TW202237591A - 苯并咪唑類衍生物、包括其的藥物組合物及其用途 - Google Patents

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Abstract

本發明屬於化學藥物技術領域，關於式(I)的化合物、其製備方法及其在醫藥上的應用。具體而言，本發明提供式(I)的化合物或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽。這些化合物是胰高血糖樣肽-1受體（GLP-1R）的促效劑。本發明還關於包含這些化合物的藥物組合物以及使用該化合物治療糖尿病等疾病的藥物中的用途。

Description

苯并咪唑類衍生物、包括其的藥物組合物及其用途
本發明屬於化學藥物技術領域，提供了一系列的胰高血糖樣肽-1受體（GLP-1R）的促效劑。本發明還關於包含這些化合物的藥物組合物以及使用該化合物治療糖尿病等疾病的藥物中的用途。
糖尿病影響全世界數百萬人，被認為是21世紀人類死亡的主要威脅之一。隨著時間推移，不被控制的糖尿病能損壞身體系統，包括心臟、血管、眼、腎和神經。在全世界範圍，糖尿病的社會經濟負擔很沉重。
有兩種主要類型的糖尿病，命名為I型和II型，其中II型糖尿病（T2DM）占全世界所有糖尿病的超過90%。I型糖尿病特徵為胰島素缺乏，主要由自身免疫介導的胰島β細胞破壞引起，II型糖尿病特徵為胰島素分泌異常和隨之而來的胰島素耐受。為預防引起酮酸中毒，患有I型糖尿病的患者必須攝取外源胰島素以存活。儘管II型糖尿病患者不像I型糖尿病患者那樣依賴於外源胰島素，他們可能需要外源胰島素以控制血糖水平。
胰高血糖素樣肽-1（GLP-1）是腸促胰素的一種，由腸道上皮L細胞分泌，通過與其受體結合發揮生理效應。GLP-1受體（GLP-1R）屬於G蛋白耦聯受體亞家族，當GLP-1與GLP-1受體相結合後，引發一系列的生物學效應。有研究表明，GLP-1是以葡萄糖依賴的方式促進胰島素分泌，即當人體內血糖濃度升高時，GLP-1刺激胰島細胞，增加胰島素分泌，降低血糖。GLP-1受體促效劑是一種新型的降糖藥物，既可在不引起低血糖的情況下，有效控制血糖水平；又可通過增加飽腹感、延緩胃排空、抑制食欲及減少脂肪堆積等，有效減輕體質量，達到減肥的目的。
目前，以GLP-1受體促效劑為基礎的多肽類藥物利拉魯肽、艾塞那肽、索馬魯肽等已經應用於肥胖的II型糖尿病患者以及單純肥胖或超重患者，均顯示出明顯地減輕體質量作用，但常伴有噁心、嘔吐等胃腸道不良反應。口服非多肽類藥物一直是研究機構嘗試用於治療II型糖尿病及減肥的藥物，但由於小分子難以模擬受體與多肽的相互作用，限制了胰高血糖素樣肽-1受體小分子藥物的發現。
目前公開非多肽類GLP-1受體促效劑的專利申請有WO2009/111700、WO2010/114824、WO2011/114271、 WO2013/090454、WO2018/056453、WO2018/109607、WO2019239319、WO2019239371、WO2020103815等。其中，目前僅有vTv公司的TTP-273和輝瑞公司的PF-06882961進入了臨床二期研究。
因此，本發明意在發現新的非多肽類GLP-1受體促效劑、特別是具有良好的生物性能、能夠被安全地應用到人體中的新化合物，本發明也提供用於預防和/或治療涉及GLP-1相關疾病、特別是糖尿病相關疾病的所需工具。
本發明提供了一系列的苯并咪唑類衍生物、其製備方法及其在醫藥上的應用。
具體而言，本發明提供式(I)的化合物或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽，其中所有變數如本文所定義。
Figure 02_image001
(I)
這些化合物是胰高血糖素樣肽1受體（GLP-1 R）的促效劑。本發明還涉及包含這些化合物的藥物組合物以及使用該化合物治療糖尿病等疾病的藥物中的用途。
具體的，本發明通過以下技術方案來實現： 式(I)的化合物：
Figure 02_image001
(I) 或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽，其中： A選自苯環、雜芳環、8~10員稠芳環； R 1選自氫、鹵素、氰基、烷基、烷氧基、鹵代烷基、鹵代烷氧基、烷氧烷基、環烷基、雜環烷基、1個或多個R 7取代的烷基、1個或多個R 8取代的芳基和雜芳基； m為0、1、2或3； W為O或NH； R 2選自氫、鹵素、氰基、烷基、鹵代烷基、烷氧基、烷氧烷基； R 3選自氟、羥基、氰基、氧代(＝O)、C 1-3烷基、OC 1-3烷基、C 3-4環烷基、或2個R 3一起環化成C 3-4螺環烷基，其中C 1-3烷基、OC 1-3烷基、C 3-4環烷基或C 3-4螺環烷基在化合價容許時可經0~3個氟原子或經0~1個羥基取代； q為0、1、2； X為CH或N； Y為CH或N； R 5選自鹵素、羥基、烷基、鹵代烷基、烷氧基、鹵代烷氧基、烷氧烷基、環烷基、雜環烷基、烷基環烷基、烷基雜環烷基； R 4為-C 1-3烷基、-C 0-3亞烷基-C 3-6環烷基、-C 0-3亞烷基-R 9或-C 1-3亞烷基-R 6，其中所述的烷基在化合價容許時可經0至3個獨立地選自0至3個F原子的取代基或經0至1個選自-C 0-1亞烷基-CN、-C 0-1亞烷基-OR O和-N(R N) 2的取代基取代，其中所述的亞烷基和環烷基在化合價容許時可獨立地經0至2個獨立地選自0至2個F原子的取代基或經0至1個選自-C 0-1亞烷基-CN、-C 0-1亞烷基-OR O和-N(R N) 2的取代基取代； R 9為4至6員雜環烷基，其中該雜環烷基在化合價容許時可經0至2個獨立地選自下列的取代基取代： 0至1個氧代(＝O)， 0至1個-CN， 0至2個F原子，或 0至2個獨立地選自-C 1-3烷基和-OC 1-3烷基的取代基，其中C 1-3烷基和OC 1-3烷基的烷基在化合價容許時可經0至3個獨立地選自下列的取代基取代： 0至3個F原子， 0至1個-CN，或 0至1個-OR O； R 6為5至6員雜芳基，其中該雜芳基在化合價容許時可經0至2個獨立地選自下列的取代基取代： 0至2個鹵素， 0至1個選自-OR O和-N(R N) 2的取代基，或 0至2個-C 1-3烷基，其中該烷基在化合價容許時可經0至3個獨立地選自下列的取代基取代： 0至3個F原子，或 0至1個-OR O； 各R O獨立地為H或-C 1-3烷基，其中C 1-3烷基可經0至3個F原子取代； 各R N獨立地為H或-C 1-3烷基； Z 1、Z 2和Z 3各自獨立地為-CR Z或N，各R Z獨立地為H、F、Cl或-CH 3； R 7選自鹵素、氰基、羥基、環烷基、雜環烷基、碸基； R 8選自鹵素、氰基、烷基、鹵代烷基，烷氧基、鹵代烷氧基、烷氧烷基、環烷基、雜環烷基、碸基。
作為本發明的一種較佳方案，所述化合物或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽如式(III)所示：
Figure 02_image004
(III) ，其中： A選自苯環、雜芳環、8~10員稠芳環； R 1選自氫、鹵素、氰基、烷基、烷氧基、鹵代烷基、鹵代烷氧基、烷氧烷基、環烷基、雜環烷基、1個或多個R 7取代的烷基、1個或多個R 8取代的芳基和雜芳基； m為0、1、2或3； W為O或NH； R 3選自氟、羥基、氰基、氧代(＝O)、C 1-3烷基、OC 1-3烷基、C 3-4環烷基、或2個R 3一起環化成C 3-4螺環烷基，其中C 1-3烷基、OC 1-3烷基、C 3-4環烷基或C 3-4螺環烷基在化合價容許時可經0~3個氟原子或經0~1個羥基取代； q為0、1、2； X為CH或N； Y為CH或N； R 5選自鹵素、羥基、烷基、鹵代烷基、烷氧基、鹵代烷氧基、烷氧烷基、環烷基、雜環烷基、烷基環烷基、烷基雜環烷基； R 4為-C 1-3烷基、-C 0-3亞烷基-C 3-6環烷基、-C 0-3亞烷基-R 9或-C 1-3亞烷基-R 6，其中所述的烷基在化合價容許時可經0至3個獨立地選自0至3個F原子的取代基或經0至1個選自-C 0-1亞烷基-CN、-C 0-1亞烷基-OR O或-N(R N) 2的取代基取代，及其中所述的亞烷基和環烷基在化合價容許時可獨立地經0至2個獨立地選自0至2個F原子的取代基或經0至1個選自-C 0-1亞烷基-CN、-C 0-1亞烷基-OR O或-N(R N) 2的取代基取代； R 9為4至6員雜環烷基，其中該雜環烷基在化合價容許時可經0至2個獨立地選自下列的取代基取代： 0至1個氧代(＝O)， 0至1個-CN， 0至2個F原子，或 0至2個獨立地選自-C 1-3烷基或-OC 1-3烷基的取代基，其中C 1-3烷基和OC 1-3烷基的烷基在化合價容許時可經0至3個獨立地選自下列的取代基取代： 0至3個F原子， 0至1個-CN，或 0至1個-OR O； R 6為5至6員雜芳基，其中該雜芳基在化合價容許時可經0至2個獨立地選自下列的取代基取代： 0至2個鹵素， 0至1個選自-OR O和-N(R N) 2的取代基，或 0至2個-C 1-3烷基，其中該烷基在化合價容許時可經0至3個獨立地選自下列的取代基取代： 0至3個F原子，或 0至1個-OR O； 各R O獨立地為H或-C 1-3烷基，其中C 1-3烷基可經0至3個F原子取代； 各R N獨立地為H或-C 1-3烷基； Z 1、Z 2和Z 3各自獨立地為-CR Z或N，各R Z獨立地為H、F、Cl或-CH 3； R 7選自鹵素、氰基、羥基、環烷基、雜環烷基、碸基； R 8選自鹵素、氰基、烷基、鹵代烷基，烷氧基、鹵代烷氧基、烷氧烷基、環烷基、雜環烷基、碸基。
作為本發明的一種較佳方案，所述化合物或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽如式(II)所示：
Figure 02_image006
(II) ，其中： A選自苯環、雜芳環、8~10員稠芳環； R 1選自氫、鹵素、氰基、烷基、烷氧基、鹵代烷基、鹵代烷氧基、烷氧烷基、環烷基、雜環烷基、1個或多個R 7取代的烷基、1個或多個R 8取代的芳基和雜芳基； m為0、1、2或3； R 3選自氟、羥基、氰基、C 1-3烷基、OC 1-3烷基、C 3-4環烷基、或2個R 3一起環化成C 3-4螺環烷基，其中C 1-3烷基和OC 1-3烷基、環烷基或螺環烷基在化合價容許時可經0~3個氟原子或經0~1個羥基取代； q為0、1、2； X為CH或N； Y為CH或N； R 5選自鹵素、羥基、烷基、鹵代烷基、烷氧基、鹵代烷氧基、烷氧烷基、環烷基、雜環烷基、烷基環烷基、烷基雜環烷基； R 4為-C 1-3烷基、-C 0-3亞烷基-C 3-6環烷基、-C 0-3亞烷基-R 9或-C 1-3亞烷基-R 6，其中所述的烷基在化合價容許時可經0至3個獨立地選自0至3個F原子的取代基或經0至1個選自-C 0-1亞烷基-CN、-C 0-1亞烷基-OR O或-N(R N) 2的取代基取代，及其中所述的亞烷基和環烷基在化合價容許時可獨立地經0至2個獨立地選自0至2個F原子的取代基或經0至1個選自-C 0-1亞烷基-CN、-C 0-1亞烷基-OR O或-N(R N) 2的取代基取代； R 9為4至6員雜環烷基，其中該雜環烷基在化合價容許時可經0至2個獨立地選自下列的取代基取代： 0至1個氧代(＝O)， 0至1個-CN， 0至2個F原子，或 0至2個獨立地選自-C 1-3烷基或-OC 1-3烷基的取代基，其中C 1-3烷基和OC 1-3烷基的烷基在化合價容許時可經0至3個獨立地選自下列的取代基取代： 0至3個F原子， 0至1個-CN，或 0至1個-OR O； R 6為5至6員雜芳基，其中該雜芳基在化合價容許時可經0至2個獨立地選自下列的取代基取代： 0至2個鹵素， 0至1個選自-OR O和-N(R N) 2的取代基，或 0至2個-C 1-3烷基，其中該烷基在化合價容許時可經0至3個獨立地選自下列的取代基取代： 0至3個F原子，或 0至1個-OR O； 各R O獨立地為H或-C 1-3烷基，其中C 1-3烷基可經0至3個F原子取代； 各R N獨立地為H或-C 1-3烷基； Z 1、Z 2和Z 3各自獨立地為-CR Z或N，各R Z獨立地為H、F、Cl或-CH 3； R 7選自鹵素、氰基、羥基、環烷基、雜環烷基、碸基； R 8選自鹵素、氰基、烷基、鹵代烷基，烷氧基、鹵代烷氧基、烷氧烷基、環烷基、雜環烷基、碸基。
作為本發明的一種較佳方案，所述烷基是指包含指定數量的碳原子的分支的、不分支的和環狀的飽和烴鏈，較佳自C 1-6的烷基，所述C 1-6的烷基選自甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、仲戊基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、叔戊基、1,2-二甲基丙基、異戊基、新戊基、正己基，異己基，仲己基，叔己基，新己基，2-甲基戊基，1,2-二甲基丁基，1-乙基丁基。
作為本發明的一種較佳方案，所述烷氧基是指烷基醚自由基，較佳自C 1-6的烷氧基，所述C 1-6的烷氧基選自甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、仲戊氧基、1-乙基丙氧基、2-甲基丁氧基、叔戊氧基、1,2-二甲基丙氧基、異戊氧基、新戊氧基、正己氧基，異己氧基，仲己氧基，叔己氧基，新己氧基，2-甲基戊氧基，1,2-二甲基丁氧基，1-乙基丁氧基。
作為本發明的一種較佳方案，所述烷氧烷基是指烷基一個以上的氫原子被烷氧基取代，較佳自C 1-4的烷氧C 1-4的烷基，進一步選自甲氧甲基、甲氧乙基、甲氧丙基、甲氧丁基、乙氧甲基、乙氧乙基、乙氧丙基、乙氧丁基、丙氧甲基、丙氧乙基、丙氧丙基、丙氧丁基、丁氧甲基、丁氧乙基、丁氧丙基、丁氧丁基等。
作為本發明的一種較佳方案，所述鹵素選自氟、氯、溴、碘，鹵代烷基指烷基一個以上的氫原子被鹵素取代，鹵代烷氧基指烷氧基一個以上的氫原子被鹵素取代，羥烷基指烷基一個以上的氫原子被羥基取代，雜環烷基是指烷基一個以上的氫原子被雜環取代，環烷亞甲基是指烷基一個以上的氫原子被環烷取代。作為本發明的一種較佳方案，所述稠芳環選自萘或者稠芳雜環，所述稠芳雜環指芳環或雜芳環與雜芳環稠合而成，所述雜芳環上的雜原子選自氮、氧、硫，所述雜原子為一個或者多個。
作為本發明的一種較佳方案，所述稠芳雜環選自吲唑、喹啉、異喹啉、喹喔啉、吲哚、異吲哚、噌啉、喹唑啉、酞嗪、嘌呤、萘啶、蝶啶、苯并呋喃、苯并噻吩、苯并噁唑、苯并噻唑、苯并異噁唑、苯并異噻唑、苯并噁二唑、苯并噻二唑、苯并三唑、苯并三嗪、苯并咪唑、吡嗪并吡唑、吡嗪并嘧啶、吡嗪并噠嗪、吡嗪并三嗪、嘧啶并吡唑、嘧啶并咪唑、嘧啶并三唑、嘧啶并三嗪、嘧啶并噠嗪、噠嗪并咪唑、噠嗪并吡唑、噠嗪并三唑、噠嗪并三嗪、三嗪并咪唑、三嗪并吡唑、三嗪并三唑、吡啶并咪唑、吡啶并噠嗪、吡啶并吡唑、吡啶并嘧啶、吡啶并三嗪、吡啶并噁唑、吡啶并噻唑、吡啶并異噁唑、吡啶并異噻唑、吡啶并噁二唑、吡啶并噻二唑、吡啶并呋喃、吡啶并吡咯、吡嗪并咪唑、吡嗪并三唑、吡嗪并噁唑、吡嗪并噻唑、吡嗪并異噁唑、吡嗪并異噻唑、吡嗪并噁二唑、吡嗪并噻二唑、吡嗪并呋喃、吡嗪并吡咯、嘧啶并噁唑、嘧啶并噻唑、嘧啶并異噁唑、嘧啶并異噻唑、嘧啶并噁二唑、嘧啶并噻二唑、嘧啶并呋喃、嘧啶并吡咯、噠嗪并噁唑、噠嗪并噻唑、噠嗪并異噁唑、噠嗪并異噻唑、噠嗪并噁二唑、噠嗪并噻二唑、噠嗪并呋喃、噠嗪并吡咯、三嗪并噁唑、三嗪并噻唑、三嗪并異噁唑、三嗪并異噻唑、三嗪并噁二唑、三嗪并噻二唑、三嗪并呋喃、三嗪并吡咯。其中所述萘啶選自
Figure 02_image008
、
Figure 02_image010
、
Figure 02_image012
、
Figure 02_image014
、
Figure 02_image016
；所述吡啶并咪唑選自
Figure 02_image018
、
Figure 02_image020
、
Figure 02_image022
、
Figure 02_image024
、
Figure 02_image026
、
Figure 02_image028
；所述吡嗪并咪唑選自
Figure 02_image030
、
Figure 02_image032
；所述吡嗪并三唑選自
Figure 02_image034
、
Figure 02_image036
、
Figure 02_image038
；所述嘧啶并吡唑選自
Figure 02_image040
、
Figure 02_image042
；所述嘧啶并咪唑選自
Figure 02_image044
、
Figure 02_image046
；所述嘧啶并三唑選自
Figure 02_image048
、
Figure 02_image050
、
Figure 02_image052
；所述噠嗪并咪唑選自
Figure 02_image054
、
Figure 02_image056
；所述噠嗪并三唑選自
Figure 02_image058
、
Figure 02_image060
；所述三嗪并咪唑選自
Figure 02_image062
、
Figure 02_image064
、
Figure 02_image066
；所述吡啶并噠嗪選自
Figure 02_image068
、
Figure 02_image070
、
Figure 02_image072
、
Figure 02_image074
；所述吡啶并吡唑選自
Figure 02_image076
、
Figure 02_image078
、
Figure 02_image080
、
Figure 02_image082
、
Figure 02_image084
；所述吡啶并嘧啶選自
Figure 02_image086
、
Figure 02_image088
、
Figure 02_image090
、
Figure 02_image092
；所述吡啶并三嗪選自
Figure 02_image094
、
Figure 02_image096
、
Figure 02_image098
、
Figure 02_image100
、
Figure 02_image102
；所述嘧啶并三嗪選自
Figure 02_image104
、
Figure 02_image106
、
Figure 02_image108
、
Figure 02_image110
。
作為本發明的一種較佳方案，所述雜環烷基的雜環選自4至10員雜環，所述4至10員雜環選自
Figure 02_image112
，
Figure 02_image114
，
Figure 02_image116
，
Figure 02_image118
，
Figure 02_image120
，
Figure 02_image122
，
Figure 02_image124
，
Figure 02_image126
，
Figure 02_image128
，
Figure 02_image130
；所述芳基選自苯基；所述雜芳基選自5至12員雜芳基，所述5至12員雜芳基選自
Figure 02_image132
，
Figure 02_image134
，
Figure 02_image136
，
Figure 02_image138
，
Figure 02_image140
，
Figure 02_image142
，
Figure 02_image144
，
Figure 02_image146
，
Figure 02_image148
，
Figure 02_image150
，
Figure 02_image152
，
Figure 02_image154
，
Figure 02_image156
，
Figure 02_image158
，
Figure 02_image160
，
Figure 02_image162
，
Figure 02_image164
，
Figure 02_image166
，
Figure 02_image168
，
Figure 02_image170
，
Figure 02_image172
，
Figure 02_image174
。
作為本發明的一種較佳方案，所述的“亞烷基”，是指烷基在化合價容許時可獨立地經0至2個獨立地被取代基取代，所述氰基是指基團-CN，所述羥基是指基團-OH，所述碸基是指基團-SO 2。
作為本發明的一種較佳方案，所述的“雜環”，是指含一個或多個雜原子(氮、氧、硫)的飽和或不飽和雜環；所述的“芳環”，是指苯環；所述的“雜芳環”，是指具有4n+2個π電子的閉合共軛體系的雜環，如呋喃、噻吩、四氫吡咯、二氫吡唑、咪唑、噻唑、異噻唑、噻二唑、噁唑、噁二唑、異噁唑、呱啶、呱嗪、噠嗪、吡嗪、三嗪、嘧啶、嗎啉或吡啶等；所述多個是指兩個、三個、或四個。
作為本發明的一種較佳方案，所述環烷選自C 3-6的環烷，C 3-6的環烷選自環丙基、環丁基、環戊基、環己基。
作為本發明的一種較佳方案，所述A選自苯環、
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、
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、
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、
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、
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。
作為本發明的一種較佳方案，所述化合物或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽如式(I)所示，其中： 所述A選自苯環、
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、
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、
Figure 02_image180
、
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、
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； R 1選自氫、氟、氯、溴、氰基、二氟乙基、三氟乙基； m為0、1、2； W為O或NH； R 2選自氯、氰基、三氟甲基、甲氧基、甲氧甲基； q為0、1； R 3為氟、甲基、氧代(＝O)、羥基、氟代甲基、甲氧基乙基； R 4為氧雜環丁-2-基甲基； X為CH或N； Y為CH或N； R 5選自甲基、乙基、環丙甲基、氟代乙基、甲氧基乙基； Z 1為CH； Z 2為CH或CF； Z 3為CH或N或CF。
作為本發明的一種較佳方案，所述化合物或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽如式(III)所示，其中： 所述A選自苯環、
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、
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、
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、
Figure 02_image182
、
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、
Figure 02_image186
； R 1選自氫、氟、氯、溴、氰基、二氟乙基、三氟乙基； m為0、1、2； W為O或NH； q為0、1； R 3為氟、甲基、氧代(＝O)、羥基、氟代甲基、甲氧基乙基； R 4為氧雜環丁-2-基甲基； X為CH或N； Y為CH或N； R 5為甲基、乙基、環丙甲基、氟代乙基、甲氧基乙基； Z 1為CH； Z 2為CH或CF； Z 3為CH或N或CF。
作為本發明的一種較佳方案，所述化合物或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽如式(II)所示，其中： 所述A選自苯環、
Figure 02_image176
、
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、
Figure 02_image180
、
Figure 02_image186
； R 1選自氫、氟、氯、溴、氰基、二氟乙基、三氟乙基； m為0、1、2； q為0； R 4為氧雜環丁-2-基甲基； X為CH或N； Y為CH或N； R 5選自甲基、乙基、環丙甲基、氟代乙基、甲氧基乙基； Z 1為CH； Z 2為CH或CF； Z 3為CH或N或CF。
作為本發明的一種較佳方案，所述化合物或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽，當與R 5相連的碳原子為手性碳原子時，所述手性碳原子為S構型和/或R構型，較佳S構型。
作為本發明的一種較佳方案，所述化合物或其藥學上可接受的鹽，選自以下化合物：
   結構式    結構式
1
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 27
Figure 02_image190
2
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 28
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3
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 29
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4
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5
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 31
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6
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7
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8
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 34
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9
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 35
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10
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11
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 37
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12
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13
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 39
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14
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 40
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15
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 41
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16
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18
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 44
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19
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20
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21
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22
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23
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24
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 50
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 51
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26
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 52
Figure 02_image290
。
作為本發明的一種較佳方案，所述化合物或其藥學上可接受的鹽，選自以下化合物：
   結構式    結構式
1A
Figure 02_image292
 27
Figure 02_image294
1B
Figure 02_image296
 28
Figure 02_image298
2A
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 29
Figure 02_image198
2B
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 30
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3
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 31
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4
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 32
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5
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 33
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6
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 34
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7
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 35
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8
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 36
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9
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 37
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10
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11
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 39A
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12
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 39B
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13
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 40
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14
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 41
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15
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 42
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16
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 43
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17
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 44
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18
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19
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 46
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20A
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 47
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24A
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24B
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 51B
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25
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 52A
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26
Figure 02_image407
 52B
Figure 02_image409
。
作為本發明的一種較佳方案，所述藥學上可接受的鹽是指化合物與藥學上可接受的酸或鹼製備。
作為本發明的一種較佳方案，所述化合物的一個以上的氫原子上被同位素氘取代。
本發明另一目的提供了一種藥物組合物，包括前述的式(I)的化合物，或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽和一種以上藥學上可接受的載體。
本發明另一目的在於提供所述的式(I)的化合物，或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽在製備用於製備治療GLP-1相關疾病的藥物用途，具體地，涉及糖尿病相關疾病的藥物用途。
除非另有說明，本文所用的下列術語和短語旨在具有下列含義。一個特定的術語或短語在沒有特別定義的情況下不應該被認為是不確定的或不清楚的，而應該按照普通的含義去理解。當本文中出現商品名時，意在指代其對應的商品或其活性成分。這裡所採用的術語“藥學上可接受的”，是針對那些化合物、材料、組合物和/或劑型而言，它們在可靠的醫學判斷的範圍之內，適用於與人類和動物的組織接觸使用，而沒有過多的毒性、刺激性、過敏性反應或其它問題或併發症，與合理的利益/風險比相稱。
術語“藥學上可接受的鹽”是指本發明化合物的鹽，由本發明發現的具有特定取代基的化合物與藥學上可接受的酸或鹼製備。
除了鹽的形式，本發明所提供的化合物還存在前藥形式。本文所描述的化合物的前藥容易地在生理條件下發生化學變化從而轉化成本發明的化合物。此外，前體藥物可以在體內環境中通過化學或生化方法被轉換到本發明的化合物。
本發明的某些化合物可以以非溶劑化形式或者溶劑化形式存在，包括水合物形式。一般而言，溶劑化形式與非溶劑化的形式相當，都包含在本發明的範圍之內。
本發明的化合物可以存在特定的幾何或立體異構體形式。本發明設想所有的這類化合物，包括順式和反式異構體、(-)-和(+)-對映體、(R)-和(S)-對映體、非對映異構體、(D)-異構體、(L)-異構體，及其外消旋混合物和其他混合物，例如對映異構體或非對映體富集的混合物，所有這些混合物都屬於本發明的範圍之內。烷基等取代基中可存在另外的不對稱碳原子。所有這些異構體以及它們的混合物，均包括在本發明的範圍之內。
可以通過的手性合成或手性試劑或者其他常規技術製備光學活性的(R)-和(S)-異構體，以及D和L異構體。如果想得到本發明某化合物的一種對映體，可以通過不對稱合成或者具有手性助劑的衍生作用來製備，其中將所得非對映體混合物分離，並且輔助基團裂開以提供純的所需對映異構體。或者，當分子中含有鹼性官能團(如氨基)或酸性官能團(如羧基)時，與適當的光學活性的酸或鹼形成非對映異構體的鹽，然後通過本領域所公知的常規方法進行非對映異構體拆分，然後回收得到純的對映體。此外，對映異構體和非對映異構體的分離通常是通過使用色譜法完成的，所述色譜法採用手性固定相，並任選地與化學衍生法相結合(例如由胺生成氨基甲酸鹽)。
本發明化合物分子的原子是同位素，通過同位素衍生化通常可以延長半衰期、降低清除率、代謝穩定和提高體內活性等效果。並且，包括一個實施方案，其中至少一個原子被具有相同原子數(質子數)和不同質量數(質子和中子和)的原子取代。本發明化合物中包括的同位素的實例包括氫原子、碳原子、氮原子、氧原子、磷原子、硫原子、氟原子、氯原子，其分別包括 2H、 3H、 13C、 14C、 15N、 17O、 18O、 31P、 32P、 35S、 18F、 36Cl。特別的是，隨其衰退而發射輻射的放射性同位素例如 3H或 14C可用於藥物製劑或者體內化合物的局部解剖學檢驗。穩定的同位素既不隨其量衰減或變化，也不具有放射性，因此其可以安全使用。當構成本發明化合物分子的原子是同位素時，通過用包含相應同位素的試劑替代合成中所用的試劑，可以根據通用方法轉化同位素。
本發明的化合物可以在一個或多個構成該化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，可用放射性同位素標記化合物，比如氘( 2H)，碘-125( 125I)或C-14( 14C)。本發明的化合物的所有同位素組成的變換，無論放射性與否，都包括在本發明的範圍之內。
進一步地，本發明的化合物一個或多個氫原子上被同位素氘( 2H)取代，本發明化合物氘代後，具有延長半衰期、降低清除率、代謝穩定和提高體內活性等效果。
所述同位素衍生物的製備方法通常包括：相轉移催化方法。例如，較佳的氘化方法採用相轉移催化劑(例如，四烷基銨鹽，NBu 4HSO 4)。使用相轉移催化劑交換二苯基甲烷化合物的亞甲基質子，導致比在酸(例如，甲磺酸)存在下用氘化矽烷(例如三乙基氘化甲矽烷)或用路易士酸如三氯化鋁採用氘化硼酸鈉還原而引入較高的氘。
術語“藥學上可接受的載體”是指能夠遞送本發明有效量活性物質、不干擾活性物質的生物活性並且對宿主或者患者無毒副作用的任何製劑載體或介質，代表性的載體包括水、油、蔬菜和礦物質、膏基、洗劑基質、軟膏基質等。這些基質包括懸浮劑、增粘劑、透皮促進劑等。它們的製劑為化妝品領域或局部藥物領域的技術人員所周知。關於載體的其他資訊，可以參考Remington:  The Science and Practice of Pharmacy, 21st Ed., Lippincott, Williams & Wilkins (2005)，該文獻的內容通過引用的方式併入本文。
術語“賦形劑”通常是指配製有效的藥物組合物所需要載體、稀釋劑和/或介質。
針對藥物或藥理學活性劑而言，術語“有效量”或“治療有效量”是指無毒的但能達到預期效果的藥物或藥劑的足夠用量。對於本發明中的口服劑型，組合物中一種活性物質的“有效量”是指與該組合物中另一種活性物質聯用時為了達到預期效果所需要的用量。有效量的確定因人而異，取決於受體的年齡和一般情況，也取決於具體的活性物質，個案中合適的有效量可以由本領域技術人員根據常規試驗確定。
術語“活性成分”、“治療劑”、“活性物質”或“活性劑”是指一種化學實體，它可以有效地治療目標紊亂、疾病或病症。
“任選”或“任選地”指的是隨後描述的事件或狀況可能但不是必需出現的，並且該描述包括其中所述事件或狀況發生的情況以及所述事件或狀況不發生的情況。
“
Figure 02_image411
”表示連接鍵。
本發明的化合物可以通過本領域技術人員所熟知的多種合成方法來製備，包括下面列舉的具體實施方式、其與其他化學合成方法的結合所形成的實施方式以及本領域技術上人員所熟知的等同替換方式，較佳的實施方式包括但不限於本發明的實施例。
下面結合實施例對本發明作進一步詳細的描述，但發明的實施方式不限於此。
化合物的結構是通過核磁共振(NMR)或質譜(MS)來確定的。NMR位移(δ)以10 -6(ppm)的單位給出。NMR的測定是用Bruker AVANCE-III核磁儀，測定溶劑為氘代二甲基亞碸(DMSO-d 6)，氘代氯仿(CDCl 3)，內標為四甲基矽烷(TMS)。
MS的測定用ISQ EC質譜儀(生產商：Thermo, 型號：ISQ EC)。
高效液相色譜法(HPLC)分析使用Thermo U3000 HPLC DAD高效液相色譜儀和Agilent 1260高效液相色譜儀。
CombiFlash快速製備儀使用CombiFlash Rf+ LUMEN (TELEDYNE ISCO)。
薄層層析矽膠板使用煙臺銀龍HSGF 254或GF 254矽膠板，薄層色譜法(TLC)使用的矽膠板採用的規格是0.17mm~0.23mm，薄層層析分離純化產品採用的規格是0.4mm~0.5mm。
矽膠柱色譜法一般使用乳山上邦矽膠100~200目矽膠為載體。
試劑：LDA-二異丙基氨基鋰， THF-四氫呋喃，TEA-三乙胺， Dioxane-1，4-二氧六環，BH 3-硼烷，EDCl-1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳醯二亞胺鹽酸鹽，HOBT-1-羥基苯并三唑，DIPEA- N,N-二異丙基乙胺，DMF- N,N-二甲基甲醯胺，K 2CO 3-碳酸鉀，DMSO-二甲基亞碸，EtOH-乙醇，NaH-氫化鈉，toluene-甲苯，r.t.-室溫，PdCl 2(dppf)-[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀，Pd(OAc)2-乙酸鈀，PhMe-甲苯，HCl/dioxane-鹽酸的二氧六環，NaCO 3-碳酸鈉，MeOH-甲醇，DCE-二氯乙烷，NCS-N-氯代丁二醯亞胺，TfOH-三氟甲磺酸，TFA-三氟乙酸，AcOH-乙酸，(CH 2O)n多聚甲醛，CDI-N,N'-羰基二咪唑，LAH-氫化鋁鋰，PPA-多聚磷酸，TsOH-對甲苯磺酸，NBS-N-溴代丁二醯亞胺，BPO-過氧苯甲醯，HATU-2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N,N,-四甲基脲六氟磷酸酯,KOH.H 2O-一水合氫氧化鉀，NaOH-氫氧化鈉，CS 2CO 3-碳酸銫，AIBN-偶氮二異丁腈，MeCN-乙腈，DEAD-偶氮二甲酸二乙酯，DAST-二乙氨基三氟化硫，PPH 3-三苯基膦，DCM-二氯甲烷，DMAP-4-二甲氨基吡啶，TBD- 1,5,7-三疊氮雙環(4,4,0)癸-5-烯，DIEA-N,N-二異丙基乙胺，BINAP-2,2'-雙(二苯基膦)-1,1'-聯萘，NMP-N-甲基吡咯烷酮。
實施例1 2-((S)-1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-((((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[d]咪唑-6-羧酸（1A）和2-((R)-1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸（1B）
Figure 02_image413
具體合成路線如下。
步驟A：合成 2-氯-6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶
Figure 02_image415
將(4-氯-2-氟苯基)甲醇(1.6克，10.0毫莫耳)，2,6-二氯吡啶(1.627克，11.0毫莫耳)，氫氧化鈉(1.2克，30.0毫莫耳)溶於 N,N-二甲基甲醯胺(30.0毫升)中，120攝氏度攪拌12小時。
反應結束後，將反應液倒入100毫升冰水中，乙酸乙酯(50毫升×3次)萃取，合併並乾燥有機相，濃縮所得粗品用矽膠柱層析純化(洗脫劑：正己烷/乙酸乙酯= 10/1)得到1.2克白色固體2-氯-6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶(收率：44.2%)。LC-MS: RT = 2.29 min, [M+H] += 272.04。
步驟B：合成 6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)-3',6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2' H)-羧酸叔丁酯
Figure 02_image417
將2-氯-6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶(1.2克，4.4毫莫耳)，4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)-3,6-二氫吡啶-1(2 H)-羧酸叔丁酯(1.3克，4.4毫莫耳)，[1,1-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯化鈀(323.0毫克)，磷酸鉀 (1.8克，8.8毫莫耳)溶於水(4毫升)，二氧六環(20毫升)中，溫度升高到75攝氏度攪拌8小時。
反應結束後，將反應液倒入20毫升水中，乙酸乙酯(20毫升×3次)萃取，合併並乾燥有機相，濃縮所得粗品用柱層析純化(洗脫劑：正己烷/乙酸乙酯= 10/1)得到1.2克淡黃色固體6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)-3',6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2' H)-羧酸叔丁酯(收率：65.2%)。LC-MS: RT = 2.43 min, [M+H] += 419.24。
步驟C：合成 4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯
Figure 02_image419
將6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)-3',6'-二氫-[2,4'-聯吡啶]-1'(2' H)-羧酸叔丁酯(1.1克，2.6毫莫耳)溶於乙酸乙酯(55.0毫升)中，加入鈀/碳((275.0毫克)，於氫氣(一個大氣壓)下室溫反應6小時。
反應結束後，過濾，旋乾，得到1.2克無色油狀物4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯(收率：80.0%)。LC-MS: RT = 2.43 min, [M+H-56] += 365.20。
步驟D：合成 2-((4-氯-2-氟苄基)氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶
Figure 02_image421
將4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯(1.1克，4.5毫莫耳)溶於二氧六環(5.0毫升)中，冰浴條件下加入鹽酸的二氧六環溶液(35.0毫升)中，室溫反應2小時。
反應完全後，有固體析出，過濾，旋乾，得到500.0毫克淡黃色固體2-((4-氯-2-氟苄基)氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶。
步驟E：合成 2-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶基-2-基)呱啶-1-基)丙酸乙酯
Figure 02_image423
室溫下，將2-((4-氯-2-氟苄基)氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶(500.0豪克，1.6毫莫耳)， 2-溴丙酸乙酯(309.3豪克，1.7毫莫耳)，碳酸鉀（441.0毫克，3.2毫莫耳）溶於乙腈(8.0毫升)中，在室溫下攪拌過夜。
反應結束後，加飽和氯化鈉淬滅，乙酸乙酯(30毫升×3次)萃取，合併並乾燥有機相，濃縮所得粗品用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷= 1/3)得到353.0毫克白色固體2-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶基-2-基)呱啶-1-基)丙酸乙酯(收率：52.5%)。LC-MS: RT = 1.82min, [M+H] += 421.25。
步驟F：合成 2-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶基-2-基)呱啶-1-基)丙酸
Figure 02_image425
室溫下，將2-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶基-2-基)呱啶-1-基)丙酸乙酯(323豪克 0.7毫莫耳)溶於混合溶劑(3.6毫升，乙醇/水=5/1)中，加入氫氧化鈉(121.6毫克，3.0毫莫耳)，室溫下攪拌12小時。
反應結束後，往反應液中加入0.5 N的稀鹽酸，調pH = 2，有白色固體析出，過濾，旋乾固體得到302.0毫克白色固體2-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶基-2-基)呱啶-1-基)丙酸。LC-MS: RT = 1.84min, [M+H] += 393.21。
步驟G：合成甲基4-(2-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)丙醯胺基)-3-((((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)氨基)苯甲酸酯
Figure 02_image427
室溫下，將2-(4-(6-((4-氯基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)丙酸(262.0毫克 0.7毫莫耳)溶於N,N-二甲基甲醯胺(2.5毫升)中，加入2-(7-氮雜苯并三氮唑)- N,N,N,N,-四甲基脲六氟磷酸酯(380.0毫克，1.0毫莫耳)和 N,N-二異丙基乙胺(0.5毫升)，攪拌0.5小時後加入(S)-4-氨基-3-(((氧雜環丁烷-2-基)甲基)氨基)苯甲酸甲酯(158.0毫克，0.6毫莫耳)，室溫下攪拌過夜。
反應結束後，加飽和氯化鈉淬滅，乙酸乙酯萃取(30毫升×3次)，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾後濃縮，所得粗品用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷= 1/1)得到395.0毫克淡黃色固體甲基4-(2-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)丙醯胺基)-3-((((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)氨基)苯甲酸酯(收率：92.5%)。 LC-MS: RT = 1.82min, [M+H] += 611.31。
步驟H：合成 2-(1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯
Figure 02_image429
將甲基4-(2-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)丙醯胺基)-3-((((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)氨基)苯甲酸酯(355.0毫克，0.6毫莫耳)溶於乙酸(4.0毫升)中，加熱至60攝氏度反應5小時。
反應結束後，將反應液倒入50.0毫升飽和碳酸氫鈉水溶液中，乙酸乙酯萃取(30毫升×3次)，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾後濃縮，所得粗品用Prep-TLC分離(展開劑：二氯甲烷/甲醇/= 13/1)得到118.0毫克淡黃色固體2-(1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(收率：33.0%)。LC-MS: RT = 1.84 min, [M+H] += 593.31。
步驟I：合成2-((S)-1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸（1A）和2-((R)-1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸（1B）
Figure 02_image431
室溫下，將2-(1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(70.0 毫克 0.2 毫莫耳)溶於混合溶劑(2.5毫升，四氫呋喃/甲醇/水 = 1/3/1)中，加入氫氧化鋰(48.0毫克，1.1毫莫耳)，室溫反應24小時。
反應結束後，加飽和氯化銨淬滅，混合溶劑萃取(15毫升×3次，二氯甲烷/甲醇 = 15/1)合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾後濃縮，所得粗品用反相高效液相製備（洗脫液濃縮、凍乾），製備條件如下：色譜柱：Agilent 5 Prep-C18 100mm×30mm 5μM；流動相：水(含有0.1%的氨水)和乙腈洗脫；流速：20毫升/分鐘；梯度：由27%乙腈在9.07分鐘及12.00分鐘分別洗脫出來1A和1B，檢測波長：254 nm。
先後得到8.0毫克白色固體2-((S)-1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸（1A） (收率：7.0%)和4.0毫克2-((R)-1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸（1B）(收率：3.5%)。
化合物1A：HPLC: RT = 9.07 min。 LC-MS: RT = 1.82 min, [M+H] += 579.29。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.20 (brs, 1H), 7.80 (dd, J= 8.4, 1.3 Hz, 1H), 7.63–7.53 (m, 3H), 7.45 (dd, J= 10.0, 1.9 Hz, 1H), 7.28 (dd, J= 8.2, 2.0 Hz, 1H), 6.84 (d, J= 7.3 Hz, 1H), 6.66 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 5.36 (s, 2H), 5.22–5.16 (m, 1H), 4.87–4.78 (m, 1H), 4.62 (dd, J= 15.2, 5.2 Hz, 1H), 4.49–4.41 (m, 2H), 4.18 (dt, J= 9.4, 5.9 Hz, 1H), 2.98–2.96 (m, 1H), 2.65–2.60 (m, 2H), 2.59–2.49 (m, 2H), 2.38–2.21 (m, 2H), 1.86–1.68 (m, 3H), 1.58–1.48 (m, 1H), 1.47 (d, J= 6.7 Hz, 3H)。
化合物1B：HPLC: RT = 12.00 min。 LC-MS: RT = 1.84min, [M+H] += 579.31。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.38 (s, 1H), 7.90 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 7.79 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 7.70–7.57 (m, 2H), 7.47 (d, J= 9.8 Hz, 1H), 7.36–7.26 (m, 1H), 6.91–6.89 (m, 1H), 6.74–6.72 (m, 1H), 5.38 (s, 2H), 5.14–4.91 (m, 2H), 4.71–4.46 (m, 2H), 3.60–3.15 (m, 3H), 2.90–2.75 (m, 1H), 2.50–2.39 (m, 1H), 2.14–1.92 (m, 4H), 1.79–1.62 (m, 3H), 1.28–1.22 (m, 4H)。
實施例2 2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸（2A）和2-((R)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸（2B）
Figure 02_image433
具體合成路線如下。
步驟A：合成 4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基呱啶-1-羧酸叔丁酯
Figure 02_image435
將3-氟-4-(羥甲基)苄腈(3.45克，22.88毫莫耳)，4-(6-氯吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯(4.50克，15.25毫莫耳)，鈀催化劑(644毫克)，碳酸銫(10克，30.50毫莫耳)溶於二氧六環(80毫升)中，溫度升高到100攝氏度攪拌8個小時。
反應結束後，用矽藻土抽濾，用二氯甲烷淋洗，濃縮濾液，所得粗品用柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷= 10/1)得到5克淡黃色油狀液體4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基呱啶-1-羧酸叔丁酯(收率：80%)。LC-MS: RT = 2.27 min, [M-55] += 356.21。
步驟B：合成 3-氟-4-(((6-(呱啶-4-基)吡啶基-2-基)氧基)甲基)苄腈
Figure 02_image437
將4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯(5.00克)溶於鹽酸的二氧六環溶液(40毫升)中，室溫攪拌。
反應完全後，減壓旋乾得到4.5克淡黃色固體3-氟-4-(((6-(呱啶-4-基)吡啶基-2-基)氧基)甲基)苄腈。LC-MS: RT = 1.65 min, [M+H] += 312.21。
步驟C：合成 2-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)丙酸乙酯
Figure 02_image439
室溫下，將3-氟-4-(((6-(呱啶-4-基)吡啶基-2-基)氧基)甲基)苄腈(4.50克，14.46毫莫耳)和碳酸鉀(4.00克，28.92毫莫耳)溶於N,N-二甲基甲醯胺(50毫升)中，再加入2-溴丙酸乙酯(3.16毫克, 17.35毫莫耳)，在室溫下攪拌。
反應結束後，加飽和氯化鈉淬滅反，乙酸乙酯(30毫升×3次)萃取，合併並乾燥有機相，濃縮所得粗品用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷= 1/3)得到3.7克白色固體2-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)丙酸乙酯(收率：62%)。LC-MS: RT = 1.70 min, [M+H] += 412.25。
步驟D：合成 2-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)丙酸
Figure 02_image441
室溫下，將2-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)丙酸乙酯(1.00克 2.43毫莫耳)溶於混合溶劑(22毫升，乙醇/水=5/1)中，加入氫氧化鋰(185毫克，4.87毫莫耳)，室溫下攪拌48小時。
反應結束後，加飽和氯化鈉淬滅，乙酸乙酯萃取(20毫升×3次)，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾後濃縮，所得粗品用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷= 1/1)得到200毫克白色固體2-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)丙酸(收率：21%)。 LC-MS: RT = 1.73 min, [M+H] += 384.27。
步驟E：合成甲基4-(2-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)丙醯胺基)-3-((((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)氨基)苯甲酸酯
Figure 02_image443
室溫下，將2-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)丙酸(200毫克 0.51毫莫耳)溶於N,N-二甲基甲醯胺(10毫升)中，加入HATU(388毫克，1.02毫莫耳)和DIEA(2毫升)，攪拌0.5小時後加入(S)-4-氨基-3-((氧雜環丁烷-2-基)甲基)氨基)苯甲酸甲酯(144毫克，0.61毫莫耳)室溫下攪拌。
反應結束後，加飽和氯化鈉淬滅，乙酸乙酯萃取(20毫升×3次)，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾後濃縮，所得粗品用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷 = 1/1)得到183毫克淡黃色固體甲基4-(2-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)丙醯胺基)-3-((((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)氨基)苯甲酸酯(收率：60%)。 LC-MS: RT = 1.77 min, [M+H] += 602.32。
步驟F：合成 2-(1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯
Figure 02_image445
將甲基4-(2-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)丙醯胺基)-3-((((S)-氧雜環丁-2-基)甲基)氨基)苯甲酸酯(183毫克，0.30毫莫耳)溶於乙酸(2毫升)中，加熱至60攝氏度反應。
反應結束後，直接濃縮所得粗品用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷= 7/1)得到150毫克棕黃色固體2-(1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(收率：86%)。LC-MS: RT = 1.79 min, [M+H] += 584.32。
步驟G：合成化合物2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸（2A）和2-((R)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸（2B）
Figure 02_image447
室溫下，將2-(1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(150 毫克 0.26 毫莫耳)溶於混合溶劑(5毫升，四氫呋喃/甲醇/水 = 2.5/2.5/1)中，加入氫氧化鋰(40毫克，1.05毫莫耳)，升溫至40攝氏度反應。
反應結束後，加飽和氯化銨淬滅，依次用乙酸乙酯(10毫升×2次)，混合溶劑萃取(10毫升×2次，二氯甲烷/甲醇 = 30/1)，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾後濃縮，所得粗品用反相高效液相製備（洗脫液濃縮、凍乾），製備條件如下：色譜柱：Agilent 5 Prep-C18 100mm×30mm 5μM；流動相：水(含有0.1%的氨水)和乙腈洗脫；流速：20毫升/分鐘；梯度：由23%乙腈在13.77分鐘及15.74分鐘分別洗脫出來2A和2B，檢測波長：254 nm。先後得到18.93毫克白色固體2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸 （2A）(收率：13%)和31.15毫克白色固體2-((R)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸（2B）(收率：21%)。
化合物2A：HPLC: RT = 13.77 min。 LC-MS: RT = 1.77 min, [M+H] += 570.31。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.77 (brs, 1H), 8.29–8.28 (m, 1H), 7.87 (d, J= 10.4 Hz, 1H), 7.80 (dd, J= 8.4, 1.6 Hz, 1H), 7.70–7.66 (m, 3H), 7.62 (dd, J= 8.2, 7.4 Hz, 1H), 6.84 (d, J= 7.1 Hz, 1H), 6.70 (d, J= 7.7 Hz, 1H), 5.44 (brs, 2H), 5.19–5.14 (m, 1H), 4.83 (dd, J= 15.5, 3.1 Hz, 1H), 4.68 (dd, J= 15.4, 5.6 Hz, 1H), 4.50–4.39 (m, 2H), 4.18 (dt, J= 9.1, 5.7 Hz, 1H), 2.98–2.94 (m, 1H), 2.67–2.45 (m, 4H), 2.37–2.19 (m, 2H), 1.84–1.61 (m, 3H), 1.46 (d, J= 6.8 Hz, 3H), 1.54–1.43 (m, 1H)。
化合物2B：HPLC: RT = 15.74 min。 LC-MS: RT = 1.77 min, [M+H] += 570.35。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ8.24 (s, 1H), 7.87 (d, J= 10.1 Hz, 1H), 7.78 (dd, J= 8.4, 1.4 Hz, 1H), 7.72-7.67 (m, 2H), 7.63 (dd, J= 8.0, 6.2 Hz, 2H), 6.86 (d, J= 7.3 Hz, 1H), 6.70 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 5.46 (s, 2H), 5.12-5.00 (m, 1H), 4.89 (dd, J= 15.1, 8.6 Hz, 1H), 4.63-4.40 (m, 4H), 3.04 (d, J= 10.8 Hz, 1H), 2.78-2.69 (m, 1H), 2.61 (t, J= 10.4 Hz, 1H), 2.55 (s, 2H), 2.26 (t, J= 10.7 Hz, 1H), 1.96-1.59 (m, 4H), 1.55-1.39 (m, 4H)。
實施例3 2-((S)-1-(4-(6-((5-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image449
具體合成路線如下。
步驟A：合成 5-氯-2-氟苄醇
Figure 02_image451
室溫下，將5-氯-2-氟苯甲醛(500毫克，3.16毫莫耳)溶於甲醇(15毫升)中，在冰浴中冷卻至零攝氏度，加入硼氫化鈉(234毫克，6.33毫莫耳)，在室溫下攪拌。
反應結束後，加飽和氯化鈉淬滅，二氯甲烷(30毫升)萃取，水洗兩次，無水硫酸鈉乾燥，過濾後濃縮，所得粗品用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷 = 1/3)得到410毫克無色油狀液體5-氯-2-氟苄醇(收率：81%)。LC-MS: RT = 1.78 min。
步驟B：合成 4-(6-((5-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯
Figure 02_image453
將5-氯-2-氟苄醇(410毫克，2.56毫莫耳)溶於N,N-二甲基甲醯胺(10毫升)中，在冰浴中冷卻至零攝氏度，加入鈉氫(270毫克，5.12毫莫耳)，在室溫下攪拌0.5小時，再加入4-(6-氟吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯(718毫克，2.56毫莫耳)，室溫反應。
反應結束後，加飽和氯化鈉淬滅，乙酸乙酯(30毫升)萃取，用水洗兩次，無水硫酸鈉乾燥，過濾後濃縮，所得粗品用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷= 1/2)得到550毫克無色油狀液體4-(6-((5-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯(收率：51%)。LC-MS: RT = 2.41 min, [M-55] += 365.17。
步驟C：合成 2-((5-氯-2-氟苄基)氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶
Figure 02_image455
將4-(6-((5-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯(550毫克，1.31毫莫耳)溶於鹽酸的二氧六環溶液(10毫升)中，室溫攪拌。反應完全後，減壓濃縮得到520克白色固體2-((5-氯-2-氟苄基)氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶。LC-MS: RT = 1.72 min, [M+H] += 321.18。
步驟C：合成 2-((S)-1-(4-(6-((5-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯
Figure 02_image457
室溫下，將2-((5-氯-2-氟苄基)氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶(150毫克，0.47毫莫耳)，DIEA(1毫升)，碘化鉀(156毫克，0.94毫莫耳)和碳酸鉀(130克，0.94毫莫耳)溶於 N,N-二甲基甲醯胺(10毫升)中，再加入2-((R)-1-氯乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(144毫克, 0.47毫莫耳)，升溫至50攝氏度反應。
反應結束後，加飽和氯化鈉淬滅，乙酸乙酯(20毫升×2次)萃取，合併並乾燥有機相，濃縮所得粗品用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷= 1/8)得到90毫克白色固體化合物2-((S)-1-(4-(6-((5-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(收率：32%)。LC-MS: RT = 1.86 min, [M+H] += 593.31。
步驟D：合成 2-((S)-1-(4-(6-((5-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image459
室溫下，將化合物2-((S)-1-(4-(6-((5-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(90 毫克 0.15 毫莫耳)溶於混合溶劑(5毫升，四氫呋喃/甲醇/水 = 2.5/2.5/1)中，加入氫氧化鋰(23毫克，0.61毫莫耳)，升溫至40攝氏度反應。
反應結束後，加飽和氯化銨淬滅，依次用乙酸乙(10毫升×2次)，混合溶劑萃取(10毫升×2次，二氯甲烷/甲醇 = 30/1)，合併有機相並，用無水硫酸鈉乾燥，過濾後濃縮，濃縮所得粗品用矽膠柱層析純化(洗脫劑：二氯甲烷/甲醇= 20/1)得到31.88毫克白色固體2-((S)-1-(4-(6-((5-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸(收率：21%)。LC-MS: RT = 1.81min, [M+H] += 579.30。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ12.72 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.64 (dd, J= 30.9, 7.9 Hz, 3H), 7.41 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 7.26 (t, J= 9.2 Hz, 1H), 6.83 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 6.67 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 5.36 (d, J= 9.1 Hz, 2H), 5.16 (s, 1H), 4.84 (d, J= 13.6 Hz, 1H), 4.69 (s, 1H), 4.54-4.31 (m, 2H), 4.17 (dt, J= 11.4, 5.7 Hz, 1H), 2.97 (s, 1H), 2.62 (d, J= 6.0 Hz, 2H), 2.24 (d, J= 54.1 Hz, 3H), 1.73 (dd, J= 28.8, 21.5 Hz, 4H), 1.59-1.35 (m, 4H)。
實施例4 2-((S)-1-(4-(6-((3-氟吡啶-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸
Figure 02_image461
具體合成路線如下。
步驟A：合成 4-(6-((3-氟吡啶-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 02_image463
將(3-氟吡啶-4-基)甲醇 (86毫克，0.68毫莫耳)和4-(6-氯吡啶-2-基)呱啶-1-甲酸叔丁酯(201毫克，0.68毫莫耳)溶解於4毫升無水二氧六環中，加入碳酸銫（443毫克，1.36毫莫耳)和甲烷磺酸(2-二環己基膦基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯基)(2'-氨基-1,1'-聯苯-2-基)鈀(II)（58毫克，0.068毫莫耳），氮氣置換3次，於100攝氏度下反應7小時。
反應結束，加水稀釋，乙酸乙酯（50毫升×2次）萃取，合併有機相，飽和食鹽水（20毫升×2次）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮所得粗品經過柱(正己烷/乙酸乙酯 = 4/1)分離得101毫克淡黃色固體4-(6-((3-氟吡啶-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-甲酸叔丁酯(收率：38.3%)。
步驟B：合成 4-(6-((3-氟吡啶-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶
Figure 02_image465
將4-(6-((3-氟吡啶-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-甲酸叔丁酯(101 毫克，0.26毫莫耳) 溶解於3毫升甲醇中，零攝氏度下加入4M鹽酸二氧六環溶液(3毫升)，升至室溫下反應40分鐘。
反應結束，反應液直接旋乾得98毫克白色固體4-(6-((3-氟吡啶-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶，直接用於下一步反應。LC-MS: RT = 1.56 min, [M+H] += 288.22。
步驟C：合成 4-((S)-2-氯丙醯胺基)-3-((((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)氨基)苯甲酸甲酯
Figure 02_image467
室溫下，將(S)-4-氨基-3-(((氧雜環丁烷-2-基)甲基)氨基)苯甲酸甲酯(500.0毫克，2.25毫莫耳)、(S)-2-氯丙酸(243.0毫克，2.25毫莫耳)溶於二氯甲烷 (10.0毫升)中，依次加入2-(7-氮雜苯并三氮唑)- N, N, N', N'-四甲基脲六氟磷酸酯(1.28克，3.38毫莫耳)、 N, N-二異丙基乙胺(3毫升)，N 2保護下，50攝氏度反應2.0小時。
反應結束，加水淬滅，乙酸乙酯(50毫升×3次)萃取。合併有機相，飽和食鹽水(30毫升×3次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，最後矽膠柱層析純化(洗脫劑：正己烷/乙酸乙酯=2/1)得到580.0毫克淡黃色固體4-((S)-2-氯丙醯胺基)-3-((((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)氨基)苯甲酸甲酯(收率：79.1%)。LC-MS: RT = 1.82 min, [M+H] += 327.18。
步驟D：合成 2-((S)-1-氯乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯
Figure 02_image469
室溫下，將4-((S)-2-氯丙醯胺基)-3-((((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)氨基)苯甲酸甲酯(580.0毫克，1.78毫莫耳)溶於乙酸 (10.0毫升)中，N 2保護下，60攝氏度反應12.0小時。
反應結束，加水淬滅，用碳酸氫鈉溶液(0.5莫耳/升)調pH至6，二氯甲烷(30毫升×3次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(30毫升×2次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，最後矽膠柱層析純化(洗脫劑：正己烷：乙酸乙酯=4：1)得到520.0毫克淡紅色油2-((S)-1-氯乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(收率：94.8%)。LC-MS: RT = 1.86 min, [M+H] += 309.23。
步驟E：合成 2-((S)-1-(4-(6-((3-氟吡啶-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯
Figure 02_image471
室溫下，將4-(6-((3-氟吡啶-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶(55.0毫克，0.19毫莫耳)、2-((S)-1-氯乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(58.5毫克，0.19毫莫耳)、碘化鉀(31.5毫克，0.19毫莫耳)和碳酸銫(123.1毫克，0.38毫莫耳)加入 N, N-二甲基甲醯胺(10.0毫升)中，最後加入 N, N-二異丙基乙胺(1.0毫升)，N 2保護下，45攝氏度反應3.0小時。
反應結束，加水淬滅，乙酸乙酯(50毫升×3次)萃取。合併有機相，飽和食鹽水(30毫升×3次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，最後矽膠柱層析純化(洗脫劑：二氯甲烷/甲醇=20/1)得到65.0毫克淡黃色固體2-((S)-1-(4-(6-((3-氟吡啶-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯(收率：58.6%)。LC-MS: RT = 1.73 min, [M+H] += 560.34。
步驟F：合成2-((S)-1-(4-(6-((3-氟吡啶-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸
Figure 02_image473
室溫下，向含有2-((S)-1-(4-(6-((3-氟吡啶-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯(65.0毫克，0.11毫莫耳)的四氫呋喃(3.0毫升)中滴加氫氧化鋰(20.0毫克，0.48毫莫耳)水溶液(1.0毫升)，最後加入(1.0毫升)的甲醇，45攝氏度下反應3.0小時。
反應結束，加水淬滅，用氯化銨水溶液(0.5莫耳/升)調pH至6，二氯甲烷(30毫升×3次)萃取，合併有機相，氯化銨水溶液(30毫升×2次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，得到的粗產品經過柱分離純化(洗脫劑：二氯甲烷/甲醇=15/1)，得32毫克淡黃色固體2-((S)-1-(4-(6-((3-氟吡啶-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸(收率：51.1%)。LC-MS: RT = 1.68 min, [M+H] += 546.31。
實施例5 2-((S)-1-(4-(6-((2,5-二氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image475
具體合成路線如下。
步驟A：合成 (2,5-二氟苯基)甲醇
Figure 02_image477
冰浴下，將2,5-二氟苯甲醛(500.0毫克，3.52毫莫耳)加入(30.0毫升)甲醇中，再分批次加入硼氫化鈉(200.6毫克，5.28毫莫耳)。N 2保護下，室溫攪拌1.0小時。
反應結束，加水淬滅，乙酸乙酯(30毫升×3次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(20毫升×2次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮得到402.0毫克無色油狀物(2,5-二氟苯基)甲醇(收率：80.4%)。
步驟B：合成 4-((R)-2-氯丙醯胺基)-3-((((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)氨基)苯甲酸甲酯
Figure 02_image479
室溫下，將(S)-4-氨基-3-(((氧雜環丁烷-2-基)甲基)氨基)苯甲酸甲酯(500.0毫克，2.25毫莫耳)、(R)-2-氯丙酸(243.0毫克，2.25毫莫耳)溶於二氯甲烷 (10.0毫升)中，依次加入2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(1.28克，3.38毫莫耳)、 N,N-二異丙基乙胺(3毫升)，N 2保護下，50攝氏度反應2.0小時。
反應結束，加水淬滅，乙酸乙酯(50毫升×3次)萃取。合併有機相，飽和食鹽水(30毫升×3次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，最後矽膠柱層析純化(洗脫劑：正己烷：乙酸乙酯=2：1)得到586.0毫克淡黃色固體4-((R)-2-氯丙醯胺基)-3-((((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)氨基)苯甲酸甲酯(收率：79.8%)。LC-MS: RT = 1.82 min, [M+H] += 327.17。
步驟C：合成 2-((R)-1-氯乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯
Figure 02_image481
室溫下，將4-((R)-2-氯丙醯胺基)-3-((((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)氨基)苯甲酸甲酯(586.0毫克，1.80毫莫耳)溶於乙酸 (10.0毫升)中，N 2保護下，60攝氏度反應12.0小時。
反應結束，加水淬滅，用碳酸氫鈉溶液(0.5莫耳/升)調pH至6，二氯甲烷(30毫升×3次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(30毫升×2次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，最後矽膠柱層析純化(洗脫劑：正己烷：乙酸乙酯=4：1)得到408.0毫克淡紅色油2-((R)-1-氯乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(收率：73.5%)。LC-MS: RT = 1.84 min, [M+H] += 309.23。
步驟D：合成 4-(6-((2,5-二氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 02_image483
冰浴下，將(2,5-二氟苯基)甲醇(50.0毫克，0.35毫莫耳)加入(4.0毫升) N,N-二甲基甲醯胺中，再分批次加入品質分數為60%的鈉氫 (28.0毫克，0.70毫莫耳) 。N 2保護下，室溫攪拌0.5小時後加入4-(6-氟吡啶-2-基)呱啶-1-甲酸叔丁酯(98.0毫克，0.35毫莫耳)， 室溫反應1.0小時。
反應結束，加水淬滅，乙酸乙酯(30毫升×3次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(20毫升×2次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=50/1)，得到88.0毫克白色固體4-(6-((2,5-二氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-甲酸叔丁酯(收率：62.2%)。LC-MS: RT = 2.33 min, [M+H-56] += 349.33。
步驟E：合成 2-((2,5-二氟苄基)氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶
Figure 02_image485
室溫下，將4-(6-((2,5-二氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-甲酸叔丁酯(88.0毫克，0.22毫莫耳)加入二氧六環的鹽酸溶液(1.00毫莫耳/毫升，3毫升)中， N 2保護下，室溫反應1小時。
反應結束，減壓濃縮。得到58.0毫克乳白色固體2-((2,5-二氟苄基)氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶(收率：87.4%)直接用於下步反應。LC-MS: RT = 1.68 min, [M+H] += 305.22。
步驟F：合成 2-((S)-1-(4-(6-((2,5-二氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯
Figure 02_image487
室溫下，將2-((2,5-二氟苄基)氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶(58.0毫克，0.19毫莫耳)、2-((R)-1-氯乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(58.5毫克，0.19毫莫耳)、碘化鉀(31.5毫克，0.19毫莫耳)和碳酸銫(123.1毫克，0.38毫莫耳)加入 N,N-二甲基甲醯胺(10.0毫升)中，最後加入 N,N-二異丙基乙胺(1.0毫升)，N 2保護下，45攝氏度反應3.0小時。
反應結束，加水淬滅，乙酸乙酯(50毫升×3次)萃取。合併有機相，飽和食鹽水(30毫升×3次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，最後矽膠柱層析純化(洗脫劑：二氯甲烷：甲醇=20：1)得到68.0毫克淡黃色固體化合物2-((S)-1-(4-(6-((2,5-二氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(收率：62.1%)。LC-MS: RT = 1.85 min, [M+H] += 577.39。
步驟G：合成 2-((S)-1-(4-(6-((2,5-二氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image489
室溫下，向含有化合物2-((S)-1-(4-(6-((2,5-二氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(68.0毫克，0.12毫莫耳)的四氫呋喃(3.0毫升)中滴加氫氧化鋰(20.0毫克，0.48毫莫耳)水溶液(1.0毫升)，最後加入(1.0毫升)的甲醇，45攝氏度下反應3.0小時。
反應結束，加水淬滅，用氯化銨水溶液(0.5莫耳/升)調pH至6，二氯甲烷(30毫升×3次)萃取，合併有機相，氯化銨水溶液(30毫升×2次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，得到的粗產品用製備型高效液相色譜純化。分離條件如下，色譜柱：Agilent 5 Prep-C18 100mm×30mm 5μM；流動相：水(含有0.05%的氨水)和乙腈；流速：20毫升/分鐘；梯度：由28%乙腈在8.00分鐘洗脫出來；檢測波長：254 nm。純化後，低溫凍乾得到24.0毫克白色固體化合物2-((S)-1-(4-(6-((2,5-二氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸(收率：35.8%)。LC-MS: RT = 1.79 min, [M+H]+ = 563.32。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.70 (brs, 1H), 8.30–8.29 (m, 1H), 7.83–7.79 (m, 1H), 7.69 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.65–7.60 (m, 1H), 7.38–7.34 (m, 1H), 7.31–7.19 (m, 2H), 6.85 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 6.69 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 5.36 (brs, 2H), 5.20–5.15 (m, 1H), 4.89–4.82 (m, 1H), 4.68 (dd, J= 15.1, 5.2 Hz, 1H), 4.50–4.42 (m, 2H), 4.19 (dt, J= 9.0, 5.7 Hz, 1H), 2.99–2.96 (m, 1H), 2.70–2.49 (m, 4H), 2.38–2.21 (m, 2H), 1.86–1.68 (m, 3H), 1.58–1.45 (m, 1H), 1.48 (d, J= 6.6 Hz, 3H)。
實施例6 2-((S)-1-(4-(6-((2,4-二氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image491
具體合成路線如下。
步驟A：合成 4-(6-((2,4-二氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 02_image493
冰浴下，將(2,4-二氟苯基)甲醇(50.0毫克，0.35毫莫耳)加入(4.0毫升) N,N-二甲基甲醯胺中，再分批次加入品質分數為60%的鈉氫 (28.0毫克，0.70毫莫耳)。N 2保護下，室溫攪拌0.5小時後加入4-(6-氟吡啶-2-基)呱啶-1-甲酸叔丁酯(98.0毫克，0.35毫莫耳)， 室溫反應1.0小時。
反應結束，加水淬滅，乙酸乙酯(30毫升×3次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(20毫升×2次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=50/1)，得到76.0毫克白色固體4-(6-((2,4-二氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-甲酸叔丁酯(收率：54.2%)。LC-MS: RT = 2.33 min, [M+H-56] += 349.33。
步驟B：合成 2-((2,4-二氟苄基)氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶
Figure 02_image495
室溫下，將4-(6-((2,4-二氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-甲酸叔丁酯(76.0毫克，0.19毫莫耳)加入二氧六環的鹽酸溶液(1.00毫莫耳/毫升，3毫升)中，N 2保護下，室溫反應1小時。
反應結束，減壓濃縮。得到43.0毫克乳白色固體2-((2,4-二氟苄基)氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶(收率：74.4%)直接用於下步反應。LC-MS: RT = 1.68 min, [M+H] += 305.22。
步驟C：合成 2-((S)-1-(4-(6-((2,4-二氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯
Figure 02_image497
室溫下，將2-((2,4-二氟苄基)氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶(43.0毫克，0.14毫莫耳)、2-((S)-1-氯乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(43.5毫克，0.14毫莫耳)、碘化鉀(23.2毫克，0.14毫莫耳)和碳酸銫(91.3毫克，0.28毫莫耳)加入N,N-二甲基甲醯胺(10.0毫升)中，最後加入 N,N-二異丙基乙胺(1.0毫升)，N 2保護下，45攝氏度反應3.0小時。
反應結束，加水淬滅，乙酸乙酯(50毫升×3次)萃取。合併有機相，飽和食鹽水(30毫升×3次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，最後矽膠柱層析純化(洗脫劑：二氯甲烷：甲醇=20：1)得到59.0毫克淡黃色固體2-((S)-1-(4-(6-((2,4-二氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(收率：73.2%)。LC-MS: RT = 1.85 min, [M+H] += 577.39。
步驟D：合成2-((S)-1-(4-(6-((2,4-二氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image499
室溫下，向含有2-((S)-1-(4-(6-((2,4-二氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(59.0毫克，0.10毫莫耳)的四氫呋喃(3.0毫升)中滴加氫氧化鋰(16.8毫克，0.40毫莫耳)水溶液(1.0毫升)，最後加入(1.0毫升)的甲醇，45攝氏度下反應3.0小時。
反應結束，加水淬滅，用氯化銨水溶液(0.5莫耳/升)調pH至6，二氯甲烷(30毫升×3次)萃取，合併有機相，氯化銨水溶液(30毫升×2次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，最後矽膠柱層析純化(洗脫劑：二氯甲烷：甲醇=10：1)得到17.3毫克淡黃色固體2-((S)-1-(4-(6-((2,4-二氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸 (收率：32.0%)。LC-MS: RT = 1.79 min, [M+H] += 563.32。1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8.29 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.81 (dd, J= 8.4, 1.6 Hz, 1H), 7.69 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.30–7.23 (m, 1H), 7.11–7.04 (m, 1H), 6.84 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 6.65 (d, J= 7.7 Hz, 1H), 6.15 (t, J= 6.7 Hz, 1H), 5.35 (s, 2H), 5.27 (d, J= 4.2 Hz, 1H), 5.04 (t, J= 5.2 Hz, 1H), 4.85 (dd, J= 15.5, 3.1 Hz, 1H), 4.69 (dd, J= 15.8, 5.8 Hz, 1H), 4.49–4.42 (m, 3H), 4.07 (d, J= 2.1 Hz, 3H), 3.80–3.77 (m, 1H), 2.11 (dd, J= 8.4, 6.8 Hz, 3H), 1.72 (dd, J= 16.0, 7.2 Hz, 3H), 1.48 (d, J= 6.7 Hz, 3H).
實施例7 2-((S)-1-(4-(6-((5-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5- b]吡啶-5-羧酸
Figure 02_image501
具體合成路線如下。
步驟A：合成 5-((S)-2-氯丙醯胺基)-6-((((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)氨基)吡啶甲酸甲酯
Figure 02_image503
將(S)-5-氨基-6-(((氧雜環丁烷-2-基)甲基)氨基)吡啶甲酸甲酯(0.8克,2.3毫莫耳)溶於四氫呋喃(30.0毫升)中，加三乙胺(1.0毫升,8.0毫莫耳)，零攝氏度下攪拌15分鐘後, 將(S)-2-氯丙醯氯(350.0毫克,2.76毫莫耳)的四氫呋喃溶液(10.0毫升)緩慢滴加到該混合液中，室溫攪拌1小時，LC-MS監測至反應完全。
向反應液加水(20.0毫升)，乙酸乙酯(40.0毫升×3次)萃取，合併有機相,飽和食鹽水(25.0毫升×3次)，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得殘餘物經矽膠柱層析純化得到600毫克黃色固體5-((S)-2-氯丙醯胺基)-6-((((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)氨基)吡啶甲酸甲酯(收率：62.2%)。LC-MS：RT = 1.73 min, [M+H] += 328.21。
步驟B：合成2-((S)-1-氯乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5- b]吡啶-5-羧酸甲酯
Figure 02_image505
將5-((S)-2-氯丙醯胺基)-6-((((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)氨基)吡啶甲酸甲酯(0.4克,1.23毫莫耳)溶於四氫呋喃(10.0毫升)中，加醋酸(1.0毫升)，60攝氏度下攪拌2小時，LC-MS監測至反應完全。
向反應液加水(20.0毫升)，乙酸乙酯(40.0毫升×3次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(25.0毫升×3次)，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得殘餘物經矽膠柱層析純化得到300毫克黃色固體2-((S)-1-氯乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5- b]吡啶-5-羧酸甲酯(收率：78.3%)。LC-MS：RT = 1.79 min, [M+H] += 310.11。
步驟C：合成 2-((S)-1-(4-(6-((5-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5- b]吡啶-5-羧酸甲酯
Figure 02_image507
將2-((5-氯-2-氟苄基)氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶(100.0毫克,0.28毫莫耳)溶於乙腈(10.0毫升)和三乙胺(2.0毫升)中，加碳酸鉀(77.0毫克,0.56毫莫耳)和碘化鉀(93.0毫克,0.56毫莫耳)， 2-((S)-1-氯乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5- b]吡啶-5-羧酸甲酯(82.0毫克,0.28毫莫耳)加入反應液中，50攝氏度下攪拌2小時後，TLC監測至反應完全。
向反應液加水(30.0毫升)，乙酸乙酯(40.0毫升×3次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(25.0毫升×3次)，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到120毫克黃色固體2-((S)-1-(4-(6-((5-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5- b]吡啶-5-羧酸甲酯(收率：72.3%)。LC-MS：RT = 1.81 min, [M+H] += 594.21。
步驟D：合成2-((S)-1-(4-(6-((5-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5- b]吡啶-5-羧酸
Figure 02_image509
將化合物2-((S)-1-(4-(6-((5-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5- b]吡啶-5-羧酸甲酯(120.0毫克,0.73毫莫耳)溶於四氫呋喃(30.0毫升)和甲醇(10.0毫升)中，然後將氫氧化鋰(84.0毫克,2.0毫莫耳)的水溶液(10.0毫升)加入反應液中，室溫攪拌2小時後。
LC-MS監測至反應完全，二氯甲烷/甲醇(9/1,20.0毫升×3次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(15.0毫升×3次)，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮。所得殘餘物經矽膠柱層析純化得到46毫克白色固體2-((S)-1-(4-(6-((5-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5- b]吡啶-5-羧酸 (收率：63.8%)。LC-MS：RT = 1.77 min, [M+H] += 580.31。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.17 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.99 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.61 (dd, J= 10.8, 4.9 Hz, 2H), 7.45–7.38 (m, 1H), 7.27 (t, J= 9.3 Hz, 1H), 6.84 (d, J= 7.3 Hz, 1H), 6.67 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 5.36 (s, 2H), 5.31 (s, 1H), 4.85 (dd, J= 15.0, 4.3 Hz, 1H), 4.79–4.68 (m, 1H), 4.61 (d, J= 6.6 Hz, 1H), 4.41 (dd, J= 13.7, 7.7 Hz, 1H), 4.13–4.02 (m, 1H), 3.00 (d, J= 11.4 Hz, 1H), 2.60 (dd, J= 22.6, 10.7 Hz, 4H), 2.36 (s, 1H), 2.30–2.21 (m, 1H), 1.80 (d, J= 23.1 Hz, 2H), 1.73–1.63 (m, 1H), 1.56 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 1.48 (d, J= 6.6 Hz, 3H)。
實施例8 2-((S)-1-(4-(6-((1-(2,2-二氟乙基)-1 H-吲唑-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image511
具體合成路線如下。
步驟A：合成 2-((S)-1-(4-(6-((1-(2,2-二氟乙基)-1 H-吲唑-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯
Figure 02_image513
室溫下，將1-(2,2-二氟乙基)-6-(((6-(呱啶-4-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)-1H-吲唑(150毫克，0.40毫莫耳)，DIEA(1毫升)，碘化鉀(133毫克，0.80毫莫耳)和碳酸鉀(110克，0.80毫莫耳)溶於N,N-二甲基甲醯胺(10毫升)中，再加入2-((S)-1-氯乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(124毫克, 0.40毫莫耳)，升溫至50攝氏度反應。
反應結束後，加飽和氯化鈉淬滅，乙酸乙酯(20毫升×2次)萃取，合併並乾燥有機相，濃縮所得粗品用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷= 1/8)得到69毫克白色固體2-((S)-1-(4-(6-((1-（2,2-二氟乙基)-1 H-吲唑-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(收率：27%)。LC-MS: RT = 1.79 min, [M+H] += 645.42。
步驟B：合成 2-((S)-1-(4-(6-((1-(2,2-二氟乙基)-1 H-吲唑-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image515
室溫下，將2-((S)-1-(4-(6-((1-(2,2-二氟乙基)-1 H-吲唑-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(69 毫克 0.11 毫莫耳)溶於混合溶劑(5毫升，四氫呋喃/甲醇/水 = 2.5/2.5/1)中，加入氫氧化鋰(16毫克，0.44毫莫耳)，升溫至40攝氏度反應。
反應結束後，加飽和氯化銨淬滅，依次用乙酸乙酯(10毫升×2次)，混合溶劑(10毫升×2次，二氯甲烷/甲醇 = 30/1)萃取，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾後濃縮，濃縮所得粗品用矽膠柱層析純化(洗脫劑：二氯甲烷/甲醇=20/1)得到19.73毫克白色固體2-((S)-1-(4-(6-((1-(2,2-二氟乙基)-1 H-吲唑-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸(收率：29%)。LC-MS: RT = 1.75 min, [M+H] += 631.40。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ12.73 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.77 (dd, J= 18.7, 7.8 Hz, 3H), 7.70-7.56 (m, 2H), 7.26 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 6.82 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 6.67 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 6.52 (s, 0.31H), 6.39 (t, J= 3.4 Hz, 0.47H), 6.25 (s, 0.29H), 5.45 (s, 2H), 5.16 (s, 1H), 4.90 (d, J= 12.1 Hz, 1H), 4.66 (d, J= 10.9 Hz, 1H), 4.52-4.37 (m, 2H), 4.22-4.11 (m, 1H), 2.96 (s, 1H), 2.62 (s, 2H), 2.39-2.11 (m, 3H), 1.77 (dd, J= 33.1, 20.9 Hz, 4H), 1.51 (dd, J= 35.0, 7.7 Hz, 4H)。
實施例9 1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-2-((S)-1-(4-(6-((1-(2,2,2-三氟乙基)-1 H-吲唑-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image517
具體合成路線如下。
步驟A：合成 1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-2-((S)-1-(4-(6-((1-(2,2,2-三氟乙基)-1 H-吲唑-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯
Figure 02_image519
將6-(((6-(呱啶-4-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1 H-吲唑(75毫克,0.176毫莫耳)，碳酸鉀(48.6毫克, 0.352毫莫耳)和碘化鉀(58毫克, 0.352毫莫耳)溶於5毫升無水乙腈中，加入甲基2-(S)-1-氯乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯（54毫克,0.176毫莫耳)於60攝氏度下反應2小時。
反應結束，加水稀釋，乙酸乙酯（30毫升×2次）萃取，合併有機相，飽和食鹽水（20毫升×2次）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮所得96毫克淡黃色固體1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-2-((S)-1-(4-(6-((1-(2,2,2-三氟乙基)-1 H-吲唑-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯。LC-MS: RT =1.86 min, [M+H] += 663.38。
步驟B：合成 1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-2-((S)-1-(4-(6-((1-(2,2,2-三氟乙基)-1 H-吲唑-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image521
將1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-2-((S)-1-(4-(6-((1-(2,2,2-三氟乙基)-1 H-吲唑-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(96毫克,0.145毫莫耳)溶解於4毫升四氫呋喃中，加入一水合氫氧化鋰(31毫克,0.723毫莫耳)，1毫升水和1毫升乙醇於室溫下反應50分鐘。
反應結束，反應液加入20毫升飽和氯化銨中和，乙酸乙酯（30毫升×2次）萃取，合併有機相，飽和食鹽水（20毫升×2次）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮所得粗品經柱層析分離製備得42毫克淡黃色固體1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-2-((S)-1-(4-(6-((1-(2,2,2-三氟乙基)-1 H-吲唑-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸。 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.65 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.19 (d, J= 0.9 Hz, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.77–7.83 (m, 2H), 7.69 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.59–7.65 (m, 1H), 7.31 (dd, J= 8.3, 1.2 Hz, 1H), 6.84 (d, J= 7.3 Hz, 1H), 6.69 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 5.48 (s, 2H), 5.42 (q, J= 9.2 Hz, 2H), 5.12–5.18 (m,1H), 4.80–4.84 (m, 1H), 4.66–4.70 (m, 1H), 4.40–4.49 (m, 2H), 4.16–4.20 (m, 1H), 2.95–3.02 (m, 1H), 2.54–2.69 (m, 4H), 2.22–2.35 (m, 2H), 1.85–1.90(m, 1H), 1.72–1.78 (m, 2H), 1.53–1.60 (m, 1H), 1.48 (d, J= 6.5 Hz, 3H). LC-MS: RT =1.77 min, [M+H] += 649.37。
實施例10 2-((S)-1-(4-(6-(異喹啉-6-基甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image523
具體合成路線如下。
步驟A：合成 2-((S)-1-(4-(6-(異喹啉-6-基甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯
Figure 02_image525
將6-(((6-(呱啶-4-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)異喹啉(100毫克,0.281毫莫耳)，碳酸鉀(73.1毫克, 0.563毫莫耳)和碘化鉀(92毫克, 0.563毫莫耳)溶於5毫升無水乙腈中，加入甲基2-(S)-1-氯乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯（86毫克,0.281毫莫耳)於60攝氏度下反應2小時。反應結束，加水稀釋，乙酸乙酯（30毫升×2次）萃取，合併有機相，飽和食鹽水（20毫升×2次）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮所得粗品經柱層析分離得78毫克淡黃色固體2-((S)-1-(4-(6-(異喹啉-6-基甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯。LC-MS: RT =1.71 min, [M+H] += 592.28。
步驟B：合成 2-((S)-1-(4-(6-(異喹啉-6-基甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image527
將2-((S)-1-(4-(6-(異喹啉-6-基甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(78毫克,0.131毫莫耳)溶解於4毫升四氫呋喃中，加入一水合氫氧化鋰(28毫克,0.655毫莫耳)，1毫升水和1毫升乙醇於室溫下反應50分鐘。
反應結束，加20毫升飽和氯化銨中和，乙酸乙酯（30毫升×2次）萃取，合併有機相，飽和食鹽水（20毫升×2次）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮所得粗品經柱層析分離製備得38毫克淡黃色固體2-((S)-1-(4-(6-(異喹啉-6-基甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.20 (s, 1H), 9.27 (s, 1H), 8.40 (d, J= 5.5 Hz, 1H), 8.28–8.33 (m, 1H), 8.10 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.89 –8.04 (m, 1H), 7.80–7.85 (m, 1H), 7.68–7.78 (m, 3H), 7.60–7.67 (m, 1H), 6.84 (d, J= 7.1 Hz, 1H), 6.73 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 5.56 (s, 2H), 5.15–5.20 (m, 1H), 4.81–4.86 (m, 1H), 4.64–4.74 (m, 1H), 4.38–4.51 (m, 2H), 4.15–4.20 (m, 1H), 2.94–3.00 (m, 1H), 2.57–2.66 (m, 2H), 2.14–2.35 (m, 4H), 1.77–1.85 (m, 2H), 1.66–1.75 (m, 2H), 1.45–1.52 (m, 3H). LC-MS: RT =1.60 min, [M-H] -=578.39。
實施例11 2-((S)-1-(4-(6-((1-(2,2-二氟乙基)-1 H-吲唑-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5- b]吡啶-5-羧酸
Figure 02_image529
具體合成路線如下。
步驟A：合成 2-((S)-1-(4-(6-((1-(2,2-二氟乙基)-1 H-吲唑-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5- b]吡啶-5-羧酸甲酯
Figure 02_image531
將1-(2,2-二氟乙基)-6-(((6-(呱啶-4-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)-1 H-吲唑(150.0毫克,0.37毫莫耳)溶於乙腈(10.0毫升)和三乙胺(2.0毫升)中,加碳酸鉀(102.0毫克,0.74毫莫耳)和碘化鉀(123.0毫克,0.74毫莫耳), 2-((S)-1-氯乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5- b]吡啶-5-羧酸甲酯(114.0毫克,0.37毫莫耳)加入反應液中，50攝氏度下攪拌2小時後。
TLC監測至反應完全，加水(30.0毫升)稀釋，乙酸乙酯(40.0毫升×3次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(25.0毫升×3次)，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到180毫克黃色固體2-((S)-1-(4-(6-((1-(2,2-二氟乙基)-1 H-吲唑-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5- b]吡啶-5-羧酸甲酯。LC-MS：RT = 1.78 min, [M+H] += 646.34。
步驟B：合成 2-((S)-1-(4-(6-((1-(2,2-二氟乙基)-1 H-吲唑-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5- b]吡啶-5-羧酸
Figure 02_image533
將2-((S)-1-(4-(6-((1-(2,2-二氟乙基)-1 H-吲唑-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5- b]吡啶-5-羧酸甲酯(180.0毫克,0.28毫莫耳)溶於四氫呋喃(6.0毫升)和甲醇(2.0毫升)中，然後將氫氧化鋰(21.0毫克,0.5毫莫耳)的水溶液(2.0毫升)加入反應液中，室溫攪拌1小時後。
LC-MS監測至反應完全，二氯甲烷/甲醇(9/1,20.0毫升×3次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(15.0毫升×3次)，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮。所得殘餘物經矽膠柱層析純化得到64毫克白色固體2-((S)-1-(4-(6-((1-(2,2-二氟乙基)-1 H-吲唑-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5- b]吡啶-5-羧酸(收率：36.2%)。LC-MS：RT = 1.73 min, [M+H] +=632.35。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.14 (s, 1H), 8.06 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 7.95 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.75 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 7.61 (t, J= 7.8 Hz, 1H), 7.26 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 6.82 (d, J= 7.3 Hz, 1H), 6.67 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 6.54 (t, J= 3.8 Hz, 0.27H), 6.40 (m, 0.49H), 6.27 (m, 0.28H), 5.45 (d, J= 3.3 Hz, 2H), 5.20 (s, 1H), 4.89 (td, J= 15.4, 3.5 Hz, 2H), 4.76 (s, 2H), 4.65–4.57 (m, 1H), 4.34 (dd, J= 13.5, 7.8 Hz, 1H), 4.06–4.01 (m, 1H), 4.00–3.93 (m, 1H), 2.98 (d, J= 10.5 Hz, 1H), 2.61 (d, J= 11.0 Hz, 2H), 2.23 (t, J= 10.8 Hz, 1H), 2.10 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 1.99 (s, 1H), 1.92–1.67 (m, 3H), 1.62–1.50 (m, 1H), 1.47 (d, J= 6.7 Hz, 3H), 1.17 (t, J= 7.1 Hz, 1H), 1.17 (t, J= 7.1 Hz, 1H).
實施例12 2-((S)-1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5- b]吡啶-5-羧酸
Figure 02_image535
具體合成路線如下。
步驟A：合成 2-((S)-1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5- b]吡啶-5-羧酸甲酯
Figure 02_image537
將2-((4-氯-2-氟苄基)氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶(100毫克,0.28毫莫耳)溶於乙腈(10.0毫升)和三乙胺(2.0毫升)中,加碳酸鉀(77.0毫克,0.56毫莫耳)和碘化鉀(93.0毫克,0.56毫莫耳), 2-((S)-1-氯乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5- b]吡啶-5-羧酸甲酯(82.0毫克,0.28毫莫耳)加入反應液中,50攝氏度下攪拌2小時後。
TLC監測至反應完全，加水(30.0毫升)稀釋,乙酸乙酯(40.0毫升×3次)萃取,合併有機相,飽和食鹽水(25.0毫升×3次),無水硫酸鈉乾燥,減壓濃縮,得到120毫克黃色固體2-((S)-1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5- b]吡啶-5-羧酸甲酯(收率：72.3%)。LC-MS：RT = 1.83 min, [M+H] += 594.21。
步驟B：合成 2-((S)-1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5- b]吡啶-5-羧酸
Figure 02_image539
將2-((S)-1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5- b]吡啶-5-羧酸甲酯(120毫克,0.73毫莫耳)溶於四氫呋喃(30.0毫升)和甲醇(10.0毫升)中,然後將氫氧化鋰(84毫克,2.0毫莫耳)的水溶液(10.0毫升)加入反應液中,室溫攪拌5小時後。
LC-MS監測至反應完全，二氯甲烷/甲醇(9/1,20.0毫升×3次)萃取,合併有機相,飽和食鹽水(15.0毫升×3次),無水硫酸鈉乾燥,減壓濃縮。所得殘餘物經矽膠柱層析純化得到16毫克白色固體2-((S)-1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5- b]吡啶-5-羧酸(收率：23.8%)。LC-MS：RT = 1.81 min, [M+H] += 580.31。
實施例13 2-((S)-1-(4-(6-((4-溴-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image541
具體合成路線如下。
步驟A：合成 (2,5-二氟苯基)甲醇
Figure 02_image543
冰浴下，將2,5-二氟苯甲醛(500.0毫克，2.47毫莫耳)加入(25.0毫升)甲醇中，再分批次加入硼氫化鈉(140.6毫克，3.70毫莫耳)。N 2保護下，室溫攪拌1.0小時。
反應結束，加水淬滅，乙酸乙酯(30毫升×3次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(20毫升×2次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮得到380.3毫克黃色油狀物(2,5-二氟苯基)甲醇(收率：76.0%)。
步驟B：合成 4-(6-((4-溴-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯
Figure 02_image545
冰浴下，將(4-溴-2-氟苯基)甲醇(60.0毫克，0.29毫莫耳)加入(3.0毫升) N,N-二甲基甲醯胺中，再分批次加入品質分數為60%的鈉氫 (23.2毫克，0.58毫莫耳)。N 2保護下，室溫攪拌0.5小時後加入4-(6-氟吡啶-2-基)呱啶-1-甲酸叔丁酯(81.2毫克，0.29毫莫耳)， 室溫反應1.0小時。
反應結束，加水淬滅，乙酸乙酯(30毫升×3次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(20毫升×2次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=50/1)，得到82.0毫克白色固體4-(6-((4-溴-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯(收率：61.0%)。LC-MS: RT = 2.45 min, [M+H-56] += 409.17。
步驟C：合成 2-((4-溴-2-氟苄基)氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶
Figure 02_image547
室溫下，將4-(6-((4-溴-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯(82.0毫克，0.18毫莫耳)加入二氧六環的鹽酸溶液(1.00毫莫耳/毫升，3毫升)中，N 2保護下，室溫反應1小時。
反應結束，減壓濃縮。得到50.2毫克乳白色固體2-((4-溴-2-氟苄基)氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶(收率：76.4%)直接用於下步反應。LC-MS: RT = 1.77 min, [M+H] += 365.16。
步驟D：合成2-((S)-1-(4-(6-((4-溴-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯
Figure 02_image549
室溫下，將2-((4-溴-2-氟苄基)氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶(50.2毫克，0.14毫莫耳)、2-((S)-1-氯乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(43.5毫克，0.14毫莫耳)、碘化鉀(23.2毫克，0.14毫莫耳)和碳酸銫(91.3毫克，0.28毫莫耳)加入 N,N-二甲基甲醯胺(10.0毫升)中，最後加入N,N-二異丙基乙胺(1.0毫升)，N 2保護下，45攝氏度反應3.0小時。
反應結束，加水淬滅，乙酸乙酯(50毫升×3次)萃取。合併有機相，飽和食鹽水(30毫升×3次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，最後矽膠柱層析純化(洗脫劑：二氯甲烷：甲醇 = 20：1)得到66.3毫克淡黃色固體2-((S)-1-(4-(6-((4-溴-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(收率：74.4%)。LC-MS: RT = 1.88 min, [M+H] += 637.26。
步驟E：合成 2-((S)-1-(4-(6-((4-溴-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image551
室溫下，向含有2-((S)-1-(4-(6-((4-溴-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(66.3毫克，0.10毫莫耳)的四氫呋喃(3.0毫升)中滴加氫氧化鋰(16.8毫克，0.40毫莫耳)水溶液(1.0毫升)，最後加入(1.0毫升)的甲醇，45攝氏度下反應3.0小時。
反應結束，加水淬滅，用氯化銨水溶液(0.5莫耳/升)調pH至6，二氯甲烷(30毫升×3次)萃取，合併有機相，氯化銨水溶液(30毫升×2次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，得到的粗產品用製備型高效液相色譜純化。分離條件如下，色譜柱：Agilent 5 Prep-C18 100mm×30mm 5μM；流動相：水(含有0.05%的氨水)和乙腈；流速：20毫升/分鐘；梯度：由25%乙腈在7.50分鐘洗脫出來；檢測波長：254 nm。純化後，低溫凍乾得到19.3毫克白色固體2-((S)-1-(4-(6-((4-溴-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸(收率：30.0%)。LC-MS: RT = 1.84 min, [M+H] += 623.28。
實施例14  2-((S)-1-(4-(6-((2,5-二氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image553
具體合成路線如下。
步驟A：合成 (2,5-二氟苯基)甲醇
Figure 02_image555
室溫下，將2,5-二氟苯甲醛(300毫克，2.11毫莫耳)溶於甲醇(15毫升)中，零攝氏度下，加入硼氫化鈉(156毫克，4.23毫莫耳)，在室溫下攪拌反應。反應結束後，加飽和氯化鈉淬滅，二氯甲烷(30毫升)萃取，水洗兩次，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮有機相，所得粗品用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/3)得到240毫克無色油狀液體(2,5-二氟苯基)甲醇(收率：80%)。LC-MS: RT = 1.78 min。
步驟B：合成 4-(6-((2,5-二氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯
Figure 02_image557
將(2,5-二氟苯基)甲醇(240毫克，1.67毫莫耳)溶於 N,N-二甲基甲醯胺(10毫升)中，降至零攝氏度下，加入鈉氫(80毫克，3.34毫莫耳)，在室溫下攪拌0.5小時，加入4-(6-氟吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯(476毫克，1.67毫莫耳)，室溫下反應。反應結束後，加飽和氯化鈉淬滅，乙酸乙酯(30毫升)萃取，水洗兩次，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮有機相，所得粗品用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/2)得到280毫克無色油狀液體4-(6-((2,5-二氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯(收率：48%)。LC-MS: RT = 2.32 min, [M-55] += 349.25。
步驟C：合成 2-((2,5-二氟苄基)氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶
Figure 02_image559
將4-(6-((2,5-二氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯(280毫克，0.69毫莫耳)溶於含鹽酸的1,4-二氧六環溶液(5毫升)中，室溫攪拌。反應完全後，減壓濃縮得到粗品300毫克白色固體2-((2,5-二氟苄基)氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶。LC-MS: RT = 1.68 min, [M+H] += 305.25。
步驟C：合成 2-((S)-1-(4-(6-((2,5-二氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸異丙酯
Figure 02_image561
室溫下，將2-((2,5-二氟苄基)氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶(60毫克，0.20毫莫耳)，DIEA(0.5毫升)，碘化鉀(65毫克，0.9毫莫耳)和碳酸鉀(54克，0.39毫莫耳)溶於 N,N-二甲基甲醯胺(5毫升)中，加入2-((S)-1-氯乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5- b]吡啶-5-羧酸異丙酯(67毫克，0.20毫莫耳)，升至50攝氏度反應。
反應結束後，加飽和氯化鈉淬滅，乙酸乙酯(20毫升×2次)萃取，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮所得粗品用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/8)，得到65毫克白色固體2-((S)-1-(4-(6-((2,5-二氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸異丙酯(收率：32%)。LC-MS: RT = 1.93 min, [M+H] += 606.38。
步驟D：合成 2-((S)-1-(4-(6-((2,5-二氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image563
室溫下，將2-((S)-1-(4-(6-((2,5-二氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸異丙酯(65毫克，0.11毫莫耳)溶於混合溶劑(6毫升，四氫呋喃/甲醇/水=2.5/2.5/1)中，加入氫氧化鋰(16毫克，0.44毫莫耳)，室溫反應。
反應結束後，加飽和氯化銨淬滅，依次用乙酸乙酯(10毫升×2次)，混合溶劑(10毫升×1次，二氯甲烷/甲醇=30/1)萃取，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮有機相，所得粗品用矽膠柱層析純化(洗脫劑：二氯甲烷/甲醇=10/1)，得到30.75毫克白色固體2-((S)-1-(4-(6-((2,5-二氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸(收率：21%)。LC-MS: RT = 1.77 min, [M+H] += 564.31。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ8.15 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.98 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.64–7.58 (m, 1H), 7.39-7.14 (m, 4H), 6.83 (d, J= 7.3 Hz, 1H), 6.67 (dd, J= 8.1, 4.4 Hz, 1H), 5.32 (dd, J= 19.5, 6.1 Hz, 3H), 4.84 (dd, J= 15.0, 4.2 Hz, 1H), 4.72 (dd, J= 15.1, 3.6 Hz, 1H), 4.60 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 4.39 (dd, J= 13.6, 7.7 Hz, 1H), 4.07 (dd, J= 15.0, 6.0 Hz, 1H), 2.98 (d, J= 11.0 Hz, 1H), 2.57 (dd, J= 11.7, 8.4 Hz, 3H), 2.26 (dd, J= 22.2, 11.6 Hz, 2H), 1.84–1.63 (m, 4H), 1.54 (dd, J= 12.0, 3.7 Hz, 1H), 1.46 (t, J= 6.5 Hz, 3H)。
實施例15 2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸
Figure 02_image565
具體合成路線如下。
步驟A：合成 4-(6-(((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基呱啶-1-羧酸叔丁酯
Figure 02_image567
零攝氏度下，向含3-氟-4-(羥甲基)苄腈(648毫克，4.29毫莫耳)的四氫呋喃(5.0毫升)中，加入氫化鈉(357毫克，60%分散於礦物油,8.94毫莫耳)，攪拌20分鐘後，加入4-(6-氟吡啶-2-基)呱啶-1-甲酸叔丁酯(1.0克，3.57毫莫耳)，室溫反應4小時。
反應結束，加水淬滅，乙酸乙酯(50毫升×3次)萃取，飽和食鹽水(50毫升)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，濾液減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/10)。得到850毫克白色固體4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯(收率：57.9%)。LC-MS: RT = 2.28 min, [M-H] -= 410.32。
步驟B：合成 3-氟-4-(((6-(呱啶-4-基)吡啶基-2-基)氧基)甲基)苄腈
Figure 02_image569
零攝氏度下，向含4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯(850毫克，2.07毫莫耳)的甲醇(4毫升)中，加入含鹽酸的1,4-二氧六環溶液(2毫升，4莫耳每升)，室溫下反應40分鐘。
反應結束，反應液直接濃縮得720毫克白色固體3-氟-4-(((6-(呱啶-4-基)吡啶基-2-基)氧基)甲基)苄腈，直接用於下一步。LC-MS: RT = 1.65 min, [M+H] += 312.26。
步驟C：合成 2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸異丙酯
Figure 02_image571
室溫下，向含3-氟-4-(((6-(呱啶-4-基)吡啶基-2-基)氧基)甲基)苄腈(120毫克，0.35毫莫耳)的N,N-二甲基甲醯胺(4.0毫升)中，加入2-((S)-1-氯乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸異丙酯(98毫克，0.29毫莫耳)、碘化鉀(96毫克，0.58毫莫耳)和碳酸鉀(80毫克，0.58毫莫耳)，60攝氏度反應4小時。
反應結束，加水淬滅，乙酸乙酯(50毫升×3次)萃取，飽和食鹽水(50毫升)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/5)。得到60毫克黃色固體化合物2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸異丙酯(收率：33.7%)。LC-MS: RT = 1.84 min, [M+H] += 613.38。
步驟D：合成 2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸
Figure 02_image573
零攝氏度下，向含2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸異丙酯 (60毫克，0.10毫莫耳)的四氫呋喃(3毫升)和甲醇(1毫升)中，滴加氫氧化鋰(17毫克，0.40毫莫耳)水溶液(1毫升)，室溫反應30分鐘。
反應結束，加水淬滅，乙酸乙酯(50毫升×3次)萃取，飽和食鹽水(50毫升)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：甲醇/二氯甲烷=1/10)。得到43毫克白色固體2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸(收率：75.3%)。LCMS: RT = 1.75 min, [M+H] += 571.36。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.22–8.08(m,1H), 7.99 (dd, J= 8.2, 5.2 Hz, 1H), 7.86 (d, J= 10.3 Hz, 1H), 7.68 (d, J= 3.9 Hz, 2H), 7.66–7.60 (m, 1H), 6.85 (t, J= 7.5 Hz, 1H), 6.70 (dt, J= 13.3, 6.6 Hz, 1H), 5.45 (s, 2H), 5.36–5.02 (m, 3H), 4.86–4.46 (m, 4H), 4.48–4.36 (m, 1H), 4.16–4.08 (m, 1H), 4.07–3.98 (m, 1H), 3.13–2.91 (m, 2H), 2.67–2.54 (m, 2H), 2.31–2.14 (m, 2H), 2.02–1.90 (m, 1H), 1.23 (d, J= 3.7 Hz, 3H)。
實施例16 1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-2-((S)-1-(4-(6-(喹啉-8-基甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image575
具體合成路線如下。
步驟A：合成 1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-2-((S)-1-(4-(6-(喹啉-8-基甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯
Figure 02_image577
將8-(((6-(呱啶-4-基)吡啶基-2-基)氧基)甲基)喹啉(60毫克，0.169毫莫耳)，碳酸鉀(47.0毫克，0.338毫莫耳)和碘化鉀(40.5毫克，0.253毫莫耳)溶於5毫升無水乙腈中，加入2-((S)-1-氯乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(52.1毫克，0.169毫莫耳)，於60攝氏度下反應2小時。反應結束，加水稀釋，乙酸乙酯(30毫升×2次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(20毫升×2次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮所得粗品經柱層析分離得76毫克淡黃色固體1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-2-((S)-1-(4-(6-(喹啉-8-基甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯。LC-MS: RT =1.82 min, [M+H] += 592.30。
步驟B：合成 1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-2-((S)-1-(4-(6-(喹啉-8-基甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image579
將1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-2-((S)-1-(4-(6-(喹啉-8-基甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(76毫克，0.128毫莫耳)溶解於4毫升四氫呋喃中，加入一水合氫氧化鋰(27毫克，0.643毫莫耳)，1毫升水和1毫升乙醇，於室溫下反應50分鐘。反應結束，加20毫升飽和氯化銨中和，乙酸乙酯(30毫升×2次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(20毫升×2次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮所得粗品經柱層析分離製備得24毫克淡黃色固體1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-2-((S)-1-(4-(6-(喹啉-8-基甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸。LC-MS: RT =1.75 min, [M-H] -=578.37。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.71 (s, 1H), 8.96 (dd, J= 4.2, 1.8 Hz, 1H), 8.41 (dd, J= 8.3, 1.7 Hz, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.93– 7.96 (m, 1H), 7.79–7.86(m, 2H), 7.56–7.71 (m, 4H), 6.84 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 6.73 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 6.00 (s, 2H), 5.11–5.16 (m, 1H), 4.75–4.81 (m, 1H), 4.56–4.64 (m, 1H), 4.36–4.46 (m, 2H), 4.10–4.17 (m, 1H), 2.90–2.98 (m, 1H), 2.54–2.65 (m, 4H), 2.18–2.33 (m, 2H), 1.67–1.87 (m, 4H), 1.43–1.48 (m, 3H)。
實施例17 3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-2-((S)-1-(4-(6-((1-(2,2,2-三氟乙基)-1 H-吲唑-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸
Figure 02_image581
具體合成路線如下。
步驟A：合成 3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-2-((S)-1-(4-(6-((1-(2,2,2-三氟乙基)-1 H-吲唑-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸異丙酯
Figure 02_image583
將6-(((6-(呱啶-4-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-1 H-吲唑(78毫克，0.183毫莫耳)，碳酸鉀(50.5毫克，0.366毫莫耳)和碘化鉀(43.8毫克，0.274毫莫耳)溶於5毫升無水乙腈中，加入2-((S)-1-氯乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸異丙酯(61.6毫克,0.183毫莫耳)，於60攝氏度下反應2小時。反應結束，加水稀釋，乙酸乙酯(30毫升×2次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(20毫升×2次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮所得粗品經柱層析分離得92毫克淡黃色固體3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-2-((S)-1-(4-(6-((1-(2,2,2-三氟乙基)-1 H-吲唑-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸異丙酯。LC-MS: RT =1.81 min, [M+H] += 692.27。
步驟B：合成 3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-2-((S)-1-(4-(6-((1-(2,2,2-三氟乙基)-1 H-吲唑-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸
Figure 02_image585
將3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-2-((S)-1-(4-(6-((1-(2,2,2-三氟乙基)-1 H-吲唑-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸異丙酯 (92毫克，0.133毫莫耳)溶解於4毫升四氫呋喃中，加入一水合氫氧化鋰(28毫克，0.664毫莫耳)，1毫升水和1毫升乙醇於室溫下反應50分鐘。反應結束，加20毫升飽和氯化銨中和，乙酸乙酯(30毫升×2次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(20毫升×2次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮所得粗品經柱層析分離製備得22毫克淡黃色固體3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-2-((S)-1-(4-(6-((1-(2,2,2-三氟乙基)-1 H-吲唑-6-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸。LC-MS：RT =1.75 min, [M+H] +=650.39。 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8.19 (s, 1H), 8.15 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.99 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 7.88 (s, 1H), 7.78 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.62 (t, J= 7.8 Hz, 1H), 7.31 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 6.84 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 6.69 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 5.48 (d, J= 1.7 Hz, 2H), 5.42 (dd, J= 18.6, 9.4 Hz, 2H), 5.30–5.26(m, 1H), 4.84–4.71 (m, 2H), 4.41–4.37 (m, 1H), 4.08–4.03 (m, 2H), 3.03–2.99 (m, 1H), 2.68–2.52 (m, 4H), 2.22–2.30 (m, 2H), 1.70–1.90 (m, 4H), 1.49 (d, J= 6.7 Hz, 3H)。
實施例18 2-((S)-1-(4-(6-((7-氟喹啉-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-3-((((S-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸
Figure 02_image587
具體合成路線如下。
步驟A：合成 7-氟-4-甲基喹啉
Figure 02_image589
將4-溴-7-氟喹啉(1.00克，4.42毫莫耳)溶於1,4-二氧六環(15.0毫升)中，加入三甲基環三硼氧烷(1.3毫升，4.42毫莫耳)，[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(323.4毫克，0.44毫莫耳)，碳酸鉀水溶液(3.3毫升，6.63毫莫耳)。氮氣保護下，100攝氏度攪拌反應4小時。過濾除去固體，旋乾濾液，柱層析純化(乙酸乙酯/正己烷=1/5)，得530.0毫克無色液體7-氟-4-甲基喹啉(收率：74.3%)。LC-MS：RT = 0.84 min, [M+H] += 162.14。
步驟B：合成 4-(溴甲基)-7-氟喹啉
Figure 02_image591
將7-氟-4-甲基喹啉(530.0毫克，3.29毫莫耳)溶於四氯化碳(10.0毫升)中，加入 N-溴代琥珀醯亞胺(703.0毫克，3.95毫莫耳)和偶氮二異丁腈(54.2毫克，0.33毫莫耳)。升溫至77攝氏度，攪拌反應2小時。過濾除去固體，旋乾濾液，得780.0毫克米黃色固體4-(溴甲基)-7-氟喹啉(收率：98.8%)。LC-MS：RT = 1.88 min, [M+H] += 240.08。
步驟C：合成 (7-氟喹啉-4-基)乙酸甲酯
Figure 02_image593
將4-(溴甲基)-7-氟喹啉(775.0毫克，3.23毫莫耳)溶於 N, N-二甲基甲醯胺(6.0毫升)中，加入乙酸鉀(634.0毫克，6.46毫莫耳)。升溫至50攝氏度，攪拌1小時。加入乙酸乙酯稀釋(50毫升)，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，旋乾溶劑，柱層析分離(乙酸乙酯：正己烷=1：2)，得400.0毫克米黃色固體(7-氟喹啉-4-基)乙酸甲酯(收率：56.5%)。LC-MS：RT = 1.73 min, [M+H] += 220.15。
步驟D：合成 (7-氟喹啉-4-基)甲醇
Figure 02_image595
將(7-氟喹啉-4-基)乙酸甲酯(400.0毫克，1.82毫莫耳)溶於甲醇(3.0毫升)中，加入氫氧化鈉水溶液(1.8毫升，3.64毫莫耳)，室溫攪拌1小時。減壓濃縮去除甲醇，加入乙酸乙酯稀釋(50毫升)，萃取，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮去除有機溶劑，濃縮所得物經柱層析分離(乙酸乙酯：正己烷=2：1)，得120.0毫克白色固體(7-氟喹啉-4-基)甲醇(收率：37.1%)。LC-MS：RT = 0.60 min, [M+H] += 178.13。
步驟E：合成 4-(6-((7-氟喹啉-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯
Figure 02_image597
將(7-氟喹啉-4-基)甲醇(90.0毫克，0.51毫莫耳)溶於1,4-二氧六環(5毫升)中,加入4-(6-氯吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯(151.4毫克，0.51毫莫耳)，甲烷磺酸(2-二環己基膦基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯基)(2'-氨基-1,1'-聯苯-2-基)鈀(II)(42.3毫克，0.05毫莫耳)和碳酸銫(249.3毫克，0.77毫莫耳)。氮氣保護下，升溫至100攝氏度，攪拌反應過夜。過濾除去固體，濾液濃縮至乾，所得物經柱層析分離(乙酸乙酯：正己烷=1：2)，得190.0毫克米黃色固體4-(6-((7-氟喹啉-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯(收率：85.5%)。LC-MS：RT = 2.25 min, [M+H] += 438.32。
步驟F：合成 7-氟-4-((6-(呱啶-4-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)喹啉
Figure 02_image599
將4-(6-((7-氟喹啉-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯(190.0毫克，0.43毫莫耳)溶於1,4-二氧六環(1.0毫升)中，加入含鹽酸的1,4-二氧六環溶液(1.0毫升，4.0毫升)，室溫攪拌1小時。濃縮去除溶劑，得149.0毫克白色固體7-氟-4-((6-(呱啶-4-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)喹啉(收率：91.8%)。LC-MS：RT = 1.63 min, [M+H] += 338.28。
步驟G：合成 2-((S)-1-(4-(6-((7-氟喹啉-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸異丙酯
Figure 02_image601
將7-氟-4-((6-(呱啶-4-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)喹啉 (70.0毫克，0.19毫莫耳)溶於 N, N-二甲基甲醯胺(3.0毫升)中，加入 N, N-二異丙基乙胺（132微升，0.80毫莫耳），攪拌溶解。然後依次加入2-((S)-1-氯乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸丙酯（64毫克，0.19毫莫耳），碳酸鉀（39毫克，0.28毫莫耳），碘化鉀（46毫克，0.28毫莫耳）。升溫至50攝氏度，攪拌反應2小時。加乙酸乙酯稀釋(50毫升)，萃取，依次用水，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮去除溶劑，所得物經柱層析分離(乙酸乙酯：正己烷=5：1)，得80.0毫克米黃色固體2-((S)-1-(4-(6-((7-氟喹啉-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸異丙酯 (收率：66.9%)。LC-MS：RT = 1.81 min, [M+H] += 639.43。
步驟H：合成 2-((S)-1-(4-(6-((7-氟喹啉-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸
Figure 02_image603
將2-((S)-1-(4-(6-((7-氟喹啉-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸異丙酯 (80.0毫克，0.13毫莫耳)溶於四氫呋喃(0.3毫升)，甲醇(0.1毫升)和水(0.1毫升)的混合溶劑中，加入一水合氫氧化鋰(26.3毫克，0.63毫莫耳)。室溫下攪拌4小時。濃縮去除溶劑，所得物經柱層析分離(甲醇：二氯甲烷= 7:93)，得51.3毫克白色固體2-((S)-1-(4-(6-((7-氟喹啉-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸(收率：68.8%)。LC-MS：RT = 1.70 min, [M+H] += 597.34。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 8.86 (d, J= 4.3 Hz, 1H), 8.25 (dd, J= 9.1, 6.2 Hz, 1H), 8.13 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.97 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.78 (dd, J= 10.3, 2.4 Hz, 1H), 7.68–7.56 (m, 2H), 7.53 (d, J= 4.3 Hz, 1H), 6.84 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 6.74 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 5.87 (s, 2H), 5.31–5.18 (m, 1H), 4.83–4.73 (m, 1H), 4.71–4.63 (m, 1H), 4.61–4.52 (m, 1H), 4.41–4.32 (m, 1H), 4.09–4.00 (m, 1H), 2.98–2.89 (m, 1H), 2.63–2.51 (m, 3H), 2.38–2.10 (m, 3H), 1.84–1.57 (m, 4H), 1.44 (d, J= 6.6 Hz, 3H)。
實施例19 2-((S)-1-(4-(6-((3-氟喹啉-8-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸
Figure 02_image605
步驟A：合成 3-氟-8-甲基喹啉
Figure 02_image607
室溫下，向含有8-溴-3-氟喹啉(200毫克，0.89毫莫耳)的1,4-二氧六環/水溶液(3.4/1.0毫升)中，依次加入三甲基環三硼氧烷(0.25毫升，0.89毫莫耳)、1,1'-雙二苯基膦二茂鐵二氯化鈀(32毫克，0.044毫莫耳)和碳酸鉀(244毫克，1.77毫莫耳)，置換氮氣，100攝氏度反應3小時。反應結束，乙酸乙酯(30毫升×3次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(30毫升×3次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/10)。得到128毫克白色固體3-氟-8-甲基喹啉(收率：89.8%)。LC-MS: RT= 2.01 min, [M+H] += 162.14。
步驟B：合成 8-(溴甲基)-3-氟喹啉
Figure 02_image609
室溫下，向含有3-氟-8-甲基喹啉(128毫克，0.80毫莫耳)的四氯化碳(4.0毫升)中依次加入 N-溴代丁二醯亞胺(156毫克，0.88毫莫耳)和偶氮二異丁腈(5毫克，0.032毫莫耳)，加熱至80攝氏度反應1小時。反應結束，加二氯甲烷(100毫升)稀釋，萃取，依次用飽和碳酸氫鈉(50毫升)和食鹽水(50毫升)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/15)。得到90毫克白色固體8-(溴甲基)-3-氟喹啉(收率：46.9%)。LC-MS: RT = 2.05 min, [M+H] += 242.05。
步驟C：合成 (3-氟喹啉-8-基)甲醇
Figure 02_image611
室溫下，向含有8-(溴甲基)-3-氟喹啉(90毫克，0.38毫莫耳)的1,4-二氧六環/水(1.5毫升/1.5毫升)溶液中加入碳酸鈉(119毫克，1.13毫莫耳)，加熱至100攝氏度反應3小時。
反應結束，冷卻至室溫，乙酸乙酯(50毫升×3次)萃取，飽和食鹽水(50毫升)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/8)。得到40毫克白色固體(3-氟喹啉-8-基)甲醇(收率：59.5%)。LC-MS: RT = 1.72 min, [M+H] += 178.15。
步驟D：合成 4-(6-((3-氟喹啉-8-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 02_image613
冰水浴，氮氣保護下，向含有(3-氟喹啉-8-基)甲醇(266毫克，1.50毫莫耳)的四氫呋喃溶液(5.0毫升)中加入氫化鈉(180毫克，60%分散於礦物油，4.5毫莫耳)。加畢，撤去冰水浴，室溫攪拌30分鐘。加入4-(6-氟吡啶-2-基)呱啶-1-甲酸叔丁酯的四氫呋喃(2.0毫升)溶液，加熱至50攝氏度反應3小時。
反應結束，加飽和氯化銨溶液淬滅，乙酸乙酯(30毫升×3次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(30毫升×3次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/8)。得到450毫克淡黃色油狀物4-(6-((3-氟喹啉-8-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-甲酸叔丁酯(收率：68.5%)。LC-MS: RT = 2.37 min, [M+H] += 438.24。
步驟E：合成 3-氟-8-(((6-(呱啶-4-基)吡啶基-2-基)氧基)甲基)喹啉
Figure 02_image615
室溫下，向含有4-(6-((3-氟喹啉-8-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-甲酸叔丁酯(450毫克，1.03毫莫耳)的甲醇溶液(4.0毫升)中加入鹽酸/1,4二氧六環溶液(1.3毫升，4.0莫耳/升，5.14毫莫耳)。加畢，室溫攪拌2小時。反應結束，減壓蒸乾溶劑，得到420毫克白色固體3-氟-8-(((6-(呱啶-4-基)吡啶基-2-基)氧基)甲基)喹啉。LC-MS: RT = 1.73 min, [M+H] += 338.27。
步驟F：合成 2-((S)-1-(4-(6-((3-氟喹啉-8-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸異丙酯
Figure 02_image617
室溫下，向含有3-氟-8-(((6-(呱啶-4-基)吡啶基-2-基)氧基)甲基)喹啉(153毫克，0.342毫莫耳)的 N,N- 二甲基甲醯胺溶液(2.0毫升)中加入 N,N- 二異丙基乙基胺(132微升，0.80毫莫耳)，攪拌溶解。依次加入2-((S)-1-氯乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸異丙酯(90毫克，0.27毫莫耳)，碳酸鉀(74毫克，0.53毫莫耳)，碘化鉀(89毫克，0.53毫莫耳)。加畢，加熱至60攝氏度攪拌1小時。
反應結束，加飽和氯化銨溶液淬滅，乙酸乙酯(30毫升×3次)萃取，合併有機相，用飽和食鹽水(30毫升×3次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：甲醇/二氯甲烷=8/92)。得到90毫克無色油狀物2-((S)-1-(4-(6-((3-氟喹啉-8-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸異丙酯(收率：52.8%)。LCMS: RT = 1.89 min, [M+H] += 639.37。
步驟G：合成 2-((S)-1-(4-(6-((3-氟喹啉-8-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸
Figure 02_image619
室溫下，向含有2-((S)-1-(4-(6-((3-氟喹啉-8-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸異丙酯(90毫克，0.14毫莫耳)的四氫呋喃/甲醇/水溶液(2.5/2.5/1.0毫升)中，加入一水合氫氧化鋰(45毫克，1.07毫莫耳)，加熱至35攝氏度反應1小時，反應完畢，加入乙酸乙酯(30毫升×3次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(30毫升×3次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：甲醇/二氯甲烷=8/92)。得到34毫克白色固體2-((S)-1-(4-(6-((3-氟喹啉-8-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸(收率：40.4%)。LC-MS: RT = 1.80 min, [M+H] += 597.40。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9.04–8.96 (m, 1H), 8.32 (dd, J= 9.6, 2.9 Hz, 1H), 8.09 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.96 (d, J= 8.2 Hz, 2H), 7.82 (d, J= 6.7 Hz, 1H), 7.63 (dd, J= 15.5, 7.6 Hz, 2H), 6.83 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 6.71 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 5.97 (s, 2H), 5.29–5.19 (m, 1H), 4.72 (ddd, J= 38.7, 14.9, 4.0 Hz, 2H), 4.55 (q, J= 6.6 Hz, 1H), 4.41–4.32 (m, 1H), 4.05 (dt, J= 9.2, 5.9 Hz, 1H), 2.95 (d, J= 10.9 Hz, 1H), 2.63–2.52 (m, 4H), 2.35–2.17 (m, 2H), 1.88–1.62 (m, 3H), 1.57–1.48 (m, 1H), 1.46 (d, J= 6.7 Hz, 3H)。
實施例20 2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸（20A）和2-((R)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸（20B）
Figure 02_image621
具體合成路線如下。
步驟A：合成 4-(6-氯吡啶-2-基)呱嗪-1-羧酸叔丁酯
Figure 02_image623
將呱嗪-1-羧酸叔丁酯(300.0毫克,1.61毫莫耳)溶於1,4-二氧六環(12.0毫升)中，加入2,6-二氯吡啶(262.0毫克,1.77毫莫耳)，甲烷磺酸(2-二環己基膦基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯基)(2'-氨基-1,1'-聯苯-2-基)鈀(II)(135.4毫克,0.16毫莫耳)和碳酸銫(788.5毫克,2.42毫莫耳)。氮氣保護下，升溫至100攝氏度，攪拌反應5小時。旋乾溶劑，柱層析分離(乙酸乙酯：正己烷=1：10)，得150.0毫克米黃色固4-(6-氯吡啶-2-基)呱嗪-1-羧酸叔丁酯(收率：31.3%)。LC-MS：RT = 1.82 min, [M- tBu+H] += 242.36。
步驟B：合成 4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-羧酸叔丁酯
Figure 02_image625
將4-(6-氯吡啶-2-基)呱嗪-1-羧酸叔丁酯(150.0毫克，0.51毫莫耳)溶於1,4-二氧六環(5.0毫升)中，加入3-氟-4-(羥甲基)苯甲腈(76.3毫克，0.51毫莫耳)，甲烷磺酸(2-二環己基膦基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯基)(2'-氨基-1,1'-聯苯-2-基)鈀(II) (43.2毫克，0.05毫莫耳)和碳酸銫(246.8毫克，0.76毫莫耳)。氮氣保護下，升溫至100攝氏度，攪拌反應15小時。旋乾溶劑，柱層析分離(乙酸乙酯：正己烷=1：10)，得102.0毫克米黃色固體4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-羧酸叔丁酯(收率：49.1%)。LC-MS：RT = 2.23 min, [M- tBu+H] += 357.23。
步驟C：合成 3-氟-4-(((6-(呱嗪-1-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苯甲腈
Figure 02_image627
將4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-羧酸叔丁酯(102.0毫克，0.25 毫莫耳)溶於甲醇(2.0毫升)中，加入鹽酸/1,4-二氧六環溶液(0.5毫升，2.0毫莫耳)。室溫條件下，攪拌反應3小時。旋乾溶劑，得73.7毫克白色固體3-氟-4-(((6-(呱嗪-1-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苄腈(收率：73.5%)。LC-MS：RT = 1.68 min, [M+H] += 313.25。
步驟D：合成 2-(1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯
Figure 02_image629
將3-氟-4-(((6-(呱嗪-1-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苄腈(73.7毫克，0.21毫莫耳)溶於 N, N-二甲基甲醯胺(3.0毫升)中，加入 N, N-二異丙基乙胺(54.7毫克，0.42毫莫耳)，碳酸鉀(58.5毫克，0.42毫莫耳)，碘化鉀(52.8毫克，0.32毫莫耳)和2-((S)-1-氯乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(71.7毫克，0.23毫莫耳)。升溫至60攝氏度，攪拌反應4小時。反應結束，加乙酸乙酯(50毫升)稀釋，萃取，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，旋乾溶劑，柱層析分離(乙酸乙酯：正己烷=4：1)，得102.0毫克米黃色固體2-(1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(收率：82.6%, dr= 80%)。LC-MS：RT = 1.86 min, [M+H] += 585.42。
步驟E：合成2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸（20A）和2-((R)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸（20B）
Figure 02_image631
將2-(1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(102.0毫克，0.17毫莫耳)溶於四氫呋喃(3.0毫升)，甲醇(3.0毫升)，水(1.0毫升)的混合溶劑中，加入一水合氫氧化鋰(36.6毫克，0.87毫莫耳)。室溫條件下，攪拌反應4小時。旋乾溶劑，經製備液相分離，得21.0毫克白色固體2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸（20A）(收率：20.6%)和2.2毫克白色固體2-((R)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸（20B）（收率2.3%）。粗產品用製備型高效液相色譜純化。分離條件如下：色譜柱：Agilent 5 Prep-C18 100mm×30mm 5μM；流動相：水(含有0.1%的氨水)和乙腈洗脫；流速：20毫升/分鐘；梯度：由23%乙腈在7.67分鐘及8.54分鐘分別洗脫出來20A和20B，檢測波長：254 nm。
化合物20A: HPLC: RT = 7.67 min。 LC-MS：RT = 1.79 min, [M+H] += 571.39。 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6) δ (ppm): 8.06 (s, 1H), 7.87 (dd, J= 9.9, 1.2 Hz, 1H), 7.78 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 7.69 (dd, J= 7.9, 1.4 Hz, 1H), 7.64 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.44 (s, 1H), 6.29 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 6.09 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 5.37 (s, 2H), 5.20–5.13 (m, 1H), 4.75 (dd, J= 15.5, 3.6 Hz, 1H), 4.55–4.53 (m, 1H), 4.48–4.42 (m, 2H), 4.18–4.12 (m, 1H), 3.40–3.30 (m, 4H), 2.65–2.63 (m, 1H), 2.58–2.50 (m, 4), 2.35–2.29 (m, 1H), 1.42 (d, J= 6.7 Hz, 3H)。
化合物20B：HPLC: RT = 8.54 min。 LC-MS：RT = 1.78 min, [M+H] += 571.33。 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6) δ (ppm):12.74 (s, 1H), 8.27 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 7.87 (dd, J= 9.9, 1.4 Hz, 1H), 7.79 (dd, J= 8.4, 1.5 Hz, 1H), 7.69 (dd, J= 7.9, 1.5 Hz, 1H), 7.68–7.61 (m, 2H), 7.46 (t, J= 8.0 Hz, 1H), 6.31 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 6.11 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 5.39 (s, 2H), 5.08–5.03 (m, 1H), 4.93–4.87 (m, 1H), 4.59–4.56 (m, 1H), 4.51–4.47 (m, 3H), 3.42–3.39 (m, 4H), 2.78–2.73 (m, 1H), 2.70–2.58 (m, 2H), 2.54–2.45 (m, 3H), 1.41 (d, J= 6.7 Hz, 3H)。
實施例21 2-((S)-1-((S)-4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-2-甲基呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image633
具體合成路線如下。
步驟A：合成 4-((6-氯吡啶-2-基)氧基)甲基)-3-氟苯甲腈
Figure 02_image635
將3-氟-4-(羥甲基)苯甲腈(1.00克，6.62毫莫耳)溶於1,4-二氧六環(25.0毫升)中，加入2,6-二氯吡啶(1.18克，7.94毫莫耳)，甲烷磺酸(2-二環己基膦基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯基)(2'-氨基-1,1'-聯苯-2-基)鈀(II)(558.7毫克，0.66毫莫耳)和碳酸銫(3.24克，9.93毫莫耳)。氮氣保護下，升溫至100 攝氏度，攪拌反應過夜。過濾除去固體，旋乾濾液，柱層析分離 (乙酸乙酯：正己烷=1：10)純化得330.0毫克白色固體4-((6-氯吡啶-2-基)氧基)甲基)-3-氟苯甲腈(收率：19.0%)。LC-MS：RT = 2.13 min, [M+H] += 263.09。
步驟B：合成 (S)-4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-2-甲基呱嗪-1-羧酸叔丁酯
Figure 02_image637
將4-((6-氯吡啶-2-基)氧基)甲基)-3-氟苯甲腈(330.0 毫克，1.26 毫莫耳) 溶於1,4-二氧六環(15.0毫升)中，加入(S)-2-甲基呱嗪-1-羧酸叔丁酯(302.4毫克，1.51毫莫耳)，甲烷磺酸(2-二環己基膦基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯基)(2'-氨基-1,1'-聯苯-2-基)鈀(II) (110.0毫克，0.13毫莫耳)和碳酸銫(615.8毫克，1.89毫莫耳)。氮氣保護下，升溫至100 攝氏度，攪拌反應14小時。過濾除去固體，旋乾濾液，柱層析分離(乙酸乙酯：正己烷=1：5)，得260.3毫克白色固體(S)-4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-2-甲基呱嗪-1-羧酸叔丁酯(收率：48.6%)。LC-MS：RT = 2.27 min, [M- tBu+H] += 371.21。
步驟C：合成 (S)-3-氟-4-((6-(3-甲基呱嗪-1-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苯甲腈
Figure 02_image639
將(S)-4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-2-甲基呱嗪-1-羧酸叔丁酯(260.3毫克，0.61毫莫耳)溶於甲醇(3.0毫升)中，加入鹽酸/1,4-二氧六環溶液(1毫升，4.0毫莫耳)。室溫條件下，攪拌反應2小時。旋乾溶劑，得73.7毫克白色固體(S)-3-氟-4-((6-(3-甲基呱嗪-1-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苯甲腈220.1毫克(收率：99.4%)。LC-MS：RT = 1.68 min, [M+H] += 327.25。
步驟D：合成 2-((S)-1-((S)-4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-2-甲基呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯
Figure 02_image641
將(S)-3-氟-4-((6-(3-甲基呱嗪-1-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苯甲腈(110.5毫克，0.30毫莫耳)溶於 N, N-二甲基甲醯胺(5.0毫升)中，加入 N, N-二異丙基乙胺(78.4毫克，0.61毫莫耳)，碳酸鉀(83.9毫克，0.61毫莫耳)，碘化鉀(75.7毫克，0.46毫莫耳)和2-((S)-1-氯乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(102.9毫克，0.33毫莫耳)。升溫至60攝氏度，攪拌反應過夜。加乙酸乙酯(50毫升)稀釋，萃取，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，旋乾溶劑，柱層析分離(乙酸乙酯：正己烷=4：1)純化，得140.0毫克米黃色固體2-((S)-1-((S)-4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-2-甲基呱嗪-1-基)乙基)-1-(（(S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(收率：76.8%)。LC-MS：RT = 1.93 min, [M+H] += 599.35。
步驟E：合成 2-((S)-1-((S)-4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-2-甲基呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image643
將2-((S)-1-((S)-4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-2-甲基呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(140.0毫克，0.23毫莫耳)溶於乙腈(5.0毫升)和水(1.0毫升)的混合溶劑中，加入1,5,7-三氮雜二環[4.4.0]癸-5-烯(65.1毫克，0.47毫莫耳)。室溫條件下，攪拌反應過夜。加檸檬酸水溶液(2莫耳/升)調體系的pH至6，二氯甲烷萃取(30毫升×3)，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，旋乾溶劑，柱層析分離(甲醇：二氯甲烷= 8:92)，得45.0毫克白色固體2-((S)-1-((S)-4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-2-甲基呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸(收率：32.1%)。LC-MS：RT = 1.84 min, [M+H] += 585.39。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ (ppm): 8.26 (d, J= 1.0 Hz, 1H), 7.87 (dd, J= 10.0, 1.4 Hz, 1H), 7.81 (dd, J= 8.4, 1.6 Hz, 1H), 7.71–7.66 (m, 2H), 7.61 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 7.44 (t, J= 8.0 Hz, 1H), 6.28 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 6.10 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 5.37 (s, 2H), 5.25–5.17 (m, 1H), 5.03 (dd, J= 15.6, 3.0 Hz, 1H), 4.95 (q, J= 6.6 Hz, 1H), 4.62 (dd, J= 15.4, 5.0 Hz, 1H), 4.49–4.39 (m, 1H), 4.19–4.11 (m, 1H), 4.07–4.00 (m, 1H), 3.88 (d, J= 12.6 Hz, 1H), 2.67–2.54 (m, 2H), 2.40–2.28 (m, 2H), 2.27–2.18 (m, 1H), 1.66–1.56 (m, 2H), 1.36 (d, J= 6.6 Hz, 3H), 1.17 (d, J= 6.2 Hz, 3H)。
實施例22 2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-2-氧代呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image645
具體合成路線如下。
步驟A：合成 2-((S)-1-(4-(叔丁氧羰基)-2-氧代呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯
Figure 02_image647
將3-氧代呱嗪-1-羧酸叔丁酯(380毫克，1.90毫莫耳)，氫化鈉(380毫克，9.5毫莫耳)和碘化鉀(473毫克，2.85毫莫耳)溶於15毫升無水四氫呋喃中，加入2-((S)-1-氯乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(600毫克，1.94毫莫耳)，於60攝氏度下反應20分鐘。反應結束，反應液倒入200毫升氯化銨溶液中，乙酸乙酯(50毫升×3次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(60毫升×2次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮所得粗品經柱層析分離得110毫克淡黃色固體2-((S)-1-(4-(叔丁氧羰基)-2-氧代呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯。LC-MS: RT = 2.12 min, [M+H] += 473.27。
步驟B：合成1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-2-((S)-1-(2-氧代呱嗪-1-基)乙基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯
Figure 02_image649
將2-((S)-1-(4-(叔丁氧羰基)-2-氧代呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯 (110毫克，0.233毫莫耳)溶於4毫升無水二氯甲烷中，加入2毫升三氟乙酸，於室溫下反應40分鐘。反應結束，反應液倒入100毫升碳酸氫鈉溶液中，乙酸乙酯(30毫升×3次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(20毫升×2次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得粗品90毫克1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-2-((S)-1-(2-氧代呱嗪-1-基)乙基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯。LC-MS: RT =1.96min, [M+H] += 373.27。
步驟C：合成 2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-2-氧代呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯
Figure 02_image651
將1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-2-((S)-1-(2-氧代呱嗪-1-基)乙基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯 (90毫克，0.241毫莫耳)，4-(((6-氯吡啶-2-基)氧基)甲基)-3-氟苄腈(63.2毫克，0.241毫莫耳)，碳酸銫(157毫克，0.482毫莫耳)和1,1'-聯萘-2,2'-雙二苯膦(15.2毫克，0.0241毫莫耳)溶於5毫升無水1,4-二氧六環中，加入三(二亞苄基丙酮)二鈀(22.1毫克，0.0241毫莫耳)，氮氣置換3次，於120攝氏度下微波反應2小時。反應結束，加水稀釋，乙酸乙酯(30毫升×2次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(20毫升×2次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮所得粗品經柱層析分離得72毫克淡黃色固體2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-2-氧代呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯。LC-MS: RT = 2.08 min, [M+H] += 599.27。
步驟D：合成 2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-2-氧代呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image653
將2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-2-氧代呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(72毫克，0.121毫莫耳)溶解於4毫升四氫呋喃中，加入一水合氫氧化鋰(26毫克，0.602毫莫耳)，1毫升水和1毫升乙醇，於室溫下反應50分鐘。反應結束，加入20毫升飽和氯化銨中和，乙酸乙酯(30毫升×2次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(20毫升×2次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮所得粗品經柱層析分離得37毫克白色固體2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-2-氧代呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸。LC-MS: RT =1.95 min, [M+H] +=585.38。 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.67 (s, 1H), 8.30 (d, J= 1.0 Hz, 1H), 7.89 (dd, J= 9.7, 0.9 Hz, 1H), 7.82 (dd, J= 8.4, 1.6 Hz, 1H), 7.75 (t, J= 8.0 Hz, 1H), 7.72–7.70 (m, 3H), 7.54–7.51 (m, 1H), 6.73–(m, 1H), 5.43 (s, 2H), 5.15–5.09 (m, 1H), 4.75–4.70 (m, 2H), 4.59–4.55 (m, 1H), 4.45–4.41 (m, 1H), 4.18–4.14 (m, 1H), 3.80–3.72 (m, 2H), 3.43 (d, J= 11.6 Hz, 2H), 2.94–2.88 (m, 2H), 2.65–2.57 (m, 1H), 2.34–2.24 (m, 1H), 1.55 (d, J= 6.8 Hz, 3H)。
實施例23 2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-氧代呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image655
具體合成路線如下。
步驟A：合成 4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-氧代呱嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 02_image657
將4-(((6-氯吡啶-2-基)氧基)甲基)-3-氟苄腈(130毫克，0.496毫莫耳)，3-氧代呱嗪-1-羧酸叔丁酯(99.2毫克，0.496毫莫耳)，碳酸銫(323毫克，0.992毫莫耳)和2-二環己基磷-2',6'-二異丙氧基-1,1'-聯苯(22.5毫克，0.0496毫莫耳)溶於5毫升無水1,4-二氧六環中，加入三(二亞苄基丙酮)二鈀(45.3毫克，0.0496毫莫耳)，氮氣置換3次，於90攝氏度下微波反應2小時。反應結束，加水稀釋，乙酸乙酯(30毫升×2次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(20毫升×2次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，所得粗品經柱層析分離得151毫克淡黃色固體4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-氧代呱嗪-1-甲酸叔丁酯。LC-MS: RT =2.08 min, [M+H] += 427.21。
步驟B：合成 3-氟-4-(((6-(2-氧代呱嗪-1-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苄腈
Figure 02_image659
將4-(6-(((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-氧代呱嗪-1-甲酸叔丁酯(151毫克，0.354毫莫耳)溶於4毫升無水二氯甲烷中，加入2毫升三氟乙酸，於室溫下反應40分鐘。反應結束，反應液倒入60毫升碳酸氫鈉溶液中，乙酸乙酯(30毫升×3次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(20毫升×2次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮得粗品120毫克3-氟-4-(((6-(2-氧代呱嗪-1-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苄腈。LC-MS: RT =1.89 min, [M+H] += 327.27。
步驟C：合成 2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-氧代呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯
Figure 02_image661
將3-氟-4-(((6-(2-氧代呱嗪-1-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苄腈(120毫克，0.367毫莫耳)，碳酸鉀(101毫克，0.733毫莫耳)和碘化鉀(91.4毫克，0.551毫莫耳)溶於5毫升無水乙腈中，加入2-((S)-1-氯乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(113毫克，0.367毫莫耳)，於60攝氏度下反應2小時。反應結束，加水稀釋，乙酸乙酯(30毫升×2次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(20毫升×2次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮所得粗品經柱層析分離得146毫克淡黃色固體2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-氧代呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯。LC-MS: RT = 1.93 min, [M+H] += 599.27。
步驟D：合成 2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-氧代呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image663
將2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-氧代呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯 (146毫克，0.243毫莫耳)溶解於4毫升乙腈中，加入1,5,7-三氮雜二環[4.4.0]癸-5-烯(71毫克，0.510毫莫耳)和1毫升水，於室溫下反應7小時。反應結束，加入20毫升飽和氯化銨中和，二氯甲烷(30毫升×2次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(20毫升×2次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮所得粗品經柱層析分離製備得38毫克白色固體2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-氧代呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸。GC-MS：RT =1.87 min, [M+H] +=585.33。 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.69 (s, 1H), 8.30 (d, J= 1.0 Hz, 1H), 7.89 (dd, J= 9.7, 0.9 Hz, 1H), 7.82 (dd, J= 8.4, 1.6 Hz, 1H), 7.75 (t, J= 8.0 Hz, 1H), 7.72–7.70 (m ,3H), 7.54–7.51 (m, 1H), 6.73–6.70 (m, 1H), 5.43 (s, 2H), 5.15–5.09 (m, 1H), 4.75–4.70 (m, 2H), 4.59–4.55 (m, 1H), 4.45–4.41 (m, 1H), 4.17 (dt, J= 9.0, 5.8 Hz, 1H), 3.78–3.72 (m, 2H), 3.43 (d, J= 11.6 Hz, 2H), 2.94–2.88 (m, 2H), 2.65–2.57 (m, 1H), 2.34–2.24 (m, 1H), 1.51 (d, J= 6.8 Hz, 3H)。
實施例24 2-((S)-1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)丙基)-1-(((S)-環雜氧丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[ d]咪唑-6-甲酸（24A）和2-((R)-1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)丙基)-1-(((S)-環雜氧丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[d]咪唑-6-甲酸（24B）
Figure 02_image665
化合物24A具體合成路線如下。
步驟A：合成 4-((R)-2-溴丁醯胺基)-3-((((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)氨基)苯甲酸甲酯
Figure 02_image667
室溫下，將4-氨基-3-((((S)氧雜環丁烷-2-基)甲基)氨基)苯甲酸甲酯(190.2毫克，0.8毫莫耳)、(R)-2-溴丁酸(200.0毫克，1.2毫莫耳)溶解在乾燥的二氯甲烷溶液(5毫升)中。依次加入4-二甲氨基吡啶(9.7毫克，80.0微莫耳)和二環己基碳二亞胺(494.4毫克，2.4毫莫耳)。在室溫下攪拌反應過夜，待反應完全後，利用矽藻土減壓過濾，並減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯=1/1)，得到300.3毫克淡黃色油狀物4-((R)-2-溴丁醯胺基)-3-((((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)氨基)苯甲酸甲酯(收率：97.1%)。LC-MS: RT = 2.45 min, [M+H] += 384.76, 387.02。
步驟B：合成 2-((R)-1-溴丙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-甲酸甲酯
Figure 02_image669
室溫下，將4-((R)-2-溴丁醯胺基)-3-((((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)氨基)苯甲酸甲酯(300.3毫克，0.8毫莫耳)溶解在甲苯(3毫升)溶液中，加入醋酸(200微升)。在110攝氏度下回流反應3小時，待反應完全後，減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯=3/1)得到195.2毫克黃色油狀物2-((R)-1-溴丙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-甲酸甲酯(收率：68.3%)。LC-MS: RT = 2.34 min, [M+H] += 366.93, 369.12。 步驟C：合成 2-((S)-1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)丙基)-1-(((S)-環雜氧丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-甲酸甲酯
Figure 02_image671
室溫下，將2-((R)-1-溴丙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-甲酸甲酯(195.2毫克，0.5毫莫耳)和2-((4-氯-2-氟苄基)氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶(210.3毫克，0.6毫莫耳)溶解在 N,N-二甲基甲醯胺(3毫升)中。加入無水碳酸鉀(208.5毫克，1.5毫莫耳)，在室溫下攪拌反應過夜。待反應完全後，加水(20毫升)稀釋，乙酸乙酯(30毫升×3次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(50毫升×3次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯=1/1~15/1)，得到230.2毫克白色固體化合物2-((S)-1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)丙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-甲酸甲酯(收率：71.4%)。LC-MS: RT = 3.43 min, [M+H] += 607.07。
步驟D：合成 2-((S)-1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)丙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-甲酸
Figure 02_image673
在室溫下，將2-((S)-1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)丙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-甲酸甲酯(230.2毫克，0.4毫莫耳）溶解在四氫呋喃(6毫升)，水(2毫升)和乙醇(2毫升)的溶液中，加入氫氧化鈉(48.0毫克，1.2毫莫耳)，在室溫下攪拌反應過夜。
反應完全後，滴加1莫耳每升的檸檬酸水溶液，直到溶液的pH到5為止。加入水(20毫升)稀釋，乙酸乙酯(30毫升×3次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(25毫升×3次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用半製備HPLC純化(流動相：含0.1%氨水的水/乙腈=90/10~40/60)得到68.8毫克2-((S)-1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)丙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-甲酸(收率：30.7%)。LC-MS: RT = 2.68 min, [M+H] += 593.21。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ 8.40 (s, 1H), 8.09 (dd, J= 8.6, 1.5 Hz, 1H), 7.86 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.67 (t, J= 7.8 Hz, 1H), 7.51 (t, J= 8.0 Hz, 1H), 7.25 (ddd, J= 10.7, 9.0, 2.0 Hz, 2H), 6.91 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 6.75 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 5.43 (s, 2H), 5.22 (q, J= 7.9 Hz, 1H), 5.09 (dd, J= 11.0, 3.9 Hz, 1H), 4.92 (s, 1H), 4.80 (d, J= 15.3 Hz, 3H), 4.04 (s, 1H), 3.64 (s, 2H), 3.03 (s, 1H), 2.93 (p, J= 7.4 Hz, 1H), 2.70 (p, J= 8.3 Hz, 1H), 2.47 (d, J= 36.2 Hz, 2H), 2.20 (t, J= 12.0 Hz, 3H), 2.15–1.96 (m, 2H), 0.98 (t, J= 7.3 Hz, 3H)。
化合物24B具體合成路線如下。
步驟A：合成 4-((S)-2-溴丁醯胺基)-3-((((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)氨基)苯甲酸甲酯
Figure 02_image675
室溫下，將4-氨基-3-((((S)氧雜環丁烷-2-基)甲基)氨基)苯甲酸甲酯(190.2毫克，0.8毫莫耳)、(S)-2-溴丁酸(200.0毫克，1.2毫莫耳)溶解在乾燥的二氯甲烷溶液(5毫升)中。依次加入4-二甲氨基吡啶(9.7毫克，80.0微莫耳)和二環己基碳二亞胺(494.4毫克，2.4毫莫耳)。在室溫下攪拌反應過夜，待反應完全後，利用矽藻土減壓過濾，並減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯=1/1)，得到300.3毫克淡黃色油狀物4-((S)-2-溴丁醯胺基)-3-((((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)氨基)苯甲酸甲酯(收率：97.1%)。LC-MS: RT = 2.45 min, [M+H] += 384.76, 387.02。
步驟B：合成 2-((S)-1-溴丙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-甲酸甲酯
Figure 02_image677
室溫下，將4-((S)-2-溴丁醯胺基)-3-((((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)氨基)苯甲酸甲酯(300.3毫克，0.8毫莫耳)溶解在甲苯(3毫升)溶液中，加入醋酸(200微升)。在110攝氏度下回流反應3小時，待反應完全後，減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯=3/1)得到195.2毫克黃色油狀物2-((S)-1-溴丙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-甲酸甲酯(收率：68.3%)。LC-MS: RT = 2.34 min, [M+H] +=366.93, 369.12。
步驟C：合成 2-((R)-1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)丙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-甲酸甲酯
Figure 02_image679
室溫下，將2-((S)-1-溴丙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-甲酸甲酯(195.2毫克，0.5毫莫耳)和2-((4-氯-2-氟苄基)氧基)-6-(呱啶-4-基)吡啶(210.3毫克，0.6毫莫耳)溶解在 N,N-二甲基甲醯胺(3毫升)中。加入無水碳酸鉀(208.5毫克，1.5毫莫耳)，在室溫下攪拌反應過夜。待反應完全後，加水(20毫升)稀釋，乙酸乙酯(30毫升×3次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(50毫升×3次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯=1/1~15/1），得到230.2毫克白色固體化合物2-((R)-1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)丙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-甲酸甲酯(收率：71.4%)。LC-MS: RT = 3.43 min, [M+H] += 607.07。
步驟D：合成 2-((R)-1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)丙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-甲酸
Figure 02_image681
在室溫下，將2-((R)-1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)丙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-甲酸甲酯(230.2毫克，0.4毫莫耳)溶解在四氫呋喃(6毫升)和水(2毫升)和乙醇(2毫升)的溶液中，加入氫氧化鈉(48.0毫克，1.2毫莫耳)，在室溫下攪拌反應過夜。
反應完全後，滴加1莫耳每升的檸檬酸水溶液，直到溶液的pH到5為止。加水(20毫升)稀釋，乙酸乙酯(30毫升×3次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(25毫升×3次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用半製備HPLC純化(流動相：含0.1%氨水的水/乙腈=90/10~40/60)得到68.8毫克2-((R)-1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)丙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-甲酸(收率：30.7%)。LC-MS: RT = 2.68 min, [M+H] += 593.21。 1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ 8.34 (d, J= 1.5 Hz, 1H), 8.03 (dd, J= 8.5, 1.5 Hz, 1H), 7.77 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.60 (dd, J= 8.2, 7.3 Hz, 1H), 7.50 (t, J= 8.3 Hz, 1H), 7.25–7.14 (m, 2H), 6.83 (d, J= 7.3 Hz, 1H), 6.66 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 5.41 (s, 2H), 5.32 (qd, J= 7.2, 2.5 Hz, 1H), 4.85 (dd, J= 15.8, 2.7 Hz, 1H), 4.75 (dd, J= 15.8, 5.9 Hz, 1H), 4.66 (td, J= 8.0, 5.9 Hz, 1H), 4.51 (dd, J= 10.6, 4.1 Hz, 1H), 4.40 (dt, J= 9.3, 5.8 Hz, 1H), 3.22 (t, J= 10.9 Hz, 2H), 2.92 (td, J= 10.8, 4.8 Hz, 1H), 2.80 (ddt, J= 13.8, 8.1, 4.0 Hz, 1H), 2.68 (dq, J= 10.9, 5.5, 4.8 Hz, 1H), 2.60 (td, J= 12.1, 3.4 Hz, 1H), 2.56–2.46 (m, 1H), 2.35 (ddd, J= 13.1, 10.6, 7.1 Hz, 1H), 2.19 (ddt, J= 11.6, 7.3, 4.3 Hz, 1H), 1.96 (td, J= 10.5, 9.5, 3.4 Hz, 2H), 1.91–1.72 (m, 2H), 0.99 (t, J= 7.3 Hz, 3H)。
實施例25 2-((4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)(環丙基)甲基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image683
具體合成路線如下。
步驟A：合成 2-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)-2-環丙基乙酸乙酯
Figure 02_image685
在室溫下，將化合物4-(6-((4-氯基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶(155.0毫克，483.2微莫耳)，2-溴-2-環丙基乙酸乙酯(200.0毫克，966.4微莫耳)和碳酸鉀(267.3毫克，1.9毫莫耳)溶解在 N,N-二甲基甲醯胺(5毫升)中，在室溫反應16小時。待反應完全後，加水(80毫升)稀釋，乙酸乙酯(50毫升×3次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(50毫升×3次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯=5/1），得到177.2毫克淡黃色油狀物2-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)-2-環丙基乙酸乙酯（S、R構型混合物）(收率：82.5%)。LC-MS: RT = 3.00 min, [M+H] += 446.97。
步驟B：合成 2-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)-2-環丙基乙酸
Figure 02_image687
在室溫下，將化合物2-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)-2-環丙基乙酸乙酯(177.0毫克，396.7微莫耳)，溶解在四氫呋喃(10毫升)、乙醇(3毫升)和水(3毫升)溶液中，加入氫氧化鈉(160.0毫克，4.0毫莫耳)，在室溫下反應48小時。反應完全後，滴加1莫耳每升的檸檬酸水溶液，直到溶液的pH到5為止。加水(50毫升)稀釋，乙酸乙酯(25毫升×3次)萃取，飽和食鹽水(25毫升×3次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯=1/1~10/1)，得到132.0毫克黃色油狀物2-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)-2-環丙基乙酸（S、R構型混合物）(收率：76.9%)。LC-MS: RT = 2.45 min, [M+H] += 419.05。
步驟C：合成 4-(2-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基-2-環丙基乙醯胺基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)苯甲酸甲酯
Figure 02_image689
室溫下，將2-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)-2-環丙基乙酸(132.0毫克，315.1微莫耳）、2-(7-氮雜苯并三氮唑)- N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽(120.0毫克，315.1毫莫耳)、 N,N-二異丙基乙胺(122.5毫克，945.2微莫耳)溶解於 N,N-二甲基甲醯胺溶液(5毫升)中，室溫反應半小時後，加入(S)-4-氨基-3-((((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)氨基)苯甲酸甲酯(74.3毫克，315.1毫莫耳)，繼續反應24小時。
待反應完全後，加乙酸乙酯(50毫升)稀釋，萃取，依次用水(30毫升×3次)，飽和食鹽水(30毫升×3次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯=5/1~1/1)得到85.0毫克黃色油狀物4-(2-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基-2-環丙基乙醯胺基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)苯甲酸甲酯（S、R構型混合物）(收率：42.2%)。 LC-MS: RT = 3.38 min, [M+H] += 637.14。
步驟D：合成 2-((4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)(環丙基)甲基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯
Figure 02_image691
室溫下，將4-(2-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基-2-環丙基乙醯胺基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)苯甲酸甲酯(85.0毫克，137.2微莫耳)加入到甲苯(5毫升)中，加入醋酸(200微升)。將溫度升到110攝氏度反應4小時。待反應完全後，將反應液冷卻至室溫，加水(30毫升)稀釋，乙酸乙酯(15毫升×3次)萃取，合併有機相，依次用飽和碳酸鈉水溶液(15毫升×3次)，飽和食鹽水(15毫升×3次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯=1/1~10/1)得到51.0毫克黃色油狀物2-((4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)(環丙基)甲基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯（S、R構型混合物）(收率：60.1%)。 LC-MS: RT = 3.48min, [M+H] += 619.29。
步驟E：合成 2-((4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)(環丙基)甲基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image693
在室溫下，將化合物2-((4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)(環丙基)甲基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并咪唑-6-羧酸甲酯(51.0毫克，82.4微莫耳)溶解在四氫呋喃(6毫升)、甲醇(2毫升)和水(2毫升)溶液中，加入氫氧化鈉(32.9毫克，823.7微莫耳)，在室溫下反應24小時。反應完全後，滴加1莫耳每升的檸檬酸水溶液，直到溶液的pH到5為止。加水(50毫升)稀釋，乙酸乙酯(25毫升×3次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(25毫升×3次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用反相HPLC(流動相：含0.1%氨水的水/乙腈=90/10~40/60)進行純化，凍乾得到9.2毫克白色固體2-((4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)(環丙基)甲基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸（S、R構型混合物）(收率：18.4%)。LC-MS: RT = 2.84 min, [M+H] += 605.22。
實施例26 2-(1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)-2-甲氧基乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image695
具體合成路線如下。
步驟A：合成 2-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)-3-甲氧基丙酸甲酯
Figure 02_image697
在室溫下，將化合物4-(6-((4-氯基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶(155.0毫克，483.2微莫耳)，2-溴-3-甲氧基丙酸甲酯(200.0毫克，966.4微莫耳)和碳酸鉀(267.3毫克，1.9毫莫耳)溶解在 N,N-二甲基甲醯胺(5毫升）中，在室溫反應16小時。
待反應完全後，加水(80毫升)稀釋，乙酸乙酯(50毫升×3次)萃取，飽和食鹽水(50毫升×3次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯=5/1)，得到177.2毫克淡黃色油狀物2-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)-3-甲氧基丙酸甲酯（S、R構型混合物）(收率：82.5%）。LC-MS: RT = 2.63 min, [M+H] += 436.96。
步驟B：合成 2-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)-3-甲氧基丙酸
Figure 02_image699
在室溫下，將化合物2-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)-3-甲氧基丙酸甲酯(177.0毫克，396.7微莫耳)，溶解在四氫呋喃(10毫升)、乙醇(3毫升)和水(3毫升)溶液中並加入氫氧化鋰(96.0毫克，4.0毫莫耳)，在室溫下反應6小時。反應完全後，滴加1莫耳每升的檸檬酸水溶液，直到溶液的pH到5為止。加水(50毫升)稀釋，乙酸乙酯(25毫升×3次)萃取，飽和食鹽水(25毫升×3次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯=1/1~10/1)，得到139.0毫克黃色油狀物2-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)-3-甲氧基丙酸（S、R構型混合物）(收率：69.2%）。LC-MS: RT = 2.37 min, [M+H] += 423.03。
步驟C：合成 4-(2-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基-3-甲氧基丙醯胺基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)苯甲酸甲酯
Figure 02_image701
室溫下，將2-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)-3-甲氧基乙酸(195.0毫克，460.1微莫耳)、2-(7-氮雜苯并三氮唑)- N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽(174.8毫克，460.1微莫耳)、 N,N-二異丙基乙胺(178.3毫克，1.4毫莫耳)溶解於 N,N-二甲基甲醯胺溶液(5毫升)中，室溫反應0.5小時，加入4-氨基-3-((((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)氨基)苯甲酸甲酯(109.0毫克，460.1微莫耳)，繼續反應24小時。
待反應完全後，加乙酸乙酯(50毫升)稀釋，萃取，依次用水(30毫升×3次)，飽和食鹽水(30毫升×3次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯=2/1~1/1)得到145.0毫克黃色油狀物4-(2-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基-3-甲氧基丙醯胺基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)苯甲酸甲酯（S、R構型混合物）(收率：49.0%)。 LC-MS: RT = 3.12min, [M+H] += 641.05。
步驟D：合成 2-(1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)-2-甲氧基乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯
Figure 02_image703
室溫下，將4-(2-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基-3-甲氧基丙醯胺基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)苯甲酸甲酯(145.0毫克，227.8微莫耳)加入到甲苯(5毫升)中，加入醋酸(100微升)。將溫度升到110氏度反應4小時。
待反應完全後，將反應液冷卻至室溫，加水(30毫升)稀釋，乙酸乙酯(15毫升×3次)萃取，合併有機相，依次用飽和碳酸鈉水溶液(15毫升×3次)，飽和食鹽水(15毫升×3次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯=1/1~10/1)得到98.5毫克黃色油狀物2-(1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)-2-甲氧基乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯（S、R構型混合物）(收率：68.0%)。LC-MS: RT = 3.48min, [M+H] += 623.48。
步驟E：合成 2-(1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)-2-甲氧基乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image705
在室溫下，將化合物2-(1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)-2-甲氧基乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(98.5毫克，158.1微莫耳)溶解在四氫呋喃(6毫升)、甲醇(2毫升)和水(2毫升)溶液中，加入氫氧化鈉(101.8毫克，2.5毫莫耳)，在室溫下反應24小時。反應完全後，滴加1莫耳每升的檸檬酸水溶液，直到溶液的pH到5為止。加水(50毫升)稀釋，乙酸乙酯(25毫升×3次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(25毫升×3次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用反相HPLC(流動相：含0.1%氨水的水/乙腈=90/10~40/60)進行進一步的純化，凍乾得到18.7毫克白色固體2-(1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)-2-甲氧基乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸（S、R構型混合物）(收率：20.5%)。LC-MS: RT = 2.82 min, [M+H] += 609.27。
實施例27 2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-4-羥基呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image707
具體合成路線如下。
步驟A：合成 4-(6-溴吡啶-2-基)-4-羥基呱啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 02_image709
室溫下，將2,6-二溴吡啶(5克，21.18毫莫耳)溶於四氫呋喃(30毫升)中，在氮氣保護下加入異丙基氯化鎂-氯化鋰(16.3毫升)，室溫攪拌2小時，加入4-氧代呱啶-1-羧酸叔丁酯(4.23克，21.18毫莫耳)，室溫反應過夜。
反應結束後，加飽和氯化銨淬滅，乙酸乙酯萃取(30毫升×3次)，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮有機相，所得粗品用用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=5/1)得到2克淡黃色油狀液體4-(6-溴吡啶-2-基)-4-羥基呱啶-1-甲酸叔丁酯(收率：27%)。LC-MS: RT = 2.04 min, [M-55] += 301.11。
步驟B：合成 4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-4-羥基呱啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 02_image711
將3-氟-4-(羥甲基)苄腈(425毫克，2.81毫莫耳)，4-(6-溴吡啶-2-基)-4-羥基呱啶-1-甲酸叔丁酯(1克，2.81毫莫耳)，鈀催化劑(128毫克)，BINAP(175毫克，0.28毫莫耳)和碳酸銫(1.83克，5.62毫莫耳)溶於1,4-二氧六環(50毫升)中，溫度升高到110攝氏度攪拌8小時。
反應結束後，用矽藻土抽濾，二氯甲烷淋洗，濃縮濾液，所得粗品用柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=10/1)得到820毫克淡黃色油狀液體4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)4-羥基呱啶-1-羧酸叔丁酯(收率：68%)。LC-MS: RT = 2.12 min, [M-55] += 372.33。
步驟C：合成 3-氟-4-(((6-(4-羥基呱啶-4-基)吡啶基-2-基)氧基)甲基)苄腈
Figure 02_image713
將4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)4-羥基呱啶-1-羧酸叔丁酯(820毫克,1.92毫莫耳)溶於鹽酸的1,4-二氧六環溶液(15毫升)中，室溫攪拌。
反應完全後，減壓旋乾得到410毫克淡黃色固體3-氟-4-(((6-(4-羥基呱啶-4-基)吡啶基-2-基)氧基)甲基)苄腈(收率：69%)。LC-MS: RT = 1.63 min, [M+H] += 328.22。
步驟D：合成 2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-4-羥基呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯
Figure 02_image715
室溫下，將3-氟-4-(((6-(4-羥基呱啶-4-基)吡啶基-2-基)氧基)甲基)苄腈(150毫克，0.46毫莫耳)，碘化鉀(153毫克，0.92毫莫耳)和碳酸鉀(127毫克，0.92毫莫耳)溶於N,N-二甲基甲醯胺(10毫升)中，加入2-((S)-1-氯乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(141毫克，0.46毫莫耳)，升溫至50攝氏度反應。
反應結束後，加飽和氯化鈉淬滅，乙酸乙酯(30毫升×3次)萃取，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮所得粗品用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷= 10/1)得到100毫克白色固體2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-4-羥基呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(收率：36%)。LC-MS: RT = 1.73 min, [M+H] += 600.34。
步驟E：合成 2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-4-羥基呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image717
室溫下，將2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-4-羥基呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯1 (100毫克，0.17毫莫耳)溶於混合溶劑(6毫升，乙腈/水=5/1)中，加入1,5,7-三疊氮雙環(4,4,0)癸-5-烯(47毫克，0.34毫莫耳)，室溫反應。
反應結束後，加檸檬酸淬滅，乙酸乙酯萃取(10毫升×3次)，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮有機相，濃縮所得粗品用矽膠柱層析純化(洗脫劑：二氯甲烷/甲醇=10/1)得到58.26毫克白色固體2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-4-羥基呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸(收率：58%)。LC-MS: RT = 1.72 min, [M+H] += 585.36。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ12.86 (s, 1H), 10.63 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 7.94–7.67 (m, 6H), 7.24 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 6.78 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 5.70–5.40 (m, 3H), 5.28–5.06 (m, 2H), 4.90–4.72 (m, 2H), 4.46 (d, J= 6.2 Hz, 1H), 4.18 (dt, J= 9.2, 5.9 Hz, 1H), 3.86–3.70 (m, 1H), 3.60–3.40 (m, 2H), 3.24–3.10 (m, 2H), 2.69–2.54 (m, 2H), 2.30–2.22 (m, 1H), 1.82–1.64 (m, 4H)。
實施例28 合成 2-(1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)-2-氟乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image719
具體合成路線如下。
步驟A：合成 2-溴-3-羥基丙酸甲酯
Figure 02_image721
冰鹽浴下，向含有DL-絲氨酸(1.2克，11.4毫莫耳)的水溶液(9.3毫升)中，依次加入氫溴酸(2.8毫升，48%水溶液）、溴化鉀(4.6克，38.8毫莫耳)，和碳酸鉀(244毫克，1.77毫莫耳)，在該溫度攪拌10分鐘，室溫反應3小時。反應結束，乙酸乙酯(30毫升×3次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(30毫升×3次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。
所得殘餘物溶於甲醇(8.8毫升)，加入乙醯氯(924微升，13.0毫莫耳)，加熱至回流，反應3小時。反應結束，減壓蒸除溶劑，所得殘餘物用乙酸乙酯(100毫升)稀釋，依次用飽和碳酸氫鈉(50毫升)、飽和食鹽水(30毫升×3次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得1.5克粗產物直接用於下一步反應。
步驟B：合成 2-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基))吡啶-2-基)呱啶-1-基)-3-羥基丙酸甲酯
Figure 02_image723
室溫下，向含有2-溴-3-羥基丙酸甲酯(1.5克，8.2毫莫耳)的乙腈(4.0毫升)中依次加入3-氟-4-((((6-(呱啶-4-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苄腈(950毫克，2.73毫莫耳)、N,N-二異丙基乙胺(1.0毫升，6.06毫莫耳)和碳酸鉀(1.0克，7.25毫莫耳)，加熱至80攝氏度反應2小時。反應結束，乙酸乙酯(30毫升×3次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(50毫升)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：甲醇/二氯甲烷=5/95)，得到800毫克黃色油狀物2-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)-3-羥基丙酸甲酯（S、R構型混合物）(收率：71.3%)。LC-MS: RT = 1.70 min, [M+H] += 414.26。
步驟C：合成 2-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)-3-氟丙酸甲酯
Figure 02_image725
冰水浴下，向含有2-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)-3-羥基丙酸甲酯(200毫克，0.484毫莫耳)的二氯甲烷(5.0毫升)溶液中，加入雙(2-甲氧基乙基)氨基三氟化硫(179微升，0.969毫莫耳)，自然升至室溫反應2小時。
反應結束，冰水浴冷卻，加水淬滅，二氯甲烷(80毫升)萃取，有機相依次用飽和碳酸氫鈉(50毫升)、飽和食鹽水(50毫升)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：甲醇/二氯甲烷=3/97)。得到160毫克淡黃色油狀物2-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)-3-氟丙酸甲酯（S、R構型混合物）(收率：79.7%)。LC-MS: RT = 1.73 min, [M+H] += 416.26。
步驟D：合成 4-(2-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)-3-氟丙醯胺基)-3-((((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)氨基)苯甲酸甲酯
Figure 02_image727
室溫下，向含有2-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)-3-氟丙酸甲酯(160毫克，0.386毫莫耳)的四氫呋喃/甲醇/水溶液(3.0/0.5/0.5毫升)中，加入一水合氫氧化鋰 (71毫克，1.54毫莫耳)，室溫反應0.5小時。反應結束，用飽和氯化銨溶液淬滅，乙酸乙酯(30毫升×3次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(30毫升×3次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得粗產物直接用於下一步反應。LC-MS: RT = 1.72 min, [M+H] += 402.26。
上述粗產物溶於二氯甲烷(4.0毫升)，依次加入2-(7-氮雜苯并三氮唑)- N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽(293毫克，0.77毫莫耳) 、 N,N-二異丙基乙胺(127微升，0.77毫莫耳)和(S)-4-氨基-3-(((氧雜環丁-2-基)甲基)氨基)苯甲酸甲酯(90毫克，0.386毫莫耳)，室溫反應40分鐘。反應結束，用二氯甲烷(100毫升)稀釋，有機相依次用水(50毫升)和飽和食鹽水(50毫升)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：甲醇/二氯甲烷=5/95)。得到200毫克淡黃色油狀物4-(2-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)-3-氟丙醯胺基)-3-((((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)氨基)苯甲酸甲酯（S、R構型混合物）(收率：83.6%)。LC-MS: RT = 1.79 min, [M+H] += 620.36。
步驟E：合成 2-(1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)-2-氟乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯
Figure 02_image729
將4-(2-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)-3-氟丙醯胺基)-3-((((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)氨基)苯甲酸甲酯(200毫克，0.323毫莫耳)溶於乙酸(2.0毫升)中，於60攝氏度反應2小時。反應完畢，加入乙酸乙酯(100毫升)，攪拌下加入飽和碳酸氫鈉溶液直至無氣泡產生，分層，有機相依次用水(50毫升)和飽和食鹽水(50毫升)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：甲醇/二氯甲烷=5/95)。得到130毫克淡黃色油狀物2-(1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)-2-氟乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯（S、R構型混合物）(收率：67.0%)。LC-MS: RT = 1.81 min, [M+H] += 602.30。
步驟F：合成 2-(1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)-2-氟乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image731
室溫下，向含有2-(1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)-2-氟乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(130毫克，0.216毫莫耳)的四氫呋喃/甲醇/水溶液(2.5/2.5/1.0毫升)中，加入一水合氫氧化鋰(36毫克，0.86毫莫耳），加熱至35攝氏度反應1小時。反應完畢，用飽和氯化銨溶液淬滅，乙酸乙酯(30毫升×3次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(30毫升×3次）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：甲醇/二氯甲烷=6/94)。得到19毫克白色固體2-(1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)-2-氟乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸（S、R構型混合物）(收率：15.0%)。LC-MS: RT = 1.77 min, [M+H] += 588.23。
實施例29 2-((S)-1-((R)-4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-2-(甲氧基甲基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image733
具體合成路線如下。
步驟A：合成 4-(((6-溴吡啶-2-基)氧基)甲基)-3-氟苄腈
Figure 02_image735
將3-氟-4-(羥甲基)苄腈(5.00克，28.41毫莫耳)溶於N,N-二甲基甲醯胺(30毫升)中，加入碳酸鉀(7.84克，56.82毫莫耳)和2-溴-6-氟吡啶(4.30毫克，28.41毫莫耳)，升溫至110攝氏度反應。
反應結束後，加飽和氯化鈉淬滅，乙酸乙酯萃取(30毫升×3次)，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮有機相，所得粗品用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/10)得到4.50克白色固體4-(((6-溴吡啶-2-基)氧基)甲基)-3-氟苄腈(收率：52%)。LC-MS: RT = 2.14 min, [M+H] += 307.03。
步驟B：合成 (R)-4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-2-(羥甲基)呱嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 02_image737
將4-(((6-溴吡啶-2-基)氧基)甲基)-3-氟苄腈(1.00克，3.26毫莫耳)，(R)-2-(羥甲基)呱嗪-1-羧酸叔丁酯(0.70克，3.26毫莫耳)，鈀催化劑(302毫克)，BINAP(411毫克，0.66毫莫耳)，碳酸銫(2克，6.52毫莫耳)溶於1,4-二氧六環(20毫升)中，升溫至100攝氏度攪拌8小時。
反應結束後，用矽藻土抽濾，二氯甲烷淋洗，濃縮濾液，所得粗品用柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/1)得到1.00克淡黃色油狀液體(R)-4-(6-((4-氰基-2-氟苄基氧基)吡啶-2-基)-2-(羥甲基)呱嗪-1-甲酸叔丁酯(收率：69%)。LC-MS: RT = 2.09 min, [M-55] += 443.22。
步驟C：合成 (R)-4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-2-(甲氧基甲基)呱嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 02_image739
將(R)-4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-2-(羥甲基)呱嗪-1-甲酸叔丁酯(100毫克，0.23毫莫耳)溶於四氫呋喃(5毫升)中，降至零攝氏度，加入鈉氫(11毫克，0.46毫莫耳)，在室溫下攪拌0.5小時，加入碘甲烷(65毫克，0.46毫莫耳)，室溫反應過夜。
反應結束後，加飽和氯化鈉淬滅，乙酸乙酯(30毫升)萃取，水洗兩次，合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮有機相，所得粗品用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/2)得到280毫克淡黃色固體(R)-4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-2-(甲氧基甲基)呱嗪-1-甲酸叔丁酯(收率：48%)。LC-MS: RT = 2.25 min, [M-55] += 457.27。
步驟D：合成 (R)-3-氟-4-(((6-(3-(甲氧基甲基)呱嗪-1-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苄腈
Figure 02_image741
將(R)-4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-2-(甲氧基甲基)呱嗪-1-甲酸叔丁酯(50毫克，0.11毫莫耳)溶於鹽酸/1,4-二氧六環溶液(5毫升)中，室溫攪拌。
反應完全後，減壓旋乾得到粗品61毫克(R)-3-氟-4-(((6-(3-(甲氧基甲基)呱嗪-1-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苄腈。LC-MS: RT = 1.70 min, [M+H] += 357.18。
步驟E：合成 2-((S)-1-((R)-4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-2-(甲氧基甲基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯
Figure 02_image743
室溫下，將(R)-3-氟-4-(((6-(3-(甲氧基甲基)呱嗪-1-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苄腈(60毫克，0.17毫莫耳)，DIEA(1毫升)，碘化鉀(56毫克，0.34毫莫耳)和碳酸鉀(47克，0.34毫莫耳)溶於N,N-二甲基甲醯胺(5毫升)中，加入2-((S)-1-氯乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(52毫克，0.17毫莫耳)，升溫至60攝氏度反應。
反應結束後，加飽和氯化鈉淬滅，乙酸乙酯(20毫升×2次)萃取，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮所得粗品用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=10/1)得到20毫克淡黃色固體2-((S)-1-((R)-4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基]吡啶-2-基)-2-(甲氧基甲基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(收率：19%)。LC-MS: RT = 1.97 min, [M+H] += 629.33。
步驟F：合成 2-((S)-1-((R)-4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-2-(甲氧基甲基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image745
室溫下，將2-((S)-1-((R)-4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-2-(甲氧基甲基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯 (20毫克，0.03毫莫耳)溶於混合溶劑(3.5毫升，乙腈/水=3/0.5)中，加入1,5,7-三疊氮雙環(4,4,0)癸-5-烯(9毫克，0.06毫莫耳)，室溫反應。
反應結束後，加檸檬酸淬滅，乙酸乙酯萃取(10毫升×2次)，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮有機相，濃縮所得粗品用矽膠柱層析純化(洗脫劑：二氯甲烷/甲醇=10/1)得到12毫克白色固體2-((S)-1-((R)-4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基]吡啶-2-基)-2-(甲氧基甲基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸(收率：61%)。LC-MS: RT = 1.86 min, [M+H] += 615.31。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ12.71 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.86 (dd, J= 10.0, 1.3 Hz, 1H), 7.79 (dd, J= 8.4, 1.5 Hz, 1H), 7.69–7.64 (m, 2H), 7.61 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 7.44 (t, J= 8.0 Hz, 1H), 6.26 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 6.10 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 5.37 (s, 2H), 5.13 (d, J= 13.0 Hz, 2H), 4.87 (d, J= 6.6 Hz, 1H), 4.61 (dd, J= 15.8, 6.5 Hz, 1H), 4.44 (dd, J= 13.4, 8.0 Hz, 1H), 4.20 (dt, J= 9.0, 5.9 Hz, 1H), 4.08–3.96 (m, 1H), 3.82 (d, J= 11.8 Hz, 1H), 3.65 (dd, J= 10.5, 3.4 Hz, 1H), 3.53–3.41 (m, 1H), 3.33 (s, 3H), 2.81 (t, J= 11.3 Hz, 1H), 2.71–2.60 (m, 2H), 2.35 (d, J= 9.1 Hz, 2H), 2.27–2.13 (m, 2H), 1.39 (d, J= 6.6 Hz, 3H)。
實施例30 2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-3-氟吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image747
具體合成路線如下。
步驟A：合成 4-(6-溴-3-氟吡啶-2-基)呱嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 02_image749
將2,6-二溴-3-氟吡啶(1.0克，3.93毫莫耳)，碳酸鉀(1.08克，7.86毫莫耳)和呱嗪-1-羧酸叔丁酯(731毫克，3.93毫莫耳)溶於10毫升無水 N,N-二甲基甲醯胺中，於120攝氏度下反應2小時。反應結束，加水稀釋，乙酸乙酯(50毫升×2次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(30毫升×2次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮所得粗品經柱層析分離得1.18克白色固體4-(6-溴-3-氟吡啶-2-基)呱嗪-1-甲酸叔丁酯。LC-MS: RT =1.98 min, [M+H] +=360.10。
步驟B：合成 4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-3-氟吡啶-2-基)呱嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 02_image751
將4-(6-溴-3-氟吡啶-2-基)呱嗪-1-甲酸叔丁酯(400毫克，1.11毫莫耳)和3-氟-4-(羥甲基)苄腈(168毫克，1.11毫莫耳)溶解於5毫升無水1,4-二氧六環中，加入碳酸銫(723毫克，2.22毫莫耳)和(2-二環己基膦基-2′,4′,6′-三異丙基-1,1′-聯苯([2-(2′-氨基-1,1′-聯苯)]甲磺酸鈀(94毫克，0.111毫莫耳)，氮氣置換3次。於120攝氏度下反應5小時。反應結束，加水稀釋，乙酸乙酯(50毫升×2次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(30毫升×2次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮所得粗品經過柱分離得367毫克淡黃色固體4-(6-(((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-3-)氟吡啶-2-基)呱嗪-1-甲酸叔丁酯。LC-MS: RT =1.95 min, [M-H] -=431.22。
步驟C：合成 3-氟-4-(((5-氟-6-(呱嗪-1-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苄腈
Figure 02_image753
將4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-3-氟吡啶-2-基)呱嗪-1-甲酸叔丁酯(367毫克，0.85毫莫耳)溶於4毫升無水二氯甲烷中，加入2毫升三氟乙酸，於室溫下反應40分鐘。反應結束，反應液倒入60毫升碳酸氫鈉溶液中，乙酸乙酯(30毫升×3次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(20毫升×2次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得260毫克3-氟-4-(((5-氟-6-(呱嗪-1-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苄腈。LC-MS: RT =1.81 min, [M+H] += 331.27。
步驟D：合成 2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-3-氟吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯
Figure 02_image755
將3-氟-4-(((5-氟-6-(呱嗪-1-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苄腈(260毫克，0.785毫莫耳)，碳酸鉀(216毫克，1.57毫莫耳)和碘化鉀(195毫克，1.17毫莫耳)溶於5毫升無水乙腈中，加入2-((S)-1-氯乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(241毫克，0.785毫莫耳)，於60攝氏度下反應2小時。反應結束，加水稀釋，乙酸乙酯(40毫升×2次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(30毫升×2次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮所得粗品經柱層析分離得310毫克淡黃色固體2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-3-氟吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯。LC-MS: RT =1.91 min, [M+H] += 603.27。
步驟E：合成 2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-3-氟吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image757
將2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-3-氟吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯 (100毫克，0.166毫莫耳)溶解於4毫升乙腈中，加入1,5,7-三氮雜二環[4.4.0]癸-5-烯(48.4毫克，0.348毫莫耳)和1毫升水，於室溫下反應7小時。反應結束，加20毫升飽和氯化銨中和，二氯甲烷(30毫升×2次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(20毫升×2次)洗滌無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮所得粗品經柱層析分離製備得38毫克白色固體2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-3-氟吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸。LC-MS: RT =1.79 min, [M+H] +=589.27。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.78 (s, 1H), 8.29 (d, J= 1.0 Hz, 1H), 7.88 (dd, J= 10.0, 1.2 Hz, 1H), 7.81 (dd, J= 8.4, 1.5 Hz, 1H), 7.72–7.64 (m, 3H), 7.49–7.44 (m, 1H), 6.26 (dd, J= 8.4, 1.6 Hz, 1H), 5.37 (s, 2H), 5.19–5.11 (m, 1H), 4.83–4.78 (m, 1H), 4.69 (dd, J= 15.6, 5.6 Hz, 1H), 4.49–4.43 (m, 2H), 4.21–4.16 (m, 1H), 2.66–2.62 (m, 2H), 2.60–2.55 (m, 6H), 2.37–2.30 (m, 2H), 1.44 (d, J= 6.7 Hz, 3H)。
實施例31 2-((1S)-1-((3,4- trans)-4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image759
具體合成路線如下。
步驟A：合成 (3,4- trans)-4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-3-醇
Figure 02_image761
將(3,4- trans)-4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-1-甲酸叔丁酯(350毫克，0.802毫莫耳)溶於5毫升無水二氯甲烷中，加入2毫升三氟乙酸，於室溫下反應40分鐘。反應結束，反應液倒入60毫升碳酸氫鈉溶液中，乙酸乙酯(50毫升×2次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(30毫升×2次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得270毫克(3,4- trans)-4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-3-醇。LC-MS: RT = 1.81 min, [M+H] += 337.17。
步驟B：合成 2-((1S)-1-((3,4- trans)-4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯
Figure 02_image763
將(3,4- trans)-4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-3-醇(270毫克，0.801毫莫耳)，碳酸鉀(222毫克，1.61毫莫耳)和碘化鉀(199毫克，1.21毫莫耳)溶於5毫升無水乙腈中，加入2-((S)-1-氯乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(246毫克，0.801毫莫耳)，60攝氏度下反應2小時。反應結束，加水稀釋，乙酸乙酯(40毫升×2次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(30毫升×2次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮所得粗品經柱層析分離得320毫克淡黃色固體2-((1S)-1-((3,4- trans)-4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯。LC-MS: RT =1.86 min, [M+H] += 609.27。
步驟C：合成 2-((1S)-1-((3,4- trans)-4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image765
將2-((1S)-1-((3,4- trans)-4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯 (150毫克，0.246毫莫耳)溶解於4毫升乙腈中，加入1,5,7-三氮雜二環[4.4.0]癸-5-烯(71.8毫克，0.517毫莫耳)和1毫升水，於室溫下反應7小時。反應結束，加20毫升飽和氯化銨中和，二氯甲烷(30毫升×2次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(20毫升×2次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮所得粗品經柱層析分離製備得41毫克白色固體2-((1S)-1-((3,4- trans)-4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸(收率：三步8.6%)。LC-MS: RT =1.78 min, [M+H] +=595.25。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.78 (s, 1H), 8.30 (dd, J= 5.1, 1.0 Hz, 1H), 7.83–7.80 (m, 1H), 7.74–7.71 (m, 1H), 7.70–7.68 (m, 1H), 7.61–7.54 (m, 2H), 7.48–7.42 (m, 1H), 7.28–7.24 (m, 1H), 6.84–6.81 (m, 1H), 6.65 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 5.42–5.32 (m, 2H), 5.24–5.14 (m, 1H), 4.85–4.80 (m, 1H), 4.72–4.66 (m, 1H), 4.55–4.41 (m, 3H), 4.22–4.16 (m, 1H), 3.20–3.17 (m, 2H), 2.70–2.60 (m, 2H), 2.40–2.32 (m, 3H), 1.88 (t, J= 5.9 Hz, 2H), 1.48 (dd, J= 6.7, 2.7 Hz, 3H)。
實施例32 2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-3,5-二氟吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image767
具體合成路線如下。
步驟A：合成 3-氟-4-(((3,5,6-三氟吡啶-2-基)氧基)甲基)苄腈
Figure 02_image769
將3-氟-4-(羥甲基)苄腈(151毫克，1毫莫耳)和2,3,5,6-四氟吡啶(151毫克，1毫莫耳)溶解於2毫升 N-甲基吡咯烷酮中，加入碳酸鉀(414毫克，3毫莫耳)，氮氣置換3次，於100攝氏度下反應8小時。
反應結束，加水稀釋，乙酸乙酯(50毫升×3次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(20毫升×3次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮所得粗品經過柱(正己烷/乙酸乙酯=8/1)分離得212毫克淡黃色固體合成3-氟-4-(((3,5,6-三氟吡啶-2-基)氧基)甲基)苄腈(收率：76.3%)。LC-MS: RT=2.09 min, [M-H] +=279.13。
步驟B：合成 4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-3,5-二氟吡啶-2-基)呱嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 02_image771
將3-氟-4-(((3,5,6-三氟吡啶-2-基)氧基)甲基)苄腈(212毫克，0.76毫莫耳)和呱嗪-1-羧酸叔丁酯(157毫克，0.84毫莫耳)溶解於2毫升 N,N-二甲基甲醯胺中，加入碳酸鉀(210毫克，1.52毫莫耳)，氮氣置換3次，於110攝氏度下反應8小時。
反應結束，加水稀釋，乙酸乙酯(50毫升×3次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(20毫升×3次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮所得粗品經過柱(正己烷/乙酸乙酯=8/1)分離得198毫克淡黃色固體合成4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-3,5-二氟吡啶-2-基)呱嗪-1-甲酸叔丁酯(收率：58.0%)。
步驟C：合成4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-3,5-二氟吡啶-2-基)呱嗪
Figure 02_image773
將4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-3,5-二氟吡啶-2-基)呱嗪-1-甲酸叔丁酯(198毫克，0.44毫莫耳)溶解於3毫升甲醇中，零攝氏度下，加入4M鹽酸1,4-二氧六環溶液(3毫升)，升至室溫反應40分鐘。
反應結束，反應液直接旋乾得215毫克白色固體4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-3,5-二氟吡啶-2-基)呱嗪，直接用於下一步反應。LC-MS: RT = 1.68 min, [M+H] += 349.16。
步驟D：合成 2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-3,5-二氟吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯
Figure 02_image775
室溫下，將4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-3,5-二氟吡啶-2-基)呱嗪(215毫克，0.44毫莫耳)、2-((S)-1-氯乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(135毫克，0.44毫莫耳)、碘化鉀(73毫克，0.44毫莫耳)和碳酸銫(287毫克，0.88毫莫耳)加入 N, N-二甲基甲醯胺(10.0毫升)中，加入 N, N-二異丙基乙胺(1.0毫升)，氮氣保護下，60攝氏度反應3.0小時。
反應結束，加水淬滅，乙酸乙酯(50毫升×3次)萃取。合併有機相，飽和食鹽水(30毫升×3次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮有機相，所得物矽膠柱層析純化(洗脫劑：二氯甲烷/甲醇=20/1)得到205毫克淡黃色固體2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-3,5-二氟吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(收率：75.1%)。LC-MS: RT=1.89min, [M+H] += 621.34。
步驟E：合成 2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-3,5-二氟吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image777
室溫下，向含有2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-3,5-二氟吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯 (205毫克，0.33毫莫耳)的四氫呋喃(3.0毫升)中，滴加氫氧化鋰(16毫克，0.66毫莫耳)水溶液(1.0毫升)，加入(1.0毫升)的甲醇，25攝氏度下反應3.0小時。
反應結束，加水淬滅，用氯化銨水溶液(0.5莫耳/升)調pH至6，二氯甲烷(30毫升×3次)萃取，合併有機相，氯化銨水溶液(30毫升×3次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得到的粗產品經過柱分離純化(洗脫劑：二氯甲烷/甲醇=15/1),得132毫克淡黃色固體2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-3,5-二氟吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸(收率：51.1%)。LC-MS: RT = 1.79 min, [M+H] += 607.29。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 12.74 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.92–7.86 (m, 1H), 7.83–75 (m, 2H), 7.72–7.62 (m, 3H), 5.45 (d, J= 13.7 Hz, 2H), 5.13 (d, J= 2.9 Hz, 1H), 4.83–4.74 (m, 1H), 4.67 (dd, J= 15.4, 5.5 Hz, 1H), 4.49–4.40 (m, 2H), 4.17 (dt, J= 9.1, 5.8 Hz, 1H), 3.29–3.18 (m, 3H), 2.67–2.52 (m, 5H), 2.29 (dd, J= 18.2, 7.3 Hz, 1H), 1.42 (t, J= 8.0 Hz, 3H)。
實施例33 2-((1S)-1-((3,4- cis)-4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-氟呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image779
具體合成路線如下。
步驟A：合成 (3,4- cis)-4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-氟呱啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 02_image781
將(3,4- trans)-4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-1-甲酸叔丁酯(500毫克，1.14毫莫耳)溶於5毫升無水二氯甲烷中，零攝氏度下，加入二乙胺基三氟化硫(220毫克,1.37毫莫耳)，於該溫度下反應30分鐘。反應結束，反應液倒入60毫升冰水中，乙酸乙酯(40毫升×2次)萃取，合併有機相，用飽和食鹽水(30毫升×2次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得485毫克(3,4- cis)-4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-氟呱啶-1-甲酸叔丁酯。LC-MS: RT =1.97min, [M+H] += 439.22。
步驟B：合成 2-((4-氯-2-氟苄基)氧基)-6-((3,4- cis)-3-氟呱啶-4-基)吡啶
Figure 02_image783
將(3,4- cis)-4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-氟呱啶-1-甲酸叔丁酯(485毫克，1.10毫莫耳)溶於5毫升無水二氯甲烷中，加入2毫升三氟乙酸，於室溫下反應40分鐘。反應結束，反應液倒入60毫升碳酸氫鈉溶液中，乙酸乙酯(50毫升×2次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(30毫升×2次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮得330毫克2-((4-氯-2-氟苄基)氧基)-6-((3,4- cis)-3-氟呱啶-4-基)吡啶。LC-MS: RT =1.92min, [M+H] += 339.17。
步驟C：合成 2-((1S)-1-((3,4- cis)-4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-氟呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯
Figure 02_image785
將2-((4-氯-2-氟苄基)氧基)-6-((3,4- cis)-3-氟呱啶-4-基)吡啶(330毫克，0.973毫莫耳)，碳酸鉀(268毫克，1.94毫莫耳)和碘化鉀(242毫克，1.46毫莫耳)溶於5毫升無水乙腈中，加入2-((S)-1-氯乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(299毫克，0.973毫莫耳)，於60攝氏度下反應2小時。反應結束，加水稀釋，用乙酸乙酯(40毫升×2次)萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(30毫升×2次)洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮所得粗品經柱層析分離得510毫克淡黃色固體2-((1S)-1-((3,4- cis)-4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-氟呱啶-1-基)乙基)-1-甲基((S)-氧雜環丁烷-2-基甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯。LC-MS: RT =2.08 min, [M+H] += 611.23。
步驟D：合成 2-((1S)-1-((3,4- cis)-4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-氟呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image787
將2-((1S)-1-((3,4- cis)-4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-氟呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(200毫克，0.327毫莫耳)溶解於4毫升乙腈中，加入1,5,7-三氮雜二環[4.4.0]癸-5-烯(95.5毫克，0.687毫莫耳)和1毫升水，於室溫下反應7小時。反應結束，加20毫升飽和氯化銨中和，二氯甲烷(40毫升×2次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(20毫升×2次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮所得粗品經柱層析分離製備得47毫克白色固體2-((1S)-1-((3,4- cis)-4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-氟呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸(收率：四步6.9%)。LC-MS: RT =1.96 min, [M+H] +=597.23。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.77 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 7.84–7.80 (m, 1H), 7.73–7.69 (m, 1H), 7.66–7.60 (m, 1H), 7.57–7.53 (m, 1H), 7.42 (ddd, J= 10.0, 4.8, 2.0 Hz, 1H), 7.28–7.23 (m, 1H), 6.90 (d, J= 7.4 Hz, 1H), 6.72 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 5.43–5.34 (m, 2H), 5.20–5.14 (m, 1H), 5.02–4.82 (m, 1H), 4.78–4.68 (m, 2H), 4.62–4.53 (m, 2H), 4.43 (dd, J= 13.5, 7.8 Hz, 1H), 4.21–4.16 (m, 1H), 3.03–2.91 (m, 1H), 2.77–2.57 (m, 3H), 2.34–2.18 (m, 2H), 1.85–1.61 (m, 2H), 1.50 (dd, J= 6.7, 2.8 Hz, 3H)。
實施例34 2-((S)-1-((R)-4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-2-(氟甲基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image789
具體合成路線如下。
步驟A：合成 2-((S)-1-((R)-4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-2-(羥甲基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯
Figure 02_image791
室溫下，將(R)-3-氟-4-(((6-(3-(羥甲基)呱嗪-1-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苄腈(160毫克，0.47毫莫耳)，DIEA(1毫升)，碘化鉀(155毫克，0.93毫莫耳)和碳酸鉀(129克，0.93毫莫耳)溶於 N,N-二甲基甲醯胺(5毫升)中，加入2-((S)-1-氯乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(144毫克，0.47毫莫耳)，升溫至50攝氏度反應。
反應結束後，加飽和氯化鈉淬滅，乙酸乙酯(20毫升×2次)萃取，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮所得粗品用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=10/1)得到94毫克淡黃色固體2-((S)-1-((R)-4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-2-(羥甲基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(收率：33%)。LC-MS: RT = 1.81 min, [M+H] += 615.30。
步驟B：合成 2-((S)-1-((R)-4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-2-(氟甲基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯
Figure 02_image793
將2-((S)-1-((R)-4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-2-(羥甲基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(90毫克，0.15毫莫耳)溶於二氯甲烷(2毫升)中，冷卻至零下78攝氏度，加入DAST(63毫克，0.29毫莫耳)，低溫下攪拌。
反應結束後，加飽和氯化鈉淬滅，乙酸乙酯(10毫升×2次)萃取，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮所得粗品用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=10/1)得到80毫克淡黃色固體2-((S)-1-((R)-4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-2-(氟甲基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(收率：33%)。LC-MS: RT = 2.09 min, [M+H] += 617.27。
步驟C：合成 2-((S)-1-((R)-4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-2-(氟甲基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image795
室溫下，將2-((S)-1-((R)-4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-2-(氟甲基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(80毫克，0.13毫莫耳)溶於混合溶劑(6毫升，乙腈/水=5/1)中，加入1,5,7-三疊氮雙環(4,4,0)癸-5-烯(36毫克，0.26毫莫耳)，室溫反應。
反應結束後，加檸檬酸淬滅，乙酸乙酯萃取(10毫升×2次)，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮有機相，濃縮所得粗品高效液相製備得到9毫克白色固體2-((S)-1-((R)-4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-2-(氟甲基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸(收率：12%)。LC-MS: RT = 1.97 min, [M+H] += 603.31。
實施例35 2-((1S)-1-((3,4- cis)-4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image797
具體合成路線如下。
步驟A：合成 6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)-3',6'-二氫-[2,4'-二吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯
Figure 02_image799
將(4-氯-2-氟苯基)甲醇(17克，106.5毫莫耳)溶於四氫呋喃(300毫升)中，降至零攝氏度，加入氫化鈉(5.6克，142毫莫耳)，在室溫下攪拌0.5小時，加入6-氟-3',6'-二氫-[2,4'-二吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯(20克，71毫莫耳)，室溫下攪拌過夜。
反應結束後，加飽和氯化鈉淬滅，乙酸乙酯(30毫升)萃取，水洗兩次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮所得粗品用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/10)得到10克白色固體6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)-3',6'-二氫-[2,4'-二吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯(收率：34%)。LC-MS: RT = 2.15 min, [M+H] += 419.23。
步驟B：合成 (3,4- trans)-4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 02_image801
將6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)-3',6'-二氫-[2,4'-二吡啶]-1'(2'H)-羧酸叔丁酯(10克，24毫莫耳)溶於四氫呋喃(150毫升)中，降至零攝氏度，緩慢滴加硼烷的四氫呋喃溶液(1M，26毫升，26毫莫耳)，在室溫下攪拌0.5小時，加入氫氧化鈉(1M，2.4克)和過氧化氫(30%，10毫升)，室溫下攪拌過夜。
反應結束後，加飽和亞硫酸氫鈉溶液和飽和的碳酸氫鈉溶液淬滅，乙酸乙酯(30毫升×3次)萃取，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮所得粗品用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/5)得到9克白色固體(3,4- trans)-4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-1-甲酸叔丁酯(收率：90%)。LC-MS: RT = 1.90 min, [M+H] += 437.37
步驟C：合成 (3,4- cis)-4-(6-(((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-((4-硝基苯甲醯基)氧基)呱啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 02_image803
將三苯基膦溶於四氫呋喃中，冰浴下加入偶氮二甲酸二乙酯(800毫克，4.6毫莫耳)，攪拌0.5小時，加入(3,4- trans)-4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-1-甲酸叔丁酯(1克，2.3毫莫耳)，攪拌15分鐘，加入對硝基苯甲酸(768毫克，4.6毫莫耳)，室溫下攪拌16小時。
反應結束後，加飽和氯化鈉淬滅，乙酸乙酯(100毫升×3次)萃取，合併有機相，水洗兩次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮所得粗品用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/10)得到800毫克白色固體黃色固體(3,4- cis)-4-(6-(((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-((4-硝基苯甲醯基)氧基)呱啶-1-甲酸叔丁酯(收率：45%)。LC-MS: RT = 2.13 min, [M+H] += 586.19。
步驟D：合成 (3,4- cis)-4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 02_image805
將(3,4- cis)-4-(6-(((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-((4-硝基苯甲醯基)氧基)呱啶-1-甲酸叔丁酯(500毫克，0.85毫莫耳)溶於甲醇(10毫升)和水(2毫升)中，加入一水合氫氧化鋰(107毫克，2.55毫莫耳)，室溫下反應1小時。
反應結束後，加水淬滅稀釋，乙酸乙酯(20毫升×3次)萃取，合併有機相，飽和碳酸氫鈉洗兩次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮所得400毫克黃色固體(3,4- cis)-4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-1-甲酸叔丁酯(收率：98%)。LC-MS: RT = 1.90 min, [M+H] += 437.25。
步驟E：合成 (3,4- cis)-4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-3-醇
Figure 02_image807
室溫下，將(3,4- cis)-4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-1-甲酸叔丁酯(150毫克，0.34毫莫耳)溶於1,4-二氧六環(2毫升)中，冰水浴下加入鹽酸/1,4-二氧六環溶液(2毫升)，室溫下攪拌0.5個小時。
反應結束後，濃縮得到120毫克白色固體(3,4- cis)-4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-3-醇。LC-MS: RT = 1.65 min, [M+H] += 337.25。
步驟F：合成 2-((1S)-1-((3,4- cis)-4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯
Figure 02_image809
室溫下，將(3,4- cis)-4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-3-醇(120毫克，0.34毫莫耳)溶於 N,N-二甲基甲醯胺(2毫升)中，加入2-((S)-(1-氯甲基)-1-(((S)氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(157毫克，0.51毫莫耳)，碘化鉀(113毫克，0.68毫莫耳)和碳酸鉀(88毫克，0.68毫莫耳)，60攝氏度下攪拌12小時。
反應結束後，加飽和氯化鈉淬滅，乙酸乙酯萃取(10毫升×2次)，合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮有機相，所得粗品用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/1)得到60毫克無色油狀液體2-((1S)-1-((3,4- cis)-4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(收率：42%)。LC-MS: RT= 1.97 min, [M+H] += 609.35。
步驟G：合成 2-((1S)-1-((3,4- cis)-4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image811
將2-((1S)-1-((3,4- cis)-4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯 (60毫克，0.1毫莫耳)溶於四氫呋喃(3毫升)，甲醇(1毫升)和水(1毫升)中，室溫下加入一水合氫氧化鋰(12毫克，0.3毫莫耳)，反應4小時。
反應結束後，濃縮，所得粗品高效液相純化得到18.22毫克白色固體2-((1S)-1-((3,4- cis)-4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸(收率：30%)。LC-MS: RT = 1.81 min, [M+H] += 595.27。
實施例36 2-((1S)-1-((3,4- trans)-4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-氟呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image813
具體合成路線如下。
步驟A：合成 (3,4- trans)-4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-氟呱啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 02_image815
將(3,4- cis)-4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-羥基呱啶-1-甲酸叔丁酯(200毫克，0.45毫莫耳)溶於四氫呋喃中，冰水浴下加入二乙胺基三氟化硫(147毫克，0.9毫莫耳)，冰水浴下攪拌0.5小時。
反應結束後，加飽和氯化鈉淬滅，乙酸乙酯(50毫升×3次)萃取，水洗兩次，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮所得粗品用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/10)得到150毫克黃色固體黃色固體(3,4- trans)-4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-氟呱啶-1-甲酸叔丁酯(收率：76%)。LC-MS: RT = 2.03 min, [M+H] += 439.19
步驟B：合成 2-((4-氯-2-氟苄基)氧基)-6-((3,4- trans)-3-氟呱啶-4-基)吡啶
Figure 02_image817
室溫下，將(3,4- trans)-4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)苯基)-3-氟呱啶-1-甲酸叔丁酯(150毫克，0.34毫莫耳)溶於1,4-二氧六環(2毫升)中，冰水浴下，加入鹽酸/1,4-二氧六環溶液(2毫升)，室溫下攪拌0.5小時。
反應結束後，濃縮得到120毫克白色固體2-((4-氯-2-氟苄基)氧基)-6-((3,4- trans)-3-氟呱啶-4-基)吡啶。LC-MS: RT = 1.68 min, [M+H] += 339.29。
步驟C：合成 2-((1S)-1-((3,4- trans)-4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-氟呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯
Figure 02_image819
室溫下，將2-((4-氯-2-氟苄基)氧基)-6-((3,4- trans)-3-氟呱啶-4-基)吡啶(120毫克，0.34毫莫耳)溶於 N,N-二甲基甲醯胺(2毫升)中，加入2-((S)-1-氯甲基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(157毫克，0.51毫莫耳)，碘化鉀(113毫克，0.68毫莫耳)和碳酸鉀(88毫克，0.68毫莫耳)，60攝氏度下攪拌12個小時。
反應結束後，加飽和氯化鈉淬滅，乙酸乙酯萃取(10毫升×2次)，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮有機相，所得粗品用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/1)得到60毫克無色油狀液體2-((1S)-1-((3,4- trans)-4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-氟呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(收率：42%)。LC-MS: RT= 1.99 min, [M+H] += 611.38。
步驟D：合成 2-((1S)-1-((3,4- trans)-4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-氟呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image821
將2-((1S)-1-((3,4- trans)-4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-氟呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并 [d]咪唑-6-羧酸甲酯 (60毫克，0.1毫莫耳)溶於四氫呋喃(3毫升)，甲醇(1毫升)和水(1毫升)中，室溫下，加入一水合氫氧化鋰(12毫克，0.3毫莫耳)，反應4小時。
反應結束後，濃縮，所得粗品經高效液相純化得到18.22毫克白色固體2-((1S)-1-((3,4- trans)-4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-氟呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸(收率：30%)。LC-MS: RT= 1.88 min, [M+H] += 597.23。
實施例37 2-((S)-1-(4-(6-((3-氟喹啉-8-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image823
具體合成路線如下。
步驟A：合成 2-((S)-1-(4-(6-((3-氟喹啉-8-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯
Figure 02_image825
室溫下，向含有3-氟-8-(((6-(呱啶-4-基)吡啶基-2-基)氧基)甲基)喹啉(132毫克，0.325毫莫耳)的 N,N-二甲基甲醯胺溶液(2.0毫升)中，加入 N,N-二異丙基乙基胺(161微升，0.975毫莫耳)，攪拌溶解。依次加入2-((S)-1-氯乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(100毫克，0.325毫莫耳)，碳酸鉀(90毫克，0.65毫莫耳)，碘化鉀(108毫克，0.65毫莫耳)。加畢，加熱至60攝氏度攪拌1小時。
反應結束，加飽和氯化銨溶液淬滅，乙酸乙酯(30毫升×3次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(30毫升×3次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：甲醇/二氯甲烷=6/94)。得到111毫克無色油狀物2-((S)-1-(4-(6-((3-氟喹啉-8-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(收率：56.0%)。LC-MS: RT = 1.87 min, [M+H] += 610.33。
步驟B：合成 2-((S)-1-(4-(6-((3-氟喹啉-8-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image827
室溫下，向含有2-((S)-1-(4-(6-((3-氟喹啉-8-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯 (111毫克，0.18毫莫耳)的四氫呋喃/甲醇/水溶液(2.5/2.5/1.0毫升)中，加入一水合氫氧化鋰(31毫克，0.73毫莫耳)，加熱至35攝氏度反應1小時，反應完畢，用飽和氯化銨溶液淬滅，乙酸乙酯(30毫升×3次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(30毫升×3次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：甲醇/二氯甲烷=8/92)。得到27毫克白色固體2-((S)-1-(4-(6-((3-氟喹啉-8-基)甲氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸(收率：24.9%)。LC-MS: RT = 1.82 min, [M+H] += 596.32。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.75 (s, 1H), 9.00 (d, J= 2.9 Hz, 1H), 8.30 (dd, J= 9.6, 2.9 Hz, 1H), 8.27 (d, J= 0.8 Hz, 1H), 7.95 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 7.85 – 7.77 (m, 2H), 7.70 – 7.58 (m, 3H), 6.83 (d, J= 7.3 Hz, 1H), 6.71 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 5.97 (s, 2H), 5.18 – 5.10 (m, 1H), 4.77 (dd, J= 15.5, 2.7 Hz, 1H), 4.62 (dd, J= 15.5, 5.4 Hz, 1H), 4.46 – 4.35 (m, 2H), 4.14 (dt, J= 9.1, 5.8 Hz, 1H), 2.94 (d, J= 10.6 Hz, 1H), 2.66 – 2.51 (m, 4H), 2.34 – 2.17 (m, 2H), 1.85 – 1.62 (m, 3H), 1.55 – 1.47 (m, 1H), 1.45 (d, J= 6.7 Hz, 3H)。
實施例38 2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氨基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-環氧丁烷-2-基)甲基)-1- H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image829
具體合成路線如下。
步驟A：合成 6-氨基-3’6’-二氫-[2,4’-聯吡啶]-1’(2’H)-羧酸叔丁酯
Figure 02_image831
室溫下，將4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼雜環戊烷-2-基)-3,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(500.4毫克，1.6毫莫耳）、2-氨基-6-氯吡啶(420.3毫克，3.2毫莫耳）、[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(146.3毫克，0.2毫莫耳)和碳酸銫(1.2克，3.5毫莫耳)加入到1,4-二噁烷(30毫升)及水(6毫升)中。氮氣置換保護，升溫至90攝氏度回流反應24小時。
待反應完全後，反應液用矽藻土過濾，減壓濃縮濾液。加水(100毫升)稀釋，乙酸乙酯(50毫升×3次)萃取，飽和食鹽水(50毫升×3次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯=6/1）得到310.7毫克黃色油狀物6-氨基-3’6’-二氫-[2,4’-聯吡啶]-1’(2’H)-羧酸叔丁酯。(收率：69.6%)
步驟B：合成 4-(6-氨基吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯
Figure 02_image833
室溫下，將6-氨基-3’6’-二氫-[2,4’-聯吡啶]-1’(2’H)-羧酸叔丁酯(310.2毫克，1.1毫莫耳)溶解在甲醇(10毫升)中，加入二氧化鉑(12.5毫克，55.0微莫耳)。氫氣置換3次，在氫氣保護下反應24小時。待反應完全後，反應液用矽藻土過濾，減壓濃縮濾液。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯=1/1），得到103.5毫克白色油狀物4-(6-氨基吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯(收率：33.0%)。LC-MS: RT = 3.25 min, [M+H] += 278.21。
步驟C：合成 4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氨基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯
Figure 02_image835
室溫下，將4-(6-氯吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯(103.2毫克，371.4微莫耳)、4-(溴甲基)-3-氟苯氰(159.02毫克，742.8微莫耳)、碳酸鉀(151.8毫克，1.1毫莫耳)溶解加入到 N,N-二甲基甲醯胺(3毫升)中。升至60攝氏度反應6小時。
待反應完全後，加水(20毫升)稀釋，乙酸乙酯(10毫升×3次)萃取，飽和食鹽水(15毫升×3次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯=5/1)得到101.2毫克黃色油狀物4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氨基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯(收率：66.4%)。LC-MS:RT = 4.07 min, [M+Na] += 433.25
步驟D：合成 3-氟-4-(((6-(呱啶-4-基)吡啶-2-基)氨基)甲基)苯甲氰
Figure 02_image837
室溫下，將4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氨基)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯(101.3毫克，246.0微莫耳)溶解於4莫耳每升的鹽酸乙酸乙酯溶液(5毫升)中，攪拌1小時，逐漸有白色固體析出。待反應完全後，將反應液減壓濃縮，加水(20毫升)稀釋，滴入飽和碳酸鈉水溶液將混合液調至鹼性，將水層以乙酸乙酯(10毫升×3次)萃取，飽和食鹽水(15毫升×3次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。得到76.4毫克白色粉末3-氟-4-(((6-(呱啶-4-基)吡啶-2-基)氨基)甲基)苯甲氰，無需純化，直接用於下步反應。LC-MS:RT = 2.69min, [M+H] += 311.04
步驟E：合成 2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氨基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1- H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯
Figure 02_image839
在室溫下，將化合物3-氟-4-(((6-(呱啶-4-基)吡啶-2-基)氨基)甲基)苯甲氰(76.1毫克，244.7微莫耳)，2-((S)-1-氯丙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-甲酸甲酯(83.2毫克，269.2微莫耳)和碳酸鉀(170.3毫克，1.2毫莫耳)溶解在 N,N-二甲基甲醯胺(10毫升)中，在50攝氏度反應16小時。
待反應完全後，加水(20毫升)稀釋，乙酸乙酯(50毫升×3次)萃取，飽和食鹽水(20毫升×3次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：石油醚/乙酸乙酯=1/1~0/1)，得到102.9毫克2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氨基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1- H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(收率：72.1%)。LC-MS: RT =1.97min, [M+H] += 583.73。
步驟F：合成 2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氨基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1- H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image841
在室溫下，將2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氨基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1- H-苯并咪唑-6-羧酸甲酯 (102.9毫克，171.8微莫耳），溶解在四氫呋喃(10毫升)、乙醇(3毫升)和水(3毫升)溶液中，加入氫氧化鈉(76.0毫克，1.9毫莫耳)，在室溫下反應16小時。
反應完全後，滴加1莫耳每升的檸檬酸水溶液，直到溶液的pH到5為止。加水(20毫升)稀釋，乙酸乙酯(25毫升×3次)萃取，飽和食鹽水(25毫升×3次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮。所得殘餘物經半製備HPLC純化(流動相：含0.1%氨水的水/乙腈=90/10~40/60）進行進一步的純化，得到20.5毫克白色固體2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氨基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1- H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸 (收率：20.4%)。LC-MS: RT =1.08min, [M+H] += 569.60。
實施例39 2-((S)-1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸（39A） 和 2-((R)-1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸（39B）
Figure 02_image843
具體合成路線如下。
步驟A：合成 2-氯-6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶
Figure 02_image845
零攝氏度下，向含(4-氯-2-氟苯基)甲醇（5.0克，31.14毫莫耳）的四氫呋喃（50.0毫升）中，加入叔丁醇鉀（4.88克，43.60毫莫耳)，攪拌30分鐘後，加入2,6-二氯吡啶（4.2克，28.38毫莫耳），於25攝氏度下反應過夜。
反應結束，加水（50毫升）淬滅，乙酸乙酯（50毫升×3次）萃取，合併有機相，飽和食鹽水（50毫升×3次）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷 = 1/2)。得到7.53克黃色油狀物2-氯-6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶(收率：88.9%)。LC-MS: RT = 2.27 min, [M+H] += 272.05。
步驟B：合成 4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-羧酸叔丁酯
Figure 02_image847
25攝氏度下，向含有2-氯-6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶（7.53克，27.68毫莫耳）的1,4-二氧六環中，加入呱嗪-1-羧酸叔丁酯（5.15克，27.68毫莫耳）、碳酸銫（18.05克，55.36毫莫耳）和甲烷磺酸(2-二環己基膦基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯基)(2'-氨基-1,1'-聯苯-2-基)鈀(II)（702.5毫克，0.83毫莫耳），於100攝氏度下反應3小時。
反應結束，加水淬滅，乙酸乙酯（50毫升×3次）萃取，合併有機相，飽和食鹽水（50毫升×2次）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷= 1/2)。得到4.7克白色固體4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-羧酸叔丁酯(收率：40.2%)。LC-MS: RT = 2.39 min, [M+H] +=422.22。
步驟C：合成 4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪
Figure 02_image849
向含有4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-羧酸叔丁酯（4.34克, 10.28毫莫耳）的甲醇（30毫升）中，加入含鹽酸的1,4-二氧六環溶液（20.0毫升，4莫耳/升），於室溫下反應3小時。
反應結束，反應液直接旋乾得3.68克白色固體4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪，直接用於下一步。LC-MS: RT = 1.65 min, [M+H] += 312.26。
步驟D：合成 2-(1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯
Figure 02_image851
向含有4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪（750毫克, 2.09毫莫耳）的乙腈（8.0毫升）中，加入 N,N-二異丙基乙胺(1.0毫升)、碘化鉀(420毫克，3.13毫莫耳)、碳酸鉀(577毫克，4.18毫莫耳)、 N,N-二甲基甲醯胺(10.0毫升)，最後加入2-((S)-1-氯乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)- 1H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯（650毫克, 2.09毫莫耳），N 2保護下，於60攝氏度反應3小時。
反應結束，加水淬滅，乙酸乙酯（30毫升×2次）萃取，合併有機相，飽和食鹽水（30毫升）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷 = 2/1。得到770毫克黃色固體2-(1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(收率：62.1%， dr= 60%)。LC-MS: RT = 1.92 min, [M+H] += 594.26。
步驟E：合成 2-((S)-1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸（39A） 和 2-((R)-1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸（39B）
Figure 02_image853
零攝氏度下，向含有2-(1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(770毫克, 1.30毫莫耳)的四氫呋喃（3毫升）和甲醇（1毫升）混合溶液中，滴加氫氧化鋰(307毫克, 7.30毫莫耳)的水溶液（1毫升），於25攝氏度下反應30分鐘。
反應結束，加水淬滅，乙酸乙酯（30毫升×2次）萃取，合併有機相用，飽和食鹽水（20毫升）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：甲醇/二氯甲烷=1/10。得到313毫克白色固體2-((S)-1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸（39A）(收率：41.6%)和78毫克白色固體2-((R)-1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸（39B）（收率10.4%）。粗產品用製備型高效液相色譜純化。分離條件如下：色譜柱：Agilent 5 Prep-C18 100mm×30mm 5μM；流動相：水(含有0.1%的氨水)和乙腈洗脫；流速：20毫升/分鐘；梯度：由25%乙腈在15.23分鐘及17.06分鐘分別洗脫出來39A和39B，檢測波長：254 nm。
化合物39A：HPLC: RT = 15.23 min。 LC-MS: RT = 1.88min, [M+H] += 580.26。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 8.26 (s, 1H), 7.80 (dd, J= 8.4, 1.5 Hz, 1H), 7.66 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.49 (t, J= 8.2 Hz, 1H), 7.44 (dt, J= 16.0, 4.9 Hz, 2H), 7.28 (dd, J= 8.2, 1.8 Hz, 1H), 6.28 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 6.06 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 5.29 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 5.14 (d, J= 3.0 Hz, 1H), 4.80 (dd, J= 15.5, 2.9 Hz, 1H), 4.68 (dd, J= 15.5, 5.5 Hz, 1H), 4.52–4.40 (m, 2H), 4.18 (dt, J= 9.1, 5.7 Hz, 1H), 3.40 (d, J= 5.3 Hz, 4H), 2.68–2.59 (m, 1H), 2.54 (d, J= 16.1 Hz, 4H), 2.38–2.26 (m, 1H), 1.45 (d, J= 6.7 Hz, 3H)。
其中化合物39A的單晶結構示意圖如圖1所示，具體晶體參數如下：
Crystal system orthorhombic
Space group P2 12 12 1
a/Å 6.8179(3)
b/Å 20.0543(12)
c/Å 20.3816(9)
α/° 90
β/° 90
γ/° 90
Volume/Å 3 2786.7(2)
Z 4
ρ calcg/cm 3 1.3825
μ/mm ‑1 0.190
F(000) 1217.2
Crystal size/mm 3 0.205 × 0.182 × 0.097
Radiation Mo Kα (λ = 0.71073)
2Θ range for data collection/° 4.06 to 62
Index ranges -9 ≤ h ≤ 8, -28 ≤ k ≤ 29, -29 ≤ l ≤ 22
Reflections collected 25423
Independent reflections 8847 [R int = 0.0434, R sigma = 0.0632]
Data/restraints/parameters 8847/0/355
Goodness-of-fit on F 2 1.227
Final R indexes [I＞=2σ (I)] R 1 = 0.0578, wR 2 = 0.1306
Final R indexes [all data] R 1 = 0.1173, wR 2 = 0.1546
Largest diff. peak/hole / e Å -3 0.60/-0.62
Flack parameter -0.11(10)
化合物39B：HPLC: RT = 17.06 min。 LC-MS: RT = 1.88min, [M+H] += 580.26。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ12.74 (s, 1H), 8.27–8.26 (m, 1H), 7.79 (dd, J= 9.9, 1.4 Hz, 1H), 7.66 (dd, J= 8.4, 1.5 Hz, 1H), 7.50 (t, J= 8.0 Hz, 1H), 7.46–7.42 (m, 2H), 7.29–7.27 (m, 1H), 6.30 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 6.07 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 5.29 (s, 2H), 4.93–4.87 (m, 1H), 4.60–4.55 (m, 1H), 4.52–4.47 (m, 3H), 3.47–3.38 (m, 5H), 2.79–2.72 (m, 1H), 2.64–2.61 (m, 2H), 2.56–2.47 (m, 2H), 1.42 (d, J= 6.7 Hz, 3H)。
實施例40 2-(1-(1-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-4-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image855
具體合成路線如下。
步驟A：合成 2-(呱啶-4-基)丙酸乙酯
Figure 02_image857
將4-(1-乙氧基-1-氧代丙烷-2-基)呱啶-1-甲酸叔丁酯（520毫克,1.82毫莫耳）溶於4毫升無水二氯甲烷中，加入2毫升三氟乙酸，於室溫下反應40分鐘。反應結束，反應液倒入50毫升碳酸氫鈉溶液中，乙酸乙酯（30毫升×2次）萃取，合併有機相，飽和食鹽水（20毫升×2次）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得310毫克2-(呱啶-4-基)丙酸乙酯(收率：92.1%)。
步驟B：合成 2-(1-(6-氯吡啶-2-基)呱啶-4-基)丙酸乙酯
Figure 02_image859
向含有2-(呱啶-4-基)丙酸乙酯（310毫克，1.67毫莫耳）的 N,N-二甲基甲醯胺（10.0毫升）中，加入 N,N-二異丙基乙胺（432毫克，3.35毫莫耳)，攪拌2分鐘後，加入2,6-二氯吡啶（245毫克，1.67毫莫耳），於120攝氏度下反應3小時。
反應結束，加水（50毫升）淬滅，乙酸乙酯（50毫升×3次）萃取，合併有機相用，飽和食鹽水（50毫升）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷 = 1/2)。得到422克淡黃色固體2-(1-(6-氯吡啶-2-基)呱啶-4-基)丙酸乙酯(收率：85.1%)。LC-MS: RT = 2.21min, [M+H] += 297.23。
步驟C：合成 2-(1-(6-氯吡啶-2-基)呱啶-4-基)丙酸
Figure 02_image861
將2-(1-(6-氯吡啶-2-基)呱啶-4-基)丙酸乙酯（422毫克,1.42毫莫耳）溶於10毫升甲醇和水的混合液中，加入氫氧化鈉固體（142毫克,3.55毫莫耳），於40攝氏度下反應3小時。
反應結束，反應液用稀鹽酸中和至pH = 6左右，乙酸乙酯（50毫升×3次）萃取，合併有機相，飽和食鹽水（50毫升）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得264毫克2-(1-(6-氯吡啶-2-基)呱啶-4-基)丙酸(收率：69.1%)。LC-MS: RT =1.94 min, [M+H] += 269.11。
步驟D：合成 4-(2-(1-(6-氯吡啶-2-基)呱啶-4-基)丙醯胺基)-3-((((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)氨基)苯甲酸甲酯
Figure 02_image863
向含有2-(1-(6-氯吡啶-2-基)呱啶-4-基)丙酸（240毫克，0.892毫莫耳），1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺（255毫克，1.34毫莫耳)的二氯甲烷（10.0毫升）中，加入吡啶（141毫克，1.78毫莫耳)，攪拌10分鐘後，加入(S)-4-氨基-3-(((氧雜環丁烷-2-基)甲基)氨基)苯甲酸甲酯（211毫克，0.892毫莫耳），於室溫下反應3小時。
反應結束，加水（50毫升）淬滅，二氯甲烷（50毫升×3次）萃取，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷 = 1/1)。得到166克淡黃色固體4-(2-(1-(6-氯吡啶-2-基)呱啶-4-基)丙醯胺基)-3-((((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)氨基)苯甲酸甲酯(收率：38.2%)。LC-MS: RT = 1.98min, [M+H] += 487.23。
步驟E：合成 2-(1-(1-(6-氯吡啶-2-基)呱啶-4-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯
Figure 02_image865
將4-(2-(1-(6-氯吡啶-2-基)呱啶-4-基)丙醯胺基)-3-((((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)氨基)苯甲酸甲酯（166毫克,0.341毫莫耳）溶於5毫升醋酸中，於85攝氏度下反應12小時。
反應結束，反應液用飽和碳酸氫鈉中和至pH = 7左右，乙酸乙酯（50毫升×3次）萃取，合併有機相，飽和食鹽水（50毫升）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得86毫克2-(1-(1-(6-氯吡啶-2-基)呱啶-4-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(收率：53.7%)。LC-MS: RT = 2.24 min, [M+H] += 469.23。
步驟F：合成 2-(1-(1-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-4-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯
Figure 02_image867
室溫下，向含有2-(1-(1-(6-氯吡啶-2-基)呱啶-4-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯（86.0毫克，0.183毫莫耳），3-氟-4-(羥甲基)苄腈（33.2毫克，0.221毫莫耳）的1,4-二氧六環（5毫升）中，加入碳酸銫（119毫克，0.366毫莫耳）和甲烷磺酸(2-二環己基膦基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯基)(2'-氨基-1,1'-聯苯-2-基)鈀(II)（15.5毫克，0.0183毫莫耳），100攝氏度反應3小時。
反應結束，加水淬滅，混合液用乙酸乙酯（20毫升×3次）萃取，合併有機相，飽和食鹽水（30毫升×2次）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷= 5/1)。得到52毫克淡黃色固體2-(1-(1-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-4-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(收率：48.6%)。LC-MS: RT =2.12 min, [M+H] += 584.27。
步驟G：合成 2-(1-(1-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-4-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image869
將2-(1-(1-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-4-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯（52.0毫克,0.089毫莫耳）溶解於4毫升乙腈中，加入 1,5,7-三氮雜二環[4.4.0]癸-5-烯（25.9毫克,0.187毫莫耳）和1毫升水，於室溫下反應7小時。
反應結束，加20毫升飽和氯化銨中和，二氯甲烷（30毫升×2次）萃取，合併有機相，飽和食鹽水（20毫升×2次）洗滌無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮所得粗品經prep-HPLC（氨水）分離製備得22毫克白色固體2-((S)-1-(4-(4-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸(收率：43.4%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.71 (s, 1H), 8.20 (dd, J= 6.1, 1.3 Hz, 1H), 7.87–7.90 (m, 1H), 7.79 (dd, J= 8.4, 1.6 Hz, 1H), 7.68–7.71 (m, 1H), 7.59–7.66 (m, 2H), 7.41–7.45(m, 1H), 6.30 (dd, J= 8.2, 4.8 Hz, 1H), 6.05–6.08 4(m, 1H), 5.38 (s, 2H), 4.95–5.05 (m, 1H), 4.44–4.55 (m, 2H), 4.25–4.28 (m, 1H), 4.06–4.13 (m, 1H), 3.06–3.15 (m, 2H), 2.58–2.77 (m, 5H), 2.32–2.38 (m, 1H),1.96–2.10 (m, 2H), 1.80–1.95 (m, 2H), 1.28 (t, J= 6.7 Hz, 3H).LC-MS: RT = 1.97 min, [M+H] += 570.29。
實施例41  2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-4-(甲氧基甲基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image871
具體合成路線如下。
步驟A：合成 2,6-二氯-4-(甲氧基甲基)吡啶
Figure 02_image873
零攝氏度下，向含有(2,6-二氯吡啶-4-基)甲醇（1.00克，5.68毫莫耳）的四氫呋喃（10.0毫升）中，加入60%氫化鈉（272毫克，6.81毫莫耳)，攪拌5分鐘後，加入碘甲烷（873毫克，6.24毫莫耳），於零到室溫下反應2小時。
反應結束，加水（50毫升）淬滅，乙酸乙酯（50毫升×3次）萃取，合併有機相，飽和食鹽水（50毫升）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷 = 1/5)。得到670毫克白色固體2,6-二氯-4-(甲氧基甲基)吡啶(收率：61.4%)。LC-MS: RT = 2.24min, [M+H] += 192.23。
步驟B：合成 4-(6-氯-4-(甲氧基甲基)吡啶-2-基)呱嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 02_image875
向含有2,6-二氯-4-(甲氧基甲基)吡啶（670毫克，3.48毫莫耳），呱嗪-1-羧酸叔丁酯（647毫克，3.48毫莫耳）的乙腈（10.0毫升）中，加入碳酸鉀（960毫克，6.96毫莫耳)，於95攝氏度下反應3小時。
反應結束，加水（50毫升）淬滅，乙酸乙酯（50毫升×3次）萃取，合併有機相，飽和食鹽水（50毫升）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷= 1/3)。得到746毫克淡黃色固體4-(6-氯-4-(甲氧基甲基)吡啶-2-基)呱嗪-1-甲酸叔丁酯(收率：62.6%)。LC-MS: RT = 2.18 min, [M+H] += 342.17。
步驟C：合成 4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-4-(甲氧基甲基)吡啶-2-基)呱嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 02_image877
室溫下，向含有4-(6-氯-4-(甲氧基甲基)吡啶-2-基)呱嗪-1-甲酸叔丁酯（250毫克，0.733毫莫耳），3-氟-4-(羥甲基)苄腈（122毫克，0.806毫莫耳）的1,4-二氧六環（5毫升）中，加入碳酸銫（477毫克，1.46毫莫耳）和甲烷磺酸(2-二環己基膦基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯基)(2'-氨基-1,1'-聯苯-2-基)鈀(II)（62.1毫克，0.0733毫莫耳），於100攝氏度反應3小時。
反應結束，加水淬滅，乙酸乙酯（50毫升×3次）萃取，合併有機相，飽和食鹽水（50毫升×2次）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/2)。得到320毫克淡黃色固體4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-4-(甲氧基甲基)吡啶-2-基)呱嗪-1-甲酸叔丁酯(收率：69.5%)。LC-MS: RT =1.98 min, [M+H] +=456.27。
步驟D：合成 3-氟-4-(((4-(甲氧基甲基)-6-(呱嗪-1-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苄腈
Figure 02_image879
將4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-4-(甲氧基甲基)吡啶-2-基)呱嗪-1-甲酸叔丁酯（320毫克, 0.701毫莫耳）溶於4毫升無水二氯甲烷中，加入2毫升三氟乙酸，於室溫下反應40分鐘。
反應結束，反應液倒入50毫升碳酸氫鈉溶液中，乙酸乙酯（30毫升×2次）萃取，合併有機相，飽和食鹽水（20毫升×2次）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得236毫克3-氟-4-(((4-(甲氧基甲基)-6-(呱嗪-1-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苄腈(收率：94.4%)。LC-MS: RT =1.83 min, [M+H] +=356.27。
步驟E：合成2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-4-(甲氧基甲基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯
Figure 02_image881
室溫下，向含有3-氟-4-(((4-(甲氧基甲基)-6-(呱嗪-1-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苄腈（236毫克, 0.662毫莫耳）的乙腈（8.0毫升）中，加入2-((S)-1-氯乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯（204毫克,  0.662毫莫耳）、碘化鉀（165毫克, 0.993毫莫耳）和碳酸鉀（183毫克, 1.32毫莫耳），60攝氏度下反應5小時。
反應結束，加水淬滅，乙酸乙酯（30毫升×2次）萃取，合併有機相，飽和食鹽水（30毫升）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷= 5/1。得到296毫克淡黃色固體2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-4-(甲氧基甲基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-((((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(收率：71.1%)。LC-MS: RT = 1.89 min, [M+H] += 629.27。
步驟F：合成2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-4-(甲氧基甲基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image883
將2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-4-(甲氧基甲基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯（120毫克,0.191毫莫耳）溶解於4毫升乙腈中，加入 1,5,7-三氮雜二環[4.4.0]癸-5-烯（55.7毫克,0.401毫莫耳）和1毫升水，於室溫下反應7小時。
反應結束，加入20毫升飽和氯化銨中和，二氯甲烷（30毫升×2次）萃取，合併有機相，飽和食鹽水（20毫升×2次）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得粗品經柱層析分離製備得36毫克白色固體2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-4-(甲氧基甲基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸(收率：30.7%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.77 (s, 1H), 8.28 (d, J= 0.9 Hz, 1H), 7.85–7.91(m, 1H), 7.81 (dd, J= 8.4, 1.5 Hz, 1H), 7.67–7.72 (m, 2H), 7.60–7.66 (m, 1H), 6.23 (s, 1H), 6.05 (s, 1H), 5.39 (s, 2H), 5.12–5.19 (m, 1H), 4.80 (dd, J= 16.2, 3.7 Hz, 1H), 4.65–4.73 (m, 1H), 4.42–4.52 (m, 2H), 4.29 (s, 2H), 4.14–4.23 (m, 1H), 3.27 (s, 3H), 3.14–3.23 (m, 2H), 2.60–2.68 (m, 2H), 2.52–2.56 (m, 3H), 2.30–2.36(m, 1H), 1.81–1.96 (m, 2H), 1.44 (d, J= 6.7 Hz, 3H). LC-MS: RT = 1.79 min, [M+H] += 615.38。
實施例42  2-((S)-1-(4-(4-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-5-氟嘧啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image885
具體合成路線如下。
步驟A：合成 4-(((2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氧基)甲基)-3-氟苄腈
Figure 02_image887
將(4-氰基-2-氟苯基)甲醇(2克，13.2毫莫耳)溶於四氫呋喃(100毫升)中，降溫至零攝氏度，加入氫化鈉(0.8克，19.5毫莫耳)，在室溫下攪拌0.5小時,加入2,4-二氯-5-氟嘧啶(3.3克，71毫莫耳)，室溫下攪拌過夜。
反應結束後，加入飽和氯化鈉淬滅，乙酸乙酯(30毫升)萃取，水洗兩次，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得粗品用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/10)得到2克白色固體4-(((2-氯-5-氟嘧啶-4-基)氧基)甲基)-3-氟苄腈(收率：53%)。LC-MS: RT = 2.12 min, [M+H] += 282.23。
步驟B：合成 4-(4-(((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-5-氟嘧啶-2-基)呱嗪)-1-甲酸叔丁酯
Figure 02_image889
將4-(((2-氰基-5-氟嘧啶-4-基)氧基)甲基)-3-氟苄腈(1克，3.5毫莫耳)溶於四氫呋喃(50毫升)中，加入呱嗪-1-羧酸叔丁酯(1克, 5.3毫莫耳)，於90攝氏度下攪拌過夜。
反應結束後，加入飽和氯化鈉淬滅，用乙酸乙酯(30毫升×2次)萃取，合併並乾燥有機相，減壓濃縮，所得粗品用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷= 1/5)得到1克白色固體4-(4-(((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-5-氟嘧啶-2-基)呱嗪)-1-甲酸叔丁酯(收率：44%)。LC-MS: RT = 1.89 min, [M+H] += 432.37。
步驟C：合成 3-氟-4-(((5-氟-2-(呱嗪-1-基)嘧啶-4-基)氧基)甲基)苄腈
Figure 02_image891
室溫下，將4-(4-(((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-5-氟嘧啶-2-基)呱嗪)-1-甲酸叔丁酯(1克，2.3毫莫耳)溶於二氧六環(10毫升)中，冰水浴下加入氯化氫二氧六環溶液(10毫升)，室溫下攪拌0.5小時。
反應結束後，濃縮得到120毫克白色固體3-氟-4-(((5-氟-2-(呱嗪-1-基)嘧啶-4-基)氧基)甲基)苄腈。LC-MS: RT = 1.62 min, [M+H] +=332.25。
步驟D：合成 2-((S)-1-(4-(4-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-5-氟嘧啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯
Figure 02_image893
室溫下，將3-氟-4-(((5-氟-2-(呱嗪-1-基)嘧啶-4-基)氧基)甲基)苄腈(200毫克 0.6毫莫耳)溶於 N,N-二甲基甲醯胺(10毫升)中，加入(S)-2-(氯乙基)-1-(((S)氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(186毫克，0.6毫莫耳),碘化鉀(200毫克，1.2毫莫耳)和碳酸鉀(166毫克，1.2毫莫耳)，於60攝氏度下攪拌12小時。
反應結束後，加入飽和氯化鈉淬滅，乙酸乙酯萃取(10毫升×2次)，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮有機相，所得粗品用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/1)得到150毫克無色油狀液體2-((S)-1-(4-(4-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-5-氟嘧啶-2-基）呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯 (收率：41%)。LC-MS: RT = 1.95 min, [M+H] += 603.35。
步驟E：合成 2-((S)-1-(4-(4-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-5-氟嘧啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image895
將2-((S)-1-(4-(4-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-5-氟嘧啶-2-基）呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯 (150毫克，0.25毫莫耳)溶於乙腈(10毫升)和水(2毫升)中，加入1,3,4,6,7,8-六氫-2H-嘧啶[1,2-a]嘧啶(139毫克，1.0毫莫耳)，於室溫下反應4小時。
反應結束後，濃縮，所得粗品高效液相純化得到55.11毫克白色固體2-((S)-1-(4-(4-((4-氰基-2-氟苄基)氧基）-5-氟嘧啶-2-基）呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸(收率：37%)。LC-MS: RT= 1.80 min, [M+H] += 590.27。
實施例43 2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-4-甲氧基吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image897
具體合成路線如下。
步驟A：合成 2-氯-6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-4-甲氧基吡啶
Figure 02_image899
零攝氏度下，向含有(4-氰基-2-氟苯基)甲醇（1.0克，6.23毫莫耳）的四氫呋喃（10.0毫升）中，加入叔丁醇鉀（0.98克，8.72毫莫耳)，攪拌30分鐘後，加入2,6-二氯-4-甲氧基吡啶（1.1克，6.23毫莫耳），於25攝氏度下反應過夜。
反應結束，加水（50毫升）淬滅，乙酸乙酯（50毫升×3次）萃取，合併有機相，飽和食鹽水（50毫升×3次）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷 = 1/2)。得到0.98克黃色油狀物2-氯-6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-4-甲氧基吡啶(收率：53.9%)。LC-MS: RT = 2.15 min, [M+H]+ = 293.05。
步驟B：合成 4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-4-甲氧基吡啶-2-基)呱嗪-1-羧酸叔丁酯
Figure 02_image901
25攝氏度下，向含有2-氯-6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-4-甲氧基吡啶（0.98克，3.36毫莫耳）的1,4-二氧六環中，加入呱嗪-1-羧酸叔丁酯（0.62克，3.36毫莫耳）、碳酸銫（2.2克，6.72毫莫耳）和甲烷磺酸(2-二環己基膦基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯基)(2'-氨基-1,1'-聯苯-2-基)鈀(II)（288毫克，0.34毫莫耳），於100攝氏度下反應3小時。
反應結束，加水淬滅，乙酸乙酯（50毫升×3次）萃取，合併有機相，飽和食鹽水（50毫升×2次）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷= 1/2)。得到1.2克白色固體4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-4-甲氧基吡啶-2-基)呱嗪-1-羧酸叔丁酯(收率：80.8%)。LC-MS: RT = 2.23 min, [M+H] += 443.29。
步驟C：合成 4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-4-甲氧基吡啶-2-基)呱嗪
Figure 02_image903
25攝氏度下，向含有4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-4-甲氧基吡啶-2-基)呱嗪-1-羧酸叔丁酯（1.2克, 2.71毫莫耳）的甲醇（20毫升）中，加入鹽酸的1,4-二氧六環溶液（10.0毫升，4莫耳/升），於25攝氏度下反應3小時。
反應結束，反應液直接旋乾得1.33克白色固體4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-4-甲氧基吡啶-2-基)呱嗪，直接用於下一步。LC-MS: RT = 1.72 min, [M+H] += 343.18。
步驟D：合成2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-4-甲氧基吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯
Figure 02_image905
25攝氏度下，向含有4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-4-甲氧基吡啶-2-基)呱嗪鹽酸鹽（1.33克, 2.71毫莫耳）的乙腈（8.0毫升）中，加入 N,N-二異丙基乙胺(1.0毫升)、碘化鉀(676毫克，4.07毫莫耳)、碳酸鉀(748毫克，5.42毫莫耳)、N,N-二甲基甲醯胺(10.0毫升)，最後加入2-((S)-1-氯乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯（837毫克, 2.71毫莫耳），N 2保護下，於60攝氏度反應3小時。
反應結束，加水淬滅，乙酸乙酯（30毫升×2次）萃取，合併有機相，飽和食鹽水（30毫升）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷= 2/1。得到900毫克黃色固體2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-4-甲氧基吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯 (收率：54.0%)。LC-MS: RT = 1.92 min, [M+H]+ = 615.31。
步驟E：合成2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-4-甲氧基吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image907
零攝氏度下，向含有2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-4-甲氧基吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯 (9000毫克, 1.46毫莫耳)的四氫呋喃（3毫升）和甲醇（1毫升）混合溶液中，滴加氫氧化鋰(307毫克, 7.30毫莫耳)的水溶液（1毫升），於25攝氏度下反應30分鐘。
反應結束，加水淬滅，乙酸乙酯（30毫升×2次）萃取，合併機相，飽和食鹽水（20毫升）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：甲醇/二氯甲烷=1/10。得到430毫克白色固體2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-4-甲氧基吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸(收率：49.0%)。LC-MS: RT = 1.79 min, [M+H]+ = 601.39。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.75 (s, 1H), 8.27 (t, J= 2.4 Hz, 1H), 7.86 (dd, J= 10.0, 1.3 Hz, 1H), 7.79 (ddd, J= 5.6, 4.1, 1.5 Hz, 1H), 7.71–7.65 (m, 2H), 7.62 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 5.83 (t, J= 4.1 Hz, 1H), 5.76–5.71 (m, 1H), 5.35 (s, 2H), 5.12 (d, J= 3.0 Hz, 1H), 4.78 (dd, J= 15.5, 2.9 Hz, 1H), 4.67 (dd, J= 15.5, 5.5 Hz, 1H), 4.52–4.41 (m, 2H), 4.20–4.11 (m, 1H), 3.71 (d, J= 3.0 Hz, 3H), 3.33 (s, 4H), 2.67–2.59 (m, 1H), 2.50 (d, J= 1.2 Hz, 4H), 2.31 (dt, J= 18.4, 7.4 Hz, 1H), 1.48–1.39 (m, 3H)。
實施例44 2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image909
具體合成路線如下。
步驟A：合成 4-(6-氯-4-(三氟甲基)吡啶-2-基)呱嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 02_image911
室溫下，將2,6-二氯-4-(三氟甲基)吡啶(500.0毫克，2.32毫莫耳)、呱嗪-1-羧酸叔丁酯(431.5毫克，2.32毫莫耳)和碳酸鉀(641.3毫克，4.64毫莫耳)加入 N,N-二甲基甲醯胺(20.0毫升)中，N 2保護下，於100攝氏度反應6小時。
反應結束，加水淬滅，乙酸乙酯(30毫升×3次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(20毫升×2次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=5/1)，得到677.0毫克淡黃色固體4-(6-氯-4-(三氟甲基)吡啶-2-基)呱嗪-1-甲酸叔丁酯 (收率：79.6%)。LC-MS: RT = 1.93 min, [M+H] +-56= 310.11。
步驟B：合成 4-(6-(((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-基)呱嗪)-1-甲酸叔丁酯
Figure 02_image913
室溫下，將4-(6-氯-4-(三氟甲基)吡啶-2-基)呱嗪-1-甲酸叔丁酯(300.0毫克，0.82毫莫耳), 3-氟-4-(羥甲基)苄腈(148.6毫克，0.98毫莫耳)和碳酸銫(534.6毫克，1.64毫莫耳)加入二氧六環(15.0毫升)中，再加入甲烷磺酸(2-二環己基膦基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯基)(2'-氨基-1,1'-聯苯-2-基)鈀(II) (35.0毫克，0.04毫莫耳)，N 2保護下，於100攝氏度反應5.0小時。
反應結束，加水淬滅，二氯甲烷 (50毫升×3次)萃取。合併有機相，飽和食鹽水(30毫升×3次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，最後矽膠柱層析純化(洗脫劑：正己烷：乙酸乙酯=10：1)得到240.0毫克淡黃色油狀固體4-(6-(((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-基)呱嗪)-1-甲酸叔丁酯(收率：60.1%)。LC-MS: RT = 1.95 min, [M-56+H] += 425.26。
步驟C：合成 3-氟-4-((((6-(呱嗪-1-基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苄腈
Figure 02_image915
室溫下，將4-(6-(((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-基)呱嗪)-1-甲酸叔丁酯(240.0毫克，0.50毫莫耳)加入二氧六環的鹽酸溶液(1.00毫莫耳/毫升，5毫升)中， N 2保護下，於室溫反應1小時。
反應結束，減壓濃縮。得到195.0毫克淡黃色固體3-氟-4-((((6-(呱嗪-1-基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苄腈 (收率：100.0%)直接用於下步反應。LC-MS: RT = 1.72 min, [M+H] += 381.17。
步驟D：合成 2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯
Figure 02_image917
室溫下，將3-氟-4-((((6-(呱嗪-1-基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苄腈(50.0毫克，0.13毫莫耳)，2-((S)-1-氯乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(40.0毫克，0.13毫莫耳)和碳酸銫(40.4毫克，0.13毫莫耳)、碘化鉀(22.0毫克，0.13毫莫耳)加入 N,N-二甲基甲醯胺(5.0毫升)中，最後加入 N,N-二異丙基乙胺(0.50毫升)，N 2保護下，於50攝氏度反應4.0小時。
反應結束，加水淬滅，用乙酸乙酯(50毫升×3次)萃取。合併有機相，飽和食鹽水(30毫升×3次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，最後矽膠柱層析純化(洗脫劑：二氯甲烷：甲醇=20：1)得到50.2毫克白色固體2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯 (收率：59.1%)。LC-MS: RT = 1.83 min, [M+H] += 653.27。
步驟E：合成 2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image919
室溫下，向含有2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯 (50.2毫克，0.08毫莫耳)的乙腈(12.0毫升)中滴加1,5,7-三氮雜二環[4.4.0]癸-5-烯(33.4毫克，0.24毫莫耳)水溶液(3.0毫升)，室溫下反應3小時。
反應結束，加水淬滅，用檸檬酸水溶液(0.5莫耳/升)調pH至6，混合液用二氯甲烷(30毫升×3次)萃取，合併有機相，檸檬酸水溶液(30毫升×2次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，粗產品用製備型高效液相色譜純化。分離條件如下，色譜柱：Agilent 5 Prep-C18 100mm×30mm 5μM；流動相：水(含有0.1%的氨水)和乙腈；流速：20毫升/分鐘；梯度：由32.3%乙腈在8.12分鐘洗脫出來；檢測波長：254 nm。純化後，低溫凍乾得到22.0毫克白色固體2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸(收率：44.1%)。LC-MS: RT = 1.75 min, [M+H] += 639.33。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.26 (d, J= 0.9 Hz, 1H), 7.88 (dd, J= 10.0, 1.2 Hz, 1H), 7.79 (dd, J= 8.4, 1.5 Hz, 1H), 7.68 (qd, J= 7.8, 3.6 Hz, 3H), 6.55 (s, 1H), 6.33 (s, 1H), 5.43 (s, 2H), 5.13 (dd, J= 13.9, 8.9 Hz, 1H), 4.70 (ddd, J= 25.6, 10.8, 4.3 Hz, 2H), 4.46 (dd, J= 17.0, 4.8 Hz, 2H), 4.20–4.12 (m, 1H), 3.48 (d, J= 5.4 Hz, 4H), 2.67–2.51 (m, 5H), 2.38–2.24 (m, 1H), 1.43 (d, J= 6.7 Hz, 3H).
實施例45 2-((S)-1-(4-(4-氰基-6-((4-氰基-2-氟苄基)氧代)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-((( S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image921
具體合成路線如下。
步驟A:合成 4-(6-氯-4-氰基吡啶-2-基)呱嗪-1-羧酸叔丁酯
Figure 02_image923
室溫下，將2,6二氯-4-氰基吡啶（1.0克，5.78毫莫耳），N-Boc-呱嗪（1.29克，6.94毫莫耳）和碳酸鉀（1.6克，11.56毫莫耳）加入到10毫升乾燥的乙腈中，升溫至85攝氏度下反應4小時。
反應結束後，將反應液冷卻至室溫，倒入40毫升的冰水溶液中，攪拌30分鐘，抽濾，水洗濾餅。濾餅乾燥後得1.7克白色固體4-(6-氯-4-氰基吡啶-2-基)呱嗪-1-羧酸叔丁酯（收率：91.4%）。LC-MS：RT = 2.18 min，[M+H] += 223.10。
步驟B:合成 4-(4-氰基-6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-羧酸叔丁酯
Figure 02_image925
室溫下，將中間體4-(6-氯-4-氰基吡啶-2-基)呱嗪-1-羧酸叔丁酯（500毫克，1.55毫莫耳）以及3-氟-4-羥甲基苯甲腈（258毫克，1.70毫莫耳），甲烷磺酸(2-二環己基膦基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯基)(2'-氨基-1,1'-聯苯-2-基)鈀(II)（65.7毫克，0.08毫莫耳）和碳酸銫（1012毫克，3.1毫莫耳）加入到10毫升乾燥的二氧六環溶液中，N 2保護下，110攝氏度反應2小時。
反應結束後，蒸乾反應液，乙酸乙酯萃取(20毫升)，無水硫酸鈉乾燥，蒸乾得淡黃色固體。柱層析純化（正己烷/乙酸乙酯= 5/2），得380毫克淡黃色固體4-(4-氰基-6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-羧酸叔丁酯（收率：56.1%）。LC-MS：RT = 2.21 min，[M-56] += 379.25。
步驟C:合成 2-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-6-(呱嗪-1-基)異煙腈
Figure 02_image927
室溫下，將4-(4-氰基-6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-羧酸叔丁酯（380毫克，0.87毫莫耳）溶於10毫升甲醇溶劑中，冰浴下加入10毫升4M/L的鹽酸二氧六環溶液，室溫反應2小時。
反應結束後，蒸乾反應液得340毫克白色固體2-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-6-(呱嗪-1-基)異煙腈（收率：116.0%）。LC-MS：RT = 1.70 min，[M+H] += 338.18。
步驟D：合成2-((S)-1-(4-(4-氰基-6-((4-氰基-2-氟苄基)氧代)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-((( S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯
Figure 02_image929
室溫下，將中間體2-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-6-(呱嗪-1-基)異煙腈（380毫克，0.87毫莫耳）以及2-((S)-1-氯乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯（267毫克，0.87毫莫耳）、碳酸鉀（240毫克，1.74毫莫耳）和碘化鉀（217毫克，1.3毫莫耳）加入至10毫升DMF溶液中，升溫至60攝氏度反應10小時。
反應結束後，將反應液倒入冰水，析出固體，抽濾，水洗濾餅得300毫克白色產品2-((S)-1-(4-(4-氰基-6-((4-氰基-2-氟苄基)氧代) 吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-((( S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯（收率：56.6%）。LC-MS：RT = 1.93 min，[M+H] += 610.34。
步驟E：合成2-((S)-1-(4-(4-氰基-6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基) 吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-((( S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image931
室溫下，將中間體2-((S)-1-(4-(4-氰基-6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基) 吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-((( S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯（100毫克，0.16毫莫耳）溶於5毫升乙腈/水（4:1）的混合溶液中，室溫下加入1,5,7-三氮雜雙環[4.4.0]-5-癸烯（48毫克，0.34毫莫耳），室溫反應4小時。
反應結束後，將反應液倒入15%的檸檬酸水溶液中，調節Ph至3-4。二氯甲烷萃取(20毫升)，水洗滌3次，無水硫酸鈉乾燥，蒸乾得淡黃色固體。柱層析純化（二氯甲烷/甲醇 = 10/1），得60毫克白色固體2-((S)-1-(4-(4-氰基-6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基) 吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-((( S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸（收率：61.4%）。LC-MS：RT = 1.82min，[M+H] += 596.29。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ8.25 (s, 1H), 7.88 (dd, J= 10.0, 1.3 Hz, 1H), 7.79 (dd, J= 8.4, 1.4 Hz, 1H), 7.71–7.60 (m, 3H), 6.76 (s, 1H), 6.46 (s, 1H), 5.42 (d, J= 13.5 Hz, 2H), 5.18 – 5.06 (m, 1H), 4.81–4.72 (m, 1H), 4.66 (dd, J= 15.4, 5.4 Hz, 1H), 4.52–4.36 (m, 2H), 4.16 (dt, J= 9.1, 5.8 Hz, 1H), 3.50–3.42 (m, 4H), 2.67–2.56 (m, 1H), 2.56–2.50 (m, 4H), 2.37–2.21 (m, 1H), 1.42 (d, J= 6.7 Hz, 3H)。
實施例46 2-((S)-1-(4-(4-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)嘧啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image933
具體合成路線如下。
步驟A：合成 4-((((2-氯嘧啶-4-基)氧基)甲基)-3-氟苄腈
Figure 02_image935
向含有(4-氰基-2-氟苯基)甲醇（2.0克，1.32毫莫耳）的 N,N-二甲基甲醯胺（10.0毫升）中，加入碳酸銫（860毫克，2.64毫莫耳)，攪拌2分鐘後，加入2,4-二氯嘧啶（1.97克，1.32毫莫耳），於90攝氏度下反應3小時。
反應結束，加水（50毫升）淬滅，乙酸乙酯（50毫升×3次）萃取，合併有機相，飽和食鹽水（50毫升）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/2)。得到2.3克黃色油狀物4-((((2-氯嘧啶-4-基)氧基)甲基)-3-氟苄腈(收率：67.6%)。LC-MS: RT = 2.36min,[M+H] += 264.17。
步驟B：合成 4-(4-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)嘧啶-2-基)-3,6-二氫吡啶-1(2 H)-甲酸叔丁酯
Figure 02_image937
室溫下，向含有4-(((2-氯嘧啶-4-基)氧基)甲基)-3-氟苄腈（700毫克，2.65毫莫耳），4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)-3,6-二氫吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯（820毫克，2.65毫莫耳）的1,4-二氧六環水混合液中，加入碳酸鉀（731毫克，5.30毫莫耳）和1,1'-二(二苯膦基)二茂鐵二氯化鈀(II)（193毫克，0.265毫莫耳），氮氣置換3次，於100攝氏度反應3小時。
反應結束，加水，乙酸乙酯（50毫升×3次）萃取，合併有機相，，飽和食鹽水（50毫升×2次）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/2)。得到570毫克淡黃色固體4-(4-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)嘧啶-2-基)-3,6-二氫吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯(收率：52.3%)。LC-MS: RT = 2.22 min, [M+H] +=411.22。
步驟C：合成 4-(4-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)嘧啶-2-基)呱啶-1-甲酸叔丁酯
Figure 02_image939
將4-(4-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)嘧啶-2-基)-3,6-二氫吡啶-1(2H)-甲酸叔丁酯（300毫克,0.729毫莫耳）溶於10毫升甲醇中，加入30毫克濕鈀碳（10%），於氫氣氛圍下室溫反應3小時。
反應結束，過濾，濾液無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得186毫克4-(4-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)嘧啶-2-基)呱啶-1-甲酸叔丁酯(收率：61.8%)。LC-MS: RT = 2.03 min, [M+H] += 413.23。
步驟D：合成 3-氟-4-((((2-(吡啶-4-基)嘧啶-4-基)氧基)甲基)苄腈
Figure 02_image941
將4-(4-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)嘧啶-2-基)吡啶-1-甲酸叔丁酯（186毫克,0.451毫莫耳）溶於4毫升無水二氯甲烷中，加入2毫升三氟乙酸，於室溫下反應40分鐘。
反應結束，反應液倒入50毫升碳酸氫鈉溶液中，乙酸乙酯（30毫升×2次）萃取，合併有機相，飽和食鹽水（20毫升×2次）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得110毫克3-氟-4-((((2-(吡啶-4-基)嘧啶-4-基)氧基)甲基)苄腈(收率：78.1%)。LC-MS: RT =1.86 min, [M+H] += 313.27。
步驟E：合成 2-((S)-1-(4-(4-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)嘧啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯
Figure 02_image943
室溫下，向含有3-氟-4-(((2-(吡啶-4-基)嘧啶-4-基)氧基)甲基)苄腈（110毫克, 0.352毫莫耳）的乙腈（8.0毫升）中，加入2-((S)-1-氯乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯（109毫克, 0.352毫莫耳）、碘化鉀（234毫克,1.41毫莫耳）和碳酸鉀（242毫克, 1.76毫莫耳），於60攝氏度下反應5小時。
反應結束，加水淬滅，乙酸乙酯（30毫升×2次）萃取，合併有機相，飽和食鹽水（30毫升）洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=5/1。得到84毫克黃色固體2-((S)-1-(4-(4-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)嘧啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-((((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(收率：70.4%)。LC-MS: RT = 1.97 min, [M+H] += 585.31。
步驟F：合成 2-((S)-1-(4-(4-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)嘧啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image945
將2-((S)-1-(4-(4-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)嘧啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯（82.0毫克,0.140毫莫耳）溶解於4毫升乙腈中，加入 1,5,7-三氮雜二環[4.4.0]癸-5-烯（41.1毫克,0.294毫莫耳）和1毫升水，於室溫下反應7小時。
反應結束，加20毫升飽和氯化銨中和，二氯甲烷（30毫升×2次）萃取，合併有機相，飽和食鹽水（20毫升×2次）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得粗品經柱層析分離製備得26毫克白色固體2-((S)-1-(4-(4-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)嘧啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[d]咪唑-6-羧酸(收率：32.5%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.75 (s, 1H), 8.49 (d, J= 5.1 Hz, 1H), 8.27 (d, J= 1.1 Hz, 1H), 7.91 (dd, J= 10.2, 1.1 Hz, 1H), 7.80 (dd, J= 8.4, 1.5 Hz, 1H), 7.74–7.76(m, 1H), 7.71–7.73 (m, 1H), 7.67 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 7.07 (d, J= 5.1 Hz, 1H), 5.48 (s, 2H), 5.13–5.19(m, 1H), 4.83 (dd, J= 16.2, 3.7 Hz, 1H), 4.68 (dd, J= 15.5, 5.7 Hz, 1H), 4.41–4.50 (m, 2H), 4.16–4.21 (m, 1H), 2.96–2.98 (m, 1H), 2.54–2.67 (m, 4H), 2.21–2.35 (m, 2H), 1.83–1.86 (m, 2H), 1.67–1.76 (m, 2H), 1.47(d, J= 6.8Hz, 3H). LC-MS: RT = 1.70 min, [M+H] += 571.31。
實施例47 1-((( S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-2-((S)-1-(4-(6-(吡唑[1,5-a]吡啶-2-基甲氧)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image947
具體合成路線如下。
步驟A:合成2-(((6-氯吡啶-2-基)氧基)甲基)吡唑并[1,5- a]吡啶
Figure 02_image949
室溫下，將2,6二氯吡啶（375毫克，2.55毫莫耳），吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基甲醇（453毫克，3.06毫莫耳）和氫氧化鈉（510毫克，12.75毫莫耳）加入到10毫升乾燥的DMF中，升溫至130攝氏度反應2小時。
反應結束後，將反應液冷卻至室溫，倒入20毫升的冰水溶液中，攪拌30分鐘後抽濾，水洗濾餅。濾餅乾燥後得480毫克白色固體2-(((6-氯吡啶-2-基)氧基)甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶（收率：72.7%）。LC-MS：RT = 2.04 min，[M+H] += 260.10。
步驟B:合成 6-(吡唑并[1,5- a]吡啶-2-基甲氧)- 3',6'-二氫-[2,4'-二吡啶] 1'(2'H)-羧酸叔丁酯
Figure 02_image951
室溫下，將中間體2-(((6-氯吡啶-2-基)氧基)甲基) 吡唑并[1,5-a]吡啶（300毫克，1.16毫莫耳）以及 N-叔丁氧羰基-1,2,5,6-四氫吡啶-4-硼酸頻哪醇酯（430毫克，1.39毫莫耳），[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀（127.3毫克，0.17毫莫耳），碳酸鉀（320毫克，2.32毫莫耳）加入至10毫升二氧六環/水（4/1）的混合溶液中，N 2保護下升溫至100攝氏度反應2小時。
反應結束後，蒸乾反應液，乙酸乙酯萃取，萃取，無水硫酸鈉乾燥，蒸乾得淡黃色固體。柱層析純化（正己烷/乙酸乙酯=5/1），得266毫克6-(吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基甲氧)- 3',6'-二氫-[2,4'-二吡啶] 1'(2'H)-羧酸叔丁酯（收率：56.5%）。LC-MS：RT = 2.21 min，[M+H] +=407.21。
步驟C: 合成 4-(6-(吡唑并[1,5- a]吡啶-2-基甲氧)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯
Figure 02_image953
冰浴下，將6-(吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基甲氧)- 3',6'-二氫-[2,4'-二吡啶] 1'(2'H)-羧酸叔丁酯（240毫克，0.59毫莫耳）溶於5毫升甲醇溶劑中，冰浴下加入10%的鈀碳（24毫克，0.0059毫莫耳），H 2保護下，零攝氏度反應12小時。
反應結束後，抽濾，蒸乾濾液得200毫克白色油狀物4-(6-(吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基甲氧)吡啶-2-基)呱啶-1-羧酸叔丁酯（收率：83.0%）。LC-MS：RT = 2.21 min，[M+H] += 409.29。
步驟D:合成2-(((6-(呱啶-4-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)吡唑并[1,5- a]吡啶
Figure 02_image955
室溫下，將4-(6-(吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基甲氧)吡啶-2-基)吡啶-1-羧酸叔丁酯（200毫克，0.49毫莫耳）溶於10毫升甲醇溶劑中，冰浴下加入5毫升4M的鹽酸二氧六環溶液，室溫反應2小時。
反應結束後，蒸乾反應液得200毫克白色固體2-(((6-(呱啶-4-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶（收率：132.5%）。LC-MS：RT = 1.65 min，[M+H] += 309.22。
步驟E：合成 1-((( S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-2-((S)-1-(4-(6-(吡唑[1,5-a]吡啶-2-基甲氧)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯
Figure 02_image957
室溫下，將中間體2-(((6-(呱啶-4-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)吡唑并[1,5-a]吡啶（200毫克，0.49毫莫耳）以及2-((S)-1-氯乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯（150毫克，0.49毫莫耳）、碳酸鉀（136.2毫克，0.98毫莫耳）和碘化鉀（122毫克，0.74毫莫耳）加入至10毫升DMF溶液中，升溫至60攝氏度反應10小時。
反應結束後，將反應液倒入冰水，析出固體，抽濾，水洗濾餅得200毫克白色產品1-((( S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-2-((S)-1-(4-(6-(吡唑[1,5-a]吡啶-2-基甲氧)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯（收率：70.4%）。LC-MS：RT=1.79 min，[M+H] +=581.38。
步驟F：合成 1-((( S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-2-((S)-1-(4-(6-(吡唑[1,5-a]吡啶-2-基甲氧)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image959
室溫下，將中間體1-((( S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-2-((S)-1-(4-(6-(吡唑[1,5-a]吡啶-2-基甲氧)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯（200毫克，0.34毫莫耳）溶於5毫升乙腈/水（4:1）的混合溶液中，室溫下加入1,5,7-三氮雜雙環[4.4.0]-5-癸烯（101毫克，0.71毫莫耳），於室溫反應7小時。
反應結束後，將反應液倒入15%的檸檬酸水溶液中，調節Ph至3-4。二氯甲烷萃取(20毫升)，水洗滌3次，無水硫酸鈉乾燥，蒸乾得淡黃色固體。柱層析純化（二氯甲烷/甲醇 = 10/1），得130毫克白色固體1-((( S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-2-((S)-1-(4-(6-(吡唑[1,5-a]吡啶-2-基甲氧)吡啶-2-基)呱啶-1-基)乙基)-1H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸（收率：67.7%）。LC-MS：RT = 1.73 min，[M+H] += 567.35。
實施例48 2-((S)-1-((R)-4-(6-(((4-氰基-2-氟苄基)氧基) 吡啶-2-基)-3-甲基呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸(48A)和2-((S)-1-((S)-4-(6-(((4-氰基-2-氟苄基)氧基) 吡啶-2-基)-3-甲基呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸(48B)
Figure 02_image961
化合物48A具體合成路線如下。
步驟A:合成 ( R)-4-(6-氯吡啶-2-基)-3-甲基呱嗪-1-羧酸叔丁酯
Figure 02_image963
室溫下，將2,6-二氯吡啶（1.5克，10毫莫耳），(R)-3-甲基呱嗪-1-羧酸叔丁酯（2.64克，13毫莫耳）和碳酸鉀（2.76克，20毫莫耳）加入到20毫升乾燥的乙腈中，升溫至85攝氏度反應15小時。
反應結束後，將反應液冷卻至室溫，倒入40毫升的冰水溶液中，攪拌30分鐘後抽濾，水洗濾餅。濾餅乾燥柱層析純化（正己烷/乙酸乙酯 = 5/1）後得350毫克白色固體(R)-4-(6-氯吡啶-2-基)-3-甲基呱嗪-1-羧酸叔丁酯（收率：11 %）。LC-MS：RT = 2.20min，[M-56] += 256.16。
步驟B:合成 ( R)-4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-甲基呱嗪-1-羧酸叔丁酯
Figure 02_image965
室溫下，將中間體(R)-4-(6-氯吡啶-2-基)-3-甲基呱嗪-1-羧酸叔丁酯（150毫克，0.48毫莫耳）以及3-氟-4羥甲基苯甲腈（80毫克，0.53毫莫耳），甲烷磺酸(2-二環己基膦基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯基)(2'-氨基-1,1'-聯苯-2-基)鈀(II)（20.4毫克，0.024毫莫耳）和碳酸銫（314毫克，0.96毫莫耳）加入到10毫升乾燥的二氧六環溶液中，N 2保護下，於110攝氏度反應2小時。
反應結束後，蒸乾反應液，乙酸乙酯萃取(20毫升)，無水硫酸鈉乾燥，蒸乾得淡黃色固體。柱層析純化（正己烷/乙酸乙酯=5/2），得150毫克淡黃色固體(R)-4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-甲基呱嗪-1-羧酸叔丁酯（收率：73.5%）。LC-MS：RT = 2.27 min，[M-56] += 371.19。
步驟C:合成 ( R)-3-氟-4-(((6-(2-甲基呱嗪-1-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苯甲腈
Figure 02_image967
室溫下，將(R)-4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-甲基呱嗪-1-羧酸叔丁酯（150毫克，0.35毫莫耳）溶於10毫升甲醇溶劑中，冰浴下加入5毫升4M/L的鹽酸二氧六環溶液，室溫反應2小時。
反應結束後，蒸乾反應液得118毫克白色固體(R)-3-氟-4-(((6-(2-甲基呱嗪-1-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苯甲腈（收率：103.5%）。LC-MS：RT = 1.70 min，[M+H] += 327.21。
步驟D：合成 2-((S)-1-((R)-4-(6-(((4-氰基-2-氟苄基)氧基) 吡啶-2-基)-3-甲基呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯
Figure 02_image969
室溫下，將中間體(R)-3-氟-4-(((6-(2-甲基呱嗪-1-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苯甲腈（150毫克，0.35毫莫耳）以及2-((S)-1-氯乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯（108毫克，0.35毫莫耳）、碳酸鉀（97.2毫克，0.70毫莫耳）和碘化鉀（87.7毫克，0.53毫莫耳）加入至10毫升DMF溶液中，升溫至60攝氏度反應10小時。
反應結束後，將反應液倒入冰水，析出固體，抽濾，水洗濾餅得140毫克白色產品2-((S)-1-((R)-4-(6-(((4-氰基-2-氟苄基)氧基) 吡啶-2-基)-3-甲基呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯（收率：67.0%）。LC-MS：RT = 1.97 min，[M+H] += 599.34。
步驟E：合成 2-((S)-1-((R)-4-(6-(((4-氰基-2-氟苄基)氧基) 吡啶-2-基)-3-甲基呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸（48A）
Figure 02_image971
室溫下，將中間體2-((S)-1-((R)-4-(6-(((4-氰基-2-氟苄基)氧基) 吡啶-2-基)-3-甲基呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯（100毫克，0.17毫莫耳）溶於5毫升乙腈/水（4:1）的混合溶液中，室溫下加入1,5,7-三氮雜雙環[4.4.0]-5-癸烯（58毫克，0.42毫莫耳）。室溫反應4小時。
反應結束後，將反應液倒入15%的檸檬酸水溶液中，調節pH至3-4。二氯甲烷萃取(20毫升)，水洗滌3次，無水硫酸鈉乾燥，蒸乾得淡黃色固體。柱層析純化（二氯甲烷/甲醇 = 10/1），得38毫克白色固體2-((S)-1-((R)-4-(6-(((4-氰基-2-氟苄基)氧基) 吡啶-2-基)-3-甲基呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸（48A）（收率：38.2%）。LC-MS：RT = 1.86 min，[M+H] += 585.31。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ8.26 (s, 1H), 7.87 (dd, J= 10.0, 1.3 Hz, 1H), 7.80 (dd, J= 8.4, 1.4 Hz, 1H), 7.67 (td, J= 5.8, 3.0 Hz, 2H), 7.60 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 7.42 (t, J= 8.0 Hz, 1H), 6.20 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 6.07 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 5.41 (d, J= 13.7 Hz, 1H), 5.32 (d, J= 13.7 Hz, 1H), 5.20–5.07 (m, 1H), 4.86–4.76 (m, 1H), 4.71 (dd, J= 15.5, 5.6 Hz, 1H), 4.45 (dt, J= 13.4, 7.3 Hz, 3H), 4.17 (dt, J= 9.1, 5.8 Hz, 1H), 3.73 (d, J= 11.7 Hz, 1H), 2.82–2.56 (m, 4H), 2.52 (d, J= 9.6 Hz, 1H), 2.32–2.22 (m, 1H), 2.17 (dd, J= 11.5, 8.3 Hz, 1H), 1.43 (d, J= 6.7 Hz, 3H), 1.01 (d, J= 6.5 Hz, 3H)。
化合物48B具體合成路線如下。
步驟A：合成 (S)-4-(6-氯吡啶-2-基)-3-甲基呱嗪-1-羧酸叔丁酯
Figure 02_image973
室溫下，將2,6-二氯吡啶(1.5克，10.00毫莫耳)、(S)-3-甲基呱嗪-1-羧酸叔丁酯(2.4克，12.00毫莫耳)和碳酸鉀(2.7克，20.00毫莫耳)加入 N,N-二甲基甲醯胺(50.0毫升)中，N 2保護下，100攝氏度反應16.0小時。
反應結束，加水淬滅，乙酸乙酯(50毫升×3次)萃取，合併有機相，飽和食鹽水(50毫升×2次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=5/1)，得到108.0毫克淡黃色固體(S)-4-(6-氯吡啶-2-基)-3-甲基呱嗪-1-羧酸叔丁酯 (收率：3.5%)。LC-MS: RT = 2.21 min, [M-56+H] += 256.11。
步驟B：合成 (S)-4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-甲基呱嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure 02_image975
室溫下，將(S)-4-(6-氯吡啶-2-基)-3-甲基呱嗪-1-羧酸叔丁酯(108.0毫克，0.35毫莫耳)、3-氟-4-(羥甲基)苄腈(63.4毫克，0.42毫莫耳)和碳酸銫(228.2毫克，0.70毫莫耳)加入二氧六環(10.0毫升)中，再加入甲烷磺酸(2-二環己基膦基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯基)(2'-氨基-1,1'-聯苯-2-基)鈀(II) (12.0毫克，0.01毫莫耳)，N 2保護下，100攝氏度反應5.0小時。
反應結束，加水淬滅，二氯甲烷 (30毫升×3次)萃取。合併有機相，飽和食鹽水(30毫升×3次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，最後矽膠柱層析純化(洗脫劑：正己烷：乙酸乙酯 = 10：1)得到76.5毫克棕色油狀固體(S)-4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-甲基呱嗪-1-甲酸叔丁酯 (收率：51.3%)。LC-MS: RT = 2.28 min, [M+H-56] += 371.26。
步驟C：合成 (S)-3-氟-4-(((6-(2-甲基呱嗪-1-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苄腈
Figure 02_image977
室溫下，將(S)-4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-甲基呱嗪-1-甲酸叔丁酯(76.5毫克，0.18毫莫耳)加入二氧六環的鹽酸溶液(1.00毫莫耳/毫升，5毫升)中， N 2保護下，室溫反應1小時。
反應結束，減壓濃縮。得到60.0毫克淡黃色固體(S)-3-氟-4-(((6-(2-甲基呱嗪-1-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苄腈 (收率：100.0%)直接用於下步反應。LC-MS: RT = 1.74 min, [M+H] += 327.14。
步驟D：合成 2-((S)-1-((S)-4-(6-(((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-甲基呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯
Figure 02_image979
室溫下，將(S)-3-氟-4-(((6-(2-甲基呱嗪-1-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苄腈(60.0毫克，0.18毫莫耳)、2-((S)-1-氯乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(55.4毫克，0.18毫莫耳)和碳酸銫(117.4毫克，0.36毫莫耳)、碘化鉀(30.0毫克，0.18毫莫耳)加入 N,N-二甲基甲醯胺(5.0毫升)中，最後加入 N,N-二異丙基乙胺(0.50毫升)，N 2保護下，50攝氏度反應4.0小時。
反應結束，加水淬滅，乙酸乙酯(50毫升×3次)萃取。合併有機相，飽和食鹽水(30毫升×3次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，最後矽膠柱層析純化(洗脫劑：二氯甲烷：甲醇=20：1)得到43.0毫克白色固體2-((S)-1-((S)-4-(6-(((4-氰基-2-氟苄基)氧基) 吡啶-2-基)-3-甲基呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(收率：40.1%)。LC-MS: RT = 2.00 min, [M+H] +=599.37。
步驟E：合成 2-((S)-1-((S)-4-(6-(((4-氰基-2-氟苄基)氧基) 吡啶-2-基)-3-甲基呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸（48B）
Figure 02_image981
室溫下，向含有2-((S)-1-((S)-4-(6-(((4-氰基-2-氟苄基)氧基) 吡啶-2-基)-3-甲基呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯(43.0毫克，0.07毫莫耳)的乙腈(12.0毫升)中滴加1,5,7-三氮雜二環[4.4.0]癸-5-烯(77.8毫克，0.56毫莫耳)水溶液(3.0毫升)，室溫下反應2.0小時。
反應結束，加水淬滅，用檸檬酸水溶液(0.5莫耳/升)調pH至6，二氯甲烷(30毫升×3次)萃取，合併有機相，檸檬酸水溶液(30毫升×2次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，粗產品用製備型高效液相色譜純化。分離條件如下，色譜柱：Agilent 5 Prep-C18 100mm×30mm 5μM；流動相：水(含有0.1%的氨水)和乙腈；流速：20毫升/分鐘；梯度：由36.3%乙腈在8.23分鐘洗脫出來；檢測波長：254 nm。純化後，低溫凍乾得到9.0毫克白色固體2-((S)-1-((S)-4-(6-(((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)-3-甲基呱嗪-1-基)乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸（48B）(收率：22.1%)。LC-MS: RT = 1.89 min, [M+H] += 585.37。 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8.23 (s, 1H), 7.85 (dd, J= 10.0, 1.3 Hz, 1H), 7.79 (dd, J= 8.4, 1.5 Hz, 1H), 7.69–7.63 (m, 2H), 7.60 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 7.43 (t, J= 8.0 Hz, 1H), 6.21 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 6.07 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 5.41 (d, J= 13.7 Hz, 1H), 5.32 (d, J= 13.7 Hz, 1H), 5.17–5.09 (m, 1H), 4.89 (dd, J= 15.5, 2.6 Hz, 1H), 4.71 (dd, J= 15.5, 5.7 Hz, 1H), 4.55–4.39 (m, 2H), 4.27 (s, 1H), 4.19 (d, J= 9.1 Hz, 1H), 3.88 (d, J= 12.1 Hz, 1H), 3.20 (s, 1H), 3.01–2.84 (m, 2H), 2.66–2.57 (m, 1H), 2.32 (dd, J= 31.7, 17.9 Hz, 3H), 1.43 (d, J= 6.7 Hz, 3H), 0.77 (d, J= 6.5 Hz, 3H)。
實施例49 2-((S)-1-(4-(4-氯-6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-((( S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image983
步驟A:合成 4-(6-溴-4-氯吡啶-2-基)呱嗪-1-羧酸叔丁酯
Figure 02_image985
室溫下，將2, 6二氯-4-溴吡啶（200毫克，1.1毫莫耳），N-Boc-呱嗪（214克，1.15毫莫耳）和碳酸鉀（302克，2.2毫莫耳）加入到10毫升乾燥的NMP中，升溫至150攝氏度反應1小時。
反應結束後，將反應液冷卻至室溫，倒入20毫升的冰水溶液中，攪拌30分鐘後抽濾，水洗濾餅。濾餅乾燥後得208毫克白色固體4-(6-溴-4-氯吡啶-2-基)呱嗪-1-羧酸叔丁酯（收率：50.5%）。LC-MS：RT = 2.30 min，[M-55] += 320.10。
步驟B:合成 4-(4-氯-6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-羧酸叔丁酯
Figure 02_image987
室溫下，將中間體4-(6-溴-4-氯吡啶-2-基)呱嗪-1-羧酸叔丁酯（168毫克，0.45毫莫耳）以及3-氟-4羥甲基苯甲腈（74.4毫克，0.49毫莫耳），甲烷磺酸(2-二環己基膦基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯基)(2'-氨基-1,1'-聯苯-2-基)鈀(II)（19毫克，0.02毫莫耳）和碳酸銫（293.4毫克，0.90毫莫耳）加入到10毫升乾燥的二氧六環溶液中，N 2保護下110攝氏度反應2小時。
反應結束後，蒸乾反應液，20毫升乙酸乙酯萃取，分出乙酸乙酯層，無水硫酸鈉乾燥，蒸乾得淡黃色固體。柱層析純化（正己烷/乙酸乙酯 = 5/2），得82毫克淡黃色固體4-(4-氯-6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-羧酸叔丁酯（收率：40.8%）。LC-MS：RT=2.29 min，[M-56+H] +=391.18。
步驟C:合成 4-(((4-氯-6-(呱嗪-1-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)-3-氟苯腈
Figure 02_image989
室溫下，將4-(4-氯-6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)呱啶-2-基)呱嗪-1-羧酸叔丁酯（82毫克，0.18毫莫耳）溶於10毫升甲醇溶劑中，冰浴下加入10毫升4M/L的鹽酸二氧六環溶液，室溫反應2小時。
反應結束後，蒸乾反應液得85毫克白色固體4-(((4-氯-6-(呱嗪-1-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)-3-氟苯腈（收率：140.5%）。LC-MS：RT = 1.77 min，[M+H] += 347.19。
步驟D：合成 2-((S)-1-(4-(4-氯-6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-((( S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯
Figure 02_image991
室溫下，將中間體4-(((4-氯-6-(呱嗪-1-基)吡啶-2-基)氧基)甲基)-3-氟苯腈（85毫克，0.19毫莫耳）以及2-((S)-1-氯乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯（59毫克，0.19毫莫耳）、碳酸鉀（52.4毫克，0.38毫莫耳）和碘化鉀（63.0毫克，0.38毫莫耳）加入至10毫升DMF溶液中，升溫至60攝氏度反應10小時。
反應結束後，將反應液倒入冰水，析出固體，抽濾，水洗濾餅得63毫克白色產品2-((S)-1-(4-(4-氯-6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-((( S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯（收率：53.8%）。LC-MS：RT = 1.98 min，[M+H] += 619.30。
步驟E：合成 2-((S)-1-(4-(4-氯-6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-((( S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸
Figure 02_image993
室溫下，將中間體2-((S)-1-(4-(4-氯-6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-((( S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸甲酯（63毫克，0.10毫莫耳）溶於5毫升乙腈/水（4:1）的混合溶液中，室溫下加入1,5,7-三氮雜雙環[4.4.0]-5-癸烯（34.8毫克，0.25毫莫耳）。室溫反應4小時。
反應結束後，將反應液倒入15%的檸檬酸水溶液中，調節pH至3-4。二氯甲烷萃取(20毫升)，水洗滌3次，無水硫酸鈉乾燥，蒸乾得淡黃色固體。柱層析純化（二氯甲烷/甲醇 = 10/1），得30毫克白色固體2-((S)-1-(4-(4-氯-6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-1-((( S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1 H-苯并[ d]咪唑-6-羧酸（收率：49.8%）。LC-MS：RT = 1.88min，[M+H] += 605.37。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ8.24 (s, 1H), 7.87 (d, J= 10.1 Hz, 1H), 7.79 (dd, J= 8.4, 1.3 Hz, 1H), 7.66 (ddd, J= 15.1, 9.5, 7.9 Hz, 3H), 6.39 (s, 1H), 6.18 (d, J= 0.9 Hz, 1H), 5.38 (s, 2H), 5.13 (s, 1H), 4.77 (d, J= 12.8 Hz, 1H), 4.65 (dd, J= 15.5, 5.5 Hz, 1H), 4.45 (td, J= 13.4, 7.3 Hz, 2H), 4.16 (dt, J= 9.0, 5.7 Hz, 1H), 3.41 (m, 4H), 2.61 (dd, J= 16.7, 8.7 Hz, 1H), 2.50 (m, 4H), 2.29 (dd, J= 18.0, 7.8 Hz, 1H), 1.42 (d, J= 6.7 Hz, 3H)。
實施例50 2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸
Figure 02_image995
具體合成路線如下。
步驟A：合成 2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯
Figure 02_image997
室溫下，將3-氟-4-((((6-(呱嗪-1-基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)甲基)苄腈(50.0毫克，0.13毫莫耳)、2-((S)-1-氯乙基)-1-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-1H-苯并[d]咪唑-6-羧酸甲酯(40.0毫克，0.13毫莫耳)和碳酸銫(40.4毫克，0.13毫莫耳)、碘化鉀(22.0毫克，0.13毫莫耳)加入 N,N-二甲基甲醯胺(5.0毫升)中，最後加入 N,N-二異丙基乙胺(0.50毫升)，N 2保護下，50攝氏度反應4.0小時。
反應結束，加水淬滅，乙酸乙酯(50毫升×3次)萃取。合併有機相，飽和食鹽水(30毫升×3次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，最後矽膠柱層析純化(洗脫劑：二氯甲烷：甲醇=20：1)得到37.2毫克黃色固體2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯(收率：43.7%)。LC-MS: RT = 1.81 min, [M+H] += 654.33。
步驟B：合成 2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸
Figure 02_image999
室溫下，向含有2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯(37.2毫克，0.06毫莫耳)的乙腈(12.0毫升)中滴加1,5,7-三氮雜二環[4.4.0]癸-5-烯(66.7毫克，0.48毫莫耳)水溶液(3.0毫升)，室溫下反應3.0小時。
反應結束，加水淬滅，用檸檬酸水溶液(0.5莫耳/升)調pH至6，二氯甲烷(30毫升×3次)萃取，合併有機相，檸檬酸水溶液(30毫升×2次)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，粗產品用製備型高效液相色譜純化。分離條件如下，色譜柱：Agilent 5 Prep-C18 100mm×30mm 5μM；流動相：水(含有0.1%的氨水)和乙腈；流速：20毫升/分鐘；梯度：由33.7%乙腈在7.52分鐘洗脫出來；檢測波長：254 nm。純化後，低溫凍乾得到10.0毫克白色固體2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)-4-(三氟甲基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸(收率：26.1%)。LC-MS: RT = 1.69 min, [M+H] += 640.33。
實施例51 2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸（51A）和2-((R)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸（51B）
Figure 02_image1001
具體合成路線如下。
步驟A：合成 2-(1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯
Figure 02_image1003
25攝氏度下，向含有4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪鹽酸鹽（652毫克, 2.09毫莫耳）的乙腈（8.0毫升）中，加入 N,N-二異丙基乙胺(1.0毫升)、碘化鉀(420毫克，3.13毫莫耳)和碳酸鉀(577毫克，4.18毫莫耳)加入 N,N-二甲基甲醯胺(10.0毫升)中，最後加入2-((S)-1-氯乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯（650毫克, 2.09毫莫耳），N 2保護下，60攝氏度反應3.0小時。
反應結束，加水淬滅，乙酸乙酯（30毫升×2次）萃取，合併有機相，飽和食鹽水（30毫升）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=2/1。得到690毫克黃色固體2-(1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯(收率：56.4%， dr= 66%)。LC-MS: RT = 1.93 min, [M+H] += 586.26。
步驟B：合成 2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸（51A）和2-((R)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸（51B）
Figure 02_image1005
零攝氏度下，向含有2-(1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯(690毫克, 1.18毫莫耳)的四氫呋喃（3毫升）和甲醇（1毫升）混合溶液中，滴加氫氧化鋰(198毫克, 4.72毫莫耳)的水溶液（1毫升），於25攝氏度下反應30分鐘。
反應結束，加水淬滅，乙酸乙酯（30毫升×2次）萃取，合併有機相，飽和食鹽水（20毫升）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：甲醇/二氯甲烷=1/10。得到290毫克白色固體2-((S)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)- 3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸（51A）(收率：43.0%)和59毫克白色固體2-((R)-1-(4-(6-((4-氰基-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)- 3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸（51B）（收率8.7%）。粗產品用製備型高效液相色譜純化。分離條件如下：色譜柱：Agilent 5 Prep-C18 100mm×30mm 5μM；流動相：水(含有0.1%的氨水)和乙腈洗脫；流速：20毫升/分鐘；梯度：由21%乙腈在10.12分鐘及12.17分鐘分別洗脫出來51A和51B，檢測波長：254 nm。
化合物51A: HPLC: RT = 10.12 min。 LC-MS: RT = 1.79 min, [M+H] +=572.30。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 8.14 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.97 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.87 (dd, J= 10.0, 1.5 Hz, 1H), 7.69 (dd, J= 7.9, 1.4 Hz, 1H), 7.64 (t, J= 7.6 Hz, 1H), 7.45 (t, J= 8.0 Hz, 1H), 6.30 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 6.10 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 5.38 (s, 2H), 5.30–5.24 (m, 1H), 4.82–4.70 (m, 2H), 4.63–4.58 (m, 1H), 4.44–4.39 (m, 1H), 4.11–4.06 (m, 1H), 3.43–3.33 (m, 4H), 2.64–2.58 (m, 1H), 2.56–2.52 (m, 4H), 2.39–2.30 (m, 1H), 1.45 (d, J= 6.7 Hz, 3H)。
化合物51B: HPLC: RT = 12.17 min。 LC-MS: RT = 1.79 min, [M+H] +=572.30。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.09 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.95 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.87 (dd, J= 10.0, 1.4 Hz, 1H), 7.69 (dd, J= 7.9, 1.5 Hz, 1H), 7.67–7.61 (m, 1H), 7.46 (t, J= 8.0 Hz, 1H), 6.31 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 6.11 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 5.39 (s, 2H), 5.07–5.00 (m, 2H), 4.69–4.49 (m, 4H), 3.47–3.37 (m, 4H), 2.79–2.70 (m, 1H), 2.66–2.52 (m, 5H), 1.42 (d, J= 6.8 Hz, 3H)。
實施例52 2-((S)-1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸（52A）和2-((R)-1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸（52B）
Figure 02_image1007
具體合成路線如下。
步驟A：合成 2-氯-6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶
Figure 02_image1009
零攝氏度下，向含有(4-氯-2-氟苯基)甲醇（5.0克，31.14毫莫耳）的四氫呋喃（50.0毫升）中，加入叔丁醇鉀（4.88克，43.60毫莫耳)，攪拌30分鐘後，加入2,6-二氯吡啶（4.2克，28.38毫莫耳），室溫反應過夜。
反應結束，加水（50毫升）淬滅，乙酸乙酯（50毫升×3次）萃取，合併有機相，飽和食鹽水（50毫升）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/2)。得到7.53克黃色油狀物2-氯-6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶(收率：88.9%)。LC-MS: RT = 2.27 min, [M+H] += 272.05。
步驟B：合成 4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-羧酸叔丁酯
Figure 02_image1011
室溫下，向含有2-氯-6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶（7.53克，27.68毫莫耳）的1,4-二氧六環中，加入呱嗪-1-羧酸叔丁酯（5.15克，27.68毫莫耳）、碳酸銫（18.05克，55.36毫莫耳）和甲烷磺酸(2-二環己基膦基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯基)(2'-氨基-1,1'-聯苯-2-基)鈀(II)（702.5毫克，0.83毫莫耳），100攝氏度反應3小時。
反應結束，加水淬滅，乙酸乙酯（50毫升×3次）萃取，合併有機相，飽和食鹽水（50毫升×2次）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷= 1/2)。得到4.7克白色固體4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-羧酸叔丁酯(收率：40.2%)。LC-MS: RT = 2.39 min, [M+H] += 422.22。
步驟C：合成 4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪
Figure 02_image1013
室溫下，向含有4-(6-(((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-羧酸叔丁酯（4.34克, 10.28毫莫耳）的甲醇（30毫升）中，加入鹽酸的二氧六環溶液（20.0毫升，4莫耳/升），室溫下反應3小時。
反應結束，反應液直接旋乾得3.68克白色固體4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪鹽酸鹽，直接用於下一步。LC-MS: RT = 1.73 min, [M+H] += 322.15。
步驟D：合成 2-(1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯
Figure 02_image1015
室溫下，向含有4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪鹽酸鹽（750毫克, 2.09毫莫耳）的乙腈（8.0毫升）中，加入2-(1-氯乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯（650毫克, 2.09毫莫耳）、碘化鉀（521毫克, 3.14毫莫耳）和碳酸鉀（577毫克, 4.18毫莫耳），60攝氏度反應過夜。
反應結束，加水淬滅，乙酸乙酯（30毫升×2次）萃取，合併有機相，飽和食鹽水（30毫升）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷 = 2/1。得到870毫克黃色固體2-(1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯(收率：70.0%)。LC-MS: RT = 1.93 min, [M+H] += 595.25。
步驟E：合成 2-((S)-1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸（52A）和2-((R)-1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸（52B）
Figure 02_image1017
零攝氏度下，向含有2-(1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸甲酯(870毫克, 1.46毫莫耳)的四氫呋喃（3毫升）和甲醇（1毫升）混合溶液中，滴加氫氧化鋰(307毫克, 7.30毫莫耳)水溶液（1毫升），室溫反應30分鐘。
反應結束，加水淬滅，乙酸乙酯（30毫升×2次）萃取，合併有機相，飽和食鹽水（20毫升）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：甲醇/二氯甲烷 = 1/10。得到300毫克白色固體2-((S)-1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸（52A）(收率：35.4%)和53毫克白色固體2-((R)-1-(4-(6-((4-氯-2-氟苄基)氧基)吡啶-2-基)呱嗪-1-基)乙基)-3-(((S)-氧雜環丁烷-2-基)甲基)-3 H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-羧酸（52B）（收率：6.2%）。粗產品用製備型高效液相色譜純化。分離條件如下：色譜柱：Agilent 5 Prep-C18 100mm×30mm 5μM；流動相：水(含有0.1%的氨水)和乙腈洗脫；流速：20毫升/分鐘；梯度：由25%乙腈在14.09分鐘及15.49分鐘分別洗脫出來52A和52B，檢測波長：254 nm。
化合物52A：HPLC: RT = 14.09 min。 LC-MS: RT = 1.91 min, [M+H] +=581.25。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.14 (d, J=8.2 Hz, 1H),7.97 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.49 (t, J= 8.2 Hz, 1H), 7.46–7.41 (m, 2H), 7.28 (dd, J= 8.2, 2.0 Hz, 1H), 6.29 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 6.07 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 5.28 (s, 2H), 4.83–4.70 (m, 2H), 4.62 (q, J= 6.5 Hz, 1H), 4.44–4.39 (m, 1H), 4.11–4.06 (m, 1H), 3.42–3.19 (m, 5H), 2.64–2.55 (m, 5H), 2.39–2.32 (m, 1H), 1.47 (d, J= 6.8 Hz, 3H)。
化合物52B：HPLC: RT = 15.49 min。 LC-MS: RT = 1.91 min, [M+H] += 581.25。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.03 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 7.92 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.51 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.49–7.41 (m, 2H), 7.28 (dd, J= 8.2, 2.1 Hz, 1H), 6.31 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 6.07 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 5.29 (s, 2H), 5.04–5.00 (m, 2H), 4.69–4.50 (m, 3H), 3.49–3.42 (m, 3H), 3.29–3.19 (m, 2H), 2.79–2.71 (m, 1H), 2.67–2.55 (m, 4H), 1.92–1.86 (m, 1H), 1.42 (d, J= 6.6 Hz, 3H)。
實施例53：人源GLP1R細胞中化合物體外cAMP信號活化的測量
細胞培養
將穩定表達人GLP1 R的細胞系(hGLP1R- U2OS)用於該試驗中。細胞採用生長培養基（完全培養基，DMEM+10% FBS+500 μg/ml G418（Promega）），於37℃、5% CO 2飽和濕度的培養箱中培養。
1、cAMP測定
以1.0×10 4個細胞/孔(5 μl)(細胞工作液為：DMEM+0.1%BSA+1mM IBMX（畢得醫藥）)，將hGLP1R- U2OS接種於384孔板中，置於37℃的培養箱中靜置30min，備用。將試劑盒中Stimulation Buffer 1（1X）逐級稀釋待測化合物，將稀釋好的待測化合物加入培養板中，5μl/孔，置於37℃的培養箱中培養30 min，然後，依次加入5 μl/孔Lysis&Detection緩衝液配置的cAMP-d2和5μl/孔的Anti cAMP-Cryptate工作液，於室溫培養60 min，最後進行檢測。
2、資料處理
計算每個孔供體與受體發射信號的比率：HTRF率= 665 nm信號/620 nm信號*104，然後將HTRF率轉化為反應率(%)，通過Y=Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogIC50-X)*HillSlope))的四參數方程創建各實施例化合物的濃度-回應曲線，並且計算半數最大(50%)有效濃度(EC 50)，結果見表一。
[表一] 本發明化合物對人GLP-1 R的EC 50
實施例化合物 EC 50(nM)
1A 1.71
2A 3.18
5 1.04
8 10.3
9 3.48
11 3.45
12 3.89
13 18.72
14 16.85
15 2.57
17 2.92
18 2.66
19 3.94
20A 4.66
31 14.4
39A 15.5
42 11.97
45 24.55
51A 2.28
52A 2.00
結論：本發明化合物對人GLP-1 R具有明顯的激動活性。
實施例54：本發明化合物大鼠藥代動力學研究
1、實驗材料
SD大鼠：雄性，180-250g，購於北京維通利華實驗動物技術有限公司。
試劑：DMSO（二甲亞碸），PEG-400（聚乙二醇400），生理鹽水，肝素，乙腈，甲酸，普萘洛爾（內標）均為市售可得。
儀器：賽默飛LC-MS（U300 UPLC，TSQ QUANTUMN ULTRA三重四級杆質譜）。
2、實驗方法
稱取化合物溶於DMSO-PEG-400-生理鹽水（5：60：35，v/v/v）體系中，大鼠靜脈或灌胃給藥後，於15min、30min、1h、2h、5h、7h、24h（iv組加采5min)採集靜脈血200μL於肝素化EP管中，12000rpm離心2min，取血漿-80℃凍存待測。精密稱取一定量供試品用DMSO溶解至2mg/mL，作為儲備液。準確吸取適量的化合物儲備液，加入乙腈稀釋製成標準系列溶液。準確吸取上述標準系列溶液各20 μL，加入空白血漿180μL，渦旋混勻，配製成相當於血漿濃度為0.3、1、3、10、30、100、300、1000、3000 ng/mL的血漿樣品，每一濃度進行雙樣本分析，建立標準曲線。取30μL血漿（靜脈給藥5min、15min、30min、1h血漿稀釋10倍），加入內標普萘洛爾（50 ng/mL）的乙腈溶液200μL，渦旋混勻後，加入100μL 純化水，再次渦旋混勻，4000rpm離心5min，取上清LC-MS分析。LC-MS檢測條件如下。
色譜柱：賽默飛HYPERSIL GOLD C-18 UPLC柱，100*2.1mm，1.7μm。
流動相：水（0.1%甲酸）-乙腈按下表進行梯度洗脫
時間（min） 水（含0.1%甲酸） 乙腈
0 90% 10%
0.6 90% 10%
1 10% 90%
2.6 10% 90%
2.61 90% 10%
4 90% 10%
3、資料處理
LC-MS檢測血藥濃度後，採用WinNonlin 6.1軟體，非房室模型法計算藥動學參數，結果見表二。
[表二]  本發明化合物對大鼠藥代動力學結果
實施例化合物 劑量(mg/kg) 給藥途徑 Cmax(ng/ml) AUClast(h*ng/ml) T 1/2(h) Cl(ml/min/kg) F(%)
1A 1, i.v 2310 2430 2.89 6.88 49.0
5, p.o 747 5950 3.4
2A 1, i.v 2330 1250 0.71 13.3 63.5
5, p.o 1290 3970 3.11
5 1, i.v 4730 5770 3.87 2.88 72.8
5, p.o 3470 21000 2.76
12 1, i.v 2250 1700 0.87 9.79 168.2
5, p.o 3780 14300 2.69
20A 1, i.v 1290 539 0.31 30.7 46.4
5, p.o 348 1250 1.17
44 1, i.v 4360 2260 0.69 7.37 57.3
5, p.o 1410 6470 2.9
51A 1, i.v 1990 613 0.71 27.2 34.3
5, p.o 323 1050 1.06
52A 1, i.v 2050 1130 0.95 14.7 76.6
5, p.o 1160 4330 2.77
實施例4A-1 （CN201780086550.1） 1, i.v 3510 1560 1.56 11 2.6
5, p.o 49 202 1.51
實施例10A-77 （CN201780086550.1） 1, i.v 1130 388 0.422 41.9 3.8
5, p.o 28 74.3 1.39
結論：從表二中可以看出本發明化合物在大鼠口服吸收較好，具有較高的暴露量和生物利用度。
實施例55：本發明化合物對hERG鉀離子通道作用的研究
1、細胞培養
將穩定表達hERG鉀離子通道的中國倉鼠卵巢細胞系CHO-hERG用於該實驗中。細胞採用F12完全培養基，10%胎牛血清，1%抗生素(G418)，89 μg/mL潮黴素。恢復培養基為F12培養基，10%胎牛血清，於37℃。5% CO 2條件培養。
2、hERG測定
採用手動膜片鉗系統，測定本發明化合物系列梯度濃度對CHO-hERG中鉀離子通道的抑制活性。
3、資料處理
hERG電流值導入到EXCEL中用於資料分析，測得的IC 50值見表三。
[表三]  本發明化合物對hERG鉀離子通道的抑制作用結果
實施例化合物 IC 50(μM)
20A ＞30
實施例4A-1 （CN201780086550.1） 11.87
結論：從表三中可以看出本發明化合物對hERG的抑制作用較弱。同時，按上述實驗方法測試部分化合物的IC 50甚至大於100μM，可顯著降低由hERG引起的心血管相關副作用。
上述實施例為本發明較佳的實施方式，但本發明的實施方式並不受上述實施例的限制， 其他的任何未背離本發明的精神實質與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化，均應為等效的置換方式，都包含在本發明的保護範圍之內。
無
圖1，為實施例39中39A的單晶結構示意圖。

Claims (22)

  1. 一種式(I)的化合物，或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽，
    Figure 03_image001
    (I) 其中， A選自苯環、雜芳環、8~10員稠芳環； R 1選自氫、鹵素、氰基、烷基、烷氧基、鹵代烷基、鹵代烷氧基、烷氧烷基、環烷基、雜環烷基、1個或多個R 7取代的烷基、1個或多個R 8取代的芳基和雜芳基； m為0、1、2或3； W為O或NH； R 2選自氫、鹵素、氰基、烷基、鹵代烷基、烷氧基、烷氧烷基； R 3選自氟、羥基、氰基、氧代(＝O)、C 1-3烷基、OC 1-3烷基、C 3-4環烷基、或2個R 3一起環化成C 3-4螺環烷基，其中C 1-3烷基、OC 1-3烷基、C 3-4環烷基或C 3-4螺環烷基在化合價容許時可經0~3個氟原子或經0~1個羥基取代； q為0、1、2； X為CH或N； Y為CH或N； R 5選自鹵素、羥基、烷基、鹵代烷基、烷氧基、鹵代烷氧基、烷氧烷基、環烷基、雜環烷基、烷基環烷基、烷基雜環烷基； R 4為-C 1-3烷基、-C 0-3亞烷基-C 3-6環烷基、-C 0-3亞烷基-R 9或-C 1-3亞烷基-R 6，其中所述的烷基在化合價容許時可經0至3個獨立地選自0至3個F原子的取代基或經0至1個選自-C 0-1亞烷基-CN、-C 0-1亞烷基-OR O或-N(R N) 2的取代基取代，及其中所述的亞烷基和環烷基在化合價容許時可獨立地經0至2個獨立地選自0至2個F原子的取代基或經0至1個選自-C 0-1亞烷基-CN、-C 0-1亞烷基-OR O或-N(R N) 2的取代基取代； R 9為4至6員雜環烷基，其中該雜環烷基在化合價容許時可經0至2個獨立地選自下列的取代基取代： 0至1個氧代(＝O)， 0至1個-CN， 0至2個F原子，或 0至2個獨立地選自-C 1-3烷基或-OC 1-3烷基的取代基，其中C 1-3烷基和OC 1-3烷基的烷基在化合價容許時可經0至3個獨立地選自下列的取代基取代： 0至3個F原子， 0至1個-CN，或 0至1個-OR O； R 6為5至6員雜芳基，其中該雜芳基在化合價容許時可經0至2個獨立地選自下列的取代基取代： 0至2個鹵素， 0至1個選自-OR O和-N(R N) 2的取代基，或 0至2個-C 1-3烷基，其中該烷基在化合價容許時可經0至3個獨立地選自下列的取代基取代： 0至3個F原子，或 0至1個-OR O； 各R O獨立地為H或-C 1-3烷基，其中C 1-3烷基可經0至3個F原子取代； 各R N獨立地為H或-C 1-3烷基； Z 1、Z 2和Z 3各自獨立地為-CR Z或N，各R Z獨立地為H、F、Cl或-CH 3； R 7選自鹵素、氰基、羥基、環烷基、雜環烷基、碸基； R 8選自鹵素、氰基、烷基、鹵代烷基，烷氧基、鹵代烷氧基、烷氧烷基、環烷基、雜環烷基、碸基。
  2. 如請求項1所述之式(I)的化合物，或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽，其中，所述化合物如式(III)所示：
    Figure 03_image1020
    (III) ，其中， A選自苯環、雜芳環、8~10員稠芳環； R 1選自氫、鹵素、氰基、烷基、烷氧基、鹵代烷基、鹵代烷氧基、烷氧烷基、環烷基、雜環烷基、1個或多個R 7取代的烷基、1個或多個R 8取代的芳基和雜芳基； m為0、1、2或3； W為O或NH； R 3選自氟、羥基、氰基、氧代(＝O)、C 1-3烷基、OC 1-3烷基、C 3-4環烷基、或2個R 3一起環化成C 3-4螺環烷基，其中C 1-3烷基、OC 1-3烷基、C 3-4環烷基或C 3-4螺環烷基在化合價容許時可經0~3個氟原子或經0~1個羥基取代； q為0、1、2； X為CH或N； Y為CH或N； R 5選自鹵素、羥基、烷基、鹵代烷基、烷氧基、鹵代烷氧基、烷氧烷基、環烷基、雜環烷基、烷基環烷基、烷基雜環烷基； R 4為-C 1-3烷基、-C 0-3亞烷基-C 3-6環烷基、-C 0-3亞烷基-R 9或-C 1-3亞烷基-R 6，其中所述的烷基在化合價容許時可經0至3個獨立地選自0至3個F原子的取代基或經0至1個選自-C 0-1亞烷基-CN、-C 0-1亞烷基-OR O或-N(R N) 2的取代基取代，及其中所述的亞烷基和環烷基在化合價容許時可獨立地經0至2個獨立地選自0至2個F原子的取代基或經0至1個選自-C 0-1亞烷基-CN、-C 0-1亞烷基-OR O或-N(R N) 2的取代基取代； R 9為4至6員雜環烷基，其中該雜環烷基在化合價容許時可經0至2個獨立地選自下列的取代基取代： 0至1個氧代(＝O)， 0至1個-CN， 0至2個F原子，或 0至2個獨立地選自-C 1-3烷基或-OC 1-3烷基的取代基，其中C 1-3烷基和OC 1-3烷基的烷基在化合價容許時可經0至3個獨立地選自下列的取代基取代： 0至3個F原子， 0至1個-CN，或 0至1個-OR O； R 6為5至6員雜芳基，其中該雜芳基在化合價容許時可經0至2個獨立地選自下列的取代基取代： 0至2個鹵素， 0至1個選自-OR O和-N(R N) 2的取代基，或 0至2個-C 1-3烷基，其中該烷基在化合價容許時可經0至3個獨立地選自下列的取代基取代： 0至3個F原子，或 0至1個-OR O； 各R O獨立地為H或-C 1-3烷基，其中C 1-3烷基可經0至3個F原子取代； 各R N獨立地為H或-C 1-3烷基； Z 1、Z 2和Z 3各自獨立地為-CR Z或N，各R Z獨立地為H、F、Cl或-CH 3； R 7選自鹵素、氰基、羥基、環烷基、雜環烷基、碸基； R 8選自鹵素、氰基、烷基、鹵代烷基，烷氧基、鹵代烷氧基、烷氧烷基、環烷基、雜環烷基、碸基。
  3. 如請求項1所述之式(I)的化合物，或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽，其中，所述化合物如式(II)所示：
    Figure 03_image006
    (II) ，其中， A選自苯環、雜芳環、8~10員稠芳環； R 1選自氫、鹵素、氰基、烷基、烷氧基、鹵代烷基、鹵代烷氧基、烷氧烷基、環烷基、雜環烷基、1個或多個R 7取代的烷基、1個或多個R 8取代的芳基和雜芳基； m為0、1、2或3； R 3選自氟、羥基、氰基、C 1-3烷基、OC 1-3烷基、C 3-4環烷基、或2個R 3一起環化成C 3-4螺環烷基，其中C 1-3烷基和OC 1-3烷基、環烷基或螺環烷基在化合價容許時可經0~3個氟原子或經0~1個羥基取代； q為0、1、2； X為CH或N； Y為CH或N； R 5選自鹵素、羥基、烷基、鹵代烷基、烷氧基、鹵代烷氧基、烷氧烷基、環烷基、雜環烷基、烷基環烷基、烷基雜環烷基； R 4為-C 1-3烷基、-C 0-3亞烷基-C 3-6環烷基、-C 0-3亞烷基-R 9或-C 1-3亞烷基-R 6，其中所述的烷基在化合價容許時可經0至3個獨立地選自0至3個F原子的取代基或經0至1個選自-C 0-1亞烷基-CN、-C 0-1亞烷基-OR O或-N(R N) 2的取代基取代，及其中所述的亞烷基和環烷基在化合價容許時可獨立地經0至2個獨立地選自0至2個F原子的取代基或經0至1個選自-C 0-1亞烷基-CN、-C 0-1亞烷基-OR O或-N(R N) 2的取代基取代； R 9為4至6員雜環烷基，其中該雜環烷基在化合價容許時可經0至2個獨立地選自下列的取代基取代： 0至1個氧代(＝O)， 0至1個-CN， 0至2個F原子，或 0至2個獨立地選自-C 1-3烷基或-OC 1-3烷基的取代基，其中C 1-3烷基和OC 1-3烷基的烷基在化合價容許時可經0至3個獨立地選自下列的取代基取代： 0至3個F原子， 0至1個-CN，或 0至1個-OR O； R 6為5至6員雜芳基，其中該雜芳基在化合價容許時可經0至2個獨立地選自下列的取代基取代： 0至2個鹵素， 0至1個選自-OR O和-N(R N) 2的取代基，或 0至2個-C 1-3烷基，其中該烷基在化合價容許時可經0至3個獨立地選自下列的取代基取代： 0至3個F原子，或 0至1個-OR O； 各R O獨立地為H或-C 1-3烷基，其中C 1-3烷基可經0至3個F原子取代； 各R N獨立地為H或-C 1-3烷基； Z 1、Z 2和Z 3各自獨立地為-CR Z或N，各R Z獨立地為H、F、Cl或-CH 3； R 7選自鹵素、氰基、羥基、環烷基、雜環烷基、碸基； R 8選自鹵素、氰基、烷基、鹵代烷基，烷氧基、鹵代烷氧基、烷氧烷基、環烷基、雜環烷基、碸基。
  4. 如請求項1至3中任一項所述之式(I)的化合物，或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽，其中，所述烷基選自C 1-6的烷基，所述C 1-6的烷基選自甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、仲戊基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、叔戊基、1,2-二甲基丙基、異戊基、新戊基、正己基、異己基、仲己基、叔己基、新己基、2-甲基戊基、1,2-二甲基丁基、1-乙基丁基。
  5. 如請求項1至3中任一項所述之式(I)的化合物，或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽，其中，所述烷氧基選自C 1-6的烷氧基，所述C 1-6的烷氧基選自甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、仲戊氧基、1-乙基丙氧基、2-甲基丁氧基、叔戊氧基、1,2-二甲基丙氧基、異戊氧基、新戊氧基、正己氧基、異己氧基、仲己氧基、叔己氧基、新己氧基、2-甲基戊氧基、1,2-二甲基丁氧基、1-乙基丁氧基；所述烷氧烷基選自C 1-4的烷氧C 1-4的烷基，進一步選自甲氧甲基、甲氧乙基、甲氧丙基、甲氧丁基、乙氧甲基、乙氧乙基、乙氧丙基、乙氧丁基、丙氧甲基、丙氧乙基、丙氧丙基、丙氧丁基、丁氧甲基、丁氧乙基、丁氧丙基、丁氧丁基等。
  6. 如請求項1至3中任一項所述之式(I)的化合物，或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽，其中，所述鹵素選自氟、氯、溴、碘，鹵代烷基指烷基一個以上的氫原子被鹵素取代，所述鹵代烷氧基指烷氧基一個以上的氫原子被鹵素取代，所述雜環烷基是指烷基一個以上的氫原子被雜環取代。
  7. 如請求項1至3中任一項所述之式(I)的化合物，或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽，其中，所述稠芳環選自萘或者稠芳雜環，所述稠芳雜環指芳環或雜芳環與雜芳環稠合而成，所述雜芳環上的雜原子選自氮、氧、硫，所述雜原子為一個或者多個。
  8. 如請求項7所述之式(I)的化合物，或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽，其中，所述稠芳雜環選自吲唑、喹啉、異喹啉、喹喔啉、吲哚、異吲哚、噌啉、喹唑啉、酞嗪、嘌呤、萘啶、蝶啶、苯并呋喃、苯并噻吩、苯并噁唑、苯并噻唑、苯并異噁唑、苯并異噻唑、苯并噁二唑、苯并噻二唑、苯并三唑、苯并三嗪、苯并咪唑、吡嗪并吡唑、吡嗪并嘧啶、吡嗪并噠嗪、吡嗪并三嗪、嘧啶并吡唑、嘧啶并咪唑、嘧啶并三唑、嘧啶并三嗪、嘧啶并噠嗪、噠嗪并咪唑、噠嗪并吡唑、噠嗪并三唑、噠嗪并三嗪、三嗪并咪唑、三嗪并吡唑、三嗪并三唑、吡啶并咪唑、吡啶并噠嗪、吡啶并吡唑、吡啶并嘧啶、吡啶并三嗪、吡啶并噁唑、吡啶并噻唑、吡啶并異噁唑、吡啶并異噻唑、吡啶并噁二唑、吡啶并噻二唑、吡啶并呋喃、吡啶并吡咯、吡嗪并咪唑、吡嗪并三唑、吡嗪并噁唑、吡嗪并噻唑、吡嗪并異噁唑、吡嗪并異噻唑、吡嗪并噁二唑、吡嗪并噻二唑、吡嗪并呋喃、吡嗪并吡咯、嘧啶并噁唑、嘧啶并噻唑、嘧啶并異噁唑、嘧啶并異噻唑、嘧啶并噁二唑、嘧啶并噻二唑、嘧啶并呋喃、嘧啶并吡咯、噠嗪并噁唑、噠嗪并噻唑、噠嗪并異噁唑、噠嗪并異噻唑、噠嗪并噁二唑、噠嗪并噻二唑、噠嗪并呋喃、噠嗪并吡咯、三嗪并噁唑、三嗪并噻唑、三嗪并異噁唑、三嗪并異噻唑、三嗪并噁二唑、三嗪并噻二唑、三嗪并呋喃、三嗪并吡咯。
  9. 如請求項8所述之式(I)的化合物，或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽，其中，所述萘啶選自
    Figure 03_image008
    、
    Figure 03_image010
    、
    Figure 03_image012
    、
    Figure 03_image014
    、
    Figure 03_image016
    ；所述吡啶并咪唑選自
    Figure 03_image018
    、
    Figure 03_image020
    、
    Figure 03_image022
    、
    Figure 03_image024
    、
    Figure 03_image026
    、
    Figure 03_image028
    ；所述吡嗪并咪唑選自
    Figure 03_image030
    、
    Figure 03_image032
    ；所述吡嗪并三唑選自
    Figure 03_image034
    、
    Figure 03_image036
    、
    Figure 03_image038
    ；所述嘧啶并吡唑選自
    Figure 03_image040
    、
    Figure 03_image042
    ；所述嘧啶并咪唑選自
    Figure 03_image044
    、
    Figure 03_image046
    ；所述嘧啶并三唑選自
    Figure 03_image048
    、
    Figure 03_image050
    、
    Figure 03_image052
    ；所述噠嗪并咪唑選自
    Figure 03_image054
    、
    Figure 03_image056
    ；所述噠嗪并三唑選自
    Figure 03_image058
    、
    Figure 03_image060
    ；所述三嗪并咪唑選自
    Figure 03_image062
    、
    Figure 03_image064
    、
    Figure 03_image066
    ；所述吡啶并噠嗪選自
    Figure 03_image068
    、
    Figure 03_image070
    、
    Figure 03_image072
    、
    Figure 03_image074
    ；所述吡啶并吡唑選自
    Figure 03_image076
    、
    Figure 03_image078
    、
    Figure 03_image080
    、
    Figure 03_image082
    、
    Figure 03_image084
    ；所述吡啶并嘧啶選自
    Figure 03_image086
    、
    Figure 03_image088
    、
    Figure 03_image090
    、
    Figure 03_image092
    ；所述吡啶并三嗪選自
    Figure 03_image094
    、
    Figure 03_image096
    、
    Figure 03_image098
    、
    Figure 03_image100
    、
    Figure 03_image102
    ；所述嘧啶并三嗪選自
    Figure 03_image104
    、
    Figure 03_image106
    、
    Figure 03_image108
    、
    Figure 03_image110
    。
  10. 如請求項1至3中任一項所述之式(I)的化合物，或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽，其中，所述雜環烷基的雜環選自4至10員雜環，所述4至10員雜環選自
    Figure 03_image112
    ，
    Figure 03_image114
    ，
    Figure 03_image116
    ，
    Figure 03_image118
    ，
    Figure 03_image120
    ，
    Figure 03_image122
    ，
    Figure 03_image124
    ，
    Figure 03_image126
    ，
    Figure 03_image128
    ，
    Figure 03_image130
    ；所述芳基選自苯基；所述雜芳基選自5至12員雜芳基，所述5至12員雜芳基選自
    Figure 03_image132
    ，
    Figure 03_image134
    ，
    Figure 03_image136
    ，
    Figure 03_image138
    ，
    Figure 03_image140
    ，
    Figure 03_image142
    ，
    Figure 03_image144
    ，
    Figure 03_image146
    ，
    Figure 03_image148
    ，
    Figure 03_image150
    ，
    Figure 03_image152
    ，
    Figure 03_image154
    ，
    Figure 03_image156
    ，
    Figure 03_image158
    ，
    Figure 03_image160
    ，
    Figure 03_image162
    ，
    Figure 03_image164
    ，
    Figure 03_image166
    ，
    Figure 03_image168
    ，
    Figure 03_image170
    ，
    Figure 03_image172
    ，
    Figure 03_image174
    。
  11. 如請求項1至3中任一項所述之式(I)的化合物，或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽，其中，所述環烷基選自C 3-6的環烷，所述C 3-6的環烷選自環丙基、環丁基、環戊基、環己基。
  12. 如請求項1至3中任一項所述之式(I)的化合物，或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽，其中，所述A選自苯環、
    Figure 03_image176
    、
    Figure 03_image178
    、
    Figure 03_image180
    、
    Figure 03_image182
    、
    Figure 03_image184
    、
    Figure 03_image186
    。
  13. 如請求項1所述之式(I)的化合物，或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽，其中，所述A選自苯環、
    Figure 03_image176
    、
    Figure 03_image178
    、
    Figure 03_image180
    、
    Figure 03_image182
    、
    Figure 03_image184
    、
    Figure 03_image186
    ； R 1選自氫、氟、氯、溴、氰基、二氟乙基、三氟乙基； m為0、1、2； W為O或NH； R 2選自氯、氰基、三氟甲基、甲氧基、甲氧甲基； q為0、1； R 3為氟、甲基、氧代(＝O)、羥基、氟代甲基、甲氧基乙基； R 4為氧雜環丁-2-基甲基； X為CH或N； Y為CH或N； R 5選自甲基、乙基、環丙甲基、氟代乙基、甲氧基乙基； Z 1為CH； Z 2為CH或CF； Z 3為CH或N或CF。
  14. 如請求項2所述之式(I)的化合物，或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽，其中，所述A選自苯環、
    Figure 03_image176
    、
    Figure 03_image178
    、
    Figure 03_image180
    、
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    、
    Figure 03_image184
    、
    Figure 03_image186
    ； R 1選自氫、氟、氯、溴、氰基、二氟乙基、三氟乙基； m為0、1、2； W為O或NH； q為0、1； R 3為氟、甲基、氧代(＝O)、羥基、氟代甲基、甲氧基乙基； R 4為氧雜環丁-2-基甲基； X為CH或N； Y為CH或N； R 5選自甲基、乙基、環丙甲基、氟代乙基、甲氧基乙基； Z 1為CH； Z 2為CH或CF； Z 3為CH或N或CF。
  15. 如請求項3所述之式(I)的化合物，或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽，其中，所述A選自苯環、
    Figure 03_image176
    、
    Figure 03_image178
    、
    Figure 03_image180
    、
    Figure 03_image186
    ； R 1選自氫、氟、氯、溴、氰基、二氟乙基、三氟乙基； m為0、1、2； q為0； R 4為氧雜環丁-2-基甲基； X為CH或N； Y為CH或N； R 5選自甲基、乙基、環丙甲基、氟代乙基、甲氧基乙基； Z 1為CH； Z 2為CH或CF； Z 3為CH或N或CF。
  16. 如請求項1至15中任一項所述之式(I)的化合物，或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽，其中，當與R 5相連的碳原子為手性碳原子時，所述手性碳原子為S構型和/或R構型，較佳為S構型。
  17. 如請求項1至3中任一項所述之式(I)的化合物，或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽，其中，所述化合物選自以下化合物：    結構式    結構式 1
    Figure 03_image188
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    Figure 03_image288
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    Figure 03_image290
    。
  18. 如請求項1至3中任一項所述之式(I)的化合物，或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽，其中，所述化合物選自以下化合物：    結構式    結構式 1A
    Figure 03_image292
     27
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    Figure 03_image407
     52B
    Figure 03_image409
    。
  19. 如請求項1至3中任一項所述之式(I)的化合物，或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽，其中，所述藥學上可接受的鹽是指化合物與藥學上可接受的酸或鹼製備。
  20. 如請求項1至18中任一項所述之式(I)的化合物，或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽，其中，所述化合物的一個以上的氫原子上被同位素氘取代。
  21. 一種藥物組合物，包括如請求項1至20中任一項所述之式(I)的化合物，或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽；和一種以上藥學上可接受的載體。
  22. 一種如請求項1至20中任一項所述之式(I)的化合物，或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽在製備用於治療GLP-1相關疾病較佳糖尿病的藥物中的用途。
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