TW202200210A - 使用精胺酸酶治療病毒感染之方法 - Google Patents

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Abstract

本發明係關於精胺酸酶(例如，非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶)在治療病毒相關疾病或病症中之用途、精胺酸酶在治療其他病原體相關疾病或病症中之用途，及包含用於該等用途之精胺酸酶之套組。

Description

使用精胺酸酶治療病毒感染之方法
本發明係關於精胺酸酶(例如聚乙二醇化精胺酸酶)在治療病毒相關疾病或病症中之用途、精胺酸酶(例如聚乙二醇化精胺酸酶)在治療其他病原體相關疾病或病症中之用途，及包含用於該等用途之精胺酸酶(例如聚乙二醇化精胺酸酶)之套組。
儘管在治療傳染病及病症中取得進展，但仍繼續存在治療挑戰。舉例而言，用於治療之病原體可對治療劑產生抗性。治療抗性的發展通常發生在抗生素抗藥性細菌之情形下(Blair等人, Molecular mechanisms of antibiotic resistance.Nat Rev Microbiol . 2015年1月；13(1)：42-51。)
此外，無治療可用於抑制所關注的病原體。在治療多種類型之病毒之情形下，經常遇到缺乏適合之治療劑。病毒性疾病及病症之治療由於缺乏可用抗病毒療法而尤其具有挑戰性。
傳染病，諸如由病毒感染引起之彼等傳染病，持續呈現顯著的公共衛生風險。根據美國疾病控制及預防中心(U.S. Center for Disease Control and Prevention)，2014年伊波拉病毒(Ebolavirus)爆發產生大約29,000個新病例，其中超過11,000例死亡。根據世界衛生組織(World Health Organization)，截至2020年3月30日，由病毒SARS-CoV-2 (COVID-19)在2019至2020年引起之冠狀病毒大流行產生超過785,000例，且幾乎有38,000例死亡。除潛在致死性病毒性疾病之感染風險以外，許多個體忍受慢性復發性病毒感染，諸如人類乳頭瘤病毒(HPV)或單純疱疹病毒(HSV)。
因此，仍存在對用於傳染病及病症(包括與病毒相關之疾病及病症)之新的且有效的治療的關鍵需求。亦需要有效針對多種病毒物種及病毒株之廣效抗病毒療法。
本文描述一種在治療疾病或病症(例如病毒相關疾病或病症)中使用精胺酸酶(例如，非聚乙二醇化或聚乙二醇化精胺酸酶)之方法。舉例而言，本文描述一種治療疾病或病症(例如，病毒相關疾病或病症)之方法，其中該方法包括投與治療有效量之包含精胺酸酶(例如，非聚乙二醇化或聚乙二醇化精胺酸酶)或其醫藥學上可接受之鹽的組合物。在一些實施例中，該方法包括向患者(例如需要治療之患者)投與治療有效量之組合物。
在一些實施例中，精胺酸酶(例如，非聚乙二醇化或聚乙二醇化精胺酸酶)或其醫藥學上可接受之鹽或包含精胺酸酶之組合物有效抑制病毒之基因體複製。在一些實施例中，精胺酸酶或包含精胺酸酶之組合物或其醫藥學上可接受之鹽有效抑制病毒之傳播。在一些實施例中，精胺酸酶或其醫藥學上可接受之鹽或包含精胺酸酶之組合物有效抑制病毒基因表現。在一些實施例中，精胺酸酶或其醫藥學上可接受之鹽或包含精胺酸酶之組合物有效抑制病毒之組裝。本文亦描述含有精胺酸酶或其醫藥學上可接受之鹽，或包含精胺酸酶之組合物或其醫藥學上可接受之鹽的套組。
胺基酸精胺酸，儘管對於哺乳動物細胞中之過程(諸如細胞增殖及生長)至關重要，但由於其代謝瓜胺酸得到精胺酸池之能力而視為人類中之非必需胺基酸(Hecker等人(1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 87(21)：8612-6)。相比之下，許多病毒依賴於外生性精胺酸以用於蛋白質合成(US 9,011,845 B2)。本發明人已發現精胺酸酶及聚乙二醇化精胺酸酶有效耗乏精胺酸含量且呈現治療病毒感染之出人意料的機制，具有靶向廣泛範圍之病毒的能力。另外，本發明人已發現，藉由非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶之精胺酸耗乏提供治療先前未遇到之病毒或當前未存在經批准之治療劑之病毒(諸如SARS-CoV-2(COVID-19))的方法。
本文描述一種治療疾病或病症(例如，病毒相關疾病或病症)之方法，其中該方法包括投與治療有效量之包含精胺酸酶(例如，非聚乙二醇化或聚乙二醇化精胺酸酶)或其醫藥學上可接受之鹽的組合物。在本文所描述之一些實施例中，聚乙二醇化精胺酸酶包含至少一個與精胺酸酶序列接合之聚乙二醇(PEG)分子。
在一些實施例中，精胺酸酶與SEQ ID NO:1-41之蛋白質序列或其片段具有至少約90%序列一致性。在一些實施例中，精胺酸酶與選自由SEQ ID NO:3-41組成之群的蛋白質序列或其片段具有至少約90%序列一致性。在一些實施例中，精胺酸酶與SEQ ID NO:1或2之蛋白質序列或其片段具有至少約90%序列一致性。在一些實施例中，精胺酸酶包含選自由SEQ ID NO:1-41組成之群的蛋白質序列。在一些實施例中，精胺酸酶包含選自由SEQ ID NO:3-41組成之群的蛋白質序列。在一些實施例中，精胺酸酶包含SEQ ID NO:1或2之蛋白質序列。
因此，在本文所描述之一些實施例中，該方法包括向有需要之患者投與治療有效量之包含精胺酸酶或其醫藥學上可接受之鹽的組合物，其中該精胺酸酶：與SEQ ID NO:1-41之蛋白質序列或其片段具有至少約90%序列一致性；與選自由SEQ ID NO:3-41組成之群的蛋白質序列或其片段具有至少約90%序列一致性；與SEQ ID NO:1或2之蛋白質序列或其片段具有至少約90%序列一致性；包含選自由SEQ ID NO:1-41組成之群的蛋白質序列；包含選自由SEQ ID NO:3-41組成之群的蛋白質序列；或包含SEQ ID NO:1或2之蛋白質序列。
因此，在一個態樣中，本發明提供治療病毒相關疾病或病症之方法，該方法包含向有需要之患者投與治療有效量之包含精胺酸酶或其醫藥學上可接受之鹽的組合物，其中非聚乙二醇化或聚乙二醇化精胺酸酶與SEQ ID NO:1或2或其片段具有至少約90%序列一致性，且其中病毒相關疾病或病症與選自由以下組成之群的病毒相關：冠狀病毒、乳頭瘤病毒、肺病毒、小核糖核酸病毒、黃病毒、α病毒、伊波拉病毒、麻疹病毒、腸病毒、正肺病毒、慢病毒及肝病毒。在一些實施例中，精胺酸酶為包含至少一個與精胺酸酶接合之聚乙二醇分子之聚乙二醇化精胺酸酶。在一些實施例中，病毒相關疾病或病症為病毒感染。舉例而言，在一些實施例中，病毒相關疾病或病症為選自由以下組成之群的病毒感染：冠狀病毒感染、乳頭瘤病毒感染、肺病毒感染、小核糖核酸病毒感染、黃病毒感染、α病毒感染、伊波拉病毒感染、麻疹病毒感染、腸病毒感染、正肺病毒感染、慢病毒感染及肝病毒感染。
在另一態樣中，本發明提供一種治療病毒相關疾病或病症之方法，該方法包含向有需要之患者投與治療有效量之包含精胺酸酶或其醫藥學上可接受之鹽的組合物，其中非聚乙二醇化或聚乙二醇化精胺酸酶與選自由SEQ ID NO:3-50及56組成之群的蛋白質序列或其片段具有至少約90%序列一致性。在一些實施例中，精胺酸酶為包含至少一個與精胺酸酶接合之聚乙二醇分子之聚乙二醇化精胺酸酶。在一些實施例中，病毒相關疾病或病症與選自由以下組成之群的病毒相關：RNA病毒、DNA病毒、冠狀病毒、乳頭瘤病毒、肺病毒、小核糖核酸病毒、流感病毒、腺病毒、巨細胞病毒、多瘤病毒、痘病毒、黃病毒、α病毒、伊波拉病毒、麻疹病毒、腸病毒、正肺病毒、慢病毒及肝病毒。在一些實施例中，病毒相關疾病或病症為病毒感染。舉例而言，在一些實施例中，病毒相關疾病或病症為選自由以下組成之群的病毒感染：RNA病毒感染、DNA病毒感染、冠狀病毒感染、乳頭瘤病毒感染、肺病毒感染、小核糖核酸病毒感染、流感病毒感染、腺病毒感染、巨細胞病毒感染、多瘤病毒感染、痘病毒感染、黃病毒感染、α病毒感染、伊波拉病毒感染、麻疹病毒感染、腸病毒感染、正肺病毒感染、慢病毒感染及肝病毒感染。
在一些實施例中，病毒相關疾病或病症侷限於或影響患者之器官或組織。在一些實施例中，病毒相關疾病或病症包含患者之器官或組織之病毒感染。在某些實施例中，器官或組織可以為(但不限於)眼、耳、內耳、肺、氣管、支氣管、細支氣管、肝臟、膽囊、膽管、腎臟、膀胱、睾丸、子宮頸、卵巢、子宮、皮膚或腦。舉例而言，在某些實施例中，器官或組織係選自由以下組成之群：眼、耳、內耳、肺、氣管、支氣管、細支氣管、肝臟、膽囊、膽管、腎臟、膀胱、睾丸、子宮頸、卵巢、子宮、皮膚及腦。
在一些實施例中，病毒相關疾病或病症可以為(但不限於)：急性呼吸道窘迫症候群；慢性阻塞性肺病(COPD)；肺炎；抗藥性肺炎；手、足及口病；異位性哮喘；或非異位性哮喘。在一些實施例中，病毒相關疾病或病症係選自由以下組成之群：急性呼吸道窘迫症候群；COPD；肺炎；抗藥性肺炎；手、足及口病；異位性哮喘；及非異位性哮喘。
在各種實施例中，本文揭示一種抑制病毒基因體複製之方法、一種抑制病毒傳播之方法、一種抑制病毒組裝之方法、一種抑制病毒基因表現之方法及一種抑制病毒釋放之方法。前述方法可以包括向有需要之患者投與治療有效量之包含精胺酸酶(例如，包含SEQ ID NO:1或2之胺基酸序列的精胺酸酶或包含選自由SEQ ID NO:3-50及56組成之群的胺基酸序列的精胺酸酶)或其醫藥學上可接受之鹽的組合物。舉例而言，本文提供一種抑制病毒之基因體複製之方法，該方法包含向有需要之患者投與治療有效量之包含精胺酸酶或其醫藥學上可接受之鹽的組合物，該精胺酸酶包含SEQ ID NO:1或2之胺基酸序列，其中精胺酸酶與SEQ ID NO:1或2或其片段具有至少約90%序列一致性，且其中病毒係選自由以下組成之群：冠狀病毒、乳頭瘤病毒、肺病毒、小核糖核酸病毒、黃病毒、α病毒、伊波拉病毒、麻疹病毒、腸病毒、正肺病毒、慢病毒及肝病毒。在一些實施例中，精胺酸酶為包含至少一個與精胺酸酶接合之聚乙二醇分子之聚乙二醇化精胺酸酶。
在另一態樣中，本文提供一種抑制病毒之基因體複製之方法，該方法包含向有需要之患者投與治療有效量之包含精胺酸酶或其醫藥學上可接受之鹽的組合物，其中精胺酸酶與選自由SEQ ID NO:3-50及56組成之群的蛋白質序列或其片段具有至少約90%序列一致性。在一些實施例中，精胺酸酶為包含至少一個與精胺酸酶接合之聚乙二醇分子之聚乙二醇化精胺酸酶。在一些實施例中，病毒係選自由以下組成之群：RNA病毒、DNA病毒、冠狀病毒、乳頭瘤病毒、肺病毒、小核糖核酸病毒、流感病毒、腺病毒、巨細胞病毒、多瘤病毒、痘病毒、黃病毒、α病毒、伊波拉病毒、麻疹病毒、腸病毒、正肺病毒、慢病毒及肝病毒。
在另一態樣中，本文提供一種抑制病毒傳播之方法，該方法包含向有需要之患者投與治療有效量之包含精胺酸酶或其醫藥學上可接受之鹽的組合物，且其中精胺酸酶與包含SEQ ID NO:1或2之精胺酸酶胺基酸序列之蛋白質序列具有至少約90%序列一致性，其中病毒係選自由以下組成之群：冠狀病毒、乳頭瘤病毒、肺病毒、小核糖核酸病毒、黃病毒、α病毒、伊波拉病毒、麻疹病毒、腸病毒、正肺病毒、慢病毒及肝病毒。在一些實施例中，精胺酸酶為包含至少一個與精胺酸酶接合之聚乙二醇分子之聚乙二醇化精胺酸酶。
在另一態樣中，本文提供一種抑制病毒傳播之方法，該方法包含向有需要之患者投與治療有效量之包含精胺酸酶或其醫藥學上可接受之鹽的組合物，且其中精胺酸酶與選自由SEQ ID NO:3-50及56組成之群的蛋白質序列或其片段具有至少約90%序列一致性。在一些實施例中，精胺酸酶為包含至少一個與精胺酸酶接合之聚乙二醇分子之聚乙二醇化精胺酸酶。在一些實施例中，病毒係選自由以下組成之群：RNA病毒、DNA病毒、冠狀病毒、乳頭瘤病毒、肺病毒、小核糖核酸病毒、流感病毒、腺病毒、巨細胞病毒、多瘤病毒、痘病毒、黃病毒、α病毒、伊波拉病毒、麻疹病毒、腸病毒、正肺病毒、慢病毒及肝病毒。
在另一態樣中，本文提供一種抑制病毒組裝之方法，該方法包含向有需要之患者投與治療有效量之包含精胺酸酶或其醫藥學上可接受之鹽的組合物，其中精胺酸酶與選自由SEQ ID NO:1-50及56組成之群的蛋白質序列或其片段具有至少約90%序列一致性。在一些實施例中，精胺酸酶為包含至少一個與精胺酸酶接合之聚乙二醇分子之聚乙二醇化精胺酸酶。
在另一態樣中，本文提供一種抑制病毒基因表現之方法，該方法包含向有需要之患者投與治療有效量之包含精胺酸酶或其醫藥學上可接受之鹽的組合物，其中精胺酸酶與選自由SEQ ID NO:1-50及56組成之群的蛋白質序列或其片段具有至少約90%序列一致性。在一些實施例中，精胺酸酶為包含至少一個與精胺酸酶接合之聚乙二醇分子之聚乙二醇化精胺酸酶。在一些實施例中，抑制包含抑制特定基因組基因之基因表現。舉例而言，在一些實施例中，抑制包含抑制β基因表現、γ基因表現或β基因表現及γ基因表現。
在另一態樣中，本文提供一種抑制病毒釋放之方法，該方法包含向有需要之患者投與治療有效量之包含精胺酸酶或其醫藥學上可接受之鹽的組合物，其中精胺酸酶與選自由SEQ ID NO:1-50及56組成之群的蛋白質序列或其片段具有至少約90%序列一致性。在一些實施例中，精胺酸酶為包含至少一個與精胺酸酶接合之聚乙二醇分子之聚乙二醇化精胺酸酶。在一些實施例中，病毒係選自由以下組成之群：RNA病毒、DNA病毒、冠狀病毒、乳頭瘤病毒、肺病毒、小核糖核酸病毒、流感病毒、腺病毒、巨細胞病毒、多瘤病毒、痘病毒、黃病毒、α病毒、伊波拉病毒、麻疹病毒、腸病毒、正肺病毒、慢病毒及肝病毒。
在本文所描述之一些實施例中，治療病毒相關疾病或病症之方法包括一種治療與冠狀病毒相關的病毒相關疾病或病症之方法。本文亦描述一種抑制病毒基因體複製之方法、一種抑制病毒傳播之方法、一種抑制病毒組裝之方法、一種抑制病毒基因表現之方法及一種抑制病毒釋放之方法，其中病毒為冠狀病毒。在某些實施例中，冠狀病毒係選自由以下組成之群：229E α冠狀病毒、NL63 α冠狀病毒、OC43 β冠狀病毒、HKU1 β冠狀病毒、中東呼吸道症候群(Middle East Respiratory Syndrome, MERS)冠狀病毒(MERS-CoV)、嚴重急性呼吸道症候群(SARS)冠狀病毒(SARS-CoV)及SARS-CoV-2 (COVID-19)。
在本文所描述之一些實施例中，治療病毒相關疾病或病症之方法包括一種治療與流感病毒相關的病毒相關疾病或病症之方法。本文亦描述一種抑制病毒基因體複製之方法、一種抑制病毒傳播之方法、一種抑制病毒組裝之方法、一種抑制病毒基因表現之方法及一種抑制病毒釋放之方法，其中病毒為流感病毒。在某些實施例中，流感病毒係選自由以下組成之群：流感病毒A(例如，H1N1及H5N1)、流感病毒B、流感病毒C、流感病毒D。
在本文所描述之一些實施例中，治療病毒相關疾病或病症之方法包括一種治療與腺病毒相關的病毒相關疾病或病症之方法。本文亦描述一種抑制病毒基因體複製之方法、一種抑制病毒傳播之方法、一種抑制病毒組裝之方法、一種抑制病毒基因表現之方法及一種抑制病毒釋放之方法，其中病毒為腺病毒。在某些實施例中，腺病毒為AdV5。
在本文所描述之一些實施例中，病毒為抗藥性病毒。
在一些實施例中，本文所描述之方法進一步包含投與包含抗病毒劑之組合物。在一些實施例中，投與包括投與治療有效量之包含抗病毒劑之組合物。在一些實施例中，向患者，例如需要治療之患者投與包含抗病毒劑之組合物。在一些實施例中，抗病毒劑係選自由以下組成之群：拉米夫定(lamivudine)、干擾素α組合物(例如干擾素α (INN；HuIFN-α-Le))、VAP抗個體基因型抗體、恩夫韋地(enfuvirtide)、金剛烷胺(amantadine)、金剛乙胺(rimantadine)、普可那利(pleconaril)、阿昔洛韋(aciclovir)、齊多夫定(zidovudine)、福米韋生(fomivirsen)、N-𠰌啉基、蛋白酶抑制劑、雙股RNA活化凋亡蛋白酶寡聚物(DRACO)、利福平(Rifampicin)、紮那米韋(zanamivir)、帕拉米韋(peramivir)、丹諾普韋(danoprevir)、利托那韋(ritonavir)、瑞德西韋(remdesivir)及奧司他韋(oseltamivir)。在某些實施例中，待治療之病毒為流感病毒，且組合物包含紮那米韋。在某些實施例中，待治療之病毒為肝炎病毒，例如B型肝炎病毒，且組合物包含拉米夫定。在某些實施例中，在投與精胺酸酶之前、期間或之後投與抗病毒劑。舉例而言，本文描述一種治療疾病或病症(例如，病毒相關疾病或病症)之方法，其中該方法包括向有需要之患者投與治療有效量之包含精胺酸酶(例如，聚乙二醇化精胺酸酶)或其醫藥學上可接受之鹽的組合物，且該方法進一步包括投與(例如，向有需要之患者投與)包含抗病毒劑(例如，治療有效量之包含抗病毒劑之組合物)之組合物。
本文亦描述一種抑制病毒之基因體複製之方法、一種抑制病毒傳播之方法、一種抑制病毒組裝之方法、一種抑制病毒基因表現之方法及一種抑制病毒釋放之方法，其中所描述之方法包括向患者(例如有需要之患者)投與治療有效量之包含精胺酸酶或其醫藥學上可接受之鹽的組合物，且該方法進一步包括投與(例如，向有需要之患者投與)包含抗病毒劑(例如治療有效量之包含抗病毒劑之組合物)之組合物。
在另一態樣中，本文提供一種治療細菌疾病或病症之方法，該方法包含向有需要之患者投與治療有效量之包含精胺酸酶或其醫藥學上可接受之鹽的組合物，該精胺酸酶選自由SEQ ID NO:1或2組成之群，其中該精胺酸酶與SEQ ID NO:1或2或其片段具有至少約90%序列一致性，且其中細菌疾病或病症與選自由以下組成之群的細菌相關：肺炎鏈球菌(Streptococcus pneumoniae)、肺炎黴漿菌(Mycoplasma pneumoniae)、流感嗜血桿菌(Haemophilus influenzae)、退伍軍人症嗜肺桿菌(Legionella pneumophila)、腸沙門氏菌(Salmonella enterica)、邦戈爾沙門氏菌(Salmonella bongori)、大腸桿菌(Escherichia coli)、幽門螺旋桿菌(Helicobacter pylori)、淋病雙球菌(Neisseria gonorrhoeae)、腦膜炎雙球菌(Neisseria meningitidis)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、鮑曼氏不動桿菌(Acinetobacter baumannii)、洋蔥伯克霍爾德菌(Burkholderia cepacian)、艱難梭菌(Clostridium difficile)、索氏梭菌(Clostridium sordellii)、腸桿菌科(Enterobacteriaceae)、糞腸球菌(Enterococcus faecalis)、克雷伯氏肺炎桿菌(Klebsiella pneumoniae)、摩氏摩根菌(Morganella morganii)、膿腫分枝桿菌(Mycobacterium abscessus)、結核分支桿菌(Mycobacterium tuberculosis)、諾羅病毒(Norovirus)、綠膿桿菌(Psuedomonas aeruginosa)及嗜麥芽窄食單胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)。在一些實施例中，精胺酸酶為包含至少一個與精胺酸酶接合之聚乙二醇分子之聚乙二醇化精胺酸酶。
在另一態樣中，本文提供一種治療細菌疾病或病症之方法，該方法包含向有需要之患者投與治療有效量之包含精胺酸酶或其醫藥學上可接受之鹽的組合物，其中該精胺酸酶與選自由SEQ ID NO:3-50及56組成之群的蛋白質序列或其片段具有至少約90%序列一致性。在一些實施例中，精胺酸酶為包含至少一個與精胺酸酶接合之聚乙二醇分子之聚乙二醇化精胺酸酶。在一些實施例中，細菌疾病或病症與選自由以下組成之群的細菌相關：肺炎披衣菌(Chlamydia pneumoniae)、霍亂弧菌(Vibrio cholerae)、肺炎鏈球菌、肺炎黴漿菌、流感嗜血桿菌、退伍軍人症嗜肺桿菌、腸沙門氏菌、邦戈爾沙門氏菌、大腸桿菌、幽門螺旋桿菌、淋病雙球菌、腦膜炎雙球菌、金黃色葡萄球菌、鮑曼氏不動桿菌、洋蔥伯克霍爾德菌、艱難梭菌、索氏梭菌、腸桿菌科、糞腸球菌、克雷伯氏肺炎桿菌、摩氏摩根菌、膿腫分枝桿菌、結核分支桿菌、諾羅病毒、綠膿桿菌及嗜麥芽窄食單胞菌。
在另一態樣中，本文提供一種治療真菌疾病或病症之方法，該方法包含向有需要之患者投與治療有效量之包含精胺酸酶或其醫藥學上可接受之鹽的組合物，其中該精胺酸酶與選自由SEQ ID NO:1-50及56組成之群的蛋白質序列或其片段具有至少約90%序列一致性。在一些實施例中，精胺酸酶為包含至少一個與精胺酸酶接合之聚乙二醇分子之聚乙二醇化精胺酸酶。在一些實施例中，真菌疾病與選自由以下組成之群的真菌相關：肺囊蟲屬真菌(Pneumocystis fungus)、麴菌屬真菌(Aspergillus fungus)及念珠菌屬真菌(Candida fungus)。
在另一態樣中，本文提供一種治療阿米巴原蟲疾病或病症之方法，該方法包含向有需要之患者投與治療有效量之包含精胺酸酶或其醫藥學上可接受之鹽的組合物，其中該精胺酸酶與選自由SEQ ID NO:1-50及56組成之群的蛋白質序列或其片段具有至少約90%序列一致性。在一些實施例中，精胺酸酶為包含至少一個與精胺酸酶接合之聚乙二醇分子之聚乙二醇化精胺酸酶。在一些實施例中，阿米巴原蟲疾病或病症與選自由以下組成之群的阿米巴原蟲相關：脆弱雙核阿米巴(Dientamoeba fragilis)、溶組織內阿米巴(Entamoeba histolytica)、變形纖毛蟲(Naegleria fowleri)、棘狀變形蟲(Acanthamoeba)、棘阿米巴角膜炎(Acanthamoeba keratitis)、巴氏阿米巴(Balamuthia mandrillaris)及雙核勻變阿米巴(Sappinia diploidea)。
在一些實施例中，精胺酸酶以每天每公斤體重約1 ng至每天每公斤體重約1 mg之劑量投與。
在一些實施例中，投與為局部、非經腸、經口、經肺、氣管內、鼻內、鞘內、經皮、皮下、眼內、玻璃體內、腹膜內或十二指腸內投與。劑量可包括或基本上由約1 ng/kg至1 mg/kg如本文所描述之精胺酸酶或其醫藥學上可接受之鹽組成。
在一些實施例中，精胺酸酶包含包括蛋白質標籤序列之胺基酸序列。舉例而言，在一些實施例中，精胺酸酶包含SEQ ID NO:1-43之胺基酸序列及蛋白質標籤序列。在一些實施例中，精胺酸酶為包含至少一個與精胺酸酶接合之聚乙二醇分子之聚乙二醇化精胺酸酶。在某些實施例中，蛋白質標籤序列為SEQ ID NO:51之6xHis標籤序列。在某些實施例中，蛋白質標籤序列位於精胺酸酶之胺基末端處。在某些實施例中，蛋白質標籤序列位於精胺酸酶之羧基末端處。
在一些實施例中，聚乙二醇化精胺酸酶包含2、3、4或更多個與精胺酸酶序列接合之聚乙二醇分子。在一些實施例中，聚乙二醇分子為約5 kDa、約10 kDa、約15 kDa、約20 kDa、約30 kDa或約40 kDa。在某些實施例中，聚乙二醇為約10 kDa至約30 kDa或約20 kDa至約40 kDa。
在一些實施例中，組合物進一步包含非天然金屬輔因子。在某些實施例中，非天然金屬輔因子係選自由鈷、錳、鐵及鋅組成之群。
在另一態樣中，本發明提供一種組合物，其包含： 精胺酸酶或其醫藥學上可接受之鹽，其中該精胺酸酶與選自由SEQ ID NO:1-50及56組成之群的蛋白質序列或其片段具有至少約90%序列一致性； 抗病毒劑；及 醫藥學上可接受之賦形劑。
在一些實施例中，精胺酸酶為包含至少一個與精胺酸酶接合之聚乙二醇分子之聚乙二醇化精胺酸酶。在一些實施例中，包括於本文所揭示之組合物中之抗病毒劑係選自由以下組成之群：拉米夫定、干擾素α組合物(例如干擾素α (INN；HuIFN-α-Le))、VAP抗個體基因型抗體、恩夫韋地、金剛烷胺、金剛乙胺、普可那利、阿昔洛韋、齊多夫定、福米韋生、N-𠰌啉基、蛋白酶抑制劑、雙股RNA活化凋亡蛋白酶寡聚物(DRACO)、利福平、紮那米韋、帕拉米韋、丹諾普韋、利托那韋、瑞德西韋及奧司他韋。
在一些實施例中，包括於本文所揭示之組合物中之精胺酸酶包括蛋白質標籤序列。在一些實施例中，蛋白質標籤序列為SEQ ID NO:51之6xHis標籤序列。在某些實施例中，蛋白質標籤序列位於精胺酸酶之胺基末端處。在某些實施例中，其中蛋白質標籤序列位於精胺酸酶之羧基末端處。
在一些實施例中，包括於本文所揭示之組合物中之聚乙二醇化精胺酸酶包含2、3、4或更多個與精胺酸酶序列接合之聚乙二醇分子。在一些實施例中，聚乙二醇分子為約5 kDa、約10 kDa、約15 kDa、約20 kDa、約30 kDa或約40 kDa。在某些實施例中，聚乙二醇分子為約10 kDa至約30 kDa或約20 kDa至約40 kDa。
在一些實施例中，本文所描述之組合物進一步包含非天然金屬輔因子。在某些實施例中，非天然金屬輔因子係選自由鈷、錳、鐵及鋅組成之群。
在另一態樣中，本文提供一種套組，其包含： 精胺酸酶或其醫藥學上可接受之鹽，其中該精胺酸酶與選自由SEQ ID NO:1-50及56組成之群的蛋白質序列或其片段具有至少約90%序列一致性；及 用於抑制病毒產生之緩衝劑、試劑及詳細說明書。
在一些實施例中，精胺酸酶為包含至少一個與精胺酸酶接合之聚乙二醇分子之聚乙二醇化精胺酸酶。在一些實施例中，套組進一步包含抗病毒劑。在某些實施例中，抗病毒劑係選自由以下組成之群：拉米夫定、干擾素α組合物(例如干擾素α (INN；HuIFN-α-Le))、VAP抗個體基因型抗體、恩夫韋地、金剛烷胺、金剛乙胺、普可那利、阿昔洛韋、齊多夫定、福米韋生、N-𠰌啉基、蛋白酶抑制劑、雙股RNA活化凋亡蛋白酶寡聚物(DRACO)、利福平、紮那米韋、帕拉米韋、丹諾普韋、利托那韋、瑞德西韋及奧司他韋。
在一些實施例中，套組用於抑制冠狀病毒產生。在某些實施例中，冠狀病毒係選自由以下組成之群：229E α冠狀病毒、NL63 α冠狀病毒、OC43 β冠狀病毒、HKU1 β冠狀病毒、中東呼吸道症候群(MERS)冠狀病毒(MERS-CoV)、嚴重急性呼吸道症候群(SARS)冠狀病毒(SARS-CoV)及SARS-CoV-2 (COVID-19)。
在一些實施例中，包括於本文所描述之套組中之精胺酸酶包括蛋白質標籤序列。在某些實施例中，蛋白質標籤序列為SEQ ID NO:51之6xHis標籤序列。在某些實施例中，蛋白質標籤序列位於精胺酸酶之胺基末端處。在某些實施例中，蛋白質標籤序列位於精胺酸酶之羧基末端處。
在一些實施例中，包括於本文所描述之套組中之聚乙二醇化精胺酸酶包含2、3、4或更多個與精胺酸酶序列接合之聚乙二醇分子。在一些實施例中，聚乙二醇為約5 kDa、約10 kDa、約15 kDa、約20 kDa、約30 kDa或約40 kDa。在某些實施例中，聚乙二醇為約10 kDa至約30 kDa或約20 kDa至約40 kDa。
在一些實施例中，本文所描述之套組進一步包含非天然金屬輔因子。在某些實施例中，非天然金屬輔因子係選自由鈷、錳、鐵及鋅組成之群。
相關申請案
本申請案主張於2020年4月17日提交之美國臨時專利申請案第63/011,658號之優先權及權益，其全部揭示內容出於所有目的以引用之方式併入本文中。
本發明提供一種使用聚乙二醇化精胺酸酶治療疾病及病症，例如病毒相關疾病及病症之方法。
除非上下文不當，否則如本文所使用，術語「一(a及an)」意謂「一或多個」且包括複數個。
如本文所使用，術語「聚乙二醇化精胺酸酶」意謂藉由至少一個聚乙二醇(PEG)分子之接合而修飾之精胺酸酶蛋白質序列，且術語「非聚乙二醇化精胺酸酶」意謂不具有與其接合之PEG分子的精胺酸酶蛋白質序列。在不受理論束縛之情況下，咸信PEG與蛋白質接合(例如精胺酸酶)增加蛋白質穩定性、增加蛋白質循環時間且使免疫反應性最小化。如本文所使用之「聚乙二醇化」係指使PEG之一或多個分子與胺基酸，例如蛋白質或肽(例如精胺酸酶蛋白質)之胺基酸接合的過程。聚乙二醇化可以經由PEG共價或非共價連接至所關注化合物來達成。較佳地，聚乙二醇化經由共價PEG連接達成。聚乙二醇化可以例如經由PEG與胺基接合、硫醇接合、氧化碳水化合物、N末端胺基酸接合或轉麩醯胺酸酶介導之酶接合來達成。聚乙二醇化方法為此項技術中已知且描述於例如Fee及Babu(2010)「Protein PEGylation: An overview of chemistry and process considerations」,European Pharmaceutical Review , 1:1-24。經歷聚乙二醇化之蛋白質、肽及胺基酸在本文中稱為「聚乙二醇化」蛋白質、肽及胺基酸。
在一些實施例中，精胺酸酶為人類精胺酸酶，例如包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列之重組人類精胺酸酶I。在一些實施例中，精胺酸酶包含人類精胺酸酶I之催化域，其包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列。在一些實施例中，聚乙二醇化精胺酸酶具有至少一個與精胺酸酶之胺基酸殘基或與超過一個胺基酸殘基共價連接之聚乙二醇(PEG)分子。在一些實施例中，至少一個PEG分子與精胺酸酶之離胺酸殘基或與超過一個離胺酸殘基共價連接。在一些實施例中，至少一個PEG分子與精胺酸酶之半胱胺酸殘基或與超過一個半胱胺酸殘基共價連接。在一些實施例中，至少一個PEG分子與一或多個離胺酸殘基、一或多個半胱胺酸殘基、一或多個組胺酸殘基、一或多個精胺酸殘基、一或多個天冬胺酸殘基、一或多個麩胺酸殘基、一或多個絲胺酸殘基、一或多個蘇胺酸殘基、一或多個酪胺酸殘基、胺基(N-)末端胺基或羧基(C-)末端羧酸基共價連接。在一些實施例中，PEG之分子量為約5 KDa、約10 kDa、約15 kDa、約20 kDa、約30 kDa或約40 kDa。在一些實施例中，PEG之分子量為約10 kDa至約30 kDa或約20 kDa至約40 kDa。
在一些實施例中，精胺酸酶之聚乙二醇化藉由使用偶合劑使PEG分子與精胺酸酶共價接合來達成。偶合劑之實例包括(但不限於)甲氧基聚乙二醇-琥珀醯亞胺基丙酸酯(mPEG-SPA)、mPEG-琥珀醯亞胺基丁酸酯(mPEG-SBA)、mPEG-琥珀醯亞胺基琥珀酸酯(mPEG-SS)、mPEG-琥珀醯亞胺基碳酸酯(mPEG-SC)、mPEG-琥珀醯亞胺戊二酸酯(mPEG-SG)、mPEG-N-羥基-琥珀醯亞胺(mPEG-NHS)、mPEG-三氟乙基磺酸酯及mPEG-醛。在一些實施例中，偶合劑為平均分子量為5000之甲氧基聚乙二醇-琥珀醯亞胺基丙酸酯5000。
在一些實施例中，本申請案中所揭示之聚乙二醇化精胺酸酶包括重組人類精胺酸酶，例如重組人類精胺酸酶I，其中重組人類精胺酸酶I具有至少一個與重組人類精胺酸酶I之胺基酸殘基或與超過一個胺基酸殘基共價連接之PEG分子。在一些實施例中，聚乙二醇化精胺酸酶(例如聚乙二醇化重組人類精胺酸酶I)具有每精胺酸酶約6-12個PEG分子。在一些實施例中，PEG分子與聚乙二醇化精胺酸酶(例如聚乙二醇化重組人類精胺酸酶I)之離胺酸殘基或與超過一個離胺酸殘基共價連接。在一些實施例中，PEG分子與聚乙二醇化精胺酸酶(例如聚乙二醇化重組人類精胺酸酶I)之半胱胺酸殘基或與超過一個半胱胺酸殘基共價連接。在一些實施例中，PEG分子與聚乙二醇化精胺酸酶(例如聚乙二醇化重組人類精胺酸酶I)之一或多個離胺酸殘基、一或多個半胱胺酸殘基、一或多個組胺酸殘基、一或多個精胺酸殘基、一或多個天冬胺酸殘基、一或多個麩胺酸殘基、一或多個絲胺酸殘基、一或多個蘇胺酸殘基、一或多個酪胺酸殘基、胺基(N-)末端胺基或羧基(C-)末端羧酸基共價連接。
在一些實施例中，本文所描述之精胺酸酶(例如，非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶)包括末端蛋白質序列(例如，N末端或C末端蛋白質序列)。可以添加末端蛋白質序列(例如)以便於蛋白質純化或蛋白質識別。適合的末端蛋白質序列之實例包括(但不限於) 6×組胺酸(6×His)標籤(SEQ ID NO:51)、旗標標籤(SEQ ID NO:52)、V5標籤(SEQ ID NO:53)、Myc標籤(SEQ ID NO:54)及血球凝集素(HA)標籤(SEQ ID NO:55)。在一些實施例中，本文所描述之聚乙二醇化精胺酸酶(例如本文所描述之聚乙二醇化重組人類精胺酸酶)包括重組精胺酸酶，其中重組精胺酸酶在其胺基末端處具有六個額外組胺酸殘基，及至少一個與重組精胺酸酶之胺基酸殘基或與超過一個胺基酸殘基共價連接之PEG分子。在一些實施例中，重組精胺酸酶每精胺酸酶具有約6-12個PEG分子。在一些實施例中，PEG分子與重組精胺酸酶之離胺酸殘基或與超過一個離胺酸殘基共價連接。在一些實施例中，本文所描述之聚乙二醇化精胺酸酶(例如本文所描述之聚乙二醇化重組人類精胺酸酶)包括重組精胺酸酶，其中重組精胺酸酶在其胺基末端處具有6xHis標籤、旗標標籤、V5標籤、Myc標籤或HA標籤，及至少一個與重組精胺酸酶之胺基酸殘基或與超過一個胺基酸殘基共價連接之PEG分子。在一些實施例中，本文所描述之聚乙二醇化精胺酸酶(例如本文所描述之聚乙二醇化重組人類精胺酸酶)包括重組精胺酸酶，其中重組精胺酸酶在其羧基末端處具有6xHis標籤、旗標標籤、V5標籤、Myc標籤或HA標籤，及至少一個與重組精胺酸酶之胺基酸殘基或與超過一個胺基酸殘基共價連接之PEG分子。
在一些實施例中，本文所描述之聚乙二醇化精胺酸酶(例如本文所描述之聚乙二醇化重組人類精胺酸酶I)包括重組精胺酸酶I，其中重組精胺酸酶在其胺基末端處具有6xHis標籤，及至少一個與重組人類精胺酸酶I之胺基酸殘基或與超過一個胺基酸殘基共價連接之PEG分子。在一些實施例中，重組人類精胺酸酶I每精胺酸酶具有約6-12個PEG分子。在一些實施例中，PEG分子與重組人類精胺酸酶I之離胺酸殘基或與超過一個離胺酸殘基共價連接。在一些實施例中，本文所描述之聚乙二醇化重組人類精胺酸酶I包括在其胺基末端處之6xHis標籤、旗標標籤、V5標籤、Myc標籤或HA標籤，及至少一個與重組人類精胺酸酶I之胺基酸殘基或與超過一個胺基酸殘基共價連接之PEG分子。在一些實施例中，本文所描述之聚乙二醇化重組人類精胺酸酶I在其羧基末端處具有6xHis標籤、旗標標籤、V5標籤、Myc標籤或HA標籤，及至少一個與重組人類精胺酸酶I之胺基酸殘基或與超過一個胺基酸殘基共價連接之PEG分子。
如本文所使用，術語「抗藥性病原體」意謂病原體，例如病毒，其已產生抵抗治療劑(例如抗病毒治療劑)之作用的能力，該治療劑能夠在病原體產生使得其對用該治療劑之治療具有抗性的一些特徵(例如基因突變)之前對該病原體進行治療。在一些實施例中，抗藥性病原體為抗藥性病毒。在一些實施例中，抗藥性病原體為抗藥性細菌。在一些實施例中，抗藥性病原體為抗藥性真菌。在一些實施例中，抗藥性病原體為抗藥性阿米巴原蟲。
如本文所使用，術語「疾病或病症」意謂任何病理病況，包括(但不限於)由病原體引起之彼等病況。在一些實施例中，疾病或病症為病毒疾病或病症，亦即，由病毒引起。在一些實施例中，疾病或病症係與特定病原體或病原體類型相關。在特定實施例中，與特定病原體或病原體類型相關之疾病或病症為由特定病原體或病原體類型引起之疾病或病症。舉例而言，病毒疾病或病症可以與特定病毒(例如SARS-CoV-2)或特定病毒群組(例如特定病毒屬，例如冠狀病毒)相關。類似地，細菌疾病或病症可以與特定細菌或特定細菌群組相關；真菌疾病或病症可以與特定真菌或特定真菌群組相關；且阿米巴原蟲疾病或病症可以與特定阿米巴原蟲或特定阿米巴原蟲群組相關。
如本文所使用，術語「感染」意謂通常不存在於宿主(例如患者)內之病原體(例如病毒)的侵入及增殖。感染可不引起症狀且為亞臨床的，或其可引起症狀且在臨床上顯而易見。感染可保持局部化，或其可例如經由血液或淋巴血管擴散，從而變為全身性。
如本文所使用，術語「預防」係指經設計且用於預防疾病或病症發生之藥物或治療。
如本文所使用，術語「治療(treat/treatment/treating)」及其類似者在本文中用於大體上意謂獲得所需藥理學及/或生理學作用。該效果就完全或部分預防疾病或其症狀而言可具預防性，及/或就部分或完全治癒疾病及/或可歸因於該疾病之不良影響而言可具治療性。如本文所使用之術語「治療」涵蓋哺乳動物，尤其人類之疾病之任何治療，且包括：(a)預防疾病在可能易患該疾病但尚未診斷出患有該疾病之個體中發生；(b)抑制疾病，即預防疾病之嚴重程度或範疇增加；(c)減輕疾病，即引起疾病之部分或完全改善；或(d)預防疾病復發，即在該疾病之症狀的先前成功治療或該疾病之治療之後預防該疾病返回至活動狀態。
「個人」、「患者」或「個體」可互換使用且包括任何動物，例如哺乳動物，例如小鼠、大鼠、其他嚙齒動物、兔、狗、貓、豬、牛、綿羊、馬或靈長類動物，且最佳為人類。本文所揭示之非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶化合物及其組合物可以投與至哺乳動物，諸如人類。本文所揭示之非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶化合物可以投與至其他哺乳動物，諸如需要獸醫治療之動物，例如家畜(例如狗、貓及其類似物)、農畜(例如牛、綿羊、豬、馬及其類似物)及實驗室動物(例如大鼠、小鼠、天竺鼠及其類似物)。患者可為診斷患有罹患疾病或病症(例如傳染性疾病或病症)之高風險之個體(例如免疫功能不全個體)，已診斷患有疾病或病症(例如傳染性疾病或病症)之某人，先前罹患疾病或病症(例如傳染性疾病或病症)之某人，或針對疾病或病症(例如傳染性疾病或病症)之症狀或適應症評估之個體。
如本文所使用之術語「有需要之患者」係指罹患疾病或病症(例如傳染性疾病或病症)之任一症狀或表現之患者、可能罹患疾病或病症(例如傳染性疾病或病症)之任一症狀或表現之患者或可能受益於本發明用於治療或預防疾病或病症(例如傳染性疾病或病症)之方法的任何患者。有需要之患者可包括經診斷患有罹患疾病或病症(例如傳染性疾病或病症)之風險之患者、過去罹患疾病或病症(例如傳染性疾病或病症)之患者或先前已針對疾病或病症(例如傳染性疾病或病症)進行治療之患者。
如本文所使用，術語「醫藥學上可接受之組合物」意謂包含至少一種與一或多種醫藥學上可接受之載劑一起調配之化合物(例如本文所描述之非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶)的組合物。
如本文所使用，術語「醫藥學上可接受之鹽」係指可存在於本發明組合物中使用之化合物(例如精胺酸酶化合物(例如非聚乙二醇化或聚乙二醇化精胺酸酶化合物))中的酸性或鹼性基團之鹽。本質上呈鹼性之本發明組合物中所包括之化合物能夠與各種無機及有機酸形成廣泛多種鹽。可用以製備此類鹼性化合物之醫藥學上可接受之酸加成鹽的酸為形成無毒酸加成鹽之彼等酸，亦即含有藥理學上可接受之陰離子之鹽，包括(但不限於)蘋果酸鹽、草酸鹽、氯化物鹽、溴化物鹽、碘鹽、硝酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、酸式磷酸鹽、異菸鹼酸鹽、乙酸鹽、乳酸鹽、水楊酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、油酸鹽、丹寧酸鹽、泛酸鹽、酒石酸氫鹽、抗壞血酸鹽、丁二酸鹽、順丁烯二酸鹽、龍膽酸鹽、反丁烯二酸鹽、葡糖酸鹽、葡糖醛酸鹽、葡糖二酸鹽、甲酸鹽、苯甲酸鹽、麩胺酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽及雙羥萘酸鹽(亦即1,1'-亞甲基-雙-(2-羥基-3-萘甲酸鹽))。包括胺基部分之本發明組合物中所包括之化合物可與各種胺基酸(除上文所提及之酸之外)形成醫藥學上可接受之鹽。本發明組合物中所包括之本質上呈酸性之化合物能夠與各種藥理學上可接受之陽離子形成鹼鹽。此類鹽之實例包括鹼金屬鹽或鹼土金屬鹽，尤其鈣鹽、鎂鹽、鈉鹽、鋰鹽、鋅鹽、鉀鹽及鐵鹽。
如本文所使用，術語「醫藥學上可接受之賦形劑」意謂幫助向個體投與活性劑及/或由個體吸收之物質，且可以包括於本發明之組合物中而不會對患者產生顯著的不良毒理學作用。醫藥學上可接受之賦形劑之非限制性實例包括水、NaCl、標準生理食鹽水溶液(諸如磷酸鹽緩衝生理食鹽水溶液)、乳液(例如，諸如油/水或水/油乳液)、乳酸林格氏(lactated Ringer's)、正常蔗糖、正常葡萄糖、黏合劑、填充劑、崩解劑、潤滑劑、包衣、甜味劑、調味劑、鹽溶液(諸如林格氏溶液(Ringer's solution))、醇、油、明膠、碳水化合物(諸如乳糖、直鏈澱粉或澱粉)、脂肪酸酯、羥甲織維素、聚乙烯吡咯啶及顏色及類似者。該等製劑可以經滅菌且視需要與不會不利地與本發明之IL-34抑制劑反應之助劑(諸如潤滑劑、防腐劑、穩定劑、潤濕劑、乳化劑、用於影響滲透壓之鹽、緩衝劑、著色劑及/或芳族物質及其類似物)混合。關於賦形劑之實例，參見Martin, Remington's Pharmaceutical Sciences, 第15版, 馬克出版公司(Mack Publ. Co.), Easton, PA (1975)。
如本文所使用，如本文所使用之術語「治療有效量」、「有效量」或「醫藥學上有效量」係指當投與患者時足以至少部分治療病況之試劑(例如本文所描述之非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶)的量。治療有效量將視病況之嚴重程度、組分之投與途徑及所治療患者之年齡、體重等而變化。因此，有效量之所揭示之非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶為治療疾病或病症(例如患者之傳染性疾病或病症)所必需的非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶之量，使得投與藥劑預防個體之疾病或病症發生，預防疾病或病症進展或減輕或完全改善疾病或病症之一些或所有相關症狀，例如引起感染之清除。
如本文所使用，術語「投與」係指藉由任何適合途徑投與，例如經口投與、以栓劑形式投與、局部接觸、靜脈內、非經腸、腹膜內、肌內、病灶內、鞘內、顱內、鼻內或皮下投與，或向個體植入緩慢釋放裝置，例如小型滲透泵。投與係藉由任何途徑，包括非經腸及經黏膜(例如經頰、舌下、經齶、經牙齦、經鼻、經陰道、經直腸或經皮)。非經腸投藥包括例如靜脈內、肌內、動脈內、皮內、皮下、腹膜內、心室內、鞘內及顱內。在一些實施例中，本文所描述之方法可以包括藉由吸入投與。舉例而言，在一些實施例中，本文所描述之方法可以包括藉由患者之經口腔、鼻腔或口腔及鼻腔吸入投與本文所描述之組合物。藉由吸入投與可以使用此項技術中已知之裝置，例如噴霧器或吸入器(例如定量吸入器或乾粉吸入器)達成。其他遞送模式包括(但不限於)使用脂質體調配物、靜脈內輸注、經皮貼片等。
「共同投與」意謂在投與一或多種額外治療劑(例如，抗病毒劑)之同時、之前或之後投與本文所描述之化合物或組合物。本文所描述之化合物或組合物可以單獨投與或可以共同投與至患者。共同投與意謂包括個別或組合地(超過一種化合物或試劑)同時或相繼投與化合物或組合物。因此，調配物亦可以在需要時與其他活性物質組合(例如以減少代謝降解或提供用於疾病預防或治療之額外治療劑)。
以上說明描述本發明之多個態樣及實施例。本專利申請案特別涵蓋態樣及實施例之所有組合及排列。II. 精胺酸酶 ( 非聚乙二醇化及聚乙二醇化精胺酸酶 )
本發明之實施例包括調節微環境中之胺基酸濃度之方法。本發明之實施例調節胺基酸濃度作為治療疾病(例如病毒感染)之治療方法。在某些實施例中，調節胺基酸濃度以抑制病毒複製且防止有害發炎。在本發明之實施例中，精胺酸酶(例如，非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶)作為抗病毒劑投與。本發明之實施例可用以治療大範圍之病毒疾病或病症，包括病毒感染。在本發明之某些實施例中，可向感染有病毒之患者投與精胺酸酶(例如，非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶)。可投與精胺酸酶(例如，非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶)以耗乏受體中之精胺酸。精胺酸之缺失可抑制病毒複製或病毒傳播。精胺酸之耗乏可減少經感染個體中之發炎性免疫反應。投與精胺酸酶(例如非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶)或其醫藥學上可接受之鹽或其組合物可以有效治療或預防病毒疾病或病症、細菌疾病或病症、真菌疾病或病症及/或阿米巴原蟲疾病或病症。投與精胺酸酶(例如非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶)或其醫藥學上可接受之鹽或其組合物可以有效抑制與病原體(例如病毒)相關之特定過程。舉例而言，投與精胺酸酶(例如，非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶)或其醫藥學上可接受之鹽或其組合物可以有效抑制以下中之任一者或全部：自細胞之病毒釋放、病毒傳播、病毒基因體複製、病毒基因表現或病毒組裝。
精胺酸酶為含錳酶且為脲循環之最終酶。特定言之，精胺酸酶催化L-精胺酸轉化為L-鳥胺酸及脲。在大部分哺乳動物中，存在精胺酸酶之兩種同功酶：精胺酸酶I，其在尿素循環中起作用且主要位於肝臟之細胞質中；及精胺酸酶II，其可調節細胞中之精胺酸/鳥胺酸濃度。聚乙二醇化為聚乙二醇(PEG)聚合物鏈共價連接至另一分子(諸如藥物或蛋白質)之過程。聚乙二醇化可遮蔽來自宿主之免疫系統之試劑且可向該試劑提供提高之溶解度、活動性及壽命。本文所描述之聚乙二醇化精胺酸酶調配物包括已聚乙二醇化之精胺酸酶I之調配物。
使精胺酸酶與PEG偶合提高精胺酸酶之穩定性及功效。舉例而言，儘管天然精胺酸酶在數分鐘內自循環清除(Savoca等人, 1984)，但大鼠中之PEG-精胺酸酶MW5000之單次注射足以達成接近完全精胺酸耗乏大約3天(Cheng等人, 2007)。
精胺酸酶為具有α/β摺疊之由數個螺旋環繞之平行八股β褶片之同型三聚酶。酶含有與酶之功能性一體化之二核金屬簇。天然精胺酸酶與Mn2 + 錯合。 在一些實施例中，本發明涵蓋其中Mn2 + 經另一金屬置換之突變體精胺酸。舉例而言，在一些實施例中，本文所描述之聚乙二醇化精胺酸酶與鈷、鐵或鋅離子而非錳離子錯合。當與天然人類精胺酸酶及天然金屬輔因子Mn2 + 相比時，人類精胺酸酶中金屬輔因子之取代可以對生理條件下之L-精胺酸水解速率及穩定性發揮有益作用。Mn2 + 經其他二價陽離子之取代可以用於使酶之最適pH偏移至較低值且因此在生理條件下達成較高速率之L-精胺酸水解。人類精胺酸酶蛋白質具有兩個Mn(II)位點；因此，任一個或兩個位點可以經取代以產生帶有非天然金屬輔因子的突變精胺酸酶。在一些實施例中，金屬為鈷(Co2 + )。在一些實施例中，併入Co2+代替Mn2 + 在生理pH下產生顯著較高活性。適用於結合至鈷之突變精胺酸酶提供於US10,098,933中。在一些實施例中，金屬為鋅(Zn2 + )。在一些實施例中，金屬為鐵(Fe2 + )。
在一些實施例中，精胺酸酶蛋白質在金屬結合位點處包含至少一個胺基酸取代。精胺酸酶之結構包括含有兩個Mn2 + 離子之活性位點裂隙，其中更深入定位之離子稱為MnA ，其與H101、D124、D128、D232及橋接氫氧化物配位。另一金屬稱為MnB 且由H126、D124、D232、D234及橋接氫氧化物配位(Chrianson及Cox, 1999)。包含精胺酸酶I之第一殼之金屬結合位點之殘基為H101、D124、H126、D128、D232及D234，且對於第二殼為W122、D181及S230。類似地，包含精胺酸酶II之第一殼之金屬結合位點之殘基為H120、D143、H145、D147、D251、D253，且對於第二殼為W141、D200、S249。在一些實施例中，精胺酸酶為突變體精胺酸酶。在某些實施例中，精胺酸酶為C303P變異體。在一些實施例中，精胺酸酶包含Fc域蛋白融合。在一些實施例中，長血清持久性改良精胺酸酶作為治療劑之用途。
在一些實施例中，精胺酸酶(例如，非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶)用於治療病原性疾病或病症，包括(但不限於)病毒疾病或病症、細菌疾病或病症、真菌疾病或病症及阿米巴原蟲疾病或病症。在一些實施例中，精胺酸酶(例如，非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶)用於治療病原性感染，包括(但不限於)病毒感染、細菌感染、真菌感染及阿米巴原蟲感染。在一些實施例中，精胺酸酶(例如，非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶)有效針對RNA病毒感染及DNA病毒感染(包括包膜及非包膜病毒兩者)。在一些實施例中，精胺酸酶(例如非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶)經口或以吸入劑調配物(例如，口服吸入劑調配物、鼻吸入劑調配物或鼻吸入劑及口服吸入劑調配物)形式投與。在一些實施例中，將精胺酸酶(例如，非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶)併入至注射組合物中。
在某些實施例中可與PEG接合以形成本發明之聚乙二醇化精胺酸酶之精胺酸酶的例示性胺基酸序列提供於表 1 中。表 1 . 例示性精胺酸酶序列
SEQ ID NO: 描述
1 MSAKSRTIGIIGAPFSKGQPRGGVEEGPTVLRKAGLLEKLKEQECDVKDYGDLPFADIPNDSPFQIVKNPRSVGKASEQLAGKVAEVKKNGRISLVLGGDHSLAIGSISGHARVHPDLGVIWVDAHTDINTPLTTTSGNLHGQPVSFLLKELKGKIPDVPGFSWVTPCISAKDIVYIGLRDVDPGEHYILKTLGIKYFSMTEVDRLGIGKVMEETLSYLLGRKKRPIHLSFDVDGLDPSFTPATGTPVVGGLTYREGLYITEEIYKTGLLSGLDIMEVNPSLGKTPEEVTRTVNTAVAITLACFGLAREGNHKPIDYLNPPK
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10 MKPISIIGVPMDLGQTRRGVDMGPSAMRYAGVIERLERLHYDIEDLGDIPIGKAERLHEQGDSRLRNLKAVAEANEKLAAAVDQWQRGRFPLVLGGDHSIAIGTLAGVAKHYERLGVIWYDAHGDVNTAETSPSGNIHGMPLAASLGFGHPALTQIGGYSPKIKPEHVVLIGVRSLDEGEKKFIREKGIKIYTMHEVDRLGMTRVMEETIAYLKERTDGVHLSLDLDGLDPSDAPGVGTPVIGGLTYRESHLAMEMLAEAQIITSAEFVEVNPILDERNKTASVAVALMGSLFGEKLM
11 MKPISIIGVPMDLGQTRRGVDMGPSAMRYAGVIERLERLHYDIEDLGDIPIGKAERLHEQGDSRLRNLKAVAEANEKLAAAVDQWQRGRFPLVLGGDHSIAIGTLAGVAKHYERLGVIWYDAHGDVNTAETSPSGNIHGMPLAASLGFGHPALTQIGGYCPKIKPEHVVLIGVRSLDEGEKKFIREKGIKIYTMHEVDRLGMTRVMEETIAYLKERTDGVHLSLDLDGLDPSDAPGVGTPVIGGLTYRESHLAMEMLAEAQIITSAEFVEVNPILDERNKTASVAVALMGSLFGEKLMHHHHHH
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27 MSAKSRTIGIIGAPFSKGQPRGGVEEGPTVLRKAGLLEKLKEQESDVKDYGDLPFADIPNDSPFQIVKNPRSVGKASEQLAGKVAEVKKNGRISLVLGGDHSLAIGSISGHARVHPDLGVIWVDAHTDINTPLTTTSGNLHGQPVSFLLKELKGKIPDVPGFSWVTPAISAKDIVYIGLRDVDPGEHYILKTLGIKYFSMTEVDRLGIGKVMEETLSYLLGRKKRPIHLSFDVDGLDPSFTPATGTPVVGGLTYREGLYITEEIYKTGLLSGLDIMEVNPSLGKTPEEVTRTVNTAVAITLASFGLAREGNHKPIDYLNPPK
28 MSAKSRTIGIIGAPFSKGQPRGGVEEGPTVLRKAGLLEKLKEQEADVKDYGDLPFADIPNDSPFQIVKNPRSVGKASEQLAGKVAEVKKNGRISLVLGGDHSLAIGSISGHARVHPDLGVIWVDAHTDINTPLTTTSGNLHGQPVSFLLKELKGKIPDVPGFSWVTPSISAKDIVYIGLRDVDPGEHYILKTLGIKYFSMTEVDRLGIGKVMEETLSYLLGRKKRPIHLSFDVDGLDPSFTPATGTPVVGGLTYREGLYITEEIYKTGLLSGLDIMEVNPSLGKTPEEVTRTVNTAVAITLAAFGLAREGNHKPIDYLNPPK
29 MSAKSRTIGIIGAPFSKGQPRGGVEEGPTVLRKAGLLEKLKEQEADVKDYGDLPFADIPNDSPFQIVKNPRSVGKASEQLAGKVAEVKKNGRISLVLGGDHSLAIGSISGHARVHPDLGVIWVDAHTDINTPLTTTSGNLHGQPVSFLLKELKGKIPDVPGFSWVTPSISAKDIVYIGLRDVDPGEHYILKTLGIKYFSMTEVDRLGIGKVMEETLSYLLGRKKRPIHLSFDVDGLDPSFTPATGTPVVGGLTYREGLYITEEIYKTGLLSGLDIMEVNPSLGKTPEEVTRTVNTAVAITLASFGLAREGNHKPIDYLNPPK
30 MSAKSRTIGIIGAPFSKGQPRGGVEEGPTVLRKAGLLEKLKEQEADVKDYGDLPFADIPNDSPFQIVKNPRSVGKASEQLAGKVAEVKKNGRISLVLGGDHSLAIGSISGHARVHPDLGVIWVDAHTDINTPLTTTSGNLHGQPVSFLLKELKGKIPDVPGFSWVTPAISAKDIVYIGLRDVDPGEHYILKTLGIKYFSMTEVDRLGIGKVMEETLSYLLGRKKRPIHLSFDVDGLDPSFTPATGTPVVGGLTYREGLYITEEIYKTGLLSGLDIMEVNPSLGKTPEEVTRTVNTAVAITLASFGLAREGNHKPIDYLNPPK
31 MSFKSQSIGIIGAPFSKGQPRGGVEEGPTALRKAGLLEKLKEQECDVKDYGDLCFADVPNDTPFQIVKNPRSVGKANQQLADVVAEIKKNGRTSLVLGGDHSMAIGSISGHARVHPDLCVIWVDAHTDINTPLTTTTGNLHGQPVSFLLKELKEKIPEVPGLSWVTPCLSAKDIVYIGLRDVDPAEHYILKTLGIKYFSMIEVDKLGIGKVMEEAFSYLLGRKKRPIHLSFDVDGLDPFFTPATGTPVHGGLSYREGIYITEEIYKTGLLSGLDIMEVNPSLGKTPEEVTRTVNTAVALVLACFGVAREGNHKPIDYLKPPK
32 MSFKSQSIGIIGAPFSKGQPRGGVEEGPTALRKAGLLEKLKEQECDVKDYGDLSFADVPNDTPFQIVKNPRSVGKANQQLADVVAEIKKNGRTSLVLGGDHSMAIGSISGHARVHPDLSVIWVDAHTDINTPLTTTTGNLHGQPVSFLLKELKEKIPEVPGLSWVTPSLSAKDIVYIGLRDVDPAEHYILKTLGIKYFSMIEVDKLGIGKVMEEAFSYLLGRKKRPIHLSFDVDGLDPFFTPATGTPVHGGLSYREGIYITEEIYKTGLLSGLDIMEVNPSLGKTPEEVTRTVNTAVALVLASFGVAREGNHKPIDYLKPPK
33 SAKSRTIGIIGAPFSKGQPRGGVEEGPTVLRKAGLLEKLKEQECDVKDYGDLPFADIPNDSPFQIVKNPRSVGKASEQLAGKVAEVKKNGRISLVLGGDHSLAIGSISGHARVHPDLGVIWVDAHTDINTPLTTTSGNLHGQPVSFLLKELKGKIPDVPGFSWVTPSISAKDIVYIGLRDVDPGEHYILKTLGIKYFSMTEVDRLGIGKVMEETLSYLLGRKKRPIHLSFDVDGLDPSFTPATGTPVVGGLTYREGLYITEEIYKTGLLSGLDIMEVNPSLGKTPEEVTRTVNTAVAITLASFGLAREGNHKPIDYLNPPK
34 XSAKSRTIGIIGAPFSKGQPRGGVEEGPTVLRKAGLLEKLKEQECDVKDYGDLPFADIPNDSPFQIVKNPRSVGKASEQLAGKVAEVKKNGRISLVLGGDHSLAIGSISGHARVHPDLGVIWVDAHTDINTPLTTTSGNLHGQPVSFLLKELKGKIPDVPGFSWVTPCISAKDIVYIGLRDVDPGEHYILKTLGIKYFSMTEVDRLGIGKVMEETLSYLLGRKKRPIHLSFDVDGLDPSFTPATGTPVVGGLTYREGLYITEEIYKTGLLSGLDIMEVNPSLGKTPEEVTRTVNTAVAITLACFGLAREGNHKPIDYLNPP，其中X係甲硫胺酸或不存在。
35 SVHSVAVIGAPFSQGQKRKGVEHGPAAIREAGLMKRLSSLGCHLKDFGDLSFTPVPKDDLYNNLIVNPRSVGLANQELAEVVSRAVSDGYSCVTLGGDHSLAIGTISGHARHCPDLCVVWVDAHADINTPLTTSSGNLHGQPVSFLLRELQDKVPQLPGFSWIKPCISSASIVYIGLRDVDPPEHFILKNYDIQYFSMRDIDRLGIQKVMERTFDLLIGKRQRPIHLSFDIDAFDPTLAPATGTPVVGGLTYREGMYIAEEIHNTGLLSALDLVEVNPQLATSEEEAKTTANLAVDVIASSFGQTREGGHIVYDQLPTPSSPDESENQARVRI
36 XSAKSRTIGIIGAPFSKGQPRGGVEEGPTVLRKAGLLEKLKEQECDVKDYGDLPFADIPNDSPFQIVKNPRSVGKASEQLAGKVAEVKKNGRISLVLGGDHSLAIGSISGHARVHPDLGVIWVDAHTDINTPLTTTSGNLHGQPVSFLLKELKGKIPDVPGFSWVTPCISAKDIVYIGLRSVDPGEHYILKTLGIKYFSMTEVDRLGIGKVMEETLSYLLGRKKRPIHLSFDVDGLDPSFTPATGTPVVGGLTYREGLYITEEIYKTGLLSGLDIMEVNPSLGKTPEEVTRTVNTAVAITLACFGLAREGNHKPIDYLNPP，其中X係甲硫胺酸或不存在。
37 XSAKSRTIGIIGAPFSKGQPRGGVEEGPTVLRKAGLLEKLKEQECDVKDYGDLPFADIPNDSPFQIVKNPRSVGKASEQLAGKVAEVKKNGRISLVLGGDHSLAIGSISGHARVHPDLGVIWVDAHTDINTPLTTTSGNLHGQPVSFLLKELKGKIPDVPGFSWVTPCISAKDIVYIGLRDVDPGEHYILKTLGIKYFSMTEVDRLGIGKVMEETLSYLLGRKKRPIHLCFDVDGLDPSFTPATGTPVVGGLTYREGLYITEEIYKTGLLSGLDIMEVNPSLGKTPEEVTRTVNTAVAITLACFGLAREGNHKPIDYLNPP，其中X係甲硫胺酸或不存在。
38 XSAKSRTIGIIGAPFSKGQPRGGVEEGPTVLRKAGLLEKLKEQECDVKDYGDLPFADIPNDSPFQIVKNPRSVGKASEQLAGKVAEVKKNGRISLVLGGDHSLAIGSISGHARVHPDLGVIWVDAHTDINTPLTTTSGNLHGQPVSFLLKELKGKIPDVPGFSWVTPCISAKDIVYIGLRDVDPGEHYILKTLGIKYFSMTEVDRLGIGKVMEETLSYLLGRKKRPIHLGFDVDGLDPSFTPATGTPVVGGLTYREGLYITEEIYKTGLLSGLDIMEVNPSLGKTPEEVTRTVNTAVAITLACFGLAREGNHKPIDYLNPP，其中X係甲硫胺酸或不存在。
39 XSAKSRTIGIIGAPFSKGQPRGGVEEGPTVLRKAGLLEKLKEQECDVKDYGDLPFADIPNDSPFQIVKNPRSVGKASEQLAGKVAEVKKNGRISLVLGGDHSLAIGSISGHARVHPDLGVIWVDAHTDINTPLTTTSGNLHGQPVSFLLKELKGKIPDVPGFSWVTPCISAKDIVYIGLRDVDPGEHYILKTLGIKYFSMTEVDRLGIGKVMEETLSYLLGRKKRPIHLSFDVDGLDPSFTPATGTPVVGGLTYREGLYITEEIYKTGLLSGLDIMEVNPSLGKTPEEVTRTVNTAVAITLAFFGLAREGNHKPIDYLNPP，其中X係甲硫胺酸或不存在。
40 XSAKSRTIGIIGAPFSKGQPRGGVEEGPTVLRKAGLLEKLKEQECDVKDYGDLPFADIPNDSPFQIVKNPRSVGKASEQLAGKVAEVKKNGRISLVLGGDHSLAIGSISGHARVHPDLGVIWVDAHTDINTPLTTTSGNLHGQPVSFLLKELKGKIPDVPGFSWVTPCISAKDIVYIGLRDVDPGEHYILKTLGIKYFSMTEVDRLGIGKVMEETLSYLLGRKKRPIHLSFDVDGLDPSFTPATGTPVVGGLTYREGLYITEEIYKTGLLSGLDIMEVNPSLGKTPEEVTRTVNTAVAITLAIFGLAREGNHKPIDYLNPP，其中X係甲硫胺酸或不存在
41 XSAKSRTIGIIGAPFSKGQPRGGVEEGPTVLRKAGLLEKLKEQECDVKDYGDLPFADIPNDSPFQIVKNPRSVGKASEQLAGKVAEVKKNGRISLVLGGDHSLAIGSISGHARVHPDLGVIWVDAHTDINTPLTTTSGNLHGQPVSFLLKELKGKIPDVPGFSWVTPCISAKDIVYIGLREVDPGEHYILKTLGIKYFSMTEVDRLGIGKVMEETLSYLLGRKKRPIHLAFDVDGLDPSFTPATGTPVVGGLTYREGLYITEEIYKTGLLSGLDIMEVNPSLGKTPEEVTRTVNTAVAITLACFGLAREGNHKPIDYLNPP，其中X係甲硫胺酸或不存在。
42 FPLVLGGDHSIAIGTLAGVAKHYERLGVIWYDAHGDVNTAETSPSGNIHGMPLAASLGFGHPALTQIGGYSPKIKPEHVVLIGVRSLDEGEKKFIREKGIKIYTMHEVDRLGMTRVMEETIAYLKERTDGVHLSLDLD
43 HSMAIGSISGHARVHPDLCVIWVDAHTDINTPLTTTTGNLHGQPVSFLLKELKEKIPEVPGLSWVTPCLSAKDIVYIGLRDVDPAEHYILKTLGIKYFSMIEVDKLGIGKVMEEAFSYLLGRKKRPIHLSFDVD
44 MHHHHHHMSAKSRTIGIIGAPFSKGQPRGGVEEGPTVLRKAGLLEKLKEQECD VKDYGDLPFADIPNDSPFQIVKNPRSVGKASEQLAGKVAEVKKNGRISLVLGGDHSLAIGSISGHARVHPDLGVIWVDAHTDINTPLTTTSGNLHGQPVSFLLKELKGKIPDVPGFSWVTPCISAKDIVYIGLRDVDPGEHYILKTLGIKYFSMTEVDRLGIGKVMEETLSYLLGRKKRPIHLSFDVDGLDPSFTPATGTPVVGGLTYREGLYITEEIYKTGLLSGLDIMEVNPSLGKTPEEVTRTVNTAVAITLAAFGLAREGNHKPIDYLNPPK
45 MHHHHHHMSAKSRTIGIIGAPFSKGQPRGGVEEGPTVLRKAGLLEKLKEQECD VKDYGDLPFADIPNDSPFQIVKNPRSVGKASEQLAGKVAEVKKNGRISLVLGG DHSLAIGSISGHARVHPDLGVIWVDAHTDINTPLTTTSGNLHGQPVSFLLKELK GKIPDVPGFSWVTPAISAKDIVYIGLRDVDPGEHYILKTLGIKYFSMTEVDRLGI GKVMEETLSYLLGRKKRPIHLSFDVDGLDPSFTPATGTPVVGGLTYREGLYITE EIYKTGLLSGLDIMEVNPSLGKTPEEVTRTVNTAVAITLACFGLAREGNHKPIDYLNPPK
46 MHHHHHHMSAKSRTIGIIGAPFSKGQPRGGVEEGPTVLRKAGLLEKLKEQEAD VKDYGDLPFADIPNDSPFQIVKNPRSVGKASEQLAGKVAEVKKNGRISLVLGG DHSLAIGSISGHARVHPDLGVIWVDAHTDINTPLTTTSGNLHGQPVSFLLKELK GKIPDVPGFSWVTPCISAKDIVYIGLRDVDPGEHYILKTLGIKYFSMTEVDRLGI GKVMEETLSYLLGRKKRPIHLSFDVDGLDPSFTPATGTPVVGGLTYREGLYITE EIYKTGLLSGLDIMEVNPSLGKTPEEVTRTVNTAVAITLACFGLAREGNHKPID YLNPPK
47 MHHHHHHMSAKSRTIGIIGAPFSKGQPRGGVEEGPTVLRKAGLLEKLKEQECD VKDYGDLPFADIPNDSPFQIVKNPRSVGKASEQLAGKVAEVKKNGRISLVLGG DHSLAIGSISGHARVHPDLGVIWVDAHTDINTPLTTTSGNLHGQPVSFLLKELK GKIPDVPGFSWVTPAISAKDIVYIGLRDVDPGEHYILKTLGIKYFSMTEVDRLGI GKVMEETLSYLLGRKKRPIHLSFDVDGLDPSFTPATGTPVVGGLTYREGLYITE EIYKTGLLSGLDIMEVNPSLGKTPEEVTRTVNTAVAITLAAFGLAREGNHKPID YLNPPK
48 MHHHHHHMSAKSRTIGIIGAPFSKGQPRGGVEEGPTVLRKAGLLEKLKEQEAD VKDYGDLPFADIPNDSPFQIVKNPRSVGKASEQLAGKVAEVKKNGRISLVLGG DHSLAIGSISGHARVHPDLGVIWVDAHTDINTPLTTTSGNLHGQPVSFLLKELK GKIPDVPGFSWVTPCISAKDIVYIGLRDVDPGEHYILKTLGIKYFSMTEVDRLGI GKVMEETLSYLLGRKKRPIHLSFDVDGLDPSFTPATGTPVVGGLTYREGLYITE EIYKTGLLSGLDIMEVNPSLGKTPEEVTRTVNTAVAITLAAFGLAREGNHKPID YLNPPK
49 MHHHHHHMSAKSRTIGIIGAPFSKGQPRGGVEEGPTVLRKAGLLEKLKEQEAD VKDYGDLPFADIPNDSPFQIVKNPRSVGKASEQLAGKVAEVKKNGRISLVLGG DHSLAIGSISGHARVHPDLGVIWVDAHTDINTPLTTTSGNLHGQPVSFLLKELK GKIPDVPGFSWVTPAISAKDIVYIGLRDVDPGEHYILKTLGIKYFSMTEVDRLG IGKVMEETLSYLLGRKKRPIHLSFDVDGLDPSFTPATGTPVVGGLTYREGLYIT EEIYKTGLLSGLDIMEVNPSLGKTPEEVTRTVNTAVAITLACFGLAREGNHKPI DYLNPPK
50 MHHHHHHMSAKSRTIGIIGAPFSKGQPRGGVEEGPTVLRKAGLLEKLKEQEAD VKDYGDLPFADIPNDSPFQIVKNPRSVGKASEQLAGKVAEVKKNGRISLVLGG DHSLAIGSISGHARVHPDLGVIWVDAHTDINTPLTTTSGNLHGQPVSFLLKELK GKIPDVPGFSWVTPAISAKDIVYIGLRDVDPGEHYILKTLGIKYFSMTEVDRLGI GKVMEETLSYLLGRKKRPIHLSFDVDGLDPSFTPATGTPVVGGLTYREGLYITE EIYKTGLLSGLDIMEVNPSLGKTPEEVTRTVNTAVAITLAAFGLAREGNHKPID YLNPPK
56 MHHHHHHMSAKSRTIGIIGAPFSKGQPRGGVEEGPTVLRKAGLLEKLKEQECDVKDYGDLPFADIPNDSPFQIVKNPRSVGKASEQLAGKVAEVKKNGRISLVLGGDHSLAIGSISGHARVHPDLGVIWVDAHTDINTPLTTTSGNLHGQPVSFLLKELKGKIPDVPGFSWVTPCISAKDIVYIGLRDVDPGEHYILKTLGIKYFSMTEVDRLGIGKVMEETLSYLLGRKKRPIHLSFDVDGLDPSFTPATGTPVVGGLTYREGLYITEEIYKTGLLSGLDIMEVNPSLGKTPEEVTRTVNTAVAITLACFGLAREGNHKPIDYLNPPK
在本文所描述之一些實施例中，非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶包含源自特定物種之精胺酸酶胺基酸序列。舉例而言，在一些實施例中，非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶包含衍生自智人(亦即人類)精胺酸酶序列、熱溶芽孢桿菌(Bacillus caldovelox)精胺酸酶序列或野豬(Sus scrofa)精胺酸酶序列之精胺酸酶胺基酸序列。在一些實施例中，非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶包含精胺酸酶之特定部分之胺基酸序列(例如，包含精胺酸酶序列之酶域的胺基酸序列(例如SEQ ID NO:2、42或43))。在一些實施例中，非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶包含胺基酸序列，該胺基酸序列包含人類精胺酸酶序列(例如SEQ ID NO:2)之酶域。
在一些實施例中，非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶包含與人類精胺酸酶有關之胺基酸序列。人類精胺酸酶之實例包括NCBI基因ID: 383中所描述之基因、mRNA及蛋白質序列，包括NCBI參考序列NP_001231367.1、NCBI參考序列NP_000036.2及NCBI參考序列NP_001355949.1之蛋白質序列。在一些實施例中，非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶包含與SEQ ID NO:1有關之胺基酸序列。舉例而言，非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶可以包含與SEQ ID NO:1至少約90% (例如約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或約100%)一致之精胺酸酶序列。
在一些實施例中，非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶包含與人類精胺酸酶之酶域有關之胺基酸序列。在一些實施例中，非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶包含與SEQ ID NO:2有關之胺基酸序列。舉例而言，非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶可以包含與SEQ ID NO:2至少約90% (例如約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或約100%)一致之胺基酸序列。
在一些實施例中，非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶包含與熱溶芽孢桿菌精胺酸酶有關之胺基酸序列。熱溶芽孢桿菌精胺酸酶之實例為NCBI GenBank條目：AAB06939.1之蛋白質序列及其相關基因及mRNA序列。在一些實施例中，非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶包含與SEQ ID NO:10有關之胺基酸序列。舉例而言，非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶可以包含與SEQ ID NO:10至少約90% (例如約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或約100%)一致之精胺酸酶序列。
在一些實施例中，非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶包含與野豬精胺酸酶有關之胺基酸序列。野豬精胺酸酶之實例包括NCBI基因ID: 397115中所描述之基因、mRNA及蛋白質序列，包括NCBI參考序列XP_020938406.1、NCBI參考序列XP_005659247.1、NCBI參考序列XP_020938398.1及NCBI參考序列XP_020938404.1之蛋白質序列。在一些實施例中，非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶包含與SEQ ID NO:31有關之胺基酸序列。舉例而言，非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶可以包含與SEQ ID NO:31至少約90% (例如約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或約100%)一致之精胺酸酶序列。
在一些實施例中，重組精胺酸酶或其功能片段(例如精胺酸酶蛋白質之酶域)可以例如活體內自細菌細胞、昆蟲細胞、哺乳動物細胞、合成細胞或活體外自無細胞系統或化學合成表現/產生。重組精胺酸酶I可以藉由簡併碼中之密碼子之任何組合編碼。在一些實施例中，核苷酸經利用遺傳密碼置換，使得密碼子變為編碼相同胺基酸殘基之不同密碼子。在一些實施例中，改變表 1 中所描述之精胺酸酶序列之半胱胺酸殘基之一致性可能導致蛋白質聚集在以下溶液中減少：約2%、約5%、約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%或約95%。
在一些實施例中，改變表 1 中所描述之精胺酸酶序列之半胱胺酸殘基之一致性可能導致溶液中之精胺酸酶蛋白質不超過1%聚集、不超過2%聚集、不超過5%聚集、不超過10%聚集、不超過15%聚集、不超過20%聚集、不超過25%聚集、不超過30%聚集、不超過35%聚集、不超過40%聚集、不超過45%聚集、不超過50%聚集、不超過55%聚集、不超過60%聚集、不超過65%聚集、不超過70%聚集、不超過75%聚集、不超過80%聚集、不超過85%聚集、不超過90%聚集或不超過95%聚集。
在一些實施例中，改變精胺酸酶蛋白質序列之一或多個胺基酸之標識可以減少重組精胺酸酶I在溶液中之聚集分佈。在一些情況下，重組精胺酸酶I或其功能片段包含1胺基酸突變、2胺基酸突變、3胺基酸突變、4胺基酸突變、5胺基酸突變、6胺基酸突變、7胺基酸突變、8胺基酸突變、9胺基酸突變、10胺基酸突變、11胺基酸突變、12胺基酸突變、13胺基酸突變、14胺基酸突變、15胺基酸突變、16胺基酸突變、17胺基酸突變、18胺基酸突變、19胺基酸突變、20胺基酸突變、21胺基酸突變、22胺基酸突變、23胺基酸突變、24胺基酸突變、25胺基酸突變、26胺基酸突變、27胺基酸突變、28胺基酸突變、29胺基酸突變、30胺基酸突變、31胺基酸突變、32胺基酸突變、33胺基酸突變、34胺基酸突變、35胺基酸突變、36胺基酸突變、37胺基酸突變、38胺基酸突變、39胺基酸突變、40胺基酸突變、41胺基酸突變、42胺基酸突變、43胺基酸突變、44胺基酸突變、45胺基酸突變、46胺基酸突變、47胺基酸突變、48胺基酸突變、49胺基酸突變或50胺基酸突變。在一些實施例中，突變之胺基酸為半胱胺酸。在一些實施例中，胺基酸突變為半胱胺酸至苯丙胺酸(C→F)突變、半胱胺酸至絲胺酸(C→S)突變、半胱胺酸至異白胺酸(C→I)突變或半胱胺酸至丙胺酸(C→A)突變。
在一些實施例中，精胺酸酶蛋白質序列可以包括(但不限於)以下突變中之一或多者：半胱胺酸至苯丙胺酸(C→F)突變、半胱胺酸至絲胺酸(C→S)突變、半胱胺酸至異白胺酸(C→I)突變、半胱胺酸至丙胺酸(C→A)突變、天冬胺酸至麩胺酸(D→E)突變、天冬胺酸至絲胺酸(D→S)突變、絲胺酸至半胱胺酸(S→C)突變、絲胺酸至丙胺酸(S→A)突變或絲胺酸至甘胺酸(S→G)突變。
在一些實施例中，重組精胺酸酶I可以具有經工程改造至重組核酸序列中之分子標籤(在本文中替代地稱為「表位標記」)。在一些實施例中，分子標籤包含胺基酸序列，例如6xHis標籤、旗標標籤、V5標籤、myc標籤、麩胺基硫-S-轉移酶(GST)標籤、麥芽糖結合蛋白(MBP)標籤、幾丁質結合蛋白(CBP)標籤或血球凝集素(HA)標籤胺基酸序列。分子標籤可以促進重組精胺酸酶自粗表現系統中之純化。在一些實施例中，本文所描述之精胺酸酶包含SEQ ID NO:1-43中之任一者之胺基酸序列及分子標籤胺基酸序列(例如6xHis標籤(例如具有N末端甲硫胺酸之6個組胺酸標籤)、旗標標籤、V5標籤、myc標籤、GST標籤、MBP標籤、CBP標籤或HA標籤胺基酸序列)，其中該分子標籤序列接近SEQ ID NO:1-43之胺基酸序列的N末端或C末端。在一些實施例中，本文所描述之聚乙二醇化精胺酸酶包含至少一個與包含SEQ ID NO:1-43中之任一者之胺基酸序列及分子標籤胺基酸序列(例如6xHis標籤(例如具有N末端甲硫胺酸之6個組胺酸標籤)、旗標標籤、V5標籤、myc標籤、GST標籤、MBP標籤、CBP標籤或HA標籤胺基酸序列)之蛋白質接合之PEG分子，其中該分子標籤序列接近SEQ ID NO:1-43之胺基酸序列的N末端或C末端。
SEQ ID NO:56為精胺酸酶蛋白質序列，其包含SEQ ID NO:1及在N末端處具有甲硫胺酸之6xHis標籤。在某些實施例中，非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶包含與SEQ ID NO:56至少約90% (例如至少約90%、至少約91%、至少約92%、至少約93%、至少約94%、至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%或約100%)一致之精胺酸酶序列。
SEQ ID NO:44-50為相對於SEQ ID NO:1包括一或多個胺基酸突變且包括N末端聚組胺酸(6×His)標籤蛋白質序列之精胺酸酶蛋白質序列。SEQ ID NO:44包含相對於SEQ ID NO:1之聚組胺酸標籤及C303→A303突變。SEQ ID NO:45包含相對於SEQ ID NO:1之聚組胺酸標籤及C168→A168突變。SEQ ID NO:46包含相對於SEQ ID NO:1之聚組胺酸標籤及C45→A45突變。SEQ ID NO:47包含相對於SEQ ID NO:1之聚組胺酸標籤、C303→A303及C168→A168雙突變。SEQ ID NO:48包含相對於SEQ ID NO:1之聚組胺酸標籤、C303→A303及C45→A45雙突變。SEQ ID NO:49包含相對於SEQ ID NO:1之聚組胺酸標籤、C168→A168及C45→A45雙突變。SEQ ID NO:50包含相對於SEQ ID NO:1之聚組胺酸標籤、C303→A303、C168→A168及C45→A45參突變。
本文所描述之方法可以包括投與治療有效量之包含SEQ ID NO:44-50之胺基酸序列之精胺酸酶或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，本文所描述之方法可以包括投與治療有效量之包含精胺酸酶或其醫藥學上可接受之鹽的組合物，該精胺酸酶包含SEQ ID NO:44-50之胺基酸序列。
本文所描述之方法可以包括投與治療有效量之包含至少一個與精胺酸酶接合之聚乙二醇分子的聚乙二醇化精胺酸酶或其醫藥學上可接受之鹽，該精胺酸酶包含SEQ ID NO:44-50之胺基酸序列。在一些實施例中，本文所描述之方法可以包括投與治療有效量之包含聚乙二醇化精胺酸酶或其醫藥學上可接受之鹽的組合物，其中聚乙二醇化精胺酸酶包含至少一個與精胺酸酶接合之聚乙二醇分子，該精胺酸酶包含SEQ ID NO:44-50之胺基酸序列。
分子標籤為此項技術中已知的。表位標記之例示性胺基酸序列顯示於表 2 中。
表 2 . 例示性分子標籤
SEQ ID NO: 描述 序列
51 6xHis標籤 HHHHHH
52 旗標標籤 DYKDDDDK
53 V5標籤 GKPIPNPLLGLDST
54 Myc EQKLISEEDL
55 HA標籤 YPYDVPDYA
本文所描述之方法可以包括投與聚乙二醇化精胺酸酶，例如投與至需要治療之患者。聚乙二醇(PEG)為包括(-O-CH2-CH2-)主鏈之聚醚。一般而言，PEG為以下通式之化合物：
Figure 02_image001
。
PEG高度可溶於水中，展現低免疫原性，且無毒(參見Herzberger等人(2016) Polymerization of Ethylene Oxide, Propylene Oxide, and Other Alkylene Oxides: Synthesis, Novel Polymer Architectures, and Bioconjugation.Chemical Reviews ：116, 2170−2243)。聚乙二醇化可以改良精胺酸酶之藥物動力學，產生持續之持續時間、改良之安全性(例如較低毒性、免疫原性及抗原性)、增加之功效、降低之給藥頻率、改良之藥物溶解度及穩定性、降低之蛋白分解及控制之藥物釋放(Roberts等人, 2002, Adv Drug Deliv Rev, 54:459-76)。在一些實施例中，PEG有助於增加精胺酸酶之半衰期。
如本文所描述，精胺酸酶或其功能片段(例如精胺酸酶蛋白質之酶域)可以經各種類型之PEG分子修飾。在一些實施例中，PEG寡聚物為甲氧基聚(乙二醇)琥珀醯亞胺基丙酸酯(mPEG-SPA)。在一些實施例中，PEG寡聚物為甲氧基聚(乙二醇)丙酸(mPEG-酸)。在一些情況下，本發明提供一種醫藥組合物，其包含與至少一個聚乙二醇寡聚物接合之純化重組人類精胺酸酶I蛋白。在一些情況下，聚乙二醇化重組人類精胺酸酶I蛋白與至少兩種聚乙二醇寡聚物接合。在一些情況下，聚乙二醇寡聚物重量為約20千道爾頓至約40千道爾頓。在一些情況下，聚乙二醇化重組人類精胺酸酶I蛋白與約4個聚乙二醇分子至約13個聚乙二醇分子接合。在一些情況下，聚乙二醇寡聚物重量為約5道爾頓。
精胺酸酶或其功能片段與所關注之聚合物聚乙二醇之共價連接可以改變精胺酸酶之物理化學特徵。可以藉由結合至PEG而改變之物理化學特徵之實例包括免疫原性、活體外及活體內生物活性、吸收速率及生物可用性、生物分佈、藥物動力學(PK)及藥效學分佈(PD)及毒性。在一些實施例中，聚乙二醇化精胺酸酶具有降低之免疫原性。-NH2 、-COOH、-OH、-SH及雙硫鍵為可以與PEG寡聚物反應之精胺酸酶之胺基酸側鏈中的化學基團之實例。在一些實施例中，N末端中之胺及C末端中之羧基亦可以與PEG寡聚物反應。
用於蛋白質聚乙二醇化之PEG試劑可以為活化PEG。活化PEG可以用於胺聚乙二醇化、硫醇聚乙二醇化或N末端聚乙二醇化。PEG試劑可以不同長度、形狀及化學性質商購，使其與蛋白質之特定官能基反應以用於其共價連接。PEG之商業供應商之非限制性實例包括NOF公司(日本)；SunBio(南朝鮮)；Chirotech技術有限責任公司(UK)；JenKem(中國)；創造型PEGWorks(USA)、西格瑪-奧德里奇(Milwaukee, WI)、Dendritech(Midland, MI)或PolysciencesTM (Warrington, PA)。
適用於本文所描述之實施例之市售PEG的非限制性實例包括(但不限於)可獲自內克塔治療(Nektar Therapeutics)(San Carlos, CA)，諸如mPEG-NH2 (Mw為約10 kDa, 約20 kDa)、甲氧基PEG琥珀醯亞胺基α-丁酸甲酯(SMB)、SMB-PEG-SMB、甲氧基PEG琥珀醯亞胺基丙酸酯(mPEG-SPA)、分支鏈PEG N-羥基琥珀醯亞胺(mPEG2-NHS)、mPEG-CM-HBA-NHS、NHS-HBA-CM-PEG-CM-HBA-NHS、mPEG-丁醛、丁醛-PEG-丁醛、分支鏈PEG丁醛(mPEG2-丁醛)、鄰-吡啶基硫酯(mPEG-OPTE)、mPEG順丁烯二醯亞胺(MAL)、MAL-PEG-MAL、分支鏈PEG順丁烯二醯亞胺(mPEG2-MAL)、叉狀順丁烯二醯亞胺(mPEG-MAL2及mPEG2-MAL2)、mPEG-鄰-吡啶基二硫化物(mPEG-OPSS)、OPSS-PEG-OPSS、mPEG-SH、SH-PEG-SH、胺-PEG-酸、Boc-PEG-NHS、Fmoc-PEG-NHS、MAL-PEG-NHS、乙烯基碸-PEG-NHS及丙烯酸-PEG-NHS酯。
可以用於胺聚乙二醇化之PEG的非限制性實例包括例如由Jenken技術(USA)製造之PEG，諸如：Y形PEG NHS酯、Y形PEG羧基、葡萄糖PEG NHS酯、半乳糖PEG NHS酯、甲氧基PEG琥珀醯亞胺基羧甲基酯、甲氧基PEG羧基、甲氧基PEG琥珀醯亞胺基丁酸酯、甲氧基PEG琥珀醯亞胺基己酸酯、甲氧基PEG己酸、甲氧基PEG琥珀醯亞胺基琥珀醯胺、甲氧基PEG琥珀醯亞胺基戊二醯胺、甲氧基PEG琥珀醯亞胺基碳酸酯、甲氧基PEG硝基苯基碳酸酯、甲氧基PEG琥珀醯亞胺基琥珀酸酯、甲氧基PEG琥珀醯亞胺基戊二酸酯。可以用於硫醇聚乙二醇化中之PEG之非限制性實例包括Y形PEG順丁烯二醯亞胺、甲氧基PEG順丁烯二醯亞胺、甲氧基PEG乙烯基碸、甲氧基PEG硫醇。可以用於N末端聚乙二醇化之PEG之非限制性實例包括例如由Jenken技術USA製造之PEG，諸如：Y形PEG醛、Y形PEG乙醛、Y形PEG丙醛及甲氧基PEG丙醛。
在一些實施例中，精胺酸酶I或其功能片段可以具有小於其所連接之PEG寡聚物的分子量。PEG寡聚物之分子量可以為例如不超過100千道爾頓(kDa)、不超過95 kDa、不超過90 kDa、不超過85 kDa、不超過80 kDa、不超過75 kDa、不超過70 kDa、不超過65 kDa、不超過60 kDa、不超過55 kDa、不超過50 kDa、不超過45 kDa、不超過40 kDa、不超過35 kDa、不超過30 kDa、不超過25 kDa、不超過20 kDa、不超過15 kDa、不超過10 kDa、不超過5 kDa、不超過1 kDa或不超過500道爾頓(Da)。
在一些實施例中，PEG分子之分子量可以大於500 Da、大於1千道爾頓(kDa)、大於5 kDa、大於10 kDa、大於15 kDa、大於20 kDa、大於25 kDa、大於30 kDa、大於35 kDa、大於40 kDa、大於45 kDa、大於50 kDa、大於55 kDa、大於60 kDa、大於65 kDa、大於70 kDa、大於75 kDa、大於80 kDa、大於85 kDa、大於90 kDa、大於95 kDa、大於100 kDa。
在一些實施例中，PEG寡聚物之分子量可以為約1 kDa至約5 kDa、約1 kDa至約10 kDa、約10 kDa至約20 kDa、約10 kDa至約30 kDa、約10 kDa至約40 kDa、約10 kDa至約50 kDa、約20 kDa至約30 kDa、約20 kDa至約40 kDa、約20 kDa至約50 kDa、約30 kDa至約40 kDa、約30 kDa至約50 kDa。
在某些實施例中，PEG寡聚物之分子量為約5 kDa。在某些實施例中，PEG寡聚物之分子量為約20 kDa至約40 kDa。III. 治療性應用
在某些實施例中，疾病或病症係由病原體感染之結果，該病原體例如細菌、病毒、真菌、原蟲(例如阿米巴原蟲)、藻或普里昂蛋白。胞內病原體包括兼性胞內寄生蟲，其能夠在宿主細胞內部或外部存活且再現；及無法在其宿主細胞外部再現之絕對胞內寄生蟲。在某些實施例中，胞內病原體為疾病或病症中之病原體。在某些實施例中，胞內病原體在細胞內休眠、潛伏或共生，但可以在病原體之生命週期後期引起疾病或病症。胞內病原體感染可以為急性或慢性的。在某些實施例中，由胞內病原體介導之疾病或病症為慢性感染。在某些實施例中，由胞內病原體介導之疾病或病症為急性感染。 治療病毒疾病及病症
在某些實施例中，疾病或病症係由病毒引起。在某些實施例中，病毒係選自由以下組成之群：反轉錄病毒(例如人類免疫缺乏病毒(HIV)、猿猴免疫缺乏病毒(SIV)、人類T細胞嗜淋巴球病毒(HTLV)-1、HTLV-2、HTLV-3、HTLV-4)、伊波拉病毒、A型肝炎病毒、B型肝炎病毒、C型肝炎病毒、單純疱疹病毒(HSV)(例如HSV-1、HSV-2、水痘帶狀疱疹病毒、巨細胞病毒)、腺病毒、正黏液病毒(例如流感病毒A、流感病毒B、流感病毒C、流感病毒D、托高土病毒)、黃病毒(例如登革熱病毒、塞卡病毒)、西尼羅河病毒、東非瑞夫特河谷羊熱病病毒、沙粒狀病毒、克里米亞剛果出血熱病毒、埃可病毒、鼻病毒、科沙奇病毒、冠狀病毒(例如嚴重急性呼吸症候群冠狀病毒(SARS-CoV)、嚴重急性呼吸症候群冠狀病毒2 (SARS-CoV-2)及中東呼吸症候群相關冠狀病毒(MERS-CoV))、呼吸道融合病毒、腮腺炎病毒、輪狀病毒、麻疹病毒、德國麻疹病毒、微小病毒(例如腺相關病毒)、痘瘡病毒、天花病毒、軟疣病毒、牛白血病病毒、脊髓灰白質炎病毒、狂犬病病毒、多瘤病毒(例如JC病毒、BK病毒)、α病毒及風疹病毒(例如德國麻疹病毒)。在某些實施例中，疾病或病症係由除肝炎及/或HIV以外之病毒引起。
在某些實施例中，本文所描述之非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶用於治療由病毒感染引起之疾病或病症，例如選自由以下組成之群之疾病或病症：後天性免疫缺乏症候群(AIDS)、HTLV-1相關脊髓病/熱帶痙攣性截癱、伊波拉病毒疾病、A型肝炎、B型肝炎、C型肝炎、疱疹、帶狀疱疹、急性水痘、單核白血球增多症、呼吸道感染、肺炎、流感、登革熱、腦炎(例如，日本腦炎)、西尼羅河熱(West Nile fever)、里夫特谷熱(Rift Valley fever)、克里米亞剛果出血熱、凱薩努森林疾病(Kyasanur Forest disease)、黃熱病、塞卡熱(Zika fever)、無菌性腦膜炎、心肌炎、感冒、肺部感染、傳染性軟疣、地方性牛白血病、冠狀病毒疾病2019 (COVID-19)、流行性腮腺炎、胃腸炎、麻疹、風疹、拍頰病、天花、疣(例如，生殖器疣)、傳染性軟疣、脊髓灰質炎、狂犬病及玫瑰糠疹。
在一些實施例中，病毒疾病或病症由人類免疫缺乏病毒(HIV)引起。HIV係指感染免疫系統細胞(例如CD4+ T細胞、巨噬細胞及小神經膠質細胞)之兩個反轉錄病毒物種(HIV-1，HIV-2)。HIV可以發展為後天免疫缺乏症候群(AIDS)。在一些實施例中，病毒疾病或病症係由人類乳頭瘤病毒(HPV)引起。HPV為可導致疣(例如生殖器疣)之性傳播感染。在一些實施例中，病毒疾病或病症係由疱疹病毒，例如C型肝炎病毒(HCV)或巨細胞病毒(CMV)引起。C型肝炎主要影響肝臟且通常導致肝病及/或肝硬化。巨細胞病毒(CMV)，例如人類巨細胞病毒，與肺炎及單核白血球增多症相關。在一些實施例中，病毒疾病或病症係由黃病毒，例如伊波拉病毒、塞卡病毒或西尼羅河病毒引起。伊波拉病毒引起伊波拉病毒疾病(EVD)，病毒出血熱。
在一些實施例中，病毒為RNA病毒(具有由RNA構成之基因體)。RNA病毒可為單股RNA (ssRNA)或雙股RNA (dsRNA)。與DNA病毒相比，RNA病毒具有高突變率，因為RNA聚合酶不具有校讀能力(參見Steinhauer DA, Holland JJ (1987). 「Rapid evolution of RNA viruses」. Annu. Rev. Microbiol. 41: 409-33)。例示性RNA病毒包括(但不限於)布尼亞病毒(bunyaviruses)(例如，漢坦病毒(hantavirus))、冠狀病毒(例如MERS-CoV、SARS-CoV、SARS-CoV-2)、黃病毒(例如，黃熱病病毒、西尼羅河病毒、登革熱病毒)、肝炎病毒(例如，A型肝炎病毒、C型肝炎病毒、E型肝炎病毒)、流感病毒(例如，A型流感病毒、B型流感病毒、C型流感病毒)、麻疹病毒、腮腺炎病毒、諾羅病毒(例如，諾沃克病毒(Norwalk virus))、脊髓灰白質炎病毒、呼吸道融合病毒(RSV)、反轉錄病毒(例如，人類免疫缺乏病毒-1 (HIV-1))及環曲病毒(toroviruses)。在一些實施例中，RNA病毒為流感病毒，例如A型流感。在一些實施例中，A型流感病毒為H1N1 流感病毒A (大流行性H1N1/09)。在一些實施例中，A型流感病毒為H5N1 流感病毒A (A/越南/2013/04)。在一些實施例中，RNA病毒為RSV。在一些實施例中，RNA病毒為MERS-CoV。在一些實施例中，RNA病毒為SARS-CoV2。在一些實施例中，RNA病毒為ZIKA。
藉由基因體之類型將RNA病毒分類(雙股、陰性(-)或陽性(+)單股)。雙股RNA病毒含有許多不同RNA分子，各自編碼一或多種病毒蛋白質。正義ssRNA病毒直接將其基因體用作mRNA；宿主細胞內之核糖體將mRNA翻譯成單一蛋白質，該單一蛋白質接著經修飾以形成病毒複製所需之各種蛋白質。一種此類蛋白質為RNA依賴性RNA聚合酶(RNA複製酶)，其複製病毒RNA以形成雙股、複製形式。反義ssRNA病毒具有由RNA複製酶複製之基因體，以產生用於複製之正義RNA。因此，病毒包含RNA複製酶。接著，所得正義RNA充當病毒mRNA且由宿主核糖體翻譯。在一些實施例中，病毒為dsRNA病毒。在一些實施例中，病毒為陰性ssRNA病毒。在一些實施例中，病毒為陽性ssRNA病毒。在一些實施例中，陽性ssRNA病毒為冠狀病毒。
有時亦稱為2019或2019-nCoV之新穎冠狀病毒的SARS-CoV2為正義單股RNA病毒。SARS-CoV2具有四種結構蛋白，稱為S(刺突)、E(包膜)、M(膜)及N(核蛋白殼)蛋白。N蛋白將RNA基因體保持在一起；S、E及M蛋白形成病毒包膜。刺突蛋白使病毒連接至宿主細胞(諸如人類細胞中之ACE2受體)之膜(Kruse R.L. (2020), Therapeutic strategies in an outbreak scenario to treat the novel coronavirus originating in Wuhan, China (第2版).F1000Research , 9:72)。SARS-CoV2為全球大流行性2019冠狀病毒疾病(COVID19)之高傳染性、致病性病毒劑。
在一些實施例中，病毒為DNA病毒(具有由DNA構成之基因體)。例示性DNA病毒包括(但不限於)微小病毒(例如，腺相關病毒)、腺病毒、非洲豬瘟病毒(asfarviruses)、疱疹病毒(例如，單純疱疹病毒1及2 (HSV-1及HSV-2)、埃-巴二氏病毒(Epstein-Barr virus；EBV)、巨細胞病毒(CMV)、乳頭瘤病毒(例如，HPV)、多瘤病毒(例如，猴空泡病毒40 (SV40))及痘病毒(例如，痘瘡病毒、牛痘病毒、天花病毒、禽痘病毒、羊痘病毒、黏液瘤病毒)。在某些實施例中，DNA病毒為腺病毒，例如AdV5。在某些實施例中，DNA病毒為腸病毒，例如EV71。在某些實施例中，DNA病毒為疱疹病毒，例如HSV-1。
在一些實施例中，感染侷限於例如器官或例如組織。在一些實施例中，感染侷限於器官，包括(但不限於)眼、耳、內耳、肺、氣管、支氣管、細支氣管、肝臟、膽囊、膽管、腎臟、膀胱、睪丸、子宮頸、卵巢、子宮、皮膚或腦。在某些實施例中，感染為病毒感染(例如HSV-1、HSV-2、VZV、CMV)且侷限於眼。在某些實施例中，感染為腺病毒感染且侷限於眼。在某些實施例中，感染為細菌感染(例如披衣菌)且侷限於眼。
在一些實施例中，感染為慢性的。如本文所使用，「慢性」係指持續延長時段或復發之感染。在一些實施例中，感染為急性的。如本文所使用，「急性」係指持續時間短的感染。
定量病毒複製之方法為此項技術中已知的。在一些實施例中，使用溶菌斑分析測定病毒計數。在一些實施例中，使用病灶形成分析(FFA)測定病毒計數。在一些實施例中，使用端點稀釋度分析測定病毒計數。在一些實施例中，使用酶聯結免疫吸附劑分析(ELISA)測定病毒計數。在一些實施例中，使用可調電阻式脈衝感測(TRPS)測定病毒計數以偵測個別病毒顆粒。在一些實施例中，病毒複製如下測定：定量宿主細胞死亡之量或百分比，例如活體外，例如使用碘化丙錠(PI)以識別死細胞、定量形態圓化細胞之量或藉由免疫螢光顯微術識別凋亡標記物。在一些實施例中，病毒計數係藉由量測病毒滴度或感染倍率(MOI)或藉由進行溶菌斑分析、焦點形成分析及端點稀釋分析、病毒蛋白質定量分析(例如血球凝集分析、二辛可寧酸分析(BCA)或單一輻射狀免疫擴散分析(SRID)分析)、穿透電子顯微術分析、可調電阻式脈衝感測(TRPS)分析、流式細胞測量術分析、定量PCR (qPCR)分析或酶聯結免疫吸附劑分析(ELISA)來測定。在一些實施例中，病毒複製係藉由定量病毒核酸(例如病毒DNA或病毒RNA)含量來測定。
定量病毒傳播之方法為此項技術中已知的。在一些實施例中，使用流行病學模型化來定量病毒傳播(參見例如Graw等人, (2016)Modeling Viral Spread.Annu Rev Virol , 3(1))。在一些實施例中，活體外，例如在細胞培養物中，例如使用顯微術，例如使用穿透電子顯微術(TEM)評估病毒傳播。
定量病毒組裝之方法為此項技術中已知的。在一些實施例中，使用統計模型化來測定病毒組裝(參見例如Clement等人, (2018)Viral Capsid Assembly: A Quantified Uncertainty Approach.J Comp Biol , 25(1))。在一些實施例中，使用生物化學技術測定病毒組裝以確定蛋白殼複合物形成，例如共免疫沈澱，例如西方墨點法。在一些實施例中，藉由流式細胞測量術測定病毒組裝以偵測共定位病毒蛋白質(參見例如Stoffel, C.L.等人(2005). 「Rapid Determination of Baculovirus Titer by a Dual Channel Virus Counter」American Biotechnology Laboratory . 37 (22): 24-25)。
病毒基因編碼病毒感染過程、多步驟過程(包括例如連接至宿主細胞、穿透、去包封、病毒基因轉錄級聯、病毒蛋白表現、病毒基因體複製、病毒包裝及組裝、包封、傳輸及成熟、釋放及外溢及宿主細胞-細胞傳播)所需之元件。β基因為對應於病毒感染之早期步驟(例如病毒基因體複製)之彼等基因。γ基因為對應於病毒感染之晚期步驟(例如外溢)之彼等基因。定量病毒基因表現之方法為此項技術中已知的。在一些實施例中，病毒基因表現係使用反轉錄酶及定量聚合酶鏈反應(RT-qPCR)測定。在一些實施例中，RNA定序(RNA-Seq)用於測定病毒基因表現。在一些實施例中，使用南方墨點法定量病毒DNA。在一些實施例中，定量β基因表現。在一些實施例中，定量γ基因表現。在一些實施例中，定量β基因表現及γ基因表現。在一些實施例中，定量整個病毒基因體之表現。
定量病毒釋放之方法為此項技術中已知的。在一些實施例中，藉由生物化學分析，例如西方墨點法，例如代謝標記測定病毒釋放(參見例如Yadav等人, (2012). 「A facile quantitative assay for viral particle genesis reveals cooperativity in virion assembly and saturation of an antiviral protein.」Virology . 429(2): 155-162)。在一些實施例中，藉由ELISA測定病毒釋放。在一些實施例中，使用電子顯微術，例如穿透電子顯微術(TEM)測定病毒釋放。在一些實施例中，病毒釋放藉由用於偵測樣品，例如血清中之病毒粒子之感染性量測來測定。在一些實施例中，病毒釋放係藉由定量活體內血清或活體外培養上清液中之病毒DNA或病毒RNA來測定。
在某些實施例中，如本文所描述之非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶以相比於未投與精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶之經感染之細胞、組織或個體，足以將經感染之細胞、組織或個體中之病毒複製、病毒傳播、病毒組裝、病毒感染及病毒釋放中的一或多種減少至少約5%、至少約10%、至少約15%、至少約20%、至少約25%、至少約30%、至少約35%、至少約40%、至少約45%、至少約50%、至少約55%、至少約60%、至少約65%、至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%或約100%的量投與。 治療其他疾病及病症
在某些實施例中，疾病或病症係由細菌，例如細菌感染引起。在某些實施例中，細菌係選自由以下組成之群：披衣菌(例如沙眼衣原體(C . trachomatis )、大腸桿菌(例如致病性大腸桿菌(enteropathogenicE . coli )、腸出血性大腸桿菌(enterohemorrhagicE . coli )、致腎盂腎炎大腸桿菌(uropathogenicE . coli )、腸侵襲性大腸桿菌(enteroinvasiveE . coli ))、幽門螺旋桿菌(Helicobacter pylori )、分支桿菌(Mycobacterium)(例如結核分枝桿菌(M . tuberculosis )、麻風分枝桿菌(M . leprae )、彌漫型麻風分枝桿菌(M . lepromatosis ))、李斯特菌(Listeria)(例如單核球增多性李斯特菌(L . monocytogenes ))、志賀桿菌(Shigella)(例如福氏志賀桿菌(S . flexneri ))、葡萄球菌(Staphylococcus)(例如金黃色葡萄球菌(S . aureus ))、鏈球菌(Streptococcus)(例如化膿性鏈球菌(S . pyogenes ))、鏈黴菌(Streptomyces)、肺炎球菌(Pneumococcus)、腦膜炎雙球菌(Meningococcus)、淋病球菌(Gonococcus)、克雷伯氏菌(Klebsiella)(例如克雷伯氏肺炎桿菌(K . pneumoniae ))、變形桿菌(Proteus)、沙雷氏菌(Serratia)、假單胞菌(Pseudomonas)(例如綠膿桿菌(P . aeruginosa ))、退伍軍人症桿菌(Legionella)、不動桿菌(Acinetobacter)(例如鮑氏不動桿菌(A . baumannii ))、棒狀桿菌(Corynebacterium)(例如白喉桿菌(C . diphtheria ))、柯克斯氏體(Coxiella)(例如伯納特柯克斯體(C . burnetii ))、芽孢桿菌(Bacillus)(例如炭疽芽胞桿菌(B . anthricis ))、擬桿菌(Bacteroides)、博德特氏菌(Bordetella)、腸內球菌(Enterococcus)(例如糞腸球菌(E . faecalis ))、弗朗西斯氏菌(Francisella)(例如土拉文氏桿菌(F . tularensis ))、流感嗜血桿菌(Haemophilus influenza)、奈瑟氏菌(Neisseria)(例如腦膜炎奈瑟氏菌(N . meningitides )、淋病奈瑟氏菌(N . gonorrhoeae ))、立克次體(Rickettsia)、沙門氏菌(Salmonella)(例如鼠傷寒沙門桿菌(S . typhimurium ))、霍亂弧菌、梭菌(Clostridium)(例如破傷風梭菌(C . tetan )、肉毒梭菌(C . botulinum ))、耶式桿菌(Yersinia)(例如鼠疫桿菌(Y . pestis ))、伯氏桿菌(Borrielia)(例如伯氏疏螺旋體(B . burgdorferi ))、布魯桿菌(Brucella)、伯克氏菌(Burkholderia)、彎曲桿菌(Campylobacter)及黴漿菌(Mycoplasma)。
在某些實施例中，本文所描述之非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶用於治療由細菌(例如，胞內細菌感染)引起之疾病或病症。本文所描述之方法可以用於治療例如選自由以下組成之群之細菌疾病或病症：披衣菌、肺結核、胃潰瘍、麻風、李斯特菌、涎腺炎、細菌引起之腹瀉或食物中毒、鏈球菌咽喉炎、猩紅熱、膿皰症、蜂窩組織炎、肺炎、腦膜炎、細菌性心內膜炎、憩室炎、彌漫性性肺炎炎、傳播性淋球菌血症(disseminated gonococcemia)、敗血性關節炎、新生兒淋球菌性眼炎、泌尿道感染、軟組織感染、脊椎關節病(例如僵直性脊椎炎)、退伍軍人病(legionellosis)(例如軍團病(Legionnaires' disease)、龐提亞克熱(Pontiac fever))、白喉、沙門氏桿菌、炭疽、霍亂、破傷風、肉毒中毒、筋膜炎、氣性壞疽、牙菌斑、萊姆病、布氏桿菌(brucellosis)、類鼻疽、Q熱、兔熱病(tularemia)、淋病、斑疹傷寒、支原體肺炎、胃腸炎及步行肺炎(walking pneumonia)。
在某些實施例中，疾病或病症係由真菌引起。在某些實施例中，真菌係選自由以下組成之群；念珠菌(Candida)(例如白色念珠菌(C . albicans )、克魯斯念珠菌(C . krusei )、格拉布勒他念珠菌(C . glabrata )、熱帶念珠菌(C . tropicalis ))、隱球菌(Cryptococcus)(例如新生隱球菌(C . neoformans )、加特隱球菌(C . gattii ))、麴菌(Aspergillus)(例如煙麴菌(A . fumigatus )、黑麴菌(A . niger ))、毛黴目(Mucorales)(例如白黴菌(M . mucor )、犁頭黴(M . absidia )、根黴菌(M . rhizopus ))、孢子絲菌(Sporothrix)(例如申克孢子絲菌(S . schenkii ))、芽生菌(Blastomyces)(例如皮炎芽生菌(B . dermatitidis ))、副球孢子菌(Paracoccidioides)(例如巴西副球孢子菌(P . brasiliensis ))、球孢子菌(Sporothrix)(例如孢子菌(C . immitis ))、組織孢漿菌(Histoplasma)(例如莢膜組織胞漿菌(H . capsulatum ))、頂孢微菌(Acremonium)、蛙糞微菌(Basidiobolus)(例如蛙糞微菌(B . ranarum ))、支孢瓶黴(Cladophialophora)(例如班辛支孢瓶黴(C . bantiana ))、小克銀漢黴(Cunninghamella)(例如灰色小克銀漢黴(C . bertholletiae ))、表皮癬菌(Epidermophyton)、外瓶黴(Exophiala)、突臍蠕孢(Exserohilum)、芳沙加菌(Fonsecaea)(例如裴氏著色黴(F . pedrosoi ))、外瓶黴(Hortaea)(例如威尼克外瓶黴(H . werneckii ))、芽生菌(Lacazia) (例如人豚共患芽生菌(L . loboi ))、小球腔菌(Leptosphaeria)(例如小斑小球腔菌(L . maculans ))、馬拉杜分支菌(Madurella)(例如足馬杜拉分支菌(M . mycetomatis ))、馬拉色菌(Malassezia)、小芽孢菌(Microsporum)、白微菌(Mucor)、新龜甲形菌(Neotestudina)、甲黴菌(Onychocola)、芽生菌(Phialophora)、子囊菌綱毛孢子菌(Piedraia)、肺囊蟲(Pneumocystis)(例如卡式肺囊蟲(P . jirovecii ))、假性微樣菌(Pseudallescheria)(例如波氏假性微樣菌(P . boydii ))、棘殼孢(Pyrenochaeta)、根黏菌(Rhizomucor)、賽多孢子菌(Scedosporium)、柱頂孢黴(Scytalidium)、孢子絲菌(Sporothrix)、發癬菌(Trichophyton)、毛芽胞菌(Trichosporon)及接合菌(Zygomycete)。
在某些實施例中，本文所描述之非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶用於治療由胞內真菌感染引起之疾病或病症，例如選自由以下組成之群的疾病或病症：念珠菌病、隱球菌病、麴菌病、白黴菌病、孢子絲菌病、芽生菌病、巴西副球黴菌病、球黴菌病、組織漿菌病、足菌腫、甲微菌病、透明絲孢黴病、皮下接合菌病、大腦膿腫、暗色菌絲體病、產色釀母菌病、足菌病、肺毛黴菌病、體癬、頭癬、股癬、足癬、甲癬、黑癬、瘢瘤性芽米菌病、黑腳病、足菌病、花斑癬、馬拉色菌毛囊炎、類固醇痤瘡、脂溢性皮炎、新生兒頭膿皰病、毛黴菌病、足分支菌病、毛幹黑結節病、囊蟲肺炎、假性阿利什利菌病、賽多孢子菌病、孢子絲菌病及接合菌病。
在某些實施例中，疾病或病症係由原蟲引起。在一些實施例中，原蟲係阿米巴原蟲。在某些實施例中，阿米巴原蟲係選自由以下組成之群：頂複蟲類(瘧原蟲(例如，間日瘧原蟲(P . vivax )、惡性瘧原蟲(P . falciparum )、卵形瘧原蟲(P . ovale )、三日瘧原蟲(P . malariae )、剛地弓形蟲(Toxoplasma gondii )、小球隱胞子蟲(Cryptosporidium parvum )、微小巴倍蟲(Babesia microti )、環孢子蟲(Cyclospora cayetanensis )、壁麗囊等孢蟲(Cystoisospora belli ))、錐蟲屬(例如，布氏錐蟲(Trypanosoma brucei )、克氏錐蟲(Trypanosoma cruzi )；及利什曼原蟲(例如，杜氏利什曼原蟲(Leishmania donovani ))。
在某些實施例中，本文所描述之非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶用於治療由胞內阿米巴原蟲感染而引起之疾病或病症，例如選自由以下組成之群的疾病或病症：焦蟲病、瘧疾、隱孢子蟲病、圓孢子蟲病、等孢子球蟲病、弓蟲病、錐蟲病、卻格司氏病(Chagas disease)及利什曼體病(leishmaniasis)。
在某些實施例中，傳染性疾病或病症係由藻類引起。在某些實施例中，藻類係原壁菌屬(Prototheca)。在某些實施例中，本文所描述之非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶用於治療由胞內藻類感染(例如原鞘炎(protothecosis))引起之疾病或病症。
在某些實施例中，傳染性疾病或病症係由普里昂蛋白引起。在某些實施例中，本文所描述之非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶用於治療由胞內普里昂蛋白感染引起之疾病或病症，例如選自由以下組成之群的疾病或病症：克-亞二式症(Creutzfeldt-Jakob disease)、變異克-亞二式症、格斯待曼氏綜合症候群(Gerstmann-Straussler-Scheinker syndrome)、致死性家族性失眠症及克魯病(kuru)。IV. 組合療法
本發明之治療方法可以以單一療法形式或與一或多種可以用於治療疾病或病症(例如感染)之其他療法(例如抗感染劑)組合使用。如本文所使用，術語「組合」應理解為意謂在患有病症之個體之病痛過程期間向個體遞送兩種或兩種以上不同的治療，使得對於患者之治療效果在一時間點處重疊。在某些實施例中，當開始提供第二種治療時，第一種治療之提供仍存在以使得就投與而言存在重疊。此在本文中有時係指「同步」或「同時遞送」。在其他實施例中，一種治療之遞送在另一治療之遞送開始之前結束。在任一情況之某些實施例中，治療歸因於組合投與而更有效。舉例而言，與在不存在第一治療之情況下投與第二治療時所發現相比，第二治療更有效，例如使用較少第二治療即可發現同等作用，或第二治療以更大的程度減少症狀，或對於第一治療可發現類似情形。在某些實施例中，遞送使得症狀減少，或與疾病相關之其他參數超過在另一治療不存在下遞送一種治療將觀測到之結果。兩種治療之作用可部分加合，完全加合或大於加合。遞送可以使得所遞送之第一治療之作用在遞送第二治療時仍可偵測。
因此，在某些實施例中，個體已接受、正在接受或計劃接受一或多種適用於治療疾病或病症之其他療法。在某些實施例中，本發明之治療方法進一步包含向個體投與一或多種適用於治療疾病或病症，例如感染之其他療法。在某些實施例中，一或多種其他療法包含改善胞內病原體感染之一或多種症狀的試劑。在某些實施例中，一或多種其他療法包含手術移除經感染之組織。
應理解，本文所揭示之使用方法可以與試劑(例如改善與胞內病原體相關之疾病或病症之一或多種症狀的抗感染劑)組合使用。舉例而言，本文所揭示之使用方法可以與抗病毒劑組合使用。
適用於治療胞內病原體感染之療法在此項技術中通常已知且由例如Kamaruzzaman等人(2017) BR. J. PHARMACOL. 174(14): 2225-36及De Clercq等人(2016) CLIN. MICROBIOL. REV. 29(3): 695-747綜述。在某些實施例中，抗感染劑抑制或降低胞內病原體之活力、增殖、感染力及/或毒力。胞內病原體可藉由以潛伏狀態駐存來逃避免疫監視及攻擊。因此，在某些實施例中，抗感染劑逆轉胞內病原體之潛時，使得感染可以由宿主之免疫系統識別。
在某些實施例中，胞內病原體為病毒，且抗感染劑為抗病毒劑。可以用於組合中之例示性抗病毒劑包括(但不限於)阿巴卡韋(abacavir)、阿昔洛韋(acyclovir)、阿丹弗(adefovir)、安普那韋(amprenavir)、阿紮那韋(atazanavir)、西多福韋(cidofovir)、達盧那韋(darunavir)、迪拉韋啶(delavirdine)、地達諾新(didanosine)、多可沙諾(docosanol)、依法韋侖(efavirenz)、埃替格韋(elvitegravir)、安卓西他賓(emtricitabine)、恩夫韋地(enfuvirtide)、恩替卡韋(entecavir)、依曲韋林(etravirine)、泛昔洛韋(famciclovir)、膦甲酸(foscarnet)、福米韋生(fomivirsen)、更昔洛韋(ganciclovir)、茚地那韋(indinavir)、碘苷(idoxuridine)、拉米夫定(lamivudine)、咯匹那韋(lopinavir)、馬拉維若(maraviroc)、MK-2048、奈非那韋(nelfinavir)、奈韋拉平(nevirapine)、噴昔洛韋(penciclovir)、雷特格韋(raltegravir)、利匹韋林(rilpivirine)、利托那韋(ritonavir)、沙奎那韋(saquinavir)、司他夫定(stavudine)、泰諾福韋(tenofovir)、曲氟尿苷(trifluridine)、伐昔洛韋(valaciclovir)、纈更昔洛韋(valganciclovir)、阿糖腺苷(vidarabine)、伊巴他濱(ibacitabine)、金剛烷胺(amantadine)、奧司他韋(oseltamivir)、金剛乙胺(rimantidine)、替拉那韋(tipranavir)、紮西他濱(zalcitabine)、紮那米韋(zanamivir)、帕拉米韋(peramivir)、丹諾普韋(danoprevir)、瑞德西韋(remdesivir)及齊多夫定(zidovudine)。特定言之，在胞內病原體為HIV之情況下，可以用於組合中之例示性抗HIV試劑包括(但不限於)核苷/核苷酸反轉錄酶抑制劑(例如拉米夫定、阿巴卡韋、齊多夫定、司他夫定、地達諾新、安卓西他賓及泰諾福韋)、非核苷反轉錄酶抑制劑(例如迪拉韋啶、依法韋侖、依曲韋林及奈韋拉平)、蛋白酶抑制劑(例如安普那韋、夫沙那韋(fosamprenavir)、阿紮那韋、達盧那韋、茚地那韋、咯匹那韋、利托那韋、奈非那韋、沙奎那韋及替拉那韋)、融合或進入抑制劑(例如恩夫韋地及馬拉維若)、整合酶抑制劑(例如雷特格韋、卡伯格韋)及延遲-逆轉試劑(例如HDAC抑制劑(例如伏立諾他(vorinostat))及TLR7促效劑(例如GS-9620，例如美國專利出版物第US20160008374A1中所描述))。
在某些實施例中，胞內病原體為細菌，且抗感染劑為抗菌劑。可以用於組合中之例示性抗菌劑包括(但不限於)萬古黴素(vancomycin)、甲硝噠唑(metronidazole)、慶大黴素(gentamicin)、可利斯汀(colistin)、非達黴素(fidaxomicin)、特拉萬星(telavancin)、奧利萬星(oritavancin)、達巴黴素(dalbavancin)、達托黴素(daptomycin)、頭孢力新(cephalexin)、頭孢呋辛(cefuroxime)、頭孢羥胺苄(cefadroxil)、頭孢唑林(cefazolin)、先鋒黴素(cephalothin)、頭孢克洛(cefaclor)、頭孢孟多(cefamandole)、頭孢西丁(cefoxitin)、頭孢羅齊(cefprozil)、頭孢吡普(ceftobiprole)、西普樂(cipro)、左氟沙星(Levaquin)、菲甯達(floxin)、加替沙星(tequin)、威洛速(avelox)、諾氟沙星(norflox)、四環素(tetracycline)、二甲胺四環素(minocycline)、土黴素(oxytetracycline)、多西環素(doxycycline)、阿莫西林(amoxicillin)、安比西林(ampicillin)、青黴素V (penicillin V)、雙氯西林(dicloxacillin)、卡本西林(carbenicillin)、甲氧西林(methicillin)、厄他培南(ertapenem)、多尼培南(doripenem)、亞胺培南/西司他汀(imipenem/cilastatin)、美羅培南(meropenem)、阿米卡星(amikacin)、康黴素(kanamycin)、新黴素(neomycin)、奈替黴素(netilmicin)、托普黴素(tobramycin)、巴龍黴素(paromomycin)、頭孢克肟(cefixime)、頭孢地尼(cefdinir)、頭孢托侖(cefditoren)、頭孢哌酮(cefoperazone)、頭孢噻肟(cefotaxime)、頭孢他啶(ceftazidime)、頭孢布坦(ceftibuten)、頭孢唑肟(ceftizoxime)、頭孢曲松(ceftriaxone)、頭孢西丁(cefoxotin)及鏈黴素(streptomycin)。
在某些實施例中，胞內病原體為真菌，且抗感染劑為抗真菌劑。可以用於組合中之例示性抗真菌劑包括(但不限於)遊黴素(natamycin)、龜裂殺菌素(rimocidin)、非律平(filipin)、制黴菌素(nystatin)、雙性黴素B (amphotericin B)、坎底辛(candicin)及哈黴素(hamycin)、咪康唑(miconazole)、酮康唑(ketoconazole)、克黴唑(clotrimazole)、益康唑(econazole)、奧莫康唑(omoconazole)、聯苯苄唑(bifonazole)、布康唑(butoconazole)、芬替康唑(fenticonazole)、異康唑(isoconazole)、奧昔康唑(oxiconazole)、舍他康唑(sertaconazole)、硫康唑(sulconazole)、噻康唑(tioconazole)、氟康唑(fluconazole)、伊曲康唑(itraconazole)、艾沙康唑(isavuconazole)、拉夫康唑(ravuconazole)、泊沙康唑(posaconazole)、伏立康唑(voriconazole)、特康唑(terconazole)及阿巴康唑(albaconazole)、阿巴芬淨(abafungin)、特比萘芬(terbinafine)、萘替芬(naftifine)、布替萘芬(butenafine)、阿尼芬淨(anidulafungin)、卡泊芬淨(caspofungin)、米卡芬淨(micafungin)、蓼二醛(polygodial)、苯甲酸(benzoic acid)、環吡酮(ciclopirox)、托萘酯(tolnaftate)、十一碳烯(undecylenic acid)、氟胞嘧啶或5-氟胞嘧啶、灰黃黴素(griseofulvin)及鹵苯炔醚(haloprogin)。
在某些實施例中，胞內病原體為原蟲，且抗感染劑為原蟲劑。可以用於組合中之例示性抗原蟲劑包括(但不限於)奎寧(quinine)(視情況與克林達黴素(clindamycin)組合)、氯奎(chloroquine)、阿莫地喹(amodiaquine)、青蒿素(artemisinin)及其衍生物(例如蒿甲醚(artemether)、青蒿琥酯(artesunate)、二氫青蒿素(dihydroartemisinin)、蒿乙醚(arteether))、多西環素(doxycycline)、乙胺嘧啶(pyrimethamine)、甲氟喹(mefloquine)、鹵泛曲林(halofantrine)、羥氯奎(hydroxychloroquine)、二氟甲基鳥氨酸(eflornithine)、硝唑尼特(nitazoxanide)、奧硝唑(ornidazole)、巴龍黴素(paromomycin)、噴他脒(pentamidine)、伯胺喹(primaquine)、乙胺嘧啶、氯胍(proguanil)(視情況與阿托喹酮(atovaquone)組合)、磺醯胺(例如磺胺多辛(sulfadoxine)、磺胺甲氧嗒𠯤(sulfamethoxypyridazine))、他非諾喹(tafenoquine)及替硝唑(tinidazole)。在特定實施例中，胞內病原體為瘧原蟲(例如間日瘧原蟲、惡性瘧原蟲、卵形瘧原蟲、三日瘧原蟲)，且抗感染劑為抗瘧疾劑。可以用於組合中之例示性抗瘧疾劑包括(但不限於)奎寧(視情況與克林達黴素組合)、氯奎、阿莫地喹、青蒿素及其衍生物(例如，蒿甲醚、青蒿琥酯、二氫青蒿素、蒿乙醚、多西環素、鹵泛曲林、甲氟喹、伯胺喹、氯胍(視情況與阿托喹酮組合)、磺醯胺(例如磺胺多辛、磺胺甲氧嗒𠯤)、他非諾喹。應理解，許多此等抗瘧疾劑可以組合使用，尤其用於治療嚴重及/或急性感染。
在某些實施例中，胞內病原體為藻類，且抗感染劑為抗藻類試劑。可以用於組合中之例示性抗藻類試劑包括(但不限於)酮康唑、伊曲康唑、氟康唑及伏立康唑。
在某些實施例中，胞內病原體為病毒，且抗感染劑為抗普里昂蛋白劑。可以用於組合中之例示性抗普里昂蛋白劑包括(但不限於)戊聚糖多硫酸酯、奎納克林、硫黃素(thioflavine)、兩性黴素B、四環素、三環抗抑鬱劑(例如地昔帕明(desipramine))及氯化鋰。
可用作治療傳染病之組合療法之一部分的另一類藥劑係免疫療法，例如免疫檢查點抑制劑。例示性免疫檢查點抑制劑包括抑制以下中之一或多者的藥劑：(i)細胞毒性T淋巴球相關抗原4 (CTLA4)；(ii)程式化細胞死亡蛋白1 (PD1)；(iii) PDL1；(iv) LAG3；(v) B7-H3；(vi) B7-H4；及(vii) TIM3。
可以根據特定感染之診斷選擇適當療法。其中個體感染有複數個病原體(例如複數個胞內病原體，例如複數個病毒感染)，用於治療此等感染之兩種或兩種以上適當療法可與本文所描述之聚乙二醇化精胺酸酶組合使用。V. 醫藥組合物及遞送方法
本發明之特徵亦在於含有治療有效量之本文所描述之非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶之醫藥組合物。組合物可以經調配用於多種藥物遞送系統。該組合物中亦可以包括一或多種生理學上可接受之賦形劑或載劑以用於適當調配。適用於本發明中之調配物見於Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Philadelphia, Pa.,第17版, 1985中。藥物遞送方法之簡要綜述參見例如Langer (Science 249:1527-1533, 1990)。非經腸遞送
本發明之靜脈內藥物遞送調配物可含於袋、筆或注射器中。在某些實施例中，袋可連接至包含管及/或針之通道。在某些實施例中，調配物可為凍乾調配物或液體調配物。在某些實施例中，調配物可經冷凍乾燥(凍乾)且含於約12-60個小瓶中。在某些實施例中，調配物可經冷凍乾燥且可在一個小瓶中含有約45 mg冷凍乾燥調配物。在某些實施例中，在一個小瓶中可含有約40 mg至約100 mg冷凍乾燥調配物。在某些實施例中，將來自小瓶(例如12、27或45個小瓶)之冷凍乾燥調配物合併以獲得靜脈內藥物調配物中之治療劑量之聚乙二醇化精胺酸酶。在某些實施例中，調配物可為液體調配物且按約250 mg/小瓶至約1000 mg/小瓶儲存。在某些實施例中，調配物可為液體調配物且按約600 mg/小瓶儲存。在某些實施例中，調配物可為液體調配物且按約250 mg/小瓶儲存。 非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶可以液態水性醫藥調配物形式存在，該調配物包括在形成調配物之緩衝溶液中的治療有效量之非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶。
此等組合物可藉由習知滅菌技術滅菌，或可經無菌過濾。所得水溶液可經包裝以按原樣使用，或經凍乾，凍乾製劑在投與之前與無菌水性載劑組合。製劑之pH通常在3與11之間，更佳在5與9之間或在6與8之間，且最佳在7與8之間，諸如7至7.5。呈固體形式之所得組合物可以多個單次劑量單元包裝，各單元含有固定量之以上提及之一或多種藥劑。呈固體形式之組合物亦可以靈活的數量包裝於容器中。
在某些實施例中，本發明提供儲存期限延長之調配物，其包括本發明之非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶，與甘露醇、單水合檸檬酸、檸檬酸鈉、二水合磷酸二鈉、二水合磷酸二氫鈉、氯化鈉、聚山梨醇酯80、水及氫氧化鈉中之一或多者。
在某些實施例中，製備包括本發明之蛋白質於pH緩衝溶液中之水性調配物。緩衝液可具有範圍為約4至約8，例如約4.5至約6.0或約4.8至約5.5之pH或可具有約5.0至約5.2 之pH。亦希望上述pH值之中間範圍為本發明之一部分。舉例而言，預期包括使用任何上述值之組合作為上限及/或下限之值範圍。將pH控制在此範圍內之緩衝劑之實例包括乙酸鹽(例如乙酸鈉)、丁二酸鹽(諸如丁二酸鈉)、葡糖酸鹽、組胺酸、檸檬酸鹽及其他有機酸緩衝劑。
在某些實施例中，調配物包括含有檸檬酸鹽及磷酸鹽以將pH維持於約4至約8之範圍內的緩衝液系統。在某些實施例中，pH範圍可為約4.5至約6.0，或約pH 4.8至約5.5，或在約5.0至約5.2之pH範圍內。在某些實施例中，該緩衝液系統包括單水合檸檬酸、檸檬酸鈉、二水合磷酸二鈉及/或二水合磷酸二氫鈉。在某些實施例中，該緩衝液系統包括約1.3 mg/mL檸檬酸(例如1.305 mg/mL)、約0.3 mg/mL檸檬酸鈉(例如0.305 mg/mL)、約1.5 mg/mL二水合磷酸二鈉(例如1.53 mg/mL)、約0.9 mg/mL二水合磷酸二氫鈉(例如0.86 mg/mL)及約6.2 mg/mL氯化鈉(例如6.165 mg/mL)。在某些實施例中，緩衝液系統包括約1至約1.5 mg/mL檸檬酸、約0.25至約0.5 mg/mL檸檬酸鈉、約1.25至約1.75 mg/mL二水合磷酸二鈉、約0.7至約1.1 mg/mL二水合磷酸二氫鈉及約6.0至約6.4 mg/mL氯化鈉。在某些實施例中，調配物之pH值係用氫氧化鈉調整。
調配物中亦可包括充當張力劑之多元醇。添加至調配物中之多元醇之量可根據調配物之所需等滲性而改變。在某些實施例中，水性調配物可具有等滲性。多元醇添加量亦可根據多元醇之分子量來改變。舉例而言，相較於雙醣(諸如海藻糖)，可添加較低量之單醣(例如甘露醇)。在某些實施例中，可作為張力劑用於調配物中之多元醇係甘露醇。在某些實施例中，甘露醇濃度可為約5至約20 mg/mL。在某些實施例中，甘露醇濃度可為約7.5至約15 mg/mL。在某些實施例中，甘露醇濃度可為約10至約14 mg/mL。在某些實施例中，甘露醇濃度可為約12 mg/mL。在某些實施例中，調配物中可包括多元醇山梨醇。
亦可將清潔劑或界面活性劑添加至調配物中。例示性清潔劑包括非離子清潔劑，諸如聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20、80等)或泊洛沙姆(poloxamers)(例如泊洛沙姆188)。所添加之清潔劑之量可以使調配物中微粒之形成降至最低及/或減少吸附。在某些實施例中，調配物可包括界面活性劑聚山梨醇酯。在某些實施例中，調配物可含有清潔劑聚山梨醇酯80或Tween80。Tween 80為用於描述聚氧乙烯(20)山梨醇酐單油酸酯(參見Fiedler, Lexikon der Hifsstoffe, Editio Cantor Verlag Aulendorf,第4版, 1996)。在某些實施例中，調配物可含有在約0.1mg/mL與約10mg/mL之間，或在約0.5mg/mL與約5mg/mL之間的聚山梨醇酯80。在某些實施例中，調配物中可添加約0.1%聚山梨醇酯80。
在實施例中，本文所描述之組合物調配為液體調配物。液體調配物可以10 mg/mL濃度存在於USP/Ph EurI型50R小瓶中，該小瓶用橡膠塞封閉且用鋁褶密封蓋密封。該橡膠塞可由符合USP及Ph Eur之彈性體製成。在某些實施例中，液體調配物可用0.9%生理食鹽水溶液稀釋。 在某些實施例中，本文所描述之組合物可製備為10 mg/mL濃度溶液與穩定含量之糖的組合。在某些實施例中，液體調配物可在水性載劑中製備。在某些實施例中，穩定劑可以不超過可能引起靜脈內投藥非所需或不適合之黏度的量添加。在某些實施例中，糖可為雙醣，例如蔗糖。在某些實施例中，液體調配物亦可包括緩衝劑、界面活性劑及防腐劑中之一或多者。
在某些實施例中，液體調配物之pH可藉由添加醫藥學上可接受之酸及/或鹼設定。在某些實施例中，醫藥學上可接受之酸可為鹽酸。在某些實施例中，鹼可為氫氧化鈉。
除聚集之外，脫醯胺係在醱酵、收集/細胞澄清、純化、藥物物質/藥品儲存期間及在樣品分析期間可能產生的肽及蛋白質之常見產物變異體。去醯胺化為蛋白質損失NH3 ，從而形成可以經歷水解之丁二醯亞胺中間物。丁二醯亞胺中間物引起親本肽質量減少17道爾頓(dalton)。後續水解引起質量增加18道爾頓。丁二醯亞胺中間物因在水性條件下不穩定而難以分離。因此，脫醯胺通常可偵測為1道爾頓質量增加。天冬醯胺脫醯胺產生天冬胺酸或異天冬胺酸。影響去醯胺速率之參數包括pH、溫度、溶劑介電常數、離子強度、初始序列、局部多肽構形及三級結構。與肽鏈中之Asn相鄰之胺基酸殘基影響脫醯胺速率。蛋白質序列中在Asn之後的Gly及Ser使得更易於脫醯胺。
在某些實施例中，本發明之組合物可在防止蛋白產物脫胺作用的pH及濕度條件下保存。
本文所描述之組合物可以包括水性載劑。本文中所關注之水性載劑為醫藥學上可接受之(對於投與人類而言安全且無毒)且適用於製備液體調配物。說明性載劑包括無菌注射用水(SWFI)、抑菌注射用水(BWFI)、pH緩衝溶液(例如磷酸鹽緩衝生理食鹽水)、無菌生理食鹽水溶液、林格氏溶液或右旋糖溶液。
防腐劑可視情況添加至本文所描述之調配物中以減少細菌作用。防腐劑之添加可例如促進多次使用(多劑量)調配物之產生。
在特定情況下，諸如當患者在醫院經由靜脈內途徑接受所有藥物時，靜脈內(IV)調配物可為較佳投與途徑。在某些實施例中，液體調配物在投與之前用0.9%氯化鈉溶液稀釋。在某些實施例中，用於注射之經稀釋藥品具有等滲性且適合於藉由靜脈內輸注來投與。
在某些實施例中，鹽或緩衝液組分之添加量可為10 mM-200 mM。鹽及/或緩衝劑係醫藥學上可接受的，且衍生自多種已知酸(無機及有機酸)與「成鹼」金屬或胺。在某些實施例中，緩衝液可為磷酸鹽緩衝液。在某些實施例中，緩衝液可為甘胺酸鹽、碳酸鹽、檸檬酸鹽緩衝液，在此情況下，鈉、鉀或銨離子可以充當相對離子。
在某些實施例中，凍乾藥品可由水性載劑構成。本文所關注之水性載劑係醫藥學上可接受(例如對於投與人類而言為安全且無毒的)且可用於製備液體調配物之水性載劑。說明性載劑包括無菌注射用水(SWFI)、抑菌注射用水(BWFI)、pH緩衝溶液(例如磷酸鹽緩衝生理食鹽水)、無菌生理食鹽水溶液、林格氏溶液或右旋糖溶液。
本發明之精胺酸酶(例如非聚乙二醇化或聚乙二醇化精胺酸酶)可以存在於包括精胺酸酶及凍乾保護劑之凍乾調配物中。凍乾保護劑可為糖，例如雙醣。在某些實施例中，凍乾保護劑可為蔗糖或麥芽糖。凍乾調配物亦可包括緩衝劑、界面活性劑、增積劑及/或防腐劑中之一或多者。可用於穩定凍乾藥品之蔗糖或麥芽糖之量可為至少1:2重量比之蛋白質比蔗糖或麥芽糖。在某些實施例中，非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶與蔗糖或麥芽糖之重量比可為1:2至1:5。
在某些實施例中，調配物在凍乾之前的pH可藉由添加醫藥學上可接受之酸及/或鹼來設定。在某些實施例中，醫藥學上可接受之酸可為鹽酸。在某些實施例中，醫藥學上可接受之鹼可為氫氧化鈉。在凍乾之前，含有本發明之蛋白質之溶液的pH可在6至8之間調整。在某些實施例中，凍乾藥品之pH範圍可為7至8。
在某些實施例中，可添加「增積劑」。「增積劑」為使凍乾混合物之質量增加且促成凍乾塊之物理結構(例如有助於產生維持開放式孔隙結構之基本上均一之凍乾塊)的化合物。說明性增積劑包括甘露醇、甘胺酸、聚乙二醇及山梨醇。本發明之凍乾調配物可含有此類增積劑。
在某些實施例中，本文所描述之凍乾藥品用無菌注射用水、USP(SWFI)或0.9%氯化鈉注射液USP復原。在復原期間，將凍乾粉末溶解成溶液。 在某些實施例中，本文所描述之凍乾組合物構成約4.5 mL注射用水且用0.9%生理食鹽水溶液(氯化鈉溶液)稀釋。
在一些實施例中，本發明之非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶係局部投與且可調配成多種可局部投與之組合物，諸如溶液、懸浮液、洗劑、凝膠、糊劑、藥用棒、香膏、乳膏及軟膏。此類醫藥組合物可以含有增溶劑、穩定劑、張力增強劑、緩衝液及防腐劑。
在一些實施例中，如本文所揭示之精胺酸酶(例如，非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶)之遞送係經由吸入途徑。吸入可經由口腔及/或鼻腔介導。在一些實施例中，吸入藉助於噴霧器或吸入器(例如定量吸入器或乾粉吸入器)。在某些實施例中，遞送係經由吸入液體霧狀物。在某些實施例中，遞送係經由吸入固體。在一些實施例中，固體係奈米級的且與奈米粒子、奈米金剛石或奈米碳組合調配，或包裝在脂質體或基於脂質體之包裝中。腸內投與
在一些實施例中，本文涵蓋適用於經口遞送所揭示之精胺酸酶(例如，非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶)之組合物，例如包括腸溶衣(例如，耐胃包衣)之錠劑，以使得組合物可將精胺酸酶遞送至(例如)患者之胃腸道。
舉例而言，提供包含包括所揭示之精胺酸酶(例如，非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶)及醫藥學上可接受之賦形劑之顆粒劑(例如，至少部分由顆粒形成)的用於經口投與之錠劑。此類錠劑可包覆有腸溶衣。預期錠劑可包括醫藥學上可接受之賦形劑，諸如填充劑、黏合劑、崩解劑及/或潤滑劑，以及著色劑、脫模劑、包衣劑、甜味劑、調味劑(諸如冬青、橙子、木糖醇、山梨醇、果糖及麥芽糊精)及芳香劑、防腐劑及/或抗氧化劑。
在一些實施例中，所涵蓋之醫藥調配物包括包括所揭示之精胺酸酶(例如，非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶)及醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之填充劑的顆粒內相。舉例而言，所揭示之非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶及填充劑可視情況與其他賦形劑摻合在一起且形成為顆粒劑。在一些實施例中，顆粒內相可使用濕式造粒形成，例如將液體(例如水)添加至摻合的非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶及填充劑，且隨後組合經乾燥、研磨及/或篩分以產生顆粒。熟習此項技術者應瞭解，其他方法可用於實現顆粒內相。
在一些實施例中，所涵蓋之調配物包括顆粒外相，其可包括一或多種醫藥學上可接受之賦形劑，且其可與顆粒內相摻合以形成所揭示之調配物。
所揭示之調配物可包括包括填充劑之顆粒內相。例示性填充劑包括(但不限於)纖維素、明膠、磷酸鈣、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇、山梨醇、微晶纖維素、果膠、聚丙烯酸酯、右旋糖、乙酸纖維素、羥丙基甲基纖維素、部分預膠凝化澱粉、碳酸鈣及其他包括其組合之填充劑。
在一些實施例中，所揭示之調配物可包括顆粒內相及/或顆粒外相，其包括黏合劑，其可通常用於將醫藥調配物之成分保持在一起。本發明之例示性黏合劑可包括(但不限於)以下：澱粉、糖、纖維素或經改質纖維素，諸如羥丙基纖維素、乳糖、預膠凝化玉米澱粉、聚乙烯吡咯啶酮、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、低取代羥丙基纖維素、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、乙基纖維素、糖醇及其他包括其組合之黏合劑。
例如包括顆粒內相及/或顆粒外相之預期調配物可包括崩解劑，諸如(但不限於)澱粉、纖維素、交聯聚乙烯吡咯啶酮、羥基乙酸澱粉鈉、羧甲基纖維素鈉、海藻酸鹽、玉米澱粉、交聯羧甲基纖維素鈉、交聯羧甲基纖維素、低取代羥丙基纖維素、阿拉伯膠及其他包括其組合之調配物。舉例而言，顆粒內相及/或顆粒外相可包括崩解劑。
在一些實施例中，所涵蓋之調配物包括包含所揭示之非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶及選自以下之賦形劑的顆粒內相：甘露醇、微晶纖維素、羥丙基甲基纖維素及羥基乙酸澱粉鈉或其組合，及包含以下中之一或多者的顆粒外相：微晶纖維素、羥基乙酸澱粉鈉及硬脂酸鎂或其混合物。
在一些實施例中，預期調配物可包括潤滑劑，例如顆粒外相可含有潤滑劑。潤滑劑包括(但不限於)滑石、二氧化矽、脂肪、硬脂酸甘油酯、硬脂酸鎂、磷酸鈣、二氧化矽、矽酸鈣、磷酸鈣、膠態二氧化矽、金屬硬脂酸鹽、氫化植物油、玉米澱粉、苯甲酸鈉、聚乙二醇、乙酸鈉、硬脂酸鈣、月桂基硫酸鈉、氯化鈉、月桂基硫酸鎂、滑石及硬脂酸。
在一些實施例中，本文所描述之組合物包含腸溶衣。一般而言，腸溶衣產生用於控制藥物沿消化道吸收之位置的口服藥物之障壁。腸溶衣可包括根據pH以不同速率分解之聚合物。腸溶衣可包括例如鄰苯二甲酸乙酸纖維素、丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸共聚物、乙酸丁二酸纖維素、鄰苯二甲酸羥丙基甲基纖維素、甲基丙烯酸甲酯-甲基丙烯酸共聚物、丙烯酸乙酯-甲基丙烯酸共聚物、C型甲基丙烯酸共聚物、聚乙酸乙烯酯-鄰苯二甲酸酯及鄰苯二甲酸乙酸纖維素。
例示性腸溶衣包括Opadry® AMB、Acryl-EZE®、Eudragit®等級。在一些實施例中，腸溶衣可包含約5重量%至約10重量%、約5重量%至約20重量%、約8重量%至約15重量%、約8重量%至約20重量%、約10重量%至約20重量%、或約12重量%至約20重量%或約18重量%之預期錠劑。舉例而言，腸溶衣可包括丙烯酸乙酯-甲基丙烯酸共聚物。劑量
本文中所描述之醫藥組合物中之活性成分之實際劑量位準可變化，以便獲得可有效達成特定患者、組合物及投與模式之所需治療反應且對患者無毒性的活性成分之量。
特定劑量可以為各患者之均一劑量，例如每日1 ng/kg至1 mg/kg蛋白質。或者，可以根據患者之大致體重或表面積定製患者之劑量。確定適當劑量之其他因素可以包括待治療或預防之疾病或病況、疾病之嚴重程度、投與途徑以及患者之年齡、性別及醫學病況。熟習此項技術者依常規方式，尤其根據劑量資訊及本文所揭示之分析，進一步改進為確定適當治療劑量所必需的計算。亦可以經由使用用於確定劑量之已知分析，結合使用適當的劑量反應資料來確定劑量。可以在監測疾病進展時調整個別患者之劑量。可以量測患者中之精胺酸酶之血液含量以瞭解是否需要調整劑量以達到或維持有效濃度。藥物基因體學可用於確定哪些精胺酸酶及其劑量最可能對既定個體有效(Schmitz等人,Clinica Chimica Acta 308: 43-53, 2001; Steimer等人,Clinica Chimica Acta 308: 33-41, 2001)。
本文所描述之醫藥組合物可以呈適合於單次投與精確劑量之單位劑型。在單位劑型中，將調配物分成含有適量一或多種化合物之單位劑量。單位劑量可以呈含有離散量調配物之包裝形式。非限制性實例為包裝錠劑或膠囊及小瓶或安瓿中之粉劑。水性懸浮液組合物可以包裝於不可再封閉之單劑量容器中。可以使用多劑量可再封閉容器，例如與防腐劑組合或不與防腐劑組合。在一些實施例中，醫藥組合物不包含防腐劑。用於非經腸注射之調配物可以以單位劑型存在，例如在安瓿中，或在含防腐劑的多劑量容器中。
本文所描述之精胺酸酶(例如，非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶)可以以約1 mg至約2000 mg的範圍存在於組合物中；約5 mg至約1000 mg、約10 mg至約500 mg、約50 mg至約250 mg、約100 mg至約200 mg、約1 mg至約50 mg、約50 mg至約100 mg、約100 mg至約150 mg、約150 mg至約200 mg、約200 mg至約250 mg、約250 mg至約300 mg、約300 mg至約350 mg、約350 mg至約400 mg、約400 mg至約450 mg、約450 mg至約500 mg、約500 mg至約550 mg、約550 mg至約600 mg、約600 mg至約650 mg、約650 mg至約700 mg、約700 mg至約750 mg、約750 mg至約800 mg、約800 mg至約850 mg、約850 mg至約900 mg、約900 mg至約950 mg、或約950 mg至約1000 mg。
本文所描述之精胺酸酶(例如，非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶)可以以約1 mg、約2 mg、約3 mg、約4 mg、約5 mg、約10 mg、約15 mg、約20 mg、約25 mg、約30 mg、約35 mg、約40 mg、約45 mg、約50 mg、約55 mg、約60 mg、約65 mg、約70 mg、約75 mg、約80 mg、約85 mg、約90 mg、約95 mg、約100 mg、約125 mg、約150 mg、約175 mg、約200 mg、約250 mg、約300 mg、約350 mg、約400 mg、約450 mg、約500 mg、約550 mg、約600 mg、約650 mg、約700 mg、約750 mg、約800 mg、約850 mg、約900 mg、約950 mg、約1000 mg、約1050 mg、約1100 mg、約1150 mg、約1200 mg、約1250 mg、約1300 mg、約1350 mg、約1400 mg、約1450 mg、約1500 mg、約1550 mg、約1600 mg、約1650 mg、約1700 mg、約1750 mg、約1800 mg、約1850 mg、約1900 mg、約1950 mg或約2000 mg的量存在於組合物中。
本文所描述之精胺酸酶(例如，非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶)之治療有效劑量可以為約1 ng/kg至約10 ng/kg、約1 ng/kg至約100 ng/kg、約1 ng/kg至約1 mg/kg、約1 ng/kg至約10 mg/kg、約1 ng/kg至約100 mg/kg、約1 ng/kg至約250 mg/kg、約1 ng/kg至約500 mg/kg、約1 ng/kg至約750 mg/kg、約1 ng/kg至約1,000 mg/kg、約1 ng/kg至約1,250 mg/kg、約1 ng/kg至約1,500 mg/kg、約1 ng/kg至約1,750 mg/kg、約1 ng/kg至約2,000 mg/kg、約10 ng/kg至約100 ng/kg、約10 ng/kg至約1 mg/kg、約10 ng/kg至約10 mg/kg、約10 ng/kg至約100 mg/kg、約10 ng/kg至約500 mg/kg、約10 ng/kg至約750 mg/kg、約10 ng/kg至約1,000 mg/kg、約10 ng/kg至約1,250 mg/kg、約10 ng/kg至約1,500 mg/kg、約10 ng/kg至約2,000 mg/kg、約100 ng/kg至約1 mg/kg、約100 ng/kg至約10 mg/kg、約100 ng/kg至約1 mg/kg100 mg/kg、約100 ng/kg至約250 mg/kg、約100 ng/kg至約500 mg/kg、約100 ng/kg至約750 mg/kg、約100 ng/kg至約1,000 mg/kg、約100 ng/kg至約1,250 mg/kg、約100 ng/kg至約1,500 mg/kg、約100 ng/kg至約1,750 mg/kg、約100 ng/kg至約2,000 mg/kg、約1 mg/kg至約10 mg/kg、約1 mg/kg至約100 mg/kg、約1 mg/kg至約500 mg/kg、約1 mg/kg至約750 mg/kg、約1 mg/kg至約1,000 mg/kg、約1 mg/kg至約1,250 mg/kg、約1 mg/kg至約1,500 mg/kg、約1 mg/kg至約1,750 mg/kg，約1 mg/kg至約2,000 mg/kg、約10 mg/kg至約100 mg/kg、約10 mg/kg至約500 mg/kg、約10 mg/kg至約750 mg/kg、約10 mg/kg至約1,000 mg/kg，約10 mg/kg至約1,250 mg/kg、約10 mg/kg至約1,500 mg/kg、約10 mg/kg至約1,750 mg/kg、約10 mg/kg至約2,000 mg/kg、約100 mg/kg至約500 mg/kg、約100 mg/kg至約750 mg/kg、約100 mg/kg至約1,000 mg/kg、約100 mg/kg至約1,250 mg/kg、約100 mg/kg至約1,500 mg/kg、約100 mg/kg至約1,750 mg/kg、約100 mg/kg至約2,000 mg/kg、約500 mg/kg至約750 mg/kg、約500 mg/kg至約1,000 mg/kg、約500 mg/kg至約1,250 mg/kg、約500 mg/kg至約1,500 mg/kg、約500 mg/kg至約1,750 mg/kg、約500 mg/kg至約2,000 mg/kg、約750 mg/kg至約1,000 mg/kg、約750 mg/kg至約1,250 mg/kg、約750 mg/kg至約1,500 mg/kg、約750 mg/kg至約1,750 mg/kg、約750 mg/kg至約2,000 mg/kg、約1,000 mg/kg至約1,250 mg/kg、約1,000 mg/kg至約1,500 mg/kg、約1,000 mg/kg至約1,750 mg/kg，或約1,000 mg/kg至約2,000 mg/kg。
在一些實施例中，本文所描述之精胺酸酶(例如，非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶)組合物之治療有效劑量可以包括約1 ng、約10 ng，約50 ng、約100 ng、約200 ng、約250 ng、約300 ng、約400 ng、約500 ng、約600 ng、約700 ng、約750 ng、約800 ng、約900 ng、約1000 ng、約10 µg、約50 µg、約100 µg、約200 µg、約250 µg、約300 µg、約400 µg、約500 µg、約600 µg，約700 µg、約750 µg、約800 µg、約900 µg、約1000 µg、約5 mg、約10 mg、約100 mg、約200 mg、約250 mg、約300 mg、約400 mg、約500 mg、約600 mg、約700 mg、約750 mg、約800 mg、約900 mg、約1000 mg、約1500 mg、約2000 mg、約3000 mg、約4000 mg、約5000 mg、約6000 mg、約7000 mg、約8000 mg、約9000 mg或約10 g的非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶。
在一些實施例中，精胺酸酶之治療有效量(例如，非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶)為約1 mg/kg至約10 mg/kg。在一些實施例中，精胺酸酶之治療有效量為約10 mg/kg至約100 mg/kg。在一些實施例中，精胺酸酶之治療有效量大於100 mg/kg。
如本文所描述之精胺酸酶(例如，非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶) (包含例如精胺酸酶蛋白質序列或其功能片段，例如精胺酸酶序列之催化域)可以在例如傳染性疾病或病況之疾病或病況出現之前、期間或之後投與。在一些實施例中，精胺酸酶可以用作預防劑且可以連續向具有病況或疾病傾向之個體投與以便減少疾病或病況出現之可能性。精胺酸酶可以在症狀發作期間或症狀發作後儘快地投與個體。投與精胺酸酶可以緊接著在症狀發作內開始，在症狀發作之最初3小時內、在症狀發作之最初6小時內、在症狀發作之最初24小時內、在症狀發作之48小時內或在自症狀發作之任何時段內開始。本發明之精胺酸酶之投與可以持續治療疾病或病症所需之時間長度，諸如約24小時至約48小時、約48小時至約1週、約1週至約2週、約2週至約1個月、約1個月至約3個月。在一些實施例中，可以投與精胺酸酶持續至少24小時、至少48小時、至少72小時、至少96小時、至少1週、至少2週、至少3週、至少4週、至少1個月、至少2個月、至少3個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少7個月、至少8個月、至少9個月、至少10個月、至少11個月、至少12個月、至少1年、至少2年、至少3年、至少4年或至少5年，或一生。各個體之治療時長可以不同。
在某些實施例中，當個體無症狀時，治療開始。在一些實施例中，在個體展示症狀時開始治療。傳染性疾病或病症之症狀包括(但不限於)發熱、發冷、充血、疲乏、肌肉疼痛、頭痛、喉嚨痛、耳痛、腹瀉、嘔吐、脫水、休克、咳嗽、乾咳嗽、打噴嚏、皮疹、呼吸短促、肺炎、心率升高、低血壓、癲癇、意識模糊、譫妄、幻覺、震顫、協調受損、結膜炎、細胞介素風暴、器官衰竭及死亡。
如本文所使用，「細胞介素風暴」係指在此項技術中亦已知作為細胞介素釋放症候群或細胞介素風暴症候群之免疫系統的急性過度反應；此類免疫反應為可以由傳染性疾病或病症引起之全身性發炎反應症候群。細胞介素風暴病理學與在局部部位處開始且例如經由全身性循環擴散在全身之炎症相關。由病毒感染引起之細胞介素風暴與急性肺損傷及急性呼吸道窘迫症候群相關。細胞介素風暴病理學描述於例如Tisonick等人, (2012)「Into the Eye of the Cytokine Storm」, Microbiol. Mol. Biol. Rev., 76(1):16-32。在某些實施例中，傳染性疾病或病症為COVID-19且症狀為細胞介素風暴。在某些實施例中，傳染性疾病或病症為COVID-19且症狀為肺炎。
在一些實施例中，本文所描述之方法(例如，包括投與精胺酸酶(例如，非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶)、其醫藥學上可接受之鹽或其組合物之方法)有效調節細胞介素釋放。在一些實施例中，本文所描述之方法(例如包括投與精胺酸酶、其醫藥學上可接受之鹽或其組合物之方法)有效調節介白素6 (IL-6)或介白素γ (IFNγ)之表現。在一些實施例中，本文所描述之方法(例如包括投與精胺酸酶、其醫藥學上可接受之鹽或其組合物之方法)有效調節腫瘤壞死因子(TNF)、IL-1β、MCP-1、IL-6、IFNγ、IL-10之表現或分泌。
所投與之量將視以下變數而定：諸如待治療之疾病或感染之類型及程度、患者之總體健康及大小、精胺酸酶(例如，非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶)之活體內效能、醫藥調配物及投與途徑。初始劑量可以增加以快速達成所需血液含量或組織含量。或者，初始劑量可以小於最佳劑量且劑量可在治療過程中逐漸增加。人類劑量可以例如在習知I期劑量遞增研究中最佳化。給藥頻率可以視諸如投與途徑、給藥量及所治療之疾病之因素而變化。例示性給藥頻率為每天三次、每天兩次、每天一次、每兩天一次、每三天一次、每四天一次、每五天一次、每六天一次、每週一次及每兩週一次。
本文所描述之精胺酸酶(例如，非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶)之投與可以為(但不限於)靜脈內、動脈內、腹膜內、肌內、皮下、胸膜內、鞘內、腔內、藉由吸入、經由導管灌注或藉由直接病灶內注射。
以上說明描述本文所描述之方法、組合物及套組之多個態樣及實施例。本專利申請案特別涵蓋態樣及實施例之所有組合及排列。 實例
現已大體描述本發明，將參考以下實例更容易地理解本發明，該等實例僅出於說明本發明之某些態樣及實施例之目的包括在內，且不意欲限制本發明。實例 1 ： 聚乙二醇化精胺酸酶抑制嚴重急性呼吸道症候群相關之冠狀病毒 ( SARSr - CoV ) 之複製
在此實例中，測定聚乙二醇化精胺酸酶對SARSr-CoV菌株複製之作用。經檢測之SARSr-CoV菌株包括分別引起2002-2004 SARS爆發及COVID-19之SARS-CoV及SARS-CoV-2。
此實例中所使用之聚乙二醇化精胺酸酶為BCT-100，其具有SEQ ID NO: 56之序列且如美國專利第9,109,218號中所描述製備，除了在此實例中使用具有N末端6xHis標籤之野生型人類精胺酸酶1(亦即SEQ ID NO: 56)。
在37℃及5% CO2 下，將Vero E6細胞以單層形式維持在補充有10%胎牛血清(美國賽默飛世爾科技(Thermo Fisher Scientific, USA))之伊格爾(Eagle's)最小必需培養基(Minimum Essential Medium, MEM)中。細胞以2×105 個細胞/mL之密度再懸浮於新鮮完全生長培養基中且接種於24孔培養盤中。細胞用不同劑量之聚乙二醇化精胺酸酶處理且以0.01之感染倍率(MOI)感染SARS-CoV或SARS-CoV-2。在感染後48小時收集培養物上清液。所收集之上清液中SARS-CoV及SARS-CoV-2之病毒負荷係使用中值組織培養物感染劑量(TCID50 )分析定量。
觀測聚乙二醇化精胺酸酶對SAR-CoV及SARS-CoV-2複製之劑量依賴性抑制作用(單因素方差分析測試(one-way ANOVA tests),p ＜0.01)。SARS-CoV及SARS-CoV-2複製之統計學顯著抑制分別用≥1 µg/mL之聚乙二醇化精胺酸酶(圖 1 )及≥6.8 µg/mL之聚乙二醇化精胺酸酶(圖 2 )的治療來觀測(鄧尼特測試(Dunnett's tests),p ＜0.05)。實例 2 ：精胺酸酶抑制中東呼吸道症候群相關之冠狀病毒 ( MERS - CoV ) 之複製
在此實例中，測定重組精胺酸酶對MERS-CoV複製之作用。
此實例中所使用之非聚乙二醇化精胺酸為使用具有N末端6xHis標籤之野生型人類精胺酸酶1(亦即SEQ ID NO: 56)。此實例中所使用之聚乙二醇化精胺酸酶為BCT-100，其具有SEQ ID NO: 56之序列且如美國專利第9,109,218號中所描述製備，除了在此實例中使用具有N末端6xHis標籤之野生型人類精胺酸酶1(亦即SEQ ID NO: 56)。
在37℃及5% CO2 下，將Huh-7細胞以單層形式維持在補充有10%胎牛血清之杜爾貝科氏改質之伊格爾培養基(Dulbecco's Modified Eagle Medium, DMEM)中。細胞以2×105 個細胞/mL之密度再懸浮於新鮮完全生長培養基中且接種於24孔培養盤中。用1250、2500、5000或10000 ng/mL非聚乙二醇化或聚乙二醇化精胺酸酶處理所接種之細胞，且以0.001之MOI感染MERS-CoV。在感染後24小時收集培養物上清液。使用定量反轉錄PCR (RT-qPCR)根據病毒基因體之拷貝數定量所收集上清液中之病毒力價。
在精胺酸酶之所有測試濃度下觀測到MERS-CoV複製之抑制，與聚乙二醇化無關(圖 3 )。半最大抑制濃度(IC50 )分別經由雙重參數邏輯模型估計為≤1325 ng/mL及≤331 ng/mL (95%置信上限)非聚乙二醇化精胺酸酶及聚乙二醇化精胺酸酶。實例 3 ：精胺酸酶抑制流感病毒之複製
在此實例中，測定重組精胺酸酶對流感病毒病毒株(包括豬流感病毒(H1N1)及禽流感病毒(H5N1))複製之作用。
此實例中所使用之非聚乙二醇化精胺酸為使用具有N末端6xHis標籤之野生型人類精胺酸酶1(亦即SEQ ID NO: 56)。此實例中所使用之聚乙二醇化精胺酸酶為BCT-100，其具有SEQ ID NO: 56之序列且如美國專利第9,109,218號中所描述製備，除了在此實例中使用具有N末端6xHis標籤之野生型人類精胺酸酶1(亦即SEQ ID NO: 56)。
在37℃，5% CO2 下，將MDCK細胞(ATCC)以單層形式培養於補充有10%胎牛血清之MEM中。細胞以1×105 個細胞/mL之密度再懸浮於新鮮培養基中且接種於24孔培養盤中。將所接種之細胞以0.01之MOI感染流感病毒A H1N1 (大流行性H1N1/09)或H5N1 (A/越南/1203/2004)，且用不同劑量之非聚乙二醇化(針對H1N1)或聚乙二醇化(針對H1N1及H5N1)精胺酸酶處理。感染後24小時收集培養物上清液。所收集之上清液中H1N1及H5N1之力價分別使用RT-qPCR及TCID50 分析來定量。
H1N1之複製在≥156 ng/mL非聚乙二醇化或≥625 ng/mL聚乙二醇化精胺酸酶存在下幾乎完全消除(圖 4 )。非聚乙二醇化或聚乙二醇化精胺酸酶對H1N1複製之IC50 分別經由雙重參數邏輯模型估計為11 ng/mL (96%信賴區間：11-12 ng/mL)及44 ng/mL(95%信賴區間：11-181 ng/mL)。
亦觀測到聚乙二醇化精胺酸酶對H5N1複製之類似劑量依賴性抑制作用(單因素方差分析,F 3 , 4 =91.24,p ＜0.001；圖 5 )。當分別用1 µg/mL或2 µg/mL聚乙二醇化精胺酸酶處理時，觀測到42倍(亦即1.63-log10 )或86倍(亦即1.94-log10 )傳染性力價降低(鄧奈特測試,p ＜0.001)。實例 4 ：精胺酸酶抑制人類腺病毒複製
在此實例中，測定精胺酸酶對腺病毒病毒株(包括人類腺病毒血清型5 (HAdV-5))複製之作用。
此實例中所使用之非聚乙二醇化精胺酸為使用具有N末端6xHis標籤之野生型人類精胺酸酶1(亦即SEQ ID NO: 56)。此實例中所使用之聚乙二醇化精胺酸酶為BCT-100，其具有SEQ ID NO: 56之序列且如美國專利第9,109,218號中所描述製備，除了在此實例中使用具有N末端6xHis標籤之野生型人類精胺酸酶1(亦即SEQ ID NO: 56)。
在37℃，5% CO2 下，將HEp-2細胞(ATCC)以單層形式培養於補充有10%胎牛血清之MEM中。細胞以1×105 個細胞/mL之密度再懸浮於新鮮培養基中且接種於24孔培養盤中。用10、625、1250、2500、5000或10000 ng/mL非聚乙二醇化或聚乙二醇化精胺酸酶處理所接種之細胞且以0.5之MOI感染HAdV-5。感染後24小時收集培養物上清液。使用RT-qPCR根據病毒基因體之拷貝數定量所收集上清液中之病毒負荷。
在≥625 ng/mL非聚乙二醇化或1250 ng/mL聚乙二醇化精胺酸酶存在下消除HAdV-5之複製(圖 6 )。聚乙二醇化精胺酸酶對HAdV-5複製之IC50 經由雙重參數邏輯模型估計為139 ng/mL (95%信賴區間=40-477 ng/mL)。 通過引用合併
除非相反陳述，否則本文所提及之專利文獻及科學文章中之每一者的全部揭示內容出於所有目的以引用的方式併入本文中。 等效物
本發明可在不脫離其精神或基本特徵之情況下以其他特定形式來實施。因此，前述實施例應在所有方面中視為說明性的而非限制本文中所描述之本發明。因此，本發明之範疇由隨附申請專利範圍而非前述描述指示，且本文意欲涵蓋申請專利範圍等效物之意義及範圍內出現之所有變化。
圖 1 描繪展示聚乙二醇化精胺酸酶對SARS-CoV之複製的劑量依賴性抑制作用之圖。在鄧尼特(Dunnett's)測試中，「*」及「**」分別表示p ＜0.05及0.01。
圖 2 描繪展示聚乙二醇化精胺酸酶對SARS-CoV-2之複製的劑量依賴性抑制作用之圖。在鄧尼特測試中，「*」表示p ＜0.05。
圖 3 描繪展示非聚乙二醇化精胺酸酶及聚乙二醇化精胺酸酶對MERS-CoV之複製的抑制作用之圖。在分別用特定濃度之非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶處理且無精胺酸酶之後，以(1-C 「精胺酸酶」 /C 0 )×100%計算出「%抑制)，其中C [ 精胺酸酶 ] 及C 0 為培養物上清液中之病毒基因體複本數。各點表示一個獨立量測。灰色曲線表示最佳擬合之雙參數邏輯模型。
圖 4 描繪展示非聚乙二醇化精胺酸酶及聚乙二醇化精胺酸酶對H1N1 流感病毒A (大流行性H1N1/09)之複製的抑制作用之圖。在分別用特定濃度之非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶處理且無精胺酸酶之後，以(1-C 「精胺酸酶」 /C 0 )×100%計算出「%抑制)，其中C [ 精胺酸酶 ] 及C 0 為培養物上清液中之病毒基因體複本數。各點表示一個獨立量測。灰色曲線表示最佳擬合之雙參數邏輯模型。
圖 5 描繪展示聚乙二醇化精胺酸酶對H5N1 流感病毒A (A/越南(Vietnam)/2013/04)之複製的劑量依賴性抑制作用之圖。在鄧尼特測試中，「***」表示p ＜0.001。
圖 6 描繪展示非聚乙二醇化精胺酸酶及聚乙二醇化精胺酸酶對人類腺病毒血清型5之複製的抑制作用之圖。在分別用特定濃度之非聚乙二醇化精胺酸酶或聚乙二醇化精胺酸酶處理且無精胺酸酶之後，以(1-C 「精胺酸酶」 /C 0 )×100%計算出「%抑制)，其中C [ 精胺酸酶 ] 及C 0 為培養物上清液中之病毒基因體複本數。各點表示一個獨立量測。灰色曲線表示最佳擬合之雙參數邏輯模型。
下文進一步詳細描述本發明之各個態樣及實施例。
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Claims (91)

  1. 一種包含精胺酸酶或其醫藥學上可接受之鹽之組合物的用途，其係用於製造用以治療病毒相關疾病或病症之藥物， 其中該精胺酸酶與SEQ ID NO:1或2或其片段具有至少約90%序列一致性，及 其中該病毒相關疾病或病症與選自由以下組成之群之病毒相關：冠狀病毒、乳頭瘤病毒、肺病毒、小核糖核酸病毒、黃病毒、α病毒、伊波拉病毒(ebolavirus)、麻疹病毒、腸病毒、正肺病毒、慢病毒及肝病毒。
  2. 如請求項1之用途，其中該精胺酸酶為聚乙二醇化精胺酸酶，其包含至少一個與該精胺酸酶接合之聚乙二醇分子。
  3. 如請求項1或請求項2之用途，其中該病毒相關疾病或病症為選自由以下組成之群的病毒感染：冠狀病毒感染、乳頭瘤病毒感染、肺病毒感染、小核糖核酸病毒感染、黃病毒感染、α病毒感染、伊波拉病毒感染、麻疹病毒感染、腸病毒感染、正肺病毒感染、慢病毒感染及肝病毒感染。
  4. 一種包含精胺酸酶或其醫藥學上可接受之鹽之組合物的用途，其係用於製造用以治療病毒相關疾病或病症之藥物， 其中該精胺酸酶與選自由SEQ ID NO:3-50及56組成之群的蛋白質序列或其片段具有至少約90%序列一致性。
  5. 如請求項4之用途，其中該精胺酸酶為聚乙二醇化精胺酸酶，其包含至少一個與該精胺酸酶接合之聚乙二醇分子。
  6. 如請求項4或請求項5之用途，其中該病毒相關疾病或病症與選自由以下組成之群的病毒相關：RNA病毒、DNA病毒、冠狀病毒、乳頭瘤病毒、肺病毒、小核糖核酸病毒、流感病毒、腺病毒、巨細胞病毒、多瘤病毒、痘病毒、黃病毒、α病毒、伊波拉病毒、麻疹病毒、腸病毒、正肺病毒、慢病毒及肝病毒。
  7. 如請求項4或5之用途，其中該病毒相關疾病或病症為選自由以下組成之群的病毒感染：RNA病毒感染、DNA病毒感染、冠狀病毒感染、乳頭瘤病毒感染、肺病毒感染、小核糖核酸病毒感染、流感病毒感染、腺病毒感染、巨細胞病毒感染、多瘤病毒感染、痘病毒感染、黃病毒感染、α病毒感染、伊波拉病毒感染、麻疹病毒感染、腸病毒感染、正肺病毒感染、慢病毒感染及肝病毒感染。
  8. 2、4及5中任一項之用途，其中該病毒相關疾病或病症包含該患者之器官或組織之病毒感染。
  9. 如請求項8之用途，其中該器官或該組織係選自由以下組成之群：眼、耳、內耳、肺、氣管、支氣管、細支氣管、肝臟、膽囊、膽管、腎臟、膀胱、睾丸、子宮頸、卵巢、子宮、皮膚及腦。
  10. 2、4及5中任一項之用途，其中該病毒相關疾病或病症係選自由以下組成之群：急性呼吸道窘迫症候群；慢性阻塞性肺病(COPD)；肺炎；抗藥性肺炎；手、足及口病；異位性哮喘；及非異位性哮喘。
  11. 一種包含精胺酸酶或其醫藥學上可接受之鹽之組合物的用途，其係用於製造用以抑制病毒之基因體複製之藥物， 其中該精胺酸酶與SEQ ID NO:1或2或其片段具有至少約90%序列一致性，及 其中該病毒係選自由以下組成之群：冠狀病毒、乳頭瘤病毒、肺病毒、小核糖核酸病毒、黃病毒、α病毒、伊波拉病毒、麻疹病毒、腸病毒、正肺病毒、慢病毒及肝病毒。
  12. 如請求項11之用途，其中該精胺酸酶為聚乙二醇化精胺酸酶，其包含至少一個與該精胺酸酶接合之聚乙二醇分子。
  13. 一種包含精胺酸酶或其醫藥學上可接受之鹽之組合物的用途，其係用於製造用以抑制病毒之基因體複製之藥物， 其中該精胺酸酶與選自由SEQ ID NO:3-50及56組成之群的蛋白質序列或其片段具有至少約90%序列一致性。
  14. 如請求項13之用途，其中該精胺酸酶為聚乙二醇化精胺酸酶，其包含至少一個與該精胺酸酶接合之聚乙二醇分子。
  15. 如請求項13或14之用途，其中該病毒係選自由以下組成之群：RNA病毒、DNA病毒、冠狀病毒、乳頭瘤病毒、肺病毒、小核糖核酸病毒、流感病毒、腺病毒、巨細胞病毒、多瘤病毒、痘病毒、黃病毒、α病毒、伊波拉病毒、麻疹病毒、腸病毒、正肺病毒、慢病毒及肝病毒。
  16. 一種包含精胺酸酶或其醫藥學上可接受之鹽之組合物的用途，其係用於製造用以抑制病毒傳播之藥物， 其中該精胺酸酶與選自由SEQ ID NO:1或2組成之群的蛋白質序列具有至少約90%序列一致性，其中該病毒係選自由以下組成之群：冠狀病毒、乳頭瘤病毒、肺病毒、小核糖核酸病毒、黃病毒、α病毒、伊波拉病毒、麻疹病毒、腸病毒、正肺病毒、慢病毒及肝病毒。
  17. 如請求項16之用途，其中該精胺酸酶為聚乙二醇化精胺酸酶，其包含至少一個與該精胺酸酶接合之聚乙二醇分子。
  18. 一種包含精胺酸酶或其醫藥學上可接受之鹽之組合物的用途，其係用於製造用以抑制病毒傳播之藥物， 其中該精胺酸酶與選自由SEQ ID NO:3-50及56組成之群的蛋白質序列或其片段具有至少約90%序列一致性。
  19. 如請求項18之用途，其中該精胺酸酶為聚乙二醇化精胺酸酶，其包含至少一個與該精胺酸酶接合之聚乙二醇分子。
  20. 如請求項18或19之用途，其中該病毒係選自由以下組成之群：RNA病毒、DNA病毒、冠狀病毒、乳頭瘤病毒、肺病毒、小核糖核酸病毒、流感病毒、腺病毒、巨細胞病毒、多瘤病毒、痘病毒、黃病毒、α病毒、伊波拉病毒、麻疹病毒、腸病毒、正肺病毒、慢病毒及肝病毒。
  21. 一種包含精胺酸酶或其醫藥學上可接受之鹽之組合物的用途，其係用於製造用以抑制病毒組裝之藥物， 其中該精胺酸酶與選自由SEQ ID NO:1-50及56組成之群的蛋白質序列或其片段具有至少約90%序列一致性。
  22. 如請求項21之用途，其中該精胺酸酶為聚乙二醇化精胺酸酶，其包含至少一個與該精胺酸酶接合之聚乙二醇分子。
  23. 一種包含精胺酸酶或其醫藥學上可接受之鹽之組合物的用途，其係用於製造用以抑制病毒基因表現之藥物， 其中該精胺酸酶與選自由SEQ ID NO:1-50及56組成之群的蛋白質序列或其片段具有至少約90%序列一致性。
  24. 如請求項23之用途，其中該精胺酸酶為聚乙二醇化精胺酸酶，其包含至少一個與該精胺酸酶接合之聚乙二醇分子。
  25. 如請求項23或24之用途，其中該抑制包含抑制β基因表現、γ基因表現或β基因表現及γ基因表現。
  26. 一種包含精胺酸酶或其醫藥學上可接受之鹽之組合物的用途，其係用於製造用以抑制病毒釋放之藥物， 其中該精胺酸酶與選自由SEQ ID NO:1-50及56組成之群的蛋白質序列或其片段具有至少約90%序列一致性。
  27. 如請求項26之用途，其中該精胺酸酶為聚乙二醇化精胺酸酶，其包含至少一個與該精胺酸酶接合之聚乙二醇分子。
  28. 如請求項23、24、26及27中任一項之用途，其中該病毒係選自由以下組成之群：RNA病毒、DNA病毒、冠狀病毒、乳頭瘤病毒、肺病毒、小核糖核酸病毒、流感病毒、腺病毒、巨細胞病毒、多瘤病毒、痘病毒、黃病毒、α病毒、伊波拉病毒、麻疹病毒、腸病毒、正肺病毒、慢病毒及肝病毒。
  29. 2、4、5、11至14、16至19、21至24、26及27中任一項之用途，其中該病毒為冠狀病毒。
  30. 如請求項29之用途，其中該冠狀病毒係選自由以下組成之群：229E α冠狀病毒、NL63 α冠狀病毒、OC43 β冠狀病毒、HKU1 β冠狀病毒、中東呼吸道症候群(Middle East Respiratory Syndrome；MERS)冠狀病毒(MERS-CoV)、嚴重急性呼吸道症候群(SARS)冠狀病毒(SARS-CoV)及SARS-CoV-2 (COVID-19)。
  31. 2、4、5、11至14、16至19、21至24、26及27中任一項之用途，其中該病毒為流感病毒。
  32. 如請求項31之用途，其中該流感病毒係選自由以下組成之群：流感病毒A (例如，H1N1及H5N1)、流感病毒B、流感病毒C、流感病毒D。
  33. 2、4、5、11至14、16至19、21至24、26及27中任一項之用途，其中該病毒為腺病毒。
  34. 如請求項33之用途，其中該腺病毒為AdV5。
  35. 2、4、5、11至14、16至19、21至24、26及27中任一項之用途，其中該病毒為抗藥性病毒。
  36. 2、4、5、11至14、16至19、21至24、26及27中任一項之用途，其進一步包含投與包含抗病毒劑之組合物。
  37. 如請求項36之用途，其中該抗病毒劑係選自由以下組成之群：拉米夫定(lamivudine)、干擾素α組合物、VAP抗個體基因型抗體、恩夫韋地(enfuvirtide)、金剛烷胺(amantadine)、金剛乙胺(rimantadine)、普可那利(pleconaril)、阿昔洛韋(aciclovir)、齊多夫定(zidovudine)、福米韋生(fomivirsen)、N-𠰌啉基、蛋白酶抑制劑、雙股RNA活化凋亡蛋白酶寡聚物(DRACO)、利福平(Rifampicin)、紮那米韋(zanamivir)、帕拉米韋(peramivir)、丹諾普韋(danoprevir)、利托那韋(ritonavir)、瑞德西韋(remdesivir)及奧司他韋(oseltamivir)。
  38. 如請求項36之用途，其中在投與該精胺酸酶之前、期間或之後投與該抗病毒劑。
  39. 一種包含精胺酸酶或其醫藥學上可接受之鹽之組合物的用途，其係用於製造用以治療細菌疾病或病症之藥物， 其中該精胺酸酶與SEQ ID NO:1或2或其片段具有至少約90%序列一致性，及 其中該細菌疾病或病症與選自由以下組成之群的細菌相關：肺炎鏈球菌(Streptococcus pneumoniae)、肺炎黴漿菌(Mycoplasma pneumoniae)、流感嗜血桿菌(Haemophilus influenzae)、退伍軍人症嗜肺桿菌(Legionella pneumophila)、腸沙門氏菌(Salmonella enterica)、邦戈爾沙門氏菌(Salmonella bongori)、大腸桿菌(Escherichia coli)、幽門螺旋桿菌(Helicobacter pylori)、淋病雙球菌(Neisseria gonorrhoeae)、腦膜炎雙球菌(Neisseria meningitidis)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、鮑曼氏不動桿菌(Acinetobacter baumannii)、洋蔥伯克霍爾德菌(Burkholderia cepacian)、艱難梭菌(Clostridium difficile)、索氏梭菌(Clostridium sordellii)、腸桿菌科(Enterobacteriaceae)、糞腸球菌(Enterococcus faecalis)、克雷伯氏肺炎桿菌(Klebsiella pneumoniae)、摩氏摩根菌(Morganella morganii)、膿腫分枝桿菌(Mycobacterium abscessus)、結核分支桿菌(Mycobacterium tuberculosis)、諾羅病毒(Norovirus)、綠膿桿菌(Psuedomonas aeruginosa)及嗜麥芽窄食單胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)。
  40. 如請求項39之用途，其中該精胺酸酶為聚乙二醇化精胺酸酶，其包含至少一個與該精胺酸酶接合之聚乙二醇分子。
  41. 一種包含精胺酸酶或其醫藥學上可接受之鹽之組合物的用途，其係用於製造用以治療細菌疾病或病症之藥物， 其中該精胺酸酶與選自由SEQ ID NO:3-50及56組成之群的蛋白質序列或其片段具有至少約90%序列一致性。
  42. 如請求項41之用途，其中該精胺酸酶為聚乙二醇化精胺酸酶，其包含至少一個與該精胺酸酶接合之聚乙二醇分子。
  43. 如請求項41或42之用途，其中該細菌疾病或病症與選自由以下組成之群的細菌相關：肺炎披衣菌(Chlamydia pneumoniae)、霍亂弧菌(Vibrio cholerae)、肺炎鏈球菌、肺炎黴漿菌、流感嗜血桿菌、退伍軍人症嗜肺桿菌、腸沙門氏菌、邦戈爾沙門氏菌、大腸桿菌、幽門螺旋桿菌、淋病雙球菌、腦膜炎雙球菌、金黃色葡萄球菌、鮑曼氏不動桿菌、洋蔥伯克霍爾德菌、艱難梭菌、索氏梭菌、腸桿菌科、糞腸球菌、克雷伯氏肺炎桿菌、摩氏摩根菌、膿腫分枝桿菌、結核分支桿菌、諾羅病毒、綠膿桿菌及嗜麥芽窄食單胞菌。
  44. 一種包含精胺酸酶或其醫藥學上可接受之鹽之組合物的用途，其係用於製造用以治療真菌疾病或病症之藥物， 其中該精胺酸酶與選自由SEQ ID NO:1-50及56組成之群的蛋白質序列或其片段具有至少約90%序列一致性。
  45. 如請求項44之用途，其中該精胺酸酶為聚乙二醇化精胺酸酶，其包含至少一個與該精胺酸酶接合之聚乙二醇分子。
  46. 如請求項44或45之用途，其中該真菌疾病與選自由以下組成之群的真菌相關：肺囊蟲屬真菌(Pneumocystis fungus)、麴菌屬真菌(Aspergillus fungus)及念珠菌屬真菌(Candida fungus)。
  47. 一種包含精胺酸酶或其醫藥學上可接受之鹽之組合物的用途，其係用於製造用以治療阿米巴原蟲疾病或病症之藥物， 其中該精胺酸酶與選自由SEQ ID NO:1-50及56組成之群的蛋白質序列或其片段具有至少約90%序列一致性。
  48. 如請求項47之用途，其中該精胺酸酶為聚乙二醇化精胺酸酶，其包含至少一個與該精胺酸酶接合之聚乙二醇分子。
  49. 如請求項47或48之用途，其中該阿米巴原蟲疾病或病症與選自由以下組成之群的阿米巴原蟲相關：脆弱雙核阿米巴(Dientamoeba fragilis)、溶組織內阿米巴(Entamoeba histolytica)、變形纖毛蟲(Naegleria fowleri)、棘狀變形蟲(Acanthamoeba)、棘阿米巴角膜炎(Acanthamoeba keratitis)、巴氏阿米巴(Balamuthia mandrillaris)及雙核勻變阿米巴(Sappinia diploidea)。
  50. 2、4、5、11至14、16至19、21至24、26、27、39至42、44、45、47及48中任一項之用途，其中該精胺酸酶以每天每公斤體重約1 ng至每天每公斤體重約1 mg之劑量投與。
  51. 2、4、5、11至14、16至19、21至24、26、27、39至42、44、45、47及48中任一項之用途，其中該投與為局部、非經腸、經口、經肺、氣管內、鼻內、鞘內、經皮、皮下、眼內、玻璃體內、腹膜內、十二指腸內或藉由吸入。
  52. 2、4、5、11至14、16至19、21至24、26、27、39至42、44、45、47及48中任一項之用途，其中該精胺酸酶與選自由SEQ ID NO:3-43組成之群的蛋白質序列或其片段具有至少約90%序列一致性，且其中該精胺酸酶包括蛋白質標籤序列。
  53. 如請求項52之用途，其中該蛋白質標籤序列包含SEQ ID NO:51之6xHis標籤序列。
  54. 如請求項52之用途，其中該蛋白質標籤序列位於該精胺酸酶之胺基末端處。
  55. 如請求項52之用途，其中該蛋白質標籤序列位於該精胺酸酶之羧基末端處。
  56. 2、4、5、11至14、16至19、21至24、26、27、39至42、44、45、47及48中任一項之用途，其中該精胺酸酶為包含2、3、4或更多個與該精胺酸酶接合之聚乙二醇分子的聚乙二醇化精胺酸酶。
  57. 5、12、14、17、19、22、24、27、40、42、45及48中任一項之用途，其中該聚乙二醇分子為約5 kDa、約10 kDa、約15 kDa、約20 kDa、約30 kDa或約40 kDa。
  58. 5、12、14、17、19、22、24、27、40、42、45及48中任一項之用途，其中該聚乙二醇為約10 kDa至約30 kDa或約20 kDa至約40 kDa。
  59. 2、4、5、11至14、16至19、21至24、26、27、39至42、44、45、47及48中任一項之用途，其中該組合物進一步包含非天然金屬輔因子。
  60. 如請求項59之用途，其中該非天然金屬輔因子係選自由鈷、錳、鐵及鋅組成之群。
  61. 一種組合物，其包含： 精胺酸酶或其醫藥學上可接受之鹽， 其中該精胺酸酶與選自由SEQ ID NO:1-50及56組成之群的蛋白質序列或其片段具有至少約90%序列一致性； 抗病毒劑；及 醫藥學上可接受之賦形劑。
  62. 如請求項61之組合物，其中該精胺酸酶為聚乙二醇化精胺酸酶，其包含至少一個與該精胺酸酶接合之聚乙二醇分子。
  63. 如請求項61或62之組合物，其中該抗病毒劑係選自由以下組成之群：拉米夫定、干擾素α組合物、VAP抗個體基因型抗體、恩夫韋地、金剛烷胺、金剛乙胺、普可那利、阿昔洛韋、齊多夫定、福米韋生、N-𠰌啉基、蛋白酶抑制劑、雙股RNA活化凋亡蛋白酶寡聚物(DRACO)、利福平、紮那米韋、帕拉米韋、丹諾普韋、利托那韋、瑞德西韋及奧司他韋。
  64. 如請求項61或62之組合物，其中該精胺酸酶與選自由SEQ ID NO:3-43組成之群的蛋白質序列或其片段具有至少約90%序列一致性，且其中該精胺酸酶包括蛋白質標籤序列。
  65. 如請求項64之組合物，其中該蛋白質標籤序列包含SEQ ID NO:51之6xHis標籤序列。
  66. 如請求項64之組合物，其中該蛋白質標籤序列位於該精胺酸酶之胺基末端處。
  67. 如請求項64之組合物，其中該蛋白質標籤序列位於該精胺酸酶之羧基末端處。
  68. 如請求項62之組合物，其中該聚乙二醇化精胺酸酶包含2、3、4或更多個與該精胺酸酶序列接合之聚乙二醇分子。
  69. 如請求項62或68之組合物，其中該聚乙二醇分子為約5 kDa、約10 kDa、約15 kDa、約20 kDa、約30 kDa或約40 kDa。
  70. 如請求項62或68之組合物，其中該聚乙二醇分子為約10 kDa至約30 kDa或約20 kDa至約40 kDa。
  71. 如請求項61、62及68中任一項之組合物，其中該組合物進一步包含非天然金屬輔因子。
  72. 如請求項71之組合物，其中該非天然金屬輔因子係選自由鈷、錳、鐵及鋅組成之群。
  73. 一種套組，其包含： 精胺酸酶或其醫藥學上可接受之鹽， 其中該精胺酸酶與選自由SEQ ID NO:1-50及56組成之群的蛋白質序列或其片段具有至少約90%序列一致性；及 用於抑制病毒產生之緩衝劑、試劑及詳細說明書。
  74. 如請求項73之套組，其中該精胺酸酶為聚乙二醇化精胺酸酶，其包含至少一個與該精胺酸酶接合之聚乙二醇分子。
  75. 如請求項73或74之套組，其進一步包含抗病毒劑。
  76. 如請求項75之套組，其中該抗病毒劑係選自由以下組成之群：拉米夫定、干擾素α組合物、VAP抗個體基因型抗體、恩夫韋地、金剛烷胺、金剛乙胺、普可那利、阿昔洛韋、齊多夫定、福米韋生、N-𠰌啉基、蛋白酶抑制劑、雙股RNA活化凋亡蛋白酶寡聚物(DRACO)、利福平、紮那米韋、帕拉米韋、丹諾普韋、利托那韋、瑞德西韋及奧司他韋。
  77. 如請求項73或74之套組，其中該套組用於抑制冠狀病毒產生。
  78. 如請求項77之套組，其中該冠狀病毒係選自由以下組成之群：229E α冠狀病毒、NL63 α冠狀病毒、OC43 β冠狀病毒、HKU1 β冠狀病毒、中東呼吸道症候群(MERS)冠狀病毒(MERS-CoV)、嚴重急性呼吸道症候群(SARS)冠狀病毒(SARS-CoV)及SARS-CoV-2 (COVID-19)。
  79. 如請求項73或74之套組，其中該病毒為流感病毒。
  80. 如請求項79之套組，其中該流感病毒係選自由以下組成之群：流感病毒A (例如，H1N1及H5N1)、流感病毒B、流感病毒C、流感病毒D。
  81. 如請求項73或74之套組，其中該病毒為腺病毒。
  82. 如請求項81之套組，其中該腺病毒為AdV5。
  83. 如請求項73或74之套組，其中該精胺酸酶與選自由SEQ ID NO:3-43組成之群的蛋白質序列或其片段具有至少約90%序列一致性，且其中該精胺酸酶包括蛋白質標籤序列。
  84. 如請求項83之套組，其中該蛋白質標籤序列為SEQ ID NO:51之6xHis標籤序列。
  85. 如請求項83之套組，其中該蛋白質標籤序列位於該精胺酸酶之胺基末端處。
  86. 如請求項83之套組，其中該蛋白質標籤序列位於該精胺酸酶之羧基末端處。
  87. 如請求項74之套組，其中該聚乙二醇化精胺酸酶包含2、3、4或更多個與該精胺酸酶序列接合之聚乙二醇分子。
  88. 如請求項74或87之套組，其中該聚乙二醇為約5 kDa、約10 kDa、約15 kDa、約20 kDa、約30 kDa或約40 kDa。
  89. 如請求項74或87之套組，其中該聚乙二醇為約10 kDa至約30 kDa或約20 kDa至約40 kDa。
  90. 如請求項73、74及87中任一項之套組，其中該套組進一步包含非天然金屬輔因子。
  91. 如請求項90之套組，其中該非天然金屬輔因子係選自由鈷、錳、鐵及鋅組成之群。
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