TW202140028A - 抗病毒組成物及使用方法 - Google Patents

Abstract

本發明係關於PIKfyve抑制劑，諸如阿吡莫德，及用於治療或預防冠狀病毒感染之相關組成物及方法。

Description

抗病毒組成物及使用方法

本發明係關於包含PIKfyve抑制劑之抗病毒組成物及其在治療冠狀病毒感染中之用途。

許多病毒經由胞吞作用進入細胞，且利用內體網作為滲透細胞及複製的手段。舉例而言，病毒進入細胞可由病毒糖蛋白（GP）介導，該糖蛋白將病毒粒子附著於細胞表面，將其遞送至內體且催化病毒與內體膜之間的融合。Rab9 GTP酶經證明為HIV-1、絲狀病毒（諸如伊波拉（Ebola）及馬堡（Marburg））及麻疹病毒複製所需的。Murray等人. 2005J. Virology 79:11742-11751。沉默Rab9表現顯著抑制HIV複製，沉默編碼TIP47、p40及PIKfyve之宿主基因亦如此，其亦促進晚期內體至反式高基氏體囊泡轉運。減少Rab9表現亦抑制包膜伊波拉及馬堡絲狀病毒以及麻疹病毒之複製，但不抑制無包膜里奧病毒之複製。US 2007/0087008（Hodge等人）將RAB9A、RAB11A及彼等蛋白之調節劑描述為對減少病毒複製、尤其HIV複製潛在有用。

冠狀病毒為引起呼吸道、肝臟及神經疾病之包膜RNA病毒（Weiss等人, (2011)Adv Virus Res 81:85-164；Cui等人, 2019Nat Rev Microbiology 17:181-192）。最近爆發的嚴重急性呼吸道症候群（SARS）及中東呼吸道症候群（MERS）已揭露高致病性之潛力（Cui等人, (2019)Nat Rev Microbiology 17:181-192）。冠狀病毒之高盛行率、廣泛分佈、遺傳多樣性、重組及頻繁跨物種感染導致新型致病性病毒株的出現（Cui等人, (2019)Nat Rev Microbiology 17:181-192；Wong等人, (2015)Cell Host and Microbe 18(4):398-401）。事實上，一種引起肺炎及高百分比死亡率之新型致病性冠狀病毒SARS-CoV-2在中國出現（Zhu等人, 2020,N Engl J Med doi: 10.1056/NEJMoa2001017；Huang等人. (2020);The Lancet, doi.org/10.1016/S0140-6736(20)30183-5）。由此產生的疾病已命名為COVID-19。用經批准之抗病毒劑及免疫調節劑治療SARS及MERS之嘗試已在臨床試驗中證實為無效的（Zumla等人, (2016),Nat Rev Drug Discov . (2016) 5月; 15(5):327-47. PMID: 26868298）。

最近，試管內或來自冠狀病毒SARS-CoV-2患者之初步資料已表明有望用氯喹、羥氯喹、亞茲索黴素（azithromycin）及托珠單抗（tocilizumab）進行治療（Gautret等人, https://www.mediterranee-infection.com/wp-content/ uploads/ 2020/03/ Hydroxychloroquine_final_DOI_IJAA.pdf；Wang等人, Cell Res., (2020)；Tocilizumab in COVID-19 Pneumonia NCT04317092, Phase 2 trial https://clinicaltrials.gov/）。冠狀病毒感染之治療及預防仍為亟待滿足的臨床需求。

另外的研究表明，內體/溶酶體膽固醇轉運體Niemann-Pick C1（NPC1）充當內吞後細胞內受體，其為伊波拉及馬堡病毒滲透所必需的。Carette等人, (2011)Nature 477:340-343。Niemann-Pick C1（NPC1）及同型融合及液泡蛋白分選（HOPS）複合物在全基因體單倍體遺傳篩選中鑑別為絲狀病毒進入之宿主因子。NPC1基因座為單一最強的命中位點，具有39個獨立插入。HOPS複合物為下一個最強的命中位點。亦鑑別出產物參與內體（PIKfyve）及溶酶體（BLOC1S1、BLOC1S2）之生物發生及將內腔貨物靶向內吞路徑（GNPTAB）的額外基因，但僅NPC1在功能分析中得到驗證。舉例而言，NPC1功能為人類纖維母細胞中伊波拉及馬堡病毒感染所需的，NPC1缺陷賦予HAP1及CHO細胞對病毒感染之抵抗性，且NPC1剔除小鼠對伊波拉及馬堡病毒之感染及發病機制具有抵抗性。WO 2012/103081（Chandran等人）描述使用尤其抑制NPC1及HOPS之藥劑治療絲狀病毒感染的方法。

在酵母中，吞噬體膜與溶酶體膜之融合需要HOP複合物及磷脂醯肌醇3,5-二磷酸（PI(3,5)P₂ ）。PI(3,5)P₂ 之合成由磷脂醯肌醇-3-磷酸5-激酶（PIKfyve）介導。磷脂肌醇，諸如PI(3,5)P₂ 為膜運輸及細胞信號傳導之重要脂質調節劑。Jefferies等人使用抑制劑YM201636證明，抑制PIKfyve及阻斷細胞產生PI(3,5)P₂ 破壞內膜轉運及反轉錄病毒出芽。Jefferies等人. EMBO rep. (2008) 9:164-170。最近，已報告PIKfyve抑制劑阿吡莫德（apilimod）阻斷絲狀病毒進入（Nelson等人, (2017)PLoS Negl Trop Dis 11(4): e0005540；Qiu等人, (2018)Virology 513:17-28）。

先天性免疫系統之細胞（嗜中性白血球、自然殺手細胞、肥大細胞、樹突狀細胞、單核球、巨噬細胞等）用於識別感染物或內源性惡性腫瘤且產生發炎反應。適應性免疫系統之細胞（B細胞、αβ效應T細胞及γδ效應T細胞）回應於先天性免疫系統產生之發炎環境而增殖及分化。適應性免疫系統用於直接破壞病原體或惡性腫瘤，且協同產生免疫記憶以提供針對特定病原體之持久保護。

靜止T細胞之活化形成適應性免疫反應之基礎（Nathan (2013)Adv Physiol Education 37(4): 273-283）。活化涉及T細胞上之數種分子，包括T細胞受體（TCR）、CD4/CD8、CD28、OX40及4-1BB共刺激受體與攜帶來自病原體或惡性腫瘤之抗原肽的抗原呈現細胞（APC）在適當I類或II類主要組織相容性複合體（MHC）以及諸如CD80/86、OX40配體及4-1BB配體之共刺激分子之情形下的相互作用。此T細胞-APC相互作用最終導致T細胞內之轉錄變化，從而導致原T細胞增殖因子IL-2之分泌。

存在免疫檢查點以調節適應性免疫反應之程度，從而限制對宿主組織之損害。存在調節性T細胞（Treg）之亞群以抑制效應T細胞的增殖及活性（Chaplin, (2010)J Allergy Clin Immunol 2月; 125(2增刊2):S3-23）。此外，活化的T細胞表現抑制性受體，諸如PD-1，其可用於限制共刺激分子連接及信號傳導。活化的T細胞表面上之PD-1與其在APC或病變細胞上之配體PD-L1或PD-L2相互作用，導致TCR近端激酶之去磷酸化，以限制TCR/CD28信號轉導（Keir等人. (2008)Annual Review of Immunology 26: 677-704）。因此，PD-1/PD-L1在腫瘤微環境內或在慢性病毒感染期間的參與藉由經由T細胞失能、耗竭及凋亡、免疫抑制性IL-10的產生及Treg分化的增強而誘導T細胞功能障礙以及藉由介導樹突狀細胞及細胞毒性T淋巴細胞功能之遏制而導致適應性免疫反應減弱（Chen等人. (2015)J Clin Invest. 125(9):3384-91）。

拮抗PD-1/PD-L1參與藉由增強晚期癌症患者之適應性免疫反應而顯著減少腫瘤負荷（Topalian等人. (2012)The New England Journal of Medicine 366:2443-2454）。類似地，在慢性病毒感染期間阻斷PD-1/PD-L1參與恢復耗竭性T細胞之功能，且在慢性淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎病毒、C型肝炎病毒、人類T細胞淋巴病毒及人類免疫缺陷病毒之情況下引起病毒負荷減少（Barber等人. (2006)Nature 439: 682-687；Day等人. (2006)Nature 443: 350-354；Golden-Mason等人. (2007)Journal of Virology 81: 9249-9258；Yao等人. (2007)Viral Immunology 20: 276-287；及Kozako等人. (2009)Leukemia 23(2):375-82）。已證明腫瘤細胞及病毒感染細胞之細胞表面上的高水準PD-L1表現直接抑制T細胞功能且促進免疫逃逸（Akhmetzyanova等人. (2015)PLoS Pathog 11(10)；及Azuma T等人. (2008)Blood 111(7):3635-3643）。同樣，在最近西非伊波拉爆發期間，高百分比之表現PD-1之T細胞與較高病毒負荷、較高炎症水準及較差存活率相關聯，支持高PD-1/PD-L1表現抑制適應性免疫反應，從而導致病毒清除率較差的假設（Ruibal等人. (2016)Nature 533(7601):100-104；及Mohamadzadeh等人. (2007)Nat Rev Immunol ;7(7):556-67）。此外，已證明免疫檢查點阻斷抗體降低具有HCV感染之肝細胞癌患者的腫瘤負荷及病毒負荷（Sangro等人. (2013)J Hepatol 59(1): 81-88）。

阿吡莫德為一種免疫調節小分子，其最初鑑別為TLR誘導之IL-12及IL-23細胞介素產生的抑制劑。IL-12及IL-23由先天性免疫系統由諸如樹突狀細胞及巨噬細胞之APC產生。IL-12之分泌促進輔助T細胞分化成分泌IFNγ之T輔助1（Th1）細胞，從而促進炎症及適應性免疫系統之活化（Teng等人. (2015)Nat Med . 21(7):719-29）。雖然IL-23可穩定Th17反應以維持T細胞活化，但其亦可抑制先天性免疫反應且促進腫瘤形成，而不依賴於Th17反應（Teng等人. (2010)Proc Natl Acad Sci 4;107(18):8328-33）。阿吡莫德已在臨床中針對克羅恩氏病（Crohn's disease）、牛皮癬及類風濕性關節炎之發炎性及自體免疫適應症進行評估，且已證明強效抑制表徵此類疾病之T輔助1（Th1）及Th17反應升高，其可能係經由清除產生IL-12/23之CD11c+樹突狀細胞（Cai等人. (2013)Chem Biol. 20(7):912-21；Krausz等人. (2012)Arthritis Rheum ; 64(6):1750-5；Sands等人. (2010)Inflamm Bowel Dis ;16(7):1209-18；Wada等人. (2012)PLoS One ;7(4):e35069；及Wada等人. (2007)Blood 109, 1156-1164）。除了強效抑制IL-12/23產生以外，已在試管內證明阿吡莫德以奈莫耳效力抑制由受刺激之人類PBMC產生之一系列細胞介素的產生，包括IL-10、IL-6、IL-5、IL-4及IFNγ（Krausz等人. (2012)Arthritis Rheum ; 64(6):1750-5）。

本發明解決了對用於治療感染病毒之個體及預防處於病毒感染風險下之個體，且尤其感染冠狀病毒或處於感染冠狀病毒風險下之人類個體的抗病毒組成物及方法的需求。

本發明提供與使用PIKfyve抑制劑治療及/或預防需要此類治療或預防之個體、較佳人類個體之冠狀病毒感染有關的組成物及方法。在一個態樣中，本發明係基於以下出乎意料的發現：阿吡莫德在試管內分析中抑制兩種冠狀病毒SARS及MERS之細胞病變效應。在另一態樣中，本發明係基於阿吡莫德單獨針對SARS-CoV-2之抗病毒活性以及其與瑞德西韋（remdesivir）組合之抗病毒活性。因此，本揭示案提供使用PIKfyve抑制劑，較佳阿吡莫德或其醫藥學上可接受之鹽單獨或與一或多種額外治療劑組合治療及預防冠狀病毒感染的方法，該一或多種額外治療劑選自細胞PD-L1、PD-L2或PD-1之拮抗劑、抗病毒劑及消炎劑。

在具體實例中，本發明提供一種用於治療或預防有需要之個體之冠狀病毒感染的方法，該方法包含向該個體投予包含治療有效量之至少一種PIKfyve抑制劑之組成物，視情況與細胞PD-L1、PD-L2或PD-1之拮抗劑組合，且進一步視情況與抗病毒劑組合。

在具體實例中，PIKfyve抑制劑選自由阿吡莫德、APY0201及YM-201636組成之群。在具體實例中，PIKfyve抑制劑為阿吡莫德或其醫藥學上可接受之鹽。在具體實例中，阿吡莫德呈游離鹼或二甲磺酸鹽形式。在具體實例中，醫藥學上可接受之鹽為選自由以下者組成之群的單鹽：氯化物、磷酸鹽、順丁烯二酸鹽、L-酒石酸酯、反丁烯二酸鹽、DL乳酸鹽及甲磺酸鹽。在具體實例中，醫藥學上可接受之鹽為選自由甲磺酸鹽、氯化物及溴化物組成之群的二鹽。阿吡莫德之其他鹽形式在下文中描述。

在具體實例中，向個體投予之阿吡莫德之量為預防或治療有效量。在具體實例中，阿吡莫德游離鹼或其醫藥學上可接受之鹽在人體內之有效量為約70至1000毫克/天、約70至500毫克/天、約70至250毫克/天、約70至200毫克/天、約70至150毫克/天或約70至100毫克/天。

在具體實例中，用於與如本文所述之阿吡莫德之組合療法的細胞PD-L1、PD-L2或PD-1之拮抗劑為抗體。在具體實例中，該抗體為抗PD-L1抗體，其選自由Tecentriq^TM （阿特珠單抗（atezolizumab））、阿維魯單抗（Avelumab）（MSB0010718C）及德瓦魯單抗（Durvalumab）（MEDI4736）組成之群。在具體實例中，該抗體為抗PD-1抗體，其選自由Opdivo®（納武單抗（nivolumab））及Keytruda®（派姆單抗（pembrolizumab））組成之群。在具體實例中，拮抗劑抗體在人類個體中之預防或治療有效量為約7至3500毫克/天、約70至1700毫克/天、約70至850毫克/天、約70至400毫克/天、約70至200毫克/天或約70至150毫克/天。在具體實例中，每日量以每週一次或每兩週一次的週期，或以3週的週期或以4週的週期的單日投予，如下文更充分描述。

在具體實例中，用於與如本文所述之阿吡莫德之組合療法的細胞PD-L1、PD-L2或PD-1之拮抗劑為小分子。在具體實例中，小分子拮抗劑在人類個體中之預防或治療有效量為約70至1000毫克/天、約70至500毫克/天、約70至250毫克/天、約70至200毫克/天、約70至150毫克/天或約70至100毫克/天。

在該等方法進一步包含投予至少一種額外抗病毒劑之具體實例中，至少一種額外抗病毒劑可包含抗體或抗體之組合，較佳為人類抗體或人類化抗體，但嵌合（例如小鼠-人類嵌合體）抗體亦為可接受的。在具體實例中，至少一種額外抗病毒劑包含重組蛋白或重組蛋白之組合。在具體實例中，至少一種額外抗病毒劑包含小干擾RNA（siRNA）或siRNA分子之組合。在具體實例中，抗體、重組蛋白、siRNA或前述任一者之組合靶向一或多種冠狀病毒蛋白。在具體實例中，一或多種冠狀病毒蛋白選自由以下者組成之群：聚合酶、膜相關蛋白、聚合酶複合蛋白、蛋白酶、解螺旋酶、包膜、核衣殼、棘突醣蛋白、病毒結構或病毒附屬蛋白。在具體實例中，siRNA或siRNA之組合、抗體或抗體之組合、蛋白或蛋白之組合靶向一或多種宿主蛋白。在具體實例中，一或多種宿主蛋白選自由以下者組成之群：干擾素、細胞表面受體、蛋白酶或參與內體運輸或酸化之蛋白。在具體實例中，抗體、重組蛋白、siRNA或前述任一者之組合靶向所有此等蛋白。

在具體實例中，抗病毒劑係選自干擾素、瑞德西韋、亞茲索黴素、羥氯喹及氯喹中之一或多者。在具體實例中，該等方法包含投予阿吡莫德及抗病毒劑與消炎劑之組合。在具體實例中，消炎劑係選自托珠單抗及賽瑞單抗（sarilumab）。在具體實例中，阿吡莫德與抗病毒劑及消炎劑以分開的劑型投予。

在具體實例中，有需要之個體為具有呼吸道病毒感染症狀之個體，該等症狀包括喉嚨痛、鼻塞及/或鼻溢液、呼吸急促、呼吸困難及發熱中之一或多者。

在具體實例中，冠狀病毒為SARS-CoV-2。在具體實例中，冠狀病毒為SARS-CoV-2，且該等方法包含投予一或多種選自以下者之額外治療劑：瑞德西韋、亞茲索黴素、羥氯喹、氯喹、托珠單抗及賽瑞單抗。在具體實例中，阿吡莫德與一或多種額外治療劑以分開的劑型投予或在相同的劑型中投予。

在本文所述之方法中，至少一種PIKfyve抑制劑可藉由任何適合的途徑投予。在具體實例中，投予係經由經口、靜脈內或皮下途徑。在具體實例中，投予係每日一次、每日兩次或連續一段時間，例如一天或數天或一週或數週。連續投予可例如藉由使用例如植入個體體內之緩釋劑型，或經由例如使用亦可植入之泵裝置連續輸注來進行。

在具體實例中，至少一種PIKfyve抑制劑為阿吡莫德或其醫藥學上可接受之鹽，且阿吡莫德以70至1000毫克/天之量投予。在一個具體實例中，投予有效地使個體體內阿吡莫德之血漿濃度在50至1000 nM之範圍內。

本發明亦提供一種醫藥包裝或套組，其在分開的容器中或在單一容器中包含單位劑量之阿吡莫德，視情況存在之單位劑量之細胞PD-L1、PD-L2或PD-1之拮抗劑，及進一步視情況存在之至少一種額外抗病毒劑。在具體實例中，醫藥包裝或套組包含至少一種PIKfyve抑制劑，其為選自阿吡莫德游離鹼、或阿吡莫德之任何醫藥學上可接受之鹽、或阿吡莫德活性代謝物之外消旋純對映異構體及其組合的阿吡莫德組成物。在具體實例中，醫藥包裝或套組包含選自由以下者組成之群的PD-L1拮抗劑及/或PD-L2拮抗劑及/或PD-1拮抗劑：抗體或其片段、肽、多肽或其片段、小分子及抑制性核酸。在具體實例中，醫藥包裝或套組包含PD-L1拮抗劑。在一個具體實例中，PD-L1拮抗劑為抗體。在一個具體實例中，PD-L1拮抗劑為單株抗體。

在具體實例中，醫藥包裝或套組在分開的容器中或在單一容器中包含單位劑量之阿吡莫德或其醫藥學上可接受之鹽及單位劑量之一或多種額外治療劑，該一或多種額外治療劑選自瑞德西韋、亞茲索黴素、羥氯喹、氯喹、托珠單抗及賽瑞單抗。

本發明提供與使用PIKfyve抑制劑治療或預防需要此類治療或預防之個體、較佳人類個體之冠狀病毒感染有關的組成物及方法。

在具體實例中，本發明提供用於治療個體之冠狀病毒感染的方法，其係藉由向該個體投予治療有效量之PIKfyve抑制劑。在具體實例中，本發明提供包含治療有效量之PIKfyve抑制劑的醫藥組成物。在具體實例中，PIKfyve抑制劑選自由阿吡莫德、APY0201、YM201636及其醫藥學上可接受之鹽組成之群。

在具體實例中，本發明提供包含治療有效量之至少一種PIKfyve抑制劑及治療有效量之細胞PD-L1、PD-L2或PD-1之拮抗劑的醫藥組成物。

在具體實例中，細胞PD-L1、PD-L2或PD-1之拮抗劑為PD-L1拮抗劑。計劃性死亡配體1（PD-L1）「蛋白PD-L1」、「PD-L1」、「PDL1」、「PDCDL1」、「hPD-L1」、「hPD-L1」、「CD274」及「B7-H1」可互換使用，且包括人類PD-L1之變體、同功異構物、物種同源物及與PD-L1具有至少一個共同抗原決定基之類似物。計劃性死亡配體1（PD-L1）為一種跨膜蛋白，其在諸如妊娠、組織同種異體移植、自體免疫疾病及其他疾病狀態諸如肝炎之特定事件期間起抑制免疫系統之作用。完整的PD-L1序列可在GENBANK®寄存編號NP_054862下找到。

在具體實例中，細胞PD-L1、PD-L2或PD-1之拮抗劑為PD-L2拮抗劑。計劃性細胞死亡1配體2（亦稱為PD-L2、B7-DC）為在人類中由PDCD1LG2 基因編碼之蛋白。完整的PD-L2序列可在GENBANK®寄存編號Q9BQ51.2下找到。

在具體實例中，細胞PD-L1、PD-L2或PD-1之拮抗劑為PD-1拮抗劑。「PD-1」係指計劃性死亡1受體。術語「計劃性死亡1（Programmed Death 1）」、「計劃性細胞死亡1（Programmed Cell Death 1）」、「蛋白PD-1」、「PD-1」、「PD1」、「PDCD1」、「hPD-1」及「hPD-I」可互換使用，且包括人類PD-1之變體、同功異構物、物種同源物及與PD-1具有至少一個共同抗原決定基之類似物。PD-1為T細胞調節因子之擴展分化叢集28（CD28）/細胞毒性T淋巴細胞相關蛋白4（CTLA-4）家族的成員。完整的PD-1序列可在GENBANK®寄存編號U64863下找到。完整的CTLA-4序列可在GENBANK®寄存編號P16410.3下找到。PD-1信號傳導係指由PD-1及其結合搭配物PD-L1提供之調節T細胞活化的負共刺激信號。PD-1可在T細胞、B細胞、自然殺手T細胞、活化的單核球及樹突狀細胞（DC）上表現。PD-1信號傳導典型地對細胞介素之產生比對細胞增殖的影響更大，對IFN-γ、TNF及IL-2之產生具有顯著影響。PD-1結合兩個配體PD-L1及PD-L2。阻斷PD-L1:PD-1相互作用之抑制劑自例如WO2001014557、WO2002086083、WO2007005874、WO2010036959、WO2010077634及WO2011066389獲知。

如本文所用，「拮抗劑（antagonist）」可指抗體或其片段、肽、多肽或其片段、小分子及抑制性核酸或其片段，其干擾另一者之活性或結合，例如藉由競爭促效劑之一或多個結合位點，但不誘導活性反應。

「拮抗劑抗體（antagonist antibody）」或「阻斷抗體（blocking antibody）」為抑制或降低其所結合之抗原之生物活性的抗體。在一些具體實例中，阻斷抗體或拮抗劑抗體實質上或完全抑制抗原之生物活性。本發明之抗PD-L1抗體及抗PD-L2抗體阻斷與其受體PD-1之相互作用，且因此阻斷經由PD-1之信號傳導。本發明之抗PD1抗體阻斷受體。或者，「促效劑（agonist）」或活化抗體為增強或引發其所結合之抗原之信號傳導的抗體。在一些具體實例中，促效劑抗體在不存在天然配體之情況下引起或活化信號傳導。

在具體實例中，拮抗劑（亦即PD-L1拮抗劑及/或PD-L2拮抗劑及/或PD-1拮抗劑）為PD-L1抗體。例示性PD-L1抗體可包括購自任何適合之分銷商的抗體，該分銷商包括例如Abcam、BD Biosciences、BioRad、Cell Signaling、EMD Millipore、Novus Biologicals、R&D Systems及其類似者。舉例而言，來自Abcam之例示性PD-L1抗體可包括但不限於：ab205921（兔單株）、ab58810（兔多株）、ab209960（兔單株）、ab210931（小鼠單株）、ab209959（兔單株）、ab209889（兔單株）、ab209961（兔單株）、ab180370（小鼠單株）、ab109052（小鼠單株）或ab80391（小鼠單株）。

在具體實例中，拮抗劑為PD-L1抗體，其選自由Tecentriq^TM （阿特珠單抗）、阿維魯單抗（MSB0010718C）及德瓦魯單抗（MEDI4736）組成之群。

在具體實例中，拮抗劑為PD-L2抗體。例示性PD-L2抗體可包括購自任何適合之分銷商的抗體，該分銷商包括例如R&D Systems、EMD Millipore、Novus Biologicals、Cell Signaling及其類似者。例示性PD-L2抗體可包括但不限於購自R&D Systems（項目號MAB1224-100；小鼠單株或項目號AF1224-SP；山羊多株或項目號BAF1224；山羊多株）、Novus Biologicals（項目號NBP1-76770；兔多株）或EMD Millipore（項目號ABC327；兔多株）之抗體。

在具體實例中，拮抗劑為PD-1抗體。在具體實例中，拮抗劑為PD-1抗體，其選自由Opdivo®（納武單抗）及Keytruda®（派姆單抗）組成之群。

在具體實例中，拮抗劑為CTLA-4抗體，例如Yervoy®（伊匹單抗（ipilimumab））。

「抗原（antigen）」定義為引起免疫反應之分子。此免疫反應可能涉及抗體產生或特異性免疫勝任細胞之活化或兩者。舉例而言，任何大分子，包括幾乎所有蛋白或肽，均可充當抗原。此外，抗原可來源於重組或基因體DNA。所屬技術領域中具有通常技術者應理解，包含編碼引發免疫反應之蛋白之核苷酸序列或部分核苷酸序列的任何DNA因此編碼如本文所用之術語「抗原」。

「小分子（small molecule）」可泛指具有低分子量化合物（例如小於約1,000 Da之分子量）的有機、無機或有機金屬化合物。小分子之分子量可小於約1,000 Da，或分子量小於約9000 Da，分子量小於約800 Da，分子量小於約700 Da，分子量小於約600 Da，分子量小於約500 Da，分子量小於約400 Da，分子量小於約300 Da，分子量小於約200 Da，分子量小於約100 Da，分子量小於約50 Da。

在具體實例中，拮抗劑（亦即PD-L1拮抗劑及/或PD-L2拮抗劑及/或PD-1拮抗劑）為小分子。在一具體實例中，小分子為AUPM-170（或者命名為CA-170、Curis）。

如本文所用，「抑制性核酸（inhibitory nucleic acid）」意謂當向哺乳動物細胞投予時，導致目標基因之表現減少（例如減少10%、25%、50%、75%或甚至90-100%）的雙股RNA、siRNA、shRNA或反義RNA或其一部分或其模擬物。典型地，核酸抑制劑包含目標核酸分子或其直系同源物之至少一部分，或包含目標核酸分子之互補股之至少一部分。舉例而言，抑制性核酸分子包含本文所述之任何或所有核酸之至少一部分。

抑制性核酸siRNA可指雙股RNA。最佳地，siRNA之長度為18、19、20、21、22、23或24個核苷酸，且在其3'端具有2-鹼基突出端。此等dsRNA可引入至個別細胞或整個動物中；例如，其可經由血流全身性引入。此類siRNA用於下調mRNA水準或啟動子活性。

在具體實例中，病毒感染由選自由以下者組成之群之冠狀病毒引起：新型冠狀病毒（SARS-CoV-2）、嚴重急性呼吸系統病毒（SARS-CoV）、中東呼吸道症候群病毒（MERS-CoV）、α冠狀病毒229E、α冠狀病毒NL63、β冠狀病毒OC43及β冠狀病毒HKU1。在具體實例中，PIKfyve抑制劑為阿吡莫德。阿吡莫德為PIKfyve之選擇性抑制劑（Cai等人. 2013Chem. & Biol . 20:912-921）。基於抑制IL-12/23產生之能力，已建議將阿吡莫德用於治療發炎性及自體免疫疾病，諸如類風濕性關節炎、敗血症、克羅恩氏病、多發性硬化症、牛皮癬或胰島素依賴性糖尿病，及咸信此等細胞介素起促增殖作用之癌症。根據本文所述之方法，本發明人已發現阿吡莫德具有冠狀病毒抗病毒活性，包括針對SARS及MERS。此根據先前證明阿吡莫德抑制絲狀病毒進入（例如伊波拉病毒及馬堡病毒）之研究為出乎意料的，因為病毒進入所需之宿主因子在不同的病毒家族之間不同，且甚至在單個家族內仍可能不同。此已為冠狀病毒所證明，其中不同病毒株使用不同的宿主蛋白酶及受體（Totura等人, (2019)Expert Opin Drug Discov 14(4):397-412）。因此，與已證實對不同的冠狀病毒病原體無效的習知方法（諸如靶向特定病毒蛋白之疫苗及單株抗體）相比，本文所述之方法提供一種替代性抗病毒療法。參見例如Totura等人, (2019)Expert Opin Drug Discov 14(4):397-412）。

如本文所用，術語「阿吡莫德（apilimod）」係指具有式I中所示之結構的阿吡莫德游離鹼：

(I)

阿吡莫德之化學名稱為2-[2-吡啶-2-基)-乙氧基]-4-N'-(3-甲基-苯亞甲基)-肼基]-6-(𠰌啉-4-基)-嘧啶（IUPAC名稱：(E)-4-(6-(2-(3-甲基苯亞甲基)肼基)-2-(2-(吡啶-2-基)乙氧基)嘧啶-4-基)

啉），且CAS編號為541550-19-0。

阿吡莫德可例如根據美國專利第7,923,557號及第7,863,270號及WO 2006/128129中所述之方法製備。

在具體實例中，阿吡莫德之醫藥學上可接受之鹽形式可用於本文所述之方法及組成物中。在具體實例中，阿吡莫德可為阿吡莫德二甲磺酸鹽。

在具體實例中，阿吡莫德可與至少一種選自APY0201及YM-201636之額外的PIKfyve抑制劑組合投予。

APY0201之化學名稱為(E)-4-(5-(2-(3-甲基苯亞甲基)肼基)-2-(吡啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-基)

啉。APY0201為一種選擇性PIKfyve抑制劑（Hayakawa等人. (2014)Bioorg. Med. Chem . 22:3021-29）。APY0201直接與PIKfyve激酶之ATP結合位點相互作用，導致抑制PI(3,5)P₂ 合成，進而抑制IL-12/23之產生。

YM201636之化學名稱為6-胺基-N-(3-(4-(N-

啉基)吡啶并[3',2':4,5]呋喃并[3,2-d]嘧啶-2-基)苯基)菸鹼醯胺（CAS編號為371942-69-7）。YM201636為PIKfyve之選擇性抑制劑（Jefferies等人. EMBO rep . (2008) 9:164-170）。其可逆地削弱NIH3T3細胞中之內體運輸，模擬藉由用siRNA耗盡PIKfyve產生之作用。YM201636亦阻斷反轉錄病毒藉由自細胞出芽而排放，其顯然係藉由干擾轉運所需之內體分選複合物（ESCRT）機制。在脂肪細胞中，YM-201636亦抑制基礎及胰島素活化的2-去氧葡萄糖攝取（IC₅₀ = 54 nM）。

如本文所用，術語「醫藥學上可接受之鹽（pharmaceutically acceptable salt）」為由例如酸及化合物（尤其如本文所述之PIKfyve抑制劑）之鹼性基團形成之鹽。說明性鹽包括但不限於硫酸鹽、檸檬酸鹽、乙酸鹽、草酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、酸式磷酸鹽、異菸鹼酸鹽、L-乳酸鹽、D-乳酸鹽、DL-乳酸鹽、柳酸鹽、酸式檸檬酸鹽、L-酒石酸鹽、D-酒石酸鹽、DL-酒石酸鹽、油酸鹽、單寧酸鹽、泛酸鹽、酒石酸氫鹽、抗壞血酸鹽、丁二酸鹽、順丁烯二酸鹽、苯磺酸鹽、龍膽酸鹽、反丁烯二酸鹽、葡萄糖酸鹽、葡糖醛酸鹽、葡糖二酸鹽、甲酸鹽、苯甲酸鹽、麩胺酸鹽、甲烷磺酸鹽（甲磺酸鹽）、乙磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽及雙羥萘酸鹽（例如1,1'-亞甲基-雙-(2-羥基-3-萘甲酸鹽)）。在具體實例中，阿吡莫德之醫藥學上可接受之鹽形式為甲烷磺酸鹽形式，或者稱為甲磺酸鹽。

術語「醫藥學上可接受之鹽」亦指由具有酸性官能基（諸如羧酸官能基）之化合物及醫藥學上可接受之無機或有機鹼製備之鹽。

術語「醫藥學上可接受之鹽」亦指由具有鹼性官能基（諸如胺基官能基）之化合物及醫藥學上可接受之無機或有機酸製備之鹽。

在具體實例中，阿吡莫德之鹽包括二鹽，其中布氏酸（Bronsted acid）係選自由以下各者組成之群：鹽酸、氫溴酸、硝酸、硫酸、氫溴酸、氫碘酸、過氯酸、甲烷磺酸、磷酸、烷基磺酸、芳基磺酸、鹵化烷基磺酸、鹵化芳基磺酸、鹵化烷基磺酸、鹵化乙酸、苦味酸、草酸、檸檬酸、甲酸、抗壞血酸、苯甲酸及具有足夠酸度之其他鹽，以形成阿吡莫德之結晶二鹽。在一具體實例中，阿吡莫德之鹽形式為二甲磺酸鹽。

本文所述之化合物之鹽可藉由習知化學方法，諸如Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, P. Hemrich Stalil (編者), Camille G. Wermuth (編者), ISBN: 3-90639-026-8, 2002年8月中所述之方法由母體化合物合成。一般而言，此類鹽可藉由使母體化合物與適當的酸在水或有機溶劑或兩者之混合物中反應來製備。

本文所述之化合物之一種鹽形式可藉由所屬技術領域中具有通常知識者熟知的方法轉化為游離鹼且視情況轉化為另一種鹽形式。舉例而言，游離鹼可藉由使鹽溶液通過含有胺固定相之管柱（例如Strata-NH₂ 管柱）而形成。或者，鹽於水中之溶液可用碳酸氫鈉處理，以分解鹽且沈澱出游離鹼。游離鹼可隨後使用常規方法與另一種酸組合。 治療方法

本發明提供用於治療有需要之個體之冠狀病毒感染的方法，其係藉由向該個體投予治療有效量之至少一種PIKfyve抑制劑。在具體實例中，至少一種PIKfyve抑制劑係選自阿吡莫德、APY0201、YM-201636及其醫藥學上可接受之鹽。

在一些具體實例中，PIKfyve抑制劑與PD-L1拮抗劑及/或PD-L2拮抗劑及/或PD-1拮抗劑組合投予。

本發明進一步提供至少一種PIKfyve抑制劑單獨或與PD-L1拮抗劑及/或PD-L2拮抗劑及/或PD-1拮抗劑組合用於製備可用於治療病毒感染之藥物的用途。

術語「治療有效量（therapeutically effective amount）」係指如本文所述，當與PIKfyve抑制劑組合投予或作為包括單獨或與PD-L1拮抗劑及/或PD-L2拮抗劑及/或PD-1拮抗劑組合投予PIKfyve抑制劑之治療方案之一部分投予時，足以治療病毒感染、改善病毒感染之症狀、降低病毒感染之嚴重程度、或縮短病毒感染之持續時間、或增強或改善另一種療法（例如另一種抗病毒療法）之治療效果的量。

在具體實例中，治療有效量為有效實現以下者中之一或多者的量：抑制細胞PIKfyve活性、實質上預防病毒進入個體之細胞、減少獲得進入個體之細胞之病毒粒子的量、減少個體之細胞內的病毒複製、改善與個體之病毒感染相關之一或多個症狀及降低與個體之病毒感染相關之一或多個症狀的嚴重程度。

在具體實例中，治療有效量為增強宿主針對病毒病原體之防禦的量。在具體實例中，治療有效量為協同促進免疫活化環境以增強宿主針對病毒病原體之防禦的量。

在具體實例中，治療有效量為足以降低個體之細胞介素風暴之程度或防止其發生的量。

在具體實例中，治療有效量為足以降低病毒負荷之量。在具體實例中，病毒負荷降低5%或更高、10%或更高、20%或更高、30%或更高、40%或更高、50%或更高或75%或更高。在具體實例中，病毒負荷降低至少0.5個對數單位、至少1個對數單位、至少2個對數單位、至少3個對數單位、至少4個對數單位、至少10個對數單位、至少15個對數單位或至少20個對數單位。

治療有效量可在約0.001 mg/kg至約1000 mg/kg、更佳0.01 mg/kg至約100 mg/kg、更佳0.1 mg/kg至約10 mg/kg之範圍內；或範圍之下限為0.001 mg/kg與900 mg/kg之間的任何量且範圍之上限為0.1 mg/kg與1000 mg/kg之間的任何量的任何範圍（例如0.005 mg/kg至200 mg/kg、0.5 mg/kg至20 mg/kg）。如所屬技術領域中具有通常知識者所認識到，有效劑量亦將視所治療之疾病、投予途徑、賦形劑使用及與其他治療性治療共同使用（諸如使用其他藥劑）之可能性而變化。參見例如美國專利第7,863,270號，其以引用之方式併入本文中。

在具體實例中，阿吡莫德在人體內之治療有效量為約70至1000毫克/天、約70至500毫克/天、約70至250毫克/天、約70至200毫克/天、約70至150毫克/天或約70至100毫克/天。

在具體實例中，PD-L1/L2或PD-1拮抗劑為抗體，且該抗體以約7至3500毫克/天、約70至1700毫克/天、約70至850毫克/天、約70至400毫克/天、約70至200毫克/天或約70至150毫克/天，一週一次、或每2週一次、或每3週一次、或每4週一次之給藥方案投予至少1週，在一些具體實例中1至4週、2至6週、2至8週、2至10週、或2至12週、2至16週或更長時間（例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、36、48或更多週）。在具體實例中，拮抗劑以70-1000毫克/天之給藥方案投予2、4、12或16週。替代地或隨後，拮抗劑以7 mg-3500 mg一天兩次之給藥方案投予4週、8週、12週、16週或更長時間。

在具體實例中，PD-L1/L2或PD-1拮抗劑為小分子，且該小分子以70-1000毫克/天（例如70、75、80、85、90、95、100、125、125、150、175、200、225、250、275、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950或1000毫克/天）之給藥方案投予至少1週，在一些具體實例中1至4週、2至6週、2至8週、2至10週、或2至12週、2至16週或更長時間（例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、36、48或更多週）。在具體實例中，小分子拮抗劑以70-1000毫克/天之給藥方案投予2、4、12或16週。替代地或隨後，小分子拮抗劑以35 mg-500 mg一天兩次之給藥方案投予4週、8週、12週、16週或更長時間。

在一些具體實例中，該等方法包含根據指定給藥時程或治療方案投予PIKfyve抑制劑與PD-L1/L2或PD-1拮抗劑及視情況存在之抗病毒劑之組合。舉例而言，PIKfyve抑制劑可每日投予一次或每日投予二至五次。在具體實例中，阿吡莫德、APY0201或YM-201636單獨或與PD-L1/L2或PD-1拮抗劑及/或抗病毒劑組合投予，每日三次、每日兩次、每日一次、在3週週期內十四天給藥（每日四次、每日三次或每日兩次、或每日一次）且7天停藥、在3週週期內至多五或七天給藥（每日四次、每日三次或每日兩次、或每日一次）且14-16天停藥、或每兩天一次、或一週一次、或每2週一次、或每3週一次。

在組合療法之情形下，PIKfyve抑制劑及PD-L1/L2或PD-1拮抗劑可以分開的劑型投予或在相同的劑型中投予。當抑制劑及拮抗劑以分開的劑型投予時，其可在同一時間或在不同時間投予。舉例而言，抑制劑及/或拮抗劑可每日三次、每日兩次、每日一次或在限定的週期內，例如在3週週期內十四天給藥（每日四次、每日三次或每日兩次、或每日一次）且7天停藥、在3週週期內至多五或七天給藥（每日四次、每日三次或每日兩次、或每日一次）且14-16天停藥，或每兩天一次、或一週一次、或每2週一次、或每3週一次投予。在拮抗劑為抗體之具體實例中，抗體一般一天僅投予一次，且一般在單一天投予，一週一次，或每2週一次，或每3週一次，或每4週一次。

根據本文所述之方法，「有需要之個體（subject in need of）」為具有冠狀病毒感染之個體，或相對於一般人群罹患冠狀病毒感染之風險增加的個體。有需要之個體可為對目前可用於病毒性疾病之療法「無反應性」或「難治性」之個體。在此情形下，術語「無反應性（non-responsive）」及「難治性（refractory）」係指個體對療法之反應在臨床上不足以緩解與病毒感染相關之一或多個症狀。在本文所述之方法的一個態樣中，有需要之個體為患有由冠狀病毒引起之病毒性疾病的個體，該個體難以用標準療法治療。

「個體（subject）」包括哺乳動物。哺乳動物可為例如任何哺乳動物，例如人類、靈長類動物、小鼠、大鼠、狗、貓、牛、馬、山羊、駱駝、綿羊或豬。較佳地，哺乳動物為人類。術語「患者（patient）」係指人類個體。

如本文所用，「治療（treatment/treating/treat）」描述出於對抗病毒性疾病之目的而對患者之管理及護理，且包括單獨或與PD-L1拮抗劑及/或PD-L2拮抗劑及/或PD-1拮抗劑組合投予PIKfyve抑制劑，較佳阿吡莫德，以緩解病毒性疾病之症狀或併發症。

如本文所用，「預防（prevention/preventing/prevent）」描述減少或消除病毒性疾病之症狀或併發症的發作，包括單獨或與PD-L1拮抗劑及/或PD-L2拮抗劑及/或PD-1拮抗劑組合投予PIKfyve抑制劑，較佳阿吡莫德組成物，以減少病毒性疾病之症狀的發作、發展或復發。

本發明亦提供包含組合療法之方法。如本文所用，「組合療法（combination therapy）」或「協同療法（co-therapy）」包括單獨或與PD-L1、PD-L2或PD-1之拮抗劑組合投予治療有效量之PIKfyve抑制劑，較佳阿吡莫德，作為特定治療方案之一部分，意欲由方案中活性劑之共同作用提供有益的效應。

「組合療法」不意欲涵蓋作為分開的單藥療法方案之一部分投予兩種或更多種治療化合物，其偶然及任意地產生非預期或預測的有益效應。

因此，本發明提供在用於治療病毒性疾病之抗病毒方案中使用包含PIKfyve抑制劑（較佳阿吡莫德）單獨或與PD-L1、PD-L2或PD-1之拮抗劑組合之組合療法治療個體之病毒性疾病或病毒感染（術語「病毒性疾病（viral disease）」及「病毒感染（viral infection）」在本文中可互換使用）的方法。

在具體實例中，組合療法可包含與抗病毒劑組合投予之PIKfyve抑制劑。在一些具體實例中，抗病毒劑係選自抗病毒疫苗、核苷酸類似物、細胞介素（例如干擾素）、免疫球蛋白及其組合。在具體實例中，抗病毒劑係選自以下者中之一或多者之抑制劑：NPCI、VPSII、VPSI6、VPSI8、液泡蛋白分選33同源物A（VPS33A）、液泡蛋白分選39同源物（VPS39）、液泡蛋白分選41同源物（VPS41）、BLOCISI、BLOCIS2、N-乙醯基葡糖胺-1-磷酸轉移酶、α及β次單元（GNPT-AB）、含FYVE指磷酸肌醇激酶（PIKFYVE）、ARGHGAP23、外殼蛋白複合物1（COPI）、外殼蛋白複合物II（COPII）、甘露糖-6-磷酸受體結合蛋白1（TIP47）、介白素12（IL-12或P40）、Rab GTP結合蛋白（例如Rab9）、格形蛋白、活化蛋白1（AP1）、轉接蛋白3（AP3）、囊泡可溶性N-乙基順丁烯二醯亞胺敏感因子附著蛋白受體（v-SNARE）、目標可溶性N-乙基順丁烯二醯亞胺敏感因子附著蛋白受體（t-SNARE）、ADP-核糖基化因子1（ARF）、Ras GTP酶及其組合。

可與如本文所述之PIKfyve抑制劑組合使用之抗病毒劑的其他非限制性實例包括乙醯嗎喃（Acemannan）；阿昔洛韋（Acyclovir）；阿昔洛韋鈉（Acyclovir Sodium）；阿德福韋（Adefovir）；阿洛夫定（Alovudine）；阿韋舒托（Alvircept Sudotox）；鹽酸金剛烷胺（Amantadine Hydrochloride）；阿拉諾汀（Aranotin）；阿立酮（Arildone）；甲磺酸阿替韋啶（Atevirdine Mesylate）；阿夫立定（Avridine）；氯喹；西多福韋（Cidofovir）；西潘茶鹼（Cipamfylline）；鹽酸阿糖胞苷（Cytarabine Hydrochloride）；甲磺酸地拉韋啶（Delavirdine Mesylate）；地昔洛韋（Desciclovir）；地達諾新（Didanosine）；二噁沙利（Disoxaril）；依度尿苷（Edoxudine）；恩韋拉登（Enviradene）；恩韋肟（Enviroxime）；泛昔洛韋（Famciclovir）；鹽酸法莫汀（Famotine Hydrochloride）；非西他濱（Fiacitabine）；非阿尿苷（Fialuridine）；磷利酯（Fosarilate）；膦甲酸鈉（Foscarnet Sodium）；膦乙醇鈉（Fosfonet Sodium）；更昔洛韋（Ganciclovir）；更昔洛韋鈉（Ganciclovir Sodium）；碘苷（Idoxuridine）；凱托沙（Kethoxal）；拉米夫定（lamivudine）；洛布卡韋（lobucavir）；鹽酸美莫汀（Memotine Hydrochloride）；美替沙腙（Methisazone）；奈韋拉平（Nevirapine）；噴昔洛韋（Penciclovir）；吡羅達韋（Pirodavir）；利巴韋林（Ribavirin）；瑞德西韋；鹽酸金剛乙胺（Rimantadine Hydrochloride）；甲磺酸沙喹那韋（Saquinavir Mesylate）；鹽酸索金剛胺（Somantadine Hydrochloride）；索利夫定（Sorivudine）；維司托隆（Statolon）；司他夫定（Stavudine）；鹽酸替洛隆（Tilorone Hydrochloride）；曲氟尿苷（Trifluridine）；鹽酸發昔洛韋（Valacyclovir Hydrochloride）；阿糖腺苷（Vidarabine）；磷酸阿糖腺苷（Vidarabine Phosphate）；阿糖腺苷磷酸鈉（Vidarabine Sodium Phosphate）；韋羅肟（Viroxime）；紮西他濱（Zalcitabine）；齊多夫定（Zidovudine）；及淨韋肟（Zinviroxime）。

在某些具體實例中，至少一種PIKfyve抑制劑與一或多種抗病毒劑組合提供於單一劑型中。在具體實例中，PIKfyve抑制劑為阿吡莫德。

在具體實例中，至少一種PIKfyve抑制劑與一或多種額外藥劑以分開的劑型提供。舉例而言，在組合療法之情形下，分開的劑型為合乎需要的，其中治療方案需要以不同的頻率或在不同的條件下或經由不同的途徑投予不同的治療劑。

在具體實例中，如本文所述之至少一種PIKfyve抑制劑的投予係經由適用於經口投予之口服劑型實現。在另一具體實例中，投予係藉由留置導管、泵（諸如滲透小型泵）或例如植入個體體內之持續釋放組成物。 醫藥組成物及調配物

本揭示案提供包含有效量之至少一種PIKfyve抑制劑及至少一種醫藥學上可接受之賦形劑或載劑的醫藥組成物，其中該有效量係如上文結合本發明之方法所述。

在具體實例中，PIKfyve抑制劑係選自阿吡莫德、APY0201、YM-201636及其醫藥學上可接受之鹽。在具體實例中，PIKfyve抑制劑為阿吡莫德或其醫藥學上可接受之鹽。

術語「醫藥學上可接受（pharmaceutically acceptable）」係指彼等化合物、材料、組成物、載劑及/或劑型在合理醫學判斷之範疇內，適用於與人類及動物之組織接觸而無過度毒性、刺激、過敏反應或其他問題或併發症，且與合理的益處/風險比率相稱。

「醫藥學上可接受之賦形劑（Pharmaceutically acceptable excipient）」意謂可用於製備醫藥組成物之賦形劑，其一般安全、無毒及既非生物學上亦非其他方面不合需要的，且包括獸醫用途以及人類醫藥用途可接受之賦形劑。醫藥學上可接受之賦形劑的實例包括但不限於無菌液體、水、緩衝生理食鹽水、乙醇、多元醇（例如丙三醇、丙二醇、液態聚乙二醇及其類似物）、油、清潔劑、懸浮劑、碳水化合物（例如葡萄糖、乳糖、蔗糖或葡聚糖）、抗氧化劑（例如抗壞血酸或麩胱甘肽）、螯合劑、低分子量蛋白質或其適合之混合物。

醫藥組成物可以散裝或單位劑型提供。為了投予之簡易性及劑量之均一性，以單位劑型調配醫藥組成物尤其有利。如本文所用，術語「單位劑型（dosage unit form）」係指適合作為單位劑量用於待治療之個體的物理離散單位；各單位含有經計算以產生所需治療效果之預定量的活性化合物與所需醫藥載劑結合。本發明之單位劑型的規格由以下因素決定且直接視以下因素而定：活性化合物之獨特特徵及欲達成之特定治療效果。單位劑型可為安瓿、小瓶、栓劑、糖衣藥丸、錠劑、膠囊、靜脈內輸液袋或氣溶膠吸入器上之單泵。

在治療應用中，劑量視藥劑、接受患者之年齡、體重及臨床病狀、投予療法之臨床醫師或醫師之經驗及判斷以及影響所選劑量之其他因素而變化。一般而言，劑量應為治療有效量。劑量可以mg/kg/天之量測單位提供（劑量可針對患者之體重（kg）、體表面積（m² ）及年齡（歲）進行調整）。上文描述治療病毒感染之方法中組成物之例示性劑量及給藥方案。

劑量可以單位劑型提供。舉例而言，單位劑型可包含1奈克至2毫克，或0.1毫克至2公克；或10毫克至1公克，或50毫克至500毫克，或1微克至20毫克；或1微克至10毫克；或0.1毫克至2毫克。

醫藥組成物可採用任何適合之形式（例如液體、氣溶膠、溶液、吸入劑、霧化劑、噴霧劑；或固體、粉末、軟膏、糊劑、乳膏、洗劑、凝膠、貼片及其類似物）藉由任何所需途徑（例如肺部、吸入、鼻內、經口、經頰、舌下、非經腸、皮下、靜脈內、肌肉內、腹膜內、胸膜內、鞘內、經皮、經黏膜、經直腸及其類似途徑）投予。舉例而言，本發明之醫藥組成物可呈水溶液或粉末形式用於藉由吸入或吹入（經由口或鼻）進行氣溶膠投予；呈錠劑或膠囊形式用於經口投予；呈無菌水溶液或分散液形式，適用於藉由直接注射或添加至用於靜脈內輸注之無菌輸注流體進行投予；或呈洗劑、乳膏、泡沫、貼片、懸浮液、溶液或栓劑形式用於經皮或經黏膜投予。

醫藥組成物可呈經口可接受之劑型形式，包括但不限於膠囊、錠劑、經頰形式、糖衣錠、口含錠及呈乳液、水性懸浮液、分散液或溶液形式之經口液體。膠囊可含有本發明化合物與惰性填料及/或稀釋劑，諸如醫藥學上可接受之澱粉（例如玉米、馬鈴薯或木薯澱粉）、糖、人工甜味劑、粉末狀纖維素（諸如結晶及微晶纖維素）、麵粉、明膠、膠等之混合物。在用於經口使用之錠劑的情況下，常用載劑包括乳糖及玉米澱粉。亦可添加潤滑劑，諸如硬脂酸鎂。對於以膠囊形式經口投予，有用的稀釋劑包括乳糖及乾燥玉米澱粉。當經口投予水性懸浮液及/或乳液時，本發明化合物可懸浮或溶解於油相中，與乳化劑及/或懸浮劑組合。若需要，可添加某些甜味劑及/或調味劑及/或著色劑。

醫藥組成物可呈錠劑形式。錠劑可包含單位劑量之本發明化合物以及惰性稀釋劑或載劑，諸如糖或糖醇，例如乳糖、蔗糖、山梨糖醇或甘露糖醇。錠劑可進一步包含非糖衍生之稀釋劑，諸如碳酸鈉、磷酸鈣、碳酸鈣；或纖維素或其衍生物，諸如甲基纖維素、乙基纖維素、羥丙基甲基纖維素；及澱粉，諸如玉米澱粉。錠劑可進一步包含結合劑及成粒劑（諸如聚乙烯吡咯啶酮）、崩解劑（例如可膨脹交聯聚合物，諸如交聯羧甲基纖維素）、潤滑劑（例如硬脂酸鹽）、防腐劑（例如對羥基苯甲酸酯）、抗氧化劑（例如BHT）、緩衝劑（例如磷酸鹽或檸檬酸鹽緩衝劑）及發泡劑（諸如檸檬酸鹽/碳酸氫鹽混合物）。

錠劑可為包衣錠劑。包衣可為保護膜包衣（例如蠟或清漆）或經設計以控制活性劑釋放之包衣，例如延遲釋放（在服用後的預定滯後時間之後釋放活性劑）或在胃腸道中特定位置釋放。後者可例如使用腸溶膜包衣，諸如以商標名Eudragit®出售之腸溶膜包衣來實現。

錠劑調配物可藉由習知壓縮、濕式造粒或乾式造粒方法製備，且利用醫藥學上可接受之稀釋劑、結合劑、潤滑劑、崩解劑、表面改質劑（包括界面活性劑）、懸浮劑或穩定劑，包括但不限於硬脂酸鎂、硬脂酸、滑石、月桂基硫酸鈉、微晶纖維素、羧甲基纖維素鈣、聚乙烯吡咯啶酮、明膠、海藻酸、阿拉伯膠、黃原膠、檸檬酸鈉、複合矽酸鹽、碳酸鈣、甘胺酸、糊精、蔗糖、山梨糖醇、磷酸二鈣、硫酸鈣、乳糖、高嶺土、甘露糖醇、氯化鈉、滑石、乾澱粉及粉糖。較佳表面改質劑包括非離子型及陰離子型表面改質劑。表面改質劑之代表性實例包括但不限於泊洛沙姆188（poloxamer 188）、氯化苯甲烴銨、硬脂酸鈣、鯨蠟硬脂醇、聚西托醇乳化蠟、脫水山梨糖醇酯、膠態二氧化矽、磷酸鹽、十二烷基硫酸鈉、矽酸鎂鋁及三乙醇胺。

醫藥組成物可呈硬明膠膠囊或軟明膠膠囊形式。根據此調配物，本發明化合物可呈固體、半固體或液體形式。

醫藥組成物可呈適合於非經腸投予之無菌水溶液或分散液形式。如本文所用，術語非經腸（parenteral）包括皮下、皮內、靜脈內、肌肉內、關節內、動脈內、滑膜內、胸骨內、鞘內、病灶內及顱內注射或輸注技術。

醫藥組成物可呈適合於藉由直接注射或添加至用於靜脈內輸注之無菌輸注流體投予之無菌水溶液或分散液形式，且包含含有以下者之溶劑或分散介質：水、乙醇、多元醇（例如丙三醇、丙二醇及液態聚乙二醇）、其適合之混合物或一或多種植物油。呈游離鹼或藥理學上可接受之鹽形式的本發明化合物之溶液或懸浮液可於水中適當地與界面活性劑混合來製備。下文給出適合之界面活性劑的實例。分散液亦可例如在丙三醇、液態聚乙二醇及其於油中之混合物中製備。

除了存在於調配物中之任何載劑或稀釋劑（諸如乳糖或甘露糖醇）以外，用於本發明方法之醫藥組成物可進一步包含一或多種添加劑。該一或多種添加劑可包含一或多種界面活性劑或由一或多種界面活性劑組成。界面活性劑典型地具有一或多個長脂族鏈，諸如脂肪酸，使其能夠直接插入細胞之脂質結構中以增強藥物滲透及吸收。常用於表徵界面活性劑之相對親水性及疏水性的經驗參數為親水性-親脂性平衡（「HLB」值）。HLB值較低之界面活性劑更具疏水性，且在油類中溶解度更大，而HLB值較高之界面活性劑更具親水性，且在水溶液中溶解度更大。因此，親水性界面活性劑一般視為HLB值大於約10之彼等化合物，而疏水性界面活性劑一般為HLB值小於約10之彼等化合物。然而，此等HLB值僅為指導，因為對於許多界面活性劑而言，HLB值可相差多達約8個HLB單位，視選自確定HLB值之經驗方法而定。

用於本發明之組成物中的界面活性劑為聚乙二醇（PEG）-脂肪酸及PEG-脂肪酸單酯及二酯、PEG甘油酯、醇-油轉酯化產物、聚甘油脂肪酸、丙二醇脂肪酸酯、固醇及固醇衍生物、聚乙二醇脫水山梨糖醇脂肪酸酯、聚乙二醇烷基醚、糖及其衍生物、聚乙二醇烷基酚、聚氧乙烯-聚氧丙烯（POE-POP）嵌段共聚物、脫水山梨糖醇脂肪酸酯、離子型界面活性劑、脂溶性維生素及其鹽、水溶性維生素及其兩親性衍生物、胺基酸及其鹽以及有機酸及其酯及酸酐。

本發明亦提供包含醫藥組成物之包裝及套組，其用於本發明之方法中。套組可包含一或多個選自由以下者組成之群的容器：瓶、小瓶、安瓿、泡殼包裝及注射器。套組可進一步包括治療及/或預防本發明之疾病、病況或病症的使用說明書、一或多個注射器、一或多個施用器或適合於復原本發明之醫藥組成物的無菌溶液中之一或多者。

除非另外指明，否則本文所用之所有百分比及比率均以重量計。本發明之其他特徵及優點自不同實施例顯而易見。以下實施例說明可用於實踐本發明之不同組分及方法。該等實施例不限制所主張之發明。基於本揭示案，所屬技術領域中具有通常知識者可鑑別及採用可用於實踐本發明之其他組分及方法。實施例 實施例1

吾等進行試管內抗病毒活性分析（細胞病變效應降低）以測試阿吡莫德針對冠狀病毒之作用。簡言之，Vero細胞在具有2% FBS及50 mg/mL慶大黴素（gentamicin）之MEM培養基中一式三份地用二甲磺酸阿吡莫德之8個半對數連續稀釋液（52 nM-164 μM）處理，且感染SARS或MERS。亦包括僅病毒及僅培養基之對照。將細胞在37℃ + 5% CO₂ 下培育，直至用顯微鏡觀察到細胞病變效應（3-5天）。細胞隨後用0.011%中性紅染料染色大約2小時，洗滌且接著用等體積的sorensen檸檬酸鹽緩衝液/乙醇培育30分鐘。在分光光度計上在540 nm處讀取吸光度，且將吸光度轉換為細胞對照百分比，相對於僅病毒之對照標準化，並使用回歸分析計算50%病毒抑制濃度（EC₅₀ ）。圖1顯示，獨立實驗之平均EC₅₀ 對於SARS（n=3）為3.7 μM，對於MERS（n=2）為13.8 μM。

此等結果出乎意料地表明，阿吡莫德表現出針對諸如SARS及MERS之冠狀病毒之抗病毒活性。此根據先前記錄之阿吡莫德抑制諸如伊波拉及馬堡之絲狀病毒之病毒進入的能力為出乎意料的，至少因為病毒進入所需之宿主因子在不同的病毒家族中一般不同，且甚至在單個家族內仍可能趨異，正如對冠狀病毒所顯示，不同的病毒株利用不同的宿主蛋白酶及受體（Totura等人, (2019)Expert Opin Drug Discov 14(4):397-412）。

由於靶向病毒蛋白之習知方法（如疫苗及單株抗體）針對不同的冠狀病毒病原體無效且迅速出現抗性突變（Totura等人, (2019)Expert Opin Drug Discov 14(4):397-412），因此發現廣泛作用的抗病毒藥不易鑑別或顯而易見，但對社會將具有巨大的價值。實際上，SARs病毒可耐受多個抗原決定基中之突變，該等突變不僅賦予病毒抗性，而且增強病毒之發病機制，如動物模型中所證明（Sui等人. (2014)J Virol . 88(23):13769-80）。另外，用核苷類似物靶向病毒聚合酶及校正外切核酸酶可選擇抗性病毒株之出現（Agostini等人. (2018)mBio 9(2) pii: e00221-18）。 實施例2：阿吡莫德抑制SARS-CoV-2感染

在Vero E6細胞中針對SARS-CoV-2之臨床分離株測試二甲磺酸阿吡莫德之抗病毒活性。用100 TCID50劑量感染細胞3小時，隨後移除病毒且添加各種劑量之阿吡莫德或瑞德西韋。四十八小時後，自細胞上清液提取RNA且經由定量即時PCR量測病毒轉錄本水準。基於與DMSO對照之比較來計算病毒抑制百分比。並行地，在不存在病毒之下，使用細胞計數套組8分析評定細胞活力。阿吡莫德降低病毒轉錄本水準，其中EC50為2.2 μM（圖2A），低於20 μM之半細胞毒性濃度（CC50）（圖2B），使得選擇性指數（CC50/EC50）為9.1。瑞德西韋並行操作，顯示EC50為0.7 μM（圖2C），CC50為205 μM（圖2D）。亦評定1 μM、3 μM或10 μM阿吡莫德與次優濃度0.5 μM瑞德西韋之組合。在所有測試濃度下，阿吡莫德與瑞德西韋組合顯示出比單一藥劑瑞德西韋或單一藥劑阿吡莫德顯著更大的抑制作用（圖2E）。亦測定同一實驗中病毒轉錄本相對於DMSO對照之減少倍數（圖2F）。與瑞德西韋組合相對於單一藥劑，觀察到病毒轉錄本之劑量依賴性顯著減少（6-2,180倍）。此等資料共同表明，阿吡莫德作為單一藥劑抑制SARS-CoV-2之感染，且與瑞德西韋組合顯示出高達2,180倍的病毒轉錄本減少之高度顯著活性。

無

[圖1]：阿吡莫德在試管內呈現針對SARS及MERS病毒之抗病毒活性。來自獨立實驗之中性紅細胞病變效應抗病毒分析中阿吡莫德之平均EC₅₀ （n=3 SARS，n=2 MERS）。

[圖2A-F]：阿吡莫德抑制SARS-CoV-2感染。(A)將Vero-E6細胞用SARS-CoV-2處理，3小時後用不同劑量之阿吡莫德二甲磺酸鹽處理，且48小時後分析病毒轉錄本複本數。顯示劑量反應曲線。計算出EC50為2.2 μM。(B)將Vero細胞在無病毒攻擊之情況下用不同劑量之阿吡莫德二甲磺酸鹽處理，且量測細胞毒性。計算出CC50為20 μM。(C)將Vero細胞用SARS-CoV-2感染，3小時後用不同劑量之瑞德西韋處理，且48小時後分析病毒轉錄本複本數。計算出EC50為0.7 μM。(D)將Vero細胞在無病毒攻擊之情況下用不同劑量之瑞德西韋處理，且量測細胞毒性。計算出CC50為205 μM。(E)在添加病毒後3小時，以單一藥劑及與10、3或1 μM阿吡莫德二甲磺酸鹽組合之形式測試0.5 μM之瑞德西韋。亦評定單劑量之阿吡莫德二甲磺酸鹽（10、3或1 μM）及DMSO對照。顯示抑制百分比，單一藥劑=淡灰色；與瑞德西韋組合=深灰色。用單向ANOVA、杜凱氏多重比較檢驗（Tukey's multiple comparison test）確定顯著性，且對比瑞德西韋（0.5 μM）/對比單一藥劑阿吡莫德顯示（**** P＜0.0001，***P＜0.001，**P＜0.01，*P＜0.05）。(F)標繪來自E之病毒轉錄本的減少倍數，單一藥劑=淡灰色；與瑞德西韋組合=深灰色。用杜凱氏多重比較檢驗確定對數變換資料之顯著性，且對比瑞德西韋（0.5 μM）/對比單一藥劑阿吡莫德顯示（**** P＜0.0001，***P＜0.001，**P＜0.01）。

Claims (23)

1. 一種用於治療或預防有需要之個體之冠狀病毒感染的方法，該方法包含向該個體投予包含阿吡莫德或其醫藥學上可接受之鹽的組成物。
2. 如請求項1之方法，其進一步包含投予至少一種選自以下者之額外活性劑：額外的PIKfyve抑制劑、PD-L1拮抗劑、PD-L2拮抗劑及PD-1拮抗劑。
3. 如請求項1或2之方法，其中該額外的PIKfyve抑制劑選自由APY0201、YM-201636及其醫藥學上可接受之鹽組成之群。
4. 如請求項1至3中任一項之方法，其中該阿吡莫德呈游離鹼或二甲磺酸鹽形式。
5. 如請求項1至3中任一項之方法，其中該醫藥學上可接受之鹽為選自由以下者組成之群的單鹽：氯化物、磷酸鹽、順丁烯二酸鹽、L-酒石酸鹽、反丁烯二酸鹽、DL乳酸鹽及甲磺酸鹽。
6. 如請求項1至3中任一項之方法，其中該醫藥學上可接受之鹽為選自由以下者組成之群的二鹽：甲磺酸鹽、氯化物及溴化物。
7. 如請求項1至6中任一項之方法，其中該個體為人類。
8. 如請求項1至7中任一項之方法，其進一步包含向該個體投予抗病毒劑。
9. 如請求項8之方法，其中該抗病毒劑為一或多種選自由以下者組成之群的藥劑：干擾素、瑞德西韋、亞茲索黴素、羥氯喹及氯喹。
10. 如請求項8之方法，其中該抗病毒劑為干擾素。
11. 如請求項8之方法，其中該抗病毒劑為瑞德西韋。
12. 如請求項8之方法，其中該抗病毒劑為亞茲索黴素。
13. 如請求項8之方法，其中該抗病毒劑為羥氯喹。
14. 如請求項8之方法，其中該抗病毒劑為氯喹。
15. 如請求項1至12中任一項之方法，其進一步包含投予消炎劑。
16. 如請求項13之方法，其中該消炎劑係選自托珠單抗（tocilizumab）及賽瑞單抗（sarilumab）。
17. 如請求項1至14中任一項之方法，其中該有需要之個體為具有呼吸道病毒感染症狀之個體，該等症狀包括喉嚨痛、鼻塞及/或鼻溢液、呼吸急促、呼吸困難及發熱中之一或多者。
18. 如請求項1至15中任一項之方法，其中該冠狀病毒為SARS-CoV-2。
19. 如請求項16之方法，其中該方法包含投予阿吡莫德或其醫藥學上可接受之鹽與一或多種額外治療劑之組合，該一或多種額外治療劑選自瑞德西韋、亞茲索黴素、羥氯喹、氯喹、托珠單抗及賽瑞單抗。
20. 如請求項17之方法，其中該阿吡莫德與該一或多種額外治療劑以分開的劑型投予或在相同的劑型中投予。
21. 一種醫藥包裝或套組，其在分開的容器中或在單一容器中包含單位劑量之阿吡莫德或其醫藥學上可接受之鹽，及視情況存在之單位劑量之PD-L1拮抗劑、PD-L2拮抗劑、PD-1拮抗劑及抗病毒劑中之一或多者。
22. 如請求項19之醫藥包裝或套組，其中該抗病毒劑為干擾素。
23. 一種醫藥包裝或套組，其在分開的容器中或在單一容器中包含單位劑量之阿吡莫德或其醫藥學上可接受之鹽及單位劑量之一或多種額外治療劑，該一或多種額外治療劑選自瑞德西韋、亞茲索黴素、羥氯喹、氯喹、托珠單抗及賽瑞單抗。

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