BR112020026159A2

BR112020026159A2 - Regimes de dosagem para inibição de tgf-beta alvos para uso no tratamento de câncer do trato biliar

Info

Publication number: BR112020026159A2
Application number: BR112020026159-9A
Authority: BR
Inventors: Isabelle Dussault; Motonobu Osada; Samer El Bawab; Yulia Vugmeyster; Akash Khandelwal; Olaf Christensen; Meng Li
Original assignee: Merck Patent Gmbh
Priority date: 2018-06-22
Filing date: 2019-06-21
Publication date: 2021-04-06
Also published as: JP2021528399A; SG11202012688UA; AU2019288765A1; MX2020014166A; CL2020003323A1; US20210214446A1; IL279647A; WO2019246595A1; EP3810654A4; CA3103908A1; CN112673020A; TW202019959A; KR20210022680A; EP3810654A1

Abstract

regimes de dosagem para inibição de tgf-beta alvos para uso no tratamento de câncer do trato biliar. a presente invenção refere-se a regimes de dosagem para inibição de tgf-ß direcionada com uma proteína de fusão bifuncional para uso em um método de tratamento de câncer do trato biliar ou inibição de crescimento de tumor do trato biliar em pacientes que não receberam tratamento ou pacientes com btc localmente avançado ou metastático que falharam ou são intolerantes à quimioterapia sistêmica de primeira linha.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "REGI- MES DE DOSAGEM PARA INIBIÇÃO DE TGF-BETA ALVOS PARA USO NO TRATAMENTO DE CÂNCER DO TRATO BILIAR".

REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS

[001] O presente pedido reivindica o benefício de e prioridade ao Pedido de Patente U.S. Provisório N° 62/688.476, depositado em 22 de junho de 2018; e ao Pedido de Patente U.S. Provisório N° 62/855.205, depositado em 31 de maio de 2019, cujas descrições são incorporadas a título de referência no presente documento na íntegra.

LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS

[002] O presente pedido contém uma Listagem de Sequências a qual foi enviada eletronicamente no formato ASCII e é incorporada ao presente documento a título de referência na íntegra. A dita cópia AS- CII, criada em 03 de junho de 2019, é denominada EMD- 008WO_SL_ST25.txt e tem um tamanho de 75.834 bytes.

CAMPO DA INVENÇÃO

[003] A presente invenção se refere, de modo geral, a regimes de dosagem para a inibição de TGF-β alvo com uma proteína de fusão bifuncional para o uso em um método de tratamento de câncer do trato biliar ("BTC") ou inibição do crescimento de tumor no tratamento de pacientes ou pacientes com BTC localmente avançado ou metastático que falharam ou são intolerantes à quimioterapia sistêmica de primeira linha.

ANTECEDENTES

[004] O eixo morte programada 1 (PD-1)/PD-L1 é um mecanismo importante para a evasão imune do tumor. As células T efetoras que detectam de forma crônica o antígeno assumem um fenótipo esgotado marcado pela expressão de PD-1, um estado sob o qual as células tumorais se acoplam por meio de regulação positiva de PD-L1. Além disso, no microambiente tumoral, células mieloides, macrófagos, célu-

las parenquimatosas e células T regulam positivamente PD-L1. O blo- queio do eixo restaura a função efetora nestas células T.

[005] A Publicação de Pedido de Patente U.S. Nº 20150225483 A1, incorporada ao presente documento a título de referência, descre- ve uma proteína de fusão bifuncional que combina um anticorpo anti- ligante 1 de morte programada (PD-L1) com o domínio extracelular solúvel do receptor de fator beta de crescimento tumoral de tipo II (TGFβRII) como uma "Armadilha" (Trap) para a neutralização de TGFβ em uma única molécula. Especificamente, a proteína é um heterote- trâmero que consiste em duas cadeias leves de imunoglobulina do an- ticorpo anti-PD-L1 e duas cadeia pesadas que compreendem a cadeia pesada do anticorpo anti-PD-L1 fundidas geneticamente através de um ligante de glicina-serina flexível ao domínio extracelular de TGFβRII humano (consulte a Figura 1). Esta molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ é concebida para ter como alvo dois mecanismos principais de imunossupressão no microambiente do tumor. A Publica- ção de Pedido de Patente U.S. Nº 20150225483 A1 descreve a admi- nistração da molécula de armadilha em doses com base no peso do paciente.

[006] O BTC é um grupo heterogêneo de tumores raros que in- cluem colangiocarcinoma intra-hepático e extra-hepático (CCA), cân- cer de vesícula biliar (GC) e carcinoma ampular (AC). O BTC não pas- sível de ressecção é tratado com quimioterapia, porém, o tempo médio de sobrevida é < 1 ano. A presente invenção é dirigida ao tratamento de BTC com uma imunoterapia com Armadilha anti-PD-L1/TGFβ.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[007] A presente invenção fornece regimes de dosagem aprimo- rados para a administração de proteínas bifuncionais que têm como alvo PD-L1 e TGFβ. Especificamente, regimes de dosagem indepen- dentes do peso corporal (independentes do PC) e formas de dosagem relacionadas que envolvem a administração de pelo menos 500 mg (por exemplo, 1200 mg, 1800 mg, 2400 mg) da proteína bifuncional administrada em várias frequências de dosagem podem ser usados como um produto terapêutico antitumor e anticâncer. O regime de do- sagem independente do PC assegura que todos os pacientes, inde- pendentemente de seu peso corporal, tenham exposição adequada ao fármaco no local do tumor.

[008] A proteína bifuncional da presente invenção (molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ) inclui um primeiro e um segundo polipep- tídeos. O primeiro polipeptídeo inclui: (a) pelo menos uma região vari- ável de uma cadeia pesada de um anticorpo que se liga à proteína humana Ligante 1 de Morte Programada (PD-L1); e (b) o Receptor de Fator β de Crescimento Transformante II humano (TGFβRII), ou um fragmento do mesmo, que pode se ligar o Fator β de Crescimento Transformante (TGFβ) (por exemplo, um fragmento solúvel). O segun- do polipeptídeo inclui pelo menos uma região variável de uma cadeia leve de um anticorpo que se liga à PD-L1, em que a cadeia pesada do primeiro polipeptídeo e a cadeia leve do segundo polipeptídeo, quando combinadas, formam um sítio de ligação a antígeno que se liga à PD- L1 (por exemplo, qualquer um dos anticorpos ou fragmentos de anti- corpo descritos no presente documento). Em virtude do fato que a pro- teína bifuncional da presente invenção se liga a dois alvos, (1) PD-L1, o qual é principalmente ligado à membrana, e (2) TGFβ, o qual é solú- vel no sangue e no interstício, o regime de dosagem independente do PC requer uma dose que seja eficaz para inibir não apenas a PD-L1 no local do tumor, mas também suficiente para inibir o TGFβ.

[009] Em um aspecto, a invenção fornece um método de trata- mento de câncer do trato biliar (BTC) (por exemplo, colangiocarcinoma intra-hepático, colangiocarcinoma extra-hepático e câncer ampular de Vater; câncer de vesícula biliar) ou inibição de crescimento de tumor do trato biliar em um paciente que não recebeu tratamento anterior ao administrar uma molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ descrita na presente invenção a um paciente que precisa da mesma. Em um as- pecto, a invenção permite o tratamento de câncer do trato biliar (por exemplo, câncer do trato biliar avançado ou metastático) em um indi- víduo que precisa do mesmo. Em um aspecto, a presente invenção fornece um método de tratamento de BTC que exibe expressão positi- va de PD-L1.

[0010] Em determinadas modalidades, a invenção fornece um mé- todo de tratamento de câncer do trato biliar (BTC) ou inibição de cres- cimento de tumor do trato biliar em um paciente que não recebeu tra- tamento anterior que precisa do mesmo ao administrar 1200 mg de uma molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ da presente invenção uma vez a cada duas semanas ao paciente. Em algumas outras moda- lidades, a invenção fornece um método de tratamento de câncer do trato biliar (BTC) ou inibição de crescimento de tumor do trato biliar em um paciente que não recebeu tratamento anterior que precisa do mesmo ao administrar 2400 mg de uma molécula de armadilha anti- PD-L1/TGFβ da presente invenção ao paciente uma vez a cada três semanas.

[0011] Em determinadas modalidades, indivíduos que não recebe- ram tratamento anterior ou pacientes com BTC avançado ou metastá- tico são tratados por meio da coadministração de gencitabina e/ou cis- platina com a molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ descrita na pre- sente invenção. Em algumas modalidades, indivíduos que não recebe- ram tratamento ou pacientes com BTC avançado ou metastático são tratados por meio da coadministração de gencitabina e cisplatina com a molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ descrita na presente inven- ção.

[0012] Em determinadas modalidades, a presente invenção des-

creve métodos de tratamento nos quais o paciente que não recebeu tratamento anterior recebe gencitabina e cisplatina no mesmo dia (por exemplo, dia 1) que a proteína (por exemplo, molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ descrita no presente documento) durante o ciclo de tratamento. Em determinadas modalidades, a gencitabina e a cisplati- na são administradas no dia 8 do ciclo de tratamento sem a proteína (por exemplo, molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ descrita no presente documento). Em algumas modalidades, o tratamento (por exemplo, coadministração da molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ com gencitabina e cisplatina no dia 1 seguido pela administração de gencitabina e cisplatina no dia 8) é repetido (por exemplo, 8 ciclos) ao longo de um período de tempo (por exemplo, 24 semanas) seguido pela administração de proteína (por exemplo, molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ descrita no presente documento) apenas durante um período de tempo (por exemplo, 2 anos).

[0013] A invenção também se caracteriza por um método para promover o esgotamento local de TGFβ. O método inclui administrar uma proteína descrita acima, onde a proteína se liga ao TGFβ em so- lução, se liga à PD-L1 sobre uma superfície celular e transporta o TGFβ ligado para a célula (por exemplo, uma célula de câncer do trato biliar).

[0014] A invenção também se caracteriza por um método para ini- bir a fosforilação de SMAD3 em uma célula (por exemplo, uma célula de câncer do trato biliar ou uma célula imune), em que o método inclui expor a célula no microambiente do tumor a uma proteína descrita acima.

[0015] Outras modalidades e detalhes da invenção são apresenta- dos no presente documento a seguir.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0016] A FIGURA 1 é um desenho esquemático de uma molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ que inclui um anticorpo anti-PD-L1 fun- dido a dois domínios extracelulares (ECDs) do receptor II de TGFβ através de um ligante de (Gly4Ser)4Gly (SEQ ID NO: 11).

[0017] A FIGURA 2 mostra um gráfico de um ensaio ELISA em duas etapas que demonstra que a Armadilha anti-PD-L1/TGFβ se liga concomitantemente à PD-L1 e ao TGFβ.

[0018] A FIGURA 3 é um gráfico que mostra que a Armadilha anti- PD-L1/TGFβ induz a um aumento drástico nos níveis de IL-2.

[0019] A FIGURA 4A é um gráfico que mostra o esgotamento in vivo de TGFβ1 em resposta à Armadilha anti-PD-L1/TGFβ. Os gráficos de linhas representam o controle de isotipo inicial, e três doses diferen- tes, conforme indicado na legenda. A FIGURA 4B é um gráfico que mostra o esgotamento in vivo de TGFβ2 em resposta à Armadilha anti- PD-L1/TGFβ. O gráfico de linhas representa o controle de isotipo inici- al, e três doses diferentes, conforme indicado na legenda. A FIGURA 4C é um gráfico que mostra o esgotamento in vivo de TGFβ3 em res- posta à Armadilha anti-PD-L1/TGFβ. O gráfico de linhas representa o controle de isotipo inicial, e três doses diferentes, conforme indicado na legenda. A FIGURA 4D é um gráfico que mostra que a ocupação de PD-L1 pela Armadilha anti-PD-L1/TGFβ suporta um modelo de li- gação a receptor no sistema de tumor EMT-6.

[0020] A FIGURA 5 é um gráfico que mostra a eficácia antitumor do controle da Armadilha anti-PD-L1/TGFβ (anti-PD-L1(mut)/TGFβ) em um modelo de xenoenxerto Detroit 562.

[0021] A FIGURA 6A é um gráfico de caixas da distribuição Cmédia para uma população inteira para uma dosagem fixa (1200 mg) versus a dosagem com base em mg/kg (17,65 mg/kg) em uma população si- mulada com um peso corporal médio de 68 kg. A FIGURA 6B é um gráfico de caixas de distribuição da AUC para exposição para uma po- pulação inteira para uma dosagem fixa (1200 mg) versus a dosagem com base em mg/kg (17,65 mg/kg) em uma população simulada com um peso corporal médio de 68 kg. A FIGURA 6C é um gráfico de cai- xas da distribuição Csérica para uma população inteira para uma dosa- gem fixa (1200 mg) versus a dosagem com base em mg/kg (17,65 mg/kg) em uma população simulada com um peso corporal médio de 68 kg. A FIGURA 6D é um gráfico de caixas da distribuição Cmax para uma população inteira para uma dosagem fixa (1200 mg) versus a do- sagem com base em mg/kg (17,65 mg/kg) em uma população simula- da com um peso corporal médio de 68 kg.

[0022] A FIGURA 6E é um gráfico de caixas da distribuição Cmédia para uma população inteira para uma dosagem fixa (500 mg) versus a dosagem com base em mg/kg (7,35 mg/kg) em uma população simu- lada com um peso corporal médio de 68 kg. A FIGURA 6F é um gráfi- co de caixas de distribuição da AUC para exposição para uma popula- ção inteira para uma dosagem fixa (500 mg) versus a dosagem com base em mg/kg (7,35 mg/kg) em uma população simulada com um pe- so corporal médio de 68 kg. A FIGURA 6G é um gráfico de caixas da distribuição Csérica para uma população inteira para uma dosagem fixa (500 mg) versus a dosagem com base em mg/kg (7,35 mg/kg) em uma população simulada com um peso corporal médio de 68 kg. A FIGURA 6H é um gráfico de caixas da distribuição Cmax para uma população inteira para uma dosagem fixa (500 mg) versus a dosagem com base em mg/kg (7,35 mg/kg) em uma população simulada com um peso corporal médio de 68 kg.

[0023] As FIGURAS 7A a 7C são gráficos que mostram a ocupa- ção prevista do receptor PK e PD-L1 ("RO") de moléculas de armadi- lha anti-PD-L1/TGFβ em doses e esquemas associados à estase do tumor em camundongos. A FIGURA 7A é um gráfico que mostra a concentração plasmática prevista em função do tempo. A FIGURA 7B é um gráfico que mostra a RO prevista para PD-L1 em função do tem-

po em PBMCs. A FIGURA 7C é um gráfico que mostra a RO prevista para PD-L1 em função do tempo no tumor.

[0024] A FIGURA 8 é um diagrama esquemático de um regime terapêutico descrito no Exemplo 2 para o tratamento de BTC avançado ou metastático.

[0025] A FIGURA 9 é um diagrama esquemático de um regime terapêutico descrito no Exemplo 4 para o tratamento de BTC avançado ou metastático.

[0026] As FIGURAS 10A-10E são gráficos de linhas que mostram que, no modelo de câncer de mama de murino 4T1, a combinação da molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ e cisplatina, mas não a molé- cula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ ou cisplatina apenas, melhora a eficácia antitumoral em relação ao controle de isotipo. A FIGURA 10A representa o volume médio do tumor por grupo de tratamento, confor- me indicado. As FIGURAS 10B-10E são gráficos de linhas que repre- sentam os volumes do tumor em camundongos individuais entre os respectivos grupos de tratamento: cada linha na FIGURA 10B repre- senta o volume do tumor em um camundongo tratado com controle de isotipo e controle de PBS (indicado como "controle de isotipo"); cada linha na FIGURA 10C representa o volume do tumor em um camun- dongo tratado com monoterapia com cisplatina; cada linha na FIGURA 10D representa o volume do tumor em um camundongo tratado com monoterapia com a molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ; e cada linha na FIGURA 10E representa o volume do tumor em um camun- dongo tratado com uma combinação da molécula de armadilha anti- PD-L1/TGFβ e cisplatina.

[0027] As FIGURAS 11A-11E são gráficos de linhas que mostram que, no modelo de câncer de bexiga MB49, a combinação da molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ e gencitabina, mas não a molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ ou gencitabina apenas, aumentou a eficá-

cia antitumoral em relação ao controle de isotipo. A FIGURA 11A re- presenta o volume médio do tumor por grupo de tratamento, conforme indicado. As FIGURAS 11B-11E são gráficos de linhas que represen- tam os volumes do tumor em camundongos individuais entre os res- pectivos grupos de tratamento: cada linha na FIGURA 11B representa o volume do tumor em um camundongo tratado com controle de isoti- po e controle de PBS (indicado como "controle de isotipo"); cada linha na FIGURA 11C representa o volume do tumor em um camundongo tratado com monoterapia com gencitabina; cada linha na FIGURA 11D representa o volume do tumor em um camundongo tratado com mono- terapia com a molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ; e cada linha na FIGURA 11E representa o volume do tumor em um camundongo tratado com uma combinação da molécula de armadilha anti-PD- L1/TGFβ e gencitabina.

DESCRIÇÃO DETALHADA

[0028] Por "TGFβRII" ou "Receptor II de TGFβ" entenda-se um polipeptídeo que tem a sequência da Isoforma A de Tipo 2 do Recep- tor de TGFβ humano de tipo selvagem (por exemplo, a sequência de aminoácidos com Nº de Acesso na NCBI Reference Sequence (Re- fSeq) NP_001020018 (SEQ ID NO: 8)) ou um polipeptídeo que tem a sequência da Isoforma B de Tipo 2 do Receptor de TGFβ humano de tipo selvagem (por exemplo, a sequência de aminoácidos com Nº de Acesso na NCBI Reference Sequence NP_003233 (SEQ ID NO: 9)) ou que tem uma sequência substancialmente idêntica à sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 8 ou SEQ ID NO: 9. O TGFβRII pode re- ter pelo menos 0,1 %, 0,5 %, 1 %, 5 %, 10 %, 25 %, 35 %, 50 %, 75 %, 90 %, 95 % ou 99 % da atividade de ligação ao TGFβ da sequência de tipo selvagem. O polipeptídeo de TGFβRII expresso carece da se- quência sinalizadora.

[0029] Por "fragmento de TGFβRII capaz de se ligar ao TGFβ" en-

tenda-se qualquer porção da sequência com Nº de Acesso na NCBI Reference Sequence NP_001020018 (SEQ ID NO: 8) ou com Nº de Acesso na NCBI Reference Sequence NP_003233 (SEQ ID NO: 9) ou uma sequência substancialmente idêntica à SEQ ID NO: 8 ou SEQ ID NO: 9 que tem pelo menos 20 (por exemplo, pelo menos 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 175 ou 200) amino- ácidos de comprimento que retém pelo menos um pouco da atividade de ligação ao TGFβ (por exemplo, pelo menos 0,1 %, 0,5 %, 1 %, 5 %, 10 %, 25 %, 35 %, 50 %, 75 %, 90 %, 95 % ou 99 %) do receptor de tipo selvagem ou do fragmento de tipo selvagem correspondente. Normalmente, tal fragmento é um fragmento solúvel. Um de tais frag- mentos exemplificativos é um domínio extracelular de TGFβRII que tem a sequência de SEQ ID NO: 10.

[0030] "Não recebeu tratamento" se refere a indivíduos ou pacien- tes que não receberam quimioterapia ou imunoterapia anterior para seu BTC localmente avançado ou metastático.

[0031] Por "falha" da quimioterapia ou um indivíduo quer "falhou" na quimioterapia, entenda-se que o câncer do indivíduo progrediu en- quanto ele era tratado com este regime de quimioterapia.

[0032] Por "intolerância" à quimioterapia ou um indivíduo que é "intolerante" à quimioterapia entenda-se, por exemplo, que um indiví- duo experimenta um alto nível de toxicidade associada à quimioterapia (por exemplo, graus de toxicidade 3 a 5 pelo NCI Common Termino- logy Criteria for Adverse Events) que resulta em hospitalização não planejada ou declínio funcional em virtude da quimioterapia ou espera- se que a mortalidade esteja associada à quimioterapia.

[0033] "PD-L1 positivo" ou "PD-L1+" indica ≥ 1 % de células tumo- rais positivas para PD-L1 conforme determinado, por exemplo, por meio do ensaio Dako IHC 22C3 PharmDx ou por meio do ensaio VENTANA PD-L1 (SP263).

[0034] "PD-L1 elevado" ou "PD-L1 high" se refere a ≥ 80 % de cé- lulas tumorais positivas para PD-L1, conforme determinado por meio do ensaio PD-L1 IHC 73-10 (Dako) ou pontuação de proporção de tu- mor (Tumor Proportion Score, TPS) ≥ 50 %, conforme determinado por meio do ensaio Dako IHC 22C3 PharmDx (TPS é um termo da técnica relacionada ao ensaio IHC 22C3 PharmDx, o qual descreve a porcen- tagem de células tumorais viáveis com coloração parcial ou completa da membrana (por exemplo, coloração para PD-L1)). Ambos os ensai- os IHC 73-10 e IHC 22C3 selecionam uma população de pacientes similar em seus respectivos cortes. Em determinadas modalidades, o ensaio VENTANA PD-L1 (SP263), o qual tem alta concordância com o ensaio 22C3 PharmDx (consulte Sughayer et al., Appl. Immunohisto- chem. Mol. Morphol., (2018)), também pode ser usado para determi- nação do nível de expressão elevada de PD-L1.

[0035] Por "substancialmente idêntico" entenda-se um polipeptí- deo que exibe pelo menos 50 %, desejavelmente 60 %, 70 %, 75 % ou 80 %, mais desejavelmente 85 %, 90 % ou 95 % e, ainda mais deseja- velmente, 99 % de identidade de sequência de aminoácidos com uma sequência de aminoácidos de referência. O comprimento das sequên- cias de comparação será geralmente de pelo menos 10 aminoácidos, desejavelmente de pelo menos 15 aminoácidos contíguos, mais dese- javelmente de pelo menos 20, 25, 50, 75, 90, 100, 150, 200, 250, 300 ou 350 aminoácidos contíguos e, ainda mais desejavelmente, a se- quência de aminoácidos de comprimento total.

[0036] Por "paciente" entenda-se um ser humano ou animal não humano (por exemplo, um mamífero). "Paciente", "indivíduo", "pacien- te que precisa de" e "indivíduo que precisa de" são termos usados de modo alternado na presente invenção, e se referem a um organismo vivo que sofre ou é propenso a uma doença ou condição que pode ser tratada através de administração usando os métodos e as composi-

ções fornecidos na presente invenção.

[0037] Os termos "tratar", "tratando" ou "tratamento" e outros equi- valentes gramaticais, conforme usado na presente invenção, incluem aliviar, diminuir, melhorar ou impedir uma doença, condição ou sinto- mas, impedir sintomas adicionais, melhorar ou impedir as causas me- tabólicas subjacentes dos sintomas, inibir a doença ou condição, por exemplo, deter o desenvolvimento da doença ou condição, aliviar a doença ou condição, causar a regressão da doença ou condição, alivi- ar uma condição causada pela doença ou condição ou interromper os sintomas da doença ou condição, e se destinam a incluir profilaxia. Os termos também incluem a obtenção de um benefício terapêutico e/ou um benefício profilático. Por benefício terapêutico entenda-se a erradi- cação ou melhora do transtorno subjacente que está sendo tratado. Além disso, um benefício terapêutico é obtido com a erradicação ou melhora de um ou mais sintomas fisiológicos associados ao transtorno subjacente de modo que uma melhora seja observada no paciente, apesar do paciente ainda poder estar acometido pelo transtorno subja- cente.

[0038] Por "câncer" entenda-se câncer do trato biliar ("BTC") avançado ou metastático. Exemplos não limitativos de BTC incluem câncer de vesícula biliar (GBC), colangiocarcinoma (CCA (colangio- carcinoma intra-hepático, colangiocarcinoma extra-hepático)) e carci- noma da ampola de Vater (VAC ou câncer ampular).

[0039] Por toda a descrição e as reivindicações do presente relató- rio descritivo, a palavra "compreende" e outras formas da palavra, tais como "compreender" e "compreendem", significam incluindo, porém sem limitações, e não se destinam a excluir, por exemplo, outros com- ponentes.

[0040] Por "coadministração" entenda-se que a composição des- crita no presente documento é administrada ao mesmo tempo, logo antes ou logo após a administração de terapias adicionais. A proteína e a composição da presente invenção podem ser administradas indivi- dualmente ou podem ser coadministradas com um segundo, terceiro ou quarto agente(s) terapêutico(s) a um paciente. Coadministração se destina a incluir administração simultânea ou sequencial da proteína ou composição individualmente ou em combinação (mais de um agen- te terapêutico).

[0041] O termo "um(a)" não deve ser entendido como se limitando ao singular. Em determinadas modalidades, o termo "um(a)" pode se referir a uma forma no plural. Conforme usado ao longo de presente invenção, as formas no singular "um", "uma" e "o/a" incluem a referên- cia no plural, a menos que o contexto expresse claramente de outra maneira. Deste modo, por exemplo, referência a "uma composição" inclui uma pluralidade de tais composições, bem como uma única composição.

[0042] Uma formulação "reconstituída" é aquela que foi preparada por meio da dissolução de uma formulação liofilizada em um carreador aquoso, de modo que a molécula bifuncional seja dissolvida na formu- lação reconstituída. A formulação reconstituída é apropriada para ad- ministração intravenosa (IV) a um paciente que precisa da mesma.

[0043] O termo "cerca de" se refere a qualquer alteração mínima na concentração ou quantidade de um agente que não muda a eficácia do agente na preparação de uma formulação e no tratamento de uma doença ou transtorno. Nas modalidades, o termo "cerca de" pode in- cluir ±15 % de um valor numérico ou ponto de dados especificado.

[0044] As faixas podem ser expressas na presente invenção como a partir de "cerca de" um valor particular e/ou "cerca de" outro valor particular. Quando tal faixa é expressa, outro aspecto inclui a partir de um valor particular e/ou até outro valor particular. Do mesmo modo, quando os valores são expressos como aproximações pelo uso do an-

tecedente "cerca de", deve ser compreendido que o valor particular forma outro aspecto. Também deve ser compreendido que os pontos extremos de cada uma das faixas são significativos em relação a outro ponto extremo e independentemente do outro ponto extremo. Também deve ser compreendido que há vários valores descritos na presente invenção, e que cada valor também é descrito como "cerca de" do va- lor particular além do próprio valor. Também deve ser compreendido que, ao longo de todo o pedido, os dados são fornecidos em vários formatos diferentes e que estes dados representam pontos extremos e pontos iniciais e faixas para qualquer combinação de pontos de dados. Por exemplo, se um determinado ponto de dados "10" e um determi- nado ponto de dados "15" são fornecidos, deve ser compreendido que maior do que, maior do que ou igual a, menor do que, menor do que ou igual a, e igual a 10 e a 15 são considerados descritos, assim como entre 10 e 15. Também deve ser compreendido que cada unidade en- tre duas unidades em particular também é descrita. Por exemplo, se 10 e 15 forem indicados, então, 11, 12, 13 e 14 também são indicados.

[0045] Uma formulação "isotônica" é aquela que tem essencial- mente a mesma pressão osmótica que o sangue humano. As formula- ções isotônicas geralmente terão uma pressão osmótica a partir de cerca de 250 a 350 mOsmol/kgH2O. O termo "hipertônico" é usado pa- ra descrever uma formulação que tem uma pressão osmótica acima daquela do sangue humano. A isotonicidade pode ser medida usando um osmômetro de tipo pressão de vapor ou congelamento, por exem- plo.

[0046] O termo "agente de tamponamento" se refere a um ou mais componentes que, quando adicionados a uma solução aquosa, podem proteger a solução contra as variações de pH quando da adição de ácido ou álcali ou quando de diluição com um solvente. Além dos tam- pões de fosfato, podem ser usados glicinato, carbonato, tampões de citrato e outros, caso nos quais os íons de sódio, potássio ou amônio podem servir como contra-íon.

[0047] Um "ácido" é uma substância que resulta em íons de hidro- gênio em uma solução aquosa. Um "ácido farmaceuticamente aceitá- vel" inclui ácidos inorgânicos e orgânicos que não são tóxicos na con- centração e da maneira como são formulados.

[0048] Uma "base" é uma substância que resulta em íons de hi- droxila na solução aquosa. As "bases farmaceuticamente aceitáveis" incluem bases inorgânicas e orgânicas que não são tóxicas na con- centração e da maneira como são formuladas.

[0049] Um "lioprotetor" é uma molécula a qual, quando combinada com uma proteína de interesse, impede ou reduz a instabilidade quí- mica e/ou física da proteína quando de liofilização e subsequente ar- mazenamento.

[0050] Um "conservante" é um agente que reduz a ação bacteria- na e pode ser opcionalmente adicionado às formulações do presente documento. A adição de um conservante pode, por exemplo, facilitar a produção de uma formulação multiuso (múltiplas doses). Exemplos de conservantes potenciais incluem cloreto de octadecil dimetil benzil amônio, cloreto de hexametônio, cloreto de benzalcônio (uma mistura dos cloretos de alquil benzil dimetil amônio na qual os grupos alquila são compostos de cadeias longas) e cloreto de benzetônio. Outros ti- pos de conservantes incluem álcoois aromáticos, tais como fenol, ál- coois butílico e benzílico, alquil parabenos, tais como metil ou propil parabeno, catecol, resorcinol, ciclo-hexanol, 3-pentanol e m-cresol.

[0051] Um "tensoativo" é uma molécula ativa na superfície que contém uma porção hidrofóbica (por exemplo, cadeia de alquila) e uma porção hidrofílica (por exemplo, grupos carboxila e carboxilato). O ten- soativo pode ser adicionado às formulações da invenção. Tensoativos apropriados para uso nas formulações da presente invenção incluem,

porém sem limitações, polissorbatos (por exemplo polissorbatos 20 ou 80); poloxâmeros (por exemplo, poloxâmero 188); ésteres de sorbitano e derivados; Triton; lauril sulfato de sódio; octil glicosídeo de sódio; lauril-, miristil-, linoleil- ou estearil-sulfobetadina; lauril-, miristil-, linoleil- ou estearil--sarcosina; linoleil-, miristil- ou cetil-betaína; lauramidopro- pil-cocamidopropil-, linoleamidopropil-, miristamidopropil-, palmidopro- pil- ou isostearamidopropil betaína (por exemplo, lauroamidopropil); miristamidopropil-, palmidopropil- ou isostearamidopropil-dimetilamina; cocoil metil sódico- ou oleil-taurato metil dissódico; e a série MONA- QUATTM (Mona Industries, Inc., Paterson, N.J.), polietileno glicol, poli- propil glicol e copolímeros de etileno e propileno glicol (por exemplo, Pluronics, PF68, etc.). Regime de Dosagem Independente do Peso Corporal

[0052] Foram desenvolvidos regimes de dosagem independentes do peso corporal que envolvem administrar aos pacientes com BTC pelo menos 500 mg de moléculas de armadilha anti-PD-L1/TGFβ bi- funcionais descritas no presente documento, instruídos pelos resulta- dos de uma variedade de avaliações pré-clínicas e clínicas das molé- culas. Dois estudos investigaram a segurança, tolerância e farmacoci- nética das moléculas, e incluíam avaliações de ocupação alvo de PD- L1 em células mononucleares de sangue periférico obtidas a partir do sangue de pacientes tratados e medições das concentrações de TGFβ1, TGFβ2 e TGFβ3. Tais avaliações foram com bases em dados provenientes de um total de 350 indivíduos (coortes de escalonamento de dose de 1, 3, 10 e 20 mg/kg em tumores sólidos e coortes de ex- pansão de 3 mg/kg, 10 mg/kg, 500 mg e 1200 mg em tipos de tumor selecionados). Modelo de Pk/Eficácia (Modelo de Camundongo)

[0053] Também foram conduzidos experimentos para determinar a eficácia da molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ em um modelo de tumor. Os resultados da eficácia dos xenoenxertos EMT-6 foram usa- dos para estabelecer o modelo de PK/Eficácia. O modelo de PK esta- belecido em camundongos foi usado para simular a exposição plasmá- tica da molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ para ajustes de eficá- cia do experimento. Os parâmetros estimados são indicados na Tabela

1. O valor de KC50 estimado foi de 55,3 µg/mL, o que representa as concentrações plasmáticas médias para as quais 50 % da atividade antitumor máxima da molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ pude- ram ser obtidos.

[0054] Os gráficos de diagnóstico básicos do modelo não revela- ram nenhum erro de especificação do modelo. As previsões do modelo podem capturar as distribuições de volume do tumor. Os resíduos ponderados condicionais normalmente são distribuídos com uma mé- dia de 0 e variância de 1 sem uma tendência. O modelo de PK/Eficácia foi, então, usado para simular a inibição de crescimento do tumor (Tu- mor Growth Inhibition, TGI) ao usar os perfis de concentração-tempo previstos em seres humanos em diferentes doses. Tabela 1: Parâmetros do modelo de PK/Eficácia da molécula de ar- madilha anti-PD-L1/TGFβ em camundongos com xenoenxerto EMT-6 Parâmetros Estimativa Padrão % de VC % de IIV -1 Kg (h ) 0,068 0,0005 0,82 40 Kg (h-1) 0,055 0,0024 4,4 76 KC50 (mg/ml) 55324,0 522,3 4,4 232 Kmax 2 0,09 1 93 Linha de base (mm3) 88,3 0,87 1 47 Análise da Resposta com Base na Ocupação de PD-L1 (em um Modelo de Camundongo)

[0055] Ao usar os experimentos de eficácia, as respostas nos ca- mundongos foram analisadas e classificadas quanto à regressão do tumor ou estase do tumor, e a PK e a ocupação do receptor (RO) para PD-L1 foram previstos com base no modelo de PK/RO integrado. A abordagem demonstrou que uma concentração plasmática da molécu- la de armadilha anti-PD-L1/TGFβ entre 40 e 100 µg/mL associada a uma RO para PD-L1 acima de 95 % no tumor é necessária para obter regressão do tumor. A concentração plasmática de uma molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ entre 10 e 40 µg/mL associada a uma RO para PD-L1 acima de 95 % na periferia é necessária para obter estase do tumor.

[0056] A análise da resposta e a PK/RO prevista nos camundon- gos remetem às FIGURAS 7A a 7C, as quais resumem a PK/RO/Eficácia para a molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ nos camundongos. Uma RO para PD-L1 de 95 % é obtida em uma con- centração plasmática de 40 µg/mL com uma TGI esperada/estimada de apenas cerca de 65 %. Aumentar a concentração acima de 40 µg/mL resulta em um aumento adicional na inibição de crescimento do tumor. Uma inibição de crescimento do tumor de 95 % é obtida na concentração plasmática média de cerca de 100 µg/mL.

[0057] Com base no modelo PK de população descrito a seguir, uma dose exata de pelo menos 500 mg administrada uma vez a cada duas semanas é necessária para manter uma concentração média de cerca de 100 µg/mL, enquanto que uma dose exata de cerca de 1200 mg administrada uma vez a cada duas semanas é necessária para manter uma Csérica de cerca de 100 µg/mL. Em determinadas modali- dades, cerca de 1200 mg a cerca de 3000 mg (por exemplo, cerca de 1200 mg, cerca de 1300 mg, cerca de 1400 mg, cerca de 1500 mg, cerca de 1600 mg, cerca de 1700 mg, cerca de 1800 mg, cerca de 1900 mg, cerca de 2000 mg, cerca de 2100 mg, cerca de 2200 mg, cerca de 2300 mg, cerca de 2400 mg, etc.) do produto de proteína da presente invenção (por exemplo, molécula de armadilha anti-PD- L1/TGFβ) são administrados a um indivíduo. Em determinadas moda- lidades, cerca de 1200 mg da molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ são administrados a um indivíduo uma vez a cada duas semanas. Em determinadas modalidades, cerca de 1800 mg da molécula de armadi- lha anti-PD-L1/TGFβ são administrados a um indivíduo uma vez a ca- da três semanas.

[0058] Nas modalidades, cerca de 1200 mg a cerca de 3000 mg (por exemplo, cerca de 1200 mg, cerca de 1300 mg, cerca de 1400 mg, cerca de 1500 mg, cerca de 1600 mg, cerca de 1700 mg, cerca de 1800 mg, cerca de 1900 mg, cerca de 2000 mg, cerca de 2100 mg, cerca de 2200 mg, cerca de 2300 mg, cerca de 2400 mg, etc.) do pro- duto de proteína com um primeiro polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3, e um segundo polipeptídeo que in- clui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 são administrados a um indivíduo para o tratamento de BTC ou inibição do crescimento de um tumor do trato biliar. Em determinadas modalidades, cerca de 1200 mg a cerca de 3000 mg (por exemplo, cerca de 1200 mg, cerca de 1300 mg, cerca de 1400 mg, cerca de 1500 mg, cerca de 1600 mg, cerca de 1700 mg, cerca de 1800 mg, cerca de 1900 mg, cerca de 2000 mg, cerca de 2100 mg, cerca de 2200 mg, cerca de 2300 mg, cerca de 2400 mg, etc.) do produto de proteína com um primeiro poli- peptídeo que inclui um primeiro polipeptídeo que compreende as se- quências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 35, 36 e 37 e um segundo polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 38, 39 e 40 são administrados a um indivíduo para o trata- mento de BTC ou inibição do crescimento de um tumor do trato biliar.

[0059] Em determinadas modalidades, cerca de 1200 mg do pro- duto de proteína com um primeiro polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 e um segundo polipeptídeo que in- clui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 são administrados a um indivíduo uma vez a cada duas semanas para o tratamento de BTC ou inibição do crescimento de um tumor do trato biliar. Em deter-

minadas modalidades, cerca de 1800 mg do produto de proteína com um primeiro polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 e um segundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 são administrados a um indivíduo uma vez a cada três semanas para o tratamento de BTC ou inibição do crescimento de um tumor do trato biliar. Em determinadas modalida- des, cerca de 1200 mg do produto de proteína que inclui um primeiro polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 35, 36 e 37 e um segundo polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 38, 39 e 40 são adminis- trados a um indivíduo uma vez a cada duas semanas para o tratamen- to de BTC ou inibição do crescimento de um tumor do trato biliar. Em determinadas modalidades, cerca de 1800 mg do produto de proteína que inclui um primeiro polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 35, 36 e 37, e um segundo polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 38, 39 e 40 são administrados a um indivíduo uma vez a cada três sema- nas para o tratamento de BTC ou inibição do crescimento de um tumor do trato biliar. Estabelecimento do Regime de Dosagem Independente do Peso Corporal

[0060] Informado pelos dados clínicos e pré-clínicos, um novo re- gime de dosagem independente do peso corporal para administração de moléculas de armadilha anti-PD-L1/TGFβ foi criado a fim de obter menos variabilidade na exposição, reduzir erros de dosagem, reduzir o tempo necessário para a preparação da dose e reduzir o desperdício do fármaco comparado com a dosagem em mg/kg, deste modo, facili- tando resultados de tratamento favoráveis. De acordo com uma moda- lidade, uma dose exata de pelo menos 500 mg pode ser administrada, não obstante o peso corporal do paciente. De acordo com outra moda-

lidade, uma dose exata de pelo menos 1200 mg pode ser administra- da, não obstante o peso corporal do paciente. De acordo com outra modalidade, uma dose exata de 1800 mg pode ser administrada, não obstante o peso corporal do paciente. De acordo com determinadas modalidades, uma dose exata de 2400 mg pode ser administrada, não obstante o peso corporal do paciente. Normalmente, tais doses seriam administradas repetidamente, tal como uma vez a cada duas semanas ou uma vez a cada 3 semanas, por exemplo. Por exemplo, para o tra- tamento de BTC ou inibição do crescimento de um tumor do trato bili- ar, uma dose exata de 1200 mg pode ser administrada uma vez a ca- da duas semanas, uma dose exata de 1800 mg pode ser administrada uma vez a cada três semanas ou uma dose exata de 2400 mg pode ser administrada uma vez a cada três semanas. Amostragem para Análise Farmacocinética (Pk) em Seres Huma- nos

[0061] Um exemplo da análise farmacocinética para determinar a dose exata ideal da molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ é forneci- do pelos experimentos descritos abaixo.

[0062] Amostras de soro para análise de dados farmacocinéticos (PK) foram coletadas antes do início da primeira dose e nos seguintes pontos no tempo após a primeira dose: no Dia 1 imediatamente após a infusão e 4 horas após o início da infusão; no Dia 2 pelo menos 24 ho- ras após o término da infusão do Dia 1; e nos Dias 8 e 15. Em ocasi- ões de dosagem subsequente selecionadas, na pré-dose, término da infusão e 2 a 8 horas após o término da infusão, as amostras foram coletadas nos Dias 15, 29, 43. Para os pontos no tempo posteriores nos Dias 57, 71 e 85, as amostras de pré-dose foram ou seriam cole- tadas seguido por uma vez a cada 6 semanas de amostragem PK até 12 semanas, então, uma vez a cada 12 semanas de amostragem PK. Na fase de expansão, uma amostragem PK escassa foi realizada.

[0063] Os dados de PK descritos acima foram usados para produ- zir um modelo de população PK e realizar simulações de possíveis re- gimes de dosagem.

Um método de modelagem, conhecido como mo- delo de abordagem completo, descrito em Gastonguay, M., Full Cova- riate Models as an Alternative to Methods Relying on Statistical Signifi- cance for Inferences about Covariate Effects: A Review of Methodo- logy and 42 Case Studies, (2011) página 20, Abstract 2229, foi aplica- do aos dados de modelo de população obtidos a partir das simulações para obter parâmetros que têm as características a seguir: modelo PK bicompartimentado com eliminação linear, IIV em CL, V1 e V2, aditivo combinado e erro residual proporcional, no modelo de covariância completo em CL e V1. As covariâncias de linha de base a seguir foram incluídas no modelo final: idade, peso, sexo, raça, albumina, CRP, contagem de plaquetas, eGFR, danos hepáticos, contagem de ECOG, tamanho do tumor, tipo do tumor e tratamento anterior com produtos biológicos.

As estimativas a seguir dentre as estimativas de parâmetro típicas para farmacocinética da proteína da presente invenção (por exemplo, molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ) foram obtidas: cle- arance (CL) 0,0177 l/h (6,2 %), volume central de distribuição (V1) 3,64 l (8,81 %), volume periférico de distribuição (V2) 0,513 l (25,1 %) e clearance intercompartimental (Q) 0,00219 l/h (17,8 %). A variabili- dade interpaciente foi de 22 % para CL, de 20 % para V1 e de 135 % para V2. O peso corporal foi uma covariância relevante em CL e V1. Para suportar a abordagem de dosagem exata, o impacto da estraté- gia de dosagem sobre a variabilidade de exposição à proteína da pre- sente invenção (por exemplo, molécula de armadilha anti-PD- L1/TGFβ) foi explorada.

Especificamente, foram feitas simulações para comparar a distribuição da exposição usando uma abordagem de do- sagem exata de 1200 mg uma vez a cada duas semanas versus uma abordagem de dosagem ajustada pelo PC de 17,65 mg/kg uma vez a cada duas semanas (a qual corresponde a 1200 mg uma vez a cada duas semanas para um indivíduo de 68 kg ou de 15 mg/kg uma vez a cada duas semanas (a qual corresponde a 1200 mg para um indivíduo de 80 kg). Simulações adicionais foram realizadas a fim de comparar a distribuição da exposição usando uma abordagem de dosagem exata de 500 mg uma vez a cada duas semanas versus uma abordagem de dosagem ajustada pelo PC de 7,35 mg/kg uma vez a cada duas se- manas (a qual corresponde a 500 mg uma vez a cada duas semanas para um indivíduo de 68 kg). Além disso, simulações foram realizadas para avaliar as doses exatas a seguir uma vez a cada três semanas: 1200 mg, 1400, mg, 1600 mg, 1800 mg, 2000 mg, 2200 mg, 2400 mg,

2.600 mg, 2.800 mg e 3000 mg.

[0064] Foi usada a metodologia a seguir para as simulações: N = 200 conjuntos de estimativas de parâmetro foram extraídos a partir da distribuição normal multivariável das estimativas de parâmetro usando a matriz de variância-covariância do modelo PK final. Para cada esti- mativa de parâmetro, 200 estimativas IIV foram extraídas a partir da distribuição normal multivariável $OMEGA, resultando em um total de

40.000 indivíduos (200 x 200). O conjunto de dados original (N = 380) foi amostrado novamente com substituição para gerar 40.000 conjun- tos de covariâncias combinadas e métricas de exposição de estado estável (AUC, Cmédia, Csérica e Cmax) foram gerados para cada regime de dosagem.

[0065] As simulações mostraram que, por todo um amplo espectro de PCs, a variabilidade na exposição é ligeiramente mais alta para a dosagem com base no PC comparado com a dosagem fixa. Um exemplo da distribuição de exposição a uma dose exata de 17,65 mg/kg e 1200 mg ou uma dose exata de 7,35 mg/kg e 500 mg para um peso corporal médio de 68 kg é mostrado nas FIGURAS 6A e 6E, res- pectivamente. As simulações também mostraram a tendência oposta nas distribuições da exposição através dos quartis de peso por toda a população de pacientes: os pacientes de baixo peso apresentaram uma exposição mais alta com a dosagem fixa, enquanto que os paci- entes com alto peso apresentaram uma exposição mais alta com a do- sagem ajustada pelo PC. Estabelecimento do Regime de Dose/Dosagem Eficaz em Seres Humanos: Dose-Resposta Preliminar em Câncer do Trato Biliar de 2ª Linha (2L BTC) Após Dosagem Uma Vez a Cada 2 Semanas (q2w) da Molécula de Armadilha Anti-PD-L1/TGFβ

[0066] Um exemplo de eficácia terapêutica da molécula de armadi- lha anti-PD-L1/TGFβ é estabelecido por meio do estudo clínico des- crito a seguir.

[0067] Pacientes com BTC metastático ou localmente avançado que progrediram após tratamento de primeira linha com base em plati- na ("1L") receberam a molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ da presente invenção a 1200 mg uma vez a cada duas semanas até do- ença progressiva, toxicidade inaceitável ou retirada do estudo confir- mada. O objetivo principal foi avaliar a segurança/tolerabilidade, en- quanto que os objetivos secundários incluíam avaliação da melhor resposta geral (Best Overall Response, "BOR") de acordo com o Res- ponse Evaluation Criteria in Solid Tumors, versão 1.1 (RECIST v1.1). A expressão de PD-L1 em células tumorais foi avaliada (clone de anti- corpo 73-10; Dako).

[0068] A partir do corte de dados no momento de análise, trinta pacientes com BTC pré-tratado receberam a molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ durante um período de tempo médio de 8,9 semanas (faixa, 2-57,6 semanas). Cinco pacientes permaneceram sob trata- mento. Os eventos adversos relacionados ao tratamento (Treatment- Related Adverse Events, TRAEs) mais comuns foram pirexia, erupção cutânea maculopapular (ambos 13,3 %), erupção cutânea e aumento de lipase (ambos 10 %). Dez pacientes (33,3 %) apresentaram TRAEs de grau ≥ 3. Foram relatados três casos de morte em virtude de even- tos adversos; uma morte foi em virtude de choque séptico (bacteremia possivelmente devido à infecção cutânea) após 14 doses de tratamen- to e duas mortes ocorreram em virtude de doença pulmonar interstici- al, a morte de um paciente ocorreu no tratamento após 3 doses e a outra morte ocorreu 6 meses após a última dose. Seis pacientes tive- ram uma resposta objetiva confirmada (ORR, 20 %), com cinco tendo respostas parciais (PRs), quatro estavam em andamento com o trata- mento em 3,9+, 4,2+, 5,5+ e 6,9+ meses, e um paciente teve uma res- posta completa (CR) em curso em 5,5+ meses. Dois pacientes adicio- nais obtiveram benefício clínico contínuo: um paciente teve uma res- posta parcial ("PR") após 1 ano de tratamento e um paciente teve uma PR contínua em 7,6+ meses após a pseudo-progressão inicial. A ORR confirmada pela expressão de PD-L1 foi de 25 % e 15,4 % em pacien- tes com tumores PD-L1+ (≥ 1 %) e PD-L1-, respectivamente.

[0069] Estes resultados demonstram que a monoterapia com a molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ tinha um perfil de segurança administrável e eficácia promissora em pacientes com BTC pré- tratado, incluindo respostas de longa duração em oito de trinta pacien- tes (27 %). Espera-se que esta atividade promissora da molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ observada como um tratamento de se- gunda linha ("2L") se traduza ou aumente como uma monoterapia de 1L ou terapia combinada (por exemplo, com gencitabina e cisplatina) no tratamento de pacientes com BTC metastático ou localmente avan- çado que não receberam tratamento anterior. Estabelecimento do Regime de Dosagem com Várias Frequências de Dosagem

[0070] Regimes de dados com várias frequências de dosagem fo- ram criados para permitir uma administração menos frequente e/ou permitir a coordenação de esquemas de dosagem com medicações concomitantes. Especificamente, a modelagem PK da população pre- liminar e a metodologia de simulação descritas acima foram usadas para simular as exposições a vários regimes de dosagem e comparar os regimes com base na exposição.

[0071] Com base nestas simulações, uma dose exata de pelo me- nos 500 mg administrada uma vez a cada duas semanas é necessária para manter uma concentração média de cerca de 100 µg/mL para um indivíduo típico, enquanto que uma dose exata de cerca de 1200 mg administrada uma vez a cada duas semanas é necessária para manter uma Csérica de cerca de 100 µg/mL.

[0072] Com base nas simulações para Cmédia, 1200 mg uma vez a cada duas semanas são equivalentes a 1800 mg uma vez a cada três semanas enquanto que, para a Csérica, 1200 mg uma vez a cada duas semanas são equivalentes a 2400 mg uma vez a cada três semanas. E, para a Cmédia, 500 mg uma vez a cada duas semanas são equiva- lentes a 750 mg uma vez a cada três semanas; para a Csérica, 500 mg uma vez a cada duas semanas são equivalentes a 1167 mg uma vez a cada três semanas.

[0073] Para administração simultânea da molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ com quimioterapias sistêmicas, as quais são fre- quentemente administradas em um esquema uma vez a cada três se- manas, 2400 mg uma vez a cada três semanas de molécula de arma- dilha anti-PD-L1/TGFβ são selecionados como um dose para a fase 2. Para a seleção da dose de uma vez a cada três semanas, Csérica,ss e concentração média ao longo do intervalo de dosagem no estado es- tacionário devem ser similares ou maiores do que aquelas alcançadas com 1200 mg uma vez a cada duas semanas de dosagem, e a maioria dos pacientes deve ter uma Csérica,ss acima da concentração alvo de 50 μg/mL. A concentração média no estado estacionário ao longo do in-

tervalo de dosagem com 2400 mg uma vez a cada três semanas de administração é de aproximadamente 328 μg/mL. A concentração mé- dia no estado estacionário ao longo do intervalo de dosagem com 1200 mg uma vez a cada duas semanas de administração é de apro- ximadamente 246 μg/mL. TGFβ Como um Alvo em Câncer

[0074] A presente invenção permite uma redução localizada de TGFβ em um microambiente de tumor ao capturar o TGFβ usando um receptor de citocina solúvel (TGFβRII) unido a uma porção de anticor- po que tem como alvo um receptor de verificação imune celular encon- trado sobre a superfície externa de determinadas células tumorais ou células imunes. Um exemplo de uma porção de anticorpo da invenção para uma proteína de verificação imune é a anti-PD-L1. Esta molécula bifuncional, algumas vezes indicada no presente documento como uma "armadilha de anticorpo-citocina", é eficaz precisamente porque a armadilha de anticorpo e citocina antirreceptor é fisicamente ligada. A vantagem resultante (em relação, por exemplo, à administração do an- ticorpo e do receptor como moléculas distintas) é em parte porque as citocinas funcionam predominantemente no ambiente local através das funções autócrina e parácrina. A porção do anticorpo direciona a mo- lécula de armadilha de citocina ao microambiente do tumor onde ela pode ser mais eficaz ao neutralizar os efeitos autócrinos ou parácrinos de imunossupressores locais. Além disso, nos casos onde o alvo do anticorpo é internalizado quando de ligação do anticorpo, é fornecido um mecanismo eficaz para a clearance do complexo de receptor de citocina/citocina. A internalização do alvo mediada por anticorpo foi mostrada para PD-L1 e foi mostrado que a molécula de armadilha anti- PD-L1/TGFβ tem uma taxa de internalização similar ao anticorpo anti- PD-L1. Esta é uma vantagem distinta em relação ao uso do anticorpo anti-TGFβ uma vez que, primeiramente, um anticorpo anti-TGFβ não poderia ser completamente neutralizado; e, em segundo, o anticorpo pode atuar como um carreador que estende a meia-vida da citocina.

[0075] Na verdade, conforme descrito a seguir, o tratamento com a molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ induz a um efeito antitumor sinérgico em virtude do bloqueio simultâneo da interação entre PD-L1 nas células tumorais e PD-1 nas células imune, e a neutralização de TGFβ no microambiente do tumor. Sem estar limitado pela teoria, isto se deve presumivelmente a um efeito sinérgico obtido a partir do blo- queio simultâneo dos dois principais mecanismos de evasão imune e, além disso, ao esgotamento do TGFβ no microambiente do tumor por uma entidade molecular única. Este esgotamento é obtido (1) ao ter como alvo o anticorpo anti-PD-L1 às células tumorais; (2) através de ligação de TGFβ autócrino/parácrino no microambiente do tumor pela molécula de armadilha de TGF-β; e (3) através de destruição do TGFβ ligado por meio de endocitose mediada pelo receptor PD-L1. Além dis- so, o TGFβRII fundido ao C-término de Fc (fragmento da cristalização de IgG) foi várias vezes mais potente do que o TGFβRII-Fc que coloca o TGFβRII no N-término de Fc.

[0076] O TGFβ tem sido um alvo um tanto questionável na imuno- terapia do câncer em virtude de de seus papéis paradoxais como "Jekyll e Hyde" molecular em câncer (Bierie et al., Nat. Rev. Cancer, 2006; 6: 506-20). Como algumas outras citocinas, a atividade de TGFβ é dependente do estágio de desenvolvimento e do contexto. Na ver- dade, o TGFβ pode atuar como um promotor do tumor ou como um supressor do tumor, afetando o início, progressão e metástase do tu- mor. Os mecanismos subjacentes deste papel duplo do TGFβ perma- necem obscuros (Yang et al., Trends Immunol. 2010; 31: 220-227). Embora tenha sido postulado que a sinalização dependente de Smad media a inibição de crescimento da sinalização ao TGFβ, enquanto que as vias independentes de Smad contribuem para seu efeito de promoção do tumor, também há dados que mostram que as vias de- pendentes de Smad estão envolvidas na progressão do tumor (Yang et al., Cancer Res. 2008; 68: 9107-11).

[0077] Tanto o ligante quanto o receptor de TGFβ foram estudados intensivamente como alvos terapêuticos. Há três isoformas do ligante, TGFβ1, 2 e 3, as quais existem como homodímeros. Também há três receptores de TGFβ (TGFβR), os quais são denominados TGFβR de tipos I, II e III (Lopez-Casillas et al., J. Cell Biol. 1994; 124: 557-68). O TGFβRI é a cadeia de sinalização e não pode se ligar ao ligante. O TGFβRII se liga aos ligantes TGFβ1 e 3, mas não ao TGFβ2, com grande afinidade. O complexo TGFβRII/TGFβ recruta TGFβRI para formar o complexo de sinalização (Won et al., Cancer Res. 1999; 59: 1273-7). O TGFβRIII é um regulador positivo de TGFβ que se liga a seus receptores de sinalização e se liga a todas as 3 isoformas de TGFβ com grande afinidade. Na superfície da célula, o complexo TGFβ/TGFβRIII se liga ao TGFβRII e, então, recruta o TGFβRI, o qual desloca o TGFβRIII para formar o complexo de sinalização.

[0078] Embora todas as três isoformas de TGFβ diferentes sinali- zem através do mesmo receptor, elas são conhecidas por terem pa- drões de expressão diferenciais e funções não sobrepostas in vivo. Camundongos com silenciamento (knockout) das três isoformas de TGF-β diferentes têm fenótipos distintos, indicando várias funções não compensadas (Bujak et al., Cardiovasc. Res. 2007; 74: 184-95). Em- bora camundongos nulos para TGFβ1 exibam comprometimento da hematopoiese e vasculogênese e camundongos nulos para TGFβ3 exibam desenvolvimento pulmonar comprometido e palatogênese, camundongos nulos para TGFβ2 mostram várias anormalidades de desenvolvimento, as mais proeminentes sendo múltiplas deformidades cardíacas (Bartram et al., Circulation 2001; 103: 2745-52; Yamagishi et al., Anat. Rec. 2012; 295: 257-67). Além disso, o TGFβ está envolvido em desempenhar um papel principal no reparo de danos ao miocárdio após isquemia e lesões por reperfusão. Em um coração adulto, os cardiomiócitos secretam TGFβ, os quais atuam de forma autócrina pa- ra manter a taxa de batimentos espontânea. De modo importante, 70 a 85 % do TGFβ secretado pelos cardiomiócitos são TGFβ2 (Roberts et al., J. Clin. Invest. 1992; 90: 2056-62). Apesar da preocupação com a cardiotoxicidade aumentada através de tratamento com inibidores de quinase de TGFβRI, a presente requerente observou uma ausência de toxicidade, incluindo cardiotoxicidade, da molécula de armadilha anti- PD-L1/TGFβ em macacos.

[0079] As abordagens terapêuticas para neutralizar o TGFβ inclu- em o uso de domínios extracelulares dos receptores de TGFβ como moléculas de armadilha receptoras solúveis e anticorpos neutralizan- tes. Dentre as abordagens de moléculas de armadilha receptoras, o TGFβRIII solúvel pode parecer a escolha óbvia, uma vez que ele se liga todos os três ligantes de TGFβ. No entanto, o TGFβRIII, o qual ocorre naturalmente como uma glicoproteína glucosaminoglicano (GAG) de 280-330 kD, com domínio extracelular de 762 resíduos de aminoácido, é uma proteína muito complexa para o desenvolvimento bioterapêutico. O TGFβRIII solúvel destituído de GAG pode ser produ- zido em células de insetos e foi demostrado que é um agente neutrali- zante de TGFβ potente (Vilchis-Landeros et al., Biochem. J., (2001), 355: 215). Os dois domínios de ligação separados (aquele relacionado à endoglina e aquele relacionado à uromodulina) de TGFβRIII poderi- am ser expressos independentemente, mas foi demonstrado que têm afinidades 20 a 100 vezes menores do que aquela do TGFβRIII solú- vel, e muita atividade de neutralização diminuída (Mendoza et al., Bio- chemistry 2009; 48: 11755-65). Por outro lado, o domínio extracelular de TGFβRII tem apenas 136 resíduos de aminoácidos de comprimento e pode ser produzido como uma proteína glicosilada de 25-35 kD.

Também foi demonstrado que o TGFβRII solúvel recombinante tam- bém se liga ao TGFβ1 com uma KD de 200 pM, a qual é razoavelmen- te similar à KD de 50 pM para o TGFβRII de comprimento total nas cé- lulas (Lin et al., J. Biol. Chem. (1995), 270: 2747-54). O TGFβRII-Fc solúvel foi testado como um agente anticâncer e foi demonstrado que inibe o crescimento de mesotelioma maligno em murinos estabelecido em um modelo de tumor (Suzuki et al., Clin. Cancer Res., 2004; 10: 5907-18). Uma vez que o TGFβRII não se liga ao TGFβ2, e o TGFβRIII se liga ao TGFβ1 e 3 com afinidade menor do que ao TGFβRII, uma proteína de fusão do domínio de endoglina de TGFβRIII e o domínio extracelular de TGFβRII foi produzida em bactérias e foi demonstrado que inibe a sinalização ao TGFβ1 e 2 em ensaios com base em células mais eficazmente do que o TGFβRII ou RIII (Verona et al., Protein Eng'g Des. Sel. (2008), 21: 463-73).

[0080] Ainda outra abordagem para neutralizar todas as três iso- formas dos ligantes de TGFβ consiste em selecionar um anticorpo an- ti-TGFβ de pan-neutralização ou um anticorpo antirreceptor que impe- de que o receptor se ligue ao TGFβ1, 2 e 3. GC1008, um anticorpo humano alvo para todas as isoformas de TGFβ, estava em um estudo de fase I/II em pacientes com melanoma maligno avançado ou carci- noma de células renais (Morris et al., J. Clin. Oncol. (2008); 26: 9028 (Meeting Abstract)). Embora o tratamento seja considerado seguro e bem tolerado, somente uma eficácia clinica limitada foi observada e, deste modo, foi difícil interpretar a importância da terapia anti-TGFβ sem caracterização adicional dos efeitos imunes (Flavell et al., Nat. Rev. Immunol. (2010); 10: 554-67). Também havia anticorpos alvos para as isoformas de TGFβ testados na clínica. O metelimumabe, um anticorpo alvo para TGFβ1, foi testado em um experimento clinico de Fase 2 como um tratamento para impedir a cicatrização pós-operatória excessiva em cirurgia de glaucoma; e o lerdelimumabe, um anticorpo alvo para TGFβ2, foi considerado seguro, mas ineficaz em melhorar a cicatrização após a cirurgia dos olhos em um estudo de Fase 3 (Khaw et al., Ophthalmology (2007); 114: 1822-1830). Os anticorpos anti- TGFβRII que impedem o receptor de se ligar a todas as três isoformas de TGFβ, tais como o anticorpo anti-TGFβRII humano TR1 e o anti- corpo anti-TGFβRII de camundongo MT1, também demostraram al- guma eficácia terapêutica contra o crescimento do tumor primário e metástase em modelos de camundongo (Zhong et al., Clin. Cancer Res. (2010); 16: 1191-205). No entanto, em um estudo de Fase I re- cente do anticorpo TR1 (LY3022859), o escalonamento da dose além de 25 mg (dose exata) foi considerado inseguro em virtude da libera- ção descontrolada de citocina, apesar do tratamento profilático (Tol- cher et al., Cancer Chemother. Pharmacol. (2017); 79: 673-680). Até o momento, a vasta maioria dos estudos sobre tratamento anticâncer com foco no TGFβ, incluindo inibidores de pequenas moléculas de si- nalização ao TGFβ os quais frequentemente são muito tóxicos, está no estágio pré-clínico e a eficácia antitumor obtida foi limitada (Calone et al., Exp Oncol. (2012); 34: 9-16; Connolly et al., Int. J. Biol. Sci. (2012); 8: 964-78).

[0081] A molécula de armadilha anti-TGF-β da invenção é uma proteína bifuncional que contém pelo menos uma porção de um recep- tor II de TGFβ humano (TGFβRII) que é capaz de ligação ao TGFβ. Em determinadas modalidades, o polipeptídeo armadilha de TGF-β é uma porção solúvel da Isoforma A do Receptor de TGFβ humano de Tipo 2 (SEQ ID NO: 8) que é capaz de ligação ao TGFβ. Em determi- nadas modalidades, o polipeptídeo armadilha de TGF-β contém pelo menos os aminoácidos 73 a 184 de SEQ ID NO: 8. Em determinadas modalidades, o polipeptídeo armadilha de TGF-β contém os aminoáci- dos 24 a 184 de SEQ ID NO: 8. Em determinadas modalidades, o poli- peptídeo armadilha de TGF-β é uma porção solúvel da isoforma B do

Receptor de TGFβ humano de Tipo 2 (SEQ ID NO: 9) que é capaz de ligação ao TGFβ. Em determinadas modalidades, o polipeptídeo ar- madilha de TGF-β contém pelo menos os aminoácidos 48-159 de SEQ ID NO: 9. Em determinadas modalidades, o polipeptídeo armadilha de TGF-β contém os aminoácidos 24 a 159 de SEQ ID NO: 9. Em deter- minadas modalidades, o polipeptídeo armadilha de TGF-β contém os aminoácidos 24 a 105 de SEQ ID NO: 9. Mecanismos de Ação

[0082] A abordagem de direcionamento dos pontos de verificação de inibição de células T para desinibição com anticorpos terapêuticos é uma área de intensa investigação (para uma revisão, consulte Par- doll, Nat. Rev. Cancer 2012; 12: 253-264). Em uma abordagem, a por- ção de anticorpo ou fragmentos de ligação a antígeno do mesmo têm como alvo proteínas de receptor do ponto de verificação de inibição de células T em células T tais como, por exemplo: CTLA-4, PD-1, BTLA, LAG-3, TIM-3 ou LAIR1. Em outra abordagem, a porção de anticorpo tem como alvo os contra-receptores em células apresentadoras de an- tígeno e células tumorais (as quais co-optam alguns desres contra- receptores para sua própria evasão imune) tais como, por exemplo: PD-L1 (B7-H1), B7-DC, HVEM, TIM-4, B7-H3 ou B7-H4.

[0083] A invenção considera o anticorpo armadilha de TGFβ que tem como alvo, através de sua porção de anticorpo ou fragmentos de ligação a antígeno do mesmo, os pontos de verificação de inibição de células T para desinibição. Para esta finalidade, as requerentes testa- ram a eficácia antitumor da combinação de uma molécula de armadi- lha de TGF-β com os anticorpos que têm como alvo as várias proteí- nas de receptor do ponto de verificação de inibição de células T, tais como anti-PD-1, anti-PD-L1, anti-TIM-3 e anti-LAG3.

[0084] O eixo de morte programada 1 (PD-1)/PD-L1 é um meca- nismo importante para a evasão imune do tumor. As células T efetoras que detectam cronicamente o antígeno assumem um fenótipo esgota- do marcado pela expressão de PD-L1, um estado sob o qual as célu- las tumorais se acoplam por meio de regulação positiva de PD-L1. Além disso, no microambiente do tumor, células mieloides, macrófa- gos, células parenquimais e células T regulam positivamente o PD-L1. O bloqueio do eixo restaura a função efetora nestas células T. A molé- cula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ também se liga ao TGFβ (isofor- mas 1, 2 e 3), o qual é uma citocina inibidora produzida no microambi- ente do tumor por células que incluem neutrófilos apoptóticos, células supressoras derivadas de mieloides, células T e o tumor. A inibição de TGFβ pelo TGFβRII solúvel reduziu o mesotelioma maligno de uma maneira que estava associada a um aumento no efeito antitumor das células T CD8+. Foi mostrado que a ausência de TGFβ1 produzido por células T CD4+ ativadas e células Treg inibe o crescimento do tumor e protegeu os camundongos contra o câncer espontâneo. Deste modo, o TGFβ parece ser importante para a evasão imune do tumor.

[0085] O TGFβ tem um efeito inibidor de crescimento em células epiteliais normais, funcionando como um regulador de homeostase da célula epitelial, e atua como um supressor do tumor durante a carcino- gênese inicial. À medida que os tumores progridem para a malignida- de, os efeitos inibidores de crescimento do TGFβ no tumor são perdi- dos através de mutação em um ou mais componentes de sinalização da via de TGFβ ou através de reprogramação oncogênica. Quando de perda da sensibilidade de inibição de TGFβ, o tumor continua a produ- zir altos níveis de TGFβ o que, então, serve para promover o cresci- mento do tumor. A citocina TGFβ é super expressa em vários tipos de câncer com correlação ao estágio do tumor. Muitos tipos de células no microambiente do tumor produzem TGFβ, incluindo as próprias células tumorais, células mieloides imaturas, células T reguladoras e fibroblas- tos estromais; estas células geram coletivamente um grande reserva-

tório de TGFβ na matriz extracelular. A sinalização ao TGFβ contribui para a progressão do tumor ao promover a metástase, estimular a an- giogênese e suprimir a imunidade antitumor inata e adaptativa. Como um fator amplamente imunossupressor, o TGFβ regula negativamente a função efetora das células T citotóxicas ativadas e células NK dire- tamente e induz potencialmente à diferenciação de células T CD4+ iniciais ao fenótipo de células T reguladoras imunossupressoras (Treg). Além disso, o TGFβ polariza macrófagos e neutrófilos para um fenótipo de cicatrização de ferimentos que está associado à produção de citocinas imunossupressoras. Como uma estratégia terapêutica, a neutralização da atividade de TGFβ tem o potencial de controlar o crescimento do tumor ao restaurar a imunidade antitumor eficaz, im- pedir a metástase e inibir a angiogênese.

[0086] A combinação destas vias, PD-1 ou PD-L1 e TGFβ, é atra- ente como uma abordagem antitumoral. O bloqueio concomitante de PD-1 e de TGFβ pode restaurar as citocinas pró-inflamatórias. A molé- cula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ inclui, por exemplo, um domínio extracelular do receptor de TGFβ humano unido covalentemente ao TGFβRII através de um ligante de glicina/serina no C-término de cada cadeia pesada do anticorpo de IgG1 anti-PD-L1 inteiramente humano. Dado o quadro emergente para a classe anti-PD-1/PD-L1, em que as respostas são aparentes, mas com espaço para aumento no tamanho do efeito, considera-se que o codirecionamento de uma etapa de mo- dulação imune complementar melhorará a resposta do tumor. Um agente similar que tem como alvo o TGF, fresolimumabe, o qual é um anticorpo monoclonal que tem como alvo o TGFβ1, 2 e 3, demonstrou uma evidência inicial da resposta do tumor em uma experimentação de Fase I em indivíduos com melanoma.

[0087] A presente invenção fornece experimentos que demonstra- ram que a porção TGFβRII da molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ

(o controle de armadilha "anti-PDL-1(mut)/TGF-β") induziu à atividade antitumor. Por exemplo, após implante subcutâneo em um modelo de carcinoma faringeal humano Detroit 562, a molécula de armadilha anti- PD-L1(mut)/TGFβ induziu a uma redução dependente da dose no vo- lume do tumor quando administrada a 25 µg, 76 µg ou 228 µg (FIGU- RA 5).

[0088] A presente invenção fornece experimentos que demonstra- ram que a proteína da presente invenção se ligou simultaneamente ao PD-L1 e ao TGFβ (FIGURA 2).

[0089] A presente invenção fornece experimentos que demonstra- ram que a proteína da presente invenção (por exemplo, molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ) inibiu a sinalização dependente de PD-L1 e TGFβ in vitro. A presente invenção forneceu experimentos que de- monstraram que a proteína da presente invenção melhorou a função efetora das células T in vitro através de bloqueio da inibição imune mediada por PD-L1, conforme medido por meio de um ensaio de indu- ção de IL-2 após estimulação com superantígeno (FIGURA 3). A apro- ximadamente 100 ng/ml, a proteína da presente invenção induziu a um aumento dramático nos níveis de IL-2 in vitro (FIGURA 3).

[0090] A presente invenção fornece experimentos que demonstra- ram que a proteína da presente invenção (por exemplo, molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ) causou o esgotamento de TGFβ do san- gue in vivo. O tratamento de células de câncer de mama EMT-6 im- plantadas ortotopicamente em camundongos JH com 55 µg, ou 164 µg, ou 492 µg da proteína da presente invenção resultou em um esgo- tamento eficiente e alvo de TGFβ1 (FIGURA 4A), TGFβ2 (FIGURA 4B) e TGFβ3 (FIGURA 4C). Além disso, a presente invenção forneceu ex- perimentos que demonstraram que a proteína da presente invenção ocupou o alvo PD-L1, dando suporte à noção de que a proteína da presente invenção se adapta a um modelo de ligação a receptor no sistema do tumor EMT-6 (FIGURA 4D).

[0091] A presente invenção fornece experimentos que demonstra- ram que a proteína da presente invenção se ligou de maneira eficiente, específica e simultânea ao PD-L1 e ao TGFβ, possuía uma atividade antitumor potente em vários modelos de camundongo, suprimiu o crescimento e a metástase do tumor, bem como estendeu a sobrevida e conferiu imunidade antitumor protetora de longo prazo. Anticorpos Anti-PD-L1

[0092] A molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ da presente in- venção pode incluir qualquer anticorpo anti-PD-L1, ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, descrito no estado da técnica. Os anti- corpos anti-PD-L1 estão comercialmente disponíveis, por exemplo, o anticorpo 29E2A3 (Biolegend, Cat. Nº 329701). Os anticorpos podem ser monoclonais, quiméricos, humanizados ou humanos. Os fragmen- tos de anticorpos incluem os fragmentos Fab, F(ab')2, scFv e Fv, os quais são descritos em mais detalhes abaixo.

[0093] Anticorpos exemplificativos são descritos na Publicação PCT WO 2013/079174. Estes anticorpos podem incluir um polipeptí- deo de região variável de cadeia pesada que inclui uma sequência de HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3, onde: (a) a sequência de HVR-H1 é X1YX2MX3 (SEQ ID NO: 21); (b) a sequência de HVR-H2 é SIYPSGGX4TFYADX5VKG (SEQ ID NO: 22); (c) a sequência de HVR-H3 é IKLGTVTTVX6Y (SEQ ID NO: 23); ainda onde: X1 é K, R, T, Q, G, A, W, M, I ou S; X2 é V, R, K, L, M ou I; X3 é H, T, N, Q, A, V, Y, W, F ou M; X4 é F ou I; X5 é S ou T; X6 é E ou D.

[0094] Em uma modalidade, X1 é M, I ou S; X2 é R, K, L, M ou I; X3 é F ou M; X4 é F ou I; X5 é S ou T; X6 é E ou D.

[0095] Em outra modalidade X1 é M, I ou S; X2 é L, M ou I; X3 é F ou M; X4 é I; X5 é S ou T; X6 é D.

[0096] Em ainda outra modalidade, X1 é S; X2 é I; X3 é M; X4 é I; X5 é T; X6 é D.

[0097] Em outro aspecto, o polipeptídeo também inclui as sequên- cias da região estrutural de cadeia pesada de região variável justapos- tas entre as HVRs de acordo com a fórmula: (HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC- FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4).

[0098] Em ainda outro aspecto, as sequências de região estrutural são derivadas de sequências de região estrutural de consenso huma- nas ou de sequências de região estrutural de linhagem germinativa humana.

[0099] Em ainda outro aspecto, pelo menos uma das sequências de região estrutural é como segue: HC-FR1 é EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS (SEQ ID NO: 24); HC-FR2 é WVRQAPGKGLEWVS (SEQ ID NO: 25); HC-FR3 é RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 26); HC-FR4 é WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 27).

[00100] Em ainda outro aspecto, o polipeptídeo de cadeia pesada também é combinado com uma cadeia leve de região variável que in- clui HVR-L1, HVR-L2 e HVR-L3, onde: (a) a sequência de HVR-L1 é TGTX7X8DVGX9YNYVS (SEQ ID NO: 28); (b) a sequência de HVR-L2 é X10VX11X12RPS (SEQ ID NO: 29); (c) a sequência de HVR-L3 é SSX13TX14X15X16X17RV (SEQ ID NO: 30); onde: X7 é N ou S; X8 é T, R ou S; X9 é A ou G; X10 é E ou D; X11 é I, N ou S; X12 é D, H ou N; X13 é F ou Y; X14 é N ou S; X15 é R, T ou S; X16 é G ou S; X17 é I ou T.

[00101] Em outra modalidade, X7 é N ou S; X8 é T, R ou S; X9 é A ou G; X10 é E ou D; X11 é N ou S; X12 é N; X13 é F ou Y; X14 é S; X15 é S; X16 é G ou S; X17 é T.

[00102] Em ainda outra modalidade, X7 é S; X8 é S; X9 é G; X10 é D; X11 é S; X12 é N; X13 é Y; X14 é S; X15 é S; X16 é S; X17 é T.

[00103] Em ainda outro aspecto, a cadeia leve também inclui as se- quências de região estrutural de cadeia leve de região variável justa- postas entre as HVRs de acordo com a fórmula: (LC-FR1MHVR-L1)- (LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4).

[00104] Em ainda outro aspecto, as sequências de região estrutural de cadeia leve são derivadas das sequências de região estrutural de consenso humanas ou de sequências de região estrutural de linhagem germinativa humana.

[00105] Em ainda outro aspecto, as sequências de região estrutural de cadeia leve são sequências de cadeia leve lambda.

[00106] Em ainda outro aspecto, pelo menos uma das sequências de região estrutural é a seguinte: LC-FR1 é QSALTQPASVSGSPGQSITISC (SEQ ID NO: 31); C-FR2 é WYQQHPGKAPKLMIY (SEQ ID NO: 32); LC-FR3 é GVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYC (SEQ ID NO: 33); LC-FR4 é FGTGTKVTVL (SEQ ID NO: 34).

[00107] Em outra modalidade, a invenção fornece um anticorpo an- ti-PD-L1 ou fragmento de ligação a antígeno que inclui uma sequência de região variável de cadeia pesada e uma sequência de região variá- vel de cadeia leve, onde: (a) a cadeia pesada inclui HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3, em que: (i) a sequência de HVR-H1 é X1YX2MX3 (SEQ ID NO: 21); (ii) a sequência de HVR-H2 é SIYPSGGX4TFYADX5VKG (SEQ ID NO: 22); (iii) a sequência de HVR-H3 é IKLGTVTTVX6Y (SEQ ID NO: 23) e; (b) a cadeia leve inclui HVR-L1, HVR-L2 e HVR-L3, em que: (iv) a sequência de HVR-L1 é TGTX7X8DVGX9YNYVS (SEQ ID NO: 28); (v) a sequência de HVR-L2 é X10VX11X12RPS (SEQ ID NO: 29); (vi) a sequência de HVR-L3 é SSX13TX14X15X16X17RV (SEQ ID NO: 30); em que: X1 é K, R, T, Q, G, A, W, M, I ou S; X2 é V, R, K, L, M ou I; X3 é H, T, N, Q, A, V, Y, W, F ou M; X4 é F ou I; X5 é S ou T; X6 é E ou D; X7 é N ou S; X8 é T, R ou S; X9 é A ou G; X10 é E ou D; X11 é I, N ou S; X12 é D, H ou N; X13 é F ou Y; X14 é N ou S; X15 é R, T ou S; X16 é G ou S; X17 é I ou T.

[00108] Em uma modalidade, X1 é M, I ou S; X2 é R, K, L, M ou I; X3 é F ou M; X4 é F ou I; X5 é S ou T; X6 é E ou D; X7 é N ou S; X8 é T, R ou S; X9 é A ou G; X10 é E ou D; X11 é N ou S; X12 é N; X13 é F ou Y; X14 é S; X15 é S; X16 é G ou S; X17 é T.

[00109] Em outra modalidade, X1 é M, I ou S; X2 é L, M ou I; X3 é F ou M; X4 é I; X5 é S ou T; X6 é D; X7 é N ou S; X8 é T, R ou S; X9 é A ou G; X10 é E ou D; X11 é N ou S; X12 é N; X13 é F ou Y; X14 é S; X15 é S; X16 é G ou S; X17 é T.

[00110] Em ainda outra modalidade, X1 é S; X2 é I; X3 é M; X4 é I; X5 é T; X6 é D; X7 é S; X8 é S; X9 é G; X10 é D; X11 é S; X12 é N; X13 é Y; X14 é S; X15 é S; X16 é S; X17 é T.

[00111] Em um aspecto adicional, a região variável de cadeia pesa- da inclui uma ou mais sequências de região estrutural justapostas en- tre as HVRs, tal como: (HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC- FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4) e as regiões variáveis de cadeia leve inclu- em uma ou mais sequências de região estrutural justapostas entre as HVRs, tal como: (LC-FR1 MHVR-L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)- (HVR-L3)-(LC-FR4).

[00112] Em um outro aspecto ainda, as sequências de região estru-

tural são derivadas das sequências de região estrutural humana de consenso ou sequências de linhagem germinativa humana.

[00113] Em um outro aspecto ainda, uma ou mais das sequências de região estrutural de cadeia pesada são as seguintes: HC-FR1 é EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS (SEQ ID NO: 24); HC-FR2 é WVRQAPGKGLEWVS (SEQ ID NO: 25); HC-FR3 é RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 26); HC-FR4 é WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 27).

[00114] Em um outro aspecto ainda, as sequências de região estru- tural de cadeia leve são sequências de cadeia leve lambda.

[00115] Em um outro aspecto ainda, uma ou mais das sequências de região estrutural de cadeia leve são as seguintes: LC-FR1 é QSALTQPASVSGSPGQSITISC (SEQ ID NO: 31); LC-FR2 é WYQQHPGKAPKLMIY (SEQ ID NO: 32); LC-FR3 é GVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYC (SEQ ID NO: 33); LC-FR4 é FGTGTKVTVL (SEQ ID NO: 34).

[00116] Em um outro aspecto ainda, o polipeptídeo de região variá- vel de cadeia pesada, o anticorpo ou o fragmento de anticorpo tam- bém inclui pelo menos um domínio CH1.

[00117] Em um aspecto mais alvo, o polipeptídeo da região variável de cadeia pesada, o anticorpo ou o fragmento de anticorpo também inclui um domínio CH1, CH2 e CH3.

[00118] Em um outro aspecto ainda, a cadeia leve da região variá- vel, o anticorpo ou o fragmento de também inclui um domínio CL.

[00119] Em um outro aspecto ainda, o anticorpo também inclui um domínio CH1, CH2, CH3 e CL.

[00120] Em um outro aspecto alvo ainda, o anticorpo também inclui uma região constante humana ou de murino.

[00121] Em um outro aspecto ainda, a região constante humana é selecionada a partir do grupo que consiste em IgG1, IgG2, IgG2, IgG3, IgG4.

[00122] Em um outro aspecto alvo ainda, a região constante huma- na ou de murino é lgG1.

[00123] Em ainda uma outra modalidade, a invenção fornece um anticorpo anti-PD-L1 que inclui uma sequência de região variável de cadeia pesada e uma sequência de região variável de cadeia leve, on- de: (a) a cadeia pesada inclui uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3 as quais têm uma identidade global de 80 % com as se- quências SYIMM (SEQ ID NO: 35), SIYPSGGITFYADTVKG (SEQ ID NO: 36) e IKLGTVTTVDY (SEQ ID NO: 37), respectivamente e (b) a cadeia leve inclui uma HVR-L1, uma HVR-L2 e uma HVR-L3 as quais têm uma identidade global de pelo menos 80 % com as sequências TGTSSDVGGYNYVS (SEQ ID NO: 38), DVSNRPS (SEQ ID NO: 39) e SSYTSSSTRV (SEQ ID NO: 40), respectivamente.

[00124] Em um aspecto alvo, a identidade de sequência é de 81 %, 82 %, 83 %, 84 %, 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 %, ou 100 %.

[00125] Em ainda uma outra modalidade, a invenção fornece um anticorpo anti-PD-L1 que inclui uma sequência de região variável de cadeia pesada e uma sequência de região variável de cadeia leve, on- de: (a) a cadeia pesada inclui uma HVR-H1, uma HVR-H2 e uma HVR-H3 as quais têm uma identidade global de pelo menos 80 % com a sequência MYMMM (SEQ ID NO: 41), SIYPSGGITFYADSVKG (SEQ ID NO: 42) e IKLGTVTTVDY (SEQ ID NO: 37), respectivamente e

(b) a cadeia leve inclui uma HVR-L1, uma HVR-L2 e uma HVR-L3 as quais têm uma identidade global de pelo menos 80 % com as sequências TGTSSDVGAYNYVS (SEQ ID NO: 43), DVSNRPS (SEQ ID NO: 39) e SSYTSSSTRV (SEQ ID NO: 40), respectivamente.

[00126] Em um aspecto alvo, a identidade da sequência é de 81 %, 82 %, 83 %, 84 %, 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 %, ou 100 %.

[00127] Em um outro aspecto ainda, no anticorpo ou fragmento de anticorpo de acordo com a invenção, comparado com as sequências de HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3, pelo menos estes aminoácidos per- manecem inalterados, os quais são destacados ao serem sublinhados como segue: (a) em HVR-H1 SYIMM (SEQ ID NO: 35), (b) em HVR-H2 SIYPSGGITFYADTVKG (SEQ ID NO: 36), (c) em HVR-H3 IKLGTVTTVDY (SEQ ID NO: 37); e também onde, comparado com as sequências de HVR-L1, HVR-L2 e HVR-L3, pelo menos estes aminoácidos permanecem inalterados, os quais são destacados ao serem sublinhados como segue: (A) HVR-L1 TGTSSDVGGYNYVS (SEQ ID NO: 38) (B) HVR-L2 DVSNRPS (SEQ ID NO: 39) (C) HVR-L3 SSYTSSSTRV (SEQ ID NO: 40).

[00128] Em um outro aspecto, a região variável de cadeia pesada inclui uma ou mais sequências de região estrutural justapostas entre as HVRs, tal como: (HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC- FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4) e as regiões variáveis de cadeia leve inclu- em uma ou mais sequências de região estrutural justapostas entre as HVRs, tal como: (LC-FR1)-(HVR-L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)- (HVR-L3)-(LC-FR4).

[00129] Em ainda um outro aspecto, as sequências de região estru- tural são derivadas de sequências de linhagem germinativa humana.

[00130] Em um outro aspecto ainda, uma ou mais das sequências de região estrutural de cadeia pesada são as seguintes: HC-FR1 é EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS (SEQ ID NO: 24); HC-FR2 é WVRQAPGKGLEWVS (SEQ ID NO: 25); HC-FR3 é RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO: 26); HC-FR4 é WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 27).

[00131] Em um outro aspecto ainda, as sequências de região estru- tural de cadeia leve são derivadas de uma sequência de cadeia leve lambda.

[00132] Em um outro aspecto ainda, uma ou mais das sequências de região estrutural de cadeia leve são as seguintes: LC-FR1 é QSALTQPASVSGSPGQSITISC (SEQ ID NO: 31); LC-FR2 é WYQQHPGKAPKLMIY (SEQ ID NO: 32); LC-FR3 é GVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYC (SEQ ID NO: 33); LC-FR4 é FGTGTKVTVL (SEQ ID NO: 34).

[00133] Em um outro aspecto alvo ainda, o anticorpo também inclui uma região constante humana ou de murino.

[00134] Em um outro aspecto ainda, a região constante humana é selecionada a partir do grupo que consiste em IgG1, IgG2, IgG2, IgG3, IgG4.

[00135] Em determinadas modalidades, a invenção fornece um an- ticorpo anti-PD-L1 que inclui uma sequência de região variável de ca- deia pesada e uma sequência de região variável de cadeia leve, onde: (a) a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 85 % em relação à sequência de cadeia pe- sada:

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMMVWRQAPGKGLE

WVSSIYPSGGITFYADWKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVY YCARIKLGTVTTVDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 44) e (b) a sequência de cadeia leve tem uma identidade de se- quência de pelo menos 85 % em relação à sequência de cadeia leve:

QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAP

KLMIYDVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSY TSSSTRVFGTGTKVTVL (SEQ ID NO: 45).

[00136] Em várias modalidades, a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 86 % em relação à SEQ ID NO: 44 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de se- quência de pelo menos 86 % em relação à SEQ ID NO: 45; a sequên- cia de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 87 % em relação à SEQ ID NO: 44 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 87 % em relação à SEQ ID NO: 45; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de se- quência de pelo menos 88 % em relação à SEQ ID NO: 44 e a se- quência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo me- nos 88 % em relação à SEQ ID NO: 45; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 89 % em relação à SEQ ID NO: 44 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 89 % em relação à SEQ ID NO: 45; a se- quência de cadeia pesada tem pelo menos, identidade da sequência de 90 % em relação à SEQ ID NO: 44 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 90 % em relação à SEQ ID NO: 45; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 91 % em relação à SEQ ID NO: 44 e a se- quência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo me- nos 91 % em relação à SEQ ID NO: 45; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 92 % em relação à SEQ ID NO: 44 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 92 % em relação à SEQ ID NO: 45; a se- quência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 93 % em relação à SEQ ID NO: 44 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 93 % em rela- ção à SEQ ID NO: 45; a sequência de cadeia pesada tem uma identi- dade de sequência de pelo menos 94 % em relação à SEQ ID NO: 44 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pe- lo menos 94 % em relação à SEQ ID NO: 45; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 95 % em re- lação à SEQ ID NO: 44 e a sequência de cadeia leve tem uma identi- dade de sequência de pelo menos 95 % em relação à SEQ ID NO: 45; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 96 % em relação à SEQ ID NO: 44 e a sequência de ca- deia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 96 % em relação à SEQ ID NO: 45; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 97 % em relação à SEQ ID NO: 44 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequên- cia de pelo menos 97 % em relação à SEQ ID NO: 45; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 98 % em relação à SEQ ID NO: 44 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 98 % em relação à SEQ ID NO: 45; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de se- quência de pelo menos 99 % em relação à SEQ ID NO: 44 e a se- quência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo me- nos 99 % em relação à SEQ ID NO: 45; ou a sequência de cadeia pe- sada compreende a SEQ ID NO: 44 e a sequência de cadeia leve compreendem a SEQ ID NO: 45.

[00137] Em determinadas modalidades, a invenção fornece um an- ticorpo anti-PD-L1 que inclui uma sequência de região variável de ca- deia pesada e uma sequência de região variável de cadeia leve, onde:

(a) a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 85 % em relação à sequência de cadeia pe- sada:

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSMYMMMWVRQAPGKGL

EVWSSIYPSGGITFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAI YYCARIKLGTVTTVDYWG QGTLVTVSS (SEQ ID NO: 46) e (b) a sequência de cadeia leve tem uma identidade de se- quência de pelo menos 85 % em relação à sequência de cadeia leve:

QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGAYNYVSWYQQHPGKAP

KLMIYDVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSY TSSSTRVFGTGTKVTVL (SEQ ID NO: 47).

[00138] Em várias modalidades, a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 86 % em relação à SEQ ID NO: 46 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de se- quência de pelo menos 86 % em relação à SEQ ID NO: 47; a sequên- cia de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 87 % em relação à SEQ ID NO: 46 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 87 % em relação à SEQ ID NO: 47; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de se- quência de pelo menos 88 % em relação à SEQ ID NO: 46 e a se- quência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo me- nos 88 % em relação à SEQ ID NO: 47; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 89 % em relação à SEQ ID NO: 46 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 89 % em relação à SEQ ID NO: 47; a se- quência de cadeia pesada tem pelo menos, identidade da sequência de 90 % em relação à SEQ ID NO: 46 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 90 % em relação à SEQ ID NO: 47; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 91 % em relação à SEQ ID NO: 46 e a se-

quência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo me- nos 91 % em relação à SEQ ID NO: 47; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 92 % em relação à SEQ ID NO: 46 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 92 % em relação à SEQ ID NO: 47; a se- quência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 93 % em relação à SEQ ID NO: 46 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 93 % em rela- ção à SEQ ID NO: 47; a sequência de cadeia pesada tem uma identi- dade de sequência de pelo menos 94 % em relação à SEQ ID NO: 46 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pe- lo menos 94 % em relação à SEQ ID NO: 47; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 95 % em re- lação à SEQ ID NO: 46 e a sequência de cadeia leve tem uma identi- dade de sequência de pelo menos 95 % em relação à SEQ ID NO: 47; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 96 % em relação à SEQ ID NO: 46 e a sequência de ca- deia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 96 % em relação à SEQ ID NO: 47; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 97 % em relação à SEQ ID NO: 46 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequên- cia de pelo menos 97 % em relação à SEQ ID NO: 47; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 98 % em relação à SEQ ID NO: 46 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 98 % em relação à SEQ ID NO: 47; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de se- quência de pelo menos 99 % em relação à SEQ ID NO: 46 e a se- quência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo me- nos 99 % em relação à SEQ ID NO: 47; ou a sequência de cadeia pe- sada compreende a SEQ ID NO: 46 e a sequência de cadeia leve compreendem a SEQ ID NO: 47.

[00139] Em uma outra modalidade, o anticorpo se liga à PD-L1 hu- mana, de camundongo ou de macaco cynomolgus. Em um aspecto alvo, o anticorpo é capaz de bloquear a interação entre à PD-L1 hu- mana, de camundongo ou de macaco cynomolgus ou os respectivos receptores de PD-1 humana, de camundongo ou de macaco cynomol- gus.

[00140] Em uma outra modalidade, o anticorpo se liga à PD-L1 hu- mana com uma KD de 5 x 10-9 M ou menos, de preferência com uma KD de 2 x 10-9 M ou menos e, mais preferivelmente, com uma KD de 1 x 10-9 M ou menos.

[00141] Em ainda uma outra modalidade, a invenção se refere a um anticorpo anti-PD-L1 ou um fragmento de ligação a antígeno do mes- mo que se liga a um epítopo funcional que inclui os resíduos Y56 e D61 de PD-L1 humana.

[00142] Em um aspecto alvo, o epítopo funcional também inclui E58, E60, Q66, R113 e M115 de PD-L1 humana.

[00143] Em um aspecto mais alvo, o anticorpo se liga a um epítopo conformacional que inclui os resíduos 54-66 e 112-122 de PD-L1 hu- mana.

[00144] Em determinadas modalidades, a invenção se refere a um anticorpo anti-PD-L1 ou ao fragmento de ligação a antígeno do mesmo que compete de modo cruzado pela ligação à PD-L1 com um anticorpo de acordo com a invenção conforme descrito no presente documento.

[00145] Em determinadas modalidades, a invenção fornece proteí- nas e polipeptídeos que incluem qualquer um dos anticorpos anti-PD- L1 descritos acima em combinação com pelo menos um carreador farmaceuticamente aceitável.

[00146] Em determinadas modalidades, a invenção fornece um áci- do nucleico isolado que codifica um polipeptídeo ou uma sequência de região variável de cadeia leve ou uma sequência de região variável de cadeia pesada de um anticorpo anti-PD-L1 ou um fragmento de liga- ção a antígeno do mesmo, conforme descrito no presente documento. Em determinadas modalidades, a invenção fornece um ácido nucleico isolado que codifica uma sequência de região variável de cadeia leve ou uma sequência de região variável de cadeia pesada de um anticor- po anti-PD-L1, em que: (a) a cadeia pesada inclui uma sequência de HVR-H1, HVR-H2 e HVR-H3 que tem pelo menos 80 % de identidade de se- quência com SYIMM (SEQ ID NO: 35), SIYPSGGITFYADTVKG (SEQ ID NO: 36) e IKLGTVTTVDY (SEQ ID NO: 37), respectivamente ou (b) a cadeia leve inclui uma sequência de HVR-L1, HVR-L2 e HVR-L3 que tem pelo menos 80 % de identidade de sequência com TGTSSDVGGYNYVS (SEQ ID NO: 38), DVSNRPS (SEQ ID NO: 39) e SSYTSSSTRV (SEQ ID NO: 40), respectivamente.

[00147] Em um aspecto alvo, a identidade de sequência é de 81 %, 82 %, 83 %, 84 %, 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou 100 %.

[00148] Em um aspecto adicional, a sequência de ácidos nucleicos para a cadeia pesada é:

(SEQ ID NO: 48) e a sequência de ácido nucleicos para a cadeia leve é: (SEQ ID NO: 49).

[00149] Outros anticorpos anti-PD-L1 exemplificativos que podem ser usados em uma molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ são des- critos na Publicação de Pedido de Patente U.S. Nº 2010/0203056. Em uma modalidade da invenção, a porção de anticorpo é YW243.55S70.

Em uma outra modalidade da invenção, a porção de anticorpo é MPDL3289A.

[00150] Em determinadas modalidades, a invenção fornece uma porção de anticorpo anti-PD-L1 que inclui uma sequência de região variável de cadeia pesada e uma sequência de região variável de ca- deia leve, onde: (a) a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 85 % em relação à sequência de cadeia pe- sada:

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLE

WVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAV YYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 12) e (b) a sequência de cadeia leve tem uma identidade de se- quência de pelo menos 85 % em relação à sequência de cadeia leve:

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLL

IYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHP ATFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 13).

[00151] Em várias modalidades, a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 86 % em relação à SEQ ID NO: 12 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de se- quência de pelo menos 86 % em relação à SEQ ID NO: 13; a sequên- cia de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 87 % em relação à SEQ ID NO: 12 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 87 % em relação à SEQ ID NO: 13; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de se- quência de pelo menos 88 % em relação à SEQ ID NO: 12 e a se- quência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo me- nos 88 % em relação à SEQ ID NO: 13; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade da sequência de pelo menos 89 % em relação à SEQ ID NO: 12 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 89 % em relação à SEQ ID NO: 13; a se- quência de cadeia pesada tem pelo menos, identidade da sequência de 90 % em relação à SEQ ID NO: 12 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 90 % em relação à SEQ ID NO: 13; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 91 % em relação à SEQ ID NO: 12 e a se- quência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo me- nos 91 % em relação à SEQ ID NO: 13; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 92 % em relação à SEQ ID NO: 12 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 92 % em relação à SEQ ID NO: 13; a se- quência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 93 % em relação à SEQ ID NO: 12 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 93 % em rela- ção à SEQ ID NO: 13; a sequência de cadeia pesada tem uma identi- dade de sequência de pelo menos 94 % em relação à SEQ ID NO: 12 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pe- lo menos 94 % em relação à SEQ ID NO: 13; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 95 % em re- lação à SEQ ID NO: 12 e a sequência de cadeia leve tem uma identi- dade de sequência de pelo menos 95 % em relação à SEQ ID NO: 13; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 96 % em relação à SEQ ID NO: 12 e a sequência de ca- deia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 96 % em relação à SEQ ID NO: 13; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 97 % em relação à SEQ ID NO: 12 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequên- cia de pelo menos 97 % em relação à SEQ ID NO: 13; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 98 % em relação à SEQ ID NO: 12 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 98 % em relação à SEQ ID NO: 13; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de se- quência de pelo menos 99 % em relação à SEQ ID NO: 12 e a se- quência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo me- nos 99 % em relação à SEQ ID NO: 13; ou a sequência de cadeia pe- sada compreende a SEQ ID NO: 12 e a sequência de cadeia leve compreendem a SEQ ID NO: 13.

[00152] Em determinadas modalidades, a invenção fornece uma porção de anticorpo anti-PD-L1 que inclui uma sequência de região variável de cadeia pesada e uma sequência de região variável de ca- deia leve, onde: (a) a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 85 % em relação à sequência de cadeia pesada:

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLE

WVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAV YYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSA (SEQ ID NO: 14) e (b) a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 85 % em relação à sequência de cadeia leve:

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLL

IYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHP ATFGQGTKVEIKR (SEQ ID NO: 13).

[00153] Em várias modalidades, a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 86 % em relação à SEQ ID NO: 14 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de se- quência de pelo menos 86 % em relação à SEQ ID NO: 13; a sequên- cia de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 87 % em relação à SEQ ID NO: 14 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 87 % em relação à SEQ ID NO: 13; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de se- quência de pelo menos 88 % em relação à SEQ ID NO: 14 e a se-

quência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo me- nos 88 % em relação à SEQ ID NO: 13; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 89 % em relação à SEQ ID NO: 14 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 89 % em relação à SEQ ID NO: 13; a se- quência de cadeia pesada tem pelo menos, identidade da sequência de 90 % em relação à SEQ ID NO: 14 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 90 % em relação à SEQ ID NO: 13; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 91 % em relação à SEQ ID NO: 14 e a se- quência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo me- nos 91 % em relação à SEQ ID NO: 13; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 92 % em relação à SEQ ID NO: 14 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 92 % em relação à SEQ ID NO: 13; a se- quência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 93 % em relação à SEQ ID NO: 14 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 93 % em rela- ção à SEQ ID NO: 13; a sequência de cadeia pesada tem uma identi- dade de sequência de pelo menos 94 % em relação à SEQ ID NO: 14 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pe- lo menos 94 % em relação à SEQ ID NO: 13; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 95 % em re- lação à SEQ ID NO: 14 e a sequência de cadeia leve tem uma identi- dade de sequência de pelo menos 95 % em relação à SEQ ID NO: 13; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 96 % em relação à SEQ ID NO: 14 e a sequência de ca- deia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 96 % em relação à SEQ ID NO: 13; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 97 % em relação à SEQ ID

NO: 14 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequên- cia de pelo menos 97 % em relação à SEQ ID NO: 13; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 98 % em relação à SEQ ID NO: 14 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 98 % em relação à SEQ ID NO: 13; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de se- quência de pelo menos 99 % em relação à SEQ ID NO: 14 e a se- quência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo me- nos 99 % em relação à SEQ ID NO: 13; ou a sequência de cadeia pe- sada compreende a SEQ ID NO: 14 e a sequência de cadeia leve compreendem a SEQ ID NO: 13.

[00154] Outros anticorpos anti-PD-L1 exemplificativos que podem ser usados em uma molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ são des- critos na Publicação de Pedido de Patente U.S. Nº 2018/0334504.

[00155] Em determinadas modalidades, a invenção fornece uma porção de anticorpo anti-PD-L1 que inclui uma sequência de região variável de cadeia pesada e uma sequência de região variável de ca- deia leve, onde: (a) a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 85 % em relação à sequência de cadeia pe- sada:

QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNDYWTWIRQHPGKGLE

YIGYISYTGSTYYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC ARSGGWLAPFDYWGRGTLVTVSS (SEQ ID NO: 55) e (b) a sequência de cadeia leve tem uma identidade de se- quência de pelo menos 85 % em relação à sequência de cadeia leve:

DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLFYHSNQKHSLAWYQQKPG

QPPKLLIYGASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC QQYYGYPYTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 56).

[00156] Em várias modalidades, a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 86 % em relação à SEQ ID NO: 55 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de se- quência de pelo menos 86 % em relação à SEQ ID NO: 56; a sequên- cia de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 87 % em relação à SEQ ID NO: 55 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 87 % em relação à SEQ ID NO: 56; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de se- quência de pelo menos 88 % em relação à SEQ ID NO: 55 e a se- quência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo me- nos 88 % em relação à SEQ ID NO: 56; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 89 % em relação à SEQ ID NO: 55 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 89 % em relação à SEQ ID NO: 56; a se- quência de cadeia pesada tem pelo menos, identidade da sequência de 90 % em relação à SEQ ID NO: 55 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 90 % em relação à SEQ ID NO: 56; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 91 % em relação à SEQ ID NO: 55 e a se- quência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo me- nos 91 % em relação à SEQ ID NO: 56; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 92 % em relação à SEQ ID NO: 55 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 92 % em relação à SEQ ID NO: 56; a se- quência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 93 % em relação à SEQ ID NO: 55 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 93 % em rela- ção à SEQ ID NO: 56; a sequência de cadeia pesada tem uma identi- dade de sequência de pelo menos 94 % em relação à SEQ ID NO: 55 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pe- lo menos 94 % em relação à SEQ ID NO: 56; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 95 % em re- lação à SEQ ID NO: 55 e a sequência de cadeia leve tem uma identi- dade de sequência de pelo menos 95 % em relação à SEQ ID NO: 56; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 96 % em relação à SEQ ID NO: 55 e a sequência de ca- deia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 96 % em relação à SEQ ID NO: 56; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 97 % em relação à SEQ ID NO: 55 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequên- cia de pelo menos 97 % em relação à SEQ ID NO: 56; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 98 % em relação à SEQ ID NO: 55 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 98 % em relação à SEQ ID NO: 56; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de se- quência de pelo menos 99 % em relação à SEQ ID NO: 55 e a se- quência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo me- nos 99 % em relação à SEQ ID NO: 56; ou a sequência de cadeia pe- sada compreende a SEQ ID NO: 55 e a sequência de cadeia leve compreendem a SEQ ID NO: 56.

[00157] Em determinadas modalidades, a invenção fornece uma porção de anticorpo anti-PD-L1 que inclui uma sequência de região variável de cadeia pesada e uma sequência de região variável de ca- deia leve, onde: (a) a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 85 % em relação à sequência de cadeia pe- sada:

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWMHWVRQAPGQGL

EWMGRIGPNSGFTSYNEKFKNRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDT AVYYCARGGSSYDYFDYWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 57) e (b) a sequência de cadeia leve tem uma identidade de se-

quência de pelo menos 85 % em relação à sequência de cadeia leve:

DIVLTQSPASLAVSPGQRATITCRASESVSIHGTHLMHWYQQKPGQP

PKLLIYAASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEAEDTANYYCQQS FEDPLTFGQGTKLEIK (SEQ ID NO: 58).

[00158] Em várias modalidades, a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 86 % em relação à SEQ ID NO: 57 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de se- quência de pelo menos 86 % em relação à SEQ ID NO: 58; a sequên- cia de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 87 % em relação à SEQ ID NO: 57 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 87 % em relação à SEQ ID NO: 58; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de se- quência de pelo menos 88 % em relação à SEQ ID NO: 57 e a se- quência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo me- nos 88 % em relação à SEQ ID NO: 58; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 89 % em relação à SEQ ID NO: 57 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 89 % em relação à SEQ ID NO: 58; a se- quência de cadeia pesada tem pelo menos, identidade da sequência de 90 % em relação à SEQ ID NO: 57 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 90 % em relação à SEQ ID NO: 58; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 91 % em relação à SEQ ID NO: 57 e a se- quência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo me- nos 91 % em relação à SEQ ID NO: 58; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 92 % em relação à SEQ ID NO: 57 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 92 % em relação à SEQ ID NO: 58; a se- quência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 93 % em relação à SEQ ID NO: 57 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 93 % em rela- ção à SEQ ID NO: 58; a sequência de cadeia pesada tem uma identi- dade de sequência de pelo menos 94 % em relação à SEQ ID NO: 57 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pe- lo menos 94 % em relação à SEQ ID NO: 58; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 95 % em re- lação à SEQ ID NO: 57 e a sequência de cadeia leve tem uma identi- dade de sequência de pelo menos 95 % em relação à SEQ ID NO: 58; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 96 % em relação à SEQ ID NO: 57 e a sequência de ca- deia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 96 % em relação à SEQ ID NO: 58; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 97 % em relação à SEQ ID NO: 57 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequên- cia de pelo menos 97 % em relação à SEQ ID NO: 58; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 98 % em relação à SEQ ID NO: 57 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 98 % em relação à SEQ ID NO: 58; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de se- quência de pelo menos 99 % em relação à SEQ ID NO: 57 e a se- quência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo me- nos 99 % em relação à SEQ ID NO: 58; ou a sequência de cadeia pe- sada compreende a SEQ ID NO: 57 e a sequência de cadeia leve compreendem a SEQ ID NO: 58.

[00159] Em determinadas modalidades, a invenção fornece uma porção de anticorpo anti-PD-L1 que inclui uma cadeia pesada e uma sequência de cadeia leve, onde: (a) a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 85 % em relação à sequência de cadeia pe- sada:

QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNDYWTWIRQHPGKGLE YIGYISYTGSTYYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC ARSGGWLAPFDYWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTA ALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVT VPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAG GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGV EVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGL PSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPS

DIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGN VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (SEQ ID NO: 59) e (b) a sequência de cadeia leve tem uma identidade de se- quência de pelo menos 85 % em relação à sequência de cadeia leve:

DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLFYHSNQKHSLAWYQQKPG QPPKLLIYGASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC QQYYGYPYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLL

NNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLS KADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 60).

[00160] Em várias modalidades, a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 86 % em relação à SEQ ID NO: 59 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de se- quência de pelo menos 86 % em relação à SEQ ID NO: 60; a sequên- cia de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 87 % em relação à SEQ ID NO: 59 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 87 % em relação à SEQ ID NO: 60; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de se- quência de pelo menos 88 % em relação à SEQ ID NO: 59 e a se- quência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo me- nos 88 % em relação à SEQ ID NO: 60; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 89 % em relação à SEQ ID NO: 59 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 89 % em relação à SEQ ID NO: 60; a se- quência de cadeia pesada tem pelo menos, identidade da sequência de 90 % em relação à SEQ ID NO: 59 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 90 % em relação à SEQ ID NO: 60; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 91 % em relação à SEQ ID NO: 59 e a se- quência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo me- nos 91 % em relação à SEQ ID NO: 60; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 92 % em relação à SEQ ID NO: 59 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 92 % em relação à SEQ ID NO: 60; a se- quência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 93 % em relação à SEQ ID NO: 59 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 93 % em rela- ção à SEQ ID NO: 60; a sequência de cadeia pesada tem uma identi- dade de sequência de pelo menos 94 % em relação à SEQ ID NO: 59 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pe- lo menos 94 % em relação à SEQ ID NO: 60; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 95 % em re- lação à SEQ ID NO: 59 e a sequência de cadeia leve tem uma identi- dade de sequência de pelo menos 95 % em relação à SEQ ID NO: 60; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 96 % em relação à SEQ ID NO: 59 e a sequência de ca- deia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 96 % em relação à SEQ ID NO: 60; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 97 % em relação à SEQ ID NO: 59 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequên- cia de pelo menos 97 % em relação à SEQ ID NO: 60; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 98 % em relação à SEQ ID NO: 59 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 98 % em relação à SEQ ID NO: 60; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de se- quência de pelo menos 99 % em relação à SEQ ID NO: 59 e a se- quência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo me- nos 99 % em relação à SEQ ID NO: 60; ou a sequência de cadeia pe- sada compreende a SEQ ID NO: 59 e a sequência de cadeia leve compreendem a SEQ ID NO: 60.

[00161] Em determinadas modalidades, a invenção fornece uma porção de anticorpo anti-PD-L1 que inclui uma cadeia pesada e uma sequência de cadeia leve, onde: (a) a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 85 % em relação à sequência de cadeia pe- sada:

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWMHWVRQAPGQGL EWMGRIGPNSGFTSYNEKFKNRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDT AVYYCARGGSSYDYFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRST SESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPA PEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWY VDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKG

FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRW QEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGA (SEQ ID NO: 61) e (b) a sequência de cadeia leve tem uma identidade de se- quência de pelo menos 85 % em relação à sequência de cadeia leve:

DIVLTQSPASLAVSPGQRATITCRASESVSIHGTHLMHWYQQKPGQP PKLLIYAASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEAEDTANYYCQQS FEDPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF

YPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKAD YEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 62).

[00162] Em várias modalidades, a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 86 % em relação à SEQ ID NO: 61 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de se- quência de pelo menos 86 % em relação à SEQ ID NO: 62; a sequên- cia de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 87 % em relação à SEQ ID NO: 61 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 87 % em relação à SEQ ID NO: 62; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de se- quência de pelo menos 88 % em relação à SEQ ID NO: 61 e a se- quência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo me- nos 88 % em relação à SEQ ID NO: 62; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 89 % em relação à SEQ ID NO: 61 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 89 % em relação à SEQ ID NO: 62; a se- quência de cadeia pesada tem pelo menos, identidade da sequência de 90 % em relação à SEQ ID NO: 61 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 90 % em relação à SEQ ID NO: 62; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 91 % em relação à SEQ ID NO: 61 e a se- quência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo me- nos 91 % em relação à SEQ ID NO: 62; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 92 % em relação à SEQ ID NO: 61 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 92 % em relação à SEQ ID NO: 62; a se- quência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 93 % em relação à SEQ ID NO: 61 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 93 % em rela- ção à SEQ ID NO: 62; a sequência de cadeia pesada tem uma identi- dade de sequência de pelo menos 94 % em relação à SEQ ID NO: 61 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pe-

lo menos 94 % em relação à SEQ ID NO: 62; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 95 % em re- lação à SEQ ID NO: 61 e a sequência de cadeia leve tem uma identi- dade de sequência de pelo menos 95 % em relação à SEQ ID NO: 62; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 96 % em relação à SEQ ID NO: 61 e a sequência de ca- deia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 96 % em relação à SEQ ID NO: 62; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 97 % em relação à SEQ ID NO: 61 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequên- cia de pelo menos 97 % em relação à SEQ ID NO: 62; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de sequência de pelo menos 98 % em relação à SEQ ID NO: 61 e a sequência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo menos 98 % em relação à SEQ ID NO: 62; a sequência de cadeia pesada tem uma identidade de se- quência de pelo menos 99 % em relação à SEQ ID NO: 61 e a se- quência de cadeia leve tem uma identidade de sequência de pelo me- nos 99 % em relação à SEQ ID NO: 62; ou a sequência de cadeia pe- sada compreende a SEQ ID NO: 61 e a sequência de cadeia leve compreende a SEQ ID NO: 62.

[00163] Outros anticorpos anti-PD-L1 exemplificativos ainda que podem ser usados em uma molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ são descritos na Publicação de Pedido de Patente U.S. Nº 7.943.743.

[00164] Em uma modalidade da invenção, o anticorpo anti-PD-L1 é MX-1105.

[00165] Em determinadas modalidades, o anticorpo anti-PD-L1 é MEDI-4736. Região Constante

[00166] As proteínas e os peptídeos da invenção podem incluir uma região constante de uma imunoglobulina ou fragmento, análogo, vari-

ante, mutante ou derivado da região constante. Em determinadas mo- dalidades, a região constante é derivada de uma cadeia pesada de imunoglobulina humana, por exemplo, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 ou ou- tras classes. Em determinadas modalidades, a região constante inclui um domínio CH2. Em determinadas modalidades, a região constante inclui os domínios CH2 e CH3 ou inclui dobradiça-CH2-CH3. Alternati- vamente, a região constante pode incluir toda ou uma parte da região de dobradiça, o domínio CH2 e/ou o domínio CH3.

[00167] Em uma modalidade, a região constante contém uma mu- tação que reduz a afinidade por um receptor de Fc ou reduz a função efetora de Fc. Por exemplo, a região constante pode conter uma mu- tação que elimina o sítio de glicosilação dentro da região constante de uma cadeia pesada de IgG. Em algumas modalidades, a região cons- tante contém mutações, eliminações ou inserções em uma posição de aminoácido que corresponde a Leu234, Leu235, Gly236, Gly237, Asn297 ou Pro331 de IgG1 (os aminoácidos são numerados de acordo com a nomenclatura EU). Em uma modalidade particular, a região constante contém uma mutação em uma posição de aminoácido que corresponde a Asn297 de IgG1. Em modalidades alternativas, a região constante contém mutações, eliminações ou inserções em uma posi- ção de aminoácido que corresponde a Leu281, Leu282, Gly283, Gly284, Asn344 ou Pro378 de IgG1.

[00168] Em algumas modalidades, a região constante contém um domínio CH2 derivado de uma cadeia pesada de IgG2 ou IgG4 huma- na. De preferência, o domínio CH2 contém uma mutação que elimina o sítio de glicosilação dentro do domínio CH2. Em uma modalidade, a mutação altera a asparagina dentro da sequência de aminoácidos Gln- Phe-Asn-Ser (SEQ ID NO: 15) dentro do domínio CH2 da cadeia pe- sada de IgG2 ou IgG4. De preferência, a mutação altera a asparagina por uma glutamina. Alternativamente, a mutação altera a fenilalanina e a asparagina dentro da sequência de aminoácidos Gln-Phe-Asn-Ser (SEQ ID NO: 15). Em uma modalidade, a sequência de aminoácidos Gln-Phe-Asn-Ser (SEQ ID NO: 15) é substituída pela sequência de aminoácidos Gln-gln-Ala-Gln-Ser-Gln-Ser (SEQ ID NO: 16). A aspara- gina dentro da sequência de aminoácidos Gln-Phe-Asn-Ser (SEQ ID NO: 15) corresponde a Asn297 de IgG1.

[00169] Em uma outra modalidade, a região constante inclui um domínio CH2 e pelo menos uma parte de uma região de dobradiça. A região de dobradiça pode ser derivada de uma cadeia pesada de imu- noglobulina, por exemplo, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 ou outras classes. De preferência, a região de dobradiça é derivada de IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 humana ou de outras classes apropriadas. A região de dobradiça é, de preferência, derivada de uma cadeia pesada de IgG1 humana. Em uma modalidade, a cisteína na sequência de aminoácidos Pro-Lys- Ser-Cys-Pro-Lys-Ser-Cys-Asp-Lys-Lys (SEQ ID NO: 17) da região de dobradiça IgG1 é alterada. Em determinadas modalidades, a sequên- cia de aminoácidos Pro-Lys-Ser-Cys-Pro-Lys-Ser-Cys-Asp-Lys-Lys (SEQ ID NO: 17) é substituída por uma sequência de aminoácidos Pro-Lys-Ser-Ser-Pro-Lys-Ser-Ser-Asp-Lys-Lys (SEQ ID NO: 18). Em determinadas modalidades, a região constante inclui um domínio CH2 derivado de um primeiro isotipo de anticorpo e uma região de dobradi- ça derivada de um segundo isotipo de anticorpo. Em determinadas modalidades, o domínio CH2 é derivado de uma cadeia pesada de IgG2 ou IgG4 humana, enquanto que a região de dobradiça é derivada de uma cadeia pesada de IgG1 humana alterada.

[00170] A alteração de aminoácidos próximo da junção da porção Fc e da porção que não Fc pode aumentar drasticamente a meia-vida sérica da proteína de fusão de Fc (publicação PCT WO 0158957, cuja descrição é incorporada ao presente documento a título de referência). Consequentemente, a região de junção de uma proteína ou polipeptí-

deo da presente invenção pode conter alterações as quais estão, em relação às sequências naturais de uma cadeia pesada de imunoglobu- lina e eritropoietina, de preferência dentro de cerca de 10 aminoácidos do ponto de junção. Estas alterações de aminoácidos podem causar um aumento na capacidade hidrofóbica. Em uma modalidade, a região constante é derivada de uma sequência de IgG na qual o resíduo de lisina do C-término é substituído. De preferência, a lisina do C-término de uma sequência de IgG é substituída por um aminoácido que não lisina, tal como alanina ou leucina, para aumentar ainda mais a meia- vida sérica. Em uma outra modalidade, a região constante é derivada de uma sequência de IgG na qual a sequência de aminoácidos Leu- Ser-Leu-Ser-Ser (SEQ ID NO: 19) próximo do C-término da região constante é alterada para eliminar potenciais epítopos de células T de junção. Por exemplo, em uma modalidade, a sequência de aminoáci- dos Leu-Ser-Leu-Ser (SEQ ID NO: 19) é substituída por uma sequên- cia de aminoácidos Ala-Thr-Ala-Thr (SEQ ID NO: 20). Em outras mo- dalidades, os aminoácidos dentro do segmento de Leu-Ser-Leu-Ser (SEQ ID NO: 19) são substituídos por outros aminoácidos, tais como glicina ou prolina. Métodos detalhados de geração de substituições de aminoácidos do segmento de Leu-Ser-Leu-Ser (SEQ ID NO: 19) pró- ximo do C-término de uma IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 ou uma outra molé- cula da classe da imunoglobulina foram descritos na Publicação de Patente U.S. Nº 20030166877, cuja descrição é incorporada ao pre- sente documento a título de referência.

[00171] Regiões de dobradiça apropriadas para a presente inven- ção podem ser derivadas de IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 e de outras clas- ses de imunoglobulina. A região de dobradiça de IgG1 tem três cisteí- nas, duas das quais estão envolvidas em ligações de dissulfeto entre as duas cadeias pesadas de imunoglobulina. Estas mesmas cisteínas permitem a formação eficiente e consistente da ligação de dissulfeto entre porções de Fc. Portanto, uma região de dobradiça da presente invenção é derivada de IgG1, por exemplo, de IgG1 humana. Em al- gumas modalidades, a primeira cisteína dentro da região de dobradiça de IgG1 humana sofre mutação para outro aminoácido, de preferência serina. A região de dobradiça de isotipo IgG2 tem quatro ligações de dissulfeto que tendem a promover a oligomerização e possivelmente a ligação de dissulfeto incorreta durante secreção em sistemas recombi- nantes. Uma região de dobradiça apropriada pode ser derivada de uma dobradiça de IgG2; cada uma das duas primeiras cisteínas, de preferência, sofre mutação para outro aminoácido. Sabe-se que a re- gião de dobradiça de IgG4 forma ligações de dissulfeto entre cadeias de maneira ineficiente. No entanto, uma região de dobradiça apropria- da para a presente invenção pode ser derivada da região de dobradiça de IgG4 a qual contém, de preferência, uma mutação que intensifica a formação correta de ligações de dissulfeto entre as porções derivadas de cadeias pesadas (Angal S., et al. (1993) Mol. Immunol., 30:105-8).

[00172] De acordo com a presente invenção, a região constante pode conter os domínios CH2 e/ou CH3 e uma região de dobradiça que seja derivados de diferentes isotipos de anticorpos, por exemplo, uma região constante híbrida. Por exemplo, em uma modalidade, a região constante contém os domínios CH2 e/ou CH3 derivados de IgG2 ou IgG4 e uma região de dobradiça mutante derivada de IgG1. Alternativamente, uma dobradiça mutante de uma outra subclasse de IgG é usada em uma região constante híbrida. Por exemplo, uma for- ma mutante da dobradiça de IgG4 que permite a ligação eficiente de dissulfeto entre as duas cadeias pesadas pode ser usada. Uma dobra- diça mutante também pode ser derivada de uma dobradiça de IgG2 na qual cada uma das duas primeiras cisteínas sofreu mutação para outro aminoácido. O conjunto de tais regiões constantes híbridas foi descrito na Publicação de Patente U.S. Nº 20030044423, cuja descrição é in-

corporada no presente documento a título de referência.

[00173] De acordo com a presente invenção, a região constante pode conter uma ou mais mutações descritas no presente documento. Combinações de mutações na porção Fc podem ter efeitos aditivos ou sinérgicos sobre a meia-vida sérica prolongada e uma potência in vivo aumentada da molécula bifuncional. Deste modo, em uma modalidade exemplificativa, a região constante pode conter (i) uma região derivada de uma sequência de IgG na qual a sequência de aminoácidos Leu- Ser-Leu-Ser (SEQ ID NO: 19) é substituída por uma sequência de aminoácidos Ala-Thr-Ala-Thr (SEQ ID NO: 20); (ii) um resíduo de ala- nina C-terminal em vez de lisina; (iii) um domínio CH2 e uma região de dobradiça que são derivados de diferentes isotipos de anticorpos, por exemplo, de um domínio CH2 de IgG e uma região de dobradiça de IgG1 alterada; e (iv) uma mutação que elimina o sítio de glicosilação dentro do domínio CH2 derivado de IgG2, por exemplo, uma sequên- cia de aminoácidos Gln-Ala-Gln-Ser (SEQ ID NO: 16) em vez da se- quência de aminoácidos Gln-Phe-Asn-Ser (SEQ ID NO: 15) dentro do domínio CH2 derivado de IgG2. Fragmentos de anticorpos

[00174] As proteínas e os polipeptídeos da invenção também po- dem incluir fragmentos de anticorpos de ligação a antígeno. Fragmen- tos de anticorpos exemplificativos incluem scFv, Fv, Fab, F(ab')2 e fra- gmentos VHH com um único domínio, tais como aqueles originários de camelídeos.

[00175] Fragmentos de anticorpos com uma única cadeia, também conhecidos como anticorpos com uma única cadeia (scFvs), são poli- peptídeos recombinantes os quais, tipicamente, se ligam a antígenos ou receptores; estes fragmentos contêm pelo menos um fragmento de uma sequência de aminoácidos de cadeia pesada variável de anticor- po (VH) unido a pelo menos um fragmento de uma sequência de ca-

deia leve variável de anticorpo (VL) com ou sem um ou mais ligantes de interconexão. Tal ligante pode ser um peptídeo flexível curto seleci- onado para assegurar que o dobramento tridimensional apropriado dos domínios de VL e VH ocorra uma vez eles estejam ligados de modo a manter a especificidade de ligação da molécula de anticorpo inteira da qual o fragmento de anticorpo com uma única cadeia é derivado. Ge- ralmente, o terminal carboxila da sequência de VL ou VH é ligado co- valentemente por tal ligante de peptídeo ao terminal amino de uma se- quência de VL e de VH complementar. Os fragmentos de anticorpo com uma única cadeia podem ser gerados por meio de clonagem mo- lecular, biblioteca de exibição em fagos de anticorpos ou técnicas simi- lares. Estas proteínas podem ser produzidas em células eucariotas ou em células procariotas, incluindo bactérias.

[00176] Os fragmentos de anticorpo com uma única cadeia contêm sequências de aminoácidos que têm pelo menos uma das regiões va- riáveis ou CDRs dos anticorpos inteiros descritos no presente relatório descritivo, mas que carecem de alguns ou todos os domínios constan- tes destes anticorpos. Estes domínios constantes não são necessários para a ligação antigênica, mas constituem uma porção principal da es- trutura de anticorpos inteiros. Os fragmentos de anticorpo com uma única cadeia podem, portanto, superar alguns dos problemas associa- dos ao uso dos anticorpos que contêm uma parte ou o todo o domínio constante. Por exemplo, os fragmentos de anticorpo com uma única cadeia tendem a ficar livres de interações indesejadas entre moléculas biológicas e a região constante de cadeia pesada ou outra atividade biológica não desejada. Além disso, os fragmentos de anticorpo com uma única cadeia são consideravelmente menores do que anticorpos inteiros e, portanto, podem ter uma permeabilidade capilar maior do que os anticorpos inteiros, permitindo que os fragmentos de anticorpo com uma única cadeia localizem e se liguem aos sítios de ligação a antígeno alvo de maneira mais eficiente. Além disso, os fragmentos de anticorpo podem ser produzidos em uma escala relativamente grande em células procariotas, deste modo, facilitando sua produção. Além disso, o tamanho relativamente pequeno de fragmentos de anticorpo com uma única cadeia torna menos provável de provocar uma respos- ta imune em um receptor do que anticorpos inteiros.

[00177] Fragmentos de anticorpos que têm as mesmas ou caracte- rísticas de ligação comparáveis àquelas do anticorpo inteiro também podem estar presentes. Tais fragmentos podem conter um ou ambos os fragmentos Fab ou o fragmento F(ab')2. Os fragmentos de anticorpo podem conter todas as seis CDRs do anticorpo inteiro, embora frag- mentos que contêm menos de todas de tais regiões, tais como três, quatro ou cinco CDRs, também sejam funcionais. Composições Farmacêuticas

[00178] A presente invenção também se caracteriza por composi- ções farmacêuticas que contêm uma quantidade terapeuticamente efi- caz de uma proteína descrita no presente documento. A composição pode ser formulada para uso em uma variedade de sistemas de distri- buição de fármaco. Um ou mais excipientes ou carreadores fisiologi- camente aceitáveis também podem ser incluídos na composição para formulação apropriada. Formulações apropriadas para uso na presen- te invenção são encontradas em Remington’s Pharmaceutical Scien- ces, Mack Publishing Company, Philadelphia, Pa., 17ª ed., 1985. Para uma revisão resumida dos métodos para distribuição de fármaco con- sulte, por exemplo, Langer (Science (1990), 249: 1527-1533).

[00179] Em um aspecto, a presente invenção fornece uma formula- ção para distribuição intravenosa de fármaco para uso em um método de tratamento de BTC ou inibição de crescimento de tumor em um pa- ciente com câncer que inclui 500 mg a 2400 mg de uma proteína que inclui um primeiro polipeptídeo e um segundo polipeptídeo, em que o primeiro polipeptídeo inclui: (a) pelo menos uma região variável de uma cadeia pesada de um anticorpo que se liga à proteína Ligante 1 de Morte Programada humana (PD-L1); e (b) ao Receptor de Fator β de Crescimento Transformante humano II (TGFβRII) ou um fragmento do mesmo que pode ligar o Fator β de Crescimento Transformante (TGFβ), em que um segundo polipeptídeo inclui pelo menos uma regi- ão variável de uma cadeia leve de um anticorpo que se liga à PD-L1 e a cadeia pesada do primeiro polipeptídeo e a cadeia leve de um se- gundo polipeptídeo, quando combinadas, formam um sítio de ligação a antígeno que se liga à PD-L1.

[00180] Em determinadas modalidades, um produto de proteína da presente invenção inclui um primeiro polipeptídeo que inclui a sequên- cia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 e um segundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1. Em determinadas modalidades, um produto de proteína da presente invenção inclui um primeiro polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 35, 36 e 37 e um segundo polipeptídeo que compre- ende as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 38, 39 e 40.

[00181] Em determinadas modalidades da presente invenção, a formulação para distribuição intravenosa de fármaco para uso em um método de tratamento de BTC ou inibição de crescimento de tumor em um paciente com câncer pode incluir uma dose de cerca de 500 mg a cerca de 2400 mg (por exemplo, de cerca de 500 mg a cerca de 2300 mg, de cerca de 500 mg a cerca de 2200 mg, de cerca de 500 mg a cerca de 2100 mg, de cerca de 500 mg a cerca de 2000 mg, de cerca de 500 mg a cerca de 1900 mg, de cerca de 500 mg a cerca de 1800 mg, de cerca de 500 mg a cerca de 1700 mg, de cerca de 500 mg a cerca de 1600 mg, de cerca de 500 a cerca de 1500 mg, de cerca de 500 mg a cerca de 1400 mg, de cerca de 500 mg a cerca de 1300 mg, de cerca de 500 mg a cerca de 1200 mg, de cerca de 500 mg a cerca de 1100 mg, de cerca de 500 mg a cerca de 1.000 mg, de cerca de 500 mg a cerca de 900 mg, de cerca de 500 mg a cerca de 800 mg, de cerca de 500 mg a cerca de 700 mg, de cerca de 500 mg a cerca de 600 mg, de cerca de 600 mg a 2400 mg, de cerca de 700 mg a 2400 mg, de cerca de 800 mg a 2400 mg, de cerca de 900 mg a 2400 mg, de cerca de 1.000 mg a 2400 mg, de cerca de 1100 mg a 2400 mg, de cerca de 1200 mg a 2400 mg, de cerca de 1300 mg a 2400 mg, de cerca de 1400 mg a 2400 mg, de cerca de 1500 mg a 2400 mg, de cerca de 1600 mg a 2400 mg, de cerca de 1700 mg a 2400 mg, de cerca de 1800 mg a 2400 mg, de cerca de 1900 mg a 2400 mg, de cerca de 2000 mg a 2400 mg, de cerca de 2100 mg a 2400 mg, de cerca de 2200 mg a 2400 mg ou de cerca de 2300 mg a 2400 mg) de uma proteína da presente invenção (por exemplo, a molécula de ar- madilha anti-PD-L1/TGFβ (por exemplo, que inclui um primeiro poli- peptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 e um segundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1)). Em determinadas modalidades, a formulação para distribuição intravenosa de fármaco pode incluir uma dose de cerca de 500 mg a cerca de 2000 mg de uma proteína da presente invenção (por exemplo, a molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ (por exemplo, que inclui um primeiro polipeptídeo que inclui a sequência de aminoá- cidos de SEQ ID NO: 3 e um segundo polipeptídeo que inclui a se- quência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1)). Em determinadas modali- dades, a formulação para distribuição intravenosa de fármaco pode incluir uma dose de cerca de 500 mg de um produto de proteína da presente invenção com um primeiro polipeptídeo que inclui a sequên- cia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 e um segundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1. Em determinadas modalidades, a formulação para distribuição intravenosa de fármaco pode incluir uma dose de 500 mg de uma proteína da presente inven-

ção (por exemplo, a molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ (por exemplo, que inclui um primeiro polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 e um segundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1)). Em determinadas mo- dalidades, a formulação para distribuição intravenosa de fármaco pode incluir uma dose de cerca de 1200 mg de um produto de proteína da presente invenção com um primeiro polipeptídeo que inclui a sequên- cia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 e um segundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1. Em determinadas modalidades, a formulação para distribuição intravenosa de fármaco pode incluir uma dose de 1200 mg de uma proteína da presente in- venção (por exemplo, a molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ (por exemplo, que inclui um primeiro polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 e um segundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1)). Em determinadas mo- dalidades, a formulação para distribuição intravenosa de fármaco pode incluir uma dose de cerca de 1800 mg de um produto de proteína da presente invenção com um primeiro polipeptídeo que inclui a sequên- cia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 e um segundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1. Em determinadas modalidades, a formulação para distribuição intravenosa de fármaco pode incluir uma dose de 1800 mg de uma proteína da presente in- venção (por exemplo, a molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ (por exemplo, que inclui um primeiro polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 e um segundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1). Em determinadas mo- dalidades, a formulação para distribuição intravenosa de fármaco pode incluir uma dose de 1800 mg de uma proteína da presente invenção (por exemplo, a molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ (por exemplo, que inclui um primeiro polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 35, 36 e 37 e um segundo polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 38, 39 e 40)). Em determinadas modalidades, a formulação para distribui- ção intravenosa de fármaco pode incluir uma dose de cerca de 2400 mg de um produto de proteína da presente invenção com um primeiro polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 e um segundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1. Em determinadas modalidades, a formulação para dis- tribuição intravenosa de fármaco pode incluir uma dose de 2400 mg de uma proteína da presente invenção (por exemplo, a molécula de ar- madilha anti-PD-L1/TGFβ (por exemplo, que inclui um primeiro poli- peptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 e um segundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1)). Em determinadas modalidades, a formulação para distribuição intravenosa de fármaco pode incluir uma dose de 2400 mg de uma proteína da presente invenção (por exemplo, a molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ (por exemplo, que inclui um primeiro poli- peptídeo que compreende as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 35, 36 e 37 e um segundo polipeptídeo que compreende as se- quências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 38, 39 e 40)).

[00182] Em determinadas modalidades, a formulação para distribui- ção intravenosa de fármaco para uso em um método de tratamento de BTC ou inibição de crescimento de tumor em um paciente com câncer pode incluir de cerca de 1200 mg a cerca de 3000 mg (por exemplo, de cerca de 1200 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 1200 mg a cer- ca de 2900 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 2800 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 2700 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 2600 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 2500 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 2400 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 2300 mg, de cerca de 1200 a cerca de 2200 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 2100 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 2000 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 1900 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 1800 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 1700 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 1600 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 1500 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 1400 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 1300 mg, de cerca de 1300 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 1400 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 1500 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 1600 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 1700 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 1800 a cerca de 3000 mg, de cerca de 1900 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 2000 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 2100 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 2200 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 2300 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 2400 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 2500 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 2600 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 2700 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 2800 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 2900 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1200 mg, cerca de 1300 mg, cerca de 1400 mg, cerca de 1500 mg, cerca de 1600 mg, cerca de 1700 mg, cerca de 1800 mg, cerca de 1900 mg, cerca de 2000 mg, cerca de 2100 mg, cerca de 2200 mg, cerca de 2300 mg, cerca de 2400 mg, cerca de 2500 mg, cerca de 2600 mg, cerca de 2700 mg, cerca de 2800 mg, cerca de 2900 mg ou cerca de 3000 mg) de um produto de proteína da presente invenção (por exemplo, a molécula de armadilha anti-PD-L1./TGFβ). Em determinadas modalidades, a formu- lação para distribuição intravenosa de fármaco para uso em um méto- do de tratamento de BTC ou inibição de crescimento de tumor em um paciente com câncer não submetido a tratamento pode incluir de cerca de 1200 mg a cerca de 3000 mg (por exemplo, de cerca de 1200 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 2900 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 2800 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 2700 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 2600 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 2500 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 2400 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 2300 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 2200 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 2100 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 2000 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 1900 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 1800 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 1700 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 1600 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 1500 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 1400 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 1300 mg, de cerca de 1300 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 1400 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 1500 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 1600 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 1700 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 1800 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 1900 a cerca de 3000 mg, de cerca de 2000 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 2100 mg a cer- ca de 3000 mg, de cerca de 2200 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 2300 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 2400 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 2500 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 2600 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 2700 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 2800 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 2900 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1200 mg, cerca de 1300 mg, cerca de 1400 mg, cerca de 1500 mg, cerca de 1600 mg, cerca de 1700 mg, cerca de 1800 mg, cerca de 1900 mg, cerca de 2000 mg, cerca de 2100 mg, cerca de 2200 mg, cerca de 2300 mg, cerca de 2400 mg, cerca de 2500 mg, cerca de 2600 mg, cerca de 2700 mg, cerca de 2800 mg, cerca de 2900 mg ou cerca de 3000 mg) de um produto de proteína que tem um primeiro polipeptídeo que inclui a sequência de aminoáci- dos de SEQ ID NO: 3 e um segundo polipeptídeo que inclui a sequên- cia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1; ou um produto de proteína que tem um primeiro polipeptídeo que compreende as sequências de ami- noácidos de SEQ ID NOs: 35, 36 e 37 e um segundo polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 38, 39 e

40.

[00183] Em determinadas modalidades, a formulação para distribui- ção intravenosa de fármaco para uso em um método de tratamento de BTC ou inibição de crescimento de tumor em um paciente com câncer pode incluir cerca de 525 mg, cerca de 550 mg, cerca de 575 mg, cer- ca de 600 mg, cerca de 625 mg, cerca de 650 mg, cerca de 675 mg, cerca de 700 mg, cerca de 725 mg, cerca de 750 mg, cerca de 775 mg, cerca de 800 mg, cerca de 825 mg, cerca de 850 mg, cerca de 875 mg, cerca de 900 mg, cerca de 925 mg, cerca de 950 mg, cerca de 975 mg, cerca de 1.000 mg, cerca de 1.025 mg, cerca de 1.050 mg, cerca de 1.075 mg, cerca de 1100 mg, cerca de 1.125 mg, cerca de

1.150 mg, cerca de 1.175 mg, cerca de 1200 mg, cerca de 1.225 mg, cerca de 1.250 mg, cerca de 1.275 mg, cerca de 1300 mg, cerca de

1.325 mg, cerca de 1.350 mg, cerca de 1.375 mg, cerca de 1400 mg, cerca de 1.425 mg, cerca de 1.450 mg, cerca de 1.475 mg, cerca de 1500 mg, cerca de 1.525 mg, cerca de 1.550 mg, cerca de 1.575 mg, cerca de 1600 mg, cerca de 1.625 mg, cerca de 1.650 mg, cerca de

1.675 mg, cerca de 1700 mg, cerca de 1.725 mg, cerca de 1.750 mg, cerca de 1.775 mg, cerca de 1800 mg, cerca de 1.825 mg, cerca de

1.850 mg, cerca de 1.875 mg, cerca de 1900 mg, cerca de 1.925 mg, cerca de 1.950 mg, cerca de 1.975 mg, cerca de 2000 mg, cerca de

2.025 mg, cerca de 2.050 mg, cerca de 2.075 mg, cerca de 2100 mg, cerca de 2.125 mg, cerca de 2.150 mg, cerca de 2.175 mg, cerca de 2200 mg, cerca de 2.225 mg, cerca de 2.250 mg, cerca de 2.275 mg, cerca de 2300 mg, cerca de 2.325 mg, cerca de 2.350 mg, cerca de

2.375 mg ou cerca de 2400 da proteína da presente invenção (por exemplo, a molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ que compreende um primeiro polipeptídeo que compreende as sequências de aminoá- cidos de SEQ ID NOs: 35, 36 e 37 e um segundo polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 38, 39 e

40).

[00184] A formulação para distribuição intravenosa de fármaco da presente invenção para uso em um método de tratamento de BTC ou inibição de crescimento de tumor em um paciente com câncer pode estar contida em uma bolsa, em uma caneta ou em uma seringa. Em determinadas modalidades, a bolsa pode ser conectada a um canal que compreende um tubo e/ou uma agulha. Em determinadas modali- dades, a formulação pode ser uma formulação liofilizada ou uma for- mulação líquida. Em determinadas modalidades, a formulação pode ser seca por congelamento (liofilizada) e estar contida em cerca de 12 a 60 frascos. Em determinadas modalidades, a formulação pode ser seca por congelamento e cerca de 45 mg da formulação seca por con- gelamento podem estar contidos em um frasco. Em determinadas mo- dalidades, a partir de cerca de 40 a cerca de 100 mg da formulação seca por congelamento podem estar contidos em um frasco. Em de- terminadas modalidades, as formulações secas por congelamento de 12, 27 ou 45 frascos são combinadas para obter uma dose terapêutica da proteína na formulação medicamentosa intravenosa. Em determi- nadas modalidades, a formulação pode ser uma formulação líquida de um produto de proteína que tem um primeiro polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 e um segundo polipeptí- deo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1; ou um produto de proteína que tem um primeiro polipeptídeo que compreen- de as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOS: 35, 36 e 37 e um segundo polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 38, 39 e 40 e armazenada de cerca de 250 mg/frasco a cerca de 2000 mg/frasco (por exemplo, de cerca de 250 mg/frasco a cerca de 2000 mg/frasco, de cerca de 250 mg/frasco a cerca de 1900 mg/frasco, de cerca de 250 mg/frasco a cerca de 1800 mg/frasco, de cerca de 250 mg/frasco a cerca de 1700 mg/frasco, de cerca de 250 mg/frasco a cerca de 1600 mg/frasco, de cerca de 250 mg/frasco a cerca de 1500 mg/frasco, de cerca de 250 mg/frasco a cerca de 1400 mg/frasco, de cerca de 250 mg/frasco a cerca de 1300 mg/frasco, de cerca de 250 mg/frasco a cerca de 1200 mg/frasco, de cerca de 250 mg/frasco a cerca de 1100 mg/frasco, de cerca de 250 mg/frasco a cerca de 1.000 mg/frasco, de cerca de 250 mg/frasco a cerca de 900 mg/frasco, de cerca de 250 mg/frasco a cerca de 800 mg/frasco, de cerca de 250 mg/frasco a cerca de 700 mg/frasco, de cerca de 250 mg/frasco a cerca de 600 mg/frasco, de cerca de 250 mg/frasco a cer- ca de 500 mg/frasco, de cerca de 250 mg/frasco a cerca de 400 mg/frasco, de cerca de 250 mg/frasco a cerca de 300 mg/frasco, de cerca de 300 mg/frasco a cerca de 2000 mg/frasco, de cerca de 400 mg/frasco a cerca de 2000 mg/frasco, de cerca de 500 mg/frasco a cerca de 2000 mg/frasco, de cerca de 600 mg/frasco a cerca de 2000 mg/frasco, de cerca de 700 mg/frasco a cerca de 2000 mg/frasco, de cerca de 800 mg/frasco a cerca de 2000 mg/frasco, de cerca de 900 mg/frasco a cerca de 2000 mg/frasco, de cerca de 1.000 mg/frasco a cerca de 2000 mg/frasco, de cerca de 1100 mg/frasco a cerca de 2000 mg/frasco, de cerca de 1200 mg/frasco a cerca de 2000 mg/frasco, de cerca de 1300 mg/frasco a cerca de 2000 mg/frasco, de cerca de 1400 mg/frasco a cerca de 2000 mg/frasco, de cerca de 1500 mg/frasco a cerca de 2000 mg/frasco, de cerca de 1600 mg/frasco a cerca de 2000 mg/frasco, de cerca de 1700 mg/frasco a cerca de 2000 mg/frasco, de cerca de 1800 mg/frasco a cerca de 2000 mg/frasco ou de cerca de 1900 mg/frasco a cerca de 2000 mg/frasco). Em determinadas modali- dades, a formulação pode ser uma formulação líquida e armazenada a cerca de 600 mg/frasco.

Em determinadas modalidades, a formulação pode ser uma formulação líquida e armazenada a cerca de 1200 mg/frasco.

Em determinadas modalidades, a formulação pode ser uma formulação líquida e armazenada a cerca de 1800 mg/frasco.

Em de-

terminadas modalidades, a formulação pode ser uma formulação líqui- da e armazenada a cerca de 2400 mg/frasco. Em determinadas moda- lidades, a formulação pode ser uma formulação líquida e armazenada a cerca de 250 mg/frasco.

[00185] A presente invenção fornece uma formulação farmacêutica aquosa líquida que inclui uma quantidade terapeuticamente eficaz da proteína da presente invenção (por exemplo, a molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ) em uma solução tamponada que forma uma formu- lação para uso em um método de tratamento de BTC ou inibição de crescimento de tumor em um paciente com câncer.

[00186] Estas composições para uso em um método de tratamento de BTC ou inibição de crescimento de tumor em um paciente com câncer podem ser esterilizadas por meio de técnicas convencionais de esterilização ou podem ser filtradas estéreis. As soluções aquosas re- sultantes podem ser acondicionadas para uso como se apresentam ou liofilizadas e o preparado liofilizado é combinado com um carreador aquoso estéril antes de administração. O pH dos preparados está, tipi- camente, entre 3 e 11, de preferência entre 5 e 9 ou entre 6 e 8 e, mais preferivelmente, entre 7 e 8, tal como a partir de 7 a 7,5. As com- posições resultantes na forma sólida podem ser acondicionadas em múltiplas unidades de uma só dose, cada uma das quais contém uma quantidade fixa de agente ou agentes supracitados. A composição na forma sólida também pode ser acondicionada em um recipiente para uma quantidade flexível.

[00187] Em determinadas modalidades, a presente invenção forne- ce o uso, em um método de tratamento de BTC ou inibição de cresci- mento de tumor em um paciente com câncer, de uma formulação com uma vida útil prolongada que inclui uma proteína da presente invenção (por exemplo, a molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ (por exemplo, que inclui um primeiro polipeptídeo que inclui a sequência de aminoá-

cidos de SEQ ID NO: 3 e um segundo polipeptídeo que inclui a se- quência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1)), em combinação com ma- nitol, ácido cítrico monoidratado, citrato de sódio, fosfato dissódico dii- dratado, di-hidrogeno fosfato de sódio diidratado, cloreto de sódio, po- lissorbato 80, água e hidróxido de sódio.

[00188] Em determinadas modalidades, uma formulação aquosa para uso em um método de tratamento de BTC ou inibição de cresci- mento de tumor em um paciente com câncer é preparada mediante a inclusão de uma proteína da presente invenção (por exemplo, a molé- cula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ (por exemplo, que inclui um pri- meiro polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 e um segundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoáci- dos de SEQ ID NO: 1; ou um produto de proteína que tem um primeiro polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 35, 36 e 37 e um segundo polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 38, 39 e 40) em uma so- lução com pH controlado. O tampão da presente invenção pode ter um pH que varia a partir de cerca de 4 a cerca de 8, por exemplo, de cer- ca de 4 a cerca de 8, de cerca de 4,5 a cerca de 8, de cerca de 5 a cerca de 8, de cerca de 5,5 a cerca de 8, de cerca de 6 a cerca de 8, de cerca de 6,5 a cerca de 8, de cerca de 7 a cerca de 8, de cerca de 7,5 a cerca de 8, de cerca de 4 a cerca de 7,5, de cerca de 4,5 a cerca de 7,5, de cerca de 5 a cerca de 7,5, de cerca de 5,5 a cerca de 7,5, de cerca de 6 a cerca de 7,5, de cerca de 6,5 a cerca de 7,5, de cerca de 4 a cerca de 7, de cerca de 4,5 a cerca de 7, de cerca de 5 a cerca de 7, de cerca de 5,5 a cerca de 7, de cerca de 6 a cerca de 7, de cer- ca de 4 a cerca de 6,5, de cerca de 4,5 a cerca de 6,5, de cerca de 5 a cerca de 6,5, de cerca de 5,5 a cerca de 6,5, de cerca de 4 a cerca de 6,0, de cerca de 4,5 a cerca de 6,0, de cerca de 5 a cerca de 6 ou de cerca de 4,8 a cerca de 5,5 ou pode ter um pH de cerca de 5,0 a cerca de 5,2. Faixas intermediárias dos pH citados acima também fazem parte da presente invenção. Por exemplo, faixas dos valores que usam uma combinação de qualquer um dos valores citados acima como limi- tes máximo e/ou mínimo devem ser incluídas. Exemplos de tampões que controlarão o pH dentro desta faixa incluem acetato (por exemplo, acetato de sódio), succinato (tal como succinato de sódio), gluconato, histidina, citrato e outros tampões de ácido orgânico.

[00189] Em determinadas modalidades, a formulação para uso em um método de tratamento de BTC ou inibição de crescimento de tumor em um paciente com câncer inclui um sistema de tampão que contém citrato e fosfato para manter o pH em uma faixa a partir de cerca de 4 a cerca de 8. Em determinadas modalidades, a faixa do pH pode ser a partir de cerca de 4,5 a cerca de 6,0 ou um pH a partir de cerca de 4,8 a cerca de 5,5 ou uma faixa de pH a partir de cerca de 5,0 a cerca de 5,2. Em determinadas modalidades, o sistema de tampão inclui ácido cítrico monoidratado, citrato de sódio, fosfato dissódico diidratado e/ou di-hidrogeno fosfato de sódio diidratado. Em determinadas modalida- des, o sistema de tampão inclui cerca de 1,3 mg/ml de ácido cítrico (por exemplo, 1,305 mg/ml), cerca de 0,3 mg/ml de citrato de sódio (por exemplo, 0,305 mg/ml), cerca de 1,5 mg/ml de fosfato dissódico diidratado (por exemplo, 1,53 mg/ml), cerca de 0,9 mg/ml de di- hidrogeno fosfato de sódio diidratado (por exemplo, 0,86 mg/ml) e cer- ca de 6,2 mg/ml de cloreto do sódio (por exemplo, 6,165 mg/ml). Em determinadas modalidades, o sistema de tampão inclui cerca de 1 a 1,5 mg/ml de ácido cítrico, de cerca de 0,25 a cerca de 0,5 mg/ml de citrato de sódio, de cerca de 1,25 a cerca de 1,75 mg/ml de fosfato dissódico diidratado, de cerca de 0,7 a cerca de 1,1 mg/ml de di- hidrogeno fosfato de sódio diidratado e de 6,0 a 6,4 mg/ml de cloreto de sódio. Em determinadas modalidades, o pH da formulação é ajus- tado com hidróxido de sódio.

[00190] Um poliol, o qual atua como um tonificante e pode estabili- zar o anticorpo, também pode ser incluído na formulação. O poliol é adicionado à formulação em uma quantidade que pode variar em rela- ção à isotonicidade desejada da formulação. Em determinadas moda- lidades, a formulação aquosa pode ser isotônica. A quantidade de po- liol adicionada também pode ser alterada em relação ao peso molecu- lar do poliol. Por exemplo, uma quantidade menor de um monossaca- rídeo (por exemplo, manitol) pode ser adicionada comparado com um dissacarídeo (tal como trealose). Em determinadas modalidades, o po- liol que pode ser usado na formulação como um agente de tonicidade é manitol. Em determinadas modalidades, a concentração de manitol pode ser a partir de cerca de 5 a cerca de 20 mg/ml. Em determinadas modalidades, a concentração de manitol pode ser a partir de cerca de 7,5 a cerca de 15 mg/ml. Em determinadas modalidades, a concentra- ção de manitol pode ser a partir de cerca de 10 a cerca de 14 mg/ml. Em determinadas modalidades, a concentração de manitol pode ser a partir de cerca de 12 mg/ml. Em determinadas modalidades, o poliol sorbitol pode ser incluído na formulação.

[00191] Um detergente ou um tensoativo também pode ser adicio- nado à formulação. Detergentes exemplificativos incluem detergentes não iônicos, tais como polissorbatos (por exemplo, polissorbatos 20, 80, etc.) ou poloxâmeros (por exemplo, poloxâmero 188). A quantida- de de detergente adicionada é tal que reduz a agregação do anticorpo formulado e/ou minimiza a formação de partículas na formulação e/ou reduz a adsorção. Em determinadas modalidades, a formulação pode incluir um tensoativo que é um polissorbato. Em determinadas modali- dades, a formulação pode conter o detergente polissorbato 80 ou Tween 80. Tween 80 é um termo usado para descrever o mono-oleato de sorbitano de polioxietileno (20) (consulte Fiedler, Lexikon der Hilfsstoffede, Editio Cantor Verlag Aulendorf, 4ª ed., 1996). Em deter-

minadas modalidades, a formulação pode conter entre cerca de 0,1 mg/ml e cerca de 10 mg/ml de polissorbato 80 ou entre cerca de 0,5 mg/ml e cerca de 5 mg/ml. Em determinadas modalidades, polissorba- to 80 a cerca de 0,1 % pode ser adicionado à formulação. Formulação Liofilizada

[00192] A formulação liofilizada para uso em um método de trata- mento de BTC ou inibição de crescimento de tumor em um paciente com câncer da presente invenção inclui a molécula de armadilha anti- PD-L1/TGFβ e um lioprotetor. O lioprotetor pode ser um açúcar, por exemplo, um dissacarídeo. Em determinadas modalidades, o lioprote- tor pode ser sacarose ou maltose. A formulação liofilizada também po- de incluir um ou mais dentre um agente de tamponamento, um tensoa- tivo, um agente espessante e/ou um conservante.

[00193] A quantidade de sacarose ou maltose útil para estabilização do produto medicamentoso liofilizado pode estar em uma proporção eme peso de pelo menos 1:2 entre a proteína e a sacarose ou malto- se. Em determinadas modalidades, a proporção em peso entre a pro- teína e a sacarose ou maltose pode ser de 1:2 a 1:5.

[00194] Em determinadas modalidades, o pH da formulação, antes de liofilização, pode ser ajustado mediante a adição de um ácido e/ou uma base farmaceuticamente aceitáveis. Em determinadas modalida- des, o ácido farmaceuticamente aceitável pode ser ácido clorídrico. Em determinadas modalidades, a base farmaceuticamente aceitável pode ser hidróxido de sódio.

[00195] Antes de liofilização, o pH da solução que contém a proteí- na da presente invenção pode ser ajustado entre cerca de 6 e cerca de 8. Em determinadas modalidades, a faixa de pH para o produto medicamentoso liofilizado pode ser a partir de cerca de 7 a cerca de 8.

[00196] Em determinadas modalidades, um sal ou componentes de tamponamento podem ser adicionados em uma quantidade a partir de cerca de 10 mM a cerca de 200 mM. Os sais e/ou tampões são farma- ceuticamente aceitáveis e são derivados de vários ácidos conhecidos (inorgânicos e orgânicos) com metais "formadores de base" ou ami- nas. Em determinadas modalidades, o tampão pode ser um tampão de fosfato. Em determinadas modalidades, o tampão pode ser um tampão de glicinato, carbonato, citrato, em cujo caso os íons de sódio, potás- sio ou amônio podem servir como contra-íon.

[00197] Em determinadas modalidades, "um agente de composição de volume" pode ser adicionado. Um "agente de composição de volu- me" é um composto que adiciona massa a uma mistura liofilizada e a contribui para a estrutura física do bolo liofilizado (por exemplo, facilita a produção de um bolo liofilizado essencialmente uniforme que man- tém uma estrutura de poros abertos). Agentes de composição de vo- lume ilustrativos incluem manitol, glicina, polietileno glicol e sorbitol. As formulações liofilizadas da presente invenção podem conter tais agen- tes de composição de volume.

[00198] Um conservante pode ser opcionalmente adicionado às formulações no presente documento para reduzir a ação bacteriana. A adição de um conservante pode, por exemplo, facilitar a produção de uma formulação de múltiplos usos (múltiplas doses).

[00199] Em determinadas modalidades, o produto medicamentoso liofilizado para uso em um método de tratamento de BTC ou inibição de crescimento de tumor em um paciente com câncer pode ser consti- tuído com um carreador aquoso. O carreador aquoso de interesse no presente documento é aquele que é farmaceuticamente aceitável (por exemplo, seguro e não tóxico para administração a um ser humano) e é útil para a preparação de uma formulação líquida após liofilização. Diluentes ilustrativos incluem água estéril para injeção (SWFI), água bacteriostática para injeção (BWFI), uma solução com pH tamponado (por exemplo, solução salina tamponada com fosfato), uma solução salina estéril, uma solução de Ringer ou uma solução de dextrose.

[00200] Em determinadas modalidades, o produto medicamentoso liofilizado da presente invenção é reconstituído com água estéril para injeção, USP (SWFI) ou cloreto de sódio a 0,9 %, USP. Durante a re- constituição, o pó liofilizado é dissolvido em uma solução.

[00201] Em determinadas modalidades, o produto liofilizado de pro- teína da presente invenção é constituído até cerca de 4,5 ml de água para injeção e diluído com a solução salina a 0,9 % (solução de cloreto do sódio). Formulação Líquida

[00202] Nas modalidades, o produto de proteína da presente inven- ção é formulado como uma formulação líquida para uso em um méto- do de tratamento de BTC ou inibição de crescimento de tumor em um paciente com câncer. A formulação líquida pode ser apresentada em uma concentração de 10 mg/ml em um ou outro frasco USP/Ph Eur de tipo I 50R fechado com uma rolha de borracha e lacrado com um lacre de vedação de alumínio. A rolha pode ser feita de um elastômero compatível com USP e Ph Eur. Em determinadas modalidades, os frascos podem ser enchidos com cerca de 61,2 ml da solução do pro- duto de proteína a fim de permitir um volume extraível de 60 ml. Em determinadas modalidades, a formulação líquida pode ser diluída com solução salina a 0,9 %. Em determinadas modalidades, os frascos po- dem conter cerca de 61,2 ml da solução de produto de proteína (por exemplo, a molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ (por exemplo, que inclui um primeiro polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 e um segundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1)) a cerca de 20 mg/ml a cerca de 50 mg/ml (por exemplo, cerca de 20 mg/ml, cerca de 25 mg/ml, cerca de 30 mg/ml, cerca de 35 mg/ml, cerca de 40 mg/ml, cerca de 45 mg/ml ou cerca de 50 mg/ml) a fim de permitir um volume extraível de 60 ml para aplicar cerca de 1200 mg a cerca de 3000 mg (por exemplo, de cerca de 1200 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 2900, de cerca de 1200 mg a cerca de 2800 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 2700 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 2600 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 2500 mg, de cerca de 1200 a cerca de 2400 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 2300 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 2200 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 2100 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 2000 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 1900 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 1800 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 1700 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 1600 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 1500 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 1400 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 1300 mg, de cerca de 1300 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 1400 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 1500 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 1600 a cerca de 3000 mg, de cerca de 1700 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 1800 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 1900 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 2000 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 2100 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 2200 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 2300 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 2400 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 2500 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 2600 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 2700 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 2800 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 2900 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1200 mg, cerca de 1300 mg, cerca de 1400 mg, cerca de 1500 mg, cerca de 1600 mg, cerca de 1700 mg, cerca de 1800 mg, cerca de 1900 mg, cerca de 2000 mg, cerca de 2100 mg, cerca de 2200 mg, cerca de 2300 mg, cerca de 2400 mg, cerca de 2500 mg, cerca de 2600 mg, cerca de 2700 mg, cerca de 2800 mg, cerca de 2900 mg ou cerca de 3000 mg) do produto de pro- teína (por exemplo, a molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ (por exemplo, que inclui um primeiro polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 e um segundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1; ou um produto de proteí- na que tem um primeiro polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 35, 36 e 37 e um segundo polipeptí- deo que compreende as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 38, 39 e 40)) a um indivíduo.

[00203] Em determinadas modalidades, os frascos podem conter cerca de 61,2 ml da solução do produto de proteína (produto de prote- ína que tem um primeiro polipeptídeo que inclui a sequência de ami- noácidos de SEQ ID NO: 3 e um segundo polipeptídeo que inclui a se- quência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1; ou um produto de proteína que tem um primeiro polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 35, 36 e 37 e um segundo polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 38, 39 e 40) de cerca de 20 mg/ml a cerca de 50 mg/ml (por exemplo, cer- ca de 20 mg/ml, cerca de 25 mg/ml, cerca de 30 mg/ml, cerca de 35 mg/ml, cerca de 40 mg/ml, cerca de 45 mg/ml ou cerca de 50 mg/ml) a fim de permitir um volume extraível de 60 ml para aplicar de cerca de 1200 mg a cerca de 3000 mg (por exemplo, de cerca de 1200 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 2900 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 2800 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 2700 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 2600 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 2500 mg, de cerca de 1200 a cerca de 2400 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 2300 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 2200 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 2100 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 2000 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 1900 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 1800 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 1700 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 1600 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 1500 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 1400 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 1300 mg, de cerca de 1300 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 1400 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 1500 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 1600 a cerca de 3000 mg, de cerca de 1700 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 1800 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 1900 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 2000 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 2100 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 2200 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 2300 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 2400 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 2500 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 2600 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 2700 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 2800 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 2900 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1200 mg, cerca de 1300 mg, cerca de 1400 mg, cerca de 1500 mg, cerca de 1600 mg, cerca de 1700 mg, cerca de 1800 mg, cerca de 1900 mg, cerca de 2000 mg, cerca de 2100 mg, cerca de 2200 mg, cerca de 2300 mg, cerca de 2400 mg, cerca de 2500 mg, cerca de 2600 mg, cerca de 2700 mg, cerca de 2800 mg, cerca de 2900 mg ou cerca de 3000 mg) do produto de proteína a um indivíduo não submetido a tratamento.

[00204] Em determinadas modalidades, a formulação líquida para uso em um método de tratamento de BTC ou inibição de crescimento de tumor em um paciente com câncer da invenção pode ser preparada como uma solução em uma concentração de 10 mg/mL em combina- ção com um açúcar em níveis estabilizantes. Em determinadas moda- lidades, a formulação líquida pode ser preparada em um carreador aquoso. Em determinadas modalidades, um estabilizante pode ser adicionado em uma quantidade não maior do que aquela que pode resultar em uma viscosidade indesejável ou inadequada para adminis- tração intravenosa. Em determinadas modalidades, o açúcar pode ser um dissacarídeo, por exemplo, sacarose. Em determinadas modalida- des, a formulação líquida também pode incluir um ou mais de um agente de tamponamento, um tensoativo e um conservante.

[00205] Em determinadas modalidades, o pH da formulação líquida pode ser ajustado mediante a adição de um ácido e/ou uma base far- maceuticamente aceitáveis. Em determinadas modalidades, o ácido farmaceuticamente aceitável pode ser ácido clorídrico. Em determina- das modalidades, a base pode ser hidróxido de sódio.

[00206] Além da agregação, a desamidação é uma variante comum do produto de peptídeos e proteínas que podem ocorrer durante a fermentação, coleta/clarificação de células, purificação, armazenamen- to de substância de fármaco/produto medicamentoso e durante análise da amostra. A desamidação é a perda de NH3 de uma proteína, for- mando um intermediário de succinimida que pode ser submetido à hi- drólise. O intermediário de succinimida resulta em uma diminuição da massa de 17 u do peptídeo precursor. Subsequente hidrólise resulta em um aumento da massa de 18 u. O isolamento do intermediário de succinimida é difícil em virtude da instabilidade sob condições aquo- sas. Desta maneira, a desamidação é tipicamente detectável como um aumento de massa de 1 u. A desamidação de uma asparagina resulta em ácido aspártico ou isoaspártico. Os parâmetros que afetam a taxa de desamidação incluem o pH, a temperatura, a constante dielétrica do solvente, a resistência iônica, a sequência primária, a conformação de polipeptídeo local e a estrutura terciária. Os resíduos de aminoáci- do adjacentes a Asn na cadeia peptídica afetam as taxas de desami- dação. Gly e Ser depois de uma Asn em sequências de proteínas re- sultam em uma maior suscetibilidade à desamidação.

[00207] Em determinadas modalidades, a formulação líquida para uso em um método de tratamento de BTC ou inibição de crescimento de tumor em um paciente com câncer da presente invenção pode ser preservada sob condições de pH e umidade para impedir a desamida- ção do produto de proteína.

[00208] O carreador aquoso de interesse no presente documento é aquele que é farmaceuticamente aceitável (seguro e não tóxico para administração a um ser humano) e é útil para a preparação de uma formulação líquida. Carreadores ilustrativos incluem água estéril para injeção (SWFI), água bacteriostática para injeção (BWFI), uma solução tamponada (por exemplo, solução salina tamponada com fosfato), uma solução salina estéril, uma solução de Ringer ou uma solução de dex- trose.

[00209] Um conservante pode ser opcionalmente adicionado às formulações no presente documento para reduzir a ação bacteriana. A adição de um conservante pode, por exemplo, facilitar a produção de uma formulação de múltiplos usos (múltiplas doses).

[00210] Formulações intravenosas (IV) podem ser a via preferida de administração em casos particulares, tal como quando um paciente está no hospital após transplante e está recebendo todos os medica- mentos através da via IV. Em determinadas modalidades, a formula- ção líquida é diluída com uma solução de cloreto de sódio a 0,9 % an- tes da administração. Em determinadas modalidades, o produto medi- camentoso diluído para injeção é isotônico e apropriado para adminis- tração através de infusão intravenosa.

[00211] Em determinadas modalidades, um sal ou componentes de tamponamento podem ser adicionados em uma quantidade de 10 mM a 200 mM. Os sais e/ou tampões são farmaceuticamente aceitáveis e são derivados de vários ácidos conhecidos (inorgânicos e orgânicos) com metais ou aminas "formadores de base". Em determinadas moda- lidades, o tampão pode ser um tampão de fosfato. Em determinadas modalidades, o tampão pode ser um tampão de glicinato, carbonato, citrato, em cujo caso íons de sódio, potássio ou amônio podem servir como contra-íon.

[00212] Um conservante pode ser opcionalmente adicionado às formulações no presente documento para reduzir a ação bacteriana. A adição de um conservante pode, por exemplo, facilitar a produção de uma formulação de múltiplos usos (múltiplas doses).

[00213] O carreador aquoso de interesse no presente documento é aquele que é farmaceuticamente aceitável (seguro e não tóxico para administração a um ser humano) e é útil para a preparação de uma formulação líquida. Carreadores ilustrativos incluem água estéril para injeção (SWFI), água bacteriostática para injeção (BWFI), uma solução de pH tamponado (por exemplo, solução salina tamponada com fosfa- to), uma solução salina estéril, uma solução de Ringer ou uma solução de dextrose.

[00214] Um conservante pode ser opcionalmente adicionado às formulações no presente documento para reduzir a ação bacteriana. A adição de um conservante pode, por exemplo, facilitar a produção de uma formulação de múltiplos usos (múltiplas doses). Método de Tratamento de Câncer ou Inibição de Crescimento de Tumor

[00215] Em um aspecto, a presente invenção fornece um método de tratamento de BTC ou inibição de crescimento de tumor em um in- divíduo que precisa do mesmo, o método incluindo administrar ao indi- víduo uma dose de pelo menos 500 mg de uma proteína que inclui um primeiro polipeptídeo e um segundo polipeptídeo. O primeiro polipeptí- deo inclui: (a) pelo menos uma região variável de uma cadeia pesada de um anticorpo que se liga à proteína humana Ligante 1 de Morte Programada (PD-L1); e (b) ao Receptor de Fator β de Crescimento Transformante humano II (TGFβRII) ou um fragmento dos mesmos que pode se ligar ao Fator β de Crescimento Transformante (TGFβ). O segundo polipeptídeo inclui pelo menos uma região variável de uma cadeia leve de um anticorpo que se liga à PD-L1 e a cadeia pesada do primeiro polipeptídeo e a cadeia leve do segundo polipeptídeo, quando combinadas, formam um sítio de ligação a antígeno que se liga à PD-

L1.

[00216] Em determinadas modalidades, o método de tratamento de BTC ou inibição de crescimento de tumor da presente invenção envol- ve administrar a um indivíduo uma proteína que inclui dois peptídeos, em que o primeiro polipeptídeo inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 e o segundo polipeptídeo inclui a sequência de aminoá- cidos de SEQ ID NO: 1. Em determinadas modalidades, a proteína é uma molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ.

[00217] Em uma modalidade, o indivíduo tratado de acordo com os métodos descritos no presente documento não recebeu a terapia ante- rior com a proteína bifuncional da presente invenção (molécula de ar- madilha anti-PD-L1/TGFβ). Em uma modalidade, o indivíduo tratado de acordo com os métodos descritos no presente documento não re- cebeu quimioterapia ou imunoterapia anterior para o tratamento de BTC.

[00218] Em outra modalidade, o indivíduo tratado de acordo com os métodos descritos no presente documento recebeu quimioterapia sis- têmica anterior, mas continua a experimentar progressão do tumor, isto é, falhou na quimioterapia sistêmica anterior (por exemplo, quimio- terapia com base em platina). Em outra modalidade, o indivíduo trata- do de acordo com os métodos descritos no presente documento é into- lerante à quimioterapia sistêmica (por exemplo, quimioterapia com ba- se em platina).

[00219] Em determinadas modalidades, o método de tratamento de BTC ou inibição de crescimento de tumor da presente invenção envol- ve administrar a um indivíduo uma proteína (por exemplo, uma molé- cula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ (por exemplo, que inclui um pri- meiro polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 e um segundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoáci- dos de SEQ ID NO: 1; ou um produto de proteína que tem um primeiro polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 35, 36 e 37 e um segundo polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 38, 39 e 40)) em uma dose de cerca de 1200 mg a cerca de 3000 mg (por exemplo, de cerca de 1200 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 2900 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 2800 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 2700 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 2600 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 2500 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 2400 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 2300 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 2200 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 2100 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 2000 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 1900 mg, de cerca de 1200 cerca de 1800 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 1700 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 1600 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 1500 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 1400 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 1300 mg, de cerca de 1300 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 1400 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 1500 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 1600 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 1700 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 1800 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 1900 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 2000 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 2100 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 2200 a cerca de 3000 mg, de cerca de 2300 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 2400 mg a cer- ca de 3000 mg, de cerca de 2500 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 2600 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 2700 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 2800 mg a cerca de 3000 mg, de cerca de 2900 mg a cerca de 3000 mg, cerca de 1200 mg, cerca de 1300 mg, cerca de 1400 mg, cerca de 1500 mg, cerca de 1600 mg, cerca de 1700 mg, cerca de 1800 mg, cerca de 1900 mg, cerca de 2000 mg, cerca de 2100 mg, cerca de 2200 mg, cerca de 2300 mg, cerca de 2400 mg, cerca de 2500 mg, cerca de 2600 mg, cerca de 2700 mg, cerca de

2800 mg, cerca de 2900 mg ou cerca de 3000 mg). Em determinadas modalidades, cerca de 1200 mg da molécula de armadilha anti-PD- L1/TGFβ são administrados a um indivíduo uma vez a cada duas se- manas.

Em determinadas modalidades, cerca de 1800 mg da molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ são administrados a um indivíduo uma vez a cada três semanas.

Em determinadas modalidades, cerca de 1200 mg de um produto de proteína que tem um primeiro polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 e um segun- do polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 são administrados a um indivíduo uma vez a cada duas semanas.

Em determinadas modalidades, cerca de 1800 mg de um produto de proteína que tem um primeiro polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 e um segundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 são administrados a um indivíduo uma vez a cada três semanas.

Em determinadas modalida- des, cerca de 1800 mg de um produto de proteína que tem um primei- ro polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 35, 36 e 37 e um segundo polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 38, 39 e 40 são admi- nistrados a um indivíduo uma vez a cada três semanas.

Em determi- nadas modalidades, cerca de 2400 mg de um produto de proteína que tem um primeiro polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 e um segundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 são administrados a um indivíduo uma vez a cada três semanas.

Em determinadas modalidades, cerca de 2400 mg de um produto de proteína que tem um primeiro polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 35, 36 e 37 e um segundo polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 38, 39 e 40 são administrados a um in- divíduo uma vez a cada três semanas.

[00220] Em determinadas modalidades, a dose administrada a um indivíduo pode ser cerca de 500 mg, cerca de 525 mg, cerca de 550 mg, cerca de 575 mg, cerca de 600 mg, cerca de 625 mg, cerca de 650 mg, cerca de 675 mg, cerca de 700 mg, cerca de 725 mg, cerca de 750 mg, cerca de 775 mg, cerca de 800 mg, cerca de 825 mg, cer- ca de 850 mg, cerca de 875 mg, cerca de 900 mg, cerca de 925 mg, cerca de 950 mg, cerca de 975 mg, cerca de 1000 mg, cerca de 1.025 mg, de cerca de 1.050 mg, cerca de 1.075 mg, cerca de 1100 mg, cer- ca de 1.125 mg, cerca de 1.150 mg, cerca de 1.175 mg, cerca de 1200 mg, cerca de 1.225 mg, cerca de 1.250 mg, cerca de 1.275 mg, cerca de 1300 mg, cerca de 1.325 mg, cerca de 1.350 mg, cerca de 1.375 mg, cerca de 1400 mg, cerca de 1.425 mg, cerca de 1.450 mg, cerca de 1.475 mg, cerca de 1500 mg, cerca de 1.525 mg, cerca de 1.550 mg, cerca de 1.575 mg, cerca de 1600 mg, cerca de 1.625 mg, cerca de 1.650 mg, cerca de 1.675 mg, cerca de 1700 mg, cerca de 1.725 mg, cerca de 1.750 mg, cerca de 1.775 mg, de cerca de 1800 mg, cer- ca de 1.825 mg, cerca de 1.850 mg, cerca de 1.875 mg, cerca de 1900 mg, cerca de 1.925 mg, cerca de 1.950 mg, cerca de 1.975 mg, cerca de 2000 mg, cerca de 2.025 mg, cerca de 2.050 mg, cerca de 2.075 mg, cerca de 2100 mg, cerca de 2.125 mg, cerca de 2.150 mg, cerca de 2.175 mg, cerca de 2200 mg, cerca de 2.225 mg, cerca de 2.250 mg, cerca de 2.275 mg, cerca de 2300 mg, cerca de 2.325 mg, cerca de 2.350 mg, cerca de 2.375 mg ou cerca de 2400 mg.

[00221] Em determinadas modalidades, a dose administrada a um indivíduo pode ser administrada uma vez a cada duas semanas. Em determinadas modalidades, a dose administrada a um indivíduo pode ser administrada uma vez a cada três semanas. Em determinadas modalidades, a proteína pode ser administrada por meio de adminis- tração intravenosa, por exemplo, com uma bolsa previamente carre- gada, uma caneta previamente carregada ou uma seringa previamente carregada. Em determinadas modalidades, a proteína é administrada intravenosamente a partir de uma bolsa de solução salina de 250 ml e a infusão intravenosa pode ser realizada durante cerca de uma hora (por exemplo, de 50 a 80 minutos). Em determinadas modalidades, a bolsa é conectada a um canal que compreende um tubo e/ou uma agulha.

[00222] Em algumas modalidades, o BTC é localmente avançado ou metastático. Por exemplo, em uma modalidade, o método trata BTC avançado. Em algumas modalidades, o método trata BTC metastático. Exemplos não limitativos de BTC incluem câncer de vesícula biliar (GBC), colangiocarcinoma (CCA) e carcinoma da ampola de Vater (VAC). GBC, CCA e VAC podem ser tratados com os métodos descri- tos no presente documento.

[00223] Em determinadas modalidades, os indivíduos ou pacientes com BTC avançado ou metastático são tratados mediante administra- ção intravenosa de pelo menos 500 mg (por exemplo, cerca de 500 mg, cerca de 600 mg, cerca de 700 mg, cerca de 800 mg, cerca de 900 mg, cerca de 1.000 mg, cerca de 1100 mg, cerca de 1200 mg, cerca de 1300 mg, cerca de 1400 mg, cerca de 1500 mg, cerca de 1600 mg, cerca de 1700 mg, cerca de 1800 mg, cerca de 1900 mg, cerca de 2000 mg, cerca de 2100 mg, cerca de 2200 mg, cerca de 2300 mg, cerca de 2400 mg, ou mais) de uma molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ que inclui um primeiro polipeptídeo que inclui a se- quência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 e um segundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1. Em determi- nadas modalidades, os indivíduos ou pacientes com BTC avançado ou metastático são tratados mediante administração intravenosa de pelo menos cerca de 500 mg (por exemplo, cerca de 500 mg, cerca de 600 mg, cerca de 700 mg, cerca de 800 mg, cerca de 900 mg, cerca de

1.000 mg, cerca de 1100 mg, cerca de 1200 mg, cerca de 1300 mg,

cerca de 1400 mg, cerca de 1500 mg, cerca de 1600 mg, cerca de 1700 mg, cerca de 1800 mg, cerca de 1900 mg, cerca de 2000 mg, cerca de 2100 mg, cerca de 2200 mg, cerca de 2300 mg, cerca de 2400 mg ou mais) de uma molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ que inclui um primeiro polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 35, 36 e 37 e um segundo polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 38, 39 e 40. Em determinadas modalidades, os indivíduos ou pacientes com BTC avançado ou metastático são tratados mediante administra- ção intravenosa de 2400 mg da molécula de armadilha anti-PD- L1/TGFβ que inclui um primeiro polipeptídeo que compreende as se- quências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 35, 36 e 37 e um segundo polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 38, 39 e 40.

[00224] Em determinadas modalidades, os indivíduos ou pacientes com BTC avançado ou metastático são tratados mediante administra- ção intravenosa de cerca de 1200 mg a cerca de 2400 mg (por exem- plo, de cerca de 1200 mg a cerca de 2400 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 2300 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 2200 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 2100 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 2000 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 1900 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 1800 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 1700 mg, de cerca de 1200 mg a cerca de 1600 mg, de cerca de 1200 a cerca de 1500 mg, de cerca de 1200 a cerca de 1400 mg, de cerca de 1200 a cerca de 1300 mg, de cerca de 1300 a cerca de 2400 mg, de cerca de 1400 a cerca de 2400 mg, de cerca de 1500 a cerca de 2400 mg, de cerca de 1600 a cerca de 2400 mg, de cerca de 1700 a cerca de 2400 mg, de cerca de 1800 a cerca de 2400 mg, de cerca de 1900 a cerca de 2400 mg, de cerca de 2000 a cerca de 2400 mg, de cerca de 2100 a cerca de 2400 mg, de cerca de 2200 a cerca de 2400 mg ou de cer-

ca de 2300 a cerca de 2400 mg) da molécula de armadilha anti-PD- L1/TGFβ que inclui um primeiro polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 e um segundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1.

[00225] Em determinadas modalidades, os indivíduos ou pacientes com BTC avançado ou metastático são tratados mediante administra- ção intravenosa de cerca de 1200 mg a cerca de 2400 mg (por exem- plo, a partir de cerca de 1200 mg a cerca de 2400 mg, a partir de cerca de 1200 mg a cerca de 2300 mg, a partir de cerca de 1200 mg a cerca de 2200 mg, a partir de cerca de 1200 mg a cerca de 2100 mg, a partir de cerca de 1200 mg a cerca de 2000 mg, a partir de cerca de 1200 mg a cerca de 1900 mg, a partir de cerca de 1200 mg a cerca de 1800 mg, a partir de cerca de 1200 mg a cerca de 1700 mg, a partir de cer- ca de 1200 mg a cerca de 1600 mg, a partir de cerca de 1200 a cerca de 1500 mg, a partir de cerca de 1200 a cerca de 1400 mg, a partir de cerca de 1200 a cerca de 1300 mg, a partir de cerca de 1300 a cerca de 2400 mg, a partir de cerca de 1400 a cerca de 2400 mg, a partir de cerca de 1500 a cerca de 2400 mg, a partir de cerca de 1600 a cerca de 2400 mg, a partir de cerca de 1700 a cerca de 2400 mg, a partir de cerca de 1800 a cerca de 2400 mg, a partir de cerca de 1900 a cerca de 2400 mg, a partir de cerca de 2000 a cerca de 2400 mg, a partir de cerca de 2100 a cerca de 2400 mg, a partir de cerca de 2200 a cerca de 2400 ou a partir de cerca de 2300 mg a cerca de 2400 mg) da mo- lécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ que inclui um primeiro polipeptí- deo que compreende as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 35, 36 e 37 e um segundo polipeptídeo que compreende as sequên- cias de aminoácidos de SEQ ID NOs: 38, 39 e 40.

[00226] Em algumas modalidades, os indivíduos ou pacientes com BTC avançado ou metastático são tratados mediante administração intravenosa da molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ em uma dose de cerca de 1200 mg uma vez a cada 2 semanas. Em algumas moda- lidades, os indivíduos ou pacientes com BTC avançado ou metastático são tratados mediante administração intravenosa de uma molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ em uma dose de cerca de 1200 mg uma vez a cada 2 semanas. Em algumas modalidades, os indivíduos ou pacientes com BTC avançado ou metastático são tratados mediante administração intravenosa de uma molécula de armadilha anti-PD- L1/TGFβ em uma dose de cerca de 1800 mg uma vez a cada 3 sema- nas. Em algumas modalidades, os indivíduos ou pacientes com BTC avançado ou metastático são tratados mediante administração intra- venosa de armadilha anti-PD-L1/TGFβ em uma dose de cerca de 1800 mg uma vez a cada 3 semanas. Em algumas modalidades, os indiví- duos ou pacientes com BTC avançado ou metastático são tratados mediante administração intravenosa de armadilha anti-PD-L1/TGFβ em uma dose de 2400 mg uma vez a cada 3 semanas.

[00227] São considerados no presente documento métodos de tra- tamento nos quais o paciente sem tratamento anterior recebe uma te- rapia combinada (por exemplo, a molécula de armadilha anti-PD- L1/TGFβ e quimioterapia). Por exemplo, em algumas modalidades, indivíduos ou pacientes com BTC avançado ou metastático que não receberam tratamento são tratados pela coadministração de gencitabi- na e/ou cisplatina com a molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ. Por exemplo, em algumas modalidades, indivíduos ou pacientes com BTC avançado ou metastático que não receberam tratamento são tratados pela coadministração de gencitabina e cisplatina com a molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ. Em algumas modalidades, indivíduos ou pacientes com BTC avançado ou metastático que não receberam tra- tamento são tratados pela coadministração de gencitabina com a mo- lécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ. Em algumas modalidades, indi- víduos ou pacientes com BTC avançado ou metastático que não rece-

beram tratamento são tratados pela coadministração de cisplatina com a molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ.

[00228] Em determinadas modalidades, a presente invenção des- creve métodos de tratamento nos quais o paciente sem tratamento an- terior recebe gencitabina e cisplatina no mesmo dia (por exemplo, dia 1) que a proteína (por exemplo, molécula de armadilha anti-PD- L1/TGFβ descrita no presente documento) durante o ciclo de tratamen- to. Em determinadas modalidades, a gencitabina e a cisplatina são administradas no dia 8 do ciclo de tratamento sem a proteína (por exemplo, uma molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ descrita no presente documento). Em algumas modalidades, o tratamento (por exemplo, coadministração da molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ com gencitabina e cisplatina no dia 1 seguido pela administração de gencitabina e cisplatina no dia 8) é repetido (por exemplo, 8 ciclos) ao longo de um período de tempo (por exemplo, 24 semanas) seguido pela administração de proteína (por exemplo, a molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ descrita no presente documento) apenas durante um período de tempo (por exemplo, 2 anos). Em algumas modalidades, o tratamento (por exemplo, coadministração da molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ com gencitabina e cisplatina no dia 1 seguido pela administração de gencitabina e cisplatina no dia 8) é repetido em um total de oito ciclos ao longo de 24 semanas seguido pela administra- ção da molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ apenas começando em 25 semanas.

[00229] A combinação de gencitabina e cisplatina é considerada o padrão global de cuidados para quimioterapia 1L para pacientes com BTC avançado ou metastático (NCCN, diretriz ESMO). Como tal, os regimes de dosagem para administração de gencitabina e cisplatina são rotineiros na técnica e são considerados aqui. Em algumas moda- lidades, a gencitabina é administrada em uma dose de cerca de 1000 mg/m2. Em algumas modalidades, a cisplatina é administrada em uma dose de cerca de 25 mg/m2. Em algumas modalidades, os pacientes tratados com uma terapia combinada podem ser tratados repetidamen- te. Por exemplo, em algumas modalidades, a gencitabina é adminis- trada em uma dose de cerca de 1000 mg/m2e a cisplatina em uma do- se de cerca de 25 mg/m2 no dia 1 e dia 8, a cada 3 semanas. Em al- gumas modalidades, a gencitabina é administrada em uma dose de cerca de 1000 mg/m2 e a cisplatina em uma dose de cerca de 25 mg/m2 no dia 1 e dia 8, a cada 3 semanas e até a semana 24, seguida por opcional gencitabina quinzenal em uma dose de cerca de 1000 mg/m2 com ou sem cisplatina em uma dose de cerca de 25 mg/m2, a cada duas semanas.

[00230] Em determinadas modalidades, indivíduos ou pacientes com BTC avançado ou metastático que não receberam tratamento são tratados pela administração intravenosa da molécula de armadilha an- ti-PD-L1/TGFβ em uma dose de cerca de 1200 mg uma vez a cada 2 semanas, em conjunto com gencitabina em uma dose de cerca de 1000 mg/m2 e cisplatina em uma dose de cerca de 25 mg/m2 no dia 1 e dia 8, a cada 3 semanas até a semana 24, seguido por gencitabina opcional quinzenal em uma dose de cerca de 1000 mg/m2 com ou sem cisplatina em uma dose de cerca de 25 mg/m2 a cada 2 semanas. Em determinadas modalidades, indivíduos ou pacientes com BTC avança- do ou metastático que não receberam tratamento são tratados pela administração intravenosa da molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ em uma dose de cerca de 1800 mg uma vez a cada 3 semanas, em conjunto com gencitabina em uma dose de cerca de 1000 mg/m2 e cisplatina em uma dose de cerca de 25 mg/m2 no dia 1 e dia 8, a cada 3 semanas até a semana 24, seguido por gencitabina opcional quinze- nal em uma dose de cerca de 1000 mg/m2 com ou sem cisplatina em uma dose de cerca de 25 mg/m2, a cada 2 semanas. Em determinadas modalidades, indivíduos ou pacientes com BTC avançado ou metastá- tico que não receberam tratamento são tratados através de coadminis- tração intravenosa da molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ em uma dose de cerca de 2.400 mg uma vez a cada 3 semanas com gen- citabina em uma dose de cerca de 1000 mg/m2 e cisplatina em uma dose de cerca de 25 mg/m2 no dia 1; e seguido por administração in- travenosa de gencitabina em uma dose de cerca de 1000 mg/m2 e cis- platina em uma dose de cerca de 25 mg/m2 no dia 8, a cada 3 sema- nas até a semana 24 (consulte, por exemplo, FIGURA 8 e Tabela 2). Da 25ª até as últimas semanas (por exemplo, aproximadamente 2 anos), o tratamento é continuado com 2.400 mg da molécula de arma- dilha anti-PD-L1/TGFβ administrados uma vez a cada três semanas, sem coadministração de gencitabina ou cisplatina.

[00231] Em determinadas modalidades, o BTC (por exemplo, BTC avançado, BTC metastático) a ser tratado é positivo para PD-L1. Por exemplo, em determinadas modalidades, o BTC (por exemplo, BTC avançado, BTC metastático) a ser tratado exibe ≥ 1 % de células tumo- rais positivas para PD-L1 determinado, por exemplo, por meio do en- saio Dako PD-L1 73-10 IHC pharmDx. Em determinadas modalidades, o BTC (por exemplo, BTC avançado, BTC metastático) a ser tratado é negativo para PD-L1. O BTC (por exemplo, BTC avançado, BTC me- tastático) a ser tratado pode exibir alta expressão de PD-L1 (ou PD-L1 high).

[00232] Métodos de detecção de um biomarcador, tal como PD-L1, por exemplo, em um BTC (por exemplo, BTC avançado, BTC metastá- tico) ou tumor do trato biliar são rotineiros na técnica e são considera- dos no presente documento. Exemplos não limitativos incluem imuno- histoquímica, imunofluorescência e separação de células ativadas por fluorescência (FACS). Em algumas modalidades, os indivíduos ou pa- cientes com PD-L1 positivo, BTC avançado ou metastático são trata-

dos por meio da administração intravenosa da molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ em uma dose de cerca de pelo menos 500 mg. Em algumas modalidades, os indivíduos ou pacientes com PD-L1 positivo, BTC avançado ou metastático são tratados pela administração intra- venosa da molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ em uma dose de cerca de 1200 mg uma vez a cada 2 semanas. Em algumas modalida- des, os indivíduos ou pacientes com PD-L1 positivo, BTC avançado ou metastático são tratados por meio da administração intravenosa da molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ em uma dose de cerca de

2.400 mg uma vez a cada 3 semanas.

[00233] Em algumas modalidades, os métodos de tratamento des- critos no presente documento resultam em uma resposta à doença ou melhora na sobrevida do indivíduo ou paciente. Em algumas modali- dades, por exemplo, a resposta da doença pode ser uma resposta completa, uma resposta parcial ou uma doença estável. Em algumas modalidades, por exemplo, a sobrevida melhor pode ser sobrevida sem progressão (PFS) ou a sobrevida global. Em algumas modalida- des, a melhora (por exemplo, em PFS) é determinada em relação a um período anterior ao início do tratamento com uma molécula de ar- madilha anti-PD-L1/TGFβ da presente invenção. Métodos para deter- minação da resposta à doença (por exemplo, resposta completa, res- posta parcial ou doença estável) e sobrevida do paciente (por exem- plo, PFS, sobrevida global) para BTC (por exemplo, BTC avançado, BTC metastático) ou terapia de tumor do trato biliar são rotineiros na técnica e são considerados no presente documento. Em algumas mo- dalidades, a resposta da doença é avaliada de acordo com RECIST

1.1 após submeter o paciente tratado à tomografia computadorizada (CT) com contraste ou ressonância magnética (MRI) da área afetada (por exemplo, tórax/abdômen e pélvis cobrindo a área da extensão su- perior da entrada torácica à sínfise púbica).

Dispositivo de Distribuição

[00234] Em um aspecto, a presente invenção fornece um dispositi- vo de distribuição de fármaco para uso em um método de tratamento de BTC (por exemplo, BTC avançado, BTC metastático) ou inibição de crescimento de tumor do trato biliar em um paciente com câncer, em que o dispositivo inclui uma formulação que compreende a partir de cerca de 500 mg a cerca de 3000 mg de uma proteína que inclui um primeiro polipeptídeo e um segundo polipeptídeo, em que o primeiro polipeptídeo inclui: (a) pelo menos uma região variável de uma cadeia pesada de um anticorpo que se liga à proteína humana Ligante 1 de Morte Programada (PD-L1); e (b) o Receptor de Fator β de Crescimen- to Transformante II humano (TGFβRII) ou um fragmento do mesmo, que pode se ligar ao Fator β de Crescimento Transformante (TGFβ) e o segundo polipeptídeo inclui pelo menos uma região variável de uma cadeia leve de um anticorpo que se liga à PD-L1 e a cadeia pesada do primeiro polipeptídeo e a cadeia leve do segundo polipeptídeo, quando combinadas, formam um sítio de ligação antigênica que se liga à PD- L1.

[00235] Em determinadas modalidades, o dispositivo pode ser uma bolsa, uma caneta ou uma seringa. Em determinadas modalidades, a bolsa pode ser conectada a um canal que compreende um tubo e/ou uma agulha.

[00236] Em determinadas modalidades da presente invenção, o dispositivo de distribuição de fármaco para uso em um método de tra- tamento de BTC (por exemplo, BTC avançado, BTC metastático) ou inibição de crescimento de tumor do trato biliar em um paciente com câncer pode incluir a partir de cerca de 500 mg a cerca de 3000 mg (por exemplo, a partir de cerca de 500 mg a cerca de 3000 mg, a partir de cerca de 500 mg a cerca de 2900 mg, a partir de cerca de 500 mg a cerca de 2800 mg, a partir de cerca de 500 a cerca de 2700 mg, a par-

tir de cerca de 500 mg a cerca de 2600 mg, a partir de cerca de 500 mg a cerca de 2500 mg, a partir de cerca de 500 mg a cerca de 2400 mg, a partir de cerca de 500 mg a cerca de 2300 mg, a partir de cerca de 500 mg a cerca de 2200 mg, a partir de cerca de 500 mg a cerca de 2100 mg, a partir de cerca de 500 mg a cerca de 2000 mg, a partir de cerca de 500 mg a cerca de 1900 mg, a partir de cerca de 500 mg a cerca de 1800 mg, a partir de cerca de 500 mg a cerca de 1700 mg, a partir de cerca de 500 mg a cerca de 1600 mg, a partir de cerca de 500 mg a cerca de 1500 mg, a partir de cerca de 500 mg a cerca de 1400 mg, a partir de cerca de 500 mg a cerca de 1300 mg, a partir de cerca de 500 a cerca de 1200 mg, a partir de cerca de 500 mg a cerca de 1100 mg, a partir de cerca de 500 mg a cerca de 1000 mg, a partir de cerca de 500 mg a cerca de 900 mg, a partir de cerca de 500 mg a cerca de 800 mg, a partir de cerca de 500 mg a cerca de 700 mg, a partir de cerca de 500 mg a cerca de 600 mg, a partir de cerca de 600 mg a cerca de 3000 mg, a partir de cerca de 700 mg a cerca de 3000 mg, a partir de cerca de 800 mg a cerca de 3000 mg, a partir de cerca de 900 mg a cerca de 3000 mg, a partir de cerca de 1000 mg a cerca de 3000 mg, a partir de cerca de 1100 mg a cerca de 3000 mg, a partir de cerca de 1200 mg a cerca de 3000 mg, a partir de cerca de 1300 mg a cerca de 3000 mg, a partir de cerca de 1400 a cerca de 3000 mg, a partir de cerca de 1500 a cerca de 3000 mg, a partir de cerca de 1600 a cerca de 3000 mg, a partir de cerca de 1700 a cerca de 3000 mg, a partir de cerca de 1800 a cerca de 3000 mg, a partir de cerca de 1900 a cerca de 3000 mg, a partir de cerca de 2000 a cerca de 3000 mg, a partir de cerca de 2100 a cerca de 3000 mg, a partir de cerca de 2200 a cerca de 3000 mg, a partir de cerca de 2300 a cerca de 3000 mg, a partir de cerca de 2400 a cerca de 3000 mg, a partir de cerca de 2500 a cerca de 3000 mg, a partir de cerca de 2600 a cerca de 3000 mg, a partir de cerca de 2700 a cerca de 3000 mg, a partir de cerca de

2800 a cerca de 3000 ou a partir de cerca de 2900 mg a cerca de 3000 mg) de uma proteína da presente invenção (por exemplo, a molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ, que inclui um primeiro polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 e um segun- do polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1; ou um produto de proteína que tem um primeiro polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 35, 36 e 37 e um segundo polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 38, 39 e 40). Em determinadas modali- dades, o dispositivo de distribuição de fármaco pode incluir uma dose a partir de cerca de 500 mg a cerca de 1200 mg de uma proteína da presente invenção (por exemplo, a molécula de armadilha anti-PD- L1/TGFβ, que inclui um primeiro polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 e um segundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1). Em determinadas mo- dalidades, o dispositivo de distribuição de fármaco podem incluir uma dose de cerca de 500 mg da proteína da presente invenção (por exemplo, a molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ, que inclui um primeiro polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 e um segundo polipeptídeo que inclui a sequência de amino- ácidos de SEQ ID NO: 1; ou um produto de proteína que tem um pri- meiro polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 35, 36 e 37 e um segundo polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 38, 39 e 40).

[00237] Em determinadas modalidades, o dispositivo de distribuição de fármaco inclui uma dose de cerca de 1200 do mg de uma proteína da presente invenção (por exemplo, a molécula de armadilha anti-PD- L1/TGFβ, que inclui um primeiro polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 e um segundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1; ou um produto de proteí-

na que tem um primeiro polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 35, 36 e 37 e um segundo polipeptí- deo que compreende as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 38, 39 e 40). Em determinadas modalidades, o dispositivo de distribui- ção de fármaco para uso em um método de tratamento de BTC (por exemplo, BTC avançado, BTC metastático) ou inibição de crescimento de tumor do trato biliar em um paciente com câncer inclui uma dose de cerca de 1800 mg de uma proteína da presente invenção (por exem- plo, a molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ que inclui um primeiro polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 e um segundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1; ou um produto de proteína que tem um primeiro poli- peptídeo que compreende as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 35, 36 e 37 e um segundo polipeptídeo que compreende as se- quências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 38, 39 e 40). Em determi- nadas modalidades, o dispositivo de distribuição de fármaco para uso em um método de tratamento de BTC (por exemplo, BTC avançado, BTC metastático) ou inibição de crescimento de tumor do trato biliar em um paciente com câncer inclui uma dose de cerca de 2400 mg de uma proteína da presente invenção (por exemplo, a molécula de ar- madilha anti-PD-L1/TGFβ que inclui um primeiro polipeptídeo que in- clui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 e um segundo poli- peptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1; ou um produto de proteína que tem um primeiro polipeptídeo que com- preende as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 35, 36 e 37 e um segundo polipeptídeo que compreende as sequências de aminoá- cidos de SEQ ID NOs: 38, 39 e 40). Em determinadas modalidades, o dispositivo de distribuição de fármaco para uso em um método de tra- tamento de BTC (por exemplo, BTC avançado, BTC metastático) ou inibição de crescimento de tumor do trato biliar em um paciente com câncer inclui uma dose de cerca de 1200 mg, cerca de 1800 mg ou cerca de 2400 mg do produto de proteína com um primeiro polipeptí- deo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 e um se- gundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1; ou um produto de proteína com um primeiro polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 35, 36 e 37 e um segundo polipeptídeo que compreende as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 38, 39 e 40.

[00238] Em determinadas modalidades, o dispositivo de distribuição de fármaco para uso em um método de tratamento de BTC (por exem- plo, BTC avançado, BTC metastático) ou inibição de crescimento de tumor do trato biliar em um paciente com câncer inclui uma dose de cerca de 1200 mg da proteína da presente invenção (por exemplo, mo- lécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ (por exemplo, que inclui um pri- meiro polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 e um segundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoáci- dos de SEQ ID NO: 1; ou um produto de proteína com um primeiro po- lipeptídeo que compreende as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 35, 36 e 37 e um segundo polipeptídeo que compreende as se- quências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 38, 39 e 40)). Em determi- nadas modalidades, o dispositivo de distribuição de fármaco para uso em um método de tratamento de BTC (por exemplo, BTC avançado, BTC metastático) ou inibição de crescimento de tumor do trato biliar em um paciente com câncer inclui uma dose de cerca de 1800 mg da proteína da presente invenção (por exemplo, molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ (por exemplo, que inclui um primeiro polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 e um segun- do polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1; ou um produto de proteína com um primeiro polipeptídeo que com- preende as sequências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 35, 36 e 37 e um segundo polipeptídeo que compreende as sequências de aminoá- cidos de SEQ ID NOs: 38, 39 e 40)). Em determinadas modalidades, o dispositivo de distribuição de fármaco para uso em um método de tra- tamento de BTC (por exemplo, BTC avançado, BTC metastático) ou inibição de crescimento de tumor do trato biliar em um paciente com câncer pode incluir cerca de 500 mg, cerca de 525 mg, cerca de 550 mg, cerca de 575 mg, cerca de 600 mg, cerca de 625 mg, cerca de 650 mg, cerca de 675 mg, cerca de 700 mg, cerca de 725 mg, cerca de 750 mg, cerca de 775 mg, cerca de 800 mg, cerca de 825 mg, cer- ca de 850 mg, cerca de 875 mg, cerca de 900 mg, cerca de 925 mg, cerca de 950 mg, cerca de 975 mg, cerca de 1000 mg, cerca de 1025 mg, cerca de 1050 mg, cerca de 1075 mg, cerca de 1100 mg, cerca de 1125 mg, cerca de 1150 mg, cerca de 1175 mg, cerca de 1200 mg, cerca de 1225 mg, cerca de 1250 mg, cerca de 1275 mg, cerca de 1300 mg, cerca de 1325 mg, cerca de 1350 mg, cerca de 1375 mg, cerca de 1400 mg, cerca de 1425 mg, cerca de 1450 mg, cerca de 1475 mg, cerca de 1500 mg, cerca de 1525 mg, cerca de 1550 mg, cerca de 1575 mg, cerca de 1600 mg, cerca de 1625 mg, cerca de 1650 mg, cerca de 1675 mg, cerca de 1700 mg, cerca de 1725 mg, cerca de 1750 mg, cerca de 1775 mg, cerca de 1800 mg, cerca de 1825 mg, cerca de 1850 mg, cerca de 1875 mg, cerca de 1900 mg, cerca de 1925 mg, cerca de 1950 mg, cerca de 1975 mg, cerca de 2000 mg, cerca de 2025 mg, cerca de 2050 mg, cerca de 2075 mg, cerca de 2100 mg, cerca de 2125 mg, cerca de 2150 mg, cerca de 2175 mg, cerca de 2200 mg, cerca de 2225 mg, cerca de 2250 mg, cerca de 2275 mg, cerca de 2300 mg, cerca de 2325 mg, cerca de 2350 mg, cerca de 2375 mg ou cerca de 2400 mg da proteína da pre- sente invenção (por exemplo, molécula de armadilha anti-PD- L1/TGFβ, por exemplo, um produto de proteína com um primeiro poli- peptídeo que compreende as sequências de aminoácidos de SEQ ID

NOs: 35, 36 e 37 e um segundo polipeptídeo que compreende as se- quências de aminoácidos de SEQ ID NOs: 38 , 39 e 40). Produção de Proteína

[00239] As proteínas de armadilha de anticorpo-citocina são, em geral, produzidas de modo recombinante ao usar células de mamíferos que contêm um ácido nucleico concebido para expressar a proteína. Embora um exemplo de uma linhagem de células e um método de produção de proteína apropriados seja descrito nos Exemplos 1 e 2 do documento de patente U.S. 20150225483 A1, uma ampla variedade de vetores, linhagens de células e métodos de produção de proteína apropriados foi usada para produzir produtos biofarmacêuticos com base em anticorpos e pode ser usada na síntese destas proteínas de armadilha de anticorpo-citocina. Indicações Terapêuticas

[00240] As proteínas de molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ descritas no pedido de patente (por exemplo, que inclui um primeiro polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 e um segundo polipeptídeo que inclui a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1), bem como as formulações para distribuição de fárma- co intravenosa e os dispositivos de distribuição que compreendem as ditas proteínas de molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ podem ser usadas para o tratamento de BTC (por exemplo, BTC avançado, BTC metastático) ou reduzir o crescimento de tumor do trato biliar em um paciente que recebeu tratamento ou um paciente que falhou ou é into- lerante à quimioterapia sistêmica anterior.

[00241] Em uma modalidade específica, um paciente com um BTC avançado ou metastático positivo para PD-L1 que não recebeu trata- mento anterior é tratado de acordo com os métodos da presente in- venção. Em outra modalidade, um paciente que falhou ou é intolerante à quimioterapia sistêmica anterior com BTC avançado ou metastático positivo para PD-L1 é tratado de acordo com os métodos da presente invenção.

EXEMPLOS

[00242] A invenção tendo sido agora sendo descrita de maneira ge- ral será compreendida mais prontamente mediante referência aos exemplos a seguir, os quais são incluídos meramente para fins de ilus- tração de determinados aspectos e modalidades da presente invenção e não se destinam a limitar o âmbito da invenção de nenhuma manei- ra. EXEMPLO 1: Acondicionamento da Formulação Medicamentosa Intravenosa

[00243] A formulação da molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ é preparada como uma formulação liofilizada ou uma formulação líquida. Para preparar a formulação liofilizada, a molécula de armadilha anti- PD-L1/TGFβ seca por congelamento é esterilizada e armazenada em frascos de vidro de uso único. Vários de tais frascos de vidro são, en- tão, acondicionados em um kit para aplicar uma dose independente do peso corporal específica a um indivíduo diagnosticado com um câncer ou um tumor. Dependendo do requisito da dose, o kit contém 12 a 60 frascos. Alternativamente, a formulação é preparada e acondicionada como uma formulação líquida e armazenada a 250 mg/frasco a 1.000 mg/frasco. Por exemplo, a formulação é uma formulação líquida e ar- mazenada a 600 mg/frasco ou armazenada a 250 mg/frasco. Em um outro exemplo, a molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ é formulada como uma solução a 10 mg/ml e fornecida em frascos USP/Ph Eur do tipo I enchidos para permitir um volume extraível de 60 ml (600 mg/60 ml) e lacrados com rolhas de borracha no formato de soro que são compatíveis com USP e Ph Eur com um lacre de vedação de alumínio.

[00244] Um indivíduo diagnosticado com BTC (por exemplo, BTC localmente avançado ou metastático) recebe intravenosamente uma formulação que contém de 500 mg a 2400 mg da molécula de armadi- lha anti-PD-L1/TGFβ. Por exemplo, o indivíduo recebe intravenosa- mente 1200 mg da molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ uma vez a cada duas semanas ou 1800 mg da molécula de armadilha anti-PD- L1/TGFβ uma vez a cada três semanas. A administração intravenosa é a partir de uma bolsa de solução salina. A quantidade da molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ administrada a um indivíduo é indepen- dente do peso corporal do indivíduo. EXEMPLO 2: Regime de dosagem independente de PC de molécu- la de armadilha anti-PD-L1/TGFβ de uma Coorte de Pacientes que Não Receberam Tratamento com BTC Localmente Avançado ou Metastático

[00245] Em uma modalidade exemplificativa, a dose independente de PC de 1200 mg da molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ é ad- ministrada a pacientes com BTC localmente avançado ou metastático (incluindo colangiocarcinoma intra- e extra-, câncer de vesícula biliar e câncer ampular) uma vez a cada duas semanas. A administração é realizada através da via intravenosa durante cerca de uma hora (-10 minutos/+20 minutos, isto é, 50 minutos a 80 minutos). Em uma moda- lidade exemplificativa, a dose independente de PC de 2400 mg da mo- lécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ é administrada a pacientes com câncer que não receberam tratamento com BTC localmente avançado ou metastático uma vez a cada três semanas. A administração é reali- zada através da via intravenosa durante cerca de uma hora (-10 minu- tos/+20 minutos, isto é, 50 minutos a 80 minutos). Em várias modali- dades, o paciente com câncer é de herança e/ou origem Asiática. Em várias modalidades, o paciente com câncer não é de herança e/ou ori- gem Asiática.

[00246] A fim de mitigar potenciais reações relacionadas à infusão, pré-medicação com um anti-histamínico e com paracetamol (acetami-

nofeno) (por exemplo, 25-50 mg de difenidramina e 500-650 mg de paracetamol [acetaminofeno] IV ou equivalente oral) aproximadamente 30 a 60 minutos antes de cada dose da molécula de armadilha anti- PD-L1/TGFβ é administrada durante as primeiras 2 infusões. A pré- medicação é opcional após a segunda infusão. Se forem observadas reações à infusão de Grau ≥ 2 durante as duas primeiras infusões, a pré-medicação não é interrompida. Esteroides como pré-medicação não são permitidos.

[00247] Em uma modalidade exemplificativa, pacientes com BTC localmente avançado ou metastático, além da administração da molé- cula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ, recebem coadministração de gencitabina em uma dose de 1000 mg/m2 e cisplatina em uma dose de 25 mg/m2 através da via intravenosa no dia 1 e no dia 8 durante 8 ci- clos a cada 21 dias (uma vez a cada 3 semanas) até a 24ª semana. Para terapia combinada, a molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ é administrada antes da dosagem de gencitabina e cisplatina. A pré- medicação, os medicamentos antieméticos, exceto os esteroides e a hidratação IV durante a infusão de cisplatina são administrados de acordo com a prática padrão para prevenir a nefrotoxicidade. Da 25ª até as últimas semanas (por exemplo, aproximadamente 2 anos), o tratamento é continuado com 2400 mg da molécula de armadilha anti- PD-L1/TGFβ administrada uma vez a cada três semanas sem coadmi- nistração de gencitabina ou cisplatina.

[00248] Em um estudo clínico duplamente às cegas randomizado, pacientes com BTC localmente avançado ou metastático que não re- ceberam tratamento são avaliados quanto à sobrevida global e sobre- vida sem progressão quando recebem a molécula de armadilha anti- PD-L1/TGFβ em combinação com gencitabina e cisplatina seguido por monoterapia com a molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ. Como parte deste estudo, a alocação/randomização do tratamento é estratifi-

cada de acordo com os seguintes fatores:

1. Tipo de BTC: colangiocarcinoma intra-hepático; colangi- ocarcinoma extra-hepático e câncer da ampola de Vater; câncer de vesícula biliar.

2. Ressecção cirúrgica localmente avançada ou anterior versus inicialmente metastática no diagnóstico.

3. Com disseminação peritoneal versus sem disseminação peritoneal.

[00249] O seguinte descreve os critérios de inclusão para pacientes usados neste exemplo. Pacientes: - têm ≥ 18 anos - têm BTC localmente avançado ou metastático confirmado histológica ou citologicamente, incluindo colangiocarcinoma intra- e extra-hepático, câncer de vesícula biliar e câncer ampular - não receberam quimioterapia ou imunoterapia para seu BTC localmente avançado ou metastático (terapia adjuvante não é permitida) - têm doença mensurável com pelo menos 1 lesão mensu- rável unidimensionalmente com base no RECIST 1.1 (consulte Eise- nhauer et al., EJC. 2009; 45: 228-247) - têm uma expectativa de vida de pelo menos 12 semanas - têm material tumoral disponível (< 6 meses de idade) (primário ou metastático) ou produz biópsias frescas - têm estado um Eastern Cooperative Oncology Group Per- formance Status (ECOG PS) de 0 a 1 - têm função hematológica adequada definida pela conta- gem de leucócitos (leucócitos) ≥ 3 × 109/L com contagem absoluta de neutrófilos (ANC) ≥ 1,5 × 109/L, contagem de linfócitos ≥ 0,5 × 109/L, contagem de plaquetas ≥ 75 × 109/L e hemoglobina (Hgb) ≥ 9 g/dL (na ausência de transfusão de sangue) - têm função hepática adequada definida por um nível de bilirrubina total ≤ 1,5 × limite máximo do normal (ULN), um nível de as- partato aminotransferase (AST) ≤ 3,0 × ULN e um nível de alanina aminotransferase (ALT) ≤ 3,0 × ULN. Para pacientes com envolvimen- to hepático em seu tumor, AST ≤ 5,0 × ULN e ALT ≤ 5,0 × ULN é acei- tável - têm função renal adequada definida pela clearance de creatinina estimada > 50 mL/min de acordo com a fórmula de Cock- croft-Gault ou medição da clearance de creatinina quando de coleta de urina de 24 horas  CCr (ml/min) = (140 anos) x peso (kg)/(72 x Crjaffe sérico)  Se mulher, x 0,85 - Se a Cr for medida através de um método enzimático, adi- cionar 0,2 e usar como Crjaffe = 0,2 + Crenzima; e - têm albumina ≥ 3,3 g/dL.

[00250] Para estudos de fase 2 e 3 nos quais a molécula de armadi- lha anti-PD-L1/TGFβ é administrada em combinação com quimiotera- pias sistêmicas, uma abordagem de modelagem é usada para selecio- nar a dose uma vez a cada três semanas da molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ. Uma vez que a maioria das quimioterapias é admi- nistrada uma vez a cada três semanas, o mesmo intervalo de dosa- gem para a molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ pode ser empre- gado por conveniência e conformidade. Para a seleção da dose uma vez a cada três semanas, um perfil de eficácia comparável àquele de 1200 mg uma vez a cada duas semanas pode ser alcançado. A Cséri- ca,ss e a concentração média ao longo do intervalo de dosagem no es- tado estacionário são similares ou maiores do que aquelas alcançada com a dosagem de 1200 mg uma vez a cada duas semanas e a maio- ria dos pacientes pode ter Csérica,ss acima da concentração alvo de 50 μg/mL. Com base no perfil de Farmacocinética-Farmacodinâmica (PK- PD) caracterizado durante a dosagem para escalonamento de dose e simulações populacionais com base em PK, espera-se que 2400 mg uma vez a cada três semanas atinja a Csérica,ss média, similar à dosa- gem de 1200 mg uma vez a cada duas semanas. Se a meia-vida de eliminação da molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ for de cerca de 7 dias, uma duplicação aproximada da dose manterá a mesma Csérica com uma dosagem a cada três semanas e uma vez a cada duas se- manas.

[00251] A FIGURA 8 e a Tabela 2 ilustram o regime terapêutico descrito neste exemplo.

Tabela 2: Detalhes das intervenções do estudo administradas no estudo.

Abreviaturas usadas na Tabela: Q3W = uma vez a cada 3 semanas; W = semana; D = dia.

Administração de Intervenção do Estudo Atividades Fase de Tratamento (± 3 Dias) Observações W1 W2 W4 W5 W7 W8 W10 W11 W13 W14 W16 W17 W19 W20 W22 W23 D1 D8 D22 D29 D43 D50 D64 D71 D85 D92 D106 D113 D127 D134 D148 D155 Administração X X X X X X X X D1W1 of Q3W, Pré- de Pré- medicação com um anti- medicação e histamínico e paraceta-

120/148 molécula de mol (acetaminofeno) armadilha anti- aproximadamente 30 a PD-Ll/TGF 60 minutos antes de cada (2400 mg) ou dose é obrigatória ape- placebo nas para as 2 primeiras infusões {por exemplo, 25-50 mg de difenidra- mina e 500-650 mg de paracetamol IV ou equi- valente oral). Gencitabina / X X X X X X X X X X X X X X X X Dias 1 e 8 de Q3W du- Cisplatina rante 8 ciclos.

[00252] Em uma modalidade exemplificativa, a administração de 2400 mg da molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ uma vez a cada três semanas ou 1200 mg da molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ uma vez a cada duas semanas para o tratamento de pacientes com BTC localmente avançado ou metastático que não receberam trata- mento atinge uma eficácia similar. Em uma modalidade exemplificati- va, as concentrações mínimas em estado estacionário médias obser- vadas (Csérica,ss) obtidas pela dosagem de 2400 mg da molécula de ar- madilha anti-PD-L1/TGFβ uma vez a cada três semanas são similares às concentrações mínimas em estado estacionário médias observadas (Csérica,ss) obtidas através de dosagem de 1200 mg da molécula de ar- madilha anti-PD-L1/TGFβ uma vez a cada duas semanas para o tra- tamento de pacientes com BTC localmente avançado ou metastático que não receberam tratamento. A segurança da dosagem de 2400 mg da molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ uma vez a cada três se- manas é sustentada pela avaliação preliminar de segurança e exposi- ções alcançadas na Fase 1 do estudo em coortes de escalonamento de dose de 0,3 - 30 mg/kg e modelagem de exposição-segurança. Avaliação do potencial de interações farmacocinéticas e toxicidades sobrepostas com quimioterapias (por exemplo, gencitabina e cisplati- na) foi conduzida para sustentar a dosagem de 2400 mg da molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ uma vez a cada três semanas no estu- do da combinação.

[00253] Ao longo do tratamento, a segurança é avaliada por meio do registro, relatório e análise das condições médicas de base, even- tos adversos (AEs), achados do exame físico, incluindo sinais vitais, estado de desempenho ECOG e testes laboratoriais. A toxicidade limi- tativa da dose (DLT) é avaliada nos primeiros 21 dias antes da segun- da dose ser administrada. Em uma modalidade exemplificativa, a se- gurança é avaliada em 2 coortes separadas de forma independente

(por exemplo, coorte de locais Asiáticos e coorte de locais não Asiáti- cos).

[00254] Em pelo menos um estudo, os pacientes selecionados não têm tuberculose ativa ou uma doença autoimune que possa piorar ao receber um agente imunoestimulante. Em pelo menos um estudo, os pacientes selecionados não têm doença pulmonar intersticial ou histó- rico da mesma, cirrose hepática, histórico conhecido de teste positivo para o vírus da imunodeficiência humana (HIV) ou síndrome da imu- nodeficiência adquirida conhecida, infecção biliar não controlada, in- fecção bacteriana ou fúngica ativa que requer terapia sistêmica, doen- ça cardiovascular/cerebrovascular clinicamente significativa. Em pelo menos um estudo, os pacientes selecionados não têm metástases no sistema nervoso central (SNC) (pacientes com histórico de metástases no SNC tratadas (através de cirurgia ou radioterapia) não são elegí- veis, a menos que tenham se recuperado totalmente do tratamento, sem progressão documentada durante pelo menos 3 meses e não re- querem terapia continuada com esteroides).

[00255] Em pelo menos um estudo, os pacientes selecionados não são receptores de qualquer transplante de órgão, incluindo transplante de células-tronco alogênico, com exceção de transplantes que não re- querem imunossupressão (por exemplo, transplante de córnea, trans- plante de cabelo). Em um estudo, os pacientes selecionados não re- ceberam terapia anterior com qualquer anticorpo/fármaco direcionado a proteínas correguladoras de células T (pontos de verificação imune), tais como anticorpos anti-PD1, anti-PD-L1, anti-CTLA-4 ou anti-4-1BB não são permitidos, incluindo a administração localizada de tais agen- tes. Em pelo menos um estudo, os pacientes selecionados não rece- beram terapia anterior com qualquer anticorpo/fármaco direcionado ao receptor de TGFβ/TGFβ.

[00256] Em pelo menos um estudo, os pacientes selecionados não receberam radiação em 28 dias além da radioterapia paliativa focal direcionada ao osso. Os pacientes selecionados não receberam tera- pia sistêmica com agentes imunossupressores nos 7 dias anteriores ao início do tratamento experimental; ou uso de qualquer medicamento experimental dentro de 28 dias antes do início do tratamento sob estu- do.

[00257] Em uma modalidade exemplificativa, os pacientes selecio- nados têm cânceres tratados curativamente sem recorrência em > 5 anos ou cânceres precoces tratados com intenção curativa, incluindo carcinoma cervical in situ, câncer de bexiga superficial não invasivo, carcinoma basocelular ou espinocelular in situ. Cânceres gastrintesti- nais (GI) iniciais ressecados endoscopicamente (esofágico, gástrico e colorretal), os quais não apresentam recorrência em > 1 ano, são per- mitidos. Pacientes com outro tipo de câncer anterior são excluídos. EXEMPLO 3: Tratamento de Pacientes com Câncer do Trato Biliar (BTC) Localmente Avançado ou Metastático com Molécula de ar- madilha Anti-PD-L1/TGFβ

[00258] Objetivo: O objetivo deste estudo é avaliar se a molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ, opcionalmente em combinação com gencitabina e cisplatina, melhora o tempo de sobrevida sem progres- são (PFS) e/ou a melhor resposta global (BOR) como um tratamento de primeira linha (1L) para pacientes com BTC localmente avançado ou metastático. A justificativa para o uso da molécula de armadilha an- ti-PD-L1/TGFβ nesta coorte de pacientes com BTC é que a molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ tem como alvo PD-L1 e TGFβ, dois mecanismos principais de imunossupressão no microambiente tumo- ral. Os dados pré-clínicos sugerem que a molécula de armadilha anti- PD-L1/TGFβ aumenta fortemente a atividade antitumoral e prolonga a sobrevida em modelos de tumor de camundongo acima do efeito do anticorpo anti-PD-L1 avelumabe ou do controle molécula de armadilha de TGFβ apenas. Assim, neutralização simultânea de PD-L1 e TGF-β, uma molécula conhecida por inibir a ativação imune do tumor, opcio- nalmente coadministrada com quimioterapia para BTC, pode melhorar a resposta clínica em pacientes.

[00259] Concepção do Estudo: Este estudo avalia a segurança e tolerabilidade, a resposta à doença e os resultados primários de so- brevida para avaliar o benefício clínico de uma molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ, opcionalmente em combinação com gencitabina e cisplatina, como tratamento de primeira linha para pacientes com BTC avançado ou metastático. Aproximadamente 150 pacientes que não receberam tratamento anterior para o seu BTC avançado ou metastá- tico (pacientes que não receberam tratamento) são incluídos neste es- tudo. Os pacientes neste estudo atendem aos critérios de inclusão de pacientes descritos no Exemplo 2. Os pacientes são estratificados de acordo com ECOG PS e o estágio do câncer (localmente avançado versus metastático).

[00260] Para avaliar a segurança da molécula de armadilha anti- PD-L1/TGFβ coadministrada com gencitabina e cisplatina, uma subco- orte de aproximadamente 6 pacientes recebe, através da via intrave- nosa, uma dose da molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ de 1200 mg uma vez a cada duas semanas, 1800 mg ou 2400 mg uma vez a cada três semanas com gencitabina na dose de 1000 mg/m2 e cisplati- na na dose de 25 mg/m2 no dia 1; e gencitabina em uma dose de 1000 mg/m2 e cisplatina em uma dose de 25 mg/m2 no dia 8 a cada 3 se- manas até 24 semanas (consulte, por exemplo: FIGURA 8 e Tabela 2). A toxicidade limitativa da dose (DLT) é avaliada nos primeiros 21 dias. Da 25ª até as últimas semanas (por exemplo, aproximadamente 2 anos), o tratamento é continuado com 2400 mg da molécula de arma- dilha anti-PD-L1/TGFβ administrada uma vez a cada três semanas sem coadministração de gencitabina ou cisplatina.

[00261] Para avaliar a eficácia clínica (BOR, PFS), os pacientes re- cebem, através da via intravenosa, uma dose da molécula de armadi- lha anti-PD-L1/TGFβ de 1200 mg uma vez a cada duas semanas, 1800 mg ou 2400 mg uma vez a cada três semanas. Alguns pacientes recebem a coadministração, através da via intravenosa, da molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ com gencitabina a 1000 mg/m2 e cis- platina a 25 mg/m2 no Dia 1 e administração intravenosa de gencitabi- na a 1000 mg/m2 e cisplatina a 25 mg/m2 no Dia 8, a cada 3 semanas até a 24ª semana. Da 25ª até as últimas semanas (por exemplo, apro- ximadamente 2 anos), o tratamento é continuado com 2400 mg da mo- lécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ administrada uma vez a cada três semanas sem coadministração de gencitabina ou cisplatina.

[00262] O tratamento é continuado até falha terapêutica, tal como doença progressiva confirmada (PD) através do Response Evaluation Criteria in Solid Tumors versão 1.1 (RECIST 1.1), toxicidade inaceitá- vel ou durante até 24 meses. No caso de PD, os pacientes que apre- sentam PD podem continuar o tratamento se o estado de desempenho do Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG PS) permanecer es- tável, se não houver toxicidade inaceitável resultante do tratamento e se o paciente se beneficiar da continuação do tratamento. Os pacien- tes que apresentam doença estável (SD), resposta parcial (PR) ou resposta completa (CR) continuarão o tratamento até o final de 24 me- ses, embora tratamento adicional seja possível.

[00263] Ao longo do tratamento, a segurança é avaliada por meio do registro, relatório e análise das condições médicas de base, even- tos adversos (AEs), achados do exame físico, incluindo sinais vitais, estado de desempenho no ECOG e testes laboratoriais.

[00264] Avaliações de Segurança e Eficácia: Os resultados de segurança incluem eventos adversos, avaliações clínicas laboratoriais, sinais vitais, exame físico, parâmetros de ECG e ECOG PS e os paci-

entes são avaliados com base no tratamento real que recebem. Medi- ções do tumor para determinar a resposta são realizadas a cada 6 semanas até 12 meses após a primeira administração do fármaco sob estudo, então, a cada 12 semanas daí em diante e a resposta ao tra- tamento é avaliada pelo Response Evaluation Criteria in Solid Tumors Versão 1.1 (RECIST 1.1). A resposta do tumor à molécula de armadi- lha anti-PD-L1/TGFβ, com ou sem gencitabina e cisplatina, é avaliada por meio de tomografia computadorizada ou ressonância magnética. As varreduras realizadas no início do estudo são repetidas nas visitas subsequentes. Em geral, as lesões detectadas na linha de base são acompanhadas usando a mesma metodologia de imagiologia e, de preferência, o mesmo equipamento de imagiologia nas visitas subse- quentes de avaliação de tumor. As respostas do tumor ao tratamento são atribuídas com base na avaliação da resposta das lesões alvo, não alvo e novas de acordo com o RECIST 1.1.

[00265] Resultados: A resposta objetiva do tumor é avaliada pela taxa de resposta global (ORR), definida como o número de participan- tes que alcançaram uma melhor resposta global (BOR), resposta com- pleta (CR) ou resposta parcial (PR) dividido pelo número de participan- tes na população sob análise. A sobrevida sem progressão é definida como o tempo desde a randomização até a data da primeira documen- tação de progressão objetiva da doença (PD), conforme avaliado de acordo com o RECIST 1.1 ou morte por qualquer causa, o que ocorrer primeiro. Considera-se que o tratamento com a molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ resulta em atividade clínica inicial em pacientes com BTC que não receberam tratamento, avançado ou metastático, tanto como monoterapia como quando combinada com gencitabina e cispla- tina. Os pacientes tratados exibem resposta à doença (por exemplo, resposta parcial, resposta completa, doença estável) e/ou sobrevida melhor (por exemplo, sobrevida sem progressão e/ou sobrevida glo-

bal).

[00266] Em suma, a molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ é considerada uma proteína de fusão bifuncional inovadora, concebida para ter como alvo simultaneamente 2 vias imunossupressoras: PD-L1 e TGF-β. A molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ, portanto, consti- tui uma nova opção terapêutica para pacientes com BTC avançado ou metastático que não receberam tratamento. EXEMPLO 4: Regime de Resposta à Dose Preliminar de Molécula de armadilha Anti-PD-L1/TGFβ em Pacientes com BTC Localmen- te Avançado ou Metastático que São Intolerantes ou Falharam na Quimioterapia Sistêmica

[00267] Pacientes com BTC metastático ou localmente avançado que progrediram após tratamento de primeira linha com base em plati- na ("1L") receberam uma molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ a 1200 mg uma vez a cada duas semanas até confirmação da doença progressiva, toxicidade inaceitável ou retirada do estudo. A segurança e a tolerabilidade foram avaliadas como objetivos primários, enquanto que os objetivos secundários incluíam avaliação da melhor resposta global ("BOR") de acordo com o Response Evaluation Criteria in Solid Tumors versão 1.1 (RECIST v1.1). A expressão de PD-L1 em células tumorais foi avaliada (clone de anticorpo 73-10; Dako).

[00268] Trinta pacientes com BTC pré-tratado receberam a molécu- la de armadilha anti-PD-L1/TGFβ durante um período médio de 8,9 semanas (intervalo de 2-57,6 semanas). Cinco pacientes permanece- ram sob tratamento. Os eventos adversos relacionados ao tratamento (TRAEs) mais comuns foram pirexia, erupção cutânea maculopapular (ambos 13,3 %), erupção cutânea e aumento de lipase (ambos 10 %). Dez pacientes (33,3 %) apresentaram TRAEs de grau ≥ 3. Foram rela- tados três casos de morte em virtude de eventos adversos; uma morte foi em virtude de choque séptico (bacteremia possivelmente devido à infecção cutânea) após 14 doses de tratamento e duas mortes ocorre- ram em virtude de doença pulmonar intersticial, a morte de um pacien- te ocorreu sob tratamento após 3 doses e outra morte ocorreu 6 me- ses após a última dose. Seis pacientes tiveram uma resposta objetiva confirmada (ORR, 20 %), com cinco tendo respostas parciais (PRs), quatro estavam em andamento com o tratamento em 3,9+, 4,2+, 5,5+ e 6,9+ meses e um paciente teve uma resposta completa ( CR) em curso em 5,5+ meses. Dois pacientes adicionais obtiveram benefício clínico contínuo: um paciente teve uma resposta parcial ("PR") após 1 ano de tratamento e um paciente teve uma PR contínua em 7,6+ me- ses após a pseudo-progressão inicial. A ORR confirmada pela expres- são de PD-L1 foi de 25 % e 15,4 % em pacientes com tumores PD-L1+ (≥ 1 %) e PD-L1-, respectivamente.

[00269] Estes resultados demonstram que a monoterapia com a molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ tinha um perfil de segurança administrável e eficácia promissora em pacientes com BTC pré- tratado, incluindo respostas de longa duração em oito de trinta pacien- tes (27 %). EXEMPLO 5: Regime de Dosagem da Molécula de armadilha anti- PD-L1/TGFβ para Pacientes com BTC Localmente Avançado ou Metastático que São Intolerantes ou Falharam na Quimioterapia Sistêmica

[00270] Pacientes com BTC localmente avançado ou metastático que falharam ou eram intolerantes à quimioterapia sistêmica de primei- ra linha são tratados com a molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ até doença progressiva confirmada (PD), toxicidade inaceitável ou reti- rada do estudo. O câncer ampular é excluído.

[00271] Em uma modalidade exemplificativa, a molécula de armadi- lha anti-PD-L1/TGFβ é administrada como uma dose independente do PC de 1200 mg aos participantes uma vez a cada duas semanas. A administração é realizada através da via intravenosa durante cerca de uma hora (10 minutos/+ 20 minutos, ou seja, durante 50 a 80 minutos). Em uma modalidade exemplificativa, a molécula de armadilha anti-PD- L1/TGFβ é administrada como uma dose independente do PC de 1800 mg aos participantes uma vez a cada três semanas. A administração é realizada através da via intravenosa durante cerca de uma hora (10 minutos/+ 20 minutos, ou seja, durante 50 a 80 minutos). Em uma mo- dalidade exemplificativa, a molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ é administrada como uma dose independente do PC de 2100 mg aos participantes uma vez a cada três semanas. A administração é reali- zada através da via intravenosa durante cerca de uma hora (10 minu- tos/+ 20 minutos, ou seja, durante 50 a 80 minutos). Em uma modali- dade exemplificativa, a molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ é ad- ministrada como uma dose independente do PC de 2400 mg aos parti- cipantes uma vez a cada três semanas. A administração é realizada através da via intravenosa durante cerca de uma hora (10 minutos/+ 20 minutos, ou seja, durante 50 a 80 minutos). Para mitigar as poten- ciais reações relacionadas à infusão, pré-medicação com um anti- histamínico e com paracetamol (acetaminofeno) (por exemplo, 25-50 mg de difenidramina e 500 650 mg de paracetamol [acetaminofeno] IV ou equivalente oral) aproximadamente 30 a 60 minutos antes de cada dose da molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ é obrigatória para as primeiras 2 infusões. A pré-medicação é opcional e a critério do inves- tigador após a segunda infusão. Se forem observadas reações de Grau 2 à infusão durante as primeiras 2 infusões, a pré-medicação não é interrompida. Esteroides como pré-medicação não são permitidos.

[00272] Em uma modalidade exemplificativa, a quimioterapia sistê- mica na qual os participantes falharam ou são intolerantes é a quimio- terapia com base em platina.

[00273] O seguinte descreve os critérios de inclusão para os paci-

entes usados neste exemplo.

Pacientes: - têm ≥ 18 anos - têm BTC localmente avançado ou metastático confirmado histológica ou citologicamente; doença deve ser mensurável com pelo menos 1 lesão mensurável unidimensionalmente pelo RECIST 1.1 e confirmada através de revisão de imagiologia independente - devem ter falhado ou ser intolerantes à quimioterapia sis- têmica de primeira linha ou ter evidência de recorrência da doença em 6 meses após a conclusão do tratamento adjuvante - têm material tumoral disponível (primário ou metastático) dentro de 28 dias antes da primeira administração da molécula de ar- madilha anti-PD-L1/TGFβ adequado para avaliação de biomarcador - têm Eastern Cooperative Oncology Group Performance Status (ECOG PS) de 0 a 1 no início do estudo e Dia 1 de tratamento com de molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ - têm expectativa de vida ≥ 12 semanas, conforme avaliado pelo investigador - têm função hematológica adequada definida pela conta- gem de leucócitos (leucócitos) ≥ 3 × 109/L com contagem absoluta de neutrófilos (ANC) ≥ 1,5 × 109/L, contagem de linfócitos ≥ 0,5 × 109/L, contagem de plaquetas ≥ 75 × 109/L e hemoglobina (Hgb) ≥ 9 g/dL (na ausência de transfusão de sangue) - têm função hepática adequada definida por um nível de bilirrubina total ≤ 1,5 × limite máximo do normal (ULN), um nível de as- partato aminotransferase (AST) ≤ 2,5 × ULN e um nível de alanina aminotransferase (ALT) ≤ 2,5 × ULN.

Para participantes com envolvi- mento hepático em seu tumor, AST ≤ 5,0 × ULN e ALT ≤ 5,0 × ULN é aceitável - têm função de coagulação adequada definida como tempo de protrombina (TP) ou proporção normalizada internacional (INR) ≤ 1,5 x LSN, a menos que o participante esteja recebendo terapia anti- coagulante - têm albumina ≥ 3,3 g/dL - têm função renal adequada definida por creatinina ≤ 1,5 x LSN ou uma clearance estimada de creatinina > 40 mL/min de acordo com a fórmula de Cockcroft-Gault ou medição da clearance de creati- nina quando de coleta de urina de 24 horas  CCr (ml/min) = (140 anos) x peso (kg)/(72 x Crjaffe sérico)  Se mulher, x 0,85 - Se a Cr for medida através de um método enzimático, adi- cionar 0,2 e usar como Crjaffe = 0,2 + Crenzima; e - têm albumina ≥ 3,3 g/dL.

[00274] Em pelo menos um estudo, os pacientes selecionados não têm tuberculose ativa ou uma doença autoimune que possa piorar ao receber um agente imunoestimulante. Em pelo menos um estudo, os pacientes selecionados não têm doença pulmonar intersticial ou histó- rico da mesma, cirrose hepática, histórico conhecido de teste positivo para o vírus da imunodeficiência humana (HIV) ou síndrome da imu- nodeficiência adquirida conhecida, infecção biliar não controlada, in- fecção bacteriana ou fúngica ativa que requer terapia sistêmica, doen- ça cardiovascular/cerebrovascular clinicamente significativa. Em pelo menos um estudo, os pacientes selecionados não têm metástases no sistema nervoso central (SNC) (pacientes com histórico de metástases no SNC tratadas (por meio de cirurgia ou radioterapia) não são elegí- veis, a menos que tenham se recuperado totalmente do tratamento, sem progressão documentada durante pelo menos 3 meses e não re- querem terapia continuada com esteroides).

[00275] Em pelo menos um estudo, os pacientes selecionados não são receptores de qualquer transplante de órgão, incluindo transplante de células-tronco alogênico, com exceção de transplantes que não re- querem imunossupressão (por exemplo, transplante de córnea, trans- plante de cabelo). Em um estudo, os pacientes selecionados não têm história conhecida de reações de hipersensibilidade à molécula de ar- madilha anti-PD-L1/TGFβ ou seus produtos, ou reações de hipersen- sibilidade graves conhecidas a anticorpos monoclonais, qualquer histó- rico de anafilaxia ou histórico recente (dentro de 5 meses) de asma não controlada.

[00276] Em uma modalidade exemplificativa, os pacientes selecio- nados não receberam tratamento anticâncer dentro de 21 dias antes de início do tratamento do estudo, por exemplo, terapia citorredutora, radioterapia envolvendo > 30 % da medula óssea (com exceção de radioterapia paliativa direcionada aos ossos), terapia imune ou terapia com citocinas. Os pacientes selecionados não receberam terapia sis- têmica com agentes imunossupressores nos 7 dias anteriores ao início do tratamento experimental; ou uso de qualquer medicamento experi- mental dentro de 28 dias antes de início do tratamento em estudo.

[00277] Em uma modalidade exemplificativa, os pacientes selecio- nados têm cânceres tratados curativamente sem recorrência em > 3 anos ou cânceres iniciais tratados com intenção curativa, incluindo carcinoma cervical in situ, câncer de bexiga superficial não invasivo, carcinoma basocelular ou espinocelular in situ. Cânceres gastrintesti- nais (GI) iniciais ressecados endoscopicamente e limitados à camada mucosal (esofágico, gástrico e colorretal), que não apresentam recor- rência em > 1 ano, são permitidos. Pacientes com outro tipo de câncer anterior são excluídos. EXEMPLO 6: Tratamento com a Molécula de armadilha Anti-PD- L1/TGFβ de Pacientes com BTC Localmente Avançado ou Metas- tático que São Intolerantes ou Falharam na Quimioterapia Sistê- mica

[00278] Objetivo: Não há terapia de segunda linha estabelecida para BTC como o padrão de tratamento de acordo com as diretrizes da NCCN e ESMO. O objetivo deste estudo é avaliar se a molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ melhora a resposta global como um trata- mento de segunda linha para pacientes com BTC localmente avança- do ou metastático que falharam ou são intolerantes à quimioterapia sistêmica de primeira linha. A justificativa para o uso da molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ nesta coorte de pacientes é que a molécu- la de armadilha anti-PD-L1/TGFβ tem como alvo PD-L1 e TGF-β, dois mecanismos principais de imunossupressão no microambiente tumoral e pode superar a resistência da monoterapia com inibidor do ponto de verificação imune. Conforme descrito acima no Exemplo 4, os dados clínicos iniciais demonstraram que a molécula de armadilha anti-PD- L1/TGFβ forneceu eficácia terapêutica com uma taxa de resposta glo- bal confirmada de 20 % (6 em 30 pacientes) como um tratamento de segunda linha para BTC. Assim, o presente estudo é sustentado por dados iniciais promissores de eficácia clínica de um pequeno tamanho de amostra.

[00279] Concepção do Estudo: Este estudo avalia a segurança e tolerabilidade, a resposta à doença e os parâmetros de sobrevida para avaliar o benefício clínico da molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ como um tratamento de segunda linha para pacientes com BTC local- mente avançado ou metastático. Aproximadamente 140 pacientes es- tão inscritos neste estudo. A melhor resposta global confirmada (BOR) de acordo com o Response Evaluation Criteria in Solid Tumors Versão

1.1 (RECIST 1.1) é medida como o parâmetro primário, o qual será usado para determinar a taxa de resposta global. A eficácia terapêuti- ca também pode ser medida pela taxa de resposta durável (a porcen- tagem de participantes com uma resposta completa ou resposta parci- al mantida continuamente durante pelo menos 6 meses), duração da resposta, sobrevida sem progressão e sobrevida global. Os pacientes neste estudo atendem aos critérios de inclusão descritos no Exemplo

5.

[00280] TC com contraste de tórax/abdômen e pelve cobrindo a área da extensão superior da entrada torácica até a sínfise púbica é a primeira escolha da modalidade de imagiologia. Se um participante não deve receber meio de contraste iodado ou em virtude de razões de proteção contra radiação, ressonância magnética (MRI) da mesma área, usando realce com gadolínio de acordo com o protocolo local, conforme permitido em conjunto com TC sem contraste do tórax da entrada torácica até o recesso costofrênico inferior deve ser feita. O mesmo método deve ser usado por participante ao longo do estudo.

[00281] Varreduras de linha de base são feitas dentro de 28 dias antes do tratamento. A doença deve ser mensurável com pelo menos 1 lesão mensurável unidimensionalmente pelo RECIST 1.1 e confir- mada através de revisão de imagiologia independente. Todas as var- reduras realizadas no início do estudo precisam ser repetidas nas visi- tas subsequentes para avaliação do tumor. Em geral, as lesões detec- tadas na linha de base precisam ser acompanhadas usando a mesma metodologia de imagiologia e, de preferência, o mesmo equipamento de imagiologia nas visitas subsequentes de avaliação do tumor.

[00282] Os participantes são avaliados a cada 6 semanas com ima- gens radiográficas para avaliar a resposta ao tratamento dentro do primeiro ano desde a primeira dose do participante da molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ, depois a cada 12 semanas. O perfil de segurança da molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ será avaliado por meio do registro, relatório e análise das condições médicas bási- cas, AEs, achados do exame físico, incluindo sinais vitais, testes labo- ratoriais, ECOG PS e leituras de eletrocardiograma de 12 derivações (ECG). O estudo é concluído 1 ano após o último participante receber a última dose da molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ.

[00283] A invenção considera que a molécula de armadilha anti-PD- L1/TGFβ melhora a sobrevida para pacientes com BTC que falharam ou são intolerantes à quimioterapia sistêmica de primeira linha. EXEMPLO 7: Efeito da Combinação da Molécula de armadilha An- ti-PD-L1/TGFβ com Cisplatina ou Gencitabina no Aumento da Efi- cácia Antitumoral

[00284] Neste exemplo, são descritos os experimentos realizados para avaliar a eficácia antitumoral da coadministração da molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ com cisplatina ou gencitabina.

[00285] Linhagens de Células: Células de câncer de mama de mu- rino 4T1 e células de câncer de bexiga MB49 foram obtidas a partir da American Type Culture Collection (ATCC). As células 4T1 foram culti- vadas em meio RPMI1640 suplementado com soro fetal bovino (FBS) termicamente inativado a 10 % (Life Technologies). As células MB49 foram cultivadas em meio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) que contém FBS a 10 %. Todas as células foram cultivadas sob condi- ções assépticas e incubadas a 37 °C com 5 % de CO2. As células fo- ram passadas antes de implante in vivo e as células aderentes foram coletadas com TrypLE Express (Gibco) ou tripsina a 0,25 %.

[00286] Camundongos: Camundongos BALB/c foram obtidos a partir da Charles River Laboratories. Todos os camundongos usados para experimentos eram fêmeas de 6 a 12 semanas de idade. Os ca- mundongos foram alojados com acesso ad libitum à comida e água em instalações sem patógenos.

[00287] Tratamento: Para todos os estudos, os camundongos fo- ram randomizados em grupos de tratamento no dia de início do trata- mento (dia 0).

[00288] Avaliação: Os tamanhos dos tumores foram medidos duas vezes por semana com paquímetros digitais e registrados automati-

camente usando o software WinWedge. Os volumes do tumor foram calculados com a seguinte fórmula: volume do tumor (mm3) = compri- mento do tumor × largura × altura × 0,5236. O peso corporal também foi medido duas vezes por semana e os camundongos foram sacrifica- dos após o volume do tumor exceder 12,5 % do peso corporal (apro- ximadamente 2.500 mm3).

[00289] Análises Estatísticas: As análises estatísticas foram reali- zadas usando GraphPad Prism Software, versão 7.0. Os dados do vo- lume do tumor são apresentados graficamente como média ± SEM por símbolos ou como camundongos individuais por linhas. Para avaliar as diferenças nos volumes do tumor entre os grupos de tratamento, foi realizada uma análise de variância (ANOVA) bidirecional seguido pelo teste de comparação múltipla de Tukey. Combinação da Molécula de armadilha Anti-PD-L1/TGFβ e Cisplati- na/Gencitabina, Mas Não da Molécula de armadilha Anti-PD-L1/TGFβ Apenas, Melhorou a Eficácia Antitumoral em Relação ao Controle de Isotipo

[00290] Combinação da molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ e cisplatina no modelo de tumor de murino 4T1: 0,5 × 105 células 4T1 foram inoculadas ortotopicamente na camada de gordura mamária de camundongos BALB/c 7 dias antes do tratamento. No dia 0 (ou seja, 7 dias após a inoculação), os camundongos foram tratados (n = 10 ca- mundongos/grupo) com controle de isotipo (o controle de isotipo é uma versão mutante de anti-PD-L1, a qual carece completamente de liga- ção à PD-L1) (400 μg administrados através de injeção intravenosa (iv); dia 2, 5, 8)) + controle de PBS (0,2 mL, administrado através da via intraperitoneal (ip); dia 0), molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ (492 μg, iv; dia 2, 5, 8), cisplatina (5 mg/kg, ip; dia 0) ou molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ + cisplatina.

[00291] Os volumes do tumor foram medidos duas vezes por se-

mana. A FIGURA 10A representa o volume médio do tumor (média ± SEM) por grupo de tratamento, conforme indicado. As FIGURAS 10B- 10E são gráficos de linhas que representam os volumes de tumor em camundongos individuais entre os respectivos grupos de tratamento: cada linha na FIGURA 10B representa o volume do tumor em um ca- mundongo tratado com controle de isotipo e controle de PBS (indicado como "controle de isotipo"); cada linha na FIGURA 10C representa o volume do tumor em um camundongo tratado com monoterapia com cisplatina; cada linha na FIGURA 10D representa o volume do tumor em um camundongo tratado com monoterapia com a molécula de ar- madilha anti-PD-L1/TGFβ; e cada linha na FIGURA 10E representa o volume do tumor em um camundongo tratado com uma combinação da molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ e cisplatina.

[00292] Os P valores foram calculados por RM ANOVA bidirecional com o pós-teste de Tukey. Embora a monoterapia com a molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ não tenha efeito sobre a atividade antitu- moral em relação ao controle de isotipo neste modelo, a combinação da molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ com cisplatina aumentou significativamente a atividade antitumoral em relação às monoterapias com a molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ e cisplatina (p < 0,0001 e p < 0,0001, respectivamente, dia 19). Combinação da Molécula de armadilha Anti-PD-L1/TGFβ e Gencitabi- na no Modelo de Tumor de Murino MB49

[00293] Neste experimento, camundongos BALB/c foram inocula- dos através da via subcutânea no flanco com 1 × 106 células MB49 7 dias antes do tratamento. No dia 0 (ou seja, 7 dias após a inoculação), os camundongos foram tratados (n = 10 camundongos/grupo) com controle de isotipo (400 μg, iv; dia 2, 5, 8) + controle de PBS (0,2 mL, ip; dia 0), molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ (492 μg, iv; dia 2, 5, 8), gencitabina (120 mg/kg, ip; dia 0) ou molécula de armadilha anti-

PD-L1/TGFβ + gencitabina.

[00294] Os volumes do tumor foram medidos duas vezes por se- mana e apresentados como média ± SEM (FIGURA 11A) ou volumes de tumor individuais (FIGURAS 11B-11E). As FIGURAS 11B-11E são gráficos de linha que representam os volumes do tumor em camun- dongos individuais entre os respectivos grupos de tratamento: cada linha na FIGURA 11B representa o volume do tumor em um camun- dongo tratado com controle de isotipo e controle de PBS (indicado co- mo "controle de isotipo"); cada linha na FIGURA 11C representa o vo- lume do tumor em um camundongo tratado com monoterapia com gencitabina; cada linha na FIGURA 11D representa o volume do tumor em um camundongo tratado com monoterapia com a molécula de ar- madilha anti-PD-L1/TGFβ; e cada linha na FIGURA 11E representa o volume do tumor em um camundongo tratado com uma combinação da molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ e gencitabina.

[00295] Os P valores foram calculados por RM ANOVA bidirecional com o pós-teste de Tukey. Embora a monoterapia com a molécula de armadilha anti-PD-L1/TGFβ e gencitabina tenham pouco ou nenhum efeito sobre a atividade antitumoral em relação ao controle de isotipo neste modelo, a combinação da molécula de armadilha anti-PD- L1/TGFβ com gencitabina aumentou significativamente a atividade an- titumoral em relação a monoterapias com a molécula de armadilha an- ti-PD-L1/TGFβ e gencitabina (p < 0,0001 e p = 0,0002, respectivamen- te, dia 15).

SEQUÊNCIAS SEQ ID NO: 1 Sequência peptídica da cadeia leve anti-PD-L1 lambda secretada

QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAP KLMIYDVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSY TSSSTRVFGTGTKVTVLGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLIS DFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPE

QWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS SEQ ID NO: 2 Sequência peptídica da cadeia H de anti-PDL1 secretada

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMMWVRQAPGKGLE WVSSIYPSGGITFYADTVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVY YCARIKLGTVTTVDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGG TAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP ELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYV DGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSN KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFY PSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQ

GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 3 Sequência peptídica da cadeia H da molécula de armadilha anti- PDL1/TGFβ secretada

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMMWVRQAPGKGLE WVSSIYPSGGITFYADTVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVY YCARIKLGTVTTVDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGG TAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSV VTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP ELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYV DGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSN KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFY PSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQ GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAGGGGSGGGGSGGGGSG GGGSGIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQ KSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFI LEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

SEQ ID NO: 4 Sequência de DNA do códon de início de translação até o códon de término de tradução da cadeia leve anti-PD-L1 lambda (a sequência líder que precede VL é o peptídeo sinalizador do ativador de uroqui- nase de plasminogênio) atgagggccctgctggctagactgctgctgtgcgtgctggtcgtgtccgacagcaagggcCAG

TCCGCCCTGACCCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGCTCCCCTGGCCA GTCCATCACCATCAGCTGCACCGGCACCTCCAGCGACGTGGGCG GCTACAACTACGTGTCCTGGTATCAGCAGCACCCCGGCAAGGCC CCCAAGCTGATGATCTACGACGTGTCCAACCGGCCCTCCGGCGT GTCCAACAGATTCTCCGGCTCCAAGTCCGGCAACACCGCCTCCCT GACCATCAGCGGACTGCAGGCAGAGGACGAGGCCGACTACTACT

GCTCCTCCTACACCTCCTCCAGCACCAGAGTGTTCGGCACCGGC ACAAAAGTGACCGTGCTGggccagcccaaggccaacccaaccgtgacactgttcc ccccatcctccgaggaactgcaggccaacaaggccaccctggtctgcctgatctcagatttctatc caggcgccgtgaccgtggcctggaaggctgatggctccccagtgaaggccggcgtggaaacc accaagccctccaagcagtccaacaacaaatacgccgcctcctcctacctgtccctgacccccg agcagtggaagtcccaccggtcctacagctgccaggtcacacacgagggctccaccgtggaa aagaccgtcgcccccaccgagtgctcaTGA SEQ ID NO: 5 Sequência de DNA do códon de início de tradução até o códon de término de tradução (líder mVK SP: letras minúsculas sublinhadas; VH: letras maiúsculas; IgG1m3 com mutação de K para A: letras mi- núsculas; (G4S)x4-G (SEQ ID NO: 11) ligante: letras maiúsculas em negrito; TGFβRII: letras minúsculas em negrito sublinhadas; dois có- dons terminais: letras maiúsculas em negrito sublinhadas) atggaaacagacaccctgctgctgtgggtgctgctgctgtgggtgcccggctccacaggcGAG

GTGCAGCTGCTGGAATCCGGCGGAGGACTGGTGCAGCCTGGCG GCTCCCTGAGACTGTCTTGCGCCGCCTCCGGCTTCACCTTCTCCA GCTACATCATGATGTGGGTGCGACAGGCCCCTGGCAAGGGCCTG GAATGGGTGTCCTCCATCTACCCCTCCGGCGGCATCACCTTCTAC GCCGACACCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCCGGGACAACTC CAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGCGGGCCGAGG ACACCGCCGTGTACTACTGCGCCCGGATCAAGCTGGGCACCGTG

ACCACCGTGGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACAGTGTC CTCCgctagcaccaagggcccatcggtcttccccctggcaccctcctccaagagcacctctgg gggcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtgg aactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactcta ctccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacccagacctacatctgcaac gtgaatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagagagttgagcccaaatcttgtgacaa aactcacacatgcccaccgtgcccagcacctgaactcctggggggaccgtcagtcttcctcttccc cccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggac gtgagccacgaagaccctgaggtcaagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatg ccaagacaaagccgcgggaggagcagtacaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcacc gtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaagccctc ccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagaaccacaggtgt acaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtca aaggcttctatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaac tacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctctatagcaagctcaccgtg gacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcaca accactacacgcagaagagcctctccctgtccccgggtgctGGCGGCGGAGGAAGC

GGAGGAGGTGGCAGCGGTGGCGGTGGCTCCGGCGGAGGTGGC TCCGGAatccctccccacgtgcagaagtccgtgaacaacgacatgatcgtgaccgac aacaacggcgccgtgaagttccctcagctgtgcaagttctgcgacgtgaggttcagcacc tgcgacaaccagaagtcctgcatgagcaactgcagcatcacaagcatctgcgagaagc cccaggaggtgtgtgtggccgtgtggaggaagaacgacgaaaacatcaccctcgagac cgtgtgccatgaccccaagctgccctaccacgacttcatcctggaagacgccgcctccc ccaagtgcatcatgaaggagaagaagaagcccggcgagaccttcttcatgtgcagctgc agcagcgacgagtgcaatgacaacatcatctttagcgaggagtacaacaccagcaacc ccgacTGATAA

SEQ ID NO: 6 Sequência polipeptídica da cadeia leve da molécula de armadilha anti- PD-L1(mut)/TGFβ lambda secretada, com as mutações A31G, D52E, R99Y

QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAP KLMIYEVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSY TSSSTYVFGTGTKVTVLGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLIS DFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPE

QWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS SEQ ID NO: 7 Sequência polipeptídica da cadeia pesada da molécula de armadilha anti-PD-L1(mut)/TGFβ secretada

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSMYMMMWVRQAPGKGL EWVSSIYPSGGITFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAI YYCARIKLGTVTTVDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSG GTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSS VVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPA PELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWY VDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGF YPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQ QGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGAGGGGSGGGGSGGGGS GGGGSGIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDN QKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHD FILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNP

D SEQ ID NO: 8 Polipeptídeo precursor de isoforma A de TGFβRII humano (NCBI Ref Seq nº. de Acesso: NP_001020018)

MGRGLLRGLWPLHIVLWTRIASTIPPHVQKSDVEMEAQKDEIICPSCN RTAHPLRHINNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMS NCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAA SPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDLLLVIFQ VTGISLLPPLGVAISVIIIFYCYRVNRQQKLSSTWETGKTRKLMEFSEH CAIILEDDRSDISSTCANNINHNTELLPIELDTLVGKGRFAEVYKAKLKQ NTSEQFETVAVKIFPYEEYASWKTEKDIFSDINLKHENILQFLTAEERK TELGKQYWLITAFHAKGNLQEYLTRHVISWEDLRKLGSSLARGIAHLH SDHTPCGRPKMPIVHRDLKSSNILVKNDLTCCLCDFGLSLRLDPTLSV DDLANSGQVGTARYMAPEVLESRMNLENVESFKQTDVYSMALVLWE MTSRCNAVGEVKDYEPPFGSKVREHPCVESMKDNVLRDRGRPEIPS FWLNHQGIQMVCETLTECWDHDPEARLTAQCVAERFSELEHLDRLS

GRSCSEEKIPEDGSLNTTK SEQ ID NO: 9 Polipeptídeo precursor de isoforma B de TGFβRII humano (NCBI Ref Seq nº. de Acesso: NP_003233

MGRGLLRGLWPLHIVLWTRIASTIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKF PQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDE NITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSD ECNDNIIFSEEYNTSNPDLLLVIFQVTGISLLPPLGVAISVIIIFYCYRVNR QQKLSSTWETGKTRKLMEFSEHCAIILEDDRSDISSTCANNINHNTEL LPIELDTLVGKGRFAEVYKAKLKQNTSEQFETVAVKIFPYEEYASWKT EKDIFSDINLKHENILQFLTAEERKTELGKQYWLITAFHAKGNLQEYLT RHVISWEDLRKLGSSLARGIAHLHSDHTPCGRPKMPIVHRDLKSSNIL VKNDLTCCLCDFGLSLRLDPTLSVDDLANSGQVGTARYMAPEVLESR MNLENVESFKQTDVYSMALVLWEMTSRCNAVGEVKDYEPPFGSKV REHPCVESMKDNVLRDRGRPEIPSFWLNHQGIQMVCETLTECWDHD

PEARLTAQCVAERFSELEHLDRLSGRSCSEEKIPEDGSLNTTK SEQ ID NO: 10 Polipeptídeo de domínio extracelular de isoforma B de TGFβRII huma- no

IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMS NCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAA

SPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD SEQ ID NO: 11 Ligante de (Gly4Ser)4Gly

GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSG SEQ ID NO: 12 Sequência polipeptídica da região variável de cadeia pesada de anti- corpo MPDL3289A anti-PD-L1 secretada

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLE WVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAV

YYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 13 Sequência polipeptídica da região variável de cadeia leve de anticorpo MPDL3289A anti-PD-L1 secretada

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLL IYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHP

ATFGQGTKVEIKR SEQ ID NO: 14 Sequência polipeptídica da região variável de cadeia pesada de anti- corpo YW243.55S70 anti-PD-L1

YYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSA SEQ ID NO: 50 Polipeptídeo de domínio extracelular de isoforma B de TGFβRII huma- no truncado

GAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVW RKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMC SCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD

SEQ ID NO: 51 Polipeptídeo de domínio extracelular de isoforma B de TGFβRII huma- no truncado

VKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRK NDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSC

SSDECNDNIIFSEEYNTSNPD SEQ ID NO: 52 Polipeptídeo de domínio extracelular de isoforma B de TGFβRII huma- no truncado

VTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVC VAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGET

FFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD SEQ ID NO: 53 Polipeptídeo de domínio extracelular de isoforma B de TGFβRII huma- no truncado

LCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENIT LETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDEC

NDNIIFSEEYNTSNPD SEQ ID NO: 54 Polipeptídeo de domínio extracelular de isoforma B de TGFβRII humano mutante

VTDNAGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVC VAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGET

FFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD SEQ ID NO: 55 Sequência polipeptídica de região variável de cadeia pesada de anticorpo anti-PD-L1

QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNDYWTWIRQHPGKGLE YIGYISYTGSTYYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC ARSGGWLAPFDYWGRGTLVTVSS

SEQ ID NO: 56 Sequência polipeptídica de região variável de cadeia leve de anticorpo anti-PD-L1

DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLFYHSNQKHSLAWYQQKPG QPPKLLIYGASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC

QQYYGYPYTFGGGTKVEIK SEQ ID NO: 57 Sequência polipeptídica de região variável de cadeia pesada de anticorpo anti-PD-L1

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWMHWVRQAPGQGL EWMGRIGPNSGFTSYNEKFKNRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDT

AVYYCARGGSSYDYFDYWGQGTTVTVSS SEQ ID NO: 58 Sequência polipeptídica de região variável de cadeia leve de anticorpo anti-PD-L1

DIVLTQSPASLAVSPGQRATITCRASESVSIHGTHLMHWYQQKPGQP PKLLIYAASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEAEDTANYYCQQS

FEDPLTFGQGTKLEIK SEQ ID NO: 59 Sequência polipeptídica de cadeia pesada de anticorpo anti-PD-L1

QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISNDYWTWIRQHPGKGLE YIGYISYTGSTYYNPSLKSRVTISRDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC ARSGGWLAPFDYWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTA ALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVT VPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAG GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGV EVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGL PSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPS DIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGN VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK

SEQ ID NO: 60 Sequência polipeptídica de cadeia leve de anticorpo anti-PD-L1

DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLFYHSNQKHSLAWYQQKPG QPPKLLIYGASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC QQYYGYPYTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLL NNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLS

KADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC SEQ ID NO: 61 Sequência polipeptídica de cadeia pesada de anticorpo anti-PD-L1

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWMHWVRQAPGQGL EWMGRIGPNSGFTSYNEKFKNRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDT AVYYCARGGSSYDYFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRST SESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPA PEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWY VDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVS NKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRW

QEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGA SEQ ID NO: 62 Sequência polipeptídica de cadeia leve de anticorpo anti-PD-L1

DIVLTQSPASLAVSPGQRATITCRASESVSIHGTHLMHWYQQKPGQP PKLLIYAASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLTINPVEAEDTANYYCQQS FEDPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF YPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKAD YEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC INCORPORAÇÃO POR REFERÊNCIA

[00296] A descrição inteira de cada um dos documentos de patente e dos artigos científicos indicados aqui é incorporada ao presente do- cumento a título de referência para todas as finalidades.

EQUIVALENTES

[00297] A invenção pode ser incorporada de outras formas específi- cas sem se desviar do caráter ou das características essenciais da mesma. As modalidades acima, portanto, devem ser consideradas, em todos os aspectos, ilustrativas em vez de limitar a invenção descrita no presente documento. Vários elementos estruturais das diferentes mo- dalidades e várias etapas do método descrito podem ser usados em várias combinações e permutações e todas de tais variantes devem ser consideradas como formas da invenção. O âmbito da invenção é, deste modo, indicado pelas reivindicações em anexo e não pela des- crição acima e todas as alterações que ocorrem dentro do significado e da faixa de equivalência das reivindicações devem ser abrangidas na mesma.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Método de tratamento de câncer do trato biliar (BTC) ou inibição de crescimento de tumor do trato biliar em um paciente que não recebeu tratamento anterior que precisa do mesmo, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao paciente uma dose de pelo menos 500 mg de uma proteína que compreende um primeiro po- lipeptídeo e um segundo polipeptídeo, em que o primeiro polipeptídeo compreende: (a) pelo me- nos uma região variável de uma cadeia pesada de um anticorpo que se liga à proteína humana Ligante de Morte Programada 1 (PD-L1); e (b) ao Receptor II de Fator β de Crescimento Transformante (TGFβRII), ou um fragmento do mesmo, capaz de se ligar ao Fator β de Crescimento Transformante (TGFβ), em que o segundo polipeptídeo compreende pelo menos uma região variável de uma cadeia leve de um anticorpo que se liga à PD-L1, e em que a cadeia pesada do primeiro polipeptídeo e a ca- deia leve do segundo polipeptídeo, quando combinadas, formam um sítio de ligação a antígeno que se liga à PD-L1.

2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o primeiro polipeptídeo compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 e o segundo polipeptídeo compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1.

3. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracteri- zado pelo fato de que a dose é de 500 mg a 2400 mg.

4. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que a dose é de 1200 mg a 2400 mg.

5. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que a dose é de 1200 mg.

6. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações

1 a 4, caracterizado pelo fato de que a dose é de 2400 mg.

7. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que a dose é administrada uma vez a cada duas semanas ou uma vez a cada três semanas.

8. Método, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que a dose é de 1200 mg, administrada uma vez a cada duas semanas.

9. Método, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que a dose é 2400 mg, administrada uma vez a cada três semanas.

10. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 3, caracterizado pelo fato de que a dose é de 2100 mg ou 2400 mg, administrada uma vez a cada três semanas.

11. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 10, caracterizado pelo fato de que o BTC é BTC localmente avançado e/ou BTC metastático.

12. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 11, caracterizado pelo fato de que o BTC exibe expressão positiva de PD-L1.

13. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 12, caracterizado pelo fato de que compreende ainda a admi- nistração de gencitabina e/ou cisplatina ao paciente.

14. Método, de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que a gencitabina e a cisplatina são administradas no mesmo dia em que a proteína é administrada (dia 1) durante o ciclo de tratamento.

15. Método, de acordo com a reivindicação 14, caracteriza- do pelo fato de que compreende ainda a administração de gencitabina e cisplatina no dia 8 do ciclo de tratamento.

16. Método, de acordo com a reivindicação 15, caracteriza-

do pelo fato de que o tratamento é repetido um total de oito ciclos ao longo de 24 semanas.

17. Método, de acordo com a reivindicação 15, caracteriza- do pelo fato de que compreende ainda continuação do tratamento do paciente através de administração da proteína a partir de 25 semanas, sem coadministrar gencitabina e cisplatina.

18. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 17, caracterizado pelo fato de que o tratamento resulta em uma resposta à doença ou melhora na sobrevida do paciente.

19. Método, de acordo com a reivindicação 18, caracteriza- do pelo fato de que a resposta da doença é uma resposta completa, uma resposta parcial ou uma doença estável.

20. Método, de acordo com a reivindicação 18, caracteriza- do pelo fato de que a sobrevida é a sobrevida sem progressão (PFS).

21. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 20, caracterizado pelo fato de que a proteína é administrada por meio de administração intravenosa.

22. Método, de acordo com a reivindicação 21, caracteriza- do pelo fato de que a administração intravenosa é realizada com uma bolsa pré-cheia, uma caneta pré-cheia ou uma seringa pré-cheia que compreende uma formulação que compreende a proteína.

23. Método, de acordo com a reivindicação 22, caracteriza- do pelo fato de que a bolsa é conectada a um canal que compreende um tubo e/ou uma agulha.

24. Formulação para distribuição intravenosa de fármaco para uso em um método de tratamento de câncer do trato biliar (BTC) ou inibição de crescimento de tumor do trato biliar em um paciente com câncer que não recebeu tratamento que precisa do mesmo, ca- racterizada pelo fato de que a formulação compreende 500 mg - 2400 mg de uma proteína que compreende um primeiro polipeptídeo e um segundo polipeptídeo; em que o primeiro polipeptídeo compreende: (a) pelo me- nos uma região variável de uma cadeia pesada de um anticorpo que se liga à proteína humana Ligante de Morte Programada 1 (PD-L1); e (b) ao Receptor II do Fator β de Crescimento Transformante (TGFβRII), ou um fragmento do mesmo, capaz de se ligar ao Fator β de Crescimento Transformante (TGFβ), em que o segundo polipeptídeo compreende pelo menos uma região variável de uma cadeia leve de um anticorpo que se liga à PD-L1, e em que a cadeia pesada do primeiro polipeptídeo e a ca- deia leve do segundo polipeptídeo, quando combinadas, formam um sítio de ligação a antígeno que se liga à PD-L1.

25. Formulação para distribuição intravenosa de fármaco para uso de acordo com a reivindicação 24, caracterizada pelo fato de que o primeiro polipeptídeo compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 e o segundo polipeptídeo compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 1.

26. Formulação para distribuição intravenosa de fármaco para uso de acordo com a reivindicação 24 ou 25, caracterizada pelo fato de que compreende 1200 mg a 2400 mg da proteína.

27. Formulação para distribuição intravenosa de fármaco para uso de acordo com a reivindicação 24 ou 25, caracterizada pelo fato de que compreende 1200 mg da proteína.

28. Formulação para distribuição intravenosa de fármaco para uso de acordo com a reivindicação 24 ou 25, caracterizada pelo fato de que compreende 2400 mg da proteína.

29. Formulação para distribuição intravenosa de fármaco para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 24 a 26, caracterizada pelo fato de que a formulação é administrada ao pacien-

te uma vez a cada duas semanas ou uma vez a cada três semanas.

30. Formulação para distribuição intravenosa de fármaco para uso, de acordo com a reivindicação 29, caracterizada pelo fato de que uma formulação que compreende 1200 mg da proteína é adminis- trada uma vez a cada duas semanas.

31. Formulação para distribuição intravenosa de fármaco para uso, de acordo com a reivindicação 29, caracterizada pelo fato de que uma formulação que compreende 2400 mg da proteína é adminis- trada uma vez a cada três semanas.

32. Formulação para distribuição intravenosa de fármaco para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 24 a 31, caracterizada pelo fato de que a formulação está contida em uma bol- sa, caneta ou seringa.

33. Formulação para distribuição intravenosa de fármaco para uso, de acordo com a reivindicação 32, caracterizada pelo fato de que a bolsa é conectada a um canal que compreende um tubo e/ou uma agulha.

34. Formulação para distribuição intravenosa de fármaco para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 24 a 33, caracterizada pelo fato de que a formulação é uma formulação liofili- zada ou uma formulação líquida.

35. Dispositivo de distribuição de fármaco para uso em um método de tratamento de câncer do trato biliar (BTC) ou inibição de crescimento de tumor do trato biliar em um paciente com câncer que não recebeu tratamento que precisa do mesmo, caracterizado pelo fato de que compreende uma formulação que compreende 500 mg - 2400 mg de uma proteína que compreende um primeiro polipeptídeo e um segundo polipeptídeo; em que o primeiro polipeptídeo compreende: (a) pelo me- nos uma região variável de uma cadeia pesada de um anticorpo que se liga à proteína humana Ligante de Morte Programada 1 (PD-L1); e (b) ao Receptor II do Fator β de Crescimento Transformante (TGFβRII), ou um fragmento do mesmo, capaz de se ligar ao Fator β de Crescimento Transformante (TGFβ), em que o segundo polipeptídeo compreende pelo menos uma região variável de uma cadeia leve de um anticorpo que se liga à PD-L1, e em que a cadeia pesada do primeiro polipeptídeo e a ca- deia leve do segundo polipeptídeo, quando combinadas, formam um sítio de ligação a antígeno que se liga à PD-L1.

36. Dispositivo de distribuição de fármaco para uso de acordo com a reivindicação 35, caracterizado pelo fato de que o pri- meiro polipeptídeo compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 e o segundo polipeptídeo compreende a sequência de ami- noácidos de SEQ ID NO: 1.

37. Dispositivo de distribuição de fármaco para uso, de acordo com a reivindicação 35 ou 36, caracterizado pelo fato de que compreende 1200 mg a 2400 mg da proteína.

38. Dispositivo de distribuição de fármaco para uso, de acordo com a reivindicação 35 ou 36, caracterizado pelo fato de que compreende 1200 mg da proteína.

39. Dispositivo de distribuição de fármaco para uso, de acordo com a reivindicação 35 ou 36, caracterizado pelo fato de que compreende 2400 mg da proteína.

40. Dispositivo de distribuição de fármaco para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 35 a 37, caracterizado pelo fato de que a formulação é administrada ao paciente uma vez a cada duas semanas ou uma vez a cada três semanas.

41. Dispositivo de distribuição de fármaco para uso, de acordo com a reivindicação 40, caracterizado pelo fato de que uma formulação que compreende 1200 mg da proteína é administrada uma vez a cada duas semanas.

42. Dispositivo de distribuição de fármaco para uso, de acordo com a reivindicação 40, caracterizado pelo fato de que uma formulação que compreende 2400 mg da proteína é administrada uma vez a cada três semanas.

43. Dispositivo de distribuição de fármaco para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 35 a 42, caracterizado pelo fato de que o dispositivo é uma bolsa, uma caneta ou uma serin- ga.

44. Dispositivo de distribuição de fármaco para uso, de acordo com a reivindicação 43, caracterizado pelo fato de que a bolsa é conectada a um canal que compreende um tubo e/ou uma agulha.

45. Formulação para distribuição intravenosa de fármaco para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 24 a 34 ou dispositivo de distribuição de fármaco para uso de acordo com qual- quer uma das reivindicações 35 a 44, caracterizados pelo fato de que o BTC é BTC localmente avançado e/ou BTC metastático.

46. Formulação para distribuição intravenosa de fármaco para uso de acordo com a reivindicação 45 ou dispositivo de distribui- ção de fármaco para uso de acordo com a reivindicação 45, caracteri- zados pelo fato de que o câncer exibe expressão positiva para PD-L1.

47. Formulação para distribuição intravenosa de fármaco para uso de acordo com a reivindicação 45 ou 46 ou dispositivo de dis- tribuição de fármaco para uso de acordo com a reivindicação 45 ou 46, caracterizados pelo fato de que compreendem ainda a coadministra- ção de gencitabina e/ou cisplatina ao paciente.

48. Formulação para distribuição intravenosa de fármaco para uso de acordo com a reivindicação 47 ou dispositivo de distribui- ção de fármaco para uso de acordo com a reivindicação 47, caracteri-

zados pelo fato de que a gencitabina e a cisplatina são administradas no mesmo dia em que a formulação que compreende a proteína é ad- ministrada (dia 1) durante o ciclo de tratamento.

49. Formulação para distribuição intravenosa de fármaco para uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 45-48 ou dispositivo de distribuição de fármaco para uso de acordo com qual- quer uma das reivindicações 45 a 48, caracterizados pelo fato de que o tratamento resulta em uma resposta à doença ou melhora na sobre- vida do paciente.

50. Formulação para distribuição intravenosa de fármaco para uso de acordo com a reivindicação 49 ou dispositivo de distribui- ção de fármaco para uso de acordo com a reivindicação 49, caracteri- zados pelo fato de que a resposta da doença é uma resposta comple- ta, uma resposta parcial ou uma doença estável.

51. Formulação para distribuição intravenosa de fármaco para uso de acordo com a reivindicação 49 ou dispositivo de distribui- ção de fármaco para uso de acordo com a reivindicação 49, caracteri- zados pelo fato de que a sobrevida é a sobrevida sem progressão (PFS).

52. Método de tratamento de câncer do trato biliar local- mente avançado ou metastático (BTC) ou inibição de crescimento de tumor do trato biliar em um paciente que falhou ou é intolerante à qui- mioterapia sistêmica anterior, caracterizado pelo fato de que compre- ende administrar ao paciente uma dose de pelo menos 500 mg de uma proteína que compreende um primeiro polipeptídeo e um segundo polipeptídeo, em que o primeiro polipeptídeo compreende: (a) pelo me- nos uma região variável de uma cadeia pesada de um anticorpo que se liga à proteína humana Ligante de Morte Programada 1 (PD-L1); e (b) ao Receptor II do Fator β de Crescimento Transformante

(TGFβRII), ou um fragmento do mesmo, capaz de se ligar ao Fator β de Crescimento Transformante (TGFβ), em que o segundo polipeptídeo compreende pelo menos uma região variável de uma cadeia leve de um anticorpo que se liga à PD-L1, e em que a cadeia pesada do primeiro polipeptídeo e a ca- deia leve do segundo polipeptídeo, quando combinadas, formam um sítio de ligação a antígeno que se liga à PD-L1.

53. Método, de acordo com a reivindicação 52, caracteriza- do pelo fato de que o primeiro polipeptídeo compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 e o segundo polipeptídeo compre- ende a sequência de aminoácido de SEQ ID NO: 1.

54. Método, de acordo com a reivindicação 52 ou 53, carac- terizado pelo fato de que a dose é de 500 mg a 2400 mg.

55. Método, de acordo com a reivindicação 52 ou 53, carac- terizado pelo fato de que a dose é de 1200 mg a 1800 mg.

56. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 52 a 55, caracterizado pelo fato de que a dose é de 1200 mg.

57. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 52 a 55, caracterizado pelo fato de que a dose é de 1800 mg.

58. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 52 a 55, caracterizado pelo fato de que a dose é administrada uma vez a cada duas semanas ou uma vez a cada três semanas.

59. Método, de acordo com a reivindicação 58, caracteriza- do pelo fato de que a dose é de 1200 mg, administrada uma vez a ca- da duas semanas.

60. Método, de acordo com a reivindicação 58, caracteriza- do pelo fato de que a dose é de 1800 mg, administrada uma vez a ca- da três semanas.

61. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica-

ções 52 a 54, caracterizado pelo fato de que a dose é de 2100 mg ou 2400 mg, administrada uma vez a cada três semanas.

62. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 52 a 61, caracterizado pelo fato de que o BTC exibe expressão PD-L1 positiva.

63. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 52 a 62, caracterizado pelo fato de que o tratamento resulta em uma resposta à doença ou melhora na sobrevida do paciente.

64. Método, de acordo com a reivindicação 63, caracteriza- do pelo fato de que a resposta da doença é uma resposta completa, uma resposta parcial ou uma doença estável.

65. Método, de acordo com a reivindicação 63, caracteriza- do pelo fato de que a sobrevida é a sobrevida sem progressão (PFS).

66. Método, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 52 a 65, caracterizado pelo fato de que a proteína é administrada por meio de administração intravenosa.

67. Método, de acordo com a reivindicação 66, caracteriza- do pelo fato de que a administração intravenosa é realizada com uma bolsa pré-cheia, uma caneta pré-cheia ou uma seringa pré-cheia que compreende uma formulação que compreende a proteína.

68. Método, de acordo com a reivindicação 67, caracteriza- do pelo fato de que a bolsa é conectada a um canal que compreende um tubo e/ou uma agulha.

69. Proteína de armadilha anti-PD-L1/TGFβ caracterizada pelo fato de que compreende um primeiro polipeptídeo e um segundo polipeptídeo para uso em um método de tratamento de câncer do trato biliar (BTC) ou inibição de crescimento de tumor do trato biliar em um paciente com câncer que não recebeu tratamento que precisa do mesmo, o método compreendendo administrar 500 mg - 2400 mg da proteína ao paciente;

em que o primeiro polipeptídeo compreende: (a) pelo me- nos uma região variável de uma cadeia pesada de um anticorpo que se liga à proteína humana Ligante de Morte Programada 1 (PD-L1); e (b) ao Receptor II do Fator β de Crescimento Transformante (TGFβRII), ou um fragmento do mesmo, capaz de se ligar ao Fator β de Crescimento Transformante (TGFβ), em que o segundo polipeptídeo compreende pelo menos uma região variável de uma cadeia leve de um anticorpo que se liga à PD-L1, e em que a cadeia pesada do primeiro polipeptídeo e a ca- deia leve do segundo polipeptídeo, quando combinadas, formam um sítio de ligação a antígeno que se liga à PD-L1.

70. Proteína de armadilha anti-PD-L1/TGFβ para uso, de acordo com a reivindicação 69, caracterizada pelo fato de que o pri- meiro polipeptídeo compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 3 e o segundo polipeptídeo compreende a sequência de ami- noácidos de SEQ ID NO: 1.

71. Proteína de armadilha anti-PD-L1/TGFβ para uso, de acordo com a reivindicação 69 ou 70, caracterizada pelo fato de que 1200 mg a 2400 mg da proteína são administrados ao paciente.

72. Proteína de armadilha anti-PD-L1/TGFβ para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 69 a 71, caracterizada pelo fato de que 1200 mg da proteína são administrados ao paciente.

73. Proteína de armadilha anti-PD-L1/TGFβ para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 69 a 71, caracterizada pelo fato de que 2400 mg da proteína são administrados ao paciente.

74. Proteína de armadilha anti-PD-L1/TGFβ para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 69 a 71, caracterizada pelo fato de que a proteína é administrada ao paciente uma vez a cada duas semanas ou uma vez a cada três semanas.

75. Proteína de armadilha anti-PD-L1/TGFβ para uso, de acordo com a reivindicação 74, caracterizada pelo fato de que 1200 mg da proteína são administrados uma vez a cada duas semanas em um ciclo de tratamento.

76. Proteína de armadilha anti-PD-L1/TGFβ para uso, de acordo com a reivindicação 74, caracterizada pelo fato de que 2400 mg da proteína são administrados uma vez a cada três semanas em um ciclo de tratamento.

77. Proteína de armadilha anti-PD-L1/TGFβ para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 69 a 76, caracterizada pelo fato de que o BTC é BTC localmente avançado e/ou BTC metas- tático.

78. Proteína de armadilha anti-PD-L1/TGFβ para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 69 a 77, caracterizada pelo fato de que o BTC exibe expressão positiva de PD-L1.

79. Proteína de armadilha anti-PD-L1/TGFβ para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 69 a 78, caracterizada pelo fato de que compreende ainda a administração de gencitabina e/ou cisplatina ao paciente.

80. Proteína de armadilha anti-PD-L1/TGFβ para uso, de acordo com a reivindicação 76, caracterizada pelo fato de que a genci- tabina e a cisplatina são administradas no mesmo dia em que a prote- ína é administrada (dia 1) durante o ciclo de tratamento.

81. Proteína de armadilha anti-PD-L1/TGFβ para uso, de acordo com a reivindicação 80, caracterizada pelo fato de que com- preende ainda a administração de gencitabina e cisplatina no dia 8 do ciclo de tratamento.

82. Proteína de armadilha anti-PD-L1/TGFβ para uso, de acordo com a reivindicação 81, caracterizada pelo fato de que o trata- mento é repetido um total de oito ciclos ao longo de 24 semanas.

83. Proteína de armadilha anti-PD-L1/TGFβ para uso, de acordo com a reivindicação 82, caracterizada pelo fato de que com- preende ainda a continuação do tratamento do paciente pela adminis- tração da proteína a partir de 25 semanas, sem coadministrar gencita- bina e cisplatina.

84. Proteína de armadilha anti-PD-L1/TGFβ para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 69 a 83, caracterizada pelo fato de que a proteína está contida em uma bolsa, caneta ou se- ringa.

85. Proteína de armadilha anti-PD-L1/TGFβ para uso, de acordo com a reivindicação 84, caracterizada pelo fato de que a bolsa está conectada a um canal que compreende um tubo e/ou uma agu- lha.

86. Proteína de armadilha anti-PD-L1/TGFβ para uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 69 a 85, caracterizada pelo fato de que a proteína está compreendida em uma formulação liofilizada ou em uma formulação líquida.