TW202242090A - 具減少脂肪與提升運動表現的乳酸菌組合物及其用途 - Google Patents

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Abstract

本發明提供一種乳酸菌組合物，其包含植物乳桿菌 Lactobacillus plantarumPL-02菌株（寄存編號：BCRC 911012）、嗜酸乳酸桿菌 Lactobacillus acidophilusTYCA06菌株（寄存編號：BCRC 910813）、乾酪乳酸桿菌 Lactobacillus caseiCS-773菌株（寄存編號：BCRC 910534）、以及生理上可接受的賦形劑、稀釋劑或載體，上述菌株寄存於財團法人食品工業發展研究所生物資源保存及研究中心。

Description

具減少脂肪與提升運動表現的乳酸菌組合物及其用途
本申請案主張2021年4月28日提申之中國大陸發明專利申請號第202110467618.9號申請案衍生的優先權，其整體內容併於此處以供參考。
本發明關於一種組合物，特別攸關一種具減少脂肪與提升運動表現的乳酸菌組合物。本發明另涵蓋上述乳酸菌組合物的用途。
肥胖為全球現代文明病，世界衛生組織（WHO）更警示「肥胖為一種慢性疾病」。依我國2017年十大死因調查，發現七項死因與肥胖有關。肥胖乃熱量攝取過多、消耗過少，導致熱量轉換成脂肪並於體內堆積所致。除了遺傳外，致胖環境與生活型態亦為造成肥胖的因子。於臨床營養上，常用身體質量指數（body mass index，BMI）或腰圍作為肥胖判斷指標；於我國，24≦BMI＜27屬過重，27≦BMI＜30屬輕度肥胖，30≦BMI＜35屬中度肥胖，BMI≥35則屬重度肥胖。研究指出糖尿病、心血管疾病、代謝症候群、膽囊疾病、血脂異常、呼吸困難、睡眠呼吸停頓、及癌症等與過重或肥胖間有某種程度的關聯。研究另指出體重減少5％以上（如：90公斤成人減輕5公斤）則可為健康帶來許多助益，進而改善高血壓與糖尿病等疾病。研究又指出不當節食減重大多讓人減少肌肉，而非脂肪，如此反而影響健康。肌肉主要負責身體基礎代謝，肌肉減少易造成四肢無力、平衡變差而提高跌倒與骨折風險。
當餵食人體或動物益生菌時，可改善腸胃道菌叢品質，促進消化與健康。因此，益生菌對健康安全無虞，惟益生菌須作用於宿主，始能增進宿主健康。職是之故，尋找具促進身體減重、降低體脂肪與血脂，並提升肌肉力量與耐力等功能的乳酸菌菌株，並利用所尋找的菌株開發安全且可長期服用的營養補充品為目前亟需努力的課題之一。
本發明基於發現所提出之乳酸菌組合物可有效降低體重並降低體脂肪與血脂所完成的。另更發現所提出的組合物可使小鼠前肢抓力與跑步耐力表現皆優於市售品 Lactobacillus plantarumTWK10。
本發明之目的在於提供一種乳酸菌組合物，其可減重、提升人體運動能力並增強身體組成，以達到提升肌肉力量與耐力等功效。
是以，本發明提供一種乳酸菌組合物，其包含植物乳桿菌 Lactobacillus plantarumPL-02菌株（寄存編號：BCRC 911012）、嗜酸乳酸桿菌 Lactobacillus acidophilusTYCA06菌株（寄存編號：BCRC 910813）、乾酪乳酸桿菌 Lactobacillus caseiCS-773菌株（寄存編號：BCRC 910534）、以及生理上可接受的賦形劑、稀釋劑或載體，上述菌株寄存於財團法人食品工業發展研究所生物資源保存及研究中心。
較佳地，所述的乳酸菌組合物更包括：長雙歧桿菌嬰兒亞種 Bifidobacterium longum subsp. infantisBLI-02菌株（寄存編號：BCRC 910812）以及鼠李糖乳酸桿菌 Lactobacillus rhamnosusbv-77菌株（寄存編號：BCRC 910533），上述菌株寄存於財團法人食品工業發展研究所生物資源保存及研究中心。
較佳地，所述的乳酸菌組合物更包括：長雙歧桿菌嬰兒亞種 Bifidobacterium longum subsp. infantisBLI-02菌株（寄存編號：BCRC 910812）以及乳酸乳球菌 Lactococcus lactisLY-66菌株（寄存編號：BCRC 911055），上述菌株寄存於財團法人食品工業發展研究所生物資源保存及研究中心。
較佳地，所述的乳酸菌組合物為一食品組合物或一醫藥組合物。
較佳地，所述之生理上可接受的賦形劑、稀釋劑或載體為一食品，食品為乳製飲品、茶、咖啡、糖果或機能性飲品，乳製飲品為發酵乳、優格、乳酪或乳粉。
較佳地，所述的醫藥組合物呈口服劑型，而口服劑型為錠劑、膠囊、溶液劑或粉劑。
較佳地，所述之乳酸菌組合物的總菌株數量為10 6CFU以上。
本發明另提供一種上述乳酸菌組合物用於製備減少脂肪與提升運動表現之組合物的用途。
為讓本發明上述及/或其他目的、功效、特徵更明顯易懂，下文特舉較佳實施方式，作詳細說明如下：
本發明所述之乳酸菌菌株以冷凍乾燥培養物形式寄存於財團法人食品工業發展研究所生物資源保存及研究中心，地址為新竹市食品路331號，而寄存的詳細資料如下列表1所示： 表1、寄存資訊
菌株名 分類 寄存編號 寄存日期
PL-02 植物乳桿菌 Lactobacillus plantarum BCRC 911012 2020年7月28日
TYCA06 嗜酸乳酸桿菌 Lactobacillus acidophilus BCRC 910813 2018年1月18日
CS-773 乾酪乳酸桿菌 Lactobacillus casei BCRC 910534 2011年12月27日
BLI-02 長雙歧桿菌嬰兒亞種 Bifidobacterium longum subsp. infantis BCRC 910812 2018年1月18日
bv-77 鼠李糖乳酸桿菌 Lactobacillus rhamnosus BCRC 910533 2011年12月27日
LY-66 乳酸乳球菌 Lactococcus lactis BCRC 911055 2021年4月23日
本文發現如表1所列之寄存的PL-02菌株、TYCA06菌株、與CS-773菌株可減重、提升運動能力、與降低疲勞感，而BLI-02菌株與bv-77菌株可減重，BLI-02菌株與LY-66菌株可提升運動能力。
於一實施方式，本發明所提之用於減少脂肪與提升運動表現的組合物，其包含：（a）經分離的乳酸菌菌株，乳酸菌菌株包含植物乳桿菌 Lactobacillus plantarumPL-02菌株（寄存編號：BCRC 911012）、嗜酸乳酸桿菌 Lactobacillus acidophilusTYCA06菌株（寄存編號：BCRC 910813）、及乾酪乳酸桿菌 Lactobacillus caseiCS-773菌株（寄存編號：BCRC 910534）以及（b）生理上可接受的賦形劑、稀釋劑或載體。
此外，為進一步提升所提之組合物的減重效果，（a）經分離的乳酸菌菌株更包含：長雙歧桿菌嬰兒亞種 Bifidobacterium longum subsp. infantisBLI-02菌株（寄存編號：BCRC 910812）以及鼠李糖乳酸桿菌 Lactobacillus rhamnosusbv-77菌株（寄存編號：BCRC 910533）。
再者，為進一步提升所提之組合物的運動能力效果，（a）經分離的乳酸菌菌株更包含：長雙歧桿菌嬰兒亞種 Bifidobacterium longum subsp. infantisBLI-02菌株（寄存編號：BCRC 910812）以及乳酸乳球菌 Lactococcus lactisLY-66菌株（寄存編號：BCRC 911055）。
較佳地，生理上可接受的賦形劑、稀釋劑或載體為醫藥上可接受的賦形劑、稀釋劑或載體，藉此所提之組合物可作為一醫藥組合物使用。
較佳地，生理上可接受的賦形劑、稀釋劑或載體為食用上可接受的賦形劑、稀釋劑或載體，藉此所提之組合物可作為一食品組合物使用。
於作為醫藥組合物下，所提之組合物呈口服劑型，而口服劑型例如錠劑、膠囊、溶液劑、或粉劑。
於作為食品組合物下，生理上可接受的賦形劑、稀釋劑或載體可為一食品，食品例如乳製飲品、茶、咖啡、糖果或機能性飲品，乳製飲品例如發酵乳、優格、乳酪或乳粉。
較佳地，（a）經分離的乳酸菌菌株單獨為活性菌株或去活性菌株。此外，於作為食品組合物或醫藥組合物的條件下，其總菌株數量為10 6CFU以上；更佳地，總菌株數量為10 10CFU以上。
＜實施例1：菌株形態及一般性質＞
依16S rDNA序列分析與API細菌鑑定系統分析確認菌株的分類學特徵，所用的菌株於形態及一般性質特徵詳如下文表2所示。 表2、菌株形態及一般性質特徵
菌株 形態特徵
植物乳桿菌 Lactobacillus plantarum PL-02菌株 （1）兼性厭氧菌，可於低或正常的氧氣濃度下生活。 （2）適合的生長溫度為10至45℃，最佳範圍則為30至35℃，但於接近冰點溫度仍能存活。 （3）最佳的生長酸鹼值範圍為pH3.5至4.2，耐鹽性為13至15％。 （4）外觀呈直線型桿狀，兩端以圓弧收尾；通常寬0.9至1.2mm，長3.0至8.0mm，並以單個、兩兩成對或多個短鏈形式排列存在。
嗜酸乳酸桿菌 Lactobacillus acidophilusTYCA06菌株 （1）於MRS瓊脂生長呈短或稍長桿狀，兩端呈方形，通常單獨或呈短鏈狀成對出現。 （2）革蘭氏染色陽性桿菌，不生成孢子，不具觸酶與氧化酶，且無運動性。 （3）於好氧與厭氧環境均能生長，最適宜的生長溫度為37±1℃，屬於兼性發酵性菌株，葡萄糖代謝時不產生氣體。
乾酪乳酸桿菌 Lactobacillus caseiCS-773菌株 （1）短桿狀或長桿狀多形性桿菌，長短不一，一般寬度均小於1.5μm。 （2）菌體兩端平齊呈方形，排列方式多為短鏈或長鏈；有時亦可見到球形菌。 （3）革蘭氏染色陽性，無運動性，不產芽胞。
長雙歧桿菌嬰兒亞種 Bifidobacterium longum subsp. InfantisBLI-02菌株 （1）於MRS瓊脂生長呈短桿狀，尾端呈橢圓形，通常單獨或呈短鏈狀成對出現。 （2）革蘭氏染色陽性，不產孢子，不具觸酶與氧化酶，無運動性。 （3）於好氧與厭氧環境均能生長，最適宜的生長溫度為37±1℃，屬於兼性異質發酵性菌株，葡萄糖代謝時不產生氣體。
鼠李糖乳酸桿菌 Lactobacillus rhamnosusbv-77菌株 （1）於MRS瓊脂生長呈Y字型、V字型或彎曲型不規則型態，菌體小且通常單獨出現不呈鏈狀。 （2）革蘭氏染色陽性，不產孢子，不具觸酶與氧化酶，無運動性。 （3）於絕對厭氧環境生長，最適宜的生長溫度為37±1℃，屬於兼性異質發酵性菌株，葡萄糖代謝時不產生氣體。
乳酸乳球菌 Lactococcus lactisLY-66菌株 （1）革蘭氏染色陽性，廣泛應用於生產酪乳與奶酪。 （2）呈成對和短鏈成團的球菌，且根據生長條件不同，其卵圓形的典型長度0.5至1.5µm。 （3）不產生孢子，也不活動，可進行同型代謝而自糖產生L-(+)-乳酸。 （4）好氧性，且於M17培養基以37±1℃條件下培養。
＜實施例2：菌株培養與投予＞
菌株均以20%甘油存放於-80℃。使用前，須以含0.05%半胱氨酸的MRS培養液（DIFCO）37℃下活化24小時二次。菌株投予60公斤人體的每日劑量建議為2x10 10CFU/day，故人體每日每公斤體重的投予劑量為3.33x10 8CFU/kg/day。參照2005年美國食品藥物管理局制定的Estimating the Maximum Safe Starting Dose in Initial Clinical. Trials for Therapeutics in Adult Healthy Volunteers，人體與小鼠的劑量換算係數為12.3，可計算得到小鼠每日每公斤體重的投予劑量為4.1x10 9CFU/kg/day。於本文實施例，使用的小鼠體重30克，故小鼠每日的投予劑量為1.23x10 8CFU/day。於本文實施例，餵食安排於每日上午9點，並以PBS將菌落數稀釋至4.1x10 8CFU/mL後，餵食小鼠0.3mL含菌的PBS。此外，同時以0.3mL的PBS餵食對照小鼠。
＜實施例3：體重與體脂肪測量＞
本實施例連續餵食小鼠10週後評估小鼠下列參數：（1）體重：定期秤重，並比較實驗開始與結束的體重；（2）體脂肪：結束時取小鼠腎臟周圍、腸繫膜周圍與睪丸周圍的脂肪組織並秤重。
圖1比較著連續餵食不同飲食10週後的小鼠體重。相較於連續餵食正常脂肪飼料後（正常飲食組），小鼠體重於連續餵食高脂肪飼料後（高脂飲食組）有明顯增加（高脂飲食組：48.7±5.9g，正常飲食組：34.9±1.6g）。此外，相較於連續餵食高脂肪飼料後，小鼠體重無論於連續餵食高脂肪飼料與益生菌TYCA06菌株（高脂飲食＋TYCA06組）、PL-02菌株（高脂飲食＋PL-02組）、BLI-02菌株（高脂飲食＋BLI-02組）、CS-773菌株（高脂飲食＋CS-773組）、或bv-77菌株（高脂飲食＋bv-77組）後均下降約11克。上述結果表示補充TYCA06菌株、PL-02菌株、BLI-02菌株、CS-773菌株、或bv-77菌株可降低高脂飲食造成的體重升高現象。
圖2比較著連續餵食不同飲食10週後的小鼠體脂肪重量。依「健康食品之不易形成體脂肪功能評估方法」，將副睪、腎臟、與腸繫膜周圍的脂肪總重量視為體脂肪重量。相較於連續餵食正常脂肪飼料後（正常飲食組），小鼠體脂肪重量於連續餵食高脂肪飼料後（高脂飲食組）有明顯增加（高脂飲食組：12.22±5.57g，正常飲食組：2.34±0.61g）。接著，相較於連續餵食高脂肪飼料後，小鼠體脂肪重量無論於連續餵食高脂肪飼料與益生菌TYCA06菌株（高脂飲食＋TYCA06組）、PL-02菌株（高脂飲食＋PL-02組）、BLI-02菌株（高脂飲食＋BLI-02組）、CS-773菌株（高脂飲食＋CS-773組）、或bv-77菌株（高脂飲食＋bv-77組）後均有顯著降低。上述結果表示補充TYCA06菌株、PL-02菌株、BLI-02菌株、CS-773菌株、或bv-77菌株可降低高脂飲食造成的體脂肪提升現象。
圖3比較著連續餵食不同飲食10週後的小鼠副睪脂肪重量。相較於連續餵食正常脂肪飼料後（正常飲食組），小鼠副睪脂肪重量於連續餵食高脂肪飼料後（高脂飲食組）有明顯增加（高脂飲食組：3.06±0.2g，正常飲食組：0.35±0.1g）。接著，相較於連續餵食高脂肪飼料後，小鼠副睪脂肪重量無論於連續餵食高脂肪飼料與益生菌TYCA06菌株（高脂飲食＋TYCA06組）、PL-02菌株（高脂飲食＋PL-02組）、BLI-02菌株（高脂飲食＋BLI-02組）、CS-773菌株（高脂飲食＋CS-773組）、或bv-77菌株（高脂飲食＋bv-77組）後均有顯著降低。上述結果表示補充TYCA06菌株、PL-02菌株、BLI-02菌株、CS-773菌株、或bv-77菌株可降低高脂飲食造成的內臟脂肪增加現象。
＜實施例4：血液生化數值分析＞
本實施例連續餵食小鼠10週後採集血液2mL，並利用生化分析儀分析血液總膽固醇含量、三酸甘油酯含量、與低密度脂蛋白含量等生化指標。
圖4比較著連續餵食不同飲食10週後的小鼠血液總膽固醇含量。相較於連續餵食正常脂肪飼料後（正常飲食組），小鼠血液總膽固醇含量於連續餵食高脂肪飼料後（高脂飲食組）有明顯增加（高脂飲食組：262±18mg/dL，正常飲食組：151±11mg/dL）。接著，相較於連續餵食高脂肪飼料後，小鼠血液總膽固醇含量無論於連續餵食高脂肪飼料與益生菌TYCA06菌株（高脂飲食＋TYCA06組）、PL-02菌株（高脂飲食＋PL-02組）、BLI-02菌株（高脂飲食＋BLI-02組）、或CS-773菌株（高脂飲食＋CS-773組）後約有顯著降低。上述結果表示補充TYCA06菌株、PL-02菌株、BLI-02菌株、或CS-773菌株可降低高脂飲食造成的高膽固醇現象。
圖5比較著連續餵食不同飲食10週後的小鼠血液三酸甘油酯含量。相較於連續餵食正常脂肪飼料後（正常飲食組），小鼠血液三酸甘油酯含量於連續餵食高脂肪飼料後（高脂飲食組）有明顯增加（高脂飲食組：93±11mg/dL，正常飲食組：57±9mg/dL）。接著，相較於連續餵食高脂肪飼料後，小鼠血液三酸甘油酯含量無論於連續餵食高脂肪飼料與益生菌TYCA06菌株（高脂飲食＋TYCA06組）、PL-02菌株（高脂飲食＋PL-02組）、BLI-02菌株（高脂飲食＋BLI-02組）、CS-773菌株（高脂飲食＋CS-773組）、或bv-77菌株（高脂飲食＋bv-77組）後有顯著降低。上述結果表示補充TYCA06菌株、PL-02菌株、BLI-02菌株、CS-773菌株、或bv-77菌株可降低高脂飲食造成的高三酸甘油酯現象。
圖6比較著連續餵食不同飲食10週後的小鼠血液低密度脂蛋白含量。相較於連續餵食正常脂肪飼料後（正常飲食組），小鼠血液低密度脂蛋白含量於連續餵食高脂肪飼料後（高脂飲食組）有明顯增加（高脂飲食組：74.6±7.3mg/dL，正常飲食組：17.5±2.9mg/dL）。接著，相較於連續餵食高脂肪飼料後，小鼠血液低密度脂蛋白含量無論於連續餵食高脂肪飼料與益生菌TYCA06菌株（高脂飲食＋TYCA06組）、PL-02菌株（高脂飲食＋PL-02組）、BLI-02菌株（高脂飲食＋BLI-02組）、CS-773菌株（高脂飲食＋CS-773組）、或bv-77菌株（高脂飲食＋bv-77組）後均有顯著降低。於未提供的圖式中，於連續餵食高脂肪飼料與市售益生菌LGG菌株後的低密度脂蛋白含量為54.9±6.6mg/dL，高於高脂飲食＋TYCA06組、高脂飲食＋PL-02組、高脂飲食＋BLI-02組、高脂飲食＋CS-773組、及高脂飲食＋bv-77組。上述結果表示補充TYCA06菌株、PL-02菌株、BLI-02菌株、CS-773菌株、或bv-77菌株可降低高脂飲食造成的高低密度脂蛋白現象。
＜實施例5：動物前肢抓力測試＞
本實施例連續餵食小鼠4週後使用動物前肢抓力測量裝置對小鼠進行30分鐘前肢抓力測試以了解餵食對小鼠肌力表現的影響。前肢抓力測試如圖7所示，詳細過程請參照Nutrients. 2014 Jul 18;6(7):2681-96、Molecules. 2013 Apr 19;18(4):4689-702、Molecules. 2014 Mar 3;19(3):2793-807等。抓力值會受動物體重影響，為避免此情況於此以小鼠相對抓力表示抓力表現，相對抓力的計算如下：
Figure 02_image001
。
圖8比較著連續餵食不同飲食4週後的小鼠抓力表現。於連續餵食正常脂肪飼料後（正常飲食組），相對抓力為343±14％；於連續餵食高脂肪飼料後（高脂飲食組），相對抓力為280±8％；於連續餵食高脂肪飼料與市售益生菌TWK10菌株後（高脂飲食＋TWK10組），相對抓力為369±34％；於連續餵食高脂肪飼料與市售益生菌LGG菌株後（高脂飲食＋LGG組），相對抓力為346±40％；於連續餵食高脂肪飼料與益生菌BLI-02菌株後（高脂飲食＋BLI-02組），相對抓力為371±20％；於連續餵食高脂肪飼料與益生菌PL-02菌株後（高脂飲食＋PL-02組），相對抓力為400±19％；於連續餵食高脂肪飼料與益生菌TYCA06菌株後（高脂飲食＋TYCA06組），相對抓力為378±24％；於連續餵食高脂肪飼料與益生菌LY-66菌株後（高脂飲食＋LY-66組），相對抓力為403±43％；於連續餵食高脂肪飼料與益生菌CS-773菌株後（高脂飲食＋CS-773組），相對抓力為428±17％。上述結果表示補充BLI-02菌株、PL-02菌株、TYCA06菌株、LY-66菌株、或CS-773菌株可提高小鼠的運動抓力表現。
＜實施例6：動物竭跑測試＞
本實施例連續餵食小鼠4週後測試小鼠的耐力表現。依「健康食品之抗疲勞功能評估方法」，自測試前1週每次餵食後30分鐘讓小鼠適應跑步機（MK680C，Muromachi Kikai Co. Ltd）訓練。測試參考J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 2009 Sep;64(9):940-8，以起始速度10m/min、5％坡度進行5分鐘，之後每分鐘提升2m/min的速度直至小鼠多次落入電擊區或於電擊區5秒內無法繼續前進，始判為「力竭」。
圖9比較著連續餵食不同飲食4週後的小鼠跑步力竭時間。於連續餵食正常脂肪飼料後（正常飲食組），力竭時間為11±3min；於連續餵食高脂肪飼料後（高脂飲食組），力竭時間為11±1min；於連續餵食高脂肪飼料與市售益生菌TWK10菌株後（高脂飲食＋TWK10組），力竭時間為13±1min；於連續餵食高脂肪飼料與益生菌BLI-02菌株後（高脂飲食＋BLI-02組），力竭時間為16±2min；於連續餵食高脂肪飼料與益生菌PL-02菌株後（高脂飲食＋PL-02組），力竭時間為17±3min；於連續餵食高脂肪飼料與益生菌TYCA06菌株後（高脂飲食＋TYCA06組），力竭時間為16±2min；於連續餵食高脂肪飼料與益生菌LY-66菌株後（高脂飲食＋LY-66組），力竭時間為16±1min；於連續餵食高脂肪飼料與益生菌CS-773菌株後（高脂飲食＋CS-773組），力竭時間為16±2min。上述結果表示補充BLI-02菌株、PL-02菌株、TYCA06菌株、LY-66菌株、或CS-773菌株可提高小鼠的運動耐力表現。
＜實施例7：肌肉細胞抗氧化試驗＞
文獻指出肌肉具備高抗氧化能力下有助於排除氧化因子，進而降低肌肉疲勞。本實施例測試益生菌對肌肉細胞抗氧化能力的影響。
先以每孔2x10 6個細胞密度種植小鼠成肌細胞C2C12於培養皿，並於DMEM培養液（含10％ FBS、1％ Penicillin/Streptomycin、0.01mg/mL human transferrin）內培養3天後，以新的DMEM培養液（含5％ FBS）替換。另於益生菌活化18小時後，以DMEM培養液（含2％ BSA、500μM油酸）調整菌落數至2x10 8CFU/mL。接著，取2mL菌液與小鼠成肌細胞C2C12於37℃恆溫培養箱內共培養12小時。移除培養液後，每孔加入lysis buffer（pH7.0，含1mM EDTA、50mM磷酸鉀）破碎細胞，並於4℃以轉速10,000rpm，離心15分鐘分離取得上清液。最後，分析所得的上清液以取得胞內過氧化氫酶（catalase）活性。
如圖10所示，未處理與維他命C處理後的活性均為19nmol/min/mL；CS-773菌株處理後的活性為28nmol/min/mL，TYCA06菌株處理後的活性為26nmol/min/mL，PL-02菌株處理後的活性為26nmol/min/mL。這表示補充CS-773菌株、TYCA06菌株、或PL-02菌株均可提升肌肉抗氧化能力進而降低疲勞。
另發現CS-773菌株、TYCA06菌株、及PL-02菌株（菌落數比1：1：1，總菌落數4x10 8CFU）共處理後的活性為81nmol/min/mL，遠大於CS-773菌株單獨處理後之活性、TYCA06菌株單獨處理後之活性、與PL-02菌株單獨處理後之活性的總和。這表示共同補充CS-773菌株、TYCA06菌株、及PL-02菌株對肌肉抗氧化能力的提升具協同效應。
＜實施例8：抗吸附脂肪酸試驗＞
益生菌能維持人體腸胃道健康，也包含食物分解與利用。油酸為食物中含量最多的脂肪酸，文獻報導 Lactobacillus會將棕梠酸作為細胞膜原料之一來合成環丙烯脂肪酸，進而有助菌體抵抗腸胃道的酸性環境，提高菌體存活。因此，益生菌可藉由與腸道細胞競爭油酸來減少腸道的脂肪吸收。本實施例測試益生菌對腸道細胞吸附脂肪的影響。
先以每孔2x10 6個細胞密度種植人類結腸癌細胞Caco-2於培養皿，並於DMEM培養液（含10％ FBS、1％ Penicillin/Streptomycin、0.01mg/mL human transferrin）內培養3天後，以新的DMEM培養液（含5％ FBS）替換。另於益生菌活化18小時後，以DMEM培養液（含2％ BSA、500μM油酸）調整菌落數至2x10 8CFU/mL。接著，取2mL菌液、500μM油酸與人類結腸癌細胞Caco-2於37℃恆溫培養箱內共培養6小時。最後，採用油紅O染色測定OD520nm值以分析胞內脂肪含量。
如圖11所示，以僅油酸處理後的胞內脂肪含量定為100％；CS-773菌株處理後的相對含量為92％，TYCA06菌株處理後的相對含量為89％，PL-02菌株處理後的相對含量為87.21％。這表示CS-773菌株、TYCA06菌株、或PL-02菌株均可與人類結腸癌細胞Caco-2競爭油酸，使胞內累績的油酸含量降低，間接證實補充CS-773菌株、TYCA06菌株、或PL-02菌株均可降低細胞吸收脂肪。另發現CS-773菌株、TYCA06菌株、及PL-02菌株（菌落數比1：1：1，總菌落數4x10 8CFU）共處理後的相對含量為73％，可知共同補充CS-773菌株、TYCA06菌株、及PL-02菌株對細胞吸收脂肪的降低具協同效應。
綜上所述，以人體建議每日2x10 10CFU總劑量單獨或共同補充本發明的PL-02菌株、TYCA06菌株、及CS-773菌株能顯著提升肌力與增加運動耐力。須說明的是，僅發現少數乳酸菌菌株具備可改善身體疲勞與提升運動表現的功效，並進一步地於動物體內（ in vivo）實驗獲得證實。此外，乳酸菌對身體健康的功能在於菌株（strains）特異性，而非菌種（species）。對於人體健康有特殊功效的菌株稱作「功能性益生菌」（Joint FAO/WHO Working Group Report on Drafting Guidelines for the Evaluation of Probiotics in Food, London, Ontario, Canada, April 30 and May 1, 2002）。
惟以上所述者，僅為本發明之較佳實施例，但不能以此限定本發明實施之範圍；故，凡依本發明申請專利範圍及發明說明書內容所作之簡單的等效改變與修飾，皆仍屬本發明專利涵蓋之範圍內。
無
圖1為一長條圖，說明連續餵食不同飲食10週後之小鼠體重的差異； 圖2為一長條圖，說明連續餵食不同飲食10週後之小鼠體脂肪重量的差異； 圖3為一長條圖，說明連續餵食不同飲食10週後之小鼠副睪脂肪重量的差異； 圖4為一長條圖，說明連續餵食不同飲食10週後之小鼠血液總膽固醇含量的差異； 圖5為一長條圖，說明連續餵食不同飲食10週後之小鼠血液三酸甘油酯含量的差異； 圖6為一長條圖，說明連續餵食不同飲食10週後之小鼠血液低密度脂蛋白含量的差異； 圖7為一照片圖，示意小鼠前肢抓力測試； 圖8為一長條圖，說明連續餵食不同飲食4週後之小鼠抓力表現的差異； 圖9為一長條圖，說明連續餵食不同飲食4週後之小鼠跑步力竭時間的差異； 圖10為一長條圖，說明益生菌對小鼠成肌細胞C2C12抗氧化能力的影響；以及 圖11為一長條圖，說明益生菌對人類結腸癌細胞Caco-2吸附脂肪的影響。
1、TW中華民國 食品工業發展研究所生物資源保存及研究中心 2020/07/28 BCRC 911012； 2、TW中華民國 食品工業發展研究所生物資源保存及研究中心 2018/01/18 BCRC 910813； 3、TW中華民國 食品工業發展研究所生物資源保存及研究中心 2011/12/27 BCRC 910534； 4、TW中華民國 食品工業發展研究所生物資源保存及研究中心 2018/01/18 BCRC 910812； 5、TW中華民國 食品工業發展研究所生物資源保存及研究中心 2011/12/27 BCRC 910533；以及 6、TW中華民國 食品工業發展研究所生物資源保存及研究中心 2021/04/23 BCRC 911055。

Claims (12)

  1. 一種乳酸菌組合物，係包括： 植物乳桿菌 Lactobacillus plantarumPL-02菌株（寄存編號：BCRC 911012）； 嗜酸乳酸桿菌 Lactobacillus acidophilusTYCA06菌株（寄存編號：BCRC 910813）； 乾酪乳酸桿菌 Lactobacillus caseiCS-773菌株（寄存編號：BCRC 910534）；以及 生理上可接受的賦形劑、稀釋劑或載體； 其中該PL-02菌株、該TYCA06菌株與該CS-773菌株均寄存於財團法人食品工業發展研究所生物資源保存及研究中心。
  2. 如請求項1所述之乳酸菌組合物，更包括： 長雙歧桿菌嬰兒亞種 Bifidobacterium longum subsp. infantisBLI-02菌株（寄存編號：BCRC 910812）；以及 鼠李糖乳酸桿菌 Lactobacillus rhamnosusbv-77菌株（寄存編號：BCRC 910533）； 其中該BLI-02菌株與該bv-77菌株均寄存於財團法人食品工業發展研究所生物資源保存及研究中心。
  3. 如請求項1所述之乳酸菌組合物，更包括： 長雙歧桿菌嬰兒亞種 Bifidobacterium longum subsp. infantisBLI-02菌株（寄存編號：BCRC 910812）；以及 乳酸乳球菌 Lactococcus lactisLY-66菌株（寄存編號：BCRC 911055）； 其中該BLI-02菌株與該LY-66菌株均寄存於財團法人食品工業發展研究所生物資源保存及研究中心。
  4. 如請求項1所述之乳酸菌組合物，係一食品組合物或一醫藥組合物。
  5. 如請求項1所述之乳酸菌組合物，係一食品組合物，其中該生理上可接受的賦形劑、稀釋劑或載體為一食品，該食品為乳製飲品、茶、咖啡、糖果或機能性飲品，該乳製飲品為發酵乳、優格、乳酪或乳粉。
  6. 如請求項1所述之乳酸菌組合物，係一醫藥組合物，其中該醫藥組合物呈口服劑型，而該口服劑型為錠劑、膠囊、溶液劑或粉劑。
  7. 如請求項1至3中任一所述之乳酸菌組合物，其總菌株數量為10 6CFU以上。
  8. 一種如請求項1至3中任一所述之乳酸菌組合物用於製備減少脂肪與提升運動表現的組合物的用途。
  9. 如請求項8所述之用途，其中該減少脂肪與提升運動表現的組合物係一食品組合物或一醫藥組合物。
  10. 如請求項8所述之用途，其中該減少脂肪與提升運動表現的組合物係一食品組合物，該生理上可接受的賦形劑、稀釋劑或載體為一食品，該食品為乳製飲品、茶、咖啡、糖果或機能性飲品，該乳製飲品為發酵乳、優格、乳酪或乳粉。
  11. 如請求項8所述之用途，其中該減少脂肪與提升運動表現的組合物係一醫藥組合物，其中該醫藥組合物呈口服劑型，而該口服劑型為錠劑、膠囊、溶液劑或粉劑。
  12. 如請求項8所述之用途，其中該乳酸菌組合物的總菌株數量為10 6CFU以上。
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