TW202211914A - 治療關節炎之藥學組合物及其製備方法 - Google Patents

Abstract

在此揭示一種治療關節炎之藥學組合物及其製備方法。所述藥學組合物是關節炎緩釋劑型藥物，其主要包含載有親脂性及親水性消炎止痛藥物的微脂體，透過結合不同種類和性質的止痛藥物，以延長藥物的釋放時間。

Description

治療關節炎之藥學組合物及其製備方法

本發明關於治療關節炎的領域，特別是關於一種微脂體藥學組合物及製備方法。

退化性關節炎好發於45歲以上個體，據統計全球關節炎患者高達約3.55億人。台灣罹患退化性關節炎者約佔全人口的5-6%，相當於120~140萬人飽受關節疼痛之苦。

目前關節炎止痛的給藥方式主要是以非固醇類消炎劑治療，以提供關節炎症的舒緩，包括口服緩釋藥物及關節腔內注射緩釋藥物等。該些藥物的主要副作用會造成骨頭壞死、凝血功能障礙與腸胃道潰爛等。再者，注射類固醇雖然可舒緩骨性關節炎的發炎症狀，但有部分研究顯示，類固醇會產生軟骨毒性，造成軟骨損害，既而將類固醇可施打次數侷限至每年三至四次。

再者，在治療退化性關節炎的方式亦可採用細胞療法，以減緩關節退化或促進受傷細胞再生，然而此治療方式較為昂貴，治療過程中需避免感染的發生，且侵入性治療對於患者而言其接受度較低。

有鑑於此，本領域亟需一種新穎的關節炎藥物劑型，以改善先前技術的缺陷。

為了讓讀者了解本揭示內容的基本意涵，發明內容係提供本揭示內容的簡要說明。發明內容並非本揭示內容的完整描述，且其用意非界定本發明的技術特徵或權利範圍。

本發明之一態樣是關於一種治療關節炎之藥學組合物。本發明之關節炎緩釋藥物劑型是包覆親脂性及親水性的消炎藥物以延長藥物釋放時間。依據本發明一實施方式，所述治療關節炎的藥學組合物包含一微脂體，其由一磷脂雙層所組成並界定出一內部空間；水溶性非類固醇消炎藥物位於內部空間；親脂性固醇類消炎藥物位於該磷脂雙層；以及親水性固醇類消炎藥物位於內部空間。

依據本發明一具體實施方式，所述水溶性非類固醇消炎藥物是雙氯芬酸，親脂性固醇類消炎藥物和親水性固醇類消炎藥物是地塞米松。

在可任選的實施方式中，水溶性非類固醇消炎藥物、親脂性固醇類消炎藥物和親水性固醇類消炎藥物的重量比為40：5-20：5-20。在一實施方式中，水溶性非類固醇消炎藥物、親脂性固醇類消炎藥物和親水性固醇類消炎藥物的重量比為40：5：5。

依據本發明另一實施方式，所述藥學組合物更包含一透明質酸鈉包覆所述微脂體。

本發明另一態樣是關於一種製備治療關節炎藥學組合物的方法，包含以下步驟： 混合親脂性固醇類消炎藥物、膽固醇、二棕櫚醯磷脂醯膽鹼(Dipalmitoylphosphatidylcholine )和二氯甲烷形成一混合物； 乾燥該混合物去除二氯甲烷後；以及 加入水溶性非類固醇消炎藥物和親水性固醇類消炎藥物進行水合反應，經過濾得到複數個載有該水溶性非類固醇消炎藥物、親脂性固醇類消炎藥物和親水性固醇類消炎藥物之微脂體。

依據本發明一實施方式，所述方法更包含混合等體積的透明質酸鈉與該微脂體。

再者，在本發明任一實施方式所示之方法，其中水溶性非類固醇消炎藥物是雙氯芬酸，親脂性固醇類消炎藥物和親水性固醇類消炎藥物是地塞米松。

在本發明其他實施方式所示之方法中，其中水溶性非類固醇消炎藥物、親脂性固醇類消炎藥物和親水性固醇類消炎藥物的重量比為40：5-20：5-20。在其他實施方式中，所述水溶性非類固醇消炎藥物、親脂性固醇類消炎藥物和親水性固醇類消炎藥物的重量比為40：5：5。

本發明所屬技術領域中具有通常知識者參閱下文實施方式後，可充分瞭解本發明的中心概念、所採用的技術手段及各種實施態樣。

為使本揭示內容的敘述更加詳盡與完備，下文針對本發明實施態樣與具體實施例提出說明性的文字敘述；但本發明的實施態樣及具體實施例並非僅限於此。

除非另有說明，本說明書所用的科學與技術專有名詞之含義與本技術領域中具有通常知識者所理解與慣用的意義相同。再者，本說明書所用的名詞均涵蓋該名詞的單數型及複數型，除非另有指明。

在本說明書所述，「約」一詞通常係指實際數值在一特定數值或範圍的正負10%、5%、1%或0.5%之內。「約」一詞在本文中代表實際數值落在平均值的可接受標準誤差之內，視本發明所屬技術領域中具有通常知識者的考量而定。除了實驗例外，或除非另有明確的說明，當可理解此處所用的範圍、數量、數值與百分比均經過「約」的修飾。因此，除非另有說明，本說明書與附隨申請專利範圍所揭示的數值或參數皆為約略的數值，且可視需求而更動。

在此所述「個體」或「患者」等詞係指可利用本發明藥學組合物治療或施用本發明藥學組合物的動物，包含人類。除非特別指明，「個體」或「患者」涵蓋雄性與雌性動物。

為解決先前技術所存在的問題，本發明提出一種新穎治療關節炎的藥學組合物及其製備方法。本發明一實施態樣是關於一種緩釋劑型的藥學組合物。所述藥學組合物包含能夠承載多種不同性質和極性藥物的微脂體，例如，水溶性非類固醇消炎藥物、親脂性固醇類消炎藥物和親水性固醇類消炎藥物。

依據本發明一具體實施方式，所述微脂體同時包覆親脂性及親水性的固醇類藥物地賽米松外，在微脂體中心另包覆水溶性非類固類藥物雙氯芬酸，透過各種藥物不同機制的止痛及消炎效果，延長止痛藥物對於個體作用的時間。

依據另一實施方式，所述藥學組合物更利用透明質酸鈉(Hyaluronan)包覆微脂體，當透明質酸鈉分解時可以進⼀步的補充作為關節腔內的潤滑液，以降低個體對於藥物的使用依賴性。具體而言，透過本發明藥學組合物中微脂體上載有的雙氯芬酸，能夠降低固醇類藥物的使用量及降低副作用的產生，再同時結合不同極性(親水性及親脂性)的固醇類藥物地賽米松，能夠用以快速消炎以抑制疼痛，這三種不同性質與極性的藥物有不同的藥物釋放時間，這些藥物皆可以分別單獨釋放並達到降低患部疼痛的效果，因此藥物釋放時間可以大幅延長，讓本發明藥學組合物在藥物達到消炎及止痛效果，具有潛力作為治療關節炎長效緩釋劑型使用。

第1圖為依據本發明一實施方式所示之藥學組合物100的示意圖。所述藥學組合物100包含一微脂體110，由一磷脂雙層112環繞所形成，並界定出一內部空間114。所述水溶性非類固醇消炎藥物120和親水性固醇類消炎藥物132位於內部空間，而親脂性固醇類消炎藥物134位於磷脂雙層112。依據本發明一實施方式，所述水溶性非類固醇消炎藥物120是雙氯芬酸，親脂性固醇類消炎藥物134和親水性固醇類消炎藥物132分別是親脂性和親水性地塞米松。

在可任選的實施方式中，所述水溶性非類固醇消炎藥物、親脂性固醇類消炎藥物和親水性固醇類消炎藥物的重量比為40：5-20：5-20。在一實施方式中，所述水溶性非類固醇消炎藥物、親脂性固醇類消炎藥物和親水性固醇類消炎藥物的重量比為40：5：5。

第2圖為依據本發明另一實施方式所示之藥學組合物200，其更包含一透明質酸鈉101包覆第1圖所示之藥學組合物100，即載有多種不同性質和極性的非固醇類和固醇類藥物之微脂體。

下文揭示多個實施例以闡述本發明各種不同的實施態樣，以使本發明所屬技術領域中具有通常知識者依據本說明書的揭示能夠實施本發明所揭示技術內容。因此，以下所揭示的各實施例不可用以限制本發明的權利範圍。再者，本說明書所引述的所有文獻，皆視為完全引用成為本說明書的一部分。

實施例1 製備本發明藥學組合物Lipo-DIC/DEX

本發明藥學組合物雙氯芬酸(Diclofenac, DIC)/地塞米松(Dexamethasone, DEX)奈米微脂體藥物Lipo-DIC/DEX的配方及各配方所製成的Lipo-DIC/DEX之物理性質分析結果，請參見表1-1和表1-2所示。

舉例而言，以製作編號7之藥學組合物Lipo-DIC/DEX為例，需分別取5 mg之脂溶性地賽米松、7.7 mg 的膽固醇與110.6 mg的二棕櫚醯磷脂醯膽鹼(Dipalmitoylphosphatidylcholine, DSPC)藥物(溶於5 mL的二棕櫚醯磷脂醯膽鹼(methylene chloride, DCM)後置於50mL圓底燒瓶中，使用旋轉減壓乾燥機以60℃進行減壓乾燥，直至瓶內DCM完全抽乾。之後加入已加熱至70℃，含有40 mg 雙氯芬酸及5 mg水溶性地賽米松之生理食鹽水溶液10 mL進行水合30分鐘，同樣以0.2 µm的過濾器進行過濾，並以10 mL緩衝溶液沖洗過濾器之過濾膜。最後以PD-10 管柱的方式收集純化的藥學組合物Lipo-DIC/DEX。

表1-1

編號	DIC (mg)	DEX (mg)	DEX sodium (mg)	包覆率(%) a	DIC 含量(%) b	DEX含量(%) b
1	40	20	0	94.7±2.4 %	15.8±2.1 %	0.9±0.3 %
2	40	15	5	93.1±4.2 %	16.4±1.0 %	1.6±0.4 %
3	40	10	10	91.6±2.7 %	17.2±2.4 %	2.6±1.0 %
4	40	5	15	92.4±4.0 %	16.1±3.8 %	4.4±1.2 %
5	40	0	20	91.4±3.5 %	18.2±3.2 %	4.8±1.5 %
6	40	10	0	92.1±4.1 %	15.1±2.3 %	1.2±0.5 %
7	40	5	5	90.5±5.6 %	22.5±4.1 %	2.5±0.6 %
8	40	0	10	93.9±3.3 %	20.8±5.4 %	3.7±1.1 %

表 1-2

編號	平均尺寸(nm) (PDI) c	Zeta 電位 (mV)
1	85.9±0.3	-8.8±3.9
2	98.5±0.3	-25.5±4.5
3	103.0±0.2	-27.9±5.4
4	92.4±0.3	-16.4±3.2
5	97.4±0.2	-17.9±4.4
6	100.0±0.3	-27.1±4.8
7	103.6±0.3	-22.3±4.6
8	98.6±0.3	-25.5±5.0

實施例2 製備本發明含透明質酸鈉之藥學組合物HA-Lipo- DIC/DEX

製作以透明質酸鈉包覆雙氯芬酸/地塞米松奈米微脂體藥物HA-Lipo- DIC/DEX，則先配置濃度為20mg/mL之透明質酸鈉(Hyaluronansodium，HA，分子量為500~750 kDa)水溶液，經高溫高壓(121℃，15-20分鐘)滅菌後，待放置至50-60℃後，與等體積之Lipo-DIC/DEX混合均勻，即為HA- Lipo- DIC/DEX。

實施例3 藥學組合物Lipo-DIC/DEX藥物釋放分析

3.1 雙氯芬酸釋放分析

以2 mL微脂體奈米顆粒藥物包覆藥物的Lipo-DIC或Lipo-DIC/DEX溶液置放於透析膜中(以分子量為3.5 kDa進行隔離)，並將透析膜置放在含有50 mL生理食鹽水(pH ~7.4)， 37℃的環境中進行透析並於固定的時間間隔收集釋放藥物。釋放出來藥物是利用高效液相層析(high performance liquid chromatography，HPLC)進行分析。流動相(mobile phase)由乙腈(acetonitrile)和含0.1％三氟乙酸(Trifluoroacetic Acid)的蒸餾水組成，流速為1.0 mL/min，雙氯芬酸是在波長為280 nm的條件下檢測。結果如第3圖所示，藥學組合物Lipo-DIC/DEX之雙氯芬酸藥物釋放方面，30分鐘可達到有效藥物作用劑量，雙氯芬酸能夠持續釋放至168小時。

3.2  地賽米松釋放分析

以2 mL微脂體奈米顆粒藥物包覆藥物的Lipo-DEX或Lipo-DIC/DEX溶液置放於透析膜中(以分子量為3.5 kDa進行隔離)，並將透析膜置放在含有50 mL生理食鹽水(pH ~7.4)， 37℃的環境中進行透析並於固定的時間間隔收集釋放藥物。釋放出來藥物是利用高效液相層析(high performance liquid chromatography，HPLC)進行分析。流動相(mobile phase)由乙腈(acetonitrile)和含0.1％三氟乙酸(Trifluoroacetic Acid)的蒸餾水組成，流速為1.0 mL/min。地塞米松是在波長為254 nm進行檢測。

藥學組合物Lipo- DIC/DEX在地賽米松藥物釋放方面，以HPLC測定親水性地賽米松和親脂性地賽米松的釋放結果。結果顯示，親水性地賽米松在10分鐘後藥物釋放可以達到有效作用濃度，親脂性地賽米松在4小時可以達到有效作用濃度，且無論是親脂性或親水性的地賽米松其藥物釋放長達至48小時（參見第4圖）。

實施例4 藥學組合物Lipo-DIC/DEX生物相溶性分析

人類軟骨細胞株(Human Chondrosarcoma cell line, SW-1353)是購買自Bioresource Collection and Research Center (BCRC)，並培養在含有10 %胎牛血清的培養基(Leibovitz's L-15 Medium)中，內含100 U/mL抗生素 Penicillin，100 ug/mL Streptomycin及2 mM L-Glutamine。細胞株皆培養在溫度37℃，濕度9.8%，二氧化碳濃度為5%的培養箱中。細胞株的繼代培養(passage)則在細胞長滿後，先將培養基吸乾，再以1倍濃度的生理實驗水清洗兩次後，加入1~2 C.C. 0.05% Tyrpsin-0.02% EDTA，使細胞自培養瓶底部脫落後，再以10 mL之角膜上皮細胞基礎培養基將細胞均勻沖散成單一的細胞，此時約留下五分之一或六分之一的細胞在原培養瓶中繼續培養，其餘細胞則依不同的實驗需要，分別均勻的分配到不同大小的培養皿或培養瓶中繼續培養。

進行CGA-Lipo-MFX、CGA-Lipo-DEX及CGA-Lipo-MFX/DEX毒性測試所使用的細胞株為人類軟骨細胞株SW-1353。將8×103的SW-1353細胞株置入細胞培養96孔盤中，之後放入37℃，5% CO2的培養箱培養24小時使細胞貼附並恢復健康生理活性。經過24小時後，將培養基吸出，用PBS清洗過後，加入已置備好的CGA、CGA-Lipo-MFX、CGA-Lipo-DEX及CGA-Lipo-MFX/DEX後再分別培養24、48及72小時。每個實驗點皆重複8次。待測定的時間到達後，再以PBS清洗後加入0.5 mg/mL的MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide)溶液，並繼續培養2小時。之後去除上清液後加入100 μL二甲基亞碸(dimethyl sulfoxide，DMSO)後培養5分鐘。釋放藥物的測定方式是利用酵素免疫分析測讀儀(ELISA Reader)並以波長570 nm以進行分析。

結果請參見第5圖至第7圖，無論是在24小時、48小時和72小時的實驗中皆產生相同的結果。具體而言，單以DIC/DEX加入細胞後在中高濃度下即產生部分細胞毒性，然而，微脂體和藥學組合物Lipo- DIC/DEX與細胞共培養後細胞存活率並沒有顯著差異，細胞存活率皆超過90%，因此，有此可證實本發明之藥學組合物Lipo- DIC/DEX生物相容性高。

綜合以上所揭示的內容可得知本發明的藥學組合物為一種長效緩釋劑型，並透過不同種類的藥物，即非固醇類和固醇類消炎止痛藥物，能夠有效降低類固醇所造成的局部軟骨毒性、凝血功能障礙與腸胃道的潰瘍等副作用的發生，並且本發明藥學組合物的複合藥物能夠能夠以不同時間點釋放，綜合速釋和緩釋的雙功效用，能夠有效改善個體關節炎疼痛的效果。

無

為讓本發明的上述與其他目的、特徵、優點與實施例能更明顯易懂，所述圖式說明如下： 第1圖為依據本發明一實施方式所示藥學組合物100； 第2圖為依據本發明另一實施方式所示之藥學組合物200； 第3圖和第4圖分別是藥學組合物Lipo-DIC/DEX藥物釋放分析的結果；以及 第5圖至第7圖為藥學組合物Lipo-DIC/DEX生物相容性分析的結果。

Claims (10)

1. 一種治療關節炎之藥學組合物，包含： 一微脂體，由一磷脂雙層所組成並界定出一內部空間； 一水溶性非類固醇消炎藥物，位於該內部空間； 一親脂性固醇類消炎藥物，位於該磷脂雙層；以及 一親水性固醇類消炎藥物，位於該內部空間。
2. 如請求項1所述之藥學組合物，其中該水溶性非類固醇消炎藥物是雙氯芬酸，該親脂性固醇類消炎藥物和該親水性固醇類消炎藥物是地塞米松。
3. 如請求項1所述之藥學組合物，其中該水溶性非類固醇消炎藥物、該親脂性固醇類消炎藥物和該親水性固醇類消炎藥物的重量比為40：5-20：5-20。
4. 如請求項3所述之藥學組合物，其中該水溶性非類固醇消炎藥物、該親脂性固醇類消炎藥物和該親水性固醇類消炎藥物的重量比為40：5：5。
5. 如請求項1所述之藥學組合物，更包含一透明質酸鈉包覆該微脂體。
6. 一種製備治療關節炎藥學組合物的方法，包含以下步驟： (a)  混合親脂性固醇類消炎藥物、膽固醇、二棕櫚醯磷脂醯膽鹼(Dipalmitoylphosphatidylcholine )和二氯甲烷形成一混合物； (b) 乾燥該混合物去除二氯甲烷後；以及 (c)  加入水溶性非類固醇消炎藥物和親水性固醇類消炎藥物進行水合反應，經過濾得到複數個載有該水溶性非類固醇消炎藥物、親脂性固醇類消炎藥物和親水性固醇類消炎藥物之微脂體。
7. 如請求項6所述之方法，更包含步驟(d)混合等體積的透明質酸鈉與該微脂體。
8. 如請求項6所述之方法，其中該水溶性非類固醇消炎藥物是雙氯芬酸，該親脂性固醇類消炎藥物和該親水性固醇類消炎藥物是地塞米松。
9. 如請求項6所述之方法，其中該水溶性非類固醇消炎藥物、該親脂性固醇類消炎藥物和該親水性固醇類消炎藥物的重量比為40：5-20：5-20。
10. 如請求項6所述之方法，其中該水溶性非類固醇消炎藥物、該親脂性固醇類消炎藥物和該親水性固醇類消炎藥物的重量比為40：5：5。

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