TW202133879A

TW202133879A - 用於皮下投予之抗cd38抗體的調配物

Info

Publication number: TW202133879A
Application number: TW109142916A
Authority: TW
Inventors: 湯瑪斯巴列特; 柯朗班葛里; 拉維卡利; 斯利文華利; 拉米瑞茲班納爾多普利資; 飛利浦維斯科
Original assignee: 美商賽諾菲阿凡提斯美國有限責任公司
Priority date: 2019-12-05
Filing date: 2020-12-04
Publication date: 2021-09-16
Also published as: MX2022006882A; KR20220159947A; CA3160502A1; AU2020397170A1; CN115698064A; US20210188996A1; CO2022009089A2; JP2023505217A; WO2021113739A1; BR112022010905A2; IL293563A; EP4069743A1

Abstract

提供了適合於皮下投予有需要的個體的抗CD38抗體的調配物。所述調配物包括高濃度的抗體、降粘劑、穩定劑、緩衝劑和表面活性劑。在某些實施例中，溶液的粘度最多為25 mPa·s，且所述溶液的pH為5.9至7.0。在某些實施例中，所述抗CD38抗體是伊沙妥昔單抗。所述調配物可用於治療人類的包括多發性骨髓瘤在內的CD38+血液惡性腫瘤以及自體免疫疾病和發炎性疾病。

Description

用於皮下投予之抗CD38抗體的調配物

本公開文本關於可用於治療疾病的抗體的調配物。更具體地，它關於抗CD38抗體的調配物，其適合於皮下投予以治療癌症，包括多發性骨髓瘤，以及其中CD38⁺ 細胞起作用的其他疾病和病症。

CD38是45 kDa II型跨膜糖蛋白，具有長C末端胞外結構域和短N末端胞質結構域。所述CD38蛋白是雙功能胞外酶，其可以催化NAD⁺ 轉化為環狀ADP-核糖（cADPR），也可以將cADPR水解為ADP-核糖。

CD38在許多血液惡性腫瘤和源自各種血液惡性腫瘤的細胞系中上調。此外，血液系統的大多數原始多能幹細胞是CD38^- 。CD38在血液惡性腫瘤中的表現及其與慢性淋巴細胞白血病（CLL）疾病進展的相關性使CD38成為抗體療法的誘人標靶。

還報導了CD38⁺ 細胞與多種其他疾病和病症（包括許多自體免疫疾病，諸如類風濕性關節炎和紅斑狼瘡以及脂多糖（LPS）或敗血症誘發的急性腎損傷）相關（Shu B等人,Cell Signal (2018) 42: 249-58）。

先前已經在例如國際專利申請案WO 2006/099875中描述了特異性識別CD38的抗CD38抗體。但是，這些抗體在用作單一藥劑並與表現CD38⁺ 的細胞一起培養時無法誘導凋亡。

單株抗CD38抗體已在國際專利申請案WO 2008/047242中描述。

這些特異性抗CD38抗體與細胞毒性劑（諸如阿糖胞苷(cytarabine)、長春新鹼(vincristine)、環磷醯胺和美法侖(melphalan)）的組合使用已在國際專利申請案WO 2010/061357、WO 2010/061358、WO 2010/061359和WO 2010/061360中報導。

國際專利申請案WO 2015/066450、WO 2012/076663和WO 2014/089416、WO 2014/159911也描述了人源化形式的38SB19（也稱為SAR650984或伊沙妥昔單抗(Isatuximab)）的使用。伊沙妥昔單抗與泊馬度胺(pomalidomide)和地塞米松的組合用於治療復發/難治性多發性骨髓瘤患者的3期臨床試驗（NCT02990338）最近達到了其主要終點，延長了無進展生存期。

本公開文本的一個方面關於適合於皮下投予個體的抗CD38抗體的調配物。有利地，本文公開的調配物適合於藉由注射或輸注（包括大體積皮下輸注）進行皮下投予。所述調配物可用於治療以表現CD38的細胞為特徵的疾病或病症。此類疾病和病症包括但不限於表現CD38的實體瘤（諸如前列腺癌）、各種血液惡性腫瘤（諸如非霍奇金淋巴瘤（NHL）、多發性骨髓瘤（MM）、急性骨髓性白血病（AML）、急性淋巴母細胞白血病（B細胞ALL）和/或慢性淋巴細胞白血病（CLL））。此類疾病和病症進一步包括但不限於自體免疫疾病（包括類風濕性關節炎和全身性紅斑狼瘡）以及脂多糖（LPS）或敗血症誘發的急性腎損傷。

在某些實施例中，本公開文本關於抗CD38抗體的調配物，其包含高濃度的抗體，pH為5.9-7.0，且在20ºC下的粘度最多為25 mPa·s。

在某些實施例中，本公開文本關於包含至少100 mg/mL的抗CD38抗體、降粘劑、穩定劑、緩衝劑和表面活性劑的調配物，其中所述調配物的pH為5.9 -7.0，且在20ºC下的粘度最多為25 mPa·s。

本公開文本的一個方面關於包含至少100 mg/mL的抗CD38抗體的調配物，其中

所述抗CD38抗體包含可變重鏈區（VH），其包含分別含有SEQ ID NO: 1-3中列出的胺基酸序列的三個互補決定區（CDR）CDR-H1、CDR2-H2和CDR-H3；以及可變輕鏈區（VL），其包含分別含有SEQ ID NO: 4-6中列出的胺基酸序列的三個CDR CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，

所述調配物包含降粘劑、穩定劑、緩衝劑和表面活性劑，且

所述調配物的pH為5.9 -7.0，且在20ºC下的粘度最多為25 mPa·s。

在某些實施例中，所述降粘劑是90-150 mM Arg-Cl。

在某些實施例中，所述降粘劑是90-125 mM Arg-Cl。

在某些實施例中，所述降粘劑是110 mM Arg-Cl。

在某些實施例中，所述表面活性劑是泊洛沙姆188 (Poloxamer 188)。

在某些實施例中，所述表面活性劑是0.4%（w/v）的泊洛沙姆188。

在某些實施例中，所述緩衝劑是組胺酸。

在某些實施例中，所述緩衝劑是9 mM組胺酸。

在某些實施例中，所述降粘劑是90-150 mM Lys-Ac。

在某些實施例中，所述降粘劑是125 mM Lys-Ac。

在某些實施例中，所述表面活性劑是聚山梨醇酯80。

在某些實施例中，所述表面活性劑是0.04%（w/v）的聚山梨醇酯80。

在某些實施例中，所述調配物包含125-155 mg/mL的抗CD38抗體。

在某些實施例中，所述調配物包含140 mg/mL的抗CD38抗體。

在某些實施例中，所述穩定劑是蔗糖。

在某些實施例中，所述穩定劑是2%（w/v）的蔗糖。

在某些實施例中，pH為5.9-7.0。

在某些實施例中，pH為5.9-6.5。

本公開文本的一個方面關於包含140 mg/mL的抗CD38抗體的調配物，其中所述抗CD38抗體包含可變重鏈區（VH），其包含分別含有SEQ ID NO: 1-3中列出的胺基酸序列的三個互補決定區（CDR）CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3；以及可變輕鏈區（VL），其包含分別含有SEQ ID NO: 4-6中列出的胺基酸序列的三個CDR CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，所述調配物包含9 mM組胺酸、110 mM Arg-Cl、2%（w/v）的蔗糖和0.4%（w/v）的泊洛沙姆188，且其中所述調配物的pH為6.2，且在20ºC下的粘度最多為14 mPa·s。

本公開文本的一個方面關於包含140 mg/mL的抗CD38抗體的調配物，其中所述抗CD38抗體包含可變重鏈區（VH），其包含分別含有SEQ ID NO: 1-3中列出的胺基酸序列的三個互補決定區（CDR）CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3；以及可變輕鏈區（VL），其包含分別含有SEQ ID NO: 4-6中列出的胺基酸序列的三個CDR CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，所述調配物包含125 mM Lys-Ac、2%（w/v）的蔗糖以及0.04%（w/v）的聚山梨醇酯80，且所述調配物的pH為6.2，且在20ºC下的粘度最多為14 mPa·s。

在某些實施例中，所述調配物適合於藉由注射或輸注（包括大體積皮下輸注）進行皮下投予。

在某些實施例中，所述抗CD38抗體的VH包含SEQ ID NO: 7中列出的胺基酸序列，且所述抗CD38抗體的VL包含SEQ ID NO: 8中列出的胺基酸序列。

在某些實施例中，所述抗CD38抗體是伊沙妥昔單抗。

本公開文本的一個方面關於一種經包裝的醫藥產品，其包含無菌容器，所述無菌容器包含治療有效量的本公開文本的調配物。

本公開文本的一個方面關於一種裝置，所述裝置包含治療有效量的本公開文本的調配物。

在某些實施例中，所述裝置可以是例如注射器、注射器驅動器和包含所述調配物的輸液泵。

在某些實施例中，所述注射器是預填充式注射器。

本公開本文的一個方面是一種治療以CD38⁺ 細胞的存在或活性為特徵的疾病或病症的方法，其包括向有需要的個體投予有效量的本公開文本的調配物，其中所述調配物是皮下投予的。

在某些實施例中，所述以CD38⁺ 細胞的存在或活性為特徵的疾病或病症是CD38⁺ 血液惡性腫瘤。

在某些實施例中，所述以CD38⁺ 細胞的存在或活性為特徵的疾病或病症是自體免疫或發炎性疾病或病症。

本公開本文的一個方面是一種治療CD38⁺ 血液惡性腫瘤的方法，其包括向有需要的個體投予有效量的本公開文本的調配物，其中所述調配物是皮下投予的。

本公開文本的一個方面是一種治療CD38⁺ 血液惡性腫瘤的方法，其包括向有需要的個體投予有效量的包含至少100 mg/mL的抗CD38抗體的抗CD38抗體的調配物，其中所述抗CD38抗體包含可變重鏈區（VH），其包含分別含有SEQ ID NO: 1-3中列出的胺基酸序列的三個互補決定區（CDR）CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3；以及可變輕鏈區（VL），其包含分別含有SEQ ID NO: 4-6中列出的胺基酸序列的三個CDR CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，所述調配物包含降粘劑、穩定劑、緩衝劑和表面活性劑，且所述調配物的pH為5.5-7.0，且在20ºC下的粘度最多為25 mPa·s，其中所述調配物是皮下投予的。

本公開文本的一個方面是一種治療CD38⁺ 血液惡性腫瘤的方法，其包括向有需要的個體投予有效量的包含140 mg/mL的抗CD38抗體的抗CD38抗體的調配物，其中所述抗CD38抗體包含可變重鏈區（VH），其包含分別含有SEQ ID NO: 1-3中列出的胺基酸序列的三個互補決定區（CDR）CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3；以及可變輕鏈區（VL），其包含分別含有SEQ ID NO: 4-6中列出的胺基酸序列的三個CDR CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，所述調配物包含9 mM組胺酸、110 mM Arg-Cl、2%（w/v）的蔗糖和0.4%（w/v）的泊洛沙姆188，且其中所述調配物的pH為6.2，且在20ºC下的粘度最多為14 mPa·s，其中所述調配物是皮下投予的。

在某些實施例中，所述方法包括向所述有需要的個體投予有效量的包含140 mg/mL的抗CD38抗體的調配物，其中所述抗CD38抗體包含可變重鏈區（VH），其包含分別含有SEQ ID NO: 1-3中列出的胺基酸序列的三個互補決定區（CDR）CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3；以及可變輕鏈區（VL），其包含分別含有SEQ ID NO: 4-6中列出的胺基酸序列的三個CDR CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，所述調配物包含9 mM組胺酸、110 mM Arg-Cl、2%（w/v）的蔗糖和0.4%（w/v）的泊洛沙姆188，且其中所述調配物的pH為6.3，且在20ºC下的粘度最多為14 mPa·s，其中所述調配物是皮下投予的。

在某些實施例中，藉由皮下輸注投予所述調配物。

在某些實施例中，所述皮下輸注是大體積皮下輸注，例如，＞ 2 mL至30 mL。

在某些實施例中，所述治療CD38⁺ 血液惡性腫瘤的方法進一步包括向所述個體投予一種或多種適合於治療C38⁺ 血液癌症的其他藥劑。在一些實施例中，所述其他試劑是例如皮質類固醇（例如，地塞米松）、化療藥物、蛋白酶體抑制劑、免疫調節藥物或其組合。

在某些實施例中，所述化療藥物是例如阿糖胞苷、柔紅黴素(daunorubicin)、道諾黴素(daunomycin)、多柔比星(doxorubicin)、脂質體多柔比星、伊達比星(idarubicin)、米托蒽醌(mitoxantrone)、吉妥珠單抗(gemtuzumab)、氯法拉濱(clofarabine)、克拉屈濱(cladribine)、羥基脲、依託泊苷(etoposide)、安吖啶(amsacrine)、FLT5抑制劑（諸如吉列替尼(gilteritinib)）、5-氮雜胞苷、地西他濱、美法侖、環磷醯胺或長春新鹼或其組合。

在某些實施例中，所述免疫調節藥物是例如沙利度胺(thalidomide)、來那度胺(lenalidomide)或泊馬度胺(pomalidomide)或其組合。

在某些實施例中，所述蛋白酶體抑制劑是例如艾沙佐米(ixazomib)、卡非佐米(carfilzomib)或硼替佐米(bortezomib)或其組合。

在某些實施例中，所述治療CD38⁺ 血液惡性腫瘤的方法包括向所述個體投予如本文所定義用於皮下投予所配製的伊沙妥昔單抗，以及來自不同類別化合物的兩種或更多種其他藥劑（諸如例如免疫調節藥物或蛋白酶體抑制劑）。

在某些實施例中，所述CD38⁺ 血液惡性腫瘤是多發性骨髓瘤。

在某些實施例中，所述多發性骨髓瘤是復發/難治性多發性骨髓瘤。在一些實施例中，所述患者已經接受了包括來那度胺和蛋白酶體抑制劑的用於多發性骨髓瘤的至少兩種先前的療法，並且在進行最後的療法時或在最後的療法完成後已經展現出疾病進展。

序列表

此申請案附有電腦可讀形式的序列表，該序列表準確地再現了本文所述的序列。

本文提供了適合於皮下投予個體的抗CD38抗體的調配物。有利地，本文公開的調配物適合於藉由注射或藉由輸注（包括大體積皮下輸注）進行皮下投予。所述調配物可用於治療以表現CD38的細胞為特徵的疾病或病症。此類疾病和病症包括但不限於各種血液惡性腫瘤，諸如非霍奇金淋巴瘤（NHL）、多發性骨髓瘤（MM）、急性骨髓性白血病（AML）、急性淋巴母細胞白血病（B細胞ALL）和/或慢性淋巴細胞白血病（CLL）。此類疾病和病症進一步包括但不限於自體免疫疾病（包括類風濕性關節炎和全身性紅斑狼瘡）以及脂多糖（LPS）或敗血症誘發的急性腎損傷。在某些實施例中，本文提供的調配物包含高濃度的抗體，pH為5.5-7.0，且在20ºC下的粘度最多為25 mPa·s。在本文提供的一些實施例中，所述調配物是水性調配物。

“血液惡性腫瘤”是影響血液、骨髓和淋巴結的癌症類型。由於三者藉由免疫系統緊密相連，因此影響三者之一的疾病也可能影響其他者。血液惡性腫瘤包括非霍奇金淋巴瘤（NHL）（包括例如伯基特淋巴瘤（BL）和T細胞淋巴瘤（TCL））、多發性骨髓瘤（MM）、慢性淋巴細胞白血病（CLL）（諸如例如B細胞慢性淋巴細胞白血病（B-CLL）和毛細胞白血病（HCL））、B和T細胞急性淋巴細胞白血病（ALL）、急性骨髓性白血病（AML）、霍奇金淋巴瘤（HL）和慢性骨髓性白血病（CML）。在一些實施例中，所述血液惡性腫瘤是CD38⁺ 血液惡性腫瘤。

因此，“CD38⁺ 血液惡性腫瘤”是如上所述的血液惡性腫瘤，其中癌細胞表現CD38。據報導，CD38⁺ 細胞也參與許多自體免疫疾病和障礙以及發炎性疾病和障礙（包括類風濕性關節炎和全身性紅斑狼瘡）以及其他病症（包括LPS或敗血症誘發的急性腎損傷）。

CD38⁺ 血液惡性腫瘤包括B細胞非霍奇金淋巴瘤（NHL）、多發性骨髓瘤（MM）、急性骨髓性白血病（AML）、急性淋巴母細胞白血病（B細胞ALL）和/或慢性淋巴細胞白血病（CLL）。在一些實施例中，所述CD38⁺ 血液惡性腫瘤是MM。在一些實施例中，所述CD38⁺ 血液惡性腫瘤是復發和/或難治性多發性骨髓瘤。

“抗體”可以是天然的或常規的抗體，其中兩個重鏈藉由二硫鍵彼此連接並且每個重鏈藉由二硫鍵與輕鏈連接。有兩種類型的輕鏈，λ（λ）和κ（κ）。有五種主要的重鏈類別（或同種型）：IgM、IgG、IgA、IgD和IgE，它們決定了抗體分子的功能活性。另外，免疫球蛋白亞類（或亞同種型）（例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2）充分表徵並且已知它們賦予功能特化。每條鏈含有不同的序列結構域。所述輕鏈包括兩個結構域或區域，可變結構域（VL）和恆定結構域（CL）。所述重鏈包括四個結構域，一個可變結構域（VH）和三個恆定結構域（CH1、CH2和CH3，統稱為CH）。輕鏈（VL）和重鏈（VH）的可變區決定了對抗原的結合識別和特異性。所述輕鏈（CL）和重鏈（CH）的恆定區結構域具有重要的生物學特性，諸如抗體鏈締合、分泌、經胎盤移動性、補體結合以及與Fc受體（FcR）的結合。Fv片段是免疫球蛋白的Fab片段的N末端部分，其包括一條輕鏈和一條重鏈的可變部分。抗體的特異性在於抗體結合位點和抗原決定簇之間的結構互補性。抗體結合位點由主要來自高變或互補決定區（CDR）的殘基組成。有時，來自非高變區或框架區（FR）的殘基會影響整體結構域結構，進而影響結合位元點。

“互補決定區”或“CDR”是指一起限定天然免疫球蛋白結合位點的天然Fv區的結合特異性和親和力的胺基酸序列。免疫球蛋白的輕鏈和重鏈分別具有三個CDR，分別稱為CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3和CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3。因此，常規的抗體抗原結合位點包括六個CDR，其包含來自重鏈和輕鏈V區中的每一個的CDR組。

基於Kabat定義（worlwideweb.bioinf.org.uk/abs/），給出了有關免疫球蛋白輕鏈或重鏈的CDR/FR定義。

抗體也可以是非天然存在的抗體，例如單株抗體、嵌合抗體或人源化抗體。如本文所用，術語“單株抗體”或“mAb”是指針對特定抗原的單一胺基酸組合物的抗體分子，並且不應解釋為要求藉由任何特定方法來產生抗體。單株抗體可以由B細胞的單個克隆或雜交瘤產生，但是也可以是重組的，即藉由蛋白工程產生。

術語“人源化抗體”是指最初完全或部分非人類來源的抗體，且已被修飾以替代某些胺基酸，例如在重鏈和輕鏈的框架區中，以避免或最小化人類的免疫反應。人源化抗體的恆定結構域可以是例如人類CH和CL結構域。在一個實施例中，人源化抗體具有人源恆定結構域。

在一些實施例中，根據本公開文本的抗CD38抗體包含重鏈，所述重鏈包含含有如SEQ ID NO: 1列出的胺基酸序列的CDR-H1、含有胺基酸序列SEQ ID NO: 2的CDR-H2以及含有胺基酸序列SEQ ID NO: 3的CDR-H3；以及輕鏈，所述輕鏈包含含有如SEQ ID NO: 4列出的胺基酸序列的CDR-L1、含有如SEQ ID NO: 5列出的胺基酸序列的CDR-L2以及含有如SEQ ID NO: 6列出的胺基酸序列的CDR-L3。 CDR-H1 DYWMQ （SEQ ID NO: 1） CDR-H2 TIYPGDGDTGYAQKFQG （SEQ ID NO: 2） CDR-H3 GDYYGSNSLDY （SEQ ID NO: 3） CDR-L1 KASQDVSTVVA （SEQ ID NO: 4） CDR-L2 SASYRYI （SEQ ID NO: 5） CDR-L3 QQHYSPPYT （SEQ ID NO: 6）

在一些實施例中，所述抗體包含重鏈可變結構域（VH），其包含如SEQ ID NO: 7列出的胺基酸序列。

在一些實施例中，所述抗體包含輕鏈可變結構域（VL），其包含如SEQ ID NO: 8列出的胺基酸序列。

在一些實施例中，所述抗體包含重鏈可變結構域（VH），其含有如SEQ ID NO: 7列出的胺基酸序列；和輕鏈可變結構域（VL），其含有如SEQ ID NO: 8列出的胺基酸序列。 QVQLVQSGAEVAKPGTSVKLSCKASGYTFTDYWMQWVKQRPGQGLEWIGTIYPGDGDTGYAQKFQGKATLTADKSSKTVYMHLSSLASEDSAVYYCARGDYYGSNSLDYWGQGTSVTVSS （SEQ ID NO: 7） DIVMTQSHLSMSTSLGDPVSITCKASQDVSTVVAWYQQKPGQSPRRLIYSASYRYIGVPDRFTGSGAGTDFTFTISSVQAEDLAVYYCQQHYSPPYTFGGGTKLEIKR （SEQ ID NO: 8）

在一些實施例中，根據本公開文本的抗CD38抗體是伊沙妥昔單抗。伊沙妥昔單抗的重鏈（HC）包含如SEQ ID NO: 9列出的胺基酸序列，且依沙妥昔單抗的輕鏈（LC）包含如SEQ ID NO: 10列出的胺基酸序列。 QVQLVQSGAEVAKPGTSVKLSCKASGYTFTDYWMQWVKQRPGQGLEWIGTIYPGDGDTGYAQKFQGKATLTADKSSKTVYMHLSSLASEDSAVYYCARGDYYGSNSLDYWGQGTSVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK （SEQ ID NO: 9） DIVMTQSHLSMSTSLGDPVSITCKASQDVSTVVAWYQQKPGQSPRRLIYSASYRYIGVPDRFTGSGAGTDFTFTISSVQAEDLAVYYCQQHYSPPYTFGGGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC （SEQ ID NO: 10）

在一些實施例中，所述抗體用於治療CD38⁺ 血液惡性腫瘤，諸如多發性骨髓瘤（MM）（包括復發和/或難治性MM），或已接受一種或多種MM先前療法的患有MM的患者。

在本公開文本的上下文中，本文所用的術語“治療（treating或treatment）”意指逆轉、減輕、抑制所述術語所適用的障礙或病症或者所述障礙或病症的一種或多種症狀的進展，或預防所述術語所適用的障礙或病症或者所述障礙或病症的一種或多種症狀。在某些實施例中，本文所用的術語“治療（treating或treatment）”意指逆轉、減輕、抑制所述術語所適用的障礙或病症或者所述障礙或病症的一種或多種症狀的進展。

如本文所用的術語“治療CD38⁺ 血液惡性腫瘤”意指抑制腫瘤的CD38⁺ 惡性細胞的生長和/或從所述CD38⁺ 腫瘤轉移的進展。這樣的治療還可以導致腫瘤生長的消退，即，可量測腫瘤的尺寸減小。

在本公開文本的上下文中，抗體的“治療有效量”意指足以治療本文所述的CD38⁺ 血液惡性腫瘤的足量抗體。

在某些實施例中，皮下投予個體的抗體的所述治療有效量為每劑500 mg至2000 mg的抗體的劑量。

在某些實施例中，所述投予個體的抗體的治療有效量為每劑1000 mg的抗體。在某些實施例中，所述投予個體的抗體的治療有效量為每劑1400 mg的抗體。在某些實施例中，所述投予個體的抗體的治療有效量為每劑1600 mg的抗體。

如本文所用，術語“個體”是指哺乳動物。在某些實施例中，術語“個體”是指人類。

本公開文本的抗體可以每周一次（QW）、每兩周一次（Q2W）投予或每周一次和兩周一次組合投予。在一些實施例中，將所述抗體每四周投予一次。

例如，可以將所述抗體以每周一次從500 mg至1400 mg的劑量投予個體，持續四周（周期1），隨後每兩周一次（例如，在每個後續四周周期的第1天和第15天）。

在一些實施例中，每周一次向個體投予1000mg 抗體，持續四周（周期1），然後在每個後續四周周期的第1天和第15天向個體投予1000 mg抗體。

在一些實施例中，每兩周一次將1000 mg的抗體投予所述個體。

在一些實施例中，每隔一周一次向個體投予1400mg 抗體，持續四周（周期1），然後在每個後續四周周期的第1天和第15天投予1400 mg抗體。

在一些實施例中，每兩周一次將1400 mg的抗體投予所述個體。在一些實施例中，可以根據間斷程式來投予抗體，每次投予之間的間隔為1周或2周，取決於對先前投予的耐受性，所述間隔可以延長1至2周。

如本文所用的“周期”是指4個日曆周，即28天。投予“每周一次”意指每7天一次。投予“兩周一次”意指每14天一次。投予每周期一次或每四周一次意指每28天一次。

在一些實施例中，抗體投予的周期數可以是2至50，諸如2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、16、18、20、25、30、35、45、50個周期。本發明的調配物

本公開文本提供了抗CD38抗體的某些調配物。在一些實施例中，所述調配物是液體調配物。在某些實施例中，此類調配物（抗體調配物）適合於投予需要用所述抗CD38抗體治療的個體。

有利地，本公開文本的抗體調配物可以藉由注射或藉由輸注（包括大體積皮下輸注）皮下投予個體。

在某些實施例中，本公開文本關於抗CD38抗體的調配物，其包含高濃度的抗體，pH為5.5-7.0，且在20ºC下的粘度最多為25 mPa·s。

在某些實施例中，本公開文本關於包含至少100 mg/mL的抗CD38抗體、降粘劑、穩定劑、緩衝劑和表面活性劑的調配物，其中所述調配物的pH為5.5-7.0，且在20ºC下的粘度最多為25 mPa·s。

在一些實施例中，提供了包含至少100 mg/mL的抗CD38抗體的抗體的調配物，其中所述抗CD38抗體包含可變重鏈區（VH），其包含分別含有SEQ ID NO: 1-3中列出的胺基酸序列的三個互補決定區（CDR）CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3；以及可變輕鏈區（VL），其包含分別含有SEQ ID NO: 4-6中列出的胺基酸序列的三個CDR CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，所述調配物包含降粘劑、穩定劑、緩衝劑和表面活性劑，且所述調配物的pH為5.5-7.0，且在20ºC下的粘度最多為25 mPa·s。

在某些實施例中，所述調配物包含125-155 mg/mL的抗CD38抗體。

在某些實施例中，所述調配物包含140 mg/mL的抗CD38抗體。

在某些實施例中，所述降粘劑是90-150 mM Arg-Cl。

在某些實施例中，所述降粘劑是90-130 mM Arg-Cl。

在某些實施例中，所述降粘劑是110 mM Arg-Cl。

在某些實施例中，所述穩定劑是蔗糖。

在某些實施例中，所述水性調配物包含125-155 mg/mL的抗CD38抗體、90-150 mM Arg-Cl、和蔗糖。

在某些實施例中，所述調配物包含140 mg/mL的抗CD38抗體、90-150 mM Arg-Cl、和蔗糖。

在某些實施例中，所述調配物包含125-155 mg/mL的抗CD38抗體、90-130 mM Arg-Cl、和蔗糖。

在某些實施例中，所述調配物包含125-155 mg/mL的抗CD38抗體，110 mM Arg-Cl、和蔗糖。

在某些實施例中，所述調配物包含140 mg/mL的抗CD38抗體、90-130 mM Arg-Cl、和蔗糖。

在某些實施例中，所述調配物包含140 mg/mL的抗CD38抗體、110 mM Arg-Cl、和蔗糖。

在某些實施例中，所述調配物包含2%（w/v）的蔗糖。

在某些實施例中，所述調配物包含125-155 mg/mL的抗CD38抗體、90-150 mM Arg-Cl和2%（w/v）的蔗糖。

在某些實施例中，所述調配物包含140 mg/mL的抗CD38抗體、90-130 mM Arg-Cl、和2% (w/v)的蔗糖。

在某些實施例中，所述調配物包含140 mg/mL的抗CD38抗體、110 mM Arg-Cl、和2% (w/v)的蔗糖。

在某些實施例中，所述調配物包含表面活性劑。

在某些實施例中，所述表面活性劑是泊洛沙姆188。

在某些實施例中，所述降粘劑是90-150 mM Arg-Cl，所述穩定劑是蔗糖，且所述表面活性劑是泊洛沙姆188。

在某些實施例中，所述降粘劑是90-150 mM Arg-Cl，所述穩定劑是2%（w/v）的蔗糖，且所述表面活性劑是泊洛沙姆188。

在某些實施例中，所述溶液包含125-155 mg/mL的抗CD38抗體、90-150 mM Arg-Cl、2%（w/v）的蔗糖、和泊洛沙姆188。

在某些實施例中，所述溶液包含140 mg/mL的抗CD38抗體、90-150 mM Arg-Cl、2%（w/v）的蔗糖、和泊洛沙姆188。

在某些實施例中，所述降粘劑是90-130 mM Arg-Cl，所述穩定劑是蔗糖，且所述表面活性劑是泊洛沙姆188。

在某些實施例中，所述降粘劑是110 mM Arg-Cl，所述穩定劑是蔗糖，且所述表面活性劑是泊洛沙姆188。

在某些實施例中，所述降粘劑是90-125 mM Arg-Cl，所述穩定劑是2%（w/v）的蔗糖，且所述表面活性劑是泊洛沙姆188。

在某些實施例中，所述降粘劑是110 mM Arg-Cl，所述穩定劑是2%（w/v）的蔗糖，且所述表面活性劑是泊洛沙姆188。

在某些實施例中，所述溶液包含125-155 mg/mL的抗CD38抗體、90-125 mM Arg-Cl、2%（w/v）的蔗糖、和泊洛沙姆188。

在某些實施例中，所述溶液包含125-155 mg/mL的抗CD38抗體、110 mM Arg-Cl、2%（w/v）的蔗糖、和泊洛沙姆188。

在某些實施例中，所述溶液包含140 mg/mL的抗CD38抗體、90-125 mM Arg-Cl、2%（w/v）的蔗糖、和泊洛沙姆188。

在某些實施例中，所述溶液包含140 mg/mL的抗CD38抗體、110 mM Arg-Cl、2%（w/v）的蔗糖、和泊洛沙姆188。

在某些實施例中，所述調配物包含0.4%（w/v）的泊洛沙姆188。

在某些實施例中，所述降粘劑是90-150 mM Arg-Cl，所述穩定劑是蔗糖，且所述表面活性劑是0.4%（w/v）的泊洛沙姆188。

在某些實施例中，所述降粘劑是90-150 mM Arg-Cl，所述穩定劑是2%（w/v）的蔗糖，且所述表面活性劑是0.4%（w/v）的泊洛沙姆188。

在某些實施例中，所述溶液包含125-155 mg/mL的抗CD38抗體、90-150 mM Arg-Cl、2%（w/v）的蔗糖、和0.4%（w/v）的泊洛沙姆188。

在某些實施例中，所述溶液包含140 mg/mL的抗CD38抗體、90-150 mM Arg-Cl、2%（w/v）的蔗糖、和0.4%（w/v）的泊洛沙姆188。

在某些實施例中，所述降粘劑是90-125 mM Arg-Cl，所述穩定劑是蔗糖，且所述表面活性劑是0.4%（w/v）的泊洛沙姆188。

在某些實施例中，所述降粘劑是110 mM Arg-Cl，所述穩定劑是蔗糖，且所述表面活性劑是0.4%（w/v）的泊洛沙姆188。

在某些實施例中，所述降粘劑是90-125 mM Arg-Cl，所述穩定劑是2%（w/v）的蔗糖，且所述表面活性劑是0.4%（w/v）的泊洛沙姆188。

在某些實施例中，所述降粘劑是110 mM Arg-Cl，所述穩定劑是2%（w/v）的蔗糖，且所述表面活性劑是0.4%（w/v）的泊洛沙姆188。

在某些實施例中，所述溶液包含125-155 mg/mL的抗CD38抗體、90-125 mM Arg-Cl、2%（w/v）的蔗糖、和0.4%（w/v）的泊洛沙姆188。

在某些實施例中，所述溶液包含125-155 mg/mL的抗CD38抗體、110 mM Arg-Cl、2%（w/v）的蔗糖、和0.4%（w/v）的泊洛沙姆188。

在某些實施例中，所述溶液包含140 mg/mL的抗CD38抗體、90-125 mM Arg-Cl、2%（w/v）的蔗糖、和0.4%（w/v）的泊洛沙姆188。

在某些實施例中，所述溶液包含140 mg/mL的抗CD38抗體、110 mM Arg-Cl、2%（w/v）的蔗糖、和0.4%（w/v）的泊洛沙姆188。

在某些實施例中，所述調配物包含緩衝劑。

在某些實施例中，所述緩衝劑是組胺酸。

在某些實施例中，所述降粘劑是90-150 mM Arg-Cl，所述穩定劑是蔗糖，所述表面活性劑是泊洛沙姆188，且所述緩衝劑是組胺酸。

在某些實施例中，所述降粘劑是90-150 mM Arg-Cl，所述穩定劑是2%（w/v）的蔗糖，所述表面活性劑是泊洛沙姆188，且所述緩衝劑是組胺酸。

在某些實施例中，所述降粘劑是90-150 mM Arg-Cl，所述穩定劑是2%（w/v）的蔗糖，所述表面活性劑是0.4%（w/v）的泊洛沙姆188，且所述緩衝劑是組胺酸。

在某些實施例中，所述溶液包含125-155 mg/mL的抗CD38抗體、90-150 mM Arg-Cl、2%（w/v）的蔗糖、0.4%（w/v）的泊洛沙姆188、和組胺酸。

在某些實施例中，所述溶液包含140 mg/mL的抗CD38抗體、90-150 mM Arg-Cl、2%（w/v）的蔗糖、0.4%（w/v）的泊洛沙姆188、和組胺酸。

在某些實施例中，所述降粘劑是90-125 mM Arg-Cl，所述穩定劑是蔗糖，所述表面活性劑是泊洛沙姆188，且所述緩衝劑是組胺酸。

在某些實施例中，所述降粘劑是110 mM Arg-Cl，所述穩定劑是蔗糖，所述表面活性劑是泊洛沙姆188，且所述緩衝劑是組胺酸。

在某些實施例中，所述降粘劑是90-125 mM Arg-Cl，所述穩定劑是2%（w/v）的蔗糖，所述表面活性劑是泊洛沙姆188，且所述緩衝劑是組胺酸。

在某些實施例中，所述降粘劑是110 mM Arg-Cl，所述穩定劑是2%（w/v）的蔗糖，所述表面活性劑是泊洛沙姆188，且所述緩衝劑是組胺酸。

在某些實施例中，所述降粘劑是90-125 mM Arg-Cl，所述穩定劑是2%（w/v）的蔗糖，所述表面活性劑是0.4%（w/v）的泊洛沙姆188，且所述緩衝劑是組胺酸。

在某些實施例中，所述降粘劑是110 mM Arg-Cl，所述穩定劑是2%（w/v）的蔗糖，所述表面活性劑是0.4%（w/v）的泊洛沙姆188，且所述緩衝劑是組胺酸。

在某些實施例中，所述溶液包含125-155 mg/mL的抗CD38抗體、90-125 mM Arg-Cl、2%（w/v）的蔗糖、0.4%（w/v）的泊洛沙姆188、和組胺酸。

在某些實施例中，所述溶液包含125-155 mg/mL的抗CD38抗體、110 mM Arg-Cl、2%（w/v）的蔗糖、0.4%（w/v）的泊洛沙姆188、和組胺酸。

在某些實施例中，所述溶液包含140 mg/mL的抗CD38抗體、90-125 mM Arg-Cl、2%（w/v）的蔗糖、0.4%（w/v）的泊洛沙姆188、和組胺酸。

在某些實施例中，所述溶液包含140 mg/mL的抗CD38抗體、110 mM Arg-Cl、2%（w/v）的蔗糖、0.4%（w/v）的泊洛沙姆188、和組胺酸。

在某些實施例中，所述緩衝劑是9 mM組胺酸。

在某些實施例中，所述降粘劑是90-150 mM Arg-Cl，所述穩定劑是蔗糖，所述表面活性劑是泊洛沙姆188，且所述緩衝劑是9 mM組胺酸。

在某些實施例中，所述降粘劑是90-150 mM Arg-Cl，所述穩定劑是2%（w/v）的蔗糖，所述表面活性劑是泊洛沙姆188，且所述緩衝劑是9 mM組胺酸。

在某些實施例中，所述降粘劑是90-150 mM Arg-Cl，所述穩定劑是2%（w/v）的蔗糖，所述表面活性劑是0.4%（w/v）的泊洛沙姆188，且所述緩衝劑是9 mM組胺酸。

在某些實施例中，所述溶液包含125-155 mg/mL的抗CD38抗體、90-150 mM Arg-Cl、2%（w/v）的蔗糖、0.4%（w/v）的泊洛沙姆188、和9 mM組胺酸。

在某些實施例中，所述溶液包含140 mg/mL的抗CD38抗體、90-150 mM Arg-Cl、2%（w/v）的蔗糖、0.4%（w/v）的泊洛沙姆188、和9 mM組胺酸。

在某些實施例中，所述降粘劑是90-125 mM Arg-Cl，所述穩定劑是蔗糖，所述表面活性劑是泊洛沙姆188，且所述緩衝劑是9 mM組胺酸。

在某些實施例中，所述降粘劑是110 mM Arg-Cl，所述穩定劑是蔗糖，所述表面活性劑是泊洛沙姆188，且所述緩衝劑是9 mM組胺酸。

在某些實施例中，所述降粘劑是90-125 mM Arg-Cl，所述穩定劑是2%（w/v）的蔗糖，所述表面活性劑是泊洛沙姆188，且所述緩衝劑是9 mM組胺酸。

在某些實施例中，所述降粘劑是110 mM Arg-Cl，所述穩定劑是2%（w/v）的蔗糖，所述表面活性劑是泊洛沙姆188，且所述緩衝劑是9 mM組胺酸。

在某些實施例中，所述降粘劑是90-125 mM Arg-Cl，所述穩定劑是2%（w/v）的蔗糖，所述表面活性劑是0.4%（w/v）的泊洛沙姆188，且所述緩衝劑是9 mM組胺酸。

在某些實施例中，所述降粘劑是110 mM Arg-Cl，所述穩定劑是2%（w/v）的蔗糖，所述表面活性劑是0.4%（w/v）的泊洛沙姆188，且所述緩衝劑是9 mM組胺酸。

在某些實施例中，所述溶液包含125-155 mg/mL的抗CD38抗體、90-125 mM Arg-Cl、2%（w/v）的蔗糖、0.4%（w/v）的泊洛沙姆188、和9 mM組胺酸。

在某些實施例中，所述溶液包含125-155 mg/mL的抗CD38抗體、110 mM Arg-Cl、2%（w/v）的蔗糖、0.4%（w/v）的泊洛沙姆188、和9 mM組胺酸。

在某些實施例中，所述溶液包含140 mg/mL的抗CD38抗體、90-125 mM Arg-Cl、2%（w/v）的蔗糖、0.4%（w/v）的泊洛沙姆188、和9 mM組胺酸。

在某些實施例中，所述溶液包含140 mg/mL的抗CD38抗體、110 mM Arg-Cl、2%（w/v）的蔗糖、0.4%（w/v）的泊洛沙姆188、和9 mM組胺酸。

在某些實施例中，所述降粘劑是90-150 mM Lys-Ac。

在某些實施例中，所述降粘劑是125 mM Lys-Ac。

在某些實施例中，所述調配物包含125-155 mg/mL的抗CD38抗體、90-150 mM Lys-Ac、和蔗糖。

在某些實施例中，所述調配物包含140 mg/mL的抗CD38抗體、90-150 mM Lys-Ac、和蔗糖。

在某些實施例中，所述調配物包含125-155 mg/mL的抗CD38抗體、125 mM Lys-Ac、和蔗糖。

在某些實施例中，所述調配物包含140 mg/mL的抗CD38抗體、125 mM Lys-Ac、和蔗糖。

在某些實施例中，所述調配物包含125-155 mg/mL的抗CD38抗體、90-150 mM Lys-Ac和2%（w/v）的蔗糖。

在某些實施例中，所述調配物包含140 mg/mL的抗CD38抗體、90-150 mM Lys-Ac和2%（w/v）的蔗糖。

在某些實施例中，所述調配物包含125-155 mg/mL的抗CD38抗體、125 mM Lys-Ac和2%（w/v）的蔗糖。

在某些實施例中，所述調配物包含140 mg/mL的抗CD38抗體、125 mM Lys-Ac和2%（w/v）的蔗糖。

在某些實施例中，所述調配物包含表面活性劑。

在某些實施例中，所述表面活性劑是聚山梨醇酯80。

在某些實施例中，所述降粘劑是90-150 mM Lys-Ac，所述穩定劑是蔗糖，且所述表面活性劑是聚山梨醇酯80。

在某些實施例中，所述調配物包含125-155 mg/mL的抗CD38抗體、90-150 mM Lys-Ac、蔗糖、和聚山梨醇酯80。

在某些實施例中，所述調配物包含140 mg/mL的抗CD38抗體、90-150 mM Lys-Ac、蔗糖、和聚山梨醇酯80。

在某些實施例中，所述降粘劑是90-150 mM Lys-Ac，所述穩定劑是2%（w/v）的蔗糖，且所述表面活性劑是聚山梨醇酯80。

在某些實施例中，所述調配物包含125-155 mg/mL的抗CD38抗體、90-150 mM Lys-Ac、2%（w/v）的蔗糖、和聚山梨醇酯80。

在某些實施例中，所述調配物包含140 mg/mL的抗CD38抗體、90-150 mM Lys-Ac、2%（w/v）的蔗糖、和聚山梨醇酯80。

在某些實施例中，所述降粘劑是125 mM Lys-Ac，所述穩定劑是蔗糖，且所述表面活性劑是聚山梨醇酯80。

在某些實施例中，所述調配物包含125-155 mg/mL的抗CD38抗體、125 mM Lys-Ac、蔗糖、和聚山梨醇酯80。

在某些實施例中，所述調配物包含140 mg/mL的抗CD38抗體、125 mM Lys-Ac、蔗糖、和聚山梨醇酯80。

在某些實施例中，所述降粘劑是125 mM Lys-Ac，所述穩定劑是2%（w/v）的蔗糖，且所述表面活性劑是聚山梨醇酯80。

在某些實施例中，所述調配物包含125-155 mg/mL的抗CD38抗體、125 mM Lys-Ac、2%（w/v）的蔗糖、和聚山梨醇酯80。

在某些實施例中，所述調配物包含140 mg/mL的抗CD38抗體、125 mM Lys-Ac、2%（w/v）的蔗糖、和聚山梨醇酯80。

在某些實施例中，所述降粘劑是90-150 mM Lys-Ac，所述穩定劑是蔗糖，且所述表面活性劑是0.04%（w/v）的聚山梨醇酯80。

在某些實施例中，所述調配物包含125-155 mg/mL的抗CD38抗體、90-150 mM Lys-Ac、蔗糖和0.04%（w/v）的聚山梨醇酯80。

在某些實施例中，所述調配物包含140 mg/mL的抗CD38抗體、90-150 mM Lys-Ac、蔗糖和0.04%（w/v）的聚山梨醇酯80。

在某些實施例中，所述降粘劑是90-150 mM Lys-Ac，所述穩定劑是2%（w/v）的蔗糖，且所述表面活性劑是0.04%（w/v）的聚山梨醇酯80。

在某些實施例中，所述調配物包含125-155 mg/mL的抗CD38抗體、90-150 mM Lys-Ac、2%（w/v）的蔗糖和0.04%（w/v）的聚山梨醇酯80。

在某些實施例中，所述調配物包含140 mg/mL的抗CD38抗體、90-150 mM Lys-Ac、2%（w/v）的蔗糖和0.04%（w/v）的聚山梨醇酯80。

在某些實施例中，所述降粘劑是125 mM Lys-Ac，所述穩定劑是蔗糖，且所述表面活性劑是0.04%（w/v）的聚山梨醇酯80。

在某些實施例中，所述調配物包含125-155 mg/mL的抗CD38抗體、125 mM Lys-Ac、蔗糖和0.04%（w/v）的聚山梨醇酯80。

在某些實施例中，所述調配物包含140 mg/mL的抗CD38抗體、125 mM Lys-Ac、蔗糖和0.04%（w/v）的聚山梨醇酯80。

在某些實施例中，所述降粘劑是125 mM Lys-Ac，所述穩定劑是2%（w/v）的蔗糖，且所述表面活性劑是0.04%（w/v）的聚山梨醇酯80。

在某些實施例中，所述調配物包含125-155 mg/mL的抗CD38抗體、125 mM Lys-Ac、2%（w/v）的蔗糖和0.04%（w/v）的聚山梨醇酯80。

在某些實施例中，所述調配物包含140 mg/mL的抗CD38抗體、125 mM Lys-Ac、2%（w/v）的蔗糖和0.04%（w/v）的聚山梨醇酯80。

在某些實施例中，所述調配物的pH為5.9-7.0。

在某些實施例中，所述調配物的pH為5.9-6.5。

在某些實施例中，所述調配物的pH為6.2。

在一些實施例中，所述調配物包含140 mg/mL的抗CD38抗體，其中所述抗CD38抗體包含可變重鏈區（VH），其包含分別含有SEQ ID NO: 1-3中列出的胺基酸序列的三個互補決定區（CDR）CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3；以及可變輕鏈區（VL），其包含分別含有SEQ ID NO: 4-6中列出的胺基酸序列的三個CDR CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，所述調配物包含9 mM組胺酸、110 mM Arg-Cl、2%（w/v）的蔗糖和0.4%（w/v）的泊洛沙姆188，且其中所述調配物的pH為6.2-6.3，且在20ºC下的粘度最多為14 mPa·s。

本公開文本的一個方面關於包含140 mg/mL的抗CD38抗體的調配物，其中所述抗CD38抗體包含可變重鏈區（VH），其包含分別含有SEQ ID NO: 1-3中列出的胺基酸序列的三個互補決定區（CDR）CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3；以及可變輕鏈區（VL），其包含分別含有SEQ ID NO: 4-6中列出的胺基酸序列的三個CDR CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，所述調配物包含125 mM Lys-Ac、2%（w/v）的蔗糖以及0.04（w/v）的聚山梨醇酯80，且所述調配物的pH為6.2，且在20ºC下的粘度最多為14 mPa·s。

根據每個前述方面和實施例，在某些實施例中，抗CD38抗體的VH包含SEQ ID NO: 7中列出的胺基酸序列。

根據每個前述方面和實施例，在某些實施例中，抗CD38抗體的VL包含SEQ ID NO: 8中列出的胺基酸序列。

根據每個前述方面和實施例，在某些實施例中，所述抗CD38抗體的VH包含SEQ ID NO: 7中列出的胺基酸序列，且所述抗CD38抗體的VL包含SEQ ID NO: 8中列出的胺基酸序列。

根據每個前述方面和實施例，在某些實施例中，所述抗CD38抗體是伊沙妥昔單抗。

根據每個前述方面和實施例，所述調配物進一步包含水，例如注射用水（WFI），其量足以實現其他成分的指定濃度。

根據每個前述方面和實施例，在某些實施例中，所述調配物適合於皮下投予。例如，所述調配物可以是無菌的。在某些實施例中，可以將調配物的組分合併以形成溶液，然後可以將溶液無菌過濾以提供無菌調配物。

在某些實施例中，完成的調配物基本上不含溶解氧。例如，可以用氮氣平衡調配物，然後在氮氣氣氛下密封。

仍進一步根據每個前述方面和實施例，在某些實施例中，所述調配物可以進一步包含至少一種用於改善穩定性的另外的賦形劑或組分，例如防腐劑。經包裝的醫藥產品

本公開文本的一個方面關於一種經包裝的醫藥產品，其包含無菌容器，所述無菌容器包含單一劑量的本公開文本的調配物。合適的無菌容器包括但不限於小瓶、安瓿瓶、瓶子、袋子、小袋、預填充式注射器、注射器驅動器、輸液泵、以及適合與注射器驅動器和/或輸液泵一起使用的容器。合適的容器包括一次性容器和多次使用容器。在某些實施例中，容器是一次性容器，例如含有對應於單劑量的量的抗體的小瓶。

如本文所使用的注射器驅動器是指構造或佈置成接合注射器的柱塞並軸向向前和/或向後驅動它以使注射器的內容物以期望的速率遞送的機械或氣動裝置。注射器驅動器在業內是已知的，並且包括，例如但不限於，美國專利號5,064,413；5,449,345；5,954,695；6,428,509；6,645,177；7,195,610；8,231,576和8,814,830中公開的裝置，其全部內容藉由引用併入本文。

輸液泵在業內是眾所周知的，並且包括，例如，Baxter Colleague CXE定量輸液泵和Cané Crono泵。

本公開文本的一個方面關於一種裝置，所述裝置包含治療有效量的本公開文本的調配物。在某些實施例中，所述裝置可以是例如注射器、注射器驅動器和包含所述調配物的輸液泵。在某些實施例中，所述注射器是預填充式注射器。

在一些實施例中，本公開文本的抗體調配物以固定體積形式提供。這樣的調配物可以存在於例如小瓶或安瓿瓶中或作為小瓶或安瓿瓶存在。例如，在一些實施例中，以約10 mL至約20 mL的體積提供本公開文本的抗體調配物。在一些實施例中，以約10 mL至約15 mL的體積提供本公開文本的抗體調配物。在一些實施例中，以約10 mL至約12.5 mL的體積提供本公開文本的抗體調配物。例如，在包含140 mg/mL的抗體的調配物的一個實施例中，含有10 mL這樣的調配物的小瓶含有1400 mg抗體。治療方法

本公開文本的調配物可以用在治療以CD38⁺ 細胞的存在或活性為特徵的疾病或病症的方法中。這樣的疾病或病症可以包括但不限於CD38⁺ 血液惡性腫瘤、自體免疫疾病或病症、發炎性疾病或病症以及LPS或敗血症誘發的腎損傷或功能不全。所述方法通常需要向有需要的個體投予有效量的本文提供的配製抗體，其中所述投予是藉由皮下注射或輸注，任選地藉由大體積（例如，10 mL或更多）皮下輸注。在某些實施例中，所述個體是人。

本公開文本的一個方面是在有需要的人類個體中治療CD38⁺ 血液惡性腫瘤的方法，所述方法包括向所述人類個體投予有效量的包含至少100 mg/mL的抗CD38抗體的調配物，其中所述抗CD38抗體包含可變重鏈區（VH），其包含分別含有SEQ ID NO: 1-3中列出的胺基酸序列的三個互補決定區（CDR）CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3；以及可變輕鏈區（VL），其包含分別含有SEQ ID NO: 4-6中列出的胺基酸序列的三個CDR CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，所述調配物包含降粘劑、穩定劑、緩衝劑和表面活性劑，且所述調配物的pH為5.7-7.0，且在20ºC下的粘度最多為25 mPa·s，且其中投予是皮下投予。

在某些實施例中，所述降粘劑是90-150 mM Arg-Cl。

在某些實施例中，所述降粘劑是90-130 mM Arg-Cl。

在某些實施例中，所述降粘劑是110 mM Arg-Cl。

在某些實施例中，所述表面活性劑是泊洛沙姆188。

在某些實施例中，所述緩衝劑是組胺酸。

在某些實施例中，所述緩衝劑是9 mM組胺酸。

在某些實施例中，所述降粘劑是90-150 mM Lys-Ac。

在某些實施例中，所述降粘劑是125 mM Lys-Ac。

在某些實施例中，所述表面活性劑是聚山梨醇酯80。

在某些實施例中，所述調配物包含125-155 mg/mL的抗CD38抗體。

在某些實施例中，所述調配物包含140 mg/mL的抗CD38抗體。

在某些實施例中，所述穩定劑是蔗糖。

在某些實施例中，所述穩定劑是2%（w/v）的蔗糖。

在某些實施例中，所述調配物的pH為5.9-7.0。

在某些實施例中，所述調配物的pH為5.9-6.5

在某些實施例中，所述調配物的pH為6.2。

在某些實施例中，所述調配物的pH為6.3。

本公開文本的一個方面是在有需要的人類個體中治療CD38⁺ 血液惡性腫瘤的方法，所述方法包括向所述人類個體投予有效量的包含140 mg/mL的抗CD38抗體的調配物，其中所述抗CD38抗體包含可變重鏈區（VH），其包含分別含有SEQ ID NO: 1-3中列出的胺基酸序列的三個互補決定區（CDR）CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3；以及可變輕鏈區（VL），其包含分別含有SEQ ID NO: 4-6中列出的胺基酸序列的三個CDR CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，所述調配物包含9 mM組胺酸、110 mM Arg-Cl、2%（w/v）的蔗糖和0.4%（w/v）的泊洛沙姆188，且所述調配物的pH為6.2，且在20ºC下的粘度最多為14 mPa·s，且其中所述投予是皮下投予。

本公開文本的一個方面是在有需要的人類個體中治療CD38⁺ 血液惡性腫瘤的方法，所述方法包括向所述人類個體投予有效量的包含140 mg/mL的抗CD38抗體的調配物，其中所述抗CD38抗體包含可變重鏈區（VH），其包含分別含有SEQ ID NO: 1-3中列出的胺基酸序列的三個互補決定區（CDR）CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3；以及可變輕鏈區（VL），其包含分別含有SEQ ID NO: 4-6中列出的胺基酸序列的三個CDR CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，所述調配物包含125 mM Lys-Ac、2%（w/v）的蔗糖以及0.04%（w/v）的聚山梨醇酯80，且所述調配物的pH為6.2，且在20ºC下的粘度最多為14 mPa·s，且其中所述投予是皮下投予。

在根據上述每種方法的某些實施例中，所述皮下投予包括一次或多次皮下注射。

在根據上述每種方法的某些實施例中，所述皮下投予包括一次或多次皮下輸注。

在根據上述每種方法的某些實施例中，所述皮下投予包括一次或多次大體積皮下輸注。如本文所用，“大體積輸注”是指大於或等於5 mL的輸注體積。在某些實施例中，“大體積輸注”是指約5-10 mL、約10-15 mL、約15-20 mL、約20-25 mL或約25-30 mL的輸注體積。在一個實施例中，“大體積輸注”是指約5-10 mL的輸注體積。在一個實施例中，“大體積輸注”是指約10-15 mL的輸注體積。在一個實施例中，“大體積輸注”是指約15-20 mL的輸注體積。在一個實施例中，“大體積輸注”是指約20-25 mL的輸注體積。在一個實施例中，“大體積輸注”是指約25-30 mL的輸注體積。

令人驚訝地，發現大體積輸注本文提供的組合物可有效實現全身遞送治療有效量的抗CD38抗體（諸如伊沙妥昔單抗），以治療以CD38⁺ 細胞的存在和/或活性為特徵的疾病或病症，包括人類CD38⁺ 血液惡性腫瘤。令人驚訝地，當在不存在諸如透明質酸酶等的分散劑的情況下對小型豬皮下投予時，本文提供的抗體調配物展現至少89%的生物可用率。因此，本文提供了不包含生物分散劑的調配物。

如實例6中所公開，在30分鐘的時間內以1800 mg/動物將伊沙妥昔單抗單次靜脈內（IV）輸注給小型豬之後，在整個672小時的劑量後採樣期間（AUC_最後）的平均AUC為364,000 hr*μg/mL。在以0.5、1或2 mL/min的流速以1806 mg/動物將伊沙妥昔單抗單次皮下（SC）輸注給小型豬之後，在整個672小時的劑量後採樣期間（AUC_最後）的平均AUC分別為326,000、565,000和369,000 hr*μg/mL。此外，當以0.5至2 mL/min的流速藉由SC輸注以1806 mg/動物（140 mg/mL的溶液）的劑量投予時，小型豬中伊沙妥昔單抗的絕對SC生物可用率至少為89%。

如本文所用，“個體”和/或“有需要的個體”是患有CD38⁺ 血液惡性腫瘤或被懷疑患有CD38⁺ 血液惡性腫瘤的個體。如本文所用，“個體”也可以指患者。

根據本公開文本的個體可以是男性或女性。

在一些實施例中，所述個體先前已經用一種或多種適合於治療表現CD38的血液惡性腫瘤的藥劑或療法進行了治療。先前的抗癌療法可以是例如皮質類固醇（例如，地塞米松）、化療藥物、蛋白酶體抑制劑、免疫調節藥物、放射療法、骨髓和/或幹細胞移植以及免疫療法。

“化療藥物”是例如用於治療血液惡性腫瘤的細胞毒性劑，包括但不限於阿糖胞苷（胞嘧啶阿拉伯糖苷或ara-C）和蒽環類藥物（諸如柔紅黴素和/或道諾黴素、多柔比星和脂質體多柔比星、伊達比星和米托蒽醌）、吉妥珠單抗、氯法拉濱、克拉屈濱、羥基脲、依託泊苷、安吖啶、FLT3抑制劑和脫甲基劑（5-氮雜胞苷和地西他濱）、美法侖、環磷醯胺和長春新鹼。

蛋白酶體抑制劑包括例如硼替佐米、卡非佐米和伊沙佐米。免疫調節藥物包括例如沙利度胺、來那度胺和泊馬度胺。

“放射療法”或“放射”是指用於除去癌細胞的高能放射。在骨髓或外周血幹細胞移植之前可能要使用放射療法。

“骨髓和/或幹細胞移植”是指旨在恢復被一種或多種高劑量化療藥物和/或放射療法破壞的幹細胞的細胞移植。幹細胞的來源包括骨髓、外周血或臍帶血。根據所移植的幹細胞的來源，所述程式可以分為骨髓移植（BMT）或外周血幹細胞移植（PBSCT）或臍帶血移植（UCBT）。此外，骨髓和/或幹細胞移植可以指自體幹細胞移植和/或同種異體移植。

在“自體移植”中，個體自體的幹細胞從他或她的骨髓或外周血中取出、冷凍並在患者接受治療（一種或多種高劑量化療藥物和/或放射）時儲存。可以使用稱為“清除（purging）”的過程來嘗試除去樣品中的任何癌細胞。治療後，幹細胞然後被重新注入個體的血液中。

“同種異體移植”是來自匹配供體的移植。同種異體骨髓移植的優勢在於，來自供體的移植細胞可以建立新的免疫系統，從而可以檢測出白血病細胞是外來的，並將其除去。同種異體移植的缺點是匹配供體的限制和副作用。

“免疫療法”是指刺激個體的免疫系統，以攻擊對所述疾病負責的惡性腫瘤細胞。這可以藉由對個體進行免疫，例如藉由投予癌症疫苗來進行（在這種情況下，對個體自體的免疫系統進行訓練以識別腫瘤細胞為要被破壞的標靶），或者藉由將治療性抗體作為藥物進投予（在這種情況下，個體的免疫系統會被治療性抗體募集來破壞腫瘤細胞）。

在本公開文本的上下文中，個體可能先前已經接受過血液惡性腫瘤的治療，但是復發和/或是難治性的。

在一些實施例中，所述個體患有多發性骨髓瘤。在一些實施例中，所述個體患有復發和/或難治性多發性骨髓瘤。

“復發”是指疾病或病症（諸如血液惡性腫瘤），其先前已經被治療且正在進展且需要開始其他治療，但是不符合原發性難治性或復發和難治性疾病的標準。

“難治性”是指在初次或挽救療法中無反應（在療法中未能實現最小反應或發展為進展性疾病）或在最後一次療法的60天內進展的疾病或病症。

復發和難治性疾病在進行挽救療法（例如，在一線療法治療失敗後投予的療法）時無反應，或是在當前病程進展之前的某個時間點實現最低反應或更好的患者中在最後一次療法後60天內進展的疾病。

原發性難治性疾病是在用任何療法從來沒有實現最低反應或更好的患者中的無反應疾病。

在一些實施例中，所述個體先前已經用硼替佐米和/或來那度胺進行治療。

在一些實施例中，所述個體先前已經接受了自體幹細胞移植（ASCT）。

在一些實施例中，所述個體在自體移植後6個月內復發。劑量和投予

在一些實施例中，將本文提供的配製的抗體以“固定劑量”投予，使得不基於身體大小或體重調整投予患者的抗體的量。在一些實施例中，投予患者的固定劑量包含1000-1800 mg的抗體。在一些實施例中，所述固定劑量是1000 mg。在一些實施例中，所述固定劑量是1400 mg。

在一些實施例中，將配製的抗體，諸如固定劑量的抗體以固定體積投予患者。例如，在一些實施例中，以約10至約20 mL的體積投予本公開文本的抗體調配物。在一些實施例中，以約10至約15 mL的體積投予本公開文本的抗體調配物。在一些實施例中，以約10 mL至約12.5 mL的體積投予本公開文本的抗體調配物。在一些實施例中，以約10 mL至約11 mL的體積投予本公開文本的抗體調配物。在一些實施例中，以約10 mL至約10.5 mL的體積投予本公開文本的抗體調配物。

在一些實施例中，在約10至約60分鐘內皮下投予本文提供的配製的抗體的劑量。在一些實施例中，在約20至約40分鐘內皮下投予配製的抗體的劑量。在一些實施例中，在約10分鐘內皮下投予配製的抗體的劑量。在一些實施例中，在約20分鐘內皮下投予配製的抗體的劑量。在一些實施例中，在約30分鐘內皮下投予配製的抗體的劑量。在一些實施例中，在約40分鐘內皮下投予配製的抗體的劑量。在一些實施例中，在約50分鐘內皮下投予配製的抗體的劑量。在一些實施例中，在約60分鐘內皮下投予配製的抗體的劑量。

在一些實施例中，所述皮下投予以所述抗體的一定輸注速率進行。例如，可以在最短的時間內以合適的速率皮下投予所述調配物，以達到所需劑量的完全遞送，而沒有顯著的滲漏或顯著的不適感。這樣的該速率可以在例如約0.1 mL/min至約1.5 mL/min的範圍內。在一些實施例中，大約的輸注速率為0.8 mL/min。在一些實施例中，所述速率是1 mL/min。在一些實施例中，所述速率是1.2 mL/min。在一些實施例中，所述速率是1.5 mL/min。

在一些實施例中，可以在整個輸注期間維持初始輸注速率。在其他實施例中，可以在輸注期間上調或下調輸注速率，或者上調和下調輸注速率。

在一些實施例中，將抗CD38抗體單獨投予。在其他實施例中，將抗CD38抗體與適合於治療CD38⁺ 血液癌症的另一種藥劑一起投予。在一些實施例中，所述其他試劑是皮質類固醇（例如，地塞米松）、化療藥物、蛋白酶體抑制劑、免疫調節藥物或其組合。

當與適合於治療CD38⁺ 血液癌症的另一種藥劑一起使用時，抗CD38抗體和一種或多種其他藥劑可以同時或分別（例如在一段時間內順序）投予。可以藉由相同或不同的投予途徑來投予抗CD38抗體和一種或多種其他藥劑。當抗CD38抗體和一種或多種其他藥劑藉由相同的投予途徑投予時，它們可以藉由相同或不同的投予部位投予。

皮質類固醇（諸如地塞米松）用於治療各種發炎性病症、自體免疫病症和過敏性病症。它也可以作為直接藥劑（例如，在多發性骨髓瘤中）或與其他藥劑（例如，免疫調節藥物、化療藥物和蛋白酶體抑制劑）組合用於癌症的治療。皮質類固醇（諸如地塞米松）也可用於抵消一種或多種化療藥物的副作用（例如，噁心和發炎）。皮質類固醇（諸如地塞米松）也可用作預防藥物，以減少由於抗體輸注而引起的輸注反應（IR）的潛在風險和/或嚴重程度。通常口服投予地塞米松。

泊馬度胺是一種沙利度胺類似物和免疫調節藥物，具有多種細胞作用，可抑制多發性骨髓瘤細胞的生長和存活，阻斷促進骨髓瘤細胞的生長的骨髓微環境的基質支援；此外，泊馬度胺具有有效的免疫調節作用，可藉由刺激自然殺傷（NK）細胞和抑制調節性T細胞來增強對骨髓瘤細胞的免疫反應。通常口服投予泊馬度胺。

在本公開文本的上下文中，醫師可以評估疾病反應並因此適配投予方案。

在投予抗體之前，個體接受預防藥物以降低通常在投予單株抗體時觀察到的輸注反應（IR）的風險和/或嚴重程度。預防藥物可包括例如孟魯司特、對乙醯胺基酚、雷尼替丁、二苯基茶苯海明、地塞米松或其組合。在一些實施例中，在如本文所述連續四次投予抗體後個體未經歷IR的情況下，可以終止預防藥物。

可以根據血液惡性腫瘤的規範標準和分期確定“疾病反應”。評估血液惡性腫瘤，特別是CD38⁺ 血液惡性腫瘤的疾病反應的方法是熟習此項技術者已知的。例如，評估疾病反應的方法包括表現狀態評估，諸如東部腫瘤協作組（ECOG）表現狀態和國際骨髓瘤工作組反應標準（分別參見Oken等人,Am. J. Clin. Oncol. 1982;5(6):649-655和Kumar等人,Lancet Oncol . 2016;17(8):328-346, respectively）。評估疾病反應的方法還包括疾病標記物的定量、骨髓活檢和/或抽吸、漿細胞瘤的放射學成像、骨骼檢查、M蛋白定量（血清和/或24小時尿液）和血清游離輕鏈或尿輕鏈水準、血清β2-微球蛋白、淋巴結活檢、放射腫瘤評估（藉由X射線、電腦斷層攝影（CT）掃描、PET掃描或磁共振成像（MRI））以及包括母細胞計數的血液計數。該評估方法清單應被理解為非限制性的。

基於從疾病反應評估中獲得的結果，然後可以根據潛在疾病的規範標準對疾病反應進行分層，並將其分為完全反應或完全緩解（CR）、部分反應（PR）、穩定疾病（SD）或進展性疾病（PD）。

在反應評估中使用的“標記物”可包括血清和/或血漿標記物，諸如C反應蛋白（CRP）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）、IL-6、IL-1β或IFN。標記物還可以包括細胞表面標記物，諸如CD38。

在患有多發性骨髓瘤的個體中評估疾病反應的技術包括，例如，骨髓活檢和/或抽吸、漿細胞瘤的放射成像、骨骼檢查、M蛋白定量以及血清β2-微球蛋白量度。

疾病反應評估可以進一步包括循環腫瘤細胞（外周血）上的受體密度和受體佔有率，骨髓母細胞和漿細胞上的受體密度和受體佔有率，以及人類抗藥物抗體（ADA）的水準。

在本公開文本中引用的所有專利和公開的專利申請的全部內容藉由引用併入本文。

藉由參考以下非限制性實例將進一步理解本公開內容。為了說明和描述本公開文本的某些實施例，下面已經列出了實例。申請專利範圍不以任何方式受到本文列出的實例的限制。實例

提出以下實例以向一般熟習此項技術者提供關於如何製備和使用本公開文本的方法和組合物的完整公開內容和描述，並且不旨在限制本發明人視為其發明的範圍。已經努力確保關於所使用的數量（例如量、溫度等）的準確性。實例1-初始篩選

最初的調配物開發活動包括篩選緩衝液-pH系統、熱穩定劑、表面活性劑和降粘劑，以鑑定與伊沙妥昔單抗相容並增強其穩定性，同時保持適合於皮下注射的重量莫耳滲透壓濃度和粘度的賦形劑及其組合。 緩衝液和 pH 系統的選擇

為了鑑定緩衝液和pH系統，在16種不同的緩衝液-pH系統中評估了伊沙妥昔單抗的穩定性。緩衝劑-pH系統（表 1 ）是基於其在目標pH範圍內的緩衝能力來測試。

表 1- 測試的緩衝液 -pH 系統

緩衝液	pH	pKa
檸檬酸鹽10 mM	5.0	4.8 – 6.4
檸檬酸鹽10 mM	5.5
檸檬酸鹽10 mM	6.0
檸檬酸鹽10 mM	6.5
檸檬酸鹽10 mM	7.0
組胺酸10 mM	5.5	6.0
組胺酸10 mM	6.0
組胺酸10 mM	6.5
磷酸鹽10 mM	6.5	7.2
磷酸鹽10 mM	7.0
磷酸鹽10 mM	7.4
琥珀酸鹽10 mM	5.0	4.2 – 5.6
琥珀酸鹽10 mM	5.5
琥珀酸鹽10 mM	6.0
乙酸鹽10 mM	5.0	4.8
乙酸鹽10 mM	5.5

在濃度為5 mg/mL的伊沙妥昔單抗的液體調配物中，在振搖和熱應力之後在可見和亞可見顆粒和可溶性聚集體（高分子量種類HMW）的形成方面，評估了緩衝液-pH系統對依沙妥昔單抗聚集的影響。

如表 2 所示，發現伊沙昔單抗聚集成可見顆粒取決於pH和緩衝液系統。pH在5.5至6.5範圍內的組胺酸緩衝液系統在振動應力下顯示最高的穩定性（應力後呈現出較少的可見顆粒），且pH 5.0至7.0的檸檬酸鹽緩衝系統以及pH 5.5、6.5和7.0的檸檬酸鹽緩衝系統在熱應力下顯示最高的穩定性（應力兩周後呈現出較少的可見顆粒）。有趣的是，pH在6.5-7.4範圍內的磷酸鹽緩衝液系統在熱應力一周後顯示出最高的熱穩定性，但是在熱應力兩周後具有幾個可見的顆粒，並且在所有測試的緩衝液系統的振動應力下，顯示伊沙妥昔單抗的穩定性最低。

表 2- 外觀檢查

緩衝液	pH	T0	振動	1周 40ºC	2周 40ºC
檸檬酸鹽10 mM	5.0	0	++	0	+
檸檬酸鹽10 mM	5.5	0	++	0	0
檸檬酸鹽10 mM	6.0	0	++	+	+
檸檬酸鹽10 mM	6.5	0	++	0	0
檸檬酸鹽10 mM	7.0	0	++	0	0
組胺酸10 mM	5.5	0	+	+	++
組胺酸10 mM	6.0	0	+	+	++
組胺酸10 mM	6.5	0	+	0	++
磷酸鹽10 mM	6.5	0	+++	0	++
磷酸鹽10 mM	7.0	0	+++	0	++
磷酸鹽10 mM	7.4	0	+++	+	++
琥珀酸鹽10 mM	5.0	0	++	++	++
琥珀酸鹽10 mM	5.5	0	++	++	++
琥珀酸鹽10 mM	6.0	0	+	++	++
乙酸鹽10 mM	5.0	0	++	+	+
乙酸鹽10 mM	5.5	0	++	++	++

0：沒有可見顆粒 +：可見顆粒很少 ++：幾個可見顆粒 +++：大量可見顆粒

藉由光透法（LO）量測振動應力和熱應力後≥ 10 µm和≥ 25 µm的亞可見顆粒的數量。如圖1所示，在振動和熱應力作用下，磷酸鹽緩衝液呈現出最高水準的亞可見顆粒。組胺酸和乙酸鹽緩衝液系統提供了最低水準的亞可見顆粒，表明伊沙妥昔單抗的穩定性更高。

在各種pH下在檸檬酸鹽、組胺酸、磷酸鹽、琥珀酸鹽和乙酸鹽緩衝液中熱應力之後，藉由尺寸排阻層析（SE-HPLC）觀察到可溶性聚集體（HMW）。如圖2所示，檸檬酸鹽、磷酸鹽和琥珀酸鹽緩衝液系統顯示可溶性聚集體的增加更高，並且觀察到的總體趨勢表明，pH越高，可溶性聚集體（HMW）含量越高。在pH高於7.0時，這一點尤為顯著。振動應力似乎對可溶性聚集體沒有任何影響。

在蔗糖和聚山梨醇酯80存在下，在組胺酸緩衝液中進一步研究了pH對伊沙妥昔單抗穩定性的影響。將表3所示調配物中濃度為5 mg/mL的伊沙妥昔單抗在40ºC下培養1個月，並藉由SE-HPLC測定HMW。

表 3- 測試的緩衝液 -pH 系統

原型參考	組成
緩衝液	pH	蔗糖 % （ w/v ）	PS80% （ w/v ）
His 10 mM pH 6.5	組胺酸10 mM	6.5	10	0.02
His 10 mM pH 6.0	組胺酸10 mM	6.0	10	0.02
His 20 mM pH 6.5	組胺酸20 mM	6.5	10	0.02
His 20 mM pH 6.0	組胺酸20 mM	6.0	10	0.02

藉由SE-HPLC觀察HMW。如圖3所示，與pH 6.5相比，在pH 6.0的組胺酸緩衝液中於40ºC熱應力1個月後，可溶性聚集體（HMW）幾乎沒有。

在表3所示的調配物中將5 mg/mL的伊沙妥昔單抗在40ºC下培養1個月後，藉由WCX（每周陽離子交換）量測伊沙妥昔單抗的酸性同工型的水準。如圖4所示，與在pH 6.5、40ºC下放置1個月相比，在pH 6.0下的組胺酸調配物顯示伊沙妥昔單抗的酸性形式的水準的增加較小。

這些結果顯示，pH和緩衝液系統影響了伊沙妥昔單抗的穩定性，pH 6.0左右的pH比pH 6.5穩定。 降低粘度的賦形劑的選擇

為了能夠皮下遞送伊沙妥昔單抗，測試了多種具有降粘賦形劑的配製條件，以確定是否可以開發出在20ºC時粘度低於25 cP的高濃度。

將抗體濃縮並配製在測試調配物中。用SoloVPE儀器以光譜學方式確認所得調配物的蛋白濃度，並量測最終溶液的pH。

表 4- 在粘度研究中測試的調配物

緩衝液	pH	蔗糖 % w/v	Arg-Cl mM	其他	濃度 mg/ml	粘度 mP.s (cP)
10 mM組胺酸	5.73	0	200	-	150	21.5
10 mM組胺酸	5.75	0	200	-	150	19.5
10 mM組胺酸	5.44	0	150	-	150	39.0
10 mM組胺酸	5.46	0	200	-	150	31.2
10 mM組胺酸	5.11	2	150	-	155	102.0
10 mM組胺酸	5.10	2	200	-	151	60.8
10 mM組胺酸	5.31	2	150	-	154	57.0
10 mM組胺酸	5.34	2	200	-	155	37.3
10 mM組胺酸	5.82	2	200	-	152	21.0
10 mM組胺酸	5.62	2	150	-	151	19.0
10 mM組胺酸	5.21	2	150	-	152	94.0
10 mM組胺酸	5.05	2	200	-	152	68.0
10 mM組胺酸	5.39	2	150	-	155	38.0
10 mM組胺酸	5.37	2	200	-	152	45.0
10 mM組胺酸	6.17	2	100	-	153	19.0
10 mM組胺酸	6.13	2	150	-	147	13.4
10 mM組胺酸	6.35	2	200	-	154	11.7
10 mM組胺酸	6.85	2	100	-	150	11.0
10 mM組胺酸	6.93	2	150	-	148	9.6
10 mM組胺酸	6.99	2	200	-	152	9.7
10 mM組胺酸乙酸鹽	6.20	2	100*	-	153	23.7
10 mM組胺酸乙酸鹽	6.16	2	150*	-	154	20.0
10 mM組胺酸乙酸鹽	6.17	2	200*	-	153	18.0
10 mM組胺酸	6.30	0	0	-	150	59.0
10 mM組胺酸	6.31	2	0	-	150	60.0
10 mM組胺酸	6.35	2	50	-	150	23.6
10 mM組胺酸	6.36	2	100	-	150	16.1
10 mM組胺酸	6.34	2	150	-	150	14.5
10 mM組胺酸	6.35	2	200	-	150	12.4
10 mM組胺酸	6.25	0	0	-	180	242.0
10 mM組胺酸	6.38	2	0	-	180	121.0
10 mM組胺酸	6.34	2	50	-	180	60.0
10 mM組胺酸	6.35	2	100	-	180	32.5
10 mM組胺酸	6.37	2	150	-	180	32.5
10 mM組胺酸	6.36	2	200	-	180	25.5
10 mM組胺酸	6.36	2	0	150 mM離胺酸	150	10.8
10 mM組胺酸	4.7	2	0	150 mM脯胺酸	150	369
10 mM琥珀酸鹽	5.77	2	150	-	150	21.7
10 mM琥珀酸鹽	5.85	2	150	-	150	18.7
10 mM磷酸鹽-琥珀酸鹽	5.42	2	150	-	150	32.8
10 mM磷酸鹽-Tris	4.98	2	150	-	150	128
水	5.97	2	150	-	150	17
10 mM組胺酸	4.96	2	0	200 mM脯胺酸	150	357
10 mM組胺酸	6.03	0	0	150 mM NaCl	150	27.2
10 mM組胺酸	7.07	0	0	-		21

*：調配物中使用的是精胺酸-乙酸鹽，而不是精胺酸-Cl

使用RheoSense Initium儀器，使用自動方法在20ºC下量測所有樣品的粘度。這會自動確定合適的剪切速率，以使儀器在感測器所需的壓力範圍內運行。由於剪切速率不超過10,000 s^-1 ，因此非牛頓效應（諸如剪切稀化）被忽略不計。

圖5顯示在0、50、100和200 mM L-精胺酸-Cl的存在下，pH 6.0時200 mg/mL的伊沙妥昔單抗溶液的粘度（cP）。初步量測表明，精胺酸-Cl是以濃度依賴的方式有效的降粘賦形劑；精胺酸-Cl濃度的增加與粘度的降低有關。

測試了40多種具有不同pH的不同調配物，測試了用於各種濃度的伊沙妥昔單抗的降粘劑。結果示於表 4 中。

在存在10 mM組胺酸和2%蔗糖的情況下，精胺酸-Cl的濃度對兩種濃度的伊沙妥昔單抗150 mg/mL（圖6A）和180 mg/mL（圖6B）的粘度的影響示於圖6A和6B中。

除了精胺酸-Cl的濃度外，還觀察到pH對伊沙妥昔單抗的粘度的顯著影響。圖7A和7B顯示對於150 mM精胺酸-Cl（圖7A）和200 mM精胺酸-Cl（圖7B），隨pH變化的粘度。

令人驚訝地，示於圖7A和7B中的結果顯示了粘度和pH之間的反向相關，即，粘度增加與pH降低有關。在pH ≤ 5.7時，粘度急劇增加。這種反向相關與蛋白溶液通常預期和觀察到的相反。另外，這種意想不到的影響隨著抗體濃度的增加而進一步放大（圖8）。

已顯示至少100 mM的精胺酸-Cl濃度可將150 mg/mL的伊沙妥昔單抗的粘度降低至小於20 cP，且將180 mg/mL的伊沙妥昔單抗的粘度降低至小於40 cP。另外，如pH低於5.7的粘度急劇增加所證明，顯示pH對粘度具有顯著影響。同時，必須考慮pH對伊沙妥昔單抗的穩定性的影響。如圖3和圖4所展現的，與在pH 6.5下的緩衝液系統相比，在pH值接近6.0的組胺酸緩衝液系統在1個月的熱應力後產生較少的HMW。實例 2 - 粘度研究

在掌握了實例1中所述的研究結果，並且目的是獲得含有可能適合皮下投予的高濃度（例如，至少100 mg/mL）伊沙妥昔單抗的調配物的情況下，製備了許多調配物並對其進行了更詳細的研究。不同的參數可能會影響溶液中蛋白的粘度，諸如蛋白濃度、pH、降粘劑的濃度和溫度。進行了幾次實驗以評估蛋白濃度、pH、精胺酸濃度對調配物粘度的影響。表 5 顯示測試的參數和值範圍。考慮到藥品將在冷藏條件下（5ºC ± 3ºC）存儲，還檢查了溫度的影響。

表 5 - 粘度研究

參數	目標配製值	探測範圍
蛋白濃度	140 mg/mL	126-154 mg/mL
pH	6.2	5.5-7.0
精胺酸濃度*	110 mM	90-150 mM
*在固定的pH 6.2和mAb濃度140 mg/mL下進行探測

將目標濃度設置為140 mg/mL，以在20ºC下實現低於25 cPs的粘度，包括當mAb溶液在製造過程中固有的抗體濃度或降粘劑濃度或pH出現波動時。實際上，由於道南效應（Donnan effect）或在混合步驟中，由於賦形劑稱量的準確性或可能影響最終的藥品中的賦形劑水準的其他製造步驟（例如過濾）的準確性，通常用UF/DF觀察到每種賦形劑實際成分和目標群組成之間的這種差異。

高濃度mAb的溶液傾向於表現出高粘度。選擇精胺酸作為降粘劑，以確定是否可以開發出在20ºC時粘度低於25 mPa·s的伊沙妥昔單抗的高濃度液體調配物。

該研究分三組進行。第一組檢查粗pH和濃度。第二組檢查細pH和濃度。第三組檢查精胺酸濃度。

在研究的第一組中，研究了伊沙妥昔單抗濃度、pH和溫度對粘度的影響。為此研究組製備了七種調配物。表 6 列出了詳細組成以及量測值。

表 6  調配物中具有伊沙妥昔單抗濃度（ C_mab ）和 pH 的量測值的調配物

mAb （ mg/mL ）	精胺酸 -Cl （ mM ）	pH	組胺酸（ mM ）	蔗糖 % （ w/v ）	P188 % （ w/v ）
126	113	6.2	9	2	0.4
142	112	5.9	9	2	0.4
143	112	6.2	9	2	0.4
142	112	6.5	9	2	0.4
141	112	6.8	9	2	0.4
152	111	5.9	9	2	0.4
154	111	6.2	9	2	0.4

與不含表面活性劑的調配物相比，P188的0.4% w/v的濃度顯示積極的穩定作用。濃度為2%的蔗糖在保持重量莫耳滲透壓濃度接近等滲性的同時，具有足夠的穩定性。

在研究的第二組中，研究了伊沙妥昔單抗濃度和pH對20ºC時粘度的影響。製備總計32種調配物。以4個目標濃度的抗體（126、140、147和154 g/L）和8個目標pH值（5.5、5.7、5.9、6.2、6.5、6.7、6.9、7.0）製備溶液。表 7 列出了詳細組成以及量測值。

表 7  調配物中具有伊沙妥昔單抗濃度（ C_mab ）和 pH 的量測值的調配物

mAb （ mg/mL ）	精胺酸 -Cl （ mM ）	pH	組胺酸（ mM ）	蔗糖 % （ w/v ）	P188 % （ w/v ）
124.6	112	5.5	9	2	0.4
131	111	5.7	9	2	0.4
129.4	111	5.9	9	2	0.4
127.3	111	6.2	9	2	0.4
125.1	112	6.6	9	2	0.4
126.5	111	6.7	9	2	0.4
124.4	112	6.9	9	2	0.4
125.6	112	7.0	9	2	0.4
141.4	110	5.5	9	2	0.4
139.5	110	5.7	9	2	0.4
141.7	110	5.9	9	2	0.4
140.5	110	6.2	9	2	0.4
140.3	110	6.5	9	2	0.4
140.1	110	6.7	9	2	0.4
138.7	110	6.9	9	2	0.4
137.4	110	7.0	9	2	0.4
147.5	109	5.6	9	2	0.4
150	109	5.7	9	2	0.4
148.6	109	5.9	9	2	0.4
147.8	109	6.2	9	2	0.4
147.2	109	6.5	9	2	0.4
148.6	109	6.7	9	2	0.4
148.2	109	6.9	9	2	0.4
144.4	110	7.0	9	2	0.4
157.6	108	5.5	9	2	0.4
156.3	108	5.7	9	2	0.4
155.8	108	5.9	9	2	0.4
157.4	108	6.2	9	2	0.4
156.1	108	6.5	9	2	0.4
155.8	108	6.7	9	2	0.4
157.5	108	6.9	9	2	0.4
159.5	108	7.1	9	2	0.4

在研究的第三組中，精胺酸濃度在90和150 mM之間變化。表 8 列出了5種調配物的詳細組成以及量測值（如果有）。

表 8  參考溶液（加標前）的配製，研究組 3- 精胺酸濃度對穩定性和粘度的影響的研究

mAb （ mg/mL ）	精胺酸 -Cl （ mM ）	pH	組胺酸（ mM ）	蔗糖 % （ w/v ）	P188 % （ w/v ）
140	93	6.2	9	2	0.4
141	101	6.2	9	2	0.4
141	117	6.2	9	2	0.4
140	127	6.2	9	2	0.4
144	150	6.2	9	2	0.4

對於研究的第1組，所有樣品的粘度均在Rheosense m-VROC粘度計上於5ºC、10ºC、15ºC、20ºC、25ºC和30ºC下測定。對於每個樣品和每個溫度，選擇的流速為最大流速的50%，導致剪切速率介於250和2500 s^-1 之間。假定所有樣品都具有牛頓行為。

對於研究的第2組，所有樣品的粘度均在Rheosense m-VROC粘度計上於20ºC下測定。對於每個樣品，選擇的流速為在灌注階段儀器測定的最大流速的50%。這導致了介於250和2500 s^-1 之間的剪切速率。假定所有樣品都具有牛頓行為。

對於研究的第3組，所有樣品的粘度均在Rheosense m-VROC粘度計上於20ºC下測定。對於每個樣品，選擇的流速為在灌注階段儀器測定的最大流速的50%。這導致了介於1200和1600 s^-1 之間的剪切速率。假定所有樣品都具有牛頓行為。 隨濃度變化的粘度

在pH 5.5下，粘度從濃度為126 mg/mL的16 mPa·s增加至濃度為154 mg/mL的54 mPa·s。在pH 7.0下，在相同的濃度範圍內，粘度從5.8 mPa·s增加至11 mPa·s。對於所有條件，使用Mooney方程擬合數據：

其中η_solv 是溶劑的粘度，[η ]是蛋白的特性粘度，K 是“群集因子”，且S 是“形狀係數”。擬合參數為[η ]和K/S 。對應於調配物緩衝液在20ºC時的粘度，對η_solv = 1.26 mPa·s使用固定值。

如圖8所示，伊沙妥昔單抗溶液的粘度隨mAb濃度的增加而增加。隨 pH 變化的粘度

圖9顯示了在第2組中使用m-VROC所獲得的資料，繪製了5種濃度的伊沙妥昔單抗（126、140、147和154 mg/mL）隨pH變化的粘度。如圖9所示，伊沙妥昔單抗溶液的粘度隨著pH的增加而降低。

在pH 6.2時，在測試抗體的整個濃度範圍內，粘度均小於25 mPa·s。對於所有高於或等於5.9的pH值，粘度均小於25 mPa·s。然而，在較低的探測pH值（5.5和5.7）下，當mAb濃度高於或等於147 g/L時，粘度高於25 mPa·s。 隨溫度變化的粘度

在第1組中，量測了隨介於5和30ºC之間的溫度變化的所探測調配物的粘度。如圖10和圖11所示，粘度隨溫度的增加而降低。使用Arrhenius擬合，確定了調配物的活化能（表 9 ）。用Mooney方程將這些值與20ºC下的擬合數據組合使用，可計算出理論值。如圖10所示，模型與實驗資料一致。

表 9 - 第 1 組的不同調配物的活化能

伊沙妥昔單抗濃度（ g/L ）	pH	活化能（ kJ/mol ）
126	6.2	22.7
142	5.9	27.1
143	6.2	23.1
142	6.5	23.6
141	6.8	24.0
152	5.9	31.6
154	6.2	26.7

活化能隨著伊沙妥昔單抗的濃度的增加而增加。活化能在介於pH 5.9和6.2之間降低。在較小的程度上，活化能在介於pH 6.2和6.8之間增加。為了在溶液中移動，mAb必須從其鄰域中逃逸，因此需要在此定義為Ea的最小能量。根據玻爾茲曼定律，mAb可以獲取此能量的概率與exp（-Ea/RT）成正比，因此與mAb的遷移率成反比的粘度遵循方程：粘度 = exp(+Ea/RT)。

對於pH 6.2的調配物，mAb濃度為143和126 mg/mL，在5ºC-30ºC的溫度範圍內，粘度保持在25 mPa·s以下。在154 mg/mL的情況下，在5ºC時記錄的值略微高於25 mPa·s。

對於pH 5.9的調配物，伊沙妥昔單抗在142 mg/mL的粘度在5ºC下約為25 mPa·s。 隨精胺酸濃度變化的粘度

初步研究顯示，對於150 mg/mL的伊沙妥昔單抗調配物（無表面活性劑），在介於0和100 mM之間的精胺酸的情況下，粘度從60 mPa·s降低至16 mPa·s，而在介於100 mM和200 mM之間的精胺酸的情況下僅降低至12 mPa·s。

在本研究中，測試了90至150 mM的精胺酸濃度，點分別為90、100、115、125和150 mM。粘度隨著精胺酸濃度的增加而降低（圖12）。值從11 mPa·s降低到9 mPa·s，證實了在初步研究中獲得的趨勢。

在所研究的精胺酸濃度範圍內（90-150 mM），粘度變化小於2 mPa·s。實例 3 – 穩定性

該實例描述了一系列穩定性研究，其中在5ºC下對2組調配物進行了穩定性研究，並在40 ºC/75% r.h.下進行了加速穩定性研究以及凍融和振動應力測試研究。

表 10 和表 11 匯總了所測試的調配物。

表 10 - F4-1 至 F4-16

調配物	蛋白濃度（mg/mL）	pH	精胺酸-HCl濃度（mM）	蔗糖濃度（mg/mL）	P188濃度（mg/mL）
1*	140	6.2	125	20	4.0
2	140	6.5	145	16	3.0
3	140	6.2	125	20	4.0
4	140	5.9	105	24	5.0
5	154	6.2	105	16	5.0
6	140	6.2	125	20	4.0
7	126	6.2	145	24	3.0
8	154	5.9	125	24	3.0
9	140	6.2	125	20	4.0
10	126	6.5	125	16	5.0
11	154	5.9	145	20	5.0
12	126	6.5	105	20	3.0
13	140	6.2	125	20	4.0
14	154	6.5	145	24	4.0
15	126	5.9	105	16	4.0
16	140	6.2	125	20	4.0

*1已作為加速研究的一部分進行了測試。

表 11 - F10-1 至 F10-16

調配物	蛋白濃度（mg/mL）	pH	離胺酸乙酸鹽濃度（mM）	蔗糖濃度（mg/mL）	PS80濃度（mg/mL）
1*	140	6.2	125	20	0.4
2	140	6.5	145	16	0.3
3	140	6.2	125	20	0.4
4	140	5.9	105	24	0.5
5	154	6.2	105	16	0.5
6	140	6.2	125	20	0.4
7	126	6.2	145	24	0.3
8	154	5.9	125	24	0.3
9	140	6.2	125	20	0.4
10	126	6.5	125	16	0.5
11	154	5.9	145	20	0.5
12	126	6.5	105	20	0.3
13	140	6.2	125	20	0.4
14	154	6.5	145	24	0.4
15	126	5.9	105	16	0.4
16	140	6.2	125	20	0.4

*1已作為加速研究的一部分進行了測試。

凍融應力是藉由使用Epsilon1-6CC凍融裝置（Martin Christ GmbH，奧斯特羅德，德國）進行的。樣品經受凍融應力。

將來自每種調配物（F4和F10）的一個小瓶放入冷凍乾燥器中，並根據以下參數運行循環：速度，0.1ºC/min；冷凍溫度，-30ºC；解凍溫度25ºC；周期數，5；保持溫度時間，60 min。五個循環後，檢查樣品中的可見顆粒並進行均質化。

將每種調配物的一個小瓶安裝在水準振動平臺（IKA，KS4000 IC）上，並在25ºC和300 rpm下加應力21天。分析了T-mech樣品以及T-1個月的時間點。

使用Gonotec Osmomat 3000（Gonotec，柏林，德國），藉由凝固點降低法量測樣品的重量莫耳滲透壓濃度。在儀器運行之前進行了3點校準，其中包括Milli-Q水和分別為300和400 mOsmol/kg的兩種重量莫耳滲透壓濃度標準。

蛋白濃度是藉由在Tecan Safire2平板讀數器（Tecan Austria GmbH，格羅迪格，奧地利）上的96孔板（Corning Incorporation，紐約，USA）中進行UV光譜測定的。用重量分析法將樣品從150 mg/mL溶液稀釋至1 mg/mL的蛋白濃度。從天平列印輸出中計算出稀釋因子。對於每個數據點，量測了三個裝有200 μL溶液的孔（n = 3），以最大程度地減少量測誤差。量測池的溫度設置為25ºC。量測稀釋緩衝液作為空白光譜。量測之後，針對路徑長度校正在280 nm處獲得的吸光度值，並用相應的空白值減去。使用在280 nm處計算出的莫耳消光係數（ε_molar ）224,320 M^-1 cm^-1 來計算消光係數（ε）。計算出的1.548 mL mg^-1 cm^-1 的消光係數（ε）用於基於280 nm處的吸光度值確定蛋白濃度。

根據歐洲藥典（第8版；專著2.9.20），在約3750 lux下，在白色背景前輕柔、手動、徑向攪動5秒鐘且在黑色背景前5秒鐘，檢查小瓶中是否存在可見顆粒。所述檢查是由兩名訓練有素的檢查員獨立進行的。

為了對觀察到的可見顆粒進行分類，使用了基於“Deutscher Arzneimittel-Codex”（DAC 2006）的數位評分（0，在5秒鐘內看不到任何顆粒；1，在5秒鐘內可見很少顆粒；2，在5秒鐘內可見中等數量顆粒；10，直接可見大量顆粒）。可能不屬於產品的纖維狀結構和顆粒不是由數位評分來解釋的。 高效尺寸排阻層析（ HP-SEC ）

在進行樣品分析之前，使用BioRad凝膠過濾標準（包含甲狀腺球蛋白、γ球蛋白、卵清蛋白、肌紅蛋白和維生素B12）測試HP-SEC管柱的性能。藉由將凍乾的物質溶解在500 μL Milli-Q水中，隨後在移動相中稀釋10倍（最終蛋白濃度為3.6 mg/mL）來製備標準。藉由注入凝膠過濾標準品（BioRad），在每個序列的開始進行系統適用性測試，並藉由計算γ球蛋白和卵清蛋白峰之間的USP解析進行評估。藉由將40 μL母液與160 μL溶液A（不含乙腈的移動相）混合，將50 mg/mL儲備樣品在1.5 mL聚丙烯管（Eppendorf）中稀釋5倍，得到10.0 mg/mL的蛋白濃度。

為避免在加速的穩定性/壓力測試過程中可能形成的較大的不溶性顆粒堵塞HP-SEC管柱，將樣品在18,000 rcf稀釋後離心5分鐘，然後將上清液轉移至HPLC小瓶中。將樣品渦旋並在自動進樣器中於5ºC下儲存直至分析。

以下參數用於HP-SEC分析：儀器：Ultimate 3000（Dionex）管柱：非晶矽管柱ProSEC 300S；300 mm 安全保護：保護管柱50 mm x 7.5 mm 流速：0.3 mL/min 移動相：90%的100 mM磷酸鹽，pH 7.2，300 mM NaClO₄ + 10%ACN 檢測：280 nm和214 nm處的UV 管柱溫箱：25ºC 樣品冷卻：5ºC – 8 ºC 進樣量：對於5.0 mg/mL樣品為10 μL，對於空白和SEC標準為10 μL 分析時間：90 min毛細管等電聚焦（ cIEF ）

成像毛細管等電聚焦（cIEF）在與PrinCE Microinjector（Convergent Bioscience，多倫多，加拿大）連接的iCE280儀器上進行。不像常規cIEF中實施的藉由固定的檢測點洗脫聚焦的分子種類，在成像的cIEF中，在整個IEF毛細管中檢測分子。為此，將波長為280 nm的UV光聚焦在UV透明毛細管上，並借助電荷耦合器件（CCD）相機以規則的間隔捕獲圖像。

在分析之前，按照儀器說明安裝熔融的石英塗層（FC）濾芯。陽極儲槽中填充了0.08 M磷酸（在0.1%甲基纖維素中，電解質套組，ProteinSimple），陰極儲槽中填充了0.1 M氫氧化鈉（在0.1%甲基纖維素中，電解質套組，ProteinSimple）。藉由量測血紅蛋白標準（iCE280系統適用性套組，ProteinSimple）來檢查系統的性能。根據製造商進行血紅蛋白標準溶液的等電聚焦（預聚焦：在1500 V時1 min；聚焦：在3000 V時4.5 min）。

藉由混合2360 μL的Milli-Q水、1400 μL的1%甲基纖維素、160 μL兩性電解質pH 3-10、20 μL的pI標記7.05和20 μL的pI標記物9.50製備用於20個樣品的主混合物。藉由渦旋將主混合物勻漿，並在5,000 rcf下短暫離心。用0.45 μm注射器PVDF過濾器單元（Millex-GV，Millipore）過濾混合物。

藉由將20 μL母溶液（C = 50 mg/mL）與30 μL相應的調配物緩衝液混合，將樣品預稀釋至20.0 mg/mL的蛋白濃度。藉由將2 μL的20.0 mg/mL的預稀釋樣品與198 μL的主混合物混合，以獲得200 μL的總體積和0.2 mg/mL的蛋白濃度，來製備用於cIEF分析的最終樣品。

DP的等電聚焦是藉由在1500 V下預聚焦1 min，隨後在3000 V下聚焦8 min來進行的。藉由使用ChromPerfect軟體（版本5.5.6）分析UV吸收圖像。 外觀檢查結果

由兩名獨立的操作員進行外觀檢查，將凍融後的樣品溶液標記為不均勻（S- Schlieren*，相分離）。在穩定性研究過程中，所有測試調配物的可見顆粒含量和濁度均未觀察到重大變化。

重量莫耳滲透壓濃度的量測結果示於表 12 中。在T0時，重量莫耳滲透壓濃度的範圍介於275-418 mOsmol/kg之間。F10調配物顯示比F4調配物高的重量莫耳滲透壓濃度值。儲存在40 ºC/75% r.h.對測試樣品的重量莫耳滲透壓濃度沒有影響。

表 12- 在T0時的重量莫耳滲透壓濃度量測結果（n = 1）

樣品	重量莫耳滲透壓濃度
F4-1	335
F4-2	353
F4-3	331
F4-4	308
F4-5	280
F4-6	336
F4-7	378
F4-8	353
F4-9	334
F4-10	320
F4-11	391
F4-12	289
F4-13	335
F4-14	404
F4-15	277
F4-16	330
F10-1	353
F10-2	381
F10-3	341
F10-4	310
F10-5	276
F10-6	346
F10-7	401
F10-8	374
F10-9	343
F10-10	328
F10-11	394
F10-12	294
F10-13	365
F10-14	418
F10-15	275
F10-16	351

表 13 - 在T-1w_40 ºC、T-2w_40 ºC和T-1m_40 ºC時的重量莫耳滲透壓濃度量測結果

樣品	重量莫耳滲透壓濃度
T-1w_40 ºC	T-2w_40 ºC	T-1m_40 ºC
F4-1	326	326	324
F10-1	342	343	344

在T0時的粘度量測結果表明，F10調配物顯示出比F4調配物略微高的粘度。對於調配物F4-8（20ºC在1000 s^-1 時為30.03 cP）和F10-8（20ºC在1000 s^-1 時為34.13 cP）量測了最高粘度。對於兩組調配物（F4和F10），運行8包含最高的蛋白質濃度（154 mg/mL）、最低的pH（5.9）和最高的蔗糖濃度（24 mg/mL）。

表 14 和表 15 提供了藉由UV光譜測定蛋白濃度的結果。在T0時，蛋白濃度介於124和156 mg/mL之間。測試調配物中的蛋白濃度在40 ºC/75% r.h儲存期間保持穩定。

表 14 – 蛋白濃度

樣品	蛋白濃度（mg/mL）
目標	T0	T-mech	T-FT	T-1m_40ºC
F4-1	140	135.0	139.5	141.2	140.9
F4-2	140	135.0	138.3	138.1	139.8
F4-3	140	137.1	138.8	139.7	136.7
F4-4	140	138.5	135.7	139.9	140.3
F4-5	154	151.8	150.9	153.6	154.4
F4-6	140	136.9	139.0	141.2	138.6
F4-7	126	123.7	125.9	127.5	125.6
F4-8	154	154.2	151.9	151.9	151.3
F4-9	140	138.5	138.0	142.1	139.2
F4-10	126	124.1	124.6	126.2	126.4
F4-11	154	154.4	153.3	154.1	156.0
F4-12	126	121.0	123.4	124.9	124.3
F4-13	140	140.0	136.8	140.2	137.1
F4-14	154	151.5	147.4	152.5	158.0
F4-15	126	124.1	122.7	122.3	125.1
F4-16	140	137.1	140.9	136.7	139.3
F10-1	140	138.4	141.8	140.7	146.0
F10-2	140	141.6	139.1	141.6	144.4
F10-3	140	140.6	141.7	139.2	141.7
F10-4	140	139.4	138.8	140.2	141.0
F10-5	154	154.3	156.4	152.2	157.2
F10-6	140	141.1	142.4	142.7	142.0
F10-7	126	129.9	126.1	128.4	130.3
F10-8	154	153.9	155.9	159.2	156.2
F10-9	140	140.2	140.3	141.9	140.2
F10-10	126	126.5	127.1	128.7	129.8
F10-11	154	154.5	152.7	152.7	155.4
F10-12	126	125.3	126.1	125.1	127.3
F10-13	140	141.1	140.9	140.1	141.8
F10-14	154	158.8	155.2	156.2	157.1
F10-15	126	123.8	127.1	126.6	125.3
F10-16	140	141.7	142.6	138.1	142.4

表 15– 蛋白濃度

樣品	蛋白濃度（mg/mL）
T-1w_40ºC	T-2w_40ºC
F4-1	137.1	140.2
F10-1	142.3	144.6

將十二烷基硫酸鈉凝膠電泳（SDS-PAGE）用於特徵化蛋白種類的分子量和相對數量。藉由量測檢測到的蛋白條帶的光密度，從SDS-PAGE凝膠中計算出分離的種類的相對量。表 16 和表 17 分別顯示了在非還原和還原條件下所有檢測到的蛋白種類的相對數量和分子量。

表 16 -藉由非還原SDS-PAGE檢測的種類的相對數量和計算的分子量

樣品	相對數量（%）	分子量（kDa）
聚集體	主要條帶	片段1	片段2	片段3	聚集體	主要條帶	片段1	片段2	片段3
F4-1 T0	0.6	95.5	3.4	0.3	0.3	244.6	157.5	141.7	112.1	25.0
F10-1 T0	0.7	95.1	3.8	0.3	0.2	241.5	158.5	142.6	112.3	24.8
F4-1 T1w_40ºC	0.9	94.9	3.6	0.5	0.3	242.5	157.5	142.0	111.7	25.1
F10-1 T1w_40ºC	1.1	95.0	3.3	0.5	0.2	242.5	159.1	142.9	110.7	24.8
F4-1 T2w_40ºC	1.0	95.6	2.2	0.8	0.5	244.9	157.4	142.1	110.6	25.4
F10-1 T2w_40ºC	1.1	94.8	3.1	0.7	0.3	247.6	158.1	142.7	110.4	25.1
F4-1 T1m_40ºC	0.9	94.9	3.1	1.0	0.2	251.7	159.7	144.0	111.2	24.8
F10-1 T1m_40ºC	1.0	95.1	2.9	0.9	0.2	249.3	159.3	144.5	111.4	24.7

表 17 -藉由還原SDS-PAGE檢測的種類的相對數量和計算的分子量

樣品	相對數量（%）	純度（%）	分子量（kDa）
N-R加合物	重鏈	輕鏈	N-R加合物	重鏈	輕鏈
F4-1T0	0.6	67.1	32.3	99.4	80.9	50.6	25.4
F10-1T0	0.8	65.9	33.4	99.3	82.3	50.6	25.3
F4-1T1w_40ºC	0.8	66.2	33.1	99.3	81.8	50.8	25.5
F10-1T1w_40ºC	0.7	66.5	32.8	99.3	81.6	50.6	25.2
F4-1T2w_40ºC	0.7	67.9	31.5	99.4	84.0	51.0	25.9
F10-1T2w_40ºC	0.6	68.6	30.9	99.5	86.1	51.4	26.0
F4-1T1m_40ºC	0.9	66.1	33.1	99.1	85.1	51.2	25.7
F10-1T1m_40ºC	1.2	65.3	33.6	98.9	85.9	51.4	25.8

進行高效尺寸排阻層析（HP-SEC）來評估單體、聚集體和片段。分配了四個聚集體種類（HMW1、HMW2、HMW3和HMW4）和兩個片段種類（LMW1和LMW2）。

在T0時，調配物F4和F10中的相對單體含量為98.5%-99.0%之間。儲存在40 ºC/75% r.h.導致所有測試樣品中的單體含量降低。在40 ºC/75% r.h.下儲存一個月後，測試調配物中的單體含量介於96.2%-97.2%之間；在調配物F4-2中發現此時間點最低的單體含量。重複的凍融循環幾乎對相對單體含量沒有影響，而機械應力導致少量下降（97.7%-98.2%）。參見圖13和圖14。

對於幾乎所有樣品和時間點，HMW1的相對含量均低於0.15%的定量限，同樣，對於幾乎所有樣品和時間點，HMW2的相對含量均低於0.15%的定量限。

在T0時HMW3的相對含量在0.7%-0.9%的範圍內。在40 ºC/75% r.h.下保存一個月後，HMW3含量增加到1.1%-1.5%。在F4-14、F10-5、F10-12和F10-14樣品中觀察到HMW3含量增加最多，而在調配物F4-1和F4-7樣品中觀察到增加最少。重複的凍融循環不會導致HMW3相對含量的增加，而機械應力導致HMW3輕微增加至0.9%-1.2%。

對於幾乎所有樣品和時間點，HMW4的相對含量均低於0.15%的定量限。

計算所有聚集體（HMWS）的總和，且峰≥ 0.15%相對面積。在T0時，聚集體的總含量（HMWS）在0.6%-1.2%的範圍內。儲存在40 ºC/75% r.h.導致所有測試調配物中HMWS含量顯著增加。在40 ºC/75% r.h.下儲存一個月後的相對HMWS含量介於1.1%-1.9%之間。對於調配物F4-7，觀察到HWM種類的增加最少，而對於調配物F4-2和F10-14，觀察到增加最多。凍融後未觀察到HMWS含量的實質性變化，且在暴露於機械應力後僅檢測到少量增加，導致HWMS含量介於0.9%-1.3%之間。參見圖15和圖16）。

在T0，片段LMW1的含量為約0.3。儲存在40 ºC/75% r.h.導致所有測試樣品中LMW1含量的增加。在40 ºC/75% r.h.下儲存一個月後的相對LMW1含量最高，且介於1.1%-1.5%之間。凍融對LMW1含量沒有影響。機械應力導致LMW1含量少量增加。

在T0時，所有測試調配物的LMW2片段的相對含量均低於定量限（≥ 0.15%）。在40ºC/75 %r.h.下儲存兩周零一個月導致LMW2含量少量增加，在T-1m_40ºC時觀察到最高值（0.3%-0.5%）。

計算所有LMWS含量的總和，且峰≥ 0.15%。在T0時，所有測試調配物的總LMWS含量約為0.3%。凍融對LMWS含量沒有影響，而機械應力導致LMWS含量少量增加（0.7%-0.9%）。儲存在40 ºC/75% r.h.導致較顯著增加，尤其是在稍後的時間點（圖17和圖18）。在T-1m_40ºC時觀察到增加最多，而LMWS的總含量介於1.4%-1.8%之間。

在T0時，藉由毛細管等電聚焦（cIEF）量測的主峰的相對含量介於70.3%-74.0%之間。在40 ºC/75% r.h.儲存一周、兩周和一個月後，檢測到主峰的相對含量逐漸降低。對於調配物F10-8觀察到降低最多（在T- 1m_40ºC下為55.4%）。對於在所有穩定時間點的所有調配物，主峰的pI保持穩定在約8.2。

在T0時，酸性種類的相對含量介於約17.9%-20.9%之間。儲存在40 ºC/75% r.h.導致酸性種類含量顯著增加。在時間點T-1m_40ºC觀察到增加最多，值介於30.4%-36.9%之間。對於調配物F10-8觀察到的增加最多，而調配物F4-7顯示的增加最少。資料的圖形表示在圖19和圖20中示出。

在T0時，觀察到的基本峰含量介於8.1%-9.5%之間。在穩定性研究期間，在大多數時間點，所有調配物的基本峰含量均保持相對穩定。對於T-1m_40ºC，基本峰含量為7.1%-9.1%。

在40 ºC/75% r.h下儲存後，毛細管等電聚焦（cIEF）資料顯示酸性種類含量增加，而所有調配物的主峰含量卻有所降低。如圖21所示，F4調配物顯示出比F10調配物更好的化學穩定性，並且在40 ºC/75% r.h.下儲存一個月後的主峰相對含量的降低較少。在40 ºC/75% r.h.下儲存一個月後，F4調配物的單體峰損失在9.5%-13.9 %的範圍內，而F10調配物的單體峰損失顯示在14.7%-17.3 %的範圍內。實例 4 – 穩定性

提供了對在110 mM精胺酸-HCl、9 mM組胺酸，2%蔗糖、0.4%泊洛沙姆188（pH 6.2）中配製的140 mg/mL伊沙妥昔單抗進行穩定性研究的結果。結果在 - 20ºC ± 5ºC 下的穩定性

如表 18 所示，在-20ºC ± 5ºC下儲存1個月後，所有測試的品質屬性（可見顆粒、顏色、乳光度、SEC和cGE純度、UV蛋白濃度、ADCC和CDC生物測定效能、光透法顆粒物質和pH）保持穩定。

與起始材料相比，icIEF的電荷異質性未顯示任何顯著變化。在 + 5ºC ± 3ºC 下的穩定性（長期儲存條件）

如表 19 和表 20 所示，在+ 5ºC ± 3ºC下儲存1、3、6、9和12個月後，所有測試的品質屬性（可見顆粒、SEC和cGE純度、UV蛋白濃度、CDC生物測定效能、光透法顆粒物質和pH）至少保持穩定12個月。

與起始材料相比，顏色、乳光度和icIEF和電荷異質性與起始材料相比至少12個月未顯示任何顯著變化。在 + 25ºC ± 2ºC/60% ± 5% RH 下的穩定性（加速儲存條件）

如表 21 所示，在+ 25ºC ± 2ºC下儲存6個月後，所有測試的品質屬性（可見顆粒、SEC純度、UV蛋白濃度、ADCC和CDC生物測定效能、光透法顆粒物質和pH）至少保持穩定6個月。

在+ 25ºC ± 2ºC下6個月後，顏色和乳光度均未觀察到變化。

在+ 25ºC ± 2ºC下6個月後，觀察到icIEF的電荷異質性分佈的變化如下：觀察到主要同工型含量降低了9%，而酸性同工型含量增加了9%。

觀察到cGE純度的主峰輕微下降（-2%）與低分子種類總和的增加（+2%）相關。

觀察到SEC單體純度輕微下降（-1.7%）。

與起始材料相比，所有其他參數均未顯示任何顯著變化。在 + 40ºC ± 2ºC/75% ± 5% RH 下的穩定性（應力條件）

如表 22 所示，在應力條件下，1個月後觀察到以下變化：

觀察到的icIEF電荷異質性分佈的變化如下：主要同工型含量降低14%，主要與酸性形式增加15%有關。

SEC聚集體的百分比保持不變。結論

該穩定性研究的結果表明，在110 mM精胺酸-HCl、9 mM組胺酸、2%蔗糖、0.4%泊洛沙姆188（pH 6.2）中配製的伊沙妥昔單抗 - 140 mg/mL在-20ºC下保持穩定至少1個月，並在+ 5ºC ± 3ºC下保持穩定至少12個月。

表 18 – 伊沙妥昔單抗 140 mg/mL - 在 - 20ºC ± 5ºC 下的穩定性結果

測試	初始結果	1 個月
澄清度和乳光度	不超過參考懸浮液	不超過參考懸浮液
顏色	不超過5級	不超過5級
測定（ UV ）
蛋白濃度（mg/mL）	139.2	138.9
pH	6.3	6.3
純度（ HPLC-SEC ）
單體（面積%）	98.8	99.0%
HMW種類總和（面積%）	1.0	0.8%
電荷異質性（ icIEF ）
主要同工型（面積%）	74	71
酸性同工型的總和（面積%）	18	21
鹼性同工型的總和（面積%）	8	8
純度（ cGE 不降低）
主峰（面積%）	96	96
LMW的總和（面積%）	4	4
顆粒物質（光透法）
每個容器中的顆粒≥ 25 µm	0	0
每個容器中的顆粒≥ 10 µm	19	56
可見顆粒	不含可見的顆粒	不含可見的顆粒
ADCC 生物測定
相對效能（%Ref Std EC₅₀ /樣品EC₅₀ ）	107	104
CDC 生物測定
相對效能（%Ref Std EC₅₀ /樣品EC₅₀ ）	105	111

表 19 – 注射用伊沙妥昔單抗溶液 140 mg/mL – 在 + 5ºC ± 3ºC 下的穩定性結果（ T1M 至 T6M ）

測試	初始結果	1 個月	3 個月	6 個月
澄清度和乳光度	不超過參考懸浮液	不超過參考懸浮液	不超過參考懸浮液	不超過參考懸浮液
顏色	不超過5級	不超過5級	不超過5級	不超過5級
測定（ UV ）
蛋白濃度（mg/mL）	139.2	140.4	139.8	139.8
pH	6.3	6.2	6.3	6.4
純度（ HPLC-SEC ）
單體（面積%）	98.8	98.8	98.7	98.6
HMW種類總和（面積%）	1.0	0.9	0.9	1.0
電荷異質性（ icIEF ）
主要同工型（面積%）	74	72	70	73
酸性同工型的總和（面積%）	18	21	22	19
鹼性同工型的總和（面積%）	8	8	8	8
純度（ cGE 不降低）
主峰（面積%）	96	96	96	96
LMW的總和（面積%）	4	4	4	4
顆粒物質（光透法）
每個容器中的顆粒≥ 25 µm	0	0	0	19
每個容器中的顆粒≥ 10 µm	19	243	187	206
可見顆粒	不含可見的顆粒	不含可見的顆粒	不含可見的顆粒	不含可見的顆粒
ADCC 生物測定
相對效能（%Ref Std EC₅₀ /樣品EC₅₀ ）	107	103	未確定	91
CDC 生物測定
相對效能（%Ref Std EC₅₀ /樣品EC₅₀ ）	105	118	101	78

表 20 – 注射用伊沙妥昔單抗溶液 140 mg/mL- 在 + 5ºC ± 3ºC 下的穩定性結果（ T9M 至 T12M ）

測試	初始結果	9 個月	12 個月
澄清度和乳光度	不超過參考懸浮液	不超過參考懸浮液	不超過參考懸浮液
顏色	不超過5級	不超過5級	不超過5級
測定（ UV ）
蛋白濃度	139.2	141.9	140.2
pH	6.3	6.2	6.2
純度（ HPLC-SEC ）
單體（面積%）	98.8	98.5	98.5
HMW種類總和（面積%）	1.0	1.1	1.1
電荷異質性（ icIEF ）
主要同工型（面積%）	74	73	73
酸性同工型的總和（面積%）	18	19	20
鹼性同工型的總和（面積%）	8	8	8
純度（ cGE 不降低）
主峰（面積%）	96	95	95
LMW的總和（面積%）	4	5	5
顆粒物質（光透法）
每個容器中的顆粒≥25 µm	0	56	0
每個容器中的顆粒≥10 µm	19	747	691
可見顆粒	不含可見的顆粒	不含可見的顆粒	不含可見的顆粒
ADCC 生物測定
相對效能（%Ref Std EC₅₀ /樣品EC₅₀ ）	107	未確定	95
CDC 生物測定
相對效能（%Ref Std EC₅₀ /樣品EC₅₀ ）	105	97	93

表 21 - 注射用伊沙妥昔單抗溶液， 140 mg/mL - 在 + 25ºC ± 2ºC/60% ± 5% RH 下的穩定性結果

測試	初始結果	1 個月	3 個月	6 個月
澄清度和乳光度	不超過參考懸浮液	不超過參考懸浮液	不超過參考懸浮液	不超過參考懸浮液
顏色	不超過5級	不超過5級	不超過5級	不超過5級
測定（ UV ）
蛋白濃度	139.2	138.2	140.7	140.5
pH	6.3	6.3	6.3	6.3
純度（ HPLC-SEC ）
單體（面積%）	98.8	98.7	97.9	97.1
HMW種類總和（面積%）	1.0	0.9	1.1	1.3
電荷異質性（ icIEF ）
主要同工型（面積%）	74	71	66	65
酸性同工型的總和（面積%）	18	21	26	27
鹼性同工型的總和（面積%）	8	8	8	8
純度（ cGE 不降低）
主峰（面積%）	96	96	95	94
LMW的總和（面積%）	4	4	5	6
顆粒物質（光透法）
每個容器中的顆粒≥ 25 µm	0	19	56	0
每個容器中的顆粒≥ 10 µm	19	280	1158	1400
可見顆粒	不含可見的顆粒	不含可見的顆粒	不含可見的顆粒	不含可見的顆粒
ADCC 生物測定
相對效能（%Ref Std EC₅₀ /樣品EC₅₀ ）	107	107	未確定	83
CDC 生物測定
相對效能（%Ref Std EC₅₀ /樣品EC₅₀ ）	105	105	95	85

表 22 - 注射用伊沙妥昔單抗溶液， 140 mg/mL - 在 + 40ºC ± 2ºC/75% ± 5% RH 下的穩定性結果

測試	初始結果	15 天	1 個月
澄清度和乳光度	不超過參考懸浮液III	不超過參考懸浮液III	不超過參考懸浮液IV
顏色	不超過5級	不超過5級	不超過5級
測定（ UV ）
蛋白濃度	139.2	139.2	138.4
pH	6.3	6.3	6.3
純度（ HPLC-SEC ）
單體（面積%）	98.8	97.9	97.2
HMW種類總和（面積%）	1.0	1.1	1.1
電荷異質性（ icIEF ）
主要同工型（面積%）	74	68	60
酸性同工型的總和（面積%）	18	25	33
鹼性同工型的總和（面積%）	8	8	7
純度（ cGE 不降低）
主峰（面積%）	96	95	94
LMW的總和（面積%）	4	5	6
顆粒物質（光透法）
每個容器中的顆粒≥ 25 µm	0	0	0
每個容器中的顆粒≥ 10 µm	19	150	56
可見顆粒	不含可見的顆粒	不含可見的顆粒	不含可見的顆粒
ADCC 生物測定
相對效能（%Ref Std EC₅₀ /樣品EC₅₀ ）	107	100	103
CDC 生物測定
相對效能（%Ref Std EC₅₀ /樣品EC₅₀ ）	105	104	97

實例 5 - 小型豬的體內研究

該實例描述了一項研究，其中藉由皮下注射投予伊沙妥昔單抗的調配物治療小型豬。選擇小型豬作為該皮下局部耐受性研究的測試模型，是因為其良好的可接受性，並且因為它通常用於對預期的人類投予途徑進行非臨床評估。

在8隻小型豬（1歲雌性，體重20-25 kg）上將四種調配物（F1、F2、F4和F10）和鹽溶液（0.9%氯化鈉）作為陰性對照進行了測試，每個測試組有4隻動物。每隻動物接受2種調配物和陰性對照的注射，每次注射之間有3周的恢復。藉由使用配備有背壓捕獲器（RSB5 Subminiature Load Cell 50LB/200N）的注射泵（Harvard Apparatus Model ‘22’），藉由裝有27G蝶形針的導管在側面區域進行投予，以監測組織背壓。

在輸注過程中，觀察動物時著重於一般行為、發聲和用於評估疼痛的視覺參數。輸注注射器壓力和洩漏的證據也受到監測。觀察注射部位的皮膚變化，並進行物質P和皮質醇的血漿分析。第5天在10% NBF中收集皮膚活檢。

在注射期間和之後5天記錄疼痛症狀。在注射過程中以及隨後的90分鐘內，將疼痛標記物投予採樣的血液中。然後對在注射點採集的皮膚樣品進行了組織病理學研究。就組織病理學而言，所有調配物均具有良好的耐受性。

伊沙妥昔單抗的所有溶液均從同一批次的伊沙妥昔單抗溶液中配製製備。該批次已被配製為在20 mM組胺酸和5%蔗糖中的30 mg/mL（pH為6）。

表 23 中描述了用於研究小型豬研究的所有測試調配物。

表 23  小型豬調配物

	濃度（ mg/mL ）	組胺酸（ mM ）	Lys-Cl （ mM ）	Arg-Cl （ mM ）	Lys-Ac （ mM ）	蔗糖 % （ p/v ）	PS 80% （ p/v ）	P188 % （ p/v ）	pH
F1	150	10*	125*	-	-	2	0.04	-	6.2
F2	135	10*	-	125*	-	2	0.04	-	6.2
F4	140	10**	-	125**	-	2	-	0.4	6.2
F10	140	-	-	-	125**	2	0.04	-	6.2
滲濾緩衝液和CES的標稱值，未考慮超濾過程中道南效應引起的偏移 *滲濾緩衝液和CES的標稱值，未考慮超濾過程中道南效應引起的偏移，但後來在F4和F10中進行了量化

為了製備每種調配物，藉由滲濾交換緩衝液（沒有蔗糖和表面活性劑），並且將抗體濃縮至比目標調配物更高的值。在首次調整濃度後，添加濃縮的賦形劑溶液（溶解在滲濾緩衝液中的濃縮的蔗糖和表面活性劑）以獲得最終調配物。

表 24 列出了研究的滲濾緩衝液。

表 24  滲濾緩衝液的組成

	組胺酸（ mM ）	組胺酸， HCl （ mM ）	離胺酸 -Cl （ mM ）	精胺酸， Cl （ mM ）	離胺酸 -Ac （ mM ）	乙酸	pH
F1	6.2	3.8	125	-	-	-	6.3
F2和F4	5.2	4.8	-	125	-	-	6.1
F10	-	-	-	-	125	3.7	6.2

最終調配物的記錄值示於表 25 中。

表 25  分析結果

	目標濃度 ( mg/mL )	濃度 ( mg/mL )	重量莫耳滲透壓濃度 ( mOsm/Kg )	重量莫耳滲透壓濃度 ( 樣品稀釋 )	密度	pH**	[His] ( mM )	[Arg] ( mM )	[Lys] ( mM )
F1	150	149.6	364	298	1.058*	6.3	n.a.	-	n.a.
F2	135	137.5	336	288	1.056	6.3	n.a.	n.a.	-
F4	140	141.8	352	297	1.057	6.3	9	105	-
F10	140	142.5	369	289	1.055	6.2	-	-	99
過濾前調配物的密度 *過濾後用微電極量測的pH n.a. = 不可用(未量測)

研究總共使用了八隻1歲雌性小型豬。在4隻動物上測試每種調配物，每隻動物在30分鐘內接受18 mL的體積（0.6 mL/min）。研究持續了5天，在此期間記錄了疼痛標記物和症狀。在5天結束時，取樣8 mm皮膚圓盤（活檢）以進行組織病理學檢查。

首先在小型豬上測試調配物F2和F4。在21天的滯後時間之後，然後在相同的8隻小型豬上測試調配物F1和F10。最後，在第二次滯後時間之後，在相同的8隻小型豬上測試了鹽溶液。

對於每種調配物/鹽溶液，進行如下研究： ․ 注射溶液至4隻小型豬（鹽溶液8隻） ․ 輸注期間：即時記錄以下參數： ο 遙感量測（ECG） ο 注射器背壓（用於計算組織背壓） ο 疼痛標記物（皮質醇、物質P，在血液中投予-需要定期抽血） ο 疼痛症狀（抓撓、擦洗、噪音、發紅）和輸注引起的水腫的大小。 ․ 輸注後： ο 輸注結束後90分鐘內出現疼痛標記物 ο 連續5天出現疼痛症狀（抓撓、擦洗、發紅）（外觀檢查，任意單位） ο 樣品組織的組織病理學（5天后的皮膚活檢）

表 26 總結了疼痛的主要結果。

表 26 - 疼痛標記物和疼痛症狀

	血漿皮質醇， nmol/L （ 4 隻小型豬的平均 max ） *	輸注期間疼痛症狀（每隻小型豬）
F1	145	0.25
F2	235	1.5
F4	195	1
F10	340	2.25
對照	n.r.**	20
對於相同調配物，動物之間差異很大 *n.r.= 未報告

在表26中，僅血漿皮質醇被報告為疼痛標記物。對所有調配物測得的物質P的水平均未隨時間變化。注射後血漿皮質醇增加。表26報導了每種調配物在4隻小型豬上計算出的平均值的最大值。對於F10，獲得了所述平均值的最大值。對於所有調配物，在4隻測試動物之間血漿皮質醇水準存在差異。

F10的疼痛症狀的數量也是4種調配物中最高的，並且血漿皮質醇水準最高（圖22）。F2的疼痛症狀數量第二高，且物質P水準最高（圖23）。表26中未顯示F1和F2均具有較差的抗體穩定性的發現。

在使用4種調配物的注射過程中，未觀察到洩漏和幾乎恆定的注射器背壓。

表 27 總結了組織病理學的主要結果。

表 27  組織病理學結果

治療組	真皮	皮下組織	骨骼肌
最小的血管周圍發炎	最小至中度增加的膠原蛋白	局灶性肌纖維壞死、修復性肉芽組織
F1	4/4 (100%)	3/4 (75%)	1/4 (25%)
F2	4/4 (100%)	2/4 (50%)	4/4 (100%)
F4	4/4 (100%)	3/4 (75%)	1/4 (25%)
F10	4/4 (100%)	3/4 (75%)	0/4 (0%)
鹽水	4/4 (100%)	1/4 (25%)	1/4 (25%)

真皮和皮下組織在調配物之間沒有顯示出有意義的差異。與調配物F1（25%）、F4（25%）、F10（0%）或鹽水（25%）相比，調配物F2顯示出更高的骨骼肌變化發生率（100%）。實例 6- 小型豬的第二次體內研究

在實例中描述的研究的目的是藉由使用三種不同的流速皮下輸注給小型豬，對伊沙妥昔單抗單次投予後的局部耐受性和血漿藥動學進行評估。此外，一組動物靜脈內投予一次，以評估不同皮下輸注後伊沙妥昔單抗的生物可用率。

使用測試樣品，用於SC輸注的伊沙妥昔單抗500 mg/25 mL（20 mg/mL）以及用於SC輸注的伊沙妥昔單抗140 mg/mL（實例5中的調配物F4）。對於第2、3和4組，注射用鹽水（0.9% NaCl）用作陰性對照項目。

研究是在20頭來自丹麥代爾莫瑟DK-4261的Ellegaard Göttingen Minipigs A/S的雌性Göttingen SPF（無特定病原體）小型豬中進行的。到來時訂購的動物的體重為20-25 kg。允許15天的預處理期（包括5天的適應期），在此期間每天觀察動物以排除任何狀況較差的動物。記錄所有觀察結果。

如表 28 所示，將動物隨機分為四個治療組：

表 28 - 治療組

組	樣品和濃度（mg/mL）	投予途徑（輸注速率）	劑量體積（mL）	伊沙妥昔單抗劑量（mg/動物）	動物 Nos
第1天	第8天
1	伊沙妥昔單抗（20）	-	IV （3 mL/min）	90	1800	1-5
2	伊沙妥昔單抗（140）	鹽水	SC （0.5 mL/min）	12.9	1806	6-10
3	伊沙妥昔單抗（140）	鹽水	SC （1 mL/min）	12.9	1806	11-15
4	伊沙妥昔單抗（140）	鹽水	SC （2 mL/min）	12.9	1806	16-20

對於靜脈內輸注，在治療開始前9天，將耳靜脈導管植入6隻動物中（5 + 1隻備用）。將這些動物中的五隻分配到第1組（IV輸注組）；最後一隻動物被納入一個皮下組中。

所有投予均使用Baxter Colleague CXE定量輸液泵進行。Baxter Colleague CXE泵能夠從半剛性容器、剛性容器、柔性IV袋和排氣注射器中輸注。在投予過程中，將測試和陰性對照專案放置在無菌玻璃輸注瓶中。

- 治療的第一天被指定為第一天。

- 在第1組的第1天，藉由植入的耳靜脈導管以3 mL/min的流速輸注30分鐘投予單劑量的伊沙妥昔單抗（1800 mg/動物）。

- 在第2、3和4組的第1天，分別在0.5、1和2 mL/min的流速下藉由帶蝶形針的皮下導管投予單劑量的伊沙妥昔單抗（1806 mg/動物）。將蝶形針放置在膝蓋區域正前方的左下側面區域中。

- 在第2、3和4組的第8天，分別在0.5、1和2 mL/min的流速下藉由帶蝶形針的皮下導管投予單劑量的鹽水（陰性對照）。將蝶形針放置在膝蓋區域正前方的右下側面區域中。

- 第1組的劑量體積為90 mL，第2-4組的為12.9 mL。

- 觀察第2-4組中皮下注射部位在輸注期間的滲漏。

- 沿著輸注程式中發生的局部腫脹的邊緣標記皮下注射部位，並在必要時重新標記。

- SC輸注的針頭大小為23G。

每天記錄所有不良健康跡象和任何行為改變。記錄任何偏離正常的情況。在投予期間，觀察動物的一般行為和任何發聲，重點是應力、不適或疼痛的任何跡象。

對於第2-4組，從投予當天起每天觀察皮下注射部位是否有出血、紅斑、腫脹（水泡形成，指示大小）和牢固性，但不排除其他跡象。在投藥的幾天，在輸注之前和輸注結束時，然後在投予結束後15 min（± 2 min）、30 min（± 2 min）、1（± 3 min）、2（± 6 min）和4小時（± 12 min）時觀察注射部位。此後，每天觀察注射部位直至第17天，儘管從第10天起未觀察到局部反應。根據以下評分系統對參數評分：0 - 不存在；1 - 最小；2 - 輕微；3 中度；和4 - 顯著。 血液樣品的藥動學

從第1天開始，採集所有動物的血液樣品。在以下時間點進行血液採樣：預處理、輸注結束後2分鐘內、以及輸注結束後1（± 3 min）、4（± 12 min）、24（± 1小時12 min）、48（± 2小時24 min）、72、96、168、192、264、336、504和672小時（容差從72小時開始為± 3小時）。

使用美國加利福尼亞州山景城的Pharsight Corporation的Phoenix WinNonlin版本6.3軟體執行藥動學（PK）分析。適當地進行使用WinNonlin血漿模型（靜脈輸注和血管外劑量模型）的非隔室分析。

來自每隻動物的血漿濃度-時間資料用於藥動學計算。除個別動物的參數估計值外，還適當地報告了描述性統計資料（例如，均值、標準差和變異係數）。每隻動物的所有參數均來自第1天治療後血漿中的各個測試品濃度。為了確定各個藥動學參數，將低於定量限的濃度視為零。為了確定平均濃度，將低於定量限的樣品視為零。

使用標稱劑量水準估算參數。由於沒有記錄到與標稱值的時間偏差超過15%的情況，因此使用標稱採樣時間對參數進行了估算。將第1天的投藥前濃度設定為零。

描述性統計（均值、標準差，如適用）和藥動學參資料包道為三個有效數字。報告的變異係數不帶小數位。

估算了伊沙妥昔單抗的以下PK參數： ․ C_max - 觀察到的最大濃度， ․ t_max - 最大濃度的時間， ․ C_最後 - 最後可量測的濃度， ․ t_最後 - 最後可量測濃度的時間， ․ AUC_{0-24 h} - 使用線性梯形法則藉由非隔室分析計算從0至24小時的血漿濃度-時間曲線下的面積， ․ AUC_{0-72 h} - 使用線性梯形法則藉由非隔室分析計算從0至72小時的血漿濃度-時間曲線下的面積， ․ AUC_{0-168 h} - 使用線性梯形法則藉由非隔室分析計算從0至168小時的血漿濃度-時間曲線下的面積， ․ AUC_0-t - 由0-t計算得出的血漿濃度-時間曲線下的面積，其中t是最後可量測濃度的時間，是使用線性梯形法則藉由非隔室分析計算的， ․ 使用AUC_{0-24 h} 、AUC_{0-72 h} 、AUC_{0-168 h} 和AUC_0-t 評估了SC輸注相對IV輸注的生物可用率。

針對IV途徑計算了其他參數（即t_1/2z ，V_z. ，CL）。從 SC 注射部位收集皮膚活檢（第 2 至 4 組）

在第8天和第29天，使用6 mm活檢打孔器從第2組至第4組所有動物的左皮下輸注部位（測試項目部位）進行了3次深度約7-10 mm的皮膚活檢，以進行組織病理學檢查。在投予用鹽水（陰性對照）後第8天進行收集，以便能夠在輸注期間監測動物。

在第8天收集的活檢（1-3號活檢）取自輸注區的前半部分。從背部區域收集1號活檢，從中部區域收集2號活檢，並從腹側部分收集3號活檢。在第29天收集的活檢以類似的方式從輸注區域的後半部分收集。此外，在兩天中，從所有動物的相同區域收集了來自劑量區域之外的未經處理的對照（4號活檢）。

在第15天和第36天，以相似的方式從第2至4組中所有動物的右皮下輸注部位（鹽水部位）收集皮膚活檢。

在第15天收集的活檢（5-7號活檢）取自輸注區的前半部分。從背部區域收集5號活檢，從中部區域收集6號活檢，並從腹側部分收集7號活檢。在第36天收集的活檢以類似的方式從輸注區域的後半部分收集。此外，在兩天中，從所有動物的相同區域收集了來自劑量區域之外的未經處理的對照（8號活檢）。

將來自每隻動物的每次活檢置於單獨的容器中，並固定在磷酸鹽緩衝的中性4%甲醛中。結果

在任何動物中均未觀察到與測試樣品相關的臨床體徵。

在第1天和第2天，對三隻動物（第1組第4號和第2組第6和7號）的皮膚觸摸是溫暖的。但是，由於受影響的動物數量很少，因此被認為是偶然發現。

在所有組中，在輸注當天對輸注部位的局部反應進行評分。其他幾天沒有評分。

在第1天（伊沙妥昔單抗）的第2組（0.5 mL/min）中，在輸注結束後的前兩個小時內，在所有動物中在輸注部位主要注意到輕微紅斑，在三隻動物中觀察到最小至中度腫脹（水泡形成）。此外，三隻動物在輸注結束後的前15分鐘內出血最少。

對於第8天（0.5 mL/min的鹽水）的第2組，在輸注結束後的前兩個小時內，所有動物中在輸注部位主要注意到最小紅斑，在兩隻動物中觀察到最小至中度腫脹（水泡形成）。此外，輸注結束後在三隻動物中觀察到最少出血。

在第1天（伊沙妥昔單抗）的第3組（1 mL/min）中，在輸注結束後的前4小時內在輸注部位的四隻動物中觀察到最小至輕微紅斑，在輸注結束後4小時三隻動物出現最小至顯著腫脹（水泡形成），尺寸減小。輸注結束後的前30分鐘內，在三隻動物中觀察到一隻動物的最少出血和輕微出血。

對於第8天（1 mL/min的鹽水）的第3組，在輸注結束後的前4小時內所有動物中在輸注部位觀察到最小至輕微紅斑，在輸注結束後2小時一隻動物在投予後具有最小至中度腫脹（水泡形成），尺寸減小。在輸注結束後的前15分鐘內，在所有動物中觀察到一隻動物的最少出血和輕微出血。

在第1天（伊沙妥昔單抗），在第4組（2 mL/min）中，在輸注結束後的前2小時內在四隻動物中在輸注部位觀察到最小至輕微紅斑（一隻動物中度），在輸注結束後4小時動物投予後出現顯著腫脹（水泡形成），尺寸減小。兩隻動物在輸注結束時顯示最少出血。

對於第8天（2 mL/min的鹽水）的第4組，在輸注結束後的前30分鐘內所有動物中在輸注部位主要觀察到最小紅斑（兩例輕微），在輸注結束後1小時兩隻動物在投予後出現中度腫脹（水泡形成），尺寸減小。在輸注結束時，在兩隻動物中觀察到最少出血。

輸注過程中未觀察到滲漏跡象。

表 29 - SC 輸注部位的局部反應發現的概述

輸注速度（mL/min）	測試項目	紅斑發生率（嚴重程度範圍）	出血發生率（嚴重程度範圍）	腫脹發生率（嚴重程度範圍） [最大尺寸]
0.5	伊沙妥昔單抗	5/5 （最小-中度）	3/5 （最小）	3/5 （最小-中度） [50 x 35 x 10 mm]
0.9% NaCl	5/5 （最小-輕微）	3/5 （最小）	2/5 （最小-中度） [45 x 45 x 10 mm]
1	伊沙妥昔單抗	4/5 （最小-輕微）	3/5 （最小-輕微）	3/5 （最小-顯著） [50 x 40 x 8 mm]
0.9% NaCl	5/5 （最小-輕微）	5/5 （最小-輕微）	1/5 （中度） [35 x 35 x 12 mm]
2	伊沙妥昔單抗	4/5 （最小-中度）	2/5 （最小）	4/5 （最小-顯著） [55 x 40 x 10 mm]
0.9% NaCl	5/5 （最小-輕微）	2/5 （最小）	2/5 （最小-中度） [25 x 25 x 8 mm]

藥動學

依沙妥昔單抗隨時間的各個血漿濃度顯示在圖24-27中。

使用Phoenix WinNonlin版本6.3藥動學軟體進行血漿水準資料的非隔室藥動學分析。

表 30 - 單次靜脈內（ IV ）或皮下（ SC ）輸注後小型豬血漿中伊沙妥昔單抗的平均（ CV% ， n=5 ）藥動學參數

途徑速率 (mL/min)	T_max (hr)	C_max (μg/mL)	T_最後 (hr)	C_最後 (μg/mL)	AUC_最後 (h*μg/mL)	AUC_0-24 (h*μg/mL)	AUC_0-72 (h*μg/mL)	AUC_0-168 (h*μg/mL)	F¹
IV 3	結束³ (0)	1,540 (8)	672³ (0)	366 (22)	364,000 (11)	28,400 (11)	69,800 (10)	136,000 (10)	-
SC 0.5	96 [72-192]² (50)	678 (8)	672³ (0)	349 (24)	325,000 (13)	5,450 (48)	31,500 (20)	92,200 (11)	0.89
SC 1	192 [48-264]² (54)	1130 (23)	672³ (0)	677 (34)	565,000 (25)	8,330 (37)	45,900 (14)	129,000 (5)	1.55⁴
SC 2	168 [72-192]² (45)	847 (12)	672³ (0)	440 (36)	369,000 (23)	6,610 (19)	38,500 (10)	106,000 (10)	1.01

結束=輸注結束¹ 使用AUC_最後計算² 中值[min-max]³ 中值、min和max的值相同⁴ 高F值與對該組注釋的較高變異性有關；2/5動物的貢獻顯示暴露量明顯更高

在研究中，從輸注結束開始收集的所有血漿樣品中的伊沙妥昔單抗均可量化，但除了對第4組女性在SC輸注結束時和對第3組在SC輸注後1小時採集的單個樣品低於定量下限（LLOQ）的情況。所有投予前樣品中的濃度均低於LLOQ。對於SC和IV途徑，曲線分別與血管外和靜脈內投予一致。總體而言，IV輸注在PK參數中觀察到的變異性較低，而SC輸注在低至中度。

在30分鐘的時間內以1800 mg/動物將伊沙妥昔單抗單次IV輸注給小型豬之後，在所有動物的輸注期結束時均觀察到最大血漿水準。在0.5、1或2 mL/min的流速下以1806 mg/動物將伊沙妥昔單抗單次SC輸注給小型豬之後，分別在輸注結束後96、192和168小時觀察到最大血漿水準中值。但是，單個的T_max 值在48至264小時的範圍內，並且顯示與SC輸注速率無關。

在30分鐘的時間內以1800 mg/動物將伊沙妥昔單抗單次IV輸注給小型豬之後，在整個672小時的劑量後採樣期間（AUC_最後）的平均AUC為364,000 hr*μg/mL。在以0.5、1或2 mL/min的流速以1806 mg/動物將伊沙妥昔單抗單次SC輸注給小型豬之後，在整個672小時的劑量後採樣期間（AUC_最後）的平均AUC分別為326,000、565,000和369,000 hr*μg/mL。每個SC組的AUC_最後值大體相似，表明輸注速率對暴露沒有影響。

在該研究的條件下，當以0.5、1或2 mL/min的流速向小型豬SC輸注時，伊沙妥昔單抗的絕對SC生物可用率與在每個AUC間隔所測試的3個流速大致相似。當使用整個672小時的劑量後採樣期間（AUC_最後）的AUC計算時，生物可用率隨著AUC間隔的增加而增加，在0.5、1和2 mL/min的流速下分別達到0.89、1.55和1.01的F值。對於以1 mL/min輸注的組，估計的高F值與對該組注釋的較高變異性有關；2/5動物的貢獻顯示暴露量明顯更高。

總的來說，得出的結論是當以0.5至2 mL/min的流速藉由SC輸注以1806 mg/動物（140 mg/mL的溶液）的劑量投予時，小型豬中伊沙妥昔單抗的絕對SC生物可用率至少為89%。 皮膚活檢的顯微鏡檢查

在注射部位皮膚活檢的顯微鏡檢查中，任何皮下組均未觀察到與治療相關的變化。顯微鏡下的發現主要是單核細胞的局灶性浸潤最少，而表皮的局灶性痂最少，皮下劑量組之間的發生率和形態無差異。同樣地，當比較劑量組（相同的輸注速度）中鹽水（陰性對照）治療的注射部位與測試樣品治療的注射部位時，發現被認為是相似的。所有顯微鏡檢查發現均被認為是Göttingen小型豬皮膚中眾所周知的偶然背景變化。討論

依沙妥昔單抗，當以3 mL/min的流速並以1800 mg/動物的劑量藉由靜脈內輸注（20 mg/mL溶液）或當以0.5、1或2mL/min的流速以1806 mg/動物的劑量皮下輸注（作為實例5的調配物F4中的140 mg/mL溶液）投予雌性Göttingen小型豬時，在臨床和組織病理學上都很好地耐受了。

僅在輸注當天在部位觀察到所有組的皮下注射部位處的局部反應。

對於三種測試的皮下流速（0.5、1和2 mL/min），紅斑和出血的發生率和嚴重程度評分是相當的，而伊沙妥昔單抗和鹽水陰性對照的紅斑和出血的發生率和嚴重程度評分相似。但是，與以0.5 mL/min輸注相比，以1 mL/min和2 mL/min輸注的伊沙妥昔單抗在輸注部位的腫脹（水泡形成）更為明顯。這很可能是一種物理現象，與在單個部位注射的大體積有關，其嚴重程度與輸注時間成反向相關，並且從輸注部位排出的流體速率恆定。此外，輸注伊沙妥昔單抗後的腫脹比輸注鹽水後更顯著。輸注鹽水後的腫脹在所有3種流速下均相當。

在注射部位皮膚活檢的顯微鏡檢查中，任何皮下組均未觀察到與治療相關的變化。

在該研究的條件下，當以0.5、1或2 mL/min的流速向小型豬SC輸注時，實例4的F4中配製的伊沙妥昔單抗的絕對SC生物可用率與在所考慮的每個AUC間隔所測試的3個流速大致相似。當使用整個672小時的劑量後採樣期間（AUC_最後）的AUC計算時，生物可用率隨著AUC間隔的增加而增加，在0.5、1和2 mL/min的流速下分別達到0.89、1.55和1.01的F值。對於以1 mL/min輸注的組，估計的高F值與對該組注釋的較高變異性有關；2/5動物的貢獻顯示暴露量明顯更高。實例 7 - 人類皮下伊沙妥昔單抗的1b期研究

該實例描述了多中心、開放標籤、1b期研究，旨在評估皮下和靜脈內注射伊沙妥昔單抗與泊馬度胺和地塞米松組合在復發/難治性多發性骨髓瘤（RRMM）患者中的藥動學、安全性和療效。

本研究旨在首次評估伊沙妥昔單抗的SC投予。此外，SC調配物與用於IV投予的調配物不同。與上述以前的研究相似，將伊沙妥昔單抗SC與泊馬度胺和地塞米松組合投予於類似的患者群體中。該研究還包括使用伊沙妥昔單抗IV投予的群組，用以評估相對於伊沙妥昔單抗SC的安全性和PK。

研究的主要終點是：(i) 評估使用輸液泵皮下投予（SC）伊沙妥昔單抗與靜脈內投予（IV）伊沙妥昔單抗的安全性和耐受性（包括局部注射部位耐受性）；以及 (ii) 評估當與泊馬度胺和地塞米松組合SC和IV投予時，伊沙妥昔單抗的藥動學。所述研究的次要終點包括：(i) 估計伊沙妥昔單抗SC和IV的絕對生物可用率；(ii) 量測SC投予與IV投予後骨髓抽吸物的漿細胞中伊沙妥昔單抗的CD38受體佔有率（RO）；以及 (iii) 評估伊沙妥昔單抗SC/IV投予的療效。

所述研究包括5個參與者群組。將患者隨機分配到群組1a（SC 1000 mg劑量）或群組1b（IV）中（2 : 1的隨機化比率）。在評估了1a群組中的伊沙妥昔單抗SC安全性、PK和RO資料後，將其他參與者隨機分配到2a或2b群組中（隨機比率為2 : 1），在2a群組中使用更高劑量的伊沙妥昔單抗SC（1400 mg劑量），且在2b群組中使用相同的IV劑量。一旦2a和2b群組中的所有患者均完成了治療的第1周期，就應在投予伊妥昔單抗SC和IV後對安全性、PK和RO資料進行最終審查。在確認推薦的2期劑量（RP2D）水準後，在群組2c中招募了其他22名患者，並以該劑量水準投予伊沙妥昔單抗SC。表 31 更詳細地描述了群組治療。

表 31 – 群組治療詳細資訊

群組	劑量	投予途徑/方法
1a (n = 8)	1000 mg	SC/輸液泵（0.8 mL/min）
1b (n = 4)	10 mg/kg	IV
2a (n = 8)	1400 mg	SC/輸液泵（0.8 mL/min）
2b (n = 4)	10 mg/kg	IV
2c (n = 22)	RP2D	SC/輸液泵（0.8 mL/min）

每周一次投予依沙妥昔單抗，持續4周（周期1），並在每個後續周期的第1天和第15天與泊馬度胺和地塞米松組合投予。每個周期持續28天。研究中的所有參與者都繼續治療，直到疾病進展、不可接受的不良反應或其他終止原因為止。

群組1a、2a和2c藉由皮下（SC）輸注接受伊沙妥昔單抗調配物，其包含140 mg/mL伊沙妥昔單抗、9 mM組胺酸、110 mM精胺酸一鹽酸鹽、2%（w/v）蔗糖和0.4%（w/v）泊洛沙姆188（pH 6.2）。1a、2a和2c群組在每28天周期的第1到21天也口服（p.o.）接受4 mg泊馬度胺；且在每28天周期的第1、8、15和22天口服地塞米松4 mg。

1b和2b群組藉由靜脈內（IV）輸注接受不同的伊沙妥昔單抗調配物，其包含20 mg/mL 伊沙妥昔單抗、20 mM組胺酸、10%（w/v）蔗糖和0.02%（w/v）泊洛沙姆80（pH 6.0）。1b和2b群組在每28天周期的第1到21天也口服（p.o.）接受4 mg泊馬度胺；且在每28天周期的第1、8、15和22天口服地塞米松4 mg。

在進行2a或2c群組之前，先分別審查了群組1a和群組2a的第1周期（前4周）的安全性、PK和RO資料。

對1群組（a/b）和2群組（a/b）中收集的安全性、PK和RO資料進行了審查，以支持選擇最合適的SC伊沙妥昔單抗劑量RP2D。

根據PK模型和類比，選擇了1000 mg的伊沙妥昔單抗劑量作為起始劑量，這證明即使假設80%的SC生物可用率，伊沙妥昔單抗濃度（第28天的穀血漿濃度[C穀]）也將與IV投予10 mg/kg和遠低於20 mg/kg IV後觀察到的第28天濃度在相似範圍內，這在臨床上已顯示是安全的。低於1000 mg的劑量不被視為起始劑量，因為伊沙妥昔單抗的PK非線性。

SC伊沙妥昔單抗的1400 mg劑量的選擇基於使用IV資料建立的群體PK模型（n = l27）。該模型表明，以QWx4/Q2W投予的1400 mg SC伊沙妥昔單抗可以將C穀維持在10 mg/kg IV QWx4/Q2W後所達到的水準之上，假設絕對生物可用率為2:50%。PK/PD分析證明，第4周的C穀是反應的顯著預測指標（客觀反應率，IV投予）。

納入標準包括以下：根據國際骨髓瘤工作組（IMWG）標準，先前已根據規範標準被診斷出患有多發性骨髓瘤（MM）且目前因為MM在反應後已復發而需要治療的患者。已經接受了包括來那度胺和蛋白酶體抑制劑的至少2種先前的療法並且在進行最後的療法時或在最後的療法完成後已經展現出疾病進展的患者；以及定義為以下至少一項的具有可量測疾病的患者： ․ 血清M蛋白≥ 0.5 g/dL（≥ 5 g/L）； ․ 尿液M蛋白≥ 200 mg/24小時；以及 ․ 血清游離輕鏈（FLC）測定：關於的FLC測定≥ 10 mg/dL（≥ 100 mg/L）和異常的血清FLC比率（＜ 0.26或＞ 1.65）。

收集骨髓和血液樣品用於以下生物標記物分析： ․ 在骨髓抽吸物的漿細胞中量測伊沙妥昔單抗的CD38受體佔有率，並與PK參數和臨床反應相關聯。在篩選時和第2周期的第1天（投予前）收集骨髓樣品。選擇RP2D 伊沙妥昔單抗SC劑量後，將停止該樣品收集（僅1a/b群組和2a/b群組）。 ․ 藉由下一代測序在骨髓抽吸物中評估最小殘留病（MRD），並與臨床反應的參數相關聯。在篩選所有參與者時以及在完全反應（CR）或非常好的部分反應（VGPR）的最大確認反應時收集骨髓樣品。僅針對達到VGPR或更好的參與者分析篩選時的樣品。 ․ 在免疫電泳和免疫固定測定中，對M蛋白評估中潛在的伊沙妥昔單抗干擾是使用消除伊沙妥昔單抗干擾的測定對血清樣品進行評估的。

無

圖 1 是一系列圖，其描繪了在所示緩衝系統中，伊沙妥昔單抗的熱應力（上圖）和振動應力（下圖）後，≥ 10 μm和≥ 25 μm的亞可見顆粒的數量。2w 40ºC，在40ºC下兩周；4w 40ºC，在40ºC下4周；Cit，檸檬酸鹽緩衝液；His，組胺酸緩衝液；Pho，磷酸鹽緩衝液；Ace，乙酸鹽緩衝液。

圖 2 是描繪在40ºC熱應力下可溶性聚集體（使用尺寸排阻層析（SE-HPLC）量測的高分子量聚集體（HMW））的百分比的圖。2w 40ºC，在40ºC下兩周；4w 40ºC，在40ºC下4周；Cit，檸檬酸鹽緩衝液；His，組胺酸緩衝液；Pho，磷酸鹽緩衝液；Ace，乙酸鹽緩衝液。

圖 3 是描繪在具有所示pH和濃度值的組胺酸緩衝液中在40ºC熱應力下使用尺寸排阻層析（SE-HPLC）量測的可溶性聚集體（高分子量聚集體（HMW））的百分比的圖。1M 40ºC，在40ºC下一個月。

圖 4 是描繪在具有所示pH和濃度值的組胺酸緩衝液中在40ºC振動應力下使用弱陽離子交換分析量測的伊沙妥昔單抗的酸性形式的百分比的圖。1M 40ºC，在40ºC下一個月。

圖 5 是描繪在所示濃度的精胺酸-Cl pH 6.0中200 mg/mL的伊沙妥昔單抗的粘度的圖。

圖 6A 是描繪在一定濃度範圍的精胺酸-HCl緩衝液（pH 6.3）下150 mg/mL的伊沙妥昔單抗的粘度的圖。插圖顯示了在更高濃度的精胺酸-HCl下的細節。

圖 6B 是描繪在一定濃度範圍的精胺酸-HCl緩衝液（pH 6.3）下180 mg/mL的伊沙妥昔單抗的粘度的圖。插圖顯示了在更高濃度的精胺酸-HCl下的細節。

圖 7A 是描繪在150 mM精胺酸-HCl緩衝液中一定pH範圍下150 mg/mL的伊沙妥昔單抗的粘度的圖。

圖 7B 是描繪在200 mM精胺酸-HCl緩衝液中一定pH範圍下150 mg/mL的伊沙妥昔單抗的粘度的圖。

圖 8 是描繪在pH 5.5、5.9、6.2和7.0（T = 20ºC）下隨mAb濃度變化繪製的粘度的圖。擬合：基於Mooney的方程式。

圖 9 是描繪在126、140、147和154 g/L的mAb濃度下（T = 20ºC）隨pH變化繪製的粘度的圖。

圖 10 是描繪在126、143和154 g/L的mAb濃度下（pH = 6.2）隨溫度變化繪製的粘度的圖。

圖 11 是描繪在142和152 g/L的mAb濃度下（pH = 5.9）隨溫度變化繪製的粘度的圖。

圖 12 是描繪在140 g/L的mAb濃度下（pH = 6.2，T = 20ºC）隨精胺酸濃度變化繪製的粘度的圖。

圖 13 是描繪在調配物F4-1至F4-16中使用伊沙妥昔單抗的HP-SEC分析檢測的相對單體含量的圖（分別為運行1至運行16，n = 2，均值）；T0：無處理，T-mech：機械應力，T-5xFT：5個凍/融循環，T-1m_40ºC：在40ºC下1個月。

圖 14 是描繪在調配物F10-1至F10-16中使用伊沙妥昔單抗的HP-SEC分析檢測的相對單體含量的圖（分別為運行1至運行16，n = 2，均值）；T0：無處理，T-mech：機械應力，T-5xFT：5個凍/融循環，T-1m_40ºC：在40ºC下1個月。

圖 15 是描繪在調配物F4-1至F4-16中使用伊沙妥昔單抗的HP-SEC分析檢測的所有聚集體（HMWS）的相對含量的圖（分別為運行1至運行16，n = 2，均值）；T0：無處理，T-mech：機械應力，T-5xFT：5個凍/融循環，T-1m_40ºC：在40ºC下1個月。

圖 16 是描繪在調配物F10-1至F10-16中使用伊沙妥昔單抗的HP-SEC分析檢測的所有聚集體（HMWS）的相對含量的圖（分別為運行1至運行16，n = 2，均值）；T0：無處理，T-mech：機械應力，T-5xFT：5個凍/融循環，T-1m_40ºC：在40ºC下1個月。

圖 17 是描繪在調配物F4-1至F4-16中使用伊沙妥昔單抗的HP-SEC分析檢測的所有片段（LMWS）的相對含量的圖（分別為運行1至運行16，n = 2，均值）；T0：無處理，T-mech：機械應力，T-5xFT：5個凍/融循環，T-1m_40ºC：在40ºC下1個月。

圖 18 是描繪在調配物F10-1至F10-16中使用伊沙妥昔單抗的HP-SEC分析檢測的所有片段（LMWS）的相對含量的圖（分別為運行1至運行16，n = 2，均值）；T0：無處理，T-mech：機械應力，T-5xFT：5個凍/融循環，T-1m_40ºC：在40ºC下1個月。

圖 19 是描繪對伊沙妥昔單抗調配物F4-1至F4-16進行的毛細管等電聚焦（cIEF）分析獲得的酸性峰含量的圖（分別為運行1至運行16，n = 2，均值）；T0：無處理，T-1m_40ºC：在40ºC下1個月。

圖 20 是描繪對在調配物F10-1至F10-16中的伊沙妥昔單抗進行的cIEF分析獲得的酸性峰含量的圖（分別為運行1至運行16，n = 2，均值）；T0：無處理，T-1m_40ºC：在40ºC下1個月。

圖 21 是描繪在40ºC/75% r.h.下儲存一個月之後，對在調配物F4-1至F4-16和F10-1至F10-16中的伊妥昔單抗進行的cIEF分析獲得的單體峰含量的相對面積[%]的損失的圖（分別為運行1至運行16，n = 2，均值）。

圖 22 是描繪如實例5中所述的皮下輸注伊妥昔單抗或NaCl對照的所示調配物的小型豬的血漿皮質醇的圖。

圖 23 是描繪如實例5中所述的皮下輸注伊妥昔單抗或NaCl對照的所示調配物的小型豬的血漿物質P的圖。

圖 24 是描繪如實例6中所述的組I中的個體小型豬1至5中伊妥昔單抗的血清濃度隨時間變化的圖。

圖 25 是描繪如實例6中所述的組II中的個體小型豬6至10中伊妥昔單抗的血清濃度隨時間變化的圖。

圖 26 是描繪如實例6中所述的組III中的個體小型豬11至15中伊妥昔單抗的血清濃度隨時間變化的圖。

圖 27 是描繪如實例6中所述的組IV中的個體小型豬16至20中伊妥昔單抗的血清濃度隨時間變化的圖。

Claims

一種包含至少100 mg/mL的抗CD38抗體的調配物，其中所述抗CD38抗體包含可變重鏈區（VH），其包含分別含有SEQ ID NO: 1-3中列出的胺基酸序列的三個互補決定區（CDR）CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3；以及可變輕鏈區（VL），其包含分別含有SEQ ID NO: 4-6中列出的胺基酸序列的三個CDR CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，所述調配物包含降粘劑、穩定劑、緩衝劑和表面活性劑，且所述調配物具有5.9-7.0的pH，及在20ºC下最多為25 mPa·s的粘度。
如請求項1所述的調配物，其中所述降粘劑是90-150 mM Arg-Cl。
如請求項2所述的調配物，其中所述降粘劑是90-125 mM Arg-Cl。
如請求項2所述的調配物，其中所述降粘劑是110 mM Arg-Cl。
如前述請求項中任一項所述的調配物，其中所述表面活性劑是泊洛沙姆188。
如前述請求項中任一項所述的調配物，其中所述表面活性劑是0.4%（w/v）的泊洛沙姆188。
如前述請求項中任一項所述的調配物，其中所述緩衝劑是組胺酸。
如前述請求項中任一項所述的調配物，其中所述緩衝劑是9 mM組胺酸。
如請求項1所述的調配物，其中所述降粘劑是90-150 mM Lys-Ac。
如請求項9所述的調配物，其中所述降粘劑是125 mM Lys-Ac。
如請求項9或10所述的調配物，其中所述表面活性劑是聚山梨醇酯80。
如請求項11所述的調配物，其中所述表面活性劑是0.04%（w/v）的聚山梨醇酯80。
如前述請求項中任一項所述的調配物，其包含125-155 mg/mL的所述抗CD38抗體。
如前述請求項中任一項所述的調配物，其包含140 mg/mL的所述抗CD38抗體。
如前述請求項中任一項所述的調配物，其中所述穩定劑是蔗糖。
如前述請求項中任一項所述的調配物，其中所述穩定劑是2%（w/v）的蔗糖。
如前述請求項中任一項所述的調配物，其中所述pH為5.9-7.0。
如請求項17所述的調配物，其中所述pH為6.2-6.3。
一種包含140 mg/mL的抗CD38抗體的調配物，其中所述抗CD38抗體包含可變重鏈區（VH），其包含分別含有SEQ ID NO: 1-3中列出的胺基酸序列的三個互補決定區（CDR）CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3；以及可變輕鏈區（VL），其包含分別含有SEQ ID NO: 4-6中列出的胺基酸序列的三個CDR CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，所述調配物包含9 mM組胺酸、110 mM Arg-Cl、2%（w/v）的蔗糖和0.4%（w/v）的泊洛沙姆188，且其中所述調配物具有6.2-6.3的pH，及在20ºC下最多為14 mPa·s的粘度。
一種包含140 mg/mL的抗CD38抗體的調配物，其中所述抗CD38抗體包含可變重鏈區（VH），其包含分別含有SEQ ID NO: 1-3中列出的胺基酸序列的三個互補決定區（CDR）CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3；以及可變輕鏈區（VL），其包含分別含有SEQ ID NO: 4-6中列出的胺基酸序列的三個CDR CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，所述調配物包含125 mM Lys-Ac、2%（w/v）的蔗糖以及0.04%（w/v）的聚山梨醇酯80，且所述調配物具有6.2的pH，及在20ºC下最多為14 mPa·s的粘度。
如前述請求項中任一項所述的調配物，其中所述調配物適合於皮下投予。
如請求項21所述的調配物，其中所述皮下投予是大體積皮下投予。
如前述請求項中任一項所述的調配物，其中所述抗CD38抗體的VH包含SEQ ID NO: 7中列出的胺基酸序列，且所述抗CD38抗體的VL包含SEQ ID NO: 8中列出的胺基酸序列。
如前述請求項中任一項所述的調配物，其中所述抗CD38抗體是伊沙妥昔單抗(isatuximab)。
一種經包裝的醫藥產品，其包含無菌容器，所述無菌容器包含治療有效量的如請求項1至24中任一項所述的調配物。
一種裝置，其包含治療有效量的如請求項1至24中任一項所述的調配物。
如請求項26所述的裝置，其中所述裝置選自由注射器、注射器驅動器和包含所述調配物的輸液泵組成之群組。
如請求項27所述的裝置，其中所述注射器是預填充式注射器。
一種治療以CD38⁺ 細胞的存在或活性為特徵的疾病或病症的方法，其包括向有需要的個體投予有效量的如請求項1至8或13至19中任一項所述的調配物，其中所述調配物是皮下投予的。
如請求項29所述的方法，其中所述以CD38⁺ 細胞的存在或活性為特徵的疾病或病症是CD38⁺ 血液惡性腫瘤。
如請求項29所述的方法，其中所述以CD38+細胞的存在或活性為特徵的疾病或病症是自體免疫疾病或病症或者發炎性疾病或病症。
一種治療CD38⁺ 血液惡性腫瘤的方法，其包括向有需要的個體投予有效量的如請求項1至8或13至19中任一項所述的調配物，其中所述調配物是皮下投予的。
如請求項32所述的方法，其中所述調配物包含140 mg/mL的抗CD38抗體，其中所述抗CD38抗體包含可變重鏈區（VH），其包含分別含有SEQ ID NO: 1-3中列出的胺基酸序列的三個互補決定區（CDR）CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3；以及可變輕鏈區（VL），其包含分別含有SEQ ID NO: 4-6中列出的胺基酸序列的三個CDR CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，所述調配物包含9 mM組胺酸、110 mM Arg-Cl、2%（w/v）的蔗糖和0.4%（w/v）的泊洛沙姆188，且其中所述調配物具有6.2或6.3的pH，及在20ºC下最多為14 mPa·s的粘度。
如請求項32或33所述的方法，其中藉由皮下輸注投予所述調配物。
如請求項34所述的方法，其中所述皮下輸注是大體積皮下輸注。
如請求項34所述的方法，其中所述個體是人類，且所述大體積皮下輸注為5至10 mL。
如請求項32至34中任一項所述的方法，其中所述CD38⁺ 血液惡性腫瘤是多發性骨髓瘤。
如請求項37所述的方法，其中多發性骨髓瘤是復發/難治性多發性骨髓瘤。
如請求項37或38所述的方法，其進一步包括向所述個體投予一種或多種選自由皮質類固醇、蛋白酶體抑制劑、免疫調節藥物、化療藥物及其組合組成之群組的的藥劑。
如請求項39所述的方法，其中所述化療藥物選自由以下組成之群組：阿糖胞苷(cytarabine)、柔紅黴素(daunorubicin)、道諾黴素(daunomycin)、多柔比星(doxorubicin)、脂質體多柔比星、伊達比星(idarubicin)、米托蒽醌(mitoxantrone)、吉妥珠單抗(gemtuzumab)、氯法拉濱(clofarabine)、克拉屈濱(cladribine)、羥基脲、依託泊苷(etoposide)、美法侖(melphalan)、環磷醯胺、長春新鹼及其組合。
如請求項39所述的方法，其中所述蛋白酶體抑制劑選自卡非佐米(carfilzomib)、硼替佐米(bortezomib)及其組合。
如請求項39所述的方法，其中所述免疫調節藥物選自沙利度胺(thalidomide)、來那度胺(lenalidomide)、泊馬度胺(pomalidomide)及其組合。
如請求項39所述的方法，其中所述皮質類固醇是地塞米松(dexamethasone)。