TW202229277A

TW202229277A - 用於治療隱孢子蟲病之化合物及組成物

Info

Publication number: TW202229277A
Application number: TW110137677A
Authority: TW
Inventors: 約瑟夫麥可楊; 麥可羅伯特圖納; 路培超
Original assignee: 瑞士商諾華公司
Priority date: 2020-10-14
Filing date: 2021-10-12
Publication date: 2022-08-01
Also published as: CN116368137A; UY39466A; JP2023545452A; WO2022079616A1; CA3197199A1; AR123766A1; US20220112189A1; AU2021362803A1; EP4229055A1; MX2023004435A

Abstract

本發明關於具有式I之化合物：

Description

用於治療隱孢子蟲病之化合物及組成物

本發明關於化合物，包含此類化合物的藥物組成物，和使用此類化合物來治療、預防、抑制、改善或根除隱孢子蟲病的病理和/或症狀之方法。

全球每年約有650萬五歲以下兒童死亡。腹瀉病係兒童死亡的第二大原因，並且在低收入國家造成約76萬例死亡（2013）。腹瀉造成的兒童死亡中有近80%發生在南亞和撒哈拉以南非洲。腹瀉係由多種病原體導致的，該等病原體包括病毒（輪狀病毒、諾如病毒等）、細菌（志賀氏菌、ETEC、弧菌、彎曲桿菌等）和原生動物寄生蟲（梨形鞭毛蟲屬、阿米巴蟲、隱孢子蟲等）。輪狀病毒係腹瀉病的主要原因，造成約450,000死亡，但已經獲得安全且有效的疫苗。由導致腹瀉的原生動物寄生蟲隱孢子蟲屬物種造成的兒童死亡近來得到認知（Striepen，2013）。

頂複門寄生蟲造成一系列重要的人類疾病，如分別由系統發育學相關的寄生蟲瘧原蟲屬物種、隱孢子蟲屬物種和弓蟲引發的瘧疾、隱孢子蟲病和弓形蟲病。隱孢子蟲病影響全世界的人；它係一種腸道疾病，表現為水樣腹瀉。在人類中，該病主要由人隱孢子蟲（ Cryptosporidium hominis）和小球隱孢子蟲（ Cryptosporidium parvum）這兩個物種引起。在健康的成人中，隱孢子蟲病通常是症狀持續1-2週的自限性感染。反之，免疫受損的個體很容易受到隱孢子蟲病感染並遭受慢性、長期且危及生命的腹瀉。近期一項調查5歲以下兒童中腹瀉的原因和影響的流行病學研究將隱孢子蟲病確定為嚴重腹瀉的第二常見病原體並與12-23月齡的幼兒死亡相關（Kotloff等人, 2012）。已知隱孢子蟲每年在兒童中造成近100,000例死亡。隱孢子蟲感染也與長期的發育遲緩及認知缺陷相關（Kotloff等人, 2012，Striepen, 2013，Checkley等人, 2015）。隱孢子蟲病仍係被低估的全球健康問題，沒有可用的疫苗且只有一種FDA批准的藥物硝唑尼特（Alinia）（2003）。在有需要的患者群體（例如，6-18月齡的營養不良兒童和免疫受損的患者）中，護理標準係不理想且未經證實的（Checkley等人, 2015）。因此，找到高效的抗隱孢子蟲病藥物的醫療需求未被滿足。

瞭解隱孢子蟲的分子生物學的重大進展來自小球隱孢子蟲的基因組定序（Abrahamsen等人, 2004）和人隱孢子蟲的基因組定序（Xu等人, 2004）。這兩個近緣種的基因組相似（96%-97%同一性），具有約4000個基因分佈在8條染色體上。隱孢子蟲屬物種的基因組遠遠小於其他頂複門原生動物寄生蟲（如惡性瘧原蟲）（Gardner等人, 2002），具有較少的內含子和較短的非編碼區。雖然隱孢子蟲顯示出與其他頂複門寄生蟲（如瘧原蟲）的遺傳趨異，但許多可藥化分子靶標和途徑在頂複門原生動物中是保守的（Abrahamsen等人, 2004，Xu等人, 2004）。

本發明提供了具有式I之化合物：

或其藥學上可接受的鹽、互變異構物或立體異構物，其中 P係0、1、2、或3； Y ¹、Y ²、Y ³、Y ⁴、Y ⁵、或Y ⁶中的每一個獨立地是C或N； R ¹、R ²、R ³或R ⁴中的每一個獨立地是氫或C _1-6烷基；每個R ⁵獨立地選自由以下組成之群組：氫、C _1-6烷基、氰基、-C(O)C _1-6烷基；鹵代、鹵代C _1-6烷基、和-S(O) ₂C _1-6烷基； R ⁶選自由以下組成之群組： a) 氫，和 b) 未經取代的或被獨立地選自由以下組成之群組的1-3個取代基取代的C _1-6烷基： i) C _1-6烷氧基， ii) 鹵代， iii) 硫代C _1-6烷基， iv) 未經取代的或被獨立地選自由側氧基和C _1-6烷基組成之群組的1-3個取代基取代的C _4-6雜環烷基； v) 未經取代的或被1-3個C _1-6烷基取代基取代的C _5-6雜芳基； vi) -C(O)R ⁷，和 vii) -C(O)NR ⁷R ⁷，其中每個R ⁷獨立地是氫或C _1-6烷基；以及用於製備此類化合物之方法。

在第二方面，本發明關於化合物以及化合物在製造藉由調節隱孢子蟲寄生蟲的磷脂醯肌醇-4-OH激酶的活性來預防、治療、抑制、改善、或根除隱孢子蟲病的病理和/或症狀的藥物中之方法和用途。

除非另有指明，否則術語「化合物」係指具有式 (I) 或其子式的化合物、該化合物的鹽、該化合物的水合物或溶劑化物、以及所有立體異構物（包括非鏡像異構物和鏡像異構物）、互變異構物和同位素標記的化合物（包括氘取代）。具有式I（或其子式）的化合物進一步包含該化合物的多晶型物。

定義

出於解釋本說明書的目的，將應用下面的定義，並且在適宜的情況下，以單數形式使用的術語還包括複數形式，並且反之亦然。

如本文所用的「醯基」係指-C(=O)R _a基團，其中R _a係羰基碳上的氫或非氫取代基，形成不同的含羰基的基團，該等基團包括但不限於酸、酸鹵化物、醛、醯胺、酯、和酮。

如本文所用的「烷氧基」係指-O-烷基基團，其中該烷基如本文所定義。如本文所用的C _X烷氧基和C _X-Y烷氧基描述烷氧基基團，其中X和Y表示烷基鏈中的碳原子數。C _1-10烷氧基的代表性實例包括但不限於甲氧基、乙氧基、丙氧基、2-丙氧基、丁氧基、三級丁氧基、戊氧基、己氧基、庚氧基、辛氧基和癸氧基。該烷氧基的烷基部分可以視需要被取代，並且取代基包括下文對烷基基團所述之那些基團。

如本文所用的「烷基」係指具有多達10個碳原子的完全飽和的支鏈或無支鏈的烴鏈。如本文所用的C _X烷基和C _X-Y烷基描述烷基基團，其中X和Y表示烷基鏈中的碳原子數。例如，C _1-10烷基係指如上文所定義的含有一至十個碳原子的烷基基團。C _1-10烷基包括但不限於甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、二級丁基、異丁基、三級丁基、正戊基、異戊基、新戊基、正己基、3-甲基己基、2,2-二甲基戊基、2,3-二甲基戊基、正庚基、正辛基、正壬基、正癸基等。烷基與另一個基團一起表示如芳基烷基、雜芳基烷基、烷氧基烷基、烷氧基烷基、烷基胺基，其中該烷基部分應具有對烷基所述之相同含義並且與該另一個基團鍵合。例如，(C _6-10)芳基(C _1-3)烷基包括苄基、苯基乙基、1-苯基乙基、3-苯基乙基、2-噻吩基甲基、2-吡啶基甲基等。

除非在本說明書中另有說明，否則烷基基團可以是未經取代的或被一個或多個取代基取代，只要這樣的取代在化學上有意義。典型的取代基包括但不限於鹵代、羥基、烷氧基、氰基、胺基、醯基、芳基、芳基烷基、和環烷基，或者該等基團之一的異型，並且它們中的每一個可以被對該特定基團而言適當的取代基取代。

如本文所用的「烯基」係指具有多達10個碳原子和至少一個碳-碳雙鍵的直鏈或支鏈烴鏈。如本文所用的C _X烯基和C _X-Y烯基描述烯基基團，其中X和Y表示烯基鏈中的碳原子數。C _2-7烯基的實例包括乙烯基、烯丙基、異丙烯基、戊烯基、己烯基、庚烯基、1-丙烯基、2-丁烯基、2-甲基-2-丁烯基等。該烯基可以視需要被取代，並且取代基包括本文所述之對烷基基團所述之那些基團。

如本文所用的「伸烷基」係指本文所定義的二價烷基基團。C _1-10伸烷基的實例包括但不限於亞甲基、伸乙基、伸正丙基、伸異丙基、伸正丁基、伸二級丁基、伸異丁基、伸三級丁基、伸正戊基、伸異戊基、伸新戊基、伸正己基、3-甲基伸己基、2,2-二甲基伸戊基、2,3-二甲基伸戊基、伸正庚基、伸正辛基、伸正壬基和伸正癸基。伸烷基基團可以視需要被取代，並且取代基包括本文對烷基基團所述之那些基團。

如本文所用的「炔基」係指具有多達10個碳原子和至少一個碳-碳三鍵的直鏈或支鏈烴鏈。如本文所用的C _X烯基和C _X-Y烯基描述炔基基團，其中X和Y表示炔基鏈中的碳原子數。例如，C _2-7炔基包括但不限於乙炔基、炔丙基、3-甲基-1-戊炔基、2-庚炔基等。炔基可以視需要被取代，並且取代基包括本文對烷基基團所述之那些基團。

如本文所用的「伸烯基」係指本文所定義的二價烯基基團。C _1-3伸烯基的實例包括但不限於乙烯-1,2-二基、丙烯-1,3-二基、和亞甲基-1,1-二基。伸烯基可以視需要被取代，並且取代基包括本文對烷基基團所述之那些基團。

如本文所用的「伸炔基」係指本文所定義的二價炔基基團。伸炔基的實例包括乙炔-1,2-二亞基、丙炔-1,3-二亞基等。伸炔基可以視需要被取代，並且取代基包括本文對烷基基團所述之那些基團。

如本文所用的「胺基」指基團-NH ₂。當胺基被描述為「取代的」或「視需要被取代」時，該術語包括NR’R’’，其中R’和R’’各自獨立地為H，或者為烷基、芳基、環烷基、芳基烷基、環烷基烷基基團或該等基團之一的異型，並且烷基、芳基、芳基烷基或環烷基烷基基團或該等基團之一的異型中的每一個視需要被本文所述之適於相應基團的取代基取代。

術語「胺基」還包括其中R’和R’’連接在一起以形成3-8員環的形式，該3-8員環可以是飽和的、不飽和的或芳族的，並且含有1-3個獨立地選自N、O和S的雜原子作為環成員，並且視需要被描述為適合於烷基的取代基取代，或者，如果NR’R’’係芳族基團，則其視需要被描述為典型用於雜芳基的取代基取代。

除非另有說明，否則含有胺基部分的本發明之化合物可以包括其被保護的衍生物。適於胺基部分的保護基包括乙醯基、三級丁氧基羰基、苄氧基羰基等。

如本文所用的「烷基胺基」係指基團-NR _aR _b，其中R _a和R _b中的至少一個或兩個均為如本文所述之烷基基團。C1-4烷基胺基基團包括-NHC _1-4烷基和-N(C _1-4烷基) ₂；例如，-NHCH ₃、-N(CH ₃) ₂、-NH(CH ₂CH ₃)、-N(CH ₂CH ₃) ₂等。

如本文所用的「芳族」係指其中組成原子構成不飽和環系統的部分，其中在環系統中的所有原子均為sp2雜化，並且pi電子的總數等於4n+2。芳族環中的環原子可以僅為碳原子，或者其可以包含碳和非碳原子（參見雜芳基）。

如本文所用的「芳基」係指其中所有環原子均為碳原子的6-14員單環或多環芳族環組件。典型地，芳基係6員單環、10-12員雙環或14員稠合三環芳族環系統。如本文所用的C _X芳基和C _X-Y芳基描述芳基基團，其中X和Y表示環系統中的碳原子數。C _6-14芳基包括但不限於苯基、聯苯基、萘基、薁基和蒽基。

芳基可以是未經取代的，或者被1-5個（例如一個或兩個或三個）取代基取代，該等取代基獨立地選自由以下組成之群組：羥基、巰基、氰基、硝基、C _1-4烷基、C _1-4烯基、C _1-4炔基、C _1-4烷氧基、硫代C _1-4烷基、C _1-4烯基氧基、C _1-4炔基氧基、鹵素、C _1-4烷基羰基、羧基、C _1-4烷氧基羰基、胺基、C _1-4烷基胺基、二-C _1-4烷基胺基、C _1-4烷基胺基羰基、二-C _1-4烷基胺基羰基、C _1-4烷基羰基胺基、C _1-4烷基羰基(C _1-4烷基)胺基、磺醯基、胺磺醯基、烷基胺磺醯基、C _1-4烷基胺基磺醯基、芳基、雜芳基、環烷基和雜環烷基，其中前述取代基中的每一個可以進一步被一個或多個獨立地選自鹵素、烷基、羥基或C _1-4烷氧基基團的取代基取代。

當「芳基」與另一個基團一起表示如「芳基烷基」、「芳基氧基烷基」、「芳基氧基羰基」、「芳基氧基-羰基烷基」時，芳基部分應當具有與上述「芳基」定義中所述相同的含義。

如本文所用的「芳基氧基」係指基團-O-芳基，其中芳基如本文所定義。

如本文所用的「雙環」或「雙環基」係指兩個環的環組件，其中兩個環稠合到一起、藉由單鍵連接或者藉由兩個橋接原子連接。該等環可以是碳環基、雜環基或其混合物。

如本文所用的「橋接環」係指多環系統，其中兩個環共有的兩個環原子彼此不直接鍵合。該環系統中的一個或多個環還可以含有雜原子作為環原子。橋接環的非排他性實例包括降莰基（norbornanyl）、7-氧雜雙環[2.2.1]庚烷基、金剛烷基等。

如本文所用的「胺基甲醯基」係指基團-C(O)NR _a-，其中R _a係H，或者係烷基、烯基、炔基、醯基、芳基、或芳基烷基基團或該等基團之一的異型，並且烷基、烯基、炔基、醯基、芳基、芳基烷基或該等基團之一的異型中的每一個視需要被本文所述之適於相應基團的取代基取代。

如本文所用的「環烷基」意指包含3-20個碳原子的非芳族、飽和或部分不飽和的單環、雙環、三環、稠合、橋接或螺多環烴環系統的基團。典型地使用C _X環烷基和C _X-Y環烷基，其中X和Y表示環組件中的碳原子數。例如，C _3-6環烷基包括環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環己烯基、2,5-環己二烯基等。

示例性單環環烷基包括但不限於環丙基、環丁基、環戊基、環戊烯基、環己基和環己烯基等。

示例性雙環環烷基包括冰片基、降莰基、吲哚基、六氫吲哚基、四氫萘基、十氫萘基、雙環[2.1.1]己基、雙環[2.2.1]庚基、雙環[2.2.1]庚烯基、6,6-二甲基雙環[3.1.1]庚基、2,6,6-三甲基雙環[3.1.1]庚基、雙環[2.2.2]辛基。示例性三環環烷基基團包括例如金剛烷基。

環烷基可以是未經取代的，或者被一個、或兩個、或三個、或更多個取代基取代，該等取代基獨立地選自由以下組成之群組：羥基、巰基、氰基、硝基、側氧基、烷基亞胺基、C _1-4烷基、C _1-4烯基、C _1-4炔基、C _1-4烷氧基、C _1-4硫代烷基、C _1-4烯基氧基、C _1-4炔基氧基、鹵素、C _1-4烷基羰基、羧基、C _1-4烷氧基羰基、胺基、C _1-4烷基胺基、二-C _1-4烷基胺基、C _1-4烷基胺基羰基、二-C _1-4烷基胺基羰基、C _1-4烷基羰基胺基、C _1-4烷基羰基(C _1-4烷基)胺基、磺醯基、胺磺醯基、烷基胺磺醯基、C _1-4烷基胺基磺醯基，其中上述烴基團（例如，烷基、烯基、炔基、烷氧基殘基）中的每一個可以進一步被一個或多個殘基取代，該等殘基在每次出現時獨立地選自鹵素、羥基或C _1-4烷氧基基團。

如本文所用的「伸環烷基」係指包含如本文所定義的環烷基環組件的二價基團。

如本文所用的「環烷氧基」係指-O-環烷基，其中該環烷基係如本文所定義的。C3.12環烷氧基的代表性實例包括但不限於單環基團，如環丙氧基、環丁氧基、環戊基氧基、環戊烯基氧基、環己基氧基和環己烯基氧基等。示例性雙環烴基團包括冰片基氧基、吲哚基氧基、六氫吲哚基氧基、四氫萘基氧基、十氫萘基氧基、雙環[2.1.1]己氧基、雙環[2.2.1]庚氧基、雙環[2.2.1]庚烯基氧基、6,6-二甲基雙環[3.1.1]庚氧基、2,6,6-三甲基雙環[3.1.1]庚氧基、雙環[2.2.2]辛氧基等。示例性三環烴基團包括，例如，金剛烷基氧基。

如本文所用的「氰基」係指基團-CN。如本文所用的「氰基」係指基團-CN。

「EC50」係指產生50%功效的抑制劑或調節劑的莫耳濃度。

如本文所用的「稠合環」係指多環組件，其中包含該環組件的環如此連接，使得兩個環共有的環原子彼此直接鍵合。稠合環組件可以是飽和的、部分飽和的、芳族的、碳環的、雜環的等。常見稠合環的非排他性實例包括十氫化萘、萘、蒽、菲、吲哚、苯并呋喃、嘌呤、喹啉等。

如本文所用的「鹵代」或「鹵素」係指氟、氯、溴和碘。

如本文所用的「鹵代烷基或鹵代取代的烷基」係指如本文所定義的烷基，其被一個或多個本文所定義的鹵原子取代。鹵代烷基可以是單鹵代烷基、二鹵代烷基或包括全鹵代烷基的多鹵代烷基。單鹵代烷基可以在烷基基團內具有一個碘、溴、氯或氟。二鹵代烷基和多鹵代烷基基團可以在烷基內具有兩個或更多個相同的鹵原子或不同的鹵基基團的組成物。典型地使用C _X鹵代烷基和C _X-Y鹵代烷基，其中X和Y表示烷基鏈中的碳原子數。C _1-4鹵代烷基的非限制性實例包括氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氯甲基、二氯甲基、三氯甲基、五氟乙基、七氟丙基、二氟氯甲基、二氯氟甲基、二氟乙基、二氟丙基、二氯乙基和二氯丙基。C _1-4全鹵代烷基基團係指所有氫原子均被鹵原子替代的C _1-4烷基基團。

如本文所用的「雜芳基」係指具有選自N、O和S的1至8個雜原子作為環原子且剩餘環原子係碳原子的5-14員環員件（例如，5-7員單環、8-10員雙環、或13-14員三環系統）。此類雜芳基環的氮原子可以視需要被四級化，且此類雜芳基環的硫原子可以視需要被氧化。如本文所用的C _X雜芳基和C _X-Y雜芳基描述雜芳基，其中X和Y表示雜芳基環中的環原子數。典型的C _5-7雜芳基基團包括噻吩基、呋喃基、咪唑基、吡唑基、吡咯基、吡咯啉基、噻唑基、1,3,4-噻二唑基、異噻唑基、㗁唑基、㗁二唑異㗁唑基、三唑基、四唑基、吡啶基、嗒𠯤基、吡𠯤基、吡𠯤基、嘧啶基等。雙環或三環C _8-14雜芳基包括但不限於衍生自以下的那些雜芳基：苯并[b]呋喃、苯并[b]噻吩、苯并咪唑、咪唑并[4,5-c]吡啶、喹唑啉（quinazoline）、噻吩并[2,3-c]吡啶、噻吩并[3,2-b]吡啶、噻吩并[2,3-b]吡啶、喹唑啉（quinazolinyle）、喋啶基、吲哚𠯤、咪唑并[1,2a]吡啶、喹啉、喹啉基、異喹啉、酞𠯤、喹㗁啉、口奈啶、口奈啶基、喹𠯤、吲哚基、吲哚、異吲哚、吲唑、吲哚啉、苯并㗁唑、苯并吡唑、苯并噻唑、咪唑并[1,5-a]吡啶、吡唑并[1,5-a]吡啶、咪唑并[1,2-a]嘧啶、咪唑并[1,2-c]嘧啶、咪唑并[1,5-a]嘧啶、咪唑并[1,5-c]嘧啶、吡咯并[2,3-b]吡啶、吡咯并[2,3-c]吡啶、吡咯并[3,2-c]吡啶、吡咯并[3,2-b]吡啶、吡咯并[2,3-d]嘧啶、吡咯并[3,2-d]嘧啶、吡咯并[2,3-b]吡𠯤、吡唑并[1,5-a]吡啶、吡咯并[1,2-b]嗒𠯤、吡咯并[1,2-c]嘧啶、吡咯并[1,2-a]嘧啶、吡咯并[1,2-a]吡𠯤、疊氮基[1,5-a]吡啶、喋啶、嘌呤、嘌呤基、咔唑、吖啶、吩𠯤、吩噻𠯤、吩㗁𠯤、1,2-二氫吡咯并[3,2,1-hi]吲哚、吲哚𠯤、吡啶并[1,2-a]吲哚和2(1H)-吡啶酮。

雜芳基可以是未經取代的，或者被一個或多個取代基取代，該等取代基獨立地選自由以下組成的組：羥基、巰基、氰基、硝基、C _1-4烷基、C _1-4烯基、C _1-4炔基、C _1-4烷氧基、硫代C _1-4烷基、C _1-4烯基氧基、C _1-4炔基氧基、鹵素、C _1-4烷基羰基、羧基、C _1-4烷氧基羰基、胺基、C _1-4烷基胺基、二-C _1-4烷基胺基、C _1-4烷基胺基羰基、二-C _1-4烷基胺基羰基、C _1-4烷基羰基胺基、C _1-4烷基羰基(C _1-4烷基)胺基、磺醯基、胺磺醯基、烷基胺磺醯基、C _1-4烷基胺基磺醯基，其中上述烴基團（例如，烷基、烯基、炔基、烷氧基殘基）中的每一個可以進一步被一個或多個殘基取代，該等殘基在每次出現時獨立地選自鹵素、羥基或C _1-4烷氧基基團。

當雜芳基與另一個基團一起表示如「雜芳基氧基」、「雜芳基氧基烷基」、「雜芳基氧基羰基」時，雜芳基部分應當具有與上述「雜芳基」的定義所述相同的含義。

如本文所用的「雜芳基氧基」係指-O-雜芳基基團，其中該雜芳基係如本申請所限定的。

如本文所用的「雜原子」指不是碳原子的原子。雜原子的特定實例包括但不限於氮、氧和硫。

如本文所用的「雜環烷基」係指具有1至8個雜原子作為環原子且剩餘環原子係碳原子的4-20員非芳族的飽和或部分不飽和單環或多環系統。雜原子選自N、O和S，較佳的是選自O和N。雜環烷基的氮原子可以視需要被四級化，且雜環烷基的硫原子可以視需要被氧化。雜環烷基可以包括稠合的或橋連的環以及螺環。典型地使用C _X雜環烷基和C _X-Y雜環烷基，其中X和Y表示環中的環原子數。典型地，該雜環烷基係含有1至3個雜原子的4-8員單環、含有1-5個雜原子的7至12員雙環系統、或含有1至7個雜原子的10-15員三環系統。C _4-6雜環烷基的實例包括氮雜環丁烷基、四氫呋喃（THF）、二氫呋喃、1,4-二㗁𠮿、𠰌啉、1,4-二噻𠮿、哌𠯤、哌啶、1,3-二氧戊環、咪唑啶、咪唑啉、吡唑啶基、吡咯啉、吡咯啶、四氫哌喃、二氫哌喃、氧硫雜環戊烷、二硫環戊烷、1,3-二㗁𠮿、1,3-二噻𠮿、氧硫雜環己烷、硫代𠰌啉等。

雜環烷基可以是未經取代的，或者被1-5個取代基（例如一個、或兩個、或三個）取代，每個取代基獨立地選自羥基、巰基、氰基、硝基、側氧基、烷基亞胺基、C _1-4烷基、C _1-4烯基、C _1-4炔基、C _1-4烷氧基、C _1-4硫代烷基、C _1-4烯基氧基、C _1-4炔基氧基、鹵素、C _1-4烷基羰基、羧基、C _1-4烷氧基羰基、胺基、C _1-4烷基胺基、二-C _1-4烷基胺基、C _1-4烷基胺基羰基、二-C _1-4烷基胺基羰基、C _1-4烷基羰基胺基、C _1-4烷基羰基(C _1-4烷基)胺基、磺醯基、胺磺醯基、烷基胺磺醯基、C _1-4烷基胺基磺醯基，其中上述烴基團（例如，烷基、烯基、炔基、烷氧基殘基）中的每一個可以進一步被一個或多個殘基取代，該等殘基在每次出現時獨立地選自鹵素、羥基或C _1-4烷氧基基團。

當雜環烷基形成其他基團的一部分如「雜環烷基-烷基」、「雜環烷氧基」、「雜環烷基-芳基」時，雜芳基部分應當具有與上述「雜芳基」的定義所述相同的含義。

如本文所用的「與苯基稠合的雜環烷基」係指其中一個環係如上所定義的雜環烷基且另一個環係苯基的雙環稠合環系統。與苯基稠合的雜環烷基包括但不限於苯并[b][1,4]㗁𠯤基、側氧基-苯并[b][1,4]㗁𠯤基、四氫喹㗁啉基、四氫喹啉基、二氫吲哚基、苯并[d]咪唑基等。

如本文所用的「雜環基」、「雜環」或「雜環的」係指每個環中含有至少一個雜原子部分（選自由N、O、SO、SO ₂、(C=O)、和S，並且較佳的是N、O、S組成之群組）、視需要含有一至四個其他雜原子的3-20員單環或多環系統。典型地使用C _X雜環基和C _X-Y雜環基，其中X和Y表示環系統中的環原子數。除非另有指明，否則雜環基可以是飽和的、部分不飽和的、芳族的或部分芳族的。

如本文所用的「羥基」係指基團-OH。

如本文所用的「羥烷基」或「羥基取代的烷基」係指如本文所定義的烷基，其中烷基中一個或多個可用氫被羥基基團替代。例如，羥基C _1-4烷基包括但不限於-CH ₂CH ₂OH、-CH(OH)CH ₂CH ₂OH、-CH(OH)CH ₂CH(OH)CH ₃。

如本文所用的「硝基」係指基團-NO ₂。

如本文所用的「側氧基」係指二價基團=O

「被保護的衍生物」意指抑制劑的衍生物，其中一個或多個反應部位被保護基團阻斷。被保護的衍生物可用於製備抑制劑，或者它們自身可以具有抑制劑的活性。被保護的基團的實例包括但不限於乙醯基、四氫哌喃、甲氧基甲基醚、β-甲氧基乙氧基甲基醚、對甲氧基苄基、甲硫基甲基醚、新戊醯、矽基醚、苄氧羰基、苄基、三級丁氧基羰基、對甲氧基苯基、9-茀基甲基氧基羰基、縮醛、縮酮、縮羰酯（acylal）、二噻𠮿、甲基酯、苄基酯、三級丁基酯和矽基酯。合適的保護基團的詳細清單可以在T.W.Greene, Protecting Groups in Organic Synthesis [有機合成中的保護基團], 第3版, John Wiley & Sons, Inc.[約翰·威利父子公司] 1999中找到。

如本文所用的「未經取代或取代的」或「視需要被取代」表示取代基鍵合到指定基團的可用價位上。如本文所用的「未經取代的」表示指定基團不再有非氫取代基。如本文所用的「取代的」或「視需要被取代」表示指定基團中至少一個可用氫原子被（或者可以被）非氫取代基替代。

如本文所用的「末端被……取代」係指取代基在母體分子的末端位置取代氫。例如，末端被胺基取代的C _1-4烷基意指-C _1-4伸烷基-胺基，其包括-(CH ₂)-NH ₂、-(CH ₂) ₂-NH ₂、-(CH ₂) ₃-NH ₂、-(CH ₂)CH ₂(CH ₂-NH ₂)、-(CH ₂)4-NH ₂、-C(CH ₂)(CH ₂CH ₂-NH ₂)、--C(CH ₃) ₂(CH ₂-NH ₂)等。

除非另有指明，否則取代基的實例可以包括但不限於鹵代、硝基、氰基、硫代、氧基、羥基、羰基氧基、C _1-6烷氧基、C _6-10芳基氧基、雜C _5-10芳基氧基、羰基、氧基羰基、胺基羰基、胺基、C1-6烷基胺基、磺醯胺基、亞胺基、磺醯基、亞磺醯基、C _1-6烷基、C _1-6鹵代烷基、羥基C _1-6烷基、羰基C _1-6烷基、硫代羰基C _1-10烷基、磺醯基C _1-6烷基、亞磺醯基C _1-6烷基、C _1-10氮雜烷基、亞胺基C _1-6烷基、C _3-12環烷基C _1-6烷基、C _4-15雜環烷基C _1-6烷基、C _6-10芳基C _1-6烷基、C _5-10雜芳基C _1-6烷基、C _10-12雙環芳基C _1-6烷基、C _9-12雜雙環芳基C _1-6烷基、C _3-12環烷基、C _4-12雜環烷基、C _9-12雙環烷基、C _3-12雜雙環烷基、C _4-12芳基、雜C _1-10芳基、C _9-12雙環芳基和C _4-12雜雙環芳基。如本文所用的「胺磺醯基」係指基團-S(O)2NRaRb，其中Ra和Rb獨立地是H，或係烷基、烯基、炔基、醯基、芳基、芳基、環烷基、芳基烷基、環烷基烷基基團或該等基團之一的異型，並且烷基、烯基、炔基、醯基、芳基、芳基烷基基團或該等基團之一的異型中的每一個視需要被本文所述之適於相應基團的取代基取代。

如本文所用的「氫硫基」意指基團-S-。

如本文所用的「亞磺醯基」意指基團-S(O)-。應當注意，術語「亞磺醯基」當表示單價取代基時可以替代地是指被取代的亞磺醯基基團S(=O)R，其中R係氫或硫原子上的非氫取代基，這形成不同的亞磺醯基基團，包括亞磺酸、亞磺醯胺、亞磺醯酯和亞碸。

如本文所用的「磺醯基」意指基團-S(O)2-。應當注意，術語「磺醯基」當表示單價取代基時可以替代地是指被取代的磺醯基基團S(=O)2R，其中R為氫或硫原子上的非氫取代基，這形成不同的磺醯基基團，包括磺酸、磺醯胺、磺酸酯和碸。

如本文所用的「硫代羰基」係指基團-C(=S)-。應當注意，術語硫代羰基當表示單價取代基時可以替代地是指被取代的硫代羰基的基團C(=S)R，其中R為氫或碳原子上的非氫取代基，這形成不同的硫代羰基基團，包括硫代酸、硫代醯胺、硫代酯和硫酮。

「

」和「

」係表示X與分子的其他部分的附接點的符號。

本文中的任意定義可以與任意其他定義組合使用以描述複合結構基團。按照慣例，任意這類定義的末端元素係與母體部分連接的元素。例如，複合基團烷氧基烷基表示與母體分子藉由烷基基團連接的烷氧基基團。

關於所有本文提供的定義應當注意，該等定義應當被解釋為係開放的，其可以包括那些指明的取代基以外的取代基。因此，C1烷基表示有一個碳原子但不表示碳原子上的取代基係什麼。因此，C ₁烷基包含甲基（即，-CH ₃）以及-CR _aR _bR _c，其中R _a、R _b和R _c可以各自獨立地是氫或任何其他取代基，其中與碳連接的原子不是氫原子。因此，例如-CF ₃、-CH ₂OH和-CH ₂CN均為C ₁烷基。

較佳的實施方式的描述

本發明提供一類新型化合物、包含此類化合物的藥物組成物以及使用此類化合物治療或預防與寄生蟲相關的疾病或障礙之方法。特別地，該等化合物可以用於治療隱孢子蟲病。

在一個實施方式中，本發明之化合物具有式I：

I 或其藥學上可接受的鹽、互變異構物或立體異構物，其中 P係0、1、2、或3； Y ¹、Y ²、Y ³、Y ⁴、Y ⁵、或Y ⁶中的每一個獨立地是C或N； R ¹、R ²、R ³或R ⁴中的每一個獨立地是氫或C _1-6烷基；每個R ⁵獨立地選自由以下組成之群組：氫、C _1-6烷基、氰基、-C(O)C _1-6烷基；鹵代、鹵代C _1-6烷基、和-S(O) ₂C _1-6烷基； R ⁶選自由以下組成之群組： a) 氫，和 b) 未經取代的或被獨立地選自由以下組成之群組的1-3個取代基取代的C _1-6烷基： i) C _1-6烷氧基， ii) 鹵代， iii) 硫代C _1-6烷基， iv) 未經取代的或被獨立地選自由側氧基和C _1-6烷基組成之群組的1-3個取代基取代的C _4-6雜環烷基； v) 未經取代的或被1-3個C _1-6烷基取代基取代的C _5-6雜芳基； vi) -C(O)R ⁷，和 vii) -C(O)NR ⁷R ⁷，其中每個R ⁷獨立地是氫或C _1-6烷基。

在本發明之化合物的一個實施方式中，參考式I，Y ²和Y ⁵係N，且Y ¹、Y ³、Y ⁴和Y ⁶係C。

在另一個變化中，Y ³和Y ⁵係N，且Y ¹、Y ²、Y ⁴和Y ⁶係C。

在另一個變化中，Y ³係N，且Y ¹、Y ²、Y ⁴、Y ⁵和Y ⁶係C。

在本發明之化合物、或其藥學上可接受的鹽、互變異構物、立體異構物的具體實施方式中，該化合物具有式Ia

Ia。

在本發明之化合物的一個變化中，參考以上的具體實施方式，R ¹、R ²和R ³係氫，且R ⁴係C _1-6烷基。

在本發明之化合物的另一個變化中，參考以上的具體實施方式和任一以上的變化，R ⁴係甲基。

在本發明之化合物的還另一個變化中，參考以上的具體實施方式或任一以上的變化，R ⁵係鹵代。

在本發明之化合物的還另一個變化中，參考以上的具體實施方式或任一以上的變化，R ⁵係氯。

根據本發明之化合物或其藥學上可接受的鹽、互變異構物或立體異構物的具體實例包括但不限於：甲基5-((三級丁氧基羰基)胺基)-2-氯苯甲酸酯；三級丁基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氯苯甲酸酯； 5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氯苯甲酸； 2-(甲硫基)乙基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氯苯甲酸酯；異丁基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氯苯甲酸酯； 2-甲氧基-2-側氧基乙基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氯苯甲酸酯；噻唑-5-基甲基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氯苯甲酸酯； 2-𠰌啉代乙基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氯苯甲酸酯；乙基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氯苯甲酸酯； 2,2,2-三氟乙基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氯苯甲酸酯； 2-甲氧基乙基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氯苯甲酸酯； 2-(二甲基胺基)-2-側氧基乙基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氯苯甲酸酯異丙基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氯苯甲酸酯；外消旋-1-((乙氧基羰基)氧基)乙基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氯苯甲酸酯；外消旋-(四氫呋喃-2-基)甲基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氯苯甲酸酯；甲基2-氯-5-(N-甲基-3-(4-(甲基胺基甲醯基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)苯甲酸酯；三級丁基2-氯-5-(N-甲基-3-(4-(甲基胺基甲醯基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)苯甲酸酯； 2-氯-5-(N-甲基-3-(4-(甲基胺基甲醯基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)苯甲酸； 2-𠰌啉代乙基2-氯-5-(N-甲基-3-(4-(甲基胺基甲醯基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)苯甲酸酯； (5-甲基-2-側氧基-1,3-二氧雜環戊烯-4-基)甲基2-氯-5-(N-甲基-3-(4-(甲基胺基甲醯基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)苯甲酸酯；甲基2-氯-5-(N-甲基-3-(2-甲基-4-(胺基甲醯基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)苯甲酸酯；甲基2-氯-5-(N-甲基-3-(3-甲基-4-(胺基甲醯基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)苯甲酸酯；甲基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氯苯甲酸酯；甲基2-氯-5-(3-(4-(甲基胺基甲醯基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)苯甲酸酯；甲基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-(三氟甲氧基)苯甲酸酯；甲基5-(N-甲基-3-(4-(甲基胺基甲醯基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-(三氟甲氧基)苯甲酸酯；甲基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氰基苯甲酸酯；甲基2-氯-5-(N-甲基-3-(4-(甲基胺基甲醯基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡𠯤-6-甲醯胺基)苯甲酸酯；甲基2-氯-5-(N-甲基-3-(4-(甲基胺基甲醯基)苯基)吡唑并[1,5-c]嘧啶-5-甲醯胺基)苯甲酸酯；和甲基2-(3-(4-胺基甲醯基苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)-5-氯苯甲酸酯。

應當注意，本發明之化合物可以呈藥學上可接受的鹽的形式。還需要注意的是，本發明之化合物可以是立體異構物的混合物，或該化合物可以包含單一立體異構物。

本發明之其他化合物具體見下文的實例中。

在另一個方面，本發明關於藥物組成物，該藥物組成物包含與藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑組合的、作為活性成分的根據上文實施方式和變化中任一項所述之化合物。

在一個實施方式中，該藥物組成物進一步包含第二藥劑，該第二藥劑可以是激酶抑制劑或抗炎劑。

在另一個實施方式中，該藥物組成物係調整為適於口服投與的固體配製物。在另一個實施方式中，該組成物係調整為適於口服投與的液體配製物。在又另一個實施方式中，該組成物係片劑。在還另一個實施方式中，該組成物係調整為適於腸胃外投與的液體配製物。

在又另一個實施方式中，將該藥物組成物調整為適於藉由選自由以下組成之群組的途徑投與：口服、腸胃外、腹膜內、靜脈內、動脈內、經皮、舌下、肌內、直腸、經口含化、鼻內、脂質體、經由吸入、陰道內、眼內、經由局部遞送（例如藉由導管或支架）、皮下、脂肪內、關節內和鞘內。

在另一個方面，本發明關於根據上文實施方式和變化中任一項所述之化合物或藥物組成物，其用於治療應用。

在另一個方面，本發明關於根據上文實施方式和變化中任一項所述之化合物或藥物組成物，其用作藥物。

在又另一個方面，本發明關於用於預防、抑制、改善或根除隱孢子蟲病的病理和/或症狀之方法，該隱孢子蟲病由隱孢子蟲屬的原生動物（特別地，人隱孢子蟲和小球隱孢子蟲）引起。選定的化合物有效地最小化隱孢子蟲感染的致細胞病變效應，從而降低感染率。發明人進一步證明了化合物靶向磷脂醯肌醇-4-OH激酶（PI(4)K），一種隱孢子蟲的脂質激酶。

可用於本發明之方法的特定化合物或其藥學上可接受的鹽、互變異構物或立體異構物選自下表I： [表I].化合物的列表

應當注意，可用於本發明之方法的化合物可以呈藥學上可接受的鹽的形式。還需要注意的是，在本發明之方法中可用的化合物可以是立體異構物的混合物，或該化合物可以包含單一立體異構物。

在另一個方面，本發明之方法關於藥物組成物之用途，該藥物組成物包含與藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑組合的、作為活性成分的根據上文實施方式和變化中任一項所述之化合物。

列舉的實施方式

本文描述了本發明之各種列舉的實施方式。應認識到，每個實施方式中指定的特徵可以與其他指定特徵組合以提供本發明之另外實施方式。

在第一實施方式中，本發明提供了一種根據式I之化合物，

或其藥學上可接受的鹽、互變異構物或立體異構物，其中 P係0、1、2、或3； Y ¹、Y ²、Y ³、Y ⁴、Y ⁵、或Y ⁶中的每一個獨立地是C或N； R ¹、R ²、R ³或R ⁴中的每一個獨立地是氫或C _1-6烷基；每個R ⁵獨立地選自由以下組成之群組：氫、C _1-6烷基、氰基、-C(O)C _1-6烷基；鹵代、鹵代C _1-6烷基、和-S(O) ₂C _1-6烷基； R ⁶選自由以下組成之群組： a) 氫，和 b) 未經取代的或被獨立地選自由以下組成之群組的1-3個取代基取代的C _1-6烷基： i) C _1-6烷氧基， ii) 鹵代， iii) 硫代C _1-6烷基， iv) 未經取代的或被獨立地選自由側氧基和C _1-6烷基組成之群組的1-3個取代基取代的C _4-6雜環烷基； v) 未經取代的或被1-3個C _1-6烷基取代基取代的C _5-6雜芳基； vi) -C(O)R ⁷，和 vii) -C(O)NR ⁷R ⁷，其中每個R ⁷獨立地是氫或C _1-6烷基。

實施方式2. 根據實施方式1所述之化合物，其中Y ³係N，且Y ¹、Y ²、Y ⁴、Y ⁵和Y ⁶係C。

實施方式3. 根據實施方式1所述之化合物，其中Y ³和Y ⁵係N，且Y ¹、Y ²、Y ⁴和Y ⁶係C。

實施方式4. 根據實施方式1所述之化合物，其中Y ²和Y ⁵係N，且Y ¹、Y ³、Y ⁴和Y ⁶係C。

實施方式5. 根據實施方式1-4中任一項所述之化合物，其中該化合物能夠抑制或調節隱孢子蟲原生動物的磷脂醯肌醇-4-OH激酶（PI4K）的活性。

實施方式6. 根據實施方式1-5中任一項所述之化合物，其中該隱孢子蟲原生動物係人隱孢子蟲或小球隱孢子蟲。

實施方式7. 根據實施方式1所述之化合物，其中該化合物具有式Ia

Ia。

實施方式8. 根據實施方式1-7中任一項所述之化合物，其中R ¹、R ²和R ³係氫，且R ⁴係C _1-6烷基。

實施方式9. 根據實施方式1-8中任一項所述之化合物，其中R ⁴係甲基。

實施方式10. 根據實施方式1所述之化合物，其中R ⁵係鹵代。

實施方式11. 根據實施方式10所述之化合物，其中R ⁵係氯。

實施方式12. 根據實施方式1所述之化合物，其中該化合物選自表I中列出的化合物的組。

實施方式13. 一種用於治療、抑制、改善或根除由隱孢子蟲原生動物引起的隱孢子蟲病的病理和/或症狀之方法，該方法包括向有需要的患者投與治療有效量的能夠調節或抑制所述原生動物的磷脂醯肌醇-4-OH激酶（PI4K）的活性的藥劑。

實施方式14. 根據實施方式13所述之化合物，其中該隱孢子蟲原生動物係人隱孢子蟲或小球隱孢子蟲。

實施方式15. 根據實施方式13或14所述之化合物，其中該藥劑係化合物，其係根據實施方式1-12中任一項所述之化合物。

如本文所用，術語「光學異構物」或「立體異構物」係指本發明之給定化合物可存在的各種立體異構組態中的任一種且包括幾何異構物。應瞭解取代基可以連接在碳原子的手性中心。術語「手性的」係指在其鏡像配偶體上具有非重疊性特性的分子，而術語「非手性的」係指在其鏡像配偶體上係可重疊的分子。因此，本發明包括化合物的鏡像異構物、非鏡像異構物或外消旋物。「鏡像異構物」係彼此為不能重疊鏡像的一對立體異構物。鏡像異構物對的1 : 1混合物係「外消旋」混合物。該術語用於在適當的情況下表示外消旋混合物。「非鏡像異構物」係具有至少兩個非對稱原子，但其彼此非鏡像的立體異構物。絕對立體化學根據Cahn-lngold-Prelog R-S系統指定。當化合物係純的鏡像異構物時，每個手性碳的立體化學可以由 R或 S表示。未知絕對組態的拆分化合物可以取決於其在鈉D線的波長處使平面偏振光旋轉的方向（右旋或左旋）來指定 (+) 或 (-)。本文所述之某些化合物含有一個或多個不對稱中心或軸且由此可以產生鏡像異構物、非鏡像異構物和其他可以根據絕對立體化學定義為 (R)-或 (S)-的立體異構物形式。

根據起始材料和程序的選擇，化合物可以呈可能的異構物形式或作為其混合物（例如作為純的光學異構物或作為異構物混合物，如外消旋物和非鏡像異構物混合物）存在，這取決於不對稱碳原子的數目。本發明旨在包括所有該等可能的異構物，包括外消旋混合物、非鏡像異構物混合物和光學純的形式。光學活性 ( R)-和 ( S)-異構物可以使用手性合成子或手性試劑來製備，或使用常規技術拆分。如果化合物含有雙鍵，則取代基可以是E或Z組態。如果化合物含有二取代的環烷基，則環烷基取代基可以具有順式或反式組態。所有互變異構形式也旨在包括在內。

如本文所用，術語「鹽（salt或salts）」係指本發明化合物的酸加成鹽或鹼加成鹽。「鹽」特別包括「藥學上可接受的鹽」。術語「藥學上可接受的鹽」係指保留本發明化合物的生物有效性和特性，並且通常不是生物學上或其他方面不合需要的鹽。在許多情況下，由於胺基和/或羧基基團或與其類似的基團的存在，本發明之化合物能夠形成酸鹽和/或鹼鹽。

可以用無機酸和有機酸形成藥學上可接受的酸加成鹽，例如乙酸鹽、天冬胺酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、溴化物/氫溴酸鹽、碳酸氫鹽/碳酸鹽、硫酸氫鹽/硫酸鹽、樟腦磺酸鹽、氯化物/鹽酸鹽、膽茶鹼（chlortheophyllonate）、檸檬酸鹽、乙二磺酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽、葡糖酸鹽、葡糖醛酸鹽、馬尿酸鹽、氫碘酸鹽/碘化物、羥乙基磺酸鹽、乳糖酸鹽、乳糖醛酸鹽、月桂基硫酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、丙二酸鹽、苦杏仁酸鹽、甲磺酸鹽、甲基硫酸鹽、萘甲酸鹽、萘磺酸鹽、菸酸鹽、硝酸鹽、十八酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、雙羥萘酸鹽、磷酸鹽/磷酸氫鹽/磷酸二氫鹽、聚半乳糖醛酸鹽、丙酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、磺基水楊酸鹽、酒石酸鹽、甲苯磺酸鹽和三氟乙酸鹽。

可以衍生出鹽的無機酸包括例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。

可以衍生出鹽的有機酸包括例如乙酸、丙酸、乙醇酸、草酸、馬來酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、苦杏仁酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、磺基水楊酸等。可以用無機鹼和有機鹼形成藥學上可接受的鹼加成鹽。

可以衍生出鹽的無機鹼包括例如銨鹽和來自元素週期表第I至XII列的金屬。在某些實施方式中，鹽衍生自鈉、鉀、銨、鈣、鎂、鐵、銀、鋅和銅；特別合適的鹽包括銨鹽、鉀鹽、鈉鹽、鈣鹽和鎂鹽。

可以衍生出鹽的有機鹼包括例如一級胺、二級胺和三級胺；取代胺（包括天然存在的取代胺）；環胺；鹼性離子交換樹脂等。某些有機胺包括異丙胺、苄星、膽鹼鹽、二乙醇胺、二乙胺、離胺酸、葡甲胺、哌𠯤和胺丁三醇。

本發明之藥學上可接受的鹽可以藉由常規的化學方法從鹼或酸部分合成。通常，此類鹽可以藉由將該等化合物的游離酸形式與化學計算量的適當鹼（例如Na、Ca、Mg或K的氫氧化物，碳酸鹽，碳酸氫鹽等）反應來製備，或藉由將該等化合物的游離鹼形式與化學計算量的適當酸反應來製備。典型地，此類反應在水中或在有機溶劑中、或在這兩者的混合物中進行。通常，在可行的情況下，希望使用非水性介質，如醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇、或乙腈。另外的合適的鹽的列表可見於例如「Remington’s Pharmaceutical Sciences [雷明頓藥物科學]」, 第20版, Mack Publishing Company [麥克出版公司], Easton, Pa.[賓夕法尼亞州伊斯頓], (1985)；以及Stahl和Wermuth的「Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use [藥用鹽手冊：特性、選擇和使用]」（Wiley-VCH [約翰威立國際出版公司], Weinheim, Germany [德國魏因海姆], 2002）。

本文中給出的任何式還旨在代表化合物的非標記形式以及同位素標記形式。除了一個或多個原子被具有選定原子量或質量數的原子替代以外，同位素標記的化合物具有本文中給出的式所描述的結構。可以摻入本發明化合物的同位素的實例包括氫、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，諸如分別為 ²H、 ³H、 ¹¹C、 ¹³C、 ¹⁴C、 ¹⁵N、 ¹⁸F、 ³¹P、 ³²P、 ³⁵S、 ³⁶Cl、 ¹²⁵I。本發明包括如本文所定義的各種同位素標記的化合物，例如其中存在放射性同位素（如 ³H和 ¹⁴C）的那些化合物，或其中存在非放射性同位素（如 ²H和 ¹³C）。這種同位素標記的化合物可用於代謝研究（用 ¹⁴C）、反應動力學研究（例如用 ²H或 ³H）、檢測或成像技術，例如正電子發射斷層掃描（PET）或單光子發射電腦斷層掃描（SPECT），包括藥物或底物組織分佈測定，或用於患者的放射治療。特別地， ¹⁸F或標記的化合物對於PET或SPECT研究可能是特別期望的。同位素標記的具有式 (I) 的化合物通常可以藉由熟悉該項技術者已知的常規技術或藉由與所附實例和製備中所述之那些類似的製程，使用適當的同位素標記的試劑代替未標記的先前使用的試劑來製備。

此外，用較重的同位素，特別是氘（即， ²H或D）取代可以提供來源於更大的代謝穩定性（例如，體內半衰期延長或劑量需求減少或治療指數改進）的某些治療優點。應理解，在此上下文中的氘被認為係具有式 (I) 的化合物的取代基。這種較重的同位素（特別是氘）的濃度可以由同位素富集因子來定義。如本文所用的術語「同位素富集因子」意指同位素豐度與指定同位素的天然豐度之間的比率。如果本發明之化合物中的取代基指示氘，這樣的化合物具有針對每個指定的氘原子的同位素富集因子為至少3500（在每個指定的氘原子上52.5%氘摻入）、至少4000（60%氘摻入）、至少4500（67.5%氘摻入）、至少5000（75%氘摻入）、至少5500（82.5%氘摻入）、至少6000（90%氘摻入）、至少6333.3（95%氘摻入）、至少6466.7（97%氘摻入）、至少6600（99%氘摻入）或至少6633.3（99.5%氘摻入）。

根據本發明之藥學上可接受的溶劑化物包括其中結晶溶劑可以被同位素取代的那些，例如D ₂O、d ₆-丙酮、d ₆-DMSO。

本發明之化合物，即含有能夠充當氫鍵供體和/或受體的基團的具有式 (I) 的化合物，能夠與適合的共晶體形成體形成共晶體。該等共晶體可以藉由已知的共晶形成程序由具有式 (I) 的化合物製備。此類程序包括在結晶條件下研磨、加熱、共昇華、共熔或使具有式 (I) 的化合物與共晶形成體在溶液中接觸，並分離由此形成的共晶體。

如本文所用，術語「藥學上可接受的載體」包括任何及所有溶劑、分散介質、包衣、表面活性劑、抗氧化劑、防腐劑（例如抗菌劑、抗真菌劑）、等滲劑、吸收延遲劑、鹽、防腐劑、藥物穩定劑、黏合劑、賦形劑、崩解劑、潤滑劑、甜味劑、調味劑、染料等及其組成物，如熟悉該項技術者將已知的（參見，例如Remington’s Pharmaceutical Sciences [雷明頓藥物科學], 第18版, Mack Printing Company [馬克出版公司], 1990, 第1289-1329頁）。除了任何常規載體與活性成分均不相容的情況外，考慮了其在治療或藥物組成物中之用途。

本發明之化合物的術語「治療有效量」係指將引起受試者的生物學或醫學應答（例如，酶或蛋白活性的降低或抑制，或改善症狀、緩解病症、減慢或延遲疾病進展或預防疾病等）的本發明之化合物的量。在一個非限制性實施方式中，術語「治療有效量」係指本發明之化合物的如下量，當投與於受試者時，該量有效地 (1) 至少部分緩解、抑制、預防和/或改善 (i) 由瘧原蟲介導，或 (ii) 與瘧原蟲活性相關，或 (iii) 表徵為瘧原蟲的活性（正常或異常）的病症或障礙或疾病；或 (2) 降低或抑制瘧原蟲的活性；或 (3) 降低或抑制瘧原蟲的生長。在另一個非限制性實施方式中，術語「治療有效量」係指本發明化合物的如下量，該量當被投與至細胞、或組織、或非細胞生物材料、或介質時有效地至少部分降低或抑制瘧原蟲的活性；或至少部分降低或抑制瘧原蟲的生長。

如本文所用，術語「受試者」係指動物。典型地，該動物係哺乳動物。受試者還指例如靈長類動物（例如人，男性或女性）、牛、綿羊、山羊、馬、狗、貓、兔、大鼠、小鼠、魚、鳥等。在某些實施方式中，受試者係靈長類動物。在又其他實施方式中，受試者係人。

如本文所用，術語「抑制（inhibit、inhibition或inhibiting）」係指減少或抑制給定的病症、症狀、或障礙、或疾病，或生物活性或過程的基礎活性的顯著降低。

如本文所用，術語任何疾病或障礙的「治療（treat、treating或treatment）」在一個實施方式中是指改善疾病或障礙（即，減慢或阻止或減少疾病或其至少一種臨床症狀的發展）。在另一個實施方式中，「治療（treat、treating或treatment）」係指減輕或改善至少一種身體參數，包括不能被患者辨別的那些。在又另一個實施方式中，「治療（treat、treating或treatment）」係指在身體上（例如，可辨別的症狀的穩定化）或在生理上（例如，身體參數的穩定化）或兩者調節疾病或障礙。在又另一個實施方式中，「治療（treat、treating或treatment）」係指預防或延遲疾病或障礙的發作或發展或進展。

如本文所用，如果受試者將在生物學上、在醫學上或在生活品質上從治療中獲益，則這種受試者係「需要」這種治療的。

如本文所用，術語「一個/種（a/an）」、「該（the）」以及在本發明之上下文中（尤其是在請求項的上下文中）使用的類似術語應被解釋為涵蓋單數和複數兩者，除非本文中另有指示或與上下文明顯相矛盾。

在本文描述的所有方法能夠以任何合適順序進行，除非本文另外指示或另外與上下文明顯矛盾。本文提供的任何和所有實例或示例性語言（例如「諸如」）的使用僅旨在更好地說明本發明，而不對另外要求保護的本發明範圍做出限制。

本發明之一種或多種化合物的任何非對稱原子（例如，碳等）可以以外消旋或鏡像異構物富集的形式存在，例如( R)-、( S)-或( R,S)-組態。在某些實施方式中，每個非對稱原子具有至少50%鏡像異構物過量、至少60%鏡像異構物過量、至少70%鏡像異構物過量、至少80%鏡像異構物過量、至少90%鏡像異構物過量、至少95%鏡像異構物過量、或至少99%鏡像異構物過量的( R)-或( S)-組態。如果可能，在具有不飽和雙鍵的原子上的取代基可以以順式 -( Z)-或反式 -( E)-形式存在。

因此，如本文所用，本發明之化合物可以呈可能的異構物、旋轉異構物、阻轉異構物、互變異構物或其混合物之一的形式，例如，作為基本上純的幾何（順式或反式）異構物、非鏡像異構物、光學異構物（對映體）、外消旋物或其混合物。

任何所得的異構物混合物可以基於成分的物理化學差異例如藉由層析法和/或分級結晶被分離成純的或基本上純的幾何或光學異構物、非鏡像異構物、外消旋物。

可以藉由已知方法將任何所得的最終產物或中間體的外消旋物拆分成旋光對映體，例如藉由分離用光學活性酸或鹼獲得的其非鏡像異構物鹽，並釋放出光學活性的酸性或鹼性化合物來拆分。特別地，因此可以採用鹼性部分將本發明之化合物拆分成它們的旋光對映體，例如藉由用光學活性酸形成的鹽的分級結晶，該光學活性酸例如酒石酸、二苯甲醯酒石酸、二乙醯酒石酸、二- O,O’-對甲苯甲醯酒石酸、苦杏仁酸、蘋果酸或樟腦-10-磺酸。外消旋產物還可以藉由手性層析法拆分，例如使用手性吸附劑的高壓液相層析法（HPLC）。

此外，本發明之化合物（包括它們的鹽）還可以按其水合物形式獲得，或包括用於其結晶的其他溶劑。本發明之化合物可以固有地或藉由設計形成具有藥學上可接受的溶劑（包括水）的溶劑化物；因此，旨在將本發明包括溶劑化形式和非溶劑化形式兩者。術語「溶劑化物」係指本發明之化合物（包括其藥學上可接受的鹽）與一種或多種溶劑分子的分子複合物。此類溶劑分子係製藥領域常用的那些，已知它們對接受者係無害的，例如水、乙醇等。術語「水合物」係指溶劑分子為水的複合物。

本發明之化合物（包括其鹽、水合物和溶劑化物），可以固有地或藉由設計形成多晶型物。

一般而言，可用於本發明之方法的化合物將以治療有效量經由本領域已知的任何常用且可接受的模式單獨或與一或多種治療劑組合投與。治療有效量可廣泛地改變，這取決於疾病的嚴重程度、受試者的年齡和相對健康狀況、所使用化合物的效力和其他因素。一般而言，指示以約0.03至2.5 mg/kg體重的日劑量可全身性地獲得令人滿意的結果。較大的哺乳動物（例如人）中所指示的日劑量在從約0.5 mg至約100 mg的範圍內，例如以多達一天四次的分劑量或以緩釋形式方便地投與。用於口服投與的合適的單位劑型包含從約1至50 mg的活性成分。

本發明之化合物可以藉由任何常規的途徑，特別是腸內，例如口服（例如以片劑或膠囊的形式）、或腸胃外（例如以可注射溶液或懸浮液的形式）、局部地（例如以洗劑、凝膠、軟膏或乳膏的形式或以鼻或栓劑形式）作為藥物組成物投與。包含呈游離形式或呈藥學上可接受的鹽形式的本發明之化合物以及至少一種藥學上可接受的載體或稀釋劑的藥物組成物可以藉由混合、製粒或包衣方法以常規方式製造。例如，口服組成物可以是片劑或明膠膠囊，其包含活性成分以及a) 稀釋劑，例如乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露糖醇、山梨糖醇、纖維素和/或甘胺酸；b) 潤滑劑，例如，二氧化矽、滑石、硬脂酸、其鎂鹽或鈣鹽和/或聚乙二醇；對於片劑還有c) 黏合劑，例如，矽酸鋁鎂、澱粉糊、明膠、黃蓍膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和或聚乙烯吡咯啶酮；如果希望，d) 崩散劑，例如，澱粉、瓊脂、海藻酸或其鈉鹽或泡騰混合物；和/或e) 吸附劑、著色劑、調味劑和甜味劑。可注射組成物可以是水性等滲溶液或懸浮液，並且栓劑可以由脂肪乳液或懸浮液製備。該等組成物可以是滅菌的和/或含有佐劑（如防腐劑、穩定劑、潤濕劑或乳化劑、溶液促進劑、用於調節滲透壓的鹽和/或緩衝劑）。另外，它們還可以含有其他有治療價值的物質。用於經皮施加的合適的配製物包括有效量的本發明之化合物和載體。載體可以包含可吸收的藥理學上可接受的溶劑以幫助穿過宿主的皮膚。例如，經皮裝置呈繃帶的形式，該繃帶包括背部構件、視需要具有載體的含有該化合物的儲庫、視需要用於將化合物以控制的和預定的速率在延長的時間段內遞送至宿主的皮膚的速率控制屏障以及用於將該裝置固定至皮膚的器件。還可以使用基質經皮配製物。用於局部施加例如至皮膚和眼睛的合適的配製物較佳的是本領域中熟知的水溶液、軟膏、乳膏或凝膠。此類系統可含有增溶劑、穩定劑、張力增強劑、緩衝液和防腐劑。

當本發明之化合物與其他療法聯合投與時，共同投與的化合物的劑量當然將根據所用的聯合藥物的類型、所用的特定藥物、所治療的病症等而變化。

本發明還提供了藥物組合（例如套組（kit）），該藥物組合包含a) 第一藥劑，其係呈游離形式或藥學上可接受的鹽形式的如本文揭露的本發明化合物；和b) 至少一種共藥劑。該套組可以包括其投與說明書。

如本文所用的術語「共同投與」或「組合投與」等旨在涵蓋將所選擇的治療劑投與至單個患者，並且意欲包括其中藥劑不一定藉由相同投與途徑投與或在同時間投與的治療方案。

如本文所用的術語「藥物組合」意指由多於一種活性成分的混合或組合所產生的產品，並且包括活性成分的固定和非固定組合兩者。術語「固定組合」意指將活性成分，例如具有式I之化合物和共藥劑兩者以單一實體或劑量的形式同時投與至患者。術語「非固定組合」意指活性成分，例如具有式I之化合物和共藥劑兩者以分開的實體同時、並行或順序投與至患者（沒有特定的時間限制），其中這種投與在患者體內提供了2種化合物的治療有效水平。後者還適用於混合物療法，例如，3種或更多種活性成分的投與。

實例

本發明由展示本發明化合物的製備的以下實例和中間體進一步例證，但不局限於此。應理解，如果特定化合物的名稱和結構之間存在差異，則結構應被視為正確的，因為化合物名稱係從結構生成的。

溫度以攝氏度給出。如果沒有另外提及，所有蒸發都在減壓下進行，典型地在約15 mm Hg與100 mm Hg（= 20-133毫巴）之間進行。最終產物、中間體和起始材料的結構藉由標準分析方法（例如，微量分析和光譜特徵（例如，MS、IR、NMR））確認。所使用的縮寫係本領域常規的縮寫。

用於合成本發明之化合物的所有起始材料、結構單元、試劑、酸、鹼、脫水劑、溶劑和催化劑係可商購獲得的或可藉由熟悉該項技術者已知的有機合成方法生產（Houben-Weyl 第4版 1952, Methods of Organic Synthesis [有機合成方法], Thieme [蒂梅出版社], 第21卷）。此外，本發明之化合物可以藉由熟悉該項技術者已知的有機合成方法生產，如以下實例所示。

LC-MS方法

方法1： Waters Acquity二元梯度泵；Waters Acquity PDA檢測器。Waters自動進樣器；帶有ESI和APCI離子源的Waters Quattro微型API質譜儀；UPLC柱：Waters Acquity；BEH；C18 1.7 um 50×2.1 mm；流動相：(A) H ₂O + 0.025%TFA和 (B) 乙腈 + 0.025%TFA。梯度：0.4 mL/分鐘，初始15% B經3.0分鐘斜升至95% B，然後保持直至4.0分鐘，在4.1分鐘時返回至15% B直至運行結束，然後將柱平衡2.0分鐘；MS掃描：在0.5秒內100至1000 amu/通道；二極體陣列檢測器：200 nm和400 nm。

方法2： Waters Acquity二元梯度泵；Waters Acquity PDA檢測器。Waters自動進樣器；帶有ESI和APCI離子源的Waters Quattro微型API質譜儀；UPLC柱：Waters Acquity；BEH；C18 1.7 um 50×2.1 mm；流動相：(A) H ₂O + 0.025%TFA和 (B) 乙腈 + 0.025%TFA。梯度：0.4 mL/分鐘，初始20% B經2.0分鐘斜升至90% B，然後保持直至4.0分鐘，在4.1分鐘時返回至20% B直至運行結束，然後將柱平衡2.0分鐘；MS掃描：在0.5秒內100至1000 amu/通道；二極體陣列檢測器：200 nm和400 nm。

方法3： Waters Acquity二元梯度泵；Waters Acquity PDA檢測器。Waters自動進樣器；Waters Acquity蒸發光散射檢測器；帶有ESI和APCI離子源的Waters Quattro微型API質譜儀；UPLC柱：Waters Acquity；BEH；C18 1.7 um 100x2.1 mm；流動相：(A) H ₂O + 0.025%TFA和 (B) 乙腈 + 0.025%TFA。梯度：0.3 mL/分鐘，初始10% B經4.0分鐘斜升至80% B，然後保持直至6.0分鐘，在6.1分鐘時返回至10% B直至運行結束，然後將柱平衡2.5分鐘；MS掃描：在0.5秒內100至1000 amu/通道；二極體陣列檢測器：200 nm和400nm；漂移管溫度：50°C，和N2氣流量：對ELSD檢測器為40 Psi。

方法4： Waters Acquity二元梯度泵；Waters Acquity PDA檢測器。Waters自動進樣器；帶有ESI和APCI離子源的Waters Quattro微型API質譜儀；UPLC柱：Waters Acquity；BEH；C18 1.7 um 50×2.1 mm；流動相：(A) H2O + 0.025%TFA和 (B) 乙腈 + 0.025%TFA。梯度：0.4 mL/分鐘，初始20% B經2.0分鐘斜升至80% B，然後保持直至4.0分鐘，在4.1分鐘時返回至20% B直至運行結束，然後將柱平衡2.0分鐘；MS掃描：在0.5秒內100至1000 amu/通道；二極體陣列檢測器：200 nm和400 nm

方法5： Waters Acquity二元梯度泵；Waters Acquity PDA檢測器。Waters自動進樣器；帶有ESI和APCI離子源的Waters Quattro微型API質譜儀；UPLC柱：Waters Acquity；BEH；C18 1.7 um 50×2.1 mm；流動相：(A) H2O + 0.025%TFA和 (B) 乙腈 + 0.025%TFA。梯度：0.4 mL/分鐘，初始10% B經3.0分鐘斜升至80% B，然後保持直至4.0分鐘，在4.1分鐘時返回至20% B直至運行結束，然後將柱平衡2.0分鐘；MS掃描：在0.5秒內100至1000 amu/通道；二極體陣列檢測器：200 nm和400 nm

方法6： Agilent G1379A脫氣器；Agilent G1312A二元泵；Agilent G1315C二極體陣列檢測器；Agilent G1367A自動進樣器；帶有ESI源的Agilent離子阱質譜儀；HPLC柱：Waters X-Terra；MS；C18；2.5 um 50 × 4.6 mm；流動相：(A) 在水中的0.01 M碳酸氫銨和 (B) 乙腈；梯度：1 mL/分鐘，初始50% B經4.0分鐘斜升至80% B，並且保持直至6.0分鐘，在6.1分鐘時返回至50% B直至運行結束。將柱再平衡3分鐘。MS掃描：100至1200 amu；二極體陣列檢測器：200 nm - 400 nm。

方法7： Agilent G1379A脫氣器；Agilent G1312A二元泵；Agilent G1315C二極體陣列檢測器；Agilent G1367A自動進樣器；帶有ESI源的Agilent離子阱質譜儀；HPLC柱：Waters X-Bridge；C18；3.5 um 150 × 4.6 mm；流動相：(A) 在水中的0.01 M碳酸氫銨和 (B) 乙腈；梯度：1 mL/分鐘，初始20% B經4.0分鐘斜升至80% B，並且保持直至8.0分鐘，在8.1分鐘時返回至20% B直至運行結束。將柱再平衡3分鐘。MS掃描：100至1200 amu；二極體陣列檢測器：200 nm - 400 nm。

方法8： Agilent G1379A脫氣器；Agilent G1312A二元泵；Agilent G1315C二極體陣列檢測器；Agilent G1367A自動進樣器；帶有ESI源的Agilent離子阱質譜儀；HPLC柱：Waters Symmetry；C18；3.5 um 75 × 4.6 mm；流動相：(A) H ₂O + 0.1%甲酸和 (B) 乙腈 + 0.1%甲酸；梯度：1 mL/分鐘，初始20% B經4.0分鐘斜升至80% B，並且保持直至7.0分鐘，在7.1分鐘時返回至20% B直至運行結束。將柱再平衡3分鐘。MS掃描：100至1200 amu；二極體陣列檢測器：200 nm - 400 nm。

實例 1.01 ： N-(4- 氰基苯基 )-N- 甲基 -3-(4-( 三氟甲基 ) 苯基 ) 吡唑并 [1,5-a] 吡啶 -5- 甲醯胺

甲基 5-(( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 )-2- 氯苯甲酸酯（ 1.01a ）

向500 mL燒瓶中裝入甲基5-胺基-2-氯苯甲酸酯（58.6 g，316 mmol）和水（250 ml）。將混合物在鋁塊上加熱至33°C。緩慢添加Boc ₂O（76 g）並將燒瓶裝配隔膜。在3 h處，添加另外的Boc ₂O（7.6 g）。30 min後，將混合物冷卻至室溫並過濾。將固體用水（150 mL）洗滌並在玻璃料上乾燥，隨後在35°C的烘箱中乾燥12 h以產生呈棕色固體的1.01a（87.6 g，307 mmol，97%產率）。LC-MS (m/z): 230.1 [M+H] ⁺, RT=0.91 min。 ¹H NMR (500 MHz, 氯仿- d) δ 7.83 (d, J= 2.7 Hz, 1H), 7.51 - 7.45 (m, 1H), 7.35 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 6.55 (s, 1H), 3.92 (s, 3H), 1.52 (s, 9H)。

甲基 5-(( 三級丁氧基羰基 )( 甲基 ) 胺基 )-2- 氯苯甲酸酯（ 1.01b ）

將1.01a（87.6 g，307 mmol）均勻分到三個配備有攪拌棒的500 mL燒瓶中。向每個燒瓶中添加MeCN（100 mL）。將燒瓶冷卻至0°C並且向每個燒瓶中添加Cs ₂CO ₃（66.6 g）。15 min後，向每個燒瓶中添加碘甲烷（13 mL）並且去除冰浴。在5 h處，添加碘甲烷（2 mL）並且將漿液攪拌過夜。將混合物合併，用EtOAc（300 mL）稀釋並且用水和鹽水洗滌。將庚烷（100 mL）添加至有機層，並且將溶液經Na ₂SO ₄乾燥、過濾並濃縮以提供呈棕色油狀物的1.01b（94 g，314 mmol，102%產率）。LC-MS (m/z): 244.2 [M+H] ⁺, RT = 0.94 min。 ¹H NMR (500 MHz, 氯仿- d) δ 7.72 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 7.38 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 7.33 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.25 (s, 3H), 1.45 (s, 9H)。

甲基 2- 氯 -5-( 甲基胺基 ) 苯甲酸酯鹽酸鹽（ 1.01c ）

將1.01b（94 g，314 mmol）均勻分到三個250 mL燒瓶中。向每個燒瓶中添加二㗁𠮿（50 mL）。向每個燒瓶中添加在二㗁𠮿（80 mL）中的4.0 M HCl。將混合物攪拌過夜。將混合物合併，並且在40°C下在8托真空中濃縮。將所得固體懸浮在甲苯（250 mL）中，然後在50°C下在8托下濃縮。將所得粉末在35°C下1托下乾燥過夜以提供呈棕色固體的1.01c（70.6 g，299 mmol，95%產率）。LC-MS (m/z): 200.1 [M+H] ⁺, RT = 0.55 min。 ¹H NMR (500 MHz, DMSO- d ₆) δ 7.27 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 6.99 (d, J= 2.8 Hz, 1H), 6.80 (dd, J= 8.9, 2.8 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H), 2.69 (s, 3H)。

甲基 5-(3- 溴 -N- 甲基吡唑并 [1,5-a] 吡啶 -5- 甲醯胺基 )-2- 氯苯甲酸酯（ 1.01d ）

向3-溴吡唑并[1,5- a]吡啶-5-甲酸（87.0 g，360 mmol）在DCM（1.9 L）中的溶液中添加草醯氯（48.1 g），然後逐滴添加DMF（1.39 mL）。將混合物攪拌5 h。添加NEt ₃（127 g），隨後添加1.01c（76.6 g），並且將混合物攪拌3 h。濃縮反應混合物以給出殘餘物。將殘餘物藉由柱層析法（SiO ₂，1%至66%石油醚/EtOAc）純化以提供呈黃色固體的1.01a（115 g，272 mmol，75.3%產率）。LC-MS (m/z): 422.0 [M+H] ⁺, RT = 0.884 min。 ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ 8.65 (d, J= 7.20 Hz, 1 H) 8.19 (s, 1 H) 7.84 (d, J= 0.80 Hz, 1 H) 7.57 (s, 1 H) 7.50 (s, 2 H) 6.81 (d, J= 6.40 Hz, 1 H) 3.82 (s, 3 H) 3.40 (s, 3 H)。

甲基 5-(3-(4- 胺基甲醯基苯基 )-N- 甲基吡唑并 [1,5-a] 吡啶 -5- 甲醯胺基 )-2- 氯苯甲酸酯（ 1.01 ）

在N ₂下，向(4-胺基甲醯基苯基)硼酸（54.6 g）和1.01d（100 g，236 mmol）在THF（2480 mL）和水（468 mL）中的溶液中添加PdCl ₂(tbdpf)（7.71 g）。將NEt ₃（98.7 mL）添加至上述混合物中。將混合物在53°C下攪拌3 h。將反應混合物在減壓下濃縮以給出殘餘物。將殘餘物藉由柱層析法（SiO ₂，在DCM中的1%-10% MeOH）純化兩次。將產物用甲醇（500 mL）研磨1 h、過濾、並藉由在50°C下從10/1 DCM/MeOH（400 mL）再結晶來純化。獲得呈黃色固體的化合物1.01（41.0 g，86.7 mmol，36.6%產率）。LC-MS (m/z): 463.1 [M+H] ⁺, RT = 0.816 min。 ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ 8.67 (d, J= 7.15 Hz, 1 H) 8.46 (s, 1 H) 8.01 - 7.97 (m, 1 H) 7.96 - 7.92 (m, 2 H) 7.91 - 7.84 (m, 2 H) 7.58 - 7.48 (m, 4 H) 7.38 - 7.31 (m, 1 H) 6.91 - 6.84 (m, 1 H) 3.41 (s, 3 H) 3.81 (s, 3 H)。

實例 1-02 ：

三級丁基 5- 胺基 -2- 氯苯甲酸酯（ 1.02a ）

三級丁基2-氯-5-硝基苯甲酸酯（10.5 g，40.8 mmol）吸收於4 : 1的THF:水（50 mL）中。添加飽和氯化銨水溶液（21.8 g）和鋅（26.7 g）。將混合物在65°C下攪拌3 h。冷卻至室溫後，將反應混合物經矽藻土過濾。將濾液用水稀釋並用EtOAc萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na ₂SO ₄乾燥，過濾並濃縮。將粗材料藉由快速柱層析法（24 g SiO ₂，在己烷中的10%-15% EtOAc）純化以提供1.02a（7 g，30.8 mmol，75.5%）。LC-MS (m/z): 228 [M+H] ⁺, RT = 1.53 min。

三級丁基 2- 氯 -5-( 甲基胺基 ) 苯甲酸酯（ 1.02b ）

將1.02a（7.0 g，30.8 mmol）吸收於二㗁𠮿（50 mL）中。添加Cu(OAc) ₂（14.0 g）和吡啶（8.3 mL）並將混合物攪拌30 min。添加甲基硼酸（4.54 g）並將混合物加熱到100°C持續12 h。冷卻至室溫後，將混合物通過矽藻土過濾、濃縮、並藉由快速柱層析法（24 g SiO ₂，在己烷中的5%-10% EtOAc）純化以提供1.02b（3.0 g，12 mmol，41%）。LC-MS (m/z): 242 [M+H] ⁺, RT = 2.4 min。

三級丁基 5-(3- 溴 -N- 甲基吡唑并 [1,5-a] 吡啶 -5- 甲醯胺基 )-2- 氯苯甲酸酯（ 1.02c ）

在0°C下，向3-溴吡唑并[1,5- a]吡啶-5-甲酸（3.89 g）在DCM（25 mL）中的溶液中添加草醯氯（2.74 mL）和DMF（0.5 mL）。將反應混合物在室溫下攪拌1 h。在減壓下蒸發溶劑。將所得固體溶解於DCM（15 mL）中。將1.02b（3.0 g，12.4 mmol）溶解於DCM（10 ml）和DIPEA（8.5 mL）中。在0°C下，將此反應混合物添加至上述醯基氯混合物。將反應混合物在室溫下攪拌4 h。將反應用水淬滅並用DCM萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，過濾並濃縮。將粗固體藉由快速柱層析法（24 g SiO ₂，在己烷中的10%-20% EtOAc）純化以提供1.02c（2.8 g，3.03 mmol，49%）。LC-MS (m/z): 465.9 [M+H] ⁺, RT = 2.45 min。

三級丁基 5-(3-(4- 胺基甲醯基苯基 )-N- 甲基吡唑并 [1,5-a] 吡啶 -5- 甲醯胺基 )-2- 氯苯甲酸酯（ 1.02 ）

在氬氣下，向(4-胺基甲醯基苯基)硼酸（42 mg）和1.02c（80 mg，0.172 mmol）在9 : 1二㗁𠮿:水（8 mL）中的溶液中添加Cs ₂CO ₃（0.167）。添加PdCl ₂(dppf)（14 mg）。將混合物在80°C下攪拌3 h。將反應混合物傾倒入水中並用EtOAc萃取。將合併的有機物用鹽水洗滌，經Na ₂SO ₄乾燥，過濾並濃縮。將殘餘物藉由HPLC（Kinetex EVO，150 mm × 21.2 mm，20 mL/min，A = 在水中的0.1% TFA，B = MeCN，經3 min 20%-40% B，經5 min 40%-70% B）純化，以提供獲得呈固體的化合物1.02（23 mg，0.045 mmol，27%產率）。LC-MS (m/z): 505.0 [M+H] ⁺, RT = 1.454 min。 ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ 8.68 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 8.49 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.98 - 7.93 (m, 2H), 7.91 (s, 1H), 7.69 - 7.65 (m, 1H), 7.58 (d, J= 8.1 Hz, 2H), 7.54 (d, J= 1.7 Hz, 2H), 7.38 (s, 1H), 6.83 (d, J= 7.5 Hz, 1H), 3.43 (s, 3H), 1.39 (s, 9H)。

實例 1-03 ：

5-(3-(4- 胺基甲醯基苯基 )-N- 甲基吡唑并 [1,5-a] 吡啶 -5- 甲醯胺基 )-2- 氯苯甲酸（ 1.03 ）

將1.02（550 mg，1.1 mmol）吸收於DCM（5.0 mL）中。將溶液冷卻至0°C並添加TFA（5.0 mL）。將混合物在室溫下攪拌6 h，並將揮發物在真空中去除。將所得固體用Et ₂O洗滌並藉由HPLC（Kinetex EVO，150 mm × 21.2 mm，20 mL/min，A = 在水中的0.1% TFA，B = MeCN，經2 min 15%-25% B，經5 min 25%-40% B）純化，以提供呈固體的1.03（190 mg，0.42 mmol，39%）。LC-MS (m/z): 449.05 [M+H] ⁺, RT = 1.37 min。 ¹H NMR (300 MHz, DMSO- d ₆) δ 8.69 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 8.48 (s, 1H), 8.03 - 7.92 (m, 3H), 7.91 - 7.82 (m, 2H), 7.56 (d, J= 8.1 Hz, 2H), 7.50 (d, J= 3.1 Hz, 2H), 7.39 (s, 1H), 6.88 (dd, J= 7.1, 1.7 Hz, 1H), 3.42 (s, 3H)。

實例 1-04 ：

2-( 甲硫基 ) 乙基 5-(3-(4- 胺基甲醯基苯基 )-N- 甲基吡唑并 [1,5-a] 吡啶 -5- 甲醯胺基 )-2- 氯苯甲酸酯（ 1.04 ）

向燒瓶中裝入1.03（0.1 g，0.22 mmol）、DMF（1 mL）、DIPEA（0.037 mL）、3-(甲硫基)丙烷-醇（7 mg）和HATU（33 mg）。將混合物攪拌12 h，用冰水稀釋並用EtOAc萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na ₂SO ₄乾燥，過濾並濃縮。將殘餘物藉由HPLC（Zorbax C18，150 mm × 21.2 mm，18 mL/min，A = 在水中的0.02% TFA，B = MeCN，經2 min 20%-30% B，經7 min 30%-50% B）純化，以提供呈固體的1.04（12 mg，0.037 mmol，18%）。LC-MS (m/z): 537.0 [M+H] ⁺, RT = 1.41 min。 ¹H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.40 (dd, J= 7.3, 0.9 Hz, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.96 - 7.88 (m, 2H), 7.77 (d, J= 2.7 Hz, 1H), 7.65 - 7.60 (m, 1H), 7.42 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.36 - 7.30 (m, 2H), 7.14 (dd, J= 8.5, 2.7 Hz, 1H), 6.94 (dd, J= 7.3, 1.9 Hz, 1H), 6.46 (bs, 1H), 5.86 (bs, 1H), 4.46 (t, J= 6.3 Hz, 2H), 3.56 (s, 3H), 2.61 (t, J= 7.1 Hz, 2H), 2.11 (s, 3H), 2.05 (p, J= 6.8 Hz, 2H)。

實例 1-05 ：

異丁基 5-(3-(4- 胺基甲醯基苯基 )-N- 甲基吡唑并 [1,5-a] 吡啶 -5- 甲醯胺基 )-2- 氯苯甲酸酯（ 1.05 ）

向燒瓶中裝入1.03（50 mg，0.111 mmol）、DMF（1 mL）、DIPEA（0.1 mL）、2-甲基丙醇（35 mg）和HATU（84 mg）。將混合物攪拌12 h，用冰水稀釋並用EtOAc萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na ₂SO ₄乾燥，過濾並濃縮。將殘餘物藉由HPLC（Zorbax C18，150 mm × 21.2 mm，18 mL/min，A = 在水中的0.02% TFA，B = MeCN，經2 min 10%-20% B，經7 min 20%-50% B）純化，以提供呈固體的1.05（15 mg，0.037 mmol，30%）。LC-MS (m/z): 505.0 [M+H] ⁺, RT = 1.47 min。 ¹H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.39 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.98 - 7.89 (m, 2H), 7.74 (d, J= 2.7 Hz, 1H), 7.64 (d, J= 1.7 Hz, 1H), 7.44 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.36 - 7.30 (m, 2H), 7.16 (dd, J= 8.5, 2.8 Hz, 1H), 6.93 (dd, J= 7.3, 1.9 Hz, 1H), 6.51 (bs, 1H), 6.03 (bs, 1H), 4.11 (d, J= 6.5 Hz, 2H), 3.56 (s, 3H), 2.03 (dq, J= 13.4, 6.8 Hz, 1H), 0.96 (d, J= 6.7 Hz, 6H)。

實例 1-06 ：

2- 甲氧基 -2- 側氧基乙基 5-(3-(4- 胺基甲醯基苯基 )-N- 甲基吡唑并 [1,5-a] 吡啶 -5- 甲醯胺基 )-2- 氯苯甲酸酯（ 1.06 ）

在0°C下，向含有1.03（70 mg，0.16 mmol）和DMF（1.5 mL）的混合物的燒瓶中裝入K ₂CO ₃（64 mg）和甲基2-溴乙酸酯（48 mg）。將混合物在80°C下攪拌2 h。冷卻至室溫後，將混合物用冰水稀釋並用EtOAc萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na ₂SO ₄乾燥，過濾並濃縮。將殘餘物藉由HPLC（Zorbax C18，150 mm × 21.2 mm，18 mL/min，A = 在水中的0.02% TFA，B = MeCN，經2 min 10%-20% B，經7 min 20%-50% B）純化，以提供呈固體的1.06（16 mg，0.030 mmol，12%）。LC-MS (m/z): 521.0 [M+H] ⁺, RT = 0.768 min。 ¹H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.43 (dd, J= 7.3, 1.0 Hz, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.98 (d, J= 2.7 Hz, 1H), 7.95 - 7.88 (m, 2H), 7.59 - 7.54 (m, 1H), 7.41 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.29-7.26 (m, 2H), 7.11 (dd, J= 8.6, 2.7 Hz, 1H), 7.05 - 6.99 (m, 1H), 6.62 (bs, 1H), 5.89 (bs, 1H)。4.90 (s, 2H), 3.81 (s, 3H), 3.57 (s, 3H)。

實例 1-07 ：

噻唑 -5- 基甲基 5-(3-(4- 胺基甲醯基苯基 )-N- 甲基吡唑并 [1,5-a] 吡啶 -5- 甲醯胺基 )-2- 氯苯甲酸酯（ 1.07 ）

向燒瓶中裝入1.03（0.1 g，0.222 mmol）、DMF（2 mL）、DIPEA（0.037 mL）、噻唑-5-基甲醇（7 mg）和HATU（33 mg）。將混合物攪拌12 h，用冰水稀釋並用EtOAc萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na ₂SO ₄乾燥，過濾並濃縮。將殘餘物藉由HPLC（Gemini NX，150 mm × 21.2 mm，18 mL/min，A = 在水中的0.1% TFA，B = MeCN，經2 min 20%-30% B，經7 min 30%-45% B）純化，以提供呈固體的1.07（20 mg，0.036 mmol，17%）。LC-MS (m/z): 549.9 [M+H] ⁺, RT = 0.66 min。 ¹H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.86 (s, 1H), 8.37 (dd, J= 7.3, 0.9 Hz, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.93 - 7.87 (m, 2H), 7.71 (d, J= 2.7 Hz, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.42 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.38 - 7.31 (m, 2H), 7.15 (dd, J= 8.6, 2.7 Hz, 1H), 6.88 (dd, J= 7.3, 1.9 Hz, 1H), 5.57 (s, 2H), 3.53 (s, 3H)。

實例 1-08 ：

2- 𠰌 啉代乙基 5-(3-(4- 胺基甲醯基苯基 )-N- 甲基吡唑并 [1,5-a] 吡啶 -5- 甲醯胺基 )-2- 氯苯甲酸酯（ 1.08 ）

在0°C下，向燒瓶中裝入1.03（160 mg，0.36 mmol）、DMF（2 mL）、DIPEA（0.130 mg）和HATU（270 mg）。在20 min後，添加4-(2-羥基乙基)𠰌啉（140 mg）。將混合物在室溫下攪拌4 h，用冰水稀釋並用EtOAc萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na ₂SO ₄乾燥，過濾並濃縮。將殘餘物藉由HPLC（Waters Xbridge，150 mm × 21.2 mm，14 mL/min，A = 在水中的0.02% NH ₄OH，B = MeCN，經2 min 10%-20% B，經7 min 20%-40% B）純化，以提供呈固體的1.08（35 mg，0.0062 mmol，17%）。LC-MS (m/z): 562.3 [M+H] ⁺, RT = 1.28 min。 ¹H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.37 (d, J= 7.6, 1.0 Hz, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.90 (d, J= 8.4 Hz, 2 H) 7.73 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.40 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.31 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.25-7.10 (m, 1H), 7.95 - 7.91 (m, 1 H), 4.46 (t, J= 6.0 Hz, 2H), 3.65 (t, J= 4.84 Hz, 4H), 3.53 (s, 3H), 2.71 (t, J= 6.0 Hz, 2H), 2.50 (t, J= 4.4 Hz, 4H)。

實例 1-09 ：

乙基 5-(3-(4- 胺基甲醯基苯基 )-N- 甲基吡唑并 [1,5-a] 吡啶 -5- 甲醯胺基 )-2- 氯苯甲酸酯（ 1.09 ）

在0°C下，向含有1.03（50 mg，0.111 mmol）和DMF（1.5 mL）的混合物的燒瓶中裝入K ₂CO ₃（46 mg）和碘乙烷（34 mg）。將混合物攪拌12 h，然後用冰水稀釋並用EtOAc萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na ₂SO ₄乾燥，過濾並濃縮。將殘餘物藉由HPLC（Zorbax C18，150 mm × 21.2 mm，18 mL/min，A = 在水中的0.02% TFA，B = MeCN，經2 min 10%-20% B，經7 min 20%-50% B）純化，以提供呈固體的1.09（12 mg，0.025 mmol，23%）。LC-MS (m/z): 476.9 [M+H] ⁺, RT = 1.1 min。 ¹H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.39 (dd, J= 7.3, 1.0 Hz, 1H), 8.16 (s, 1H), 7.96 - 7.89 (m, 2H), 7.77 (d, J= 2.7 Hz, 1H), 7.64 - 7.58 (m, 1H), 7.41 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 7.30 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.12 (dd, J= 8.5, 2.8 Hz, 1H), 6.95 (dd, J= 7.3, 1.9 Hz, 1H), 6.45 (bs, 1H), 5.62 (bs, 1H), 4.41 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 3.56 (s, 3H), 1.39 (t, J= 7.1 Hz, 3H)。

實例 1-10 ：

2,2,2- 三氟乙基 5-(3-(4- 胺基甲醯基苯基 )-N- 甲基吡唑并 [1,5-a] 吡啶 -5- 甲醯胺基 )-2- 氯苯甲酸酯（ 1.10 ）

向燒瓶中裝入1.03（100 mg，0.222 mmol）、DMF（1 mL）、DIPEA（0.037 mL）、2,2,2-三氟乙烷-1-醇（7 mg）和HATU（33 mg）。將混合物攪拌12 h，用冰水稀釋並用EtOAc萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na ₂SO ₄乾燥，過濾並濃縮。將殘餘物藉由HPLC（Waters Xbridge，150 mm × 21.2 mm，20 mL/min，A = 在水中的0.05% TFA，B = MeCN，經2 min 25%-35% B，經6 min 35%-50% B）純化，以提供呈固體的1.10（20 mg，0.037 mmol，18%）。LC-MS (m/z): 530.9 [M+H] ⁺, RT = 1.394 min。 ¹H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.39 (dd, J= 7.2, 0.9 Hz, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.92 - 7.86 (m, 2H), 7.77 (d, J= 2.7 Hz, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.45 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 7.42 - 7.35 (m, 2H), 7.22 (dd, J= 8.6, 2.8 Hz, 1H), 6.86 (dd, J= 7.3, 1.9 Hz, 1H), 6.39 (bs, 2H), 4.70 (q, J= 8.2 Hz, 2H), 3.55 (d, J= 1.3 Hz, 3H)。

實例 1-11 ：

2- 甲氧基乙基 5-(3-(4- 胺基甲醯基苯基 )-N- 甲基吡唑并 [1,5-a] 吡啶 -5- 甲醯胺基 )-2- 氯苯甲酸酯（ 1.11 ）

向燒瓶中裝入1.03（50 mg，0.111 mmol）、DMF（1 mL）、DIPEA（0.10 mL）、2-甲氧基乙烷-1-醇（16 mg）和HATU（84 mg）。將混合物攪拌12 h，用冰水稀釋並用EtOAc萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na ₂SO ₄乾燥，過濾並濃縮。將殘餘物藉由HPLC（Zorbax C18，150 mm × 21.2 mm，18 mL/min，A = 在水中的0.02% TFA，B = MeCN，經2 min 20%-30% B，經8 min 30%-45% B）純化，以提供呈固體的1.11（20 mg，0.039 mmol，40%）。LC-MS (m/z): 506.9 [M+H] ⁺, RT = 0.653 min。 ¹H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.41 (d, J= 7.3 Hz, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.96 - 7.88 (m, 2H), 7.83 (d, J= 2.7 Hz, 1H), 7.57 (d, J= 1.5 Hz, 1H), 7.40 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.29 (s, 2H), 7.09 (dd, J= 8.6, 2.7 Hz, 1H), 6.99 (dd, J= 7.3, 1.9 Hz, 1H), 6.58 (bs, 1H), 5.61 (bs, 1H), 4.62 - 4.46 (m, 2H), 3.82 - 3.70 (m, 2H), 3.56 (s, 3H), 3.40 (s, 3H)。

實例 1-12 ：

2-( 二甲基胺基 )-2- 側氧基乙基 5-(3-(4- 胺基甲醯基苯基 )-N- 甲基吡唑并 [1,5-a] 吡啶 -5- 甲醯胺基 )-2- 氯苯甲酸酯（ 1.12 ）

在0°C下，向含有1.03（100 mg，0.22 mmol）和DMF（1.5 mL）的混合物的燒瓶中裝入K ₂CO ₃（92 mg）和甲基2-溴- N,N-二甲基乙醯胺（74 mg）。將混合物在80°C下攪拌2 h。冷卻至室溫後，將混合物用冰水稀釋並用EtOAc萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na ₂SO ₄乾燥，過濾並濃縮。將殘餘物藉由HPLC（Zorbax C18，150 mm × 21.2 mm，18 mL/min，A = 在水中的0.02% TFA，B = MeCN，經2 min 10%-20% B，經8 min 20%-50% B）純化，以提供呈固體的1.12（16 mg，0.030 mmol，14%）。LC-MS (m/z): 533.9 [M+H] ⁺, RT = 0.380 min。 ¹H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.45 (dd, J= 7.3, 1.0 Hz, 1H), 8.17 (s, 1H), 8.12 (d, J= 2.7 Hz, 1H), 8.01 - 7.94 (m, 2H), 7.50 - 7.46 (m, 1H), 7.35 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.23 - 7.16 (m, 2H), 7.10 (dd, J= 7.3, 1.9 Hz, 1H), 7.05 - 6.97 (m, 1H), 5.03 (s, 2H), 3.57 (s, 3H), 3.09 (s, 3H), 3.02 (s, 3H)。

實例 1-13 ：

異丙基 5-(( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 )-2- 氯苯甲酸酯（ 1.13a ）

向異丙基5-胺基-2-氯苯甲酸酯（1.0 g，4.7 mmol）在THF（30 mL）和水（7 mL）中的溶液中添加Boc ₂O（3.1 g）和K ₂CO ₃（1.9 g）。將混合物攪拌16 h，然後將揮發物在真空下去除。將所得水溶液用EtOAc萃取，經Na ₂SO ₄乾燥，過濾並濃縮。將殘餘物藉由矽膠層析法純化以提供1.13a（1.4 g，4.46 mmol，95%產率）。LC-MS (m/z): 331.7.1 [M+NH ₄] ⁺, RT = 0.98 min。 ¹H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 10.19 (s, 1H), 8.42 (d, J= 9.1 Hz, 1H), 7.96 (d, J= 2.6 Hz, 1H), 7.44 (dd, J= 9.1, 2.6 Hz, 1H), 3.92 (s, 3H), 1.52 (s, 10H)。

異丙基 5-(( 三級丁氧基羰基 )( 甲基 ) 胺基 )-2- 氯苯甲酸酯（ 1.13b ）

向燒瓶中裝入1.13a（1.4 g，4.5 mmol）和DMF（22 mL）並且在冰浴中冷卻。分批添加60% NaH（0.25 g）並且將混合物攪拌30 min。添加碘甲烷（0.7 mL）並且將燒瓶溫熱過夜。將混合物用EtOAc稀釋，用水、鹽水洗滌，經Na ₂SO ₄乾燥，並濃縮以給出1.13b（1.463 g，4.46 mmol，100%產率）。LC-MS (m/z): 230.1 [M+H] ⁺, RT = 1.17 min。

異丙基 2- 氯 -5-( 甲基胺基 ) 苯甲酸酯（ 1.13c ）

將裝有1.13b（90 mg，0.28 mmol）和DCM（212 µL）的小瓶在冰浴中冷卻。添加TFA（212 µL）並將混合物攪拌30 min。將揮發物在真空下去除，並將所得殘餘物1.13c（0.275 mmol，假定的定量產率）不經純化使用。LC-MS (m/z): 228.2 [M+H] ⁺, RT = 0.85 min。

異丙基 5-(3- 溴 -N- 甲基吡唑并 [1,5-a] 吡啶 -5- 甲醯胺基 )-2- 氯苯甲酸酯（ 1.13d ）

將3-溴吡唑并[1,5- a]吡啶-5-甲酸（67 mg，0.275 mmol）在DCM（0.917 mL）中的溶液用草醯氯（26 µL）處理，然後用DMF（3.19 µL）處理。將所得溶液攪拌20 min。添加NEt ₃（0.096 ml），隨後添加在1 mL DCM中的1.13c（63 mg）。在3 h後，將混合物在EtOAc與水之間分配。分離層，並且將水層用EtOAc萃取。將合併的有機物經Na ₂SO ₄乾燥、過濾並濃縮以提供1.13d（0.28 mmol，假定的定量），將其不經純化使用。LC-MS (m/z): 258.1 [M+H] ⁺, RT = 0.62 min。

異丙基 5-(3-(4- 胺基甲醯基苯基 )-N- 甲基吡唑并 [1,5-a] 吡啶 -5- 甲醯胺基 )-2- 氯苯甲酸酯（ 1.13 ）

向5 mL微波小瓶中裝入在二㗁𠮿（3.5 mL）/水（0.692 mL）中的1.13d（187 mg，0.415 mmol）、(4-胺基甲醯基苯基)硼酸（103 mg）、PdCl ₂(dppf)（61 mg）和K ₃PO ₄（264 mg）。將氛圍用N ₂吹掃10 min。然後將小瓶在100°C微波中加熱10 min。將混合物過濾並濃縮。將所得殘餘物藉由HPLC（Sunfire Prep C18，30 × 100 mm，60 mL/min，A = 在水中的0.1% TFA，B = MeCN，經4 min 30% B，經20 min 30%-70% B，經1 min 70%-95% B）純化，以提供呈固體的1.13（7.3 mg，0.015 mmol，3.5%）。LC-MS (m/z): 491.2 [M+H] ⁺, RT = 0.84 min。 ¹H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.69 (d, J= 1.8 Hz, 1H), 8.51 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.12 (d, J= 8.2 Hz, 2H), 8.02 (s, 1H), 7.84 (dd, J= 8.6, 2.1 Hz, 1H), 7.56 (d, J= 8.2 Hz, 2H), 7.38 (s, 1H), 6.78 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.64 (s, 3H)。

實例 1-14 ：

外消旋 -1-((乙氧基羰基)氧基)乙基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)- N-甲基吡唑并[1,5- a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氯苯甲酸酯（1.14）

向含有1.03（50 mg，0.111 mmol）和DMF（2.0 mL）的混合物的燒瓶中裝入K ₂CO ₃（30 mg）、NaI（2 mg）和1-氯乙基乙基碳酸酯（35 mg）。將混合物在80°C下攪拌2 h。冷卻後，將混合物用冰水稀釋並用EtOAc萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na ₂SO ₄乾燥，過濾並濃縮。將殘餘物藉由HPLC（Kinetex EVO C18，155 mm × 19 mm，20 mL/min，A = 在水中的0.1% TFA，B = MeCN，經3 min 20%-40% B，經7 min 40%-70% B）純化，以提供呈固體的1.14（13 mg，0.023 mmol，20%）。LC-MS (m/z): 565.3 [M+H] ⁺, RT = 1.358 min。 ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ 8.63 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 8.44 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.95 (t, J= 1.9, 1.9 Hz, 1H), 7.93 - 7.88 (m, 2H), 7.85 (s, 1H), 7.82 - 7.77 (m, 1H), 7.69 - 7.64 (m, 1H), 7.54-7.48 (m, 2H), 7.37 (s, 1H), 6.89 - 6.84 (m, 1H), 6.80 (q, J= 5.4 Hz, 1H), 4.09 (qd, J= 7.1, 1.8 Hz, 2H), 3.43 (s, 3H), 1.50 (d, J = 5.4 Hz, 3H), 1.15 (t, J= 7.1 Hz, 3H)。

實例 1-15 ：

外消旋-(四氫呋喃-2-基)甲基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氯苯甲酸酯（1.15）

向燒瓶中裝入1.03（50 mg，0.111 mmol）、DMF（1 mL）、DIPEA（0.10 mL）、(四氫呋喃-2-基)甲醇（25 mg）和HATU（84 mg）。將混合物攪拌12 h，用冰水稀釋並用EtOAc萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na ₂SO ₄乾燥，過濾並濃縮。將殘餘物藉由HPLC（Zorbax C18，150 mm × 21.2 mm，20 mL/min，A = 在水中的0.1% TFA，B = MeCN，經2 min 30%-40% B，經8 min 40%-60% B）純化，以提供呈固體的1.15（20 mg，0.037 mmol，39%）。LC-MS (m/z): 533.0 [M+H] ⁺, RT = 0.906 min。 ¹H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.43 (dd, J= 7.3, 0.9 Hz, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.98 - 7.90 (m, 2H), 7.86 (d, J= 2.7 Hz, 1H), 7.53 (t, J= 1.4 Hz, 1H), 7.40 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.27 (s, 2H), 7.09 (dd, J= 8.5, 2.7 Hz, 1H), 7.03 (dd, J= 7.3, 1.9 Hz, 1H), 6.90 (bs, 1H), 6.52 (bs, 1H), 4.47 (dd, J= 11.2, 2.8 Hz, 1H), 4.36 - 4.22 (m, 2H), 3.92 - 3.77 (m, 2H), 2.22-2.20 (m, 3H), 1.80 - 1.66 (m, 1H)。

實例 1-16 ：

甲基 2- 氯 -5-(N- 甲基 -3-(4-( 甲基胺基甲醯基 ) 苯基 ) 吡唑并 [1,5-a] 吡啶 -5- 甲醯胺基 ) 苯甲酸酯（ 1.16 ）

向化合物1.01d（14.4 g，34.1 mmol）在THF（360 mL）中的懸浮液中添加(4-(甲基胺基甲醯基)苯基)硼酸（8.6 g）、Et ₃N（14.3 mL）和H ₂O（67 mL），將混合物脫氣並用N ₂吹掃三次。添加PdCl ₂(dtbpf)（222 mg），將混合物在53°C下攪拌3 h。將反應混合物用EtOAc和水稀釋並過濾。分離層，將有機層經Na ₂SO ₄乾燥、過濾，並去除部分揮發物。將所得漿料過濾以收集固體。將固體溶解於EtOH和EtOAc中，用Pd清除樹脂攪拌，過濾並完全濃縮。將固體溶解於熱EtOAc（150 mL）中並緩慢冷卻。收集固體以提供呈黃色固體的1.16（10. g，21. mmol，61%產率）。LC-MS (m/z): 477.0 [M+H] ⁺, RT = 0.691 min。 ¹H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.33 - 8.25 (m, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.80 - 7.75 (m, 2H), 7.71 (d, J= 2.80 Hz, 1H), 7.52 (d, J= 0.80 Hz, 1H), 7.32 (d, J= 8.80 Hz, 1H), 7.24 - 7.17 (m, 3H), 7.04 (dd, J= 2.80, 8.40 Hz, 1H), 6.83 (dd, J= 2.00, 7.20 Hz, 1H), 6.39 (br s, 1H), 3.92 - 3.82 (m, 3H), 3.51 - 3.40 (m, 3H), 3.00 (d, J= 5.20 Hz, 3H)。

實例 1-17 ：

三級丁基2-氯-5-(N-甲基-3-(4-(甲基胺基甲醯基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)苯甲酸酯（1.17）

在氬氣下，向(4-(甲基胺基甲醯基)苯基)硼酸（170 mg）和1.02c（300 mg，0.645 mmol）在9 : 1二㗁𠮿:水（10 mL）中的溶液中添加Cs ₂CO ₃（0.628）。添加PdCl ₂(dppf)（52 mg）。將混合物在80°C下攪拌3 h。將反應混合物傾倒入水中並用EtOAc萃取。將合併的有機物用鹽水洗滌，經Na ₂SO ₄乾燥，過濾並濃縮。將殘餘物藉由柱層析法（12 g SiO ₂，在DCM中的2%-3% MeOH）純化以提供獲得呈固體的化合物1.17（240 mg，0.463 mmol，72%產率）。LC-MS (m/z): 519.0 [M+H] ⁺, RT = 1.523 min。 ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ 8.68 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 8.47 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.95 - 7.87 (m, 3H), 7.70 - 7.65 (m, 1H), 7.59 (d, J= 8.1 Hz, 2H), 7.53 (d, J= 1.9 Hz, 2H), 6.88 - 6.77 (m, 1H), 3.43 (s, 3H), 2.81 (d, J= 4.5 Hz, 3H), 1.39 (s, 9H)。

實例 1-18 ：

2- 氯 -5-(N- 甲基 -3-(4-( 甲基胺基甲醯基 ) 苯基 ) 吡唑并 [1,5-a] 吡啶 -5- 甲醯胺基 ) 苯甲酸（ 1.18 ）

將1.17（130 mg，0.25 mmol）吸收於DCM（5.0 mL）中。將溶液冷卻至0°C並添加TFA（5.0 mL）。將混合物在室溫下攪拌6 h，並將揮發物在真空中去除。將所得固體用Et ₂O洗滌並藉由HPLC（Kinetex EVO，150 mm × 21.2 mm，20 mL/min，A = 在水中的0.1% TFA，B = MeCN，經2 min 20%-30% B，經7 min 30%-44% B）純化，以提供呈固體的1.18（25 mg，0.055 mmol，22%）。LC-MS (m/z): 463.15 [M+H] ⁺, RT = 1.41 min。 ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ 8.68 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 8.52 - 8.40 (m, 2H), 7.95 - 7.82 (m, 4H), 7.57 (d, J= 8.0 Hz, 2H), 7.49 (d, J= 3.2 Hz, 2H), 6.87 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 3.42 (s, 3H), 2.81 (d, J= 4.4 Hz, 3H)。

實例 1-19 ：

2- 𠰌 啉代乙基 2- 氯 -5-(N- 甲基 -3-(4-( 甲基胺基甲醯基 ) 苯基 ) 吡唑并 [1,5-a] 吡啶 -5- 甲醯胺基 ) 苯甲酸酯（ 1.19 ）

向燒瓶中裝入1.18（110 mg，0.24 mmol）和DMF（2 mL）並冷卻至0°C。添加DIPEA（92 mg）和HATU（181 mg）。20 min後，添加4-(2-羥基乙基)𠰌啉（94 mg）並將混合物經4 h加溫至室溫。將混合物用冰水稀釋並用EtOAc萃取。將合併的有機層經Na ₂SO ₄乾燥，過濾，並濃縮。將殘餘物藉由HPLC（Gemini, 150 mm × 21.2 mm，2 µ，18 mL/min，A = 在水中的0.02% NH ₄OH，B = MeCN，經2 min 10%-20% B，經7 min 20%-50% B）純化，以提供呈固體的1.18（1.4 mg，0.024 mmol，11%）。LC-MS (m/z): 576.3 [M+H] ⁺, RT = 1.48 min。 ¹H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ δ 8.68 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 8.50 - 8.48 (m, 2H), 7.92 - 7.88 (m, 2H), 7.79 (s, 1H), 7.58 - 7.57 (m, 3H), 6.85 - 6.83 (m, 1H), 4.30 (t, J= 5.6 Hz, 2H), 3.48 - 3.46 (m, 2H), 3.43 (s, 3H), 2.81 (d, J= 4.4 Hz, 3H), 2.33-2.32 (m, 4H)。

實例 1-20 ：

(5- 甲基 -2- 側氧基 -1,3- 二氧雜環戊烯 -4- 基 ) 甲基 2- 氯 -5-(N- 甲基 -3-(4-( 甲基胺基甲醯基 ) 苯基 ) 吡唑并 [1,5-a] 吡啶 -5- 甲醯胺基 ) 苯甲酸酯（ 1.20 ）

向燒瓶中裝入1.18（100 mg，0.2 mmol）和DMF（2 mL）並冷卻至0°C。添加DIPEA（80 mg）和HATU（160 mg）。20 min後，添加4-(羥基甲基)-5-甲基-1,3-二氧雜環戊烯-2-酮（80 mg）並將混合物經16 h加溫至室溫。將混合物用冰水稀釋並用EtOAc萃取。將合併的有機層經Na ₂SO ₄乾燥，過濾，並濃縮。將殘餘物藉由HPLC（Gemini,150 mm × 21.2 mm，2 µ，20 mL/min，A = 水，B = MeCN，經2 min 35%-45% B，經6 min 45%-55% B）純化，以提供呈固體的1.20（15 mg，0.002 mmol，12%）。LC-MS (m/z): 575.05 [M+H] ⁺, RT = 1.47 min。

實例 1.21 ：甲基 2- 氯 -5-(N- 甲基 -3-(2- 甲基 -4-( 胺基甲醯基 ) 苯基 ) 吡唑并 [1,5-a] 吡啶 -5- 甲醯胺基 ) 苯甲酸酯（ 1.21 ）

甲基 2- 氯 -5-(N- 甲基 -3-(2- 甲基 -4-( 胺基甲醯基 ) 苯基 ) 吡唑并 [1,5-a] 吡啶 -5- 甲醯胺基 ) 苯甲酸酯（ 1.21 ）

向2打蘭小瓶中添加1.01d（0.025 g，0.059 mmol），隨後添加(4-胺基甲醯基-2-甲基苯基)硼酸（13 mg）、PdCl ₂(dtbpf)（1.9 mg）、2-MeTHF（0.5 mL）、水（0.084 mL）和NEt ₃（0.025 mL）。將小瓶密封並加熱至65°C過夜。冷卻後，將混合物在EtOAc與水之間分配。分離層，並且將水層用EtOAc萃取兩次。將合併的有機物經Na ₂SO ₄乾燥，過濾並濃縮。將所得油狀物藉由HPLC（Sunfire B-9m-1050，75 mL/min，在水中的0.1% TFA）純化以提供呈黃色固體的1.21（6.9 mg，0.1 mmol，19%）。LC-MS (m/z): 477.3 [M+H] ⁺, RT = 0.75 min。 ¹H NMR (500 MHz, DMSO- d ₆) δ 8.72 (dd, J= 7.2, 0.9 Hz, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.84 (dd, J= 11.3, 2.3 Hz, 2H), 7.75 (dd, J= 7.9, 1.9 Hz, 1H), 7.55 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.47 (dd, J= 8.6, 2.7 Hz, 1H), 7.36 (d, J= 11.1 Hz, 2H), 7.06 (d, J= 7.9 Hz, 1H), 6.93 (dd, J= 7.2, 1.9 Hz, 1H), 3.84 (s, 3H), 3.40 (s, 4H), 2.19 (s, 3H)。

實例 1.22 ：甲基 2- 氯 -5-(N- 甲基 -3-(3- 甲基 -4-( 胺基甲醯基 ) 苯基 ) 吡唑并 [1,5-a] 吡啶 -5- 甲醯胺基 ) 苯甲酸酯（ 1.22 ）

甲基 2- 氯 -5-(N- 甲基 -3-(3- 甲基 -4-( 胺基甲醯基 ) 苯基 ) 吡唑并 [1,5-a] 吡啶 -5- 甲醯胺基 ) 苯甲酸酯（ 1.22 ）

向燒瓶中添加1.01d（80 mg，0.189 mmol）、 N-2-二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)苯甲醯胺（62.5 mg）、THF（2 mL）、水（1 mL）、NEt ₃（0.079 mL）和PdCl ₂(dtbpf)（24. mg）。將混合物用氮氣吹掃，將小瓶密封然後加熱至100°C持續1 h。將混合物過濾、濃縮、並藉由HPLC（Sunfire B-9m-1050，75 mL/min，在水中的0.1% TFA）純化以提供呈固體的1.22（12 mg，0.019 mmol，10%）。HPLC-MS (m/z): 491.1 [M+H] ⁺, RT = 5.69 min。 ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ 8.67 (d, J= 7.3 Hz, 1H), 8.42 (s, 1H), 8.17 (d, J= 4.7 Hz, 1H), 7.92 - 7.84 (m, 2H), 7.53 (d, J= 2.3 Hz, 2H), 7.43 - 7.33 (m, 2H), 7.33 - 7.26 (m, 1H), 6.86 (dd, J= 7.2, 1.7 Hz, 1H), 3.81 (s, 3H), 2.78 (d, J= 4.6 Hz, 3H), 2.41 (s, 3H)。

實例 1.23 ：甲基 5-(3-(4- 胺基甲醯基苯基 ) 吡唑并 [1,5-a] 吡啶 -5- 甲醯胺基 )-2- 氯苯甲酸酯（ 1.23 ）

甲基 5-(3- 溴吡唑并 [1,5-a] 吡啶 -5- 甲醯胺基 )-2- 氯苯甲酸酯（ 1.23a ）

向3-溴吡唑并[1,5- a]吡啶-5-甲酸（500 mg，2.1 mmol）在DCM（8 mL）中的溶液中逐滴添加草醯氯（290 mg），隨後逐滴添加DMF（3滴）。將混合物攪拌1 h，然後冷卻至0°C。添加DIPEA（804 mg），隨後添加甲基5-胺基-2-氯苯甲酸酯（501 mg），並且將混合物攪拌30 min。濃縮反應混合物以給出殘餘物。將殘餘物藉由柱層析法（SiO ₂，0%至80%庚烷/EtOAc）純化以提供1.23a（703 mg，1.72 mmol，83%產率）。LC-MS (m/z): 408.2 [M+H] ⁺, RT = 1.06 min。 ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 10.82 (s, 1H), 8.89 (d, J= 7.1 Hz, 1H), 8.37 - 8.31 (m, 3H), 8.07 - 8.01 (m, 1H), 7.62 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 7.46 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 3.91 (d, J= 4.5 Hz, 3H)。

甲基 5-(3-(4- 胺基甲醯基苯基 ) 吡唑并 [1,5-a] 吡啶 -5- 甲醯胺基 )-2- 氯苯甲酸酯（ 1.23 ）

向小瓶中裝入在THF（0.82 ml）/水（0.41 ml）中的1.23a（50 mg，0.122 mmol）、(4-胺基甲醯基苯基)硼酸（28 mg）、PdCl ₂(dtbpf)（8 mg）和NEt ₃（37 mg）。將氛圍用N ₂吹掃。將小瓶在65°C下加熱15 min。將混合物冷卻，並且用EtOAc洗滌固體，隨後溶解於DMF中並經矽藻土過濾。將溶液用EtOAc稀釋，用鹽水洗滌兩次，經MgSO ₄乾燥，過濾並濃縮。將殘餘物藉由HPLC（Sunfire B-9m-3070，75 mL/min，在水中的0.1% TFA）純化以產生呈固體的1.23（2.7 mg，0.047 mmol，4%）。LC-MS (m/z): 449.3 [M+H]+, RT = 0.81 min。 ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d ₆ ) δ 10.82 (s, 1H), 8.92 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 8.67 (d, J= 1.5 Hz, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.33 (d, J= 2.7 Hz, 1H), 8.09 - 8.02 (m, 3H), 7.91 (d, J= 8.3 Hz, 2H), 7.63 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.46 (dd, J= 7.2, 1.9 Hz, 1H), 7.40 (s, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.31 (s, 1H), 2.56 (s, 1H)。

實例 1.24 ：甲基 2- 氯 -5-(3-(4-( 甲基胺基甲醯基 ) 苯基 ) 吡唑并 [1,5-a] 吡啶 -5- 甲醯胺基 ) 苯甲酸酯

甲基 2- 氯 -5-(3-(4-( 甲基胺基甲醯基 ) 苯基 ) 吡唑并 [1,5-a] 吡啶 -5- 甲醯胺基 ) 苯甲酸酯（ 1.24 ）

在惰性氣氛下，向小瓶中裝入1.23a（50 mg，0.122 mmol）、P(t-Bu) ₃Pd G2（1.567 mg）和(4-(甲基胺基甲醯基)苯基)硼酸（35.1 mg）。添加三級戊醇（1 mL）、水（173 µl）和NEt ₃（51.2 µl）。將混合物加熱至60°C持續1 h，然後濃縮。將殘餘物藉由HPLC（Sunfire B-9m-2060，75 mL/min，在水中的0.1% TFA）純化以產生呈固體的1.24（16.5 mg，0.028 mmol，23%）。LC-MS (m/z): 463.3 [M+H] ⁺, RT = 0.83 min。 ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ 10.80 (s, 1H), 8.91 (dd, J= 7.3, 0.9 Hz, 1H), 8.65 (dd, J= 2.0, 1.0 Hz, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.48 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 8.32 (d, J= 2.6 Hz, 1H), 8.05 (dd, J= 8.8, 2.7 Hz, 1H), 8.02 - 7.96 (m, 2H), 7.94 - 7.87 (m, 2H), 7.62 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.45 (dd, J= 7.3, 1.9 Hz, 1H), 3.90 (s, 3H), 2.83 (d, J= 4.5 Hz, 3H)。

實例 1.25 ：甲基 5-(3-(4- 胺基甲醯基苯基 )-N- 甲基吡唑并 [1,5-a] 吡啶 -5- 甲醯胺基 )-2-( 三氟甲氧基 ) 苯甲酸酯（ 1.25 ）

甲基 5-( 甲基胺基 )-2-( 三氟甲氧基 ) 苯甲酸酯（ 1.25a ）

在烘箱乾燥的小瓶中，將甲基5-胺基-2-(三氟甲氧基)苯甲酸酯（500 mg，2.1 mmol）溶解於DMF（5 mL）中並冷卻至0°C。以單份添加在油中的60% NaH（100 mg）。10 min後，逐滴添加碘甲烷（360 mg）並將反應加溫至室溫。2 h後，用EtOAc和NH ₄Cl（飽和水溶液）稀釋混合物。分離層，並且將水層用EtOAc萃取一次。將合併的有機物經MgSO ₄乾燥，過濾，濃縮。將所得殘餘物藉由柱層析法（SiO ₂，0%至60%庚烷/EtOAc）純化以提供1.25a（85 mg，0.34 mmol，16%）。LC-MS (m/z): 250.3 [M+H] ⁺, RT = 0.97 min。

甲基 5-(3- 溴 -N- 甲基吡唑并 [1,5-a] 吡啶 -5- 甲醯胺基 )-2-( 三氟甲氧基 ) 苯甲酸酯（ 1.25b ）

向3-溴吡唑并[1,5- a]吡啶-5-甲酸（82 mg，0.341 mmol）在DCM（3 mL）中的溶液中添加草醯氯（45 mg），隨後逐滴添加DMF（1滴）。將混合物攪拌1 h，然後冷卻至0°C。添加DIPEA（132 mg），隨後添加1.25a（85 mg）並且將混合物攪拌30 min並濃縮以給出殘餘物。將殘餘物藉由柱層析法（SiO ₂，0%至100%庚烷/EtOAc）純化以提供1.25b（130 mg，0.28 mmol，83%產率）。LC-MS (m/z): 350.3 [M+H] ⁺, RT = 1.06 min。 ¹H NMR (500 MHz, 氯仿- d) δ 8.25 (d, J= 7.3 Hz, 1H), 7.95 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.83 (d, J= 2.8 Hz, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.28 (q, J= 8.8, 7.7 Hz, 3H), 6.67 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 3.94 (d, J= 2.4 Hz, 3H), 3.56 (d, J= 2.5 Hz, 3H)。

甲基 5-(3-(4- 胺基甲醯基苯基 )-N- 甲基吡唑并 [1,5-a] 吡啶 -5- 甲醯胺基 )-2-( 三氟甲氧基 ) 苯甲酸酯（ 1.25 ）

向小瓶中裝入在THF（0.9 ml）/水（0.45 ml）中的1.25b（65 mg，0.138 mmol）、(4-胺基甲醯基苯基)硼酸（39 mg）、PdCl ₂(dtbpf)（9 mg）和NEt ₃（42 mg）。將氛圍用N ₂吹掃。將小瓶在60°C下加熱25 min。將混合物用水稀釋並用EtOAc萃取3次。將合併的有機物過濾並濃縮。將殘餘物藉由HPLC（Sunfire B-9m-1050，75 mL/min，在水中的0.1% TFA）純化，以產生呈固體的1.25（42 mg，0.066 mmol，48%）。LC-MS (m/z): 513.3 [M+H] ⁺, RT = 0.95 min。 ¹H NMR (500 MHz, DMSO- d ₆) δ 8.70 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 8.48 (s, 1H), 8.04 (d, J= 2.8 Hz, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.97 - 7.92 (m, 2H), 7.88 (s, 1H), 7.67 (dd, J= 8.8, 2.8 Hz, 1H), 7.55 (d, J= 8.0 Hz, 2H), 7.48 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 7.36 (s, 1H), 6.92 (d, J= 7.1 Hz, 1H), 3.84 (s, 3H), 3.45 (s, 3H)。

實例 1.26 ：甲基 5-(N- 甲基 -3-(4-( 甲基胺基甲醯基 ) 苯基 ) 吡唑并 [1,5-a] 吡啶 -5- 甲醯胺基 )-2-( 三氟甲氧基 ) 苯甲酸酯（ 1.26 ）

甲基5-( N-甲基-3-(4-(甲基胺基甲醯基)苯基)吡唑并[1,5- a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-(三氟甲氧基)苯甲酸酯（1.26）

向小瓶中裝入在THF（0.9 ml）/水（0.45 ml）中的1.25b（65 mg，0.138 mmol）、(4-(甲基胺基甲醯基)苯基)硼酸（42 mg）、PdCl ₂(dtbpf)（9 mg）和NEt ₃（42 mg）。將氛圍用N ₂吹掃。將小瓶在60°C下加熱25 min。將混合物用水稀釋並用EtOAc萃取3次。將合併的有機物過濾並濃縮。將殘餘物藉由HPLC（Sunfire B-9m-2060，75 mL/min，在水中的0.1% TFA）純化，以產生呈固體的1.26（48 mg，0.075 mmol，55%）。LC-MS (m/z): 527.3 [M+H] ⁺, RT = 0.99 min。 ¹H NMR (400 MHz, DMSO- d ₆) δ 8.70 (dd, J= 7.2, 0.9 Hz, 1H), 8.46 (d, J= 12.4 Hz, 2H), 8.04 (d, J= 2.7 Hz, 1H), 7.90 (dd, J= 10.3, 3.6 Hz, 3H), 7.66 (dd, J= 8.8, 2.8 Hz, 1H), 7.55 (d, J= 8.1 Hz, 2H), 7.48 (dd, J= 8.7, 1.3 Hz, 1H), 6.92 (dd, J= 7.2, 1.8 Hz, 1H), 3.85 (s, 4H), 3.45 (s, 3H), 2.82 (d, J= 4.4 Hz, 3H)。

實例 1.27 ：甲基 5-(3-(4- 胺基甲醯基苯基 )-N- 甲基吡唑并 [1,5-a] 吡啶 -5- 甲醯胺基 )-2- 氰基苯甲酸酯（ 1.27 ）

甲基 2- 氰基 -5-( 甲基胺基 ) 苯甲酸酯（ 1.27a ）

向微波小瓶中裝入甲基2-氰基-5-氟苯甲酸酯（200 mg，1.1 mmol）、在THF（1.7 mL）中的2.0 M甲胺和DMA（1.1 mL）。在130°C下，在微波中將混合物攪拌30 min。將揮發物去除，並將殘餘物藉由柱層析法純化以提供1.27a（160 mg，0.84 mmol，75%）。LC-MS (m/z): 191.1 [M+H] ⁺, RT = 0.65 min。

甲基 5-(3- 溴 -N- 甲基吡唑并 [1,5-a] 吡啶 -5- 甲醯胺基 )-2- 氰基苯甲酸酯（ 1.27b ）

將3-溴吡唑并[1,5- a]吡啶-5-甲酸（60 mg，0.25 mmol）在DCM（2.5 mL）中的溶液用草醯氯（95 mg）和一滴DMF處理。在室溫下將所得溶液攪拌一小時，然後濃縮並在高真空下短暫乾燥。將殘餘物溶解於DCM（2.5 mL）中。添加DIPEA（0.131 mL）和1.27a（65 mg）。將混合物攪拌3 hr並且在減壓下濃縮。將殘餘物藉由矽膠層析法純化以提供1.27b（62 mg，0.150 mmol，60%產率）。LC-MS (m/z): 413.0 [M+H] ⁺, RT = 0.83 min。

甲基 5-(3-(4- 胺基甲醯基苯基 )-N- 甲基吡唑并 [1,5-a] 吡啶 -5- 甲醯胺基 )-2- 氰基苯甲酸酯（ 1.27 ）

向微波小瓶中裝入1.27b（62.0 mg，0.15 mmol）、(4-胺基甲醯基苯基)硼酸（37 mg）、PdCl ₂(dppf)（22 mg）和K ₃PO ₄（96 mg）、二㗁𠮿（1.2 mL）和水（250 µl）。將小瓶密封，用N ₂吹掃10 min，然後置於100°C微波中20 min。將混合物過濾並濃縮。將殘餘物藉由HPLC（Sunfire B-9m-1050，75 mL/min，在水中的0.1% TFA）純化，以產生呈固體的1.27（27 mg，0.06 mmol，40%）。LC-MS (m/z): 454.5 [M+H] ⁺, RT = 0.68 min。 ¹H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.37 (dd, J= 7.3, 0.9 Hz, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.03 (d, J= 2.3 Hz, 1H), 7.92 - 7.84 (m, 2H), 7.75 - 7.68 (m, 2H), 7.43 - 7.30 (m, 3H), 6.79 (dd, J= 7.3, 1.9 Hz, 1H), 6.24 (s, 1H), 5.74 (s, 1H), 4.01 (s, 3H), 3.59 (s, 3H)。

實例 2.1 ：甲基 2- 氯 -5-(N- 甲基 -3-(4-( 甲基胺基甲醯基 ) 苯基 ) 咪唑并 [1,2-a] 吡𠯤 -6- 甲醯胺基 ) 苯甲酸酯

甲基 5-(3- 溴 -N- 甲基咪唑并 [1,2-a] 吡𠯤 -6- 甲醯胺基 )-2- 氯苯甲酸酯（ 2.1a ）

向燒瓶中裝入3-溴咪唑并[1,2- a]吡𠯤-6-甲酸（300 mg，1.24 mmol）、1.01c（240 mg）和吡啶（10 mL）。將燒瓶冷卻至0°C並緩慢添加POCl ₃（570 mg）。去除冰浴。在30 min處，將混合物倒入冰水中並將水層用DCM萃取。將合併的有機物用鹽水洗滌，經Na ₂SO ₄乾燥，過濾並濃縮，以提供足夠乾淨以用於下一反應的2.1a（400 mg，0.94 mmol，76%）。LC-MS (m/z): 425.0 [M+3] ⁺, RT = 0.87 min。

甲基 2- 氯 -5-(N- 甲基 -3-(4-( 甲基胺基甲醯基 ) 苯基 ) 咪唑并 [1,2-a] 吡𠯤 -6- 甲醯胺基 ) 苯甲酸酯（ 2.1 ）

向密封管中裝入2.1a（200 mg，0.472 mmol）、(4-(甲基胺基甲醯基)苯基)硼酸（84 mg）、二㗁𠮿（4 mL）和水（1 mL）。添加CsF（143 mg），隨後添加Pd(amphos)Cl ₂（16 mg）。將混合物在90°C下加熱1.5 h。將反應混合物冷卻，用水淬滅並用乙酸乙酯萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，經Na ₂SO ₄乾燥，過濾並在減壓下濃縮。將殘餘物藉由HPLC（LUNA Phenomenex，250 mm × 21.2 mm，20 mL/min，A = 在水中的0.02% TFA，B = MeCN，經2 min 20%-30% B，經6 min 30%-60% B）純化，以提供呈固體的2.1（40 mg，0.083 mmol，17%）。LC-MS (m/z): 478.1 [M+1] ⁺, RT = 0.52 min。 ¹H NMR (300 MHz, DMSO- d ₆) δ8.88 (s, 2H), 8.69 - 8.50 (m, 1H), 8.21 (s, 1H), 8.05 (d, J= 7.9 Hz, 2H), 7.89 - 7.72 (m, 3H), 7.45 (s, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.44 (s, 3H), 2.84 (d, J= 4.9 Hz, 3H)。

實例 3.1 ：甲基 2- 氯 -5-(N- 甲基 -3-(4-( 甲基胺基甲醯基 ) 苯基 ) 吡唑并 [1,5-c] 嘧啶 -5- 甲醯胺基 ) 苯甲酸酯

乙基吡唑并 [1,5-c] 嘧啶 -5- 甲酸酯（ 3.1a ）

將1 H-吡唑-5-甲醛（14.4 g，150 mmol）吸收於THF（150 mL）中。添加DBU（5.71 g）和乙基2-異氰基乙酸乙酯（17 g）。將混合物在55°C下加熱過夜，然後冷卻至室溫並去除揮發物。將粗材料藉由快速柱層析法（在庚烷中0至100% EtOAc）純化以提供3.1a（13.5 g，70.6 mmol，47%）。LC-MS (m/z): 192.2 [M+H] ⁺, RT = 0.49 min。 ¹H NMR (500 MHz, 氯仿- d) δ 9.33 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 6.80 (s, 1H), 4.49 (q, J= 7.5 Hz, 2H), 1.46 (t, J= 7.2Hz, 2H)。

乙基 3- 溴吡唑并 [1,5-c] 嘧啶 -5- 甲酸酯（ 3.1b ）

將3.1a（6.8 g，36 mmol）溶解於DCM（178 mL）中。添加NBS（8.2 g）。攪拌2 h後，添加另外的NBS（4 g）。2 h後，用飽和硫代硫酸酯水溶液淬滅反應。分離層，並將有機層用飽和碳酸氫鹽水溶液洗滌、經Na ₂SO ₄乾燥、過濾並濃縮以提供3.1b（9.5 g，35 mmol，98%）。LC-MS (m/z): 272.1 [M+H] ⁺, RT = 0.67 min。 ¹H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 9.25 (d, J= 1.4 Hz, 1H), 8.32 (d, J= 1.4 Hz, 1H), 8.15 (s, 1H), 4.50 (q, J= 7.1 Hz, 3H), 1.46 (t, J= 7.1 Hz, 4H)。

3- 溴吡唑并 [1,5-c] 嘧啶 -5- 甲酸（ 3.1c ）

將3.1b（9.45 g，35.0 mmol）溶解於甲醇（175 mL）中。緩慢添加2.0 M NaOH（87 mL）並將混合物攪拌45 min。用10% HCl水溶液將反應酸化至約2的pH，然後用EtOAc分配。將混合物通過布氏（Buechener）漏斗過濾以收集沈澱。分離濾液並濃縮有機層。將合併的固體在真空烘箱中乾燥以提供3.1c（7.26 g，30.0 mmol，86%）。LC-MS (m/z): 242.1 [M+H] ⁺, RT = 0.47 min。 ¹H NMR (500 MHz, DMSO- d6) δ 9.62 (d, J= 1.4 Hz, 1H), 8.53 (s, 1H), 8.15 (d, J= 1.4 Hz, 1H)。

甲基 5-(3- 溴 -N- 甲基吡唑并 [1,5-c] 嘧啶 -5- 甲醯胺基 )-2- 氯苯甲酸酯（ 3.1d ）

將3.1c（632 mg，2.61 mmol）在DCM（2.6 mL）中的溶液用草醯氯（251 µl）和DMF（10 µl，0.131 mmol）處理。將所得溶液攪拌30 min。添加NEt ₃（909 µL），隨後添加在1 mL DCM中的1.01c（616 mg）。將混合物攪拌3 h，然後用水和EtOAc分配。將水層用EtOAc萃取。將合併的有機物經Na ₂SO ₄乾燥，過濾，濃縮並藉由快速柱層析法純化以提供3.1a（630 mg，1.5 mmol，57.0%產率），將其無需進一步純化用於下一步驟。LC-MS (m/z): 423.2 [M+1] ⁺, RT = 0.88 min。

甲基 2- 氯 -5-(N- 甲基 -3-(4-( 甲基胺基甲醯基 ) 苯基 ) 吡唑并 [1,5-c] 嘧啶 -5- 甲醯胺基 ) 苯甲酸酯（ 3.1 ）

向小瓶中裝入(4-(甲基胺基甲醯基)苯基)硼酸（202 mg）、3.1d（342 mg，0.807 mmol）、THF（8.5 mL）、水（1.6 mL）和NEt ₃（338 µl），然後用N ₂吹掃。添加PdCl ₂(dtbpf)（10.52 mg）。將混合物在53°C下攪拌8 h。添加另外的(4-(甲基胺基甲醯基)苯基)硼酸（100 mg）和PdCl ₂(dtbpf)（30 mg）並將混合物再加熱10 min。將混合物用EtOAc稀釋，用水、鹽水洗滌，並濃縮。將殘餘物藉由快速柱層析法然後藉由HPLC（胺基柱C3_20-25，CO ₂/MeOH，80 mL/min）純化，以給出呈固體的3.1（230 mg，0.476 mmol，59.0%產率）。LC-MS (m/z): 478.4 [M+1] ⁺, RT = 0.86 min。 ¹H NMR (500 MHz, DMSO- d ₆) δ 9.43 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 8.52 (q, J= 4.4 Hz, 1H), 8.31 (d, J= 1.5 Hz, 1H), 8.00 - 7.94 (m, 2H), 7.86 - 7.79 (m, 3H), 7.50 (d, J= 10.8 Hz, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.46 (s, 3H), 2.84 (d, J= 4.5 Hz, 3H)。

實例 4.1 ：甲基 2-(3-(4- 胺基甲醯基苯基 )-N- 甲基吡唑并 [1,5-a] 吡啶 -5- 甲醯胺基 )-5- 氯苯甲酸酯（ 4.1 ）

甲基 2-(( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 )-5- 氯苯甲酸酯（ 4.1a ）

將甲基2-胺基-5-氯苯甲酸酯（2.0 g，11 mmol）吸收於DCM（72 mL）中。依次添加Boc ₂O（3.53 g）和DMAP（0.1 g）。將混合物攪拌過夜，濃縮並藉由快速柱層析法純化以給出4.1a（1.2 g，4.3 mmol，40%產率）。LC-MS (m/z): 186.1 [M+H] ⁺, RT = 1.11 min。 ¹H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 10.19 (s, 1H), 8.42 (d, J= 9.1 Hz, 1H), 7.96 (d, J= 2.6 Hz, 1H), 7.44 (dd, J= 9.1, 2.6 Hz, 1H), 3.92 (s, 3H), 1.52 (s, 10H)。

甲基 2-(( 三級丁氧基羰基 )( 甲基 ) 胺基 )-5- 氯苯甲酸酯（ 4.1b ）

將4.1a（1.2 g，4.2 mmol）吸收於DMF（28.0 ml）中並將燒瓶在冰浴中冷卻。添加60% NaH（0.25 g）。攪拌30 min後，添加碘甲烷（0.39 mL）並將燒瓶加溫至室溫過夜。將混合物用EtOAc稀釋，用水、鹽水洗滌，經Na ₂SO ₄乾燥，並濃縮以給出4.1b（1.3 g，4.2 mmol，99%產率）。LC-MS (m/z): 200.1 [M+H-( t-BuO ₂C)] ⁺, RT = 0.92 min。

甲基 5- 氯 -2-( 甲基胺基 ) 苯甲酸酯（ 4.1c ）

將4.1b（1.2 g，4.0 mmol）吸收於DCM（4.0 mL）中並將燒瓶在冰浴中冷卻。添加TFA（3.1 mL）。30 min後，在真空下去除揮發物以提供呈TFA鹽的4.1c（0.80 g，4.0 mmol，100%），將其不經純化使用。LC-MS (m/z): 200.1 [M+H] ⁺, RT = 0.86 min。

甲基 2-(3- 溴 -N- 甲基吡唑并 [1,5-a] 吡啶 -5- 甲醯胺基 )-5- 氯苯甲酸酯（ 4.1d ）

將3-溴吡唑并[1,5- a]吡啶-5-甲酸（0.96 g，4.0 mmol）在DCM（40.0 mL）中的溶液用草醯氯（1.5 g）和若干滴DMF處理。將所得溶液攪拌1 h，然後濃縮並在高真空下短暫乾燥。將所得醯基氯用DCM（40 mL）稀釋，並向此溶液中添加4.1c（0.80 g）和DIPEA（2.6 g）。將所得混合物攪拌12 h。將溶劑在減壓下去除，並將殘餘物藉由矽膠層析法純化以提供4.1d（1.2 g，2.8 mmol，71%）。LC-MS (m/z): 422.1 [M+1] ⁺, RT = 0.87 min。

甲基 2-(3-(4- 胺基甲醯基苯基 )-N- 甲基吡唑并 [1,5-a] 吡啶 -5- 甲醯胺基 )-5- 氯苯甲酸酯（ 4.1 ）

在微波小瓶中，4.1d（0.79 g，1.9 mmol）、(4-胺基甲醯基苯基)硼酸（0.46 g）、PdCl ₂(dtbpf)（0.27 g）和K ₃PO ₄（1.2 g）吸收於二㗁𠮿（15 mL）和水（3.1 mL）中。將小瓶用N ₂吹掃10 min，然後在100°C微波中加熱10 min。將混合物過濾，濃縮，並藉由HPLC（胺基柱C3_20-25，CO ₂/MeOH，80 mL/min）純化以產生呈黃色固體的4.1（650 mg，1.4 mmol，75%產率）。LC-MS (m/z): 463.2 [M+1] ⁺, RT = 0.76 min。 ¹H NMR (400 MHz, 氯仿- d) δ 8.69 (d, J= 1.8 Hz, 1H), 8.51 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.12 (d, J= 8.2 Hz, 2H), 8.02 (s, 1H), 7.84 (dd, J= 8.6, 2.1 Hz, 1H), 7.56 (d, J= 8.2 Hz, 2H), 7.38 (s, 1H), 6.78 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 3.96 (s, 3H), 3.64 (s, 3H)。

生物學測定

本發明之用於抑制宿主細胞中的寄生蟲血症之方法中使用的化合物的活性可以藉由以下的測定來評估。應當理解的是該等測定法說明了本發明，而不以任何方式限制本發明之範圍。

培養並維持宿主細胞和隱孢子蟲寄生蟲

在37°C和5% CO ₂下在潮濕培養箱中，將人類回盲腸結腸直腸腺癌細胞（HCT-8 [HRT-18] ATCC，CCL-34）維持在完全生長培養基（RPMI-1640培養基（吉布科公司（Gibco）），11875），補充有10%熱滅活的馬血清（吉布科公司），26050）、1X MEM非必需胺基酸（吉布科公司），11140）、10 mM HEPES（吉布科公司），15630）、100單位/mL青黴素、和100單位/mL鏈黴素）中的T-175燒瓶（康寧公司（Corning），431080）中。將培養物每週傳代兩次，使用10 mL不含Ca ²⁺和Mg ²⁺的1X磷酸鹽緩衝鹽水（PBS）（吉布科公司，20012）進行洗滌，並將3-5 mL/T-175 燒瓶的TrypLE Express酶（吉布科公司（Gibco），12604）解離黏附細胞。

將從亞利桑那大學斯特林實驗室（Sterling Laboratory, University of Arizona）購買的小球隱孢子蟲卵囊（Iowa分離株）用不連續蔗糖和氯化銫離心梯度從被感染的小牛糞便中純化，並儲存在含有0.01%吐溫20、100單位/mL青黴素和100單位/mL建它黴素的PBS溶液中。

人隱孢子蟲卵囊從塔夫茨大學卡明斯獸醫學院（Tufts University Cummings School of Veterinary Medicine（由Dr. Saul Tzipori贊助））購買。人隱孢子蟲卵囊從被感染的限菌小豬糞便中純化，並儲存在含有0.01%吐溫-20、100單位/mL青黴素和100單位/mL建它黴素的PBS溶液中。在感染實驗中使用從脫落日起少於三月齡的小球隱孢子蟲和人隱孢子蟲卵囊。

脫囊和感染：脫囊和感染方案係按照既定之方法並進行了一些修改而製定的（Gut和Nelson, 1999，Upton等人, 1995，Bessoff等人, 2013）。簡言之，將卵囊在1X Hank’s平衡鹽溶液（HBSS）（吉布科公司，14025）中1 mL的10 mM鹽酸中引發10分鐘，伴隨在37°C下在Eppendorf熱混合儀中以1000 rpm攪拌，然後藉由在25°C下以13,000 rpm離心3分鐘用1 mL室溫非酸性1X HBSS洗滌兩次。將引發的卵囊進一步在1x10 ⁶卵囊/µL的濃度下、在25°C下、在由以下組成的寄生蟲感染培養基中脫囊10分鐘：Leibovitz’s L-15培養基的預熱和預充氣的1 : 1配製物（吉布科公司，11415）和UltraCULTURE培養基（龍沙公司（Lonza），12-725F），補充有2 mM牛磺膽酸鈉（西格瑪公司（Sigma），86339-1）、10%熱滅活的馬血清、和200 µM L-抗壞血酸（西格瑪公司，95210）。將HCT-8單層細胞按指定的感染複數（MOI）用脫囊的隱孢子蟲感染。所有用於隨後測定的稀釋都在不含牛磺膽酸鈉的寄生蟲感染培養基中進行。使用C-Chip一次性血細胞計數器（納恩泰公司（NanoEnTek），DHC-N01）在顯微鏡下計數預脫囊的卵囊。

化合物和測定板製備：在稀釋進源板之前，將化合物粉末溶解於淨DMSO（飛世爾公司（Fisher），D4121）至10 mM並儲存在4°C下。使用Microlab STAR液體處理器（漢密爾頓公司（Hamilton））來進行稀釋以獲得一式兩份的含有從10 mM起十點或八點三倍稀釋液的化合物源板。在點樣進測定板之前，將源板儲存在4°C下。在投與前，將所有化合物源板平衡至室溫。使用Echo聲學液體處理器（LABCYTE公司，550）將來自源板的指定體積的化合物點樣到測定板中，使得最終DMSO濃度小於0.5%。每個測定板指定數量的DMSO處理的陰性對照孔和研究充分的有效活性化合物在100 nM下作為陽性對照。作為品質控制，所有陽性和陰性對照孔都用來計算每個板的Z’-值和信噪比（S:N）。

藉由基於致細胞病變效應（ CPE ）測定進行 IC ₅₀ 確定：隱孢子蟲屬物種係感染腸上皮細胞的專性細胞內寄生蟲，並且在寄生蟲排出（parasite egress）時殺死宿主細胞。在患者中，已經證明隱孢子蟲感染誘發由絨毛腸上皮細胞損失引起的嚴重絨毛萎縮。上皮細胞的損失係由快速的寄生蟲侵襲/增殖/排出和促炎性的免疫應答兩者造成的（Adams等人, 1994，Griffiths等人, 1994）。我們已經使用CellTiter-Glo試劑在 C. spp感染的宿主細胞的生存力損失的HCT-8細胞中觀察到連續的致細胞病變效應（CPE）。

按對小球隱孢子蟲1 : 2和對人隱孢子蟲1 : 4的MOI（宿主與寄生蟲），將在T-175燒瓶中匯合的HCT-8細胞直接感染脫囊的卵囊。在對照燒瓶中使用NucleoCounter（Chemometec公司，NC-100）來確定宿主細胞數。將感染的單層在37°C下孵育3小時，隨後用10 mL 1X PBS輕輕洗滌一次，之後用3-5 mL的TrypLE解離。將感染的細胞沈澱重新懸浮在90%完全生長培養基和10%寄生蟲感染培養基（不含牛磺膽酸鈉）中。使用MultiDrop液體處理器（賽默飛世爾科技公司（ThermoScientific），5840300）將2.5 × 10 ⁴批感染的HCT-8細胞以30 µL的總孔體積接種在384孔板（格瑞那公司（Greiner），789091）的每個孔中。在化合物投與前，將所有板在37°C下孵育24小時。使用Echo聲學液體處理器（LABCYTE公司，550）將化合物從源板以各種濃度按每孔60 nL點樣，並且將處理進行48小時。化合物處理之後，在生物安全櫃中將測定板平衡至室溫一小時以最小化溫度梯度效應。將細胞溶解並藉由使用Multidrop添加20 µL/孔的Cell-Titer Glo 2.0（普洛麥格公司（Promega），G9243）來測量宿主細胞生存力。按0.1秒/孔的速率藉由Clarity光度計（拜爾泰克公司（BioTek））測量發光讀數。將原始數據檔案輸出並將結果表示為百分比刺激，其中100%刺激相當於活性對照孔的平均值，且0%刺激相當於DMSO處理的陰性對照孔的平均值。使用諾華公司軟體來分析細胞生存力曲線。

測量選定的化合物在最小化人隱孢子蟲和小球隱孢子蟲兩者的致細胞病變效應方面的有效性。結果報告在表II中，小球隱孢子蟲在第一欄中[( CpCPE EC ₅₀（µM）]且人隱孢子蟲在第四欄[( ChCPE EC ₅₀（µM）]。有效性範圍為從無效到納莫耳濃度。

藉由高含量成像（ HCI ）測定進行 IC ₅₀ 確定： 感染和化合物處理：成像測定係按照既定的隱孢子蟲屬物種標記和體外感染模型並進行了一些修改而製定的（Bessoff等人, 2013，Gut和Nelson, 1999）。簡言之，使用Multidrop Combi液體處理器（賽默飛世爾科技公司（ThermoScientific），5840300）和標準管分注用容器（standard tube dispensing cassette）（賽默飛世爾科技公司（ThermoScientific），24072670），將2 × 10 ⁴HCT-8細胞/孔按20 µL/孔接種進384孔平坦黑色透明底的OPERA測定板（格瑞那公司（Greiner），789071-G）的完全生長培養基中，並且在37°C下孵育24小時。在寄生蟲感染培養基中使用Multidrop將HCT-8細胞感染10 µL/孔1 × 10 ⁴脫囊的小球隱孢子蟲卵囊（宿主與寄生蟲MOI為1 : 0.5）或10 µL/孔4 × 10 ⁴脫囊的人隱孢子蟲卵囊（MOI 1 : 2），並在37°C下孵育。感染後24小時，使用如上所述之Echo聲學液體處理器（LABCYTE公司，550）將60 nL化合物點樣進每個孔，並將板在37°C下孵育48小時。

固定和標記：在化合物處理後，將細胞用PBS洗滌兩次，在25°C下用40 µL的4%多聚甲醛（電子顯微鏡科學公司（Electron Microscopy Sciences），15710）固定在PBS中20分鐘，並用PBS、隨後用PBS-FT（PBS中含有1%胎牛血清和0.05%吐溫-20的PBS）洗滌。為保證單層不被破壞，所有抽吸步驟的進行都允許15 µL的剩餘孔體積。將固定的細胞在25°C下透化並阻斷PBS-FT持續30分鐘。為了染色，將4 μg/mL鏈黴親和素軛合的Alexa Fluor 568（生命技術公司（Life Technologies），S11226）與2 μg/mL生物素化的毛苕子（ Vicia villosa）凝集素（載體實驗室公司（Vector Laboratories），B-1235）在PBS-FT中混合，並在25°C下孵育1小時。將結合標記通過預平衡的注射器式過濾器（賽多利斯斯泰帝公司（Sartorius Stedim），16534-K）過濾。為標記細胞內寄生蟲的生活期，將透化的細胞用20 µL Alexa568-VVL在25°C下孵育1小時。將標記的細胞用PBS-FT洗滌，隨後用PBS洗滌。最後，在檢測前將HCT-8宿主細胞核用在PBS中稀釋的5 µM Draq-5（艾博抗公司（Abcam），ab108410）複染色並儲存。

檢測：標記後，使用Opera QEHS（PerkinElmer™）將板成像。使用Nikon UPlan Apo物鏡以10x成像。在每個孔中收集九個圖像，覆蓋超過80%的孔表面。將樣本曝光於561 nm和635 nm雷射線下以分別激發Alexa Fluor® 598軛合的凝集素和DRAQ5™。雷射功率選定為2250 µW，曝光時間設置在800毫秒且焦點高度設置在5 µm。在冷卻的CCD照相機上收集螢光信號，這之前使發射光通過四頻主二向色鏡（405/488/561/635）和檢測二向色鏡（510），隨後通過發射光濾器600/40和690/50，以收集分別由標記的寄生蟲和細胞核發射的光。

分析：使用寫入Acapella®（PerkinElmer™）的定製分析腳本來分析圖像。簡言之，檢測到細胞核，然後將獲得的掩膜擴張以包含細胞質。下文中將該等對象稱為細胞體。針對每個細胞體，測量了寄生蟲通道收集的圖像的平均信號。然後藉由施加強度分界值將細胞分類為感染的細胞與未感染的細胞，且對每個孔計算細胞數和感染的細胞的百分比。使用陽性和陰性對照、使用’R’來自動優化用於將細胞分類為感染的細胞與未感染的細胞的分界值（Team, 2015）。簡言之，將分界值設置成作為將Z’因子最大化的強度閾值（Zhang等人, 1999）。將結果表示為百分比抑制，其中100%抑制相當於活性對照孔的平均值，且0%抑制相當於DMSO處理的陰性對照孔的平均值。用諾華公司內部軟體（Helios軟體應用程式，諾華生物醫學研究所，未出版），使用在以下參考文獻中描述之方法來分析數據（Fomenko等人, 2006，Kelly和Rice, 1990，Normolle, 1993，Sebaugh, 2011）（Kahm等人, 2010）。在手動處理以解決任何潛在的篩選模型或偽影，使用對照孔將每個孔的數據點歸一化，使得無效被設置為0%且完全抑制被設置為-100%。然後將數據曲線擬合進Helios軟體以計算導致只有50%細胞被感染的活性濃度。

將選定的化合物在小球隱孢子蟲上的測定結果報告於表II，第二欄[Cp HCI IC ₅₀(µM)]。選定的化合物展示出在預防宿主細胞感染中的亞微莫耳活性。

細胞毒性的確定

如前所述，確定針對人肝癌細胞系HepG2（ATCC# HB-8065）的細胞毒性（Manjunatha等人, 2015）。簡言之，將細胞按10 ⁵個細胞/孔的濃度接種，在37°C下孵育24 h並暴露於兩倍連續稀釋的化合物5天。使用細胞增殖套組II（英傑公司（Invitrogen））來監測細胞生存力。

將選定化合物的細胞毒性值報告在表II的第五欄中[HepG2 CC ₅₀(µM)]。結果顯示該化合物通常是安全的。

PI(4)K 酶法測定

小球隱孢子蟲磷脂醯肌醇 4- 激酶的桿狀病毒表現和純化：將小球隱孢子蟲PI(4)K（cgd8_4500，1114胺基酸）的全長編碼序列針對桿狀病毒表現進行密碼子優化、合成並使用BamHI和HindIII限制位點在具有胺基末端的聚組胺酸標記的框內選殖進pFastBac-HTb（英傑公司10584-027）中。重組pFastBacHTb-CpPI(4)K桿粒殖株係藉由在大腸桿菌DH10Bac（英傑公司10361-012）中的位點特異性轉座來產生的。藉由直接DNA定序來確認桿粒序列，以確認整個基因沒有突變。桿粒分離、轉染和選擇重組病毒的後續步驟係根據製造商的方案進行的（Bac-to-Bac系統# 10359，英傑公司）。

將培養在SF-900 III無血清培養基中的SF9細胞在1/200 (v/v)下用重組桿狀病毒轉染並在27°C下孵育72 h。在離心後收集沈澱並將其重新懸浮在細胞裂解緩衝液（20 mM Tris-HCl，pH 7.5，300 mM NaCl，1 mM DTT，20 mM咪唑，0.01% Triton X-100和1×不含EDTA的完全蛋白酶抑制劑混合物（羅氏診斷公司（Roche Diagnostics）04693116001））中。將細胞懸浮物藉由超音波處理裂解，並將澄清的上清液裝載到1 ml HisTrap親和柱（GE醫療集團（GE Healthcare））上，該柱用緩衝液A（20 mM Tris-HCl，pH 7.5，300 mM NaCl，1 mM DTT，20 mM咪唑，和1×不含EDTA的完全蛋白酶抑制劑混合物）預平衡。將該柱用緩衝液B（含有45 mM 咪唑的緩衝液A）洗滌並且將目的結合蛋白用緩衝液C（具有90 mM咪唑的緩衝液A）洗脫。將含有CpPI(4)K的級分合併，用Amicon Ultra-15濃縮並藉由凝膠過濾柱（Hi-Load 26/60 Superdex 200，GE醫療集團）純化，該柱用20 mM Tris、pH 7.5、300 mM NaCl、1 mM DTT和1×不含EDTA的蛋白酶抑制劑混合物平衡。藉由使用蛋白莫耳消光係數（ ε ₂₈₀ _nm= 133,810 M ⁻ ¹cm ⁻ ¹）來確定經純化的蛋白的濃度（Mw 132.39 kda）。將等分試樣快速冷凍在液氮中並立即儲存在−80°C下。

PI(4)K 酶法測定：CpPI(4)K酶法測定係如前所述並進行了一些修改而進行的（McNamara等人, 2013）。簡言之，將溶解在3%正辛基葡糖苷（羅氏診斷公司（Roche Diagnostics）10634425001）中的L-α-磷脂醯肌醇（阿凡提極地脂質公司（Avanti Polar Lipids）840046）用作PI(4)K活性測定的脂質底物。使用Transcreener ADP ₂FP檢測套組（貝爾布魯克實驗室（BellBrook）3010），在黑色固體384孔板（康寧公司（Corning）3575）中測定CpPI(4)K。最終測定體積係10 μl且含有3 nM分別構建在10 mM Tris、pH 7.5、1 mM DTT、3 μM ATP、5 mM Mn2+、0.05% Triton X-100和10 μM磷脂醯肌醇/辛基葡糖苷中的CpPI(4)K。在室溫下將酶反應進行50分鐘，並藉由添加10 μl含有1×終止緩衝液（50 mM HEPES、pH7.5、400 mM NaCl、20 mM EDTA、和0.02% Brij-35）的檢測混合物、2 nM AMP Alexa Fluor 633示蹤劑、和20 μg ml ⁻ ¹ADP抗體來停止反應。將螢光偏振測量在Infinite M1000讀板機（帝肯公司（Tecan））上進行，其中λex = 635 nm且λem = 680 nm（20-nm頻寬）。使用Graphpad Prism軟體來計算IC ₅₀值。

該等化合物展示出亞微莫耳抑制值，因此係小球隱孢子蟲PI(4)K酶的有效抑制劑。

將所得IC ₅₀值總結於下表2中：+≥1 µM；1 µM＞++≥0.1 µM；0.1 µM＞+++

實例編號	化合物名稱	(a) C.p.* PI(4)K IC ₅₀（µM）	(b) C.p.* CPE EC ₅₀（µM）	(c) C.h.* CPE EC ₅₀（µM）	(d) H.s.* PI(4)K IC ₅₀（µM）
1.01	甲基5-((三級丁氧基羰基)胺基)-2-氯苯甲酸酯	+++	+++	+++	++
1.02	三級丁基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)- N-甲基吡唑并[1,5- a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氯苯甲酸酯	+++	++
1.03	5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)- N-甲基吡唑并[1,5- a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氯苯甲酸	+++	+		++
1.04	2-(甲硫基)乙基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)- N-甲基吡唑并[1,5- a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氯苯甲酸酯	+++	+
1.05	異丁基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)- N-甲基吡唑并[1,5- a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氯苯甲酸酯	+++	++
1.06	2-甲氧基-2-側氧基乙基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)- N-甲基吡唑并[1,5- a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氯苯甲酸酯	+++	+
1.07	噻唑-5-基甲基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)- N-甲基吡唑并[1,5- a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氯苯甲酸酯	+++	++
1.08	2-𠰌啉代乙基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)- N-甲基吡唑并[1,5- a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氯苯甲酸酯	+++	++		+
1.09	乙基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)- N-甲基吡唑并[1,5- a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氯苯甲酸酯	+++	++
1.10	2,2,2-三氟乙基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氯苯甲酸酯	+++	+
1.11	2-甲氧基乙基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)-N-甲基吡唑并[1,5- a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氯苯甲酸酯	+++	++
1.12	2-(二甲基胺基)-2-側氧基乙基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)-N-甲基吡唑并[1,5- a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氯苯甲酸酯	+++	++
1.13	異丙基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)- N-甲基吡唑并[1,5- a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氯苯甲酸酯	+++	++
1.14	外消旋-1-((乙氧基羰基)氧基)乙基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)- N-甲基吡唑并[1,5- a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氯苯甲酸酯	++	+		+
1.15	外消旋-(四氫呋喃-2-基)甲基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氯苯甲酸酯	+++	++
1.16	甲基2-氯-5-( N-甲基-3-(4-(甲基胺基甲醯基)苯基)吡唑并[1,5- a]吡啶-5-甲醯胺基)苯甲酸酯	+++	+++	+++	++
1.17	三級丁基2-氯-5-(N-甲基-3-(4-(甲基胺基甲醯基)苯基)吡唑并[1,5- a]吡啶-5-甲醯胺基)苯甲酸酯	+++	+++
1.18	2-氯-5-( N-甲基-3-(4-(甲基胺基甲醯基)苯基)吡唑并[1,5- a]吡啶-5-甲醯胺基)苯甲酸	+++	+		++
1.19	2-𠰌啉代乙基2-氯-5-( N-甲基-3-(4-(甲基胺基甲醯基)苯基)吡唑并[1,5- a]吡啶-5-甲醯胺基)苯甲酸酯	+++	++		++
1.20	(5-甲基-2-側氧基-1,3-二氧雜環戊烯-4-基)甲基2-氯-5-( N-甲基-3-(4-(甲基胺基甲醯基)苯基)吡唑并[1,5- a]吡啶-5-甲醯胺基)苯甲酸酯
1.21	甲基2-氯-5-( N-甲基-3-(2-甲基-4-(胺基甲醯基)苯基)吡唑并[1,5- a]吡啶-5-甲醯胺基)苯甲酸酯	+++	++		+
1.22	甲基2-氯-5-( N-甲基-3-(3-甲基-4-(胺基甲醯基)苯基)吡唑并[1,5- a]吡啶-5-甲醯胺基)苯甲酸酯	++	+		+
1.23	甲基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)吡唑并[1,5- a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氯苯甲酸酯	+	+		+
1.24	甲基2-氯-5-(3-(4-(甲基胺基甲醯基)苯基)吡唑并[1,5- a]吡啶-5-甲醯胺基)苯甲酸酯	+	+		+
1.25	甲基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)- N-甲基吡唑并[1,5- a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-(三氟甲氧基)苯甲酸酯	+++	++		+
1.26	甲基5-( N-甲基-3-(4-(甲基胺基甲醯基)苯基)吡唑并[1,5- a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-(三氟甲氧基)苯甲酸酯	+++	++
1.27	甲基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)- N-甲基吡唑并[1,5- a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氰基苯甲酸酯	+++	+++		+
2.1	甲基2-氯-5-( N-甲基-3-(4-(甲基胺基甲醯基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡𠯤-6-甲醯胺基)苯甲酸酯	+++	++		+
3.1	甲基2-氯-5-( N-甲基-3-(4-(甲基胺基甲醯基)苯基)吡唑并[1,5- c]嘧啶-5-甲醯胺基)苯甲酸酯	+++	++	++	+
4.1	甲基2-(3-(4-胺基甲醯基苯基)- N-甲基吡唑并[1,5- a]吡啶-5-甲醯胺基)-5-氯苯甲酸酯	+++	+++	+++	++

應理解，本文描述的實例和實施方式僅用於舉例說明目的，其各種修飾或改變對於熟悉該項技術者將是明瞭的，並包括在本申請的精神和範圍內和所附申請專利範圍的範圍內。出於所有目的，本文引用的所有出版物、專利、和專利申請都藉由引用特此併入。

無

Claims

一種根據式I之化合物，
或其藥學上可接受的鹽、互變異構物或立體異構物，其中 P係0、1、2、或3； Y ¹、Y ²、Y ³、Y ⁴、Y ⁵、或Y ⁶中的每一個獨立地是C或N； R ¹、R ²、R ³或R ⁴中的每一個獨立地是氫或C _1-6烷基；每個R ⁵獨立地選自由以下組成之群組：氫、C _1-6烷基、氰基、-C(O)C _1-6烷基；鹵代、鹵代C _1-6烷基、和-S(O) ₂C _1-6烷基； R ⁶選自由以下組成之群組： a) 氫，和 b) 未經取代的或被獨立地選自由以下組成之群組的1-3個取代基取代的C _1-6烷基： i) C _1-6烷氧基， ii) 鹵代， iii) 硫代C _1-6烷基， iv) 未經取代的或被獨立地選自由側氧基和C _1-6烷基組成之群組的1-3個取代基取代的C _4-6雜環烷基； v) 未經取代的或被1-3個C _1-6烷基取代基取代的C _5-6雜芳基； vi) -C(O)R ⁷，和 vii) -C(O)NR ⁷R ⁷，其中每個R ⁷獨立地是氫或C _1-6烷基。
如請求項1所述之化合物，其中： Y ²和Y ⁵係N，且Y ¹、Y ³、Y ⁴、和Y ⁶係C。
如請求項1所述之化合物，其中： Y ³和Y ⁵係N，且Y ¹、Y ²、Y ⁴、和Y ⁶係C。
如請求項1所述之化合物，其中： Y ³係N，且Y ¹、Y ²、Y ⁴、Y ⁵、和Y ⁶係C。
如請求項1所述之化合物，其中該化合物具有式Ia：
Ia。
如請求項5所述之化合物，其中 R ¹、R ²和R ³係氫，且R ⁴係C _1-6烷基；。
如請求項5所述之化合物，其中 R ⁴係甲基。
如請求項5所述之化合物，其中 R ⁵係鹵代。
如請求項5所述之化合物，其中 R ⁵係氯。
如請求項1所述之化合物，其中該化合物選自由以下組成之群組：甲基5-((三級丁氧基羰基)胺基)-2-氯苯甲酸酯；三級丁基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氯苯甲酸酯； 5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氯苯甲酸； 2-(甲硫基)乙基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氯苯甲酸酯；異丁基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氯苯甲酸酯； 2-甲氧基-2-側氧基乙基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氯苯甲酸酯；噻唑-5-基甲基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氯苯甲酸酯； 2-𠰌啉代乙基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氯苯甲酸酯；乙基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氯苯甲酸酯； 2,2,2-三氟乙基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氯苯甲酸酯； 2-甲氧基乙基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氯苯甲酸酯； 2-(二甲基胺基)-2-側氧基乙基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氯苯甲酸酯異丙基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氯苯甲酸酯；外消旋-1-((乙氧基羰基)氧基)乙基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氯苯甲酸酯；外消旋-(四氫呋喃-2-基)甲基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氯苯甲酸酯；甲基2-氯-5-(N-甲基-3-(4-(甲基胺基甲醯基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)苯甲酸酯；三級丁基2-氯-5-(N-甲基-3-(4-(甲基胺基甲醯基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)苯甲酸酯； 2-氯-5-(N-甲基-3-(4-(甲基胺基甲醯基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)苯甲酸； 2-𠰌啉代乙基2-氯-5-(N-甲基-3-(4-(甲基胺基甲醯基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)苯甲酸酯； (5-甲基-2-側氧基-1,3-二氧雜環戊烯-4-基)甲基2-氯-5-(N-甲基-3-(4-(甲基胺基甲醯基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)苯甲酸酯；甲基2-氯-5-(N-甲基-3-(2-甲基-4-(胺基甲醯基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)苯甲酸酯；甲基2-氯-5-(N-甲基-3-(3-甲基-4-(胺基甲醯基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)苯甲酸酯；甲基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氯苯甲酸酯；甲基2-氯-5-(3-(4-(甲基胺基甲醯基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)苯甲酸酯；甲基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-(三氟甲氧基)苯甲酸酯；甲基5-(N-甲基-3-(4-(甲基胺基甲醯基)苯基)吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-(三氟甲氧基)苯甲酸酯；甲基5-(3-(4-胺基甲醯基苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)-2-氰基苯甲酸酯；甲基2-氯-5-(N-甲基-3-(4-(甲基胺基甲醯基)苯基)咪唑并[1,2-a]吡𠯤-6-甲醯胺基)苯甲酸酯；甲基2-氯-5-(N-甲基-3-(4-(甲基胺基甲醯基)苯基)吡唑并[1,5-c]嘧啶-5-甲醯胺基)苯甲酸酯；和甲基2-(3-(4-胺基甲醯基苯基)-N-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-5-甲醯胺基)-5-氯苯甲酸酯。
如請求項1所述之化合物，其中該化合物能夠抑制或調節隱孢子蟲原生動物的活性。
如請求項11所述之化合物，其中該隱孢子蟲原生動物係人隱孢子蟲或小球隱孢子蟲。
一種藥物組成物，其包含至少一種如請求項1所述之化合物或其藥學上可接受的鹽以及藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
如請求項13所述之藥物組成物，其進一步包含第二治療劑。
一種用於治療、抑制、改善或根除由隱孢子蟲原生動物引起的隱孢子蟲病的病理和/或症狀之方法，該方法包括向受試者投與治療有效量的如請求項1所述之化合物或如請求項13所述之組成物，其中該投與可與第二藥劑組合。
如請求項15所述之方法，其中該隱孢子蟲原生動物係人隱孢子蟲或小球隱孢子蟲。
如請求項15或16所述之方法，其中該藥劑係如請求項1至12中任一項所述之化合物。