KR20240038723A

KR20240038723A - 메소텔린을 특이적으로 표적화하는 car-발현 면역 세포 및 이의 용도

Info

Publication number: KR20240038723A
Application number: KR1020247003396A
Authority: KR
Inventors: 개리 샤피로; 치히로 타케; 요시아키 카사이; 싱위에 헤; 찬탈 쿤
Original assignee: 다케다 야쿠힝 고교 가부시키가이샤
Priority date: 2021-07-29
Filing date: 2022-07-28
Publication date: 2024-03-25
Also published as: WO2023009700A2; AU2022316980A1; CA3227745A1; TW202313979A; IL309914A; CO2024001484A2; WO2023009700A3; EP4377355A2

Abstract

메소텔린을 특이적으로 인식하고 IL-15 및 임의로 CCL19를 발현하는 조작된 면역 세포가 본원에 개시된다. 또한, 메소텔린을 특이적으로 인식하는 항체, 및 4-1BB 세포내 영역을 포함하는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드; 및 IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드; 및 임의로 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 단리된 핵산 분자, 벡터, 핵산 분자를 포함하는 약학 조성물, 및 조작된 면역 세포를 사용하는 방법이 본원에 개시된다.

Description

메소텔린을 특이적으로 표적화하는 CAR-발현 면역 세포 및 이의 용도

관련 출원에 대한 교차-참조

본 출원은 35 U.S.C § 119(e) 하에서 2022 년 2 월 4 일에 출원된 미국 가출원 번호 63/306,862 및 2021 년 7 월 29 일에 출원된 미국 가출원 번호 63/227,115에 대해 우선권을 주장하며, 이는 그 전체가 본원에 참조로 원용된다.

기술 분야

본 발명은 인간 메소텔린을 특이적으로 인식하는 세포 표면 분자, 인터류킨 15 (IL-15) 및 임의로 케모카인 (C-C 모티프) 리간드 19 (CCL19)를 발현하는 면역 세포, 면역 세포를 포함하는 약학 조성물, 메소텔린을 특이적으로 인식하는 세포 표면 분자를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 임의로 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터, 사용 방법, 및 면역 세포에 인간 메소텔린을 특이적으로 인식하는 세포 표면 분자를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 임의로 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 도입하는 단계를 포함하는, 인간 메소텔린을 특이적으로 인식하는 세포 표면 분자, IL-15 및 임의로 CCL19를 발현하는 면역 세포의 생산 방법에 관한 것이다.

악성 종양은 전 세계적으로 많은 사람들에게 영향을 미치는 질환이며, 일반적으로 화학요법, 방사선요법 또는 수술 요법에 의해 널리 치료되고 있다. 그러나, 이상 반응의 발생, 일부 기능의 상실, 및 치료될 수 없는 반복성 또는 전이와 같은 다양한 문제가 발생하고 있다. 그에 따라, 최근에는 환자의 보다 높은 삶의 질 (QOL)을 유지하기 위해 면역 세포 요법의 개발이 진행되고 있다. 면역 세포 요법은 환자로부터 면역 세포를 수확하고, 수확된 면역 세포의 면역 기능을 향상시키는 절차를 수행하고, 세포를 증폭시키고, 세포를 환자에 다시 투여하는 것을 포함한다. 예를 들어, 면역 세포 요법은 환자로부터 T 세포를 수집하고, 키메라 항원 수용체 (구성적 안드로스탄 수용체: 이하, "CAR"로서 또한 지칭됨)를 인코딩하는 핵산을 T 세포에 도입하고, T 세포를 환자에 다시 재투여하는 것을 포함할 수 있다. CAR-T 요법을 이용하여 혈액암에서의 초기 성공이 관찰되었지만; 고형 종양의 치료에서 생명을 위협하는 독성 및 실질적인 효험의 결여가 또한 관찰되었다. 그에 따라, 개선된 CAR-T 요법이 필요하다.

특허 문헌 1: WO2020/045610 특허 문헌 2: US2020/0101142 특허 문헌 3: WO2013/063419

T 세포를 이용한 면역요법에는 고형 종양에 대한 불충분한 트래피킹, 정상 조직에 대한 높은 독성, 면역억제성 종양 미세환경을 극복하기에 불능, 및 내인성 면역 반응의 불충분한 활성화와 같은 다수의 문제가 존재한다. 추가로, 메소텔린을 특이적으로 인식하는 CAR을 발현하도록 변형된 면역 세포는 최소한의 치료적 효험을 나타내는 것으로 나타났다. 따라서, 해결해야 할 객관적인 기술적 과제는 메소텔린-발현 암을 표적화하는 최적화된 변형된 면역 세포를 제공하는 것이다.

본 발명자들은 메소텔린을 특이적으로 인식하는 CAR, IL-15 및 임의로 CCL19를 발현하도록 변형된 면역 세포가 면역요법의 치료적 효험을 개선시키고 생존율을 개선시킬 수 있음을 발견하였다.

인간 메소텔린을 특이적으로 인식하는 항체 및 4-1BB 세포내 영역을 포함하는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 인코딩하는 제1 폴리뉴클레오티드, 및 인터류킨 15 (IL-15)를 인코딩하는 제2 폴리뉴클레오티드를 포함하는, 단리된 핵산 분자. 일부 실시양태에서, CAR은 CD8 힌지 영역, CD8 막관통 영역 및 CD3ζ 세포내 영역을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 단리된 핵산 분자는 CAR을 인코딩하는 제1 폴리뉴클레오티드 및 IL-15를 인코딩하는 제2 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 단리된 핵산 분자는 CCL19를 인코딩하는 제3 폴리뉴클레오티드를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, IL-15는 인간 IL-15이다. 일부 실시양태에서, CCL19는 인간 CCL19이다. 일부 실시양태에서, 항체는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하며, 여기서 VH는 서열번호 16-18을 포함하는 3 개의 상보성-결정 영역 (CDR)을 포함하고, VL은 서열번호 19-21을 포함하는 3 개의 CDR을 포함한다. 일부 실시양태에서, VH는 서열번호 22를 포함하고, VL은 서열번호 23을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 단일-쇄 가변 단편 (scFv) 형식을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열번호 1을 포함한다. 일부 실시양태에서, 4-1BB 세포내 영역은 서열번호 24를 포함한다. 일부 실시양태에서, CD3ζ 세포내 영역은 서열번호 25를 포함한다. 일부 실시양태에서, 4-1BB 세포내 영역은 단리된 핵산 분자에서 CD3ζ 세포내 영역의 상류에 있다. 일부 실시양태에서, CD8 힌지 영역은 서열번호 26을 포함한다. 일부 실시양태에서, CD8 막관통 영역은 서열번호 27을 포함한다. 일부 실시양태에서, CAR은 항체 및 CD8 힌지 영역을 연결하는 3 내지 10 개의 아미노산 잔기 길이의 펩티드 링커를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 펩티드 링커는 서열번호 4를 포함한다. 일부 실시양태에서, CAR 분자는 시그널링 펩티드를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 시그널링 펩티드는 단리된 핵산 분자에서 인간 메소텔린을 특이적으로 인식하는 항체의 상류에 위치한다. 일부 실시양태에서, 시그널링 펩티드는 서열번호 2를 포함한다. 일부 실시양태에서, IL-15를 인코딩하는 제2 폴리뉴클레오티드 및 임의로 CCL19를 인코딩하는 제3 폴리뉴클레오티드는 자가-절단 2A 펩티드 (2A 펩티드)를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 프로모터 하에서 각각 독립적으로 전사된다. 일부 실시양태에서, 2A 펩티드는 서열번호 5를 포함한다. 일부 실시양태에서, IL-15는 서열번호 8-11로부터 선택된 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, IL-15는 서열번호 28 또는 29로부터 선택된 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, CCL19는 서열번호 13을 포함한다. 일부 실시양태에서, CAR을 인코딩하는 제1 폴리뉴클레오티드 및 IL-15를 인코딩하는 제2 폴리뉴클레오티드는 핵산 분자에서 5' 말단으로부터 3' 말단으로, CAR을 인코딩하는 제1 폴리뉴클레오티드 - IL-15를 인코딩하는 제2 폴리뉴클레오티드와 같이 배열된다. 일부 실시양태에서, CAR을 인코딩하는 제1 폴리뉴클레오티드, IL-15를 인코딩하는 제2 폴리뉴클레오티드, 및 CCL19를 인코딩하는 제3 폴리뉴클레오티드는 핵산 분자에서 5' 말단으로부터 3' 말단으로, CAR을 인코딩하는 제1 폴리뉴클레오티드 - IL-15를 인코딩하는 제2 폴리뉴클레오티드 - CCL19를 인코딩하는 제3 폴리뉴클레오티드와 같이 배열된다. 일부 실시양태에서, 단리된 핵산 분자는 서열번호 14 또는 31을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 실시양태에서, 단리된 핵산 분자는 서열번호 34, 35, 36, 또는 15를 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 실시양태에서, 단리된 핵산 분자는 서열번호 37, 38, 39, 또는 40을 포함한다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 핵산 분자를 포함하는 벡터가 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, 벡터는 바이러스 벡터, 임의로 발현 벡터이다. 일부 실시양태에서, 바이러스 벡터는 레트로바이러스 벡터, 렌티바이러스 벡터, 아데노바이러스 벡터 및 아데노-연관된 바이러스 (AAV) 벡터로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 바이러스 벡터는 pSFG 벡터, pMSGV 벡터 또는 pMSCV 벡터이다. 일부 실시양태에서, 벡터는 플라스미드이다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 핵산 분자 또는 본원에 기재된 벡터를 포함하는 면역 세포가 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 감마-TCR (γTCR)을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 델타-TCR (δTCR)을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, γTCR은 V 감마 9 TCR (Vγ9 TCR)이고, δTCR은 V 델타 2 TCR (Vδ2TCR)이다.

특정 실시양태에서, 다음을 발현하는 면역 세포가 본원에 개시된다: a) 인간 메소텔린을 특이적으로 인식하는 항체, CD8 힌지 영역, CD8 막관통 영역, 4-1BB 세포내 영역 및 CD3ζ 세포내 영역을 포함하는 키메라 항원 수용체 (CAR); 및 b) IL-15; 및 c) 임의로 CCL19. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 T 세포, 자연 살해 (NK) 세포, B 세포, 항원 제시 세포 또는 과립구, 임의로 T 세포 또는 NK 세포이다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 유도 만능 줄기 세포 (iPSC)로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 알파 TCR (αTCR) 및/또는 베타 TCR (βTCR), 임의로 αβTCR을 발현하지 않는다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 γδTCR을 발현한다. 일부 실시양태에서, γδTCR은 Vγ9 TCR 및 Vδ2TCR을 포함한다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 면역 세포 및 약학적으로 허용가능한 첨가제를 포함하는 약학 조성물이 본원에 개시된다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 면역 세포 또는 본원에 기재된 약학 조성물을 메소텔린-발현 암의 치료를 필요로 하는 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 메소텔린-발현 암을 치료하는 방법이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, 메소텔린-발현 암은 임의로 중피종, 결장직장암, 췌장암, 흉선암, 담관암, 폐암, 피부암, 유방암, 전립선암, 비뇨기 방광암, 질암, 경부암, 자궁암, 간암, 신장암, 비장암, 기관암, 기관지암, 위암, 식도암, 담낭암, 고환암, 난소암, 및 골암으로부터 선택된 고형 종양이다. 일부 실시양태에서, 메소텔린-발현 암은 조혈암이다. 일부 실시양태에서, 메소텔린-발현 암은 임의로 연골육종, 유잉 육종, 악성 혈관내피종, 악성 신경초종, 골육종 및 연조직 육종으로부터 선택된 육종이다. 일부 실시양태에서, 메소텔린-발현 암은 전이성 암이다. 일부 실시양태에서, 메소텔린-발현 암은 재발성 암 또는 불응성 암이다. 일부 실시양태에서, 방법은 추가적인 치료제 또는 추가적인 치료적 양생법을 대상체에 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 추가적인 치료제는 화학요법제, 면역요법제, 표적화된 요법, 방사선 요법, 또는 이들의 조합을 포함한다. 일부 실시양태에서, 추가적인 치료적 양생법은 제1 라인 요법을 포함한다. 일부 실시양태에서, 추가적인 치료적 양생법은 수술을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 면역 세포 또는 본원에 기재된 약학 조성물 및 추가적인 치료제는 동시에 투여된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 면역 세포 또는 본원에 기재된 약학 조성물 및 추가적인 치료제는 순차적으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 면역 세포 또는 본원에 기재된 약학 조성물은 추가적인 치료제의 투여 전에 대상체에 투여된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 면역 세포 또는 본원에 기재된 약학 조성물은 추가적인 치료제의 투여 후에 대상체에 투여된다. 일부 실시양태에서, 대상체는 인간이다.

특정 실시양태에서, 종양 세포를 위에 기재된 면역 세포와 접촉시켜 종양 세포 증식을 감소시키는 단계를 포함하는, 종양 세포 증식을 감소시키는 방법이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, 방법은 생체외 방법이다. 일부 실시양태에서, 방법은 생체내 방법이다.

특정 실시양태에서, 인간 메소텔린을 특이적으로 인식하는 세포 표면 분자, IL-15 및 임의로 CCL19를 발현하는 면역 세포를 생산하는 방법이 본원에 개시되며, 이 방법은 다음을 포함한다: 면역 세포에 위에 기재된 핵산 분자 또는 위에 기재된 벡터를 도입하여, 면역 세포에 의해 인간 메소텔린을 특이적으로 인식하는 세포 표면 분자, IL-15 및 임의로 CCL19의 발현을 유도하는 단계. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 T 세포, 자연 살해 (NK) 세포, B 세포, 항원 제시 세포 또는 과립구, 임의로 T 세포 또는 NK 세포이다.

특정 실시양태에서, 위에 기재된 핵산 분자; 위에 기재된 벡터, 위에 기재된 면역 세포, 또는 위에 기재된 약학 조성물, 및 사용 설명서를 포함하는 키트가 본원에 개시된다.

본 발명의 면역 세포는 메소텔린 (예컨대, 인간 메소텔린)을 발현하는 암세포에 대항하는 세포독성 활성을 가지며, 메소텔린 (예컨대, 인간 메소텔린)을 발현하는 종양의 형성을 억압할 수 있다. 또한, 본 발명의 면역 세포는 암세포의 반복성에 대한 억압적인 효과를 갖는다.

도 1a는 메소텔린을 특이적으로 인식하는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 예시적인 벡터의 만화 표현을 도시한다.
도 1b는 메소텔린을 특이적으로 인식하는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, 및 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 예시적인 벡터의 만화 표현을 도시한다.
도 1c는 메소텔린을 특이적으로 인식하는 CAR 및 IL-15를 발현하는 변형된 면역 세포의 만화 표현을 도시한다.
도 1d는 메소텔린을 특이적으로 인식하는 CAR, IL-15 및 CCL19을 발현하는 변형된 면역 세포의 만화 표현을 도시한다.
도 2는 획득된 세포를 항체 세트 (Vδ1 Myltenyi FITC, Vδ2 Miltenyi APC, γδTCR BD BV510, CD3 BioLegend APC/Cy7 및 αβTCR eBioscience FITC)를 사용하여 염색함으로써 수득된 결과를 도시한다. 채워진 피크는 비-염색군의 결과를 도시하고, 빈 피크는 각각의 항원-특이적 항체를 사용한 염색 결과를 도시한다.
도 3은 획득된 세포를 항체 세트 (Vδ1 Miltenyi FITC, Vδ2 Miltenyi APC, γδTCR BD BV510, CD3 BioLegend APC/Cy7 및 αβTCR eBioscience FITC)를 사용하여 염색함으로써 수득된 유세포 분석법의 결과를 도시한다.
도 4는 iPS 세포-유래된 γδT 세포 (iγδT 세포)의 세포 증식의 측정 결과를 도시한다. 세로 축은 세포 증식률을 도시하고, 가로 축은 항-CD3 항체 (UCHT1) 및 항-CD30 항체를 이용한 자극이 시작된 날로부터 경과된 일수를 도시한다.
도 5는 Vγ9Vδ2TCR 유전자를 iPS 세포에 도입함으로써 분화된 γδT 세포 (iγ9δ2T 세포)의 세포막 표면에서 CD3 및 γδTCR 분자의 발현을 도시한다.
도 6은 i메소텔린-CAR/IL-15γ9δ2T 세포의 세포 증식의 측정 결과를 도시한다. 세로 축은 세포의 갯수를 도시하고, 가로 축은 항-CD3 항체 (UCHT1)를 이용한 자극이 시작된 날로부터 경과된 일수를 도시한다.
도 7a는 종양 세포주에 대한 메소텔린 염색을 도시한다.
도 7b는 iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T 세포가 용량 의존적 방식으로 생체외에서 메소텔린 양성 세포주를 살해시킨다는 것을 도시한다.
도 8은 공동자극 도메인 CD28 또는 4-1BB를 포함하는 iMeso-CAR/IL-15γδT 세포가 테스트된 다른 공동자극 도메인보다 성능이 뛰어나다는 것을 도시한다.
도 9a-도 9d는 mIL15/Ra 또는 sushi15를 갖는 iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T 세포가 테스트된 다른 iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T 세포보다 더 높은 항-종양 효험을 나타낸다는 것을 도시한다. 도 9a 및 도 9b는 아암 1 양생법 (5x10⁶ 개의 세포)을 도시한다. 도 9c 및 도 9d는 아암 2 양생법 (1.5x10⁶개의 세포)을 도시한다.
도 9e는 4-1BB를 포함하는 iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T 세포가 CD28을 포함하는 iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T 세포보다 더 높은 항-종양 효과를 나타낸다는 것을 도시한다.
도 10은 종양내 iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T 세포 주사를 이용한 GSU s.c. 이종이식을 도시한다. mIL15/Ra 또는 sushi15를 발현하는 iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T 세포는 테스트된 다른 iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T 세포보다 더 높은 효험을 나타낸다.
도 11은 복강내 GSU-redLuc 이종이식 모델에서 i.p. 그리고 i.v. 투여된 iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T 세포의 효험을 도시한다.
도 12a는 지시된 시점에 수행된 유세포 분석법 및 FACS 표현형분석에 의해 카운팅된 CAR-T 세포를 도시한다.
도 12b는 TGFβ 조절제 (예컨대, TGFβR2-VH 또는 dnTGFbR2) 또는 GFP에 대항하는 대조군 VH (Msln-대조군 VH)와 함께 Msln에 대항하는 CAR을 공동-발현하는 항-Msln CAR-T 세포에서의 세포독성 퍼센트를 도시한다.

조작된 면역 세포

특정 실시양태에서, 메소텔린에 특이적으로 결합하는 조작된 세포 표면 분자, 인터류킨 15 (IL-15) 및 임의로 케모카인 (C-C 모티프) 리간드 19 (CCL19)를 발현하는 조작된 면역 세포가 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, 조작된 세포 표면 분자는 메소텔린을 특이적으로 인식하는 키메라 항원 수용체 (CAR) 또는 메소텔린에 특이적으로 결합하는 T 세포 수용체 (TCR)를 포함한다.

일부 실시양태에서, 조작된 면역 세포는 조작된 세포 표면 분자를 인코딩하는 외인성 핵산, IL-15를 인코딩하는 외인성 핵산 및 임의로 CCL19를 인코딩하는 외인성 핵산을 함유한다. 일부 실시양태에서, 조작된 면역 세포는 메소텔린을 특이적으로 인식하는 표면 분자, IL-15 및 임의로 CCL19를 발현한다.

메소텔린 (MSLN)은 세포 표면-결합된 글리코실포스파티딜이노시톨 (GPI) 고정 단백질이며, 여기서 정상적인 발현은 흉막, 심낭, 복막, 고환 초막(tunica vaginalis), 난소 또는 나팔관과 같은 중피 세포로 제한된다. 그러나, MSLN은 또한 악성 중피종, 난소암, 유방암 (예컨대, 삼중-음성 유방암, TNBC), 췌장암, 폐암, 위암, 자궁내막암, 자궁경부암, 담도암, 자궁 장액 암종, 담관암종, 및 소아 급성 골수성 백혈병과 같은 과도한 암에서 과발현되는 것으로 나타났다. 추가로, 증가된 MSLN 발현은 TNBC, 난소암, 폐 선암종, 담관암종 및 췌장 선암종을 갖는 환자에서의 더 불량한 예후와 연관되어 있다.

MSLN의 생리학적 및 생물학적 기능은 완전히 밝혀지지 않았다. 그러나, MSLN은 암 발병기전의 여러 메커니즘에 관여하는 것으로 나타났다. 예를 들어, 상피성 난소 암종에서, 수술-절제된 난소암 조직에서 더 높은 수준의 MSLN mRNA 발현을 나타내는 환자는 더 낮은 MSLN 수준을 발현하는 화학반응에 민감한(chemo-sensitive) 환자와 비교할 때 백금 및 사이클로포스파미드를 이용한 화학요법에 대한 저항성을 보였다 (Tang, et al., "The role of mesothelin in tumor progression and targeted therapy," Anticancer Agents Med Chem. 13(2): 276-280 (2013)). MSLN은 또한 표면 뮤신 MUC16 (또는 CA125)에 높은 친화도로 결합하는 것으로 밝혀졌으며, 결합은 중피 세포에 대한 난소암 세포의 접착을 매개하고 전이를 촉진하는 것으로 제안되었다 (Rump, et al., "Binding of ovarian cancer antigen CA125/MUC16 to mesothelin mediates cell adhesion," J Biol Chem 279(10): 9190-9198, 2004; Gubbels, et al., "Mesothelin-MUC16 binding is a high affinity, N-glycan dependent interaction that facilitates peritoneal metastasis of ovarian tumors," Mol Cancer 5(1): 50, 2006). 추가로, MSLN은 생체외 및 생체내 둘 모두에서 췌장암의 종양 진행, 세포 생존 및 증식에 관여하는 것으로 나타났다 (Li, et al., "Mesothelin is a malignant factor and therapeutic vaccine target for pancreatic cancer," Mol Cancer Ther. 7(2): 286-296, 2008).

키메라 항원 수용체 (CAR)

A. 항-메소텔린 항체

일부 실시양태에서, 조작된 세포 표면 분자는 메소텔린을 특이적으로 인식하는 항체를 포함하는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 포유동물 메소텔린, 예컨대, 설치류 메소텔린, 비-인간 영장류 메소텔린, 또는 인간 메소텔린을 특이적으로 인식한다.

40 kDa 단백질인 인간 메소텔린은 MSLN 유전자에 의해 인코딩된다. 인간 메소텔린에 대한 서열 정보는 공공연하게 알려진 문헌 또는 데이터베이스, 예컨대, NCBI (www.ncbi.nlm.nih.gov/guide/)의 검색에 의해 적절하게 수득될 수 있다. 인간 메소텔린에 대한 아미노산 서열 정보의 예는 GenBank 수탁 번호 NP_037536.2, AAV87530.1 및 이들의 아이소폼을 포함할 수 있다.

일부 실시양태에서, 항-메소텔린 항체는 서열번호 16에 제시된 바와 같은 CDRH1, 서열번호 17에 제시된 바와 같은 CDRH2, 및 서열번호 18에 제시된 바와 같은 CDRH3을 포함하거나 이로 이루어진 중쇄 가변 영역 (VH); 및 서열번호 19에 제시된 바와 같은 CDRL1, 서열번호 20에 제시된 바와 같은 CDRL2, 및 서열번호 21에 제시된 바와 같은 CDRL3을 포함하거나 이로 이루어진 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함한다. 표 1을 참고.

표 1

*항-메소텔린 항체는 또한 본원에서 P4로서 지칭된다.

일부 실시양태에서, 항-메소텔린 항체는 서열번호 22에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH); 및 서열번호 23에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-메소텔린 항체는 서열번호 22에 대해 약 80% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH); 및 서열번호 23에 대해 약 80% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-메소텔린 항체는 서열번호 22에 대해 약 85% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH); 및 서열번호 23에 대해 약 85% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-메소텔린 항체는 서열번호 22에 대해 약 90% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH); 및 서열번호 23에 대해 약 90% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-메소텔린 항체는 서열번호 22에 대해 약 95% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH); 및 서열번호 23에 대해 약 95% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-메소텔린 항체는 서열번호 22에 대해 약 96% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH); 및 서열번호 23에 대해 약 96% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-메소텔린 항체는 서열번호 22에 대해 약 97% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH); 및 서열번호 23에 대해 약 97% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-메소텔린 항체는 서열번호 22에 대해 약 98% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH); 및 서열번호 23에 대해 약 98% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-메소텔린 항체는 서열번호 22에 대해 약 99% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH); 및 서열번호 23에 대해 약 99% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함한다. 항-메소텔린 항체는 서열번호 22를 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 서열번호 23을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함할 수 있다. 항-메소텔린 항체는 서열번호 22로 이루어진 중쇄 가변 영역 (VH) 및 서열번호 23으로 이루어진 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함할 수 있다.

일부 실시양태에서, 프레임워크 영역 내의 하나 이상의 잔기가 항-메소텔린 항체에서 변형되어, VH 또는 VL 영역에서 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 생성한다. 용어 '프레임워크 영역'은 상보성-결정 영역 (CDR)을 제외한 항체의 영역을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 항-메소텔린 항체는 프레임워크 영역 내에 하나 이상의 변형을 포함하고, 서열번호 22에 대해 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 포함하는 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-메소텔린 항체는 프레임워크 영역 내에 하나 이상의 변형을 포함하고, 서열번호 22에 대해 85% 서열 동일성을 포함하는 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-메소텔린 항체는 프레임워크 영역 내에 하나 이상의 변형을 포함하고, 서열번호 22에 대해 90% 서열 동일성을 포함하는 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-메소텔린 항체는 프레임워크 영역 내에 하나 이상의 변형을 포함하고, 서열번호 22에 대해 95% 서열 동일성을 포함하는 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-메소텔린 항체는 프레임워크 영역 내에 하나 이상의 변형을 포함하고, 서열번호 22에 대해 96% 서열 동일성을 포함하는 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-메소텔린 항체는 프레임워크 영역 내에 하나 이상의 변형을 포함하고, 서열번호 22에 대해 97% 서열 동일성을 포함하는 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-메소텔린 항체는 프레임워크 영역 내에 하나 이상의 변형을 포함하고, 서열번호 22에 대해 98% 서열 동일성을 포함하는 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-메소텔린 항체는 프레임워크 영역 내에 하나 이상의 변형을 포함하고, 서열번호 22에 대해 99% 서열 동일성을 포함하는 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-메소텔린 항체는 프레임워크 영역 내에 하나 이상의 변형을 포함하고, 서열번호 23에 대해 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 포함하는 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-메소텔린 항체는 프레임워크 영역 내에 하나 이상의 변형을 포함하고, 서열번호 23에 대해 85% 서열 동일성을 포함하는 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-메소텔린 항체는 프레임워크 영역 내에 하나 이상의 변형을 포함하고, 서열번호 23에 대해 90% 서열 동일성을 포함하는 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-메소텔린 항체는 프레임워크 영역 내에 하나 이상의 변형을 포함하고, 서열번호 23에 대해 95% 서열 동일성을 포함하는 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-메소텔린 항체는 프레임워크 영역 내에 하나 이상의 변형을 포함하고, 서열번호 23에 대해 96% 서열 동일성을 포함하는 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-메소텔린 항체는 프레임워크 영역 내에 하나 이상의 변형을 포함하고, 서열번호 23에 대해 97% 서열 동일성을 포함하는 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-메소텔린 항체는 프레임워크 영역 내에 하나 이상의 변형을 포함하고, 서열번호 23에 대해 98% 서열 동일성을 포함하는 서열을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항-메소텔린 항체는 프레임워크 영역 내에 하나 이상의 변형을 포함하고, 서열번호 23에 대해 99% 서열 동일성을 포함하는 서열을 갖는다.

일부 실시양태에서, 항-메소텔린 항체는 단일-쇄 가변 단편 (scFv) 형식을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-메소텔린 scFv 항체는 서열번호 16에 제시된 바와 같은 CDRH1, 서열번호 17에 제시된 바와 같은 CDRH2, 및 서열번호 18에 제시된 바와 같은 CDRH3을 포함하거나 이로 이루어진 VH; 및 서열번호 19에 제시된 바와 같은 CDRL1, 서열번호 20에 제시된 바와 같은 CDRL2, 및 서열번호 21에 제시된 바와 같은 CDRL3을 포함하거나 이로 이루어진 VL를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-메소텔린 scFv 항체는 서열번호 22에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 VH; 및 서열번호 23에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 VL을 포함한다.

일부 실시양태에서, 항-메소텔린 scFv 항체의 VH 및 VL은 펩티드 링커를 통해 연접된다. 펩티드 링커는 3 개 이상, 예를 들어, 약 3 내지 약 30 개, 약 3 내지 약 25 개, 약 3 내지 약 20 개, 약 4 내지 약 30 개, 약 4 내지 약 20 개, 약 4 내지 약 10 개, 약 5 내지 약 30 개, 약 5 내지 약 20 개, 또는 약 5 내지 약 10 개의 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 펩티드 링커는 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 또는 30 개의 아미노산 잔기를 포함할 수 있다.

펩티드 링커는 복수의 폴리-알라닌, 폴리-글리신, 또는 알라닌 및 글리신 잔기의 혼합물을 포함할 수 있다. 펩티드 링커는 (Gly₄Ser)n 링커를 포함할 수 있으며, 여기서 n은 1 내지 30, 바람직하게는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30, 더욱 바람직하게는 15, 16, 17, 18, 19 또는 20의 정수이다. 일부 경우에, 펩티드 링커는 GILGSGGGGSGGGGSGGGGS (서열번호 45)를 포함하고, 펩티드 링커는 GGGGSGGGGSGGGGS (서열번호 30)를 포함한다. 일부 경우에, 펩티드 링커는 GSGGGGSGGGGSGGGGS (서열번호 41)를 포함한다. 일부 경우에, 펩티드 링커는 서열번호 45를 포함한다.

일부 실시양태에서, 항-메소텔린 scFv 항체는 QVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSS GILGSGGGGSGGGGSGGGGS QPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLS (서열번호 1)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함하며, 링커는 이탤릭체로 표시된다. 항-메소텔린 scFv는 또한 본원에서 P4로서 지칭된다. 일부 실시양태에서, 항-메소텔린 scFv 항체는 서열번호 1에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-메소텔린 scFv 항체는 서열번호 1에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-메소텔린 scFv 항체는 서열번호 1에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-메소텔린 scFv 항체는 서열번호 1에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-메소텔린 scFv 항체는 서열번호 1에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-메소텔린 scFv 항체는 서열번호 1에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-메소텔린 scFv 항체는 서열번호 1에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-메소텔린 scFv 항체는 서열번호 1을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-메소텔린 scFv 항체는 서열번호 1로 이루어진다.

B. CAR에 대한 시그널링 펩티드

일부 실시양태에서, 본원에 개시된 키메라 항원 수용체 (CAR)는 시그널링 펩티드 (예컨대, 리더 서열로서)를 포함한다. 시그널링 펩티드는 CAR을 세포의 표면에 국소화시킬 수 있다. 시그널링 펩티드는 면역 글로불린 중쇄, 면역글로불린 경쇄, CD8, T 세포 수용체 α 및 β 쇄, CD3ζ, CD28, CD3E, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, ICOS, CD154 또는 GITR-유래된 신호 펩티드 (리더 서열)의 폴리펩티드를 포함할 수 있다.

일부 실시양태에서, 시그널링 펩티드는 면역 글로불린 중쇄의 폴리펩티드를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 시그널링 펩티드는 MDWTWRILFLVAAATGAHS (서열번호 2)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 시그널링 펩티드는 서열번호 2에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 시그널링 펩티드는 서열번호 2에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 시그널링 펩티드는 서열번호 2에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 시그널링 펩티드는 서열번호 2에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 시그널링 펩티드는 서열번호 2에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 시그널링 펩티드는 서열번호 2에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 시그널링 펩티드는 서열번호 2에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 시그널링 펩티드는 서열번호 2를 포함한다. 일부 실시양태에서, 시그널링 펩티드는 서열번호 2로 이루어진다.

C. 막관통 영역

일부 실시양태에서, 항-메소텔린 항체는 하나 이상의 막관통 및 세포내 시그널링 도메인에 연결된다. 막관통 영역은 자연적 또는 합성 공급원으로부터 유래될 수 있다. 예시적인 막관통 영역은 CD8, T 세포 수용체 α 및 β 쇄, CD3ζ, CD28, CD3E (CD3 엡실론), CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, ICOS, CD154 및 GITR로부터 유래된 막관통 영역의 폴리펩티드를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 막관통 영역은 CD8 막관통 영역 (예컨대, 인간 CD8 막관통 영역)을 포함한다.

일부 실시양태에서, 막관통 영역은 CD8로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 막관통 영역은 IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCN (서열번호 27)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 막관통 영역은 서열번호 27에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 막관통 영역은 서열번호 27에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 막관통 영역은 서열번호 27에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 막관통 영역은 서열번호 27에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 막관통 영역은 서열번호 27에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 막관통 영역은 서열번호 27에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 막관통 영역은 서열번호 27에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 막관통 영역은 서열번호 27을 포함한다. 일부 실시양태에서, 막관통 영역은 서열번호 27로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 막관통 영역은 IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYC (서열번호 63)와 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 막관통 영역은 서열번호 63에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 막관통 영역은 서열번호 63에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 막관통 영역은 서열번호 63에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 막관통 영역은 서열번호 63에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 막관통 영역은 서열번호 63에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 막관통 영역은 서열번호 63에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 막관통 영역은 서열번호 63에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 막관통 영역은 서열번호 63을 포함한다. 일부 실시양태에서, 막관통 영역은 서열번호 63으로 이루어진다.

D. 세포외 힌지 영역

임의적인 올리고펩티드 또는 폴리펩티드를 포함하거나 이로 이루어진 세포외 힌지 영역은 메소텔린을 인식하는 세포 표면 분자 및 막관통 영역 사이에 위치될 수 있다. 세포외 힌지 영역의 길이의 예는 1 내지 100 개의 아미노산 잔기, 바람직하게는 10 내지 70 개, 10 내지 50 개, 또는 10 내지 30 개의 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 예시적인 세포외 힌지 영역은 CD8, CD28 및 CD4로부터 유래된 힌지 영역, 및 면역 글로불린 힌지 영역을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 힌지 영역은 인간 CD8의 힌지 영역을 포함한다.

일부 실시양태에서, 세포외 힌지 영역은 PTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD (서열번호 26)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 CD8 힌지 영역이다. 일부 실시양태에서, CD8 힌지 영역은 서열번호 26에 대해 약 85% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, CD8 힌지 영역은 서열번호 26에 대해 약 90% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, CD8 힌지 영역은 서열번호 26에 대해 약 95% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, CD8 힌지 영역은 서열번호 26에 대해 약 96% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, CD8 힌지 영역은 서열번호 26에 대해 약 97% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, CD8 힌지 영역은 서열번호 26에 대해 약 98% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, CD8 힌지 영역은 서열번호 26에 대해 약 99% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, CD8 힌지 영역은 서열번호 26을 포함한다. 일부 실시양태에서, CD8 힌지 영역은 서열번호 26으로 이루어진다. 일부 실시양태에서, CD8 힌지 영역은 TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD (서열번호 64)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, CD8 힌지 영역은 서열번호 64에 대해 약 85% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, CD8 힌지 영역은 서열번호 64에 대해 약 90% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, CD8 힌지 영역은 서열번호 64에 대해 약 95% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, CD8 힌지 영역은 서열번호 64에 대해 약 96% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, CD8 힌지 영역은 서열번호 64에 대해 약 97% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, CD8 힌지 영역은 서열번호 64에 대해 약 98% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, CD8 힌지 영역은 서열번호 64에 대해 약 99% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, CD8 힌지 영역은 서열번호 64를 포함한다. 일부 실시양태에서, CD8 힌지 영역은 서열번호 64로 이루어진다.

일부 실시양태에서, 항-메소텔린 scFv 항체는 펩티드 링커를 통해 힌지 영역에 연접된다. 펩티드 링커는 3 개 이상, 예를 들어, 약 3 내지 약 30 개, 약 3 내지 약 20 개, 3 내지 약 10 개, 약 4 내지 약 30 개, 약 4 내지 약 20 개, 약 4 내지 약 10 개, 약 5 내지 약 30 개, 약 5 내지 약 20 개, 또는 약 5 내지 약 10 개의 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 펩티드 링커는 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 또는 30 개의 아미노산 잔기를 포함할 수 있다.

펩티드 링커는 복수의 폴리-알라닌, 폴리-글리신, 알라닌 및 글리신 잔기의 혼합물, 또는 알라닌 또는 글리신과 하나 이상의 추가적인 아미노산의 혼합물을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 펩티드 링커는 ArgAlaAlaAla ("RAAA") (서열번호 4)를 포함한다. 일부 실시양태에서, 펩티드 링커는 ArgAlaAlaAla ("RAAA")(서열번호 4)이다. 일부 실시양태에서, 펩티드 링커는 AlaAlaAla ("AAA")를 포함한다. 일부 실시양태에서, 펩티드 링커는 삼중 알라닌 링커 또는 AlaAlaAla ("AAA")이다.

일부 실시양태에서, 항-메소텔린 scFv 항체는 링커 없이 힌지 영역에 연접된다.

E. 세포내 시그널링 영역 (공동자극 도메인)

일부 실시양태에서, CAR은 하나 이상의 세포내 시그널링 영역을 포함한다. 세포내 시그널링 영역 (세포내 시그널링 영역은 또한 본원에서 "공동자극 도메인"으로서 지칭됨을 유의함)은 세포 표면 분자가 메소텔린을 인식할 때 세포 내로 신호를 전달할 수 있는 영역을 포함할 수 있다. 세포내 시그널링 영역은 CD28, 4-1BB (CD137), GITR, CD27, OX40, HVEM, CD3ζ 또는 Fc 수용체-연관된 γ 쇄의 폴리펩티드의 세포내 영역으로부터 선택된 적어도 하나 이상의 구성원을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 세포내 시그널링 영역은 CD28 세포내 영역 (공동자극 도메인)의 폴리펩티드, 4-1BB 세포내 영역 (공동자극 도메인)의 폴리펩티드, CD3 세포내 영역의 폴리펩티드, 또는 이들의 조합을 포함한다.

일부 실시양태에서, CAR은 4-1BB 세포내 영역 (공동자극 도메인)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 4-1BB 세포내 영역 (공동자극 도메인)은 KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL (서열번호 24)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 4-1BB 세포내 영역은 서열번호 24와 약 85% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 4-1BB 세포내 영역은 서열번호 24에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 4-1BB 세포내 영역은 서열번호 24에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 4-1BB 세포내 영역은 서열번호 24에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 4-1BB 세포내 영역은 서열번호 24에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 4-1BB 세포내 영역은 서열번호 24에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 4-1BB 세포내 영역은 서열번호 24에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 4-1BB 세포내 영역은 서열번호 24를 포함한다. 일부 실시양태에서, 4-1BB 세포내 영역은 서열번호 24로 이루어진다.

일부 실시양태에서, CAR은 CD3ζ 세포내 영역을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, CD3ζ 세포내 영역은 RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (서열번호 25)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, CD3ζ 세포내 영역은 서열번호 25에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, CD3ζ 세포내 영역은 서열번호 25에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, CD3ζ 세포내 영역은 서열번호 25에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, CD3ζ 세포내 영역은 서열번호 25에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, CD3ζ 세포내 영역은 서열번호 25에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, CD3ζ 세포내 영역은 서열번호 25에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, CD3ζ 세포내 영역은 서열번호 25에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, CD3ζ 세포내 영역은 서열번호 25를 포함한다. 일부 실시양태에서, CD3ζ 세포내 영역은 서열번호 25로 이루어진다.

IL-15

인터류킨 15 (IL-15)는 림프구 발달, 분화 및 항상성에 관여한다. IL-15는 또한 CD8 T 세포를 자극하고, 자연 살해 (NK) 세포 활성화를 유도한다. 종양 미세환경 내에서, IL-15의 발현은 향상된 항종양 반응과 상관관계가 있다. 게다가, IL-15의 발현은 T 세포의 엑스 비보 확장 동안 이익을 보여주었고, CAR-T 세포의 효능을 향상시킨다.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "IL-15"는 본 발명의 효과에서 IL-15의 기능이 유지되는 한, 전장 IL-15 단백질뿐만 아니라 단편도 포함한다. 추가로, 용어 "IL-15"는 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 야생형 IL-15 및 이의 변이체를 포함한다. 일부 경우에, 돌연변이는 결실, 치환 및/또는 첨가를 포함한다. 예를 들어, IL-15는 하나 이상의 치환을 포함할 수 있다. IL-15는 또한 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20 개 이상의 아미노산 잔기의 절삭을 포함할 수 있으며, 여기서 절삭은 IL-15의 N-말단, C-말단 또는 내부 영역에 위치될 수 있다. 게다가, IL-15 또는 이의 변이체는 다른 단백질에 연결되어, 융합 단백질을 형성할 수 있다 (예컨대, IL-15Rα의 전체 또는 일부에 연결됨). IL-15는 막 경계 단백질 또는 분비 단백질일 수 있다.

A. mIL15/Rα

일부 경우에, IL-15는 IL-15 수용체 α 쇄 (IL-15Rα)에 융합된 막 결합된 IL-15를 포함한다. 융합 IL-15 단백질은 본원에서 mIL15/Ra로서 지칭된다. IL-15Rα는 전체 야생형 IL-15Rα (신호 펩티드 없음)를 포함할 뿐만 아니라 이의 기능적 단편 (예컨대, IL-15Rα의 세포외 도메인 또는 sushi 도메인) 및 임의로 하나 이상의 치환, 결실 또는 첨가를 포함하는 IL-15Rα의 변이체도 포함한다.

일부 경우에, mIL15/Ra 융합 단백질은 직접적으로 또는 링커를 통해 간접적으로 막 결합된 IL-15 폴리펩티드의 C-말단에 융합된 IL-15Rα 폴리펩티드를 포함한다. 펩티드 링커는 1 개 이상, 예를 들어, 약 1 내지 약 30 개, 약 3 내지 약 20 개, 3 내지 약 10 개, 약 4 내지 약 30 개, 약 4 내지 약 20 개, 약 4 내지 약 10 개, 약 5 내지 약 30 개, 약 5 내지 약 20 개, 또는 약 5 내지 약 10 개의 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 펩티드 링커는 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 또는 30 개의 아미노산 잔기를 포함할 수 있다.

펩티드 링커는 복수의 폴리-알라닌, 폴리-글리신, 또는 알라닌 및 글리신 잔기의 혼합물을 포함할 수 있다. 펩티드 링커는 (Gly₄Ser)n 링커를 포함할 수 있으며, 여기서 n은 1 내지 30, 바람직하게는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30, 더욱 바람직하게는 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30의 정수이다. 일부 경우에, 펩티드 링커는 SGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQ (서열번호 32)를 포함한다. 일부 경우에, 펩티드 링커는 SGGSGGGGSGGGSGGGGSLQ (서열번호 33)를 포함한다. 일부 경우에, 펩티드 링커는 GGGGSGGGGSGGGGS (서열번호 30)를 포함한다. 일부 경우에, 펩티드 링커는 GSGGGGSGGGGSGGGGS (서열번호 41)를 포함한다. 일부 경우에, 펩티드 링커는 서열번호 45를 포함한다.

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 면역 세포는 mIL15/Ra를 발현한다. 일부 실시양태에서, mIL15/Ra는 NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSSGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSPSSNNTAATTAAIVPGSQLMPSKSPSTGTTEISSHESSHGTPSQTTAKNWELTASASHQPPGVYPQGHSDTTVAISTSTVLLCGLSAVSLLACYLKSRQTPPLASVEMEAMEALPVTWGTSSRDEDLENCSHHL (서열번호 8)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, mIL15/Ra는 서열번호 8에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, mIL15/Ra는 서열번호 8에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, mIL15/Ra는 서열번호 8에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, mIL15/Ra는 서열번호 8에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, mIL15/Ra는 서열번호 8에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, mIL15/Ra는 서열번호 8에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, mIL15/Ra는 서열번호 8에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, mIL15/Ra는 서열번호 8을 포함한다. 일부 실시양태에서, mIL15/Ra는 서열번호 8로 이루어진다.

일부 경우에, mIL15/Ra는 IL-2 신호 펩티드 (IL2sp)를 추가로 포함한다. 일부 경우에, IL2sp는 MYRMQLLSCIALSLALVTNS (서열번호 6)를 포함한다. 일부 경우에, IL2sp는 서열번호 6으로 이루어진다.

일부 경우에, 본원에 기재된 면역 세포는 MYRMQLLSCIALSLALVTNSATSNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSSGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSPSSNNTAATTAAIVPGSQLMPSKSPSTGTTEISSHESSHGTPSQTTAKNWELTASASHQPPGVYPQGHSDTTVAISTSTVLLCGLSAVSLLACYLKSRQTPPLASVEMEAMEALPVTWGTSSRDEDLENCSHHL (서열번호 28)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 IL2sp-mIL15/Ra 폴리펩티드를 발현한다. 일부 경우에, IL2sp-mIL15/Ra 폴리펩티드는 서열번호 28에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL2sp-mIL15/Ra 폴리펩티드는 서열번호 28에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL2sp-mIL15/Ra 폴리펩티드는 서열번호 28에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL2sp-mIL15/Ra 폴리펩티드는 서열번호 28에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL2sp-mIL15/Ra 폴리펩티드는 서열번호 28에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL2sp-mIL15/Ra 폴리펩티드는 서열번호 28에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL2sp-mIL15/Ra 폴리펩티드는 서열번호 28에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL2sp-mIL15/Ra 폴리펩티드는 서열번호 28을 포함한다. 일부 경우에, IL2sp-mIL15/Ra 폴리펩티드는 서열번호 28로 이루어진다.

B. sushi15

일부 경우에, IL-15는 IL-15에 융합된 IL-15 수용체 α 쇄 (IL-15Rα) sushi 도메인을 포함한다. 이 융합 IL-15 단백질은 본원에서 sushi15로서 지칭된다. IL-15Rα sushi 도메인은 직접적으로 또는 링커를 통해 간접적으로 IL-15 폴리펩티드의 C-말단에 융합된다.

일부 경우에, IL-15Rα의 sushi 도메인이 링커를 통해 간접적으로 IL-15 폴리펩티드에 융합된다. 펩티드 링커는 1 개 이상, 예를 들어, 약 1 내지 약 30 개, 약 3 내지 약 20 개, 3 내지 약 10 개, 약 4 내지 약 30 개, 약 4 내지 약 20 개, 약 4 내지 약 10 개, 약 5 내지 약 30 개, 약 5 내지 약 20 개, 또는 약 5 내지 약 10 개의 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 펩티드 링커는 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 또는 30 개의 아미노산 잔기를 포함할 수 있다.

펩티드 링커는 복수의 폴리-알라닌, 폴리-글리신, 또는 알라닌 및 글리신 잔기의 혼합물을 포함할 수 있다. 펩티드 링커는 (Gly₄Ser)n 링커를 포함할 수 있으며, 여기서 n은 1 내지 30, 바람직하게는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30, 더욱 바람직하게는 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30의 정수이다. 일부 경우에, 펩티드 링커는 서열번호 32를 포함한다. 일부 경우에, 펩티드 링커는 서열번호 33을 포함한다. 일부 경우에, 펩티드 링커는 서열번호 30을 포함한다. 일부 경우에, 펩티드 링커는 서열번호 41을 포함한다. 일부 경우에, 펩티드 링커는 서열번호 45를 포함한다.

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 면역 세포는 sushi15를 발현한다. 일부 실시양태에서, sushi15는 ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRSGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS (서열번호 10)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, sushi15는 서열번호 10에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, sushi15는 서열번호 10에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, sushi15는 서열번호 10에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, sushi15는 서열번호 10에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, sushi15는 서열번호 10에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, sushi15는 서열번호 10에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, sushi15는 서열번호 10에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, sushi15는 서열번호 10을 포함한다. 일부 경우에, sushi15는 서열번호 10으로 이루어진다.

일부 경우에, sushi15는 IL-15Rα 신호 펩티드 (IL15Rasp)를 추가로 포함한다. 일부 경우에, IL15Rasp는 MAPRRARGCRTLGLPALLLLLLLRPPATRG (서열번호 7)를 포함한다. 일부 경우에, IL15Rasp가 서열번호 7로 이루어진다.

일부 경우에, 본원에 기재된 면역 세포는 MAPRRARGCRTLGLPALLLLLLLRPPATRGITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRSGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS (서열번호 29)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 IL15Rasp-sushi15 폴리펩티드를 발현한다. 일부 경우에, IL15Rasp-sushi15 폴리펩티드는 서열번호 29에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL15Rasp-sushi15 폴리펩티드는 서열번호 29에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL15Rasp-sushi15 폴리펩티드는 서열번호 29에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL15Rasp-sushi15 폴리펩티드는 서열번호 29에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL15Rasp-sushi15 폴리펩티드는 서열번호 29에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL15Rasp-sushi15 폴리펩티드는 서열번호 29에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL15Rasp-sushi15 폴리펩티드는 서열번호 29에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, IL15Rasp-sushi15 폴리펩티드는 서열번호 29를 포함한다. 일부 경우에, IL15Rasp-sushi15 폴리펩티드는 서열번호 29로 이루어진다.

C. mIL15/Ra-LSP

일부 경우에, IL-15는 IL-15 수용체 α 쇄 (IL-15Rα)에 융합된 막 결합된 IL-15, IL15 프로펩티드 및 IL-15의 긴 신호 펩티드 (LSP) 융합 단백질을 포함한다. 이 융합 IL-15 단백질은 본원에서 mIL15/Ra-LSP로서 지칭된다. IL-15Rα 폴리펩티드는 신호 펩티드가 없는 전장 IL-15Rα 쇄를 포함한다. IL-15Ra는 직접적으로 또는 링커를 통해 간접적으로 IL-15 폴리펩티드의 C-말단에 융합된다. IL15 프로펩티드는 LSP의 C-말단에 직접적으로 또는 간접적으로 융합된다. IL15 프로펩티드는 IL-15Rα 폴리펩티드의 C-말단에 직접적으로 또는 간접적으로 융합된다. 일부 경우에, IL15 프로펩티드는 GIHVFILGCFSAGLPKTEA (서열번호 48)를 포함한다. 일부 경우에, IL15 프로펩티드는 서열번호 48로 이루어진다. 일부 경우에, LSP는 MRISKPHLRSISIQCYLCLLLNSHFLTEA (서열번호 47)를 포함한다. 일부 경우에, LSP는 서열번호 47로 이루어진다.

일부 경우에, IL-15Ra는 링커를 통해 간접적으로 IL-15 폴리펩티드의 C-말단에 융합된다. 펩티드 링커는 1 개 이상, 예를 들어, 약 1 내지 약 30 개, 약 3 내지 약 20 개, 3 내지 약 10 개, 약 4 내지 약 30 개, 약 4 내지 약 20 개, 약 4 내지 약 10 개, 약 5 내지 약 30 개, 약 5 내지 약 20 개, 또는 약 5 내지 약 10 개의 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 펩티드 링커는 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25 또는 30 개의 아미노산 잔기를 포함할 수 있다.

펩티드 링커는 복수의 폴리-세린, 폴리-글리신, 또는 세린 및 글리신 잔기의 혼합물을 포함할 수 있다. 펩티드 링커는 (Gly₄Ser)n 링커를 포함할 수 있으며, 여기서 n은 1 내지 30, 바람직하게는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30, 더욱 바람직하게는 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30의 정수이다. 일부 경우에, 펩티드 링커는 서열번호 32를 포함한다. 일부 경우에, 펩티드 링커는 서열번호 33을 포함한다. 일부 경우에, 펩티드 링커는 서열번호 30을 포함한다. 일부 경우에, 펩티드 링커는 서열번호 41을 포함한다. 일부 경우에, 펩티드 링커는 서열번호 45를 포함한다.

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 면역 세포는 mIL15/Ra-LSP를 발현한다. 일부 실시양태에서, mIL15/Ra-LSP는 MRISKPHLRSISIQCYLCLLLNSHFLTEAGIHVFILGCFSAGLPKTEANWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSSGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSPSSNNTAATTAAIVPGSQLMPSKSPSTGTTEISSHESSHGTPSQTTAKNWELTASASHQPPGVYPQGHSDTTVAISTSTVLLCGLSAVSLLACYLKSRQTPPLASVEMEAMEALPVTWGTSSRDEDLENCSHHL (서열번호 9)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, mIL15/Ra-LSP는 서열번호 9에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, mIL15/Ra-LSP는 서열번호 9에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, mIL15/Ra-LSP는 서열번호 9에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, mIL15/Ra-LSP는 서열번호 9에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, mIL15/Ra-LSP는 서열번호 9에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, mIL15/Ra-LSP는 서열번호 9에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, mIL15/Ra-LSP는 서열번호 9에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, mIL15/Ra-LSP는 서열번호 9를 포함한다. 일부 경우에, mIL15/Ra-LSP가 서열번호 9로 이루어진다.

일부 경우에, mIL15/Ra-LSP는 IL-2 신호 펩티드 (IL2sp)를 추가로 포함한다. 일부 경우에, IL2sp는 서열번호 6을 포함한다. 일부 경우에, IL2sp는 서열번호 6으로 이루어진다.

D. sIL15-LSP

일부 실시양태에서, IL-15는 IL-15 폴리펩티드, IL-15 프로펩티드 및 IL-15의 긴 신호 펩티드 (LSP) 융합 단백질을 포함한다. 이 융합 IL-15 단백질은 본원에서 sIL15로서 지칭된다. IL15 프로펩티드는 LSP의 C-말단에 직접적으로 또는 간접적으로 융합된다. IL-15 폴리펩티드는 IL-15 프로펩티드의 C-말단에 직접적으로 또는 간접적으로 융합된다. 일부 경우에, IL15 프로펩티드는 서열번호 48을 포함한다. 일부 경우에, IL15 프로펩티드는 서열번호 48로 이루어진다. 일부 경우에, LSP는 서열번호 47을 포함한다. 일부 경우에, LSP는 서열번호 47로 이루어진다. 일부 경우에, 본원에 기재된 면역 세포는 sIL15를 발현한다. 일부 실시양태에서, sIL15는 MRISKPHLRSISIQCYLCLLLNSHFLTEAGIHVFILGCFSAGLPKTEANWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS (서열번호 11)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, sIL15는 서열번호 11에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, sIL15는 서열번호 11에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, sIL15는 서열번호 11에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, sIL15는 서열번호 11에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, sIL15는 서열번호 11에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, sIL15는 서열번호 11에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, sIL15는 서열번호 11에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, sIL15는 서열번호 11을 포함한다. 일부 경우에, sIL15는 서열번호 11로 이루어진다.

CCL19

EBl1 리간드 케모카인 (ELC) 및 대식세포 염증성 단백질-3-베타 (MIP-3-베타)로서 또한 알려진 케모카인 (C-C 모티프) 리간드 19 (CCL19)는 림프구 재순환 및 귀소에 역할을 한다. CCL19는 림프절의 수지상 세포 또는 대식세포에 의해 발현되며, 수용체 CCR7을 통해 T 세포, B 세포 또는 성숙한 수지상 세포의 이동을 개시하는 기능을 가지고 있다.

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 면역 세포는 CCL19를 추가로 발현한다. 일부 실시양태에서, CCL19는 GTNDAEDCCLSVTQKPIPGYIVRNFHYLLIKDGCRVPAVVFTTLRGRQLCAPPDQPWVERIIQRLQRTSAKMKRRSS (서열번호 13)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, CCL19는 서열번호 13에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, CCL19는 서열번호 13에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, CCL19는 서열번호 13에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, CCL19는 서열번호 13에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, CCL19는 서열번호 13에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, CCL19는 서열번호 13에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, CCL19는 서열번호 13에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, CCL19는 서열번호 13을 포함한다. 일부 실시양태에서, CCL19는 서열번호 13으로 이루어진다.

일부 실시양태에서, CCL19는 신호 펩티드, MALLLALSLLVLWTSPAPTLS (서열번호 12)(또한 본원에서 endosp로서 지칭됨)를 추가로 포함한다. 일부 경우에, 본원에 기재된 면역 세포는 신호 펩티드 서열번호 12 및 서열번호 13에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함하는 CCL19 둘 모두를 발현한다. 일부 경우에, CCL19는 endosp의 C-말단에 융합된다.

추가적인 면역 기능 제어 인자

본 발명의 면역 세포는 추가적인 면역 기능 제어 인자, 예컨대, CCL21, IL-2, IL-4, IL-7, IL-12, IL-13, IL-17, IL-18, IP-10, 인터페론-γ, MIP-1알파, GM-CSF, M-CSF, TGF-베타, XCL1, FLT3L 또는 TNF-알파를 추가로 발현할 수 있다. 일부 실시양태에서, 추가적인 면역 기능 제어 인자는 IL-2를 포함한다. 일부 실시양태에서, 추가적인 면역 기능 제어 인자는 IL-7을 포함한다. 일부 실시양태에서, 추가적인 면역 기능 제어 인자는 인터페론-γ를 포함한다. 일부 실시양태에서, 추가적인 면역 기능 제어 인자는 GM-CSF를 포함한다. 일부 실시양태에서, 추가적인 면역 기능 제어 인자는 TGF-베타를 포함한다. 일부 실시양태에서, 추가적인 면역 기능 제어 인자는 TNF-알파를 포함한다. 일부 실시양태에서, 추가적인 면역 기능 제어 인자는 바람직하게는 IL-12 이외의 면역 기능 제어 인자이다.

각각의 영역의 배열

특정 실시양태에서, 메소텔린에 특이적으로 결합하는 조작된 세포 표면 분자 (예컨대, 메소텔린에 특이적으로 결합하는 CAR), IL-15 및 임의로 CCL19를 인코딩하는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 단리된 핵산 분자가 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, 단리된 핵산 분자는 인간 메소텔린을 특이적으로 인식하는 항체, CD8 힌지 영역, CD8 막관통 영역, 4-1BB 세포내 영역 및 CD3ζ 세포내 영역을 포함하는 CAR을 인코딩하는 제1 폴리뉴클레오티드; 및 IL-15를 인코딩하는 제2 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 인간 메소텔린을 특이적으로 인식하는 항체, CD8 힌지 영역, CD8 막관통 영역, 4-1BB 세포내 영역 및 CD3ζ 세포내 영역을 포함하는 CAR을 인코딩하는 제1 폴리뉴클레오티드; IL-15를 인코딩하는 제2 폴리뉴클레오티드; 및 CCL19를 인코딩하는 제3 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, CAR, IL-15 및 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드는 핵산 분자 내의 2 개 이상의 상이한 폴리뉴클레오티드에 위치된다. 다른 실시양태에서, 단리된 핵산 분자는 CAR 및 IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, CAR 및 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, 또는 CAR, IL-15 또는 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.

일부 실시양태에서, CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드는 인간 메소텔린을 특이적으로 인식하는 항체의 상류에 시그널링 펩티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 펩티드 링커 (예컨대, 서열번호 41)에 의해 CD8 힌지 영역에 연결된다. 일부 실시양태에서, 4-1BB 세포내 영역은 폴리뉴클레오티드 내의 CD3ζ 세포내 영역의 상류에 위치된다.

폴리뉴클레오티드는 MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSS GILGSGGGGSGGGGSGGGGS QPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLS (서열번호 3)(또한 본원에서 ssVH-P4로서 지칭됨)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 CAR을 인코딩할 수 있다. CAR은 서열번호 3에 대해 약 85% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 3에 대해 약 90% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 3에 대해 약 95% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 3에 대해 약 96% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 3에 대해 약 97% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 3에 대해 약 98% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 3에 대해 약 99% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 3을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 3으로 이루어질 수 있다.

폴리뉴클레오티드는 MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSS GILGSGGGGSGGGGSGGGGS QPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLS RAAA PTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (서열번호 46)(또한 본원에서 ssVH-P4-CAR로서 지칭됨)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 CAR을 인코딩할 수 있다. CAR은 서열번호 46에 대해 약 85% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 46에 대해 약 90% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 46에 대해 약 95% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 46에 대해 약 96% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 46에 대해 약 97% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 46에 대해 약 98% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 46에 대해 약 99% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 46을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 46으로 이루어질 수 있다.

폴리뉴클레오티드는 MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSS GILGSGGGGSGGGGSGGGGS QPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLS RAAA PTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (서열번호 43)(또한 본원에서 ssVHsp-P4-CD8힌지-TM-41BB-CD3z로서 지칭됨)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 CAR을 인코딩할 수 있다. CAR은 서열번호 43에 대해 약 85% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 43에 대해 약 90% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 43에 대해 약 95% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 43에 대해 약 96% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 43에 대해 약 97% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 43에 대해 약 98% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 43에 대해 약 99% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 43을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 43으로 이루어질 수 있다.

폴리뉴클레오티드에서는 MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSS GILGSGGGGSGGGGSGGGGS QPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLSPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (서열번호 65)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 CAR을 인코딩할 수 있다. CAR은 서열번호 65에 대해 약 85% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 65에 대해 약 90% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 65에 대해 약 95% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 65에 대해 약 96% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 65에 대해 약 97% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 65에 대해 약 98% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 65에 대해 약 99% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 65를 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 65로 이루어질 수 있다.

폴리뉴클레오티드에서는 MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSS GILGSGGGGSGGGGSGGGGS QPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (서열번호 66)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 CAR을 인코딩할 수 있다. CAR은 서열번호 66에 대해 약 85% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 66에 대해 약 90% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 66에 대해 약 95% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 66에 대해 약 96% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 66에 대해 약 97% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 66에 대해 약 98% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 66에 대해 약 99% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 66을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 66으로 이루어질 수 있다.

폴리뉴클레오티드에서는 MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSS GILGSGGGGSGGGGSGGGGS QPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLSPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (서열번호 67)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 CAR을 인코딩할 수 있다. CAR은 서열번호 67에 대해 약 85% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 67에 대해 약 90% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 67에 대해 약 95% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 67에 대해 약 96% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 67에 대해 약 97% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 67에 대해 약 98% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 67에 대해 약 99% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 67을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 67로 이루어질 수 있다.

폴리뉴클레오티드에서는 MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSS GILGSGGGGSGGGGSGGGGS QPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (서열번호 68)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 CAR을 인코딩할 수 있다. CAR은 서열번호 68에 대해 약 85% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 68에 대해 약 90% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 68에 대해 약 95% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 68에 대해 약 96% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 68에 대해 약 97% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 68에 대해 약 98% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 68에 대해 약 99% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 68을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 68로 이루어질 수 있다.

폴리뉴클레오티드는 MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSS GILGSGGGGSGGGGSGGGGS QPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLS AAA PTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (서열번호 69)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 CAR을 인코딩할 수 있다. CAR은 서열번호 69에 대해 약 85% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 69에 대해 약 90% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 69에 대해 약 95% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 69에 대해 약 96% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 69에 대해 약 97% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 69에 대해 약 98% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 69에 대해 약 99% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 69를 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 69로 이루어질 수 있다.

폴리뉴클레오티드는 MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSS GILGSGGGGSGGGGSGGGGS QPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLS AAA TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (서열번호 70)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 CAR을 인코딩할 수 있다. CAR은 서열번호 70에 대해 약 85% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 70에 대해 약 90% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 70에 대해 약 95% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 70에 대해 약 96% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 70에 대해 약 97% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 70에 대해 약 98% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 70에 대해 약 99% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 70을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 70으로 이루어질 수 있다.

폴리뉴클레오티드는 MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSS GILGSGGGGSGGGGSGGGGS QPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLS AAA PTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (서열번호 71)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 CAR을 인코딩할 수 있다. CAR은 서열번호 71에 대해 약 85% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 71에 대해 약 90% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 71에 대해 약 95% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 71에 대해 약 96% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 71에 대해 약 97% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 71에 대해 약 98% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 71에 대해 약 99% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 71을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 71로 이루어질 수 있다.

폴리뉴클레오티드는 MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSS GILGSGGGGSGGGGSGGGGS QPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLS RAAA TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (서열번호 72)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 CAR을 인코딩할 수 있다. CAR은 서열번호 72에 대해 약 85% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 72에 대해 약 90% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 72에 대해 약 95% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 72에 대해 약 96% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 72에 대해 약 97% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 72에 대해 약 98% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 72에 대해 약 99% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 72를 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 72로 이루어질 수 있다.

폴리뉴클레오티드는 MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSS GILGSGGGGSGGGGSGGGGS QPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLS RAAA PTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (서열번호 73)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 CAR을 인코딩할 수 있다. CAR은 서열번호 73에 대해 약 85% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 73에 대해 약 90% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 73에 대해 약 95% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 73에 대해 약 96% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 73에 대해 약 97% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 73에 대해 약 98% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 73에 대해 약 99% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 73을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 73으로 이루어질 수 있다.

폴리뉴클레오티드는 MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSS GILGSGGGGSGGGGSGGGGS QPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLS RAAA TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (서열번호 74)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 CAR을 인코딩할 수 있다. CAR은 서열번호 74에 대해 약 85% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 74에 대해 약 90% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 74에 대해 약 95% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 74에 대해 약 96% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 74에 대해 약 97% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 74에 대해 약 98% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 74에 대해 약 99% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 74를 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 74로 이루어질 수 있다.

폴리뉴클레오티드는 MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSS GILGSGGGGSGGGGSGGGGS QPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLS AAA TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR (서열번호 75)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 CAR을 인코딩할 수 있다. CAR은 서열번호 75에 대해 약 85% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 75에 대해 약 90% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 75에 대해 약 95% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 75에 대해 약 96% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 75에 대해 약 97% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 75에 대해 약 98% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 75에 대해 약 99% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 43을 포함할 수 있다. CAR은 서열번호 75로 이루어질 수 있다.

본원에 기재된 CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드는 ATGGACTGGACATGGCGGATACTCTTCCTCGTCGCTGCTGCAACCGGAGCCCACAGCCAGGTGCAGCTCCAGCAGTCTGGGCCAGGTTTGGTGACTCCTAGTCAGACATTGAGCTTGACTTGTGCTATCAGCGGAGACTCTGTTTCATCTAATTCTGCAACTTGGAACTGGATTCGGCAGTCCCCCAGCCGGGGGCTCGAGTGGTTGGGTCGGACCTACTATCGGAGCAAATGGTACAATGACTATGCAGTGAGCGTCAAATCAAGAATGAGCATCAATCCTGACACAAGCAAGAACCAGTTTAGCCTTCAGCTTAATAGCGTGACTCCAGAGGACACAGCTGTGTACTATTGCGCGAGAGGCATGATGACATACTATTACGGAATGGACGTGTGGGGCCAGGGAACTACTGTTACAGTGTCAAGCGGAATCCTCGGTAGCGGAGGCGGCGGTTCCGGCGGAGGGGGTAGTGGTGGCGGGGGTAGTCAACCTGTGCTGACCCAGAGCAGCTCTCTTAGTGCTAGCCCAGGTGCAAGTGCAAGTCTTACCTGTACACTGCGCTCCGGTATTAATGTGGGCCCTTACCGAATTTACTGGTACCAGCAGAAACCAGGCTCCCCTCCCCAGTATCTGCTGAACTATAAGTCTGACTCAGACAAACAGCAGGGCTCCGGTGTGCCATCCCGATTTAGTGGCTCAAAGGATGCTAGTGCAAATGCCGGTGTTCTCCTGATCAGCGGACTCAGATCAGAGGACGAAGCAGACTATTACTGTATGATTTGGCATAGCAGCGCTGCTGTCTTCGGAGGAGGGACTCAGCTCACTGTCTTGAGTCGGGCCGCTGCACCTACCACTACCCCTGCCCCTCGACCCCCTACTCCCGCCCCAACTATCGCATCCCAACCACTCTCTCTCAGACCCGAAGCCTGTAGACCCGCAGCCGGTGGCGCTGTGCATACTCGCGGACTTGATTTTGCTTGTGATATTTATATCTGGGCCCCCCTTGCCGGAACTTGTGGAGTTCTCCTGCTGTCTCTCGTAATCACCCTTTATTGTAACAAACGGGGGCGCAAAAAACTTCTTTACATTTTCAAGCAGCCCTTTATGCGGCCCGTGCAGACCACACAGGAAGAAGATGGCTGCAGCTGCAGGTTCCCAGAGGAAGAAGAGGGCGGCTGCGAGCTGCGAGTAAAGTTCAGCCGGAGCGCCGATGCACCTGCATACCAGCAGGGTCAGAACCAGCTCTACAATGAGCTGAACCTGGGCAGAAGAGAGGAATATGATGTACTCGACAAGAGAAGGGGACGCGATCCAGAGATGGGCGGCAAACCACGGCGGAAAAATCCGCAGGAGGGGCTCTATAACGAGCTCCAGAAGGACAAGATGGCAGAAGCCTACTCAGAAATTGGCATGAAAGGAGAGAGAAGGAGGGGAAAGGGCCATGATGGCCTTTACCAAGGGTTGTCTACTGCCACCAAGGATACGTACGATGCACTCCATATGCAGGCTCTTCCTCCCCGA (서열번호 50), ATGGACTGGACATGGCGGATACTCTTCCTCGTCGCTGCTGCAACCGGAGCCCACAGCCAGGTGCAGCTCCAGCAGTCTGGGCCAGGTTTGGTGACTCCTAGTCAGACATTGAGCTTGACTTGTGCTATCAGCGGAGACTCTGTTTCATCTAATTCTGCAACTTGGAACTGGATTCGGCAGTCCCCCAGCCGGGGGCTCGAGTGGTTGGGTCGGACCTACTATCGGAGCAAATGGTACAATGACTATGCAGTGAGCGTCAAATCAAGAATGAGCATCAATCCTGACACAAGCAAGAACCAGTTTAGCCTTCAGCTTAATAGCGTGACTCCAGAGGACACAGCTGTGTACTATTGCGCGAGAGGCATGATGACATACTATTACGGAATGGACGTGTGGGGCCAGGGAACTACTGTTACAGTGTCAAGCGGAATCCTCGGTAGCGGAGGCGGCGGTTCCGGCGGAGGGGGTAGTGGTGGCGGGGGTAGTCAACCTGTGCTGACCCAGAGCAGCTCTCTTAGTGCTAGCCCAGGTGCAAGTGCAAGTCTTACCTGTACACTGCGCTCCGGTATTAATGTGGGCCCTTACCGAATTTACTGGTACCAGCAGAAACCAGGATCCCCTCCCCAGTATCTGCTGAACTATAAGTCTGACTCAGACAAACAGCAGGGCTCCGGTGTGCCATCCCGATTTAGTGGCTCAAAGGATGCTAGTGCAAATGCCGGTGTTCTCCTGATCAGCGGACTCAGATCAGAGGACGAAGCAGACTATTACTGTATGATTTGGCATAGCAGCGCTGCTGTCTTCGGAGGAGGGACTCAGCTCACTGTCTTGAGTCGGGCCGCTGCACCTACCACTACCCCTGCCCCTCGACCCCCTACTCCCGCCCCAACTATCGCATCCCAACCACTCTCTCTCAGACCCGAAGCCTGTAGACCCGCAGCCGGTGGCGCTGTGCATACTCGCGGACTTGATTTTGCTTGTGATATTTATATCTGGGCCCCCCTTGCCGGAACTTGTGGAGTTCTCCTGCTGTCTCTCGTAATCACCCTTTATTGTAACAAACGGGGGCGCAAAAAACTTCTTTACATTTTCAAGCAGCCCTTTATGCGGCCCGTGCAGACCACACAGGAAGAAGATGGCTGCAGCTGCAGGTTCCCAGAGGAAGAAGAGGGCGGCTGCGAGCTGCGAGTAAAGTTCAGCCGGAGCGCCGATGCACCTGCATACCAGCAGGGTCAGAACCAGCTCTACAATGAGCTGAACCTGGGCAGAAGAGAGGAATATGATGTACTCGACAAGAGAAGGGGACGCGATCCAGAGATGGGCGGCAAACCACGGCGGAAAAATCCGCAGGAGGGGCTCTATAACGAGCTCCAGAAGGACAAGATGGCAGAAGCCTACTCAGAAATTGGCATGAAAGGAGAGAGAAGGAGGGGAAAGGGCCATGATGGCCTTTACCAAGGGTTGTCTACTGCCACCAAGGATACGTACGATGCACTCCATATGCAGGCTCTTCCTCCCCGA (서열번호 51), 또는 ATGGATTGGACCTGGCGAATACTCTTCCTCGTCGCAGCGGCCACTGGTGCCCATTCACAAGTCCAACTGCAGCAGAGCGGACCTGGCCTGGTGACACCCAGTCAGACTCTCAGCCTGACTTGTGCAATCAGCGGCGATAGTGTGTCTAGTAATTCTGCAACATGGAACTGGATCAGACAATCACCAAGTCGGGGACTGGAGTGGCTCGGTAGAACCTATTATAGGTCCAAATGGTATAACGATTATGCAGTGTCCGTGAAGTCCCGAATGTCTATCAACCCTGATACTAGTAAGAATCAATTCAGTCTGCAGCTTAACAGCGTAACCCCCGAAGATACTGCTGTGTATTACTGTGCCCGGGGTATGATGACTTACTACTACGGAATGGATGTGTGGGGGCAGGGAACAACCGTTACTGTTTCATCCGGCATTCTCGGGAGCGGAGGCGGTGGAAGCGGTGGGGGAGGGTCCGGGGGAGGAGGATCTCAGCCTGTTCTTACTCAATCTTCTTCCCTCTCCGCCTCACCCGGGGCCTCCGCCTCACTGACCTGCACTCTGCGATCAGGCATCAACGTTGGGCCTTATAGAATCTACTGGTACCAGCAAAAGCCTGGATCACCGCCCCAGTACCTGCTGAACTATAAATCAGACTCAGACAAGCAGCAGGGCTCCGGCGTGCCGAGTCGATTTAGCGGGAGCAAGGACGCGTCTGCTAATGCCGGCGTGCTTCTCATCAGCGGGCTCCGCAGTGAGGATGAGGCAGATTACTACTGCATGATTTGGCATAGCAGTGCAGCCGTATTTGGCGGAGGAACACAGCTGACTGTCCTCTCTCGCGCCGCCGCTCCGACCACCACCCCTGCACCACGCCCACCTACTCCTGCGCCAACCATTGCCAGCCAGCCTCTCTCTCTCCGACCCGAGGCCTGTAGACCTGCCGCTGGCGGTGCAGTTCATACTCGGGGTCTCGATTTCGCCTGCGACATCTACATCTGGGCACCACTGGCTGGCACTTGTGGCGTTTTGCTCCTGTCCCTGGTGATCACTCTCTACTGTAATAAGAGGGGGAGGAAGAAACTCCTGTATATTTTCAAACAACCCTTTATGCGCCCTGTCCAAACCACCCAGGAAGAAGATGGATGTAGTTGCAGATTCCCAGAAGAAGAGGAGGGTGGGTGTGAACTTAGGGTGAAGTTTAGTCGCAGTGCCGACGCTCCCGCTTACCAACAGGGTCAGAACCAACTCTACAATGAGCTGAATCTGGGGAGGCGCGAAGAATACGACGTTCTGGATAAAAGACGCGGCCGCGACCCCGAGATGGGCGGGAAACCGCGGAGAAAGAACCCACAGGAAGGATTGTACAATGAGCTCCAGAAAGATAAGATGGCAGAAGCCTACTCCGAGATCGGCATGAAGGGGGAGCGAAGGCGCGGGAAAGGACACGATGGGCTGTACCAGGGTCTTTCAACCGCGACAAAGGACACCTATGATGCTCTCCATATGCAGGCCCTCCCGCCACGC (서열번호 52)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함할 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 서열번호 50, 서열번호 51 또는 서열번호 52에 대해 약 85% 서열 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함할 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 서열번호 50, 서열번호 51 또는 서열번호 52에 대해 약 90% 서열 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함할 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 서열번호 50, 서열번호 51 또는 서열번호 52에 대해 약 95% 서열 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함할 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 서열번호 50, 서열번호 51 또는 서열번호 52에 대해 약 96% 서열 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함할 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 서열번호 50, 서열번호 51 또는 서열번호 52에 대해 약 97% 서열 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함할 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 서열번호 50, 서열번호 51 또는 서열번호 52에 대해 약 98% 서열 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함할 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 서열번호 50, 서열번호 51 또는 서열번호 52에 대해 약 99% 서열 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함할 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 서열번호 50, 서열번호 51 또는 서열번호 52를 포함할 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 서열번호 50, 서열번호 51 또는 서열번호 52로 이루어질 수 있다.

일부 실시양태에서, CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 임의로 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드는 자가-절단 2A 펩티드 (2A 펩티드) 또는 내부 리보솜 진입 부위 (IRES)를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 프로모터 하에서 각각 독립적으로 전사된다. 일부 실시양태에서, IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드는 2A 펩티드 또는 IRES를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 프로모터 하에서 각각 독립적으로 전사된다. 일부 실시양태에서, IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드는 2A 펩티드 또는 IRES를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 프로모터 하에 전사된다.

일부 실시양태에서, CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 임의로 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드는 2A 펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 프로모터 하에서 각각 독립적으로 전사된다. 2A 펩티드 패밀리에는 다음의 4 개의 구성원이 있다: P2A, E2A, F2A 및 T2A. P2A는 돼지 테스코바이러스-1 2A로부터 유래된다. E2A는 말 비염 A 바이러스로부터 유래된다. F2A는 구제역 바이러스 18로부터 유래된다. T2A는 토시 아시냐 바이러스(thosea asigna virus) 2A로부터 유래된다. 2A 펩티드 구성원에 대한 예시적인 서열은 다음을 포함한다:

P2A - ATNFSLLKQAGDVEENPGP;

E2A - QCTNYALLKLAGDVESNPGP;

F2A - VKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP; 및

T2A - EGRGSLLTCGDVEENPGP.

일부 실시양태에서, 펩티드 링커는 2A 펩티드의 말단, 예컨대, N-말단에 추가로 첨가된다. 일부 실시양태에서, 펩티드 링커는 GSG를 포함한다. 일부 경우에, P2A는 GSGATNFSLLKQAGDVEENPGP (서열번호 5)를 포함한다.

일부 실시양태에서, CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 임의로 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드는 2A 펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 프로모터 하에서 각각 독립적으로 전사된다. 일부 경우에, IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드는 동일한 2A 펩티드를 포함하는 프로모터 하에서 각각 전사된다. 일부 경우에, IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드는 2 개의 상이한 2A 펩티드를 포함하는 프로모터 하에서 각각 전사된다. 일부 경우에, CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, 및 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드는 상이한 2A 펩티드를 포함하는 프로모터 하에서 각각 독립적으로 전사된다.

일부 실시양태에서, CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 임의로 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드는 P2A 펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 프로모터 하에서 각각 독립적으로 전사된다. P2A 펩티드는 ATNFSLLKQAGDVEENPGP를 포함할 수 있다. P2A 펩티드는 또한 서열번호 5를 포함할 수 있다.

일부 실시양태에서, CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드는 핵산 분자에서 5' 말단으로부터 3' 말단으로 다음과 같이 배열된다:

CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 - IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드; 또는

IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 - CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드.

일부 실시양태에서, CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, 및 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드는 핵산 분자에서 5' 말단으로부터 3' 말단으로 다음과 같이 배열된다:

CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 - IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 - CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드;

CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 - CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 - IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드;

IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 - CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 - CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드;

CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 - CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 - IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드;

IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 - CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 - CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드; 또는

CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 - IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 - CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드.

일부 실시양태에서, 단리된 핵산 분자는 mIL-15/Ra를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 MYRMQLLSCIALSLALVTNSATSNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSSGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSPSSNNTAATTAAIVPGSQLMPSKSPSTGTTEISSHESSHGTPSQTTAKNWELTASASHQPPGVYPQGHSDTTVAISTSTVLLCGLSAVSLLACYLKSRQTPPLASVEMEAMEALPVTWGTSSRDEDLENCSHHLGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMALLLALSLLVLWTSPAPTLSGTNDAEDCCLSVTQKPIPGYIVRNFHYLLIKDGCRVPAVVFTTLRGRQLCAPPDQPWVERIIQRLQRTSAKMKRRSS (서열번호 14)(또한 본원에서 mIL15/Ra-P2A-CCL19로서 지칭됨)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 14에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 14에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 14에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 14에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 14에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 14에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 14에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 14를 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 14로 이루어진 폴리펩티드를 인코딩한다.

일부 실시양태에서, 단리된 핵산 분자는 sushi15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 MAPRRARGCRTLGLPALLLLLLLRPPATRGITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRSGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMALLLALSLLVLWTSPAPTLSGTNDAEDCCLSVTQKPIPGYIVRNFHYLLIKDGCRVPAVVFTTLRGRQLCAPPDQPWVERIIQRLQRTSAKMKRRSS (서열번호 31)(또한 본원에서 IL15Rasp-sushi15-P2A-endosp-CCL19 또는 sushi15-CCL19로서 지칭됨)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 31에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 31에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 31에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 31에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 31에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 31에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 31에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 31을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 31로 이루어진 폴리펩티드를 인코딩한다.

일부 실시양태에서, 단리된 핵산 분자는 메소텔린에 특이적으로 결합하는 CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 mIL-15/Ra를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSSGILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLSRAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMYRMQLLSCIALSLALVTNSATSNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSSGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSPSSNNTAATTAAIVPGSQLMPSKSPSTGTTEISSHESSHGTPSQTTAKNWELTASASHQPPGVYPQGHSDTTVAISTSTVLLCGLSAVSLLACYLKSRQTPPLASVEMEAMEALPVTWGTSSRDEDLENCSHHL (서열번호 34)(또한 본원에서 ssVH-P4-CAR-P2A-IL2sp-mIL15/Ra 또는 P4-BB-mIL15/Ra로서 지칭됨)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 34에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 34에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 34에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 34에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 34에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 34에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 34에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 34를 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 34로 이루어진 폴리펩티드를 인코딩한다.

일부 실시양태에서, ssVH-P4-CAR-P2A-IL2sp-mIL15/Ra 또는 P4-BB-mIL15/Ra를 인코딩하는 단리된 핵산 분자는 ATGGACTGGACATGGCGGATACTCTTCCTCGTCGCTGCTGCAACCGGAGCCCACAGCCAGGTGCAGCTCCAGCAGTCTGGGCCAGGTTTGGTGACTCCTAGTCAGACATTGAGCTTGACTTGTGCTATCAGCGGAGACTCTGTTTCATCTAATTCTGCAACTTGGAACTGGATTCGGCAGTCCCCCAGCCGGGGGCTCGAGTGGTTGGGTCGGACCTACTATCGGAGCAAATGGTACAATGACTATGCAGTGAGCGTCAAATCAAGAATGAGCATCAATCCTGACACAAGCAAGAACCAGTTTAGCCTTCAGCTTAATAGCGTGACTCCAGAGGACACAGCTGTGTACTATTGCGCGAGAGGCATGATGACATACTATTACGGAATGGACGTGTGGGGCCAGGGAACTACTGTTACAGTGTCAAGCGGAATCCTCGGTAGCGGAGGCGGCGGTTCCGGCGGAGGGGGTAGTGGTGGCGGGGGTAGTCAACCTGTGCTGACCCAGAGCAGCTCTCTTAGTGCTAGCCCAGGTGCAAGTGCAAGTCTTACCTGTACACTGCGCTCCGGTATTAATGTGGGCCCTTACCGAATTTACTGGTACCAGCAGAAACCAGGCTCCCCTCCCCAGTATCTGCTGAACTATAAGTCTGACTCAGACAAACAGCAGGGCTCCGGTGTGCCATCCCGATTTAGTGGCTCAAAGGATGCTAGTGCAAATGCCGGTGTTCTCCTGATCAGCGGACTCAGATCAGAGGACGAAGCAGACTATTACTGTATGATTTGGCATAGCAGCGCTGCTGTCTTCGGAGGAGGGACTCAGCTCACTGTCTTGAGTCGGGCCGCTGCACCTACCACTACCCCTGCCCCTCGACCCCCTACTCCCGCCCCAACTATCGCATCCCAACCACTCTCTCTCAGACCCGAAGCCTGTAGACCCGCAGCCGGTGGCGCTGTGCATACTCGCGGACTTGATTTTGCTTGTGATATTTATATCTGGGCCCCCCTTGCCGGAACTTGTGGAGTTCTCCTGCTGTCTCTCGTAATCACCCTTTATTGTAACAAACGGGGGCGCAAAAAACTTCTTTACATTTTCAAGCAGCCCTTTATGCGGCCCGTGCAGACCACACAGGAAGAAGATGGCTGCAGCTGCAGGTTCCCAGAGGAAGAAGAGGGCGGCTGCGAGCTGCGAGTAAAGTTCAGCCGGAGCGCCGATGCACCTGCATACCAGCAGGGTCAGAACCAGCTCTACAATGAGCTGAACCTGGGCAGAAGAGAGGAATATGATGTACTCGACAAGAGAAGGGGACGCGATCCAGAGATGGGCGGCAAACCACGGCGGAAAAATCCGCAGGAGGGGCTCTATAACGAGCTCCAGAAGGACAAGATGGCAGAAGCCTACTCAGAAATTGGCATGAAAGGAGAGAGAAGGAGGGGAAAGGGCCATGATGGCCTTTACCAAGGGTTGTCTACTGCCACCAAGGATACGTACGATGCACTCCATATGCAGGCTCTTCCTCCCCGAGGTTCAGGCGCAACAAATTTTTCACTTCTTAAACAAGCTGGCGATGTCGAGGAAAACCCAGGTCCCATGTATAGAATGCAGCTTCTGTCATGTATCGCACTGAGTCTGGCCCTGGTGACCAACAGTGCCACCAGCAACTGGGTGAATGTGATAAGCGACCTTAAGAAAATAGAAGACCTTATTCAGTCCATGCACATAGATGCCACACTGTACACCGAGAGCGATGTGCACCCTTCCTGCAAAGTGACAGCTATGAAATGCTTCCTTCTGGAACTGCAAGTAATTTCATTGGAATCTGGCGATGCTTCCATACATGACACCGTGGAAAACCTTATTATTTTGGCTAACAATTCATTGAGCTCAAATGGAAACGTGACAGAATCCGGTTGTAAGGAATGTGAAGAGCTGGAAGAAAAAAATATCAAGGAATTCCTGCAGAGCTTTGTTCACATTGTGCAAATGTTTATTAATACATCCTCAGGGGGCGGTTCCGGAGGCGGGGGAAGTGGCGGAGGAGGAAGCGGCGGAGGAGGAAGCGGAGGAGGATCACTTCAAATCACATGTCCCCCCCCTATGAGTGTTGAACATGCTGACATCTGGGTGAAATCCTATTCCCTTTATTCAAGAGAACGATACATATGTAATTCCGGGTTTAAGAGGAAAGCAGGCACATCATCTCTCACCGAATGTGTCCTGAATAAGGCGACAAACGTAGCTCACTGGACTACGCCCTCCCTCAAATGCATTAGAGACCCAGCACTCGTGCACCAAAGGCCAGCCCCCCCAAGCACCGTCACTACTGCAGGTGTAACCCCGCAACCAGAATCCCTCTCACCAAGCGGAAAAGAGCCAGCCGCATCTTCTCCTAGTTCCAATAATACAGCCGCGACAACAGCCGCAATTGTCCCTGGAAGCCAGTTGATGCCATCAAAGTCCCCAAGTACGGGTACGACCGAAATCTCCTCCCACGAAAGCAGCCACGGAACACCAAGCCAGACTACCGCCAAGAACTGGGAGCTGACCGCTTCTGCATCACATCAGCCGCCGGGAGTGTATCCACAGGGGCACTCTGATACCACAGTAGCAATCTCAACCTCCACCGTCCTGCTGTGTGGCCTTAGCGCTGTGTCTCTCCTCGCATGTTACCTCAAATCCAGGCAGACCCCCCCCCTTGCTAGTGTCGAAATGGAGGCAATGGAAGCACTTCCCGTGACATGGGGCACTTCTAGCAGAGATGAGGACCTTGAAAACTGCTCACACCACCTC (서열번호 37)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 37에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 37에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 37에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 37에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 37에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 37에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 37에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 37을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 37로 이루어진다.

일부 실시양태에서, 단리된 핵산 분자는 메소텔린에 특이적으로 결합하는 CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 sushi15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSSGILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLSRAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMAPRRARGCRTLGLPALLLLLLLRPPATRGITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRSGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS (서열번호 35)(또한 본원에서 ssVH-P4-CAR-P2A-sushi15 또는 P4-BB-sushi15로서 지칭됨)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 35에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 35에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 35에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 35에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 35에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 35에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 35에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 35를 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 35로 이루어진 폴리펩티드를 인코딩한다.

일부 실시양태에서, ssVH-P4-CAR-P2A-sushi15 또는 P4-BB-sushi15를 인코딩하는 단리된 핵산 분자는 ATGGACTGGACATGGCGGATACTCTTCCTCGTCGCTGCTGCAACCGGAGCCCACAGCCAGGTGCAGCTCCAGCAGTCTGGGCCAGGTTTGGTGACTCCTAGTCAGACATTGAGCTTGACTTGTGCTATCAGCGGAGACTCTGTTTCATCTAATTCTGCAACTTGGAACTGGATTCGGCAGTCCCCCAGCCGGGGGCTCGAGTGGTTGGGTCGGACCTACTATCGGAGCAAATGGTACAATGACTATGCAGTGAGCGTCAAATCAAGAATGAGCATCAATCCTGACACAAGCAAGAACCAGTTTAGCCTTCAGCTTAATAGCGTGACTCCAGAGGACACAGCTGTGTACTATTGCGCGAGAGGCATGATGACATACTATTACGGAATGGACGTGTGGGGCCAGGGAACTACTGTTACAGTGTCAAGCGGAATCCTCGGTAGCGGAGGCGGCGGTTCCGGCGGAGGGGGTAGTGGTGGCGGGGGTAGTCAACCTGTGCTGACCCAGAGCAGCTCTCTTAGTGCTAGCCCAGGTGCAAGTGCAAGTCTTACCTGTACACTGCGCTCCGGTATTAATGTGGGCCCTTACCGAATTTACTGGTACCAGCAGAAACCAGGATCCCCTCCCCAGTATCTGCTGAACTATAAGTCTGACTCAGACAAACAGCAGGGCTCCGGTGTGCCATCCCGATTTAGTGGCTCAAAGGATGCTAGTGCAAATGCCGGTGTTCTCCTGATCAGCGGACTCAGATCAGAGGACGAAGCAGACTATTACTGTATGATTTGGCATAGCAGCGCTGCTGTCTTCGGAGGAGGGACTCAGCTCACTGTCTTGAGTCGGGCCGCTGCACCTACCACTACCCCTGCCCCTCGACCCCCTACTCCCGCCCCAACTATCGCATCCCAACCACTCTCTCTCAGACCCGAAGCCTGTAGACCCGCAGCCGGTGGCGCTGTGCATACTCGCGGACTTGATTTTGCTTGTGATATTTATATCTGGGCCCCCCTTGCCGGAACTTGTGGAGTTCTCCTGCTGTCTCTCGTAATCACCCTTTATTGTAACAAACGGGGGCGCAAAAAACTTCTTTACATTTTCAAGCAGCCCTTTATGCGGCCCGTGCAGACCACACAGGAAGAAGATGGCTGCAGCTGCAGGTTCCCAGAGGAAGAAGAGGGCGGCTGCGAGCTGCGAGTAAAGTTCAGCCGGAGCGCCGATGCACCTGCATACCAGCAGGGTCAGAACCAGCTCTACAATGAGCTGAACCTGGGCAGAAGAGAGGAATATGATGTACTCGACAAGAGAAGGGGACGCGATCCAGAGATGGGCGGCAAACCACGGCGGAAAAATCCGCAGGAGGGGCTCTATAACGAGCTCCAGAAGGACAAGATGGCAGAAGCCTACTCAGAAATTGGCATGAAAGGAGAGAGAAGGAGGGGAAAGGGCCATGATGGCCTTTACCAAGGGTTGTCTACTGCCACCAAGGATACGTACGATGCACTCCATATGCAGGCTCTTCCTCCCCGAGGGTCTGGCGCTACGAATTTCTCTCTCCTTAAACAGGCCGGAGACGTGGAAGAAAATCCCGGCCCGATGGCGCCCCGCAGGGCCCGCGGGTGTCGAACATTGGGTCTGCCTGCTCTCTTGCTGCTGTTGCTTCTCAGACCTCCCGCCACACGCGGAATTACGTGCCCTCCCCCCATGTCTGTGGAACATGCCGACATATGGGTCAAGTCTTACAGTCTTTACTCTAGAGAACGGTATATCTGCAATAGCGGGTTCAAAAGAAAAGCAGGGACTTCCAGCCTGACAGAGTGCGTACTGAATAAGGCCACTAACGTTGCTCACTGGACCACCCCATCATTGAAGTGTATTCGATCAGGAGGCGGAAGCGGTGGTGGGGGCTCAGGGGGTGGCGGTAGTGGAGGCGGGGGCAGCGGAGGGGGCTCTTTGCAAAACTGGGTTAATGTTATTAGCGACCTTAAGAAAATCGAGGACCTGATACAGTCCATGCACATCGATGCGACCCTGTACACTGAGAGCGATGTGCATCCCAGTTGCAAAGTGACTGCTATGAAATGCTTTCTGCTCGAGTTGCAGGTGATCTCCCTGGAAAGCGGCGACGCCTCAATACACGACACGGTCGAAAATCTGATCATTCTCGCCAACAACTCTCTCTCAAGTAACGGGAATGTGACAGAAAGTGGATGCAAAGAATGCGAGGAACTTGAGGAGAAAAACATTAAAGAATTCCTCCAGTCCTTCGTCCACATCGTGCAGATGTTTATCAATACTTCC (서열번호 38)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 38에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 38에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 38에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 38에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 38에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 38에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 38에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 38을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 38로 이루어진다.

일부 실시양태에서, 단리된 핵산 분자는 메소텔린에 특이적으로 결합하는 CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, mIL-15/Ra를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSSGILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLSRAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMYRMQLLSCIALSLALVTNSATSNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSSGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSPSSNNTAATTAAIVPGSQLMPSKSPSTGTTEISSHESSHGTPSQTTAKNWELTASASHQPPGVYPQGHSDTTVAISTSTVLLCGLSAVSLLACYLKSRQTPPLASVEMEAMEALPVTWGTSSRDEDLENCSHHLGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMALLLALSLLVLWTSPAPTLSGTNDAEDCCLSVTQKPIPGYIVRNFHYLLIKDGCRVPAVVFTTLRGRQLCAPPDQPWVERIIQRLQRTSAKMKRRSS (서열번호 36)(또한 본원에서 ssVH-P4-CAR-P2A-IL2sp-mIL15/Ra-P2A-CCL19 또는 P4-BB-mIL15-CCL19로서 지칭됨)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 36에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 36에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 36에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 36에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 36에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 36에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 36에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 36을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 36으로 이루어진 폴리펩티드를 인코딩한다.

일부 실시양태에서, ssVH-P4-CAR-P2A-IL2sp-mIL15/Ra-P2A-CCL19 또는 P4-BB-mIL15-CCL19를 인코딩하는 단리된 핵산 분자는 ATGGATTGGACCTGGCGAATACTCTTCCTCGTCGCAGCGGCCACTGGTGCCCATTCACAAGTCCAACTGCAGCAGAGCGGACCTGGCCTGGTGACACCCAGTCAGACTCTCAGCCTGACTTGTGCAATCAGCGGCGATAGTGTGTCTAGTAATTCTGCAACATGGAACTGGATCAGACAATCACCAAGTCGGGGACTGGAGTGGCTCGGTAGAACCTATTATAGGTCCAAATGGTATAACGATTATGCAGTGTCCGTGAAGTCCCGAATGTCTATCAACCCTGATACTAGTAAGAATCAATTCAGTCTGCAGCTTAACAGCGTAACCCCCGAAGATACTGCTGTGTATTACTGTGCCCGGGGTATGATGACTTACTACTACGGAATGGATGTGTGGGGGCAGGGAACAACCGTTACTGTTTCATCCGGCATTCTCGGGAGCGGAGGCGGTGGAAGCGGTGGGGGAGGGTCCGGGGGAGGAGGATCTCAGCCTGTTCTTACTCAATCTTCTTCCCTCTCCGCCTCACCCGGGGCCTCCGCCTCACTGACCTGCACTCTGCGATCAGGCATCAACGTTGGGCCTTATAGAATCTACTGGTACCAGCAAAAGCCTGGATCACCGCCCCAGTACCTGCTGAACTATAAATCAGACTCAGACAAGCAGCAGGGCTCCGGCGTGCCGAGTCGATTTAGCGGGAGCAAGGACGCGTCTGCTAATGCCGGCGTGCTTCTCATCAGCGGGCTCCGCAGTGAGGATGAGGCAGATTACTACTGCATGATTTGGCATAGCAGTGCAGCCGTATTTGGCGGAGGAACACAGCTGACTGTCCTCTCTCGCGCCGCCGCTCCGACCACCACCCCTGCACCACGCCCACCTACTCCTGCGCCAACCATTGCCAGCCAGCCTCTCTCTCTCCGACCCGAGGCCTGTAGACCTGCCGCTGGCGGTGCAGTTCATACTCGGGGTCTCGATTTCGCCTGCGACATCTACATCTGGGCACCACTGGCTGGCACTTGTGGCGTTTTGCTCCTGTCCCTGGTGATCACTCTCTACTGTAATAAGAGGGGGAGGAAGAAACTCCTGTATATTTTCAAACAACCCTTTATGCGCCCTGTCCAAACCACCCAGGAAGAAGATGGATGTAGTTGCAGATTCCCAGAAGAAGAGGAGGGTGGGTGTGAACTTAGGGTGAAGTTTAGTCGCAGTGCCGACGCTCCCGCTTACCAACAGGGTCAGAACCAACTCTACAATGAGCTGAATCTGGGGAGGCGCGAAGAATACGACGTTCTGGATAAAAGACGCGGCCGCGACCCCGAGATGGGCGGGAAACCGCGGAGAAAGAACCCACAGGAAGGATTGTACAATGAGCTCCAGAAAGATAAGATGGCAGAAGCCTACTCCGAGATCGGCATGAAGGGGGAGCGAAGGCGCGGGAAAGGACACGATGGGCTGTACCAGGGTCTTTCAACCGCGACAAAGGACACCTATGATGCTCTCCATATGCAGGCCCTCCCGCCACGCGGAAGTGGAGCAACTAATTTTAGCCTTCTGAAACAAGCTGGCGATGTTGAGGAAAATCCTGGGCCGATGTACAGGATGCAGCTGCTTTCTTGCATTGCACTGAGTTTGGCACTCGTCACCAACTCTGCCACATCAAATTGGGTTAACGTTATCAGCGATCTGAAGAAAATCGAGGATTTGATCCAGAGTATGCATATTGACGCAACCTTGTATACAGAATCTGATGTGCACCCAAGCTGTAAAGTCACAGCTATGAAATGCTTTTTGCTGGAACTCCAAGTGATCTCCCTCGAATCCGGCGATGCATCCATCCACGATACTGTCGAAAACCTTATAATTTTGGCCAATAACAGCCTCAGCAGCAATGGCAACGTGACAGAGTCTGGGTGTAAGGAGTGTGAAGAACTGGAGGAGAAAAATATTAAAGAATTCCTGCAGTCCTTTGTACACATTGTGCAAATGTTCATTAACACTTCAAGTGGCGGCGGGAGCGGCGGGGGTGGTTCAGGTGGTGGCGGCAGCGGTGGTGGGGGGTCTGGCGGGGGTAGTCTCCAAATTACTTGTCCTCCCCCAATGAGCGTTGAACACGCCGACATTTGGGTCAAGTCTTATTCACTGTACAGCCGAGAAAGATATATCTGTAACTCTGGATTTAAGCGCAAGGCCGGAACGTCTAGTCTGACTGAGTGCGTGCTGAATAAGGCCACTAATGTTGCCCACTGGACTACCCCCAGCCTGAAGTGTATTCGCGATCCTGCCTTGGTGCACCAACGACCCGCGCCACCCAGCACAGTCACTACTGCCGGTGTGACTCCACAGCCCGAGTCTTTGTCCCCGAGCGGAAAGGAGCCCGCCGCATCTTCACCTTCTTCAAATAACACGGCCGCCACAACCGCTGCAATCGTCCCAGGTAGTCAACTGATGCCCTCTAAAAGCCCCTCTACGGGGACAACTGAGATAAGCAGCCACGAGTCTAGTCACGGCACACCAAGCCAGACTACCGCCAAAAACTGGGAGCTGACCGCCTCTGCCTCACACCAACCACCAGGCGTGTATCCCCAGGGGCACAGCGACACCACTGTGGCAATCAGCACCAGCACGGTACTGTTGTGCGGACTCTCTGCCGTCAGTCTGCTGGCCTGCTACCTGAAATCCAGACAGACTCCCCCCCTGGCCAGCGTGGAAATGGAAGCTATGGAGGCTCTGCCCGTGACCTGGGGGACTAGCTCCAGAGATGAAGACTTGGAGAACTGCAGTCACCATCTCGGGTCCGGAGCCACGAATTTCTCTCTCCTCAAACAAGCTGGGGATGTTGAGGAGAACCCTGGGCCAATGGCCCTCTTGCTCGCACTGTCCCTCCTGGTCCTGTGGACATCACCCGCCCCCACCCTGTCCGGCACGAATGACGCAGAAGACTGCTGCCTGTCTGTCACGCAGAAACCCATCCCCGGCTATATAGTGCGGAACTTCCATTACCTGCTGATCAAGGACGGATGTAGGGTGCCAGCCGTCGTCTTCACCACCCTGCGAGGGCGCCAGCTGTGCGCTCCTCCTGACCAGCCCTGGGTGGAGCGGATCATTCAACGCTTGCAGCGCACCTCAGCAAAAATGAAAAGAAGAAGTAGT (서열번호 39)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 39에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 39에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 39에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 39에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 39에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 39에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 39에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 39를 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 39로 이루어진다.

일부 실시양태에서, 단리된 핵산 분자는 메소텔린에 특이적으로 결합하는 CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, sushi 15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSSGILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLSRAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMAPRRARGCRTLGLPALLLLLLLRPPATRGITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRSGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMALLLALSLLVLWTSPAPTLSGTNDAEDCCLSVTQKPIPGYIVRNFHYLLIKDGCRVPAVVFTTLRGRQLCAPPDQPWVERIIQRLQRTSAKMKRRSS (서열번호 15)(또한 본원에서 ssVH-P4-CAR-P2A-sushi15-P2A-CCL19 또는 P4-BB-sushi15-CCL19로서 지칭됨)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 15에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 15에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 15에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 15에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 15에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 15에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 15에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 15를 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 15로 이루어진 폴리펩티드를 인코딩한다.

일부 실시양태에서, ssVH-P4-CAR-P2A-sushi15-P2A-CCL19 또는 P4-BB-sushi15-CCL19를 인코딩하는 단리된 핵산 분자는 ATGGATTGGACCTGGCGAATACTCTTCCTCGTCGCAGCGGCCACTGGTGCCCATTCACAAGTCCAACTGCAGCAGAGCGGACCTGGCCTGGTGACACCCAGTCAGACTCTCAGCCTGACTTGTGCAATCAGCGGCGATAGTGTGTCTAGTAATTCTGCAACATGGAACTGGATCAGACAATCACCAAGTCGGGGACTGGAGTGGCTCGGTAGAACCTATTATAGGTCCAAATGGTATAACGATTATGCAGTGTCCGTGAAGTCCCGAATGTCTATCAACCCTGATACTAGTAAGAATCAATTCAGTCTGCAGCTTAACAGCGTAACCCCCGAAGATACTGCTGTGTATTACTGTGCCCGGGGTATGATGACTTACTACTACGGAATGGATGTGTGGGGGCAGGGAACAACCGTTACTGTTTCATCCGGCATTCTCGGGAGCGGAGGCGGTGGAAGCGGTGGGGGAGGGTCCGGGGGAGGAGGATCTCAGCCTGTTCTTACTCAATCTTCTTCCCTCTCCGCCTCACCCGGGGCCTCCGCCTCACTGACCTGCACTCTGCGATCAGGCATCAACGTTGGGCCTTATAGAATCTACTGGTACCAGCAAAAGCCTGGATCACCGCCCCAGTACCTGCTGAACTATAAATCAGACTCAGACAAGCAGCAGGGCTCCGGCGTGCCGAGTCGATTTAGCGGGAGCAAGGACGCGTCTGCTAATGCCGGCGTGCTTCTCATCAGCGGGCTCCGCAGTGAGGATGAGGCAGATTACTACTGCATGATTTGGCATAGCAGTGCAGCCGTATTTGGCGGAGGAACACAGCTGACTGTCCTCTCTCGCGCCGCCGCTCCGACCACCACCCCTGCACCACGCCCACCTACTCCTGCGCCAACCATTGCCAGCCAGCCTCTCTCTCTCCGACCCGAGGCCTGTAGACCTGCCGCTGGCGGTGCAGTTCATACTCGGGGTCTCGATTTCGCCTGCGACATCTACATCTGGGCACCACTGGCTGGCACTTGTGGCGTTTTGCTCCTGTCCCTGGTGATCACTCTCTACTGTAATAAGAGGGGGAGGAAGAAACTCCTGTATATTTTCAAACAACCCTTTATGCGCCCTGTCCAAACCACCCAGGAAGAAGATGGATGTAGTTGCAGATTCCCAGAAGAAGAGGAGGGTGGGTGTGAACTTAGGGTGAAGTTTAGTCGCAGTGCCGACGCTCCCGCTTACCAACAGGGTCAGAACCAACTCTACAATGAGCTGAATCTGGGGAGGCGCGAAGAATACGACGTTCTGGATAAAAGACGCGGCCGCGACCCCGAGATGGGCGGGAAACCGCGGAGAAAGAACCCACAGGAAGGATTGTACAATGAGCTCCAGAAAGATAAGATGGCAGAAGCCTACTCCGAGATCGGCATGAAGGGGGAGCGAAGGCGCGGGAAAGGACACGATGGGCTGTACCAGGGTCTTTCAACCGCGACAAAGGACACCTATGATGCTCTCCATATGCAGGCCCTCCCGCCACGCGGAAGTGGAGCAACTAATTTTAGCCTTCTGAAACAAGCTGGCGATGTTGAGGAAAATCCTGGGCCGATGGCACCTAGACGGGCACGCGGGTGTAGAACGCTGGGCCTCCCCGCACTGTTGTTGCTCTTGCTTCTGAGACCTCCCGCTACAAGGGGGATAACTTGCCCTCCACCTATGAGCGTCGAGCATGCTGACATTTGGGTGAAGTCCTATTCACTCTATTCCCGGGAGCGGTACATCTGTAACTCTGGATTCAAGAGGAAAGCCGGCACCAGCAGTCTGACCGAGTGCGTGCTGAATAAGGCCACCAATGTGGCCCACTGGACAACCCCTAGCCTTAAATGTATACGGTCAGGGGGCGGATCTGGAGGCGGCGGCTCCGGTGGAGGCGGGAGTGGGGGCGGGGGCTCTGGAGGTGGTAGCCTGCAGAATTGGGTTAACGTGATTAGCGACCTCAAAAAAATCGAAGATCTTATCCAGAGCATGCATATAGACGCAACCCTGTACACAGAAAGCGATGTTCACCCGTCCTGCAAGGTAACGGCTATGAAGTGTTTTCTTTTGGAGTTGCAAGTCATATCACTGGAAAGTGGGGATGCCTCAATTCACGATACCGTGGAGAACCTCATCATCCTCGCAAATAACAGCCTGAGCTCCAATGGCAATGTCACAGAGTCAGGTTGCAAAGAGTGTGAAGAGCTGGAAGAGAAAAACATCAAAGAGTTCCTCCAGTCATTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATTAACACTAGTGGTAGTGGTGCCACAAATTTTAGTCTGTTGAAACAGGCCGGGGACGTCGAAGAAAACCCGGGGCCTATGGCCCTCTTGCTCGCACTGTCCCTCCTGGTCCTGTGGACATCACCCGCCCCCACCCTGTCCGGCACGAATGACGCAGAAGACTGCTGCCTGTCTGTCACGCAGAAACCCATCCCCGGCTATATAGTGCGGAACTTCCATTACCTGCTGATCAAGGACGGATGTAGGGTGCCAGCCGTCGTCTTCACCACCCTGCGAGGGCGCCAGCTGTGCGCTCCTCCTGACCAGCCCTGGGTGGAGCGGATCATTCAACGCTTGCAGCGCACCTCAGCAAAAATGAAAAGAAGAAGTAGT (서열번호 40)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 40에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 40에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 40에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 40에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 40에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 40에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 40에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 40을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 40으로 이루어진다.

일부 실시양태에서, 단리된 핵산 분자는 메소텔린에 특이적으로 결합하는 CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 mIL15/Ra-LSP를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSS GILGSGGGGSGGGGSGGGGS QPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLSRAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMRISKPHLRSISIQCYLCLLLNSHFLTEAGIHVFILGCFSAGLPKTEANWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSSGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGSLQITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSPSSNNTAATTAAIVPGSQLMPSKSPSTGTTEISSHESSHGTPSQTTAKNWELTASASHQPPGVYPQGHSDTTVAISTSTVLLCGLSAVSLLACYLKSRQTPPLASVEMEAMEALPVTWGTSSRDEDLENCSHHL (서열번호 53)(또한 본원에서 ssVHsp-P4-CD8h/TM-BB-CD3z-P2A-IL15LSP-IL15프로펩티드-mIL15/Ra 또는 ssVHsp-P4-BB-mIL15/Ra-LSP로서 지칭됨)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 53에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 53에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 53에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 53에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 53에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 53에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 53에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 53을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 53으로 이루어진 폴리펩티드를 인코딩한다.

일부 실시양태에서, ssVHsp-P4-CD8h/TM-BB-CD3z-P2A-IL15LSP-IL15프로펩티드-mIL15/Ra 또는 ssVHsp-P4-BB-mIL15/Ra-LSP를 인코딩하는 단리된 핵산 분자는 ATGGACTGGACATGGCGGATACTCTTCCTCGTCGCTGCTGCAACCGGAGCCCACAGCCAGGTGCAGCTCCAGCAGTCTGGGCCAGGTTTGGTGACTCCTAGTCAGACATTGAG CTTGACTTGTGCTATCAGCGGAGACTCTGTTTCATCTAATTCTGCAACTTGGAACTGGATTCGGCAGTCCCCCAGCCGGGGGCTCGAGTGGTTGGGTCGGACCTACTATCGGAGCAAATGGTACAATGACTATGCAGTGAGCGTCAAATCAAGAATGAGCATCAATCCTGACACAAGCAAGAACCAGTTTAGCCTTCAGCTTAATAGCGTGACTCCAGAGGACACAGCTGTGTACTATTGCGCGAGAGGCATGATGACATACTATTACGGAATGGACGTGTGGGGCCAGGGAACTACTGTTACAGTGTCAAGCGGAATCCTCGGTAGCGGAGGCGGCGGTTCCGGCGGAGGGGGTAGTGGTGGCGGGGGTAGTCAACCTGTGCTGACCCAGAGCAGCTCTCTTAGTGCTAGCCCAGGTGCAAGTGCAAGTCTTACCTGTACACTGCGCTCCGGTATTAATGTGGGCCCTTACCGAATTTACTGGTACCAGCAGAAACCAGGCTCCCCTCCCCAGTATCTGCTGAACTATAAGTCTGACTCAGACAAACAGCAGGGCTCCGGTGTGCCATCCCGATTTAGTGGCTCAAAGGATGCTAGTGCAAATGCCGGTGTTCTCCTGATCAGCGGACTCAGATCAGAGGACGAAGCAGACTATTACTGTATGATTTGGCATAGCAGCGCTGCTGTCTTCGGAGGAGGGACTCAGCTCACTGTCTTGAGTCGGGCCGCTGCACCTACCACTACCCCTGCCCCTCGACCCCCTACTCCCGCCCCAACTATCGCATCCCAACCACTCTCTCTCAGACCCGAAGCCTGTAGACCCGCAGCCGGTGGCGCTGTGCATACTCGCGGACTTGATTTTGCTTGTGATATTTATATCTGGGCCCCCCTTGCCGGAACTTGTGGAGTTCTCCTGCTGTCTCTCGTAATCACCCTTTATTGTAACAAACGGGGGCGCAAAAAACTTCTTTACATTTTCAAGCAGCCCTTTATGCGGCCCGTGCAGACCACACAGGAAGAAGATGGCTGCAGCTGCAGGTTCCCAGAGGAAGAAGAGGGCGGCTGCGAGCTGCGAGTAAAGTTCAGCCGGAGCGCCGATGCACCTGCATACCAGCAGGGTCAGAACCAGCTCTACAATGAGCTGAACCTGGGCAGAAGAGAGGAATATGATGTACTCGACAAGAGAAGGGGACGCGATCCAGAGATGGGCGGCAAACCACGGCGGAAAAATCCGCAGGAGGGGCTCTATAACGAGCTCCAGAAGGACAAGATGGCAGAAGCCTACTCAGAAATTGGCATGAAAGGAGAGAGAAGGAGGGGAAAGGGCCATGATGGCCTTTACCAAGGGTTGTCTACTGCCACCAAGGATACGTACGATGCACTCCATATGCAGGCTCTTCCTCCCCGAGGCTCAGGAGCCACCAACTTCTCCCTGCTGAAGCAGGCCGGCGACGTGGAGGAGAACCCAGGTCCTATGAGAATCTCAAAACCCCATCTTAGAAGCATCTCTATACAGTGTTATCTGTGTCTCTTGCTGAACTCCCACTTTTTGACAGAAGCTGGGATACATGTCTTTATCCTGGGATGTTTTTCCGCCGGGCTCCCTAAAACCGAGGCCAACTGGGTAAACGTAATCTCAGACCTTAAAAAGATTGAGGACCTGATTCAGTCAATGCATATCGATGCAACTTTGTACACGGAGAGCGATGTTCACCCAAGTTGTAAAGTGACCGCGATGAAATGTTTTCTCCTCGAATTGCAGGTGATCTCCCTCGAGTCAGGCGACGCGTCTATCCACGATACTGTGGAAAACCTTATCATTTTGGCGAACAATAGCCTCTCATCTAATGGTAACGTGACCGAGTCCGGCTGCAAGGAATGTGAGGAACTGGAGGAGAAAAATATCAAGGAATTCCTGCAGTCATTTGTACACATCGTGCAAATGTTTATCAACACTTCTTCAGGAGGCGGGTCAGGAGGGGGAGGCTCAGGCGGCGGAGGTAGTGGAGGAGGAGGAAGTGGAGGCGGCAGTCTCCAGATCACCTGTCCACCACCAATGAGTGTGGAACACGCGGACATTTGGGTCAAGTCATATTCTCTTTACTCCAGAGAGCGATACATATGCAACAGTGGTTTCAAGCGGAAAGCGGGTACTTCTTCACTTACCGAGTGCGTGCTCAATAAAGCAACCAACGTCGCGCACTGGACAACACCTAGCCTGAAATGCATAAGAGATCCTGCCCTGGTTCACCAGCGGCCAGCGCCACCGTCCACAGTGACAACAGCTGGTGTGACACCCCAGCCGGAGAGCCTTAGCCCTAGCGGCAAAGAGCCGGCCGCAAGCTCACCAAGCTCAAATAACACAGCCGCGACAACTGCTGCTATCGTGCCCGGTTCACAATTGATGCCGAGCAAATCACCAAGCACCGGAACTACCGAAATCTCAAGTCATGAAAGTAGTCACGGTACTCCTAGCCAGACGACGGCAAAGAATTGGGAGCTGACTGCCTCTGCGAGCCACCAGCCGCCGGGTGTTTACCCTCAGGGGCATTCAGATACTACTGTGGCTATCTCTACTTCCACCGTCCTCTTGTGCGGCTTGTCTGCTGTGTCTCTTCTGGCTTGCTATTTGAAAAGTAGACAGACACCACCCCTTGCAAGTGTCGAGATGGAAGCGATGGAGGCATTGCCTGTGACCTGGGGAACCAGTAGTAGGGACGAGGACCTGGA AAATTGTAGTCACCACCTGTGA (서열번호 58)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 58에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 58에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 58에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 58에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 58에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 58에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 58에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 58을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 58로 이루어진다.

일부 실시양태에서, 단리된 핵산 분자는 메소텔린에 특이적으로 결합하는 CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 sIL15-LSP를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSSGILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLSRAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMRISKPHLRSISIQCYLCLLLNSHFLTEAGIHVFILGCFSAGLPKTEANWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS (서열번호 54)(또한 본원에서 ssVHsp-P4-CD8h/TM-BB-CD3z-P2A-IL15LSP-IL15프로펩티드-IL15 또는 ssVHsp-P4-BB-sIL15-LSP로서 지칭됨)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 54에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 54에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 54에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 54에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 54에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 54에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 54에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 54를 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 54로 이루어진 폴리펩티드를 인코딩한다.

일부 실시양태에서, ssVHsp-P4-CD8h/TM-BB-CD3z-P2A-IL15LSP-IL15프로펩티드-IL15 또는 ssVHsp-P4-BB-sIL15-LSP를 인코딩하는 단리된 핵산 분자는 ATGGACTGGACATGGCGGATACTCTTCCTCGTCGCTGCTGCAACCGGAGCCCACAGCCAGGTGCAGCTCCAGCAGTCTGGGCCAGGTTTGGTGACTCCTAGTCAGACATTGAGCTTGACTTGTGCTATCAGCGGAGACTCTGTTTCATCTAATTCTGCAACTTGGAACTGGATTCGGCAGTCCCCCAGCCGGGGGCTCGAGTGGTTGGGTCGGACCTACTATCGGAGCAAATGGTACAATGACTATGCAGTGAGCGTCAAATCAAGAATGAGCATCAATCCTGACACAAGCAAGAACCAGTTTAGCCTTCAGCTTAATAGCGTGACTCCAGAGGACACAGCTGTGTACTATTGCGCGAGAGGCATGATGACATACTATTACGGAATGGACGTGTGGGGCCAGGGAACTACTGTTACAGTGTCAAGCGGAATCCTCGGTAGCGGAGGCGGCGGTTCCGGCGGAGGGGGTAGTGGTGGCGGGGGTAGTCAACCTGTGCTGACCCAGAGCAGCTCTCTTAGTGCTAGCCCAGGTGCAAGTGCAAGTCTTACCTGTACACTGCGCTCCGGTATTAATGTGGGCCCTTACCGAATTTACTGGTACCAGCAGAAACCAGGCTCCCCTCCCCAGTATCTGCTGAACTATAAGTCTGACTCAGACAAACAGCAGGGCTCCGGTGTGCCATCCCGATTTAGTGGCTCAAAGGATGCTAGTGCAAATGCCGGTGTTCTCCTGATCAGCGGACTCAGATCAGAGGACGAAGCAGACTATTACTGTATGATTTGGCATAGCAGCGCTGCTGTCTTCGGAGGAGGGACTCAGCTCACTGTCTTGAGTCGGGCCGCTGCACCTACCACTACCCCTGCCCCTCGACCCCCTACTCCCGCCCCAACTATCGCATCCCAACCACTCTCTCTCAGACCCGAAGCCTGTAGACCCGCAGCCGGTGGCGCTGTGCATACTCGCGGACTTGATTTTGCTTGTGATATTTATATCTGGGCCCCCCTTGCCGGAACTTGTGGAGTTCTCCTGCTGTCTCTCGTAATCACCCTTTATTGTAACAAACGGGGGCGCAAAAAACTTCTTTACATTTTCAAGCAGCCCTTTATGCGGCCCGTGCAGACCACACAGGAAGAAGATGGCTGCAGCTGCAGGTTCCCAGAGGAAGAAGAGGGCGGCTGCGAGCTGCGAGTAAAGTTCAGCCGGAGCGCCGATGCACCTGCATACCAGCAGGGTCAGAACCAGCTCTACAATGAGCTGAACCTGGGCAGAAGAGAGGAATATGATGTACTCGACAAGAGAAGGGGACGCGATCCAGAGATGGGCGGCAAACCACGGCGGAAAAATCCGCAGGAGGGGCTCTATAACGAGCTCCAGAAGGACAAGATGGCAGAAGCCTACTCAGAAATTGGCATGAAAGGAGAGAGAAGGAGGGGAAAGGGCCATGATGGCCTTTACCAAGGGTTGTCTACTGCCACCAAGGATACGTACGATGCACTCCATATGCAGGCTCTTCCTCCCCGAGGTTCAGGCGCAACAAATTTTTCACTTCTTAAACAAGCTGGCGATGTCGAGGAAAACCCAGGTCCCATGCGGATCTCTAAACCCCACTTGCGGAGCATTTCTATCCAGTGTTATCTTTGCCTCCTGCTTAACTCCCACTTTCTCACAGAAGCAGGGATACACGTGTTCATCCTGGGCTGTTTTTCTGCCGGTCTCCCCAAAACAGAAGCCAACTGGGTGAATGTGATCAGTGATCTTAAGAAAATAGAAGACCTCATCCAGTCAATGCACATCGATGCCACCTTGTACACTGAGAGCGACGTGCACCCTTCCTGCAAGGTGACAGCTATGAAGTGCTTCCTGCTTGAGCTCCAGGTCATATCCCTTGAGTCTGGAGATGCAAGTATCCACGATACGGTGGAAAACCTTATTATACTGGCCAATAATTCTCTTTCTTCCAATGGCAATGTTACCGAATCAGGGTGTAAAGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAAAATATCAAAGAGTTTTTGCAGTCATTTGTGCACATCGTCCAGATG TTTATTAATACAAGTTGA (서열번호 59)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 59에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 59에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 59에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 59에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 59에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 59에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 59에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 59를 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 59로 이루어진다.

일부 실시양태에서, 단리된 핵산 분자는 메소텔린에 특이적으로 결합하는 CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, mIL15/Ra-LSP를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSSGILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLSRAAAPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMRISKPHLRSISIQCYLCLLLNSHFLTEAGIHVFILGCFSAGLPKTEANWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMALLLALSLLVLWTSPAPTLSGTNDAEDCCLSVTQKPIPGYIVRNFHYLLIKDGCRVPAVVFTTLRGRQLCAPPDQPWVERIIQRLQRTSAKMKRRSS (서열번호 55)(또한 본원에서 ssVHsp-P4-CD8h/TM-BB-CD3z-P2A-IL15LSP-IL15프로펩티드-IL15-P2A-endospCCL19 또는 ssVHsp-P4-BB-mIL15/Ra-LSP-CCL19로서 지칭됨)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 55에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 55에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 55에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 55에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 55에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 55에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 55에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 55를 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 55로 이루어진 폴리펩티드를 인코딩한다.

일부 실시양태에서, ssVHsp-P4-CD8h/TM-BB-CD3z-P2A-IL15LSP-IL15프로펩티드-IL15-P2A-endospCCL19 또는 ssVHsp-P4-BB-mIL15/Ra-LSP-CCL19를 인코딩하는 단리된 핵산 분자는 ATGGATTGGACCTGGCGAATACTCTTCCTCGTCGCAGCGGCCACTGGTGCCCATTCACAAGTCCAACTGCAGCAGAGCGGACCTGGCCTGGTGACACCCAGTCAGACTCTCAGCCTGACTTGTGCAATCAGCGGCGATAGTGTGTCTAGTAATTCTGCAACATGGAACTGGATCAGACAATCACCAAGTCGGGGACTGGAGTGGCTCGGTAGAACCTATTATAGGTCCAAATGGTATAACGATTATGCAGTGTCCGTGAAGTCCCGAATGTCTATCAACCCTGATACTAGTAAGAATCAATTCAGTCTGCAGCTTAACAGCGTAACCCCCGAAGATACTGCTGTGTATTACTGTGCCCGGGGTATGATGACTTACTACTACGGAATGGATGTGTGGGGGCAGGGAACAACCGTTACTGTTTCATCCGGCATTCTCGGGAGCGGAGGCGGTGGAAGCGGTGGGGGAGGGTCCGGGGGAGGAGGATCTCAGCCTGTTCTTACTCAATCTTCTTCCCTCTCCGCCTCACCCGGGGCCTCCGCCTCACTGACCTGCACTCTGCGATCAGGCATCAACGTTGGGCCTTATAGAATCTACTGGTACCAGCAAAAGCCTGGATCACCGCCCCAGTACCTGCTGAACTATAAATCAGACTCAGACAAGCAGCAGGGCTCCGGCGTGCCGAGTCGATTTAGCGGGAGCAAGGACGCGTCTGCTAATGCCGGCGTGCTTCTCATCAGCGGGCTCCGCAGTGAGGATGAGGCAGATTACTACTGCATGATTTGGCATAGCAGTGCAGCCGTATTTGGCGGAGGAACACAGCTGACTGTCCTCTCTCGCGCCGCCGCTCCGACCACCACCCCTGCACCACGCCCACCTACTCCTGCGCCAACCATTGCCAGCCAGCCTCTCTCTCTCCGACCCGAGGCCTGTAGACCTGCCGCTGGCGGTGCAGTTCATACTCGGGGTCTCGATTTCGCCTGCGACATCTACATCTGGGCACCACTGGCTGGCACTTGTGGCGTTTTGCTCCTGTCCCTGGTGATCACTCTCTACTGTAATAAGAGGGGGAGGAAGAAACTCCTGTATATTTTCAAACAACCCTTTATGCGCCCTGTCCAAACCACCCAGGAAGAAGATGGATGTAGTTGCAGATTCCCAGAAGAAGAGGAGGGTGGGTGTGAACTTAGGGTGAAGTTTAGTCGCAGTGCCGACGCTCCCGCTTACCAACAGGGTCAGAACCAACTCTACAATGAGCTGAATCTGGGGAGGCGCGAAGAATACGACGTTCTGGATAAAAGACGCGGCCGCGACCCCGAGATGGGCGGGAAACCGCGGAGAAAGAACCCACAGGAAGGATTGTACAATGAGCTCCAGAAAGATAAGATGGCAGAAGCCTACTCCGAGATCGGCATGAAGGGGGAGCGAAGGCGCGGGAAAGGACACGATGGGCTGTACCAGGGTCTTTCAACCGCGACAAAGGACACCTATGATGCTCTCCATATGCAGGCCCTCCCGCCACGCGGAAGTGGAGCAACTAATTTTAGCCTTCTGAAACAAGCTGGCGATGTTGAGGAAAATCCTGGGCCGATGCGCATTAGCAAGCCACATCTGAGGAGTATCAGCATCCAGTGCTACCTTTGCCTGCTGCTCAACTCTCACTTTCTGACAGAAGCTGGCATCCACGTCTTCATCCTGGGGTGCTTCAGCGCCGGCTTGCCGAAGACCGAAGCCAACTGGGTGAATGTGATCTCCGACCTCAAGAAGATCGAGGACCTGATCCAGAGTATGCATATTGATGCTACACTTTACACCGAGTCCGATGTTCACCCTAGTTGTAAGGTGACTGCCATGAAATGTTTCTTGCTGGAGCTTCAGGTAATAAGCCTTGAGTCTGGGGATGCAAGCATTCATGACACGGTTGAGAATCTCATCATCCTGGCAAATAATTCACTGTCTTCAAATGGTAACGTTACAGAGAGCGGCTGTAAGGAGTGCGAAGAGCTTGAAGAGAAAAACATCAAGGAATTCCTCCAGAGTTTCGTGCACATCGTGCAAATGTTCATCAACACGAGCTCTGGAGGCGGATCAGGAGGCGGAGGATCAGGGGGGGGAGGGTCAGGCGGAGGGGGATCTGGTGGAGGCAGCCTTCAAATCACATGCCCGCCACCTATGTCCGTTGAGCACGCCGACATATGGGTGAAGTCATATTCACTGTATAGTCGGGAGAGGTACATTTGTAATTCAGGTTTCAAGCGAAAAGCTGGGACATCAAGCCTGACAGAATGCGTACTTAACAAGGCCACAAATGTCGCCCATTGGACCACTCCGAGTCTGAAGTGTATACGAGATCCCGCACTGGTGCACCAGCGACCTGCTCCCCCTAGTACAGTAACAACCGCGGGCGTTACGCCCCAGCCTGAATCCCTGAGCCCATCTGGCAAGGAGCCTGCAGCTAGCTCTCCGAGCAGCAATAATACTGCAGCGACCACTGCAGCCATCGTCCCCGGCTCCCAGCTCATGCCTAGTAAAAGTCCGTCTACAGGAACGACCGAAATCTCCAGCCACGAGTCTAGTCACGGGACCCCGAGTCAGACCACTGCCAAGAACTGGGAGCTTACGGCCAGTGCCTCCCATCAACCCCCGGGCGTCTACCCGCAAGGCCATAGCGACACCACAGTCGCCATTAGCACATCTACTGTCCTCTTGTGCGGGCTCTCCGCTGTGTCCCTCCTGGCCTGTTATCTCAAGAGCAGACAGACCCCCCCATTGGCAAGCGTTGAGATGGAGGCAATGGAGGCTCTGCCCGTTACTTGGGGGACTTCTTCACGCGACGAGGATCTGGAGAACTGCTCCCACCACCTGGGAAGTGGTGCCACAAATTTCAGCCTGCTCAAGCAGGCCGGGGATGTTGAAGAGAACCCAGGGCCGATGGCCCTCTTGCTCGCACTGTCCCTCCTGGTCCTGTGGACATCACCCGCCCCCACCCTGTCCGGCACGAATGACGCAGAAGACTGCTGCCTGTCTGTCACGCAGAAACCCATCCCCGGCTATATAGTGCGGAACTTCCATTACCTGCTGATCAAGGACGGATGTAGGGTGCCAGCCGTCGTCTTCACCACCCTGCGAGGGCGCCAGCTGTGCGCTCCTCCTGACCAGCCCTGGGTGGAGCGGATCATTCAACGCTTGCAGCGCACCTCAGCAAAAATGAAAAGAAGAAGTAGTTGA (서열번호 60)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 60에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 60에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 60에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 60에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 60에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 60에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 60에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 60을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 60으로 이루어진다.

일부 실시양태에서, 단리된 핵산 분자는 메소텔린에 특이적으로 결합하는 CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, sIL15-LSP를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSS GILGSGGGGSGGGGSGGGGS QPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLS RAAA PTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMRISKPHLRSISIQCYLCLLLNSHFLTEAGIHVFILGCFSAGLPKTEANWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMALLLALSLLVLWTSPAPTLSGTNDAEDCCLSVTQKPIPGYIVRNFHYLLIKDGCRVPAVVFTTLRGRQLCAPPDQPWVERIIQRLQRTSAKMKRRSS (서열번호 56)(또한 본원에서 ssVHsp-P4-CD8h/TM-BB-CD3z-P2A-IL15LSP-IL15프로펩티드-IL15-P2A-endospCCL19 또는 ssVHsp-P4-BB-sIL15-LSP-CCL19로서 지칭됨)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 56에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 56에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 56에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 56에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 56에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 56에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 56에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 56을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 56으로 이루어진 폴리펩티드를 인코딩한다.

일부 실시양태에서, ssVHsp-P4-CD8h/TM-BB-CD3z-P2A-IL15LSP-IL15프로펩티드-IL15-P2A-endospCCL19 또는 ssVHsp-P4-BB-sIL15-LSP-CCL19를 인코딩하는 단리된 핵산 분자는 ATGGATTGGACCTGGCGAATACTCTTCCTCGTCGCAGCGGCCACTGGTGCCCATTCACAAGTCCAACTGCAGCAGAGCGGACCTGGCCTGGTGACACCCAGTCAGACTCTCAGCCTGACTTGTGCAATCAGCGGCGATAGTGTGTCTAGTAATTCTGCAACATGGAACTGGATCAGACAATCACCAAGTCGGGGACTGGAGTGGCTCGGTAGAACCTATTATAGGTCCAAATGGTATAACGATTATGCAGTGTCCGTGAAGTCCCGAATGTCTATCAACCCTGATACTAGTAAGAATCAATTCAGTCTGCAGCTTAACAGCGTAACCCCCGAAGATACTGCTGTGTATTACTGTGCCCGGGGTATGATGACTTACTACTACGGAATGGATGTGTGGGGGCAGGGAACAACCGTTACTGTTTCATCCGGCATTCTCGGGAGCGGAGGCGGTGGAAGCGGTGGGGGAGGGTCCGGGGGAGGAGGATCTCAGCCTGTTCTTACTCAATCTTCTTCCCTCTCCGCCTCACCCGGGGCCTCCGCCTCACTGACCTGCACTCTGCGATCAGGCATCAACGTTGGGCCTTATAGAATCTACTGGTACCAGCAAAAGCCTGGATCACCGCCCCAGTACCTGCTGAACTATAAATCAGACTCAGACAAGCAGCAGGGCTCCGGCGTGCCGAGTCGATTTAGCGGGAGCAAGGACGCGTCTGCTAATGCCGGCGTGCTTCTCATCAGCGGGCTCCGCAGTGAGGATGAGGCAGATTACTACTGCATGATTTGGCATAGCAGTGCAGCCGTATTTGGCGGAGGAACACAGCTGACTGTCCTCTCTCGCGCCGCCGCTCCGACCACCACCCCTGCACCACGCCCACCTACTCCTGCGCCAACCATTGCCAGCCAGCCTCTCTCTCTCCGACCCGAGGCCTGTAGACCTGCCGCTGGCGGTGCAGTTCATACTCGGGGTCTCGATTTCGCCTGCGACATCTACATCTGGGCACCACTGGCTGGCACTTGTGGCGTTTTGCTCCTGTCCCTGGTGATCACTCTCTACTGTAATAAGAGGGGGAGGAAGAAACTCCTGTATATTTTCAAACAACCCTTTATGCGCCCTGTCCAAACCACCCAGGAAGAAGATGGATGTAGTTGCAGATTCCCAGAAGAAGAGGAGGGTGGGTGTGAACTTAGGGTGAAGTTTAGTCGCAGTGCCGACGCTCCCGCTTACCAACAGGGTCAGAACCAACTCTACAATGAGCTGAATCTGGGGAGGCGCGAAGAATACGACGTTCTGGATAAAAGACGCGGCCGCGACCCCGAGATGGGCGGGAAACCGCGGAGAAAGAACCCACAGGAAGGATTGTACAATGAGCTCCAGAAAGATAAGATGGCAGAAGCCTACTCCGAGATCGGCATGAAGGGGGAGCGAAGGCGCGGGAAAGGACACGATGGGCTGTACCAGGGTCTTTCAACCGCGACAAAGGACACCTATGATGCTCTCCATATGCAGGCCCTCCCGCCACGCGGAAGTGGAGCAACTAATTTTAGCCTTCTGAAACAAGCTGGCGATGTTGAGGAAAATCCTGGGCCGATGCGCATCTCCAAGCCCCATCTGAGGAGCATCAGCATCCAGTGCTACCTGTGTCTGCTGCTCAACAGCCACTTCCTGACGGAAGCAGGCATTCATGTCTTTATCCTGGGATGCTTTTCTGCCGGCCTGCCAAAGACAGAAGCAAACTGGGTTAACGTTATCAGTGATCTGAAAAAAATCGAGGACCTGATCCAGTCCATGCATATTGACGCTACGCTGTATACAGAGTCCGACGTCCACCCATCATGCAAGGTGACCGCTATGAAGTGTTTCCTGCTGGAACTGCAGGTTATCAGCTTGGAAAGTGGCGACGCTTCCATTCACGATACGGTGGAGAACTTGATAATCCTTGCGAATAATAGTCTGAGCAGCAACGGCAACGTTACTGAAAGCGGGTGCAAAGAATGTGAAGAGCTCGAAGAGAAAAACATCAAAGAATTTTTGCAGTCTTTCGTGCATATTGTTCAGATGTTTATTAACACCAGTGGATCAGGAGCAACTAACTTCTCTCTTCTTAAGCAAGCTGGCGATGTAGAGGAAAACCCTGGGCCTATGGCCCTCTTGCTCGCACTGTCCCTCCTGGTCCTGTGGACATCACCCGCCCCCACCCTGTCCGGCACGAATGACGCAGAAGACTGCTGCCTGTCTGTCACGCAGAAACCCATCCCCGGCTATATAGTGCGGAACTTCCATTACCTGCTGATCAAGGACGGATGTAGGGTGCCAGCCGTCGTCTTCACCACCCTGCGAGGGCGCCAGCTGTGCGCTCCTCCTGACCAGCCCTGGGTGGAGCGGATCATTCAACGCTTGCAGCGCACCTCAGCAAAAATGAAAAGAAGAAGTAGTTGA (서열번호 61)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 61에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 61에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 61에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 61에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 61에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 61에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 61에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 61을 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 61로 이루어진다.

일부 실시양태에서, 단리된 핵산 분자는 메소텔린에 특이적으로 결합하는 CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, sushi 15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 MDWTWRILFLVAAATGAHSQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSS GILGSGGGGSGGGGSGGGGS QPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLS RAAA IEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVRSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMAPRRARGCRTLGLPALLLLLLLRPPATRGITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRSGGSGGGGSGGGSGGGGSLQNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMALLLALSLLVLWTSPAPTLSGTNDAEDCCLSVTQKPIPGYIVRNFHYLLIKDGCRVPAVVFTTLRGRQLCAPPDQPWVERIIQRLQRTSAKMKRRSS (서열번호 57)(또한 본원에서 ssVH-P4-CD28힌지-TM-CD28cyto-CD3z-P2A-IL15Rasp-IL15Ra(sushi)-20aa링커-IL15-P2A-endospCCL19 또는 SSVHsp-P4-CD28-sushi15-CCL19로서 지칭됨)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 57에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 57에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 57에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 57에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 57에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 57에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 57에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 57을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 단리된 핵산 분자는 서열번호 57로 이루어진 폴리펩티드를 인코딩한다.

벡터

일부 실시양태에서, 하나 이상의 벡터는 CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 임의로 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 벡터 (예컨대, 발현 벡터)는 인간 메소텔린을 특이적으로 인식하는 항체, CD8 힌지 영역, CD8 막관통 영역, 4-1BB 세포내 영역, 및 CD3ζ 세포내 영역을 포함하는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드; IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드; 및 임의로 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 핵산 분자를 포함한다. 도 1a 및 도 1b를 참고한다.

일부 실시양태에서, CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드는 벡터 (예컨대, 발현 벡터)에서 5' 말단으로부터 3' 말단으로 다음과 같이 배열된다:

일부 실시양태에서, CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, 및 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드는 벡터 (예컨대, 발현 벡터)에서 5' 말단으로부터 3' 말단으로 다음과 같이 배열된다:

일부 실시양태에서, 제1 벡터 (예컨대, 제1 발현 벡터)는 CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하고, 제2 벡터 (예컨대, 제2 발현 벡터)는 IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.

일부 실시양태에서, 제1 벡터 (예컨대, 제1 발현 벡터)는 CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하고, 제2 벡터 (예컨대, 제2 발현 벡터)는 IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하며, 여기서 IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드는 임의로 제2 벡터 (예컨대, 제2 발현 벡터)에서 5' 말단으로부터 3' 말단으로 IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 - CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 또는 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 - IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드와 같이 배열된다.

추가적인 실시양태에서, 제1 벡터 (예컨대, 제1 발현 벡터)는 CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 또는 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하고, 제2 벡터 (예컨대, 제2 발현 벡터)는 IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 또는 제1 벡터에 포함되지 않은 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 벡터 (예컨대, 제1 발현 벡터)는 CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하고, 제2 벡터 (예컨대, 제2 발현 벡터)는 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 다른 실시양태에서, 제1 벡터 (예컨대, 제1 발현 벡터)는 CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하고, 제2 벡터 (예컨대, 제2 발현 벡터)는 IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.

추가적인 실시양태에서, 제1 벡터 (예컨대, 제1 발현 벡터)는 CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하고, 제2 벡터 (예컨대, 제2 발현 벡터)는 IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하고, 제3 벡터 (예컨대, 제3 발현 벡터)는 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 벡터 (예컨대, 발현 벡터)는 mIL-15/Ra를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 일부 경우에, 벡터 (예컨대, 발현 벡터)는 서열번호 14 (또한 본원에서 mIL15/Ra-P2A-CCL19로서 지칭됨)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩하는 핵산 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 14에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 14에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 14에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 14에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 14에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 14에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 14에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 14를 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 14로 이루어진 폴리펩티드를 인코딩한다.

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 벡터 (예컨대, 발현 벡터)는 sushi15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 일부 경우에, 벡터 (예컨대, 발현 벡터)는 서열번호 31 (또한 본원에서 sushi15-CCL19로서 지칭됨)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩하는 핵산 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 31에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 31에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 31에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 31에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 31에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 31에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 31에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 31을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 31로 이루어진 폴리펩티드를 인코딩한다.

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 벡터 (예컨대, 발현 벡터)는 메소텔린에 특이적으로 결합하는 CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 mIL-15/Ra를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 일부 경우에, 벡터 (예컨대, 발현 벡터)는 서열번호 34 (또한 본원에서 ssVH-P4-CAR-P2A-IL2sp-mIL15/Ra 또는 P4-BB-mIL15/Ra로서 지칭됨)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩하는 핵산 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 34에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 34에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 34에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 34에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 34에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 34에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 34에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 34를 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 34로 이루어진 폴리펩티드를 인코딩한다.

일부 실시양태에서, ssVH-P4-CAR-P2A-IL2sp-mIL15/Ra 또는 P4-BB-mIL15/Ra를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 벡터는 서열번호 37에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 37에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 37에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 37에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 37에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 37에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 37에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 37에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 37을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 37로 이루어진다.

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 벡터 (예컨대, 발현 벡터)는 메소텔린에 특이적으로 결합하는 CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 sushi15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 일부 경우에, 벡터 (예컨대, 발현 벡터)는 서열번호 35 (또한 본원에서 ssVH-P4-CAR-P2A-sushi15 또는 P4-BB-sushi15로서 지칭됨)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩하는 핵산 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 35에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 35에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 35에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 35에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 35에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 35에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 35에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 35를 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 35로 이루어진 폴리펩티드를 인코딩한다.

일부 실시양태에서, ssVH-P4-CAR-P2A-sushi15 또는 P4-BB-sushi15를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 벡터는 서열번호 38에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 38에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 38에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 38에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 38에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 38에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 38에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 38에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 38을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 38로 이루어진다.

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 벡터 (예컨대, 발현 벡터)는 메소텔린에 특이적으로 결합하는 CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, mIL-15/Ra를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 일부 경우에, 벡터 (예컨대, 발현 벡터)는 서열번호 36 (또한 본원에서 ssVH-P4-CAR-P2A-IL2sp-mIL15/Ra-P2A-CCL19 또는 P4-BB-mIL15-CCL19로서 지칭됨)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩하는 핵산 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 36에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 36에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 36에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 36에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 36에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 36에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 36에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 36을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 36으로 이루어진 폴리펩티드를 인코딩한다.

일부 실시양태에서, ssVH-P4-CAR-P2A-IL2sp-mIL15/Ra-P2A-CCL19 또는 P4-BB-mIL15-CCL19를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 벡터는 서열번호 39에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 39에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 39에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 39에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 39에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 39에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 39에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 39에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 39를 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 39로 이루어진다.

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 벡터 (예컨대, 발현 벡터)는 메소텔린에 특이적으로 결합하는 CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, sushi15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 일부 경우에, 벡터 (예컨대, 발현 벡터)는 서열번호 15 (또한 본원에서 ssVH-P4-CAR-P2A-sushi15-P2A-CCL19 또는 P4-BB-sushi15-CCL19로서 지칭됨)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩하는 핵산 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 15에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 15에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 15에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 15에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 15에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 15에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 15에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 15를 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 15로 이루어진 폴리펩티드를 인코딩한다.

일부 실시양태에서, ssVH-P4-CAR-P2A-sushi15-P2A-CCL19 또는 P4-BB-sushi15-CCL19를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 벡터는 서열번호 40에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 40에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 40에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 40에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 40에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 40에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 40에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 40에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 40을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 40으로 이루어진다.

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 벡터 (예컨대, 발현 벡터)는 메소텔린에 특이적으로 결합하는 CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 mIL15/Ra-LSP를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 일부 경우에, 벡터 (예컨대, 발현 벡터)는 서열번호 53 (또한 본원에서 ssVHsp-P4-CD8h/TM-BB-CD3z-P2A-IL15LSP-IL15프로펩티드-mIL15/Ra 또는 SSVHsp-P4-BB-mIL15/Ra-LSP로서 지칭됨)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩하는 핵산 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 53에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 53에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 53에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 53에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 53에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 53에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 53에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 53을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 53으로 이루어진 폴리펩티드를 인코딩한다.

일부 실시양태에서, ssVHsp-P4-CD8h/TM-BB-CD3z-P2A-IL15LSP-IL15프로펩티드-mIL15/Ra 또는 SSVHsp-P4-BB-mIL15/Ra-LSP를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 벡터는 서열번호 58에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 58에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 58에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 58에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 58에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 58에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 58에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 58에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 58을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 58로 이루어진다.

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 벡터 (예컨대, 발현 벡터)는 메소텔린에 특이적으로 결합하는 CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 sIL15-LSP를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 일부 경우에, 벡터 (예컨대, 발현 벡터)는 서열번호 54 (또한 본원에서 ssVHsp-P4-CD8h/TM-BB-CD3z-P2A-IL15LSP-IL15프로펩티드-IL15 또는 SSVHsp-P4-BB-sIL15-LSP로서 지칭됨)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩하는 핵산 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 54에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 54에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 54에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 54에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 54에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 54에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 54에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 54를 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 54로 이루어진 폴리펩티드를 인코딩한다.

일부 실시양태에서, ssVHsp-P4-CD8h/TM-BB-CD3z-P2A-IL15LSP-IL15프로펩티드-IL15 또는 SSVHsp-P4-BB-sIL15-LSP를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 벡터는 서열번호 59에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 59에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 59에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 59에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 59에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 59에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 59에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 59에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 59를 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 59로 이루어진다.

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 벡터 (예컨대, 발현 벡터)는 메소텔린에 특이적으로 결합하는 CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, mIL15/Ra-LSP를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 일부 경우에, 벡터 (예컨대, 발현 벡터)는 서열번호 55 (또한 본원에서 ssVHsp-P4-CD8h/TM-BB-CD3z-P2A-IL15LSP-IL15프로펩티드-IL15-P2A-endospCCL19 또는 ssVHsp-P4-BB-mIL15/Ra-LSP-CCL19로서 지칭됨)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩하는 핵산 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 55에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 55에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 55에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 55에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 55에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 55에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 55에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 55를 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 55로 이루어진 폴리펩티드를 인코딩한다.

일부 실시양태에서, ssVHsp-P4-CD8h/TM-BB-CD3z-P2A-IL15LSP-IL15프로펩티드-IL15-P2A-endospCCL19 또는 ssVHsp-P4-BB-mIL15/Ra-LSP-CCL19를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 벡터는 서열번호 60에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 60에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 60에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 60에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 60에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 60에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 60에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 60에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 60을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 60으로 이루어진다.

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 벡터 (예컨대, 발현 벡터)는 메소텔린에 특이적으로 결합하는 CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, sIL15-LSP를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 일부 경우에, 벡터 (예컨대, 발현 벡터)는 서열번호 56 (또한 본원에서 ssVHsp-P4-CD8h/TM-BB-CD3z-P2A-IL15LSP-IL15프로펩티드-IL15-P2A-endospCCL19 또는 ssVHsp-P4-BB-sIL15-LSP-CCL19로서 지칭됨)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩하는 핵산 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 56에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 56에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 56에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 56에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 56에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 56에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 56에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 56을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 56으로 이루어진 폴리펩티드를 인코딩한다.

일부 실시양태에서, ssVHsp-P4-CD8h/TM-BB-CD3z-P2A-IL15LSP-IL15프로펩티드-IL15-P2A-endospCCL19 또는 ssVHsp-P4-BB-sIL15-LSP-CCL19를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하는 벡터는 서열번호 61에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 61에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 61에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 61에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 61에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 61에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 61에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 61에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함하는 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 61을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 61로 이루어진다.

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 벡터 (예컨대, 발현 벡터)는 메소텔린에 특이적으로 결합하는 CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, sushi15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 일부 경우에, 벡터 (예컨대, 발현 벡터)는 서열번호 57 (또한 본원에서 ssVH-P4-CD28힌지-TM-CD28cyto-CD3z-P2A-IL15Rasp-IL15Ra(sushi)-20aa링커-IL15-P2A-endospCCL19 또는 ssVHsp-P4-CD28-sushi15-CCL19로서 지칭됨)에 대해 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩하는 핵산 서열을 포함한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 57에 대해 약 85% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 57에 대해 약 90% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 57에 대해 약 95% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 57에 대해 약 96% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 57에 대해 약 97% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 57에 대해 약 98% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 57에 대해 약 99% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 57을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, 핵산 서열은 서열번호 57로 이루어진 폴리펩티드를 인코딩한다.

본 발명의 벡터 (예컨대, 발현 벡터)는 하나 이상의 자연적으로 유래된 핵산 또는 인공적으로 합성된 핵산을 포함할 수 있으며, 본 발명의 벡터 (예컨대, 발현 벡터)가 도입될 세포의 유형에 따라 적절하게 선택될 수 있다. 이들의 서열 정보는 공공연하게 알려진 문헌 또는 데이터베이스, 예컨대, NCBI (www.ncbi.nlm.nih.gov/guide/)의 검색에 의해 적절하게 수득될 수 있다.

본 발명의 벡터는 벡터를 세포와 접촉시킴으로써 면역 세포 또는 이의 전구체 세포 내로 도입되어 그 안에 인코딩된 소정의 단백질 (폴리펩티드)이 면역 세포 내에서 발현되어 본 발명의 변형된 면역 세포를 생산할 수 있는 발현 벡터일 수 있다. 본 발명의 발현 벡터는 임의의 실시양태에 의해 특별히 제한되지 않는다. 당업자는 면역 세포에서 원하는 단백질 (폴리펩티드)의 발현을 가능하게 하는 발현 벡터를 설계하고 생산할 수 있다. 인간 메소텔린을 특이적으로 인식하는 세포 표면 분자를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 임의로 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 본 발명의 발현 벡터의 예는 본 발명의 면역 세포를 생산하기 위한 발현 벡터 중 임의의 것을 포함할 수 있다.

본 발명의 발현 벡터의 종류는 선형 형태 또는 원형 형태일 수 있으며, 비-바이러스 벡터, 예컨대, 플라스미드일 수 있거나, 바이러스 벡터일 수 있거나, 트랜스포손에 기반한 벡터일 수 있다. 이러한 벡터는 제어 서열, 예컨대, 프로모터 또는 종결자, 또는 선택적 마커 서열, 예컨대, 약물 저항성 유전자 또는 리포터 유전자를 함유할 수 있다. IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드는 폴리뉴클레오티드 각각이 효율적으로 전사될 수 있도록 프로모터 서열의 하류에 작동가능하게 배열될 수 있다.

프로모터의 예는 다음을 포함할 수 있다: 바이러스-유래된 프로모터, 예컨대, 레트로바이러스 LTR 프로모터, SV40 초기 프로모터, 사이토메갈로바이러스 프로모터, 및 단순 포진 바이러스 티미딘 키나제 프로모터; 및 포유류-유래된 프로모터, 예컨대, 포스포글리세레이트 키나제 (PGK) 프로모터, Xist 프로모터, β-액틴 프로모터 및 RNA 중합효소 II 프로모터. 일부 실시양태에서, 프로모터는 바람직하게는 레트로바이러스 LTR 프로모터를 포함할 수 있다. 레트로바이러스 LTR 프로모터는 CTGAATATGGGCCAAACAGGATATCTGTGGTAAGCAGTTCCTGCCCCGGCTCAGGGCCAAGAACAGATGGAACAGCTGAATATGGGCCAAACAGGATATCTGTGGTAAGCAGTTCCTGCCCCGGCTCAGGGCCAAGAACAGATGGTCCCCAGATGCGGTCCAGCCCTCAGCAGTTTCTAGAGAACCATCAGATGTTTCCAGGGTGCCCCAAGGACCTGAAATGACCCTGTGCCTTATTTGAACTAACCAATCAGTTCGCTTCTCGCTTCTGTTCGCGCGCTTCTGCTCCCCGAGCTCAATAAAAGAGCCCACAACCCCTCACTCGGCGCGCCAGTCCTCCGATTGACTGAGTCGCCCGGGTACCCGTGTATCCAATAAACCCTCTTGCAGTTGCATCCGACTTGTGGTCTCGCTGTTCCTTGGGAGGGTCTCCTCTGAGTGATTGACTACCCGTCAGCGGGGGTCTTTCA를 포함할 수 있다. 대안적으로, 테트라사이클린에 의해 유도되는 테트라사이클린-반응성 프로모터, 또는 인터페론에 의해 유도되는 Mx1 프로모터 등이 사용될 수 있다. 본 발명의 발현 벡터에서 특정 물질에 의해 유도되는 프로모터의 사용은 예를 들어, 본 발명의 벡터를 함유하는 면역 세포를 암의 치료에 사용하기 위한 약학 조성물로서 사용하는 경우, 암의 치료의 과정에 따라 IL-15 발현 및 임의로 CCL19 발현의 유도의 제어를 가능하게 한다.

바이러스 벡터의 예는 레트로바이러스 벡터, 렌티바이러스 벡터, 아데노바이러스 벡터, 및 아데노-연관된 바이러스 벡터를 포함할 수 있으며, 바람직하게는 레트로바이러스 벡터, 바람직하게는 감마 레트로바이러스 벡터, 더욱 바람직하게는 pMSGV 벡터 (Tamada k et al., Clin Cancer Res 18: 6436-6445 (2002)), pMSCV 벡터 (Takara Bio Inc.에 의해 제조됨), 또는 pSFG 벡터를 포함할 수 있다. 레트로바이러스 벡터의 사용은 트랜스진이 숙주 세포의 게놈에 통합되기 때문에 트랜스진의 장기적이고 안정적인 발현을 가능하게 한다.

면역 세포에서 본 발명의 발현 벡터의 함유를 확인하기 위해 하나 이상의 검정을 사용할 수 있다. 예시적인 검정은 조작된 면역 세포에 의해 CAR의 발현을 스크리닝하기 위한 유세포 측정법, 노던 블롯팅, 서던 블롯팅, PCR, 예컨대, RT-PCR, ELISA 또는 웨스턴 블롯팅을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 발현 벡터는 면역 세포에 의해 CAR, IL-15 및/또는 CCL19의 발현을 검출하기 위한 마커 유전자 (예컨대, 형광 단백질, 예컨대, 녹색 형광 단백질 (GFP), 적색 형광 단백질 (RFP) 또는 황색 형광 단백질 (YFP)을 인코딩함)을 추가로 포함한다.

면역 세포 및 생산 방법

특정 실시양태에서, 본원에 기재된 면역 세포는 메소텔린 (예컨대, 인간 메소텔린)을 특이적으로 인식하는 세포 표면 분자, IL-15 및 임의로 CCL19를 발현하도록 변형된다 (도 1c 및 도 1d). 예시적인 면역 세포는 림프성 세포, 예컨대, T 세포, 자연 살해 세포 (NK 세포) 및 B 세포, 항원 제시 세포, 예컨대, 단핵구, 대식세포, 수지상 세포 또는 과립구, 예컨대, 호중구, 호산구, 호염기구 또는 비만 세포를 포함할 수 있다. 면역 세포는 줄기 세포, 예컨대, 유도 만능 줄기 세포 (iPSC), 배아 줄기 세포 (ESC), ESC-유래된 조혈 전구체 세포 (HPC) 또는 조혈 내피 세포 (HEC)로부터 유래될 수 있다. 면역 세포는 포유류, 예컨대, 인간, 개, 고양이, 돼지 또는 마우스로부터 유래된 T 세포, 바람직하게는 인간으로부터 유래되거나 분리된 T 세포를 포함할 수 있다. 면역 세포 (예컨대, T 세포)는 배양, 예컨대, 엑스 비보 배양을 통해 수득되거나 포유류로부터 직접 수확될 수 있다. 면역 세포는 세포가 면역 반응에 관여하고 메소텔린 (예컨대, 인간 메소텔린)을 특이적으로 인식하는 세포 표면 분자를 발현할 수 있고, IL-15를 발현하고, 임의로 CCL19를 발현하는 한, 제한되지 않는다. 면역 세포는 후속 치료를 위해 이를 필요로 하는 대상체로부터 수확된 자가유래 세포일 수 있다. 면역 세포는 또한 이를 필요로 하는 대상체에 대해 동종이계 세포 또는 동계 세포일 수 있다.

일부 실시양태에서, 면역 세포는 대상체에서의 면역 세포의 투여로 인해 대상체에서 염증 또는 면역 반응을 손상시키거나 호전시키도록 추가로 변형된다. 일부 경우에, 염증 또는 면역 반응은 이식편 대 숙주 질환 (GvHD)이고, 면역 세포는 GvHD를 손상시키거나 호전시키도록 추가로 변형된다.

일부 경우에, 면역 세포는 T-세포 수용체 (TCR)의 알파 쇄 및/또는 베타 쇄의 발현을 손상시키거나 제거하도록 변형된다. 일부 경우에, 면역 세포는 TCR의 알파 쇄 및 베타 쇄 (TCRα/β)의 발현을 손상시키거나 제거하도록 변형된다. 일부 경우에, 면역 세포는 TCR의 알파 쇄 및 베타 쇄 (TCRα/β)를 발현하지 않는다. 일부 경우에, 추가적인 CD3 도메인 (예컨대, CD3 델타, CD3 감마 또는 CD3 엡실론) 중 하나 이상은 TCRα/β 기능을 손상시키도록 변형된다.

일부 경우에, 면역 세포는 감마 델타 T 세포 수용체 (gdTCR 또는 γδTCR)를 발현한다. γδT 세포는 T 세포의 하위그룹이며, 모든 T-림프구의 약 0.5-5%를 차지한다. 암 환경 하에서, γδT 세포는 세포의 표면에서 제시된 γ 및 δ 수용체의 조합 하위그룹을 기반으로, 전종양 및 항-종양 활성 둘 모두를 발휘하는 것으로 나타났다. 예를 들어, Vγ9Vδ2 T 세포로서 또한 지칭된, γ-쇄 가변 영역 9 (Vγ9) 및 δ-쇄 가변 영역 2 (Vδ2)를 함유하는 TCR을 발현하는 γδT 세포는 비제한적으로 암세포 증식, 혈관신생, 림프관신생의 억제 및 암세포 아폽토시스의 증가를 포함하는 항-종양 활성을 발휘한다. γTCR의 예는 Vγ1TCR, Vγ2TCR, Vγ3TCR, Vγ4TCR, Vγ5TCR, Vγ6TCR, Vγ7TCR, Vγ8TCR 및 Vγ9TCR을 포함하고, δTCR의 예는 Vδ1TCR, Vδ2TCR, Vδ3TCR, Vδ4TCR, Vδ5TCR, Vδ6TCR, Vδ7TCR, Vδ8TCR 및 Vδ9TCR를 포함한다. 특이적 γTCR 및 δTCR의 조합은 제한되지 않으나, 예를 들어, Vγ3Vδ1TCR, Vγ4Vδ1TCR, Vγ9Vδ1TCR 및 Vγ9Vδ2TCR이 고려된다. 일부 경우에, 면역 세포는 Vγ9 TCR, Vδ2 TCR 또는 Vγ9Vδ2 TCR을 발현한다.

일부 실시양태에서, 감마 델타 T 세포 수용체 (gdTCR 또는 γδTCR)를 발현하는 본원에 기재된 면역 세포는 유도 만능 줄기 세포 (iPSC)로부터 생산된다. 일부 경우에, iPSC는 αβT 세포가 아닌 세포로부터 확립된다. 일부 경우에, iPSC는 γδTCR 세포로 분화되기 전에 Vγ9Vδ2 유전자를 iPSC의 게놈에 삽입함으로써 추가로 변형된다. 일부 경우에, Vγ9Vδ2 유전자는 서열번호 44에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에, Vγ9Vδ2 유전자는 서열번호 44로 이루어진 폴리펩티드를 인코딩한다.

일부 실시양태에서, 본원에 개시된 γδTCR 세포는 메소텔린을 특이적으로 인식하는 CAR을 발현하고 IL-15를 발현하도록 변형된다. 일부 경우에, γδTCR 세포는 CCL19를 발현하도록 추가로 변형된다. 일부 경우에, γδTCR 세포는 Vγ9Vδ2 유전자로 변형된 iPSC로부터 분화된다. 일부 경우에, γδTCR 세포는 서열번호 44에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩하는 Vγ9Vδ2 유전자로 변형된 iPSC로부터 분화된다. 일부 경우에, γδTCR 세포는 서열번호 44로 이루어진 폴리펩티드를 인코딩하는 Vγ9Vδ2 유전자로 변형된 iPSC로부터 분화된다.

특정 실시양태에서, 메소텔린을 특이적으로 인식하는 CAR 및 IL-15를 발현하도록 변형된 면역 세포의 집단이 본원에 개시된다. 일부 경우에, 면역 세포의 집단은 CCL19를 추가로 발현한다. 일부 실시양태에서, 면역 세포의 집단은 메소텔린을 특이적으로 인식하는 CAR, IL-15 및 임의로 CCL19를 발현하는 변형된 T 세포 (예컨대, 엑스 비보에서 확장되거나 포유류로부터 수확됨)를 포함한다. 면역 세포의 집단은 변형된 T 세포의 약 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 그 초과의 백분율을 포함할 수 있다. 면역 세포의 집단은 약 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95%의 변형된 T 세포를 포함할 수 있다. 면역 세포의 집단은 변형된 T 세포의 실질적으로 순수한 집단을 포함할 수 있다. 예시적인 T 세포는 알파-베타 T 세포, 감마-델타 T 세포, CD8⁺T 세포, CD4⁺T 세포, 종양 침윤 T 세포, 기억 T 세포, 나이브 T 세포 및 자연 살해 T (NKT) 세포를 포함할 수 있다.

일부 실시양태에서, 메소텔린을 특이적으로 인식하는 CAR, IL-15 및 임의로 CCL19를 발현하도록 변형된 면역 세포의 집단은 약 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5% 또는 그 미만의 오염 세포보다 적은 오염 세포를 포함한다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "오염 세포"는 메소텔린을 특이적으로 인식하는 CAR, IL-15 및 임의로 CCL19를 발현하지 않는 세포를 지칭한다. 오염 세포는 메소텔린을 특이적으로 인식하는 CAR, IL-15 및 임의로 CCL19를 발현하지 않는 T 세포, 및 메소텔린을 특이적으로 인식하는 CAR, IL-15 및 임의로 CCL19를 발현하지 않는 다른 유형의 면역 세포를 포함할 수 있다. 오염 세포는 또한 체액, 예컨대, 혈액 또는 골수액으로부터의 비-면역 세포, 조직, 예컨대, 비장 조직, 흉선 또는 림프절로부터 유래된 비-면역 세포, 또는 암 조직, 예컨대, 원발성 종양 조직, 전이성 종양 조직 또는 암성 복수로부터 유래된 비-면역 세포를 지칭할 수 있다.

본 발명의 면역 세포를 생산하는 방법의 예는 세포 표면 분자를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 임의로 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 면역 세포에 도입하는 생산 방법을 포함할 수 있다. 생산 방법은 예를 들어, WO2016/056228, WO2017/159736, WO2013/176915, WO2015/120096, WO2016/019300, 또는 Vormittag P et al, Curr Opin Biotechnol 2018; 53: 164-81에 기재된 바와 같은 생산 방법을 포함할 수 있다. 대안적인 예는 메소텔린 (예컨대, 인간 메소텔린)을 특이적으로 인식하는 세포 표면 분자 및/또는 IL-15, 및 추가로 임의적으로 CCL19의 발현을 위한 벡터를 수정란에 이식함으로써 생산된 트랜스제닉 포유류로부터 면역 세포를 정제하고 수득하는 방법, 및 필요한 경우, 메소텔린 (예컨대, 인간 메소텔린)을 특이적으로 인식하는 세포 표면 분자 및/또는 IL-15, 및 추가로 임의적으로 CCL19의 발현을 위한 벡터를 트랜스제닉 포유류로부터 정제되고 수득된 면역 세포에 추가로 도입하는 생산 방법을 포함할 수 있다.

세포 표면 분자를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 임의로 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, 또는 위의 기재된 벡터를 도입하는 경우에, 방법은 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 면역 세포에 도입하는 임의의 방법일 수 있다. 예는 전기천공법 (Cytotechnology, 3, 133 (1990)), 칼슘 포스페이트 방법 (일본 미심사 특허 출원 공개공보 번호 2-227075), 리포펙션법 (Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 84, 7413 (1987)) 및 바이러스 감염 방법을 포함할 수 있다. 바이러스 감염 방법의 예는 패키징 세포, 예컨대, GP2-293 세포 (Takara Bio Inc.에 의해 제조됨), Plat-GP 세포 (Cosmo Bio Co., Ltd.에 의해 제조됨), PG13 세포 (ATCC CRL-10686) 또는 PA317 세포 (ATCC CRL-9078)에, 도입될 벡터 및 패키징 플라스미드를 형질주입시켜, 재조합 바이러스를 생산하고, 면역 세포를 재조합 바이러스로 감염시키는 방법을 포함할 수 있다 (예컨대, WO2017/159736 참고).

일부 실시양태에서, 방법은 CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 임의로 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 하나 이상의 벡터를 면역 세포에 도입하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 인간 메소텔린을 특이적으로 인식하는 항체, CD8 힌지 영역, CD8 막관통 영역, 4-1BB 세포내 영역 및 CD3ζ 세포내 영역을 포함하는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드; IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드; 및 임의로 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 핵산 분자를 포함하는 벡터 (예컨대, 발현 벡터)를 면역 세포에 도입하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제1 벡터 (예컨대, 제1 발현 벡터) 및 IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제2 벡터 (예컨대, 제2 발현 벡터)를 함께 또는 단계적으로 면역 세포에 도입하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제1 벡터 (예컨대, 제1 발현 벡터) 및 IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제2 벡터 (예컨대, 제2 발현 벡터)를 함께 또는 단계적으로 면역 세포에 도입하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 또는 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제1 벡터 (예컨대, 제1 발현 벡터), 및 IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 또는 제1 벡터에 포함되지 않은 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제2 벡터 (예컨대, 제2 발현 벡터)를 함께 또는 단계적으로 면역 세포에 도입하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제1 벡터 (예컨대, 제1 발현 벡터), 및 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제2 벡터 (예컨대, 제2 발현 벡터)를 함께 또는 단계적으로 면역 세포에 도입하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제1 벡터 (예컨대, 제1 발현 벡터), 및 IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제2 벡터 (예컨대, 제2 발현 벡터)를 함께 또는 단계적으로 면역 세포에 도입하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제1 벡터 (예컨대, 제1 발현 벡터), IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제2 벡터 (예컨대, 제2 발현 벡터), 및 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 제3 벡터 (예컨대, 제3 발현 벡터)를 함께 또는 단계적으로 면역 세포에 도입하는 단계를 포함한다.

CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 중 하나 이상이 면역 세포의 게놈에 통합될 수 있다. 일부 실시양태에서, CAR을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, IL-15를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, 및 CCL19를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드는 게놈 내로 (예컨대, 에피솜적으로) 통합되지 않는다.

사용 방법

특정 실시양태에서, 메소텔린-발현 암을 치료하는 방법이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, 방법은 메소텔린에 특이적으로 결합하는 조작된 세포 표면 분자, 인터류킨 15 (IL-15) 및 임의로 케모카인 (C-C 모티프) 리간드 19 (CCL19)를 발현하도록 변형된 본원에 기재된 면역 세포를 이를 필요로 하는 대상체에 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 메소텔린을 특이적으로 인식하는 키메라 항원 수용체 (CAR) 또는 메소텔린에 특이적으로 결합하는 T 세포 수용체 (TCR)를 포함하는 조작된 세포 표면 분자를 발현하도록 변형된다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 인간 메소텔린을 특이적으로 인식하는 항체, CD8 힌지 영역, CD8 막관통 영역, 4-1BB 세포내 영역 및 CD3ζ 세포내 영역을 포함하는 CAR; IL-15; 및 임의로 CCL19을 발현하도록 변형된다.

일부 실시양태에서, 메소텔린-발현 암은 고형 종양이다. 일부 실시양태에서, 고형 종양은 중피종, 결장직장암, 췌장암, 흉선암, 담관암, 폐암, 피부암, 유방암, 전립선암, 비뇨기 방광암, 질암, 경부암, 자궁암, 간암, 신장암, 위암(gastric cancer), 비장암, 기관암, 기관지암, 위암(stomach cancer), 식도암, 담낭암, 고환암, 난소암, 또는 골암을 포함한다. 일부 실시양태에서, 메소텔린-발현 암은 난소암이다. 일부 실시양태에서, 메소텔린-발현 암은 중피종이다. 일부 실시양태에서, 메소텔린-발현 암은 위암이다. 일부 실시양태에서, 메소텔린-발현 암은 폐암 (예컨대, 비-소세포 폐암 (NSCLC), 소세포 폐암 (SCLC), 폐 카르시노이드 종양, 폐의 선편평 암종, 대세포 신경내분비 암종, 또는 타액선-유형 폐 암종)이다. 일부 실시양태에서, 메소텔린-발현 암은 NSCLC (예컨대, 폐의 선암종, 편평 세포, 대-세포 미분화된 암종, 육종양 암종 또는 선편평 암종)이다.

메소텔린-발현 암은 조혈암일 수 있다. 조혈암은 B-세포 조혈암, T-세포 조혈암, 호지킨 림프종, 또는 비-호지킨 림프종일 수 있다. 조혈암은 급성 림프구성 백혈병 (ALL), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 소 림프구성 림프종 (SLL), 미만성 거대 B-세포 림프종 (DLBCL), 여포성 림프종 (FL), 외투 세포 림프종 (MCL), 변연부 림프종, 버킷 림프종, 또는 발덴스트롬 마크로글로불린혈증일 수 있다.

조혈암은 육종일 수 있다. 육종은 연골육종, 유잉 육종, 악성 혈관내피종, 악성 신경초종, 골육종 또는 연조직 육종을 포함할 수 있다.

메소텔린-발현 암은 전이성 암, 예컨대, 전이성 고형 종양 또는 전이성 조혈암일 수 있다. 전이성 메소텔린-발현 암은 전이성 난소암, 전이성 중피종, 전이성 위암, 또는 전이성 폐암 (예컨대, 전이성 NSCLC)일 수 있다.

메소텔린-발현 암은 재발성 또는 불응성 암, 예컨대, 재발성 또는 불응성 고형 종양, 또는 재발성 또는 불응성 조혈암일 수 있다. 재발성 또는 불응성 메소텔린-발현 암은 재발성 또는 불응성 난소암, 재발성 또는 불응성 중피종, 재발성 또는 불응성 위암, 또는 재발성 또는 불응성 폐암 (예컨대, 재발성 또는 불응성 NSCLC)일 수 있다.

일부 실시양태에서, 방법은 추가적인 치료제 또는 추가적인 치료적 양생법을 대상체에 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 추가적인 치료제는 화학요법제, 면역요법제, 표적화된 요법, 방사선 요법, 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. 예시적인 추가적인 치료제는 알킬화제, 예컨대, 알트레타민, 부설판, 카보플라틴, 카르무스틴, 클로람부실, 시스플라틴, 사이클로포스파미드, 다카르바진, 로무스틴, 멜팔란, 옥살리플라틴, 테모졸로미드 또는 티오테파; 항대사물질, 예컨대, 5-플루오로우라실 (5-FU), 6-머캅토퓨린 (6-MP), 카페시타빈, 시타라빈, 플록수리딘, 플루다라빈, 젬시타빈, 하이드록시우레아, 메토트렉세이트 또는 페메트렉세드; 안트라사이클린, 예컨대, 다우노루비신, 독소루비신, 에피루비신 또는 이다루비신; 토포이소머라제 I 억제제, 예컨대, 토포테칸 또는 이리노테칸 (CPT-11); 토포이소머라제 II 억제제, 예컨대, 에토포시드 (VP-16), 테니포시드 또는 미톡산트론; 유사분열 억제제, 예컨대, 도세탁셀, 에스트라무스틴, 익사베필론, 파클리탁셀, 빈블라스틴, 빈크리스틴 또는 비노렐빈; 또는 코르티코스테로이드, 예컨대, 프레드니손, 메틸프레드니솔론 또는 덱사메타손을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.

일부 실시양태에서, 추가적인 치료제는 제1 라인 요법을 포함한다. 본원에 사용된 바와 같이 "제1 라인 요법"은 암을 갖는 대상체에 대한 일차 치료를 포함한다. 일부 실시양태에서, 암은 원발성 암이다. 다른 실시양태에서, 암은 전이성 또는 반복성 암이다. 일부 실시양태에서, 제1 라인 요법은 화학요법을 포함한다. 다른 실시양태에서, 제1 라인 치료는 방사선 요법을 포함한다. 당업자는 상이한 제1 라인 치료가 상이한 유형의 암에 적용될 수 있다는 것을 용이하게 이해할 것이다.

일부 실시양태에서, 추가적인 치료제는 폴리 ADP 리보스 중합효소 (PARP) 효소의 억제제를 포함한다. 예시적인 PARP 억제제는 올라파립 (AZD-2281, 린파자®, Astra Zeneca로부터의), 루카파립 (PF-01367338, 루브라카®, Clovis Oncology로부터의), 니라파립 (MK-4827, 제줄라®, Tesaro로부터의), 탈라조파립 (BMN-673, BioMarin Pharmaceutical Inc.로부터의), 벨리파립 (ABT-888, Abb Vie로부터의), CK-102 (구 CEP 9722, Teva Pharmaceutical Industries Ltd.로부터의), E7016 (Eisai로부터의), 이니파립 (BSI 201, Sanofi로부터의) 및 파미파립 (BGB-290, BeiGene으로부터의)을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.

일부 실시양태에서, 추가적인 치료제는 면역 체크포인트 억제제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 체크포인트 억제제는 펨브롤리주맙, 니볼루맙, 트레멜리무맙 또는 이필리무맙을 포함한다. 일부 실시양태에서, 체크포인트 억제제는 PD-L1, PD-L2, PD-1, CTLA-4, LAG3, B7-H3, KIR, CD137, PS, TFM3, CD52, CD30, CD20, CD33, CD27, OX40, GITR, ICOS, BTLA (CD272), CD160, 2B4, LAIR1, TIGHT, LIGHT, DR3, CD226, CD2 또는 SLAM의 억제제를 포함한다. 억제제는 항체 또는 이의 단편 (예컨대, 단클론 항체, 인간, 인간화된 또는 키메라 항체), RNAi 분자 또는 소분자일 수 있다.

일부 실시양태에서, 추가적인 치료제는 항체, 예컨대, 알렘투주맙, 트라스투주맙, 이브리투모맙 티욱세탄, 브렌툭시맙 베도틴, 아도-트라스투주맙 엠탄신 또는 블리나투모맙을 포함한다.

일부 실시양태에서, 추가적인 치료제는 사이토카인을 포함한다. 예시적인 사이토카인은 IL-1β, IL-6, IL-7, IL-10, IL-12, IL-21 또는 TNFα를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.

일부 실시양태에서, 추가적인 치료제는 수용체 작용제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 수용체 작용제는 톨-유사 수용체 (TLR) 리간드를 포함한다. 일부 실시양태에서, TLR 리간드는 TLR1, TLR2, TLR3, TLR4, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8 또는 TLR9를 포함한다. 일부 실시양태에서, TLR 리간드는 합성 리간드, 예컨대, 예를 들어, Pam3Cys, CFA, MALP2, Pam2Cys, FSL-1, Hib-OMPC, 폴리 I:C, 폴리 A:U, AGP, MPL A, RC-529, MDF2p, CFA 또는 플라겔린을 포함한다.

일부 실시양태에서, 추가적인 치료제는 플루다라빈 및 사이클로포스파미드를 포함한다.

일부 실시양태에서, 추가적인 치료제는 티사겐레클레우셀 (킴리아®), 악시카브타겐 실로류셀 (예카르타®) 또는 브렉수카브타겐 오토류셀 (테카르투스®)을 포함한다.

일부 실시양태에서, 추가적인 치료 양생법은 수술을 포함한다.

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 면역 세포 또는 본원에 기재된 약학 조성물 및 추가적인 치료제는 동시에 투여된다.

일부 실시양태에서, 본원에 기재된 면역 세포 또는 본원에 기재된 약학 조성물 및 추가적인 치료제는 순차적으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 면역 세포 또는 본원에 기재된 약학 조성물은 추가적인 치료제의 투여 전에 대상체에 투여된다. 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 면역 세포 또는 본원에 기재된 약학 조성물은 추가적인 치료제의 투여 후에 대상체에 투여된다.

일부 실시양태에서, 대상체는 인간이다.

일부 실시양태에서, 메소텔린 (예컨대, 인간 메소텔린)을 특이적으로 인식하는 세포 표면 분자, IL-15 및 임의로 CCL19를 발현하는 면역 세포를 생산하는 방법이 또한 본원에 기재된다. 방법은 본원에 기재된 핵산 분자 또는 핵산 분자를 포함하는 벡터를 면역 세포에 도입하여, 면역 세포에 의해 인간 메소텔린을 특이적으로 인식하는 세포 표면 분자, IL-15 및 임의로 CCL19의 발현을 유도하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 T 세포, 자연 살해 (NK) 세포, B 세포, 항원 제시 세포 또는 과립구, 임의로 T 세포 또는 NK 세포이다.

약학 조성물

특정 실시양태에서, 위에 기재된 면역 세포는 약학 조성물로서 제형화된다. 일부 실시양태에서, 약학 조성물은 비제한적으로 비경구, 경구, 설하 또는 경피 투여 경로를 포함하는 다중 투여 경로에 의해 대상체에 투여된다. 일부 실시양태에서, 비경구 투여는 정맥내, 피하, 근육내, 비강내, 동맥-내, 관절-내, 피내, 골내 주입, 복강내, 지주막하, 두개내, 윤활막내, 종양내, 피부내, 골수내, 심장내 또는 척추강내(intratechal) 투여를 포함한다. 일부 실시양태에서, 약학 조성물은 국소 투여용으로 제형화된다. 다른 실시양태에서, 약학 조성물은 전신 투여용으로 제형화된다.

일부 실시양태에서, 약학 조성물은 약학적으로 허용가능한 첨가제를 포함한다. 첨가제의 예는 식염수, 완충된 식염수, 세포 배양 배지, 덱스트로스, 주사용수, 글리세롤, 에탄올, 안정화제, 가용화제, 계면활성제, 완충액, 방부제, 장성제, 충진제, 윤활제, 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다.

일부 실시양태에서, 약학 조성물은 산, 예컨대, 아세트산, 붕산, 시트르산, 젖산, 인산 및 염산, 염기, 예컨대, 소듐 하이드록시드, 소듐 포스페이트, 소듐 보레이트, 소듐 시트레이트, 소듐 아세테이트, 소듐 락테이트 및 트리스-하이드록시메틸아미노메탄, 및 완충액, 예컨대, 시트레이트/덱스트로스, 소듐 바이카보네이트 및 암모늄 클로라이드를 포함하는 pH 조정제 또는 완충제를 추가로 포함한다. 이러한 산, 염기 및 완충액은 조성물의 pH를 허용가능한 범위로 유지하는 데 필요한 양으로 포함된다.

일부 실시양태에서, 약학 조성물은 조성물의 삼투질농도를 허용가능한 범위로 만드는 데 필요한 양으로 하나 이상의 염을 포함한다. 이러한 염은 소듐, 포타슘 또는 암모늄 양이온 및 클로라이드, 시트레이트, 아스코르베이트, 보레이트, 포스페이트, 바이카보네이트, 설페이트, 티오설페이트 또는 바이설파이트 음이온을 갖는 것들을 포함하며, 적합한 염은 소듐 클로라이드, 포타슘 클로라이드, 소듐 티오설페이트, 소듐 바이설파이트 및 암모늄 설페이트를 포함한다.

예시적인 방법에서, 본 발명의 약학 조성물은 1 개의 분획(in one portion) 또는 여러 개의 분할된 분획으로, 1 일 4 회, 3 회, 2 회 또는 1 회, 1-일, 2-일, 3-일, 4-일 또는 5-일 간격으로, 1 주 1 회, 7-일, 8-일 또는 9-일 간격으로, 1 주 2 회, 1 개월 1 회, 1 개월 2 회, 1 개월당 3 회 또는 그 초과로 독립적으로 투여될 수 있다.

환자의 상태가 개선되는 경우, 의사의 재량에 따라 조성물의 투여가 지속적으로 주어지거나, 대안적으로, 투여될 조성물의 용량이 일시적으로 감소되거나 특정 길이의 시간 동안 중단된다 (즉, "휴약기"). 일부 실시양태에서, 휴약기의 길이는 단지 예로서, 2 일, 3 일, 4 일, 5 일, 6 일, 7 일, 10 일, 12 일, 15 일, 20 일, 28 일, 35 일, 50 일, 70 일, 100 일, 120 일, 150 일, 180 일, 200 일, 250 일, 280 일, 300 일, 320 일, 350 일 또는 365 일을 포함하여 2 일 내지 1 년으로 다양하다. 휴약기 동안의 용량 감소는 단지 예로서, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%를 포함하여 10%-100%이다.

일부 실시양태에서, 이러한 양에 상응하는 주어진 CAR-T 세포의 양은 질환의 중증도 및 치료가 필요한 대상체 또는 숙주의 아이덴티티 (예컨대, 체중)와 같은 인자에 따라 달라지나, 그럼에도 불구하고, 예컨대, 투여될 특이적인 약제, 투여 경로 및 치료될 대상체 또는 숙주를 포함하여 사례를 둘러싼 특정 상황에 따라 당업계에 알려진 방식으로 일상적으로 결정된다. 일부 실시양태에서, 원하는 용량은 단일 용량으로 또는 동시에 (또는 짧은 기간에 걸쳐) 또는 적절한 간격으로 투여되는 분할 용량, 예를 들어, 1 일당 2, 3 또는 4 회 이상의 하위-용량으로서 편리하게 제시된다.

개별 치료 양생법에 관한 변수의 갯수가 많고 이러한 권장된 값으로부터의 상당한 변동이 드물지 않기 때문에, 전술한 범위는 단지 시사적일 뿐이다. 이러한 투여량은 사용되는 화합물의 활성, 치료될 질환 또는 병태, 투여 방식, 개별 대상체의 요구사항, 치료될 질환 또는 병태의 중증도, 및 시술자의 판단에 제한되지 않고 다수의 변수에 따라 변경된다.

일부 실시양태에서, 이러한 치료적 양생법의 독성 및 치료적 효험은 비제한적으로 LD50 (집단의 50%에 치명적인 용량) 및 ED50 (집단의 50%에서 치료적으로 효과적인 용량)의 결정을 포함하는, 세포 배양물 또는 실험 동물에서의 표준 약학 절차에 의해 결정된다. 독성 및 치료적 효과 사이의 용량 비는 치료적 지수이며, 이는 LD50 및 ED50 간의 비로서 표현된다. 높은 치료적 지수를 나타내는 화합물이 선호된다. 세포 배양물 검정 및 동물 연구로부터 수득된 데이터는 인간에게 사용하기 위한 다양한 투여량을 제형화하는 데 사용된다. 이러한 화합물의 투여량은 바람직하게는 최소한의 독성을 갖는 ED50을 포함하는 순환 농도의 범위 내에 있다. 투여량은 사용된 투여량 형태 및 활용된 투여 경로에 따라 이 범위 내에서 다양하다.

키트/제조 물품

특정 실시양태에서, 위에 기재된 핵산 분자, 위에 기재된 핵산 분자를 포함하는 벡터, 메소텔린 (예컨대, 인간 메소텔린)을 특이적으로 인식하는 CAR, IL-15 및 임의로 CCL19를 발현하는 면역 세포, 또는 약학 조성물을 포함하는 키트가 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, 키트는 암의 치료에 사용하기 위한 사용 방법 등을 명시하는 하나 이상의 패키징 재료, 예컨대, 패키지 삽입물, 표지 또는 패키지 등을 함유할 수 있다. 본 발명의 약학 조성물 내의 면역 세포는 종양 반복성에 대한 억압적인 효과를 가지므로, 본 발명의 약학 조성물은 종양 반복성의 억압에 사용하기 위한 약학 조성물로서 역할을 할 수 있다. 종양 반복성의 억압에 사용하기 위한 이러한 약학 조성물은 종양 반복성의 억압에 사용하기 위한 사용 방법 등을 명시하는 하나 이상의 패키징 재료, 예컨대, 패키지 삽입물, 표지 또는 패키지 등을 함유할 수 있다.

용어 "패키징 재료"는 키트의 구성요소를 수용하는 물리적인 구조를 지칭한다. 재료는 구성요소를 무균적으로 유지할 수 있으며, 이러한 목적을 위해 일반적으로 사용되는 재료 (예컨대, 종이, 골판지 섬유, 유리, 플라스틱, 호일, 앰플, 바이알, 튜브 등)로 만들어질 수 있다.

본 발명의 키트는 표지 또는 삽입물을 포함할 수 있다. 표지 또는 삽입물은 별도로, 또는 구성요소, 키트 또는 패키징 재료 (예컨대, 상자)에 첨부되거나, 키트 구성요소를 함유하는 앰플, 튜브 또는 바이알에 부착된 "인쇄물", 예컨대, 종이 또는 판지를 포함한다. 표지 또는 삽입물은 추가적으로 컴퓨터 판독가능한 매체, 예컨대, 디스크 (예컨대, 플로피 디스켓, ZIP 디스크), 광학 디스크, 예컨대, CD- 또는 DVD-ROM/RAM, DVD, MP3, 자기 테이프 또는 전기 저장 매체, 예컨대, RAM 및 ROM, 또는 이들의 하이브리드, 예컨대, 자기/광학 저장 매체, FLASH 매체 또는 메모리 유형 카드를 포함할 수 있다.

표지 또는 삽입물은 그 안의 하나 이상의 구성요소 (예컨대, 결합제 또는 약학 조성물), 용량, 작용 기전을 포함하는 활성제(들)의 임상 약리학, 약동학 및 약력학의 식별 정보를 포함할 수 있다. 표지 또는 삽입물은 제조업체 정보, 로트 번호, 및 제조 위치 및 날짜를 식별하는 정보를 포함할 수 있다.

표지 또는 삽입물은 키트 구성요소가 사용될 수 있는 질환에 대한 정보를 포함할 수 있다. 표지 또는 삽입물은 방법, 또는 치료 프로토콜 또는 치료적 양생법에서 키트 구성요소 중 하나 이상을 사용하기 위한 임상의 또는 대상체를 위한 설명서를 포함할 수 있다. 설명서는 투여량, 빈도 또는 지속기간, 및 본원에 기재된 방법, 치료 프로토콜 또는 치료적 양생법 중 임의의 것을 실시하기 위한 설명서를 포함할 수 있다.

표지 또는 삽입물은 구성요소가 제공할 수 있는 임의의 이익, 예컨대, 치료적 이익에 대한 정보를 포함할 수 있다. 표지 또는 삽입물은 특정 조성물 (예컨대, 본원에 기재된 변형된 면역 세포)을 사용하는 것이 적절하지 않은 상황에 관해 대상체 또는 임상의에게 경고하는 것과 같은 잠재적인 이상 부작용에 대한 정보를 포함할 수 있다. 예를 들어, 이상 부작용은 일반적으로 활성제의 더 높은 용량, 빈도 또는 지속기간에서 발생할 가능성이 더 높으므로, 설명서는 더 높은 용량, 빈도 또는 지속기간에 대한 권장사항을 포함할 수 있다. 대상체가 조성물과 양립할 수 없는 하나 이상의 다른 의약을 복용했거나 복용할 것이거나 현재 복용 중인 경우, 또는 대상체가 조성물과 양립할 수 없는 다른 치료 프로토콜 또는 치료적 양생법을 겪었거나 겪을 것이거나 현재 겪고 있는 경우, 이상 부작용이 또한 발생할 것이므로, 설명서는 이러한 부적합성에 관한 정보를 포함할 수 있다.

정의

명세서 및 청구범위에 사용된 바와 같이, 단수형 "a", "an" 및 "the"는 문맥상 명백하게 달리 지시하지 않는 한 복수의 지시대상을 포함한다. 예를 들어, 용어 "세포"는 이들의 혼합물을 비롯하여 복수의 세포를 포함한다.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "포함하는"은 조성물 및 방법이 열거된 요소를 포함하지만, 다른 것들을 제외하지 않는다는 것을 의미하도록 의도된다. 조성물 및 방법을 정의하기 위해 사용될 때 "본질적으로 이로 이루어진"은 의도된 용도를 위한 조합에 대해 임의의 필수적인 유의성의 다른 요소를 제외하는 것을 의미할 것이다. 예를 들어, 본원에 정의된 바와 같은 요소로 본질적으로 이루어진 조성물은 단리 및 정제 방법으로부터의 미량 오염물질 및 약학적으로 허용가능한 담체, 예컨대, 포스페이트 완충된 식염수 및 보존제 등을 제외하지 않을 것이다. "이로 이루어진"은 본원에 개시된 조성물을 투여하기 위한 실질적인 방법 단계 및 미량 원소 초과의 다른 성분을 제외하는 것을 의미할 것이다. 이들 전환 용어 각각에 의해 정의된 양태는 본 개시내용의 범주 내에 있다.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "약"은 값이 값을 결정하기 위해 사용될 장치 또는 방법에 대한 오차의 표준 편차를 포함함을 나타내는 데 사용된다. 범위를 포함하는, 수치적인 지정, 예컨대, 온도, 시간, 양 및 농도 앞에 사용될 때 용어 "약"은 (+) 또는 (-) 15%, 10%, 5%, 3%, 2% 또는 1%만큼 달라질 수 있는 근사치를 나타낸다.

또한 본원에 사용된 바와 같이, "및/또는"은 연관된 나열된 항목 중 하나 이상의 임의의 및 모든 가능한 조합뿐만 아니라 대안 ("또는")으로 해석될 때 조합의 결여를 지칭하고 포함한다.

본원에 사용된 바와 같이, "임의적" 또는 "임의적으로"는 후속적으로 설명되는 이벤트 또는 상황이 발생할 수 있거나 발생할 수 없으며, 설명은 이벤트 또는 상황이 발생하는 실시양태 및 이가 발생하지 않는 실시양태를 포함한다는 것을 의미한다.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "항체"는 각각 중쇄 및 경쇄 가변 도메인, V_H및 V_L을 통해 다른 분자 (항원, 예컨대, 메소텔린)에 결합하는 단백질을 지칭한다. 용어 "가변 영역" 또는 "가변 도메인"은 항원에 대한 항체의 결합에 관여하는 항체의 도메인을 지칭한다. 천연 항체의 중쇄 및 경쇄 (각각 VH 및 VL)의 가변 도메인은 일반적으로 유사한 구조를 가지며, 각각의 도메인은 4 개의 보존된 프레임워크 영역 (FR) 및 3 개의 CDR을 포함한다. (예컨대, Kindt et al. Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., page 91 (2007) 참고). 단일 VH 또는 VL 도메인은 항원-결합 특이성을 부여하기에 충분할 수 있다. 게다가, 특정 항원에 결합하는 항체는 각각 상보적인 VL 또는 VH 도메인의 라이브러리를 스크리닝하기 위해 항원에 결합하는 항체로부터 VH 또는 VL 도메인을 사용하여 단리될 수 있다. 예컨대, Portolano et al., J. Immunol. 150:880-887 (1993); Clarkson et al., Nature 352:624-628 (1991) 참고.

본 개시내용의 항체는 단클론 항체를 포함한다. 항체와 관련하여 사용될 때 용어 "단클론"은 임의의 진핵생물, 원핵생물 또는 파지 클론을 포함하는 단일 클론에 기초하거나, 그로부터 수득되거나, 그로부터 유래된 항체를 지칭한다. 따라서 "단클론" 항체는 본원에서 구조적으로 정의되며, 이를 생산하는 방법은 정의되지 않는다.

단클론 항체는 당업계에 알려진 방법에 의해 제조된다 (Kohler et　al., Nature, 256:495(1975); 및 Harlow and Lane, Using Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, 1999). 간단히 말해서, 단클론 항체는 마우스에 항원을 주사함으로써 수득될 수 있다. 동물을 면역화하는 데 사용되는 폴리펩티드 또는 펩티드는 번역된 DNA로부터 유래되거나, 화학적으로 합성되고, 담체 단백질에 컨쥬게이션될 수 있다. 면역화 펩티드에 화학적으로 커플링되는 일반적으로 사용되는 담체는 예를 들어, 키홀 림펫 헤모시아닌 (KLH), 티로글로불린, 소 혈청 알부민 (BSA) 및 파상풍 독소를 포함한다. 항체 생산은 혈청 샘플을 분석하고, 비장을 제거하여 B 림프구를 수득하고, B 림프구를 골수종 세포와 융합하여 하이브리도마를 생산하고, 하이브리도마를 클로닝하고, 항원에 대한 항체를 생산하는 양성 클론을 선택하고, 하이브리도마 배양물로부터 항체를 단리함으로써 검증된다. 단클론 항체는 예를 들어, 단백질-A 세파로스를 이용한 친화도 크로마토그래피, 크기-배제 크로마토그래피 및 이온-교환 크로마토그래피를 포함하는 다양한 확립된 기술에 의해 하이브리도마 배양물로부터 단리 및 정제될 수 있다 (예컨대, Coligan et　al., Current Protocols in Immunology sections 2.7.1-2.7.12 및 sections 2.9.1-2.9.3; 및 Barnes et　al., "Methods in Molecular Biology," 10:79-104, Humana Press (1992) 참고).

본 개시내용의 항체는 임의의 항체 클래스, IgM, IgG, IgE, IgA, IgD 또는 서브클래스에 속할 수 있다. IgG에 대한 예시적인 서브클래스는 IgG₁, IgG₂, IgG₃ 및 IgG₄이다.

본 개시내용의 항체는 인간화된 항체일 수 있다. 용어 "인간화된"은 수용자 인간 면역글로불린 분자에서 항원에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 상보성 결정 영역 (CDR)의 비-인간 아미노산 잔기, 및 CDR에 측접하는 프레임워크 영역 (FR)에서 하나 이상의 인간 아미노산 잔기를 갖는 항체 서열을 지칭한다. 임의의 마우스, 랫트, 기니피그, 염소, 비-인간 영장류 (예컨대, 유인원, 침팬지, 마카크, 오랑우탄 등) 또는 기타 동물 항체가 인간화된 항체를 생산하기 위한 CDR 공여자로서 사용될 수 있다. 인간 프레임워크 영역 잔기는 (예컨대, 공여자 가변 영역으로부터의) 상응하는 비-인간 잔기로 대체될 수 있다. 따라서, 인간 프레임워크 영역에서의 잔기는 비-인간 CDR 공여자 항체로부터의 상응하는 잔기로 치환될 수 있다. 인간화된 항체는 인간 항체나 공여자 CDR 또는 프레임워크 서열에서는 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 인간화된 단클론 항체로부터 유래된 항체 구성요소의 사용은 비-인간 영역의 면역원성과 연관된 문제를 감소시킨다. 인간화된 항체를 생산하는 방법은 당업계에 알려져 있다 (예를 들어, 미국 특허 번호 5,225,539; 5,530,101, 5,565,332 및 5,585,089; Riechmann et al., (1988) Nature 332:323; EP 239,400; W091/09967; EP 592,106; EP 519,596; Padlan Molecular Immunol. (1991) 28:489; Studnicka et al., Protein Engineering (1994) 7:805; Singer et　al., J. Immunol. (1993) 150:2844; 및 Roguska et al., Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA (1994) 91:969 참고).

본 개시내용의 항체는 키메라 항체일 수 있다. 용어 "키메라 항체"는 상이한 부분이 상이한 동물 종으로부터 유래된 항체, 예컨대, 뮤린 단클론 항체로부터 유래된 가변 영역 및 인간 면역글로불린 불변 영역을 갖는 것들, 예컨대, 인간화된 항체를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 적절한 생물학적 활성의 인간 항체 분자로부터의 유전자와 함께 적절한 항원 특이성의 마우스 항체 분자로부터의 유전자를 스플라이싱함으로써 "키메라 항체"의 생산을 위해 개발된 기술 (Morrison et al., 1984, Proc. Natl. Acad. Sci.　81:851-855; Neuberger et al., 1984, Nature　312:604-608; Takeda et al., 1985, Nature　314:452-454)이 사용된다.

본 개시내용의 항체는 이들의 결합 단편을 포함한다. 예시적인 항체 단편은 Fab, Fab', F(ab')₂, Fv, Fd, 단일-쇄 Fv (scFv), 디설파이드-연결된 Fv (sdFv), 경쇄 가변 영역 V_L, 중쇄 가변 영역 V_H, 삼중특이적 (Fab₃), 이중특이적 (Fab₂), 디아바디 ((V_L-V_H)₂ 또는 (V_H-V_L)₂), 트리아바디 (3가), 테트라바디 (4가), 미니바디 ((scF_V-C_H)₂), 이중특이적 단일-쇄 Fv (Bis-scFv), IgG델타CH2, scFv-Fc, (scFv)₂-Fc 및 IgG4PE를 포함한다. 이러한 단편은 전장 항체로서의 결합 친화도, 전장 항체로서의 결합 특이성, 또는 전장 항체로서의 하나 이상의 활성 또는 기능, 예컨대, 메소텔린 결합 항체의 기능 또는 활성을 가질 수 있다.

항체 단편은 조합될 수 있다. 예를 들어, V_L 또는 V_H 하위서열은 링커 서열에 의해 접합되어 V_L-V_H 키메라를 형성할 수 있다. 단일-쇄 Fvs (scFv) 서열의 조합은 링커 서열에 의해 접합되어 scFv - scFv 키메라를 형성할 수 있다. 항체 단편에는 단일-쇄 항체 또는 가변 영역(들)이 단독으로 또는 다른 서열 전체 또는 일부와 조합되어 포함된다.

항체 단편은 온전한 항체의 단백질분해 소화뿐만 아니라 재조합 숙주 세포에 의한 생산을 포함하나 이에 제한되지 않는 다양한 기술에 의해 제조될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체는 합성 링커, 예컨대, 펩티드 링커에 의해 접합된 2 개 이상의 항체 영역 또는 쇄를 포함하는 것들과 같은 자연적으로 발생하지 않는/않거나 자연적으로 발생하는 온전한 항체의 효소 소화에 의해 생산되지 않을 수 있는 배열을 포함하는 단편과 같은 재조합적으로 생산된 단편이다. 일부 양태에서, 항체 단편은 scFv이다.

항체 단편은 또한 항체의 단백질분해 가수분해, 예를 들어, 전체 항체의 펩신 또는 파파인 소화에 의해 제조될 수 있다. 펩신을 이용한 효소적 절단에 의해 생산된 항체 단편은 F(ab')₂로 표시된 5S 단편을 제공한다. 이 단편은 티올 환원제를 사용하여 추가로 절단되어, 3.5S Fab' 1가 단편을 생산할 수 있다. 대안적으로, 펩신을 사용한 효소적 절단은 2 개의 1가 Fab' 단편 및 Fc 단편을 직접 생산한다 (예컨대, 미국 특허 번호 4,036,945 및 4,331,647; 및 Edelman et al., Methods Enymol. 1:422 (1967) 참고). 1가 경-중쇄 단편을 형성하기 위한 중쇄의 분리, 단편의 추가 절단, 또는 기타 효소 또는 화학물질과 같은 항체 절단의 다른 방법이 또한 사용될 수 있다.

일부 실시양태에서, 단일 쇄 항체의 생산을 위해 기재된 기술 (미국 특허 번호 4,694,778; Bird, 1988, Science　242:423-42; Huston et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA　85:5879-5883; 및 Ward et al., 1989, Nature　334:544-54)은 단일 쇄 항체를 생산하도록 조정된다. 단일 쇄 항체는 Fv 영역의 중쇄 및 경쇄 단편을 아미노산 브릿지를 통해 연결함으로써 형성되어, 단일 쇄 폴리펩티드를 초래한다. 대장균에서 기능적 Fv 단편을 조립하는 기술이 또한 임의적으로 사용된다 (Skerra et al., 1988, Science　242:1038-1041).

본원에 사용된 바와 같이, 2 개 이상의 핵산 또는 폴리펩티드 서열의 맥락에서 사용될 때, "동일한", "서열 동일성" 또는 "동일성" 퍼센트는 명시된 영역에 걸쳐 동일하거나 동일한 뉴클레오티드 또는 아미노산 잔기의 명시된 백분율, 예컨대, 60% 이상의 동일성, 바람직하게는 적어도 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 초과의 동일성을 갖는 2 개 이상의 서열을 지칭한다. 정렬 및 서열 동일성은 당업계에 알려진 소프트웨어 프로그램, 예를 들어, Current Protocols in Molecular Biology (Ausubel et al., eds. 1987) 부록 30, 섹션 7.7.18, 표 7.7.1에 기재된 것들을 사용하여 결정될 수 있다. 바람직하게는, 정렬을 위해 기본 매개변수가 사용된다. 선호되는 정렬 프로그램은 기본 매개변수를 사용하는 BLAST이다. 특히, 선호되는 프로그램은 다음의 기본 매개변수를 사용하는 BLASTN 및 BLASTP이다: 유전자 코드 = 표준; 필터 = 없음; 가닥 = 둘 모두; 컷오프 = 60; 기대 = 10; 매트릭스 = BLOSUM62; 설명 = 50 개의 서열; 정렬 기준 = 높은 점수; 데이터베이스 = 비-중복, GenBank + EMBL + DDBJ + PDB + GenBank CDS 번역 + SwissProtein + SPupdate + PIR. 이러한 프로그램의 상세한 설명은 다음의 인터넷 주소에서 찾아볼 수 있다: ncbi.nlm.nih.gov/cgi-bin/BLAST. 용어 "동일한", "서열 동일성" 또는 "동일성" 퍼센트는 또한 테스트 서열의 보완물을 지칭하거나 이에 적용될 수 있다. 이 용어는 또한 결실 및/또는 첨가를 갖는 서열뿐만 아니라 치환을 갖는 것들을 포함한다. 본원에 기재된 바와 같이, 선호되는 알고리즘은 갭 등을 점유할 수 있다. 바람직하게는, 동일성은 약 25 개 이상의 아미노산 또는 뉴클레오티드 길이인 영역에 걸쳐 존재하거나, 보다 바람직하게는 50-100 개 이상의 아미노산 또는 뉴클레오티드 길이인 영역에 걸쳐 존재한다. "관련되지 않은" 또는 "비-상동적인" 서열은 본원에 개시된 서열 중 하나와 40% 미만의 동일성, 또는 대안적으로 25% 미만의 동일성을 공유한다.

용어 "단백질", "펩티드" 및 "폴리펩티드"는 2 개 이상의 서브유닛 아미노산, 아미노산 유사체 또는 펩티드모방체의 화합물을 지칭하기 위해 상호교환적으로 그리고 가장 넓은 의미로 사용된다. 서브유닛은 펩티드 결합에 의해 연결될 수 있다. 다른 양태에서, 서브유닛은 다른 결합, 예컨대, 에스테르, 에테르 등에 의해 연결될 수 있다. 단백질 또는 펩티드는 2 개 이상의 아미노산을 함유해야 하며, 단백질의 서열 또는 펩티드의 서열을 포함할 수 있는 아미노산의 최대 갯수에는 제한이 없다. 폴리펩티드는 전장의 천연 폴리펩티드 및 하위서열, 변이체 서열, 융합/키메라 서열 및 우성-음성 서열과 같은 "변형된" 형태를 포함한다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "아미노산"은 글리신 및 D 및 L 광학 이성질체 둘 모두, 아미노산 유사체 및 펩티드모방체를 포함하여 자연 및/또는 비자연 또는 합성 아미노산을 지칭한다.

펩티드는 L- 및 D-이성질체, 및 이들의 조합을 포함한다. 펩티드는 전형적으로 단백질의 번역-후 가공과 연관된 변형, 예를 들어, 고리화 (예컨대, 디설파이드 또는 아미드 결합), 인산화, 글리코실화, 카복실화, 유비퀴틴화, 미리스틸화 또는 지질화를 포함할 수 있다. 변형된 펩티드는 다른 잔기로 치환되거나, 서열에 첨가되거나, 서열로부터 결실된 하나 이상의 아미노산 잔기를 가질 수 있다. 구체적인 예는 하나 이상의 아미노산 치환, 첨가 또는 결실 (예컨대, 1-3, 3-5, 5-10, 10-20 또는 그 초과)을 포함한다.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "변형" 및 "변형된"은 변형이 없는 항체, 단백질 또는 폴리펩티드와 등가물인 참조 항체, 단백질 또는 폴리펩티드와 비교하여 항체, 단백질 또는 폴리펩티드의 하나 이상의 아미노산 잔기의 돌연변이, 치환, 첨가 또는 결실을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 변형은 보존적 치환을 포함한다.

"보존적 치환"은 하나의 아미노산을 생물학적, 화학적 또는 구조적으로 유사한 잔기로 대체하는 것이다. 생물학적으로 유사하다는 것은 치환이 비치환 서열의 활성 또는 기능과 양립할 수 있다는 것을 의미한다. 구조적으로 유사하다는 것은 아미노산이 알라닌, 글리신 및 세린과 같이 유사한 길이를 갖거나 유사한 크기를 갖는 측쇄를 가지고 있음을 의미한다. 화학적 유사성은 잔기가 동일한 전하를 갖거나 친수성 또는 소수성 둘 모두라는 것을 의미한다. 특정 예는 하나의 소수성 잔기, 예컨대, 이소류신, 발린, 류신 또는 메티오닌의 다른 것으로의 치환, 또는 하나의 극성 잔기의 다른 것으로의 치환, 예컨대, 아르기닌의 리신으로의 치환, 글루탐산의 아스파르트산으로의 치환, 또는 글루타민의 아스파라긴으로의 치환, 및 세린의 트레오닌으로의 치환 등을 포함한다.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "핵산"은 자연, 합성 또는 인공 뉴클레오티드 유사체 또는 염기를 포함하는 DNA 또는 RNA를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 뉴클레오티드 유사체 또는 인공 뉴클레오티드 염기는 리보스 모이어티의 2' 하이드록실 기에서 변형을 갖는 핵산을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형은 H, OR, R, 할로, SH, SR, NH₂, NHR, NR₂ 또는 CN을 포함하며, 여기서 R은 알킬 모이어티이다. 예시적인 알킬 모이어티는 할로겐, 황, 티올, 티오에테르, 티오에스테르, 아민 (1차, 2차 또는 3차), 아미드, 에테르, 에스테르, 알콜 및 산소를 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 알킬 모이어티는 변형을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형은 아조 기, 케토 기, 알데히드 기, 카복실 기, 니트로 기, 니트로소, 기, 니트릴 기, 헤테로사이클 (예컨대, 이미다졸, 하이드라지노 또는 하이드록실아미노) 기, 이소시아네이트 또는 시아네이트 기, 또는 황 함유 기 (예컨대, 설폭사이드, 설폰, 설파이드 또는 디설파이드)를 포함한다. 일부 실시양태에서, 알킬 모이어티는 헤테로 치환을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 헤테로사이클릭 기의 탄소는 질소, 산소 또는 황으로 치환된다. 일부 실시양태에서, 헤테로사이클릭 치환은 모르폴리노, 이미다졸 및 피롤리디노를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.

일부 실시양태에서, 뉴클레오티드 유사체는 변형된 염기, 예컨대, 비제한적으로 5-프로피닐우리딘, 5-프로피닐시티딘, 6-메틸아데닌, 6-메틸구아닌, N,N,-디메틸아데닌, 2-프로필아데닌, 2프로필구아닌, 2-아미노아데닌, 1-메틸 이노신, 3-메틸우리딘, 5-메틸시티딘, 5-메틸우리딘 및 5 위치에서 변형을 갖는 기타 뉴클레오티드, 5-(2-아미노)프로필우리딘, 5-할로시티딘, 5-할로우리딘, 4-아세틸시티딘, 1-메틸아데노신, 2-메틸아데노신, 3-메틸시티딘, 6-메틸우리딘, 2-메틸구아노신, 7-메틸구아노신, 2,2-디메틸구아노신, 5-메틸아미노에틸우리딘, 5-메틸옥시우리딘, 데아자뉴클레오티드 (예컨대, 7-데아자-아데노신, 6-아조우리딘, 6-아조시티딘 또는 6-아조티미딘), 5-메틸-2-티오우리딘, 기타 티오 염기 (예컨대, 2-티오우리딘, 4-티오우리딘 및 2-티오시티딘), 디하이드로우리딘, 슈도우리딘, 큐오신, 아르카에오신, 나프틸 및 치환된 나프틸 기, 임의의 O- 및 N-알킬화 퓨린 및 피리미딘 (예컨대, N6-메틸아데노신, 5-메틸카보닐메틸우리딘, 우리딘 5-옥시아세트산, 피리딘-4-온 또는 피리딘-2-온), 페닐 및 변형된 페닐 기, 예컨대, 아미노페놀 또는 2,4,6-트리메톡시 벤젠, G-클램프 뉴클레오티드로서 작용하는 변형된 시토신, 8-치환된 아데닌 및 구아닌, 5-치환된 우라실 및 티민, 아자피리미딘, 카복시하이드록시알킬 뉴클레오티드, 카복시알킬아미노알킬 뉴클레오티드, 및 알킬카보닐알킬화된 뉴클레오티드를 포함한다. 변형된 뉴클레오티드는 또한 당 모이어티와 관련하여 변형된 뉴클레오티드뿐만 아니라 리보실이 아닌 당 또는 이의 유사체를 갖는 뉴클레오티드를 포함된다. 예를 들어, 일부 실시양태에서 당 모이어티는 만노스, 아라비노스, 글루코피라노스, 갈락토피라노스, 4'-티오리보스 및 기타 당, 헤테로사이클 또는 카보사이클이거나, 이를 기반으로 한다. 용어 뉴클레오티드는 또한 당업계에 보편적인 염기로서 알려진 것을 포함한다. 예로서, 보편적인 염기는 3-니트로피롤, 5-니트로인돌 또는 네뷸라린을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 핵산 분자는 핵산 각각의 뉴클레오티드 서열에 대한 정보를 기초로 하여 화학적 합성 방법 또는 PCR 증폭 방법과 같은 공공연하게 알려진 기술에 의해 생산될 수 있다. 아미노산을 인코딩하기 위해 선택된 코돈은 관심 숙주 세포에서 핵산 발현을 최적화하기 위해 조작될 수 있다.

본 발명에서, T 세포에 의한 "IL-15의 발현"은 IL-15의 다양한 형태 (예컨대, 위에 기재된 야생형, 변이체 또는 융합 단백질)가 본 발명의 효과가 상실되지 않는 한, 발현될 수 있음을 의미한다.

본원에 사용된 바와 같이, T 세포의 집단을 기재할 때 용어 "실질적으로"는 약 30%, 25%, 20%, 15%, 10% 또는 5% 이하의 오염 세포보다 적은 오염 세포를 포함하는 집단을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 오염 세포는 T 세포의 집단에서 약 20% 미만이다. 일부 실시양태에서, 오염 세포는 T 세포의 집단에서 약 15% 미만이다. 일부 실시양태에서, 오염 세포는 T 세포의 집단에서 약 10% 미만이다.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "치료하는" 및 "치료" 등은 원하는 약리학적 및/또는 생리학적 효과를 수득하는 것을 의미한다. 효과는 질환의 증상의 호전, 또는 질환의 부분적 또는 완전한 치유 및/또는 질환으로 인한 이상 효과의 측면에서 치료적일 수 있다. 일 양태에서, 용어 "치료"는 예방을 제외한다.

본원에 사용된 바와 같이, "치료"는 병리학과 연관된 증상의 전신적 호전 및/또는 증상의 발병의 지연을 추가로 포함한다. "치료"의 임상적 및 하위-임상적 증거는 병리학, 개체 및 치료에 따라 달라질 것이다. 일 양태에서, 치료는 예방을 제외한다.

용어 "호전시킨다"는 대상체의 병태의 검출가능한 개선을 의미한다. 검출가능한 개선은 질환에 의해 유발된 또는 질환과 연관된 증상, 예컨대, 하나 이상의 이상 증상, 장애, 질병, 병리, 질환 또는 질환에 의해 유발된 또는 질환과 연관된 합병증의 발생, 빈도, 중증도, 진행 또는 지속기간의 주관적 또는 객관적인 저하, 감소, 억제, 억압, 제한 또는 제어, 또는 질환의 근본 원인 또는 결과의 개선, 또는 질환의 역전을 포함한다.

따라서, 치료는 질환, 또는 연관된 증상 또는 결과, 또는 근본 원인의 저하, 감소, 억제, 억압, 제한, 제어 또는 예방; 질환, 병태, 증상 또는 결과 또는 근본 원인의 진행 또는 악화의 저하, 감소, 억제, 억압, 제한, 제어 또는 예방; 또는 질환 병태 또는 증상의 하나 이상의 추가적인 증상의 추가 황폐화(deterioration) 또는 발생을 초래할 수 있다. 따라서, 성공적인 치료 결과는 대상체에서 병태, 질환 또는 증상의 하나 이상의 증상 또는 근본 원인 또는 결과, 예컨대, 예컨대, 하나 이상의 이상 증상, 장애, 질병, 병리, 질환, 또는 질환 또는 병태에 의해 유발된 또는 이와 연관된 합병증의 발생, 빈도, 중증도, 진행 또는 지속기간을 저하, 감소, 억제, 억압, 제한, 제어 또는 예방하는 "치료적 효과" 또는 "이익"을 야기한다. 따라서, 병태, 질환 또는 증상의 하나 이상의 근본 원인에 영향을 미치는 치료 방법은 유익한 것으로 간주된다. 장애 또는 병태를 안정화시키는 것은 또한 성공적인 치료 결과이다.

따라서, 치료적 이익 또는 개선은 병태 또는 질환과 연관된 증상, 합병증, 결과 또는 근본 원인 중 하나, 대부분 또는 전부를 완전히 제거할 필요는 없다. 따라서, 만족스러운 엔드포인트는 짧은 또는 긴 지속기간 (몇 시간, 며칠, 몇 주, 몇 달 등)에 걸쳐, 생리학적, 생화학적 또는 세포적 징후 중 하나 이상 또는 장애 또는 질환, 예컨대, 하나 이상의 이상 증상, 장애, 질병, 병리, 질환, 또는 질환 또는 병태에 의해 유발된 또는 이와 연관된 합병증의 특징의, 대상체의 병태의 증분의 개선, 또는 하나 이상의 연관된 이상 증상 또는 합병증 또는 결과 또는 근본 원인, 악화 또는 진행의 발생, 빈도, 중증도, 진행 또는 지속기간의 부분적 저하, 감소, 억제, 억압, 제한, 제어 또는 예방 (예컨대, 병태, 장애 또는 질환의 하나 이상의 증상 또는 합병증을 안정화시키는 것)이 있을 때, 달성된다.

본원에 개시된 임의의 구성요소, 범위, 투약 형태 등의 선택을 설명하기 위해 사용될 때, 용어 "허용가능한", "효과적인" 또는 "충분한"은 상기 구성요소, 범위, 투약 형태 등이 개시된 목적에 적합하다는 것을 의미한다.

용어 "대상체", "숙주", "개체" 및 "환자"는 동물, 전형적으로 포유동물을 지칭하기 위해 본원에서 상호교환적으로 사용된다. 임의의 적합한 포유류는 본원에 기재된 방법, 세포 또는 조성물에 의해 치료될 수 있다. 포유류의 비-제한적인 예는 인간, 비-인간 영장류 (예컨대, 유인원, 긴팔원숭이, 침팬지, 오랑우탄, 원숭이 및 마카크 등), 가축 (예컨대, 개 및 고양이), 농장 동물 (예컨대, 말, 소, 염소, 양, 돼지) 및 실험 동물 (예컨대, 마우스, 랫트, 토끼, 기니피그)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 포유류는 인간이다. 포유류는 임의의 연령 또는 임의의 발달 단계 (예컨대, 성체, 10대, 유아, 영아 또는 자궁 내 포유류)일 수 있다. 포유류는 수컷 또는 암컷일 수 있다. 포유류는 임신한 암컷일 수 있다. 일부 실시양태에서, 대상체는 인간이다.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "γδT 세포"는 CD3을 발현하고, TCRγ 쇄 (γTCR) 및 TCRδ 쇄 (δTCR)로 구성된 TCR (이하, 때때로 "γδTCR"로서 지칭됨)을 발현하는 세포를 의미한다.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "αβT 세포"는 CD3을 발현하고, TCRα 쇄 (αTCR) 및 TCRβ 쇄 (βTCR)로 구성된 TCR (이하, 때때로 "αβTCR"로서 지칭됨)을 발현하는 세포를 의미한다. 일부 경우에, 거의 모든 αβT 세포가 αβTCR에 의해 항원 펩티드-MHC (주요 조직적합성 복합체, 인간의 경우에, HLA: 인간 백혈구 항원) 복합체를 인식한다 (이는 MHC 제한으로서 지칭됨). 대조적으로, γδT 세포는 MHC 분자와 상관없이 γδTCR에 의해 세포가 발현하는 다양한 분자를 인식한다.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "조정하다" 또는 "조절제"는 연관된 기능을 양성적으로 또는 음성적으로 변경하는 구성요소의 능력을 지칭한다. 예시적인 조정은 약 1%, 약 2%, 약 5%, 약 10%, 약 25%, 약 50%, 약 75%, 또는 약 100% 변화를 포함한다.

특정 실시양태에서, TGFβ 수용체의 시그널링을 변경하거나 예방할 수 있는 TGFβ 시그널링 조절제가 본원에 제공된다. 당업자는 이것이 TGFβR의 시그널링을 활성화하는 사이토카인 (즉, TGFβ) 또는 수용체 자체 (예컨대, TGFβ 항체 또는 이의 단편, TGFBR 항체 또는 이의 단편)에 결합함으로써 달성될 수 있음을 이해할 것이다. 따라서, 이 용어는 TGFβ에 결합하는 분자 및 TGFβR에 결합하는 분자 둘 모두를 포함한다. 일 실시양태에서, 본 개시내용의 조절제는 TGFβRII를 통해 TGFβ 시그널링을 중화시킬 수 있다. "중화"는 TGFβ의 존재가 TGFβRII 시그널링에 중립 효과를 갖도록 TGFβ의 정상적인 시그널링 효과가 차단된다는 것을 의미한다. 일부 실시양태에서, TGFβ 조절제는 숙주의 면역 반응을 개선시킨다.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "변형 성장 인자-β", "TGF-베타", "TGFb", "TGFβ" 및 "변형 성장 인자-베타"는 본원에서 상호교환적으로 사용되며, 잠복 형태 및 전구체 및 성숙한 TGF-베타의 회합된 또는 회합되지 않은 복합체 ("잠복 TGF-베타")를 포함하여 인간으로부터의 TGF-베타 중 임의의 것의 전장의 천연 아미노산 서열을 갖는 분자의 패밀리를 지칭한다. 본원에서 이러한 TGF-베타에 대한 언급은 TGF-베타1, TGF-베타2, TGF-베타3, TGF-베타4 및 TGF-베타5 및 이의 잠복 버전을 포함하는 현재 식별된 형태 중 어느 하나뿐만 아니라 임의의 알려진 TGF-베타의 서열로부터 유래되고 서열과 약 75% 이상, 바람직하게는 약 80% 이상, 보다 바람직하게는 약 85% 이상, 보다 더 바람직하게는 약 90% 이상, 및 보다 더 바람직하게는 약 95% 이상의 상동성인 폴리펩티드를 포함하는 추후에 식별될 인간 TGF-베타 종에 대한 언급인 것으로 이해될 것이다. 구체적인 용어 "TGF-베타1", "TGF-베타2" 및 "TGF-베타3"뿐만 아니라 "TGF-베타4" 및 "TGF-베타5"는 문헌, 예컨대, 위의 Derynck et al., Nature, 위의 Seyedin et al., J. Biol. Chem., 262, 및 위의 deMartin et al.에 정의된 TGF-베타를 지칭한다. 용어 "TGF-베타"는 인간 TGF-베타를 인코딩하는 유전자를 지칭한다. 선호되는 TGF-베타는 천연-서열 인간 TGF-베타이다.

TGF-베타 패밀리의 구성원은 분자의 성숙한 부분에 9 개의 시스테인 잔기를 갖고, 성숙한 영역에서 알려진 다른 TGF-베타 서열과 65% 이상의 상동성을 공유하며, 동일한 수용체에 대해 경쟁할 수 있는 것들로서 정의된다. 게다가, 이들은 모두 N-말단 근처의 높은 상동성의 영역을 공유하고 나중에 가공에 의해 제거될 전구체의 부분에서 3 개의 시스테인 잔기의 보존을 보여주는 더 큰 전구체로서 인코딩되는 것으로 보인다. 더욱이, TGF-베타는 4 개 또는 5 개의 아미노산을 포함하는 가공 부위를 갖고 있는 것으로 보인다.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "변형 성장 인자-β 수용체", "TGF-bR" 또는 "TGF-b 수용체" 또는 "TGF-베타 수용체" 또는 "TGFβR"은 TGFβR 패밀리의 3 개의 하위-유형 (즉, TGFβR1, TGFβR2, TGFβR3) 모두를 포함하는 데 사용된다. TGFβ 수용체는 세린/트레오닌 키나제 활성을 특징으로 하며, 동종이합체 또는 이종이합체일 수 있는 여러 가지 상이한 아이소폼으로 존재한다.

본원에 사용된 바와 같이, 본원에서 상호교환적으로 사용된 바와 같은 용어 "TGFβ 시그널링 경로 조절제", "TGFβ 조절제", "TGFβ 시그널링 경로 조절제" 또는 "TGFβ 조절제"는 TGFβ 시그널링 경로를 조정할 수 있는 (예컨대, 억제, 차단 또는 중화 효과를 가짐) 분자 (예컨대, 항체 또는 이의 단편)를 지칭하며, 이는 TGFβ 자체에 결합할 수 있거나, 세포 상의 TGFβ 수용체에 결합할 수 있다. 두 경우 중 어느 하나에서, 조절제는 TGFβ 시그널링 경로를 억제한다 (예컨대, 사이토카인 (즉, TGFβ) 자체에 결합함으로써 또는 TGFβ에 대한 수용체에 결합함으로써). 따라서, 이 용어는 TGFβ에 결합하는 조절제 및 TGFβ 수용체에 결합하는 조절제의 두 유형 모두를 포함한다. 본원에 기재된 다양한 실시양태에서, TGFβ 시그널링 경로 조절제는 변형된 면역 세포 (예컨대, CAR-T 세포)에서 키메라 항원 수용체와 함께 발현된다. 본원에 기재된 다양한 실시양태에서, TGFβ 시그널링 경로 조절제는 변형된 면역 세포로부터 분비되거나, 면역 세포의 막에 결합되어 발현된다. 이러한 TGFβ 시그널링 경로 조절제를 발현하는 CAR-T 세포는 본원에서 TGFβ 무장된 CAR-T 세포로서 지칭된다.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "유도 만능 줄기 세포" (이하, 때때로 "iPS 세포"로서 지칭됨)는 재프로그래밍 인자를 체세포에 도입함으로써 확립되고, 살아있는 유기체에 존재하는 많은 세포로의 분화를 가능하게 하는 다능성을 갖고, 또한 증식 역량을 갖는 줄기 세포를 의미한다. 이는 본 발명에 사용될 조혈 전구체 세포로 유도된 임의의 세포를 포함한다. 유도 만능 줄기 세포는 바람직하게는 포유류 (예컨대, 마우스, 랫트, 햄스터, 기니피그, 개, 원숭이, 오랑우탄, 침팬지, 인간), 보다 바람직하게는 인간으로부터 유래된다.

일부 경우에, 임의의 체세포에 리프로그래밍 인자를 도입함으로써 만능 줄기 세포가 유도되거나 확립될 수 있다. 예시적인 재프로그래밍 인자는 유전자 및 유전자 산물, 예컨대, Oct3/4, Sox2, Sox1, Sox3, Sox15, Sox17, Klf4, Klf2, c-Myc, N-Myc, L-Myc, Nanog, Lin28, Fbx15, ERas, ECAT15-2, Tcl1, 베타-카테닌, Lin28b, Sall1, Sall4, Esrrb, Nr5a2, Tbx3, 및 Glis1 등을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 이러한 재프로그래밍 인자는 단독으로 또는 조합하여 사용될 수 있다. 일부 경우에, 조합 재프로그래밍 인자는 WO 2007/069666, WO 2008/118820, WO 2009/007852, WO 2009/032194, WO 2009/058413, WO 2009/057831, WO 2009/075119, WO 2009/079007, WO 2009/091659, WO 2009/101084, WO 2009/101407, WO 2009/102983, WO 2009/114949, WO 2009/117439, WO 2009/126250, WO 2009/126251, WO 2009/126655, WO 2009/157593, WO 2010/009015, WO 2010/033906, WO 2010/033920, WO 2010/042800, WO 2010/050626, WO 2010/056831, WO 2010/068955, WO 2010/098419, WO 2010/102267, WO 2010/111409, WO 2010/111422, WO 2010/115050, WO 2010/124290, WO 2010/147395, WO 2010/147612, Huangfu D, et al. (2008), Nat. Biotechnol., 26: 795-797, Shi Y, et al. (2008), Cell Stem Cell, 2: 525-528, Eminli S, et al. (2008), Stem Cells. 26:2467-2474, Huangfu D, et al. (2008), Nat. Biotechnol. 26:1269-1275, Shi Y, et al. (2008), Cell Stem Cell, 3, 568-574, Zhao Y, et al. (2008), Cell Stem Cell, 3:475-479, Marson A, (2008), Cell Stem Cell, 3, 132-135, Feng B, et al. (2009), Nat. Cell Biol. 11:197-203, R.L. Judson et al., (2009), Nat. Biotechnol., 27:459-461, Lyssiotis CA, et al. (2009), Proc Natl Acad Sci U S A. 106:8912-8917, Kim JB, et al. (2009), Nature. 461:649-643, Ichida JK, et al. (2009), Cell Stem Cell. 5:491-503, Heng JC, et al. (2010), Cell Stem Cell. 6:167-74, Han J, et al. (2010), Nature. 463:1096-100, Mali P, et al. (2010), Stem Cells. 28:713-720, 및 Maekawa M, et al. (2011), Nature. 474:225-9에 기재된 조합에 의해 예시된다.

체세포의 예는 태아 체세포, 신생아 체세포 및 성숙한 체세포 중 임의의 것뿐만 아니라 일차 배양된 세포, 계대배양된 세포 및 확립된 세포주 중 임의의 것을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 게다가, 위에 기재된 세포는 건강한 세포 또는 질환이 있는 세포일 수 있다. 체세포의 구체적인 예는 (1) 조직 줄기 세포 (체세포 줄기 세포), 예컨대, 신경 줄기 세포, 조혈 전구체 세포, 간엽 줄기 세포 및 치아 치수 줄기 세포; (2) 조직 전구체 세포; 및 (3) 분화된 세포, 예컨대, 혈액 세포 (예컨대, 말초 혈액 세포 및 제대혈 세포 등), 단핵 세포 (예컨대, 림프구 (NK 세포, B 세포, αβT 세포 이외의 T 세포 (예컨대, γδT 세포 등), 단핵구, 및 수지상 세포 등)), 과립구 (예컨대, 호산구, 호중구, 호염기구), 거핵구), 상피 세포, 내피 세포, 근육 세포, 섬유아세포 (예컨대, 피부 세포 등), 모 세포, 간 세포, 위 점막 세포, 장세포, 비장 세포, 췌장 세포 (예컨대, 췌장 외분비 세포 등), 뇌 세포, 폐 세포, 신장 세포 및 지방세포를 포함한다. 이들 중, αβT 세포 이외의 단핵 세포가 바람직하고, 보다 구체적으로는, 단핵구 또는 γδT 세포가 바람직하다.

예시적인 방법, 예컨대, 칼슘 포스페이트 공침법, PEG 방법, 전기천공법, 미세주사법, 및 지방감염법 등을 사용하여 재프로그래밍 인자를 체세포에 도입할 수 있다. 추가적인 방법은 Cell Engineering additional volume 8, New Cell Engineering experiment protocol, 263-267 (1995) (published by Shujunsha), Virology, vol. 52, 456 (1973), 및 Folia Pharmacol. Jpn., vol. 119 (No. 6), 345-351 (2002)에 기재된 것들을 포함할 수 있다. 바이러스 벡터가 사용되는 경우, 적합한 패키징 세포 (예컨대, Plat-E 세포) 및 보완 세포주 (예컨대, 293 세포)에 핵산을 도입하고, 배양 상청액에서 생산된 바이러스 벡터를 회수하고, 세포에 각각의 바이러스 벡터에 적합한 적절한 방법으로 벡터를 감염시켜, 벡터를 세포 내로 도입한다. 예를 들어, 벡터로서 레트로바이러스 벡터가 사용되는 경우, 구체적인 수단은 WO 2007/69666, Cell, 126, 663-676 (2006) 및 Cell, 131, 861-872 (2007) 등에 개시되어 있다. 특히, 레트로바이러스 벡터가 사용되는 경우, 재조합 피브로넥틴 단편 CH-296 (Takara Bio Inc.에 의해 제조됨)을 사용함으로써 다양한 세포로의 고도의 효율적인 형질주입이 가능하다.

RNA의 형태의 재프로그래밍 인자는 세포 내로 직접 도입되고 세포에서 발현될 수 있다. RNA를 도입하는 방법으로서 알려진 방법이 사용될 수 있으며, 예를 들어, 리포펙션법 또는 전기천공법 등이 바람직하게 사용될 수 있다. 재프로그래밍 인자가 단백질의 형태인 경우, 리포펙션, 세포성 막-투과 펩티드 (예컨대, HIV-유래된 TAT 및 폴리아르기닌)와의 융합, 및 미세주사 등과 같은 방법에 의해 세포 내로 도입될 수 있다.

일부 실시양태에서, 유도 만능 줄기 세포를 T 세포로 분화시키는 방법은 유도 만능 줄기 세포가 γδT 세포로 분화될 수 있는 한, 특별히 제한되지 않는다. 일부 경우에, 방법은 유도 만능 줄기 세포를 조혈 전구체 세포로 분화시키는 단계 및 조혈 전구체 세포를 CD3 양성 T 세포로 분화시키는 단계를 포함한다. iPSC를 조혈 전구체 세포로 분화시키는 데 사용하기 위한 예시적인 방법은 WO 2013/075222, WO 2016/076415 및 Liu S. et al., Cytotherapy, 17 (2015); 344-358에 개시된 것들을 포함한다. 조혈 전구체 세포를 CD3 양성 T 세포로 분화시키는 데 사용하기 위한 예시적인 방법은 WO 2016/076415, 및 WO 2017/221975에 개시된 것들을 포함한다. 또한 WO2020/013315에 개시된 방법을 참고한다.

실시예

이들 실시예는 단지 예시적 목적으로만 제공되며, 본원에 제공된 청구범위의 범주를 제한하지 않는다.

실시예 1

γδTCR을 발현하는 세포의 생산 방법

알려진 배양 방법 (예컨대, Cell Reports 2(2012)1722-1735 또는 WO 2017/221975에 기재된 바와 같음)을 사용하여, 교토 대학, iPS 세포 연구 및 응용 센터에서 제공한 iPS 세포 (Ff-I01s04 세포주: 건강한 개체의 말초 혈액 단핵 세포로부터 유래됨)로부터 분화된 부유된 세포 집단을 사용하여, 조혈 전구체 세포 (HPC)를 함유하는 세포 집단을 생성하였다. 예를 들어, Ff-I01s04 세포주를 초-저 접착-처리된 6 웰 플레이트에 6 x 10⁵ 개의 세포/웰로 씨딩하고 (0 일차), 10 ng/ml BMP4, 50 ng/ml bFGF, 15 ng/ml VEGF, 2 μM SB431542를 EB 배지 (10 μg/ml 인간 인슐린, 5.5 μg/ml 인간 트랜스페린, 5 ng/ml 소듐 셀레나이트, 2 mM L-글루타민, 45 mM α-모노티오글리세롤 및 50 μg/ml 아스코르브산 2-포스페이트가 첨가된 StemPro34)에 첨가하고, 세포를 저-산소 조건 (5% O₂) 하에서 5 일 동안 배양하였다 (5 일차). 그런 다음, 50 ng/ml SCF, 30 ng/ml TPO, 10 ng/ml FLT-3L을 첨가하고, 세포를 5 - 9 일 (- 14 일차) 동안 배양하여, 부유된 세포 집단을 산출하였다. 배양 기간 동안 2 또는 3 일마다 배지를 바꾸었다. HPC를 함유하는 생성된 부유된 세포 집단을 표 2에 도시된 바와 같은 항체 세트를 사용하여 염색하였다.

표 2

위에 언급된 염색을 거친 세포 집단을 FACSAria에 의해 분류하였다. 수득된 세포 분획을 알려진 방법 (예컨대, Journal of Leukocyte Biology 96(2016)1165-1175 및 WO 2017/221975에 기재된 방법)에 따라 림프성 세포로 분화시켰다. 예를 들어, 조혈 전구체 세포 집단을 재조합 h-DLL4/Fc 키메라 (Sino Biological) 및 레트로넥틴 (Takara Bio Inc.)으로 코팅된 48-웰-플레이트에 2000 개의 세포/웰로 씨딩하고, 5% CO₂, 37℃ 조건 하에서 배양하였다. 배양 기간 동안 2 또는 3 일마다 배지를 바꾸었다. αMEM 배지는 15% FBS, 2 mM L-글루타민, 100 U/ml 페니실린, 100 ng/ml 스트렙토마이신, 55 μμ 2-머캅토에탄올, 50 μg/ml 아스코르브산 2-포스페이트, 10 μg/ml 인간 인슐린, 5.5 μg/ml 인간 트랜스페린, 5 ng/ml 소듐 셀레나이트, 50 ng/ml SCF, 50 ng/ml IL-7, 50 ng/ml FLT-3L, 100 ng/ml TPO, 15 μM SB203580, 및 30 ng/ml SDF-1α를 함유하였다. 배양의 시작으로부터 7 일차 및 14 일차에 유사하게 코팅된 48-웰 플레이트에 세포를 계대하였다. 배양의 시작으로부터 21 일차에 모든 세포를 수집하고 (35 일차), 유세포 분석기 (BD FACSAria^TM Fusion, BD Biosciences에 의해 제조됨)에 의해 CD45(+), CD3(+) 분획의 존재를 확인하였다. 수득된 세포를 48-웰 플레이트에 씨딩하고, 5% CO₂, 37℃ 조건 하에서 배양하였다. αMEM 배지는 15% FBS, 2 mμ L-글루타민, 100 U/ml 페니실린, 100 ng/ml 스트렙토마이신, 50 μg/ml 아스코르브산 2-포스페이트, 10 μg/ml 인간 인슐린, 5.5 μg/ml 인간 트랜스페린, 5 ng/mL 소듐 셀레나이트, 500 ng/mL 항-CD3 항체 (OKT3) 및 10 ng/mL IL-7을 함유하였다. 배양의 시작으로부터 27 일차 모든 세포를 수집하고 (41 일차)에, 세포를 혈구계산기에 의해 카운팅하고, 표 3에 도시된 바와 같은 항체 세트를 사용하여 염색하였다.

표 3

염색의 결과로서, iPS 세포 (Ff-I01s04 세포주)로부터 유래된 조혈 전구체 세포로부터 γδTCR을 발현하는 세포 (γδTCR 양성 세포)를 제조할 수 있음을 보여주었다 (도 2).

게다가, γδTCR 양성 세포는 Vδ1 양성 γδT 세포 및 Vδ2 양성 γδT 세포를 함유하고 있으므로, Vδ1 유형 및 Vδ2 유형 γδT 세포가 제조될 수 있음을 보여주었다 (도 3). (γδTCR 유전자의 KI가 없는 iPS 세포-유래된 γδTCR 양성 세포는 또한 본원에서 "iγδT 세포"로서 지칭됨을 유의함)

실시예 2

iγδT 세포의 확장 배양 및 기능 평가

iγδT 세포의 생산은, 항-CD3 항체로서 UCHT1 (GeneTex에 의해 제조됨)을 사용한 것을 제외하고는 실시예 1에서와 동일한 방법으로 사용하여 수행하였고, iPS 세포 (Ff-I01s04 세포주)로부터 유래된 γδT 세포 (iγδT 세포)를 생산하였다.

수득된 후속적인 iγδT 세포를 15% FBS 및 표 4에 도시된 바와 같은 사이토카인을 함유하는 첨가제를 함유하는 α-MEM 배지에 2,000,000 개의 세포/mL로 현탁시키고, 항-CD3 항체 (UCHT1) 및 레트로넥틴으로 고상화한(solid-phased) 플레이트에 씨딩하고, 5% CO₂/37℃에서 3 일 동안 배양하였다. 배양의 3 일째에, 플레이트로부터 세포를 수집하고, NucleoCounter (등록 상표) NC-200 (ChemoMetec)을 사용하여 세포의 갯수를 카운팅하고, 세포를 15% FBS 및 표 5에 도시된 바와 같은 사이토카인을 함유하는 첨가제를 함유하는 α-MEM 배지에 적절한 양으로 현탁하고, 비-고정화된 G-Rex (등록 상표) 6-웰 플레이트 (WILSONWOLF)에 첨가하고, 5% CO₂/37℃에서 배양하였다. 5 일차, 6 일차, 7 일차, 8 일차, 9 일차, 10 일차, 11 일차, 14 일차 및 17 일차에 4-6 회 플레이트로부터 세포의 일부를 수집하고, 혈구계산기를 사용하여 세포의 갯수를 카운팅하였다.

항-CD3 항체 및 레트로넥틴을 다음의 방법에 의해 배양 플레이트에 고정화시켰다. 필요한 농도로 PBS에 용해된 항-CD3 항체 (UCHT1 최종 농도 3000 ng/mL) 및 레트로넥틴 (최종 농도 150 μg/mL)을 플레이트에 첨가한 다음, 4℃에서 밤새 방치하였다. PBS로 세척한 후, 플레이트를 테스트하였다.

표 4

표 5

iγδT 세포의 증식을 항-CD3 항체 (UCHT1) 및 항-CD30 항체를 이용한 자극에 의해 관찰하였다 (도 4).

실시예 3

iPS 세포-유래된 Vγ9Vδ2T 세포의 생산

1. iPS 세포의 제조

iPS 세포를 실시예 1에 개시된 바와 같이 유사하게 제조하였다. 특히, 교토 대학교, iPS 세포 연구 및 응용 센터 (CiRA)에서 제공한 Ff-I01s04 세포주를 사용하였다. iPS 세포를 CiRA가 배포한 "인간 iPS 세포의 공급자 세포-없는 배양(feeder-free culture)" 프로토콜에 따라 배양하였다.

2. iPS 세포의 HPC로의 분화

iPS 세포의 조혈 전구체 세포 (HPC)로의 분화는 WO 2017/221975에 개시된 방법에 따라 수행하였다.

3. Vγ9Vδ2 유전자

G115γδT 세포 클론-유래된 Vγ9Vδ2 T 세포 수용체 (Vγ9Vδ2TCR G115)를 사용하였다. 서열번호 44를 인코딩하는 Vγ9Vδ2TCR G115를 인코딩하는 유전자를 포함하는 핵산은 표 6에 도시된 바와 같은 유전자를 함유하고 있다. 핵산을 인공적으로 합성하였다.

표 6

MVSLLHASTLAVLGALCVYGAGHLEQPQISSTKTLSKTARLECVVSGITISATSVYWYRERPGEVIQFLVSISYDGTVRKESGIPSGKFEVDRIPETSTSTLTIHNVEKQDIATYYCALWEAQQELGKKIKVFGPGTKLIITDKQLDADVSPKPTIFLPSIAETKLQKAGTYLCLLEKFFPDVIKIHWEEKKSNTILGSQEGNTMKTNDTYMKFSWLTVPEKSLDKEHRCIVRHENNKNGVDQEIIFPPIKTDVITMDPKDNCSKDANDTLLLQLTNTSAYYMYLLLLLKSVVYFAIITCCLLRRTAFCCNGEKSGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPMERISSLIHLSLFWAGVMSAIELVPEHQTVPVSIGVPATLRCSMKGEAIGNYYINWYRKTQGNTMTFIYREKDIYGPGFKDNFQGDIDIAKNLAVLKILAPSERDEGSYYCACDTLGMGGEYTDKLIFGKGTRVTVEPRSQPHTKPSVFVMKNGTNVACLVKEFYPKDIRINLVSSKKITEFDPAIVISPSGKYNAVKLGKYEDSNSVTCSVQHDNKTVHSTDFEVKTDSTDHVKPKETENTKQPSKSCHKPKAIVHTEKVNMMSLTVLGLRMLFAKTVAVNFLLTAKLFFL (서열번호 44).

4. Vγ9Vδ2 유전자를 운반하는 레트로바이러스 벡터의 생산

렌티바이러스 벡터 pLVSIN-Ub를 사용하였고, pLVSIN-CMV Neo 벡터 (Clontech Laboratories, Inc.)로부터 네오마이신 저항성 유전자를 인코딩하는 서열을 제거함으로써 벡터를 생성하였고, CMV 프로모터를 인간 유비퀴틴 프로모터로 대체하였다. 인공 올리고 DNA를 표 6에 따라 합성하였다. Vγ9Vδ2 유전자를 pLVSIN-Ub 레트로바이러스 벡터의 다중-클로닝 부위에 통합하였다. 이 플라스미드 및 렌티-X^TM 293T 세포주 및 Clontech Laboratories, Inc.의 렌티-X^TM 패키징 단일 샷 (VSV-G)을 사용하여, 렌티바이러스 벡터 pLVSIN-Ub를 생산하였다.

5. iPS 세포-유래된 Vγ9Vδ2T 세포의 생산

1. iPS 세포의 제조 에서 제조된 iPS 세포를, Vγ9Vδ2 유전자를 운반하는, 4. Vγ9Vδ2 유전자를 운반하는 레트로바이러스 벡터의 생산 에서 제조된 레트로바이러스 벡터로 감염시켰다. 이들 세포를 실시예 1에서와 동일한 방식으로 알려진 방법 (WO2017/221975에 개시된 바와 같음)에 따라 T 세포로 분화시켜, iPS 세포-유래된 Vγ9Vδ2T 세포를 제조하였다. 500 ng/mL OKT3 (TakaraBio)를 분화 단계에서 항-CD3 항체로서 사용하였다. (iPS 세포로부터 제조된 iPS 세포-유래된 Vγ9Vδ2T 세포는 또한 본원에서 "iγ9δ2T 세포"로서 지칭됨을 유의함.) 수득된 iγ9δ2T 세포를 유세포 분석기 (BD FACSAria^TM Fusion, BD Biosciences에 의해 제조됨)를 이용하여 세포막 표면에 CD3, γδTCR, Vγ9 및 Vδ2의 발현에 대해 측정하였다 (도 5).

실시예 4

iPS 세포-유래된 항-메소텔린-CAR/IL-15γδT 세포의 생산

1. 항-메소텔린-CAR 유전자

항-메소텔린-CAR을 인코딩하는 유전자를 포함하는 핵산을 인공적으로 합성하였다. 표 7에 나열된 유전자를 사용하여 iγδT 세포 또는 iγ9δ2T 세포로의 형질주입을 위해 11 개의 패턴의 인공 핵산을 합성하였다.

표 7

2. IL-15 유전자

인공 핵산은 각각의 IL-15 버전을 인코딩하는 유전자를 포함하였다. IL-15 버전의 유전자는 표 8에 도시되어 있다.

표 8

인공 핵산의 제1 패턴은 N-말단으로부터 순서대로 ssVH-P4-CD8힌지/TM-41BB-CD3z-P2A-IL2sp-mIL15/Ra를 포함한다.

인공 핵산의 제2 패턴은 N-말단으로부터 순서대로 ssVH-P4-CD8힌지/TM-41BB-CD3z-P2A-mIL15/Ra-LSP를 포함한다.

인공 핵산의 제3 패턴은 N-말단으로부터 순서대로 ssVH-P4-CD8힌지/TM-41BB-CD3z-P2A-IL15Rasp-sushi15를 포함한다.

인공 핵산의 제4 패턴은 N-말단으로부터 순서대로 ssVH-P4-CD8힌지/TM-41BB-CD3z-P2A-sIL15-LSP를 포함한다.

인공 핵산의 제5 패턴은 N-말단으로부터 순서대로 ssVH-P4-CD8힌지/TM-41BB-CD3z-P2A-IL2sp-mIL15/Ra-P2A-endosp-CCL19를 포함한다.

인공 핵산의 제6 패턴은 N-말단으로부터 순서대로 ssVH-P4-CD8힌지/TM-41BB-CD3z-P2A-mIL15/Ra-LSP-P2A-endosp-CCL19를 포함한다.

인공 핵산의 제7 패턴은 N-말단으로부터 순서대로 ssVH-P4-CD8힌지/TM-41BB-CD3z-P2A-IL15Rasp-sushi15-P2A-endosp-CCL19를 포함한다.

인공 핵산의 제8 패턴은 N-말단으로부터 순서대로 ssVH-P4-CD8힌지/TM-41BB-CD3z-P2A-sIL15-LSP-P2A-endosp-CCL19를 포함한다.

인공 핵산의 제9 패턴은 N-말단으로부터 순서대로 ssVH-P4-CD8힌지/TM-CD28-CD3z-P2A-IL15sp-sushi15-P2A-endosp-CCL19를 포함한다.

추가적으로, CD8힌지/TM 및 CD3z 사이의 세포내 도메인으로서 각각 DAP10 및 TNFR2를 사용하여 2 개의 패턴을 더 제조하였다.

인공 핵산의 제10 패턴은 N-말단으로부터 순서대로 ssVH-P4-CD8힌지/TM-DAP10-CD3z-P2A-IL2sp-mIL15/Ra를 포함한다.

인공 핵산의 제11 패턴은 N-말단으로부터 순서대로 ssVH-P4-CD8힌지/TM-TNFR2-CD3z-P2A-IL2sp-mIL15/Ra를 포함한다.

2. 항-메소텔린-CAR 유전자를 운반하는 레트로바이러스 벡터의 생산

레트로바이러스 패키징 세포주 (ATCC)인 Phoenix A 세포를 DMEM 20% FBS 및 Pen/Strep에서 50-70% 컨플루언시까지 성장시켰다. 제조업체의 프로토콜에 따라 위에 기재된 CAR 작제물을 인코딩하는 유전자를 포함하는 핵산의 패턴을 함유하는 각각의 플라스미드, 헬퍼 플라스미드 gag-pol 및 pVSVG 및 형질도입 시약 Fugene HD (Promega)를 사용하여 DNA 복합체를 제조하였다. 형질주입 16-24 시간 후에 바이러스를 수확하고, 추가 사용을 위해 분취하고 냉동하였다.

3. iPS 세포-유래된 항-메소텔린-CAR/IL-15γδT 세포의 생산

iγδT 세포 또는 iγ9δ2T 세포를 해동하고, 배지 (DMEM 10% FCS 및 표 10에 나열된 첨가제)에서 3 일 동안 휴지시켰다. 플라스크를 레트로넥틴 (Takara) 및 CD3 항체 (UCHT1)로 4'C에서 밤새 코팅하였다. iγδT 세포 또는 iγ9δ2T 세포를 세척하고, DMEM 10% FCS 및 표 9에 명시된 보충제에 재현탁하고, 활성화를 위해 72 시간 동안 레트로넥틴 및 항-CD3 항체 코팅된 플라스크로 옮겼다.

iγδT 세포 또는 iγ9δ2T 세포에 스피노큘레이션(spinocculation)을 사용하여 위에 기재된 CAR 작제물을 인코딩하는 유전자를 포함하는 핵산의 각각의 패턴을 형질도입하였다. 간단히 말해서, iγδT 세포 또는 iγ9δ2T 세포를 레트로넥틴 코팅된 플레이트 (제조업체의 설명서에 따라 제조됨)로 옮기고, 위에 기재된 CAR 인코딩 pVSVG 슈도타이핑된 바이러스로 스피노큘레이션 (2,000 g; 32'C)하였다. 세포를 DMEM 10% FCS 및 표 10에 기재된 첨가제에서 밤새 37'C 5% CO2에서 항온처리하고, 형질도입을 다음날 반복하고, 세포를 DMEM 10% FCS 및 표 10에 기재된 첨가제로 확장시켰다.

형질도입된 세포를 DMEM 10% FCS 및 표 10에 나열된 첨가제에서 위에 기재된 바와 같은 레트로넥틴/항-CD3 항체 활성화를 사용하여 추가로 확장하였고, 활성화 후 3 일차에 G-REX로 옮겼다. 활성화 후 7 일차에 세포를 수확하고 동결하여 추가로 사용하였다. (iγδT 세포로부터 제조된 iPS 세포-유래된 항-메소텔린-CAR/IL-15γδT 세포는 또한 본원에서 "iMeso-CAR/IL-15γδT 세포"로서 지칭되며, iγ9δ2T 세포로부터 제조된 iPS 세포-유래된 항-Meso-CAR/IL-15γδT 세포는 또한 본원에서 "iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T 세포"로서 지칭됨을 유의함).

실시예 5

iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T 세포의 확장 배양

실시예 3에 기재된 것과 유사한 방법을 사용하여, 실시예 5에서 수득된 iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T 세포 (P4-41BB-mIL15/Ra-CCL19)의 확장 배양을 수행하였다. 표 4의 사이토카인을 함유하는 첨가제 대신에 표 9의 사이토카인을 함유하는 첨가제, 및 표 5의 사이토카인을 함유하는 첨가제 대신에 표 10의 사이토카인을 함유하는 첨가제를 함유하는 배지를 사용하였다.

표 9

표 10

실시예 4에서 수득된 iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T 세포의 확장 배양을 수행하였다.

iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T 세포의 증식을 항-CD3 항체 (OKT3)를 이용한 자극에 의해 관찰하였다 (도 6).

실시예 6

1. 인간 세포주 MiaPaCa-2, MiaPaCa-2 Msln+, Capan-2 및 GSU에 의한 메소텔린 발현.

인간 세포주 MiaPaCa-2 (ATCC; CRL-1420), MiaPaCa-2 Msln+ (바이러스 벡터를 사용하여 메소텔린의 과발현에 의해 MiaPaca-2로부터 생성됨), Capan-2 (ATCC, HTB-80) 및 GSU (RIKEN, RBC2278)을 공급자에 의해 권장된 바와 같이 배양하였다. 유세포 분석법을 위해, TrypLE 발현 효소 (Gibco; #12605010)을 사용하여 세포를 수확하고, 세척하고, 일차 비표지된 항-메소텔린 항체 (Rockland; #MN1200301A88) 및 이차 APC 컨쥬게이션된 항-마우스 IgG 항체 (Biolegend; #405308)로 염색하였다. 사멸된 세포를 고정가능한 생존력 염료 (eBiosciences; #65-0866-14)를 사용하여 염색하고, FACS Fortessa (BD Biosciences)에서 획득하기 전에 세포를 고정시켰다. FlowJo를 사용하여 분석을 수행하였다. MiaPaca-2는 메소텔린 발현에 대해 매우 낮거나 음성인 반면, Capan-2, GSU 및 MiaPaca-2 Msln+는 높은 메소텔린 발현을 나타냈다 (도 7a).

2. 인간 세포주 MiaPaCa-2, MiaPaCa-2 Msln+, Capan-2 및 GSU에 대항하는 iPS 세포-유래된 항-메소텔린-CAR/IL-15γδT 세포의 생체외 세포독성.

모든 표적 세포주 (MiaPaCa-2, MiaPaCa-2 Msln+, Capan-2 및 GSU)를 분리하고, 세척하고, 검정 배지에 재현탁시키고, 카운팅한 후, 콜라겐 코팅된 평평한 바닥 플레이트에 3 회 반복실험으로(in triplicates) 플레이팅하였다. 세포를 37'C 5% CO2에서 2 시간 이상 동안 항온처리하여, 완전히 접착시켰다.

Meso iCAR-T를 해동하고, 세척하고, 검정 배지에 재현탁시키고, 카운팅한 후, 표시된 이펙터 대 표적 (E:T) 비 (즉, 3:1, 1:1, 0.3:1, 0.1:1)로 48 시간 동안 37'C 5% CO2에서 표적 세포와 공동-배양하였다. iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T 세포에 의한 표적 세포의 살해를 제조업체의 설명서에 따라 CellTiter-Glo 발광 세포 생존력 검정 (Promega)을 사용하여 평가하였다. 살해%를 다음 방정식에 따라 계산하였다:

% 살해 = (평균 발광 공동배양물 - 평균 발광 이펙터 세포 단독)

평균 발광 표적 세포 단독

결과는 모든 IL-15 버전을 갖는 iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T 세포가 자연적으로 메소텔린을 발현하는 세포주 (GSU, Capan-2) 또는 생체외에서 메소텔린을 발현하도록 조작된 세포주 (MiaPaCa-2 Msln+)를 잠재적으로 살해시키지만 메소텔린 음성 MiaPaCa-2 세포는 그렇지 않으며, 살해가 형질도입되지 않은 대조군 세포 (UTD)(iγ9δ2T 세포)와 비교하여 크게 증가한다는 것을 보여준다 (도 7b).

실시예 7

1. Capan-2 s.c. 이종이식 모델에서 상이한 공동자극 도메인을 운반하는 iPS 세포-유래된 항-메소텔린-CAR/IL-15γδT 세포의 생체내 항-종양 효험을 평가함

6-16 주령 암컷 NSG 마우스 (Jackson Labs)에 100 ul McCoys 5A + matrigel 중 4x10⁶ 개의 생존가능한 Capan-2 종양 세포를 피하 접종하였다. 이식 3 주 후, 종양 크기는 약 50 mm3에 도달하였고, 마우스를 유사한 평균 종양 크기 (평균 ~100 mm3; 그룹당 n=6)를 갖는 치료 그룹으로 무작위화하였다. 다음날 1x10⁶ 개의 갓 생산된 iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T 세포를 종양내로 주사하였다. 독성을 모니터링하기 위해 체중을 매주 2 회 측정하였다. 종양 크기를 매주 2 회 측정하였으며, 종양 부피를 다음의 공식을 사용하여 계산하였다: 종양 부피 (mm³) = 길이 x 너비 x 높이 x 0.5236. 아래 표 11 참고.

표 11

4-1BB 또는 CD28 공동자극 도메인을 운반하는 iMeso-CAR/IL-15γδT 세포를 이용하여 최고의 항-종양 효험을 관찰하였다 (도 8).

실시예 8

1. Capan-2 s.c. 이종이식 모델에서 4-1BB 및 CD28 공동자극 도메인의 비교 및 상이한 IL-15 버전을 운반하는 iPS 세포-유래된 항-메소텔린-CAR/IL-15γδT 세포의 생체내 항-종양 효험을 평가함

6-16 주령 암컷 NSG 마우스 (Jackson Labs; n=6/그룹)에 100 ul McCoys 5A + matrigel 중 4x10⁶개의 생존가능한 Capan-2 종양 세포를 피하 접종하였다. 이식 3 주 후 종양 크기가 약 100 mm3에 도달하였을 때, 마우스를 유사한 평균 종양 크기(평균 ~100 mm3; 그룹당 n=6)를 갖는 치료 그룹으로 무작위화하였다. 다음날 5x10⁶ (아암 1) 또는 1.5x10⁶ (아암 2) 개의 냉동보존된 iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T 세포를 종양내로 주사하였다. 독성을 모니터링하기 위해 체중을 매주 2 회 측정하였다. 종양 크기를 매주 2 회 측정하였으며, 종양 부피를 다음의 공식을 사용하여 계산하였다: 종양 부피 (mm³) = 길이 x 너비 x 높이 x 0.5236. 표 12-14 참고.

표 12: 아암 1. 또한 도 9a 및 도 9b 참고.

표 13: 아암 2. 또한 도 9c 및 도 9d 참고.

표 14: 도 9e 참고

IL-15 버전 Sushi15 또는 mIL15/Ra를 운반하는 iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T 세포는 사용된 세포 갯수 (즉, 5x10⁶ 또는 1.5x10⁶개; 도 9e)에 관계없이 전반적으로 최고의 항-종양 효험을 나타냈다. 공동자극 도메인 4-1BB를 운반하는 iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T 세포는 CD28 공동자극 도메인을 사용하는 iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T 세포와 비교하여 우수한 종양 제어를 나타냈다 (도 9e).

실시예 9

1. GSU s.c. 이종이식 모델에서 상이한 IL-15 버전 및 CCL19로 무장된(armored) iPS 세포-유래된 항-메소텔린-CAR/IL-15γ9δ2T 세포의 생체내 항-종양 효험을 평가함

6-16 주령 암컷 NSG 마우스 (Jackson Labs; n=6/그룹)에 Matrigel:PBS 1:1 중 2x10⁶ 개의 생존가능한 GSU 종양 세포를 피하 접종하였다. 이식 7 일 후에, 종양 크기는 약 100 mm3에 도달하였고, 마우스를 유사한 평균 종양 크기 (평균 ~100 mm3; 그룹당 n=6)를 갖는 치료 그룹으로 무작위화하였다. 다음날 10x10⁶ 개의 냉동보존된 iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T 세포를 종양내로 주사하였다. 독성을 모니터링하기 위해 체중을 매주 2 회 측정하였다. 종양 크기를 매주 2 회 측정하였으며, 종양 부피를 다음의 공식을 사용하여 계산하였다: 종양 부피 (mm³) = 길이 x 너비 x 높이 x 0.5236. 아래 표 15 및 도 10 참고.

표 15

10x10⁶ 개의 iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T 세포의 복강내 투여는 종양을 제거한(cleared) 반면, 10x10⁶ 개의 Meso iCAR-T의 정맥내 투여는 종양 제어를 나타냈지만 완전한 반응은 보이지 않았다. sushi15-CCL19 또는 mIL15/Ra-CCL19로 무장된 iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T 세포는 비교적 잘 수행되었다.

실시예 10

1. GSU i.p. 이종이식 모델에서 상이한 IL-15 버전 및 CCL19로 무장된 iPS 세포-유래된 항-메소텔린-CAR/IL-15γ9δ2T 세포의 생체내 항-종양 효험을 평가함

Perkin Elmer로부터의 RediFect Red-FLuc-퓨로마이신 바이러스 (CLS960002)를 사용하여 루시퍼화된 GSU 세포주를 생성하였다. 형질도입을 1.6 ug/ml 폴리브렌 (Millipore)의 존재 하에서 밤새 수행하였으며, EF1a 프로모터 및 퓨로마이신 저항성의 제어 하에서 인간 CD19를 인코딩하는 플라스미드를 운반하는 바이러스로 세포를 형질도입하였다. GSU-RedLuc 세포를 퓨로마이신을 사용하여 양성 선택하였다.

6-16 주령 암컷 NSG (Jackson Labs; n=4/그룹)에 Matrigel:PBS 1:1 중 5x10⁶ 개의 생존가능한 GSU-RedLuc 세포를 복강내로 접종하였다. 이식 2 일 후, 종양 성장을 생체내 이미징 시스템 (IVIS) 스펙트럼 (Perkin Elmer)을 사용하여 생물발광 이미징으로 모니터링하고, 무작위화를 위해 IVIS 이미징 소프트웨어 (Perkin Elmer)를 사용하여 분석하였다. 값은 광자/초로서 표현된다. 간단히 말하면, 이미징 6 분 전에, 동물은 150 mg/kg D-루시페린 포타슘 염 (Promega)의 복강내 (IP) 주사를 제공받았다. 흡입형 이소플루란을 이용하여 마취를 제공하였다. 무작위화 다음 날 마우스에 10x10⁶ 개의 생존가능한 iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T 세포를 복강내 또는 정맥내로 투여하고, 종양 성장 및 체중을 연구가 끝날 때까지 주당 2 회 모니터링하였다. 아래 표 16 및 도 11 참고.

표 16

10x10⁶ 개의 iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T 세포는 사용된 IL-15 버전 (sushi15 대 mIL15/Ra)과 관계없이 복강내 GSU-RedLuc에서 종양 성장을 강력하게 억제하였다. 복강내 투여된 iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T 세포는 신속하고 완전한 종양 제거를 야기한 반면, 정맥내 주사된 iMeso-CAR/IL-15γ9δ2T 세포는 PBS 처리된 대조군과 비교하여 종양 성장을 유의하게 억제하였다.

실시예 11

메소텔린 (Msln) 양성 종양에서 항원 자극을 반복함.

TGFβ 조절제 (예컨대, TGFβR2-VH 또는 dnTGFbR2) 또는 GFP에 대항하는 대조군 VH (Msln-대조군 VH)와 함께 Msln에 대항하는 CAR을 공동-발현하는 대략 100,000 개의 iPSC 유래된 항-Msln CAR-T 세포를 TGF-β (R&D Systems, 10 ng/ml)의 존재 또는 부재 하에, 인간 Msln을 과발현하는 40,000 개의 MiaPaca-2 종양 세포와 2 회 반복실험으로(in duplicates) 공동-배양하였다. TGFβR2-VH는 CAR-T 세포로부터 분비되는 반면, dnTGFbR2는 CAR-T 세포의 막에 결합되어 있었다. 3-4 일마다, 웰당 CAR-T 세포의 절반을 동일한 조건 (TGF-β 10 ng/ml 포함 또는 없음) 하에서 종양 세포의 새로운 플레이트로 옮겼다. 나중 평가를 위해 상청액을 수확하고 냉동하였다. CAR-T 세포를 유세포 분석법으로 카운팅하고, 선택된 시점에서 FACS 표현형분석을 수행하였다 (도 12a).

제조업체의 프로토콜에 따라 CellTiterGlo (Promega)를 사용하여 종양 세포의 생존력을 평가하였다. Pherastar 플레이트 판독기를 사용하여 플레이트를 분석하였다. 살해 퍼센트는 다음의 공식을 사용하여 평가하였다:

대조군 웰은 이펙터 (즉, CAR-T) 세포 없이 종양 세포만을 함유하였다. 세포독성 퍼센트는 도 12b에 도시되어 있다.

Sytox Red 염료 (Thermofisher, 제조업체의 프로토콜에 따름)를 사용하여 사멸 세포를 제외함으로써 세포 카운트를 수행하고, HTS 유닛을 사용하여 Fortessa 유세포 분석기 (BD Biosciences)에서 동일한 부피의 세포 현탁액을 획득하였다. 살아있는 세포, 단일 세포 및 크기에 대해 게이팅함으로써 살아있는 CAR-T 세포를 카운팅하였다. 결과를 외삽하여, 웰당 세포 갯수를 수득하였다.

만성 항원 활성화를 시뮬레이션하는 표적 세포를 이용한 여러 라운드의 재자극 후에, TGF-β는 CAR-T 세포 기능 (즉, 살해)의 억제를 유도하고, CAR-T 세포의 증식을 억제하는 것으로 관찰되었다. 대조군 VH가 아닌 TGFβ 조절제를 발현하는 CAR-T 세포 (예컨대, TGFβR2 VH 이합체의 분비 또는 막 결합된 dnTGFbR2의 발현)만이 TGF-β (10 ng/ml)의 억제 효과로부터 보호되었다.

달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 기술이 속하는 기술분야의 당업자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다.

본원에 예시적으로 기재된 본 기술은 본원에 구체적으로 개시되지 않은 임의의 요소 또는 요소들, 제한 또는 제한들의 부재 하에 적합하게 실시될 수 있다. 따라서, 예를 들어, 용어 "포함하는", "비롯하는", "함유하는" 등은 제한 없이 그리고 광범위하게 판독되어야 한다. 추가적으로, 본원에 사용된 용어 및 표현은 제한이 아닌 설명의 용어로서 사용되었으며, 이러한 용어 및 표현의 사용에 있어서 도시되고 기재된 특징의 임의의 등가물 또는 이의 일부를 배제하려는 의도는 없으나, 청구된 본 기술의 범주 내에서 다양한 변형이 가능한 것으로 인식된다.

따라서, 여기에 제공된 재료, 방법 및 실시예는 바람직한 양태를 대표하고, 예시적이며, 본 기술의 범주를 제한하려는 의도가 아니라는 점을 이해해야 한다.

본 기술은 본원에서 광범위하고 일반적으로 기재되었다. 일반적인 개시내용 내에 속하는 더 좁은 종 및 하위-속 그룹(sub-generic grouping) 각각이 또한 본 기술의 일부를 형성한다. 이는 삭제된 자료가 본원에 구체적으로 열거되었는지 여부에 관계없이, 속(genus)으로부터 임의의 주제를 제거하는 단서 또는 부정적 제한과 함께 본 기술의 일반적인 설명을 포함한다.

게다가, 본 기술의 특징 또는 양태가 Markush 그룹의 관점에서 기재되는 경우, 당업자는 본 기술이 또한 Markush 그룹의 임의의 개별 구성원 또는 구성원의 하위그룹의 관점에서 기재된다는 것을 인식할 것이다.

본원에 언급된 모든 공개물, 특허 출원, 특허 및 기타 참고문헌은 각각이 개별적으로 참조로 원용되는 것과 동일한 정도로, 그 전체가 참조로 명시적으로 원용된다. 상충되는 경우, 정의를 포함한 본 명세서가 우선한다.

다른 양태는 다음의 청구범위 내에 제시되어 있다.

서열 목록

요약표

서열번호 1 / AA / P4 scFv (신호 펩티드 포함/없음)

서열번호 2 / AA / ssVH 신호 펩티드 (sp)

서열번호 3 / AA / ssVHsp-P4 scFv

서열번호 4 / AA / 링커 (P4 scFv-CD8힌지))

서열번호 5 / AA / P2A 펩티드

서열번호 6 / AA / IL2 sp

서열번호 7 / AA / IL15Rasp

서열번호 8 / AA / mIL15/Ra (26aa 링커 포함) (IL2sp 포함/없음)

서열번호 9 / AA / mIL15/Ra-LSP (IL15LSP-(IL15프로펩티드)-IL15-26aa링커-IL15Ra(FL))

서열번호 10 / AA / sushi15 (26aa 링커 포함) (IL15Rasp 포함/없음)

서열번호 11 / AA / sIL15-LSP (IL15LSP-(IL15프로펩티드)-IL15)

서열번호 47 / AA / IL15LSP

서열번호 48 / AA / IL15프로펩티드

서열번호 12 (endosp)

서열번호 13 / AA / CCL19

서열번호 14 / AA / IL2sp-mIL15/Ra-P2A-endosp-CCL19 (26aa 링커 포함)

서열번호 24 / AA / 4-1BB 공동자극 도메인

서열번호 25 / AA / CD3z(wt) 세포내 영역

서열번호 26 / AA / CD8 힌지

서열번호 27 / AA / CD8TM 도메인

서열번호 43 / AA / ssVHsp-CD8힌지-TM-41BB-CD3z

서열번호 42 / NA / ssVHsp-P4-CD8힌지-TM-BB-CD3z

서열번호 28 / AA / IL2sp-mIL15/Ra (IL2sp-IL15-26 aa 링커-IL15Ra(FL))

서열번호 29 / AA / IL15Rasp-sushi15 (IL15Rasp-sushi 도메인-26 aa 링커- IL15)

서열번호 45 / AA / P4 scFv 중 펩티드 링커 (20 개의 AA)

서열번호 31 / AA / IL15Rasp-sushi15-P2A-endosp-CCL19 (IL15Rasp-sushi 도메인-26 aa 링커-IL15-P2A-endosp-CCL19)

서열번호 32 / AA / 펩티드 링커 (26 개의 AA)

서열번호 33 / AA / 펩티드 링커 (20 개의 AA)

서열번호 34 / AA / ssVHsp-P4-CD8h/TM-BB-CD3z-P2A-IL2sp-mIL15/Ra (26aa 링커 포함)

서열번호 35 / AA / ssVHsp-P4-CD8h/TM-BB-CD3z-P2A-IL15Rasp-sushi15-IL15 (26aa 링커 포함)

서열번호 36 / AA / ssVHsp-P4-CD8h/TM-BB-CD3z-P2A-IL2sp-mIL15/Ra-P2A-endosp-CCL19 (26aa 링커 포함)

서열번호 15 / AA / ssVHsp-P4-CD8h/TM-BB-CD3z-P2A-IL15Rasp-sushi15-IL15-endosp-CCL19 (26aa 링커 포함)

서열번호 37 DNA P4-BB-mIL15/Ra

P4-BB-mIL15/Ra-LSP

서열번호 38 DNA P4-BB-sushi15

P4-BB-sIL15-LSP

서열번호 39 DNA P4-BB-mIL15/RaxCCL19

P4-BB-mIL15/Ra-LSP xCCL19

서열번호 40 DNA P4-BB-sushi15xCCL19

서열번호 50 / DNA /

>Seq42A_from_37

서열번호 51 / DNA /

>Seq42B_from_38 (42ª와 1 개의 염기 차이)

서열번호 52 / DNA /

>Seq42C_from_39 (Seq42A 1154/1523에 대한 동일성 (75.8%); CAR Seq ID#40으로부터의 DNA 서열과 동일함)

서열번호 44 / AA / Vg9-P2A-Vd2 TCR

서열번호 53 AA SSVHsp-P4-BB-mIL15/Ra-LSP

(ssVHsp-P4-CD8h/TM-BB-CD3z-P2A-IL15LSP-IL15프로펩티드-mIL15/Ra (26aa 링커 포함)

서열번호 54 AA SSVHsp-P4-BB-sIL15-LSP

(ssVHsp-P4-CD8h/TM-BB-CD3z-P2A-IL15LSP-IL15프로펩티드-IL15)

서열번호 55 AA SSVHsp-P4-BB-mIL15/Ra-LSP-CCL19

(ssVHsp-P4-CD8h/TM-BB-CD3z-P2A-IL15LSP-IL15프로펩티드-IL15-P2A-endospCCL19)

서열번호 56 AA SSVHsp-P4-BB-sIL15-LSP-CCL19

서열번호 57 AA SSVHsp-P4-CD28-sushi15-CCL19

(ssVH-P4-CD28힌지-TM-CD28cyto-CD3z-P2A-IL15Rasp-IL15Ra(sushi)-20aa링커-IL15-P2A-endospCCL19)

서열번호 58 DNA ssVHsp-P4-BB-mIL15/Ra-LSP

서열번호 59 DNA ssVHsp-P4-BB-sIL15-LSP

서열번호 60 DNA ssVHsp-P4-BB-mIL15/Ra-LSP-CCL19

서열번호 61 DNA ssVHsp-P4-BB-sIL15-LSP-CCL19

서열번호 63 / AA / CD8TM 도메인

서열번호 64 / AA / CD8 힌지

서열번호 65 / AA / ssVHsp-P4-CD8힌지-TM-41BB-CD3z

서열번호 66 / AA / ssVHsp-P4-CD8힌지-TM-41BB-CD3z

서열번호 67 / AA / ssVHsp P4-CD8힌지-TM-41BB-CD3z

서열번호 68 / AA / ssVHsp-P4-CD8힌지-TM-41BB-CD3z

서열번호 69 / AA / ssVHsp-P4-CD8힌지-TM-41BB-CD3z

서열번호 70 / AA / ssVHsp-P4-CD8힌지-TM-41BB-CD3z

서열번호 71 / AA / ssVHsp-P4-CD8힌지-TM-41BB-CD3z

서열번호 72 / AA / ssVHsp-P4-CD8힌지-TM-41BB-CD3z

서열번호 73 / AA / ssVHsp-P4-CD8힌지-TM-41BB-CD3z

서열번호 74 / AA / ssVHsp-P4-CD8힌지-TM-41BB-CD3z

서열번호 75 / AA / ssVHsp-P4-CD8힌지-TM-41BB-CD3z

Claims

인간 메소텔린을 특이적으로 인식하는 항체 및 4-1BB 세포내 영역을 포함하는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 인코딩하는 제1 폴리뉴클레오티드, 및 인터류킨 15 (IL-15)를 인코딩하는 제2 폴리뉴클레오티드를 포함하는, 단리된 핵산 분자.
제1항에 있어서,
상기 CAR이 CD8 힌지 영역, CD8 막관통 영역 및 CD3ζ 세포내 영역을 추가로 포함하는, 단리된 핵산 분자.
제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 단리된 핵산 분자가 CAR을 인코딩하는 제1 폴리뉴클레오티드 및 IL-15를 인코딩하는 제2 폴리뉴클레오티드를 포함하는, 단리된 핵산 분자.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
CCL19를 인코딩하는 제3 폴리뉴클레오티드를 추가로 포함하는, 단리된 핵산 분자.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 IL-15가 인간 IL-15인, 단리된 핵산 분자.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 CCL19가 인간 CCL19인, 단리된 핵산 분자.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항체가 중쇄 가변 영역 (VH) 및 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함하며, 여기서 VH가 서열번호 16-18을 포함하는 3 개의 상보성-결정 영역 (CDR)을 포함하고, VL이 서열번호 19-21을 포함하는 3 개의 CDR을 포함하는, 단리된 핵산 분자.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 VH가 서열번호 22를 포함하고, VL이 서열번호 23을 포함하는, 단리된 핵산 분자.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항체가 단일-쇄 가변 단편 (scFv) 형식을 포함하는, 단리된 핵산 분자.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항체가 서열번호 1을 포함하는, 단리된 핵산 분자.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 4-1BB 세포내 영역이 서열번호 24를 포함하는, 단리된 핵산 분자.
제2항에 있어서,
상기 CD3ζ 세포내 영역이 서열번호 25를 포함하는, 단리된 핵산 분자.
제2항 또는 제12항에 있어서,
상기 4-1BB 세포내 영역이 단리된 핵산 분자 내의 CD3ζ 세포내 영역의 상류에 있는, 단리된 핵산 분자.
제2항에 있어서,
상기 CD8 힌지 영역이 서열번호 26을 포함하는, 단리된 핵산 분자.
제2항에 있어서,
상기 CD8 막관통 영역이 서열번호 27을 포함하는, 단리된 핵산 분자.
제2항 또는 제14항에 있어서,
상기 CAR이 항체 및 CD8 힌지 영역을 연결하는 3 내지 10 개의 아미노산 잔기 길이의 펩티드 링커를 추가로 포함하는, 단리된 핵산 분자.
제16항에 있어서,
상기 펩티드 링커가 서열번호 4를 포함하는, 단리된 핵산 분자.
제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 CAR이 시그널링 펩티드를 추가로 포함하는, 단리된 핵산 분자.
제18항에 있어서,
상기 시그널링 펩티드가 단리된 핵산 분자에서 인간 메소텔린을 특이적으로 인식하는 항체의 상류에 위치하는, 단리된 핵산 분자.
제18항 또는 제19항에 있어서,
상기 시그널링 펩티드가 서열번호 2를 포함하는, 단리된 핵산 분자.
제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서,
IL-15를 인코딩하는 제2 폴리뉴클레오티드 및 임의로 CCL19를 인코딩하는 제3 폴리뉴클레오티드가 자가-절단 2A 펩티드 (2A 펩티드)를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 프로모터 하에서 각각 독립적으로 전사되는, 단리된 핵산 분자.
제21항에 있어서,
상기 2A 펩티드가 서열번호 5를 포함하는, 단리된 핵산 분자.
제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 IL-15가 서열번호 8-11로부터 선택된 서열을 포함하는, 단리된 핵산 분자.
제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 IL-15가 서열번호 28 또는 29로부터 선택된 서열을 포함하는, 단리된 핵산 분자.
제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 CCL19가 서열번호 13을 포함하는, 단리된 핵산 분자.
제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 CAR을 인코딩하는 제1 폴리뉴클레오티드 및 IL-15를 인코딩하는 제2 폴리뉴클레오티드가 핵산 분자에서 5' 말단으로부터 3' 말단으로, CAR을 인코딩하는 제1 폴리뉴클레오티드 - IL-15를 인코딩하는 제2 폴리뉴클레오티드와 같이 배열되는, 단리된 핵산 분자.
제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 CAR을 인코딩하는 제1 폴리뉴클레오티드, IL-15를 인코딩하는 제2 폴리뉴클레오티드, 및 CCL19를 인코딩하는 제3 폴리뉴클레오티드가 핵산 분자에서 5' 말단으로부터 3' 말단으로, CAR을 인코딩하는 제1 폴리뉴클레오티드 - IL-15를 인코딩하는 제2 폴리뉴클레오티드 - CCL19를 인코딩하는 제3 폴리뉴클레오티드와 같이 배열되는, 단리된 핵산 분자.
제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 단리된 핵산 분자가 서열번호 14 또는 31을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩하는, 단리된 핵산 분자.
제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 단리된 핵산 분자가 서열번호 34, 35, 36, 또는 15를 포함하는 폴리펩티드를 인코딩하는, 단리된 핵산 분자.
제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 단리된 핵산 분자가 서열번호 37, 38, 39, 또는 40을 포함하는, 단리된 핵산 분자.
제1항 내지 제30항 중 어느 한 항의 핵산 분자를 포함하는 벡터.
제31항에 있어서,
상기 벡터가 바이러스 벡터, 임의로 발현 벡터인, 벡터.
제32항에 있어서,
상기 바이러스 벡터가 레트로바이러스 벡터, 렌티바이러스 벡터, 아데노바이러스 벡터 및 아데노-연관된 바이러스 (AAV) 벡터로부터 선택되는, 벡터.
제31항 또는 제32항에 있어서,
상기 바이러스 벡터가 pSFG 벡터, pMSGV 벡터 또는 pMSCV 벡터인, 벡터.
제31항에 있어서,
상기 벡터가 플라스미드인, 벡터.
제1항 내지 제30항 중 어느 한 항의 핵산 분자 또는 제31항 내지 제35항 중 어느 한 항의 벡터를 포함하는, 면역 세포.
제36항에 있어서,
상기 면역 세포가 감마-TCR (γTCR)을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 델타-TCR (δTCR)을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 추가로 포함하는, 면역 세포.
제36항에 있어서,
상기 γTCR이 V 감마 9 TCR (Vγ9 TCR)이고, δTCR이 V 델타 2 TCR (Vδ2TCR)인, 면역 세포.
다음을 발현하는 면역 세포:
a) 인간 메소텔린을 특이적으로 인식하는 항체 및 4-1BB 세포내 영역을 포함하는 키메라 항원 수용체 (CAR); 및
b) IL-15; 및
c) 임의로 CCL19.
제39항에 있어서,
상기 CAR이 CD8 힌지 영역, CD8 막관통 영역 및 CD3ζ 세포내 영역을 추가로 포함하는, 면역 세포.
제36항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 면역 세포가 T 세포, 자연 살해 (NK) 세포, B 세포, 항원 제시 세포, 또는 과립구, 임의로 T 세포 또는 NK 세포인, 면역 세포.
제36항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 면역 세포가 유도 만능 줄기 세포 (iPSC)로부터 유래되는, 면역 세포.
제36항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 면역 세포가 알파 TCR (αTCR) 및/또는 베타 TCR (βTCR), 임의로 αβTCR을 발현하지 않는, 면역 세포.
제36항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 면역 세포가 γδTCR을 발현하는, 면역 세포.
제44항에 있어서,
상기 γδTCR이 Vγ9 TCR 및 Vδ2TCR을 포함하는, 면역 세포.
제35항 내지 제44항 중 어느 한 항의 면역 세포 및 약학적으로 허용가능한 첨가제를 포함하는, 약학 조성물.
메소텔린-발현 암을 치료하는 방법으로서, 제35항 내지 제44항 중 어느 한 항의 면역 세포 또는 제46항의 약학 조성물을 치료를 필요로 하는 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
제47항에 있어서,
상기 메소텔린-발현 암이 임의로 중피종, 결장직장암, 췌장암, 흉선암, 담관암, 폐암, 피부암, 유방암, 전립선암, 비뇨기 방광암, 질암, 경부암, 자궁암, 간암, 신장암, 비장암, 기관암, 기관지암, 위암, 식도암, 담낭암, 고환암, 난소암, 및 골암으로부터 선택된 고형 종양인, 방법.
제47항에 있어서,
상기 메소텔린-발현 암이 조혈암인, 방법.
제47항에 있어서,
상기 메소텔린-발현 암이 임의로 연골육종, 유잉 육종, 악성 혈관내피종, 악성 신경초종, 골육종 및 연조직 육종으로부터 선택된 육종인, 방법.
제47항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 메소텔린-발현 암이 전이성 암인, 방법.
제47항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 메소텔린-발현 암이 재발성 암 또는 불응성 암인, 방법.
제47항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 방법이 추가적인 치료제 또는 추가적인 치료적 양생법을 대상체에 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
제53항에 있어서,
상기 추가적인 치료제가 화학요법제, 면역요법제, 표적화된 요법, 방사선 요법, 또는 이들의 조합을 포함하는, 방법.
제53항에 있어서,
상기 추가적인 치료적 양생법이 제1 라인 요법을 포함하는, 방법.
제53항에 있어서,
상기 추가적인 치료적 양생법이 수술을 포함하는, 방법.
제53항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서,
제36항 내지 제44항 중 어느 한 항의 면역 세포 또는 제45항의 약학 조성물 및 추가적인 치료제가 동시에 투여되는, 방법.
제52항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서,
제36항 내지 제44항 중 어느 한 항의 면역 세포 또는 제45항의 약학 조성물 및 추가적인 치료제가 순차적으로 투여되는, 방법.
제57항에 있어서,
제36항 내지 제44항 중 어느 한 항의 면역 세포 또는 제5항의 약학 조성물이 추가적인 치료제의 투여 전에 대상체에 투여되는, 방법.
제57항에 있어서,
제35항 내지 제43항 중 어느 한 항의 면역 세포 또는 제45항의 약학 조성물이 추가적인 치료제의 투여 후에 대상체에 투여되는, 방법.
제46항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 대상체가 인간인, 방법.
종양 세포 증식을 감소시키는 방법으로서,
종양 세포를 제36항 내지 제45항 중 어느 한 항의 면역 세포와 접촉시켜 종양 세포 증식을 감소시키는 단계를 포함하는, 방법.
제62항에 있어서,
상기 방법이 생체외 방법인, 방법.
제62항에 있어서,
상기 방법이 생체내 방법인, 방법.
인간 메소텔린을 특이적으로 인식하는 세포 표면 분자, IL-15 및 임의로 CCL19를 발현하는 면역 세포를 생산하는 방법으로서, 방법은
제1항 내지 제30항 중 어느 한 항의 핵산 분자 또는 제31항 내지 제35항 중 어느 한 항의 벡터를 면역 세포에 도입하여, 면역 세포에 의해 인간 메소텔린을 특이적으로 인식하는 세포 표면 분자, IL-15 및 임의로 CCL19의 발현을 유도하는 단계를 포함하는, 방법.
제65항에 있어서,
상기 면역 세포가 T 세포, 자연 살해 (NK) 세포, B 세포, 항원 제시 세포 또는 과립구, 임의로 T 세포 또는 NK 세포인, 방법.
제1항 내지 제30항 중 어느 한 항의 핵산 분자; 제31항 내지 제35항 중 어느 한 항의 벡터, 제36항 내지 제45항 중 어느 한 항의 면역 세포, 또는 제46항의 약학 조성물, 및 사용 설명서를 포함하는, 키트.