TW202237064A - 化妝料組成物之製造方法 - Google Patents

Abstract

本發明課題在於提供一種包含富含膠原蛋白之胎盤萃取物，且機能性優良的化妝料組成物及化妝料組成物之製造方法。 解決手段為，適用本發明之化妝料組成物的一例之化妝水係具有以總量基準計，重量比率包含純水：30~ 95%、含膠原蛋白之胎盤萃取物：0.05~0.8%(v/v)、多元醇：0.1~50%、酯油：適量(0~5%，有時未摻混)、界面活性劑：適量、檸檬酸：適量、羧基乙烯聚合物：適量(下限0.1%)、氫氧化鈉：適量、植物萃取物：適量(下限0.1%)防腐劑：適量之組成。又，此處所示化妝水係含有以總量基準計為0.0000075~0.00012%(w/v)的濃度的表皮細胞生長因子(EGF)。

Description

化妝料組成物之製造方法

本發明係有關於一種化妝料組成物之製造方法。詳言之，係有關於一種包含富含膠原蛋白之胎盤萃取物，且機能性優良的化妝料組成物之製造方法。

傳統上，對於化妝水、乳液、凝膠等化妝料，常賦予供改善皮膚的黑化或色素沉積所致之斑點、雀斑等的美白效果，及供預防斑點或鬆弛的保濕效果或抗氧化效果，而將各種的原料摻混於化妝料中。

此外，皮膚時常暴露於外界，隨著年齡增長而產生皺紋、鬆弛、暗沉、色素沉積等老化現象。尤其是，咸認占真皮基質之90%以上的膠原蛋白對皺紋或鬆弛等形態變化所造成的影響極大。

此膠原蛋白的量會隨著年齡增長而減少，因膠原蛋白的減少導致真皮構造的形成不完全，而成為皮膚衰老、產生皺紋、鬆弛的最主要原因之一。

又，就膠原蛋白量減少的原因，可舉出真皮的纖維母細胞導致膠原蛋白的產生能力變差，其結果，便產生皮膚的皺紋或鬆弛。

因此，有人嘗試從天然物中尋求促進膠原蛋白產生的素材，迄此已有報導指出，除植物的萃取物或其成分外，各種物質亦具有促進膠原蛋白產生之作用。

又，已知膠原蛋白本身或水解膠原蛋白尚有纖維母細胞生長效果或產生膠原蛋白之作用。

又，具有促進膠原蛋白產生之作用的原料外，作為對化妝料賦予美白效果及諸多有用之機能的原料，胎盤萃取物(placenta extract)亦備受矚目。

此胎盤萃取物具有調整內分泌之作用、強肝暨解毒作用、免疫賦活作用、自律神經作用、促進血液循環暨造血作用之效果。又，就美容方面，亦具有極多機能，如改善抗發炎作用所致之肌膚乾澀等、抗氧化作用所產生之美白效果、促進新陳代謝、使肌膚回春等。

又，就化妝料而言，為了提升胎盤萃取物所具有的美白效果等，業界進行各種研究，例如有人提出專利文獻1所記載之含有胎盤萃取物的化妝料組成物。

於此專利文獻1所記載之化妝料組成物中，係使用將胎盤萃取物與薏苡封入於微脂體之原料。 [先前技術文獻] [專利文獻]

[專利文獻1]日本特開2010-180193號公報

[發明所欲解決之課題]

然而，以專利文獻1所揭示之化妝料組成物為首，在習知以胎盤萃取物為原料的化妝料中，胎盤萃取物本身所含膠原蛋白的含量較少，而在提升膠原蛋白所產生之纖維母細胞生長效果及產生膠原蛋白之作用方面，企望更進一步之改良。

本發明係有鑑於以上各點而研發者，茲以提供一種包含富含膠原蛋白之胎盤萃取物，且機能性優良的化妝料組成物之製造方法為目的。 [解決課題之手段]

為達成上述目的，本發明之化妝料組成物係構成為含有胎盤萃取物與表皮細胞生長因子(EGF)，且前述胎盤萃取物中，該胎盤萃取物之每單位總氮濃度(w/v)之羥脯胺酸濃度(w/v)為0.47以上。

於此，透過胎盤萃取物中胎盤萃取物之每單位總氮濃度(w/v)之羥脯胺酸濃度(w/v)為0.47以上，作為原料之胎盤萃取物中即富含膠原蛋白。首先，羥脯胺酸為膠原蛋白的主要成分，且為膠原蛋白中獨特可見之胺基酸的一種，故羥脯胺酸量係膠原蛋白含量之指標。因此，胎盤萃取物之每單位總氮濃度(w/v)之羥脯胺酸的濃度(w/v)愈高，可判斷為胎盤萃取物中的膠原蛋白的濃度愈高。又，所稱胎盤萃取物之每單位總氮濃度(w/v)之羥脯胺酸濃度(w/v)為0.47以上，係指高於習知市售胎盤萃取物中的羥脯胺酸的濃度，含有足量的膠原蛋白。此結果，可提高胎盤萃取物中膠原蛋白所產生之纖維母細胞生長效果及產生膠原蛋白之作用。

又，透過含有胎盤萃取物與表皮細胞生長因子(EGF)，與單獨摻混各成分之組成相比，更可加乘性地提高化妝料組成物中的纖維母細胞生長效果。

又，透過胎盤萃取物的濃度為0.025v/v%~ 1.0v/v%之範圍內，當表皮細胞生長因子(EGF)的濃度為0.00000375w/v%~0.00015w/v%之範圍內時，可進一步提高化妝料組成物中的纖維母細胞生長效果。又，可抑制化妝料帶有顏色。

又，另一方面，當胎盤萃取物的濃度未達0.025v/v%時，化妝料組成物中的纖維母細胞生長效果雖有所提升，但效果提升程度較小。又，當胎盤萃取物的濃度超過1.0v/v%時，胎盤萃取物本身帶有的顏色容易顯現於化妝料中，在考量應用於化妝料顏色需要透明或白色化妝料時，不易用作原料。

又，另一方面，當表皮細胞生長因子(EGF)的濃度未達0.00000375w/v%時，化妝料組成物中的纖維母細胞生長效果雖有所提升，但效果提升程度較小。又，當表皮細胞生長因子(EGF)的濃度超過0.00015w/v%時，化妝料組成物中的纖維母細胞生長效果雖有所提升，但與更低的濃度相比，效果提升程度已到頂，使得所用表皮細胞生長因子(EGF)的成本增加而不佳。

又，當胎盤萃取物的濃度為0.2v/v%~ 0.8v/v%之範圍內時，可更顯著地提高化妝料組成物中的纖維母細胞生長效果。

又，當胎盤萃取物取自於馬胎盤時，可作為能用作化妝料組成物之原料的胎盤萃取物。

又，為達成上述目的，本發明之化妝料組成物之製造方法係具備胎盤萃取物製造步驟與混合步驟，其中，該胎盤萃取物製造步驟係具有：熱水萃取步驟，其係將解凍之馬胎盤或豬胎盤與前述解凍時所滲出之血液混合，並以熱水進行處理；及消化反應步驟，其係將經過前述熱水萃取步驟之萃取處理物，以60度~70度之範圍內的溫度，使用木瓜蛋白酶進行酵素消化；該混合步驟係將該胎盤萃取物製造步驟中所得之胎盤萃取物，且其每單位總氮濃度(w/v)之羥脯胺酸濃度(w/v)為0.47以上的胎盤萃取物與表皮細胞生長因子(EGF)混合。

於此，於熱水萃取步驟中，藉由將解凍之馬胎盤或豬胎盤與解凍時所滲出之血液混合，並以熱水進行處理，可由馬胎盤或豬胎盤中有效地萃取出水溶性的膠原蛋白成分。亦即，在隨後之消化反應步驟中所生成之酵素萃取物與殘渣之間，可增加酵素萃取物方所含之膠原蛋白成分，而提高消化效率。此外，此處所稱熱水，係包含例如約80℃的高溫水。

又，於消化反應步驟中，藉由將經過熱水萃取步驟之萃取處理物，以60度~70度之範圍內的溫度，使用木瓜蛋白酶進行酵素消化，可使經過熱水萃取步驟之萃取處理物藉由酵素反應溶解，而分成酵素萃取物與殘渣。又，可獲得含有水溶性膠原蛋白成分的酵素萃取物。又，木瓜蛋白酶由於為具耐熱性之酵素，對於前步驟之熱水萃取步驟中經高溫處理之萃取處理物，可在保持高溫下穩定地供予酵素反應。

又，於混合步驟中，藉由將胎盤萃取物製造步驟中所得之胎盤萃取物，且其每單位總氮濃度(w/v)之羥脯胺酸濃度(w/v)為0.47以上的胎盤萃取物與表皮細胞生長因子(EGF)混合，可製造含有富含膠原蛋白之胎盤萃取物與表皮細胞生長因子(EGF)的化妝料組成物。

又，為達成上述目的，本發明之化妝料組成物係構成為含有胎盤萃取物，且前述胎盤萃取物中，該胎盤萃取物之每單位總氮濃度(w/v)之羥脯胺酸濃度(w/v)為0.47以上，且前述胎盤萃取物的濃度為0.025v/v%~0.8v/v%之範圍內。

於此，透過胎盤萃取物中胎盤萃取物之每單位總氮濃度(w/v)之羥脯胺酸濃度(w/v)為0.47以上，作為原料之胎盤萃取物中即富含膠原蛋白。所稱胎盤萃取物之每單位總氮濃度(w/v)之羥脯胺酸濃度(w/v)為0.47以上，係指高於習知市售胎盤萃取物中的羥脯胺酸的濃度，含有足量的膠原蛋白。此結果，可提高胎盤萃取物中膠原蛋白所產生之纖維母細胞生長效果及產生膠原蛋白之作用。

又，透過胎盤萃取物的濃度為0.025v/v%~0.8v/v%之範圍內，可提高化妝料組成物中的纖維母細胞生長效果。又，可抑制化妝料帶有顏色。

此外，本說明書中所稱「胎盤萃取物之每單位總氮濃度(w/v)」，係指以胎盤萃取物之總氮濃度1%(w/v)為基準的濃度(%(w/v))。 [發明之效果]

本發明之化妝料組成物之製造方法可提供一種包含富含膠原蛋白之胎盤萃取物，且機能性優良的化妝料組成物。

[實施發明之形態]

以下就適用本發明之化妝料組成物的一例之化妝水的組成加以說明。

此處所示化妝水係具有以總量基準計，重量比率包含純水：30~95%、含膠原蛋白之胎盤萃取物：0.05~0.8%(v/v)、多元醇：0.1~50%、酯油：適量(0~5%，有時未摻混)、界面活性劑：適量、檸檬酸：適量、羧基乙烯聚合物：適量(下限0.1%)、氫氧化鈉：適量、植物萃取物：適量(下限0.1%)防腐劑：適量之組成。又，此處所示化妝水係含有以總量基準計為0.0000075~0.00012%(w/v)的濃度的表皮細胞生長因子(EGF)。

此外，含膠原蛋白之胎盤萃取物係指本案請求項中的「胎盤萃取物」。此外，以下係使用「含膠原蛋白之胎盤萃取物」之用語。

又，此處所示化妝水之組成僅為化妝料組成物之一例，可適宜設定其他成分或不同摻混量。例如，除上述以外，亦可配合製劑的種類、用途而含有螯合劑(鉗合劑)、收斂劑、殺菌劑、皮膚賦活劑(維生素類、胺基酸及胺基酸衍生物)、消炎劑、美白劑(熊果苷、傳明酸、維生素C衍生物等)。又，亦可視需求摻混香料或著色料。

純水為化妝水之基劑，係將包含上述各種成分之化妝水的總量調整為100%。

含膠原蛋白之胎盤萃取物為特徵成分，係可對化妝水賦予纖維母細胞生長效果、膠原蛋白產生作用、膠原蛋白酶活性抑制作用、抗氧化作用、抗發炎作用、促進新陳代謝及使肌膚回春之機能，或提升此等較佳之作用的成分。又，其係將馬胎盤以後述製造方法進行處理而得的產物。

又，含膠原蛋白之胎盤萃取物係包含胎盤萃取物之每單位總氮濃度1%(w/v)之羥脯胺酸濃度為0.47%(w/v)的羥脯胺酸。羥脯胺酸為胎盤萃取物中的膠原蛋白的濃度之指標，本組成中的含膠原蛋白之胎盤萃取物之羥脯胺酸的濃度係高於習知市售胎盤萃取物中的羥脯胺酸的濃度，含有足量的膠原蛋白。

表皮細胞生長因子(EGF)為特徵成分，係對於化妝水，使纖維母細胞生長效果提升的成分。表皮細胞生長因子(EGF)，透過與含膠原蛋白之胎盤萃取物組合，可加乘性地提高纖維母細胞生長效果。

多元醇為保濕劑。多元醇可使用例如甘油、1,3-丁二醇、1,2-戊二醇等。

酯油為柔軟劑(軟化劑)。於上述組成中，係使用酯油，惟除此之外亦可使用例如植物油等。

界面活性劑為油性成分的乳化劑或可助溶劑。界面活性劑可使用例如卵磷脂及卵磷脂衍生物、甘油脂肪酸酯、聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯、聚氧乙烯硬化蓖麻油等。此外，於本發明中，油性成分的乳化劑或助溶劑的種類非限定於此等，亦可使用其他界面活性劑。

檸檬酸為緩衝劑(pH調整劑)。於上述組成中，係使用檸檬酸，惟除此之外亦可使用例如檸檬酸鈉等。

羧基乙烯聚合物為增黏劑，係賦予化妝水適度黏性者。於上述組成中，係使用羧基乙烯聚合物，惟除此之外亦可使用例如丙烯酸系增黏劑、聚乙烯醇、黃原膠、鹿角菜膠、瓊脂、明膠等。

氫氧化鈉為中和劑。於上述組成中，係使用氫氧化鈉，惟除此之外亦可使用例如氫氧化鉀等。

植物萃取物係對於化妝水，對皮膚賦予有效的期望機能性的成分。又，防腐劑係使化妝水具有防腐力之成分。

於此，植物萃取物可舉出例如如下者。薏苡籽萃取物、蜂王漿萃取物、雷公根葉萃取物、白芨根萃取物、胎盤萃取物、黃芩萃取物、姬風葉萃取物、大豆胎盤素萃取物、雜交玫瑰花萃取物、月桃葉萃取物、毛果一枝黃花萃取物、酵母菌溶質萃取物、肌酸紅菱果皮萃取物、高麗參根萃取物、芍藥根萃取物、葡萄藤萃取物。

於此，含膠原蛋白之胎盤萃取物的摻混量，以化妝水的總量基準計為0.05~0.8%。於此，未必有將含膠原蛋白之胎盤萃取物的摻混量設定成以化妝水的總量基準計為0.05~0.8%之必要。惟，由進一步提升化妝水的纖維母細胞生長效果而言，含膠原蛋白之胎盤萃取物的摻混量較佳設定成以化妝水的總量基準計為0.025~1.0%。又，由進一步提升化妝水的纖維母細胞生長效果，同時可抑制含膠原蛋白之胎盤萃取物所產生的顏色顯現於化妝水而言，含膠原蛋白之胎盤萃取物的摻混量較佳設定成以化妝水的總量基準計為0.2~0.8%。

又，表皮細胞生長因子(EGF)的摻混量，以化妝水的總量基準計為0.0000075~0.00012%(w/v)的濃度。於此，未必有將表皮細胞生長因子(EGF)的摻混量設定成以化妝水的總量基準計為0.0000075~0.00012%(w/v)的濃度之必要。惟，由進一步提升化妝水的纖維母細胞生長效果，同時防止效果提升程度到頂而言，表皮細胞生長因子(EGF)的摻混量較佳設定成以化妝水的總量基準計為0.00000375~0.00015%(w/v)的濃度範圍。

接著說明適用本發明之化妝料組成物之製造方法的一例。此處係以上述化妝水為例進行說明。

首先，針對由馬胎盤製造含膠原蛋白之胎盤萃取物的內容加以說明。 將經冷凍保存之馬胎盤解凍(解凍)。計量與解凍之馬胎盤的肉質部等量的滲出液(解凍時所生成的血液)，並將肉質部弄碎(弄碎及供給原料)。

又，將馬胎盤的碎解物與滲出液混合，以80℃進行熱水萃取約22小時(熱水萃取)。藉此，可由馬胎盤中有效地萃取出水溶性的膠原蛋白成分。亦即，在以下消化反應步驟中所生成之酵素萃取物與殘渣之間，可增加酵素萃取物方所含之膠原蛋白成分，而提高消化效率。此外，本步驟係屬本案請求項中的熱水萃取步驟。

接著，將熱水萃取處理物，使用0.2%木瓜蛋白酶，以60~70℃進行消化反應3小時(消化反應)。藉此，可使萃取處理物藉由酵素反應溶解，而分成酵素萃取物與殘渣。又，可獲得含有水溶性膠原蛋白成分的酵素萃取物。此外，本步驟係屬本案請求項中的消化反應步驟。

其次，將酵素萃取物，使用0.8%的活性碳進行10分鐘的活性碳處理。又，此後，以90℃進行加熱處理30分鐘。進而，視需求以8000rpm進行離心分離5分鐘，分離成上澄液與沉澱物。

又，將經離心分離之上澄液，再使用過濾助劑進行真空過濾(No.2濾紙)。進而，將真空過濾後的上澄液進行澄清過濾。

又，對澄清過濾之濾液添加2-苯氧基乙醇1.6%並攪拌。進而，使用0.22μm濾器進行除菌過濾。依迄此之步驟，可由馬胎盤製造含膠原蛋白之胎盤萃取物。

此外，上述方法純粹僅為一例，各種條件或方法可適宜變更。

又，於進行熱水萃取之步驟中，未必有以80℃進行熱水萃取約22小時之必要，水的溫度或時間可適宜變更。惟，基於由馬胎盤中充分且有效地萃取出水溶性膠原蛋白成分而言，較佳以80℃進行熱水萃取約22小時。

又，於進行消化反應之步驟中，未必有使用0.2%木瓜蛋白酶，以60~70℃進行消化反應3小時之必要，亦可採用木瓜蛋白酶以外的耐熱性消化酵素。又，消化反應的溫度及時間亦可適宜變更。惟，基於由經熱水萃取之處理物中獲得富含水溶性膠原蛋白成分的酵素萃取物而言，較佳使用0.2%木瓜蛋白酶，以60~70℃進行消化反應3小時。

又，就本發明之化妝料組成物之製造方法的一例，係將上述所得之含膠原蛋白之胎盤萃取物與含有表皮細胞生長因子(EGF)的各種成分混合，而製造化妝水。

於此，含膠原蛋白之胎盤萃取物與含有表皮細胞生長因子(EGF)的各種成分的混合方法可採用已知之化妝料之製造方法。

諸如上述，適用本發明之化妝料組成物可藉由上述方法生成含膠原蛋白之胎盤萃取物，並將此含膠原蛋白之胎盤萃取物與含有表皮細胞生長因子(EGF)的各種原料混合而製造。此外，此處所示製造方法或條件純粹僅為一例，理當可依據原料成分或添加物的種類等而適宜設定變更。

又，適用本發明之化妝料組成物的種類非限定於上述化妝水，可應用於例如乳液/乳霜系化妝料、凝膠、洗淨劑(洗髮精)、洗面乳(洗臉用)等。又，其製造方法可採用將生成之含膠原蛋白之胎盤萃取物與含有表皮細胞生長因子(EGF)的各種化妝料之原料，以配合化妝料的種類的既有方法混合之方法。

諸如上述，適用本發明之化妝料組成物，可提供一種包含富含膠原蛋白之胎盤萃取物，且機能性優良的化妝料組成物。 又，適用本發明之化妝料組成物之製造方法係一種可提供包含富含膠原蛋白之胎盤萃取物，且機能性優良的化妝料組成物之方法。 [實施例]

以下說明本發明之實施例。

首先，就本發明之化妝料組成物所含之含膠原蛋白之胎盤萃取物進行以下評定。

對於以上述含膠原蛋白之胎盤萃取物之製造方法所製造的含膠原蛋白之胎盤萃取物與2種市售胎盤萃取物A及胎盤萃取物B(皆取自於馬胎盤)，進行羥脯胺酸含量的測定。

此外，胎盤萃取物A及胎盤萃取物B係重複將作為原料之馬胎盤於低溫下冷凍、浸漬，將細胞組織碎解，萃取出其原生質並經過除蛋白、超過濾所調製而成者。此外，胎盤萃取物A及胎盤萃取物B之調製方法可採用已知方法。例如除解凍外，亦可組合酵素萃取之步驟。

(1)羥脯胺酸含量的測定 以最終濃度成為6M的方式對含膠原蛋白之胎盤萃取物與胎盤萃取物A及胎盤萃取物B之各試料溶液添加鹽酸，並以110℃進行水解24小時。對水解後的各試料，以採用鄰酞醛標記的後管柱法進行胺基酸分析。又，另外事先測定試料中的總氮濃度，並比較試料之每單位總氮濃度1%(w/v)之羥脯胺酸的濃度(%(w/v))。 將各試料中的羥脯胺酸含量示於表1。

[表1]

	含膠原蛋白之 胎盤萃取物	胎盤萃取物A	胎盤萃取物B
每單位總氮濃度1% (w/v)之羥脯胺酸濃度 (%(w/v))	0.470	0.272	0.063

如表1所示，顯然本發明之化妝料組成物所含之含膠原蛋白之胎盤萃取物中含有多於市售胎盤萃取物A及胎盤萃取物B的羥脯胺酸。亦即，顯然含膠原蛋白之胎盤萃取物中含有多於胎盤萃取物A及胎盤萃取物B的膠原蛋白。此外，基於原料來源不同的馬胎盤，同樣地藉由含膠原蛋白之胎盤萃取物之製造方法調製含膠原蛋白之胎盤萃取物，並測定試料之每單位總氮濃度1%(w/v)之羥脯胺酸的濃度，有顯示0.59(%(w/v))之結果。

(2)纖維母細胞生長活性試驗 其次，針對含膠原蛋白之胎盤萃取物與胎盤萃取物A及胎盤萃取物B之各試料，進行纖維母細胞生長活性試驗。 於此，纖維母細胞係指位於皮膚的真皮且可產生膠原蛋白的細胞。茲將促進此纖維母細胞的繁殖之作用(繁殖活性)較高評定為促進膠原蛋白產生之作用優良的試料。

(試驗方法) 將取自人類新生兒的皮膚纖維母細胞以2×10 ⁴個/井孔的方式播種於96孔井盤中，以含有0.5%之胎牛血清(Fetal Bovine Serum,簡稱FBS)的DMEM培養基(Dulbecco’s Modified Eagle Medium)培養一夜。針對含膠原蛋白之胎盤萃取物、胎盤萃取物A及胎盤萃取物B，分別更換為添加有加總總氮量之濃度的培養基，於37℃、5%CO ₂恆溫箱內培養24小時。以磷酸緩衝生理食鹽水(Phosphate-buffered saline,簡稱PBS)將細胞洗淨，添加含有10%之市售細胞繁殖分析套組(同人化學研究所股份有限公司製：Cell Counting Kit-8)的DMEM，並於37℃、5%CO ₂恆溫箱內培養4小時。培養後，測定450nm的吸光度。 此外，測定結果係以將未添加含膠原蛋白之胎盤萃取物、胎盤萃取物A及胎盤萃取物B時的繁殖活性設為100%時的相對值表示。又，細胞繁殖活性係以下述式1所示計算式算出。 (式1) 細胞繁殖活性(%)={(試料添加群之450nm的吸光度)/ (試料無添加群之450nm的吸光度)}×100 將纖維母細胞生長活性試驗之結果示於表2。

[表2]

	含膠原蛋白之 胎盤萃取物	胎盤萃取物A	胎盤萃取物B	控制組
繁殖活性(%)	119.3	102.7	106.2	100.0

如表2所示，本發明之化妝料組成物所含之含膠原蛋白之胎盤萃取物，相較於市售胎盤萃取物A及胎盤萃取物B，顯示纖維母細胞生長活性顯著提升之結果。

接著製作以適用本發明之化妝料組成物之製造方法所製造的化妝料組成物之實施例及比較例，進行纖維母細胞生長活性試驗的評定。 (3)試料的原料成分 首先，以成為表3~表6所示組成的方式添加原料成分，而製成實施例1~15及比較例1~9之各試料。此外，以下表3~6所示各成分的數值，就含膠原蛋白之胎盤萃取物，係表示以總量為基準的體積比率(%(v/v))；就表皮細胞生長因子(EGF)，則表示重量體積比率(%(w/v))。

[表3]

	實施例1	實施例2	實施例3	實施例4	實施例5	實施例6	比較例7
含膠原蛋白之 胎盤萃取物(%)	0.8	0.4	0.2	0.1	0.05	0.025	－
繁殖活性(%)	119.3	118.5	119.9	109.5	108.5	103.5	100.0

[表4]

	比較例2	比較例3	比較例4	比較例5	比較例6	比較例7	比較例8
EGF濃度(%(w/v))	0.00012	0.00006	0.00003	0.000015	0.0000075	0.00000375	－
繁殖活性(%)	114.6	121.0	122.1	129.5	124.5	124.7	100.0

[表5]

	實施例7	實施例8	實施例9	實施例10	實施例11
含膠原蛋白之 胎盤萃取物(%)	2.0	1.0	0.8	0.4	0.2
EGF濃度(%(w/v))	0.0003	0.00015	0.00012	0.00006	0.00003
繁殖活性(%)	131.0	132.0	137.4	133.2	137.3

[表6]

	實施例12	實施例13	實施例14	實施例15	比較例9
含膠原蛋白之 胎盤萃取物(%)	0.1	0.05	0.025	0.0125	－
EGF濃度(%(w/v))	0.000015	0.0000075	0.00000375	0.000001875	－
繁殖活性(%)	129.8	127.7	129.0	118.0	100.0

又，對於纖維母細胞生長活性試驗，係依以下內容進行。 (試驗方法) 將取自人類新生兒的皮膚纖維母細胞以2×10 ⁴個/井孔的方式播種於96孔井盤中，以含有0.5%之胎牛血清(FBS)的DMEM培養基培養一夜。將含膠原蛋白之胎盤萃取物、表皮細胞生長因子(EGF)，及含膠原蛋白之胎盤萃取物與表皮細胞生長因子(EGF)的混合物，分別更換為添加有表3~5所示量的培養基，於37℃、5%CO ₂恆溫箱內培養24小時。以磷酸緩衝生理食鹽水(PBS)將細胞洗淨，添加含有10%之市售細胞繁殖分析套組(同人化學研究所股份有限公司製：Cell Counting Kit-8)的DMEM，並於37℃、5%CO ₂恆溫箱內培養4小時。培養後，測定450nm的吸光度。 此外，測定結果係以將未添加含膠原蛋白之胎盤萃取物、表皮細胞生長因子(EGF)，及含膠原蛋白之胎盤萃取物與表皮細胞生長因子(EGF)的混合物時的繁殖活性設為100%時的相對值表示。又，細胞繁殖活性係以下述式1所示計算式算出。 (式1) 細胞繁殖活性(%)={(試料添加群之450nm的吸光度)/ (試料無添加群之450nm的吸光度)}×100 此外，比較例1、8及9係顯示未添加含膠原蛋白之胎盤萃取物、表皮細胞生長因子(EGF)，及含膠原蛋白之胎盤萃取物與表皮細胞生長因子(EGF)的混合物時的繁殖活性。

將纖維母細胞生長活性試驗之結果示於圖1~圖3及表3~表6。此外，圖1係將表3所示數值圖表化，圖2係將表4所示數值圖表化，圖3則將表5及表6所示數值圖表化。

就實施例1~實施例6及實施例7~15，顯示纖維母細胞生長活性有所提升之結果。尤其是就實施例7~實施例14，與比較例2~4、6、7相比，亦顯示纖維母細胞生長活性顯著提升之結果。

又，以下示出以適用本發明之化妝料組成物之製造方法所製造的各種化妝料之一例。

(乳液/乳霜) [表7]

構成成分	代表性原料	添加量(%)
水	純水	30~95
保濕劑(多元醇)	甘油、1,3-丁二醇、1,2-戊二醇等	適量(0.1~50%)
含膠原蛋白之 胎盤萃取物		0.05~0.8%(v/v)
表皮細胞生長因子(EGF)		0.00012~0.0000075%(w/v)
油分(柔軟劑、軟化劑)	高級醇、脂肪酸、酯油、植物油、矽油、蠟類等	適量(3~50%)
乳化劑	界面活性劑	適量
緩衝劑(pH調整劑)	檸檬酸、檸檬酸鈉	適量
增黏劑	羧基乙烯基聚合物、丙烯酸系增黏劑、聚乙烯醇、黃原膠、鹿角菜膠、瓊脂、明膠等	適量(下限0.1%)
中和劑	氫氧化鈉、氫氧化鉀	適量
植物萃取物		適量(下限0.1%)
防腐劑		適量

(凝膠) [表8]

構成成分	代表性原料	添加量(%)
水	純水	30~95
保濕劑(多元醇)	甘油、1,3-丁二醇、1,2-戊二醇等	適量(0.1~50%)
含膠原蛋白之胎盤萃取物		0.05~0.8%(v/v)
表皮細胞生長因子(EGF)		0.00012~0.0000075%(w/v)
油分(柔軟劑、軟化劑)	高級醇、脂肪酸、酯油、植物油、矽油、蠟類等	適量(1~50%)
乳化劑	界面活性劑	適量
緩衝劑(pH調整劑)	檸檬酸、檸檬酸鈉	適量
增黏劑	羧基乙烯基聚合物、丙烯酸系增黏劑、聚乙烯醇、黃原膠、鹿角菜膠、瓊脂、明膠等	適量(下限0.1%)
中和劑	氫氧化鈉、氫氧化鉀	適量
植物萃取物		適量(下限0.1%)
防腐劑		適量
防腐劑		適量

(洗淨劑(洗髮精)) [表9]

構成成分	代表性原料	添加量(%)
水	純水	30~95
保濕劑(多元醇)	甘油、1,3-丁二醇、1,2-戊二醇等	適量(0.1~50%)
含膠原蛋白之胎盤萃取物		0.05~0.8%(v/v)
表皮細胞生長因子(EGF)		0.00012~0.0000075%(w/v)
洗淨劑	界面活性劑	5~50%
緩衝劑(pH調整劑)	檸檬酸、檸檬酸鈉	適量
植物萃取物		適量(下限0.1%)
防腐劑		適量

(洗面乳(洗臉)) [表10]

構成成分	代表性原料	添加量(%)
水	純水	10~50
保濕劑(多元醇)	甘油、1,3-丁二醇、1,2-戊二醇等	適量(1~50%)
含膠原蛋白之胎盤萃取物		0.05~0.8%(v/v)
表皮細胞生長因子(EGF)		0.00012~0.0000075%(w/v)
脂肪酸	硬脂酸、棕櫚酸、肉豆蔻酸、月桂酸	5~50%
緩衝劑(pH調整劑)	氫氧化鈣	適量(配合中和度)
植物萃取物		適量(下限0.1%)
防腐劑		適量

又，於上述各種化妝料中，可適宜設定其他成分或不同摻混量。例如，除上述以外，亦可配合製劑的種類、用途而含有螯合劑(鉗合劑)、收斂劑、殺菌劑、皮膚賦活劑(維生素類、胺基酸及胺基酸衍生物)、消炎劑、美白劑(熊果苷、傳明酸、維生素C衍生物等)。又，亦可視需求摻混香料或著色料。

[圖1]為表示胎盤萃取物中的纖維母細胞生長活性試驗之結果的圖表。 [圖2]為表示表皮細胞生長因子(EGF)中的纖維母細胞生長活性試驗之結果的圖表。 [圖3]為表示胎盤萃取物及表皮細胞生長因子(EGF)之混合物中的纖維母細胞生長活性試驗之結果的圖表。

Claims (4)

1. 一種化妝料組成物之製造方法，其係具備胎盤萃取物製造步驟與混合步驟，其中， 該胎盤萃取物製造步驟係具有： 熱水萃取步驟，其係將解凍之馬胎盤或豬胎盤與前述解凍時所滲出之血液等組織液混合，並將此混合物加溫而進行熱水萃取處理；及 消化反應步驟，其係將經過前述熱水萃取步驟之萃取處理物，以60度~70度之範圍內的溫度，使用木瓜蛋白酶進行酵素消化； 該混合步驟係將該胎盤萃取物製造步驟中所得之胎盤萃取物，且其每單位總氮濃度(w/v)之羥脯胺酸濃度(w/v)為0.47以上的胎盤萃取物與表皮細胞生長因子(EGF)混合。
2. 如請求項1之化妝料組成物之製造方法，其中， 前述胎盤萃取物的濃度為0.025v/v%~1.0v/v%之範圍內， 前述表皮細胞生長因子(EGF)的濃度為0.00000375 w/v%~0.00015w/v%之範圍內。
3. 如請求項2之化妝料組成物之製造方法，其中， 前述胎盤萃取物的濃度為0.05v/v%~0.8v/v%之範圍內。
4. 如請求項1、2或3之化妝料組成物之製造方法，其中， 前述胎盤萃取物係取自於馬胎盤。

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