TW202216769A

TW202216769A - 靶向ｈｅｒ２的激動性ｃｄ２８抗原結合分子

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Publication number: TW202216769A
Application number: TW110122801A
Authority: TW
Inventors: 史蒂芬蓋捨; 湯瑪士哈福; 提姆塔帕尼強提拉; 克里斯俊克萊; 克莉斯汀屈特爾; 珍妮托斯卡湯姆; 帕洛尤瑪那
Original assignee: 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司
Priority date: 2020-06-23
Filing date: 2021-06-22
Publication date: 2022-05-01
Also published as: CA3181014A1; BR112022025989A2; CN115702168A; JP2023530760A; KR20230016206A; US20220017637A1; MX2022015795A; CR20220627A; AR122719A1; AU2021295549A1; CL2022003515A1; PE20231361A1; IL297880A; WO2021259890A1; CO2023000055A2; EP4168448A1

Abstract

本發明涉及以單價結合 CD28 為特徵的 Her2 靶向的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子、其生產方法、含有該等抗體的醫藥組成物以及使用該等抗體和該等醫藥組成物之方法。

Description

靶向　Her2　的激動性　CD28　抗原結合分子

本發明涉及以與 CD28 單價結合為特徵的 Her2 靶向雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子、其生產方法、含有這些分子的醫藥組成物，以及這些分子在治療疾病，特別是在癌症中，作為免疫調節劑及/或共刺激劑的用途。

癌症免疫療法正在成為一種日益有效的治療選擇，可在例如黑色素瘤、非小細胞肺癌和腎細胞癌等癌症類型中產生顯著且持久的反應。這主要是由於幾種免疫檢查點的封鎖成功，包括抗 PD-1 (例如 Keytruda、Merck、Opdivo、BMS)、抗 CTLA-4 (例如 Yervoy、BMS) 和抗 PD-L1 (例如 Tecentriq、Roche)。這些藥劑很可能作為許多癌症類型的標準照護，或作為組合療法的骨幹，然而，只有一小部分患者 (＜25%) 受益於此類療法。此外，各種癌症 (前列腺癌、大腸直腸癌、胰腺癌、肉瘤、非三陰性乳癌等) 都對這些免疫調節劑表現出初級抗性。許多報告指出，預先存在的抗腫瘤 T 細胞的缺失導致了一些患者缺乏反應或反應不佳。總之，儘管現有免疫療法具有令人印象深刻的抗癌效果，但對於解決大量癌症患者群體和開發目標為誘導和增強新型腫瘤特異性 T 細胞反應的療法上，存在明顯的醫學需求。

CD28 是共刺激分子次家族的創始成員，其特徵為成對的 V 組免疫球蛋白超家族 (immunoglobulin superfamily，IgSF) 域連接到包含關鍵信號傳導模體的單個跨膜域和細胞質域 (Carreno and Collins，2002)。該次家族的其他成員包括 ICOS、CTLA-4、PD1、PD1H、TIGIT 和 BTLA (Chen and Flies，2013)。CD28 表現僅限於 T 細胞，在所有初始的和大多數經歷過抗原的亞群中普遍存在，包括那些表現 PD-1 或 CTLA-4 的亞群。CD28 和 CTLA-4 高度同源並競爭結合相同的 B7 分子 CD80 和 CD86，它們在樹突細胞、B 細胞、巨噬細胞及腫瘤細胞上表現 (Linsley et al., 1990)。CTLA-4 對於 B7 配體家族的更高親和力允許 CTLA-4 在配體結合方面勝過 CD28，並抑制效應 T 細胞反應 (Engelhardt et al., 2006)。相較之下，PD-1 顯示藉由部分去磷酸化 CD28 的細胞質域來抑制 CD28 信號傳導 (Hui et al., 2017)。CD80 或 CD86 在專職抗原呈現細胞表面連接 CD28 是初始 T 細胞功能性從頭啟動、隨後的選殖擴增、細胞激素產生、靶細胞裂解和長期記憶形成所必需的。CD28 配體的結合亦可促進誘導型共刺激受體的表現，例如 OX-40、ICOS 和 4-1BB (評論於 Acuto and Michel, 2003)。CD28 連接後，雙硫鍵連接的同源二聚體、膜近端 YMNM 模體和遠端 PYAP 模體已顯示與幾種激酶和轉接蛋白複合 (Boomer and Green, 2010)。這些模體對於誘導 IL2 轉錄很重要，該轉錄由 NFAT、AP-1 及 NFκB 家族轉錄因子的 CD28 依賴性活化介導 (Fraser et al., 1991) (June et al., 1987) (Thompson et al., 1989)。然而，在 CD28 的細胞質域內發現其他未充分表徵的磷酸化及泛蛋白化位點。正如 (Esensten et al., 2016) 所評論的，CD28 啟動的路徑在促進習知 T 細胞的增殖和效應功能上具有關鍵作用。CD28 連接亦促進調節性 T 細胞的抗炎功能。CD28 藉由部分增強來自 T 細胞受體的信號來共同刺激 T 細胞，但也顯示出介導獨特的信號傳導事件 (Acuto and Michel, 2003；Boomer and Green, 2010；June et al., 1987)。由 CD28 特異性觸發的信號控制 T 細胞許多重要方面的功能，包括下游蛋白的磷酸化及其他轉譯後修飾 (例如，PI3K 介導的磷酸化)、轉錄變化 (例如 Bcl-xL 表現)、表觀遺傳改變 (例如 IL- 2 啟動子)、細胞骨架重塑 (例如微管組織中心的方向) 和醣解速率的變化 (例如醣解通量)。CD28 缺陷小鼠對傳染性病原體、同種異體移植抗原、移植物抗宿主疾病、接觸性過敏症和氣喘的反應降低 (Acuto and Michel, 2003)。缺乏 CD28 介導的共刺激導致活體外和活體內 T 細胞增殖的減少，嚴重抑制增殖中心形成和免疫球蛋白同種型轉換，減少 T 輔助 (Th) 細胞分化和 Th2-型細胞激素之表現。CD4 依賴性細胞毒性 CD8+ T 細胞反應亦受到影響。重要的是，CD28 缺陷的初始 T 細胞表現出增殖反應降低，尤其是在較低的抗原濃度下。越來越多的文獻支持對 T 細胞上 CD28 的參與具有抗腫瘤潛力的觀點。最近的證據表明，PD-L1/PD-1 及 CTLA-4 檢查點抑制劑的抗癌作用取決於 CD28 (Kamphorst et al., 2017；Tai et al., 2007)。研究 CTLA-4 和 PD-1 阻斷之治療效果的臨床研究顯示，在晚期黑色素瘤和其他癌症患者中取得了非常可觀的結果。此外，基因工程 T 細胞的輸注表現人工嵌合 T 細胞受體 (包含與細胞內 TCR 信號轉導域 (CD3z) 及細胞內共刺激域 (CD28 及/或 4-1BB 域) 融合的細胞外抗原識別域) 在 B 細胞癌和其他癌症中已顯示高比率和持久的反應。

CD28 激動性抗體可區分為兩類：(i) CD28 超激動性抗體和 (ii) CD28 習用激動性抗體。通常，為了活化初始 T 細胞，需要 T 細胞抗原受體 (TCR，信號 1) 的接合與藉由 CD28 的共刺激信號傳導 (信號 2)。CD28 超級激動劑 (CD28SA) 為 CD28 特異性單株抗體，能夠自主活化 T 細胞而無需明顯的 T 細胞受體接合 (Hünig，2012)。在囓齒動物中，CD28SA 活化習用 T 細胞及調節性 T 細胞。CD28SA 抗體在自體免疫、炎症和移植的多種模型中具有治療效果。然而，人類 CD28SA 抗體 TGN1412 的第一期研究在 2006 年造成一場危及生命的細胞激素風暴。後續的研究表明，毒性是由於人類 T 細胞和臨床前動物模型的 T 細胞的 CD28 反應性差異導致的劑量錯誤所引起的。目前正在對 RA 患者和轉移性或不可切除的晚期實體惡性腫瘤患者進行開放標示、多中心劑量遞增研究，對 TGN1412 進行重新評估。CD28 習用激動性抗體，例如殖株 9.3，模擬 CD28 天然配體，只能在 T 細胞受體信號 (信號 1) 存在下增強 T 細胞活化。已發表的見解表明，抗體的結合表位對激動性抗體是超級促效劑或習用促效劑具有重大影響 (Beyersdorf et al., 2005) 。超激動性 TGN1412 結合 CD28 的橫向模體，而習用激動性分子 9.3 結合接近配體結合表位。由於結合表位不同，超激動性抗體和習用激動性抗體在 T 細胞表面形成 CD28 分子的線性複合物的能力不同。準確地說，TGN1412 能夠有效地形成 CD28 的線性陣列，這可能會導致聚集的信號傳導成分，其足以超過 T 細胞活化的閾值。另一方面，習用促效劑 9.3 導致複合物在結構上不是線性的。先前已公開嘗試使用針對黑色素瘤相關蛋白聚醣和 CD28 的重組雙特異性單鏈抗體來轉化基於 9.3 殖株的習用激動性結合物 (Otz et al., 2009)。已報導基於雙特異性單鏈抗體形成多聚體構建物的內在趨勢，儘管使用習用 CD28 激動性結合物 9.3，但報導的雙特異性單鏈抗體仍能發揮「超激動」活性。

人類上皮生長因子受體-2 (Her2; ErbB2) 是一種受體酪胺酸激酶，而且是跨膜受體之上皮生長因子受體 (EGFR) 家族的成員。Her2 在一系列腫瘤類型中過度表現，且其與疾病的發生和進展有關。它與預後不良有關。例如，在大約 30% 的人類乳癌中觀察到 Her2 的過度表現，這與這些腫瘤相關的侵襲性生長和不良臨床結果有關 (Slamon et al (1987) Science 235:177-182)。

人源化抗 Her2 單株抗體曲妥珠單抗 (CAS 180288-69-1、HERCEPTIN®、huMAb4D5-8、rhuMAb Her2、Genentech) 靶向 Her-2 的細胞外域 (US 5677171；US 5821337；US 6054297；US 6165464；US 6339142; US 6407213; US 6639055; US 6719971；US 6800738；US 7074404；Coussens et al (1985) Science 230:1 132-9；Slamon et al (1989) Science 244:707-12；Slamon et al (2001) New Engl. J .Med. 344:783-792)。曲妥珠單抗已顯示可抑制過度表現 Her-2 的人類腫瘤細胞的增殖，並且是一種抗體依賴性細胞毒性 (ADCC) 的介質 (Hudziak et al (1989) Mol Cell Biol 9:1 165-72; Lewis et al (1993) Cancer Immunol Immunother; 37:255-63；Baselga et al (1998) Cancer Res. 58:2825-2831；Hotaling et al (1996) [abstract].Proc. Annual Meeting Am Assoc Cancer Res; 37:471；Pegram MD, et al (1997) [abstract].Proc Am Assoc Cancer Res; 38:602；Sliwkowski et al (1999) Seminars in Oncology 26(4), Suppl 12:60- 70；Yarden Y. and Sliwkowski, M. (2001) Nature Reviews: Molecular Cell Biology, Macmillan Magazines, Ltd., Vol. 2:127-137)。

HERCEPTIN® (曲妥珠單抗，Genentech Inc.) 於 1998 年被批准用於治療 Her2 過度表現的轉移性乳癌患者 (Baselga et al, (1996) J. Clin. Oncol.14:737-744)。在 2006 年，FDA 批准 HERCEPTIN® 作為包含阿黴素 (doxorubicin)、環磷醯胺和紫杉醇的治療方案的一部分，用於輔助治療 Her2 陽性、淋巴結陽性乳癌患者。帕妥珠單抗 (pertuzumab) (亦已知為重組人源化單株抗體 2C4，rhuMAb 2C4，PERJETA®，Genentech, Inc, South San Francisco) 是另一種靶向 Her2 的抗體治療。帕妥珠單抗是一種 Her 二聚化抑制劑 (HDI)，其作用是抑制 Her2 與其他 Her 受體 (例如 EGFR/Her l、Her2、Her3 及 Her4) 形成活性異源二聚體或同源二聚體的能力。參見例如， Harari and Yarden Oncogene 19:6102-14 (2000); Yarden and Sliwkowski.Nat Rev Mol Cell Biol 2:127-37 (2001)；Sliwkowski, Nat Struct Biol 10:158-9 (2003)；Cho et al. Nature 421:756-60 (2003)；及 Malik et al., Pro Am Soc Cancer Res 44:176-7 (2003); US 7560111。PERJETA® 於 2012 年首次被批准與曲妥珠單抗和歐洲紫杉醇 (docetaxel) 聯合用於治療晚期或後期 (轉移性) Her2 陽性乳癌患者。同時，使用曲妥珠單抗和帕妥珠單抗的組合治療亦被批准在復發的高風險上用於新輔助 (手術前) 治療 Her2 陽性、局部晚期、炎症或早期乳癌的及輔助 (手術後) 治療 Her2 陽性早期乳癌 (EBC)。Perjeta 和 Herceptin 的作用機制被相信是相互補充的，因為兩者都與 Her2 受體結合，但結合不同地方。Perjeta 和 Herceptin 的組合被認為可提供更全面的 HER 信號傳導路徑的雙重阻斷，從而防止腫瘤細胞的生長和存活。針對人類 ErbB2 的域 II、III 和 IV 的雙特異性、二價 Her2 抗體揭示於WO 2012/143523。包含抗體 rhuMab 2C4 和 hu4D5 的優化變異體的雙特異性 HER-2 抗體，稱為 Herceptarg，已敘述於 WO 2015/091738。

儘管曲妥珠單抗在乳癌中的治療效果得到良好的證明，但仍有許多患者因耐藥性而無法從曲妥珠單抗中獲益。鑑於在 Her2 表現量低的特定癌症中缺乏有效的抗 Her2 療法、對當前療法的耐藥性以及表現 Her2 的癌症的盛行率，需要新療法來治療此類癌症。

已經發現，當量有限的抗 CD3 雙特異性抗體，即 T 細胞雙特異性抗體 (TCB) (例如 Her2-靶向的 CD3 抗體) 與激動性抗 CD28 分子組合時，可實現較佳的 T 細胞活化。鑑於 CD28 在各種腫瘤適應症的 T 細胞上以基線被表現 (Lavin et al., 2017；Tirosh et al., 2016；Zheng et al., 2017) 並且 CD28 信號的活化增強了 T 細胞受體信號，組合 TCB 分子與 Her2-靶向的 CD28 抗原結合分子有望協同作用以誘導強而持久的抗腫瘤反應。因此，我們在本文中描述新穎的 Her2-靶向的激動性 CD28 分子，其顯示出與 TCB 的協同作用，並且需要 CD28 結合單價，在 TCB 信號存在下實現嚴格的腫瘤標靶依賴性。

本發明描述 Her2-靶向的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其實現腫瘤依賴性 T 細胞活化和腫瘤細胞毒殺，而無需形成多聚體。本發明的雙特異性 CD28 抗原結合分子的特徵在於與 CD28 的單價結合，且其中它們包含能夠與人類上皮生長因子受體-2 (Her2) 特異性結合的第二抗原結合域。此外，它們具有由能夠穩定締合的第一次單元和第二次單元組成的 Fc 域，包括一個或多個胺基酸取代，來降低抗原結合分子對 Fc 受體及/或效應功能的結合親和力。Fc 受體介導的交聯因此被廢除並且藉由通過結合能與 Her2 特異性結合的第二抗原結合域的交聯而實現腫瘤特異性活化。

因此，本發明提供一種雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其特徵在於與 CD28 的單價結合，其包含 (a) 第一抗原結合域，其能夠特異性結合 CD28， (b) 第二抗原結合域，其能夠特異性結合能夠特異性結合人類上皮生長因子受體-2 (Her2) 的抗原結合域，及 (c) Fc 域，其由能夠穩定締合之第一次單元及第二次單元構成，包含降低抗原結合分子對 Fc 受體的結合親和力及/或效應功能的一個或多個胺基酸取代。

特別地，本發明提供一種特徵在於與 CD28 單價結合的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其包含 (a) 第一抗原結合域，其能夠特異性結合 CD28， (b) 第二抗原結合域，其能夠特異性結合能夠特異性結合人類上皮生長因子受體-2 (Her2) 的抗原結合域，及 (c) Fc 域，其由能夠穩定締合之第一次單元及第二次單元構成，該 Fc 域包含降低該抗原結合分子對 Fc 受體的結合親和力及/或效應功能的一個或多個胺基酸取代，其中能夠特異性結合 Her2 的該第二抗原結合域包含 (i) 重鏈可變區 (V _HHer2)，其包含 SEQ ID NO: 2 之重鏈互補決定區 CDR-H1、SEQ ID NO: 3 之 CDR-H2 及 SEQ ID NO: 4 之 CDR-H3；及輕鏈可變區 (V _LHer2)，其包含 SEQ ID NO: 5 之輕鏈互補決定區 CDR-L1、SEQ ID NO: 6 之 CDR-L2 及 SEQ ID NO: 7 之 CDR-L3；或 (ii) 重鏈可變區 (V _HHer2)，其包含 SEQ ID NO: 10 之重鏈互補決定區 CDR-H1、SEQ ID NO: 11 之 CDR-H2 及 SEQ ID NO: 12 之 CDR-H3；及輕鏈可變區 (V _LHer2)，其包含 SEQ ID NO: 13 之輕鏈互補決定區 CDR-L1、SEQ ID NO: 14 之 CDR-L2 及 SEQ ID NO: 15 之 CDR-L3；或 (iii) 重鏈可變區 (V _HHer2)，其包含 SEQ ID NO: 132 之重鏈互補決定區 CDR-H1、SEQ ID NO: 133 之 CDR-H2 及 SEQ ID NO: 134 之 CDR-H3；及輕鏈可變區 (V _LHer2)，其包含 SEQ ID NO: 135 之輕鏈互補決定區 CDR-L1、SEQ ID NO: 136 之 CDR-L2 及 SEQ ID NO: 137 之 CDR-L3；或 (iv) 重鏈可變區 (V _HHer2)，其包含 SEQ ID NO: 140 之重鏈互補決定區 CDR-H1、SEQ ID NO: 141 之 CDR-H2 及 SEQ ID NO: 142 之 CDR-H3；及輕鏈可變區 (V _LHer2)，其包含 SEQ ID NO: 143 之輕鏈互補決定區 CDR-L1、SEQ ID NO: 144 之 CDR-L2 及 SEQ ID NO: 145 之 CDR-L3。

在一個方面，本發明提供一種特徵在於與 CD28 單價結合的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其包含 (a) 第一抗原結合域，其能夠特異性結合 CD28， (b) 第二抗原結合域，其能夠特異性結合能夠特異性結合人類上皮生長因子受體-2 (Her2) 的抗原結合域，及 (c) Fc 域，其由能夠穩定締合之第一次單元及第二次單元構成，該 Fc 域包含降低該抗原結合分子對 Fc 受體的結合親和力及/或效應功能的一個或多個胺基酸取代，其中能夠特異性結合 Her2 的該第二抗原結合域包含 (i) 重鏈可變區 (V _HHer2)，其包含 SEQ ID NO: 2 之重鏈互補決定區 CDR-H1、SEQ ID NO: 3 之 CDR-H2 及 SEQ ID NO: 4 之 CDR-H3；及輕鏈可變區 (V _LHer2)，其包含 SEQ ID NO: 5 之輕鏈互補決定區 CDR-L1、SEQ ID NO: 6 之 CDR-L2 及 SEQ ID NO: 7 之 CDR-L3；或 (ii) 重鏈可變區 (V _HHer2)，其包含 SEQ ID NO: 10 之重鏈互補決定區 CDR-H1、SEQ ID NO: 11 之 CDR-H2 及 SEQ ID NO: 12 之 CDR-H3；及輕鏈可變區 (V _LHer2)，其包含 SEQ ID NO: 13 之輕鏈互補決定區 CDR-L1、SEQ ID NO: 14 之 CDR-L2 及 SEQ ID NO: 15 之 CDR-L3。

在另一方面，本發明提供一種特徵在於與 CD28 單價結合的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其包含 (a) 第一抗原結合域，其能夠特異性結合 CD28， (b) 第二抗原結合域，其能夠特異性結合能夠特異性結合人類上皮生長因子受體-2 (Her2) 的抗原結合域，及 (c) Fc 域，其由能夠穩定締合之第一次單元及第二次單元構成，該 Fc 域包含降低該抗原結合分子對 Fc 受體的結合親和力及/或效應功能的一個或多個胺基酸取代，其中能夠特異性結合 Her2 的該第二抗原結合域包含 (iii) 重鏈可變區 (V _HHer2)，其包含 SEQ ID NO: 132 之重鏈互補決定區 CDR-H1、SEQ ID NO: 133 之 CDR-H2 及 SEQ ID NO: 134 之 CDR-H3；及輕鏈可變區 (V _LHer2)，其包含 SEQ ID NO: 135 之輕鏈互補決定區 CDR-L1、SEQ ID NO: 136 之 CDR-L2 及 SEQ ID NO: 137 之 CDR-L3；或 (iv) 重鏈可變區 (V _HHer2)，其包含 SEQ ID NO: 140 之重鏈互補決定區 CDR-H1、SEQ ID NO: 141 之 CDR-H2 及 SEQ ID NO: 142 之 CDR-H3；及輕鏈可變區 (V _LHer2)，其包含 SEQ ID NO: 143 之輕鏈互補決定區 CDR-L1、SEQ ID NO: 144 之 CDR-L2 及 SEQ ID NO: 145 之 CDR-L3。

在一個方面，提供如本文所定義的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中 Fc 域為 IgG，特別是 IgG1 Fc 域或 IgG4 Fc 域。在一個特定方面，由能夠穩定締合的第一次單元和第二次單元構成的 Fc 域為 IgG1 Fc 域。在一個方面，Fc 域包含胺基酸取代 L234A 和 L235A (根據 Kabat EU 索引編號)。在一個方面，Fc 域屬於人類 IgG1 亞型，且包含胺基酸突變 L234A、L235A 及 P329G (根據 Kabat EU 索引編號)。

在一個方面，提供如前文所定義的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 CD28 的第一抗原結合域包含 (i) 重鏈可變區 (V _HCD28)，其包含 SEQ ID NO: 26 之重鏈互補決定區 CDR-H1、SEQ ID NO: 27 之 CDR-H2 及 SEQ ID NO: 28 之 CDR-H3；及輕鏈可變區 (V _LCD28)，其包含 SEQ ID NO: 29 之輕鏈互補決定區 CDR-L1、SEQ ID NO: 30 之 CDR-L2 及 SEQ ID NO: 31 之 CDR-L3；或 (ii) 重鏈可變區 (V _HCD28)，其包含 SEQ ID NO: 18 之 CDR-H1、SEQ ID NO: 19 之 CDR-H2 及 SEQ ID NO: 20 之 CDR-H3；及輕鏈可變區 (V _LCD28)，其包含 SEQ ID NO: 21 之 CDR-L1、SEQ ID NO: 22 之 CDR-L2 及 SEQ ID NO: 23 之 CDR-L3。

在一個方面，能與雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子的 CD28 特異性結合的抗原結合域包含含 SEQ ID NO: 26 之 CDR-H1、SEQ ID NO: 27 之 CDR-H2 及 SEQ ID NO: 28 之 CDR-H3 的重鏈可變區 (V _HCD28)，及含 SEQ ID NO: 29 之 CDR-L1、SEQ ID NO: 30 之 CDR-L2 及 SEQ ID NO: 31 之 CDR-L3 的輕鏈可變區 (V _LCD28)。

另一方面，能與雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子的 CD28 特異性結合的抗原結合域包含含 SEQ ID NO: 18 之 CDR-H1、SEQ ID NO: 19 之 CDR-H2 及 SEQ ID NO: 20 之 CDR-H3 的重鏈可變區 (V _HCD28)，及含 SEQ ID NO: 21 之 CDR-L1、SEQ ID NO: 22 之 CDR-L2 及 SEQ ID NO: 23 之 CDR-L3 的輕鏈可變區 (V _LCD28)。

在另一方面，提供如上文所定義的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 CD28 的第一抗原結合域包含 (i) 重鏈可變區 (V _HCD28)，其包含 SEQ ID NO: 52 之重鏈互補決定區 CDR-H1、SEQ ID NO: 53 之 CDR-H2 及 SEQ ID NO: 54 之 CDR-H3；及輕鏈可變區 (V _LCD28)，其包含 SEQ ID NO: 55 之輕鏈互補決定區 CDR-L1、SEQ ID NO: 56 之 CDR-L2 及 SEQ ID NO: 57 之 CDR-L3；或 (ii) 重鏈可變區 (V _HCD28)，其包含 SEQ ID NO: 58 之 CDR-H1、SEQ ID NO: 59 之 CDR-H2 及 SEQ ID NO: 60 之 CDR-H3；及輕鏈可變區 (V _LCD28)，其包含 SEQ ID NO: 61 之 CDR-L1、SEQ ID NO: 62 之 CDR-L2 及 SEQ ID NO: 63 之 CDR-L3；或 (ii) 重鏈可變區 (V _HCD28)，其包含 SEQ ID NO: 64 之 CDR-H1、SEQ ID NO: 65 之 CDR-H2 及 SEQ ID NO: 66 之 CDR-H3；及輕鏈可變區 (V _LCD28)，其包含 SEQ ID NO: 67 之 CDR-L1、SEQ ID NO: 68 之 CDR-L2 及 SEQ ID NO: 69 之 CDR-L3。

在一個方面，能與雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子的 CD28 特異性結合的抗原結合域包含含 SEQ ID NO: 52 之 CDR-H1、SEQ ID NO: 53 之 CDR-H2 及 SEQ ID NO: 54 之 CDR-H3 的重鏈互補決定區的重鏈可變區 (V _HCD28)，及含 SEQ ID NO: 55 之 CDR-L1、SEQ ID NO: 56 之 CDR-L2 及 SEQ ID NO: 57 之 CDR-L3 的輕鏈互補決定區的輕鏈可變區 (V _LCD28)。

另一方面，能與雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子的 CD28 特異性結合的抗原結合域包含含有 SEQ ID NO: 58 之 CDR-H1、SEQ ID NO: 59 之 CDR-H2 及 SEQ ID NO: 60 之 CDR-H3 的重鏈可變區 (V _HCD28)，及含有 SEQ ID NO: 61 之 CDR-L1、SEQ ID NO: 62 之 CDR-L2 及 SEQ ID NO: 63 之 CDR-L3 的輕鏈可變區 (V _LCD28)。

又另一方面，能與雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子的 CD28 特異性結合的抗原結合域包含含 SEQ ID NO: 64 之 CDR-H1、SEQ ID NO: 65 之 CDR-H2 及 SEQ ID NO: 66 之 CDR-H3 的重鏈可變區 (V _HCD28)，及含 SEQ ID NO: 67 之 CDR-L1、SEQ ID NO: 68 之 CDR-L2 及 SEQ ID NO: 69 之 CDR-L3 的輕鏈可變區 (V _LCD28)。

再者，提供如上文所定義的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 CD28 的第一抗原結合域包含含有與 SEQ ID NO: 24 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28)，及含有與 SEQ ID NO: 25 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD28)。

在另一方面，提供雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 CD28 的第一抗原結合域包含重鏈可變區 (V _HCD28)，該重鏈可變區包含選自 SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:40 及 SEQ ID NO:41 所組成之群組的胺基酸序列，及包含輕鏈可變區 (V _LCD28)，該輕鏈可變區包含選自 SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50 及 SEQ ID NO:51 所組成之群組的胺基酸序列。

在另一方面，提供了雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 CD28 的第一抗原結合域包含 (a) 包含 SEQ ID NO:37 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28)；及包含 SEQ ID NO:44 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD28)，或 (b) 包含 SEQ ID NO:37 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28)；及包含 SEQ ID NO:25 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD28)，或 (c) 包含 SEQ ID NO:41 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28)；及包含 SEQ ID NO:51 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD28)，或 (d) 包含 SEQ ID NO:36 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28)；及包含 SEQ ID NO:43 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD28)，或 (e) 包含 SEQ ID NO:36 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28)；及包含 SEQ ID NO:44 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD28)，或 (f) 包含 SEQ ID NO:36 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28)；及包含 SEQ ID NO:49 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD28)，或 (g) 包含 SEQ ID NO:36 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28)；及包含 SEQ ID NO:25 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD28)，或 (h) 包含 SEQ ID NO:33 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28)；及包含 SEQ ID NO:25 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD28)，或 (i) 包含 SEQ ID NO:32 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28)；及包含 SEQ ID NO:43 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD28)，或 (j) 包含 SEQ ID NO:32 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28)；及包含 SEQ ID NO:49 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD28)，或 (k) 包含 SEQ ID NO:32 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28)；及包含 SEQ ID NO:25 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD28)。

在一個特定方面，提供雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 CD28 的第一抗原結合域包含 (i) 重鏈可變區 (V _HCD28)，該重鏈可變區包含 SEQ ID NO: 52 之重鏈互補決定區 CDR-H1、SEQ ID NO: 53 之 CDR-H2 及 SEQ ID NO: 54 之 CDR-H3，及輕鏈可變區 (V _LCD28)，該輕鏈可變區包含 SEQ ID NO: 55 之輕鏈互補決定區 CDR-L1、SEQ ID NO: 56 之 CDR-L2 及 SEQ ID NO: 57 之 CDR-L3。在一個方面，能與 CD28 特異性結合的第一抗原結合域包含含有 SEQ ID NO: 37 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28) 之 CDR，及含有 SEQ ID NO: 44 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD28) 之 CDR。

在另一特定方面，提供雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能與 CD28 特異性結合的抗原結合域包含含有 SEQ ID NO: 36 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28)，及含有 SEQ ID NO: 43 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD28)。在另一特定方面，提供雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 CD28 的抗原結合域包含含有 SEQ ID NO: 32 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28)，及含有 SEQ ID NO: 25 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD28)。

在一個方面，提供雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 Her2 的抗原結合域包含含有 SEQ ID NO: 2 之重鏈互補決定區 CDR-H1、SEQ ID NO: 3 之 CDR-H2 及 SEQ ID NO: 4 之 CDR-H3 的重鏈可變區 (V _HHer2)，及含有 SEQ ID NO: 5 之輕鏈互補決定區 CDR-L1、SEQ ID NO: 6 之 CDR-L2 及 SEQ ID NO: 7 之 CDR-L3 的輕鏈可變區 (V _LHer2)。在一個方面，能與 Her2 特異性結合的抗原結合域包含含有 SEQ ID NO: 8 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HHer2) 之 CDR，及含有 SEQ ID NO: 9 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LHer2) 之 CDR。在一個特定方面，能與 Her2 特異性結合的抗原結合域包含含有 SEQ ID NO: 8 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HHer2)，及含有 SEQ ID NO: 9 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LHer2)。

在另一方面，提供如本文所述之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 Her2 的抗原結合域包含含有 SEQ ID NO: 10 之重鏈互補決定區 CDR-H1、SEQ ID NO: 11 之 CDR-H2 及 SEQ ID NO: 12 之 CDR-H3 的重鏈可變區 (V _HHer2)，及含有 SEQ ID NO: 13 之輕鏈互補決定區 CDR-L1、SEQ ID NO: 14 之 CDR-L2 及 SEQ ID NO: 15 之 CDR-L3 的輕鏈可變區 (V _LHer2)。在一個方面，能與 Her2 特異性結合的抗原結合域包含含有 SEQ ID NO: 16 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HHer2) 之 CDR，及含有 SEQ ID NO: 17 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LHer2) 之 CDR。在一個特定方面，能與 Her2 特異性結合的抗原結合域包含含有 SEQ ID NO: 16 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HHer2)，及含有 SEQ ID NO: 17 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LHer2)。

又另一方面，提供如本文所述之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 Her2 的抗原結合域包含含有 SEQ ID NO: 132 之重鏈互補決定區 CDR-H1、SEQ ID NO: 133 之 CDR-H2 及 SEQ ID NO: 134 之 CDR-H3 的重鏈可變區 (V _HHer2)，及含有 SEQ ID NO: 135 之輕鏈互補決定區 CDR-L1、SEQ ID NO: 136 之 CDR-L2 及 SEQ ID NO: 137 之 CDR-L3 的輕鏈可變區 (V _LHer2)。在一個方面，能與 Her2 特異性結合的抗原結合域包含含有 SEQ ID NO: 138 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HHer2) 之 CDR，及含有 SEQ ID NO: 139 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LHer2) 之 CDR。在一個特定方面，能與 Her2 特異性結合的抗原結合域包含含有 SEQ ID NO: 138 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HHer2)，及含有 SEQ ID NO: 139 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LHer2)。

在另一方面，提供如本文所述之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 Her2 的抗原結合域包含含有 SEQ ID NO: 140 之重鏈互補決定區 CDR-H1、SEQ ID NO: 141 之 CDR-H2 及 SEQ ID NO: 142 之 CDR-H3 的重鏈可變區 (V _HHer2)，及含有 SEQ ID NO: 143 之輕鏈互補決定區 CDR-L1、SEQ ID NO: 144 之 CDR-L2 及 SEQ ID NO: 145 之 CDR-L3 的輕鏈可變區 (V _LHer2)。在一個方面，能與 Her2 特異性結合的抗原結合域包含含有 SEQ ID NO: 146 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HHer2) 之 CDR，及含有 SEQ ID NO: 147 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LHer2) 之 CDR。在一個特定方面，能與 Her2 特異性結合的抗原結合域包含含有 SEQ ID NO: 146 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HHer2)，及含有 SEQ ID NO: 147 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LHer2)。

在另一方面，提供如上文所定義之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 CD28 的第一抗原結合域及/或能夠特異性結合 Her2 的第二抗原結合域為 Fab 片段或交叉 Fab 片段 (crossFab fragment)。在一個方面，提供如本文所述之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其包含 (a) 能夠特異性結合 CD28 的 Fab 片段，(b) 能夠特異性結合 Her2 的交叉 Fab 片段，及 (c) 由能夠穩定締合的第一次單元和第二次單元構成之 Fc 域，其包含降低抗原結合分子對 Fc 受體及/或效應功能的結合親和力的一個或多個胺基酸取代。在另一方面，提供如本文所述之雙特異性激動性CD28抗原結合分子，其包含 (a) 能夠特異性結合 CD28 的交叉 Fab 片段，(b) 能夠特異性結合 Her2 的 Fab 片段，及 (c) 由能夠穩定締合的第一次單元和第二次單元構成之 Fc 域，其包含降低抗原結合分子對 Fc 受體及/或效應功能的結合親和力的一個或多個胺基酸取代。

在一個方面，能夠特異性結合 CD28 的該第一抗原結合域為 Fab 片段，其中 Fab 輕鏈及 Fab 重鏈之可變域 VL 與 VH 或恆定域 CL 與 CH1 被相互替換，特別是該可變域 VL 與 VH。在一個方面，能夠特異性結合 Her2 的第二抗原結合域為習用 Fab 片段。在一個方面，能夠特異性結合 Her2 的第二抗原結合域為 Fab 分子，其中在恆定域 CL 中，位置 123 處的胺基酸 (根據 Kabat EU 索引編號) 被選自離胺酸 (K)、精胺酸 (R) 或組胺酸 (H) 的胺基酸取代以及位置 124 處的胺基酸 (根據 Kabat EU 索引編號) 被離胺酸(K)、精胺酸 (R) 或組胺酸 (H) 獨立地取代，且其中在恆定域 CH1 中，位置 147 處的胺基酸 (根據 Kabat EU 索引編號) 被麩胺酸 (E) 或天冬胺酸 (D) 獨立地取代以及位置 213 處的胺基酸 (根據 Kabat EU 索引編號) 被麩胺酸 (E) 或天冬胺酸 (D) 獨立地取代 (根據 Kabat EU 索引編號)。

在一個特定方面，提供雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其包含 (i) 含有 SEQ ID NO: 92 之胺基酸序列的第一輕鏈、含有 SEQ ID NO: 91 之胺基酸序列的第一重鏈、含有 SEQ ID NO: 96 之胺基酸序列的第二重鏈及含有 SEQ ID NO: 97 之胺基酸序列的第二輕鏈，或 (ii) 含有 SEQ ID NO: 92 之胺基酸序列的第一輕鏈、含有 SEQ ID NO: 91 之胺基酸序列的第一重鏈、含有 SEQ ID NO: 98 之胺基酸序列的第二重鏈及含有 SEQ ID NO: 97 之胺基酸序列的第二輕鏈，或 (iii) 含有 SEQ ID NO: 92 之胺基酸序列的第一輕鏈、含有 SEQ ID NO: 91 之胺基酸序列的第一重鏈、含有 SEQ ID NO: 101 之胺基酸序列的第二重鏈及含有 SEQ ID NO: 97 之胺基酸序列的第二輕鏈。

在另一特定方面，提供雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其包含 (i) 含有 SEQ ID NO: 179 之胺基酸序列的第一輕鏈、含有 SEQ ID NO: 178 之胺基酸序列的第一重鏈、含有 SEQ ID NO: 180 之胺基酸序列的第二重鏈及含有 SEQ ID NO: 181 之胺基酸序列的第二輕鏈，或 (ii) 含有 SEQ ID NO: 179 之胺基酸序列的第一輕鏈、含有 SEQ ID NO: 178 之胺基酸序列的第一重鏈、含有 SEQ ID NO: 182 之胺基酸序列的第二重鏈及含有 SEQ ID NO: 183 之胺基酸序列的第二輕鏈。

在另一方面，提供雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 Her2 的該第二抗原結合域為 Fab 分子，其中 Fab 輕鏈及 Fab 重鏈之可變域 VL 與 VH 或恆定域 CL 與 CH1 被相互替換，特別是該可變域 VL 與 VH。在一個方面，能夠特異性結合 CD28 的第一抗原結合域為習用 Fab 分子。在一個方面，能夠特異性結合 CD28 的第一抗原結合域為 Fab 分子，其中在恆定域 CL 中，位置 123 處的胺基酸 (根據 Kabat EU 索引編號) 被選自離胺酸 (K)、精胺酸 (R) 或組胺酸 (H) 的胺基酸取代以及位置 124 處的胺基酸 (根據 Kabat EU 索引編號) 被離胺酸(K)、精胺酸 (R) 或組胺酸 (H) 獨立地取代，且其中在恆定域 CH1 中，位置 147 處的胺基酸 (根據 Kabat EU 索引編號) 被麩胺酸 (E) 或天冬胺酸 (D) 獨立地取代以及位置 213 處的胺基酸 (根據 Kabat EU 索引編號) 被麩胺酸 (E) 或天冬胺酸 (D) 獨立地取代 (根據 Kabat EU 索引編號)。

在一個特定方面，提供雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其包含 (i) 含有 SEQ ID NO: 83 之胺基酸序列的第一輕鏈、含有 SEQ ID NO: 74 之胺基酸序列的第一重鏈、含有 SEQ ID NO: 99 之胺基酸序列的第二重鏈及含有 SEQ ID NO: 100 之胺基酸序列的第二輕鏈，或 (ii) 含有 SEQ ID NO: 83 之胺基酸序列的第一輕鏈、含有 SEQ ID NO: 74 之胺基酸序列的第一重鏈、含有 SEQ ID NO: 102 之胺基酸序列的第二重鏈及含有 SEQ ID NO: 100 之胺基酸序列的第二輕鏈。

在另一方面，提供如本文所揭示之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中第一抗原結合域和第二抗原結合域各為 Fab 分子，且該 Fc 域由能夠穩定締合之第一次單元及第二次單元構成；且其中 (i) 該第一抗原結合域在 Fab 重鏈的 C 端處與 Fc 域的第一次單元的 N 端融合，且第二抗原結合域在 Fab 重鏈的 C 端處與 Fc 域的第二次單元的 N 端融合，或 (ii) 該第二抗原結合域在 Fab 重鏈的 C 端處與 Fc 域的第一次單元的 N 端融合，且第一抗原結合域在 Fab 重鏈的 C 端處與 Fc 域的第二次單元的 N 端融合。在一個方面，Fc 域包含促進 Fc 域之第一次單元與第二次單元之締合的修飾。在一個方面，Fc 域的第一次單元包含胺基酸取代 S354C 及 T366W (EU 編號)，且 Fc 域的第二次單元包含胺基酸取代 Y349C、T366S 及 Y407V (根據 Kabat EU 索引編號)。

根據本發明的另一方面，提供編碼本發明的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子的一種或多種分離多核苷酸。本發明進一步提供一種或多種載體，特別是表現載體，其包含本發明的分離多核苷酸，以及包含本發明的分離多核苷酸或表現載體的宿主細胞。在一些方面，本發明之宿主細胞為真核細胞，特定而言為哺乳動物細胞。在一些方面，宿主細胞為原核細胞。在另一方面，提供產生如本文所述之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子的方法，包含在適於表現雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子的條件下培養本發明的宿主細胞。視情況地，該方法亦包含回收雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子。本發明亦包含藉由本發明之方法所產生的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子。

本發明進一步提供包含本發明的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子和至少一種醫藥上可接受之賦形劑的醫藥組成物。在一個方面，該醫藥組成物用於治療疾病，特別是癌症。在一個方面，該醫藥組成物用於治療 Her2 陽性癌症。

本發明亦包含使用本發明之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子或醫藥組成物的方法。在一個方面，本發明提供用為藥劑的根據本發明之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子或醫藥組成物。在一個方面，提供用於 (a) 增強細胞活化或 (b) 增強 T 細胞效應功能的如本文所述的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子。在一個方面，提供用於治療疾病的根據本發明之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子或醫藥組成物。在一具體方面，該疾病為癌症，特別是 Her2 陽性癌症。在另一方面，提供用於治療癌症的根據本發明的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子或醫藥組成物，其中該雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子用於與化療劑、放射療法及/或其他用於癌症免疫療法的藥劑組合投予。在另一方面，提供用於治療癌症的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子或醫藥組成物，其中該雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子用於與 T 細胞活化抗 CD3 雙特異性抗體組合投予。在一個方面，T 細胞活化抗 CD3 雙特異性抗體為抗 Her2/抗 CD3 抗體。又另一方面，提供用於治療癌症的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子或醫藥組成物，其中該雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子用於與抗 PD-L1 抗體或抗 PD-1抗體組合投予。

亦提供根據本發明的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子或醫藥組成物在製造用於治療疾病之藥物中的用途；以及治療受試者疾病的方法，包括向該受試者投予治療有效量的根據本發明之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子或以醫藥上可接受的形式包含根據本發明的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子的組成物。在一具體方面中，疾病為癌症。在一個方面，提供在受試者中 (a) 增強 T 細胞活化或 (b) 增強 T 細胞效應功能的方法，包含投予根據本發明的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子或以醫藥上可接受的形式包含該雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子的組成物至該受試者。在另一方面，提供根據本發明的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子在製造用於治療疾病的藥物中的用途，其中該治療包含與化療劑、放射療法及/或用於癌症免疫療法的其他藥物共同投予。在另一方面，提供治療受試者疾病的方法，包含向該受試者投予治療有效量的根據本發明之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子或以醫藥上可接受的形式包含根據本發明的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子的組成物，其中該方法包含與化療劑、放射療法及/或用於癌症免疫療法的其他藥劑共同投予。在另一方面，提供治療受試者疾病的方法，包括向該受試者投予治療有效量的根據本發明之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子或以醫藥上可接受的形式包含根據本發明之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子的組成物，其中該方法包含共同投予 T 細胞活化抗 CD3 雙特異性抗體。在一個方面，T 細胞活化抗 CD3 雙特異性抗體為抗 Her2/抗 CD3 抗體。在另一方面，提供一種治療受試者疾病的方法，包含向該受試者投予治療有效量的根據本發明之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子或以醫藥上可接受的形式包含根據本發明之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子的組成物，其中該方法包含共同投予抗 PD-L1 抗體或抗 PD-1 抗體。亦提供一種抑制受試者中腫瘤細胞生長的方法，包含向該受試者投予有效量的根據本發明之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子或以醫藥上可接受的形式包含根據本發明之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子的組成物，以抑制腫瘤細胞生長。在任何上述方面中，該受試者較佳為哺乳動物，特別是人類。

定義

除非另有定義，否則本文所使用之技術及科學術語具有與本發明所屬技術中通常使用的含義相同。為了解釋本說明書的目的，將應用以下定義，並且只要合適，以單數形式使用的術語亦將包括複數，反之亦然。

如本文中所使用，術語「 抗原結合分子」以其最廣的涵義是指特異性結合抗原決定位的分子。抗原結合分子的實例為抗體、多特異性抗體 (例如雙特異性抗體)、抗體片段及支架抗原結合蛋白。

如本文中所使用，術語「 結合腫瘤相關抗原的抗原結合域」或「能夠特異性結合腫瘤相關抗原的部分」是指特異性結合腫瘤相關抗原 Her2 的多肽分子。在一個方面，抗原結合域能通過 Her2 活化信號傳導。在特定方面，抗原結合域能將其附著的實體 (例如 CD28 抗體) 引導至表現 Her2 的細胞，例如特定類型的腫瘤細胞。能與 Her2 特異性結合的抗原結合域包括本文所進一步定義的抗體及其片段。此外，能與腫瘤相關抗原特異性結合的抗原結合域包括本文所進一步定義的支架抗原結合蛋白，例如基於設計的重複蛋白或設計的重複結構域的結合域 (參見例如 WO 2002/020565)。

關於抗原結合分子，即抗體或其片段，術語「抗原結合域」是指包含與抗原的部分或全部特異性結合並與之互補之區域的分子部分。可藉由例如一個或多個抗體可變域 (亦稱為抗體可變區) 提供能夠特異性抗原結合的抗原結合域。特別地，能夠特異性抗原結合的抗原結合域包含抗體輕鏈可變區 (VL) 和抗體重鏈可變區 (VH)。另一方面，「能夠特異性結合腫瘤相關抗原的抗原結合域」亦可為 Fab 片段或交叉 Fab 片段。如本文中所使用的關於抗原結合域等的術語「第一」、「第二」或「第三」，係用於方便區分每一類型之部分何時存在多於一個。除非明確說明，否則使用此等術語並非旨在賦予部分特定之順序或方向。

本文中的術語「抗體」以最廣義使用且涵蓋各種抗體結構，包括但不限於單株抗體、多株抗體、單特異性抗體及多特異性抗體 (例如，雙特異性抗體) 及抗體片段，只要其等呈現期望的抗原結合活性即可。

如本文所用的術語「 單株抗體」是指獲自實質上同源抗體群體的抗體，即構成群體的受試者抗體是相同的及/或結合相同的表位，除了可能的變異體抗體，例如，包含天然發生的突變或在單株抗體製劑的生產過程中產生的，此類變異體通常以少量存在。與通常包括針對不同決定位 (表位) 之不同抗體之多株抗體製劑相反，單株抗體製劑之每個單株抗體係針對於抗原上的單一決定位。

如本文所用，術語「 單特異性」抗體表示具有一個或多個結合位點的抗體，各結合位點結合相同抗原的相同表位。術語「 雙特異性」意指抗原結合分子能夠特異性結合至少二個不同的抗原決定位。通常，雙特異性抗原結合分子包含二個抗原結合位點，各該抗原結合位點對不同抗原決定位具有特異性。然而，雙特異性抗原結合分子亦可包含結合其他抗原決定位的額外抗原結合位點。在某些方面，該雙特異性抗原結合分子能同時結合二個抗原決定位，特別是在兩個不同的細胞或同一細胞上表現的兩個抗原決定位。因此，根據本發明的術語「 雙特異性」亦可包括三特異性分子，例如，包含 CD28 抗體和針對兩種不同靶細胞抗原的兩個抗原結合域的雙特異性分子。

本案中所使用的術語「價」表示在抗原結合分子中存在特定數量的對一種不同抗原決定位特異的結合位點，該結合位點對一種不同抗原決定位具有特異性。因此，術語「二價」、「四價」及「六價」分別表示在抗原結合分子中存在對某個抗原決定位特異的兩個結合位點、四個結合位點及六個結合位點。在本發明的特定方面，根據本發明的雙特異性抗原結合分子對於某種抗原決定位可以是單價的，意指它們對於該抗原決定位僅具有一個結合位點，或者它們對於某種抗原決定位可以是二價或四價的，意指是它們分別具有針對該抗原決定位的兩個結合位點或四個結合位點。

術語「全長抗體」、「完整抗體」及「全抗體」在本文中可互換使用，是指具有與天然抗體結構實質上類似之結構的抗體。「 天然抗體」或「 野生型」是指具有不同結構的天然生成之免疫球蛋白分子。例如，天然 IgG 級抗體為約 150,000 個道耳頓的異四聚體醣蛋白，其由二條輕鏈及二條重鏈經雙硫鍵鍵合所構成。從 N 端至 C 端，每條重鏈具有可變區 (VH)，亦稱為可變重域或重鏈可變域，接著為三個恆定域 (CH1、CH2 及 CH3)，亦稱為重鏈恆定區。類似地，從 N 端至 C 端，各輕鏈具有可變區 (VL)，亦稱為可變輕域或輕鏈可變域，接著為輕鏈恆定域 (CL)，亦稱為輕鏈恆定區。抗體的重鏈可歸為五種類型之一，稱為α (IgA)、δ (IgD)、ε (IgE)、γ (IgG) 或 μ (IgM)，其中的一些可再區分為亞型，例如 γ1 (IgG1)、γ2 (IgG2)、γ3 (IgG3)、γ4 (IgG4)、α1 (IgA1) 和α2 (IgA2)。基於其恆定域之胺基酸序列，抗體之輕鏈可被歸類為兩種類型中的一種，稱為卡帕 (κ) 及蘭姆達 (λ)。

「 抗體片段」是指除完整抗體以外的分子，其包含完整抗體的一部分，該完整抗體結合完整抗體所結合的抗原。抗體片段之實例包括，但不限於 Fv、Fab、Fab'、Fab’-SH、F (ab') ₂；雙功能抗體、三功能抗體、四功能抗體、交叉 Fab 片段、線性抗體；單鏈抗體分子 (例如 scFv)；及單域抗體。關於某些抗體片段的綜述，參見 Hudson 等人，Nat Med 9，129-134 (2003)。關於 scFv 片段的綜述，請參見 Pluckthün，The Pharmacology of Monoclonal Antibodies，第 113 卷，Rosenburg 及 Moore 編，Springer-Verlag，New York，第 269-315 頁 (1994)；亦可參見 WO 93/16185；及美國專利第 5,571,894 號及第 5,587,458 號。關於包含補救受體結合表位殘基且具有增加的體內半衰期之 Fab 及 F(ab')2 片段的論述，參見美國專利號 5,869,046。雙功能抗體是具有兩個抗原結合位點的抗體片段，其可為二價或雙特異性的，參見例如 EP 404,097；WO 1993/01161；Hudson et al., Nat Med 9, 129-134 (2003)；及 Hollinger et al., Proc Natl Acad Sci USA 90, 6444-6448 (1993)。Hudson 等人，Nat Med 9，129-134 (2003) 中亦描述三功能抗體及四功能抗體。單域抗體為包含抗體之全部或部分重鏈可變域或抗體之全部或部分輕鏈可變域的抗體片段。在某些實施例中，單域抗體為人類單域抗體 (Domantis, Inc.，Waltham, MA；參見例如美國第 6,248,516 B1 號專利)。抗體片段可透過各種技術製造，包括但不限於如本文所述之完整抗體的蛋白水解消化以及重組宿主細胞 (例如大腸桿菌或噬菌體) 的產生。

木瓜酵素對完整抗體之消化產生兩個相同的抗原結合片段，稱為「Fab」片段，其各自包含重鏈可變域及輕鏈可變域以及輕鏈之恆定域和重鏈之第一恆定域 (CH1)。因此，如本文所使用，術語「 Fab 片段」或「 Fab 分子」是指包含輕鏈片段的抗體片段，該輕鏈片段包含可變輕鏈(VL)域和輕鏈恆定域 (CL)，以及可變重鏈域 (VH) 和重鏈第一恆定域 (CH1)。Fab' 片段與 Fab 片段不同之處在於，在重鏈 CH1 域之羧基端添加少數殘基，包括來自抗體鉸鏈區的一個或多個半胱胺酸。Fab’-SH 是 Fab’ 片段，其中恆定域的半胱胺酸殘基帶有一個游離硫醇基團。胃蛋白酶處理產生 F(ab') ₂片段，該片段具有兩個抗原結合位點 (兩個 Fab 片段) 及一部分 Fc 區。「習用 Fab 片段」由 VL-CL 輕鏈和 VH-CH1 重鏈構成。

術語「交叉 Fab 片段 (crossFab fragment)」或「xFab 片段」或「互換型 Fab 片段 (crossover Fab fragment)」是指其中重鏈及輕鏈之可變區或恆定區互換的 Fab 片段。可能存在交叉 Fab 分子之兩種不同鏈組成且包含於本發明之雙特異性抗體中：一方面，Fab 重鏈及輕鏈之可變區互換，亦即互換型 Fab 分子包含由輕鏈可變區 (VL) 及重鏈恆定域 (CH1) 構成之肽鏈，及由重鏈可變域 (VH) 及輕鏈恆定域 (CL) 構成之肽鏈。此互換型 Fab 分子亦稱為交叉 Fab _(VLVH)。另一方面，當 Fab 重鏈及輕鏈之恆定區互換時，互換型 Fab 分子包含由重鏈可變域 (VH) 及輕鏈恆定域 (CL) 構成之肽鏈，及由輕鏈可變域 (VL) 及重鏈恆定域 (CH1) 構成之肽鏈。這種互換型 Fab 分子亦稱為交叉 Fab _(CLCH1)。

「單鏈 Fab 片段」或「 scFab」為由抗體重鏈可變域 (VH)、抗體恆定域1 (CH1)、抗體輕鏈可變域 (VL)、抗體輕鏈恆定域 (CL) 及連接子組成之多肽，其中該抗體域及該連接子按 N 端至 C 端方向之次序具有以下中之一者：a) VH-CH1-連接子-VL-CL，b) VL-CL-連接子-VH-CH1，c) VH-CL-連接子-VL-CH1 或 d) VL-CH1-連接子-VH-CL；且其中該連接子為至少 30 個胺基酸，較佳為 32 與 50 個胺基酸之間的多肽。該單鏈 Fab 片段通過 CL 域與 CH1 域之間的天然雙硫鍵達到穩定。此外，此等單鏈 Fab 分子可經由插入半胱胺酸殘基 (例如可變重鏈中之位置 44 及可變輕鏈中之位置 100，根據 Kabat 編號) 而產生鏈間雙硫鍵來進一步穩定化。

「互換型單鏈 Fab 片段」或「 x-scFab」是由抗體重鏈可變域 (VH)、抗體恆定域1 (CH1)、抗體輕鏈可變域 (VL)、抗體輕鏈恆定域 (CL) 及連接子組成之多肽，其中該抗體域及該連接子按 N 端至 C 端方向之次序具有以下中之一者：a) VH-CL-連接子-VL-CH1 和 b) VL-CH1-連接子-VH-CL；其中 VH 和 VL 一起形成與抗原特異性結合的抗原結合位點，且其中該連接子為至少 30 個胺基酸之多肽。此外，此等 x-scFab 分子可經由插入半胱胺酸殘基 (例如可變重鏈中之位置 44 及可變輕鏈中之位置 100，根據 Kabat 編號) 而產生鏈間雙硫鍵來進一步穩定化。

「 單鏈可變片段( scFv)」為抗體之重鏈 (V _H) 及輕鏈 (V _L) 之可變區之融合蛋白質，其與十至約 25 個胺基酸之短連接子肽連接。連接子通常富含甘胺酸以具有可撓性，以及絲胺酸或蘇胺酸以具有可溶性，且可連接 V _H之 N 端與 V _L之 C 端，或 反之亦然。儘管移除恆定區且引入連接子，但此蛋白質保持原始抗體之特異性。scFv 抗體例如描述於 Houston, J.S., Methods in Enzymol. 203 (1991) 46-96)。此外，抗體片段包含單鏈多肽，其具有 VH 域 (亦即能與 VL 域一起組裝至功能性抗原結合位點) 或 VL 域 (亦即能與 VH 域一起組裝至功能性抗原結合位點) 之特徵，且藉此提供全長抗體之抗原結合性質。

「 支架抗原結合蛋白」為技術中已知的，例如纖網蛋白及經設計之錨蛋白重複蛋白質 (DARPins) 已用作抗原結合域之替代性支架，參見例如 Gebauer and Skerra, Engineered protein scaffolds as next-generation antibody therapeutics.Curr Opin Chem Biol 13:245-255 (2009) and Stumpp et al., Darpins: A new generation of protein therapeutics.Drug Discovery Today 13: 695-701 (2008)。在本發明之一方面，支架抗原結合蛋白係選自由以下組成之群：CTLA-4 (艾維伯迪 (Evibody))；脂質運載蛋白(抗運載蛋白 (Anticalin))；蛋白質 A 衍生之分子，諸如蛋白質 A 之 Z 域 (親和抗體)；A 域 (高親和性多聚體/最大抗體)；血清運鐵蛋白( 反式-抗體)；經設計之錨蛋白重複蛋白質 (DARPin)；抗體輕鏈或重鏈之可變域(單域抗體，sdAb)；抗體重鏈之可變域(奈米抗體，aVH)；V _NAR片段；纖網蛋白(阿耐克汀(AdNectin))；C 型凝集素域(四連接素 (Tetranectin))；新型抗原受體β-內醯胺酶之可變域(V _NAR片段)；人類γ-晶狀體球蛋白或泛素(阿菲林 (Affilin) 分子)；人類蛋白酶抑制劑之庫尼茨 (kunitz) 型域，微體，諸如來自knottin家族之蛋白質、肽適體及纖網蛋白(阿耐克汀 (adnectin))。CTLA-4 (細胞毒性 T 淋巴細胞相關抗原 4) 為表現於主要 CD4 ⁺T 細胞上之 CD28 家族受體。其細胞域具有可變域類 Ig 摺疊。對應於抗體之 CDR 之環可經異源序列取代以賦予不同結合特性。經工程改造以具有不同結合特異性之 CTLA-4 分子亦稱為艾維伯迪 (Evibodies) (例如 US7166697B1)。艾維伯迪 (Evibody) 與抗體 (例如結構域抗體) 之經分離之可變區之尺寸大致相同。關於其他細節，參見 Journal of Immunological Methods 248 (1-2), 31-45 (2001)。脂質運載蛋白為細胞外蛋白質之家族，其傳遞小型疏水性分子，諸如類固醇、後膽色素 (bilins)、類視色素及脂質。其具有剛性 β-片狀第二結構，其在圓錐結構之開放端具有許多環，其可經工程改造以結合不同標靶抗原。抗運載蛋白 (Anticalin) 的大小在 160-180 個胺基酸之間，且來源於脂質運載蛋白。關於其他細節，參見 Biochim Biophys Acta 1482: 337-350 (2000)、US7250297B1 及 US20070224633。親和抗體為來源於金黃色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus) 之蛋白質 A 的支架，其可經工程化以結合於抗原。結構域由具有約 58 個胺基酸的三螺旋束組成。已藉由表面殘基之隨機化產生文庫。關於其他細節，參見 Protein Eng. Des. Sel. 2004, 17, 455-462 及 EP 1641818A1。高親合性多聚體 (Avimers) 為來源於 A-域支架家族之多域蛋白質。約 35 個胺基酸之原生結構域採用既定雙硫鍵鍵結之結構。藉由改組由 A-域之家族呈現之天然變化來產生多樣性。關於其他細節，參見 Nature Biotechnology 23(12), 1556-1561 (2005) 及 Expert Opinion on Investigational Drugs 16(6), 909-917 (June 2007)。運鐵蛋白為單體血清運送醣蛋白。運鐵蛋白可藉由在允許的表面環中插入肽序列而經工程化以結合不同標靶抗原。經工程化之運鐵蛋白支架之實例包括反式體。關於其他細節，參見 J. Biol. Chem 274, 24066-24073 (1999)。經設計之錨蛋白重複蛋白質 (DARPins) 來源於錨蛋白，錨蛋白為介導整合膜蛋白質與細胞骨架之連接的蛋白質之家族。單一錨蛋白重複為由兩個 α 螺旋及 β 迴旋 (beta-turn) 組成之 33 殘基積蓄模體。其可藉由隨機化各重複之第一個 α 螺旋及 β 迴旋中之殘基而經工程化以結合不同標靶抗原。可藉由增加模組數目來增加其結合界面 (親和力成熟方法)。關於其他細節，參見 J. Mol. Biol. 332, 489-503 (2003), PNAS 100(4), 1700-1705 (2003) 及 J. Mol. Biol. 369, 1015-1028 (2007) 及 US20040132028A1。單域抗體為由單一單體可變抗體域組成之抗體片段。第一個單域源自來自駱駝之抗體重鏈之可變域 (奈米抗體或 V _HH 片段)。此外，術語單域抗體包括自主人類重鏈可變域 (aVH) 或來源於鯊魚之 V _NAR片段。纖網蛋白為可經工程化結合於抗原之支架。纖連蛋白由第三型人類纖網蛋白 (FN3) 之 15 個重複單元的第 10 個域的天然胺基酸序列之主鏈組成。β-夾層結構之一端處的三個環可經工程化以使阿耐克汀 (Adnectin) 能夠特異性識別感興趣的治療目標。關於其他細節，參見 Protein Eng. Des. Sel.18, 435- 444 (2005)、US20080139791、WO2005056764 及 US6818418B1。肽適體為組合性識別分子，其由恆定支架蛋白質 (通常為硫氧還蛋白 (TrxA)) 組成，該恆定支架蛋白質含有在活性位點處插入之限制性可變肽環。關於其他細節，參見 Expert Opin. Biol. Ther. 5, 783-797 (2005)。微體來源於天然存在之長度為 25-50 個胺基酸之微型蛋白質，其含有 3-4 個半胱胺酸橋，微型蛋白質之實例包括 KalataBI 及芋螺毒素 (conotoxin) 及打結素 (knottin)。微型蛋白質具有環，其可經工程化以包括至多25個胺基酸而不影響微型蛋白質之整體摺疊。關於經工程改造之打結素結構域之其他細節，參見 WO2008098796。

與參考分子「 結合於相同表位之抗原結合分子」係指一種抗原結合分子，其在競爭分析中阻斷參考分子與其抗原之結合達 50% 或更多，且相反地，參考分子在競爭分析中阻斷抗原結合分子與其抗原之結合達50%或更多。

術語「 抗原結合域」係指抗原結合分子之一部分，其包含特異性結合於一部分或全部抗原且與其互補之區域。當抗原較大時，抗原結合分子可僅結合於抗原之特定一部分，該部分稱為表位。抗原結合域可由例如一或多個可變域 (亦稱為可變區) 提供。較佳地，抗原結合域包含抗體輕鏈可變域 (VL) 及抗體重鏈可變域 (VH)。

如本文所使用，術語「 抗原決定位」與「抗原」及「表位」同義，且是指多肽大分子上與抗原結合部分結合，形成抗原結合部分-抗原複合物的位點(例如，胺基酸之相鄰延伸或由非相鄰胺基酸之不同區域組成的構形組態)。例如，可用之抗原決定位可存在於腫瘤細胞之表面上、受病毒感染之細胞之表面上、其他患病細胞之表面上、免疫細胞的表面上，不存在於血清中，及/或存在於細胞外基質 (ECM) 中。除非另有指示，否則本文中適用作抗原之蛋白質可為來自任何脊椎動物來源 (包括哺乳動物，諸如靈長類動物 (例如人類) 及嚙齒動物 (例如小鼠及大鼠)) 之蛋白質的任何原生形式。在特定實施例中，該抗原為人蛋白質。在本文中提及特定蛋白質的情況下，該術語涵蓋「全長」、未處理之蛋白質及由在細胞中處理所產生之任何蛋白質形式。該術語亦涵蓋天然生成之蛋白質變異體例如剪接變異體或對偶基因變異體。

術語「 能夠特異性結合 Her2」是指能以足夠的親和力結合 Her2 的抗原結合分子，使得抗原結合分子可用作靶向 Her2 的診斷及/或治療劑。抗原結合分子包括但不限於抗體、Fab 分子、互換型 Fab 分子、單鏈 Fab 分子、Fv 分子、scFv 分子、單域抗體以及 VH 和支架抗原結合蛋白。在一個方面，抗 Her2 抗原結合分子與無關的非 Her2 蛋白的結合程度小於抗原結合分子與 Her2 結合的約 10%，例如藉由表面電漿子共振 (SPR) 測量。特別是，能夠特異性結合至 Her2 之抗原結合分子具有解離常數 (K _d) 為 ≤ 1μM、≤ 100 nM、≤ 10 nM、≤ 1 nM、≤ 0.1 nM、≤ 0.01 nM、或≤ 0.001 nM (例如 10 ^-8M 或更低，例如 10 ^-8M 至 10 ^-13M，例如 10 ^-9至 10 ^-13M)。在某些方面，抗 Her2 抗原結合分子結合來自不同物種的 Her2。特別是，抗 Her2 抗原結合分子結合人類和食蟹猴 Her2。

術語「表位 (epitope)」表示蛋白質或非蛋白質抗原上抗體結合的位點。表位可由連續的胺基酸延伸形成 (線性表位) 或包含非連續的胺基酸 (構象表位)，例如，由於抗原的折疊，即藉由蛋白抗原的三級折疊而在空間上接近。線性表位通常在蛋白抗原暴露於變性劑後仍被抗體結合，而構象表位通常在變性劑處理後被破壞。在獨特空間構象中，表位包含至少 3 個、至少 4 個、至少 5 個、至少 6 個、至少 7 個或 8 個至 10 個胺基酸。

「表位 4D5」或「4D5 表位」或「4D5」是 HER2 胞外域中抗體 4D5 (ATCC CRL 10463) 和曲妥珠單抗結合的區域。該表位靠近 HER2 的跨膜域，並在 HER2 的域 IV 內。為了篩選與 4D5 表位結合的抗體，可進行習用交叉阻斷測定，例如在 Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Ed Harlow and David Lane (1988) 中所描述的。或者，可進行表位定位 (mapping) 以評估抗體是否結合 HER2 的 4D5 表位 (例如，人類 HER2 (SEQ ID NO: 54) 的從約殘基 550 至約殘基 610 的區域中 (包括端點) 的任何一個或多個殘基)。

「表位 2C4」或「2C4 表位」是 HER2 胞外域中抗體 2C4 結合的區域。為了篩選與 2C4 表位結合的抗體，可進行習用交叉阻斷測定，例如在 Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Ed Harlow and David Lane (1988) 中所描述的。或者，可進行表位定位以評估抗體是否與 HER2 的 2C4 表位結合。表位 2C4 包含來自 HER2 胞外域中域 II 的殘基。2C4 抗體和帕妥珠單抗在結構域 I、II 及 III 的連接處與 HER2 的胞外域結合 (Franklin et al. Cancer Cell 5:317-328 (2004))。

「 特異性結合」意謂結合對於抗原而言具有選擇性且可與非所需或非特異性相互作用區分。抗原結合分子結合特異性抗原之能力可藉由酶聯免疫吸附分析 (ELISA) 或所屬領域知識者所熟悉的其他技術，例如表面電漿子共振 (SPR) 技術 (於 BIAcore 儀器上分析) (Liljeblad et al., Glyco J 17, 323-329 (2000)) 及傳統的結合測定 (Heeley, Endocr Res 28, 217-229 (2002)) 來量測。在一個實施例中，抗原結合分子結合不相關的蛋白質之程度小於抗原結合分子結合抗原的約 10%，例如藉由 SPR。在某些實施例中，結合至抗原之分子具有解離常數 (Kd) 為 ≤ 1μM、≤ 100 nM、≤ 10 nM、≤ 1 nM、≤ 0.1 nM、≤ 0.01 nM、或≤ 0.001 nM (例如 10 ^-8M 或更低，例如 10 ^-8M 至 10 ^-13M，例如 10 ^-9至 10 ^-13M)。

「 親和力」或「結合親和力」是指分子 (例如抗體) 之單一結合位點與其結合配偶體 (例如抗原) 之間的非共價相互作用之總和強度。除非另有說明，否則如本文中所使用的「結合親和力」係指反映結合對成員 (例如抗體及抗原) 之間 1:1 交互作用之內在結合親和力。分子 X 對其搭配物 Y 之親和力通常可由解離常數 (Kd) 表示，解離常數為解離速率常數與締合速率常數 (分別為 koff 及 kon) 之比率。因此，等效親和力可包括不同速率常數，只要速率常數比保持相同即可。可以藉由本領域已知的常規方法測量親和力，包括彼等本文所述之方法。用於測定親和力之特定方法為表面電漿子共振 (SPR)。

如本文中所使用的「 腫瘤相關抗原」或 TAA，是指標靶細胞 (例如腫瘤中之細胞，諸如癌細胞或腫瘤基質之細胞) 表面上所呈現的抗原決定位。在某些方面，標靶細胞抗原為腫瘤細胞表面上的抗原。在一個特定方面，TAA 為 Her2。

術語「 Her2」，亦稱為「ErbB2」、「ErbB2 受體」或「c-Erb-B2」，是指由細胞中 HER2 前驅蛋白加工產生的任何天然、成熟的 HER2。除非另有說明，否則該術語包括是指來自任何脊椎動物來源的 HER2，該脊椎動物包括哺乳動物，諸如靈長類動物 (例如，人類及食蟹獼猴) 和囓齒類動物 (例如，小鼠和大鼠)。該術語亦包括天然存在之 HER2 變異體，例如，剪接變異體或等位基因變異體。該例示性人類 HER2 蛋白的胺基酸序列顯示於 SEQ ID NO: 103 中。

術語「 CD28」 (分化簇 28，Tp44) 是指源自任何脊椎動物 (包括哺乳動物，諸如靈長類動物 (例如人類)、非人類的靈長類動物 (例如食蟹獼猴) 及囓齒動物 (例如小鼠及大鼠)) 的任何 CD28 蛋白質，除非另有說明。CD28 在 T 細胞上表現並提供 T 細胞活化和存活所需的共刺激信號。除了 T 細胞受體 (TCR) 之外，通過 CD28 刺激 T 細胞可為各種白細胞介質的產生提供有效的信號。CD28 是 CD80 (B7.1) 和 CD86 (B7.2) 蛋白的受體，並且是唯一在初始 T 細胞上組成性地表現的 B7 受體。人類 CD28 的胺基酸序列顯示於 UniProt (www.uniprot.org) 登錄號 P10747 (SEQ ID NO:1)。

「 激動性抗體」是指包含針對給定受體的激動性功能的抗體。一般而言，當促效劑配體 (因子) 與受體結合時，受體蛋白的三級結構發生變化，且受體被活化 (當受體是膜蛋白時，通常會轉導細胞生長信號等)。若受體是形成二聚體的類型，激動性抗體可在適當的距離和角度將受體二聚化，因此作用類似於配體。合適的抗受體抗體可模擬由配體進行的受體二聚化作用，因此成為激動性抗體。

「 CD28 激動性抗原結合分子」或「CD28 習用激動性抗原結合分子」是一種抗原結合分子，其模擬 CD28 天然配體 (CD80 或 CD86)在 T 細胞受體信號 (「信號 2」) 存在下增強 T 細胞活化的角色。T 細胞需要兩個信號才能完全活化。在生理條件下，「信號 1」來自 T 細胞受體 (TCR) 分子與抗原呈現細胞 (APC) 上的肽/主要組織相容性複合物 (MHC) 複合物的相互作用，「信號 2」由共刺激受體 (例如 CD28) 的接合提供。CD28 激動性抗原結合分子能夠共刺激 T 細胞 (信號 2)。它還能夠與對 TCR 複合物具有特異性的分子結合來誘導 T 細胞增殖和細胞激素分泌，然而， CD28 激動性抗原結合分子並在沒有額外刺激 TCR 的情況下不能完全活化 T 細胞。然而，有一個 CD28 特異性抗原結合分子的子類，即所謂的 CD28 超激動抗原結合分子。「 CD28 超激動性抗原結合分子」是一種 CD28 抗原結合分子，其能夠在沒有額外刺激 TCR 的情況下完全活化 T 細胞。CD28 超激動抗原結合分子能夠誘導 T 細胞增殖和細胞激素分泌，而無需事先活化 T 細胞 (信號 1)。

如本文所使用，「 T 細胞抗原」是指存在於 T 淋巴球，特別是細胞毒性 T 淋巴球表面上的抗原決定位。

如本文所使用，「 T 細胞活化治療劑」是指能夠在個體中誘導 T 細胞活化的治療劑，特別是設計用於在個體中誘導 T 細胞活化的治療劑。T 細胞活化治療劑的實例包括特異性結合活化 T 細胞抗原 (例如 CD3) 和標靶細胞抗原 (例如 CEA 或葉酸受體) 的雙特異性抗體。

如本文中所使用的「活化 T 細胞抗原」是指藉由 T 淋巴球 (特定而言是細胞毒性 T 淋巴球) 表現的抗原決定位，其能夠在與抗原結合分子相互作用時誘導或增強 T 細胞活化。具體而言，抗原結合分子與活化 T 細胞抗原之相互作用可藉由觸發 T 細胞受體複合體之傳訊級聯來誘導 T 細胞活化。例示性的活化 T 細胞抗原為 CD3。

除非另有說明，否則術語「 CD3」是指來自任何脊椎動物來源之任何天然 CD3，該脊椎動物包括哺乳動物，諸如靈長類動物 (例如，人類)、非人靈長類 (例如，食蟹獼猴) 和囓齒類動物 (例如，小鼠和大鼠)。該術語涵蓋「全長」、未處理之 CD3 以及在細胞處理中得到的任何形式的 CD3。該術語亦涵蓋天然生成之 CD3 變異體，例如，剪接變異體或對偶基因變異體。在一實施例中，CD3 是人類 CD3，特別是人類 CD3 的 ε 次單元 (CD3ε)。人類 CD3ε 的胺基酸序列顯示於 UniProt (www.uniprot.org) 登錄號 P07766 (版本 144) 或 NCBI (www.ncbi.nlm.nih.gov/) RefSeq NP_000724.1。亦可參見 SEQ ID NO: 188。食蟹猴 [Macaca fascicularis] CD3ε 的胺基酸序列顯示於 UniProt (www.uniprot.org) 登錄號 Q95LI5。亦可參見 SEQ ID NO: 189。

術語「 可變域」或「可變區」是指抗體重鏈或輕鏈中涉及抗原結合分子與抗原之結合的結構域。天然抗體之重鏈及輕鏈（分別為 VH 及 VL）之可變域通常具有類似的結構，且每個結構域均包含四個保守性骨架區 (FR) 及三個高變區 (HVR)。參見例如 Kindt et al., Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., page 91 (2007)。單個 VH 或 VL 域可能足以賦予抗原結合特異性。

如本文所使用之術語「高變區」或「HVR」是指在序列上高度可變異的並決定抗原結合特異性的抗原結合可變域的各區域，例如「互補決定區」 (「CDR」)。通常，抗原結合域包括六個 CDR：三個在 VH 中 (CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3)，且三個在 VL 中 (CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3)。在本文中，例示性 CDR 包括： (a) 高度可變環存在於胺基酸殘基 26-32 (L1)、50-52 (L2)、91-96 (L3)、26-32 (H1)、53-55 (H2)、及 96-101 (H3) 處 (Chothia 及 Lesk， J. Mol. Biol.196:901-917 (1987))； (b) CDR 存在於胺基酸殘基 24-34 (L1)、50-56 (L2)、89-97 (L3)、31-35b (H1)、50-65 (H2)、及 95-102 (H3)處 (Kabat et al. , Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991))；及 (c) 抗原接觸存在於胺基酸殘基 27c-36 (L1)、46-55 (L2)、89-96 (L3)、30-35b (H1)、47-58 (H2)、及 93-101 (H3) 處 (MacCallum 等人 J. Mol. Biol.262: 732-745 (1996))。

除非另有說明，否則 CDR 根據 Kabat 等人在上述文獻中所述之方法來確定。本領域之技術人員將理解，亦可根據 如上述的 Chothia、 如上述的 McCallum 或任何其他科學上接受之命名系統來確定 CDR 名稱。Kabat 等人亦定義適用於任何抗體之可變區序列編號系統。本領域普通技術人員可針對任何可變區序列明確地指定此「Kabat 編號」系統，而不依賴於除序列本身以外的任何實驗資料。如本文所使用，「Kabat 編號」是指由 Kabat et al., U.S. Dept. of Health and Human Services, “Sequence of Proteins of Immunological Interest” (1983) 所闡述之編號系統。除非另有指明，否則提及抗體可變區中之特定胺基酸殘基位置的編號是依據 Kabat 編號系統。

如本文所使用，在抗原結合分子 (例如，抗體) 的上下文中，術語「 親和力成熟的」是指源自參考抗原結合分子 (例如藉由突變) 之抗原結合分子，其與參考抗體結合於相同抗原，較佳結合於相同表位；且與參考抗原結合分子相比對抗原具有較高親和力。親和力成熟通常涉及抗原結合分子之一個或多個 CDR 中一個或多個胺基酸殘基的修飾。通常，親和力成熟的抗原結合分子與初始參考抗原結合分子結合於相同表位。

「骨架」或「FR」是指除高變區 (HVR) 殘基之外的可變域殘基。可變域之 FR 通常由四個 FR 域組成：FR1、FR2、FR3、及 FR4。因此，HVR 及 FR 序列通常以如下順序出現在 VH (或 VL) 中：FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4。

就本文目的而言，「 接受者人類骨架」是包含源自人類免疫球蛋白骨架或人類共通骨架的輕鏈可變域 (VL) 骨架或重鏈可變域 (VH) 骨架的胺基酸序列的骨架，如下定義。「衍生自」人免疫球蛋白骨架或人共通骨架的接受者人骨架可包含其相同的胺基酸序列，或者其可含有胺基酸序列變化。於一些實施例中，胺基酸變更數目為 10 或更少、9 或更少、8 或更少、7 或更少、6 或更少、5 或更少、4 或更少、3 或更少、或 2 或更少。於一些實施例中，VL 受體人骨架與 VL 人免疫球蛋白骨架序列或人共通骨架序列的序列相同。

術語「嵌合」抗體是指其中重鏈及/或輕鏈的一部分源自特定來源或物種，而重鏈及/或輕鏈的其餘部分源自不同來源或物種的抗體。

抗體之「類 (class)」是指其重鏈所具有的恆定域或恆定區的類型。有五大類主要抗體：IgA、IgD、IgE、IgG 及 IgM，且彼等中的幾種可進一步分為子類 (同型 (isotype))，例如 IgG ₁、IgG ₂、IgG ₃、IgG ₄、IgA ₁及 IgA ₂。對應於不同類之免疫球蛋白的重鏈恆定域分別稱為 α、δ、ε、γ 及 μ。

「 人源化」抗體是指包含來自非人類 HVR 之胺基酸殘基及來自人類 FR 之胺基酸殘基的嵌合抗體。在某些實施例中，人源化抗體將包括實質上所有至少一個 (且通常兩個) 可變域，其中所有或實質上所有 HVR (例如 CDR) 對應於非人抗體之其等，及所有或實質上所有 FR 對應對於人抗體之其等。人源化抗體視情況可包含源自人抗體之抗體恆定區之至少一部分。抗體 (例如非人類抗體) 之「 人源化形式」是指已經歷人源化的抗體。本發明所涵蓋的「人源化抗體 (humanized antibody)」之其他形式為其中恆定區已自原始抗體之形式另外修飾或改變者，以產生根據本發明之性質、尤其關於 C1q 結合及/或 Fc 受體 (FcR) 結合之性質。

「人類」抗體為一種抗體，其具有之胺基酸序列對應於由人類或人類細胞產生的胺基酸序列或來自利用人類抗體譜系 (antibody repertoire) 或其他人類抗體編碼序列之非人類來源所衍生之胺基酸序列。人抗體的該定義特定地排除包含非人抗原結合殘基之人源化抗體。

術語「 CH1 結構域」表示大約從 EU 位置 118 延伸至 EU 位置 215 (根據 Kabat 的 EU 編號系統) 的抗體重鏈多肽的部分。在一個方面，CH1 域具有胺基酸序列 ASTKGPSVFP ASTKGPSVFP LAPSSKSTSG GTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPS NTKVDKKV (SEQ ID NO: 104)。通常，具有 EPKSC 胺基酸序列 (SEQ ID NO: 107) 的區段隨後將 CH1 域連接到鉸鏈區，

術語「 鉸鏈區」表示在野生型抗體重鏈中連接 CH1 域和 CH2 域的抗體重鏈多肽部分，例如根據 Kabat 的 EU 編號系統，從約位置 216 到約位置 230，或根據 Kabat 的 EU 編號系統，從約位置 226 到約位置 230。其他 IgG 子類的鉸鏈區可藉由與 IgG1 子類序列的鉸鏈區半胱胺酸殘基比對來確定。鉸鏈區通常是由兩個具有相同胺基酸序列的多肽組成的二聚體分子。鉸鏈區通常包含多達 25 個胺基酸殘基並且是可撓性的，允許相關的目標結合位點獨立移動。鉸鏈區可細分為三個結構域：上部、中部和下部鉸鏈域 (參見例如 Roux, et al., J. Immunol. 161 (1998) 4083)。

在一個方面，鉸鏈區具有胺基酸序列 DKTHTCPXCP (SEQ ID NO: 108)，其中 X 為 S 或 P。在一個方面，鉸鏈區具有胺基酸序列 HTCPXCP (SEQ ID NO: 109)，其中 X 為 S 或 P。在一個方面，鉸鏈區具有胺基酸序列 CPXCP (SEQ ID No:110)，其中 X 為 S 或 P。

本文之術語「 Fc 域」或「Fc 區」，用於定義含有至少一部分恆定區之抗體重鏈的 C 端區域。該術語包括天然序列 Fc 區及變異體 Fc 區。IgG Fc 區包含 IgG CH2 和 IgG CH3 域。

人類 IgG Fc 區的「CH2 域」通常從約 EU 位置 231 處的胺基酸殘基延伸至約 EU 位置 340 處的胺基酸殘基 (根據 Kabat 的 EU 編號系統)。在一個方面，CH2 域具有胺基酸序列 APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVWDVSHEDP EVKFNWYVDG VEVHNAKTKP REEQESTYRW SVLTVLHQDW LNGKEYKCKV SNKALPAPIE KTISKAK (SEQ ID NO: 105)。CH2 域的獨特之處在於其沒有與另一域緊密配對。而是，兩個 N-連接的分支碳水化合物鏈插入完整的天然 Fc 區的兩個 CH2 域之間。經推測，碳水化合物可提供該域-域配對的替代物，並有助於穩定 CH2 域。Burton, Mol. Immunol. 22 (1985) 161-206。在一實施例中，碳水化合物鏈附接至 CH2 域。本文的 CH2 域可為天然序列 CH2 域或變異體 CH2 域。

「CH3 域」包含 Fc 區中 CH2 域的 C 端延伸的殘基，指的是抗體重鏈多肽大約從 EU 位置 341 延伸至 EU 位置 446 的部分 (根據 Kabat 的 EU 編號系統)。在一個方面，CH3 域具有胺基酸序列 GQPREPQVYT LPPSRDELTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPG (SEQ ID NO: 106)。本文中，CH3 區可為天然序列 CH3 域或變異體 CH3 域 (例如在其一個鏈中具有引入之「隆凸」(「杵」)且在其另一個鏈中具有對應的引入之「凹穴」(「臼」) 之 CH3 域，參見美國專利號 5,821,333，其藉由引用方式明確併入本文中)。此類變異體 CH3 域可用於促進如本文中所描述之兩個非一致抗體重鏈之異二聚化。。於一個實施例中，人 IgG 重鏈 Fc 區域從 Cys226 或 Pro230 延伸至重鏈之羧基端。然而，Fc 區域的 C 端離胺酸 (Lys447) 可以存在或可以不存在。除非本文另有說明，否則 Fc 區或恆定區中胺基酸殘基之編號根據 EU 編號系統 (也稱為 EU 指數) 進行，如 Kabat 等人所述 (Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第 5 版 Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991)。

「杵臼 (knob-into-hole)」技術描述於例如：US 5,731,168；US 7,695,936；Ridgway et al., Prot Eng 9, 617-621 (1996)；及 Carter，J Immunol Meth 248，7-15 (2001)。通常，該方法包括在第一多肽之界面處引入一個突起 (「杵」)，並且在第二多肽之界面中引入一個對應的空腔 (「臼」)，以使該突起可定位於空腔中，從而促進異源二聚體形成並阻礙同源二聚體形成。透過用較大側鏈 (例如酪胺酸或色胺酸) 替換第一多肽界面上之較小的胺基酸側鏈來構建突起。透過將較大胺基酸側鏈替換為較小的胺基酸側鏈 (例如丙胺酸或蘇胺酸)，在第二多肽之界面中形成與突起具有相同或相近大小的互補空腔。可透過改變編碼多肽的核酸 (例如透過針對特定位點之突變或透過胜肽合成) 來製備突起和空腔。在一特定實施例中，杵修飾包含 Fc 域之兩個次單元中之一者中的胺基酸取代 T366W，且臼修飾包含 Fc 域之兩個次單元中之另一者中的胺基酸取代 T366S、L368A 及 Y407V。在另一特定實施例中，包含杵修飾之 Fc 域之子單元額外包含胺基酸取代 S354C，且包含臼修飾之 Fc 域的次單元額外包含胺基酸取代 Y349C。引入此等兩個半胱胺酸殘基使得 Fc 區之兩個子單元之間形成雙硫鍵結，由此進一步穩定二聚體 (Carter, J Immunol Methods 248, 7-15 (2001))

「與免疫球蛋白之 Fc 區等效的區域」意指包括免疫球蛋白之 Fc 區的天然存在之對偶基因變異體以及具有變化之變異體，該等變化產生取代、添加或缺失，但不實質上降低免疫球蛋白介導效應功能(諸如抗體依賴性細胞毒性)的能力。例如，免疫球蛋白 Fc 區之 N 端或 C 端可缺失一個或多個胺基酸而不實質上損失生物功能。此類變異體可根據此項技術中已知的一般法則選擇以對活性具有最小影響 (參見例如， Bowie, J. U. et al., Science 247:1306-10 (1990))。

術語「 野生型 Fc 域」表示與自然界中發現的 Fc 域的胺基酸序列相同的胺基酸序列。野生型人類 Fc 區包括但不限於天然人類 IgG1 Fc 區 (非 A 和 A 同種異型)；天然人類 IgG2 Fc 區；天然人類 IgG3 Fc 區；及天然人類 IgG4 Fc 區，以及其天然生成之變異體。野生型 Fc 區在 SEQ ID NO: 111 (IgG1，高加索人同種異型)、SEQ ID NO: 112 (IgG1，非裔美國人同種異型)、SEQ ID NO: 113 (IgG2)、SEQ ID NO: 114 (IgG3) 及 SEQ ID NO: 115 (IgG4) 中表示。

術語「 變異體 ( 人類 ) Fc 域」表示一種胺基酸序列，其由於至少一個「胺基酸突變」而不同於「野生型」 (人類) Fc 域胺基酸序列。在一個方面，與天然 Fc 區相比，變異體 Fc 區具有至少一個胺基酸突變，例如在天然 Fc 區中從約 1 個到約 10 個胺基酸突變，且在一個方面從約 1 個到約 5 個胺基酸突變。在一個方面，(變異體) Fc 區與野生型 Fc 區具有至少約 95％的同源性。

術語「 效應功能」是指歸因於抗體的 Fc 區域的那些生物活性，其隨抗體同型而變化。抗體效應功能的實例包括：C1q 結合及補體依賴性細胞毒性 (CDC)、Fc 受體結合、抗體依賴型細胞媒介的細胞毒性 (ADCC)、抗體依賴性細胞吞噬作用 (ADCP)、細胞激素分泌、抗原呈現細胞攝取之免疫複合物媒介抗原、細胞表面受體 (例如，B 細胞受體) 降調及 B 細胞活化。

Fc受體結合依賴性效應功能可以藉由抗體的Fc區與Fc受體(FcR)的相互作用來進行中介，Fc受體是造血細胞上的特化細胞表面受體。Fc受體屬於免疫球蛋白超家族，並且已顯示其藉由免疫複合物的吞噬作用來中介抗體包覆之病原體的去除，以及其經由抗體依賴性的細胞媒介之細胞毒性(ADCC)，中介包覆有相應抗體之紅血球及各種其他細胞標的（例如腫瘤細胞）的裂解（參見，例如Van de Winkel, J.G.和Anderson, C.L., J. Leukoc.Biol. 49 (1991) 511-524)。FcR由其對免疫球蛋白同型的特異性來定義：對於IgG抗體的Fc受體稱為FcγR。Fc受體結合被描述於例如Ravetch, J.V.和Kinet, J.P.，Immunol. 9 (1991) 457-492；Capel, P.J.等人，Immunomethods 4 (1994) 25-34；de Haas, M.等人，J. Lab. Clin. Med. 126 (1995) 330-341；以及Gessner, J.E.等人Ann. Hematol.76 (1998) 231-248。

對於IgG抗體(FcγR)之Fc區域的受體交聯，可觸發廣泛多樣的效應功能，包括吞噬作用、抗體依賴性細胞毒性、及發炎介質的釋放以及免疫複合物的清除和抗體產生的調節。在人中，已鑑定出三類FcγR，其為： FcγRI (CD64) 與具有高親和力的單體 IgG 結合，並表現於巨噬細胞、單核球、嗜中性球和嗜酸性球上。在Fc 區域的IgG中至少一個胺基酸殘基E233-G236、P238、D265、N297、A327和P329（根據Kabat的EU索引編號）的修飾，會降低與FcγRI的結合。IgG2殘基在位置233–236被IgG1和IgG4取代，與 FcγRI 的結合會降低10³倍，且消除了人單核球對抗體致敏之紅血球細胞的反應（Armour, K.L.等人，Eur. J. Immunol. 29 (1999) 2613–2624）。 FcγRII (CD32) 以中至低的親和力與複合的 IgG 結合，並且廣泛地表現。此受體可分為兩種亞型，FcγRIIA 及 FcγRIIB。FcγRIIA 在涉及毒殺的許多細胞 (例如巨噬細胞、單核球、嗜中性球) 上被發現，且似乎能夠活化毒殺過程。FcγRIIB 似乎在抑制過程中起作用，並在 B 細胞、巨噬細胞以及肥大細胞和嗜酸性球上被發現。在 B 細胞上，它似乎具有抑制免疫球蛋白進一步產生和同型轉換為例如 IgE 類的功能。在巨噬細胞上，FcγRIIB可抑制透過FcγRIIA中介的吞噬作用。在嗜酸性球和肥大細胞上，B 型可能透過 IgE 與其獨立受體的結合而有助於抑制這些細胞的活化。例如，已發現包含IgG Fc區域的抗體與FcγRIIA的結合降低，該Fc區域具有至少一個胺基酸殘基E233-G236、P238、D265、N297、A327、P329、D270、Q295、A327、R292及K414（根據Kabat EU索引編號）突變。 FcγRIII (CD16) 以中至低的親和力與 IgG 結合，並以兩種類型存在。FcγRIIIA 在 NK 細胞、巨噬細胞、嗜酸性球以及一些單核球和T細胞上被發現，並介導 ADCC。FcγRIIIB在嗜中性球上高度表達。例如，發現包含 IgG Fc 區的抗體與 FcγRIIIA 的結合降低，該 Fc 區具有至少一個胺基酸殘基 E233-G236、P238、D265、N297、A327、P329、D270、Q295、A327、S239、E269、E293、Y296、V303、A327、K338 及 D376 (根據 Kabat EU 索引編號) 的突變。

對人IgG1上與Fc受體的結合位點進行定位，上述突變位點以及測量與FcγRI和FcγRIIA結合的方法，描述於Shields, R.L.等人， J. Biol. Chem. 276 (2001) 6591-6604。

術語「 ADCC」或「抗體依賴性細胞毒性」為一種免疫機制，導致免疫效應細胞裂解經抗體包覆的標靶細胞。標靶細胞為抗體或其衍生物包含 Fc 區的細胞，其通常透過作為 N 端的蛋白質部分與 Fc 區特異性結合。如本文中所使用，術語「減少 ADCC」被定義為藉由上述定義的 ADCC 機制，在標靶細胞周圍培養基中給定的濃度下，在給定的時間內裂解的標靶細胞數量的減少，及/或藉由 ADCC 機制，在給定時間內達到給定數量的標靶細胞裂解所需的標靶細胞周圍培養基中抗體濃度的增加。ADCC 的減少相對於使用相同標準生產、純化、配製和儲存方法 (本技術領域具有通常知識者已知的方法) 由相同類型的宿主細胞所生產的相同抗體 (但尚未工程化) 所媒介的 ADCC。例如，藉由在其 Fc 域中包含減少 ADCC 的胺基酸取代的抗體所介導的ADCC 的減少，相對於 Fc 域中沒有此種胺基酸取代的相同抗體所介導的 ADCC。用於測量 ADCC 的合適的測定法為本技術領域中熟知的 (參見例如 PCT 公開號 WO 2006/082515 或 PCT 公開號 WO 2012/130831)。例如，藉由測量抗體與 Fcγ 受體表現的細胞 (例如重組表現 FcγRI 及/或 FcγRIIA 的細胞或 NK 細胞 (實質上表現 FcγRIIIA)) 的結合來研究抗體誘導介導 ADCC 的初始步驟的能力。特別是，測量與 NK 細胞上之 FcγR 的結合。

「活化 Fc 受體」為 Fc 受體在與抗體之 Fc 區接合之後，引發信號傳導事件，刺激攜帶受體之細胞以執行效應功能。活化 Fc 受體包括 FcγRIIIa (CD16a)、FcγRI (CD64)、FcγRIIa (CD32) 及 FcαRI (CD89)。特定活化 Fc 受體為人類 FcγRIIIa (UniProt 寄存編號 P08637，版本141)。

「 胞外域」為膜蛋白質中延伸至細胞外空間 (亦即標靶細胞外之空間) 的域。胞外域通常為蛋白質中起始與表面之接觸 (其引起信號轉導) 之部分。

術語「 肽連接子」是指包含一個或多個胺基酸，通常約 2 至 20 個胺基酸的肽。肽連接子為此項技術中已知或描述於本文中。適合的非免疫原性連接肽為例如 (G ₄S) _n、(SG ₄) _n或 G ₄(SG ₄) _n肽連接子，其中「n」通常為 1 與 5 之間的數值，通常在 2 與 4 之間，尤其為 2，亦即選自由 GGGGS (SEQ ID NO:117) GGGGSGGGGS (SEQ ID NO:118)、SGGGGSGGGG (SEQ ID NO:119) 及 GGGGSGGGGSGGGG (SEQ ID NO:120) 所組成之群組的肽，但亦包括序列 GSPGSSSSGS (SEQ ID NO:121)、(G4S) ₃(SEQ ID NO:122)、(G4S) ₄(SEQ ID NO:123)、GSGSGSGS (SEQ ID NO:124)、GSGSGNGS (SEQ ID NO:125)、GGSGSGSG (SEQ ID NO:126)、GGSGSG (SEQ ID NO:127)、GGSG (SEQ ID NO:128)、GGSGNGSG (SEQ ID NO:129)、GGNGSGSG (SEQ ID NO:130) 及 GGNGSG (SEQ ID NO:131)。尤其受關注之肽連接子為 (G4S) (SEQ ID NO:117)、(G ₄S) ₂或 GGGGSGGGGS (SEQ ID NO:118)、(G4S) ₃(SEQ ID NO:122) 及 (G4S) ₄(SEQ ID NO:123)。

如本申請案所載之術語「 胺基酸」表示天然存在之羧基 α-胺基酸之群組，其包含丙胺酸 (三字母代碼：ala，一字母代碼：A)、精胺酸 (arg，R)、天冬醯胺酸 (asn，N)、天冬胺酸 (asp，D)、半胱胺酸 (cys，C)、麩醯胺酸 (gln，Q)、麩胺酸 (glu，E)、甘胺酸 (gly，G)、組胺酸 (his，H)、異白胺酸 (ile，I)、白胺酸 (leu，L)、離胺酸 (lys，K)、甲硫胺酸 (met，M)、苯丙胺酸 (phe，F)、脯胺酸 (pro，P)、絲胺酸 (ser，S)、蘇胺酸 (thr，T)、色胺酸 (trp，W)、酪胺酸 (tyr，Y) 及纈胺酸(val，V)。

「融合」或「連接」意謂組分 (例如多肽及該 TNF 配體家族成員之胞外域) 由肽鍵連接 (直接或經由一或多個肽連接子)。

相對於參考多肽序列 (蛋白質) 之「 胺基酸序列同一性百分比 (%)」定義為在比對參考多肽序列與候選序列且必要時引入間隙以達成最大序列同一性百分比之後，且在不將保守性取代視為序列同一性之一部分之情況下，候選序列中與參考多肽序列中之胺基酸殘基一致的胺基酸殘基之百分比。出於測定胺基酸序列同一性百分比之目的之比對可以此項技術內之各種方式實現，例如使用公開可用之電腦軟體，例如 BLAST、BLAST-2、ALIGN.SAWI 或 Megalign (DNASTAR) 軟體。本領域之技術人員可確定用於比對序列之合適參數，包括在所比較之序列全長上實現最大比對所需之任何演算法。然而，出於本文的目的，使用序列比較電腦程式 ALIGN-2 產生 % 胺基酸序列同一值。ALIGN-2 序列比較電腦程式由建南德克公司編寫，原始程式碼已與用戶文檔一起存檔於美國版權局，華盛頓特區，20559，並以美國版權註冊號 TXU510087 進行註冊。ALIGN-2 程式可從加利福尼亞南三藩市的建南德克公司公眾可取得，亦可以從原始程式碼進行編譯。ALIGN-2 程式應編譯為在 UNIX 作業系統 (包括數位 UNIX V4.0D) 上使用。所有序列比較參數均由 ALIGN-2 程式設置，並且沒有變化。在使用 ALIGN-2 進行胺基酸序列比較的情況下，既定胺基酸序列 A 對、與、或相對於既定胺基酸序列 B 的 % 胺基酸序列同一性 (其視情況表述為既定胺基酸序列 A，其對、與、或相對於既定胺基酸序列 B 具有或包含一定 % 的胺基酸序列同一性) 計算如下：100 乘以分數 X/Y，其中 X 為在 A 與 B 之比對程式中藉由序列比對程式 ALIGN-2 以一致匹配形式所得到之胺基酸殘基數目，且其中 Y 為 B 中之胺基酸殘基之總數目。應瞭解，在胺基酸序列 A 之長度與胺基酸序列 B 之長度不相等之情況下， A 與 B 之胺基酸序列同一性 % 將不等於 B 與 A 之胺基酸序列同一性 %。除非另外特定陳述，否則本文所使用之所有胺基酸序列同一性 % 值係使用 ALIGN-2 電腦程式獲得，如前一段落中剛剛所述。

在某些實施例中，涵蓋本文中所提供之 CD28 抗原結合分子的 胺基酸序列變異體。例如，可能需要改良 CD28 抗原結合分子之結合親和力及/或其他生物特性。CD 28 抗原結合分子之胺基酸序列變異體可藉由將適合的修飾引入編碼核苷酸序列之分子或藉由肽合成來製備。此等修飾包括例如，抗體之胺基酸序列中的殘基的缺失及/或插入及/或取代。可實施缺失、插入和取代之任意組合以得到最終構建體，前提條件是最終構建體具有所需之特徵，例如抗原結合特徵。用於取代性誘變之感興趣的位點包括 HVR 及骨架 (FR)。保守性取代以標題「較佳取代」提供於表 B 中，並在下文中參考胺基酸側鏈分類 (1) 至 (6) 進一步描述。可將胺基酸取代引入相關分子且針對所需活性篩選產物，例如保持/改良之抗原結合、降低之免疫原性或改良之 ADCC 或 CDC。表 A

原始殘基	例示性取代	優選取代
Ala (A)	Val；Leu；Ile	Val
Arg (R)	Lys；Gln；Asn	Lys
Asn (N)	Gln；His；Asp；Lys；Arg	Gln
Asp (D)	Glu；Asn	Glu
Cys (C)	Ser；Ala	Ser
Gln (Q)	Asn；Glu	Asn
Glu (E)	Asp；Gln	Asp
Gly (G)	Ala	Ala
His (H)	Asn；Gln；Lys；Arg	Arg
Ile (I)	Leu；Val；Met；Ala；Phe；正白胺酸	Leu
Leu (L)	正白胺酸；Ile；Val；Met；Ala；Phe	Ile
Lys (K)	Arg；Gln；Asn	Arg
Met (M)	Leu；Phe；Ile	Leu
Phe (F)	Trp；Leu；Val；Ile；Ala；Tyr	Tyr
Pro (P)	Ala	Ala
Ser (S)	Thr	Thr
Thr (T)	Val；Ser	Ser
Trp (W)	Tyr；Phe	Tyr
Tyr (Y)	Trp；Phe；Thr；Ser	Phe
Val (V)	Ile；Leu；Met；Phe；Ala；正白胺酸	Leu

胺基酸可根據常見的側鏈特性進行分組： (1) 疏水性：正白胺酸，Met，Ala，Val，Leu，Ile； (2) 中性親水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln； (3) 酸性：Asp，Glu； (4) 鹼性：His，Lys，Arg; (5) 影響鏈取向之殘基：Gly，Pro； (6) 芳香族：Trp，Tyr，Phe。

非保守性取代需要將這些類別中之一類的成員交換為另一類的成員。

術語「 胺基酸序列變異體」包括實質性變異體，其中在親本抗原結合分子 ( 例如人源化或人類抗體) 之一個或多個高變區殘基中存在胺基酸取代。通常，所選擇用於進一步研究的所產生之變異體與親代抗原結合分子相比將具有某些生物特性之修飾 (例如改良) (例如提高的親和力、降低的免疫原性) 及/或將實質上保持親本抗原結合分子之某些生物特性。例示性取代變異體是親和力成熟的抗體，其可以方便地產生，例如，使用基於噬菌體展示的親和力成熟技術，例如，本文所述的那些。簡言之，一個或多個 HVR 殘基突變且變異體抗原結合分子在噬菌體上呈現並針對特定生物活性 (例如結合親和力) 進行篩選。在某些實施例中，一個或多個 HVR 內可存在取代、插入或缺失，只要此類變化不實質上降低抗原結合分子結合抗原之能力即可。例如，可在 HVR 中實施基本上不降低結合親和力的保守性取代（例如，本文所提供之保守性替換）。如 Cunningham 與 Wells (1989) Science, 244:1081-1085 所揭示，用於識別可能誘變的抗體殘基或區域的一種有用的方法稱為「丙胺酸掃描誘變」。在該方法中，識別殘基或目標殘基組（例如，帶電荷的殘基，如 Arg、Asp、His、Lys 和 Glu)，並用中性或帶負電荷的胺基酸（例如，丙胺酸或聚丙胺酸）取代以確定抗體與抗原之交互作用是否受到影響。可在胺基酸位置引入更多取代，表明對初始取代具有良好的功能靈敏度。或者或另外地，抗原-抗原結合分子之晶體結構複合以鑑別抗體與抗原之間的接觸點。此等接觸殘基和鄰近殘基可靶向或消除為取代的候選物。可篩選變異體以確定它們是否包含所需之特性。

胺基酸序列插入包括胺基及/或羧基末端融合體之長度，從一個殘基到包含一百個或更多殘基之序列，以及單個或多個胺基酸殘基的序列內插入。插入的實例包括 CD28 抗原結合分子，其以 N 端或 C 端與多肽融合，此增加了 CD28 抗原結合分子的血清半衰期。

在某些實施例中，本文中提供之 CD28 抗原結合分子經改變以增加或降低抗體之醣基化程度。藉由改變胺基酸序列從而產生或移除一個或多個醣基化位點可便利地獲得分子之醣基化變異體。當激動性 CD28 抗原結合分子包含 Fc 域時，可改變與其附接之碳水化合物。哺乳動物細胞產生的天然抗體通常包含分支的雙觸角寡醣，其通常藉由 N 鍵連接至 Fc 區域 CH2 域之 Asn297。參見例如，Wright 等人 TIBTECH15:26-32 (1997)。寡醣可包括各種碳水化合物，例如，甘露糖、N-乙醯基葡糖胺 (GlcNAc)、半乳糖和唾液酸以及在雙觸角寡醣結構之「莖」中連接至 GlcNAc 的岩藻醣。在一些實施例中，可進行激動性 ICOS-結合分子中的寡醣修飾以產生具有某些改良特性的變異體。在一個方面，提供激動 CD28 抗原結合分子的變異體，其具有不含與 Fc 區連接 (直接或間接) 之岩藻醣的碳水化合物結構。此類岩藻醣基化變異體可具有改良之 ADCC 功能，參見例如，美國專利公開號 US 2003/0157108 (Presta, L.) 或 US 2004/0093621 (Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd)。本發明之 CD28 抗原結合分子之其他變異體包括具有平分寡醣之變異體，例如，其中連接至 Fc 區之雙觸角寡醣由 GlcNAc 平分。此類變異體可具有降低之岩藻醣基化及/或改良之 ADCC 功能，參見例如，WO 2003/011878 (Jean-Mairet et al.)；美國專利號 6,602,684 (Umana et al.)；及 US 2005/0123546 (Umana et al)。亦提供寡醣中之至少一個半乳糖殘基與 Fc 區連接之變異體。此類抗體變異體可具有改良的 CDC 功能且描述於例如，WO 1997/30087 (Patel et al.)；WO 1998/58964 (Raju, S.)；及 WO 1999/22764 (Raju, S.) 中。

在某些實施例中，可能需要產生本發明之 CD28 抗原結合分子的 經半胱胺酸工程化之變異體，例如「thioMAbs」，其中分子之一個或多個殘基經半胱胺酸殘基取代。在特定實施例中，經取代之殘基存在於分子之可達位點處。藉由用半胱胺酸取代此等殘基，藉此將反應性硫醇基置於抗體可達的位點，並可用於使抗體與其他部分 (諸如藥物部分或連接子-藥物部分) 結合以產生免疫結合物。在某些方面中，以下任何一個或多個殘基可被半胱胺酸取代：輕鏈的 V205 (Kabat 編號)；重鏈的 A118 (EU 編號)；及重鏈 Fc 區的 S400 (EU 編號)。可例如美國專利號 7,521,541 中所述產生經半胱胺酸工程化的抗原結合分子。

在某些方面，本文所提供之 CD 28 抗原結合分子可經進一步修飾以含有技術中已知且可容易地獲得的其他非蛋白質部分。適用於抗體之衍生化的部分包括但不限於水溶性聚合物。水溶性聚合物之非限制性實例包括但不限於聚乙二醇 (PEG)、乙二醇/丙二醇共聚物、羧甲基纖維素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚-1,3-二氧戊環、聚-1,3,6-三㗁𠮿、乙烯/順丁烯二酐共聚物、聚胺基酸 (均聚物或隨機共聚物) 以及葡聚糖或聚(N-乙烯吡咯啶酮)聚乙二醇、丙二醇均聚物、環氧丙烷/環氧乙烷共聚物、聚氧乙烯化多元醇（例如，甘油）、聚乙烯醇及其混合物。聚乙二醇丙醛由於其水中之穩定性而可能在製造中具有優勢。該聚合物可具有任何分子量，並且可以為支鏈聚合物或非支鏈聚合物。連接至抗體的聚合物之數量可以變化，並且如果連接的聚合物超過一種，則它們可以為相同或不同之分子。通常，用於衍生作用之聚合物之數目及/或類型可基於包括，但不限於待改良抗體之特定特性或功能、雙特異性抗體衍生物是否將用於限定條件下之療法等考慮因素來確定。在另一方面，提供抗體與可藉由暴露於輻射來選擇性地加熱之非蛋白質部分之結合物。在一個實施例中，非蛋白質部分為碳奈米管 (Kam, N.W. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102 (2005) 11600-11605)。輻射可具有任何波長，且包括，但不限於不損害一般細胞但將非蛋白質部分加熱至殺死抗體-非蛋白質部分附近之細胞之溫度的波長。在另一方面中，可獲得本文所提供之 CD28 抗原結合分子的免疫結合物。「 免疫結合物」為結合於一個或多個異源分子之抗體，該異源分子包括，但不限於細胞毒性劑。

術語「 多核苷酸」是指分離之核酸分子或構建體，例如訊息 RNA (mRNA)、病毒源 RNA 或質體 DNA (pDNA)。多核苷酸可包含習知的磷酸二酯鍵或非習知的鍵 (例如醯胺鍵，諸如胜肽核酸 (PNA) 中所見)。術語「核酸分子」，是指任何存在於多核苷酸中之一個或多個核酸片段，例如 DNA 或 RNA 片段。每個核苷酸由鹼基具體而言嘌呤或嘧啶鹼基 (即，胞嘧啶 (C)、鳥嘌呤 (G)、腺嘌呤 (A)、胸腺嘧啶 (T) 或尿嘧啶 (U))、糖 (即，脫氧核糖或核糖) 及磷酸基團構成。通常，核酸分子通過鹼基序列進行描述，其中該鹼基代表核酸分子的一級結構 (線性結構)。鹼基序列通常由 5’ 至 3’ 表示。在本文中，術語核酸分子包括：去氧核糖核酸 (DNA)，其包括例如互補 DNA (cDNA) 和基因體 DNA；核糖核酸 (RNA)，特定而言信使 RNA (mRNA)；DNA 或 RNA 的合成形式；以及包含兩個或更多個這些分子的混合聚合物。核酸分子可以是線性或環狀的。另外，術語核酸分子包括有義股和反義股，以及單股和雙股形式。此外，本文所述之核酸分子可包含天然存在或非天然存在之核苷酸。非天然存在之核苷酸的例子包括帶有衍生糖、磷酸鹽連接或化學修飾殘基的經修飾之核苷酸鹼基。核酸分子還包括適於在體外及/或體內例如在宿主或患者體內直接表現本發明之抗體的載體的 DNA 和 RNA 分子。此等 DNA (例如，cDNA) 或 RNA (例如，mRNA) 載體可以是未修飾的或經過修飾的。例如，mRNA 可經過化學修飾以增強 RNA 載體之穩定性及/或編碼分子之表現，從而將 mRNA 注入個體體內以產生抗體 (參見例如 Stadler 等人 (2017) Nature Medicine 23:815-817 或 EP 2 101 823 B1)。

藉由「 分離的」核酸分子或多核苷酸旨在自原生環境中移出的核酸分子、DNA 或 RNA。例如，就本發明而言，編碼載體中所含之多肽的重組多核苷酸被視為是經分離。經分離之多核苷酸之更多實例包括在異源性宿主細胞中保持之重組多核苷酸或溶液中經純化之 (部分或基本上) 多核苷酸。經分離之多核苷酸包括通常包含多核苷酸分子之細胞中所含之多核苷酸分子，但是多核苷酸分子存在於染色體外或與自然染色體位置不同之染色體位置。分離的 RNA 分子包括本發明之活體內或活體外 RNA 轉錄物，以及正股及負股形式，及雙股形式。根據本發明之經分離之多核苷酸或核酸進一步包括合成產生之此等分子。此外，多核苷酸或核酸可以為或可以包括調控元件，諸如啟動子、核醣體結合位點或轉錄終止子。

藉由與本發明的參考核苷酸序列具有至少例如 95% 的「同一性」的核苷酸序列的核酸或多核苷酸，意指該多核苷酸的核苷酸序列與參考序列具有同一性，除了參考核苷酸序列的每 100 個核苷酸，多核苷酸序列最多可包含五個點突變。換句話說，為了獲得與參考核苷酸序列具有至少 95% 的同一性的核苷酸序列的多核苷酸，可以刪除參考序列中最多 5% 的核苷酸或用另一個核苷酸取代，或者將參考序列中核苷酸總數最多 5% 的核苷酸數插入到參考序列中。參考序列的這些改變可能發生在參考核苷酸序列的 5’ 端或 3’ 端位置或這些末端位置之間的任何位置，既散佈在參考序列的殘基之間，也散佈在參考序列內的一個或多個連續基團中。實際上，任何特定的多核苷酸序列是否與本發明的核苷酸序列具有至少 80%、85%、90%、95%、96%、97%、98% 或 99% 的同一性可以使用已知的電腦程式常規地確定，諸如如上討論用於多肽的程式 (例如，ALIGN-2)。

術語「 表現匣」是指以重組或合成方式產生的多核苷酸，其具有允許標靶細胞中之特定核酸發生轉錄的一系列特定核酸元件。重組表現匣可被引入質體、染色體、粒線體 DNA、色素體 DNA、病毒或核酸片段中。通常，表現載體之重組表現匣部分除其他序列外還包括待轉錄之核酸序列和啟動子。在某些實施例中，本發明之表現匣包含編碼本發明之雙特異性抗原結合分子或其片段的多核苷酸序列。

術語「載體」或「表現載體」與「表現構建體」同義，且是指用於導入特定基因並導引該基因表現的 DNA 分子，該 DNA 分子與該基因在標靶細胞中可操作地連接。該術語包括作為自我複制核酸結構之載體以及摻入已引入該宿主細胞的基因組中的載體。本發明之表現載體包含表現匣。表現載體轉錄大量穩定的 mRNA。一旦表現載體進入標靶細胞內，則藉由細胞轉錄及/或轉譯機構產生由該基因編碼的核糖核酸分子或蛋白質。在一個實施例中，本發明之表現載體包含表現匣，該表現匣包含編碼本發明之雙特異性抗原結合分子或其片段的多核苷酸序列。

術語「 宿主細胞」、「宿主細胞株」及「宿主細胞培養物」可互換使用，且是指已引入外源核酸之細胞，包括此類細胞之後代。宿主細胞包括「轉形體」和「轉形細胞」，其包括原代轉形細胞及由其衍生的子代細胞，與傳代次數無關。子代細胞之核酸含量可能與親代細胞不完全相同，但可能含有突變。本文中包括從原始轉形細胞中篩選或選擇具有相同功能或生物學活性的突變子代細胞。宿主細胞為可用於產生本發明之雙特異性抗原結合分子的任何類型之細胞系統。宿主細胞包括培養細胞，例如哺乳動物培養細胞，諸如 CHO 細胞、BHK 細胞、NS0 細胞、SP2/0 細胞、YO 骨髓瘤細胞、P3X63 小鼠骨髓瘤細胞、PER 細胞、PER.C6 細胞或融合瘤細胞、酵母細胞、昆蟲細胞及植物細胞 (僅舉數例)，但亦包括轉殖基因動物、轉殖基因植物或培養植物或動物組織內所含的細胞。

藥劑之「 有效量」是指使其所投與之細胞或組織中產生生理學變化所需的量。

藥劑 (例如醫藥組成物) 之「 治療有效量」是指在必需的劑量及時段情況下，有效達成所需治療或預防結果的量。治療有效量的藥劑例如消除、減少、延遲、最小化或防止疾病的不利影響。

「個體」或「受試者」為哺乳動物。哺乳動物包括但不限於馴養的動物 (例如牛、綿羊、貓、狗和馬)、靈長類動物 (例如人及非人類靈長類動物諸如猴)、兔以及囓齒類動物 (例如小鼠及大鼠)。特別地，個體或受試者為人類。

術語「 醫藥組成物」是指所呈形式允許其中所含活性成分之生物活性有效發揮的製劑，且其不含對調配物將投與之個體具有不可接受毒性之其他組分。

「 醫藥上可接受之賦形劑」是指醫藥組成物中之除活性成分以外的對個體無毒的成分。醫藥上可接受之賦形劑包含，但不限於緩衝劑、穩定劑或防腐劑。

術語「 藥品仿單」用於指通常包括於治療性產品之商業包裝中之說明書，其含有關於與使用此類治療性產品有關之適應症、用法、劑量、投藥、組合療法、禁忌及/或警告之資訊。

如本文所使用，「治療 (treatment)」(及其語法變化形式，諸如「治療 (treat)」或「治療 (treating)」) 係指試圖改變所治療受試者之自然病程的臨床介入，並可出於防治目的或在臨床病理學之病程期間進行。期望之治療效果包括但不限於預防疾病之發生或複發、減輕症狀、減輕疾病之任何直接或間接病理後果、預防轉移、降低疾病進展之速度、改善或減輕疾病狀態、及緩解或改善預後。在一些實施例中，本發明之分子用於延遲疾病發展或減慢疾病之進程。

如本文所述，術語「 組合治療」或「 共同投予」包括組合投予 (其中兩種或多種治療劑包含在相同或分開的調配物中) 和分開投予，在這種情況下，投予如本文所報導的抗體可在投予另外的一種或多種治療劑 (較佳為一種或多種抗體) 之前、同時及/或之後發生。

術語「癌症」是指或描述為通常以不受調節的細胞生長/增殖為特徵的哺乳動物生理狀況。因此，本文所使用的術語癌症是指增生性疾病，例如癌、淋巴瘤 (例如霍奇金氏 (Hodgkin) 和非霍奇金氏淋巴瘤)、母細胞瘤、肉瘤和白血病。特別是，術語癌症包括淋巴球性白血病、肺癌、非小細胞肺 (NSCL) 癌、細支氣管肺泡細胞肺癌、骨癌、胰臟癌、皮膚癌、頭頸癌、皮膚或眼內黑素瘤、子宮癌、卵巢癌、直腸癌、肛門區癌、胃癌 (stomach cancer)、胃癌 (gastric cancer)、大腸癌、乳癌、子宮癌、輸卵管癌、子宮內膜癌、子宮頸癌、陰道癌、外陰癌、霍奇金氏病 (Hodgkin's Disease)、食道癌、小腸癌、內分泌系統癌症、甲狀腺癌、副甲狀腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、前列腺癌、膀胱癌、腎臟或尿管之癌症、腎細胞癌、腎盂癌、間皮瘤、肝細胞癌、膽癌、中樞神經系統 (CNS) 之贅瘤、脊柱軸腫瘤、腦幹神經膠質瘤、多形性膠質母細胞瘤、星形細胞瘤、神經鞘瘤、室管膜瘤、神經管胚細胞瘤、脊膜瘤、鱗狀細胞癌、垂體腺瘤及尤文氏肉瘤 (Ewings sarcoma)、包括以上癌症中之任一者之頑抗性版本，或以上癌症中之一或多者之組合。在一個方面，癌症為實性腫瘤。在另一方面，癌症是血液學癌症，特別是白血病，最特別是急性淋巴細胞白血病 (ALL) 或急性髓性白血病 (AML)。

「 Her2 陽性」癌症包含具有高於正常水平的 Her2 的癌細胞。Her2 陽性癌症的實例包括 Her2 陽性乳癌和 Her2 陽性胃癌。視情況地，Her2 陽性癌症具有 2+ 或 3+ 的免疫組織化學 (IHC) 評分及/或原位雜交 (ISH) 擴增比＞2.0。

術語「早期乳癌 (early stage breast cancer，EBC)」或「早期乳癌 (early breast cancer)」在本文中用於指未擴散到乳房或腋窩淋巴結之外的乳癌。此包括原位乳管癌和 I 期、IIA 期、IIB 期和 IIIA 期乳癌。

將腫瘤或癌症稱為「0 期」、「I 期」、「II 期」、「III 期」或「IV 期」以及該分類中的各種子期，表示使用本領域已知的整體階段分組 (Overall Stage Grouping) 或或羅馬數字分期 (Roman Numeral Staging) 方法分類腫瘤或癌症。雖然癌症的實際階段取決於癌症的類型，但是一般地，0 期癌症是原位病灶，I 期癌症是小局部腫瘤，II 和 III 期癌症是展現出局部淋巴結侵入的局部晚期腫瘤，而 IV 期癌症代表轉移性癌症。每類腫瘤的特定階段是熟練內科醫生已知的。

術語「轉移性乳癌」意指乳癌的一種狀態，癌細胞藉由血管或淋巴管從原始部位轉移到身體其他部位的一個或多個部位，從而在乳房以外的一個或多個器官中形成一個或多個繼發性腫瘤。

「晚期」癌症是一種已經擴散到原始部位或器官之外的癌症，無論是藉由局部侵襲還是轉移。因此，術語「晚期」癌症包括局部晚期和轉移性疾病。

「復發性」癌症是指在對初始治療 (例如手術) 有反應後，在初始部位或遠處部位重新生長的癌症。「局部復發」癌症是治療後在與先前治療過的癌症相同的地方復發的癌症。「可手術的」或「可切除的」癌症是局限於原發器官並適合手術 (切除) 的癌症。「非可切除的」或「不可切除的」的癌症不能藉由手術切除 (切除) 。

本發明的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子

本發明提供新穎的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其具有特別有利的特性，例如可生產性、穩定性、結合親和力、生物活性、靶向效率、降低的毒性、可給予患者的擴大的劑量範圍並因此可能增強功效。新穎雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子包含由能夠穩定締合的第一次單元和第二次單元所構成的 Fc 域，包含降低抗原結合分子對 Fc 受體的結合親和力及/或效應功能(Fc 沉默) 的一個或多個胺基酸取代，因此避免了經由 Fc 受體的非特異性交聯。反而，它們包含至少一個能夠特異性結合 Her2 的抗原結合域，從而在腫瘤部位引起交聯。因此，實現了腫瘤特異性 T 細胞活化。

本發明提供一種與 CD28 單價結合的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，包含 (a) 第一抗原結合域，其能夠特異性結合 CD28， (b) 第二抗原結合域，其能夠特異性結合能夠特異性結合人類上皮生長因子受體-2 (Her2) 的抗原結合域，及 (c) Fc 域，其由能夠穩定締合之第一次單元及第二次單元構成，該 Fc 域包含降低該抗原結合分子對 Fc 受體的結合親和力及/或效應功能的一個或多個胺基酸取代，其中能夠特異性結合 Her2 的該第二抗原結合域包含 (i) 重鏈可變區 (V _HHer2)，其包含 SEQ ID NO: 2 之重鏈互補決定區 CDR-H1、SEQ ID NO: 3 之 CDR-H2 及 SEQ ID NO: 4 之 CDR-H3；及輕鏈可變區 (V _LHer2)，其包含 SEQ ID NO: 5 之輕鏈互補決定區 CDR-L1、SEQ ID NO: 6 之 CDR-L2 及 SEQ ID NO: 7 之 CDR-L3；或 (ii) 重鏈可變區 (V _HHer2)，其包含 SEQ ID NO: 10 之重鏈互補決定區 CDR-H1、SEQ ID NO: 11 之 CDR-H2 及 SEQ ID NO: 12 之 CDR-H3；及輕鏈可變區 (V _LHer2)，其包含 SEQ ID NO: 13 之輕鏈互補決定區 CDR-L1、SEQ ID NO: 14 之 CDR-L2 及 SEQ ID NO: 15 之 CDR-L3；或 (iii) 重鏈可變區 (V _HHer2)，其包含 SEQ ID NO: 132 之重鏈互補決定區 CDR-H1、SEQ ID NO: 133 之 CDR-H2 及 SEQ ID NO: 134 之 CDR-H3；及輕鏈可變區 (V _LHer2)，其包含 SEQ ID NO: 135 之輕鏈互補決定區 CDR-L1、SEQ ID NO: 136 之 CDR-L2 及 SEQ ID NO: 137 之 CDR-L3；或 (iv) 重鏈可變區 (V _HHer2)，其包含 SEQ ID NO: 140 之重鏈互補決定區 CDR-H1、SEQ ID NO: 141 之 CDR-H2 及 SEQ ID NO: 142 之 CDR-H3；及輕鏈可變區 (V _LHer2)，其包含 SEQ ID NO: 143 之輕鏈互補決定區 CDR-L1、SEQ ID NO: 144 之 CDR-L2 及 SEQ ID NO: 145 之 CDR-L3。

本發明提供一種與 CD28 單價結合的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，包含 (a) 第一抗原結合域，其能夠特異性結合 CD28， (b) 第二抗原結合域，其能夠特異性結合能夠特異性結合人類上皮生長因子受體-2 (Her2) 的抗原結合域，及 (c) Fc 域，其由能夠穩定締合之第一次單元及第二次單元構成，該 Fc 域包含降低該抗原結合分子對 Fc 受體的結合親和力及/或效應功能的一個或多個胺基酸取代，其中能夠特異性結合 Her2 的該第二抗原結合域包含 (i) 重鏈可變區 (V _HHer2)，其包含 SEQ ID NO: 2 之重鏈互補決定區 CDR-H1、SEQ ID NO: 3 之 CDR-H2 及 SEQ ID NO: 4 之 CDR-H3；及輕鏈可變區 (V _LHer2)，其包含 SEQ ID NO: 5 之輕鏈互補決定區 CDR-L1、SEQ ID NO: 6 之 CDR-L2 及 SEQ ID NO: 7 之 CDR-L3；或 (ii) 重鏈可變區 (V _HHer2)，其包含 SEQ ID NO: 10 之重鏈互補決定區 CDR-H1、SEQ ID NO: 11 之 CDR-H2 及 SEQ ID NO: 12 之 CDR-H3；及輕鏈可變區 (V _LHer2)，其包含 SEQ ID NO: 13 之輕鏈互補決定區 CDR-L1、SEQ ID NO: 14 之 CDR-L2 及 SEQ ID NO: 15 之 CDR-L3。

在一個方面，提供如本文所定義的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中 Fc 域為 IgG，特別是 IgG1 Fc 域或 IgG4 Fc 域。在一個特定方面，由能夠穩定締合的第一次單元和第二次單元構成的 Fc 域為 IgG1 Fc 域。Fc 域包含降低抗原結合分子對 Fc 受體的結合親和力及/或降低或消除效應功能的一個或多個胺基酸取代。在一個方面，Fc 域包含胺基酸取代 L234A 和 L235A (根據 Kabat EU 索引編號)。在一個方面，Fc 域屬於人類 IgG1 亞型，且包含胺基酸突變 L234A、L235A 及 P329G (根據 Kabat EU 索引編號)。在一個方面，提供雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中該抗原結合分子包含由能夠穩定締合的第一次單元和第二次單元構成的 Fc 域，其中該第一次單元包含胺基酸序列 SEQ ID NO: 70 (Fc 臼 PGLALA) 且第二次單元包含胺基酸序列 SEQ ID NO: 71 (Fc 杵 PGLALA)。

再者，提供如上文所定義的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 CD28 的抗原結合域包含含有與 SEQ ID NO: 24 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28)，及含有與 SEQ ID NO: 25 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD28)。在一個方面，能夠特異性結合 CD28 的第一抗原結合域包含重鏈可變區 (V _HCD28)，該重鏈可變區包含選自 SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:40 及 SEQ ID NO:41 所組成之群組的胺基酸序列，及包含輕鏈可變區 (V _LCD28)，該輕鏈可變區包含選自 SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50 及 SEQ ID NO:51 所組成之群組的胺基酸序列。

在一個方面，提供雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能與 CD28 特異性結合的第一抗原結合域包含含有 SEQ ID NO: 37 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28) 之 CDR，及含有 SEQ ID NO: 44 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD28) 之 CDR。另一方面，能與雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子的 CD28 特異性結合的第一抗原結合域包含含 SEQ ID NO: 52 之 CDR-H1、SEQ ID NO: 53 之 CDR-H2 及 SEQ ID NO: 54 之 CDR-H3 的重鏈可變區 (V _HCD28)，及含 SEQ ID NO: 55 之 CDR-L1、SEQ ID NO: 56 之 CDR-L2 及 SEQ ID NO: 57 之 CDR-L3 的輕鏈可變區 (V _LCD28)。

在另一方面，提供雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能與 CD28 特異性結合的抗原結合域包含含有 SEQ ID NO: 36 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28) 的 CDR，及含有 SEQ ID NO: 43 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD28) 的 CDR。另一方面，能與雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子的 CD28 特異性結合的抗原結合域包含含 SEQ ID NO: 58 之 CDR-H1、SEQ ID NO: 59 之 CDR-H2 及 SEQ ID NO: 60 之 CDR-H3 的重鏈可變區 (V _HCD28)，及含 SEQ ID NO: 61 之 CDR-L1、SEQ ID NO: 62 之 CDR-L2 及 SEQ ID NO: 63 之 CDR-L3 的輕鏈可變區 (V _LCD28)。

在另一方面，提供雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能與 CD28 特異性結合的抗原結合域包含含有 SEQ ID NO: 32 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28) 的 CDR，及含有 SEQ ID NO: 25 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD28) 的 CDR。另一方面，能與雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子的 CD28 特異性結合的抗原結合域包含含 SEQ ID NO: 64 之 CDR-H1、SEQ ID NO: 65 之 CDR-H2 及 SEQ ID NO: 66 之 CDR-H3 的重鏈可變區 (V _HCD28)，及含 SEQ ID NO: 67 之 CDR-L1、SEQ ID NO: 68 之 CDR-L2 及 SEQ ID NO: 69 之 CDR-L3 的輕鏈可變區 (V _LCD28)。

在一個方面，提供雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中與抗原結合域相比能以降低的親和力結合 CD28 的特異性結合 CD28 的抗原結合域包含含有 SEQ ID NO: 24 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28)，及含有 SEQ ID NO: 25 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD28)。藉由流式細胞分析技術測量親和力作為與表現 CD28 的 CHO 細胞的結合。在一個方面，與包含含 SEQ ID NO: 24 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28) 與含 SEQ ID NO: 25 之胺基酸序列的輕鏈鏈可變區 (V _LCD28) 的抗原結合域相比，能與 CD28 特異性結合的抗原結合域以降低的親和力與 CD28 結合，並包含含 SEQ ID NO: 37 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28) 的 CDR-H1、CDR-H2 及 CDR-H3 與含 SEQ ID NO:44 之胺基酸序列的輕鏈可變區(V _LCD28) 的 CDR-L1、CDR-L2 和 CDR-L3。在一個方面，與包含含 SEQ ID NO: 24 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28) 與含SEQ ID NO: 25 之胺基酸序列的輕鏈鏈可變區 (V _LCD28) 的抗原結合域相比，能以降低的親和力與 CD28 特異性結合的抗原結合域包含含有與 SEQ ID NO: 37 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28) 及含有與 SEQ ID NO: 44 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD28)。

在一個特定方面，提供雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能與 CD28 特異性結合的抗原結合域包含含有 SEQ ID NO: 37 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28)，及含有 SEQ ID NO: 44 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD28)。

在另一特定方面，提供雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能與 CD28 特異性結合的抗原結合域包含含有 SEQ ID NO: 36 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28)，及含有 SEQ ID NO: 43 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD28)。

在另一特定方面，提供雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 CD28 的抗原結合域包含含有 SEQ ID NO: 32 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28)，及含有 SEQ ID NO: 25 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD28)。

Her2 靶向雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子

本文提供雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合腫瘤相關抗原的抗原結合域是能夠特異性結合人類上皮生長因子受體-2 (Her2) 的抗原結合域。

在一個方面，提供如本文所述之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 Her2 的抗原結合域包含重鏈可變區 (V _HHer2) 及輕鏈可變區 (V _LHer2)，該重鏈可變區包含含有 SEQ ID NO:2 之胺基酸序列的 CDR-H1、含有 SEQ ID NO:3 之胺基酸序列的 CDR-H2 及含有 SEQ ID NO:4 之胺基酸序列的 CDR-H3，且該輕鏈可變區包含含有 SEQ ID NO:5 之胺基酸序列的 CDR-L1、含有 SEQ ID NO:6 之胺基酸序列的 CDR-L2及含有 SEQ ID NO:7 之胺基酸序列的 CDR-L3。在一個方面，能與 Her2 特異性結合的抗原結合域包含含有 SEQ ID NO: 8 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HHer2) 之 CDR，及含有 SEQ ID NO: 9 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LHer2) 之 CDR。在一個方面，提供雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 Her2 的抗原結合域包含含有與 SEQ ID NO: 8 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HHer2)，及含有與 SEQ ID NO: 9 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LHer2)。特別是，能與 Her2 特異性結合的抗原結合域包含含有 SEQ ID NO: 8 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HHer2)，及含有 SEQ ID NO: 9 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LHer2)。

在一方面，提供如本文所述之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 Her2 的抗原結合域包含重鏈可變區 (V _HHer2) 及輕鏈可變區 (V _LHer2)，該重鏈可變區包含含有 SEQ ID NO:10 之胺基酸序列的 CDR-H1、含有 SEQ ID NO:11 之胺基酸序列的 CDR-H2 及含有 SEQ ID NO:12 之胺基酸序列的 CDR-H3，且該輕鏈可變區包含含有 SEQ ID NO:13 之胺基酸序列的 CDR-L1、含有 SEQ ID NO:14 之胺基酸序列的 CDR-L2 及含有 SEQ ID NO:15 之胺基酸序列的 CDR-L3。在一個方面，能與 Her2 特異性結合的抗原結合域包含含有 SEQ ID NO: 16 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HHer2) 之 CDR，及含有 SEQ ID NO: 17 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LHer2) 之 CDR。在一個方面，提供雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 Her2 的抗原結合域包含含有與 SEQ ID NO: 16 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HHer2)，及含有與 SEQ ID NO: 17 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LHer2)。特別是，能與 Her2 特異性結合的抗原結合域包含含有 SEQ ID NO: 16 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HHer2)，及含有 SEQ ID NO: 17 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LHer2)。

本文亦揭示如本文所述之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 Her2 的抗原結合域包含重鏈可變區 (V _HHer2)，該重鏈可變區包含 (i) 含有 SEQ ID NO:132 之胺基酸序列的 CDR-H1、(ii) 含有 SEQ ID NO:133 之胺基酸序列的 CDR-H2、及 (iii) 含有 SEQ ID NO:134 之胺基酸序列的 CDR-H3，以及包含輕鏈可變區 (V _LHer2)，該輕鏈可變區包含 (iv) 含有 SEQ ID NO:135 之胺基酸序列的 CDR-L1、(v) 含有 SEQ ID NO:136 之胺基酸序列的 CDR-L2、及 (vi) 含有 SEQ ID NO:137 之胺基酸序列的 CDR-L3。在一個方面，能夠特異性結合 Her2 的抗原結合域包含含有與 SEQ ID NO: 138 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HHer2)，及含有與 SEQ ID NO: 139 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LHer2)。特別是，能與 Her2 特異性結合的抗原結合域包含含有 SEQ ID NO: 138 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HHer2)，及含有 SEQ ID NO: 139 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LHer2) (帕妥珠單抗，2C4)。

再者，本文揭示如本文所述之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 Her2 的抗原結合域包含重鏈可變區 (V _HHer2) 該重鏈可變區包含 (i) 含有 SEQ ID NO:140 之胺基酸序列的 CDR-H1、(ii) 含有 SEQ ID NO:141 之胺基酸序列的 CDR-H2 及 (iii) 含有 SEQ ID NO:142 之胺基酸序列的 CDR-H3，以及包含輕鏈可變區 (V _LHer2)，該輕鏈可變區包含 (iv) 含有 SEQ ID NO:143 之胺基酸序列的 CDR-L1、(v) 含有 SEQ ID NO:144 之胺基酸序列的 CDR-L2 及 (vi) 含有 SEQ ID NO:145 之胺基酸序列的 CDR-L3。在一個方面，能夠特異性結合 Her2 的抗原結合域包含含有與 SEQ ID NO: 146 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HHer2)，及含有與 SEQ ID NO: 147 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LHer2)。特別是，能與 Her2 特異性結合的抗原結合域包含含有 SEQ ID NO: 146 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HHer2)，及含有 SEQ ID NO: 147 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LHer2) (曲妥珠單抗，4D5)。

此外，本文揭示如本文所述之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 Her2 的抗原結合域包含重鏈可變區 (V _HHer2)，該重鏈可變區包含 (i) 含有 SEQ ID NO:156 之胺基酸序列的 CDR-H1、(ii) 含有 SEQ ID NO:157 之胺基酸序列的 CDR-H2 及 (iii) 含有 SEQ ID NO:158 之胺基酸序列的 CDR-H3，以及包含輕鏈可變區 (V _LHer2)，且該輕鏈可變區包含 (iv) 含有 SEQ ID NO:159 之胺基酸序列的 CDR-L1、(v) 含有 SEQ ID NO:160 之胺基酸序列的 CDR-L2 及 (vi) 含有 SEQ ID NO:161 之胺基酸序列的 CDR-L3。在一個方面，能夠特異性結合 Her2 的抗原結合域包含含有與 SEQ ID NO: 162 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HHer2)，及含有與 SEQ ID NO: 163 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LHer2)。特別是，能與 Her2 特異性結合的抗原結合域包含含有 SEQ ID NO: 162 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HHer2)，及含有 SEQ ID NO: 163 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LHer2) (7C2)。

雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子單價結合 CD28 和單價結合 Her2 (1+1 型式 )

在一個方面，提供雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 CD28 的第一抗原結合域及/或能夠特異性結合 Her2 的第二抗原結合域為 Fab 片段。在一個特定方面，能夠特異性結合 CD28 的第一抗原結合域和能夠特異性結合 Her2 的第二抗原結合域都是 Fab 片段。

在一個方面，提供如本文所述之雙特異性激動性CD28抗原結合分子，其包含 (a) 能夠特異性結合 CD28 的交叉 Fab 片段，(b) 能夠特異性結合 Her2 的習用 Fab 片段，及 (c) 由能夠穩定締合的第一次單元和第二次單元構成之 Fc 域，其包含降低抗原結合分子對 Fc 受體及/或效應功能的結合親和力的一個或多個胺基酸取代。在另一方面，提供如本文所述之雙特異性激動性CD28抗原結合分子，其包含 (a) 能夠特異性結合 CD28 的習用 Fab 片段，(b) 能夠特異性結合 Her2 的交叉 Fab 片段，及 (c) 由能夠穩定締合的第一次單元和第二次單元構成之 Fc 域，其包含降低抗原結合分子對 Fc 受體及/或效應功能的結合親和力的一個或多個胺基酸取代。

在一個方面，提供雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 CD28 的該第一抗原結合域為 Fab 片段，其中 Fab 輕鏈及 Fab 重鏈之可變域 VL 與 VH 或恆定域 CL 與 CH1 被相互替換 (交叉 Fab 片段)，特別是該可變域 VL 與 VH。在一個方面，能夠特異性結合 CD28 的該第一抗原結合域為 Fab 片段，其中 Fab 輕鏈及 Fab 重鏈之可變域 VL 與 VH 或恆定域 CL 與 CH1 被相互替換，特別是該可變域 VL 與 VH，且能夠特異性結合 Her2 的第二抗原結合域是習用 Fab 片段。在一個方面，能夠特異性結合 Her2 的第二抗原結合域為 Fab 片段，其中在恆定域 CL 中，位置 123 處的胺基酸 (根據 Kabat EU 索引編號) 被選自離胺酸 (K)、精胺酸 (R) 或組胺酸 (H) 的胺基酸取代以及位置 124 處的胺基酸 (根據 Kabat EU 索引編號) 被離胺酸(K)、精胺酸 (R) 或組胺酸 (H) 獨立地取代，且其中在恆定域 CH1 中，位置 147 處的胺基酸 (根據 Kabat EU 索引編號) 被麩胺酸 (E) 或天冬胺酸 (D) 獨立地取代以及位置 213 處的胺基酸 (根據 Kabat EU 索引編號) 被麩胺酸 (E) 或天冬胺酸 (D) 獨立地取代 (根據 Kabat EU 索引編號)。

在一個特定方面，提供雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其包含含 SEQ ID NO: 92 之胺基酸序列的第一輕鏈；包含 SEQ ID NO: 91 之胺基酸序列的第一重鏈；包含 SEQ ID NO:96 之胺基酸序列的第二重鏈；及包含 SEQ ID NO: 97 之胺基酸序列第二輕鏈 (分子 A)。在又一特定方面，提供雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其包含含 SEQ ID NO: 92 之胺基酸序列的第一輕鏈；包含 SEQ ID NO: 91 之胺基酸序列的第一重鏈；包含 SEQ ID NO: 98 之胺基酸序列的第二重鏈；及包含 SEQ ID NO: 97 之胺基酸序列第二輕鏈 (分子 B)。在另一特定方面，提供雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其包含：含有 SEQ ID NO: 92 之胺基酸序列的第一輕鏈、含有 SEQ ID NO: 91 之胺基酸序列的第一重鏈、含有 SEQ ID NO: 101 之胺基酸序列的第二重鏈及含有 SEQ ID NO: 97 之胺基酸序列的第二輕鏈 (分子 D)。

在另一特定方面，提供雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其包含含 SEQ ID NO: 179 之胺基酸序列的第一輕鏈；包含 SEQ ID NO: 178 之胺基酸序列的第一重鏈；包含 SEQ ID NO:180 之胺基酸序列的第二重鏈；及包含 SEQ ID NO: 181 之胺基酸序列第二輕鏈 (分子 F)。在另一特定方面，提供雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其包含：含有 SEQ ID NO: 179 之胺基酸序列的第一輕鏈、含有 SEQ ID NO: 178 之胺基酸序列的第一重鏈、含有 SEQ ID NO: 182 之胺基酸序列的第二重鏈及含有 SEQ ID NO: 183 之胺基酸序列的第二輕鏈 (分子 A)。

在一個方面，提供如本文所述之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 Her2 的該第二抗原結合域為 Fab 片段，其中 Fab 輕鏈及 Fab 重鏈之可變域 VL 與 VH 或恆定域 CL 與 CH1 被相互替換 (交叉 Fab 片段)，特別是該可變域 VL 與 VH。在一個方面，能夠特異性結合 Her2 的該第二抗原結合域為 Fab 片段，其中 Fab 輕鏈及 Fab 重鏈之可變域 VL 與 VH 或恆定域 CL 與 CH1 被相互替換，特別是該可變域 VL 與 VH，且能夠特異性結合 CD28 的第一抗原結合域是習用 Fab 片段。在一個方面，能夠特異性結合 CD28 的抗原結合域為 Fab 片段，其中在恆定域 CL 中，位置 123 處的胺基酸 (根據 Kabat EU 索引編號) 被選自離胺酸 (K)、精胺酸 (R) 或組胺酸 (H) 的胺基酸取代以及位置 124 處的胺基酸 (根據 Kabat EU 索引編號) 被離胺酸(K)、精胺酸 (R) 或組胺酸 (H) 獨立地取代，且其中在恆定域 CH1 中，位置 147 處的胺基酸 (根據 Kabat EU 索引編號) 被麩胺酸 (E) 或天冬胺酸 (D) 獨立地取代以及位置 213 處的胺基酸 (根據 Kabat EU 索引編號) 被麩胺酸 (E) 或天冬胺酸 (D) 獨立地取代 (根據 Kabat EU 索引編號)。

在一個特定方面，提供雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其包含含 SEQ ID NO: 83 之胺基酸序列的第一輕鏈；包含 SEQ ID NO: 74 之胺基酸序列的第一重鏈；包含 SEQ ID NO:99 之胺基酸序列的第二重鏈；及包含 SEQ ID NO: 100 之胺基酸序列第二輕鏈 (分子 C)。在一個特定方面，提供雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其包含：含有 SEQ ID NO: 83 之胺基酸序列的第一輕鏈、含有 SEQ ID NO: 74 之胺基酸序列的第一重鏈、含有 SEQ ID NO: 102 之胺基酸序列的第二重鏈及含有 SEQ ID NO: 100 之胺基酸序列的第二輕鏈 (分子 E)。

減少 Fc 受體結合及 / 或效應功能之 Fc 域修飾

本發明的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子的 Fc 域由一對多肽鏈組成，該多肽鏈包含免疫球蛋白分子的重鏈域。例如，免疫球蛋白 G (IgG) 分子之 Fc 域為二聚體，其每個次單元包含 CH2 及 CH3 IgG 重鏈恆定域。Fc 域之兩個次單元能夠彼此穩定締合。Fc 域賦予本發明的抗原結合分子有利的藥物動力學特性，包括有助於在標靶組織中良好積累的長的血清半衰期和有利的組織-血液分佈比。然而，另一方面，它可能導致本發明的雙特異性抗體不期望地靶向表現 Fc 受體的細胞，而非較佳的攜帶抗原的細胞。

因此，與天然 IgG1 Fc 域相比，本發明的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子的 Fc 域呈現對 Fc 受體降低的結合親和力及/或降低的效應功能。在一個方面，Fc 實質上不結合 Fc 受體及/或不誘導效應功能。在一個特定實施例中，Fc 受體為 Fcγ 受體。在一個方面，Fc 受體為人類 Fc 受體。在一個具體方面中，Fc 受體為活化人 Fcγ 受體，更具體而言人 FcγRIIIa、FcγRI 或 FcγRIIa，最具體而言人 FcγRIIIa。在一個方面，Fc 域不誘導效應功能。降低之效應功能可包括，但不限於以下中之一或多者：降低之補體依賴性細胞毒性 (CDC)、降低之抗體依賴性細胞介導之細胞毒性 (ADCC)、降低之抗體依賴性細胞吞噬 (ADCP)、降低之細胞激素分泌、降低之免疫複合物介導之抗原呈現細胞之抗原捕捉、降低之與 NK 細胞之結合、降低之與巨噬細胞之結合、降低之與單核細胞之結合、降低之與多形核細胞之結合、降低之誘導細胞凋亡之直接信號傳導、降低之樹突狀細胞成熟或降低之T細胞活化。

在某些方面，可在本文所提供之抗體的 Fc 區域中引入一個或多個胺基酸修飾，從而產生 Fc 區變異體。Fc 區域變異體可包含人 Fc 區域序列 (例如，人 IgG1、IgG2、IgG3 或 IgG4 Fc 區域)，其在一個或多個胺基酸位置包含胺基酸修飾 (例如，取代)。

在一個特定方面，本發明提供一種抗原結合分子，其中 Fc 區包含一個或多個胺基酸取代，其降低與 Fc 受體的結合，特別是對 Fc γ 受體的結合。在一個方面，本發明提供一種抗體，其中 Fc 區包含一個或多個胺基酸取代，且其中由抗體誘導的 ADCC 被減少至由包含野生型人類 IgG1 Fc 區之抗體所誘導的 ADCC 的 0-20%。

在一個方面中，本發明之抗原結合分子的 Fc 域包含一個或多個胺基酸突變，其降低 Fc 域對 Fc 受體及/或效應功能之結合親和力。通常，在 Fc 域之兩個次單元中的每個中都存在相同的一個或多個胺基酸突變。特別地，Fc 域在位置 E233、L234、L235、N297、P331 及 P329 (EU 編號) 處包含胺基酸取代。特別地，Fc 域包含 IgG 重鏈之位置 234 及 235 (EU 編號) 及/或 329 (EU 編號) 處的胺基酸取代。更特別地，提供根據本發明之抗原結合分子，其包含具有 IgG 重鏈中之胺基酸取代 L234A、L235A 及 P329G (「P329G LALA」，EU 編號) 之 Fc 域。胺基酸取代 L234A 及 L235A 是指所謂的 LALA 突變。胺基酸取代之「P329G LALA」組合幾乎完全消除人類 IgG1 Fc 域之 Fcγ 受體結合且描述於國際專利申請公開號 WO 2012/130831 A1 中，其亦描述製備此類突變體 Fc 域之方法及測定其特性 (諸如 Fc 受體結合或效應功能) 之方法。

具有降低之 Fc 受體結合及/或效應功能之 Fc 域亦包括具有 Fc 域殘基 238、265、269、270、297、327 及 329 中之一者或多者之取代的域 (美國專利號 6,737,056)。此類 Fc 突變體包括在胺基酸位置 265、269、270、297 和 327 中的兩個或更多個取代的 Fc 突變體，包括所謂的「DANA」Fc 突變體，其中殘基 265 和 297 被丙胺酸所取代 (美國專利號 7,332,581)。

在另一方面，Fc 域為 IgG4 Fc 域。與 IgG1 抗體相比，IgG4 抗體呈現降低的對 Fc 受體之結合親和力及降低的效應功能。在一更具體方面，Fc 域為包含位置 S228 (Kabat 編號) 之胺基酸取代 (特別是，胺基酸取代 S228P) 的 IgG4 Fc 域。在一更具體方面，Fc 域為 IgG4 Fc 域，其包含胺基酸取代 L235E 及 S228P 及 P329G (EU 編號)。此類 IgG4 Fc 域突變體及其 Fcγ 受體結合特性亦描述於 WO 2012/130831 中。

另外或替代地，一個或多個取代突變包含無醣基化位點突變 (例如，在胺基酸殘基 N297 (EU 編號) 處的無醣基化位點突變，例如 N297G 或 N297A (EU 編號) 的無醣基化位點突變，其亦減少結合 Fc 受體及/或效應功能。在特定方面，Fc 域是包含根據 EU 編號的胺基酸取代N297G 的 IgG1 Fc 域。

可使用此領域中所公知遺傳或化學方法，透過胺基酸缺失、取代、插入或修飾來製備變異型 Fc 域。遺傳方法可包括編碼 DNA 序列的位點特異性突變、PCR、基因合成等。可透過例如測序來驗證核苷酸變化是否正確。

與 Fc 受體之結合可易於透過 ELISA 確定，或透過表面電漿子共振 (SPR) 使用標準儀器例如 BIAcore 儀器 (GE Healthcare) 進行確定，並且 Fc 受體可透過例如重組表現來獲得。或者，Fc 域或包含 Fc 域的細胞活化抗體對 Fc 受體的結合親和力可使用已知表現特定 Fc 受體的細胞株進行評估，例如表現 FcγIIIa 受體的人類 NK 細胞。

Fc 域或包含 Fc 域之本發明之抗原結合分子的效應功能可藉由技術中已知之方法量測。適用於量測 ADCC 之分析描述於本文中。用於評估感興趣之分子的 ADCC 活性的活體外測定的實例敘述於例如：美國專利號 5,500,362；Hellstrom et al. Proc Natl Acad Sci USA 83, 7059-7063 (1986)；及 Hellstrom et al., Proc Natl Acad Sci USA 82，1499-1502 (1985)；美國專利號 5,821,337；Bruggemann et al., J Exp Med 166，1351-1361 (1987)。可替代地，可採用非放射性分析方法 (參見例如：用於流式細胞分析技術的 ACTI™ 非放射性細胞毒性測定 (CellTechnology，Inc. Mountain View，CA)；及 CytoTox 96® 非放射性細胞毒性測定 (Promega，Madison，WI))。用於此等分析的有用的效應細胞包括外周血單核細胞 (PBMC) 及自然殺手 (NK) 細胞。可替代地或另外地，可在例如 Clynes et al., Proc Natl Acad Sci USA 95, 652-656 (1998) 中揭示的動物模型中在活體內評估感興趣的分子之 ADCC 活性。

在一些方面中，減少 Fc 域與補體組分之結合，具體而言減少與 C1q 之結合。因此，在一些方面中，其中，Fc 域工程改造為具有降低的效應功能，該降低的效應功能包括降低的 CDC。可進行 C1q 結合分析以測定本發明之雙特異性抗體是否能夠結合 C1q 且因此具有 CDC 活性。參見例如 WO 2006/029879 及 WO 2005/100402 中的 C1q 和 C3c 結合 ELISA。為評估補體活化，可實施 CDC 測定 (參見例如：Gazzano-Santoro 等人，J Immunol Methods 202，163 (1996)；Cragg 等人，Blood 101，1045-1052 (2003)；及 Cragg 和 Glennie，Blood 103，2738-2743 (2004))。

在一個特定方面，與天然 IgG1 Fc 域相比，呈現對 Fc 受體降低的結合親和力及/或降低的效應功能的 Fc 域為人類 IgG1 Fc 域，其包含胺基酸取代 L234A、L235A 及視情況地 P329G，或為人類 IgG4 Fc 域，其包含胺基酸取代 S228P、L235E 及視情況地 P329G (根據 Kabat EU 指數編號)。更特定地，其為包含胺基酸取代 L234A、L235A 及 P329G (根據 Kabat EU 索引編號) 的人類 IgG1 Fc 域。

在另一方面，Fc 域為 IgG1 或 IgG4 Fc 域，其中降低與 Fc 受體的結合及/或效應功能的一個或多個胺基酸取代位於 N297。在特定方面，Fc 域是包含根據 EU 編號的胺基酸取代N297G 的 IgG1 Fc 域。

促進異源二聚化的 Fc 域修飾

本發明之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子包含不同的抗原結合位點，與 Fc 域的兩個次單元中的一個或另一個融合，因此 Fc 域的兩個次單元可包含在兩條不同的多肽鏈中。這些多肽的重組共表現及隨後的二聚化導致兩種多肽具有若干可能的組合。為改善重組生產中本發明之雙特異性抗原結合分子之產率和純度，在本發明之雙特異性抗原結合分子的 Fc 域中導入促進所需之多肽締合的修飾將是有利的。

因此，在特定方面，本發明涉及與 CD28 單價結合的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其包含 (a) 一個能與 CD28 特異性結合的抗原結合域，(b) 能夠特異性結合腫瘤相關抗原的至少一個抗原結合域，及 (c) 由能夠穩定締合之第一次單元和第二次單元構成的 Fc 域，包括降低抗原結合分子對 Fc 受體及/或效應功能的一個或多個胺基酸取代，其中 Fc 域包含促進 Fc域的第一次單元與第二次單元締合的修飾。人類 IgG Fc 域之兩個次單元之間最廣泛的蛋白質-蛋白質相互作用位點在 Fc 域之 CH3 結構域中。因此，在一個方面中，該修飾在 Fc 域之 CH3 域中進行。

在一具體方面，該修飾為所謂的「杵臼 (knob-into-hole)」修飾，其包含 Fc 域的兩個次單元中之一者中的「杵 (knob)」修飾及 Fc 域之兩個次單元之另一者中的「臼 (hole)」。因此，本發明涉及與 CD28 單價結合的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其包含 (a) 一個能與 CD28 特異性結合的抗原結合域，(b) 能夠特異性結合腫瘤相關抗原的至少一個抗原結合域，及 (c) 由能夠穩定締合之第一次單元和第二次單元構成的 Fc 域，包括降低抗原結合分子對 Fc 受體及/或效應功能的一個或多個胺基酸取代，其中根據該杵臼方法，Fc 域的第一次單元包含杵，且 Fc 域的第二次單元包含臼。在一特定方面，Fc 域的第一次單元包含胺基酸取代 S354C 及/或 T366W (EU 編號)，且 Fc 域之第二次單元包含胺基酸取代 Y349C、T366S 及 Y407V (根據 Kabat EU 索引編號)。

「杵臼」技術描述於例如：US 5,731,168；US 7,695,936；Ridgway 等人，Prot Eng 9，617-621 (1996)；及 Carter，J Immunol Meth 248，7-15 (2001)。通常，該方法包括在第一多肽之界面處引入一個突起 (「杵」)，並且在第二多肽之界面中引入一個對應的空腔 (「臼」)，以使該突起可定位於空腔中，從而促進異源二聚體形成並阻礙同源二聚體形成。透過用較大側鏈 (例如酪胺酸或色胺酸) 替換第一多肽界面上之較小的胺基酸側鏈來構建突起。透過將較大胺基酸側鏈替換為較小的胺基酸側鏈 (例如丙胺酸或蘇胺酸)，在第二多肽之界面中形成與突起具有相同或相近大小的互補空腔。

因此，在一個方面，在雙特異性抗原結合分子之 Fc 域的第一次單元的 CH3 域中，胺基酸殘基被具有較大側鏈體積的胺基酸殘基取代，從而在第一次單元之 CH3 域內產生突起，該突起可定位在第二次單元之 CH3 域內的空腔中，且在 Fc 域的第二次單元的 CH3 域中，胺基酸殘基被具有較小側鏈體積的胺基酸殘基取代，從而在第二次單元之 CH3 域內產生空腔，第一次單元之 CH3 域內的突起可定位在該空腔內。可透過改變編碼多肽的核酸 (例如透過針對特定位點之突變或透過胜肽合成) 來製備突起和空腔。在一具體方面，在 Fc 域的第一次單元之 CH3 域中，位置 366 處之蘇胺酸殘基經色胺酸殘基置換 (T366W)，且在 Fc 域的第二次單元之 CH3 域中，位置 407 處之酪胺酸殘基經纈胺酸殘基置換 (Y407V)。在一個方面，另外在 Fc 域之第二次單元中，位置 366 處之蘇胺酸殘基經絲胺酸殘基置換 (T366S)，且位置 368 處之白胺酸殘基經丙胺酸殘基置換 (L368A)。

再一方面，另外在 Fc 域的第一次單元中，位置 354 處之絲胺酸殘基經半胱胺酸殘基置換 (S354C)，且另外在 Fc 域的第二次單元中，位置 349 處之酪胺酸殘基經半胱胺酸殘基置換 (Y349C)。引入這兩個半胱胺酸殘基導致在 Fc 域的兩個次單元之間形成雙硫鍵結，進一步穩定二聚體 (Carter (2001), J Immunol Methods 248，7-15)。在一特定方面，Fc 域的第一次單元包含胺基酸取代 S354C 和 T366W (EU 編號)，且 Fc 域的第二次單元包含胺基酸取代 Y349C、T366S 及 Y407V (根據 Kabat EU 索引編號)。

在一替代方面中，促進 Fc 域之第一次單元及第二次單元的締合的修飾包括介導靜電轉向作用的修飾，例如 PCT 公開 WO 2009/089004 中所述。通常，此方法涉及用帶電荷的胺基酸殘基取代兩個 Fc 域次單元界面上的一個或多個胺基酸殘基，從而使同源二聚體形成在靜電上不利，但異源二聚化在靜電上有利。

如本文所報導的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子的重鏈的 C 端可為以胺基酸殘基 PGK 結尾的完整 C 端。重鏈的 C 端可以是縮短的 C 端，其中一個或兩個 C 端胺基酸殘基已被去除。在一較佳方面，重鏈的 C 端是以 P 結尾的縮短的 C端。在一較佳方面，重鏈的 C 端是以 PG 結尾的縮短的 C 端。在本文所報告的所有方面中之一方面，包含包括如本文指定的 C 端 CH3 域之重鏈的 CD28 抗原結合分子，其包含 C 端甘胺酸-離胺酸二肽 (G446 及 K447，根據 Kabat EU 索引編號)。在本文所報告的所有方面中之一方面，包含包括如本文指定的 C 端 CH3 域之重鏈的 CD28 抗原結合分子，其包含 C 端甘胺酸殘基 (G446，根據 Kabat EU 索引編號)。

Fab 域中的修飾

在一個方面，本發明涉及一種雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其特徵在於與 CD28 單價結合，包含 (a) 能夠特異性結合 CD28 的第一抗原結合域，(b) 能夠特異性結合 Her2 的第二抗原結合域，和 (c) 由能夠穩定締合之第一次單元和第二次單元構成的 Fc 域，包括降低抗原結合分子對 Fc 受體及/或效應功能的一個或多個胺基酸取代，其中能與 Her2 特異性結合的第二抗原結合域為 Fab 片段，且在該 Fab 片段中，可變域 VH 和 VL 或恆定域 CH1 和 CL 根據 Crossmab 技術互換。

在一個結合臂 (CrossMabVH-VL 或 CrossMabCH-CL) 中具有域置換/互換的多特異性抗體在 WO2009/080252 和 Schaefer, W. et al, PNAS, 108 (2011) 11187-1191 中有詳細描述。它們明顯減少了由針對第一種抗原的輕鏈與針對第二種抗原的錯誤重鏈的錯配所引起的副產物 (與沒有這種域互換的方法相比)。

在一個方面，本發明涉及一種雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其特徵在於與 CD28 單價結合，包含 (a) 能夠特異性結合 CD28 的第一抗原結合域，(b) 能夠特異性結合 Her2 的第二抗原結合域，和 (c) 由能夠穩定締合之第一次單元和第二次單元構成的 Fc 域，包括降低抗原結合分子對 Fc 受體及/或效應功能的一個或多個胺基酸取代，其中在能夠特異性結合 CD28 的 Fab 片段，可變域 VL 和 VH 被彼此替換，使得 VH 域是輕鏈的一部分，VL 域是重鏈的一部分。

在另一方面，為了進一步改善正確配對，特徵在於與 CD28 單價結合的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子包含 (a) 能夠特異性結合 CD28 的第一抗原結合域，(b) 能夠特異性結合 Her2 的第二抗原結合域，及 (c) 由能夠穩定締合的第一次單元和第二次單元構成之 Fc 域，其包含降低抗原結合分子對 Fc 受體及/或效應功能的結合親和力的一個或多個胺基酸取代，該 Fc 域可包含不同帶電的胺基酸取代 (所謂的「帶電殘基」)。這些修飾被導入交叉或非交叉的 CH1 和 CL 域中。在一特定方面，本發明涉及雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中在一個 CL 域中，位置 123 (EU 編號) 處的胺基酸已被精胺酸 (R) 置換且位置 124 (EU 編號) 處的胺基酸已被離胺酸 (K) 置換，且其中在 CH1 域之一者中，位置 147 (EU 編號) 和位置 213 (EU 編號) 處的胺基酸已被麩胺酸 (E) 置換。在一個特定方面，在能與 CD28 特異性結合的 Fab 片段的 CL 結構域中，位置 123 (EU 編號) 處的胺基酸已被精胺酸 (R) 置換且位置 124 (EU 編號) 處的胺基酸已被離胺酸 (K) 置換，且在能與 CD28 特異性結合的 Fab 片段的 CH1 域中，位置 147 (EU 編號) 和位置 213 (EU 編號) 處的胺基酸已被麩胺酸 (E) 置換。

多核苷酸

本發明進一步提供編碼如本文所述的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子或其片段的分離的多核苷酸。編碼本發明之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子的一個或多個分離多核苷酸可表現為編碼整個抗原結合分子之單一多核苷酸或表現為共表現之多個 (例如兩個或兩個以上) 多核苷酸。由共表現之多核苷酸所編碼的多肽可經由例如雙硫鍵或其他方式締合，以形成功能性抗原結合分子。舉例而言，免疫球蛋白的輕鏈部分可由來自免疫球蛋白之重鏈部分的單獨多核苷酸編碼。當共表現時，重鏈多肽將與輕鏈多肽締合以形成免疫球蛋白。在一些方面，分離的多核苷酸編碼如本文所述的根據本發明的完整雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子。在其他方面，分離的多核苷酸編碼包含在如本文所述的根據本發明的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子中的多肽。在某些方面中，多核苷酸或核酸為 DNA。在其他方面中，本發明之多核苷酸為 RNA，例如，呈信使 RNA (mRNA) 的形式。本發明之 RNA 可以為單鏈或雙鏈 RNA。

重組方法

本發明之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子可例如藉由固態肽合成 (例如梅里菲爾德固相合成(Merrifield solid phase synthesis)) 或重組生產來獲得。關於重組生產，分離編碼雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子或其多肽片段的一個或多個多核苷酸 (例如上文所描述)，並插入一個或多個載體中用於在宿主細胞中進一步選殖及/或表現。此等多核苷酸可易於使用習知方法進行分離和測序。在本發明之一方面，提供包含本發明之一個或多個多核苷酸的載體，較佳為表現載體。可使用熟習此項技術者熟知的方法構築表現載體，該表現載體含有抗體 (片段) 以及適當的轉錄/轉譯控制信號。此等方法包括活體外重組 DNA 技術、合成技術及活體內重組/基因重組。參見例如以下所述之技術：Maniatis et al., MOLECULAR CLONING:A LABORATORY MANUAL, Cold Spring Harbor Laboratory, N.Y.(1989)；及 Ausubel et al., CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY, Greene Publishing Associates and Wiley Interscience, N.Y.(1989)。表現載體可以為質體、病毒的一部分，也可以為核酸片段。表現載體包括表現匣，其中的編碼抗體或其多肽片段之多核苷酸 (亦即編碼區) 與啟動子及/或其他轉錄或轉譯控制元件以可操作締合之方式選殖。如本文所用的「編碼區」，為由翻譯成胺基酸的密碼子組成的核酸的一部分。儘管「終止密碼子」 (TAG、TGA 或 TAA) 不翻譯成胺基酸，但可以將其視為編碼區的一部分 (如果存在)，但是任何側翼序列 (例如啟動子、核醣體結合位點、轉錄終止子、內含子、5’ 和 3’ 非翻譯區等) 不屬於編碼區的一部分。兩個或更多個編碼區可存在於單個多核苷酸構建體中，例如，存在於單個載體上，或存在於單獨的多核苷酸構建體中，例如，存在於單獨的 (不同的) 載體上。此外，任何載體可包含單個編碼區，或可包含兩個或更多個編碼區，例如，本發明之載體可編碼一種或多種多肽，該多肽經由蛋白水解後轉譯或共轉譯分離成最終蛋白。此外，本發明之載體、多核苷酸或核酸可編碼異源編碼區，可以與編碼本發明之抗體或其多肽片段的多核苷酸或其變異體或衍生物融合或不融合。異源編碼區包括但不限於專門的元件或模體 (諸如分泌信號胜肽) 或異源功能域。可操作的締合是指基因產物的編碼區 (例如，多肽) 與一個或多個調控序列締合，從而使基因產物的表現處於調控序列的影響或控制之下。如果啟動子功能的誘導導致編碼所需基因產物的 mRNA 轉錄，並且兩個 DNA 片段之間的連接子性質不干擾表現調控序列指導基因產物表現的能力，也不干擾 DNA 模板被轉錄的能力，則兩個 DNA 片段 (例如多肽編碼區以及與之相締合的啟動子) 「可操縱地締合」。因此，如果啟動子能夠影響核酸的轉錄，則該啟動子區將與編碼多肽的核酸可操縱地締合。啟動子可以為細胞特異性啟動子，其僅指導預定細胞中 DNA 的大量轉錄。除啟動子外，其他轉錄控制元件，例如增強子、操縱子、抑制子和轉錄終止信號，可與多核苷酸可操縱地締合以指導細胞特異性轉錄。

本文公開了合適的啟動子及其他轉錄控制區。各種轉錄控制區為本領域的技術人員所公知的。此等區域包括 (但不限於) 在脊椎動物細胞中起作用的轉錄控制區，例如 (但不限於) 啟動子及增強子區段，其來自巨細胞病毒 (例如即刻早期啟動子，連同內含子 A)、猿猴病毒 40 (例如早期啟動子) 及反轉錄病毒 (例如勞斯肉瘤病毒 (Rous sarcoma virus))。其他轉錄控制區包括來源於脊椎動物基因 (例如肌動蛋白、熱休克蛋白、牛生長激素及兔 â-血球蛋白) 之區域，以及能夠控制真核細胞中之基因表現的其他序列。其他適合的轉錄控制區包括組織特異性啟動子及增強子以及誘導性啟動子 (例如啟動子誘導性四環素 (tetracyclins))。類似地，各種翻譯控制元件為本領域的普通技術人員所公知的。其中包括但不限於核醣體結合位點、翻譯起始和終止密碼子以及來源於病毒體系的元件 (特定而言內部核醣體進入位點或 IRES，也稱為 CITE 序列)。表現匣還可包含其他特徵，例如複製起點及/或染色體整合元件，例如逆轉錄病毒長末端重複序列 (LTR) 或腺相關病毒 (AAV) 反向末端重複序列 (ITR)。

本發明之多核苷酸及核酸編碼區可與編碼分泌或信號肽的其他編碼區締合，該分泌或信號胜肽指導由本發明之多核苷酸編碼的多肽的分泌。舉例而言，若需要分泌抗體或其多肽片段，則可將編碼信號序列之 DNA 置放於編碼本發明之抗體或其多肽片段之核酸的上游。根據信號假說，哺乳動物細胞所分泌之蛋白質具有信號胜肽或分泌前導序列，其在增長的蛋白質鏈透過粗內質網輸出時從成熟蛋白質上裂解下來。本領域的普通技術人員將認識到，脊椎動物細胞所分泌之多肽通常具有與多肽之 N 端融合的信號胜肽，其從翻譯後的多肽上裂解下來以產生分泌或「成熟」形式的多肽。在某些實施例中，使用天然信號肽 (例如免疫球蛋白重鏈或輕鏈信號肽)，或保持引導與其可操作結合之多肽之分泌之能力的該序列之功能衍生物。可替代地，可使用異源哺乳動物信號胜肽或其功能性衍生物。例如，野生型前導序列可被人組織胞漿素原活化物 (TPA) 或小鼠 β-葡萄醣醛酸苷酶的前導序列取代。

編碼可用於促進較晚純化 (例如組胺酸標籤) 或幫助標記雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子之短蛋白質序列的 DNA 可包括於編碼本發明之抗體或其多肽片段的多核苷酸內或位於其末端。

在本發明之另一方面，提供包含本發明之一或多種多核苷酸的宿主細胞。在某些實施例中，提供了包含本發明之一種或多種載體的宿主細胞。多核苷酸和載體可分別單獨或組合結合本文中相對於多核苷酸和載體所述的任何特徵。在一個方面，宿主細胞包含載體 (例如經該載體轉型或轉染)，該載體包含編碼本發明之抗體 (之一部分) 的多核苷酸。如本文中所使用，術語「宿主細胞」係指任何類型之可經工程改造以產生本發明之融合蛋白質或其片段的細胞系統。適用於複製及支持抗原結合分子之表現的宿主細胞為此項技術中熟知。此類細胞可視需要經特定表現載體轉染或轉導，且可生長含有大量載體之細胞以用於接種大型醱酵槽，以獲得足量抗原結合分子以用於臨床應用。合適的宿主細胞包括原核微生物 (例如大腸桿菌) 或各種真核細胞 (例如中國倉鼠卵巢細胞 (CHO)、昆蟲細胞等)。例如，多肽可能在細菌中產生，特定而言在無需醣基化的情況下。在表現後，多肽可與細菌細胞糊中的可溶性部分分離，並可經過進一步純化。除原核生物以外，真核微生物 (如絲狀真菌或酵母菌) 也為合適的多肽編碼載體的選殖或表現宿主，包括其醣基化途徑已被「人源化」的真菌和酵母菌株，從而導致具有部分或完全人醣基化模式的多肽的產生。參見：Gerngross，Nat Biotech 22，1409-1414 (2004)；及 Li 等人，Nat Biotech 24，210-215 (2006)。

用於表現 (醣基化) 多肽的合適的宿主細胞也來源於多細胞生物 (無脊椎動物和脊椎動物)。無脊椎動物細胞之實例包括植物和昆蟲細胞。已鑑定出許多桿狀病毒株，它們可以與昆蟲細胞結合使用，特別是用於轉染草地貪夜蛾 (Spodoptera frugiperda) 細胞。植物細胞培養物也可以用作宿主。參見例如，美國專利號 5,959,177、6,040,498、6,420,548、7,125,978 及 6,417,429 (描述在基因轉殖植物中生產抗體的 PLANTIBODIES ^TM技術)。脊椎動物細胞也可用作宿主。例如，可使用適於在懸浮液中生長的哺乳動物細胞係。可用的哺乳動物宿主細胞系的其他實例包括：由 SV40 (COS-7) 轉化的猴腎 CV1 系；人胚胎腎系 (如 Graham 等人，J Gen Virol 36，59 (1977) 中所述之 293 或 293T 細胞)；幼地鼠腎細胞 (BHK)；小鼠睾丸支持細胞 (如 Mather，Biol Reprod 23，243-251 (1980) 中所述之 TM4 細胞)；猴腎細胞 (CV1)；非洲綠猴腎細胞 (VERO-76)；人宮頸癌細胞 (HELA)；犬腎細胞 (MDCK)；Buffalo 大鼠肝細胞 (BRL 3A)；人肺細胞 (W138)；人肝細胞 (Hep G2)；小鼠乳腺腫瘤細胞 (MMT 060562)；TRI 細胞 (如 Mather 等人，Annals N.Y.Acad Sci 383，44-68 (1982) 所述)；MRC 5 細胞；及 FS4 細胞。其他可用的哺乳動物宿主細胞系包括中華倉鼠卵巢 (CHO) 細胞，包括 dhfr- CHO 細胞 (Urlaub et al., Proc Natl Acad Sci USA 77, 4216 (1980))；及骨髓瘤細胞系，例如 YO、NS0、P3X63 和 Sp2/0。有關某些適用於蛋白質生產的哺乳動物宿主細胞系的綜述，參見例如：Yazaki 和 Wu，Methods in Molecular Biology，Vol. 248 (B.K.C. Lo 主編，Humana Press，Totowa, NJ)，pp. 255-268 (2003)。宿主細胞包括培養的細胞，例如哺乳動物培養細胞、酵母細胞、昆蟲細胞、細菌細胞和植物細胞等，還包括轉基因動物、轉基因植物或培養的植物或動物組織內的細胞。在一個實施例中，宿主細胞為真核細胞，較佳的是哺乳動物細胞，例如中國倉鼠卵巢 (CHO) 細胞、人胚腎 (HEK) 細胞或淋巴樣細胞 (例如，Y0、NS0、Sp20 細胞)。標準技術為此領域中所公知，可在這些系統中表現外源基因。表現包含免疫球蛋白之重鏈或輕鏈之多肽的細胞可經工程改造以亦表現免疫球蛋白鏈中之另一者，使得所表現產物為具有重鏈及輕鏈的免疫球蛋白。

在一個方面，提供製備本發明之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子或其多肽片段的方法，其中該方法包含在適用於表現本發明之抗體或其多肽片段之條件下培養包含多核苷酸之宿主細胞，該等多核苷酸編碼如本文中提供之本發明之抗體或其多肽片段，及自宿主細胞(或宿主細胞培養基)回收本發明之抗體或其多肽片段。

在某些方面，能與形成抗原結合分子的一部分的 Her2 (例如，Fab 片段) 特異性結合的抗原結合域包含能與抗原結合的至少一個免疫球蛋白可變區。變異區可形成並來源於天然或非天然存在的抗體及其片段的一部分。用於生產多克隆抗體和單克隆抗體的方法為此技術領域中所公知 (參見例如 Harlow 和 Lane，"Antibodies, a laboratory manual"，Cold Spring Harbor Laboratory，1988)。非天然存在的抗體可使用固相胜肽合成來構建，可重組產生 (例如，如美國專利號 4,186,567 中所述)，或者可例如透過篩選包含可變重鏈和可變輕鏈的組合文庫來獲得 (參見例如授予 McCafferty 的美國專利號 5,969,108)。

本發明中可使用任何動物物種之免疫球蛋白。適用於本發明之非限制性免疫球蛋白可為鼠、長類動物或人類來源。若融合蛋白質意欲用於人類用途，則可使用其中免疫球蛋白之恆定區來自人類之免疫球蛋白之嵌合形式。亦可根據此項技術中熟知之方法製備免疫球蛋白之人源化或完全人類形式 (參見例如 Winter 之美國專利號 5,565,332)。人源化可以透過多種方法實現，這些方法包括但不限於：(a) 將非人類 (例如供體抗體) CDR 移植到人 (例如受體抗體) 骨架和恆定區上，其中保留或不保留關鍵骨架殘基 (例如，對於保持良好的抗原結合親和性或抗體功能很重要的那些)，(b) 僅將非人類特異性決定區 (SDR 或 a-CDR；對抗體-抗原相互作用至關重要的殘基) 移植到人骨架和恆定區，或 (c) 移植整個非人類可變域，但透過替換錶面殘基將其「隱藏」 (cloaking) 在仿人區段中。人源化抗體及其製造方法評述於例如 Almagro and Fransson, Front Biosci 13, 1619-1633 (2008) 中，且進一步描述於例如 Riechmann et al., Nature 332, 323-329 (1988)；Queen et al., Proc Natl Acad Sci USA 86, 10029-10033 (1989)；美國專利號 5,821,337、7,527,791、6,982,321 及 7,087,409；Jones et al., Nature 321, 522-525 (1986)；Morrison et al., Proc Natl Acad Sci 81, 6851-6855 (1984)；Morrison and Oi, Adv Immunol 44, 65-92 (1988)；Verhoeyen et al., Science 239, 1534-1536 (1988)；Padlan, Molec Immun 31(3), 169-217 (1994)；Kashmiri et al., Methods 36, 25-34 (2005) (描述 SDR (a-CDR) 移植)；Padlan, Mol Immunol 28, 489-498 (1991) (描述「表面重修」)；Dall'Acqua et al., Methods 36, 43-60 (2005) (描述「FR改組」)；及 Osbourn et al., Methods 36, 61-68 (2005) 及 Klimka et al., Br J Cancer 83, 252-260 (2000) (描述FR改組的「導向選擇」方法)中。根據本發明之特定免疫球蛋白為人類免疫球蛋白。人類抗體及人類可變區可使用此項技術中已知之各種技術產生。人抗體一般性描述於：van Dijk 和 van de Winkel，Curr Opin Pharmacol 5，368-74 (2001)；及 Lonberg，Curr Opin Immunol 20，450-459 (2008)。人類可變區可形成藉由融合瘤方法製得之人類單株抗體的一部分且可來源於藉由融合瘤方法製得之人類單株抗體 (參見例如 Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987))。人類抗體及人類可變區亦可藉由如下製備：向經修飾之轉殖基因動物投與免疫原，從而回應於抗原挑戰而產生完整人類抗體或具有人類可變區之完整抗體 (參見例如 Lonberg, Nat Biotech 23, 1117-1125 (2005))。人類抗體及人類可變區亦可藉由分隔選自人類衍生之噬菌體呈現文庫的Fv純系可變區序列來產生(參見例如Hoogenboom et al., Methods in Molecular Biology 178, 1-37 (O’Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001)；及 McCafferty et al., Nature 348, 552-554; Clackson et al., Nature 352, 624-628 (1991))。噬菌體通常以單鏈 Fv (scFv) 片段或 Fab 片段展示抗體片段。

在某些方面，包含在雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子中的抗原結合域根據例如 PCT 公開號 WO 2012/020006 (參見與親和力成熟相關的實例) 或美國專利公開號 2004/0132066。本發明之抗原結合分子結合於特異性抗原決定位之能力可經由酶聯結免疫吸附分析法 (ELISA) 或熟習此項技術者熟悉的其他技術 (例如表面電漿子共振技術) (Liljeblad et al., Glyco J 17, 323-329 (2000)) 及傳統結合分析 (Heeley, Endocr Res 28, 217-229 (2002)) 量測。可使用競爭分析鑑別與參考抗體競爭結合於特定抗原之抗原結合分子。在某些實施例中，此類競爭抗原結合分子結合於與由參考抗原結合分子所結合相同的表位 (例如直鏈或構形表位)。抗原結合分子所結合之表位之定位的詳細例示性方法提供於 Morris (1996) 「Epitope Mapping Protocols」, Methods in Molecular Biology vol. 66 (Humana Press, Totowa, NJ) 中。在例示性競爭分析中，在包含結合於抗原之第一標記抗原結合分子及測試與第一抗原結合分子競爭結合於抗原之能力的第二未標記抗原結合分子之溶液中培育固定抗原。第二抗原結合分子可存在於融合瘤上清液中。作為對照，在包含第一標記抗原結合分子但不包含第二未標記抗原結合分子之溶液中培育固定抗原。在允許第一抗體結合於抗原之條件下培育後，移除過量的未結合抗體，且量測與固定抗原相關之標記量。若與對照樣品相比，測試樣品中與固定抗原相關之標記量實質上降低，則表明第二抗原結合分子與第一抗原結合分子競爭結合於抗原。參見 Harlow and Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual ch.14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY)。

如本文中所描述製備之本發明之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子可藉由此項技術中已知的技術純化，諸如高效液相層析、離子交換層析、凝膠電泳、親和層析、尺寸排阻層析及其類似技術。用於純化特定蛋白質之實際條件將部分取決於淨電荷、疏水性、親水性等因素，並且對本領域的技術人員而言為顯而易見的。關於親和層析純化，可使用與抗原結合分子結合的抗體、配位體、受體或抗原。舉例而言，關於本發明之抗原結合分子之親和層析純化，可使用具有蛋白質 A 或蛋白質 G 之基質。可使用序列蛋白質 A 或 G 親和層析及尺寸排阻層析來分離實質上如實例中所描述之抗原結合分子。可藉由多種熟知分析方法 (包括凝膠電泳、高壓液相層析及其類似方法) 中之任一種測定 CD28 抗原結合分子或其片段的純度。舉例而言，顯示如實例中所描述來表現之 CD28 抗原結合分子為完整的且經適當組裝，如藉由還原及非還原性 SDS-PAGE 證明。

測定

可藉由此項技術中已知之各種分析對本文中提供之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子針對其物理/化學特性及/或生物活性進行鑑別、篩選或表徵。

1. 親和力測定

可使用標準測試設備 (例如蛋白質儀器 (Bio-rad)) 及例如可藉由重組表現獲得之受體或標靶蛋白質，根據實例中所闡述之方法，藉由表面電漿子共振 (SPR) 測定本文中所提供之抗原結合分子對相對目標的親和力。亦可使用標準測試設備 (例如蛋白質儀器 (Bio-rad)) 及例如可藉由重組表現獲得之受體或標靶蛋白質，藉由表面電漿子共振 (SPR) 測定抗原結合分子對標靶細胞抗原的親和力。根據一方面，在 25℃ 下使用 Proteon ® 機器 (Bio-Rad)，藉由表面電漿子共振測量 K _D。

2. 結合測定及其他測定

本文中提供之雙特異性抗原結合分子與表現相應受體之細胞的結合可使用表現特定受體或標靶抗原之細胞株藉由例如流式細胞分析技術 (FACS) 來評估。在一個方面，在結合測定中使用表現人類 CD28 的 CHO 細胞 (親代細胞系 CHO-k1 ATCC #CCL-61，經修飾以穩定過表現人類 CD28)。

在另一方面，表現 Her2 的癌細胞株 (例如人類乳癌細胞株 KPL-4，Kawasaki Medical School) 用於證實雙特異性抗原結合分子與標靶細胞抗原的結合。

3. 活性測定

在一個方面，提供用於鑑定具有生物活性的 CD28 抗原結合分子的測定。生物活性可包括，例如 T 細胞活化和細胞激素分泌或腫瘤細胞毒殺，如用實例 3 中所述的方法測量。亦提供在 活體內及/或 活體外具有這種生物活性的抗原結合分子。

醫藥組成物、調配物及投藥途徑

在另一方面，本發明提供醫藥組成物，其包含本文所提供之任何雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，例如用於以下任一種治療方法中。在一實施例中，醫藥組成物包含任一種本文中所提供之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子及至少一種醫藥上可接受之賦形劑。在另一方面，醫藥組成物包含任本文中所提供之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子及至少一種其他治療劑，例如下文所描述。

本發明之醫藥組成物包含治療有效量之一或多種溶解或分散於醫藥上可接受之賦形劑中的雙特異性抗原結合分子。短語「醫藥上或藥理學上可接受」是指在採用的劑量和濃度下通常對受體無毒的分子實體和組成物，即給予動物 (例如人) 時不產生不利的、過敏或其他不良反應 (在適當情況下)。根據本揭示，含有至少一種雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子及視情況選用之額外的活性成分之醫藥組成物的製備為熟習此項技術者已知的，如由 Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. Mack Printing Company, 1990 所例示的，其藉由引用併入本文中。特別是，組成物為凍乾調配物或水性溶液。如本文中所使用，「醫藥上可接受之賦形劑」包括任何及所有溶劑、緩衝液、分散介質、塗料、界面活性劑、抗氧化劑、防腐劑 (例如抗菌劑、抗真菌劑)、等滲劑、鹽、穩定劑及其組合，如一般熟習此項技術者已知。

腸胃外組成物包括那些設計用於注射投予的組成物，例如皮下、皮內、病灶內、靜脈內、動脈內、肌肉內、鞘內或腹腔內注射。對於注射，本發明之含有TNF家族配位三聚體之抗原結合分子可在水性溶液中，較佳在生理學上相容之緩衝液(諸如漢克氏溶液 (Hanks' solution)、林格氏溶液 (Ringer's solution) 或生理食鹽水緩衝液)中調配。該溶液可包含配製劑，例如懸浮劑、穩定劑及/或分散劑。或者，雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子可呈粉末形式，以用於在使用之前用適合的媒劑 (例如無菌無熱原質水) 復原。藉由將所需量之本發明之融合蛋白質併入視需要具有多種下文列舉之其他成分之適當溶劑中來製備無菌可注射溶液。無菌性可易於例如透過無菌濾膜過濾來實現。通常，透過將各種滅菌后的活性成分摻入含有基本分散介質及/或其他成分的無菌載劑中來製備分散液。對於用於製備無菌注射液、混懸劑或乳劑的無菌粉末，優選的製備方法是真空乾燥或冷凍乾燥技術，該技術可從先前過濾後的無菌液體介質中得到活性成分與任何其他所需成分的粉末。如有必要，應適當緩衝液體介質，並且在註射足夠的鹽水或葡萄糖之前先使液體稀釋劑等滲。組成物必須在製造和儲存條件下保持穩定，並且必須能夠抵抗諸如細菌和真菌等微生物的污染作用。應當理解，內毒素污染應最小限度地保持在安全濃度，例如，小於 0.5 ng/mg 蛋白質。適合的醫藥上可接受之賦形劑包括，但不限於：緩衝液，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸及甲硫胺酸；防腐劑(諸如十八烷基二甲基苯甲基氯化銨；氯化六羥季銨；苯紮氯銨；苄索氯銨；酚、丁醇或苯甲醇；對羥基苯甲酸烷基酯，諸如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；及間甲酚)；低分子量(小於約10個殘基)多肽；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺酸、組胺酸、精胺酸或離胺酸；單醣、雙糖及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA；糖，諸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成鹽相對離子，諸如鈉；金屬錯合物(例如Zn-蛋白質錯合物)；及/或非離子性界面活性劑，諸如聚乙二醇(PEG)。水性注射懸浮液可包含提高混懸劑黏度的化合物，例如羧甲基纖維素鈉、山梨糖醇、右旋葡萄聚糖等。視情況，懸浮液還可包含合適的穩定劑或提高化合物溶解度的試劑，以製備高濃度溶液。另外，可將活性化合物的懸浮液製備為合適的油性注射懸浮液。合適的親脂性溶劑或載劑包括脂肪油 (例如芝麻油) 或合成脂肪酸酯 (例如油酸乙酯或甘油三酯) 或脂質體。

活性成分可以包載在例如透過凝聚技術或透過介面聚合製備的微囊 (例如，分別為羥甲基纖維素微囊或明膠微囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微囊) 中、膠體藥物遞送系統 (例如脂質體、白蛋白微球、微乳、奈米顆粒和奈米囊 (nanocapsule)) 中或粗滴乳狀液中。此等技術公開於 Remington’s Pharmaceutical Sciences (第 18 版，Mack Printing Company，1990) 中。可以製備緩釋製劑。緩釋製劑的適宜的實例包括含有多肽的固體疏水聚合物的半透性基質，該基質是成形物品的形式，例如膜或微囊。在特定實施例中，可以透過在組成物中使用延遲吸收的物質 (例如單硬脂酸鋁、明膠或其組合) 來產生可注射組成物的延長吸收。本文中之例示性醫藥上可接受的載劑進一步包括間質藥物分散劑，諸如可溶性中性活性玻尿酸酶醣蛋白 (sHASEGP)，例如人類可溶性PH-20玻尿酸酶醣蛋白，例如 rHuPH20 (HYLENEX®，Baxter International, Inc.)。某些例示性 sHASEGP 及用法 (包括 rHuPH20) 描述於美國專利公開號 2005/0260186 和 2006/0104968 中。在一個方面，sHASEGP 與一種或多種額外的糖胺聚醣酶諸如軟骨素酶結合在一起。例示性凍乾抗體製劑如美國第 6,267,958 號專利所述。水性抗體調配物包括美國專利第6,171,586號及WO2006/044908中所述之調配物，後者調配物包括組胺酸-乙酸鹽緩衝液。除先前描述之組成物以外，雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子亦可調配成儲存製劑。此等長效製劑可以透過植入 (例如皮下或肌內) 或透過肌內注射投予。因此，舉例而言，雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子可用適合的聚合或疏水性材料 (例如呈可接受之油中的乳液形式) 或離子交換樹脂調配，或調配成微溶性衍生物，例如微溶性鹽。

包含本發明之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子的醫藥組成物可藉由習知混合、溶解、乳化、包裹、包覆或凍乾方法製造。可使用一種或多種有助於將蛋白質加工成可藥用製劑的生理上可接受之載劑、稀釋劑、賦形劑或助劑以習用方式配製醫藥組成物。適宜的製劑視所選的投藥途徑而定。可將本發明之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子調配成游離酸或鹼、中性或鹽形式之組成物。醫藥上可接受之鹽是基本上保留游離酸或鹼的生物活性的鹽。此等鹽包括酸加成鹽，例如與蛋白質組成物之游離胺基形成的鹽，或與無機酸 (例如鹽酸或磷酸) 或有機酸 (例如乙酸、草酸、酒石酸或杏仁酸) 形成的鹽。與游離羧基形成的鹽類還可以衍生自：無機鹼，例如氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化銨、氫氧化鈣或氫氧化鐵；或有機鹼，諸如異丙胺、三甲胺、組胺酸或普魯卡因。藥用鹽趨向於比對應的游離鹼形式更易溶於水性溶劑和其他質子性溶劑。本文之組成物亦可含有一種以上為治療特定適應症所需之活性成分，較佳為具有互補活性不會對彼此產生不利影響之活性成分。此等活性成分適宜地以對預期目的有效的量組合存在。用於活體內投予的調配物通常是無菌的。無菌性可易於例如透過無菌濾膜過濾來實現。

治療方法及組成物

本文提供的任何雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子可單獨或組合用於治療方法中。

在一個方面，提供用為藥物的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子。再一方面，提供用於治療癌症的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子。在某些方面，提供用於治療方法的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子。在某些方面，本文提供用於治療患有癌症的受試者的方法中使用的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，該方法包含向該受試者投予有效量的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子。在一個此類實施例中，該方法進一步包含向該受試者投予有效量的至少一種額外的治療劑。

在一個方面，雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子用於抑制表現 Her2 的癌細胞的生長。因此，在特定方面，雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子用於治療 Her2 陽性癌症。Her2 陽性癌症的實例包括乳癌、卵巢癌、胃癌、膀胱癌、唾液腺癌、子宮內膜癌、胰腺癌及非小細胞肺癌 (NSCLC)。在一個方面，Her2 陽性癌症為 Her2+ 陽性乳癌，例如早期或局部晚期 Her2+ 陽性乳癌。因此，提供用於治療這些癌症的如本文所述的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子。需要治療的個體、患者或「受試者」通常為哺乳動物，更具體而言為人類。

在某些方面，提供用於治療方法的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子。在某些方面，本文提供用於治療患有癌症的受試者的方法中使用的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，該方法包含向該受試者投予有效量的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子。在另一方面，提供雙特異性激動性CD28抗原結合分子用於治療患有 her2 陽性癌症之受試者的方法，特別是乳癌、卵巢癌、胃癌、膀胱癌、唾液腺癌、子宮內膜癌、胰腺癌和非小細胞癌 (NSCLC)，包含向該受試者投予有效量的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子。在一個此類實施例中，該方法進一步包含向該受試者投予有效量的至少一種額外的治療劑。

再一方面，本文提供如本文所述的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子在製造或製備藥物中的用途。在一實施例中，該藥物用於治療癌症，特別是 Her2 陽性癌症。再一方面，該藥物用於治療癌症的方法中，該方法包含向患有癌症的受試者投予有效量之藥物。在一個此等方面，該方法進一步包含將有效量之至少一種另外治療劑 (如下文所述) 投予個體。在另一方面，該藥物用於治療 Her2 陽性癌症。再一方面，藥物用於治療癌症，特別是 Her2 陽性癌症的方法，包含向患有癌症的受試者投予有效量的藥物。再一方面，本文提供一種治療癌症，特別是 Her2 陽性癌症的方法。在一個方面，該方法包含向患有癌症的受試者投用有效量的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子。在一個此等方面，該方法進一步包含將有效量之至少一種另外治療劑 (如下文所述) 投予個體。根據上述任一方面的「個體」可以是人。

再一方面，本文提供包含本文所報導之任何雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子的醫藥調配物，例如用於任何上述治療方法。在一個方面，醫藥調配物包含本文所報導之任何雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子和醫藥上可接受之載劑。在另一方面，醫藥調配物包含本文所報導之任何雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子和至少一種額外的治療劑。

如本文所報導的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子可單獨使用或與其他藥劑組合用於治療。例如，本文所報導之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子可與至少一種額外的治療劑共同投予。因此，提供用於癌症免疫療法的如本文所述之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子。在某些實施例中，提供用於癌症免疫療法之方法中的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子。根據上述任一方面的「個體」較佳地為人。

上述此類組合療法包括組合投予 (其中兩種或更多種治療劑包含在相同或單獨的調配物中) 和分別投予，在此情況下，如本文所報導的抗體可在投予另外的一種或多種治療劑之前、同時和/或隨後投予。投予雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子和投予另外的治療劑彼此發生在約一個月內，或約一、二或三週內，或約一、二、三、四、五或六天之內。

可藉由任何合適的方式投予如本文所報導之抗原結合分子 (和任何另外的治療劑)，包括腸胃外、肺內和鼻內，且如果需要局部治療，可在病灶內投予。腸胃外輸注包括肌內、靜脈內、動脈內、腹膜內或皮下投予。投予可透過任何合適的途徑進行，例如透過注射，例如靜脈內或皮下注射，部分取決於短暫投予還是長期投予。本文中考慮各種投予方案，其包括但不限於在多種時間點單次或多次投予、快速注射投予及脈衝輸注。

本文所述之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子以符合良好醫學實踐之方式調配、給藥及投予。在這種情況下，考慮的因素包括待治療的具體障礙、待治療的具體哺乳動物、個體患者的臨床病症、障礙的原因、遞送藥物的部位、投予方法、投予日程及醫療從業者已知的其他因素。雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子不需要，但可視情況地與一種或多種目前用於預防或治療所討論之病症的藥劑一起調配。此等其他治療劑的有效量取決於存在於調製劑中存在的抗體量、病症或治療的類型以及上文討論的其他因素。這些通常以與本文中所述相同的劑量及投予途徑，或本文中所述劑量的約 1% 至 99%，或以經驗上/臨床上確定為適當的任何劑量及藉由任何途徑使用。

為了預防或治療疾病，如本文所述之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子 (當單獨使用或與一種或多種額外治療劑組合使用時) 的適當劑量將取決於待治療的疾病類型、抗體類型、疾病嚴重程度和病程、投予抗體是用於預防還是治療目的、先前的治療、患者的臨床病史和對抗體的反應，以及主治醫生的判斷。雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子適於投予患者一次或經過一系列的治療。根據疾病的類型和嚴重程度不同，約 1 µg/kg 至 15 mg/kg (例如 0.5 mg/kg – 10 mg/kg) 的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子可以是用於投予患者的初始候選劑量，例如藉由一次或多次分開投予，或藉由連續輸注。根據上述因素，一種典型的日劑量可在約 1 µg/kg 至 100 mg/kg 或更多的範圍內。對於在幾天或更長時間內重複投予，視病症而定，治療通常將持續直至出現所需的疾病症狀抑制。抗體的一種例示性劑量將在從 0.05 mg/kg 至約 10 mg/kg 的範圍內。因此，可以對患者投予約 0.5 mg/kg、2.0 mg/kg、4.0 mg/kg 或 10 mg/kg 中的一種或多種劑量 (或其任意組合)。此等劑量可以間歇施用，例如每週或每三週施用 (例如，使得患者接受約 2 種至約 20 種或例如約 6 種劑量的抗體)。可以投予初始較高的負荷劑量，然後投予一種或多種較低的劑量。但是，可以使用其他劑量方案。透過習用技術和測定很容易監測此治療的進展。

其他藥劑及治療

如前所述，本發明的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子可在治療中與一種或多種其他藥劑組合給藥。例如，本發明的抗原結合分子可與至少一種額外的治療劑共同給藥。術語「治療劑」涵蓋可投與用於治療需要此類治療之受試者中之症狀或疾病的任何藥劑。此等另外的治療劑可包含適合於所治療的特定適應症的任何活性成分，較佳地，為那些相互無不利影響的具有互補活性成分。在某些實施例中，該額外的治療劑為另一抗癌劑，例如微管破壞劑、抗代謝藥、拓撲異構酶抑制劑、DNA 嵌入劑、烷化劑、激素療法、激酶抑制劑、受體拮抗劑、腫瘤細胞凋亡啟動劑或抗血管生成劑。在某些方面，該額外的治療劑是免疫調節劑、細胞抑制劑、細胞黏附抑制劑、細胞毒性劑或細胞抑制劑、細胞凋亡活化劑或增加細胞對凋亡誘導劑靈敏度的藥劑。

因此，提供用於治療癌症的本發明之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子或包含其之醫藥組成物，其中該雙特異性抗原結合分子與化療劑、放射線及/或用於癌症免疫療法的其他藥劑組合施用。

此等其他藥物適宜地以對預期目的有效的量組合存在。此類其他藥劑之有效量視所使用之融合蛋白質之量、病症或治療之類型及如上文所述之其他因素而定。本發明之雙特異性抗原結合分子或抗體通常以相同劑量及藉由如本文中所描述之投藥途徑使用，或本文中所描述之劑量之約1至99%，或以任何劑量及藉由憑經驗/臨床上測定合適的任何途徑。上述此類組合療法包括組合投予 (其中兩種或更多種治療劑包含在相同或分開的組成物中) 和分開投予，在此情況下，投予本發明的雙特異性抗原結合分子或抗體可在投予額外的治療劑及/或佐劑之前、同時及/或之後進行。

在另一方面，提供用於治療癌症，特別是 Her2 陽性癌症的如本文前述的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中該雙特異性抗原結合分子與另一免疫調節劑組合給藥。術語「免疫調節劑」是指包括影響免疫系統的單株抗體的任何物質。本發明的分子可被認為是免疫調節劑。免疫調節劑可用作治療癌症的抗腫瘤劑。在一個方面，免疫調節劑包括，但不限於抗 CTLA4 抗體 (例如伊匹木單抗 (ipilimumab))、抗 PD1 抗體 (例如納武利尤單抗 (nivolumab) 或帕博利珠單抗)、PD-L1 抗體 (例如阿替利珠單抗 (atezolizumab)、阿維魯單抗 (avelumab) 或度伐魯單抗 (durvalumab))、OX-40 抗體、4-1BB 抗體和 GITR 抗體。上述此類組合療法包括組合投予 (其中兩種或更多種治療劑包含在相同或分開的組成物中) 和分開投予，在此情況下，投予雙特異性抗原結合分子可在投予額外的治療劑及/或佐劑之前、同時及/或之後進行。

與 T 細胞雙特異性抗體組合

在一個方面，本發明之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子可與 T 細胞活化抗 CD3 雙特異性抗體組合給藥。在一個方面，特異性針對腫瘤相關抗原的 T 細胞活化抗 CD3 雙特異性抗體是抗 Her2/抗 CD3 雙特異性抗體。在一個方面，包含能夠特異性結合 Her2 之至少一個抗原結合域的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子適於與抗 Her2/抗 CD3 雙特異性抗體組合投予。在一個方面，抗 Her2/抗 CD3 抗體包含結合 CD3 的第一抗原結合域和結合 Her2 的第二抗原結合域。在一特定方面，與 Her2 結合的第二結合域結合至 Her2 上與含 4-1BBL 三聚體的抗原結合分子不同的表位。

在一個方面，如本文所使用的抗 Her2/抗 CD3 雙特異性抗體，其包含含有重鏈可變區 (V _HCD3) 及/或輕鏈可變區 (V _LCD3) 的第一抗原結合域，該重鏈可變區包含 SEQ ID NO:148 之 CDR-H1 序列、SEQ ID NO:149 之 CDR-H2 序列及 SEQ ID NO:150 之 CDR-H3 序列；取該輕鏈可變區包含 SEQ ID NO:151 之 CDR-L1 序列、SEQ ID NO:152 之 CDR-L2 序列及 SEQ ID NO:153 之 CDR-L3 序列。更具體地，抗 Her2/抗 CD3 雙特異性抗體包含第一抗原結合域，該第一抗原結合域包含與 SEQ ID NO: 154 之胺基酸序列至少 90%、95%、96%、97%、98% 或 99% 相同的重鏈可變區 (V _HCD3) 及/或與 SEQ ID NO: 155 之胺基酸序列至少 90%、95%、96%、97%、98% 或 99% 相同的輕鏈可變區 (V _LCD3)。再一方面，抗 Her2/抗 CD3 雙特異性抗體包含含有 SEQ ID NO:154 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD3) 及/或含有 SEQ ID NO:155 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD3)。

在一個方面，抗 Her2/抗 CD3 雙特異性抗體包含與抗體 4D5 (人源化版本稱為曲妥珠單抗) 結合相同表位的第二抗原結合域。在另一方面，抗 Her2/抗 CD3 雙特異性抗體包含與抗體 2C4 (人源化版本稱為帕妥珠單抗) 結合相同表位的第二抗原結合域。又另一方面，抗 Her2/抗 CD3 雙特異性抗體包含與抗體 7C2 (美國專利號 9,518,118) 結合相同表位的第二抗原結合域。

在另一方面，抗 Her2/抗 CD3 雙特異性抗體包含第二抗原結合域，其包含 (a) 重鏈可變區 (V _HHer2)，其包含 SEQ ID NO:140 之 CDR-H1 序列、SEQ ID NO:141 之 CDR-H2 序列及 SEQ ID NO:142 之 CDR-H3 序列，及/或輕鏈可變區 (V _LHer2)，其包含 SEQ ID NO:143 之 CDR-L1 序列、SEQ ID NO:144 之 CDR-L2 序列及 SEQ ID NO:145 之 CDR-L3 序列，或 (b) 重鏈可變區 (V _HHer2)，其包含 SEQ ID NO:132 之 CDR-H1 序列、SEQ ID NO:133 之 CDR-H2 序列及 SEQ ID NO:134 之 CDR-H3 序列，及/或輕鏈可變區 (V _LHer2)，其包含 SEQ ID NO:135 之 CDR-L1 序列、SEQ ID NO:136 之 CDR-L2 序列及 SEQ ID NO:137 之 CDR-L3 序列，或 (c) 重鏈可變區 (V _HHer2)，其包含 SEQ ID NO:156 之 CDR-H1 序列、SEQ ID NO:157 之 CDR-H2 序列及 SEQ ID NO:158 之 CDR-H3 序列，及/或輕鏈可變區 (V _LHer2)，其包含 SEQ ID NO:159 之 CDR-L1 序列、SEQ ID NO:160 之 CDR-L2 序列及 SEQ ID NO:161 之 CDR-L3 序列。

在一個方面，抗 Her2/抗 CD3 雙特異性抗體包含第二抗原結合域，該第二抗原結合域包含與 SEQ ID NO: 146 之胺基酸序列至少 90%、95%、96%、97%、98% 或 99% 相同的重鏈可變區 (V _HHer2) 及/或與 SEQ ID NO: 147 之胺基酸序列至少 90%、95%、96%、97%、98% 或 99% 相同的輕鏈可變區 (V _LHer2)。再一方面，抗 Her2/抗 CD3 雙特異性抗體包含含有 SEQ ID NO:146 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HHer2) 及/或含有 SEQ ID NO:147 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LHer2) 的第二抗原結合域。

在一個方面，抗 Her2/抗 CD3 雙特異性抗體包含包含第一抗原結合域及第二抗原結合域，該第一抗原結合域包含含有 SEQ ID NO:154 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD3) 及/或含有 SEQ ID NO:155 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD3)，且該第二抗原結合域包含含有 SEQ ID NO:146 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HHer2) 及/或包含 SEQ ID NO: 147 之胺基酸序列的輕鏈可變區(V _LHer2)。

在一個方面，抗 Her2/抗 CD3 雙特異性抗體包含包含含有 SEQ ID NO: 174 之胺基酸序列的第一重鏈及/或含有 SEQ ID NO: 175 之胺基酸序列的第一輕鏈以及含有 SEQ ID NO: 176 之胺基酸序列的第二重鏈及/或含有 SEQ ID NO: 177 之胺基酸序列的第二輕鏈 (HER2 TDB)。

在另一方面，抗 Her2/抗 CD3 雙特異性抗體包含第二抗原結合域，該第二抗原結合域包含與 SEQ ID NO: 138 之胺基酸序列至少 90%、95%、96%、97%、98% 或 99% 相同的重鏈可變區 (V _HHer2) 及/或與 SEQ ID NO: 139 之胺基酸序列至少 90%、95%、96%、97%、98% 或 99% 相同的輕鏈可變區 (V _LHer2)。再一方面，抗 Her2/抗 CD3 雙特異性抗體包含含有 SEQ ID NO:138 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HHer2) 及/或含有 SEQ ID NO:139 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LHer2) 的第二抗原結合域。在另一方面，抗 Her2/抗 CD3 雙特異性抗體包含第二抗原結合域，該第二抗原結合域包含與 SEQ ID NO: 162 之胺基酸序列至少 90%、95%、96%、97%、98% 或 99% 相同的重鏈可變區 (V _HHer2) 及/或與 SEQ ID NO: 163 之胺基酸序列至少 90%、95%、96%、97%、98% 或 99% 相同的輕鏈可變區 (V _LHer2)。再一方面，抗 Her2/抗 CD3 雙特異性抗體包含含有 SEQ ID NO:162 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HHer2) 及/或含有 SEQ ID NO:163 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LHer2) 的第二抗原結合域。

在一個方面，抗 Her2/抗 CD3 雙特異性抗體包含包含第一抗原結合域及第二抗原結合域，該第一抗原結合域包含含有 SEQ ID NO:154 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD3) 及/或含有 SEQ ID NO:155 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD3)，且該第二抗原結合域包含含有 SEQ ID NO:162 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HHer2) 及/或包含 SEQ ID NO: 163 之胺基酸序列的輕鏈可變區(V _LHer2)。

再一方面，雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子與 T 細胞活化抗 CD3 雙特異性抗體組合使用，且 T 細胞活化抗 CD3 雙特異性抗體與雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子同時、之前或之後給藥。

再一方面，提供雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子在製備用於治療癌症的藥物中的用途，其中該雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子與 T 細胞活化抗 CD3 雙特異性抗體組合，特別是抗 Her2/抗 CD3 雙特異性抗體。在某些方面，待治療之疾病為 Her2 陽性癌症。Her2 陽性癌症的實例包括乳癌、卵巢癌、胃癌、膀胱癌、唾液腺癌、子宮內膜癌、胰腺癌及非小細胞肺癌 (NSCLC)。在某些方面，待治療的癌症是 Her2 陽性乳癌，特別是 Her2 陽性轉移性乳癌。

在另一方面，本發明提供一種治療受試者癌症的方法，其包含向該受試者投予治療有效量的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子和有效量的 T 細胞活化抗 CD3 雙特異性抗體，特別是，如上述定義的抗 Her2/抗 CD3 雙特異性抗體。在某些方面，該方法用於治療 Her2 陽性癌症。Her2 陽性癌症的實例包括乳癌、卵巢癌、胃癌、膀胱癌、唾液腺癌、子宮內膜癌、胰腺癌及非小細胞肺癌 (NSCLC)。在一個方面，該方法用於治療 Her2 陽性轉移性乳癌。

在另一方面，提供包含如本文所述的雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子和 T 細胞活化抗 CD3 雙特異性抗體的組合產品。在一個方面，特異性針對腫瘤相關抗原的 T 細胞活化抗 CD3 雙特異性抗體是抗 Her2/抗 CD3 雙特異性抗體。

與阻斷 PD-L1/PD-1 相互作用之藥劑組合

在一個方面，本發明之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子可與阻斷 PD-L1/PD-1 相互作用之藥劑 (例如 PD-L1 結合拮抗劑或 PD-1 結合拮抗劑，特別是，抗 PD-L1 抗體或抗 PD-1 抗體) 組合給藥。

在一個方面，阻斷 PD-L1/PD-1 相互作用之藥劑為抗 PD-L1 抗體。術語「 PD-L1」(亦稱為 CD274 或 B7-H1) 是指來自任何脊椎動物來源 (包括哺乳動物，例如靈長類動物 (例如人類)、非人類靈長類動物 (例如食蟹獼猴) 及嚙齒動物 (例如小鼠及大鼠)) 之任何天然 PD-L1，特別是指「人類 PD-L1」。完全人類 PD-L1 的胺基酸序列顯示於 UniProt (www.uniprot.org) 登錄號 Q9NZQ7 (SEQ ID NO:164)。術語「 PD-L1 結合拮抗劑」是指一種分子，其減少、阻斷、抑制、消除或干擾由 PD-L1 與其一種或多種結合配偶體 (binding partner) (例如 PD-1、B7-1) 之交互作用引起的信號轉導。在一些方面，PD-L1 結合拮抗劑為抑制 PD-L1 與其結合伴侶之結合的分子。在具體方面，PD-L1 結合拮抗劑抑制 PD-L1 與 PD-1 和/或 B7-1 之結合。在一些方面，PD-L1 結合拮抗劑包括抗 PD-L1 抗體、其抗原結合片段、免疫黏附素、融合蛋白、寡肽以及減少、阻斷、抑制、消除或干擾由 PD-L1 與其一種或多種結合伴侶 (例如 PD-1 或 B7-1) 之交互作用引起的訊息轉導的其他分子。在一個方面，PD-L1 結合拮抗劑減少由 T 淋巴球上表現的細胞表面蛋白所介導或藉由其表現的負共刺激信號 (藉由 PD-L1 介導的信號傳導)，從而減輕失能性 T 細胞的功能障礙 (例如，增強效應子對抗原識別的反應)。特別是，PD-L1 結合拮抗劑為抗 PD-L1 抗體。術語「抗 PD-L1 抗體」或「結合至人類 PD-L1 之抗體」或「特異性結合至人類 PD-L1 之抗體」或「拮抗性抗 PD-L1」是指以KD值為 1.0 x 10 ^-8或更低，在一個方面，K _D值為 1.0 x10 ^-9mol/l 或更低的結合親和力特異性結合至人類 PD-L1 抗原的抗體。以標準結合測定決定結合親和力，例如以表面電漿子共振技術 (BIAcore®, GE-Healthcare Uppsala, Sweden)。在一特定方面，阻斷 PD-L1/PD-1 相互作用之藥劑為抗 PD-L1 抗體。在一具體方面，抗 PD-L1 抗體選自阿替利珠單抗 (MPDL3280A，RG7446)、度伐魯單抗 (MEDI4736)、阿維魯單抗 (MSB0010718C) 及 MDX-1105 所組成之群組。於一具體方面，抗 PD-L1 抗體為本文所揭示之 YW243.55.S70。於另一個具體方面中，抗 PD-L1 抗體為本文所揭示之 MDX-1105。在又一具體方面，抗 PD-L1 抗體為 MEDI4736 (度伐魯單抗)。在再一方面，抗 PD-L1 抗體為 MSB0010718C (阿維魯單抗)。更特別地，阻斷 PD-L1/PD-1 相互作用之藥劑為阿替利珠單抗 (MPDL3280A)在另一方面，阻斷 PD-L1/PD-1 相互作用的藥劑為抗 PD-L1 抗體，其包含 SEQ ID NO: 165 之重鏈可變域 VH(PDL-1) 及 SEQ ID NO: 166 之輕鏈可變域 VL(PDL-1)。在另一方面，阻斷 PD-L1/PD-1 相互作用的藥劑為抗 PD-L1 抗體，其包含 SEQ ID NO: 167 之重鏈可變域 VH(PDL-1) 及 SEQ ID NO: 168 之輕鏈可變域 VL(PDL-1)。

術語「 PD-1」，亦稱為 CD279、PD1 或程式化細胞死亡蛋白 1，是指來自任何脊椎動物來源 (包括哺乳動物，例如靈長類動物 (例如人類)、非人類靈長類動物 (例如食蟹獼猴) 及嚙齒動物 (例如小鼠及大鼠)) 之任何天然 PD-L1，特別是，具有如 UniProt (www.uniprot.org) 寄存編號 Q15116 (SEQ ID NO: 1691) 中所示之胺基酸序列的人類蛋白質 PD-1。術語「 PD-1 結合拮抗劑」是指抑制 PD-1 結合至其配體結合配偶體的分子。在一些實施例中，PD-1 結合拮抗劑抑制 PD-1 與 PD-L1 之結合。在一些實施例中，PD-1 結合拮抗劑抑制 PD-1 與 PD-L2 之結合。在一些實施例中，PD-1 結合拮抗劑抑制 PD-1 與 PD-L1 和 PD-L2 二者結合。特別是，PD-L1 結合拮抗劑為抗 PD-L1 抗體。術語「抗 PD-1 抗體」或「結合至人類 PD-1 之抗體」或「特異性結合至人類 PD-1 之抗體」或「拮抗性抗 PD-1」是指以 KD 值為 1.0 x 10 ^-8或更低，在一個方面，KD 值為 1.0 x10 ^-9mol/l 或更低的結合親和力特異性結合至人類 PD-1 抗原的抗體。以標準結合測定決定結合親和力，例如以表面電漿子共振技術 (BIAcore®, GE-Healthcare Uppsala, Sweden)。在一個方面，阻斷 PD-L1/PD-1 相互作用之藥劑為抗 PD-1 抗體。在一個具體方面，抗 PD-1 抗體選自 MDX 1106 (納武利尤單抗)、MK-3475 (帕博利珠單抗 (pembrolizumab))、CT-011 (匹定利珠單抗 (pidilizumab))、MEDI-0680 (AMP-514)、PDR001、 REGN2810 及 BGB-108 所組成之群組，特別是來自帕博利珠單抗和納武利尤單抗。在另一方面，阻斷 PD-L1/PD-1 相互作用的藥劑為抗 PD-1 抗體，其包含 SEQ ID NO: 170 之重鏈可變域 VH(PD-1) 及 SEQ ID NO: 171 之輕鏈可變域 VL(PD-1)。在另一方面，阻斷 PD-L1/PD-1 相互作用的藥劑為抗 PD-1 抗體，其包含 SEQ ID NO: 172 之重鏈可變域 VH(PD-1) 及 SEQ ID NO: 173 之輕鏈可變域 VL(PD-1)。

在另一方面，提供了一種組合產品，其包含如本文所述之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子和阻斷 PD-L1/PD-1 相互作用的藥劑，例如 PD-L1 結合拮抗劑或 PD-1 結合拮抗劑，特別是抗 PD-L1 抗體或抗 PD-1 抗體。

上述此類組合療法包括組合投予 (其中兩種或更多種治療劑包含在相同或分開的調配物中) 及分開投予，在此情況下，治療劑可在投予另外的一種或多種治療劑之前、同時和/或隨後投予。在一個實施例中，投予治療劑及投予額外的治療劑彼此發生在約一個月內，或發生在約一週、兩週或三週內，或發生在約一天、兩天、三天、四天、五天、或六天內。

製品

本發明的另一方面提供包含用於治療、預防和/或診斷上述疾病的製成品。該製品包括容器及容器上或與容器相關的標籤或藥品說明書。合適的容器包括例如，瓶、小瓶、注射器、IV 溶液袋等。該等容器可以由多種材料例如，玻璃或塑膠形成。容器裝有單獨或與有效治療、預防及/或診斷症狀之另一組成物組合的組成物，且可具有無菌出入孔 (例如容器可為具有可由皮下注射針刺穿之塞子的靜脈內溶液袋或小瓶)。組成物中的至少一種活性劑為本發明之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子。該標籤或藥品說明書指示該組成物用於治療所選擇的症狀。此外，該製品可包含 (a) 其中含有組成物的第一容器，其中該組成物包含本發明之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子；及 (b) 其中含有組成物的第二容器，其中該組成物包含另一種細胞毒性劑或其他治療劑。本發明之此實施例中的製成品可以進一步包含指示組成物可以用於治療具體疾病的藥品說明書。可替代地或另外地，製成品可以進一步包含第二 (或第三) 容器，該容器包含醫藥上可接受之緩衝劑，例如抑菌注射用水 (BWFI)、磷酸鹽緩衝鹽水、Ringer 溶液和葡萄糖溶液。從商業和使用者的角度來看，它可以進一步包含其他材料，其中包括其他緩衝劑、稀釋劑、過濾器、針頭和注射器。表 B ( 序列 ) ：

SEQ ID NO:	名稱	序列
1	hu CD28 UniProt no. P10747，版本 1	MLRLLLALNL FPSIQVTGNK ILVKQSPMLV AYDNAVNLSC KYSYNLFSRE FRASLHKGLD SAVEVCVVYG NYSQQLQVYS KTGFNCDGKL GNESVTFYLQ NLYVNQTDIY FCKIEVMYPP PYLDNEKSNG TIIHVKGKHL CPSPLFPGPS KPFWVLVVVG GVLACYSLLV TVAFIIFWVR SKRSRLLHSD YMNMTPRRPG PTRKHYQPYA PPRDFAAYRS
2	重鏈 CDR-H1，帕妥珠單抗 CLC	DYTMD
3	重鏈 CDR-H2，帕妥珠單抗 CLC	DVNPNSGGSIVNRRFKG
4	重鏈 CDR-H3，帕妥珠單抗 CLC	NLGPFFYFDY
5	輕鏈 CDR-L1，帕妥珠單抗 CLC	KASQDVSTA
6	輕鏈 CDR-L2，帕妥珠單抗 CLC	SASFRYT
7	輕鏈 CDR-L3，帕妥珠單抗 CLC	QQHYTTPPT
8	重鏈可變域 VH，帕妥珠單抗 CLC	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIVNRRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPFFYFDYWGQGTLVTVSS
9	輕鏈可變域 VL，帕妥珠單抗 CLC	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFRYTGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIK
10	重鏈 CDR-H1，曲妥珠單抗 CLC	GFNIKDTYIH
11	重鏈 CDR-H2，曲妥珠單抗 CLC	RIYPTNGYTRYADSVKG
12	重鏈 CDR-H3，曲妥珠單抗 CLC	WGGEGFYAMDY
13	輕鏈 CDR-L1，曲妥珠單抗 CLC	KASQDVSTA
14	輕鏈 CDR-L2，曲妥珠單抗 CLC	SASFRYT
15	輕鏈 CDR-L3，曲妥珠單抗 CLC	QQHYTTPPT
16	重鏈可變域 VH，曲妥珠單抗 CLC	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGEGFYAMDYWGQGTLVTVSS
17	輕鏈可變域 VL，曲妥珠單抗 CLC	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFRYTGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIK
18	CD28(SA) CDR-H1	SYYIH
19	CD28(SA) CDR-H2	CIYPGNVNTNYNEKFKD
20	CD28(SA) CDR-H3	SHYGLDWNFDV
21	CD28(SA) CDR-L1	HASQNIYVWLN
22	CD28(SA) CDR-L2	KASNLHT
23	CD28(SA) CDR-L3	QQGQTYPYT
24	CD28(SA) VH	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYIHWVRQAPGQGLEWIGCIYPGNVNTNYNEKFKDRATLTVDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYFCTRSHYGLDWNFDVWGQGTTVTVSS
25	CD28(SA) VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCHASQNIYVWLNWYQQKPGKAPKLLIYKASNLHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQTYPYTFGGGTKVEIK
26	CD28 CDR-H1 共通序列	SYYIH
27	CD28 CDR-H2 共通序列	SIYPX ₁X ₂X ₃X ₄TNYNEKFKD，其中 X ₁為 G 或 R X ₂為 N 或 D X ₃為 V 或 G X ₄為 N 或 Q 或 A
28	CD28 CDR-H3 共通序列	SHYGX ₅DX ₆NFDV，其中 X ₅為 L 或 A X ₆為 W 或 H 或 Y 或 F
29	CD28 CDR-L1 共通序列	X ₇ASQX ₈IX ₉X ₁₀X ₁₁LN，其中 X ₇為 H 或 R X ₈為 N 或 G X ₉為 Y 或 S X ₁₀為 V 或 N X ₁₁為 W 或 H 或 F 或 Y
30	CD28 CDR-L2 共通序列	X ₁₂X ₁₃SX ₁₄LX ₁₅X ₁₆，其中 X ₁₂為 K 或 Y X ₁₃為 A 或 T X ₁₄為 N 或 S X ₁₅為 H 或 Y X ₁₆為 T 或 S
31	CD28 CDR-L3 共通序列	QQX ₁₇QTYPYT，其中 X ₁₇為 G 或 A
32	CD28 VH 變異體 a	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYIHWVRQAPGQGLEWIGSIYPGNVNTNYNEKFKDRATLTVDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYFCTRSHYGLDWNFDVWGQGTTVTVSS
33	CD28 VH 變異體 b	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYIHWVRQAPGQGLEWIGSIYPGNVQTNYNEKFKDRATLTVDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYFCTRSHYGLDHNFDVWGQGTTVTVSS
34	CD28 VH 變異體 c	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYIHWVRQAPGQGLEWIGSIYPGNVQTNYNEKFKDRATLTVDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYFCTRSHYGADHNFDVWGQGTTVTVSS
35	CD28 VH 變異體 d	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYIHWVRQAPGQGLEWIGSIYPRDGQTNYNEKFKDRATLTVDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYFCTRSHYGLDYNFDVWGQGTTVTVSS
36	CD28 VH 變異體 e	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYIHWVRQAPGQGLEWIGSIYPGNVQTNYNEKFKDRATLTVDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYFCTRSHYGLDWNFDVWGQGTTVTVSS
37	CD28 VH 變異體 f	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYIHWVRQAPGQGLEWIGSIYPGNVQTNYNEKFKDRATLTVDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYFCTRSHYGLDFNFDVWGQGTTVTVSS
38	CD28 VH 變異體 g	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYIHWVRQAPGQGLEWIGSIYPRNVQTNYNEKFKDRATLTVDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYFCTRSHYGLDHNFDVWGQGTTVTVSS
39	CD28 VH 變異體 h	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYIHWVRQAPGQGLEWIGSIYPRDVQTNYNEKFKDRATLTVDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYFCTRSHYGLDHNFDVWGQGTTVTVSS
40	CD28 VH 變異體 i	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTSYYIHWVRQAPGKGLEWVASIYPGNVNTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCTRSHYGLDWNFDVWGQGTTVTVSS
41	CD28 VH 變異體 j	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTSYYIHWVRQAPGKGLEWVASIYPGNVATRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCTRSHYGLDWNFDVWGQGTTVTVSS
42	CD28 VL 變異體 k	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCHASQNIYVHLNWYQQKPGKAPKLLIYKASNLHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQAQTYPYTFGGGTKVEIK
43	CD28 VL 變異體 l	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCHASQNIYVFLNWYQQKPGKAPKLLIYKASNLHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQTYPYTFGGGTKVEIK
44	CD28 VL 變異體 m	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCHASQNIYVYLNWYQQKPGKAPKLLIYKASNLHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQTYPYTFGGGTKVEIK
45	CD28 VL 變異體 n	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCHASQGISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYKASNLHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQTYPYTFGGGTKVEIK
46	CD28 VL 變異體 o	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCHASQNIYVWLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSSLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQTYPYTFGGGTKVEIK
47	CD28 VL 變異體 p	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCHASQGISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSSLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQTYPYTFGGGTKVEIK
48	CD28 VL 變異體 q	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCHASQGISNHLNWYQQKPGKAPKLLIYKASNLHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQTYPYTFGGGTKVEIK
49	CD28 VL 變異體 r	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCHASQGIYVYLNWYQQKPGKAPKLLIYKASNLHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQTYPYTFGGGTKVEIK
50	CD28 VL 變異體 s	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCHASQGISVYLNWYQQKPGKAPKLLIYKASNLHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQTYPYTFGGGTKVEIK
51	CD28 VL 變異體 t	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQNIYVWLNWYQQKPGKAPKLLIYKASNLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQTYPYTFGQGTKLEIK
52	CD28(變異體 8) CDR-H1	SYYIH
53	CD28(變異體 8) CDR-H2	SIYPGNVQTNYNEKFKD
54	CD28(變異體 8) CDR-H3	SHYGLDWNFDV
55	CD28(變異體 8) CDR-L1	HASQNIYVYLN
56	CD28(變異體 8) CDR-L2	KASNLHT
57	CD28(變異體 8) CDR-L3	QQGQTYPYT
58	CD28(變異體 15) CDR-H1	SYYIH
59	CD28(變異體 15) CDR-H2	SIYPGNVQTNYNEKFKD
60	CD28(變異體 15) CDR-H3	SHYGLDWNFDV
61	CD28(變異體 15) CDR-L1	HASQNIYVFLN
62	CD28(變異體 15) CDR-L2	KASNLHT
63	CD28(變異體 15) CDR-L3	QQGQTYPYT
64	CD28(變異體 29) CDR-H1	SYYIH
65	CD28(變異體 29) CDR-H2	SIYPGNVNTNYNEKFKD
66	CD28(變異體 29) CDR-H3	SHYGLDWNFDV
67	CD28(變異體 29) CDR-L1	HASQNIYVWLN
68	CD28(變異體 29) CDR-L2	KASNLHT
69	CD28(變異體 29) CDR-L3	QQGQTYPYT
70	Fc 臼 PGLALA	DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP
71	Fc 杵 PGLALA	DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP
72	VH (CD28 SA) CH1 (EE)- Fc 杵 PGLALA	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYIHWVRQAPGQGLEWIGCIYPGNVNTNYNEKFKDRATLTVDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYFCTRSHYGLDWNFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVEDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDEKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP
73	VH (CD28 變異體 g) CH1 (EE) - Fc 杵 PGLALA	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYIHWVRQAPGQGLEWIGSIYPRNVQTNYNEKFKDRATLTVDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYFCTRSHYGLDHNFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVEDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDEKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP
74	VH (CD28 變異體 f) CH1 (EE) - Fc 杵 PGLALA	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYIHWVRQAPGQGLEWIGSIYPGNVQTNYNEKFKDRATLTVDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYFCTRSHYGLDFNFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVEDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDEKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP
75	VH (CD28 變異體 j) CH1 (EE) - Fc 杵 PGLALA	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTSYYIHWVRQAPGKGLEWVASIYPGNVATRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCTRSHYGLDWNFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVEDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDEKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP
76	VH (CD28 變異體 e) CH1 (EE)- Fc 杵 PGLALA	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYIHWVRQAPGQGLEWIGSIYPGNVQTNYNEKFKDRATLTVDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYFCTRSHYGLDWNFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVEDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDEKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP
77	VH (CD28 變異體 b) CH1 (EE) - Fc 杵 PGLALA	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYIHWVRQAPGQGLEWIGSIYPGNVQTNYNEKFKDRATLTVDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYFCTRSHYGLDHNFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVEDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDEKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP
78	VH (CD28 變異體 a) CH1 (EE) - Fc 杵 PGLALA	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYIHWVRQAPGQGLEWIGSIYPGNVNTNYNEKFKDRATLTVDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYFCTRSHYGLDWNFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVEDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDEKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP
79	VH (CD28 變異體 i) CH1 (EE) - Fc 杵 PGLALA	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTSYYIHWVRQAPGKGLEWVASIYPGNVNTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCTRSHYGLDWNFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVEDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDEKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP
80	VL-CD28(SA)-CL“RK”	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCHASQNIYVWLNWYQQKPGKAPKLLIYKASNLHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQTYPYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDRKLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
81	VL (CD28 變異體 k) -CL (RK)	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCHASQNIYVHLNWYQQKPGKAPKLLIYKASNLHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQAQTYPYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDRKLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
82	VL (CD28 變異體 l)-CL (RK)	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCHASQNIYVFLNWYQQKPGKAPKLLIYKASNLHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQTYPYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDRKLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
83	VL (CD28 變異體 m)-CL (RK)	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCHASQNIYVYLNWYQQKPGKAPKLLIYKASNLHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQTYPYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDRKLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
84	VL (CD28 變異體 r) -CL (RK)	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCHASQGIYVYLNWYQQKPGKAPKLLIYKASNLHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQTYPYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDRKLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
85	VL (CD28 變異體) -CL (RK)	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCHASQGISVYLNWYQQKPGKAPKLLIYKASNLHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQTYPYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDRKLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
86	VL (CD28 變異體 t) -CL (RK)	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQNIYVWLNWYQQKPGKAPKLLIYKASNLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQTYPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDRKLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
87	Fc 臼 PGLALA，HYRF	DKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSP
88	Avi tag	GLNDIFEAQKIEWHE
89	CD28(SA) VL-CH1 hu IgG1 Fc 杵 PGLALA	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCHASQNIYVWLNWYQQKPGKAPKLLIYKASNLHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQTYPYTFGGGTKVEIKSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP
90	CD28(SA) VH-Cκ	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYIHWVRQAPGQGLEWIGCIYPGNVNTNYNEKFKDRATLTVDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYFCTRSHYGLDWNFDVWGQGTTVTVSSASVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
91	CD28(SA_變異體 8) VL-CH1 hu IgG1 Fc 杵 PGLALA	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCHASQNIYVYLNWYQQKPGKAPKLLIYKASNLHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQTYPYTFGGGTKVEIKSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP
92	CD28(SA_變異體 8) VH-Cκ	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYIHWVRQAPGQGLEWIGSIYPGNVQTNYNEKFKDRATLTVDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYFCTRSHYGLDFNFDVWGQGTTVTVSSASVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
93	CD28(SA_變異體 15) VL-CH1 hu IgG1 Fc 杵 PGLALA	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCHASQNIYVFLNWYQQKPGKAPKLLIYKASNLHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQTYPYTFGGGTKVEIKSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCRDELTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP
94	CD28(SA_變異體 15) VH-Cκ	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYIHWVRQAPGQGLEWIGSIYPGNVQTNYNEKFKDRATLTVDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYFCTRSHYGLDWNFDVWGQGTTVTVSSASVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
95	CD28(SA_變異體 29) VH-Cκ	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYIHWVRQAPGQGLEWIGSIYPGNVNTNYNEKFKDRATLTVDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYFCTRSHYGLDWNFDVWGQGTTVTVSSASVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
96	Her2 (帕妥珠單抗 CLC) hu IgG1 VH-CH1 “EE” Fc 臼野生型	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIVNRRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPFFYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVEDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDEKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP
97	Her2 (帕妥珠單抗 CLC) VL-Cκ“RK”	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFRYTGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDRKLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
98	Her2 (帕妥珠單抗 CLC) hu IgG1 VH-CH1 “EE” Fc 臼 PGLALA	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIVNRRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPFFYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVEDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDEKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP
99	Her2 (帕妥珠單抗 CLC) VL-CH1 hu IgG1 Fc 杵 PGLALA	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFRYTGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP
100	Her2 (帕妥珠單抗 CLC) VH-Cκ	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIVNRRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPFFYFDYWGQGTLVTVSSASVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
101	Her2 (曲妥珠單抗 CLC) hu IgG1 VH-CH1 “EE” Fc 臼 PGLALA	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGEGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVEDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDEKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP
102	Her2 (曲妥珠單抗 CLC) VL-CH1 hu IgG1 Fc 杵 PGLALA	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFRYTGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP
103	人類 Her2， UniProt Acc. No. P04626-1	MELAALCRWGLLLALLPPGAASTQVCTGTDMKLRLPASPETHLDMLRHLYQGCQVVQGNLELTYLPTNASLSFLQDIQEVQGYVLIAHNQVRQVPLQRLRIVRGTQLFEDNYALAVLDNGDPLNNTTPVTGASPGGLRELQLRSLTEILKGGVLIQRNPQLCYQDTILWKDIFHKNNQLALTLIDTNRSRACHPCSPMCKGSRCWGESSEDCQSLTRTVCAGGCARCKGPLPTDCCHEQCAAGCTGPKHSDCLACLHFNHSGICELHCPALVTYNTDTFESMPNPEGRYTFGASCVTACPYNYLSTDVGSCTLVCPLHNQEVTAEDGTQRCEKCSKPCARVCYGLGMEHLREVRAVTSANIQEFAGCKKIFGSLAFLPESFDGDPASNTAETLEEITGYLYISAWPDSLPDLSVFQNLQVIRGRILHNGAYSLTLQGLGISWLGLRSLRELGSGLALIHHNTHLCFVHTVPWDQLFRNPHQALLHTANRPEDECVGEGLACHQLCARGHCWGPGPTQCVNCSQFLRGQECVEECRVLQGLPREYVNARHCLPCHPECQPQNGSVTCFGPEADQCVACAHYKDPPFCVARCPSGVKPDLSYMPIWKFPDEEGACQPCPINCTHSCVDLDDKGCPAEQRASPLTSIISAVVGILLVVVLGVVFGILIKRRQQKIRKYTMRRLLQETELVEPLTPSGAMPNQAQMRILKETELRKVKVLGSGAFGTVYKGIWIPDGENVKIPVAIKVLRENTSPKANKEILDEAYVMAGVGSPYVSRLLGICLTSTVQLVTQLMPYGCLLDHVRENRGRLGSQDLLNWCMQIAKGMSYLEDVRLVHRDLAARNVLVKSPNHVKITDFGLARLLDIDETEYHADGGKVPIKWMALESILRRRFTHQSDVWSYGVTVWELMTFGAKPYDGIPAREIPDLLEKGERLPQPPICTIDVYMIMVKCWMIDSECRPRFRELVSEFSRMARDPQRFVVIQNEDLGPASPLDSTFYRSLLEDDDMGDLVDAEEYLVPQQGFFCPDPAPGAGGMVHHRHRSSSTRSGGGDLTLGLEPSEEEAPRSPLAPSEGAGSDVFDGDLGMGAAKGLQSLPTHDPSPLQRYSEDPTVPLPSETDGYVAPLTCSPQPEYVNQPDVRPQPPSPREGPLPAARPAGATLERPKTLSPGKNGVVKDVFAFGGAVENPEYLTPQGGAAPQPHPPPAFSPAFDNLYYWDQDPPERGAPPSTFKGTPTAENPEYLGLDVPV
104	IgG CH1 域	ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV
105	IgG CH2 域	APELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQESTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK
106	IgG CH3 域	GQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
107	CH1 連接體	EPKSC
108	鉸鏈全	DKTHTCPXCP，其中 X 為 S 或 P
109	鉸鏈中等	HTCPXCP，其中 X 為 S 或 P
110	鉸鏈短	CPXCP，其中 X 為 S 或 P
111	IgG1，高加索人同種異型	ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
112	IgG1，非裔美國人同種異型	ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
113	IgG2	ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDISVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
114	IgG3	ASTKGPSVFPLAPCSRSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYTCNVNHKPSNTKVDKRVELKTPLGDTTHTCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFKWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTFRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESSGQPENNYNTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNIFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGK
115	IgG4	ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
116	人類 FcγRIIIa UniProt 登錄號 P08637	MWQLLLPTALLLLVSAGMRTEDLPKAVVFLEPQWYRVLEKDSVTLKCQGAYSPEDNSTQWFHNESLISSQASSYFIDAATVDDSGEYRCQTNLSTLSDPVQLEVHIGWLLLQAPRWVFKEEDPIHLRCHSWKNTALHKVTYLQNGKGRKYFHHNSDFYIPKATLKDSGSYFCRGLFGSKNVSSETVNITITQGLAVSTISSFFPPGYQVSFCLVMVLLFAVDTGLYFSVKTNIRSSTRDWKDHKFKWRKDPQDK
117	肽連接子 (G4S)	GGGGS
118	肽連接子 (G4S)2	GGGGSGGGGS
119	肽連接子 (SG4)2	SGGGGSGGGG
120	肽連接子 G4(SG4)2	GGGGSGGGGSGGGG
121	肽連接子	GSPGSSSSGS
122	(G4S)3 肽連接子	GGGGSGGGGSGGGGS
123	(G4S)4 肽連接子	GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS
124	肽連接子	GSGSGSGS
125	肽連接子	GSGSGNGS
126	肽連接子	GGSGSGSG
127	肽連接子	GGSGSG
128	肽連接子	GGSG
129	肽連接子	GGSGNGSG
130	肽連接子	GGNGSGSG
131	肽連接子	GGNGSG
132	CDR-H1，帕妥珠單抗	GFTFTDYTMD
133	CDR-H2，帕妥珠單抗	DVNPNSGGSIYNQRFKG
134	CDR-H3，帕妥珠單抗	NLGPSFYFDY
135	CDR-L1，帕妥珠單抗	KASQDVSIGVA
136	CDR-L2，帕妥珠單抗	SASYRYT
137	CDR-L3，帕妥珠單抗	QQYYIYPYT
138	重鏈可變域 VH，帕妥珠單抗	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSS
139	輕鏈可變域 VL，帕妥珠單抗	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIK
140	CDR-H1，曲妥珠單抗	GFNIKDTYIH
141	CDR-H2，曲妥珠單抗	RIYPTNGYTRYADSVKG
142	CDR-H3，曲妥珠單抗	WGGDGFYAMDY
143	CDR-L1，曲妥珠單抗	RASQDVNTAVA
144	CDR-L2，曲妥珠單抗	SASFLYS
145	CDR-L3，曲妥珠單抗	QQHYTTPPT
146	重鏈可變域 VH，曲妥珠單抗	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSS
147	輕鏈可變域 VL，曲妥珠單抗	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIK
148	CDR-H1，CD3	NYYIH
149	CDR-H2，CD3	WIYPGDGNTK YNEKFKG
150	CDR-H3，CD3	DSYSNYYFDY
151	CDR-L1，CD3	KSSQSLLNSR TRKNYLA
152	CDR-L2，CD3	WASTRES
153	CDR-L3，CD3	TQSFILRT
154	重鏈可變域 VH，CD3	EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYIHWVRQAPGQGLEWIGWIYPGDGNTKYNEKFKGRATLTADTSTSTAYLELSSLRSEDTAVYYCARDSYSNYYFDYWGQGTLVTVSS
155	輕鏈可變域 VL，CD3	DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLNSRTRKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCTQSFILRTFGQGTKVEIK
156	CDR-H1，Her2 (7C2)	GYWMN
157	CDR-H2，Her2 (7C2)	MIHPSDSEIR ANQKFRD
158	CDR-H3，Her2 (7C2)	GTYDGGFEY
159	CDR-L1，Her2 (7C2)	RASQSVSGSR FTYMH
160	CDR-L2，Her2 (7C2)	YASILES
161	CDR-L3，Her2 (7C2)	QHSWEIPPWT
162	重鏈可變域 VH、Her2 (7C2)	QVQLQQPGAELVRPGASVKLSCKASGYSFTGYWMNWLKQRPGQGLEWIGMIHPSDSEIRANQKFRDKATLTVDKSSTTAYMQLSSPTSEDSAVYYCARGTYDGGFEYWGQGTTLTVSS
163	輕鏈可變域 VL，Her2 (7C2)	DIVLTQSPASLVVSLGQRATISCRASQSVSGSRFTYMHWYQQKPGQPPKLLIKYASILESGVPARFSGGGSGTDFTLNIHPVEEDDTATYYCQHSWEIPPWTFGGGTKLEIK
164	人類 PD-L1 Uniprot 登錄號 Q9NZQ7	MRIFAVFIFMTYWHLLNAFTVTVPKDLYVVEYGSNMTIECKFPVEKQLDLAALIVYWEMEDKNIIQFVHGEEDLKVQHSSYRQRARLLKDQLSLGNAALQITDVKLQDAGVYRCMISYGGADYKRITVKVNAPYNKINQRILVVDPVTSEHELTCQAEGYPKAEVIWTSSDHQVLSGKTTTTNSKREEKLFNVTSTLRINTTTNEIFYCTFRRLDPEENHTAELVIPELPLAHPPNERTHLVILGAILLCLGVALTFIFRLRKGRMMDVKKCGIQDTNSKKQSDTHLEET
165	VH (PD-L1)	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSS
166	VL (PD-L1)	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIK
167	VH (PD-L1)	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYWMSWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSEKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGGWFGELAFDYWGQGTLVTVSS
168	VL (PD-L1)	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQRVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSLPWTFGQGTKVEIK
169	人 PD-1 Uniprot 登錄號 Q15116	MQIPQAPWPVVWAVLQLGWRPGWFLDSPDRPWNPPTFSPALLVVTEGDNATFTCSFSNTSESFVLNWYRMSPSNQTDKLAAFPEDRSQPGQDCRFRVTQLPNGRDFHMSVVRARRNDSGTYLCGAISLAPKAQIKESLRAELRVTERRAEVPTAHPSPSPRPAGQFQTLVVGVVGGLLGSLVLLVWVLAVICSRAARGTIGARRTGQPLKEDPSAVPVFSVDYGELDFQWREKTPEPPVPCVPEQTEYATIVFPSGMGTSSPARRGSADGPRSAQPLRPEDGHCSWPL
170	VH (PD-1)	QVQLVQSGVEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYMYWVRQAPGQGLEWMGGINPSNGGTNFNEKFKNRVTLTTDSSTTTAYMELKSLQFDDTAVYYCARRDYRFDMGFDYWGQGTTVTVSS
171	VL (PD-1)	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKGVSTSGYSYLHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLESGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQHSRDLPLTFGGGTKVEIK
172	VH (PD-1)	QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSS
173	VL (PD-1)	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIK
174	Her2-CD3 (4D5/40G5c) HC1 (Fc 杵)	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP
175	Her2-CD3 (4D5/40G5c) LC1	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
176	Her2-CD3 (4D5/40G5c) HC2 (Fc 臼)	EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYIHWVRQAPGQGLEWIGWIYPGDGNTKYNEKFKGRATLTADTSTSTAYLELSSLRSEDTAVYYCARDSYSNYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIA VEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP
177	Her2-CD3 (4D5/40G5c) LC2	DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLNSRTRKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCTQSFILRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKAD YEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
178	CD28(SA_變異體 8) hu IgG1 Fc 臼 N297G	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYIHWVRQAPGQGLEWIGSIYPGNVQTNYNEKFKDRATLTVDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYFCTRSHYGLDFNFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP
179	CD28(SA_變異體 8) VL-Cκ	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCHASQNIYVYLNWYQQKPGKAPKLLIYKASNLHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQTYPYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
180	Her2 (4D5) hu IgG1 杵 N297G	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP
181	Her2 (4D5) VL-Cκ	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
182	Her2 (2C4) hu IgG1 杵 N297G	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTDYTMDWVRQAPGKGLEWVADVNPNSGGSIYNQRFKGRFTLSVDRSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNLGPSFYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP
183	Her2 (2C4) VL-Cκ	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSIGVAWYQQKPGKAPKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYYIYPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
184	CD28 IgG4 Fc	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYIHWVRQAPGQGLEWIGCIYPGNVNTNYNEKFKDRATLTVDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYFCTRSHYGLDWNFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
185	CD28 κ 輕鏈	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCHASQNIYVWLNWYQQKPGKAPKLLIYKASNLHTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGQTYPYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
186	DP47 huIgG1 PGLALA 重鏈	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKGSGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALGAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP
187	DP47 huIgG1 PGLALA 輕鏈	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPLTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
188	人 CD3ε Uniprot No. P07766	MQSGTHWRVLGLCLLSVGVWGQDGNEEMGGITQTPYKVSISGTTVILTCPQYPGSEILWQHNDKNIGGDEDDKNIGSDEDHLSLKEFSELEQSGYYVCYPRGSKPEDANFYLYLRARVCENCMEMDVMSVATIVIVDICITGGLLLLVYYWSKNRKAKAKPVTRGAGAGGRQRGQNKERPPPVPNPDYEPIRKGQRDLYSGLNQRRI
189	食蟹猴CD3ε Uniprot No. Q95LI5	MQSGTRWRVLGLCLLSIGVWGQDGNEEMGSITQTPYQVSISGTTVILTCSQHLGSEAQWQHNGKNKEDSGDRLFLPEFSEMEQSGYYVCYPRGSNPEDASHHLYLKARVCENCMEMDVMAVATIVIVDICITLGLLLLVYYWSKNRKAKAKPVTRGAGAGGRQRGQNKERPPPVPNPDYEPIRKGQQDLYSGLNQRRI

有關人免疫球蛋白輕鍊和重鏈核苷酸序列的一般資訊，請參見：Kabat, E.A.等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，MD (1991)。抗體鏈的胺基酸根據 Kabat 的編號系統如上述定義進行編號和引用 (Kabat, E.A., et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991))。

以下編號的段落 (paras) 描述本發明的方面： 1.一種雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其特徵在於與 CD28 單價結合，該雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子包含 (a) 第一抗原結合域，其能夠特異性結合 CD28， (b) 第二抗原結合域，其能夠特異性結合能夠特異性結合人類上皮生長因子受體-2 (Her2) 的抗原結合域，及 (c) Fc 域，其由能夠穩定締合之第一次單元及第二次單元構成，該 Fc 域包含降低該抗原結合分子對 Fc 受體的結合親和力及/或效應功能的一個或多個胺基酸取代，其中能夠特異性結合 Her2 的該第二抗原結合域包含 (i) 重鏈可變區 (V _HHer2)，其包含 SEQ ID NO: 2 之重鏈互補決定區 CDR-H1、SEQ ID NO: 3 之 CDR-H2 及 SEQ ID NO: 4 之 CDR-H3；及輕鏈可變區 (V _LHer2)，其包含 SEQ ID NO: 5 之輕鏈互補決定區 CDR-L1、SEQ ID NO: 6 之 CDR-L2 及 SEQ ID NO: 7 之 CDR-L3；或 (ii) 重鏈可變區 (V _HHer2)，其包含 SEQ ID NO: 10 之重鏈互補決定區 CDR-H1、SEQ ID NO: 11 之 CDR-H2 及 SEQ ID NO: 12 之 CDR-H3；及輕鏈可變區 (V _LHer2)，其包含 SEQ ID NO: 13 之輕鏈互補決定區 CDR-L1、SEQ ID NO: 14 之 CDR-L2 及 SEQ ID NO: 15 之 CDR-L3。 2.如段落 1 之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中該 Fc 域屬於人類 IgG1 亞型，且包含胺基酸突變 L234A、L235A 及 P329G (根據 Kabat EU 索引編號)。 3.如段落 1 或 2 之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 CD28 的第一抗原結合域包含 (i) 重鏈可變區 (V _HCD28)，其包含 SEQ ID NO: 26 之重鏈互補決定區 CDR-H1、SEQ ID NO: 27 之 CDR-H2 及 SEQ ID NO: 28 之 CDR-H3；及輕鏈可變區 (V _LCD28)，其包含 SEQ ID NO: 29 之輕鏈互補決定區 CDR-L1、SEQ ID NO: 30 之 CDR-L2 及 SEQ ID NO: 31 之 CDR-L3；或 (ii) 重鏈可變區 (V _HCD28)，其包含 SEQ ID NO: 18 之 CDR-H1、SEQ ID NO: 19 之 CDR-H2 及 SEQ ID NO: 20 之 CDR-H3；及輕鏈可變區 (V _LCD28)，其包含 SEQ ID NO: 21 之 CDR-L1、SEQ ID NO: 22 之 CDR-L2 及 SEQ ID NO: 23 之 CDR-L3。 4.如段落 1 至 3 中任一者之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 CD28 的第一抗原結合域包含重鏈可變區 (V _HCD28)，該重鏈可變區包含與 SEQ ID NO: 24 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的胺基酸序列；及包含輕鏈可變區 (V _LCD28)，該輕鏈可變區包含與 SEQ ID NO: 25 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的胺基酸序列。 5.如段落 1 至 4 中任一者之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 CD28 的第一抗原結合域包含重鏈可變區 (V _HCD28)，該重鏈可變區包含選自 SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:40 及 SEQ ID NO:41 所組成之群組的胺基酸序列；及包含輕鏈可變區 (V _LCD28)，該輕鏈可變區包含選自 SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50 及 SEQ ID NO:51 所組成之群組的胺基酸序列。 6.如段落 1 至 3 或 5 中任一者之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 CD28 的第一抗原結合域包含 (a) 包含 SEQ ID NO:37 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28)；及包含 SEQ ID NO:44 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD28)，或 (b) 包含 SEQ ID NO:37 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28)；及包含 SEQ ID NO:25 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD28)，或 (c) 包含 SEQ ID NO:41 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28)；及包含 SEQ ID NO:51 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD28)，或 (d) 包含 SEQ ID NO:36 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28)；及包含 SEQ ID NO:43 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD28)，或 (e) 包含 SEQ ID NO:36 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28)；及包含 SEQ ID NO:44 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD28)，或 (f) 包含 SEQ ID NO:36 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28)；及包含 SEQ ID NO:49 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD28)，或 (g) 包含 SEQ ID NO:36 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28)；及包含 SEQ ID NO:25 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD28)，或 (h) 包含 SEQ ID NO:33 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28)；及包含 SEQ ID NO:25 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD28)，或 (i) 包含 SEQ ID NO:32 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28)；及包含 SEQ ID NO:43 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD28)，或 (j) 包含 SEQ ID NO:32 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28)；及包含 SEQ ID NO:49 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD28)，或 (k) 包含 SEQ ID NO:32 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28)；及包含 SEQ ID NO:25 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD28)。 7.如段落 1 至 6 中任一者之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 CD28 的第一抗原結合域包含 (i) 重鏈可變區 (V _HCD28)，該重鏈可變區包含 SEQ ID NO: 52 之重鏈互補決定區 CDR-H1、SEQ ID NO: 53 之 CDR-H2 及 SEQ ID NO: 54 之 CDR-H3，及輕鏈可變區 (V _LCD28)，該輕鏈可變區包含 SEQ ID NO: 55 之輕鏈互補決定區 CDR-L1、SEQ ID NO: 56 之 CDR-L2 及 SEQ ID NO: 57 之 CDR-L3。 8.如段落 1 至 6 中任一者之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 CD28 的第一抗原結合域包含含有 SEQ ID NO: 37 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28) 之 CDR，及含有 SEQ ID NO: 44 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD28) 之 CDR。 9.如段落 1 至 8 中任一者之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 Her2 的抗原結合域包含含有 SEQ ID NO: 8 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HHer2) 之 CDR，及含有 SEQ ID NO: 9 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LHer2) 之 CDR。 10.如段落 1 至 9 中任一者之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 Her2 的抗原結合域包含含有 SEQ ID NO: 8 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HHer2)，及含有 SEQ ID NO: 9 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LHer2)。 11.如段落 1 至 8 中任一者之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 Her2 的抗原結合域包含含有 SEQ ID NO: 16 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HHer2) 之 CDR，及含有 SEQ ID NO: 17 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LHer2) 之 CDR。 12.如段落 1 至 8 或 11 中任一者之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 Her2 的該抗原結合域包含含有 SEQ ID NO: 16 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HHer2)，及含有 SEQ ID NO: 17 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LHer2)。 13.如段落 1 至 12 中任一者之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 CD28 的第一抗原結合域及/或能夠特異性結合 Her2 的第二抗原結合域為 Fab 分子。 14.如段落 1 至 13 中任一者之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 CD28 的該第一抗原結合域為 Fab 分子，其中 Fab 輕鏈及 Fab 重鏈之可變域 VL 及 VH 或恆定域 CL 及 CH1，特別是可變域 VL 及 VH，被相互替代。 15.如段落 1 至 14 中任一者之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 Her2 的該第二抗原結合域為習用 Fab 分子。 16.如段落 1 至 15 中任一者之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 Her2 的該第二抗原結合域為 Fab 分子，其中在恆定域 CL 中，位置 123 處的胺基酸 (根據 Kabat EU 索引編號) 被選自離胺酸 (K)、精胺酸 (R) 或組胺酸 (H) 的胺基酸取代以及位置 124 處的胺基酸 (根據 Kabat EU 索引編號) 被離胺酸(K)、精胺酸 (R) 或組胺酸 (H) 獨立地取代，且其中在恆定域 CH1 中，位置 147 處的胺基酸 (根據 Kabat EU 索引編號) 被麩胺酸 (E) 或天冬胺酸 (D) 獨立地取代以及位置 213 處的胺基酸 (根據 Kabat EU 索引編號) 被麩胺酸 (E) 或天冬胺酸 (D) 獨立地取代 (根據 Kabat EU 索引編號)。 17.如段落 1 至 16 中任一者之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其包含 (i) 含有 SEQ ID NO: 92 之胺基酸序列的第一輕鏈、含有 SEQ ID NO: 91 之胺基酸序列的第一重鏈、含有 SEQ ID NO: 96 之胺基酸序列的第二重鏈及含有 SEQ ID NO: 97 之胺基酸序列的第二輕鏈，或 (ii) 含有 SEQ ID NO: 92 之胺基酸序列的第一輕鏈、含有 SEQ ID NO: 91 之胺基酸序列的第一重鏈、含有 SEQ ID NO: 98 之胺基酸序列的第二重鏈及含有 SEQ ID NO: 97 之胺基酸序列的第二輕鏈，或 (iii) 含有 SEQ ID NO: 92 之胺基酸序列的第一輕鏈、含有 SEQ ID NO: 91 之胺基酸序列的第一重鏈、含有 SEQ ID NO: 101 之胺基酸序列的第二重鏈及含有 SEQ ID NO: 97 之胺基酸序列的第二輕鏈。 18.如段落 1 至 13 中任一者之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 Her2 的該第二抗原結合域為 Fab 分子，其中 Fab 輕鏈及 Fab 重鏈之可變域 VL 及 VH 或恆定域 CL 及 CH1，特別是可變域 VL 及 VH，被相互替代。 19.如段落 1 至 13 或 18 中任一者之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 CD28 的第一抗原結合域為習用 Fab 分子。 20.如段落 1 至 13 或 18 或 19 中任一者之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 CD28 的第一抗原結合域為 Fab 分子，其中在恆定域 CL 中，位置 123 處的胺基酸 (根據 Kabat EU 索引編號) 被選自離胺酸 (K)、精胺酸 (R) 或組胺酸 (H) 的胺基酸取代以及位置 124 處的胺基酸 (根據 Kabat EU 索引編號) 被離胺酸(K)、精胺酸 (R) 或組胺酸 (H) 獨立地取代，且其中在恆定域 CH1 中，位置 147 處的胺基酸 (根據 Kabat EU 索引編號) 被麩胺酸 (E) 或天冬胺酸 (D) 獨立地取代以及位置 213 處的胺基酸 (根據 Kabat EU 索引編號) 被麩胺酸 (E) 或天冬胺酸 (D) 獨立地取代 (根據 Kabat EU 索引編號)。 21.如段落 1 至 13 或 18 至 20 中任一者之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其包含 (i) 含有 SEQ ID NO: 83 之胺基酸序列的第一輕鏈、含有 SEQ ID NO: 74 之胺基酸序列的第一重鏈、含有 SEQ ID NO: 99 之胺基酸序列的第二重鏈及含有 SEQ ID NO: 100 之胺基酸序列的第二輕鏈，或 (ii) 含有 SEQ ID NO: 83 之胺基酸序列的第一輕鏈、含有 SEQ ID NO: 74 之胺基酸序列的第一重鏈、含有 SEQ ID NO: 102 之胺基酸序列的第二重鏈及含有 SEQ ID NO: 100 之胺基酸序列的第二輕鏈。 22.如段落 1 至 21 中任一者之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中第一抗原結合域及第二抗原結合域各為 Fab 分子，且該Fc 域由能夠穩定締合之第一次單元及第二次單元構成；且其中 (i) 該第一抗原結合域在 Fab 重鏈的 C 端處與 Fc 域的第一次單元的 N 端融合，且第二抗原結合域在 Fab 重鏈的 C 端處與 Fc 域的第二次單元的 N 端融合，或 (ii) 該第二抗原結合域在 Fab 重鏈的 C 端處與 Fc 域的第一次單元的 N 端融合，且第一抗原結合域在 Fab 重鏈的 C 端處與 Fc 域的第二次單元的 N 端融合。 23.如段落 1 至 22 中任一者之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中該 Fc 域包含促進 Fc 域之第一次單元與第二次單元締合的修飾。 24.如段落 1 至 23 中任一者之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中 Fc 域的第一次單元包含胺基酸取代 S354C 及 T366W (EU編號)，且 Fc 域的第二次單元包含胺基酸取代 Y349C、T366S 及 Y407V (根據 Kabat EU 索引編號)。 25.一種或多種分離多核苷酸，其編碼如段落 1 至 24 中任一者之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子。 26.一種或多種載體，特別是表現載體，其包含如段落 25 之多核苷酸。 27.一種宿主細胞，其包含如段落 25 之多核苷酸或如段落 26 之載體。 28.一種生產雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子之方法，其包含步驟 a) 在適合表現該雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子之條件下培養如段落 27 之宿主細胞，b) 視情況地回收該雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子。 29.一種由如段落 28 之方法所生產之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子。 30.一種醫藥組成物，其包含如段落 1 至 24 中任一者之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子及至少一種醫藥上可接受之賦形劑。 31.如段落 1 至 24 中任一者之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子或如段落 30 之醫藥組成物，其用為藥物。 32.如段落 1 至 24 中任一項之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子或如段落 30 之醫藥組成物，其用於增強 (a) T 細胞活化或 (b) T 細胞效應功能。 33.如段落 1 至 24 中任一者之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子或如段落 30 之醫藥組成物，其用於疾病的治療。 34.如段落 33 之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子或醫藥組成物的用途，其中疾病是癌症。 35.如段落 1 至 24 中任一者之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子或如段落 30 之醫藥組成物，其用於癌症治療，其中用於與化療劑、放射療法及/或用於癌症免疫療法的其他藥劑組合投予。 36.如段落 1 至 24 中任一項之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子或如段落 30 之醫藥組成物，其用於癌症治療，其中該用途用於與 T 細胞活化抗 CD3 雙特異性抗體組合投予。 37.如段落 1 至 24 中任一者之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子或如段落 30 之醫藥組成物，其用於癌症治療，其中該用途用於與抗 PD-L1 抗體或抗 PD-1 抗體組合投予。 38.一種如段落 1 至 24 中任一者之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子或如段落 30 之醫藥組成物於製造藥物之用途，該藥物用於治療疾病，特別是用於癌症治療。 39.一種在受試者中治療疾病之方法，該疾病特別是癌症，該方法包含向該受試者投予有效量之如段落 1 至 24 中任一者之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子或如段落 30 之醫藥組成物。 40.如段落 39 之方法，其進一步包含與化療劑、放射療法及/或用於癌症免疫療法的其他藥劑組合投予，特別是 T 細胞活化抗 CD3 雙特異性抗體或抗 PD-L1 抗體或抗 PD-1 抗體。 *** 實例

以下為本發明之方法和組成物的實例。應當理解，鑒於上文給出的一般描述，可以實施各種其他實施例。

重組 DNA 技術

使用標準方法操作 DNA，如敘述於 Sambrook et al., Molecular cloning: A laboratory manual; Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, 1989。根據製造商之說明使用分子生物試劑。關於人類免疫球蛋白輕鏈及重鏈之核苷酸序列之一般資訊提供於：Kabat, E.A. et al., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Ed., NIH Publication No 91-3242。

DNA 測序

透過雙股測序測定 DNA 序列。

基因合成

在需要時，所需的基因片段使用適當模板藉由 PCR 產生，或藉由自動化基因合成法，在 Geneart AG (Regensburg, Germany) 或 Genscript (New Jersey, USA) 自合成的寡核苷酸及 PCR 產物合成。將位於單個限制內切酶切割位點側翼的基因片段選殖到標準選殖/測序載體中。從轉化的細菌中純化質體 DNA，並透過 UV 光譜確定濃度。透過 DNA 測序確認亞克隆基因片段的 DNA 序列。基因片段設計有合適的限制位點，以允許亞選殖到各自的表現載體中。所有構建體均設計有用於前導肽的 5’ 端 DNA 序列編碼，該前導肽靶向蛋白質以在真核細胞中分泌。

細胞培養技術

使用標準細胞培養技術，如敘述於 Current Protocols in Cell Biology (2000), Bonifacino, J.S., Dasso, M., Harford, J.B., Lippincott-Schwartz, J. and Yamada, K.M. (eds.), John Wiley & Sons, Inc。

蛋白質純化

參照標準方案從過濾的細胞培養上清液中純化蛋白質。簡而言之，將抗體施用於蛋白質 A 瓊脂糖凝膠管柱 (GE Healthcare) 並以 PBS 洗滌。在 pH 2.8 下實現抗體之溶離，接著立即中和樣品。在 PBS 或 20 mm組胺酸、150 mM NaCl pH 6.0 中藉由粒徑排阻層析 (Superdex 200，GE Healthcare) 將聚集的蛋白質與單體抗體分離。收集單體抗體濾份，(必要時) 使用例如 MILLIPORE Amicon Ultra (30 MWCO) 離心濃縮器濃縮，冷凍並在 -20℃ 或 -80℃ 下儲存。提供部分樣品用於後續蛋白質分析及分析型特徵化，例如藉由 SDS-PAGE、粒徑排阻層析 (SEC) 或質譜分析。

SDS-PAGE

根據製造商說明使用 NuPAGE® Pre-Cast 凝膠系統 (Invitrogen)。特別是，使用 10% 或 4-12% NuPAGE® Novex® Bis-TRIS Pre-Cast 凝膠 (pH 6.4) 及 NuPAGE® MES (還原性凝膠，具有 NuPAGE® Antioxidant 操作緩衝液添加劑) 或 MOPS (非還原性凝膠) 操作緩衝液。

分析型粒徑排阻 層析

藉由HPLC層析進行用於測定抗體之聚集及寡聚狀態之粒徑排阻層析(SEC)。簡言之，將蛋白質 A 純化抗體施用於 Agilent HPLC 1100 系統上 300 mM NaCl、50 mM KH ₂PO ₄/K ₂HPO ₄，pH 7.5 中之 Tosoh TSKgel G3000SW 管柱或 Dionex HPLC 系統上 2×PBS 中之 Superdex 200 管柱 (GE Healthcare)。藉由 UV 吸光度及峰值面積之積分來定量溶離之蛋白質。BioRad Gel 過濾標準 151-1901 用作標準。

質譜分析

此章節描述具有 VH/VL 交換 (VH/VL CrossMab) 之多特異性抗體之表徵，其中強調其正確組裝。藉由去醣基化完整 CrossMabs 及去醣基化/纖維蛋白溶酶消化或以其他方式去醣基化/限制性 LysC 消化 CrossMab 之電噴霧電離質譜 (ESI-MS) 來分析預期主要結構。

在 1 mg/ml 之蛋白質濃度下，VH/VL CrossMab 在磷酸鹽或 Tris 緩衝液中，在 37℃ 下用 N-糖苷酶 F 去醣基化 17 小時。纖維蛋白溶酶或限制性 LysC (Roche) 消化用 100 µg 去醣基化 VH/VL CrossMab 分別在 Tris 緩衝液 pH 8 中，在室溫下進行 120 小時及在 37℃ 下進行 40 分鐘。在質譜分析之前，在 Sephadex G25 管柱 (GE Healthcare) 上經由HPLC將樣品去鹽。在配備有 TriVersa NanoMate 來源 (Advion) 之 maXis 4G UHR-QTOF MS 系統 (Bruker Daltonik) 上經由 ESI-MS 測定總質量。

使用表面電漿子共振 (SPR)(BIACORE) 測定多特異性抗體與各別抗原之結合及結合親和力

使用 BIACORE 儀器 (GE Healthcare Biosciences AB, Uppsala, Sweden) 藉由表面電漿子共振研究所產生之抗體與各別抗原之結合。簡言之，對於親和力量測，山羊抗人類 IgG、JIR 109-005 -098 抗體經由胺偶合固定在 CM5 晶片上以用於針對各別抗原之抗體之呈現。在 HBS 緩衝液 (HBS-P)(10 mM HEPES、150 mM NaCl、0.005% Tween 20，ph 7.4)中，在 25℃ 下 (或在 37℃ 下) 量測結合。在溶液中以多種濃度添加抗原 (R&D Systems 或內部純化)。藉由 80 秒至 3 分鐘之抗原注射來量測締合；藉由用 HBS 緩衝液洗滌晶片表面 3 - 10 分鐘來量測解離且使用 1:1 朗格繆爾結合模型 (Langmuir binding model) 來評估 KD 值。自樣品曲線減去陰性對照資料 (例如緩衝液曲線) 以用於系統內源性基線偏移之校正及雜訊信號降低。使用各別 Biacore Evaluation 軟體進行感測圖譜之分析及親和力資料之計算。實例 1 靶向 CD28 及人類上皮生長因子受體 -2 (Her2) 的雙特異性抗原結合分子的生成和生產 1.1 靶向 CD28 及人類上皮生長因子受體 -2 (Her2) 的雙特異性抗原結合分子的選殖

抗原之選殖：

將編碼人類 CD28) 之細胞外域 (成熟蛋白質之胺基酸 1 至 134) 之 DNA 片段 (Uniprot: P10747) 以框架插入編碼 hum IgG1 Fc 片段之片段上游之兩個不同哺乳動物受體載體中，該 Fc 片段用作溶解度及純化標籤。該等表現載體中之一者含有 Fc 區中之「臼」突變，另一者含有「杵」突變以及 C 端 avi 標籤 (GLNDIFEAQKIEWHE，SEQ ID NO:88)，其允許在與 Bir A 生物素連接酶共同表現期間特異性生物素化。此外，兩個 Fc 片段均含有 PG-LALA 突變。兩個載體均與編碼 BirA 生物素連接酶之質粒組合共轉染，以得到在 Fc-杵鏈之 C 端處具有一價經生物素化之 avi-標籤之二聚體 CD28-Fc 構建體。

無熱點且親和力降低的 CD28 (SA) 變異體的生成及表徵

具有包含 SEQ ID NO: 24 之胺基酸序列的 VH 與包含 SEQ ID NO: 25 之胺基酸序列的 VL 的 CD28 超激動性抗體 (SA) 敘述於 WO 2006/050949 中。

移除未配對的半胱胺酸殘基、色胺酸殘基、脫醯胺位點並生成親和力降低的 CD28 (SA) 變異體

作為我們詳細的結合物特徵化的一部分，對 CD28(SA) 可變域序列進行計算分析。該分析揭示了 VH CDR2 區中的未配對半胱胺酸 (位置 50，Kabat 編號)，VH CDR3 (位置 100a，Kabat 編號) 及 VL 的 CDR1 (位置 32，Kabat 編號) 中的色胺酸殘基，以及在VH 之 CDR2 中潛在的天冬醯胺酸脫醯胺的位點 (位置 56，Kabat 編號)。雖然色胺酸的氧化是一個相當緩慢的過程，並可藉由添加還原性化合物來防止，但抗體可變域中未配對的半胱胺酸的存在可能是至關重要的。游離半胱胺酸具有反應性，並可與其他蛋白質或細胞或培養基成分的其他未配對半胱胺酸形成穩定的鍵。因此，這可導致具有未知修飾的異質性和不穩定性產品，這些修飾具有潛在的免疫原性，因此可能對患者構成風險。此外，天冬醯胺酸的脫醯胺以及由此產生的異天冬胺酸及琥珀醯亞胺的形成會影響 活體外穩定性及 活體內生物學功能。親代鼠結合物 5.11A 的晶體結構分析表明，C50 不參與與人類 CD28 的結合，因此可被類似的胺基酸 (如絲胺酸) 取代，而不會影響對 CD28 的親和力。然而，色胺酸殘基以及位置 50 處的天冬醯胺酸都接近或參與結合界面，因此被相似的胺基酸取代可導致結合親和力的降低。在此實例中，我們特別針對降低 CD28(SA) 對人類 CD28 的親和力，原因如下：CD28(SA) 的親和力在 1-2 nM 的範圍內，結合半衰期約為 32 分鐘。當靜脈注射到患者體內時，這種強大的親和力會導致在含有大量表現 CD28 之細胞的組織 (如血液和淋巴組織) 中產生下沉效應 (sink effect)。因此，化合物的位點特異性靶向藉由靶向組分可能降低並且構建體的功效可能降低。為了最小化這種影響，生成幾個 VH 和 VL 變異體，以將親和力降低至不同程度 ( 圖 2A 和 2C)。除了前述的代表潛在穩定性熱點的位置之外，直接或間接參與與人類 CD28 結合的其他殘基被原始鼠種系胺基酸或類似胺基酸取代。此外，CD28(SA) VL 和 VH 的 CDR 亦被移植到各自的曲妥珠單抗骨架序列中 ( 圖 2B 和 2D)。然後將 VH 和 VL 變異體的幾種組合表現為單價單臂抗 CD28 IgG 樣構建體，並藉由 SPR 表徵結合。

藉由 SPR 分析降低的單臂抗 CD28 變異體的解離速率常數 (k _off)

為了在第一步驟中表徵抗 CD28 結合物變異體，所有結合物都表現為單價單臂 IgG 樣構建體 ( 圖 1A)。選擇這種型式是為了在 1:1 模型中表徵與 CD28 的結合。在轉染至 HEK 細胞後 5 天，收集上清液並測定表現構建體的力價。

使用 ProteOn XPR36 儀器 (Biorad) 在 25°C 下藉由表面電漿子共振 (SPR) 確定抗 CD28 結合物變異體的解離率，其中生物素化的 huCD28-Fc 抗原藉由中性抗生物素蛋白捕獲固定在 NLC 晶片上。為了固定重組抗原 (配體)，將 huCD28-Fc 以 PBST (含 Tween 20 的磷酸鹽緩衝鹽水，由 10 mM 磷酸鹽、150 mM 氯化鈉 pH 7.4、0.005% Tween 20 組成) 稀釋至 100 至 500 nM 的濃度，然後在不同的接觸時間以 25 μl/分鐘的速度注射。這導致垂直方向上 1000 到 3000 個反應單位 (RU) 之間的固定水平。

對於一次性動力學測量，注射方向改為水平方向。基於產生的上清液的力價，將單價單臂 IgG 以 PBST 稀釋以獲得 100 nM 至 6.25 nM 範圍內的兩倍稀釋系列。沿分開的通道 1-5，以 50 μl/min 同時進行注射，締合時間為 120 秒，解離時間為 300 秒。緩衝液 (PBST) 沿第六個通道注入，以提供「在線」空白供參考。由於結合相互作用是以來自上清液的單價單臂 IgG 測量的，無需純化和生化表徵，因此僅使用蛋白質：蛋白質相互作用的解離率來進一步得出結論。藉由在 ProteOn Manager v3.1 軟體中擬合解離感測圖，使用簡易的一對一朗繆爾 (Langmuir) 結合模型計算解離率。所有殖株的解離速率常數 (k _off) 值匯總於表 1。產生的變異體的比較顯示，k _off值與親代序列相比降低了 30 倍。表 1: 具有解離速率常數 (k _off) 值的所有表現的單價抗 CD28 變異體的概述

結合物變異體	Tapir ID	SEQ ID NO:	SEQ ID NO:	SEQ ID NO:	k _off(10 ^-4/M)
CD28(SA)_變異體_1 (親代 CD28)	P1AE4441	72	80	87	3.0
CD28(SA)_變異體_2	P1AE3058	73	81	87	N/A
CD28(SA)_變異體_3	P1AE3059	73	82	87	N/A
CD28(SA)_變異體_4	P1AE3060	73	83	87	N/A
CD28(SA)_變異體_5	P1AE3061	73	80	87	N/A
CD28(SA)_變異體_6	P1AE3062	74	81	87	N/A
CD28(SA)_變異體_7	P1AE3063	74	82	87	100
CD28(SA)_變異體_8	P1AE3064	74	83	87	68
CD28(SA)_變異體_9	P1AE3065	74	84	87	78
CD28(SA)_變異體_10	P1AE3066	74	85	87	N/A
CD28(SA)_變異體_11	P1AE3067	74	80	87	37
CD28(SA)_變異體_12	P1AE3068	75	86	87	2.4
CD28(SA)_變異體_13	P1AE3069	75	80	87	1.9
CD28(SA)_變異體_14	P1AE3070	76	81	87	100
CD28(SA)_變異體_15	P1AE3071	76	82	87	24
CD28(SA)_變異體_16	P1AE3072	76	83	87	10
CD28(SA)_變異體_17	P1AE3073	76	84	87	14
CD28(SA)_變異體_18	P1AE3074	76	85	87	82
CD28(SA)_變異體_19	P1AE3075	76	80	87	2.9
CD28(SA)_變異體_20	P1AE3076	77	81	87	N/A
CD28(SA)_變異體_21	P1AE3077	77	82	87	N/A
CD28(SA)_變異體_22	P1AE3078	77	83	87	61
CD28(SA)_變異體_23	P1AE3079	77	80	87	43
CD28(SA)_變異體_24	P1AE3080	78	81	87	80
CD28(SA)_變異體_25	P1AE3081	78	82	87	3.51
CD28(SA)_變異體_26	P1AE3082	78	83	87	9.7
CD28(SA)_變異體_27	P1AE3083	78	84	87	14
CD28(SA)_變異體_28	P1AE3084	78	85	87	69
CD28(SA)_變異體_29	P1AE3085	78	80	87	2.5
CD28(SA)_變異體_30	P1AE3086	79	86	87	3.22
CD28(SA)_變異體_31	P1AE3087	79	80	87	2.5

以表現人類 CD28 的 CHO 細胞 (親代細胞株 CHO-k1 ATCC #CCL-61，經修飾以穩定過表現人 CD28) 測試與人類 CD28 的結合。為了評估結合，收穫細胞、計數、檢查活力並以 2.5x10 ⁵/ml 再懸浮於 FACS 緩衝液 (eBioscience，Cat No 00-4222-26) 中。將 5x10 ⁴個細胞在圓底 96 孔盤中，與濃度逐漸增加 CD28 的結合物 (1 pM – 100 nM) 在 4°C 下培育 2 小時。然後，將細胞以冷的 FACS 緩衝液洗滌 3 次，在 4°C 下與 PE 結合的山羊抗人類 PE (Jackson ImmunoReserach，Cat No 109-116-098) 進一步培育 60 分鐘，以冷的 FACS 緩衝液洗滌一次，離心並再懸浮於 100 ul FACS 緩衝液中。為了監測構建體和細胞之間的非特異性結合相互作用，將抗 DP47 IgG 包括作為陰性對照。藉由流式細胞分析技術，以 FACS Fortessa (BD，軟體 FACS Diva)，評估結合。使用 GraphPadPrism6 獲得結合曲線。顯示出結合差異的單價單臂 IgG 樣 CD28 變異體構建體可見於圖 3A 至 3C。

選殖靶向 CD28 及 Her2 的雙特異性抗原結合分子

用於產生表現質粒，使用各自可變域之序列及於具有各自恆定區之框架中次選殖，該等恆定區經預先插入各自受體哺乳動物表現載體中。在 Fc 域中，已將 Pro329Gly、Leu234Ala 及 Leu235Ala 突變 (PG-LALA) 導入人類 IgG1 重鏈之恆定區以廢除與 Fcγ 受體之結合，根據國際專利公開號 WO 2012/130831 所述的方法。用於生成雙特異性抗體，Fc-片段含有「杵」突變 (T366W 突變，根據 EU 索引編號，視情況亦可選擇 S354C 突變，根據 EU 索引編號) 或「臼」突變 (T366S/L368A/Y407V 突變，根據 EU 索引編號，視情況亦可選擇 Y349C 突變，根據 EU 索引編號) 以避免重鏈之錯配。在一些情況中，如前所述，杵和臼抗體在分開的細胞中表現、純化並組裝成完整的雙特異性抗體。為避免在雙特異性抗原結合分子中輕鏈的錯配，將 VH/VL 或 CH1/Cκ 域之互換導入一個結合部分中 (CrossFab 技術)。於另一結合部分中，將電荷導入 CH1 及 Cκ 域中，如在國際專利公開號 WO 2015/150447 中所述。

Her2 抗體帕妥珠單抗 CLC 和曲妥珠單抗 CLC 的生成和製備敘述於 WO 2015/091738。

將下列分子選殖，其之示意性說明顯示於圖 1B 、 1C或 1D中：分子 A：Her2 (帕妥珠單抗 CLC_WT)-CD28 (SA_變異體 8) 1+1 型式，雙特異性 huIgG1 野生型 /PG-LALA 嵌合體 CrossFab 分子，在 CD28 (SA_變異體 8) Fab 片段 (鈕)中具有 VH/VL 互換，且在 Her2 (帕妥珠單抗 CLC_WT) Fab 片段 (臼) 中具有荷電修飾 ( 圖 1B，然而，僅 Fc 杵鏈包含 PG-LALA 突變)，包含 SEQ ID NO: 91 及 96 之重鏈胺基酸序列與 SEQ ID NO: 92 及 97 之輕鏈胺基酸序列 (P1AF6741)。分子 B：Her2 (帕妥珠單抗 CLC)-CD28 (SA_變異體 8) 1+1 型式，雙特異性 huIgG1 PG-LALA CrossFab 分子，在 CD28 (SA_變異體 8) Fab 片段 (杵) 中具有 VH/VL 互換，且在 Her2 (帕妥珠單抗 CLC) Fab 片段 (臼) 中具有荷電修飾 ( 圖 1B)，包含 SEQ ID NO: 91 及 98 之重鏈胺基酸序列與 SEQ ID NO: 92 及 97 輕鏈胺基酸序列 (P1AF8305)。分子 C：Her2 (帕妥珠單抗 CLC)-CD28 (SA_變異體 8) 1+1，雙特異性 huIgG1 PG-LALA CrossFab 分子，在 CD28 (SA_變異體 8) Fab 片段 (杵) 中具有荷電修飾，且在 Her2 (帕妥珠單抗 CLC)-Fab 片段 (臼)中具有 VH/VL 互換 ( 圖 1D)，包含 SEQ ID NO: 74 及 99 的重鏈胺基酸序列與 SEQ ID NO: 83 及 100 的輕鏈胺基酸序列。分子 D：Her2 (曲妥珠單抗 CLC)-CD28 (SA_變異體 8) 1+1，雙特異性 huIgG1 PG-LALA CrossFab 分子，在 CD28 (SA_變異體 8) Fab 片段 (杵) 中具有 VH/VL 互換，且在 Her2 (曲妥珠單抗 CLC)-Fab片段 (臼) 中具有荷電修飾 ( 圖 1B)，包含 SEQ ID NO: 91 及 101 的重鏈胺基酸序列與 SEQ ID NO: 92 及 97 的輕鏈胺基酸序列 (P1AF8338)。分子 E：Her2 (曲妥珠單抗 CLC)-CD28 (SA_變異體 8) 1+1，雙特異性 huIgG1 PG-LALA CrossFab 分子，在 CD28 (SA_變異體 8) Fab 片段 (杵) 中具有荷電修飾，且在 Her2 (曲妥珠單抗 CLC) Fab 片段 (臼) 中具有 VH/VL 互換 ( 圖 1D)，包含 SEQ ID NO: 74 及 102 的重鏈胺基酸序列與 SEQ ID NO: 83 及 100 的輕鏈胺基酸序列。分子 F：Her2 (4D5)-CD28 (SA_變異體 8) 1+1，雙特異性 huIgG1 N297G ( 圖 1C)，包含 SEQ ID NO: 178 及 180 之重鏈胺基酸序列與 SEQ ID NO: 179 及 181 之輕鏈胺基酸序列。分子 G：Her2 (2C4)-CD28 (SA_變異體 8) 1+1，雙特異性 huIgG1 N297G ( 圖 1C)，包含 SEQ ID NO: 178 及 182 之重鏈胺基酸序列與 SEQ ID NO: 179 及 183 之輕鏈胺基酸序列。 1.2 靶向 CD28 及 Her2 之雙特異性抗原結合分子之生產

上述分子之表現藉由嵌合 MPSV 啟動子或 CMV 啟動子驅動。聚腺苷酸化藉由位於 CDS 之 3’端之合成 polyA 信號序列驅動。此外，各載體含有用於常染色體複製之 EBV OriP 序列。

藉由短暫轉染 HEK293 EBNA 細胞或 CHO EBNA 細胞產生抗體及雙特異性抗體。將細胞離心及藉由預升溫之 CD CHO 培養基更換培養基 (Thermo Fisher, Cat N 10743029)。將表現載體於 CD CHO 培養基中混合，添加 PEI (聚乙烯亞胺，Polysciences, Inc, Cat N 23966-1)，將溶液渦旋及在室溫下培育 10 分鐘。之後，將細胞 (2 Mio/ml) 與該載體/PEI溶液混合，轉移至燒瓶中並在 37℃ 下於具有 5% CO ₂氣壓之震盪培養箱中培育 3 小時。培育後，添加具有補充劑 (佔總體積的 80%) 的 Excell 培養基 (W. Zhou 和 A. Kantardjieff，Mammalian Cell Cultures for Biologics Manufacturing, DOI: 10.1007/978-3-642-54050-9; 2014)。轉染後一天，加入補充劑 (進料，佔總體積的 12%)。於 7 天後藉由離心及隨後過濾 (0.2 μm 過濾器)收穫細胞上清液，並藉由如下所示之標準方法自所收穫的上清液純化蛋白質。

或者，藉由 Evitria，使用其專有載體系統，利用習知 (基於非 PCR) 選殖技術及使用懸浮液適應之 CHO K1 細胞 (最初接收自 ATCC 及適應於 Evitria 之懸浮培養中無血清生長) 製備本文所述之抗體及雙特異性抗體。在生產過程中，Evitria 使用其專有的、不含動物成分和無血清的培養基 (eviGrow 及 eviMake2) 及其專有的轉染試劑 (eviFect)。通過離心和隨後的過濾 (0.2 μm 過濾器) 收穫上清液，並通過標準方法從收穫的上清液中純化蛋白質。 1.3 靶向 CD28 及 Her2 之雙特異性抗原結合分子之純化

參照標準方案從過濾的細胞培養上清液中純化蛋白質。簡而言之，透過蛋白A-親和層析法從細胞培養上清液中純化含 Fc 的蛋白質 (平衡緩衝液：20 mM 檸檬酸鈉、20 mM 磷酸鈉、pH 7.5；洗脫緩衝液：20 mM 檸檬酸鈉，pH 3.0) 。在 pH 3.0 下完成洗脫，然後立即中和樣品的 pH。透過離心將該蛋白質濃縮 (Millipore Amicon® ULTRA-15 (Art.Nr.：UFC903096)，並透過尺寸排除色譜法在 20 mM 組胺酸，140 mM 氯化鈉，pH 6.0 中將聚集的蛋白質與單體蛋白質分離。 1.4 靶向 CD28 及 Her2 之雙特異性抗體的分析資料

通過使用根據 Pace 等人，Protein Science, 1995, 4, 2411-1423 基於胺基酸序列計算的質量消光係數來量測在 280 nm 處的吸收來測定純化蛋白質之濃度。在存在和缺乏還原劑的情況下，使用 LabChipGXII 或 LabChip GX Touch (Perkin Elmer)，透過 CE-SDS 來分析蛋白質的純度和分子量。在 25℃ 下使用於運行緩衝液 (200 mM KH ₂PO ₄，250 mM KCl pH 6.2，0.02% NaN ₃) 中平衡的分析型粒徑排阻管柱 (TSKgel G3000 SW XL 或 UP-SW3000)，藉由 HPLC 層析法進行聚集內容物之測定。表 2中提供所有分子之純化參數之概述。表 2: 雙特異性 CD28 抗原結合分子之生產及純化概述

分子	描述	產率 [mg/l]	分析型 SEC (HMW/單體/LMW) [%]	藉由CE-SDS量測之純度 [%]
A	Her2 (帕妥珠單抗 CLC_WT) - CD28 (SA_變異體 8) 1+1	n.d.	4.6 / 93.6 / 1.7	88.61
B	Her2 (帕妥珠單抗 CLC) - CD28 (SA_變異體 8) 1+1	68.16	3.3 / 93.6 / 3.1	80.71
D	Her2 (曲妥珠單抗 CLC) - CD28 (SA_變異體 8) 1+1	48.1	1.5 / 98.5 / 0	98.35

實例 2 靶向 Her2 之雙特異性 CD28 激動性抗原結合分子與 Her2- 及 CD28- 表現細胞之結合

使用人類乳癌細胞株 KPL-4 (Kawasaki Medical School) 測試 Her2-CD28 雙特異性抗原結合分子與 Her2 之結合，並以表現人類 CD28 之 CHO 細胞(親代細胞株 CHO-k1 ATCC #CCL-61，經修飾以穩定過度表現人類 CD28) 測試與人類 CD28 之結合。

為評估結合，收穫細胞，計數，檢查活力並將以 2 Mio cells/m 再懸浮於 PBS 中的 2x10 ⁵細胞於圓底 96 孔盤 (greiner bio-one，cellstar，Cat.‑ No.650185) 中，於 4°C 以漸增濃度之 Her2-CD28 構建體或對照分子 (DP47 huIgG1 P329G LALA，包含 SEQ ID NO:186 之重鏈及 SEQ ID NO:187 之輕鏈) 培育 60 分鐘。然後，將細胞以 PBS 洗滌二次，進一步於 4°C 與第二結合 R-藻紅素 AffiniPure F(ab')₂ 片段山羊抗人類 IgG，Fcγ 片段特異的 (Jackson ImmunoResearch，Cat. No. 109-116-098) 培育 30 分鐘，以 PBS 洗滌二次，離心並再懸浮於 150 μl PBS + Dapi (4’,6-二脒-2’-苯基吲哚二鹽酸鹽，1:10000 稀釋於 PBS，10236276001 Roche)。藉由流式細胞分析技術，以 FACS Fortessa (BD，軟體 FACS Diva)，評估結合。使用 GraphPadPrism 7 (Graph Pad Software Inc.) 獲得結合曲線。

如圖 4A 和 4B 以及圖 6A 和 6B 所示，Her2-CD28 雙特異性抗原結合分子顯示結合於 KPL-4 細胞上的 Her2 及結合於表現人類 CD28 之 CHO-k1 (ATCC #CCL-61) 細胞上的 CD28。實例 3 靶向 Her2 的雙特異性 CD28 激動性抗原結合分子的 活體外功能性特徵化 3.1 基於 IL-2 報導子測定 -CD3-IgG 刺激的靶向 Her2 的雙特異性 CD28 激動性抗原結合分子的 活體外功能性特徵化

為了評估 Her2-CD28 雙特異性抗原結合分子支持抗 CD3 介導的 T 細胞活化的能力，在 IL-2 報導子細胞測定中測試 Her2-CD28 雙特異性抗原結合分子。IL-2 報導子細胞 (Promega，Ca No J1651) 作為效應子細胞 (表現藉由 IL-2 啟動子驅動的螢光素酶報導子的 Jurkat T 細胞株)，KPL-4 細胞作為腫瘤標靶。DP47 huIgG1 P329G LALA 抗體被包括作為非結合對照。在 10 nM 抗 CD3 (eBioscience #16-0037-85) 單獨存在下或與增加濃度的 Her2-CD28 雙特異性抗體組合使用 (2.44 pM – 10 nM)，將 10000 個腫瘤標靶細胞與 50000 個 IL-2 報導子細胞 (E：T 5：1) 在白色平底 96 孔盤 (Greiner 655083) 中於 37°C 培育 6 小時。在測量之前，將盤在室溫下培育 15 分鐘，然後將 100 μl 受質 (ONE-Glo 溶液，Promega，Ca No E6120) 加入細胞中。在室溫下在黑暗中培育 10 分鐘後，以 Tecan Spark 10M 測量發光度 (計數/秒)。

如圖 5及圖 7A所示，Her2-CD28 雙特異性抗原結合分子能夠增強 T 細胞活化，此藉由以濃度依賴性方式暴露於次優的 CD3 刺激的 T 細胞中所增加的 IL-2 產生來判斷。對於 DP47 huIgG1 P329G LALA 抗體或在不存在表現 Her2 的 KPL4 腫瘤細胞的情況下，未觀察到 T 細胞活化 ( 圖 7B)。 3.2 使用周邊血液單核細胞 (PBMC) 活體外 評估藉由靶向 Her2 的雙特異性 CD28 激動性抗原結合分子的 T 細胞活化

在存在或不存在單特異性或雙特異性 CD28 促效劑抗體的情況下，藉由以 HER2 TDB 處理健康供體 PBMC 和 Her2 擴增的 KPL-4 乳癌細胞來測試 Her2-CD28 雙特異性抗原結合分子對 HER2 TDB 誘導的 T 細胞活化的影響。CD4 和 CD8 T 細胞的活化藉由流式細胞分析技術測量。

人 PBMC 和腫瘤標靶細胞 (KPL-4) (以 10:1 的比例) 在 HER2 TDB (一種 Her2-CD3 雙特異性抗體，包含 SEQ ID NO: 174 的重鏈 HC1、SEQ ID NO: 175 的輕鏈 LC1、SEQ ID NO: 176 的第二重鏈 HC2 和 SEQ ID NO: 177 的第二輕鏈) 與 Her2-CD28 雙特異性抗原結合分子 Her2(4D5)/CD28 或 Her2 (2C4)/CD28 (500 ng/ml) 或單特異性抗 CD28 抗體 (CD28 二價，500 ng/ml) 在平底 96 孔盤 (BD) 中培育 24 小時。培育後，將細胞轉移至新的 V 型底 96 孔盤中。細胞以 CD4-PE-Cy7、CD8-FITC、CD69-PE 和 CD25-APC 染色。藉由流式細胞分析技術檢測 CD4 ⁺或 CD8 ⁺T 細胞上的 CD69 和 CD25 表面表現。CD4 ⁺CD69 ⁺CD25 ⁺和 CD8 ⁺CD69 ⁺CD25 ⁺T 細胞的百分比報告為 CD4 ⁺( 圖 8A) 和 CD8 ⁺T 細胞活化 ( 圖 8B)。

如所預期的，以 HER2 TDB 單藥劑治療導致 CD4 和 CD8 細胞的強烈活化。HER2 TDB 與三種 CD28 激動劑中的任何一種組合治療進一步增加了活化 T 細胞的分數和 T 細胞活化的效力。與非靶向二價 CD28 抗體相比，以 Her2 為靶點的雙特異性抗原結合分子更有效地增強了 T 細胞活化。 3.3 活體外 評估在 Her2 TDB 存在下以靶向 Her2 的雙特異性 CD28 激動性抗原結合分子對腫瘤細胞的毒殺

使用與實施例 3.2 中相同的實驗設置來分析 CD28 共刺激對 HER2 TDB 誘導的腫瘤細胞毒殺的影響。藉由細胞力價-輝光發光細胞活力測定 (Cell Titer-Glow Luminescent Cell Viability assay) 檢測腫瘤細胞活力的喪失。為了評估雙特異性 Her2-CD28 抗原結合分子實現腫瘤細胞毒殺或支持 TDB 介導的腫瘤細胞毒殺的能力，表現 Her2 的 KPL-4 細胞用作腫瘤標靶。標靶細胞 KPL-4 以每孔 10,000 個細胞的密度接種在黑色、透明底的 96 孔盤中。將人類 PBMC 以 10：1 的 E：T 比例添加到孔中。將所示濃度的 HER2 TDB 添加至具有 Her2-CD28 雙特異性抗原結合分子 Her2(4D5)/CD28 或 Her2(2C4)/CD28 (500ng/ml) 的孔中。48 小時後，將盤以 PBS 洗滌兩次。如說明書所述，添加 100uL 細胞力價-輝光發光細胞活力試劑 (Promega cat#G7570)，並在光度計上讀取平盤。

用三種 CD28 激動劑中的任何一種聯合治療都增加了 HER2 TDB 在介導 KPL-4 細胞毒殺方面的效力 ( 圖 8C)。與 T 細胞活化類似，與非靶向二價 CD28 抗體相比，HER2 靶向雙特異性 CD28 抗原結合分子的作用更強。與使用抗 HER2 殖株 4D5 的 Her2 靶向相比，使用抗 HER2 殖株 2C4 的 Her2 靶向在 T 細胞活化和腫瘤細胞毒殺方面都產生了增強的反應，這可能是由於與 4D5 靶向 HER2 TDB 的非競爭性結合。 3.4 活體外 細胞激素釋放試驗

在處理後 24 小時從 T 細胞活化測定中收集上清液用於分析可溶性細胞激素。使用 Bio-Plex Pro Human Cytokine Assay (Biorad; Hercules, CA)，按照製造商的說明，研究從 活體外T 細胞活化測定 (在實例 3.2 中描述) 收集的上清液樣品。

添加二價 CD28 抗體對於 HER2 TDB 誘導的細胞激素釋放只有很小的影響，而添加任一 HER2 靶向 CD28 雙特異性抗原結合分子導致所有測量的細胞激素實質增加。在圖 9A 至 9G 中，顯示出 GM-CSF (圖9A)、IFN-γ (圖9B)、IL-10 (圖9C)、IL-6 (圖9D)、TNF-α (圖9E)、IL-2 (圖9F) 和 IL-1b (圖9G) 的細胞激素釋放。 3.5 活體外 T 細胞和 NK 細胞數計數

CD28 共刺激對免疫細胞數量的影響通過流式細胞分析技術在 HER2-TDB 治療後長達數週的不同時間點進行測量。依據製造商的說明，以羧基螢光素琥珀醯亞胺酯 (CFSE；ThermoFisher Scientific；Waltham，MA) 標記人類 PBMC。在存在或不存在 50 ng HER2 TDB 及 500 ng/ml Her2-CD28 雙特異性抗原結合分子 Her2(4D5)/CD28 或 Her2 (2C4)/CD28下，將 CFSE 標記的 PBMC 及標靶細胞 (KPL-4) (以 10:1 比例) 在平底 96 孔盤 (BD) 中放置 3、7、10 或 14 天。在培育時間結束時，對細胞進行 CD4-PE-Cy7、CD8-太平洋藍、CD56-APC 染色，並使用計數珠以流式細胞分析技術計數細胞數量。

與僅以 HER2 TDB 處理的樣品相比，用三種 CD28 促效劑分子中的任何一種共同處理導致第 7-14 天 CD4 ⁺細胞數量增加 ( 圖 10B)。在第 14 天，所有 CD28 促效劑分子也明顯增加了 CD8 ⁺細胞數量，而兩種靶向 Her2 的雙特異性 CD28 抗原結合分子僅略微增加 NK 細胞數量 ( 圖 10D)。類似於 T 細胞活化、腫瘤細胞毒殺和細胞激素釋放，與二價 CD28 抗體相比，與靶向 HER2 的雙特異性抗原結合分子共同治療導致免疫細胞數量更強勁地增加。 ***

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在圖 1A 至 1D中顯示如本文所述的例示性分子之示意圖。圖 1A顯示作為單價hu IgG1 PGLALA 同型 (「Fc沉默」) 的 CD28 激動性抗體變異體的示意圖。圖 1B顯示 1+1 型式的雙特異性 Her2-CD28 抗原結合分子，其中在包含 CD28 抗原結合域的 Fab 分子中，VH 和 VL 域彼此互換 (VH/VL crossfab)，且其中在包含 Her2 抗原結合域的 Fab 分子中， CH1 和 CL 域中的某些胺基酸被交換 (荷電變異體) 以允許與輕鏈更好地配對。Fc 域為 hu IgG1 PGLALA 版本。圖 1C顯示 1+1 型式的雙特異性 Her2-CD28 抗原結合分子，其中兩條重鏈均包含 N297G 突變，其中兩種 Fab 分子在不同細胞株中表現、純化並組裝成完整的雙特異性。圖 1D顯示 1+1 型式的雙特異性 Her2-CD28 抗原結合分子，其中在包含 CD28 抗原結合域的 Fab 分子中，VH 和 VL 域彼此互換 (VH/VL crossfab)，且其中在包含 Her2 抗原結合域的 Fab 分子中，CH1 和 CL 域中的某些胺基酸被交換 (荷電變異體) 以允許與輕鏈更好地配對。 CD28(SA) 及其變異體的可變域的比對顯示於圖 2A至 2D中。圖 2A顯示 CD28(SA) VH 域及其變異體的比對以移除半胱胺酸 50 並將所得抗 CD28 結合物的親和力降低到不同程度。值得注意的是，在 VH 變異體 i 和 j 中，CD28(SA) 的 CDR 從 IGHV1-2 骨架移植到 IGHV3-23 骨架中 ( 圖 2B)。在圖 2C中，顯示 CD28(SA) VL 域及其變異體的比對，以將所得抗 CD28 結合物的親和力降低到不同程度。在變異體 t 中，CDR 被移植到曲妥珠單抗 (Herceptin) VL 序列的骨架序列中 ( 圖 2D)。在圖 3A至 3C中，顯示來自上清液的單特異性、單價 IgG 型式的親和力降低的 CD28 激動性抗體變異體與細胞上的人類 CD28 的結合。與陰性對照 (抗 DP47) 和原始 CD28 抗體 CD28(SA) 相比，與表現人類 CD28 的 CHO 細胞 (親代細胞株 CHO-k1 ATCC #CCL-61，經修飾以穩定過表現人類 CD28) 結合的中位數螢光強度，藉由流式細胞分析技術評估。變異體 1-10 的結合曲線如圖 3A所示，變異體 11-22 的結合曲線如圖 3B所示，變異體 23-31 的結合曲線如圖 3C所示。所繪示的為技術二重複加上 SD。圖 4A顯示 Her2-CD28 雙特異性抗原結合分子與人類乳癌細胞株 KPL-4 在細胞表面表現的 Her2 的結合。Her2-CD28 (P1AF6741) 或對照分子 (DP47 huIgG1 P329G LALA 抗體) 與表現 Her2 的細胞株 KPL-4 在不同濃度下培育，如 X 軸所示。然後洗掉過量的和未結合的分子，並用二級結合 R-藻紅蛋白 AffiniPure F(ab')₂ 片段山羊抗人類 IgG，Fcγ 片段特異性檢測結合分子。藉由流式細胞分析技術測量螢光強度的中位數 (MFI)，並以劑量依賴性方式指示測試分子的親和力。顯示的值是技術二重複 +/- SEM 的平均值。圖 4B顯示 Her2-CD28 雙特異性抗原結合分子與在 CHOk1-huCD28 細胞株的細胞表面上表現的 CD28 的結合。Her2-CD28 (P1AF6741) 或對照分子 (DP47 huIgG1 P329G LALA 抗體) 與 CHOk1-huCD28 細胞株在不同濃度下培育，如 X 軸所示。然後洗掉過量的和未結合的分子，並用二級結合 R-藻紅蛋白 AffiniPure F(ab')₂ 片段山羊抗人類 IgG，Fcγ 片段特異性檢測結合分子。藉由流式細胞分析技術測量螢光強度的中位數 (MFI)，並以劑量依賴性方式指示測試分子的親和力。顯示的值是技術二重複 +/- SEM 的平均值。圖 5顯示，在存在 KPL-4 細胞的 IL-2 報導子測定中，Her2-CD28 雙特異性抗原結合分子增強了 T 細胞對抗 CD3 刺激物的反應。所顯示的是在存在次優濃度的抗 CD3 IgG 殖株 OKT3 (10 nM) 和濃度增加的 Her2-CD28 (P1AF6741) 或對照分子 (DP47) 的情況下，與 KPL-4 細胞共培育 6 小時後，藉由發光讀數測量的 IL-2 報導子細胞活化。虛線顯示僅抗 CD3。顯示的值是技術二重複 +/- SEM 的平均值。圖 6A顯示 Her2-CD28 雙特異性抗原結合分子 B、D 及 A 與表現於人類乳癌細胞株 KPL-4 細胞表面上的 Her2 的結合。所有分子，包括陰性對照 (種系對照 DP47 IgG1 Fc PGLALA) 均以 0.01-500 nM 的濃度範圍以 5 倍稀釋進行培育。然後，洗滌過量和未結合的分子，並以 Fcγ 片段特異性山羊抗人類 IgG R-藻紅蛋白 AffiniPure F(ab')₂ 二抗檢測結合的分子。藉由流式細胞分析技術測量螢光強度的中位數 (MFI)，並以劑量依賴性方式指示測試分子的親和力。所有數值均表示為技術三重複 +/- SEM 的平均值。圖 6B顯示 Her2-CD28 雙特異性抗原結合分子 B、D 及 A 與 CHOk1 huCD28 細胞表面所表現之 CD28 的結合。所有分子，包括陰性對照 (DP47 IgG1 Fc PGLALA) 均以 0.01-500 nM 的濃度範圍以 5 倍稀釋進行培育。然後，洗滌過量和未結合的分子，並以 Fcγ 片段特異性山羊抗人類 IgG R-藻紅蛋白 AffiniPure F(ab')₂ 二抗檢測結合的分子。藉由流式細胞分析技術測量螢光強度的中位數 (MFI)，並以劑量依賴性方式指示測試分子的親和力。所有數值均表示為技術三重複 +/- SEM 的平均值。圖 7A 及圖 7B顯示在存在 ( 圖 7A) 或不存在 ( 圖 7B) KPL4 腫瘤標靶細胞的情況下，曲妥珠單抗 CLC-CD28 (分子 D) 和帕妥珠單抗 CLC-CD28 (分子 A 及 B) 的交叉變異體之間的比較。包括 DP47 IgG1 Fc PGLALA 作為非結合對照。報導子細胞和標靶細胞以 5：1 的 E：T 比例平盤培養。添加抗 CD3 至 10 nM 的濃度後，將分子以 0.002 至 10 nM 的濃度培育，稀釋因子為 4。培育 6 小時後，加入受質緩衝液並測量發光。所有數值均表示為技術二重複 +/- SEM 的平均值。圖 8A圖式顯示 Her2-CD28 雙特異性抗原結合分子 2C4/CD28 (分子 F) 和 4D5/CD28 (分子 G) 以及CD28 抗體在濃度為 500 ng/mL 時，對高表現 Her2 的細胞株 KPL4 一起培養的人類 CD4 ⁺T 細胞之 HER2 TDB 的影響。T 細胞活化藉由 CD69 和 CD25 的雙重表現來測量。圖 8B圖式顯示 Her2-CD28 雙特異性抗原結合分子 2C4/CD28 和 4D5/CD28 以及CD28 抗體在濃度為 500 ng/mL 時，對高表現 Her2 的細胞株 KPL4 一起培養的人類 CD8 ⁺T 細胞之 HER2 TDB 的影響。T 細胞活化藉由 CD69 和 CD25 的雙重表現來測量。圖 8C圖式顯示 Her2-CD28 雙特異性抗原結合分子 2C4/CD28 及 4D5/CD28 以及 CD28 抗體對 KPL-4 腫瘤細胞之HER2 TDB 介導的標靶細胞毒殺作用。圖 9A至 9G顯示 Her2-CD28 雙特異性抗原結合分子 2C4/CD28 及 4D5/CD28 以及 CD28 抗體對 HER2 TDB 誘導的細胞激素釋放的影響，如在處理後24 小時，從 T 細胞活化測定收穫的上清液樣品中測量。所顯示為可溶性細胞激素 GM-CSF ( 圖 9A)、IFN-γ ( 圖 9B)、IL-10 ( 圖 9C)、IL-6 ( 圖 9D)、TNF-α ( 圖 9E)、IL-2 ( 圖 9F) 及 IL-1b ( 圖 9G) 的量。圖 10A至 10D顯示在用 HER2-TDB 處理後長達 15 天的不同時間點，與 Her2-CD28 雙特異性抗原結合分子 2C4/CD28 及 4D5/CD28 以及 CD28 抗體共刺激對於免疫細胞數量的影響。總免疫細胞計數顯示於圖 10A中，而圖 10B顯示 CD4 ⁺細胞計數。圖 10C顯示 CD8 ⁺細胞計數，而 NK 細胞計數顯示在圖 10D中。

<![CDATA[<110>  瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 (F. Hoffmann-La Rcohe AG)]]>
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          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  1]]>
          Met Leu Arg Leu Leu Leu Ala Leu Asn Leu Phe Pro Ser Ile Gln Val 
          1               5                   10                  15      
          Thr Gly Asn Lys Ile Leu Val Lys Gln Ser Pro Met Leu Val Ala Tyr 
                      20                  25                  30          
          Asp Asn Ala Val Asn Leu Ser Cys Lys Tyr Ser Tyr Asn Leu Phe Ser 
                  35                  40                  45              
          Arg Glu Phe Arg Ala Ser Leu His Lys Gly Leu Asp Ser Ala Val Glu 
              50                  55                  60                  
          Val Cys Val Val Tyr Gly Asn Tyr Ser Gln Gln Leu Gln Val Tyr Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Lys Thr Gly Phe Asn Cys Asp Gly Lys Leu Gly Asn Glu Ser Val Thr 
                          85                  90                  95      
          Phe Tyr Leu Gln Asn Leu Tyr Val Asn Gln Thr Asp Ile Tyr Phe Cys 
                      100                 105                 110         
          Lys Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser 
                  115                 120                 125             
          Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro 
              130                 135                 140                 
          Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile 
                          165                 170                 175     
          Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met 
                      180                 185                 190         
          Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro 
                  195                 200                 205             
          Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser 
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          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
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                      20                  25                  30          
          Thr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile Val Asn Arg Arg Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Arg Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Asn Leu Gly Pro Phe Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 
                      100                 105                 110         
          Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 
          <![CDATA[<210>  9]]>
          <![CDATA[<211>  107]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  輕鏈可變域 VL，帕妥珠單抗 CLC]]>
          <![CDATA[<400>  9]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 
                      20                  25                  30          
          Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Ser Ala Ser Phe Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
                      100                 105         
          <![CDATA[<210>  10]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  重鏈 CDR-H1, 曲妥珠單抗 CLC]]>
          <![CDATA[<400>  10]]>
          Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr Ile His 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  11]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  重鏈 CDR-H2, 曲妥珠單抗 CLC]]>
          <![CDATA[<400>  11]]>
          Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val Lys 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  12]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  重鏈 CDR-H3, 曲妥珠單抗 CLC]]>
          <![CDATA[<400>  12]]>
          Trp Gly Gly Glu Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  13]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  輕鏈 CDR-L1, 曲妥珠單抗 CLC]]>
          <![CDATA[<400>  13]]>
          Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  14]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  輕鏈 CDR-L2, 曲妥珠單抗 CLC]]>
          <![CDATA[<400>  14]]>
          Ser Ala Ser Phe Arg Tyr Thr 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  15]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  輕鏈 CDR-L3, 曲妥珠單抗 CLC]]>
          <![CDATA[<400>  15]]>
          Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  16]]>
          <![CDATA[<211>  120]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  重鏈可變域 VH, 曲妥珠單抗 CLC]]>
          <![CDATA[<400>  16]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ser Arg Trp Gly Gly Glu Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120 
          <![CDATA[<210>  17]]>
          <![CDATA[<211>  107]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  輕鏈可變域 VL，曲妥珠單抗 CLC]]>
          <![CDATA[<400>  17]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 
                      20                  25                  30          
          Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Ser Ala Ser Phe Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
                      100                 105         
          <![CDATA[<210>  18]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD28(SA) CDR-H1]]>
          <![CDATA[<400>  18]]>
          Ser Tyr Tyr Ile His 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  19]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD28(SA) CDR-H2]]>
          <![CDATA[<400>  19]]>
          Cys Ile Tyr Pro Gly Asn Val Asn Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 
          1               5                   10                  15      
          Asp 
          <![CDATA[<210>  20]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD28(SA) CDR-H3]]>
          <![CDATA[<400>  20]]>
          Ser His Tyr Gly Leu Asp Trp Asn Phe Asp Val 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  21]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD28(SA) CDR-L1]]>
          <![CDATA[<400>  21]]>
          His Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Val Trp Leu Asn 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  22]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD28(SA) CDR-L2]]>
          <![CDATA[<400>  22]]>
          Lys Ala Ser Asn Leu His Thr 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  23]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD28(SA) CDR-L3]]>
          <![CDATA[<400>  23]]>
          Gln Gln Gly Gln Thr Tyr Pro Tyr Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  24]]>
          <![CDATA[<211>  120]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD28(SA) VH]]>
          <![CDATA[<400>  24]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Cys Ile Tyr Pro Gly Asn Val Asn Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 
                          85                  90                  95      
          Thr Arg Ser His Tyr Gly Leu Asp Trp Asn Phe Asp Val Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120 
          <![CDATA[<210>  25]]>
          <![CDATA[<211>  107]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD28(SA) VL]]>
          <![CDATA[<400>  25]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys His Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Val Trp 
                      20                  25                  30          
          Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Thr Tyr Pro Tyr 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
                      100                 105         
          <![CDATA[<210>  26]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD28 CDR-H1 共有序列]]>
          <![CDATA[<400>  26]]>
          Ser Tyr Tyr Ile His 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  27]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD28 CDR-H2 共有序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  變異體]]>
          <![CDATA[<222>  (5)..(5)]]>
          <![CDATA[<223>  Gly 或 Arg]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  變異體]]>
          <![CDATA[<222>  (6)..(6)]]>
          <![CDATA[<223>  Asn or Asp]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  變異體]]>
          <![CDATA[<222>  (7)..(7)]]>
          <![CDATA[<223>  Val 或 Gly]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  變異體]]>
          <![CDATA[<222>  (8)..(8)]]>
          <![CDATA[<223>  Asn, Gln 或 Ala]]>
          <![CDATA[<400>  27]]>
          Ser Ile Tyr Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 
          1               5                   10                  15      
          Asp 
          <![CDATA[<210>  28]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD28 CDR-H3 共有序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  變異體]]>
          <![CDATA[<222>  (5)..(5)]]>
          <![CDATA[<223>  Leu 或 Ala]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  變異體]]>
          <![CDATA[<222>  (7)..(7)]]>
          <![CDATA[<223>  Trp, His, Tyr 或 Phe]]>
          <![CDATA[<400>  28]]>
          Ser His Tyr Gly Xaa Asp Xaa Asn Phe Asp Val 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  29]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD28 CDR-L1 共有序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  變異體]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(1)]]>
          <![CDATA[<223>  His 或 Arg]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  變異體]]>
          <![CDATA[<222>  (5)..(5)]]>
          <![CDATA[<223>  Asn 或 Gly]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  變異體]]>
          <![CDATA[<222>  (7)..(7)]]>
          <![CDATA[<223>  Tyr 或 Ser]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  變異體]]>
          <![CDATA[<222>  (8)..(8)]]>
          <![CDATA[<223>  Val 或 Asn]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  變異體]]>
          <![CDATA[<222>  (9)..(9)]]>
          <![CDATA[<223>  Trp, His, Phe 或 Tyr]]>
          <![CDATA[<400>  29]]>
          Xaa Ala Ser Gln Xaa Ile Xaa Xaa Xaa Leu Asn 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  30]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD28 CDR-L2 共有序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  變異體]]>
          <![CDATA[<222>  (1)..(1)]]>
          <![CDATA[<223>  Lys 或 Tyr]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  變異體]]>
          <![CDATA[<222>  (2)..(2)]]>
          <![CDATA[<223>  Ala 或 Gly]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  變異體]]>
          <![CDATA[<222>  (4)..(4)]]>
          <![CDATA[<223>  Asn 或 Ser]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  變異體]]>
          <![CDATA[<222>  (6)..(6)]]>
          <![CDATA[<223>  His 或 Tyr]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  變異體]]>
          <![CDATA[<222>  (7)..(7)]]>
          <![CDATA[<223>  Thr 或 Ser]]>
          <![CDATA[<400>  30]]>
          Xaa Xaa Ser Xaa Leu Xaa Xaa 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  31]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD28 CDR-L3 共有序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  變異體]]>
          <![CDATA[<222>  (3)..(3)]]>
          <![CDATA[<223>  Gly 或 Ala]]>
          <![CDATA[<400>  31]]>
          Gln Gln Xaa Gln Thr Tyr Pro Tyr Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  32]]>
          <![CDATA[<211>  120]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD28 VH 變異體 a]]>
          <![CDATA[<400>  32]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Ser Ile Tyr Pro Gly Asn Val Asn Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 
                          85                  90                  95      
          Thr Arg Ser His Tyr Gly Leu Asp Trp Asn Phe Asp Val Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120 
          <![CDATA[<210>  33]]>
          <![CDATA[<211>  120]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD28 VH 變異體 b]]>
          <![CDATA[<400>  33]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Ser Ile Tyr Pro Gly Asn Val Gln Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 
                          85                  90                  95      
          Thr Arg Ser His Tyr Gly Leu Asp His Asn Phe Asp Val Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120 
          <![CDATA[<210>  34]]>
          <![CDATA[<211>  120]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD28 VH 變異體 c]]>
          <![CDATA[<400>  34]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Ser Ile Tyr Pro Gly Asn Val Gln Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 
                          85                  90                  95      
          Thr Arg Ser His Tyr Gly Ala Asp His Asn Phe Asp Val Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120 
          <![CDATA[<210>  35]]>
          <![CDATA[<211>  120]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD28 VH 變異體 d]]>
          <![CDATA[<400>  35]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Ser Ile Tyr Pro Arg Asp Gly Gln Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 
                          85                  90                  95      
          Thr Arg Ser His Tyr Gly Leu Asp Tyr Asn Phe Asp Val Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120 
          <![CDATA[<210>  36]]>
          <![CDATA[<211>  120]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD28 VH 變異體 e]]>
          <![CDATA[<400>  36]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Ser Ile Tyr Pro Gly Asn Val Gln Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 
                          85                  90                  95      
          Thr Arg Ser His Tyr Gly Leu Asp Trp Asn Phe Asp Val Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120 
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          <![CDATA[<400>  37]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Ser Ile Tyr Pro Gly Asn Val Gln Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 
                          85                  90                  95      
          Thr Arg Ser His Tyr Gly Leu Asp Phe Asn Phe Asp Val Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120 
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          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Ser Ile Tyr Pro Arg Asn Val Gln Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 
                          85                  90                  95      
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          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 
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          Gly Ser Ile Tyr Pro Arg Asp Val Gln Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
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              50                  55                  60                  
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          Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
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                      100                 105         
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          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys His Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr 
                      20                  25                  30          
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          Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
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          Asp 
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          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  61]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD28(變異體 15) CDR-L1]]>
          <![CDATA[<400>  61]]>
          His Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Val Phe Leu Asn 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  62]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD28(變異體 15) CDR-L2]]>
          <![CDATA[<400>  62]]>
          Lys Ala Ser Asn Leu His Thr 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  63]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD28(變異體 15) CDR-L3]]>
          <![CDATA[<400>  63]]>
          Gln Gln Gly Gln Thr Tyr Pro Tyr Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  64]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD28(變異體 29) CDR-H1]]>
          <![CDATA[<400>  64]]>
          Ser Tyr Tyr Ile His 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  65]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD28(變異體 29) CDR-H2]]>
          <![CDATA[<400>  65]]>
          Ser Ile Tyr Pro Gly Asn Val Asn Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 
          1               5                   10                  15      
          Asp 
          <![CDATA[<210>  66]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD28(變異體 29) CDR-H3]]>
          <![CDATA[<400>  66]]>
          Ser His Tyr Gly Leu Asp Trp Asn Phe Asp Val 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  67]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD28(變異體 29) CDR-L1]]>
          <![CDATA[<400>  67]]>
          His Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Val Trp Leu Asn 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  68]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD28(變異體 29) CDR-L2]]>
          <![CDATA[<400>  68]]>
          Lys Ala Ser Asn Leu His Thr 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  69]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD28(變異體 29) CDR-L3]]>
          <![CDATA[<400>  69]]>
          Gln Gln Gly Gln Thr Tyr Pro Tyr Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  70]]>
          <![CDATA[<211>  225]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  Fc 臼 PGLALA]]>
          <![CDATA[<400>  70]]>
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                      20                  25                  30          
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                  35                  40                  45              
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
              50                  55                  60                  
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
                          85                  90                  95      
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                      100                 105                 110         
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                  115                 120                 125             
          Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
              130                 135                 140                 
          Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                  195                 200                 205             
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
              210                 215                 220                 
          Pro 
          225 
          <![CDATA[<210>  71]]>
          <![CDATA[<211>  225]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  Fc 杵 PGLALA]]>
          <![CDATA[<400>  71]]>
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                      20                  25                  30          
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                  35                  40                  45              
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
              50                  55                  60                  
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
                          85                  90                  95      
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                      100                 105                 110         
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                  115                 120                 125             
          Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
              130                 135                 140                 
          Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                  195                 200                 205             
          His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
              210                 215                 220                 
          Pro 
          225 
          <![CDATA[<210>  72]]>
          <![CDATA[<211>  448]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  VH (CD28 SA) CH1 (EE)- Fc 杵 PGLALA]]>
          <![CDATA[<400>  72]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Cys Ile Tyr Pro Gly Asn Val Asn Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 
                          85                  90                  95      
          Thr Arg Ser His Tyr Gly Leu Asp Trp Asn Phe Asp Val Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 
                  115                 120                 125             
          Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 
                          165                 170                 175     
          Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 
                      180                 185                 190         
          Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 
                  195                 200                 205             
          Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 
              210                 215                 220                 
          Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 
                          245                 250                 255     
          Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 
                      260                 265                 270         
          Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 
                  275                 280                 285             
          Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 
              290                 295                 300                 
          Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu 
                          325                 330                 335     
          Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 
                      340                 345                 350         
          Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 
                  355                 360                 365             
          Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 
              370                 375                 380                 
          Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 
          385                 390                 395                 400 
          Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 
                          405                 410                 415     
          Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 
                      420                 425                 430         
          Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 
                  435                 440                 445             
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          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Ser Ile Tyr Pro Arg Asn Val Gln Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 
                          85                  90                  95      
          Thr Arg Ser His Tyr Gly Leu Asp His Asn Phe Asp Val Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 
                  115                 120                 125             
          Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 
                          165                 170                 175     
          Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 
                      180                 185                 190         
          Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 
                  195                 200                 205             
          Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 
              210                 215                 220                 
          Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly 
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          Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 
                          245                 250                 255     
          Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 
                      260                 265                 270         
          Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 
                  275                 280                 285             
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              290                 295                 300                 
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          305                 310                 315                 320 
          Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu 
                          325                 330                 335     
          Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 
                      340                 345                 350         
          Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 
                  355                 360                 365             
          Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 
              370                 375                 380                 
          Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 
          385                 390                 395                 400 
          Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 
                          405                 410                 415     
          Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 
                      420                 425                 430         
          Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 
                  435                 440                 445             
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          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Ser Ile Tyr Pro Gly Asn Val Gln Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 
                          85                  90                  95      
          Thr Arg Ser His Tyr Gly Leu Asp Phe Asn Phe Asp Val Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 
                  115                 120                 125             
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              130                 135                 140                 
          Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 
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          Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 
                          165                 170                 175     
          Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 
                      180                 185                 190         
          Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 
                  195                 200                 205             
          Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 
              210                 215                 220                 
          Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly 
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                          245                 250                 255     
          Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 
                      260                 265                 270         
          Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 
                  275                 280                 285             
          Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 
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          305                 310                 315                 320 
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                      340                 345                 350         
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                  355                 360                 365             
          Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 
              370                 375                 380                 
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                      420                 425                 430         
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          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
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          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
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                  35                  40                  45              
          Ala Ser Ile Tyr Pro Gly Asn Val Ala Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 
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          145                 150                 155                 160 
          Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 
                          165                 170                 175     
          Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 
                      180                 185                 190         
          Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 
                  195                 200                 205             
          Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 
              210                 215                 220                 
          Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 
                          245                 250                 255     
          Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 
                      260                 265                 270         
          Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 
                  275                 280                 285             
          Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 
              290                 295                 300                 
          Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu 
                          325                 330                 335     
          Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 
                      340                 345                 350         
          Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 
                  355                 360                 365             
          Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 
              370                 375                 380                 
          Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 
          385                 390                 395                 400 
          Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 
                          405                 410                 415     
          Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 
                      420                 425                 430         
          Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 
                  435                 440                 445             
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          <![CDATA[<400>  76]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Ser Ile Tyr Pro Gly Asn Val Gln Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 
                          85                  90                  95      
          Thr Arg Ser His Tyr Gly Leu Asp Trp Asn Phe Asp Val Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 
                  115                 120                 125             
          Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 
                          165                 170                 175     
          Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 
                      180                 185                 190         
          Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 
                  195                 200                 205             
          Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 
              210                 215                 220                 
          Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 
                          245                 250                 255     
          Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 
                      260                 265                 270         
          Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 
                  275                 280                 285             
          Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 
              290                 295                 300                 
          Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu 
                          325                 330                 335     
          Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 
                      340                 345                 350         
          Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 
                  355                 360                 365             
          Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 
              370                 375                 380                 
          Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 
          385                 390                 395                 400 
          Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 
                          405                 410                 415     
          Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 
                      420                 425                 430         
          Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 
                  435                 440                 445             
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          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Ser Ile Tyr Pro Gly Asn Val Gln Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 
                          85                  90                  95      
          Thr Arg Ser His Tyr Gly Leu Asp His Asn Phe Asp Val Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 
                  115                 120                 125             
          Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 
                          165                 170                 175     
          Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 
                      180                 185                 190         
          Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 
                  195                 200                 205             
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              210                 215                 220                 
          Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 
                          245                 250                 255     
          Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 
                      260                 265                 270         
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                  275                 280                 285             
          Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 
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          Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu 
                          325                 330                 335     
          Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 
                      340                 345                 350         
          Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 
                  355                 360                 365             
          Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 
              370                 375                 380                 
          Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 
          385                 390                 395                 400 
          Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 
                          405                 410                 415     
          Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 
                      420                 425                 430         
          Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 
                  435                 440                 445             
          <![CDATA[<210>  78]]>
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          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Ser Ile Tyr Pro Gly Asn Val Asn Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 
                          85                  90                  95      
          Thr Arg Ser His Tyr Gly Leu Asp Trp Asn Phe Asp Val Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 
                  115                 120                 125             
          Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 
                          165                 170                 175     
          Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 
                      180                 185                 190         
          Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 
                  195                 200                 205             
          Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 
              210                 215                 220                 
          Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly 
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          Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 
                          245                 250                 255     
          Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 
                      260                 265                 270         
          Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 
                  275                 280                 285             
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          Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 
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          Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu 
                          325                 330                 335     
          Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 
                      340                 345                 350         
          Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 
                  355                 360                 365             
          Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 
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          Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 
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          Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 
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          Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 
                  435                 440                 445             
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          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Ser Ile Tyr Pro Gly Asn Val Asn Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Thr Arg Ser His Tyr Gly Leu Asp Trp Asn Phe Asp Val Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
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          Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 
                          165                 170                 175     
          Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 
                      180                 185                 190         
          Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 
                  195                 200                 205             
          Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 
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                      260                 265                 270         
          Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 
                  275                 280                 285             
          Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 
              290                 295                 300                 
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                          325                 330                 335     
          Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 
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                  355                 360                 365             
          Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 
              370                 375                 380                 
          Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 
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          Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 
                  435                 440                 445             
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          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
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          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys His Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Val Trp 
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                  35                  40                  45              
          Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Thr Tyr Pro Tyr 
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          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys His Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Val His 
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          Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
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          Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 
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          Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
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          Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
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          Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
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          1               5                   10                  15      
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                      20                  25                  30          
          Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Lys Ala Ser Asn Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Thr Tyr Pro Tyr 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 
                      100                 105                 110         
          Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Arg Lys Leu Lys Ser Gly 
                  115                 120                 125             
          Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 
              130                 135                 140                 
          Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 
                      180                 185                 190         
          Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 
                  195                 200                 205             
          Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 
          <![CDATA[<210>  87]]>
          <![CDATA[<211>  225]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  Fc 臼 PGLALA, HYRF]]>
          <![CDATA[<400>  87]]>
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 
                      20                  25                  30          
          Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 
                  35                  40                  45              
          Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 
              50                  55                  60                  
          His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 
                          85                  90                  95      
          Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile 
                      100                 105                 110         
          Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 
                  115                 120                 125             
          Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 
              130                 135                 140                 
          Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 
                          165                 170                 175     
          Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val 
                      180                 185                 190         
          Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 
                  195                 200                 205             
          His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 
              210                 215                 220                 
          Pro 
          225 
          <![CDATA[<210>  88]]>
          <![CDATA[<211>  15]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  Avi 標籤]]>
          <![CDATA[<400>  88]]>
          Gly Leu Asn Asp Ile Phe Glu Ala Gln Lys Ile Glu Trp His Glu 
          1               5                   10                  15  
          <![CDATA[<210>  89]]>
          <![CDATA[<211>  437]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD28(SA) VL-CH1 hu IgG1 Fc 杵 PGLALA]]>
          <![CDATA[<400>  89]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys His Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Val Trp 
                      20                  25                  30          
          Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Thr Tyr Pro Tyr 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Ser Ser Ala Ser Thr 
                      100                 105                 110         
          Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser 
                  115                 120                 125             
          Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu 
              130                 135                 140                 
          Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His 
          145                 150                 155                 160 
          Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser 
                          165                 170                 175     
          Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys 
                      180                 185                 190         
          Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu 
                  195                 200                 205             
          Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 
              210                 215                 220                 
          Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 
          225                 230                 235                 240 
          Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 
                          245                 250                 255     
          Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 
                      260                 265                 270         
          Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 
                  275                 280                 285             
          Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 
              290                 295                 300                 
          Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 
                          325                 330                 335     
          Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys 
                      340                 345                 350         
          Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 
                  355                 360                 365             
          Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 
              370                 375                 380                 
          Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 
          385                 390                 395                 400 
          Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 
                          405                 410                 415     
          Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 
                      420                 425                 430         
          Leu Ser Leu Ser Pro 
                  435         
          <![CDATA[<210>  90]]>
          <![CDATA[<211>  227]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD28(SA) VH-κ]]>
          <![CDATA[<400>  90]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Cys Ile Tyr Pro Gly Asn Val Asn Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 
                          85                  90                  95      
          Thr Arg Ser His Tyr Gly Leu Asp Trp Asn Phe Asp Val Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Val Ala Ala Pro Ser Val 
                  115                 120                 125             
          Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser 
              130                 135                 140                 
          Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val 
                          165                 170                 175     
          Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu 
                      180                 185                 190         
          Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu 
                  195                 200                 205             
          Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg 
              210                 215                 220                 
          Gly Glu Cys 
          225         
          <![CDATA[<210>  91]]>
          <![CDATA[<211>  437]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  91]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys His Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Val Tyr 
                      20                  25                  30          
          Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Thr Tyr Pro Tyr 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Ser Ser Ala Ser Thr 
                      100                 105                 110         
          Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser 
                  115                 120                 125             
          Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu 
              130                 135                 140                 
          Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His 
          145                 150                 155                 160 
          Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser 
                          165                 170                 175     
          Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys 
                      180                 185                 190         
          Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu 
                  195                 200                 205             
          Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 
              210                 215                 220                 
          Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 
          225                 230                 235                 240 
          Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 
                          245                 250                 255     
          Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 
                      260                 265                 270         
          Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 
                  275                 280                 285             
          Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 
              290                 295                 300                 
          Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 
                          325                 330                 335     
          Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys 
                      340                 345                 350         
          Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 
                  355                 360                 365             
          Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 
              370                 375                 380                 
          Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 
          385                 390                 395                 400 
          Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 
                          405                 410                 415     
          Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 
                      420                 425                 430         
          Leu Ser Leu Ser Pro 
                  435         
          <![CDATA[<210>  92]]>
          <![CDATA[<211>  227]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD28(SA_變異體 8) VH-κ]]>
          <![CDATA[<400>  92]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Ser Ile Tyr Pro Gly Asn Val Gln Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 
                          85                  90                  95      
          Thr Arg Ser His Tyr Gly Leu Asp Phe Asn Phe Asp Val Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Val Ala Ala Pro Ser Val 
                  115                 120                 125             
          Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser 
              130                 135                 140                 
          Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val 
                          165                 170                 175     
          Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu 
                      180                 185                 190         
          Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu 
                  195                 200                 205             
          Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg 
              210                 215                 220                 
          Gly Glu Cys 
          225         
          <![CDATA[<210>  93]]>
          <![CDATA[<211>  437]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD28(SA_變異體 15) VL-CH1 hu IgG1 Fc 杵 PGLALA]]>
          <![CDATA[<400>  93]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys His Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Val Phe 
                      20                  25                  30          
          Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Thr Tyr Pro Tyr 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Ser Ser Ala Ser Thr 
                      100                 105                 110         
          Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser 
                  115                 120                 125             
          Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu 
              130                 135                 140                 
          Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His 
          145                 150                 155                 160 
          Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser 
                          165                 170                 175     
          Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys 
                      180                 185                 190         
          Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu 
                  195                 200                 205             
          Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 
              210                 215                 220                 
          Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 
          225                 230                 235                 240 
          Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 
                          245                 250                 255     
          Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 
                      260                 265                 270         
          Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 
                  275                 280                 285             
          Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 
              290                 295                 300                 
          Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 
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          Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 
                          325                 330                 335     
          Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys 
                      340                 345                 350         
          Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 
                  355                 360                 365             
          Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 
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          Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 
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          Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 
                          405                 410                 415     
          Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 
                      420                 425                 430         
          Leu Ser Leu Ser Pro 
                  435         
          <![CDATA[<210>  94]]>
          <![CDATA[<211>  227]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD28(SA_變異體 15) VH-κ]]>
          <![CDATA[<400>  94]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Ser Ile Tyr Pro Gly Asn Val Gln Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 
                          85                  90                  95      
          Thr Arg Ser His Tyr Gly Leu Asp Trp Asn Phe Asp Val Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Val Ala Ala Pro Ser Val 
                  115                 120                 125             
          Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser 
              130                 135                 140                 
          Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val 
                          165                 170                 175     
          Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu 
                      180                 185                 190         
          Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu 
                  195                 200                 205             
          Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg 
              210                 215                 220                 
          Gly Glu Cys 
          225         
          <![CDATA[<210>  95]]>
          <![CDATA[<211>  227]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD28(SA_變異體 29) VH-κ]]>
          <![CDATA[<400>  95]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Ser Ile Tyr Pro Gly Asn Val Asn Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 
                          85                  90                  95      
          Thr Arg Ser His Tyr Gly Leu Asp Trp Asn Phe Asp Val Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Val Ala Ala Pro Ser Val 
                  115                 120                 125             
          Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser 
              130                 135                 140                 
          Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val 
                          165                 170                 175     
          Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu 
                      180                 185                 190         
          Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu 
                  195                 200                 205             
          Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg 
              210                 215                 220                 
          Gly Glu Cys 
          225         
          <![CDATA[<210>  96]]>
          <![CDATA[<211>  447]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  Her2 (帕妥珠單抗 CLC) hu IgG1 VH-CH1 "EE" Fc 臼野生型]]>
          <![CDATA[<400>  96]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Thr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile Val Asn Arg Arg Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Arg Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Asn Leu Gly Pro Phe Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 
                      100                 105                 110         
          Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 
                  115                 120                 125             
          Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 
              130                 135                 140                 
          Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 
          145                 150                 155                 160 
          Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 
                          165                 170                 175     
          Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 
                      180                 185                 190         
          Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 
                  195                 200                 205             
          Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 
              210                 215                 220                 
          Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro 
          225                 230                 235                 240 
          Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 
                          245                 250                 255     
          Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 
                      260                 265                 270         
          Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 
                  275                 280                 285             
          Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 
              290                 295                 300                 
          Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 
          305                 310                 315                 320 
          Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 
                          325                 330                 335     
          Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr 
                      340                 345                 350         
          Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser 
                  355                 360                 365             
          Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 
              370                 375                 380                 
          Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 
                          405                 410                 415     
          Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 
                      420                 425                 430         
          Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 
                  435                 440                 445         
          <![CDATA[<210>  97]]>
          <![CDATA[<211>  214]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  Her2 (帕妥珠單抗 CLC) VL-κ "RK"]]>
          <![CDATA[<400>  97]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 
                      20                  25                  30          
          Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Ser Ala Ser Phe Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 
                      100                 105                 110         
          Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Arg Lys Leu Lys Ser Gly 
                  115                 120                 125             
          Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 
              130                 135                 140                 
          Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 
                      180                 185                 190         
          Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 
                  195                 200                 205             
          Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 
          <![CDATA[<210>  98]]>
          <![CDATA[<211>  447]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  Her2 (帕妥珠單抗 CLC) hu IgG1 VH-CH1 "EE" Fc 臼 PGLALA]]>
          <![CDATA[<400>  98]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Thr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile Val Asn Arg Arg Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Arg Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Asn Leu Gly Pro Phe Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 
                      100                 105                 110         
          Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 
                  115                 120                 125             
          Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 
              130                 135                 140                 
          Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 
          145                 150                 155                 160 
          Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 
                          165                 170                 175     
          Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 
                      180                 185                 190         
          Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 
                  195                 200                 205             
          Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 
              210                 215                 220                 
          Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro 
          225                 230                 235                 240 
          Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 
                          245                 250                 255     
          Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 
                      260                 265                 270         
          Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 
                  275                 280                 285             
          Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 
              290                 295                 300                 
          Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 
          305                 310                 315                 320 
          Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys 
                          325                 330                 335     
          Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr 
                      340                 345                 350         
          Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser 
                  355                 360                 365             
          Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 
              370                 375                 380                 
          Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 
                          405                 410                 415     
          Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 
                      420                 425                 430         
          Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 
                  435                 440                 445         
          <![CDATA[<210>  99]]>
          <![CDATA[<211>  437]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  Her2 (帕妥珠單抗 CLC) VL-CH1 hu IgG1 Fc 杵 PGLALA]]>
          <![CDATA[<400>  99]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 
                      20                  25                  30          
          Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Ser Ala Ser Phe Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Ser Ser Ala Ser Thr 
                      100                 105                 110         
          Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser 
                  115                 120                 125             
          Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu 
              130                 135                 140                 
          Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His 
          145                 150                 155                 160 
          Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser 
                          165                 170                 175     
          Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys 
                      180                 185                 190         
          Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu 
                  195                 200                 205             
          Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 
              210                 215                 220                 
          Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 
          225                 230                 235                 240 
          Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 
                          245                 250                 255     
          Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 
                      260                 265                 270         
          Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 
                  275                 280                 285             
          Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 
              290                 295                 300                 
          Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 
                          325                 330                 335     
          Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys 
                      340                 345                 350         
          Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 
                  355                 360                 365             
          Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 
              370                 375                 380                 
          Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser 
          385                 390                 395                 400 
          Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 
                          405                 410                 415     
          Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 
                      420                 425                 430         
          Leu Ser Leu Ser Pro 
                  435         
          <![CDATA[<210>  100]]>
          <![CDATA[<211>  226]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  Her2 (帕妥珠單抗 CLC) VH-κ]]>
          <![CDATA[<400>  100]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Thr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile Val Asn Arg Arg Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Arg Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Asn Leu Gly Pro Phe Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 
                      100                 105                 110         
          Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Val Ala Ala Pro Ser Val Phe 
                  115                 120                 125             
          Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val 
              130                 135                 140                 
          Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp 
          145                 150                 155                 160 
          Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr 
                          165                 170                 175     
          Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr 
                      180                 185                 190         
          Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val 
                  195                 200                 205             
          Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly 
              210                 215                 220                 
          Glu Cys 
          225     
          <![CDATA[<210>  101]]>
          <![CDATA[<211>  448]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  Her2 (曲妥珠單抗 CLC) hu IgG1 VH-CH1 "EE" Fc 臼 PGLALA]]>
          <![CDATA[<400>  101]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ser Arg Trp Gly Gly Glu Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 
                  115                 120                 125             
          Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 
                          165                 170                 175     
          Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 
                      180                 185                 190         
          Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 
                  195                 200                 205             
          Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 
              210                 215                 220                 
          Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 
                          245                 250                 255     
          Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 
                      260                 265                 270         
          Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 
                  275                 280                 285             
          Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 
              290                 295                 300                 
          Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu 
                          325                 330                 335     
          Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys 
                      340                 345                 350         
          Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 
                  355                 360                 365             
          Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 
              370                 375                 380                 
          Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 
          385                 390                 395                 400 
          Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp 
                          405                 410                 415     
          Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 
                      420                 425                 430         
          Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 
                  435                 440                 445             
          <![CDATA[<210>  102]]>
          <![CDATA[<211>  437]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  Her2 (曲妥珠單抗 CLC) VL-CH1 hu IgG1 Fc 杵 PGLALA]]>
          <![CDATA[<400>  102]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 
                      20                  25                  30          
          Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Ser Ala Ser Phe Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Ser Ser Ala Ser Thr 
                      100                 105                 110         
          Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser 
                  115                 120                 125             
          Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu 
              130                 135                 140                 
          Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His 
          145                 150                 155                 160 
          Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser 
                          165                 170                 175     
          Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys 
                      180                 185                 190         
          Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu 
                  195                 200                 205             
          Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 
              210                 215                 220                 
          Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 
          225                 230                 235                 240 
          Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 
                          245                 250                 255     
          Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 
                      260                 265                 270         
          Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 
                  275                 280                 285             
          Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 
              290                 295                 300                 
          Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 
          305                 310                 315                 320 
          Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 
                          325                 330                 335     
          Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys 
                      340                 345                 350         
          Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 
                  355                 360                 365             
          Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 
              370                 375                 380                 
          Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser 
          385                 390                 395                 400 
          Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 
                          405                 410                 415     
          Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 
                      420                 425                 430         
          Leu Ser Leu Ser Pro 
                  435         
          <![CDATA[<210>  103]]>
          <![CDATA[<211>  1245]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  103]]>
          Met Glu Leu Ala Ala Leu Cys Arg Trp Gly Leu Leu Leu Ala Leu Leu 
          1               5                   10                  15      
          Pro Pro Gly Ala Ala Ser Thr Gln Val Cys Thr Gly Thr Asp Met Lys 
                      20                  25                  30          
          Leu Arg Leu Pro Ala Ser Pro Glu Thr His Leu Asp Met Leu Arg His 
                  35                  40                  45              
          Leu Tyr Gln Gly Cys Gln Val Val Gln Gly Asn Leu Glu Leu Thr Tyr 
              50                  55                  60                  
          Leu Pro Thr Asn Ala Ser Leu Ser Phe Leu Gln Asp Ile Gln Glu Val 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Gly Tyr Val Leu Ile Ala His Asn Gln Val Arg Gln Val Pro Leu 
                          85                  90                  95      
          Gln Arg Leu Arg Ile Val Arg Gly Thr Gln Leu Phe Glu Asp Asn Tyr 
                      100                 105                 110         
          Ala Leu Ala Val Leu Asp Asn Gly Asp Pro Leu Asn Asn Thr Thr Pro 
                  115                 120                 125             
          Val Thr Gly Ala Ser Pro Gly Gly Leu Arg Glu Leu Gln Leu Arg Ser 
              130                 135                 140                 
          Leu Thr Glu Ile Leu Lys Gly Gly Val Leu Ile Gln Arg Asn Pro Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Leu Cys Tyr Gln Asp Thr Ile Leu Trp Lys Asp Ile Phe His Lys Asn 
                          165                 170                 175     
          Asn Gln Leu Ala Leu Thr Leu Ile Asp Thr Asn Arg Ser Arg Ala Cys 
                      180                 185                 190         
          His Pro Cys Ser Pro Met Cys Lys Gly Ser Arg Cys Trp Gly Glu Ser 
                  195                 200                 205             
          Ser Glu Asp Cys Gln Ser Leu Thr Arg Thr Val Cys Ala Gly Gly Cys 
              210                 215                 220                 
          Ala Arg Cys Lys Gly Pro Leu Pro Thr Asp Cys Cys His Glu Gln Cys 
          225                 230                 235                 240 
          Ala Ala Gly Cys Thr Gly Pro Lys His Ser Asp Cys Leu Ala Cys Leu 
                          245                 250                 255     
          His Phe Asn His Ser Gly Ile Cys Glu Leu His Cys Pro Ala Leu Val 
                      260                 265                 270         
          Thr Tyr Asn Thr Asp Thr Phe Glu Ser Met Pro Asn Pro Glu Gly Arg 
                  275                 280                 285             
          Tyr Thr Phe Gly Ala Ser Cys Val Thr Ala Cys Pro Tyr Asn Tyr Leu 
              290                 295                 300                 
          Ser Thr Asp Val Gly Ser Cys Thr Leu Val Cys Pro Leu His Asn Gln 
          305                 310                 315                 320 
          Glu Val Thr Ala Glu Asp Gly Thr Gln Arg Cys Glu Lys Cys Ser Lys 
                          325                 330                 335     
          Pro Cys Ala Arg Val Cys Tyr Gly Leu Gly Met Glu His Leu Arg Glu 
                      340                 345                 350         
          Val Arg Ala Val Thr Ser Ala Asn Ile Gln Glu Phe Ala Gly Cys Lys 
                  355                 360                 365             
          Lys Ile Phe Gly Ser Leu Ala Phe Leu Pro Glu Ser Phe Asp Gly Asp 
              370                 375                 380                 
          Pro Ala Ser Asn Thr Ala Glu Thr Leu Glu Glu Ile Thr Gly Tyr Leu 
          385                 390                 395                 400 
          Tyr Ile Ser Ala Trp Pro Asp Ser Leu Pro Asp Leu Ser Val Phe Gln 
                          405                 410                 415     
          Asn Leu Gln Val Ile Arg Gly Arg Ile Leu His Asn Gly Ala Tyr Ser 
                      420                 425                 430         
          Leu Thr Leu Gln Gly Leu Gly Ile Ser Trp Leu Gly Leu Arg Ser Leu 
                  435                 440                 445             
          Arg Glu Leu Gly Ser Gly Leu Ala Leu Ile His His Asn Thr His Leu 
              450                 455                 460                 
          Cys Phe Val His Thr Val Pro Trp Asp Gln Leu Phe Arg Asn Pro His 
          465                 470                 475                 480 
          Gln Ala Leu Leu His Thr Ala Asn Arg Pro Glu Asp Glu Cys Val Gly 
                          485                 490                 495     
          Glu Gly Leu Ala Cys His Gln Leu Cys Ala Arg Gly His Cys Trp Gly 
                      500                 505                 510         
          Pro Gly Pro Thr Gln Cys Val Asn Cys Ser Gln Phe Leu Arg Gly Gln 
                  515                 520                 525             
          Glu Cys Val Glu Glu Cys Arg Val Leu Gln Gly Leu Pro Arg Glu Tyr 
              530                 535                 540                 
          Val Asn Ala Arg His Cys Leu Pro Cys His Pro Glu Cys Gln Pro Gln 
          545                 550                 555                 560 
          Asn Gly Ser Val Thr Cys Phe Gly Pro Glu Ala Asp Gln Cys Val Ala 
                          565                 570                 575     
          Cys Ala His Tyr Lys Asp Pro Pro Phe Cys Val Ala Arg Cys Pro Ser 
                      580                 585                 590         
          Gly Val Lys Pro Asp Leu Ser Tyr Met Pro Ile Trp Lys Phe Pro Asp 
                  595                 600                 605             
          Glu Glu Gly Ala Cys Gln Pro Cys Pro Ile Asn Cys Thr His Ser Cys 
              610                 615                 620                 
          Val Asp Leu Asp Asp Lys Gly Cys Pro Ala Glu Gln Arg Ala Ser Pro 
          625                 630                 635                 640 
          Leu Thr Ser Ile Ile Ser Ala Val Val Gly Ile Leu Leu Val Val Val 
                          645                 650                 655     
          Leu Gly Val Val Phe Gly Ile Leu Ile Lys Arg Arg Gln Gln Lys Ile 
                      660                 665                 670         
          Arg Lys Tyr Thr Met Arg Arg Leu Leu Gln Glu Thr Glu Leu Val Glu 
                  675                 680                 685             
          Pro Leu Thr Pro Ser Gly Ala Met Pro Asn Gln Ala Gln Met Arg Ile 
              690                 695                 700                 
          Leu Lys Glu Thr Glu Leu Arg Lys Val Lys Val Leu Gly Ser Gly Ala 
          705                 710                 715                 720 
          Phe Gly Thr Val Tyr Lys Gly Ile Trp Ile Pro Asp Gly Glu Asn Val 
                          725                 730                 735     
          Lys Ile Pro Val Ala Ile Lys Val Leu Arg Glu Asn Thr Ser Pro Lys 
                      740                 745                 750         
          Ala Asn Lys Glu Ile Leu Asp Glu Ala Tyr Val Met Ala Gly Val Gly 
                  755                 760                 765             
          Ser Pro Tyr Val Ser Arg Leu Leu Gly Ile Cys Leu Thr Ser Thr Val 
              770                 775                 780                 
          Gln Leu Val Thr Gln Leu Met Pro Tyr Gly Cys Leu Leu Asp His Val 
          785                 790                 795                 800 
          Arg Glu Asn Arg Gly Arg Leu Gly Ser Gln Asp Leu Leu Asn Trp Cys 
                          805                 810                 815     
          Met Gln Ile Ala Lys Gly Met Ser Tyr Leu Glu Asp Val Arg Leu Val 
                      820                 825                 830         
          His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Val Leu Val Lys Ser Pro Asn His 
                  835                 840                 845             
          Val Lys Ile Thr Asp Phe Gly Leu Ala Arg Leu Leu Asp Ile Asp Glu 
              850                 855                 860                 
          Thr Glu Tyr His Ala Asp Gly Gly Lys Val Pro Ile Lys Trp Met Ala 
          865                 870                 875                 880 
          Leu Glu Ser Ile Leu Arg Arg Arg Phe Thr His Gln Ser Asp Val Trp 
                          885                 890                 895     
          Ser Tyr Gly Val Thr Val Trp Glu Leu Met Thr Phe Gly Ala Lys Pro 
                      900                 905                 910         
          Tyr Asp Gly Ile Pro Ala Arg Glu Ile Pro Asp Leu Leu Glu Lys Gly 
                  915                 920                 925             
          Glu Arg Leu Pro Gln Pro Pro Ile Cys Thr Ile Asp Val Tyr Met Ile 
              930                 935                 940                 
          Met Val Lys Cys Trp Met Ile Asp Ser Glu Cys Arg Pro Arg Phe Arg 
          945                 950                 955                 960 
          Glu Leu Val Ser Glu Phe Ser Arg Met Ala Arg Asp Pro Gln Arg Phe 
                          965                 970                 975     
          Val Val Ile Gln Asn Glu Asp Leu Gly Pro Ala Ser Pro Leu Asp Ser 
                      980                 985                 990         
          Thr Phe Tyr Arg Ser Leu Leu Glu  Asp Asp Asp Met Gly  Asp Leu Val 
                  995                 1000                 1005             
          Asp Ala  Glu Glu Tyr Leu Val  Pro Gln Gln Gly Phe  Phe Cys Pro 
              1010                 1015                 1020             
          Asp Pro  Ala Pro Gly Ala Gly  Gly Met Val His His  Arg His Arg 
              1025                 1030                 1035             
          Ser Ser  Ser Thr Arg Ser Gly  Gly Gly Asp Leu Thr  Leu Gly Leu 
              1040                 1045                 1050             
          Glu Pro  Ser Glu Glu Glu Ala  Pro Arg Ser Pro Leu  Ala Pro Ser 
              1055                 1060                 1065             
          Glu Gly  Ala Gly Ser Asp Val  Phe Asp Gly Asp Leu  Gly Met Gly 
              1070                 1075                 1080             
          Ala Ala  Lys Gly Leu Gln Ser  Leu Pro Thr His Asp  Pro Ser Pro 
              1085                 1090                 1095             
          Leu Gln  Arg Tyr Ser Glu Asp  Pro Thr Val Pro Leu  Pro Ser Glu 
              1100                 1105                 1110             
          Thr Asp  Gly Tyr Val Ala Pro  Leu Thr Cys Ser Pro  Gln Pro Glu 
              1115                 1120                 1125             
          Tyr Val  Asn Gln Pro Asp Val  Arg Pro Gln Pro Pro  Ser Pro Arg 
              1130                 1135                 1140             
          Glu Gly  Pro Leu Pro Ala Ala  Arg Pro Ala Gly Ala  Thr Leu Glu 
              1145                 1150                 1155             
          Arg Pro  Lys Thr Leu Ser Pro  Gly Lys Asn Gly Val  Val Lys Asp 
              1160                 1165                 1170             
          Val Phe  Ala Phe Gly Gly Ala  Val Glu Asn Pro Glu  Tyr Leu Thr 
              1175                 1180                 1185             
          Pro Gln  Gly Gly Ala Ala Pro  Gln Pro His Pro Pro  Pro Ala Phe 
              1190                 1195                 1200             
          Ser Pro  Ala Phe Asp Asn Leu  Tyr Tyr Trp Asp Gln  Asp Pro Pro 
              1205                 1210                 1215             
          Glu Arg  Gly Ala Pro Pro Ser  Thr Phe Lys Gly Thr  Pro Thr Ala 
              1220                 1225                 1230             
          Glu Asn  Pro Glu Tyr Leu Gly  Leu Asp Val Pro Val  
              1235                 1240                 1245 
          <![CDATA[<210>  104]]>
          <![CDATA[<211>  98]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  104]]>
          Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 
          1               5                   10                  15      
          Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 
                  35                  40                  45              
          Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 
              50                  55                  60                  
          Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 
                          85                  90                  95      
          Lys Val 
          <![CDATA[<210>  105]]>
          <![CDATA[<211>  107]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  105]]>
          Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 
          1               5                   10                  15      
          Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 
                      20                  25                  30          
          Trp Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 
                  35                  40                  45              
          Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln 
              50                  55                  60                  
          Glu Ser Thr Tyr Arg Trp Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro 
                          85                  90                  95      
          Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 
                      100                 105         
          <![CDATA[<210>  106]]>
          <![CDATA[<211>  106]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  106]]>
          Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp 
          1               5                   10                  15      
          Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 
                      20                  25                  30          
          Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 
                  35                  40                  45              
          Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 
              50                  55                  60                  
          Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 
                          85                  90                  95      
          Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
                      100                 105     
          <![CDATA[<210>  107]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  107]]>
          Glu Pro Lys Ser Cys 
          1               5   
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          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MISC_FEATURE]]>
          <![CDATA[<222>  (8)..(8)]]>
          <![CDATA[<223>  X 為 S 或 P]]>
          <![CDATA[<400>  108]]>
          Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Xaa Cys Pro 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  109]]>
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          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MISC_FEATURE]]>
          <![CDATA[<222>  (5)..(5)]]>
          <![CDATA[<223>  X 為 S 或 P]]>
          <![CDATA[<400>  109]]>
          His Thr Cys Pro Xaa Cys Pro 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  110]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<222>  (3)..(3)]]>
          <![CDATA[<223>  X 為 S 或 P]]>
          <![CDATA[<400>  110]]>
          Cys Pro Xaa Cys Pro 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  111]]>
          <![CDATA[<211>  330]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  111]]>
          Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 
          1               5                   10                  15      
          Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 
                  35                  40                  45              
          Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 
              50                  55                  60                  
          Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 
                          85                  90                  95      
          Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 
                      100                 105                 110         
          Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 
                  115                 120                 125             
          Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 
              130                 135                 140                 
          Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 
          145                 150                 155                 160 
          Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 
                          165                 170                 175     
          Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 
                      180                 185                 190         
          His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 
                  195                 200                 205             
          Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 
              210                 215                 220                 
          Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 
                          245                 250                 255     
          Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 
                      260                 265                 270         
          Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 
                  275                 280                 285             
          Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 
              290                 295                 300                 
          Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 
          305                 310                 315                 320 
          Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                          325                 330 
          <![CDATA[<210>  112]]>
          <![CDATA[<211>  330]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  112]]>
          Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 
          1               5                   10                  15      
          Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 
                  35                  40                  45              
          Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 
              50                  55                  60                  
          Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 
                          85                  90                  95      
          Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 
                      100                 105                 110         
          Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 
                  115                 120                 125             
          Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 
              130                 135                 140                 
          Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 
          145                 150                 155                 160 
          Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 
                          165                 170                 175     
          Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 
                      180                 185                 190         
          His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 
                  195                 200                 205             
          Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 
              210                 215                 220                 
          Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 
          225                 230                 235                 240 
          Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 
                          245                 250                 255     
          Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 
                      260                 265                 270         
          Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 
                  275                 280                 285             
          Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 
              290                 295                 300                 
          Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 
          305                 310                 315                 320 
          Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
                          325                 330 
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          <![CDATA[<400>  113]]>
          Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 
          1               5                   10                  15      
          Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 
                  35                  40                  45              
          Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 
              50                  55                  60                  
          Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 
                          85                  90                  95      
          Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 
                      100                 105                 110         
          Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 
                  115                 120                 125             
          Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 
              130                 135                 140                 
          Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 
          145                 150                 155                 160 
          Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn 
                          165                 170                 175     
          Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp 
                      180                 185                 190         
          Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro 
                  195                 200                 205             
          Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu 
              210                 215                 220                 
          Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 
                          245                 250                 255     
          Ser Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 
                      260                 265                 270         
          Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 
                  275                 280                 285             
          Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 
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          Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 
          305                 310                 315                 320 
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                          325     
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          <![CDATA[<400>  114]]>
          Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 
          1               5                   10                  15      
          Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 
                  35                  40                  45              
          Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 
              50                  55                  60                  
          Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Tyr Thr Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 
                          85                  90                  95      
          Arg Val Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr Thr His Thr Cys Pro 
                      100                 105                 110         
          Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg 
                  115                 120                 125             
          Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys 
              130                 135                 140                 
          Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro 
          145                 150                 155                 160 
          Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 
                          165                 170                 175     
          Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 
                      180                 185                 190         
          Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Lys Trp Tyr 
                  195                 200                 205             
          Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu 
              210                 215                 220                 
          Gln Tyr Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 
          225                 230                 235                 240 
          Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys 
                          245                 250                 255     
          Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln 
                      260                 265                 270         
          Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met 
                  275                 280                 285             
          Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro 
              290                 295                 300                 
          Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Ser Gly Gln Pro Glu Asn Asn 
          305                 310                 315                 320 
          Tyr Asn Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu 
                          325                 330                 335     
          Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Ile 
                      340                 345                 350         
          Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln 
                  355                 360                 365             
          Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 
              370                 375         
          <![CDATA[<210>  115]]>
          <![CDATA[<211>  327]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  115]]>
          Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 
          1               5                   10                  15      
          Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 
                  35                  40                  45              
          Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 
              50                  55                  60                  
          Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 
                          85                  90                  95      
          Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro 
                      100                 105                 110         
          Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 
                  115                 120                 125             
          Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 
              130                 135                 140                 
          Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe 
                          165                 170                 175     
          Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 
                      180                 185                 190         
          Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 
                  195                 200                 205             
          Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 
              210                 215                 220                 
          Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 
          225                 230                 235                 240 
          Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 
                          245                 250                 255     
          Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 
                      260                 265                 270         
          Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 
                  275                 280                 285             
          Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 
              290                 295                 300                 
          Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 
          305                 310                 315                 320 
          Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 
                          325         
          <![CDATA[<210>  116]]>
          <![CDATA[<211>  254]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  116]]>
          Met Trp Gln Leu Leu Leu Pro Thr Ala Leu Leu Leu Leu Val Ser Ala 
          1               5                   10                  15      
          Gly Met Arg Thr Glu Asp Leu Pro Lys Ala Val Val Phe Leu Glu Pro 
                      20                  25                  30          
          Gln Trp Tyr Arg Val Leu Glu Lys Asp Ser Val Thr Leu Lys Cys Gln 
                  35                  40                  45              
          Gly Ala Tyr Ser Pro Glu Asp Asn Ser Thr Gln Trp Phe His Asn Glu 
              50                  55                  60                  
          Ser Leu Ile Ser Ser Gln Ala Ser Ser Tyr Phe Ile Asp Ala Ala Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Val Asp Asp Ser Gly Glu Tyr Arg Cys Gln Thr Asn Leu Ser Thr Leu 
                          85                  90                  95      
          Ser Asp Pro Val Gln Leu Glu Val His Ile Gly Trp Leu Leu Leu Gln 
                      100                 105                 110         
          Ala Pro Arg Trp Val Phe Lys Glu Glu Asp Pro Ile His Leu Arg Cys 
                  115                 120                 125             
          His Ser Trp Lys Asn Thr Ala Leu His Lys Val Thr Tyr Leu Gln Asn 
              130                 135                 140                 
          Gly Lys Gly Arg Lys Tyr Phe His His Asn Ser Asp Phe Tyr Ile Pro 
          145                 150                 155                 160 
          Lys Ala Thr Leu Lys Asp Ser Gly Ser Tyr Phe Cys Arg Gly Leu Phe 
                          165                 170                 175     
          Gly Ser Lys Asn Val Ser Ser Glu Thr Val Asn Ile Thr Ile Thr Gln 
                      180                 185                 190         
          Gly Leu Ala Val Ser Thr Ile Ser Ser Phe Phe Pro Pro Gly Tyr Gln 
                  195                 200                 205             
          Val Ser Phe Cys Leu Val Met Val Leu Leu Phe Ala Val Asp Thr Gly 
              210                 215                 220                 
          Leu Tyr Phe Ser Val Lys Thr Asn Ile Arg Ser Ser Thr Arg Asp Trp 
          225                 230                 235                 240 
          Lys Asp His Lys Phe Lys Trp Arg Lys Asp Pro Gln Asp Lys 
                          245                 250                 
          <![CDATA[<210>  117]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  肽連接子 G4S]]>
          <![CDATA[<400>  117]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  118]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  肽連接子 (G4S)2]]>
          <![CDATA[<400>  118]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  119]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  肽連接子 (SG4)2]]>
          <![CDATA[<400>  119]]>
          Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  120]]>
          <![CDATA[<211>  14]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  肽連接子 G4(SG4)2]]>
          <![CDATA[<400>  120]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 
          1               5                   10                  
          <![CDATA[<210>  121]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  肽連接子]]>
          <![CDATA[<400>  121]]>
          Gly Ser Pro Gly Ser Ser Ser Ser Gly Ser 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  122]]>
          <![CDATA[<211>  15]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  肽連接子 (G4S)3]]>
          <![CDATA[<400>  122]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 
          1               5                   10                  15  
          <![CDATA[<210>  123]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  肽連接子 (G4S)4]]>
          <![CDATA[<400>  123]]>
          Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gly Gly Gly Ser 
                      20  
          <![CDATA[<210>  124]]>
          <![CDATA[<211>  8]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  肽連接子]]>
          <![CDATA[<400>  124]]>
          Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ser 
          1               5               
          <![CDATA[<210>  125]]>
          <![CDATA[<211>  8]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  肽連接子]]>
          <![CDATA[<400>  125]]>
          Gly Ser Gly Ser Gly Asn Gly Ser 
          1               5               
          <![CDATA[<210>  126]]>
          <![CDATA[<211>  8]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  肽連接子]]>
          <![CDATA[<400>  126]]>
          Gly Gly Ser Gly Ser Gly Ser Gly 
          1               5               
          <![CDATA[<210>  127]]>
          <![CDATA[<211>  6]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  肽連接子]]>
          <![CDATA[<400>  127]]>
          Gly Gly Ser Gly Ser Gly 
          1               5       
          <![CDATA[<210>  128]]>
          <![CDATA[<211>  4]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  肽連接子]]>
          <![CDATA[<400>  128]]>
          Gly Gly Ser Gly 
          1               
          <![CDATA[<210>  129]]>
          <![CDATA[<211>  8]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  肽連接子]]>
          <![CDATA[<400>  129]]>
          Gly Gly Ser Gly Asn Gly Ser Gly 
          1               5               
          <![CDATA[<210>  130]]>
          <![CDATA[<211>  8]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  肽連接子]]>
          <![CDATA[<400>  130]]>
          Gly Gly Asn Gly Ser Gly Ser Gly 
          1               5               
          <![CDATA[<210>  131]]>
          <![CDATA[<211>  6]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  肽連接子]]>
          <![CDATA[<400>  131]]>
          Gly Gly Asn Gly Ser Gly 
          1               5       
          <![CDATA[<210>  132]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CDR-H1, 帕妥珠單抗]]>
          <![CDATA[<400>  132]]>
          Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr Thr Met Asp 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  133]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CDR-H2, 帕妥珠單抗]]>
          <![CDATA[<400>  133]]>
          Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Gln Arg Phe Lys 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  134]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CDR-H3, 帕妥珠單抗]]>
          <![CDATA[<400>  134]]>
          Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  135]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CDR-L1, 帕妥珠單抗]]>
          <![CDATA[<400>  135]]>
          Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ile Gly Val Ala 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  136]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CDR-L2, 帕妥珠單抗]]>
          <![CDATA[<400>  136]]>
          Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  137]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CDR-L3, 帕妥珠單抗]]>
          <![CDATA[<400>  137]]>
          Gln Gln Tyr Tyr Ile Tyr Pro Tyr Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  138]]>
          <![CDATA[<211>  119]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  重鏈可變域 VH, 帕妥珠單抗]]>
          <![CDATA[<400>  138]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Thr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Gln Arg Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Arg Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 
                      100                 105                 110         
          Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 
          <![CDATA[<210>  139]]>
          <![CDATA[<211>  107]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  輕鏈可變域 VL，帕妥珠單抗]]>
          <![CDATA[<400>  139]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ile Gly 
                      20                  25                  30          
          Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ile Tyr Pro Tyr 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
                      100                 105         
          <![CDATA[<210>  140]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CDR-H1, 曲妥珠單抗]]>
          <![CDATA[<400>  140]]>
          Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr Ile His 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  141]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CDR-H2, 曲妥珠單抗]]>
          <![CDATA[<400>  141]]>
          Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val Lys 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  142]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CDR-H3, 曲妥珠單抗]]>
          <![CDATA[<400>  142]]>
          Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  143]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CDR-L1, 曲妥珠單抗]]>
          <![CDATA[<400>  143]]>
          Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala Val Ala 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  144]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CDR-L2, 曲妥珠單抗]]>
          <![CDATA[<400>  144]]>
          Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  145]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CDR-L3, 曲妥珠單抗]]>
          <![CDATA[<400>  145]]>
          Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  146]]>
          <![CDATA[<211>  120]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  重鏈可變域 VH, 曲妥珠單抗]]>
          <![CDATA[<400>  146]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120 
          <![CDATA[<210>  147]]>
          <![CDATA[<211>  107]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  輕鏈可變域 VL，曲妥珠單抗]]>
          <![CDATA[<400>  147]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala 
                      20                  25                  30          
          Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
                      100                 105         
          <![CDATA[<210>  148]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CDR-H1, CD3]]>
          <![CDATA[<400>  148]]>
          Asn Tyr Tyr Ile His 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  149]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CDR-H2, CD3]]>
          <![CDATA[<400>  149]]>
          Trp Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 
          1               5                   10                  15      
          Gly 
          <![CDATA[<210>  150]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CDR-H3, CD3]]>
          <![CDATA[<400>  150]]>
          Asp Ser Tyr Ser Asn Tyr Tyr Phe Asp Tyr 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  151]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CDR-L1, CD3]]>
          <![CDATA[<400>  151]]>
          Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu 
          1               5                   10                  15      
          Ala 
          <![CDATA[<210>  152]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CDR-L2, CD3]]>
          <![CDATA[<400>  152]]>
          Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  153]]>
          <![CDATA[<211>  8]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CDR-L3, CD3]]>
          <![CDATA[<400>  153]]>
          Thr Gln Ser Phe Ile Leu Arg Thr 
          1               5               
          <![CDATA[<210>  154]]>
          <![CDATA[<211>  119]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  重鏈可變域 VH, CD3]]>
          <![CDATA[<400>  154]]>
          Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Asp Ser Tyr Ser Asn Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 
                      100                 105                 110         
          Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 
          <![CDATA[<210>  155]]>
          <![CDATA[<211>  112]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  輕鏈可變域 VL，CD3]]>
          <![CDATA[<400>  155]]>
          Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 
                      20                  25                  30          
          Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 
                  35                  40                  45              
          Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 
              50                  55                  60                  
          Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Gln 
                          85                  90                  95      
          Ser Phe Ile Leu Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110         
          <![CDATA[<210>  156]]>
          <![CDATA[<211>  5]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CDR-H1, Her2 (7C2)]]>
          <![CDATA[<400>  156]]>
          Gly Tyr Trp Met Asn 
          1               5   
          <![CDATA[<210>  157]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CDR-H2, Her2 (7C2)]]>
          <![CDATA[<400>  157]]>
          Met Ile His Pro Ser Asp Ser Glu Ile Arg Ala Asn Gln Lys Phe Arg 
          1               5                   10                  15      
          Asp 
          <![CDATA[<210>  158]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CDR-H3, Her2 (7C2)]]>
          <![CDATA[<400>  158]]>
          Gly Thr Tyr Asp Gly Gly Phe Glu Tyr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  159]]>
          <![CDATA[<211>  15]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CDR-L1, Her2 (7C2)]]>
          <![CDATA[<400>  159]]>
          Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Gly Ser Arg Phe Thr Tyr Met His 
          1               5                   10                  15  
          <![CDATA[<210>  160]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CDR-L2, Her2 (7C2)]]>
          <![CDATA[<400>  160]]>
          Tyr Ala Ser Ile Leu Glu Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  161]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CDR-L3, Her2 (7C2)]]>
          <![CDATA[<400>  161]]>
          Gln His Ser Trp Glu Ile Pro Pro Trp Thr 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  162]]>
          <![CDATA[<211>  118]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  重鏈可變域 VH, Her2 (7C2)]]>
          <![CDATA[<400>  162]]>
          Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr 
                      20                  25                  30          
          Trp Met Asn Trp Leu Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Met Ile His Pro Ser Asp Ser Glu Ile Arg Ala Asn Gln Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Arg Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Thr Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Gln Leu Ser Ser Pro Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Gly Thr Tyr Asp Gly Gly Phe Glu Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 
                      100                 105                 110         
          Thr Leu Thr Val Ser Ser 
                  115             
          <![CDATA[<210>  163]]>
          <![CDATA[<211>  112]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  輕鏈可變域 VL，Her2 (7C2)]]>
          <![CDATA[<400>  163]]>
          Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Val Val Ser Leu Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Gly Ser 
                      20                  25                  30          
          Arg Phe Thr Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 
                  35                  40                  45              
          Lys Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Ile Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala 
              50                  55                  60                  
          Arg Phe Ser Gly Gly Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His 
          65                  70                  75                  80  
          Pro Val Glu Glu Asp Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Trp 
                          85                  90                  95      
          Glu Ile Pro Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110         
          <![CDATA[<210>  164]]>
          <![CDATA[<211>  290]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  164]]>
          Met Arg Ile Phe Ala Val Phe Ile Phe Met Thr Tyr Trp His Leu Leu 
          1               5                   10                  15      
          Asn Ala Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr 
                      20                  25                  30          
          Gly Ser Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu 
                  35                  40                  45              
          Asp Leu Ala Ala Leu Ile Val Tyr Trp Glu Met Glu Asp Lys Asn Ile 
              50                  55                  60                  
          Ile Gln Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Tyr Arg Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn 
                          85                  90                  95      
          Ala Ala Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr 
                      100                 105                 110         
          Arg Cys Met Ile Ser Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val 
                  115                 120                 125             
          Lys Val Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val 
              130                 135                 140                 
          Asp Pro Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr 
          145                 150                 155                 160 
          Pro Lys Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser 
                          165                 170                 175     
          Gly Lys Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn 
                      180                 185                 190         
          Val Thr Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr 
                  195                 200                 205             
          Cys Thr Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu 
              210                 215                 220                 
          Val Ile Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Thr His 
          225                 230                 235                 240 
          Leu Val Ile Leu Gly Ala Ile Leu Leu Cys Leu Gly Val Ala Leu Thr 
                          245                 250                 255     
          Phe Ile Phe Arg Leu Arg Lys Gly Arg Met Met Asp Val Lys Lys Cys 
                      260                 265                 270         
          Gly Ile Gln Asp Thr Asn Ser Lys Lys Gln Ser Asp Thr His Leu Glu 
                  275                 280                 285             
          Glu Thr 
              290 
          <![CDATA[<210>  165]]>
          <![CDATA[<211>  118]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  VH (PD-L1)]]>
          <![CDATA[<400>  165]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser 
                      20                  25                  30          
          Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 
                      100                 105                 110         
          Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115             
          <![CDATA[<210>  166]]>
          <![CDATA[<211>  107]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  VL (PD-L1)]]>
          <![CDATA[<400>  166]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala 
                      20                  25                  30          
          Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
                      100                 105         
          <![CDATA[<210>  167]]>
          <![CDATA[<211>  121]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  VH (PD-L1) 2]]>
          <![CDATA[<400>  167]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr 
                      20                  25                  30          
          Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Glu Gly Gly Trp Phe Gly Glu Leu Ala Phe Asp Tyr Trp Gly 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120     
          <![CDATA[<210>  168]]>
          <![CDATA[<211>  108]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  VL (PD-L1) 2]]>
          <![CDATA[<400>  168]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Arg Val Ser Ser Ser 
                      20                  25                  30          
          Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 
                  35                  40                  45              
          Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Leu Pro 
                          85                  90                  95      
          Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
                      100                 105             
          <![CDATA[<210>  169]]>
          <![CDATA[<211>  288]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  169]]>
          Met Gln Ile Pro Gln Ala Pro Trp Pro Val Val Trp Ala Val Leu Gln 
          1               5                   10                  15      
          Leu Gly Trp Arg Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp 
                      20                  25                  30          
          Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp 
                  35                  40                  45              
          Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val 
              50                  55                  60                  
          Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala 
          65                  70                  75                  80  
          Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg 
                          85                  90                  95      
          Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg 
                      100                 105                 110         
          Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu 
                  115                 120                 125             
          Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val 
              130                 135                 140                 
          Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro 
          145                 150                 155                 160 
          Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu Val Val Gly Val Val Gly Gly 
                          165                 170                 175     
          Leu Leu Gly Ser Leu Val Leu Leu Val Trp Val Leu Ala Val Ile Cys 
                      180                 185                 190         
          Ser Arg Ala Ala Arg Gly Thr Ile Gly Ala Arg Arg Thr Gly Gln Pro 
                  195                 200                 205             
          Leu Lys Glu Asp Pro Ser Ala Val Pro Val Phe Ser Val Asp Tyr Gly 
              210                 215                 220                 
          Glu Leu Asp Phe Gln Trp Arg Glu Lys Thr Pro Glu Pro Pro Val Pro 
          225                 230                 235                 240 
          Cys Val Pro Glu Gln Thr Glu Tyr Ala Thr Ile Val Phe Pro Ser Gly 
                          245                 250                 255     
          Met Gly Thr Ser Ser Pro Ala Arg Arg Gly Ser Ala Asp Gly Pro Arg 
                      260                 265                 270         
          Ser Ala Gln Pro Leu Arg Pro Glu Asp Gly His Cys Ser Trp Pro Leu 
                  275                 280                 285             
          <![CDATA[<210>  170]]>
          <![CDATA[<211>  120]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  VH (PD-1)]]>
          <![CDATA[<400>  170]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Val Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 
                  35                  40                  45              
          Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Asn Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Ser Ser Thr Thr Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Lys Ser Leu Gln Phe Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 
                  115                 120 
          <![CDATA[<210>  171]]>
          <![CDATA[<211>  111]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  VL (PD-1)]]>
          <![CDATA[<400>  171]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser 
                      20                  25                  30          
          Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro 
                  35                  40                  45              
          Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala 
              50                  55                  60                  
          Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg 
                          85                  90                  95      
          Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110     
          <![CDATA[<210>  172]]>
          <![CDATA[<211>  113]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  VH (PD-1) 2]]>
          <![CDATA[<400>  172]]>
          Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Asp Cys Lys Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Ser 
                      20                  25                  30          
          Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Thr Asn Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 
                      100                 105                 110         
          Ser 
          <![CDATA[<210>  173]]>
          <![CDATA[<211>  107]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  VL (PD-1) 2]]>
          <![CDATA[<400>  173]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Asn Trp Pro Arg 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
                      100                 105         
          <![CDATA[<210>  174]]>
          <![CDATA[<211>  448]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  Her2-CD3 (4D5/40G5c) HC1 (Fc 杵)]]>
          <![CDATA[<400>  174]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 
                  115                 120                 125             
          Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 
                          165                 170                 175     
          Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 
                      180                 185                 190         
          Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 
                  195                 200                 205             
          Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 
              210                 215                 220                 
          Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 
                          245                 250                 255     
          Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 
                      260                 265                 270         
          Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 
                  275                 280                 285             
          Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg 
              290                 295                 300                 
          Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 
                          325                 330                 335     
          Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 
                      340                 345                 350         
          Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 
                  355                 360                 365             
          Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 
              370                 375                 380                 
          Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 
          385                 390                 395                 400 
          Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 
                          405                 410                 415     
          Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 
                      420                 425                 430         
          Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 
                  435                 440                 445             
          <![CDATA[<210>  175]]>
          <![CDATA[<211>  214]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  Her2-CD3 (4D5/40G5c) LC1]]>
          <![CDATA[<400>  175]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala 
                      20                  25                  30          
          Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 
                      100                 105                 110         
          Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 
                  115                 120                 125             
          Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 
              130                 135                 140                 
          Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 
                      180                 185                 190         
          Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 
                  195                 200                 205             
          Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 
          <![CDATA[<210>  176]]>
          <![CDATA[<211>  447]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  Her2-CD3 (4D5/40G5c) HC2 (Fc 臼)]]>
          <![CDATA[<400>  176]]>
          Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Asp Ser Tyr Ser Asn Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 
                      100                 105                 110         
          Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 
                  115                 120                 125             
          Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 
              130                 135                 140                 
          Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 
          145                 150                 155                 160 
          Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 
                          165                 170                 175     
          Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 
                      180                 185                 190         
          Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 
                  195                 200                 205             
          Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 
              210                 215                 220                 
          Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro 
          225                 230                 235                 240 
          Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 
                          245                 250                 255     
          Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 
                      260                 265                 270         
          Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 
                  275                 280                 285             
          Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Val 
              290                 295                 300                 
          Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 
          305                 310                 315                 320 
          Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 
                          325                 330                 335     
          Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 
                      340                 345                 350         
          Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser 
                  355                 360                 365             
          Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 
              370                 375                 380                 
          Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 
                          405                 410                 415     
          Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 
                      420                 425                 430         
          Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 
                  435                 440                 445         
          <![CDATA[<210>  177]]>
          <![CDATA[<211>  219]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  Her2-CD3 (4D5/40G5c) LC2]]>
          <![CDATA[<400>  177]]>
          Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 
                      20                  25                  30          
          Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 
                  35                  40                  45              
          Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 
              50                  55                  60                  
          Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 
          65                  70                  75                  80  
          Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Gln 
                          85                  90                  95      
          Ser Phe Ile Leu Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 
                      100                 105                 110         
          Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 
                  115                 120                 125             
          Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 
              130                 135                 140                 
          Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 
                          165                 170                 175     
          Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 
                      180                 185                 190         
          Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 
                  195                 200                 205             
          Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 215                 
          <![CDATA[<210>  178]]>
          <![CDATA[<211>  448]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD28(SA_變異體 8) hu IgG1 Fc 臼 N297G]]>
          <![CDATA[<400>  178]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Ser Ile Tyr Pro Gly Asn Val Gln Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 
                          85                  90                  95      
          Thr Arg Ser His Tyr Gly Leu Asp Phe Asn Phe Asp Val Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 
                  115                 120                 125             
          Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 
                          165                 170                 175     
          Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 
                      180                 185                 190         
          Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 
                  195                 200                 205             
          Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 
              210                 215                 220                 
          Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 
                          245                 250                 255     
          Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 
                      260                 265                 270         
          Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 
                  275                 280                 285             
          Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg 
              290                 295                 300                 
          Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 
                          325                 330                 335     
          Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 
                      340                 345                 350         
          Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 
                  355                 360                 365             
          Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 
              370                 375                 380                 
          Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 
          385                 390                 395                 400 
          Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp 
                          405                 410                 415     
          Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 
                      420                 425                 430         
          Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 
                  435                 440                 445             
          <![CDATA[<210>  179]]>
          <![CDATA[<211>  214]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD28(SA_變異體 8) VL-κ]]>
          <![CDATA[<400>  179]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys His Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Val Tyr 
                      20                  25                  30          
          Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Thr Tyr Pro Tyr 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 
                      100                 105                 110         
          Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 
                  115                 120                 125             
          Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 
              130                 135                 140                 
          Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 
                      180                 185                 190         
          Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 
                  195                 200                 205             
          Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 
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          <![CDATA[<400>  180]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 
                  115                 120                 125             
          Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 
                          165                 170                 175     
          Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 
                      180                 185                 190         
          Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 
                  195                 200                 205             
          Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 
              210                 215                 220                 
          Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 
                          245                 250                 255     
          Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 
                      260                 265                 270         
          Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 
                  275                 280                 285             
          Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg 
              290                 295                 300                 
          Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 
                          325                 330                 335     
          Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 
                      340                 345                 350         
          Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 
                  355                 360                 365             
          Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 
              370                 375                 380                 
          Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 
          385                 390                 395                 400 
          Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 
                          405                 410                 415     
          Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 
                      420                 425                 430         
          Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 
                  435                 440                 445             
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          <![CDATA[<400>  181]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala 
                      20                  25                  30          
          Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 
                      100                 105                 110         
          Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 
                  115                 120                 125             
          Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 
              130                 135                 140                 
          Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 
                      180                 185                 190         
          Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 
                  195                 200                 205             
          Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 
          <![CDATA[<210>  182]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  182]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 
                      20                  25                  30          
          Thr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ala Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Gln Arg Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Arg Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Arg Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 
                      100                 105                 110         
          Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 
                  115                 120                 125             
          Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 
              130                 135                 140                 
          Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 
          145                 150                 155                 160 
          Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 
                          165                 170                 175     
          Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 
                      180                 185                 190         
          Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 
                  195                 200                 205             
          Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 
              210                 215                 220                 
          Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro 
          225                 230                 235                 240 
          Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 
                          245                 250                 255     
          Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 
                      260                 265                 270         
          Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 
                  275                 280                 285             
          Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gly Ser Thr Tyr Arg Val 
              290                 295                 300                 
          Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 
          305                 310                 315                 320 
          Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 
                          325                 330                 335     
          Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 
                      340                 345                 350         
          Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp 
                  355                 360                 365             
          Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 
              370                 375                 380                 
          Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 
                          405                 410                 415     
          Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 
                      420                 425                 430         
          Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 
                  435                 440                 445         
          <![CDATA[<210>  183]]>
          <![CDATA[<211>  214]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  Her2 (2C4) VL-κ]]>
          <![CDATA[<400>  183]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ile Gly 
                      20                  25                  30          
          Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ile Tyr Pro Tyr 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 
                      100                 105                 110         
          Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 
                  115                 120                 125             
          Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 
              130                 135                 140                 
          Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 
                      180                 185                 190         
          Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 
                  195                 200                 205             
          Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 
          <![CDATA[<210>  184]]>
          <![CDATA[<211>  447]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD28 IgG4 Fc]]>
          <![CDATA[<400>  184]]>
          Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 
                  35                  40                  45              
          Gly Cys Ile Tyr Pro Gly Asn Val Asn Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 
                          85                  90                  95      
          Thr Arg Ser His Tyr Gly Leu Asp Trp Asn Phe Asp Val Trp Gly Gln 
                      100                 105                 110         
          Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 
                  115                 120                 125             
          Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala 
              130                 135                 140                 
          Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 
                          165                 170                 175     
          Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 
                      180                 185                 190         
          Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys 
                  195                 200                 205             
          Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro 
              210                 215                 220                 
          Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val 
          225                 230                 235                 240 
          Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 
                          245                 250                 255     
          Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu 
                      260                 265                 270         
          Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 
                  275                 280                 285             
          Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 
              290                 295                 300                 
          Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile 
                          325                 330                 335     
          Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 
                      340                 345                 350         
          Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 
                  355                 360                 365             
          Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 
              370                 375                 380                 
          Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 
          385                 390                 395                 400 
          Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 
                          405                 410                 415     
          Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 
                      420                 425                 430         
          His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 
                  435                 440                 445         
          <![CDATA[<210>  185]]>
          <![CDATA[<211>  214]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  CD28 κ 輕鏈]]>
          <![CDATA[<400>  185]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys His Ala Ser Gln Asn Ile Tyr Val Trp 
                      20                  25                  30          
          Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Lys Ala Ser Asn Leu His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Gln Thr Tyr Pro Tyr 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 
                      100                 105                 110         
          Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 
                  115                 120                 125             
          Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 
              130                 135                 140                 
          Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 
                      180                 185                 190         
          Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 
                  195                 200                 205             
          Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 
          <![CDATA[<210>  186]]>
          <![CDATA[<211>  443]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  DP47 huIgG1 PGLALA 重鏈]]>
          <![CDATA[<400>  186]]>
          Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 
                      20                  25                  30          
          Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 
              50                  55                  60                  
          Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Lys Gly Ser Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 
                      100                 105                 110         
          Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 
                  115                 120                 125             
          Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 
              130                 135                 140                 
          Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 
          145                 150                 155                 160 
          Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 
                          165                 170                 175     
          Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 
                      180                 185                 190         
          Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 
                  195                 200                 205             
          Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys 
              210                 215                 220                 
          Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 
          225                 230                 235                 240 
          Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu 
                          245                 250                 255     
          Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 
                      260                 265                 270         
          Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 
                  275                 280                 285             
          Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 
              290                 295                 300                 
          Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 
          305                 310                 315                 320 
          Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 
                          325                 330                 335     
          Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 
                      340                 345                 350         
          Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 
                  355                 360                 365             
          Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 
              370                 375                 380                 
          Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 
          385                 390                 395                 400 
          Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 
                          405                 410                 415     
          Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 
                      420                 425                 430         
          His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 
                  435                 440             
          <![CDATA[<210>  187]]>
          <![CDATA[<211>  215]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  DP47 huIgG1 PGLALA 輕鏈]]>
          <![CDATA[<400>  187]]>
          Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser 
                      20                  25                  30          
          Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 
                  35                  40                  45              
          Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro 
                          85                  90                  95      
          Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala 
                      100                 105                 110         
          Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser 
                  115                 120                 125             
          Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 
              130                 135                 140                 
          Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 
                          165                 170                 175     
          Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 
                      180                 185                 190         
          Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 
                  195                 200                 205             
          Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 215 
          <![CDATA[<210>  188]]>
          <![CDATA[<211>  207]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  188]]>
          Met Gln Ser Gly Thr His Trp Arg Val Leu Gly Leu Cys Leu Leu Ser 
          1               5                   10                  15      
          Val Gly Val Trp Gly Gln Asp Gly Asn Glu Glu Met Gly Gly Ile Thr 
                      20                  25                  30          
          Gln Thr Pro Tyr Lys Val Ser Ile Ser Gly Thr Thr Val Ile Leu Thr 
                  35                  40                  45              
          Cys Pro Gln Tyr Pro Gly Ser Glu Ile Leu Trp Gln His Asn Asp Lys 
              50                  55                  60                  
          Asn Ile Gly Gly Asp Glu Asp Asp Lys Asn Ile Gly Ser Asp Glu Asp 
          65                  70                  75                  80  
          His Leu Ser Leu Lys Glu Phe Ser Glu Leu Glu Gln Ser Gly Tyr Tyr 
                          85                  90                  95      
          Val Cys Tyr Pro Arg Gly Ser Lys Pro Glu Asp Ala Asn Phe Tyr Leu 
                      100                 105                 110         
          Tyr Leu Arg Ala Arg Val Cys Glu Asn Cys Met Glu Met Asp Val Met 
                  115                 120                 125             
          Ser Val Ala Thr Ile Val Ile Val Asp Ile Cys Ile Thr Gly Gly Leu 
              130                 135                 140                 
          Leu Leu Leu Val Tyr Tyr Trp Ser Lys Asn Arg Lys Ala Lys Ala Lys 
          145                 150                 155                 160 
          Pro Val Thr Arg Gly Ala Gly Ala Gly Gly Arg Gln Arg Gly Gln Asn 
                          165                 170                 175     
          Lys Glu Arg Pro Pro Pro Val Pro Asn Pro Asp Tyr Glu Pro Ile Arg 
                      180                 185                 190         
          Lys Gly Gln Arg Asp Leu Tyr Ser Gly Leu Asn Gln Arg Arg Ile 
                  195                 200                 205         
          <![CDATA[<210>  189]]>
          <![CDATA[<211>  198]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  食蟹獼猴]]>
          <![CDATA[<400>  189]]>
          Met Gln Ser Gly Thr Arg Trp Arg Val Leu Gly Leu Cys Leu Leu Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ile Gly Val Trp Gly Gln Asp Gly Asn Glu Glu Met Gly Ser Ile Thr 
                      20                  25                  30          
          Gln Thr Pro Tyr Gln Val Ser Ile Ser Gly Thr Thr Val Ile Leu Thr 
                  35                  40                  45              
          Cys Ser Gln His Leu Gly Ser Glu Ala Gln Trp Gln His Asn Gly Lys 
              50                  55                  60                  
          Asn Lys Glu Asp Ser Gly Asp Arg Leu Phe Leu Pro Glu Phe Ser Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Met Glu Gln Ser Gly Tyr Tyr Val Cys Tyr Pro Arg Gly Ser Asn Pro 
                          85                  90                  95      
          Glu Asp Ala Ser His His Leu Tyr Leu Lys Ala Arg Val Cys Glu Asn 
                      100                 105                 110         
          Cys Met Glu Met Asp Val Met Ala Val Ala Thr Ile Val Ile Val Asp 
                  115                 120                 125             
          Ile Cys Ile Thr Leu Gly Leu Leu Leu Leu Val Tyr Tyr Trp Ser Lys 
              130                 135                 140                 
          Asn Arg Lys Ala Lys Ala Lys Pro Val Thr Arg Gly Ala Gly Ala Gly 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Arg Gln Arg Gly Gln Asn Lys Glu Arg Pro Pro Pro Val Pro Asn 
                          165                 170                 175     
          Pro Asp Tyr Glu Pro Ile Arg Lys Gly Gln Gln Asp Leu Tyr Ser Gly 
                      180                 185                 190         
          Leu Asn Gln Arg Arg Ile 
                  195

Claims

一種雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其特徵在於與 CD28 單價結合，該雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子包含 (a) 第一抗原結合域，其能夠特異性結合 CD28， (b) 第二抗原結合域，其能夠特異性結合能夠特異性結合人類上皮生長因子受體-2 (Her2) 的抗原結合域，及 (c) Fc 域，其由能夠穩定締合之第一次單元及第二次單元構成，該 Fc 域包含降低該抗原結合分子對 Fc 受體的結合親和力及/或效應功能的一個或多個胺基酸取代，其中能夠特異性結合 Her2 的該第二抗原結合域包含 (i) 重鏈可變區 (V _HHer2)，其包含 SEQ ID NO: 2 之重鏈互補決定區 CDR-H1、SEQ ID NO: 3 之 CDR-H2 及 SEQ ID NO: 4 之 CDR-H3；及輕鏈可變區 (V _LHer2)，其包含 SEQ ID NO: 5 之輕鏈互補決定區 CDR-L1、SEQ ID NO: 6 之 CDR-L2 及 SEQ ID NO: 7 之 CDR-L3；或 (ii) 重鏈可變區 (V _HHer2)，其包含 SEQ ID NO: 10 之重鏈互補決定區 CDR-H1、SEQ ID NO: 11 之 CDR-H2 及 SEQ ID NO: 12 之 CDR-H3；及輕鏈可變區 (V _LHer2)，其包含 SEQ ID NO: 13 之輕鏈互補決定區 CDR-L1、SEQ ID NO: 14 之 CDR-L2 及 SEQ ID NO: 15 之 CDR-L3；或 (iii) 重鏈可變區 (V _HHer2)，其包含 SEQ ID NO: 132 之重鏈互補決定區 CDR-H1、SEQ ID NO: 133 之 CDR-H2 及 SEQ ID NO: 134 之 CDR-H3；及輕鏈可變區 (V _LHer2)，其包含 SEQ ID NO: 135 之輕鏈互補決定區 CDR-L1、SEQ ID NO: 136 之 CDR-L2 及 SEQ ID NO: 137 之 CDR-L3；或 (iv) 重鏈可變區 (V _HHer2)，其包含 SEQ ID NO: 140 之重鏈互補決定區 CDR-H1、SEQ ID NO: 141 之 CDR-H2 及 SEQ ID NO: 142 之 CDR-H3；及輕鏈可變區 (V _LHer2)，其包含 SEQ ID NO: 143 之輕鏈互補決定區 CDR-L1、SEQ ID NO: 144 之 CDR-L2 及 SEQ ID NO: 145 之 CDR-L3。
如請求項 1 之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中該 Fc 域屬於人類 IgG1 亞型，且包含胺基酸突變 L234A、L235A 及 P329G (根據 Kabat EU 索引編號)。
如請求項 1 或 2 之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 CD28 的該第一抗原結合域包含 (i) 重鏈可變區 (V _HCD28)，其包含 SEQ ID NO: 26 之重鏈互補決定區 CDR-H1、SEQ ID NO: 27 之 CDR-H2 及 SEQ ID NO: 28 之 CDR-H3；及輕鏈可變區 (V _LCD28)，其包含 SEQ ID NO: 29 之輕鏈互補決定區 CDR-L1、SEQ ID NO: 30 之 CDR-L2 及 SEQ ID NO: 31 之 CDR-L3；或 (ii) 重鏈可變區 (V _HCD28)，其包含 SEQ ID NO: 18 之 CDR-H1、SEQ ID NO: 19 之 CDR-H2 及 SEQ ID NO: 20 之 CDR-H3；及輕鏈可變區 (V _LCD28)，其包含 SEQ ID NO: 21 之 CDR-L1、SEQ ID NO: 22 之 CDR-L2 及 SEQ ID NO: 23 之 CDR-L3。
如請求項 1 或 2 之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 CD28 的該第一抗原結合域包含 (i) 重鏈可變區 (V _HCD28)，其包含 SEQ ID NO: 52 之重鏈互補決定區 CDR-H1、SEQ ID NO: 53 之 CDR-H2 及 SEQ ID NO: 54 之 CDR-H3；及輕鏈可變區 (V _LCD28)，其包含 SEQ ID NO: 55 之輕鏈互補決定區 CDR-L1、SEQ ID NO: 56 之 CDR-L2 及 SEQ ID NO: 57 之 CDR-L3；或 (ii) 重鏈可變區 (V _HCD28)，其包含 SEQ ID NO: 58 之 CDR-H1、SEQ ID NO: 59 之 CDR-H2 及 SEQ ID NO: 60 之 CDR-H3；及輕鏈可變區 (V _LCD28)，其包含 SEQ ID NO: 61 之 CDR-L1、SEQ ID NO: 62 之 CDR-L2 及 SEQ ID NO: 63 之 CDR-L3；或 (ii) 重鏈可變區 (V _HCD28)，其包含 SEQ ID NO: 64 之 CDR-H1、SEQ ID NO: 65 之 CDR-H2 及 SEQ ID NO: 66 之 CDR-H3；及輕鏈可變區 (V _LCD28)，其包含 SEQ ID NO: 67 之 CDR-L1、SEQ ID NO: 68 之 CDR-L2 及 SEQ ID NO: 69 之 CDR-L3。
如請求項 1 或 2 之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 CD28 的該第一抗原結合域包含：重鏈可變區 (V _HCD28)，該重鏈可變區包含與 SEQ ID NO: 24 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的胺基酸序列；及輕鏈可變區 (V _LCD28)，該輕鏈可變區包含與 SEQ ID NO: 25 之胺基酸序列至少約 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同的胺基酸序列。
如請求項 1 或 2 之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 CD28 的該第一抗原結合域包含：重鏈可變區 (V _HCD28)，該重鏈可變區包含選自由 SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:40 及 SEQ ID NO:41 所組成之群組的胺基酸序列；及輕鏈可變區 (V _LCD28)，該輕鏈可變區包含選自由 SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50 及 SEQ ID NO:51 所組成之群組的胺基酸序列。
如請求項 1、2 或 6 之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 CD28 的該第一抗原結合域包含 (a) 包含 SEQ ID NO:37 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28)；及包含 SEQ ID NO:44 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD28)，或 (b) 包含 SEQ ID NO:37 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28)；及包含 SEQ ID NO:25 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD28)，或 (c) 包含 SEQ ID NO:41 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28)；及包含 SEQ ID NO:51 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD28)，或 (d) 包含 SEQ ID NO:36 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28)；及包含 SEQ ID NO:43 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD28)，或 (e) 包含 SEQ ID NO:36 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28)；及包含 SEQ ID NO:44 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD28)，或 (f) 包含 SEQ ID NO:36 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28)；及包含 SEQ ID NO:49 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD28)，或 (g) 包含 SEQ ID NO:36 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28)；及包含 SEQ ID NO:25 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD28)，或 (h) 包含 SEQ ID NO:33 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28)；及包含 SEQ ID NO:25 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD28)，或 (i) 包含 SEQ ID NO:32 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28)；及包含 SEQ ID NO:43 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD28)，或 (j) 包含 SEQ ID NO:32 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28)；及包含 SEQ ID NO:49 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD28)，或 (k) 包含 SEQ ID NO:32 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28)；及包含 SEQ ID NO:25 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD28)。
如請求項 1 或 2 之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 CD28 的該第一抗原結合域包含 (i) 重鏈可變區 (V _HCD28)，該重鏈可變區包含 SEQ ID NO: 52 之重鏈互補決定區 CDR-H1、SEQ ID NO: 53 之 CDR-H2 及 SEQ ID NO: 54 之 CDR-H3，及輕鏈可變區 (V _LCD28)，該輕鏈可變區包含 SEQ ID NO: 55 之輕鏈互補決定區 CDR-L1、SEQ ID NO: 56 之 CDR-L2 及 SEQ ID NO: 57 之 CDR-L3。
如請求項 1、2 或 8 之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 CD28 的該第一抗原結合域包含含有 SEQ ID NO: 37 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HCD28) 之 CDR，及含有 SEQ ID NO: 44 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LCD28) 之 CDR。
如請求項 1 或 2 之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 Her2 的該抗原結合域包含含有 SEQ ID NO: 8 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HHer2) 之 CDR，及含有 SEQ ID NO: 9 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LHer2) 之 CDR。
如請求項 1 或 2 之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 Her2 的該抗原結合域包含含有 SEQ ID NO: 8 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HHer2)，及含有 SEQ ID NO: 9 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LHer2)。
如請求項 1 或 2 之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 Her2 的該抗原結合域包含含有 SEQ ID NO: 16 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HHer2) 之 CDR，及含有 SEQ ID NO: 17 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LHer2) 之 CDR。
如請求項 1、2 或 12 之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 Her2 的該抗原結合域包含含有 SEQ ID NO: 16 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HHer2)，及含有 SEQ ID NO: 17 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LHer2)。
如請求項 1 或 2 之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 Her2 的該抗原結合域包含含有 SEQ ID NO: 138 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HHer2) 之 CDR，及含有 SEQ ID NO: 139 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LHer2) 之 CDR。
如請求項 1、2 或 14 之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 Her2 的該抗原結合域包含含有 SEQ ID NO: 138 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HHer2)，及含有 SEQ ID NO: 139 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LHer2)。
如請求項 1 或 2 之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 Her2 的該抗原結合域包含含有 SEQ ID NO: 146 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HHer2) 之 CDR，及含有 SEQ ID NO: 147 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LHer2) 之 CDR。
如請求項 1、2 或 16 之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 Her2 的該抗原結合域包含含有 SEQ ID NO: 146 之胺基酸序列的重鏈可變區 (V _HHer2)，及含有 SEQ ID NO: 147 之胺基酸序列的輕鏈可變區 (V _LHer2)。
如請求項 1 或 2 之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 CD28 的該第一抗原結合域及/或能夠特異性結合 Her2 的該第二抗原結合域為 Fab 分子。
如請求項 1 或 2 之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 CD28 的該第一抗原結合域為 Fab 分子，其中 Fab 輕鏈及 Fab 重鏈之可變域 VL 及 VH 或恆定域 CL 及 CH1，特定而言該可變域 VL 及 VH 相互替換。
如請求項 1 或 2 之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 Her2 的該第二抗原結合域為習用 Fab 分子。
如請求項 1 或 2 之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 Her2 的該第二抗原結合域為 Fab 分子，其中在該恆定域 CL 中，位置 123 的胺基酸 (根據 Kabat EU 索引編號) 經選自離胺酸 (K)、精胺酸 (R) 或組胺酸 (H) 的胺基酸取代以及位置 124 的胺基酸 (根據 Kabat EU 索引編號) 獨立地經離胺酸 (K)、精胺酸 (R) 或組胺酸 (H) 取代，且其中在該恆定域 CH1 中，位置 147 的胺基酸 (根據 Kabat EU 索引編號) 獨立地經麩胺酸 (E) 或天冬胺酸 (D) 取代以及位置 213 的胺基酸 (根據 Kabat EU 索引編號) 獨立地經麩胺酸 (E) 或天冬胺酸 (D) (根據 Kabat EU 索引編號) 取代。
如請求項 1 之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其包含 (i) 含有 SEQ ID NO: 92 之胺基酸序列的第一輕鏈、含有 SEQ ID NO: 91 之胺基酸序列的第一重鏈、含有 SEQ ID NO: 96 之胺基酸序列的第二重鏈及含有 SEQ ID NO: 97 之胺基酸序列的第二輕鏈，或 (ii) 含有 SEQ ID NO: 92 之胺基酸序列的第一輕鏈、含有 SEQ ID NO: 91 之胺基酸序列的第一重鏈、含有 SEQ ID NO: 98 之胺基酸序列的第二重鏈及含有 SEQ ID NO: 97 之胺基酸序列的第二輕鏈，或 (iii) 含有 SEQ ID NO: 92 之胺基酸序列的第一輕鏈、含有 SEQ ID NO: 91 之胺基酸序列的第一重鏈、含有 SEQ ID NO: 101 之胺基酸序列的第二重鏈及含有 SEQ ID NO: 97 之胺基酸序列的第二輕鏈。
如請求項 1 之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其包含 (i) 含有 SEQ ID NO: 179 之胺基酸序列的第一輕鏈、含有 SEQ ID NO: 178 之胺基酸序列的第一重鏈、含有 SEQ ID NO: 180 之胺基酸序列的第二重鏈及含有 SEQ ID NO: 181 之胺基酸序列的第二輕鏈，或 (ii) 含有 SEQ ID NO: 179 之胺基酸序列的第一輕鏈、含有 SEQ ID NO: 178 之胺基酸序列的第一重鏈、含有 SEQ ID NO: 182 之胺基酸序列的第二重鏈及含有 SEQ ID NO: 183 之胺基酸序列的第二輕鏈。
如請求項 1 或 2 之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 Her2 的該第二抗原結合域為 Fab 分子，其中該 Fab 輕鏈及該 Fab 重鏈之該可變域 VL 及 VH 或該恆定域 CL 及 CH1，特定而言該可變域 VL 及 VH 相互替換。
如請求項 1 或 2 之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 CD28 的該第一抗原結合域為習用 Fab 分子。
如請求項 1 或 2 之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中能夠特異性結合 CD28 的該第一抗原結合域為 Fab 分子，其中在該恆定域 CL 中，位置 123 的胺基酸 (根據 Kabat EU 索引編號) 經選自離胺酸 (K)、精胺酸 (R) 或組胺酸 (H) 的胺基酸取代以及位置 124 的胺基酸 (根據 Kabat EU 索引編號) 獨立地經離胺酸(K)、精胺酸 (R) 或組胺酸 (H) 取代，且其中在該恆定域 CH1 中，位置 147 的胺基酸 (根據 Kabat EU 索引編號) 獨立地經麩胺酸 (E) 或天冬胺酸 (D) 取代以及位置 213 的胺基酸 (根據 Kabat EU 索引編號) 獨立地經麩胺酸 (E) 或天冬胺酸 (D) (根據 Kabat EU 索引編號) 取代。
如請求項 1 或 2 之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其包含 (i) 含有 SEQ ID NO: 83 之胺基酸序列的第一輕鏈、含有 SEQ ID NO: 74 之胺基酸序列的第一重鏈、含有 SEQ ID NO: 99 之胺基酸序列的第二重鏈及含有 SEQ ID NO: 100 之胺基酸序列的第二輕鏈，或 (ii) 含有 SEQ ID NO: 83 之胺基酸序列的第一輕鏈、含有 SEQ ID NO: 74 之胺基酸序列的第一重鏈、含有 SEQ ID NO: 102 之胺基酸序列的第二重鏈及含有 SEQ ID NO: 100 之胺基酸序列的第二輕鏈。
如請求項 1、2、22 和 23 中任一項之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中該第一抗原結合域及該第二抗原結合域各自為 Fab 分子，且該 Fc 域由能夠穩定締合之第一次單元及第二次單元構成；且其中 (i) 該第一抗原結合域在 Fab 重鏈的 C 端與該 Fc 域的該第一次單元的 N 端融合，且該第二抗原結合域在 Fab 重鏈的 C 端與該 Fc 域的該第二次單元的 N 端融合，或 (ii) 該第二抗原結合域在 Fab 重鏈的 C 端與該 Fc 域的該第一次單元的 N 端融合，且該第一抗原結合域在 Fab 重鏈的 C 端與該 Fc 域的該第二次單元的 N 端融合。
如請求項 1、2 和 22 中任一項之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中該 Fc 域包含促進該 Fc 域的該第一次單元與該第二次單元之締合的修飾。
如請求項 1、2、22 和 23 中任一項之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子，其中該 Fc 域的該第一次單元包含胺基酸取代 S354C 及/或 T366W (EU 編號)，且該 Fc 域的該第二次單元包含胺基酸取代 Y349C、T366S 及 Y407V (根據 Kabat EU 索引編號)。
一種或多種經分離之多核苷酸，其編碼如請求項 1 至 30 中任一項之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子。
一種或多種載體，特定而言表現載體，其包含如請求項 31 之多核苷酸。
一種宿主細胞，其包含如請求項 31 之多核苷酸或如請求項 32 之載體。
一種生產雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子之方法，其包含步驟 a) 在適合表現該雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子之條件下培養如請求項 33 之宿主細胞，及 b) 視情況回收該雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子。
一種藉由如請求項 34 之方法所生產之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子。
一種醫藥組成物，其包含如請求項 1 至 30 中任一項之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子以及至少一種醫藥上可接受之賦形劑。
一種如請求項 1 至 30 中任一項之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子或如請求項 36 之醫藥組成物在藥物製造中之用途，該藥物用於增強 (a) T 細胞活化或 (b) T 細胞效應功能。
一種如請求項 1 至 30 中任一項之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子或如請求項 36 之醫藥組成物在藥物製造中之用途，該藥物用於癌症治療，其中該藥物係與化療劑、放射療法及/或用於癌症免疫療法的其他藥劑組合投予。
一種如請求項 1 至 30 中任一項之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子或如請求項 36 之醫藥組成物在藥物製造中之用途，該藥物用於癌症治療，其中該藥物係與 T 細胞活化抗 CD3 雙特異性抗體組合投予。
如請求項 39 之用途，其中該 T 細胞活化抗 CD3 雙特異性抗體為抗 Her2/抗 CD3 抗體。
一種如請求項 1 至 30 中任一項之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子或如請求項 36 之醫藥組成物在藥物製造中之用途，該藥物用於癌症治療，其中該藥物係與抗 PD-L1 抗體或抗 PD-1 抗體組合投予。
一種如請求項 1 至 30 中任一項之雙特異性激動性 CD28 抗原結合分子或如請求項 36 之醫藥組成物在藥物製造中之用途，該藥物用於疾病治療，特定而言用於癌症治療。