TW202019959A - 用於治療膽道癌的標靶性tgf-b抑制之給藥方案 - Google Patents

用於治療膽道癌的標靶性tgf-b抑制之給藥方案 Download PDF

Info

Publication number
TW202019959A
TW202019959A TW108121691A TW108121691A TW202019959A TW 202019959 A TW202019959 A TW 202019959A TW 108121691 A TW108121691 A TW 108121691A TW 108121691 A TW108121691 A TW 108121691A TW 202019959 A TW202019959 A TW 202019959A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
seq
protein
tgfβ
polypeptide
weeks
Prior art date
Application number
TW108121691A
Other languages
English (en)
Inventor
長田元信
巴瓦伯 沙曼 艾爾
伊莎貝爾 杜沙特
優利亞 維格美斯特
阿卡許 坎德瓦
歐雷夫 克里史坦森
猛 李
Original Assignee
德商馬克專利公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 德商馬克專利公司 filed Critical 德商馬克專利公司
Publication of TW202019959A publication Critical patent/TW202019959A/zh

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/71—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for growth factors; for growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2827—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against B7 molecules, e.g. CD80, CD86
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7068—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
    • A61K33/243—Platinum; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • A61K38/179—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for growth factors; for growth regulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/80—Vaccine for a specifically defined cancer
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/80—Vaccine for a specifically defined cancer
    • A61K2039/844—Liver
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

本發明係關於用雙功能融合蛋白標靶TGF-β抑制之給藥方案，用於治療膽道癌或抑制膽道腫瘤生長於初始(naïve)治療患者或一線全身化學療法失敗或不耐受的局部晚期或轉移性BTC之患者的方法中。

Description

用於治療膽道癌的標靶性TGF-B抑制之給藥方案
本發明大體上係關於用雙功能融合蛋白進行標靶性TGF-β抑制之給藥方案，該等給藥方案用於治療初始治療患者或一線全身化學療法失敗或不耐受之局部晚期或轉移性膽道癌(「BTC」)患者之BTC或抑制其腫瘤生長之方法中。
計劃性死亡1 (PD-1)/PD-L1軸係腫瘤免疫逃避之一種重要機制。長期感測抗原之效應T細胞呈現藉由PD-1表現標記之耗盡表型，此係腫瘤細胞藉由上調PD-L1實現接合之狀態。另外，在腫瘤微環境中，骨髓細胞、巨噬細胞、實質細胞及T細胞均上調PD-L1。阻斷該軸將復原此等T細胞之效應功能。
以引用之方式併入本文中的美國專利申請公開案第US 20150225483 A1號描述一種雙功能融合蛋白，其將抗計劃性死亡配體1 (PD-L1)抗體與作為TGFβ中和「誘捕劑(Trap)」之腫瘤生長因子β受體II型(TGFβRII)之可溶性細胞外結構域組合成單一分子。具體而言，該蛋白質係雜四聚體，由抗PD-L1之兩條免疫球蛋白輕鏈以及包含抗PD-L1之重鏈的兩條重鏈經由可撓性甘胺酸-絲胺酸連接子與人類TGFβRII之細胞外結構域基因融合組成(參見圖1)。此抗PD-L1/TGFβ誘捕分子係設計成靶向腫瘤微環境中免疫抑制之兩個主要機制。美國專利申請公開案第US 20150225483 A1號描述以基於患者體重之劑量投與該誘捕分子。
BTC係包括肝內及肝外膽管癌(CCA)、膽囊癌(GC)及壺腹癌(AC)在內的一組異質性罕見腫瘤。不可切除性BTC係用化學療法治療，但中值存活時間＜1年。本發明係針對用抗PD-L1/TGFβ誘捕分子免疫療法治療BTC。
本發明提供用於投與靶向PD-L1及TGFβ之雙功能蛋白質的改良之給藥方案。具體而言，可使用不依賴體重(不依賴BW)之給藥方案及相關劑型作為抗腫瘤及抗癌療法，該等給藥方案涉及投與至少500 mg(例如1200 mg、1800 mg、2400 mg)雙功能蛋白質，以多種給藥頻率投與。不依賴於BW之給藥方案確保所有患者無論體重如何，在腫瘤部位處皆具有足夠的藥物暴露。
本發明之雙功能蛋白質(抗PD-L1/TGFβ誘捕分子)包括第一多肽及第二多肽。第一多肽包括：(a)結合至人類蛋白質計劃性死亡配體1 (PD-L1)之抗體的至少重鏈可變區；以及(b)能夠結合轉型生長因子β (TGFβ)之人類轉型生長因子β受體II (TGFβRII)或其片段(例如可溶性片段)。第二多肽包括結合PD-L1之抗體之至少輕鏈可變區，其中第一多肽之重鏈與第二多肽之輕鏈在組合時形成結合PD-L1之抗原結合位點(例如本文所述之抗體或抗體片段中之任一種)。由於本發明之雙功能蛋白質結合至兩個目標：(1) PD-L1，其主要結合膜；及(2) TGFβ，其可溶於血液及間質中，故不依賴於BW之給藥方案需要不僅在腫瘤部位處有效抑制PD-L1且亦充分抑制TGFβ之劑量。
在一個態樣中，本發明提供一種治療初始治療患者之膽道癌(BTC)(例如肝內膽管癌、肝外膽管癌及乏特氏壺腹癌(ampulla of Vater cancer)；膽囊癌)或抑制其膽道腫瘤生長之方法，其係藉由向有需要患者投與本發明中所描述之抗PD-L1/TGFβ誘捕分子實現。在一個態樣中，本發明提供有需要個體之膽道癌(例如晚期或轉移性膽道癌)之治療。在一個態樣中，本發明提供一種治療展現陽性PD-L1表現之BTC的方法。
在某些實施例中，本發明提供一種治療初始治療之有需要患者之膽道癌(BTC)或抑制其膽道腫瘤生長的方法，其係藉由每兩週一次向該患者投與1200 mg本發明之抗PD-L1/TGFβ誘捕分子實現。在某些其他實施例中，本發明提供一種治療初始治療之有需要患者之膽道癌(BTC)或抑制其膽道腫瘤生長的方法，其係藉由每三週一次向該患者投與2400 mg本發明之抗PD-L1/TGFβ誘捕分子實現。
在某些實施例中，初始治療的患有晚期或轉移性BTC之個體或患者係藉由將吉西他濱(gemcitabine)及/或順鉑(cisplatin)與本發明中所揭示之抗PD-L1/TGFβ誘捕分子共投與來治療。在一些實施例中，初始治療的患有晚期或轉移性BTC之個體或患者係藉由將吉西他濱及順鉑與本發明中所揭示之抗PD-L1/TGFβ誘捕分子共投與來治療。
在某些實施例中，本發明描述治療方法，在該等方法中，在治療週期期間，在投與該蛋白質(例如本文所描述之抗PD-L1/TGFβ誘捕分子)之同一天(例如第1天)，向初始治療患者投與吉西他濱及順鉑。在某些實施例中，在治療週期之第8天投與吉西他濱及順鉑，而不投與該蛋白質(例如本文所描述之抗PD-L1/TGFβ誘捕分子)。在一些實施例中，在一段時間內(例如24週)重複(例如8個週期)治療(例如在第1天共投與抗PD-L1/TGFβ誘捕分子與吉西他濱及順鉑，隨後在第8天投與吉西他濱及順鉑)，隨後投與單獨蛋白質(例如本文所描述之抗PD-L1/TGFβ誘捕分子)一段時間(例如2年)。
本發明之特徵亦在於一種促進TGFβ局部耗盡之方法。該方法包括投與上述蛋白質，其中該蛋白質結合溶液中之TGFβ，結合細胞表面上之PD-L1，且將結合之TGFβ載運至細胞(例如膽道癌細胞)中。
本發明之特徵亦在於一種抑制細胞(例如膽道癌細胞或免疫細胞)中之SMAD3磷酸化的方法，該方法包括使腫瘤微環境中之細胞暴露於上述蛋白質。
本發明之其他實施例及細節呈現於下文。
相關申請案之交叉引用
本申請案主張2018年6月22日提交的美國臨時專利申請案第62/688,476號；以及2019年5月31日提交的美國臨時專利申請案第62/855,205號之權益及優先權，該等申請案之全部揭示內容以引用的方式併入本文中。 序列表
本申請案含有序列表，該序列表已以ASCII格式以電子方式提交且其全文以引用的方式併入本文中。該ASCII複本於2019年6月3日創建，命名為EMD-008WO_SL_ST25.txt且大小係75,834個位元組。
「TGFβRII」或「TGFβ受體II」意謂具有野生型人類TGFβ受體2型同功異型物A序列(例如NCBI參考序列(RefSeq)寄存編號NP_001020018之胺基酸序列(SEQ ID NO: 8))之多肽，或具有野生型人類TGFβ受體2型同功異型物B序列(例如NCBI RefSeq寄存編號NP_003233之胺基酸序列(SEQ ID NO: 9))或具有與SEQ ID NO: 8或SEQ ID NO: 9之胺基酸序列實質上一致之序列的多肽。TGFβRII可保留TGFβ與野生型序列結合之活性的至少0.1%、0.5%、1%、5%、10%、25%、35%、50%、75%、90%、95%或99%。表現之TGFβRII之多肽缺乏信號序列。
「TGFβRII中能夠結合TGFβ之片段」意謂保留野生型受體或相應野生型片段之至少部分TGFβ結合活性(例如至少0.1%、0.5%、1%、5%、10%、25%、35%、50%、75%、90%、95%或99%)的NCBI RefSeq寄存編號NP_001020018 (SEQ ID NO: 8)或NCBI RefSeq寄存編號NP_003233(SEQ ID NO: 9)之任何部分，或與SEQ ID NO: 8或SEQ ID NO: 9實質上一致的長度為至少20個(例如至少30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、175或200個)胺基酸的序列。通常，此類片段係可溶性片段。例示性此類片段係具有SEQ ID NO: 10之序列的TGFβRII細胞外結構域。
「初始治療(Treatment naïve)」係指個體或患者先前未接受過針對其局部晚期或轉移性BTC之化學療法或免疫療法。
化學療法「失敗」或個體具有「失敗」之化學療法意味著個體之癌症儘管用該化學療法方案治療仍進展。
對化學療法「不耐受」或個體對化學療法「不耐受」意味著，例如，個體因化學療法而經歷與化學療法相關之較高水準毒性(例如NCI不良事件常用術語標準(NCI Common Terminology Criteria for Adverse Events)毒性等級3至5級)，由此引起計劃外住院或功能減退，或預期死亡與化學療法相關。
「PD-L1陽性」或「PD-L1+」指示如例如藉由Dako IHC 22C3 PharmDx分析或藉由VENTANA PD-L1 (SP263)分析所測定，PD-L1陽性腫瘤細胞≥1%。
「PD-L1高」或「高PD-L1」係指如藉由PD-L1 IHC 73-10分析(Dako)所測定，PD-L1陽性腫瘤細胞≥80%，或如藉由Dako IHC 22C3 PharmDx分析所測定，腫瘤比例分數(tumor proportion score，TPS)≥50%(TPS係此項技術中與IHC 22C3 PharmDx分析相關之術語，其描述具有部分或完全膜染色(例如針對PD-L1染色)之活腫瘤細胞的百分比)。IHC 73-10與IHC 22C3分析在其各別截止值下選擇類似患者群體。在某些實施例中，VENTANA PD-L1 (SP263)分析與22C3 PharmDx分析(參見Sughayer等人,Appl . Immunohistochem . Mol . Morphol . , (2018))高度一致，亦可用於測定PD-L1高表現量。
「實質上一致」意謂與參考胺基酸序列展現至少50%、理想地60%、70%、75%或80%、更理想地85%、90%或95%且最理想地99%胺基酸序列一致性之多肽。比較序列之長度一般為至少10個胺基酸，理想地為至少15個連續胺基酸，更理想地為至少20個、25個、50個、75個、90個、100個、150個、200個、250個、300個或350個連續胺基酸，且最理想地為全長胺基酸序列。
「患者」意謂人類或非人類動物(例如哺乳動物)。「患者」、「個體」、「有需要之患者」及「有需要之個體」在本發明中可互換使用，且係指罹患可使用本發明中所提供之方法及組合物藉由投與來治療之疾病或病況或者易患上該疾病或病況的活生物體。
如本發明中所使用，術語「治療(treat)」、「治療(treating)」或「治療(treatment)」及其他語法等效表示包括緩解、緩和、改善或預防疾病、病況或症狀；預防其他症狀；改善或預防症狀之根本代謝病因；抑制疾病或病況，例如停滯疾病或病況之發展；減輕疾病或病況；使疾病或病況消退；減輕疾病或病況所引起之病況；或終止疾病或病況之症狀，且意欲包括預防。該等術語進一步包括達成治療益處及/或預防益處。治療益處意謂根除或改善所治療的潛在病症。此外，藉由根除或改善與潛在病症相關之一或多種生理症狀以使得在患者中觀察到改善來實現治療益處，但該患者仍可能罹患潛在病症。
「癌症」意謂晚期或轉移性膽道癌(「BTC」)。BTC之非限制性實例包括膽囊癌(GBC)、膽管癌(CCA(肝內膽管癌、肝外膽管癌))及乏特氏壺腹癌(VAC或壺腹部癌症)。
在本說明書之描述及申請專利範圍通篇，「包含(comprise)」一詞及該詞語之其他形式諸如「包含(comprising)」及「包含(comprises)」意謂包括(但不限於)，且不意欲排除例如其他組分。
「共投與」意謂在投與額外療法之同時投與，在即將投與額外療法之前投與，或在投與額外療法之後立即投與本文所述之組合物。本發明之蛋白質及組合物可單獨投與患者，或可與第二、第三或第四治療劑共投與患者。共投與意欲包括個別或組合地(超過一種治療劑)同時或依序投與蛋白質或組合物。
術語「一個(種)」不意圖限制為單數。在某些實施例中，術語「一個(種)」可指複數形式。除非上下文另外明確規定，否則如本發明通篇所使用，單數形式「一個(種)(a/an)」及「該(the)」包括複數個(種)參考物。因此，例如，提及「一種組合物」包括複數種此類組合物，以及單一組合物。
「復原」調配物係藉由將凍乾調配物溶解於水性載劑中，使得雙功能分子溶解於復原調配物中而製備之調配物。復原調配物適合於靜脈內投與(IV)有需要之患者。
術語「約」係指在製備調配物及治療疾病或病症時不改變藥劑功效的藥劑濃度或量之任何最小改變。在實施例中，術語「約」可包括指定數字值或數據點±15%。
範圍在本發明中可表示為自「約」一個特定值及/或至「約」另一特定值。當表示此類範圍時，另一個態樣包括自一個特定值及/或至另一個特定值。類似地，當藉由在前面使用「約」，以近似值表示值時，應理解，特定值形成另一態樣。還應理解，範圍中之每一端點明顯與另一端點相關且獨立於另一端點。亦應理解，本發明中揭示多個值且除值本身外，每個值亦揭示為「約」該特定值。亦應理解，在本申請案通篇，數據係以多種不同格式提供且此數據表示端點及起點以及該等數據點之任何組合的範圍。舉例而言，若揭示特定數據點「10」及特定數據點「15」，則應理解，視為揭示大於、大於或等於、小於、小於或等於及等於10及15以及在10與15之間。亦應理解，亦揭示兩個特定單元之間的每個單元。舉例而言，若揭示10及15，則亦揭示11、12、13及14。
「等滲」調配物係滲透壓與人類血液基本上相同之調配物。等滲調配物之滲透壓將一般為約250至350 mOsmol/kgH2 O。術語「高滲」用於描述滲透壓高於人類血液之調配物。等滲性可使用例如蒸氣壓或冰凍型滲透計量測。
術語「緩衝劑」係指當添加至水溶液中時能夠保護溶液對抗添加酸或鹼時或用溶劑稀釋時pH值之變化的一或多種組分。除磷酸鹽緩衝液之外，亦可使用甘胺酸鹽、碳酸鹽、檸檬酸鹽緩衝液及類似物，在此情況下，鈉、鉀或銨離子可充當抗衡離子。
「酸」係在水溶液中產生氫離子之物質。「醫藥學上可接受之酸」包括在其調配濃度及方式下無毒之無機酸及有機酸。
「鹼」係在水溶液中產生氫氧根離子之物質。“「醫藥學上可接受之鹼」包括在其調配濃度及方式下無毒之無機鹼及有機鹼。
「凍乾保護劑」係這樣一種分子，其與所關注蛋白質組合時防止或降低該蛋白質在凍乾及隨後儲存時的化學及/或物理不穩定性。
「防腐劑」係減少細菌作用且可視情況添加至本文中之調配物的試劑。防腐劑之添加可例如有助於製造多次使用之(多劑量)調配物。可能的防腐劑之實例包括氯化十八烷基二甲基苯甲基銨、氯化六羥季銨、苯紮氯銨(benzalkonium chloride)(氯化烷基苯甲基二甲基銨之混合物，其中烷基係長鏈化合物)及苄索氯銨(benzethonium chloride)。其他類型之防腐劑包括芳族醇，諸如苯酚、丁醇及苄醇；對羥基苯甲酸烷酯，諸如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；及間甲酚。
「界面活性劑」係含有疏水性部分(例如烷基鏈)與親水性部分(例如羧基及羧酸酯基)兩者之表面活性分子。界面活性劑可添加至本發明之調配物中。適用於本發明之調配物中的界面活性劑包括(但不限於)聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80)；泊洛沙姆(poloxamer)(例如泊洛沙姆188)；脫水山梨糖醇酯及衍生物；曲拉通(Triton)；月桂基硫酸鈉；辛基糖苷鈉；月桂基-、肉豆蔻基-、亞油基-或硬脂醯基-磺基甜菜鹼；月桂基-、肉豆蔻基-、亞油基-或硬脂醯基-肌胺酸；亞油基-、肉豆蔻基-或鯨蠟基-甜菜鹼；月桂醯胺基丙基-、椰油醯胺基丙基-、亞油醯胺基丙基-、肉豆蔻醯胺基丙基-、棕櫚醯胺基丙基-或異硬脂醯胺基丙基-甜菜鹼(例如月桂醯胺基丙基)；肉豆蔻醯胺基丙基-、棕櫚醯胺丙基-或異硬脂醯胺基丙基-二甲胺；甲基椰油醯基牛磺酸鈉或甲基油基牛磺酸二鈉；及MONAQUATTM 系列(Mona Industries, Inc., Paterson, N.J.)；聚乙二醇、聚丙二醇，及乙二醇與丙二醇之共聚物(例如Pluronics, PF68等)。不依賴於體重之給藥方案
由本文所述之雙功能抗PD-L1/TGFβ誘捕分子之多項臨床前及臨床評估的結果獲悉，已開發出包括向BTC患者投與至少500 mg該等分子的不依賴於體重之給藥方案。兩項研究對該等分子之安全性、耐受性及藥物動力學進行研究，且包括對獲自經治療患者之血液的周邊血液單核細胞上PD-L1之目標佔有率的評估以及對TGFβ1、TGFβ2及TGFβ3之濃度的量測。此等評估係基於來自總計350名個體(實體腫瘤中1、3、10及20 mg/kg之劑量遞增組，及所選腫瘤類型中3 mg/kg、10 mg/kg、500 mg及1200 mg之擴增組)之資料。 PK/ 功效模型 ( 小鼠模型 )
亦進行實驗以確定腫瘤模型中抗PD-L1/TGFβ誘捕分子之功效。使用由EMT-6異種移植物得到的功效結果建立PK/功效模型。使用所建立的小鼠PK模型模擬在功效實驗設置下抗PD-L1/TGFβ誘捕分子之血漿暴露情況。估計之參數報告於表1中。估計之KC50 值係55.3 µg/mL。該值表示可實現抗PD-L1/TGFβ誘捕分子之最大抗腫瘤活性之50%的平均血漿濃度。
該模型之基礎診斷學圖未顯示模型誤設。該等模型預測能夠捕捉腫瘤體積分佈。條件加權殘差係以0平均值及1變異數常態分佈，無趨勢。接著，使用PK/功效模型，在不同劑量下使用人類預測濃度-時間曲線模擬腫瘤生長抑制(TGI)。
表1：在EMT-6異種移植小鼠中抗PD-L1/TGFβ誘捕分子之小鼠PK/功效模型參數
Figure 108121691-A0304-0001
 基於 PD-L1 佔有率之反 應 分析 ( 小鼠模型中 )
使用功效實驗，分析小鼠中之反應，並依據腫瘤消退或腫瘤停滯進行分選，且基於整合之PK/RO模型預測PK及PD-L1受體佔有率(RO)。該方法展示，實現腫瘤消退需要與腫瘤中PD-L1 RO超過95%相關的抗PD-L1/TGFβ誘捕分子血漿濃度介於40與100 µg/mL之間。實現腫瘤停滯需要與周圍中PD-L1 RO超過95%相關的抗PD-L1/TGFβ誘捕分子血漿濃度介於10與40 µg/mL之間。
在小鼠中之反應分析及預測之PK/RO產生圖7A-7C，該等圖概述小鼠中抗PD-L1/TGFβ誘捕分子之PK/RO/功效。在40 µg/mL之血漿濃度下實現95%之PD-L1 RO，且預期/估計TGI僅為約65%。濃度增加至超過40 µg/mL引起腫瘤生長抑制之進一步增加。在約100 µg/mL之平均血漿濃度下實現95%之腫瘤生長抑制。
基於下文描述之群體PK模型，維持約100 µg/mL之平均濃度需要每兩週一次投與至少500 mg之均一劑量，而維持約100 µg/mL之C谷 需要每兩週一次投與約1200 mg之均一劑量。在某些實施例中，向個體投與約1200 mg至約3000 mg(例如約1200 mg、約1300 mg、約1400 mg、約1500 mg、約1600 mg、約1700 mg、約1800 mg、約1900 mg、約2000 mg、約2100 mg、約2200 mg、約2300 mg、約2400 mg等)本發明之蛋白質產物(例如抗PD-L1/TGFβ誘捕分子)。在某些實施例中，每兩週一次向個體投與約1200 mg抗PD-L1/TGFβ誘捕分子。在某些實施例中，每三週一次向個體投與約1800 mg抗PD-L1/TGFβ誘捕分子。
在實施例中，向個體投與約1200 mg至約3000 mg(例如約1200 mg、約1300 mg、約1400 mg、約1500 mg、約1600 mg、約1700 mg、約1800 mg、約1900 mg、約2000 mg、約2100 mg、約2200 mg、約2300 mg、約2400 mg等)該蛋白質產物以治療BTC或抑制膽道腫瘤生長，該蛋白質產物具有包括SEQ ID NO:3之胺基酸序列的第一多肽及包括SEQ ID NO:1之胺基酸序列的第二多肽。在某些實施例中，向個體投與約1200 mg至約3000 mg(例如約1200 mg、約1300 mg、約1400 mg、約1500 mg、約1600 mg、約1700 mg、約1800 mg、約1900 mg、約2000 mg、約2100 mg、約2200 mg、約2300 mg、約2400 mg等)該蛋白質產物以治療BTC或抑制膽道腫瘤生長，該蛋白質產物包括含SEQ ID NO:35、36及37之胺基酸序列的第一多肽及含SEQ ID NO:38、39及40之胺基酸序列的第二多肽。
在某些實施例中，每兩週一次向個體投與約1200 mg該蛋白質產物以治療BTC或抑制膽道腫瘤生長，該蛋白質產物具有包括SEQ ID NO:3之胺基酸序列的第一多肽及包括SEQ ID NO:1之胺基酸序列的第二多肽。在某些實施例中，每三週一次向個體投與約1800 mg該蛋白質產物以治療BTC或抑制膽道腫瘤生長，該蛋白質產物具有包括SEQ ID NO:3之胺基酸序列的第一多肽及包括SEQ ID NO:1之胺基酸序列的第二多肽。在某些實施例中，每兩週一次向個體投與約1200 mg該蛋白質產物以治療BTC或抑制膽道腫瘤生長，該蛋白質產物包括含SEQ ID NO:35、36及37之胺基酸序列的第一多肽及含SEQ ID NO:38、39及40之胺基酸序列的第二多肽。在某些實施例中，每三週一次向個體投與約1800 mg該蛋白質產物以治療BTC或抑制膽道腫瘤生長，該蛋白質產物包括含SEQ ID NO:35、36及37之胺基酸序列的第一多肽及含SEQ ID NO:38、39及40之胺基酸序列的第二多肽。 確定不依 賴 於體重之 給藥 方案
由臨床及臨床前資料獲悉，已建立用於投與抗PD-L1/TGFβ誘捕分子的不依賴於體重之新給藥方案，以相較於以mg/kg計之劑量，實現較小的暴露變化，減小劑量誤差，減少劑量製備所需之時間，且減少藥物消耗，由此促進有利的治療結果。根據一個實施例，無論患者體重如何，均可投與至少500 mg之均一劑量。根據另一個實施例，無論患者體重如何，均可投與至少1200 mg之均一劑量。根據另一個實施例，無論患者體重如何，均可投與1800 mg之均一劑量。根據某些實施例，無論患者體重如何，均可投與2400 mg之均一劑量。通常，重複投與此類劑量，諸如每兩週一次或每3週一次。舉例而言，對於治療BTC或抑制膽道腫瘤生長，可每兩週一次投與1200 mg之均一劑量，可每三週一次投與1800 mg之均一劑量，或可每三週一次投與2400 mg之均一劑量。 在人 類 中之 藥 物 動 力學 (PK) 分析取 樣
下文描述之實驗將提供確定抗PD-L1/TGFβ誘捕分子之最佳均一劑量的藥物動力學分析之實例。
在開始第一次劑量之前及在第一次劑量之後的以下時間點收集用於藥物動力學(PK)資料分析之血清樣品：第1天，緊接地在輸注之後及在開始輸注之後4小時；第2天，即在第1天輸注結束之後至少24小時；以及在第8天及第15天。在所選後續給藥場合，即在第15天、第29天、第43天，在給藥前、輸注結束後以及輸注結束後2至8小時，收集樣品。對於後續時間點，在第57天、第71天及第85天，收集或打算收集給藥前樣品，隨後每6週一次進行PK取樣，直至12週，接著每12週一次進行PK取樣。在擴增期，進行稀疏PK取樣。
使用上述PK資料產生群體PK模型且模擬可能的給藥方案。將Gastonguay,M.,Full Covariate Models as an Alternative to Methods Relying on Statistical Significance for Inferences about Covariate Effects : A Review of Methodology and 42 Case Studies , (2011) 第20頁, Abstract 2229中所描述之建模方法，稱為完全方法模型，應用於由該等模擬獲得的群體模型資料，以獲得具有以下特徵之參數：利用線性消元之2隔室PK模型、基於CL、V1及V2之IIV、合併之加性及比例殘差、基於CL及V1之全共變數模型。最終模型中包括以下基線共變數：年齡、體重、性別、人種、白蛋白、CRP、血小板計數、eGFR、肝損傷、ECOG評分、腫瘤尺寸、腫瘤類型及先前用生物試劑治療。獲得本發明蛋白質(例如抗PD-L1/TGFβ誘捕分子)之藥物動力學之典型參數估計值的以下估計值：清除率(CL) 0.0177 L/h (6.2%)、中央室分佈體積(V1) 3.64 L (8.81%)、周圍室分佈體積(V2) 0.513 L (25.1%)及隔室間清除率(Q) 0.00219 L/h (17.8%)。患者間變化對於CL為22%，對於V1為20%且對於V2為135%。體重係基於CL及V1之相關共變數。為證實均一劑量方法，研究給藥策略對本發明蛋白質(例如抗PD-L1/TGFβ誘捕分子)之暴露變化的影響。具體而言，執行模擬以比較使用每兩週一次1200 mg之均一劑量方法對比每兩週一次17.65 mg/kg (對應於68 kg個體每兩週一次1200 mg)或每兩週一次15 mg/kg (對應於80 kg個體1200 mg)的根據BW調整之劑量方法的暴露分佈。進一步執行模擬以比較使用每兩週一次500 mg之均一劑量方法對比每兩週一次7.35 mg/kg (對應於68 kg個體每兩週一次500 mg)的根據BW調整之劑量方法的暴露分佈。另外，再執行模擬以評估以下每三週一次之均一劑量：1200 mg、1400、mg、1600 mg、1800 mg、2000 mg、2200 mg、2400 mg、2600 mg、2800 mg及3000 mg。
使用以下模擬方法：使用最終PK模型變異數-共變數矩陣，自參數估計值之多變數常態分佈獲取N=200組參數估計值。對於每一參數估計值，自$OMEGA多變數常態分佈獲取200個IIV估計值，得到總計40000 (200×200)個對象。在不重複情況下對原始資料集(N=380)再取樣，產生40000組相配之共變數，且產生各給藥方案之穩態暴露量度(AUC、Cavg 、C谷 及Cmax )。
模擬顯示，在較寬BW範圍內，基於BW之劑量的暴露變化性略高於固定劑量。對於68 kg中值體重，在17.65 mg/kg及1200 mg均一劑量、或7.35 mg/kg及500 mg均一劑量下暴露分佈之實例分別顯示於圖6A及6E中。模擬亦顯示，患者群體在一定體重分位數內的暴露分佈呈現相反趨勢：體重較輕之患者在固定劑量下具有較高暴露，而體重較重之患者在基於BW調整之劑量下具有較高暴露。 在人類中建立有效劑量 / 給藥方案 ： 在每 2 週一次 ( q2w ) 給與抗 PD - L1 / TGF β 誘捕分子之後第 2 線膽道癌 ( 2L BTC ) 中之初步劑量 - 反應
藉由下文描述之臨床研究建立抗PD-L1/TGFβ誘捕分子之治療功效的實例。
在基於鉑之一線(「1L」)治療之後出現進展的患有轉移性或局部晚期BTC之患者每兩週一次接受1200 mg本發明之抗PD-L1/TGFβ誘捕分子，直至確定疾病進展、不可接受的毒性或退出研究。主要目標係評估安全性/耐受性，而次要目標包括依據實體腫瘤反應評價標準1.1版(Response Evaluation Criteria in Solid Tumors version 1.1，RECIST v1.1)評估最佳總體反應(「BOR」)。評價腫瘤細胞PD-L1表現(抗體純系73-10；Dako)。
截至分析時的資料截止值，患有預治療之BTC的三十名患者接受抗PD-L1/TGFβ誘捕分子，中值持續時間為8.9週(範圍2-57.6週)。五名患者繼續治療。最常見的治療相關不良事件(TRAE)係發熱、紅斑丘疹(二者佔13.3%)、皮疹及脂肪酶增加(二者佔10%)。有十名患者(33.3%)經歷等級≥3級之TRAE。據報導，有三例由不良事件引起之死亡病例；一例係在14次治療劑量後因敗血性休克(可能由皮膚感染引起之菌血症)而死亡，且兩例死於間質性肺病，一名患者係在3次劑量後於治療時死亡且另一名係在最後一次劑量後6個月死亡。六名患者有確定的客觀反應(ORR，20%)，其中五名具有部分反應(PRS)，且四名在治療3.9+、4.2+、5.5+及6.9+個月時仍持續；及一名患者具有完全反應(CR)，持續5.5+個月。另有兩名患者具有持續的臨床益處：一名患者在治療1年之後具有部分反應(「PR」)，且一名患者在最初假性疾病進展之後7.6+個月時具有持續的PR。在患有PD-L1+(≥1%)及PD-L1−腫瘤之患者中，由PD-L1表現確定之ORR分別係25%及15.4%。
此等結果展示，抗PD-L1/TGFβ誘捕分子單藥療法在患有預治療之BTC的患者中具有可管理之安全型態及有前景的功效，包括在三十名患者中之八名(27%)中出現的長效反應。預期將抗PD-L1/TGFβ誘捕分子作為第二線(「2L」)治療所觀察到的此有前景之活性在初始治療之局部晚期或轉移性BTC患者中轉變為1L單藥療法或組合療法(例如與吉西他濱及順鉑組合)或作為1L單藥療法或組合療法而增加。建立利用多種 給藥頻 率之 給藥 方案
已建立利用多種給藥頻率之資料方案，以允許不太頻繁地投藥及/或使給藥時程與聯合藥物治療協調。具體而言，已使用上述初步群體PK建模及模擬方法模擬多種給藥方案之暴露並基於暴露比較各方案。
基於此等模擬，在典型個體中維持約100 µg/mL之平均濃度需要每兩週一次投與至少500 mg之均一劑量，而維持約100 µg/mL之C谷 需要每兩週一次投與約1200 mg之均一劑量。
基於關於Cavg 之模擬，每兩週一次1200 mg等效於每三週一次1800 mg，而對於C谷 ，每兩週一次1200 mg等效於每三週一次2400 mg。且對於Cavg ，每兩週一次500 mg等效於每三週一次750 mg；對於C谷 ，每兩週一次500 mg等效於每三週一次1,167 mg。作為癌症目標之 TGFβ
本發明允許藉由使用可溶性細胞介素受體(TGFβRII)捕捉TGFβ，使腫瘤微環境中之TGFβ局部減少，該TGFβRII繫栓至靶向在某些腫瘤細胞或免疫細胞之外表面上發現之細胞免疫檢查點受體的抗體部分。針對免疫檢查點蛋白的本發明之抗體部分的實例係抗PD-L1。該雙功能分子，在本文件中有時稱為「抗體-細胞介素誘捕分子」，正是由於抗受體抗體與細胞介素誘捕分子係以物理方式連接而有效。由此得到的益處(例如相對於將該抗體及該受體作為獨立分子投與)部分地因為細胞介素在局部環境中主要經由自分泌及旁分泌功能發揮作用。抗體部分將細胞介素誘捕分子引導至腫瘤微環境，在腫瘤微環境中，其可藉由中和局部免疫抑制性自分泌或旁分泌作用而發揮最大效力。此外，在抗體之目標在抗體結合時內化之情況下，提供有效清除細胞介素/細胞介素受體複合物之機制。顯示針對PD-L1的抗體介導之目標內化，且經顯示，抗PD-L1/TGFβ誘捕分子具有與抗PD-L1類似之內化速率。此係相對於使用抗TGFβ抗體之獨特益處，因為首先，抗TGFβ抗體可能無法完全中和；且其次，該抗體可用作載劑，用以延長細胞介素之半衰期。
實際上，如下所述，用抗PD-L1/TGFβ誘捕分子進行之治療因同時阻斷腫瘤細胞上之PD-L1與免疫細胞上之PD-1之間的相互作用以及中和腫瘤微環境中之TGFβ而引起協同抗腫瘤作用。不受理論束縛，此可能歸因於由同時阻斷兩種主要免疫逃避機制以及單分子實體耗盡腫瘤微環境中之TGFβ所獲得的協同效應。此耗盡係藉由以下來達成：(1)抗PD-L1靶向腫瘤細胞；(2)TGFβ誘捕分子結合腫瘤微環境中之TGFβ自分泌/旁分泌；以及(3)經由PD-L1受體介導之內吞作用破壞結合之TGFβ。此外，TGFβRII與Fc(IgG之結晶片段)之C末端融合要比將TGFβRII置於Fc之N末端的TGFβRII-Fc強效若干倍。
TGFβ因其作為癌症之分子雙重人格(Jekyll and Hyde)的反常作用而成為有些可疑的目標(Bierie等人,Nat. Rev. Cancer , 2006; 6:506-20)。與一些其他細胞介素相同，TGFβ活性視發育階段及環境而定。實際上，TGFβ可充當腫瘤促進劑或腫瘤抑制劑，影響腫瘤起始、進展及轉移。此TGFβ雙重作用之潛在機制仍不明了(Yang等人,Trends Immunol. 2010; 31:220-227)。儘管已假定Smad依賴性信號傳導介導TGFβ信號傳導之生長抑制作用，而不依賴Smad之路徑促成其促腫瘤作用，但亦有資料顯示Smad依賴性路徑與腫瘤進展有關(Yang等人,Cancer Res . 2008; 68:9107-11)。
已深入地研究TGFβ配體與受體作為治療目標。存在三種配體同功異型物：TGFβ1、TGFβ2及TGFβ3，均以同二聚體形式存在。亦存在三種TGFβ受體(TGFβR)，稱為TGFβR I型、II型及III型(López-Casillas等人, J Cell Biol. 1994; 124:557-68)。TGFβRI係信號傳導鏈且無法結合配體。TGFβRII以高親和力結合配體TGFβ1及TGFβ3，而不結合TGFβ2。TGFβRII/TGFβ複合物募集TGFβRI，形成信號傳導複合物(Won等人,Cancer Res. 1999; 59:1273-7)。TGFβRIII係TGFβ結合至其信號傳導受體之正調控劑，且以高親和力結合全部3種TGFβ同功異型物。在細胞表面上，TGFβ/TGFβRIII複合物結合TGFβRII且接著募集TGFβRI，其取代TGFβRIII形成信號傳導複合物。
雖然三種不同TGFβ同功異型物均經由相同受體傳導信號，但已知其在活體內具有不同表現模式及不重疊之功能。該三種不同TGF-β同功異型物基因剔除小鼠具有不同表型，表明具有眾多未補償之功能(Bujak等人,Cardiovasc Res. 2007; 74:184-95)。無TGFβ1之小鼠具有血細胞生成及血管生成缺陷，且無TGFβ3之小鼠顯示肺部發育及缺陷性齶發育，而無TGFβ2之小鼠顯示多種發育異常，最主要的是多種心臟畸形(Bartram等人, Circulation. 2001; 103:2745-52；Yamagishi等人,Anat. Rec. 2012; 295:257-67)。此外，TGFβ亦涉及在局部缺血及再灌注損傷之後心肌損傷之修復中起到主要作用。在成年心臟中，心肌細胞分泌TGFβ，其充當自分泌以維持自發跳動速率。重要的是，心肌細胞分泌的TGFβ中有70%-85%係TGFβ2 (Roberts等人,J. Clin. Invest. 1992; 90:2056-62)。儘管由TGFβRI激酶抑制劑治療引起心臟毒性問題，但本案申請者已觀察到在猴中抗PD-L1/TGFβ誘捕分子沒有毒性，包括心臟毒性。
中和TGFβ之治療方法包括使用TGFβ受體之細胞外結構域作為可溶性受體誘捕劑及中和抗體。在受體誘捕方法中，可溶性TGFβRIII看起來係顯而易見之選擇，因為其結合全部三種TGFβ配體。然而，TGFβRIII係一種用於生物治療劑開發之極複雜蛋白質，其在自然界中以280-330 kD葡糖胺聚糖(GAG)-糖蛋白形式存在，且其細胞外結構域具有762個胺基酸殘基。缺乏GAG之可溶性TGFβRIII可在昆蟲細胞中產生，且經顯示，其係一種有效TGFβ中和劑(Vilchis-Landeros等人,Biochem. J. , (2001), 355:215)。TGFβRIII之兩個獨立結合結構域(內皮因子相關結合結構域及尿調素相關結合結構域)可獨立地表現，但經顯示，其親和力比可溶性TGFβRIII之親和力低20至100倍，且具有明顯降低之中和活性(Mendoza等人,Biochemistry 2009; 48:11755-65)。另一方面，TGFβRII之細胞外結構域僅為136個胺基酸殘基長度，且可以25-35 kD之糖基化蛋白質形式產生。另外，經顯示重組可溶性TGFβRII以200 pM之KD 結合TGFβ1，與對細胞上全長TGFβRII的50 pM之KD 極其類似(Lin等人,J. Biol. Chem . (1995), 270:2747-54)。將可溶性TGFβRII-Fc作為抗癌劑進行測試，且顯示其抑制腫瘤模型中建立之鼠類惡性間皮瘤生長(Suzuki等人,Clin. Cancer Res ., (2004), 10:5907-18)。由於TGFβRII不結合TGFβ2且TGFβRIII以比TGFβRII低之親和力結合TGFβ1及TGFβ3，故在細菌中產生TGFβRIII之內皮因子結構域與TGFβRII之細胞外結構域的融合蛋白且其在基於細胞之分析中顯示的對TGFβ1及TGFβ2之信號傳導之抑制作用比TGFβRII或TGFβRIII更有效(Verona等人,Protein Eng ' g. Des. Sel. (2008), 21:463-73)。
中和TGFβ配體之全部三種同功異型物的又另一方法係篩選全中和抗TGFβ抗體，或阻斷受體與TGFβ1、TGFβ2及TGFβ3之結合的抗受體抗體。GC1008係一種對TGFβ之所有同功異型物具有特異性之人類抗體，正處於晚期惡性黑色素瘤或腎細胞癌患者之I/II期研究中(Morris等人,J. Clin. Oncol . (2008), 26:9028 (會議概要))。儘管發現該治療很安全且具有良好耐受性，但僅觀察到有限的臨床功效，且因此在未進一步表徵免疫作用下難以解釋抗TGFβ療法之重要性(Flavell等人,Nat. Rev. Immunol . (2010), 10:554-67)。亦在臨床中測試TGFβ同功異型物特異性抗體。在2期臨床試驗中將作為TGFβ1特異性抗體之美泊珠單抗(Metelimumab)作為預防青光眼手術之過量術後結疤的治療進行測試；且在3期研究中發現作為TGFβ2特異性抗體之樂地單抗(Lerdelimumab)係安全的，但在改善眼部手術後結疤方面不太有效(Khaw等人,Ophthalmology (2007), 114:1822-1830)。阻斷受體與全部三種TGFβ同功異型物結合之抗TGFβRII抗體，諸如抗人類TGFβRII抗體TR1及抗小鼠TGFβRII抗體MT1，針對小鼠模型中原發性腫瘤生長及轉移亦顯示出某種治療功效(Zhong等人,Clin. Cancer Res . (2010), 16:1191-205)。然而，在近期針對抗體TR1(LY3022859)之I期研究中，儘管用於預防性治療，但由於細胞介素釋放不可控，故認為劑量遞增超出25 mg(均一劑量)係不安全的(Tolcher等人,Cancer Chemother. Pharmacol. (2017), 79:673-680)。迄今為止，絕大部分關於靶向TGFβ之抗癌治療，包括通常毒性極高的針對TGFβ信號傳導之小分子抑制劑的研究主要處於臨床前階段中且所獲得的抗腫瘤功效有限(Calone等人,Exp. Oncol. (2012), 34:9-16；Connolly等人,Int. J. Biol. Sci. (2012), 8:964-78)。
本發明之抗體-TGFβ誘捕分子係含有能夠結合TGFβ之人類TGFβ受體II (TGFβRII)之至少一部分的雙功能蛋白質。在某些實施例中，TGFβ誘捕多肽係能夠結合TGFβ之人類TGFβ受體2型同功異型物A (SEQ ID NO: 8)之可溶性部分。在某些實施例中，TGFβ誘捕多肽含有SEQ ID NO: 8之至少胺基酸73-184。在某些實施例中，TGFβ誘捕多肽含有SEQ ID NO: 8之胺基酸24-184。在某些實施例中，TGFβ誘捕多肽係能夠結合TGFβ之人類TGFβ受體2型同功異型物B (SEQ ID NO: 9)之可溶性部分。在某些實施例中，TGFβ誘捕多肽含有SEQ ID NO: 9之至少胺基酸48-159。在某些實施例中，TGFβ誘捕多肽含有SEQ ID NO: 9之胺基酸24-159。在某些實施例中，TGFβ誘捕多肽含有SEQ ID NO: 9之胺基酸24-105。作用機制
靶向T細胞抑制檢查點以解除治療性抗體之抑制的方法係深入調查之領域(有關評述，參見Pardoll,Nat. Rev. Cancer (2012), 12:253-264)。在一種方法中，抗體部分或其抗原結合片段靶向T細胞上之T細胞抑制檢查點受體蛋白質，諸如：CTLA-4、PD-1、BTLA、LAG-3、TIM-3或LAIR1。在另一方法中，抗體部分靶向抗原呈現細胞及腫瘤細胞上之反受體(增選此等反受體中之一部分用於其自身免疫逃避)，諸如：PD-L1 (B7-H1)、B7-DC、HVEM、TIM-4、B7-H3或B7-H4。
本發明涵蓋經由抗體部分或其抗原結合片段靶向T細胞抑制檢查點以解除抑制的抗體TGFβ誘捕分子。為此，申請者已測試TGFβ誘捕分子與諸如抗PD-1、抗PD-L1、抗TIM-3及抗LAG3之類靶向多種T細胞抑制檢查點受體蛋白質之抗體之組合的抗腫瘤功效。
計劃性死亡1 (PD-1)/PD-L1軸係腫瘤免疫逃避之一種重要機制。長期感測抗原之效應T細胞呈現藉由PD-1表現標記之耗盡表型，此係腫瘤細胞藉由上調PD-L1實現接合之狀態。另外，在腫瘤微環境中，骨髓細胞、巨噬細胞、實質細胞及T細胞均上調PD-L1。阻斷該軸將復原此等T細胞之效應功能。抗PD-L1/TGFβ誘捕分子亦結合TGFβ (1、2及3同功異型物)，TGFβ係一種在腫瘤微環境中由包括凋亡之嗜中性白血球、骨髓源性抑制細胞、T細胞及腫瘤在內之細胞產生的抑制性細胞介素。可溶性TGFβRII抑制TGFβ以與CD8+ T細胞抗腫瘤作用之增加相關的方式減少惡性間皮瘤。經顯示，由活化CD4+ T細胞及Treg細胞產生之TGFβ1的缺乏可抑制腫瘤生長，且保護小鼠以防自發性癌症。因此，TGFβ看來對於腫瘤免疫逃避極為重要。
TGFβ對正常上皮細胞具有生長抑制作用，用作上皮細胞動態平衡之調控劑，且其充當早期癌發生期間之腫瘤抑制因子。當腫瘤朝向惡性疾病進展時，TGFβ對腫瘤之生長抑制作用經由一或多個TGFβ路徑信號傳導組分之突變或經由致癌重編程而消失。在喪失對TGFβ抑制之敏感性後，腫瘤繼續產生高水準TGFβ，接著該高水準TGFβ用於促進腫瘤生長。TGFβ細胞介素在多種癌症類型中過度表現且與腫瘤階段相關。腫瘤微環境中之許多類型細胞產生TGFβ，包括腫瘤細胞自身、不成熟骨髓細胞、調節T細胞及基質纖維母細胞；此等細胞一起在細胞外基質中產生大量TGFβ。TGFβ信號傳導藉由促進轉移、刺激血管生成以及抑制先天性及適應性抗腫瘤免疫而促成腫瘤進展。作為廣泛免疫抑制因子，TGFβ直接下調活化之細胞毒性T細胞及NK細胞之效應功能，且有效地誘導天然CD4+ T細胞分化成免疫抑制性調節T細胞(Treg)表型。另外，TGFβ將巨噬細胞及嗜中性白血球極化成與免疫抑制性細胞介素產生相關的傷口癒合表型。作為治療策略，中和TGFβ活性能夠藉由恢復有效抗腫瘤免疫、阻斷轉移及抑制血管生成來控制腫瘤生長。
將此等路徑PD-1或PD-L1與TGFβ組合係一種引人注目的抗腫瘤方法。聯合PD-1及TGFβ阻斷可恢復促炎性細胞介素。抗PD-L1/TGFβ誘捕分子包括例如人類TGFβ受體TGFβRII之細胞外結構域經由甘胺酸/絲胺酸連接子共價接合至完全人類IgG1抗PD-L1抗體每一重鏈之C末端。考慮到PD-1/PD-L1類別之新興景象，其中反應明顯但效應量仍有增加空間，假定共靶向互補免疫調節步驟將改善腫瘤反應。一種類似的TGF靶向劑福萊索單抗(fresolimumab)係靶向TGFβ1、TGFβ2及TGFβ3之單株抗體，在患有黑素瘤之個體的I期試驗中顯示出腫瘤反應之初始證據。
本發明提供的實驗展示，抗PD-L1/TGFβ誘捕分子(誘捕分子對照「抗PDL-1(mut)/TGFβ誘捕分子」)之TGFβRII部分引發抗腫瘤活性。舉例而言，在Detroit 562人類咽癌模型中進行皮下植入後，抗PD-L1(mut)/TGFβ誘捕分子當以25 µg、76 µg或228 µg投與時引發腫瘤體積之劑量依賴性減小(圖5)。
本發明提供的實驗展示，本發明之蛋白質同時結合至PD-L1與TGFβ兩者(圖2)。
本發明提供的實驗展示，本發明之蛋白質(例如抗PD-L1/TGFβ誘捕分子)在活體外抑制PD-L1及TGFβ依賴性信號傳導。本發明提供的實驗展示，如藉由在超級抗原刺激後進行的IL-2誘導分析所量測，本發明之蛋白質在活體外經由阻斷PD-L1介導之免疫抑制來增強T細胞效應功能(圖3)。在約100 ng/ml下，本發明之蛋白質在活體外誘導IL-2水準顯著增加(圖3)。
本發明提供的實驗展示，本發明之蛋白質(例如抗PD-L1/TGFβ誘捕分子)在活體內引起血液中TGFβ耗盡。用55 µg或164 µg或492 µg本發明之蛋白質治療在JH小鼠中正位植入之EMT-6乳癌細胞引起TGFβ1 (圖4A)、TGFβ2 (圖4B)及TGFβ3 (圖4C)之有效且特異性的耗盡。此外，本發明提供的實驗展示，本發明之蛋白質佔用PD-L1目標，證實本發明之蛋白質與EMT-6腫瘤系統中之受體結合模型相配的概念(圖4D)。
本發明提供的實驗展示，本發明之蛋白質高效、特異性且同時結合至PD-L1及TGFβ，在多種小鼠模型中具有強效抗腫瘤活性，抑制腫瘤生長及轉移，以及延長存活期且賦予長期保護性抗腫瘤免疫。 抗PD-L1抗體
本發明之抗PD-L1/TGFβ誘捕分子可以包括此項技術中描述之任何抗PD-L1抗體或其抗原結合片段。抗PD-L1抗體係可商購的，例如29E2A3抗體(Biolegend，目錄號329701)。抗體可為單株抗體、嵌合抗體、人類化抗體或人類抗體。抗體片段包括Fab、F(ab')2、scFv及Fv片段，其進一步詳細描述於下文中。
例示性抗體描述於PCT公開案WO 2013/079174中。此等抗體可包括含HVR-H1、HVR-H2及HVR-H3序列之重鏈可變區多肽，其中： (a)該HVR-H1序列係X1 YX2 MX3 (SEQ ID NO: 21)； (b) 該HVR-H2序列係SIYPSGGX4 TFYADX5 VKG (SEQ ID NO: 22)； (c) 該HVR-H3序列係IKLGTVTTVX6 Y (SEQ ID NO: 23)； 又其中：X1 係K、R、T、Q、G、A、W、M、I或S；X2 係V、R、K、L、M或I；X3 係H、T、N、Q、A、V、Y、W、F或M；X4 係F或I；X5 係S或T；X6 係E或D。
在一個實施例中，X1 係M、I或S；X2 係R、K、L、M或I；X3 係F或M；X4 係F或I；X5 係S或T；X6 係E或D。
在另一個實施例中，X1 係M、I或S；X2 係L、M或I；X3 係F或M；X4 係I；X5 係S或T；X6 係D。
在又另一實施例中，X1 係S；X2 係I；X3 係M；X4 係I；X5 係T；X6 係D。
在另一態樣中，根據下式，多肽進一步包括並置於HVR之間的可變區重鏈構架序列：(HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4)。
在又另一態樣中，該構架序列係來源於人類共同構架序列或人類生殖系構架序列。
在另一態樣中，至少一個構架序列係以下： HC-FR1係EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS (SEQ ID NO: 24)； HC-FR2係WVRQAPGKGLEWVS (SEQ ID NO: 25)； HC-FR3係RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 26)； HC-FR4係WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 27)。
在另一態樣中，重鏈多肽進一步與包括HVR-L1、HVR-L2及HVR-L3之可變區輕鏈組合，其中： (a)該HVR-L1序列係TGTX7 X8 DVGX9 YNYVS (SEQ ID NO: 28)； (b) 該HVR-L2序列係X10 VX11 X12 RPS (SEQ ID NO: 29)； (c) 該HVR-L3序列係SSX13 TX14 X15 X16 X17 RV (SEQ ID NO: 30)； 又其中：X7 係N或S；X8 係T、R或S；X9 係A或G；X10 係E或D；X11 係I、N或S；X12 係D、H或N；X13 係F或Y；X14 係N或S；X15 係R、T或S；X16 係G或S；X17 係I或T。
在另一實施例中，X7 係N或S；X8 係T、R或S；X9 係A或G；X10 係E或D；X11 係N或S；X12 係N；X13 係F或Y；X14 係S；X15 係S；X16 係G或S；X17 係T。
在又另一實施例中，X7 係S；X8 係S；X9 係G；X10 係D；X11 係S；X12 係N；X13 係Y；X14 係S；X15 係S；X16 係S；X17 係T。
在另一態樣中，根據下式，輕鏈進一步包括並置於HVR之間的可變區輕鏈構架序列：(LC-FR1MHVR-L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4)。
在又另一態樣中，該輕鏈構架序列係來源於人類共同構架序列或人類生殖系構架序列。
在另一態樣中，輕鏈構架序列係λ輕鏈序列。
在另一態樣中，至少一個構架序列係以下： LC-FR1係QSALTQPASVSGSPGQSITISC (SEQ ID NO: 31)； LC-FR2係WYQQHPGKAPKLMIY (SEQ ID NO: 32)； LC-FR3係GVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYC (SEQ ID NO: 33)； LC-FR4係FGTGTKVTVL (SEQ ID NO: 34)。
在另一個實施例中，本發明提供一種抗PD-L1抗體或抗原結合片段，其包括重鏈及輕鏈可變區序列，其中： (a)該重鏈包括HVR-H1、HVR-H2及HVR-H3，其中另外：(i)該HVR-H1序列係X1 YX2 MX3 (SEQ ID NO: 21)；(ii)該HVR-H2序列係SIYPSGGX4 TFYADX5 VKG (SEQ ID NO: 22)；(iii)該HVR-H3序列係IKLGTVTTVX6 Y (SEQ ID NO: 23)，且； (b)該輕鏈包括HVR-L1、HVR-L2及HVR-L3，其中另外：(iv)該HVR-L1序列係TGTX7 X8 DVGX9 YNYVS (SEQ ID NO: 28)；(v)該HVR-L2序列係X10 VX11 X12 RPS (SEQ ID NO: 29)；(vi)該HVR-L3序列係SSX13 TX14 X15 X16 X17 RV (SEQ ID NO: 30)；其中：X1 係K、R、T、Q、G、A、W、M、I或S；X2 係V、R、K、L、M或I；X3 係H、T、N、Q、A、V、Y、W、F或M；X4 係F或I；X5 係S或T；X6 係E或D；X7 係N或S；X8 係T、R或S；X9 係A或G；X10 係E或D；X11 係I、N或S；X12 係D、H或N；X13 係F或Y；X14 係N或S；X15 係R、T或S；X16 係G或S；X17 係I或T。
在一個實施例中，X1 係M、I或S；X2 係R、K、L、M或I；X3 係F或M；X4 係F或I；X5 係S或T；X6 係E或D；X7 係N或S；X8 係T、R或S；X9 係A或G；X10 係E或D；X11 係N或S；X12 係N；X13 係F或Y；X14 係S；X15 係S；X16 係G或S；X17 係T。
在另一實施例中，X1 係M、I或S；X2 係L、M或I；X3 係F或M；X4 係I；X5 係S或T；X6 係D；X7 係N或S；X8 係T、R或S；X9 係A或G；X10 係E或D；X11 係N或S；X12 係N；X13 係F或Y；X14 係S；X15 係S；X16 係G或S；X17 係T。
在又另一實施例中，X1 係S；X2 係I；X3 係M；X4 係I；X5 係T；X6 係D；X7 係S；X8 係S；X9 係G；X10 係D；X11 係S；X12 係N；X13 係Y；X14 係S；X15 係S；X16 係S；X17 係T。
在另一態樣中，該重鏈可變區包括如下並置於HVR之間的一或多個構架序列：(HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4)，且輕鏈可變區包括如下並置於HVR之間的一或多個構架序列：(LC-FR1 MHVR-L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4)。
在又另一態樣中，該構架序列係來源於人類共同構架序列或人類生殖系序列。
在另一態樣中，一或多個重鏈構架序列如下： HC-FR1係EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS (SEQ ID NO: 24)； HC-FR2係WVRQAPGKGLEWVS (SEQ ID NO: 25)； HC-FR3係RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 26)； HC-FR4係WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 27)。
在另一態樣中，輕鏈構架序列係λ輕鏈序列。
在另一態樣中，一或多個輕鏈構架序列如下： LC-FR1係QSALTQPASVSGSPGQSITISC (SEQ ID NO: 31)； LC-FR2係WYQQHPGKAPKLMIY (SEQ ID NO: 32)； LC-FR3係GVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYC (SEQ ID NO: 33)； LC-FR4係FGTGTKVTVL (SEQ ID NO: 34)。
在另一態樣中，重鏈可變區多肽、抗體或抗體片段進一步包括至少一個CH 1結構域。
在一個更特定態樣中，重鏈可變區多肽、抗體或抗體片段進一步包括CH 1、CH 2及CH 3結構域。
在另一態樣中，可變區輕鏈、抗體或抗體片段進一步包括CL 結構域。
在另一態樣中，抗體進一步包括CH 1、CH 2、CH 3及CL 結構域。
在另一特定態樣中，抗體進一步包括人類或鼠類恆定區。
在又另一態樣中，人類恆定區係選自由以下組成之群：IgG1、IgG2、IgG2、IgG3及IgG4。
在另一特定態樣中，人類或鼠類恆定區係lgG1。
在又另一實施例中，本發明之特徵在於一種抗PD-L1抗體，其包括重鏈及輕鏈可變區序列，其中： (a)該重鏈包括HVR-H1、HVR-H2及HVR-H3，其分別與SYIMM(SEQ ID NO:35)、SIYPSGGITFYADTVKG(SEQ ID NO:36)及IKLGTVTTVDY(SEQ ID NO:37)具有至少80%總體序列一致性，且 (b)該輕鏈包括HVR-L1、HVR-L2及HVR-L3，其分別與TGTSSDVGGYNYVS(SEQ ID NO:38)、DVSNRPS(SEQ ID NO:39)及SSYTSSSTRV(SEQ ID NO:40)具有至少80%總體序列一致性。
在一特定態樣中，該序列一致性係81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%。
在又另一實施例中，本發明之特徵在於一種抗PD-L1抗體，其包括重鏈及輕鏈可變區序列，其中： (a)該重鏈包括HVR-H1、HVR-H2及HVR-H3，其分別與MYMMM(SEQ ID NO:41)、SIYPSGGITFYADSVKG(SEQ ID NO:42)及IKLGTVTTVDY(SEQ ID NO:37)具有至少80%總體序列一致性，且 (b)該輕鏈包括HVR-L1、HVR-L2及HVR-L3，其分別與TGTSSDVGAYNYVS(SEQ ID NO:43)、DVSNRPS(SEQ ID NO:39)及SSYTSSSTRV(SEQ ID NO:40)具有至少80%總體序列一致性。
在一特定態樣中，該序列一致性係81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%。
在另一態樣中，在根據本發明之抗體或抗體片段中，與HVR-H1、HVR-H2及HVR-H3之序列相比，至少如下序列中藉由加下劃線突出之該等胺基酸保持不變： (a) HVR-H1 SY IM M (SEQ ID NO: 35)， (b) HVR-H2SIYPSGGITFYADTVKG (SEQ ID NO: 36)， (c) HVR-H3IKLGTVTTVDY (SEQ ID NO: 37)； 且又其中，與HVR-L1、HVR-L2及HVR-L3之序列相比，至少如下序列中藉由加下劃線突出之該等胺基酸保持不變： (a) HVR-L1 TGTSSDVGGYNYVS (SEQ ID NO: 38) (b) HVR-L2D VSNRPS (SEQ ID NO: 39) (c) HVR-L3SS YTSSSTRV (SEQ ID NO: 40)。
在另一態樣中，重鏈可變區包括如下並置於HVR之間的一或多個構架序列：(HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4)，且輕鏈可變區包括如下並置於HVR之間的一或多個構架序列：(LC-FR1)-(HVR-L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4)。
在又另一態樣中，構架序列係來源於人類生殖系序列。
在另一態樣中，一或多個重鏈構架序列如下： HC-FR1係EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS (SEQ ID NO: 24)； HC-FR2係WVRQAPGKGLEWVS (SEQ ID NO: 25)； HC-FR3係RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 26)； HC-FR4係WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 27)。
在另一態樣中，輕鏈構架序列係來源於λ輕鏈序列。
在另一態樣中，一或多個輕鏈構架序列如下： LC-FR1係QSALTQPASVSGSPGQSITISC (SEQ ID NO: 31)； LC-FR2係WYQQHPGKAPKLMIY (SEQ ID NO: 32)； LC-FR3係GVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYC (SEQ ID NO: 33)； LC-FR4係FGTGTKVTVL (SEQ ID NO: 34)。
在另一特定態樣中，抗體進一步包括人類或鼠類恆定區。
在又另一態樣中，人類恆定區係選自由以下組成之群：IgG1、IgG2、IgG2、IgG3、IgG4。
在某些實施例中，本發明之特徵在於一種抗PD-L1抗體，其包括重鏈及輕鏈可變區序列，其中： (a)該重鏈序列與以下重鏈序列具有至少85%序列一致性：
Figure 02_image001
Figure 02_image003
，且 (b)該輕鏈序列與以下輕鏈序列具有至少85%序列一致性：
Figure 02_image005
Figure 02_image007
。
在各種實施例中，該重鏈序列與SEQ ID NO: 44具有至少86%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 45具有至少86%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 44具有至少87%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 45具有至少87%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 44具有至少88%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 45具有至少88%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 44具有至少89%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 45具有至少89%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 44具有至少90%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 45具有至少90%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 44具有至少91%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 45具有至少91%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 44具有至少92%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 45具有至少92%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 44具有至少93%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 45具有至少93%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 44具有至少94%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 45具有至少94%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 44具有至少95%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 45具有至少95%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 44具有至少96%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 45具有至少96%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 44具有至少97%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 45具有至少97%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 44具有至少98%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 45具有至少98%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 44具有至少99%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 45具有至少99%序列一致性；或該重鏈序列包含SEQ ID NO: 44且該輕鏈序列包含SEQ ID NO: 45。
在某些實施例中，本發明提供一種抗PD-L1抗體，其包括重鏈及輕鏈可變區序列，其中： (a)該重鏈序列與以下重鏈序列具有至少85%序列一致性：
Figure 02_image009
Figure 02_image011
，且 (b)該輕鏈序列與以下輕鏈序列具有至少85%序列一致性：
Figure 02_image013
Figure 02_image015
。
在各種實施例中，該重鏈序列與SEQ ID NO: 46具有至少86%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 47具有至少86%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 46具有至少87%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 47具有至少87%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 46具有至少88%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 47具有至少88%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 46具有至少89%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 47具有至少89%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 46具有至少90%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 47具有至少90%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 46具有至少91%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 47具有至少91%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 46具有至少92%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 47具有至少92%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 46具有至少93%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 47具有至少93%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 46具有至少94%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 47具有至少94%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 46具有至少95%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 47具有至少95%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 46具有至少96%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 47具有至少96%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 46具有至少97%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 47具有至少97%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 46具有至少98%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 47具有至少98%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 46具有至少99%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 47具有至少99%序列一致性；或該重鏈序列包含SEQ ID NO: 46且該輕鏈序列包含SEQ ID NO: 47。
在另一實施例中，該抗體結合至人類、小鼠或食蟹獼猴PD-L1。在一特定態樣中，該抗體能夠阻斷人類、小鼠或食蟹獼猴PD-L1與各別人類、小鼠或食蟹獼猴PD-1受體之間的相互作用。
在另一個實施例中，該抗體以5×10- 9 M或更低之KD、較佳地以2×10- 9 M或更低之KD且甚至更佳地以1×10- 9 M或更低之KD結合至人類PD-L1。
在又另一個實施例中，本發明係關於一種結合至包括人類PD-L1之殘基Y56及D61之功能性抗原決定基的抗PD-L1抗體或其抗原結合片段。
在一特定態樣中，該功能性抗原決定基進一步包括人類PD-L1之E58、E60、Q66、R113及M115。
在一更特定態樣中，該抗體結合至構形抗原決定基，包括人類PD-L1之殘基54-66及112-122。
在某些實施例中，本發明係關於抗PD-L1抗體或其抗原結合片段，其與如本文所述的根據本發明之抗體交叉競爭結合至PD-L1。
在某些實施例中，本發明之特徵在於包括上述抗PD-L1抗體中之任一種與至少一種醫藥學上可接受之載劑之組合的蛋白質及多肽。
在某些實施例中，本發明之特徵在於一種經分離之核酸，其編碼如本文所述之多肽、或抗PD-L1抗體或其抗原結合片段之輕鏈或重鏈可變區序列。在某些實施例中，本發明提供一種經分離之核酸，其編碼抗PD-L1抗體之輕鏈或重鏈可變區序列，其中： (a)該重鏈包括HVR-H1、HVR-H2及HVR-H3序列，其分別與SYIMM(SEQ ID NO:35)、SIYPSGGITFYADTVKG(SEQ ID NO:36)及IKLGTVTTVDY(SEQ ID NO:37)具有至少80%序列一致性，或 (b)該輕鏈包括HVR-L1、HVR-L2及HVR-L3序列，其分別與TGTSSDVGGYNYVS(SEQ ID NO:38)、DVSNRPS(SEQ ID NO:39)及SSYTSSSTRV(SEQ ID NO:40)具有至少80%序列一致性。
在一特定態樣中，該序列一致性係81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%。
在另一態樣中，重鏈之核酸序列為：
Figure 02_image017
且輕鏈之核酸序列為：
Figure 02_image019
可用於抗PD-L1/TGFβ誘捕分子中之其他例示性抗PD-L1抗體描述於美國專利申請公開案US 2010/0203056中。在本發明之一個實施例中，該抗體部分係YW243.55S70。在本發明之另一實施例中，該抗體部分係MPDL3289A。
在某些實施例中，本發明之特徵在於一種抗PD-L1抗體部分，其包括重鏈及輕鏈可變區序列，其中： (a)該重鏈序列與以下重鏈序列具有至少85%序列一致性：
Figure 02_image021
Figure 02_image023
，及 (b)該輕鏈序列與以下輕鏈序列具有至少85%序列一致性：
Figure 02_image025
在各種實施例中，該重鏈序列與SEQ ID NO: 12具有至少86%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 13具有至少86%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 12具有至少87%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 13具有至少87%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 12具有至少88%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 13具有至少88%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 12具有至少89%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 13具有至少89%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 12具有至少90%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 13具有至少90%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 12具有至少91%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 13具有至少91%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 12具有至少92%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 13具有至少92%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 12具有至少93%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 13具有至少93%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 12具有至少94%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 13具有至少94%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 12具有至少95%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 13具有至少95%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 12具有至少96%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 13具有至少96%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 12具有至少97%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 13具有至少97%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 12具有至少98%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 13具有至少98%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 12具有至少99%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 13具有至少99%序列一致性；或該重鏈序列包含SEQ ID NO: 12且該輕鏈序列包含SEQ ID NO: 13。
在某些實施例中，本發明之特徵在於一種抗PD-L1抗體部分，其包括重鏈及輕鏈可變區序列，其中： (a)該重鏈序列與以下重鏈序列具有至少85%序列一致性：
Figure 02_image027
Figure 02_image029
，及 (b)該輕鏈序列與以下輕鏈序列具有至少85%序列一致性：
Figure 02_image031
在各種實施例中，該重鏈序列與SEQ ID NO: 14具有至少86%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 13具有至少86%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 14具有至少87%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 13具有至少87%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 14具有至少88%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 13具有至少88%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 14具有至少89%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 13具有至少89%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 14具有至少90%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 13具有至少90%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 14具有至少91%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 13具有至少91%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 14具有至少92%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 13具有至少92%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 14具有至少93%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 13具有至少93%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 14具有至少94%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 13具有至少94%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 14具有至少95%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 13具有至少95%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 14具有至少96%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 13具有至少96%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 14具有至少97%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 13具有至少97%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 14具有至少98%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 13具有至少98%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 14具有至少99%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 13具有至少99%序列一致性；或該重鏈序列包含SEQ ID NO: 14且該輕鏈序列包含SEQ ID NO: 13。
可用於抗PD-L1/TGFβ誘捕分子中之其他例示性抗PD-L1抗體描述於美國專利申請公開案US 2018/0334504中。
在某些實施例中，本發明之特徵在於一種抗PD-L1抗體部分，其包括重鏈及輕鏈可變區序列，其中 (a)該重鏈序列與以下重鏈序列具有至少85%序列一致性：
Figure 02_image033
Figure 02_image035
，及 (b)該輕鏈序列與以下輕鏈序列具有至少85%序列一致性：
Figure 02_image037
在各種實施例中，該重鏈序列與SEQ ID NO: 55具有至少86%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 56具有至少86%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 55具有至少87%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 56具有至少87%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 55具有至少88%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 56具有至少88%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 55具有至少89%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 56具有至少89%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 55具有至少90%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 56具有至少90%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 55具有至少91%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 56具有至少91%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 55具有至少92%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 56具有至少92%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 55具有至少93%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 56具有至少93%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 55具有至少94%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 56具有至少94%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 55具有至少95%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 56具有至少95%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 55具有至少96%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 56具有至少96%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 55具有至少97%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 56具有至少97%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 55具有至少98%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 56具有至少98%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 55具有至少99%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 56具有至少99%序列一致性；或該重鏈序列包含SEQ ID NO: 55且該輕鏈序列包含SEQ ID NO: 56。
在某些實施例中，本發明之特徵在於一種抗PD-L1抗體部分，其包括重鏈及輕鏈可變區序列，其中 (a)該重鏈序列與以下重鏈序列具有至少85%序列一致性：
Figure 02_image039
Figure 02_image041
，及 (b)該輕鏈序列與以下輕鏈序列具有至少85%序列一致性：
Figure 02_image043
在各種實施例中，該重鏈序列與SEQ ID NO: 57具有至少86%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 58具有至少86%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 57具有至少87%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 58具有至少87%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 57具有至少88%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 58具有至少88%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 57具有至少89%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 58具有至少89%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 57具有至少90%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 58具有至少90%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 57具有至少91%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 58具有至少91%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 57具有至少92%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 58具有至少92%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 57具有至少93%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 58具有至少93%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 57具有至少94%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 58具有至少94%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 57具有至少95%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 58具有至少95%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 57具有至少96%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 58具有至少96%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 57具有至少97%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 58具有至少97%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 57具有至少98%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 58具有至少98%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 57具有至少99%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 58具有至少99%序列一致性；或該重鏈序列包含SEQ ID NO: 57且該輕鏈序列包含SEQ ID NO: 58。
在某些實施例中，本發明之特徵在於一種抗PD-L1抗體部分，其包括重鏈及輕鏈序列，其中： (a)該重鏈序列與以下重鏈序列具有至少85%序列一致性：
Figure 02_image045
Figure 02_image047
，及 (b)該輕鏈序列與以下輕鏈序列具有至少85%序列一致性：
Figure 02_image049
在各種實施例中，該重鏈序列與SEQ ID NO: 59具有至少86%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 60具有至少86%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 59具有至少87%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 60具有至少87%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 59具有至少88%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 60具有至少88%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 59具有至少89%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 60具有至少89%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 59具有至少90%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 60具有至少90%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 59具有至少91%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 60具有至少91%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 59具有至少92%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 60具有至少92%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 59具有至少93%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 60具有至少93%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 59具有至少94%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 60具有至少94%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 59具有至少95%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 60具有至少95%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 59具有至少96%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 60具有至少96%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 59具有至少97%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 60具有至少97%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 59具有至少98%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 60具有至少98%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 59具有至少99%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 60具有至少99%序列一致性；或該重鏈序列包含SEQ ID NO: 59且該輕鏈序列包含SEQ ID NO: 60。
在某些實施例中，本發明之特徵在於一種抗PD-L1抗體部分，其包括重鏈及輕鏈序列，其中： (a)該重鏈序列與以下重鏈序列具有至少85%序列一致性：
Figure 02_image051
Figure 02_image053
，及 (b)該輕鏈序列與以下輕鏈序列具有至少85%序列一致性：
Figure 02_image055
在各種實施例中，該重鏈序列與SEQ ID NO: 61具有至少86%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 62具有至少86%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 61具有至少87%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 62具有至少87%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 61具有至少88%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 62具有至少88%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 61具有至少89%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 62具有至少89%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 61具有至少90%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 62具有至少90%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 61具有至少91%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 62具有至少91%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 61具有至少92%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 62具有至少92%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 61具有至少93%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 62具有至少93%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 61具有至少94%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 62具有至少94%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 61具有至少95%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 62具有至少95%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 61具有至少96%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 62具有至少96%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 61具有至少97%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 62具有至少97%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 61具有至少98%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 62具有至少98%序列一致性；該重鏈序列與SEQ ID NO: 61具有至少99%序列一致性且該輕鏈序列與SEQ ID NO: 62具有至少99%序列一致性；或該重鏈序列包含SEQ ID NO: 61且該輕鏈序列包含SEQ ID NO: 62。
可用於抗PD-L1/TGFβ誘捕分子中之又其他例示性抗PD-L1抗體描述於美國專利申請公開案US 7,943,743中。
在本發明之一個實施例中，抗PD-L1抗體係MDX-1105。
在某些實施例中，抗PD-L1抗體係MEDI-4736。恆定區
本發明之蛋白質及肽可包括免疫球蛋白之恆定區或該恆定區之片段、類似物、變異體、突變體或衍生物。在某些實施例中，該恆定區係來源於人類免疫球蛋白重鏈，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其他類別。在某些實施例中，該恆定區包括CH2結構域。在某些實施例中，該恆定區包括CH2及CH3結構域，或包括鉸鏈-CH2-CH3。或者，該恆定區可包括鉸鏈區、CH2結構域及/或CH3結構域之全部或一部分。
在一個實施例中，該恆定區含有降低對Fc受體之親和力或降低Fc效應功能之突變。舉例而言，該恆定區可含有消除IgG重鏈恆定區內之糖基化位點的突變。在一些實施例中，該恆定區在對應於IgG1之Leu234、Leu235、Gly236、Gly237、Asn297或Pro331之胺基酸位置處含有突變、缺失或插入(胺基酸係根據EU命名法編號)。在一特定實施例中，該恆定區在對應於IgG1之Asn297之胺基酸位置處含有突變。在替代性實施例中，該恆定區在對應於IgG1之Leu281、Leu282、Gly283、Gly284、Asn344或Pro378之胺基酸位置處含有突變、缺失或插入。
在一些實施例中，該恆定區含有來源於人類IgG2或IgG4重鏈之CH2結構域。較佳地，該CH2結構域含有消除CH2結構域內之糖基化位點的突變。在一個實施例中，該突變改變IgG2或IgG4重鏈之CH2結構域內Gln-Phe-Asn-Ser (SEQ ID NO: 15)胺基酸序列內的天冬醯胺。較佳地，該突變使天冬醯胺變成麩醯胺酸。或者，該突變改變Gln-Phe-Asn-Ser (SEQ ID NO: 15)胺基酸序列內之苯丙胺酸與天冬醯胺。在一個實施例中，Gln-Phe-Asn-Ser (SEQ ID NO: 15)胺基酸序列經Gln-Ala-Gln-Ser(SEQ ID NO: 16)胺基酸序列置換。Gln-Phe-Asn-Ser (SEQ ID NO: 15)胺基酸序列內之天冬醯胺對應於IgG1之Asn297。
在另一個實施例中，該恆定區包括CH2結構域及至少一部分鉸鏈區。鉸鏈區可來源於免疫球蛋白重鏈，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其他類別。較佳地，鉸鏈區來源於人類IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其他適合類別。更佳地，鉸鏈區來源於人類IgG1重鏈。在一個實施例中，IgG1鉸鏈區之Pro-Lys-Ser-Cys-Asp-Lys (SEQ ID NO: 17)胺基酸序列中的半胱胺酸改變。在某些實施例中，Pro-Lys-Ser-Cys-Asp-Lys (SEQ ID NO: 17)胺基酸序列經Pro-Lys-Ser-Ser-Asp-Lys (SEQ ID NO: 18)胺基酸序列置換。在某些實施例中，該恆定區包括來源於第一抗體同型之CH2結構域及來源於第二抗體同型之鉸鏈區。在某些實施例中，CH2結構域來源於人類IgG2或IgG4重鏈，而鉸鏈區來源於改變之人類IgG1重鏈。
靠近Fc部分與非Fc部分之接合點的胺基酸之改變可顯著增加Fc融合蛋白之血清半衰期(PCT公開案WO 0158957，其揭示內容以引用的方式併入本文中)。因此，本發明之蛋白質或多肽的接合區可含有改變，相對於免疫球蛋白重鏈及紅血球生成素之天然存在之序列，該等改變較佳在該接合點之約10個胺基酸內。此等胺基酸變化會使疏水性增加。在一個實施例中，該恆定區來源於C末端離胺酸殘基經置換之IgG序列。較佳地，IgG序列之C末端離胺酸經非離胺酸胺基酸，諸如丙胺酸或白胺酸置換，以進一步增加血清半衰期。在另一實施例中，該恆定區來源於靠近恆定區C末端之Leu-Ser-Leu-Ser (SEQ ID NO: 19)胺基酸序列經改變以消除潛在接合性T細胞抗原決定基之IgG序列。舉例而言，在一個實施例中，Leu-Ser-Leu-Ser (SEQ ID NO: 19)胺基酸序列經Ala-Thr-Ala-Thr (SEQ ID NO: 20)胺基酸序列置換。在其他實施例中，Leu-Ser-Leu-Ser (SEQ ID NO: 19)區段內之胺基酸經其他胺基酸，諸如甘胺酸或脯胺酸置換。在靠近IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或其他免疫球蛋白類別分子之C末端的Leu-Ser-Leu-Ser (SEQ ID NO: 19)區段產生胺基酸取代的詳細方法已描述於美國專利公開案第20030166877號，其揭示內容以引用的方式併入本文中。
適用於本發明之鉸鏈區可來源於IgG1、IgG2、IgG3、IgG4及其他免疫球蛋白類別。IgG1鉸鏈區具有三個半胱胺酸，其中兩個參與免疫球蛋白兩條重鏈之間的二硫鍵。此等半胱胺酸允許在Fc部分之間形成高效且一致之二硫鍵。因此，本發明之鉸鏈區來源於IgG1，例如人類IgG1。在一些實施例中，人類IgG1鉸鏈區內之第一個半胱胺酸突變成另一胺基酸，較佳地為絲胺酸。IgG2同型鉸鏈區具有四個二硫鍵，在重組系統中分泌期間，該等二硫鍵往往促進寡聚及可能不正確之二硫鍵鍵結。適合鉸鏈區可來源於IgG2鉸鏈；頭兩個半胱胺酸各自較佳地突變成另一胺基酸。已知IgG4之鉸鏈區低效地形成鏈間二硫鍵。然而，適用於本發明之鉸鏈區可來源於IgG4鉸鏈區，其較佳地含有增進重鏈源性部分之間二硫鍵之正確形成的突變(Angal S等人,Mol. Immunol. (1993), 30:105-8)。
根據本發明，該恆定區可含有來源於不同抗體同型之CH2及/或CH3結構域及鉸鏈區，亦即，混合恆定區。舉例而言，在一個實施例中，該恆定區含有來源於IgG2或IgG4之CH2及/或CH3結構域及來源於IgG1之突變鉸鏈區。或者，將來自另一IgG亞類之突變鉸鏈區用於混合恆定區。舉例而言，可使用允許在兩條重鏈之間實現高效二硫鍵鍵結的IgG4鉸鏈之突變形式。突變鉸鏈亦可來源於IgG2鉸鏈，其中頭兩個半胱胺酸各自突變成另一胺基酸。此類混合恆定區之組裝已描述於美國專利公開案第20030044423號中，其揭示內容以引用的方式併入本文中。
根據本發明，該恆定區可含有一或多個本文所述之突變。Fc部分中突變之組合在延長雙功能分子之血清半衰期及增加其活體內效力方面可具有累加或協同作用。因此，在一個例示性實施例中，該恆定區可含有(i)來源於Leu-Ser-Leu-Ser (SEQ ID NO: 19)胺基酸序列經Ala-Thr-Ala-Thr (SEQ ID NO: 20)胺基酸序列置換之IgG序列之區域；(ii)代替離胺酸之C末端丙胺酸殘基；(iii)來源於不同抗體同型之CH2結構域及鉸鏈區，例如IgG2 CH2結構域及改變之IgG1鉸鏈區；以及(iv)消除IgG2源性CH2結構域內之糖基化位點的突變，例如Gln-Ala-Gln-Ser (SEQ ID NO: 16)胺基酸序列代替IgG2源性CH2結構域內之Gln-Phe-Asn-Ser (SEQ ID NO: 15)胺基酸序列。 抗體片段
本發明之蛋白質及多肽亦可包括抗體之抗原結合片段。例示性抗體片段包括scFv、Fv、Fab、F(ab')2 及單結構域VHH片段，諸如駱駝起源之該等片段。
單鏈抗體片段，又稱為單鏈抗體(scFv)，係通常結合抗原或受體之重組多肽；此等片段含有抗體可變重鏈胺基酸序列(VH )之至少一個片段經由或不經由一或多個互連連接子繫栓至抗體可變輕鏈序列(VL )之至少一個片段。此類連接子可為較短的可撓性肽，其經選擇以確保VL 及VH 結構域在連接後發生適當三維摺疊，從而維持作為單鏈抗體片段來源之完全抗體的目標分子結合特異性。一般而言，VL 或VH 序列之羧基末端藉由此類肽連接子與互補VL 及VH 序列之胺基酸末端共價連接。單鏈抗體片段可藉由分子選殖、抗體噬菌體呈現文庫或類似技術產生。此等蛋白質可在真核細胞或原核細胞，包括在細菌中產生。
單鏈抗體片段包含具有本說明書中所描述之完全抗體之可變區或CDR中之至少一個的胺基酸序列，但缺乏該等抗體之恆定結構域中的一些或全部。此等恆定結構域並非抗原結合所需的，但構成完全抗體之結構的主要部分。因此，單鏈抗體片段可克服與使用含有一部分或全部恆定結構域之抗體相關的一些問題。舉例而言，單鏈抗體片段往往在生物分子與重鏈恆定區之間沒有不希望的相互作用，或不具有其他不想要的生物活性。另外，單鏈抗體片段明顯小於完全抗體，且因此可具有比完全抗體更大的毛細管滲透性，從而允許單鏈抗體片段更高效地定位且結合至目標抗原結合位點。另外，抗體片段可在原核細胞中相對大規模地產生，由此促進其產生。此外，單鏈抗體片段相對較小的尺寸使其相較於完全抗體不太可能在接受者中刺激免疫反應。
亦可存在與完全抗體具有相同或相當之結合特徵的抗體片段。此類片段可含有一個或兩個Fab片段或F(ab')2 片段。抗體片段可含有完全抗體之全部六個CDR，不過含有此類區域之少於全部，諸如含有三個、四個或五個CDR之片段亦具有功能。 醫藥組合物
本發明之特徵亦在於含有治療有效量本文所述之蛋白質的醫藥組合物。該組合物可調配用於多種藥物遞送系統。為適當調配，該組合物中亦可包括一或多種生理學上可接受之賦形劑或載劑。適用於本發明中之調配物見於Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Philadelphia, Pa., 第17版, 1985。關於藥物遞送方法之簡短評述，參見例如Langer, Science (1990), 249:1527-1533)。
在一個態樣中，本發明提供一種用於治療癌症患者之BTC或抑制其腫瘤生長之方法中的靜脈內藥物遞送調配物，其包括500 mg-2400 mg蛋白質，該蛋白質包括第一多肽及第二多肽，該第一多肽包括：(a)結合至人類蛋白質計劃性死亡配體1(PD-L1)之抗體的至少重鏈可變區；以及(b)能夠結合轉型生長因子β(TGFβ)之人類轉型生長因子β受體II(TGFβRII)或其片段，第二多肽包括結合PD-L1之抗體的至少輕鏈可變區，且該第一多肽之重鏈及第二多肽之輕鏈當組合時形成結合PD-L1之抗原結合位點。
在某些實施例中，本發明之蛋白質產物包括含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之第二多肽。在某些實施例中，本發明之蛋白質產物包括含SEQ ID NO:35、36及37之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO:38、39及40之胺基酸序列之第二多肽。
在本發明之某些實施例中，該用於治療癌症患者之BTC或抑制其腫瘤生長之方法中的靜脈內藥物遞送調配物可以包括約500 mg至約2400 mg (例如約500 mg至約2300 mg、約500 mg至約2200 mg、約500 mg至約2100 mg、約500 mg至約2000 mg、約500 mg至約1900 mg、約500 mg至約1800 mg、約500 mg至約1700 mg、約500 mg至約1600 mg、約500 mg至約1500 mg、約500 mg至約1400 mg、約500 mg至約1300 mg、約500 mg至約1200 mg、約500 mg至約1100 mg、約500 mg至約1000 mg、約500 mg至約900 mg、約500 mg至約800 mg、約500 mg至約700 mg、約500 mg至約600 mg、約600 mg至2400 mg、約700 mg至2400 mg、約800 mg至2400 mg、約900 mg至2400 mg、約1000 mg至2400 mg、約1100 mg至2400 mg、約1200 mg至2400 mg、約1300 mg至2400 mg、約1400 mg至2400 mg、約1500 mg至2400 mg、約1600 mg至2400 mg、約1700 mg至2400 mg、約1800 mg至2400 mg、約1900 mg至2400 mg、約2000 mg至2400 mg、約2100 mg至2400 mg、約2200 mg至2400 mg、或約2300 mg至2400 mg)劑量本發明之蛋白質(例如抗PD-L1/TGFβ誘捕分子(例如包括含SEQ ID NO:3之胺基酸序列的第一多肽及含SEQ ID NO:1之胺基酸序列的第二多肽))。在某些實施例中，該靜脈內藥物遞送調配物可包括約500至約2000 mg劑量本發明之蛋白質(例如抗PD-L1/TGFβ誘捕分子(例如包括含SEQ ID NO:3之胺基酸序列的第一多肽及含SEQ ID NO:1之胺基酸序列的第二多肽))。在某些實施例中，該靜脈內藥物遞送調配物可包括約500 mg劑量之本發明之蛋白質產物，該蛋白質產物具有包括SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之第一多肽及包括SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之第二多肽。在某些實施例中，該靜脈內藥物遞送調配物可包括500 mg劑量之本發明之蛋白質(例如抗PD-L1/TGFβ誘捕分子(例如包括含SEQ ID NO:3之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO:1之胺基酸序列之第二多肽))。在某些實施例中，該靜脈內藥物遞送調配物可包括約1200 mg劑量之本發明之蛋白質產物，該蛋白質產物具有包括SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之第一多肽及包括SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之第二多肽。在某些實施例中，該靜脈內藥物遞送調配物可包括1200 mg劑量之本發明之蛋白質(例如抗PD-L1/TGFβ誘捕分子(例如包括含SEQ ID NO:3之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO:1之胺基酸序列之第二多肽))。在某些實施例中，該靜脈內藥物遞送調配物可包括約1800 mg劑量之本發明之蛋白質產物，該蛋白質產物具有包括SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之第一多肽及包括SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之第二多肽。在某些實施例中，該靜脈內藥物遞送調配物可包括1800 mg劑量之本發明之蛋白質(例如抗PD-L1/TGFβ誘捕分子(例如包括含SEQ ID NO:3之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO:1之胺基酸序列之第二多肽))。在某些實施例中，該靜脈內藥物遞送調配物可包括1800 mg劑量之本發明之蛋白質(例如抗PD-L1/TGFβ誘捕分子(例如包括含SEQ ID NO: 35、36及37之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO: 38、39及40之胺基酸序列之第二多肽))。在某些實施例中，該靜脈內藥物遞送調配物可包括約2400 mg劑量之本發明之蛋白質產物，該蛋白質產物具有包括SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之第一多肽及包括SEQ ID NO: 1之胺基酸序列之第二多肽。在某些實施例中，該靜脈內藥物遞送調配物可包括2400 mg劑量之本發明之蛋白質(例如抗PD-L1/TGFβ誘捕分子(例如包括含SEQ ID NO:3之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO:1之胺基酸序列之第二多肽))。在某些實施例中，該靜脈內藥物遞送調配物可包括2400 mg劑量之本發明之蛋白質(例如抗PD-L1/TGFβ誘捕分子(例如包括含SEQ ID NO: 35、36及37之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO: 38、39及40之胺基酸序列之第二多肽))。
在某些實施例中，該用於治療癌症患者之BTC或抑制其腫瘤生長之方法中的靜脈內藥物遞送調配物可包括約1200 mg至約3000 mg (例如約1200 mg至約3000 mg、約1200 mg至約2900 mg、約1200 mg至約2800 mg、約1200 mg至約2700 mg、約1200 mg至約2600 mg、約1200 mg至約2500 mg、約1200 mg至約2400 mg、約1200 mg至約2300 mg、約1200 mg至約2200 mg、約1200 mg至約2100 mg、約1200 mg至約2000 mg、約1200 mg至約1900 mg、約1200 mg至約1800 mg、約1200 mg至約1700 mg、約1200 mg至約1600 mg、約1200 mg至約1500 mg、約1200 mg至約1400 mg、約1200 mg至約1300 mg、約1300 mg至約3000 mg、約1400 mg至約3000 mg、約1500 mg至約3000 mg、約1600 mg至約3000 mg、約1700 mg至約3000 mg、約1800 mg至約3000 mg、約1900 mg至約3000 mg、約2000 mg至約3000 mg、約2100 mg至約3000 mg、約2200 mg至約3000 mg、約2300 mg至約3000 mg、約2400 mg至約3000 mg、約2500 mg至約3000 mg、約2600 mg至約3000 mg、約2700 mg至約3000 mg、約2800 mg至約3000 mg、約2900 mg至約3000 mg、約1200 mg、約1300 mg、約1400 mg、約1500 mg、約1600 mg、約1700 mg、約1800 mg、約1900 mg、約2000 mg、約2100 mg、約2200 mg、約2300 mg、約2400 mg、約2500 mg、約2600 mg、約2700 mg、約2800 mg、約2900 mg或約3000 mg)本發明之蛋白質產物(例如抗PD-L1/TGFβ誘捕分子)。在某些實施例中，該用於治療癌症患者之BTC或抑制其腫瘤生長之方法中的靜脈內藥物遞送調配物可包括約1200 mg至約3000 mg(例如約1200 mg至約3000 mg、約1200 mg至約2900 mg、約1200 mg至約2800 mg、約1200 mg至約2700 mg、約1200 mg至約2600 mg、約1200 mg至約2500 mg、約1200 mg至約2400 mg、約1200 mg至約2300 mg、約1200 mg至約2200 mg、約1200 mg至約2100 mg、約1200 mg至約2000 mg、約1200 mg至約1900 mg、約1200 mg至約1800 mg、約1200 mg至約1700 mg、約1200 mg至約1600 mg、約1200 mg至約1500 mg、約1200 mg至約1400 mg、約1200 mg至約1300 mg、約1300 mg至約3000 mg、約1400 mg至約3000 mg、約1500 mg至約3000 mg、約1600 mg至約3000 mg、約1700 mg至約3000 mg、約1800 mg至約3000 mg、約1900 mg至約3000 mg、約2000 mg至約3000 mg、約2100 mg至約3000 mg、約2200 mg至約3000 mg、約2300 mg至約3000 mg、約2400 mg至約3000 mg、約2500 mg至約3000 mg、約2600 mg至約3000 mg、約2700 mg至約3000 mg、約2800 mg至約3000 mg、約2900 mg至約3000 mg、約1200 mg、約1300 mg、約1400 mg、約1500 mg、約1600 mg、約1700 mg、約1800 mg、約1900 mg、約2000 mg、約2100 mg、約2200 mg、約2300 mg、約2400 mg、約2500 mg、約2600 mg、約2700 mg、約2800 mg、約2900 mg或約3000 mg)具有含SEQ ID NO:3之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO:1之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物；或具有含SEQ ID NO:35、36及37之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO:38、39及40之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物。
在某些實施例中，該用於治療癌症患者之BTC或抑制其腫瘤生長之方法中的靜脈內藥物遞送調配物可包括約525 mg、約550 mg、約575 mg、約600 mg、約625 mg、約650 mg、約675 mg、約700 mg、約725 mg、約750 mg、約775 mg、約800 mg、約825 mg、約850 mg、約875 mg、約900 mg、約925 mg、約950 mg、約975 mg、約1000 mg、約1025 mg、約1050 mg、約1075 mg、約1100 mg、約1125 mg、約1150 mg、約1175 mg、約1200 mg、約1225 mg、約1250 mg、約1275 mg、約1300 mg、約1325 mg、約1350 mg、約1375 mg、約1400 mg、約1425 mg、約1450 mg、約1475 mg、約1500 mg、約1525 mg、約1550 mg、約1575 mg、約1600 mg、約1625 mg、約1650 mg、約1675 mg、約1700 mg、約1725 mg、約1750 mg、約1775 mg、約1800 mg、約1825 mg、約1850 mg、約1875 mg、約1900 mg、約1925 mg、約1950 mg、約1975 mg、約2000 mg、約2025 mg、約2050 mg、約2075 mg、約2100 mg、約2125 mg、約2150 mg、約2175 mg、約2200 mg、約2225 mg、約2250 mg、約2275 mg、約2300 mg、約2325 mg、約2350 mg、約2375 mg或約2400 mg本發明之蛋白質(例如抗PD-L1/TGFβ誘捕分子，其包括含SEQ ID NO:35、36及37之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO:38、39及40之胺基酸序列之第二多肽)。
用於治療癌症患者之BTC或抑制其腫瘤生長之方法中的本發明之靜脈內藥物遞送調配物可包含在袋子、筆或注射器中。在某些實施例中，袋子可連接至包含管及/或針之通道。在某些實施例中，調配物可為凍乾調配物或液體調配物。在某些實施例中，調配物可經冷凍乾燥(凍乾)且包含在約12-60個小瓶中。在某些實施例中，調配物可經冷凍乾燥且可在一個小瓶中含有約45 mg冷凍乾燥之調配物。在某些實施例中，在一個小瓶中可含有約40 mg至約100 mg冷凍乾燥之調配物。在某些實施例中，將來自12、27或45個小瓶的冷凍乾燥之調配物合併以在靜脈內藥物調配物中獲得治療劑量之該蛋白質。在某些實施例中，調配物可為具有含SEQ ID NO:3之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO:1之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物；或具有含SEQ ID NO:35、36及37之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO:38、39及40之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物之液體配製物，且以約250毫克/小瓶至約2000毫克/小瓶(例如約250毫克/小瓶至約2000毫克/小瓶、約250毫克/小瓶至約1900毫克/小瓶、約250毫克/小瓶至約1800毫克/小瓶、約250毫克/小瓶至約1700毫克/小瓶、約250毫克/小瓶至約1600毫克/小瓶、約250毫克/小瓶至約1500毫克/小瓶、約250毫克/小瓶至約1400毫克/小瓶、約250毫克/小瓶至約1300毫克/小瓶、約250毫克/小瓶至約1200毫克/小瓶、約250毫克/小瓶至約1100毫克/小瓶、約250毫克/小瓶至約1000毫克/小瓶、約250毫克/小瓶至約900毫克/小瓶、約250毫克/小瓶至約800毫克/小瓶、約250毫克/小瓶至約700毫克/小瓶、約250毫克/小瓶至約600毫克/小瓶、約250毫克/小瓶至約500毫克/小瓶、約250毫克/小瓶至約400毫克/小瓶、約250毫克/小瓶至約300毫克/小瓶、約300毫克/小瓶至約2000毫克/小瓶、約400毫克/小瓶至約2000毫克/小瓶、約500毫克/小瓶至約2000毫克/小瓶、約600毫克/小瓶至約2000毫克/小瓶、約700毫克/小瓶至約2000毫克/小瓶、約800毫克/小瓶至約2000毫克/小瓶、約900毫克/小瓶至約2000毫克/小瓶、約1000毫克/小瓶至約2000毫克/小瓶、約1100毫克/小瓶至約2000毫克/小瓶、約1200毫克/小瓶至約2000毫克/小瓶、約1300毫克/小瓶至約2000毫克/小瓶、約1400毫克/小瓶至約2000毫克/小瓶、約1500毫克/小瓶至約2000毫克/小瓶、約1600毫克/小瓶至約2000毫克/小瓶、約1700毫克/小瓶至約2000毫克/小瓶、約1800毫克/小瓶至約2000毫克/小瓶、或約1900毫克/小瓶至約2000毫克/小瓶)儲存。在某些實施例中，該調配物可為液體調配物且以約600毫克/小瓶儲存。在某些實施例中，該調配物可為液體調配物且以約1200毫克/小瓶儲存。在某些實施例中，該調配物可為液體調配物且以約1800毫克/小瓶儲存。在某些實施例中，該調配物可為液體調配物且以約2400毫克/小瓶儲存。在某些實施例中，該調配物可為液體調配物且以約250毫克/小瓶儲存。
本發明提供一種液體水性醫藥調配物，其在緩衝溶液中包括治療有效量的本發明之蛋白質(例如抗PD-L1/TGFβ誘捕分子)，形成用於治療癌症患者之BTC或抑制其腫瘤生長之方法中的調配物。
用於治療癌症患者之BTC或抑制其腫瘤生長之方法中的此等組合物可藉由習知滅菌技術滅菌，或可經無菌過濾。所得水溶液可經包裝以按原樣使用，或經凍乾，凍乾製劑在投與之前與無菌水性載劑組合。該等製劑之pH值通常在3與11之間，更佳地在5與9之間或在6與8之間，且最佳地在7與8之間，諸如為7至7.5。所得呈固體形式之組合物可包裝於多個單次劑量單元中，各單元含有固定量的一或多種以上提及之藥劑。呈固體形式之組合物亦可以靈活數量包裝於容器中。
在某些實施例中，本發明提供用於治療癌症患者之BTC或抑制其腫瘤生長之方法中的具有較長保存期限之調配物，該調配物包括本發明之蛋白質(例如抗PD-L1/TGFβ誘捕分子(例如包括含SEQ ID NO:3之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO:1之胺基酸序列之第二多肽))與甘露糖醇、單水合檸檬酸、檸檬酸鈉、二水合磷酸二鈉、二水合磷酸二氫鈉、氯化鈉、聚山梨醇酯80、水及氫氧化鈉的組合。
在某些實施例中，製備出用於治療癌症患者之BTC或抑制其腫瘤生長之方法中的水性調配物，其包括在pH緩衝溶液中的本發明之蛋白質(例如抗PD-L1/TGFβ誘捕分子(例如包括含SEQ ID NO:3之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO:1之胺基酸序列之第二多肽；或具有含SEQ ID NO:35、36及37之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO:38、39及40之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物)。本發明之緩衝液的pH值範圍可為約4至約8，例如為約4至約8、約4.5至約8、約5至約8、約5.5至約8、約6至約8、約6.5至約8、約7至約8、約7.5至約8、約4至約7.5、約4.5至約7.5、約5至約7.5、約5.5至約7.5、約6至約7.5、約6.5至約7.5、約4至約7、約4.5至約7、約5至約7、約5.5至約7、約6至約7、約4至約6.5、約4.5至約6.5、約5至約6.5、約5.5至約6.5、約4至約6.0、約4.5至約6.0、約5至約6、或約4.8至約5.5，或其pH值可為約5.0至約5.2。預期在上述pH值中間之範圍亦為本發明之一部分。舉例而言，希望包括使用任何上述值之組合作為上限及/或下限之值範圍。將pH值控制在此範圍內的緩衝液之實例包括乙酸鹽(例如乙酸鈉)、琥珀酸鹽(諸如琥珀酸鈉)、葡糖酸鹽、組胺酸、檸檬酸鹽及其他有機酸緩衝液。
在某些實施例中，用於治療癌症患者之BTC或抑制其腫瘤生長之方法中的調配物包括緩衝系統，其含有檸檬酸鹽及磷酸鹽，以將pH值維持在約4至約8之範圍內。在某些實施例中，pH值範圍可為約4.5至約6.0，或約pH 4.8至約5.5，或在約5.0至約5.2之pH值範圍內。在某些實施例中，該緩衝系統包括單水合檸檬酸、檸檬酸鈉、二水合磷酸二鈉及/或二水合磷酸二氫鈉。在某些實施例中，該緩衝系統包括約1.3 mg/ml檸檬酸(例如1.305 mg/ml)、約0.3 mg/ml檸檬酸鈉(例如0.305 mg/ml)、約1.5 mg/ml二水合磷酸二鈉(例如1.53 mg/ml)、約0.9 mg/ml二水合磷酸二氫鈉(例如0.86)及約6.2 mg/ml氯化鈉(例如6.165 mg/ml)。在某些實施例中，該緩衝系統包括約1-1.5 mg/ml檸檬酸、約0.25至約0.5 mg/ml檸檬酸鈉、約1.25至約1.75 mg/ml二水合磷酸二鈉、約0.7至約1.1 mg/ml二水合磷酸二氫鈉及6.0至6.4 mg/ml氯化鈉。在某些實施例中，調配物之pH值係用氫氧化鈉調整。
調配物中亦可包括充當張力劑且可以使抗體穩定的多元醇。添加至調配物中的多元醇之量可根據調配物之所需等滲性而改變。在某些實施例中，水性調配物可具有等滲性。多元醇之添加量亦可根據多元醇之分子量而改變。舉例而言，相較於二醣(諸如海藻糖)，可添加較低量之單醣(例如甘露糖醇)。在某些實施例中，可作為張力劑用於調配物中之多元醇係甘露糖醇。在某些實施例中，甘露糖醇之濃度可為約5至約20 mg/ml。在某些實施例中，甘露糖醇之濃度可為約7.5至約15 mg/ml。在某些實施例中，甘露糖醇之濃度可為約10至約14 mg/ml。在某些實施例中，甘露糖醇之濃度可為12 mg/ml。在某些實施例中，調配物中可以包括多元醇山梨糖醇。
亦可將清潔劑或界面活性劑添加至調配物中。例示性清潔劑包括非離子型清潔劑，諸如聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20、80等)或泊洛沙姆(poloxamers)(例如泊洛沙姆188)。清潔劑之添加量係使得其減少所調配之抗體聚集且/或使在調配物中微粒之形成減到最少及/或減少吸附。在某些實施例中，調配物可以包括界面活性劑聚山梨醇酯。在某些實施例中，調配物可以含有清潔劑聚山梨醇酯80或Tween 80。Tween 80係用於描述聚氧化乙烯(20)脫水山梨糖醇單油酸酯的術語(參見Fiedler, Lexikon der Hilfsstoffe, Editio Cantor Verlag Aulendorf, 第4版, 1996)。在某些實施例中，調配物可以含有在約0.1 mg/mL與約10 mg/mL之間，或在約0.5 mg/mL與約5 mg/mL之間的聚山梨醇酯80。在某些實施例中，調配物中可添加約0.1%聚山梨醇酯80。 凍乾調配物
用於本發明的治療癌症患者之BTC或抑制其腫瘤生長之方法中的凍乾調配物包括抗PD-L1/TGFβ誘捕分子及凍乾保護劑。凍乾保護劑可為糖，例如二醣。在某些實施例中，凍乾保護劑可為蔗糖或麥芽糖。凍乾調配物亦可包括緩衝劑、界面活性劑、增積劑及/或防腐劑中之一或多種。
可用於穩定凍乾藥品的蔗糖或麥芽糖之量可為至少1:2重量比之蛋白質比蔗糖或麥芽糖。在某些實施例中，蛋白質與蔗糖或麥芽糖之重量比可為1:2至1:5。
在某些實施例中，調配物在凍乾之前的pH可藉由添加醫藥學上可接受之酸及/或鹼來設定。在某些實施例中，醫藥學上可接受之酸可為鹽酸。在某些實施例中，醫藥學上可接受之鹼可為氫氧化鈉。
在凍乾之前，含有本發明之蛋白質之溶液的pH值可在約6至約8之間調整。在某些實施例中，凍乾藥品之pH值範圍可為約7至約8。
在某些實施例中，鹽或緩衝劑組分可以約10 mM至約200 mM之量添加。鹽及/或緩衝劑係醫藥學上可接受的，且衍生自多種已知酸(無機及有機酸)與「成鹼」金屬或胺。在某些實施例中，緩衝劑可為磷酸鹽緩衝劑。在某些實施例中，緩衝劑可為甘胺酸鹽、碳酸鹽、檸檬酸鹽緩衝劑，在此情況下，鈉、鉀或銨離子可充當抗衡離子。
在某些實施例中，可以添加「增積劑」。「增積劑」係使凍乾混合物的質量增加且促成凍乾塊之物理結構(例如有助於製造維持開放式孔隙結構的基本上均一之凍乾塊)的一種化合物。說明性增積劑包括甘露糖醇、甘胺酸、聚乙二醇及山梨糖醇。本發明之凍乾調配物可含有此類增積劑。
防腐劑可視情況添加至本文中之調配物中以減少細菌作用。防腐劑之添加可例如有助於製造多次使用之(多劑量)調配物。
在某些實施例中，用於治療癌症患者之BTC或抑制其腫瘤生長之方法中的凍乾藥品可以用水性載劑復原。本文所關注之水性載劑係醫藥學上可接受(例如對於投與人類而言為安全且無毒的)且可用於在凍乾之後製備液體調配物的水性載劑。說明性稀釋劑包括無菌注射用水(SWFI)、抑菌注射用水(BWFI)、pH緩衝溶液(例如磷酸鹽緩衝生理食鹽水)、無菌生理食鹽水溶液、林格氏溶液(Ringer's solution)或右旋糖溶液。
在某些實施例中，本發明之凍乾藥品係用USP級無菌注射用水(SWFI)或USP級0.9%氯化鈉注射液復原。在復原期間，將凍乾粉末溶解成溶液。
在某些實施例中，本發明之凍乾蛋白質產物用約4.5 mL注射用水復原且用0.9%生理食鹽水溶液(氯化鈉溶液)稀釋。 液體調配物
在實施例中，本發明之蛋白質產物係調配為液體調配物形式以用於治療癌症患者之BTC或抑制其腫瘤生長之方法中。液體調配物可以10 mg/mL濃度提供於USP/Ph Eur I型50R小瓶中，用橡膠塞封閉且用鋁褶密封蓋密封。該橡膠塞可由符合USP及Ph Eur之彈性體製成。在某些實施例中，小瓶可填充約61.2 mL蛋白質產物溶液以便達到60 mL之可萃取體積。在某些實施例中，液體調配物可用0.9%生理食鹽水溶液稀釋。在某些實施例中，小瓶可以含有約61.2 mL的約20 mg/mL至約50 mg/mL(例如約20 mg/mL、約25 mg/mL、約30 mg/mL、約35 mg/mL、約40 mg/mL、約45 mg/mL或約50 mg/mL)之蛋白質產物(例如抗PD-L1/TGFβ誘捕分子(例如包括含SEQ ID NO:3之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO:1之胺基酸序列之第二多肽))溶液以便允許60 mL之可萃取體積向個體遞送約1200 mg至約3000 mg(例如約1200 mg至約3000 mg、約1200 mg至約2900 mg、約1200 mg至約2800 mg、約1200 mg至約2700 mg、約1200 mg至約2600 mg、約1200 mg至約2500 mg、約1200 mg至約2400 mg、約1200 mg至約2300 mg、約1200 mg至約2200 mg、約1200 mg至約2100 mg、約1200 mg至約2000 mg、約1200 mg至約1900 mg、約1200 mg至約1800 mg、約1200 mg至約1700 mg、約1200 mg至約1600 mg、約1200 mg至約1500 mg、約1200 mg至約1400 mg、約1200 mg至約1300 mg、約1300 mg至約3000 mg、約1400 mg至約3000 mg、約1500 mg至約3000 mg、約1600 mg至約3000 mg、約1700 mg至約3000 mg、約1800 mg至約3000 mg、約1900 mg至約3000 mg、約2000 mg至約3000 mg、約2100 mg至約3000 mg、約2200 mg至約3000 mg、約2300 mg至約3000 mg、約2400 mg至約3000 mg、約2500 mg至約3000 mg、約2600 mg至約3000 mg、約2700 mg至約3000 mg、約2800 mg至約3000 mg、約2900 mg至約3000 mg、約1200 mg、約1300 mg、約1400 mg、約1500 mg、約1600 mg、約1700 mg、約1800 mg、約1900 mg、約2000 mg、約2100 mg、約2200 mg、約2300 mg、約2400 mg、約2500 mg、約2600 mg、約2700 mg、約2800 mg、約2900 mg或約3000 mg)蛋白質產物(例如抗PD-L1/TGFβ誘捕分子(例如包括含SEQ ID NO:3之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO:1之胺基酸序列之第二多肽；或具有含SEQ ID NO:35、36及37之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO:38、39及40之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物))。
在某些實施例中，小瓶可以含有約61.2 mL的約20 mg/mL至約50 mg/mL(例如約20 mg/mL、約25 mg/mL、約30 mg/mL、約35 mg/mL、約40 mg/mL、約45 mg/mL或約50 mg/mL)之蛋白質產物溶液(具有含SEQ ID NO:3之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO:1之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物；或具有含SEQ ID NO:35、36及37之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO:38、39及40之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物)以便允許60 mL之可萃取體積向個體遞送約1200 mg至約3000 mg(例如約1200 mg至約3000 mg、約1200 mg至約2900 mg、約1200 mg至約2800 mg、約1200 mg至約2700 mg、約1200 mg至約2600 mg、約1200 mg至約2500 mg、約1200 mg至約2400 mg、約1200 mg至約2300 mg、約1200 mg至約2200 mg、約1200 mg至約2100 mg、約1200 mg至約2000 mg、約1200 mg至約1900 mg、約1200 mg至約1800 mg、約1200 mg至約1700 mg、約1200 mg至約1600 mg、約1200 mg至約1500 mg、約1200 mg至約1400 mg、約1200 mg至約1300 mg、約1300 mg至約3000 mg、約1400 mg至約3000 mg、約1500 mg至約3000 mg、約1600 mg至約3000 mg、約1700 mg至約3000 mg、約1800 mg至約3000 mg、約1900 mg至約3000 mg、約2000 mg至約3000 mg、約2100 mg至約3000 mg、約2200 mg至約3000 mg、約2300 mg至約3000 mg、約2400 mg至約3000 mg、約2500 mg至約3000 mg、約2600 mg至約3000 mg、約2700 mg至約3000 mg、約2800 mg至約3000 mg、約2900 mg至約3000 mg、約1200 mg、約1300 mg、約1400 mg、約1500 mg、約1600 mg、約1700 mg、約1800 mg、約1900 mg、約2000 mg、約2100 mg、約2200 mg、約2300 mg、約2400 mg、約2500 mg、約2600 mg、約2700 mg、約2800 mg、約2900 mg或約3000 mg)蛋白質產物。
在某些實施例中，用於本發明的治療癌症患者之BTC或抑制其腫瘤生長之方法中的液體調配物可製備為與穩定水準之糖組合之10 mg/mL濃度溶液形式。在某些實施例中，液體調配物可以在水性載劑中製備。在某些實施例中，穩定劑之添加量可不超過可能引起靜脈內投藥不合意或不適合之黏度的量。在某些實施例中，糖可為二醣，例如蔗糖。在某些實施例中，液體調配物亦可包括緩衝劑、界面活性劑及防腐劑中之一或多種。
在某些實施例中，液體調配物之pH值可藉由添加醫藥學上可接受之酸及/或鹼設定。在某些實施例中，醫藥學上可接受之酸可為鹽酸。在某些實施例中，鹼可為氫氧化鈉。
除聚集之外，脫醯胺係在醱酵、收集/細胞澄清、純化、藥物物質/藥品儲存期間及在樣品分析期間可能產生的肽及蛋白質之常見產物變異體。脫醯胺係蛋白質損失NH3 ，形成可經歷水解之琥珀醯亞胺中間物。琥珀醯亞胺中間物使親本肽減少17 u質量。隨後的水解引起18 u質量增加。琥珀醯亞胺中間物因在水性條件下不穩定而難以分離。因此，脫醯胺通常可以1 u質量增加偵測。天冬醯胺脫醯胺產生天冬胺酸或異天冬胺酸。影響脫醯胺速率之參數包括pH、溫度、溶劑介電常數、離子強度、一級序列、局部多肽構形及三級結構。與肽鏈中之Asn相鄰之胺基酸殘基影響脫醯胺速率。蛋白質序列中在Asn之後的Gly及Ser使得更易於脫醯胺。
在某些實施例中，用於本發明的治療癌症患者之BTC或抑制其腫瘤生長之方法中的液體配製物可以在防止蛋白質產物脫醯胺之pH及濕度條件下保存。
本文所關注之水性載劑係醫藥學上可接受(對於投與人類而言為安全且無毒的)且可用於製備液體調配物的水性載劑。說明性載劑包括無菌注射用水(SWFI)、抑菌注射用水(BWFI)、pH緩衝溶液(例如磷酸鹽緩衝生理食鹽水)、無菌生理食鹽水溶液、林格氏溶液或右旋糖溶液。
防腐劑可視情況添加至本文中之調配物中以減少細菌作用。防腐劑之添加可例如有助於製造多次使用之(多劑量)調配物。
在特定情況下，諸如當患者移植之後在醫院經由靜脈內(IV)途徑接受所有藥物時，IV調配物可為較佳投與途徑。在某些實施例中，液體調配物在投與之前用0.9%氯化鈉溶液稀釋。在某些實施例中，供注射的經稀釋藥品具有等滲性且適合於藉由靜脈內輸注來投與。
在某些實施例中，鹽或緩衝劑組分之添加量可為10 mM-200 mM。鹽及/或緩衝劑係醫藥學上可接受的，且衍生自多種已知酸(無機及有機酸)與「成鹼」金屬或胺。在某些實施例中，緩衝劑可為磷酸鹽緩衝劑。在某些實施例中，緩衝劑可為甘胺酸鹽、碳酸鹽、檸檬酸鹽緩衝劑，在此情況下，鈉、鉀或銨離子可充當抗衡離子。
防腐劑可視情況添加至本文中之調配物中以減少細菌作用。防腐劑之添加可例如有助於製造多次使用之(多劑量)調配物。
本文所關注之水性載劑係醫藥學上可接受(對於投與人類而言為安全且無毒的)且可用於製備液體調配物的水性載劑。說明性稀釋劑包括無菌注射用水(SWFI)、抑菌注射用水(BWFI)、pH緩衝溶液(例如磷酸鹽緩衝生理食鹽水)、無菌生理食鹽水溶液、林格氏溶液或右旋糖溶液。
防腐劑可視情況添加至本文中之調配物中以減少細菌作用。防腐劑之添加可例如有助於製造多次使用之(多劑量)調配物。治療癌症或抑制腫瘤生長之方法
在一個態樣中，本發明提供一種治療有需要個體之BTC或抑制其腫瘤生長的方法，該方法包括向該個體投與至少500 mg劑量的包括第一多肽及第二多肽之蛋白質。第一多肽包括：(a)結合至人類蛋白質計劃性死亡配體1 (PD-L1)之抗體的至少重鏈可變區；以及(b)能夠結合轉型生長因子β (TGFβ)之人類轉型生長因子β受體II (TGFβRII)或其片段。第二多肽包括結合PD-L1之抗體之至少輕鏈可變區，且第一多肽之重鏈與第二多肽之輕鏈在組合時形成結合PD-L1之抗原結合位點。
在某些實施例中，本發明的治療BTC或抑制腫瘤生長之方法涉及向個體投與包括兩種肽之蛋白質，其中第一多肽包括SEQ ID NO:3之胺基酸序列且第二多肽包括SEQ ID NO:1之胺基酸序列。在某些實施例中，該蛋白質係抗PD-L1/TGFβ誘捕分子。
在一個實施例中，根據本文所揭示之方法治療的個體未曾接受過用本發明之雙功能蛋白質(抗PD-L1/TGFβ誘捕分子)進行之先前療法。在一個實施例中，根據本文所揭示之方法治療的個體未曾接受過用於治療BTC之先前化學療法或免疫療法。
在另一個實施例中，根據本文所揭示之方法治療的個體已接受先前全身化學療法，但仍經歷腫瘤進展，亦即，先前全身化學療法(例如基於鉑之化學療法)失敗。在另一個實施例中，根據本文所揭示之方法治療的個體對全身化學療法(例如基於鉑之化學療法)不耐受。
在某些實施例中，本發明之治療BTC或抑制腫瘤生長之方法涉及向個體投與約1200 mg至約3000 mg(例如約1200 mg至約3000 mg、約1200 mg至約2900 mg、約1200 mg至約2800 mg、約1200 mg至約2700 mg、約1200 mg至約2600 mg、約1200 mg至約2500 mg、約1200 mg至約2400 mg、約1200 mg至約2300 mg、約1200 mg至約2200 mg、約1200 mg至約2100 mg、約1200 mg至約2000 mg、約1200 mg至約1900 mg、約1200 mg至約1800 mg、約1200 mg至約1700 mg、約1200 mg至約1600 mg、約1200 mg至約1500 mg、約1200 mg至約1400 mg、約1200 mg至約1300 mg、約1300 mg至約3000 mg、約1400 mg至約3000 mg、約1500 mg至約3000 mg、約1600 mg至約3000 mg、約1700 mg至約3000 mg、約1800 mg至約3000 mg、約1900 mg至約3000 mg、約2000 mg至約3000 mg、約2100 mg至約3000 mg、約2200 mg至約3000 mg、約2300 mg至約3000 mg、約2400 mg至約3000 mg、約2500 mg至約3000 mg、約2600 mg至約3000 mg、約2700 mg至約3000 mg、約2800 mg至約3000 mg、約2900 mg至約3000 mg、約1200 mg、約1300 mg、約1400 mg、約1500 mg、約1600 mg、約1700 mg、約1800 mg、約1900 mg、約2000 mg、約2100 mg、約2200 mg、約2300 mg、約2400 mg、約2500 mg、約2600 mg、約2700 mg、約2800 mg、約2900 mg或約3000 mg)劑量的蛋白質(例如抗PD-L1/TGFβ誘捕分子(例如包括含SEQ ID NO:3之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO:1之胺基酸序列之第二多肽；或具有含SEQ ID NO:35、36及37之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO:38、39及40之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物))。在某些實施例中，每兩週一次向個體投與約1200 mg抗PD-L1/TGFβ誘捕分子。在某些實施例中，每三週一次向個體投與約1800 mg抗PD-L1/TGFβ誘捕分子。在某些實施例中，每兩週一次向個體投與約1200 mg具有含SEQ ID NO:3之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO:1之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物。在某些實施例中，每三週一次向個體投與約1800 mg具有含SEQ ID NO:3之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO:1之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物。在某些實施例中，每三週一次向個體投與約1800 mg具有含SEQ ID NO:35、36及37之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO:38、39及40之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物。在某些實施例中，每三週一次向個體投與約2400 mg具有含SEQ ID NO:3之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO:1之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物。在某些實施例中，每三週一次向個體投與約2400 mg具有含SEQ ID NO:35、36及37之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO:38、39及40之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物。
在某些實施例中，投與個體之劑量可為約500 mg、約525 mg、約550 mg、約575 mg、約600 mg、約625 mg、約650 mg、約675 mg、約700 mg、約725 mg、約750 mg、約775 mg、約800 mg、約825 mg、約850 mg、約875 mg、約900 mg、約925 mg、約950 mg、約975 mg、約1000 mg、約1025 mg、約1050 mg、約1075 mg、約1100 mg、約1125 mg、約1150 mg、約1175 mg、約1200 mg、約1225 mg、約1250 mg、約1275 mg、約1300 mg、約1325 mg、約1350 mg、約1375 mg、約1400 mg、約1425 mg、約1450 mg、約1475 mg、約1500 mg、約1525 mg、約1550 mg、約1575 mg、約1600 mg、約1625 mg、約1650 mg、約1675 mg、約1700 mg、約1725 mg、約1750 mg、約1775 mg、約1800 mg、約1825 mg、約1850 mg, 1875 mg、約1900 mg、約1925 mg、約1950 mg、約1975 mg、約2000 mg、約2025 mg、約2050 mg、約2075 mg, 2100 mg、約2125 mg、約2150 mg、約2175 mg、約2200 mg、約2225 mg、約2250 mg、約2275 mg、約2300 mg、約2325 mg、約2350 mg、約2375 mg或約2400 mg。
在某些實施例中，投與個體之劑量可每兩週一次投與。在某些實施例中，投與個體之劑量可每三週一次投與。在某些實施例中，該蛋白質可例如利用預填充袋、預填充筆或預填充注射器，藉由靜脈內投與來投與。在某些實施例中，經靜脈內自250 ml生理食鹽水袋投與該蛋白質，且靜脈內輸注可持續約一小時(例如50至80分鐘)。在某些實施例中，該袋係連接至包含管及/或針之通道。
在一些實施例中，BTC係局部晚期或轉移性。舉例而言，在一個實施例中，該方法治療晚期BTC。在一些實施例中，該方法治療轉移性BTC。BTC之非限制性實例包括膽囊癌(GBC)、膽管癌(CCA)及乏特氏壺腹癌(VAC)。GBC、CCA及VAC可以用本文所揭示之方法治療。
在某些實施例中，患有晚期或轉移性BTC之個體或患者係藉由靜脈內投與約至少500 mg(例如約500 mg、約600 mg、約700 mg、約800 mg、約900 mg、約1000 mg、約1100 mg、約1200 mg、約1300 mg、約1400 mg、約1500 mg、約1600 mg、約1700 mg、約1800 mg、約1900 mg、約2000 mg、約2100 mg、約2200 mg、約2300 mg、約2400 mg或更高)抗PD-L1/TGFβ誘捕分子治療，該抗PD-L1/TGFβ誘捕分子包括含SEQ ID NO:3之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO:1之胺基酸序列之第二多肽。在某些實施例中，患有晚期或轉移性BTC之個體或患者係藉由靜脈內投與約至少500 mg(例如約500 mg、約600 mg、約700 mg、約800 mg、約900 mg、約1000 mg、約1100 mg、約1200 mg、約1300 mg、約1400 mg、約1500 mg、約1600 mg、約1700 mg、約1800 mg、約1900 mg、約2000 mg、約2100 mg、約2200 mg、約2300 mg、約2400 mg或更高)抗PD-L1/TGFβ誘捕分子治療，該抗PD-L1/TGFβ誘捕分子包括含SEQ ID NO:35、36及37之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO:38、39及40之胺基酸序列之第二多肽。在某些實施例中，患有晚期或轉移性BTC之個體或患者係藉由靜脈內投與2400 mg抗PD-L1/TGFβ誘捕分子治療，該抗PD-L1/TGFβ誘捕分子包括含SEQ ID NO:35、36及37之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO:38、39及40之胺基酸序列之第二多肽。
在某些實施例中，患有晚期或轉移性BTC之個體或患者係藉由靜脈內投與約1200 mg至約2400 mg(例如約1200 mg至約2400 mg、約1200 mg至約2300 mg、約1200 mg至約2200 mg、約1200 mg至約2100 mg、約1200 mg至約2000 mg、約1200 mg至約1900 mg、約1200 mg至約1800 mg、約1200 mg至約1700 mg、約1200 mg至約1600 mg、約1200 mg至約1500 mg、約1200 mg至約1400 mg、約1200 mg至約1300 mg、約1300 mg至約2400 mg、約1400 mg至約2400 mg、約1500 mg至約2400 mg、約1600 mg至約2400 mg、約1700 mg至約2400 mg、約1800 mg至約2400 mg、約1900 mg至約2400 mg、約2000 mg至約2400 mg、約2100 mg至約2400 mg、約2200 mg至約2400 mg、或約2300 mg至約2400 mg)抗PD-L1/TGFβ誘捕分子治療，該抗PD-L1/TGFβ誘捕分子包括含SEQ ID NO:3之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO:1之胺基酸序列之第二多肽。在某些實施例中，患有晚期或轉移性BTC之個體或患者係藉由靜脈內投與約1200 mg至約2400 mg(例如約1200 mg至約2400 mg、約1200 mg至約2300 mg、約1200 mg至約2200 mg、約1200 mg至約2100 mg、約1200 mg至約2000 mg、約1200 mg至約1900 mg、約1200 mg至約1800 mg、約1200 mg至約1700 mg、約1200 mg至約1600 mg、約1200 mg至約1500 mg、約1200 mg至約1400 mg、約1200 mg至約1300 mg、約1300 mg至約2400 mg、約1400 mg至約2400 mg、約1500 mg至約2400 mg、約1600 mg至約2400 mg、約1700 mg至約2400 mg、約1800 mg至約2400 mg、約1900 mg至約2400 mg、約2000 mg至約2400 mg、約2100 mg至約2400 mg、約2200 mg至約2400 mg、或約2300 mg至約2400 mg)抗PD-L1/TGFβ誘捕分子治療，該抗PD-L1/TGFβ誘捕分子包括含SEQ ID NO:35、36及37之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO:38、39及40之胺基酸序列之第二多肽。
在一些實施例中，患有晚期或轉移性BTC之個體或患者係藉由每2週一次靜脈內投與約1200 mg劑量之抗PD-L1/TGFβ誘捕分子進行治療。在一些實施例中，患有晚期或轉移性BTC之個體或患者係藉由每3週一次靜脈內投與約1800 mg劑量之抗PD-L1/TGFβ誘捕分子進行治療。在一些實施例中，患有晚期或轉移性BTC之個體或患者係藉由每3週一次靜脈內投與約2400 mg劑量之抗PD-L1/TGFβ誘捕分子進行治療。在一些實施例中，患有晚期或轉移性BTC之個體或患者係藉由每3週一次靜脈內投與2400 mg劑量之抗PD-L1/TGFβ誘捕分子進行治療。
本文涵蓋治療方法，在該等方法中，向初始治療患者投與組合療法(例如抗PD-L1/TGFβ誘捕分子及化學療法)。舉例而言，在一些實施例中，藉由共投與吉西他濱及/或順鉑與抗PD-L1/TGFβ誘捕分子治療初始治療的患有晚期或轉移性BTC之個體或患者。舉例而言，在一些實施例中，藉由共投與吉西他濱及順鉑與抗PD-L1/TGFβ誘捕分子治療初始治療的患有晚期或轉移性BTC之個體或患者。在一些實施例中，藉由共投與吉西他濱與抗PD-L1/TGFβ誘捕分子來治療初始治療的患有晚期或轉移性BTC之個體或患者。在一些實施例中，藉由共投與順鉑與抗PD-L1/TGFβ誘捕分子治療初始治療的患有晚期或轉移性BTC之個體或患者。
在某些實施例中，本發明描述治療方法，在該等方法中，在治療週期期間，在投與該蛋白質(例如本文所描述之抗PD-L1/TGFβ誘捕分子)之同一天(例如第1天)，向初始治療患者投與吉西他濱及順鉑。在某些實施例中，在治療週期之第8天投與吉西他濱及順鉑，而不投與該蛋白質(例如本文所描述之抗PD-L1/TGFβ誘捕分子)。在一些實施例中，在一段時間內(例如24週)重複(例如8個週期)治療(例如在第1天共投與抗PD-L1/TGFβ誘捕分子與吉西他濱及順鉑，隨後在第8天投與吉西他濱及順鉑)，隨後投與單獨蛋白質(例如本文所描述之抗PD-L1/TGFβ誘捕分子)一段時間(例如2年)。在一些實施例中，在24週內重複治療(例如在第1天共投與抗PD-L1/TGFβ誘捕分子與吉西他濱及順鉑，隨後在第8天投與吉西他濱及順鉑)總計八個週期，隨後自25週開始，投與單獨抗PD-L1/TGFβ誘捕分子。
吉西他濱與順鉑之組合被視為用於晚期或轉移性BTC患者之1L化學療法的全球標準護理(NCCN, ESMO指南)。因此，用於投與吉西他濱及順鉑之給藥方案係此項技術中之常規方案且涵蓋於本文中。在一些實施例中，投與約1000 mg/m2 劑量之吉西他濱。在一些實施例中，投與約25 mg/m2 劑量之順鉑。在一些實施例中，用組合療法治療之患者可重複治療。舉例而言，在一些實施例中，每3週在第1天及第8天，投與約1000 mg/m2 劑量之吉西他濱及約25 mg/m2 劑量之順鉑。在一些實施例中，每3週且直至第24週，在第1天及第8天投與約1000 mg/m2 劑量之吉西他濱及約25 mg/m2 劑量之順鉑，隨後每兩週，可選兩週一次投與約1000 mg/m2 劑量之吉西他濱，同時投與或不投與約25 mg/m2 劑量之順鉑。
在某些實施例中，藉由每2週一次靜脈內投與約1200 mg劑量之抗PD-L1/TGFβ誘捕分子，且每3週直至第24週，在第1天及第8天投與1000 mg/m2 劑量之吉西他濱及約25 mg/m2 劑量之順鉑，隨後每2週，可選兩週一次投與約1000 mg/m2 劑量之吉西他濱，同時投與或不投與約25 mg/m2 劑量之順鉑，來治療初始治療的患有晚期或轉移性BTC之個體或患者。在某些實施例中，藉由每3週一次靜脈內投與約1800 mg劑量之抗PD-L1/TGFβ誘捕分子，且每3週直至第24週，在第1天及第8天投與約1000 mg/m2 劑量之吉西他濱及約25 mg/m2 劑量之順鉑，隨後每2週，可選兩週一次投與約1000 mg/m2 劑量之吉西他濱，同時投與或不投與約25 mg/m2 劑量之順鉑，來治療初始治療的患有晚期或轉移性BTC之個體或患者。在某些實施例中，藉由每3週一次在第1天靜脈內共投與約2400 mg劑量之抗PD-L1/TGFβ誘捕分子以及約1000 mg/m2 劑量之吉西他濱及約25 mg/m2 劑量之順鉑；且隨後每3週直至第24週，在第8天靜脈內投與約1000 mg/m2 劑量之吉西他濱及約25 mg/m2 劑量之順鉑，來治療初始治療的患有晚期或轉移性BTC之個體或患者(參見例如圖8及表2)。自第25週至隨後數週(例如約2年)，藉由每三週一次投與2400 mg抗PD-L1/TGFβ誘捕分子繼續治療，但不共投與吉西他濱或順鉑。
在某些實施例中，待治療之BTC(例如晚期BTC、轉移性BTC)呈PD-L1陽性。舉例而言，在某些實施例中，藉由例如Dako PD-L1 73-10 IHC pharmDx分析所測定，待治療之BTC(例如晚期BTC、轉移性BTC)展現≥1%之PD-L1陽性腫瘤細胞。在某些實施例中，待治療之BTC(例如晚期BTC、轉移性BTC)呈PD-L1陰性。待治療之BTC(例如晚期BTC、轉移性BTC)可展現高PD-L1表現(或高PD-L1)。
偵測例如BTC(例如晚期BTC、轉移性BTC)或膽道腫瘤上之生物標記物諸如PD-L1的方法係此項技術中之常規方法且涵蓋於本文中。非限制性實例包括免疫組織化學法、免疫螢光法及螢光活化細胞分選(FACS)。在一些實施例中，藉由靜脈內投與約至少500 mg劑量之抗PD-L1/TGFβ誘捕分子來治療患有PD-L1陽性、晚期或轉移性BTC之個體或患者。在一些實施例中，藉由每2週一次靜脈內投與約1200 mg劑量之抗PD-L1/TGFβ誘捕分子來治療患有PD-L1陽性、晚期或轉移性BTC之個體或患者。在一些實施例中，藉由每3週一次靜脈內投與約2400 mg劑量之抗PD-L1/TGFβ誘捕分子來治療患有PD-L1陽性、晚期或轉移性BTC之個體或患者。
在一些實施例中，本文所揭示之治療方法引起個體或患者之疾病反應或改善之存活期。在一些實施例中，例如，疾病反應可為完全反應、部分反應或穩定疾病。在一些實施例中，例如，改善之存活期可為無進行存活期(PFS)或總體存活期。在一些實施例中，改善(例如PFS之改善)係相對於開始用本發明之抗PD-L1/TGFβ誘捕分子治療前之時段測定。測定BTC(例如晚期BTC、轉移性BTC)或膽道腫瘤療法之疾病反應(例如完全反應、部分反應或穩定疾病)及患者存活期(例如PFS、總體存活期)之方法係此項技術中之常規方法且涵蓋於本文中。在一些實施例中，疾病反應係在對經治療患者之患病區域(例如覆蓋自胸廓入口較大範圍至恥骨聯合之區域的胸部/腹部及骨盆)進行造影劑增強型電腦斷層攝影(CT)或磁共振成像(MRI)之後根據RECIST 1.1評價。遞送裝置
在一個態樣中，本發明提供一種用於治療癌症患者之BTC(例如晚期BTC、轉移性BTC)或抑制其膽道腫瘤生長之方法中的藥物遞送裝置，其中該裝置包括含約500 mg至約3000 mg蛋白質之調配物，該蛋白質包括第一多肽及第二多肽，該第一多肽包括：(a)結合至人類蛋白質計劃性死亡配體1(PD-L1)之抗體之至少重鏈可變區；以及(b)能夠結合轉型生長因子β(TGFβ)之人類轉型生長因子β受體II(TGFβRII)或其片段，該第二多肽包括結合PD-L1之抗體之至少輕鏈可變區，且該第一多肽之重鏈與該第二多肽之輕鏈當組合時形成結合PD-L1之抗原結合位點。
在某些實施例中，該裝置可為袋子、筆或注射器。在某些實施例中，該袋子可連接至包含管及/或針之通道。
在本發明之某些實施例中，用於治療癌症患者之BTC(例如晚期BTC、轉移性BTC)或抑制其膽道腫瘤生長之方法中的藥物遞送裝置可以包括約500 mg至約3000 mg(例如約500 mg至約3000 mg、約500 mg至約2900 mg、約500 mg至約2800 mg、約500 mg至約2700 mg、約500 mg至約2600 mg、約500 mg至約2500 mg、約500 mg至約2400 mg、約500 mg至約2300 mg、約500 mg至約2200 mg、約500 mg至約2100 mg、約500 mg至約2000 mg、約500 mg至約1900 mg、約500 mg至約1800 mg、約500 mg至約1700 mg、約500 mg至約1600 mg、約500 mg至約1500 mg、約500 mg至約1400 mg、約500 mg至約1300 mg、約500 mg至約1200 mg、約500 mg至約1100 mg、約500 mg至約1000 mg、約500 mg至約900 mg、約500 mg至約800 mg、約500 mg至約700 mg、約500 mg至約600 mg、約600 mg至約3000 mg、約700 mg至約3000 mg、約800 mg至約3000 mg、約900 mg至約3000 mg、約1000 mg至約3000 mg、約1100 mg至約3000 mg、約1200 mg至約3000 mg、約1300 mg至約3000 mg、約1400 mg至約3000 mg、約1500 mg至約3000 mg、約1600 mg至約3000 mg、約1700 mg至約3000 mg、約1800 mg至約3000 mg、約1900 mg至約3000 mg、約2000 mg至約3000 mg、約2100 mg至約3000 mg、約2200 mg至約3000 mg、約2300 mg至約3000 mg、約2400 mg至約3000 mg、約2500 mg至約3000 mg、約2600 mg至約3000 mg、約2700 mg至約3000 mg、約2800 mg至約3000 mg、或約2900 mg至約3000 mg)本發明之蛋白質(例如抗PD-L1/TGFβ誘捕分子，其包括含SEQ ID NO:3之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO:1之胺基酸序列之第二多肽；或具有含SEQ ID NO:35、36及37之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO:38、39及40之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物)。在某些實施例中，該藥物遞送裝置可包括約500至約1200 mg劑量的本發明之蛋白質(例如抗PD-L1/TGFβ誘捕分子，其包括含SEQ ID NO:3之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO:1之胺基酸序列之第二多肽)。在某些實施例中，該藥物遞送裝置可包括約500 mg劑量的本發明之蛋白質(例如抗PD-L1/TGFβ誘捕分子，其包括含SEQ ID NO:3之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO:1之胺基酸序列之第二多肽；或具有含SEQ ID NO:35、36及37之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO:38、39及40之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物)。
在某些實施例中，藥物遞送裝置包括約1200 mg劑量的本發明之蛋白質(例如抗PD-L1/TGFβ誘捕分子，其包括含SEQ ID NO:3之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO:1之胺基酸序列之第二多肽；或具有含SEQ ID NO:35、36及37之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO:38、39及40之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物)。在某些實施例中，用於治療癌症患者之BTC(例如晚期BTC、轉移性BTC)或抑制其膽道腫瘤生長之方法中的藥物遞送裝置包括約1800 mg劑量的本發明之蛋白質(例如抗PD-L1/TGFβ誘捕分子，其包括含SEQ ID NO:3之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO:1之胺基酸序列之第二多肽；或具有含SEQ ID NO:35、36及37之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO:38、39及40之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物)。在某些實施例中，用於治療癌症患者之BTC(例如晚期BTC、轉移性BTC)或抑制其膽道腫瘤生長之方法中的藥物遞送裝置包括約2400 mg劑量的本發明之蛋白質(例如抗PD-L1/TGFβ誘捕分子，其包括含SEQ ID NO:3之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO:1之胺基酸序列之第二多肽；或具有含SEQ ID NO:35、36及37之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO:38、39及40之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物)。在某些實施例中，用於治療癌症患者之BTC(例如晚期BTC、轉移性BTC)或抑制其膽道腫瘤生長之方法中的藥物遞送裝置包括約1200 mg、約1800 mg或約2400 mg劑量的具有含SEQ ID NO:3之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO:1之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物；或具有含SEQ ID NO:35、36及37之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO:38、39及40之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物。
在某些實施例中，用於治療癌症患者之BTC(例如晚期BTC、轉移性BTC)或抑制其膽道腫瘤生長之方法中的藥物遞送裝置包括約1200 mg劑量的本發明之蛋白質(例如抗PD-L1/TGFβ誘捕分子(例如包括含SEQ ID NO:3之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO:1之胺基酸序列之第二多肽；或具有含SEQ ID NO:35、36及37之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO:38、39及40之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物))。在某些實施例中，用於治療癌症患者之BTC(例如晚期BTC、轉移性BTC)或抑制其膽道腫瘤生長之方法中的藥物遞送裝置包括約1800 mg劑量的本發明之蛋白質(例如抗PD-L1/TGFβ誘捕分子(例如包括含SEQ ID NO:3之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO:1之胺基酸序列之第二多肽；或具有含SEQ ID NO:35、36及37之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO:38、39及40之胺基酸序列之第二多肽的蛋白質產物))。在某些實施例中，該用於治療癌症患者之BTC(例如晚期BTC、轉移性BTC)或抑制其膽道腫瘤生長之方法中的藥物遞送裝置可包括約500 mg、約525 mg、約550 mg、約575 mg、約600 mg、約625 mg、約650 mg、約675 mg、約700 mg、約725 mg、約750 mg、約775 mg、約800 mg、約825 mg、約850 mg、約875 mg、約900 mg、約925 mg、約950 mg、約975 mg、約1000 mg、約1025 mg、約1050 mg、約1075 mg、約1100 mg、約1125 mg、約1150 mg、約1175 mg、約1200 mg、約1225 mg、約1250 mg、約1275 mg、約1300 mg、約1325 mg、約1350 mg、約1375 mg、約1400 mg、約1425 mg、約1450 mg、約1475 mg、約1500 mg、約1525 mg、約1550 mg、約1575 mg、約1600 mg、約1625 mg、約1650 mg、約1675 mg、約1700 mg、約1725 mg、約1750 mg、約1775 mg、約1800 mg、約1825 mg、約1850 mg、約1875 mg、約1900 mg、約1925 mg、約1950 mg、約1975 mg、約2000 mg、約2025 mg、約2050 mg、約2075 mg、約2100 mg、約2125 mg、約2150 mg、約2175 mg、約2200 mg、約2225 mg、約2250 mg、約2275 mg、約2300 mg、約2325 mg、約2350 mg、約2375 mg或約2400 mg本發明之蛋白質(例如抗PD-L1/TGFβ誘捕分子，其包括含SEQ ID NO:35、36及37之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO:38、39及40之胺基酸序列之第二多肽)。 蛋白質產生
抗體-細胞介素誘捕蛋白一般係以重組方式，使用含有經工程改造成表現該蛋白質之核酸的哺乳動物細胞產生。儘管US 20150225483 A1之實例1及2中描述適合細胞株及蛋白質產生方法之一個實例，但已使用多種適合載體、細胞株及蛋白質產生方法產生基於抗體之生物藥劑，且其可用於合成此等抗體-細胞介素誘捕蛋白。 治療適應症
本申請案中所描述之抗PD-L1/TGFβ誘捕蛋白(例如包括含SEQ ID NO:3之胺基酸序列之第一多肽及含SEQ ID NO:1之胺基酸序列之第二多肽)，以及所揭示的包含該等抗PD-L1/TGFβ誘捕蛋白之靜脈內藥物遞送調配物及遞送裝置可用於治療初始治療患者或先前全身化學療法失敗或不耐受之患者的BTC(例如晚期BTC、轉移性BTC)，或減少其膽道腫瘤生長。
在一個特定實施例中，初始治療的患有PD-L1陽性晚期或轉移性BTC之患者係根據本發明之方法治療。在另一個實施例中，先前全身化學療法失敗或不耐受的患有PD-L1陽性晚期或轉移性BTC之患者係根據本發明之方法治療。 實例
參照以下實例將更容易地理解現大體上描述的本發明，該等實例僅出於說明本發明某些態樣及實施例之目的而包括在內，且不意欲以任何方式限制本發明之範圍。 實例1：靜脈內藥物調配物之包裝
將抗PD-L1/TGFβ誘捕分子之調配物製備為凍乾調配物或液體調配物形式。為製備凍乾調配物，對冷凍乾燥之抗PD-L1/TGFβ誘捕分子滅菌且儲存於一次性玻璃小瓶中。接著，將若干此類玻璃小瓶包裝於套組中以向經診斷患有癌症或腫瘤之個體遞送與具體體重無關之劑量。取決於劑量要求，該套組含有12-60個小瓶。或者，將調配物製備成液體調配物形式並包裝，且以250毫克/小瓶至1000毫克/小瓶儲存。舉例而言，該調配物係液體調配物且以600毫克/小瓶儲存或以250毫克/小瓶儲存。在另一實例中，將抗PD-L1/TGFβ誘捕分子調配為10 mg/mL溶液且供應於USP/Ph Eur I型50R小瓶中，填充至60 mL (600 mg/60 mL)之可萃取體積，且遵從USP及Ph Eur，以漿液形式用橡膠塞封閉，並用鋁褶密封蓋密封。
向診斷患有BTC (例如局部晚期或轉移性BTC)之個體靜脈內投與含有500 mg至2400 mg抗PD-L1/TGFβ誘捕分子之調配物。舉例而言，向該個體每兩週一次靜脈內投與1200 mg抗PD-L1/TGFβ誘捕分子或每三週一次靜脈內投與1800 mg抗PD-L1/TGFβ誘捕分子。靜脈內投與係自生理食鹽水袋進行。投與個體之抗PD-L1/TGFβ誘捕分子之量與個體之體重無關。實例 2 ： 初始治療之局部晚期或轉移性 BTC 患者組的不依賴於 BW 之 抗 PD - L1 / TGFβ 誘捕分子給藥方案
在一個例示性實施例中，每兩週一次向患有局部晚期或轉移性BTC(包括肝內及肝外膽管癌、膽囊癌及壺腹癌)之癌症患者投與1200 mg不依賴於BW之劑量的抗PD-L1/TGFβ誘捕分子。靜脈內投與持續約一小時(-10分鐘/+20分鐘，亦即，50分鐘至80分鐘)。在一個例示性實施例中，每三週一次向患有局部晚期或轉移性BTC的初始治療之癌症患者投與2400 mg不依賴於BW之劑量的抗PD-L1/TGFβ誘捕分子。靜脈內投與持續約一小時(-10分鐘/+20分鐘，亦即，50分鐘至80分鐘)。在各種實施例中，癌症患者屬於亞裔及/或起源。在各種實施例中，癌症患者不屬於亞裔及/或起源。
為減緩可能的輸注相關反應，在前2次輸注中，在每劑抗PD-L1/TGFβ誘捕分子前約30至60分鐘，投與用抗組胺劑及撲熱息痛(paracetamol)(乙醯胺苯酚(acetaminophen))進行之前驅用藥(例如25-50 mg苯海拉明(diphenhydramine)及500-650 mg撲熱息痛[乙醯胺苯酚] IV或口服等效物)。在第二次輸注之後，可選進行前驅用藥。若在前兩次輸注期間觀察到級別≥2級之輸注反應，則不停止前驅用藥。不容許類固醇作為前驅用藥。
在一個例示性實施例中，除向患有局部晚期或轉移性BTC之癌症患者投與抗PD-L1/TGFβ誘捕分子外，亦每21天(每3週一次)直至第24週，在第1天及第8天靜脈內共投與1000 mg/m2 劑量之吉西他濱及25 mg/m2 劑量之順鉑，持續8個週期。對於組合療法，在給與吉西他濱及順鉑之前，投與抗PD-L1/TGFβ誘捕分子。根據標準實踐，在順鉑輸注期間投與前驅用藥、除類固醇外的鎮吐藥及IV水合液以防止腎毒性。自第25週至隨後數週(例如約2年)，藉由每三週一次投與2400 mg抗PD-L1/TGFβ誘捕分子繼續治療，但不共投與吉西他濱或順鉑。
在隨機化雙盲臨床研究中，評價當投與抗PD-L1/TGFβ誘捕分子與吉西他濱及順鉑之組合且隨後投與抗PD-L1/TGFβ誘捕分子單藥療法時初始治療的局部晚期或轉移性BTC患者之總體存活期及無進行存活期。作為本研究之一部分，根據以下因素對治療分配/隨機化進行分層： 1. BTC之類型：肝內膽管癌；肝外膽管癌及乏特氏壺腹癌；膽囊癌。2.局部晚期或先前手術切除相對於最初在診斷時之轉移癌。
3. 出現腹膜播散相對於無腹膜播散。以下描述本實例中使用之患者的納入標準。患者： -   ≥ 18歲 -   具有組織學或細胞學上確定的局部晚期或轉移性BTC，包括肝內及肝外膽管癌、膽囊癌及壺腹癌 -   先前未接受針對其局部晚期或轉移性BTC之化學療法或免疫療法(不允許輔助療法). -   基於RECIST 1.1(參見Eisenhauer等人, EJC.2009; 45:228-247)，患有含至少1個單向可量測病變之可量測疾病 -   具有至少12週之預期壽命 -   具有存檔(＜6個月時間)腫瘤材料(原發性或轉移性)或產生新鮮活檢體 -   東部腫瘤協作組活動狀態(Eastern Cooperative Oncology Group Performance Status，ECOG PS)為0至1 -   具有藉由以下定義之適當血液功能：白血球(WBC)計數≥3×109 個/L且絕對嗜中性白血球計數(ANC)≥1.5×109 個/L，淋巴細胞計數≥0.5×109 個/L，血小板計數≥75×109 個/L及血紅蛋白(Hgb)≥9 g/dL(未進行輸血) -   具有如下定義之適當肝功能：總膽紅素含量≤1.5×正常上限(ULN)，天冬胺酸胺基轉移酶(AST)含量≤3.0×ULN及丙胺酸轉胺酶(ALT)含量≤3.0×ULN。對於腫瘤累及肝之患者，AST≤5.0×ULN及ALT≤5.0×ULN係可接受的 -   具有藉由根據科克羅夫特-高爾特公式(Cockcroft-Gault formula)或藉由收集24小時尿液量測肌酐清除率，估計肌酐清除率＞50 mL/min所定義之適當腎功能 o   CCr(ml/min)=(140-年齡)×體重(kg)/(72×血清Crjaffe ) o  若為女性，則×0.85 -   若藉由酶法測量Cr，則添加0.2且以Crjaffe =0.2+Cr酶 使用；以及具有白蛋白≥3.3 g/dL
圖 8 及表2示出本實例中描述之治療方案。
表 2 ：本研究中投與之研究干預的詳情。表中所用縮寫：Q3W=每3週一次；W=週；D=天。
Figure 108121691-A0304-0002
在一個例示性實施例中，向初始治療的患有局部晚期或轉移性BTC之癌症患者每三週一次投與2400 mg 抗PD-L1/TGFβ誘捕分子或每兩週一次投與1200 mg抗PD-L1/TGFβ誘捕分子實現類似功效。在一個例示性實施例中，向初始治療的患有局部晚期或轉移性BTC之癌症患者藉由每三週一次給與2400 mg 抗PD-L1/TGFβ誘捕分子所獲得的平均穩態波谷濃度觀測值(C谷 , ss )類似於藉由每兩週一次給與1200 mg 抗PD-L1/TGFβ誘捕分子所獲得的平均穩態波谷濃度觀測值(C谷 , ss )。藉由對1期研究中以0.3-30 mg/kg劑量遞增組實現的安全性及暴露之初步評估及暴露-安全性模型，證實在單藥療法情形中每三週一次給與2400 mg抗PD-L1/TGFβ誘捕分子之安全性。評估利用化學療法(例如吉西他濱及順鉑)之潛在藥物動力學相互作用及重疊毒性以支持在組合研究中每三週一次給與2400 mg 抗PD-L1/TGFβ誘捕分子。
在整個治療中，經由記錄、報導及分析基線醫學病況、不良事件(AE)、體檢發現，包括生命體徵、ECOG活動狀態及實驗室測試來評估安全性。在投與第二次劑量之前的前21天，評價劑量限制性毒性(DLT)。在一個例示性實施例中，獨立地在2個獨立組 (例如亞洲地點組及非亞洲地點組)中評價安全性。
在至少一項研究中，所選患者未患在接受免疫刺激劑時可能惡化之活動性肺結核或自身免疫性疾病。在至少一項研究中，所選患者無間質性肺病或該病史、肝硬化、已知之針對人類免疫缺陷病毒(HIV)陽性測試史或已知之後天免疫缺乏症候群、不受控制之膽感染、需要全身療法之活動性細菌或真菌感染、臨床上顯著之心血管/腦血管疾病。在至少一項研究中，所選患者無中樞神經系統(CNS)轉移(有CNS轉移治療史(藉由手術或放射療法治療)之患者不符合條件，除非其已自治療完全康復，證實無進行至少3個月且不需要繼續類固醇療法)。
在至少一項研究中，所選患者並非任何器官移植，包括同種異體幹細胞移植之接受者，但不需要免疫抑制之移植(例如角膜移植、毛髮移植)除外。在一項研究中，所選患者未曾接受用靶向T細胞共調控蛋白質(免疫檢查點)之任何抗體/藥物進行的先前療法，諸如抗PD-1、抗PD-L1、抗CTLA-4抗體或抗-4-1BB抗體係不容許的，包括局部投與此類藥劑在內。在至少一項研究中，所選患者未曾接受用靶向TGFβ/TGFβ受體之任何抗體/藥物進行之先前療法。
在至少一項研究中，所選患者在28天未接受過放射，局灶姑息性骨定向放射療法除外。所選患者在開始試驗治療之前7天內未接受過用免疫抑制劑進行之全身療法；或在開始試驗治療之前28天內未使用任何研究性藥物。
在一個例示性實施例中，所選患者患有治癒性治療之癌症且在＞5年內無復發或患有以治癒性意向治療之早期癌症，包括原位子宮頸癌；表面、非侵襲性膀胱癌；基底細胞或原位鱗狀細胞癌。在內窺鏡下切除早期胃腸(GI)癌症(食道、胃及結腸直腸癌)且在＞1年內不復發係容許的。患有其他先前癌症之患者排除在外。實例 3 ： 用抗 PD - L1 / TGFβ 誘捕分子治療局部晚期或轉移性膽道癌 ( BTC ) 患者
目標：本研究之目的係評價抗PD-L1/TGFβ誘捕分子視情況與吉西他濱及順鉑組合作為一線(1L)治療是否能改善局部晚期或轉移性BTC患者之無進行存活(PFS)時間及/或最佳總體反應(BOR)。在此BTC患者組中使用抗PD-L1/TGFβ誘捕分子之基本原理係抗PD-L1/TGFβ誘捕分子靶向PD-L1及TGFβ，此為腫瘤微環境中免疫抑制之兩個主要機制。臨床前資料表明，抗PD-L1/TGFβ誘捕分子在小鼠腫瘤模型中明顯增強抗腫瘤活性且延長存活期，超過單獨抗PD-L1抗體阿維魯單抗(avelumab)或TGFβ誘捕分子對照之作用。因此，同時中和作為已知可抑制腫瘤免疫活化之分子的PD-L1及TGF-β且視情況共投與針對BTC之化學療法可改善患者之臨床反應。
研究設計：本研究評價抗PD-L1/TGFβ誘捕分子視情況與吉西他濱及順鉑組合作為晚期或轉移性BTC患者之一線治療的安全性及耐受性、疾病反應及存活期主要終點以評估臨床益處。在本研究中招收約150名先前未接受過針對晚期或轉移性BTC之治療的患者(患者係初始治療的)。本研究中的患者滿足實例2中所描述的患者納入標準。患者根據ECOG PS及癌症分期(局部晚期相對於轉移性)進行分層。
為評估抗PD-L1/TGFβ誘捕分子與吉西他濱及順鉑共投與之安全性，向一小組約6名患者靜脈內投與每兩週一次1200 mg、每三週一次1800 mg或2400 mg劑量之抗PD-L1/TGFβ誘捕分子且在第1天投與1000 mg/m2 劑量之吉西他濱及25 mg/m2 劑量之順鉑；且每3週直至24週，在第8天靜脈內投與1000 mg/m2 劑量之吉西他濱及25 mg/m2 劑量之順鉑(參見例如：圖8及表2)。在前21天評價劑量限制性毒性(DLT)。自第25週至隨後數週(例如約2年)，藉由每三週一次投與2400 mg抗PD-L1/TGFβ誘捕分子繼續治療，但不共投與吉西他濱或順鉑。
為評價臨床功效(BOR、PFS)，向患者靜脈內投與每兩週一次1200 mg、每三週一次1800 mg或2400 mg劑量之抗PD-L1/TGFβ誘捕分子。向一些患者靜脈內共投與抗PD-L1/TGFβ誘捕分子及在第1天1000 mg/m2 吉西他濱及25 mg/m2 順鉑，且每3週直至第24週，在第8天靜脈內投與1000 mg/m2 吉西他濱及25 mg/m2 順鉑。自第25週至隨後數週(例如約2年)，藉由每三週一次投與2400 mg抗PD-L1/TGFβ誘捕分子繼續治療，但不共投與吉西他濱或順鉑。
繼續治療，直至根據實體腫瘤反應評價標準1.1版(RECIST v1.1)確定疾病進展(PD)、不可接受之毒性，或持續24個月。在PD情況下，若經歷PD之患者的東部腫瘤協作組活動狀態(ECOG PS)保持穩定，若無治療引起的不可接受之毒性及若該患者將得益於持續治療，則該患者可繼續治療。經歷穩定疾病(SD)、部分反應(PR)或完全反應(CR)之患者將繼續治療，直至24個月結束，不過額外治療亦係可能的。
在整個治療中，經由記錄、報導及分析基線醫學病況、不良事件(AE)、體檢發現，包括生命體徵、ECOG活動狀態及實驗室測試來評估安全性。
安全性及功效評估： 安全性終點包括不良事件、臨床實驗室評估、生命體徵、體檢、ECG參數及ECOG PS且基於患者接受之實際治療對其進行評價。在投與第一次研究藥物之後12個月內每6週且接著之後每12週執行腫瘤量測以確定反應，且根據實體腫瘤反應評價標準1.1版(RECIST 1.1)評價針對該治療之反應。藉由CT掃描或MRI評估針對組合或未組合吉西他濱及順鉑之抗PD-L1/TGFβ誘捕分子的腫瘤反應。在隨後訪視時重複在基線時執行之掃描。一般而言，在隨後腫瘤評價訪視時使用相同成像方法且較佳使用相同成像設備追蹤在基線時偵測到的病變。針對治療之腫瘤反應係根據RECIST 1.1，基於對目標、非目標及新病變之反應的評價指定。
結果：藉由總體反應率(ORR)評估客觀腫瘤反應，ORR定義為達到完全反應(CR)或部分反應(PR)之最佳總體反應(BOR)的參與者之數量除以分析群體中參與者之數量。無進行存活期定義為自隨機化至如根據RECIST 1.1評估客觀疾病進展(PD)之第一次記載日期或由任何原因造成之死亡日期(以先發生者為準)的時間。預期用抗PD-L1/TGFβ誘捕分子作為單藥療法或與吉西他濱及順鉑組合時治療在初始治療之晚期或轉移性BTC患者中引起初始臨床活性。經治療患者展現疾病反應(例如部分反應、完全反應、穩定疾病)及/或改善之存活期(例如無進行存活期及/或總體存活期)。
總體而言，發現抗PD-L1/TGFβ誘捕分子係一種創新的第一類雙功能融合蛋白，該雙功能融合蛋白係設計成同時靶向2個免疫抑制路徑：PD-L1及TGF-β。因此，抗PD-L1/TGFβ誘捕分子為初始治療之晚期或轉移性BTC患者提供一種新穎治療選擇。實例 4 ： 在全身化學療法不耐受或失敗的局部晚期或轉移性 BTC 患者中抗 PD - L1 / TGFβ 誘捕分子之初步劑量反應方案
每兩週一次向在基於鉑之一線(「1L」)治療之後進展的轉移性或局部晚期BTC患者投與1200 mg抗PD-L1/TGFβ誘捕分子，直至確定疾病進展、不可接受之毒性或退出研究。評估安全性及耐受性作為主要目標，而次要目標包括根據實體腫瘤反應評價標準1.1版(RECIST v1.1)評估最佳總體反應(「BOR」)。評價腫瘤細胞PD-L1表現(抗體純系73-10；Dako)。
三十名患有預治療之BTC的患者接受抗PD-L1/TGFβ誘捕分子，持續8.9週之中值持續時間(範圍2-57.6週)。五名患者繼續治療。最常見的治療相關不良事件(TRAE)係發熱、紅斑丘疹(二者佔13.3%)、皮疹及脂肪酶增加(二者佔10%)。有十名患者(33.3%)經歷等級≥3級之TRAE。據報導，有三例由不良事件引起之死亡病例；一例係在14次治療劑量後因敗血性休克(可能由皮膚感染引起之菌血症)而死亡，且兩例死於間質性肺病，一名患者係在3次劑量後於治療時死亡且另一名係在最後一次劑量後6個月死亡。六名患者有確定的客觀反應(ORR，20%)，其中五名具有部分反應(PRS)，且四名在治療3.9+、4.2+、5.5+及6.9+個月時仍持續；及一名患者具有完全反應(CR)，持續5.5+個月。另有兩名患者具有持續的臨床益處：一名患者在治療1年之後具有部分反應(「PR」)，且一名患者在最初假性疾病進展之後7.6+個月時具有持續的PR。在患有PD-L1+(≥1%)及PD-L1−腫瘤之患者中，由PD-L1表現確定之ORR分別係25%及15.4%。
此等結果展示，抗PD-L1/TGFβ誘捕分子單藥療法在患有預治療之BTC的患者中具有可管理之安全型態及有前景的功效，包括在三十名患者中之八名(27%)中出現的長效反應。實例 5 ： 用於全身化學療法不耐受或失敗的局部晚期或轉移性 BTC 患者之抗 PD - L1 / TGFβ 誘捕分子給藥方案
用抗PD-L1/TGFβ誘捕分子治療一線全身化學療法失敗或不耐受之局部晚期或轉移性BTC患者，直至確定疾病進展(PD)、不可接受之毒性或退出研究。壺腹癌排除在外。
在一個例示性實施例中，每兩週一次將1200 mg不依賴BW之劑量的抗PD-L1/TGFβ誘捕分子投與參與者。靜脈內投與持續約一小時(-10分鐘/+20分鐘，亦即，經50至80分鐘)。在一個例示性實施例中，每三週一次將1800 mg不依賴BW之劑量的抗PD-L1/TGFβ誘捕分子投與參與者。靜脈內投與持續約一小時(-10分鐘/+20分鐘，亦即，經50至80分鐘)。在一個例示性實施例中，每三週一次將2100 mg不依賴BW之劑量的抗PD-L1/TGFβ誘捕分子投與參與者。靜脈內投與持續約一小時(-10分鐘/+20分鐘，亦即，經50至80分鐘)。在一個例示性實施例中，每三週一次將2400 mg不依賴BW之劑量的抗PD-L1/TGFβ誘捕分子投與參與者。靜脈內投與持續約一小時(-10分鐘/+20分鐘，亦即，經50至80分鐘)。為減緩可能的輸注相關反應，在前2次輸注中，需要在每劑抗PD-L1/TGFβ誘捕分子前約30至60分鐘，投與用抗組胺劑及撲熱息痛(乙醯胺苯酚)進行之前驅用藥(例如25-50 mg苯海拉明及500-650 mg撲熱息痛[乙醯胺苯酚]IV或口服等效物)。在第二次輸注後，前驅用藥係可選進行的且由研究者酌情處理。若在前2次輸注期間觀察到2級輸注反應，則不停止前驅用藥。不容許類固醇作為前驅用藥。
在一個例示性實施例中，參與者失敗或不耐受之全身化學療法係基於鉑之化學療法。
以下描述本實例中使用之患者的納入標準。患者： -   ≥ 18歲 -   具有組織學或細胞學上確定的局部晚期或轉移性BTC；疾病必須為依據RECIST 1.1具有至少1個單向可量測病變且藉由獨立成像檢查確定的可量測疾病 -   須一線全身化學療法失敗或不耐受，或在輔助治療完成之6個月內有疾病復發跡象 -   在第一次投與抗PD-L1/TGFβ誘捕分子之前28天內具有適合於生物標記物評估的可用腫瘤材料(原發性或轉移性) -   在進入研究時及在用抗PD-L1/TGFβ誘捕分子治療之第1天，東部腫瘤協作組活動狀態(ECOG PS)為0至1 -   依據研究者之判斷，預期壽命≥12週。 -   具有藉由以下定義之適當血液功能：白血球(WBC)計數≥3×109 個/L且絕對嗜中性白血球計數(ANC)≥1.5×109 個/L，淋巴細胞計數≥0.5×109 個/L，血小板計數≥75×109 個/L及血紅蛋白(Hgb)≥9 g/dL(未進行輸血)。 -   具有如下定義之適當肝功能：總膽紅素含量≤1.5×正常上限(ULN)，天冬胺酸胺基轉移酶(AST)含量≤2.5×ULN及丙胺酸轉胺酶(ALT)含量≤2.5×ULN。對於腫瘤累及肝之參與者，AST≤5.0×ULN及ALT≤5.0×ULN係可接受的。 -   具有以凝血酶原時間(PT)或國際標準化比值(INR)≤1.5×ULN所定義之適當凝血功能，除非參與者正接受抗凝血劑療法。 -   白蛋白 ≥ 3.3 g/dL -   具有藉由根據科克羅夫特-高爾特公式或藉由收集24小時尿液量測的肌酸酐≤1.5×ULN或估計肌酐清除率＞40 mL/min所定義之適當腎功能。 o   CCr(ml/min)=(140-年齡)×體重(kg)/(72×血清Crjaffe ) o  若為女性，則×0.85 o  若藉由酶法測量Cr，則添加0.2且以Crjaffe =0.2+Cr酶 使用； -   以及白蛋白≥3.3 g/dL
在至少一項研究中，所選患者未患在接受免疫刺激劑時可能惡化之活動性肺結核或自身免疫性疾病。在至少一項研究中，所選患者無間質性肺病或該病史、肝硬化、已知之針對人類免疫缺陷病毒(HIV)陽性測試史或已知之後天免疫缺乏症候群、不受控制之膽感染、需要全身療法之活動性細菌或真菌感染、臨床上顯著之心血管/腦血管疾病。在至少一項研究中，所選患者無中樞神經系統(CNS)轉移(有CNS轉移治療史(藉由手術或放射療法治療)之患者不符合條件，除非其已自治療完全康復，證實無進行至少3個月且不需要繼續類固醇療法)。
在至少一項研究中，所選患者並非任何器官移植，包括同種異體幹細胞移植之接受者，但不需要免疫抑制之移植(例如角膜移植、毛髮移植)除外。在一項研究中，所選患者無已知的針對抗PD-L1/TGFβ誘捕分子或其製品之過敏反應史、或已知的針對單株抗體之重度過敏反應、任何全身性過敏反應史、或近期(5個月內)無不受控制之哮喘史。
在一個例示性實施例中，所選患者在開始研究治療之前21天內未接受過抗癌治療，例如細胞減滅療法、涉及＞30%骨髓之放射療法(姑息性骨定向放射療法除外)、免疫療法或細胞介素療法。所選患者在開始試驗治療之前7天內未接受過用免疫抑制劑進行之全身療法；或在開始試驗治療之前28天內未使用任何研究性藥物。
在一個例示性實施例中，所選患者患有治癒性治療之癌症且在＞3年內無復發或患有以治癒性意向治療之早期癌症，包括原位子宮頸癌；表面、非侵襲性膀胱癌；基底細胞或原位鱗狀細胞癌。在內窺鏡下切除侷限於黏膜層之早期胃腸(GI)癌症(食道、胃及結腸直腸癌)且在＞1年內不復發係容許的。患有其他先前癌症之患者排除在外。實例 6 ： 抗 PD - L1 / TGFβ 誘捕分子治療全身化學療法不耐受或失敗之局部晚期或轉移性 BTC 患者
目標：根據NCCN及ESMO指南，不存在確定之BTC第二線療法作為標準護理。本研究之目的係評價抗PD-L1/TGFβ誘捕分子作為一線全身化學療法失敗或不耐受之局部晚期或轉移性BTC患者之第二線治療是否能改善總體反應。在此患者組中使用抗PD-L1/TGFβ誘捕分子之基本原理係抗PD-L1/TGFβ誘捕分子靶向作為腫瘤微環境中免疫抑制之2個主要機制的PD-L1及TGF-β，且可解決檢查點抑制劑單藥療法之抗性。如上文實例4中所描述，早期臨床資料展示，抗PD-L1/TGFβ誘捕分子作為BTC之第二線治療提供治療功效且具有20%(30名患者中之6名)之確定總體反應率。因此，由較小樣品規模得到的有前景之早期臨床功效資料證實本研究。
研究設計：本研究評價抗PD-L1/TGFβ誘捕分子作為局部晚期或轉移性BTC患者之第二線治療的安全性及耐受性、疾病反應及存活期終點以評估臨床益處。在本研究中招收約140名患者。根據實體腫瘤反應評價標準1.1版(RECIST 1.1)量測確定之最佳總體反應(BOR)作為主要終點，其將用於測定總體反應率。亦可藉由持久反應率(完全反應或部分反應持續維持至少6個月之參與者的百分比)、反應持續時間、無進行存活期及總體存活期量測治療功效。本研究中的患者滿足實例5中所描述的納入標準。
覆蓋自胸廓入口較大範圍至恥骨聯合之區域的胸部/腹部及骨盆之造影劑增強型CT係首選的成像模式。若參與者不願接受碘化造影介質或出於放射保護之原因，則應在容許情況下，根據局部方案，對該區域使用釓增強進行之磁共振成像(MRI)，同時進行自胸廓入口至下部肋膈隱窩之胸部非增強型CT。在整個研究中，應對每位參與者使用相同方法。
基線掃描係在治療前28天內實行。疾病必須為根據RECIST 1.1具有至少1個單向可量測病變且藉由獨立影像檢查確定之可量測疾病。在基線時執行的所有掃描均需在隨後訪視時重複執行以進行腫瘤評估。一般而言，在隨後腫瘤評價訪視時需要使用相同成像方法且較佳使用相同成像設備追蹤在基線時偵測到的病變。
在參與者接受第一劑抗PD-L1/TGFβ誘捕分子之第一年裏每6週，接著每12週藉由放射線照相成像評價參與者以評估針對治療之反應。抗PD-L1/TGFβ誘捕分子之安全型態將經由記錄、報導及分析基線醫學病況、AE、體檢發現，包括生命體徵、實驗室測試、ECOG PS及12導程心電圖(ECG)記錄進行評估。該研究在最後一位參與者接受最後一次劑量之抗PD-L1/TGFβ誘捕分子之後1年結束。
本發明預期抗PD-L1/TGFβ誘捕分子改善一線全身化學療法失敗或不耐受之BTC患者的存活期。實例 7 ： 抗 PD - L1 / TGFβ 誘捕分子與順鉑或吉西他濱之組合在增強抗腫瘤功效方面之作用
在本實例中，描述所執行的評價共投與抗PD-L1/TGFβ誘捕分子與順鉑或吉西他濱之抗腫瘤功效的實驗。
細胞株 ： 4T1鼠類乳癌細胞及MB49膀胱癌細胞係獲自美國典型培養物保藏中心(ATCC)。4T1細胞係在補充有10%熱滅活胎牛血清(FBS)之RPMI1640培養基(Life Technologies)中培養。MB49細胞係在含有10% FBS之達爾伯克氏改良型伊格爾氏培養基(Dulbecco's Modified Eagle Medium，DMEM)中培養。所有細胞均在無菌條件下培養並在37℃及5% CO2 下培育。在活體內植入之前，使細胞繼代並用TrypLE Express(Gibco)或0.25%胰蛋白酶收集黏附細胞。
小鼠 ： BALB/c小鼠係自Charles River Laboratories獲得。用於實驗之所有小鼠均為6至12週齡之雌性。小鼠在無病原體設施中圈養，並使其任意獲取食物及水。
治療 ：對於所有研究，在治療起始當天(第0天)，將小鼠隨機分入各治療組。
評價 ： 每週兩次用數位測徑規量測腫瘤尺寸並使用WinWedge軟體自動記錄。用下式計算腫瘤體積：腫瘤體積(mm3 )=腫瘤長度×寬度×高度×0.5236。另外，每週兩次量測體重，並在小鼠腫瘤體積超過其體重之12.5%(約2,500 mm3 )之後對其實施安樂死。
統計分析 ：使用7.0版GraphPad Prism軟體執行統計分析。腫瘤體積資料係藉由符號以平均值±SEM或藉由直線以各個小鼠以圖形方式呈現。為評估治療組之間腫瘤體積之差異，執行雙因素變異數分析(ANOVA)，隨後執行杜凱氏多重比較測試(Tukey's multiple comparison test)。抗 PD - L1 / TGFβ 誘捕分子與順鉑 / 吉西他濱之組合使抗腫瘤功效相對於同型對照改善 ， 但單獨抗 PD - L1 / TGFβ 誘捕分子則不然
抗PD-L1/TGFβ誘捕分子與順鉑之組合用於4T1鼠類腫瘤模型中：在治療前7天，將0.5×105 個4T1細胞正位接種於BALB/c小鼠之乳房脂肪墊中。在第0天(亦即，接種後7天)，用同型對照(該同型對照係抗PD-L1之突變形式，其完全不結合PD-L1)(藉由靜脈內注射(i.v.)投與400 μg；第2天、第5天、第8天))+PBS對照(0.2 mL，腹膜內(i.p.)投與；第0天)、抗PD-L1/TGFβ誘捕分子(492 μg，i.v.；第2天、第5天、第8天)、順鉑(5 mg/kg，i.p.；第0天)、或抗PD-L1/TGFβ誘捕分子+順鉑治療小鼠(n =10隻小鼠/組)。
每週量測腫瘤體積兩次。圖 10A 描繪每個治療組之平均(平均值±SEM)腫瘤體積，如所指示。圖 10B - 10E 係描繪各別治療組中各個小鼠之腫瘤體積的線形圖：圖 10B 中之每一條線表示同型對照及PBS對照治療之小鼠的腫瘤體積(標記為「同型對照」)；圖 10C 中之每一條線表示用順鉑單藥療法治療之小鼠的腫瘤體積；圖 10D 中之每一條線表示用抗PD-L1/TGFβ誘捕分子單藥療法治療之小鼠的腫瘤體積；以及圖 10E 中之每一條線表示用抗PD-L1/TGFβ誘捕分子與順鉑之組合治療之小鼠的腫瘤體積。
藉由雙因素重複量測變異數分析及杜凱氏事後檢驗(Tukey's post-test)計算P 值。儘管在此模型中，相對於同型對照，抗PD-L1/TGFβ誘捕分子單藥療法對抗腫瘤活性無作用，但抗PD-L1/TGFβ誘捕分子與順鉑之組合相對於抗PD-L1/TGFβ誘捕分子及順鉑單藥療法明顯增強抗腫瘤活性(在第19天，分別為p ＜0.0001及p ＜0.0001)。
抗PD-L1/TGFβ誘捕分子與吉西他濱之組合用於MB49鼠類腫瘤模型中：在此實驗中，在治療前7天，將1×106 個MB49細胞皮下接種於BALB/c小鼠之側腹中。在第0天(亦即，接種之後7天)，用同型對照(400 μg，i.v.；第2天、第5天、第8天)+PBS對照(0.2 mL，i.p；第0天)、抗PD-L1/TGFβ誘捕分子(492 μg，i.v.；第2天、第5天、第8天)、吉西他濱(120 mg/kg，i.p.；第0天)或抗PD-L1/TGFβ誘捕分子+吉西他濱治療小鼠(n =10隻小鼠/組)。
每週兩次量測腫瘤體積且以平均值±SEM(圖 11A )或個別腫瘤體積(圖 11B - 11E )表示。圖 11B - 11E 係描繪各別治療組中各個小鼠之腫瘤體積的線形圖：圖 11B 中之每一條線表示同型對照及PBS對照治療之小鼠的腫瘤體積(標記為「同型對照」)；圖 11C 中之每一條線表示用吉西他濱單藥療法治療之小鼠的腫瘤體積；圖 11D 中之每一條線表示用抗PD-L1/TGFβ誘捕分子單藥療法治療之小鼠的腫瘤體積；以及圖 11E 中之每一條線表示用抗PD-L1/TGFβ誘捕分子與吉西他濱之組合治療之小鼠的腫瘤體積。
藉由雙因素重複量測變異數分析及杜凱氏事後檢驗計算P 值。儘管在此模型中，相對於同型對照，抗PD-L1/TGFβ誘捕分子及吉西他濱單藥療法對抗腫瘤活性具有極小且甚至無作用，但抗PD-L1/TGFβ誘捕分子與吉西他濱之組合相對於抗PD-L1/TGFβ誘捕分子及吉西他濱單藥療法明顯增強抗腫瘤活性(在第15天，分別為p ＜0.0001及p =0.0002)。序列 SEQ ID NO: 1 分泌之抗PD-L1λ輕鏈之肽序列
Figure 02_image057
SEQ ID NO: 2 分泌之抗PDL1重鏈之肽序列
Figure 02_image059
SEQ ID NO: 3 分泌之抗PDL1/TGFβ誘捕分子重鏈之肽序列
Figure 02_image061
Figure 02_image063
SEQ ID NO: 4 自抗PD-L1λ輕鏈之轉譯起始密碼子至轉譯終止密碼子的DNA序列(在VL前之前導序列係來自尿激酶纖維蛋白溶酶原活化物之信號肽)
Figure 02_image065
SEQ ID NO: 5 自轉譯起始密碼子至轉譯終止密碼子之DNA序列(mVK SP前導序列：小寫加下劃線；VH：大寫字母；具有K變為A突變之IgG1m3：小寫字母；(G4S)x4-G (SEQ ID NO: 11)連接子：粗體大寫字母；TGFβRII：粗體加下劃線之小寫字母；兩個終止密碼子：粗體加下劃線之大寫字母)
Figure 02_image067
Figure 02_image069
SEQ ID NO: 6 分泌之抗PD-L1(mut)/TGFβ誘捕分子λ輕鏈之多肽序列，具有突變A31G、D52E、R99Y
Figure 02_image071
SEQ ID NO: 7 分泌之抗PD-L1(mut)/TGFβ誘捕分子重鏈之多肽序列
Figure 02_image073
Figure 02_image075
SEQ ID NO: 8 人類TGFβRII同功異型物A前驅多肽(NCBI RefSeq寄存編號：NP_001020018)
Figure 02_image077
SEQ ID NO: 9 人類TGFβRII同功異型物B前驅多肽(NCBI RefSeq寄存編號：NP_003233
Figure 02_image079
SEQ ID NO: 10 人類TGFβRII同功異型物B細胞外結構域多肽
Figure 02_image081
SEQ ID NO: 11 (Gly4 Ser)4 Gly連接子
Figure 02_image083
SEQ ID NO: 12 分泌之抗PD-L1抗體MPDL3289A之重鏈可變區之多肽序列
Figure 02_image085
SEQ ID NO: 13 分泌之抗PD-L1抗體MPDL3289A之輕鏈可變區之多肽序列
Figure 02_image087
SEQ ID NO: 14 分泌之抗PD-L1抗體YW243.55S70之重鏈可變區之多肽序列
Figure 02_image089
SEQ ID NO: 50 截短之人類TGFβRII同功異型物B細胞外結構域多肽
Figure 02_image091
SEQ ID NO: 51 截短之人類TGFβRII同功異型物B細胞外結構域多肽
Figure 02_image093
SEQ ID NO: 52 截短之人類TGFβRII同功異型物B細胞外結構域多肽
Figure 02_image095
SEQ ID NO: 53 截短之人類TGFβRII同功異型物B細胞外結構域多肽
Figure 02_image097
SEQ ID NO: 54 突變之人類TGFβRII同功異型物B細胞外結構域多肽
Figure 02_image099
SEQ ID NO: 55 抗 PD-L1 抗體重鏈可變區之多肽序列
Figure 02_image101
SEQ ID NO: 56 抗 PD-L1 抗體輕鏈可變區之多肽序列
Figure 02_image103
SEQ ID NO: 57 抗 PD-L1 抗體重鏈可變區之多肽序列
Figure 02_image105
SEQ ID NO: 58 抗 PD-L1 抗體輕鏈可變區之多肽序列
Figure 02_image107
SEQ ID NO: 59 抗 PD-L1 抗體重鏈之多肽序列
Figure 02_image109
SEQ ID NO: 60 抗 PD-L1 抗體輕鏈之多肽序列
Figure 02_image111
SEQ ID NO: 61 抗 PD-L1 抗體重鏈之多肽序列
Figure 02_image113
Figure 02_image115
SEQ ID NO: 62 抗 PD-L1 抗體輕鏈之多肽序列
Figure 02_image117
以引用之方式併入
本文所提及之專利文件及科學論文各自之完整揭示內容以引用之方式併入用於所有目的。等效物
在不偏離本發明之精神或基本特徵之情況下，本發明可以其他特定形式體現。因此，前述實施例在所有方面中應視為說明性的，而非限制本文所描述之揭示內容。不同實施例及多種所揭示之方法步驟的多種結構要素可呈多種組合及排列形式利用，且所有此類變化形式均視為本發明之形式。因此，本發明之範圍係由所附申請專利範圍而非前述描述指示，且在與申請專利範圍等效之含義及範圍內的所有變化均意欲包括在本文中。
圖 1 係抗PD-L1/TGFβ誘捕分子之示意圖，該分子包括一個抗PD-L1抗體經由(Gly4 Ser)4 Gly(SEQ ID NO: 11)連接子與TGFβ受體II之兩個細胞外結構域(ECD)融合。
圖 2 顯示兩步ELISA之圖，展示抗PD-L1/TGFβ誘捕分子同時結合至PD-L1及TGFβ。
圖 3 係顯示抗PD-L1/TGFβ誘捕分子誘導IL-2水準顯著增加之圖。
圖 4A 係顯示響應於抗PD-L1/TGFβ誘捕分子而在活體內耗盡TGFβ1的圖。線形圖表示初始治療組、同型對照組及三個不同劑量組，如圖例中所指示。圖 4B 係顯示響應於抗PD-L1/TGFβ誘捕分子而在活體內耗盡TGFβ2的圖。線形圖表示初始治療組、同型對照組及三個不同劑量組，如圖例中所指示。圖 4C 係顯示響應於抗PD-L1/TGFβ誘捕分子而在活體內耗盡TGFβ3的圖。線形圖表示初始治療組、同型對照組及三個不同劑量組，如圖例中所指示。圖 4D 係顯示抗PD-L1/TGFβ誘捕分子對PD-L1之佔用支持EMT-6腫瘤系統中之受體結合模型的圖。
圖 5 係顯示在Detroit 562異種移植模型中抗PD-L1/TGFβ誘捕分子對照(抗PD-L1(mut)/TGFβ)之抗腫瘤功效的圖。
圖 6A 係在68 kg中值體重之模擬群體中在固定劑量(1200 mg)對比以mg/kg計之劑量(17.65 mg/kg)下整個群體之Cavg 分佈的盒狀圖。圖 6B 係在68 kg中值體重之模擬群體中在固定劑量(1200 mg)對比以mg/kg計之劑量(17.65 mg/kg)下整個群體之暴露AUC分佈的盒狀圖。圖 6C 係在68 kg中值體重之模擬群體中在固定劑量(1200 mg)對比以mg/kg計之劑量(17.65 mg/kg)下整個群體之C谷 分佈的盒狀圖。圖 6D 係在68 kg中值體重之模擬群體中在固定劑量(1200 mg)對比以mg/kg計之劑量(17.65 mg/kg)下整個群體之Cmax 分佈的盒狀圖。
圖 6E 係在68 kg中值體重之模擬群體中在固定劑量(500 mg)對比以mg/kg計之劑量(7.35 mg/kg)下整個群體之Cavg 分佈的盒狀圖。圖 6F 係在68 kg中值體重之模擬群體中在固定劑量(500 mg)對比以mg/kg計之劑量(7.35 mg/kg)下整個群體之暴露AUC分佈的盒狀圖。圖 6G 係在68 kg中值體重之模擬群體中在固定劑量(500 mg)對比以mg/kg計之劑量(7.35 mg/kg)下整個群體之C谷 分佈的盒狀圖。圖 6H 係在68 kg中值體重之模擬群體中在固定劑量(500 mg)對比以mg/kg計之劑量(7.35 mg/kg)下整個群體之Cmax 分佈的盒狀圖。
圖 7A - 7C 係顯示在小鼠中與腫瘤停滯相關之劑量及時程下抗PD-L1/TGFβ誘捕分子之預測PK及PD-L1受體佔有率(「RO」)的圖。圖 7A 係顯示預測血漿濃度隨時間變化之圖。圖 7B 係顯示PBMC中之預測PD-L1 RO隨時間變化之圖。圖 7C 係顯示腫瘤中之預測PD-L1 RO隨時間變化之圖。
圖 8 係實例2中所描述的用於治療晚期或轉移性BTC之治療方案的示意圖。
圖 9 係實例4中所描述的用於治療晚期或轉移性BTC之治療方案的示意圖。
圖 10A - 10E 係線形圖，顯示在4T1鼠類乳癌模型中，相對於同型對照，抗PD-L1/TGFβ誘捕分子與順鉑之組合使抗腫瘤功效增強，但單獨抗PD-L1/TGFβ誘捕分子或順鉑則不然。圖 10A 描繪每個治療組之平均腫瘤體積，如所指示。圖 10B - 10E 係描繪各別治療組中各個小鼠之腫瘤體積的線形圖：圖 10B 中之每一條線表示同型對照及PBS對照治療之小鼠的腫瘤體積(標記為「同型對照」)；圖 10C 中之每一條線表示用順鉑單藥療法治療之小鼠的腫瘤體積；圖 10D 中之每一條線表示用抗PD-L1/TGFβ誘捕分子單藥療法治療之小鼠的腫瘤體積；以及圖 10E 中之每一條線表示用抗PD-L1/TGFβ誘捕分子與順鉑之組合治療之小鼠的腫瘤體積。
圖 11A - 11E 係線形圖，顯示在MB49膀胱癌模型中，相對於同型對照，抗PD-L1/TGFβ誘捕分子與吉西他濱之組合使抗腫瘤功效增強，但單獨抗PD-L1/TGFβ誘捕分子或吉西他濱則不然。圖 11A 描繪每個治療組之平均腫瘤體積，如所指示。圖 11B - 11E 係描繪各別治療組中各個小鼠之腫瘤體積的線形圖：圖 11B 中之每一條線表示同型對照及PBS對照治療之小鼠的腫瘤體積(標記為「同型對照」)；圖 11C 中之每一條線表示用吉西他濱單藥療法治療之小鼠的腫瘤體積；圖 11D 中之每一條線表示用抗PD-L1/TGFβ誘捕分子單藥療法治療之小鼠的腫瘤體積；以及圖 11E 中之每一條線表示用抗PD-L1/TGFβ誘捕分子與吉西他濱之組合治療之小鼠的腫瘤體積。
Figure 12_A0101_SEQ_0001
Figure 12_A0101_SEQ_0002
Figure 12_A0101_SEQ_0003
Figure 12_A0101_SEQ_0004
Figure 12_A0101_SEQ_0005
Figure 12_A0101_SEQ_0006
Figure 12_A0101_SEQ_0007
Figure 12_A0101_SEQ_0008
Figure 12_A0101_SEQ_0009
Figure 12_A0101_SEQ_0010
Figure 12_A0101_SEQ_0011
Figure 12_A0101_SEQ_0012
Figure 12_A0101_SEQ_0013
Figure 12_A0101_SEQ_0014
Figure 12_A0101_SEQ_0015
Figure 12_A0101_SEQ_0016
Figure 12_A0101_SEQ_0017
Figure 12_A0101_SEQ_0018
Figure 12_A0101_SEQ_0019
Figure 12_A0101_SEQ_0020
Figure 12_A0101_SEQ_0021
Figure 12_A0101_SEQ_0022
Figure 12_A0101_SEQ_0023
Figure 12_A0101_SEQ_0024
Figure 12_A0101_SEQ_0025
Figure 12_A0101_SEQ_0026
Figure 12_A0101_SEQ_0027
Figure 12_A0101_SEQ_0028
Figure 12_A0101_SEQ_0029
Figure 12_A0101_SEQ_0030
Figure 12_A0101_SEQ_0031
Figure 12_A0101_SEQ_0032
Figure 12_A0101_SEQ_0033
Figure 12_A0101_SEQ_0034
Figure 12_A0101_SEQ_0035
Figure 12_A0101_SEQ_0036
Figure 12_A0101_SEQ_0037
Figure 12_A0101_SEQ_0038
Figure 12_A0101_SEQ_0039
Figure 12_A0101_SEQ_0040
Figure 12_A0101_SEQ_0041
Figure 12_A0101_SEQ_0042
Figure 12_A0101_SEQ_0043
Figure 12_A0101_SEQ_0044
Figure 12_A0101_SEQ_0045
Figure 12_A0101_SEQ_0046
Figure 12_A0101_SEQ_0047
Figure 12_A0101_SEQ_0048
Figure 12_A0101_SEQ_0049
Figure 12_A0101_SEQ_0050
Figure 12_A0101_SEQ_0051
Figure 12_A0101_SEQ_0052
Figure 12_A0101_SEQ_0053
Figure 12_A0101_SEQ_0054
Figure 12_A0101_SEQ_0055
Figure 12_A0101_SEQ_0056
Figure 12_A0101_SEQ_0057

Claims (86)

  1. 一種於有需要之初始(naïve)治療患者治療膽道癌(BTC)或抑制膽道腫瘤生長之方法，該方法包含向該患者投與至少500 mg劑量的包含第一多肽及第二多肽之蛋白質， 其中該第一多肽包含：(a)結合至人類蛋白質計劃性死亡配體1 (PD-L1)之抗體的至少一個重鏈可變區；以及(b)能夠結合轉型生長因子β (TGFβ)之人類轉型生長因子β受體II (TGFβRII)或其片段， 其中該第二多肽包含結合PD-L1之抗體之至少一個輕鏈可變區，且 其中該第一多肽之重鏈與該第二多肽之輕鏈在組合時形成結合PD-L1之抗原結合位點。
  2. 如請求項1之方法，其中該第一多肽包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列，且該第二多肽包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列。
  3. 如請求項1或2之方法，其中該劑量係500 mg至2400 mg。
  4. 如請求項1至3中任一項之方法，其中該劑量係1200 mg至2400 mg。
  5. 如請求項1至4中任一項之方法，其中該劑量係1200 mg。
  6. 如請求項1至4中任一項之方法，其中該劑量係2400 mg。
  7. 如請求項1至4中任一項之方法，其中該劑量係每兩週一次或每三週一次投與。
  8. 如請求項7之方法，其中該劑量係1200 mg，每兩週一次投與。
  9. 如請求項7之方法，其中該劑量係2400 mg，每三週一次投與。
  10. 如請求項1至3中任一項之方法，其中該劑量係2100 mg或2400 mg，每三週一次投與。
  11. 如請求項1至10中任一項之方法，其中該BTC係局部晚期BTC及/或轉移性BTC。
  12. 如請求項1至11中任一項之方法，其中該BTC展現陽性PD-L1表現。
  13. 如請求項1至12中任一項之方法，其進一步包含向該患者投與吉西他濱(gemcitabine)及/或順鉑(cisplatin)。
  14. 如請求項9之方法，其中在治療週期期間，吉西他濱及順鉑係在投與該蛋白質之同一天(第1天)投與。
  15. 如請求項14之方法，其進一步包含在該治療週期之第8天投與吉西他濱及順鉑。
  16. 如請求項15之方法，其中該治療在24週內重複總計八個週期。
  17. 如請求項15之方法，其進一步包含藉由在25週開始投與該蛋白質以繼續治療該患者，但不共投與吉西他濱及順鉑。
  18. 如請求項1至17中任一項之方法，其中該治療造成該患者之疾病反應或改善存活期。
  19. 如請求項18之方法，其中該疾病反應係完全反應、部分反應或穩定疾病。
  20. 如請求項18之方法，其中該存活期係無進行存活期(PFS)。
  21. 如請求項1至20中任一項之方法，其中該蛋白質係藉由靜脈內投與。
  22. 如請求項21之方法，其中該靜脈內投與係用包括含該蛋白質之調配物的預填充袋、預填充筆或預填充注射器執行。
  23. 如請求項22之方法，其中該袋連接至包含管及/或針之通道。
  24. 一種用於有需要之初始治療癌症患者治療膽道癌(BTC)或抑制膽道腫瘤生長之方法中的靜脈內藥物遞送調配物，該調配物包含500 mg-2400 mg包含第一多肽及第二多肽之蛋白質； 其中該第一多肽包含：(a)結合至人類蛋白質計劃性死亡配體1 (PD-L1)之抗體的至少一個重鏈可變區；以及(b)能夠結合轉型生長因子β (TGFβ)之人類轉型生長因子β受體II (TGFβRII)或其片段， 其中該第二多肽包含結合PD-L1之抗體之至少一個輕鏈可變區，且 其中該第一多肽之重鏈與該第二多肽之輕鏈在組合時形成結合PD-L1之抗原結合位點。
  25. 如請求項24所使用之靜脈內藥物遞送調配物，其中該第一多肽包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列，且該第二多肽包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列。
  26. 如請求項24或25所使用之靜脈內藥物遞送調配物，其包含1200 mg至2400 mg該蛋白質。
  27. 如請求項24或25所使用之靜脈內藥物遞送調配物，其包含1200 mg該蛋白質。
  28. 如請求項24或25所使用之靜脈內藥物遞送調配物，其包含2400 mg該蛋白質。
  29. 如請求項24至26中任一項所使用之靜脈內藥物遞送調配物，其中該調配物係每兩週一次或每三週一次投與該患者。
  30. 如請求項29所使用之靜脈內藥物遞送調配物，其中包含1200 mg該蛋白質之調配物係每兩週一次投與。
  31. 如請求項29所使用之靜脈內藥物遞送調配物，其中包含2400 mg該蛋白質之調配物係每三週一次投與。
  32. 如請求項24至31中任一項所使用之靜脈內藥物遞送調配物，其中該調配物係含在袋子、筆或注射器中。
  33. 如請求項32所使用之靜脈內藥物遞送調配物，其中該袋子係連接至包含管及/或針之通道。
  34. 如請求項24至33中任一項所使用之靜脈內藥物遞送調配物，其中該調配物係凍乾調配物或液體調配物。
  35. 一種用於有需要之初始治療癌症患者治療膽道癌(BTC)或抑制膽道腫瘤生長之方法中的藥物遞送裝置，該裝置包括含500 mg-2400 mg蛋白質之調配物，該蛋白質包含第一多肽及第二多肽； 其中該第一多肽包含：(a)結合至人類蛋白質計劃性死亡配體1 (PD-L1)之抗體的至少一個重鏈可變區；以及(b)能夠結合轉型生長因子β (TGFβ)之人類轉型生長因子β受體II (TGFβRII)或其片段， 其中該第二多肽包含結合PD-L1之抗體之至少一個輕鏈可變區，且 其中該第一多肽之重鏈與該第二多肽之輕鏈在組合時形成結合PD-L1之抗原結合位點。
  36. 如請求項35所使用之藥物遞送裝置，其中該第一多肽包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列，且該第二多肽包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列。
  37. 如請求項35或36所使用之藥物遞送裝置，其包含1200 mg至2400 mg該蛋白質。
  38. 如請求項35或36所使用之藥物遞送裝置，其包含1200 mg該蛋白質。
  39. 如請求項35或36所使用之藥物遞送裝置，其包含2400 mg該蛋白質。
  40. 如請求項35至37中任一項所使用之藥物遞送裝置，其中該調配物係每兩週一次或每三週一次投與該患者。
  41. 如請求項40所使用之藥物遞送裝置，其中包含1200 mg該蛋白質之調配物係每兩週一次投與。
  42. 如請求項40所使用之藥物遞送裝置，其中包含2400 mg該蛋白質之調配物係每三週一次投與。
  43. 如請求項35至42中任一項所使用之藥物遞送裝置，其中該裝置係袋子、筆或注射器。
  44. 如請求項43所使用之藥物遞送裝置，其中該袋子係連接至包含管及/或針之通道。
  45. 如請求項24至34中任一項所使用之靜脈內藥物遞送調配物，或如請求項35至44中任一項所使用之藥物遞送裝置，其中該BTC係局部晚期BTC及/或轉移性BTC。
  46. 如請求項45所使用之靜脈內藥物遞送調配物，或如請求項45所使用之藥物遞送裝置，其中該癌症展現陽性PD-L1表現。
  47. 如請求項45至46中任一項所使用之靜脈內藥物遞送調配物，或如請求項45至46中任一項所使用之藥物遞送裝置，其進一步包含向該患者共投與吉西他濱及/或順鉑。
  48. 如請求項47所使用之靜脈內藥物遞送調配物，或如請求項47所使用之藥物遞送裝置，其中在治療週期期間，吉西他濱及順鉑係在投與包含該蛋白質之調配物的同一天(第1天)投與。
  49. 如請求項45至48中任一項所使用之靜脈內藥物遞送調配物，或如請求項45至48中任一項所使用之藥物遞送裝置，其中該治療造成該患者之疾病反應或改善存活期。
  50. 如請求項49所使用之靜脈內藥物遞送調配物，或如請求項49所使用之藥物遞送裝置，其中該疾病反應係完全反應、部分反應或穩定疾病。
  51. 如請求項49所使用之靜脈內藥物遞送調配物，或如請求項49所使用之藥物遞送裝置，其中該存活期係無進行存活期(PFS)。
  52. 一種於先前全身化學療法失敗或不耐受之患者治療局部晚期或轉移性膽道癌(BTC)或抑制膽道腫瘤生長之方法，該方法包含向該患者投與至少500 mg劑量的包含第一多肽及第二多肽之蛋白質， 其中該第一多肽包含：(a)結合至人類蛋白質計劃性死亡配體1 (PD-L1)之抗體的至少一個重鏈可變區；以及(b)能夠結合轉型生長因子β (TGFβ)之人類轉型生長因子β受體II (TGFβRII)或其片段， 其中該第二多肽包含結合PD-L1之抗體之至少一個輕鏈可變區，且 其中該第一多肽之重鏈與該第二多肽之輕鏈在組合時形成結合PD-L1之抗原結合位點。
  53. 如請求項52之方法，其中該第一多肽包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列，且該第二多肽包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列。
  54. 如請求項52或53之方法，其中該劑量係500 mg至2400 mg。
  55. 如請求項52至53中任一項之方法，其中該劑量係1200 mg至1800 mg。
  56. 如請求項52至55中任一項之方法，其中該劑量係1200 mg。
  57. 如請求項52至55中任一項之方法，其中該劑量係1800 mg。
  58. 如請求項52至55中任一項之方法，其中該劑量係每兩週一次或每三週一次投與。
  59. 如請求項58之方法，其中該劑量係1200 mg，每兩週一次投與。
  60. 如請求項58之方法，其中該劑量係1800 mg，每三週一次投與。
  61. 如請求項52至54中任一項之方法，其中該劑量係2100 mg或2400 mg，每三週一次投與。
  62. 如請求項52至61中任一項之方法，其中該BTC展現陽性PD-L1表現。
  63. 如請求項52至62中任一項之方法，其中該治療造成該患者之疾病反應或改善存活期。
  64. 如請求項63之方法，其中該疾病反應係完全反應、部分反應或穩定疾病。
  65. 如請求項63之方法，其中該存活期係無進行存活期(PFS)。
  66. 如請求項52至65中任一項之方法，其中該蛋白質係藉由靜脈內投與。
  67. 如請求項66之方法，其中該靜脈內投與係用包括含該蛋白質之調配物的預填充袋、預填充筆或預填充注射器執行。
  68. 如請求項67之方法，其中該袋連接至包含管及/或針之通道。
  69. 一種包含第一多肽及第二多肽之抗PD-L1/TGFβ誘捕蛋白，其用於有需要之初始治療癌症患者治療膽道癌(BTC)或抑制膽道腫瘤生長之方法中，該方法包含向該患者投與500 mg-2400 mg該蛋白質； 其中該第一多肽包含：(a)結合至人類蛋白質計劃性死亡配體1 (PD-L1)之抗體的至少一個重鏈可變區；以及(b)能夠結合轉型生長因子β (TGFβ)之人類轉型生長因子β受體II (TGFβRII)或其片段， 其中該第二多肽包含結合PD-L1之抗體之至少一個輕鏈可變區，且 其中該第一多肽之重鏈與該第二多肽之輕鏈在組合時形成結合PD-L1之抗原結合位點。
  70. 如請求項69所使用之抗PD-L1/TGFβ誘捕蛋白，其中該第一多肽包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列，且該第二多肽包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列。
  71. 如請求項69至70中任一項所使用之抗PD-L1/TGFβ誘捕蛋白，其中1200 mg至2400 mg該蛋白質投與該患者。
  72. 如請求項69至71中任一項所使用之抗PD-L1/TGFβ誘捕蛋白，其中1200 mg該蛋白質投與該患者。
  73. 如請求項69至71中任一項所使用之抗PD-L1/TGFβ誘捕蛋白，其中2400 mg該蛋白質投與該患者。
  74. 如請求項69至71中任一項所使用之抗PD-L1/TGFβ誘捕蛋白，其中該蛋白質係每兩週一次或每三週一次投與該患者。
  75. 如請求項74所使用之抗PD-L1/TGFβ誘捕蛋白，其中在治療週期中，每兩週一次投與1200 mg該蛋白質。
  76. 如請求項74所使用之抗PD-L1/TGFβ誘捕蛋白，其中在治療週期中，每三週一次投與2400 mg該蛋白質。
  77. 如請求項69至76中任一項所使用之抗PD-L1/TGFβ誘捕蛋白，其中該BTC係局部晚期BTC及/或轉移性BTC。
  78. 如請求項69至77中任一項所使用之抗PD-L1/TGFβ誘捕蛋白，其中該BTC展現陽性PD-L1表現。
  79. 如請求項69至78中任一項所使用之抗PD-L1/TGFβ誘捕蛋白，其進一步包含向該患者投與吉西他濱及/或順鉑。
  80. 如請求項76所使用之抗PD-L1/TGFβ誘捕蛋白，其中在該治療週期期間，吉西他濱及順鉑係在投與該蛋白質之同一天(第1天)投與。
  81. 如請求項80所使用之抗PD-L1/TGFβ誘捕蛋白，其進一步包含在該治療週期之第8天投與吉西他濱及順鉑。
  82. 如請求項81所使用之抗PD-L1/TGFβ誘捕蛋白，其中該治療在24週內重複總計八個週期。
  83. 如請求項82所使用之抗PD-L1/TGFβ誘捕蛋白，其進一步包含藉由在25週時開始投與該蛋白質以繼續治療該患者，但不共投與吉西他濱及順鉑。
  84. 如請求項69至83中任一項所使用之抗PD-L1/TGFβ誘捕蛋白，其中該蛋白質係包含在袋子、筆或注射器中。
  85. 如請求項84所使用之抗PD-L1/TGFβ誘捕蛋白，其中該袋子連接至包含管及/或針之通道。
  86. 如請求項69至85中任一項所使用之抗PD-L1/TGFβ誘捕蛋白，其中該蛋白質係包含在凍乾調配物或液體調配物中。
TW108121691A 2018-06-22 2019-06-21 用於治療膽道癌的標靶性tgf-b抑制之給藥方案 TW202019959A (zh)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201862688476P 2018-06-22 2018-06-22
US62/688,476 2018-06-22
US201962855205P 2019-05-31 2019-05-31
US62/855,205 2019-05-31

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW202019959A true TW202019959A (zh) 2020-06-01

Family

ID=68982740

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW108121691A TW202019959A (zh) 2018-06-22 2019-06-21 用於治療膽道癌的標靶性tgf-b抑制之給藥方案

Country Status (14)

Country Link
US (1) US20210214446A1 (zh)
EP (1) EP3810654A4 (zh)
JP (1) JP2021528399A (zh)
KR (1) KR20210022680A (zh)
CN (1) CN112673020A (zh)
AU (1) AU2019288765A1 (zh)
BR (1) BR112020026159A2 (zh)
CA (1) CA3103908A1 (zh)
CL (1) CL2020003323A1 (zh)
IL (1) IL279647A (zh)
MX (1) MX2020014166A (zh)
SG (1) SG11202012688UA (zh)
TW (1) TW202019959A (zh)
WO (1) WO2019246595A1 (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TW202304979A (zh) * 2021-04-07 2023-02-01 瑞士商諾華公司 抗ＴＧＦβ抗體及其他治療劑用於治療增殖性疾病之用途
WO2023045141A1 (zh) * 2021-09-26 2023-03-30 上海迈泰君奥生物技术有限公司 一种双功能融合蛋白

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
HUE054873T2 (hu) * 2014-02-10 2021-10-28 Merck Patent Gmbh Célzott TGF-béta-gátlás
GB201505305D0 (en) * 2015-03-27 2015-05-13 Immatics Biotechnologies Gmbh Novel Peptides and combination of peptides for use in immunotherapy against various tumors
CN118307682A (zh) * 2016-09-27 2024-07-09 埃皮辛特瑞柯斯公司 免疫调节性融合蛋白
SG11201906157YA (en) * 2017-01-07 2019-08-27 Merck Patent Gmbh Dosing regimens and dosage forms for targeted tgf-b inhibition

Also Published As

Publication number Publication date
CA3103908A1 (en) 2019-12-26
KR20210022680A (ko) 2021-03-03
EP3810654A4 (en) 2022-04-20
US20210214446A1 (en) 2021-07-15
WO2019246595A1 (en) 2019-12-26
IL279647A (en) 2021-03-01
EP3810654A1 (en) 2021-04-28
AU2019288765A1 (en) 2021-01-07
SG11202012688UA (en) 2021-01-28
CN112673020A (zh) 2021-04-16
MX2020014166A (es) 2021-03-09
BR112020026159A2 (pt) 2021-04-06
JP2021528399A (ja) 2021-10-21
CL2020003323A1 (es) 2021-07-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP3565599A1 (en) Dosing regimens and dosage forms for targeted tgf-b inhibition
TW202011954A (zh) 第三期nsclc之治療及與該治療相關之病理症狀之減緩
US20220195065A1 (en) Pharmaceutical formulations and dosage regimens for multi-specific binding proteins that bind her2, nkg2d, and cd16 for cancer treatment
US20210214446A1 (en) Dosing regimens for targeted tgf-b inhibition for use in treating biliary tract cancer
US20210115145A1 (en) Combination therapy with targeted tgf-b inhibition for treatment of advanced non-small cell lung cancer
US20210061899A1 (en) Dosing regimens for targeted tgf-b inhibition for use in treating cancer in treatment naïve subjects
WO2024064878A1 (en) Methods and compositions for the treatment of melanoma
TW202028226A (zh) Ｉｌ－１５蛋白複合物聯合ｐｄ－ｌ１抗體用於治療腫瘤疾病的用途