JP2021528399A - 胆道癌を治療する際に使用するための標的ＴＧＦ−β阻害のための投薬計画 - Google Patents

胆道癌を治療する際に使用するための標的ＴＧＦ−β阻害のための投薬計画 Download PDF

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Abstract

本開示は、未治療患者又は第一選択全身性化学療法を失敗した若しくはそれに対して不耐容である局所進行又は転移性ＢＴＣを有する患者において胆道癌を治療する又は胆道腫瘍増殖を阻害するための方法において使用するための二機能融合タンパク質による標的ＴＧＦ−β阻害のための投薬計画に関する。

Description

関連出願の相互参照
[0001] 本出願は、２０１８年６月２２日に出願された米国仮特許出願第６２／６８８，４７６号；及び２０１９年５月３１日に出願された米国仮特許出願第６２／８５５，２０５号の利益及び優先権を主張し、これらの全開示は、本明細書において参照によって援用される。
配列表
[0002] 本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出され、その全体が参照によってこれによって援用される配列表を含有する。２０１９年６月３日に作成された前記ＡＳＣＩＩの原稿は、名前がＥＭＤ−００８ＷＯ＿ＳＬ＿ＳＴ２５．ｔｘｔで、サイズが７５，８３４バイトである。
開示の分野
[0003] 本開示は、概して、未治療患者又は第一選択全身性化学療法を失敗した若しくはそれに対して不耐容である局所進行又は転移性ＢＴＣを有する患者において胆道癌（「ＢＴＣ」）を治療する又は腫瘍増殖を阻害するための方法において使用するための二機能融合タンパク質による標的ＴＧＦ−β阻害のための投薬計画に関する。
背景
[0004] プログラム死１（ＰＤ−１）／ＰＤ−Ｌ１軸は、腫瘍免疫回避にとって重要なメカニズムである。長期にわたって抗原を検知し続けているエフェクターＴ細胞は、ＰＤ−１発現によって特徴づけられる、疲弊した表現型を持つようになり、このような状況下で、腫瘍細胞は、ＰＤ−Ｌ１をアップレギュレートすることによって交戦してくる。そのうえ、腫瘍微小環境では、骨髄系細胞、マクロファージ、実質細胞、及びＴ細胞は、ＰＤ−Ｌ１をアップレギュレートする。軸の遮断は、これらのＴ細胞におけるエフェクター機能を回復させる。
[0005] 参照によって本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１５０２２５４８３ Ａ１号は、抗プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）抗体をＴＧＦβ中和「トラップ」としての腫瘍増殖因子ベータ受容体ＩＩ型（ＴＧＦβＲＩＩ）の可溶性細胞外ドメインと組み合わせて、単一の分子にした二機能融合タンパク質を記載する。詳細には、タンパク質は、可動性のグリシン−セリンリンカーを介してヒトＴＧＦβＲＩＩの細胞外ドメインに遺伝的に融合された抗ＰＤ−Ｌ１の２つの免疫グロブリン軽鎖及び抗ＰＤ−Ｌ１の重鎖を含む２つの重鎖からなるヘテロ四量体である（図１を参照）。この抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子は、腫瘍微小環境において免疫抑制の２つの重大なメカニズムを標的にするように設計されている。米国特許出願公開第２０１５０２２５４８３ Ａ１号は、患者の体重に基づいた用量でのトラップ分子の投与を記載する。
[0006] ＢＴＣは、肝内及び肝外胆管癌（ＣＣＡ）、胆嚢癌（ＧＣ）、及び乳頭部癌（ＡＣ）を含む希少腫瘍の不均一なグループである。切除不能ＢＴＣは化学療法によって治療されるが、生存期間中央値は＜１年である。本発明は、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ免疫療法によるＢＴＣの治療を対象とする。
開示の概要
[0007] 本開示は、ＰＤ−Ｌ１及びＴＧＦβを標的にする二機能タンパク質の投与のための改善された投薬計画を提供する。詳細には、様々な投薬頻度で投与される少なくとも５００ｍｇ（たとえば１２００ｍｇ、１８００ｍｇ、２４００ｍｇ）の二機能性タンパク質の投与を伴う、体重に無関係な（ＢＷに無関係な）投薬計画及び関係する投薬形態は、抗腫瘍及び抗癌治療薬として使用することができる。ＢＷに無関係な投薬計画は、すべての患者が体重に関係なく、腫瘍部位に十分な薬剤曝露量を有するであろうということを保証する。
[0008] 本開示の二機能性タンパク質（抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子）は、第１及び第２のポリペプチドを含む。第１のポリペプチドは、（ａ）ヒトタンパク質プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）に結合する抗体の重鎖の少なくとも１つの可変領域；及び（ｂ）ヒト形質転換増殖因子β受容体ＩＩ（ＴＧＦβＲＩＩ）又は形質転換増殖因子β（ＴＧＦβ）に結合することができるその断片（たとえば可溶性の断片）を含む。第２のポリペプチドは、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗体の軽鎖の少なくとも１つの可変領域を含み、第１のポリペプチドの重鎖及び第２のポリペプチドの軽鎖は、組み合わせられると、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗原結合部位を形成する（たとえば、本明細書において記載される抗体又は抗体断片のいずれか）。本開示の二機能性タンパク質が２つの標的（１）大部分が膜に結合しているＰＤ−Ｌ１並びに（２）血液及び間質において可溶性であるＴＧＦβに結合するので、ＢＷに無関係な投薬計画は、腫瘍部位でＰＤ−Ｌ１を阻害するのに有効であるだけでなく、ＴＧＦβを阻害するのにも十分な用量を必要とする。
[0009] 一態様では、本開示は、本開示において記載される抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子をその必要がある患者に投与することによって、未治療患者において胆道癌（ＢＴＣ）（たとえば肝内胆管癌、肝外胆管癌及びファーター乳頭部癌；胆嚢癌）を治療する又は胆道腫瘍増殖を阻害するための方法を提供する。一態様では、本開示は、その必要がある対象における胆管癌（たとえば進行又は転移性胆道癌）の治療を提供する。一態様では、本発明は、ポジティブＰＤ−Ｌ１発現を示すＢＴＣを治療するための方法を提供する。
[0010] ある実施形態では、本開示は、患者に、２週間ごとに１回、１２００ｍｇの本開示の抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子を投与することによって、その必要がある未治療患者において胆道癌（ＢＴＣ）を治療する又は胆道腫瘍増殖を阻害するための方法を提供する。ある他の実施形態では、本開示は、患者に、３週間ごとに１回、２４００ｍｇの本開示の抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子を投与することによって、その必要がある未治療患者において胆道癌（ＢＴＣ）を治療する又は胆道腫瘍増殖を阻害するための方法を提供する。
[0011] ある実施形態では、進行又は転移性ＢＴＣを有する未治療対象又は患者は、ゲムシタビン及び／又はシスプラチンを本開示において開示される抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子と同時投与することによって治療される。いくつかの実施形態では、進行又は転移性ＢＴＣを有する未治療対象又は患者は、ゲムシタビン及びシスプラチンを本開示において開示されるＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子と同時投与することによって治療される。
[0012] ある実施形態では、本開示は、未治療患者にゲムシタビン及びシスプラチンを治療サイクルの間にタンパク質（たとえば本明細書において記載される抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子）と同じ日（たとえば１日目）に投与する、治療の方法を記載する。ある実施形態では、ゲムシタビン及びシスプラチンは、タンパク質（たとえば本明細書において記載される抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子）なしで治療サイクルの８日目に投与される。いくつかの実施形態では、治療（たとえば１日目の抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップとゲムシタビン及びシスプラチンとの同時投与と、その後の８日目のゲムシタビン及びシスプラチンの投与）は、一定期間（たとえば２４週間）にわたって繰り返され（たとえば８サイクル）、その後、一定期間（たとえば２年）、タンパク質（たとえば本明細書において記載される抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子）単独が投与される。
[0013] 本開示はまた、ＴＧＦβの局所的な除去を促進するための方法をも特徴づける。方法は、上記に記載されるタンパク質を投与することを含み、タンパク質は、溶液中のＴＧＦβに結合し、細胞表面のＰＤ−Ｌ１に結合し、細胞（たとえば胆道癌細胞）の中に、結合ＴＧＦβを運ぶ。
[0014] 本開示はまた、細胞（たとえば胆道癌細胞又は免疫細胞）におけるＳＭＡＤ３リン酸化を阻害するための方法であって、腫瘍微小環境中の細胞を上記に記載されるタンパク質に曝露することを含む方法をも特徴づける。
[0015] 他の実施形態及び本開示の詳細は、本明細書において下記に提供される。
図面の簡単な説明
[0016]図１は、（Ｇｌｙ4Ｓｅｒ）4Ｇｌｙ（配列番号１１）リンカーを介してＴＧＦβ受容体ＩＩの２つの細胞外ドメイン（ＥＣＤ）に融合された１つの抗ＰＤ−Ｌ１抗体を含む抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子の略図を示す図である。 [0017]図２は、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップがＰＤ−Ｌ１及びＴＧＦβの両方に同時に結合することを実証するツーステップＥＬＩＳＡを示す図である。 [0018]図３は、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップが、ＩＬ−２レベルにおける劇的な増加を誘発することを示す図である。 [0019]図４Ａは、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップに応じたＴＧＦβ１のインビボにおける除去を示す図である。線グラフは、凡例において示されるように、ナイーブ、アイソタイプコントロール、及び３つの異なる用量を示す。 [0019]図４Ｂは、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップに応じたＴＧＦβ２のインビボにおける除去を示す図である。線グラフは、凡例において示されるように、ナイーブ、アイソタイプコントロール、及び３つの異なる用量を示す。 [0019]図４Ｃは、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップに応じたＴＧＦβ３のインビボにおける除去を示す図である。線グラフは、凡例において示されるように、ナイーブ、アイソタイプコントロール、及び３つの異なる用量を示す。 [0019]図４Ｄは、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップによるＰＤ−Ｌ１の占有率が、ＥＭＴ−６腫瘍系における受容体結合モデルを支持することを示す図である。 [0020]図５は、Ｄｅｔｒｏｉｔ５６２異種移植モデルにおける抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップコントロール（抗ＰＤ−Ｌ１（ｍｕｔ）／ＴＧＦβ）の抗腫瘍効能を示す図である。 [0021]図６Ａは、体重の中央値が６８ｋｇのシミュレーション集団における固定（１２００ｍｇ）対ｍｇ／ｋｇベースの投薬（１７．６５ｍｇ／ｋｇ）についての集団全体についてのＣavg分布のボックスプロットを示す図である。 [0021]図６Ｂは、体重の中央値が６８ｋｇのシミュレーション集団における固定（１２００ｍｇ）対ｍｇ／ｋｇベースの投薬（１７．６５ｍｇ／ｋｇ）についての集団全体についての曝露量ＡＵＣ分布のボックスプロットを示す図である。 [0021]図６Ｃは、体重の中央値が６８ｋｇのシミュレーション集団における固定（１２００ｍｇ）対ｍｇ／ｋｇベースの投薬（１７．６５ｍｇ／ｋｇ）についての集団全体についてのＣtrough分布のボックスプロットを示す図である。 [0021]図６Ｄは、体重の中央値が６８ｋｇのシミュレーション集団における固定（１２００ｍｇ）対ｍｇ／ｋｇベースの投薬（１７．６５ｍｇ／ｋｇ）についての集団全体についてのＣmax分布のボックスプロットを示す図である。 [0022]図６Ｅは、体重の中央値が６８ｋｇのシミュレーション集団における固定（５００ｍｇ）対ｍｇ／ｋｇベースの投薬（７．３５ｍｇ／ｋｇ）についての集団全体についてのＣavg分布のボックスプロットを示す図である。 [0022]図６Ｆは、体重の中央値が６８ｋｇのシミュレーション集団における固定（５００ｍｇ）対ｍｇ／ｋｇベースの投薬（７．３５ｍｇ／ｋｇ）についての集団全体についての曝露量ＡＵＣ分布のボックスプロットを示す図である。 [0022]図６Ｇは、体重の中央値が６８ｋｇのシミュレーション集団における固定（５００ｍｇ）対ｍｇ／ｋｇベースの投薬（７．３５ｍｇ／ｋｇ）についての集団全体についてのＣtrough分布のボックスプロットを示す図である。 [0022]図６Ｈは、体重の中央値が６８ｋｇのシミュレーション集団における固定（５００ｍｇ）対ｍｇ／ｋｇベースの投薬（７．３５ｍｇ／ｋｇ）についての集団全体についてのＣmax分布のボックスプロットを示す図である。 [0023]図７Ａ〜７Ｃは、マウスにおける腫瘍静止に関連する用量及びスケジュールでの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子の予測ＰＫ及び予測ＰＤ−Ｌ１受容体占有率（「ＲＯ」）を示す図である。図７Ａは、予測血漿濃度対時間を示す図である。 [0023]図７Ａ〜７Ｃは、マウスにおける腫瘍静止に関連する用量及びスケジュールでの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子の予測ＰＫ及び予測ＰＤ−Ｌ１受容体占有率（「ＲＯ」）を示す図である。図７Ｂは、ＰＢＭＣにおける予測ＰＤ−Ｌ１ ＲＯ対時間を示す図である。 [0023]図７Ａ〜７Ｃは、マウスにおける腫瘍静止に関連する用量及びスケジュールでの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子の予測ＰＫ及び予測ＰＤ−Ｌ１受容体占有率（「ＲＯ」）を示す図である。図７Ｃは、腫瘍における予測ＰＤ−Ｌ１ ＲＯ対時間を示す図である。 [0024]図８は、進行又は転移性ＢＴＣを治療するための実施例２に記載される治療計画の模式図である。 [0025]図９は、進行又は転移性ＢＴＣを治療するための実施例４に記載される治療計画の模式図である。 [0026]図１０Ａ〜１０Ｅは、４Ｔ１マウス乳癌モデルにおいて、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ及びシスプラチンの組み合わせがアイソタイプコントロールと比べて抗腫瘍効能を高めたが、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ又はシスプラチン単独のいずれも高めなかったことを示す線グラフである。図１０Ａは、示される治療群ごとの平均腫瘍容積を示す。 [0026]図１０Ａ〜１０Ｅは、４Ｔ１マウス乳癌モデルにおいて、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ及びシスプラチンの組み合わせがアイソタイプコントロールと比べて抗腫瘍効能を高めたが、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ又はシスプラチン単独のいずれも高めなかったことを示す線グラフである。図１０Ｂ〜１０Ｅは、それぞれの治療群のうちの個々のマウスにおける腫瘍容積を示す線グラフである：図１０Ｂにおけるそれぞれの線は、アイソタイプコントロール及びＰＢＳコントロールによって治療されたマウス（「アイソタイプコントロール」と表示）における腫瘍容積を表す。 [0026]図１０Ａ〜１０Ｅは、４Ｔ１マウス乳癌モデルにおいて、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ及びシスプラチンの組み合わせがアイソタイプコントロールと比べて抗腫瘍効能を高めたが、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ又はシスプラチン単独のいずれも高めなかったことを示す線グラフである。図１０Ｂ〜１０Ｅは、それぞれの治療群のうちの個々のマウスにおける腫瘍容積を示す線グラフである：図１０Ｃにおけるそれぞれの線は、シスプラチン単剤療法によって治療されたマウスにおける腫瘍容積を表す。 [0026]図１０Ａ〜１０Ｅは、４Ｔ１マウス乳癌モデルにおいて、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ及びシスプラチンの組み合わせがアイソタイプコントロールと比べて抗腫瘍効能を高めたが、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ又はシスプラチン単独のいずれも高めなかったことを示す線グラフである。図１０Ｂ〜１０Ｅは、それぞれの治療群のうちの個々のマウスにおける腫瘍容積を示す線グラフである：図１０Ｄにおけるそれぞれの線は、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ単剤療法によって治療されたマウスにおける腫瘍容積を表す。 [0026]図１０Ａ〜１０Ｅは、４Ｔ１マウス乳癌モデルにおいて、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ及びシスプラチンの組み合わせがアイソタイプコントロールと比べて抗腫瘍効能を高めたが、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ又はシスプラチン単独のいずれも高めなかったことを示す線グラフである。図１０Ｂ〜１０Ｅは、それぞれの治療群のうちの個々のマウスにおける腫瘍容積を示す線グラフである：図１０Ｅにおけるそれぞれの線は、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ及びシスプラチンの組み合わせによって治療されたマウスにおける腫瘍容積を表す。 [0027]図１１Ａ〜１１Ｅは、ＭＢ４９膀胱癌モデルにおいて、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ及びゲムシタビンの組み合わせがアイソタイプコントロールと比べて抗腫瘍効能を高めたが、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ又はゲムシタビン単独のいずれも高めなかったことを示す線グラフである。図１１Ａは、示される治療群ごとの平均腫瘍容積を示す。 [0027]図１１Ａ〜１１Ｅは、ＭＢ４９膀胱癌モデルにおいて、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ及びゲムシタビンの組み合わせがアイソタイプコントロールと比べて抗腫瘍効能を高めたが、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ又はゲムシタビン単独のいずれも高めなかったことを示す線グラフである。図１１Ｂ〜１１Ｅは、それぞれの治療群のうちの個々のマウスにおける腫瘍容積を示す線グラフである：図１１Ｂにおけるそれぞれの線は、アイソタイプコントロール及びＰＢＳコントロールによって治療されたマウス（「アイソタイプコントロール」と表示）における腫瘍容積を表す。 [0027]図１１Ａ〜１１Ｅは、ＭＢ４９膀胱癌モデルにおいて、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ及びゲムシタビンの組み合わせがアイソタイプコントロールと比べて抗腫瘍効能を高めたが、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ又はゲムシタビン単独のいずれも高めなかったことを示す線グラフである。図１１Ｂ〜１１Ｅは、それぞれの治療群のうちの個々のマウスにおける腫瘍容積を示す線グラフである：図１１Ｃにおけるそれぞれの線は、ゲムシタビン単剤療法によって治療されたマウスにおける腫瘍容積を表す。 [0027]図１１Ａ〜１１Ｅは、ＭＢ４９膀胱癌モデルにおいて、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ及びゲムシタビンの組み合わせがアイソタイプコントロールと比べて抗腫瘍効能を高めたが、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ又はゲムシタビン単独のいずれも高めなかったことを示す線グラフである。図１１Ｂ〜１１Ｅは、それぞれの治療群のうちの個々のマウスにおける腫瘍容積を示す線グラフである：図１１Ｄにおけるそれぞれの線は、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ単剤療法によって治療されたマウスにおける腫瘍容積を表す。 [0027]図１１Ａ〜１１Ｅは、ＭＢ４９膀胱癌モデルにおいて、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ及びゲムシタビンの組み合わせがアイソタイプコントロールと比べて抗腫瘍効能を高めたが、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ又はゲムシタビン単独のいずれも高めなかったことを示す線グラフである。図１１Ｂ〜１１Ｅは、それぞれの治療群のうちの個々のマウスにおける腫瘍容積を示す線グラフである：図１１Ｅにおけるそれぞれの線は、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ及びゲムシタビンの組み合わせによって治療されたマウスにおける腫瘍容積を表す。
詳細な説明
[0028] 「ＴＧＦβＲＩＩ」又は「ＴＧＦβ受容体ＩＩ」は、野生型ヒトＴＧＦβ受容体２型アイソフォームＡ配列を有するポリペプチド（たとえばＮＣＢＩ参照配列（ＲｅｆＳｅｑ）受入番号ＮＰ＿００１０２００１８（配列番号８）のアミノ酸配列）又は野生型ヒトＴＧＦβ受容体２型アイソフォームＢ配列を有するポリペプチド（たとえばＮＣＢＩ ＲｅｆＳｅｑ受入番号ＮＰ＿００３２３３（配列番号９）のアミノ酸配列）又は配列番号８若しくは配列番号９のアミノ酸配列と実質的に同一な配列を有するポリペプチドを意味する。ＴＧＦβＲＩＩは、野生型配列のＴＧＦβ結合活性の少なくとも０．１％、０．５％、１％、５％、１０％、２５％、３５％、５０％、７５％、９０％、９５％、又は９９％を保持してもよい。発現されたＴＧＦβＲＩＩのポリペプチドは、シグナル配列を欠く。
[0029] 「ＴＧＦβに結合することができるＴＧＦβＲＩＩの断片」は、少なくとも２０（たとえば少なくとも３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７５、又は２００）アミノ酸長であり、野生型受容体又は対応する野生型断片の少なくともいくらかのＴＧＦβ結合活性（たとえば少なくとも０．１％、０．５％、１％、５％、１０％、２５％、３５％、５０％、７５％、９０％、９５％、又は９９％）を保持する、ＮＣＢＩ ＲｅｆＳｅｑ受入番号ＮＰ＿００１０２００１８（配列番号８）若しくはＮＣＢＩ ＲｅｆＳｅｑ受入番号ＮＰ＿００３２３３（配列番号９）の任意の部分又は配列番号８若しくは配列番号９と実質的に同一な配列を意味する。典型的に、そのような断片は、可溶性の断片である。例示的なそのような断片は、配列番号１０の配列を有するＴＧＦβＲＩＩの細胞外ドメインである。
[0030] 「未治療」は、その局所進行又は転移性ＢＴＣのための化学療法も免疫療法も以前に受けなかった対象又は患者を指す。
[0031] 化学療法の「失敗」又は対象が化学療法を「失敗」したことは、その化学療法計画によって治療されている一方、対象の癌が進行したこと意味する。
[0032] 化学療法に対する「不耐容性」又は対象が化学療法に対して「不耐容」であることは、たとえば、対象が、化学療法に起因する計画外の入院若しくは機能低下をもたらす化学療法に伴う高レベルの毒性（たとえばＮＣＩ有害事象共通用語規準の毒性グレード３〜５）を経験すること、又は死亡率が化学療法に伴うことが予測されることを意味する。
[0033] 「ＰＤ−Ｌ１ポジティブ」又は「ＰＤ−Ｌ１＋」は、たとえば、Ｄａｋｏ ＩＨＣ ２２Ｃ３ ＰｈａｒｍＤｘアッセイによって又はＶＥＮＴＡＮＡ ＰＤ−Ｌ１（ＳＰ２６３）アッセイによって決定される≧１％のＰＤ−Ｌ１ポジティブ腫瘍細胞を示す。
[0034] 「ＰＤ−Ｌ１高」又は「高ＰＤ−Ｌ１」は、ＰＤ−Ｌ１ ＩＨＣ ７３−１０アッセイ（Ｄａｋｏ）によって決定されるように≧８０％のＰＤ−Ｌ１ポジティブ腫瘍細胞又はＤａｋｏ ＩＨＣ ２２Ｃ３ ＰｈａｒｍＤｘアッセイによって決定されるように腫瘍割合スコア（ＴＰＳ）≧５０％を指す（ＴＰＳは、ＩＨＣ ２２Ｃ３ ＰｈａｒｍＤｘアッセイに関する専門用語であり、膜が部分的に又は完全に染色された（たとえばＰＤ−Ｌ１について染色）生存腫瘍細胞のパーセンテージについて説明する）。ＩＨＣ ７３−１０アッセイ及びＩＨＣ ２２Ｃ３アッセイの両方は、それらのそれぞれのカットオフ値で同様の患者集団を選択する。ある実施形態では、ＶＥＮＴＡＮＡ ＰＤ−Ｌ１（ＳＰ２６３）アッセイは、２２Ｃ３ ＰｈａｒｍＤｘアッセイと非常に一致するが（Sughayer et al., Appl. Immunohistochem. Mol. Morphol., (2018)を参照）、これもまた、ＰＤ−Ｌ１高発現レベルを決定するために使用することができる。
[0035] 「実質的に同一な」は、参照アミノ酸配列に対して、少なくとも５０％、望ましくは６０％、７０％、７５％、又は８０％、より望ましくは８５％ ９０％、又は９５％、最も望ましくは９９％のアミノ酸配列同一性を示すポリペプチドを意味する。比較配列の長さは、一般に、少なくとも１０アミノ酸、望ましくは少なくとも１５の連続アミノ酸、より望ましくは少なくとも２０、２５、５０、７５、９０、１００、１５０、２００、２５０、３００、又は３５０の連続アミノ酸、最も望ましくは完全長アミノ酸配列であろう。
[0036] 「患者」は、ヒト又は非ヒト動物（たとえば哺乳動物）を意味する。「患者」、「対象」、「その必要がある患者」、及び「その必要がある対象」は、本開示において区別なく使用され、本開示において提供される方法及び組成物を使用する投与によって治療することができる疾患又は状態に罹患している又はそれを起こしやすい生物を指す。
[0037] 用語「治療する」、「治療すること」、又は「治療」及び本開示において使用される他の文法上の等価物は、疾患、状態、若しくは症状を軽減する、緩和する、回復させる、若しくは予防すること、さらなる症状を予防すること、症状の根底にある代謝的な原因を回復させる若しくは予防すること、疾患若しくは状態を阻害すること、たとえば疾患若しくは状態の発症を阻止すること、疾患若しくは状態を和らげること、疾患若しくは状態の後退を引き起こすこと、疾患若しくは状態によって引き起こされる状態を和らげること、又は疾患若しくは状態の症状を停止させることを含み、予防処置を含むことが意図される。用語は、治療上の利益及び／又は予防的な利益を実現することをさらに含む。治療上の利益は、治療されている根底にある障害の根絶又は回復を意味する。さらに、治療上の利益は、根底にある障害に関連する、１つ以上の生理学的症状の根絶又は回復により実現され、改善が患者において観察される、それにもかかわらず、患者は、なお、根底にある障害で苦しんでいてもよい。
[0038] 「癌」は、進行又は転移性胆道癌（「ＢＴＣ」）を意味する。ＢＴＣの非限定的な例は、胆嚢癌（ＧＢＣ）、胆管癌（ＣＣＡ（肝内胆管癌、肝外胆管癌））、及びファーター乳頭部癌（ＶＡＣ又は乳頭部癌）を含む。
[0039] 本明細書の説明及び請求項の全体にわたって、「含む」という語並びに「含むこと」及び「含む（comprises）」などのようなこの語の他の形態は、〜を含むが、これらに限定されないという意味であり、たとえば他の構成成分を除外するようには意図されない。
[0040] 「同時投与する」によって、本明細書において記載される組成物が、さらなる療法の投与と同時に、その直前に、又はその直後に投与されることを意味する。本開示のタンパク質及び組成物は、患者に単独で投与することができる又は第２、第３、若しくは第４の治療剤と同時投与することができる。同時投与は、個々の又は組み合わせた（２つ以上の治療剤）、タンパク質又は組成物の同時の又は順次の投与を含むことを意味する。
[0041] 用語「１つの」は、単数に限られることを意味するものではない。ある実施形態では、用語「１つの」は、複数形を指してもよい。本開示の全体にわたって使用されるように、単数形「１つの（a）」、「１つの（an）」、及び「その」は、文脈上、明らかに他の意味を示す場合を除き、複数形の指示内容を含む。したがって、たとえば、「組成物」への言及は、単一の組成物だけでなく、複数のそのような組成物を含む。
[0042] 「還元」製剤は、二機能性分子が還元製剤中に溶解するように、水性キャリヤ中に凍結乾燥製剤を溶解することによって調製された製剤である。還元製剤は、その必要がある患者への静脈内投与（ＩＶ）に適している。
[0043] 用語「約」は、製剤の調製において及び疾患又は障害の治療において作用物質の効能を変化させない、作用物質の濃度又は量における任意の最小限の変化を指す。実施形態では、用語「約」は、特定の数値又はデータポイントの±１５％を含んでいてもよい。
[0044] 範囲は、「約」ある特定の値から及び／又は「約」別の特定の値までとして、本開示において表現することができる。そのような範囲が表現される場合、別の態様には、ある特定の値から及び／又は他の特定の値までが含まれる。同様に、値が、先の例の「約」の使用によって近似値として表現される場合、特定の値が、別の態様を形成することが理解される。範囲のそれぞれの終点が、他の終点に関連して及び他の終点と無関係に有効であることがさらに理解される。本開示において開示される多くの値があり、それぞれの値はまた、その値自体に加えて、「約」その特定の値としても開示されることもまた、理解される。本出願の全体にわたって、データは、多くの異なる形式で提供され、データは、データポイントの任意の組み合わせについて終点及び起点並びに範囲を示すこともまた、理解される。たとえば、特定のデータポイント「１０」及び特定のデータポイント「１５」が開示される場合、１０及び１５を超える、それを超える又はそれに等しい、それ未満の、それ未満の又はそれに等しい、並びにそれに等しいが、１０及び１５の間と同様に、開示されていると見なされることが理解される。２つの特定の単位量の間のそれぞれの単位量もまた、開示されることもまた、理解される。たとえば、１０及び１５が開示される場合、１１、１２、１３、及び１４もまた、開示される。
[0045] 「等張」製剤は、ヒト血液と本質的に同じ浸透圧を有する製剤である。等張製剤は、一般に、約２５０〜３５０ｍＯｓｍｏｌ／ＫｇＨ2Ｏの浸透圧を有するであろう。用語「高張」は、ヒト血液の浸透圧を上回る浸透圧を有する製剤を記載するために使用される。等張性は、たとえば、蒸気圧又は氷結型浸透圧計を使用して測定することができる。
[0046] 用語「緩衝剤」は、水溶液に追加された場合、酸若しくはアルカリを追加した場合に又は溶媒による希釈に際して、ｐＨの変動から溶液を保護することができる１つ以上の構成成分を指す。リン酸バッファーに加えて、グリシン酸、炭酸、クエン酸バッファー、及びその他同種のものを使用することができ、この場合、ナトリウム、カリウム、又はアンモニウムイオンは、対イオンとして果たすことができる。
[0047] 「酸」は、水溶液中で水素イオンを産出する物質である。「薬学的に許容され得る酸」は、それらが製剤される濃度及び手法で無毒な無機酸及び有機酸を含む。
[0048] 「塩基」は、水溶液中でヒドロキシルイオンを産出する物質である。「薬学的に許容され得る塩基」は、それらが製剤される濃度及び手法で無毒性の無機塩基及び有機塩基を含む。
[0049] 「凍結乾燥保護剤（lyoprotectant）」は、関心のあるタンパク質と組み合わせられた場合に、凍結乾燥及び続く保存に際してタンパク質の化学的及び／又は物理的不安定性を予防する又は低下させる分子である。
[0050] 「保存剤」は、細菌作用を低下させ、任意選択で本明細書における製剤に追加されてもよい作用物質である。保存剤の追加は、たとえば、多重使用（複数回投与）製剤の産生を容易にしてもよい。可能性として考えられる保存剤の例は、オクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウム、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム（アルキル基が長鎖化合物である塩化アルキルベンジルジメチルアンモニウムの混合物）、及び塩化ベンゼトニウムを含む。他のタイプの保存剤は、フェノール、ブチル、及びベンジルアルコールなどのような芳香族アルコール、メチル又はプロピルパラベンなどのようなアルキルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３−ペンタノール、並びにｍ−クレゾールを含む。
[0051] 「界面活性剤」は、疎水性部分（たとえばアルキル鎖）並びに親水性部分（たとえばカルボキシル基及びカルボキシレート基）の両方を含有する表面活性分子である。界面活性剤は、本発明の製剤に追加されてもよい。本発明の製剤において使用するのに適した界面活性剤は、ポリソルベート（たとえばポリソルベート２０又は８０）；ポロキサマー（たとえばポロキサマー１８８）；ソルビタンエステル及び誘導体；Ｔｒｉｔｏｎ；ラウリル硫酸ナトリウム；オクチルグリコシドナトリウム；ラウリル−、ミリスチル−、リノレイル−、又はステアリル−スルホベタイン；ラウリル−、ミリスチル−、リノレイル−、又はステアリル−サルコシン；リノレイル−、ミリスチル−、又はセチル−ベタイン；ラウラミドプロピル−ココアミドプロピル−、リノールアミドプロピル−、ミリスタミドプロピル−、パルミドプロピル（palmidopropyl）−、又はイソステアラミドプロピルベタイン（たとえばラウロアミドプロピル（lauroamidopropyl））；ミリスタミドプロピル−、パルミドプロピル−、又はイソステアラミドプロピル−ジメチルアミン；ココイルメチルタウリン酸ナトリウム又はメチルオレイルタウリン酸二ナトリウム；並びにMONAQUAT（商標）シリーズ（Mona Industries, Inc.、Paterson、N.J.）、ポリエチレングリコール、ポリプロピルグリコール、及びエチレン及びプロピレングリコールのコポリマー（たとえばプルロニック（登録商標）、ＰＦ６８など）を含むが、これらに限定されない。
体重に無関係な投薬計画
[0052] 少なくとも５００ｍｇの本明細書において記載される二機能性抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子のＢＴＣ患者への投与を伴う体重に無関係な投薬計画を立て、分子についての様々な前臨床及び臨床評価の結果によって特徴づけた。２つの研究が、分子の安全性、耐性、及び薬物動態を調査し、治療された患者の血液から得られた末梢血単核細胞に対するＰＤ−Ｌ１標的占有率の評価並びにＴＧＦβ１、ＴＧＦβ２、及びＴＧＦβ３の濃度の測定を含んだ。これらの評価は、合計３５０人の対象からのデータに基づいた（固形腫瘍における１、３、１０、及び２０ｍｇ／ｋｇの用量漸増コホート並びに選択した腫瘍タイプにおける３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、５００ｍｇ、及び１２００ｍｇの拡大コホート）。
ＰＫ／効能モデル（マウスモデル）
[0053] 実験はまた、腫瘍モデルにおける抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子の効能を決定するためにも行った。ＥＭＴ−６異種移植からの効能結果は、ＰＫ／効能モデルを確立するために使用した。マウスにおける確立されたＰＫモデルは、効能実験設定のために、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ血漿曝露量をシミュレートするために使用した。推定パラメーターを、表１に報告する。推定ＫＣ５０値は、５５．３μｇ／ｍＬであり、この値は、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子の最大の抗腫瘍活性の５０％を実現することができた平均血漿濃度を示す。
[0054] モデルの基本的な診断プロットは、モデル誤設計を明らかにしなかった。モデル予測により、腫瘍容積分布をとらえることができる。条件付き重み付き残差は、傾向（ｔｒｅｎｄ）なしの平均０及び分散１で正規分布する。次いで、ＰＫ／効能モデルは、様々な用量でのヒト予測濃度−時間プロファイルを使用し、腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）をシミュレートするために使用した。
[0055]
Figure 2021528399
ＰＤ−Ｌ１占有率に基づいた応答分析（マウスモデルにおいて）
[0056] 効能実験を使用して、マウスにおける応答について分析し、腫瘍後退又は腫瘍静止のいずれかによってソートし、ＰＫ及びＰＤ−Ｌ１受容体占有率（ＲＯ）を、統合ＰＫ／ＲＯモデルに基づいて予測した。このアプローチは、腫瘍における９５％を上回るＰＤ−Ｌ１ ＲＯに関連する４０及び１００μｇ／ｍＬの間の抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子血漿濃度が、腫瘍後退に達するために必要とされることを実証した。末梢における９５％を上回るＰＤ−Ｌ１ ＲＯに関連する１０及び４０μｇ／ｍＬの間の抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子の血漿濃度は、腫瘍静止に達するために必要とされる。
[0057] マウスにおける応答分析及び予測ＰＫ／ＲＯは、図７Ａ〜７Ｃを導き、これらは、マウスにおける抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子についてのＰＫ／ＲＯ／効能を要約する。ＰＤ−Ｌ１ ＲＯの９５％は、４０μｇ／ｍＬの血漿濃度で実現され、期待／推定ＴＧＩは、わずか約６５％である。４０μｇ／ｍＬを上回る濃度の増加は、腫瘍増殖阻害においてさらなる増加をもたらす。９５％の腫瘍増殖阻害は、約１００μｇ／ｍＬの平均血漿濃度で実現される。
[0058] 下記に記載される母集団ＰＫモデルに基づくと、２週間ごとに１回投与される少なくとも５００ｍｇの均一の用量が、約１００μｇ／ｍＬの平均濃度を維持するために必要とされ、一方、２週間ごとに１回投与される約１２００ｍｇの均一の用量が、約１００μｇ／ｍＬのＣtroughを維持するために必要とされる。ある実施形態では、約１２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ（たとえば約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２１００ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２３００ｍｇ、約２４００ｍｇなど）の本開示のタンパク質産物（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ）が、対象に投与される。ある実施形態では、約１２００ｍｇの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子は、２週間ごとに１回、対象に投与される。ある実施形態では、約１８００ｍｇの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子は、３週間ごとに１回、対象に投与される。
[0059] 実施形態では、約１２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ（たとえば約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２１００ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２３００ｍｇ、約２４００ｍｇなど）の、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物が、ＢＴＣを治療する又は胆道腫瘍増殖を阻害するために対象に投与される。ある実施態様では、約１２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ（たとえば約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２１００ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２３００ｍｇ、約２４００ｍｇなど）の、配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドを含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９、及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物が、ＢＴＣを治療する又は胆道腫瘍増殖を阻害するために対象に投与される。
[0060] ある実施態様では、約１２００ｍｇの、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物が、２週間ごとに１回、ＢＴＣを治療する又は胆道腫瘍増殖を阻害するために対象に投与される。ある実施態様では、約１８００ｍｇの、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物が、３週間ごとに１回、ＢＴＣを治療する又は胆道腫瘍増殖を阻害するために対象に投与される。ある実施形態では、約１２００ｍｇの、配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９、及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むタンパク質産物が、２週間ごとに１回、ＢＴＣを治療する又は胆道腫瘍増殖を阻害するために対象に投与される。ある実施形態では、約１８００ｍｇの、配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９、及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含むタンパク質産物が、３週間ごとに１回、ＢＴＣを治療する又は胆道腫瘍増殖を阻害するために対象に投与される。
体重に無関係な投薬計画の確立
[0061] 臨床及び前臨床データによって報告されるように、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子の投与のための新たな、体重に無関係な投薬計画を、曝露量におけるより少ないばらつきを実現し、投薬ミスを低下させ、用量の調製に必要な時間を低下させ、且つｍｇ／ｋｇ投薬と比較して薬剤浪費を低下させ、したがって好都合な治療成果を得やすくするために作成した。一実施形態によれば、少なくとも５００ｍｇの均一の用量を、患者の体重にかかわらず投与することができる。別の実施形態によれば、少なくとも１２００ｍｇの均一の用量を、患者の体重にかかわらず投与することができる。別の実施形態によれば、１８００ｍｇの均一の用量を、患者の体重にかかわらず投与することができる。ある実施形態によれば、２４００ｍｇの均一の用量を、患者の体重にかかわらず投与することができる。典型的には、そのような用量は、たとえば２週間ごとに１回又は３週間ごとに１回などのように、繰り返し投与されるであろう。たとえば、ＢＴＣを治療する又は胆道腫瘍増殖を阻害するために、１２００ｍｇの均一の用量を２週間ごとに１回投与することができる又は１８００ｍｇの均一の用量を３週間ごとに１回投与することができる又は２４００ｍｇの均一の用量を３週間ごとに１回投与することができる。
ヒトにおける薬物動態（ＰＫ）解析のためのサンプリング
[0062] 抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップの最適な均一の量を決定するための薬物動態解析の例は、下記に記載される実験によって提供される。
[0063] 薬物動態学的（ＰＫ）データ分析のための血清サンプルは、第１の用量のスタートの前に及び第１の用量の後の以下の時点で収集した：１日目の注入直後及び注入のスタートから４時間後；２日目、１日目の注入の終了から少なくとも２４時間後；並びに８日目及び１５日目。選択した続く投薬の時、投与前、注入の終了時、及び注入の終了から２〜８時間後のサンプルを、１５、２９、４３日目に収集した。５７、７１、及び８５日目の後の時点については、投与前のサンプルを収集し、その後、１２週まで６週間ごとに１回のＰＫサンプリング、次いで、１２週間ごとに１回、ＰＫサンプリングを続けた。拡大フェーズでは、まばらなＰＫサンプリングを行った。
[0064] 上記に記載されるＰＫデータは、母集団ＰＫモデルを生成するために及び実行可能な投薬計画のシミュレーションを実行するために使用した。Gastonguay, M., Full Covariate Models as an Alternative to Methods Relying on Statistical Significance for Inferences about Covariate Effects: A Review of Methodology and 42 Case Studies, (2011) p. 20, Abstract 2229において記載される完全アプローチモデルとして知られているモデリング方法を、母集団モデルに対して適用し、データをシミュレーションから得て、以下の特徴を有するパラメーターを得た：線形消失を有する２−コンパートメントＰＫモデル、ＣＬ、Ｖ１、及びＶ２のＩＩＶ、付加及び比例残差の組み合わせ、ＣＬ及びＶ１の完全共変量モデル。以下のベースライン共変量を最終モデルに含めた：年齢、体重、性別、人種、アルブミン、ＣＲＰ、血小板数、ｅＧＦＲ、肝臓の損傷、ＥＣＯＧスコア、腫瘍の大きさ、腫瘍のタイプ、及び生物製剤による以前の治療。本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ）の薬物動態の典型的なパラメーター推定値について以下の推定値を得た：クリアランス（ＣＬ） ０．０１７７Ｌ／時（６．２％）、中央分布容積（Ｖ１） ３．６４Ｌ（８．８１％）、末梢分布容積（Ｖ２） ０．５１３Ｌ（２５．１％）、及びコンパートメント間クリアランス（Ｑ） ０．００２１９Ｌ／時（１７．８％）。患者間の変動は、ＣＬについては２２％、Ｖ１については２０％、Ｖ２については１３５％であった。体重は、ＣＬ及びＶ１の両方と関係のある共変量であった。均一の投薬アプローチを支持するために、本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ）の曝露量変動に対する投薬戦略の影響について調べた。詳細には、シミュレーションは、２週間ごとに１回の１２００ｍｇの均一の投薬アプローチ対２週間ごとに１回の１７．６５ｍｇ／ｋｇ（６８ｋｇの対象については２週間ごとに１回の１２００ｍｇに対応する又は２週間ごとに１回の１５ｍｇ／ｋｇ（８０ｋｇの対象については１２００ｍｇに対応する）のＢＷ調整投薬アプローチを使用し、曝露量分布を比較するために実行した。さらなるシミュレーションは、２週間ごとに１回の５００ｍｇの均一の投薬アプローチ対２週間ごとに１回の７．３５ｍｇ／ｋｇのＢＷ調整投薬アプローチ（６８ｋｇの対象については２週間ごとに１回の５００ｍｇに対応する）を使用し、曝露量分布を比較するために実行した。そのうえ、シミュレーションを、３週間ごとに１回、以下の均一の用量について評価するために実行した：１２００ｍｇ、１４００ｍｇ、１６００ｍｇ、１８００ｍｇ、２０００ｍｇ、２２００ｍｇ、２４００ｍｇ、２６００ｍｇ、２８００ｍｇ、及び３０００ｍｇ。
[0065] シミュレーションのために以下の手法を使用した：Ｎ＝２００セットのパラメーター推定値を、最終ＰＫモデル分散共分散行列を使用して、パラメーター推定値の多変量正規分布から得た。各パラメーター推定値について、２００のＩＩＶ推定値を、＄ＯＭＥＧＡ多変量正規分布から得て、合計４００００（２００×２００）の対象がもたらされた。共変量が一致した４００００セットを生成するために、元のデータセット（Ｎ＝３８０）を置き換えにより再サンプリングし、定常状態曝露量測定基準（ＡＵＣ、Ｃavg、Ｃtrough、及びＣmax）を、それぞれの投薬計画について生成した。
[0066] シミュレーションは、広いＢＷ範囲にわたって、曝露量における変動が、固定投薬と比較してＢＷベースの投薬についてわずかに高いことを示した。６８ｋｇの体重の中央値についての１７．６５ｍｇ／ｋｇ及び１２００ｍｇの均一の用量又は７．３５ｍｇ／ｋｇ及び５００ｍｇの均一の用量の曝露量分布の例をそれぞれ図６Ａ及び図６Ｅに示す。シミュレーションは、さらに、患者集団にわたる体重四分値にわたって曝露量分布における反対の傾向を示した：低体重の患者は、固定投薬でより高い曝露量を有し、高体重の患者は、ＢＷ調整投薬でより高い曝露量を有する。
ヒトにおける効果的な用量／投薬計画の確立：抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップの２週間ごとに１回（ｑ２ｗ）の投薬後の第２選択胆道癌（２Ｌ ＢＴＣ）における予備的用量応答
[0067] 抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップの治療上の効能の例は、下記に記載される臨床試験によって立証される。
[0068] 白金ベース第一選択（「１Ｌ」）治療後に進行した転移性又は局所進行ＢＴＣを有する患者は、進行性の疾患、容認できない毒性、又は離脱が確認されるまで２週間ごとに１回、１２００ｍｇで本開示の抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを受けた。主目的は安全性／耐容性を評価することであった一方、副次的目的は固形癌効果判定基準バージョン１．１（ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１）による最良総合結果（「ＢＯＲ」）の評価を含んだ。腫瘍細胞ＰＤ−Ｌ１発現を判定した（抗体クローン７３−１０；Dako）。
[0069] 解析時のデータカットオフの時点で、治療歴を有するＢＴＣを有する３０人の患者が、８．９週間（範囲、２〜５７．６週間）の持続期間中央値の間、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを受けた。５人の患者が治療を続けた。最もよく見られた治療に関係する有害事象（ＴＲＡＥ）は、発熱、斑状丘疹状皮疹（両方とも１３．３％）、皮疹、及びリパーゼ増加（両方とも１０％）であった。１０人の患者（３３．３％）がグレード≧３のＴＲＡＥを経験した。有害事象に起因する３人の死亡の症例が報告され；１人の死亡は１４回の治療投与後の敗血性ショック（皮膚感染に起因すると思われる菌血症）に起因し、２人の死亡は間質性肺疾患に起因して生じ、一方の患者の死亡は３回投与後の治療中に生じ、別の患者の死亡は最後の投与の６か月後に生じた。６人の患者は確認された客観的奏効率（ＯＲＲ、２０％）を有し、その５人は部分寛解（ＰＲ）を有し、４人は３．９＋、４．２＋、５．５＋、及び６．９＋か月において治療を続け、１人の患者は５．５＋か月において続く完全寛解（ＣＲ）を有した。２人の追加の患者は、継続する臨床的な利益を有した：一方の患者は治療中の１年後に部分寛解（「ＰＲ」）を有し、一方の患者は初回の偽増悪後に７．６＋か月において続くＰＲを有した。ＰＤ−Ｌ１発現によって確認されたＯＲＲは、ＰＤ−Ｌ１＋（≧１％）及びＰＤ−Ｌ１−腫瘍を有する患者においてそれぞれ２５％及び１５．４％であった。
[0070] これらの結果は、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ単剤療法が、３０人の患者の８人（２７％）における長期的な応答を含む、治療歴を有するＢＴＣを有する患者における管理可能な安全性プロファイル及び有望な効能を有したことを実証する。第二選択（「２Ｌ」）治療として観察された抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップのこの有望な活性は、未治療の局所進行又は転移性ＢＴＣ患者において１Ｌ単剤療法又は組み合わせ療法（たとえばゲムシタビン及びシスプラチンとの）として解釈される又は高まることが期待される。
様々な投薬頻度による投薬計画の確立
[0071] 様々な投薬頻度によるデータ投与計画を、それほど頻繁でない投与を可能にするために及び／又は併用薬との投薬スケジュールの調和を可能にするために作成した。詳細には、上記に記載される予備的母集団ＰＫモデリング及びシミュレーション手法を、様々な投薬計画についての曝露量をシミュレートするために及び曝露量に基づいた投与計画を比較するために使用した。
[0072] これらのシミュレーションに基づくと、２週間ごとに１回投与される少なくとも５００ｍｇの均一の用量が、典型的な対象について約１００μｇ／ｍＬの平均濃度を維持するために必要とされ、一方、２週間ごとに１回投与される約１２００ｍｇの均一の用量が、約１００μｇ／ｍＬのＣtroughを維持するために必要とされる。
[0073] シミュレーションに基づくと、Ｃavgについては、２週間ごとに１回の１２００ｍｇが、３週間ごとに１回の１８００ｍｇに等しく、一方、Ｃtroughについては、２週間ごとに１回の１２００ｍｇが、３週間ごとに１回の２４００ｍｇに等しい。また、Ｃavgについては、２週間ごとに１回の５００ｍｇが、３週間ごとに１回の７５０ｍｇに等しく、Ｃtroughについては、２週間ごとに１回の５００ｍｇが、３週間ごとに１回の１，１６７ｍｇに等しい。
[0074] 抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップと３週間ごとに１回のスケジュールで高頻度で投与される全身性化学療法との同時投与のため、２４００ｍｇの３週間ごとに１回の抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップがフェーズ２用量として選択される。３週間ごとに１回の用量の選択のため、定常状態における投薬間隔にわたるＣtrough,ss及び平均濃度は、１２００ｍｇの２週間ごとに１回の投薬について達成されるものと類似すべき又はそれよりも高くあるべきであり、ほとんどの患者が５０μｇ／ｍＬの標的濃度を超えるＣtrough,ssを有するべきである。２４００ｍｇの３週間ごとに１回の投薬による投薬間隔にわたる定常状態濃度中央値は、およそ３２８μｇ／ｍＬであると予測される。１２００ｍｇの２週間ごとに１回の投薬による投薬間隔にわたる定常状態濃度中央値は、およそ２４６μｇ／ｍＬであると予測される。
癌標的としてのＴＧＦβ
[0075] 本開示は、ある腫瘍細胞又は免疫細胞の外部表面に見つけられる細胞免疫チェックポイント受容体を標的にする抗体成分につながれた可溶性サイトカイン受容体（ＴＧＦβＲＩＩ）を使用してＴＧＦβを捕捉することによって、腫瘍微小環境におけるＴＧＦβの局所的な低下を可能にする。免疫チェックポイントタンパク質に対する本開示の抗体成分の例は、抗ＰＤ−Ｌ１である。この二機能性分子は、時に本明細書において「抗体−サイトカイントラップ」と呼ばれ、まさに抗受容体抗体及びサイトカイントラップが物理的に連結されているという理由で、有効である。結果として生じる利点（たとえば別々の分子としての抗体及び受容体の投与に対して）は、部分的には、サイトカインがオートクリン及びパラクリン機能によってたいてい局所的な環境において機能するからである。抗体成分は、サイトカイントラップを、サイトカイントラップが局所的な免疫抑制性のオートクリン又はパラクリン効果を中和することによって非常に有効になり得る腫瘍微小環境に向ける。さらに、抗体の標的が抗体結合に際して内部移行される場合に、サイトカイン／サイトカイン受容体複合体のクリアランスにとって有効なメカニズムが提供される。抗体媒介性の標的内部移行は、ＰＤ−Ｌ１について示され、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップは、抗ＰＤ−Ｌ１と同様の内部移行率を有することが示された。第１に、抗ＴＧＦβ抗体が完全には中和していないかもしれず、そして第２に、抗ＴＧＦβ抗体が、サイトカインの半減期を延ばすキャリヤとして作用し得るので、これは、抗ＴＧＦβ抗体の使用にまさる明確な利点である。
[0076] 実際に、下記に記載されるように、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップによる治療は、腫瘍細胞上のＰＤ−Ｌ１及び免疫細胞上のＰＤ−１の間の相互作用の同時の遮断並びに腫瘍微小環境におけるＴＧＦβの中和により、相乗的な抗腫瘍効果を誘起する。理論によって拘束されないが、これは、おそらく、２つの重大な免疫逃避メカニズムの同時の遮断並びにそのうえ単一の分子実体による腫瘍微小環境におけるＴＧＦβの除去から得られる相乗効果によるものである。この除去は、（１）腫瘍細胞の抗ＰＤ−Ｌ１ターゲティング；（２）ＴＧＦβトラップによる腫瘍微小環境におけるオートクリン／パラクリンＴＧＦβの結合；及び（３）ＰＤ−Ｌ１受容体媒介性のエンドサイトーシスによる結合ＴＧＦβの破壊によって実現される。さらに、Ｆｃ（ＩｇＧの結晶化可能断片）のＣ−末端に融合されたＴＧＦβＲＩＩは、ＦｃのＮ−末端にＴＧＦβＲＩＩを置くＴＧＦβＲＩＩ−Ｆｃよりも数倍強力であった。
[0077] ＴＧＦβは、癌の分子二重人格者としてのその逆説的な役割のために、癌免疫療法において多少疑問の余地のある標的であった（Bierie et al., Nat. Rev. Cancer, 2006; 6:506-20）。他のいくつかのサイトカインのように、ＴＧＦβ活性は発生段階及び状況に依存性である。実際に、ＴＧＦβは、発癌プロモーター又は腫瘍抑制因子として作用することができ、腫瘍イニシエーション、進行、及び転移に影響を与える。ＴＧＦβのこの二重の役割の根底にあるメカニズムは、不明なままである（Yang et al., Trends Immunol. 2010; 31:220-227）。Ｓｍａｄ依存性のシグナル伝達がＴＧＦβシグナル伝達の増殖阻害を媒介し、一方、Ｓｍａｄ非依存性の経路が、その腫瘍促進効果に寄与することが想定されたが、Ｓｍａｄ依存性の経路が腫瘍進行に関係することを示すデータもある（Yang et al., Cancer Res. 2008; 68:9107-11）。
[0078] ＴＧＦβリガンド及び受容体の両方は、治療標的として徹底的に研究されてきた。３つのリガンドアイソフォーム、ＴＧＦβ１、２、及び３があり、これらはすべて、ホモ二量体として存在する。ＴＧＦβ受容体（ＴＧＦβＲ）も３つあり、これらはＴＧＦβＲ Ｉ、ＩＩ、及びＩＩＩ型と呼ばれる（Lopez-Casillas et al., J Cell Biol. 1994; 124:557-68）。ＴＧＦβＲＩは、シグナル伝達鎖であり、リガンドに結合することができない。ＴＧＦβＲＩＩは、高い親和性でリガンドＴＧＦβ１及び３に結合するが、ＴＧＦβ２には結合しない。ＴＧＦβＲＩＩ／ＴＧＦβ複合体は、シグナル伝達複合体を形成するためにＴＧＦβＲＩを動員する（Won et al., Cancer Res. 1999; 59:1273-7）。ＴＧＦβＲＩＩＩは、ＴＧＦβのそのシグナル伝達受容体への結合の正の調節因子であり、３つのＴＧＦβアイソフォームすべてに高い親和性で結合する。細胞表面上で、ＴＧＦβ／ＴＧＦβＲＩＩＩ複合体は、ＴＧＦβＲＩＩに結合し、次いでＴＧＦβＲＩを動員し、ＴＧＦβＲＩは、シグナル伝達複合体を形成するためにＴＧＦβＲＩＩＩにとって代わる。
[0079] ３つの異なるＴＧＦβアイソフォームはすべて、同じ受容体によってシグナル伝達するが、それらは、インビボにおいて違う発現パターン及び重複しない機能を有することが知られている。３つの異なるＴＧＦ−βアイソフォームノックアウトマウスは、異なる表現型を有し、多数の非代償性の機能であることを示す（Bujak et al., Cardiovasc Res. 2007; 74:184-95）。ＴＧＦβ１ヌルマウスは、造血及び脈管形成の欠損を有し、ＴＧＦβ３ヌルマウスは、肺疾患の発症及び口蓋発生（palatogenesis）の欠損を表すが、ＴＧＦβ２ヌルマウスは、様々な発生異常を示し、複数の心奇形が最も顕著である（Bartram et al., Circulation. 2001; 103:2745-52; Yamagishi et al., Anat Rec. 2012; 295:257-67）。さらに、ＴＧＦβは、虚血及び再灌流傷害の後の心筋の損傷の修復において重大な役割を果たすことが示されている。成人の心臓では、心筋細胞は、ＴＧＦβを分泌し、これは、自発的な拍動数を維持するためにオートクリンとして作用する。重要なことには、心筋細胞によって分泌されるＴＧＦβの７０〜８５％は、ＴＧＦβ２である（Roberts et al., J Clin Invest. 1992; 90:2056-62）。ＴＧＦβＲＩキナーゼ阻害剤による治療によって持ち上がった心毒性の問題にもかかわらず、本発明の出願人らは、サルにおいて、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップについて、心毒性を含む毒性がないことを観察した。
[0080] ＴＧＦβを中和するための治療上のアプローチは、可溶性の受容体トラップ及び中和抗体としてＴＧＦβ受容体の細胞外ドメインを使用することを含む。受容体トラップアプローチのうちで、可溶性のＴＧＦβＲＩＩＩが３つのＴＧＦβリガンドすべてに結合するので、可溶性のＴＧＦβＲＩＩＩが分かり切った選択肢のように思われるかもしれない。しかしながら、７６２アミノ酸残基の細胞外ドメインを有する２８０〜３３０ｋＤグルコサミノグリカン（ＧＡＧ）−糖タンパク質として天然に存在するＴＧＦβＲＩＩＩは、生物療法（biotherapeutic）の開発にとって非常に複雑なタンパク質である。ＧＡＧを欠く可溶性のＴＧＦβＲＩＩＩは、昆虫細胞において産生することができ、強力なＴＧＦβ中和剤であることが示された(Vilchis-Landeros et al, Biochem J., (2001),355:215)。ＴＧＦβＲＩＩＩの２つの別々の結合ドメイン（エンドグリンに関係する及びウロモジュリンに関係する）は、独立して発現させることができたが、それらは、可溶性のＴＧＦβＲＩＩＩよりも２０〜１００倍低い親和性及びはるかに小さな中和活性を有することが示された（Mendoza et al., Biochemistry. 2009; 48:11755-65）。他方では、ＴＧＦβＲＩＩの細胞外ドメインは、長さがわずか１３６のアミノ酸残基であり、２５〜３５ｋＤのグリコシル化タンパク質として産生することができる。組換え可溶性ＴＧＦβＲＩＩは、２００ｐＭのＫDでＴＧＦβ１に結合することがさらに示され、これは、細胞上の完全長ＴＧＦβＲＩＩに対する５０ｐＭのＫDにかなり類似している（Lin et al., J. Biol. Chem. (1995); 270:2747-54）。可溶性のＴＧＦβＲＩＩ−Ｆｃは、抗癌剤として試験され、腫瘍モデルにおいて確立されたマウス悪性中皮腫増殖を阻害することが示された（Suzuki et al., Clin. Cancer Res., (2004); 10:5907-18）。ＴＧＦβＲＩＩは、ＴＧＦβ２に結合せず、ＴＧＦβＲＩＩＩは、ＴＧＦβＲＩＩよりも低い親和性でＴＧＦβ１及び３に結合するので、ＴＧＦβＲＩＩＩのエンドグリンドメイン及びＴＧＦβＲＩＩの細胞外ドメインの融合タンパク質が、細菌において産生され、細胞ベースのアッセイにおいて、ＴＧＦβＲＩＩ又はＲＩＩＩのいずれかよりも有効に、ＴＧＦβ１及び２のシグナル伝達を阻害することが示された（Verona et al., Protein Eng'g Des. Sel. (2008); 21:463-73）。
[0081] ＴＧＦβリガンドの３つのアイソフォームをすべて中和するさらに別のアプローチは、全部を中和する（pan-neutralizing）抗ＴＧＦβ抗体又はＴＧＦβ１、２、及び３への結合から受容体を遮断する抗受容体抗体についてスクリーニングすることである。ＴＧＦβのすべてのアイソフォームに対して特異的なヒト抗体であるＧＣ１００８は、進行悪性黒色腫又は腎細胞癌を有する患者においてフェーズＩ／ＩＩの研究中であった(Morris et al., J. Clin. Oncol. (2008); 26:9028 (Meeting abstract))。治療は安全で、十分に耐容性を示すことがわかったが、限られた臨床上の効能しか観察されず、よって、免疫学的効果のさらなる特徴付けなしで抗ＴＧＦβ療法の重要性を説明するのは困難であった（Flavell et al., Nat. Rev. Immunol. (2010); 10:554-67）。さらに、ＴＧＦβアイソフォーム特異的抗体が臨床において試験された。ＴＧＦβ１に対して特異的な抗体であるメテリムマブは、緑内障手術に対して過度の術後の瘢痕を予防する治療としてフェーズ２臨床試験において試験され、また、ＴＧＦβ２に対して特異的な抗体であるレルデリムマブは、フェーズ３研究において眼の手術の後の瘢痕の改善について安全であるが、効果がないことがわかった（Khaw et al., Ophthalmology (2007); 114:1822-1830）。抗ヒトＴＧＦβＲＩＩ抗体ＴＲ１及び抗マウスＴＧＦβＲＩＩ抗体ＭＴ１などのような、３つすべてのＴＧＦβアイソフォームへの結合から受容体を遮断する抗ＴＧＦβＲＩＩ抗体もまた、マウスモデルにおいて、原発性腫瘍増殖及び転移に対するいくらかの治療上の効能を示した（Zhong et al., Clin. Cancer Res. (2010); 16:1191-205）。しかしながら、抗体ＴＲ１（ＬＹ３０２２８５９）の最近のフェーズＩの研究において、２５ｍｇ（均一の用量）を超える用量漸増は、予防的な治療にもかかわらず、サイトカイン放出のコントロール不良により、安全でないと見なされた（Tolcher et al., Cancer Chemother. Pharmacol. (2017); 79:673-680）。現在までのところ、かなり毒性であることが多い、ＴＧＦβシグナル伝達の小分子阻害剤を含むＴＧＦβ標的抗癌治療に関する研究の大部分は、多くは、前臨床ステージにあり、得られた抗腫瘍効能は、限られている（Calone et al., Exp Oncol. (2012); 34:9-16; Connolly et al., Int. J. Biol. Sci. (2012); 8:964-78）。
[0082] 本開示の抗体−ＴＧＦβトラップは、ＴＧＦβに結合することができるヒトＴＧＦβ受容体ＩＩ（ＴＧＦβＲＩＩ）の少なくとも一部分を含有する二機能性タンパク質である。ある実施形態では、ＴＧＦβトラップポリペプチドは、ＴＧＦβに結合することができるヒトＴＧＦβ受容体２型アイソフォームＡ（配列番号８）の可溶性の部分である。ある実施形態では、ＴＧＦβトラップポリペプチドは、配列番号８の少なくともアミノ酸７３〜１８４を含有する。ある実施形態では、ＴＧＦβトラップポリペプチドは、配列番号８のアミノ酸２４〜１８４を含有する。ある実施形態では、ＴＧＦβトラップポリペプチドは、ＴＧＦβに結合することができるヒトＴＧＦβ受容体２型アイソフォームＢ（配列番号９）の可溶性の部分である。ある実施形態では、ＴＧＦβトラップポリペプチドは、配列番号９の少なくともアミノ酸４８〜１５９を含有する。ある実施形態では、ＴＧＦβトラップポリペプチドは、配列番号９のアミノ酸２４〜１５９を含有する。ある実施形態では、ＴＧＦβトラップポリペプチドは、配列番号９のアミノ酸２４〜１０５を含有する。
作用メカニズム
[0083] 治療抗体による脱阻害のためにＴ細胞阻害チェックポイントを標的にするアプローチは、精力的に調査されているエリアである（概説についてはPardoll, Nat Rev Cancer. (2012); 12:253-264を参照）。あるアプローチでは、抗体成分又はその抗原結合断片は、たとえばＣＴＬＡ−４、ＰＤ−１、ＢＴＬＡ、ＬＡＧ−３、ＴＩＭ−３、又はＬＡＩＲ１などのような、Ｔ細胞上のＴ細胞阻害チェックポイント受容体タンパク質を標的にする。別のアプローチでは、抗体成分は、たとえばＰＤ−Ｌ１（Ｂ７−Ｈ１）、Ｂ７−ＤＣ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ−４、Ｂ７−Ｈ３、又はＢ７−Ｈ４などのような、抗原提示細胞及び腫瘍細胞（それら自体の免疫回避のためにこれらのカウンターレセプターのうちのいくつかを利用する）上のカウンターレセプターを標的にする。
[0084] 本開示は、抗体成分又はその抗原結合断片により、脱阻害のためにＴ細胞阻害チェックポイントを標的にする抗体ＴＧＦβトラップを企図する。その目的のために、出願人らは、ＴＧＦβトラップを、抗ＰＤ−１、抗ＰＤ−Ｌ１、抗ＴＩＭ−３、及び抗ＬＡＧ３などのような様々なＴ細胞阻害チェックポイント受容体タンパク質を標的にする抗体と組み合わせることについての抗腫瘍効能を試験した。
[0085] プログラム死１（ＰＤ−１）／ＰＤ−Ｌ１軸は、腫瘍免疫回避にとって重要なメカニズムである。長期にわたって抗原を検知し続けているエフェクターＴ細胞は、ＰＤ−１発現によって特徴づけられる、疲弊した表現型を持つようになり、このような状況下で、腫瘍細胞は、ＰＤ−Ｌ１をアップレギュレートすることによって交戦してくる。そのうえ、腫瘍微小環境では、骨髄系細胞、マクロファージ、実質細胞、及びＴ細胞は、ＰＤ−Ｌ１をアップレギュレートする。軸の遮断は、これらのＴ細胞におけるエフェクター機能を回復させる。抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップはまた、ＴＧＦβ（１、２、及び３アイソフォーム）にも結合し、これは、アポトーシス性好中球、骨髄由来抑制細胞、Ｔ細胞、及び腫瘍を含む細胞によって腫瘍微小環境において産生される阻害性サイトカインである。可溶性のＴＧＦβＲＩＩによるＴＧＦβの阻害は、ＣＤ８＋Ｔ細胞抗腫瘍効果の増加に関連する仕方で悪性中皮腫を低下させた。活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＴｒｅｇ細胞によって産生されるＴＧＦβ１の欠如は、腫瘍増殖を阻害し、自然発生癌からマウスを保護することが示された。したがって、ＴＧＦβは、腫瘍免疫回避にとって重要と思われる。
[0086] ＴＧＦβは、正常な上皮細胞に対して増殖阻害効果を有し、上皮細胞ホメオスタシスの調節因子として機能し、またＴＧＦβは、初期の発癌現象の間は腫瘍抑制因子として作用する。腫瘍が悪性疾患の方へ進行すると、腫瘍に対するＴＧＦβの増殖阻害効果は、１つ以上のＴＧＦβ経路シグナル伝達構成成分における突然変異を介して又は腫瘍形成性の再プログラムによって失われる。ＴＧＦβ阻害に対する感受性の損失と同時に、腫瘍は、高レベルのＴＧＦβを産生し続け、次いで、これは、腫瘍増殖を促進する役目を果たす。ＴＧＦβサイトカインは、様々な癌のタイプで過剰発現され、腫瘍ステージと相関性がある。腫瘍細胞自体、未成熟骨髄系細胞、調節性Ｔ細胞、及び間質性線維芽細胞を含む腫瘍微小環境における多くのタイプの細胞が、ＴＧＦβを産生し、これらの細胞は、集団的に、細胞外マトリックス中にＴＧＦβの大きな貯蔵所を生成する。ＴＧＦβシグナル伝達は、転移を促進し、血管新生を刺激し、自然免疫及び適応抗腫瘍免疫を抑制することによって腫瘍進行に寄与する。広く免疫抑制性の因子として、ＴＧＦβは、活性化された細胞障害性Ｔ細胞及びＮＫ細胞のエフェクター機能を直接ダウンレギュレートし、ナイーブＣＤ４＋Ｔ細胞の免疫抑制性調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）表現型への分化を強力に誘発する。そのうえ、ＴＧＦβは、マクロファージ及び好中球を、免疫抑制性のサイトカインの産生に関連する創傷治癒表現型に極性化する。治療上の戦略として、ＴＧＦβ活性の中和は、有効な抗腫瘍免疫を回復させ、転移を遮断し、血管新生を阻害することによって、腫瘍増殖をコントロールする可能性を有する。
[0087] これらの経路、ＰＤ−１又はＰＤ−Ｌ１、及びＴＧＦβを組み合わせることは、抗腫瘍アプローチとして魅力的である。同時に起こるＰＤ−１及びＴＧＦβの遮断は、炎症促進性のサイトカインを回復させることができる。抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップは、たとえば、完全ヒトＩｇＧ１抗ＰＤ−Ｌ１抗体のそれぞれの重鎖のＣ末端にグリシン／セリンリンカーを介して共有結合されたヒトＴＧＦβ受容体ＴＧＦβＲＩＩの細胞外ドメインを含む。応答は明らかであるが、効果量を増加させる余地がある抗ＰＤ−１／ＰＤ−Ｌ１クラスについての明らかになりつつある状況を考慮すれば、補足的な免疫調整ステップを共標的にすることは腫瘍応答を改善するであろうということが仮定される。類似するＴＧＦ標的作用物質であるフレソリムマブは、ＴＧＦβ１、２、及び３を標的にするモノクローナル抗体であり、黒色腫を有する対象におけるフェーズＩ治験において腫瘍応答の最初の証拠を示した。
[0088] 本開示は、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ（トラップコントロール「抗ＰＤＬ−１（ｍｕｔ）／ＴＧＦβトラップ」）のＴＧＦβＲＩＩ部分が抗腫瘍活性を誘起することを実証した実験を提供する。たとえば、Ｄｅｔｒｏｉｔ５６２ヒト咽頭癌モデルにおける皮下移植後に、抗ＰＤ−Ｌ１（ｍｕｔ）／ＴＧＦβトラップは、２５μｇ、７６μｇ、又は２２８μｇで投与された場合に、腫瘍容積において用量依存的な低下を誘起した（図５）。
[0089] 本開示は、本開示のタンパク質が、ＰＤ−Ｌ１及びＴＧＦβの両方に同時に結合することを実証した実験を提供する（図２）。
[0090] 本開示は、本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ）が、インビトロにおいてＰＤ−Ｌ１及びＴＧＦβに依存性のシグナル伝達を阻害することを実証した実験を提供する。本開示は、本開示のタンパク質が、超抗原刺激後のＩＬ−２誘発アッセイによって測定されるように、ＰＤ−Ｌ１媒介性の免疫阻害の遮断を介してインビトロにおけるＴ細胞エフェクター機能を高めることを実証した実験を提供する（図３）。およそ１００ｎｇ／ｍｌで、本開示のタンパク質は、インビトロにおいてＩＬ−２レベルの劇的な増加を誘発した（図３）。
[0091] 本開示は、本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ）が、インビボにおいて血液からのＴＧＦβの除去を引き起こすことを実証した実験を提供する。５５μｇ又は１６４μｇ又は４９２μｇの本開示のタンパク質によるＪＨマウスにおける同所移植ＥＭＴ−６乳癌細胞の治療は、ＴＧＦβ１（図４Ａ）、ＴＧＦβ２（図４Ｂ）、及びＴＧＦβ３（図４Ｃ）の効率的で特異的な除去をもたらした。さらに、本開示は、本開示のタンパク質が、ＰＤ−Ｌ１標的をふさぎ、本開示のタンパク質が、ＥＭＴ−６腫瘍系における受容体結合モデルにあてはまるという考えを支持することを実証した実験を提供する（図４Ｄ）。
[0092] 本開示は、本開示のタンパク質が、ＰＤ−Ｌ１及びＴＧＦβに効率的に、特異的に、且つ同時に結合し、様々なマウスモデルにおいて強力な抗腫瘍活性を持ち、腫瘍増殖及び転移を抑制する並びに生存期間を延ばし、長期的な防御抗腫瘍免疫を与えることを実証した実験を提供する。
抗ＰＤ−Ｌ１抗体
[0093] 本開示の抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子は、当技術分野において記載される任意の抗ＰＤ−Ｌ１抗体又はその抗原結合断片を含むことができる。抗ＰＤ−Ｌ１抗体、たとえば２９Ｅ２Ａ３抗体（Biolegend、カタログ番号３２９７０１）は、市販で入手可能である。抗体は、モノクローナル、キメラ、ヒト化、又はヒト抗体とすることができる。抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ及びＦｖ断片を含み、これらは、下記にさらに詳細に記載される。
[0094] 例示的な抗体は、国際公開第２０１３／０７９１７４号において記載される。これらの抗体は、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３配列を含む重鎖可変領域ポリペプチドを含むことができ、
（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１配列は、Ｘ1ＹＸ2ＭＸ3（配列番号２１）であり、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２配列は、ＳＩＹＰＳＧＧＸ4ＴＦＹＡＤＸ5ＶＫＧ（配列番号２２）であり、
（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３配列は、ＩＫＬＧＴＶＴＴＶＸ6Ｙ（配列番号２３）であり、
さらにＸ1は、Ｋ、Ｒ、Ｔ、Ｑ、Ｇ、Ａ、Ｗ、Ｍ、Ｉ、又はＳであり、Ｘ2は、Ｖ、Ｒ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、又はＩであり、Ｘ3は、Ｈ、Ｔ、Ｎ、Ｑ、Ａ、Ｖ、Ｙ、Ｗ、Ｆ、又はＭであり、Ｘ4は、Ｆ又はＩであり、Ｘ5は、Ｓ又はＴであり、Ｘ6は、Ｅ又はＤである。
[0095] 一実施形態では、Ｘ1は、Ｍ、Ｉ、又はＳであり、Ｘ2は、Ｒ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、又はＩであり、Ｘ3は、Ｆ又はＭであり、Ｘ4は、Ｆ又はＩであり、Ｘ5は、Ｓ又はＴであり、Ｘ6は、Ｅ又はＤである。
[0096] 別の実施形態では、Ｘ1は、Ｍ、Ｉ、又はＳであり、Ｘ2は、Ｌ、Ｍ、又はＩであり、Ｘ3は、Ｆ又はＭであり、Ｘ4は、Ｉであり、Ｘ5は、Ｓ又はＴであり、Ｘ6は、Ｄである。
[0097] さらに別の実施形態ではＸ1は、Ｓであり、Ｘ2は、Ｉであり、Ｘ3は、Ｍであり、Ｘ4は、Ｉであり、Ｘ5は、Ｔであり、Ｘ6は、Ｄである。
[0098] 別の態様では、ポリペプチドは、式：（ＨＣ−ＦＲ１）−（ＨＶＲ−Ｈ１）−（ＨＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｈ２）−（ＨＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｈ３）−（ＨＣ−ＦＲ４）によるＨＶＲの間に並べられた可変領域重鎖フレームワーク配列をさらに含む。
[0099] さらに別の態様では、フレームワーク配列は、ヒトコンセンサスフレームワーク配列又はヒト生殖細胞系列フレームワーク配列に由来する。
[0100] さらなる態様では、フレームワーク配列の少なくとも１つは、以下のとおり：
ＨＣ−ＦＲ１は、ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号２４）であり、
ＨＣ−ＦＲ２は、ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳ（配列番号２５）であり、
ＨＣ−ＦＲ３は、ＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号２６）であり、
ＨＣ−ＦＲ４は、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２７）である。
[0101] さらなる態様では、重鎖ポリペプチドは、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む可変領域軽鎖とさらに組み合わせられ、
（ａ）ＨＶＲ−Ｌ１配列は、ＴＧＴＸ7Ｘ8ＤＶＧＸ9ＹＮＹＶＳ（配列番号２８）であり、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｌ２配列は、Ｘ10ＶＸ11Ｘ12ＲＰＳ（配列番号２９）であり、
（ｃ）ＨＶＲ−Ｌ３配列は、ＳＳＸ13ＴＸ14Ｘ15Ｘ16Ｘ17ＲＶ（配列番号３０）であり、
さらにＸ7は、Ｎ又はＳであり、Ｘ8は、Ｔ、Ｒ、又はＳであり、Ｘ9は、Ａ又はＧであり、Ｘ10は、Ｅ又はＤであり、Ｘ11は、Ｉ、Ｎ、又はＳであり、Ｘ12は、Ｄ、Ｈ、又はＮであり、Ｘ13は、Ｆ又はＹであり、Ｘ14は、Ｎ又はＳであり、Ｘ15は、Ｒ、Ｔ、又はＳであり、Ｘ16は、Ｇ又はＳであり、Ｘ17は、Ｉ又はＴである。
[0102] 他の実施形態では、Ｘ7は、Ｎ又はＳであり、Ｘ8は、Ｔ、Ｒ、又はＳであり、Ｘ9は、Ａ又はＧであり、Ｘ10は、Ｅ又はＤであり、Ｘ11は、Ｎ又はＳであり、Ｘ12は、Ｎであり、Ｘ13は、Ｆ又はＹであり、Ｘ14は、Ｓであり、Ｘ15は、Ｓであり、Ｘ16は、Ｇ又はＳであり、Ｘ17は、Ｔである。
[0103] さらに別の実施形態ではＸ7は、Ｓであり、Ｘ8は、Ｓであり、Ｘ9は、Ｇであり、Ｘ10は、Ｄであり、Ｘ11は、Ｓであり、Ｘ12は、Ｎであり、Ｘ13は、Ｙであり、Ｘ14は、Ｓであり、Ｘ15は、Ｓであり、Ｘ16は、Ｓであり、Ｘ17は、Ｔである。
[0104] さらなる態様では、軽鎖は、式：（ＬＣ−ＦＲ１ＭＨＶＲ−Ｌ１）−（ＬＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｌ２）−（ＬＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｌ３）−（ＬＣ−ＦＲ４）によるＨＶＲの間に並べられた可変領域軽鎖フレームワーク配列をさらに含む。
[0105] さらなる態様では、軽鎖フレームワーク配列は、ヒトコンセンサスフレームワーク配列又はヒト生殖細胞系列フレームワーク配列に由来する。
[0106] さらなる態様では、軽鎖フレームワーク配列は、ラムダ軽鎖配列である。
[0107] さらなる態様では、フレームワーク配列の少なくとも１つは、以下のとおり：
ＬＣ−ＦＲ１は、ＱＳＡＬＴＱＰＡＳＶＳＧＳＰＧＱＳＩＴＩＳＣ（配列番号３１）であり、
ＬＣ−ＦＲ２は、ＷＹＱＱＨＰＧＫＡＰＫＬＭＩＹ（配列番号３２）であり、
ＬＣ−ＦＲ３は、ＧＶＳＮＲＦＳＧＳＫＳＧＮＴＡＳＬＴＩＳＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣ（配列番号３３）であり、
ＬＣ−ＦＲ４は、ＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬ（配列番号３４）である。
[0108] 別の実施形態では、本開示は、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体又は抗原結合断片を提供し、
（ａ）重鎖は、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含み、さらに（ｉ）ＨＶＲ−Ｈ１配列は、Ｘ1ＹＸ2ＭＸ3（配列番号２１）であり、（ｉｉ）ＨＶＲ−Ｈ２配列は、ＳＩＹＰＳＧＧＸ4ＴＦＹＡＤＸ5ＶＫＧ（配列番号２２）であり、（ｉｉｉ）ＨＶＲ−Ｈ３配列は、ＩＫＬＧＴＶＴＴＶＸ6Ｙ（配列番号２３）であり、
（ｂ）軽鎖は、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含み、さらに（ｉｖ）ＨＶＲ−Ｌ１配列は、ＴＧＴＸ7Ｘ8ＤＶＧＸ9ＹＮＹＶＳ（配列番号２８）であり、（ｖ）ＨＶＲ−Ｌ２配列は、Ｘ10ＶＸ11Ｘ12ＲＰＳ（配列番号２９）であり、（ｖｉ）ＨＶＲ−Ｌ３配列は、ＳＳＸ13ＴＸ14Ｘ15Ｘ16Ｘ17ＲＶ（配列番号３０）であり、Ｘ1は、Ｋ、Ｒ、Ｔ、Ｑ、Ｇ、Ａ、Ｗ、Ｍ、Ｉ、又はＳであり、Ｘ2は、Ｖ、Ｒ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、又はＩであり、Ｘ3は、Ｈ、Ｔ、Ｎ、Ｑ、Ａ、Ｖ、Ｙ、Ｗ、Ｆ、又はＭであり、Ｘ4は、Ｆ又はＩであり、Ｘ5は、Ｓ又はＴであり、Ｘ6は、Ｅ又はＤであり、Ｘ7は、Ｎ又はＳであり、Ｘ8は、Ｔ、Ｒ、又はＳであり、Ｘ9は、Ａ又はＧであり、Ｘ10は、Ｅ又はＤであり、Ｘ11は、Ｉ、Ｎ、又はＳであり、Ｘ12は、Ｄ、Ｈ、又はＮであり、Ｘ13は、Ｆ又はＹであり、Ｘ14は、Ｎ又はＳであり、Ｘ15は、Ｒ、Ｔ、又はＳであり、Ｘ16は、Ｇ又はＳであり、Ｘ17は、Ｉ又はＴである。
[0109] 一実施形態では、Ｘ1は、Ｍ、Ｉ、又はＳであり、Ｘ2は、Ｒ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、又はＩであり、Ｘ3は、Ｆ又はＭであり、Ｘ4は、Ｆ又はＩであり、Ｘ5は、Ｓ又はＴであり、Ｘ6は、Ｅ又はＤであり、Ｘ7は、Ｎ又はＳであり、Ｘ8は、Ｔ、Ｒ、又はＳであり、Ｘ9は、Ａ又はＧであり、Ｘ10は、Ｅ又はＤであり、Ｘ11は、Ｎ又はＳであり、Ｘ12は、Ｎであり、Ｘ13は、Ｆ又はＹであり、Ｘ14は、Ｓであり、Ｘ15は、Ｓであり、Ｘ16は、Ｇ又はＳであり、Ｘ17は、Ｔである。
[0110] 他の実施形態では、Ｘ1は、Ｍ、Ｉ、又はＳであり、Ｘ2は、Ｌ、Ｍ、又はＩであり、Ｘ3は、Ｆ又はＭであり、Ｘ4は、Ｉであり、Ｘ5は、Ｓ又はＴであり、Ｘ6は、Ｄであり、Ｘ7は、Ｎ又はＳであり、Ｘ8は、Ｔ、Ｒ、又はＳであり、Ｘ9は、Ａ又はＧであり、Ｘ10は、Ｅ又はＤであり、Ｘ11は、Ｎ又はＳであり、Ｘ12は、Ｎであり、Ｘ13は、Ｆ又はＹであり、Ｘ14は、Ｓであり、Ｘ15は、Ｓであり、Ｘ16は、Ｇ又はＳであり、Ｘ17は、Ｔである。
[0111] さらに別の実施形態では、Ｘ1は、Ｓであり、Ｘ2は、Ｉであり、Ｘ3は、Ｍであり、Ｘ4は、Ｉであり、Ｘ5は、Ｔであり、Ｘ6は、Ｄであり、Ｘ7は、Ｓであり、Ｘ8は、Ｓであり、Ｘ9は、Ｇであり、Ｘ10は、Ｄであり、Ｘ11は、Ｓであり、Ｘ12は、Ｎであり、Ｘ13は、Ｙであり、Ｘ14は、Ｓであり、Ｘ15は、Ｓであり、Ｘ16は、Ｓであり、Ｘ17は、Ｔである。
[0112] さらなる態様では、重鎖可変領域は、（ＨＣ−ＦＲ１）−（ＨＶＲ−Ｈ１）−（ＨＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｈ２）−（ＨＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｈ３）−（ＨＣ−ＦＲ４）のようにＨＶＲの間に並べられた１つ以上のフレームワーク配列を含み、軽鎖可変領域は、（ＬＣ−ＦＲ１ ＭＨＶＲ−Ｌ１）−（ＬＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｌ２）−（ＬＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｌ３）−（ＬＣ−ＦＲ４）のようにＨＶＲの間に並べられた１つ以上のフレームワーク配列を含む。
[0113] さらなる態様では、フレームワーク配列は、ヒトコンセンサスフレームワーク配列又はヒト生殖細胞系列配列に由来する。
[0114] さらなる態様では、重鎖フレームワーク配列の１つ以上は、以下のとおり：
ＨＣ−ＦＲ１は、ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号２４）であり、
ＨＣ−ＦＲ２は、ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳ（配列番号２５）であり、
ＨＣ−ＦＲ３は、ＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号２６）であり、
ＨＣ−ＦＲ４は、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２７）である。
[0115] さらなる態様では、軽鎖フレームワーク配列は、ラムダ軽鎖配列である。
[0116] さらなる態様では、軽鎖フレームワーク配列の１つ以上は、以下のとおり：
ＬＣ−ＦＲ１は、ＱＳＡＬＴＱＰＡＳＶＳＧＳＰＧＱＳＩＴＩＳＣ（配列番号３１）であり、
ＬＣ−ＦＲ２は、ＷＹＱＱＨＰＧＫＡＰＫＬＭＩＹ（配列番号３２）であり、
ＬＣ−ＦＲ３は、ＧＶＳＮＲＦＳＧＳＫＳＧＮＴＡＳＬＴＩＳＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣ（配列番号３３）であり、
ＬＣ−ＦＲ４は、ＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬ（配列番号３４）である。
[0117] さらなる態様では、重鎖可変領域ポリペプチド、抗体、又は抗体断片は、少なくとも１つのＣH１ドメインをさらに含む。
[0118] より特定の態様では、重鎖可変領域ポリペプチド、抗体、又は抗体断片は、ＣH１、ＣH２、及びＣH３ドメインをさらに含む。
[0119] さらなる態様では、可変領域軽鎖、抗体、又は抗体断片は、ＣLドメインをさらに含む。
[0120] さらなる態様では、抗体は、ＣH１、ＣH２、ＣH３、及びＣLドメインをさらに含む。
[0121] さらに特定の態様では、抗体は、ヒト又はマウス定常領域をさらに含む。
[0122] さらなる態様では、ヒト定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４からなる群から選択される。
[0123] さらに特定の態様では、ヒト又はマウス定常領域は、ｌｇＧ１である。
[0124] さらに別の実施形態では、本開示は、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体を特徴づけ、
（ａ）重鎖は、それぞれＳＹＩＭＭ（配列番号３５）、ＳＩＹＰＳＧＧＩＴＦＹＡＤＴＶＫＧ（配列番号３６）、及びＩＫＬＧＴＶＴＴＶＤＹ（配列番号３７）に対して少なくとも８０％の全体的な配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含み、
（ｂ）軽鎖は、それぞれＴＧＴＳＳＤＶＧＧＹＮＹＶＳ（配列番号３８）、ＤＶＳＮＲＰＳ（配列番号３９）、及びＳＳＹＴＳＳＳＴＲＶ（配列番号４０）に対して少なくとも８０％の全体的な配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む。
[0125] 特定の態様では、配列同一性は、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％である。
[0126] さらに別の実施形態では、本開示は、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体を特徴づけ、
（ａ）重鎖は、それぞれＭＹＭＭＭ（配列番号４１）、ＳＩＹＰＳＧＧＩＴＦＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号４２）、及びＩＫＬＧＴＶＴＴＶＤＹ（配列番号３７）に対して少なくとも８０％の全体的な配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３を含み、
（ｂ）軽鎖は、それぞれＴＧＴＳＳＤＶＧＡＹＮＹＶＳ（配列番号４３）、ＤＶＳＮＲＰＳ（配列番号３９）、及びＳＳＹＴＳＳＳＴＲＶ（配列番号４０）に対して少なくとも８０％の全体的な配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３を含む。
[0127] 特定の態様では、配列同一性は、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％である。
[0128] さらなる態様では、本開示による抗体又は抗体断片において、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３の配列と比較して、少なくとも、以下のとおり下線を引くことによって強調されるアミノ酸は、不変のままであり：
（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１において
Figure 2021528399
 、
（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２において
Figure 2021528399
 、
（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３において
Figure 2021528399
 、さらに、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３の配列と比較して、少なくとも、以下のとおり下線を引くことによって強調されるアミノ酸は、不変のままである：
（ａ）ＨＶＲ−Ｌ１ ＴＧＴＳＳＤＶＧＧＹＮＹＶＳ（配列番号３８）
（ｂ）ＨＶＲ−Ｌ２
Figure 2021528399
 （ｃ）ＨＶＲ−Ｌ３
Figure 2021528399
 。
[0129] 別の態様では、重鎖可変領域は、（ＨＣ−ＦＲ１）−（ＨＶＲ−Ｈ１）−（ＨＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｈ２）−（ＨＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｈ３）−（ＨＣ−ＦＲ４）のようにＨＶＲの間に並べられた１つ以上のフレームワーク配列を含み、軽鎖可変領域は、（ＬＣ−ＦＲ１）−（ＨＶＲ−Ｌ１）−（ＬＣ−ＦＲ２）−（ＨＶＲ−Ｌ２）−（ＬＣ−ＦＲ３）−（ＨＶＲ−Ｌ３）−（ＬＣ−ＦＲ４）のようにＨＶＲの間に並べられた１つ以上のフレームワーク配列を含む。
[0130] さらに別の態様では、フレームワーク配列は、ヒト生殖細胞系列配列に由来する。
[0131] さらなる態様では、重鎖フレームワーク配列の１つ以上は、以下のとおり：
ＨＣ−ＦＲ１は、ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号２４）であり、
ＨＣ−ＦＲ２は、ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳ（配列番号２５）であり、
ＨＣ−ＦＲ３は、ＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号２６）であり、
ＨＣ−ＦＲ４は、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２７）である。
[0132] さらなる態様では、軽鎖フレームワーク配列は、ラムダ軽鎖配列に由来する。
[0133] さらなる態様では、軽鎖フレームワーク配列の１つ以上は、以下のとおり：
ＬＣ−ＦＲ１は、ＱＳＡＬＴＱＰＡＳＶＳＧＳＰＧＱＳＩＴＩＳＣ（配列番号３１）であり、
ＬＣ−ＦＲ２は、ＷＹＱＱＨＰＧＫＡＰＫＬＭＩＹ（配列番号３２）であり、
ＬＣ−ＦＲ３は、ＧＶＳＮＲＦＳＧＳＫＳＧＮＴＡＳＬＴＩＳＧＬＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣ（配列番号３３）であり、
ＬＣ−ＦＲ４は、ＦＧＴＧＴＫＶＴＶＬ（配列番号３４）である。
[0134] さらに特定の態様では、抗体は、ヒト又はマウス定常領域をさらに含む。
[0135] さらなる態様では、ヒト定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４からなる群から選択される。
[0136] ある実施形態では、本開示は、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体を特徴づけ、
（ａ）重鎖配列は、重鎖配列：
Figure 2021528399
 に対して少なくとも８５％の配列同一性を有し、及び
（ｂ）軽鎖配列は、軽鎖配列：
Figure 2021528399
 に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する。
[0137] 様々な実施形態では、重鎖配列は、配列番号４４に対して少なくとも８６％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４５に対して少なくとも８６％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４４に対して少なくとも８７％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４５に対して少なくとも８７％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４４に対して少なくとも８８％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４５に対して少なくとも８８％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４４に対して少なくとも８９％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４５に対して少なくとも８９％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４４に対して少なくとも９１％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４５に対して少なくとも９１％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４４に対して少なくとも９２％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４５に対して少なくとも９２％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４４に対して少なくとも９３％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４５に対して少なくとも９３％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４４に対して少なくとも９４％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４５に対して少なくとも９４％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４４に対して少なくとも９５％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４５に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４４に対して少なくとも９６％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４５に対して少なくとも９６％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４４に対して少なくとも９７％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４５に対して少なくとも９７％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４４に対して少なくとも９８％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４５に対して少なくとも９８％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４４に対して少なくとも９９％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４５に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する；又は重鎖配列は、配列番号４４を含み、軽鎖配列は、配列番号４５を含む。
[0138] ある実施形態では、本開示は、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体を提供し、
（ａ）重鎖配列は、重鎖配列：
Figure 2021528399
 に対して少なくとも８５％の配列同一性を有し、及び
（ｂ）軽鎖配列は、軽鎖配列：
Figure 2021528399
 に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する。
[0139] 様々な実施形態では、重鎖配列は、配列番号４６に対して少なくとも８６％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４７に対して少なくとも８６％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４６に対して少なくとも８７％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４７に対して少なくとも８７％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４６に対して少なくとも８８％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４７に対して少なくとも８８％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４６に対して少なくとも８９％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４７に対して少なくとも８９％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４６に対して少なくとも９０％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４６に対して少なくとも９１％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４７に対して少なくとも９１％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４６に対して少なくとも９２％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４７に対して少なくとも９２％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４６に対して少なくとも９３％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４７に対して少なくとも９３％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４６に対して少なくとも９４％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４７に対して少なくとも９４％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４６に対して少なくとも９５％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４７に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４６に対して少なくとも９６％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４７に対して少なくとも９６％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４６に対して少なくとも９７％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４７に対して少なくとも９７％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４６に対して少なくとも９８％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４７に対して少なくとも９８％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号４６に対して少なくとも９９％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号４７に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する；又は重鎖配列は、配列番号４６を含み、軽鎖配列は、配列番号４７を含む。
[0140] 別の実施形態では、抗体は、ヒト、マウス、又はカニクイザルＰＤ−Ｌ１に結合する。特定の態様では、抗体は、ヒト、マウス、又はカニクイザルＰＤ−Ｌ１及びそれぞれのヒト、マウス、又はカニクイザルＰＤ−１受容体の間の相互作用を遮断することができる。
[0141] 別の実施形態では、抗体は、５×１０-9Ｍ又はそれ以下のＫＤで、好ましくは２×１０-9Ｍ又はそれ以下のＫＤで、さらにより好ましくは１×１０-9Ｍ又はそれ以下のＫＤでヒトＰＤ−Ｌ１に結合する。
[0142] さらに別の実施形態では、本開示は、ヒトＰＤ−Ｌ１の残基Ｙ５６及びＤ６１を含む機能的なエピトープに結合する抗ＰＤ−Ｌ１抗体又はその抗原結合断片に関する。
[0143] 特定の態様では、機能的なエピトープは、ヒトＰＤ−Ｌ１のＥ５８、Ｅ６０、Ｑ６６、Ｒ１１３、及びＭ１１５をさらに含む。
[0144] より特定の態様では、抗体は、ヒトＰＤ−Ｌ１の残基５４〜６６及び１１２〜１２２を含む立体エピトープに結合する。
[0145] ある実施形態では、本開示は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体又はその抗原結合断片に関し、これは、本明細書において記載される本開示による抗体と、ＰＤ−Ｌ１への結合について交差競合（cross-compete）する。
[0146] ある実施形態では、本開示は、少なくとも１つの薬学的に許容され得るキャリヤと組み合わせて上記に記載される抗ＰＤ−Ｌ１抗体のいずれかを含むタンパク質及びポリペプチドを特徴づける。
[0147] ある実施形態では、本開示は、本明細書において記載されるように、ポリペプチド又は抗ＰＤ−Ｌ１抗体の軽鎖若しくは重鎖可変領域配列又はその抗原結合断片をコードする単離核酸を特徴づける。ある実施形態では、本開示は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体の軽鎖又は重鎖可変領域配列をコードする単離核酸であって、
（ａ）重鎖は、それぞれＳＹＩＭＭ（配列番号３５）、ＳＩＹＰＳＧＧＩＴＦＹＡＤＴＶＫＧ（配列番号３６）、及びＩＫＬＧＴＶＴＴＶＤＹ（配列番号３７）に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３配列を含む、又は
（ｂ）軽鎖は、それぞれＴＧＴＳＳＤＶＧＧＹＮＹＶＳ（配列番号３８）、ＤＶＳＮＲＰＳ（配列番号３９）、及びＳＳＹＴＳＳＳＴＲＶ（配列番号４０）に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３配列を含む、単離核酸を提供する。
[0148] 特定の態様では、配列同一性は、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％である。
[0149] さらなる態様では、重鎖の核酸配列は、
Figure 2021528399
 であり、
軽鎖の核酸配列は、
Figure 2021528399
 である。
[0150] 抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップにおいて使用することができるさらなる例示的な抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、米国特許出願公開第２０１０／０２０３０５６号に記載される。本開示の一実施形態では、抗体成分は、ＹＷ２４３．５５Ｓ７０である。本開示の別の実施形態では、抗体成分は、ＭＰＤＬ３２８９Ａである。
[0151] ある実施形態では、本開示は、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体成分を特徴づけ、
（ａ）重鎖配列は、重鎖配列：
Figure 2021528399
 に対して少なくとも８５％の配列同一性を有し、及び
（ｂ）軽鎖配列は、軽鎖配列：
Figure 2021528399
 に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する。
[0152] 様々な実施形態では、重鎖配列は、配列番号１２に対して少なくとも８６％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも８６％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１２に対して少なくとも８７％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも８７％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１２に対して少なくとも８８％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも８８％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１２に対して少なくとも８９％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも８９％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１２に対して少なくとも９１％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも９１％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１２に対して少なくとも９２％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも９２％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１２に対して少なくとも９３％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも９３％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１２に対して少なくとも９４％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも９４％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１２に対して少なくとも９５％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１２に対して少なくとも９６％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも９６％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１２に対して少なくとも９７％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも９７％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１２に対して少なくとも９８％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも９８％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１２に対して少なくとも９９％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する；又は重鎖配列は、配列番号１２を含み、軽鎖配列は、配列番号１３を含む。
[0153] ある実施形態では、本開示は、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体成分を特徴づけ、
（ａ）重鎖配列は、重鎖配列：
Figure 2021528399
 に対して少なくとも８５％の配列同一性を有し、及び
（ｂ）軽鎖配列は、軽鎖配列：
Figure 2021528399
 に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する。
[0154] 様々な実施形態では、重鎖配列は、配列番号１４に対して少なくとも８６％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも８６％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１４に対して少なくとも８７％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも８７％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１４に対して少なくとも８８％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも８８％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１４に対して少なくとも８９％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも８９％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１４に対して少なくとも９０％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１４に対して少なくとも９１％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも９１％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１４に対して少なくとも９２％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも９２％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１４に対して少なくとも９３％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも９３％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１４に対して少なくとも９４％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも９４％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１４に対して少なくとも９５％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１４に対して少なくとも９６％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも９６％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１４に対して少なくとも９７％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも９７％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１４に対して少なくとも９８％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも９８％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号１４に対して少なくとも９９％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号１３に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する；又は重鎖配列は、配列番号１４を含み、軽鎖配列は、配列番号１３を含む。
[0155] 抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップにおいて使用することができるさらなる例示的な抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、米国特許出願公開第２０１８／０３３４５０４号に記載される。
[0156] ある実施形態では、本開示は、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体成分を特徴とし、
（ａ）重鎖配列は、重鎖配列：
Figure 2021528399
 に対して少なくとも８５％の配列同一性を有し、及び
（ｂ）軽鎖配列は、軽鎖配列：
Figure 2021528399
 に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する。
[0157] 様々な実施形態では、重鎖配列は、配列番号５５に対して少なくとも８６％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５６に対して少なくとも８６％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５５に対して少なくとも８７％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５６に対して少なくとも８７％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５５に対して少なくとも８８％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５６に対して少なくとも８８％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５５に対して少なくとも８９％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５６に対して少なくとも８９％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５６に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５５に対して少なくとも９１％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５６に対して少なくとも９１％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５５に対して少なくとも９２％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５６に対して少なくとも９２％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５５に対して少なくとも９３％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５６に対して少なくとも９３％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５５に対して少なくとも９４％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５６に対して少なくとも９４％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５５に対して少なくとも９５％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５６に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５５に対して少なくとも９６％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５６に対して少なくとも９６％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５５に対して少なくとも９７％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５６に対して少なくとも９７％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５５に対して少なくとも９８％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５６に対して少なくとも９８％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５５に対して少なくとも９９％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５６に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する；又は重鎖配列は、配列番号５５を含み、軽鎖配列は、配列番号５６を含む。
[0158] ある実施形態では、本開示は、重鎖及び軽鎖可変領域配列を含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体成分を特徴とし、
（ａ）重鎖配列は、重鎖配列：
Figure 2021528399
 に対して少なくとも８５％の配列同一性を有し、及び
（ｂ）軽鎖配列は、軽鎖配列：
Figure 2021528399
 に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する。
[0159] 様々な実施形態では、重鎖配列は、配列番号５７に対して少なくとも８６％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５８に対して少なくとも８６％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５７に対して少なくとも８７％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５８に対して少なくとも８７％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５７に対して少なくとも８８％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５８に対して少なくとも８８％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５７に対して少なくとも８９％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５８に対して少なくとも８９％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５８に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５７に対して少なくとも９１％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５８に対して少なくとも９１％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５７に対して少なくとも９２％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５８に対して少なくとも９２％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５７に対して少なくとも９３％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５８に対して少なくとも９３％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５７に対して少なくとも９４％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５８に対して少なくとも９４％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５７に対して少なくとも９５％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５８に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５７に対して少なくとも９６％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５８に対して少なくとも９６％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５７に対して少なくとも９７％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５８に対して少なくとも９７％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５７に対して少なくとも９８％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５８に対して少なくとも９８％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５７に対して少なくとも９９％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号５８に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する；又は重鎖配列は、配列番号５７を含み、軽鎖配列は、配列番号５８を含む。
[0160] ある実施形態では、本開示は、重鎖及び軽鎖配列を含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体成分を特徴とし、
（ａ）重鎖配列は、重鎖配列：
Figure 2021528399
 に対して少なくとも８５％の配列同一性を有し、及び
（ｂ）軽鎖配列は、軽鎖配列：
Figure 2021528399
 に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する。
[0161] 様々な実施形態では、重鎖配列は、配列番号５９に対して少なくとも８６％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６０に対して少なくとも８６％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５９に対して少なくとも８７％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６０に対して少なくとも８７％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５９に対して少なくとも８８％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６０に対して少なくとも８８％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５９に対して少なくとも８９％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６０に対して少なくとも８９％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６０に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５９に対して少なくとも９１％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６０に対して少なくとも９１％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５９に対して少なくとも９２％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６０に対して少なくとも９２％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５９に対して少なくとも９３％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６０に対して少なくとも９３％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５９に対して少なくとも９４％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６０に対して少なくとも９４％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５９に対して少なくとも９５％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６０に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５９に対して少なくとも９６％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６０に対して少なくとも９６％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５９に対して少なくとも９７％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６０に対して少なくとも９７％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５９に対して少なくとも９８％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６０に対して少なくとも９８％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号５９に対して少なくとも９９％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６０に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する；又は重鎖配列は、配列番号５９を含み、軽鎖配列は、配列番号６０を含む。
[0162] ある実施形態では、本開示は、重鎖及び軽鎖配列を含む抗ＰＤ−Ｌ１抗体成分を特徴とし、
（ａ）重鎖配列は、重鎖配列：
Figure 2021528399
 に対して少なくとも８５％の配列同一性を有し、及び
（ｂ）軽鎖配列は、軽鎖配列：
Figure 2021528399
 に対して少なくとも８５％の配列同一性を有する。
[0163] 様々な実施形態では、重鎖配列は、配列番号６１に対して少なくとも８６％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６２に対して少なくとも８６％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号６１に対して少なくとも８７％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６２に対して少なくとも８７％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号６１に対して少なくとも８８％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６２に対して少なくとも８８％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号６１に対して少なくとも８９％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６２に対して少なくとも８９％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号６１に対して少なくとも９０％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６２に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号６１に対して少なくとも９１％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６２に対して少なくとも９１％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号６１に対して少なくとも９２％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６２に対して少なくとも９２％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号６１に対して少なくとも９３％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６２に対して少なくとも９３％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号６１に対して少なくとも９４％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６２に対して少なくとも９４％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号６１に対して少なくとも９５％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６２に対して少なくとも９５％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号６１に対して少なくとも９６％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６２に対して少なくとも９６％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号６１に対して少なくとも９７％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６２に対して少なくとも９７％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号６１に対して少なくとも９８％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６２に対して少なくとも９８％の配列同一性を有する；重鎖配列は、配列番号６１に対して少なくとも９９％の配列同一性を有し、軽鎖配列は、配列番号６２に対して少なくとも９９％の配列同一性を有する；又は重鎖配列は、配列番号６１を含み、軽鎖配列は、配列番号６２を含む。
[0164] 抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップにおいて使用することができるさらなる例示的な抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、米国特許第７，９４３，７４３号に記載される。
[0165] 本開示の一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＭＤＸ−１１０５である。
[0166] ある実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１抗体は、ＭＥＤＩ−４７３６である。
定常領域
[0167] 本開示のタンパク質及びペプチドは、免疫グロブリンの定常領域又は定常領域の断片、アナログ、変異体、突然変異体、若しくは誘導体を含むことができる。ある実施形態では、定常領域は、ヒト免疫グロブリン重鎖、たとえばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、又は他のクラスに由来する。ある実施形態では、定常領域は、ＣＨ２ドメインを含む。ある実施形態では、定常領域は、ＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含む又はヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３を含む。その代わりに、定常領域は、ヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、及び／又はＣＨ３ドメインのすべて又は一部分を含むことができる。
[0168] 一実施形態では、定常領域は、Ｆｃ受容体に対する親和性を低下させる又はＦｃエフェクター機能を低下させる突然変異を含有する。たとえば、定常領域は、ＩｇＧ重鎖の定常領域内のグリコシル化部位を省く突然変異を含有することができる。いくつかの実施形態では、定常領域は、ＩｇＧ１のＬｅｕ２３４、Ｌｅｕ２３５、Ｇｌｙ２３６、Ｇｌｙ２３７、Ａｓｎ２９７、又はＰｒｏ３３１に対応するアミノ酸の位置に突然変異、欠失、又は挿入を含有する（アミノ酸は、ＥＵ命名法に従ってナンバリングされる）。特定の実施形態では、定常領域は、ＩｇＧ１のＡｓｎ２９７に対応するアミノ酸の位置に突然変異を含有する。代替の実施形態では、定常領域は、ＩｇＧ１のＬｅｕ２８１、Ｌｅｕ２８２、Ｇｌｙ２８３、Ｇｌｙ２８４、Ａｓｎ３４４、又はＰｒｏ３７８に対応するアミノ酸の位置に突然変異、欠失、又は挿入を含有する。
[0169] いくつかの実施形態では、定常領域は、ヒトＩｇＧ２又はＩｇＧ４重鎖に由来するＣＨ２ドメインを含有する。好ましくは、ＣＨ２ドメインは、ＣＨ２ドメイン内のグリコシル化部位を省く突然変異を含有する。一実施形態では、突然変異は、ＩｇＧ２又はＩｇＧ４重鎖のＣＨ２ドメイン内のＧｌｎ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ（配列番号１５）アミノ酸配列内のアスパラギンを改変する。好ましくは、突然変異は、アスパラギンをグルタミンに変化させる。その代わりに、突然変異は、Ｇｌｎ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ（配列番号１５）アミノ酸配列内のフェニルアラニン及びアスパラギンの両方を改変する。一実施形態では、Ｇｌｎ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ（配列番号１５）アミノ酸配列は、Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ（配列番号１６）アミノ酸配列と交換される。Ｇｌｎ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ（配列番号１５）アミノ酸配列内のアスパラギンは、ＩｇＧ１のＡｓｎ２９７に対応する。
[0170] 別の実施形態では、定常領域は、ＣＨ２ドメイン及びヒンジ領域の少なくとも一部分を含む。ヒンジ領域は、免疫グロブリン重鎖、たとえばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、又は他のクラスに由来することができる。好ましくは、ヒンジ領域は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、又は他の適したクラスに由来する。より好ましくは、ヒンジ領域は、ヒトＩｇＧ１重鎖に由来する。一実施形態では、ＩｇＧ１ヒンジ領域のＰｒｏ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（配列番号１７）アミノ酸配列におけるシステインは、改変される。ある実施形態では、Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（配列番号１７）アミノ酸配列は、Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ（配列番号１８）アミノ酸配列と交換される。ある実施形態では、定常領域は、第１の抗体アイソタイプに由来するＣＨ２ドメイン及び第２の抗体アイソタイプに由来するヒンジ領域を含む。ある実施形態では、ＣＨ２ドメインは、ヒトＩｇＧ２又はＩｇＧ４重鎖に由来し、ヒンジ領域は、改変ヒトＩｇＧ１重鎖に由来する。
[0171] Ｆｃ部分及び非Ｆｃ部分の接合部の近くのアミノ酸の改変は、Ｆｃ融合タンパク質の血清半減期を劇的に増加させることができる（国際公開第０１５８９５７号、この開示は、参照によってこれによって組み込まれる）。したがって、本開示のタンパク質又はポリペプチドの接合部領域は、免疫グロブリン重鎖及びエリスロポイエチンの天然に存在する配列に比べて、好ましくは、接合点の約１０アミノ酸内にある改変を含有することができる。これらのアミノ酸変化は、疎水性の増加を引き起こすことができる。一実施形態では、定常領域は、Ｃ−末端リシン残基が交換されたＩｇＧ配列に由来する。好ましくは、ＩｇＧ配列のＣ−末端リシンは、血清半減期をさらに増加させるために、アラニン又はロイシンなどのような非リシンアミノ酸と交換される。別の実施形態では、定常領域は、定常領域のＣ−末端の近くのＬｅｕ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ（配列番号１９）アミノ酸配列が、可能性として考えられる接合部Ｔ細胞エピトープを省くために改変されたＩｇＧ配列に由来する。たとえば、一実施形態では、Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ（配列番号１９）アミノ酸配列は、Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｔｈｒ（配列番号２０）アミノ酸配列と交換される。他の実施形態では、Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ（配列番号１９）セグメント内のアミノ酸は、グリシン又はプロリンなどのような他のアミノ酸と交換される。ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、又は他の免疫グロブリンクラス分子のＣ−末端の近くのＬｅｕ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ（配列番号１９）セグメントのアミノ酸置換を生成する詳細な方法は、米国特許出願公開第２００３０１６６８７７号において記載され、この開示は、参照によってこれによって組み込まれる。
[0172] 本開示に適したヒンジ領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、及び他の免疫グロブリンクラスに由来することができる。ＩｇＧ１ヒンジ領域は、３つのシステインを有し、このうちの２つは、免疫グロブリンの２つの重鎖の間のジスルフィド結合に関係する。これらの同じシステインは、Ｆｃ部分の間で効率的でしっかりしたジスルフィド結合形成を可能にする。そのため、本開示のヒンジ領域は、ＩｇＧ１、たとえばヒトＩｇＧ１に由来する。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ１ヒンジ領域内の第１のシステインは、別のアミノ酸、好ましくはセリンに突然変異させられる。ＩｇＧ２アイソタイプヒンジ領域は、組換え系における分泌の間にオリゴマー化及び場合により不正確なジスルフィド結合を促進する傾向がある４つのジスルフィド結合を有する。適したヒンジ領域は、ＩｇＧ２ヒンジに由来することができ、最初の２つのシステインは、好ましくは、それぞれ、別のアミノ酸に突然変異させられる。ＩｇＧ４のヒンジ領域は、鎖間ジスルフィド結合を非効率的に形成することが知られている。しかしながら、本開示に適したヒンジ領域は、重鎖由来成分の間のジスルフィド結合の正確な形成を高める突然変異を好ましくは含有するＩｇＧ４ヒンジ領域に由来することができる（Angal S, et al. Mol. Immunol. (1993), 30:105-8）。
[0173] 本開示に従って、定常領域は、異なる抗体アイソタイプに由来するＣＨ２及び／又はＣＨ３ドメイン並びにヒンジ領域を含有することができる、すなわちハイブリッド定常領域とすることができる。たとえば、一実施形態では、定常領域は、ＩｇＧ２又はＩｇＧ４に由来するＣＨ２及び／又はＣＨ３ドメイン並びにＩｇＧ１に由来する突然変異ヒンジ領域を含有する。その代わりに、別のＩｇＧサブクラスからの突然変異ヒンジ領域が、ハイブリッド定常領域において使用される。たとえば、２つの重鎖の間で効率的なジスルフィド結合を可能にするＩｇＧ４ヒンジの突然変異形態を使用することができる。突然変異ヒンジはまた、最初の２つのシステインが別のアミノ酸にそれぞれ突然変異させられるＩｇＧ２ヒンジに由来することができる。そのようなハイブリッド定常領域のアセンブリーは、米国特許出願公開第２００３００４４４２３号において記載されており、この開示は、参照によってこれによって組み込まれる。
[0174] 本開示に従って、定常領域は、本明細書において記載される１つ以上の突然変異を含有することができる。Ｆｃ部分における突然変異の組み合わせは、二機能性分子の血清半減期の延長及びインビボにおける効力の増加に対して相加的又は相乗的効果を有することができる。したがって、例示的な一実施形態では、定常領域は、（ｉ）Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ（配列番号１９）アミノ酸配列が、Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｔｈｒ（配列番号２０）アミノ酸配列と交換されるＩｇＧ配列に由来する領域；（ｉｉ）リシンの代わりとなるＣ−末端アラニン残基；（ｉｉｉ）異なる抗体アイソタイプに由来するＣＨ２ドメイン及びヒンジ領域、たとえばＩｇＧ２ ＣＨ２ドメイン及び改変ＩｇＧ１ヒンジ領域；並びに（ｉｖ）ＩｇＧ２由来ＣＨ２ドメイン内のグリコシル化部位を省く突然変異、たとえば、ＩｇＧ２由来ＣＨ２ドメイン内のＧｌｎ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ（配列番号１５）アミノ酸配列の代わりとなるＧｌｎ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ（配列番号１６）アミノ酸配列を含有することができる。
抗体断片
[0175] 本開示のタンパク質及びポリペプチドはまた、抗体の抗原結合性断片を含むこともできる。例示的な抗体断片は、ラクダ科の動物起源のものなどのようなｓｃＦｖ、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）2、及び単一ドメインＶＨＨ断片を含む。
[0176] 単鎖抗体（ｓｃＦｖ）としても知られている単鎖抗体断片は、典型的に抗原又は受容体に結合する組換えポリペプチドであり、これらの断片は、１つ以上の相互連結リンカーあり又はなしで抗体可変軽鎖配列（ＶL）の少なくとも１つの断片につながれた抗体可変重鎖アミノ酸配列（ＶH）の少なくとも１つの断片を含有する。そのようなリンカーは、単鎖抗体断片が由来する抗体全体の標的分子結合特異性を維持するために、一旦ＶLドメイン及びＶHドメインが連結するとＶLドメイン及びＶHドメインの適切な三次元フォールディングが生じるのを確実にするように選択された短く可動性のペプチドであってもよい。一般に、ＶL又はＶH配列のカルボキシル末端は、そのようなペプチドリンカーによって相補的なＶL及びＶH配列のアミノ酸末端に共有結合で連結される。単鎖抗体断片は、分子クローニング、抗体ファージディスプレーライブラリー、又は同様の技術によって生成することができる。これらのタンパク質は、真核細胞又は細菌を含む原核細胞のいずれかにおいて産生することができる。
[0177] 単鎖抗体断片は、本明細書に記載される抗体全体の可変領域又はＣＤＲの少なくとも１つを有するアミノ酸配列を含有するが、それらの抗体の定常ドメインのうちのいくつか又はすべてを欠いている。これらの定常ドメインは、抗原結合に必要ではないが、抗体全体の構造の大部分を構成する。そのため、単鎖抗体断片は、定常ドメインの一部又はすべてを含有する抗体の使用に関連する問題のうちのいくつかを改善してもよい。たとえば、単鎖抗体断片は、生体分子及び重鎖定常領域の間の望まれない相互作用又は他の不要な生物学的活性がない傾向がある。そのうえ、単鎖抗体断片は、抗体全体よりもかなり小さく、そのため、抗体全体よりも高い毛細血管透過性を有し、単鎖抗体断片が、より効率的に、局在化し、標的抗原結合性部位に結合するのを可能にしてもよい。さらに、抗体断片は、原核細胞において比較的大規模で産生され、したがって、それらの産生を容易にすることができる。さらに、比較的小さなサイズの単鎖抗体断片は、抗体全体よりもレシピエントにおいて免疫応答を引き起こす可能性が低い。
[0178] 抗体全体の特徴と同じ又は同等の結合性の特徴を有する抗体の断片もまた、存在してもよい。そのような断片は、一方若しくは両方のＦａｂ断片又はＦ（ａｂ’）2断片を含有してもよい。抗体断片は、抗体全体の６つのＣＤＲをすべて含有してもよいが、３、４、又は５つのＣＤＲなどのようにすべてよりも少数のそのような領域を含有する断片もまた、機能的である。
医薬組成物
[0179] 本開示はまた、治療有効量の本明細書において記載されるタンパク質を含有する医薬組成物をも特徴づける。組成物は、様々な薬剤送達系において使用するために製剤することができる。１つ以上の生理学的に許容され得る賦形剤又はキャリヤもまた、適切な製剤のために組成物に含むことができる。本開示において使用するための適した製剤は、Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Philadelphia, Pa., 17th ed., 1985において見つけることができる。薬剤送達のための方法の簡単な概説については、たとえばLanger, Science, (1990) 249:1527-1533を参照されたい。
[0180] 一態様では、本開示は、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドを含む、５００ｍｇ〜２４００ｍｇのタンパク質を含む癌患者において、ＢＴＣを治療する又は腫瘍増殖を阻害するための方法において使用するための静脈注射用薬剤送達製剤であって、第１のポリペプチドは、（ａ）ヒトタンパク質プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）に結合する抗体の重鎖の少なくとも１つの可変領域；及び（ｂ）ヒト形質転換増殖因子β受容体ＩＩ（ＴＧＦβＲＩＩ）又は形質転換増殖因子β（ＴＧＦβ）に結合することができるその断片を含み、第２のポリペプチドは、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗体の軽鎖の少なくとも１つの可変領域を含み、第１のポリペプチドの重鎖及び第２のポリペプチドの軽鎖は、組み合わせられると、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗原結合部位を形成する、静脈注射用薬剤送達製剤を提供する。
[0181] ある実施形態では、本開示のタンパク質産物は、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む。ある実施形態では、本開示のタンパク質産物は、配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９、及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む。
[0182] 本開示のある実施形態では、癌患者において、ＢＴＣを治療する又は腫瘍増殖を阻害するための方法において使用するための静脈注射用薬剤送達製剤は、約５００ｍｇ〜約２４００ｍｇの用量（たとえば約５００ｍｇ〜約２３００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約２２００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約２１００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約２０００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１９００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１８００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１７００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１６００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１５００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１４００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１３００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１２００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１１００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１０００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約９００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約８００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約７００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約６００ｍｇ、約６００ｍｇ〜２４００ｍｇ、約７００ｍｇ〜２４００ｍｇ、約８００ｍｇ〜２４００ｍｇ、約９００ｍｇ〜２４００ｍｇ、約１０００ｍｇ〜２４００ｍｇ、約１１００ｍｇ〜２４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜２４００ｍｇ、約１３００ｍｇ〜２４００ｍｇ、約１４００ｍｇ〜２４００ｍｇ、約１５００ｍｇ〜２４００ｍｇ、約１６００ｍｇ〜２４００ｍｇ、約１７００ｍｇ〜２４００ｍｇ、約１８００ｍｇ〜２４００ｍｇ、約１９００ｍｇ〜２４００ｍｇ、約２０００ｍｇ〜２４００ｍｇ、約２１００ｍｇ〜２４００ｍｇ、約２２００ｍｇ〜２４００ｍｇ、又は約２３００ｍｇ〜２４００ｍｇ）の本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ）（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む））を含んでいてもよい。ある実施形態では、静脈注射用薬剤送達製剤は、約５００〜約２０００ｍｇの用量の本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ）（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む））を含んでいてもよい。ある実施形態では、静脈注射用薬剤送達製剤は、約５００ｍｇの用量の、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有する本開示のタンパク質産物を含んでいてもよい。ある実施形態では、静脈注射用薬剤送達製剤は、５００ｍｇの用量の本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ）（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む））を含んでいてもよい。ある実施形態では、静脈注射用薬剤送達製剤は、約１２００ｍｇの用量の、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有する本開示のタンパク質産物を含んでいてもよい。ある実施形態では、静脈注射用薬剤送達製剤は、１２００ｍｇの用量の本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む））を含んでいてもよい。ある実施形態では、静脈注射用薬剤送達製剤は、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有する、約１８００ｍｇの用量の本開示のタンパク質産物を含んでいてもよい。ある実施形態では、静脈注射用薬剤送達製剤は、１８００ｍｇの用量の本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む））を含んでいてもよい。ある実施形態では、静脈注射用薬剤送達製剤は、１８００ｍｇの用量の本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ（たとえば配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９、及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む））を含んでいてもよい。ある実施形態では、静脈注射用薬剤送達製剤は、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド、及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有する約２４００ｍｇの用量の本開示のタンパク質産物を含んでいてもよい。ある実施形態では、静脈注射用薬剤送達製剤は、２４００ｍｇの用量の本開示のタンパク質（たとえば、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ（たとえば配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド、及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む））を含んでいてもよい。ある実施形態では、静脈注射用薬剤送達製剤は、２４００ｍｇの用量の本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ（たとえば、配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９、及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む））を含んでいてもよい。
[0183] ある実施形態では、癌患者においてＢＴＣを治療する又は腫瘍増殖を阻害するための方法において使用するための静脈注射用薬剤送達製剤は、約１２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ（たとえば約１２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２９００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２８００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２７００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２６００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２５００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２３００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２２００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２１００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２０００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１９００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１８００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１７００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１６００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１５００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１３００ｍｇ、約１３００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１４００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１５００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１６００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１７００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１８００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１９００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２０００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２１００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２３００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２４００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２５００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２６００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２７００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２８００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２９００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２１００ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２３００ｍｇ、約２４００ｍｇ、約２５００ｍｇ、約２６００ｍｇ、約２７００ｍｇ、約２８００ｍｇ、約２９００ｍｇ、又は約３０００ｍｇ）の本開示のタンパク質産物（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ）を含んでいてもよい。ある実施形態では、癌患者においてＢＴＣを治療する又は腫瘍増殖を阻害するための方法において使用するための静脈注射用薬剤送達製剤は、約１２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ（たとえば約１２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２９００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２８００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２７００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２６００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２５００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２３００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２２００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２１００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２０００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１９００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１８００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１７００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１６００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１５００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１３００ｍｇ、約１３００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１４００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１５００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１６００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１７００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１８００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１９００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２０００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２１００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２３００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２４００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２５００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２６００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２７００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２８００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２９００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２１００ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２３００ｍｇ、約２４００ｍｇ、約２５００ｍｇ、約２６００ｍｇ、約２７００ｍｇ、約２８００ｍｇ、約２９００ｍｇ、又は約３０００ｍｇ）の、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド又は配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９、及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物を含んでいてもよい。
[0184] ある実施形態では、癌患者においてＢＴＣを治療する又は腫瘍増殖を阻害するための方法において使用するための静脈注射用薬剤送達製剤は、約５２５ｍｇ、約５５０ｍｇ、約５７５ｍｇ、約６００ｍｇ、約６２５ｍｇ、約６５０ｍｇ、約６７５ｍｇ、約７００ｍｇ、約７２５ｍｇ、約７５０ｍｇ、約７７５ｍｇ、約８００ｍｇ、約８２５ｍｇ、約８５０ｍｇ、約８７５ｍｇ、約９００ｍｇ、約９２５ｍｇ、約９５０ｍｇ、約９７５ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１０２５ｍｇ、約１０５０ｍｇ、約１０７５ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１１２５ｍｇ、約１１５０ｍｇ、約１１７５ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１２２５ｍｇ、約１２５０ｍｇ、約１２７５ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１３２５ｍｇ、約１３５０ｍｇ、約１３７５ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１４２５ｍｇ、約１４５０ｍｇ、約１４７５ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１５２５ｍｇ、約１５５０ｍｇ、約１５７５ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１６２５ｍｇ、約１６５０ｍｇ、約１６７５ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１７２５ｍｇ、約１７５０ｍｇ、約１７７５ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１８２５ｍｇ、約１８５０ｍｇ、約１８７５ｍｇ、約１９００ｍｇ、約１９２５ｍｇ、約１９５０ｍｇ、約１９７５ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２０２５ｍｇ、約２０５０ｍｇ、約２０７５ｍｇ、約２１００ｍｇ、約２１２５ｍｇ、約２１５０ｍｇ、約２１７５ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２２２５ｍｇ、約２２５０ｍｇ、約２２７５ｍｇ、約２３００ｍｇ、約２３２５ｍｇ、約２３５０ｍｇ、約２３７５ｍｇ、又は約２４００ｍｇの本開示のタンパク質（たとえば、配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９、及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ）を含んでいてもよい。
[0185] 本開示の癌患者においてＢＴＣを治療する又は腫瘍増殖を阻害するための方法において使用するための静脈注射用薬剤送達製剤は、バッグ、ペン、又はシリンジ中に含有されてもよい。ある実施形態では、バッグは、チューブ及び／又は針を含む導管に接続されてもよい。ある実施形態では、製剤は、凍結乾燥製剤又は液体製剤であってもよい。ある実施形態では、製剤は、冷凍乾燥されてもよく（凍結乾燥されてもよく）、約１２〜６０本のバイアル中に含有されてもよい。ある実施形態では、製剤は、冷凍乾燥されてもよく、約４５ｍｇの冷凍乾燥製剤は、１本のバイアル中に含有されてもよい。ある実施形態では、約４０ｍｇ〜約１００ｍｇの冷凍乾燥製剤は、１本のバイアル中に含有されてもよい。ある実施形態では、１２、２７、又は４５本のバイアルからの冷凍乾燥された製剤は、静脈注射用薬剤製剤における治療用量のタンパク質を得るために組み合わせられる。ある実施形態では、製剤は、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有する又は配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９、及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物の液体製剤であってもよく、約２５０ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル（たとえば約２５０ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約１９００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約１８００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約１７００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約１６００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約１５００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約１４００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約１３００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約１２００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約１１００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約１０００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約９００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約８００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約７００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約６００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約５００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約４００ｍｇ／バイアル、約２５０ｍｇ／バイアル〜約３００ｍｇ／バイアル、約３００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、約４００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、約５００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、約６００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、約７００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、約８００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、約９００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、約１０００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、約１１００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、約１２００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、約１３００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、約１４００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、約１５００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、約１６００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、約１７００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、約１８００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル、又は約１９００ｍｇ／バイアル〜約２０００ｍｇ／バイアル）として保存されてもよい。ある実施形態では、製剤は、液体製剤であってもよく、約６００ｍｇ／バイアルとして保存されてもよい。ある実施形態では、製剤は、液体製剤であってもよく、約１２００ｍｇ／バイアルとして保存されてもよい。ある実施形態では、製剤は、液体製剤であってもよく、約１８００ｍｇ／バイアルとして保存されてもよい。ある実施形態では、製剤は、液体製剤であってもよく、約２４００ｍｇ／バイアルとして保存されてもよい。ある実施形態では、製剤は、液体製剤であってもよく、約２５０ｍｇ／バイアルとして保存されてもよい。
[0186] 本開示は、癌患者においてＢＴＣを治療する又は腫瘍増殖を阻害するための方法において使用するための製剤を形成する緩衝液中に治療有効量の本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ）を含む液体水性医薬製剤を提供する。
[0187] 癌患者においてＢＴＣを治療する又は腫瘍増殖を阻害するための方法において使用するためのこれらの組成物は、従来の滅菌技術によって滅菌されてもよい又は滅菌ろ過されてもよい。結果として生じる水溶液は、そのまま使用するためにパッケージされてもよく又は凍結乾燥されてもよく、凍結乾燥された調製物は、投与前に滅菌水性キャリヤと組み合わせられる。調製物のｐＨは、典型的に、３及び１１の間に、より好ましくは５及び９の間に又は６及び８の間に、最も好ましくは、７〜７．５などのように７及び８の間にあるであろう。固体形態をした結果として生じる組成物は、複数の単回投与単位でパッケージされてもよく、それぞれが、固定量の前述の作用物質を含有する。固体形態をした組成物はまた、数量を柔軟にするためにコンテナーにパッケージすることもできる。
[0188] ある実施形態では、本開示は、癌患者においてＢＴＣを治療する又は腫瘍増殖を阻害するための方法において使用するための、本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ）（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む））を、マンニトール、クエン酸一水和物、クエン酸ナトリウム、リン酸二ナトリウム二水和物、リン酸二水素ナトリウム二水和物、塩化ナトリウム、ポリソルベート８０、水、及び水酸化ナトリウムと組み合わせて含む、長期間にわたる有効期間を有する製剤を提供する。
[0189] ある実施形態では、癌患者においてＢＴＣを治療する又は腫瘍増殖を阻害するための方法において使用するための、ｐＨ緩衝液中に本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド又は配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９、及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物を含む））を含む水性製剤が、調製される。本発明のバッファーは、約４〜約８、たとえば約４〜約８、約４．５〜約８、約５〜約８、約５．５〜約８、約６〜約８、約６．５〜約８、約７〜約８、約７．５〜約８、約４〜約７．５、約４．５〜約７．５、約５〜約約７．５、約５．５〜約７．５、約６〜約７．５、約６．５〜約７．５、約４〜約７、約４．５〜約７、約５〜約７、約５．５〜約７、約６〜約７、約４〜約６．５、約４．５〜約６．５、約５〜約６．５、約５．５〜約６．５、約４〜約６．０、約４．５〜約６．０、約５〜約６、若しくは約４．８〜約５．５の範囲にわたるｐＨを有していてもよい又は約５．０〜約５．２のｐＨを有していてもよい。上記に詳述されるｐＨの中間にある範囲もまた、本開示の一部であることが意図される。たとえば、上限値及び／又は下限値として上記に詳述される値のいずれかの組み合わせを使用する値に範囲が含まれることが意図される。この範囲内のｐＨをコントロールするだろうバッファーの例は、酢酸（たとえば酢酸ナトリウム）、コハク酸（コハク酸ナトリウムなど）、グルコン酸、ヒスチジン、クエン酸、及び他の有機酸バッファーを含む。
[0190] ある実施形態では、癌患者においてＢＴＣを治療する又は腫瘍増殖を阻害するための方法において使用するための製剤は、約４〜約８の範囲にｐＨを維持するためにクエン酸及びリン酸を含有するバッファー系を含む。ある実施形態では、ｐＨ範囲は、約４．５〜約６．０若しくは約ｐＨ４．８〜約５．５であってもよい又は約５．０〜約５．２のｐＨ範囲にあってもよい。ある実施形態では、バッファー系は、クエン酸一水和物、クエン酸ナトリウム、リン酸二ナトリウム二水和物、及び／又はリン酸二水素ナトリウム二水和物を含む。ある実施形態では、バッファー系は、約１．３ｍｇ／ｍｌのクエン酸（たとえば１．３０５ｍｇ／ｍｌ）、約０．３ｍｇ／ｍｌのクエン酸ナトリウム（たとえば０．３０５ｍｇ／ｍｌ）、約１．５ｍｇ／ｍｌのリン酸二ナトリウム二水和物（たとえば１．５３ｍｇ／ｍｌ）、約０．９ｍｇ／ｍｌのリン酸二水素ナトリウム二水和物（たとえば０．８６）、及び約６．２ｍｇ／ｍｌの塩化ナトリウム（たとえば６．１６５ｍｇ／ｍｌ）を含む。ある実施形態では、バッファー系は、約１〜１．５ｍｇ／ｍｌのクエン酸、約０．２５〜約０．５ｍｇ／ｍｌのクエン酸ナトリウム、約１．２５〜約１．７５ｍｇ／ｍｌのリン酸二ナトリウム二水和物、約０．７〜約１．１ｍｇ／ｍｌのリン酸二水素ナトリウム二水和物、及び６．０〜６．４ｍｇ／ｍｌの塩化ナトリウムを含む。ある実施形態では、製剤のｐＨは、水酸化ナトリウムにより調整される。
[0191] 等張化剤（tonicifier）として作用し、抗体を安定させてもよいポリオールもまた、製剤に含まれてもよい。ポリオールは、製剤の所望の等張性を基準にして変動してもよい量で製剤に追加される。ある実施形態では、水性製剤は、等張であってもよい。追加されるポリオールの量もまた、ポリオールの分子量を基準にして変化させてもよい。たとえば、二糖（トレハロースなど）と比較して、より少ない量の単糖（たとえばマンニトール）が、追加されてもよい。ある実施形態では、等張化剤として製剤中に使用されてもよいポリオールは、マンニトールである。ある実施形態では、マンニトール濃度は、約５〜約２０ｍｇ／ｍｌであってもよい。ある実施形態では、マンニトールの濃度は、約７．５〜約１５ｍｇ／ｍｌであってもよい。ある実施形態では、マンニトールの濃度は、約１０〜約１４ｍｇ／ｍｌであってもよい。ある実施形態では、マンニトールの濃度は、約１２ｍｇ／ｍｌであってもよい。ある実施形態では、ポリオールであるソルビトールが、製剤中に含まれてもよい。
[0192] 洗浄剤又は界面活性剤もまた、製剤に追加されてもよい。例示的な洗浄剤は、ポリソルベート（たとえばポリソルベート２０、８０など）又はポロキサマー（たとえばポロキサマー１８８）などのような非イオン性洗浄剤を含む。追加される洗浄剤の量は、製剤された抗体の凝集を低下させる及び／又は製剤における粒子の形成を最小限にする及び／又は吸着を低下させるような量である。ある実施形態では、製剤は、ポリソルベートである界面活性剤を含んでいてもよい。ある実施形態では、製剤は、洗浄剤であるポリソルベート８０又はＴｗｅｅｎ８０を含有してもよい。Ｔｗｅｅｎ８０は、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノオレアートを記載するために使用される用語である（Fiedler, Lexikon der Hilfsstoffe, Editio Cantor Verlag Aulendorf, 4th ed., 1996を参照）。ある実施形態では、製剤は、約０．１ｍｇ／ｍＬ及び約１０ｍｇ／ｍＬの間の又は約０．５ｍｇ／ｍＬ及び約５ｍｇ／ｍＬの間のポリソルベート８０を含有してもよい。ある実施形態では、約０．１％のポリソルベート８０は、製剤中に追加されてもよい。
凍結乾燥製剤
[0193] 本開示の癌患者においてＢＴＣを治療する又は腫瘍増殖を阻害するための方法において使用するための凍結乾燥製剤は、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子及び凍結乾燥保護剤を含む。凍結乾燥保護剤は、糖、たとえば二糖であってもよい。ある実施形態では、凍結乾燥保護剤は、スクロース又はマルトースであってもよい。凍結乾燥製剤はまた、緩衝剤、界面活性剤、増量剤、及び／又は保存剤の１つ以上を含んでいてもよい。
[0194] 凍結乾燥薬剤製品の安定化に有用なスクロース又はマルトースの量は、少なくとも１：２のタンパク質対スクロース又はマルトースの重量比であってもよい。ある実施形態では、タンパク質対スクロース又はマルトースの重量比は、１：２〜１：５であってもよい。
[0195] ある実施形態では、製剤のｐＨは、冷凍乾燥前に、薬学的に許容され得る酸及び／又は塩基の追加によって設定されてもよい。ある実施形態では、薬学的に許容され得る酸は、塩酸であってもよい。ある実施形態では、薬学的に許容され得る塩基は、水酸化ナトリウムであってもよい。
[0196] 凍結乾燥の前に、本開示のタンパク質を含有する溶液のｐＨは、約６〜約８の間に調整されてもよい。ある実施形態では、凍結乾燥薬剤製品についてのｐＨ範囲は、約７〜約８であってもよい。
[0197] ある実施形態では、塩又はバッファー構成成分は、約１０ｍＭ〜約２００ｍＭの量で追加されてもよい。塩及び／又はバッファーは、薬学的に許容され得るものであり、「塩基形成」金属又はアミンと様々な既知の酸（無機及び有機）に由来する。ある実施形態では、バッファーは、リン酸バッファーであってもよい。ある実施形態では、バッファーは、グリシン酸、炭酸、クエン酸バッファーであってもよく、この場合、ナトリウム、カリウム、又はアンモニウムイオンは、対イオンとして果たすことができる。
[0198] ある実施形態では、「増量剤」が、追加されてもよい。「増量剤」は、凍結乾燥混合物に対して嵩を増し、凍結乾燥ケークの物理的構造に寄与する（たとえば、開気孔構造を維持する本質的に均一な凍結乾燥ケークの産生を容易にする）化合物である。例示の増量剤は、マンニトール、グリシン、ポリエチレングリコール、及びソルビトールを含む。本発明の凍結乾燥製剤は、そのような増量剤を含有してもよい。
[0199] 保存剤は、細菌作用を低下させるために本明細書における製剤に任意選択で追加されてもよい。保存剤の追加は、たとえば、多重使用（複数回投与）製剤の産生を容易にしてもよい。
[0200] ある実施形態では、癌患者においてＢＴＣを治療する又は腫瘍増殖を阻害するための方法において使用するための凍結乾燥薬剤製品は、水性キャリヤと共に構成されてもよい。本明細書において関心のある水性キャリヤは、薬学的に許容され得るものであり（たとえば、ヒトへの投与に安全であり、無毒性である）、冷凍乾燥後の液体製剤の調製に有用であるキャリヤである。例示の希釈剤は、注射用滅菌水（ＳＷＦＩ）、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝液（たとえばリン酸緩衝食塩水）、滅菌生理食塩水、リンゲル液、又はデキストロース溶液を含む。
[0201] ある実施形態では、本開示の凍結乾燥薬剤製品は、注射用滅菌水、ＵＳＰ（ＳＷＦＩ）又は０．９％塩化ナトリウム注射液、ＵＳＰにより還元される。還元の間に、凍結乾燥粉剤は、溶液になる。
[0202] ある実施形態では、本開示の凍結乾燥タンパク質産物は、約４．５ｍＬ注射用水にされ、０．９％生理食塩水（塩化ナトリウム溶液）により希釈される。
液体製剤
[0203] 実施形態では、本開示のタンパク質産物は、癌患者においてＢＴＣを治療する又は腫瘍増殖を阻害するための方法において使用するための液体製剤として製剤される。液体製剤は、ゴム栓により密封され、アルミニウムクリンプシールにより密閉されたＵＳＰ／Ｐｈ ＥｕｒのいずれかのＩ型５０Ｒバイアル中１０ｍｇ／ｍＬ濃度で提供されてもよい。栓は、ＵＳＰ及びＰｈ Ｅｕｒに従うエラストマーから作製されてもよい。ある実施形態では、バイアルは、６０ｍＬの抽出可能な容積を可能にするよう、約６１．２ｍＬのタンパク質産物溶液により充填されてもよい。ある実施形態では、液体製剤は、０．９％生理食塩水により希釈されてもよい。ある実施形態では、バイアルは、約２０ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ（たとえば約２０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ、約３５ｍｇ／ｍＬ、約４０ｍｇ／ｍＬ、約４５ｍｇ／ｍＬ、又は約５０ｍｇ／ｍＬ）の約６１．２ｍＬのタンパク質産物（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む））溶液を、約１２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ（たとえば約１２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２９００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２８００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２７００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２６００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２５００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２３００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２２００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２１００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２０００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１９００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１８００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１７００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１６００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１５００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１３００ｍｇ、約１３００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１４００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１５００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１６００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１７００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１８００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１９００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２０００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２１００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２３００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２４００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２５００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２６００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２７００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２８００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２９００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２１００ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２３００ｍｇ、約２４００ｍｇ、約２５００ｍｇ、約２６００ｍｇ、約２７００ｍｇ、約２８００ｍｇ、約２９００ｍｇ、又は約３０００ｍｇ）のタンパク質産物（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド又は配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９、及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物を含む））を対象に送達するために６０ｍＬの抽出可能な容積を可能にするよう、含有してもよい。
[0204] ある実施形態では、バイアルは、約２０ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬ（たとえば約２０ｍｇ／ｍＬ、約２５ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ、約３５ｍｇ／ｍＬ、約４０ｍｇ／ｍＬ、約４５ｍｇ／ｍＬ、又は 約５０ｍｇ／ｍＬ）の約６１．２ｍＬのタンパク質産物溶液（配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド又は配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９、及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物）を、約１２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ（たとえば約１２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２９００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２８００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２７００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２６００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２５００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２３００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２２００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２１００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２０００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１９００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１８００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１７００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１６００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１５００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１３００ｍｇ、約１３００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１４００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１５００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１６００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１７００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１８００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１９００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２０００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２１００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２３００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２４００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２５００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２６００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２７００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２８００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２９００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２１００ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２３００ｍｇ、約２４００ｍｇ、約２５００ｍｇ、約２６００ｍｇ、約２７００ｍｇ、約２８００ｍｇ、約２９００ｍｇ、又は約３０００ｍｇ）のタンパク質産物を対象に送達するために６０ｍＬの抽出可能な容積を可能にするよう、含有してもよい。
[0205] ある実施形態では、本開示の癌患者においてＢＴＣを治療する又は腫瘍増殖を阻害するための方法において使用するための液体製剤は、安定レベルの糖と組み合わせて１０ｍｇ／ｍＬ濃度溶液として調製されてもよい。ある実施形態では、液体製剤は、水性キャリヤ中で調製されてもよい。ある実施形態では、安定剤は、静脈内投与にとって望ましくない又は適さない粘性をもたらすかもしれない量以下の量で追加されてもよい。ある実施形態では、糖は、二糖、たとえばスクロースであってもよい。ある実施形態では、液体製剤はまた、緩衝剤、界面活性剤、及び保存剤の１つ以上を含んでいてもよい。
[0206] ある実施形態では、液体製剤のｐＨは、薬学的に許容され得る酸及び／又は塩基の追加によって設定されてもよい。ある実施形態では、薬学的に許容され得る酸は、塩酸であってもよい。ある実施形態では、塩基は、水酸化ナトリウムであってもよい。
[0207] 凝集に加えて、脱アミドは、発酵、回収／細胞清澄化、精製、原薬／薬剤製品保存の間に及びサンプル分析の間に生じ得る、ペプチド及びタンパク質の一般的な産物変異体である。脱アミドは、加水分解を受けることができるスクシンイミド中間体を形成する、タンパク質からのＮＨ3の損失である。スクシンイミド中間体は、親ペプチドの１７ｕの質量減少をもたらす。続く加水分解は、１８ｕの質量増加をもたらす。スクシンイミド中間体の単離は、水性条件下での不安定性により困難である。そのため、脱アミドは、１ｕの質量増加として典型的に検出可能である。アスパラギンの脱アミドは、アスパラギン酸又はイソアスパラギン酸をもたらす。脱アミド率に影響を与えるパラメーターは、ｐＨ、温度、溶媒誘電率、イオン強度、一次配列、局所的なポリペプチドコンホメーション、及び三次構造を含む。ペプチド鎖においてＡｓｎに隣接するアミノ酸残基は、脱アミド率に影響を与える。タンパク質配列におけるＡｓｎの後のＧｌｙ及びＳｅｒは、脱アミドに対して、より高い感受性をもたらす。
[0208] ある実施形態では、本開示の癌患者においてＢＴＣを治療する又は腫瘍増殖を阻害するための方法において使用するための液体製剤は、タンパク質産物の脱アミドを予防するためのｐＨ及び湿度の条件下で保たれてもよい。
[0209] 本明細書において関心のある水性キャリヤは、薬学的に許容され得るものであり（ヒトへの投与に安全であり、無毒性である）、液体製剤の調製に有用であるキャリヤである。例示のキャリヤは、注射用滅菌水（ＳＷＦＩ）、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝液（たとえばリン酸緩衝食塩水）、滅菌生理食塩水、リンゲル液、又はデキストロース溶液を含む。
[0210] 保存剤は、細菌作用を低下させるために本明細書における製剤に任意選択で追加されてもよい。保存剤の追加は、たとえば、多重使用（複数回投与）製剤の産生を容易にしてもよい。
[0211] 静脈内（ＩＶ）製剤は、患者が移植の後に入院しており、ＩＶルートを介してすべての薬剤を受けている場合などのような特定の場合に、好ましい投与ルートであってもよい。ある実施形態では、液体製剤は、投与の前に０．９％塩化ナトリウム溶液により希釈される。ある実施形態では、注射用の希釈薬剤製品は、等張であり、静脈内注入による投与に適している。
[0212] ある実施形態では、塩又はバッファー構成成分は、１０ｍＭ〜２００ｍＭの量で追加されてもよい。塩及び／又はバッファーは、薬学的に許容され得るものであり、「塩基形成」金属又はアミンと様々な既知の酸（無機及び有機）に由来する。ある実施形態では、バッファーは、リン酸バッファーであってもよい。ある実施形態では、バッファーは、グリシン酸、炭酸、クエン酸バッファーであってもよく、この場合、ナトリウム、カリウム、又はアンモニウムイオンは、対イオンとして果たすことができる。
[0213] 保存剤は、細菌作用を低下させるために本明細書における製剤に任意選択で追加されてもよい。保存剤の追加は、たとえば、多重使用（複数回投与）製剤の産生を容易にしてもよい。
[0214] 本明細書において関心のある水性キャリヤは、薬学的に許容され得るものであり（ヒトへの投与に安全であり、無毒性である）、液体製剤の調製に有用であるキャリヤである。例示のキャリヤは、注射用滅菌水（ＳＷＦＩ）、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝液（たとえばリン酸緩衝食塩水）、滅菌生理食塩水、リンゲル液、又はデキストロース溶液を含む。
[0215] 保存剤は、細菌作用を低下させるために本明細書における製剤に任意選択で追加されてもよい。保存剤の追加は、たとえば、多重使用（複数回投与）製剤の産生を容易にしてもよい。
癌を治療する又は腫瘍増殖を阻害するための方法
[0216] 一態様では、本開示は、その必要がある対象においてＢＴＣを治療する又は腫瘍増殖を阻害するための方法であって、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドを含む、少なくとも５００ｍｇの用量のタンパク質を対象に投与することを含む、方法を提供する。第１のポリペプチドは、（ａ）ヒトタンパク質プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）に結合する抗体の重鎖の少なくとも１つの可変領域；及び（ｂ）ヒト形質転換増殖因子β受容体ＩＩ（ＴＧＦβＲＩＩ）又は形質転換増殖因子β（ＴＧＦβ）に結合することができるその断片を含む。第２のポリペプチドは、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗体の軽鎖の少なくとも１つの可変領域を含み、第１のポリペプチドの重鎖及び第２のポリペプチドの軽鎖は、組み合わせられると、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗原結合部位を形成する。
[0217] ある実施形態では、本開示のＢＴＣを治療する又は腫瘍増殖を阻害するための方法は、第１のポリペプチドが配列番号３のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチドが配列番号１のアミノ酸配列を含む２つのペプチドを含むタンパク質を対象に投与することを含む。ある実施形態では、タンパク質は、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子である。
[0218] 一実施形態では、本明細書において開示される方法に従って治療される対象は、本開示の二機能タンパク質（抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子）による治療法を以前に受けていない。一実施形態では、本明細書において開示される方法に従って治療される対象は、ＢＴＣを治療するための化学療法も免疫療法も以前に受けていない。
[0219] 別の実施形態では、本明細書において開示される方法に従って治療される対象は、全身性化学療法を以前に受けているが腫瘍進行を経験し続けており、すなわち全身性化学療法（たとえば白金ベース化学療法）を以前に失敗している。別の実施形態では、本明細書において開示される方法に従って治療される対象は、全身性化学療法（たとえば白金ベース化学療法）に対して不耐容である。
[0220] ある実施形態では、本開示の、ＢＴＣを治療する又は腫瘍増殖を阻害するための方法は、対象に、タンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む；又は配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９、及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物））を、約１２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ（たとえば約１２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２９００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２８００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２７００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２６００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２５００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２３００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２２００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２１００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２０００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１９００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１８００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１７００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１６００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１５００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１３００ｍｇ、約１３００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１４００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１５００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１６００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１７００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１８００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１９００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２０００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２１００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２３００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２４００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２５００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２６００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２７００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２８００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２９００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２１００ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２３００ｍｇ、約２４００ｍｇ、約２５００ｍｇ、約２６００ｍｇ、約２７００ｍｇ、約２８００ｍｇ、約２９００ｍｇ、又は約３０００ｍｇ）の用量で投与することを含む。ある実施形態では、約１２００ｍｇの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子は、２週間ごとに１回、対象に投与される。ある実施形態では、約１８００ｍｇの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子は、３週間ごとに１回、対象に投与される。ある実施形態では、約１２００ｍｇの、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物は、２週間ごとに１回、対象に投与される。ある実施形態では、約１８００ｍｇの、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物は、３週間ごとに１回、対象に投与される。ある実施形態では、約１８００ｍｇの、配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９、及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物は、３週間ごとに１回、対象に投与される。ある実施形態では、約２４００ｍｇの、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物は、３週間ごとに１回、対象に投与される。ある実施形態では、約２４００ｍｇの、配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９、及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物は、３週間ごとに１回、対象に投与される。
[0221] ある実施形態では、対象に投与される用量は、約５００ｍｇ、約５２５ｍｇ、約５５０ｍｇ、約５７５ｍｇ、約６００ｍｇ、約６２５ｍｇ、約６５０ｍｇ、約６７５ｍｇ、約７００ｍｇ、約７２５ｍｇ、約７５０ｍｇ、約７７５ｍｇ、約８００ｍｇ、約８２５ｍｇ、約８５０ｍｇ、約８７５ｍｇ、約９００ｍｇ、約９２５ｍｇ、約９５０ｍｇ、約９７５ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１０２５ｍｇ、約１０５０ｍｇ、約１０７５ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１１２５ｍｇ、約１１５０ｍｇ、約１１７５ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１２２５ｍｇ、約１２５０ｍｇ、約１２７５ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１３２５ｍｇ、約１３５０ｍｇ、約１３７５ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１４２５ｍｇ、約１４５０ｍｇ、約１４７５ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１５２５ｍｇ、約１５５０ｍｇ、約１５７５ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１６２５ｍｇ、約１６５０ｍｇ、約１６７５ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１７２５ｍｇ、約１７５０ｍｇ、約１７７５ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１８２５ｍｇ、約１８５０ｍｇ、１８７５ｍｇ、約１９００ｍｇ、約１９２５ｍｇ、約１９５０ｍｇ、約１９７５ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２０２５ｍｇ、約２０５０ｍｇ、約２０７５ｍｇ、約２１００ｍｇ、約２１２５ｍｇ、約２１５０ｍｇ、約２１７５ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２２２５ｍｇ、約２２５０ｍｇ、約２２７５ｍｇ、約２３００ｍｇ、約２３２５ｍｇ、約２３５０ｍｇ、約２３７５ｍｇ、又は約２４００ｍｇであってもよい。
[0222] ある実施形態では、対象に投与される用量は、２週間ごとに１回、投与されてもよい。ある実施形態では、対象に投与される用量は、３週間ごとに１回、投与されてもよい。ある実施形態では、タンパク質は、たとえば充填済みのバッグ、充填済みのペン、又は充填済みのシリンジにより、静脈内投与によって投与されてもよい。ある実施形態では、タンパク質は、２５０ｍｌの生理的食塩水バッグから静脈内に投与され、静脈内注入は、約１時間（たとえば５０〜８０分間）であってもよい。ある実施形態では、バッグは、チューブ及び／又は針を含む導管に接続される。
[0223] いくつかの実施形態では、ＢＴＣは、局所進行又は転移性である。たとえば、一実施形態では、方法は、進行ＢＴＣを治療する。いくつかの実施形態では、方法は、転移性ＢＴＣを治療する。ＢＴＣの非限定的な例は、胆嚢癌（ＧＢＣ）、胆管癌（ＣＣＡ）及びファーター乳頭部癌（ＶＡＣ）を含む。ＧＢＣ、ＣＣＡ、及びＶＡＣは、本明細書において開示される方法によって治療することができる。
[0224] ある実施形態では、進行又は転移性ＢＴＣを有する対象又は患者は、約少なくとも５００ｍｇ（たとえば約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約８００ｍｇ、約９００ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２１００ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２３００ｍｇ、約２４００ｍｇ又はそれ以上）の、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。ある実施形態では、進行又は転移性ＢＴＣを有する対象又は患者は、少なくとも約５００ｍｇ（たとえば約５００ｍｇ、約６００ｍｇ、約７００ｍｇ、約８００ｍｇ、約９００ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１９００ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２１００ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２３００ｍｇ、約２４００ｍｇ、又はそれ以上）の、配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９、及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。ある実施形態では、進行又は転移性ＢＴＣを有する対象又は患者は、２４００ｍｇの、配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９、及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。
[0225] ある実施形態では、進行又は転移性ＢＴＣを有する対象又は患者は、約１２００ｍｇ〜約２４００ｍｇ（たとえば約１２００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２３００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２２００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２１００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２０００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１９００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１８００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１７００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１６００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１５００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１３００ｍｇ、約１３００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１４００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１５００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１６００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１７００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１８００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１９００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約２０００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約２１００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約２２００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、又は約２３００ｍｇ〜約２４００ｍｇ）の、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。ある実施形態では、進行又は転移性ＢＴＣを有する対象又は患者は、約１２００ｍｇ〜約２４００ｍｇ（たとえば約１２００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２３００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２２００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２１００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約２０００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１９００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１８００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１７００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１６００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１５００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１４００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約１３００ｍｇ、約１３００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１４００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１５００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１６００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１７００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１８００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約１９００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約２０００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約２１００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約２２００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、又は約２３００ｍｇ〜約２４００ｍｇ）の、配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９、及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。
[0226] いくつかの実施形態では、進行又は転移性ＢＴＣを有する対象又は患者は、２週間ごとに１回、約１２００ｍｇの用量で抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。いくつかの実施形態では、進行又は転移性ＢＴＣを有する対象又は患者は、２週間ごとに１回、１２００ｍｇの用量で抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。いくつかの実施形態では、進行又は転移性ＢＴＣを有する対象又は患者は、３週間ごとに１回、約１８００ｍｇの用量で抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。いくつかの実施形態では、進行又は転移性ＢＴＣを有する対象又は患者は、３週間ごとに１回、１８００ｍｇの用量で抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。いくつかの実施形態では、進行又は転移性ＢＴＣを有する対象又は患者は、３週間ごとに１回、約２４００ｍｇの用量で抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。いくつかの実施形態では、進行又は転移性ＢＴＣを有する対象又は患者は、３週間ごとに１回、２４００ｍｇの用量で抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。
[0227] 本明細書において、未治療患者に組み合わせ療法（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ及び化学療法）を投与する、治療の方法が想定される。たとえば、いくつかの実施形態では、進行又は転移性ＢＴＣを有する未治療対象又は患者は、ゲムシタビン及び／又はシスプラチンを抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップと同時投与することによって治療される。たとえば、いくつかの実施形態では、進行又は転移性ＢＴＣを有する未治療対象又は患者は、ゲムシタビン及びシスプラチンを抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップと同時投与することによって治療される。いくつかの実施形態では、進行又は転移性ＢＴＣを有する未治療対象又は患者は、ゲムシタビンを抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップと同時投与することによって治療される。いくつかの実施形態では、進行又は転移性ＢＴＣを有する未治療対象又は患者は、シスプラチンを抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップと同時投与することによって治療される。
[0228] ある実施形態では、本開示は、未治療患者にゲムシタビン及びシスプラチンを治療サイクルの間にタンパク質（たとえば本明細書において記載される抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子）と同じ日（たとえば１日目）に投与する、治療の方法を記載する。ある実施形態では、ゲムシタビン及びシスプラチンは、タンパク質（たとえば本明細書において記載される抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子）なしで治療サイクルの８日目に投与される。いくつかの実施形態では、治療（たとえば１日目の抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップとゲムシタビン及びシスプラチンとの同時投与と、その後の８日目のゲムシタビン及びシスプラチンの投与）は、一定期間（たとえば２４週間）にわたって繰り返され（たとえば８サイクル）、その後、一定期間（たとえば２年）、タンパク質（たとえば本明細書において記載される抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ分子）単独が投与される。いくつかの実施形態では、治療（たとえば１日目の抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップとゲムシタビン及びシスプラチンとの同時投与と、その後の８日目のゲムシタビン及びシスプラチンの投与）は、２４週間にわたって合計８サイクル繰り返され、その後、２５週目において開始して抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ単独が投与される。
[0229] ゲムシタビン及びシスプラチンの組み合わせは、進行又は転移性ＢＴＣを有する患者のための１Ｌ化学療法についての世界的な標準治療とみなされている（ＮＣＣＮ、ＥＳＭＯガイドライン）。したがって、ゲムシタビン及びシスプラチン投与のための投薬計画は、当技術分野においてごく普通であり、本明細書において想定される。いくつかの実施形態では、ゲムシタビンは、約１０００ｍｇ／ｍ2の用量で投与される。いくつかの実施形態では、シスプラチンは、約２５ｍｇ／ｍ2の用量で投与される。いくつかの実施形態では、組み合わせ療法によって治療される患者は、繰り返し治療されてもよい。たとえば、いくつかの実施形態では、３週間ごとに１日目及び８日目に、ゲムシタビンが約１０００ｍｇ／ｍ2の用量で投与され、シスプラチンが約２５ｍｇ／ｍ2の用量で投与される。いくつかの実施形態では、３週間ごとに且つ２４週目まで１日目及び８日目に、ゲムシタビンが約１０００ｍｇ／ｍ2の用量で投与され、シスプラチンが約２５ｍｇ／ｍ2の用量で投与され、その後、任意選択で、２週間に１回、約１０００ｍｇ／ｍ2の用量のゲムシタビンが、２週間ごとの約２５ｍｇ／ｍ2の用量のシスプラチンあり又はなしで投与される。
[0230] ある実施形態では、進行又は転移性ＢＴＣを有する未治療対象又は患者は、２週間ごとに１回、約１２００ｍｇの用量で抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを、２４週目まで３週間ごとに１日目及び８日目に約１０００ｍｇ／ｍ2の用量のゲムシタビン及び約２５ｍｇ／ｍ2の用量のシスプラチンと併用して静脈内に投与し、その後、任意選択で、２週間に１回、約１０００ｍｇ／ｍ2の用量のゲムシタビンを、２週間ごとの約２５ｍｇ／ｍ2の用量のシスプラチンあり又はなしで静脈内に投与することによって治療される。ある実施形態では、進行又は転移性ＢＴＣを有する未治療対象又は患者は、３週間ごとに１回、約１８００ｍｇの用量で抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを、２４週目まで３週間ごとに１日目及び８日目に約１０００ｍｇ／ｍ2の用量のゲムシタビン及び約２５ｍｇ／ｍ2の用量のシスプラチンと併用して静脈内に投与し、その後、任意選択で、２週間に１回、約１０００ｍｇ／ｍ2の用量のゲムシタビンを、２週間ごとの約２５ｍｇ／ｍ2の用量のシスプラチンあり又はなしで静脈内に投与することによって治療される。ある実施形態では、進行又は転移性ＢＴＣを有する未治療対象又は患者は、３週間ごとに１回、約２４００ｍｇの用量で抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを約１０００ｍｇ／ｍ2の用量のゲムシタビン及び約２５ｍｇ／ｍ2の用量のシスプラチンと１日目に静脈内に同時投与し；その後、２４週目まで３週間ごとに８日目に約１０００ｍｇ／ｍ2の用量のゲムシタビン及び約２５ｍｇ／ｍ2の用量のシスプラチンを静脈内に投与することによって治療される（たとえば図８及び表２参照）。２５週目からそれ以降の週まで（たとえばおよそ２年）、治療は、ゲムシタビン又はシスプラチンの同時投与なしで３週間ごとに１回投与される２４００ｍｇの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップによって継続される。
[0231] ある実施形態では、治療されることになるＢＴＣ（たとえば進行ＢＴＣ、転移性ＢＴＣ）は、ＰＤ−Ｌ１ポジティブである。たとえば、ある実施形態では、治療されることになるＢＴＣ（たとえば進行ＢＴＣ、転移性ＢＴＣ）は、たとえばDako PD-L1 73-10 IHC pharmDxアッセイによって決定して≧１％のＰＤ−Ｌ１ポジティブ腫瘍細胞を示す。ある実施形態では、治療されることになるＢＴＣ（たとえば進行ＢＴＣ、転移性ＢＴＣ）は、ＰＤ−Ｌ１ネガティブである。治療されることになるＢＴＣ（たとえば進行ＢＴＣ、転移性ＢＴＣ）は、高ＰＤ−Ｌ１発現（又は高ＰＤ−Ｌ１）を示し得る。
[0232] たとえばＢＴＣ（たとえば進行ＢＴＣ、転移性ＢＴＣ）又は胆道腫瘍上のＰＤ−Ｌ１などのようなバイオマーカーを検出する方法は、当技術分野においてごく普通であり、本明細書において想定される。非限定的な例は、免疫組織化学的検査、免疫蛍光法及び蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）を含む。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１ポジティブ、進行又は転移性ＢＴＣを有する対象又は患者は、約少なくとも５００ｍｇの用量で抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１ポジティブ、進行又は転移性ＢＴＣを有する対象又は患者は、２週間ごとに１回、約１２００ｍｇの用量で抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。いくつかの実施形態では、ＰＤ−Ｌ１ポジティブ、進行又は転移性ＢＴＣを有する対象又は患者は３週間ごとに１回、約２４００ｍｇの用量で抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与することによって治療される。
[0233] いくつかの実施形態では、本明細書において開示される治療の方法は、対象又は患者の疾患応答又は改善された生存期間をもたらす。いくつかの実施形態では、たとえば、疾患応答は、完全寛解、部分寛解、又は安定性の疾患であってもよい。いくつかの実施形態では、たとえば、改善された生存期間は、無増悪生存期間（ＰＦＳ）又は全生存期間とすることができる。いくつかの実施形態では、改善（たとえばＰＦＳにおける）は、本開示の抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップによる治療の開始前の期間と比べて決定される。ＢＴＣ（たとえば進行ＢＴＣ、転移性ＢＴＣ）、又は胆道腫瘍療法についての疾患応答（たとえば完全寛解、部分寛解、又は安定性の疾患）及び患者生存期間（たとえばＰＦＳ、全生存期間）を決定する方法は、当技術分野においてごく普通であり、本明細書において想定される。いくつかの実施形態では、疾患応答は、治療される患者を、患部（たとえば、胸郭入口の上部から恥骨結合までのエリアをカバーする胸部／腹部及び骨盤）の造影コンピューター断層撮影（ＣＴ）又は磁気共鳴画像検査（ＭＲＩ）にかけた後、ＲＥＣＩＳＴ１．１に従って判定される。
送達デバイス
[0234] 一態様では、本開示は、癌患者において、ＢＴＣ（たとえば進行ＢＴＣ、転移性ＢＴＣ）を治療する又は胆道腫瘍増殖を阻害するための方法において使用するための薬剤送達デバイスであって、デバイスは、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドを含む、約５００ｍｇ〜約３０００ｍｇのタンパク質を含む製剤を含み、第１のポリペプチドは、（ａ）ヒトタンパク質プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）に結合する抗体の重鎖の少なくとも１つの可変領域；及び（ｂ）ヒト形質転換増殖因子β受容体ＩＩ（ＴＧＦβＲＩＩ）又は形質転換増殖因子β（ＴＧＦβ）に結合することができるその断片を含み、第２のポリペプチドは、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗体の軽鎖の少なくとも１つの可変領域を含み、第１のポリペプチドの重鎖及び第２のポリペプチドの軽鎖は、組み合わせられると、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗原結合部位を形成する、薬剤送達デバイスを提供する。
[0235] ある実施形態では、デバイスは、バッグ、ペン、又はシリンジであってもよい。ある実施形態では、バッグは、チューブ及び／又は針を含む導管に接続されてもよい。
[0236] 本開示のある実施形態では、癌患者においてＢＴＣ（たとえば進行ＢＴＣ、転移性ＢＴＣ）を治療する又は胆道腫瘍増殖を阻害するための方法において使用するための薬剤送達デバイスは、約５００ｍｇ〜約３０００ｍｇ（たとえば約５００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約２９００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約２８００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約２７００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約２６００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約２５００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約２４００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約２３００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約２２００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約２１００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約２０００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１９００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１８００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１７００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１６００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１５００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１４００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１３００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１２００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１１００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約１０００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約９００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約８００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約７００ｍｇ、約５００ｍｇ〜約６００ｍｇ、約６００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約７００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約８００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約９００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１０００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１１００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１３００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１４００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１５００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１６００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１７００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１８００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約１９００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２０００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２１００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２２００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２３００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２４００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２５００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２６００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２７００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約２８００ｍｇ〜約３０００ｍｇ、又は約２９００ｍｇ〜約３０００ｍｇ）の本開示のタンパク質（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチド又は配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９、及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物を含む抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ）を含んでいてもよい。ある実施形態では、薬剤送達デバイスは、約５００〜約１２００ｍｇの用量の本開示のタンパク質（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ）を含んでいてもよい。ある実施形態では、薬剤送達デバイスは、約５００ｍｇの用量の本開示のタンパク質（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ；又は配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９、及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物）を含んでいてもよい。
[0237] ある実施形態では、薬剤送達デバイスは、約１２００ｍｇの用量の本開示のタンパク質（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ；又は配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９、及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物）を含む。ある実施形態では、癌患者においてＢＴＣ（たとえば進行ＢＴＣ、転移性ＢＴＣ）を治療する又は胆道腫瘍増殖を阻害するための方法において使用するための薬剤送達デバイスは、約１８００ｍｇの用量の本開示のタンパク質（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ；又は配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９、及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物）を含む。ある実施形態では、癌患者においてＢＴＣ（たとえば進行ＢＴＣ、転移性ＢＴＣ）を治療する又は胆道腫瘍増殖を阻害するための方法において使用するための薬剤送達デバイスは、約２４００ｍｇの用量の本開示のタンパク質（たとえば配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ；又は配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物）を含む。ある実施形態では、癌患者においてＢＴＣ（たとえば進行ＢＴＣ、転移性ＢＴＣ）を治療する又は胆道腫瘍増殖を阻害するための方法において使用するための薬剤送達デバイスは、約１２００ｍｇ、約１８００ｍｇ、又は約２４００ｍｇの用量の、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物；又は配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物を含む。
[0238] ある実施形態では、癌患者においてＢＴＣ（たとえば進行ＢＴＣ、転移性ＢＴＣ）を治療する又は胆道腫瘍増殖を阻害するための方法において使用するための薬剤送達デバイスは、約１２００ｍｇの用量の本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む；又は配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物））を含む。ある実施形態では、癌患者においてＢＴＣ（たとえば進行ＢＴＣ、転移性ＢＴＣ）を治療する又は胆道腫瘍増殖を阻害するための方法において使用するための薬剤送達デバイスは、約１８００ｍｇの用量の本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ（たとえば、配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む；又は配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物））を含む。ある実施形態では、癌患者において、ＢＴＣ（たとえば進行ＢＴＣ、転移性ＢＴＣ）を治療する又は胆道腫瘍増殖を阻害するための方法において使用するための薬剤送達デバイスは、約５００ｍｇ、約５２５ｍｇ、約５５０ｍｇ、約５７５ｍｇ、約６００ｍｇ、約６２５ｍｇ、約６５０ｍｇ、約６７５ｍｇ、約７００ｍｇ、約７２５ｍｇ、約７５０ｍｇ、約７７５ｍｇ、約８００ｍｇ、約８２５ｍｇ、約８５０ｍｇ、約８７５ｍｇ、約９００ｍｇ、約９２５ｍｇ、約９５０ｍｇ、約９７５ｍｇ、約１０００ｍｇ、約１０２５ｍｇ、約１０５０ｍｇ、約１０７５ｍｇ、約１１００ｍｇ、約１１２５ｍｇ、約１１５０ｍｇ、約１１７５ｍｇ、約１２００ｍｇ、約１２２５ｍｇ、約１２５０ｍｇ、約１２７５ｍｇ、約１３００ｍｇ、約１３２５ｍｇ、約１３５０ｍｇ、約１３７５ｍｇ、約１４００ｍｇ、約１４２５ｍｇ、約１４５０ｍｇ、約１４７５ｍｇ、約１５００ｍｇ、約１５２５ｍｇ、約１５５０ｍｇ、約１５７５ｍｇ、約１６００ｍｇ、約１６２５ｍｇ、約１６５０ｍｇ、約１６７５ｍｇ、約１７００ｍｇ、約１７２５ｍｇ、約１７５０ｍｇ、約１７７５ｍｇ、約１８００ｍｇ、約１８２５ｍｇ、約１８５０ｍｇ、約１８７５ｍｇ、約１９００ｍｇ、約１９２５ｍｇ、約１９５０ｍｇ、約１９７５ｍｇ、約２０００ｍｇ、約２０２５ｍｇ、約２０５０ｍｇ、約２０７５ｍｇ、約２１００ｍｇ、約２１２５ｍｇ、約２１５０ｍｇ、約２１７５ｍｇ、約２２００ｍｇ、約２２２５ｍｇ、約２２５０ｍｇ、約２２７５ｍｇ、約２３００ｍｇ、約２３２５ｍｇ、約２３５０ｍｇ、約２３７５ｍｇ、又は約２４００ｍｇの本開示のタンパク質（たとえば抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ、たとえば、配列番号３５、３６、及び３７のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド並びに配列番号３８、３９、及び４０のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを有するタンパク質産物）を含んでいてもよい。
タンパク質産生
[0239] 抗体−サイトカイントラップタンパク質は、一般に、タンパク質を発現するように操作された核酸を含有する哺乳動物細胞を使用して、組換えで産生される。適した細胞株及びタンパク質産生方法の１つの例は、米国特許出願公開第２０１５０２２５４８３ Ａ１号の実施例１及び２において記載されるが、種々様々の適したベクター、細胞株、及びタンパク質産生方法が、抗体ベースの生物製剤を産生するために使用されてきており、これらの抗体−サイトカイントラップタンパク質の合成において使用することができた。
治療上の指標
[0240] 本出願において記載される抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質（たとえば配列番号３のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチド及び配列番号１のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドを含む）、並びに前記抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質を含む開示される静脈注射用薬剤送達製剤及び送達デバイスは、未治療患者又は以前の全身性化学療法を失敗した若しくはそれに対して不耐容である患者においてＢＴＣ（たとえば進行ＢＴＣ、転移性ＢＴＣ）を治療する又は胆道腫瘍増殖を低下させるために使用することができる。
[0241] 特定の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１ポジティブ進行又は転移性ＢＴＣを有する未治療患者が、本開示の方法に従って治療される。別の実施形態では、ＰＤ−Ｌ１ポジティブ進行又は転移性ＢＴＣを有する、以前の全身性化学療法を失敗した又はそれに対して不耐容である患者が、本開示の方法に従って治療される。
実施例
[0242] ここで全般的に記載されている本開示は、本開示のある態様及び実施形態の例説の目的のために単に含まれる以下の実施例への参照によって、より容易に理解されるであろう、また、決して本開示の範囲を限定するようには意図されない。
実施例１：静脈注射用薬剤製剤のパッケージ
[0243] 抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップの製剤は、凍結乾燥製剤又は液体製剤として調製する。凍結乾燥製剤の調製のために、冷凍乾燥抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを滅菌し、使い捨てガラスバイアル中に保存した。次いで、癌又は腫瘍と診断された対象に、特定の体重に無関係な用量を送達するために数個のそのようなガラスバイアルをキット中にパッケージする。用量の必要量に依存して、キットは、１２〜６０バイアルを含有する。その代わりに、製剤は、液体製剤として調製し、パッケージし、２５０ｍｇ／バイアル〜１０００ｍｇ／バイアルとして保存する。たとえば、製剤は、液体製剤であり、６００ｍｇ／バイアルとして保存する又は２５０ｍｇ／バイアルとして保存する。別の実施例では、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップは、１０ｍｇ／ｍＬの溶液として製剤し、ＵＳＰ／Ｐｈ Ｅｕｒ Ｉ型５０Ｒバイアル中に入れ、６０ｍＬ（６００ｍｇ／６０ｍＬ）の抽出可能容量を可能にするように充填し、アルミニウムクリンプシール栓と共に、ＵＳＰ及びＰｈ Ｅｕｒに従う血清フォーマット（serum format）でゴム栓により密封する。
[0244] ＢＴＣ（たとえば局所進行又は転移性ＢＴＣ）と診断された対象に、５００ｍｇ〜２４００ｍｇの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを含有する製剤を静脈内に投与する。たとえば、対象に、２週間ごとに１回、１２００ｍｇの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ又は３週間ごとに１回、１８００ｍｇの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを静脈内に投与する。静脈内投与は、生理的食塩水バッグからとする。対象に投与される抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップの量は、対象の体重に無関係である。
実施例２：未治療局所進行又は転移性ＢＴＣ患者コホートの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップのＢＷに無関係な投薬計画
[0245] 例示的な一実施形態では、１２００ｍｇのＢＷに無関係な用量の抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップが、局所進行又は転移性ＢＴＣ（肝内及び肝外胆管癌、胆嚢癌及び乳頭部癌を含む）を有する癌患者に２週間ごとに１回投与される。投与は、約１時間、静脈内に実行される（−１０分／＋２０分、すなわち５０分〜８０分）。例示的な一実施形態では、２４００ｍｇのＢＷに無関係な用量の抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップが、局所進行又は転移性ＢＴＣを有する未治療癌患者に３週間ごとに１回投与される。投与は、約１時間、静脈内に実行される（−１０分／＋２０分、すなわち５０分〜８０分）。様々な実施形態では、癌患者は、アジア人系及び／又は起源の者である。様々な実施形態では、癌患者は、アジア人系及び／又は起源の者でない。
[0246] 可能性として考えられる、注入に関係する反応を静めるために、抗ヒスタミン薬による及びパラセタモール（アセトアミノフェン）による前投薬（たとえば２５〜５０ｍｇジフェンヒドラミン及び５００〜６５０ｍｇパラセタモール［アセトアミノフェン］ＩＶ又は経口等価物）を、各抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを与えるおよそ３０〜６０分前に、最初の２回の注入について投与する。前投薬は、２回目の注入後に任意選択とする。グレード≧２の注入反応が最初の２回の注入の間に観察される場合、前投薬は停止しない。前投薬としてのステロイドは許可しない。
[0247] 例示的な一実施形態では、局所進行又は転移性ＢＴＣを有する癌患者は、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップの投与に加え、２４週目まで２１日ごと（３週間ごとに１回）の８サイクル、１日目及び８日目に１０００ｍｇ／ｍ2の用量のゲムシタビン及び２５ｍｇ／ｍ2の用量のシスプラチンを静脈内に同時投与される。組み合わせ療法のため、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップはゲムシタビン及びシスプラチン投薬前に投与される。シスプラチン注入の間の前投薬、ステロイドを除く制吐薬、及びＩＶ補水は、腎毒性を防止するために標準的慣行に従って投与される。２５週目からそれ以降の週まで（たとえばおよそ２年）、治療は、ゲムシタビン又はシスプラチンの同時投与なしで３週間ごとに１回投与される２４００ｍｇの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップによって継続される。
[0248] ランダム化二重盲検臨床研究において、局所進行又は転移性ＢＴＣを有する未治療患者は、ゲムシタビン及びシスプラチンと組み合わせて抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを投与され、その後、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ単剤療法を投与される場合、全生存期間及び無増悪生存期間について判定する。本研究の一部として、治療割り付け／ランダム化は、以下の因子に従って層別化する：
１．ＢＴＣのタイプ：肝内胆管癌；肝外胆管癌及びファーター乳頭部癌；胆嚢癌。２．診断時の局所進行又は以前の外科的切除対初期転移。３．腹膜播種を有する対腹膜播種を有していない。
[0249] 以下は、本実施例において使用する、患者の選択基準について記載する。
患者：
−≧１８歳とする
−肝内及び肝外胆管癌、胆嚢癌並びに乳頭部癌を含む組織学的に又は細胞学的に確定された局所進行又は転移性ＢＴＣを有する
−局所進行又は転移性ＢＴＣのための化学療法も免疫療法も以前に受けたことがない（アジュバント療法は認められない）
−ＲＥＣＩＳＴ １．１（Eisenhauer et al.,EJC.2009; 45:228-247参照）に基づく少なくとも１つの一次元的に測定可能な病変を有する測定可能な疾患を有する
−少なくとも１２週間の平均余命を有する
−保存用（＜６か月）腫瘍検体（原発又は転移性）を有する又は新しい生検材料を取り出す
−０〜１のEastern Cooperative Oncology Group Performance Status（ＥＣＯＧ ＰＳ）を有する
−白血球（ＷＢＣ）数≧３×１０9／Ｌと、絶対的好中球数（ＡＮＣ）≧１．５×１０9／Ｌ、リンパ球数≧０．５×１０9／Ｌ、血小板数≧７５×１０9／Ｌ、及びヘモグロビン（Ｈｇｂ）≧９ｇ／ｄＬ（輸血の不存在下）によって定義される十分な血液機能を有する
−総ビリルビンレベル≦１．５×正常範囲の上限（ＵＬＮ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）レベル≦３．０×ＵＬＮ、及びアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）レベル≦３．０×ＵＬＮによって定義される十分な肝機能を有する。腫瘍中に肝病変を有する参加者については、ＡＳＴ≦５．０×ＵＬＮ、ＡＬＴ≦５．０×ＵＬＮが許容され得る
−Cockcroft-Gault式に従う又は２４時間の採尿からのクレアチニンクリアランスの測定による推定クレアチニンクリアランス＞５０ｍＬ／分によって定義される十分な腎機能を有する
〇ＣＣｒ（ｍｌ／分）＝（１４０−年齢）×重量（ｋｇ）／（７２×血清Ｃｒjaffe）
〇女性の場合、×０．８５
−Ｃｒが酵素的方法によって測定される場合、０．２を加算し、Ｃｒjaffe＝０．２＋Ｃｒenzumeとして使用し；アルブミン≧３．３ｇ／ｄＬを有する
[0250] 全身性化学療法と組み合わせて抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを投与するフェーズ２及び３研究のため、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップの３週間ごとに１回の用量を選択するためのモデリングアプローチを使用する。ほとんどの化学療法は３週間ごとに１回投与されるため、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップについての同じ投薬間隔を簡便性及びコンプライアンスのために用いることができる。３週間ごとに１回の用量の選択のため、２週間ごとに１回の１２００ｍｇの用量のものと同等の効能プロファイルが達成され得る。定常状態における投薬間隔にわたるＣtrough,ss及び平均濃度は、２週間ごとに１回の１２００ｍｇの投薬について達成されるものと類似する又はそれより高く、ほとんどの患者は、５０μｇ／ｍＬの標的濃度を超えるＣtrough,ssを有し得る。用量漸増について投薬の間に特徴づけられる薬物動態・薬力学（ＰＫ−ＰＤ）プロファイル及び集団ＰＫベースシミュレーションに基づいて、３週間ごとに１回の２４００ｍｇは、２週間ごとに１回の１２００ｍｇの投薬と類似するＣtrough,ss中央値を達成することが予測される。抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップの消失半減期が約７日である場合、用量のおよその倍化は、２週間ごとに１回の投薬と同様に３週間ごとに１回の投薬で同じＣtroughを維持する。
[0251] 図８及び表２は、本実施例に記載される治療計画を説明する。
[0252]
Figure 2021528399
[0253] 例示的な一実施形態では、局所進行又は転移性ＢＴＣを有する未治療癌患者への３週間ごとに１回の２４００ｍｇの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ又は２週間ごとに１回の１２００ｍｇの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップの投与は、類似の効能を達成する。例示的な一実施形態では、局所進行又は転移性ＢＴＣを有する未治療癌患者への３週間ごとに１回の２４００ｍｇの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップの投薬によって得られる観察される平均定常状態トラフ濃度（Ｃtrough,ss）は、２週間ごとに１回の１２００ｍｇの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップの投薬によって得られる観察される平均定常状態トラフ濃度（Ｃtrough,ss）と類似する。３週間ごとに１回の２４００ｍｇの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップの投薬の安全性は、０．３〜３０ｍｇ／ｋｇ用量漸増コホート及び曝露量・安全性モデリングにおける本研究のフェーズ１で達成される安全性及び曝露量の予備的評価によって支持される。組み合わせ療法における３週間ごとに１回の２４００ｍｇの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップの投薬を支持するために化学療法（たとえばゲムシタビン及びシスプラチン）との薬物動態相互作用及び重複毒性の潜在性の評価を行った。
[0254] 治療全体にわたって、安全性は、ベースラインの病状、有害事象（ＡＥ）、バイタルサインを含む理学的検査所見、ＥＣＯＧパフォーマンスステータス、及び臨床検査の記録、報告、及び分析を通して評価する。用量制限毒性（ＤＬＴ）は、２回目の用量を投与する前の最初の２１日において判定する。例示的な一実施形態では、安全性は、２つの別個のコホートで無関係に判定する（たとえばアジア地区コホート及び非アジア地区コホート）。
[0255] 少なくとも１つの研究において、選択される患者は、免疫賦活剤を受ける場合に悪化し得る活動性結核も自己免疫疾患も有していない。少なくとも１つの研究において、選択される患者は、間質性肺疾患又はその病歴、肝硬変、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）についての検査にポジティブの既知の病歴又は既知の後天性免疫不全症候群、コントロール不良胆道感染症、全身性の治療法を要求する活動性細菌又は真菌感染、臨床的に有意な心血管／脳血管疾患を有していない。少なくとも１つの研究において、選択される患者は、中枢神経系（ＣＮＳ）転移を有していない（治療されたＣＮＳ転移の病歴（手術又は放射線療法による）を有する患者は、それらが治療から完全に回復しており、少なくとも３か月、進行がないことが報告されており、且つ継続的なステロイド療法を要求しない限り利用できない）。
[0256] 少なくとも１つの研究において、選択される患者は、同種造血幹細胞移植を含む任意の臓器移植のレシピエントでないが、但し免疫抑制を要求しない移植（たとえば角膜移植物、植毛）を除く。一研究において、選択される患者は、Ｔ細胞共調節タンパク質（免疫チェックポイント）を標的にする任意の抗体／薬剤による治療法を以前に受けておらず、たとえば抗ＰＤ−１、抗ＰＤ−Ｌ１、抗ＣＴＬＡ−４抗体、又は抗４−１ＢＢ抗体は、このような薬剤の局所投与を含めて認められない。少なくとも１つの研究において、選択される患者は、ＴＧＦβ／ＴＧＦβ受容体を標的にするいかなる抗体／薬剤による治療法も以前に受けていない。
[0257] 少なくとも１つの研究において、選択される患者は、限局緩和的骨指向性放射線療法以外に２８日以内に放射線を受けていない。選択される患者は、治験治療の開始前７日以内に免疫抑制剤による全身性の治療法を受けておらず；治験治療の開始前２８日以内にいかなる治験薬の使用も受けていない。
[0258] 例示的な一実施形態では、選択される患者は、上皮内子宮頸癌、表在性非浸潤性膀胱癌、上皮内基底細胞又は扁平上皮癌を含む、＞５年再発がない治癒的に治療された癌又は治癒目的で治療された早期癌を有する。＞１年再発がない内視鏡によって切除された早期消化管（ＧＩ）癌（食道、胃、及び結腸直腸）は認められる。他の以前の癌を有する患者は除外する。
実施例３：抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップによる局所進行又は転移性胆道癌（ＢＴＣ）患者の治療
[0259] 目的：本研究の目的は、任意選択でゲムシタビン及びシスプラチンとの組み合わせにおける抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップが局所進行又は転移性ＢＴＣを有する患者の一次選択（１Ｌ）治療として、無増悪生存期間（ＰＦＳ）の時間及び／又は最良総合結果（ＢＯＲ）を改善するかどうかを判定することである。このＢＴＣ患者コホートにおいて抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを使用する論理的根拠は、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップが、腫瘍微小環境における免疫抑制の２つの重大なメカニズムであるＰＤ−Ｌ１及びＴＧＦβを標的にするということである。前臨床データは、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップが、マウス腫瘍モデルにおいて、抗腫瘍活性を強力に高め、且つ生存期間を延長し、抗ＰＤ−Ｌ１抗体アベルマブ又はＴＧＦβトラップコントロール単独での効果を上回ることを示唆する。したがって、ＢＴＣのための化学療法と任意選択で同時投与される腫瘍免疫活性化を阻害することが知られている分子であるＰＤ−Ｌ１及びＴＧＦ−βの同時の中和は、患者において臨床応答を改善するかもしれない。
[0260] 研究設計：本研究は、進行又は転移性ＢＴＣを有する患者のための第一選択治療としての任意選択でゲムシタビン及びシスプラチンとの組み合わせの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップの臨床的な利益を評価するために、安全性及び耐容性、疾患応答、並びに生存期間のプライマリーエンドポイントを判定する。進行又は転移性ＢＴＣのための治療を以前に受けたことがないおよそ１５０人の患者（患者は未治療である）が、本研究に登録される。本研究における患者は、実施例２に記載される患者の選択基準を満たす。患者は、ＥＣＯＧ ＰＳ及び癌ステージ（局所進行対転移性）に従って層別化される。
[0261] ゲムシタビン及びシスプラチンと同時投与される抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップの安全性を評価するため、およそ６人の患者のサブコホートに２週間ごとに１回の１２００ｍｇ、３週間ごとに１回の１８００ｍｇ又は２４００ｍｇの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ用量を、１０００ｍｇ／ｍ2の用量のゲムシタビン及び２５ｍｇ／ｍ2の用量のシスプラチンと１日目に静脈内に投与し；２４週目まで３週間ごとに８日目に１０００ｍｇ／ｍ2の用量のゲムシタビン、及び２５ｍｇ／ｍ2の用量のシスプラチンを静脈内に投与する（たとえば図８及び表２参照）。用量制限毒性（ＤＬＴ）は、最初の２１日において判定する。２５週目からそれ以降の週まで（たとえばおよそ２年）、治療は、ゲムシタビン又はシスプラチンの同時投与なしで３週間ごとに１回投与される２４００ｍｇの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップによって継続される。
[0262] 臨床上の効能（ＢＯＲ、ＰＦＳ）を判定するため、患者に、２週間ごとに１回の１２００ｍｇ、３週間ごとに１回の１８００ｍｇ又は２４００ｍｇの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ用量を静脈内に投与する。いくらかの患者に、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを１０００ｍｇ／ｍ2のゲムシタビン及び２５ｍｇ／ｍ2のシスプラチンと１日目に静脈内に同時投与し、２４週目まで３週間ごとに８日目に１０００ｍｇ／ｍ2のゲムシタビン及び２５ｍｇ／ｍ2のシスプラチンを静脈内に投与する。２５週目からそれ以降の週まで（たとえばおよそ２年）、治療は、ゲムシタビン又はシスプラチンの同時投与なしで３週間ごとに１回投与される２４００ｍｇの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップによって継続される。
[0263] 治療は、固形癌効果判定基準バージョン１．１（ＲＥＣＩＳＴ １．１）による治療失敗、たとえば進行性の疾患（ＰＤ）、容認できない毒性が確認されるまで、又は２４か月まで継続される。ＰＤの症例において、ＰＤを経験する患者は、その患者のEastern Cooperative Oncology Group Performance Status（ＥＣＯＧ ＰＳ）が安定したままである場合、治療から生じる容認できない毒性が存在しない場合及びその患者が継続的な治療から利益を受ける場合、治療を継続することができる。安定性の疾患（ＳＤ）、部分寛解（ＰＲ）、又は完全寛解（ＣＲ）を経験する患者は、２４か月の終わりまで治療を継続するであろうが、追加の治療が可能である。
[0264] 治療の全体にわたって、安全性は、ベースラインの病状、有害事象（ＡＥ）、バイタルサインを含む理学的検査所見、ＥＣＯＧパフォーマンスステータス、及び臨床検査の記録、報告、及び分析を通して評価する。
[0265] 安全性及び効能評価：安全性エンドポイントは、有害事象、臨床検査評価、バイタルサイン、理学的検査、ＥＣＧパラメータ、及びＥＣＯＧ ＰＳを含み、患者は、それらが受ける実際の治療に基づいて判定する。応答を決定するための腫瘍測定は、最初の研究薬剤投与の１２か月後まで６週間ごと、次いでその後は１２週間ごとに実行し、治療に対する応答は、固形癌効果判定基準バージョン１．１（ＲＥＣＩＳＴ １．１）によって判定する。ゲムシタビン及びシスプラチンあり又なしの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップに対する腫瘍応答は、ＣＴスキャン又はＭＲＩによって評価する。ベースラインで実行したスキャンを、続く訪問時に繰り返す。一般に、ベースライン時に検出された病変は、続く腫瘍判定訪問時に、同じ画像手法、好ましくは同じ画像機器を使用して経過観察する。治療に対する腫瘍応答は、ＲＥＣＩＳＴ １．１による標的、非標的、及び新たな病変の応答の評価に基づいて割り当てる。
[0266] 結果：客観的な腫瘍応答は、解析集団における参加者の数によって割った、完全寛解（ＣＲ）又は部分寛解（ＰＲ）の最良総合効果（ＢＯＲ）に達した参加者の数として定義される全奏効率（ＯＲＲ）によって判定する。無増悪生存期間は、ランダム化からＲＥＣＩＳＴ １．１に従って評価される客観的な疾患の進行（ＰＤ）についての最初の証拠書類提出の日又は任意の原因による死亡のどちらか最初に生じた方までの時間として定義される。抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップによる治療が、単剤療法として、又はゲムシタビン及びシスプラチンと組み合わせる場合の両方で未治療進行又は転移性ＢＴＣ患者において最初の臨床活性をもたらすことが想定される。治療された患者は、疾患応答（たとえば部分寛解、完全寛解、安定性の疾患）及び／又は改善された生存期間（たとえば無増悪生存期間及び／又は全生存期間）を示す。
[0267] 要約すると、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップは、２つの免疫抑制経路：ＰＤ−Ｌ１及びＴＧＦ−βを同時に標的にするように設計される革新的なファーストインクラスの二機能融合タンパク質であることが見出される。したがって、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップは、未治療進行又は転移性ＢＴＣ患者のための新規治療選択を提供する。
実施例４：全身性化学療法に対して不耐容である又はそれを失敗した局所進行又は転移性ＢＴＣを有する患者における抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップの予備的用量応答計画
[0268] 白金ベース一次選択（「１Ｌ」）治療後に進行した転移性又は局所進行ＢＴＣを有する患者に、進行性の疾患、容認できない毒性、又は離脱が確認されるまで２週間ごとに１回、１２００ｍｇの抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを投与した。安全性及び耐容性を主目的として評価した一方、副次的目的は固形癌効果判定基準バージョン１．１（ＲＥＣＩＳＴ ｖ１．１）による最良総合結果（「ＢＯＲ」）の評価を含んだ。腫瘍細胞ＰＤ−Ｌ１発現を判定した（抗体クローン７３−１０；Dako）。
[0269] 治療歴を有するＢＴＣを有する３０人の患者が、８．９週間（範囲、２〜５７．６週間）の持続時間中央値の間、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを受けた。５人の患者が治療を続けた。最もよく見られた治療に関係する有害事象（ＴＲＡＥ）は、発熱、斑状丘疹状皮疹（両方とも１３．３％）、皮疹、及びリパーゼ増加（両方とも１０％）であった。１０人の患者（３３．３％）がグレード≧３のＴＲＡＥを経験した。有害事象に起因する３つの死亡の症例が報告され；１人の死亡は１４回の治療投与後の敗血性ショック（皮膚感染に起因すると思われる菌血症）に起因し、２人の死亡は間質性肺疾患に起因して生じ、一方の患者の死亡は３回投与後の治療中に生じ、別の患者の死亡は最後の投与の６か月後に生じた。６人の患者は確認された客観的奏効率（ＯＲＲ、２０％）を有し、その５人は部分寛解（ＰＲ）を有し、４人は３．９＋、４．２＋、５．５＋、及び６．９＋か月において治療を続け、１人の患者は５．５＋か月において継続する完全寛解（ＣＲ）を有した。２人の追加の患者は、継続する臨床的な利益を有した：一方の患者は治療中の１年後に部分寛解（「ＰＲ」）を有し、一方の患者は初回の偽増悪後に７．６＋か月において続くＰＲを有した。ＰＤ−Ｌ１発現によって確認されたＯＲＲは、ＰＤ−Ｌ１＋（≧１％）及びＰＤ−Ｌ１−腫瘍を有する患者においてそれぞれ２５％及び１５．４％であった。
[0270] これらの結果は、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ単剤療法が、３０人の患者の８人（２７％）における長期的な応答を含む、治療歴を有するＢＴＣを有する患者における管理可能な安全性プロファイル及び有望な効能を有したことを実証する。
実施例５：全身性化学療法に対して不耐容である又はそれを失敗した局所進行又は転移性ＢＴＣを有する患者のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ投薬計画
[0271] 一次選択全身性化学療法を失敗した又はそれに対して不耐容であった局所進行又は転移性ＢＴＣを有する患者は、進行性の疾患（ＰＤ）、容認できない毒性、又は研究離脱が確認されるまで抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップによって治療される。乳頭部癌は除外する。
[0272] 例示的な一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップは、２週間ごとに１回、１２００ｍｇのＢＷに無関係な用量として参加者に投与される。投与は、約１時間、静脈内に実行される（−１０分／＋２０分、すなわち５０分超〜８０分）。例示的な一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップは、３週間ごとに１回、１８００ｍｇのＢＷに無関係な用量として参加者に投与される。投与は、約１時間、静脈内に実行される（−１０分／＋２０分、すなわち５０分超〜８０分）。例示的な一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップは、３週間ごとに１回、２１００ｍｇのＢＷに無関係な用量として参加者に投与される。投与は、約１時間、静脈内に実行される（−１０分／＋２０分、すなわち５０分超〜８０分）。例示的な一実施形態では、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップは、３週間ごとに１回、２４００ｍｇのＢＷに無関係な用量として参加者に投与される。投与は、約１時間、静脈内に実行される（−１０分／＋２０分、すなわち５０分超〜８０分）。可能性として考えられる、注入に関係する反応を静めるために、抗ヒスタミン薬による及びパラセタモール（アセトアミノフェン）による前投薬（たとえば２５〜５０ｍｇジフェンヒドラミン及び５００〜６５０ｍｇパラセタモール［アセトアミノフェン］ＩＶ又は経口等価物）が、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップのそれぞれを与えるおよそ３０〜６０分前に、最初の２回の注入について必須である。前投薬は、２回目の注入後に任意選択とし、治験責任医師の裁量による。グレード２の注入反応が最初の２回の注入の間に見られる場合、前投薬は停止しない。前投薬としてのステロイドは許可しない。
[0273] 例示的な一実施形態では、参加者が失敗した又は不耐容である全身性化学療法は、白金ベース化学療法である。
[0274] 以下は、本実施例において使用する、患者の選択基準について記載する。患者：
−≧１８歳とする
−組織学的に又は細胞学的に確定された局所進行又は転移性ＢＴＣを有し；疾患は、ＲＥＣＩＳＴ １．１による少なくとも１つの一次元的に測定可能な病変によって測定可能でなければならず、独立画像判定によって確認しなければならない
−第一選択全身性化学療法を失敗した若しくはそれに対して不耐容でなければならず、又はアジュバント治療の完了の６か月以内の疾患再発の証拠を有した
−バイオマーカー評価に好適な抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップの最初の投与前２８日以内に利用可能な腫瘍検体（原発又は転移性）を有する
−研究参加時及び抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップによる治療の１日目に０〜１のEastern Cooperative Oncology Group Performance Status（ＥＣＯＧ ＰＳ）を有する
−治験責任医師によって判断して平均余命≧１２週間を有する。
−白血球（ＷＢＣ）数≧３×１０９／Ｌと、絶対的好中球数（ＡＮＣ）≧１．５×１０９／Ｌ、リンパ球数≧０．５×１０９／Ｌ、血小板数≧７５×１０９／Ｌ、及びヘモグロビン（Ｈｇｂ）≧９ｇ／ｄＬ（輸血の不存在下）によって定義される十分な血液機能を有する。
−総ビリルビンレベル≦１．５×正常範囲の上限（ＵＬＮ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）レベル≦２．５×ＵＬＮ、及びアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）レベル≦２．５×ＵＬＮによって定義される十分な肝機能を有する。腫瘍中に肝病変を有する参加者については、ＡＳＴ≦５．０×ＵＬＮ及びＡＬＴ≦５．０×ＵＬＮが許容され得る。
−参加者が抗凝固療法を受けていない限りプロトロンビン時間（ＰＴ）又は国際標準化比（ＩＮＲ）≦１．５×ＵＬＮと定義される十分な凝固機能を有する。
−アルブミン≧３．３ｇ／ｄＬを有する
−Cockcroft-Gault式に従う又は２４時間の採尿からのクレアチニンクリアランスの測定によるクレアチニン≦１．５×ＵＬＮ又は推定クレアチニンクリアランス＞４０ｍＬ／分によって定義される十分な腎機能を有する。
〇ＣＣｒ（ｍｌ／分）＝（１４０−年齢）×体重（ｋｇ）／（７２×血清Ｃｒjaffe）
〇女性の場合、×０．８５
〇Ｃｒが酵素的方法によって測定される場合、０．２を加算し、Ｃｒjaffe＝０．２＋Ｃｒenzumeとして使用する；
−アルブミン≧３．３ｇ／ｄＬを有する。
[0275] 少なくとも１つの研究において、選択される患者は、免疫賦活剤を受ける場合に悪化し得る活動性結核も自己免疫疾患も有していない。少なくとも１つの研究において、選択される患者は、間質性肺疾患又はその病歴、肝硬変、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）についての検査にポジティブの既知の病歴又は既知の後天性免疫不全症候群、コントロール不良胆道感染症、全身性の治療法を要求する活動性細菌又は真菌感染、臨床的に有意な心血管／脳血管疾患を有していない。少なくとも１つの研究において、選択される患者は、中枢神経系（ＣＮＳ）転移を有していない（治療されたＣＮＳ転移の病歴（手術又は放射線療法による）を有する患者は、それらが治療から完全に回復しており、少なくとも３か月、進行がないことが報告されており、且つ継続的なステロイド療法を要求しない限り利用できない）。
[0276] 少なくとも１つの研究において、選択される患者は、同種造血幹細胞移植を含む任意の臓器移植のレシピエントでないが、但し免疫抑制を要求しない移植（たとえば角膜移植、植毛）を除く。一研究において、選択される患者は、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ又はその産物に対する過敏反応の既知の病歴も、モノクローナル抗体に対する既知の重度の過敏反応も、いかなるアナフィラキシーの病歴も、最近（５か月以内）のコントロール不良喘息の病歴も有していない。
[0277] 例示的な一実施形態では、選択される患者は、研究治療開始前２１日以内に抗癌治療、たとえば細胞減少療法、骨髄の＞３０％に作用する放射線療法（緩和的骨指向性放射線療法を除く）も、免疫療法も、サイトカイン療法も受けていない。選択される患者は、治験治療の開始前７日以内に免疫抑制剤による全身性の治療法を受けておらず；治験治療の開始前２８日以内にいかなる治験薬の使用も受けていない。
[0278] 例示的な一実施形態では、選択される患者は、上皮内子宮頸癌、表在性非浸潤性膀胱癌、上皮内基底細胞又は扁平上皮癌を含む、＞３年再発がない治癒的に治療された癌又は治癒目的で治療された早期癌を有する。＞１年、再発がない粘膜層に限定される内視鏡によって切除された早期消化管（ＧＩ）癌（食道、胃、及び結腸直腸）は認められる。他の以前の癌を有する患者は除外する。
実施例６：全身性化学療法に対して不耐容である又はそれを失敗した局所進行又は転移性ＢＴＣ患者の抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ治療
[0279] 目的：ＮＣＣＮ及びＥＳＭＯガイドラインによる標準治療としてのＢＴＣのための確立された第二選択療法は存在しない。本研究の目的は、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップが第一選択全身性化学療法を失敗した又はそれに対して不耐容である局所進行又は転移性ＢＴＣを有する患者のための第二選択治療として全奏効率を改善するかどうかを判定することである。この患者コホートにおいて抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップを使用する論理的根拠は、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップが、腫瘍微小環境における免疫抑制の２つの重大なメカニズムであるＰＤ−Ｌ１及びＴＧＦβを標的にし、チェックポイント阻害剤単剤療法の耐性を克服することができることである。実施例４に上記のとおり、早期臨床データは、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップが、ＢＴＣのための第二選択治療として２０％（３０人の患者のうち６人）の確認された全奏効率で治療効能を提供することを実証した。したがって、本研究は、小サンプルサイズからの有望な早期臨床効能データによって支持される。
[0280] 研究設計：本研究は、局所進行又は転移性ＢＴＣを有する患者のための第二選択治療としての抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップの臨床的な利益を評価するために、安全性及び耐容性、疾患応答、及び生存期間のエンドポイントを判定する。およそ１４０人の患者が本研究に登録される。固形癌効果判定基準バージョン１．１（ＲＥＣＩＳＴ １．１）に従って確認された最良総合結果（ＢＯＲ）は、全奏効率を決定するために使用されるプライマリーエンドポイントとして測定する。治療効能は、持続的奏効率（少なくとも６か月、継続的に維持された完全寛解又は部分寛解を有する参加者のパーセント）、応答の持続期間、無増悪生存期間、及び全生存期間によって測定することもできる。本研究における患者は、実施例５に記載される選択基準を満たす。
[0281] 胸郭入口の上部から恥骨結合までのエリアをカバーする胸部／腹部及び骨盤の造影ＣＴは、画像化モダリティの第一候補である。参加者がヨード造影剤を受けるべきでない場合、又は放射線保護の理由に起因して、胸郭入口から下位肋骨横隔膜までの胸部の非造影ＣＴとともに許可される各国プロトコルに従うガドリニウム増強を使用する同じエリアの磁気共鳴画像化（ＭＲＩ）を行うべきである。本研究全体にわたって参加者ごとに同じ方法を使用すべきである。
[0282] ベースラインスキャンは、治療前２８日以内に行う。疾患は、ＲＥＣＩＳＴ １．１による少なくとも１つの一次元的に測定可能な病変によって測定可能でなければならず、独立画像判定によって確認しなければならない。ベースラインで実行したすべてのスキャンを、腫瘍評価のための続く訪問時に繰り返す必要がある。一般に、ベースライン時に検出された病変は、続く腫瘍判定訪問時に、同じ画像手法、好ましくは同じ画像機器を使用して経過観察する必要がある。
[0283] 参加者は、参加者の抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップの最初の投与の１年以内に治療に対する応答を評価するために放射線画像化によって６週間ごと、次いで１２週間ごとに判定する。抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップの安全性プロファイルは、ベースラインの病状、ＡＥ、バイタルサインを含む理学的検査所見、臨床検査、ＥＣＯＧ ＰＳ、及び１２誘導心電図（ＥＣＧ）記録の記録、報告、及び分析を通して評価するであろう。本研究は、最後の参加者が抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップの最後の投与を受けた１年後に結論づける。
[0284] 本開示は、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップが第一選択全身性化学療法を失敗した又はそれに対して不耐容であるＢＴＣ患者についての生存期間を改善することを想定する。
実施例７：抗腫瘍効能の向上における抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップとシスプラチン又はゲムシタビンとの組み合わせの効果
[0285] 本実施例において、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップのシスプラチン又はゲムシタビンとの同時投与の抗腫瘍効能を判定するために実行される実験が記載される。
[0286] 細胞系：４Ｔ１マウス乳癌細胞及びＭＢ４９膀胱癌細胞をAmerican Type Culture Collection（ＡＴＣＣ）から入手した。４Ｔ１細胞は、１０％熱不活化ウシ胎児血清（ＦＢＳ）が補給されたＲＰＭＩ１６４０培地（Life Technologies）中で培養した。ＭＢ４９細胞は、１０％ＦＢＳを含有するダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中で培養した。すべての細胞を無菌条件下で培養し、５％のＣＯ2で３７℃においてインキュベートした。細胞をインビボ移植前に継代し、接着細胞をTrypLE Express（Gibco）又は０．２５％トリプシンによって回収した。
[0287] マウス：ＢＡＬＢ／ｃマウスをCharles River Laboratoriesから入手した。実験に使用したすべてのマウスは６〜１２週齢の雌であった。マウスを無菌施設中で飼料及び水を自由に与えて飼育した。
[0288] 治療：すべての研究のため、マウスを治療開始日（０日目）に治療群にランダム化した。
[0289] 判定：腫瘍サイズをデジタルキャリパーによって週２回測定し、WinWedgeソフトウェアを使用して自動記録した。腫瘍容積は以下の式：腫瘍容積（ｍｍ3）＝腫瘍長さ×幅×高さ×０．５２３６によって計算した。体重も週２回測定し、マウスをその腫瘍容積がその体重の１２．５％（およそ２，５００ｍｍ3）を超過した後に安楽死させた。
[0290] 統計的分析：統計的分析は、GraphPad Prism Software、バージョン７．０を使用して実行した。腫瘍容積データは、記号によって平均±ＳＥＭとして又は線によって個々のマウスとしてグラフで提示する。治療群間の腫瘍容積の差を評価するため、二元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を実行し、その後、テューキーの多重比較検定を実行した。
抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ及びシスプラチン／ゲムシタビンの組み合わせはアイソタイプコントロールと比べて抗腫瘍効能を改善したが、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ単独は改善しなかった
[0291] ４Ｔ１マウス腫瘍モデルにおける抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ及びシスプラチンの組み合わせ：０．５×１０5個の４Ｔ１細胞を治療７日前にＢＡＬＢ／ｃマウスの乳腺脂肪体中に同所接種した。０日目（すなわち接種７日後）、マウスをアイソタイプコントロール（アイソタイプコントロールは、ＰＤ−Ｌ１結合を完全に欠く抗ＰＤ−Ｌ１の突然変異バージョンである）（静脈内投与（ｉ．ｖ．）によって投与される４００μｇ；２、５、８日目）＋ＰＢＳコントロール（０．２ｍＬ、腹腔内に投与（ｉ．ｐ．）；０日目）、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ（４９２μｇ、ｉ．ｖ．；２、５、８日目）、シスプラチン（５ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．；０日目）、又は抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ＋シスプラチンによって治療した（ｎ＝１０匹のマウス／群）。
[0292] 腫瘍容積を週２回測定した。図１０Ａは、示される治療群ごとの平均（平均±ＳＥＭ）腫瘍容積を示す。図１０Ｂ〜１０Ｅは、それぞれの治療群のうちの個々のマウスにおける腫瘍容積を示す線グラフである：図１０Ｂにおけるそれぞれの線は、アイソタイプコントロール及びＰＢＳコントロールによって治療されたマウス（「アイソタイプコントロール」と表示）における腫瘍容積を表し；図１０Ｃにおけるそれぞれの線は、シスプラチン単剤療法によって治療されたマウスにおける腫瘍容積を表し；図１０Ｄにおけるそれぞれの線は、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ単剤療法によって治療されたマウスにおける腫瘍容積を表し；図１０Ｅにおけるそれぞれの線は、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ及びシスプラチンの組み合わせによって治療されたマウスにおける腫瘍容積を表す。
[0293] ｐ値は、二元ＲＭ ＡＮＯＶＡとテューキーの事後検定によって計算した。このモデルにおいて抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ単剤療法はアイソタイプコントロールと比べて抗腫瘍活性に対する効果を有さなかったが、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップとシスプラチンとの組み合わせは、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ及びシスプラチン単独療法と比べて抗腫瘍活性を有意に高めた（それぞれｐ＜０．０００１及びｐ＜０．０００１、１９日目）。
[0294] ＭＢ４９マウス腫瘍モデルにおける抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ及びゲムシタビンの組み合わせ：本実験において、ＢＡＬＢ／ｃマウスに治療７日前に１×１０6個のＭＢ４９細胞を脇腹中で皮下接種した。０日目（すなわち接種７日後）、マウスをアイソタイプコントロール（４００μｇ、ｉ．ｖ．；２、５、８日目）＋ＰＢＳコントロール（０．２ｍＬ、ｉ．ｐ；０日目）、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ（４９２μｇ、ｉ．ｖ．；２、５、８日目）、ゲムシタビン（１２０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．；０日目）、又は抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ＋ゲムシタビンによって治療した（ｎ＝１０匹のマウス／群）。
[0295] 腫瘍容積を週２回測定し、平均±ＳＥＭ（図１１Ａ）又は個々の腫瘍容積（図１１Ｂ〜１１Ｅ）として提示した。図１１Ｂ〜１１Ｅは、それぞれの治療群のうちの個々のマウスにおける腫瘍容積を示す線グラフである：図１１Ｂにおけるそれぞれの線は、アイソタイプコントロール及びＰＢＳコントロールによって治療されたマウス（「アイソタイプコントロール」と表示）における腫瘍容積を表し；図１１Ｃにおけるそれぞれの線は、ゲムシタビン単剤療法によって治療されたマウスにおける腫瘍容積を表し；図１１Ｄにおけるそれぞれの線は、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ単剤療法によって治療されたマウスにおける腫瘍容積を表し；図１１Ｅにおけるそれぞれの線は、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ及びゲムシタビンの組み合わせによって治療されたマウスにおける腫瘍容積を表す。
[0296] ｐ値は、二元ＲＭ ＡＮＯＶＡとテューキーの事後検定によって計算した。このモデルにおいて抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ及びゲムシタビン単剤療法はアイソタイプコントロールと比べて抗腫瘍活性に対する効果をほとんど有さなかった又は有さなかったが、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップとゲムシタビンとの組み合わせは、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップ及びゲムシタビン単独療法と比べて抗腫瘍活性を有意に高めた（それぞれｐ＜０．０００１及びｐ＝０．０００２、１５日目）。
配列
配列番号１
分泌抗ＰＤ−Ｌ１ラムダ軽鎖のペプチド配列
Figure 2021528399
 配列番号２
抗ＰＤＬ１の分泌Ｈ鎖のペプチド配列
Figure 2021528399
 配列番号３
抗ＰＤＬ１／ＴＧＦβトラップの分泌Ｈ鎖のペプチド配列
Figure 2021528399
 配列番号４
抗ＰＤ−Ｌ１ラムダ軽鎖の翻訳開始コドンから翻訳終止コドンまでのＤＮＡ配列（ＶＬに先行するリーダー配列は、ウロキナーゼプラスミノーゲン活性化因子由来のシグナルペプチドである）
Figure 2021528399
 配列番号５
翻訳開始コドンから翻訳終止コドンまでのＤＮＡ配列（ｍＶＫ ＳＰリーダー：下線を引いた小文字；ＶＨ：大文字；ＫからＡへの突然変異を有するＩｇＧ１ｍ３：小文字；（Ｇ４Ｓ）ｘ４−Ｇ（配列番号１１）リンカー：太字の大文字；ＴＧＦβＲＩＩ：太字の下線を引いた小文字；２つの終止コドン：太字の下線を引いた大文字）
Figure 2021528399
 配列番号６
突然変異Ａ３１Ｇ、Ｄ５２Ｅ、Ｒ９９Ｙを有する抗ＰＤ−Ｌ１（ｍｕｔ）／ＴＧＦβトラップの分泌ラムダ軽鎖のポリペプチド配列
Figure 2021528399
 配列番号７
抗ＰＤ−Ｌ１（ｍｕｔ）／ＴＧＦβトラップの分泌重鎖のポリペプチド配列
Figure 2021528399
 配列番号８
ヒトＴＧＦβＲＩＩアイソフォームＡ前駆体ポリペプチド（ＮＣＢＩ ＲｅｆＳｅｑ受入番号：ＮＰ＿００１０２００１８）
Figure 2021528399
 配列番号９
ヒトＴＧＦβＲＩＩアイソフォームＢ前駆体ポリペプチド（ＮＣＢＩ ＲｅｆＳｅｑ受入番号：ＮＰ＿００３２３３）
Figure 2021528399
 配列番号１０
ヒトＴＧＦβＲＩＩアイソフォームＢ細胞外ドメインポリペプチド
Figure 2021528399
 配列番号１１
（Ｇｌｙ4Ｓｅｒ）4Ｇｌｙリンカー
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧ
配列番号１２
抗ＰＤ−Ｌ１抗体ＭＰＤＬ３２８９Ａの分泌重鎖可変領域のポリペプチド配列
Figure 2021528399
 配列番号１３
抗ＰＤ−Ｌ１抗体ＭＰＤＬ３２８９Ａの分泌軽鎖可変領域のポリペプチド配列
Figure 2021528399
 配列番号１４
抗ＰＤ−Ｌ１抗体ＹＷ２４３．５５Ｓ７０の分泌重鎖可変領域のポリペプチド配列
Figure 2021528399
 配列番号５０
切断型ヒトＴＧＦβＲＩＩアイソフォームＢ細胞外ドメインポリペプチド
Figure 2021528399
 配列番号５１
切断型ヒトＴＧＦβＲＩＩアイソフォームＢ細胞外ドメインポリペプチド
Figure 2021528399
 配列番号５２
切断型ヒトＴＧＦβＲＩＩアイソフォームＢ細胞外ドメインポリペプチド
Figure 2021528399
 配列番号５３
切断型ヒトＴＧＦβＲＩＩアイソフォームＢ細胞外ドメインポリペプチド
Figure 2021528399
 配列番号５４
突然変異ヒトＴＧＦβＲＩＩアイソフォームＢ細胞外ドメインポリペプチド
Figure 2021528399
 配列番号５５
抗ＰＤ−Ｌ１抗体の重鎖可変領域のポリペプチド配列
Figure 2021528399
 配列番号５６
抗ＰＤ−Ｌ１抗体の軽鎖可変領域のポリペプチド配列
Figure 2021528399
 配列番号５７
抗ＰＤ−Ｌ１抗体の重鎖可変領域のポリペプチド配列
Figure 2021528399
 配列番号５８
抗ＰＤ−Ｌ１抗体の軽鎖可変領域のポリペプチド配列
Figure 2021528399
 配列番号５９
抗ＰＤ−Ｌ１抗体の重鎖のポリペプチド配列
Figure 2021528399
 配列番号６０
抗ＰＤ−Ｌ１抗体の軽鎖のポリペプチド配列
Figure 2021528399
 配列番号６１
抗ＰＤ−Ｌ１抗体の重鎖のポリペプチド配列
Figure 2021528399
 配列番号６２
抗ＰＤ−Ｌ１抗体の軽鎖のポリペプチド配列
Figure 2021528399
参照による組み込み
[0297] 本明細書において参照される特許文献及び科学論文のそれぞれの開示の全体は、事実上、参照によって組み込まれる。
等価物
[0298] 本開示は、その精神又は本質的な特徴から逸脱することなく、他の特定の形態で例示されてもよい。そのため、前述の実施形態は、本明細書において記載される本開示を限定するものではなく、あらゆる点において例示と見なされるべきである。様々な実施形態の様々な構造的要素及び様々な開示される方法のステップは、様々に組み合わせて及び並べ換えて利用されてもよく、そのような変形はすべて、本開示の形態と見なされるべきである。本開示の範囲は、したがって、前述の説明ではなく、添付の請求項によって示され、請求項と同等の意味及び範囲内にある変化はすべて、請求項に包含されることが意図される。

Claims (86)

  1. 必要がある未治療患者において胆道癌（ＢＴＣ）を治療する又は胆道腫瘍増殖を阻害するための方法であって、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドを含む、少なくとも５００ｍｇの用量のタンパク質を前記患者に投与することを含み、
    前記第１のポリペプチドは、（ａ）ヒトタンパク質プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）に結合する抗体の重鎖の少なくとも１つの可変領域；及び（ｂ）ヒト形質転換増殖因子β受容体ＩＩ（ＴＧＦβＲＩＩ）又は形質転換増殖因子β（ＴＧＦβ）に結合することができるその断片を含み、
    前記第２のポリペプチドは、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗体の軽鎖の少なくとも１つの可変領域を含み、そして
    前記第１のポリペプチドの前記重鎖及び前記第２のポリペプチドの前記軽鎖は、組み合わされると、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗原結合部位を形成する、方法。
  2. 前記第１のポリペプチドは、配列番号３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の方法。
  3. 前記用量は、５００ｍｇ〜２４００ｍｇである、請求項１又は２に記載の方法。
  4. 前記用量は、１２００ｍｇ〜２４００ｍｇである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
  5. 前記用量は、１２００ｍｇである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
  6. 前記用量は、２４００ｍｇである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
  7. 前記用量は、２週間ごとに１回又は３週間ごとに１回、投与される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
  8. 前記用量は、１２００ｍｇであり、２週間ごとに１回、投与される、請求項７に記載の方法。
  9. 前記用量は、２４００ｍｇであり、３週間ごとに１回、投与される、請求項７に記載の方法。
  10. 前記用量は、２１００ｍｇ又は２４００ｍｇであり、３週間ごとに１回、投与される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
  11. 前記ＢＴＣは、局所進行ＢＴＣ及び／又は転移性ＢＴＣである、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
  12. 前記ＢＴＣは、ポジティブＰＤ−Ｌ１発現を示す、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
  13. ゲムシタビン及び／又はシスプラチンを前記患者に投与することをさらに含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
  14. ゲムシタビン及びシスプラチンは、前記治療サイクルの間に前記タンパク質が投与される同じ日（１日目）に投与される、請求項９に記載の方法。
  15. ゲムシタビン及びシスプラチンを前記治療サイクルの８日目に投与することをさらに含む、請求項１４に記載の方法。
  16. 前記治療は、２４週間にわたって合計８サイクル繰り返される、請求項１５に記載の方法。
  17. ゲムシタビン及びシスプラチンを同時投与せずに２５週目から開始して前記タンパク質を投与することによって前記患者の治療を継続することをさらに含む、請求項１５に記載の方法。
  18. 前記治療は、前記患者の疾患応答又は改善された生存期間をもたらす、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
  19. 前記疾患応答は、完全寛解、部分寛解、又は安定性の疾患である、請求項１８に記載の方法。
  20. 前記生存期間は、無増悪生存期間（ＰＦＳ）である、請求項１８に記載の方法。
  21. 前記タンパク質は、静脈内投与によって投与される、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
  22. 前記静脈内投与は、前記タンパク質を含む製剤を含む充填済みのバッグ、充填済みのペン、又は充填済みのシリンジによって実行される、請求項２１に記載の方法。
  23. 前記バッグは、チューブ及び／又は針を含む導管に接続される、請求項２２に記載の方法。
  24. 必要がある未治療癌患者において胆道癌（ＢＴＣ）を治療する又は胆道腫瘍増殖を阻害するための方法において使用するための静脈注射用薬剤送達製剤であって、前記製剤は、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドを含む、５００ｍｇ〜２４００ｍｇのタンパク質を含み；
    前記第１のポリペプチドは、（ａ）ヒトタンパク質プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）に結合する抗体の重鎖の少なくとも１つの可変領域；及び（ｂ）ヒト形質転換増殖因子β受容体ＩＩ（ＴＧＦβＲＩＩ）又は形質転換増殖因子β（ＴＧＦβ）に結合することができるその断片を含み、
    前記第２のポリペプチドは、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗体の軽鎖の少なくとも１つの可変領域を含み、そして
    前記第１のポリペプチドの前記重鎖及び前記第２のポリペプチドの前記軽鎖は、組み合わされると、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗原結合部位を形成する、静脈注射用薬剤送達製剤。
  25. 前記第１のポリペプチドは、配列番号３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列を含む、請求項２４に記載の使用のための静脈注射用薬剤送達製剤。
  26. １２００ｍｇ〜２４００ｍｇの前記タンパク質を含む、請求項２４又は２５に記載の使用のための静脈注射用薬剤送達製剤。
  27. １２００ｍｇの前記タンパク質を含む、請求項２４又は２５に記載の使用のための静脈注射用薬剤送達製剤。
  28. ２４００ｍｇの前記タンパク質を含む、請求項２４又は２５に記載の使用のための静脈注射用薬剤送達製剤。
  29. 前記製剤は、２週間ごとに１回又は３週間ごとに１回、前記患者に投与される、請求項２４〜２６のいずれか一項に記載の使用のための静脈注射用薬剤送達製剤。
  30. １２００ｍｇの前記タンパク質を含む製剤は、２週間ごとに１回、投与される、請求項２９に記載の使用のための静脈注射用薬剤送達製剤。
  31. ２４００ｍｇの前記タンパク質を含む製剤は、３週間ごとに１回、投与される、請求項２９に記載の使用のための静脈注射用薬剤送達製剤。
  32. 前記製剤は、バッグ、ペン、又はシリンジ中に含有される、請求項２４〜３１のいずれか一項に記載の使用のための静脈注射用薬剤送達製剤。
  33. 前記バッグは、チューブ及び／又は針を含む導管に接続される、請求項３２に記載の使用のための静脈注射用薬剤送達製剤。
  34. 前記製剤は、凍結乾燥製剤又は液体製剤である、請求項２４〜３３のいずれか一項に記載の使用のための静脈注射用薬剤送達製剤。
  35. 必要がある未治療癌患者において胆道癌（ＢＴＣ）を治療する又は胆道腫瘍増殖を阻害するための方法において使用するための薬剤送達デバイスであって、前記デバイスは、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドを含む、５００ｍｇ〜２４００ｍｇのタンパク質を含む製剤を含み；
    前記第１のポリペプチドは、（ａ）ヒトタンパク質プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）に結合する抗体の重鎖の少なくとも１つの可変領域；及び（ｂ）ヒト形質転換増殖因子β受容体ＩＩ（ＴＧＦβＲＩＩ）又は形質転換増殖因子β（ＴＧＦβ）に結合することができるその断片を含み、
    前記第２のポリペプチドは、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗体の軽鎖の少なくとも１つの可変領域を含み、そして
    前記第１のポリペプチドの前記重鎖及び前記第２のポリペプチドの前記軽鎖は、組み合わされると、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗原結合部位を形成する、薬剤送達デバイス。
  36. 前記第１のポリペプチドは、配列番号３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列を含む、請求項３５に記載の使用のための薬剤送達デバイス。
  37. １２００ｍｇ〜２４００ｍｇの前記タンパク質を含む、請求項３５又は３６に記載の使用のための薬剤送達デバイス。
  38. １２００ｍｇの前記タンパク質を含む、請求項３５又は３６に記載の使用のための薬剤送達デバイス。
  39. ２４００ｍｇの前記タンパク質を含む、請求項３５又は３６に記載の使用のための薬剤送達デバイス。
  40. 前記製剤は、２週間ごとに１回又は３週間ごとに１回、前記患者に投与される、請求項３５〜３７のいずれか一項に記載の使用のための薬剤送達デバイス。
  41. １２００ｍｇの前記タンパク質を含む製剤は、２週間ごとに１回、投与される、請求項４０に記載の使用のための薬剤送達デバイス。
  42. ２４００ｍｇの前記タンパク質を含む製剤は、３週間ごとに１回、投与される、請求項４０に記載の使用のための薬剤送達デバイス。
  43. 前記デバイスは、バッグ、ペン、又はシリンジである、請求項３５〜４２のいずれか一項に記載の使用のための薬剤送達デバイス。
  44. 前記バッグは、チューブ及び／又は針を含む導管に接続される、請求項４３に記載の使用のための薬剤送達デバイス。
  45. 前記ＢＴＣは、局所進行ＢＴＣ及び／又は転移性ＢＴＣである、請求項２４〜３４のいずれか一項に記載の使用のための静脈注射用薬剤送達製剤、又は請求項３５〜４４のいずれか一項に記載の使用のための薬剤送達デバイス。
  46. 前記癌は、ポジティブＰＤ−Ｌ１発現を示す、請求項４５に記載の使用のための静脈注射用薬剤送達製剤、又は請求項４５に記載の使用のための薬剤送達デバイス。
  47. ゲムシタビン及び／又はシスプラチンを前記患者に同時投与することをさらに含む、請求項４５若しくは４６に記載の使用のための静脈注射用薬剤送達製剤、又は請求項４５若しくは４６に記載の使用のための薬剤送達デバイス。
  48. ゲムシタビン及びシスプラチンは、前記治療サイクルの間に前記タンパク質を含む製剤が投与される同じ日（１日目）に投与される、請求項４７に記載の使用のための静脈注射用薬剤送達製剤、又は請求項４７に記載の使用のための薬剤送達デバイス。
  49. 前記治療は、前記患者の疾患応答又は改善された生存期間をもたらす、請求項４５〜４８のいずれか一項に記載の使用のための静脈注射用薬剤送達製剤、又は請求項４５〜４８のいずれか一項に記載の使用のための薬剤送達デバイス。
  50. 前記疾患応答は、完全寛解、部分寛解、又は安定性の疾患である、請求項４９に記載の使用のための静脈注射用薬剤送達製剤、又は請求項４９に記載の使用のための薬剤送達デバイス。
  51. 前記生存期間は、無増悪生存期間（ＰＦＳ）である、請求項４９に記載の使用のための静脈注射用薬剤送達製剤、又は請求項４９に記載の使用のための薬剤送達デバイス。
  52. 以前の全身性化学療法を失敗した又はそれに対して不耐容である患者において局所進行若しくは転移性胆道癌（ＢＴＣ）を治療する又は胆道腫瘍増殖を阻害するための方法であって、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドを含む、少なくとも５００ｍｇの用量のタンパク質を前記患者に投与することを含み、
    前記第１のポリペプチドは、（ａ）ヒトタンパク質プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）に結合する抗体の重鎖の少なくとも１つの可変領域；及び（ｂ）ヒト形質転換増殖因子β受容体ＩＩ（ＴＧＦβＲＩＩ）又は形質転換増殖因子β（ＴＧＦβ）に結合することができるその断片を含み、
    前記第２のポリペプチドは、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗体の軽鎖の少なくとも１つの可変領域を含み、そして
    前記第１のポリペプチドの前記重鎖及び前記第２のポリペプチドの前記軽鎖は、組み合わされると、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗原結合部位を形成する、方法。
  53. 前記第１のポリペプチドは、配列番号３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列を含む、請求項５２に記載の方法。
  54. 前記用量は、５００ｍｇ〜２４００ｍｇである、請求項５２又は５３に記載の方法。
  55. 前記用量は、１２００ｍｇ〜１８００ｍｇである、請求項５２又は５３に記載の方法。
  56. 前記用量は、１２００ｍｇである、請求項５２〜５５のいずれか一項に記載の方法。
  57. 前記用量は、１８００ｍｇである、請求項５２〜５５のいずれか一項に記載の方法。
  58. 前記用量は、２週間ごとに１回又は３週間ごとに１回、投与される、請求項５２〜５５のいずれか一項に記載の方法。
  59. 前記用量は、１２００ｍｇであり、２週間ごとに１回、投与される、請求項５８に記載の方法。
  60. 前記用量は、１８００ｍｇであり、３週間ごとに１回、投与される、請求項５８に記載の方法。
  61. 前記用量は、２１００ｍｇ又は２４００ｍｇであり、３週間ごとに１回、投与される、請求項５２〜５４のいずれか一項に記載の方法。
  62. 前記ＢＴＣは、ポジティブＰＤ−Ｌ１発現を示す、請求項５２〜６１のいずれか一項に記載の方法。
  63. 前記治療は、前記患者の疾患応答又は改善された生存期間をもたらす、請求項５２〜６２のいずれか一項に記載の方法。
  64. 前記疾患応答は、完全寛解、部分寛解、又は安定性の疾患である、請求項６３に記載の方法。
  65. 前記生存期間は、無増悪生存期間（ＰＦＳ）である、請求項６３に記載の方法。
  66. 前記タンパク質は、静脈内投与によって投与される、請求項５２〜６５のいずれか一項に記載の方法。
  67. 前記静脈内投与は、前記タンパク質を含む製剤を含む充填済みのバッグ、充填済みのペン、又は充填済みのシリンジによって実行される、請求項６６に記載の方法。
  68. 前記バッグは、チューブ及び／又は針を含む導管に接続される、請求項６７に記載の方法。
  69. 必要がある未治療癌患者において胆道癌（ＢＴＣ）を治療する又は胆道腫瘍増殖を阻害するための方法において使用するための第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドを含む抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質であって、前記方法は、５００ｍｇ〜２４００ｍｇの前記タンパク質を前記患者に投与することを含み；
    前記第１のポリペプチドは、（ａ）ヒトタンパク質プログラム死リガンド１（ＰＤ−Ｌ１）に結合する抗体の重鎖の少なくとも１つの可変領域；及び（ｂ）ヒト形質転換増殖因子β受容体ＩＩ（ＴＧＦβＲＩＩ）又は形質転換増殖因子β（ＴＧＦβ）に結合することができるその断片を含み、
    前記第２のポリペプチドは、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗体の軽鎖の少なくとも１つの可変領域を含み、そして
    前記第１のポリペプチドの前記重鎖及び前記第２のポリペプチドの前記軽鎖は、組み合わされると、ＰＤ−Ｌ１に結合する抗原結合部位を形成する、抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
  70. 前記第１のポリペプチドは、配列番号３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列を含む、請求項６９に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
  71. １２００ｍｇ〜２４００ｍｇの前記タンパク質が、前記患者に投与される、請求項６９又は７０に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
  72. １２００ｍｇの前記タンパク質が、前記患者に投与される、請求項６９〜７１のいずれか一項に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
  73. ２４００ｍｇの前記タンパク質が、前記患者に投与される、請求項６９〜７１のいずれか一項に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
  74. 前記タンパク質は、２週間ごとに１回又は３週間ごとに１回、前記患者に投与される、請求項６９〜７１のいずれか一項に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
  75. １２００ｍｇの前記タンパク質は、治療サイクルにおいて２週間ごとに１回、投与される、請求項７４に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
  76. ２４００ｍｇの前記タンパク質は、治療サイクルにおいて３週間ごとに１回、投与される、請求項７４に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
  77. 前記ＢＴＣは、局所進行ＢＴＣ及び／又は転移性ＢＴＣである、請求項６９〜７６のいずれか一項に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
  78. 前記ＢＴＣは、ポジティブＰＤ−Ｌ１発現を示す、請求項６９〜７７のいずれか一項に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
  79. ゲムシタビン及び／又はシスプラチンを前記患者に投与することをさらに含む、請求項６９〜７８のいずれか一項に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
  80. ゲムシタビン及びシスプラチンは、前記治療サイクルの間に前記タンパク質が投与される同じ日（１日目）に投与される、請求項７６に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
  81. ゲムシタビン及びシスプラチンを前記治療サイクルの８日目にさらに投与することを含む、請求項８０に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
  82. 前記治療は、２４週間にわたって合計８サイクル繰り返される、請求項８１に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
  83. ゲムシタビン及びシスプラチンを同時投与せずに２５週目から開始して前記タンパク質を投与することによって前記患者の治療を継続することをさらに含む、請求項８２に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
  84. 前記タンパク質は、バッグ、ペン、又はシリンジ中に含有される、請求項６９〜８３のいずれか一項に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
  85. 前記バッグは、チューブ及び／又は針を含む導管に接続される、請求項８４に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
  86. 前記タンパク質は、凍結乾燥製剤又は液体製剤中に含まれる、請求項６９〜８５のいずれか一項に記載の使用のための抗ＰＤ−Ｌ１／ＴＧＦβトラップタンパク質。
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