TW202224677A - 一種化合物在製備治療或預防病毒性肝炎用藥物中的應用 - Google Patents

Abstract

本發明提供了一種化合物在製備治療或預防病毒性肝炎用藥物中的應用。所述化合物為式1的化合物或其藥學上可接受的鹽，較佳地，所述病毒性肝炎為B型肝炎。本發明還提供了用於治療或預防病毒性肝炎的藥物組合物，其包含式1的化合物或其藥學上可接受的鹽、任選的一種或多種另外的治療劑或預防劑，以及藥學上可接受的載體。

Description

一種化合物在製備治療或預防病毒性肝炎用藥物中的應用

本發明涉及抗病毒藥物的技術領域，具體地，涉及一種用於治療或預防病毒性肝炎的藥物組合物及其應用。

人B型肝炎病毒（HBV）感染是世界範圍內的重要公共健康問題。急性B肝病毒感染後，仍有8％左右發展為慢性B型肝炎感染，持續性HBV感染將導致肝硬化，甚至肝癌。我國是B型肝炎大國，B肝病毒攜帶者接近1.3億人，約占總人口的9％。儘管隨著B肝疫苗的大範圍普及，新B肝感染率得到有效控制，但B肝病毒攜帶者人口基數大，防治B肝成為我國公共健康問題的重中之重。B肝傳播途徑主要藉由垂直傳播與水平傳播。垂直傳播是指母嬰傳播；水平傳播主要藉由血液傳播。

B型肝炎的治療也是一個長期的過程，治療目標就是最大限度地抑制或消除HBV，減輕肝細胞炎症壞死及肝纖維素化，延緩和阻止疾病進展，減少和防止肝臟失代償、肝硬化、肝細胞性肝癌及其併發症的發生，從而改善生活品質和延長存活時間。

目前市場上有很多B型肝炎治療藥物，主要藉由使用干擾素或者核苷類似物進行抗病毒治療。對於干擾素而言，重組DNA白細胞干擾素（IFN-α）可抑制HBV的複製。但是干擾素在治療B肝時，往往伴隨著較強的不良反應，包括骨髓抑制，影響甲狀腺功能和抑鬱等。

核苷類似物主要藉由抑制HBV複製過程中的逆轉錄酶活性從而抑制HBV產生，臨床可用藥物包括以下類別：拉米夫定、泛昔洛韋、如阿昔洛韋、阿德福韋、恩替卡韋、替諾福韋、膦甲酸鈉等，這些藥物均有一定抑制HBV效果。

這些逆轉錄酶抑制劑雖然可以有效降低HBV DNA水平，使患者控制B肝病毒水平，但是由於其作用靶點為RNA逆轉錄成DNA的過程，對於HBV cccDNA和HBsAg的清除無直接作用。因此核苷類似物單藥治療發生HBsAg血清學轉化的概率極低，並不能真正治癒B肝，患者需要長期甚至終身服用藥物。

在長期服用上述藥物的條件下，所產生的耐藥性、巨額的醫藥費用、藥物嚴重的副作用等問題對於B肝病人來說是沉重的負擔。關鍵是，目前仍然沒有一種藥物能夠完全清除病毒達到功能性治癒B肝。因此，本領域迫切需要提供一種新的治療B型肝炎、能夠清除HBsAg、達到功能性治癒的藥物。

本發明藉由人工智慧系統，基於多個靶點和大資料分析，篩選出了具有B肝治療效果的式1的化合物，進一步藉由生物學實驗的驗證，獲得了具有清除HBsAg和HBeAg效果的式1的化合物，有望功能性治癒B肝，清除B肝病毒。

在一個實施方式中，本發明提供了式1的化合物、其衍生物或其藥學上可接受的鹽在製備用於治療或預防病毒性肝炎的藥物中的用途， 式1

， 較佳地，所述藥學上可接受的鹽選自以下的至少一種：醋酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、天冬胺酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、環戊烷丙酸鹽、二葡萄糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、延胡索酸鹽、葡庚酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙烷磺酸鹽、乳酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、甲磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、煙酸鹽、草酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽、十一烷酸鹽、鈉鹽、鈣鹽、鉀鹽、銨鹽、四乙銨鹽、甲銨鹽、二甲銨鹽和乙醇胺鹽。

在一個較佳的實施方式中，所述式1的化合物的衍生物包括其氘代產物、胺基被保護的化合物，以及鹵素取代的產物。

在一個較佳的實施方式中，其中所述衍生物包括選自化合物1-2至化合物1-4：

； 其中，在化合物1-3中，「AA」是指胺基酸殘基，即20種天然胺基酸去掉羧基後剩餘的部分。

在一個較佳的實施方式中，其中所述病毒性肝炎為B型肝炎或D型肝炎。

在一個較佳的實施方式中，其中所述藥物能夠降低B型肝炎病毒（HBV）載量、HBsAg和/或HBeAg水平。在一個較佳的實施方式中，其中所述藥物還包含一種或多種另外的治療劑或預防劑，較佳地，所述另外的治療劑或預防劑選自干擾素、PEG化的干擾素、硝唑尼特或其類似物、式A所示的化合物或者核苷類似物中的至少一種， 式A

，較佳所述核苷類似物選自恩替卡韋、富馬酸替諾福韋二吡呋酯和替諾福韋艾拉酚胺。在一個較佳的實施方式中，其中所述藥物經配製藉由選自以下的途徑施用：口服、直腸、經鼻、經肺、局部、口腔和舌下、陰道、腸胃外、皮下、肌肉內、靜脈內、皮內、鞘內和硬膜外，較佳口服施用，更佳為片劑或膠囊的形式。

本發明還提供了用於治療或預防病毒性肝炎的藥物組合物，其包含治療有效量的式1的化合物、其衍生物或其藥學上可接受的鹽以及任選的一種或多種另外的治療劑或預防劑，以及藥學上可接受的載體，較佳地，所述另外的治療劑或預防劑選自干擾素、PEG化的干擾素、硝唑尼特或其類似物、式A所示的化合物或者核苷類似物中的至少一種，所述衍生物選自化合物1-2至化合物1-4：

。 其中，在化合物1-3中，「AA」是指胺基酸殘基，即20種天然胺基酸去掉羧基後剩餘的部分。

本發明的技術方案具有以下有益效果：

1、將式1的化合物或其藥學上可接受的鹽應用於治療或預防病毒性肝炎，從而提供了一種新穎的病毒性肝炎治療選項，關鍵是能夠清除HBsAg和HBeAg，有望達到功能性治癒B肝的效果。

2、式1的化合物或其藥學上可接受的鹽能夠同時有效降低B型肝炎病毒（HBV）載量、HBsAg和/或HBeAg水平，特別是與現有的核苷類似物藥物聯用的情況下，有望清除B肝病毒，治癒B肝，避免終身服藥的痛苦。

3、作為已上市的藥物，式1的化合物塞來昔布或其藥學上可接受的鹽具有優異的臨床安全性和藥代動力學性質，具有較好的成藥性。

4、式1的化合物或其藥學上可接受的鹽能夠任選地與一種或多種另外的治療劑或預防劑進行組合，從而為後續的組合給藥設計提供了廣闊的思路，並具有協同增效的可能性。

在一個方面中，本發明提供了式1的化合物或其藥學上可接受的鹽在製備用於治療或預防病毒性肝炎的藥物中的用途， 式1

， 較佳地，所述藥學上可接受的鹽選自以下的至少一種：醋酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、天冬胺酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、環戊烷丙酸鹽、二葡萄糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、延胡索酸鹽、葡庚酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙烷磺酸鹽、乳酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、甲磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、煙酸鹽、草酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽、十一烷酸鹽、鈉鹽、鈣鹽、鉀鹽、銨鹽、四乙銨鹽、甲銨鹽、二甲銨鹽和乙醇胺鹽。

在一個較佳的實施方式中，所述式1的化合物的衍生物包括其氘代產物、胺基被保護的化合物，以及鹵素取代的產物。

在一個較佳的實施方式中，其中所述衍生物包括選自化合物1-2、化合物1-3和化合物1-4：

； 其中，在化合物1-3中，「AA」是指胺基酸殘基，即20種天然胺基酸去掉羧基後剩餘的部分，例如丙胺酸、甘胺酸等。

在一個較佳的實施方式中，其中所述病毒性肝炎為B型肝炎或D型肝炎。

在一個較佳的實施方式中，其中所述藥物能夠降低B型肝炎病毒（HBV）載量、HBsAg和/或HBeAg水平。在一個較佳的實施方式中，其中所述藥物還包含一種或多種另外的治療劑或預防劑，較佳地，所述另外的治療劑或預防劑選自干擾素、PEG化的干擾素、硝唑尼特或其類似物、式A所示的化合物或者核苷類似物中的至少一種， 式A

，較佳所述核苷類似物選自恩替卡韋、富馬酸替諾福韋二吡呋酯和替諾福韋艾拉酚胺。

在一個較佳的實施方式中，其中所述藥物經配製藉由選自以下的途徑施用：口服、直腸、經鼻、經肺、局部、口腔和舌下、陰道、腸胃外、皮下、肌肉內、靜脈內、皮內、鞘內和硬膜外，較佳口服施用，更佳為片劑或膠囊的形式。

本發明還提供了用於治療或預防病毒性肝炎的藥物組合物，其包含治療有效量的式1的化合物、其衍生物或其藥學上可接受的鹽以及任選的一種或多種另外的治療劑或預防劑，以及藥學上可接受的載體，較佳地，所述另外的治療劑或預防劑選自干擾素、PEG化的干擾素、硝唑尼特或其類似物、式A所示的化合物或者核苷類似物中的至少一種，所述衍生物選自化合物1-2、化合物1-3、化合物1-4：

。 其中，在化合物1-3中，「AA」是指胺基酸殘基，即20種天然胺基酸去掉羧基後剩餘的部分。

在另一個較佳的實施方式中，所述化合物被氘取代或同位素標記。氘取代的化合物能夠複製原化合物的活性的同時，提高該化合物的半衰期。

在一個較佳實施方式中，所述病毒性肝炎為B型肝炎。在一個較佳實施方式中，所述藥物能夠降低B型肝炎病毒（HBV）載量、HBsAg和/或HBeAg水平。式1的化合物為已知藥物塞來昔布，塞來昔布為用於緩解骨關節炎的症狀和體徵、緩解成人類風濕關節炎的症狀和體徵、治療成人急性疼痛的藥物。目前尚無其用於B肝治療的任何報導。

本申請的發明人藉由人工智慧系統分析和研究了藥物結構和靶點的大資料後意外發現這一系列化合物具有治療B肝的潛在活性。在經過了一系列生物學實驗驗證後，獲得了該具有治療B肝的治療效果的式1的化合物。

更特別地，塞來昔布及其衍生物被驗證了能夠降低HBsAg和/或HBeAg水平，這是現有的常用藥核苷類似物所不能達到的效果。這就使得塞來昔布與核苷類似物聯用來功能性治癒甚至完全清除B肝病毒成為可能。

取代基的定義 本文中所用的「氘代」是指用氫元素的同位素氘原子代替原有的氫原子的取代方式。由於本文中所用的「鹵素」是指氟、氯、溴、碘中的至少一種。本文中所用的「胺基被保護」是指-NH2基團可以被形成醯胺鍵而保護起來，並在代謝過程中藉由體內酶的降解而形成活性胺基發揮作用。例如丙胺酸等胺基酸的羧基與胺基發生脫水反應之後形成的醯胺鍵。「AA」是指胺基酸殘基，即20種天然胺基酸去掉羧基後剩餘的部分。即，利用胺基酸對活性-NH2基團形成醯胺鍵，以保護原有的活性胺基。

病毒性肝炎 病毒性肝炎的病原學分型，目前已被公認的有A、B、C、D、E五種肝炎病毒，分別寫作HAV、HBV、HCV、HDV、HEV，除B型肝炎病毒為DNA病毒外，其餘均為RNA病毒。

B型肝炎是由B型肝炎病毒引起的以肝臟病變為主的一種傳染病。臨床上以食欲減退、噁心、上腹部不適、肝區痛、乏力為主要表現。部分患者可有黃疸發熱和肝腫大伴有肝功能損害。有些患者可慢性化，甚至發展成肝硬化，少數可發展為肝癌。

B型病毒性肝炎的病原為B型肝炎病毒，縮寫為HBV，B型肝炎病毒為DNA病毒。基因組是雙鏈、環形、不完全閉合DNA。病毒最外層是病毒的外膜或稱衣膜，其內層為核心部分，核蛋白即是核心抗原（HBcAg)，不能在血清中檢出。HBsAg陽性者的血清在電子顯微鏡下可見3種顆粒，直徑為22nm的圓形和絲狀顆粒，還有較少的直徑為42埃的球形顆粒，又稱為Dane氏顆粒，是完整的HBV顆粒。

B型肝炎的標誌檢測如下：①HBsAg與抗-HBs：HBsAg陽性表示HBV目前處於感染階段，抗-HBs為免疫保護性抗體陽性示已產生對HBV的免疫力。慢性HBsAg攜帶者的診斷依據為無任何臨床症狀和體徵、肝功能正常，HBsAg持續陽性6個月以上者。②HBeAg與抗-HBe：HBeAg陽性為HBV活躍複製及傳染性強的指標，被檢血清從HBeAg陽性轉變為抗-HBe陽性表示疾病有緩解，感染性減弱。③HBcAg與抗-HBc：HBcAg陽性提示存在完整的HBV顆粒直接反應，HBV活躍複製由於檢測方法複雜臨床少用。抗-HBc為HBV感染的標誌，抗-HBc IgM 陽性提示處於感染早期，體內有病毒複製。在慢性輕度B型肝炎和HBsAg攜帶者中HBsAg、HBeAg和抗-HBc三項均陽性具有高度傳染性指標難以轉陰。

在一個較佳實施方式中，所述藥物還包含一種或多種另外的治療劑或預防劑。在一個較佳實施方式中，所述另外的治療劑或預防劑選自干擾素或者核苷類似物。在一個較佳實施方式中，所述核苷類似物選自恩替卡韋、富馬酸替諾福韋二吡呋酯和替諾福韋艾拉酚胺。

另外的治療劑或預防劑 在一些實施方式中，所述另外的治療劑或預防劑選自恩替卡韋、富馬酸替諾福韋二吡呋酯和替諾福韋艾拉酚胺中的一種或多種，例如選自恩替卡韋、富馬酸替諾福韋二吡呋酯和替諾福韋艾拉酚胺中的一種或選自恩替卡韋、富馬酸替諾福韋二吡呋酯和替諾福韋艾拉酚胺中的至少兩種。

恩替卡韋(Entecavir)的化學名為2-胺基-1,9-二氫-9-[(1S,3R,4S)-4-羥基-3-(羥甲基)-2-亞甲基環戊烷]-6H-嘌呤-6-酮，其結構式如下：

美國專利US5206244公開了恩替卡韋及其治療B肝病毒的用途；WO9809964中公開了新的恩替卡韋合成方法；WO0164421公開了低劑量的恩替卡韋固體製劑。

恩替卡韋是一種高效的抗病毒劑，由美國施貴寶公司在20世紀90年代研發，具有較強的抗HBV作用。它能夠藉由磷酸化成為具有活性的三磷酸鹽，三磷酸鹽在細胞內的半衰期為15h。藉由與HBV多聚酶的天然基質三磷酸去氧鳥嘌呤核苷競爭，恩替卡韋三磷酸鹽能抑制病毒多聚酶(逆轉錄酶)的所有三種活性：（1）HBV多聚酶的啟動；（2）前基因組mRNA逆轉錄負鏈的形成；（3）HBV DNA正鏈的合成。

富馬酸替諾福韋二吡呋酯(英文名：Tenofovir disoproxil fumarate，TDF；化學名為(R)-[[2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-1-甲基乙氧基]甲基]膦酸二異丙氧羰基甲酯富馬酸鹽)是替諾福韋的酯類前體，屬於新型核苷酸類逆轉錄酶抑制劑，具有抑制HBV病毒活性。

TDF是美國吉利德公司繼阿德福韋酯後成功開發的另一個新型開環膦酸核苷類化合物於2001年10月首次在美國上市，目前已經在歐洲、澳大利亞和加拿大等國家上市。

TDF在體內可藉由競爭性地結合於天然去氧核糖基質來抑制病毒聚合酶，並藉由插入DNA中終止DNA鏈的合成。其主要作用機制為口服後水解為替諾福韋，替諾福韋被細胞激酶磷酸化，生成具有藥理活性的代謝產物替諾福韋二磷酸，後者與5’-三磷酸去氧腺苷酸競爭，參與病毒DNA的合成，進入病毒DNA後，由於缺乏3’-OH基團，導致DNA延長受阻，進而阻斷病毒的複製。臨床應用表明，TDF具有顯著的抗HBV病毒療效，並且毒副作用較小，因而具有較大的臨床應用前景。

替諾福韋艾拉酚胺（Tenofovir Alafenamide），是由美國吉利德科學公司開發的一種新核苷類逆轉錄酶抑制劑(NRTI)替諾福韋（Tenofovir）的前體藥物。與上一代的抗B肝類似藥物替諾福韋二吡呋酯TDF相比，替諾福韋艾拉酚胺的抗病毒活性為其10倍，在血漿中的穩定性為其200倍，半衰期較其提高了225倍。與TDF相比，替諾福韋艾拉酚胺只需要十分之一的TDF給藥劑量，即可實現與TDF相同的抗病毒療效。因此替諾福韋艾拉酚胺用於B型肝炎病毒(HBV)感染的預防或/和治療，具有更好的療效、更高的安全性和更低的耐藥性。

除了上述活性藥物外，本文所述的藥物或藥物組合物還可任選地包含一種或多種另外的用於治療HBV的其他藥物，其例如但不限於3-雙加氧酶(IDO)抑制劑，靶向病毒mRNA的反義寡核苷酸，載脂蛋白A1調節劑，精胺酸酶抑制劑，B-和T-淋巴細胞減毒劑抑制劑，Bruton酪胺酸激酶(BTK)抑制劑，CCR2趨化因數拮抗劑，CD137抑制劑，CD160抑制劑，CD305抑制劑，CD4促效劑和調節劑，靶向HBcAg的化合物，靶向B型肝炎核心抗原(HBcAg)的化合物，共價閉合環狀DNA(cccDNA)抑制劑，親環蛋白抑制劑，細胞因數，細胞毒性T淋巴細胞相關蛋白4(ipi4)抑制劑，DNA聚合酶抑制劑，核酸內切酶調節劑，表觀遺傳修飾劑，法尼醇X受體促效劑，基因修飾劑或編輯物，HBsAg抑制劑，HBsAg分泌或組裝抑制劑，HBV抗體，HBV DNA聚合酶抑制劑，HBV複製抑制劑，HBV RNA酶抑制劑，HBV疫苗，HBV病毒進入抑制劑，HBx抑制劑，B型肝炎大套膜蛋白調節劑，B型肝炎大套膜蛋白刺激劑，B型肝炎結構蛋白調節劑，B型肝炎表面抗原(HBsAg)抑制劑，B型肝炎表面抗原(HBsAg)分泌或組裝抑制劑，B型肝炎病毒E抗原抑制劑，B型肝炎病毒複製抑制劑，肝炎病毒結構蛋白抑制劑，HIV-1逆轉錄酶抑制劑，透明質酸酶抑制劑，IAP抑制劑，IL-2促效劑，IL-7促效劑，免疫球蛋白促效劑，免疫球蛋白G調節劑，免疫調節劑，吲哚胺-2，核糖核苷酸還原酶抑制劑，干擾素促效劑，干擾素α1配體，干擾素α2配體，干擾素α5配體調節劑，干擾素α配體，干擾素α配體調節劑，干擾素α受體配體，干擾素β配體，干擾素配體，干擾素受體調節劑，白介素-2配體，ipi4抑制劑，賴胺酸脫甲酶抑制劑，組蛋白脫甲酶抑制劑，KDM5抑制劑，KDM1抑制劑，殺傷細胞凝集素樣受體亞家族G成員1抑制劑，淋巴細胞活化基因3抑制劑，淋巴毒素β受體促效劑，微RNA(miRNA)基因治療劑，Axl調節劑，B7-H3調節劑，B7-H4調節劑，CD160調節劑，CD161調節劑，CD27調節劑，CD47調節劑，CD70調節劑，GITR調節劑，HEVEM調節劑，ICOS調節劑，Mer調節劑，NKG2A調節劑，NKG2D調節劑，OX40調節劑，SIRPα調節劑，TIGIT調節劑，Tim-4調節劑，Tyro調節劑，Na+-牛磺酸鹽協同轉運多肽(NTCP)抑制劑，天然殺傷細胞受體2B4抑制劑，NOD2基因刺激劑，核蛋白抑制劑，核蛋白調節劑，PD-1抑制劑，PD-L1抑制劑，PEG-干擾素λ，肽基脯胺醯異構酶抑制劑，磷脂醯肌醇-3激酶(PI3K)抑制劑，重組清道夫受體A(SRA)蛋白，重組胸腺素α-1，視網酸誘導基因1刺激物，逆轉錄酶抑制劑，核糖核酸酶抑制劑，RNADNA聚合酶抑制劑，短干擾RNA(siRNA)，短合成髮夾RNA(sshRNA))，SLC10A1基因抑制劑，SMAC模擬物，Src酪胺酸激酶抑制劑，干擾素基因刺激物(STING)促效劑，NOD1刺激物，T細胞表面糖蛋白CD28抑制劑，T細胞表面糖蛋白CD8調節劑，胸腺素促效劑，胸腺素α1配體，Tim-3抑制劑，TLR-3促效劑，TLR-7促效劑，TLR-9促效劑，TLR9基因刺激劑，toll樣受體(TLR)調節劑，病毒核糖核苷酸還原酶抑制劑，鋅指核酸酶或合成核酸酶(TALEN)及其組合。

如本文中所使用，「治療有效量」或「有效量」是指在劑量下有效並且持續所需時間週期以實現期望的治療結果的量。B肝治療劑的治療有效量將取決於障礙或症狀的性質並取決於特定的試劑，且可以藉由本發明所屬技術領域中具有通常知識者已知的標準臨床技術確定。

治療結果可以是，如，減輕症狀、延長存活、改善生活品質等。治療結果不需要是「治癒」。治療結果也可以是預防性的。最佳的治療效果是功能性治癒和B肝病毒的清除。

在一個較佳實施方式中，所述藥物經配製藉由選自以下的途徑施用：口服、直腸、經鼻、經肺、局部、口腔和舌下、陰道、腸胃外、皮下、肌肉內、靜脈內、皮內、鞘內和硬膜外。

在一個較佳實施方式中，所述藥物經配製藉由口服施用，較佳為片劑或膠囊的形式。

給藥途徑 本公開的藥物或藥物組合物藉由適合於待治療病症的任何途徑施用。合適的途徑包括口服、直腸、鼻、肺、局部(包括口腔和舌下)、陰道和腸胃外(包括皮下、肌肉內、靜脈內、皮內、鞘內和硬膜外)等。

在某些實施方式中，本文公開的藥物或藥物組合物藉由靜脈內注射施用。將會理解，較佳途徑可根據例如接受者的狀況而變化。本公開藥物或藥物組合物的一個優點在於，它們是口服生物可利用的並且可以口服施用。

藥物組合物 在某些實施方式中，在藥物組合物中施用式1的化合物或化合物1-2至1-4或其藥學上可接受的鹽。本公開的藥物組合物可以用常規載體和賦形劑(其將根據通常的實踐選擇)配製。片劑將含有賦形劑、助流劑、填充劑、黏合劑等。水性製劑以無菌形式製備，並且當用於藉由非口服施用遞送時，通常是等滲的。所有製劑將任選地含有賦形劑，例如“Handbook of Pharmaceutical Excipients”(1986)中所述的賦形劑。賦形劑包括抗壞血酸和其它抗氧化劑，螯合劑如EDTA，碳水化合物如葡聚糖，羥基烷基纖維素，羥基烷基甲基纖維素，硬脂酸等。製劑的pH範圍為約3至約11，但通常為約7至10。在一些實施方式中，製劑的pH範圍為約2至約5，但通常為約3至4。

製劑包括適用於前述施用途徑的製劑。製劑可以方便地以單位劑型存在，並且可以藉由藥學領域熟知的任何方法製備。技術和製劑通常在Remington’s Pharmaceutical Sciences(Mack Publishing Co.，Easton，PA)中找到。這樣的方法包括使活性成分與由一種或多種輔助成分構成的載體結合的步驟。通常，藉由將活性成分與液體載體或細分的固體載體或兩者均勻地和緊密地結合在一起，然後根據需要使產品成形，來製備製劑。

適用於口服施用的本發明的製劑可以作為以下形式存在：各自含有預定量活性成分的離散單元，如膠囊劑或片劑；粉末或顆粒；水性或非水性液體中的溶液或懸浮液；或者水包油液體乳劑或油包水液體乳劑。

片劑藉由任選地與一種或多種輔助成分一起壓製或模製而製成。壓製片劑可以藉由以下來製備：在合適的機器中壓製自由流動形式如粉末或顆粒的活性成分，其任選地與黏合劑、潤滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、表面活性劑或分散劑混合。模製片劑可以藉由在合適的機器中模製用惰性液體稀釋劑潤濕的粉末狀活性成分的混合物來製備。片劑可任選地包衣或刻痕，並任選地配製，以便自其提供活性成分的緩釋或控釋。

用於口服使用的製劑也可以呈現為硬明膠膠囊，其中活性成分與惰性固體稀釋劑例如磷酸鈣或高嶺土混合，或呈現為軟明膠膠囊，其中活性成分與水或油介質例如花生油、液體石蠟或橄欖油混合。

本公開的藥物組合物也可以是無菌可注射製劑的形式，例如無菌可注射水性或油性懸浮液。該懸浮液可以根據已知技術使用上面提到的那些合適的分散劑或潤濕劑和懸浮劑配製。無菌可注射製劑還可以是在無毒的腸胃外可接受的稀釋劑或溶劑中的無菌可注射溶液或懸浮液，例如在1,3-丁二醇中的溶液，或製備成凍乾粉末。可以使用的可接受的載體和溶劑包括水、林格氏溶液和等滲氯化鈉溶液。另外，無菌固定油通常可用作溶劑或懸浮介質。為此目的，可以使用任何溫和的固定油，包括合成的甘油單酯或甘油二酯。此外，脂肪酸如油酸同樣可用於製備注射劑。可以使用的可接受的載體和溶劑包括水、林格氏溶液、等滲氯化鈉溶液和高滲氯化鈉溶液。

在查閱了下面的實施例之後，本發明的另外的目的、優勢和新特徵對本發明所屬技術領域中具有通常知識者將變得顯而易見。

實施例 實施例1-應用HepG2-NTCP細胞評價式1化合物的體外抗HBV活性

化合物配製方法如下： 以配製20 mM濃度的儲液為例，溶劑DMSO的體積(μl)=樣品質量(mg)×純度÷分子量÷20×10 ⁶

對照化合物包括ETV（批號：P1214012；99.0%純度），購自上海泰坦科技股份有限公司。陽性對照化合物RG7834（批號：ET25747-14-P1；99.5%純度），購自上海藥明康得新藥開發有限公司。

以上對照化合物的母液濃度均為20 mM，並在-20℃下保存。

表1.主要試劑和細胞病毒

試劑名稱	生產商	貨號
QIAamp96 DNA 試劑盒	Qiagen	51162
HBsAg ELISA 試劑盒	Antu	CL 0310
HBeAg ELISA 試劑盒	Antu	CL 0312
FastStart     Universal       Probe Master	Roche	04914058001
HepG2-NTCP細胞	上海藥明康得構建
HBV病毒	上海藥明康得自製
式1化合物	上海陶素生化科技有限公司

實驗方案

鋪細胞和化合物處理 第0天，將HepG2-NTCP鋪種到48孔板中（7.5×10 ⁴個細胞/孔）。第1天，更換為含2%DMSO的培養基。

第2天，先加入化合物預處理細胞1小時，然後加入D型HBV感染HepG2-NTCP細胞（感染同時加入化合物）。受試化合物稀釋3個單藥濃度，1個聯合用藥濃度，2複孔測試。對照化合物為ETV。化合物濃度設定參見表2。

第3、5和7天更換一次含化合物的新鮮培養基。

第9天，收集上清，將收集的細胞上清用ELISA法檢測HBeAg和HbsAg，qPCR法檢測HBV DNA水平。同時，CellTiter-Glo檢測細胞活力，收集細胞冷凍保存（備用）。實驗流程參見表3。

表2：化合物濃度

化合物	1	2	3	4	5	6	7
塞來昔布(μM)	20	10	1	/
RG7834(nM)	100.00	33.33	11.11	3.70	1.23	0.41	0.14
ETV(nM)	20.000	6.667	2.222	0.741	0.247	0.082	0.027

表3：實驗流程

天數	細胞處理	樣品收集
0	細胞鋪板
2	加藥預處理2小時，感染病毒 （同時加藥）
3	化合物處理
5	化合物處理
7	化合物處理
9	CellTiter-Glo測細胞活力	收集細胞檢測HBV DNA, HBeAg和HBsAg

樣品檢測

1）qPCR法檢測細胞培養上清中HBV DNA的含量 參照QIAamp 96 DNA Blood Kit說明書，提取細胞培養上清中的DNA。HBV特異性引物qPCR檢測HBV DNA的含量。PCR反應：95°C，10 min；95°C，15 sec，60°C，1 min，40個循環。

2）ELISA法檢測細胞培養上清中HBeAg和HBsAg的含量方法參照試劑盒說明書，方法簡述如下：分別取50 μl的標準品， 樣品和對照品加入到檢測板中，然後每孔加入50 μl酶結合物，37°C孵育60分鐘，用洗液洗板後吸乾，然後加入50 μl預混發光基質，室溫避光孵育10分鐘，最後酶標儀測定發光值。

3）CellTiter-Glo細胞活力檢測 參照CellTiter-Glo試劑盒說明書測定細胞活力，方法簡述如下：收集細胞培養上清之後，每孔加入CellTiter-Glo(培養基1:1稀釋)，室溫孵育10分鐘，酶標儀測定發光值。

資料分析 HBV DNA抑制率（%）=（1-化合物組樣品的HBV拷貝數/DMSO組的HBV拷貝數）×100% Hbe/sAg抑制率（%）=（1-樣品的HBe/sAg值/DMSO對照組HBe/sAg值）×100%

結果分析

檢測結果參見表4-表6和圖1-圖3。

表4 測試化合物的HBV DNA抑制率

藥物濃度	HBV DNA抑制率%
20 µM式1化合物	10 µM式1化合物	1 µM式1化合 物	0.1nM ETV	20 µM 式1化合物+ 0.1nM ETV
抑制率 %	73.01	49.17	7.59	44.66	80.69

表5 測試化合物的HBsAg抑制率

藥物濃度	HBsAg抑制率%
20 µM式1化合物	10 µM式1化合物	1 µM式1化合物	0.1nM ETV	20 µM式1化合物+0.1nM ETV
抑制率	46.12	-7.65	21.53	1.22	41.11

表6.測試化合物的HBeAg抑制率

藥物濃度	HBeAg抑制率%
20 µM 式1化合物	10 µM式1化合物	1 µM式1化合物	0.1nM ETV	20 µM式1化合物+0.1nM ETV
抑制率	78.13	50.38	18.02	-1.35	80.46

以上試驗結果顯示，與空白對照組相比，式1的化合物能有效降低HBV病毒載量，在降低HBV DNA達73.01%的情況下，還能夠同時降低HBsAg和HBeAg達到46.12%和78.13%。而恩替卡韋正如文獻中報導的一樣，僅僅能夠降低HBV DNA，對於降低HBeAg和HBsAg基本沒有效果。式1的化合物塞來昔布與恩替卡韋聯用時，其抑制率能分別增加至80.69%（HBV DNA）和80.46%（HBeAg），有一定的協同作用效果，特別是針對HBeAg，ETV單獨使用本來沒有抑制作用，但與塞來昔布聯合用藥時能夠將抑制率再增加2.33%，表明其在HBeAg的抑制方面具有協同作用。可見，式1的化合物與恩替卡韋相比，能夠有效降低HBeAg和HBsAg，從而有望清除B肝病毒，達到功能性治癒。

雖然已參照特定實施方式對本發明進行了說明，但本發明所屬技術領域中具有通常知識者應認識到的是，在不偏離本發明主旨和範圍的情況下，可對所述實施方案進行改變或改進，本發明範圍藉由所附發明申請專利範圍限定。

無。

圖1為根據本發明實施例的化合物對於HBV DNA的抑制結果。 圖2為根據本發明實施例的化合物對於HBsAg的抑制結果。 圖3為根據本發明實施例的化合物對於HBeAg的抑制結果。

Claims (5)

1. 一種式1的化合物、其衍生物或其藥學上可接受的鹽在製備用於降低B型肝炎病毒載量的藥物中的用途， 式1

   

   ；其中，所述衍生物為式1化合物的氘代產物。
2. 如請求項1所述的用途，其中，所述藥學上可接受的鹽選自以下的至少一種：醋酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、天冬胺酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、環戊烷丙酸鹽、二葡萄糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、延胡索酸鹽、葡庚酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙烷磺酸鹽、乳酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、甲磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、煙酸鹽、草酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽、十一烷酸鹽、鈉鹽、鈣鹽、鉀鹽、銨鹽、四乙銨鹽、甲銨鹽、二甲銨鹽和乙醇胺鹽。
3. 如請求項1所述的用途，其中所述衍生物包括選自化合物1-2或化合物1-4：

   

   

   。
4. 如請求項1-3任一項所述的用途，其中所述藥物還包含一種或多種另外的治療劑或預防劑，所述另外的治療劑或預防劑選自干擾素、PEG化的干擾素、硝唑尼特、式A所示的化合物、恩替卡韋、富馬酸替諾福韋二吡呋酯和替諾福韋艾拉酚胺中的至少一種， 式A

   

   。
5. 請求項1所述的用途，其中所述藥物經配製藉由選自以下的途徑施用：口服、直腸、經鼻、經肺、局部、口腔和舌下、陰道、腸胃外、皮下、肌肉內、靜脈內、皮內、鞘內和硬膜外。

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