TW202123960A - Pcsk9拮抗劑化合物 - Google Patents
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Abstract
本發明揭示式 A
化合物或其醫藥學上可接受之鹽：
其中A、X、R1
及R2
如本文所定義，該等化合物具有拮抗PCSK9之特性。亦描述包含式I化合物或其鹽之醫藥調配物，以及治療與PCSK9活性相關之心血管疾病及病狀的方法，該心血管疾病及病狀係例如動脈粥樣硬化、高膽固醇血症、冠心病、代謝症候群、急性冠狀動脈症候群或相關心血管疾病及心血管代謝病狀。
Description
對有效治療心血管病痛之化合物及/或試劑之鑑別為高度符合需要的。在臨床試驗中，LDL膽固醇含量之降低已經直接與冠狀動脈事件之比率相關；Law等人, 2003BMJ
326:1423-1427。血漿LDL膽固醇含量之適度終身降低經發現與冠狀動脈事件之發生率的實質性降低相關；Cohen等人, 2006N. Engl. J. Med.
354:1264-1272。甚至在具有高發病率之非脂質相關心血管風險因子之群體中，情況亦如此；同前文獻。因此，對LDL膽固醇含量進行管理控制將獲得較大益處。
亦被稱作神經細胞凋亡調節轉化酶1 (「NARC-1」)之前蛋白轉化酶枯草桿菌蛋白酶-克新(kexin) 9型(下文稱作「PCSK9」)為一種經鑑別為分泌性枯草桿菌酶家族之第9成員的蛋白酶K類枯草桿菌酶；參見Seidah等人, 2003PNAS
100:928-933。PCSK9屬於絲胺酸蛋白酶之哺乳動物前蛋白轉化酶家族，且含有N端信號序列、前域、催化域及C端域；參見Seidah等人, 2012Nat. Rev. Drug Discov.
11:367-383。對PCSK9轉錄調節之研究表明，其藉由固醇調節元件-結合蛋白(「SREBP」)調節，如涉及膽固醇代謝之其他基因所見；Maxwell等人, 2003J. Lipid Res.
44:2109-2119，如涉及脂蛋白代謝之其他基因之典型情況；Dubuc等人, 2004Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol.
24:1454-1459。斯他汀(statin)已展現出以歸因於藥物之膽固醇降低效果的方式上調PCSK9表現；同前文獻。此外，已顯示PCSK9啟動子擁有涉及膽固醇調節之兩個保守位點，固醇調節元件及Sp1位點；同前文獻。
當在內質網中時，PCSK9以其僅有催化活性在殘基Gln-152與Ser-153之間執行自裂解；參見Naureckiene等人, 2003Arch. Biochem. Biophys.
420:55-67；Seidah等人, 2003Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A.
100:928-933。在隨後經由反式高爾基體網絡運輸期間，前域保持與催化域緊密相關聯。已表明，經由自裂解陳化對於PCSK9分泌及後續細胞外功能至關重要(參見Benjannet等人, 2012J. Biol. Chem.
287:33745-33755)。因此，若干條證據表明，PCSK9尤其降低肝LDLR蛋白的量，且因此損害肝臟自循環移除LDL膽固醇之能力。
PCSK9在小鼠肝臟中之腺病毒介導之過度表現由於肝LDLR蛋白之大量損失而導致循環LDL-C之積聚，其對LDLR mRNA含量無影響；Benjannet等人, 2004J. Biol. Chem.
279:48865-48875；Maxwell與Breslow, 2004PNAS
101:7100-7105；Park等人, 2004J. Biol. Chem.
279:50630-50638；及Lalanne等人, 2005J. Lipid Res.
46:1312-1319。PCSK9過度表現對升高小鼠體內之循環LDL-C含量的影響完全視LDLR之表現而定，此再次表明PCSK9對LDL-C之調節係經由LDLR蛋白之下調所介導。與此等發現一致，缺乏PCSK9或其中PCSK9 mRNA已藉由反義寡核苷酸抑制劑減少之小鼠具有較高含量之肝LDLR蛋白及較大的清除循環LDL-C之能力；Rashid等人, 2005PNAS
102:5374-5379；及Graham等人, 2007J. Lipid Res.
48(4):763-767。另外，藉由siRNA降低所培養人類肝細胞中之PCSK9含量亦產生較高LDLR蛋白含量及增加的吸收LDL-C之能力；Benjannet等人, 2004J. Biol. Chem.
279:48865-48875；及Lalanne等人, 2005J. Lipid Res.
46:1312-1319。總之，此等資料表明PCSK9作用藉由降低LDLR蛋白含量來引起LDL-C增加。
基因PCSK9中之突變之數目亦已確鑿地與體染色體顯性高膽固醇血症(「ADH」)相關聯，該體染色體顯性高膽固醇血症為一種由血漿中之低密度脂蛋白(「LDL」)粒子顯著升高表徵之遺傳性代謝病症，其可導致過早心血管衰竭；參見Abifadel等人, 2003Nature Genetics
34:154-156；Timms等人, 2004Hum. Genet.
114:349-353；Leren, 2004Clin. Genet.
65:419-422。據Abifadel等人之後公開的對S127R突變之研究(同前文獻)報導，攜載此突變之患者血漿中呈現較高總膽固醇及apoB100，此係歸因於(1)諸如低密度脂蛋白(「LDL」)、極低密度脂蛋白(「VLDL」)及中等密度脂蛋白(「IDL」)之含apoB100脂蛋白之過度產生，及(2)該等脂蛋白之清除或轉化之相關聯減少；Ouguerram等人, 2004Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol.
24:1448-1453。
因此，可毋庸置疑，PCSK9起調節LDL之作用。PCSK9之表現或上調與LDL膽固醇之血漿含量增加相關聯，且PCSK9之表現的對應抑制或缺失與LDL膽固醇血漿含量降低相關聯。已發現，與PCSK9之序列變異相關聯的LDL膽固醇含量降低對冠心病具有保護作用；Cohen，2006N. Engl. J. Med.
354:1264-1272。
因此，對有效治療心血管病痛之化合物及/或試劑之鑑別為高度符合需要的，包括PCSK9在LDL調節中之拮抗作用。一般而言，由於PCSK9在血液中循環且對細胞表面LDL受體具有適當的結合親和力，因此利用此機制來治療與高血清LDL含量有關之疾病的先前嘗試集中於使用大生物分子，例如抗體。因此，鮮有反映針對使用小肽或小分子來抑制PCSK9之此目標之活性的公開案，參見例如Zhang等人, 2014 J. Biol. Chemistry, 289(2): 942-955。此外，存在極小量之化合物，該等化合物能夠調配成利用經口投與途徑來給予此類化合物之劑型，該途徑將高度適用於對其中PCSK9之活性調節可發揮作用之病狀提供療法。
本發明藉由提供PCSK9之拮抗劑而推進此等利益，咸信該等拮抗劑具有用於抑制PCSK9之活性的用途以及PCSK9在各種病狀(其中PCSK9拮抗劑之投與提供療法)中所起的對應作用。本發明之化合物相比於2019年6月20日申請之共同未決申請案PCT/US19/38155中之化合物已經最佳化以提供增加之半衰期。本發明之化合物相比於該共同未決申請案之化合物亦具有改良的藥物動力學概況及延長的藥物作用。
在一個態樣中，本發明提供一種式 A
化合物：
其中：
X為H、F、Cl或Br；
R獨立地選自H或C1-6
烷基；
Ra
獨立地選自H、-CR2
-S(O)2
OR9
或-C(O)OR9
；
Rb
獨立地選自H、C1-6
烷基或C1-6
烷基-N+
(CH3
)2
；
Rd
獨立地選自H或-C(O)OR9
；
R1
係選自：
(a) -H，
(b) C1-6
烷基，
(c) -(CR2
)z
-NRb
-C(O)R10
，及
(d) -(CR2
)z
-NR-C(O)-(CR2
)z
[O(CR2
)n
]r
-N+
(CH3
)3
；
R2
係選自：
(a) -H，
(b) C1-6
烷基，
(c) -(CR2
)z
-NRb
-C(O)R10
，及
(d) -(CR2
)z
-NR-C(O)-(CR2
)z
[O(CR2
)n
]r
-N+
(CH3
)3
；
其限制條件為R1
及R2
中之至少一者為-(CR2
)z
-NRb
-C(O)R10
；
R4
為
；
R5
獨立地選自-(CRa 2
)x
-、-(CRa 2
)x
O(CRa 2
)x
-及C1-8
烷基；
R6
獨立地選自-(CRa 2
)x
NRC(O)-、-(CR2
)x
NRS(O)2
-及-(CRa 2
)n
O(CRa 2
)q
NRC(O)-；
R9
獨立地選自H或C1-6
烷基；
R10
獨立地選自：
a) -(R5
-N+
(CH3
)2
-R6
)u
-(R20
)n
-(R6
)m
-R12
，
b) -(R20
)n
-(R6
)m
-R5
-N+
(CH3
)2
-R6
-R12
，
c) -(R20
)n
-R5
-N+
(CH3
)2
-(R20
)s
-(R6
)q
-R12
，
d) -R6
-R20
-N+
(CH3
)2
-(R20
)n
-(R6
)m
-R12
，
e) -R20
-N+
(CH3
)2
-(R6
)m
-(R20
)n
-(R6
)q
-R12
，
f) -(R20
)n
-(R6
)m
-R12
，
g) -R5
-N+
(CH3
)2
-(R20
)n
-(R6
)m
-R5
-[NRC(O)-R5
]q
，
h) -R20
-N+
(CH3
)2
-(R6
)m
-R5
，
i) -R5
-N+
(CH3
)2
-(R20
)n
-(R6
)m
-R5
，
j) -R5
-N+
(CH3
)2
-(R20
)n
-(R6
)m
-R12
，
k) -(R20
)n
-N+
(CH3
)2
-(R20
)n
-(R6
)q
-R12
，
l) -R6
-R5
-N+
(CH3
)2
-(R20
)n
-(R6
)q
-R12
，
m) -(R20
)n
-N+
(CH3
)2
-(R6
)q
-R12
，
n) -(R20
)n
-(R6
)m
-R20
-N+
(CH3
)2
-(R20
)s
-(R6
)q
-R12
，
o) -R20
-N+
(CH3
)2
-(R6
)m
-R4
，
p) -(R20
)n
-N+
(CH3
)2
-(R6
)q
-(R20
)n
-(R6
)m
-R12
，
q) -R20
-N+
(CH3
)2
-(R6
)m
-(R20
)n
-N+
(CH3
)2
-(R20
)n
-(R6
)q
-R12
，
r) -R5
-N+
(CH3
)2
-(R6
)m
-R5
-N+
(CH3
)2
-(R20
)n
-(R6
)q
-R12
，及
s) -CRb 2
-(R20
)n
-(R6
)m
-R12
；
R12
獨立地選自-C11-20
烷基-Rd
、-(CR2
)x
-O-(CR2
)x
-Rd
、-C11-20
烷基-C(O)NR-(CRd 2
)2
H及C2-16
烯基；
R20
獨立地選自
a) -(CRa 2
)t
O(CRa 2
)q
O-(CRa 2
)t
-，
b) -(CRa 2
)t
O(CRa 2
)q
O-(CRa 2
)t
-NRC(O)-，
c) -(CRa 2
)t
O(CRa 2
)q
-NRC(O)-(CRa 2
)n
O(CRa 2
)n
O-，
d) -(CRa 2
)t
-NRC(O)-(CRa 2
)q
O(CRa 2
)q
O-(CRa 2
)t
-，
e) -(CRa 2
)t
O(CRa 2
)q
O-(CRa 2
)t
-，及
f) -(CRa 2
)t
-O-(CRa 2
)q
O(CRa 2
)q
O-(CRa 2
)t
-；A
係選自C2-6
烷基或C2-6
烯基；
m獨立地選自0、1、2、3或4；
n獨立地選自1、2或3；
q獨立地選自1、2、3或4；
r獨立地選自0、1、2、3或4；
s獨立地選自0、1、2或3；
t獨立地選自0、1、2或3；
u為1或2；
x獨立地選自1、2、3、4、5、6、7或8；
z獨立地選自1、2、3、4、5或6；
或其任一者之醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種式A化合物，其中X
為F，或其任一者之醫藥學上可接受之鹽。
在一個實施例中，本發明提供包含本發明化合物(例如式A化合物)及至少一種醫藥賦形劑之醫藥組合物，較佳為針對經口投與之組合物。
在另一態樣中，本發明提供一種式 I
化合物：
其中：
X為H、F、Cl或Br；
R獨立地選自H或C1-6
烷基；
Ra
獨立地選自H或-C(O)OR9
；
Rb
獨立地選自H、C1-6
烷基或C1-6
烷基-N+
(CH3
)2
；
Rd
獨立地選自H或-C(O)OR9
；
R1
係選自：
(a) -H，
(b) C1-6
烷基，
(c) -(CR2
)z
-NRb
-C(O)R10
，及
(d) -(CR2
)z
-NR-C(O)-(CR2
)z
[O(CR2
)n
]r
-N+
(CH3
)3
；
R2
係選自：
(a) -H，
(b) C1-6
烷基，
(c) -(CR2
)z
-NRb
-C(O)R10
，及
(d) -(CR2
)z
-NR-C(O)-(CR2
)z
[O(CR2
)n
]r
-N+
(CH3
)3
；
其限制條件為R1
及R2
中之至少一者為-(CR2
)z
-NRb
-C(O)R10
；
R4
為
；
R5
獨立地選自-(CRa 2
)x
-、-(CRa 2
)x
O(CRa 2
)x
-及C1-8
烷基；
R6
獨立地選自-(CRa 2
)x
NRC(O)-、-(CR2
)x
NRS(O)2
-及-(CRa 2
)n
O(CRa 2
)q
NRC(O)-；
R9
獨立地選自H或C1-6
烷基；
R10
獨立地選自：
a) -(R5
-N+
(CH3
)2
-R6
)u
-(R20
)n
-(R6
)m
-R12
，
b) -(R20
)n
-(R6
)m
-R5
-N+
(CH3
)2
-R6
-R12
，
c) -(R20
)n
-R5
-N+
(CH3
)2
-(R20
)s
-(R6
)q
-R12
，
d) -R6
-R20
-N+
(CH3
)2
-(R20
)n
-(R6
)m
-R12
，
e) -R20
-N+
(CH3
)2
-(R6
)m
-(R20
)n
-(R6
)q
-R12
，
f) -(R20
)n
-(R6
)m
-R12
，
g) -R5
-N+
(CH3
)2
-(R20
)n
-(R6
)m
-R5
-[NRC(O)-R5
]q
，
h) -R20
-N+
(CH3
)2
-(R6
)m
-R5
，
i) -R5
-N+
(CH3
)2
-(R20
)n
-(R6
)m
-R5
，
j) -R5
-N+
(CH3
)2
-(R20
)n
-(R6
)m
-R12
，
k) -(R20
)n
-N+
(CH3
)2
-(R20
)n
-(R6
)q
-R12
，
l) -R6
-R5
-N+
(CH3
)2
-(R20
)n
-(R6
)q
-R12
，
m) -(R20
)n
-N+
(CH3
)2
-(R6
)q
-R12
，
n) -(R20
)n
-(R6
)m
-R20
-N+
(CH3
)2
-(R20
)s
-(R6
)q
-R12
，
o) -R20
-N+
(CH3
)2
-(R6
)m
-R4
，
p) -(R20
)n
-N+
(CH3
)2
-(R6
)q
-(R20
)n
-(R6
)m
-R12
，
q) -R20
-N+
(CH3
)2
-(R6
)m
-(R20
)n
-N+
(CH3
)2
-(R20
)n
-(R6
)q
-R12
，
r) -R5
-N+
(CH3
)2
-(R6
)m
-R5
-N+
(CH3
)2
-(R20
)n
-(R6
)q
-R12
，及
s) -CRb 2
-(R20
)n
-(R6
)m
-R12
；
R12
獨立地選自-C11-20
烷基-Rd
、-(CR2
)x
-O-(CR2
)x
-Rd
、-C11-20
烷基-C(O)NR-(CRd 2
)2
H及C2-16
烯基；
R20
獨立地選自
a) -(CRa 2
)t
O(CRa 2
)q
O-(CRa 2
)t
-，
b) -(CRa 2
)t
O(CRa 2
)q
O-(CRa 2
)t
-NRC(O)-，
c) -(CRa 2
)t
O(CRa 2
)q
-NRC(O)-(CRa 2
)n
O(CRa 2
)n
O-，
d) -(CRa 2
)t
-NRC(O)-(CRa 2
)q
O(CRa 2
)q
O-(CRa 2
)t
-，
e) -(CRa 2
)t
O(CRa 2
)q
O-(CRa 2
)t
-，及
f) -(CRa 2
)t
-O-(CRa 2
)q
O(CRa 2
)q
O-(CRa 2
)t
-；A
係選自C2-6
烷基或C2-6
烯基；
m獨立地選自0、1、2、3或4；
n獨立地選自1、2或3；
q獨立地選自1、2、3或4；
r獨立地選自0、1、2、3或4；
s獨立地選自0、1、2或3；
t獨立地選自0、1、2或3；
u為1或2；
x獨立地選自1、2、3、4、5、6、7或8；
z獨立地選自1、2、3、4、5或6；
或其任一者之醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種式I化合物，其中X
為F，或其任一者之醫藥學上可接受之鹽。
在一個實施例中，本發明提供包含本發明化合物(例如式I化合物)及至少一種醫藥賦形劑之醫藥組合物，較佳為針對經口投與之組合物。
在另一態樣中，本發明提供一種在對與PCSK9活性相關之疾病病況提供療法時，藉由向有需要之個體投與治療有效量之較佳呈醫藥組合物形式之式A化合物或其鹽來對PCSK9進行拮抗之方法，該等疾病病況例如動脈粥樣硬化、高膽固醇血症、冠心病、代謝症候群、急性冠狀動脈症候群或相關心血管疾病及心血管代謝病狀。
在一個態樣中，本發明提供一種在對與PCSK9活性相關之疾病病況提供療法時，藉由向有需要之個體投與治療有效量之較佳呈醫藥組合物形式之式I化合物或其鹽來對PCSK9進行拮抗之方法，該等疾病病況例如動脈粥樣硬化、高膽固醇血症、冠心病、代謝症候群、急性冠狀動脈症候群或相關心血管疾病及心血管代謝病狀。
相關申請案
本申請案主張2019年8月30日申請的美國臨時專利申請案第62/894,286號及2019年12月19日申請的美國臨時專利申請案第62/950,690號之優先權益。此兩個申請案之內容均以全文引用之方式併入本文中。
在以下描述中，採用習知結構性表示且其包括某些非對稱碳中心之習知立體化學標號。
因此，本發明之化合物的結構性表示包括展示於實例化合物中之一些非對稱碳中心的習知立體化學標號。因此，在此類情況下，實心黑色「楔形」鍵表示自重現媒體之平面伸出之鍵，「散列楔形」鍵表示重現媒體之平面中之下降鍵，且攜有雙鍵之碳所附接之「波浪」線指示包括可能的順式及反式定向兩者。如習知一樣，普通實線表示所描繪鍵合之所有空間構形。因此，在未供應特定立體化學標號之情況下，該表示涵蓋結構性特徵之所有立體化學及空間定向。
如本發明之實例中所展示且如上文所提及，特定非對稱碳中心使用習知「實心楔形」及「散列楔形」鍵合表示來進行結構性表示。大多數情況下，尚未確定實例化合物之絕對構形，但已藉由類比將絕對構形分配至使用相同或類似反應條件及起始反應劑且在相同層析條件下分離所製備的具有已知立體化學構形(藉由X射線結晶測定)之特定實例化合物。因此，除非在所呈現資料中另外指出，否則本文中進行結構性表示之構形的特定分配意謂用以鑑別所製備特定化合物已具有過量之一種特定立體異構體，且在本文中不一定提出為該化合物之立體化學結構之絕對測定的陳述。
應瞭解，在獲得異構混合物時，可視需要藉由使用習用方法，例如藉由層析或結晶，或藉由使用用於所描述合成之立體化學均一起始物質或藉由立體選擇性合成來分離混合物，以顯著百分比之對映異構體過量之形式來進行個別立體異構體的製備。可視情況在分離立體異構體之前進行衍生作用。可在式I化合物合成期間以中間步驟進行或可對最終外消旋產物進行立體異構體混合物之分離。
當在本文中指示時，藉由結晶產物或結晶中間物之X射線結晶來測定絕對立體化學，該等結晶產物或結晶中間物視需要藉由含有已知構形之立體對稱中心的反應劑衍生。除非指明此類外消旋物、對映除非指明特定異構體、此類外消旋體、對映異構體或非對映異構體之鹽、溶劑合物(包括水合物)或溶劑化鹽，否則本發明包括所有此類異構體，以及此類外消旋體、對映異構體、非對映異構體及其混合物之鹽、溶劑合物(包括水合物)及溶劑化鹽。
本發明亦包涵經同位素標記之本發明之化合物，其結構上等同於本文中所敍述之彼等，但事實上化合物之呈統計學顯著百分比形式之一或多種原子經具有不同於在自然界中通常發現之最豐富同位素之原子質量或質量數之原子質量或質量數的原子置換，因此更改本發明之化合物中存在之彼同位素之天然存在豐度。本發明意欲包括式I化合物之所有合適的同位素變體。
可較佳地併入至本發明之化合物中之同位素之實例包括氫、碳、氮、氧、磷、碘、氟及氯之同位素，例如但不限於：2
H、3
H、11
C、13
C、14
C、13
N、15
N、15
O、17
O、18
O、31
P、32
P、35
S、18
F及36
Cl、123
I及125
I。應瞭解，亦可藉由已知手段併入其他同位素。
特定言之，本發明之某些經同位素標記之化合物(例如用3
H、11
C及14
C標記之彼等化合物)公認為特別適用於使用多種已知技術的化合物及/或受質組織分佈分析中。另外，本發明之化合物涵蓋同位素取代物，其包括不同同位素形式之氫(H)，包括氕(1
H)及氘(2
H或D)。氕係自然界中存在之主要氫同位素。增濃氘可獲得某些治療優勢，諸如增加活體內半衰期或減少劑量需求，或可提供適用作表徵生物樣本之標準物的化合物。式I內之同位素增濃化合物無需過度實驗即可藉由熟習此項技術者熟知的習知技術或藉由與本文中之流程及實例中所描述類似的製程使用適當同位素增濃試劑及/或中間物來製備。
當波浪線端接習知鍵(與連接結構內之兩個原子相對)時，其指示與結構之鍵合點，例如：
指示次丁基部分經由亞甲基經由波浪線端接之鍵而鍵合。當字母標號用以描繪取代基部分時，破折號用以指示與所指示受質之鍵合點，例如：-CH2
-C(O)-CH2
Cl指示乙醯氯部分經由該部分之亞甲基部分鍵合。
除非在定義時另外規定，否則當任何變數(例如n、R、Ra
、R6
等)在任何成分中或在式I中出現超過一次時，其在每次出現時之定義獨立於其在其他每次出現時之定義。一般熟習此項技術者將認識到，對定義於結構性表示中之各種取代基(亦即R、R6
、R20
等)之組合的選擇將與化學結構連接性及穩定性之熟知原則一致地進行選擇，且取代基及/或變數之組合僅在此類組合產生穩定化合物時才為可容許的。舉例而言，若R10
定義為「-R5
-N+
(CH3
)2
-(R20
)n
-(R6
)m
-R12
」，則整數n可選自1、2或3，且整數m可選自0、1、2、3或4。若在此實例中整數n為3且整數m為4，則三個R20
取代基中之每一者及四個R6
取代基中之每一者獨立地選自本文所提供之定義清單。
「穩定」化合物為可製備及分離之化合物，且其結構及特性保持或可導致基本上保持不變持續足以允許將化合物用於本文中所描述之目的的時間段(例如向個體治療性投與)。本發明之化合物限於式I所包涵之穩定化合物。
當任何變數或部分以範圍之形式表達時，例如(-CH2
-)0-4
，同時包括所指定範圍之端值(亦即實例中之0及4)以及其間之所有整數值(亦即實例中之1、2及3)。
除非在使用時另外規定，否則術語「鹵素」包括氟、氯、溴及碘。
如術語在本文中所使用，「個體」(或者「患者」)係指動物，較佳哺乳動物，且特定言之人類或非人類動物，包括牲畜動物及家畜動物，包括(但不限於)牛、馬、綿羊、豬、山羊、兔、貓、犬及需要治療之其他哺乳動物。在一些實施例中，個體較佳為人類。如本文中所使用，關於式I化合物之術語「投與」及其變體(例如「投與」化合物)意謂向需要治療之個體提供該化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
如上文所提及，在一個態樣中，本發明包括提供具有拮抗PCSK9功能之特性的式 A
化合物或其醫藥學上可接受之鹽。因此，在一個態樣中，本發明提供一種式 A
化合物：
其中：
X為H、F、Cl或Br；
R獨立地選自H或C1-6
烷基；
Ra
獨立地選自H、-CR2
-S(O)2
OR9
或-C(O)OR9
；
Rb
獨立地選自H、C1-6
烷基或C1-6
烷基-N+
(CH3
)2
；
Rd
獨立地選自H或-C(O)OR9
；
R1
係選自：
(a) -H，
(b) C1-6
烷基，
(c) -(CR2
)z
-NRb
-C(O)R10
，及
(d) -(CR2
)z
-NR-C(O)-(CR2
)z
[O(CR2
)n
]r
-N+
(CH3
)3
；
R2
係選自：
(a) -H，
(b) C1-6
烷基，
(c) -(CR2
)z
-NRb
-C(O)R10
，及
(d) -(CR2
)z
-NR-C(O)-(CR2
)z
[O(CR2
)n
]r
-N+
(CH3
)3
；
其限制條件為R1
及R2
中之至少一者為-(CR2
)z
-NRb
-C(O)R10
；
R4
為
；
R5
獨立地選自-(CRa 2
)x
-、-(CRa 2
)x
O(CRa 2
)x
-及C1-8
烷基；
R6
獨立地選自-(CRa 2
)x
NRC(O)-、-(CR2
)x
NRS(O)2
-及-(CRa 2
)n
O(CRa 2
)q
NRC(O)-；
R9
獨立地選自H或C1-6
烷基；
R10
獨立地選自：
a) -(R5
-N+
(CH3
)2
-R6
)u
-(R20
)n
-(R6
)m
-R12
，
b) -(R20
)n
-(R6
)m
-R5
-N+
(CH3
)2
-R6
-R12
，
c) -(R20
)n
-R5
-N+
(CH3
)2
-(R20
)s
-(R6
)q
-R12
，
d) -R6
-R20
-N+
(CH3
)2
-(R20
)n
-(R6
)m
-R12
，
e) -R20
-N+
(CH3
)2
-(R6
)m
-(R20
)n
-(R6
)q
-R12
，
f) -(R20
)n
-(R6
)m
-R12
，
g) -R5
-N+
(CH3
)2
-(R20
)n
-(R6
)m
-R5
-[NRC(O)-R5
]q
，
h) -R20
-N+
(CH3
)2
-(R6
)m
-R5
，
i) -R5
-N+
(CH3
)2
-(R20
)n
-(R6
)m
-R5
，
j) -R5
-N+
(CH3
)2
-(R20
)n
-(R6
)m
-R12
，
k) -(R20
)n
-N+
(CH3
)2
-(R20
)n
-(R6
)q
-R12
，
l) -R6
-R5
-N+
(CH3
)2
-(R20
)n
-(R6
)q
-R12
，
m) -(R20
)n
-N+
(CH3
)2
-(R6
)q
-R12
，
n) -(R20
)n
-(R6
)m
-R20
-N+
(CH3
)2
-(R20
)s
-(R6
)q
-R12
，
o) -R20
-N+
(CH3
)2
-(R6
)m
-R4
，
p) -(R20
)n
-N+
(CH3
)2
-(R6
)q
-(R20
)n
-(R6
)m
-R12
，
q) -R20
-N+
(CH3
)2
-(R6
)m
-(R20
)n
-N+
(CH3
)2
-(R20
)n
-(R6
)q
-R12
，
r) -R5
-N+
(CH3
)2
-(R6
)m
-R5
-N+
(CH3
)2
-(R20
)n
-(R6
)q
-R12
，及
s) -CRb 2
-(R20
)n
-(R6
)m
-R12
；
R12
獨立地選自-C11-20
烷基-Rd
、-(CR2
)x
-O-(CR2
)x
-Rd
、-C11-20
烷基-C(O)NR-(CRd 2
)2
H及C2-16
烯基；
R20
獨立地選自
a) -(CRa 2
)t
O(CRa 2
)q
O-(CRa 2
)t
-，
b) -(CRa 2
)t
O(CRa 2
)q
O-(CRa 2
)t
-NRC(O)-，
c) -(CRa 2
)t
O(CRa 2
)q
-NRC(O)-(CRa 2
)n
O(CRa 2
)n
O-，
d) -(CRa 2
)t
-NRC(O)-(CRa 2
)q
O(CRa 2
)q
O-(CRa 2
)t
-，
e) -(CRa 2
)t
O(CRa 2
)q
O-(CRa 2
)t
-，及
f) -(CRa 2
)t
-O-(CRa 2
)q
O(CRa 2
)q
O-(CRa 2
)t
-；A
係選自C2-6
烷基或C2-6
烯基；
m獨立地選自0、1、2、3或4；
n獨立地選自1、2或3；
q獨立地選自1、2、3或4；
r獨立地選自0、1、2、3或4；
s獨立地選自0、1、2或3；
t獨立地選自0、1、2或3；
u為1或2；
x獨立地選自1、2、3、4、5、6、7或8；
z獨立地選自1、2、3、4、5或6；
或其任一者之醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，本發明提供一種式A化合物，其中X
為F，或其任一者之醫藥學上可接受之鹽。
在式A化合物之一實施例中，R1
係選自C1-6
烷基、-(CR2
)z
-NRb
-C(O)R10
及-(CR2
)z
-NR-C(O)-(CR2
)z
[O(CR2
)n
]r
-N+
(CH3
)3
。在式I之另一實施例中，R1
為C1-6
烷基，且R2
為-(CH2
)z
-NH-C(O)R10
。
在式A化合物之一實施例中，R2
係選自C1-6
烷基、-(CR2
)z
-NRb
-C(O)R10
及-(CR2
)z
-NR-C(O)-(CR2
)z
[O(CR2
)n
]r
-N+
(CH3
)3
。在另一實施例中，R2
為-(CR2
)z
-NRb
-C(O)R10
。在另一實施例中，R2
為-(CH2
)z
-NH-C(O)R10
。
在式A化合物之一實施例中，R5
為C1-8
烷基。
在式A化合物之一實施例中，R6
為-(CRa 2
)x
NRC(O)-。在另一實施例中，R6
獨立地選自：
。
在一個實施例中，本發明提供包含本發明化合物(例如式A化合物)及至少一種醫藥賦形劑之醫藥組合物，較佳為針對經口投與之組合物。
如上文所提及，在一個態樣中，本發明包括提供具有拮抗PCSK9功能之特性的式 I
化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
在本發明之一個實施例中，本發明包括一種式 I
化合物：
其中：
X為F；
R獨立地選自H或C1-6
烷基；
Ra
獨立地選自H或-C(O)OR9
；
Rb
獨立地選自H、C1-6
烷基或C1-6
烷基-N+
(CH3
)2
；
Rd
獨立地選自H或-C(O)OR9
；
R1
係選自：
(a) H，
(b) C1-6
烷基，及
(c) -(CR2
)z
-NRb
-C(O)R10
；
R2
係選自：
(a) C1-6
烷基，及
(b) -(CR2
)z
-NRb
-C(O)R10
；
其限制條件為R1
及R2
中之至少一者為-(CR2
)z
-NRb
-C(O)R10
；
R4
為
；
R5
獨立地選自-(CRa 2
)x
-、-(CRa 2
)x
O(CRa 2
)x
-及C1-8
烷基；
R6
獨立地選自-(CRa 2
)x
NRC(O)-及-(CRa 2
)n
O(CRa 2
)q
NRC(O)-；
R9
獨立地選自H或C1-6
烷基；
R10
係選自：
a) -(R5
-N+
(CH3
)2
-R6
)u
-(R20
)n
-(R6
)m
-R12
，
b) -(R20
)n
-(R6
)m
-R5
-N+
(CH3
)2
-R6
-R12
，
c) -(R20
)n
-R5
-N+
(CH3
)2
-(R20
)s
-(R6
)q
-R12
，
d) -R6
-R20
-N+
(CH3
)2
-(R20
)n
-(R6
)m
-R12
，
e) -R20
-N+
(CH3
)2
-(R6
)m
-(R20
)n
-(R6
)q
-R12
，
f) -(R20
)n
-(R6
)m
-R12
，
g) -R5
-N+
(CH3
)2
-(R20
)n
-(R6
)m
-R5
-[NRC(O)-R5
]q
，
h) -R20
-N+
(CH3
)2
-(R6
)m
-R5
，
i) -R5
-N+
(CH3
)2
-(R20
)n
-(R6
)m
-R5
，
j) -R5
-N+
(CH3
)2
-(R20
)n
-(R6
)m
-R12
，
k) -(R20
)n
-N+
(CH3
)2
-(R20
)n
-(R6
)q
-R12
，
l) -R6
-R5
-N+
(CH3
)2
-(R20
)n
-(R6
)q
-R12
，
m) -(R20
)n
-N+
(CH3
)2
-(R6
)q
-R12
，
n) -(R20
)n
-(R6
)m
-R20
-N+
(CH3
)2
-(R20
)s
-(R6
)q
-R12
，
o) -R20
-N+
(CH3
)2
-(R6
)m
-R4
，
p) -(R20
)n
-N+
(CH3
)2
-(R6
)q
-(R20
)n
-(R6
)m
-R12
，
q) -R20
-N+
(CH3
)2
-(R6
)m
-(R20
)n
-N+
(CH3
)2
-(R20
)n
-(R6
)q
-R12
，
r) -R5
-N+
(CH3
)2
-(R6
)m
-R5
-N+
(CH3
)2
-(R20
)n
-(R6
)q
-R12
，及
s) -CRb 2
-(R20
)n
-(R6
)m
-R12
；
R12
獨立地選自-C11-20
烷基-Rd
、-(CR2
)x
-O-(CR2
)x
-Rd
及-C11-20
烷基-C(O)NR-(CRd 2
)2
H；
R20
獨立地選自
a) -(CRa 2
)t
O(CRa 2
)n
O-(CRa 2
)t
-，
b) -(CRa 2
)t
O(CRa 2
)n
O-(CRa 2
)t
-NRC(O)-，
c) -(CRa 2
)t
O(CRa 2
)n
-NRC(O)-(CRa 2
)n
O(CRa 2
)n
O-，
d) -(CRa 2
)t
-NRC(O)-(CRa 2
)n
O(CRa 2
)n
O-(CRa 2
)t
-，
e) -(CRa 2
)t
O(CRa 2
)n
O-，
f) -(CRa 2
)t
-O-(CRa 2
)n
O(CRa 2
)n
O-(CRa 2
)t
-，A
為C2-6
烷基；
m獨立地選自0、1、2、3或4；
n獨立地選自1、2或3；
q獨立地選自1、2、3或4；
r獨立地選自0、1、2、3或4；
s獨立地選自0、1或2；
t獨立地選自0、1、2或3；
u為1或2；
x獨立地選自1、2、3、4、5、6、7或8；
z獨立地選自1、2、3、4、5或6；
或其任一者之醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，式I化合物具有式 IA
之結構：
其中R1
、R10
及A如上文式I中所定義，
或其醫藥學上可接受之鹽。
在一實施例中，式I化合物具有式 II
之結構：
其中R1
為-(CR2
)z
-NRb
-C(O)R10
，A
及R10
如上文式I中所定義，
或其醫藥學上可接受之鹽。
在一實施例中，式I化合物具有式 IIA
之結構：
其中R2
為-(CR2
)z
-NRb
-C(O)R10
，A
及R10
如上文式I中所定義，
或其醫藥學上可接受之鹽。
在式I、式IA或式II化合物之一實施例中，R1
係選自C1-6
烷基、-(CR2
)z
-NRb
-C(O)R10
及-(CR2
)z
-NR-C(O)-(CR2
)z
[O(CR2
)n
]r
- N+
(CH3
)3
。在式I之另一實施例中，R1
為C1-6
烷基，且R2
為-(CH2
)z
-NH-C(O)R10
。
在式I或式IIA化合物之一實施例中，R2
係選自C1-6
烷基、-(CR2
)z
-NRb
-C(O)R10
及-(CR2
)z
-NR-C(O)-(CR2
)z
[O(CR2
)n
]r
-N+
(CH3
)3
。在另一實施例中，R2
為-(CR2
)z
-NRb
-C(O)R10
。在另一實施例中，R2
為-(CH2
)z
-NH-C(O)R10
。
在式I、式IA、式II或式IIA化合物之一實施例中，R5
為C1-8
烷基。
在式I、式IA、式II或式IIA化合物之一實施例中，R6
為-(CRa 2
)x
NRC(O)-。在另一實施例中，R6
獨立地選自：
。
在式I、式IA、式II或式IIA化合物之一實施例中，R10
獨立地選自
a) -R6
-R20
-N+
(CH3
)2
-(R20
)n
-(R6
)m
-R12
，
b) -R20
-N+
(CH3
)2
-(R6
)m
-(R20
)n
-(R6
)q
-R12
，
c) -(R20
)n
-(R6
)m
-R12
，
d) -R5
-N+
(CH3
)2
-(R20
)n
-(R6
)m
-R12
，
e) -(R20
)n
-N+
(CH3
)2
-(R20
)n
-(R6
)q
-R12
，
f) -(R20
)n
-N+
(CH3
)2
-(R6
)q
-R12
，及
g) -(R20
)n
-(R6
)m
-R20
-N+
(CH3
)2
-(R20
)s
-(R6
)q
-R12
。
在式I、式IA、式II或式IIA化合物之另一實施例中，R10
獨立地選自
a) -R6
-R20
-N+
(CH3
)2
-(R20
)n
-(R6
)m
-R12
，
b) -R5
-N+
(CH3
)2
-(R20
)n
-(R6
)m
-R12
，
c) -(R20
)n
-N+
(CH3
)2
-(R20
)n
-(R6
)q
-R12
，及
d) -(R20
)n
-(R6
)m
-R20
-N+
(CH3
)2
-(R20
)s
-(R6
)q
-R12
。
在另一實施例中，R10
為-(R20
)n
-N+
(CH3
)2
-(R20
)n
-(R6
)q
-R12
。
在式I、式IA、式II或式IIA化合物之一實施例中，A
為
(a) -(CH2
)4-6
，或
(b) 下式之部分：
，
其中x為1至3。在另一實施例中，A
為-(CH2
)6
。
應理解，除非另外指明，否則對「式I」之提及亦涵蓋式IA、式II及式IIA化合物。
本文亦提供選自Ex-1、Ex-2、Ex-3、Ex-4、Ex-5、Ex-6、Ex-7、Ex-8、Ex-9、Ex-10、Ex-11、Ex-12、Ex-13、Ex-14、Ex-15、Ex-16、Ex-17、Ex-18、Ex-19、Ex-20、Ex-21、Ex-22、Ex-23、Ex-24、Ex-25、Ex-26、Ex-27、Ex-28、Ex-29、Ex-31、Ex-35、Ex-36、Ex-38、Ex-39、Ex-40、Ex-41、Ex-44、Ex-47、Ex-48、Ex-49、Ex-50、Ex-51、Ex-52、Ex-53、Ex-54、Ex-55、Ex-56、Ex-57、Ex-58、Ex-59、Ex-60、Ex-61、Ex-62、Ex-63、Ex-64、Ex-65、Ex-66、Ex-67及Ex-68之式A化合物或其任何醫藥學上可接受之鹽。
本文亦提供選自Ex-1、Ex-2、Ex-3、Ex-4、Ex-5、Ex-6、Ex-7、Ex-8、Ex-9、Ex-10、Ex-11、Ex-12、Ex-13、Ex-14、Ex-15、Ex-16、Ex-17、Ex-18、Ex-19、Ex-20、Ex-21、Ex-22、Ex-23、Ex-24、Ex-25、Ex-26、Ex-27、Ex-28、Ex-29、Ex-31、Ex-35、Ex-36、Ex-38、Ex-39、Ex-40、Ex-41、Ex-44、Ex-47、Ex-48、Ex-49、Ex-50、Ex-51、Ex-52、Ex-53、Ex-54、Ex-55、Ex-56、Ex-57、Ex-58、Ex-59、Ex-60、Ex-61、Ex-62、Ex-63及Ex-64之式I化合物或其任何醫藥學上可接受之鹽。
本發明之一實施例包含選自Ex-2、Ex-4、Ex-8、Ex-9、Ex-10、Ex-22、Ex-34、Ex-44、Ex-48、Ex-49及Ex-58之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。本發明之另一實施例包含選自Ex-4、Ex-8、Ex-9、Ex-10、Ex-22、Ex-34、Ex-48及Ex-49之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
下方表1中展示之化合物在本文中亦被稱為「本發明化合物」。在表1中，*表示化合物包括「A-
」，其表示任何醫藥學上可接受之相對離子，包括實驗部分中所描繪之彼等者。表 1 
或其醫藥學上可接受之鹽。
本文中所採用之術語「鹽」及其在片語「醫藥學上可接受之鹽」中之使用包括以下中之任一者：與無機酸及/或有機酸形成之酸鹽、與無機鹼及/或有機鹼形成之鹼鹽、兩性離子及四級銨錯合物。本發明化合物之鹽可藉由一般熟習此項技術者已知的方法形成，例如藉由使本發明化合物與一定量(諸如當量)之酸或鹼在諸如鹽沈澱之介質或水性介質中反應，隨後凍乾。如本文中所使用，表1之化合物之醫藥學上可接受之鹽可不同於與相對離子(A-)締合之化合物。
本發明之化合物含有參配位氮原子，例如一級、二級或三級胺基部分，其中如所已知，駐存於氮原子上之孤電子對可在適當反應條件下藉由適當酸質子化或藉由適當反應劑(例如烷基溴化物)烷基化，以提供藉由該過程中所產生之陰離子(例如鹵素離子或共軛鹼)穩定化之四配位帶電氮。因此，本發明之化合物可以游離鹼形式來製備，或以四元錯合物或鹽錯合物形式來分離。在存在靠近鹼性氮原子之適當酸性質子的一些情況下，可能形成兩性離子錯合物。如術語在本文中所使用，本發明化合物之鹽包括在本發明之範疇中，無論該等鹽係用無機及/或有機酸形成之酸性鹽、用無機及/或有機鹼形成之鹼性鹽、所形成的包括兩性離子特性之鹽(例如，其中化合物同時含有鹼性部分，例如(但不限於)氮原子，例如胺、吡啶或咪唑；及酸性部分，例如(但不限於)羧酸)以及四級銨錯合物。
因此，無論以游離鹼形式、鹽形式、兩性離子形成抑或四級銨形式，本發明之化合物之結構性表示亦包括上文所論述之此類化合物的所有其他形式。因此，本發明之一個態樣為以醫藥學上可接受之鹽、兩性離子錯合物或四級銨錯合物之形式來提供本發明之化合物。熟習此項技術者將認識到本發明之化合物可形成此類錯合物之彼等實例，包括其中四配位氮可經四級銨化或質子化且帶電氮形式藉由相關聯陰離子穩定化之實例。術語「醫藥學上可接受之鹽」係指擁有類似於或大於化合物之游離鹼形式之效力且並非生物學上或以其他方式非所要(例如既無毒性亦不以其他方式對其接受者有害)的鹽(包括四級銨錯合物及諸如兩性離子錯合物之內鹽)。
自鹼性(或酸性)醫藥化合物形成醫藥學上有用之鹽藉由例如以下文獻論述：S. Berge等人, Journal of Pharmaceutical Sciences (1977) 66(1) 1-19；P. Gould, International J. of Pharmaceutics (1986) 33 201-217；Anderson等人, The Practice of Medicinal Chemistry (1996), Academic Press, New York；in The Orange Book (在其網站上之Food & Drug Administration, Washington, D.C.)；及P. Heinrich Stahl, Camille G. Wermuth (編), Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, (2002) Int'l. Union of Pure and Applied Chemistry, 第330-331頁。此等揭示內容以引用之方式併入本文中。
本發明涵蓋本發明之化合物的游離鹼形式及所有可供使用之鹽兩者，其包括用於製備醫藥學調配物普遍認為安全之鹽及可在當前一般技術者內形成且稍後經分類為用於醫藥調配物之製備為「普遍認為安全」的彼等，在本文中稱為「醫藥學上可接受之鹽」。如將瞭解，游離鹼化合物可藉由在合成期間控制化合物之分離的條件或藉由中和及與本發明之化合物之鹽形式的離子交換來製備。
醫藥學上可接受之酸鹽之實例包括但不限於乙酸鹽，其包括三氟乙酸鹽、己二酸鹽、海藻酸鹽、抗壞血酸鹽、天冬胺酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、硼酸鹽、丁酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、環戊烷丙酸鹽、二葡糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、反丁烯二酸鹽、葡糖庚酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、氫氯酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、乳酸鹽、順丁烯二酸鹽、甲磺酸鹽、甲基硫酸鹽、2-萘磺酸鹽、菸酸鹽、硝酸鹽、草酸鹽、雙羥萘酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、3-苯丙酸鹽、磷酸酯、苦味酸鹽、特戊酸鹽、丙酸鹽、水楊酸鹽、丁二酸鹽、硫酸鹽、磺酸鹽(諸如本文中所提及之彼等)、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽(toluenesulfonate) (亦稱為甲苯磺酸鹽(tosylate))、十一烷酸鹽及其類似者。
醫藥學上可接受之鹼性鹽之實例包括(但不限於)：銨鹽；鹼金屬鹽，諸如鈉鹽、鋰鹽及鉀鹽；鹼土金屬鹽，諸如鈣鹽及鎂鹽；鋁鹽；鋅鹽；與有機鹼(例如，有機胺)之鹽，該等有機鹼諸如苄星(benzathine)、二乙胺、二環已基胺、海卓胺(hydrabamine) (用N,N-雙(去氫松香基)乙二胺形成)、N-甲基-D-葡糖胺、N-甲基-D-葡糖醯胺、第三丁基胺、哌𠯤、苯基環己基-胺、膽鹼、緩血酸胺；及與胺基酸之鹽，該等胺基酸諸如精胺酸、離胺酸及其類似者。鹼性含氮基團可轉化為銨離子或藉由諸如以下之試劑四級化：低碳數烷基鹵化物(例如，甲基、乙基、丙基及丁基之氯化物、溴化物及碘化物)、二烷基硫酸鹽(例如，二甲基、二乙基、二丁基及二戊基之硫酸鹽)、長鏈鹵化物(例如，癸基、月桂基、肉豆蔻基及硬脂醯基之氯化物、溴化物及碘化物)、芳烷基鹵化物(例如，苯甲基及苯乙基之溴化物)及其他。
可與本發明一起使用之醫藥學上可接受之鹽的其他實例包括但不限於氟化物、氯化物、溴化物及碘化物。
一般而言，化合物之鹽意欲為在本發明之範疇內的醫藥學上可接受之鹽。
術語化合物之「經純化」、「呈經純化形式」或「呈經分離及經純化形式」係指該化合物在從合成製程或天然來源或其組合中分離之後之物理狀態。因此，術語化合物之「經純化」、「呈經純化形式」或「呈經分離及經純化形式」係指在從純化方法或本文所描述之或熟習此項技術者熟知之方法獲得之後且呈表徵為本文所描述之或熟習此項技術者熟知的標準分析技術的充分純度的該化合物的物理狀態。本發明之化合物包括化合物之任何形式，其包括原位反應混合物以及以藉由常規技術獲得之經分離且經純化之形式。亦包括本發明之化合物的多晶形式及其溶劑合物以及前驅藥。
本發明之某些化合物可以不同互變異構形式存在，例如但不限於酮/烯醇互變異構形式、亞胺-烯胺互變異構形式及例如諸如以下部分之雜芳族形式：
。
以相同方式，除非另外指明，否則展現呈現互變異構之化合物之任何互變異構形式之結構表示意謂以包括該化合物之所有此類互變異構形式。因此，當本發明之化合物、其鹽、及溶劑合物及其前藥可呈不同互變異構形式或在此類形式中處於平衡存在時，涵蓋該化合物之所有此類形式且包括在本發明之範疇內。
在另一態樣中，本發明提供包含一或多種本發明之化合物的醫藥組合物。如本文所使用，術語「醫藥組合物」包含至少一種醫藥活性化合物及至少一種賦形劑，且意欲涵蓋以規定量之規定成分之組合及自以該規定量之該規定成分之組合直接或間接產生結果之的任何產品兩者。
一般熟習此項技術者應瞭解，賦形劑為使組合物適應特別投與途徑或有助於將組合物處理為劑型而自身不發揮活性醫藥效果的任何組成。一般而言，視投與途徑及所投與活性劑之特性而定，組合物包含超過一種賦形劑。向組合物賦予使其更易於操縱或處理之特性的賦形劑之實例包括但不限於意欲製成錠劑之粉末藥物中的潤滑劑或壓製助劑及組合物中之乳液穩定劑(其中活性劑以乳液之形式存在)。使組合物適應於所要投與途徑之賦形劑的實例為例如但不限於促進自胃腸道吸收之吸收增進劑(針對經口投與)、滲透增進劑(針對經皮或經黏膜投與)，例如用於黏著性皮膚「貼片」或用於經頰投與之組合物中之彼等。
儘管功能賦形劑以組合物來執行，但賦形劑在本文中統稱為「載體」。典型地，雖然可以不同比率來製備調配物，但調配物可包含高達約百分之95的活性成分及餘量載體。一般而言，可接受醫藥組合物含有合適濃度之活性劑，從而可基於投與途徑以可接受體積之個別劑型提供有效量之PCSK9拮抗劑，以使得該等醫藥組合物可在投與有組合物之個體體內提供治療血清含量之活性劑持續可接受時間段，且組合物將在於可接受溫度範圍內儲存可接受時間段期間保持生物活性。
如本文中所使用，醫藥組合物係指為尚未形成為個別劑量單位以供投與之調配物質的體組合物及個別劑量單位內所含有之組合物兩者。
雖然本發明之組合物可以散裝形式採用，但應瞭解，對於大多數應用，組合物將併入至提供適用於投與給患者之個別單元的劑型中，各劑型包含一定量的含有有效量之該一或多種式I化合物之所選組合物。合適劑型之實例包括(但不限於)適合於以下之劑型：(i)經口投與，例如液體、凝膠、粉末、固體或半固體形式之醫藥組合物，其裝入膠囊中或壓製成錠劑，且可額外包含一或多種改變其釋放特性之包衣(例如賦予延時釋放之包衣)或具有延長釋放特性之調配物；(ii)適合於經由口腔之組織投與的劑型，例如快速溶解之錠劑、口含錠、溶液、凝膠、藥囊或適合於提供黏膜內投與之針陣列；(iii)適合於經由鼻腔或上呼吸腔之黏膜投與的劑型，例如用於分散在鼻子或氣管中之溶液、懸浮液或乳液調配物；(iv)適合於經皮投與之劑型，例如貼片、乳膏或凝膠；(v)適合於皮內投與之劑型，例如顯微操作用針陣列；(vi)適合於靜脈內(IV)輸注之劑型，例如在較長時間內使用靜脈內輸注泵；(vii)適合於肌肉內投與(IM)之劑型，例如可注射溶液或懸浮液，且其可用於形成具有延長釋放特性之儲槽；(viii)適合於靜脈內滴注投與(IV)之劑型，例如溶液或懸浮液，例如呈IV溶液或待注射至鹽水IV袋中之濃縮物形式；(ix)適合於皮下投與之劑型，包括藉由植入條棒或其他裝置而在長期時間段內投與，該條棒或其他裝置將化合物擴散至周圍組織中且由此提供連續的血清治療水準；或(x)適合於經由直腸或陰道黏膜遞送之劑型，例如栓劑。
醫藥組合物可為固體、半固體或液體。固體、半固體及液體形式製劑可適用於多種投與模式，該等製劑之實例包括但不限於可例如用於製錠、囊封或直接投與之粉末、分散性顆粒、微錠劑、珠粒。另外，液體形式製劑包括但不限於溶液、懸浮液及乳液，該等製劑例如但非排他地可採用呈意欲用於攝入、吸入或靜脈內投與(IV) (例如但不限於經由滴液IV或輸注泵、肌肉內注射(IM)之投與(例如歷經延長持續時間釋放之推注)、直接IV注射)或適用於皮下投與途徑之調配物之製劑的形式。
可考慮之其他投與途徑包括鼻內投與或一些其他經黏膜投與。製備用於投與至各種黏膜之調配物亦可包括使其適應於此類投與之額外組分，例如黏度調節劑。
雖然在一些實施例中，適用於固體口服劑型(例如錠劑或速熔口腔溶解調配物)之組合物為本發明化合物或其鹽之較佳投與途徑，但本發明之組合物可經調配以經由上文所提及之其他途徑來投與。實例包括例如適合於經由吸入或經由鼻黏膜投與之氣溶膠製劑，可包括溶液及呈粉末形式之固體，其可與例如惰性壓縮氣體(例如氮氣)之醫藥學上可接受之推進劑組合。另外，包括意欲在使用前即刻轉化為例如用於經口或非經腸投與之懸浮液或溶液的固體形式製劑。此類固體形式之實例包括(但不限於)冷凍乾燥調配物及吸附至固體吸收劑介質中之液體調配物。
舉例而言，本發明之化合物亦可為可經皮或經黏膜遞送的例如液體、栓劑、乳膏、泡沫、凝膠或快速溶解固體形式。應瞭解，經皮組合物亦可採取乳膏、乳液、噴霧劑及/或乳化液之形式，且可呈包括此項技術中知道之任何經皮貼片的單位劑型來提供，該經皮貼片例如，併入包含醫藥活性化合物之基質或包含固體或液體形式之醫藥活性化合物之儲槽。
醫藥學上可接受之載劑及製備上文提及之各種組合物之方法的實例可見於A. Gennaro (編), Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 第20版, (2000), Lippincott Williams & Wilkins, Baltimore, MD中。解決調配物問題之公開案之額外實例可見於以下各者中：醫藥組合物可藉由此項技術中已知的任何數目之策略來調配，參見例如McGoff及Scher，2000Solution Formulation of Proteins/Peptides:
In - McNally, E.J.編, Protein Formulation and Delivery. New York, NY: Marcel Dekker; 第139-158頁；Akers與Defilippis, 2000,Peptides and Proteins as Parenteral Solutions.
In - Pharmaceutical Formulation Development of Peptides and Proteins. Philadelphia, PA: Taylor and Francis; 第145-177頁；Akers等人, 2002,Pharm. Biotechnol.
14:47-127。
在另一態樣中，本發明提供採用本文中所描述之用於拮抗PCSK9功能的PCSK9特異性拮抗劑化合物之方法；該等方法在下文進一步描述。術語「拮抗」之使用貫穿本申請案係指向患病組織提供對抗患病組織中之PCSK9之作用、抑制、抵消、壓制或降低患病組織中之PCSK9之一或多種功能的物質。對PCSK9相關功能特性中之一或多者之抑制或拮抗可易於根據此項技術所已知的方法(參見例如Barak與Webb, 1981J. Cell Biol.
90:595-604；Stephan與Yurachek, 1993J. Lipid Res.
34:325330；及McNamara等人, 2006Clinica Chimica Acta
369:158-167)以及本文中所描述之彼等方法來測定。相對於見於拮抗劑缺失中之彼PCSK9活性或例如相對於當存在具有不相關特異性之對照拮抗劑時所觀測到之活性所見之彼PCSK9活性，抑制或拮抗將實現PCSK9活性之降低。較佳地，本發明之PCSK9特異性拮抗劑將PCSK9機能拮抗至所量測參數降低至少10%的點，且更佳地，降低至所量測參數降低至少20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%及95%的點，該參數包括但不限於本文中所揭示之活性。對PCSK9機能之此類抑制/拮抗在其中PCSK9機能至少部分地促成負面影響個體之特定表現型、疾病、病症或病狀的彼等情況下尤其有效。
在一個態樣中，本發明提供一種用於拮抗PCSK9之活性的方法，其包含使能夠被PCSK9感染(亦即，表現及/或包含LDL受體)之細胞、細胞群或組織樣品與本文所揭示之PCSK9特異性拮抗劑在允許該拮抗劑與PCSK9 (若存在)結合且抑制PCSK9對細胞LDL攝入之抑制的條件下接觸。本發明之一些實施例包括其中細胞為人類細胞之此類方法。本發明之額外實施例包括其中細胞為小鼠細胞之此類方法。
在一個態樣中，本發明提供一種用於拮抗個體體內之PCSK9之活性的方法，該方法包含向個體投與治療有效量之本發明的PCSK9特異性拮抗劑。在一些實施例中，用於拮抗PCSK9功能之方法如本文中所定義係用於PCSK9相關聯疾病、病症或病狀的治療，或可替代地用於在可得益於PCSK9拮抗劑之效果的疾病、病症或病狀中提供療法。
因此，本發明涵蓋本文中所描述之PCSK9特異性拮抗劑在需要拮抗PCSK9功能之各種治療方法中的用途。如本文中所使用，術語「治療方法」係關於導致在本質上可為防治性或治療性的疾病病況之至少一種症狀之變化的行動方針。在一些實施例中，本發明係關於一種用於與PCSK9活性相關聯及/或歸因於PCSK9活性之病狀或其中PCSK9之機能對特定個體為禁忌之病狀的治療方法，該方法包含向個體投與治療有效量的式I之PCSK9拮抗劑化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在一些實施例中，該病狀可為動脈粥樣硬化、高膽固醇血症、冠心病、代謝症候群、急性冠狀動脈症候群或相關心血管疾病及心血管代謝病狀，或可為其中PCSK9活性為禁忌之疾病病況或病狀。
本發明之治療方法包含向個體投與治療(或防治)有效量的本發明之PCSK9特異性拮抗劑。術語「治療有效」或「防治有效」參考一定量之使用係指在為達成所要治療性及/或防治性效果持續所要時間段之預期劑量處所必需的量。所要效果可例如為與所治療病狀相關聯之至少一種症狀的緩解、減輕、降低或停止。如熟習此項技術者將瞭解，此等量將根據各種因素而變化，該等因素包括但不限於疾病病況、年齡、性別及個體之體重以及PCSK9特異性拮抗劑在個體體內誘發所要效果之能力。反應可藉由試管內分析、活體內非人類動物研究來記錄且/或進一步由臨床試驗來支援。
在一些實施例中，較佳以如本文中所描述之醫藥組合物的形式來投與本發明之PCSK9拮抗劑化合物。
拮抗劑治療劑之給藥完全在熟習此項技術者之領域內，參見例如Lederman等人, 1991Int. J. Cancer
47:659-664；Bagshawe等人, 1991Antibody, Immunoconjugates and Radiopharmaceuticals
4:915-922，且該給藥將基於多個因素而變化，例如(但不限於)上文所提及之彼等因素，包括患者之病狀、經治療之區域、投與途徑及所要治療(例如防治或急性治療)及其類似者。具有一般技術之醫師或獸醫可易於判定及規定拮抗劑之有效治療量。
個體可能需要(in need of/desire)對現有疾病或醫學病狀之治療。如本文中所使用，「需要」治療現有病狀之個體涵蓋需要藉由醫療專業人士之判定以及需要此類治療之個體兩者。當化合物或其鹽與一或多種其他活性劑組合提供時，「投與」及其變型各自理解為包括同期或歷經一段時間內之獨立投與之療程而提供化合物或其鹽及其他藥劑。當組合之藥劑同時投與時，其可在單個組合物中一起投與或其可分開投與。應理解，活性劑之「組合」可為含有全部活性劑之單個組合物或各自含有一或多種活性劑之多個組合物。在兩種活性劑的情況下，組合可為包含兩種藥劑之單個組合物或各自包含一種藥劑之兩個單獨組合物；在三種活性劑的情況下，組合可為包含全部三種藥劑之單個組合物、各自包含一種試劑之三個單獨組合物，或兩個組合物，其中一者包含藥劑中之兩種且另一者包含第三藥劑；等等。
本發明之組合物及組合以有效量適合地投與。術語「有效量」意謂足以拮抗PCSK9且藉此誘發所尋求反應(亦即在動物或人類中在對與PCSK9功能相關或受PCSK9功能影響之病狀進行治療或管理時誘導治療反應，該等病狀包括但不限於動脈粥樣硬化、高膽固醇血症、冠心病、代謝症候群、急性冠狀動脈症候群以及相關心血管疾病及心血管代謝病狀)之活性化合物的量。
所採用之實際劑量可視患者之需求及所治療病狀之嚴重程度而變化。用於特定情形之適當給藥方案之判定係在此項技術中之例如如標準文獻中所描述之技能內，例如，如「Physicians' Desk Reference」 (PDR), 例如1996版本(Medical Economics Company, Montvale, NJ 07645-1742, USA), the Physician's Desk Reference, 第56版, 2002 (由Medical Economics company, Inc. Montvale, NJ 07645-1742公開), 或the Physician's Desk Reference, 第57版, 2003 (由Thompson PDR, Montvale, NJ 07645-1742公開)中所描述；其揭示內容以引用之方式併入本文中。為方便起見，每日總劑量可劃分為多份且在當日視需要逐份投與或連續遞送。
PCSK9特異性拮抗劑可藉由此項技術中所瞭解之任何投與途徑單獨或與經設計為輔助個體之治療的其他藥劑組合而投與至個體，該投與途徑包括但不限於經口投與、藉由注射投與(其特定實施例包括靜脈內、皮下、腹膜內或肌肉內注射)或藉由吸入、鼻內投與或局部投與。PCSK9特異性拮抗劑亦可藉由注射器件、注射器筆、無針器件；及皮下貼片遞送系統來投與。投與途徑應基於熟習此項技術者所瞭解之數個考量來確定，該等考量包括但不限於治療之所要生理化學特性。
可將一或多種額外藥理學活性劑與式I化合物組合投與。額外活性劑(或藥劑)欲意謂在體內具活性之醫藥活性劑(或藥劑)，包括在投與之後轉化為醫藥活性形式之前藥(其不同於式I化合物)，且亦包括該等額外活性劑之游離酸、游離鹼及醫藥學上可接受之鹽。一般而言，任何合適的額外活性劑或藥劑，包括(但不限於)抗高血壓藥劑、抗動脈粥樣硬化藥劑(諸如脂質改性化合物)、抗糖尿病藥劑及/或抗肥胖藥劑，可以與呈單一劑型之式I化合物的任何組合(固定劑量藥物組合)形式來使用，或可以一或多種分離劑量調配物投與給個體，其允許活性劑之同時或依序投與(分離活性劑之共同投與)。
可採用的額外活性劑之實例包括(但不限於)：血管收縮素轉化酶抑制劑(例如，阿拉普利(alacepril)、貝那普利(benazepril)、卡托普利(captopril)、西羅普利(ceronapril)、西拉普利(cilazapril)、地拉普利(delapril)、依那普利(enalapril)、依那普利拉(enalaprilat)、福辛普利(fosinopril)、咪達普利(imidapril)、賴諾普利(lisinopril)、莫維普利(moveltipril)、培哚普利(perindopril)、喹那普利(quinapril)、雷米普利(ramipril)、螺普利(spirapril)、替莫普利(temocapril)或群多普利(trandolapril))、血管收縮素II受體拮抗劑(例如，氯沙坦(losartan) (亦即，COZAAR®)、纈沙坦(valsartan)、坎地沙坦(candesartan)、奧美沙坦(olmesartan)、替米沙坦(telmesartan)及與氫氯噻𠯤(諸如HYZAAR®)組合使用之此等藥物中之任一者)、中性內肽酶抑制劑(例如，塞奧芬(thiorphan)及磷醯二肽)、醛固酮拮抗劑、醛固酮合成酶抑制劑、腎素抑制劑(例如，二肽及三肽之脲衍生物(參見美國專利第5,116,835號)、胺基酸及衍生物(美國專利5,095,119及5,104,869)、藉由非肽鍵鍵聯之胺基酸鏈(美國專利5,114,937)、二肽及三肽衍生物、肽基胺基二醇及肽基β-胺基醯基胺基二醇胺基甲酸酯、及小分子腎素抑制劑(包括二醇磺醯胺及亞磺醯基)、N-(N
-𠰌啉基)衍生物、N-雜環醇類及吡咯咪唑酮；以及，胃酶抑素衍生物及含有斯達酮(statone)之肽的氟及氯衍生物、依那克倫(enalkrein)、RO 42-5892、A 65317、CP 80794、ES 1005、ES 8891、SQ 34017、阿力克倫(2(S),4(S),5(S),7(S)-N-(2-胺甲醯基-2-甲基丙基)-5-胺基-4-羥基-2,7-二異丙基-8-[4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基)-苯基]-辛醯胺半反丁烯二酸鹽)、SPP600、SPP630及SPP635)、內皮素受體拮抗劑、磷酸二酯酶-5抑制劑(例如，西地那非(sildenafil)、他達那非(tadalfil)及伐地那非(vardenafil))、血管擴張劑、鈣離子通道阻斷劑(例如，胺氯地平(amlodipine)、硝苯地平(nifedipine)、維拉帕米(veraparmil)、地爾硫卓(diltiazem)、加洛帕米(gallopamil)、尼魯地平(niludipine)、尼莫地平(nimodipin)、尼卡地平(nicardipine))、鉀通道活化劑(例如，尼可地爾(nicorandil)、吡那地爾(pinacidil)、克羅卡林(cromakalim)、米諾地爾(minoxidil)、阿普瑞卡林(aprilkalim)、氯普唑侖(loprazolam))、利尿劑(例如，氫氯噻𠯤)、交感神經抑制劑、β-腎上腺素阻斷藥物(例如，普萘洛爾(propranolol)、阿替洛爾(atenolol)、比索洛爾(bisoprolol)、卡維地洛(carvedilol)、美托洛爾(metoprolol)或酒石酸美托洛爾)、α腎上腺素阻斷藥物(例如，多沙唑𠯤(doxazocin)、哌唑𠯤(prazocin)或α甲基多巴(alpha methyldopa))、中央α腎上腺素促效劑、外周血管擴張劑(例如，聯胺肼(hydralazine))；降脂劑，例如HMG-CoA還原酶抑制劑，諸如以呈內酯前藥形式之ZOCOR®及MEVACOR®出售且在投與後充當抑制劑的辛伐他汀(simvastatin)及洛伐他汀(lovastatin)，及二羥基開環酸HMG-CoA還原酶抑制劑之醫藥學上可接受之鹽，諸如阿托伐他汀(atorvastatin) (特定言之以LIPITOR®出售之鈣鹽)、羅素他汀(rosuvastatin) (特定言之以CRESTOR®出售之鈣鹽)、普伐他汀(pravastatin) (特定言之以PRAVACHOL®出售之鈉鹽)、氟伐他汀(fluvastatin) (特定言之以LESCOL®出售之鈉鹽)、西立伐他汀(crivastatin)及匹伐他汀(pitavastatin)；膽固醇吸收抑制劑，諸如依澤替米貝(ezetimibe) (ZETIA®)，及依澤替米貝與諸如上述HMG-CoA還原酶抑制劑之任何其他降脂劑之組合，且特定言之與辛伐他汀(VYTORIN®)或與阿托伐他汀鈣之組合；呈立即釋放或受控釋放形式及/或與HMG-CoA還原酶抑制劑一起之菸酸；菸酸受體促效劑，諸如阿昔莫司(acipimox)及阿昔呋喃(acifran)，以及菸酸受體部分促效劑；代謝改變劑，包括胰島素及胰島素模擬物(例如，德穀胰島素、甘精胰島素、賴脯胰島素)、二肽基肽酶-IV (DPP-4)抑制劑(例如，西格列汀(sitagliptin)、阿格列汀(alogliptin)、奧格列汀(omarigliptin)、利格列汀(linagliptin)、維格列汀(vildagliptin))；胰島素增敏劑，包括(i) PPARγ促效劑，諸如格列酮(glitazone) (例如吡格列酮(pioglitazone)、AMG 131、MBX2044、米托格列酮(mitoglitazone)、洛貝格列酮(lobeglitazone)、IDR-105、羅格列酮(rosiglitazone)及巴拉格列酮(balaglitazone))，及其他PPAR配位體，包括(1) PPARα/γ雙促效劑(例如，ZYH2、ZYH1、GFT505、西格列紮(chiglitazar)、莫格列紮(muraglitazar)、阿格列紮(aleglitazar)、索格列紮(sodelglitazar)及那格列紮(naveglitazar))；(2) PPARα促效劑，諸如非諾貝酸(fenofibric acid)衍生物(例如，吉非羅齊(gemfibrozil)、氯貝特(clofibrate)、環丙貝特(ciprofibrate)、非諾貝特(fenofibrate)、苯紮貝特(bezafibrate))，(3)選擇性PPARγ調節劑(SPPARγM) (例如，諸如WO 02/060388、WO 02/08188、WO 2004/019869、WO 2004/020409、WO 2004/020408及WO 2004/066963中所揭示之彼等者)；及(4) PPARγ部分促效劑；(ii)雙胍，諸如二甲雙胍及其醫藥學上可接受之鹽，特定言之鹽酸二甲雙胍，及其延長釋放調配物，諸如Glumetza™、Fortamet™及GlucophageXR™；及(iii)蛋白質酪胺酸磷酸酶-1B (PTP-1B)抑制劑(例如，ISIS-113715及TTP814)；胰島素或胰島素類似物(例如，地特胰島素、賴麩胰島素、德穀胰島素、甘精胰島素、賴脯胰島素及每一者之可吸入調配物)；瘦素及瘦素衍生物及促效劑；澱粉素及澱粉素類似物(例如，普蘭林肽(pramlintide))；磺醯脲及非磺醯脲胰島素促分泌物(例如，甲苯磺丁脲(tolbutamide)、格列本脲(glyburide)、格列吡𠯤(glipizide)、格列美脲(glimepiride)、米格列奈(mitiglinide)、美格列奈(meglitinide)、那格列奈(nateglinide)及瑞格列奈(repaglinide))；α-葡糖苷酶抑制劑(例如，阿卡波糖(acarbose)、伏格列波糖(voglibose)及米格列醇(miglitol))；升糖素受體拮抗劑(例如，MK-3577、MK-0893、LY-2409021及KT6-971)；腸促胰島素模擬物，諸如GLP-1、GLP-1類似物、衍生物及模擬物；及GLP-1受體促效劑(例如，度拉糖肽(dulaglutide)、司美魯肽(semaglutide)、阿必魯肽(albiglutide)、艾塞那肽(exenatide)、利拉魯肽(liraglutide)、利司那肽(lixisenatide)、他司魯肽(taspoglutide)、CJC-1131及BIM-51077，包括其鼻內、經皮及每週一次調配物)；膽汁酸螯合劑(例如，考來替蘭(colestilan)、科利醯胺(colestimide)、鹽酸科利伐蘭(colesevalam hydrochloride)、考來替潑(colestipol)、消膽胺(cholestyramine)及交聯聚葡萄糖之二烷基胺基烷基衍生物)、醯基CoA:膽固醇醯基轉移酶抑制劑(例如，阿伐麥布(avasimibe))；抗肥胖化合物；意欲用於發炎病狀之藥劑，諸如阿司匹林(aspirin)，非類固醇消炎藥或NSAID，糖皮質激素，及選擇性環加氧酶-2或COX-2抑制劑；葡糖激酶活化劑(GKA) (例如，AZD6370)；1型11β-羥基類固醇脫氫酶之抑制劑(例如，諸如美國專利第6,730,690號中所揭示之彼等者，及LY-2523199)；CETP抑制劑(例如，安特普(anacetrapib)、托徹普(torcetrapib)及伊特普(evacetrapib))；果糖1,6-二磷酸酶之抑制劑(例如，諸如美國專利第6,054,587號、第6,110,903號、第6,284,748號、第6,399,782號及第6,489,476號中所揭示之彼等者)；乙醯基CoA羧化酶-1或乙醯基CoA羧化酶-2 (ACC1或ACC2)之抑制劑；AMP活化蛋白激酶(AMPK)活化劑；G蛋白偶聯受體之其他促效劑：(i) GPR-109，(ii) GPR-119 (例如，MBX2982及PSN821)，及(iii) GPR-40 (例如，TAK875)；SSTR3拮抗劑(例如，諸如WO 2009/001836中所揭示之彼等者)；神經介肽U受體促效劑(例如，諸如WO 2009/042053中所揭示之彼等者，包括(但不限於)神經介肽S (NMS))；SCD調節劑；GPR-105拮抗劑(例如，諸如WO 2009/000087中所揭示之彼等者)；SGLT抑制劑(例如，ASP1941、SGLT-3、恩格列淨(empagliflozin)、達格列淨(dapagliflozin)、卡格列淨(canagliflozin)、BI-10773、埃格列淨(ertugliflozin)、雷莫格列淨(remogloflozin)、TS-071、托格列淨(tofogliflozin)、伊格列淨(ipragliflozin)及LX-4211)；醯基輔酶A:二醯甘油醯基轉移酶1及2 (DGAT-1及DGAT-2)之抑制劑；脂肪酸合成酶之抑制劑；醯基輔酶A:單醯甘油醯基轉移酶1及2 (MGAT-1及MGAT-2)之抑制劑；TGR5受體(亦被稱作GPBAR1、BG37、GPCR19、GPR131及M-BAR)之促效劑；迴腸膽汁酸轉運體抑制劑；PACAP、PACAP模擬物及PACAP 受體3促效劑；PPAR促效劑；蛋白質酪胺酸磷酸酶-1B (PTP-1B)抑制劑；IL-1b抗體(例如，XOMA052及康納單抗(canakinumab))；及甲磺酸溴麥角環肽及其快速釋放調配物；或有益於治療上文所提及之病狀或病症的其他藥物，包括上述活性劑之在化學上可能的游離酸、游離鹼及醫藥學上可接受之鹽形式。
根據以下反應流程及實例或其變體，使用現成可用的起始物質、試劑及習知合成步驟，可容易地製備本發明之化合物。在此等反應中，亦可利用已知變體。對於使用逆相層析(HPLC或MPLC，如下文所述)來純化該等化合物，使用C18管柱。根據以下反應流程及實例，一般熟習此項技術者將顯而易知用於製備本發明化合物之其他方法。可在本文中之例示性流程及/或實例中使用下列縮寫。
縮寫
ACN為乙腈；AcOH為乙酸；Boc為第三丁氧基羰基；Boc2
O為二碳酸二第三丁酯；BnBr為苯甲基溴；BzCl為苯甲醯氯；CBr4
為全溴甲烷或四溴甲烷；Cbz-Cl為氯甲酸苯甲酯；Cbz-OSu為N-(苯甲氧基羰氧基)丁二醯亞胺；Cs2
CO3
為碳酸銫；DCE為1,2-二氯乙烷；DCM為二氯甲烷；DIEA或DIPEA為N,N-二異丙基乙胺；DMF為N,N-二甲基甲醯胺；DMAP為4-二甲胺基吡啶；DMSO為二甲亞碸；DIAD為二氮烯-1,2-二甲酸(E)-二異丙酯；DMP為戴斯-馬丁(Dess-Martin)高碘烷；Et3
N為三乙胺；EA或EtOAc為乙酸乙酯；Et2
O為二乙醚；EtOH為乙醇；Fmoc為茀基甲氧羰基保護基；Fmoc-Cl為氯甲酸(9H-茀-9-基)甲酯；Fmoc-Osu為Fmoc N-羥基丁二醯亞胺酯；HATU為1-[雙(二甲胺基)亞甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡錠3-氧化物六氟磷酸酯；HPLC為高壓液相層析；Im為咪唑；IPA為異丙醇；IPAc為乙酸異丙酯；LC/MS為液相層析質譜分析；LiOH為氫氧化鋰；Me為甲基；MeOH為甲醇；MeI為碘甲烷；MgSO4
為硫酸鎂；MPLC為中壓液相層析；Na2
SO4
為硫酸鈉；NaHCO3
為碳酸氫鈉；Na2
CO3
為碳酸鈉；NaBH3
CN為氰基硼氫化鈉；NaBH(OAc)3
為三乙醯氧基硼氫化鈉；NaN3
為疊氮化鈉；NH4
Cl為氯化銨；NH4
HCO3
為碳酸氫銨；NMR為核磁共振；NsCl為4-硝基苯-1-磺醯氯；Oxyma為2-氰基-2-(羥亞胺基)乙酸乙酯；Pd/C為鈀/碳；PE為石油醚；Pd2
(dba)3
(HCCl3
)為參(二苯亞甲基丙酮)二鈀(0)-氯仿加合物；PPh3
或Ph3
P為三苯膦；Pd(dppf)Cl2
.CH2
Cl2
為二氯[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]鈀(II)二氯甲烷加合物；Pd(PPh3
)4
為肆(三苯基膦)鈀；RT或r.t.或rt為室溫；S-Phos為2-二環己基膦基-2',6'-二甲氧基二苯基；TBAB為溴化四丁基銨；TBAF為氟化四丁基銨；TBAHS為硫酸氫四丁基銨；TEA為三乙胺；TFA為三氟乙酸；THF為四氫呋喃；Tf2
O為三氟甲烷磺酸酐；TMS-重氮甲烷為三甲基矽基-重氮甲烷；Teoc-OSu為1-[2-(三甲基矽基)乙氧基羰氧基]吡咯啶-2,5-二酮。
根據以下反應流程及實例或其變體，結合現成可用的起始物質、試劑及習知合成步驟，可容易地製備本發明之化合物。本發明中亦可存在產物及中間物之替代鹽形式。根據以下反應流程及實例，一般熟習此項技術者將顯而易知用於製備本發明化合物之替代方法。舉例而言，在此等反應中，有可能利用已知變體。接下來為描述適用於製備本發明之實例化合物的中間物之製備的部分。除非另外指出，用於製備中間物及實例之試劑為市售的或可藉由已知方法製備。
適用於製備本發明之實例的中間物之製備
中間物
A
之製備
步驟 A - 中間物 A -1 之合成
在0℃下向N,N-二甲基乙烷-1,2-二胺(1.00 g，11.3 mmol)於DCM (20 mL)中之溶液中添加Boc2
O (3.42 mL，14.8 mmol)。將混合物在RT下攪拌1 h，接著減壓濃縮，且在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用1%-15%之MeOH/DCM梯度溶離)。將含有所需產物之溶離份合併且濃縮，得到A-1
。LC/MS：[M+H]+
= 189.2。
步驟 B - 中間物 A-2 之合成
向A-1
(500 mg，2.66 mmol)於乙腈(2 mL)中之溶液中添加6-溴己酸甲酯(1.67 g，7.97 mmol)。將反應混合物在50℃下攪拌16 h，接著減壓濃縮。將殘餘物用Et2
O稀釋，在RT下攪拌1 h，過濾，用Et2
O洗滌並乾燥，得到A-2
。LC/MS：[M]+
= 317.2。
步驟 C - 中間物 A 之合成
將A-2
(800 mg，2.01 mmol)於含4 M HCl之二㗁烷(10 mL)中之溶液在RT下攪拌4 h。將最終混合物減壓濃縮，用Et2
O稀釋，且在RT下攪拌2 h。過濾固體，用Et2
O沖洗並乾燥，得到中間物A
。LC/MS：[M]+
= 217.2。1
H NMR (400 MHz, DMSO-d 6
)：δ 8.64 (s, 3H), 3.68-3.56 (m, 5H), 3.40-3.33 (m, 2H), 3.33-3.22 (br, 2H), 3.12 (s, 6H), 2.36 (t,J
= 7.4 Hz, 2H), 1.79-1.66 (m, 2H), 1.65-1.54 (m, 2H), 1.36-1.25 (m, 2H)。
中間物
B
之製備
步驟 A - 中間物 B-1 之合成
在RT下向2,2'-氧基二乙醇(24.8 g，234 mmol)於THF (150 mL)中之混合物中添加鈉(0.054 g，2.34 mmol)，接著添加丙烯酸第三丁酯(10 g，78 mmol)，直至鈉溶解。將所得混合物在RT下攪拌16 h，接著藉由添加含飽和NH4
Cl之水(100 mL)而淬滅。用EtOAc萃取混合物，合併有機萃取物，用鹽水洗滌，經無水Na2
SO4
乾燥且濃縮。在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用40%-60%之EtOAc/PE梯度溶離)，得到B-1
。1
H NMR (300 MHz, CDCl3
)：δ 3.79-3.70 (m, 4H), 3.68-3.56 (m, 6H), 2.51 (t,J
= 6.3 Hz, 2H), 2.37 (s, 1H), 1.45 (s, 9H)。
步驟 B - 中間物 B-2 之合成
在0℃下向B-1
(5.00 g，21.3 mmol)及四溴化碳(21.2 g，64.0 mmol)於DCM (50 mL)中之混合物中添加三苯基膦(16.8 g，64.0 mmol)。將混合物在0℃下攪拌2 h，接著藉由添加水(100 mL)而淬滅。藉由過濾移除固體，且用EtOAc萃取濾液。合併有機萃取物，用鹽水洗滌，經Na2
SO4
乾燥且濃縮。在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用20%-50%之EtOAc/PE梯度溶離)，得到B-2
。1
H NMR (400 MHz, CD3
OD)：δ 3.81 (t,J
= 6.0 Hz, 2H), 3.73 (t,J
= 6.4 Hz, 2H), 3.68-3.60 (m, 4H), 3.52 (t,J
= 6.0 Hz, 2H), 2.50 (t,J
= 6.2 Hz, 2H), 1.48 (s, 9H)。
步驟 C - 中間物 B-3 之合成
在0℃下向B-2
(4.90 g，16.49 mmol)於DCM (25 mL)中之混合物中添加TFA (25 mL)。將混合物在RT下攪拌2 h，接著濃縮，得到B-3
。1
H NMR (300 MHz, DMSO-d 6
)：δ 3.78-3.70 (m, 2H), 3.67-3.48 (m, 8H), 2.46 (t,J
= 6.3 Hz, 2H)。
步驟 D - 中間物 B-4 之合成
在0℃下向B-3
(3.50 g，14.5 mmol)及NaHCO3
(4.88 g，58.1 mmol)於DMF (20 mL)中之混合物中添加MeI (8.24 g，58.1 mmol)。將混合物在RT下攪拌16 h，接著用水(200 mL)淬滅。用EtOAc萃取混合物，且合併有機萃取物，用鹽水洗滌，經Na2
SO4
乾燥且濃縮。在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用20%-45%之EtOAc/PE梯度溶離)，得到B-4
，其呈甲基-3-(2-(2-溴乙氧基)乙氧基)丙酸酯與甲基-3-(2-(2-碘乙氧基)乙氧基)丙酸酯之混合物(1:1)。LC/MS (溴化物)：[M+H]+
= 255.1及257.1；LC/MS (碘化物)：[M+H]+
= 303.0。
步驟 E - 中間物 B-5 之合成
在RT下向B-4
(400.0 mg，1.436 mmol)於EtOH (4 mL)中之溶液中添加(2-(甲胺基)乙基)胺基甲酸第三丁酯(1251 mg，7.18 mmol)。將混合物攪拌16 h，接著濃縮，且在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用0%-5%之MeOH/DCM梯度溶離)，得到B-5
。LC/MS：[M+H]+
= 349.3。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
)：δ 3.57(t,J
= 6.5 Hz, 2H), 3.50 (s, 3H), 3.47-3.34 (m, 6H), 3.02 (q,J
= 6.1, 5.6 Hz, 2H), 2.42 (q,J
= 6.3, 5.7 Hz, 4H), 2.35 (t,J
= 6.1 Hz, 2H),2.11 (s, 3H), 1.25 (s, 9H)。
步驟 F - 中間物 B-6 之合成
在RT下向B-5
(440.0 mg，1.263 mmol)於乙腈(10 mL)中之溶液中添加MeI (0.395 mL，6.31 mmol)，且將反應混合物攪拌36 h。將最終混合物濃縮，得到B-6
。LC/MS：[M]+
= 363.3。
步驟 G - 中間物 B 之合成
將B-6
(600 mg，1.224 mmol)於含4 M HCl之二㗁烷(12 mL)中之溶液在RT下攪拌4 h。將混合物減壓濃縮，且將殘餘物溶解於Et2
O中。將漿液在RT下攪拌2 h，接著過濾，且將固體用Et2
O沖洗並乾燥，得到中間物B
。LC/MS：[M]+
= 263.3。
中間物
C
之製備
步驟 A - 中間物 C-1 之合成
在RT下向2-(2-(2-胺基乙氧基)乙氧基)乙酸甲酯(1.28 g，7.22 mmol)及三聚甲醛(0.433 g，14.5 mmol)於DCE (20 mL)中之溶液中添加MgSO4
(8.69 g，72.2 mmol)及TEA (3.02 mL，21.7 mmol)，且將反應物攪拌30 min。將NaBH(OAc)3
(4.59 g，21.7 mmol)添加至混合物中，且將反應物在RT下攪拌16 h。過濾反應混合物，減壓濃縮濾液，且在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用1%-16%之MeOH/DCM梯度溶離)，得到C-1
。LC/MS：[M+H]+
= 206.2。1
H NMR (300 MHz, CD3
OD)：δ 4.18 (s, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.74-3.65 (m, 6H), 3.05-2.92 (m, 2H), 2.63 (s, 6H)。
步驟 B - 中間物 C-2 之合成
在RT下向C-1
(600 mg，2.92 mmol)於乙腈(12 mL)中之溶液中添加(2-(2-溴乙氧基)乙基)胺基甲酸第三丁酯(6.27 g，23.4 mmol)及NaHCO3
(737 mg，8.77 mmol)。將混合物在50℃下攪拌16 h，接著將其冷卻至RT並過濾。減壓濃縮濾液，且在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用10%-20%之MeOH/DCM梯度溶離)，得到C-2
。LC/MS：[M]+
= 393.3。
步驟 C - 中間物 C 之合成
在RT下向2 M HCl於EtOAc (4 mL)中之溶液中添加C-2
(330 mg，0.700 mmol)，且將反應物攪拌1.5 h。減壓濃縮溶劑，將物質溶解於DCM中，接著減壓濃縮，得到中間物C
。LC/MS：[M]+
= 293.3。
中間物
D
之製備
步驟 A - 中間物 D-1 之合成
在10℃下向(2-羥乙基)(甲基)胺基甲酸第三丁酯(2.0 g，11.41 mmol)於甲苯(200 mL)及35% NaOH水溶液(200 mL，11.41 mmol)中之溶液中添加TBAB (1.10 g，3.42 mmol)及2-溴乙酸第三丁酯(2.23 g，11.41 mmol)，接著將反應物在RT下攪拌30 min。將最終混合物用Et2
O稀釋，用鹽水、0.1 N HCl水溶液及鹽水洗滌，接著經無水MgSO4
乾燥並過濾。減壓濃縮濾液，得到D-1
。LC/MS：[M+H]+
= 290.2。
步驟 B - 中間物 D-2 之合成
在RT下向D-1
(3.2 g，11.06 mmol)於THF (32 mL)中之溶液中添加1 M NaOH水溶液(1.769 g，44.2 mmol)，接著將混合物升溫至40℃且攪拌24 h。在0℃下將溶液用1 M HCl水溶液(45 mL)淬滅，且用Me-THF (100 mL)稀釋。將有機層用鹽水洗滌，經無水MgSO4
乾燥且過濾。減壓濃縮濾液，得到D-2
。LC/MS：[M+H]+
= 234.1。
步驟 C - 中間物 D-3 之合成
在RT下向D-2
(2.80 g，12.00 mmol)於DMF (28 mL)中之溶液中添加NaHCO3
(5.04 g，60.0 mmol)及MeI (3.00 mL，48.0 mmol)，且將反應物攪拌24 h。將混合物用鹽水稀釋，用EA萃取，用鹽水洗滌，經無水MgSO4
乾燥且過濾。減壓濃縮濾液，且在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用1%-50%之EtOAc/PE梯度溶離)，得到D-3
。LC/MS：[M+H]+
= 248.2。
步驟 D - 中間物 D-4 之合成
在0℃下向D-3
(2.00 g，8.09 mmol)於DCM (30 mL)中之溶液中添加TFA (10 mL)，接著將混合物在RT下攪拌3 h。將最終溶液減壓濃縮，得到D-4
。LC/MS：[M+H]+
= 148.2。
步驟 E - 中間物 D-5 之合成
在RT下向D-4
(1.7 g，6.51 mmol)於DCE (17 mL)中之溶液中添加三聚甲醛(3.91 g，65.1 mmol)。將反應物用MgSO4
處理，且在RT下攪拌30 min，接著向溶液中添加NaBH(OAc)3
(6.90 g，32.5 mmol)。將混合物在RT下攪拌16 h，接著過濾。減壓濃縮濾液，且在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用0%-15%之MeOH (+10%氨水)/DCM梯度溶離)，得到D-5
。1
H NMR (400 MHz, CD3
OD)：δ 4.15 (s, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.69 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 2.63 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 2.33 (s, 6H)。
步驟 F - 中間物 D-6 之合成
在RT下向D-5
(800 mg，4.96 mmol)於乙腈(10 mL)中之溶液中添加(2-(2-溴乙氧基)乙基)胺基甲酸第三丁酯(6.65 g，24.81 mmol)及NaHCO3
(2.09 g，24.81 mmol)，接著將反應物在55℃下攪拌16 h。將最終混合物冷卻，過濾，減壓濃縮濾液，且在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用0%-20%之MeOH/DCM梯度溶離)，得到D-6
。LC/MS：[M]+
= 349.1。1
H NMR (300 MHz, CD3
OD)：δ 4.23 (s, 2H), 4.06-3.89 (m, 4H), 3.79 -3.70 (m, 7H), 3.56 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 3.31-3.21 (m, 8H), 1.46 (s, 9H)。
步驟 G - 中間物 D 之合成
在RT下向2 M HCl於EtOAc (30 mL)中之溶液中添加D-6
(1.3 g，3.03 mmol)，且將反應物攪拌1 h。減壓濃縮溶劑，得到中間物D
。LC/MS：[M]+
= 249.2。
中間物
E
之製備
步驟 A - 中間物 E-1 之合成
在RT下向C-1
(1.00 g，4.87 mmol)於乙腈(15 mL)中之溶液中添加(2-溴乙基)胺基甲酸第三丁酯(6.55 g，29.2 mmol)，接著將溶液在50℃下攪拌16 h。將最終混合物冷卻，過濾，減壓濃縮濾液，且在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用0%-10%之MeOH/DCM梯度溶離)，得到E-1
。LC/MS：[M]+
= 349.1。1
H NMR (400 MHz, CD3
OD)：δ 4.20 (s, 2H), 4.01-3.99 (m, 2H), 3.77-3.75 (m, 4H), 3.73-3.72 (m, 4H), 3.69-3.66 (m, 2H), 3.55 (s, 3H), 3.25 (s, 6H), 1.34 (s, 9H)。
步驟 B - 中間物 E 之合成
在RT下向2 M HCl於EtOAc (4 mL)中之溶液中添加E-1
(330 mg，0.780 mmol)，且將反應物攪拌1.5 h。減壓濃縮溶劑，將物質溶解於DCM中，接著減壓濃縮，得到中間物E
。LC/MS：[M]+
= 249.1。
中間物
F
之製備
步驟 A - 中間物 F-1 之合成
在RT下向A-1
(4.90 g，26 mmol)於乙腈(20 ml)中之溶液中添加4-溴丁酸甲酯(7.24 ml，57.2 mmol)，且將混合物升溫至50℃並攪拌隔夜。濃縮反應物，且用Et2
O稀釋殘餘物。將漿液在RT下攪拌2 h，且過濾固體，用Et2
O沖洗並乾燥，得到F-1
。LC/MS：[M]+
= 289.14。
步驟 B - 中間物 F 之合成
將F-1
(8.92 g，24.15 mmol)於含4 N HCl之二㗁烷(60.4 ml，242 mmol)中之溶液攪拌2 h。將反應物濃縮，用Et2
O稀釋，攪拌2 h，接著濃縮，得到中間物F
。1
H NMR (400 MHz, DMSO-d 6
)：δ 8.54 (s, 3H), 3.65-3.45 (m, 5H), 3.40-3.20 (m, 4H), 3.12 (s, 6H), 2.41 (t,J
= 7.4 Hz, 2H), 2.00-1.90 (m, 2H)。
中間物
G
之製備
步驟 A - 中間物 G-1 之合成
在RT下向8-((第三丁氧基羰基)胺基)辛酸(5.00 g，19.28 mmol)於DMF (100 mL)中之溶液中添加NaHCO3
(8.10 g，96 mmol)及MeI (4.82 mL，77 mmol)，且將混合物攪拌24 h。將溶液用鹽水稀釋，用EtOAc萃取，用鹽水洗滌，經MgSO4
乾燥且過濾。濃縮濾液，且在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用1%-25%之EtOAc/PE梯度溶離)，得到G-1
。LC/MS：[M+H]+
= 274.2。
步驟 B - 中間物 G-2 之合成
將G-1
(3.9 g，14.27 mmol)於含4 M HCl之二㗁烷(40 mL)中之溶液在RT下攪拌2 h，接著減壓濃縮。將殘餘物溶解於DCM (50 mL)中，且減壓濃縮，得到G-2
。LC/MS：[M+H]+
= 174.2。
步驟 C - 中間物 G-3 之合成
在0℃下向G-2
(2.6 g，12.40 mmol)於DMF (30 mL)中之溶液中添加DIPEA (4.81 g，37.2 mmol)及庚醯氯(1.843 g，12.40 mmol)，且將混合物在0℃下攪拌1 h。將溶液用鹽水稀釋，用DCM萃取，用鹽水洗滌，經無水MgSO4
乾燥且過濾。濃縮濾液，且在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用1%-30%之EtOAc/PE梯度溶離)，得到G-3
。LC/MS：[M+H]+
= 286.3。
步驟 D - 中間物 G 之合成
在RT下向G-3
(2.00 g，7.01 mmol)於THF (20 mL)中之溶液中添加2M LiOH水溶液(14.01 mL，28.0 mmol)，且將混合物攪拌16 h。將溶液用1 M HCl水溶液(28 mL)淬滅，用鹽水稀釋，用EtOAc萃取，用鹽水洗滌，經MgSO4
乾燥且過濾。濃縮濾液，且將殘餘物溶解於Et2
O (20 mL)中，且在RT下攪拌1 h。過濾固體，用Et2
O洗滌並乾燥，得到中間物G
。LC/MS：[M+H]+
= 272.2。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
)：δ 2.97 (td, J = 6.6, 6.2, 1.9 Hz, 2H), 2.10 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 1.98 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.41 (tt, J = 9.8, 5.6 Hz, 4H), 1.31 (p, J = 7.0 Hz, 2H), 1.25-1.05 (m, 12H), 0.81-0.67 (m, 3H)。
中間物
H
之製備
步驟 A - 中間物 H-1 之合成
在RT下向9-羥基壬酸甲酯(5 g，26.6 mmol)於THF (50 mL)中之溶液中添加1 M LiOH水溶液(53.1 mL，53.1 mmol)，接著將溶液攪拌1 h。用1 N HCl水溶液將溶液調節至pH 2，接著用EA (2 × 100 mL)萃取。合併之有機層用鹽水洗滌，經無水Na2
SO4
乾燥且過濾。減壓濃縮濾液，得到H-1
。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
)：δ 3.64 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 2.34 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.66-1.52 (m, 4H), 1.38-1.29 (m, 8H)。
步驟 B - 中間物 H-2 之合成
在RT下向H-1
(4.6 g，26.4 mmol)於DCM (50 mL)中之溶液中添加鄰第三丁基N,N'-二異丙基異脲(26.4 g，132 mmol)，接著將溶液在50℃下攪拌5 h。將最終混合物減壓濃縮，且在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用1%-30%之EtOAc/PE梯度溶離)，得到H-2
。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
)：δ 3.64 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 2.20 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.61-1.52 (m, 4H), 1.44 (s, 9H), 1.36-1.27 (m, 8H)。
步驟 C - 中間物 H-3 之合成
在0℃下向H-2
(3 g，13.0 mmol)於DCM (10 mL)中之溶液中添加CBr4
(8.64 g，26.0 mmol)及Ph3
P (5.12 g，19.5 mmol)，接著將反應物在RT下攪拌2 h。將最終混合物減壓濃縮，且在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用1%-10%之EtOAc/PE梯度溶離)，得到H-3
。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
)：δ 3.41 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.20 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.90-1.80 (m, 2H), 1.61-1.39 (m, 13H), 1.36-1.26 (m, 6H)。
步驟 D - 中間物 H-4 之合成
在0℃下向H-3
(3.3 g，11.2 mmol)及庚-1,7-二醇(2.98 g，22.5 mmol)於苯(40 mL)中之溶液中添加50% NaOH水溶液(16 mL)及TBAHS (3.82 g，11.25 mmol)，接著將反應混合物在RT下攪拌16 h。將最終溶液用水稀釋，用EtOAc萃取，且合併之有機層用鹽水洗滌，經無水Na2
SO4
乾燥且過濾。減壓濃縮濾液，且在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用1%-30%之EtOAc/PE梯度溶離)，得到H-4
。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
)：δ 3.64 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 3.45-3.33 (m, 4H), 2.20 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.59-1.55 (m, 8H), 1.44 (s, 9H), 1.39-1.25 (m, 14H)。
步驟 E - 中間物 H-5 之合成
在0℃下向H-4
(1.9 g，5.5 mmol)於DCM (20 mL)中之溶液中添加DMP (4.68 g，11.0 mmol)，接著將反應混合物在RT下攪拌2 h。最終溶液藉由飽和Na2
S2
O3
/NaHCO3
水溶液(100 mL)淬滅，且用EtOAc (2 × 50 mL)萃取。合併之有機層用鹽水洗滌，經無水Na2
SO4
乾燥且過濾。減壓濃縮濾液，且藉由矽膠管柱層析來純化殘餘物(用1%-10%之EtOAc/PE梯度溶離)，得到H-5
。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
)：δ 9.76 (t, J = 1.8 Hz, 1H), 3.45-3.29 (m, 4H), 2.47-2.38 (m, 2H), 2.20 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.68-1.53 (m, 8H), 1.44 (s, 9H), 1.40-1.26 (m, 12H)。
步驟 F - 中間物 H-6 之合成
在RT下向H-5
(1.2 g，3.50 mmol)於甲苯(20 mL)中之溶液中添加(三苯基亞正膦基)乙酸苯甲酯(2.88 g，7.01 mmol)，接著將反應物攪拌16 h。將最終溶液減壓濃縮，且在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用1%-5%之EtOAc/PE梯度溶離)，得到H-6
。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
)：δ 7.42-7.28 (m, 5H), 7.01 (dt, J = 15.7, 7.0 Hz, 1H), 5.86 (dt, J = 15.7, 1.6 Hz, 1H), 5.17 (s, 2H), 3.38 (td, J = 6.7, 1.0 Hz, 4H), 2.26-2.14 (m, 4H), 1.61-1.53 (m, 6H), 1.50-1.41 (s, 11H), 1.38-1.24 (m, 12H)。
步驟 G - 中間物 H 之合成
在RT下在氮氣氛圍下向H-6
(900 mg，1.90 mmol)於THF (20 mL)中之溶液中添加10% Pd/C (100 mg，0.094 mmol)。將混合物用氫氣脫氣3次，且在氫氣(1.5大氣壓)下在RT下攪拌16 h。最終混合物經由矽藻土過濾，且減壓濃縮濾液，得到中間物H
。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
)：δ 3.39 (t, J = 6.7 Hz, 4H), 2.35 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.20 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.67-1.49 (m, 8H), 1.44 (s, 9H), 1.38-1.26 (m, 16H)。
中間物
I
之製備
步驟 A - 中間物 I-1 之合成
在RT下在氮氣下向2,2'-氧基雙(乙-1-醇) (35.1 ml，370 mmol)於THF (247 ml)中之溶液中添加鈉(0.085 g，3.70 mmol)，接著添加丙烯酸苯甲酯(18.87 ml，123 mmol)，且將所得混合物在RT下攪拌隔夜。最終混合物用飽和NH4
Cl水溶液淬滅，用EtOAc萃取，用鹽水洗滌，經MgSO4
乾燥，過濾且濃縮。在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用0%-80%之EtOAc/己烷梯度溶離)，得到I-1
。LC/MS：[M+H]+
= 269.23。
步驟 B - 中間物 I-2 之合成
在0℃下經10 min向I-1
(1.69 g，6.30 mmol)及四溴化碳(6.27 g，18.90 mmol)於DCM (15.75 ml)中之溶液中逐份添加三苯基膦(4.96 g，18.90 mmol)，接著將所得混合物在0℃下攪拌2 h。最終混合物用水淬滅，用DCM萃取，經MgSO4
乾燥且過濾。濃縮濾液，且在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用0%-60%之EtOAc/己烷梯度溶離)，得到I-2
。LC/MS：[M+H]+
= 331.2, 333.2。
步驟 C - 中間物 I-3 之合成
在RT下向I-2
(3.17 g，9.57 mmol)於EtOH (9.57 ml)中之溶液中添加2-(甲胺基)乙基胺基甲酸第三丁酯(8.34 g，47.9 mmol)及碘化鈉(0.072 g，0.479 mmol)，接著將反應混合物在RT下攪拌72 h。將最終混合物濃縮，且在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用0%-10%之MeOH/DCM梯度溶離)，得到I-3
。LC/MS：[M+H]+
= 425.4。
步驟 D - 中間物 I-4 之合成
在RT下向I-3
(1.48 g，3.49 mmol)於乙腈(11.62 ml)中之溶液中添加碘甲烷(1.085 ml，17.43 mmol)。將反應混合物在RT下攪拌隔夜，接著濃縮，得到I-4
。LC/MS：[M]+
= 439.4。
步驟 E - 中間物 I 之合成
在RT下向I-4
(1.97 g，3.48 mmol)於DCM (17.39 ml)中之溶液中添加含4 M HCl之二㗁烷(3.48 ml，13.91 mmol)，且將混合物在RT下攪拌2.5 h。將最終溶液濃縮，接著將殘餘物溶解於1:1之乙腈:水中並凍乾，得到中間物I
。LC/MS：[M]+
= 339.4。
中間物
J
之製備
步驟 A - 中間物 J-1 之合成
在0℃下向(S)-2-甲基吡咯啶-2-甲酸甲酯鹽酸鹽(7.00 g，39 mmol)及(S)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-(4-甲氧基苯基)丙酸(12.08 g，40.9 mmol)於DMF (100 ml)中之溶液中添加DIPEA (17.01 ml，97.0 mmol)，接著添加HATU (19.26 g，50.7 mmol)，且將所得混合物升溫至RT並攪拌隔夜。將反應物用10% LiCl水溶液淬滅，且用EtOAc萃取。合併之有機層用10% LiCl水溶液洗滌，經MgSO4
乾燥且過濾。減壓濃縮濾液，且在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用20%-60%之EtOAc/己烷梯度溶離)，得到J-1
。LC/MS：[M+H]+
= 421.3。
步驟 B - 中間物 J-2 之合成
向J-1
(16.4 g，39.0 mmol)於EtOAc (100 ml)中之溶液中添加含4 N HCl之二㗁烷(48.8 ml，195 mmol)。將所得混合物在室溫下攪拌18 h，且減壓濃縮，得到J-2
。
步驟 C - 中間物 J-3 之合成
在0℃下向J-2
(13.2 g，37.0 mmol)及N-((苯甲氧基)羰基)-O-(第三丁基)-L-蘇胺酸(18.15 g，37.0 mmol)於DMF中之溶液中添加DIPEA (16.15 ml，92 mmol)，接著添加HATU (18.28 g，48.1 mmol)，且將所得混合物升溫至RT並攪拌隔夜。將反應物用10% LiCl水溶液淬滅，且用EtOAc萃取。合併之有機層用10% LiCl水溶液洗滌，經MgSO4
乾燥且過濾。減壓濃縮濾液，且在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用20%-60%之EtOAc/己烷梯度溶離)，得到J-3
。
步驟 D - 中間物 J-4 之合成
向J-3
(16.5 g，27.0 mmol)於MeOH中之溶液中添加10% Pd/C之漿液，且將混合物在20 psi下氫化4 h。反應混合物經由矽藻土過濾，且減壓濃縮濾液。接著將粗產物再溶解於DCM中，且溶液經由2 μm濾紙過濾並濃縮，得到J-4
。
步驟 E - 中間物 J-5 之合成
在RT下向J-4
(10.34 g，21.65 mmol)於THF (100 ml)中之溶液中添加2 N單水合氫氧化鋰(43.3 ml，87 mmol)，且將混合物升溫至45℃並攪拌隔夜，得到呈粗產物溶液形式之J-5
。LC/MS：[M+H]+
= 464.3。將反應混合物冷卻至0℃，且用1 M HCl水溶液(40 mL)處理。所得J-5
溶液不經進一步純化即直接用於下一步驟中。
步驟 F - 中間物 J 之合成
在0℃下向前一步驟中所製備之粗產物J-5
溶液中添加NaHCO3
(1.725 g，20.54 mmol)及Fmoc-OSu (3.81 g，11.30 mmol)。將反應混合物在0℃下攪拌2 h，接著用1 M HCl水溶液(20.5 mL)處理，且用EtOAc (2 × 200 mL)萃取。合併之有機層用鹽水(2 × 100 mL)洗滌，經Na2
SO4
乾燥，過濾且減壓濃縮濾液。在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用2%-5%之MeOH/DCM梯度溶離)，得到中間物J
。LC/MS：[M+H]+
= 686.4。
中間物
K
之製備
步驟 A - 中間物 K-1 之合成
將4-溴苯甲醛(15.00 g，81 mmol)、第三丁基N-[2-(三氟甲硼烷)乙基]胺基甲酸鉀(20.97 g，84 mmol)、碳酸銫(52.8 g，162 mmol)及1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵-二氯化鈀(II)二氯甲烷錯合物(1.99 g，2.43 mmol)於脫氣甲苯(250 ml)及水(85 ml)中之溶液升溫至76℃且攪拌隔夜。混合物在RT下用半飽和NH4
Cl水溶液淬滅，且用EtOAc萃取。將合併之有機溶離份用鹽水洗滌，經Na2
SO4
乾燥，過濾，且真空濃縮濾液。在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用EtOAc/DCM梯度溶離)，得到K-1
。LC/MS：[M-56]+
= 193.0.
步驟 B - 中間物 K-2 之合成
在RT下在水浴中，向K-1
(12.9 g，51.7 mmol)及戊-4-烯-1-胺(6.61 g，78 mmol)於DCM (120 ml)及AcOH (3 ml)中之溶液中逐份添加三乙醯氧基硼氫化鈉(32.9 g，155 mmol)，且將混合物攪拌30 min。將反應物在0℃下用水(3 ml)緩慢淬滅，倒入1 N NaOH水溶液(500 ml)中，攪拌15 min，接著用DCM萃取，經Na2
SO4
乾燥，且濃縮。在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用MeOH/DCM梯度溶離)，得到K-2
。LC/MS：[M+H]+
= 319.2。
步驟 C - 中間物 K-3 之合成
向K-2
(8.48 g，20.77 mmol)及4-甲氧基-4-側氧基丁酸(3.02 g，22.85 mmol)於DMF (40 ml)中之溶液中添加HATU (9.48 g，24.92 mmol)及DIPEA (8.71 ml，49.8 mmol)。將所得溶液在RT下攪拌1 h，接著用飽和NaHCO3
水溶液(10 mL)淬滅。將混合物分配於EtOAc (500 mL)與飽和NaHCO3
水溶液(200 mL)之間，將有機相用鹽水(3×200 mL)洗滌，經Na2
SO4
乾燥，濃縮，且在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用EtOAc/己烷梯度溶離)，得到K-3
。LC/MS：[M+H]+
= 433.4。
步驟 D - 中間物 K 之合成
在RT下向K-3
(2.9 g，6.70 mmol)於DCM (15 mL)中之溶液中添加含4 M HCl之二㗁烷(10 mL)，且將反應混合物在RT下攪拌1 h。將混合物減壓濃縮，得到中間物K
。LC/MS：[M+H]+
= 333.3。
中間物
L
之製備
步驟 A - 中間物 L-1 之合成
在0℃下向D-Dap(Boc)-OMe HCl鹽(4.10 g，16.10 mmol)、Fmoc-Ala-OH (5.01 g，16.10 mmol)及HATU (6.43 g，16.90 mmol)於DMF (40 ml)中之溶液中添加DIPEA (7.03 ml，40.2 mmol)，且將混合物在0℃下攪拌2 h，接著在冷凍機中保持隔夜。混合物在RT下用水淬滅，且用EtOAc萃取。將合併之有機溶離份用半鹽水洗滌，經Na2
SO4
乾燥，過濾，且真空濃縮濾液。在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用EtOAc/己烷梯度溶離)，得到L-1
。LC/MS：[M+H]+
= 512.3。
步驟 B - 中間物 L 之合成
在RT下向L-1
(8.03 g，15.70 mmol)及0.8 N氯化鈣(19.62 ml，15.70 mmol)於水(40 ml)及2-丙醇(120 ml)中之溶液中添加固體氫氧化鈉(0.691 g，17.27 mmol)。將混合物在室溫下攪拌隔夜。將最終混合物濃縮，用0.5 N HCl水溶液酸化至pH約2 (約40 mL)，用EtOAc萃取三次，用鹽水洗滌，經Na2
SO4
乾燥且濃縮。在C18上藉由逆相MPLC來純化殘餘物(用乙腈/水(+ 0.1% TFA)梯度溶離)，得到中間物L
。LC/MS：[M+H]+
= 498.2。
中間物
M
之製備
步驟 A - 中間物 M-1 之合成
在0℃下向(2S,3S)-3-羥基吡咯啶-2-甲酸(5.32 g，40.6 mmol)於二㗁烷(100 ml)中之懸浮液中添加1N NaOH水溶液(122 ml，122 mmol)，隨後逐滴添加氯甲酸苯甲酯(6.50 ml，44.6 mmol)，接著將所得懸浮液在0℃下攪拌5 h。濃縮溶液，將水層酸化至pH 3，分配於含30% IPA之DCM (200 mL)與鹽水(50 mL)之間，且用含30% IPA之DCM (2×100 mL)進一步萃取水相。合併之有機層經Na2
SO4
乾燥，過濾，且濃縮濾液，得到M-1
。LC/MS：[M+H]+
= 266.1。
步驟 B - 中間物 M-2 之合成
向M-1
(7.48 g，28.2 mmol)於MeOH (80 ml)中之溶液中逐滴添加TMS-重氮甲烷(70.5 ml，141 mmol)，且將所得溶液在RT下攪拌10 min，接著藉由逐滴添加乙酸(約400 μL)而淬滅。濃縮溶液，且在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用EtOAc/己烷梯度溶離)，得到M-2
。LC/MS：[M+H]+
= 280.1。
步驟 C - 中間物 M-3 之合成
向M-2
(4.81 g，17.22 mmol)於DCM (200 mL)中之溶液中鼓泡通入氮氣持續30 min，隨後添加乙酸銠(ii)二聚體(0.761 g，1.722 mmol)。在冰水浴中冷卻混合物，且在0℃下逐滴添加重氮乙酸第三丁酯(3.58 mL，25.8 mmol)。將所得混合物在0℃下攪拌1.5 h。藉由添加水(100 mL)淬滅最終反應物，用DCM (3×100 mL)萃取混合物，且合併之有機層經Na2
SO4
乾燥並過濾。濃縮濾液，且在C18上藉由逆相MPLC來純化殘餘物(用乙腈(+0.05% TFA)/水(+0.05% TFA)梯度溶離)。濃縮含有產物之溶離份，且用DCM (2×100 mL)萃取所得水相。合併之有機相經Na2
SO4
乾燥，過濾且濃縮，得到M-3
。LC/MS：[M+H]+
= 394.2。
步驟 D - 中間物 M-4 之合成
向M-3
(3.72 g，9.46 mmol)於MeOH (80 ml)中之溶液中添加10% Pd/C (0.805 g，0.756 mmol)，且在RT下使用填充氫氣之氣球對所得混合物進行氫化，持續2 h。經由矽藻土過濾最終混合物，且濃縮濾液，得到M-4
。LC/MS：[M+H]+
= 259.9。
步驟 E - 中間物 M-5 之合成
在0℃下向(S)-2-((((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-3-(5-氟-1H-吲哚-3-基)丙酸(3 g，6.75 mmol)於THF (20 ml)、MeOH (10 mL)及水(20.00 ml)中之溶液中添加1N NaOH水溶液(20.25 ml，20.25 mmol)，且將所得溶液在RT下攪拌4 h，接著濃縮。向混合物水溶液中添加二㗁烷(50 ml)及水(20 mL)，將所得溶液冷卻至0℃，且添加Boc2
O (1.881 ml，8.10 mmol)。將所得溶液在0℃下攪拌3 h，接著濃縮，且將水相用Et2
O (3×40 mL)萃取，酸化至pH 3，接著用DCM (3×100 mL)萃取，隨後用含30% IPA之DCM (2×80 mL)萃取。合併之有機層經Na2
SO4
乾燥，過濾且濃縮，得到M-5
。LC/MS：[M+H]+
= 322.9。
步驟 F - 中間物 M-6 之合成
在0℃下向M-5
(2.079 g，6.45 mmol)於DMF (40 ml)中之溶液中添加含60% NaH之己烷(0.568 g，14.19 mmol)，且將所得溶液在0℃下攪拌50 min，隨後逐滴添加烯丙基溴(1.172 mL，13.54 mmol)。將所得溶液在0℃下攪拌1.5 h，接著藉由添加1N HCl水溶液(約3.68 mL)而淬滅。接著將溶液分配於EtOAc (200 mL)與水(100 mL)之間，將有機相用鹽水(2×100 mL)洗滌，經Na2
SO4
乾燥，過濾且濃縮，且在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用MeOH/DCM梯度溶離)，得到M-6
。LC/MS：[M+H]+
= 363.0。
步驟 G - 中間物 M-7 之合成
向M-6
(2.239 g，6.18 mmol)及M-4
(1.842 g，7.11 mmol)於DMF (30 ml)中之溶液中添加HATU (2.82 g，7.41 mmol)及DIEA (2.59 ml，14.83 mmol)，且將所得溶液在RT下攪拌1 h。將混合物分配於EtOAc (200 mL)與鹽水(100 mL)之間，將有機相用鹽水(3×100 mL)洗滌，經Na2
SO4
乾燥，過濾且濃縮，且在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用EtOAc/己烷梯度溶離)，得到M-7
。LC/MS：[M+H]+
= 604.2。
步驟 H - 中間物 M-8 之合成
在0℃下向M-7
(2.83 g，4.69 mmol)於DCM (20 ml)及tBuOAc (30 ml)中之溶液中添加甲磺酸(1.218 ml，18.75 mmol)，且將所得溶液在0℃下攪拌16.5 h，接著在RT下攪拌2.5 h。含有產物M-8
之溶液不經進一步純化即用於下一步驟中。LC/MS：[M+H]+
= 504.2。
步驟 I - 中間物 M-9 之合成
向(S)-2-((((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-3-(3-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)苯基)丙酸(2.66 g，5.16 mmol)於DMF (10 ml)中之溶液中添加HATU (1.961 g，5.16 mmol)及DIEA (5.32 ml，30.5 mmol)，且將所得溶液在RT下攪拌30 min，接著添加至以上所製備之含有M-8
之溶液之冰冷浴中。將所得溶液在RT下攪拌1 h，接著減壓濃縮。在C18上藉由逆相MPLC來純化殘餘物(用乙腈(+0.05% TFA)/水(+0.05% TFA)梯度溶離)，得到M-9
。LC/MS：[M+H]+
= 1002.1。
步驟 J - 中間物 M-10 之合成
向M-9
(3.235 g，3.23 mmol)於DCM (4 ml)中之溶液中添加TFA (7.46 ml，97 mmol)，且將所得溶液在RT下攪拌1 h，接著濃縮。將殘餘物溶解於DCM (10 mL)中，用含4 N HCl之二㗁烷(3.23 ml，12.91 mmol)處理，並濃縮。將殘餘物溶解於乙腈(100 mL)及水(50 mL)中並凍乾，得到M-10
。LC/MS：[M+H]+
= 846.1。
步驟 K - 中間物 M-11 之合成
向M-10
(2.85 g，3.23 mmol)於DMF (45 ml)中之溶液中添加HATU (1.474 g，3.88 mmol)，且將所得溶液在RT下攪拌30 min，接著用DCM (600 ml)稀釋，隨後逐滴添加DIEA (1.692 ml，9.69 mmol)。將所得溶液在環境溫度下攪拌1 h。將最終溶液濃縮，且在C18上藉由逆相MPLC來純化殘餘物(用乙腈(+0.05% TFA)/水(+0.05% TFA)梯度溶離)。濃縮含有產物之溶離份，且將水層分配於DCM (200 mL)與飽和NaHCO3
(200 mL)之間。用DCM (2×100 mL)進一步萃取水相，且合併之有機層經Na2
SO4
乾燥，過濾且濃縮，得到M-11
。LC/MS：[M+H]+
= 828.1。
步驟 L - 中間物 M 之合成
在0℃下向M-11
(1.93 g，2.331 mmol)於THF (60 ml)、MeOH (30 ml)及水(20 ml)中之溶液中逐滴添加1N LiOH水溶液(9.9 ml，9.90 mmol)，且將所得溶液在0℃下攪拌16 h，接著藉由添加1N HCl水溶液(9.9 mL)而淬滅。將混合物減壓濃縮，且在0℃下向所得溶液中添加丙酮(60 ml)、碳酸鈉(0.371 g，3.50 mmol)及Fmoc-Osu (0.802 g，2.378 mmol)。將所得溶液在0℃下攪拌6 h，減壓濃縮，接著將水相酸化至pH 4，且用含30% IPA之DCM (3×100 mL)萃取。合併之有機層經Na2
SO4
乾燥，過濾且濃縮，且在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用MeOH/DCM梯度溶離)，得到中間物M
。LC/MS：[M+H]+
= 814.2。
中間物
N
之製備
步驟 A - 中間物 N-1 之合成
在0℃下向中間物J
(7.09 g，10.33 mmol)於DMF (45 ml)中之溶液中添加中間物K
(3.63 g，9.84 mmol)及HATU (3.74 g，9.84 mmol)，隨後添加DIPEA (6.87 ml，39.4 mmol)，且將混合物升溫至RT並攪拌1 h。將最終混合物在0℃下用鹽水淬滅，且用EtOAc萃取。將合併之有機溶離份用鹽水洗滌，經MgSO4
乾燥，過濾且真空濃縮。在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用1%-80%之EtOAc/PE梯度溶離)，得到N-1
。LC/MS：[M+H]+
= 1000.5。
步驟 B - 中間物 N-2 之合成
向N-1
(3.48 g，3.48 mmol)於乙腈(50 ml)中之溶液中添加哌啶(1.72 ml，17.40 mmol)，且將所得溶液在RT下攪拌3 h。濃縮混合物，將殘餘物再溶解於1:1之DCM:乙腈(20 mL)中，再次濃縮，且將殘餘物真空乾燥，得到N-2
。LC/MS：[M+H]+
= 778.5。
步驟 C - 中間物 N-3 之合成
在0℃下向中間物M
(2.45 g，3.01 mmol)及N-2
(2.69 g，3.46 mmol)於DMF (70 ml)中之溶液中添加HATU (1.37 g，3.61 mmol)，隨後添加DIEA (1.05 ml，6.02 mmol)，接著將所得溶液在RT下攪拌50 min。將最終混合物分配於EtOAc (500 mL)與鹽水(200 mL)之間。將有機相用鹽水(2×200 mL)洗滌，經Na2
SO4
乾燥，過濾且濃縮，且在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用1%-5%之MeOH/DCM梯度溶離)，得到N-3
。LC/MS：[M+H]+
= 1574.7。
步驟 D - 中間物 N-4 之合成
在RT下向N-3
(1.91 g，1.21 mmol)於DCM (1500 ml)及乙酸(30 mL)中之溶液中鼓泡通入氮氣持續30 min，隨後添加Zhan氏催化劑-1B (0.445 g，0.607 mmol)。在RT下向所得混合物中進一步鼓泡通入氮氣持續30 min，接著在55℃下加熱5 h。在冷卻至RT之後，經由矽藻土過濾混合物，濃縮濾液，且在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用1%-5%之MeOH/DCM梯度溶離)，得到N-4
(呈順式烯烴與反式烯烴之混合物形式)。LC/MS：[M+H]+
= 1546.8。
步驟 E - 中間物 N-5 之合成
向N-4
(呈順式烯烴與反式烯烴之混合物形式) (5.49 g，3.55 mmol)於DCM (20 ml)及乙腈(50 ml)中之溶液中添加哌啶(1.76 ml，17.8 mmol)。將所得溶液在RT下攪拌2 h，接著濃縮，且將殘餘物懸浮於乙腈(20 ml)中，且再次濃縮。接著將殘餘物真空乾燥，得到N-5
(呈順式烯烴與反式烯烴之混合物形式)。LC/MS：[M+H]+
= 1323.8。
步驟 F - 中間物 N-6 之合成
在0℃下向N-5
(呈順式烯烴與反式烯烴之混合物形式) (4.70 g，3.55 mmol)及中間物L
(2.21 g，4.44 mmol)於DMF (70 ml)中之溶液中添加HATU (1.76 g，4.62 mmol)及DIEA (1.55 ml，8.88 mmol)。將所得溶液升溫至RT且攪拌1 h，接著分配於EtOAc (300 mL)與鹽水(200 mL)之間。用EtOAc (200 mL)萃取水相，且將合併之有機層用鹽水洗滌，經Na2
SO4
乾燥，過濾且濃縮。在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用1%-5%之MeOH/DCM梯度溶離)，得到N-6
(呈順式烯烴與反式烯烴之混合物形式)。LC/MS：[M+H]+
= 1802.8。
步驟 G - 中間物 N-7 之合成
在0℃下向N-6
(呈順式烯烴與反式烯烴之混合物形式) (5.41 g，3.00 mmol)於THF (100 ml)、MeOH (30 ml)及水(30 ml)中之溶液中逐滴添加1 N LiOH水溶液(24.0 ml，24.0 mmol)，且將所得溶液在0℃下攪拌3 h。在0℃下藉由添加1N HCl水溶液來中和混合物，濃縮反應物，且藉由添加1 N HCl水溶液進一步使水層達至pH 5。接著將混合物冷凍並凍乾，且在C18上藉由逆相MPLC來純化殘餘物(用乙腈(0.05% TFA)/水(0.05% TFA)梯度溶離)，得到呈TFA鹽之N-7
(呈順式烯烴與反式烯烴之混合物形式)。在0℃下向含由此獲得之N-7
TFA鹽(呈順式烯烴與反式烯烴之混合物形式)之乙腈(750 mL)及水(450 mL)中逐滴添加0.1N HCl水溶液(150 ml，15.00 mmol)。將所得溶液在0℃下攪拌5 min，冷凍且凍乾，得到呈HCl鹽之N-7
(呈順式烯烴與反式烯烴之混合物形式)。LC/MS：[M+H]+
= 1566.6。
步驟 H - 中間物 N-8 之合成
向N-7
HCl鹽(呈順式烯烴與反式烯烴之混合物形式) (1.01 g，0.630 mmol)於DMF (50 ml)及DCM (1300 ml)中之溶液中添加DIEA (0.330 ml，1.890 mmol)及HATU (0.287 g，0.756 mmol)，且將所得溶液在RT下攪拌2 h。濃縮混合物，且將殘餘物分配於EtOAc (400 mL)與鹽水(200 mL)之間。用EtOAc (300 mL)萃取水相，且將合併之有機層用鹽水(3×100 mL)洗滌，經Na2
SO4
乾燥，過濾且濃縮。在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用1%-10%之MeOH/DCM梯度溶離)，得到N-8
(呈順式烯烴與反式烯烴之混合物形式)。LC/MS：[M+H]+
= 1548.8。
步驟 I - 中間物 N-9 之合成
向N-8
(呈順式烯烴與反式烯烴之混合物形式) (1.22 g，0.788 mmol)於MeOH (100 ml)中之溶液中添加10% Pd/C (0.645 g，0.607 mmol)，且在RT下使用填充氫氣之氣球對所得混合物進行氫化，持續7 h。經由矽藻土過濾反應混合物，濃縮濾液，且在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用1%-10%之MeOH/DCM梯度溶離)，得到N-9
。LC/MS：[M+H]+
= 1550.9。
步驟 J - 中間物 N 之合成
在RT下向N-9
(1.14 g，0.735 mmol)於DCM (6 ml)中之溶液中添加TFA (12 ml，156 mmol)，且將所得溶液攪拌30 min。濃縮混合物，將殘餘物再溶解於DCM (20 mL)及甲苯(20 mL)中，並濃縮。將殘餘物再溶解於DCM (20 mL)中，用含4N HCl之二㗁烷(0.919 ml，3.68 mmol)處理，且濃縮所得混合物。將所得固體再溶解於乙腈(200 mL)及水(100 mL)中，且在0℃下用1N HCl水溶液(3.68 ml，3.68 mmol)逐滴處理。將所得溶液在0℃下攪拌2 min，接著冷凍且凍乾，得到呈HCl鹽之中間物N
。LC/MS：[M+H]+
= 1394.7。
中間物
O
之製備
步驟 A - 中間物 O-1 之合成
在RT下向(R)-6-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)己酸(5 g，13.14 mmol)於DMF (50 mL)中之溶液中添加NaHCO3
(5.52 g，65.7 mmol)及MeI (4.11 mL，65.7 mmol)，且將溶液攪拌24 h。將反應物用水淬滅，用EtOAc萃取，且將合併之有機層用鹽水洗滌，經無水Na2
SO4
乾燥，過濾且濃縮。在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用0%-50%之EtOAc/PE梯度溶離)，得到O-1
。LC/MS：[M+Na]+
= 417.2。
步驟 B - 中間物 O-2 之合成
向O-1
(5 g，12.68 mmol)於THF (80 mL)中之溶液中添加10% Pd/C (1.5 g，1.268 mmol)，且在RT下使用填充氫氣之氣球對所得混合物進行氫化，持續6 h。過濾所得混合物，且減壓濃縮濾液，得到O-2
。LC/MS：[M+H]+
= 261.2。
步驟 C - 中間物 O-3 之合成
在RT下向O-2
(3.2 g，12.29 mmol)於MeOH (80 mL)中之溶液中添加NaHCO3
(5.16 g，61.5 mmol)及MeI (7.69 mL，123 mmol)，且將溶液攪拌14 h。過濾所得混合物，減壓濃縮濾液，且在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用0%-13%之MeOH/DCM梯度溶離)，得到O-3
。LC/MS：[M]+
= 303.2。1
H NMR (300 MHz, CD3
OD)：δ 4.14 (dd, J = 9.0, 5.1 Hz, 1H), 3.72 (s, 3H), 3.44-3.34 (m, 2H), 3.15 (s, 9H), 1.98-1.64 (m, 5H), 1.55-1.47 (m, 1H), 1.44 (s, 9H)。
步驟 D - 中間物 O 之合成
在RT下向O-3
(1.1 g，2.56 mmol)於DCM (5 mL)中之溶液中添加含4 M HCl之二㗁烷(20 mL)，且將反應混合物攪拌2 h。將最終溶液減壓濃縮，得到中間物O
。LC/MS：[M]+
= 203.2。
中間物
P
之製備
步驟 A - 中間物 P-1 之合成
在0℃下向16-(苯甲氧基)-16-側氧基十六烷酸(1.1 g，2.92 mmol)於DMF (12 mL)中之溶液中添加2-胺基丁二酸(S)-二第三丁酯鹽酸鹽(0.91 g，3.21 mmol)、HATU (1.22 g，3.21 mmol)及DIEA (2.55 mL，14.61 mmol)，且將反應混合物在0℃下攪拌1 h。將所得溶液用水(2 mL)淬滅，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水(0.05% TFA)梯度溶離)，得到P-1
。LC/MS：[M+H]+
= 604.5。
步驟 B - 中間物 P 之合成
在RT下向P-1
(650 mg，1.08 mmol)於EtOH (18 mL)中之溶液中添加10% Pd/C (115 mg，0.108 mmol)，且在RT下使用填充氫氣之氣球對所得混合物進行氫化，持續2 h。過濾最終混合物，減壓濃縮濾液，且在C18上藉由逆相MPLC來純化殘餘物(用乙腈/水(0.05% TFA)梯度溶離)，得到中間物P
。LC/MS：[M+H]+
= 514.3。1
H NMR (300 MHz, CD3
OD)：δ 4.62 (dd, J = 7.2, 5.4 Hz, 1H), 2.82-2.57 (m, 2H), 2.32-2.18 (m, 4H), 1.66-1.55 (m, 4H), 1.48 (s, 9H), 1.46 (s, 9H),1.36-1.21 (m, 20H)。
使用上文所描述之合成流程及中間物，製備以下中間物，且如將瞭解，在一些情況下用熟習此項技術者顯而易知之不同間隔基來適當取代某些中間物。
表2. 本發明之額外中間物。
| 中間物 | 結構 | LC/MS 觀測值 [M+H]+ |
| Q |  | 1381.5 |
| R |  | 1394.4 |
中間物
S
之製備
步驟 A - 中間物 S-1 之合成
向2-氯三苯甲基氯樹脂(0.5 g，約1 mmol/g負載)中添加無水DCM (3 mL)，且使樹脂在RT下靜置20 min。緩慢添加17-(9-茀基甲氧羰基-胺基)-9-氮雜-3,6,12,15-四氧雜-10-酮-十七烷酸(CAS 560088-89-3) (332 mg，0.625 mmol)及DIPEA (0.109 mL，0.625 mmol)於DCM (1.5 mL)中之溶液，隨後添加更多DIPEA (0.25 mL)。將樹脂在RT下震盪2 h，接著過濾，且用DCM沖洗三次。接著將樹脂用含5% DIPEA及10% MeOH之DCM (5 mL)淬滅，且在RT下震盪2 h。過濾樹脂，用DCM沖洗三次，用DMF沖洗三次，用DCM沖洗三次，接著真空乾燥，得到樹脂S-1
，其按原樣用於下一步驟中。
步驟 B - 中間物 S-2 之合成
將來自步驟A之樹脂S-1
用含20%哌啶之DMF (4 mL)處理，在RT下震盪30 min，過濾，且用DMF沖洗三次，用DCM沖洗三次，並且用DMF沖洗三次。接著將樹脂用Fmoc-L-Glu-OtBu (0.851 g，2.00 mmol)、HATU (0.760 g，2.00 mmol)及DIPEA (0.699 mL，4.00 mmol)於DMF (5 mL)中之溶液處理，且在RT下震盪75 min。過濾樹脂，且用DMF沖洗三次，用DCM沖洗三次，並且用DMF沖洗三次，得到樹脂S-2
，其按原樣用於下一步驟中。
步驟 C - 中間物 S-3 之合成
將來自步驟B之樹脂S-2
用含20%哌啶之DMF (4 mL)處理，在RT下震盪30 min，過濾，且用DMF沖洗三次，用DCM沖洗三次，並且用DMF沖洗三次。接著將樹脂用Fmoc-L-Glu-OtBu (0.851 g，2.00 mmol)、HATU (0.760 g，2.00 mmol)及DIPEA (0.699 mL，4.00 mmol)於DMF (5 mL)中之溶液處理，且在RT下震盪75 min。過濾樹脂，且用DMF沖洗三次，用DCM沖洗三次，用DMF沖洗三次，並且用DCM沖洗三次，得到樹脂S-3
，其按原樣用於下一步驟中。
步驟 D - 中間物 S 之合成
將來自步驟C之樹脂S-3
用含25%六氟異丙醇之DCM (5 mL)處理，在RT下震盪75 min，接著過濾。真空濃縮濾液，得到中間物S
。LC/MS：[M+H]+
= 901.0。1
H NMR (400 MHz, DMSO-d6
)：δ 8.14 (m, 1H), 7.90 (m, 2H), 7.70-7.75 (m, 2H), 7.64 (m, 1H), 7.40-7.45 (m, 2H), 7.30-7.35 (m, 2H), 4.32 (m, 1H), 4.20-4.28 (m, 2H), 4.05 (m, 1H), 3.99 (s, 2H), 3.90 (m, 1H), 3.98 (s, 2H), 3.50-3.60 (m, 6H), 3.37-3.45 (m, 4H), 3.24-3.35 (m, 6H), 3.17-3.22 (m, 2H), 2.22 (m, 2H), 2.15 (m, 2H), 1.85-1.98 (m, 2H), 1.70-1.82 (m, 2H), 1.39 (s, 18H)。
中間物
T
之製備
步驟 A - (R)-2-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-3-(((2-( 三甲基矽基 ) 乙氧基 ) 羰基 ) 胺基 ) 丙酸 T-1 之合成
在室溫下向(R
)-3-胺基-2-((第三丁氧基羰基)胺基)丙酸(800 mg，3.92 mmol)於1,4-二㗁烷(20 mL)中之溶液中添加Teoc-OSu (1.52 g，5.88 mmol)及TEA (1.2 g，11.75 mmol)。將反應溶液在室溫下攪拌4 h。將所得溶液減壓濃縮。殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用0%-10%之MeOH/DCM梯度溶離。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到(R
)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-(((2-(三甲基矽基)乙氧基)羰基)胺基)丙酸T-1
。C14
H28
N2
O6
Si [M + Na]+
之LCMS (ESI)計算值：371.2，實驗值371.2。
步驟 B - 2-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 )-3-(((2-( 三甲基矽基 ) 乙氧基 ) 羰基 ) 胺基 ) 丙酸 (R)- 苯甲酯 T-2 之合成
在室溫下向(R
)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-(((2-(三甲基矽基)乙氧基)羰基)胺基)丙酸T-1
(1.20 g，3.44 mmol)於DMF (15 mL)中之經攪拌溶液中添加NaHCO3
(0.579 g，6.89 mmol)及BnBr (0.707 g，4.13 mmol)。將溶液在室溫下攪拌16 h。將所得溶液用H2
O (100 mL)稀釋，且用EA (2 × 100 mL)萃取。合併之有機層用鹽水(3 × 100 mL)洗滌，經無水Na2
SO4
乾燥且過濾。減壓濃縮濾液。殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用0%-30%之EA/PE梯度溶離。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮，得到2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-(((2-(三甲基矽基)乙氧基)羰基)胺基)丙酸(R
)-苯甲酯T-2
。C21
H34
N2
O6
Si [M + H]+
之LCMS (ESI)計算值：439.2，實驗值439.3。1
H NMR (300 MHz, CDCl3
) δ 7.42-7.35 (m, 5H), 5.49 (br, 1H), 5.21 (s, 2H), 4.89 (s, 1H), 4.41 (s, 1H), 4.21-4.09 (m, 2H), 3.64-3.57 (m, 2H), 1.46 (s, 9H), 1.04-0.92 (m, 2H), 0.05 (s, 9H)。
步驟 C - 2- 胺基 -3-(((2-( 三甲基矽基 ) 乙氧基 ) 羰基 ) 胺基 ) 丙酸 (R)- 苯甲酯鹽酸鹽 T-3 之合成
在室溫下向2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-(((2-(三甲基矽基)乙氧基)羰基)胺基)丙酸(R
)-苯甲酯T-2
(800 mg，1.824 mmol)於THF (8 mL)中之經攪拌溶液中添加含4 N HCl之1,4-二㗁烷(8 mL)。將反應混合物在室溫下攪拌3 h。將所得溶液減壓濃縮，得到2-胺基-3-(((2-(三甲基矽基)乙氧基)羰基)胺基)丙酸(R
)-苯甲酯鹽酸鹽T-3
。C16
H27
ClN2
O4
Si [M - HCl + H]+
之LCMS (ESI)計算值：339.2，實驗值339.2。
步驟 D - 2-((S)-2-((((9H 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丙醯胺基 )-3-(((2-( 三甲基矽基 ) 乙氧基 ) 羰基 ) 胺基 ) 丙酸 (R)- 苯甲酯 T-4 之合成
在-10℃下在氮氣氛圍下，向(S
)-2-((((9H
-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙酸T-3
(796 mg，1.87 mmol)於DMF (10 mL)中之經攪拌溶液中添加HATU (781 mg，2.05 mmol)、2-胺基-3-(((2-(三甲基矽基)乙氧基)羰基)胺基)丙酸(R
)-苯甲酯鹽酸鹽(700 mg，1.87 mmol)及DIEA (1.63 mL，9.33 mmol)。將反應溶液在-10℃下攪拌1 h。將反應物用水(100 mL)淬滅，用EA (3 × 100 mL)萃取。合併之有機層用鹽水(3 × 100 mL)洗滌，經無水Na2
SO4
乾燥且過濾。粗混合物藉由矽膠管柱層析純化，用0%-50%之EA/PE梯度溶離，得到2-((S
)-2-((((9H
-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙醯胺基)-3-(((2-(三甲基矽基)乙氧基)羰基)胺基)丙酸(R
)-苯甲酯T-4
。C39
H50
N4
O9
Si [M + H]+
之LCMS (ESI)計算值：747.3，實驗值747.3。1
H NMR (400 MHz, CD3
OD) δ 7.84 (d,J
= 7.5 Hz, 2H), 7.70 (d,J
= 7.5 Hz, 2H), 7.48-7.28 (m, 9H), 5.25-5.09 (m, 2H), 4.62-4.53 (m, 1H), 4.41-4.21 (m, 4H), 4.08 (t,J
= 8.4 Hz, 2H), 3.65-3.35 (m, 4H), 1.45 (s, 9H), 0.93 (t,J
= 8.6 Hz, 2H), 0.02 (s, 9H)。
步驟 E - (R)-2-((S)-2-((((9H- 茀 -9- 基 ) 甲氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-3-(( 第三丁氧基羰基 ) 胺基 ) 丙醯胺基 )-3-(((2-( 三甲基矽基 ) 乙氧基 ) 羰基 ) 胺基 ) 丙酸 T-5 之合成
在室溫下在氮氣氛圍下，向2-((S
)-2-((((9H
-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙醯胺基)-3-(((2-(三甲基矽基)乙氧基)羰基)胺基)丙酸(R
)-苯甲酯T-4
(900 mg，1.205 mmol)於THF (30 mL)中之溶液中添加10% Pd/C (128 mg，0.12 mmol，無水，10% wt)。將反應混合物用氫氣脫氣三次，且在室溫下攪拌2 h。過濾所得混合物且減壓濃縮濾液，得到(R
)-2-((S
)-2-((((9H
-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-3-((第三丁氧基羰基)胺基)丙醯胺基)-3-(((2-(三甲基矽基)乙氧基)羰基)胺基)丙酸T-5
。C32
H44
N4
O9
Si [M + H]+
之LCMS (ESI)計算值：657.3，實驗值657.3。1
H NMR (300 MHz, CD3
OD) δ 7.80 (d,J
= 7.5 Hz, 2H), 7.73-7.64 (m, 2H), 7.45-7.26 (m, 4H), 4.56-4.46 (m, 1H), 4.43-4.20 (m, 4H), 4.13-4.00 (m, 2H), 3.72-3.34 (m, 4H), 1.44 (s, 9H), 0.91 (t,J
= 8.4 Hz, 2H), 0.00 (s, 9H)。
步驟 F - T-6 之合成
在0℃下向中間物W
(100 mg，0.077 mmol)添加T-5
(50.3 mg，0.077 mmol)、HATU (34.9 mg，0.092 mmol)及DIEA (59.4 mg，0.459 mmol)之經攪拌溶液中。將反應混合物在0℃下攪拌1 h。將所得混合物用鹽水(50 mL)稀釋，用EA (2 × 50 mL)萃取，用鹽水(2 × 50 mL)洗滌，經無水Na2
SO4
乾燥且過濾，接著減壓濃縮濾液。殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用1%-6%之MeOH/DCM梯度溶離。合併含有所需產物之溶離份且濃縮，得到T-6
。C100
H127
FN14
O21
Si [M + H]+
之LCMS (ESI)計算值：1907.9，實驗值1908.6。
步驟 G - T-7 之合成
在0℃下向T-6
(110 mg，0.058 mmol)於THF (2 mL)及MeOH (0.4 mL)中之溶液中添加1 M LiOH水溶液(0.461 mL，0.461 mmol)。將反應混合物在0℃下攪拌3 h。所得混合物用1 M HCl水溶液(0.5 mL)淬滅，且藉由逆相急驟層析(管柱：Flash C18
80 g；移動相A：水(0.1% TFA)，移動相B：ACN；流動速率：65 mL/min；梯度：在5 min內2% B至2% B，在20 min內30% B至50% B；偵測器：UV 220 nm；Rt = 18 min)來純化混合物，得到T-7
。C84
H115
FN14
O19
Si [M + H]+
之LCMS (ESI)計算值：1671.8，實驗值1671.5。
步驟 H - T-8 之合成
在0℃下向T-7
(68 mg，0.041 mmol)於DMF (6 mL)及DCM (75 mL)中之溶液中添加DIEA (15.8 mg，0.122 mmol)、HATU (18.6 mg，0.049 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌1 h。將所得溶液減壓濃縮以移除DCM，且用鹽水(50 mL)稀釋，用EA (2 × 50 mL)萃取，用鹽水(2 × 50 mL)洗滌，經無水Na2
SO4
乾燥且過濾。減壓濃縮濾液。殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用1%-10%之MeOH/DCM梯度溶離。合併含有所需產物之溶離份且濃縮，得到T-8
。C84
H113
FN14
O18
Si [(M/2 + H)]+
之LCMS (ESI)計算值：827.4，實驗值827.6。
步驟 I - T-9 之合成
在室溫下向T-8
(110 mg，0.065 mmol)於DMF (2 mL)中之溶液中添加CsF (198 mg，1.31 mmol)。將混合物在45℃下攪拌16 h。反應溶液藉由逆相急驟層析(管柱：Flash C18
40 g；移動相A：水(0.1% TFA)，移動相B：ACN；流動速率：45 mL/min；梯度：在5 min內2% B至2% B，在15 min內20% B至50% B；偵測器：UV 220 nm；Rt = 17 min)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將殘餘物再溶解於ACN (5 mL)及水(5 mL)中，且凍乾，得到T-9
。C80
H102
F4
N14
O18
[(M-TFA)/2 + H]+
之LCMS (ESI)計算值：755.4，實驗值755.7。
步驟 J - T-10 之合成
在0℃下向T-9
(80 mg，0.049 mmol)於DMF (300 µL)及水(30 µL)中之溶液中添加氯化2-(2-(2-羧基乙氧基)乙氧基)-N
,N
,N
-三甲基乙銨(25.2 mg，0.099 mmol)、HATU (37.5 mg，0.099 mmol)及DIEA (68.8 µL，0.394 mmol)。將混合物在0℃下攪拌1 h。將反應溶液用水(100 µL)淬滅，且藉由逆相急驟層析(管柱：Flash C18
80 g；移動相A：水(0.1% TFA)，移動相B：ACN；流動速率：45 mL/min；梯度：在5 min內2% B至2% B，在20 min內20% B至60% B；偵測器：UV 220 nm；Rt = 15 min)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將殘餘物再溶解於ACN (5 mL)及水(5 mL)中，且凍乾，得到T-10
。C90
H121
F4
N15
O21
[(M-TFA-
)/2]+
之LCMS (ESI)計算值：855.4，實驗值856.6。
步驟 K - T-11 之合成
在0℃下向T-10
(60 mg，0.033 mmol)於DCM (1 mL)中之懸浮液中添加TFA (200 µL，2.60 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌0.5 h。將所得溶液減壓濃縮，且殘餘物藉由逆相急驟層析(管柱：Flash C18
40 g；移動相A：水(0.1% TFA)，移動相B：ACN；流動速率：45 mL/min；梯度：在5 min內2% B至2% B，在20 min內20% B至60% B；偵測器：UV 210 nm；Rt = 15 min)純化。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮。將殘餘物再溶解於ACN (3 mL)及水(6 mL)中，用1 M HCl水溶液(33 µL)處理且凍乾，得到T-11
。C87
H114
F7
N15
O21
[(M-TFA-TFA-
)/2]+
之LCMS (ESI)計算值：805.4，實驗值806.4。
步驟 L - 中間物 T 之合成
將5 g AG MP-1樹脂(目錄號141-1841 BIO-RAD)封裝在管柱中。將管柱用水(2 × 10 mL)洗滌，隨後用含20% ACN之水(2 × 10 mL)洗滌。將T-11
(45 mg，0.026 mmol)於含40% ACN之水(20 mL)中之溶液加載至樹脂管柱上，接著將管柱用含40% ACN之水(3 × 20 mL)溶離。將溶離劑合併且凍乾，得到中間物T
。C83
H114
Cl2
FN15
O17
[(M-Cl-
-HCl)/2]+
之LCMS (ESI)計算值：805.4，實驗值806.4。
中間物
U
之製備
步驟 A - 4-((((9H- 茀 -9- 基 ) 甲氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-5- 羥基戊酸第三丁酯 U-1 之合成
在0℃下向2-((((9H
-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-5-(第三丁氧基)-5-側氧基戊酸(2 g，4.70 mmol)於THF (20 mL)中之溶液中添加BH3
-THF (23.5 mL，23.5 mmol)。將混合物在室溫下攪拌3 h。將所得混合物減壓濃縮，且殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用0-47%之EA/PE梯度溶離。合併含有所需產物之溶離份且濃縮，得到4-((((9H
-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-5-羥基戊酸第三丁酯U-1
。C24
H29
NO5
[M + H]+
之LCMS (ESI)計算值：412.2，實驗值412.2；1
H NMR (300 MHz, CD3
OD) δ 7.82 (d,J
= 7.4 Hz, 2H), 7.68 (d,J
= 7.5 Hz, 2H), 7.46-7.28 (m, 4H), 4.66-4.29 (m, 2H), 4.23 (t,J
= 6.9 Hz, 1H), 3.62 (s, 2H), 3.53-3.41 (m, 2H), 2.29 (t,J
= 7.6 Hz, 2H), 2.01-1.78 (m, 2H), , 1.46 (d,J
= 1.3 Hz, 9H)。
步驟 B - 4-((((9H- 茀 -9- 基 ) 甲氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-5- 碘戊酸第三丁酯 U-2 之合成
在室溫下向4-((((9H
-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-5-羥基戊酸第三丁酯U-1
(100 mg，0.243 mmol)於DCM (2 mL)中之溶液中添加PPh3
(96 mg，0.365 mmol)、Im (29.8 mg，0.437 mmol)及I2
(74 mg，0.292 mmol)。將混合物在室溫下攪拌2 h。將所得混合物減壓濃縮，且殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用0-15%之EA/PE梯度溶離。合併含有所需產物之溶離份且濃縮，得到4-((((9H
-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-5-碘戊酸第三丁酯U-2
。C24
H28
INO4
[M + H]+
之LCMS (ESI)計算值：522.1，實驗值522.1；1
H NMR (400 MHz, CD3
OD) δ 7.82 (d,J
= 7.5 Hz, 2H), 7.73-7.62 (m, 2H), 7.41 (t,J
= 7.4 Hz, 2H), 7.37-7.29 (m, 2H), 4.49-4.32 (m, 2H), 4.25 (t,J
= 6.9 Hz, 1H), 3.62-3.53 (m, 1H), 3.43-3.20 (m, 2H), 2.29 (t,J
= 7.4 Hz, 2H), 2.04-1.61 (m, 2H), 1.47 (s, 9H)。
步驟 C - 2-(2-((((9H- 茀 -9- 基 ) 甲氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-5-( 第三丁氧基 )-5- 側氧基戊基 ) 異硫 
U-3 之合成
在室溫下向4-((((9H
-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-5-碘戊酸第三丁酯U-2
(50 mg，0.096 mmol)於ACN (1 mL)中之溶液中添加硫脲(21.9 mg，0.288 mmol)。將混合物在60℃下攪拌16 h。將所得混合物減壓濃縮，得到2-(2-((((9H
-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-5-(第三丁氧基)-5-側氧基戊基)異硫 U-3
。C25
H32
N3
O4
S [M]+
之LCMS (ESI)計算值：470.2，實驗值470.3。
步驟 D - 4-((((9H- 茀 -9- 基 ) 甲氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-5- 巰基戊酸第三丁酯 U-4 之合成
在室溫下向2-(2-((((9H
-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-5-(第三丁氧基)-5-側氧基戊基)異硫 U-3
(1.8 g，1.912 mmol)於DCM (20 mL)及水(4 mL)中之溶液中添加Na2
S2
O5
(545 mg，2.87 mmol)。將混合物在40℃下攪拌2 h。將反應物用水(50 mL)稀釋，用EA (2 × 100 mL)萃取。將合併之有機層用鹽水(100 mL)洗滌，經無水Na2
SO4
乾燥且過濾。減壓濃縮濾液，且殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用0-25%之EA/PE梯度溶離。合併含有所需產物之溶離份且濃縮，得到4-((((9H
-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-5-巰基戊酸第三丁酯U-4
。C24
H29
NO4
S [M + Na]+
之LCMS (ESI)計算值：450.2，實驗值450.2；1
H NMR (400 MHz, CD3
OD) δ 7.82 (d,J
= 7.5 Hz, 2H), 7.69 (d,J
= 7.5 Hz, 2H), 7.41 (t,J
= 7.4 Hz, 2H), 7.37-7.29 (m, 2H), 4.46-4.38 (m, 2H), 4.24 (t,J
= 6.7 Hz, 1H), 3.66-3.58 (m, 1H), 2.65-2.54 (m, 2H), 2.26 (t,J
= 7.5 Hz, 2H), 2.00-1.85 (m, 1H), 1.75-1.59 (m, 1H), 1.46 (s, 9H)。
步驟 E - 4-((((9H- 茀 -9- 基 ) 甲氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-5- 磺基戊酸 U-5 之合成
在0℃下將30% H2
O2
溶液(50 mL)溶解於98%甲酸(100 mL)中，且將混合物在此溫度下攪拌1 h，得到過甲酸。向該過甲酸溶液中逐滴添加4-((((9H
-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-5-巰基戊酸第三丁酯U-4
(635 mg，1.485 mmol)於98%甲酸(25 mL)中之溶液，且將所得反應混合物在室溫下攪拌16 h。將所得混合物減壓濃縮，且用EA (2 × 100 mL)萃取。將合併之有機層用鹽水(100 mL)洗滌，經無水Na2
SO4
乾燥且過濾。減壓濃縮濾液，且殘餘物藉由逆相急驟層析(管柱：Flash C18
120 g；移動相A：水(0.05% TFA)，移動相B：ACN；流動速率：85 mL/min；梯度：在10 min內2% B至2% B，在20 min內30% B至70% B；偵測器：UV 220 nm；RT：21 min)純化，得到4-((((9H
-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-5-磺基戊酸U-5
。C20
H21
NO7
S [M + H]+
之LCMS (ESI)計算值：420.1，實驗值420.1。
步驟 F - 2,2- 二甲基 -4,13- 二側氧基 -3,8,11,17,20- 五氧雜 -5,14- 二氮雜二十二烷 -22- 酸 U-7 之合成
在0℃下向2,2-二甲基-4,13-二側氧基-3,8,11,17,20-五氧雜-5,14-二氮雜二十二烷-22-酸甲酯(400 mg，0.947 mmol)於THF (5 mL)中之溶液中添加1 M LiOH水溶液(0.947 mL，0.947 mmol)。將混合物在0℃下攪拌0.5 h。將反應溶液用1 M HCl水溶液(0.74 mL)淬滅，且藉由逆相急驟層析(管柱：Flash C18
80 g；移動相A：水(0.05% TFA)，移動相B：ACN；流動速率：60 mL/min；梯度：在30 min內2% B至40% B；偵測器：UV 220 nm；RT：15 min)純化。合併含有所需產物之溶離份且濃縮，得到2,2-二甲基-4,13-二側氧基-3,8,11,17,20-五氧雜-5,14-二氮雜二十二烷-22-酸U-7
。C17
H32
N2
O9
[M + H]+之LCMS (ESI)計算值：409.2，實驗值409.2。
步驟 G - N-(2-(2-(3- 甲氧基 - 3- 側氧基丙氧基 ) 乙氧基 ) 乙基 ) -N,N,2,2- 四甲基 -4,13,22- 三側氧基 -3,8,11,17,20- 五氧雜 -5,14,23- 三氮雜二十五烷 -25- 銨 2,2,2- 三氟乙酸鹽 U-8 之合成
在0℃下向2,2-二甲基-4,13-二側氧基-3,8,11,17,20-五氧雜-5,14-二氮雜二十二烷-22-酸U-7
(360 mg，0.881 mmol)於DMF (3 mL)中之經攪拌溶液中添加HATU (369 mg，0.970 mmol)及DIEA (0.924 mL，5.29 mmol)。向該溶液中添加氯化2-胺基-N
-(2-(2-(3-甲氧基-3-側氧基丙氧基)乙氧基)乙基)-N
,N
-二甲基乙銨鹽酸鹽中間物B
(591 mg，1.763 mmol)於DMF (1 mL)及水(0.3 mL)中之溶液，且將所得反應混合物在0℃下攪拌0.5 h。將反應溶液用水(2 mL)淬滅，且藉由逆相急驟層析(管柱：Flash C18
80 g；移動相A：水(0.05% TFA)，移動相B：ACN；流動速率：65 mL/min；梯度：在10 min內2% B至10% B，在20 min內10% B至30% B；偵測器：UV 220 nm；RT：20 min)純化，得到N
-(2-(2-(3-甲氧基-3-側氧基丙氧基)乙氧基)乙基)-N
,N
,2,2-四甲基-4,13,22-三側氧基-3,8,11,17,20-五氧雜-5,14,23-三氮雜二十五烷-25-銨2,2,2-三氟乙酸鹽U-8
。C31
H57
F3
N4
O14
[M - TFA-
]+
之LCMS (ESI)計算值：653.4，實驗值653.4。
步驟 H - 氯化 20- 胺基 -N-(2-(2-(3- 甲氧基 -3- 側氧基丙氧基 ) 乙氧基 ) 乙基 )-N,N- 二甲基 -4,13- 二側氧基 -6,9,15,18- 四氧雜 -3,12- 二氮雜二十烷 -1- 銨鹽酸鹽 U-9 之合成
在室溫下向N
-(2-(2-(3-甲氧基-3-側氧基丙氧基)乙氧基)乙基)-N
,N
,2,2-四甲基-4,13,22-三側氧基-3,8,11,17,20-五氧雜-5,14,23-三氮雜二十五烷-25-銨2,2,2-三氟乙酸鹽U-8
(340 mg，0.443 mmol)之溶液中添加含HCl (4 M)之二㗁烷(10 mL)。將反應混合物在室溫下攪拌1 h。將所得溶液減壓濃縮，得到氯化20-胺基-N
-(2-(2-(3-甲氧基-3-側氧基丙氧基)乙氧基)乙基)-N
,N
-二甲基-4,13-二側氧基-6,9,15,18-四氧雜-3,12-二氮雜二十烷-1-銨鹽酸鹽U-9
。C24
H50
Cl2
N4
O10
[M - HCl - Cl-
]+
之LCMS (ESI)計算值：553.4，實驗值553.4。
步驟 I - 1-(9H- 茀 -9- 基 )-N-(2-(2-(3- 甲氧基 -3- 側氧基丙氧基 ) 乙氧基 ) 乙基 )-N,N- 二甲基 -3,8,17,26- 四側氧基 -5-( 磺基甲基 )-2,12,15,21,24- 五氧雜 -4,9,18,27- 四氮雜二十九烷 -29- 銨 2,2,2- 三氟乙酸鹽 U-10 之合成
在0℃下向4-((((9H
-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-5-磺基戊酸U-5
(120 mg，0.286 mmol)於DMF (4 mL)中之經攪拌溶液中添加HATU (120 mg，0.315 mmol)及DIEA (0.4 mL，2.289 mmol)。向該溶液中添加含氯化20-胺基-N
-(2-(2-(3-甲氧基-3-側氧基丙氧基)乙氧基)乙基)-N
,N
-二甲基-4,13-二側氧基-6,9,15,18-四氧雜-3,12-二氮雜二十烷-1-銨鹽酸鹽U-9
(215 mg，0.343 mmol)之DMF (1 mL)及水(0.5 mL)，且將其在0℃下攪拌0.5 h。將反應溶液用水(1 mL)淬滅，且藉由逆相急驟層析(管柱：Flash C18
80 g；移動相A：水(0.05% TFA)，移動相B：ACN；流動速率：65 mL/min；梯度：在10 min內2% B至2% B，在25 min內2% B至50% B；偵測器：UV 220 nm；RT：24 min)純化，得到1-(9H
-茀-9-基)-N
-(2-(2-(3-甲氧基-3-側氧基丙氧基)乙氧基)乙基)-N
,N-二甲基-3,8,17,26-四側氧基-5-(磺基甲基)-2,12,15,21,24-五氧雜-4,9,18,27-四氮雜二十九烷-29-銨2,2,2-三氟乙酸鹽U-10
。C46
H68
F3
N5
O18
S [M - TFA-
]+
之LCMS (ESI)計算值：954.4，實驗值954.3；1
H NMR (400 MHz, CD3
OD) δ 7.82 (d,J
= 7.4 Hz, 2H), 7.69 (t,J
= 6.4 Hz, 2H), 7.41 (t,J
= 7.4 Hz, 2H), 7.34 (t,J
= 7.4 Hz, 2H), 4.37 (d,J
= 7.2 Hz, 2H), 4.24 (t,J
= 6.8 Hz, 1H), 4.10-3.99 (m, 6H), 3.93 (br, 2H), 3.81-3.56 (m, 27H), 3.48-3.35 (m, 4H), 3.22 (s, 6H), 3.13-2.93 (m, 2H), 2.57 (t,J
= 6.0 Hz, 1H), 2.30-2.17 (m, 2H), 1.97-1.82 (m, 2H)。
步驟 J - 25- 胺基 -N-(2-(2-(3- 甲氧基 -3- 側氧基丙氧基 ) 乙氧基 ) 乙基 )-N,N- 二甲基 -4,13,22- 三側氧基 -26- 磺基 -6,9,15,18- 四氧雜 -3,12,21- 三氮雜二十六烷 -1- 銨 2,2,2- 三氟乙酸鹽 U-11 之合成
在室溫下向1-(9H
-茀-9-基)-N
-(2-(2-(3-甲氧基-3-側氧基丙氧基)乙氧基)乙基)-N
,N
-二甲基-3,8,17,26-四側氧基-5-(磺基甲基)-2,12,15,21,24-五氧雜-4,9,18,27-四氮雜二十九烷-29-銨2,2,2-三氟乙酸鹽U-10
(90 mg，0.084 mmol)於ACN (2 mL)中之溶液中添加哌啶(35.9 mg，0.421 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌1 h。將所得溶液減壓濃縮，得到25-胺基-N
-(2-(2-(3-甲氧基-3-側氧基丙氧基)乙氧基)乙基)-N
,N
-二甲基-4,13,22-三側氧基-26-磺基-6,9,15,18-四氧雜-3,12,21-三氮雜二十六烷-1-銨2,2,2-三氟乙酸鹽U-11
。C31
H58
F3
N5
O16
S [M - TFA-
]+
之LCMS (ESI)計算值：732.4，實驗值732.3。
步驟 K - N-(2-(2-(3- 甲氧基 -3- 側氧基丙氧基 ) 乙氧基 ) 乙基 )-N,N,46,46- 四甲基 -4,13,22,27,44- 五側氧基 -25-( 磺基甲基 )-6,9,15,18,45- 五氧雜 -3,12,21,26- 四氮雜四十七烷 -1- 銨 2,2,2- 三氟乙酸鹽 U-12 之合成
在0℃下向18-(第三丁氧基)-18-側氧基十八烷酸(28.9 mg，0.078 mmol)於DMF (2 mL)中之經攪拌溶液中添加HATU (32.4 mg，0.085 mmol)及DIEA (0.074 mL，0.426 mmol)。向該溶液中添加含25-胺基-N
-(2-(2-(3-甲氧基-3-側氧基丙氧基)乙氧基)乙基)-N
,N
-二甲基-4,13,22-三側氧基-26-磺基-6,9,15,18-四氧雜-3,12,21-三氮雜二十六烷-1-銨2,2,2-三氟乙酸鹽U-11
(60 mg，0.071 mmol)之DMF (1 mL)及水(0.2 mL)，且將其在0℃下攪拌0.5 h。將反應溶液用水(1 mL)淬滅，且藉由逆相急驟層析(管柱：Flash C18
80 g；移動相A：水(0.05% TFA)，移動相B：ACN；流動速率：65 mL/min；梯度：在10 min內2% B至2% B，在25 min內2% B至50% B；偵測器：UV 220 nm；RT：29 min)純化，得到N
-(2-(2-(3-甲氧基-3-側氧基丙氧基)乙氧基)乙基)-N
,N
,46,46-四甲基-4,13,22,27,44-五側氧基-25-(磺基甲基)-6,9,15,18,45-五氧雜-3,12,21,26-四氮雜四十七烷-1-銨2,2,2-三氟乙酸鹽U-12
。C53
H98
F3
N5
O19
S [M - TFA-
]+
之LCMS (ESI)計算值：1084.65，實驗值1084.75。
步驟 L - N-(2-(2-(2- 羧基乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙基 )-N,N,46,46- 四甲基 -4,13,22,27,44- 五側氧基 -25-( 磺基甲基 )-6,9,15,18,45- 五氧雜 -3,12,21,26- 四氮雜四十七烷 -1- 銨 U 之合成
在0℃下向N
-(2-(2-(3-甲氧基-3-側氧基丙氧基)乙氧基)乙基)-N
,N
,46,46-四甲基-4,13,22,27,44-五側氧基-25-(磺基甲基)-6,9,15,18,45-五氧雜-3,12,21,26-四氮雜四十七烷-1-銨2,2,2-三氟乙酸鹽U-12
(70 mg，0.058 mmol)於THF (1 mL)中之溶液中添加氫氧化鋰(0.117 mL，0.117 mmol)。將混合物在0℃下攪拌0.5 h。將反應溶液用1 M HCl水溶液(0.12 mL)淬滅，且藉由逆相急驟層析(管柱：Flash C18
40 g；移動相A：水(5 mmol NH4
HCO3
)，移動相B：ACN；流動速率：40 mL/min；梯度：在10 min內1% B至30% B，在20 min內30% B至70% B；偵測器：UV 220 nm；RT：25 min)純化。合併含有所需產物之溶離份且濃縮，得到N
-(2-(2-(2-羧基乙氧基)乙氧基)乙基)-N
,N
,46,46-四甲基-4,13,22,27,44-五側氧基-25-(磺基甲基)-6,9,15,18,45-五氧雜-3,12,21,26-四氮雜四十七烷-1-銨中間物U
。C51
H97
N5
O20
S [M - HCO3 -
]+
之LCMS (ESI)計算值：1070.6，實驗值1070.9；1
H NMR (400 MHz, CD3
OD) δ 4.36-4.26 (m, 1H), 4.07 (s, 2H), 4.03 (s, 2H), 3.97 (br, 2H), 3.84-3.55 (m, 24H), 3.49 (t,J
= 5.5 Hz, 2H), 3.40 (q,J
= 5.5 Hz, 2H), 3.25 (s, 6H), 3.12-2.93 (m, 2H), 2.55 (t,J
= 6.0 Hz, 2H), 2.35-2.11 (m, 7H), 1.9-1.81 (m, 1H), 1.70-1.51 (m, 4H), 1.46 (s, 9H), 1.41-1.26 (m, 24H)。
中間物
V
之製備
步驟 A - 3-((((9H- 茀 -9- 基 ) 甲氧基 ) 羰基 ) 胺基 ) 丙 -1- 磺酸 V-1 之合成
在0℃下向3-胺基丙-1-磺酸(2 g，14.37 mmol)於水(60 mL)中之溶液中添加NaOH (0.58 g，14.37 mmol)及Fmoc-OSu (5.82 g，17.24 mmol)。將混合反應物在室溫下攪拌16 h。減壓濃縮濾液，且殘餘物藉由逆相急驟層析(管柱：Flash C18
330 g；移動相A：水；移動相B：ACN；流動速率：80 mL/min；在10 min內2%-2%，在5 min內2%-25%；在15 min內25%-55%；偵測器：UV 210 nm；RT：30 min)純化，得到3-((((9H
-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)丙-1-磺酸V-1
。C18
H19
NO5
S [M + H]+
之LCMS (ESI)計算值：362.1，實驗值362.0；1
H NMR (400 MHz, CD3
OD) δ 7.79 (d,J
= 7.5 Hz, 2H), 7.65 (d,J
= 7.5 Hz, 2H), 7.38 (t,J
= 7.4 Hz, 2H), 7.31 (td,J
= 7.4, 1.2 Hz, 2H), 4.59-4.32 (m, 2H), 4.26-4.18 (m, 1H), 3.26-3.22 (m, 2H), 2.86-2.80 (m, 2H), 2.01-1.92 (m, 2H)。
步驟 B - (3-( 氯磺醯基 ) 丙基 ) 胺基甲酸 (9H- 茀 -9- 基 ) 甲酯 V-2 之合成
在0℃下向3-((((9H
-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)丙-1-磺酸V-1
(2 g，5.53 mmol)於ACN (40 mL)中之溶液中添加草醯二氯(4.68 mL，55.3 mmol)及催化量之DMF。將混合物在室溫下攪拌3 h。減壓濃縮濾液，且殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用0-55%之EA/PE梯度溶離，得到(3-(氯磺醯基)丙基)胺基甲酸(9H
-茀-9-基)甲酯V-2
。C18
H18
ClNO4
S [M + Na]+
之LCMS (ESI)計算值：402.1，實驗值402.1；1
H NMR (400 MHz, CD3
OD) δ 7.79 (d,J
= 7.5 Hz, 2H), 7.64 (d,J
= 7.5 Hz, 2H), 7.39 (t,J
= 7.4 Hz, 2H), 7.34-7.28 (m, 2H), 4.44-4.39 (m, 2H), 4.23-4.17 (m, 1H), 3.89-3.81 (m, 2H), 3.26-3.21 (m, 2H), 2.19-2.09 (m, 2H)。
步驟 C - 3-((3-((((9H- 茀 -9- 基 ) 甲氧基 ) 羰基 ) 胺基 ) 丙基 ) 磺醯胺基 ) 丙 -1- 磺酸 V-3 之合成
在0℃下向3-胺基丙-1-磺酸(0.550 g，3.95 mmol)於水(15 mL)中之溶液中添加K2
CO3
(1.092 g，7.90 mmol)及(3-(氯磺醯基)丙基)胺基甲酸(9H
-茀-9-基)甲酯V-2
(1.5 g，3.95 mmol)。將反應物在室溫下攪拌2 h。減壓濃縮濾液，且殘餘物藉由逆相急驟層析(管柱：Flash C18
330 g；移動相A：水(0.05% TFA)；移動相B：ACN；流動速率：80 mL/min；在10 min內2%-2%；在5 min內2%-30%；在20 min內30%-70%；偵測器：UV 210 nm；RT：35 min)純化，得到3-((3-((((9H
-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)丙基)磺醯胺基)丙-1-磺酸V-3
。C21
H26
N2
O7
S2
[M + H]+
之LCMS (ESI)計算值：483.1，實驗值483.1；1
H NMR (400 MHz, CD3
OD) δ 7.79 (d,J
= 7.5 Hz, 2H), 7.65 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.39 (t,J
= 7.4 Hz, 2H), 7.31 (t,J
= 7.5 Hz, 2H), 4.37 (d,J
= 6.8 Hz, 2H), 4.21 (d,J
= 7.0 Hz,1H), 3.24-3.21 (m, 2H), 3.19-3.15 (m, 2H), 3.06-3.02 (m, 2H), 2.90-2.84 (m, 2H), 2.03-1.89 (m, 4H)。
步驟 D - (3-(N-(3-( 氯磺醯基 ) 丙基 ) 胺磺醯基 ) 丙基 ) 胺基甲酸 (9H- 茀 -9- 基 ) 甲酯 V-4 之合成
在0℃下向3-((3-((((9H
-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)丙基)磺醯胺基)丙-1-磺酸V-3
(190 mg，0.394 mmol)於ACN (4 mL)中之溶液中添加草醯二氯(0.333 mL，3.94 mmol)及催化量之DMF。將混合物在室溫下攪拌2 h，且減壓濃縮。殘餘物藉由矽膠管柱層析純化，用0-55%之EA/PE梯度溶離，得到(3-(N
-(3-(氯磺醯基)丙基)胺磺醯基)丙基)胺基甲酸(9H
-茀-9-基)甲酯V-4
。C21
H25
ClN2
O6
S2
[M + H]+
之LCMS (ESI)計算值：501.1，實驗值501.1；1
H NMR (300 MHz, CD3
OD) δ 7.80 (d,J
= 7.5 Hz, 2H), 7.64 (d,J
= 7.4 Hz, 2H), 7.35 (dt,J
= 23.9, 7.2 Hz, 4H), 4.38 (d,J
= 6.8 Hz, 2H), 4.22 (d,J
= 6.8 Hz, 1H), 4.01-3.93 (m, 2H), 3.26-3.18 (m, 4H), 3.09-3.01 (m, 2H), 2.24-2.15 (m, 2H), 1.99-1.90 (m, 2H)。
步驟 E - 2-((3-((3-((((9H- 茀 -9- 基 ) 甲氧基 ) 羰基 ) 胺基 ) 丙基 ) 磺醯胺基 ) 丙基 ) 磺醯胺基 )-N-(2-(2-(3- 甲氧基 -3- 側氧基丙氧基 ) 乙氧基 ) 乙基 )-N,N- 二甲基乙 -1- 銨 2,2,2- 三氟乙酸鹽 V-5 之合成
在0℃下向氯化2-胺基-N
-(2-(2-(3-甲氧基-3-側氧基丙氧基)乙氧基)乙基)-N
,N
-二甲基乙銨鹽酸鹽中間物B
(100 mg，0.299 mmol)於ACN (2 mL)中之溶液中添加NaHCO3
(134 mg，1.597 mmol)及(3-(N
-(3-(氯磺醯基)丙基)胺磺醯基)丙基)胺基甲酸(9H
-茀-9-基)甲酯V-4
(100 mg，0.200 mmol)。將反應物在室溫下攪拌2 h。減壓濃縮濾液，且殘餘物藉由逆相急驟層析(管柱：Flash C18
40 g；移動相A：水；移動相B：ACN；流動速率：45 mL/min；在5 min內2%-2%；在5 min內2%-30%；在20 min內30%-75%；偵測器：UV 210 nm；RT：30 min)純化，得到2-((3-((3-((((9H
-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)丙基)磺醯胺基)丙基)磺醯胺基)-N
-(2-(2-(3-甲氧基-3-側氧基丙氧基)乙氧基)乙基)-N
,N
-二甲基乙-1-銨2,2,2-三氟乙酸鹽V-5
。C35
H51
F3
N4
O12
S2
[M - TFA-
]+
之LCMS (ESI)計算值：727.3，實驗值727.3。
步驟 F - 2-((3-((3- 胺基丙基 ) 磺醯胺基 ) 丙基 ) 磺醯胺基 )-N-(2-(2-(3- 甲氧基 -3- 側氧基丙氧基 ) 乙氧基 ) 乙基 )-N,N- 二甲基乙 -1- 銨 2,2,2- 三氟乙酸鹽 V-6 之合成
在0℃下向2-((3-((3-((((9H
-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)丙基)磺醯胺基)丙基)磺醯胺基)-N
-(2-(2-(3-甲氧基-3-側氧基丙氧基)乙氧基)乙基)-N
,N
-二甲基乙-1-銨2,2,2-三氟乙酸鹽V-5
(45 mg，0.054 mmol)於DMF (1 mL)中之溶液中添加TBAF (1.688 mg，5.35 µmol)。將混合物在室溫下攪拌5 h。將混合物減壓濃縮，得到2-((3-((3-胺基丙基)磺醯胺基)丙基)磺醯胺基)-N
-(2-(2-(3-甲氧基-3-側氧基丙氧基)乙氧基)乙基)-N
,N
-二甲基乙-1-銨2,2,2-三氟乙酸鹽V-6
。C20
H41
F3
N4
O10
S2
[M - TFA-
]+
之LCMS (ESI)計算值：505.2，實驗值505.15。
步驟 G - (S)-2-((3-((3-(5-( 第三丁氧基 )-4-(18-( 第三丁氧基 )-18- 側氧基十八醯胺基 )-5- 側氧基戊醯胺基 ) 丙基 ) 磺醯胺基 ) 丙基 ) 磺醯胺基 )-N-(2-(2-(3- 甲氧基 -3- 側氧基丙氧基 ) 乙氧基 ) 乙基 )-N,N- 二甲基乙 -1- 銨 2,2,2- 三氟乙酸鹽 V-7 之合成
在-10℃下向2-((3-((3-胺基丙基)磺醯胺基)丙基)磺醯胺基)-N
-(2-(2-(3-甲氧基-3-側氧基丙氧基)乙氧基)乙基)-N
,N
-二甲基乙-1-銨2,2,2-三氟乙酸鹽V-6
(32 mg，0.052 mmol) (粗物質)於DMF (500 µL)及水(50 µL)中之溶液中添加HATU (39.3 mg，0.103 mmol)、DIEA (68.4 µL，0.414 mmol)及(S
)-5-(第三丁氧基)-4-(18-(第三丁氧基)-18-側氧基十八醯胺基)-5-側氧基戊酸7b
(34.5 mg，0.062 mmol；其合成描述於實例7中)。將所得混合物在-10℃下攪拌0.5 h，且直接藉由逆相急驟層析(管柱：Flash C18
40 g；移動相A：水(0.05% TFA)；移動相B：ACN；流動速率：45 mL/min；在5 min內2%-2%；在5 min內2%-30%；在10 min內30%-65%；在15 min內60%-95%；偵測器：UV 210 nm；RT：35 min)純化，得到(S
)-2-((3-((3-(5-(第三丁氧基)-4-(18-(第三丁氧基)-18-側氧基十八醯胺基)-5-側氧基戊醯胺基)丙基)磺醯胺基)丙基)磺醯胺基)-N
-(2-(2-(3-甲氧基-3-側氧基丙氧基)乙氧基)乙基)-N
,N
-二甲基乙-1-銨2,2,2-三氟乙酸鹽V-7
。C51
H96
F3
N5
O16
S2
[M - TFA-
]+
之LCMS (ESI)計算值：1042.6，實驗值1042.5。
步驟 H - (S)-2-((3-((3-(5-( 第三丁氧基 )-4-(18-( 第三丁氧基 )-18- 側氧基十八醯胺基 )-5- 側氧基戊醯胺基 ) 丙基 ) 磺醯胺基 ) 丙基 ) 磺醯胺基 )-N-(2-(2-(2- 羧基乙氧基 ) 乙氧基 ) 乙基 )-N,N- 二甲基乙 -1- 銨碳酸氫鹽 V 之合成
在0℃下向(S
)-2-((3-((3-(5-(第三丁氧基)-4-(18-(第三丁氧基)-18-側氧基十八醯胺基)-5-側氧基戊醯胺基)丙基)磺醯胺基)丙基)磺醯胺基)-N
-(2-(2-(3-甲氧基-3-側氧基丙氧基)乙氧基)乙基)-N
,N
-二甲基乙-1-銨2,2,2-三氟乙酸鹽V-7
(80 mg，0.069 mmol)於THF (1 mL)中之溶液中添加1 M LiOH水溶液(0.138 mL，0.138 mmol)。將反應混合物在0℃下攪拌0.5 h。將反應混合物冷卻至0℃，且用1 M HCl水溶液(0.140 mL)處理，接著直接藉由逆相急驟層析(管柱：Flash C18
40 g；移動相A：水(5 mM NH4
HCO3
)；移動相B：ACN；流動速率：50 mL/min；在5 min內2%-2%；在5 min內2%-30%；在8 min內30%-65%；在12 min內65%-95%；偵測器：UV 210 nm；RT：35 min)純化，得到(S
)-2-((3-((3-(5-(第三丁氧基)-4-(18-(第三丁氧基)-18-側氧基十八醯胺基)-5-側氧基戊醯胺基)丙基)磺醯胺基)丙基)磺醯胺基)-N
-(2-(2-(2-羧基乙氧基)乙氧基)乙基)-N
,N
-二甲基乙-1-銨碳酸氫鹽V。C49
H95
N5
O17
S2
[M - HCO3 -
]+
之LCMS (ESI)計算值：1028.6，實驗值1028.6；1
H NMR (400 MHz, CD3
OD) δ 4.23 (dd, J = 9.1, 5.1 Hz, 1H), 3.94 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 3.73 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 3.68-3.57 (m, 10H), 3.34-3.10 (m, 12H), 3.11-3.05 (m, 2H),2.40 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 2.31-2.17 (m, 6H), 2.15-1.82 (m, 6H), 1.70-1.56 (m, 4H), 1.45 (d, J = 9.8 Hz, 18H), 1.29 (d, J = 4.9 Hz, 24H)。
中間物
W
之製備
步驟 A - 中間物 W-1 之合成
在-40℃下向(S
)-2-((第三丁氧基羰基)胺基)-3-(4-甲氧基苯基)丙酸(3 g，10.16 mmol)及HATU (3.86 g，10.16 mmol)於DMF (50 ml)中之溶液中添加DIEA (7.10 ml，40.6 mmol)及2-甲基吡咯啶-2-甲酸(S)-甲酯(1.60 g，11.2 mmol)。將混合物在-40℃下攪拌2 h，接著用水(50 mL)淬滅且用EA (2 × 50 mL)萃取。將合併之有機層用鹽水洗滌，經無水Na2
SO4
乾燥，過濾且濃縮。在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用40%-50%之EA/PE梯度溶離)，得到W-1
。LC/MS：[M+H]+
= 421.3。
步驟 B - 中間物 W-2 之合成
在RT下向W-1
(1.2 g，2.71 mmol)於THF (18 mL)中之溶液中添加2N LiOH水溶液(5.42 mL，10.84 mmol)。接著將反應物在45℃下攪拌48 h。用1 N HCl水溶液將溶液之pH值調節至4，且用EA (3 × 50 mL)萃取溶液。將合併之有機層用鹽水洗滌，經無水Na2
SO4
乾燥，過濾且濃縮，得到W-2
。LC/MS：[M+H]+
= 407.2。1
H NMR (300 MHz, 氯仿-d)：δ 7.19 -7.10 (m, 2H), 6.80 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 5.29 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.54 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 3.74 (s, 3H), 3.71 -3.59 (m, 1H), 2.99 (dd, J = 13.0, 7.3 Hz, 2H), 2.92 -2.79 (m, 1H), 2.50 -2.40 (m, 1H), 1.84 (d, J = 16.8 Hz, 2H), 1.83 -1.71 (m, 1H), 1.61 (s, 3H), 1.40 (s, 9H)。
步驟 C - 中間物 W-3 之合成
在0℃下向中間物K
(0.91 g，2.46 mmol)、W-2
(1.00 g，2.46 mmol)及DIPEA (1.72 ml，9.84 mmol)於DMF (20 ml)中之溶液中添加HATU (1.22 g，3.20 mmol)，且將反應物升溫至RT並攪拌1 h。將反應物用EA及10% LiCl水溶液稀釋，傾析，且將有機層用10% LiCl水溶液洗滌，經無水Na2
SO4
乾燥，過濾且濃縮。在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用20%-70%之EA/己烷梯度溶離)，得到W-3
。LC/MS：[M+H]+
= 721.4。
步驟 D - 中間物 W-4 之合成
在-10℃下經30 min向W-3
(38 g，52.7 mmol)於MeOH (190 ml)中之溶液中逐滴添加乙醯氯(7.50 ml，105 mmol)，接著將混合物升溫至RT且攪拌隔夜。將反應物濃縮且與AcN共蒸發兩次，得到W-4
。LC/MS：[M+H]+
= 621.2。
步驟 E - 中間物 W-5 之合成
在0℃下向M-11
(10 g，12.08 mmol)於DCM (50 ml)中之溶液中逐滴添加哌啶(10.28 g，121 mmol)，接著將混合物在RT下攪拌3 h。將混合物濃縮，接著在矽膠上藉由MPLC來純化(用40:1之DCM:MeOH溶離)，得到W-5
。LC/MS：[M+H]+
= 606.4。
步驟 F - 中間物 W-6 之合成
向W-5
(4 g，6.60 mmol)及三乙胺(1.93 ml，13.84 mmol)於DCM (40 ml)中之溶液中添加二碳酸二第三丁酯(1.70 ml，7.33 mmol)，且將溶液在RT下攪拌隔夜。將反應混合物用鹽水洗滌，經無水Na2
SO4
乾燥，過濾且濃縮，得到W-6
。LC/MS：[M+H]+
= 706.4。
步驟 G - 中間物 W-7 之合成
在0℃下向W-6
(2.1 g，2.98 mmol)於THF (20 mL)中之溶液中添加2 M LiOH水溶液(3 mL)。將反應混合物在0℃下攪拌2 h，接著用1N HCl水溶液(6 mL)處理，且用EA (3 × 50 ml)萃取。將合併之有機層用鹽水洗滌，經無水Na2
SO4
乾燥，過濾且濃縮，得到W-7
。LC/MS：[M+Na]+
= 714.4。
步驟 H - 中間物 W-8 之合成
向W-7
(8.75 g，9.49 mmol)、2-胺基-3-羥基丁酸(2S,3S)-甲酯鹽酸鹽(2.41 g，14.23 mmol)及HATU (4.69 g，12.33 mmol)於DMF (88 ml)中之溶液中添加水(1.31 ml)，隨後添加DIPEA (4.97 ml，28.5 mmol)，且將反應物攪拌1 h。將反應物用10% LiCl水溶液、EA及水稀釋，傾析，且將有機層用10% LiCl水溶液、水、接著鹽水洗滌，且經無水Na2
SO4
乾燥，過濾且濃縮。在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用0-25%之(20% MeOH/DCM)/DCM梯度溶離)，得到W-8
。
步驟 I - 中間物 W-9 之合成
向W-8
(475 mg，0.589 mmol)於MeOH (4.8 ml)中之溶液中添加1N LiOH水溶液(2.36 ml，2.36 mmol)，且將反應物攪拌2 h。將混合物濃縮，用水稀釋，經由逐滴添加1 M HCl水溶液將pH調節至＜4，且經由過濾收集所得固體，用水沖洗並乾燥，得到W-9
。LC/MS：[M+H]+
= 793.4。
步驟 J - 中間物 W-10 之合成
向W-4
(30 g，45.6 mmol)於DMF (300 ml)中之溶液中添加W-9
(36.2 g，45.6 mmol)及DIEA (7.97 ml，45.6 mmol)。在RT下經1 h添加HATU (17.36 g，45.6 mmol)，接著將混合物在RT下攪拌1 h。將混合物倒入水中，過濾，且用水沖洗。將固體溶解於EA中，且將有機層用鹽水洗滌，經無水Na2
SO4
乾燥，過濾且濃縮。在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用2-5%之MeOH/DCM梯度溶離)，得到W-10
。LC/MS：[M+H2
O]+
= 1413.5。
步驟 K - 中間物 W-11 之合成
向DCE溶液(4.5 L)中鼓泡通入氮氣持續30 min，接著加熱至70℃。添加Zhan氏催化劑-1B (1.66 g，2.26 mmol)，隨後在70℃下經30 min逐滴添加W-10
(45 g，32.2 mmol)於DCE (900 ml，鼓泡通入氮氣持續30 min)中之溶液。接著將混合物在70℃下攪拌1 h。將混合物濃縮，接著藉由逆相急驟層析(管柱，C18-1矽膠；移動相，ACN/H2
O (NH4
HCO3
) (在30 min內50-65%，在15 min內至100%)；偵測器，UV 254 nm，210 nm)純化，得到W-11
。LC/MS：[M+H]+
= 1368.7。
步驟 L - 中間物 W-12 之合成
向W-11
(30 g，21.94 mmol)於MeOH (300 ml)中之溶液中添加Pd(OH)2
(10 g，14.24 mmol)。將反應物用氫氣吹掃三次，接著在RT下在一大氣壓之氫氣下攪拌隔夜。過濾反應物，接著濃縮，得到W-12
。LC/MS：[M+H]+
= 1370.1。
步驟 M - 中間物 W 之合成
在0℃下向W-12
(700 mg，0.511 mmol)於DCM (30 mL)中之溶液中添加TFA (6 mL)。將混合物在0℃下攪拌2 h，接著減壓濃縮。將殘餘物溶解於DCM (20 mL)及甲苯(20 mL)中，且減壓濃縮。將殘餘物溶解於DCM (20 mL)及HCl (4 M於二㗁烷中，0.7 mL)中，且再次減壓濃縮。將殘餘物溶解於ACN (30 mL)及水(30 mL)中，在0℃下用1 M HCl水溶液(0.7 mL)處理且凍乾，得到中間物W
。LC/MS：[M+H]+
= 1269.8。
實例
1
之合成
步驟 A - 中間物 1a 之合成
在RT下向2,2-二甲基-4-側氧基-3,8,11-三氧雜-5-氮雜十三烷-13-酸(900 mg，3.42 mmol)於DMF (10 mL)中之溶液中添加NaHCO3
(144 mg，17.1 mmol)及MeI (0.641 mL，10.3 mmol)。將混合物攪拌24 h，接著用鹽水稀釋且用EtOAc萃取。將合併之有機層用鹽水洗滌，經MgSO4
乾燥且過濾，並且濃縮濾液。在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用1%-50%之EtOAc/PE梯度溶離)，得到1a
。LC/MS：[M+H]+
= 278.2。
步驟 B - 中間物 1b 之合成
將1a
(770 mg，2.78 mmol)於含4 M HCl之二㗁烷(2 mL)中之溶液在RT下攪拌2 h，接著減壓濃縮。將殘餘物再溶解於DCM (5 mL)中，且減壓濃縮，得到1b
。LC/MS：[M+H]+
= 178.2。
步驟 C - 中間物 1c 之合成
在0℃下向18-(第三丁氧基)-18-側氧基十八烷酸(347 mg，0.936 mmol)於DMF (2 mL)中之溶液中添加1b
(200 mg，0.936 mmol)、HATU (356 mg，0.936 mmol)及DIPEA (0.817 mL，4.68 mmol)，且將混合物在RT下攪拌1 h。將溶液用水稀釋且用EtOAc萃取。將合併之有機層用鹽水洗滌，經MgSO4
乾燥，過濾且濃縮。在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用1%-5%之MeOH/DCM梯度溶離)，得到1c
。LC/MS：[M+H]+
= 530.5。
步驟 D - 中間物 1d 之合成
在RT下向1c
(300 mg，0.566 mmol)於THF (6 mL)中之溶液中添加0.5N LiOH水溶液(0.425 mL，0.849 mmol)，且將混合物攪拌1 h。將反應物用1 M HCl水溶液(0.85 mL)淬滅，且減壓濃縮。在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用1%-20%之MeOH/DCM梯度溶離)，得到1d
。LC/MS：[M+H]+
= 516.5。
步驟 E - 中間物 1e 之合成
在0℃下向1d
(260 mg，0.504 mmol)於DMF (2 mL)及水(200 µL)中之溶液中添加中間物A
(292 mg，1.01 mmol)、HATU (383 mg，1.01 mmol)及DIPEA (521 mg，4.03 mmol)，接著將反應物在RT下攪拌1 h。將溶液用水(50 µL)淬滅，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水(0.05% TFA)梯度溶離)。合併含有所需產物之溶離份且濃縮。將殘餘物再溶解於DCM (5 mL)及HCl (4N於二㗁烷中，0.2 mL)中。將所得混合物減壓濃縮，將殘餘物再溶解於乙腈(10 mL)及水(10 mL)中，在0℃下用1 N HCl水溶液(0.6 mL)處理，接著凍乾，得到1e
。LC/MS：[M]+
= 714.6。
步驟 F - 中間物 1f 之合成
在0℃下向1e
(170 mg，0.227 mmol)於THF (1.7 mL)中之溶液中添加2 M LiOH水溶液(0.227 mL，0.453 mmol)，且將混合物在0℃下攪拌2 h。將溶液用1 M HCl水溶液(450 µL)淬滅，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水梯度溶離)。合併含有所需產物之溶離份且濃縮。將殘餘物再溶解於乙腈(5 mL)及水(5 mL)中，在0℃下用1 N HCl水溶液(0.2 mL)處理且凍乾，得到1f
。LC/MS：[M]+
= 700.6。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
)：δ 4.06 (s, 2H), 3.80-3.64 (m, 6H), 3.57 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.48 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.45-3.36 (m, 4H), 3.17 (s, 6H), 2.32 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.22 (td, J = 7.5, 6.0 Hz, 4H), 1.90-1.80 (m, 2H), 1.77-1.67 (m, 2H), 1.66-1.54 (m, 4H), 1.53-1.42 (m, 11H), 1.38-1.29 (d, J = 5.8 Hz, 24H)。
步驟 G - 中間物 1g 之合成
在0℃下向中間物N
(35.0 mg，0.024 mmol)於DMF (200 µL)及水(100 µL)中之溶液中添加1f
(27.0 mg，0.037 mmol)、HATU (13.95 mg，0.037 mmol)及DIPEA (21.36 µL，0.122 mmol)，接著將反應物在RT下攪拌1 h。將溶液用水(200 µL)淬滅，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水(+0.05% TFA)梯度溶離)，得到1g
。LC/MS：[(M+H)/2)]+
= 1039.2。
步驟 H - 實例 1 (TFA 鹽 ) 之合成
在0℃下向1g
(35.0 mg，0.016 mmol)於DCM (1 mL)中之溶液中添加TFA (1 mL)，接著將反應物在RT下攪拌1 h。將混合物減壓濃縮，且在C18上藉由逆相MPLC來純化殘餘物(用乙腈/水(+0.05% TFA)梯度溶離)，得到實例 1 (TFA 鹽 )
。LC/MS：[M]+
= 2020.2。
實例
2
之合成
步驟 A - 中間物 2a 之合成
在0℃下向(S)-22-(第三丁氧基羰基)-43,43-二甲基-10,19,24,41-四側氧基-3,6,12,15,42-五氧雜-9,18,23-三氮雜四十四烷-1-酸(250 mg，0.295 mmol，其合成描述於WO 2009/115469之實例9 (第90頁)中)於DMF (300 µL)及水(50 µL)中之溶液中添加中間物A
(103 mg，0.355 mmol)、HATU (124 mg，0.325 mmol)及DIPEA (153 mg，1.18 mmol)。將混合物在RT下攪拌1 h，接著用水(50 µL)淬滅，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水(+0.05% TFA)梯度溶離)。合併含有所需產物之溶離份且濃縮。將殘餘物再溶解於DCM (5 mL)及含4 N HCl之二㗁烷(0.1 mL)中，接著減壓濃縮。將殘餘物再溶解於乙腈(10 mL)及水(10 mL)中，在0℃下用1 N HCl水溶液(0.4 mL)處理且凍乾，得到2a
。LC/MS：[M]+
= 1044.7。
步驟 B - 中間物 2b 之合成
在0℃下向2a
(50.0 mg，0.046 mmol)於THF (0.5 mL)中之溶液中添加LiOH水溶液(0.069 mL，0.139 mmol，2 N)，且將混合物在RT下攪拌2 h。將溶液用1 M HCl水溶液(140 µL)淬滅，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水(+0.05% TFA)梯度溶離)。合併含有所需產物之溶離份且濃縮。將殘餘物再溶解於乙腈(5 mL)及水(5 mL)中，在0℃下用1 N HCl水溶液(0.1 mL)處理且凍乾，得到2b
。LC/MS：[M]+
= 1030.8。
步驟 C - 中間物 2c 之合成
在0℃下向中間物N
(20.0 mg，0.014 mmol)於DMF (100 µL)及水(50 µL)中之溶液中添加2b
(22.4 mg，0.021 mmol)、HATU (7.97 mg，0.021 mmol)及DIPEA (9.03 mg，0.070 mmol)。將混合物在RT下攪拌1 h，接著用水(50 µL)淬滅，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水(+0.05% TFA)梯度溶離)，得到2c
。LC/MS：[(M+H)/2)]+
= 1204.3。
步驟 D - 實例 2 (TFA 鹽 ) 之合成
在0℃下向2c
(12.0 mg，4.76 µmol)於DCM (0.5 mL)中之溶液中添加TFA (0.5 mL)，接著將混合物在RT下攪拌1 h。減壓濃縮溶液，且在C18上藉由逆相MPLC來純化殘餘物(用乙腈/水(+0.05% TFA)梯度溶離)，得到實例 2 (TFA 鹽 )
。LC/MS：[M]+
= 2294.3。
實例
3
之合成
步驟 A - 中間物 3a 之合成
在0℃下向2,2-二甲基-4-側氧基-3,8,11-三氧雜-5-氮雜十三烷-13-酸(3.33 g，12.6 mmol)於DMF (30 mL)中之溶液中添加1b
(2.70 g，12.6 mmol)、HATU (4.80 g，12.6 mmol)及DIPEA (6.53 g，50.5 mmol)，接著將溶液在RT下攪拌1 h。將混合物用鹽水稀釋，用EtOAc萃取，用鹽水洗滌，經MgSO4
乾燥且過濾。減壓濃縮濾液，且在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用1%-8%之MeOH/DCM梯度溶離)，得到3a
。LC/MS：[M+H]+
= 445.3。
步驟 B - 中間物 3b 之合成
將3a
(3.00 g，7.10 mmol)於含4 M HCl之二㗁烷(30 mL)中之溶液在RT下攪拌2 h，接著濃縮。將殘餘物再溶解於DCM (30 mL)中，且減壓濃縮，得到3b
。LC/MS：[M+H]+
= 323.2。
步驟 C - 中間物 3c 之合成
在0℃下向(S)-4-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-5-(第三丁氧基)-5-側氧基戊酸(0.940 g，2.79 mmol)於DMF (10 mL)中之溶液中添加3b
(1.00 g，2.79 mmol)、HATU (1.06 g，2.79 mmol)及DIPEA (1.80 g，13.9 mmol)，接著將混合物在RT下攪拌1 h。將溶液用鹽水稀釋，用EtOAc萃取，用鹽水洗滌，經MgSO4
乾燥且過濾。減壓濃縮濾液，且在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用1%-8%之MeOH/DCM梯度溶離)，得到3c
。LC/MS：[M+H]+
= 642.3。
步驟 D - 中間物 3d 之合成
在0℃下向3c
(2.00 g，3.12 mmol)於THF (20 mL)中之溶液中添加2 M LiOH水溶液(3.12 mL，6.23 mmol)，且將混合物在0℃下攪拌2 h。將溶液用1 M HCl水溶液(6.3 mL)淬滅，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水(+0.05% TFA)梯度溶離)，得到3d
。LC/MS：[M+H]+
= 628.3。
步驟 E - 中間物 3e 之合成
在0℃下向3d
(1.70 g，2.71 mmol)於DMF (10 mL)及水(1 mL)中之溶液中添加中間物A
(1.57 g，5.42 mmol)、HATU (2.06 g，5.42 mmol)及DIPEA (2.80 g，21.7 mmol)，接著將混合物在RT下攪拌1 h。將反應物用水(2 mL)淬滅，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水(+0.05% TFA)梯度溶離)。合併含有所需產物之溶離份且濃縮。將殘餘物再溶解於DCM (20 mL)中，且用含4 N HCl之二㗁烷(0.35 mL)處理。濃縮所得混合物，且將殘餘物再溶解於乙腈(30 mL)及水(30 mL)中，在0℃下用1 N HCl水溶液(1.3 mL)處理且凍乾，得到3e
。LC/MS：[M]+
= 826.5。
步驟 F - 中間物 3f 之合成
在1.5大氣壓下對3e
(1.10 g，1.28 mmol)及10% Pd-C (110 mg，0.103 mmol)於THF (30 mL)中之溶液進行氫化，持續4 h。過濾混合物，且濃縮濾液，得到3f
。LC/MS：[M]+
= 692.5。
步驟 G - 中間物 3g 之合成
在0℃下向16-(第三丁氧基)-16-側氧基十六烷酸(127 mg，0.371 mmol)於DMF (2 mL)及水(200 µL)中之溶液中添加3f
(180 mg，0.247 mmol)、HATU (188 mg，0.494 mmol)及DIPEA (256 mg，1.98 mmol)，接著將混合物在RT下攪拌1 h。將溶液用水(50 µL)淬滅，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水(+0.05% TFA)梯度溶離)，得到3g
。LC/MS：[M]+
= 1016.7。
步驟 H - 中間物 3h 之合成
在0℃下向3g
(190 mg，0.168 mmol)於THF (2 mL)中之溶液中添加2 M LiOH水溶液(0.252 mL，0.504 mmol)，且將混合物在0℃下攪拌1 h。將溶液用1 M HCl水溶液(500 µL)淬滅，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水(+0.05% TFA)梯度溶離)。合併含有所需產物之溶離份且濃縮。將殘餘物再溶解於乙腈(20 mL)及水(20 mL)中，在0℃下用1 N HCl水溶液(0.12 mL)處理且凍乾，得到3h
。LC/MS：[M]+
= 1002.8。1
H NMR (400 MHz, CD3
OD)：δ 4.07 (t, J = 6.9 Hz, 1H), 3.84 (dd, J = 12.2, 3.0 Hz, 4H), 3.49 (d, J = 9.4 Hz, 10H), 3.40 (dt, J = 14.5, 4.8 Hz, 4H), 3.29 (s, 4H), 3.21 (s, 4H), 2.98 (d, J = 2.9 Hz, 6H), 2.23-1.98 (m, 8H), 1.92 (s, 1H), 1.66 (s, 3H), 1.59-1.33 (m, 6H), 1.33 -1.06 (m, 40H)。
步驟 I - 中間物 3i 之合成
在0℃下向中間物N
(30.0 mg，0.021 mmol)於DMF (200 µL)及水(100 µL)中之溶液中添加3h
(32.7 mg，0.031 mmol)、HATU (12.0 mg，0.031 mmol)及DIPEA (13.6 mg，0.105 mmol)，且將混合物在RT下攪拌1 h。將溶液用水(50 µL)淬滅，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水(+0.05% TFA)梯度溶離)，得到3i
。LC/MS：[(M+H)/2)]+
= 1190.4。
步驟 J - 實例 3 (TFA 鹽 ) 之合成
在0℃下向3i
(25.0 mg，10.0 µmol)於DCM (1 mL)中之溶液中添加TFA (1 mL)，接著將混合物在RT下攪拌1 h。減壓濃縮溶液，且在C18上藉由逆相MPLC來純化殘餘物(用乙腈/水(+0.05% TFA)梯度溶離)，得到實例 3 (TFA 鹽 )
。LC/MS：[M]+
= 2266.3。
實例
4
之合成
A
步驟 A - 中間物 4a 之合成
在RT下向3c
(700 mg，1.091 mmol)於THF (20 mL)中之溶液中添加10% Pd/C (70 mg，0.066 mmol)，接著將混合物用氫氣脫氣3次，且在RT下在1.5大氣壓之氫氣下攪拌4 h。最終混合物經由矽藻土過濾，且減壓濃縮濾液，得到4a
。LC/MS：[M+H]+
= 508.3。
步驟 B - 中間物 4b 之合成
在0℃下向4a
(510 mg，1.005 mmol)於DMF (5 mL)中之溶液中添加16-(第三丁氧基)-16-側氧基十六烷酸(344 mg，1.005 mmol)、HATU (382 mg，1.005 mmol)及DIEA (0.526 mL，3.01 mmol)，且將混合物在0℃下攪拌1 h。將溶液用水(1 mL)淬滅，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水(+0.05% TFA)梯度溶離)，得到4b
。LC/MS：[M+H]+
= 832.6。
步驟 C - 中間物 4c 之合成
在0℃下向4b
(490 mg，0.589 mmol)於THF (5 mL)中之溶液中添加1 M LiOH水溶液(1.178 mL，1.178 mmol)，且將混合物在0℃下攪拌1 h。將溶液用1 M HCl水溶液(1.2 mL)淬滅，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水梯度溶離)，得到4c
。LC/MS：[M+H]+
= 818.6。
步驟 D - 中間物 4d 之合成
在0℃下向4c
(250 mg，0.306 mmol)於DMF (2 mL)及水(0.2 mL)中之溶液中添加中間物B
(102 mg，0.306 mmol)、HATU (116 mg，0.306 mmol)及DIEA (0.267 mL，1.528 mmol)，且將混合物在0℃下攪拌1 h。將溶液用水(500 µL)稀釋，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水(+0.05% TFA)梯度溶離)。合併含有所需產物之溶離份且濃縮。將殘餘物再溶解於乙腈(10 mL)及水(10 mL)中，且凍乾，得到4d
。LC/MS：[M]+
= 1062.7。
步驟 E - 中間物 4e 之合成
在0℃下向4d
(240 mg，0.204 mmol)於THF (2.5 mL)中之溶液中添加1 M LiOH水溶液(0.408 mL，0.408 mmol)，且將混合物在0℃下攪拌1 h。將溶液用1 M HCl水溶液(0.41 mL)淬滅，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水(+0.05% TFA)梯度溶離)。合併含有所需產物之溶離份且濃縮。將殘餘物再溶解於乙腈(5 mL)及水(5 mL)中，在0℃下用1 N HCl水溶液(0.22 mL)處理且凍乾，得到4e
。LC/MS：[M]+
= 1048.7。1
H NMR (300 MHz, CD3
OD)：δ 4.26 (dd, J = 9.1, 5.1 Hz, 1H), 4.05 (s, 2H), 4.02 (s, 2H), 3.96 (s, 2H), 3.83-3.51 (m, 24H), 3.47 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 3.39 (t, J = 5.6 Hz, 3H), 3.22 (s, 6H), 2.42 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 2.30 (t, J = 7.9 Hz, 2H), 2.21 (t, J = 7.6 Hz, 4H), 2.18-2.02 (m, 1H), 1.91 (dd, J = 14.2, 8.5 Hz, 1H), 1.59 (dd, J = 15.7, 8.0 Hz, 5H), 1.47 (s, 9H), 1.45 (s, 9H), 1.31 (s, 20H)。
步驟 F - 中間物 4f 之合成
在0℃下向中間物N
(48 mg，0.034 mmol)於DMF (500 µL)及水(250 µL)中之溶液中添加4e
(36.4 mg，0.034 mmol)、HATU (19.13 mg，0.050 mmol)及DIEA (21.68 mg，0.168 mmol)，且將混合物在0℃下攪拌1 h。將最終溶液用水(30 µL)淬滅，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水(+0.05% TFA)梯度溶離)，得到4f
。LC/MS：[(M+H)/2)]+
= 1213.3。
步驟 G - 實例 4 (TFA 鹽 ) 之合成
在0℃下向4f
(38 mg，0.015 mmol)於DCM (6 mL)中之溶液中添加TFA (6 mL)，接著將混合物在RT下攪拌1 h。將最終溶液減壓濃縮，且在C18上藉由逆相MPLC來純化殘餘物(用乙腈/水(+0.05% TFA)梯度溶離)，得到實例 4 (TFA 鹽 )
。LC/MS：[(M+H)/2)]+
= 1157.0。
步驟 H - 實例 4 (Cl 鹽 ) 之合成
將5 g AG-MP-1M Cl樹脂(Bio-RAD，目錄號141-1841)封裝在管柱中，且用水(2×10 mL)洗滌，隨後用含20%乙腈之水(2×10 mL)洗滌。將實例 4 (TFA 鹽 )
於50%乙腈(10 mL)中之溶液加載至管柱上，接著用50%乙腈(50 mL)溶離化合物。凍乾收集的溶離份，得到實例 4 (Cl 鹽 )
。LC/MS：[M]+
= 2312.5。
實例
4
之合成
B
步驟 A - 中間物 4g 之合成
在RT下向2,2-二甲基-4-側氧基-3,8,11-三氧雜-5-氮雜十三烷-13-酸(8.55 g，32.5 mmol)於丙酮(125 ml)中之溶液中添加碳酸鉀(11.9 g，86 mmol)，隨後添加苯甲基溴(5 ml，42.0 mmol)，且將反應物在回流下加熱1.5 h。最終混合物經由矽藻土過濾且濃縮。在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用0%-50%之EtOAc/己烷梯度溶離)，得到4g
。LC/MS：[M+Na]+
= 376.1。
步驟 B - 中間物 4h 之合成
向4g
(9.88 g，28.0 mmol)於二㗁烷(120 ml)中之溶液中添加含4 N HCl之二㗁烷(28.0 ml，112 mmol)，接著將反應混合物在50℃下加熱4 h，且在60℃下再加熱1.5 h。將最終混合物濃縮，得到4h
。LC/MS：[M+H]+
= 254.5。
步驟 C - 中間物 4i 之合成
向4h
(6.8 g，23.47 mmol)及2,2-二甲基-4-側氧基-3,8,11-三氧雜-5-氮雜十三烷-13-酸(6.45 g，24.50 mmol)於DMF (35 ml)及乙腈(105 ml)中之溶液中添加DIPEA (15 ml，86 mmol)。將反應混合物冷卻至5℃，且逐份添加HATU (10.03 g，26.4 mmol)。將溶液在RT下攪拌1.5 h，接著濃縮，用水稀釋，且用IPAc萃取。將合併之有機層用水、5% LiCl水溶液、鹽水洗滌，經MgSO4
乾燥，過濾且濃縮。在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用10%-90%之EtOAc/己烷梯度溶離，隨後用60%-90%之(3:1之EtOAc:EtOH)/己烷梯度溶離)，得到4i
。LC/MS：[M+Na]+
= 521.2。
步驟 D - 中間物 4j 之合成
向4i
(9.694 g，19.44 mmol)於二㗁烷(50 ml)中之溶液中添加含4 N HCl之二㗁烷(5 mL，20.00 mmol)，接著將反應混合物在60℃下加熱4 h。添加更多含4 N HCl之二㗁烷(15 mL，60.00 mmol)，且將反應混合物再加熱3 h。將最終混合物濃縮，得到4j
。LC/MS：[M+H]+
= 399.2。
步驟 E - 中間物 4k 之合成
向4j
(6.76 g，15.55 mmol)及Fmoc-Glu-OtBu (7.282 g，17.11 mmol)於乙腈(80 mL)及DMF (20 mL)中之溶液中添加DIEA (10.83 mL，62.2 mmol)。將反應混合物冷卻至5℃，且逐份添加HATU (7.69 g，20.22 mmol)。將溶液在RT下攪拌1.5 h，接著濃縮，用水稀釋，且用IPAc萃取。將合併之有機層用水、5% LiCl水溶液、鹽水洗滌，經MgSO4
乾燥，過濾且濃縮。在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用30%-100%之(3:1之EtOAc:EtOH)/己烷梯度溶離)，得到4k
。LC/MS：[M+Na]+
= 828.3。
步驟 F - 中間物 4l 之合成
在RT下向4k
(4.82 g，5.98 mmol)於乙腈(50 mL)中之溶液中添加哌啶(3 mL，30.4 mmol)，且將反應混合物攪拌3.5 h。將最終混合物用乙腈稀釋且用己烷洗滌，接著濃縮乙腈層，且將殘餘物溶解於乙腈(50 mL)及水(50 mL)中並凍乾，得到4l
。LC/MS：[M+H]+
= 584.2。
步驟 G - 中間物 4m 之合成
向4l
(3.49 g，5.98 mmol)及16-(第三丁氧基)-16-側氧基十六烷酸(2.262 g，6.60 mmol)於乙腈(40 mL)及DMF (10 mL)中之溶液中添加DIPEA (4 mL，22.96 mmol)。將反應混合物冷卻至5℃，且逐份添加HATU (2.82 g，7.42 mmol)，接著將溶液在RT下攪拌1.5 h。添加更多16-(第三丁氧基)-16-側氧基十六烷酸(0.24 g，2.505 mmol)、DIPEA (0.5 mL，9.19 mmol)及HATU (0.26 g，2.78 mmol)，且將混合物攪拌2 h。將最終溶液濃縮，用水稀釋，且用IPAc萃取。將合併之有機層用水、5% LiCl水溶液、鹽水洗滌，經MgSO4
乾燥，過濾且濃縮。在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用20%-100%之(3:1之EtOAc:EtOH)/己烷梯度溶離)，得到4m
。LC/MS：[M+H]+
= 908.7。
步驟 H - 中間物 4n 之合成
在RT下向4m
(4.896 g，5.39 mmol)於MeOH (30 mL)中之溶液中添加10% Pd/C (0.066 g，0.620 mmol)。將混合物用氫氣脫氣3次，且在氫氣下在RT下攪拌3 h。最終混合物經由矽藻土過濾，且減壓濃縮濾液，得到4n
。LC/MS：[M+H]+
= 819.8。
步驟 I - 中間物 4o 之合成
向4n
(2.59 g，3.17 mmol)於乙腈(30 mL)中之溶液中添加中間物I
(1.436 g，3.49 mmol)於DMF (6 mL)中之懸浮液，隨後添加DIEA (2.2 mL，12.63 mmol)。將反應混合物冷卻至5℃，且逐份添加HATU (1.484 g，3.90 mmol)。將溶液在RT下攪拌1.5 h，接著濃縮且用Et2
O洗滌。接著用DCM稀釋，且進一步用1:1之鹽水:水洗滌。接著用二氯甲烷萃取水層，且合併之有機層用鹽水洗滌，經MgSO4
乾燥且過濾。濃縮濾液，得到4o
。LC/MS：[M]+
= 1139.5。
步驟 J - 中間物 4p 之合成
向4o
(3.20 mmol)於MeOH (99 mL)中之溶液中添加充分震盪之雷氏Ni (2 mL)。1 h後，添加更多充分震盪之雷氏Ni (23 mL)以及0.1 M pH 4磷酸鉀緩衝液(5 mL)，且使用填充氫氣之氣球對所得混合物進行氫化，持續3 h。接著添加更多充分震盪之雷氏Ni (8 mL)以及0.1 M pH 4磷酸鉀緩衝液(5 mL)，且使用填充氫氣之氣球進一步對混合物進行氫化，持續6.5 h。最終混合物經由矽藻土過濾，用DCM沖洗，且濃縮濾液，得到4p
。LC/MS：[M]+
= 1048 [M]。1
H-NMR (CD3
CN, 500 MHz)：δ 7.86 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 7.02 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.93 (s, 1H), 4.20-4.31 (m, 1H), 4.00 (s, 2H), 3.97 (s, 2H), 3.91 (s, 2H), 3.76-3.49 (m, 24H), 3.45 (q, J = 5.2 Hz, 2H), 3.36 (q, J = 5.4 Hz, 2H), 3.14 (s, 6H), 2.41 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.24 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.19 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.18 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.03 (dtd, J = 5.2, 7.6, 13.0 Hz, 1H), 1.86 (dtd, J = 4.8, 7.7, 13.7 Hz, 1H), 1.46 (s, 9H), 1.44 (s, 9H), 1.30 (s, 24H)
步驟 K - 中間物 4q 之合成
使用與實例9之合成之步驟C中所描述之彼等條件類似的條件，使中間物4p
(1.416 g，1.305 mmol)與中間物N
反應且轉化成4q
。LC/MS：[(M+H)/2]+
= 1213.3。
步驟 L - 實例 4 (Cl 鹽 ) 之合成
使用與實例4之合成A之步驟G及H中所描述之彼等條件類似的條件，將中間物4q
(3.44 g，1.398 mmol)轉化成實例 4 (Cl 鹽 )
。LC/MS：[(M+H)/2]+
= 1157.2。
實例
5
之合成
步驟 A - 中間物 5a 之合成
在0℃下向18-(第三丁氧基)-18-側氧基十八烷酸(400 mg，1.08 mmol)於DMF (5 mL)及水(0.5 mL)中之溶液中添加中間物A
(411 mg，1.62 mmol)、HATU (616 mg，1.62 mmol)及DIPEA (1.51 mL，8.64 mmol)，且將溶液在0℃下攪拌1 h。將最終混合物用水(1 mL)淬滅，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水(+0.05% TFA)梯度溶離)，得到5a
。LC/MS：[M]+
= 569.7。
步驟 B - 中間物 5b 之合成
在0℃下向5a
(380 mg，0.56 mmol)於THF (4 mL)中之溶液中添加1 M LiOH水溶液(1.12 mL，1.12 mmol)，且將溶液在0℃下攪拌1 h。將混合物用1 M HCl水溶液(1.12 mL)淬滅，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水(+0.05% TFA)梯度溶離)，得到5b
。LC/MS：[M]+
= 555.5。1
H NMR (300 MHz, CDCl3
)：δ 8.84 (br, 1H), 8.03 (br, 1H), 3.72 (s, 2H), 3.57 (s, 2H), 3.39 (s, 2H), 3.17 (s, 6H), 2.41-2.32 (m, 2H), 2.28-2.16 (m, 4H), 1.89-1.51 (m, 8H), 1.46 (s, 9H), 1.35-1.20 (m, 26H)。
步驟 C - 中間物 5c 之合成
在0℃下向5b
(250 mg，0.37 mmol)於DMF (4 mL)及水(0.4 mL)中之溶液中添加HATU (213 mg，0.56 mmol)、4a
(190 mg，0.37 mmol)及DIPEA (0.53 mL，2.99 mmol)，且將溶液在0℃下攪拌1 h。將最終混合物用水(1 mL)淬滅，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水(+0.05% TFA)梯度溶離)，得到5c
。LC/MS：[M]+
= 1044.7。
步驟 D - 中間物 5d 之合成
在0℃下向5c
(300 mg，0.26 mmol)於THF (3 mL)中之溶液中添加1 M LiOH水溶液(0.52 mL，0.52 mmol)，且將反應物攪拌1 h。將混合物用1 M HCl水溶液(0.52 mL)淬滅，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水梯度溶離)。合併含有所需產物之溶離份且濃縮。將殘餘物再溶解於乙腈(3 mL)及水(5 mL)中，在0℃下用1 N HCl水溶液(0.20 mL)處理且凍乾，得到5d
。LC/MS：[M]+
= 1030.6。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
)：δ 8.36 (br, 1H), 7.86 (br, 1H), 7.58 (br, 1H), 7.44 (br, 1H), 4.32 (d, J = 6.3 Hz, 1H), 4.18 (s, 2H), 4.03 (s, 2H), 3.78-3.41 (m, 23H), 3.28 (s, 6H), 2.47-2.12 (m, 10H), 2.05-1.51 (m, 8H), 1.48 (s, 9H), 1.46 (s, 9H), 1.32-1.23 (m, 26H)。
步驟 E - 中間物 5e 之合成
在0℃下向中間物N
(55 mg，0.038 mmol)於DMF (550 µL)及水(55 µL)中之溶液中添加5d
(41.0 mg，0.038 mmol)、HATU (21.92 mg，0.058 mmol)及DIEA (24.84 mg，0.192 mmol)，且將混合物在0℃下攪拌1 h。將反應溶液用水(500 µL)淬滅，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水(+0.1% TFA)梯度溶離)，得到5e
。LC/MS：[(M+H)/2)]+
= 1204.3。
步驟 F - 實例 5 (Cl 鹽 ) 之合成
在0℃下向5e
(48.0 mg，0.019 mmol)於DCM (10 mL)中之溶液中添加TFA (12.5 mL)，接著將混合物在RT下攪拌3 h。將溶液減壓濃縮，且在C18上藉由逆相MPLC來純化殘餘物(用乙腈/水(+0.1% TFA)梯度溶離)，得到實例 5 (TFA 鹽 )
。將6 g AG-MP-1M Cl樹脂(Bio-RAD，目錄號141-1841)封裝在管柱中，且用水(2×10 mL)洗滌，隨後用含20%乙腈之水(2×10 mL)洗滌。將實例 5 (TFA 鹽 )
溶解於50%乙腈(2×2 mL)中且加載至管柱上，並且用65%乙腈(80 mL)溶離化合物。凍乾收集的溶離份，得到實例 5 (Cl 鹽 )
。LC/MS：[M]+
= 2294.3。
實例
6
之合成
步驟 A - 中間物 6a 之合成
在0℃下向中間物N
(70 mg，0.049 mmol)及[2-[2-(fmoc-胺基)乙氧基]乙氧基]乙酸(20.74 mg，0.054 mmol)於DMF (2 ml)及水(0.1 ml)中之溶液中添加HATU (20.46 mg，0.054 mmol)及DIEA (0.034 ml，0.196 mmol)，且將所得溶液在0℃下攪拌90 min。最終混合物在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈(+0.05% TFA)/水(+0.05% TFA)梯度溶離)，得到6a
。LC/MS：[(M+2)/2]+
= 881.7。
步驟 B - 中間物 6b 之合成
在RT下向6a
(76 mg，0.043 mmol)於DMF (2 ml)中之溶液中添加哌啶(0.017 ml，0.173 mmol)，且將所得溶液在RT下攪拌2 h。最終混合物在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈(+0.05% TFA)/水(+0.05% TFA)梯度溶離)，得到呈TFA鹽之產物。將鹽再溶解於1:1之乙腈/水(15 mL)中，用1 N HCl水溶液(0.216 ml，0.216 mmol)處理且凍乾，得到6b
。LC/MS：[(M+2)/2]+
= 770.7。
步驟 C - 中間物 6c 之合成
在0℃下向6b
(59.6 mg，0.038 mmol)及2b
(42.7 mg，0.038 mmol)於DMF (3 mL)及水(0.15 mL)中之溶液中添加HATU (14.38 mg，0.038 mmol)及DIEA (0.040 mL，0.227 mmol)，且將溶液在0℃下攪拌40 min。最終混合物在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈(+0.05% TFA)/水(+0.05% TFA)梯度溶離)，得到6c
。LC/MS：[(M+H)/2)]+
= 1277.0。
步驟 D - 實例 6 (Cl 鹽 ) 之合成
使用與實例4之合成A之步驟G中所描述之彼等條件類似的第三丁酯脫除保護基條件，將中間物6c
(94 mg，0.035 mmol)轉化成實例 6 (TFA 鹽 )
。LC/MS：[(M+H)/2)]+
= 1220.9。接著使用與實例4之合成A之步驟H中所描述之彼等條件類似的樹脂交換條件，將實例 6 (TFA 鹽 )
轉化成實例 6 (Cl 鹽 )
。LC/MS：[(M+H)/2)]+
= 1220.7。
實例
7
之合成
步驟 A - 中間物 7a 之合成
在0℃下向18-(第三丁氧基)-18-側氧基十八烷酸(730 mg，1.971 mmol)於DMF (5 mL)中之溶液中添加2-胺基戊二酸(S)-1-第三丁酯5-甲酯鹽酸鹽(500 mg，1.971 mmol)、HATU (787 mg，2.069 mmol)及DIEA (1273 mg，9.85 mmol)，接著將混合物在0℃下攪拌1 h。將混合物用鹽水(20 mL)稀釋，用EtOAc萃取，用鹽水洗滌，經無水MgSO4
乾燥且過濾。減壓濃縮濾液，且在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用1%-40%之EtOAc/PE梯度溶離)，得到7a
。LC/MS：[M+H]+
= 570.7。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
)：δ 6.08 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 4.59-4.44 (m, 1H), 3.68 (s, 3H), 2.54-2.25 (m, 2H), 2.26-2.10 (m, 5H), 2.02-1.90 (m, 1H), 1.60-1.55 (m, 4H), 1.47 (s, 9H), 1.44 (s, 9H), 1.36-1.20 (d, J = 15.0 Hz, 24H)。
步驟 B - 中間物 7b 之合成
在0℃下向7a
(780 mg，1.369 mmol)於THF中之溶液中添加2 M LiOH水溶液(1.369 mL，2.74 mmol)，且將混合物在0℃下攪拌5 h。將溶液用1 M HCl水溶液(2.8 mL)淬滅，用鹽水(20 mL)稀釋，用EtOAc萃取，且合併之有機層用鹽水洗滌，經無水MgSO4
乾燥且過濾。減壓濃縮濾液，且在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用1%-8%之MeOH/DCM梯度溶離)，得到7b
。LC/MS：[M+H]+
= 556.4。
步驟 C - 中間物 7c 之合成
在0℃下向7b
(280 mg，0.504 mmol)於DMF (3 mL)及水(0.6 mL)中之溶液中添加中間物B
(169 mg，0.504 mmol)、HATU (192 mg，0.504 mmol)及DIEA (0.440 mL，2.52 mmol)，且將混合物在0℃下攪拌1 h。將溶液用水(600 µL)淬滅，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水(+0.05% TFA)梯度溶離)。合併含有所需產物之溶離份且濃縮。將殘餘物再溶解於乙腈(10 mL)及水(10 mL)中，且凍乾，得到7c
。LC/MS：[M]+
= 800.7。
步驟 D - 中間物 7d 之合成
在0℃下向7c
(240 mg，0.263 mmol)於THF (2.4 mL)中之溶液中添加1 M LiOH水溶液(0.525 mL，0.525 mmol)，且將混合物在0℃下攪拌1 h。將溶液用1 M HCl水溶液(0.53 mL)淬滅，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水梯度溶離)。合併含有所需產物之溶離份且濃縮。將殘餘物再溶解於乙腈(10 mL)及水(10 mL)中，在0℃下用1 N HCl水溶液(0.25 mL)處理且凍乾，得到7d
。LC/MS：[M]+
= 786.6。1
H NMR (400 MHz, CD3
OD)：δ 4.29 (dd, J = 9.3, 5.2 Hz, 1H), 3.97 (d, J = 5.7 Hz, 2H), 3.76 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 3.74-3.58 (m, 8H), 3.53 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 3.23 (s, 6H), 2.57 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 2.41-2.30 (m, 2H), 2.30-2.18 (m, 4H), 2.20-2.11 (m, 1H), 2.01-1.82 (m, 1H), 1.69-1.53 (m, 4H), 1.49 (s, 9H), 1.47 (s, 9H), 1.42-1.25 (m, 24H)。
步驟 E - 中間物 7e 之合成
在0℃下向中間物N
(65 mg，0.045 mmol)於DMF (600 µL)及水(60 µL)中之溶液中添加7d
(37.4 mg，0.045 mmol)、HATU (25.9 mg，0.068 mmol)及DIEA (29.4 mg，0.227 mmol)，且將混合物在0℃下攪拌1 h。將溶液用水(500 µL)淬滅，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水(+0.1% TFA)梯度溶離)，得到7e
。LC/MS：[(M+H)/2)]+
= 1082.1。
步驟 F - 實例 7 (Cl 鹽 ) 之合成
使用與實例4之合成A之步驟G中所描述之彼等條件類似的第三丁酯脫除保護基條件，將中間物7e
(58.0 mg，0.025 mmol)轉化成實例 7 (TFA 鹽 )
。LC/MS：[(M+H)/2)]+
= 1026.1。接著使用與實例4之合成A之步驟H中所描述之彼等條件類似的樹脂交換條件，將實例 7 (TFA 鹽 )
轉化成實例 7 (Cl 鹽 )
。LC/MS：[M]+
= 2050.1。
實例
8
之合成
步驟 A - 中間物 8a 之合成
遵循與實例2步驟A中所描述之彼等條件類似的條件，使(S)-22-(第三丁氧基羰基)-43,43-二甲基-10,19,24,41-四側氧基-3,6,12,15,42-五氧雜-9,18,23-三氮雜四十四烷-1-酸(3.00 g，3.55 mmol，其合成描述於WO 2009/115469之實例9 (第90頁)中)與中間物B
(1.329 g，4.43 mmol)偶合，接著遵循與實例2步驟B中所描述之彼等條件類似的條件進行水解，得到8a
。LC/MS：[M]+
= 1076.5。
步驟 B - 中間物 8b 之合成
在RT下向8a
(130 mg，0.111 mmol)於DMF (1.0 ml)中之溶液中添加HATU (46.3 mg，0.122 mmol)及DIPEA (0.087 ml，0.498 mmol)，且將混合物攪拌10 min。接著在RT下添加呈於NMP (1.5 ml)中之漿液形式之H-Glu-OtBu (25.8 mg，0.127 mmol)，且將混合物攪拌30 min。將混合物在0℃下用0.5 N HCl水溶液(0.85 ml)緩慢淬滅，接著在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈(+0.05% TFA)/水(+0.05% TFA)梯度溶離)，得到8b
。LC/MS：[M]+
= 1261.9。
步驟 C - 中間物 8c 之合成
在0℃下向中間物N
(40 mg，0.028 mmol)及8b
(38.0 mg，0.028 mmol)於DMF (3 ml)中之溶液中添加HATU (10.63 mg，0.028 mmol)及DIEA (0.029 ml，0.168 mmol)，接著將所得溶液在0℃下攪拌1 h。最終混合物在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈(+0.05% TFA)/水(+0.05% TFA)梯度溶離)，得到8c
。LC/MS：[(M+H)/2)]+
= 1320.0。
步驟 D - 實例 8 (Cl 鹽 ) 之合成
使用與實例4之合成A之步驟G中所描述之彼等條件類似的第三丁酯脫除保護基條件，將中間物8c
(63 mg，0.024 mmol)轉化成實例 8 (TFA 鹽 )
。LC/MS：[(M+H)/2)]+
= 1235.5。接著使用與實例4步驟H中所描述之彼等條件類似的樹脂交換條件，將實例 8 (TFA 鹽 )
轉化成實例 8 (Cl 鹽 )
。LC/MS：[(M+H)/2)]+
= 1235.3。
實例
9
之合成
步驟 A - 中間物 9a 之合成
在0℃下向18-(第三丁氧基)-18-側氧基十八烷酸(350 mg，0.944 mmol)於DMF (2.0 mL)及水(0.15 mL)中之溶液中添加中間物B
(390 mg，1.133 mmol)、HATU (413 mg，1.086 mmol)及DIPEA (0.99 mL，5.67 mmol)，接著將混合物在RT下攪拌90 min。將反應物用0.5N HCl水溶液(2 mL)淬滅，接著在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水(+0.05% TFA)梯度溶離)，得到9a
。LC/MS：[M]+
= 615.4。
步驟 B - 中間物 9b 之合成
在RT下向9a
(434 mg，0.608 mmol)於THF (7 mL)中之溶液中添加1N LiOH水溶液(0.912 mL，0.912 mmol)，且將混合物攪拌1 h。將混合物用0.5 N HCl水溶液(2.0 mL)淬滅，濃縮，接著溶解於含50%乙腈之水中且凍乾，得到9b
。LC/MS：[M]+
= 601.4。
步驟 C - 中間物 9c 之合成
在0℃下向中間物N
(140 mg，0.098 mmol)及中間物S
(93 mg，0.103 mmol)於乙腈(2 mL)及DMF (0.2 mL)中之溶液中添加HATU (39.1 mg，0.103 mmol)及DIPEA (0.068 mL，0.391 mmol)，接著將混合物在RT下攪拌45 min。將溶液緩慢滴入填充有1:1之IPAc/環戊基甲基醚(30 mL)之離心管中。將試管在-78℃下冷凍5 min，接著離心15 min。傾析溶液，添加1:1之IPAc/環戊基甲基醚(20 ml)，震盪試管，在-78℃下冷凍5 min，接著離心15 min。傾析溶液，且真空乾燥固體，得到9c
。LC/MS：[(M+2)/2]+
= 1139.4。
步驟 D - 中間物 9d 之合成
在RT下向9c
(226 mg，0.099 mmol)於乙腈(2 mL)及DMF (0.2 mL)中之溶液中添加哌啶(0.039 mL，0.397 mmol)，且將混合物攪拌1 h。將溶液緩慢滴入填充有1:1之IPAc/環戊基甲基醚(30 mL)之離心管中。將試管在-78℃下冷凍5 min，接著離心15 min。傾析溶液，添加1:1之IPAc/環戊基甲基醚(20 ml)，震盪試管，在-78℃下冷凍5 min，接著離心15 min。傾析溶液，且真空乾燥固體，得到9d
。LC/MS：[(M+2)/2]+
= 1028.1。
步驟 E - 中間物 9e 之合成
在0℃下向9d
(75 mg，0.036 mmol)及9b
(31.9 mg，0.046 mmol)於乙腈(1.0 mL)及DMF (0.15 mL)中之溶液中添加HATU (15.96 mg，0.042 mmol)及DIPEA (0.025 mL，0.146 mmol)，接著將混合物在RT下攪拌30 min。將溶液緩慢滴入填充有1:1之IPAc/環戊基甲基醚(30 mL)之離心管中。將試管在-78℃下冷凍5 min，接著離心20 min。傾析溶液，添加1:1之IPAc/環戊基甲基醚(20 ml)，震盪試管，在-78℃下冷凍5 min，接著離心15 min。傾析溶液，且真空乾燥固體，得到9e
。LC/MS：[(M+H)/2]+
= 1319.4。
步驟 F - 實例 9 (Cl 鹽 ) 之合成
使用與實例4之合成A之步驟G中所描述之彼等條件類似的第三丁酯脫除保護基條件，將中間物9e
(81 mg，0.029 mmol)轉化成實例 9 (TFA 鹽 )
。LC/MS：[(M+H)/2)]+
= 1235.4。接著使用與實例4之合成A之步驟H中所描述之彼等條件類似的樹脂交換條件，將實例 9 (TFA 鹽 )
轉化成實例 9 (Cl 鹽 )
。LC/MS：[(M+H)/2]+
= 1235.5。
實例
10
之合成
A
步驟 A - 中間物 10a 之合成
在RT下向中間物S
(300 mg，0.333 mmol)及中間物B
(169 mg，0.400 mmol)於DMF (4 ml)中之溶液中添加HATU (146 mg，0.383 mmol)及DIEA (0.465 ml，2.66 mmol)，且將溶液在RT下攪拌2 h。最終混合物在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈(+0.05% TFA)/水(+0.05% TFA)梯度溶離)，得到10a
。LC/MS：[M]+
= 1145.4。
步驟 B - 中間物 10b 之合成
向10a
(327 mg，0.285 mmol)於乙腈(5 ml)中之溶液中添加哌啶(0.085 ml，0.856 mmol)，且將溶液在RT下攪拌3 h。濃縮最終混合物，將殘餘物溶解於2:1之乙腈/水(20 mL)中，接著凍乾，得到10b
。LC/MS：[M]+
= 923.3。
步驟 C - 中間物 10c 之合成
向10b
(132 mg，0.143 mmol)於DMF (4 ml)中之溶液中添加18-(第三丁氧基)-18-側氧基十八烷酸(74.1 mg，0.200 mmol)、HATU (76 mg，0.200 mmol)及DIEA (0.100 ml，0.571 mmol)，且將溶液在RT下攪拌1 h。最終混合物在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈(+0.05% TFA)/水(+0.05% TFA)梯度溶離)，得到10c
。LC/MS：[M]+
= 1275.6。
步驟 D - 中間物 10d 之合成
在0℃下向10c
(161 mg，0.117 mmol)於THF (2.5 ml)中之溶液中添加1N LiOH水溶液(0.135 ml，0.135 mmol)，接著將溶液在RT下攪拌2 h。將最終混合物在0℃下用1 N HCl水溶液(100 μL)淬滅，濃縮，且在C18上藉由逆相MPLC來純化殘餘物(用乙腈(+0.05% TFA)/水(+0.05% TFA)梯度溶離)，得到10d
。LC/MS：[M]+
= 1261.5。1
H NMR (500 MHz,CD3
OD)：δ 4.29-4.23 (m, 2H), 4.05 (s, 2H), 4.01 (s, 2H), 3.98-3.93 (m, 2H), 3.78-3.53 (m, 24H), 3.46 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.39 (td, J = 5.6, 4.0 Hz, 2H), 3.21 (s, 6H), 2.40 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 2.37-2.09 (m, 10H), 1.93-1.82 (m, 2H), 1.68-1.51 (m, 4H), 1.469 (s, 9H), 1.467 (s, 9H), 1.44 (s, 9H), 1.36-1.26 (m, 24H)。
步驟 E - 中間物 10e 之合成
在0℃下向中間物N
(60 mg，0.042 mmol)及10d
(68.5 mg，0.050 mmol)於DMF (3 ml)及水(0.15 ml)中之溶液中添加HATU (17.54 mg，0.046 mmol)及DIEA (0.044 ml，0.252 mmol)，且將溶液在0℃下攪拌1 h。最終混合物在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈(+0.05% TFA)/水(+0.05% TFA)梯度溶離)，得到10e
。LC/MS：[(M+H)/2]+
= 1320.2。
步驟 F - 實例 10 (Cl 鹽 ) 之合成
使用與實例4之合成A之步驟G中所描述之彼等條件類似的第三丁酯脫除保護基條件，將中間物10e
(113 mg，0.041 mmol)轉化成實例 10 (TFA 鹽 )
。LC/MS：[(M+H)/2)]+
= 1236.0。接著使用與實例4之合成A之步驟H中所描述之彼等條件類似的樹脂交換條件，將實例 10 (TFA 鹽 )
轉化成實例 10 (Cl 鹽 )
。LC/MS：[(M+H)/2]+
= 1235.9。
實例
10
之合成
B
步驟 A - 中間物 10f 之合成
在0℃下向4l
(2.411 g，4.13 mmol)及Fmoc-Glu-OtBu (2.109 g，4.96 mmol)於DMF (15 ml)及乙腈(40.00 ml)中之溶液中添加HATU (1.884 g，4.96 mmol)及DIEA (2.89 ml，16.52 mmol)，接著將所得溶液在RT下攪拌2 h。將最終混合物用鹽水稀釋，且用EtOAc萃取。將有機層用鹽水洗滌，經Na2
SO4
乾燥且過濾。濃縮濾液，且在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用MeOH/DCM梯度溶離)，得到10f
。LC/MS：[M+H]+
= 991.3。
步驟 B - 中間物 10g 之合成
向10f
(3.6 g，3.63 mmol)於乙腈(40 ml)中之溶液中添加哌啶(1.798 ml，18.16 mmol)，且將所得溶液在RT下攪拌3 h。將混合物用乙腈(150 mL)稀釋，用己烷洗滌兩次，接著濃縮，得到10g
。LC/MS：[M+H]+
= 770.1。
步驟 C - 中間物 10h 之合成
在0℃下向10g
(2.79 g，3.63 mmol)於DMF (20 ml)中之溶液中添加18-(第三丁氧基)-18-側氧基十八烷酸(1.748 g，4.72 mmol)、HATU (1.794 g，4.72 mmol)及DIEA (2.54 ml，14.51 mmol)，接著將所得溶液在RT下攪拌40 min。將最終混合物用鹽水稀釋，且用EtOAc萃取。將有機層用鹽水洗滌，經Na2
SO4
乾燥且過濾。濃縮濾液，且在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用MeOH/DCM梯度溶離)，得到10h
。LC/MS：[M+H]+
= 1121.4。
步驟 D - 中間物 10i 之合成
在RT下向10h
(3.1 g，2.76 mmol)於MeOH (100 ml)中之溶液中添加10% Pd/C (0.588 g，0.553 mmol)，且使混合物脫氣，接著使用填充氫氣之氣球進行氫化，持續2 h。最終混合物經由矽藻土過濾且濃縮，得到10i
。LC/MS：[M+H]+
= 1031.7。
步驟 E - 中間物 10j 之合成
在0℃下向10i
(2.548 g，2.471 mmol)及中間物I
(1.491 g，2.96 mmol)於DMF (6 ml)及乙腈(30 ml)中之溶液中添加DIEA (2.158 ml，12.35 mmol)及HATU (1.127 g，2.96 mmol)，接著將所得溶液在RT下攪拌1 h。將最終混合物濃縮，用鹽水稀釋，且用DCM萃取。將合併之有機層用鹽水洗滌，經Na2
SO4
乾燥且濃縮，得到10j
。LC/MS：[M]+
= 1351.9。
步驟 F - 中間物 10k 之合成
向10j
(3.65 g，2.467 mmol)於MeOH (100 ml)中之溶液中添加充分震盪之雷氏Ni (25 ml，2.467 mmol)，接著使用填充氫氣之氣球對所得混合物進行氫化，持續8 h。最終混合物經由矽藻土過濾(用MeOH及DCM沖洗)，且濃縮濾液。殘餘物在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈(+0.05% TFA)/水(+0.05% TFA)梯度溶離)，得到10k
。LC/MS：[M]+
= 1261.8。
步驟 G - 中間物 10l 之合成
使用與實例9步驟C中所描述之彼等條件類似的條件，使中間物10k
(1.78 g，1.294 mmol)與中間物N
反應且轉化成10l
。LC/MS：[(M+H)/2]+
= 1320.0。
步驟 H - 實例 10 (Cl 鹽 ) 之合成
使用與實例4之合成A之步驟G及H中所描述之彼等條件類似的條件，將中間物10l
(3.7 g，1.289 mmol)轉化成實例 10 (Cl 鹽 )
。LC/MS：[(M+H)/2]+
= 1235.9。
實例
11
之合成
步驟 A - 中間物 11a 之合成
在RT下向中間物B
(1.0 g，2.358 mmol)於乙腈(20 ml)中之混合物中添加含DIEA (2.471 ml，14.15 mmol)及Boc2
O (0.602 ml，2.59 mmol)之DCM (10 mL)，接著將所得溶液在RT下攪拌2 h。濃縮溶液，且在C18上藉由逆相MPLC來純化殘餘物(用乙腈(+0.05% TFA)/水(+0.05% TFA)梯度溶離)，得到11a
。LC/MS：[M]+
= 363.3。
步驟 B - 中間物 11b 之合成
在0℃下向11a
(1.34 g，2.90 mmol)於THF (10 ml)、MeOH (3 ml)及水(3 ml)中之溶液中添加1 N LiOH水溶液(11.61 ml，11.61 mmol)，接著將所得溶液在RT下攪拌2 h。將溶液濃縮，用1 N HCl水溶液酸化至pH 3-4，接著凍乾，得到11b
。LC/MS：[M]+
= 349.3。
步驟 C - 中間物 11c 之合成
在RT下向中間物B
(1.355 g，3.20 mmol)及11b
(1.121 g，2.90 mmol)於DMF (30 mL)中之混合物中添加DIEA (5.07 ml，29.0 mmol)及HATU (1.160 g，3.05 mmol)，接著將所得混合物在RT下攪拌4 h。最終混合物在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈(+0.05% TFA)/水(+0.05% TFA)梯度溶離)，得到11c
。LC/MS：[M/2]+
= 297.3。
步驟 D - 中間物 11d 之合成
向11c
(2.06 g，2.60 mmol)於DCM (10 ml)中之溶液中添加TFA (10 ml，130 mmol)，且將所得溶液在RT下攪拌50 min。濃縮溶液，將殘餘物溶解於乙腈(25 mL)及水(25 mL)中且凍乾，接著將殘餘物再溶解於3:1之DCM/乙腈(30 mL)中，用含4N HCl之二㗁烷(1.954 ml，7.81 mmol)處理且濃縮，得到11d
。LC/MS：[M/2]+
= 247.3。
步驟 E - 中間物 11e 之合成
在RT下向中間物S
(150 mg，0.166 mmol)及11d
(157 mg，0.216 mmol)於DMF (4 ml)中之溶液中添加HATU (66.5 mg，0.175 mmol)及DIEA (0.174 ml，0.999 mmol)，接著將所得溶液在RT下攪拌1 h。最終溶液在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈(+0.05% TFA)/水(+0.05% TFA)梯度溶離)，得到11e
。LC/MS：[M/2]+
= 688.6。
步驟 F - 中間物 11f 之合成
向11e
(191 mg，0.121 mmol)於乙腈(2 ml)中之溶液中添加哌啶(0.036 ml，0.364 mmol)，且將所得溶液在RT下攪拌2.5 h，接著濃縮，得到11f
。LC/MS：[M/2]+
= 577.7
步驟 G - 中間物 11g 之合成
在RT下向11f
(174 mg，0.129 mmol)及16-(第三丁氧基)-16-側氧基十六烷酸(66.1 mg，0.193 mmol)於DMF (4.5 ml)中之溶液中添加HATU (73.4 mg，0.193 mmol)及DIEA (0.135 ml，0.772 mmol)，接著將所得溶液在RT下攪拌1.5 h。最終混合物在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈(+0.05% TFA)/水(+0.05% TFA)梯度溶離)，得到11g
。LC/MS：[M/2]+
= 739.7。
步驟 H - 中間物 11h 之合成
在0℃下向11g
(163 mg，0.097 mmol)於THF (2 ml)中之溶液中添加1 N LiOH水溶液(0.224 ml，0.224 mmol)，且將所得溶液在0℃下攪拌1 h。將最終溶液用1 N HCl水溶液(200 µL)淬滅，接著濃縮，且在C18上藉由逆相MPLC來純化殘餘物(用乙腈(+0.05% TFA)/水(+0.05% TFA)梯度溶離)，得到11h
。LC/MS：[M/2]+
= 732.8。
步驟 I - 中間物 11i 之合成
在0℃下向中間物N
(52 mg，0.036 mmol)及11h
(66.4 mg，0.040 mmol)於DMF (2 ml)及水(0.1 ml)中之溶液中添加HATU (15.20 mg，0.040 mmol)及DIEA (0.051 ml，0.291 mmol)，且將溶液在0℃下攪拌90 min。溶液在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈(+0.05% TFA)/水(+0.05% TFA)梯度溶離)，得到11i
。LC/MS：[M/2]+
= 1421.1。
步驟 J - 實例 11 (Cl 鹽 ) 之合成
使用與實例4之合成A之步驟G中所描述之彼等條件類似的第三丁酯脫除保護基條件，將中間物11i
(92 mg，0.032 mmol)轉化成實例 11 (TFA 鹽 )
。LC/MS：[M/2]+
= 1337.0。接著使用與實例4之合成A之步驟H中所描述之彼等條件類似的樹脂交換條件，將實例 11 (TFA 鹽 )
轉化成實例 11 (Cl 鹽 )
。LC/MS：[M/2]+
= 1336.4。
實例
12
之合成
步驟 A - 實例 12 (TFA 鹽 ) 之合成
向實例 2 (TFA 鹽 )
(103 mg，0.043 mmol)於MeOH (10 ml)中之溶液中逐滴添加TMS-重氮甲烷(2.138 ml，4.28 mmol)，且將所得溶液在RT下攪拌10 min。溶液藉由添加幾滴乙酸淬滅，濃縮，接著在C18上藉由逆相HPLC來純化殘餘物(用乙腈(+0.05% TFA)/水(+0.05% TFA)梯度溶離)，得到實例 12 (TFA 鹽 )
。LC/MS：[(M+H)/2]+
= 1161.8。
步驟 B - 實例 12 (Cl 鹽 ) 之合成
使用與實例4之合成A之步驟H中所描述之彼等條件類似的樹脂交換條件，將實例 12 (TFA 鹽 )
轉化成實例 12 (Cl 鹽 )
。LC/MS：[(M+H)/2]+
= 1161.9。
實例
13
之合成
步驟 A - 中間物 13a 之合成
在0℃下向7b
(1.2 g，2.16 mmol)於DMF (15 mL)中之溶液中添加4a
(1.21 g，2.38 mmol)、HATU (0.90 g，2.38 mmol)及DIEA (3.02 mL，17.27 mmol)，且將反應混合物在0℃下攪拌1 h。將溶液用水(2 mL)淬滅，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水(+0.05% TFA)梯度溶離)，得到13a
。LC/MS：[M+Na]+
= 1068.6。
步驟 B - 中間物 13b 之合成
在0℃下向13a
(1.6 g，1.53 mmol)於THF (16 mL)中之溶液中添加1 M LiOH水溶液(3.06 mL，3.06 mmol)，且將反應混合物在0℃下攪拌1 h。將所得溶液用1 M HCl水溶液(3.06 mL)淬滅，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水梯度溶離)，得到13b
。LC/MS：[M+H]+
= 1031.5。1
H NMR (400 MHz, CD3
OD)：δ 4.32-4.25 (m, 2H), 4.18 (s, 2H), 4.03 (s, 2H), 3.76-3.65 (m, 8H), 3.63-3.56 (m, 4H), 3.47 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 3.41 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 2.40-2.11 (m, 10H), 1.94-1.86 (m, 2H), 1.70-1.54 m, 4H), 1.51-1.44 (m, 27H), 1.37-1.29 (m, 24H)。
步驟 C - 中間物 13c 之合成
在0℃下向13b
(200 mg，0.194 mmol)於DMF (2 mL)及水(0.2 mL)中之溶液中添加HATU (88 mg，0.233 mmol)、DIEA (0.203 mL，1.164 mmol)及中間物C
(142 mg，0.388 mmol)，且將混合物在-10℃下攪拌10 min。將最終溶液用水(200 µL)淬滅，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水(+0.05% TFA)梯度溶離)。合併含有所需產物之溶離份且濃縮。將殘餘物再溶解於乙腈(10 mL)及水(10 mL)中且凍乾，得到13c
。LC/MS：[M]+
= 1305.8。
步驟 D - 中間物 13d 之合成
在0℃下向13c
(230 mg，0.16 mmol)於THF (2.3 mL)中之溶液中添加1 M LiOH水溶液(0.32 mL，0.32 mmol)，且將混合物在0℃下攪拌1 h。將溶液用1 M HCl水溶液(0.33 mL)淬滅，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水(+0.05% TFA)梯度溶離)。合併含有所需產物之溶離份且濃縮。將殘餘物再溶解於乙腈(5 mL)及水(5 mL)中，在0℃下用1 N HCl水溶液(0.17 mL)處理且凍乾，得到13d
。LC/MS：[M]+
= 1291.8。
步驟 E - 中間物 13e 之合成
在0℃下向13d
(91 mg，0.068 mmol)於DMF (700 µL)及水(70 µL)中之溶液中添加中間物N
(70 mg，0.05 mmol)、HATU (37.2 mg，0.10 mmol)及DIEA (50.6 mg，0.39 mmol)，且將混合物在0℃下攪拌10 min。將最終溶液用水(500 µL)淬滅，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水(+0.05% TFA)梯度溶離)，得到13e
。LC/MS：[(M+H)/2)]+
= 1335.0。
步驟 F - 實例 13 (Cl 鹽 ) 之合成
使用與實例4之合成A之步驟G中所描述之彼等條件類似的第三丁酯脫除保護基條件，將中間物13e
(95 mg，0.034 mmol)轉化成實例 13 (TFA 鹽 )
。LC/MS：[(M+H)/2)]+
= 1250.7。接著使用與實例4之合成A之步驟H中所描述之彼等條件類似的樹脂交換條件，將實例 13 (TFA 鹽 )
轉化成實例 13 (Cl 鹽 )
。LC/MS：[M]+
= 2499.3。
實例
14
之合成
步驟 A - 中間物 14a 之合成
在0℃下向(S)-4-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-5-(第三丁氧基)-5-側氧基戊酸(8.68 g，25.7 mmol)於DMF (50 mL)中之溶液中添加HATU (10.68 g，28.1 mmol)、1b
(5 g，23.40 mmol)及DIEA (32.7 mL，187 mmol)，且將反應物在0℃下攪拌1 h。將最終混合物用水(200 mL)淬滅，且用EtOAc (2 × 100 mL)萃取。合併之有機層用鹽水洗滌，經無水Na2
SO4
乾燥且過濾。減壓濃縮濾液，且在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用0%-30%之EtOAc/PE梯度溶離)，得到14a
。LC/MS：[M+H]+
= 497.2。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
)：δ 7.37-7.28 (m, 5H), 5.10 (s, 2H), 4.30-4.16 (m, 1H), 4.14 (s, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.72-3.67 (m, 2H), 3.67-3.62 (m, 2H), 3.69-3.63 (m, 2H), 3.50-3.36 (m, 2H), 2.37-1.84 (m, 4H), 1.45 (s, 9H)。
步驟 B - 中間物 14b 之合成
在RT下向14a
(9 g，18.13 mmol)於THF (150 mL)中之溶液中添加10% Pd/C (900 mg，0.846 mmol)。將混合物用氫氣脫氣3次，且在氫氣下在RT下攪拌16 h。最終混合物經由矽藻土過濾，且減壓濃縮濾液，得到14b
。LC/MS：[M+H]+
= 363.2。
步驟 C - 中間物 14c 之合成
在0℃下向7b
(1 g，1.80 mmol)於DMF (10 mL)中之溶液中添加14b
(0.72 g，1.98 mmol)、HATU (0.75 g，1.98 mmol)及DIEA (1.57 mL，9.00 mmol)，且將反應混合物在0℃下攪拌1 h。將最終溶液用水(2 mL)淬滅，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水(+0.05% TFA)梯度溶離)，得到14c
。LC/MS：[M+H]+
= 900.6。
步驟 D - 中間物 14d 之合成
在0℃下向14c
(1.4 g，1.56 mmol)於THF (14 mL)中之溶液中添加1 M LiOH水溶液(3.11 mL，3.11 mmol)，且將反應混合物在0℃下攪拌1 h。將最終混合物用1 M HCl水溶液(3.1 mL)淬滅，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水梯度溶離)，得到14d
。LC/MS：[M+H]+
= 886.7。1
H NMR (400 MHz, CD3
OD)：δ 4.32-4.23 (m, 2H), 4.15 (s, 2H), 3.75-3.69 (m, 2H), 3.68-3.63 (m, 2H), 3.57 (t, J = 5.4 Hz, 2H), 3.42-3.35 (m, 2H), 2.42-2.09 (m, 10H), 1.96-1.84 (m, 2H), 1.67-1.54 (m, 4H), 1.51 -1.44 (m, 27H), 1.41-1.29 (m, 24H)。
步驟 E - 中間物 14e 之合成
在0℃下向14d
(200 mg，0.23 mmol)於DMF (2 mL)及水(0.2 mL)中之溶液中添加中間物F
(118 mg，0.45 mmol)、HATU (129 mg，0.34 mmol)及DIEA (0.24 mL，1.35 mmol)，且將反應物在0℃下攪拌1 h。將最終溶液用水(2 mL)淬滅，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水(+0.05% TFA)梯度溶離)，得到14e
。LC/MS：[M]+
= 1056.6。
步驟 F - 中間物 14f 之合成
在0℃下向14e
(180 mg，0.15 mmol)於THF (2 mL)中之溶液中添加1 M LiOH水溶液(0.31 mL，0.31 mmol)，且將反應混合物在0℃下攪拌1 h。將最終溶液用1 M HCl水溶液(0.31 mL)淬滅，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水梯度溶離)。合併含有所需產物之溶離份且濃縮。將殘餘物再溶解於乙腈(3 mL)及水(5 mL)中，在0℃下用1 N HCl水溶液(0.12 mL)處理且凍乾，得到14f
。LC/MS：[M]+
= 1043.6。1
H NMR (400 MHz, CD3
OD)：δ 4.33-4.25 (m, 2H), 4.06 (s, 2H), 3.81-3.65 (m, 8H), 3.62-3.36 (m, 6H), 3.21 (s, 6H), 2.48 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.40-2.01 (m, 12H), 1.95-1.81 (m, 2H), 1.72-1.54 (m, 4H), 1.52-1.44 (m, 27H), 1.42-1.29 (m, 24H)。
步驟 G - 中間物 14g 之合成
在0℃下向中間物N
(50 mg，0.035 mmol)於DMF (500 µL)及水(50 µL)中之溶液中添加14f
(52.8 mg，0.049 mmol)、HATU (26.6 mg，0.07 mmol)及DIEA (36.1 mg，0.28 mmol)，且將反應混合物在0℃下攪拌1 h。將最終混合物用水(300 µL)淬滅，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水(+0.05% TFA)梯度溶離)，得到14g
。LC/MS：[(M+H)/2)]+
= 1210.4。
步驟 H - 實例 14 (Cl 鹽 ) 之合成
使用與實例4之合成A之步驟G中所描述之彼等條件類似的第三丁酯脫除保護基條件，將中間物14g
(64 mg，0.025 mmol)轉化成實例 14 (TFA 鹽 )
。LC/MS：[(M+H)/2)]+
= 1126.0。接著使用與實例4之合成A之步驟H中所描述之彼等條件類似的樹脂交換條件，將實例 14 (TFA 鹽 )
轉化成實例 14 (Cl 鹽 )
。LC/MS：[M]+
= 2250.2。
實例
15
之合成
步驟 A - 中間物 15a 之合成
在0℃下向18-(第三丁氧基)-18-側氧基十八烷酸(2 g，5.40 mmol)於DMF (20 mL)中之溶液中添加HATU (2.25 g，5.94 mmol)、2-胺基丁二酸(S)-1-第三丁酯4-甲酯鹽酸鹽(1.55 g，6.48 mmol)及DIEA (4.71 mL，27.0 mmol)，且將混合物在0℃下攪拌1 h。將反應溶液用水(3 mL)淬滅，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水(+0.05% TFA)梯度溶離)，得到15a
。LC/MS：[M+Na]+
= 578.5。
步驟 B - 中間物 15b 之合成
在0℃下向15a
(2.5 g，4.50 mmol)於THF (25 mL)中之溶液中添加1 M LiOH水溶液(9.00 mL，9.00 mmol)，且將混合物在0℃下攪拌1 h。將反應溶液用1 M HCl水溶液(9 mL)淬滅，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水(+0.05% TFA)梯度溶離)，得到15b
。LC/MS：[M+Na]+
= 564.4。
步驟 C - 中間物 15c 之合成
在0℃下向15b
(300 mg，0.554 mmol)於DMF (3 mL)中之溶液中添加HATU (232 mg，0.609 mmol)、3b
(397 mg，1.11 mmol)及DIEA (0.484 mL，2.77 mmol)，且將混合物在0℃下攪拌1 h。將反應溶液用水(1 mL)淬滅，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水(+0.1% TFA)梯度溶離)，得到15c
。LC/MS：[M+H]+
= 846.5。1
H NMR (300 MHz, CD3
OD)：δ 4.62-4.58 (m, 1H), 4.17 (s, 2H), 4.00 (s, 2H), 3.73 (s, 3H), 3.72-3.51 (m, 12H), 3.48-3.33 (m, 4H), 2.73-2.58 (m, 2H), 2.26-2.14 (m, 4H), 1.63-1.50 (m, 4H), 1.48-1.41 (m, 18H), 1.36-1.26 (m, 24H)。
步驟 D - 中間物 15d 之合成
在0℃下向0.8 M CaCl2
於2-丙醇(4.2 mL)及水(1.8 mL)中之溶液中添加15c
(300 mg，0.355 mmol)及1 N LiOH水溶液(0.532 mL，0.532 mmol)，接著將溶液在RT下攪拌1 h。將反應物用AcOH (0.3 mL)淬滅，減壓濃縮，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水(+0.1% TFA)梯度溶離)，得到15d
。LC/MS：[M+H]+
= 832.5。
步驟 E - 中間物 15e 之合成
在0℃下向15d
(150 mg，0.180 mmol)於DMF (800 µL)及水(80 µL)中之溶液中添加HATU (82 mg，0.216 mmol)、DIEA (157 µL，0.901 mmol)及中間物I
(148 mg，0.361 mmol)，且將混合物在0℃下攪拌1 h。將反應溶液用水(0.5 mL)淬滅，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水(+0.1% TFA)梯度溶離)，得到15e
。LC/MS：[M]+
= 1152.6。
步驟 F - 中間物 15f 之合成
向15e
(200 mg，0.158 mmol)於THF (30 mL)中之溶液中添加10% Pd/C (20 mg，0.019 mmol)，且將混合物脫氣，接著使用填充氫氣之氣球氫化1 h。最終混合物經由矽藻土過濾且濃縮，接著在C18上藉由逆相MPLC來純化殘餘物(用乙腈/水(+0.1% TFA)梯度溶離)。合併含有所需產物之溶離份且減壓濃縮，接著將殘餘物再溶解於乙腈(3 mL)及水(6 mL)中，在0℃下用1 N HCl水溶液(0.16 mL)處理且凍乾，得到15f
。LC/MS：[M]+
= 1062.6。
步驟 G - 中間物 15g 之合成
在-20℃下向中間物N
(50 mg，0.035 mmol)於DMF (500 µL)及水(50 µL)中之溶液中添加15f
(53.7 mg，0.049 mmol)、HATU (26.6 mg，0.070 mmol)及DIEA (36.1 mg，0.28 mmol)，接著將反應混合物在0℃下攪拌30 min。將所得溶液用水(300 µL)淬滅，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水(+0.1% TFA)梯度溶離)，得到15g
。LC/MS：[(M+H)/2)]+
= 1220.2。
步驟 H - 實例 15 (Cl 鹽 ) 之合成
使用與實例4之合成A之步驟G中所描述之彼等條件類似的第三丁酯脫除保護基條件，將中間物15g
(68 mg，0.027 mmol)轉化成實例 15 (TFA 鹽 )
。LC/MS：[(M+H)/2)]+
= 1164.2。接著使用與實例4之合成A之步驟H中所描述之彼等條件類似的樹脂交換條件，將實例 15 (TFA 鹽 )
轉化成實例 15 (Cl 鹽 )
。LC/MS：[M]+
= 2326.3。
實例
16
之合成
步驟 A - 中間物 16a 之合成
在0℃下向3-胺基戊二酸二甲酯鹽酸鹽(1 g，4.72 mmol)於THF (10 mL)及水(10 mL)中之溶液中添加NaHCO3
(1.588 g，18.90 mmol)及Cbz-OSu (1.766 g，7.09 mmol)，接著將反應物在RT下攪拌2 h。將所得混合物用水稀釋，且用EtOAc萃取。合併之有機層用鹽水洗滌，經Na2
SO4
乾燥且過濾。減壓濃縮濾液，且在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用1%-50%之EtOAc/PE梯度溶離)，得到16a
。LC/MS：[M+H]+
= 310.1。
步驟 B - 中間物 16b 之合成
在0℃下向16a
(1.3 g，4.20 mmol)於THF (13 mL)中之溶液中添加1 M LiOH水溶液(6.30 mL，6.30 mmol)，接著將反應混合物在RT下攪拌1 h。將所得溶液用1N HCl水溶液調節至pH 4至5，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水(+0.05% TFA)梯度溶離)，得到16b
。LC/MS：[M+H]+
= 282.1。
步驟 C - 中間物 16c 之合成
在0℃下向16b
(600 mg，2.133 mmol)於EtOAc (10 mL)中之溶液中添加DCC (484 mg，2.347 mmol)，接著將混合物在RT下攪拌14 h。過濾所得溶液，且減壓濃縮濾液，得到16c
。LC/MS：[M+H]+
= 264.1。
步驟 D - 中間物 16d 之合成
在RT下向16c
(470 mg，1.785 mmol)於MeOH (6 mL)中之溶液中添加MeONa (1.929 mg，0.036 mmol)，接著將混合物在65℃下攪拌2 h。所得溶液在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水(+0.05% TFA)梯度溶離)，得到16d
。LC/MS：[M+Na]+
= 318.1。
步驟 E - 中間物 16e 之合成
在RT下向16d
(410 mg，1.39 mmol)於DCM (5 mL)中之溶液中添加鄰第三丁基N,N'-二異丙基異脲(1.39 g，6.94 mmol)，接著將溶液在50℃下攪拌5 h。減壓濃縮所得溶液，且在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用1%-30%之EtOAc/PE梯度溶離)，得到16e
。LC/MS：[M+H]+
= 352.2。
步驟 F - 中間物 16f 之合成
在0℃下向16e
(450 mg，1.28 mmol)於THF (5 mL)中之溶液中添加1 M LiOH水溶液(2.56 mL，2.56 mmol)，接著將反應物在RT下攪拌1 h。將所得溶液用1 M HCl水溶液(2.56 mL)淬滅，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水(+0.1% TFA)梯度溶離)，得到16f
。LC/MS：[M+Na]+
= 360.0。1
H NMR (300 MHz, CD3
OD)：δ 7.45-7.20 (m, 5H), 5.08 (S, 2H), 4.40-4.24 (m, 1H), 2.61-2.42 (m, 4H), 1.42 (s, 9H)。
步驟 G - 中間物 16g 之合成
在0℃下向16f
(200 mg，0.593 mmol)於DMF (2 mL)中之溶液中添加3b
(234 mg，0.652 mmol)、HATU (248 mg，0.652 mmol)及DIEA (0.828 mL，4.74 mmol)，且將反應混合物在0℃下攪拌1 h。將最終溶液用水(2 mL)淬滅，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水(+0.05% TFA)梯度溶離)，得到16g
。LC/MS：[M+H]+
= 642.4。
步驟 H - 中間物 16h 之合成
在RT下向16g
(200 mg，0.312 mmol)於THF (5 mL)中之經攪拌溶液中添加10% Pd/C (33.2 mg，0.031 mmol)，且將混合物脫氣，接著使用填充氫氣之氣球氫化2 h。經由矽藻土過濾所得混合物，且濃縮濾液，得到16h
。LC/MS：[M+H]+
= 508.4。
步驟 I - 中間物 16i 之合成
在0℃下向7b
(150 mg，0.27 mmol)於DMF (2 mL)中之溶液中添加16h
(137 mg，0.27 mmol)、HATU (113 mg，0.297 mmol)及DIEA (0.377 mL，2.159 mmol)，且將反應混合物在0℃下攪拌1 h。將所得溶液用水(2 mL)淬滅，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水(+0.05% TFA)梯度溶離)，得到16i
。LC/MS：[M+H]+
= 1045.6。
步驟 J - 中間物 16j 之合成
在0℃下向16i
(260 mg，0.249 mmol)於THF (3 mL)中之溶液中添加1 M LiOH水溶液(0.497 mL，0.497 mmol)，且將反應混合物在0℃下攪拌1 h。將溶液用1 M HCl水溶液(0.5 mL)淬滅，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水(+0.05% TFA)梯度溶離)，得到16j
。LC/MS：[M+Na]+
= 1053.4。
步驟 K - 中間物 16k 之合成
在0℃下向16j
(180 mg，0.175 mmol)於DMF (2 mL)及水(0.2 mL)中之溶液中添加中間物B
(117 mg，0.349 mmol)、HATU (100 mg，0.262 mmol)及DIEA (0.244 mL，1.396 mmol)，且將反應混合物在0℃下攪拌1 h。將所得溶液用水(0.5 mL)淬滅，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水(+0.05% TFA)梯度溶離)，得到16k
。LC/MS：[M]+
= 1276.7。
步驟 L - 中間物 16l 之合成
在0℃下向16k
(220 mg，0.158 mmol)於THF (3 mL)中之溶液中添加1 M LiOH水溶液(0.317 mL，0.317 mmol)，且將反應混合物在0℃下攪拌1 h。將所得溶液用1 M HCl水溶液(0.32 mL)淬滅，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水(+0.05% TFA)梯度溶離)。
合併含有所需產物之溶離份且濃縮。將殘餘物再溶解於乙腈(3 mL)及水(5 mL)中，在0℃下用1 N HCl水溶液(0.12 mL)處理，且將溶液凍乾，得到16l
。LC/MS：[M]+
= 1261.5。
步驟 M - 中間物 16m 之合成
在-20℃下向中間物N
(50 mg，0.035 mmol)於DMF (500 µL)及水(50 µL)中之溶液中添加16l
(63.5 mg，0.049 mmol)、HATU (26.6 mg，0.07 mmol)及DIEA (36.1 mg，0.280 mmol)，且將反應物在0℃下攪拌30 min。將最終溶液用水(300 µL)淬滅，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水(+0.1% TFA)梯度溶離)，得到16m
。LC/MS：[(M+H)/2)]+
= 1319.7。
步驟 N - 實例 16 (Cl 鹽 ) 之合成
使用與實例4之合成A之步驟G中所描述之彼等條件類似的第三丁酯脫除保護基條件，將中間物16m
(65 mg，0.024 mmol)轉化成實例 16 (TFA 鹽 )
。LC/MS：[(M+H)/2)]+
= 1235.6。接著使用與實例4之合成A之步驟H中所描述之彼等條件類似的樹脂交換條件，將實例 16 (TFA 鹽 )
轉化成實例 16 (Cl 鹽 )
。LC/MS：[M]+
= 2469.3。
實例
17
之合成
步驟 A - 中間物 17a 之合成
在0℃下向(3-羥丙基)(甲基)胺基甲酸第三丁酯(1.00 g，5.28 mmol)於DCM (10 mL)中之溶液中添加DMP (4.48 g，10.6 mmol)，接著將反應混合物在RT下攪拌2 h。將最終溶液用飽和Na2
S2
O3
/NaHCO3
溶液(100 mL)淬滅，且用DCM (2 × 50 mL)稀釋。將有機層用鹽水洗滌，經無水Na2
SO4
乾燥且過濾。減壓濃縮濾液，且在矽膠上藉由MPLC來純化殘餘物(用0%-40%之EtOAc/PE梯度溶離)，得到17a
。1
H NMR (400 MHz, CDCl3
)：δ 9.81 (t, J = 1.8 Hz, 1H), 3.55 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 2.87 (s, 3H), 2.72-2.64 (m, 2H), 1.45 (s, 9H)。
步驟 B - 中間物 17b 之合成
在RT下向中間物N
(20 mg，0.014 mmol)於DCE (300 µL)中之溶液中添加17a
(1.31 mg，6.99 µmol)及Et3
N (4.24 mg，0.042 mmol)，且溶液經過量無水MgSO4
乾燥。在RT下攪拌30 min之後，添加NaBH(OAc)3
(8.89 mg，0.042 mmol)，且將混合物在RT下攪拌16 h。將最終溶液過濾，濃縮，且在C18上藉由逆相MPLC來純化殘餘物(用乙腈/水(+0.1% TFA)梯度溶離)，得到17b
。LC/MS：[(M+H)/2)]+
= 783.8。
步驟 C - 中間物 17c 之合成
在-20℃下向17b
(10.0 mg，6.39 µmol)於DMF (300 µL)中之溶液中添加(S)-22-(第三丁氧基羰基)-43,43-二甲基-10,19,24,41-四側氧基-3,6,12,15,42-五氧雜-9,18,23-三氮雜四十四烷-1-酸(7.56 mg，8.94 µmol，其合成描述於WO 2009/115469之實例9 (第90頁)中)、HATU (4.86 mg，0.013 mmol)及DIEA (6.60 mg，0.051 mmol)，接著將反應物在0℃下攪拌2 h。將所得溶液用水(100 µL)淬滅，且在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水(+0.1% TFA)梯度溶離)，得到17c
。LC/MS：[(M+H)/2)]+
= 1197.8。
步驟 D - 中間物 17d 之合成
在0℃下向17c
(10 mg，4.18 µmol)於DCM (2 mL)中之溶液中添加TFA (2 mL)，接著將混合物在RT下攪拌3 h。將所得溶液減壓濃縮，得到17d
。LC/MS：[(M+H)/2)]+
= 1091.5。
步驟 E - 實例 17 (Cl 鹽 ) 之合成
在RT下向17d
(8.0 mg，3.48 µmol)於乙腈(300 µL)及MeOH (300 µL)中之溶液中添加MeI (4.95 mg，0.035 mmol)及NaHCO3
(1.46 mg，0.017 mmol)，且將混合物攪拌14 h。用1 N HCl水溶液將溶液之pH值調節至5，且所得溶液在C18上藉由逆相MPLC來純化(用乙腈/水(+0.1% TFA)梯度溶離)，得到實例 17 (TFA 鹽 )
。LC/MS：[(M+H)/2)]+
= 1105.6。接著使用與實例4之合成A之步驟H中所描述之彼等條件類似的樹脂交換條件，將實例 17 (TFA 鹽 )
轉化成實例 17 (Cl 鹽 )
。LC/MS：[M]+
= 2209.2。
使用上文所描述之合成流程及中間物，製備以下本發明化合物(表3)，且如將瞭解，在一些情況下用熟習此項技術者顯而易知之不同間隔基來適當取代某些中間物。亦可製備下方化合物之替代鹽形式。
表3. 本發明之額外實例。
活性測定
本發明之所選化合物經歷以下程序中之一或多者以分析其對PCSK9活性之拮抗的活性。
以下為用於測定本發明化合物以及所報導之任何對比化合物針對PCSK9拮抗之活性的分析之描述。經生物素標記之PCSK9經商業獲得。
Alexa FRET 標準 TR-FRET
PCSK9 Alexa FRET標準分析量測PCSK9與經AlexaFluor647 (AF)標記之環肽(試劑A (KD
= 83 nM))之間的相互作用。在50 mM HEPES pH 7.4、0.15 M NaCl、5 mM CaCl2
、0.01% BSA及0.01%表面活性劑P20中製得含有1 nM經生物素標記之PCSK9 + 2.5 nM Lance抗生蛋白鏈菌素銪(Strep-Eu)之溶液。在相同緩衝劑系統中製得含有40 nM經AlexaFluor標記之環肽的分離溶液。使用Echo將0.750 μl化合物轉移至分析培養盤，隨後添加15 μl之PCSK9+Strep-Eu及15 μl之AF肽。最終分析體積為30.750 μl，其含有0.5 nM PCSK9、1.25 nM Strep-Eu及20 nM AF環肽。在室溫下將反應物培育至少兩個小時，隨後使用Envision Multilabel讀取器進行螢光量測。藉由使用非線性回歸將資料擬合至S形劑量-反應曲線來測定IC50值。隨後根據Ic50及AF環肽之KD
來計算Ki。追蹤經銪標記之PCSK9的計數(B計數)以觀測化合物是否不利地影響PCSK9。B計數之降低有可能指示抑制之偽陽性。來自此程序之資料經報導為「A = 『數值』(奈莫耳)」。
根據以下方法來製備試劑A：
步驟 A - 中間化合物 Int-A 之合成
在CEM Liberty Blue微波合成器上，使用Fmoc/t
Bu化學方法在PS Rink-Amide MBHA樹脂(0.32 mmol g-1
)上以0.250 mmol規模合成肽。使用單偶合使用4當量含0.2M經Fmoc保護之胺基酸之DMF、4當量含0.5M HATU之DMF、4當量2M DIPEA (針對Tyr使用雙偶合)來進行組裝。使用含20% (V/V)哌啶之DMF來進行Fmoc脫除保護基循環。
所使用的經Fmoc保護之胺基酸及架構基塊之序列為：
1. N-(((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)-S-三苯甲基-L-半胱胺酸
2. (S)-1((((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-2-甲基吡咯啶-2-甲酸
3. (((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)-L-酪胺酸
4. N-(((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)-N-三苯甲基-L-組胺酸
5. (S)-2-((((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-4-(第三丁氧基)-4-側氧基丁酸
6. (S)-2-((((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-3-(5-氟-1H-吲哚-3-基)丙酸
7. (S)-2-((((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-3-(5-氟-1H-吲哚-3-基)丙酸
8. (((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)甘胺酸
9. N2
-(((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)-N6
-(第三丁氧基羰基)-L-離胺酸
10. 3-(三苯甲基硫基)丙酸
在組裝結束時，用DMF、MeOH、DCM、Et2
O洗滌樹脂。在室溫下使用50 ml之TFA溶液(v/v) (91% TFA，5% H2
O，4% TIPS)使肽自固體載體斷裂持續大約1.5小時。將樹脂過濾，用TFA洗滌，且將溶液濃縮至乾並凍乾。凍乾得到中間化合物 Int. A
(399 mg)，其以粗產物形式用於下一步驟中。C61
H75
F2
N15
O13
S2
之LCMS分析計算值：1328.48，實驗值：1328.2 (M+1)+
步驟 B - 中間化合物 Int-B 之合成：
如針對試劑B所描述
藉由RP-HPLC (Waters Deltapak C4，雙濾筒，40×100 mm，15 μm，300A；15%至35% ACN/水+0.1% TFA改性劑，歷經20 min)來純化。將所收集溶離份凍乾，得到35 mg中間化合物 Int-B
。C69
H81
F2
N15
O13
S2
之LCMS分析計算值：1430.62；實驗值：1430.9 (M+1)+
步驟 C - 化合物試劑 A 之合成 ：
如針對試劑B所描述
C105
H122
F2
N17
O26
S6 3-
之LCMS 分析計算值：2268.58；1135.8 (M+2)2+
Alexa FRET Plus TR-FRET
PCSK9 Alexa FRET Plus分析量測PCSK9與經AlexaFluor647 (AF)標記之環肽(試劑B (KD
= 35 nM))之間的相互作用。在50 mM HEPES pH 7.4、0.15 M NaCl、5 mM CaCl2
、0.01% BSA及0.01%表面活性劑P20中製得含有1 nM經生物素標記之PCSK9 + 2.5 nM Lance抗生蛋白鏈菌素銪(Strep-Eu)之溶液。在相同緩衝劑系統中製得含有1920 nM經AlexaFluor標記之環肽的分離溶液。使用Echo將0.075 μl化合物加0.675 μl DMSO轉移至分析培養盤之各孔中，隨後添加15 μl之PCSK9+Strep-Eu及15 μl之AF肽。最終分析體積為30.750 μl，其含有0.5 nM PCSK9、1.25 nM Strep-Eu及960 nM AF環肽。在室溫下將反應物培育至少兩個小時，隨後使用Envision Multilabel讀取器進行螢光量測。藉由使用非線性回歸將資料擬合至S形劑量-反應曲線來測定IC50
值。隨後根據Ic50
及AF環肽之KD
來計算Ki。追蹤經銪標記之PCSK9的計數(B計數)以觀測化合物是否不利地影響PCSK9。B計數之降低有可能指示抑制之偽陽性。來自此程序之資料經報導為「P = 『數值』(奈莫耳)」。
藉由以下程序來製備試劑B。
步驟 A - 中間化合物 Int-A 之合成
在CEM Liberty Blue微波合成器上，使用Fmoc/t
Bu化學方法在PS Rink-Amide MBHA樹脂(0.32 mmol g-1
)上以0.250 mmol規模合成肽。使用單偶合使用4當量含0.2M經Fmoc保護之胺基酸之DMF、4當量含1M Oxyma之DMF、4當量0.5MN,N
-二異丙基碳化二亞胺(DIC) (針對Y01使用雙偶合)來進行組裝。使用含20% (V/V)哌啶之DMF來進行Fmoc脫除保護基循環。
所使用的經Fmoc保護之胺基酸及架構基塊之序列為：
1. N-(((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)-S-三苯甲基-L-半胱胺酸
2. (S)-1((((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-2-甲基吡咯啶-2-甲酸
3. (S)-2-((((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-3-(4-甲氧基苯基)丙酸
4. N-(((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)-N-三苯甲基-L-組胺酸
5. (S)-2-((((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-4-(第三丁氧基)-4-側氧基丁酸
6. (S)-2-((((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-3-(5-氟-1H-吲哚-3-基)丙酸
7. (S)-2-((((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-3-(5-氟-1H-吲哚-3-基)丙酸
8. (((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)-D-丙胺酸
9. N2
-(((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)-N6
-(第三丁氧基羰基)-L-離胺酸
10. 3-(三苯甲基硫基)丙酸
在組裝結束時，用DMF、MeOH、DCM、Et2
O洗滌樹脂。在室溫下使用50 ml之TFA溶液(v/v) (91% TFA，5% H2
O，4% TIPS)使肽自固體載體斷裂持續大約1.5小時。將樹脂過濾，用TFA洗滌，且將溶液濃縮至乾並凍乾。凍乾得到中間化合物 Int. A
(300 mg)，其以粗產物形式用於下一步驟中。C63
H79
F2
N15
O13
S2
之LCMS分析計算值：1356.53，實驗值：1356.9 (M+1)+
步驟 B - 中間化合物 Int-B 之合成
將粗產物 Int-A
(0.22 mmol)溶解於24 ml DMF中。添加6 ml之1M碳酸氫鈉水溶液以使pH升高至7。接著逐滴添加0.26 mmol 1,3-雙(溴甲基)苯(0.1M於DMF中)。將反應物在室溫下攪拌20 min，用TFA淬滅(pH達3至4)，且接著真空濃縮，得到粗產物 Int-B
，藉由RP-HPLC (Waters XBridge，C18，50×150 mm，5 μm，130A；25%至40% ACN/水+0.1% TFA改性劑，歷經20 min)對該粗產物進行純化。將所收集溶離份凍乾，得到35 mg中間化合物 Int-B
。C71
H85
F2
N15
O13
S2
之LCMS計算值：1458.67；實驗值：1458.8 (M+1)+
步驟 C - 化合物試劑 B 之合成
將中間化合物 Int-B
(15 mg)溶解於0.2 ml無水DMSO中。接著添加15 mg溶解於1.5 ml無水DMSO中之ALEXAFLUOR 647NHS酯(A37566，Life technology)。添加20 μL無水DIPEA。在暗處在氮氣氛圍下，將反應物在室溫下攪拌12 h。用TFA淬滅(pH達3至4)，且藉由RP-HPLC (Dr Maish，Reprosil Gold C18，250×20 mm，120 Å，10 µm；20%至35%含0.1% TFA之ACN/含0.1% TFA之H2
O，歷經20 min，接著35%至40%，歷經5 min，流動速率20 mL/min)來純化。將所收集溶離份凍乾，得到16.1 mg化合物試劑 B
。C107
H126
F2
N17
O26
S6 3-
之LCMS分析：2296.64；實驗值：1150.6 (M+2)2+
針對本發明之所選實例化合物按以下格式報導藉由上述程序中之一者或兩者所獲得的活性資料：
實例編號：A (標準TR Fret) = 『數值』；P (Alexa Fret plus標準TR Fret) = 『數值』/，應注意，所有報導值為奈莫耳。
Alexa FRET Ultra TR-FRET
PCSK9 Alexa FRET Ultra分析量測PCSK9與經AlexaFluor647 (AF)標記之環肽(試劑B (KD
= 0.99 nM))之間的相互作用。在50 mM HEPES pH 7.4、0.15 M NaCl、5 mM CaCl2
、0.01% BSA及0.01%表面活性劑P20中製得含有1 nM經生物素標記之PCSK9 + 2.5 nM Lance抗生蛋白鏈菌素銪(Strep-Eu)之溶液。在相同緩衝劑系統中製得含有1920 nM經AlexaFluor標記之環肽的分離溶液。使用Echo將0.015 μl化合物加0.735 μl DMSO轉移至分析培養盤之各孔中，隨後添加15 μl之PCSK9+Strep-Eu及15 μl之AF肽。最終分析體積為30.750 μl，其含有0.5 nM PCSK9、1.25 nM Strep-Eu及960 nM AF環肽。在室溫下將反應物培育至少兩個小時，隨後使用Envision Multilabel讀取器進行螢光量測。藉由使用非線性回歸將資料擬合至S形劑量-反應曲線來測定IC50
值。隨後根據Ic50
及AF環肽之KD
來計算Ki。追蹤經銪標記之PCSK9的計數(B計數)以觀測化合物是否不利地影響PCSK9。B計數之降低有可能指示抑制之偽陽性。來自此程序之資料經報導為「Ki Ultra = 『數值』(所報導資料為奈莫耳)」。
使用上文所描述之方案來評估以下化合物，且結果展示於表4中。
表4. 本發明之實例之活性資料。
| 實例 | Alexa FRET標準TR-FRET，nM | Alexa FRET Plus TR-FRET，nM | Alexa FRET Ultra TR-FRET，nM |
| 1 | ＜1.26 | ＜0.006 | 0.007 |
| 2 | ＜1.26 | 0.014 | 0.006 |
| 3 | ＜1.26 | ＜0.006 | 0.005 |
| 4 | ＜1.26 | ＜0.006 | 0.003 |
| 5 | ＜1.26 | ＜0.006 | 0.007 |
| 6 | ＜1.26 | 0.009 | 0.012 |
| 7 | ＜1.26 | 0.008 | 0.013 |
| 8 | ＜1.26 | 0.016 | 0.008 |
| 9 | ＜1.26 | ＜0.006 | 0.007 |
| 10 | ＜1.26 | 0.008 | 0.006 |
| 11 | ＜1.26 | 0.007 | 0.006 |
| 12 | ＜1.26 | 0.014 | 0.007 |
| 13 | ＜1.26 | ＜0.006 | 0.003 |
| 14 | ＜1.26 | ＜0.006 | 0.005 |
| 15 | ＜1.26 | ＜0.006 | 0.005 |
| 16 | ＜1.26 | 0.014 | 0.008 |
| 17 | ＜1.26 | 0.016 | 0.018 |
| 18 | ＜1.26 | 0.023 | 0.021 |
| 19 | ＜1.26 | ＜0.006 | 0.001 |
| 20 | ＜1.26 | ＜0.006 | 0.001 |
| 21 | ＜1.26 | 0.010 | 0.001 |
| 22 | ＜1.26 | 0.015 | 0.004 |
| 23 | ＜1.26 | ＜0.006 | 0.007 |
| 24 | ＜1.26 | 0.009 | 0.018 |
| 25 | ＜1.26 | 0.006 | 0.009 |
| 26 | ＜1.26 | 0.006 | 0.008 |
| 27 | ＜1.26 | 0.014 | 0.006 |
| 28 | ＜1.26 | 0.013 | 0.010 |
| 29 | ＜1.26 | 0.011 | 0.013 |
| 30 | ＜1.26 | ＜0.006 | 0.004 |
| 31 | ＜1.26 | ＜0.006 | 0.006 |
| 32 | ＜1.26 | 0.009 | 0.011 |
| 33 | ＜1.26 | 0.014 | 0.016 |
| 34 | ＜1.26 | ＜0.006 | 0.003 |
| 35 | ＜1.26 | 0.007 | 0.009 |
| 36 | ＜1.26 | 0.044 | 0.016 |
| 37 | ＜1.26 | ＜0.006 | 0.006 |
| 38 | ＜1.26 | 0.013 | 0.012 |
| 39 | ＜1.26 | ＜0.006 | 0.003 |
| 40 | ＜1.26 | 0.008 | 0.004 |
| 41 | ＜1.26 | ＜0.006 | 0.005 |
| 42 | ＜1.26 | ＜0.006 | 0.010 |
| 43 | ＜1.26 | ＜0.006 | 0.002 |
| 44 | ＜1.26 | ＜0.006 | 0.003 |
| 45 | ＜1.26 | ＜0.006 | 0.002 |
| 46 | ＜1.26 | ＜0.006 | 0.001 |
| 47 | ＜1.26 | ＜0.006 | 0.003 |
| 48 | ＜1.26 | ＜0.006 | 0.009 |
| 49 | ＜1.26 | ＜0.006 | 0.003 |
| 50 | ＜1.26 | ＜0.006 | 0.005 |
| 51 | ＜1.26 | 0.007 | 0.005 |
| 52 | ＜1.26 | ＜0.006 | 0.001 |
| 53 | ＜1.26 | 0.010 | 0.014 |
| 54 | ＜1.26 | 0.021 | 0.014 |
| 55 | ＜1.26 | 0.012 | 0.010 |
| 56 | ＜1.26 | ＜0.006 | 0.004 |
| 57 | ＜1.26 | 0.009 | 0.034 |
| 58 | ＜1.26 | 0.018 | 0.079 |
| 59 | ＜1.26 | 0.020 | 0.101 |
| 60 | ＜1.26 | 0.008 | 0.062 |
| 61 | ＜1.26 | 0.049 | 0.131 |
| 62 | ＜1.26 | ＜0.006 | 0.038 |
| 63 | ＜1.26 | ＜0.006 | 0.045 |
| 64 | ＜1.26 | 0.012 | 0.028 |
| 65 | ＜1.26 | ＜0.006 | 0.024 |
| 66 | ＜1.26 | 0.007 | 0.027 |
| 67 | ＜1.26 | ＜0.006 | 0.005 |
| 68 | ＜1.26 | ＜0.006 | 0.005 |
Claims (13)
- 一種式 A 化合物：或其醫藥學上可接受之鹽， 其中： X為H、F、Cl或Br； R獨立地選自H或C1-6 烷基； Ra 獨立地選自H、-CR2 -S(O)2 OR9 或-C(O)OR9 ； Rb 獨立地選自H、C1-6 烷基或C1-6 烷基-N+ (CH3 )2 ； Rd 獨立地選自H或-C(O)OR9 ； R1 係選自： (a) -H， (b) C1-6 烷基， (c) -(CR2 )z -NRb -C(O)R10 ，及 (d) -(CR2 )z -NR-C(O)-(CR2 )z [O(CR2 )n ]r -N+ (CH3 )3 ； R2 係選自： (a) -H， (b) C1-6 烷基， (c) -(CR2 )z -NRb -C(O)R10 ，及 (d) -(CR2 )z -NR-C(O)-(CR2 )z [O(CR2 )n ]r -N+ (CH3 )3 ； 其限制條件為R1 及R2 中之至少一者為-(CR2 )z -NRb -C(O)R10 ； R4 為
； R5 獨立地選自-(CRa 2 )x -、-(CRa 2 )x O(CRa 2 )x -及C1-8 烷基； R6 獨立地選自-(CRa 2 )x NRC(O)-、-(CR2 )x NRS(O)2 -及-(CRa 2 )n O(CRa 2 )q NRC(O)-； R9 獨立地選自H或C1-6 烷基； R10 獨立地選自： a) -(R5 -N+ (CH3 )2 -R6 )u -(R20 )n -(R6 )m -R12 ， b) -(R20 )n -(R6 )m -R5 -N+ (CH3 )2 -R6 -R12 ， c) -(R20 )n -R5 -N+ (CH3 )2 -(R20 )s -(R6 )q -R12 ， d) -R6 -R20 -N+ (CH3 )2 -(R20 )n -(R6 )m -R12 ， e) -R20 -N+ (CH3 )2 -(R6 )m -(R20 )n -(R6 )q -R12 ， f) -(R20 )n -(R6 )m -R12 ， g) -R5 -N+ (CH3 )2 -(R20 )n -(R6 )m -R5 -[NRC(O)-R5 ]q ， h) -R20 -N+ (CH3 )2 -(R6 )m -R5 ， i) -R5 -N+ (CH3 )2 -(R20 )n -(R6 )m -R5 ， j) -R5 -N+ (CH3 )2 -(R20 )n -(R6 )m -R12 ， k) -(R20 )n -N+ (CH3 )2 -(R20 )n -(R6 )q -R12 ， l) -R6 -R5 -N+ (CH3 )2 -(R20 )n -(R6 )q -R12 ， m) -(R20 )n -N+ (CH3 )2 -(R6 )q -R12 ， n) -(R20 )n -(R6 )m -R20 -N+ (CH3 )2 -(R20 )s -(R6 )q -R12 ， o) -R20 -N+ (CH3 )2 -(R6 )m -R4 ， p) -(R20 )n -N+ (CH3 )2 -(R6 )q -(R20 )n -(R6 )m -R12 ， q) -R20 -N+ (CH3 )2 -(R6 )m -(R20 )n -N+ (CH3 )2 -(R20 )n -(R6 )q -R12 ， r) -R5 -N+ (CH3 )2 -(R6 )m -R5 -N+ (CH3 )2 -(R20 )n -(R6 )q -R12 ，及 s) -CRb 2 -(R20 )n -(R6 )m -R12 ； R12 獨立地選自-C11-20 烷基-Rd 、-(CR2 )x -O-(CR2 )x -Rd 、-C11-20 烷基-C(O)NR-(CRd 2 )2 H及C2-16 烯基； R20 獨立地選自 a) -(CRa 2 )t O(CRa 2 )q O-(CRa 2 )t -， b) -(CRa 2 )t O(CRa 2 )q O-(CRa 2 )t -NRC(O)-， c) -(CRa 2 )t O(CRa 2 )q -NRC(O)-(CRa 2 )n O(CRa 2 )n O-， d) -(CRa 2 )t -NRC(O)-(CRa 2 )q O(CRa 2 )q O-(CRa 2 )t -， e) -(CRa 2 )t O(CRa 2 )q O-(CRa 2 )t -，及 f) -(CRa 2 )t -O-(CRa 2 )q O(CRa 2 )q O-(CRa 2 )t -；A 係選自C2-6 烷基或C2-6 烯基； m獨立地選自0、1、2、3或4； n獨立地選自1、2或3； q獨立地選自1、2、3或4； r獨立地選自0、1、2、3或4； s獨立地選自0、1、2或3； t獨立地選自0、1、2或3； u為1或2； x獨立地選自1、2、3、4、5、6、7或8； z獨立地選自1、2、3、4、5或6。
- 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物具有式I之結構：其中： X為H、F、Cl或Br； R獨立地選自H或C1-6 烷基； Ra 獨立地選自H或-C(O)OR9 ； Rb 獨立地選自H、C1-6 烷基或C1-6 烷基-N+ (CH3 )2 ； Rd 獨立地選自H或-C(O)OR9 ； R1 係選自： (a) -H， (b) C1-6 烷基， (c) -(CR2 )z -NRb -C(O)R10 ，及 (d) -(CR2 )z -NR-C(O)-(CR2 )z [O(CR2 )n ]r -N+ (CH3 )3 ； R2 係選自： (a) -H， (b) C1-6 烷基， (c) -(CR2 )z -NRb -C(O)R10 ，及 (d) -(CR2 )z -NR-C(O)-(CR2 )z [O(CR2 )n ]r -N+ (CH3 )3 ； 其限制條件為R1 及R2 中之至少一者為-(CR2 )z -NRb -C(O)R10 ； R4 為
； R5 獨立地選自-(CRa 2 )x -、-(CRa 2 )x O(CRa 2 )x -及C1-8 烷基； R6 獨立地選自-(CRa 2 )x NRC(O)-、-(CR2 )x NRS(O)2 -及-(CRa 2 )n O(CRa 2 )q NRC(O)-； R9 獨立地選自H或C1-6 烷基； R10 獨立地選自： a) -(R5 -N+ (CH3 )2 -R6 )u -(R20 )n -(R6 )m -R12 ， b) -(R20 )n -(R6 )m -R5 -N+ (CH3 )2 -R6 -R12 ， c) -(R20 )n -R5 -N+ (CH3 )2 -(R20 )s -(R6 )q -R12 ， d) -R6 -R20 -N+ (CH3 )2 -(R20 )n -(R6 )m -R12 ， e) -R20 -N+ (CH3 )2 -(R6 )m -(R20 )n -(R6 )q -R12 ， f) -(R20 )n -(R6 )m -R12 ， g) -R5 -N+ (CH3 )2 -(R20 )n -(R6 )m -R5 -[NRC(O)-R5 ]q ， h) -R20 -N+ (CH3 )2 -(R6 )m -R5 ， i) -R5 -N+ (CH3 )2 -(R20 )n -(R6 )m -R5 ， j) -R5 -N+ (CH3 )2 -(R20 )n -(R6 )m -R12 ， k) -(R20 )n -N+ (CH3 )2 -(R20 )n -(R6 )q -R12 ， l) -R6 -R5 -N+ (CH3 )2 -(R20 )n -(R6 )q -R12 ， m) -(R20 )n -N+ (CH3 )2 -(R6 )q -R12 ， n) -(R20 )n -(R6 )m -R20 -N+ (CH3 )2 -(R20 )s -(R6 )q -R12 ， o) -R20 -N+ (CH3 )2 -(R6 )m -R4 ， p) -(R20 )n -N+ (CH3 )2 -(R6 )q -(R20 )n -(R6 )m -R12 ， q) -R20 -N+ (CH3 )2 -(R6 )m -(R20 )n -N+ (CH3 )2 -(R20 )n -(R6 )q -R12 ， r) -R5 -N+ (CH3 )2 -(R6 )m -R5 -N+ (CH3 )2 -(R20 )n -(R6 )q -R12 ，及 s) -CRb 2 -(R20 )n -(R6 )m -R12 ； R12 獨立地選自-C11-20 烷基-Rd 、-(CR2 )x -O-(CR2 )x -Rd 、-C11-20 烷基-C(O)NR-(CRd 2 )2 H及C2-16 烯基； R20 獨立地選自 a) -(CRa 2 )t O(CRa 2 )q O-(CRa 2 )t -， b) -(CRa 2 )t O(CRa 2 )q O-(CRa 2 )t -NRC(O)-， c) -(CRa 2 )t O(CRa 2 )q -NRC(O)-(CRa 2 )n O(CRa 2 )n O-， d) -(CRa 2 )t -NRC(O)-(CRa 2 )q O(CRa 2 )q O-(CRa 2 )t -， e) -(CRa 2 )t O(CRa 2 )q O-(CRa 2 )t -，及 f) -(CRa 2 )t -O-(CRa 2 )q O(CRa 2 )q O-(CRa 2 )t -；A 係選自C2-6 烷基或C2-6 烯基； m獨立地選自0、1、2、3或4； n獨立地選自1、2或3； q獨立地選自1、2、3或4； r獨立地選自0、1、2、3或4； s獨立地選自0、1、2或3； t獨立地選自0、1、2或3； u為1或2； x獨立地選自1、2、3、4、5、6、7或8； z獨立地選自1、2、3、4、5或6。
- 如請求項2之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中 X為F； R獨立地選自H或C1-6 烷基； Ra 獨立地選自H或-C(O)OR9 ； Rb 獨立地選自H、C1-6 烷基或C1-6 烷基-N+ (CH3 )2 ； Rd 獨立地選自H或-C(O)OR9 ； R1 係選自： (a) H， (b) C1-6 烷基，及 (c) -(CR2 )z -NRb -C(O)R10 ； R2 係選自： (a) C1-6 烷基，及 (b) -(CR2 )z -NRb -C(O)R10 ； 其限制條件為R1 及R2 中之至少一者為-(CR2 )z -NRb -C(O)R10 ； R4 為； R5 獨立地選自-(CRa 2 )x -、-(CRa 2 )x O(CRa 2 )x -及C1-8 烷基； R6 獨立地選自-(CRa 2 )x NRC(O)-及-(CRa 2 )n O(CRa 2 )q NRC(O)-； R9 獨立地選自H或C1-6 烷基； R10 係選自： a) -(R5 -N+ (CH3 )2 -R6 )u -(R20 )n -(R6 )m -R12 ， b) -(R20 )n -(R6 )m -R5 -N+ (CH3 )2 -R6 -R12 ， c) -(R20 )n -R5 -N+ (CH3 )2 -(R20 )s -(R6 )q -R12 ， d) -R6 -R20 -N+ (CH3 )2 -(R20 )n -(R6 )m -R12 ， e) -R20 -N+ (CH3 )2 -(R6 )m -(R20 )n -(R6 )q -R12 ， f) -(R20 )n -(R6 )m -R12 ， g) -R5 -N+ (CH3 )2 -(R20 )n -(R6 )m -R5 -[NRC(O)-R5 ]q ， h) -R20 -N+ (CH3 )2 -(R6 )m -R5 ， i) -R5 -N+ (CH3 )2 -(R20 )n -(R6 )m -R5 ， j) -R5 -N+ (CH3 )2 -(R20 )n -(R6 )m -R12 ， k) -(R20 )n -N+ (CH3 )2 -(R20 )n -(R6 )q -R12 ， l) -R6 -R5 -N+ (CH3 )2 -(R20 )n -(R6 )q -R12 ， m) -(R20 )n -N+ (CH3 )2 -(R6 )q -R12 ， n) -(R20 )n -(R6 )m -R20 -N+ (CH3 )2 -(R20 )s -(R6 )q -R12 ， o) -R20 -N+ (CH3 )2 -(R6 )m -R4 ， p) -(R20 )n -N+ (CH3 )2 -(R6 )q -(R20 )n -(R6 )m -R12 ， q) -R20 -N+ (CH3 )2 -(R6 )m -(R20 )n -N+ (CH3 )2 -(R20 )n -(R6 )q -R12 ， r) -R5 -N+ (CH3 )2 -(R6 )m -R5 -N+ (CH3 )2 -(R20 )n -(R6 )q -R12 ，及 s) -CRb 2 -(R20 )n -(R6 )m -R12 ； R12 獨立地選自-C11-20 烷基-Rd 、-(CR2 )x -O-(CR2 )x -Rd 及-C11-20 烷基-C(O)NR-(CRd 2 )2 H； R20 獨立地選自 a) -(CRa 2 )t O(CRa 2 )n O-(CRa 2 )t -， b) -(CRa 2 )t O(CRa 2 )n O-(CRa 2 )t -NRC(O)-， c) -(CRa 2 )t O(CRa 2 )n -NRC(O)-(CRa 2 )n O(CRa 2 )n O-， d) -(CRa 2 )t -NRC(O)-(CRa 2 )n O(CRa 2 )n O-(CRa 2 )t -， e) -(CRa 2 )t O(CRa 2 )n O-， f) -(CRa 2 )t -O-(CRa 2 )n O(CRa 2 )n O-(CRa 2 )t -，A 為C2-6 烷基； m獨立地選自0、1、2、3或4； n獨立地選自1、2或3； q獨立地選自1、2、3或4； r獨立地選自0、1、2、3或4； s獨立地選自0、1或2； t獨立地選自0、1、2或3； u為1或2； x獨立地選自1、2、3、4、5、6、7或8； z獨立地選自1、2、3、4、5或6。
- 如請求項3之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物具有式 IA 之結構：。
- 如請求項3之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物具有式 II 之結構：其中R1 為-(CR2 )z -NRb -C(O)R10 。
- 如請求項3之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中該化合物具有式 IIA 之結構：其中R2 為-(CR2 )z -NRb -C(O)R10 。
- 如請求項2之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R6 為 -(CRa 2 )x NRC(O)-。
- 如請求項2之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R10 係選自 a) -R6 -R20 -N+ (CH3 )2 -(R20 )n -(R6 )m -R12 ， b) -R20 -N+ (CH3 )2 -(R6 )m -(R20 )n -(R6 )q -R12 ， c) -(R20 )n -(R6 )m -R12 ， d) -R5 -N+ (CH3 )2 -(R20 )n -(R6 )m -R12 ， e) -(R20 )n -N+ (CH3 )2 -(R20 )n -(R6 )q -R12 ， f) -(R20 )n -N+ (CH3 )2 -(R6 )q -R12 ，及 g) -(R20 )n -(R6 )m -R20 -N+ (CH3 )2 -(R20 )s -(R6 )q -R12 。
- 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其係選自由以下組成之群：
或其醫藥學上可接受之鹽，其中A- 為醫藥學上可接受之相對離子。
- 如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其係選自Ex-2、Ex-4、Ex-8、Ex-9、Ex-10、Ex-22、Ex-34、Ex-44、Ex-48、Ex-49及Ex-58或其醫藥學上可接受之鹽。
- 如請求項10之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其係選自
或其醫藥學上可接受之鹽。
- 一種組合物，其包含如請求項1至11中任一項之至少一種化合物或其醫藥學上可接受之鹽或其游離鹼形式，及至少一種醫藥學上可接受之賦形劑。
- 一種如請求項1至11中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽或如請求項12之組合物的用途，其係用於製造用以治療高膽固醇血症之藥劑。
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