RU2818677C2

RU2818677C2 - Ингибитор egfr для лечения рака

Info

Publication number: RU2818677C2
Application number: RU2021137929A
Authority: RU
Inventors: Козимо Доленте; Анник ГЁРГЛЕР; Дэвид ХЬЮИНГС; Георг Ешке; Бернд КУН; Ивонн Элис НЕЙДЖЕЛ; Ульрике Обст Зандер; Антонио Риччи; Даниэль Рюхер; Сандра СТЕЙНЕР
Original assignee: Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг
Priority date: 2019-06-21
Filing date: 2020-06-19
Publication date: 2024-05-03

Abstract

Изобретение относится к соединению формулы (I) или его фармацевтически приемлемым солям. Изобретение также относится к фармацевтической композиции, ингибирующей рецептор эпидермального фактора роста (EGFR), на основе указанного соединения. Технический результат – получено новое соединение и фармацевтическая композиция на его основе, которые могут найти применение в медицине для лечения рака, в частности немелкоклеточного рака легкого. 3 н. и 4 з.п. ф-лы, 1 табл., 1 пр.

Description

В настоящем изобретении предложено соединение, которое является селективным аллостерическим ингибитором EGFR, содержащего мутации T790M/L858R, T790M/L858R/C797S, L858R, L858R/C797S, его изготовление, содержащие его фармацевтические композиции и его применение в качестве терапевтически активного вещества.

В настоящем изобретении предложено новое соединение формулы (I)

(I)

или фармацевтически приемлемые соли.

Рецепторные тирозинкиназы семейства HER являются медиаторами клеточного роста, дифференцировки и выживания. Это семейство рецепторов включает четыре различных представителя, а именно рецептор эпидермального фактора роста (EGFR, ErbB1 или HER1), HER2 (ErbB2), HER3 (ErbB3) и HER4 (ErbB4). После связывания лиганда рецепторы образуют гомо- и гетеродимеры, а последующая активация характерной активности тирозинкиназы приводит к автофосфорилированию рецепторов и активации последующих сигнальных молекул (Yarden, Y., Sliwkowski, MX. Untangling the ErbB signalling network. Nature Review Mol Cell Biol. 2001 Feb; 2(2): 127-37). Нарушение регуляции EGFR за счет сверхэкспрессии или мутации было связано с многими типами рака человека, включая колоректальный рак, рак поджелудочной железы, глиомы, рак головы и шеи и легкого, в частности немелкоклеточный рак легкого (НМРЛ), и за это время было разработано несколько агентов, нацеленных на EGFR (Ciardiello, F., and Tortora, G. (2008). EGFR antagonists in cancer treatment. The New England journal of medicine 358, 1160-1174). Эрлотиниб (Тарцева®), обратимый ингибитор тирозинкиназы EGFR, был одобрен во многих странах для лечения рецидивного НМРЛ.

Впечатляющую активность ингибиторов тирозинкиназы EGFR в качестве отдельных агентов наблюдают в подгруппе пациентов с НМРЛ, в опухолях которых присутствуют соматические мутации киназного домена, тогда как клиническая польза для пациентов с EGFR дикого типа сильно снижена (Paez, J. et al. (2004). EGFR mutations in lung cancer: correlation with clinical response to gefitinib therapy. Science (New York, NY 304, 1497-1500). Наиболее распространенными соматическими мутациями EGFR являются делеции в экзоне 19 с наиболее преобладающей мутацией дельта 746-750 и аминокислотные замены в экзоне 21 с наиболее часто встречающейся мутацией L858R (Sharma SV, Bell DW, Settleman J, Haber DA. Epidermal growth factor receptor mutations in lung cancer. Nat Rev Cancer. 2007 Mar; 7(3): 169-81).

Часто возникает резистентность к лечению, обычно вследствие вторичной мутации T790M в АТФ-сайте рецептора. Некоторые разработанные селективные к мутациям необратимые ингибиторы являются высокоактивными против мутанта T790M, но их эффективность может быть снижена за счет приобретенной мутации C797S, т. е. остатка цистеина, с которым они образуют ключевую ковалентную связь (Thress, K. S. et al. Acquired EGFR C797S mutation mediates resistance to AZD9291 in non-small cell lung cancer harboring EGFR T790M. Nat. Med. 21, 560-562 (2015)). В работе Wang дополнительно сообщалось, что мутация C797S является основным механизмом резистентности к нацеленным на T790M ингибиторам EGFR (Wang et al. EGFR C797S mutation mediates resistance to third-generation inhibitors in T790M-positive non-small cell lung cancer, J Hematol Oncol. 2016; 9: 59). Дополнительные мутации, которые вызывают резистентность к осимертинибу, описаны у Yang, например L718Q (Yang et al, Investigating Novel Resistance Mechanisms to Third-Generation EGFR Tyrosine Kinase Inhibitor Osimertinib in Non-Small Cell Lung Cancer Patients, Clinical Cancer Research, DOI: 10.1158/1078-0432.CCR-17-2310). В Lu et al. (Targeting EGFR^L858R/T790M and EGFR^{L858R/T790M/C797S} resistance mutations in NSCLC: Current developments in medicinal chemistry, Med Res Rev 2018; 1-32) приведена обзорная статья по нацеливанию на мутации резистентности EGFR^L858R/T790M и EGFR^{L858R/T790M/C797S} при лечении НМРЛ.

Поскольку наиболее доступные ингибиторы тирозинкиназы EGFR нацелены на АТФ-сайт киназы, существует потребность в новых терапевтических агентах, которые действуют иным образом, например, за счет нацеливания на резистентные к лекарственным средствам мутантные варианты EGFR.

Последние исследования позволяют предположить, что нацеливание на аллостерические сайты позволит получить селективные к мутантам ингибиторы (Jia et al. Overcoming EGFR(T790M) and EGFR(C797S) resistance with mutant-selective allosteric inhibitors, June 2016, Nature 534, 129-132).

Существует потребность в создании селективных молекул, которые специфически ингибируют EGFR, содержащий мутации T790M/L858R, T790M/L858R/C797S, L858R, L858R/C797S, в частности EGFR, содержащий мутации T790M и C797S, применимые для терапевтического и/или профилактического лечения рака.

В WO2009158369 описаны некоторые гетероциклические антибактериальные агенты. В WO2016183534 описаны некоторые гетероциклические соединения, пригодные в качестве ингибиторов EBNA1. В WO2011128279 описаны некоторые гетероциклические соединения, пригодные в качестве модуляторов mGluR5.

Термин «фармацевтически приемлемые соли» относится к тем солям, которые сохраняют биологическую эффективность и свойства свободных оснований или свободных кислот и которые не являются биологически или иным образом нежелательными. Эти соли образуются с неорганическими кислотами, такими как хлористоводородная кислота, бромистоводородная кислота, серная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота и т.п., в частности хлористоводородная кислота, и органическими кислотами, такими как уксусная кислота, пропионовая кислота, гликолевая кислота, пировиноградная кислота, щавелевая кислота, малеиновая кислота, малоновая кислота, янтарная кислота, фумаровая кислота, винная кислота, лимонная кислота, бензойная кислота, коричная кислота, миндальная кислота, метансульфоновая кислота, этансульфоновая кислота, п-толуолсульфоновая кислота, салициловая кислота, N-ацетилцистеин и т.п. Кроме того, эти соли можно получать путем добавления неорганического основания или органического основания к свободной кислоте. Соли, полученные из неорганического основания, включают, но не ограничиваются этим, соли натрия, калия, лития, аммония, кальция, магния и т.п. Соли, полученные из органических оснований, включают, но не ограничиваются этим, соли первичных, вторичных и третичных аминов, замещенных аминов, в том числе встречающихся в природе замещенных аминов, циклических аминов и основных ионообменных смол, например смол изопропиламина, триметиламина, диэтиламина, триэтиламина, трипропиламина, этаноламина, лизина, аргинина, N-этилпиперидина, пиперидина, полиимина и т. п. Конкретные фармацевтически приемлемые соли соединения формулы (I) представляют собой соли хлористоводородной кислоты, соли метансульфоновой кислоты и соли лимонной кислоты.

Сокращение мкM означает микромолярный и является эквивалентом символа μM.

Сокращение мкл означает микролитр и является эквивалентом символа μл.

Сокращение мкг означает микрограмм и является эквивалентом символа μг.

Соединение формулы (I) может содержать несколько асимметрических центров и может находиться в форме оптически чистых энантиомеров, смесей энантиомеров, таких как, например, рацематы, оптически чистых диастереоизомеров, смесей диастереоизомеров, диастереоизомерных рацематов или смесей диастереоизомерных рацематов.

В соответствии с правилом Кана - Ингольда - Прелога асимметрический атом углерода может находиться в «R»- или «S»- конфигурации.

Также один вариант осуществления настоящего изобретения относится к описанному в данном документе соединению в соответствии с формулой (I) и его фармацевтически приемлемым солям, конкретнее - к описанному в данном документе соединению в соответствии с формулой (I).

Способы изготовления описанного в данном документе соединения формулы (I) также являются предметом изобретения.

Следует понимать, что соединение формулы I в данном изобретении может быть дериватизировано в функциональных группах, чтобы получить производные, которые способны к обратному превращению в исходное соединение in vivo.

Определенный вариант осуществления изобретения относится к описанному в данном документе соединению формулы I или его фармацевтически приемлемой соли для применения в качестве терапевтически активного вещества.

Определенный вариант осуществления изобретения относится к описанному в данном документе соединению формулы I или его фармацевтически приемлемой соли для применения в терапевтическом и/или профилактическом лечении рака, в частности немелкоклеточного рака легкого.

Определенный вариант осуществления изобретения относится к описанному в данном документе соединению формулы I или его фармацевтически приемлемой соли для применения в терапевтическом и/или профилактическом лечении немелкоклеточного рака легкого.

Определенный вариант осуществления изобретения относится к описанному в данном документе соединению формулы I или его фармацевтически приемлемой соли для изготовления лекарственного средства для терапевтического и/или профилактического лечения рака, в частности немелкоклеточного рака легкого.

Определенный вариант осуществления изобретения относится к фармацевтической композиции, содержащей описанное в данном документе соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.

Определенный вариант осуществления изобретения относится к способу терапевтического и/или профилактического лечения рака, в частности немелкоклеточного рака легкого, путем введения пациенту описанного в данном документе соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли.

Определенный вариант осуществления изобретения относится к описанному в данном документе соединению формулы I или его фармацевтически приемлемой соли для применения в качестве лекарственного средства в терапевтическом и/или профилактическом лечении пациента с активирующими EGFR мутациями, имеющего рак, в частности немелкоклеточный рак легкого, включающего определение статуса активирующих EGFR мутаций у указанного пациента, а затем введение указанному пациенту описанного в данном документе соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли.

Определенный вариант осуществления изобретения относится к описанному в данном документе соединению формулы I или его фармацевтически приемлемой соли для применения в качестве лекарственного средства в терапевтическом и/или профилактическом лечении пациента с мутациями EGFR T790M/L858R, T790M/L858R/C797S, L858R и/или L858R/C797S, имеющего рак, в частности немелкоклеточный рак легкого, включающего определение статуса активирующих EGFR мутаций у указанного пациента, а затем введение указанному пациенту описанного в данном документе соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли.

Определенный вариант осуществления изобретения относится к описанному в данном документе соединению формулы I или его фармацевтически приемлемой соли для применения в качестве лекарственного средства в терапевтическом и/или профилактическом лечении пациента с активирующими EGFR мутациями, определенными с помощью теста для определения мутаций cobas® EGFR Mutation Test v2, имеющего рак, в частности немелкоклеточный рак легкого, включающего определение статуса активирующих EGFR мутаций у указанного пациента, а затем введение указанному пациенту описанного в данном документе соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли.

Кроме того, в тех случаях, когда это применимо, данное изобретение включает все заместители соединения формулы I в их соответствующей дейтерированной форме.

Соединение формулы I может содержать один или более асимметрических центров и, следовательно, может существовать в виде рацематов, рацемических смесей, отдельных энантиомеров, диастеремерных смесей и отдельных диастереомеров. Могут присутствовать дополнительные асимметрические центры в зависимости от природы различных заместителей в молекуле. Каждый такой асимметрический центр будет независимо давать два оптических изомера, и предполагается, что все возможные оптические изомеры и диастереомеры в смеси, а также чистые или частично очищенные соединения включены в данное изобретение. Предполагается, что настоящее изобретение охватывает все такие изомерные формы предложенного соединения. Независимый синтез этих диастереомеров или их хроматографическое разделение можно осуществлять, как известно в данной области техники, путем соответствующей модификации методологии, описанной в данном документе. Их абсолютную стереохимию можно определять с помощью рентгеноструктурной кристаллографии кристаллических продуктов или кристаллических промежуточных соединений, которые, при необходимости, дериватизированы реагентом, содержащим асимметрический центр с известной абсолютной конфигурацией. При необходимости, рацемические смеси соединений можно разделять так, чтобы выделить отдельные энантиомеры. Разделение можно осуществлять способами, хорошо известными в данной области техники, например сочетанием рацемической смеси соединений с энантиомерно чистым соединением с образованием диастереомерной смеси, с последующим разделением отдельных диастереомеров стандартными способами, такими как фракционная кристаллизация или хроматография.

В вариантах осуществления, в которых предложены оптически чистые энантиомеры, выражение «оптически чистый энантиомер» означает, что соединение содержит > 90 % необходимого изомера по массе, в частности > 95 % необходимого изомера по массе или, конкретнее, > 99 % необходимого изомера по массе, при этом указанное процентное содержание приведено с учетом общей массы изомера(-ов) соединения. Хирально чистое или хирально обогащенное соединение можно получать посредством хирально-селективного синтеза или посредством разделения энантиомеров. Разделение энантиомеров можно проводить для конечного продукта или, в альтернативном варианте, для подходящего промежуточного соединения.

Также в одном варианте осуществления настоящего изобретения предложено описанное в данном документе соединение формулы (I), изготовленное в соответствии с любым из описанных способов.

Аналитические процедуры

Анализ ГФВР фосфо-EGFR TMLRCS (клеточный)

Линия клеток и среды

Линия клеток BaF3-TMLRCS была получена от Crownbio (Сан-Диего, Калифорния, США). Клетки поддерживали при 37°C, 5 % CO₂ в RPMI ATCC (Gibco 31870) + 2 мМ глутамина + 0,5 мкг/мл пуромицина, дополненной 10 % фетальной бычьей сыворотки (ФБС) (Gibco).

Протокол

Клетки переносили, как указано выше, в микротитровальный планшет Greiner Bio-One № 784-08 при 20000 клеток/лунка в 12,5 мкл среды для роста/лунка после предварительного добавления в планшеты 12,5 нл ДМСО-растворов предназначенных для исследования соединений (доза - ответ) или только ДМСО. После центрифугирования планшетов при 300xg в течение 30 секунд клетки инкубировали в течение 4 часов при 37°C, 5 % CO₂ и влажности 95 %. Клетки лизировали путем добавления в смесь соединения 4 мк/лунка дополненного лизисного буфера (Cis-bio, набор для ГФВР фосфо-EGFR, 64EG1PEH) с последующей инкубацией в течение 30 мин. при комнатной температуре при встряхивании (400 об/мин). Затем планшеты замораживали и хранили в течение ночи при -80°C. На следующий день после размораживания планшетов в каждую лунку добавляли по 4 мкл смеси растворов антитела к фосфо-EGFR криптату и антитела к фосфо-EGFR-d2, приготовленных в поставляемом буфере для обнаружения. Затем закрытые крышками планшеты инкубировали в течение 4 ч при комнатной температуре перед считыванием эмиссии флуоресценции на 616 и 665 нм с использованием ридера Envision (Perkin Elmer). Данные анализировали указанным выше образом, используя нормализованное отношение сигналов на 665 и 616, умноженное на 10000.

Результаты приведены в Таблице 1.

Пример	IC₅₀ (-baF3) мкМ
1	0,005

Соединение формулы (I) и его фармацевтически приемлемые соли можно использовать как лекарственные средства (например, в форме фармацевтических препаратов). Фармацевтические препараты можно вводить внутрь, например, перорально (например, в форме таблеток, покрытых оболочкой таблеток, драже, твердых и мягких желатиновых капсул, растворов, эмульсий или суспензий), назально (например, в форме назальных спреев), ректально (например, в форме суппозиториев) или местно через глаза (например, в форме растворов, мазей, гелей или водорастворимых полимерных вкладок). При этом введение также можно осуществлять парентерально, а именно, внутримышечно, внутривенно или внутриокулярно (например, в форме стерильных инъекционных растворов).

Соединение формулы (I) и его фармацевтически приемлемые соли можно обрабатывать фармацевтически инертными, неорганическими или органическими адъювантами для производства таблеток, покрытых оболочкой таблеток, драже, твердых желатиновых капсул, инъекционных растворов или составов для местного применения. В качестве таких адъювантов для таблеток, драже и твердых желатиновых капсул можно использовать, например, лактозу, кукурузный крахмал или его производные, тальк, стеариновую кислоту или ее соли и т.д.

Подходящими адъювантами для мягких желатиновых капсул являются, например, растительные масла, воски, жиры, полутвердые вещества и жидкие полиолы и т.д.

Подходящими адъювантами для получения растворов и сиропов являются, например, вода, полиолы, сахароза, инвертированный сахар, глюкоза и т.д.

Подходящими адъювантами для инъекционных растворов являются, например, вода, спирты, полиолы, глицерин, растительные масла и т.д.

Подходящими адъювантами для суппозиториев являются, например, натуральные или отвержденные масла, воски, жиры, полутвердые или жидкие полиолы и т.д.

Подходящими адъювантами для местных глазных составов являются, например, циклодекстрины, манит или множество других носителей и эксципиентов, известных в данной области техники.

Кроме того, фармацевтические препараты могут содержать консерванты, солюбилизаторы, вещества, повышающие вязкость, стабилизаторы, смачивающие агенты, эмульгаторы, подсластители, красители, ароматизаторы, соли для изменения осмотического давления, буферы, маскирующие агенты или антиоксиданты. Также они могут содержать другие имеющие терапевтическую ценность вещества.

Дозировку можно варьировать в широком диапазоне и, конечно, ее следует подбирать в зависимости от индивидуальных требований в каждом конкретном случае. В целом, в случае перорального введения суточная доза составляет от около 0,1 мг до 20 мг на кг массы тела, предпочтительно от около 0,5 мг до 4 мг на кг массы тела (например, около 300 мг на человека), предпочтительно разделенная на 1-3 отдельные дозы, которые могут состоять, например, из одинаковых количеств, если это уместно. В случае местного применения состав может содержать от 0,001 % до 15 % по массе лекарственного средства, а необходимую дозу, которая может составлять от 0,1 до 25 мг, можно вводить один раз в день или в неделю, или в виде нескольких доз (от 2 до 4) в день, или в виде нескольких доз в неделю. При этом следует понимать, что в случае соответствующего показания верхняя или нижняя граница, приведенная в данном документе, может быть превышена.

Получение фармацевтических композиций, содержащих соединение по изобретению:

Таблетки на основе следующей композиции изготавливают традиционным образом:

Ингредиент	мг/таблетка
Ингредиент	5	25	100	500
Соединение формулы I	5	25	100	500
Безводная лактоза ДТГ	125	105	30	150
Sta-Rx 1500	6	6	6	60
Микрокристаллическая целлюлоза	30	30	30	450
Стеарат магния	1	1	1	1
Всего	167	167	167	831

Процедура изготовления

1. Смешать ингредиенты 1, 2, 3 и 4 и гранулировать с очищенной водой.

2. Высушить гранулы при 50°C.

3. Пропустить гранулы через подходящее помольное оборудование.

4. Добавить ингредиент 5 и перемешивать в течение трех минут; спрессовать на подходящем прессе.

Капсулы на основе следующей композиции изготавливают таким образом:

Ингредиент	мг/капсула
Ингредиент	5	25	100	500
Соединение формулы I	5	25	100	500
Гидролактоза	159	123	148	-
Кукурузный крахмал	25	35	40	70
Тальк	10	15	10	25
Стеарат магния	1	2	2	5
Всего	200	200	300	600

Процедура изготовления

1. Смешать ингредиенты 1, 2 и 3 в подходящем смесителе в течение 30 минут.

2. Добавить ингредиенты 4 и 5 и смешивать в течение 3 минут.

3. Наполнить соответствующие капсулы.

Соединение формулы I, лактозу и кукурузный крахмал сначала смешивают в смесителе, а затем в машине для измельчения. Смесь возвращают в смеситель; туда же добавляют тальк и перемешивают. Машина наполняет смесью соответствующие капсулы, например, твердые желатиновые капсулы.

Инъекционные растворы на основе следующей композиции изготавливают таким образом:

Ингредиент	мг/инъекционный раствор
Соединение формулы I	3
Полиэтиленгликоль 400	150
уксусная кислота	по необходимости до pH 5,0
вода для инъекционных растворов	до 1,0 мл

Далее данное изобретение проиллюстрировано примерами, которые не имеют ограничительного характера.

Если препаративные примеры получают в виде смеси энантиомеров, чистые энантиомеры можно получать методами, описанными в данном документе, или методами, известными специалистам в данной области техники, такими как, например, хиральная хроматография или кристаллизация.

Пример 1

2-[4,7-дихлор-6-(4-морфолинофенил)индазол-2-ил]-2-[(6R)-6-фтор-6,7-дигидро-5H-пирроло[1,2-c]имидазол-1-ил]-N-тиазол-2-илацетамид

Шаг 1: 4-бром-3,6-дихлор-2-фторбензальдегид

Раствор 1-бром-2,5-дихлор-3-фторбензола (9,41 г, 38,6 ммоль) в тетрагидрофуране (70 мл) охлаждали на бане с сухим льдом/ацетоном. Добавляли ДАЛ, 2 моль/л в ТГФ (21,2 мл, 42,5 ммоль, 1,1 экв.), и перемешивали смесь при -75°C в течение 20 минут. По каплям добавляли N,N-диметилформамид (2,82 г, 3,0 мл, 38,6 ммоль, 1 экв.) и перемешивали в течение 1 часа. Добавляли раствор уксусной кислоты в эфире (1:1, 10 мл). Смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры. Добавляли воду и экстрагировали смесь этилацетатом. Органические слои промывали водой, сушили (MgSO₄), фильтровали и концентрировали в вакууме с получением неочищенного указанного в заголовке соединения (количественный выход) в виде светло-желтого вещества. Это соединение использовали на следующем шаге без дополнительной очистки.

Шаг 2: 6-бром-4,7-дихлор-1H-индазол

В раствор 4-бром-3,6-дихлор-2-фторбензальдегида (пример 1, шаг 1) (10,5 г, 38,6 ммоль) в диоксане (50 мл) добавляли гидрат гидразина (3,86 г, 3,78 мл, 77,2 ммоль, 2,0 экв.). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 дней. Добавляли гидрат гидразина (386 мг, 0,38 мл, 7,72 ммоль, 0,2 экв.) и нагревали смесь до 70°C в течение 7 часов. После охлаждения до комнатной температуры добавляли воду, а выпавшее в осадок твердое вещество собирали путем фильтрации. К твердому веществу добавляли небольшое количество ацетонитрила и перемешивали в течение 2 часов. Твердое вещество собирали путем фильтрации, промывали небольшим количеством ацетонитрила и сушили с получением указанного в заголовке соединения (7,8 г, выход 76 %) в виде грязно-белого твердого вещества. м/з 267,0/269,0, [M+H]⁺, ИЭР поз., изотопы Br.

Шаг 3: Этил 2-(6-бром-4,7-дихлориндазол-2-ил)ацетат

В раствор 6-бром-4,7-дихлор-1H-индазола (пример 1, шаг 2) (7,84 г, 29,5 ммоль, экв.: 1) в N,N-диметилацетамиде (11,5 мл) добавляли этил 2-бромацетат (9,85 г, 6,53 мл, 59 ммоль, 2,0 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 16 часов при 100°C. Добавляли лед, а выпавшее в осадок твердое вещество собирали путем фильтрации и промывали водой. Это соединение кристаллизовали из кипящего этанола. Твердое вещество собирали путем фильтрации, промывали небольшим количеством этанола и сушили с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (7,5 г, выход 70 %). м/з 353,0, 355,0, [M+H]⁺, ИЭР поз., изотопы Br.

Шаг 4: трет-бутил (2S,4R)-2-[2-(6-бром-4,7-дихлор-индазол-2-ил)-3-этокси-3-оксо-пропаноил]-4-фтор-пирролидин-1-карбоксилат

Раствор (2S,4R)-1-(трет-бутоксикарбонил)-4-фторпирролилин-2-карбоновой кислоты (2,34 г, 10 ммоль, 1,55 экв.) в тетрагидрофуране (11 мл) охлаждали на ледяной бане. Добавляли карбонилдиимидазол (1,63 г, 10 ммоль, 1,55 экв.). Охлаждающую баню убирали и перемешивали смесь в течение 3 часов с получением раствора A. Раствор этил 2-(6-бром-4,7-дихлор-индазол-2-ил)ацетата (пример 1, шаг 3) (2,28 г, 6,5 ммоль) в тетрагидрофуране (11 мл) охлаждали до -70°C. По каплям добавляли ДАЛ, 2 моль/л в тетрагидрофуране (5,0 мл, 10 ммоль, 1,55 экв.), в течение 5 мин. Смесь перемешивали в течение 30 минут при -70°C. По каплям добавляли раствор A в течение 5 минут. Смесь оставляли на ночь нагреваться до комнатной температуры на охлаждающей бане. После добавления насыщенного водного раствора NH₄Cl смесь дважды экстрагировали этилацетатом. Органические слои промывали водой, объединяли, сушили над сульфатом натрия и концентрировали досуха с получением неочищенного указанного в заголовке соединения (количественный выход), которое использовали на следующем шаге без дополнительной очистки. м/з 566,1/568,1, [M+H]⁺, ИЭР поз., изотопы Br.

Шаг 5: Этил 2-(6-бром-4,7-дихлор-индазол-2-ил)-2-[(6R)-6-фтор-3-тиоксо-2,5,6,7-тетрагидропирроло[1,2-c]имидазол-1-ил]ацетат

Раствор трет-бутил (2S,4R)-2-[2-(6-бром-4,7-дихлор-индазол-2-ил)-3-этокси-3-оксопропаноил]-4-фторпирролидин-1-карбоксилата (пример 1, шаг 4) (4,23 г, 6,41 ммоль) в 4 М HCl в диоксане (11 мл) перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре. Смесь концентрировали досуха. Остаток растворяли в этаноле (37 мл), добавляли тиоцианат калия (829 мг, 8,53 ммоль, 1,33 экв.) и 1 М HCl в этаноле (12,8 мл) и перемешивали в течение 40 часов при комнатной температуре. Добавляли воду и экстрагировали смесь этилацетатом. Органические слои промывали водой, сушили над MgSO₄, фильтровали, концентрировали и сушили с получением неочищенного указанного в заголовке соединения (2,5 г, выход 76 %), которое использовали на следующем этапе без дополнительной очистки. м/з 509,0/511,0, [M+H]⁺, ИЭР поз., изотопы Br.

Шаг 6: Этил 2-(6-бром-4,7-дихлориндазол-2-ил)-2-[(6R)-6-фтор-6,7-дигидро-5H-пирроло[1,2-c]имидазол-1-ил]ацетат

Раствор этил 2-(6-бром-4,7-дихлор-индазол-2-ил)-2-[(6R)-6-фтор-3-тиоксо-2,5,6,7-тетрагидропирроло[1,2-c]имидазол-1-ил]ацетата (пример 1, шаг 5) (1,46 г, 2,88 ммоль) в уксусной кислоте (10 мл) охлаждали до 10°C. По каплям добавляли 35 % перекись водорода (1,12 г, 1,01 мл, 11,5 ммоль, 4 экв.). Реакционную смесь перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре. Избыток перекиси водорода удаляли путем добавления насыщенного раствора сульфита натрия. После добавления некоторого количества воды (достаточного для растворения всех солей) и этилацетата смесь доводили до pH 9 путем аккуратного добавления твердого карбоната натрия. Смесь экстрагировали этилацетатом. Органические слои промывали водой, сушили над сульфатом натрия и концентрировали. Продукт очищали посредством хроматографии (SiO₂, 0-100 % этилацетата в гептане) с получением указанного в заголовке соединения (0,81 г, выход 58 %) в виде светло-коричневого твердого вещества. м/з 475,0/477,0, [M+H]⁺, ИЭР поз., изотопы Br.

Шаг 7: Этил 2-[4,7-дихлор-6-(4-морфолинофенил)индазол-2-ил]-2-[(6R)-6-фтор-6,7-дигидро-5H-пирроло[1,2-c]имидазол-1-ил]ацетат

Этил 2-(6-бром-4,7-дихлор-индазол-2-ил)-2-[(6R)-6-фтор-6,7-дигидро-5H-пирроло[1,2-c]имидазол-1-ил]ацетат (пример 1, шаг 6) (100 мг, 0,21 ммоль), (4-морфолинофенил)бороновую кислоту (130 мг, 0,63 ммоль, 3 экв.) и карбонат цезия (205 мг, 0,63 ммоль, 3 экв.) смешивали с толуолом (3,0 мл), дегазировали путем барботирования через смесь аргона с одновременной ультразвуковой обработкой. Добавляли [1,1'-би(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий (II) (15 мг, 0,02 ммоль, 0,1 экв.) и перемешивали смесь в течение 30 минут при 110°C в герметично закрытой пробирке. Смесь охлаждали до комнатной температуры, разводили этилацетатом, промывали полуконцентрированным раствором карбоната натрия, сушили над сульфатом натрия и концентрировали. Неочищенный материал очищали посредством флэш-хроматографии (SiO₂, от 0 % до 40 % метанола в этилацетате) с получением указанного в заголовке соединения (82 мг, выход 69 %) в виде светло-коричневого аморфного твердого вещества. м/з 558,4, [M+H]⁺, ИЭР поз.

Шаг 8: 2-[4,7-дихлор-6-(4-морфолинофенил)индазол-2-ил]-2-[(6R)-6-фтор-6,7-дигидро-5H-пирроло[1,2-c]имидазол-1-ил]-N-тиазол-2-илацетамид

В раствор этил 2-[4,7-дихлор-6-(4-морфолинофенил)индазол-2-ил]-2-[(6R)-6-фтор-6,7-дигидро-5H-пирроло[1,2-c]имидазол-1-ил]ацетата (пример 1, этап 7) (40 мг, 0,071 ммоль) в тетрагидрофуране (1,1 мл) добавляли 1 М LiOH (101 мкл, 0,10 ммоль, 1,5 экв.) и воду (400 мкл). Смесь перемешивали в течение 30 минут при комнатной температуре. Смесь концентрировали и сушили. Остаток растворяли в N,N-диметилформамиде (1,1 мл). После добавления тиазол-2-амина (9 мг, 0,086 ммоль, 1,2 экв.), HATU (33 мг, 0,086 ммоль, 1,2 экв.) и основания Хунига (28 мг, 0,037 мл, 0,21 ммоль, 3 экв.) смесь перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре. Добавляли воду и экстрагировали смесь этилацетатом. Органические слои объединяли, сушили сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Неочищенный материал очищали посредством флэш-хроматографии (SiO₂, от 0 % до 40 % метанола в этилацетате) с получением указанного в заголовке соединения (22 мг, выход 50 %) в виде светло-коричневого твердого вещества. м/з 612,4, [M+H]⁺, ИЭР поз.

Claims

1. Соединение формулы (I)

(I)

или его фармацевтически приемлемые соли.

2. Соединение формулы (I) по п. 1, где соединение представляет собой

.

3. Соединение по любому из пп. 1 или 2 для применения в качестве терапевтически активного вещества.

4. Фармацевтическая композиция, ингибирующая рецептор эпидермального фактора роста (EGFR), содержащая эффективное количество соединения по любому из пп. 1 или 2 и терапевтически инертный носитель.

5. Соединение по любому из пп. 1 или 2 для применения в лечении или профилактике рака.

6. Соединение по любому из пп. 1, 2 для применения в лечении или профилактике немелкоклеточного рака легкого.

7. Применение соединения по любому из пп. 1, 2 для получения лекарственного средства для лечения или профилактики немелкоклеточного рака легкого.