGAGTGGGGGCGGGGGCTCTGGAGGTGGTAGCCTGCAGAATTGGGTTAACGTGATTAGCGACCTCAAAAAAATCGAAGATCTTATCCAGAGCATGCATATAGACGCAACCCTGTACACAGAAAGCGATGTTCACCCGTCCTGCAAGGTAACGGCTATGAAGTGTTTTCTTTTGGAGTTGCAAGTCATATCACTGGAAAGTGGGGATGCCTCAATTCACGATACCGTGGAGAACCTCATCATCCTCGCAAATAACAGCCTGAGCTCCAATGGCAATGTCACAGAGTCAGGTTGCAAAGAGTGTGAAGAGCTGGAAGAGAAAAACATCAAAGAGTTCCTCCAGTCATTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATTAACACTAGTGGTAGTGGTGCCACAAATTTTAGTCTGTTGAAACAGGCCGGGGACGTCGAAGAAAACCCGGGGCCTATGGCCCTCTTGCTCGCACTGTCCCTCCTGGTCCTGTGGACATCACCCGCCCCCACCCTGTCCGGCACGAATGACGCAGAAGACTGCTGCCTGTCTGTCACGCAGAAACCCATCCCCGGCTATATAGTGCGGAACTTCCATTACCTGCTGATCAAGGACGGATGTAGGGTGCCAGCCGTCGTCTTCACCACCCTGCGAGGGCGCCAGCTGTGCGCTCCTCCTGACCAGCCCTGGGTGGAGCGGATCATTCAACGCTTGCAGCGCACCTCAGCAAAAATGAAAAGAAGAAGTAGT (SEQ ID NO: 40)之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 40之約85%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 40之約90%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 40之約95%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 40之約96%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 40之約97%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 40之約98%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 40之約99%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含SEQ ID NO: 40。在一些情況下，分離核酸分子由SEQ ID NO: 40組成。
在一些實施例中，分離核酸分子包含編碼特異性結合至間皮素之CAR之多核苷酸及編碼mIL15/Ra-LSP之多核苷酸。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSS GILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLSRAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMRISKPHLRSISIQCYLCLLLNSHFLTEAGIHVFILGCFSAGLPKTEANWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSSGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSPSSNNTAATTAAIVPGSQLMPSKSPSTGTTEISSHESSHGTPSQTTAKNWELTASASHQPPGVYPQGHSDTTVAISTSTVLLCGLSAVSLLACYLKSRQTPPLASVEMEAMEALPVTWGTSSRDEDLENCSHHL (SEQ ID NO: 53) (在本文中亦稱為ssVHsp-P4-CD8h/TM-BB-CD3z-P2A- IL15LSP -IL15前肽-mIL15/Ra或ssVHsp-P4-BB-mIL15/Ra-LSP)之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 53之約85%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 53之約90%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 53之約95%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 53之約96%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 53之約97%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 53之約98%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 53之約99%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包括SEQ ID NO: 53之多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼由SEQ ID NO: 53組成之多肽。
在一些實施例中，編碼ssVHsp-P4-CD8h/TM-BB-CD3z-P2A- IL15LSP -IL15前肽-mIL15/Ra或ssVHsp-P4-BB-mIL15/Ra-LSP之分離核酸分子包含有包含與ATGGACTGGACATGGCGGATACTCTTCCTCGTCGCTGCTGCAACCGGAGCCCACAGCCAGGTGCAGCTCCAGCAGTCTGGGCCAGGTTTGGTGACTCCTAGTCAGACATTGAG CTTGACTTGTGCTATCAGCGGAGACTCTGTTTCATCTAATTCTGCAACTTGGAACTGGATTCGGCAGTCCCCCAGCCGGGGGCTCGAGTGGTTGGGTCGGACCTACTATCGGAGCAAATGGTACAATGACTATGCAGTGAGCGTCAAATCAAGAATGAGCATCAATCCTGACACAAGCAAGAACCAGTTTAGCCTTCAGCTTAATAGCGTGACTCCAGAGGACACAGCTGTGTACTATTGCGCGAGAGGCATGATGACATACTATTACGGAATGGACGTGTGGGGCCAGGGAACTACTGTTACAGTGTCAAGCGGAATCCTCGGTAGCGGAGGCGGCGGTTCCGGCGGAGGGGGTAGTGGTGGCGGGGGTAGTCAACCTGTGCTGACCCAGAGCAGCTCTCTTAGTGCTAGCCCAGGTGCAAGTGCAAGTCTTACCTGTACACTGCGCTCCGGTATTAATGTGGGCCCTTACCGAATTTACTGGTACCAGCAGAAACCAGGCTCCCCTCCCCAGTATCTGCTGAACTATAAGTCTGACTCAGACAAACAGCAGGGCTCCGGTGTGCCATCCCGATTTAGTGGCTCAAAGGATGCTAGTGCAAATGCCGGTGTTCTCCTGATCAGCGGACTCAGATCAGAGGACGAAGCAGACTATTACTGTATGATTTGGCATAGCAGCGCTGCTGTCTTCGGAGGAGGGACTCAGCTCACTGTCTTGAGTCGGGCCGCTGCACCTACCACTACCCCTGCCCCTCGACCCCCTACTCCCGCCCCAACTATCGCATCCCAACCACTCTCTCTCAGACCCGAAGCCTGTAGACCCGCAGCCGGTGGCGCTGTGCATACTCGCGGACTTGATTTTGCTTGTGATATTTATATCTGGGCCCCCCTTGCCGGAACTTGTGGAGTTCTCCTGCTGTCTCTCGTAATCACCCTTTATTGTAACAAACGGGGGCGCAAAAAACTTCTTTACATTTTCAAGCAGCCCTTTATGCGGCCCGTGCAGACCACACAGGAAGAAGATGGCTGCAGCTGCAGGTTCCCAGAGGAAGAAGAGGGCGGCTGCGAGCTGCGAGTAAAGTTCAGCCGGAGCGCCGATGCACCTGCATACCAGCAGGGTCAGAACCAGCTCTACAATGAGCTGAACCTGGGCAGAAGAGAGGAATATGATGTACTCGACAAGAGAAGGGGACGCGATCCAGAGATGGGCGGCAAACCACGGCGGAAAAATCCGCAGGAGGGGCTCTATAACGAGCTCCAGAAGGACAAGATGGCAGAAGCCTACTCAGAAATTGGCATGAAAGGAGAGAGAAGGAGGGGAAAGGGCCATGATGGCCTTTACCAAGGGTTGTCTACTGCCACCAAGGATACGTACGATGCACTCCATATGCAGGCTCTTCCTCCCCGAGGCTCAGGAGCCACCAACTTCTCCCTGCTGAAGCAGGCCGGCGACGTGGAGGAGAACCCAGGTCCTATGAGAATCTCAAAACCCCATCTTAGAAGCATCTCTATACAGTGTTATCTGTGTCTCTTGCTGAACTCCCACTTTTTGACAGAAGCTGGGATACATGTCTTTATCCTGGGATGTTTTTCCGCCGGGCTCCCTAAAACCGAGGCCAACTGGGTAAACGTAATCTCAGACCTTAAAAAGATTGAGGACCTGATTCAGTCAATGCATATCGATGCAACTTTGTACACGGAGAGCGATGTTCACCCAAGTTGTAAAGTGACCGCGATGAAATGTTTTCTCCTCGAATTGCAGGTGATCTCCCTCGAGTCAGGCGACGCGTCTATCCACGATACTGTGGAAAACCTTATCATTTTGGCGAACAATAGCCTCTCATCTAATGGTAACGTGACCGAGTCCGGCTGCAAGGAATGTGAGGAACTGGAGGAGAAAAATATCAAGGAATTCCTGCAGTCATTTGTACACATCGTGCAAATGTTTATCAACACTTCTTCAGGAGGCGGGTCAGGAGGGGGAGGCTCAGGCGGCGGAGGTAGTGGAGGAGGAGGAAGTGGAGGCGGCAGTCTCCAGATCACCTGTCCACCACCAATGAGTGTGGAACACGCGGACATTTGGGTCAAGTCATATTCTCTTTACTCCAGAGAGCGATACATATGCAACAGTGGTTTCAAGCGGAAAGCGGGTACTTCTTCACTTACCGAGTGCGTGCTCAATAAAGCAACCAACGTCGCGCACTGGACAACACCTAGCCTGAAATGCATAAGAGATCCTGCCCTGGTTCACCAGCGGCCAGCGCCACCGTCCACAGTGACAACAGCTGGTGTGACACCCCAGCCGGAGAGCCTTAGCCCTAGCGGCAAAGAGCCGGCCGCAAGCTCACCAAGCTCAAATAACACAGCCGCGACAACTGCTGCTATCGTGCCCGGTTCACAATTGATGCCGAGCAAATCACCAAGCACCGGAACTACCGAAATCTCAAGTCATGAAAGTAGTCACGGTACTCCTAGCCAGACGACGGCAAAGAATTGGGAGCTGACTGCCTCTGCGAGCCACCAGCCGCCGGGTGTTTACCCTCAGGGGCATTCAGATACTACTGTGGCTATCTCTACTTCCACCGTCCTCTTGTGCGGCTTGTCTGCTGTGTCTCTTCTGGCTTGCTATTTGAAAAGTAGACAGACACCACCCCTTGCAAGTGTCGAGATGGAAGCGATGGAGGCATTGCCTGTGACCTGGGGAACCAGTAGTAGGGACGAGGACCTGGA AAATTGTAGTCACCACCTGTGA (SEQ ID NO: 58)之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 58之約85%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 58之約90%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 58之約95%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 58之約96%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 58之約97%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 58之約98%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 58之約99%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含SEQ ID NO: 58。在一些情況下，分離核酸分子由SEQ ID NO: 58組成。
在一些實施例中，分離核酸分子包含編碼特異性結合至間皮素之CAR之多核苷酸及編碼sIL15-LSP之多核苷酸。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSS GILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLS RAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMRISKPHLRSISIQCYLCLLLNSHFLTEAGIHVFILGCFSAGLPKTEANWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS (SEQ ID NO: 54) (在本文中亦稱為ssVHsp-P4-CD8h/TM-BB-CD3z-P2A- IL15LSP-IL15前肽-IL15或ssVHsp-P4-BB-sIL15-LSP)之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 54之約85%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 54之約90%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 54之約95%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 54之約96%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 54之約97%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 54之約98%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 54之約99%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包括SEQ ID NO: 54之多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼由SEQ ID NO: 54組成之多肽。
在一些實施例中，編碼ssVHsp-P4-CD8h/TM-BB-CD3z-P2A- IL15LSP-IL15前肽-IL15或ssVHsp-P4-BB-sIL15-LSP之分離核酸分子包含有包含與ATGGACTGGACATGGCGGATACTCTTCCTCGTCGCTGCTGCAACCGGAGCCCACAGCCAGGTGCAGCTCCAGCAGTCTGGGCCAGGTTTGGTGACTCCTAGTCAGACATTGAGCTTGACTTGTGCTATCAGCGGAGACTCTGTTTCATCTAATTCTGCAACTTGGAACTGGATTCGGCAGTCCCCCAGCCGGGGGCTCGAGTGGTTGGGTCGGACCTACTATCGGAGCAAATGGTACAATGACTATGCAGTGAGCGTCAAATCAAGAATGAGCATCAATCCTGACACAAGCAAGAACCAGTTTAGCCTTCAGCTTAATAGCGTGACTCCAGAGGACACAGCTGTGTACTATTGCGCGAGAGGCATGATGACATACTATTACGGAATGGACGTGTGGGGCCAGGGAACTACTGTTACAGTGTCAAGCGGAATCCTCGGTAGCGGAGGCGGCGGTTCCGGCGGAGGGGGTAGTGGTGGCGGGGGTAGTCAACCTGTGCTGACCCAGAGCAGCTCTCTTAGTGCTAGCCCAGGTGCAAGTGCAAGTCTTACCTGTACACTGCGCTCCGGTATTAATGTGGGCCCTTACCGAATTTACTGGTACCAGCAGAAACCAGGCTCCCCTCCCCAGTATCTGCTGAACTATAAGTCTGACTCAGACAAACAGCAGGGCTCCGGTGTGCCATCCCGATTTAGTGGCTCAAAGGATGCTAGTGCAAATGCCGGTGTTCTCCTGATCAGCGGACTCAGATCAGAGGACGAAGCAGACTATTACTGTATGATTTGGCATAGCAGCGCTGCTGTCTTCGGAGGAGGGACTCAGCTCACTGTCTTGAGTCGGGCCGCTGCACCTACCACTACCCCTGCCCCTCGACCCCCTACTCCCGCCCCAACTATCGCATCCCAACCACTCTCTCTCAGACCCGAAGCCTGTAGACCCGCAGCCGGTGGCGCTGTGCATACTCGCGGACTTGATTTTGCTTGTGATATTTATATCTGGGCCCCCCTTGCCGGAACTTGTGGAGTTCTCCTGCTGTCTCTCGTAATCACCCTTTATTGTAACAAACGGGGGCGCAAAAAACTTCTTTACATTTTCAAGCAGCCCTTTATGCGGCCCGTGCAGACCACACAGGAAGAAGATGGCTGCAGCTGCAGGTTCCCAGAGGAAGAAGAGGGCGGCTGCGAGCTGCGAGTAAAGTTCAGCCGGAGCGCCGATGCACCTGCATACCAGCAGGGTCAGAACCAGCTCTACAATGAGCTGAACCTGGGCAGAAGAGAGGAATATGATGTACTCGACAAGAGAAGGGGACGCGATCCAGAGATGGGCGGCAAACCACGGCGGAAAAATCCGCAGGAGGGGCTCTATAACGAGCTCCAGAAGGACAAGATGGCAGAAGCCTACTCAGAAATTGGCATGAAAGGAGAGAGAAGGAGGGGAAAGGGCCATGATGGCCTTTACCAAGGGTTGTCTACTGCCACCAAGGATACGTACGATGCACTCCATATGCAGGCTCTTCCTCCCCGAGGTTCAGGCGCAACAAATTTTTCACTTCTTAAACAAGCTGGCGATGTCGAGGAAAACCCAGGTCCCATGCGGATCTCTAAACCCCACTTGCGGAGCATTTCTATCCAGTGTTATCTTTGCCTCCTGCTTAACTCCCACTTTCTCACAGAAGCAGGGATACACGTGTTCATCCTGGGCTGTTTTTCTGCCGGTCTCCCCAAAACAGAAGCCAACTGGGTGAATGTGATCAGTGATCTTAAGAAAATAGAAGACCTCATCCAGTCAATGCACATCGATGCCACCTTGTACACTGAGAGCGACGTGCACCCTTCCTGCAAGGTGACAGCTATGAAGTGCTTCCTGCTTGAGCTCCAGGTCATATCCCTTGAGTCTGGAGATGCAAGTATCCACGATACGGTGGAAAACCTTATTATACTGGCCAATAATTCTCTTTCTTCCAATGGCAATGTTACCGAATCAGGGTGTAAAGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAAAATATCAAAGAGTTTTTGCAGTCATTTGTGCACATCGTCCAGATG TTTATTAATACAAGTTGA (SEQ ID NO: 59)之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 59之約85%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 59之約90%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 59之約95%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 59之約96%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 59之約97%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 59之約98%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 59之約99%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含SEQ ID NO: 59。在一些情況下，分離核酸分子由SEQ ID NO: 59組成。
在一些實施例中，分離核酸分子包含編碼特異性結合至間皮素之CAR之多核苷酸、編碼mIL15/Ra-LSP之多核苷酸及編碼CCL19之多核苷酸。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSS GILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLS RAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMRISKPHLRSISIQCYLCLLLNSHFLTEAGIHVFILGCFSAGLPKTEANWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMALLLALSLLVLWTSPAPTLSGTNDAEDCCLSVTQKPIPGYIVRNFHYLLIKDGCRVPAVVFTTLRGRQLCAPPDQPWVERIIQRLQRTSAKMKRRSS (SEQ ID NO: 55) (在本文中亦稱為ssVHsp-P4-CD8h/TM-BB-CD3z-P2A- IL15LSP-IL15前肽-IL15-P2A-endospCCL19或ssVHsp-P4-BB-mIL15/Ra-LSP-CCL19)之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 55之約85%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 55之約90%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 55之約95%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 55之約96%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 55之約97%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 55之約98%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 55之約99%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包括SEQ ID NO: 55之多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼由SEQ ID NO: 55組成之多肽。
在一些實施例中，編碼ssVHsp-P4-CD8h/TM-BB-CD3z-P2A- IL15LSP-IL15前肽-IL15-P2A-endospCCL19或ssVHsp-P4-BB-mIL15/Ra-LSP-CCL19之分離核酸分子包含有包含與ATGGATTGGACCTGGCGAATACTCTTCCTCGTCGCAGCGGCCACTGGTGCCCATTCACAAGTCCAACTGCAGCAGAGCGGACCTGGCCTGGTGACACCCAGTCAGACTCTCAGCCTGACTTGTGCAATCAGCGGCGATAGTGTGTCTAGTAATTCTGCAACATGGAACTGGATCAGACAATCACCAAGTCGGGGACTGGAGTGGCTCGGTAGAACCTATTATAGGTCCAAATGGTATAACGATTATGCAGTGTCCGTGAAGTCCCGAATGTCTATCAACCCTGATACTAGTAAGAATCAATTCAGTCTGCAGCTTAACAGCGTAACCCCCGAAGATACTGCTGTGTATTACTGTGCCCGGGGTATGATGACTTACTACTACGGAATGGATGTGTGGGGGCAGGGAACAACCGTTACTGTTTCATCCGGCATTCTCGGGAGCGGAGGCGGTGGAAGCGGTGGGGGAGGGTCCGGGGGAGGAGGATCTCAGCCTGTTCTTACTCAATCTTCTTCCCTCTCCGCCTCACCCGGGGCCTCCGCCTCACTGACCTGCACTCTGCGATCAGGCATCAACGTTGGGCCTTATAGAATCTACTGGTACCAGCAAAAGCCTGGATCACCGCCCCAGTACCTGCTGAACTATAAATCAGACTCAGACAAGCAGCAGGGCTCCGGCGTGCCGAGTCGATTTAGCGGGAGCAAGGACGCGTCTGCTAATGCCGGCGTGCTTCTCATCAGCGGGCTCCGCAGTGAGGATGAGGCAGATTACTACTGCATGATTTGGCATAGCAGTGCAGCCGTATTTGGCGGAGGAACACAGCTGACTGTCCTCTCTCGCGCCGCCGCTCCGACCACCACCCCTGCACCACGCCCACCTACTCCTGCGCCAACCATTGCCAGCCAGCCTCTCTCTCTCCGACCCGAGGCCTGTAGACCTGCCGCTGGCGGTGCAGTTCATACTCGGGGTCTCGATTTCGCCTGCGACATCTACATCTGGGCACCACTGGCTGGCACTTGTGGCGTTTTGCTCCTGTCCCTGGTGATCACTCTCTACTGTAATAAGAGGGGGAGGAAGAAACTCCTGTATATTTTCAAACAACCCTTTATGCGCCCTGTCCAAACCACCCAGGAAGAAGATGGATGTAGTTGCAGATTCCCAGAAGAAGAGGAGGGTGGGTGTGAACTTAGGGTGAAGTTTAGTCGCAGTGCCGACGCTCCCGCTTACCAACAGGGTCAGAACCAACTCTACAATGAGCTGAATCTGGGGAGGCGCGAAGAATACGACGTTCTGGATAAAAGACGCGGCCGCGACCCCGAGATGGGCGGGAAACCGCGGAGAAAGAACCCACAGGAAGGATTGTACAATGAGCTCCAGAAAGATAAGATGGCAGAAGCCTACTCCGAGATCGGCATGAAGGGGGAGCGAAGGCGCGGGAAAGGACACGATGGGCTGTACCAGGGTCTTTCAACCGCGACAAAGGACACCTATGATGCTCTCCATATGCAGGCCCTCCCGCCACGCGGAAGTGGAGCAACTAATTTTAGCCTTCTGAAACAAGCTGGCGATGTTGAGGAAAATCCTGGGCCGATGCGCATTAGCAAGCCACATCTGAGGAGTATCAGCATCCAGTGCTACCTTTGCCTGCTGCTCAACTCTCACTTTCTGACAGAAGCTGGCATCCACGTCTTCATCCTGGGGTGCTTCAGCGCCGGCTTGCCGAAGACCGAAGCCAACTGGGTGAATGTGATCTCCGACCTCAAGAAGATCGAGGACCTGATCCAGAGTATGCATATTGATGCTACACTTTACACCGAGTCCGATGTTCACCCTAGTTGTAAGGTGACTGCCATGAAATGTTTCTTGCTGGAGCTTCAGGTAATAAGCCTTGAGTCTGGGGATGCAAGCATTCATGACACGGTTGAGAATCTCATCATCCTGGCAAATAATTCACTGTCTTCAAATGGTAACGTTACAGAGAGCGGCTGTAAGGAGTGCGAAGAGCTTGAAGAGAAAAACATCAAGGAATTCCTCCAGAGTTTCGTGCACATCGTGCAAATGTTCATCAACACGAGCTCTGGAGGCGGATCAGGAGGCGGAGGATCAGGGGGGGGAGGGTCAGGCGGAGGGGGATCTGGTGGAGGCAGCCTTCAAATCACATGCCCGCCACCTATGTCCGTTGAGCACGCCGACATATGGGTGAAGTCATATTCACTGTATAGTCGGGAGAGGTACATTTGTAATTCAGGTTTCAAGCGAAAAGCTGGGACATCAAGCCTGACAGAATGCGTACTTAACAAGGCCACAAATGTCGCCCATTGGACCACTCCGAGTCTGAAGTGTATACGAGATCCCGCACTGGTGCACCAGCGACCTGCTCCCCCTAGTACAGTAACAACCGCGGGCGTTACGCCCCAGCCTGAATCCCTGAGCCCATCTGGCAAGGAGCCTGCAGCTAGCTCTCCGAGCAGCAATAATACTGCAGCGACCACTGCAGCCATCGTCCCCGGCTCCCAGCTCATGCCTAGTAAAAGTCCGTCTACAGGAACGACCGAAATCTCCAGCCACGAGTCTAGTCACGGGACCCCGAGTCAGACCACTGCCAAGAACTGGGAGCTTACGGCCAGTGCCTCCCATCAACCCCCGGGCGTCTACCCGCAAGGCCATAGCGACACCACAGTCGCCATTAGCACATCTACTGTCCTCTTGTGCGGGCTCTCCGCTGTGTCCCTCCTGGCCTGTTATCTCAAGAGCAGACAGACCCCCCCATTGGCAAGCGTTGAGATGGAGGCAATGGAGGCTCTGCCCGTTACTTGGGGGACTTCTTCACGCGACGAGGATCTGGAGAACTGCTCCCACCACCTGGGAAGTGGTGCCACAAATTTCAGCCTGCTCAAGCAGGCCGGGGATGTTGAAGAGAACCCAGGGCCGATGGCCCTCTTGCTCGCACTGTCCCTCCTGGTCCTGTGGACATCACCCGCCCCCACCCTGTCCGGCACGAATGACGCAGAAGACTGCTGCCTGTCTGTCACGCAGAAACCCATCCCCGGCTATATAGTGCGGAACTTCCATTACCTGCTGATCAAGGACGGATGTAGGGTGCCAGCCGTCGTCTTCACCACCCTGCGAGGGCGCCAGCTGTGCGCTCCTCCTGACCAGCCCTGGGTGGAGCGGATCATTCAACGCTTGCAGCGCACCTCAGCAAAAATGAAAAGAAGAAGTAGTTGA (SEQ ID NO: 60)之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 60之約85%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 60之約90%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 60之約95%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 60之約96%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 60之約97%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 60之約98%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 60之約99%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含SEQ ID NO: 60。在一些情況下，分離核酸分子由SEQ ID NO: 60組成。
在一些實施例中，分離核酸分子包含編碼特異性結合至間皮素之CAR之多核苷酸、編碼sIL15-LSP之多核苷酸及編碼CCL19之多核苷酸。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSS GILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLS RAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMRISKPHLRSISIQCYLCLLLNSHFLTEAGIHVFILGCFSAGLPKTEANWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMALLLALSLLVLWTSPAPTLSGTNDAEDCCLSVTQKPIPGYIVRNFHYLLIKDGCRVPAVVFTTLRGRQLCAPPDQPWVERIIQRLQRTSAKMKRRSS (SEQ ID NO: 56) (在本文中亦稱為ssVHsp-P4-CD8h/TM-BB-CD3z-P2A- IL15LSP-IL15前肽-IL15-P2A-endospCCL19或ssVHsp-P4-BB-sIL15-LSP-CCL19)之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 56之約85%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 56之約90%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 56之約95%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 56之約96%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 56之約97%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 56之約98%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 56之約99%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包括SEQ ID NO: 56之多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼由SEQ ID NO: 56組成之多肽。
在一些實施例中，編碼ssVHsp-P4-CD8h/TM-BB-CD3z-P2A- IL15LSP-IL15前肽-IL15-P2A-endospCCL19或ssVHsp-P4-BB-sIL15-LSP-CCL19之分離核酸分子包含有包含與ATGGATTGGACCTGGCGAATACTCTTCCTCGTCGCAGCGGCCACTGGTGCCCATTCACAAGTCCAACTGCAGCAGAGCGGACCTGGCCTGGTGACACCCAGTCAGACTCTCAGCCTGACTTGTGCAATCAGCGGCGATAGTGTGTCTAGTAATTCTGCAACATGGAACTGGATCAGACAATCACCAAGTCGGGGACTGGAGTGGCTCGGTAGAACCTATTATAGGTCCAAATGGTATAACGATTATGCAGTGTCCGTGAAGTCCCGAATGTCTATCAACCCTGATACTAGTAAGAATCAATTCAGTCTGCAGCTTAACAGCGTAACCCCCGAAGATACTGCTGTGTATTACTGTGCCCGGGGTATGATGACTTACTACTACGGAATGGATGTGTGGGGGCAGGGAACAACCGTTACTGTTTCATCCGGCATTCTCGGGAGCGGAGGCGGTGGAAGCGGTGGGGGAGGGTCCGGGGGAGGAGGATCTCAGCCTGTTCTTACTCAATCTTCTTCCCTCTCCGCCTCACCCGGGGCCTCCGCCTCACTGACCTGCACTCTGCGATCAGGCATCAACGTTGGGCCTTATAGAATCTACTGGTACCAGCAAAAGCCTGGATCACCGCCCCAGTACCTGCTGAACTATAAATCAGACTCAGACAAGCAGCAGGGCTCCGGCGTGCCGAGTCGATTTAGCGGGAGCAAGGACGCGTCTGCTAATGCCGGCGTGCTTCTCATCAGCGGGCTCCGCAGTGAGGATGAGGCAGATTACTACTGCATGATTTGGCATAGCAGTGCAGCCGTATTTGGCGGAGGAACACAGCTGACTGTCCTCTCTCGCGCCGCCGCTCCGACCACCACCCCTGCACCACGCCCACCTACTCCTGCGCCAACCATTGCCAGCCAGCCTCTCTCTCTCCGACCCGAGGCCTGTAGACCTGCCGCTGGCGGTGCAGTTCATACTCGGGGTCTCGATTTCGCCTGCGACATCTACATCTGGGCACCACTGGCTGGCACTTGTGGCGTTTTGCTCCTGTCCCTGGTGATCACTCTCTACTGTAATAAGAGGGGGAGGAAGAAACTCCTGTATATTTTCAAACAACCCTTTATGCGCCCTGTCCAAACCACCCAGGAAGAAGATGGATGTAGTTGCAGATTCCCAGAAGAAGAGGAGGGTGGGTGTGAACTTAGGGTGAAGTTTAGTCGCAGTGCCGACGCTCCCGCTTACCAACAGGGTCAGAACCAACTCTACAATGAGCTGAATCTGGGGAGGCGCGAAGAATACGACGTTCTGGATAAAAGACGCGGCCGCGACCCCGAGATGGGCGGGAAACCGCGGAGAAAGAACCCACAGGAAGGATTGTACAATGAGCTCCAGAAAGATAAGATGGCAGAAGCCTACTCCGAGATCGGCATGAAGGGGGAGCGAAGGCGCGGGAAAGGACACGATGGGCTGTACCAGGGTCTTTCAACCGCGACAAAGGACACCTATGATGCTCTCCATATGCAGGCCCTCCCGCCACGCGGAAGTGGAGCAACTAATTTTAGCCTTCTGAAACAAGCTGGCGATGTTGAGGAAAATCCTGGGCCGATGCGCATCTCCAAGCCCCATCTGAGGAGCATCAGCATCCAGTGCTACCTGTGTCTGCTGCTCAACAGCCACTTCCTGACGGAAGCAGGCATTCATGTCTTTATCCTGGGATGCTTTTCTGCCGGCCTGCCAAAGACAGAAGCAAACTGGGTTAACGTTATCAGTGATCTGAAAAAAATCGAGGACCTGATCCAGTCCATGCATATTGACGCTACGCTGTATACAGAGTCCGACGTCCACCCATCATGCAAGGTGACCGCTATGAAGTGTTTCCTGCTGGAACTGCAGGTTATCAGCTTGGAAAGTGGCGACGCTTCCATTCACGATACGGTGGAGAACTTGATAATCCTTGCGAATAATAGTCTGAGCAGCAACGGCAACGTTACTGAAAGCGGGTGCAAAGAATGTGAAGAGCTCGAAGAGAAAAACATCAAAGAATTTTTGCAGTCTTTCGTGCATATTGTTCAGATGTTTATTAACACCAGTGGATCAGGAGCAACTAACTTCTCTCTTCTTAAGCAAGCTGGCGATGTAGAGGAAAACCCTGGGCCTATGGCCCTCTTGCTCGCACTGTCCCTCCTGGTCCTGTGGACATCACCCGCCCCCACCCTGTCCGGCACGAATGACGCAGAAGACTGCTGCCTGTCTGTCACGCAGAAACCCATCCCCGGCTATATAGTGCGGAACTTCCATTACCTGCTGATCAAGGACGGATGTAGGGTGCCAGCCGTCGTCTTCACCACCCTGCGAGGGCGCCAGCTGTGCGCTCCTCCTGACCAGCCCTGGGTGGAGCGGATCATTCAACGCTTGCAGCGCACCTCAGCAAAAATGAAAAGAAGAAGTAGTTGA (SEQ ID NO: 61)之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 61之約85%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 61之約90%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 61之約95%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 61之約96%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 61之約97%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 61之約98%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含有包含與SEQ ID NO: 61之約99%序列一致性的序列。在一些情況下，分離核酸分子包含SEQ ID NO: 61。在一些情況下，分離核酸分子由SEQ ID NO: 61組成。
在一些實施例中，分離核酸分子包含編碼特異性結合至間皮素之CAR之多核苷酸、編碼sushi15之多核苷酸及編碼CCL19之多核苷酸。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSS GILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLS RAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMAPRRARGCRTLGLPALLLLLLLRPPATRGITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRSGGSGGGGSGGGSGGGGSLQNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMALLLALSLLVLWTSPAPTLSGTNDAEDCCLSVTQKPIPGYIVRNFHYLLIKDGCRVPAVVFTTLRGRQLCAPPDQPWVERIIQRLQRTSAKMKRRSS (SEQ ID NO: 57) (在本文中亦稱為ssVH-P4-CD28鉸鏈-TM-CD28cyto-CD3z-P2A-IL15Rasp-IL15Ra (sushi)-20aa連接子-IL15-P2A-endospCCL19或SSVHsp-P4-CD28-sushi15 -CCL19)之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 57之約85%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 57之約90%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 57之約95%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 57之約96%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 57之約97%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 57之約98%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包含與SEQ ID NO: 57之約99%序列一致性的多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼包括SEQ ID NO: 57之多肽。在一些情況下，分離核酸分子編碼由SEQ ID NO: 57組成之多肽。 載體
在一些實施例中，一或多個載體涵蓋編碼CAR之多核苷酸、編碼IL-15之多核苷酸及視情況編碼CCL19之多核苷酸。在一些實施例中，載體(例如，表現載體)包含核酸分子，其包含：編碼嵌合抗原受體(CAR)之多核苷酸，該嵌合抗原受體包含特異性識別人類間皮素之抗體、CD8鉸鏈區、CD8跨膜區、4-1BB胞內區及CD3ζ胞內區；編碼IL-15之多核苷酸；及視情況編碼CCL19之多核苷酸。 參見圖1A及圖1B。
在一些實施例中，編碼CAR之多核苷酸及編碼IL-15之多核苷酸自5'末端至3'末端呈以下排列在載體(例如，表現載體)中： 編碼CAR之多核苷酸-編碼IL-15之多核苷酸；或 編碼IL-15之多核苷酸-編碼CAR之多核苷酸。
在一些實施例中，編碼CAR之多核苷酸、編碼IL-15之多核苷酸及編碼CCL19之多核苷酸自5'末端至3'末端呈以下排列在載體(例如，表現載體)中： 編碼CAR之多核苷酸-編碼IL-15之多核苷酸–編碼CCL19之多核苷酸； 編碼CAR之多核苷酸-編碼CCL19之多核苷酸–編碼IL-15之多核苷酸； 編碼IL-15之多核苷酸–編碼CAR之多核苷酸–編碼CCL19之多核苷酸； 編碼CCL19之多核苷酸–編碼CAR之多核苷酸-編碼IL-15之多核苷酸； 編碼IL-15之多核苷酸–編碼CCL19之多核苷酸-編碼CAR之多核苷酸；或 編碼CCL19之多核苷酸–編碼IL-15之多核苷酸-編碼CAR之多核苷酸。
在一些實施例中，第一載體(例如，第一表現載體)包含編碼CAR之多核苷酸，且第二載體(例如，第二表現載體)包含編碼IL-15之多核苷酸。
在一些實施例中，第一載體(例如，第一表現載體)包含編碼CAR之多核苷酸，且第二載體(例如，第二表現載體)包含編碼IL-15之多核苷酸及編碼CCL19之多核苷酸，其中編碼IL-15之多核苷酸及編碼CCL19之多核苷酸視情況自5'末端至3'末端呈編碼IL-15之多核苷酸–編碼CCL19之多核苷酸或編碼CCL19之多核苷酸–編碼IL-15之多核苷酸排列在第二載體(例如，第二表現載體)中。
在另外實施例中，第一載體(例如，第一表現載體)包含編碼CAR之多核苷酸及編碼IL-15之多核苷酸或編碼CCL19之多核苷酸，且第二載體(例如，第二表現載體)包含不包括在第一載體中的編碼IL-15之多核苷酸或編碼CCL19之多核苷酸。在一些實施例中，第一載體(例如，第一表現載體)包含編碼CAR之多核苷酸及編碼IL-15之多核苷酸，且第二載體(例如，第二表現載體)包含編碼CCL19之多核苷酸。在其他實施例中，第一載體(例如，第一表現載體)包含編碼CAR之多核苷酸及編碼CCL19之多核苷酸，且第二載體(例如，第二表現載體)包含編碼IL-15之多核苷酸。
在另外實施例中，第一載體(例如，第一表現載體)包含編碼CAR之多核苷酸，第二載體(例如，第二表現載體)包含編碼IL-15之多核苷酸，且第三載體(例如，第三表現載體)包含編碼CCL19之多核苷酸。
在一些實施例中，本文所述之載體(例如，表現載體)包含編碼mIL-15/Ra之多核苷酸及編碼CCL19之多核苷酸。在一些情況下，載體(例如，表現載體)包含編碼包含與SEQ ID NO: 14 (在本文中亦稱為mIL15/Ra-P2A-CCL19)之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的多肽之核酸序列。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 14之約85%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 14之約90%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 14之約95%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 14之約96%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 14之約97%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 14之約98%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 14之約99%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含SEQ ID NO: 14之多肽。在一些情況下，核酸序列編碼由SEQ ID NO: 14組成之多肽。
在一些實施例中，本文所述之載體(例如，表現載體)包含編碼sushi15之多核苷酸及編碼CCL19之多核苷酸。在一些情況下，載體(例如，表現載體)包含編碼包含與SEQ ID NO: 31 (在本文中亦稱為sushi15-CCL19)之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的多肽之核酸序列。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 31之約85%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 31之約90%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 31之約95%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 31之約96%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 31之約97%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 31之約98%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 31之約99%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含SEQ ID NO: 31之多肽。在一些情況下，核酸序列編碼由SEQ ID NO: 31組成之多肽。
在一些實施例中，本文所述之載體(例如，表現載體)包含編碼特異性結合至間皮素之CAR之多核苷酸及編碼mIL-15/Ra之多核苷酸。在一些情況下，載體(例如，表現載體)包含編碼包含與SEQ ID NO: 34 (在本文中亦稱為ssVH-P4-CAR-P2A-IL2sp-mIL15/Ra或P4-BB-mIL15/Ra)之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的多肽之核酸序列。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 34之約85%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 34之約90%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 34之約95%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 34之約96%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 34之約97%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 34之約98%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 34之約99%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含SEQ ID NO: 34之多肽。在一些情況下，核酸序列編碼由SEQ ID NO: 34組成之多肽。
在一些實施例中，包含編碼ssVH-P4-CAR-P2A-IL2sp-mIL15/Ra或P4-BB-mIL15/Ra之核酸序列之載體包含有包含與SEQ ID NO: 37之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 37之約85%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 37之約90%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 37之約95%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 37之約96%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 37之約97%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 37之約98%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 37之約99%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含SEQ ID NO: 37。在一些情況下，核酸序列由SEQ ID NO: 37組成。
在一些實施例中，本文所述之載體(例如，表現載體)包含編碼特異性結合至間皮素之CAR之多核苷酸及編碼sushi15之多核苷酸。在一些情況下，載體(例如，表現載體)包含編碼包含與SEQ ID NO: 35 (在本文中亦稱為ssVH-P4-CAR-P2A-sushi15或P4-BB-sushi15)之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的多肽之核酸序列。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 35之約85%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 35之約90%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 35之約95%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 35之約96%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 35之約97%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 35之約98%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 35之約99%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含SEQ ID NO: 35之多肽。在一些情況下，核酸序列編碼由SEQ ID NO: 35組成之多肽。
在一些實施例中，包含編碼ssVH-P4-CAR-P2A-sushi15或P4-BB-sushi15之核酸序列之載體包含有包含與SEQ ID NO: 38之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 38之約85%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 38之約90%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 38之約95%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 38之約96%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 38之約97%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 38之約98%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 38之約99%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含SEQ ID NO: 38。在一些情況下，核酸序列由SEQ ID NO: 38組成。
在一些實施例中，本文所述之載體(例如，表現載體)包含編碼特異性結合至間皮素之CAR之多核苷酸、編碼mIL-15/Ra之多核苷酸及編碼CCL19之多核苷酸。在一些情況下，載體(例如，表現載體)包含編碼包含與SEQ ID NO: 36 (在本文中亦稱為ssVH-P4-CAR-P2A-IL2sp-mIL15/Ra-P2A-CCL19或P4-BB-mIL15-CCL19)之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的多肽之核酸序列。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 36之約85%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 36之約90%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 36之約95%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 36之約96%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 36之約97%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 36之約98%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 36之約99%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含SEQ ID NO: 36之多肽。在一些情況下，核酸序列編碼由SEQ ID NO: 36組成之多肽。
在一些實施例中，包含編碼ssVH-P4-CAR-P2A-IL2sp-mIL15/Ra-P2A-CCL19或P4-BB-mIL15-CCL19之核酸序列之載體包含有包含與SEQ ID NO: 39之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 39之約85%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 39之約90%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 39之約95%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 39之約96%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 39之約97%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 39之約98%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 39之約99%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含SEQ ID NO: 39。在一些情況下，核酸序列由SEQ ID NO: 39組成。
在一些實施例中，本文所述之載體(例如，表現載體)包含編碼特異性結合至間皮素之CAR之多核苷酸、編碼sushi15之多核苷酸及編碼CCL19之多核苷酸。在一些情況下，載體(例如，表現載體)包含編碼包含與SEQ ID NO: 15 (在本文中亦稱為ssVH-P4-CAR-P2A-sushi15-P2A-CCL19或P4-BB-sushi15-CCL19)之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的多肽之核酸序列。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 15之約85%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 15之約90%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 15之約95%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 15之約96%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 15之約97%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 15之約98%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 15之約99%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含SEQ ID NO: 15之多肽。在一些情況下，核酸序列編碼由SEQ ID NO: 15組成之多肽。
在一些實施例中，包含編碼ssVH-P4-CAR-P2A-sushi15-P2A-CCL19或P4-BB-sushi15-CCL19之核酸序列之載體包含有包含與SEQ ID NO: 40之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 40之約85%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 40之約90%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 40之約95%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 40之約96%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 40之約97%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 40之約98%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 40之約99%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含SEQ ID NO: 40。在一些情況下，核酸序列由SEQ ID NO: 40組成。
在一些實施例中，本文所述之載體(例如，表現載體)包含編碼特異性結合至間皮素之CAR之多核苷酸及編碼mIL15/Ra-LSP之多核苷酸。在一些情況下，載體(例如，表現載體)包含編碼包含與SEQ ID NO: 53 (在本文中亦稱為ssVHsp-P4-CD8h/TM-BB-CD3z-P2A- IL15LSP -IL15前肽-mIL15/Ra或SSVHsp-P4-BB-mIL15/Ra-LSP)之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的多肽之核酸序列。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 53之約85%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 53之約90%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 53之約95%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 53之約96%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 53之約97%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 53之約98%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 53之約99%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含SEQ ID NO: 53之多肽。在一些情況下，核酸序列編碼由SEQ ID NO: 53組成之多肽。
在一些實施例中，包含編碼ssVHsp-P4-CD8h/TM-BB-CD3z-P2A- IL15LSP -IL15前肽-mIL15/Ra或SSVHsp-P4-BB-mIL15/Ra-LSP之核酸序列之載體包含有包含與SEQ ID NO: 58之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 58之約85%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 58之約90%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 58之約95%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 58之約96%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 58之約97%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 58之約98%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 58之約99%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含SEQ ID NO: 58。在一些情況下，核酸序列由SEQ ID NO: 58組成。
在一些實施例中，本文所述之載體(例如，表現載體)包含編碼特異性結合至間皮素之CAR之多核苷酸及編碼sIL15-LSP之多核苷酸。在一些情況下，載體(例如，表現載體)包含編碼包含與SEQ ID NO: 54 (在本文中亦稱為ssVHsp-P4-CD8h/TM-BB-CD3z-P2A- IL15LSP-IL15前肽-IL15或SSVHsp-P4-BB-sIL15-LSP)之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的多肽之核酸序列。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 54之約85%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 54之約90%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 54之約95%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 54之約96%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 54之約97%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 54之約98%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 54之約99%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含SEQ ID NO: 54之多肽。在一些情況下，核酸序列編碼由SEQ ID NO: 54組成之多肽。
在一些實施例中，包含編碼ssVHsp-P4-CD8h/TM-BB-CD3z-P2A- IL15LSP-IL15前肽-IL15或SSVHsp-P4-BB-sIL15-LSP之核酸序列之載體包含有包含與SEQ ID NO: 59之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 59之約85%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 59之約90%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 59之約95%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 59之約96%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 59之約97%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 59之約98%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 59之約99%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含SEQ ID NO: 59。在一些情況下，核酸序列由SEQ ID NO: 59組成。
在一些實施例中，本文所述之載體(例如，表現載體)包含編碼特異性結合至間皮素之CAR之多核苷酸、編碼mIL15/Ra-LSP之多核苷酸及編碼CCL19之多核苷酸。在一些情況下，載體(例如，表現載體)包含編碼包含與SEQ ID NO: 55 (在本文中亦稱為ssVHsp-P4-CD8h/TM-BB-CD3z-P2A- IL15LSP-IL15前肽-IL15-P2A-endospCCL19或ssVHsp-P4-BB-mIL15/Ra-LSP-CCL19)之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的多肽之核酸序列。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 55之約85%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 55之約90%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 55之約95%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 55之約96%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 55之約97%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 55之約98%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 55之約99%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含SEQ ID NO: 55之多肽。在一些情況下，核酸序列編碼由SEQ ID NO: 55組成之多肽。
在一些實施例中，包含編碼ssVHsp-P4-CD8h/TM-BB-CD3z-P2A- IL15LSP-IL15前肽-IL15-P2A-endospCCL19或ssVHsp-P4-BB-mIL15/Ra-LSP-CCL19之核酸序列之載體包含有包含與SEQ ID NO: 60之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 60之約85%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 60之約90%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 60之約95%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 60之約96%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 60之約97%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 60之約98%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 60之約99%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含SEQ ID NO: 60。在一些情況下，核酸序列由SEQ ID NO: 60組成。
在一些實施例中，本文所述之載體(例如，表現載體)包含編碼特異性結合至間皮素之CAR之多核苷酸、編碼sIL15-LSP之多核苷酸及編碼CCL19之多核苷酸。在一些情況下，載體(例如，表現載體)包含編碼包含與SEQ ID NO: 56 (在本文中亦稱為ssVHsp-P4-CD8h/TM-BB-CD3z-P2A- IL15LSP-IL15前肽-IL15-P2A-endospCCL19或ssVHsp-P4-BB-sIL15-LSP-CCL19)之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的多肽之核酸序列。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 56之約85%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 56之約90%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 56之約95%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 56之約96%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 56之約97%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 56之約98%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 56之約99%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含SEQ ID NO: 56之多肽。在一些情況下，核酸序列編碼由SEQ ID NO: 56組成之多肽。
在一些實施例中，包含編碼ssVHsp-P4-CD8h/TM-BB-CD3z-P2A- IL15LSP-IL15前肽-IL15-P2A-endospCCL19或ssVHsp-P4-BB-sIL15-LSP-CCL19之核酸序列之載體包含有包含與SEQ ID NO: 61之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 61之約85%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 61之約90%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 61之約95%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 61之約96%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 61之約97%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 61之約98%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含有包含與SEQ ID NO: 61之約99%序列一致性的序列。在一些情況下，核酸序列包含SEQ ID NO: 61。在一些情況下，核酸序列由SEQ ID NO: 61組成。
在一些實施例中，本文所述之載體(例如，表現載體)包含編碼特異性結合至間皮素之CAR之多核苷酸、編碼sushi15之多核苷酸及編碼CCL19之多核苷酸。在一些情況下，載體(例如，表現載體)包含編碼包含與SEQ ID NO: 57 (在本文中亦稱為ssVH-P4-CD28鉸鏈-TM-CD28cyto-CD3z-P2A-IL15Rasp-IL15Ra(sushi)-20aa連接子-IL15-P2A-endospCCL19或ssVHsp-P4-CD28-sushi15 -CCL19)之約80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的多肽之核酸序列。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 57之約85%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 57之約90%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 57之約95%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 57之約96%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 57之約97%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 57之約98%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含與SEQ ID NO: 57之約99%序列一致性的多肽。在一些情況下，核酸序列編碼包含SEQ ID NO: 57之多肽。在一些情況下，核酸序列編碼由SEQ ID NO: 57組成之多肽。
本發明之載體(例如，表現載體)可包含一或多個天然衍生核酸或人工合成核酸，且可根據引入本發明之載體(例如，表現載體)的細胞之類型來適當地選擇。其序列資訊可適當地藉由搜尋公開已知文件或資料庫諸如NCBI (www.ncbi.nlm.nih.gov/guide/)來獲得。
本發明之載體可為表現載體，其藉由使載體與細胞接觸來引入至免疫細胞或其前驅細胞中，使得其中編碼之預定蛋白質(多肽)可在免疫細胞中表現以產生本發明之經修飾之免疫細胞。本發明之表現載體不特別受任何實施例限制。熟習此項技術者能夠設計及產生允許在免疫細胞中表現所需蛋白質(多肽)的表現載體。包含編碼特異性識別人類間皮素之細胞表面分子之多核苷酸、編碼IL-15之多核苷酸及視情況編碼CCL19之多核苷酸的本發明之表現載體之實例可包括用於產生本發明之免疫細胞的任何表現載體。
本發明之表現載體之類型可為線性形式或圓形形式，且可為非病毒載體諸如質體，可為病毒載體，或可為基於轉座子之載體。此類載體可含有控制序列(諸如啟動子或終止子)或選擇標記序列(諸如抗藥性基因或報道基因)。編碼IL-15之多核苷酸及編碼CCL19之多核苷酸可以可操作地排列在啟動子序列的下游，使得多核苷酸中之每一者可有效地轉錄。
啟動子之實例可包括：病毒衍生啟動子，諸如反轉錄病毒LTR啟動子、SV40早期啟動子、巨細胞病毒啟動子及單純性疱疹病毒胸苷激酶啟動子；及哺乳動物衍生啟動子，諸如磷酸甘油酸激酶(PGK)啟動子、Xist啟動子、β-肌動蛋白啟動子及RNA聚合酶II啟動子。在一些實施例中，啟動子可較佳包括反轉錄病毒LTR啟動子。反轉錄病毒LTR啟動子可包含CTGAATATGGGCCAAACAGGATATCTGTGGTAAGCAGTTCCTGCCCCGGCTCAGGGCCAAGAACAGATGGAACAGCTGAATATGGGCCAAACAGGATATCTGTGGTAAGCAGTTCCTGCCCCGGCTCAGGGCCAAGAACAGATGGTCCCCAGATGCGGTCCAGCCCTCAGCAGTTTCTAGAGAACCATCAGATGTTTCCAGGGTGCCCCAAGGACCTGAAATGACCCTGTGCCTTATTTGAACTAACCAATCAGTTCGCTTCTCGCTTCTGTTCGCGCGCTTCTGCTCCCCGAGCTCAATAAAAGAGCCCACAACCCCTCACTCGGCGCGCCAGTCCTCCGATTGACTGAGTCGCCCGGGTACCCGTGTATCCAATAAACCCTCTTGCAGTTGCATCCGACTTGTGGTCTCGCTGTTCCTTGGGAGGGTCTCCTCTGAGTGATTGACTACCCGTCAGCGGGGGTCTTTCA。替代地，可使用藉由四環素來誘導之四環素反應性啟動子、藉由干擾素來誘導的Mx1啟動子或其類似者。在本發明之表現載體中使用藉由特定物質來誘導之啟動子允許根據癌症之治療時程來控制IL-15表現及視情況CCL19表現之誘導，例如，當含有本發明之載體之免疫細胞用作用於治療癌症之醫藥組成物時。
病毒載體之實例可包括反轉錄病毒載體、慢病毒載體、腺病毒載體及腺病毒相關病毒載體，且可較佳包括反轉錄病毒載體，較佳γ反轉錄病毒載體，更佳pMSGV載體(Tamada k等人, Clin Cancer Res 18: 6436-6445 (2002))、pMSCV載體(由Takara Bio Inc.製造)或pSFG載體。反轉錄病毒載體之使用允許轉殖基因之長期且穩定的表現，因為轉殖基因整合於宿主細胞之基因體中。
一或多種檢定可用於確認本發明之表現載體容納於免疫細胞中。示範性檢定可包括用於篩檢藉由經工程改造之免疫細胞之CAR之表現的流動式細胞測量術、北方墨點法、南方墨點法、PCR (諸如RT-PCR)、ELISA或西方墨點法。在一些實施例中，表現載體進一步包含標記基因(例如，編碼螢光蛋白諸如綠色螢光蛋白(GFP)、紅色螢光蛋白(RFP)或黃色螢光蛋白(YFP))以偵測免疫細胞之CAR、IL-15及/或CCL19表現。 免疫細胞及生產方法
在某些實施例中，本文所述之免疫細胞經修飾以表現特異性識別間皮素(例如，人類間皮素)之細胞表面分子、IL-15及視情況CCL19 (圖1C及圖1D)。示範性免疫細胞可包括淋巴樣細胞諸如T細胞、自然殺手細胞(NK細胞)及B細胞、抗原呈現細胞諸如單核球、巨噬細胞、樹突細胞或顆粒球諸如嗜中性球、嗜伊紅球、嗜鹼性球或肥大細胞。免疫細胞可衍生自幹細胞，例如，誘導性多能幹細胞(iPSC)、胚胎幹細胞(ESC)、ESC衍生造血前驅細胞(HPC)或生血內皮細胞(HEC)。免疫細胞可包括衍生自哺乳動物諸如人類、狗、貓、豬或小鼠之T細胞，較佳自人類衍生或分離之T細胞。免疫細胞(例如，T細胞)可通過培養(例如， 離體培養)來獲得或直接自哺乳動物收穫。免疫細胞不受限，只要細胞涉及免疫反應且可表現特異性識別間皮素(例如，人類間皮素)之細胞表面分子，表現IL-15且視情況表現CCL19即可。免疫細胞可為自需要其進行後續治療的個體收穫之自體細胞。免疫細胞亦可為有需要之個體的同種異體細胞或同基因細胞。
在一些實施例中，免疫細胞進一步經修飾以削弱或改善個體之由於在個體中投與免疫細胞所致的發炎或免疫反應。在一些情況下，發炎或免疫反應為移植物抗宿主疾病(GvHD)，且免疫細胞進一步經修飾以削弱或改善GvHD。
在一些情況下，免疫細胞經修飾以削弱或移除T細胞受體(TCR)之α鏈及/或β鏈之表現。在一些情況下，免疫細胞經修飾以削弱或移除TCR之α鏈及β鏈(TCRα/β)之表現。在一些情況下，免疫細胞不表現TCR之α鏈及β鏈(TCRα/β)。在一些情況下，額外CD3域中之一或多者(例如，CD3δ、CD3γ或CD3ε)經修飾以削弱TCRα/β功能。
在一些情況下，免疫細胞表現γδT細胞受體(gdTCR或γδTCR)。γδT細胞為T細胞亞群且佔全部T淋巴球之約0.5-5%。在癌症環境中，基於呈現於細胞表面處之γ及δ受體之組合亞群，γδT細胞已被證明發揮促腫瘤及抗腫瘤活性。例如，表現含有γ-鏈可變區9 (Vγ9)及δ-鏈可變區2 (Vδ2)之TCR的γδT細胞，亦稱為Vγ9Vδ2 T細胞，發揮抗腫瘤活性，包括但不限於抑制癌細胞增殖、血管生成、淋巴管生成及增加癌細胞凋亡。γTCR之實例包括Vγ1TCR、Vγ2TCR、Vγ3TCR、Vγ4TCR、Vγ5TCR、Vγ6TCR、Vγ7TCR、Vγ8TCR及Vγ9TCR，且δTCR之實例包括Vδ1TCR、Vδ2TCR、Vδ3TCR、Vδ4TCR、Vδ5TCR、Vδ6TCR、Vδ7TCR、Vδ8TCR及Vδ9TCR。雖然特定γTCR及δTCR之組合不受限，但是涵蓋例如Vγ3Vδ1TCR、Vγ4Vδ1TCR、Vγ9Vδ1TCR及Vγ9Vδ2TCR。在一些情況下，免疫細胞表現Vγ9 TCR、Vδ2 TCR或Vγ9Vδ2 TCR。
在一些實施例中，表現γδT細胞受體(gdTCR或γδTCR)之本文所述之免疫細胞自誘導性多能幹細胞(iPSC)產生。在一些情況下，iPSC自除了αβT細胞以外之細胞建立。在一些情況下，在分化成γδTCR細胞之前，藉由將Vγ9Vδ2基因插入至iPSC之基因體中，iPSC進一步經修飾。在一些情況下，Vγ9Vδ2基因編碼包含與SEQ ID NO: 44之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的多肽。在一些情況下，Vγ9Vδ2基因編碼由SEQ ID NO: 44組成之多肽。
在一些實施例中，本文所揭示之γδTCR細胞經修飾以表現特異性識別間皮素之CAR並表現IL-15。在一些情況下，γδTCR細胞進一步經修飾以表現CCL19。在一些情況下，γδTCR細胞自經Vγ9Vδ2基因修飾之iPSC分化。在一些情況下，γδTCR細胞自經Vγ9Vδ2基因修飾之iPSC分化，該基因編碼包含與SEQ ID NO: 44之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性的多肽。在一些情況下，γδTCR細胞自經Vγ9Vδ2基因修飾之iPSC分化，該基因編碼由SEQ ID NO: 44組成之多肽。
在某些實施例中，本文揭示經修飾以表現特異性識別間皮素之CAR及IL-15的免疫細胞群體。在一些情況下，免疫細胞群體進一步表現CCL19。在一些實施例中，免疫細胞群體包含經修飾之T細胞(例如， 離體擴增或自哺乳動物收穫)，該等細胞表現特異性識別間皮素之CAR、IL-15及視情況CCL19。免疫細胞群體可包含約20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%或更高百分比之經修飾之T細胞。免疫細胞群體可包含約20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或95%之經修飾之T細胞。免疫細胞群體可包含實質上純的經修飾之T細胞群體。示範性T細胞可包括α-βT細胞、γ-δT細胞、CD8 +T細胞、CD4 +T細胞、腫瘤浸潤T細胞、記憶T細胞、初始(naive) T細胞及自然殺手T (NKT)細胞。
在一些實施例中，經修飾以表現特異性識別間皮素之CAR、IL-15及視情況CCL19的免疫細胞群體包含少於約30%、25%、20%、15%、10%、5%或更少污染細胞。如本文使用，術語「污染細胞」係指不表現特異性識別間皮素之CAR、IL-15及視情況CCL19的細胞。污染細胞可包括不表現特異性識別間皮素之CAR、IL-15及視情況CCL19的T細胞以及不表現特異性識別間皮素之CAR、IL-15及視情況CCL19的其他類型之免疫細胞。污染細胞亦可指來自體液諸如血液或骨髓液，衍生自組織諸如脾臟組織、胸腺或淋巴結，或衍生自癌症組織諸如原發性腫瘤組織、轉移性腫瘤組織或癌腹水的非免疫細胞。
用於產生本發明之免疫細胞的方法之實例可包括將編碼細胞表面分子之多核苷酸、編碼IL-15之多核苷酸及視情況編碼CCL19之多核苷酸引入至免疫細胞的生產方法。生產方法可包括如例如WO2016/056228、WO2017/159736、WO2013/176915、WO2015/120096、WO2016/019300或Vormittag P等人, Curr Opin Biotechnol 2018; 53: 164-81所描述之生產方法。替代實例可包括自藉由將用於表現特異性識別間皮素(例如，人類間皮素)之細胞表面分子及/或IL-15及進一步視情況CCL19的載體植入受精卵中所產生之轉殖基因哺乳動物純化及獲得免疫細胞之方法，及如果有必要，進一步將用於表現特異性識別間皮素(例如，人類間皮素)之細胞表面分子及/或IL-15及進一步視情況CCL19的載體引入自轉殖基因哺乳動物純化及獲得之免疫細胞的生產方法。
在引入編碼細胞表面分子之多核苷酸、編碼IL-15之多核苷酸及視情況編碼CCL19之多核苷酸或 上文描述之載體的情況下，該方法可為用於將多核苷酸或載體引入至免疫細胞的任何方法。實例可包括電穿孔方法(Cytotechnology, 3, 133 (1990))、磷酸鈣方法(日本未審查專利申請公開案第2-227075號)、脂質轉染方法(Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 84, 7413 (1987))及病毒感染方法。示範性病毒感染方法可包括用待引入之載體及封裝質體轉染封裝細胞諸如GP2-293細胞(由Takara Bio Inc.製造)、Plat-GP細胞(由Cosmo Bio Co., Ltd.製造)、PG13細胞(ATCC CRL-10686)或PA317細胞(ATCC CRL-9078)以產生重組病毒以及用重組病毒感染免疫細胞的方法(參見例如，WO2017/159736)。
在一些實施例中，該方法包含將包含編碼CAR之多核苷酸、編碼IL-15之多核苷酸及視情況編碼CCL19之多核苷酸的一或多個載體引入至免疫細胞。在一些實施例中，該方法包含將包含核酸分子之載體(例如，表現載體)引入至免疫細胞，該核酸分子包含：編碼嵌合抗原受體(CAR)之多核苷酸，該嵌合抗原受體包含特異性識別人類間皮素之抗體、CD8鉸鏈區、CD8跨膜區、4-1BB胞內區及CD3ζ胞內區；編碼IL-15之多核苷酸；及視情況編碼CCL19之多核苷酸。在一些實施例中，該方法包含將包含編碼CAR之多核苷酸的第一載體(例如，第一表現載體)及包含編碼IL-15之多核苷酸的第二載體(例如，第二表現載體)一起或分階段地引入至免疫細胞。在一些實施例中，該方法包含將包含編碼CAR之多核苷酸的第一載體(例如，第一表現載體)及包含編碼IL-15之多核苷酸及編碼CCL19之多核苷酸的第二載體(例如，第二表現載體)一起或分階段地引入至免疫細胞。在一些實施例中，該方法包含將包含編碼CAR之多核苷酸及編碼IL-15之多核苷酸或編碼CCL19之多核苷酸的第一載體(例如，第一表現載體)及包含不包括在第一載體中的編碼IL-15之多核苷酸或編碼CCL19之多核苷酸的第二載體(例如，第二表現載體)一起或分階段地引入至免疫細胞。在一些實施例中，該方法包含將包含編碼CAR之多核苷酸及編碼IL-15之多核苷酸的第一載體(例如，第一表現載體)及包含編碼CCL19之多核苷酸的第二載體(例如，第二表現載體)一起或分階段地引入至免疫細胞。在一些實施例中，該方法包含將包含編碼CAR之多核苷酸及編碼CCL19之多核苷酸的第一載體(例如，第一表現載體)及包含編碼IL-15之多核苷酸的第二載體(例如，第二表現載體)一起或分階段地引入至免疫細胞。在一些實施例中，該方法包含將包含編碼CAR之多核苷酸的第一載體(例如，第一表現載體)、包含編碼IL-15之多核苷酸的第二載體(例如，第二表現載體)及包含編碼CCL19之多核苷酸的第三載體(例如，第三表現載體)一起或分階段地引入至免疫細胞。
編碼CAR之多核苷酸、編碼IL-15之多核苷酸及編碼CCL19之多核苷酸中之一或多者可整合至免疫細胞之基因體中。在一些實施例中，編碼CAR之多核苷酸、編碼IL-15之多核苷酸及編碼CCL19之多核苷酸不整合至基因體中(例如，附加型)。 使用方法
在某些實施例中，本文揭示一種治療表現間皮素之癌症的方法。在一些實施例中，該方法包含向有需要之個體投與經修飾以表現特異性結合至間皮素之經工程改造之細胞表面分子、介白素15 (IL-15)及視情況趨化因子(C-C模體)配體19 (CCL19)的本文所述之免疫細胞。在一些實施例中，免疫細胞經修飾以表現經工程改造之細胞表面分子，其包含特異性識別間皮素之嵌合抗原受體(CAR)或特異性結合至間皮素之T細胞受體(TCR)。在一些實施例中，免疫細胞經修飾以表現包含特異性識別人類間皮素之抗體、CD8鉸鏈區、CD8跨膜區、4-1BB胞內區及CD3ζ胞內區的CAR；IL-15；及視情況CCL19。
在一些實施例中，表現間皮素之癌症為實性瘤。在一些實施例中，實性瘤包含間皮瘤、結直腸癌、胰腺癌、胸腺癌、膽管癌、肺癌、皮膚癌、乳癌、前列腺癌、膀胱癌、陰道癌、頸癌、子宮癌、肝癌、腎癌、胃癌、脾癌、氣管癌、支氣管癌、胃癌、食道癌、膽囊癌、睪丸癌、卵巢癌或骨癌。在一些實施例中，表現間皮素之癌症為卵巢癌。在一些實施例中，表現間皮素之癌症為間皮瘤。在一些實施例中，表現間皮素之癌症為胃癌。在一些實施例中，表現間皮素之癌症為肺癌(例如，非小細胞肺癌(NSCLC)、小細胞肺癌(SCLC)、肺類癌(lung carcinoid tumor)、肺腺鱗癌、大細胞神經內分泌癌或唾液腺類型肺癌)。在一些實施例中，表現間皮素之癌症為NSCLC (例如，肺腺癌、鱗狀細胞、大細胞未分化癌、肉瘤樣癌或腺鱗癌)。
表現間皮素之癌症可為造血癌症。造血癌症可為B細胞造血癌症、T細胞造血癌症、何杰金氏淋巴瘤(Hodgkin's lymphoma)或非何杰金氏淋巴瘤。造血癌症可為急性淋巴球性白血病(ALL)、慢性淋巴球性白血病(CLL)、小淋巴球性淋巴瘤(SLL)、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、濾泡性淋巴瘤(FL)、套細胞淋巴瘤(MCL)、邊緣帶淋巴瘤、伯基特淋巴瘤或華氏巨球蛋白血症。
造血癌症可為肉瘤。肉瘤可包括軟骨肉瘤、尤因肉瘤、惡性血管內皮瘤、惡性神經鞘瘤、骨肉瘤或軟組織肉瘤。
表現間皮素之癌症可為轉移性癌症，例如，轉移性實性瘤或轉移性造血癌症。轉移性表現間皮素之癌症可為轉移性卵巢癌、轉移性間皮瘤、轉移性胃癌或轉移性肺癌(例如，轉移性NSCLC)。
表現間皮素之癌症可為復發或難治性癌症，例如，復發或難治性實性瘤，或復發或難治性造血癌症。復發或難治性表現間皮素之癌症可為復發或難治性卵巢癌、復發或難治性間皮瘤、復發或難治性胃癌或復發或難治性肺癌(例如，復發或難治性NSCLC)。
在一些實施例中，該方法進一步包含向個體投與額外治療劑或額外治療方案。額外治療劑可包含化學治療劑、免疫治療劑、靶向療法、輻射療法或其組合。說明性額外治療劑包括但不限於：烷化劑，諸如六甲蜜胺、白消安、卡鉑、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、順鉑、環磷醯胺、達卡巴嗪、洛莫司汀、美法侖、奧沙利鉑、替莫唑胺或塞替派；抗代謝藥物，諸如5-氟尿嘧啶(5-FU)、6-巰基嘌呤(6-MP)、卡培他濱、阿糖胞苷、氟尿苷、氟達拉濱、吉西他賓、羥基脲、胺甲蝶呤或培美曲塞；蒽環類藥物，諸如道諾黴素、阿黴素、泛艾黴素或艾達黴素；拓撲異構酶I抑制劑，諸如拓撲替康或伊立替康(CPT-11)；拓撲異構酶II抑制劑，諸如依託泊苷(VP-16)、替尼泊苷或米托蒽醌；有絲分裂抑制劑，諸如多烯紫杉醇、雌莫司汀、伊沙匹隆、紫杉醇、長春花鹼、長春新鹼或長春瑞賓；或皮質類固醇，諸如普賴松、甲基普賴蘇穠或地塞米松。
在一些實施例中，額外治療劑包含第一線療法。如本文使用，「第一線療法」包含癌症個體之初級治療。在一些實施例中，癌症為原發性癌症。在其他實施例中，癌症為轉移性或復發性癌症。在一些實施例中，第一線療法包含化學療法。在其他實施例中，第一線治療包含輻射療法。熟習此項技術者容易理解，不同的第一線治療可適用於不同類型的癌症。
在一些實施例中，額外治療劑包含多ADP核糖聚合酶(PARP)之抑制劑。示範性PARP抑制劑包括但不限於奧拉帕尼(olaparib) (AZD-2281，Lynparza®，來自Astra Zeneca)、盧卡帕尼(rucaparib) (PF-01367338，Rubraca®，來自Clovis Oncology)、尼拉帕尼(niraparib) (MK-4827，Zejula®，來自Tesaro)、他拉唑帕尼(talazoparib) (BMN-673，來自BioMarin Pharmaceutical Inc.)、維利帕尼(veliparib) (ABT-888，來自Abb Vie)、CK-102 (以前為CEP 9722，來自Teva Pharmaceutical Industries Ltd.)、E7016 (來自Eisai)、伊尼帕利布(iniparib) (BSI 201，來自Sanofi)及帕米帕利(pamiparib) (BGB-290，來自BeiGene)。
在一些實施例中，額外治療劑包含免疫檢查點抑制劑。在一些實施例中，檢查點抑制劑包含帕博利珠單抗(pembrolizumab)、納武單抗(nivolumab)、曲利木單抗(tremelimumab)或依匹單抗(ipilimumab)。在一些實施例中，檢查點抑制劑包含PD-L1、PD-L2、PD-1、CTLA-4、LAG3、B7-H3、KIR、CD137、PS、TFM3、CD52、CD30、CD20、CD33、CD27、OX40、GITR、ICOS、BTLA (CD272)、CD160、2B4、LAIR1、TIGHT、LIGHT、DR3、CD226、CD2或SLAM之抑制劑。抑制劑可為抗體或其片段(例如，單株抗體、人類抗體、人源化抗體或嵌合抗體)、RNAi分子或小分子。
在一些實施例中，額外治療劑包含抗體諸如阿侖單抗(alemtuzumab)、曲妥珠單抗(trastuzumab)、替伊莫單抗(ibritumomab tiuxetan)、本妥昔單抗(brentuximab vedotin)、阿多曲妥珠單抗美坦辛(ado-trastuzumab emtansine)或貝林妥歐單抗(blinatumomab)。
在一些實施例中，額外治療劑包含細胞介素。示範性細胞介素包括但不限於IL-1β、IL-6、IL-7、IL-10、IL-12、IL-21或TNFα。
在一些實施例中，額外治療劑包含受體促效劑。在一些實施例中，受體促效劑包含Toll樣受體(TLR)配體。在一些實施例中，TLR配體包含TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8或TLR9。在一些實施例中，TLR配體包含合成配體例如像Pam3Cys、CFA、MALP2、Pam2Cys、FSL-1、Hib-OMPC、Poly I:C、poly A:U、AGP、MPL A、RC-529、MDF2p、CFA或鞭毛蛋白。
在一些實施例中，額外治療劑包含氟達拉濱及環磷醯胺。
在一些實施例中，額外治療劑包含tisagenlecleucel (KYMRIAH®)、axicabtagene ciloleucel (YESCARTA®)或brexucabtagene autoleucel (TECARTUS®)。
在一些實施例中，額外治療方案包含手術。
在一些實施例中，本文所述之免疫細胞或本文所述之醫藥組成物及額外治療劑同時投與。
在一些實施例中，本文所述之免疫細胞或本文所述之醫藥組成物及額外治療劑依序投與。在一些實施例中，在投與額外治療劑之前，將本文所述之免疫細胞或本文所述之醫藥組成物投與至個體。在其他實施例中，在投與額外治療劑之後，將本文所述之免疫細胞或本文所述之醫藥組成物投與至個體。
在一些實施例中，個體為人類。
在一些實施例中，本文亦描述一種用於產生表現特異性識別間皮素(例如，人類間皮素)之細胞表面分子、IL-15及視情況CCL19的免疫細胞的方法。該方法包含將本文所述之核酸分子或包含該核酸分子之載體引入至免疫細胞以誘導免疫細胞表現特異性識別人類間皮素之細胞表面分子、IL-15及視情況CCL19。在一些實施例中，免疫細胞為T細胞、自然殺手(NK)細胞、B細胞、抗原呈現細胞或顆粒球，視情況T細胞或NK細胞。 醫藥組成物
在某些實施例中，如上所述之免疫細胞經調配為醫藥組成物。在一些實施例中，醫藥組成物藉由多種投與途徑來投與至個體，包括但不限於非經腸、經口、舌下或經皮投與途徑。在一些實施例中，非經腸投與包含靜脈內、皮下、肌肉內、鼻內、動脈內、關節內、皮內、骨內輸注、腹膜內、蛛網膜下、顱內、滑膜內、腫瘤內、皮內、髓內、心臟內或囊內投與。在一些實施例中，醫藥組成物經調配用於局部投與。在其他實施例中，醫藥組成物被經調配用於全身投與。
在一些實施例中，醫藥組成物包含醫藥學上可接受之添加劑。添加劑之實例可包括鹽水、緩衝鹽水、細胞培養基、右旋糖、可注射水、甘油、乙醇、穩定劑、增溶劑、界面活性劑、緩衝液、防腐劑、張度劑、填充劑、潤滑劑或其組合。
在一些實施例中，醫藥組成物進一步包含pH調整劑或緩衝劑，其包括：酸，諸如乙酸、硼酸、檸檬酸、乳酸、磷酸及鹽酸；鹼，諸如氫氧化鈉、磷酸鈉、硼酸鈉、檸檬酸鈉、乙酸鈉、乳酸鈉及三羥甲基胺基甲烷；及緩衝劑，諸如檸檬酸鹽/右旋糖、碳酸氫鈉及氯化銨。此等酸、鹼及緩衝劑以將組成物之pH維持在可接受範圍內所需之量被包括在內。
在一些實施例中，醫藥組成物包括使組成物之滲透壓達到可接受範圍內所需之量的一或多種鹽。此等鹽包括具有鈉、鉀或銨陽離子及氯離子、檸檬酸根、抗壞血酸根、硼酸根、磷酸根、碳酸氫根、硫酸根、硫代硫酸根或亞硫酸氫根陰離子的鹽，合適的鹽包括氯化鈉、氯化鉀、硫代硫酸鈉、亞硫酸氫鈉及硫酸銨。
在示範性方法中，本發明之醫藥組成物可獨立地以一個部分或多個劃分部分每天4次、3次、兩次或一次，以1天、2天、3天、4天或5天間隔，每週一次，以7天、8天或9天間隔，每週兩次，每月一次，每月兩次，每月三次或更多次投與。
在患者之狀態確實改善的情況下，在醫師裁量下，繼續給予組成物之投與，替代地，所投與之組成物之劑量臨時減少或臨時暫停一定長度的時間(亦即，「藥物假期」)。在一些實施例中，藥物假期之長度在2天與1年之間變化，僅舉例而言包括2天、3天、4天、5天、6天、7天、10天、12天、15天、20天、28天、35天、50天、70天、100天、120天、150天、180天、200天、250天、280天、300天、320天、350天或365天。藥物假期期間的劑量減少為10%-100%，僅舉例而言包括10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
在一些實施例中，對應於此量的給定CAR-T細胞之量取決於諸如疾病嚴重程度及需要治療之個體或宿主之身份(例如，體重)之因素而變化，但是常規地以在此項技術中已知之方式、根據圍繞病例之特定情況來確定，該等情況包括例如所投與之特定劑、投與途徑及所治療個體或宿主。在一些實施例中，所需劑量便利地以單一劑量來呈現或呈現為同時(或在一段較短時間內)或在適當間隔下投與之劃分劑量，例如為每天兩個、三個、四個或更多個亞劑量。
先前之範圍僅供參考，因為就個體治療方案而論變數之數目較大，並且自該等推薦數值之相當大的偏離不足為奇。此等劑量視許多變數而改變，該等變數不限於使用之化合物之活性、所治療之疾病或疾患、投與方式、個別個體之需求、所治療之疾病或疾患之嚴重程度及醫師之判斷。
在一些實施例中，此等治療方案之毒性及治療功效藉由標準醫藥程序在細胞培養物或實驗動物中確定，包括但不限於確定LD50 (對50%群體致死之劑量)及ED50 (在50%群體中治療有效之劑量)。毒性與治療效應之間的劑量比率為治療指數且其表示為LD50與ED50之間的比率。展現高治療指數之化合物為較佳的。獲自細胞培養檢定及動物研究之資料用於制定用於人類的劑量範圍。此等化合物之劑量較佳位於循環濃度範圍內，包括具有最小毒性之ED50。視所使用之劑型及所利用之投與途徑而定，劑量在此範圍內變化。 套組/製品
在某些實施例中，本文揭示一種套組，其包含：如上所述之核酸分子；包含如上所述之核酸分子之載體；表現特異性識別間皮素(例如，人類間皮素)之CAR、IL-15及視情況CCL19之免疫細胞；或醫藥組成物。在一些實施例中，套組可含有說明用於治療癌症之使用方法等的一或多種包裝材料，諸如包裝插頁、標籤、包裝或類似材料。由於本發明之醫藥組成物中之免疫細胞對於腫瘤復發具有抑制效應，因此本發明之醫藥組成物可充當用於抑制腫瘤復發之醫藥組成物。用於抑制腫瘤復發之此醫藥組成物可含有說明用於抑制腫瘤復發之使用方法等的一或多種包裝材料，諸如包裝插頁、標籤、包裝或類似材料。
術語「包裝材料」係指容納套組之組分的物理結構。該材料可維持組分無菌，且可由通常用於此等目的之材料( 例如，紙、瓦楞纖維、玻璃、塑膠、箔、安瓿、小瓶、管等)製成。
本發明之套組可包括標籤或插頁。標籤或插頁包括「印刷品」例如，紙或紙板，或單獨或固定至組分、套組或包裝材料(例如，箱子)，或附接至含有套組組分之安瓿、管或小瓶。標籤或插頁可另外包括電腦可讀取媒體，諸如磁碟(例如，軟式磁片、ZIP磁碟)，光碟諸如CD-或DVD-ROM/RAM，DVD，MP3，磁帶，或電性儲存媒體諸如RAM及ROM或此等媒體之併合體諸如磁/光儲存媒體，FLASH媒體或記憶類型卡。
標籤或插頁可包括其中之一或多種組分(例如，結合劑或醫藥組成物)、給藥量、活性劑之臨床藥理學包括作用機制、藥代動力學及藥效學的鑑別資訊。標籤或插頁可包括鑑別製造商資訊、批號及製造地點及日期的資訊。
標籤或插頁可包括關於可使用套組組分之疾病的資訊。標籤或插頁可包括臨床醫師或個體在方法或治療計劃(treatment protocol)或治療方案中使用一或多種套組組分的說明書。說明書可包括給藥量、頻率或持續時間，及實踐本文所述之任何方法、治療計劃或治療方案的說明書。
標籤或插頁可包括關於組分可提供之任何益處，諸如治療益處的資訊。標籤或插頁可包括關於潛在不良副作用之資訊，諸如關於不適合使用特定組成物(例如，本文所述經修飾免疫細胞)之情況，對於個體或臨床醫師之警告。例如，不良副作用通常更可能在活性劑之更高給藥量、頻率或持續時間下發生，且因此說明書可包括針對更高給藥量、頻率或持續時間之建議。不良副作用亦可在個體已經、將要或目前正服用一或多種可與組成物不相容的其他藥物，或個體已經、將要或目前正經歷與組成物不相容的另一治療計劃或治療方案時發生，且因此，說明書可包括關於此等不相容性的資訊。 定義
除非上下文另外明確指出，否則如在說明書及申請專利範圍中使用，單數形式「一個(種)」及「該」包括複數個指示物。例如，術語「細胞」包括複數個細胞，包括其混合物。
如本文使用，術語「包含」意欲意謂組成物及方法包括所列舉要素，但是不排除其他要素。「基本上由……組成」在用於定義組成物及方法時，意謂排除對於意欲用途之組合具有任何基本意義的其他要素。例如，基本上由如本文定義之要素組成的組成物不排除來自分離及純化方法的痕量污染物以及醫藥學上可接受之載劑，諸如磷酸鹽緩衝鹽水、防腐劑及其類似載劑。「由……組成」意謂排除其他成分及用於投與本文所揭示之組成物之基本方法步驟的超過痕量之要素。藉由此等過渡術語中之每一者所定義之態樣在本揭露之範疇內。
如本文使用，術語「約」用於指示一值包括用於確定該值之裝置或方法之誤差之標準偏差。術語「約」在數字指定例如溫度、時間、量及濃度(包括範圍)之前使用時，指示可變化(+)或(–)15%、10%、5%、3%、2%或1%的近似值。
亦如本文使用，「及/或」係指且涵蓋一個或多個相關列出項目之任何及所有可能的組合，以及在以兩者擇一方式(「或」)來解釋時，不存在組合。
如本文使用，「視情況選用之(optional)」或「視情況(optionally)」意謂隨後描述之事件或情況可發生或可不發生，且該描述包括事件或情況發生之實施例及其不發生之實施例。
如本文使用，術語「抗體」係指分別經由重鏈及輕鏈可變域V H及V L結合至其他分子(抗原，例如，間皮素)的蛋白質。術語「可變區」或「可變域」係指抗體中參與抗體與抗原之結合的域。天然抗體之重鏈及輕鏈之可變域(分別為VH及VL)通常具有類似結構，其中各域包含四個保守框架區(FR)及三個CDR。(參見例如Kindt等人Kuby Immunology,第6版, W.H. Freeman and Co.,第91頁(2007))。單個VH或VL結構域可足以賦予抗原結合特異性。此外，結合特定抗原之抗體可分別使用來自結合抗原之抗體VH或VL域來分離以篩選互補VL或VH域之文庫。參見例如Portolano等人, J. Immunol. 150:880-887 (1993)；Clarkson等人, Nature 352:624-628 (1991)。
本揭露之抗體包括單株抗體。術語「單株」在關於抗體使用時，係指基於、獲自或衍生自單一殖株，包括任何真核、原核或噬菌體殖株的抗體。因此，「單株」抗體在本文中在結構上，而不是根據其產生之方法來定義。
單株抗體藉由在此項技術中已知之方法來產生(Kohler 等人, Nature, 256:495(1975)；及Harlow及Lane ,Using Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, 1999)。簡言之，單株抗體可藉由用抗原注射小鼠來獲得。用於使動物免疫之多肽或肽可衍生自轉譯DNA或經化學合成且綴合至攜載蛋白。化學偶合至免疫接種肽之常用載劑包括例如匙孔血藍蛋白(KLH)、甲狀腺球蛋白、牛血清白蛋白(BSA)及破傷風類毒素。抗體產生藉由分析血清樣品，移除脾來獲得B淋巴球，將B淋巴球與骨髓瘤細胞融合以便產生融合瘤，選殖融合瘤，選擇產生針對抗原之抗體的陽性殖株及將抗體自融合瘤培養物中分離來驗證。單株抗體可藉由各種既定技術自融合瘤培養物分離及純化，該等技術包括例如使用蛋白-A瓊脂糖凝膠之親和層析法、粒徑排阻層析法及離子交換層析法(參見例如，Coligan等人, Current Protocols in Immunology第2.7.1-2.7.12部分及第2.9.1-2.9.3部分；及Barnes 等人, 「Methods in Molecular Biology,」 10:79-104, Humana Press (1992))。
本揭露之抗體可屬任何抗體類別IgM、IgG、IgE、IgA、IgD或子類。IgG之示範性子類為IgG 1、IgG 2、IgG 3及IgG 4。
本揭露之抗體可為人源化抗體。術語「人源化」係指以下抗體序列，其在接受者人類免疫球蛋白分子中具有特異性結合至抗原之一或多個互補決定區(CDR)的非人類胺基酸殘基，及框架區(FR)中的側接該等CDR之一或多個人類胺基酸殘基。任何小鼠、大鼠、豚鼠、山羊、非人類靈長類動物(例如，猿、黑猩猩、彌猴、猩猩等)或其他動物抗體可用作用於產生人源化抗體的CDR供體。人類框架區殘基可用對應的非人類殘基(例如，來自供體可變區的殘基)置換。因此，人類框架區中之殘基可用來自非人類CDR供體抗體之對應的殘基取代。人源化抗體可包括既不存在於人類抗體中，亦不存在於供體CDR或框架序列中之殘基。使用衍生自人源化單株抗體之抗體組分減少與非人類區域之免疫原性相關的問題。產生人源化抗體之方法在此項技術中為已知的(參見，例如，美國專利第5,225,539號、第5,530,101號、第5,565,332號及第5,585,089號；Riechmann等人, (1988) Nature 332:323；EP 239,400；W091/09967；EP 592,106；EP 519,596；Padlan Molecular Immunol. (1991) 28:489；Studnicka等人, Protein Engineering (1994) 7:805；Singer等人, J. Immunol. (1993) 150:2844；及Roguska等人, Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA (1994) 91:969)。
本揭露之抗體可為嵌合抗體。術語「嵌合抗體」係指不同部分衍生自不同動物物種的抗體，諸如具有衍生自鼠單株抗體之可變區及人類免疫球蛋白恆定區之抗體，例如，人源化抗體。在一些實施例中，使用經開發用於藉由將來自適當抗原特異性的小鼠抗體分子之基因與適當生物活性之人類抗體分子之基因拼接來產生「嵌合抗體」的技術(Morrison等人, 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. 81:851-855；Neuberger等人, 1984, Nature 312:604-608；Takeda等人, 1985, Nature 314:452-454)。
本揭露之抗體包括其結合片段。示範性抗體片段包括Fab、Fab'、F(ab') 2、Fv、Fd、單鏈Fv(scFv)、二硫化物連接之Fv (sdFv)、輕鏈可變區V L、重鏈可變區V H、三特異性(Fab 3)、雙特異性(Fab 2)、雙功能抗體(diabody) ((V L-V H) 2或(V H-V L) 2)、三功能抗體(triabody) (三價)、四功能抗體(tetrabody) (四價)、微抗體(minibody) ((scF V-C H) 2)、雙特異性單鏈Fv (雙-scFv)、IgGδCH2、scFv-Fc、(scFv) 2-Fc及IgG4PE。此等片段可具有如全長抗體之結合親和力、如全長抗體之結合特異性或如全長抗體之一或多種活性或功能， 例如，間皮素結合抗體之功能或活性。
抗體片段可經組合。例如，V L或V H子序列可藉由連接子序列來連接，由此形成V L-V H嵌合體。單鏈Fv (scFv)序列之組合可藉由連接子序列來連接，由此形成scFv-scFv嵌合體。抗體片段包括單獨或與其他序列之全部或一部分組合的單鏈抗體或可變區。
抗體片段可藉由各種技術製備，包括但不限於蛋白水解消化完整抗體以及藉由重組宿主細胞產生。在一些實施例中，抗體為重組產生之片段，諸如包含不天然存在之排列的片段，諸如具有藉由合成連接子(例如肽連接子)連接之二或更多個抗體區域或鏈的片段，及/或不可藉由天然存在之完整抗體之酶消化來產生的片段。在一些態樣中，抗體片段為scFv。
抗體片段亦可藉由抗體之蛋白水解，例如，藉由完整抗體之胃蛋白酶或木瓜蛋白酶消化來製備。藉由使用胃蛋白酶之酶促裂解所產生之抗體片段提供5S片段，稱為F(ab') 2。此片段可使用硫醇還原劑進一步裂解以產生3.5S Fab'單價片段。替代地，使用胃蛋白酶之酶促裂解直接產生兩個單價Fab'片段及Fc片段(參見， 例如，美國專利第4,036,945號及第4,331,647號；及Edelman 等人, Methods Enymol.1:422 (1967))。亦可使用其他裂解抗體的方法，諸如分離重鏈以形成單價輕鏈-重鏈片段，進一步裂解片段，或其他酶促或化學方法。
在一些實施例中，所描述用於產生單鏈抗體之技術(美國專利第4,694,778號；Bird, 1988, Science 242:423-42；Huston等人, 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883；及Ward等人, 1989, Nature 334:544-54)適於產生單鏈抗體。單鏈抗體藉由經由胺基酸橋連接Fv區之重鏈及輕鏈片段，產生單鏈多肽來形成。亦視情況使用在大腸桿菌中組裝功能性Fv片段之技術(Skerra等人, 1988, Science 242:1038-1041)。
如本文使用，在用於二或更多個核酸或多肽序列之情形中時，「一致」、「序列一致性」或百分比「一致性」係指二或更多個序列相同或具有相同的核苷酸或胺基酸殘基之指定百分比，例如，在指定區域內至少60%一致性，較佳至少65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更高一致性。比對及序列一致性可使用在此項技術中已知之軟體程式來確定，例如Current Protocols in Molecular Biology (Ausubel等人編, 1987)增刊30,第7.7.18部分,表7.7.1所描述之程式。較佳地，使用預設參數進行比對。較佳比對程式為BLAST，其使用預設參數。具體而言，較佳程式為BLASTN及BLASTP，其使用以下預設參數：遺傳密碼=標準；過濾器=無；股=兩個；截止= 60；預期= 10；矩陣= BLOSUM62；描述= 50個序列；排序=較高評分；資料庫=非冗餘，GenBank + EMBL + DDBJ + PDB + GenBank CDS翻譯+ SwissProtein + SPupdate + PIR。此等程式之細節可發現於以下網際網路地址：ncbi.nlm.nih.gov/cgi-bin/BLAST。術語「一致」、「序列一致性」或百分比「一致性」亦指或可應用於測試序列之補體。術語亦包括具有缺失及/或添加之序列以及具有取代之序列。如本文描述，較佳演算法可考慮到間隙及其類似方面。較佳地，一致性存在於至少約25個胺基酸或核苷酸長度的區域上，或更佳在至少50-100個胺基酸或核苷酸長度的區域上。「無關」或「非同源」序列與本文所揭示之序列中之一者共有少於40%一致性，或替代地少於25%一致性。
術語「蛋白質」、「肽」及「多肽」可互換地且以其最廣泛意義使用以指二或更多個亞單位胺基酸、胺基酸類似物或擬肽的化合物。亞單位可由肽鍵連接。在另一態樣中，亞單位可由其他鍵例如酯、醚等連接。蛋白質或肽必須含有至少兩個胺基酸且對於可構成蛋白或肽序列的胺基酸之最大數目沒有限制。多肽包括全長天然多肽，及「經修飾之」形式，諸如子序列、變異體序列、融合/嵌合序列及顯性負性序列。如本文使用，術語「胺基酸」係指天然及/或非天然或合成胺基酸(包括甘胺酸以及D及L光學異構物兩者)、胺基酸類似物及擬肽。
肽包括L-異構物及D-異構物及其組合。肽可包括通常與蛋白質之轉譯後處理相關的修飾，例如，環化( 例如，二硫化物或醯胺鍵)、磷酸化、醣化、羧化、泛素化、十四烷基化或脂化。經修飾之肽可具有經另一個殘基取代、添加至序列或自序列中缺失的一或多個胺基酸殘基。特定實例包括一或多個胺基酸取代、添加或缺失(例如，1-3、3-5、5-10、10-20或更多個)。
如本文使用，術語「修飾」及「經修飾」係指與作為沒有修飾之抗體、蛋白質或多肽之等效物的參考抗體、蛋白質或多肽相比的抗體、蛋白質或多肽之一或多個胺基酸殘基之突變、取代、添加或缺失。在一些實施例中，修飾包含保守取代。
「保守取代」為一個胺基酸由生物學、化學或結構上類似之殘基置換。生物學類似意謂取代與未經取代之序列之活性或功能相容。結構上類似意謂胺基酸具有長度相似之側鏈，諸如丙胺酸、甘胺酸及絲胺酸，或具有類似大小。化學類似性意謂殘基具有相同電荷或均為親水性或疏水性的。特定實例包括用一個疏水性殘基諸如異白胺酸、纈胺酸、白胺酸或甲硫胺酸取代另一個疏水性殘基，或用一個極性殘基取代另一個極性殘基，諸如用精胺酸取代離胺酸、用麩胺酸取代天冬胺酸、或用麩醯胺酸取代天冬醯胺、用絲胺酸取代蘇胺酸及其類似取代。
如本文使用，術語「核酸」係指DNA或RNA，其包含天然、合成或人工核苷酸類似物或鹼基。在一些實施例中，核苷酸類似物或人工核苷酸鹼基包含在核糖部分之2'羥基處具有修飾的核酸。在一些實施例中，修飾包括H、OR、R、鹵基、SH、SR、NH 2、NHR、NR 2或CN，其中R為烷基部分。示範性烷基部分包括但不限於鹵素、硫、硫醇、硫醚、硫酯、胺(一級、二級或三級)、醯胺、醚、酯、醇及氧。在一些實施例中，烷基部分進一步包含修飾。在一些實施例中，修飾包含偶氮基、酮基、醛基、羧基、硝基、亞硝基、腈基團、雜環(例如，咪唑、肼基或羥胺基)基團、異氰酸酯或氰酸酯基團或含硫基團(例如，亞碸、碸、硫化物或二硫化物)。在一些實施例中，烷基部分進一步包含雜取代。在一些實施例中，雜環基團之碳經氮、氧或硫取代。在一些實施例中，雜環取代包括但不限於N-嗎啉基、咪唑及N-吡咯啶基(pyrrolidino)。
在一些實施例中，核苷酸類似物包含經修飾之鹼基，諸如但不限於5-丙炔基尿苷、5-丙炔基胞苷、6-甲基腺嘌呤、6-甲基鳥嘌呤、N,N,-二甲基腺嘌呤、2-丙基腺嘌呤、2-丙基鳥嘌呤、2-胺基腺嘌呤、1-甲基肌苷、3-甲基尿苷、5-甲基胞苷、5-甲基尿苷及在5位具有修飾之其他核苷酸、5-(2-胺基)丙基尿苷、5-鹵代胞苷、5-鹵代尿苷、4-乙醯胞苷、1-甲基腺苷、2-甲基腺苷、3-甲基胞苷、6-甲基尿苷、2-甲基鳥苷、7-甲基鳥苷、2,2-二甲基鳥苷、5-甲基胺基乙基尿苷、5-甲氧基尿苷、去氮核苷酸(諸如7-去氮-腺苷、6-偶氮尿苷、6-偶氮胞苷或6-偶氮胸苷)、5-甲基-2-硫代尿苷、其他硫代鹼基(例如2-硫代尿苷、4-硫代尿苷及2-硫代尿苷)、二氫尿苷、假尿苷、Q核苷(queuosine)、古嘌苷(archaeosine)、萘基及經取代之萘基、任何O-及N-烷基化嘌呤及嘧啶(諸如N6-甲基腺苷、5-甲基羰基甲基尿苷、尿苷5-氧乙酸、吡啶-4-酮或吡啶-2-酮)、苯基及經修飾之苯基(諸如胺基苯酚或2,4,6-三甲氧基苯)、充當G鉗(G-clamp)核苷酸之經修飾之胞嘧啶、8-取代之腺嘌呤及鳥嘌呤、5-取代之尿嘧啶及胸腺嘧啶、氮雜嘧啶、羧基羥基烷基核苷酸、羧基烷基胺基烷基核苷酸及烷基羰基烷基化核苷酸。經修飾之核苷酸亦包括相對於糖部分經修飾之核苷酸，以及具有糖或其不為核糖基之類似物的核苷酸。例如，在一些實施例中，糖部分為或係基於甘露糖、阿拉伯糖、葡萄哌喃糖、半乳哌喃糖、4'-硫代核糖及其他糖、雜環或碳環。術語核苷酸亦包括在此項技術中稱為通用鹼基者。舉例而言，通用鹼基包括但不限於3-硝基吡咯、5-硝基吲哚或水粉蕈素(nebularine)。
本發明之核酸分子可藉由公開已知的技術諸如化學合成方法或PCR擴增方法，基於各核酸之核苷酸序列之資訊來產生。經選擇用於編碼胺基酸之密碼子可經工程改造之以優化所關注之宿主細胞中之核酸表現。
在本發明中，T細胞之「IL-15之表現」意謂可表現各種形式之IL-15 (例如，如上所述野生型、變異體或融合蛋白)，只要本發明之效應不喪失即可。
如本文使用，術語「實質上」在描述T細胞群體時係指群體包含少於約30%、25%、20%、15%、10%、5%或更少污染細胞。在一些實施例中，T細胞群體中之污染細胞少於約20%。在一些實施例中，T細胞群體中之污染細胞少於約15%。在一些實施例中，T細胞群體中之污染細胞少於約10%。
如本文使用，術語「治療(treating)」、「治療(treatment)」及其類似術語意謂獲得所需藥理及/或生理效應。效應可在改善疾病症狀方面為治療性的，或疾病及/或可歸因於疾病之不利影響的部分或完全治癒。在一個態樣中，術語「治療」排除預防。
如本文使用，「治療」進一步包括與病理相關的症狀之全身改善及/或症狀發作之延遲。「治療」之臨床及亞臨床跡象隨著病理、個體及治療而變化。在一個態樣中，治療排除預防。
術語「改善」意謂個體之疾患的可偵測改良。可偵測改良包括主觀或客觀降低、減少、抑制、壓制、限制或控制由疾病造成或與疾病相關之症狀諸如由疾病造成或與疾病相關之一或多個不良症狀、病症、病、病理、疾病或併發症的發生、頻率、嚴重程度、進展或持續時間，或潛在病因或疾病後果之改良，或疾病之逆轉。
因此，治療可導致降低、減少、抑制、壓制、限制、控制或預防疾病或相關症狀或後果或潛在病因；降低、減少、抑制、壓制、限制、控制或預防疾病、疾患、症狀或後果或潛在病因之進展或惡化；或疾病疾患或症狀之一或多個額外症狀之進一步惡化或發生。因此，成功的治療結果導致降低、減少、抑制、壓制、限制、控制或預防個體之疾患、疾病或症狀之一或多個症狀或潛在病因或後果，諸如由疾病或疾患造成或與其相關之一或多個不良症狀、病症、病、病理、疾病或併發症的發生、頻率、嚴重程度、進展或持續時間的「治療效果」或「益處」。因此，影響疾患、疾病或症狀之一或多個潛在病因的治療方法被視為有益的。使病症或疾患穩定亦為成功的治療結果。
因此，治療益處或改良不一定為與疾患或疾病相關之任何一個、大多數或所有症狀、併發症、後果或潛在病因的完全消除。因此，在較短或較長持續時間(幾小時、幾天、幾週、幾個月等)內，當存在個體疾患之漸增改良，或部分降低、減少、抑制、壓制、限制、控制或預防一或多個相關不良症狀或併發症或後果或潛在病因之發生、頻率、嚴重程度、進展或持續時間，或使其得到抑制或逆轉，病症或疾病之一個或多個生理、生物化學或細胞表現或特徵，諸如由疾病或疾患造成或與其相關之一或多個不良症狀、病症、疾病、病理、疾病或併發症之惡化或進展(例如，使疾患、病症或疾病之一或多個症狀或併發症穩定)時，達成令人滿意的端點。
術語「可接受」、「有效」或「足夠」在用於描述本文所揭示之任何組分、範圍、劑量形式等之選擇時，意欲該組分、範圍、劑量形式等適合於所揭示之目的。
如在本文中可互換使用之術語「個體(subject)」、「宿主」、「個體(individual)」及「患者」係指動物，通常哺乳動物。任何合適的哺乳動物可藉由本文描述的方法、細胞或組成物治療。哺乳動物之非限制性實例包括人類、非人類靈長類動物(例如，猿、長臂猿、黑猩猩、猩猩、猴子、獼猴等)、家畜(例如，狗及貓)、農場動物(例如，馬、母牛、山羊、綿羊、豬)及實驗動物(例如，小鼠、大鼠、兔、豚鼠)。在一些實施例中，哺乳動物為人類。哺乳動物可為任何年齡或處於任何發育階段(例如，成人、青少年、兒童、嬰兒或子宮內之哺乳動物)。哺乳動物可為雄性或雌性。哺乳動物可為懷孕雌性。在一些實施例中，個體為人類。
如本文使用，術語「γδT細胞」意謂表現CD3且表現由TCRγ鏈(γTCR)及TCRδ鏈(δTCR)構成之TCR (在下文有時被稱為「γδTCR」)的細胞。
如本文使用，術語「αβT細胞」意謂表現CD3且表現由TCRα鏈(αTCR)及TCRβ鏈(βTCR)構成之TCR (在下文有時被稱為「αβTCR」)的細胞。在一些情況下，幾乎所有αβT細胞藉由αβTCR來識別抗原肽-MHC (主要組織相容性複合物，在人類的情況下，HLA:人類白血球抗原)複合物(此被稱為MHC限制)。相比之下，γδT細胞藉由γδTCR來識別由細胞表現之各種分子，不論MHC分子為何。
如本文使用，術語「調節」或「調節劑」係指組分正性或負性地改變相關功能的能力。示範性調節包括約1%、約2%、約5%、約10%、約25%、約50%、約75%或約100%變化。
在某些實施例中，本文提供能夠改變或預防TGFβ受體進行傳訊的TGFβ傳訊調節劑。熟習此項技術者理解，此可藉由結合活化TGFβR之傳訊之細胞介素(亦即，TGFβ)，或受體本身(例如，TGFβ抗體或其片段，TGFBR抗體或其片段)來達成。因此，此術語涵蓋結合TGFβ之分子及結合TGFβR之分子兩者。在一個實施例中，本揭露之調節劑可通過TGFβRII來中和TGFβ傳訊。「中和」意謂TGFβ之正常傳訊效應被阻斷，使得TGFβ之存在對於TGFβRII傳訊具有中性效應。在一些實施例中，TGFβ調節劑改良宿主之免疫反應。
如本文使用，術語「轉化生長因子-β (transforming growth factor-β)」、「TGF-β」、「TGFb」、「TGFβ」及「轉化生長因子-β (transforming growth factor-beta)」在本文中可互換使用且指具有來自人類之任何TGF-β之全長、天然胺基酸序列的分子家族，包括前驅物及成熟TGF-β之潛在形式及相關或不相關複合物(「潛在TGF-β」)。在本文中提及此TGF-β應理解為提及當前經鑑別之形式中之任一者，包括TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3、TGF-β4及TGF-β5及其潛在型式，以及將來鑑別之人類TGF-β物種，包括衍生自任何已知TGF-β之序列且與該序列至少約75%，較佳至少約80%，更佳至少約85%，仍然更佳至少約90%，及甚至更佳至少約95%同源的多肽。特定術語「TGF-β1」、「TGF-β2」及「TGF-β3」以及「TGF-β4」及「TGF-β5」係指文獻中定義之TGF-β，例如，Derynck等人, Nature,上文，Seyedin等人, J. Biol. Chem., 262,上文及deMartin等人,上文。術語「TGF-β」係指編碼人類TGF-β之基因。較佳TGF-β為天然序列人類TGF-β。
TGF-β家族之成員定義為在分子之成熟部分中具有九個半胱胺酸殘基，與成熟區域中之其他已知TGF-β序列共有至少65%同源性且可為相同受體競爭的成員。另外，其全部似乎被編碼為較大前驅物，該前驅物共有N末端附近之高同源性之區域且顯示在稍後藉由處理來移除之前驅物之部分中有三個半胱胺酸殘基之保守。另外，TGF-β似乎具有帶有四個或五個胺基酸之處理位點。
如本文使用，術語「轉化生長因子-β受體」、「TGF-bR」或「TGF-b受體」或「TGF-β受體」或「TGFβR」用於涵蓋TGFβR家族之所有三種亞型(亦即，TGFβR1、TGFβR2、TGFβR3)。TGFβ受體之特徵在於絲胺酸/蘇胺酸激酶活性且以可為同或異二聚的多種不同的同功型之形式存在。
如本文使用，如在本文中可互換使用之術語「TGFβ傳訊途徑調節劑」、「TGFβ調節劑」、「TGFβ傳訊途徑調節劑」或「TGFβ調節劑」係指能夠調節TGFβ傳訊途徑之分子(例如，抗體或其片段) (例如，其具有抑制、阻斷或中和作用)，其可結合TGFβ本身或其可結合細胞上之TGFβ受體。在任一種情況下，調節劑抑制TGFβ傳訊途徑(例如，藉由結合細胞介素(亦即，TGFβ)本身)或藉由結合TGFβ之受體。因此，此術語涵蓋結合TGFβ及結合TGFβ受體的兩種類型之調節劑。在本文所述之各種實施例中，TGFβ傳訊途徑調節劑與嵌合抗原受體一起在經修飾之免疫細胞(例如，CAR-T細胞)中表現。在本文所述之各種實施例中，TGFβ傳訊途徑調節劑自經修飾之免疫細胞分泌或以結合在免疫細胞之膜上的形式來表現。表現此TGFβ傳訊途徑調節劑之CAR-T細胞在本文中稱為TGFβ裝甲CAR-T細胞。
如本文使用，術語「誘導性多能幹細胞」(在下文有時被稱為「iPS細胞」)意謂如下藉由將重編程因子引入至體細胞中來建立，具有允許分化成存在於活有機體中之許多細胞的多能性且亦具有增殖能力的幹細胞。其涵蓋被誘導成造血前驅細胞以便用於本發明中之任何細胞。誘導性多能幹細胞較佳衍生自哺乳動物(例如，小鼠、大鼠、倉鼠、豚鼠、狗、猴、猩猩、黑猩猩、人類)，更佳人類。
在一些情況下，多能幹細胞可藉由將重編程因子引入至任何體細胞中來誘導或建立。示範性重編程因子包括但不限於基因及基因產物，諸如Oct3/4、Sox2、Sox1、Sox3、Sox15、Sox17、Klf4、Klf2、c-Myc、N-Myc、L-Myc、Nanog、Lin28、Fbx15、ERas、ECAT15-2、Tcl1、β-連環蛋白、Lin28b、Sall1、Sall4、Esrrb、Nr5a2、Tbx3、Glis1及其類似者。此等重編程因子可單獨或組合使用。在一些情況下，組合重編程因子藉由以下文獻所描述之組合來例示：WO 2007/069666；WO 2008/118820；WO 2009/007852；WO 2009/032194；WO 2009/058413；WO 2009/057831；WO 2009/075119；WO 2009/079007；WO 2009/091659；WO 2009/101084；WO 2009/101407；WO 2009/102983；WO 2009/114949；WO 2009/117439；WO 2009/126250；WO 2009/126251；WO 2009/126655；WO 2009/157593；WO 2010/009015；WO 2010/033906；WO 2010/033920；WO 2010/042800；WO 2010/050626；WO 2010/056831；WO 2010/068955；WO 2010/098419；WO 2010/102267；WO 2010/111409；WO 2010/111422；WO 2010/115050；WO 2010/124290；WO 2010/147395；WO 2010/147612；Huangfu D等人(2008), Nat. Biotechnol., 26: 795-797；Shi Y等人(2008), Cell Stem Cell, 2: 525-528；Eminli S等人(2008), Stem Cells. 26:2467-2474；Huangfu D等人(2008), Nat. Biotechnol. 26:1269-1275；Shi Y等人(2008), Cell Stem Cell, 3, 568-574；Zhao Y等人(2008), Cell Stem Cell, 3:475-479；Marson A, (2008), Cell Stem Cell, 3, 132-135；Feng B等人(2009), Nat. Cell Biol. 11:197-203；R.L. Judson等人(2009), Nat. Biotechnol., 27:459-461；Lyssiotis CA等人(2009), Proc Natl Acad Sci U S A. 106:8912-8917；Kim JB等人(2009), Nature. 461:649-643；Ichida JK等人(2009), Cell Stem Cell. 5:491-503；Heng JC等人(2010), Cell Stem Cell. 6:167-74；Han J等人 (2010), Nature. 463:1096-100；Mali P等人 (2010), Stem Cells. 28:713-720；及Maekawa M等人(2011), Nature. 474:225-9。
體細胞之實例包括但不限於任何胎兒體細胞、新生兒體細胞及成熟體細胞，以及任何初代培養細胞、繼代培養細胞及確立細胞株。此外，如上所述之細胞可為健康細胞或患病細胞。體細胞之特定實例包括(1)組織幹細胞(體幹細胞)諸如神經幹細胞、造血前驅細胞、間質幹細胞及牙髓幹細胞；(2)組織前驅細胞；及(3)分化細胞諸如血細胞(例如，末梢血細胞、臍帶血細胞及其類似細胞)、單核細胞(例如，淋巴球(NK細胞、B細胞、除了αβT細胞以外之T細胞(例如，γδT細胞及其類似細胞)、單核球、樹突細胞及其類似細胞))、顆粒球(例如，嗜伊紅性球、嗜中性球、嗜鹼性球)、巨核細胞)、上皮細胞、內皮細胞、肌肉細胞、纖維母細胞(例如，皮膚細胞及其類似細胞)、毛細胞、肝細胞、胃黏膜細胞、腸細胞、脾細胞、胰腺細胞(例如，胰腺外分泌細胞及其類似細胞)、腦細胞、肺細胞、腎細胞及脂肪細胞。其中，除了αβT細胞以外的單核細胞為較佳的，更具體而言，單核球或γδT細胞為較佳的。
示範性方法諸如磷酸鈣共沉澱方法、PEG方法、電穿孔方法、顯微注射方法、脂質轉染方法及其類似方法可用於將重編程因子引入至體細胞中。額外方法可包括以下文獻中描述之方法：Cell Engineering additional volume 8, New Cell Engineering experiment protocol, 263-267 (1995) (由Shujunsha出版), Virology, 第52卷, 456 (1973)，及Folia Pharmacol. Jpn.,第119卷(第6期), 345-351 (2002)。當使用病毒載體時，將核酸引入至合適封裝細胞(例如，Plat-E細胞)及互補細胞株(例如，293細胞)中，將在培養物上清液中產生之病毒載體回收，且藉由適合於各病毒載體之適當方法，用載體感染細胞，由此將載體引入至細胞中。例如，當反轉錄病毒載體用作載體時，特定手段揭示於WO 2007/69666, Cell, 126, 663-676 (2006)及Cell, 131, 861-872 (2007)及其類似文獻中。具體而言，在使用反轉錄病毒載體時，藉由使用重組纖連蛋白片段CH-296 (由Takara Bio Inc.製造)，高效轉染至各種細胞中為可能的。
呈RNA形式之重編程因子可直接引入至細胞中並在細胞中表現。作為用於引入RNA之方法，可使用已知方法且可較佳使用例如脂質轉染方法、電穿孔方法或其類似方法。當重編程因子呈蛋白質形式時，其可藉由方法諸如脂質轉染、與細胞膜穿透肽(例如，HIV衍生TAT及聚精胺酸)融合、顯微注射及其類似方法來引入至細胞中。
在一些實施例中，用於使誘導性多能幹細胞分化成T細胞之方法不特別受到限制，只要誘導性多能幹細胞可分化成γδT細胞即可。在一些情況下，該方法包含使誘導性多能幹細胞分化成造血前驅細胞及使造血前驅細胞分化成CD3陽性T細胞。用於使iPSC分化成造血前驅細胞之示範性方法包括在WO 2013/075222、WO 2016/076415及Liu S. 等人, Cytotherapy, 17 (2015)；344-358中揭示之方法。用於使造血前驅細胞分化成CD3陽性T細胞之示範性方法包括在WO 2016/076415及WO 2017/221975中揭示之方法。亦參見WO2020/013315中揭示之方法。 實例
此等實例僅出於說明性目的而提供且不限制本文提供之申請專利範圍之範疇。 實例1 表現γδTCR之細胞之生產方法
使用已知培養方法(例如，如Cell Reports 2(2012)1722-1735或WO 2017/221975所描述)，由京都大學iPS細胞研究所(the Center for iPS Cell Research and Application)提供之iPS細胞(Ff-I01s04株：衍生自健康個體之周邊血液單核細胞)分化的懸浮細胞群體，用於產生含有造血前驅細胞(HPC)之細胞群體。例如，將Ff-I01s04株以6 x 10 5個細胞/孔(第0天)接種於超低黏附處理6孔盤中，將10 ng/ml BMP4、50 ng/ml bFGF、15 ng/ml VEGF、2 μM SB431542添加至EB培養基(StemPro34，其添加有10 μg/ml人類胰島素、5.5 μg/ml人類運鐵蛋白、5 ng/ml亞硒酸鈉、2 mM L-麩醯胺酸、45 mM α-單硫代甘油及50 μg/ml抗壞血酸2-磷酸鹽)中，且細胞在低氧條件(5% O 2)下(第5天)培養5天。然後，添加50 ng/ml SCF、30 ng/ml TPO、10 ng/ml FLT-3L，並且將細胞培養5 - 9天(-第14天)以便產生懸浮細胞群體。在培養期期間，每二或三天更換培養基。含有HPC之所得懸浮細胞群體使用如表2展示之抗體集染色。 表2
抗CD34抗體 Abcam PE/Cy7
抗CD43抗體 BD APC
抗CD45抗體 BioLegend BV510
抗CD14抗體 BioLegend APC/eFluor780
抗CD235a抗體 BD FITC
經歷上述染色之細胞群體經受藉由FACSAria之分選。根據已知方法(例如，Journal of Leukocyte Biology 96(2016)1165-1175及WO 2017/221975所描述之方法)，將所獲得之細胞級分分化成淋巴樣細胞。例如，將造血前驅細胞群體以2000個細胞/孔接種於塗佈有重組h-DLL4/Fc嵌合體(Sino Biological)及Retronectin (Takara Bio Inc.)之48孔盤中並在5% CO 2、37°C條件下培養。在培養期期間，每二或三天更換培養基。αMEM培養基含有15% FBS、2 mM L-麩醯胺酸、100 U/ml青黴素、100 ng/ml鏈黴素、55 μμ 2-巰基乙醇、50 μg/ml抗壞血酸2-磷酸鹽、10 μg/ml人類胰島素、5.5 μg/ml人類運鐵蛋白、5 ng/ml亞硒酸鈉、50 ng/ml SCF、50 ng/ml IL-7、50 ng/ml FLT-3L、100 ng/ml TPO、15 μM SB203580及30 ng/ml SDF-1α。在培養開始之第7天及第14天，將細胞繼代至類似塗佈之48孔盤。在培養開始之第21天(第35天)收集所有細胞，且藉由流式細胞儀(BD FACSAria TMFusion，由BD Biosciences製造)確認CD45(+)，CD3(+)級分之存在。將所獲得之細胞接種於48孔盤中且在5% CO 2、37°C條件下培養。αMEM培養基含有15% FBS、2 mμ L-麩醯胺酸、100 U/ml青黴素、100 ng/ml鏈黴素、50 μg/ml抗壞血酸2-磷酸鹽、10 μg/ml人類胰島素、5.5 μg/ml人類運鐵蛋白、5 ng/mL亞硒酸鈉、500 ng/mL抗CD3抗體(OKT3)及10 ng/mL IL-7。在培養開始第27天(第41天)收集所有細胞，藉由血球計對細胞進行計數，且使用如表3展示之抗體集進行染色。 表3
Vδ1 Miltenyi FITC
Vδ2 Miltenyi APC
γδTCR BD BV510
CD3 BioLegend APC/Cy7
αβTCR eBioscience FITC
由於染色，證明表現γδTCR之細胞(γδTCR陽性細胞)可由衍生自iPS細胞(Ff-I01s04株)之造血前驅細胞製備(圖2)。
此外，因為γδTCR陽性細胞含有Vδ1陽性γδT細胞及Vδ2陽性γδT細胞，所以證明可製備Vδ1類型及Vδ2類型γδT細胞(圖3)。(注意，沒有γδTCR基因之KI的iPS細胞衍生γδTCR陽性細胞在本文中亦稱為「iγδT細胞」) 實例2 iγδT細胞之擴增培養及功能評估
iγδT細胞之生產使用與實例1相同的方法執行，除了將UCHT1 (由GeneTex製造)用作抗CD3抗體，產生衍生自iPS細胞(Ff-I01s04株)之γδT細胞(iγδT細胞)。
將隨後獲得的iγδT細胞以2,000,000個細胞/mL懸浮於含有15% FBS及如表4所示含有細胞介素之添加劑的α-MEM培養基中，接種於以抗CD3抗體(UCHT1)及RetroNectin固相化之盤上，且在5% CO 2/37°C下培養3天。在培養第3天，自盤收集細胞，使用NucleoCounter (註冊商標) NC-200 (ChemoMetec)計數細胞之數目，且將細胞以適當量懸浮於含有15% FBS及如表5所示含有細胞介素之添加劑的α-MEM培養基中，添加至非固定G-Rex (註冊商標) 6孔盤(WILSONWOLF)，且在5% CO 2/37°C下培養。在第5天、第6天、第7天、第8天、第9天、第10天、第11天、第14天及第17天，自盤收集細胞之一部分4-6次，且使用血球計計數細胞之數目。
藉由以下方法，將抗CD3抗體及RetroNectin固定於培養盤上。在必需濃度下溶解於PBS中之抗CD3抗體(UCHT1最終濃度3000 ng/mL)及RetroNectin (最終濃度150 μg/mL)添加至盤，然後使其在4°C下靜置隔夜。用PBS洗滌之後，對盤進行測試。 表4
產品名稱 製造商 最終濃度
胰島素-運鐵蛋白-硒補充物 Invitrogen 1 x
抗壞血酸2-磷酸鹽 sigma 50 μg/ml
IL-2 Peprotech 15 ng/ml
IL-7 Peprotech 10 ng/ml
IL-15 Peprotech 10 ng/ml
IL-21 Peprotech 20 ng/ml
IL-12 Merck 50 ng/ml
IL-18 MBL 50 ng/ml
TL-1A Peprotech 50 ng/ml
Z-VAD-FMK R&D 10 μM
人類CD30抗體 R&D 300 ng/ml
表5
產品名稱 製造商 最終濃度
胰島素-運鐵蛋白-硒補充物 Invitrogen 1 x
抗壞血酸2-磷酸鹽 sigma 50 μg/ml
IL-2 Peprotech 15 ng/ml
IL-7 Peprotech 10 ng/ml
IL-15 Peprotech 10 ng/ml
人類CD30抗體 R&D 300 ng/ml
藉由用抗CD3抗體(UCHT1)及抗CD30抗體刺激，觀察到iγδT細胞之增殖(圖4)。 實例3 產生iPS細胞衍生Vγ9Vδ2T細胞 1. 製備iPS細胞
iPS細胞如實例1所揭示類似地製備。具體而言，使用由京都大學iPS細胞研究所(CiRA)提供之Ff-I01s04株。iPS細胞根據CiRA發布之計劃「無進料器培養人類iPS細胞(feeder-free culture of human iPS cells)」來培養。 2. iPS 細胞分化成HPC
iPS細胞分化成造血前驅細胞(HPC)根據WO 2017/221975揭示之方法來執行。 3. Vγ9Vδ2 基因
使用G115γδT細胞殖株衍生Vγ9Vδ2 T細胞受體(Vγ9Vδ2TCR G115)。包括編碼SEQ ID NO: 44的編碼Vγ9Vδ2TCR G115之基因的核酸含有如表6所示之基因。核酸經人工合成。 表6
自N末端之順序 基因 根據SEQ ID NO: 44之殘基編號
1 (G115衍生) TRG 1-315
2 P2A 316-337
3 (G115衍生) TRD 338-629
MVSLLHASTLAVLGALCVYGAGHLEQPQISSTKTLSKTARLECVVSGITISATSVYWYRERPGEVIQFLVSISYDGTVRKESGIPSGKFEVDRIPETSTSTLTIHNVEKQDIATYYCALWEAQQELGKKIKVFGPGTKLIITDKQLDADVSPKPTIFLPSIAETKLQKAGTYLCLLEKFFPDVIKIHWEEKKSNTILGSQEGNTMKTNDTYMKFSWLTVPEKSLDKEHRCIVRHENNKNGVDQEIIFPPIKTDVITMDPKDNCSKDANDTLLLQLTNTSAYYMYLLLLLKSVVYFAIITCCLLRRTAFCCNGEKSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMERISSLIHLSLFWAGVMSAIELVPEHQTVPVSIGVPATLRCSMKGEAIGNYYINWYRKTQGNTMTFIYREKDIYGPGFKDNFQGDIDIAKNLAVLKILAPSERDEGSYYCACDTLGMGGEYTDKLIFGKGTRVTVEPRSQPHTKPSVFVMKNGTNVACLVKEFYPKDIRINLVSSKKITEFDPAIVISPSGKYNAVKLGKYEDSNSVTCSVQHDNKTVHSTDFEVKTDSTDHVKPKETENTKQPSKSCHKPKAIVHTEKVNMMSLTVLGLRMLFAKTVAVNFLLTAKLFFL (SEQ ID NO: 44)。 4. 產生攜載Vγ9Vδ2基因之反轉錄病毒載體
使用慢病毒載體pLVSIN-Ub，且藉由自pLVSIN-CMV Neo載體(Clontech Laboratories, Inc.)移除編碼新黴素抗性基因之序列產生載體，且用人類泛素啟動子置換CMV啟動子。人工寡聚DNA根據表6來合成。將Vγ9Vδ2基因併入至pLVSIN-Ub反轉錄病毒載體之多選殖位點中。使用此質體及Lenti-X TM293 T細胞株及Clontech Laboratories, Inc.之Lenti-X TMPackaging Single Shots (VSV-G)，產生慢病毒載體pLVSIN-Ub。 5. 產生iPS細胞衍生Vγ9Vδ2T細胞
在 1. 製備iPS細胞中製備之iPS細胞用在 4. 產生攜載Vγ9Vδ2基因中製備之攜載Vγ9Vδ2基因的反轉錄病毒載體感染。根據已知方法(如WO2017/221975揭示)以與實例1相同的方式，使此等細胞分化成T細胞，以製備iPS細胞衍生Vγ9Vδ2T細胞。在分化步驟中，500 ng/mL OKT3 (TakaraBio)用作抗CD3抗體。(注意，自iPS細胞製備之iPS細胞衍生Vγ9Vδ2T細胞在本文中亦稱為「iγ9δ2T細胞」。)使用流式細胞儀(BD FACSAria TMFusion，由BD Biosciences製造)，量測所獲得之iγ9δ2T細胞之細胞膜表面上CD3、γδTCR、Vγ9及Vδ2之表現(圖5)。 實例4 產生iPS細胞衍生抗間皮素-CAR/IL-15γδT細胞 1. 抗間皮素-CAR基因
包含編碼抗間皮素-CAR之基因的核酸經人工合成。使用表7列出之基因，合成人工核酸之11種模式以便轉染至iγδT細胞或iγ9δ2T細胞中。 表7
縮寫 自N末端之順序 基因
ssVH 1 免疫球蛋白重鏈之前導序列
P4 scFv (P4) 2 抗間皮素抗體(P4)重鏈之可變區
3 GILGSGGGGSGGGGSGGGGS連接子
4 抗間皮素抗體(P4)輕鏈之可變區
CD8鉸鏈/TM 5 CD8衍生序列(包括跨膜區)
CD28 6a (或) CD28之胞內域區
41BB 6b (或) 4-1BB之胞內域區
CD3z 7 CD3之胞內域區ζ
P2A 8 P2A
IL2sp或IL15Rasp 9 (有/沒有) 訊息肽
mIL15/Ra、mIL15/Ra-LSP、sushi15或sIL15-LSP 10 IL-15
P2A 11 (有/沒有) P2A
endosp 12 訊息肽
CCL19 13 (有/沒有) CCL19
2. IL-15 基因
人工核酸包含編碼各IL-15型式之基因。IL-15型之式基因展示於表8中。 表8
縮寫 自N末端之順序 基因 SEQ ID NO:
mIL15/Ra (具有IL2sp) 1 IL2sp (SEQ ID NO: 6) 28   
2 人類IL-15之C末端序列
3 肽連接子(SEQ ID NO: 32)
4 人類IL-15RA之C末端序列
sushi15 (具有IL15Rasp) 1 IL15Rasp (SEQ ID NO: 7) 29
2 sushi15 (SEQ ID NO: 10)
3 肽連接子(SEQ ID NO: 32)
4 人類IL-15RA之C末端序列
mIL15/Ra-LSP 1 IL-15Ra-LSP 9
2 IL-15前肽
3 人類IL-15之C末端序列
4 肽連接子(SEQ ID NO: 32)
5 人類IL-15RA之C末端序列
sIL15-LSP 1 IL-15Ra-LSP 11
2 IL-15前肽
3 人類IL-15之C末端序列
人工核酸之第1種模式包含此自N末端之順序之ssVH-P4-CD8鉸鏈/TM-41BB-CD3z-P2A-IL2sp-mIL15/Ra。
人工核酸之第2種模式包含此自N末端之順序之ssVH-P4-CD8鉸鏈/TM-41BB-CD3z-P2A-mIL15/Ra-LSP。
人工核酸之第3種模式包含此自N末端之順序之ssVH-P4-CD8鉸鏈/TM-41BB-CD3z-P2A-IL15Rasp-sushi15。
人工核酸之第4種模式包含此自N末端之順序之ssVH-P4-CD8鉸鏈/TM-41BB-CD3z-P2A-sIL15-LSP。
人工核酸之第5種模式包含此自N末端之順序之ssVH-P4-CD8鉸鏈/TM-41BB-CD3z-P2A-IL2sp-mIL15/Ra-P2A-endosp-CCL19。
人工核酸之第6種模式包含此自N末端之順序之ssVH-P4-CD8鉸鏈/TM-41BB-CD3z-P2A-mIL15/Ra-LSP-P2A-endosp-CCL19。
人工核酸之第7種模式包含此自N末端之順序之ssVH-P4-CD8鉸鏈/TM-41BB-CD3z-P2A-IL15Rasp-sushi15-P2A-endosp-CCL19。
人工核酸之第8種模式包含此自N末端之順序之ssVH-P4-CD8鉸鏈/TM-41BB-CD3z-P2A-sIL15-LSP-P2A-endosp-CCL19。
人工核酸之第9種模式包含此自N末端之順序之ssVH-P4-CD8鉸鏈/TM-CD28-CD3z-P2A-IL15sp-sushi15-P2A-endosp-CCL19。
另外，分別使用DAP10及TNFR2作為CD8鉸鏈/TM與CD3z之間的胞內域製備另2種模式。
人工核酸之第10種模式包含此自N末端之順序之ssVH-P4-CD8鉸鏈/TM-DAP10-CD3z-P2A-IL2sp-mIL15/Ra。
人工核酸之第11種模式包含此自N末端之順序之ssVH-P4-CD8鉸鏈/TM-TNFR2-CD3z-P2A-IL2sp-mIL15/Ra。 2. 產生攜載抗間皮素-CAR基因之反轉錄病毒載體
Phoenix A細胞，一種反轉錄病毒封裝細胞株(ATCC)，在DMEM 20% FBS及Pen/Strep中生長至50-70%匯合。根據製造商方案，使用含有包含編碼上文所述之CAR構築體的基因的核酸之一模式的相應質體、輔助質體gag-pol與pVSVG及轉導試劑FugeneHD (Promega)製備DNA複合物。轉染之後16-24 h收穫病毒且分裝及冷凍以供進一步使用。 3. 產生iPS細胞衍生抗間皮素-CAR/IL-15γδT細胞
將iγδT細胞或iγ9δ2T細胞解凍並在培養基(DMEM 10% FCS及表10列出之添加劑)中靜置3天。燒瓶在4℃下用retronectin (Takara)及CD3抗體(UCHT1)塗佈隔夜。將iγδT細胞或iγ9δ2T細胞洗滌，再懸浮於DMEM 10% FCS及表9指定之補充物中，且轉移至retronectin及抗CD3抗體塗佈之燒瓶72小時以便活化。
使用離心接種(spinocculation)，用包含編碼上文所述之CAR構築體之基因的每一種模式之核酸轉導iγδT細胞或iγ9δ2T細胞。簡言之，將iγδT細胞或iγ9δ2T細胞轉移至retronectin塗佈之盤(根據製造商說明書來製備)並用上文所述之編碼CAR之pVSVG假型病毒進行離心接種(2,000g；32℃)。在37℃ 5% CO2下，將細胞在DMEM 10% FCS及表10描述之添加劑中培育隔夜並在第二天重複轉導，且在DMEM 10% FCS及表10描述之添加劑中擴增細胞。
如上所述使用retronectin/抗CD3抗體活化，將經轉導之細胞在DMEM 10% FCS及表10中列出的添加劑中進一步擴增，且在活化之後第3天，轉移至G-REX。活化之後第7天，收穫細胞並冷凍供進一步使用。(注意，自iγδT細胞製備之iPS細胞衍生抗間皮素-CAR/IL-15γδT細胞在本文中亦稱為「iMeso-CAR/IL-15γδT細胞」，且自iγ9δ2T細胞製備之iPS細胞衍生抗Meso-CAR/IL-15γδT細胞在本文中亦稱為「iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T細胞」)。 實例5 iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T 細胞之擴增培養
使用與實例3描述之方法類似的方法，執行實例5中獲得之iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T細胞(P4-41BB-mIL15/Ra-CCL19)之擴增培養。使用一種培養基，其含有表9中之含有細胞介素之添加劑代替表4中之含有細胞介素之添加劑，及表10中之含有細胞介素之添加劑代替表5中之含有細胞介素之添加劑。 表9
產品名稱 製造商 最終濃度
胰島素-運鐵蛋白-硒補充物 Invitrogen 1 x
抗壞血酸2-磷酸鹽 Sigma 50 μg/ml
IL-7 Peprotech 10 ng/ml
IL-15 Peprotech 10 ng/ml
IL-21 Peprotech 20 ng/ml
IL-18 MBL 50 ng/ml
Z-VAD-FMK R&D 10 μM
表10
產品名稱 製造商 最終濃度
胰島素-運鐵蛋白-硒補充物 Invitrogen 1 x
抗壞血酸2-磷酸鹽 Sigma 50 μg/ml
IL-7 Peprotech 10 ng/ml
IL-15 Peprotech 10 ng/ml
執行實例4中獲得之iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T細胞之擴增培養。
藉由用抗CD3抗體(OKT3)刺激，觀察到iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T細胞之增殖(圖6)。 實例6 1. 藉由人類細胞株MiaPaCa-2、MiaPaCa-2 Msln+、Capan-2及GSU的間皮素表現。
人類細胞株MiaPaCa-2(ATCC；CRL-1420)、MiaPaCa-2 Msln+ (藉由使用病毒載體來過度表現間皮素，自MiaPaca-2產生)、Capan-2 (ATCC，HTB-80)及GSU (RIKEN，RBC2278)如供應商推薦來培養。對於流動式細胞測量術，細胞使用TrypLE Express Enzyme (Gibco；#12605010)來收穫，洗滌並用一級未標記之抗間皮素抗體(Rockland；#MN1200301A88)及二級APC綴合之抗小鼠IgG抗體(Biolegend；#405308)染色。使用可固定生存力染料(eBiosciences；#65-0866-14)將死亡細胞染色，且將細胞固定，之後於FACS Fortessa(BD Biosciences)上採集。使用FlowJo執行分析。對於間皮素表現而言，MiaPaca-2非常低或呈陰性，而Capan-2、GSU及MiaPaca-2 Msln+展示高間皮素表現(圖7A)。 2. iPS 細胞衍生抗間皮素-CAR/IL-15γδT細胞針對人類細胞株MiaPaCa-2、MiaPaCa-2 Msln+、Capan-2及GSU之體外細胞毒性。
將所有靶細胞株(MiaPaCa-2、MiaPaCa-2 Msln+、Capan-2及GSU)分離、洗滌、再懸浮於檢定培養基中並計數，然後一式三份塗鋪於膠原塗佈之平底盤上。細胞在37℃ 5% CO2下培育至少2小時以便完全黏附。
將Meso iCAR-T解凍，洗滌，再懸浮於檢定培養基並計數，然後在37℃ 5% CO2下，與靶細胞一起以指示之效應物與靶(E:T)比率(亦即3:1、1:1、0.3:1、0.1:1)共培養48 h。根據製造商說明書，使用CellTiter-Glo發光細胞生存力檢定(Promega)評估iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T細胞對靶細胞之殺傷。%殺傷根據以下方程來計算：
Figure 02_image001
結果示出，具有所有IL-15型式之iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T細胞有效地殺傷天然表現間皮素(GSU，Capan-2)或經工程改造以表現間皮素(MiaPaCa-2 Msln+)的細胞株但是在體外不殺傷間皮素陰性MiaPaCa-2細胞，且如與未轉導之對照細胞(UTD)(iγ9δ2T細胞)相比，殺傷顯著增加(圖7B)。 實例7 1. 在Capan-2 s.c.異種移植物模型中，評估攜載不同共刺激域之iPS細胞衍生抗間皮素-CAR/IL-15γδT細胞之體內抗腫瘤功效
將6-16週齡雌性NSG小鼠(Jackson Labs)皮下接種100 ul McCoys 5A+基質膠中之4x10 6個活Capan-2腫瘤細胞。植入之後三週，腫瘤大小達到約50 mm3，且將小鼠隨機分組至具有類似平均腫瘤大小之治療組(平均值約100 mm3；n=6/組)。第二天，腫瘤內注射1x10 6個新鮮產生之iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T細胞。每週量測體重兩次以便監測毒性。每週量測腫瘤大小兩次，且腫瘤體積使用下式來計算：腫瘤體積(mm 3) =長度x寬度x高度x 0.5236。參見下表11。 表11
組 名稱 結合劑 共刺激域 裝甲 細胞數目(CAR陽性；*10 6)
1 PBS N/A N/A N/A N/A
2 P4-41BB-mIL15/Ra P4 scFv (VH-VL) 4-1BB mIL15/Ra 1
3 P4-CD28-mIL15/Ra P4 scFv (VH-VL) CD28 mIL15/Ra 1
4 P4-DAP10-mIL15/Ra P4 scFv (VH-VL) DAP10 mIL15/Ra 1
5 P4-TNFR2-mIL15/Ra P4 scFv (VH-VL) TNFR2 mIL15/Ra 1
使用攜載4-1BB或CD28共刺激域之iMeso-CAR/IL-15γδT細胞，觀察到最佳抗腫瘤功效(圖8)。 實例8 1. 在Capan-2 s.c.異種移植物模型中，評估攜載不同IL-15型式之iPS細胞衍生抗間皮素-CAR/IL-15γδT細胞之體內抗腫瘤功效以及4-1BB及CD28共刺激域之比較
將6-16週齡雌性NSG小鼠(Jackson Labs；n=6/組)皮下接種100 ul McCoys 5A+基質膠中之4x10 6個活Capan-2腫瘤細胞。植入之後三週，當腫瘤大小達到約100 mm3時，將小鼠隨機分組至具有類似平均腫瘤大小之治療組(平均值約100 mm3；n=6/組)。第二天，腫瘤內注射5x10 6(支組1)或1.5x10 6(支組2)低溫保存之iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T細胞。每週量測體重兩次以便監測毒性。每週量測腫瘤大小兩次，且腫瘤體積使用下式來計算：腫瘤體積(mm 3) =長度x 寬度x 高度x 0.5236。參見表12-14。 表12：支組1。亦參見圖9A及圖9B。
組 名稱 結合劑 共刺激域 裝甲1 裝甲2 細胞數目(CAR陽性；*10 6) 排序(d32)
1 PBS N/A N/A N/A N/A N/A 9
2 P4-41BB-mIL15/Ra P4 scFv (VH-VL) 4-1BB mIL15/Ra N/A 5 2
3 P4-41BB-mIL15/Ra-LSP P4 scFv (VH-VL) 4-1BB mIL15/Ra-LSP N/A 5 6
4 P4-41BB-sushi15 P4 scFv (VH-VL) 4-1BB Sushi15 N/A 5 4
5 P4-41BB-sIL15-LSP P4 scFv (VH-VL) 4-1BB sIL15-LSP N/A 5 7
6 P4-41BB-mIL15/Ra - CCL19 P4 scFv (VH-VL) 4-1BB mIL15/Ra CCL19 5 5
7 P4-41BB-mIL15/Ra-LSP - CCL19 P4 scFv (VH-VL) 4-1BB mIL15/Ra-LSP CCL19 5 8
8 P4-41BB-sushi15 - CCL19 P4 scFv (VH-VL) 4-1BB Sushi15 CCL19 5 1
9 P4-41BB-sIL15-LSP - CCL19 P4 scFv (VH-VL) 4-1BB sIL15-LSP CCL19 5 3
表13：支組2。亦參見圖9C及圖9D。
組 名稱 結合劑 共刺激域 裝甲1 裝甲2 細胞數目(CAR陽性；*10 6) 排序 (d32)
1 PBS N/A N/A N/A N/A N/A 9
2 P4-41BB-mIL15/Ra P4 scFv (VH-VL) 4-1BB mIL15/Ra N/A 1.5 5
3 P4-41BB-mIL15/Ra-LSP P4 scFv (VH-VL) 4-1BB mIL15/Ra-LSP N/A 1.5 8
4 P4-41BB-sushi15 P4 scFv (VH-VL) 4-1BB Sushi15 N/A 1.5 2
5 P4-41BB-sIL15-LSP P4 scFv (VH-VL) 4-1BB sIL15-LSP N/A 1.5 3
6 P4-41BB-mIL15/Ra - CCL19 P4 scFv (VH-VL) 4-1BB mIL15/Ra CCL19 1.5 4
7 P4-41BB-mIL15/Ra-LSP -CCL19 P4 scFv (VH-VL) 4-1BB mIL15/Ra-LSP CCL19 1.5 6
8 P4-41BB-sushi15 - CCL19 P4 scFv (VH-VL) 4-1BB Sushi15 CCL19 1.5 1
9 P4-41BB-sIL15-LSP - CCL19 P4 scFv (VH-VL) 4-1BB sIL15-LSP CCL19 1.5 7
表14. 亦參見圖9E
組 名稱 結合劑 共刺激域 裝甲1 裝甲2 細胞數目(CAR陽性；*10 6) 排序(d32)
1 PBS N/A N/A N/A N/A N/A 3
2 P4-41BB-sushi15 - CCL19 P4 scFv (VH-VL) 4-1BB Sushi15 CCL19 5 1
3 P4-CD28-sushi15 - CCL19 P4 scFv (VH-VL) CD28 Sushi15 CCL19 5 2
攜載IL-15型式sushi15或mIL15/Ra之iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T細胞展示總體最佳抗腫瘤功效，與所使用之細胞數目無關(亦即，5x10 6或1.5x10 6；圖9E)。與使用CD28共刺激域之iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T細胞相比，攜載共刺激域4-1BB之iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T細胞展示更好腫瘤控制(圖9E)。 實例9 1. 在GSU s.c.異種移植物模型中，評估用不同IL-15型式及CCL19裝甲之iPS細胞衍生抗間皮素-CAR/IL-15γ9δ2T細胞之體內抗腫瘤功效
6-16週齡雌性NSG小鼠(Jackson Labs；n=6/組)皮下接種基底膠:PBS 1:1中之2x10 6個活GSU腫瘤細胞。植入之後7天，腫瘤大小達到約100 mm3，且將小鼠隨機分組至平均腫瘤大小類似之治療組(平均值約100 mm3；n=6/組)。第二天，腫瘤內注射10x10 6個低溫保存之iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T細胞。每週量測體重兩次以便監測毒性。每週量測腫瘤大小兩次，且腫瘤體積使用下式來計算：腫瘤體積(mm 3) =長度x寬度x高度x 0.5236。參見下表15及圖10。 表15
組 名稱 結合劑 共刺激域 裝甲1 裝甲2 細胞數目(CAR陽性；*10 6) 排序(d25)
1 PBS N/A N/A N/A N/A N/A 5
2 P4-41BB-mIL15/Ra -CCL19 P4 scFv (VH-VL) 4-1BB mIL15 CCL19 10 1
3 P4-41BB-mIL15/Ra-LSP-CCL19 P4 scFv (VH-VL) 4-1BB mIL15-LSP CCL19 10 4
4 P4-41BB-sushi15 - CCL19 P4 scFv (VH-VL) 4-1BB Sushi15 CCL19 10 2
5 P4-41BB-sIL15-LSP - CCL19 P4 scFv (VH-VL) 4-1BB sIL15-LSP CCL19 10 3
腹膜內投與10x10 6個iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T細胞清除腫瘤，而靜脈內投與10x10 6個Meso iCAR-T展示腫瘤控制但沒有完全反應。用sushi15-CCL19或mIL15/Ra-CCL19裝甲之iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T細胞執行相當好。 實例10 1. 在GSU i.p.異種移植物模型中，評估用不同IL-15型式及CCL19裝甲之iPS細胞衍生抗間皮素-CAR/IL-15γ9δ2T細胞之體內抗腫瘤功效
使用來自Perkin Elmer (CLS960002)之RediFect Red-FLuc-嘌呤黴素病毒，產生螢光素化GSU細胞株。在1.6 ug/ml凝聚胺(polybrene) (Millipore)存在下執行轉導隔夜。用攜載編碼EF1a啟動子控制下之人類CD19及嘌呤黴素抗性之質體的病毒轉導細胞。GSU-RedLuc細胞使用嘌呤黴素來正性選擇。
6-16週齡雌性NSG (Jackson Labs；n=4/組)腹膜內接種基底膠:PBS 1:1中之5x10 6個活GSU-RedLuc細胞。植入之後兩天，腫瘤生長藉由使用體內成像系統(IVIS)光譜(Perkin Elmer)之生物發光成像來監測並使用IVIS成像軟體(Perkin Elmer)來分析以便進行隨機分組。值表示為光子/s。簡言之，成像之前六分鐘，動物接受腹膜內(IP)注射150 mg/kg D-螢光素鉀鹽(Promega)。麻醉以吸入異氟烷提供。隨機分組之後當天，向小鼠腹膜內或靜脈內投與10x10 6個活iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T細胞，且每週監測腫瘤生長及重量兩次直到研究結束為止。參見下表16及圖11。 表16
組 名稱 結合劑 共刺激域 裝甲1 裝甲2 細胞數目(CAR陽性；*10 6) 途徑
1 PBS N/A N/A N/A N/A N/A i.p.
2 P4-41BB-mIL15/Ra - CCL19 P4 scFv (VH-VL) 4-1BB mIL15/Ra CCL19 10 i.p.
3 P4-41BB-sushi15 - CCL19 P4 scFv (VH-VL) 4-1BB Sushi15 CCL19 10 i.p.
4 P4-41BB-mIL15/Ra - CCL19 P4 scFv (VH-VL) 4-1BB mIL15/Ra CCL19 10 i.v.
5 P4-41BB-sushi15 - CCL19 P4 scFv (VH-VL) 4-1BB Sushi15 CCL19 10 i.v.
10x10 6個iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T細胞有效地抑制腹膜內GSU-RedLuc中之腫瘤生長，與所使用之IL-15型式無關(sushi15相比於mIL15/Ra)。與PBS治療之對照相比，腹膜內投與之iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T細胞導致快速且完全的腫瘤清除，而靜脈內注射之iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T細胞顯著抑制腫瘤生長。 實例11 間皮素(Msln)陽性腫瘤中之重複抗原剌激。
在存在或不存在TGF-β (R&D Systems, 10ng/ml)的情況下，將共表現針對Msln之CAR以及TGFβ調節劑(例如，TGFβR2-VH或dnTGFbR2)或針對GFP之對照VH (Msln-對照VH)的大約100,000個iPSC衍生抗Msln CAR-T細胞一式兩份地與40,000個過度表現人類Msln之MiaPaca-2腫瘤細胞共培養。TGFβR2-VH自CAR-T細胞分泌，而dnTGFbR2結合至CAR-T細胞之膜。每3-4天，在相同條件(具有或不具有TGF-β 10ng/ml)下，將每個孔之一半CAR-T細胞轉移至腫瘤細胞之新盤。收穫上清液並冷凍供稍後評估。藉由流動式細胞測量術對CAR-T細胞進行計數並在選定時間點執行FACS表型分析(圖12A)。
腫瘤細胞之生存力使用CellTiterGlo(Promega)根據製造商之方案來評估。各盤使用Pherastar盤讀取器分析。百分比殺傷使用下式來評估：
Figure 02_image003
對照孔含有單獨腫瘤細胞而沒有效應(亦即，CAR-T)細胞。細胞毒性百分比展示於圖12B中。
藉由使用Sytox紅色染料(Thermofisher，根據製造商方案)排除死亡細胞來執行細胞計數，且使用HTS單元在Fortessa流式細胞儀(BD Biosciences)上來獲得相等體積之細胞懸浮液。藉由對於活細胞、單一細胞及大小進行閘控對活CAR-T細胞進行計數。將結果外推以便獲得每孔之細胞數目。
觀察到，在模擬長期抗原活化的用靶細胞之多輪再刺激之後，TGF-β誘導CAR-T細胞功能(亦即，殺傷)之抑制且抑制CAR-T細胞之增殖。僅表現TGFβ調節劑(例如，分泌TGFβR2 VH二聚物或表現膜結合dnTGFbR2)但是不表現對照VH的CAR-T細胞受保護，以避免TGF-β (10 ng/ml)之抑制效應。
除非另外定義，否則本文中所用之所有技術及科學術語均具有與一般熟習本技術所屬技術者通常所理解之含義相同的含義。
本文說明性地描述之本發明技術可適當地在不存在本文未具體揭示之任何一或多個元件、一或多個限制的情況下實踐。因此，例如，術語「包含」、「包括」、「含有」等應可擴展地且無限制地詮釋。另外，本文使用之術語及表述用作描述而非限制之術語，且在使用此等術語及表述中不意欲排除所展示及描述之特徵或其一部分的任何等效物，但是應認識到在所主張之本發明技術之範疇內，各種修改為可能的。
因此，應瞭解本文所提供之材料、方法及實例代表較佳態樣，為示範性的，且不意欲作為對本發明技術之範疇的限制。
本發明技術在本文中廣泛地且一般地描述。落於一般揭示內容中之較窄項目及亞屬分組中之每一者亦形成本發明技術之一部分。此包括本發明技術之一般描述，限制條件或負性限制為自該屬移除任何標的物，不論本文是否敘述刪去之材料。
另外，當本發明技術之特徵或態樣根據馬庫什群組來描述時，熟習此項技術者將認識到，本發明技術亦因此根據馬庫什群組之任何個別成員或成員亞組來描述。
本文提及之所有公開案、專利申請案、專利及其他參考文獻明確以引用方式整體併入，其引用程度如同每一者以引用方式個別地併入一般。若有衝突，則以本說明書(包括定義)為準。
其他態樣在以下申請專利範圍中闡述。 序列清單 匯總表
1 AA P4 scFv (沒有訊息肽)   
2 AA ssVH訊息肽(sp)   
3 AA ssVHsp-P4 scFv   
4 AA 肽連接子(P4 scFv-CD8鉸鏈)   
5 AA 具有GSG連接子之P2A肽   
6 AA IL2sp   
7 AA IL15Rasp   
8 AA mIL15/Ra (沒有IL2sp)   
9 AA mIL15/Ra-LSP   
10 AA Sushi15 (沒有IL15Rasp)   
11 AA sIL15-LSP   
PRP AA IL15前肽   
LSP AA IL15LSP   
12 AA Endosp   
13 AA CCL19   
14 AA IL2sp-mIL15/Ra-P2A- endosp-CCL19   
15 AA 參見下文   
16 AA CDR1_VH   
17 AA CDR2_VH   
18 AA CDR3_VH   
19 AA CDR1_VL   
20 AA CDR2_VL   
21 AA CDR3_VL   
22 AA VH   
23 AA VL   
24 AA 4-BB   
25 AA CD3z(野生型)   
26 AA CD8鉸鏈   
27 AA CD8 TM域   
28 AA IL2sp-mIL15/Ra   
29 AA IL15/Rasp-sushi15   
30 AA 肽連接子 15 AA
31 AA IL15Rasp-sushi15/Ra-P2A- endosp-CCL19   
32 AA 肽連接子(IL15-Ra/sushi-IL15) 26 AA
33 AA 肽連接子 20 AA
34* AA ssVHsp-P4-BB-mIL15/Ra DNA: SEQ ID NO: 37
53 AA ssVHsp-P4-BB-mIL15/Ra-LSP DNA: SEQ ID NO: 58
35* AA ssVHsp-P4-BB-sushi15 DNA: SEQ ID NO: 38
54 AA ssVHsp-P4-BB-sIL15-LSP DNA: SEQ ID NO: 59
36* AA ssVHsp-P4-BB-mIL15/Ra-CCL19 DNA: SEQ ID NO: 39
55 AA ssVHsp-P4-BB-mIL15/Ra-LSP-CCL19 DNA: SEQ ID NO: 60
15* AA ssVHsp-P4-BB-sushi15-CCL19 DNA: SEQ ID NO: 40
56 AA ssVHsp-P4-BB-sIL15-LSP-CCL19 DNA: SEQ ID NO: 61
57 AA ssVHsp-P4-CD28-sushi15 -CCL19   
37* DNA ssVHsp-P4-BB-mIL15/Ra   
38* DNA ssVHsp-P4-BB-sushi15   
39* DNA ssVHsp-P4-BB-mIL15/Ra-CCL19   
40* DNA ssVHsp-P4-BB-sushi15-CCL19   
41 AA 肽連接子(VH-VL, IL15-Ra) 17 AA
42 DNA ssVHsp-P4-CD8鉸鏈-TM-BB-CD3z   
43 AA ssVHsp-P4-CD8鉸鏈-TM-41BB-CD3z   
44 AA Vg9Vd2TCR   
           
45 AA P4 scFv中之肽連接子VH-VL 20 AA (GILGSSG…)
46 AA ssVHsp-P4-CD8-BB-CD3z   
47 AA LSP   
48 AA IL15前肽   
49       缺乏
50 DNA ssVHsp-P4-BB (密碼子優化型式1)   
51 DNA ssVHsp-P4-BB (密碼子優化型式2)   
52 DNA ssVHsp-P4-BB (密碼子優化型式3)   
           
58 DNA ssVHsp-P4-BB-mIL15/Ra-LSP   
59 DNA ssVHsp-P4-BB-sIL15-LSP   
60 DNA ssVHsp-P4-BB-mIL15/Ra-LSP-CCL19   
61 DNA ssVHsp-P4-BB-sIL15-LSP-CCL19   
           
62 DNA ssVHsp-P4-CD28-sushi15 -CCL19   
63 AA CD8 TM域   
64 AA CD8鉸鏈   
65 AA ssVHsp-P4-CD8鉸鏈鉸鏈-TM-41BB-CD3z   
66 AA ssVHsp-P4-CD8鉸鏈鉸鏈-TM-41BB-CD3z   
67 AA ssVHsp P4-CD8鉸鏈鉸鏈-TM-41BB-CD3z   
68 AA ssVHsp-P4-CD8鉸鏈鉸鏈-TM-41BB-CD3z   
69 AA ssVHsp-P4-CD8鉸鏈鉸鏈-TM-41BB-CD3z   
70 AA ssVHsp-P4-CD8鉸鏈鉸鏈-TM-41BB-CD3z   
71 AA ssVHsp-P4-CD8鉸鏈鉸鏈-TM-41BB-CD3z   
72 AA ssVHsp-P4-CD8鉸鏈鉸鏈-TM-41BB-CD3z   
73 AA ssVHsp-P4-CD8鉸鏈鉸鏈-TM-41BB-CD3z   
74 AA ssVHsp-P4-CD8鉸鏈鉸鏈-TM-41BB-CD3z   
75 AA ssVHsp-P4-CD8鉸鏈鉸鏈-TM-41BB-CD3z   
SEQ ID NO: 1 / AA / P4 scFv (沒有訊息肽) QVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSSGILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLS SEQ ID NO: 2 / AA / ssVH訊息肽(sp) MDWTWRILFLVAAATGAHS SEQ ID NO: 3 / AA / ssVHsp-P4 scFv MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSSGILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLS SEQ ID NO: 4 / AA /連接子(P4 scFv-CD8鉸鏈)) RAAA SEQ ID NO: 5 / AA / P2A肽 GSGATNFSLLKQAGDVEENPGP SEQ ID NO: 6 /AA/ IL2 sp MYRMQLLSCIALSLALVTNS SEQ ID NO: 7 /AA/ IL15Rasp MAPRRARGCRTLGLPALLLLLLLRPPATRG SEQ ID NO: 8 /AA/ mIL15/Ra (包括26aa連接子) (沒有IL2sp) NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSSGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSPSSNNTAATTAAIVPGSQLMPSKSPSTGTTEISSHESSHGTPSQTTAKNWELTASASHQPPGVYPQGHSDTTVAISTSTVLLCGLSAVSLLACYLKSRQTPPLASVEMEAMEALPVTWGTSSRDEDLENCSHHL SEQ ID NO: 9 /AA/ mIL15/Ra-LSP (IL15LSP-(IL15前肽)-IL15-26aa連接子-IL15Ra(FL)) MRISKPHLRSISIQCYLCLLLNSHFLTEAGIHVFILGCFSAGLPKTEANWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSSGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSPSSNNTAATTAAIVPGSQLMPSKSPSTGTTEISSHESSHGTPSQTTAKNWELTASASHQPPGVYPQGHSDTTVAISTSTVLLCGLSAVSLLACYLKSRQTPPLASVEMEAMEALPVTWGTSSRDEDLENCSHHL SEQ ID NO: 10 /AA/ sushi15 (包括26aa連接子) (沒有IL15Rasp) ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRSGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS SEQ ID NO: 11 /AA/ sIL15-LSP (IL15LSP-(IL15前肽)-IL15) MRISKPHLRSISIQCYLCLLLNSHFLTEAGIHVFILGCFSAGLPKTEANWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS SEQ ID NO: 47 /AA/ IL15LSP MRISKPHLRSISIQCYLCLLLNSHFLTEA SEQ ID NO: 48 /AA/ IL15前肽 GIHVFILGCFSAGLPKTEA SEQ ID NO: 12 (endosp) MALLLALSLLVLWTSPAPTLS SEQ ID NO: 13 /AA/ CCL19 GTNDAEDCCLSVTQKPIPGYIVRNFHYLLIKDGCRVPAVVFTTLRGRQLCAPPDQPWVERIIQRLQRTSAKMKRRSS SEQ ID NO: 14 /AA/ IL2sp-mIL15/Ra-P2A- endosp -CCL19 (包括26aa連接子) MYRMQLLSCIALSLALVTNSATSNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSSGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSPSSNNTAATTAAIVPGSQLMPSKSPSTGTTEISSHESSHGTPSQTTAKNWELTASASHQPPGVYPQGHSDTTVAISTSTVLLCGLSAVSLLACYLKSRQTPPLASVEMEAMEALPVTWGTSSRDEDLENCSHHLGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMALLLALSLLVLWTSPAPTLSGTNDAEDCCLSVTQKPIPGYIVRNFHYLLIKDGCRVPAVVFTTLRGRQLCAPPDQPWVERIIQRLQRTSAKMKRRSS SEQ ID NO: 24 /AA / 4-1BB共刺激域 KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL SEQ ID NO: 25 /AA / CD3z(野生型)胞內區 RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR SEQ ID NO: 26 /AA / CD8鉸鏈 PTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD SEQ ID NO: 27 /AA / CD8TM域 IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCN SEQ ID NO: 43 / AA/ ssVHsp-CD8鉸鏈-TM-41BB-CD3z MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSSGIL GSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLSRAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR SEQ ID NO: 42 / NA/ ssVHsp-P4-CD8鉸鏈鉸鏈-TM-BB-CD3z ATGGACTGGACATGGCGGATACTCTTCCTCGTCGCTGCTGCAACCGGAGCCCACAGCCAGGTGCAGCTCCAGCAGTCTGGGCCAGGTTTGGTGACTCCTAGTCAGACATTGAGCTTGACTTGTGCTATCAGCGGAGACTCTGTTTCATCTAATTCTGCAACTTGGAACTGGATTCGGCAGTCCCCCAGCCGGGGGCTCGAGTGGTTGGGTCGGACCTACTATCGGAGCAAATGGTACAATGACTATGCAGTGAGCGTCAAATCAAGAATGAGCATCAATCCTGACACAAGCAAGAACCAGTTTAGCCTTCAGCTTAATAGCGTGACTCCAGAGGACACAGCTGTGTACTATTGCGCGAGAGGCATGATGACATACTATTACGGAATGGACGTGTGGGGCCAGGGAACTACTGTTACAGTGTCAAGCGGAATCCTCGGTAGCGGAGGCGGCGGTTCCGGCGGAGGGGGTAGTGGTGGCGGGGGTAGTCAACCTGTGCTGACCCAGAGCAGCTCTCTTAGTGCTAGCCCAGGTGCAAGTGCAAGTCTTACCTGTACACTGCGCTCCGGTATTAATGTGGGCCCTTACCGAATTTACTGGTACCAGCAGAAACCAGGCTCCCCTCCCCAGTATCTGCTGAACTATAAGTCTGACTCAGACAAACAGCAGGGCTCCGGTGTGCCATCCCGATTTAGTGGCTCAAAGGATGCTAGTGCAAATGCCGGTGTTCTCCTGATCAGCGGACTCAGATCAGAGGACGAAGCAGACTATTACTGTATGATTTGGCATAGCAGCGCTGCTGTCTTCGGAGGAGGGACTCAGCTCACTGTCTTGAGTCGGGCCGCTGCACCTACCACTACCCCTGCCCCTCGACCCCCTACTCCCGCCCCAACTATCGCATCCCAACCACTCTCTCTCAGACCCGAAGCCTGTAGACCCGCAGCCGGTGGCGCTGTGCATACTCGCGGACTTGATTTTGCTTGTGATATTTATATCTGGGCCCCCCTTGCCGGAACTTGTGGAGTTCTCCTGCTGTCTCTCGTAATCACCCTTTATTGTAACAAACGGGGGCGCAAAAAACTTCTTTACATTTTCAAGCAGCCCTTTATGCGGCCCGTGCAGACCACACAGGAAGAAGATGGCTGCAGCTGCAGGTTCCCAGAGGAAGAAGAGGGCGGCTGCGAGCTGCGAGTAAAGTTCAGCCGGAGCGCCGATGCACCTGCATACCAGCAGGGTCAGAACCAGCTCTACAATGAGCTGAACCTGGGCAGAAGAGAGGAATATGATGTACTCGACAAGAGAAGGGGACGCGATCCAGAGATGGGCGGCAAACCACGGCGGAAAAATCCGCAGGAGGGGCTCTATAACGAGCTCCAGAAGGACAAGATGGCAGAAGCCTACTCAGAAATTGGCATGAAAGGAGAGAGAAGGAGGGGAAAGGGCCATGATGGCCTTTACCAAGGGTTGTCTACTGCCACCAAGGATACGTACGATGCACTCCATATGCAGGCTCTTCCTCCCCGATGA SEQ ID NO: 28 /AA/ IL2sp-mIL15/Ra (IL2sp-IL15-26 aa連接子- IL15Ra(FL)) MYRMQLLSCIALSLALVTNSATSNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSSGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSPSSNNTAATTAAIVPGSQLMPSKSPSTGTTEISSHESSHGTPSQTTAKNWELTASASHQPPGVYPQGHSDTTVAISTSTVLLCGLSAVSLLACYLKSRQTPPLASVEMEAMEALPVTWGTSSRDEDLENCSHHL SEQ ID NO: 29 /AA/ IL15Rasp-sushi15 (IL15Rasp-sushi域-26 aa連接子- IL15) MAPRRARGCRTLGLPALLLLLLLRPPATRGITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRSGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS SEQ ID NO: 45 / AA /P4 scFv中之肽連接子(20 AA) GILGSGGGGSGGGGSGGGGS SEQ ID NO: 31 /AA/ IL15Rasp-sushi15 -P2A- endosp-CCL19 (IL15Rasp-sushi域-26 aa連接子- IL15-P2A-endosp-CCL19) MAPRRARGCRTLGLPALLLLLLLRPPATRGITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRSGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMALLLALSLLVLWTSPAPTLSGTNDAEDCCLSVTQKPIPGYIVRNFHYLLIKDGCRVPAVVFTTLRGRQLCAPPDQPWVERIIQRLQRTSAKMKRRSS SEQ ID NO: 32 / AA /肽連接子(26 AA) SGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQ SEQ ID NO: 33 / AA /肽連接子(20 AA) SGGSGGGGSGGGSGGGGSLQ SEQ ID NO: 34 /AA/ ssVHsp-P4-CD8h/TM-BB-CD3z-P2A-IL2sp-mIL15/Ra (包括26aa連接子) MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSSGILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLSRAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMYRMQLLSCIALSLALVTNSATSNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSSGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSPSSNNTAATTAAIVPGSQLMPSKSPSTGTTEISSHESSHGTPSQTTAKNWELTASASHQPPGVYPQGHSDTTVAISTSTVLLCGLSAVSLLACYLKSRQTPPLASVEMEAMEALPVTWGTSSRDEDLENCSHHL SEQ ID NO: 35 /AA/ ssVHsp-P4-CD8h/TM-BB-CD3z-P2A- IL15Rasp-sushi15-IL15 (包括26aa連接子) MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSSGILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLSRAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMAPRRARGCRTLGLPALLLLLLLRPPATRGITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRSGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS SEQ ID NO: 36 /AA/ ssVHsp-P4-CD8h/TM-BB-CD3z-P2A-IL2sp-mIL15/Ra-P2A-endosp-CCL19 (包括26aa連接子) MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSSGILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLSRAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMYRMQLLSCIALSLALVTNSATSNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSSGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSPSSNNTAATTAAIVPGSQLMPSKSPSTGTTEISSHESSHGTPSQTTAKNWELTASASHQPPGVYPQGHSDTTVAISTSTVLLCGLSAVSLLACYLKSRQTPPLASVEMEAMEALPVTWGTSSRDEDLENCSHHLGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMALLLALSLLVLWTSPAPTLSGTNDAEDCCLSVTQKPIPGYIVRNFHYLLIKDGCRVPAVVFTTLRGRQLCAPPDQPWVERIIQRLQRTSAKMKRRSS SEQ ID NO: 15 /AA/ ssVHsp-P4-CD8h/TM-BB-CD3z-P2A-IL15Rasp-sushi15-IL15-endosp-CCL19 (包括26aa連接子) MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSSGILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLSRAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMAPRRARGCRTLGLPALLLLLLLRPPATRGITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRSGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMALLLALSLLVLWTSPAPTLSGTNDAEDCCLSVTQKPIPGYIVRNFHYLLIKDGCRVPAVVFTTLRGRQLCAPPDQPWVERIIQRLQRTSAKMKRRSS SEQ ID NO: 37 DNA P4-BB-mIL15/Ra atggactggacatggcggatactcttcctcgtcgctgctgcaaccggagcccacagccaggtgcagctccagcagtctgggccaggtttggtgactcctagtcagacattgagcttgacttgtgctatcagcggagactctgtttcatctaattctgcaacttggaactggattcggcagtcccccagccgggggctcgagtggttgggtcggacctactatcggagcaaatggtacaatgactatgcagtgagcgtcaaatcaagaatgagcatcaatcctgacacaagcaagaaccagtttagccttcagcttaatagcgtgactccagaggacacagctgtgtactattgcgcgagaggcatgatgacatactattacggaatggacgtgtggggccagggaactactgttacagtgtcaagcggaatcctcggtagcggaggcggcggttccggcggagggggtagtggtggcgggggtagtcaacctgtgctgacccagagcagctctcttagtgctagcccaggtgcaagtgcaagtcttacctgtacactgcgctccggtattaatgtgggcccttaccgaatttactggtaccagcagaaaccaggctcccctccccagtatctgctgaactataagtctgactcagacaaacagcagggctccggtgtgccatcccgatttagtggctcaaaggatgctagtgcaaatgccggtgttctcctgatcagcggactcagatcagaggacgaagcagactattactgtatgatttggcatagcagcgctgctgtcttcggaggagggactcagctcactgtcttgagtcgggccgctgcacctaccactacccctgcccctcgaccccctactcccgccccaactatcgcatcccaaccactctctctcagacccgaagcctgtagacccgcagccggtggcgctgtgcatactcgcggacttgattttgcttgtgatatttatatctgggccccccttgccggaacttgtggagttctcctgctgtctctcgtaatcaccctttattgtaacaaacgggggcgcaaaaaacttctttacattttcaagcagccctttatgcggcccgtgcagaccacacaggaagaagatggctgcagctgcaggttcccagaggaagaagagggcggctgcgagctgcgagtaaagttcagccggagcgccgatgcacctgcataccagcagggtcagaaccagctctacaatgagctgaacctgggcagaagagaggaatatgatgtactcgacaagagaaggggacgcgatccagagatgggcggcaaaccacggcggaaaaatccgcaggaggggctctataacgagctccagaaggacaagatggcagaagcctactcagaaattggcatgaaaggagagagaaggaggggaaagggccatgatggcctttaccaagggttgtctactgccaccaaggatacgtacgatgcactccatatgcaggctcttcctccccgaggttcaggcgcaacaaatttttcacttcttaaacaagctggcgatgtcgaggaaaacccaggtcccatgtatagaatgcagcttctgtcatgtatcgcactgagtctggccctggtgaccaacagtgccaccagcaactgggtgaatgtgataagcgaccttaagaaaatagaagaccttattcagtccatgcacatagatgccacactgtacaccgagagcgatgtgcacccttcctgcaaagtgacagctatgaaatgcttccttctggaactgcaagtaatttcattggaatctggcgatgcttccatacatgacaccgtggaaaaccttattattttggctaacaattcattgagctcaaatggaaacgtgacagaatccggttgtaaggaatgtgaagagctggaagaaaaaaatatcaaggaattcctgcagagctttgttcacattgtgcaaatgtttattaatacatcctcagggggcggttccggaggcgggggaagtggcggaggaggaagcggcggaggaggaagcggaggaggatcacttcaaatcacatgtcccccccctatgagtgttgaacatgctgacatctgggtgaaatcctattccctttattcaagagaacgatacatatgtaattccgggtttaagaggaaagcaggcacatcatctctcaccgaatgtgtcctgaataaggcgacaaacgtagctcactggactacgccctccctcaaatgcattagagacccagcactcgtgcaccaaaggccagcccccccaagcaccgtcactactgcaggtgtaaccccgcaaccagaatccctctcaccaagcggaaaagagccagccgcatcttctcctagttccaataatacagccgcgacaacagccgcaattgtccctggaagccagttgatgccatcaaagtccccaagtacgggtacgaccgaaatctcctcccacgaaagcagccacggaacaccaagccagactaccgccaagaactgggagctgaccgcttctgcatcacatcagccgccgggagtgtatccacaggggcactctgataccacagtagcaatctcaacctccaccgtcctgctgtgtggccttagcgctgtgtctctcctcgcatgttacctcaaatccaggcagacccccccccttgctagtgtcgaaatggaggcaatggaagcacttcccgtgacatggggcacttctagcagagatgaggaccttgaaaactgctcacaccacctc P4-BB-mIL15/Ra-LSP SEQ ID NO: 38 DNA P4-BB-sushi15 ATGGACTGGACATGGCGGATACTCTTCCTCGTCGCTGCTGCAACCGGAGCCCACAGCCAGGTGCAGCTCCAGCAGTCTGGGCCAGGTTTGGTGACTCCTAGTCAGACATTGAGCTTGACTTGTGCTATCAGCGGAGACTCTGTTTCATCTAATTCTGCAACTTGGAACTGGATTCGGCAGTCCCCCAGCCGGGGGCTCGAGTGGTTGGGTCGGACCTACTATCGGAGCAAATGGTACAATGACTATGCAGTGAGCGTCAAATCAAGAATGAGCATCAATCCTGACACAAGCAAGAACCAGTTTAGCCTTCAGCTTAATAGCGTGACTCCAGAGGACACAGCTGTGTACTATTGCGCGAGAGGCATGATGACATACTATTACGGAATGGACGTGTGGGGCCAGGGAACTACTGTTACAGTGTCAAGCGGAATCCTCGGTAGCGGAGGCGGCGGTTCCGGCGGAGGGGGTAGTGGTGGCGGGGGTAGTCAACCTGTGCTGACCCAGAGCAGCTCTCTTAGTGCTAGCCCAGGTGCAAGTGCAAGTCTTACCTGTACACTGCGCTCCGGTATTAATGTGGGCCCTTACCGAATTTACTGGTACCAGCAGAAACCAGGATCCCCTCCCCAGTATCTGCTGAACTATAAGTCTGACTCAGACAAACAGCAGGGCTCCGGTGTGCCATCCCGATTTAGTGGCTCAAAGGATGCTAGTGCAAATGCCGGTGTTCTCCTGATCAGCGGACTCAGATCAGAGGACGAAGCAGACTATTACTGTATGATTTGGCATAGCAGCGCTGCTGTCTTCGGAGGAGGGACTCAGCTCACTGTCTTGAGTCGGGCCGCTGCACCTACCACTACCCCTGCCCCTCGACCCCCTACTCCCGCCCCAACTATCGCATCCCAACCACTCTCTCTCAGACCCGAAGCCTGTAGACCCGCAGCCGGTGGCGCTGTGCATACTCGCGGACTTGATTTTGCTTGTGATATTTATATCTGGGCCCCCCTTGCCGGAACTTGTGGAGTTCTCCTGCTGTCTCTCGTAATCACCCTTTATTGTAACAAACGGGGGCGCAAAAAACTTCTTTACATTTTCAAGCAGCCCTTTATGCGGCCCGTGCAGACCACACAGGAAGAAGATGGCTGCAGCTGCAGGTTCCCAGAGGAAGAAGAGGGCGGCTGCGAGCTGCGAGTAAAGTTCAGCCGGAGCGCCGATGCACCTGCATACCAGCAGGGTCAGAACCAGCTCTACAATGAGCTGAACCTGGGCAGAAGAGAGGAATATGATGTACTCGACAAGAGAAGGGGACGCGATCCAGAGATGGGCGGCAAACCACGGCGGAAAAATCCGCAGGAGGGGCTCTATAACGAGCTCCAGAAGGACAAGATGGCAGAAGCCTACTCAGAAATTGGCATGAAAGGAGAGAGAAGGAGGGGAAAGGGCCATGATGGCCTTTACCAAGGGTTGTCTACTGCCACCAAGGATACGTACGATGCACTCCATATGCAGGCTCTTCCTCCCCGAGGGTCTGGCGCTACGAATTTCTCTCTCCTTAAACAGGCCGGAGACGTGGAAGAAAATCCCGGCCCGATGGCGCCCCGCAGGGCCCGCGGGTGTCGAACATTGGGTCTGCCTGCTCTCTTGCTGCTGTTGCTTCTCAGACCTCCCGCCACACGCGGAATTACGTGCCCTCCCCCCATGTCTGTGGAACATGCCGACATATGGGTCAAGTCTTACAGTCTTTACTCTAGAGAACGGTATATCTGCAATAGCGGGTTCAAAAGAAAAGCAGGGACTTCCAGCCTGACAGAGTGCGTACTGAATAAGGCCACTAACGTTGCTCACTGGACCACCCCATCATTGAAGTGTATTCGATCAGGAGGCGGAAGCGGTGGTGGGGGCTCAGGGGGTGGCGGTAGTGGAGGCGGGGGCAGCGGAGGGGGCTCTTTGCAAAACTGGGTTAATGTTATTAGCGACCTTAAGAAAATCGAGGACCTGATACAGTCCATGCACATCGATGCGACCCTGTACACTGAGAGCGATGTGCATCCCAGTTGCAAAGTGACTGCTATGAAATGCTTTCTGCTCGAGTTGCAGGTGATCTCCCTGGAAAGCGGCGACGCCTCAATACACGACACGGTCGAAAATCTGATCATTCTCGCCAACAACTCTCTCTCAAGTAACGGGAATGTGACAGAAAGTGGATGCAAAGAATGCGAGGAACTTGAGGAGAAAAACATTAAAGAATTCCTCCAGTCCTTCGTCCACATCGTGCAGATGTTTATCAATACTTCC P4-BB-sIL15-LSP SEQ ID NO: 39 DNA P4-BB-mIL15/RaxCCL19 ATGGATTGGACCTGGCGAATACTCTTCCTCGTCGCAGCGGCCACTGGTGCCCATTCACAAGTCCAACTGCAGCAGAGCGGACCTGGCCTGGTGACACCCAGTCAGACTCTCAGCCTGACTTGTGCAATCAGCGGCGATAGTGTGTCTAGTAATTCTGCAACATGGAACTGGATCAGACAATCACCAAGTCGGGGACTGGAGTGGCTCGGTAGAACCTATTATAGGTCCAAATGGTATAACGATTATGCAGTGTCCGTGAAGTCCCGAATGTCTATCAACCCTGATACTAGTAAGAATCAATTCAGTCTGCAGCTTAACAGCGTAACCCCCGAAGATACTGCTGTGTATTACTGTGCCCGGGGTATGATGACTTACTACTACGGAATGGATGTGTGGGGGCAGGGAACAACCGTTACTGTTTCATCCGGCATTCTCGGGAGCGGAGGCGGTGGAAGCGGTGGGGGAGGGTCCGGGGGAGGAGGATCTCAGCCTGTTCTTACTCAATCTTCTTCCCTCTCCGCCTCACCCGGGGCCTCCGCCTCACTGACCTGCACTCTGCGATCAGGCATCAACGTTGGGCCTTATAGAATCTACTGGTACCAGCAAAAGCCTGGATCACCGCCCCAGTACCTGCTGAACTATAAATCAGACTCAGACAAGCAGCAGGGCTCCGGCGTGCCGAGTCGATTTAGCGGGAGCAAGGACGCGTCTGCTAATGCCGGCGTGCTTCTCATCAGCGGGCTCCGCAGTGAGGATGAGGCAGATTACTACTGCATGATTTGGCATAGCAGTGCAGCCGTATTTGGCGGAGGAACACAGCTGACTGTCCTCTCTCGCGCCGCCGCTCCGACCACCACCCCTGCACCACGCCCACCTACTCCTGCGCCAACCATTGCCAGCCAGCCTCTCTCTCTCCGACCCGAGGCCTGTAGACCTGCCGCTGGCGGTGCAGTTCATACTCGGGGTCTCGATTTCGCCTGCGACATCTACATCTGGGCACCACTGGCTGGCACTTGTGGCGTTTTGCTCCTGTCCCTGGTGATCACTCTCTACTGTAATAAGAGGGGGAGGAAGAAACTCCTGTATATTTTCAAACAACCCTTTATGCGCCCTGTCCAAACCACCCAGGAAGAAGATGGATGTAGTTGCAGATTCCCAGAAGAAGAGGAGGGTGGGTGTGAACTTAGGGTGAAGTTTAGTCGCAGTGCCGACGCTCCCGCTTACCAACAGGGTCAGAACCAACTCTACAATGAGCTGAATCTGGGGAGGCGCGAAGAATACGACGTTCTGGATAAAAGACGCGGCCGCGACCCCGAGATGGGCGGGAAACCGCGGAGAAAGAACCCACAGGAAGGATTGTACAATGAGCTCCAGAAAGATAAGATGGCAGAAGCCTACTCCGAGATCGGCATGAAGGGGGAGCGAAGGCGCGGGAAAGGACACGATGGGCTGTACCAGGGTCTTTCAACCGCGACAAAGGACACCTATGATGCTCTCCATATGCAGGCCCTCCCGCCACGCGGAAGTGGAGCAACTAATTTTAGCCTTCTGAAACAAGCTGGCGATGTTGAGGAAAATCCTGGGCCGATGTACAGGATGCAGCTGCTTTCTTGCATTGCACTGAGTTTGGCACTCGTCACCAACTCTGCCACATCAAATTGGGTTAACGTTATCAGCGATCTGAAGAAAATCGAGGATTTGATCCAGAGTATGCATATTGACGCAACCTTGTATACAGAATCTGATGTGCACCCAAGCTGTAAAGTCACAGCTATGAAATGCTTTTTGCTGGAACTCCAAGTGATCTCCCTCGAATCCGGCGATGCATCCATCCACGATACTGTCGAAAACCTTATAATTTTGGCCAATAACAGCCTCAGCAGCAATGGCAACGTGACAGAGTCTGGGTGTAAGGAGTGTGAAGAACTGGAGGAGAAAAATATTAAAGAATTCCTGCAGTCCTTTGTACACATTGTGCAAATGTTCATTAACACTTCAAGTGGCGGCGGGAGCGGCGGGGGTGGTTCAGGTGGTGGCGGCAGCGGTGGTGGGGGGTCTGGCGGGGGTAGTCTCCAAATTACTTGTCCTCCCCCAATGAGCGTTGAACACGCCGACATTTGGGTCAAGTCTTATTCACTGTACAGCCGAGAAAGATATATCTGTAACTCTGGATTTAAGCGCAAGGCCGGAACGTCTAGTCTGACTGAGTGCGTGCTGAATAAGGCCACTAATGTTGCCCACTGGACTACCCCCAGCCTGAAGTGTATTCGCGATCCTGCCTTGGTGCACCAACGACCCGCGCCACCCAGCACAGTCACTACTGCCGGTGTGACTCCACAGCCCGAGTCTTTGTCCCCGAGCGGAAAGGAGCCCGCCGCATCTTCACCTTCTTCAAATAACACGGCCGCCACAACCGCTGCAATCGTCCCAGGTAGTCAACTGATGCCCTCTAAAAGCCCCTCTACGGGGACAACTGAGATAAGCAGCCACGAGTCTAGTCACGGCACACCAAGCCAGACTACCGCCAAAAACTGGGAGCTGACCGCCTCTGCCTCACACCAACCACCAGGCGTGTATCCCCAGGGGCACAGCGACACCACTGTGGCAATCAGCACCAGCACGGTACTGTTGTGCGGACTCTCTGCCGTCAGTCTGCTGGCCTGCTACCTGAAATCCAGACAGACTCCCCCCCTGGCCAGCGTGGAAATGGAAGCTATGGAGGCTCTGCCCGTGACCTGGGGGACTAGCTCCAGAGATGAAGACTTGGAGAACTGCAGTCACCATCTCGGGTCCGGAGCCACGAATTTCTCTCTCCTCAAACAAGCTGGGGATGTTGAGGAGAACCCTGGGCCAATGGCCCTCTTGCTCGCACTGTCCCTCCTGGTCCTGTGGACATCACCCGCCCCCACCCTGTCCGGCACGAATGACGCAGAAGACTGCTGCCTGTCTGTCACGCAGAAACCCATCCCCGGCTATATAGTGCGGAACTTCCATTACCTGCTGATCAAGGACGGATGTAGGGTGCCAGCCGTCGTCTTCACCACCCTGCGAGGGCGCCAGCTGTGCGCTCCTCCTGACCAGCCCTGGGTGGAGCGGATCATTCAACGCTTGCAGCGCACCTCAGCAAAAATGAAAAGAAGAAGTAGT P4-BB-mIL15/Ra-LSP xCCL19 SEQ ID NO: 40 DNA P4-BB-sushi15xCCL19 ATGGATTGGACCTGGCGAATACTCTTCCTCGTCGCAGCGGCCACTGGTGCCCATTCACAAGTCCAACTGCAGCAGAGCGGACCTGGCCTGGTGACACCCAGTCAGACTCTCAGCCTGACTTGTGCAATCAGCGGCGATAGTGTGTCTAGTAATTCTGCAACATGGAACTGGATCAGACAATCACCAAGTCGGGGACTGGAGTGGCTCGGTAGAACCTATTATAGGTCCAAATGGTATAACGATTATGCAGTGTCCGTGAAGTCCCGAATGTCTATCAACCCTGATACTAGTAAGAATCAATTCAGTCTGCAGCTTAACAGCGTAACCCCCGAAGATACTGCTGTGTATTACTGTGCCCGGGGTATGATGACTTACTACTACGGAATGGATGTGTGGGGGCAGGGAACAACCGTTACTGTTTCATCCGGCATTCTCGGGAGCGGAGGCGGTGGAAGCGGTGGGGGAGGGTCCGGGGGAGGAGGATCTCAGCCTGTTCTTACTCAATCTTCTTCCCTCTCCGCCTCACCCGGGGCCTCCGCCTCACTGACCTGCACTCTGCGATCAGGCATCAACGTTGGGCCTTATAGAATCTACTGGTACCAGCAAAAGCCTGGATCACCGCCCCAGTACCTGCTGAACTATAAATCAGACTCAGACAAGCAGCAGGGCTCCGGCGTGCCGAGTCGATTTAGCGGGAGCAAGGACGCGTCTGCTAATGCCGGCGTGCTTCTCATCAGCGGGCTCCGCAGTGAGGATGAGGCAGATTACTACTGCATGATTTGGCATAGCAGTGCAGCCGTATTTGGCGGAGGAACACAGCTGACTGTCCTCTCTCGCGCCGCCGCTCCGACCACCACCCCTGCACCACGCCCACCTACTCCTGCGCCAACCATTGCCAGCCAGCCTCTCTCTCTCCGACCCGAGGCCTGTAGACCTGCCGCTGGCGGTGCAGTTCATACTCGGGGTCTCGATTTCGCCTGCGACATCTACATCTGGGCACCACTGGCTGGCACTTGTGGCGTTTTGCTCCTGTCCCTGGTGATCACTCTCTACTGTAATAAGAGGGGGAGGAAGAAACTCCTGTATATTTTCAAACAACCCTTTATGCGCCCTGTCCAAACCACCCAGGAAGAAGATGGATGTAGTTGCAGATTCCCAGAAGAAGAGGAGGGTGGGTGTGAACTTAGGGTGAAGTTTAGTCGCAGTGCCGACGCTCCCGCTTACCAACAGGGTCAGAACCAACTCTACAATGAGCTGAATCTGGGGAGGCGCGAAGAATACGACGTTCTGGATAAAAGACGCGGCCGCGACCCCGAGATGGGCGGGAAACCGCGGAGAAAGAACCCACAGGAAGGATTGTACAATGAGCTCCAGAAAGATAAGATGGCAGAAGCCTACTCCGAGATCGGCATGAAGGGGGAGCGAAGGCGCGGGAAAGGACACGATGGGCTGTACCAGGGTCTTTCAACCGCGACAAAGGACACCTATGATGCTCTCCATATGCAGGCCCTCCCGCCACGCGGAAGTGGAGCAACTAATTTTAGCCTTCTGAAACAAGCTGGCGATGTTGAGGAAAATCCTGGGCCGATGGCACCTAGACGGGCACGCGGGTGTAGAACGCTGGGCCTCCCCGCACTGTTGTTGCTCTTGCTTCTGAGACCTCCCGCTACAAGGGGGATAACTTGCCCTCCACCTATGAGCGTCGAGCATGCTGACATTTGGGTGAAGTCCTATTCACTCTATTCCCGGGAGCGGTACATCTGTAACTCTGGATTCAAGAGGAAAGCCGGCACCAGCAGTCTGACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCCACCAATGTGGCCCACTGGACAACCCCTAGCCTTAAATGTATACGGTCAGGGGGCGGATCTGGAGGCGGCGGCTCCGGTGGAGGCGGGAGTGGGGGCGGGGGCTCTGGAGGTGGTAGCCTGCAGAATTGGGTTAACGTGATTAGCGACCTCAAAAAAATCGAAGATCTTATCCAGAGCATGCATATAGACGCAACCCTGTACACAGAAAGCGATGTTCACCCGTCCTGCAAGGTAACGGCTATGAAGTGTTTTCTTTTGGAGTTGCAAGTCATATCACTGGAAAGTGGGGATGCCTCAATTCACGATACCGTGGAGAACCTCATCATCCTCGCAAATAACAGCCTGAGCTCCAATGGCAATGTCACAGAGTCAGGTTGCAAAGAGTGTGAAGAGCTGGAAGAGAAAAACATCAAAGAGTTCCTCCAGTCATTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATTAACACTAGTGGTAGTGGTGCCACAAATTTTAGTCTGTTGAAACAGGCCGGGGACGTCGAAGAAAACCCGGGGCCTATGGCCCTCTTGCTCGCACTGTCCCTCCTGGTCCTGTGGACATCACCCGCCCCCACCCTGTCCGGCACGAATGACGCAGAAGACTGCTGCCTGTCTGTCACGCAGAAACCCATCCCCGGCTATATAGTGCGGAACTTCCATTACCTGCTGATCAAGGACGGATGTAGGGTGCCAGCCGTCGTCTTCACCACCCTGCGAGGGCGCCAGCTGTGCGCTCCTCCTGACCAGCCCTGGGTGGAGCGGATCATTCAACGCTTGCAGCGCACCTCAGCAAAAATGAAAAGAAGAAGTAGT SEQ ID NO: 50 /DNA / ＞Seq42A_自_37 atggactggacatggcggatactcttcctcgtcgctgctgcaaccggagcccacagccaggtgcagctccagcagtctgggccaggtttggtgactcctagtcagacattgagcttgacttgtgctatcagcggagactctgtttcatctaattctgcaacttggaactggattcggcagtcccccagccgggggctcgagtggttgggtcggacctactatcggagcaaatggtacaatgactatgcagtgagcgtcaaatcaagaatgagcatcaatcctgacacaagcaagaaccagtttagccttcagcttaatagcgtgactccagaggacacagctgtgtactattgcgcgagaggcatgatgacatactattacggaatggacgtgtggggccagggaactactgttacagtgtcaagcggaatcctcggtagcggaggcggcggttccggcggagggggtagtggtggcgggggtagtcaacctgtgctgacccagagcagctctcttagtgctagcccaggtgcaagtgcaagtcttacctgtacactgcgctccggtattaatgtgggcccttaccgaatttactggtaccagcagaaaccaggctcccctccccagtatctgctgaactataagtctgactcagacaaacagcagggctccggtgtgccatcccgatttagtggctcaaaggatgctagtgcaaatgccggtgttctcctgatcagcggactcagatcagaggacgaagcagactattactgtatgatttggcatagcagcgctgctgtcttcggaggagggactcagctcactgtcttgagtcgggccgctgcacctaccactacccctgcccctcgaccccctactcccgccccaactatcgcatcccaaccactctctctcagacccgaagcctgtagacccgcagccggtggcgctgtgcatactcgcggacttgattttgcttgtgatatttatatctgggccccccttgccggaacttgtggagttctcctgctgtctctcgtaatcaccctttattgtaacaaacgggggcgcaaaaaacttctttacattttcaagcagccctttatgcggcccgtgcagaccacacaggaagaagatggctgcagctgcaggttcccagaggaagaagagggcggctgcgagctgcgagtaaagttcagccggagcgccgatgcacctgcataccagcagggtcagaaccagctctacaatgagctgaacctgggcagaagagaggaatatgatgtactcgacaagagaaggggacgcgatccagagatgggcggcaaaccacggcggaaaaatccgcaggaggggctctataacgagctccagaaggacaagatggcagaagcctactcagaaattggcatgaaaggagagagaaggaggggaaagggccatgatggcctttaccaagggttgtctactgccaccaaggatacgtacgatgcactccatatgcaggctcttcctccccga SEQ ID NO: 51 /DNA / ＞Seq42B_自38 (與42ª有1個鹼基差異) ATGGACTGGACATGGCGGATACTCTTCCTCGTCGCTGCTGCAACCGGAGCCCACAGCCAGGTGCAGCTCCAGCAGTCTGGGCCAGGTTTGGTGACTCCTAGTCAGACATTGAGCTTGACTTGTGCTATCAGCGGAGACTCTGTTTCATCTAATTCTGCAACTTGGAACTGGATTCGGCAGTCCCCCAGCCGGGGGCTCGAGTGGTTGGGTCGGACCTACTATCGGAGCAAATGGTACAATGACTATGCAGTGAGCGTCAAATCAAGAATGAGCATCAATCCTGACACAAGCAAGAACCAGTTTAGCCTTCAGCTTAATAGCGTGACTCCAGAGGACACAGCTGTGTACTATTGCGCGAGAGGCATGATGACATACTATTACGGAATGGACGTGTGGGGCCAGGGAACTACTGTTACAGTGTCAAGCGGAATCCTCGGTAGCGGAGGCGGCGGTTCCGGCGGAGGGGGTAGTGGTGGCGGGGGTAGTCAACCTGTGCTGACCCAGAGCAGCTCTCTTAGTGCTAGCCCAGGTGCAAGTGCAAGTCTTACCTGTACACTGCGCTCCGGTATTAATGTGGGCCCTTACCGAATTTACTGGTACCAGCAGAAACCAGGATCCCCTCCCCAGTATCTGCTGAACTATAAGTCTGACTCAGACAAACAGCAGGGCTCCGGTGTGCCATCCCGATTTAGTGGCTCAAAGGATGCTAGTGCAAATGCCGGTGTTCTCCTGATCAGCGGACTCAGATCAGAGGACGAAGCAGACTATTACTGTATGATTTGGCATAGCAGCGCTGCTGTCTTCGGAGGAGGGACTCAGCTCACTGTCTTGAGTCGGGCCGCTGCACCTACCACTACCCCTGCCCCTCGACCCCCTACTCCCGCCCCAACTATCGCATCCCAACCACTCTCTCTCAGACCCGAAGCCTGTAGACCCGCAGCCGGTGGCGCTGTGCATACTCGCGGACTTGATTTTGCTTGTGATATTTATATCTGGGCCCCCCTTGCCGGAACTTGTGGAGTTCTCCTGCTGTCTCTCGTAATCACCCTTTATTGTAACAAACGGGGGCGCAAAAAACTTCTTTACATTTTCAAGCAGCCCTTTATGCGGCCCGTGCAGACCACACAGGAAGAAGATGGCTGCAGCTGCAGGTTCCCAGAGGAAGAAGAGGGCGGCTGCGAGCTGCGAGTAAAGTTCAGCCGGAGCGCCGATGCACCTGCATACCAGCAGGGTCAGAACCAGCTCTACAATGAGCTGAACCTGGGCAGAAGAGAGGAATATGATGTACTCGACAAGAGAAGGGGACGCGATCCAGAGATGGGCGGCAAACCACGGCGGAAAAATCCGCAGGAGGGGCTCTATAACGAGCTCCAGAAGGACAAGATGGCAGAAGCCTACTCAGAAATTGGCATGAAAGGAGAGAGAAGGAGGGGAAAGGGCCATGATGGCCTTTACCAAGGGTTGTCTACTGCCACCAAGGATACGTACGATGCACTCCATATGCAGGCTCTTCCTCCCCGA SEQ ID NO: 52 /DNA / ＞Seq42C_自39 (與Seq42A 1154/1523之一致性(75.8%)；與來自CAR Seq ID#40之DNA序列相同) ATGGATTGGACCTGGCGAATACTCTTCCTCGTCGCAGCGGCCACTGGTGCCCATTCACAAGTCCAACTGCAGCAGAGCGGACCTGGCCTGGTGACACCCAGTCAGACTCTCAGCCTGACTTGTGCAATCAGCGGCGATAGTGTGTCTAGTAATTCTGCAACATGGAACTGGATCAGACAATCACCAAGTCGGGGACTGGAGTGGCTCGGTAGAACCTATTATAGGTCCAAATGGTATAACGATTATGCAGTGTCCGTGAAGTCCCGAATGTCTATCAACCCTGATACTAGTAAGAATCAATTCAGTCTGCAGCTTAACAGCGTAACCCCCGAAGATACTGCTGTGTATTACTGTGCCCGGGGTATGATGACTTACTACTACGGAATGGATGTGTGGGGGCAGGGAACAACCGTTACTGTTTCATCCGGCATTCTCGGGAGCGGAGGCGGTGGAAGCGGTGGGGGAGGGTCCGGGGGAGGAGGATCTCAGCCTGTTCTTACTCAATCTTCTTCCCTCTCCGCCTCACCCGGGGCCTCCGCCTCACTGACCTGCACTCTGCGATCAGGCATCAACGTTGGGCCTTATAGAATCTACTGGTACCAGCAAAAGCCTGGATCACCGCCCCAGTACCTGCTGAACTATAAATCAGACTCAGACAAGCAGCAGGGCTCCGGCGTGCCGAGTCGATTTAGCGGGAGCAAGGACGCGTCTGCTAATGCCGGCGTGCTTCTCATCAGCGGGCTCCGCAGTGAGGATGAGGCAGATTACTACTGCATGATTTGGCATAGCAGTGCAGCCGTATTTGGCGGAGGAACACAGCTGACTGTCCTCTCTCGCGCCGCCGCTCCGACCACCACCCCTGCACCACGCCCACCTACTCCTGCGCCAACCATTGCCAGCCAGCCTCTCTCTCTCCGACCCGAGGCCTGTAGACCTGCCGCTGGCGGTGCAGTTCATACTCGGGGTCTCGATTTCGCCTGCGACATCTACATCTGGGCACCACTGGCTGGCACTTGTGGCGTTTTGCTCCTGTCCCTGGTGATCACTCTCTACTGTAATAAGAGGGGGAGGAAGAAACTCCTGTATATTTTCAAACAACCCTTTATGCGCCCTGTCCAAACCACCCAGGAAGAAGATGGATGTAGTTGCAGATTCCCAGAAGAAGAGGAGGGTGGGTGTGAACTTAGGGTGAAGTTTAGTCGCAGTGCCGACGCTCCCGCTTACCAACAGGGTCAGAACCAACTCTACAATGAGCTGAATCTGGGGAGGCGCGAAGAATACGACGTTCTGGATAAAAGACGCGGCCGCGACCCCGAGATGGGCGGGAAACCGCGGAGAAAGAACCCACAGGAAGGATTGTACAATGAGCTCCAGAAAGATAAGATGGCAGAAGCCTACTCCGAGATCGGCATGAAGGGGGAGCGAAGGCGCGGGAAAGGACACGATGGGCTGTACCAGGGTCTTTCAACCGCGACAAAGGACACCTATGATGCTCTCCATATGCAGGCCCTCCCGCCACGC SEQ ID NO: 44 / AA / Vg9-P2A-Vd2 TCR MVSLLHASTLAVLGALCVYGAGHLEQPQISSTKTLSKTARLECVVSGITISATSVYWYRERPGEVIQFLVSISYDGTVRKESGIPSGKFEVDRIPETSTSTLTIHNVEKQDIATYYCALWEAQQELGKKIKVFGPGTKLIITDKQLDADVSPKPTIFLPSIAETKLQKAGTYLCLLEKFFPDVIKIHWEEKKSNTILGSQEGNTMKTNDTYMKFSWLTVPEKSLDKEHRCIVRHENNKNGVDQEIIFPPIKTDVITMDPKDNCSKDANDTLLLQLTNTSAYYMYLLLLLKSVVYFAIITCCLLRRTAFCCNGEKSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMERISSLIHLSLFWAGVMSAIELVPEHQTVPVSIGVPATLRCSMKGEAIGNYYINWYRKTQGNTMTFIYREKDIYGPGFKDNFQGDIDIAKNLAVLKILAPSERDEGSYYCACDTLGMGGEYTDKLIFGKGTRVTVEPRSQPHTKPSVFVMKNGTNVACLVKEFYPKDIRINLVSSKKITEFDPAIVISPSGKYNAVKLGKYEDSNSVTCSVQHDNKTVHSTDFEVKTDSTDHVKPKETENTKQPSKSCHKPKAIVHTEKVNMMSLTVLGLRMLFAKTVAVNFLLTAKLFFL SEQ ID NO: 53 AA SSVHsp-P4-BB-mIL15/Ra-LSP (ssVHsp-P4-CD8h/TM-BB-CD3z-P2A- IL15LSP -IL15前肽-mIL15/Ra (包括26aa連接子) MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSSGILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLSRAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMRISKPHLRSISIQCYLCLLLNSHFLTEAGIHVFILGCFSAGLPKTEANWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSSGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSPSSNNTAATTAAIVPGSQLMPSKSPSTGTTEISSHESSHGTPSQTTAKNWELTASASHQPPGVYPQGHSDTTVAISTSTVLLCGLSAVSLLACYLKSRQTPPLASVEMEAMEALPVTWGTSSRDEDLENCSHHL SEQ ID NO: 54 AA SSVHsp-P4-BB-sIL15-LSP (ssVHsp-P4-CD8h/TM-BB-CD3z-P2A- IL15LSP-IL15前肽-IL15) MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSSGILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLSRAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMRISKPHLRSISIQCYLCLLLNSHFLTEAGIHVFILGCFSAGLPKTEANWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS SEQ ID NO: 55 AA SSVHsp-P4-BB-mIL15/Ra-LSP-CCL19 (ssVHsp-P4-CD8h/TM-BB-CD3z-P2A- IL15LSP-IL15前肽-IL15-P2A-endospCCL19) MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSSGILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLSRAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMRISKPHLRSISIQCYLCLLLNSHFLTEAGIHVFILGCFSAGLPKTEANWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMALLLALSLLVLWTSPAPTLSGTNDAEDCCLSVTQKPIPGYIVRNFHYLLIKDGCRVPAVVFTTLRGRQLCAPPDQPWVERIIQRLQRTSAKMKRRSS SEQ ID NO: 56 AA SSVHsp-P4-BB-sIL15-LSP-CCL19 (ssVHsp-P4-CD8h/TM-BB-CD3z-P2A- IL15LSP-IL15前肽-IL15-P2A-endospCCL19) MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSSGILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLSRAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMRISKPHLRSISIQCYLCLLLNSHFLTEAGIHVFILGCFSAGLPKTEANWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMALLLALSLLVLWTSPAPTLSGTNDAEDCCLSVTQKPIPGYIVRNFHYLLIKDGCRVPAVVFTTLRGRQLCAPPDQPWVERIIQRLQRTSAKMKRRSS SEQ ID NO: 57 AA SSVHsp-P4-CD28-sushi15 -CCL19 (ssVH-P4-CD28鉸鏈-TM-CD28cyto-CD3z-P2A-IL15Rasp-IL15Ra(sushi)-20aa連接子-IL15-P2A-endospCCL19) MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSSGILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLSRAAAIEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMAPRRARGCRTLGLPALLLLLLLRPPATRGITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRSGGSGGGGSGGGSGGGGSLQNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMALLLALSLLVLWTSPAPTLSGTNDAEDCCLSVTQKPIPGYIVRNFHYLLIKDGCRVPAVVFTTLRGRQLCAPPDQPWVERIIQRLQRTSAKMKRRSS SEQ ID NO: 58 DNA ssVHsp-P4-BB-mIL15/Ra-LSP atggactggacatggcggatact cttcctcgtcgctgctgcaaccggagccca cagccaggtgcagctccagcagtctgggcc aggtttggtgactcctagtcagacattgag cttgacttgtgctatcagcggagactctgt ttcatctaattctgcaacttggaactggat tcggcagtcccccagccgggggctcgagtg gttgggtcggacctactatcggagcaaatg gtacaatgactatgcagtgagcgtcaaatc aagaatgagcatcaatcctgacacaagcaa gaaccagtttagccttcagcttaatagcgt gactccagaggacacagctgtgtactattg cgcgagaggcatgatgacatactattacgg aatggacgtgtggggccagggaactactgt tacagtgtcaagcggaatcctcggtagcgg aggcggcggttccggcggagggggtagtgg tggcgggggtagtcaacctgtgctgaccca gagcagctctcttagtgctagcccaggtgc aagtgcaagtcttacctgtacactgcgctc cggtattaatgtgggcccttaccgaattta ctggtaccagcagaaaccaggctcccctcc ccagtatctgctgaactataagtctgactc agacaaacagcagggctccggtgtgccatc ccgatttagtggctcaaaggatgctagtgc aaatgccggtgttctcctgatcagcggact cagatcagaggacgaagcagactattactg tatgatttggcatagcagcgctgctgtctt cggaggagggactcagctcactgtcttgag tcgggccgctgcacctaccactacccctgc ccctcgaccccctactcccgccccaactat cgcatcccaaccactctctctcagacccga agcctgtagacccgcagccggtggcgctgt gcatactcgcggacttgattttgcttgtga tatttatatctgggccccccttgccggaac ttgtggagttctcctgctgtctctcgtaat caccctttattgtaacaaacgggggcgcaa aaaacttctttacattttcaagcagccctt tatgcggcccgtgcagaccacacaggaaga agatggctgcagctgcaggttcccagagga agaagagggcggctgcgagctgcgagtaaa gttcagccggagcgccgatgcacctgcata ccagcagggtcagaaccagctctacaatga gctgaacctgggcagaagagaggaatatga tgtactcgacaagagaaggggacgcgatcc agagatgggcggcaaaccacggcggaaaaa tccgcaggaggggctctataacgagctcca gaaggacaagatggcagaagcctactcaga aattggcatgaaaggagagagaaggagggg aaagggccatgatggcctttaccaagggtt gtctactgccaccaaggatacgtacgatgc actccatatgcaggctcttcctccccgagg ctcaggagccaccaacttctccctgctgaa gcaggccggcgacgtggaggagaacccagg tcctatgagaatctcaaaaccccatcttag aagcatctctatacagtgttatctgtgtct cttgctgaactcccactttttgacagaagc tgggatacatgtctttatcctgggatgttt ttccgccgggctccctaaaaccgaggccaa ctgggtaaacgtaatctcagaccttaaaaa gattgaggacctgattcagtcaatgcatat cgatgcaactttgtacacggagagcgatgt tcacccaagttgtaaagtgaccgcgatgaa atgttttctcctcgaattgcaggtgatctc cctcgagtcaggcgacgcgtctatccacga tactgtggaaaaccttatcattttggcgaa caatagcctctcatctaatggtaacgtgac cgagtccggctgcaaggaatgtgaggaact ggaggagaaaaatatcaaggaattcctgca gtcatttgtacacatcgtgcaaatgtttat caacacttcttcaggaggcgggtcaggagg gggaggctcaggcggcggaggtagtggagg aggaggaagtggaggcggcagtctccagat cacctgtccaccaccaatgagtgtggaaca cgcggacatttgggtcaagtcatattctct ttactccagagagcgatacatatgcaacag tggtttcaagcggaaagcgggtacttcttc acttaccgagtgcgtgctcaataaagcaac caacgtcgcgcactggacaacacctagcct gaaatgcataagagatcctgccctggttca ccagcggccagcgccaccgtccacagtgac aacagctggtgtgacaccccagccggagag ccttagccctagcggcaaagagccggccgc aagctcaccaagctcaaataacacagccgc gacaactgctgctatcgtgcccggttcaca attgatgccgagcaaatcaccaagcaccgg aactaccgaaatctcaagtcatgaaagtag tcacggtactcctagccagacgacggcaaa gaattgggagctgactgcctctgcgagcca ccagccgccgggtgtttaccctcaggggca ttcagatactactgtggctatctctacttc caccgtcctcttgtgcggcttgtctgctgt gtctcttctggcttgctatttgaaaagtag acagacaccaccccttgcaagtgtcgagat ggaagcgatggaggcattgcctgtgacctg gggaaccagtagtagggacgaggacctgga aaattgtagtcaccacctgtga SEQ ID NO: 59 DNA ssVHsp-P4-BB-sIL15-LSP atggactggacatggcgg atactcttcctcgtcgctgctgcaaccgga gcccacagccaggtgcagctccagcagtct gggccaggtttggtgactcctagtcagaca ttgagcttgacttgtgctatcagcggagac tctgtttcatctaattctgcaacttggaac tggattcggcagtcccccagccgggggctc gagtggttgggtcggacctactatcggagc aaatggtacaatgactatgcagtgagcgtc aaatcaagaatgagcatcaatcctgacaca agcaagaaccagtttagccttcagcttaat agcgtgactccagaggacacagctgtgtac tattgcgcgagaggcatgatgacatactat tacggaatggacgtgtggggccagggaact actgttacagtgtcaagcggaatcctcggt agcggaggcggcggttccggcggagggggt agtggtggcgggggtagtcaacctgtgctg acccagagcagctctcttagtgctagccca ggtgcaagtgcaagtcttacctgtacactg cgctccggtattaatgtgggcccttaccga atttactggtaccagcagaaaccaggctcc cctccccagtatctgctgaactataagtct gactcagacaaacagcagggctccggtgtg ccatcccgatttagtggctcaaaggatgct agtgcaaatgccggtgttctcctgatcagc ggactcagatcagaggacgaagcagactat tactgtatgatttggcatagcagcgctgct gtcttcggaggagggactcagctcactgtc ttgagtcgggccgctgcacctaccactacc cctgcccctcgaccccctactcccgcccca actatcgcatcccaaccactctctctcaga cccgaagcctgtagacccgcagccggtggc gctgtgcatactcgcggacttgattttgct tgtgatatttatatctgggccccccttgcc ggaacttgtggagttctcctgctgtctctc gtaatcaccctttattgtaacaaacggggg cgcaaaaaacttctttacattttcaagcag ccctttatgcggcccgtgcagaccacacag gaagaagatggctgcagctgcaggttccca gaggaagaagagggcggctgcgagctgcga gtaaagttcagccggagcgccgatgcacct gcataccagcagggtcagaaccagctctac aatgagctgaacctgggcagaagagaggaa tatgatgtactcgacaagagaaggggacgc gatccagagatgggcggcaaaccacggcgg aaaaatccgcaggaggggctctataacgag ctccagaaggacaagatggcagaagcctac tcagaaattggcatgaaaggagagagaagg aggggaaagggccatgatggcctttaccaa gggttgtctactgccaccaaggatacgtac gatgcactccatatgcaggctcttcctccc cgaggttcaggcgcaacaaatttttcactt cttaaacaagctggcgatgtcgaggaaaac ccaggtcccatgcggatctctaaaccccac ttgcggagcatttctatccagtgttatctt tgcctcctgcttaactcccactttctcaca gaagcagggatacacgtgttcatcctgggc tgtttttctgccggtctccccaaaacagaa gccaactgggtgaatgtgatcagtgatctt aagaaaatagaagacctcatccagtcaatg cacatcgatgccaccttgtacactgagagc gacgtgcacccttcctgcaaggtgacagct atgaagtgcttcctgcttgagctccaggtc atatcccttgagtctggagatgcaagtatc cacgatacggtggaaaaccttattatactg gccaataattctctttcttccaatggcaat gttaccgaatcagggtgtaaagagtgcgaa gagctggaggagaaaaatatcaaagagttt ttgcagtcatttgtgcacatcgtccagatg tttattaatacaagttga SEQ ID NO: 60 DNA ssVHsp-P4-BB-mIL15/Ra-LSP-CCL19 atggattggacctggcgaatact cttcctcgtcgcagcggccactggtgccca ttcacaagtccaactgcagcagagcggacc tggcctggtgacacccagtcagactctcag cctgacttgtgcaatcagcggcgatagtgt gtctagtaattctgcaacatggaactggat cagacaatcaccaagtcggggactggagtg gctcggtagaacctattataggtccaaatg gtataacgattatgcagtgtccgtgaagtc ccgaatgtctatcaaccctgatactagtaa gaatcaattcagtctgcagcttaacagcgt aacccccgaagatactgctgtgtattactg tgcccggggtatgatgacttactactacgg aatggatgtgtgggggcagggaacaaccgt tactgtttcatccggcattctcgggagcgg aggcggtggaagcggtgggggagggtccgg gggaggaggatctcagcctgttcttactca atcttcttccctctccgcctcacccggggc ctccgcctcactgacctgcactctgcgatc aggcatcaacgttgggccttatagaatcta ctggtaccagcaaaagcctggatcaccgcc ccagtacctgctgaactataaatcagactc agacaagcagcagggctccggcgtgccgag tcgatttagcgggagcaaggacgcgtctgc taatgccggcgtgcttctcatcagcgggct ccgcagtgaggatgaggcagattactactg catgatttggcatagcagtgcagccgtatt tggcggaggaacacagctgactgtcctctc tcgcgccgccgctccgaccaccacccctgc accacgcccacctactcctgcgccaaccat tgccagccagcctctctctctccgacccga ggcctgtagacctgccgctggcggtgcagt tcatactcggggtctcgatttcgcctgcga catctacatctgggcaccactggctggcac ttgtggcgttttgctcctgtccctggtgat cactctctactgtaataagagggggaggaa gaaactcctgtatattttcaaacaaccctt tatgcgccctgtccaaaccacccaggaaga agatggatgtagttgcagattcccagaaga agaggagggtgggtgtgaacttagggtgaa gtttagtcgcagtgccgacgctcccgctta ccaacagggtcagaaccaactctacaatga gctgaatctggggaggcgcgaagaatacga cgttctggataaaagacgcggccgcgaccc cgagatgggcgggaaaccgcggagaaagaa cccacaggaaggattgtacaatgagctcca gaaagataagatggcagaagcctactccga gatcggcatgaagggggagcgaaggcgcgg gaaaggacacgatgggctgtaccagggtct ttcaaccgcgacaaaggacacctatgatgc tctccatatgcaggccctcccgccacgcgg aagtggagcaactaattttagccttctgaa acaagctggcgatgttgaggaaaatcctgg gccgatgcgcattagcaagccacatctgag gagtatcagcatccagtgctacctttgcct gctgctcaactctcactttctgacagaagc tggcatccacgtcttcatcctggggtgctt cagcgccggcttgccgaagaccgaagccaa ctgggtgaatgtgatctccgacctcaagaa gatcgaggacctgatccagagtatgcatat tgatgctacactttacaccgagtccgatgt tcaccctagttgtaaggtgactgccatgaa atgtttcttgctggagcttcaggtaataag ccttgagtctggggatgcaagcattcatga cacggttgagaatctcatcatcctggcaaa taattcactgtcttcaaatggtaacgttac agagagcggctgtaaggagtgcgaagagct tgaagagaaaaacatcaaggaattcctcca gagtttcgtgcacatcgtgcaaatgttcat caacacgagctctggaggcggatcaggagg cggaggatcaggggggggagggtcaggcgg agggggatctggtggaggcagccttcaaat cacatgcccgccacctatgtccgttgagca cgccgacatatgggtgaagtcatattcact gtatagtcgggagaggtacatttgtaattc aggtttcaagcgaaaagctgggacatcaag cctgacagaatgcgtacttaacaaggccac aaatgtcgcccattggaccactccgagtct gaagtgtatacgagatcccgcactggtgca ccagcgacctgctccccctagtacagtaac aaccgcgggcgttacgccccagcctgaatc cctgagcccatctggcaaggagcctgcagc tagctctccgagcagcaataatactgcagc gaccactgcagccatcgtccccggctccca gctcatgcctagtaaaagtccgtctacagg aacgaccgaaatctccagccacgagtctag tcacgggaccccgagtcagaccactgccaa gaactgggagcttacggccagtgcctccca tcaacccccgggcgtctacccgcaaggcca tagcgacaccacagtcgccattagcacatc tactgtcctcttgtgcgggctctccgctgt gtccctcctggcctgttatctcaagagcag acagacccccccattggcaagcgttgagat ggaggcaatggaggctctgcccgttacttg ggggacttcttcacgcgacgaggatctgga gaactgctcccaccacctgggaagtggtgc cacaaatttcagcctgctcaagcaggccgg ggatgttgaagagaacccagggccgatggc cctcttgctcgcactgtccctcctggtcct gtggacatcacccgcccccaccctgtccgg cacgaatgacgcagaagactgctgcctgtc tgtcacgcagaaacccatccccggctatat agtgcggaacttccattacctgctgatcaa ggacggatgtagggtgccagccgtcgtctt caccaccctgcgagggcgccagctgtgcgc tcctcctgaccagccctgggtggagcggat cattcaacgcttgcagcgcacctcagcaaa aatgaaaagaagaagtagttga SEQ ID NO: 61 DNA ssVHsp-P4-BB-sIL15-LSP-CCL19 atggattggacctggcgaatact cttcctcgtcgcagcggccactggtgccca ttcacaagtccaactgcagcagagcggacc tggcctggtgacacccagtcagactctcag cctgacttgtgcaatcagcggcgatagtgt gtctagtaattctgcaacatggaactggat cagacaatcaccaagtcggggactggagtg gctcggtagaacctattataggtccaaatg gtataacgattatgcagtgtccgtgaagtc ccgaatgtctatcaaccctgatactagtaa gaatcaattcagtctgcagcttaacagcgt aacccccgaagatactgctgtgtattactg tgcccggggtatgatgacttactactacgg aatggatgtgtgggggcagggaacaaccgt tactgtttcatccggcattctcgggagcgg aggcggtggaagcggtgggggagggtccgg gggaggaggatctcagcctgttcttactca atcttcttccctctccgcctcacccggggc ctccgcctcactgacctgcactctgcgatc aggcatcaacgttgggccttatagaatcta ctggtaccagcaaaagcctggatcaccgcc ccagtacctgctgaactataaatcagactc agacaagcagcagggctccggcgtgccgag tcgatttagcgggagcaaggacgcgtctgc taatgccggcgtgcttctcatcagcgggct ccgcagtgaggatgaggcagattactactg catgatttggcatagcagtgcagccgtatt tggcggaggaacacagctgactgtcctctc tcgcgccgccgctccgaccaccacccctgc accacgcccacctactcctgcgccaaccat tgccagccagcctctctctctccgacccga ggcctgtagacctgccgctggcggtgcagt tcatactcggggtctcgatttcgcctgcga catctacatctgggcaccactggctggcac ttgtggcgttttgctcctgtccctggtgat cactctctactgtaataagagggggaggaa gaaactcctgtatattttcaaacaaccctt tatgcgccctgtccaaaccacccaggaaga agatggatgtagttgcagattcccagaaga agaggagggtgggtgtgaacttagggtgaa gtttagtcgcagtgccgacgctcccgctta ccaacagggtcagaaccaactctacaatga gctgaatctggggaggcgcgaagaatacga cgttctggataaaagacgcggccgcgaccc cgagatgggcgggaaaccgcggagaaagaa cccacaggaaggattgtacaatgagctcca gaaagataagatggcagaagcctactccga gatcggcatgaagggggagcgaaggcgcgg gaaaggacacgatgggctgtaccagggtct ttcaaccgcgacaaaggacacctatgatgc tctccatatgcaggccctcccgccacgcgg aagtggagcaactaattttagccttctgaa acaagctggcgatgttgaggaaaatcctgg gccgatgcgcatctccaagccccatctgag gagcatcagcatccagtgctacctgtgtct gctgctcaacagccacttcctgacggaagc aggcattcatgtctttatcctgggatgctt ttctgccggcctgccaaagacagaagcaaa ctgggttaacgttatcagtgatctgaaaaa aatcgaggacctgatccagtccatgcatat tgacgctacgctgtatacagagtccgacgt ccacccatcatgcaaggtgaccgctatgaa gtgtttcctgctggaactgcaggttatcag cttggaaagtggcgacgcttccattcacga tacggtggagaacttgataatccttgcgaa taatagtctgagcagcaacggcaacgttac tgaaagcgggtgcaaagaatgtgaagagct cgaagagaaaaacatcaaagaatttttgca gtctttcgtgcatattgttcagatgtttat taacaccagtggatcaggagcaactaactt ctctcttcttaagcaagctggcgatgtaga ggaaaaccctgggcctatggccctcttgct cgcactgtccctcctggtcctgtggacatc acccgcccccaccctgtccggcacgaatga cgcagaagactgctgcctgtctgtcacgca gaaacccatccccggctatatagtgcggaa cttccattacctgctgatcaaggacggatg tagggtgccagccgtcgtcttcaccaccct gcgagggcgccagctgtgcgctcctcctga ccagccctgggtggagcggatcattcaacg cttgcagcgcacctcagcaaaaatgaaaag aagaagtagttga SEQ ID NO: 63 /AA / CD8TM域 IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYC SEQ ID NO: 64/AA / CD8鉸鏈 TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD SEQ ID NO: 65/ AA/ ssVHsp-P4-CD8鉸鏈-TM-41BB-CD3z MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSSGILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLSPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR SEQ ID NO: 66 /AA/ ssVHsp-P4-CD8鉸鏈-TM-41BB-CD3z MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSSGILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR SEQ ID NO: 67 /AA/ ssVHsp P4-CD8鉸鏈-TM-41BB-CD3z MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSSGILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLSPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR SEQ ID NO: 68 /AA/ ssVHsp-P4-CD8鉸鏈-TM-41BB-CD3z MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSSGILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR SEQ ID NO: 69 /AA/ ssVHsp-P4-CD8鉸鏈-TM-41BB-CD3z MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSSGILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLSAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR SEQ ID NO: 70 /AA/ ssVHsp-P4-CD8鉸鏈-TM-41BB-CD3z MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSSGILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLSAAATTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR SEQ ID NO: 71 /AA/ ssVHsp-P4-CD8鉸鏈-TM-41BB-CD3z MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSSGILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLSAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR SEQ ID NO: 72 /AA/ ssVHsp-P4-CD8鉸鏈-TM-41BB-CD3z MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSSGILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLSRAAATTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR SEQ ID NO: 73 /AA/ ssVHsp-P4-CD8鉸鏈-TM-41BB-CD3z MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSSGILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLSRAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR SEQ ID NO: 74 /AA/ ssVHsp-P4-CD8鉸鏈-TM-41BB-CD3z MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSSGILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLSRAAATTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR SEQ ID NO: 75 /AA/ ssVHsp-P4-CD8鉸鏈-TM-41BB-CD3z MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSSGILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLSAAATTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR
無
圖1A示出示範性載體之卡通表示，該載體包含編碼特異性識別間皮素之嵌合抗原受體(CAR)之多核苷酸及編碼IL-15之多核苷酸。 圖1B示出示範性載體之卡通表示，該載體包含編碼特異性識別間皮素之嵌合抗原受體(CAR)之多核苷酸、編碼IL-15之多核苷酸及編碼CCL19之多核苷酸。 圖1C示出經修飾之免疫細胞之卡通表示，該細胞表現特異性識別間皮素之CAR及IL-15。 圖1D示出經修飾之免疫細胞之卡通表示，該細胞表現特異性識別間皮素之CAR、IL-15及CCL19。 圖2示出藉由使用抗體集(Vδ1 Myltenyi FITC、Vδ2 Miltenyi APC、γδTCR BD BV510、CD3 BioLegend APC/Cy7及αβTCR eBioscience FITC)，將所獲取之細胞染色而獲得的結果。經填充之峰示出未染色組之結果，且空白峰示出使用各抗原特異性抗體的染色結果。 圖3示出藉由使用抗體集(Vδ1 Miltenyi FITC、Vδ2 Miltenyi APC、γδTCR BD BV510、CD3 BioLegend APC/Cy7及αβTCR eBioscience FITC)，將所獲取之細胞染色而獲得的流動式細胞測量術之結果。 圖4示出iPS細胞衍生之γδT細胞(iγδT細胞)之細胞增殖之量測結果。縱軸示出細胞增殖速率，且橫軸示出自開始用抗CD3抗體(UCHT1)及抗CD30抗體刺激之日起過去的天數。 圖5示出藉由將Vγ9Vδ2TCR基因引入至iPS細胞中所分化之γδT細胞(iγ9δ2T細胞)之細胞膜表面上CD3及γδTCR分子之表現。 圖6示出iMesothelin-CAR/IL-15γ9δ2T細胞之細胞增殖之量測結果。縱軸示出細胞之數目，且橫軸示出自開始用抗CD3抗體(UCHT1)刺激之日起過去的天數。 圖7A示出腫瘤細胞株之間皮素染色。 圖7B示出iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T細胞在體外以劑量依賴性方式殺傷間皮素陽性細胞株。 圖8示出包含共刺激域CD28或4-1BB之iMeso-CAR/IL-15γδT細胞勝過其他所測試之共刺激域。 圖9A-圖9D示出具有mIL15/Ra或sushi15之iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T細胞展現出比其他所測試之iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T細胞高的抗腫瘤功效。圖9A及圖9B示出支組(Arm) 1方案(5x10 6個細胞)。圖9C及圖9D示出支組2方案(1.5x10 6個細胞)。 圖9E示出包含4-1BB之iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T細胞展現出比包含CD28之iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T細胞高的抗腫瘤效應。 圖10示出使用腫瘤內iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T細胞注射的GSU s.c.異種移植物。表現mIL15/Ra或sushi15之iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T細胞展現出比其他所測試之iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T細胞高的功效。 圖11示出在腹膜內GSU-redLuc異種移植物模型中i.p.及i.v.投與之iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T細胞之功效。 圖12A示出藉由在指示之時間點執行之流動式細胞測量術及FACS表型分析(phenotyping)所計數之CAR-T細胞。 圖12B示出在共表現針對Msln之CAR以及TGFβ調節劑(例如，TGFβR2-VH或dnTGFbR2)或針對GFP之對照VH (Msln-對照VH)的抗Msln CAR-T細胞中之百分比細胞毒性。
TW202313979A_111128457_SEQL.xml

Claims (67)

  1. 一種分離核酸分子，其包含：第一多核苷酸，其編碼包含特異性識別人類間皮素之抗體及4-1BB胞內區之嵌合抗原受體(CAR)；及第二多核苷酸，其編碼介白素15 (IL-15)。
  2. 如請求項1之分離核酸分子，其中該CAR進一步包含CD8鉸鏈區、CD8跨膜區及CD3ζ胞內區。
  3. 如請求項1或2之分離核酸分子，其中該分離核酸分子包含編碼CAR之該第一多核苷酸及編碼IL-15之該第二多核苷酸。
  4. 如請求項1-3中任一項之分離核酸分子，其進一步包含編碼CCL19之第三多核苷酸。
  5. 如請求項1-4中任一項之分離核酸分子，其中該IL-15為人類IL-15。
  6. 如請求項1-5中任一項之分離核酸分子，其中該CCL19為人類CCL19。
  7. 如請求項1-6中任一項之分離核酸分子，其中該抗體包含重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)，其中該VH包含有包含SEQ ID NO: 16-18之三個互補決定區(CDR)，且其中該VL包含有包含SEQ ID NO: 19-21之三個CDR。
  8. 如請求項1-7中任一項之分離核酸分子，其中該VH包含SEQ ID NO: 22，且該VL包含SEQ ID NO: 23。
  9. 如請求項1-8中任一項之分離核酸分子，其中該抗體包含單鏈可變片段(scFv)形式。
  10. 如請求項1-9中任一項之分離核酸分子，其中該抗體包含SEQ ID NO: 1。
  11. 如請求項1-10之分離核酸分子，其中該4-1BB胞內區包含SEQ ID NO: 24。
  12. 如請求項2之分離核酸分子，其中該CD3ζ胞內區包含SEQ ID NO: 25。
  13. 如請求項2或12之分離核酸分子，其中該4-1BB胞內區在該分離核酸分子中在該CD3ζ胞內區的上游。
  14. 如請求項2之分離核酸分子，其中該CD8鉸鏈區包含SEQ ID NO: 26。
  15. 如請求項2之分離核酸分子，其中該CD8跨膜區包含SEQ ID NO: 27。
  16. 如請求項2或14之分離核酸分子，其中該CAR進一步包含連接該抗體與該CD8鉸鏈區的3至10個胺基酸殘基長度之肽連接子。
  17. 如請求項16之分離核酸分子，其中該肽連接子包含SEQ ID NO: 4。
  18. 如請求項1-17中任一項之分離核酸分子，其中該CAR進一步包含傳訊肽。
  19. 如請求項18之分離核酸分子，其中該傳訊肽在該分離核酸分子中位於特異性識別人類間皮素之該抗體的上游。
  20. 如請求項18或19之分離核酸分子，其中該傳訊肽包含SEQ ID NO: 2。
  21. 如請求項1-20中任一項之分離核酸分子，其中編碼IL-15之該第二多核苷酸及視情況編碼CCL19之該第三多核苷酸各自獨立地在包含編碼自身裂解2A肽(2A肽)之多核苷酸的啟動子下轉錄。
  22. 如請求項21之分離核酸分子，其中該2A肽包含SEQ ID NO: 5。
  23. 如請求項1-22中任一項之分離核酸分子，其中該IL-15包含選自SEQ ID NO: 8-11之序列。
  24. 如請求項1-22中任一項之分離核酸分子，其中該IL-15包含選自SEQ ID NO: 28或29之序列。
  25. 如請求項1-24中任一項之分離核酸分子，其中該CCL19包含SEQ ID NO: 13。
  26. 如請求項1-25中任一項之分離核酸分子，其中編碼該CAR之該第一多核苷酸及編碼IL-15之該第二多核苷酸在自5'末端至3'末端呈編碼該CAR之該第一多核苷酸-編碼IL-15之該第二多核苷酸排列在該核酸分子中。
  27. 如請求項1-25中任一項之分離核酸分子，其中編碼該CAR之該第一多核苷酸、編碼IL-15之該第二多核苷酸及編碼CCL19之該第三多核苷酸自5'末端至3'末端呈編碼該CAR之該第一多核苷酸-編碼IL-15之該第二多核苷酸–編碼CCL19之該第三多核苷酸排列在該核酸分子中。
  28. 如請求項1-27中任一項之分離核酸分子，其中該分離核酸分子編碼包含SEQ ID NO: 14或31之多肽。
  29. 如請求項1-27中任一項之分離核酸分子，其中該分離核酸分子編碼包含SEQ ID NO: 34、35、36或15之多肽。
  30. 如請求項1-27中任一項之分離核酸分子，其中該分離核酸分子包含SEQ ID NO: 37、38、39或40。
  31. 一種載體，其包含如請求項1-30中任一項之核酸分子。
  32. 如請求項31之載體，其中該載體為病毒載體，視情況表現載體。
  33. 如請求項32之載體，其中該病毒載體選自反轉錄病毒載體、慢病毒載體、腺病毒載體及腺病毒相關病毒(AAV)載體。
  34. 如請求項31或32之載體，其中該病毒載體為pSFG載體、pMSGV載體或pMSCV載體。
  35. 如請求項31之載體，其中該載體為質體。
  36. 一種免疫細胞，其包含如請求項1-30中任一項之核酸分子或如請求項31-35中任一項之載體。
  37. 如請求項36之免疫細胞，其中該免疫細胞進一步包含編碼γ-TCR (γTCR)之多核苷酸及編碼δ-TCR (δTCR)之多核苷酸。
  38. 如請求項36之免疫細胞，其中該γTCR為Vγ9 TCR，且該δTCR為Vδ2 TCR。
  39. 一種免疫細胞，其表現： a) 嵌合抗原受體(CAR)，其包含特異性識別人類間皮素之抗體及4-1BB胞內區；及 b) IL-15；及 c) 視情況CCL19。
  40. 如請求項39之免疫細胞，其中該CAR進一步包含CD8鉸鏈區、CD8跨膜區及CD3ζ胞內區。
  41. 如請求項36-40中任一項之免疫細胞，其中該免疫細胞為T細胞、自然殺手細胞(NK)、B細胞、抗原呈現細胞或顆粒球，視情況T細胞或NK細胞。
  42. 如請求項36-41中任一項之免疫細胞，其中該免疫細胞衍生自誘導性多能幹細胞(iPSC)。
  43. 如請求項36-42中任一項之免疫細胞，其中該免疫細胞不表現αTCR及/或βTCR，視情況αβTCR。
  44. 如請求項36-43中任一項之免疫細胞，其中該免疫細胞表現γδTCR。
  45. 如請求項44之免疫細胞，其中該γδTCR包含Vγ9 TCR及Vδ2TCR。
  46. 一種醫藥組成物，其包含如請求項35-44中任一項之免疫細胞及醫藥學上可接受之添加劑。
  47. 一種治療表現間皮素之癌症的方法，其包含向有需要之個體投與如請求項35-44中任一項之免疫細胞或如請求項46之醫藥組成物。
  48. 如請求項47之方法，其中該表現間皮素之癌症為實性瘤，視情況選自間皮瘤、結直腸癌、胰腺癌、胸腺癌、膽管癌、肺癌、皮膚癌、乳癌、前列腺癌、膀胱癌、陰道癌、頸癌、子宮癌、肝癌、腎癌、脾癌、氣管癌、支氣管癌、胃癌、食道癌、膽囊癌、睪丸癌、卵巢癌及骨癌。
  49. 如請求項47之方法，其中該表現間皮素之癌症為造血癌症。
  50. 如請求項47之方法，其中該表現間皮素之癌症為肉瘤，視情況選自軟骨肉瘤、尤因肉瘤、惡性血管內皮瘤、惡性神經鞘瘤、骨肉瘤及軟組織肉瘤。
  51. 如請求項47-50中任一項之方法，其中該表現間皮素之癌症為轉移性癌症。
  52. 如請求項47-50中任一項之方法，其中該表現間皮素之癌症為復發癌症或難治性癌症。
  53. 如請求項47-52中任一項之方法，其中該方法進一步包含向該個體投與額外治療劑或額外治療方案。
  54. 如請求項53之方法，其中該額外治療劑包含化學治療劑、免疫治療劑、靶向療法、輻射療法或其組合。
  55. 如請求項53之方法，其中該額外治療方案包含第一線療法。
  56. 如請求項53之方法，其中該額外治療方案包含手術。
  57. 如請求項53-56中任一項之方法，其中如請求項36-44中任一項之免疫細胞或如請求項45之醫藥組成物與該額外治療劑同時投與。
  58. 如請求項52-55中任一項之方法，其中如請求項36-44中任一項之免疫細胞或如請求項45之醫藥組成物與該額外治療劑依序投與。
  59. 如請求項57之方法，其中在投與該額外治療劑之前，將如請求項36-44中任一項之免疫細胞或如請求項5之醫藥組成物投與至該個體。
  60. 如請求項57之方法，其中在投與該額外治療劑之後，將如請求項35-43中任一項之免疫細胞或如請求項45之醫藥組成物投與至該個體。
  61. 如請求項46-59中任一項之方法，其中該個體為人類。
  62. 一種減少腫瘤細胞增殖之方法，其包含使該腫瘤細胞與如請求項36-45中任一項之免疫細胞接觸，由此減少該腫瘤細胞增殖。
  63. 如請求項62之方法，其中該方法為 體外方法。
  64. 如請求項62之方法，其中該方法為 體內方法。
  65. 一種用於產生表現特異性識別人類間皮素之細胞表面分子、IL-15及視情況CCL19的免疫細胞的方法，該方法包含： 將如請求項1-30中任一項之核酸分子或如請求項31-35中任一項之載體引入免疫細胞以誘導該免疫細胞表現特異性識別人類間皮素之細胞表面分子、IL-15及視情況CCL19。
  66. 如請求項65之方法，其中該免疫細胞為T細胞、自然殺手細胞(NK)、B細胞、抗原呈現細胞或顆粒球，視情況T細胞或NK細胞。
  67. 一種套組，其包含如請求項1-30中任一項之核酸分子、如請求項31-35中任一項之載體、如請求項36-45中任一項之免疫細胞或如請求項46之醫藥組成物及使用說明書。
TW111128457A 2021-07-29 2022-07-28 特異性靶向間皮素的ｃａｒ表現免疫細胞及其用途 TW202313979A (zh)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202163227115P 2021-07-29 2021-07-29
US63/227,115 2021-07-29
US202263306862P 2022-02-04 2022-02-04
US63/306,862 2022-02-04

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW202313979A true TW202313979A (zh) 2023-04-01

Family

ID=85088244

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW111128457A TW202313979A (zh) 2021-07-29 2022-07-28 特異性靶向間皮素的ｃａｒ表現免疫細胞及其用途

Country Status (10)

Country Link
EP (1) EP4377355A2 (zh)
JP (1) JP2024528052A (zh)
KR (1) KR20240038723A (zh)
AU (1) AU2022316980A1 (zh)
CA (1) CA3227745A1 (zh)
CO (1) CO2024001484A2 (zh)
IL (1) IL309914A (zh)
MX (1) MX2024001364A (zh)
TW (1) TW202313979A (zh)
WO (1) WO2023009700A2 (zh)

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9272002B2 (en) 2011-10-28 2016-03-01 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Fully human, anti-mesothelin specific chimeric immune receptor for redirected mesothelin-expressing cell targeting
CN111182909A (zh) * 2017-05-01 2020-05-19 朱诺治疗学股份有限公司 细胞疗法与免疫调节化合物的组合
WO2018231759A1 (en) 2017-06-12 2018-12-20 Obsidian Therapeutics, Inc. Pde5 compositions and methods for immunotherapy
US20200399383A1 (en) * 2018-02-13 2020-12-24 Novartis Ag Chimeric antigen receptor therapy in combination with il-15r and il15
MX2021002373A (es) 2018-08-31 2021-07-15 Noile Immune Biotech Inc Celulas t que expresan car y vector de expresion de car.

Also Published As

Publication number Publication date
WO2023009700A3 (en) 2023-04-13
EP4377355A2 (en) 2024-06-05
WO2023009700A2 (en) 2023-02-02
MX2024001364A (es) 2024-02-27
IL309914A (en) 2024-03-01
JP2024528052A (ja) 2024-07-26
CA3227745A1 (en) 2023-02-02
CO2024001484A2 (es) 2024-02-26
KR20240038723A (ko) 2024-03-25
AU2022316980A1 (en) 2024-01-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7451627B2 (ja) キメラ受容体及びその使用方法
US20230124464A1 (en) Chimeric receptors to flt3 and methods of use thereof
KR102612313B1 (ko) 인간화 항-bcma 키메라 항원 수용체를 사용한 암의 치료
CN108137669B (zh) 抗ror1嵌合抗原受体
TWI719942B (zh) 使用ｃｄ３３嵌合抗原受體治療癌症
TWI718992B (zh) 使用cll-1嵌合抗原受體治療癌症
TW202016139A (zh) Bcma 嵌合抗原受體及其用途
JP2023123445A (ja) 改変ｔ細胞に関する方法および組成物
TW202019474A (zh) 抗bcma嵌合抗原受體之用途
JP2024506557A (ja) 修飾された腫瘍浸潤リンパ球を作製する方法及び養子細胞療法におけるそれらの使用
JP2018500337A (ja) 炭酸脱水酵素ｉｘ特異的キメラ抗原受容体およびその使用方法
JP2024515189A (ja) 細胞免疫療法におけるキメラ共刺激受容体、ケモカイン受容体、及びそれらの使用
JP2023525720A (ja) Ｉｎ ｖｉｖｏ形質導入のためのベクター及び方法
JP2024500403A (ja) 腫瘍浸潤リンパ球によるがんの治療
US20210324083A1 (en) Methods and compositions comprising b7h3 chimeric antigen receptors
JP2024500847A (ja) 適合可能な受容体特異性を有するキメラ抗原受容体システム
US20230381312A1 (en) Redirecting glucose metabolism to limit stress and improve adoptive cell therapy
TW202313979A (zh) 特異性靶向間皮素的ｃａｒ表現免疫細胞及其用途
CN118019765A (zh) 特异性靶向间皮素的表达car的免疫细胞及其用途
KR20240040068A (ko) 메조텔린을 특이적으로 표적화하는 조작된 면역 세포 및 이의 용도
TW202413646A (zh) 免疫細胞療法
WO2023122580A2 (en) Polypeptides targeting cd105 + cancers
EA044866B1 (ru) Химерные рецепторы к flt3 и способы их применения