TW202136245A

TW202136245A - 新穎甲基喹唑啉酮衍生物

Info

Publication number: TW202136245A
Application number: TW109143500A
Authority: TW
Inventors: 可西摩多藍提; 大衛赫溫; 丹尼爾亨尼克; 丹尼拉庫曼亞契; 皮爾吉奧吉奧佩塔佐尼; 裘根衛奇曼
Original assignee: 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司
Priority date: 2019-12-10
Filing date: 2020-12-09
Publication date: 2021-10-01
Also published as: BR112022011123A2; CO2022008968A2; JP2022124458A; IL292161A; CN114787156A; ZA202204675B; JP2022531609A; CL2022001529A1; PE20221778A1; AU2020403443B2; EP4073065A1; AR122351A1; KR20220110554A; JP7108146B2; CR20220251A; MX2022006783A; CA3162883A1; WO2021116055A1; AU2020403443A1; US20220298119A1

Abstract

本發明提供一種具有通式 (I) 之新穎化合物

Description

新穎甲基喹唑啉酮衍生物

本發明提供一種新穎化合物、其製備方法，包含其之醫藥組成物及其作為治療活性物質的用途。本發明的化合物為 BRAF 抑制劑並具有逆理性遮斷性質 (paradox breaking property)。

本發明特別提供一種新穎的式 (I) 化合物

(I) 或其醫藥上可接受之鹽。

絲胺酸-蘇胺酸激酶的迅速加速纖維肉瘤 (Rapidly Accelerated Fibrosarcoma，RAF) 類包含三個成員 (ARAF、BRAF、RAF1)，其等構成 MAP 激酶信號傳導途徑的第一節點。儘管經過 MEK1 及 MEK2 的磷酸化，在信號傳遞中三種 RAF 同功型明顯過多，但通常僅針對 BRAF 發現頻繁的致癌活化突變。特別是，V600 被麩胺酸或離胺酸取代使該激酶高度活化，而導致 MAPK 途徑的過度刺激，而與外部刺激無關 (Cell. 2015 Jun 18; 161(7): 1681–1696)。

突變型 BRAF 為一種可靶向的致癌驅動因子，到目前為止，三種 BRAF 抑制劑 (維羅非尼 (vemurafenib)、達拉非尼 (dabrafenib) 及恩考芬尼 (encorafenib)) 已進入市場，現已顯示出對 BRAFV600E 陽性黑色素瘤的功效。然而，快速獲得耐藥性是幾乎普遍被觀察到的，且標靶治療的治療效益持續時間仍然有限。

此外，已開發的 BRAF 抑制劑在經 BRAFV600E 驅動的腫瘤中展現出抑制 MAPK 信號傳遞的不可預期的「逆理性」能力，而相同的抑制劑在 BRAF 野生型 (WT) 模型中表現出 MAPK 刺激活性 (N Engl J Med 2012; 366:271-273; and British Journal of Cancer volume 111, pages 640–645(2014))。

然後，針對 RAF 逆理性進行機理研究證實了致癌性 BRAFV600E 以其單體細胞質形式磷酸化 MEK 1/2，而 WT BRAF 及 RAF1 活化需要複雜的事件步驟，包括細胞膜移位及經活化的 RAS (KRAS、NRAS、HRAS) 所促進的同源及/或異源二聚化作用 (Nature Reviews Cancer volume 14, pages 455–467 (2014))。

如維羅非尼，達拉非尼或恩考芬尼的抑制劑與 WT BRAF 或 RAF1 單元體 (protomer) 的結合迅速誘導 RAF 同源及/或異源二聚化作用以及新形成的 RAF 二聚體的膜締合。在二聚體構形中，一個 RAF 單元體異位誘導的第二個的構形變而導致激酶活化狀態，且重要的是，形成不利於抑制劑結合的構形。結果，經藥物治療所誘導的二聚體藉由被未結合之單元體所操縱的催化作用與途徑的過度活化而促進 MEK 磷酸化。

RAF 逆理性導致兩個臨床上相關的後果：1) BRAFi 單一治療後繼發性腫瘤的生長加速 (主要是角膜癌 (keratochantoma) 和鱗狀上皮細胞癌) (N Engl J Med 2012; 366:271-273) 和 2) 在 BRAFi 單一治療及 BRAFi + MEKi 組合治療中獲得耐藥性皆是藉由遺傳驅動事件 (包括 RAS 突變、BRAF 擴增、二聚體作用之 BRAF 剪接變體的表達) 而呈現活化二聚體調控的 RAF 信號傳遞 (Nature Reviews Cancer volume 14, pages 455–467(2014))。因此，需要能夠遮斷該逆理性的 RAF 抑制劑。

此外，目前批准的正統 BRAF 抑制劑維羅非尼 (Mol. Pharmaceutics 2012, 9, 11, 3236–3245)、達拉非尼 (J Pharmacol Ex Ther 2013, 344 (3) 655-664) 及恩考芬尼 (Pharmacol Res. 2018;129:414-423) 都具有不佳的腦部通透性。這是使用這些正統 BRAF 抑制劑治療腦癌或腦部轉移的主要限制。因此，需要具有改善的腦部通透性的 BRAF 抑制劑。

本發明涉及令人驚訝的發現，即式 (I) 的 BRAF 抑制劑是更有效力及選擇性的 BRAF 抑制劑，其顯示出明顯更少的 MAPK 信號傳遞途徑逆理性活化，同時保持高效力。對照於引起 RAF 逆理性的化合物 (並可稱為逆理性誘導劑或 RAF 逆理性誘導劑)，此化合物因此可稱為逆理性遮斷劑或 RAF 逆理性遮斷劑。該式 (I) 化合物除了是逆理性遮斷劑之外，還具有非常強的腦部滲透特性，因此提供急需的替代療法來治療腦癌。

WO2012/118492 揭示參考化合物 AR-25 作為實例 25，AR-30 作為實例 30 及 AR-31 作為實例 31。

術語「醫藥上可接受之鹽」意指保有自由鹼或自由酸的生物有效性及特性，且並非在生物上或在其他方面有不利之處的該式 (I) 化合物的那些鹽類。該鹽類是以無機酸形成，例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等、特別是鹽酸，以及以有機酸形成，例如乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、馬來酸、丙二酸、琥珀酸、延胡索酸、酒石酸、檸檬酸、苄酸、肉桂酸、苦杏仁酸、甲磺酸、乙磺酸、對甲苯磺酸、水楊酸、N-乙醯半胱胺酸等。此外，這些鹽類可藉由將無機鹼或有機鹼添加至游離酸中來製備。衍生自無機鹼的鹽類包括但不限於鈉、鉀、鋰、銨、鈣、鎂鹽等。衍生自有機鹼的鹽類包括但不限於一級胺、二級胺、和三級胺的鹽類、經取代的胺，包括天然存在之經取代的胺、環胺及鹼性離子交換樹脂，例如異丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、離胺酸、精胺酸、N-乙基哌啶、哌啶、聚亞胺樹脂等。式 (I) 化合物的特定醫藥上可接受之鹽為鹽酸鹽、甲磺酸鹽及檸檬酸鹽。

該式 (I) 化合物含有一個非對稱中心，且其可以光學上純鏡像異構物、鏡像異構物的混合物 (例如外消旋物) 的形式存在。

依據嵌-英格-普洛 (Cahn-Ingold-Prelog) 序列法則，非對稱碳原子可為「R」或「S」組態。

再者，本發明的實施例為如本文所述的根據式 (I) 化合物或醫藥上可接受之鹽，特別是如本文所述的根據式 (I) 化合物，更特別是如本文所述的式 (Ia) 或 (Ib) 化合物。

本發明亦涉及該式 (I) 化合物的醫藥上可接受之鹽，其中該醫藥上可接受的鹽可選自鹽酸鹽、甲磺酸鹽及檸檬酸鹽。

再者，本發明的一個實施例為式 (Ia) 化合物。

(Ia)

再者，本發明的一個實施例為式 (Ib) 化合物。

(Ib)

如本文所述的式 (Ia) 及 (Ib) 化合物的製造方法亦為本發明之目的。

本發明的該式 (I) 化合物的製備可依序或會聚合合成途徑進行。本發明之合成示出於以下一般流程中。進行所得產物之反應及純化所需的技術為熟習技術者所知。

更詳細地，該式 (I) 化合物可藉由以下給定之方法、藉由實例中所給定之方法或藉由類似方法來製造。個別反應步驟之適當的反應條件為熟習此項技術者已知。反應順序不限於流程 1 中所示出之順序，然而，視起始物質及其相應反應性而定，反應步驟之順序可自由改變。起始原料是可商購的，或可藉由類似於下列給定之方法的方法、藉由說明書或實例中所引用的參考文獻中描述的方法或藉由技術中已知的方法製備。

流程 1

應當理解，本發明中的該式 (I) 化合物可在官能基上衍生化以提供能夠在活體內轉化回母體化合物的衍生物。

因此，本發明亦涉及製備根據本發明的化合物的方法，其包含將式 (B1) 化合物

(B1) 與式 (B2) 化合物反應，

(B2) 上述反應是在鹼存在下進行。

反應可在溶劑中方便地進行。溶劑可例如為 DMF。

反應可在鹼的存在下方便地進行，該鹼可例如為碳酸銫。

用於反應的方便條件可在約 30℃ 至約 150℃ 之間，特別是在約 50℃ 至約 130℃ 之間，更特別是在約 70℃ 至約 120℃ 之間。方便的條件為在約 100℃ 下約 1 小時至約 48 小時之間，特別是約 2 小時至約 20 小時之間。

當根據本發明的方法製造時，本發明亦涉及根據本發明的化合物。

本發明還特別涉及：

如本文所揭示之式 (I) 化合物或其醫藥上可接受之鹽，其用作治療活性物質；

醫藥組成物，其包含如本文中所述之式 (I) 化合物或其醫藥上可接受之鹽及治療上之惰性載體；

如本文所述之式 (I) 化合物或其醫藥上可接受之鹽，其用於治療或預防癌症；

如本文所述的式 (I) 化合物或其醫藥上可接受之鹽，其用於治療或預防甲狀腺癌、結腸直腸癌、腦癌、黑色素瘤或非小細胞肺癌 (non-small cell lung cancer，NSCLC)；

如本文所述的式 (I) 化合物或其醫藥上可接受之鹽於治療或預防甲狀腺癌、結腸直腸癌、腦癌、黑色素瘤或 NSCLC 的用途；

如本文所述的式 (I) 化合物或其醫藥上可接受之鹽於製備用於治療或預防甲狀腺癌、結腸直腸癌、腦癌、黑色素瘤或 NSCLC 的藥物的用途；

一種用於治療癌症的方法，該方法包含將有效量的本文所述之式 (I) 化合物或其醫藥上可接受之鹽投予有此需要之患者；及

一種治療或預防甲狀腺癌、結腸直腸癌、腦癌、黑色素瘤或 NSCLC 的方法，該方法包含將有效量的本文所述之式 (I) 化合物或其醫藥上可接受之鹽投予有此需要之患者。

本發明某些實施例涉及如本文所述的該式 (I) 化合物或其醫藥上可接受之鹽，用於治療及/或預防性治療癌症的用途，特別是 BRAF 突變型驅動的癌症，更特別是甲狀腺癌、結腸直腸癌、腦癌、黑色素瘤或 NSCLC。

本發明某些實施例涉及如本文所述的該式 (I) 化合物或其醫藥上可接受之鹽，用於製備用於治療及/或預防性治療癌症的藥物，特別是用於 BRAF 突變型驅動的癌症，更特別地為甲狀腺癌、結腸直腸癌、腦癌、黑色素瘤或 NSCLC。

本發明某些實施例涉及一種醫藥組成物，其包含如本文中所述之該式 (I) 化合物，或其醫藥上可接受之鹽，以及醫藥上可接受之賦形劑。

本發明某些實施例涉及用於治療及/或預防性治療癌症的方法，特別是對於 BRAF 突變型驅動的癌症，更特別地是甲狀腺癌、結腸直腸癌、腦癌、黑色素瘤或非小細胞肺癌 (NSCLC)，其藉由將有效量的該式 (I) 化合物或其醫藥上可接受之鹽投予有此需要之患者。

本發明某些實施例涉及如本文所述之該式 (I) 化合物或其醫藥上可接受之鹽，其用作治療及/或預防性治療罹患 BRAF 突變型驅動的癌症病患的藥物，特別是罹患甲狀腺癌、結腸直腸癌、腦癌、黑色素瘤或 NSCLC，包含確定在該病患中的 BRAF 突變狀態，然後投予該病患如本文所述之式 (I) 化合物或其醫藥上可接受之鹽。

本發明的某些實施例涉及如本文所述的該式 (I) 化合物，或其醫藥上可接受之鹽，其用作治療及/或預防腦部轉移的藥物。

此外，在適用的情況下，本發明包括該式 (I) 化合物在其對應的氘化形式下所有取代物。

此外，在適用的情況下，本發明包括該式 (I) 化合物的其對應的氚化形式下所有取代物。

本發明某些實施例關於本文所述之該式 (I) 化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中至少一個取代基包含至少一個放射性同位素。放射性同位素的具體實例為² H、³ H、¹³ C、¹⁴ C 及¹⁸ F。

此外，本發明包括該式 (I) 化合物的所有光學異構物，即非鏡像異構物、非鏡像異構混合物、外消旋混合物、所有其對應的鏡像異構物及/或互變異構物及其等在適用之處的溶劑化物。

如果需要，可分離本發明化合物的外消旋混合物，從而分離出各別的鏡像異構物。可藉由本技術領域所知的方法進行分離，例如將化合物的外消旋混合物與鏡像異構性純的化合物偶合以形成非鏡像異構混合物，然後藉由標準方法，例如分化結晶作用或層析法分離各別的非鏡像異構物。

在提供光學上純的鏡像異構物的實施例中，光學上純的鏡像異構物意指化合物包含＞所需異構物重量之 90%，特別是＞所需異構物重量之 95%，或更特別是＞所需異構物重量之 99%，該重量百分比基於化合物的異構體的總重量。手性純的或手性富集的化合物可藉由手性選擇性合成或藉由鏡像異構物分離來製備。鏡像異構物分離可在最終產物上或在適當之中間體上進行。

本發明的另一實施例提供含有本發明化合物及治療惰性載體、稀釋劑或賦形劑的醫藥組成物或藥物，以及使用本發明化合物製備此類組成物及藥物的方法。在一個實例中，可藉由在周圍溫度下於適當 pH 及在所需的純度，將該式 (I) 化合物與生理上可接受的載體 (即在用於蓋倫投予形式的劑量及濃度下對接受者無毒的載體) 混合來配製。調配物的 pH 主要取決於化合物的具體的用途及濃度，但較佳範圍為約 pH 3 至約 pH 8。在一個實例中，式 (I) 化合物在 pH 5 的乙酸鹽緩衝液中調配。在另一實施例中，該式 (I) 化合物是無菌的。該化合物可例如以固體或非晶質組成物、凍乾製劑或水溶液形式存儲。

以與優良醫學實務一致的方式調配、給藥及投予組成物。在此情況下考慮的因素包括正在治療的特定病症、正在治療的特定哺乳動物、個體病患的臨床症狀、疾病的原因、藥劑的遞送部位、投予方法、投予時間表及其他醫學從業人員已知的因素。

再者，當根據所述的任何一種方法製造時，本發明的實施例為如本文所述的該式 (I) 化合物。

測定程序

材料

補充有 L-麩醯胺的 DMEM 無酚紅培養基購自 (Thermo Fisher Scientific)。胎牛血清 (FBS) 購自 VWR。高級 ERK 磷酸-T202/Y204 套組-10,000 測試購自 Cisbio cat# 64AERPEH。A375 及 HCT116 細胞最初是從 ATCC 獲得，並由 Roche 寄存庫存儲。384-孔微量多孔盤購自 Greiner Bio-One，384-孔 (帶有 Lid，HiBase，低容量 cat 784-080)。

在 A375 或 HCT116 細胞中用於 P-ERK 確定的 HTRF 測定法

A375 是表現 V600E 突變的 BRAF 的細胞癌模型，而 HCT116 是表現 WT BRAF 的細胞癌模型。第一代 BRAF 抑制劑，例如達拉非尼對腫瘤細胞誘導出逆理性作用，因為其等抑制 V600E 突變的 BRAF 細胞 (例如 A375) 的生長，而其等卻活化 WT BRAF 細胞 (例如 HCT 116) 的生長。以下報導 ERK 1,2 磷酸化 (MAPK 途徑之磷酸化級聯的末端成員) 作為 MAPK 途徑活化狀態的主要讀數。在測定之前，將 A375 及 HCT116 細胞株維持在補充有 10% 胎牛血清 (FBS) 的 DMEM 無酚紅培養基中。化合物處理後，藉由測量 FRET 螢光信號來測定 P-ERK 水平，該信號是由上述套組 (Cisbio cat# 64AERPEH) 中提供的二種抗體在 Thr202/Tyr204 處磷酸化時選擇性結合在 ERK 蛋白上所引起的。簡而言之，將含 8,000 個細胞/孔之 12 µl 培養基/孔接種於 384 孔板中，並置於培養箱 (37°C，5% 的 CO2 濕潤的空氣) 中隔夜，次日，將平盤以一式兩份的測試化合物、達拉非尼及 PLX8394 (後兩者作為對照) 於下列最終藥物濃度處理：10µM-3µM-1µM-0.3µM-0.1µM-0.03µM-0.01µM-0.003µM-0.001µM，所有孔均進行 DMSO 歸一化，藥物孵育1小時。然後，將套組所附的 4µl 4X溶解緩衝液添加至孔中，然後將平盤離心 30 秒 (300 rcf)，並在室溫下於平板振盪器上孵育 1 小時。

孵育結束時，添加 4µL/孔的高級 P-ERK 抗體溶液 (根據製造商的說明書製備)，然後將 4µL/孔的穴狀化合物 (criptate) P-ERK 抗體溶液 (根據製造商的說明書製備) (Cisbio cat# 64AERPEH) 添加至測試孔中。

為了獲得適當的數據歸一化對照，下表中所報告的未經藥物處理的孔總是包含在每個平盤中 (根據製造商的說明書)：

p-ERK HTRF 孔組成物 (µl)：

陰性對照	陽性對照	中性對照	cpd	空白試樣
-	-	12	12	12	細胞
12	-	-	-	-	培養基
-	-	-	＜0.05	-	Cpd
-	16	-	-	-	對照溶解液 (即用)
4	-	4	4	4	4x溶解緩衝液
4	4	4	4	-	高級 p-ERK 抗體溶液
-	-	-	-	4	高級 p-ERK1/2 穴狀化合物 (Cryptate) 抗體溶液。
20	20	20	20	20	孔中總體積

然後將平盤在 300 rcf 下離心 30 秒，密封以防止蒸發，並在黑暗中於室溫下孵育隔夜。

然後分析平盤，並透過 Pherastast FSX (BMG Labtech) 儀器在 665 及 620 nM 處收集螢光釋出值。

根據公式比率 = 信號 (620 nm) / 信號 (625 nm)* 10,000 處理所獲得的螢光值，然後將空白試樣的平均值減去所有數值。

對於 A375 細胞 (BRAF 抑制)，將僅藉由 DMSO 處理的細胞所得出的比率 (減去空白試樣) 平均值視為 100%，並藉由將 10µM 達拉非尼處理的細胞所得出的比率 (減去空白試樣) 平均值視為 0%，將數據歸一化。將經歸一化的點的平均值與 S 形曲線擬合並確定 IC50。結果示出於表 1-2 及圖 1-3。

對於 HCT116 細胞 (BRAF 活化)，將僅藉由 DMSO 處理的細胞所得出的比率 (減去空白試樣) 平均值視為 0%，並藉由將達拉非尼處理的細胞在提供最高信號的濃度所得出的比率 (減去空白試樣) 平均值視為 100%，將數據歸一化。將個別的點與S形或鐘形曲線擬合，並確定相較於最大達拉非尼介導之活化的活化百分比。EC50 為達到達拉非尼所獲得之最大值活化的 50% 時的濃度。結果示出於表 2 及圖 4-6。

若活化未達到達拉非尼所達到的最大值的 50%，則 EC50 計算並不適用。

藉由評估測試化合物在測試劑量範圍內誘導其之最大 P-ERK 信號的百分比 (以達拉非尼所產生的最高信號的百分比方式)，確定達拉非尼產生最大逆理性誘導作用的百分比。

實施例	Kd (µM)
	BRAF	BRAF V600E	CRAF	CSK	LCK
1	0.0006	0.0012	0.0017	23.3	40
2	0.0013	0.0009	0.0012	9.16	20.12
AR-25	0.0001	0.0002	0.0003	＞40	＞40
AR-30	0.1740	0.5040	0.8220	8.007	10.352
AR-31	0.0459	0.1190	0.1903	1.208	11.975

表 1 ：當與 AR-30 及 AR-31 相比，實例 1 及實例 2 對 RAF 激酶具有高親和力，且對 C 端 Src 激酶 (C-terminal Src kinase，CSK) 及淋巴細胞特異性酪胺酸蛋白激酶 (lymphocyte-specific tyrosine protein kinase，LCK) 具有高選擇性。

實施例	pERK IC₅₀ (nM)	p-ERK EC50 (nM) 化合物誘導 p-ERK 活化是達拉非尼所誘導之活化的 50% 時的濃度 (nM) ( 達拉非尼為陽性對照逆理性誘導劑 )	達拉非尼的最大逆理性誘導效果的百分比
	A375	HCT-116
1	6.9	不適用	43.65%
2	10.6	不適用	46.2%
AR-25	1.1	9.6	103%
AR-30	406	＞ 1000	59%
AR-31	311	＞ 1000	51.2%

表 2: 實例 1 及實例 2 在表達 WT BRAF 的 HCT-116 癌細胞中遮斷逆理性 RAF 活化。當與達拉非尼或 AR-25 相比，最大逆理性誘導效果降低到小於 50%。

CSF K_p,uu 測量用於評估腦部滲透能力

CSFK _p,uu 是腦脊液 (CSF) 中濃度：未結合血漿暴露的比率，而K _p,uu 值 ≥1 表示良好的腦部滲透。對於化合物實例 1，小鼠及大鼠的單一口服劑量研究藉由 LC-MS/MS 測量連續的血漿及 CSF 濃度 (至給藥後 24 小時)，以計算 CSFK _p,uu 。對於大鼠及迷你豬的多次口服劑量研究，藉由 LC-MS/MS 測量接近 Tmax (最後一次給藥後 3 小時) 的血漿及 CSF 濃度，並用於計算 CSFK _p,uu 。

	值	類
分子量 / 極性表面積	461 / 99	-
BCS ( 生物製藥分類系統 )	-	2
P-gp 頂端外流率*	1.5	低
血漿蛋白結合 (%) ( 小鼠、大鼠、迷你豬、猴、人類 )	≥ 99	很高
小鼠 CSF K_p,uu _{單次口服劑量} _{10 mg/kg}	≥ 1	高
大鼠 CSF K_p,uu _{單次口服劑量} _{20 mg/kg}	≥ 1	高
大鼠 CSF K_p,uu _{300 mg/kg/} _天 ₍₂ _週 _DRF) _{多次口服劑量}	≥ 1	高
迷你豬 CSF K_p,uu _{300 mg/kg/} _天 ₍₂ _週 _DRF) _{多次口服劑量}	≥ 1	高

* 以 MDR1 轉染的 LLC-PK1 細胞株，在存在 / 不存在 P-gp 抑制劑的情況下進行評估

表 3: 化合物實例 1 的理化及 ADME 性質。CSFK _p,uu 值 ≥1 表示實例 1 的腦部滲透力優異。此外，在單一劑量大鼠藥物動力學 (PK) 研究中，在給藥後 24 小時內評估血漿與 CSF 的時間關係，並表明其在 CSF 中的快速且廣泛的分佈。

顱內植入的 A375-Luc

將組成性表達螢光素酶的 A375 BRAF V600E 癌細胞顱內注射至免疫功能低下的小鼠內。從顱內注射的第 7 天開始以化合物實例 1 治療，並持續 2 週。不同組別分別每日口服投予 1mg/kg、5mg/kg 及 20mg/kg 的實例 1。結果示出於圖 8。

該式 (I) 化合物及其醫藥上可接受之鹽可用作藥物 (例如以醫藥製劑的形式)。醫藥製劑可經內部投予，例如經口 (例如以錠劑、包衣錠、糖衣錠、硬質及軟質明膠膠囊、溶液、乳劑或懸浮液的形式)、經鼻 (例如以鼻噴霧劑的形式)、經直腸 (例如以栓劑的形式) 或經眼部局部 (例如以溶液、軟膏、凝膠或水溶性聚合物插入物的形式)。然而，投予亦可以腸胃道外實行，諸如肌肉內、靜脈內或眼內 (例如以無菌注射溶液的形式)。

該式 (I) 化合物或其醫藥上可接受之鹽可與醫藥上惰性、無機或有機佐劑一起加工，用於製造錠劑、包衣錠、糖衣錠、硬質明膠膠囊、注射溶液或局部調配物，可將乳糖、玉米澱粉或其衍生物、滑石、硬脂酸或其鹽類等用作例如錠劑、糖衣錠及硬質明膠膠囊的此類佐劑。

軟質明膠膠囊的適當佐劑為例如植物油、蠟、脂肪、半固體物質及液體多元醇等。

用於產生溶液及糖漿之適合佐劑為例如水、多元醇、蔗糖、轉化糖、葡萄糖等。

注射溶液之適合佐劑為例如水、醇類、多元醇、甘油、植物油等。

栓劑之適合佐劑為例如天然或硬化油、蠟、脂肪、半固體或液體多元醇等。

用於局部眼用調配物的適當佐劑為例如環糊精、甘露醇或本領域已知的許多其他載體及賦形劑。

此外，醫藥製劑可含有防腐劑、增溶劑、增黏物質、穩定劑、濕潤劑、乳化劑、甜味劑、著色劑、調味劑、用於改變滲透壓之鹽、緩衝劑、掩蔽劑或抗氧化劑。其亦可還含有其他治療上有價值之物質。

劑量可在較寬界限內改變且當然將適合各特定情況下之個別要求。一般而言，在口服投予的情況下，每公斤體重約 0.1 mg 至 20 mg，較佳為每公斤體重約 0.5 mg 至 4 mg (例如每人約 300 mg) 的每日劑量較佳分成 1 至 3 個個別劑量 (其可由例如相同量組成) 應該是適當的。在局部投予的情況下，調配物可包含按藥物重量之 0.001% 至 15%，且可在 0.1 至 25 mg 之間的所需劑量可每天或每週單一劑量投予，或每天多劑量 (2 至 4 劑量) 投予，或每週多劑量投予，然而，顯而易見的是，當表明有指示時，可以超過本文給定的上限或下限。

醫藥組成物

該式 (I) 化合物及其醫藥上可接受之鹽可用作治療活性物質，例如，以醫藥製劑的形式。醫藥製劑可經口投予，例如以錠劑、包衣錠、糖衣錠、硬質及軟質明膠膠囊、溶液、乳劑或混懸劑的形式。然而，投予亦可經直腸實行，例如以栓劑的形式，或經非胃腸道實行，例如以注射溶液的形式。

該式 (I) 化合物及其醫藥上可接受之鹽可與醫藥上惰性、無機或有機載體一起加工用於製造醫藥製劑。可將乳糖、玉米澱粉或其衍生物、滑石、硬脂酸或其鹽等用作例如錠劑、包衣錠、糖衣錠及硬質明膠膠囊的此類載體。軟質明膠膠囊的適當載體為例如植物油、蠟、脂肪、半固體及液體多元醇等。然而，依據活性物質的性質，在軟質明膠膠囊的情況下，通常不需要載體。用於產生溶液及糖漿的適當載體為例如水、多元醇、甘油、植物油等。用於栓劑的適當載體為例如天然或硬化油、蠟、脂肪、半液體或液體多元醇等。

此外，醫藥製劑可包含醫藥上可接受之輔助物質，例如防腐劑、增溶劑、穩定劑、濕潤劑、乳化劑、甜味劑、著色劑、調味劑、用於改變滲透壓的鹽類、緩沖劑、掩蓋劑或抗氧化劑。其亦可還含有其他治療上有價值之物質。

本發明亦提供包含該式 (I) 化合物或其醫藥上可接受之鹽及治療惰性載體的藥物，以及其等之製造方法，包括促使一種或多種式 (I) 化合物及/或其醫藥上可接受之鹽，如果需要的話，與一種或多種其他有治療價值的物質和一種或多種治療惰性載體一起形成蓋倫 (galenical) 投予形式。

劑量可在較寬界限內改變，且當然在各種情況下都必需根據個人需要調整。在口服投予的情況下，成人的劑量可在每天約 0.01 mg 至約 1,000 mg 的式 (I) 化合物或其對應量的醫藥上可接受之鹽之間改變。每日劑量可以單一劑量或均分劑量投予，且此外，當發現有指示時，亦可超過上限。

以下實例舉例說明本發明而非限制本發明，而僅作為其代表。醫藥製劑方便地含有約 1-500 mg，特別是 1-100 mg 的式 (I) 化合物。根據本發明的組成物的實例為：

實例 A

以下組成物的錠劑以通常方法製造：

成分	mg/錠劑
5	25	100	500
一種式 (I) 化合物	5	25	100	500
無水乳糖 DTG	125	105	30	150
Sta-Rx 1500	6	6	6	60
微晶纖維素	30	30	30	450
硬脂酸鎂	1	1	1	1
總計	167	167	167	831

表 4：可能的錠劑組成物

製造程序 1. 混合成分 1、成分2、成分3 及成分 4，並以純水製粒。 2. 在 50℃ 乾燥顆粒。 3. 使顆粒通過適當的研磨設備。 4. 加入成分 5 並混合 3 分鐘；在合適的加壓機上壓縮。

實例 B-1

製造以下組成物的膠囊：

成分	mg/膠囊
5	25	100	500
一種式 (I) 化合物	5	25	100	500
含水乳糖	159	123	148	-
玉米澱粉	25	35	40	70
滑石	10	15	10	25
硬脂酸鎂	1	2	2	5
總計	200	200	300	600

表 5：可能的膠囊成分組成物

製造程序 1. 在適當的混合器中將成分 1、成分2 及成分3 混合 30 分鐘。 2. 添加成分 4 及成分5，並混合 3 分鐘。 3. 充填入適當膠囊中。

將該式 (I) 化合物、乳糖及玉米澱粉首先在混合器中混合，然後在粉碎機中混合。將混合物送回混合器；添加滑石於其中並充分混合。將混合物藉由機器充填至適合的膠囊中，例如硬質明膠膠囊。

實例 B-2

製造以下組成物的軟質明膠膠囊：

成分	mg/膠囊
一種式 (I) 化合物	5
黃蠟	8
氫化大豆油	8
部分氫化植物油	34
大豆油	110
總計	165

表 6：可能的軟質明膠膠囊成分組成物

成分	mg/膠囊
明膠	75
甘油 85%	32
Karion 83	8 (乾物質)
二氧化鈦	0.4
氧化鐵黃	1.1
總計	116.5

表 7：可能的軟質明膠膠囊組成物

製造程序

將該式 (I) 化合物溶於其他成分的溫熱熔融物中，並將混合物充填至適當大小的軟質明膠膠囊中。根據通常程序處理經充填的軟質明膠膠囊。

實例 C

製造以下組成物的栓劑：

成分	mg/栓劑
一種式 (I) 化合物	15
栓劑質量	1285
總計	1300

表 8：可能的栓劑組成物

製造程序

將栓劑在玻璃或鋼製容器中融化，充分混合並冷卻至 45°C，隨後，添加經細粉化的式 (I) 化合物並攪拌直至其完全分散。將混合物倒入適當大小的栓劑模具中，待冷，然後將栓劑從模具中移出並個別包裝於蠟紙或金屬箔中。

實例 D

製造以下組成物的注射溶液：

成分	mg/注射溶液。
一種式 (I) 化合物	3
聚乙二醇 400	150
乙酸	q.s. ad pH 5.0
注射溶液用水	ad 1.0 ml

表 9：可能的注射溶液組成物

製造程序

將該式 (I) 化合物溶於聚乙二醇 400 及注射用水 (部分) 的混合物中。用乙酸將 pH 調整至 5.0。藉由添加剩餘量的水將體積調整至 1.0 ml。過濾溶液，使用適當的增量充填至小瓶中並滅菌。

實例 E

製造以下組成物的小藥囊 (sachet)：

成分	mg/小藥囊
一種式 (I) 化合物	50
乳糖，細粉	1015
微晶纖維素 (AVICEL PH 102)	1400
羧甲基纖維素鈉	14
聚乙烯吡咯啶酮 K 30	10
硬脂酸鎂	10
調味添加劑	1
總計	2500

表 10：可能的小藥囊組成物

製造程序

將該式 (I) 化合物與乳糖、微晶纖維素及羧甲基纖維素鈉混合，並與含聚乙烯吡咯啶酮之水的混合物製粒。將顆粒與硬脂酸鎂及調味添加劑混合，並充填入小藥囊中。

實例

縮寫 DCM = 二氯甲烷；DMF = 二甲基甲醯胺；DMSO = 二甲基亞碸；DRF = 劑量範圍尋找；ESI = 電噴灑游離；EtOAc = 乙酸乙酯；LC-MS/MS = 液相層析-MS/MS；MeOH = 甲醇；MS = 質譜；rt = 室溫；P-gp = P-糖蛋白；SFC = 超臨界流體層析。

參考化合物 AR-25、AR-30 及 AR-31 分別根據 WO2012/118492 中實例 25、實例 30 及實例 31 中所揭示的合成方法製備。

6- 羥基 -3- 甲基喹唑啉 -4- 酮

2-胺基-5-羥基苯甲酸 (10 g，65.3 mmol，Eq：1.0) 及N -甲基甲醯胺 (30 g，29.9 mL，503 mmol，Eq：7.7) 在 145°C 加熱 21 小時 45 分鐘，然後冷卻至室溫。將反應混合物以 50 mL H₂ O 稀釋，並在室溫攪拌 20 分鐘，過濾收集所產生之沉澱物。將淺棕色固體以 20 mL 水洗滌 3 次。將固體吸收於甲苯中並蒸發至乾燥 (3 ×)。將固體在高真空下於 40℃ 真空乾燥隔夜，得到呈淺棕色固體的標題化合物 (10.3 g，89% 產率)。MS (ESI)m /z : 177.1 [M+H]⁺ 。

3,6- 二氟 -2-(3- 甲基 -4- 側氧基 - 喹唑啉 -6- 基 ) 氧基 - 苯甲腈

將碳酸銫 (3.22 g，9.79 mmol，Eq：1.15) 在室溫添加至含 6-羥基-3-甲基喹唑啉-4-酮 (1500 mg，8.51 mmol，Eq：1.0) 之N ,N -二甲基甲醯胺 (35 mL) 溶液中。將混合物在室溫攪拌 30 分鐘，然後添加 2,3,6-三氟苯甲腈 (1.47 g，1.08 ml，9.37 mmol，Eq：1.1)。1 小時後，將反應在冰上冷卻，並以水 (120 mL) 稀釋。過濾收集所產生之固體，以冰水 (100 mL) 及庚烷 (100 mL) 洗滌並真空乾燥。將固體吸收於甲苯中，並蒸發至乾燥 (3 ×)，然後真空乾燥隔夜，得到呈淺棕色固體的標題化合物 (2.58 g，97% 產率)。MS (ESI)m /z : 314.1 [M+H]+。

(3R )-3- 氟吡咯啶 -1- 磺醯胺

將 (R )-3-氟吡咯啶鹽酸鹽 (1.8 g，14.3 mmol，Eq: 1.2) 添加至含硫醯胺 (1.148 g，11.9 mmol，Eq：1.0) 及三乙胺 (2.42 g，3.33 mL，23.9 mmol，Eq：2) 之二噁烷 (10 mL) 溶液中。將反應在密封管中於 115℃ 攪拌 15.5 小時，然後冷卻至室溫並在真空中濃縮。將殘餘物以 DCM 稀釋，以矽膠蒸發至乾燥，並轉移至管柱中。藉由快速層析法純化 (40 g 二氧化矽，80% EtOAc)，得到呈白色結晶固體的標題化合物 (1.82 g，91% 產率)。MS (ESI)m /z : 169.1 [M+H]⁺ 。

(3S )-3- 氟吡咯啶 -1- 磺醯胺

將三乙胺 (304 mg，419 µl，3.01 mmol，Eq：2.0) 添加至含硫醯胺 (146 mg，1.5 mmol，Eq：1.0) 及 (S)-3-氟吡咯啶鹽酸鹽 (234 mg，1.8 mmol，Eq：1.2) 之二噁烷 (1.3 ml) 懸浮液中。將反應在密封管中於 115℃ 下攪拌 16 小時 35 分鐘，然後於真空中濃縮。將殘餘物以 MeOH 稀釋，並用矽凝膠蒸發至乾燥，並轉移至管柱中。藉由快速層析法純化 (40 g 二氧化矽，0-8% MeOH/DCM)，得到呈淺黃色固體的標題化合物 (193mg，75% 產率)。MS (ESI)m /z : 169.1 [M+H]⁺ 。

(3R )-N -[2- 氰基 -4- 氟 -3-(3- 甲基 -4- 側氧基 - 喹唑啉 -6- 基 ) 氧基 - 苯基 ]-3- 氟 - 吡咯啶 -1- 磺酰胺 ( 實例 1)

將 (R )-3-氟吡咯啶-1-磺酰胺 (1.26 g，7.51 mmol，Eq：2.1) 及碳酸銫 (2.56 g，7.87 mmol，Eq：2.2) 在氬氣壓下懸浮於乾 DMF (10.2 ml) 中。將反應在 50℃ 攪拌 30 分鐘，將反應混合物冷卻至室溫並添加含 3,6-二氟-2-((3-甲基-4-側氧基-3,4-二氫喹唑啉-6-基)氧基)芐腈 (1.12 g，3.58 mmol，Eq：1.0) 之 DMF (25.5 ml) 溶液。將反應混合物於 100℃ 攪拌 15 小時，然後在真空中濃縮。將殘餘物吸收於飽和 NH₄ Cl 水溶液 (100 mL) 及 EtOAc (100 mL) 中。分離各相，並將水層進一步以 2 × 100 mL EtOAc 萃取。合併的有機層以水 (200 mL) 及鹽水 (200 mL) 洗滌，乾燥 (Na₂ SO₄ )，過濾並在真空中濃縮。以 EtOAc (3 × 100 mL) 反萃取水層。合併的有機萃取物以鹽水 (200 mL) 洗滌，乾燥 (Na₂ SO₄ )，過濾並在真空中濃縮。將殘餘物以 DCM 及 MeOH 稀釋，並濃縮到二氧化矽上。藉由快速層析純化 (120 g，0.5-2% MeOH/DCM)，得到灰白色固體，將其與 1：1 庚烷/DCM (20 mL) 在超音波震盪中研製，然後在真空中乾燥，得到呈無色固體的標題化合物 (1.087 g，66% 產率)。MS (ESI)m /z : 426.2 [M+H]⁺ 。手性 SFC：RT = 4.594 分鐘 [Chiralpak IC 管柱，4.6 × 250 mm，粒徑 5 µm (Daicel)；在 8 分鐘內含 0.2% NHEt₂ 之 20 - 40% MeOH 的梯度；流速：2.5 mL/min；140 巴的反壓]。

(3S )-N -[2- 氰基 -4- 氟 -3-(3- 甲基 -4- 側氧基 - 喹唑啉 -6- 基 ) 氧基 - 苯基 ]-3- 氟 - 吡咯烷 -1- 磺酰胺 ( 實例 2)

將 (S )-3-氟吡咯啶-1-磺醯胺 (181 mg，1.08 mmol，Eq：2.1) 溶於 DMF (1.6 ml) 中。在室溫下將碳酸銫 (368 mg，1.13 mmol，Eq：2.2) 加入，並將反應混合物在 50℃ 攪拌 30 分鐘。將反應混合物冷卻至室溫並將 3,6-二氟-2-((3-甲基-4-側氧基-3,4-二氫喹唑啉-6-基)氧基)芐腈溶液 (160.8 mg，513 µmol，Eq：1.0) 之 DMF (4 ml) 溶液。將反應混合物在 105℃ 攪拌 2 小時 50 分鐘，然後在真空中濃縮。將殘餘物吸收於 DCM 中，並以飽和 NH₄ Cl 水溶液洗滌。水溶液層以 DCM 反萃取兩次。合併的有機層在 Na₂ SO₄ 上乾燥，過濾並蒸發。將殘餘物 (棕色油狀物) 以 DCM 稀釋並轉移至管柱中。藉由快速層析純化 (80 g，含 0~100% EtOAc 之 DCM)，得到固體，將其藉由 SFC 進一步純化，得到呈淺黃色固體的標題化合物 (119 mg，50% 產率)。MS (ESI)m /z : 426.2 [M+H]⁺ 。手性 SFC：RT = 4.411 分鐘 [Chiralpak IC 管柱，4.6 × 250 mm，粒徑 5 µm (Daicel)；在 8 分鐘內含 0.2% NHEt₂ 之 20 - 40% MeOH 的梯度；流速：2.5 mL/min；140 巴的反壓]。

圖 1 揭示在 BRAF 突變型細胞株 A375 中藉由實例 1 所誘導的 P-ERK 抑制曲線。圖 2 揭示在 BRAF 突變型細胞株 A375 中藉由實例 2 所誘導的 P-ERK 抑制曲線。圖 3 揭示在 BRAF 突變型細胞株 A375 中，藉由參考化合物 AR-25 所誘導的 P-ERK 抑制曲線。圖 4 揭示在 WT BRAF 細胞株 HCT-116 中，藉由實例 1 所誘導的 P-ERK 活化曲線。為了進行比較，亦顯示以對照化合物達拉非尼 (逆理性誘導劑) 及 PLX-8394 (逆理性遮斷劑) 處理所產生的數據。圖 5 揭示在 WT BRAF 細胞株 HCT-116 中，藉由實例 2 所誘導的 P-ERK 活化曲線。為了進行比較，亦顯示以對照化合物達拉非尼 (逆理性誘導劑) 及 PLX-8394 (逆理性遮斷劑) 處理所產生的數據。圖 6 揭示在 WT BRAF 細胞株 HCT-116 中，經參考化合物 AR-25 所誘導的 P-ERK 活化曲線。為了進行比較，亦顯示以對照化合物達拉非尼 (逆理性誘導劑) 及 PLX-8394 (逆理性遮斷劑) 處理所產生的數據。圖 7 描繪由第一代 BRAF 抑制劑所誘導的 MAP 激酶途徑的逆理性活化。BRAF 是 MAP 激酶信號傳導途徑第一節點的一部分，而突變型 BRAF 是致癌驅動因子 (左)。在 BRAF V600E/K 突變的腫瘤中，BRAF 信號作為單體，這種情況是蛋白質被第一代 BRAF 抑制劑抑制 (中)。第一代 BRAF 抑制劑促進 BRAF WT 同源及/或異源二聚化作用 (上，右)。在這種情況下，未被 BRAF 抑制劑佔據的單元體獲得了不利於抑制劑結合的構形 (中，右)。在這種情況下，以第一代 BRAF 抑制劑治療的結果是在 BRAF WT 細胞中逆理性地增加 MAPK 活化和隨之而來的腫瘤生長 (底部，右)。圖 8 揭示化合物實例 1 從每天 1 mg/kg 開始的引發劑量依賴性抗腫瘤活性，證明有效的腦部通透性介導的功效。

Claims

一種式(I)化合物
(I)，或其醫藥上可接受之鹽。
如請求項1之化合物，其中該化合物為該式(I)化合物。
如請求項1之化合物，其中該化合物為式(Ia)化合物。
(Ia)
如請求項1之化合物，其中該化合物為式(Ib)化合物。
(Ib)
一種製備如請求項1至4中任一項之化合物之方法，其包含使式(B1)化合物
(B1) 與式(B2)化合物，
(B2) 在鹼存在下進行反應。
如請求項1至4中任一項之化合物，其係根據如請求項5之方法製造。
如請求項1至4中任一項之化合物，其係用作治療活性物質。
一種醫藥組成物，其包含如請求項1至4中任一項之化合物及治療惰性載體。
如請求項1至4中任一項之化合物，其係用於治療或預防癌症。
如請求項1至4中任一項之化合物，其係用於治療或預防甲狀腺癌、結腸直腸癌、腦癌、黑色素瘤或NSCLC。
一種如請求項1至4中任一項之化合物用於製備供治療或預防甲狀腺癌、結腸直腸癌、腦癌、黑色素瘤或NSCLC之藥物的用途。
一種如請求項1至4中任一項之化合物用於製備供治療癌症之藥物的用途。