TW202308602A

TW202308602A - 敗血病的治療

Info

Publication number: TW202308602A
Application number: TW111117651A
Authority: TW
Inventors: 凡妮莎勒格利; 雷米漢福; 西蒙德貝克爾; 菲利普普蘭; 貝努瓦諾埃爾; 羅伯沃查克; 佩吉帕羅什
Original assignee: 法商Ｇｅｎｆｉｔ公司
Priority date: 2021-05-11
Filing date: 2022-05-11
Publication date: 2023-03-01
Also published as: WO2022238448A1; AU2022272414A1; WO2022238451A1; EP4337185A1; CA3214544A1; TW202329922A

Abstract

本發明係關於用於治療敗血病之化合物。

Description

敗血病的治療

本發明屬於醫學領域，且係關於敗血病之治療。

敗血病為對感染之失調免疫反應，其導致器官功能障礙。其由於對感染（在大多數情況下為細菌感染）之複雜、失調宿主反應而產生。此失調宿主反應之特徵不僅在於發炎增加，且亦在於免疫抑止。此對感染之不當反應的影響導致細胞功能障礙，且最終導致器官衰竭。敗血病中之單器官功能障礙罕見，且通常若干器官受影響。敗血病患者之死亡率與受影響器官之數目相關。

許多敗血病患者罹患循環衰竭，其導致異常細胞氧代謝。異常細胞氧代謝表現為血液乳酸含量增加，通常達＞2毫當量/公升之值。儘管有足夠容量復蘇但需要血管加壓劑來維持最小平均動脈壓，且血液乳酸含量升高之患者在臨床上診斷為患有敗血性休克。

敗血病之當前治療旨在藉由提供快速感染控制、血液動力學穩定及器官支持（可能時）來限制器官功能障礙發展以確保器官功能恢復。但敗血病及敗血性休克之治療仍為相當大的未滿足之醫療需求。

本發明係關於一種PPAR促效劑，其選自：艾拉菲諾（elafibranor）或其醫藥學上可接受之鹽；及2-[2,6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-側氧基-丙基]苯氧基]-2-甲基丙酸或其醫藥學上可接受之鹽；其用於治療有需要個體之敗血病的方法中。

在一特定實施例中，向罹患敗血病且伴有多器官衰竭或具有敗血病且伴有多器官衰竭之風險的個體投與PPAR促效劑。在另一實施例中，個體罹患敗血性休克或具有敗血性休克之風險。

在另一實施例中，PPAR促效劑在該方法中用作單一活性劑。

在又一實施例中，在本文所揭示之方法中，PPAR促效劑與抗微生物劑組合使用。在另一實施例中，抗微生物劑為抗生素，尤其碳青黴烯抗生素，諸如厄他培南（ertapenem）。

本發明係關於一種PPAR促效劑，其選自：艾拉菲諾或其醫藥學上可接受之鹽；及2-[2,6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-側氧基-丙基]苯氧基]-2-甲基丙酸或其醫藥學上可接受之鹽；其用於治療敗血病之方法中。

定義

在本發明之上下文中，以下術語具有以下含義：

術語「醫藥學上可接受之鹽」包括無機酸鹽以及有機酸鹽。適合無機酸之代表性實例包括鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、磷酸及其類似物。適合有機酸之代表性實例包括甲酸、乙酸、三氯乙酸、三氟乙酸、丙酸、苯甲酸、肉桂酸、檸檬酸、反丁烯二酸、順丁烯二酸、甲磺酸及其類似物。醫藥學上可接受之無機酸或有機酸加成鹽之其他實例包括以下中列出之醫藥學上可接受之鹽：J. Pharm. Sci. 1977, 66, 2，及Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use，P. Heinrich Stahl及Camille G. Wermuth, 2002。「醫藥學上可接受之鹽」亦包括無機鹼鹽以及有機鹼鹽。適合無機鹼之代表性實例包括鈉鹽或鉀鹽、鹼土金屬鹽（諸如鈣鹽或鎂鹽）或銨鹽。與有機鹼之適合鹽的代表性實例包括例如與甲胺、二甲胺、三甲胺、哌啶、嗎啉或三-(2-羥乙基)胺之鹽。

如本文所使用，術語「治療（treatment/treat/treating）」係指意欲改善患者之健康狀況的任何行為，諸如疾病之療法、預防、防治及延遲。在某些實施例中，此類術語係指疾病或與其相關之症狀的改善或根除。在其他實施例中，此術語係指使疾病之擴散或惡化減至最小，由向患有此種疾病之個體投與一或多種治療劑而引起。在一特定實施例中，本發明用於降低與敗血病相關之死亡率。在其他實施例中，本發明可用於減緩或停止敗血病之進展。特定言之，本發明可用於預防罹患敗血病之個體的敗血病之進展，尤其預防敗血病進展為敗血性休克。在其他實施例中，本發明可用於預防罹患敗血病之個體的器官衰竭，尤其多器官衰竭。

如本文所使用，術語「個體」、「個人」或「患者」可互換且係指動物，較佳哺乳動物，甚至更佳人類，包括成人、兒童、新生兒及產前期人類。然而，術語「個體」亦可指非人類動物，尤其哺乳動物，諸如狗、貓、馬、牛、豬、羊及非人類靈長類動物，以及其他。

在本發明之上下文中，應用於數值之術語「約」意謂值+/- 10%。為清楚起見，此意謂「約100」係指包含於90-110範圍內之值。另外，在本發明之上下文中，其中X為數值之術語「約X」亦特定地揭示X值，且亦揭示如此定義之範圍之較低值及較高值，更特定言之X值。

根據本發明使用之化合物

本發明提供一種PPAR促效劑，其選自：艾拉菲諾或其醫藥學上可接受之鹽；及2-[2,6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-側氧基-丙基]苯氧基]-2-甲基丙酸或其醫藥學上可接受之鹽；其用於治療敗血病之方法中。

根據本發明使用之PPAR促效劑可呈醫藥學上可接受之鹽，尤其與醫藥用途相容之酸鹽或鹼鹽的形式。根據本發明使用之PPAR促效劑的鹽包括醫藥學上可接受之酸加成鹽、醫藥學上可接受之鹼加成鹽、醫藥學上可接受之金屬鹽、銨及烷基化銨鹽。此等鹽可在PPAR促效劑之最終純化步驟期間或藉由將鹽併入至先前純化之PPAR促效劑中來獲得。

敗血病

如上文所提及，如本文所使用之術語「敗血病」係指對感染之有害全身發炎反應，正式定義為存在感染以及感染之全身表現。如本文所使用之術語敗血病涵蓋任何嚴重程度之敗血病及其併發症，諸如敗血病伴有多器官衰竭及敗血性休克。

在本發明之一特定實施例中，個體罹患敗血病或其併發症或具有罹患敗血病或其併發症之風險。

在另一特定實施例中，個體罹患由一或多種微生物物種引起之敗血病。特定言之，個體可能罹患由細菌、真菌或病毒感染引起之敗血病。在又一實施例中，該敗血病由細菌感染引起。

在本發明之上下文中，PPAR促效劑以治療有效量向個體投與。「治療有效量」係指有效達成所需治療結果之藥物之量。藥物之治療有效量可根據諸如個人之疾病狀態、年齡、性別及體重以及藥物在個人中引起所需反應之能力的因素而變化。治療有效量亦為其中治療有益作用超過藥劑之任何毒性或有害作用的量。藥物之有效劑量及劑量方案視待治療之疾病或病況而定且可由熟習此項技術者確定。一般熟習此項技術之醫師可易於確定及開具所需醫藥組合物之有效量。舉例而言，醫師可以低於為達成所需治療作用所需之位準的位準開始醫藥組合物中所採用之藥物劑量，且逐漸增加劑量直至達成所需作用。一般而言，本發明組合物之適合劑量將為作為根據特定劑量方案有效產生治療作用之最低劑量的化合物的量。此有效劑量一般視上文所描述之因素而定。

PPAR促效劑可以醫藥組合物形式調配，醫藥組合物進一步包含一種或若干種醫藥學上可接受之賦形劑或媒劑（例如生理食鹽水溶液、生理溶液、等張溶液等），其與醫藥用途相容且為一般熟習此項技術者熟知。此等組合物亦可進一步包含一種或若干種選自分散劑、增溶劑、穩定劑、防腐劑等之試劑或媒劑。適用於此等調配物之試劑或媒劑（液體及/或可注射劑及/或固體）尤其為甲基纖維素、羥甲基纖維素、羧甲基纖維素、聚山梨醇酯80、甘露糖醇、明膠、乳糖、植物油、阿拉伯膠、脂質體等。此等組合物可最終藉助於草本製劑形式或確保延長及/或緩慢釋放之裝置以可注射懸浮液、糖漿、凝膠、油、軟膏、丸劑、錠劑、栓劑、散劑、膠囊錠（gel cap）、膠囊、氣霧劑等形式調配。對於此類調配物，可有利地使用諸如纖維素、碳酸鹽或澱粉之試劑。

PPAR促效劑可藉由不同途徑且以不同形式投與。舉例而言，其可經由全身性方式、經口、非經腸、藉由吸入、藉由鼻噴霧、藉由鼻滴注或藉由注射，諸如靜脈內，藉由肌內途徑、藉由皮下途徑、藉由經皮途徑、藉由局部途徑、藉由動脈內途徑等來投與。當然，投與途徑將根據熟習此項技術者熟知之程序適應於藥物形式。

在一特定實施例中，化合物經調配為錠劑。在另一特定實施例中，化合物係經口投與。

關於投與之頻率及/或劑量可由一般熟習此項技術者針對患者、病理學、投與形式等加以調適。通常，PPAR促效劑可以包含於0.01毫克/天至4000毫克/天，諸如50毫克/天至2000毫克/天，諸如100毫克/天至2000毫克/天；及尤其100毫克/天至1000毫克/天之間的劑量投與。必要時，可每天或甚至每天若干次執行投與。在一個實施例中，一天至少一次，諸如一天一次、一天兩次或一天三次投與化合物。在一特定實施例中，PPAR促效劑一天投與一次或兩次。特定言之，經口投與可一天進行一次，在用餐期間，例如在早餐、午餐或晚餐期間，藉由服用包含PPAR促效劑之錠劑進行。

適合地，PPAR促效劑之治療過程持續至少1週，尤其至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20或24週或更長時間。在一特定實施例中，治療過程持續至少1個月、至少2個月或至少3個月。在一特定實施例中，治療過程視所治療個體之病況而持續至少1年或更長時間。

在一特定實施例中，治療方法由投與作為單一活性成分之PPAR促效劑組成。

在另一特定實施例中，投與PPAR促效劑與另一活性成分組合進行，較佳與抗微生物劑，諸如抗生素、抗真菌劑或抗病毒劑組合進行。當然，如此項技術中所熟知，最適合之抗微生物劑將視引起感染之生物體或病毒而加以選擇。在一特定實施例中，敗血病由細菌感染引起，且抗微生物劑為抗生素。適用於治療細菌感染之抗生素為此項技術中所熟知。說明性抗生素家族包括但不限於β-內醯胺抗生素（諸如青黴素）、四環素、頭孢菌素、喹啉酮、林可黴素、巨環內酯、磺醯胺、醣肽、胺基糖苷及碳青黴烯。在一特定實施例中，PPAR促效劑可與碳青黴烯家族抗生素，諸如厄他培南組合。

PPAR促效劑及抗微生物劑可以相同或獨立醫藥組合物形式向個體投與。在一特定實施例中，本發明提供一種醫藥組合物，其包含PPAR促效劑、抗微生物劑及醫藥學上可接受之賦形劑。此醫藥組合物可用於本發明之方法中，用於治療敗血病。在另一實施例中，本發明提供一種方法，其中包含PPAR促效劑及醫藥學上可接受之賦形劑的第一醫藥組合物；及包含抗微生物劑之第二醫藥組合物；均向個體投與以用於治療敗血病。

第一及第二醫藥組合物可同時、分開或依序使用（亦即第一醫藥組合物可在第二醫藥組合物之前或之後投與）。因此，本發明亦提供一種組份套組，其包含：包含PPAR促效劑及醫藥學上可接受之賦形劑的第一醫藥組合物；及包含抗微生物劑之第二醫藥組合物；其同時、分開或依序用於敗血病之治療中。

以下實例係用以說明本發明且不得視為限制本發明之範疇。

實例

化學

化學名稱遵循IUPAC命名法。起始物質及溶劑係購自商業供應商（Acros Organic、Sigma Aldrich、Combi-Blocks、Fluorochem、Fluka、Alfa Aesar或Lancaster）且不經進一步純化按原樣使用。一些起始物質可由熟習此項技術者容易地合成。空氣及濕氣敏感反應在惰性氮氣氛圍下進行，且玻璃器皿經烘乾。未嘗試使反應產率最佳化。化學位移（δ）以百萬分率（parts per million，ppm）報告，參照作為內標之氘化溶劑的氫化殘餘物：DMSO-d6為2.50 ppm，CDCl3為7.26 ppm，且甲醇-d4為3.31及4.78。譜分裂圖案如下指定：s，單峰；d，二重峰；dd，雙二重峰；ddd，雙重雙二重峰；t，三重峰；dt，雙三重峰；q，四重峰；m，多重峰；br s，寬單峰。

根據本發明使用之PPAR促效劑可遵循WO2005005369及WO2007147879中所揭示之通用程序合成。

實驗中所用之化合物為以下化合物：化合物1：艾拉菲諾；及化合物2：2-[2,6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-側氧基-丙基]苯氧基]-2-甲基丙酸。

動物實驗

小心地對動物進行操縱以便將壓力降至最低。所有實驗均遵照法國農業部（French Ministry of Agriculture）關於實驗室動物實驗之指南（法則87-848）來執行。遵照動物健康法規（針對動物保護之2010年9月22日歐洲理事會指令（Council directive）第2010/63/EU號及2013年2月1日法國法令第2013-118號）進行研究。

實例1：根據本發明之化合物抑制單核球分化成巨噬細胞

為了測試化合物抑制免疫系統活化之功效，吾人使用人類單核球性細胞株THP-1（Sigma）。將THP1單核球在37℃下5% CO2培育箱中在補充有10%胎牛血清（FBS，#10270，Gibco）、1%青黴素/鏈黴素（#15140，Gibco）及25 mM Hepes（H0887，Sigma）之含L-麩醯胺酸RPMI 1640培養基（#10-040-CV，Corning）中培養。

為了評估化合物對單核球分化之影響，將2.5×10 ⁴個THP-1細胞在384孔盤中含有劑量範圍內之化合物1及化合物2，以及5或100 ng/mL佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯（PMA，#P8139，Sigma）（如所指示）的FBS缺乏培養基中培養24小時，以誘導分化成巨噬細胞。

腫瘤壞死α（TNFα）及單核球趨化蛋白1（MCP1）在細胞上清液中藉由均相時差式螢光（HTRF，#62HTNFAPEG用於TNFα，及62HCCL2PEG用於MCP1，Cisbio）量測。用Infinite 500（#30019337，Tecan）量測螢光以確定細胞介素濃度。

結果

結果顯示於圖1A至圖1D中。雖然PMA誘導TNFα及MCP1（單核球分化為巨噬細胞之標記）分泌，但化合物1顯著減少上清液中之TNFα（圖1A）及MCP1（圖1B）含量，在10 µM劑量下達到大約80-85%抑制。同樣，化合物2減少回應於PMA之TNFα分泌（圖1C）且顯著減少MCP1分泌，在10 µM劑量下達到70%抑制（圖1D）。

綜合而言，此等結果顯示根據本發明之化合物降低免疫系統活化之功效。

實例2：根據本發明之化合物抑制巨噬細胞活化

為了測試化合物對巨噬細胞活化及促炎性細胞介素產生之功效，將2.5×10 ⁴個THP-1細胞在384孔盤中培養且用100 ng/mL PMA（#P8139，Sigma）處理24小時以誘導分化成巨噬細胞。

隨後，移除培養基且添加含有該等化合物之FBS缺乏培養基24小時。最後，用100 ng/mL LPS（大腸桿菌（E.coli）O55:B5，#L4005，Sigma）刺激THP1巨噬細胞6小時。

結果

結果顯示於圖2中。化合物1以劑量依賴型方式減少PMA分化巨噬細胞中由LPS誘導之細胞介素分泌，在1 µM劑量之情況下達到86%的TNFα分泌抑制（圖2A）。

此等結果顯示化合物抵消巨噬細胞活化及限制細胞介素產生之效力，藉此防護對組織之損傷。

實例3：盲腸結紮穿孔模型中之活體內效應

對於存活率，藉由使用對數等級檢定來確定實驗組之間差異的統計評估。小於0.05之P值視為顯著的。

研究目標

由盲腸結紮穿孔（CLP）誘導之多微生物敗血病之特徵在於全身發炎反應失調，接著為免疫抑止。小鼠CLP模型模擬人類敗血病之進展及特徵。

此研究旨在研究化合物1（艾拉菲諾（ELA））在C57BL6J（BL6）雄性小鼠之盲腸結紮穿孔（CLP）模型中的功效。基於研究時段內動物之存活率評估測試化合物之功效。

盲腸結紮穿孔手術

9週齡、到達時體重22-25 g之C57BL6J雄性小鼠（供應商Janvier -法國）以250 µL甲苯噻

/氯胺酮溶液（對於氯胺酮，6.75 mg/kg，且對於甲苯噻

，2.5 mg/kg）藉由腹膜內途徑麻醉。製造1-1.5 cm腹部正中切口且定位盲腸，且在盲腸遠極與基部之間距離一半處用4-0絲質縫合線（輕度）緊密結紮。中結紮之後，用21號針自腸系膜朝向腸系膜對向方向貫穿盲腸一次。擠出少量糞便以確保傷口開放。隨後，將盲腸放回腹部內原始位置，腹部用縫合線及創緣夾封閉。追蹤小鼠體重演變及死亡率直至第6天。

處理方案

媒劑為CMC（羧甲基纖維素）。

化合物1在CMC中製備。ELA（10 mg/kg，經口）200 µL體積對應於10 mg/kg與不同劑量厄他培南（0.3；1；3及10 mg/kg，腹膜內）之組合在第0天CLP手術前1小時投與，且每天實行一次直至第6天。

厄他培南（ORB134782/PO8952，lnterchim/Biorbyt）在PBS 1×及NaCl中製備。厄他培南（0.3；1；3及10 mg/kg，腹膜內）用作藥理學參考化合物，且在第0天手術前1小時藉由腹膜內途徑投與200 µL，且在CLP手術之後每天實行。

實驗組

9週齡C57BL6J小鼠如上文所描述進行處理。

使用九組，每組10隻小鼠： 1. BL6小鼠CLP（21G針）+媒劑（10 mL/kg；經口）+媒劑（腹膜內） 2. BL6小鼠CLP（21G針）+媒劑（10 mL/kg；經口）+厄他培南（0.3 mg/kg，腹膜內） 3. BL6小鼠CLP（21G針）+媒劑（10 mL/kg；經口）+厄他培南（1 mg/kg，腹膜內） 4. BL6小鼠CLP（21G針）+媒劑（10 mL/kg；經口）+厄他培南（3 mg/kg，腹膜內） 5. BL6小鼠CLP（21G針）+媒劑（10 mL/kg；經口）+厄他培南（10 mg/kg，腹膜內） 6. BL6小鼠CLP（21G針）+化合物1（10 mg/kg；經口）+厄他培南（0.3 mg/kg，腹膜內） 7. BL6小鼠CLP（21G針）+化合物1（10 mg/kg；經口）+厄他培南（1 mg/kg，腹膜內） 8. BL6小鼠CLP（21G針）+化合物1（10 mg/kg；經口）+厄他培南（3 mg/kg，腹膜內） 9. BL6小鼠CLP（21G針）+化合物1（10 mg/kg；經口）+厄他培南（10 mg/kg，腹膜內）

臨床徵象

包括於第1組至第5組中之動物接受媒劑伴隨或不伴隨不同劑量之厄他培南，且包括於第6組至第9組中之動物接受化合物1處理，在第0天手術前1小時進行，且其在CLP手術之後每天實行直至第6天。每次投與之後均未記錄到化合物1之副作用。量測體重及存活率持續7天。

結果

存活率

「CLP+媒劑（經口）+媒劑（腹膜內）」組在第2天顯示40%，在第4天達到70%且在第7天達到90%。

與「CLP+媒劑（經口）+媒劑（腹膜內）」組相比，「CLP+媒劑（經口）+厄他培南（10 mg/kg，腹膜內）」組顯示存活率顯著提高，以第3天90%存活率開始，且在第7天達到70%。

與「CLP+媒劑（經口）+媒劑（腹膜內）」組相比，「CLP+媒劑（經口）+厄他培南（3 mg/kg，腹膜內）」組顯示存活率之一天延遲，以第2天70%存活率開始，在第4天達到30%，且保持穩定直至第7天。

與「CLP+媒劑（經口）+媒劑（腹膜內）」組相比，「CLP+媒劑（經口）+厄他培南（1 mg/kg，腹膜內）」組顯示存活率之一天延遲，以第2天70%存活率開始，在第4天達到50%，且保持穩定直至第6天，且第7天為30%。

與「CLP+媒劑（經口）+媒劑（腹膜內）」組相比，「CLP+媒劑（經口）+厄他培南（0.3 mg/kg，腹膜內）」組顯示相似存活率演變。

與「CLP+媒劑（經口）+媒劑（腹膜內）」組相比，「CLP+化合物1（10 mg/kg，經口）+厄他培南（10 mg/kg，腹膜內）」組顯示存活率顯著提高，以第3天90%存活率開始，且在第7天達到80%。此表示與「CLP+媒劑（經口）+厄他培南（3 mg/kg，腹膜內）」組相比，第7天存活率之10%提高。

與「CLP+媒劑（經口）+媒劑（腹膜內）」組相比，「CLP+化合物1（10 mg/kg，經口）+厄他培南（3 mg/kg，腹膜內）」組顯示存活率顯著提高，以第2天90%存活率開始，且自第4天達到70%直至第7天。與CLP+媒劑（經口）+厄他培南（3 mg/kg，腹膜內）組相比，「CLP+化合物1（10 mg/kg，經口）+厄他培南（3 mg/kg，腹膜內）」顯示存活率提高。

與「CLP+媒劑（經口）+媒劑（腹膜內）」組相比，「CLP+化合物1（10 mg/kg，經口）+厄他培南（1 mg/kg，腹膜內）」組顯示存活率顯著提高，以第2天90%存活率開始，且自第5天達到60%直至第7天。與「CLP+媒劑（經口）+厄他培南（3 mg/kg，腹膜內）組」相比，「CLP+化合物1（10 mg/kg，經口）+厄他培南（3 mg/kg，腹膜內）」顯示存活率提高。

與「CLP+媒劑（經口）+媒劑（腹膜內）」組相比，「CLP+化合物1（10 mg/kg，經口）+厄他培南（0.3 mg/kg，腹膜內）」組顯示存活率之略微延遲，以第2天80%存活率開始，且自第5天達到40%直至第7天。與CLP+媒劑（經口）+厄他培南（3 mg/kg，腹膜內）組相比，CLP+化合物1（10 mg/kg，經口）+厄他培南（3 mg/kg，腹膜內）顯示存活率提高。

結論

用作參考化合物之厄他培南提高存活率。

與CLP+媒劑對照組相比，在第0天手術前1小時給與及每天一次直至第7天給與之化合物1（10 mg/kg，經口）與厄他培南（3 mg/kg或10 mg/kg，腹膜內）之組合顯著提高存活率。

總之，化合物1與厄他培南之組合對小鼠中CLP誘導之多微生物敗血病中之存活率具有有益作用。

實例4：根據本發明之化合物保護免於由內毒素誘導之低白蛋白血症

諸如脂多醣（LPS）之內毒素被識別為敗血病及敗血性休克之發病機制中所牽涉之最強力微生物介體。循環內毒素升高發生在敗血病期間且誘導低白蛋白血症，此預測發病率及死亡率（Wang等人J Surg Res 2004, 121(1), p20-4；Gatta等人Intern Emerg Med 2012,增刊3,:S193-9）。

內毒素血症之臨床前模型

為了評估化合物對由內毒素誘導之低白蛋白血症的功效，來自Janvier Labs之250-275 g雄性史泊格多利大鼠接受單次腹膜內注射1 mg/kg LPS（大腸桿菌O111:B4，#L2630，Sigma-Aldrich）。

化合物1（30毫克/公斤/天）或媒劑（羧甲基纖維素1%，0.1%吐溫（Tween）80）在LPS注射之前3天期間藉由經口管飼投與。在LPS處理後3小時藉由頸椎脫位術使大鼠安樂死。恰好在處死之前，對用異氟烷（異氟醚1000 mg/g，GTIN 03760087152678，Axience）使之略微昏睡的動物進行眶後竇穿刺獲得血液樣品。

使用Randox Daytona plus automate套組（#AB8301，Randox Laboratories）來量測白蛋白之血清濃度。簡言之，白蛋白量測係基於其與指示劑3,3',5,5'-四溴-間甲酚磺酞（溴甲酚綠）之定量結合。白蛋白-BCG複合物在578 nm下最大限度地吸收。

結果

雖然大鼠中之LPS注射引起血清白蛋白含量減少，但與未處理對照大鼠相比，經化合物1處理之動物顯示白蛋白濃度提高88%（圖3）。

此等結果顯示，投與化合物1使得可很大程度上恢復活體內回應於LPS之循環白蛋白含量，藉此保護免於組織損傷及器官衰竭。

實例5：根據本發明之化合物保護肝細胞免於星形孢菌素誘導之細胞凋亡

為了評估化合物對經歷由星形孢菌素誘導之細胞壓力之人類肝細胞的影響，將人類肝母細胞瘤衍生之HepG ₂細胞株（ECACC，#85011430，Sigma-Aldrich）在37℃下5% CO ₂培育箱中在補充有10%胎牛血清（FBS，#10270，Gibco）、1%青黴素/鏈黴素（#15140，Gibco）、1%丙酮酸鈉（#11360，Gibco）及1% MEM非必需胺基酸（#11140，Gibco）之高葡萄糖DMEM培養基（#41965，Gibco，法國）中培養。

為了評估凋亡蛋白酶3/7活性（細胞凋亡之替代標記），將1.5×10 ⁴個細胞接種於384孔盤（#781080，Greiner，法國）中。細胞黏附（8小時）之後，細胞在3 µM化合物1或化合物2或媒劑存在下血清饑餓16小時。其後，細胞經補充有3 µM化合物之10 µM星形孢菌素（#569397，Sigma-Aldrich，德國）再處理4小時，隨後進行細胞溶解及凋亡蛋白酶活性量測。

使用凋亡蛋白酶Glow ^TM3/7分析（#G8093，Promega，美國）來量測凋亡蛋白酶3/7活性。使用Spark微量盤式讀取器（#30086376，Tecan，美國）來量測發光。發光量（RLU）與凋亡蛋白酶3/7活性直接相關。

結果

將HepG2細胞與星形孢菌素一起培育誘導細胞凋亡，如凋亡蛋白酶3/7活性提高8倍所示（圖4）。添加3 µM化合物1或化合物2使由星形孢菌素誘導之凋亡蛋白酶活性分別降低38%及25%（圖4）。此等結果顯示化合物1及化合物2兩者藉由抑制凋亡蛋白酶活性直接保護肝細胞免於細胞死亡。

總之，此等結果顯示，用根據本發明之化合物處理經由對單核球及巨噬細胞之直接抗發炎作用降低免疫系統之明顯活化，同時該等化合物亦直接減少細胞凋亡且保護免於由內毒素誘導之低白蛋白血症。因此，根據本發明之化合物保護免於在敗血病及敗血性休克期間出現之組織損傷、器官衰竭及死亡。

無

圖1：根據本發明之化合物減少經PMA刺激之THP1單核球中之TNFα及MCP1分泌。圖1A及圖1B分別顯示化合物1對經PMA刺激之THP1中TNFα及MCP1分泌減少的影響；對於圖1A及圖1B：*、**、***關於使用變異數分析（ANOVA）以及霍爾姆-西達克氏校正（Holm-Sidak’s correction）進行多重比較，p＜0.05、p＜0.01、p＜0.001；&、&&、&&&關於使用非參數克拉斯卡瓦立斯檢定（Kruskal Wallis test）以及鄧恩校正（Dunn’s correction）進行多重比較，p＜0.05、p＜0.01、p＜0.001；PMA劑量：5 ng/mL。圖1C及圖1D分別顯示化合物2對經PMA刺激之THP1中TNFα及MCP1分泌減少的影響；對於圖1C及圖1D：*、**、***關於與媒劑（Veh）相比，使用變異數分析及費雪最低顯著差異檢定（Fisher’s LSD test）進行多重比較，p＜0.05、p＜0.01、p＜0.001。NS，未經PMA刺激。圖2：根據本發明之化合物減少THP1分化巨噬細胞之細胞介素產生。圖2A及圖2B分別顯示化合物1對THP1分化巨噬細胞之TNFα及MCP1產生減少的影響；對於圖2A及圖2B：*、**、***關於使用變異數分析以及杜奈特校正（Dunnett’s correction）進行多重比較，p＜0.05、p＜0.01、p＜0.001；&、&&、&&&關於使用非參數克拉斯卡瓦立斯檢定以及鄧恩校正進行多重比較，p＜0.05、p＜0.01、p＜0.001。圖3：化合物1對內毒素血症中血清白蛋白含量之影響。小鼠每天經30 mg/kg化合物1或媒劑（Veh.）處理，持續3天，隨後進行LPS注射。在LPS注射後3小時收集血液，以量測血清中之白蛋白濃度。使用單因子變異數分析以及杜奈特檢定進行多重檢定來評估統計顯著性。*** p＜0.001。圖4：化合物1及化合物2對HepG2細胞中星形孢菌素（staurosporin）誘導之細胞凋亡的影響。HepG2細胞經3 µM化合物1或化合物2預處理16小時，隨後10 µM星形孢菌素再培育4小時。經由凋亡蛋白酶3/7活性量測來評估細胞凋亡。使用單因子變異數分析以及杜奈特檢定進行多重檢定來評估統計顯著性。*** p＜0.001。

無。

Claims

一種PPAR促效劑，其選自：艾拉菲諾（elafibranor）或其醫藥學上可接受之鹽；及 2-[2,6-二甲基-4-[3-[4-(甲硫基)苯基]-3-側氧基-丙基]苯氧基]-2-甲基丙酸或其醫藥學上可接受之鹽；其用於治療有需要個體之敗血病的方法中。
如請求項1之PPAR促效劑，其中該個體罹患敗血病且伴有多器官衰竭或具有敗血病且伴有多器官衰竭之風險。
如請求項1或2之PPAR促效劑，其中該個體罹患敗血性休克或具有敗血性休克之風險。
如請求項1至3中任一項之PPAR促效劑，其中該PPAR促效劑在該方法中用作單一活性劑。
如請求項1至3中任一項之PPAR促效劑，其中該PPAR促效劑用於在該方法中與抗微生物劑組合使用。
如請求項5之PPAR促效劑，其中該抗微生物劑為抗生素。
如請求項5或6之PPAR促效劑，其中該抗微生物劑為碳青黴烯抗生素。
如請求項5或6之PPAR促效劑，其中該抗微生物劑為厄他培南（ertapenem）。