TW202132568A - 用於治療血管收縮素原相關病症之方法及組成物 - Google Patents

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Abstract

本發明係關於抑制受試者體內AGT基因之表現的方法，以及使用靶向AGT基因之RNAi劑例如雙股RNAi劑治療患有AGT相關疾患例如高血壓之受試者的方法。本發明亦關於使用此類RNAi劑來抑制AGT基因表現，從而降低受試者之血壓量級的方法。

Description

用於治療血管收縮素原相關病症之方法及組成物
相關申請
本申請主張2020年4月30日遞交之美國臨時專利申請第63/017,854號及2019年11月13日遞交之美國臨時專利申請第62/934,695號之優先權權益，該等臨時申請各自之整體內容藉由引用併入本文。
本申請係關於2019年5月14日遞交之PCT申請第PCT/US2019/032150號，該申請之整體內容藉由引用併入本文。
序列表
本申請含有序列表，其業經以ASCII格式提交電子版，且藉由引用以其整體併入本文。所述ASCII拷貝於2020年11月3日創建，名為121301-11120_SL.txt，大小為24,638位元組。
腎素-血管收縮素-醛固酮系統(RAAS)於血壓調節中發揮關鍵作用。RAAS級聯以近腎絲球細胞將腎素釋放至循環中為起始。腎素分泌受到多種因子之刺激，包括遠端小管中之Na+載荷、β-交感神經刺激或 減低之腎灌注。血漿中之活性腎素裂解血管收縮素原(由肝臟產生)為血管收縮素I，其隨後藉由循環以及局部表現之血管收縮素轉化酶(ACE)而轉化為血管收縮素II。血管收縮素II對於RAAS之絕大多數效應係藉由下述發揮：其結合至血管收縮素II之第1型受體(AT1R)，導致動脈血管收縮效應、管效應及腎小球效應，諸如提升之Na+再吸收或對腎小球過濾率之調控。此外，與其他刺激諸如促腎上腺皮質素、抗利尿激素、兒茶酚胺類、內皮素、血清素以及Mg2+及K+之量級一起，AT1R刺激導致醛固酮釋放，其轉而促進腎遠曲小管中之Na+及K+排泄。
造成例如過量之血管收縮素II產生或AT1R刺激的RAAS失調，導致高血壓，其可造成例如增加之氧化應激、炎症之促成、心臟、腎臟及動脈之肥厚及纖維化，並且導致例如左心室心肌纖維化、動脈重構及腎小球硬化。
高血壓係已開發國家最普遍、最可控自疾病，影響20%至50%之成年人群。高血壓係多種疾病、疾患及病症諸如預期壽命縮短、慢性腎病、中風、心肌梗塞、心衰竭、動脈瘤(例如，主動脈瘤)、周圍動脈疾病、心臟損傷(例如，心肥大或肥厚)以及其他心血管相關疾病、疾患或病症的主要風險因子。此外，已經表明，高血壓係心血管發病率及死亡率的最重要之風險因子，對於所有中風病例中之62%及所有心臟病病例中之49%負有責任或有所貢獻。於2017年，對高血壓之診斷、預防及治療之指南做出改變，提出更低血壓之目標，以進一步降低發展出與高血壓相關之疾病或疾患的風險(參見，例如，Reboussin等人，「關於2017年ACC/AHA/AAPA/ABC/ACPM/AGS/APhA/ASH/ASPC/NMA/PCNA關 於成年人高血壓預防、偵檢、評估及管理之指南的系統性回顧：美國心臟病學會/美國心臟協會特別工作中關於臨床實踐指南之報告」，J Am Coll Cardiol.2017 Nov 7.pii：S0735-1097(17)41517-8.doi：10.1016/j.jacc.2017.11.004；以及Whelton等人「關於成年人高血壓預防、偵檢、評估及管理之2017年ACC/AHA/AAPA/ABC/ACPM/AGS/APhA/ASH/ASPC/NMA/PCNA指南：美國心臟病學會/美國心臟協會特別工作中關於臨床實踐指南之報告」，J Am Coll Cardiol.2017 Nov 7.pii：S0735-1097(17)41519-1.doi：10.1016/j.jacc.2017.11.006)。
儘管大量抗高血壓藥物可用於治療高血壓，但超過三分之二的受試者無法使用一種抗高血壓劑得到控制，而需要選自不同藥物類別之兩種或更多種抗高血壓劑。這進一步減低血壓受控之受試者人數，蓋因隨著藥品數量之增加，依從性減低並且副作用增加。此外，若干研究業經表明，長期使用抗高血壓藥物與腎功能惡化之間存在潛在之關係，發現用於控制血壓之抗高血壓劑亦影響腎功能，而這種影響係獨立於其對於血壓之效應(Tomlinson,et al(2013)PLoS ONE 8(11)Article ID e78465；The SPRINT Research Group(2015)NEJM 373(22)：2103-2116,ClinicalTrials.gov number,NCT01206062；Kidney Disease：Improving Global Outcomes(KDIGO)CKD Work Group(2013)Kidney International Supplements 3：1-150；Kamaroff,et al.(2018(Hindawi International J Chron Dis Article ID 1382705 | https：//doi.org/10.1155/2018/1382705)。
據此，本領域存在對於治療患有高血壓之受試者的其他方法及療法的需求。
本發明係提供方法及組成物，其用於抑制血管收縮素原(AGT)基因之表現，用於治療患有將受益於AGT表現減低之疾患的受試者，用於治療患有AGT相關疾患之受試者，以及用於降低受試者之血壓。該方法包括對受試者給藥固定劑量的靶向AGT基因之RNAi劑，例如雙股RNAi劑。
一方面，本發明係提供抑制血管收縮素原(AGT)在受試者體內之表現的方法。該方法包括對受試者給藥約50mg至約800mg(例如，約50至約200mg、約50mg至約500mg、約100mg至約800mg、約100mg至約500mg、約100mg至約300mg、約200mg至約300mg、約200mg至約400mg、約200mg至約500mg、約200mg至約800mg、約300mg至約800mg、約300mg至約500mg、約300mg至約4000mg、約400mg至約800mg、約400mg至約500mg，例如，約50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750或約800mg)之固定劑量的雙股核糖核酸(RNAi)劑或其鹽，從而抑制AGT基因在該受試者體內之表現，其中，該雙股RNAi劑或其鹽包含形成雙股區域之正義股及反義股，其中，該反義股包含具有核苷酸序列UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(SEQ ID NO：9)之至少19個接續核苷酸的核苷酸序列，並且該正義股包含具有核苷酸序列 GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(SEQ ID NO：10)之至少19個接續核苷酸的核苷酸序列；其中，該雙股RNAi劑或其鹽包含至少一個經修飾之核苷酸；以及，其中，該等核苷酸之修飾之至少一者係熱去安定化核苷酸修飾。
另一方面，本發明係提供治療將受益於血管收縮素原(AGT)表現減低之受試者例如處於發展出AGT相關疾患例如高血壓風險下之受試者的方法。該方法包括對受試者給藥約50mg至約800mg(例如，約50至約200mg、約50mg至約500mg、約100mg至約800mg、約100mg至約500mg、約100mg至約300mg、約200mg至約300mg、約200mg至約400mg、約200mg至約500mg、約200mg至約800mg、約300mg至約800mg、約300mg至約500mg、約300mg至約4000mg、約400mg至約800mg、約400mg至約500mg，例如，約50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750或約800mg)之固定劑量的雙股核糖核酸(RNAi)劑或其鹽，從而治療將受益於AGT表現減低之受試者，其中，該雙股RNAi劑或其鹽包含形成雙股區域之正義股及反義股，其中，該反義股包含具有核苷酸序列UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(SEQ ID NO：9)之至少19個接續核苷酸的核苷酸序列，並且該正義股包含具有核苷酸序列GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(SEQ ID NO：10)之至少19個接續核苷酸的核苷酸序列；其中，該雙股RNAi劑或其鹽包含至少一個經修飾之核苷酸；以及，其中，該等核苷酸之修飾之至少一者係熱去安定化核苷酸修飾。
一方面，本發明係提供治療患有血管收縮素原(AGT)相關疾患例如高血壓之受試者的方法。該方法包括對受試者給藥約50mg至約800mg(例如，約50至約200mg、約50mg至約500mg、約100mg至約800mg、約100mg至約500mg、約100mg至約300mg、約200mg至約300mg、約200mg至約400mg、約200mg至約500mg、約200mg至約800mg、約300mg至約800mg、約300mg至約500mg、約300mg至約4000mg、約400mg至約800mg、約400mg至約500mg，例如，約50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750或約800mg)之固定劑量的雙股核糖核酸(RNAi)劑或其鹽，從而治療患有AGT相關疾患之受試者，其中，該雙股RNAi劑或其鹽包含形成雙股區域之正義股及反義股，其中，該反義股包含具有核苷酸序列UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(SEQ ID NO：9)之至少19個接續核苷酸的核苷酸序列，並且該正義股包含具有核苷酸序列GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(SEQ ID NO：10)之至少19個接續核苷酸的核苷酸序列；其中，該雙股RNAi劑或其鹽包含至少一個經修飾之核苷酸；其中，該等核苷酸之修飾之至少一者係熱去安定化核苷酸修飾。
另一方面，本發明係提供降低受試者諸如患有AGT相關疾患例如高血壓之受試者血壓量級的方法。該方法包括對受試者給藥約50mg至約800mg(例如，約50至約200mg、約50mg至約500mg、約100mg至約800mg、約100mg至約500mg、約100mg至約300mg、約200mg至約300mg、約200mg至約400mg、約200mg至約500mg、約200mg至約800mg、約300mg至約800mg、約300mg至約 500mg、約300mg至約4000mg、約400mg至約800mg、約400mg至約500mg，例如，約50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750或約800mg)之固定劑量的雙股核糖核酸(RNAi)劑或其鹽，從而降低該受試者之血壓量級，其中，該雙股RNAi劑或其鹽包含形成雙股區域之正義股及反義股，其中，該反義股包含具有核苷酸序列UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(SEQ ID NO：9)之至少19個接續核苷酸的核苷酸序列，並且該正義股包含具有核苷酸序列GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(SEQ ID NO：10)之至少19個接續核苷酸的核苷酸序列；其中，該雙股RNAi劑或其鹽包含至少一個經修飾之核苷酸；其中，該等核苷酸之修飾之至少一者係熱去安定化核苷酸修飾。
於一些態樣中，固定劑量係以每個月一次之間隔給藥至受試者。於其他態樣中，固定劑量係以每季一次之間隔給藥至受試者。於一些態樣中，固定劑量係以每半年一次之間隔給藥至受試者。
於一些態樣中，受試者係以約50mg至約200mg之固定劑量給藥。於其他態樣中，受試者係以約200mg至約400mg之固定劑量給藥。於一些態樣中，受試者係以約400mg至約800mg之固定劑量給藥。
於一些態樣中，受試者係以約100mg之固定劑量給藥。於一些態樣中，受試者係以約200mg之固定劑量給藥。於一些態樣中，受試者係以約300mg之固定劑量給藥。於一些態樣中，受試者係以約400mg之固定劑量給藥。於一些態樣中，受試者係以約500mg之固定劑量給藥。於其他態樣中，受試者係以約600mg之固定劑量給藥。於一些態樣中，受試者係以約800mg之固定劑量給藥。
於一些態樣中，雙股RNAi劑或其鹽係經皮下或靜脈內給藥至受試者。於一些態樣中，皮下給藥係皮下注射，例如，皮下自我給藥。於其他態樣中，靜脈內給藥係靜脈內注射。
於一些態樣中，反義股包含具有核苷酸序列UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(SEQ ID NO：9)之至少20個接續核苷酸的核苷酸序列，以及正義股包含具有核苷酸序列GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(SEQ ID NO：10)之至少20個接續核苷酸的核苷酸序列。
於其他態樣中，反義股包含具有核苷酸序列UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(SEQ ID NO：9)之至少21個接續核苷酸的核苷酸序列，以及正義股包含具有核苷酸序列GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(SEQ ID NO：10)之至少20個接續核苷酸的核苷酸序列。
於一些態樣中，反義股包含具有核苷酸序列UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(SEQ ID NO：9)之至少22個接續核苷酸的核苷酸序列，以及正義股包含具有核苷酸序列GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(SEQ ID NO：10)之至少20個接續核苷酸的核苷酸序列。
於一些態樣中，反義股包含核苷酸序列UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(SEQ ID NO：9)，以及正義股包含核苷酸序列GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(SEQ ID NO：10)。
於一些態樣中，反義股由核苷酸序列UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(SEQ ID NO：9)組成，以及正義股由核苷酸序列GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(SEQ ID NO：10)組成。
於一些態樣中，正義股之實質上全部之核苷酸係經修飾之核苷酸。於其他態樣中，反義股之實質上全部之核苷酸係經修飾之核苷酸。
於一些態樣中，正義股之全部核苷酸係經修飾之核苷酸。於一些態樣中，反義股之全部核苷酸係經修飾之核苷酸。
於一些態樣中，核苷酸修飾之至少一者選自由下列所成群組：脫氧核苷酸、3’-末端脫氧胸腺嘧啶(dT)核苷酸、2'-O-甲基修飾之核苷酸、2'-氟修飾之核苷酸、2'-脫氧修飾之核苷酸、鎖定之核苷酸、未鎖定之核苷酸、構形限定之核苷酸、約束之乙基核苷酸、無鹼基之核苷酸、2’-胺基修飾之核苷酸、2’-O-烯丙基修飾之核苷酸、2’-C-烷基修飾之核苷酸、2’-羥基修飾之核苷酸、2’-甲氧基乙基修飾之核苷酸、2’-O-烷基修飾之核苷酸、N-嗎啉基核苷酸、胺基磷酸酯、包含非天然鹼基之核苷酸、四氫呋喃修飾之核苷酸、1,5-失水己糖醇修飾之核苷酸、環己基修飾之核苷酸、包含硫代磷酸酯基團之核苷酸、包含甲基膦酸酯基團之核苷酸、包含5’-磷酸酯之核苷酸、包含5’-磷酸酯模擬物之核苷酸、熱去安定化之核苷酸、二醇修飾之核苷酸(GNA)、及2-O-(N-甲基丙烯醯胺)修飾之核苷酸；及其組合。
於一些態樣中，核苷酸修飾之至少一者選自由下列所成群組：脫氧核苷酸、2’-O-甲基修飾之核苷酸、2’-氟修飾之核苷酸、2’-脫氧修飾之核苷酸、二醇修飾之核苷酸(GNA)以及2-O-(N-甲基乙醯胺)修飾之核苷酸；及其組合。
於一些態樣中，雙股區域係19至23個核苷酸對之長度，19至21個核苷酸對之長度，21至23個核苷酸對之長度，或21個核苷酸對之長度。
於一些態樣中，每一個獨立為19至23個核苷酸之長度，19至25個核苷酸之長度，或21至23個核苷酸之長度。於一些態樣中，正義股係21個核苷酸之長度，以及反義股係23個核苷酸之長度。
於一些態樣中，至少一股包含具有至少1個核苷酸之3’突出；或具有至少2個核苷酸之3’突出。
於一些態樣中，雙股RNAi劑或其鹽復包含至少一個硫代磷酸酯類或甲基膦酸酯類核苷酸間鏈結。於一些態樣中，硫代磷酸酯類或甲基膦酸酯類核苷酸間鏈結位於一股之3’-末端。於一些態樣中，該股係反義股。於其他態樣中，該股係正義股。
於一些態樣中，硫代磷酸酯類或甲基膦酸酯類核苷酸間鏈結位於一股之5’-末端。於一些態樣中，該股係反義股。於其他態樣中，該股係正義股。
於一些態樣中，硫代磷酸酯類或甲基膦酸酯類核苷酸間鏈結位於一股之5’-末端及3’-末端兩處。於一些態樣中，該股係反義股。
一方面，本發明係提供在受試者體內抑制血管收縮素原(AGT)之表現的方法。該方法包括對受試者給藥約50mg至約800mg(例如，約50至約200mg、約50mg至約500mg、約100mg至約800mg、約100mg至約500mg、約100mg至約300mg、約200mg至約300mg、約200mg至約400mg、約200mg至約500mg、約200mg至約 800mg、約300mg至約800mg、約300mg至約500mg、約300mg至約4000mg、約400mg至約800mg、約400mg至約500mg，例如，約50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750或約800mg)之固定劑量的雙股核糖核酸(RNAi)劑或其鹽，從而在該受試者體內抑制AGT基因之表現，其中，該雙股RNAi劑或其鹽包含形成雙股區域之一正義股及一反義股，其中，該反義股包含具有經修飾之核苷酸序列usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(SEQ ID NO：11)之至少19個接續核苷酸的經修飾之核苷酸序列，並且該正義股包含具有經修飾之核苷酸序列gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(SEQ ID NO：12)之至少19個接續核苷酸的經修飾之核苷酸序列；其中，a係2'-O-甲基腺苷-3’-磷酸酯，c係2’-O-甲基胞苷-3’-磷酸酯，g係2’-O-甲基鳥苷-3’-磷酸酯，u係2’-O-甲基尿苷-3’-磷酸酯，Af係2’-氟腺苷-3’-磷酸酯，Cf係2’-氟胞苷-3’-磷酸酯，Gf係2’-氟鳥苷-3’-磷酸酯，Uf係2’-氟腺苷-3’-磷酸酯，(Tgn)係胸腺嘧啶-二醇核酸(GNA)S-異構物，以及s係硫代磷酸酯鏈結。
另一方面，本發明係提供治療將受益於AGT表現減低之受試者例如處於發展出AGT相關疾患例如高血壓風險下之受試者的方法。該方法包括對受試者給藥約50mg至約800mg(例如，約50至約200mg、約50mg至約500mg、約100mg至約800mg、約100mg至約500mg、約100mg至約300mg、約200mg至約300mg、約200mg至約400mg、約200mg至約500mg、約200mg至約800mg、約300mg至約800mg、約300mg至約500mg、約300mg至約4000mg、約400mg至約800mg、約400mg至約500mg，例如，約50、100、150、200、250、 300、350、400、450、500、550、600、650、700、750或約800mg)之固定劑量的雙股核糖核酸(RNAi)劑或其鹽，從而治療將受益於AGT表現減低之受試者，其中，該雙股RNAi劑或其鹽包含形成雙股區域之正義股及反義股，其中，該反義股包含具有經修飾之核苷酸序列usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(SEQ ID NO：11)之至少19個接續核苷酸的經修飾之核苷酸序列，並且該正義股包含具有經修飾之核苷酸序列gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(SEQ ID NO：12)之至少19個接續核苷酸的經修飾之核苷酸序列；其中，a係2'-O-甲基腺苷-3’-磷酸酯，c係2’-O-甲基胞苷-3’-磷酸酯，g係2’-O-甲基鳥苷-3’-磷酸酯，u係2’-O-甲基尿苷-3’-磷酸酯，Af係2’-氟腺苷-3’-磷酸酯，Cf係2’-氟胞苷-3’-磷酸酯，Gf係2’-氟鳥苷-3’-磷酸酯，Uf係2’-氟腺苷-3’-磷酸酯，(Tgn)係胸腺嘧啶-二醇核酸(GNA)S-異構物，以及s係硫代磷酸酯鏈結。
一方面，本發明係提供治療患有AGT相關疾患例如高血壓之受試者的方法。該方法包括對受試者給藥約50mg至約800mg(例如，約50至約200mg、約50mg至約500mg、約100mg至約800mg、約100mg至約500mg、約100mg至約300mg、約200mg至約300mg、約200mg至約400mg、約200mg至約500mg、約200mg至約800mg、約300mg至約800mg、約300mg至約500mg、約300mg至約4000mg、約400mg至約800mg、約400mg至約500mg，例如，約50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750或約800mg)之固定劑量的雙股核糖核酸(RNAi)劑或其鹽，從而治療患有AGT相關疾患之受試者，其中，該雙股RNAi劑或其鹽包含形成雙股 區域之正義股及反義股，其中，該反義股包含具有經修飾之核苷酸序列usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(SEQ ID NO：11)之至少19個接續核苷酸的經修飾之核苷酸序列，並且該正義股包含具有經修飾之核苷酸序列gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(SEQ ID NO：12)之至少19個接續核苷酸的經修飾之核苷酸序列；其中，a係2'-O-甲基腺苷-3’-磷酸酯，c係2’-O-甲基胞苷-3’-磷酸酯，g係2’-O-甲基鳥苷-3’-磷酸酯，u係2’-O-甲基尿苷-3’-磷酸酯，Af係2’-氟腺苷-3’-磷酸酯，Cf係2’-氟胞苷-3’-磷酸酯，Gf係2’-氟鳥苷-3’-磷酸酯，Uf係2’-氟腺苷-3’-磷酸酯，(Tgn)係胸腺嘧啶-二醇核酸(GNA)S-異構物，以及s係硫代磷酸酯鏈結。
另一方面，本發明係提供降低受試者體內血壓量級的方法。該方法包括對受試者給藥約50mg至約800mg(例如，約50至約200mg、約50mg至約500mg、約100mg至約800mg、約100mg至約500mg、約100mg至約300mg、約200mg至約300mg、約200mg至約400mg、約200mg至約500mg、約200mg至約800mg、約300mg至約800mg、約300mg至約500mg、約300mg至約4000mg、約400mg至約800mg、約400mg至約500mg，例如，約50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750或約800mg)之固定劑量的雙股核糖核酸(RNAi)劑或其鹽，從而降低受試者之血壓量級，其中，該雙股RNAi劑或其鹽包含形成雙股區域之正義股及反義股，其中，該反義股包含具有經修飾之核苷酸序列usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(SEQ ID NO：11)之至少19個接續核苷酸的經修飾之核苷酸序列，並且該正義股包含具有經修飾之核苷酸序列 gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(SEQ ID NO：12)之至少19個接續核苷酸的經修飾之核苷酸序列；其中，a係2'-O-甲基腺苷-3’-磷酸酯，c係2’-O-甲基胞苷-3’-磷酸酯，g係2’-O-甲基鳥苷-3’-磷酸酯，u係2’-O-甲基尿苷-3’-磷酸酯，Af係2’-氟腺苷-3’-磷酸酯，Cf係2’-氟胞苷-3’-磷酸酯，Gf係2’-氟鳥苷-3’-磷酸酯，Uf係2’-氟腺苷-3’-磷酸酯，(Tgn)係胸腺嘧啶-二醇核酸(GNA)S-異構物，以及s係硫代磷酸酯鏈結。
於一些態樣中，固定劑量係以每個月一次之間隔給藥至受試者。於其他態樣中，固定劑量係以每季一次之間隔給藥至受試者。於一些態樣中，固定劑量係以每半年一次之間隔給藥至受試者。
於一些態樣中，受試者係以約50mg至約200mg之固定劑量給藥。於其他態樣中，受試者係以約200mg至約400mg之固定劑量給藥。於一些態樣中，受試者係以約400mg至約800mg之固定劑量給藥。
於一些態樣中，受試者係以約100mg之固定劑量給藥。於一些態樣中，受試者係以約200mg之固定劑量給藥。於一些態樣中，受試者係以約300mg之固定劑量給藥。於一些態樣中，受試者係以約400mg之固定劑量給藥。於一些態樣中，受試者係以約500mg之固定劑量給藥。於其他態樣中，受試者係以約600mg之固定劑量給藥。於一些態樣中，受試者係以約800mg之固定劑量給藥。
於一些態樣中，雙股RNAi劑或其鹽係經皮下或靜脈內給藥至受試者。於一些態樣中，皮下給藥係皮下注射，例如，皮下自我給藥。於其他態樣中，靜脈內給藥係靜脈內注射。
於一些態樣中，反義股包含具有經修飾之核苷酸序列usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(SEQ ID NO：11)之至少20個接續核苷酸的經修飾之核苷酸序列，以及正義股包含具有經修飾之核苷酸序列gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(SEQ ID NO：12)之至少20個接續核苷酸的經修飾之核苷酸序列。
於一些態樣中，反義股包含具有經修飾之核苷酸序列usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(SEQ ID NO：11)之至少21個接續核苷酸的經修飾之核苷酸序列，以及正義股包含具有經修飾之核苷酸序列gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(SEQ ID NO：12)之至少20個接續核苷酸的經修飾之核苷酸序列。
於一些態樣中，反義股包含具有經修飾之核苷酸序列usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(SEQ ID NO：11)之至少22個接續核苷酸的經修飾之核苷酸序列，以及正義股包含具有經修飾之核苷酸序列gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(SEQ ID NO：12)之至少20個接續核苷酸的經修飾之核苷酸序列。
於一些態樣中，反義股包含經修飾之核苷酸序列usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(SEQ ID NO：11)，以及正義股包含經修飾之核苷酸序列gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(SEQ ID NO：12)。
於其他態樣中，反義股由經修飾之核苷酸序列usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(SEQ ID NO：11)組成，以及正義股由經修飾之核苷酸序列gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(SEQ ID NO：12)組成。
於一些態樣中，雙股RNAi劑或其鹽復包含配位子。於其他態樣中，配位子接合至正義股之3’端。
於一些態樣中，配位子係N-乙醯基半乳胺糖(GalNAc)衍生物。於一些態樣中，GalNAc衍生物包含經由單價、二價或三價分支鏈之鏈結基附接的一個或多個GalNAc衍生物。
於一些態樣中，配位子係
Figure 109138855-A0202-12-0016-1
於其他態樣中，正義股之3’端接合至如下述式中所示之配位子
Figure 109138855-A0202-12-0016-2
以及，其中，X係O或S。
於一些態樣中，受試者係人。於一些態樣中，受試者具有至少130mm Hg之收縮壓或至少80mm Hg之舒張壓。於其他態樣中，受試者具有至少140mm Hg之收縮壓或至少80mm Hg之舒張壓。
於一些態樣中，受試者係易受鹽敏感度影響、超重、肥胖、妊娠、備孕、患有第2型糖尿病、患有第1型糖尿病或腎功能減退之群組的一部分。
於一些態樣中，將受益於AGT表現減低之疾患係AGT相關疾患。於一個態樣中，AGT相關疾患係高血壓。於一些態樣中，AGT相關疾患選自由下列所成群組：血壓偏高、高血壓、臨界性高血壓、原發性高血壓、繼發性高血壓、孤立性收縮期或舒張期高血壓、妊娠相關高血壓、糖尿病性高血壓、阻抗性高血壓、難治性高血壓、陣發性高血壓、腎血管性高血壓、Goldblatt氏高血壓、眼性高血壓、青光眼、肺性高血壓、門靜脈高血壓、全身性靜脈高血壓、收縮期高血壓、底線性高血壓、高血壓性心臟病、高血壓腎病變、動脈粥狀硬化、動脈硬化、血管病變、糖尿病腎病變、糖尿病視網膜病變、慢性心衰竭、心肌病、糖尿病性心肌病、夜間低血壓、腎小球硬化、主動脈狹窄、主動脈動脈瘤、心室纖維化、心衰竭、心肌梗塞、心絞痛、中風、腎病、腎衰竭、全身性硬化症、宮內生長遲緩(IUGR)、胎兒生長遲緩、肥胖、肝脂肪變性/脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、葡萄糖失耐、第2型糖尿病、以及代謝症候群。於一個態樣中，AGT相關疾患係高血壓。於一態樣中，高血壓係選自由下列所成群組：血壓偏高、高血壓、臨界性高血壓、原發性高血壓、繼發性高血壓、孤立性收縮期或舒張期高血壓、妊娠相關高血壓、糖尿病性高血壓、阻抗性高血壓、難治性高血壓、陣發性高血壓、腎血管性高血壓、Goldblatt氏高血壓、眼性高血壓、青光眼、肺性高血壓、門靜 脈高血壓、全身性靜脈高血壓、收縮期高血壓、底線性高血壓、高血壓性心臟病及高血壓腎病變。
於一些態樣中，血壓包含收縮壓及/或舒張壓。
於一些態樣中，給藥導致AGT表現下降至少30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、或95%。於一些態樣中，受試者之血液或血清樣品中之AGT蛋白質量級下降至少30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或95%。
於一些態樣中，給藥導致收縮壓及/或舒張壓之下降。於一些態樣中，收縮壓及/或舒張壓下降至少4mmHg、5mmHg、6mmHg、7mmHg、8mmHg、9mmHg或10mmHg。
於一些態樣中，該方法復包括將用於治療高血壓之附加治療劑給藥至受試者。於一些態樣中，附加治療劑選自由下列所成群組：利尿劑、血管收縮素轉化酶(ACE)抑制劑、血管收縮素II受體拮抗劑、β-阻斷劑、血管舒張劑、鈣通道阻斷劑、醛固酮拮抗劑、α2-促效劑、腎素抑制劑、α-阻斷劑、周圍作動腎上腺素劑、選擇性D1受體部分促效劑、非選擇性α-腎上腺素拮抗劑、合成物、類固醇性抗鹽皮質類固醇劑、前述者之任何組合、以及配製為多種劑之組合的高血壓治療劑。於一些態樣中，附加治療劑包含血管收縮素II受體拮抗劑。於其他態樣中，血管收縮素II受體拮抗劑選自由下列所成群組：洛沙坦、纈沙坦、奧美沙坦、依普沙坦及阿齊沙坦。
於一些態樣中，RNAi劑係作為醫藥組成物給藥。
於一些態樣中，RNAi劑係於未緩衝溶液中給藥。於一些態樣中，未緩衝溶液係鹽水或水。
於一些態樣中，RNAi劑係於緩衝溶液中給藥。於一些態樣中，緩衝溶液包含醋酸鹽、枸櫞酸鹽、醇溶榖蛋白、碳酸鹽、或磷酸鹽、或其任何組合。於一些態樣中，緩衝溶液係磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)。
本發明亦提供實施本發明之方法之套組，如本文中所揭示者。套組包含a)RNAi劑，以及b)使用說明書，以及c)視需要，用於將RNAi劑給藥至受試者之裝置。
另一方面，本發明亦提供治療AGT相關疾患之醫藥組成物，其包含用於抑制血管收縮素原(AGT)之表現的雙股核糖核酸(RNAi)劑或其鹽。醫藥組成物包含dsRNA劑，該dsRNA劑包含形成雙股區域之正義股及反義股，其中，該反義股包含具有核苷酸序列UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(SEQ ID NO：9)之至少19個接續核苷酸的核苷酸序列，並且該正義股包含具有核苷酸序列GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(SEQ ID NO：10)之至少19個接續核苷酸的核苷酸序列；其中，該等核苷酸中不超過五者不包含修飾；其中，該等核苷酸修飾之至少一者係熱去安定化核苷酸修飾；其中，該雙股RNAi劑係以至少50mg/劑之劑量每個月給藥不超過一次，例如，以約50mg至約800mg之劑量每個月給藥約一次(例如，約50mg至約200mg、約50mg至約500mg、約100mg至約800mg、約100mg至約500mg、約100mg至約300mg、約200mg至約300mg、約200mg至約400mg、約200mg至約500mg、約200mg至約800mg、約300mg至約800 mg、約300mg至約500mg、約300mg至約4000mg、約400mg至約800mg、約400mg至約500mg，例如，約50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、或約800mg)。
於某些態樣中，反義股包含具有核苷酸序列UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(SEQ ID NO：9)之至少20個接續核苷酸的核苷酸序列。於某些態樣中，正義股復包含具有核苷酸序列GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(SEQ ID NO：10)之至少20個接續核苷酸的核苷酸序列。
於某些態樣中，反義股包含具有核苷酸序列UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(SEQ ID NO：9)之至少21個接續核苷酸的核苷酸序列。於某些態樣中，正義股復包含核苷酸序列GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(SEQ ID NO：10)。
於某些態樣中，反義股包含具有核苷酸序列UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(SEQ ID NO：9)之至少22個接續核苷酸的核苷酸序列。於某些態樣中，正義股復包含具有核苷酸序列GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(SEQ ID NO：10)。
於某些態樣中，反義股包含核苷酸序列UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(SEQ ID NO：9)。於某些態樣中，正義股復包含核苷酸序列GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(SEQ ID NO：10)。
於某些態樣中，反義股之核苷酸序列由UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(SEQ ID NO：9)組成。於某些態樣 中，正義股之核苷酸序列復由GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(SEQ ID NO：10)組成。
於某些態樣中，正義股之全部核苷酸及反義股之全部核苷酸包含核苷酸修飾。
於某些態樣中，核苷酸修飾之至少一者選自由下列所成群組：脫氧核苷酸、3’-端脫氧胸腺嘧啶(dT)核苷酸、2'-O-甲基修飾之核苷酸、2'-氟修飾之核苷酸、2'-脫氧修飾之核苷酸、鎖定之核苷酸、未鎖定之核苷酸、構形限定之核苷酸、約束之乙基核苷酸、無鹼基之核苷酸、2’-胺基修飾之核苷酸、2’-O-烯丙基修飾之核苷酸、2’-C-烷基修飾之核苷酸、2’-羥基修飾之核苷酸、2’-甲氧基乙基修飾之核苷酸、2’-O-烷基修飾之核苷酸、N-嗎啉基核苷酸、胺基磷酸酯、包含非天然鹼基之核苷酸、四氫呋喃修飾之核苷酸、1,5-失水己糖醇修飾之核苷酸、環己基修飾之核苷酸、包含硫逐磷酸酯基團之核苷酸、包含甲基膦酸酯基團之核苷酸、包含5’-磷酸酯之核苷酸、包含5’-磷酸酯模擬物之核苷酸、熱去安定化之核苷酸、二醇修飾之核苷酸(GNA)、及2-O-(N-甲基丙烯醯胺)修飾之核苷酸；及其組合。於某些態樣中，核苷酸修飾之至少一者選自由下列所成群組：脫氧核苷酸、2’-O-甲基修飾之核苷酸、2’-氟修飾之核苷酸、2’-脫氧修飾之核苷酸、二醇修飾之核苷酸(GNA)以及2-O-(N-甲基乙醯胺)修飾之核苷酸；及其組合。
於某些態樣中，核苷酸修飾選自由下列所成群組：2’-甲氧基乙基、2’-氟、2'-脫氧修飾之核苷酸乙基GNA；及其組合。
於某些態樣中，雙股區域係選自下列之長度：19至23個核苷酸對之長度；19至21個核苷酸對之長度；21至23個核苷酸對之長度； 21個核苷酸對之長度；19至30個核苷酸對之長度；19至25個核苷酸之長度；23至27個核苷酸對之長度。於某些態樣中，雙股區域具有19至21個核苷酸對之長度。
於某些態樣中，雙股RNAi或其鹽之各股獨立為選自下列之長度：19至30個核苷酸之長度，19至23個核苷酸之長度，以及21至23個核苷酸之長度。於某些態樣中，各股獨立為21至23個核苷酸之長度。於某些態樣中，正義股係21個核苷酸之長度，以及反義股係23個核苷酸之長度。
於某些態樣中，至少一股包含至少1個核苷酸的3’突出。於某些態樣中，至少一股包含至少2個核苷酸的3’突出。
於某些態樣中，該劑復包含至少一個硫代磷酸酯類或甲基硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結。於某些態樣中，硫代磷酸酯類或甲基膦酸酯類核苷酸間鏈結位於一股之3’-末端。於某些態樣中，該股係反義股。於某些態樣中，該股係正義股。
於某些態樣中，硫代磷酸酯類或甲基膦酸酯類核苷酸間鏈結位於一股之5’-末端。於某些態樣中，該股係反義股。於某些態樣中，該股係正義股。
於某些態樣中，硫代磷酸酯類或甲基膦酸酯類核苷酸間鏈結位於一股之5’-末端及3’-末端兩處。於某些態樣中，該股係反義股。
本發明係提供治療AGT相關疾患之醫藥組成物，其包含用於抑制血管收縮素原(AGT)之表現的雙股核糖核酸(RNAi)劑或其鹽。醫藥組成物包含雙股RNAi劑或其鹽，該劑包含形成雙股區域之正義股及反義 股，其中，該反義股包含具有經修飾之核苷酸序列usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(SEQ ID NO：11)之至少19個接續核苷酸的經修飾之核苷酸序列，並且該正義股包含具有經修飾之核苷酸序列gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(SEQ ID NO：12)之至少19個接續核苷酸的經修飾之核苷酸序列；其中，化學修飾定義如下：a係2'-O-甲基腺苷-3’-磷酸酯，c係2’-O-甲基胞苷-3’-磷酸酯，g係2’-O-甲基鳥苷-3’-磷酸酯，u係2’-O-甲基尿苷-3’-磷酸酯，Af係2’-氟腺苷-3’-磷酸酯，Cf係2’-氟胞苷-3’-磷酸酯，Gf係2’-氟鳥苷-3’-磷酸酯，Uf係2’-氟腺苷-3’-磷酸酯，(Tgn)係胸腺嘧啶-二醇核酸(GNA)S-異構物，以及s係硫代磷酸酯鏈結；以及，其中，醫藥組成物係以至少50mg/劑之劑量每個月給藥不超過一次。
於某些態樣中，反義股包含具有經修飾之核苷酸序列usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(SEQ ID NO：11)之至少20個接續核苷酸的經修飾核苷酸序列。於某些態樣中，正義股復包含具有經修飾之核苷酸序列gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(SEQ ID NO：12)之至少20個接續核苷酸的經修飾核苷酸序列。
於某些態樣中，反義股包含具有經修飾之核苷酸序列usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(SEQ ID NO：11)之至少21個接續核苷酸的經修飾核苷酸序列。於某些態樣中，正義股復包含經修飾之核苷酸序列gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(SEQ ID NO：12)。
於某些態樣中，反義股包含具有經修飾之核苷酸序列usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(SEQ ID NO：11)之至少22個接 續核苷酸的經修飾核苷酸序列。於某些態樣中，正義股復包含經修飾之核苷酸序列gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(SEQ ID NO：12)。
於某些態樣中，反義股包含經修飾之核苷酸序列usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(SEQ ID NO：11)。於某些態樣中，正義股復包含經修飾之核苷酸序列gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(SEQ ID NO：12)。
於某些態樣中，反義股的經修飾之核苷酸序列由usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(SEQ ID NO：11)組成。於某些態樣中，正義股的經修飾之核苷酸序列由gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(SEQ ID NO：12)組成。
於某些態樣中，雙股RNAi劑或其鹽復包含配位子。於某些態樣中，配位子接合至正義股之3’端。於某些態樣中，配位子係N-乙醯基半乳胺糖(GalNAc)衍生物。於某些態樣中，GalNAc衍生物包含經由單價、二價或三價分支鏈之鏈結基附接的一個或多個GalNAc衍生物。
於某些態樣中，配位子係
Figure 109138855-A0202-12-0024-3
於某些態樣中，正義股之3’端接合至如下述式中所示之配位子
Figure 109138855-A0202-12-0025-4
以及，其中，X係O或S。於某些態樣中，X係O。
於某些態樣中，正義股包含核苷酸序列gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca，其中正義股之3’端接合至L96(N-[參(GalNAc-烷基)-醯胺基十二烷醯基)]-4-羥基脯胺醇Hyp-(GalNAc-alkyl)3)，以及，反義股包含核苷酸序列usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa；其中，化學修飾定義如下：a係2'-O-甲基腺苷-3’-磷酸酯，c係2’-O-甲基胞苷-3’-磷酸酯，g係2’-O-甲基鳥苷-3’-磷酸酯，u係2’-O-甲基尿苷-3’-磷酸酯，Af係2’-氟腺苷-3’-磷酸酯，Cf係2’-氟胞苷-3’-磷酸酯，Gf係2’-氟鳥苷-3’-磷酸酯，Uf係2’-氟腺苷-3’-磷酸酯，(Tgn)係胸腺嘧啶-二醇核酸(GNA)S-異構物，以及s係硫代磷酸酯鏈結。
於某些態樣中，雙股RNAi劑或其鹽係以每劑50mg至500mg之劑量給藥。於某些態樣中，雙股RNAi劑或其鹽係以每劑50mg至400mg之劑量給藥。於某些雙股RNAi劑之態樣中，雙股RNAi劑或其鹽係以每劑50mg至300mg之劑量給藥。
於一些態樣中，雙股RNAi劑或其鹽係以約50mg至約200mg之固定劑量給藥。於其他態樣中，雙股RNAi劑或其鹽係以約200mg 至約400mg之固定劑量給藥。於一些態樣中，雙股RNAi劑或其鹽係以約400mg至約800mg之固定劑量給藥。
於一些態樣中，雙股RNAi劑或其鹽係約100mg之固定劑量給藥。於一些態樣中，雙股RNAi劑或其鹽係約200mg之固定劑量給藥。於一些態樣中，雙股RNAi劑或其鹽係約300mg之固定劑量給藥。於一些態樣中，雙股RNAi劑或其鹽係約400mg之固定劑量給藥。於一些態樣中，雙股RNAi劑或其鹽係約500mg之固定劑量給藥。於其他態樣中，雙股RNAi劑或其鹽係約600mg之固定劑量給藥。於一些態樣中，雙股RNAi劑或其鹽係約800mg之固定劑量給藥。
於某些態樣中，醫藥組成物係以每個月一次至每六個月一次之頻率給藥。於某些態樣中，醫藥組成物係以每個月一次至每三個月一次之頻率給藥。於某些態樣中，醫藥組成物係以每三個月一次至每六個月一次之頻率給藥。
於一些態樣中，醫藥組成物係以每個月一次之間隔給藥至受試者。於其他態樣中，醫藥組成物係以每季一次之間隔給藥至受試者。於一些態樣中，醫藥組成物係以每半年一次之間隔給藥至受試者。
於某些態樣中雙股RNAi劑係以50mg至400mg每劑之劑量以每個月一次至每六個月一次之頻率給藥。
於某些態樣中，AGT相關疾患選自由下列所成群組：血壓偏高、高血壓、臨界性高血壓、原發性高血壓、繼發性高血壓、孤立性收縮期或舒張期高血壓、妊娠相關高血壓、糖尿病性高血壓、阻抗性高血壓、難治性高血壓、陣發性高血壓、腎血管性高血壓、Goldblatt氏高血壓、眼 性高血壓、青光眼、肺性高血壓、門靜脈高血壓、全身性靜脈高血壓、收縮期高血壓、底線性高血壓、高血壓性心臟病、高血壓腎病變、動脈粥樣硬化、動脈硬化、血管病變、糖尿病腎病變、糖尿病視網膜病變、慢性心衰竭、心肌病、糖尿病性心肌病、夜間低血壓、腎小球硬化、主動脈狹窄、主動脈動脈瘤、心室纖維化、心衰竭、心肌梗塞、心絞痛、中風、腎病、腎衰竭、全身性硬化症、宮內生長遲緩(IUGR)、胎兒生長遲緩、肥胖、肝脂肪變性/脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、葡萄糖失耐、第2型糖尿病、以及代謝症候群。
於某些態樣中，受試者具有至少130mm Hg之收縮壓或至少80mm Hg之舒張壓。於某些態樣中，受試者具有至少140mm Hg之收縮壓及至少80mm Hg之舒張壓。
於某些態樣中，受試者係易受鹽敏感度影響、超重、肥胖、妊娠、備孕、患有第2型糖尿病或患有第1型糖尿病之群組的一部分。
於某些態樣中，受試者患有AGT相關疾患，並且復係易受鹽敏感度影響、超重、肥胖、妊娠、備孕、患有第2型糖尿病或患有第1型糖尿病之群組的一部分。
於某些態樣中，受試者具有減退之腎功能。於某些態樣中，受試者患有AGT相關疾患並且復具有減退之腎功能。
於某些態樣中，醫藥組成物復包含藥學上可接受之載劑。
於某些態樣中，該組成物用於藉由皮下注射或靜脈內注射給藥。
本發明復提供醫藥組成物用於治療AGT相關疾患之任何方法中之用途，或用於製備用於治療AGT相關疾患之方法的藥物中之用途。
圖1係顯示，於皮下投藥單獨之安慰劑以及10mg、25mg、50mg、100mg或200mg之AD-85481後第0天，血清AGT相對於AGT基線之百分比改變的圖。
圖2係顯示，於皮下投藥單獨之安慰劑以及10mg、25mg、50mg、100mg或200mg之AD-85481後第8週，收縮壓(SBP)及舒張壓(DBP)相對於基線之改變的圖。各群組中受試者數係顯示於x軸。
本發明係提供抑制血管收縮素原(AGT)基因之表現的方法。本發明亦提供治療患有將受益於AGT表現減低之疾患的受試者的方法，或治療受試者之AGT相關疾患的方法。此外，本發明係提供受試者體內降低血壓量級的方法。該方法包括將如本文所揭示的靶向AGT之雙股RNAi劑或其鹽以固定劑量例如約50mg至約800mg給藥至受試者。
下列詳細說明揭露，使用靶向AGT之雙股RNAi劑或其鹽或包含固定劑量之此類RNAi劑或其鹽之醫藥組成物，來抑制AGT基因表現的方法、治療將受益於AGT基因表現減低之受試者例如易患或被診斷患有AGT相關疾患例如高血壓之受試者的方法，用於抑制AGT基因之表現。
I.定義
為了更容易地理解本發明，首先定義某些術語。此外，應注意，無論何時，當應用參數之數值或數值範圍，該等數值及處於該等所引用之數值中間的範圍亦作為本發明之一部分。
本文中使用之冠詞「一」指代該冠詞之語法賓語的一者或超過一者(亦即，至少一者)。舉例而言，「一元件」意指一個元件或超過一個元件如複數個元件。
本文中使用之術語「包括」意指「包括但不限於」，且與後者可互換地使用。
除非語境中明確排除，否則本文中使用之術語「或」意指「及/或」，且與後者可互換地使用。例如，「正義股或反義股」理解為「正義股或反義股或者正義股及反義股」。
本文中使用之術語「約」意指處於該技藝中之公差範圍內。例如，「約」可理解為與均值偏離2標準偏差。於某些態樣中，約意指±10%。於某些態樣中，約意指±5%。當「約」存在於一系列數字或範圍之前時，理解為「約」可修飾該一系列數字或範圍中之每一個。處於數字或一系列數字之前的術語「至少」理解為包括與該術語「至少」相鄰之數字，以及後面之全部數字或邏輯上可包括之整數，如從語境中明顯可知者。例如，核酸分子中之核苷酸的數目必需為整數。例如，「21個核苷酸之核酸分子的至少19個核苷酸」意指19、20或21個核苷酸具有所指示之特性。當「至少」存在於一系列數字或範圍之前時，理解為「至少」可修飾該一系列數字或範圍中之每一個。
如本文所用，「不超過」或「少於」理解為與短語相鄰之數值以及邏輯上更低之數值或整數，如從語境中邏輯上推知者，到零為止。例如，具有「不超過2個核苷酸」之突出的雙螺旋具有2、1或0個核苷酸之突出。當「不超過」存在於一系列數字或範圍之前時，理解為「不超過」可修飾該一系列數字或範圍中之每一個。如本文中所用，範圍包括上限及下限兩者。
在序列與其在轉錄本或其他序列所指示之位點之間存在矛盾的情況下，以本說明書中敘述之核苷酸序列為準。
在化學結構與化學名稱之間存在矛盾的情況下，以化學結構為準。
如本文中所用，「血管收縮素原」與術語「AGT」可互換使用，指稱習知之基因及多肽，該領域中亦已知為Serpin肽酶抑制劑，演化支A，成員8；α-1抗蛋白酶；抗胰蛋白酶；SERPINA8；血管收縮素I；Serpin A8；血管收縮素II；α-1抗蛋白酶血管收縮素原；抗胰蛋白酶；前血管收縮素原2；ANHU；絲胺酸蛋白酶抑制劑；以及半胱胺酸蛋白酶抑制劑。
術語「AGT」包括人AGT，其胺基酸及完全編碼序列可見於例如GenBank登錄號GI：188595658(NM_000029.3；SEQ ID NO：1)；食蟹猴(Macaca fascicularis)AGT，其胺基酸及完全編碼序列可見於例如GenBank登錄號GI：90075391(AB170313.1；SEQ ID NO：3)；小鼠(Mus musculus)AGT，其胺基酸及完全編碼序列可見於例如GenBank登錄號GI：113461997(NM_007428.3；SEQ ID NO：5)；以及大鼠(Rattus norvegicus)AGT，其胺基酸及完全編碼序列可見於例如GenBank登錄號GI：51036672(NM_134432；SEQ ID NO：7)。
AGT mRNA序列之其他示例可使用公共資料庫輕易獲得，例如，GenBank、UniProt、OMIM以及獼猴基因組項目網站。
如本文中所用，術語「AGT」亦指稱AGT基因的天然出現之DNA序列變異，諸如AGT基因中之單核苷酸多型性(SNP)。示例性SNP可見於可於www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/SNP/snp_ref.cgi？geneId=183獲得之dbSNP資料庫。AGT基因內之序列變異的非限制性示例包括，例如，彼等揭示於美國專利第5,589,584號中者，該專利之整體內容藉由引用併入本文。例如，AGT基因內之序列變異可包括：位置-532處(相對於轉錄開始位點)之C→T；位置-386處之G→A；位置-218處之G→A；位置-18處之C→T；位置-6及-10處之G→A及A→C；位置+10處(未經翻譯)之C→T；位置+521處之C→T(T174M)；位置+597處之T→C(P199P)；位置+704處之T→C(M235T；亦參見，例如，可於www.ncbi.nlm.nih.gov/SNP獲得之參考SNP(refSNP)群包括：rs699,)；位置+743處之A→G(Y248C)；位置+813處之C→T(N271N)；位置+1017處之G→A(L339L)；位置+1075處之C→A(L359M)；及/於位置+1162處之G→A(V388M)。
如本文中所用，「標靶序列」指稱於AGT基因之轉錄過程中形成之mRNA分子之核苷酸序列的接續部分，包括作為初級轉錄產物之RNA加工產物的mRNA。序列之標靶部分將至少長至足以用作RNA引導之裂解的受質，該裂解在AGT基因之轉錄過程中形成之mRNA分子的核 苷酸序列的部分處或鄰近該處。於一個態樣中，標靶序列在AGT之蛋白質編碼區域內。
靶標序列可係約19至36個核苷酸之長度，例如，較佳約19至30個核苷酸之長度。例如，標靶序列可約19至30個核苷酸之長度，19至30、19至29、19至28、19至27、19至26、19至25、19至24、19至23、19至22、19至21、19至20、20至30、20至29、20至28、20至27、20至26、20至25、20至24、20至23、20至22、20至21、21至30、21至29、21至28、21至27、21至26、21至25、21至24、21至23、或21至22個核苷酸之長度。上文引述之範圍及長度之間的範圍及長度亦視為本發明之一部分。
如本文中所使用，術語「包含序列之股」指稱包含核苷酸之鏈的寡核苷酸，其中該核苷酸藉由使用標準核苷酸命名法指稱之序列而揭示。
「G」、「C」、「A」、「T」及「U」各自通常分別表示含有鳥嘌呤、胞嘧啶、腺嘌呤、胸腺嘧啶及尿嘧啶作為鹼基之核苷酸。惟，應理解，術語「核糖核苷酸」或「核苷酸」亦可指稱經修飾之核苷酸，如下文進一步揭示者，或替代替換部分(參見，例如，表2)。熟練之人士熟知，鳥嘌呤、胞嘧啶、腺嘌呤及尿嘧啶可經由其他部分替換而基本上不改變包含承載此替換部分之核苷酸之寡核苷酸的鹼基配對特性。例如而不限於，包含肌苷作為其鹼基之核苷酸可與含有腺嘌呤、胞嘧啶或鳥嘌呤之核苷酸進行鹼基配對。因此，於本發明提出之dsRNA之核苷酸序列中，含有尿嘧啶、鳥嘌呤或腺嘌呤之核苷酸可替換為含有例如肌苷之核苷酸。於另一示 例中，寡核苷酸中任何位置之腺嘌呤及胞嘧啶可分別替換為鳥嘌呤及尿嘧啶，以與標靶mRNA形成G-U Wobble鹼基配對。含有此類替換部分之序列適用於本發明提出之組成物及方法。
如本文中可互換使用，術語「iRNA」、「RNAi劑」、「iRNA劑」、「RNA干擾劑」指稱含有如本文中定義之術語的RNA，且其經由RNA誘導之靜默複合物(RISC)途徑而介導RNA轉錄本的靶向裂解。iRNA透過被稱為RNA干擾(RNAi)之進程而引導mRNA之序列特異性降解。iRNA調控例如抑制細胞例如受試者諸如哺乳動物受試者較佳人類受試者體內之細胞中AGT基因的表現。
於一個態樣中，本發明之RNAi劑包括單股RNA，其與標靶RNA序列如AGT標靶mRNA相互作用，以引導標靶RNA之裂解。不欲受縛於理論，咸信被引入細胞內之長雙股RNA藉由被稱為切丁酶(Dicer)之第III型核酸內切酶之作用而破碎為siRNA(Sharp et al.(2001)Genes Dev.15：485)。切丁酶，亦稱核酸酶III樣酶，將daRNA加工為19至23個鹼基對之短干擾RNA，該短干擾RNA之特徵係具有兩個鹼基之3’突出(Bernstein,et al.,(2001)Nature 409：363)。隨後，siRNA被併入RNA誘導之靜默複合物(RISC)內，於該處，一種或多種解旋酶令siRNA雙螺旋解捲曲，使得補體反義股能夠引導靶標識別(Nykanen,et al.,(2001)Cell 107：309)。當結合至適宜之標靶mRNA時，RISC內之一種或多種核酸內切酶裂解標靶以誘導靜默(Elbashir,et al.,(2001)Genes Dev.15：188)。因此，於一方面，本發明係關於單股RNA(siRNA)，其於細胞內生成且促 進RISC複合物之形成，以有效靜標默靶基因亦即AGT基因。據此，本文中，術語「siRNA」亦用以指稱上揭之iRNA。
於某些態樣中，RNAi劑可係單股siRNA(ssRNAi)，其被引入細胞或有機體內以抑制標靶mRNA。單股RNAi劑結合至RISC核酸內切酶Argonaute 2，其隨後裂解標靶mRNA。該單股siRNA通常係15至30個核苷酸且經化學修飾。單股siRNA之設計及測試揭示於美國專利第8,101,348號及Lima et al.,(2012)Cell 150：883-894中，其各自之整體內容藉由引用而併入本文。本文中揭示之任何反義核苷酸序列可用作本文中揭示之單股siRNA或用作藉由Lima et al.,(2012)Cell 150：883-894中揭示之方法化學修飾者。
於某些態樣中，用於本發明之組成物、用途及方法中之「iRNA」係雙股RNA，且於本文中指稱為「雙股RNA劑」、「雙股RNA(dsRNA)分子」、「dsRNA劑」或「dsRNA」。術語「dsRNA」指稱核糖核酸分子之複合體，其具有包含兩個反平行且實質上互補之核酸股的雙螺旋結構，該兩個核酸股指稱為具有相對於標靶RNA亦即AGT基因之「正義」取向及「反義」取向。於本發明之一些態樣中，雙股RNA(dsRNA)經由轉錄後基因靜默機制而觸發標靶RNA如mRNA之降解，本文中，該機制指稱為RNA干擾或RNAi。
通常，dsRNA分子之各股核苷酸的絕大多數係非核糖核苷酸，例如，脫氧核糖核苷酸或經修飾之核苷酸。此外，如本說明書中所用，「iRNA」可包括具有化學修飾之核糖核苷酸；iRNA可包括於多個核苷酸處之實質性修飾。如本文中所用，術語「經修飾之核苷酸」指稱獨立具有 經修飾之糖部分、經修飾之核苷酸間鏈結、或經修飾之核鹼基或其任何組合的核苷酸。因此，術語「經修飾之核苷酸」涵蓋將例如官能基或原子替換為、加成至核苷酸間鏈結、糖部分或核鹼基或自其移除。適用於本發明之劑中的修飾包括本文中所揭露或該領域中已知之全部類型的修飾。對於本說明書及申請專利範圍之目的，任何此類修飾，如在siRNA類型分子中所用者，為「iRNA」或「RNAi劑」所涵蓋。
該雙螺旋區域可係允許所欲之標靶RNA經由RISC途徑而特異性降解的任何長度，且可係約19至36個鹼基對之長度範圍，如約19至30個鹼基對之長度，例如，約19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、或36個鹼基對之長度，諸如約19至30、19至29、19至28、19至27、19至26、19至25、19至24、19至23、19至22、19至21、19至20、20至30、20至29、20至28、20至27、20至26、20至25、20至24、20至23、20至22、20至21、21至30、21至29、21至28、21至27、21至26、21至25、21至24、21至23、或21至22個鹼基對之長度。於某些態樣中，該雙螺旋區域係19至21個鹼基對之長度。上文引述之範圍及長度之間的範圍及長度亦視為本發明之一部分。
形成該雙螺旋結構之兩股可係一個較大RNA分子之不同部分，或它們可係獨立之RNA分子。若該兩股係一個較大分子之部分，且因此藉由界於一股之3’端與形成該雙螺旋結構之相對另一股之5’端之間的未中斷核苷酸鏈而連結，則該連結RNA鏈指稱為「髮夾環圈」。髮夾環圈可包含至少一個未配對之核苷酸。於一些態樣中，髮夾環圈可包含至少4、 5、6、7、8、9、10、20、23、或更多個未配對之核苷酸。於一些態樣中，髮夾環圈可係10個或更少核苷酸。於一些態樣中，髮夾環圈可係8個或更少個未配對之核苷酸。於一些態樣中，髮夾環圈可係4至10個未配對之核苷酸。於一些態樣中，髮夾環圈可係4至8個核苷酸。
若dsRNA之兩個實質上互補之股由獨立之RNA分子構成，則那些分子不必但可以共價連結。若兩股藉由除界於一股之3’端與形成雙螺旋結構之相對另一股之5’端之間的未中斷核苷酸鏈以外之手段共價連結，則該連結結構指稱為“鏈結子”。RNA股可具有相同或相異數目之核苷酸。鹼基對之最大數目係dsRNA之最短鏈中之核苷酸數減去雙螺旋中存在之任何突出。RNAi除了包含雙螺旋結構外，亦可包含一個或多個核苷酸突出。
於某些態樣中，本發明之iRNA劑係dsRNA，其各股包含19至23個核苷酸，其與標靶RNA序列例如AGT基因相互作用以引導標靶RNA之裂解。
於一些態樣中，本發明之iRNA劑係24至30個核苷酸之dsRNA，其與標靶RNA序列例如AGT基因相互作用以引導標靶RNA之裂解。
如本文中所用，術語「核苷酸突出」指稱從雙股iRNA之雙螺旋結構伸出的至少一個未配對之核苷酸。舉例而言，當dsRNA之一股的3’端延伸超過另一股之5’端，或與之相反，則存在核苷酸突出。dsRNA可包含具有至少一個核苷酸之突出；或者突出可包含至少兩個核苷酸、至少三個核苷酸、至少四個核苷酸、至少五個核苷酸或更多個。核苷酸突出可 包含核苷酸/核苷類似物或由其組成，其中該核苷酸/核苷類似物包括脫氧核苷酸/核苷。突出可位於正義股、反義股或其任何組合上此外，突出之核苷酸可存在於dsRNA之反義股或正義股之5’端、3’端或兩端。
於某些態樣中，dsRNA之反義股具有突出在3’端或5’端之1至10個核苷酸，如1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10個核苷酸。於某些態樣中，於正義股或反義股或兩者之突出可包括長於10個核苷酸之延伸長度，例如，1至30個核苷酸、2至30個核苷酸、10至30個核苷酸、10至25個核苷酸、10至20個核苷酸或10至15個核苷酸之長度。於某些態樣中，延伸之突出係於雙螺旋之正義股。於某些態樣中，延伸之突出存在於雙螺旋之正義股的3’端。於某些態樣中，延伸之突出存在於雙螺旋之正義股的5’端。於某些態樣中，延伸之突出係於雙螺旋之反義股。於某些態樣中，延伸之突出存在於雙螺旋之反義股的3’端。於某些態樣中，延伸之突出存在於雙螺旋之反義股的5’端。於某些態樣中，延伸之突出中之一個或多個核苷酸被替換為核苷硫代磷酸酯。於某些態樣中，突出包括自身互補之部分，使得該突出能夠形成在生理學條件下安定之髮夾結構。
「鈍」或「鈍端」意指於雙股RNA劑之末端沒有未配對之核苷酸，亦即，沒有核苷酸突出。「鈍端之」雙股RNA劑於其整個長度為雙股，亦即，於分子之每一端皆沒有核苷酸突出。本發明之RNAi劑包括於一端沒有核苷酸突出(亦即，具有一個突出及一個鈍端之劑)或於任一端皆沒有核苷酸突出。最常見之此類分子將於其整個長度上為雙股。
術語「反義股」或「導引股」指稱iRNA例如dsRNA之股，其包括與標靶序列如AGT mRNA實質上互補之區域。如本文中所用，術 語「互補之區域」指稱反義股之與本文中定義之序列如標靶序列如AGT核苷酸序列實質上互補的區域。若互補之區域與標靶序列不完全互補，則誤配可存在於分子之中間區域或末端區域。通常，最能被容忍之誤配存在於末端區域內，如iRNA之5’端或3’端之5、4或3個核苷酸內。於一些態樣中，本發明之雙股RNA劑包括反義股之核苷酸誤配。於一些態樣中，本發明之雙股RNA劑包括正義股之核苷酸誤配。於一些態樣中，核苷酸誤配係於例如自iRNA之3’末端計數之5、4、3個核苷酸內。於另一態樣中，核苷酸誤配例如係於iRNA之3’-末端核苷酸。
如本文中所用，術語「正義股」指稱iRNA之股，其包括與如本文中定義之術語之反義股之區域實質上互補的區域。
如本文中所用，「實質上全部核苷酸係經修飾者」大多數並非全部經修飾，且可包括不超過5、4、3、2或1個未經修飾之核苷酸。
如本文中所用，術語「裂解區域」指稱位於緊鄰裂解位點處之區域。裂解位點係標靶之裂解出現處之位點。於一些態樣中，裂解區域包含於裂解位點任一端且緊鄰該裂解位點的三個鹼基。於一些態樣中，裂解區域包含於裂解位點任一端且緊鄰該裂解位點的兩個鹼基。於一些態樣中，裂解位點特異性地出現於反義股之藉由核苷酸10及11鍵結之位點，且裂解區域包含核苷酸11、12及13。
如本文中所述之iRNA如dsRNA內之互補序列包括包含第一核苷酸序列之寡核苷酸或多核苷酸與包含第二核苷酸序列之寡核苷酸或多核苷酸在一個或兩個核苷酸序列之整體長度的鹼基配對。此類序列可指稱為彼此「完全互補」。惟，本文中，若第一序列指稱為與第二序列「實 質上互補」，則當雜交形成多達30個鹼基對之雙螺旋時，兩個序列可係完全互補，或它們可形成一個或多個但通常不超過5、4、3或2個誤配鹼基對，同時保留在最適於其最終應用之條件下雜交的能力，如對經由RISC途徑之基因表現的抑制。惟，若兩個寡核苷酸設計為當雜交時形成一個或多個單股突出，則此類突出不應視為關於確定互補性之誤配。舉例而言，包含一個長度為21個核苷酸之寡核苷酸及另一個長度為23個核苷酸之寡核苷酸的dsRNA，其中該較長之核苷酸包含一個與該較短之核苷酸完全互補的21個核苷酸之序列，對於本文所揭示之目的，仍可指稱為「完全互補」。
如本文中所用，「互補之」序列亦可包括非Watson-Crick鹼基對或從非天然核苷酸及經修飾之核苷酸形成的鹼基對，或完全由其形成，只要對其雜交能力之上述需求得以滿足即可。此類非Watson-Crick鹼基對包括但不限於，G：U Wobble鹼基配對或Hoogstein鹼基配對。
本文中，術語「互補」、「完全互補」及「實質上互補」可關於dsRNA之正義股與反義股之間或雙股RNA劑之反義股與標靶序列之間的鹼基配對而使用，如可從其用途之語境中理解者。
如本文中所用，與信使RNA(mRNA)之「至少一部分實質上互補」之多核苷酸指稱與感興趣之mRNA(例如，編碼AGT之mRNA)之接續部分實質上互補之多核苷酸。舉例而言，如果序列與編碼AGT基因之mRNA之非中斷部分實質上互補，則該多核苷酸與AGT mRNA之至少一部分互補。
據此，於一些態樣中，本文中揭露之正義股多核苷酸及反義多核苷酸與標靶AGT序列完全互補。於其他態樣中，本發明之正義股多核 苷酸及反義多核苷酸與標靶AGT序列基本互補，且包含一接續核苷酸序列，該接續核苷酸序列在其整個長度與SEQ ID NO：1及2中任一者或SEQ ID No：1及2中任一者之片段的等效核苷酸序列區域為至少80%互補，諸如至少90%或95%互補；或100%互補。
據此，於一些態樣中，本文中揭露之反義股多核苷酸與標靶AGT序列完全互補。於其他態樣中，本發明之反義多核苷酸與標靶AGT序列基本互補，且包含一接續核苷酸序列，該接續核苷酸序列在其整個長度與SEQ ID NO：1及或SEQ ID No：1之片段的等效核苷酸序列區域為至少約90%互補，諸如至少約90%或約95%互補。於一些態樣中，SEQ ID NO：1之片段係SEQ ID NO：1之核苷酸638-658。
於某些態樣中，本發明之iRNA之反義股的核苷酸序列包含核苷酸序列UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(SEQ ID NO：9)之至少19個接續核苷酸。於某些態樣中，本發明之iRNA復包含正義股，該正義股包含核苷酸序列GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(SEQ ID NO：10)之至少19個接續核苷酸。
於某些態樣中，本發明之iRNA之反義股的核苷酸序列包含核苷酸序列UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(SEQ ID NO：9)。於某些態樣中，本發明之iRNA復包含正義股，該正義股包含核苷酸序列GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(SEQ ID NO：10)。
於某些態樣中，本發明之iRNA之反義股的核苷酸序列由UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(SEQ ID NO：9)組成。於某些態樣 中，本發明之iRNA復包含正義股，其中，該正義股的核苷酸序列由核苷酸序列GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(SEQ ID NO：10)組成。
於某些態樣中，本發明之iRNA之反義股的經修飾之核苷酸序列包含經修飾之核苷酸序列usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(SEQ ID NO：11)之至少19個接續核苷酸。於某些態樣中，本發明之iRNA復包含正義股，該正義股包含具有gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(SEQ ID NO：12)之至少19個接續核苷酸的經修飾之核苷酸序列。化學修飾定義如下：a係2'-O-甲基腺苷-3’-磷酸酯，c係2’-O-甲基胞苷-3’-磷酸酯，g係2’-O-甲基鳥苷-3’-磷酸酯，u係2’-O-甲基尿苷-3’-磷酸酯，Af係2’-氟腺苷-3’-磷酸酯，Cf係2’-氟胞苷-3’-磷酸酯，Gf係2’-氟鳥苷-3’-磷酸酯，Uf係2’-氟腺苷-3’-磷酸酯，(Tgn)係胸腺嘧啶-二醇核酸(GNA)S-異構物，以及s係硫代磷酸酯鏈結；以及，其中，正義股之3’端視需要共價鏈結至配位子例如N-[參(GalNAc-烷基)-醯胺基癸醯基)]-4-羥基脯胺醇(亦指稱為Hyp-(GalNAc-alkyl)3或L96)。
於某些態樣中，本發明之iRNA之反義股的經修飾之核苷酸序列包含經修飾之核苷酸序列usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(SEQ ID NO：11)。於某些態樣中，本發明之iRNA復包含正義股，該正義股包含經修飾之核苷酸序列gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(SEQ ID NO：12)。
於某些態樣中，本發明之iRNA之反義股的經修飾之核苷酸序列由usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(SEQ ID NO：11)組成。於某些態樣中，本發明之iRNA復包含正義股，其中，該正義股的經修飾核 苷酸序列由經修飾之核苷酸序列gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(SEQ ID NO：12)組成。
通常，「iRNA」包括具有化學修飾之核糖核苷酸。此類修飾可包括本文中揭露或本領域中已知之全部類型之修飾。對於本說明書及申請專利範圍之目的，任何此類修飾，如在dsRNA分子中所用者，為「iRNA」所涵蓋。
於本發明之一方面，用於本發明之方法及組成物中之劑係單股反義寡核苷酸分子，其經由反義抑制機制抑制標靶mRNA。單股反義寡核苷酸分子與標靶mRNA內之序列互補。單股反義寡核苷酸可藉由與mRNA進行鹼基配對並且物理地阻礙轉譯機制而以化學計量學方式抑制轉譯，參見，Dias,N.et al.,(2002)Mol Cancer Ther 1：347-355。單股反義寡核苷酸分子可係約14至約30個核苷酸之長度，並且具有與標靶序列互補之序列。舉例而言，單股反義寡核苷酸分子可包含序列，該序列係來自本文所揭示之反義序列中任一者之至少約14、15、16、17、18、19、20或更多個接續核苷酸。
如本文中所用，短語「令細胞與iRNA接觸」包括藉由任何可能之手段接觸細胞。令細胞與iRNA接觸包括在體外令細胞與iRNA接觸或在體內令細胞與iRNA接觸。接觸可直接或間接進行。因此，舉例而言，iRNA可藉由單獨執行該方法而令其與細胞物理接觸，或作為另一種選擇，可將iRNA置於將允許或造成其後續與該細胞接觸之境地。
舉例而言，可藉由以iRNA與細胞溫育而令該細胞在體外完成該接觸。舉例而言，可藉由將iRNA注射至細胞所處之組織內或鄰近該 組織處，或藉由將iRNA注射至另一區域如血流或皮下空間內而使得該劑將後續到達待接觸之細胞所處之組織，從而令該細胞在體內完成該接觸。舉例而言，iRNA可含有引導iRNA至感興趣之部位如肝臟之配位子如GalNAc或與配位子偶聯。體外接觸方法與體內接觸方法之組合亦係可能者。舉例而言，細胞可在體外與iRNA接觸，並隨後移植入受試者體內。
於某些態樣中，令細胞與iRNA接觸包括，藉由促進或影響至該細胞內之攝取或吸收而「將iRNA引入或遞送至細胞內」。iRNA之吸收或攝取可經由無輔助之擴散或活性細胞進程而進行，或藉由輔助劑或裝置而進行。將iRNA引入細胞內可係體外或體內進程。舉例而言，對於體內進行之引入，可將iRNA注射至組織部位或全身性給藥。在體外進行之引入細胞內包括該領域中已知之方法，如電穿孔及脂質轉染。其他途徑揭示於下文中或係該領域中已知者。
術語「脂質奈米顆粒」或「LNP」係介質，其包含脂質層，該脂質層封裝藥學活性分子如核酸分子如iRNA或iRNA自其轉錄之質體。LNP揭示於，舉例而言，美國專利第6,858,225號、第6,815,432號、第8,158,601號及第8,058,069號，該等專利之整體內容藉由引用而併入本文。
如本文中所用，「受試者」係動物如哺乳動物，包括靈長類(諸如人、非人靈長類例如猴及黑猩猩)、非靈長類(諸如牛、豬、馬、山羊、兔、綿羊、倉鼠、豚鼠、貓、狗、大鼠、或小鼠)，其內源性地或異源性地表現標靶基因。於一個態樣中，受試者係人，諸如正在進行對將受益於AGT表現減低之疾病或疾患之治療或評估的人；處於將受益於AGT表現減低之 疾病或疾患風險下的人；罹患將受益於AGT表現減低之疾病或疾患的人；或正在進行對將受益於AGT表現減低之疾病或疾患之治療的人，如本文中所述。AGT相關疾患例如高血壓之診斷策略提供於下。於一些態樣中，受試者係女人。於一些態樣中，受試者係男人。於某些態樣中，受試者係易受鹽敏感度影響之群組的一部分，例如，黑人或老年人(
Figure 109138855-A0202-12-0044-14
65歲之年齡)。於某些態樣中，受試者係超重或肥胖，例如，患有中心型肥胖之受試者。於某些態樣中，受試者係定棲者。於默許態樣中，受試者係懷孕者或備孕者。於某些態樣中，受試者具有減退之腎功能。於某些態樣中，受試者患有第1型糖尿病。於某些態樣中，受試者患有第2型糖尿病。
如本文中所用，術語「治療」或「處理」指稱有益或所欲之結果，諸如減低受試者體內AGT相關疾患例如高血壓之至少一種跡象或症候。治療亦包括減低與不希望之AGT表現相關的一種或多種跡象或症候，例如，第II型血管收縮素1受體激活(AT1R)(例如，高血壓、慢性腎病、中風、心肌梗塞、心衰竭、動脈瘤、周圍動脈疾病、心臟疾病、氧化壓力增加例如超氧化物形成增加、炎症、血管收縮、鈉及水滯留、鉀及鎂損失、腎素抑制、肌細胞及平滑肌肥厚、膠原蛋白合成增加、刺激血管、心肌及腎纖維化、心臟收縮速率及力增加、心率改變例如心律不整增加、刺激血漿蛋白原活化因子抑制劑1(PAI1)、激活交感神經系統、及內皮素分泌增加)、妊娠相關高血壓之症候(例如，子癎前症及子癇症)，包括但不限於，宮內生長遲緩(IUGR)或胎兒生長遲緩、與惡性高血壓相關之症候、與高醛固酮症相關之症候；降低不希望之AT1R激活的程度；安定化(亦即，不惡化)慢性AT1R激活之狀態；改善或緩解不希望之AT1R激活(例如，高血壓、 慢性腎病、中風、心肌梗塞、心衰竭、動脈瘤、周圍動脈疾病、心臟疾病、氧化壓力增加例如超氧化物形成增加、炎症、血管收縮、鈉及水滯留、鉀及鎂損失、腎素抑制、肌細胞及平滑肌肥厚、膠原蛋白合成增加、刺激血管、心肌及腎纖維化、心臟收縮速率及力增加、心率改變例如心律不整增加、刺激血漿蛋白原活化因子抑制劑1(PAI1)、激活腳感神經系統、以及內皮素分泌增加)，無論可偵檢或不可偵檢。AGT相關疾患亦可包括肥胖；肝脂肪變性/脂肪肝，例如，非酒精性脂肪性肝炎(NASH)及非酒精性脂肪肝病(NAFLD)；葡萄糖失耐；第2型糖尿病；以及代謝症候群。「治療」亦可意指相對於在治療缺失情況下預期之生存期而延長生存期。
如本文所用，「腎功能減退」等可使用任何數目之公認標準例如腎小球濾過率(GFR)、蛋白尿、肌酸酐或BUN診斷之。如本文所用，腎功能減退可係暫時性或長期性。至少60之GFR係視為正常。60或更低之GFR係腎功能減退之標誌，其中>15-60之GFR係腎病之標誌，而小於15之GFR係腎衰竭之標誌。GFR典型係基於尿液肌酸酐量級測定，肌酸酐量級愈高，指示腎功能愈低。尿液中白蛋白之存在亦係腎功能下降之標準。可測定白蛋白之絕對量級以診斷腎功能之下降。亦可測定白蛋白與肌酸酐之比率以評估腎功能。尿液白蛋白與肌酸酐之比率為30mg/g或更低，係腎功能正常之標誌。尿液白蛋白與肌酸酐之比率大於30mg/g，係腎功能減退之標誌。
在受試者之AGT基因表現或agt蛋白質產生或者疾病標記物或症候量級之情境中，術語「降低」指稱此量級之統計學顯著之下降。該下降可係，舉例而言，至少50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、 85%、90%、或95%，或低於偵檢方法在與相關細胞或組織例如肝細胞或其他受試者樣本例如血液、源自該血液之血清、尿液中之偵檢量級。與某些態樣中，「降低」係血清中之AGT蛋白質於給藥一個或多個劑量的本文提供之iRNA劑之後，相對於給藥任何劑量的本文提供之iRNA劑之前的血清中AGT蛋白質量級有所減低。
如本文所用，當「預防」或「防止」針對疾病或疾患使用時，其將受益於AGT基因表現或agt蛋白質產生之減低，例如，於由於年齡增長、遺傳因素、激素變化、飲食及久坐生活方式而易患AGT相關疾患之受試者中，其中該受試者尚不符合AGT相關疾患之診斷標準。如本文所用，預防可理解為，向尚不符合AGT相關疾患之診斷標準的受試者給藥一種劑以延遲或減低該受試者將發展出AGT相關疾患之可能性。由於該劑係藥劑，應理解，給藥典型將於能夠將尚不符合AGT相關疾患之診斷標準和的受試者鑒別為易於發展出AGT相關疾患的醫療護理專業人士之指導下進行。高血壓之診斷標準及高血壓之風險因素提供於下。與某些態樣中，該疾病或疾患係例如不希望之AT1R激活的症候，諸如高血壓、慢性腎病、中風、心肌梗塞、心衰竭、動脈瘤、周圍動脈疾病、心臟病、氧化壓力增加例如超氧化物形成增加、炎症、血管收縮、鈉及水滯留、鉀及鎂損失、腎素抑制、肌細胞及平滑肌肥厚、膠原蛋白合成增加、刺激血管、心肌及腎纖維化、心臟收縮速率及力增加、心率改變例如心律不整增加、刺激血漿蛋白原活化因子抑制劑1(PAI1)、激活交感神經系統、及內皮素分泌增加。AGT相關疾患亦可包括肥胖；肝脂肪變性/脂肪肝，例如，非酒精性脂肪性肝炎(NASH)及非酒精性脂肪肝病(NAFLD)；葡萄糖失耐；第2型糖尿病； 以及代謝症候群。例如，當具有一種或多種高血壓風險因素之個體未發展出高血壓或發展出其嚴重程度低於具有相同風險因素但未接受如本文所揭示治療之群體的高血壓時，則發展出例如高血壓之可能性得以減低。未發展出AGT相關疾患例如高血壓，或發展出高血壓之時間延遲數月或數年，則視為有效預防。預防可能需要給藥超過一個劑量之iRNA劑。藉由提供鑒別處於發展出任何上揭AGT相關疾病之風險中的受試者的方法，本文提供之iRNA劑可作為藥劑執行預防AGT相關疾病之方法或用於該方法中。各種AGT相關疾病之風險因素檢討於下。
如本文所用，術語「血管收縮素原相關疾病」或「AGT相關疾病」係由腎素-血管收縮素-醛固酮系統(RAAS)激活造成或與之相關之疾病或疾患，或其症候或其進展因應RAAS失活之疾病或疾患。術語「血管收縮素原相關疾病」包括將受益於AGT表現減低之疾病、疾患或病症。此類疾病典型係與高血壓相關。血管收縮素原相關疾病之非限制性示例包括高血壓，例如，臨界性高血壓(亦稱高血壓前期)、原發性高血壓(亦稱本態性高血壓或特發性高血壓)、繼發性高血壓(亦稱非本態性高血壓)、孤立性收縮期或舒張期高血壓、妊娠相關高血壓(例如，子癇前症、子癇症及產後子癇前症)、糖尿病性高血壓、阻抗性高血壓、難治性高血壓、陣發性高血壓、腎血管性高血壓(亦稱腎高血壓)、Goldblatt氏高血壓、眼性高血壓、青光眼、肺性高血壓、門靜脈高血壓、全身性靜脈高血壓、收縮期高血壓、底線性高血壓；高血壓性心臟病、高血壓腎病變、動脈粥樣硬化、動脈硬化、血管病變(包括周圍血管疾病)、糖尿病腎病變、糖尿病視網膜病變、慢性心衰竭、心肌病、糖尿病性心肌病、腎小球硬化、主動脈狹窄、主動脈 動脈瘤、心室纖維化、睡眠呼吸中止、心衰竭(例如，左心室收縮功能不良、心衰竭伴射出分率下降)、心肌梗塞、心絞痛、中風、腎病(例如，視需要在妊娠情況下慢性腎病或發生之糖尿病性腎病變)、腎衰竭(例如，慢性腎衰竭)、以及全身性硬化症(例如，硬皮症性腎危症)。於某些態樣中，AGT相關疾病包括子宮內生長遲緩(IUGR)或胎兒生長遲緩。於某些態樣中，AGT相關疾患亦可包括肥胖；肝脂肪變性/脂肪肝，例如，非酒精性脂肪性肝炎(NASH)及非酒精性脂肪肝病(NAFLD)；葡萄糖失耐；第2型糖尿病；代謝症候群；以及夜間低血壓。
高血壓之閾值及高血壓之階段於下文中詳細檢討。
於一個態樣中，血管收縮素原相關疾病係原發性高血壓。「原發性高血壓」係環境或遺傳原因之結果(例如，無明顯潛在醫療原因之結果)。
於一個態樣中，血管收縮素原相關疾病係繼發性高血壓。「繼發性高血壓」具有可鑒別之潛在疾患，其可由多種病因引起，包括腎、血管及內分泌原因，例如，腎臟器質性疾病(例如，多囊腎、腎小球疾病或間質病)、腎血管疾病(例如，腎動脈狹窄、纖維肌性發育不全)、內分泌疾患(例如，腎上腺皮質素或礦皮質素過剩、嗜鉻細胞瘤、甲狀腺機能亢進或甲狀腺機能減退、生長激素過剩、副甲狀腺機能亢進)、主動脈狹窄或口服避孕藥之使用。
於一個態樣中，血管收縮素原相關疾病係妊娠相關高血壓，例如，長期性妊娠高血壓、妊娠高血壓、子癎前症、子癇症、子癎前症疊加慢性高血壓、HELLP症候群以及妊娠高血壓(亦稱為暫時性妊娠高血壓、 於妊娠後半段鑒別之慢性高血壓、以及妊娠引起之高血壓(PIH))。妊娠相關高需要之診斷標準提供於下。
於一個態樣中，血管收縮素原相關疾患係阻抗性高血壓。「阻抗性高血壓」係即便同時使用三種不同類別之抗高血壓藥物(其中一種係噻嗪類利尿劑)仍保持於高位(例如，高於130mm Hg之收縮壓或高於90之舒張壓)之血壓。血壓在使用四種或更多種藥品時得以控制之受試者亦視為患有阻抗性高血壓。
「治療有效量」或「預防有效量」亦包括以可用於任何治療之合理效益/風險比率產生一些所欲效果之RNAi劑的量。本發明方法中採用之iRNA可以足以產生可用於此治療之合理效益/風險比率的量給藥。
本文中，短語「藥學上可接受」用以指代彼等化合物、材料、組成物或劑型，其處於適用於與人類受試者及動物受試者之組織接觸而無過度毒性、刺激、過敏反應或其他問題或併發症之所謂醫療判斷之範疇內，與合理效益/風險比率相稱。
如本文中所用，短語「藥學上可接受之載劑」意指藥學上可接受之材料、組成物或介質，如液體或固體填料、稀釋劑、賦形劑、製造助劑(例如，潤滑劑、滑石、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、硬脂酸鋅、或硬脂酸)、或溶劑封裝材料，其牽涉入將受試化合物從一個器官或身體部分攜帶或運送至另一器官或身體部分。就與製劑之其他成分相容且不損害被治療之受試者而言，各載劑必須係「可接受」者。此類載劑係該領域中已知者。藥學可接受之載劑包括用於藉由注射給藥之載劑。
如本文中所用，術語「樣本」包括從受試者單離之相似體液、細胞或組織的集合，以及受試者體內存在之體液、細胞或組織。生物體液之示例包括血液、血清及漿膜液、血漿、腦脊液、眼液、淋巴液、尿液、唾液等。組織樣本可包括來自組織、器官或局部區域之樣本。舉例而言，樣本可源自特定之器官、器官之部分、或彼等器官內之體液或細胞。於某些態樣中，樣本可源自肝臟(例如，全肝或肝臟之某些區段或肝臟中某些類型之細胞，例如，肝細胞)。於一些態樣中，「源自受試者之樣本」指稱從受試者獲得之尿液。「源自受試者之樣本」可指稱來自受試者之血液或源自血液之血清或血漿。
II.本發明之方法
本發明係提供抑制血管收縮素原(AGT)基因之表現的方法。本發明亦提供治療將受益於AGT表現減低之受試者(諸如處於發展出AGT相關疾患例如高血壓之風險下的受試者)的方法，或治療受試者之AGT相關疾患例如高血壓的方法。此外，本發明係提供降低受試者諸如患有AGT相關疾患例如高血壓之受試者血壓量級的方法。該方法包括將如本文所揭示的靶向AGT之雙股RNAi劑以固定劑量例如約50mg至約800mg給藥至受試者。
據此，一方面，本發明係提供在受試者體內抑制血管收縮素原(AGT)之表現的方法。該方法包括，將約50mg至約800mg(例如，約50至約200mg,about 50mg至約500mg、約100mg至約800mg、約100mg至約500mg、約100mg至約300mg、約200mg至約300mg、約200mg至約400mg、約200mg至約500mg、約200mg至約800 mg、約300mg至約800mg、約300mg至約500mg、約300mg至約4000mg、約400mg至約800mg、約400mg至約500mg，例如，約50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、或約800mg)之固定劑量的抑制AGT表現之雙股核糖核酸劑(RNAi)給藥至受試者。前文引述之值及範圍之間的範圍及值亦視為本發明之一部分。
如本文中所用，術語「抑制」與「減輕」、「靜默」、「下調」、「阻抑」及其他類似術語可互換使用，且包括任何量級之抑制。
如本文中所用，短語「抑制AGT之表現」旨在指稱抑制任何AGT基因(例如，小鼠AGT基因、大鼠AGT基因、猴AGT基因、或人AGT基因)以及編碼AGT基因之變體或突變體的表現。因此，於經基因操縱之細胞、細胞群組或生物體之語境中，AGT基因可係野生型AGT基因、突變AGT基因或基因轉殖AGT基因。
「抑制AGT基因之表現」包括對AGT基因之任何量級之抑制，例如，對AGT基因之表現的至少部分的阻抑。AGT基因之表現可基於與AGT基因表現相關之任何變量之量級例如AGT mRNA量級或AGT蛋白質量級或量級之改變而評估。這一量級可於個體細胞或細胞群組中評估之，該細胞或細胞群組包括，例如，源自受試者之樣本。應理解，AGT係主要表現於肝臟中，但亦表現於腦、膽囊、心臟及腎臟中，並且存在於循環中。
抑制可藉由與AGT表現相關之一個或多個變項之絕對或相對量級與對照量級相比的下降而評估。對照量級可係該領域中使用之任何 類型之對照量級，如投藥前之基線量級，或自未治療或經對照物(例如，僅含緩衝劑之對照物或非活性劑之對照物)治療之類似受試者、細胞或樣本測得之量級。
於本發明之方法的一些態樣中，AGT基因之表現被抑制至少30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或95%，或被抑制到低於該檢定之偵檢量級。於較佳之態樣中，AGT基因之表現被抑制至少50%。復應理解，抑制某些組織例如肝臟中之AGT表現而不顯著抑制其在其他組織例如腦中之抑制可能係所欲者。於較佳之態樣中，使用PCT申請案第PCT/US2019/032150號之實施例2中提供之方法使用10nM siRNA濃度於適宜物種匹配細胞系中測定表現量級。
於某些態樣中，體內表現之抑制係藉由減弱表現人類基因之嚙齒動物(例如，表現人類標靶基因(亦即，AGT)之經AAV轉染之小鼠)體內之人類基因而測定，例如，當在RNA表現之最低點給藥3mg/kg之單一劑量時。模型動物系統中外源性基因表現之減弱亦可例如在RNA表現之最低點給藥3mg/kg之單一劑量之後測定。當人類基因與模型動物基因之核酸序列足夠接近而使得人類iRNA提供模型動物基因之有效減弱時，此類系統係可用者。肝臟中之RNA表現係使用PCT申請第PCT/US2019/032150號之實施例2中提供之PCR方法測定。
AGT基因表現之抑制可藉由第一細胞或細胞群組(此類細胞可存在於來如來源於受試者之樣本中)所表現之mRNA量相對於基本上與第一細胞或細胞群組相同但未經如是處理之第二細胞或細胞群組(未經iRNA處理或未經靶向感興趣基因之iRNA處理的對照細胞)減低而體現， 於該細胞或細胞群組中，AGT基因被轉錄並且業經處理(例如，藉由令該一個或多個細胞與本發明之iRNA接觸，或藉由將本發明之iRNA給藥至其體內存在或曾經存在該細胞之受試者)，使得AGT基因被抑制。於較佳之態樣中，藉由PCT申請第PCT/US2019/032150號之實施例2中提供之方法，使用10nM siRNA濃度，於物種匹配細胞係中評估該抑制，並使用下述公式將經處理之細胞內的mRNA量級表示為相對於對照細胞中mRNA量級的百分比：
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於其他態樣中，AGT基因表現之抑制可從功能上與AGT基因表現例如來自受試者之血液或血清中AGT蛋白質量級關聯之參數的減低而進行評估。AGT基因靜默可於與表現構造物同源或異源的表現AGT之任何細胞內測定，並且藉由該技藝中已知之任何檢定測定。
AGT蛋白質表現之抑制可藉由受試者樣本中細胞或細胞群組所表現之AGT蛋白質量級(例如，於源自受試者之血液樣本中的蛋白質量級)之減低而體現。如上所述，對於mRNA阻抑之評估，經處理之細胞或細胞群組中蛋白質表現量級之抑制可類似地表現為相對於對照細胞或細胞群組中蛋白質量級的百分比，或受試者樣本例如源自該受試者之血液或血清中蛋白質量級的改變。
可用來評估AGT基因表現之抑制的對照細胞、細胞群組或受試者樣本包括尚未與本發明之RNAi劑接觸的細胞、細胞群組或受試者 樣本。舉例而言，對照細胞、細胞群組或受試者樣本可源自使用RNAi劑治療受試者之前的個體受試者(例如，人類或動物受試者)或源自經適宜匹配之群體對照。
細胞或細胞群體所表現之AGT mRNA量級可使用該領域中已知用於評估mRNA表現之任何方法測定。於一個態樣中，樣本中之AGT表現量級可藉由偵檢經轉錄之聚核苷酸或其蛋白質例如AGT基因之mRNA而測定。可使用RNA抽取技術，包括例如使用酸酚/異硫氰酸胍抽取(RNAzol B；Biogenesis)、RNeasyTM RNA製備套組(Qiagen®)或PAXgeneTM(PreAnalytixTM，Switzerland)，從細胞中抽取RNA。採用核糖核酸雜交之典型檢定型式包括核連綴檢定、RT-PCR、RNase保護檢定、北方印漬術、原位雜交及微陣列分析。
於一些態樣中，使用核酸探針確定AGT之表現量級。如本文所用，術語「探針」指稱能夠選擇性地結合至特異性AGT的任何分子。探針可由該領域熟練人士合成，或來源於適宜之生物學製劑。探針可特異性地設計為被標記。可用作探針之分子的示例包括但不限於RNA、DNA、蛋白質、抗體及有機分子。
單離之mRNA可用於雜交或擴增檢定中，該檢定包括但不限於，南方或北方印漬分析、聚合酶連鎖反應(PCR)分析及探針陣列。一種用於測定mRNA量級之方法包括令單離之mRNA與可雜交至AGT mRNA之核酸分子(探針)接觸。於一態樣中，例如，藉由令單離之mRNA於瓊脂糖凝膠電泳並將mRNA從該凝膠轉移至膜諸如硝基纖維素膜，從而將mRNA固定於固體表面並令其與探針接觸。於備選之態樣中，例如，於 Affymetrix®基因晶片陣列中，將探針固定於固體表面並令mRNA與該探針接觸。熟練人士可輕易地調整已知之mRNA偵檢方法以用於測定AGT mRNA之量級。
用於測定樣本中AGT表現量級之方法包括例如樣本中之mRNA的核酸擴增或逆轉錄(以製備cDNA)之製程，該製程係例如藉由RT-PCR(Mullis於1987年於美國專利4,683,202中詳述之實驗性態樣)、連接酶連鎖反應(Barany(1991)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88：189-193)、自我持續之序列複製(Guatelli et al.(1990)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87：1874-1878)、轉錄擴增系統(Kwoh et al.(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86：1173-1177)、Q-β複製酶(Lizardi et al.(1988)Bio/Technology 6：1197)、滾環式複製(Lizardi et al.,US Patent No.5,854,033)或任何其他核酸擴增方法進行，之後使用該領域彼等熟練人士習知之技術偵檢所擴增之分子。如果核酸分子以非常低之數量存在，則此等偵檢方法尤其有用於偵檢此類分子。於本發明之具體方面中，AGT表現之量級係藉由定量螢光RT-PCR(亦即，TaqManTM系統)測定。於較佳之態樣中，表現量級係藉由PCT申請案第PCT/US2019/032150號之實施例2中提供之方法使用10nM siRNA濃度於物種匹配細胞系中測定。
AGT蛋白質表現之量級可使用該領域中已知用於量測蛋白質量級之任何方法測定。此類方法包括，例如，高效液相層析術(HPLC)、吸收光譜、比色檢定、分光光度檢定、流式細胞術、免疫電泳、西方印漬術、放射免疫檢定(RIA)、酶聯免疫吸附檢定(ELISA)、免疫螢光檢定、電化學發光檢定等。
於一些態樣中，本發明之方法的效力藉由AGT mRNA或蛋白質之量級降低(例如，於肝臟活檢樣本中)評估。於某些態樣中，穿刺肝臟活檢樣本用作組織材料來監測AGT基因或蛋白質之表現減低。於其他態樣中，血液樣本用作受試者樣本來監測agt蛋白質表現之減低。
於本發明之方法的一些態樣中，將iRNA給藥至受試者，使得iRNA被遞送至該受試者體內之具體位點。AGT表現之抑制可使用來源於來自該受試者特定位點(例如，肝臟或血液)之體液或組織的樣本中AGT mRNA或agt蛋白質之量級或量級改變的量測值進行評估。
如本文中所用，術語偵檢或確定分析質之量級係理解為意指執行該等步驟以確定材料例如蛋白質、RNA是否存在。如本文中所用，偵檢或確定方法包括偵檢或確定低於所使用方法之偵檢量級的分析質量級。
另一方面，本發明係提供治療患有AGT相關疾患例如高血壓例如高血壓之受試者的方法。該方法包括向受試者給藥約50mg至約800mg，例如，約50至200mg、約200至400mg、約400至800mg，例如，約50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、或約800mg之固定劑量的抑制AGT表現之雙股核糖核酸(RNAi)劑。前文引述之值及範圍之間的範圍及值亦視為本發明之一部分。
於一些態樣中，AGT相關疾患選自由下列所成群組：血壓偏高、高血壓、臨界性高血壓、原發性高血壓、繼發性高血壓、孤立性收縮期或舒張期高血壓、妊娠相關高血壓、糖尿病性高血壓、阻抗性高血壓、難治性高血壓、陣發性高血壓、腎血管性高血壓、Goldblatt氏高血壓、眼 性高血壓、青光眼、肺性高血壓、門靜脈高血壓、全身性靜脈高血壓、收縮期高血壓、底線性高血壓、高血壓性心臟病、高血壓腎病變、動脈粥樣硬化、動脈硬化、血管病變、糖尿病腎病變、糖尿病視網膜病變、慢性心衰竭、心肌病、糖尿病性心肌病、夜間低血壓、腎小球硬化、主動脈狹窄、主動脈動脈瘤、心室纖維化、心衰竭、心肌梗塞、心絞痛、中風、腎病、腎衰竭、全身性硬化症、宮內生長遲緩(IUGR)、胎兒生長遲緩、肥胖、肝脂肪變性/脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、葡萄糖失耐、第2型糖尿病、以及代謝症候群。
於一個態樣中，AGT相關疾患係高血壓。於一個態樣中，高血壓係臨界性高血壓、原發性高血壓、繼發性高血壓、孤立性收縮期或舒張期高血壓、妊娠相關高血壓、糖尿病性高血壓、阻抗性高血壓、難治性高血壓、陣發性高血壓、腎血管性高血壓、Goldblatt氏高血壓、眼性高血壓、青光眼、肺性高血壓、門靜脈高血壓、全身性靜脈高血壓、收縮期高血壓、底線性高血壓、高血壓性心臟病或高血壓腎病變。
於又一方面，本發明提供治療將受益於AGT表現減低之受試者的方法。該方法包括向受試者給藥約50mg至約800mg，例如，約50至200mg、約200至400mg、約400至800mg，例如，約50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、或約800mg之固定劑量的抑制AGT表現之雙股核糖核酸(RNAi)劑。前文引述之值及範圍之間的範圍及值亦視為本發明之一部分。
於又一方面，本發明提供降低受試者血壓量級例如收縮壓及/或舒張壓的方法。該方法包括向受試者給藥約50mg至約800mg，例如， 約50至200mg、約200至400mg、約400至800mg，例如，約50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、或約800mg之固定劑量的抑制AGT表現之雙股核糖核酸(RNAi)劑。前文引述之值及範圍之間的範圍及值亦視為本發明之一部分。
於本發明之方法中，細胞例如受試者諸如人類受試者(例如，有此需要之受試者，諸如患有AGT相關疾患之受試者)體內之細胞，可與siRNA於體外或體內(亦即，該細胞可處於受試者體內)接觸。
適用於使用本發明之方法處理的細胞可係任何表現AGT基因之細胞，例如，肝細胞、腦細胞、膽囊細胞、心細胞或腎細胞，但較佳係肝細胞。適用於在本發明之方法中使用的細胞可係哺乳動物細胞，例如，靈長動物細胞(諸如人類細胞，包括嵌合非人動物內之人類細胞，或非人類靈長動物細胞例如猴細胞或黑猩猩細胞)或非靈長動物細胞。於某些態樣中，該細胞係人類細胞，例如人類肝細胞。於本發明之方法中，細胞中之AGT表現被抑制至少30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或95%，或被抑制到低於該檢定之偵檢量級。
於一個態樣中，將靶向AGT之dsRNA給藥至受試者，使得AGT量級例如該受試者之細胞、組織、血液、尿液或其他組織或體液內的AGT量級減低至少約10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、62%、64%、65%、 66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或至少約99%或更多。
於另一態樣中，將靶向AGT之dsRNA劑給藥至受試者，使得該受試者之血壓量級例如收縮壓及/或舒張壓減低至少約1、2、3、4、5、6、7、8、9或10mmHg或更多。
根據本發明之方法及用途給藥dsRNA劑可導致患有原發性高草酸鹽尿症之患者體內此等疾病或病變之嚴重性、跡象、症候、及/或標誌物之減低。這一語境中，「減低」意為此量級之統計學顯著的下降。該減低可係，舉例而言，至少約5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、或約100%。
疾病之治療或預防的效力可藉由下述評估，舉例而言，量測疾病進展、疾病緩解、症候嚴重性、疼痛之減低、生命品質、持續治療效果所需之藥物劑量、疾病標記物或任何適用於給定之待治療疾病或預防之靶向的其他可量測之參數。藉由量測此類參數之任一者或參數之任何組合而監控治療或預防之效率，完全處於熟悉該領域之人士的能力範圍內。舉例而言，可例如藉由週期性監測被治療之受試者體內之草酸鹽量級而評估對原發性高草酸鹽尿症之治療效力。將後來之量測結果與最初之量測結果比較，向醫師提供治療是否有效之指示。藉由量測此參數或參數之任何組合而監控治療或預防之效率，完全處於熟悉該領域之人士的能力範圍內。 與靶向AGT之dsRNA劑或其醫藥組成物之給藥相關聯，「有效對抗」原發性高草酸鹽尿症指示，以臨床上適宜之模式給藥在至少統計學顯著分數之患者中導致有益效果，例如症候之改善、治愈、疾病之減低、生命延長、生命品質之改善、或其他通常被熟悉治療原發性高草酸鹽尿症及相關肇因之醫生認為積極的效果。
當疾病狀態之一個或多個參數存在統計學顯著之改善時，或預期惡化或發展出症候者沒有惡化或發展出症候時，證明治療性或預防性效果。作為實例，可量測之疾病參數之至少10%且較佳至少20%、30%、40%、50%或更高的有利改變，可係有效治療之指示。給定dsRNA劑藥物或該藥物之製劑的效力亦可使用該領域中已知之用於給定疾病之實驗動物模型來判斷。當使用試驗動物模型時，當觀察到標誌物或症候之統計學顯著的減低時，則證明治療之功效。
任何導致例如使用適宜量表量測之疾病嚴重程度變小的正向改變，代表使用本文所揭示之dsRNA劑或dsRNA製劑進行足夠之治療。
本發明之體內方法可包括對受試者給藥含有iRNA之組成物，其中該iRNA係包括與待給藥該RNAi劑之哺乳動物的AGT基因之RNA轉錄本之至少一部分互補的核苷酸序列。該組成物可藉由該領域中已知之任何手段給藥，該手段包括但不限於，口服、腹膜內或腸胃外途徑，包括顱內(例如，腦室內、腦實質內及鞘內)、靜脈內、肌肉內、皮下、透皮、氣管(氣溶膠)、鼻內、直腸內及外用(包括頰腔及舌下)給藥。於某些態樣中，該組成物係藉由靜脈內輸液或注射而給藥。於某些態樣中，該組成物係藉由皮下注射而給藥。於某些態樣中，該組成物係藉由肌肉內注射而給藥。
於一些態樣中，該給藥係經由積存注射進行。積存注射可在延長之時間段內以一致之途徑釋放dsRNA劑。因此，積存注射可減低獲得所欲效果例如所欲之AGT抑制或治療性或預防性效果所需之給藥頻次。積存注射亦可提供更為一致之血清濃度。積存注射可包括皮下注射或肌肉注射。於較佳之態樣中，積存注射係皮下注射。
於一些態樣中，該給藥係經由幫浦進行。該幫浦可係外部幫浦或經外科手術植入之幫浦。於另一態樣中，該幫浦係經皮下植入之滲透幫浦。於其它態樣中，該幫浦係輸液幫浦。輸液幫浦可用於靜脈內、皮下、動脈內或硬膜內輸液。於較佳之態樣中，該輸液幫浦係皮下輸液幫浦。於其他態樣中，該幫浦係經外科手術植入之將dsRNA劑遞送至肝臟的幫浦。
其他給藥模式包括硬膜上給藥、腦內給藥、腦室內給藥、鼻內給藥、動脈內輸注、心內輸注、骨內輸注、鞘內腔注射、玻璃體內注射及肺內給藥。可基於局部治療或系統性治療是否係所欲者並基於待治療之面積而選擇給藥模式。可選擇給藥之途徑及位點以增強靶向性。
該iRNA較佳係經皮下給藥，亦即，藉由皮下注射給藥。一次或多次注射可用來將所欲之劑量的iRNA遞送至受試者。該注射可在一段時間內重複實施。
該給藥可定期重複實施。於某些態樣中，iRNA係約每個月給藥一次至約每季給藥一次(亦即，約每三個月給藥一次)，或約每季給藥一次至約每年給藥兩次(亦即，每六個月給藥一次)。於某些態樣中，iRNA係每個月給藥一次。於其他態樣中，iRNA係每三個月給藥一次，或每季給藥一次。於再另一態樣中，iRNA係每六個月或每半年給藥一次。
本發明之dsRNA劑可以「裸」形式或作為「游離dsRNA劑」給藥。自由dsRNA劑係於醫藥組成物之不存在下給藥。裸dsRNA劑可處於合適之緩衝溶液中。緩衝溶液可包含醋酸鹽、枸櫞酸鹽、醇溶榖蛋白、碳酸鹽、或磷酸鹽、或其任何組合。於一個態樣中，緩衝溶液係磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)。含有dsRNA劑之緩衝溶液之pH及滲透壓可經調節，使得其適用於給藥至受試者。
或者，本發明之iRNA可作為醫藥組成物給藥，例如作為dsRNA脂質體製劑給藥。RNAi劑可作為醫藥組成物於未緩衝溶液中給藥。未緩衝溶液可包含鹽水或水。或者，RNAi劑可作為醫藥組成物於緩衝溶液中給藥。緩衝溶液可包含醋酸鹽、枸櫞酸鹽、醇溶榖蛋白、碳酸鹽、或磷酸鹽、或其任何組合。於一個態樣中，緩衝溶液係磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)。
將受益於AGT基因表現之抑制的受試者係易患或被診斷患有AGT相關疾病或疾患例如高血壓例如高血壓之受試者。該受試者可能具有至少130、135、140、145、150、155或160mmHg之收縮壓或至少80、85、90、95、100、105、110mmHg之舒張壓。該受試者可能係易受鹽敏感性之影響者、超重者、肥胖者、懷孕者或備孕者。該受試者可能患有第2型糖尿病、第1型糖尿病，或具有減退之腎功能。
該方法復包括將用於治療高血壓之附加治療劑給藥至受試者。用作組合療法之例示性治療劑可包括但不限於，利尿劑、血管收縮素轉化酶(ACE)抑制劑、血管收縮素II受體拮抗劑、β-阻斷劑、血管舒張劑、鈣通道阻斷劑、醛固酮拮抗劑、α2-促效劑、腎素抑制劑、α-阻斷劑、周圍作動腎上腺素劑、選擇性D1受體部分促效劑、非選擇性α-腎上腺素拮抗 劑、合成物、類固醇性抗鹽皮質類固醇劑、前述者之任何組合、以及配製為多種劑之組合的高血壓治療劑。於一些態樣中，附加治療劑包含血管收縮素II受體拮抗劑，例如，洛沙坦、纈沙坦、奧美沙坦(olmesartan)、依普沙坦(eprosartan)及阿齊沙坦(azilsartan)。
根據本發明之方法給藥iRNA可導致對AGT相關疾患例如高血壓例如高血壓之預防或治療。各種類型之高血壓的診斷標準係提供於下。
III.高血壓之診斷標準、風險因子及治療
最近，預防及治療高血壓之實踐指南得以修訂。Reboussin等人(「關於2017年ACC/AHA/AAPA/ABC/ACPM/AGS/APhA/ASH/ASPC/NMA/PCNA關於成年人高血壓預防、偵檢、評估及管理之指南的系統性回顧：美國心臟病學會/美國心臟協會特別工作中關於臨床實踐指南之報告」，J Am Coll Cardiol.2017 Nov 7.pii：S0735-1097(17)41517-8.doi：10.1016/j.jacc.2017.11.004)以及Whelton等人(「關於成年人高血壓預防、偵檢、評估及管理之2017年ACC/AHA/AAPA/ABC/ACPM/AGS/APhA/ASH/ASPC/NMA/PCNA指南：美國心臟病學會/美國心臟協會特別工作中關於臨床實踐指南之報告」，J Am Coll Cardiol.2017 Nov 7.pii：S0735-1097(17)41519-1.doi：10.1016/j.jacc.2017.11.006)發佈了大量報告。新指南之一些要點提供如下。惟，該指南應理解為向本領域技術人員提供關於在遞交本申請案時高血壓之診斷及監測標準及治療的知識並藉由引用併入本文。
A.診斷標準
儘管較高之血壓與心血管疾病風險增加之間存在持續關聯，但對血壓量級進行分離對於作成臨床及公共健康決策係有用者。基於醫療環境中量測之平均血壓(診室血壓)，血壓可分類為4個水準：正常、升高、第1階段高血壓或第2階段高血壓，如下表所示(來自Whelton et al.,2017)。
Figure 109138855-A0202-12-0064-6
血壓指示基於在
Figure 109138855-A0202-12-0064-19
2中情況下獲得之
Figure 109138855-A0202-12-0064-20
2個謹慎讀數之平均值的血壓。用於獲得謹慎血壓讀數的最優實踐於Whelton et al.,2017中詳述並係該領域中已知者。
這一分類法不同於先前於JNC 7報告(Chobanian等人；「國立高血壓教育項目協調委員會，全國高血壓預防、偵檢、評估及治療聯合委員會第七次報告」(the National High Blood Pressure Education Program Coordinating Committee.Seventh Report of the Joint National Committee on Prevention,Detection,Evaluation,and Treatment of High Blood Pressure),Hypertension,2003；42：1206-52)中建議者，第1階段高血壓現在定義為收縮壓(SBP)為130至139mm Hg或舒張壓(DBP)為80至89 mm Hg，而第2階段高血壓在本檔案中對應於JNC 7報告中之第1階段及第2階段。這一分類法之基本原理係基於關於以下項之觀察資料：SBP/DBP與心血管疾病風險之間的關聯、藉由改變生活方式來降低血壓之隨機臨床試驗、以及使用抗高血壓醫療手段進行治療以預防心血管疾病的隨機臨床試驗。
具有第2階段高血壓之成年人的心血管疾病之患病風險增加得以充分確認。日趨增加之個體研究以及對觀察資料之薈萃分析(meta-analyses)業經報告，從正常血液至升高之血液以及第1階段高血壓存在心血管疾病風險逐漸提高之梯度。於眾多此等薈萃分析中，將120至129/80至84mm Hg之SBP/DBP與<120/80mm Hg者進行比較，冠心病及中風之危害比介於1.1與1.5之間，而將130至139/85至89mm Hg之SBP/DBP與<120/80mm Hg者進行比較，則介於1.5與2.0之間。這一風險梯度於跨性別及種族/民族劃分之亞組中係一致者。與較高之血壓相關的心血管疾病風險之相對增加有所削弱，但於老年人群體中仍然存在。對具有升高之血壓及第1及第2階段高血壓之個體建議改變生活方及進行藥物抗高血壓治療。即便不能藉由治療而令血壓正常化，藉由減低升高之血壓的階段仍可獲得臨床有益效果。
B.風險因素
高血壓係一種複雜疾病，其係包括但不限於遺傳因素、生活方式、飲食及繼發性風險因素綜合作用之結果。高血壓亦可能與妊娠有關。應理解，由於高血壓之複雜特性，可能需要多種干預來治療高血壓。此外， 非藥物性干預，包括改變飲食及生活方式，可能對於預防及治療高血壓有用。再者，干預可以提供臨床有益效果而無需將個體之血壓完全正常化。
1.遺傳風險因素
業經鑒別出若干種單基因型高血壓，諸如糖皮質素可治型醛固酮過多症、Liddle氏症候群、Gordon氏症候群以及其中單基因突變完全詮釋高血壓之病理生理學者，此等疾患罕見。目前已知之對血壓及高血壓有所貢獻之基因變異體的列表包括超過25種罕見突變以及120種單一核苷酸多形性。惟，儘管遺傳因素可能在一些個體中對高血壓有所貢獻，但據估計，遺傳突變僅佔血壓變異性之約3.5%。
2.飲食及飲酒量
導致高血壓之常見環境及生活方式風險因素包括飲食不良、體力活動不足以及過量飲酒。此等因素可導致人變得超重或肥胖，進一步增加發展或加重高血壓之可能性。升高之血壓與腰臀比或軀幹脂肪分佈之其他量度的相關性甚至更強。年輕時肥胖及進行性肥胖與老年時高血壓的相關性強。達成正常體重可將發展出高血壓之風險減低至從未肥胖過之人的水準。
鈉、鉀、鎂及鈣之攝入亦可能對血壓具有顯著影響。鈉攝入與血壓呈正相關，並且是大多數年齡相關性血壓增加之原因。某些群組對於增加之鈉消耗比其他群體更為敏感，包括黑人及老年人(
Figure 109138855-A0202-12-0066-18
65歲)，以及彼等具有更高水準之血壓者或患有併發症諸如慢性腎病、糖尿病或代謝症候群者。此等群體合計佔全部美國成年人之一般以上。鹽敏感性可以係心 血管疾病及總死亡率增加之標誌物，而與血壓無關。當下，識別鹽敏感性之技術於臨床環境中不實用。因此，鹽敏感性最佳地被視為群體特徵。
鉀攝入與血壓及中風呈逆相關，並且較高水準之鉀似乎削弱了鈉對於血壓之效應。較低之鈉-鉀比率與較低之血壓相關，該較低之血壓係對應於針對鈉或鉀自身而關注者。關於心血管疾病之風險，得到了相似之觀察結果。
長期以來，飲酒係與高血壓相關。在美國，據估計，飲酒者佔據高血壓族群之約10%，且男性中之比例高於女性。
應理解，飲食或飲酒量之改變可能成為預防或治療高血壓之一個方面。
3.體力活動
體力活動/身體健康與血壓量級之間存在得以良好確認之逆相關。即便最輕度量級之體力活動業經證明於減少高血壓中有益。
應理解，增加體力活動可能成為預防或治療高血壓之一個方面。
4.繼發性風險因素
繼發性高血壓可導致血壓嚴重升高、藥物阻抗性高血壓、高血壓之突然發作、先前受控於藥物治療之高血壓或者的血液增加、老年人之舒張性高血壓發作、以及標靶器官損害與高血壓之持續時間或嚴重程度不相稱。儘管血壓升高的年輕患者(年齡<30歲)應懷疑為繼發性高血壓，但原發性高血壓在年輕群體尤其是黑人中之表現並不少見，並且一些形式之繼發性高血壓諸如腎血管疾病在老年人(年齡
Figure 109138855-A0202-12-0067-16
65歲)中更為常見。繼發性高 血壓之眾多肇因與暗示特定疾患之臨床發現或一組臨床發現強烈相關。於此等情況下，對基礎病症之治療可能解決血壓增高之問題而無需概要典型用於治療高血壓之劑。
5.妊娠
妊娠係高血壓之風險因素，並且妊娠期間之高血壓係生命後期心血管疾病及高血壓之風險因素。關於妊娠相關高血壓之報告係由美國婦產科學院(ACOG)於2013年發佈(美國婦產科學院，妊娠高血壓特別工作組，「妊娠高血壓，美國婦產科學院妊娠高血壓特別工作組之報告」，Obstet Gynecol.2013；122：1122-31)。該報告之一些要點提供如下。惟，該包括應理解為向本領域技術人員提供關於在遞交本申請案時妊娠高血壓之診斷及監測標準及治療的知識並藉由引用併入本文。
子癇前症之診斷標準提供於下表(來自2013年ACOG報告之表1)中。
Figure 109138855-A0202-12-0069-7
妊娠期間之血壓管理因以下事實而複雜，眾多常用之抗高血壓藥物，包括ACE抑制劑及ARB，皆因為其對胎兒之潛在危害性而為妊娠期間禁忌者。妊娠期間抗高血壓治療之目標包括預防重度高血壓以及延長妊娠期以使胎兒於分娩前有更長時間成熟之可能性。對妊娠相關重度高血壓治療之回顧發現，無足夠之證據以推薦特定藥劑；相反，於此情境下係推薦臨床醫生之經驗(Duley L,Meher S,Jones L.Drugs for treatment of very high blood pressure during pregnancy.Cochrane Database Syst Rev.2013；7：CD001449.)。
C.治療
高血壓之治療係複雜者，蓋因其往往與其他共病同時存在，該共病一般包括腎功能減退，且受試者亦可正在進行對該共病之治療。管理患有高血壓之成年人的臨床醫生應專注於患者整體健康，且特別強調減低未來之有害心血管疾病結果的風險。全部之患者風險因素需要以總合方式管理，包括一組全面之非藥理學策略及藥理學策略。隨著患者血壓及未來心血管疾病事件之風險增加，應加強血壓管理。
單純基於血壓量級而使用降低血壓之藥品進行高血壓治療係視為具有成本效益，在減低心血管疾病風險方面，使用絕對心血管疾病風險與血壓量級之組合來指導此治療比僅使用血壓量級更為有效且更具成本效益。以單一藥劑開始之眾多患者後續將需要來自不同藥理學類別之
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2種藥物來達到其血壓目標。對各劑之作動的藥理學機制之了解不重要。具有互補活性之藥物方案，其中第二抗高血壓藥物係用以阻斷對初始藥劑之代償性響應或影響不同之加血壓機制，可導致額外降低血壓。舉例而言，噻嗪類利尿劑可刺激腎素-血管收縮素-醛固酮系統。藉由將ACE抑制劑或ARB添加至噻嗪，可獲得額外之血壓降低效應。組合療法之使用亦可改善依附性。幾種2及3固定劑量藥物之抗高血壓藥物療法的組合係可用者，其組分間具有互補之作動機制。
來自Whelton et al.2017之列述口服抗高血壓藥物的表18提供於下。提供了用於治療高血壓之治療劑類別以及落入彼等類別之藥物。亦提供劑量範圍、投藥頻率及注釋。
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IV.用於本發明之方法中的iRNA劑遞送
用於本發明之方法中的遞送iRNA劑至細胞例如受試者諸如人類受試者(例如，有此需要之受試者，諸如具有AGT相關疾患例如高血壓之受試者)體內之細胞，可藉由大量不同路徑達成。舉例而言，可藉由將細胞與本發明之iRNA在體外或體內接觸而實施遞送。體內遞送亦可藉由將包含iRNA如dsRNA之組成物給藥至受試者而直接實施。或者，體內遞送可藉由將編碼並引導該iRNA之表現的一種或多種載體給藥而間接實施。此等選擇於下文中進一步檢討。
通常，遞送核酸分子之任何方法(體外或體內)可適用於與本發明之iRNA合用(參見，例如，Akhtar S.and Julian RL.(1992)Trends Cell.Biol.2(5)：139-144及WO94/02595，其藉由引用而以其整體併入本文)。對於體內遞送，為了遞送iRNA分子而慮及之因素包括，舉例而言，所遞送之分子的生物學安定性、非特異性效應之預防、及所遞送之分子在標靶組織內之蓄積。iRNA之非特異性效應可藉由局部給藥而最小化，舉例而言，藉由直接注射或移植入組織內或外用給藥該製劑。局部給藥至治療位點將該劑之局部濃度最大化，限制該劑與可能受該劑傷害或可降解該劑之全身組織接觸，且允許以較低之劑量給藥iRNA分子。若干研究業經顯示，當局部給藥iRNA時，成功減弱基因產物。舉例而言，藉由玻璃體內注射對食蟹猴進行VEGF dsRNA之眼內遞送(Tolentino,MJ.,et al(2004)Retina 24：132-138)以及藉由視網膜下注射對小鼠進行該眼內遞送(Reich,SJ.,et al(2003)Mol.Vis.9：210-216)，兩者皆顯示防止老年性黃斑部退化實驗模型中的新血管生成。此外，在小鼠體內進行dsRNA之直接腫瘤內注射減小腫瘤體積(Pille,J.,et al(2005)Mol.Ther.11：267-274)且可延長 荷瘤小鼠之生存期(Kim,WJ.,et al(2006)Mol.Ther.14：343-350；Li,S.,et al(2007)Mol.Ther.15：515-523)。RNA干擾亦業經顯示藉由直接注射進行之局部遞送的成功(Dorn,G.,et al.(2004)Nucleic Acids 32：e49；Tan,PH.,et al(2005)Gene Ther.12：59-66；Makimura,H.,et al(2002)BMC Neurosci.3：18；Shishkina,GT.,et al(2004)Neuroscience 129：521-528；Thakker,ER.,et al(2004)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.101：17270-17275；Akaneya,Y.,et al(2005)J.Neurophysiol.93：594-602)以及藉由鼻內給藥而成功遞送至肺部(Howard,KA.,et al(2006)Mol.Ther.14：476-484；Zhang,X.,et al(2004)J.Biol.Chem.279：10677-10684；Bitko,V.,et al(2005)Nat.Med.11：50-55)。對於全身給藥iRNA用於治療疾病，該RNA可經修飾或者使用藥物遞送系統遞送；兩種方法皆作動以防止該dsRNA被內核酸酶及外核酸在體內快速降解。對RNA或藥學載劑之修飾亦可允許該iRNA組成物以靶標組織為靶向且避免非所欲之脫靶效應。iRNA分子可藉由化學接合酯親脂性基團如膽固醇而修飾，以提升細胞攝取且防止降解。舉例而言，將被接合至親脂性膽固醇部分之對抗ApoB的iRNA係經全身注射至小鼠體內，導致肝臟及空腸兩處之apoB mRNA的減弱(Soutschek,J.et al.,(2004)Nature 432：173-178)。業經顯示，將iRNA接合至適配體抑制前列腺癌模型小鼠體內之腫瘤生長並介導腫瘤衰退(McNamara,JO.et al.,(2006)Nat.Biotechnol.24：1005-1015)。於作為另一種選擇之態樣中，該iRNA可使用藥物遞送系統如奈米顆粒、樹枝狀聚合物、聚合物、脂質體、或陽離子遞送系統進行遞送。荷正電之陽離子遞送系統係促進iRNA分子(荷負電)之結合，亦提升在荷負電之細胞膜 處的相互作用，以允許該細胞對iRNA之有效攝取。陽離子脂質、樹枝狀聚合物或聚合物可或結合至iRNA或被誘導以形成包合iRNA之泡囊或微胞(參見，例如，Kim SH.et al.,(2008)Journal of Controlled Release 129(2)：107-116)。泡囊或微胞之形成進一步防止當全身給藥時該iRNA之降解。製作及給藥陽離子-iRNA複合物之方法完全處於該領域熟練人士之能力範圍內(參見，例如，Sorensen,DR.,et al.(2003)J.Mol.Biol 327：761-766；Verma,UN.et al.,(2003)Clin.Cancer Res.9：1291-1300；Arnold,AS et al.(2007)J.Hypertens.25：197-205，其皆藉由引用而整體併入本文)。可用於iRNA之系統性遞送的藥物遞送系統之一些非限制性示例包括DOTAP(Sorensen,DR.,et al(2003)，同上；Verma,UN.et al.,(2003)，同上)、Oligofectamine、「固體核酸脂質顆粒」(Zimmermann,TS.et al.,(2006)Nature 441：111-114)、心磷脂(Chien,PY.et al.,(2005)Cancer Gene Ther.12：321-328；Pal,A.et al.,(2005)Int J.Oncol.26：1087-1091)、聚乙亞胺(Bonnet ME.et al.,(2008)Pharm.Res.Aug 16電子優先發佈；Aigner,A.(2006)J.Biomed.Biotechnol.71659)、Arg-Gly-Asp(RGD)胜肽(Liu,S.(2006)Mol.Pharm.3：472-487)及聚醯胺基胺(Tomalia,DA.et al.,(2007)Biochem.Soc.Trans.35：61-67；Yoo,H.et al.,(1999)Pharm.Res.16：1799-1804)。於一些態樣中，iRNA與環糊精形成用於全身給藥之複合物。給藥之方法及iRNA與環糊精之醫藥組成物可見於美國專利第7,427,605號，其藉由引用而以其整體併入本文。
A.用於本發明之經載體編碼之iRNA
靶向AGT基因之iRNA可從插入DNA或RNA載體之轉錄單元表現(參見，例如，Couture,A,et al.,TIG.(1996),12：5-10；Skillern,A.,et al.，國際PCT公開第WO 00/22113號；Conrad，國際PCT公開第WO 00/22114號；以及Conrad，美國專利第6,054,299號)。表現可係瞬時者(幾小時至幾週之等級)或持續者(幾週至幾個月或更久)，取決於所使用之具體構造及靶標組織或細胞類型。此等基因轉殖可作為線性構造、環狀質體、或病毒載體而引入，其可係整合載體或非整合載體。基因轉殖亦可構造為允許其被作為粒線體外質體而被繼承(Gassmann,et al.,(1995)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 92：1292)。
iRNA之個體股或多股可從表現載體之啟動子轉錄。若兩個分離之股待表現以生成例如dsRNA，則可將兩個分隔之表現載體共同引入(例如，藉由轉染或感染)靶標細胞內。或者，dsRNA之各個體股可藉由位於相同表現質體之兩種啟動子轉錄。於一個態樣中，dsRNA表現為反向重複多核苷酸，其藉由鏈結子聚核苷酸序列接合，使得該dsRNA具有莖環結構。
iRNA表現載體通常係DNA質體或病毒載體。與真核細胞相容之表現載體，較佳係彼等與脊椎動物細胞相容者，可用來生產用於表現本文所述iRNA之重組構造。真核細胞表現載體係該領域中習知者，且可從大量商業來源獲得。典型地，此類載體係提供為含有用於插入所欲之核酸鏈段的便利限定位點。iRNA表現載體之屬性可係全身性者，如藉由靜脈內或肌肉內給藥；藉由給藥至從該患者外植之靶標細胞，之後重新引入患者體內；或藉由任何其它容許引入所欲之靶標細胞內的手段。
iRNA表現質體可作為與陽離子脂質載劑(例如，Oligofectamine)或非陽離子脂質系載劑(例如，Transit-TKOTM)之複合物而經轉染至標靶細胞內。本發明亦設想，於一週或更久之時間內進行針對靶向標靶RNA不同區域之iRNA介導之減弱的多脂質轉染。載體至宿主細胞內之成功引入可使用各種已知方法監測之。例如，暫時轉染可使用報告者諸如螢光標誌物諸如綠色螢光蛋白(GFP)發出信號。細胞之間接體內安定轉染可使用標誌物確保之，該標誌物向經轉染之細胞提供對於特定環境因素(例如，抗生素及藥物)之抗性諸如潮黴素B抗性。
可與本文所述方法及組成物合用之病毒載體系統係包括但不限於，(a)腺病毒載體；(b)逆轉錄病毒載體，包括但不限於慢病毒載體、莫洛尼鼠白血病病毒等；(c)腺相關病毒載體；(d)單純皰疹病毒載體；(e)Sv40載體；(f)多瘤病毒載體；(g)乳頭狀瘤病毒載體；(h)小核糖核酸病毒載體；(i)痘病毒載體，如天花如牛痘病毒載體，或禽痘如金絲雀痘或雞痘病毒載體；以及(j)幫手依賴性或裸線病毒載體。複製缺陷病毒亦可係優勢者。不同之載體將變為或不變為併入該細胞之基因組內。若必要，該等構造可包括用於轉染之病毒序列。或者，該構造可併入能進行附加型複製(episomal replication)之載體如EPV載體及EBV載體內。用於iRNA之重組表現之構造通常將會需要調節元件，如啟動子、增強子等，以確保該iRNA在靶標細胞內之表現。對於載體及構造所慮及之其他方面進一步揭示於下。
可用於遞送iRNA之載體將包括足以在所欲標靶細胞或組織內表現iRNA之調控元件(啟動子、增強子等)。可選擇調控元件以提供組成性或經調控/可誘導之表現。
iRNA之表現可例如使用可誘導之調控序列精確調控之，該調控序列對於某些生理調控因子例如循環葡萄糖水準或激素敏感(Docherty et al.,1994,FASEB J.8：20-24)。此類適用於控制細胞或哺乳動物體內之dsRNA表現的可誘導之表現系統包括，例如，藉由蛻皮激素、雌激素、黃體素、四環素、二聚化之化學誘導劑以及異丙基-β-D1-硫代半乳糖苷(IPTG)之調控。本領域技術人員將能夠基於iRNA基因轉殖之預期用途而選擇適宜之調控/啟動子序列。
可使用含有編碼iRNA之核酸序列的病毒載體。例如，可使用逆轉錄病毒載體(參見，Miller et al.,Meth.Enzymol.217：581-599(1993))。此等逆轉錄病毒載體含有正確封裝病毒基因組並整合至宿主細胞DNA中所必需之成分。編碼iRNA之核酸序列經選殖至一個或多個載體中，其促進將核酸遞送至患者體內。關於逆轉錄病毒載體之更多細節可見於，例如，Boesen et al.,Biotherapy 6：291-302(1994)中，其揭示逆轉錄病毒遞送mdr1基因至造血幹細胞以作成更耐化療之幹細胞的用途。其他例證逆轉錄病毒載體於基因療法中之用途的參考文獻係：Clowes et al.,J.Clin.Invest.93：644-651(1994)；Kiem et al.,Blood 83：1467-1473(1994)；Salmons and Gunzberg,Human Gene Therapy 4：129-141(1993)；以及Grossman and Wilson,Curr.Opin.in Genetics and Devel.3：110-114(1993)。預期使用之慢病毒載體包括，例如，美國專利第6,143,520號、 第5,665,557號及第5,981,276號中揭示之HIV系載體，該等專利藉由引用併入本文。
腺病毒亦預期用於遞送本發明之iRNA。腺病毒係特別有吸引力之載體，例如，用於遞送基因至呼吸道上皮。腺病毒天然地感染呼吸道上皮，它們於該處造成輕度疾病。腺病毒系遞送系統之其他標靶係肝臟、中樞神經系統、內皮細胞及肌肉。腺病毒具有能夠感染非分裂細胞之優點。Kozarsky and Wilson,Current Opinion in Genetics and Development 3：499-503(1993)呈遞關於腺病毒系基因療法之綜述。Bout et al.,Human Gene Therapy 5：3-10(1994)演示了腺病毒載體轉移基因至恆河猴呼吸道上皮的用途。腺病毒於基因療法中之用途的其他實例可見於Rosenfeld et al.,Science 252：431-434(1991)；Rosenfeld et al.,Cell 68：143-155(1992)；Mastrangeli et al.,J.Clin.Invest.91：225-234(1993)；PCT公佈WO94/12649；以及Wang,et al.,Gene Therapy 2：775-783(1995)。適用於表現本發明提出之iRNA的AV載體、構建重組AV載體之方法、以及遞送載體至標靶細胞內之方法揭示於Xia H et al.(2002),Nat.Biotech.20：1006-1010中。
腺相關病毒(AAV)載體亦可用來遞送本發明之iRNA(Walsh et al.,Proc.Soc.Exp.Biol.Med.204：289-300(1993)；美國專利第5,436,146號)。於一個態樣中，iRNA可表現為來自重組AAV載體的兩個獨立、互補之單股RNA分子，該載體具有例如U6或H1 RNA啟動子或者具有巨細胞病毒(CMV)啟動子。適用於表現本發明提出之dsRNA的AAV、構建重組AV載體之方法、以及遞送載體至標靶細胞內之方法揭示於以下 文獻中：Samulski R et al.(1987),J.Virol.61：3096-3101；Fisher K J et al.(1996),J.Virol,70：520-532；Samulski R et al.(1989),J.Virol.63：3822-3826；美國專利第5,252,479號；美國專利第5,139,941號；國際專利申請第WO 94/13788號；以及國際專利申請第WO 93/24641號，此等文獻之整體揭露藉由引用併入本文。
其他適用於遞送本發明之iRNA的病毒載體係痘病毒諸如天花病毒，例如，減毒疫苗諸如改良阿卡拉病毒(Modified Virus Ankara(MVA))或NYVAC(一種鳥類痘病毒諸如雞痘病毒或金絲雀痘病毒)。
病毒載體之向性可藉由以來自其他病毒之包膜蛋白或其他表面抗原將載體假型包裝或藉由按需要取代不同之病毒殼蛋白而修飾。例如，可使用來自水泡性口炎病毒(VSV)、狂犬病病毒、伊波拉病毒、摩科拉(Mokola)病毒等之表面蛋白將慢病毒載體假型包裝。可藉由工程化載體以表現不同殼蛋白血清型而將AAV病毒作成靶向不同細胞；參見，例如，Rabinowitz J E et al.(2002),J Virol 76：791-801，其整體揭露藉由引用併入本文。
載體之藥物製劑可包括處於可接受之稀釋劑中之該載體，或可包括將基因遞送媒介物包埋於其中的緩慢釋放基質。另選地，在可以從重組細胞完整地產生完全基因遞送載體例如逆轉錄病毒載體的情況下，藥物製劑可包括產生該基因遞送系統的一個或多個細胞。
V.用於本發明之方法中的雙股iRNA劑
適用於本發明之方法中的雙股RNAi劑包括具有互補區域之反義股，該互補區域與在AGT基因表現中所形成之mRNA的至少一部 分互補。該互補區域係約19至30個核苷酸之長度(例如，約30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20或19個核苷酸之長度)。當與表現AGT基因之細胞接觸時，該iRNA將AGT基因(例如，人類、靈長類、非靈長類或大鼠AGT基因)之表現抑制至少約50%，如藉由例如PCR或基於分支鏈DNA(bDNA)之方法所檢定，或藉由基於蛋白質之方法諸如藉由使用例如西方印跡法之免疫螢光分子或流式細胞術所檢定。於較佳之態樣中，表現之抑制係藉由PCT申請第PCT/US2019/032150號之實施例中尤其是實施例2中所提供之qPCR方法測定，siRNA係10nM濃度，於該申請中提供之適宜生物體細胞系中進行。於較佳之態樣中，體內表現之抑制係藉由減弱表現人類基因之嚙齒動物(例如，表現人類標靶基因之小鼠或經AAV轉染之小鼠)體內之人類基因而測定，例如，當在RNA表現之最低點給藥3mg/kg之單一劑量時。肝臟中之RNA表現係使用PCT申請第PCT/US2019/032150號之實施例2中提供之PCR方法測定。
dsRNA包括兩個RNA股，在該dsRNA將被使用之條件下，該兩股互補並雜交以形成雙螺旋結構。dsRNA之一股(反義股)包括互補區域，該互補區域與靶標系列實質上互補且通常完全互補。標靶序列可源自在AGT基因表現過程中形成之mRNA序列。另一股(正義股)包括一區域，該區域與該反義股互補，使得當在適宜條件下組合時，兩股雜交並形成雙螺旋結構。如本文中他處所述，dsRNA之互補序列亦可作為單個核酸分子之自互補區域而保護，與作為獨立之寡核苷酸相反。
通常，該雙螺旋區域係19至30個鹼基對之長度。同樣，與標靶序列互補之區域係19至30個核苷酸之長度。
於一些態樣中，該dsRNA係約19至約23個核苷酸之長度，或約25至約30個核苷酸之長度。通常，該dsRNA係足夠長，以用作切丁酶之受質。舉例而言，該領域中習知，長度超過約21至23個核苷酸之dsRNA可用作切丁酶之受質。具有該領域通常知識者亦應認知，作為裂解標靶之RNA區域最通常係較大RNA分子之一部分，一般為mRNA分子。若相關，則mRNA靶標之「一部分」係mRNA靶標之接續序列，其長度足以令其作為RNAi引導之裂解(亦即，通過RISC途徑裂解)的受質。
熟識該領域者亦應認知，雙螺旋區域係dsRNA之主要功能性部分，例如，約19至約30個鹼基對，例如，約19至30、19至29、19至28、19至27、19至26、19至25、19至24、19至23、19至22、19至21、19至20、20至30、20至29、20至28、20至27、20至26、20至25、20至24、20至23、20至22、20至21、21至30、21至29、21至28、21至27、21至26、21至25、21至24、21至23或21至22個鹼基對之雙螺旋區域。於某些態樣中，雙螺旋區域係19至21個鹼基對。因此，於一個態樣中，就其被加工為例如15至30個鹼基對之以用於裂解之所欲RNA為靶向之官能性雙螺旋的程度而言，具有超過30個鹼基對之RNA分子或RNA分子之複合物係dsRNA。因此，具有通常知識之技術人員將認知，於一個態樣中，miRNA係dsRNA。於另一態樣中，dsRNA不是天然出現之miRNA。於另一態樣中，可用於靶向AG基因T表現之iRNA劑並非藉由較大dsRNA之裂解而在靶標細胞內生成。
本文中所述之dsRNA可復包括一個或多個具有例如1至4、2至4、1至3、2至3、1、2、3或4個核苷酸之單股核苷酸突出。相對於 其鈍端之對應物，具有至少一個核苷酸突出之dsRNA可具有傑出之抑制特性。核苷酸突出可包含核苷酸/核苷類似物或由其組成，其中該核苷酸/核苷類似物包括脫氧核苷酸/核苷。突出可位於正義股、反義股或其任何組合。此外，突出之核苷酸可存在於dsRNA之反義股或正義股之5’端、3’端或兩端。
突出可係一股比另一股長之結果，或係相同長度之兩股交錯之結果。突出可形成與標靶mRNA之誤配，或其可與待作為標靶之基因序列互補或可係另一序列。該第一股與第二股亦可藉由例如額外之鹼基接合以形成髮夾，或藉由其他非鹼基鏈結子接合。
於一個態樣中，該RNAi劑之突出區域中之核苷酸可各自獨立為經修飾或未經修飾之核苷酸，包括但不限於，2’-糖修飾，例如，2-F、2’-O-甲基胸苷(T)、2`-O-甲氧基乙基-5-甲基尿苷(Teo)、2`-O-甲氧基乙基腺苷(Aeo)、2`-O-甲氧基乙基-5-甲基胞苷(m5Ceo)、及其任何組合。舉例而言，TT可係任一股之任一端之突出序列。突出可形成與標靶mRNA之誤配，或其可與待作為標靶之基因序列互補或可係另一序列。
RNAi劑之正義股、反義股或兩股之5’突出或3’突出可經磷酸化。於一些態樣中，該突出區域含有兩個核苷酸且在該兩個核苷酸之間具有硫代磷酸酯，其中該兩個核苷酸可係相同或相異。於一個態樣中，該突出存在於正義股、反義股或兩股之3’端。於一個態樣中，這一3’突出存在於反義股中。於一個態樣中，這一3’突出存在於正義股中。
該RNAi劑可僅含有單個突出，該突出可強化該RNAi劑之干擾活性而不影響其整體安定性。舉例而言，該單股突出可位於正義股之 3’末端，或者位於反義股之3’末端。該RNAi劑亦可具有鈍端，位於反義股之5’端(或正義股之3’端)，反之亦然。通常，該RNAi之反義股具有3’端之核苷酸突出，且5’端係鈍端。儘管不欲受縛於理論，但反義股5’端之不對稱鈍端以及反義股之3’端突出有助於將導引股加載至RISC過程中。
於一些態樣中，用於本發明之方法中的雙股RNAi劑未經修釋。於其他態樣中，用於本發明之方法中的雙股RNAi劑係經修飾，例如，包含能夠抑制標靶基因(亦即，AGT基因)體內表現或增強該劑之其他有益特徵之安定性的化學修飾。於一些態樣中，雙股RNAi劑包含熱去安定化核苷酸修飾。
如下文中更詳細揭示者，於本發明之某些方面，本發明之iRNA的基本上全部核苷酸係經修飾。於本發明之另一態樣中，本發明之iRNA之全部核苷酸皆係經修飾者。本發明之其“基本上全部核苷酸係經修飾者”的iRNA大多數並非全部經修飾，且可包括不超過5、4、3、2或1個未經修飾之核苷酸。
daRNA可藉由該技藝中已知之標準方法合成。本發明之雙股RNAi化合物可使用兩步之過程製備。首先，雙股RNA分子之個體股係單獨製備。隨後，將該等組分股降溫黏合。該siRNA化合物之個體股可使用溶液相有機合成、固相有機合成或兩者製備。有機合成提供下述優點：包含非天然或經修飾之核苷酸的寡核苷酸股可輕易製備之。類似地，本發明之單股寡核苷酸可使用溶液相有機合成、固相有機合成或兩者製備。
VI.本發明之修飾iRNA
於某些態樣中，本發明之iRNA之RNA例如dsRNA未經修飾，且不包含例如該領域中已知及本文所述之化學修飾或接合。於其他態樣中，本發明之iRNA之RNA如dsRNA經化學修飾以增強安定性或其他有益特徵。於本發明之某些態樣中，本發明之iRNA的實質上全部核苷酸係經修飾。於本發明之其他態樣中，iRNA之全部核苷酸或iRNA之實質上全部核苷酸係經修飾，亦即，不超過5、4、3、2或1個未經修飾之核苷酸存在於iRNA之股內。
本發明提出之核酸可藉由該領域中良好構建至方法合成或修飾，該方法係例如彼等於《現代核酸化學技術》(「Current protocols in nucleic acid chemistry」,Beaucage,S.L.et al.(Edrs.),John Wiley & Sons,Inc.,New York,NY,USA)中揭示者，該文獻藉由引用而併入本文。修飾包括，舉例而言，末端修飾，例如，5’末端修飾(磷醯化、接合、反向鏈結)或3’末端修飾(接合、DNA核苷酸、反向鏈結等)；鹼基修飾，例如，替換為安定化鹼基、去安定化鹼基、或與同伴之拓展物進行鹼基配對之鹼基，移除鹼基(無鹼基之核苷酸)，或接合鹼基；糖修飾(例如，在2’-位置或4’-位置)或糖之取代；或骨幹修飾，包括磷酸二酯類鏈結之修飾或取代。可用於本文所述態樣中之iRNA化合物之具體實例包括，但不限於，含有經修飾之骨幹或不含天然核苷酸間鏈結之RNA。具有經修飾之骨幹的RNA除此之外亦包括彼等在骨幹中不具有磷原子者。對於本說明書之目的，且如該領域中有時參照者，在其核苷酸間骨幹中不具有磷原子的經修飾之RNA亦可視為寡核苷酸。於一些態樣中，經修飾之RNA將在其核苷酸間骨幹中具有磷原子。
經修飾之RNA骨幹包括，舉例而言，具有正常3’-5’鏈結之硫代磷酸酯類、手性硫代磷酸酯類、二硫代磷酸酯類、磷酸三酯類、胺基烷基磷酸三酯類、包括3’-伸烷基磷酸酯類及手性磷酸酯類之甲基及其他烷基磷酸酯類、膦酸酯類、包括3’-胺基磷醯胺化物及胺基烷基磷醯胺化物之磷醯胺化物、硫羰基磷醯胺化物類、硫羰基烷基磷酸酯類、硫羰基烷基磷酸三酯類、以及硼磷酸酯類；此等之2’-5’鏈結類似物；以及彼等具有反向極性者，其中相鄰至核苷單元對係將3’-5’鏈結至5’-3’或將2’-5’鏈結至5’-2’。亦可包括多種鹽類例如鈉鹽、混合鹽類及游離酸形式。
教示上述含磷鏈結之製備的代表性美國專利包括但不限於，美國專利第3,687,808號、第4,469,863號、第4,476,301號、第5,023,243號、第5,177,195號、第5,188,897號、第5,264,423號、第5,276,019號、第5,278,302號、第5,286,717號、第5,321,131號、第5,399,676號、第5,405,939號、第5,453,496號、第5,455,233號、第5,466,677號、第5,476,925號、第5,519,126號、第5,536,821號、第5,541,316號、第5,550,111號、第5,563,253號、第5,571,799號、第5,587,361號、第5,625,050號、第6,028,188號、第6,124,445號、第6,160,109號、第6,169,170號、第6,172,209號、第6,239,265號、第6,277,603號、第6,326,199號、第6,346,614號、第6,444,423號、第6,531,590號、第6,534,639號、第6,608,035號、第6,683,167號、第6,858,715號、第6,867,294號、第6,878,805號、第7,015,315號、第7,041,816號、第7,273,933號、第7,321,029號、及美國再公告專利第39464號，其各自之整體內容藉由引用而併入本文。
其內部不包括磷原子之經修飾之RNA骨幹具有藉由短鏈烷基或環烷基類核苷酸間鏈結、混合雜原子及烷基或環烷基類核苷酸間鏈結、或一個或多個短鏈雜原子或雜環類核苷酸間鏈結形成的骨幹。此等包括彼等具有N-嗎啉基鏈結(部分地由核苷之糖部分形成)；矽氧烷骨幹；硫醚、亞碸及碸骨幹；甲醯基及硫代甲醯基骨幹；亞甲基甲醯基及硫代甲醯基骨幹；含有烯之骨幹；胺基磺酸酯骨幹；亞甲基亞胺基及亞甲基肼基骨幹；磺酸酯及磺醯胺骨幹；醯胺骨幹；以及其它具有混合之N、O、S及CH2組分部分者。
教示上述寡核苷酸之製備的代表性美國專利包括但不限於，美國專利第5,034,506號、第5,166,315號、第5,185,444號、第5,214,134號、第5,216,141號、第5,235,033號、第5,64,562號、第5,264,564號、第5,405,938號、第5,434,257號、第5,466,677號、第5,470,967號、第5,489,677號、第5,541,307號、第5,561,225號、第5,596,086號、第5,602,240號、第5,608,046號、第5,610,289號、第5,618,704號、第5,623,070號、第5,663,312號、第5,633,360號、第5,677,437號、及第5,677,439號，其各自之整體內容藉由引用而併入本文。
適宜之RNA模擬物預期用於本文提供之iRNA中，其中核苷酸單元之糖及核苷酸間鏈結兩者亦即骨幹係替換為新穎基團。鹼基單元維持與適宜之核酸標靶化合物雜交。一種此類寡聚化合物，其中業經顯示具有優異雜交特性之RNA模擬物指稱為胜肽核酸(PNA)。於PNA化合物中，RNA之糖骨幹替換為含有醯胺之骨幹，尤其是胺基乙基甘油骨幹。核鹼基得以保留，且直接或間接地鍵結至骨幹之醯胺部分的氮雜氮原子。教 示PNA化合物之製備的代表性美國專利包括但不限於，美國專利第5,539,082號、第5,714,331號、及第5,719,262號，其各自之整體內容藉由引用而併入本文。適用於本發明之iRNA中之額外之PNA化合物揭示於，舉例而言，Nielsen et al.,Science,1991,254,1497-1500中。
本發明提出之一些態樣包括具有硫代磷酸酯骨幹之RNA以及具有雜原子骨幹之寡核苷酸，尤其是上文引用之美國專利第5,489,677號的--CH2--NH--CH2-、--CH2--N(CH3)--O--CH2--[稱為亞甲基(甲基亞胺基)或MMI骨幹]、--CH2--O--N(CH3)--CH2--、--CH2--N(CH3)--N(CH3)--CH2--及--N(CH3)--CH2--CH2--[其中，天然磷酸二酯骨幹表示為--O--P--O--CH2--]，以及上文引用之美國專利第5,602,240號的醯胺骨幹。於一些態樣中，本文提出之RNA具有上文引用之美國專利第5,034,506號的N-嗎啉基骨幹結構。
經修飾之RNA亦可含有一個或多個經取代之糖部分。本文提出之iRNA如dsRNA可包括位於2’位置之下述之一者：OH；F；O-、S-或N-烷基；O-、S-或N-烯基；O-、S-或N-炔基；或O-烷基-O-烷基，其中該烷基、烯基及炔基可係經取代或未經取代之C1至C10烷基或C2至C10烯基及炔基。例示性之適宜修飾包括O[(CH2)nO]mCH3、O(CH2)．nOCH3、O(CH2)nNH2、O(CH2)nCH3、O(CH2)nONH2、及O(CH2)nON[(CH2)nCH3)]2，其中n及m係從1至約10。於其他態樣中，dsRNA包括位於2’位置之下述之一者：C1至C10低級烷基、經取代之低級烷基、烷芳基、芳烷基、O-烷芳基或O-芳烷基、SH、SCH3、OCN、Cl、Br、CN、CF3、OCF3、SOCH3、SO2CH3、ONO2、NO2、N3、NH2、雜環烷基、雜環烷基芳基、胺基烷基胺 基、聚烷基胺基、經取代之矽烷基、RNA裂解基團、保護基團、嵌入劑、用於改善iRNA之藥物動力學特性之基團、或用於改善iRNA之藥效動力學特性之基團、以及其它具有類似特性之取代基。於一些態樣中，該修飾包括2’-甲氧基乙氧基(2'-O--CH2CH2OCH3，亦稱為2'-O-(2-甲氧基乙基)或2'-MOE)(Martin et al.,Helv.Chim.Acta,1995,78：486-504)，亦即，烷氧基-烷氧基基團。另一例示性修飾係2'-二甲基胺基氧乙氧基，亦即，O(CH2)2ON(CH3)2基團，亦稱為2'-DMAOE，如下文實施例中所述；以及2'-二甲基胺基乙氧基乙氧基(該領域中亦稱為2'-O-二甲基胺基乙氧基乙基或2'-DMAEOE)，亦即，2'-O--CH2--O--CH2--N(CH2)2。其他示例性修飾包括：5’-Me-2’-F核苷酸、5’-Me-2’-OMe核苷酸、5’-Me-2’-脫氧核苷酸(於此三組中，皆係R異構物與S異構物兩者)；2’-烷氧基烷基；以及2’-NMA(N-甲基乙醯胺)。
其它修飾包括2'-甲氧基(2'-OCH3)、2'-胺基丙氧基(2'-OCH2CH2CH2NH2)及2'-氟(2'-F)。類似之修飾亦可在iRNA之RNA之其它位置作成，尤其是3’末端核苷酸之糖的3’位置或2'-5’鏈結之dsRNA中以及5’端核苷酸之5’位置。iRNA亦可具有替代呋喃戊糖基糖的糖模擬物如環丁基部分。
iRNA亦可包括核鹼基(該領域中一般簡稱為「鹼基」)修飾或取代。如本文中所用，「未經修飾」或「天然」核鹼基包括嘌呤鹼基腺嘌呤(A)及鳥嘌呤(G)，以及嘧啶鹼基胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)及尿嘧啶(U)。經修飾之核鹼基包括其他合成及天然核鹼基，諸如去氧-胸腺嘧啶(dT)、5-甲基胞嘧啶(5-me-C)；5-羥甲基胞嘧啶；黃嘌呤；次黃嘌呤；2-胺基腺嘌呤； 腺嘌呤及鳥嘌呤之6-甲基及其他烷基衍生物；腺嘌呤及鳥嘌呤之2-丙基及其他烷基衍生物；2-硫尿嘧啶、2-硫胸腺嘧啶及2-硫胞嘧啶；5-鹵尿嘧啶及5-鹵胞嘧啶；5-丙炔基尿嘧啶及5-丙炔基胞嘧啶；6-偶氮尿嘧啶、6-偶氮胞嘧啶及6-偶氮胸腺嘧啶；5-尿嘧啶(假尿嘧啶)；4-硫尿嘧啶；8-鹵、8-胺基、8-巰基、8-硫烷基、8-羥基及其他8-取代之腺嘌呤及鳥嘌呤；5-鹵尤其是5-溴、5-三氟甲基及其他5-取代之尿嘧啶及胞嘧啶；7-甲基鳥嘌呤及7-甲基腺嘌呤；8-氮雜鳥嘌呤及8-氮雜腺嘌呤；7-去氮鳥嘌呤及7-去氮腺嘌呤；以及3-去氮鳥嘌呤及3-去氮腺嘌呤。其他核鹼基包括彼等揭露於美國專利第3,687,808號中者；彼等揭露於《生物化學、生物技術及醫藥中之經修飾之核苷酸》(Modified Nucleosides in Biochemistry,Biotechnology and Medicine,Herdewijn,P.ed.Wiley-VCH,2008)中者；彼等揭露於《聚合物科學及工程之簡明百科》(The Concise Encyclopedia Of Polymer Science And Engineering,pages 858-859,Kroschwitz,J.L,ed.John Wiley & Sons,1990)中者；此等由Englisch et al.,Angewandte Chemie,International Edition,1991,30,613揭露者；以及彼等由《dsRNA研究及應用》第15章第289至302頁(Sanghvi,YS.,Chapter 15,dsRNA Research and Applications,pages 289-302,Crooke,S.T.and Lebleu,B.,Ed.,CRC Press,1993)揭露者。此等核鹼基中之某些尤其可用於增加本發明提出之寡聚化合物的結合親和性。此等包括5-取代之嘧啶、6-氮雜嘧啶及N-2、N-6及O-6取代之嘌呤，包括2-胺基丙基腺嘌呤、5-丙基尿嘧啶及5-丙基胞嘧啶。5-甲基胞嘧啶取代業經顯示將核酸雙螺旋安定性增加0.6至1.2℃(Sanghvi,Y.S.,Crooke,S.T.and Lebleu,B.,Eds.,dsRNA Research and Applications,CRC Press,Boca Raton,1993,pp.276-278)且係示例性之鹼基取代，尤其是當與2'-O-甲氧基乙基糖修飾合用時尤甚。
教示某些上述經修飾之核鹼基以及其他經修飾之核鹼基的代表性美國專利包括但不限於，上述之美國專利第3,687,808號、第4,845,205號、第5,130,30號、第5,134,066號、第5,175,273號、第5,367,066號、第5,432,272號、第5,457,187號、第5,459,255號、第5,484,908號、第5,502,177號、第5,525,711號、第5,552,540號、第5,587,469號、第5,594,121號、第5,596,091號、第5,614,617號、第5,681,941號、第5,750,692號、第6,015,886號、第6,147,200號、第6,166,197號、第6,222,025號、第6,235,887號、第6,380,368號、第6,528,640號、第6,639,062號、第6,617,438號、第7,045,610號、第7,427,672號、及第7,495,088號，其各自之整體內容藉由引用而併入本文。
iRNA之RNA亦可經修飾，以包括一個或多個鎖定之核酸(LNA)。鎖定之核酸係具有經修飾之核糖部分的核苷酸，其中該核糖部分包含連結2’碳與4’碳之外接橋。這一結構有效地將該核糖「鎖定」為3’-環內結構之構形。將鎖定之核酸加至siRNA中業經顯示增加血清中siRNA安定性，且降低脫靶效應(Elmen,J.et al.,(2005)Nucleic Acids Research 33(1)：439-447；Mook,OR.et al.,(2007)Mol Canc Ther 6(3)：833-843；Grunweller,A.et al.,(2003)Nucleic Acids Research 31(12)：3185-3193)。
教示鎖定之核酸核苷酸之製備的代表性美國專利包括但不限於下列者：美國專利第6,268,490號、第6,670,461號、第6,794,499號、 第6,998,484號、第7,053,207號、第7,084,125號、及第7,399,845號，其各自之整體內容藉由引用併入本文。
於一些態樣中，iRNA之RNA亦可經修飾，以包括一個或多個雙環糖部分。「雙環糖」係藉由兩個原子之橋接而修飾之呋喃糖基環。「雙環核苷」(「BNA」)係核苷，其具有包含連結該糖環之兩個碳原子之橋的糖部分，從而形成雙環系統。於某些態樣中，橋連結糖環之4'碳與2'碳。因此，於一些態樣中，本發明之劑可包括一個或多個鎖定之核酸(LNA)。鎖定之核酸係具有經修飾之核糖部分的核苷酸，其中該核糖部分包含連結2’碳與4’碳之外接橋。換言之，LNA係包含雙環糖部分之核苷酸，其中該雙環糖部分包含4'-CH2-O-2’橋。這一結構有效地將該核糖「鎖定」為3’-環內結構之構形。將鎖定之核酸加至siRNA中業經顯示增加血清中siRNA安定性，且降低脫靶效應(Elmen,J.et al.,(2005)Nucleic Acids Research 33(1)：439-447；Mook,OR.et al.,(2007)Mol Canc Ther 6(3)：833-843；Grunweller,A.et al.,(2003)Nucleic Acids Research 31(12)：3185-3193)。用於本發明之多核苷酸之雙環核苷的示例包括而不限於，包含位於4'核糖基環原子與2'核糖基環原子間之橋的核苷。於某些態樣中，本發明之反義多核苷酸劑包括一個或多個包含4'至2'橋之雙環核苷。此類4'至2'橋接之雙環核苷的示例包括但不限於，4'-(CH2)-O-2'(LNA)；4'-(CH2)-S-2'；4'-(CH2)2-O-2'(ENA)；4'-CH(CH3)-O-2'(亦指稱為「約束之乙基」或「cEt」)及4'-CH(CH2OCH3)-O-2'(及其類似物；參見，例如，美國專利第7,399,845號)；4'-C(CH3)(CH3)-O-2'(及其類似物；參見，例如，美國專利第8,278,283號)；4'-CH2-N(OCH3)-2'(及其類似物；參見，例如，美 國專利第8,278,425號)；4'-CH2-O-N(CH3)-2'(參見，例如，美國專利公開案第2004/0171570號)；4'-CH2-N(R)-O-2'，其中R係H、C1-C12烷基、或保護基團(參見，例如，美國專利第7,427,672號)；4'-CH2-C(H)(CH3)-2'(參見，例如，Chattopadhyaya et al.,J.Org.Chem.,2009,74,118-134)；以及4'-CH2-C(=CH2)-2'(及其類似物；參見，例如，美國專利第8,278,426號)。
前述雙環核苷之任何者可製備為具有一種或多種立體化學糖組態，包括，舉例而言，α-L-呋喃核糖及β-D-呋喃核糖(參見，WO 99/14226)。
iRNA之RNA亦可經修飾，以包括一個或多個約束之乙基核苷酸。如本文中所用，「約束之乙基核苷酸」或「cEt」包含雙環糖部分之鎖定之核酸，其中該雙環糖部分包含4’-CH(CH3)-O-2’橋。於一個態樣中，約束之乙基核苷酸係S構形，本文中指代為「S-cEt」。
本發明之iRNA亦可經修飾，以包括一個或多個「構形上受限之核苷酸」(「CRN」)。CRN係具有連結核糖之C2’碳與C4’碳或核糖之C3碳與C5'碳之鏈結子的核苷酸類似物。CRN將該核糖鎖定為適宜之構形，且增加其與mRNA之雜交親和性。該鏈接基足夠長，以將氧置於對於安定性及親和性為最優之位置，從而令核糖不易起皺。
於一些態樣中，本發明之iRNA包含一個或多個作為UNA(未鎖定之核酸)核苷酸之單體。UNA係未鎖定之非環狀核酸，其中該糖之任何鍵業經移除，形成未鎖定之「糖」殘基。於一示例中，UNA亦涵蓋其C1’-C4’鍵(亦即，位於C1’碳與C4’碳間之碳-氧-碳共價鍵)業經移除之單 體。於另一示例中，糖之C2'-C3'鍵(亦即，位於C2’碳與C3’碳之間的碳-碳共價鍵)業經移除(參見，Nuc.AcidsSymp.Series,52,133-134(2008)及Fluiter et al.,Mol.Biosyst.,2009,10,1039，藉由引用併入本文)。
對RNA分子之末端的潛在安定化修飾可包括N-(乙醯基胺基己醯基)-4-羥基脯胺醇(Hyp-C6-NHAc)、N-(己醯基-4-羥基脯胺醇(Hyp-C6)、N-(乙醯基-4-羥基脯胺醇(Hyp-NHAc)、胸腺嘧啶-2'-0-脫氧胸腺嘧啶(醚)、N-(胺基己醯基)-4-羥基脯胺醇(Hyp-C6-胺基)、2-二十二醯基-尿苷-3"-磷酸酯、反向鹼基dT(idT)等。這一修飾之揭露可見於PCT申請第WO 2011/005861號中。
本發明之iRNA之核苷酸的其他修飾包括5’磷酸酯或5’磷酸酯模擬物，如位於iRNA劑之反義股的5’末端磷酸酯或磷酸酯模擬物。適宜之磷酸酯模擬物揭露於，舉例而言，美國專利公開案第2012/0157511號中，其整體內容藉由引用而併入本文。
A.本發明之包含模體的經修飾之iRNA
於本發明之某些方面，本發明之雙股RNA劑包括具有如例如WO2013/075035中所揭露之化學修飾的劑，該申請各自之整體內容藉由引用而併入本文。WO2013/075035將三個接續核苷酸之三個相同修飾的模體提供到dsRNAi劑之正義股或反義股中，尤其在裂解位點處或鄰近裂解位點處。於一些態樣中，dsRNAi劑之正義股及反義股可以其他方式完全修飾。此等模體之引入中斷正義股或反義股之修飾模式(若存在)。dsRNAi劑可視需要與GalNAc衍生物配位子例如於正義股接合。
更詳而言之，當雙股RNA劑之正義股及反義股經完全修飾以在dsRNAi劑之至少一股的裂解位點處或鄰近裂解位點處具有三個接續核苷酸之三個相同修飾的一個或多個模體時，觀察到了dsRNAi劑之基因靜默活性。
據此，本發明係提供能在體內抑制標靶基因(亦即，AGT基因)之表現的雙股RNA劑。RNAi劑包含正義股及反義股。RNAi劑之每一股可係，例如，17至30個核苷酸之長度、25至30個核苷酸之長度、27至30個核苷酸之長度、19至25個核苷酸之長度、19至23個核苷酸之長度、19至21個核苷酸之長度、21至25個核苷酸之長度、或21至23個核苷酸之長度。
正義股及反義股典型地形成雙螺旋雙股RNA(「dsRNA」)，本文中亦指稱為「dsRNAi劑」。dsRNAi劑之雙螺旋區域可係，舉例而言，雙螺旋區域可係27至30個核苷酸對之長度；19至25個核苷酸對之長度；19至23個核苷酸對之長度；19至21個核苷酸對之長度；21至25個核苷酸對之長度；或21至23個核苷酸對之長度。於另一示例中，該雙螺旋區域係選自19、20、21、22、23、24、25、26及27個核苷酸之長度。
於某些態樣中，dsRNAi劑可含有一股或兩股之3’端、5’端或兩端的一個或多個突出區域或封端基團。突出可獨立為1至6個核苷酸之長度，例如，2至6個核苷酸之長度、1至5個核苷酸之長度、2至5個核苷酸之長度、1至4個核苷酸之長度、2至4個核苷酸之長度、1至3個核苷酸之長度、2至3個核苷酸之長度、或1至2個核苷酸之長度。於某些態樣中，突出區域可包括上文提供的延伸之突出區域。突出可係一股比 另一股長之結果，或係相同長度之兩股交錯之結果。突出可形成與標靶mRNA之誤配，或其可與待作為標靶之基因序列互補或可係另一序列。第一股與第二股亦可藉由例如額外之鹼基接合以形成髮夾，或藉由其他非鹼基鏈結基接合。
於某些態樣中，dsRNAi劑之突出區域中之核苷酸可各自獨立為經修飾或未經修飾之核苷酸，包括但不限於，2’-糖修飾，諸如2’-F、2’-O-甲基胸苷(T)、2’-O-甲氧基乙基-5-甲基尿苷(Teo)、2’-O-甲氧基乙基腺苷(Aeo)、2’-O-甲氧基乙基-5-甲基胞苷(m5Ceo)、及其任何組合。舉例而言，TT可係任一股之任一端之突出序列。突出可形成與標靶mRNA之誤配，或其可與待作為標靶之基因序列互補或可係另一序列。
dsRNAi劑之正義股、反義股或兩股之5’突出或3’突出可經磷酸化。於一些態樣中，突出區域含有兩個核苷酸且在該兩個核苷酸之間具有硫代磷酸酯，其中，兩個核苷酸可係相同或相異。於一些態樣中，突出存在於正義股、反義股或兩股之3’端。於一些態樣中，這一3’突出存在於反義股中。於一些態樣中，這一3’突出存在於正義股中。
dsRNAi劑可僅含有單個突出，該突出可強化RNAi劑之干擾活性而不影響其整體安定性。舉例而言，單股突出可位於正義股之3’端，或者位於反義股之3’端。RNAi劑亦可具有鈍端，位於反義股之5’端(或正義股之3’端)，反之亦然。通常，dsRNAi劑之反義股具有位於3’端之核苷酸突出，且5’端係鈍端。儘管不欲受縛於理論，但反義股5’端之不對稱鈍端以及反義股之3’端突出有助於將導引股加載至RISC過程中。
於某些態樣中，dsRNAi劑係19個核苷酸長度之雙鈍端者，其中，正義股含有至少一個從5’端之位置7、8、9之三個接續核苷酸之三個2’-F修飾的模體。反義股含有至少一個從5’末端之位置11、12、13之三個接續核苷酸之三個2’-O-甲基修飾的模體。
於其他態樣中，dsRNAi劑係20個核苷酸長度之雙鈍端者，其中，正義股含有至少一個從5’端之位置8、9、10之三個接續核苷酸之三個2’-F修飾的模體。反義股含有至少一個從5’端之位置11、12、13之三個接續核苷酸之三個2’-O-甲基修飾的模體。
於再其他態樣中，dsRNAi劑係21個核苷酸長度之雙鈍端者，其中，正義股含有至少一個從5’端之位置9、10、11之三個接續核苷酸之三個2’-F修飾的模體。反義股含有至少一個從5’端之位置11、12、13之三個接續核苷酸之三個2’-O-甲基修飾的模體。
於某些態樣中，dsRNAi劑包含21個核苷酸之正義股及23個核苷酸之反義股，其中，正義股含有至少一個從5’端之位置9、10、11之三個接續核苷酸之三個2’-F修飾的模體；反義股含有至少一個從5’端之位置11、12、13之三個接續核苷酸之三個2’-O-甲基修飾的模體，其中，RNAi劑之一端係鈍端而另一端包含2個核苷酸之突出。較佳地，具有2個核苷酸之突出係於反義股之3’末端。
當2個核苷酸之突出位於反義股之3’端時，在末端三個核苷酸之間可能存在兩個硫代硫酸酯類核苷酸間鏈結，其中，該三個核苷酸中之兩者係突出核苷酸，且第三個核苷酸與緊鄰該突出核苷酸之下一個核苷酸配對。於一個態樣中，RNAi劑在正義股之5’端及反義股之5’端兩處 額外具有位於末端三個核苷酸之間的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結。於某些態樣中，dsRNAi劑之正義股及反義股中之每一個核苷酸，包括作為模體之一部分的核苷酸，皆係經修飾之核苷酸。於某些態樣中，各殘基獨立經2’-O-甲基或3’-氟以例如交替模體方式修飾。視需要，dsRNAi劑復包含配位子(較佳係GalNAc3)。
於某些態樣中，dsRNAi劑包含正義股及反義股，其中，正義股係25至30個核苷酸殘基之長度，其中，第一股之從5’末端核苷酸(位置1)開始之位置1至23包含至少8個核糖核苷酸；反義股係36至66個核苷酸殘基之長度，且從3’末端核苷酸開始，在與正義股之位置1至23配對以形成雙螺旋之位置中包含至少8個核糖核苷酸；其中，至少反義股之3’末端核苷酸未與正義股配對，且多至6個接續之3’末端核苷酸未與正義股配對，從而形成具有1至6個核苷酸之3’單股突出；其中，反義股之5’末端包含10至30個未與正義股配對之接續核苷酸，從而形成具有10至30個核苷酸之單股5’突出；其中，當將正義股與反義股對準以進行最大互補時，至少正義股之5’末端核苷酸及3’末端核苷酸與反義股之核苷酸進行鹼基配對，從而在正義股與反義股之間形成實質上雙螺旋之區域；以及，反義股在沿著反義股長度之至少19個核苷酸與標靶RNA充分互補，以在當將雙股核酸引入哺乳動物細胞內時降低標靶基因之表現；以及，其中，正義股含有至少一個位於三個接續核苷酸之三個2’-F修飾的模體，其中，模體之至少一者出現在裂解位點或鄰近該裂解位點處。反義股含有至少一個於裂解位點或鄰近該裂解位點處之三個接續核苷酸之三個2’-O-甲基修飾的模體。
於某些態樣中，dsRNAi劑包含正義股及反義股，其中，dsRNAi劑包含具有至少25個且至多29個核苷酸之長度的第一股，以及具有至多30個核苷酸之長度且具有至少一個從5’端之位置11、12、13之三個接續核苷酸之三個2’-O-甲基修飾之模體的第二股；其中，第一股之3’端及第二股之5’端形成鈍端，且第二股於其3’端比第一股長1至4個核苷酸，其中，雙螺旋區域之長度係至少25個核苷酸，且第二股在沿著第二股長度之至少19個核苷酸與標靶RNA充分互補，以在當將RNAi劑引入哺乳動物細胞內時降低標靶基因表現，以及，其中，dsRNAi劑之切丁酶裂解優先得到包含第二股之3’端的siRNA，從而降低哺乳動物中之標靶基因的表現。視需要地，dsRNAi劑復包含配位子。
於某些態樣中，dsRNAi劑之正義股含有至少一個位於三個接續核苷酸之三個一相同修飾的模體，其中，模體之一者出現在正義股之裂解位點處。
於某些態樣中，dsRNAi劑之反義股亦可含有至少一個於三個接續核苷酸之三個相同修飾的模體，其中，模體之一者出現在反義股之裂解位點或鄰近該裂解位點處。
對於具有19至23個核苷酸之長度之雙螺旋區域的dsRNAi劑，反義股之裂解位點典型係從5’端之10、11、12位置附近。因此，三個相同修飾之模體可出現在反義股之9、10、11位置，10、11、12位置，11、12、13位置，12、13、14位置，或13、14、15位置，從反義股之5’端的第一個核苷酸開始計數，或從反義股之5’端在雙螺旋區域內第一個配 對核苷酸開始計數。反義股之裂解位點亦可根據從5’端之dsRNAi之雙螺旋區域長度而改變。
dsRNAi劑之正義股可含有至少一個於該股之裂解位點處之三個接續核苷酸之三個相同修飾的模體；且反義股可具有至少一個於該股之裂解位點或鄰近該裂解位點處之三個接續核苷酸之三個相同修飾的模體。當正義股及反義股形成dsRNA雙螺旋時，正義股及反義股可經對準，使得於正義股之一個三核苷酸模體與於反義股之一個三核苷酸模體具有至少一個核苷酸重疊，亦即，正義股中模體之三個核苷酸之至少一者與反義股中模體之三個核苷酸之至少一者形成鹼基配對。另選地，至少兩個核苷酸可重疊，或全部三個核苷酸可重疊。
於一些態樣中，dsRNAi劑之正義股可含有超過一個於三個接續核苷酸之三個相同修飾的模體。第一模體可出現在該股之裂解位點或鄰近該裂解位點處，且其他模體可係側翼修飾。本文中，術語「側翼修飾」指稱出現在該股之另一部位的與位於相同股之裂解位點或鄰近該裂解位點處之模體分隔開的模體。側翼修飾或與第一模體相鄰或藉由至少一個或多個核苷酸與第一模體分隔開。當模體彼此緊鄰時，則該等模體之化學性彼此截然不同；而當模體藉由一個或多個核苷酸分隔開時，則該等化學性可相同或相異。可存在兩個或多個側翼修飾。例如，當存在兩個側翼修飾時，每一側翼修飾可出現在位於裂解位點或鄰近該裂解位點處之第一模體的一端，或出現在該前導模體之任一側。
與正義股相似，dsRNAi劑之反義股可含有超過一個於三個接續核苷酸之三個相同修飾的模體，且模體之至少一者出現在該股之裂解 位點或鄰近該裂解位點處。這一反義股亦可含有一個或多個側翼修飾，該側翼修飾之排列類似於可能存在於該正義股之側翼修飾。
於一些態樣中，dsRNAi劑之正義股或反義股之側翼修飾典型地不包括於該股之3’端、5’端或兩端之最開始的一個或兩個末端核苷酸。
於其他態樣中，dsRNAi劑之正義股或反義股之側翼修飾典型地不包括於該股之3’端、5’端或兩端之雙螺旋區域內之最開始的一個或兩個配對核苷酸。
當dsRNAi劑之正義股及反義股各自含有至少一個側翼修飾時，該側翼修飾可落於雙螺旋區域之相同端，且具有一個、兩個或三個核苷酸之重疊。
當dsRNAi劑之正義股及反義股各自含有至少兩個側翼修飾時，正義股與反義股可經對準而使得來自一股之兩個修飾之各者落於雙螺旋區域之一端且具有一個、兩個或三個核苷酸之重疊；來自一股之兩個修飾之各者落於雙螺旋區域之另一端且具有一個、兩個或三個核苷酸之重疊；一股之兩個修飾落於前導模體之各側且在雙螺旋區域具有一個、兩個或三個核苷酸之重疊。
於一些態樣中，dsRNAi劑之正義股及反義股中之每一個核苷酸，包括作為模體之一部分的核苷酸，可經修飾。各核苷酸可藉由相同或相異之修飾而經修飾，該等修飾可包括非鏈結性磷酸酯氧之一者或兩者或鏈結性磷酸酯氧之一者或多者的一個或多個變更；核糖之構建的變更，如核糖之2’-羥基之變更；以「去磷」鏈結子進行之磷酸酯部分的整體替換；天然出現之鹼基的修飾或替換；以及核糖-磷酸酯骨幹的替換或修飾。
由於核酸係子單元之聚合物，多數修飾出現在核酸內重複之位置，如，鹼基、磷酸酯部分、或磷酸酯部分之非鏈結性O的修飾。於一些情形中，修飾將出現在該核酸之所有受試位置，但在多數情形中並非如此。舉例而言，修飾可僅出現在3’或5’末端位置，可僅出現在末端區域，例如，出現在末端核苷酸之位置或出現在一股之最末2、3、4、5或10個核苷酸。修飾可出現在雙股區域、單股區域、或兩者。修飾可僅出現在RNA之雙股區域，或僅出現在RNA之單股區域。例如，於非鏈結性O位置之硫代磷酸酯修飾可僅出現在一末端或兩末端；可僅出現在末端區域，例如出現在末端核苷酸之位置或出現在一股之最末2、3、4、5或10個核苷酸；或可出現在雙股區域及單股區域，尤其是在末端。一個或多個5’末端可經磷酸化。
下述係可能者，例如，提升安定性，在突出中包括特定之鹼基，或在單股突出如5’突出或3’突出或兩者中包括經修飾之核苷酸或核苷酸替代品。例如，可能所欲者係在突出中包括嘌呤核苷酸。於一些態樣中，3’或5’突出之全部或一些鹼基可經修飾，如具有本文所述之修飾。修飾可包括，例如，使用在核糖之2’位置具有該領域中已知之修飾者，如使用脫氧核糖核苷酸，使用2’-脫氧-2’-氟(2’-F)或2’-O-甲基修飾者替代核鹼基之核糖，以及使用磷酸酯基團中之修飾如硫代磷酸酯修飾。突出無需與標靶序列同源。
於一些態樣中，正義股及反義股之各殘基獨立地經LNA、CRN、cET、UNA、HNA、CeNA、2’-己氧基乙基、2’-O-甲基、2’-O-烯丙基、2’-C-烯丙基、2’-脫氧、2’-羥基或2’-氟修飾。該股可含有超過一個 修飾。於一個態樣中，正義股及反義股之各殘基獨立地經2’-O-甲基或2’-氟修飾。
至少兩個相異之修飾典型存在於正義股及反義股。彼等兩個修飾可係2’-O-甲基或2’-氟修飾等。
於某些態樣中，Na或Nb包含交替模式之修飾。如本文中所用，術語「交替模體」係指稱具有一個或多個修飾之模體，各修飾出現在一股之交替核苷酸。交替核苷酸可指稱每兩個核苷酸一個或每三個核苷酸一個或類似模式。例如，如果A、B及C各自表示一種類型之對核苷酸之修飾，則交替模體可係「ABABABABABAB…」、「AABBAABBAABB…」、「AABAABAABAAB…」、「AAABAAABAAAB…」、「AAABBBAAABBB…」或「ABCABCABCABC…」等。
交替模體中含有之修飾的類型可係相同或相異。例如，如果A、B、C、D各自表示於核苷酸之一種類型之修飾，則交替模體亦即每兩個核苷酸之修飾可係相同，但正義股或反義股可各自選自交替模體諸如「ABABAB…」、「ACACAC…」、「BDBDBD…」或「CDCDCD…」等中修飾之若干可能性。
於一些態樣中，本發明之dsRNAi劑包含，正義股之交替模體的修飾模式相對於反義股之交替模體的修飾模式位移。該位移可使得正義股之核苷酸的修飾基團與反義股之核苷酸的不同修飾基團相對應，反之亦然。例如，當正義股與反義股在dsRNA雙螺旋中鹼基配對時，在雙螺旋區域內，正義股中之交替模體可始於該股之5’至3’之「ABABAB」，且反義股中之交替模體可始於該股之5’至3’之「BABABA」。作為另一示例， 在雙螺旋區域內，正義股中之交替模體可始於該股之5’至3’之「AABBAABB」，且反義股中之交替模體可始於該股之5’至3’之「BBAABBAA」，因此正義股與反義股之間存在修飾模式之完全或部分位移。
於一些態樣中，dsRNAi劑包含於正義股之2'-O-甲基修飾與2'-F修飾起始之交替模體之模式，該模式具有相對於反義股之2'-O-甲基修飾與2'-F修飾起始之交替模體之模式的位移，亦即，正義股鹼基對之2'-O-甲基修飾之核苷酸與反義股之2'-F修飾之核苷酸進行鹼基配對，反之亦然。正義股之1位置可始於該2'-F修飾，且反義股之1位置可始於該2'-O-甲基修飾。
將一個或多個於三個接續核苷酸之三個相同修飾的模體引入正義股或反義股中，中斷正義股或反義股中存在之初始修飾模式。藉由將一個或多個於三個接續核苷酸之三個相同修飾的模體引入正義股或反義股中而中斷正義股或反義股的修飾模式，可提升對於標靶基因之基因靜默活性。
於一些態樣中，當將於三個接續核苷酸之三個相同修飾的模體引入任一股時，次於模體之核苷酸的修飾係不同於該模體之修飾者。例如，含有模體之序列部位係「…NaYYYNb…」，其中，「Y」表示於三個接續核苷酸之三個相同修飾的模體，且「Na」及「Nb」表示次於模體「YYY」之核苷酸的不同於Y修飾之修飾，並且其中，Na與Nb可係相同或相異之修飾。另選地，當存在側翼修飾時，Na或Nb可存在或不存在。
iRNA可復包含至少一個硫代磷酸酯類或甲基硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結。硫代磷酸酯或甲基磷酸酯類核苷酸間鏈結修飾可出現在正義股或反義股或兩股的位於該股任何位置之任何核苷酸。例如，核苷酸間鏈結修飾可出現在正義股或反義股之每一個核苷酸；各一核苷酸間鏈結修飾可以交替模式出現在正義股或反義股；或正義股或反義股可包含交替模式之兩種核苷酸間鏈結修飾。正義股之交替模式之核苷酸間鏈結修飾可與反義股相同或相異，其正義股之交替模式之核苷酸間鏈結修飾可具有相對於反義股之交替模式之核苷酸間鏈結修飾的位移。於一個態樣中，雙股RNAi劑包括6至8個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結。於一些態樣中，反義股包括於5’端之兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結以及於3’端之兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，且正義股包含於5’端或3’端之至少兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結。
於一些態樣中，dsRNA劑包含於突出區域內之硫代磷酸酯或甲基膦酸酯類核苷酸間鏈結修飾。例如，突出區域可含有兩個核苷酸且在該兩個核苷酸間具有硫代磷酸酯或甲基磷酸酯類核苷酸間鏈結。核苷酸間鏈結修飾亦可作成將突出核苷酸與雙螺旋區域內之末端配對核苷酸鏈結。例如，至少2、3、4或全部突出核苷酸可經由硫代磷酸酯或甲基膦酸酯類核苷酸間鏈結而鏈結，且視需要地，可存在額外之硫代磷酸酯或甲基膦酸酯類核苷酸間鏈結將突出核苷酸與該突出核苷酸之下一個成對核苷酸鏈結。例如，在末端三個核苷酸之間可能存在至少兩個硫代硫酸酯類核苷酸間鏈結，其中該三個核苷酸中之兩者係突出核苷酸，且第三個核苷酸係 該突出核苷酸之下一個配對核苷酸。此等末端核苷酸可於反義股之3’端、正義股之3’端、反義股之5’端或正義股之5’端。
於一些態樣中，2個核苷酸之突出係於反義股之3’端，且在末端三個核苷酸之間可能存在兩個硫代硫酸酯類核苷酸間鏈結，其中該三個核苷酸中之兩者係突出核苷酸，且第三個核苷酸與該突出核苷酸之下一個核苷酸配對。視需要地，dsRNAi劑可在正義股之5’末端及反義股之5’末端兩處額外具有位於末端三個核苷酸之間的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結。
於一個態樣中，dsRNAi劑包含與標靶之誤配、雙螺旋中之誤配、或其組合。誤配可出現在突出區域或雙螺旋區域。基於鹼基對促進解離或熔融之傾向性(例如，基於特定配對之關聯或解離之自由能，最簡單途徑係於個體配對基礎檢查配對，但亦可使用次近鄰分析及類似分析)，可將鹼基對排名。就促進解離而言：A：U優於G：C；G：U優於G：C；且I：C優於G：C(I係肌苷)。誤配如非規範配對或除規範配對之外者(如本文中他處所揭示)優於規範(A：T、A：U、G：C)配對；且包括萬用鹼基之配對優於規範配對。
於某些態樣中，dsRNAi劑包含，於雙螺旋區域內自反義股之5’端之最前面第1、2、3、4或5個鹼基對的至少一者選自下列所成群組：A：U、G：U、I：C、以及誤配例如非規範配對或除規範配對之外者或包括萬用鹼基之配對，以促進於該雙螺旋之5’端的反義股解離。
於某些態樣中，於該雙螺旋區域內自反義股之5’端之1位置處的核苷酸選自A、dA、dU、U及dT。另選地，於雙螺旋區域內自反 義股之5’端之最前面之第1、2或3個鹼基對的至少一者係AU鹼基對。例如，位於雙螺旋區域內自反義股之5’端之第一個鹼基對係AU鹼基對。
於其他態樣中，於正義股之3’端之核苷酸係脫氧胸苷(dT)，或於反義股之3’端之核苷酸係脫氧胸苷(dT)。舉例而言，在正義股、反義股或兩股之3’端存在脫氧胸腺嘧啶核苷酸之短序列，例如，兩個dT核苷酸。
於某些態樣中，正義股序列可藉由式(I)表示：
5' np-Na-(XXX)i-Nb-YYY-Nb-(ZZZ)j-Na-nq 3' (I)
其中：
i及j各自獨立為0或1；
p及q各自獨立為0至6；
各Na獨立表示包含0至25個經修飾之核苷酸的寡核苷酸序列，各序列包含至少兩個不同的經修飾之核苷酸；
各Nb獨立表示包含0至10個經修飾之核苷酸的寡核苷酸序列；
各np與nq獨立表示突出核苷酸；
其中，Nb及Y不具有相同之修飾；以及
XXX、YYY及ZZZ各自獨立表示一個於三個接續核苷酸之三個相同修飾的模體。較佳地，YYY全部為2’-F修飾之核苷酸。
於一些態樣中，Na或Nb包含交替模式之修飾。
於一些態樣中，YYY模體出現於或接近於正義股之裂解位點處。例如，當dsRNAi劑具有長度為17至23個核苷酸之雙螺旋區域時，YYY模體出現於正義股之裂解位點處或其左近(例如，可出現於位置6、7、 8；7、8、9；9、10、11；10、11、12；或11、12、13)，從5’端之第1個核苷酸開始計數；或視需要地，從5’端之雙螺旋區域內第一個配對核苷酸開始計數。
於一個態樣中，i係1且j係0，或i係0且j係1，或i及j兩者均係1。正義股可因此藉由下列式表示：
5' np-Na-YYY-Nb-ZZZ-Na-nq 3' (Ib)；
5' np-Na-XXX-Nb-YYY-Na-nq 3' (Ic)；或
5' np-Na-XXX-Nb-YYY-Nb-ZZZ-Na-nq 3' (Id)。
當正義股藉由式(Ib)表示時，Nb表示包含0至10、0至7、0至5、0至4、0至2或0個經修飾之核苷酸的寡核苷酸序列。各Na獨立可表示包含2至20、2至15或2至10個經修飾之核苷酸的寡核苷酸序列。
當正義股表示為式(Ic)時，Nb表示包含0至10、0至7、0至10、0至7、0至5、0至4、0至2或0個經修飾之核苷酸的寡核苷酸序列。各Na可獨立表示包含2至20、2至15或2至10個經修飾之核苷酸的寡核苷酸序列。
當正義股表示為式(Id)表示時，各Nb獨立表示包含0至10、0至7、0至5、0至4、0至2或0個經修飾之核苷酸的寡核苷酸序列。較佳地，Nb係0、1、2、3、4、5或6。各Na可獨立表示包含2至20、2至15或2至10個經修飾之核苷酸的寡核苷酸序列。
各X、Y及Z可係彼此相同或相異。
於其他態樣中，i係0且j係0，且正義股可藉由下式表示：
5' np-Na-YYY-Na-nq 3' (Ia)。
當正義股藉由式(Ia)表示時，各Na獨立表示包含2至20、2至15或2-10個經修飾之核苷酸的寡核苷酸序列。
於一個態樣中，RNAi之反正義股序列可藉由式(II)表示：
5' nq’-Na '-(Z’Z'Z')k-Nb '-Y'Y'Y'-Nb '-(X'X'X')l-N' a-np ' 3' (II)
其中：
k及l各自獨立為0或1；
p’及q’各自獨立為0至6；
各Na’獨立表示包含0至25個經修飾之核苷酸的寡核苷酸序列，各序列包含至少兩個不同的經修飾之核苷酸；
各Nb’獨立表示包含0至10個經修飾之核苷酸的寡核苷酸序列；
各np’與nq’各自獨立表示突出核苷酸；
其中，Nb’及Y’不具有相同之修飾；以及
X’X’X’、Y’Y’Y’及Z’Z’Z’各自獨立表示一個於三個接續核苷酸之三個相同修飾的模體。
於一些態樣中，Na’或Nb’包含交替模式之修飾。
Y’Y’Y’模體出現於或接近於反義股之裂解位點處。例如，當dsRNAi劑具有長度為17至23個核苷酸之雙螺旋區域時，Y’Y’Y’模體出現於該反義股之位置9、10、11；10、11、12；11、12、13；12、13、14；或13、14、15處，從5’端之第1個核苷酸開始計數；或視需要地，從5’端之雙螺旋區域內第一個配對核苷酸開始計數。較佳地，Y’Y’Y’模體出現於位置11、12、13處。
於某些態樣中，Y’Y’Y’模體全部為2’-OMe修飾之核苷酸。
於某些態樣中，k係1且l係0，或k係0且l係1，或k及l兩者均係1。
反義股可因此藉由下列式表示：
5' nq’-Na '-Z'Z'Z'-Nb '-Y'Y'Y'-Na '-np’3' (IIb)；
5' nq’-Na '-Y'Y'Y'-Nb '-X'X'X'-np’3' (IIc)；或
5' nq’-Na '-Z'Z'Z'-Nb '-Y'Y'Y'-Nb '-X'X'X'-Na '-np’3' (IId)。
當反義股藉由式(IIb)表示時，Nb’表示包含0至10、0至7、0至10、0至7、0至5、0至4、0至2或0個經修飾之核苷酸的寡核苷酸序列。各Na’獨立表示包含2至20、2至15或2至10個經修飾之核苷酸的寡核苷酸序列。
當反義股表示為式(IIc)時，Nb’表示包含0至10、0至7、0至10、0至7、0至5、0至4、0至2或0個經修飾之核苷酸的寡核苷酸序列。各Na’獨立表示包含2至20、2至15或2至10個經修飾之核苷酸的寡核苷酸序列。
當反義股表示為式(IId)時，Nb’各自獨立表示包含0至10、0至7、0至10、0至7、0至5、0至4、0至2或0個經修飾之核苷酸的寡核苷酸序列。各Na’獨立表示包含2至20、2至15或2至10個經修飾之核苷酸的寡核苷酸序列。較佳地，Nb係0、1、2、3、4、5或6。
於其他態樣中，k係0且1係0，且反義股可藉由下式表示：
5' np’-Na’-Y’Y’Y’-Na’-nq’3' (Ia)。
當反義股表示為式(Ia)時，各Na’獨立表示包含2至20、2至15或2-10個經修飾之核苷酸的寡核苷酸序列。
各X’、Y’及Z’可係彼此相同或相異。
正義股及反義股之各核苷酸獨立經LNA、CRN、UNA、cET、HNA、CeNA、2’-己氧基乙基、2’-O-甲基、2’-O-烯丙基、2’-C-烯丙基、2’-羥基或2’-氟修飾。例如，正義股及反義股之各核苷酸獨立經2’-O-甲基或2’-氟修飾。特別地，各X、Y、Z、X’、Y’及Z’可表示2’-O-甲基修飾或2’-F修飾。
於一些態樣中，當雙螺旋區域係21 nt時，dsRNAi劑之正義股可含有出現在該股之9、10及11位置之YYY模體，從5’端之第一個核苷酸開始計數，或視需要地，在雙螺旋區域內從5’端之第一個配對核苷酸開始計數；以及，Y表示2’-F修飾。正義股可額外含有XXX模體或ZZZ模體作為位於雙螺旋區域之相對端的側翼修飾；以及，XXX與ZZZ各自獨立表示2’-OMe修飾或2’-F修飾。
於一些態樣中，反義股可含有出現在該股之位置11、12及13之Y’Y’Y’模體，從5’端之第一個核苷酸開始計數，或視需要地，在雙螺旋區域內從5’端之第一個配對核苷酸開始計數；以及，Y’表示2’-O-甲基修飾。反義股可額外含有X’X’X’模體或Z’Z’Z’模體作為於雙螺旋區域之相對端的側翼修飾；以及，X’X’X’與Z’Z’Z’各自獨立表示2’-OMe修飾或2’-F修飾。
由上述式(Ia)、(Ib)、(Ic)及(Id)中任一者表示之正義股分別與由式(IIa)、(IIb)、(IIc)及(IId)中任一者表示之反義股形成雙螺旋。
據此，用於本發明之方法中的dsRNAi劑可包含正義股及反義股，各股具有14至30個核苷酸，iRNA雙螺旋由式(III)表示：
正義：5' np-Na-(XXX)i-Nb-YYY-Nb-(ZZZ)j-Na-nq 3'反義：3' np ’-Na ’-(X’X'X')k-Nb ’-Y'Y'Y'-Nb ’-(Z'Z'Z')l-Na ’-nq ’5' (III)
其中：
i、j、k及l各自獨立為0或1；
p、p'、q及q'各自獨立為0至6；
各Na及Na’獨立表示包含0至25個經修飾之核苷酸的寡核苷酸序列，各序列包含至少兩個不同的經修飾之核苷酸；
各Nb與Nb '獨立表示包含0至10個經修飾之核苷酸的寡核苷酸序列；
其中，各np’、np、nq’及nq各自可存在或不存在，且獨立表示突出核苷酸；以及
XXX、YYY、ZZZ、X’X’X’、Y’Y’Y’及Z’Z’Z’各自獨立表示一個於三個接續核苷酸之三個相同修飾的模體。
於一態樣中，i係0且j係0；或i係1且j係0；或i係0且j係1；或i及j兩者均係0；或i及j兩者均係1。於另一態樣中，k係0且l係0；或k係1且l係0；或k係0且l係1；或k及l兩者均係0；或k及l兩者均係1.
形成iRNA雙螺旋之正義股與反義股的示例性組合包括下述各式：
5' np-Na-Y Y Y-Na-nq 3' 3' np ’-Na ’-Y'Y'Y'-Na ’nq ’5' (IIIa)
5' np-Na-Y Y Y-Nb-Z Z Z-Na-nq 3' 3' np ’-Na ’-Y'Y'Y'-Nb ’-Z'Z'Z'-Na ‘nq ’5' (IIIb)
5' np-Na-X X X-Nb-Y Y Y-Na-nq 3' 3' np ’-Na ’-X'X'X'-Nb ’-Y'Y'Y'-Na ’-nq ’5' (IIIc)
5' np-Na-X X X-Nb-Y Y Y-Nb-Z Z Z-Na-nq 3' 3' np ’-Na ’-X'X'X'-Nb ’-Y'Y'Y'-Nb ’-Z'Z'Z'-Na-nq ’5' (IIId)
當dsRNAi劑藉由式(IIIa)表示時，各Na獨立表示包含2至20、2至15或2至10個經修飾之核苷酸的寡核苷酸序列。
當dsRNAi劑藉由式(IIIb)表示時，各Nb獨立表示包含1至10、1至7、1至5或1至4個經修飾之核苷酸的寡核苷酸序列。各Na獨立表示包含2至20、2至15或2至10個經修飾之核苷酸的寡核苷酸序列。
當dsRNAi劑表示為式(IIIc)時，各Nb、Nb’獨立表示包含0至10、0至7、0至10、0至7、0至5、0至4、0至2或0個經修飾之核苷酸的寡核苷酸序列。各Na獨立表示包含2至20、2至15或2至10個經修飾之核苷酸的寡核苷酸序列。
當dsRNAi劑表示為式(IIId)時，各Nb、Nb’獨立表示包含0至10、0至7、0至10、0至7、0至5、0至4、0至2或0個經修飾之核 苷酸的寡核苷酸序列。各Na及Na’獨立表示包含2至20、2至15或2至10個經修飾之核苷酸的寡核苷酸序列。各Na、Na’、Nb及Nb’獨立包含交替模式之修飾。
式(III)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)及(IIId)中之各X、Y及Z可係彼此相同或相異。
當dsRNAi劑由式(III)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)及(IIId)表示時，Y核苷酸之至少一者可與Y'核苷酸之一者形成鹼基配對。或者，Y核苷酸之至少兩者與相應之Y'核苷酸形成鹼基配對；或Y核苷酸之全部三者與相應之Y'核苷酸形成鹼基配對。
當dsRNAi劑由式(IIIb)或(IIId)表示時，Z核苷酸之至少一者可與Z'核苷酸之一者形成鹼基配對。或者，Z核苷酸之至少兩者與相應之Z'核苷酸形成鹼基配對；或Z核苷酸之全部三者與相應之Z'核苷酸形成鹼基配對。
當dsRNAi劑由式(IIIc)或(IIId)表示時，X核苷酸之至少一者可與X'核苷酸之一者形成鹼基配對。或者，X核苷酸之至少兩者與相應之X'核苷酸形成鹼基配對；或X核苷酸之全部三者與相應之X'核苷酸形成鹼基配對。
於某些態樣中，Y核苷酸之修飾不同於Y’核苷酸之修飾，Z核苷酸之修飾不同於Z’核苷酸之修飾，或X核苷酸之修飾不同於X’核苷酸之修飾。
於某些態樣中，當dsRNAi劑由式(IIId)表示時，Na修飾係2'-O-甲基修飾或2'修飾。於其他態樣中，當RNAi劑由式(IIId)表示時， Na修飾係2'-O-甲基修飾或2'-氟修飾，且np’>0，以及，至少一個np’經由硫代磷酸酯鏈結而鏈結至相鄰核苷酸。於再其他態樣中，當RNAi劑由式(IIId)表示時，Na修飾係2'-O-甲基修飾或2'-氟修飾，np '>0，且至少一個np'經由硫代磷酸酯鏈結而鏈結至相鄰核苷酸，以及，正義股經由二價或三價分支鏈之鏈結子(下文揭示)接合至一個多個GalNAc衍生物。於其他態樣中，當RNAi劑由式(IIId)表示時，Na修飾係2'-O-甲基修飾或2'-氟修飾，np '>0，且至少一個np '經由硫代磷酸酯鏈結而鏈結至相鄰核苷酸，正義股包含至少一個硫代磷酸酯鏈結，以及，正義股經由二價或三價分支鏈之鏈結子接合至一個多個GalNAc衍生物。
於一些態樣中，當RNAi劑由式(IIIa)表示時，Na修飾係2'-O-甲基修飾或2'-氟修飾，np '>0，且至少一個np '經由硫代磷酸酯鏈結而鏈結至相鄰核苷酸，正義股包含至少一個硫代磷酸酯鏈結，以及，正義股經由二價或三價分支鏈之鏈結子接合至一個多個GalNAc衍生物。
於一些態樣中，dsRNAi劑為含有至少兩個由式(III)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)及(IIId)表示之雙螺旋的多聚物，其中該等雙螺旋藉由鏈結子連結。鏈結子可係可裂解者或不可裂解者。視需要地，多聚物復包含配位子。各雙螺旋可靶向相同基因或兩個相異基因；或各雙螺旋可靶向相同基因之兩個相異標靶位點。
於一些態樣中，dsRNAi劑為含有3、4、5、6或更多個由式(III)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)及(IIId)表示之雙螺旋的多聚物，其中雙螺旋藉由鏈結子連結。鏈結子可係可裂解或不可裂解。視需要地，多聚物復包含 配位子。雙螺旋可各自靶向相同基因或兩個相異基因；或雙螺旋可各自靶向相同基因之兩個相異標靶位點。
於一態樣中，由式(III)、(IIIa)、(IIIb)、(IIIc)及(IIId)之至少一者表示的兩個dsRNAi劑在5’端及一個或兩個3’端彼此鏈結，且視需要接合至配位子。該等劑可各自靶向相同基因或兩個相異基因；或該等劑可各自靶向相同基因之兩個相異標靶位點。
於某些態樣中，本發明之RNAi劑可含有低數目之含有2’-氟修飾的核苷酸，如10個或更少具有2’-氟修飾的核苷酸。例如，RNAi劑可含有10、9、8、7、6、5、4、3、2、1或0個具有2’-氟修飾的核苷酸。於具體態樣中，本發明之RNAi劑含有10個具有2’-氟修飾之核苷酸，例如，在正義股中含有4個具有2’-氟修飾之核苷酸且在反義股中含有6個具有2’-氟修飾之核苷酸。於另一具體態樣中，本發明之RNAi劑含有6個具有2’-氟修飾之核苷酸，例如，在正義股中含有4個具有2’-氟修飾之核苷酸且在反義股中含有2個具有2’-氟修飾之核苷酸。
於其他態樣中，本發明之RNAi劑可含有超低數目之含有2’-氟修飾的核苷酸，如2個或更少含有2’-氟修飾的核苷酸。例如，RNAi劑可含有2、1或0個具有2’-氟修飾的核苷酸。於具體態樣中，RNAi劑可含有2個具有2’-氟修飾之核苷酸，例如，在正義股中含有0個具有2’-氟修飾之核苷酸且在反義股中含有2個具有2’-氟修飾之核苷酸。
多個出版物揭示可用於本發明之方法中的多聚iRNA。此類出版物包括WO2007/091269、美國專利第7,858,769號、WO2010/141511、 WO2007/117686、WO2009/014887及WO2011/031520，其各自之整體內容藉由引用而併入本文。
如下文中更詳細揭示，含有一個或多個碳水化合物部分與iRNA之接合的iRNA可優化該iRNA之一種或多種特性。於多種情形中，碳水化合物部分將附接至iRNA之經修飾之子單元。例如，iRNA之一個或多個核糖核苷酸子單元的核糖可替換為另一部分，如其上附接有碳水化合物配位子之非碳水化合物(較佳係環狀)載劑。本文中，其子單元之核糖業經如是替換的核糖核苷酸子單元指稱為核糖替換修飾子單元(RRMS)。環狀載劑可係碳環系統，亦即，所有環原子皆係碳原子；或係雜環系統，亦即，一個或多個環原子可係雜環如氮、氧、硫。環狀載劑可係單環系統，或可含有兩個或多個環如稠環。環狀載劑可係完全飽和之環系統，或其可含有一個或多個雙鍵。
配位子可經由載劑附接至多核苷酸。載劑包括(i)至少一個「骨幹附接點」，較佳兩個「骨幹附接點」，以及(ii)至少一個「繫帶附接點」。如本文中所用，「骨幹附接點」指稱官能基如羥基，或通常係鍵，其可用於且適用於將載劑併入核糖核酸之骨幹如磷酸酯或經修飾之磷酸酯如含硫之骨幹中。於一些態樣中，「繫帶附接點」(TAP)指稱環狀載劑之構建環原子，例如，碳原子或雜原子(與提供骨幹附接點之原子截然不同)，其連結所選擇之部分。該部分可係例如碳水化合物，如單糖、二醣、三醣、四醣、寡醣或多醣。視需要，所選擇之部分藉由中介繫帶連結至所選擇之載劑。因此，環狀載劑一般將包括官能基例如胺基，或通常提供適用於將另一化學實體如配位子併入或繫帶至構建環的鍵。
iRNA可經由載劑接合至配位子，其中該載劑可係環狀基團或非環狀基團；較佳地，該環狀基團係選自吡咯烷基、吡唑啉基、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、哌啶基、哌
Figure 109138855-A0202-12-0122-112
基、[1,3]二氧雜環戊烷基、
Figure 109138855-A0202-12-0122-113
唑烷基、異
Figure 109138855-A0202-12-0122-114
唑烷基、嗎啉基、噻唑烷基、異噻唑烷基、喹
Figure 109138855-A0202-12-0122-115
啉基、嗒
Figure 109138855-A0202-12-0122-116
酮基、四氫呋喃基及十氫萘基；較佳地，該非環狀基團係自絲胺醇骨幹或二乙醇胺骨幹。
於本發明之另一態樣中，iRNA劑包含正義股及反義股，每一股具有14至40個核苷酸。RNAi劑可由式(L)表示：
Figure 109138855-A0202-12-0122-126
於式(L)中，B1、B2、B3、B1’、B2’、B3’及B4’各自獨立為含有選自下列所組成群組之修飾的核苷酸：2’-O-烷基、2’-取代之烷氧基、2’-取代之烷基、2’-鹵、ENA、及BNA/LNA。於一個態樣中，B1、B2、B3、B1’、B2’、B3’及B4’各自含有2’-OMe修飾。於一個態樣中，B1、B2、B3、B1’、B2’、B3’及B4’各自含有2’-OMe修飾或2’-F修飾。於一個態樣中，B1、B2、B3、B1’、B2’、B3’及B4’之至少一者含有2’-O-N-甲基乙醯胺基(2'-O-NMA)修飾。
C1係置於與反義股之種子區域(亦即，反義股之5’末端的位置2至8)相對位點之熱去安定化核苷酸。例如，C1位於正義股之與反義股之5’端的位置2至8之核苷酸配對的位置。於一實例中，C1位於正義股之 5’端的位置15。C1核苷酸承載可包括無鹼基修飾在內之熱學去安定化修飾；與雙螺旋中相對核苷酸之誤配；以及糖修飾如2’-脫氧修飾或非環狀核苷酸如未鎖定之核酸(UNA)或甘油核酸(GNA)。於一個態樣中，C1具有選自下列所成群組的熱去安定化修飾：i)與反義股中相對核苷酸之誤配；ii)選自下列所成群組的無鹼基修飾：
Figure 109138855-A0202-12-0123-127
；以及iii)選自下列所成群組的糖修飾：
Figure 109138855-A0202-12-0123-128
、
Figure 109138855-A0202-12-0123-129
、
Figure 109138855-A0202-12-0123-130
、
Figure 109138855-A0202-12-0123-131
、
Figure 109138855-A0202-12-0123-132
、及
Figure 109138855-A0202-12-0123-133
，其中B係經修飾或未經修飾之核鹼基，R1與R2獨立為H、鹵素、OR3、或烷基；以及R3係H、烷基、環烷基、芳基、芳烷基、雜芳基或糖。於一個態樣中，C1中之熱去安定化修飾係選自G：G、G：A、G：U、G：T、A：A、A：C、C：C、C：U、C：T、U：U、T：T、及U：T所成群組的誤配；且視需要地，該誤配對中之至少一個核鹼基係2’-脫氧核鹼基。於一個示例中，C1中之熱去安定化修飾係GNA或
Figure 109138855-A0202-12-0123-134
。
T1、T1’、T2’及T3’各自獨立表示包含修飾之核苷酸，該修飾向該核苷酸提供立體位阻係小於或等於2’-OMe修飾之立體位阻。立體位阻指稱修飾之立體效果的總和。確定核苷酸修飾之立體效果的方法係該領域技術人員所已知者。修飾可於該核苷酸之核糖的2’位置，或係對非核糖核苷酸、非環狀核苷酸、或該核苷酸之骨幹的與該核糖之2’位置相似或等效的修飾，且向該核苷酸提供立體位阻係小於或等於2’-OMe修飾之立體位阻。例如，T1、T1’、T2’及T3’各自獨立選自DNA、RNA、LNA、2’-F、及2’-F-5’-甲基。於一個態樣中，T1係DNA。於一個態樣中，T1’係DNA、RNA或LNA。於一個態樣中，T2’係DNA或RNA。於一個態樣中，T3’係DNA或RNA。
n1、n3及q1獨立為4至15個核苷酸之長度。
n5、q3及q7獨立為1至6個核苷酸之長度。
n4、q2及q6獨立為1至3個核苷酸之長度；或者，n4係0。
q5獨立為0至10個核苷酸之長度。
n2及q4獨立為0至3個核苷酸之長度。
或者，n4係0至3個核苷酸之長度。
於一個態樣中，n4可係0。於一個態樣中，n4係0，且q2及q6係1。於另一示例中，n4係0，且q2及q6係1，具有於該正義股之位置1至5處(從該正義股之5’端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，以及於該反義股之位置1及2處的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結及位於該反義股之位置18至23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從該反義股之5’端計數)。
於一個態樣中，n4、q2及q6各自為1。
於一個態樣中，n2、n4、q2、q4及q6各自為1。
於一個態樣中，當正義股係19至22個核苷酸之長度時，C1係於正義股之5’端的位置14至17，且n4係1。於一個態樣中，C1係於正義股之5’末端的位置15。
於一個態樣中，T3’始於反義股之5’端的位置2。於一示例中，T3’始於反義股之5’端的位置2，且q6等於1。
於一個態樣中，T1’始於反義股之5’端的位置14。於一示例中，T1’始於反義股之5’端的位置14，且q2等於1。
於例示性態樣中，T3’始於反義股之5’端的位置2，且T1’始於反義股之5’端的位置14。於一個示例中，T3’始於反義股之5’端的位置2，且q6等於1；以及T1’始於反義股之5’端的位置14，且q2等於1。
於一個態樣中，T1’與T3’藉由11個核苷酸之長度而分隔開來(亦即，T1’及T3’之核苷酸不計算在內)。
於一個態樣中，T1’係於反義股之5’末端計數的位置14。於一個示例中，T1’係於反義股之5’末端計數的位置14且q2等於1，以及，修飾位於非核糖、非環狀或骨幹之一個或多個2’位置且提供比2’-OMe核糖更低之位阻效應。
於一個態樣中，T3’係於反義股之5’端的位置2。於一個示例中，T3’係於反義股之5’端的位置2且q6等於1，以及，修飾係於非核糖、非環狀或骨幹之一個或多個2’位置且提供低於或等於2’-OMe核糖之立體位阻。
於一個態樣中，T1係於正義股之裂解位點。於一個態樣中，當正義股係19至22個核苷酸之長度時，T1係於正義股之5’端的位置11，且n2係1。於例示性態樣中，當正義股係19至22個核苷酸之長度時，T1係於正義股之5’端的位置11之裂解位點，且n2係1。
於一個態樣中，T2’始於反義股之5’端的位置6。於一示例中，T2’係於反義股之5’端的位置6至10，且q4係1。
於例示性態樣中，當正義股係19至22個核苷酸之長度時，T1係於正義股之裂解位點，例如，於正義股之5’端的位置11，且n2係1；T1’係於反義股之5’端的位置14，且q2等於1，且T1’之修飾係於核糖之2’位置或於非核糖、非環狀或骨幹之多個位置且提供低於2’-OMe核糖之立體位阻；T2’係於反義股之5’端的位置6至10，且q4係1；以及，T3’係於反義股之5’端的位置2，且q6等於1，以及，T3’之修飾係於核糖之2’位置或於非核糖、非環狀或骨幹之多個位置且提供低於或等於2’-OMe核糖之立體位阻。
於一個態樣中，T2’始於反義股之5’端的位置8。於一示例中，T2’始於反義股之5’端的位置8，且q4係2。
於一個態樣中，T2’始於反義股之5’端的位置9。於一示例中，T2’係於反義股之5’端的位置9，且q4係1。
於一個態樣中，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4、T2’係2’-F，q4係1，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係6，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-F，且q7係1；具有於該正義股之位置1至5(從該正義股之5’端計數)的兩個硫代磷酸酯 類核苷酸間鏈結，以及於該反義股之位置1及2的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結及位於該反義股之位置18至23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從該反義股之5’端計數)。
於一個態樣中，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，T2’係2’-F，q4係1，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係6，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-F，且q7係1；具有於該正義股之位置1至5(從該正義股之5’端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，以及於該反義股之位置1及2的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結及位於該反義股之位置18至23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從該反義股之5’末端計數)。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’F，n2係3，B2係2’-OMe、n3係7、n4係0、B3係2’OMe、n5係3、B1’係2’-OMe或2’-F、q1係9、T1’係2’-F、q2係1、B2’係2’-OMe或2’-F、q3係4、T2’係2’-F、q4係2、B3’係2’-OMe或2’-F、q5係5、T3’係2’-F、q6係1、B4’係2’-OMe、且q7係1。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe、n3係7，n4係0，B3係2’OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，T2’係2’-F，q4係2，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係5，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-OMe，且q7係1；具有於該正義股之位置1至5(從該正義股之5’端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，以及於該反義股之位置1及2(從該反義股之5’端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結 及於該反義股之位置18至23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從該反義股之5’端計數)。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係6，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係7，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，T2’係2’-F，q4係2，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係5，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-OMe，且q7係1。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係6，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係7，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，T2’係2’-F，q4係2，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係5，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-OMe，且q7係1；具有於該正義股之位置1至5(從該正義股之5’端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，以及於該反義股之位置1及2的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結及於該反義股之位置18至23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從該反義股之5’端計數)。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，T2’係2’-F，q4係1，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係6，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-OMe，且q7係1。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’ 係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，T2’係2’-F，q4係1，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係6，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-OMe，且q7係1；具有於該正義股之位置1至5(從該正義股之5’端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，以及於該反義股之位置1及2的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結及於該反義股之位置18至23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從該反義股之5’端計數)。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係5，T2’係2’-F，q4係1，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係5，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-OMe，且q7係1；視需要具有於該反義股之3’端的至少2個額外之TT。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係5，T2’係2’-F，q4係1，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係5，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-OMe，且q7係1；視需要具有於該反義股之3’端的至少2個額外之TT；具有位於該正義股之位置1至5(從該正義股之5’末端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，以及位於該反義股之位置1及2的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結及於該反義股之位置18至23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從該反義股之5’端計數)。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，q4係0，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係7，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-OMe，且q7係1。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，q4係0，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係7，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-OMe，且q7係1；具有於該正義股之位置1至5(從5’端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，以及於該反義股之位置1及2的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結及於該反義股之位置18至23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從5’端計數)。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，T2’係2’-F，q4係2，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係5，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-F，且q7係1。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，T2’係2’-F，q4係2，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係5，T3’係2’- F，q6係1，B4’係2’-F，且q7係1；具有於該正義股之位置1至5(從該正義股之5’端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，以及於該反義股之位置1及2的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結及於該反義股之位置18至23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從該反義股之5’端計數)。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，q4係0，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係7，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-F，且q7係1。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，q4係0，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係7，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-F，且q7係1；具有於該正義股之位置1至5(從該正義股之5’端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，以及於該反義股之位置1及2的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結及位於該反義股之位置18至23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從該反義股之5’端計數)。
該RNAi劑可包含於該正義股或反義股之5’端的含磷基團。該5’端之含磷基團可係5’端磷酸酯(5’-P)、5’端硫代磷酸酯(5’-PS)、5’端二硫代磷酸酯(5’-PS2)、5’-端乙烯基磷酸酯(5’-VP)、5’端甲基磷酸酯 (MePhos)、或5’-脫氧-5’-C-丙二醯基(
Figure 109138855-A0202-12-0132-135
)。當該5’端之含磷基團係5’-端乙烯基磷酸酯(5’-VP)時，該5’-VP可係5’-E-VP異構物(亦即，反式-乙烯基磷酸酯，
Figure 109138855-A0202-12-0132-221
)、5’-Z-VP異構物(亦即，反式-乙烯基磷 酸酯，
Figure 109138855-A0202-12-0132-137
)、或其混合物。
於一個態樣中，RNAi劑包含於正義股之5’端的含磷基團。於一個態樣中，RNAi劑包含於反義股之5’端的含磷基團。
於一個態樣中，RNAi劑包含5’-P。於一個態樣中，RNAi劑包含於反義股之5’-P。
於一個態樣中，RNAi劑包含5’-PS。於一個態樣中，RNAi劑包含於反義股之5’-PS。
於一個態樣中，RNAi劑包含5’-VP。於一個態樣中，RNAi劑包含於反義股之5’-VP。於一個態樣中，RNAi劑包含於反義股之5’-E-VP。於一個態樣中，RNAi劑包含於反義股之5’-Z-VP。
於一個態樣中，RNAi劑包含5’-PS2。於一個態樣中，RNAi劑包含於反義股之5’-PS2。
於一個態樣中，RNAi劑包含5’-PS2。於一個態樣中，RNAi劑包含於反義股之5’-脫氧-5’-C-丙二醯基。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，T2’係2’-F，q4係2，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係5，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-OMe，且q7係1。RNAi劑亦包含5’-PS。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，T2’係2’-F，q4係2，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係5，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-OMe，且q7係1。RNAi劑亦包含5’-P。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，T2’係2’-F，q4係2，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係5，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-OMe，且q7係1。RNAi劑亦包含5’-VP。該5’-VP可係5’-E-VP、5’-Z-VP、或其組合。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，T2’係2’-F，q4係2，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係5，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-OMe，且q7係1。RNAi劑亦包含5’-PS2。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，T2’係2’-F，q4係2，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係5，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-OMe，且q7係1。RNAi劑亦包含5’-脫氧-5’-C-丙二醯基。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，T2’係2’-F，q4係2，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係5，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-OMe，且q7係1；具有於該正義股之位置1至5(從該正義股之5’端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，以及於該反義股之位置1及2的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結及於該反義股之位置18至23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從該反義股之5’端計數)。RNAi劑亦包含5’-P。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，T2’係2’-F，q4係2，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係5，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-OMe，且q7係1；具有於該正義股之位置1至5(從該正義股之5’端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，以及於該反義股之位置1及2的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結及位於該反義股之位置18 至23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從該反義股之5’端計數)。RNAi劑亦包含5’-PS。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，T2’係2’-F，q4係2，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係5，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-OMe，且q7係1；具有於該正義股之位置1至5(從該正義股之5’端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，以及於該反義股之位置1及2的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結及於該反義股之位置18至23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從該反義股之5’端計數)。RNAi劑亦包含5’-VP。該5’-VP可係5’-E-VP、5’-Z-VP、或其組合。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，T2’係2’-F，q4係2，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係5，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-OMe，且q7係1；具有於該正義股之位置1至5(從該正義股之5’端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，以及於該反義股之位置1及2的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結及位於該反義股之位置18至23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從該反義股之5’端計數)。RNAi劑亦包含5’-PS2。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’ 係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，T2’係2’-F，q4係2，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係5，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-OMe，且q7係1；具有於該正義股之位置1至5(從該正義股之5’端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，以及於該反義股之位置1及2的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結及於該反義股之位置18至23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從該反義股之5’端計數)。RNAi劑亦包含5’-脫氧-5’-C-丙二醯基。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，q4係0，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係7，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-OMe，且q7係1。RNAi劑亦包含5’-P。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，q4係0，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係7，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-OMe，且q7係1。該dsRNA劑亦包含5’-PS。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，q4係0，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係7，T3’係2’-F，q6係1， B4’係2’-OMe，且q7係1。RNAi劑亦包含5’-VP。5’-VP可係5’-E-VP、5’-Z-VP、或其組合。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，q4係0，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係7，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-OMe，且q7係1。RNAi劑亦包含5’-PS2。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，q4係0，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係7，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-OMe，且q7係1。RNAi劑亦包含5’-脫氧-5’-C-丙二醯基。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，q4係0，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係7，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-OMe，且q7係1；具有於該正義股之位置1至5(從5’端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，以及於該反義股之位置1及2的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結及於該反義股之位置18至23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從5’端計數)。RNAi劑亦包含5’-P。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’ 係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，q4係0，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係7，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-OMe，且q7係1；具有於該正義股之位置1至5(從5’端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，以及於該反義股之位置1及2的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結及於該反義股之位置18至23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從5’端計數)。RNAi劑亦包含5’-PS。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，q4係0，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係7，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-OMe，且q7係1；具有於該正義股之位置1至5(從5’端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，以及於該反義股之位置1及2的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結及於該反義股之位置18至23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從5’端計數)。RNAi劑亦包含5’-VP。5’-VP可係5’-E-VP、5’-Z-VP、或其組合。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，q4係0，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係7，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-OMe，且q7係1；具有於該正義股之位置1至5(從5’端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，以及於該反義股之位置1及2的兩個硫 代磷酸酯類核苷酸間鏈結及於該反義股之位置18至23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從5’端計數)。RNAi劑亦包含5’-PS2。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，q4係0，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係7，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-OMe，且q7係1；具有於該正義股之位置1至5(從5’端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，以及於該反義股之位置1及2的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結及於該反義股之位置18至23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從5’端計數)。RNAi劑亦包含5’-脫氧-5’-C-丙二醯基。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，T2’係2’-F，q4係2，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係5，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-F，且q7係1。RNAi劑亦包含5’-P。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，T2’係2’-F，q4係2，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係5，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-F，且q7係1。RNAi劑亦包含5’-PS。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’ 係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，T2’係2’-F，q4係2，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係5，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-F，且q7係1。RNAi劑亦包含5’-VP。該5’-VP可係5’-E-VP、5’-Z-VP、或其組合。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，T2’係2’-F，q4係2，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係5，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-F，且q7係1。該dsRNAi RNA劑亦包含5’-PS2。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，T2’係2’-F，q4係2，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係5，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-F，且q7係1。RNAi劑亦包含5’-脫氧-5’-C-丙二醯基。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，T2’係2’-F，q4係2，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係5，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-F，且q7係1；具有於該正義股之位置1至5(從該正義股之5’端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，以及於該反義股之位置1及2的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結及位於該反義股之位置18至 23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從該反義股之5’端計數)。RNAi劑亦包含5’-P。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，T2’係2’-F，q4係2，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係5，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-F，且q7係1；具有於該正義股之位置1至5(從該正義股之5’端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，以及於該反義股之位置1及2的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結及於該反義股之位置18至23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從該反義股之5’端計數)。RNAi劑亦包含5’-PS。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，T2’係2’-F，q4係2，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係5，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-F，且q7係1；具有於該正義股之位置1至5(從該正義股之5’端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，以及於該反義股之位置1及2的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結及於該反義股之位置18至23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從該反義股之5’端計數)。RNAi劑亦包含5’-VP。5’-VP可係5’-E-VP、5’-Z-VP、或其組合。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’ 係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，T2’係2’-F，q4係2，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係5，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-F，且q7係1；具有於該正義股之位置1至5(從該正義股之5’端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，以及於該反義股之位置1及2的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結及於該反義股之位置18至23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從該反義股之5’端計數)。RNAi劑亦包含5’-PS2。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，T2’係2’-F，q4係2，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係5，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-F，且q7係1；具有於該正義股之位置1至5(從該正義股之5’端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，以及於該反義股之位置1及2的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結及於該反義股之位置18至23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從該反義股之5’端計數)。RNAi劑亦包含5’-脫氧-5’-C-丙二醯基。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，q4係0，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係7，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-F，且q7係1。RNAi劑亦包含5’-P。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，q4係0，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係7，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-F，且q7係1。RNAi劑亦包含5’-PS。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，q4係0，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係7，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-F，且q7係1。RNAi劑亦包含5’-VP。5’-VP可係5’-E-VP、5’-Z-VP、或其組合。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，q4係0，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係7，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-F，且q7係1。RNAi劑亦包含5’-PS2。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，q4係0，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係7，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-F，且q7係1。RNAi劑亦包含5’-脫氧-5’-C-丙二醯基。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，q4係0，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係7，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-F，且q7係1；具有於該正義股之位置1至5(從該正義股之5’端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，以及於該反義股之位置1及2的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結及於該反義股之位置18至23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從該反義股之5’端計數)。RNAi劑亦包含5’-P。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，q4係0，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係7，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-F，且q7係1；具有於該正義股之位置1至5(從該正義股之5’端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，以及於該反義股之位置1及2的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結及於該反義股之位置18至23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從該反義股之5’端計數)。RNAi劑亦包含5’-PS。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，q4係0，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係7，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-F，且q7係1；具有於該正義股之位置1至5(從該正義股之5’端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，以及於該反義股之位置1及2的 兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結及於該反義股之位置18至23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從該反義股之5’端計數)。RNAi劑亦包含5’-VP。5’-VP可係5’-E-VP、5’-Z-VP、或其組合。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，q4係0，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係7，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-F，且q7係1；具有於該正義股之位置1至5(從該正義股之5’端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，以及於該反義股之位置1及2的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結及位於該反義股之位置18至23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從該反義股之5’端計數)。RNAi劑亦包含5’-PS2。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，q4係0，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係7，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-F，且q7係1；具有於該正義股之位置1至5(從該正義股之5’端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，以及於該反義股之位置1及2的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結及位於該反義股之位置18至23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從該反義股之5’端計數)。RNAi劑亦包含5’-脫氧-5’-C-丙二醯基。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，T2’係2’-F，q4係2，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係5，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-OMe，且q7係1；具有於該正義股之位置1至5(從該正義股之5’端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，以及於該反義股之位置1及2的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結及於該反義股之位置18至23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從該反義股之5’端計數)。RNAi劑亦包含5’-P及靶向配位子。於一個態樣中，5’-P係於反義股之5’端，且靶向配位子係於正義股之3’端。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，T2’係2’-F，q4係2，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係5，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-OMe，且q7係1；具有於該正義股之位置1至5(從該正義股之5’端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，以及於該反義股之位置1及2的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結及於該反義股之位置18至23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從該反義股之5’端計數)。RNAi劑亦包含5’-PS及靶向配位子。於一個態樣中，5’-PS係於反義股之5’端，且靶向配位子係於正義股之3’端。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’ 係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，T2’係2’-F，q4係2，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係5，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-OMe，且q7係1；具有於該正義股之位置1至5(從該正義股之5’端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，以及於該反義股之位置1及2的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結及於該反義股之位置18至23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從該反義股之5’端計數)。RNAi劑亦包含5’-VP(例如，5’-E-VP、5’-Z-VP、或其組合)及靶向配位子。
於一個態樣中，5’-VP係於反義股之5’端，且靶向配位子係於正義股之3’端。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，T2’係2’-F，q4係2，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係5，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-OMe，且q7係1；具有於該正義股之位置1至5(從該正義股之5’端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，以及於該反義股之位置1及2的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結及於該反義股之位置18至23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從該反義股之5’端計數)。RNAi劑亦包含5’-PS2及靶向配位子。於一個態樣中，5’-PS2係於反義股之5’端，且靶向配位子係於正義股之3’端。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F， q3係4，T2’係2’-F，q4係2，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係5，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-OMe，且q7係1；具有於該正義股之位置1至5(從該正義股之5’端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，以及於該反義股之位置1及2的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結及於該反義股之位置18至23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從該反義股之5’端計數)。RNAi劑亦包含5’-脫氧-5’-C-丙二醯基及靶向配位子。於一個態樣中，5’-脫氧-5’-C-丙二醯基係於反義股之5’端，且靶向配位子係於正義股之3’端。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，q4係0，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係7，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-OMe，且q7係1；具有於該正義股之位置1至5(從5’端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，以及於該反義股之位置1及2的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結及於該反義股之位置18至23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從5’端計數)。RNAi劑亦包含5’-P及靶向配位子。於一個態樣中，5’-P係於反義股之5’端，且靶向配位子係於正義股之3’端。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，q4係0，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係7，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-OMe，且q7係1；具有於該正義股之位置1至5(從5’端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，以及於該反義股之位置1及2的兩個硫 代磷酸酯類核苷酸間鏈結及於該反義股之位置18至23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從5’端計數)。RNAi劑亦包含5’-PS及靶向配位子。於一個態樣中，5’-PS係於反義股之5’端，且靶向配位子係於正義股之3’端。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，q4係0，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係7，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-OMe，且q7係1；具有於該正義股之位置1至5(從5’端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，以及於該反義股之位置1及2的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結及於該反義股之位置18至23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從5’端計數)。RNAi劑亦包含5’-VP(例如，5’-E-VP、5’-Z-VP、或其組合)及靶向配位子。於一個態樣中，5’-VP係於反義股之5’端，且靶向配位子係於正義股之3’端。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，q4係0，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係7，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-OMe，且q7係1；具有於該正義股之位置1至5(從5’端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，以及於該反義股之位置1及2的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結及於該反義股之位置18至23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從5’端計數)。RNAi劑亦包含5’-PS2及靶向配位子。 於一個態樣中，5’-PS2係於反義股之5’端，且靶向配位子係於正義股之3’端。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，q4係0，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係7，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-OMe，且q7係1；具有於該正義股之位置1至5(從5’端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，以及於該反義股之位置1及2的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結及於該反義股之位置18至23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從5’端計數)。RNAi劑亦包含5’-脫氧-5’-C-丙二醯基及靶向配位子。於一個態樣中，5’-脫氧-5’-C-丙二醯基係於反義股之5’端，且靶向配位子係於正義股之3’端。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，T2’係2’-F，q4係2，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係5，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-F，且q7係1；具有於該正義股之位置1至5(從該正義股之5’端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，以及於該反義股之位置1及2的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結及於該反義股之位置18至23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從該反義股之5’端計數)。RNAi劑亦包含5’-P及靶向配位子。於一個態樣中，5’-P係於反義股之5’端，且靶向配位子係於正義股之3’端。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，T2’係2’-F，q4係2，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係5，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-F，且q7係1；具有於該正義股之位置1至5(從該正義股之5’端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，以及於該反義股之位置1及2的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結及於該反義股之位置18至23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從該反義股之5’端計數)。RNAi劑亦包含5’-PS及靶向配位子。於一個態樣中，5’-PS係於反義股之5’端，且靶向配位子係於正義股之3’端。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，T2’係2’-F，q4係2，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係5，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-F，且q7係1；具有於該正義股之位置1至5(從該正義股之5’端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，以及於該反義股之位置1及2的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結及於該反義股之位置18至23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從該反義股之5’端計數)。RNAi劑亦包含5’-VP(例如，5’-E-VP、5’-Z-VP、或其組合)及靶向配位子。於一個態樣中，5’-VP係於反義股之5’端，且靶向配位子係於正義股之3’端。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’ 係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，T2’係2’-F，q4係2，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係5，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-F，且q7係1；具有於該正義股之位置1至5(從該正義股之5’端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，以及於該反義股之位置1及2的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結及於該反義股之位置18至23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從該反義股之5’端計數)。RNAi劑亦包含5’-PS2及靶向配位子。於一個態樣中，5’-PS2係於反義股之5’端，且靶向配位子係於正義股之3’端。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，T2’係2’-F，q4係2，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係5，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-F，且q7係1；具有於該正義股之位置1至5(從該正義股之5’端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，以及於該反義股之位置1及2的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結及於該反義股之位置18至23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從該反義股之5’端計數)。RNAi劑亦包含5’-脫氧-5’-C-丙二醯基及靶向配位子。於一個態樣中，5’-脫氧-5’-C-丙二醯基係於反義股之5’端，且靶向配位子係於正義股之3’端。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，q4係0，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係7，T3’係2’-F，q6係1， B4’係2’-F，且q7係1；具有於該正義股之位置1至5(從該正義股之5’端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，以及於該反義股之位置1及2的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結及於該反義股之位置18至23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從該反義股之5’端計數)。RNAi劑亦包含5’-P及靶向配位子。於一個態樣中，5’-P係於反義股之5’端，且靶向配位子係於正義股之3’端。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，q4係0，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係7，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-F，且q7係1；具有於該正義股之位置1至5(從該正義股之5’端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，以及於該反義股之位置1及2的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結及於該反義股之位置18至23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從該反義股之5’端計數)。RNAi劑亦包含5’-PS及靶向配位子。於一個態樣中，5’-PS係於反義股之5’端，且靶向配位子係於正義股之3’端。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，q4係0，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係7，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-F，且q7係1；具有於該正義股之位置1至5(從該正義股之5’端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，以及於該反義股之位置1及2的 兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結及於該反義股之位置18至23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從該反義股之5’端計數)。RNAi劑亦包含5’-VP(例如，5’-E-VP、5’-Z-VP、或其組合)及靶向配位子。於一個態樣中，5’-VP係於反義股之5’端，且靶向配位子係於正義股之3’端。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，q4係0，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係7，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-F，且q7係1；具有於該正義股之位置1至5(從該正義股之5’端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，以及於該反義股之位置1及2的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結及於該反義股之位置18至23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從該反義股之5’端計數)。RNAi劑亦包含5’-PS2及靶向配位子。於一個態樣中，5’-PS2係於反義股之5’端，且靶向配位子係於正義股之3’端。
於一個態樣中，B1係2’-OMe或2’-F，n1係8，T1係2’-F，n2係3，B2係2’-OMe，n3係7，n4係0，B3係2’-OMe，n5係3，B1’係2’-OMe或2’-F，q1係9，T1’係2’-F，q2係1，B2’係2’-OMe或2’-F，q3係4，q4係0，B3’係2’-OMe或2’-F，q5係7，T3’係2’-F，q6係1，B4’係2’-F，且q7係1；具有於該正義股之位置1至5(從該正義股之5’端計數)的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結，以及於該反義股之位置1及2的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結及於該反義股之位置18至23中的兩個硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從該反義股之5’端計數)。RNAi劑亦包含5’-脫 氧-5’-C-丙二醯基及靶向配位子。於一個態樣中，5’-脫氧-5’-C-丙二醯基係於反義股之5’端，且靶向配位子位係正義股之3’端。
於特定之態樣中，本發明之RNAi劑包含：
(a)正義股，其具有：
(i)21個核苷酸之長度；
(ii)附接至3’末端之ASGPR配位子，其中該ASGPR配位子包含經由三價分支鏈之鏈結基附接之三個GalNAc衍生物；以及
(iii)於位置1、3、5、7、9至11、13、17、19及21之2’-F修飾，以及於位置2、4、6、8、12、14至16、18及20之2’-OMe修飾(從5’端計數)；
以及
(b)反義股，其具有：
(i)23個核苷酸之長度；
(ii)於位置1、3、5、9、11至13、15、17、19、21及23之2’-OMe修飾，以及於位置2、4、6、8、10、14、16、18、20及22之2’-F修飾(從5’端計數)；以及
(iii)於位置21與22之間以及位置22與23之間的硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從5’端計數)；
其中該dsRNA劑具有於該反義股之3’端的兩個核苷酸突出，以及於該反義股之5’端的鈍端。
於另一特定之態樣中，本發明之RNAi劑包含：
(a)正義股，其具有：
(i)21個核苷酸之長度；
(ii)附接至3’末端之ASGPR配位子，其中該ASGPR配位子包含經由三價分支鏈之鏈結基附接之三個GalNAc衍生物；
(iii)於位置1、3、5、7、9至11、13、15、17、19及21之2’-F修飾，以及於位置2、4、6、8、12、14、16、18及20之2’-OMe修飾(從5’端計數)；以及
(iv)於位置1與2之間以及位置2與3之間的硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從5’端計數)；
以及
(b)反義股，其具有：
(i)23個核苷酸之長度；
(ii)於位置1、3、5、7、9、11至13、15、17、19及21至23之2’-OMe修飾，以及於位置2、4、6、8、10、14、16、18及20處之2’-F修飾(從5’端計數)；以及
(iii)於核苷酸位置1與2之間、核苷酸位置2與3之間、核苷酸位置21與22之間、以及核苷酸位置22與23之間的硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從5’端計數)；
其中該RNAi劑具有於該反義股之3’末端的兩個核苷酸的突出，以及於該反義股之5’端的鈍端。
於另一特定之態樣中，本發明之RNAi劑包含：
(a)正義股，其具有：
(i)21個核苷酸之長度；
(ii)附接至3’末端之ASGPR配位子，其中該ASGPR配位子包含經由三價分支鏈之鏈結基附接之三個GalNAc衍生物；
(iii)於位置1至6、8、10及12至21之2’-OMe修飾，於位置7及9處之2’-F修飾，以及於位置11處之脫氧核苷酸(例如，dT)(從5’端計數)；以及
(iv)於位置1與2之間以及位置2與3之間的硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從5’端計數)；
以及
(b)反義股，其具有：
(i)23個核苷酸之長度；
(ii)於位置1、3、7、9、11、13、15、17及19至23之2’-OMe修飾，以及於位置2、4至6、8、10、12、14、16及18處之2’-F修飾(從5’端計數)；以及
(iii)於核苷酸位置1與2之間、核苷酸位置2與3之間、核苷酸位置21與22之間、以及核苷酸位置22與23之間的硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從5’端計數)；
其中該RNAi劑具有於該反義股之3’端的兩個核苷酸的突出，以及於該反義股之5’端的鈍端。
於另一特定之態樣中，本發明之RNAi劑包含：
(a)正義股，其具有：
(i)21個核苷酸之長度；
(ii)附接至3’末端之ASGPR配位子，其中該ASGPR配位子包含經由三價分支鏈之鏈結基附接之三個GalNAc衍生物；
(iii)於位置1至6、8、10、12、14及16至21之2’-OMe修飾，以及於位置7、9、11、13及15之2’-F修飾；以及
(iv)於位置1與2之間以及位置2與3之間的硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從5’端計數)；
以及
(b)反義股，其具有：
(i)23個核苷酸之長度；
(ii)於位置1、5、7、9、11、13、15、17、19及21至23之2’-OMe修飾，以及於位置2至4、6、8、10、12、14、16、18及20處之2’-F修飾(從5’端計數)；以及
(iii)於核苷酸位置1與2之間、核苷酸位置2與3之間、核苷酸位置21與22之間、以及核苷酸位置22與23之間的硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從5’端計數)；
其中該RNAi劑具有於該反義股之3’末端的兩個核苷酸的突出，以及於該反義股之5’端的鈍端。
於另一特定之態樣中，本發明之RNAi劑包含：
(a)正義股，其具有：
(i)21個核苷酸之長度；
(ii)附接至3’末端之ASGPR配位子，其中該ASGPR配位子包含經由三價分支鏈之鏈結基附接之三個GalNAc衍生物；
(iii)於位置1至9及12至21之2’-OMe修飾，以及於位置10及11之2’-F修飾；以及
(iv)於位置1與2之間以及位置2與3之間的硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從5’端計數)；
以及
(b)反義股，其具有：
(i)23個核苷酸之長度；
(ii)於位置1、3、5、9、11至13、15、17、19及21至23之2’-OMe修飾，以及於位置2、4、6、8、10、14、16、18及20之2’-F修飾從5’端計數；以及
(iii)於核苷酸位置1與2之間、核苷酸位置2與3之間、核苷酸位置21與22之間、以及核苷酸位置22與23之間的硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從5’端計數)；
其中該RNAi劑具有位於該反義股之3’末端的兩個核苷酸的突出，以及於該反義股之5’末端的鈍端。
於另一特定之態樣中，本發明之RNAi劑包含：
(a)正義股，其具有：
(i)21個核苷酸之長度；
(ii)附接至3’末端之ASGPR配位子，其中該ASGPR配位子包含經由三價分支鏈之鏈結基附接之三個GalNAc衍生物；
(iii)於位置1、3、5、7、9至11及13之2’-F修飾，以及於位置2、4、6、8、12及14至21之2’-OMe修飾；以及
(iv)於位置1與2之間以及位置2與3之間的硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從5’端計數)；
以及
(b)反義股，其具有：
(i)23個核苷酸之長度；
(ii)於位置1、3、5至7、9、11至13、15、17至19及21至23之2’-OMe修飾，以及於位置2、4、8、10、14、16及20處之2’-F修飾(從5’端計數)；以及
(iii)於核苷酸位置1與2之間、核苷酸位置2與3之間、核苷酸位置21與22之間、以及核苷酸位置22與23之間的硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從5’端計數)；
其中該RNAi劑具有於該反義股之3’末端的兩個核苷酸的突出，以及於該反義股之5’端的鈍端。
於另一特定之態樣中，本發明之RNAi劑包含：
(a)正義股，其具有：
(i)21個核苷酸之長度；
(ii)附接至3’末端之ASGPR配位子，其中該ASGPR配位子包含經由三價分支鏈之鏈結基附接之三個GalNAc衍生物；
(iii)於位置1、2、4、6、8、12、14、15、17及19至21之2’-OMe修飾，以及於位置3、5、7、9至11、13、16及18處之2’-F修飾；以及
(iv)於位置1與2之間以及位置2與3之間的硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從5’端計數)；
以及
(b)反義股，其具有：
(i)25個核苷酸之長度；
(ii)於位置1、4、6、7、9、11至13、15、17及19至23之2’-OMe修飾，以及於位置2、3、5、8、10、14、16及18處之2’-F修飾；以及位於位置24及25處之脫氧核苷酸(例如，dT)(從5’端計數)；以及
(iii)於核苷酸位置1與2之間、核苷酸位置2與3之間、核苷酸位置21與22之間、以及核苷酸位置22與23之間的硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從5’端計數)；
其中該RNAi劑具有於該反義股之3’末端的四個核苷酸的突出，以及於該反義股之5’端的鈍端。
於另一特定之態樣中，本發明之RNAi劑包含：
(a)正義股，其具有：
(i)21個核苷酸之長度；
(ii)附接至3’末端之ASGPR配位子，其中該ASGPR配位子包含經由三價分支鏈之鏈結基附接之三個GalNAc衍生物；
(iii)於位置1至6、8及12至21之2’-OMe修飾，以及於位置7及9至11之2’-F修飾；以及
(iv)於位置1與2之間以及位置2與3之間的硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從5’端計數)；
以及
(b)反義股，其具有：
(i)23個核苷酸之長度；
(ii)於位置1、3至5、7、8、10至13、15及17至23之2’-OMe修飾，以及於位置2、6、9、14及16處之2’-F修飾(從5’端計數)；以及
(iii)於核苷酸位置1與2之間、核苷酸位置2與3之間、核苷酸位置21與22之間、以及核苷酸位置22與23之間的硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從5’端計數)；
其中該RNAi劑具有於該反義股之3’端的兩個核苷酸的突出，以及於該反義股之5’端的鈍端。
於另一特定之態樣中，本發明之RNAi劑包含：
(a)正義股，其具有：
(i)21個核苷酸之長度；
(ii)附接至3’末端之ASGPR配位子，其中該ASGPR配位子包含經由三價分支鏈之鏈結基附接之三個GalNAc衍生物；
(iii)於位置1至6、8及12至21之2’-OMe修飾，以及於位置7及9至11處之2’-F修飾(從5’端計數)；以及
(iv)於位置1與2之間以及位置2與3之間的硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從5’端計數)；
以及
(b)反義股，其具有：
(i)23個核苷酸之長度；
(ii)於位置1、3至5、7、10至13、15及17至23之2’-OMe修飾，以及於位置2、6、8、9、14及16之2’-F修飾(從5’端計數)；以及
(iii)於核苷酸位置1與2之間、核苷酸位置2與3之間、核苷酸位置21與22之間、以及核苷酸位置22與23之間的硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從5’端計數)；
其中該RNAi劑具有於該反義股之3’端的兩個核苷酸的突出，以及於該反義股之5’末端的鈍端。
於另一特定之態樣中，本發明之RNAi劑係包含：
(a)正義股，其具有：
(i)19個核苷酸之長度；
(ii)附接至3’末端之ASGPR配位子，其中該ASGPR配位子包含經由三價分支鏈之鏈結基附接之三個GalNAc衍生物；
(iii)於位置1至4、6及10至19之2’-OMe修飾，以及位於位置5及7至9之2’-F修飾；以及
(iv)於位置1與2之間以及位置2與3之間的硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從5’端計數)；
以及
(b)反義股，其具有：
(i)21個核苷酸之長度；
(ii)於位置1、3至5、7、10至13、15及17至21之2’-OMe修飾，以及於位置2、6、8、9、14及16之2’-F修飾(從5’端計數)；以及
(iii)於核苷酸位置1與2之間、核苷酸位置2與3之間、核苷酸位置19與20之間、以及核苷酸位置20與21之間的硫代磷酸酯類核苷酸間鏈結(從5’端計數)；
其中該RNAi劑具有於該反義股之3’端的兩個核苷酸的突出，以及於該反義股之5’端的鈍端。
於某些態樣中，用於本發明之方法中的iRNA係選自表3、表5或表6中所列之劑。此等劑可復包含配位子。
VII.配位子
用於本發明之方法中的雙股RNAi劑可視需要接合之一種或多種配位子、部分或接合物，該配位子、部分或接合物增強iRNA之活性、細胞分別或細胞攝取，例如到細胞內之細胞攝取。配位子可於3’端、5’端或兩端附接至正義股、反義股或兩股。例如，配位子可接合至正義股。於一些態樣中，配位子接合至正義股之3’端。
此等部分包括但不限於脂質部分如膽固醇部分(Letsinger et al.,Proc.Natl.Acid.Sci.USA,1989,86：6553-6556)。於其他態樣中，配位子係膽酸(Manoharan et al.,Biorg.Med.Chem.Let.,1994,4：1053- 1060)、硫醚例如己基-S-三苯甲基硫醇(Manoharan et al.,Ann.N.Y. Acad.Sci.,1992,660：306-309；Manoharan et al.,Biorg.Med.Chem.Let.,1993,3：2765-2770)、硫代膽固醇(Oberhauser et al.,Nucl.Acids Res.,1992,20：533-538、脂肪鏈例如十二烷二醇或十一烷基殘基(Saison-Behmoaras et al.,EMBO J,1991,10：1111-1118；Kabanov et al.,FEBS Lett.,1990,259：327-330；Svinarchuk et al.,Biochimie,1993,75：49-54)、磷脂質例如二-十六烷基-rac-甘油或1,2-二-O-十六烷基-rac-甘油-3-磷酸三乙銨(Manoharan et al.,Tetrahedron Lett.,1995,36：3651-3654；Shea et al.,Nucl.Acids Res.,1990,18：3777-3783)、聚胺或聚乙二醇鏈(Manoharan et al.,Nucleosides & Nucleotides,1995,14：969-973)、或金剛烷乙酸(Manoharan et al.,Tetrahedron Lett.,1995,36：3651-3654)、棕櫚醯基部分(Mishra et al.,Biochim.Biophys.Acta,1995,1264：229-237)、或十八烷基胺或己基胺-羰氧基膽固醇部分(Crooke et al.,J.Pharmacol.Exp.Ther.,1996,277：923-937)。於一個態樣中，配位子係GalNAc配位子。於一些具體態樣中，配位子係GalNAc。配位子經由中介繫帶或直接或間接地偶聯，較佳共價偶聯。
於某些態樣中，配位子改變其所併入之iRNA劑的分佈、靶向或壽命。於較佳之態樣中，配位子提供比缺失此配位子者增強的對於所選標靶如分子、細胞或細胞類型、腔室如細胞或器官之腔室、組織、器官或身體區域之親和性。較佳之配位子不參與雙螺旋核酸中之雙螺旋配對。
配位子可包括天然出現之物質，例如蛋白質(例如，人血清白蛋白(HSA)、低密度脂蛋白(LDL)、或球蛋白)；碳水化合物(例如，聚葡 萄糖、聚三葡萄糖、幾丁質、幾丁聚醣、菊糖、環糊精、N-乙醯基葡萄胺糖、N-乙醯基半乳胺糖或玻尿酸)；或脂質。配位子亦可係重組分子或合成分子，例如合成聚合物，如合成聚胺基酸。聚胺基酸之示例包括聚離胺酸(PLL)、聚L-天冬胺酸、聚L-麩胺酸、苯乙烯-馬來酸酐共聚物、聚(L-乳酸交酯-共-乙交酯)共聚物、二乙烯基醚-馬來酸酐共聚物、N-(2-羥基丙基)甲基丙烯醯胺共聚物(HMPA)、聚乙二醇(PEG)、聚乙烯醇(PVA)、聚胺酯、聚(2-乙基丙烯酸)、N-異丙基丙烯醯胺聚合物、或聚磷嗪(polyphosphazine)。聚胺之示例包括：聚伸乙二胺、聚離胺酸(PLL)、精胺、精三胺、聚胺、假肽-聚胺、胜肽模擬性聚胺、樹枝狀聚胺、精胺酸、脒、魚精蛋白、陽離子脂質、陽離子卟啉、聚胺之四級鹽、或α螺旋胜肽。
配位子亦可包括靶向基團，如細胞或組織靶向劑，如凝集素、醣蛋白、脂質或蛋白質，如抗體，其係接合至特定之細胞類型如腎細胞。靶向基團可係促甲狀腺素、促黑素、凝集素、醣蛋白、界面活性劑蛋白A、粘蛋白碳水化合物、多價乳糖、多價半乳糖、N-乙醯基-半乳胺糖、N-乙醯基葡萄胺糖、多價甘露糖、多價果糖、糖基化聚胺基酸、多價半乳糖、運鐵蛋白、雙膦酸酯、聚麩胺酸鹽、聚天冬胺酸鹽、脂質、膽固醇、類固醇、膽汁酸、葉酸、維生素B12、維生素A、生物素、或RGD胜肽或RGD胜肽模擬物。於某些態樣中，配位子係多價半乳糖，例如，N-乙醯基-半乳胺糖。
配位子之其他示例包括染料；嵌入劑(例如，吖啶類)；交聯劑(例如，補骨脂素、絲裂黴素C)；卟啉類(TPPC4、texaphyrin、Sapphyrin)；多環芳烴(例如，啡
Figure 109138855-A0202-12-0165-117
、二氫啡
Figure 109138855-A0202-12-0165-118
)；人工核酸內切酶(例如，EDTA)；親脂 性分子(例如，膽固醇、膽酸、金剛烷乙酸、1-芘丁酸、二氫睪固酮、1,3-雙-O(十六烷基)甘油、香葉基氧己基、十六烷基甘油、冰片、薄荷醇、1,3-丙二醇、十六烷基、棕櫚酸、肉豆蔻酸、O3-(油醯基)石膽酸、O3-(油醯基)膽烯酸、二甲氧基三苯甲基、或啡
Figure 109138855-A0202-12-0166-119
)；以及胜肽複合物(例如，觸角足突變肽、Tat胜肽)、烷基化劑、磷酸鹽、胺基、巰基、PEG(例如，PEG-40K)、MPEG、[MPEG]2、聚胺基、烷基、經取代之烷基、放射標記至標記物、酵素、半抗原(如，生物素)、轉運/吸收促進劑(例如，阿司匹林、維生素E、葉酸)、合成核糖核酸酶(例如，咪唑、雙咪唑、組胺、咪唑簇、吖啶-咪唑複合物、四氮雜大環之Eu3+錯合物)、二硝基苯基、HRP、或AP。
配位子可係蛋白質如醣蛋白、或胜肽如具有對於共配位子之特異親和性的分子、或抗體如結合至特定細胞類型如肝細胞之抗體。配位子亦可包括激素及激素受體。它們亦可包括非胜肽類物質，例如脂質、凝集素、碳水化合物、維生素、輔助因子、多價乳糖、多價半乳糖、N-乙醯基半乳胺糖、N-乙醯基葡萄胺糖、多價甘露糖、或多價果糖。配位子可係，舉例而言，脂質多醣、p38 MAP激酶之活化劑、或NF-κB之活化劑。
配位子可係例如藥物之物質，其可藉由例如擾亂細胞之細胞骨幹如藉由擾亂細胞之微管、微絲或中間體絲而增加細胞對iRNA劑之攝取。該藥物可係，舉例而言，泰素(taxol)、長春新鹼、長春鹼、細胞鬆弛素、諾考達唑、杰普肯利得(japlakinolide)、紅海海綿蛋白A、鬼筆環肽(phalloidin)、海綿抗菌素(swinholide)A、吲達諾欣(indanocine)、或邁爾素(myoservin)。
於一些態樣中，附接至本文中所述之iRNA的配位子用作藥物動力學調節子(PK調節子)。PK調節子包括親脂質物、膽汁酸、類固醇、磷脂質類似物、胜肽、蛋白結合劑、PEG、維生素等。示例性PK調節子包括但不限於，膽固醇、脂肪酸、膽酸、石膽酸、二烷基甘油酯、二醯基甘油酯、磷脂質、神經鞘脂質、萘普生、布洛芬、維生素E、生物素。包含大量硫代硫酸酯類鏈結之寡核苷酸亦已知結合至血清蛋白，因此在骨幹中包含多個硫代磷酸酯類鏈結之短寡核苷酸如約5個鹼基、10個鹼基、15個鹼基或20個鹼基之寡核苷酸亦可作為配位子(例如，作為PK調節配位子)而遵循本發明。此外，於本文所揭示之態樣中，結合血清組分(例如，血清蛋白)之適配體亦適用於作為PK調節性配位子而使用。
本發明之接合有配位子之iRNA可藉由使用承載側鏈反應性官能度之寡核苷酸如衍生自將鏈結分子附接在寡核苷酸(揭示於下)上者而合成。這一反應性寡核苷酸可直接與可商購之配位子、合成為承載多種保護基團之任一者的配位子、或具有附接於其上之鏈結部分的配位子反應。
於本發明之接合物中使用之寡核苷酸可經由習知之固相合成技術便利且常規性地合成。
於本發明之接合有配位子之iRNA及承載序列特異性鏈結之核苷的配位子分子中，該寡核苷酸及寡核苷可在合適DNA合成器上使用標準核苷酸或核苷前驅物、或已經承載鏈結部分之核苷酸或核苷接合前驅物、已經承載配位子分子之配位子-核苷酸或核苷接合前驅物、或承載配位子之非核苷酸構建模塊而組裝。
當使用已經承載鏈結部分之核苷酸接合前驅物時，典型係完成序列特異性鏈結之核苷的合成，隨後將該配位子分子與該鏈結部分反應以形成接合有配位子之寡核苷酸。於一些態樣中，本發明之寡核苷酸或經鏈結之核苷係藉由自動合成器使用衍生自配位子-核苷接合物之除標準亞磷醯胺之外的亞磷醯胺及可商購且常規用於寡核苷酸合成中之非標準亞磷醯胺來合成。
A.脂質接合物
於某些態樣中，配位子或接合物係脂質或基於脂質之分子。此類脂質或基於脂質之分子較佳係接合血清蛋白如人血清白蛋白(HSA)。HSA結合配位子允許該接合物分佈於標靶組織，如非腎臟之身體標靶組織。舉例而言，靶標組織可係肝臟，包括肝臟之實質細胞。可結合HSA之其他分子亦可用作配位子。舉例而言，可使用萘普生或阿司匹林。脂質或基於脂質之配位子可(a)增加對於接合物降解之抗性，(b)增加對標靶細胞或細胞膜之靶向或遞送，或(c)可用以調節與血清蛋白例如HSA之結合。
基於脂質之配位子可用以抑制如控制該接合物結合至標靶組織。舉例而言，與HSA之結合更強的脂質或基於脂質之配位子將更不可能靶向腎臟，並因此更不可能被從身體清除。與HSA之結合強度較低的脂質或基於脂質之配位子可用來令接合物靶向腎臟。
於某些態樣中，基於脂質之配位子結合HSA。較佳地，其以足夠之親和性結合HSA，使得該接合物將較佳地分佈至非腎臟組織內。惟，較佳係該親和性之強度不足以造成該HSA-配位子之結合係不可逆者。
於其他態樣中，基於脂質之配位子與HSA之結合弱或根本不結合，使得該接合物將較佳分佈至腎臟內。靶向腎細胞之其他部分亦可用於替換該基於脂質之配位子或與該基於脂質之配位子同時使用。
於另一方面，該配位子係被標靶細胞例如增殖細胞攝取之部分例如維生素。此等尤其可用於治療以例如惡性或非惡性細胞如癌細胞的非預期之細胞增殖為特徵的疾患。示例性維生素包括維生素A、維生素E及維生素K。其他示例性維生素包括B族維生素，如葉酸、維生素B12、核黃素、生物素、吡哆醛、或其他被靶標細胞如肝細胞攝取之維生素或營養物質。亦包括者係HSA及低密度脂蛋白(LDL)。
B.細胞滲透劑
於另一方面，配位子係細胞滲透劑，較佳係螺旋細胞滲透劑。較佳地，該劑係兩親性。示例性劑係胜肽，例如tat或觸角足突變肽。如果該劑係胜肽，其可經修飾，包括肽基模擬物、嵌入體、非胜肽或假胜肽類鏈結、以及D-胺基酸之使用。該螺旋劑較佳係α-螺旋劑，其較佳具有親脂相及疏脂相。
該配位子可係胜肽或胜肽模擬物。胜肽模擬物(本文中亦指代為寡肽模擬物)係能折疊為所定義之類似於天然胜肽之三維結構的分子。胜肽及胜肽模擬物至iRNA劑之附接可影響iRNA之藥物動力學分佈，例如藉由提升細胞識別及吸收而影響。胜肽或胜肽模擬物部分可係5至50個胺基酸之長度，例如，約5、10、15、20、25、30、35、40、45或50個胺基酸之長度。
胜肽或胜肽模擬物可係，舉例而言，細胞滲透胜肽、陽離子胜肽、兩親性胜肽、或疏水性胜肽(例如，主要由Tyr、Trp或Phe構成)。胜肽部分可係樹枝狀胜肽、受約束之胜肽或交聯之胜肽。於另一選擇中，胜肽部分可包括疏水性膜易位序列(MTS)。示例性之含有MTS的疏水性胜肽係具有下述胺基酸序列的RFGF：AAVALLPAVLLALLAP(SEQ ID NO：13)。含有疏水性MTS之RFGF類似物(例如，胺基酸序列AALLPVLLAAP(SEQ ID NO：14))亦可係靶向部分。胜肽部分可係「遞送性」胜肽，其可攜帶包括胜肽、寡核苷酸、及蛋白質在內之極性大分子跨越細胞膜。舉例而言，業經發現，來自HIV Tat蛋白質之序列(GRKKRRQRRRPPQ(SEQ ID NO：15))及來自果蠅觸角足突變肽蛋白之序列(RQIKIWFQNRRMKWKK(SEQ ID NO：16))能起到遞送肽之功能。胜肽或胜肽模擬物可由DNA之隨機序列編碼，例如從噬菌體呈現庫或一珠一物(OBOC)組合庫鑑定之胜肽(Lam et al.,Nature,354：82-84,1991)。經由合併之單體單元繫帶至dsRNA劑之用於細胞靶向目的之胜肽或胜肽模擬物的示例係精胺酸-甘胺酸-天冬胺酸(RGD)胜肽或RGD模擬物。胜肽部分之長度範圍可係約5個胺基酸至約40個胺基酸。該等胜肽部分可具有結構性修飾，例如以增加安定性或引導構形特性。可使用下文所述之任何結構性修飾。
用於本發明之組成物及方法的RGD胜肽可係線性或環狀，且可經修飾例如經糖基化或甲基化以促進對特定組織之靶向。含有RGD之胜肽及胜肽模擬物可包括D-胺基酸，以及合成RGD模擬物。除了RGD之 外，亦可使用其他以整合素配位子為標靶之部分。這一配位子之較佳接合物靶向PECAM-1或VEGF。
「細胞滲透胜肽」能滲透細胞例如微生物細胞諸如細菌或真菌細胞，或哺乳動物細胞諸如人類細胞。微生物細胞滲透胜肽可係，舉例而言，α-螺旋線性胜肽(例如，LL-37或Ceropin P1)、含二硫鍵之胜肽(例如，α-防禦素、β-防禦素或抗菌肽(bactenecin))、或僅含有一個或兩個支配性胺基酸之胜肽(例如，PR-39或吲哚菌肽(indolicidin))。細胞滲透胜肽亦可包括線性定位訊號(NLS)。舉例而言，細胞滲透胜肽可係雙向兩親性胜肽如MPG，其衍生自HIV-1 gp41之融合胜肽結構域及SV40的T抗原之NLS(Simeoni et al.,Nucl.Acids Res.31：2717-2724,2003)。
C.碳水化合物接合物
於本發明之組成物及方法的一些態樣中，iRNA復包含碳水化合物。接合有碳水化合物之iRNA對於核酸之體內遞送具有優勢，且組成物係適用於體內治療性用途，如本文中所揭示。如本文中所用，「碳水化合物」指代碳水化合物自身，其由一個或多個具有至少6個碳原子之單糖單元(其可係線性、分支鏈或環狀)與鍵結至每一碳原子之氧、氮或硫原子所組成；或係具有碳水化合物部分作為其一部分的化合物，該碳水化合物部分由一個或多個具有至少六個碳原子之單糖單元(其可係線性、分支鏈或環狀)與鍵結至每一碳原子之氧、氮或硫原子所組成。代表性碳水化合物包括糖類(單糖、二醣、三醣及含有約4、5、6、7、8、或9個單糖單元之寡醣)，以及多醣如澱粉、糖原、纖維素及多醣膠。具體之單糖包括C5糖類 及上述(如，C5、C6、C7或C8)糖類；二醣及三醣，其包括具有兩個或三個單醣單元(如，C5、C6、C7或C8)之糖類。
於某些態樣中，用於本發明之組成物及方法中之碳水化合物接合物係單糖。
於一個態樣中，用於本發明之組成物及方法中之碳水化合物接合物選自由下列所成群組：
Figure 109138855-A0202-12-0172-138
Figure 109138855-A0202-12-0172-139
Figure 109138855-A0202-12-0172-140
Figure 109138855-A0202-12-0173-141
Figure 109138855-A0202-12-0173-142
Figure 109138855-A0202-12-0173-143
Figure 109138855-A0202-12-0173-144
Figure 109138855-A0202-12-0173-145
Figure 109138855-A0202-12-0174-146
Figure 109138855-A0202-12-0174-147
Figure 109138855-A0202-12-0174-148
Figure 109138855-A0202-12-0174-149
Figure 109138855-A0202-12-0175-150
Figure 109138855-A0202-12-0175-151
Figure 109138855-A0202-12-0175-152
Figure 109138855-A0202-12-0175-153
Figure 109138855-A0202-12-0175-154
Figure 109138855-A0202-12-0175-155
Figure 109138855-A0202-12-0175-156
Figure 109138855-A0202-12-0176-157
Figure 109138855-A0202-12-0176-158
Figure 109138855-A0202-12-0176-159
Figure 109138855-A0202-12-0176-160
，其中Y係O或S，且n係3至6(式XXIV)；
Figure 109138855-A0202-12-0176-161
，其中Y係O或S，且n係3至6(式XXV)；
Figure 109138855-A0202-12-0177-162
Figure 109138855-A0202-12-0177-163
，其中X係O或S(式XXVII)；
Figure 109138855-A0202-12-0177-164
Figure 109138855-A0202-12-0178-165
Figure 109138855-A0202-12-0178-166
Figure 109138855-A0202-12-0179-167
於另一態樣中，用於本發明之組成物及方法中之碳水化合物接合物係單糖。於一個態樣中，單糖係N-乙醯基半乳胺糖，例如
Figure 109138855-A0202-12-0179-168
用於本文所述之態樣中的另一代表性碳水化合物接合物包括但不限於，
Figure 109138855-A0202-12-0180-169
當X或Y之一者係寡核苷酸時，另一者係氫。
於一些態樣中，合適之配位子係WO2019/055633中揭露之配位子，該專利之整體內容係藉由引用而併入本文。於一態樣中，配位子包含以下結構：
Figure 109138855-A0202-12-0180-170
於本發明之某些態樣中，GalNAc或GalNAc衍生物經由單價鏈結子附接至本發明之iRNA劑。於一些態樣中，GalNAc或GalNAc衍生物經由二價鏈結子附接至本發明之iRNA劑。於本發明之又一些態樣中，GalNAc或GalNAc衍生物經由三價鏈結子附接至本發明之iRNA劑。
於一個態樣中，本發明之雙股RNAi劑包含附接至該iRNA劑之一個GalNAc或GalNAc衍生物，例如，附接至dsRNA劑之正義股的 5’端或如本文所揭示之雙靶向RNAi劑之一個或兩個正義股之5’端。於另一態樣中，本發明之雙股RNAi劑包含複數(例如，2、3、4、5或6)個GalNAc或GalNAc衍生物，其經由複數個單價鏈結子而各自獨立附接至該雙股RNAi劑之複數個核苷酸。
於一些態樣中，舉例而言，當本發明之iRNA劑之兩股皆係一個更大分子之一部分且係藉由位於一股之3’端與另一股之5’端之間的不間斷核苷酸鏈連結而形成包含複數個未配對核苷酸的髮夾環圈時，該髮夾環圈內之每一個未配對核苷酸可獨立包含經由單價鏈結子附接之GalNAc或GalNAc衍生物。
於一些態樣中，碳水化合物接合物復包含如上文所述的一個或多個另外配位子，例如但不限於，PK調節子或細胞滲透胜肽。
適用於本發明之附加碳水化合物接合物及鏈結子包括彼等於PCT申請第WO 2014/179620號及第WO 2014/179627號中所揭示者，其各自之整體內容藉由引用而併入本文。
D.鏈結子
於一些態樣中，本文中揭示之接合物或配位子可使用多種鏈結子附接至iRNA寡核苷酸，該鏈接基可係可裂解者或不可裂解者。
術語「鏈結子」或「鏈結基團」意指將化合物之兩個部分連結在一起，例如，將化合物之兩個部分共價附接的有機部分。鏈結子典型包含直接鍵結或原子如氧或硫，單元如NR8、C(O)、C(O)NH、SO、SO2、SO2NH或原子之鏈，例如但不限於，經取代或未經取代之烷基、經取代或未經取代之烯基、經取代或未經取代之炔基、芳基烷基、芳基烯基、芳基 炔基、雜芳基烷基、雜芳基烯基、雜芳基炔基、雜環基烷基、雜環基烯基、雜環基炔基、芳基、雜芳基、雜環基、環烷基、環烯基、烷基芳基烷基、烷基芳基烯基、烷基芳基炔基、烯基芳基烷基、烯基芳基烯基、烯基芳基炔基、炔基芳基烷基、炔基芳基烯基、炔基芳基炔基、烷基雜芳基烷基、烷基雜芳基烯基、烷基雜芳基炔基、烯基雜芳基烷基、烯基雜芳基烯基、烯基雜芳基炔基、炔基雜芳基烷基、炔基雜芳基烯基、炔基雜芳基炔基、烷基雜環基烷基、烷基雜環基烯基、烷基雜環基炔基、烯基雜環基烷基、烯基雜環基烯基、烯基雜環基炔基、炔基雜環基烷基、炔基雜環基烯基、炔基雜環基炔基、烷基芳基、烯基芳基、炔基芳基、烷基雜芳基、烯基雜芳基、炔基雜芳基，其一個或多個亞甲基可由O、S、S(O)、SO2、N(R8)、C(O)、經取代或未經取代之芳基、經取代或未經取代之雜芳基、或經取代或未經取代之雜環基中斷或終止；其中R8係氫、醯基、脂族或經取代之脂族。於一個態樣中，鏈結子係約1至24個原子、2至24個原子、3至24個原子、4至24個原子、5至24個原子、6至24個原子、6至18個原子、7至18個原子、8至18個原子、7至17個原子、8至17個原子、6至16個原子、7至17個原子、或8至16個原子。
可裂解之鏈結基團在細胞外足夠安定，但當進入標靶細胞時裂解以釋放被該鏈結子保持在一起之兩個部分。於較佳之態樣中，可裂解之鏈結基團在靶標細胞內或在第一參考條件(其可係例如經選擇以模擬或呈現細胞內之條件)下之裂解比在受試者血液內或在第二參考條件(其可係例如經選擇以模擬或呈現見於血液或血清中之條件)下之裂解快至少約10 倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或更高、或至少100倍。
可裂解之鏈接基團係對於裂解劑例如pH、氧化還原電位或可降解分子之存在為敏感者。通常，與在血清或血液中相比，裂解劑在細胞內更為普遍或以更高水準或活性被發現。此類降解劑之示例包括：氧化還原劑，其係選擇用於特定之受質或其不具有受質特異性，包括例如細胞內存在之可降解氧化還原可藉由還原可裂解之鏈結基團的氧化酶、還原酶或還原劑如硫醇；酯酶；內切酶，或可創建酸性環境之劑如導致pH為5或更低之彼等；可藉由作為通用酸、肽酶(其可係受質特異性者)及磷酸酶作動而水解或降解酸可裂解之鏈結基團的酶。
可裂解之鏈結基團如二硫鍵可能對於pH敏感。人血清之pH為7.4，而細胞內平均pH略低，為7.1至7.3之範圍。胞內體具有酸性更強之pH，為5.5至6.0之範圍；而溶酶體甚至具有酸性更強之pH，約為5.0。一些鏈結子將具有可裂解之鏈結基團，該鏈結基團在較佳之pH裂解，從而在細胞內將陽離子脂質從該配位子釋放出來或將該陽離子脂質釋放如所欲之細胞腔室內。
鏈結子可包括可藉由特定酶裂解之可裂解之鏈結基團。併入鏈結子的可裂解之鏈結基團的類型可取決於待作為標靶之細胞。舉例而言，肝臟靶向配位子可經由包括酯基之鏈結子而鏈結至陽離子脂質。肝細胞富含酯酶，因此鏈結子在肝細胞中將比在不富含酯酶之細胞類型內更有效地被裂解。其他富含酯酶之細胞類型包括肺、腎皮質及睪丸之細胞。
當靶向細胞類型係富含肽酶者如肝細胞及滑膜細胞時，可使用含有肽酶之鏈結子。
通常，可藉由測試降解劑(或條件)裂解備選鏈結基團之能力而評估該備選之可裂解鏈結基團的適用性。亦所欲者係亦測試該備選可裂解鏈結基團在血液中或當與其他非標靶組織接觸時之抵抗裂解的能力。因此，可測定第一條件與第二條件間之裂解相對敏感性，其中，該第一條件係選擇為靶標細胞內之裂解標誌物，且該第二條件係選擇為其它組織或生物流體如血液或血清中之裂解標誌物。該等評估可在無細胞之系統內、細胞內、細胞培養物內、器官或組織培養物內、或在整個動物體內進行。可能有用者係，在無細胞或培養條件下作成初始評估，並藉由在整體動物體內之進一步評估而證實之。於較佳之態樣中，可用之備選化合物在細胞內(或在選擇以模擬細胞內條件之體外條件下)之裂解比在血液或血清中(或在選擇以模擬細胞外條件之體外條件下)快至少約2倍、4倍、10倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍。
i.氧化還原可裂解之鏈結基團
於某些態樣中，可裂解之鏈結基團係氧化還原可裂解之鏈結基團，其當還原或氧化時被裂解。可經還原裂解之鏈結基團的示例係二硫鏈結基團(-S-S-)。為了確定備選可裂解鏈結基團是否係合適之「可還原裂解之鏈結基團」或例如是否適用於與特定iRNA部分及特定靶向劑合用，可查看本文中揭示之方法。舉例而言，可藉由以二硫蘇糖醇(DTT)或使用該領域中已知試劑之還原劑溫育來評估備選者，該溫育模擬在細胞如靶標細胞內將會觀察到之裂解速率。該等備選物亦可在經選擇以模擬血液或血清 條件之條件下評估之。於一個態樣中，備選化合物在血液中被裂解至多約10%。於其他態樣中，可用之備選化合物在細胞內(或在選擇以模擬細胞內條件之體外條件下)之降解比在血液或血清中(或在選擇以模擬細胞外條件之體外條件下)快至少約2倍、4倍、10倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或約100倍。備選化合物之裂解速率可使用標準酶動力學分析在經選擇以模擬細胞內介質之條件下測定，並將其與在經選擇以模擬細胞外介質之條件下所測者比較。
ii.基於磷酸酯之可裂解鏈結基團
於其他態樣中，可裂解之鏈結子包含基於磷酸酯之可裂解鏈結基團。基於磷酸酯之可裂解鏈結基團藉由降解或水解該磷酸酯基團之劑而裂解。在細胞內裂解磷酸酯基團之劑的示例係酶如細胞內之磷酸酶。磷酸酯系鏈結基團之示例係-O-P(O)(ORk)-O-、-O-P(S)(ORk)-O-、-O-P(S)(SRk)-O-、-S-P(O)(ORk)-O-、-O-P(O)(ORk)-S-、-S-P(O)(ORk)-S-、-O-P(S)(ORk)-S-、-S-P(S)(ORk)-O-、-O-P(O)(Rk)-O-、-O-P(S)(Rk)-O-、-S-P(O)(Rk)-O-、-S-P(S)(Rk)-O-、-S-P(O)(Rk)-S-、-O-P(S)(Rk)-S-。較佳之態樣係-O-P(O)(OH)-O-、-O-P(S)(OH)-O-、-O-P(S)(SH)-O-、-S-P(O)(OH)-O-、-O-P(O)(OH)-S-、-S-P(O)(OH)-S-、-O-P(S)(OH)-S-、-S-P(S)(OH)-O-、-O-P(O)(H)-O-、-O-P(S)(H)-O-、-S-P(O)(H)-O-、-S-P(S)(H)-O-、-S-P(O)(H)-S-及-O-P(S)(H)-S-。較佳之態樣係-O-P(O)(OH)-O-。此等備選者可使用與上述之彼等類似之方法評估。
iii.酸可裂解之鏈結基團
於其他態樣中，可裂解之鏈結子包含酸可裂解之鏈結基團。酸可裂解之鏈結基團係在酸性條件下被裂解之鏈結基團。於較佳之態樣中，酸可裂解之鏈結基團係在pH為約6.5或更低(例如，約6.0、5.5、5.0或更低)之酸性環境中被裂解，或被劑諸如可用作通用酸之酶裂解。於細胞內，特異性低pH胞器如胞內體及溶酶體，可提供用於酸可裂解之鏈結基團的裂解環境。酸可裂解之鏈結基團之示例包括但不限於腙類、酯類、及胺基酸之酯類。酸可裂解之鏈結基團可具有通式-C=NN-、C(O)O、或-OC(O)。較佳之態樣係，當附接至酯之氧(烷氧基)的碳係芳基時，經取代之烷基、或四級烷基如二甲基戊基或第三丁基。此等備選者可使用與上述之彼等類似之方法評估。
iv.基於酯之鏈結基團
於其他態樣中，可裂解之鏈結子包含基於酯之可裂解鏈結基團。基於酯之可裂解鏈結基團由酶諸如酯酶或醯胺酶在細胞內裂解。基於酯之可裂解鏈結基團的示例包括但不限於伸烷基、伸烯基及伸炔基之酯類。酯可裂解之鏈結基團可具有通式-C(O)O-或-OC(O)-。此等備選者可使用與上述之彼等類似之方法評估。
v.基於胜肽之裂解基團
於其他態樣中，可裂解之鏈結子包含基於胜肽之可裂解鏈結基團。基於胜肽之可裂解鏈結基團由酶諸如肽酶及蛋白酶在細胞內裂解。基於胜肽之可裂解基團在胺基酸間形成以獲得寡肽(例如，二肽、三肽等)及多肽之肽鍵。基於胜肽之可裂解基團不包括醯胺基團(-C(O)NH-)。醯胺基團可在任何伸烷基、伸烯基或伸炔基之間形成。肽鍵在胺基酸間形成以獲 得胜肽及蛋白質之特異類型的醯胺鍵。基於胜肽之裂解基團通常限定為在胺基酸間形成而獲得胜肽及蛋白質的肽鍵(亦即，醯胺鍵)，且不包括該完整醯胺官能基。基於胜肽之可裂解鏈結基團具有通式-NHCHRAC(O)NHCHRBC(O)-，其中RA與RB係兩個相鄰胺基酸之R基團。此等備選者可使用與上述之彼等類似之方法評估。
於一些態樣中，本發明之iRNA經由鏈結子接合至碳水化合物。本發明之組成物及方法之具有鏈結子之iRNA碳水化合物接合物的非限制性示例包括，但不限於，
Figure 109138855-A0202-12-0187-171
Figure 109138855-A0202-12-0187-172
Figure 109138855-A0202-12-0187-173
Figure 109138855-A0202-12-0188-174
Figure 109138855-A0202-12-0188-175
Figure 109138855-A0202-12-0188-176
Figure 109138855-A0202-12-0188-177
Figure 109138855-A0202-12-0189-178
(式XLIV)，其中，X或Y之一者係寡核苷酸，且另一者係氫。
於本發明之組成物及方法之某些態樣中，配位子係一種或多種經由二價或三價分支鏈之鏈結子附接的GalNAc(N-乙醯基半乳胺糖)衍生物。
於一個態樣中，本發明之dsRNA接合至選自式(XLV)至(XLVI)中任一者所示結構組成之群組的二價或三價分支鏈之鏈結基：
Figure 109138855-A0202-12-0189-179
其中：
q2A、q2B、q3A、q3B、q4A、q4B、q5A、q5B及q5C於每次出現時獨立表示0至20，其中，該重複單元可係相同或相異；
P2A、P2B、P3A、P3B、P4A、P4B、P5A、P5B、P5C、T2A、T2B、T3A、T3B、T4A、T4B、T4A、T5B、T5C於每次出現時獨立地不存在或係CO、NH、O、S、OC(O)、NHC(O)、CH2、CH2NH或CH2O；
Q2A、Q2B、Q3A、Q3B、Q4A、Q4B、Q5A、Q5B、Q5C於每次出現時獨立地不存在或係伸烷基、經取代之伸烷基(其中，一個或多個亞甲基可藉由O、S、S(O)、SO2、N(RN)、C(R’)=C(R”)、C≡C或C(O)之一者或多者中斷或封端)；
R2A、R2B、R3A、R3B、R4A、R4B、R5A、R5B、R5C於每次出現時獨立地不存在或係NH、O、S、CH2、C(O)O、C(O)NH、NHCH(Ra)C(O)、-C(O)-CH(Ra)-NH-、CO、CH=N-O、
Figure 109138855-A0202-12-0190-180
、
Figure 109138855-A0202-12-0190-181
、
Figure 109138855-A0202-12-0190-182
、
Figure 109138855-A0202-12-0190-183
、
Figure 109138855-A0202-12-0190-184
或雜環基；
L2A、L2B、L3A、L3B、L4A、L4B、L5A、L5B及L5C表示配位子，亦即，於每次出現時各自獨立為單糖(如GalNAc)、二醣、三醣、四醣、寡醣、或多醣；且Ra係H或胺基酸側鏈。三價接合GalNAc衍生物尤其可與RNAi劑合用，以用於抑制標靶基因之表現，例如式(XLIX)之彼等：
式XLIX
Figure 109138855-A0202-12-0190-185
其中L5A、L5B及L5C表示單糖，如GalNAc衍生物。
合適之接合GalNAc衍生物之二價及三價分支鏈之鏈結子的示例包括但不限於，上文作為式II、VII、XI、X、及XIII而引用之結構。
教示RNA接合物之製備之代表性美國專利包括但不限於，美國專利第4,828,979號、第4,948,882號、第5,218,105號、第5,525,465號、第5,541,313號、第5,545,730號、第5,552,538號、第5,578,717號、第5,580,731號、第5,591,584號、第5,109,124號、第5,118,802號、第5,138,045號、第5,414,077號、第5,486,603號、第5,512,439號、第5,578,718號、第5,608,046號、第4,587,044號、第4,605,735號、第4,667,025號、第4,762,779號、第4,789,737號、第4,824,941號、第4,835,263號、第4,876,335號、第4,904,582號、第4,958,013號、第5,082,830號、第5,112,963號、第5,214,136號、第5,082,830號、第5,112,963號、第5,214,136號、第5,245,022號、第5,254,469號、第5,258,506號、第5,262,536號、第5,272,250號、第5,292,873號、第5,317,098號、第5,371,241號、第5,391,723號、第5,416,203號、第5,451,463號、第5,510,475號、第5,512,667號、第5,514,785號、第5,565,552號、第5,567,810號、第5,574,142號、第5,585,481號、第5,587,371號、第5,595,726號、第5,597,696號、第5,599,923號、第5,599,928號、第5,688,941號、第6,294,664號、第6,320,017號、第6,576,752號、第6,783,931號、第6,900,297號、第7,037,646號、第8,106,022，其各自之整體內容藉由引用而併入本文。
給定化合物之所有位置經均勻修飾係不必要者，且事實上，超過一種前述修飾可併入單個化合物中或甚至併入iRNA之單個核苷處。本發明亦包括作為嵌合化合物之iRNA化合物。
於本發明之語境中，「嵌合」iRNA化合物或「嵌合體」係iRNA化合物，較佳係dsRNAi劑，其含有兩個或更多個化學上截然不同之區域，各自由至少一個單體單元構成，亦即，在dsRNA化合物之情形中，該單體單元係核苷酸。此等iRNA典型含有至少一個區域，其中，該RNA經修飾以賦予該iRNA以增加之對核酸酶降解之抗性、增加之細胞攝取、或增加之與標靶核酸之親和性。iRNA之附加區域可用作能裂解RNA：DNA雜交體或RNA：RNA雜交體之酶的受質。舉例而言，RNase H係細胞之核酸內切酶，其裂解RNA：DNA雙螺旋之RNA股。因此，RNase H之激活導致RNA標靶之裂解，從而極大地提升對基因表現之iRNA抑制的效率。因此，當使用嵌合dsRNA時，使用較短之iRNA往往可獲得與使用雜交至相同標靶區域之硫代磷酸酯脫氧dsRNA相當的結果。RNA標靶之裂解可藉由凝膠電泳常規偵檢之，且若需要，可將凝膠電泳與該領域中已知之相關核酸雜交技術合用。
於某些例子中，iRNA之RNA可藉由非配位子基團予以修飾。大量非配位子分子業經接合至iRNA以提升iRNA之活性、細胞分佈或細胞攝取，且執行此類接合之過程可在科技文獻中獲得。此類非配位子部分業經包括脂質部分，如膽固醇(Kubo,T.et al.,Biochem.Biophys.Res.Comm.,2007,365(1)：54-61；Letsinger et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1989,86：6553)、膽酸(Manoharan et al.,Bioorg.Med.Chem.Lett.,1994, 4：1053)、硫醚例如己基-S-三苯甲基硫醇(Manoharan et al.,Ann.N.Y.Acad.Sci.,1992,660：306；Manoharan et al.,Bioorg.Med.Chem.Let.,1993,3：2765)、硫代膽固醇(Oberhauser et al.,Nucl.Acids Res.,1992,20：533)、脂肪鏈例如十二烷二醇或十一烷基殘基(Saison-Behmoaras et al.,EMBO J.,1991,10：111；Kabanov et al.,FEBS Lett.,1990,259：327；Svinarchuk et al.,Biochimie,1993,75：49)、磷脂質例如二-十六烷基-rac-甘油或1,2-二-O-十六烷基-rac-甘油-3-磷酸三乙銨(Manoharan et al.,Tetrahedron Lett.,1995,36：3651；Shea et al.,Nucl.Acids Res.,1990,18：3777)、聚胺或聚乙二醇鏈(Manoharan et al.,Nucleosides & Nucleotides,1995,14：969)、或金剛烷乙酸(Manoharan et al.,Tetrahedron Lett.,1995,36：3651)、棕櫚醯基部分(Mishra et al.,Biochim.Biophys.Acta,1995,1264：229)、或十八烷基胺或己基胺-羰氧基膽固醇部分(Crooke et al.,J.Pharmacol.Exp.Ther.,1996,277：923)。教示此類RNA接合物之製備的代表性美國專利列述於上文中。典型之接合策略牽涉在該序列之一個或多個位置承載胺基鏈結子之RNA的合成。胺基隨後與使用合適之偶聯劑或活化劑接合之分子反應。接合反應可使用仍鍵結至固體支撐物之RNA執行，或在RNA於溶液相中裂解後執行。藉由HPLC進行之RNA接合物之純化典型提供純接合物。
VIII.本發明之醫藥組成物
本發明亦包括用於本發明之方法中的包括本發明之iRNA的醫藥組成物及製劑。於一態樣中，本文提供含有如本文所揭示之iRNA以及藥學可接受之載劑的醫藥組成物。含有iRNA之醫藥組成物可用於預 防或治療AGT相關疾患，例如，高血壓。此等醫藥組成物係基於遞送模式而配製。
包含本發明之RNAi劑的醫藥組成物可係，舉例而言，具有或不具有緩衝性之溶液，或含有藥學上可接受之載劑的組成物。此類組成物包括，舉例而言，水性或晶體性組成物、脂質體製劑、微胞製劑、乳液、及基因治療載體。
於本發明之方法中，RNAi劑可於溶液中給藥。游離RNAi劑可於非緩衝溶液例如鹽水或水中給藥。另選地，游離siRNA亦可於合適之緩衝溶液中給藥。緩衝溶液可包含醋酸鹽、枸櫞酸鹽、醇溶榖蛋白、碳酸鹽、或磷酸鹽、或其任何組合。於一個態樣中，緩衝溶液係磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)。含有RNAi劑之緩衝溶液之pH及滲透壓可經調節，使得其適用於給藥至受試者。
於一些態樣中，緩衝溶液復包含控制溶液滲透性之劑，使得滲透性保持為所欲之值，例如，人類血漿之生理學值。可加至緩衝溶液中以控制滲透性之溶質包括但不限於，蛋白質、胜肽、胺基酸、非代謝性聚合物、維生素、離子、糖、代謝物、有機酸、脂質或鹽。於一些態樣中，控制溶液滲透性之劑係鹽。於某些態樣中，控制溶液滲透性之劑係氯化鈉或氯化鉀。
於一些態樣中，本發明之醫藥組成物係無熱原者或非熱原性者。
本發明之醫藥組成物可經由大量途徑給藥，取決於局部治療或全身治療是否為所欲者，且取決於待治療之面積。給藥可係外用(例如， 藉由透皮貼劑)；肺部給藥，例如藉由粉末或氣溶膠之吸入或吹入，包括藉由噴霧器；氣管內給藥、鼻內給藥、表皮給藥及透皮給藥；口服或腸胃外給藥。腸胃外給藥包括靜脈內、動脈內、皮下、腹膜內或肌肉內注射或輸注；真皮下給藥，例如經由植入裝置；或顱內給藥，例如藉由腦實質內給藥、鞘內給藥或腦室內給藥。
一個示例係將組成物配製為用於經由腸胃外遞送之系統性給藥，例如，藉由皮下(subQ)遞送、肌肉內(IM)遞送或靜脈內(IV)遞送。本發明之醫藥組成物可以足以抑制AGT基因表現之劑量給藥。
本發明之醫藥組成物可以足以抑制AGT基因表現之劑量給藥。於一些態樣中，將約50mg至約800mg(例如，約50至約200mg,about 50mg至約500mg、約100mg至約800mg、約100mg至約500mg、約100mg至約300mg、約200mg至約300mg、約200mg至約400mg、約200mg至約500mg、約200mg至約800mg、約300mg至約800mg、約300mg至約500mg、約300mg至約4000mg、約400mg至約800mg、約400mg至約500mg，例如，約50、100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、或約800mg)之固定劑量的iRNA劑給藥至受試者。
重複劑量方案可包括規律地給藥治療量之iRNA，諸如每個月一次、每兩個月一次、每三個月一次、每四個月一次、每五個月一次、每六個月一次、每3至6個月一次、或每年一次。於某些態樣中，iRNA係大約每個月給藥一次至大約每季給藥一次至大約每六個月給藥一次。
於初始之治療方案後，該治療之實施頻次可降低。治療之持續時間可基於疾病之嚴重程度而確定。
於其他態樣中，單一劑量之醫藥組成物可係長期持續者，使得劑量係以不超過1、2、3、4、5或6個月之間隔給藥。於本發明之一些態樣中，單一劑量之本發明之醫藥組成物係約每個月給藥一次。於本發明之其他態樣中，單一劑量之本發明之醫藥組成物係約每季(亦即，約每三個月)給藥一次。於本發明之其他態樣中，單一劑量之本發明之醫藥組成物係約每年給藥兩次(亦即，約每六個月給藥一次)。
熟練技術人員應知悉，某些因素可影響有效治療受試者所需之劑量及時機，該等因素包括但不限於受試者體內存在之突變、先前之治療、受試者之一般健康情況或年齡、以及存在之其他疾病。此外，使用適宜的預防或治療有效量之組成物治療受試者可包括單一治療或一系列治療。
iRNA可以靶向具體組織(例如，肝細胞)之方式遞送。
本發明之醫藥組成物係包括但不限於，溶液、乳液、及含脂質體之製劑。此等組成物可從多種組分生成，該等組分包括但不限於，預成形之液體、自乳化之固體及自乳化之半固體。製劑包括彼等靶向肝臟者。
可便利地以單位劑型存在的本發明之醫藥製劑，可根據醫藥工業中習知之傳統技術製備之。此類技術包括將活性成分與醫藥載劑或賦形劑帶至聯合之步驟。通常，藉由將活性成分與液體載劑均勻且緊密地帶至聯合而製備製劑。
IX.套組
本發明亦提供用於實施本發明之任何方法之套組。此類套組包括一種或多種雙股RNAi劑及使用說明，例如，用於給藥固定劑量之雙股RNAi劑的使用說明書。雙股RNAi劑可處於小瓶內或預填充之注射器內。套組可視需要復包含用於給藥雙股RNAi劑之裝置(例如，注射設備，諸如預填充之注射器)或用於量測對AGT之抑制的裝置(例如，用於量測對AGT mRNA、AGT蛋白質及/或AGT活性之抑制的裝置)。此類用於量測對AGT之抑制的裝置可包含用於從受試者獲得樣本如血漿樣本的裝置。本發明之套組可視需要復包含用於確定治療有效量或預防有效量的裝置。
除非另做定義，否則本文中使用之所有科技術語具有與具有本發明所屬領域通常知識之人士所一般理解者相同之意。儘管在本發明提出之iRNA及方法之實踐或測試中可使用與本文中揭示之方法及材料類似或等效者，但適宜之方法及材料係揭示於下。本文中述及之所有出版物、專利申請案及其它參考文獻藉由引用而以其整體併入本文。若有矛盾之處，則以包括定義在內之本說明書為準。此外，材料、方法及實施例僅做例示性說明之用而非意圖限制。
本發明藉由下述實施例進一步示例性說明，該等實施例不應視為限制性。本說明書通篇所引用之全部參考文獻、專利及公佈專利申請之整體內容以及序列表藉由引用而併入本文。
實施例
核苷酸序列呈現中使用之核苷酸單體的縮寫。應理解，當此等單體存在於寡核苷酸中時，除非另做指定，否則其係藉由5'-3'-磷酸二酯鍵而相互鏈結。
Figure 109138855-A0202-12-0198-186
Figure 109138855-A0202-12-0199-187
實施例1：AGT daRNA之第1期臨床試驗
設計一項多中心、隨機、雙盲、活性藥物對照組(active comparator)單劑量及多劑量臨床試驗，以評估皮下給藥(SC)Ad-85481對於高血壓患者之安全性、耐受性、藥物動力學(PK)及藥效動力學(PD)效應。
該研究包括4部分：
部分A：高血壓患者中之遞增單劑量(SAD)期；
部分B：具有受控之鹽攝入的高血壓患者中之但劑量(SD)；
部分C：高血壓患者中之多劑量(MD)期；以及
部分D：肥胖高血壓患者中之多劑量(MD)期。
於該研究之所有部分中，收集對安全性、耐受性及可用PD及PK資料之進行性回顧。
診斷及主要合格性標準
該研究包括年齡為18至65歲之患有高血壓(平均坐姿收縮壓[SBP]為>130且
Figure 109138855-A0202-12-0200-120
159mmHg)的成年人。排除患有繼發性高血壓之患者或平均坐姿舒張壓[DBP]
Figure 109138855-A0202-12-0200-121
100mmHg之患者。亦排除具有將會影響研究依從性或資料判讀之臨床顯著醫學病症或共病(包括糖尿病或任何心血管事件病史)的患者，或當下正在服用或預期使用已知影響血壓之藥品的患者。
研究藥物、劑量及給藥模式
研究藥物，亦即，AD-85481，係一種經化學修飾之接合有N-乙醯基半乳胺糖(GalNAc)的小干擾RNA(siRNA)，其設計為阻抑血管收縮素原(AGT)產生而作為降低個體血壓的策略，將其作為單一皮下注射給藥(部分A及部分B)或於第1週給藥一次且於第12週給藥一次而作為2次皮下注射給藥(部分C及部分D)。
未經修飾及經修飾的AD-85481之核苷酸序列
Figure 109138855-A0202-12-0200-188
化學修飾定義如下：a係2'-O-甲基腺苷-3’-磷酸酯，c係2’-O-甲基胞苷-3’-磷酸酯，g係2’-O-甲基鳥苷-3’-磷酸酯，u係2’-O-甲基尿苷-3’-磷酸酯，Af係2’-氟腺苷-3’-磷酸酯，Cf係2’-氟胞苷-3’-磷酸酯，Gf係2’-氟鳥苷-3’-磷酸酯，Uf係2’-氟腺苷-3’-磷酸酯，(Tgn)係胸腺嘧啶-二醇核酸(GNA)S-異構物，以及s係硫代磷酸酯鏈結。正義股之3’末端共價鏈結至N-[參(GalNAc-烷基)-醯胺基癸醯基)]-4-羥基脯胺醇(亦稱為Hyp-(GalNAc-alkyl)3或L96)配位子。
安慰劑對照、劑量及給藥模式
於部分A及部分B中，AD-85481之對照藥物係安慰劑(用於皮下給藥之0.9%生理鹽水)。
於部分C及部分D中，AD-85481之模擬治療係進行0.9%生理鹽水之皮下給藥。艾比沙坦之模擬治療係匹配艾比沙坦之外觀的惰性模擬片劑。
活性藥物對照組對照、劑量及給藥模式
於該研究之部分C及部分D中，使用每日口服一次(PO)劑量為150mg之艾比沙坦作為活性藥物對照組。
治療及參與研究之持續時間
於部分A及部分B中，皮下給藥單劑量之AD-85481。於部分C及部分D中，歷時12週皮下給藥2個研究藥物之劑量。
統計方法
樣本量係基於實際考量並且與這一類型之早期研究一致。
全分析組(FAS)包括所有根據他們所隨機分配之治療而接受任何量之研究藥物的患者。PK分析組包括所有接受至少1個劑量之研究藥物之患者，該患者具有至少1個進行AD-85481濃度測定之投藥後血液樣本並且具有可評估之PK資料。PD分析組包括所有接受至少1個劑量之研究藥物之患者，該患者具有至少1個進行血清AGT測定之投藥後血液樣本。
使用FAS分析AD-85481活性。分別使用PK分析組及PD分析組來執行PK分析及PD分析。
統計分析本質上係主要敘述性者。呈遞針對連續變項之敘述統計(例如，均值、標準偏差、中位數、最小值及最大值)。呈遞針對分類變項及次序變項之頻率及百分比。提供針對臨床實驗室資料、心電圖(ECG)及生命跡象資料之敘述統計。
研究設計基本原理
第1期之多中心、隨機、雙盲研究係將AD-85481皮下(SC)給藥至高血壓患者。該研究之主要目標係評估高血壓患者對單劑或多劑AD-85481之安全性及耐受性。該研究以4部分執行：遞增單劑量(SAD)期(部分A)；具有受控之鹽攝入的患者中之單劑量(SD)期(部分B)；多劑量(MD)期(部分C)；以及肥胖患者中之MD期(部分D)。
該研究設計為提供對AD-85481之安全性及耐受性的初步了解。基於已知的獲批之抗高血壓藥物的安全性特徵，本研究係設計為謹慎地監測血壓、血清電解質及肌酸酐，並且於預期AGT最低點期間頻繁收 集資料(於AD-85481投藥後評估4至6週)。於給藥研究藥物之後，週期性地收集臨床實驗室評估及血壓資料，以對應AGT最低點。
除了AD-85481之安全性之外，本研究係設計為能夠深入了解下述次要或探索性研究問題。
AD-85481之藥效動力學(PD)：PD效應直接藉由一系列血清AGT量測值得到證明，以確定其相對於血漿AGT水準基線之改變。AGT之下游效應子(血漿腎素濃度、血漿腎素活性、血管收縮素I、血管收縮素II、醛固酮)亦可於血液及尿液中作為探索性生物標誌物而量測。
AD-85481之藥物動力學(PK)：藉由例如qPCR測定AD-85481及潛在代謝物之血漿及尿液水準而評估AG-85481之PK參數。
血壓減低：本研究納入高血壓患者(最初對應於ESC/ESH標準之第1級)來進行治療性血壓減低之評估。單劑量期(部分A及部分B)持續時間，並且使用惰性安慰劑群組。為了遵守最佳倫理標準，更長之MD期(部分C及部分D)使用經確立之血管收縮素II受體阻斷劑(ARB)(艾比沙坦)作為AD-85481治療之活性藥物對照組。AD-85481之探索性評估包括藉由24小時動態血壓監測(ABPM)評估之SBP及DBP相對於基線的改變以及藉由示波自動診間血壓(AOBP)及藉由示波居家血壓監測(HBPM)評估之SBP及DBP相對於基線的改變。
如當前指南所建議，患者於給藥研究藥物之前中斷先前之抗高血壓醫療大約3至4週，並且以自動診室血壓(AOBP)量測值及門診24小時動態血壓監測(ABPM)兩者監測血壓。後一種方法除了具有更高精度之外，亦評估峰谷血壓比率及晝夜節律(包括正常夜間血壓下滑模式的潛在 恢復，24%至35%之高血壓患者喪失該功能)。經由第三種方法，亦即，示波居家庭血壓檢查(HBPM)，收集更頻繁(每日)之量測值，以表徵PD之逐漸影響並且提供對潛在低血壓之更密切安全監測而無需處於臨床狀態下。
低鹽攝入對於對AD-85481之血壓響應的影響：因為在一些患者中之高血壓係鹽敏感者，全部研究患者皆接受關於飲食之教育材料，其中說明從篩查之日起至治療結束(EOT)，每天之鹽消耗限制為大約2.0g。注意，此係2018 ESC/ESH指南對高血壓患者及一般群體兩者建議之鈉攝入量。
此外，部分B對鹽攝入受控的1個患者隊列進行研究，以評價於低鹽狀態(1.15g鈉每天)下增強藥理學及安全性之可能性，該可能性先前業經使用其他RAAS抑制藥物證明。部分B之患者完成為期2週的飲食亞方案，改變其鈉消耗量以直接測試鹽敏感性血壓響應。於部分B期間，食物於研究/代謝處方根據共同方案製作並提供給患者。患者於2週亞方案之第一週住院以促進對於低鹽飲食之依從性並提高對引入鹽剝奪後可能增強之AD-85481藥理學的監測。於AGT降低及鹽剝奪之後，表徵單純對於高鹽攝入之血液響應。AG-85481之探索終點包括測定藉由ABPM及AOBP評估之SBP及DBP於低鹽濃度與高鹽濃度下相對於基線之改變。
肥胖：大多數高血壓患者預計為超重或肥胖。此外，增加之肥胖傾向似乎與高血壓有因果關係。部分D對身體質量指數(BMI)處於第I至III類肥胖範圍內之1個患者隊列進行研究，以評估體重對於PK及PD參數的影響。
由於臨床前研究業經涉及，AGT經由可能不同於經典RAAS途徑之機制對於飲食所致肥胖及肝脂肪變性兩者有所貢獻，故評估體重減輕作為探索終點。收集人體計測(腰圍、腰臀比)及身體組成之放射影像學評估(雙能量x光吸收儀；DEXA)以測定體重改變是否由身體脂肪損失所致。大約每3個月量測藉由體重減低而得以改善的脂質及葡萄糖代謝之生物化學參數(脂質分析、HbA1c、空腹血糖)。注意，部分A、部分B及部分C納入正常至超重以及輕度(第I類)肥胖範圍(BMI
Figure 109138855-A0202-12-0205-122
18kg/m2且
Figure 109138855-A0202-12-0205-123
35kg/m2)之患者。部分D中之單一隊列限定為肥胖患者(BMI>30kg/m2且
Figure 109138855-A0202-12-0205-124
50kg/m2)。AD-85481效應之探索終點包括測定肥胖患者之體重、腰圍、腰臀比及身體組成相對於基線的改變(如藉由雙能量x光吸收儀(DEXA)量測者)。
該研究之進一步探索目標整體包括藉由測定HbA1c、空腹血漿葡萄糖及血清脂質分析相對於基線的改變來評估ALN-AD-85481對於代謝症候群參數之效果；以及藉由測定血漿腎素濃度、血漿腎素活性、血管收縮素I、血管收縮素II、及醛固酮相對於基線的改變來評估AD-85481對於RAAS之探索性生物標誌物的效果。
研究藥物投藥及進展。
部分A之劑量係10mg、25mg、50mg、100mg、200mg、及
Figure 109138855-A0202-12-0205-125
400mg。6個隊列，每個隊列12位患者(其中進行中等投藥水準評估、較低投藥水準評估或先前隊列之擴展的3個視需要隊列納入部分A，以更好地表徵劑量響應或安全性及耐受性)，進行AD-85481：安慰劑之2：1隨 機分組。最低劑量預計不具有降低血壓之效果。預計首先在50mg劑量組觀察到血壓降低活性，且血清AGT降低至少80%。
第I期：部分A
在部分A中，相對於基線降低血清AGT。於第1天，向符合包含及排除標準之受試者給藥單劑量之AD-85481或安慰劑。於給藥之後6週內每一週，皆於給藥AD-85481或安慰劑之前收集血液樣本，並且於治療後第8週及第12週以及隨訪期間每3個月收集血液樣本。藉由固相夾心ELISA測定血清AGT水準，並且於每個時間點測定AGT相對於基線之降低。
於該研究之部分A中，總計60位高血壓患者完成治療。患者或接受安慰劑(每個隊列，n=4)或接受AD-85481(每個隊列，n=8)。下表中呈現參與部分A之受試者的人口統計學及基線特徵。
Figure 109138855-A0202-12-0207-189
部分A中之安全性特徵。該研究之主要目標係評估高血壓患者對單劑AD-85481之安全性及耐受性。如下表中所證明，AD-85481之安全性係可接受者，沒有安全性問題。絕大多數不良事件之嚴重程度係輕度或中度，並且無需干預即得以解決。即無死亡或導致退出研究之不良事件，亦無治療相關之嚴重不良事件(SAE)。基於篩查期間於投藥後實施並且報告為陽性之活檢，1位接受200mg之患者報告前列腺癌之嚴重SAE。沒有患者需要進行干預以降低血壓，並且於該研究進程中沒有觀察到血清丙 胺酸胺基轉移酶(ALT)、血清肌酸酐或血清鉀之臨床顯著升高。五位患者報告輕度注射部位反應。
Figure 109138855-A0202-12-0208-190
單劑量AD-85481之給藥對於血清AGT之效果呈遞於第1圖中。
以10mg劑量給藥時，觀察到之平均最大AGT降低為54%，並且在以10mg劑量給藥4週時之平均降低為52%。
以25mg劑量給藥時，觀察到之平均最大AGT降低為69%，並且在以25mg劑量給藥4週時之平均降低為69%。
以50mg劑量給藥時，觀察到之平均最大AGT降低為74%，並且在以50mg劑量給藥4週時之平均降低為68%。
以100mg劑量給藥時，觀察到之平均最大AGT降低為94%，並且在以100mg劑量給藥4週時之平均降低為92%。
以200mg劑量給藥時，觀察到之平均最大AGT降低為96%，並且在以200mg劑量給藥4週時之平均降低為95%。
此等資料證明，於使用單劑量之AD-85481治療後，血清AGT具有持續的劑量依賴性減低。此外，於接受較高劑量AD-85481之受 試者中觀察到血清AGT水準減低超過90%，並且AGT之減低持續超過3個月，例如，證明以至少一個季度間隔進行長期定量給藥將係有效者。
部分A中，血壓相對於基線的調整。AD-85481之探索性評估包括藉由24小時動態血壓監測(ABPM)評估之SBP及DBP相對於基線的改變以及藉由振蕩法自動診室血壓(AOBP)及藉由振蕩法家庭血壓監測(HBPM)評估之SBP及DBP相對於基線的改變。
如第2圖中所示，如藉由24小時動態血壓量測(ABPM)所測定者，與安慰劑比較，100mg單劑量之AD-85481於第8週將收縮期血壓及舒張期血壓分別減低約10.1mmHg及約5.5mmHg。如藉由24小時動態血壓量測(ABPM)所測定者，與使用安慰劑時觀察結果比較，於投藥200mg單劑量之AD-85481後第8週，收縮期血壓及舒張期血壓之減低分別為約11mmHg及約7.7mmHg。
此等資料證明，於接受單劑量之AD-85481之受試者中存在SBP及DBP的劑量依賴性減低。詳而言，於投藥單劑量(例如，100mg或200mg)之AD-85481後第8週，觀察到24小時SBP減低超過10mmHg。
總結
總而言之，此遞增單劑量研究與AD-85481之最大效應為特徵，並且證明了AD-85481治療之超過3個月的持久性。此等資料證明，皮下單劑量之AD-85481(亦指稱為ALN-AGT01)於患有輕度至重度高血壓之患者中耐受良好，沒有治療相關之嚴重不良事件。AD-85481之給藥導致血清AGT的劑量依賴性且持續之減低。於更高之單劑量AD-85481投藥 之後，觀察到AGT減低超過90%並且持續>3個月，證明需要不頻繁之投藥間隔。
血壓減低反映了於給藥固定單劑量AD-85481後的AGT敲除，其於以100mg或更高之單劑量投藥後第8週，觀察到24小時SBP減低>10mmHg。
與當前治療高血壓之方法及治療劑(其大多與對腎功能產生副作用)相比，此等資料進一步證明，AGT之肝臟特異性靜默係有效者並因此提供改善之腎安全性。AD-85481之作動持續時間延長進一步優於當前之治療劑，蓋因其可提供連續且持久之血壓響應、削弱晝間BP變動並且增強依從性，因為需要不頻繁之投藥並存在總體藥丸量負擔之減低。
等效物
彼等熟識本領域者應知悉或能夠僅使用常規實驗來探明本文所揭示之具體態樣及方法的多種等效物。此類等效物擬涵蓋於下列申請專利範圍之範疇內。
<110> 美商阿尼拉製藥公司(ALNYLAM PHARMACEUTICALS,INC.)
<120> 用於治療血管收縮素原相關病症方法及組成物(METHODS AND COMPOSITIONS FOR TREATING AN ANGIOTENSINOGEN-(AGT-)ASSOCIATED DISORDER)
<130> 121301-11120
<140>
<141>
<150> 63/017,854
<151> 2020-04-30
<150> 62/934,695
<151> 2019-11-13
<160> 16
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 2587
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 1
Figure 109138855-A0202-12-0211-191
Figure 109138855-A0202-12-0212-192
Figure 109138855-A0202-12-0213-193
<210> 2
<211> 2587
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 2
Figure 109138855-A0202-12-0213-194
Figure 109138855-A0202-12-0214-195
<210> 3
<211> 1834
<212> DNA
<213> 食蟹獼猴(Macaca fascicularis)
<400> 3
Figure 109138855-A0202-12-0215-196
Figure 109138855-A0202-12-0216-197
<210> 4
<211> 1834
<212> DNA
<213> 食蟹獼猴(Macaca fascicularis)
<400> 4
Figure 109138855-A0202-12-0216-198
Figure 109138855-A0202-12-0217-199
<210> 5
<211> 1856
<212> DNA
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 5
Figure 109138855-A0202-12-0217-200
Figure 109138855-A0202-12-0218-201
<210> 6
<211> 1856
<212> DNA
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 6
Figure 109138855-A0202-12-0218-202
Figure 109138855-A0202-12-0219-203
Figure 109138855-A0202-12-0220-204
<210> 7
<211> 1958
<212> DNA
<213> 大鼠(Rattus norvegicus)
<400> 7
Figure 109138855-A0202-12-0220-205
Figure 109138855-A0202-12-0221-206
<210> 8
<211> 1958
<212> DNA
<213> 大鼠(Rattus norvegicus)
<400> 8
Figure 109138855-A0202-12-0221-207
Figure 109138855-A0202-12-0222-208
<210> 9
<211> 23
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=〞人工序列的敘述：合成的寡核苷酸〞
<400> 9
Figure 109138855-A0202-12-0223-209
<210> 10
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=〞人工序列的敘述：合成的寡核苷酸〞
<400> 10
Figure 109138855-A0202-12-0223-210
<210> 11
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=〞人工序列的敘述：合成的寡核苷酸〞
<220>
<221> 來源
<223> /註=〞組合的DNA/RNA分子的敘述：合成的寡核苷酸〞
<400> 11
Figure 109138855-A0202-12-0223-211
<210> 12
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<221> 來源
<223> /註=〞人工序列的敘述：合成的寡核苷酸〞
<400> 12
Figure 109138855-A0202-12-0223-212
<210> 13
<211> 16
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<221> 來源
<223> /註=〞未知的敘述：RFGF肽〞
<400> 13
Figure 109138855-A0202-12-0224-213
<210> 14
<211> 11
<212> PRT
<213> 未知
<220>
<221> 來源
<223> /註=〞未知的敘述：RFGF類似肽〞
<400> 14
Figure 109138855-A0202-12-0224-214
<210> 15
<211> 13
<212> PRT
<213> 人類免疫不全病毒(Human immunodeficiency virus)
<400> 15
Figure 109138855-A0202-12-0224-215
<210> 16
<211> 16
<212> PRT
<213> 果蠅(Drosophila sp.)
<400> 16
Figure 109138855-A0202-12-0224-216

Claims (97)

  1. 一種抑制受試者血管收縮素原(AGT)基因之表現的方法，該方法包括向該受試者給藥約50mg至約800mg之固定劑量的雙股核酸(RNAi)劑或其鹽，
    其中，該雙股RNAi劑或其鹽包含形成雙股區域之正義股及反義股，
    其中，該反義股包含具有核苷酸序列UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(SEQ ID NO：9)之至少19個接續核苷酸的核苷酸序列，以及該正義股包含具有核苷酸序列GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(SEQ ID NO：10)之至少19個接續核苷酸的核苷酸序列；
    其中，該雙股RNAi劑或其鹽包含至少一個經修飾之核苷酸；以及
    其中，該核苷酸之修飾的至少一者係熱去安定化核苷酸修飾，從而抑制該受試者體內之AGT基因的表現。
  2. 一種治療將受益於血管收縮素原(AGT)表現減低之受試者的方法，該方法包括向該受試者給藥約50mg至約800mg之固定劑量的雙股核酸(RNAi)劑或其鹽，
    其中，該雙股RNAi劑或其鹽包含形成雙股區域之正義股及反義股，
    其中，該反義股包含具有核苷酸序列UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(SEQ ID NO：9)之至少19個接續核苷酸的核苷酸序列，以及該正義股包含具有核苷酸序列GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(SEQ ID NO：10)之至少19個接續核苷酸的核苷酸序列；
    其中，該雙股RNAi劑或其鹽包含至少一個經修飾之核苷酸；以及
    其中，該核苷酸之修飾的至少一者係熱去安定化核苷酸修飾，從而治療該將受益於AGT表現減低之受試者。
  3. 一種治療患有血管收縮素原(AGT)相關疾患之受試者的方法，該方法包括向該受試者給藥約50mg至約800mg之固定劑量的雙股核酸(RNAi)劑或其鹽，
    其中，該雙股RNAi劑或其鹽包含形成雙股區域之一正義股及一反義股，
    其中，該反義股包含具有核苷酸序列UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(SEQ ID NO：9)之至少19個接續核苷酸的核苷酸序列，以及該正義股包含具有核苷酸序列GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(SEQ ID NO：10)之至少19個接續核苷酸的核苷酸序列；
    其中，該雙股RNAi劑或其鹽包含至少一個經修飾之核苷酸；
    其中，該核苷酸之修飾的至少一者係熱去安定化核苷酸修飾，從而治療患有AGT相關疾患之受試者。
  4. 一種降低受試者血壓量級的方法，該方法包括向該受試者給藥約50mg至約800mg之固定劑量的雙股核酸(RNAi)劑或其鹽，
    其中，該雙股RNAi劑或其鹽包含形成雙股區域之正義股及反義股，
    其中，該反義股包含具有核苷酸序列UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(SEQ ID NO：9)之至少19個接續核苷酸的核苷酸序列，以及該正義股包含具有核苷酸序列 GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(SEQ ID NO：10)之至少19個接續核苷酸的核苷酸序列；
    其中，該雙股RNAi劑或其鹽包含至少一個經修飾之核苷酸；
    其中，該核苷酸之修飾的至少一者係熱去安定化核苷酸修飾，從而降低該受試者之血壓量級。
  5. 如請求項1至4中任一項所述之方法，其中，該固定劑量係以每個月一次之間隔給藥至受試者。
  6. 如請求項1至4中任一項所述之方法，其中，該固定劑量係以每六個月一次之間隔給藥至受試者。
  7. 如請求項1至4中任一項所述之方法，其中，該固定劑量係以每六個月一次之間隔給藥至受試者。
  8. 如請求項1至7中任一項所述之方法，其中，該固定劑量係約50mg至約200mg。
  9. 如請求項1至7中任一項所述之方法，其中，該固定劑量係約200mg至約400mg。
  10. 如請求項1至7中任一項所述之方法，其中，該固定劑量係約400mg至約800mg。
  11. 如請求項1至7中任一項所述之方法，其中，該固定劑量係約100mg。
  12. 如請求項1至7中任一項所述之方法，其中，該固定劑量係約200mg。
  13. 如請求項1至7中任一項所述之方法，其中，該固定劑量係約300mg。
  14. 如請求項1至7中任一項所述之方法，其中，該固定劑量係約400mg。
  15. 如請求項1至7中任一項所述之方法，其中，該固定劑量係約500mg。
  16. 如請求項1至7中任一項所述之方法，其中，該固定劑量係約600mg。
  17. 如請求項1至7中任一項所述之方法，其中，該固定劑量係約700或800mg。
  18. 如請求項1至17中任一項所述之方法，其中，該雙股RNAi劑或其鹽係經皮下或靜脈內給藥至受試者。
  19. 如請求項18所述之方法，其中，該皮下給藥係皮下注射。
  20. 如請求項18所述之方法，其中，該靜脈內給藥係靜脈內注射。
  21. 如請求項1至20中任一項所述之方法，其中，該反義股包含具有核苷酸序列UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(SEQ ID NO：9)之至少20個接續核苷酸的核苷酸序列，以及該正義股包含具有核苷酸序列GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(SEQ ID NO：10)之至少20個接續核苷酸的核苷酸序列。
  22. 如請求項1至21中任一項所述之方法，其中，該反義股包含具有核苷酸序列UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(SEQ ID NO： 9)之至少21個接續核苷酸的核苷酸序列，以及該正義股包含具有核苷酸序列GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(SEQ ID NO：10)之至少20個接續核苷酸的核苷酸序列。
  23. 如請求項1至22中任一項所述之方法，其中，該反義股包含具有核苷酸序列UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(SEQ ID NO：9)之至少22個接續核苷酸的核苷酸序列，以及該正義股包含具有核苷酸序列GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(SEQ ID NO：10)之至少20個接續核苷酸的核苷酸序列。
  24. 如請求項1至23中任一項所述之方法，其中，該反義股包含核苷酸序列UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(SEQ ID NO：9)，以及該正義股包含核苷酸序列GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(SEQ ID NO：10)。
  25. 如請求項1至24中任一項所述之方法，其中，該反義股由核苷酸序列UGUACUCUCAUUGUGGAUGACGA(SEQ ID NO：9)組成，以及該正義股由核苷酸序列GUCAUCCACAAUGAGAGUACA(SEQ ID NO：10)組成。
  26. 如請求項1至25中任一項所述之方法，其中，該正義股之實質上全部之核苷酸係經修飾之核苷酸。
  27. 如請求項1至25中任一項所述之方法，其中，該反義股之實質上全部之核苷酸係經修飾之核苷酸。
  28. 如請求項1至25中任一項所述之方法，其中，該正義股之全部核苷酸係經修飾之核苷酸。
  29. 如請求項1至25中任一項所述之方法，其中，該反義股之全部核苷酸係經修飾之核苷酸。
  30. 如請求項1至29中任一項所述之方法，其中，該核苷酸修飾之至少一者選自由下列所成群組：脫氧核苷酸、3’-端脫氧胸腺嘧啶(dT)核苷酸、2'-O-甲基修飾之核苷酸、2'-氟修飾之核苷酸、2'-脫氧修飾之核苷酸、鎖定之核苷酸、未鎖定之核苷酸、構形限定之核苷酸、約束之乙基核苷酸、無鹼基之核苷酸、2’-胺基修飾之核苷酸、2’-O-烯丙基修飾之核苷酸、2’-C-烷基修飾之核苷酸、2’-羥基修飾之核苷酸、2’-甲氧基乙基修飾之核苷酸、2’-O-烷基修飾之核苷酸、N-嗎啉基核苷酸、胺基磷酸酯、包含非天然鹼基之核苷酸、四氫呋喃修飾之核苷酸、1,5-失水己糖醇修飾之核苷酸、環己基修飾之核苷酸、包含硫代磷酸酯基團之核苷酸、包含甲基膦酸酯基團之核苷酸、包含5’-磷酸酯之核苷酸、包含5’-磷酸酯模擬物之核苷酸、熱去安定化之核苷酸、二醇修飾之核苷酸(GNA)、及2-O-(N-甲基丙烯醯胺)修飾之核苷酸；及其組合。
  31. 如請求項30所述之方法，其中，該核苷酸修飾之至少一者選自由下列所成群組：脫氧核苷酸、2’-O-甲基修飾之核苷酸、2’-氟修飾之核苷酸、2’-脫氧修飾之核苷酸、二醇修飾之核苷酸(GNA)以及2-O-(N-甲基乙醯胺)修飾之核苷酸；及其組合。
  32. 如請求項1至31中任一項所述之方法，其中，該雙股區域係19至23個核苷酸對之長度，19至21個核苷酸對之長度，21至23個核苷酸對之長度，或21個核苷酸對之長度。
  33. 如請求項1至32中任一項所述之方法，其中，每一股係19至23個核苷酸之長度，19至25個核苷酸之長度，或19至23個核苷酸之長度。
  34. 如請求項33所述之方法，其中，該正義股係21個核苷酸之長度，以及該反義股係23個核苷酸之長度。
  35. 如請求項1至34中任一項所述之方法，其中，至少一股包含具有至少1個核苷酸之3’突出或具有至少2個核苷酸之3’突出。
  36. 如請求項1至35中任一項所述之方法，其中，該雙股RNAi劑或其鹽復包含至少一個硫代磷酸酯類或甲基膦酸酯類核苷酸間鏈結。
  37. 如請求項36所述之方法，其中，該硫代磷酸酯類或甲基膦酸酯類核苷酸間鏈結位於一股之3’-末端。
  38. 如請求項37所述之方法，其中，該股係反義股。
  39. 如請求項37所述之方法，其中，該股係正義股。
  40. 如請求項36所述之方法，其中，該硫代磷酸酯類或甲基膦酸酯類核苷酸間鏈結位於一股之5’-末端。
  41. 如請求項40所述之方法，其中，該股係反義股。
  42. 如請求項40所述之方法，其中，該股係正義股。
  43. 如請求項36所述之方法，其中，該硫代磷酸酯類或甲基膦酸酯類核苷酸間鏈結位於一股之5’-末端及3’-末端兩處。
  44. 如請求項43所述之方法，其中，該股係反義股。
  45. 一種抑制受試者血管收縮素原(AGT)基因之表現的方法，該方法包括向該受試者給藥約50mg至約800mg之固定劑量的雙股核酸(RNAi)劑或其鹽，
    其中，該雙股RNAi劑或其鹽包含形成雙股區域之正義股及反義股，
    其中，該反義股包含具有經修飾之核苷酸序列usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(SEQ ID NO：11)之至少19個接續核苷酸的經修飾之核苷酸序列，以及該正義股包含具有經修飾之核苷酸序列gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(SEQ ID NO：12)之至少19個接續核苷酸的經修飾之核苷酸序列；
    其中，a係2'-O-甲基腺苷-3’-磷酸酯，c係2’-O-甲基胞苷-3’-磷酸酯，g係2’-O-甲基鳥苷-3’-磷酸酯，u係2’-O-甲基尿苷-3’-磷酸酯，Af係2’-氟腺苷-3’-磷酸酯，Cf係2’-氟胞苷-3’-磷酸酯，Gf係2’-氟鳥苷-3’-磷酸酯，Uf係2’-氟腺苷-3’-磷酸酯，(Tgn)係胸腺嘧啶-二醇核酸(GNA)S-異構物，以及s係硫代磷酸酯鏈結，從而抑制受試者之AGT基因之表現。
  46. 一種治療將受益於AGT表現減低之受試者的方法，該方法包括向該受試者給藥約50mg至約800mg之固定劑量的雙股核酸(RNAi)劑或其鹽，
    其中，該雙股RNAi劑或其鹽包含形成雙股區域之一正義股及一反義股，
    其中，該反義股包含具有經修飾之核苷酸序列usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(SEQ ID NO：11)之至少19個接續核苷酸的經修飾之核苷酸序列，以及該正義股包含具有經修飾之核苷酸序列 gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(SEQ ID NO：12)之至少19個接續核苷酸的經修飾之核苷酸序列；
    其中，a係2'-O-甲基腺苷-3’-磷酸酯，c係2’-O-甲基胞苷-3’-磷酸酯，g係2’-O-甲基鳥苷-3’-磷酸酯，u係2’-O-甲基尿苷-3’-磷酸酯，Af係2’-氟腺苷-3’-磷酸酯，Cf係2’-氟胞苷-3’-磷酸酯，Gf係2’-氟鳥苷-3’-磷酸酯，Uf係2’-氟腺苷-3’-磷酸酯，(Tgn)係胸腺嘧啶-二醇核酸(GNA)S-異構物，以及s係硫代磷酸酯鏈結，從而治療將受益於AGT表現減低之受試者。
  47. 一種治療患有AGT相關疾患之受試者的方法，該方法包括向該受試者給藥約50mg至約800mg之固定劑量的雙股核酸(RNAi)劑或其鹽，
    其中，該雙股RNAi劑或其鹽包含形成雙股區域之正義股及反義股，
    其中，該反義股包含具有經修飾之核苷酸序列usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(SEQ ID NO：11)之至少19個接續核苷酸的經修飾之核苷酸序列，以及該正義股包含具有經修飾之核苷酸序列gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(SEQ ID NO：12)之至少19個接續核苷酸的經修飾之核苷酸序列；
    其中，a係2'-O-甲基腺苷-3’-磷酸酯，c係2’-O-甲基胞苷-3’-磷酸酯，g係2’-O-甲基鳥苷-3’-磷酸酯，u係2’-O-甲基尿苷-3’-磷酸酯，Af係2’-氟腺苷-3’-磷酸酯，Cf係2’-氟胞苷-3’-磷酸酯，Gf係2’-氟鳥苷-3’-磷酸酯，Uf係2’-氟腺苷-3’-磷酸酯，(Tgn)係胸腺嘧啶-二醇核酸(GNA)S-異構物，以及s係硫代磷酸酯鏈結，從而治療患有AGT相關疾患之受試者。
  48. 一種降低受試者血壓量級的方法，該方法包括向該受試者給藥約50mg至約800mg之固定劑量的雙股核酸(RNAi)劑或其鹽，
    其中，該雙股RNAi劑或其鹽包含形成雙股區域之正義股及反義股，
    其中，該反義股包含具有經修飾之核苷酸序列usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(SEQ ID NO：11)之至少19個接續核苷酸的經修飾之核苷酸序列，以及該正義股包含具有經修飾之核苷酸序列gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(SEQ ID NO：12)之至少19個接續核苷酸的經修飾之核苷酸序列；
    其中，a係2'-O-甲基腺苷-3’-磷酸酯，c係2’-O-甲基胞苷-3’-磷酸酯，g係2’-O-甲基鳥苷-3’-磷酸酯，u係2’-O-甲基尿苷-3’-磷酸酯，Af係2’-氟腺苷-3’-磷酸酯，Cf係2’-氟胞苷-3’-磷酸酯，Gf係2’-氟鳥苷-3’-磷酸酯，Uf係2’-氟腺苷-3’-磷酸酯，(Tgn)係胸腺嘧啶-二醇核酸(GNA)S-異構物，以及s係硫代磷酸酯鏈結，從而降低受試者之血壓量級。
  49. 如請求項45至48中任一項所述之方法，其中，該固定劑量係以每個月一次之間隔給藥至受試者。
  50. 如請求項45至48中任一項所述之方法，其中，該固定劑量係以每3個月一次之間隔給藥至受試者。
  51. 如請求項45至48中任一項所述之方法，其中，該固定劑量係以每六個月一次之間隔給藥至受試者。
  52. 如請求項45至51中任一項所述之方法，其中，該固定劑量係約50mg至約200mg。
  53. 如請求項45至51中任一項所述之方法，其中，該固定劑量係約200mg至約400mg。
  54. 如請求項45至51中任一項所述之方法，其中，該固定劑量係約400mg至約800mg。
  55. 如請求項45至51項中任一項所述之方法，其中，該固定劑量係約100mg。
  56. 如請求項45至51中任一項所述之方法，其中，該固定劑量係約200mg。
  57. 如請求項45至51中任一項所述之方法，其中，該固定劑量係約300mg。
  58. 如請求項45至51中任一項所述之方法，其中，該固定劑量係約400mg。
  59. 如請求項45至51中任一項所述之方法，其中，該固定劑量係約500mg。
  60. 如請求項45至51中任一項所述之方法，其中，該固定劑量係約600mg。
  61. 如請求項45至51中任一項所述之方法，其中，該固定劑量係約700或800mg。
  62. 如請求項45至61中任一項所述之方法，其中，該雙股RNAi劑或其鹽係經皮下或靜脈內給藥至受試者。
  63. 如請求項62所述之方法，其中，該皮下給藥係皮下注射。
  64. 如請求項62所述之方法，其中，該靜脈內給藥係靜脈內注射。
  65. 如請求項45至64中任一項所述之方法，其中，該反義股包含具有經修飾之核苷酸序列usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(SEQ ID NO：11)之至少20個接續核苷酸的經修飾之核苷酸序列，以及該正義股包含具有經修飾之核苷酸序列gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(SEQ ID NO：12)之至少20個接續核苷酸的經修飾之核苷酸序列。
  66. 如請求項45至65中任一項所述之方法，其中，該反義股包含具有經修飾之核苷酸序列usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(SEQ ID NO：11)之至少21個接續核苷酸的經修飾之核苷酸序列，以及該正義股包含具有經修飾之核苷酸序列gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(SEQ ID NO：12)之至少20個接續核苷酸的經修飾之核苷酸序列。
  67. 如請求項45至66中任一項所述之方法，其中，該反義股包含具有經修飾之核苷酸序列usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(SEQ ID NO：11)之至少22個接續核苷酸的經修飾之核苷酸序列，以及該正義股包含具有經修飾之核苷酸序列gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(SEQ ID NO：12)之至少20個接續核苷酸的經修飾之核苷酸序列。
  68. 如請求項45至67中任一項所述之方法，其中，該反義股包含經修飾之核苷酸序列usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(SEQ ID NO：11)，以及該正義股包含經修飾之核苷酸序列gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(SEQ ID NO：12)。
  69. 如請求項45至68中任一項所述之方法，其中，該反義股由經修飾之核苷酸序列usGfsuac(Tgn)cucauugUfgGfaugacsgsa(SEQ ID NO：11)組成，以及該正義股由經修飾之核苷酸序列gsuscaucCfaCfAfAfugagaguaca(SEQ ID NO：12)組成。
  70. 如請求項45至69中任一項所述之方法，其中，該雙股RNAi劑或其鹽復包含配位子。
  71. 如請求項70所述之方法，其中，該配位子接合至該正義股的3’端。
  72. 如請求項70或71所述之方法，其中，該配位子係N-乙醯基半乳胺糖(GalNAc)衍生物。
  73. 如請求項72所述之方法，其中，該GalNAc衍生物包含經由單價、二價或三價分支鏈之鏈結子附接的一個或多個GalNAc衍生物。
  74. 如請求項72所述之方法，其中，該配位子係
    Figure 109138855-A0202-13-0013-222
  75. 如請求項74所述之方法，其中，該正義股之3’端接合至如下述式中所示之配位子
    Figure 109138855-A0202-13-0014-218
    ，以及，其中，X係O或S，或者，其中，X係O。
  76. 如請求項1至4及45至48中任一項所述之方法，其中，該受試者係人。
  77. 如請求項76所述之方法，其中，該受試者具有至少130mm Hg之收縮壓或至少80mm Hg之舒張壓。
  78. 如請求項76所述之方法，其中，該受試者具有至少140mm Hg之收縮壓或至少80mm Hg之舒張壓。
  79. 如請求項1至4及45至48中任一項所述之方法，其中，該受試者係易受鹽敏感度影響、超重、肥胖、妊娠、備孕、患有第2型糖尿病、患有第1型糖尿病或腎功能減退之群組的一部分。
  80. 如請求項2或46所述之方法，其中，該將受益於AGT表現減低之疾患係AGT相關疾患。
  81. 如請求項3、47或80所述之方法，其中，該AGT相關疾患選自由下列所成群組：血壓偏高、高血壓、臨界性高血壓、原發性高血壓、繼發性高血壓、孤立性收縮期或舒張期高血壓、妊娠相關高血壓、糖尿病性高血壓、阻抗性高血壓、難治性高血壓、陣發性高血壓、腎血管 性高血壓、Goldblatt氏高血壓、眼性高血壓、青光眼、肺性高血壓、門靜脈高血壓、全身性靜脈高血壓、收縮期高血壓、底線性高血壓、高血壓性心臟病、高血壓腎病變、動脈粥樣硬化、動脈硬化、血管病變、糖尿病腎病變、糖尿病視網膜病變、慢性心衰竭、心肌病、糖尿病性心肌病、夜間低血壓、腎小球硬化、主動脈狹窄、主動脈動脈瘤、心室纖維化、心衰竭、心肌梗塞、心絞痛、中風、腎病、腎衰竭、全身性硬化症、宮內生長遲緩(IUGR)、胎兒生長遲緩、肥胖、肝脂肪變性/脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、葡萄糖失耐、第2型糖尿病、以及代謝症候群。
  82. 如請求項4或48所述之方法，其中，該血壓包含收縮壓及/或舒張壓。
  83. 如請求項1至4及45至48中任一項所述之方法，其中，該方法導致AGT表現下降至少30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或95%。
  84. 如請求項83所述之方法，其中，該受試者之血液或血清樣品中之AGT蛋白質量級下降至少30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或95%。
  85. 如請求項1至4及45至48所述之方法，其中，該方法導致收縮壓及/或舒張壓下降。
  86. 如請求項85所述之方法，其中，該收縮壓及/或舒張壓下降至少4mmHg、5mmHg、6mmHg、7mmHg、8mmHg、9mmHg或10mmHg。
  87. 如請求項1至86中任一項所述之方法，復包括將用於治療高血壓之附加治療劑給藥至受試者。
  88. 如請求項87所述之方法，其中，該附加治療劑選自由下列所成群組：利尿劑、血管收縮素轉化酶(ACE)抑制劑、血管收縮素II受體拮抗劑、β-阻斷劑、血管舒張劑、鈣通道阻斷劑、醛固酮拮抗劑、α2-促效劑、腎素抑制劑、α-阻斷劑、周圍作動腎上腺素劑、選擇性D1受體部分促效劑、非選擇性α-腎上腺素拮抗劑、合成物、類固醇性抗鹽皮質類固醇劑、前述者之任何組合、以及配製為多種劑之組合的高血壓治療劑。
  89. 如請求項87所述之方法，其中，該附加治療劑包含血管收縮素II受體拮抗劑。
  90. 如請求項89所述之方法，其中，該血管收縮素II受體拮抗劑選自由下列所成群組：洛沙坦、纈沙坦、奧美沙坦、依普沙坦及阿齊沙坦。
  91. 如請求項1至4及45至48中任一項所述之方法，其中，該RNAi劑或其鹽係於醫藥組成物中給藥。
  92. 如請求項91所述之方法，其中，該RNAi劑或其鹽係於非緩衝溶液中給藥。
  93. 如請求項92所述之方法，其中，該非緩衝溶液係鹽水或水。
  94. 如請求項91所述之方法，其中，該RNAi劑或其鹽係於緩衝溶液中給藥。
  95. 如請求項94所述之方法，其中，該緩衝溶液包含醋酸鹽、枸櫞酸鹽、醇溶榖蛋白、碳酸鹽、或磷酸鹽、或其組合。
  96. 如請求項95所述之方法，其中，該緩衝溶液係磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)。
  97. 一種用於施行如請求項1至4及45至48中任一項所述之方法的套組，包含
    a)該RNAi劑或其鹽，以及
    b)使用說明書，以及
    c)視需要，用於將該RNAi劑或其鹽給藥至受試者之裝置。
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