TW202120499A - 二氧代哌嗪類衍生物、其製備方法及其在醫藥上的應用 - Google Patents

二氧代哌嗪類衍生物、其製備方法及其在醫藥上的應用 Download PDF

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Abstract

本發明屬於化學藥物技術領域，涉及二氧代哌嗪類衍生物、其製備方法及其在醫藥上的應用。具體而言，本發明提供式(I)的化合物或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽，其中所有變數如本文所定義。這些化合物是選擇性因數XIa（Factor XIa，簡稱FXIa）的抑制劑。本發明還涉及包含這些化合物的藥物組合物以及使用該化合物治療血栓栓塞等疾病的藥物中的用途。

Description

二氧代哌嗪類衍生物、其製備方法及其在醫藥上的應用
本發明屬於化學藥物技術領域，涉及二氧代哌嗪類衍生物、其製備方法及其在醫藥上的應用。具體而言，本發明提供式(I)的化合物或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽，其中所有變數如本文所定義。這些化合物是選擇性因數XIa（Factor XIa，簡稱FXIa）的抑制劑。本發明還涉及包含這些化合物的藥物組合物以及使用該化合物治療血栓栓塞等疾病的藥物中的用途。
全球每年腦血管、腦梗塞、心肌梗塞、冠心病、動脈硬化等心腦血管疾病奪走近1200萬人的生命，接近世界總死亡人數的1/4，成為人類健康的頭號大敵。中國每年死於心血管疾病的人數達到260萬人以上，存活的患者75％致殘，其中40％以上重殘。由心腦血管疾病和糖尿病及其併發症引起的血栓問題，成為當今要解決的刻不容緩的問題。
人體血液凝固過程由內源性途徑(intrinsic pathway)、外源性途徑(extrinsic pathway)和共同通路組成(Annu.Rev.Med.2011.62:41–57)，是通過多種酶原被順序啟動而過程不斷得到加強和放大的一種連鎖反應。凝血級聯反應由內源性途徑(又稱接觸啟動途徑)及外源性途徑(又稱組織因數途徑)啟動生成FXa，再經共同途徑生成凝血酶(FIIa)，最終形成纖維蛋白。
內源性途徑是指由XII因數被啟動形XIa-VIIIa-Ca2+-P L複合物、並啟動X因數的過程，外源性凝血途徑則是從組織因數(TF)釋放到TF-VIIa-Ca2+ 複合物形成並啟動因數Ⅹ的過程。共同通路是指因數Xa形成後，兩條途徑合二為一，啟動凝血酶原並最終生成纖維蛋白的過程，其中FXI是維持內源性途徑所必需的，而且在凝血級聯反應放大過程中發揮關鍵作用。在凝血級聯反應中，凝血酶可回饋啟動FXI，活化的FXI(FXIa)又促使凝血酶的大量產生，從而使凝血級聯反應放大。因此，FXI的拮抗劑被廣泛開發，用於各種血栓的治療。
傳統的抗凝藥物，如華法林、肝素、低分子量肝素(LMWH)，以及近年上市的新藥，如FXa抑制劑(利伐沙班、阿哌沙班等)和凝血酶抑制劑(達比加群酯、水蛭素等)，對減少血栓形成均具有較好效果，以其顯著有效性佔據廣大心腦血管市場，然而其副作用也越來越顯著，其中“出血風險(bleeding risk)”是首當其衝 最為嚴峻的問題之一(N Engl J Med 1991；325:153-8、Blood.2003；101:4783-4788)。
研究發現，在血栓模型中，抑制FXIa因數可以有效抑制血栓的形成，但在更為嚴重的血栓情況下，FXIa的作用微乎其微(Blood.2010；116(19):3981-3989)。臨床統計顯示，提高FXIa的量會增加VTE的患病率(Blood 2009；114:2878-2883)，而FXIa嚴重不足者其患有DVT的風險性減少(Thromb Haemost 2011；105:269–273)。
FXIa作為目前抑制血栓的新興靶點，公開具有FXIa抑制活性的化合物的專利申請有WO9630396、WO9941276、WO2013093484、WO2004002405、WO2013056060、WO2017005725、WO2017/023992、WO2018041122等。其中，目前僅拜耳公司的反義寡核苷酸BAY-2306001進入了臨床二期研究。
本發明化合物具有更高的活性。特別是本發明化合物表現出優異的對人血液的抗凝血作用，並具有良好的藥代活性，可用於有效治療和/或預防心腦血管疾病及血栓症狀。
本發明提供了一系列的氧代噠嗪醯胺類衍生物、其製備方法及其在醫藥上的應用。
具體而言，本發明提供式(I)的化合物或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽，其中所有變數如本文所定義。
Figure 02_image001
式(I)
這些化合物是選擇性因數XIa（Factor XIa，簡稱FXIa）的抑制劑。本發明還涉及包含這些化合物的藥物組合物以及使用該化合物治療血栓栓塞等疾病的藥物中的用途。
具體的，本發明通過以下技術方案來實現：
式(I)的化合物或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽：
Figure 02_image001
R1 選自R3 取代或者未取代的四氮唑，R3 取代或者未取代的三氮唑；
R2 選自R4 取代或者未取代的苯環，其中R4 選自-NR5 -(CH2 )n-CO-(CH2 )n-NR6 R7 、-NR5 -SO2 -NR6 R7 ；
Ar選自至少一個R8取代或者未取代的以下基團：
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、
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、
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、
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、
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、
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、
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；
其中，R3 選自氫、鹵素、C1-4 的烷基、鹵素取代的C1-4 的烷基；
R5 、R6 、R7 獨立的選自氫、C1-4 的烷基、C1-4 的烷氧基-C1-4 烷基、-SO2 -C1-4 烷、-SO2 -苯、- C1-6 的一元或者二元醇、
Figure 02_image019
、-(CH2 )n-C3-12 的脂肪環，或者其中NR5 與NR6 R7 之中的任意一個以上通過-(CH2 )n-成環；或者NR6 R7 一起構成C3-12 的脂肪環；前述C3-12 的脂肪環環上的一個以上碳原子被0-2個N、O、S原子所替代，所述脂肪環進一步被一個以上的R9 所取代；
R8 選自氫、鹵素、C1-4 的烷基、羥基、-C1-4 的羧酸、-C1-4 的羧酸-C1-4 醇酯；
R9 選自氫、- (CH2 )n-OH、-SO2 -C1-4 烷、-(CH2 )n-COOH、-醯胺、氰基、NR10 R11 -C1-4 的烷氧基、C1-4 的烷基、C1-4 的烷氧基、C1-4 的烷氧-C1-4 烷基、-CO-嗎啉、-CO-NR12 -(CH2 )n-OH、HOOC - C1-4 烷氧基、
Figure 02_image021
；
R10 、R11 、R12 獨立選自氫或C1-4 烷基；
前述n=0-6的自然數。
作為本發明的一種優選技術方案，所述-NR5 -(CH2 )n-CO-(CH2 )n-NR6 R7 包括
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、
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、
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、
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、
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、
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、
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、
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，其中，R7 和R9 如上定義。
作為本發明的一種優選技術方案，所述C1-4 的烷基選自甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基；
-C1-4 的羧酸選自甲酸、乙酸、丙酸、正丁酸、異丁酸、叔丁酸；
-C1-4 的羧酸-C1-4 醇酯選自甲酸甲酯、甲酸乙酯、甲酸丙酯、甲酸丁酯、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、丙酸甲酯、丙酸乙酯、丙酸丙酯、丙酸丁酯、丁酸甲酯、丁酸乙酯、丁酸丙酯、丁酸丁酯。
作為本發明的一種優選技術方案，所述鹵素選自氟、氯、溴、碘。
作為本發明的一種優選技術方案，所述C1-4 的烷選自甲烷、乙烷、丙烷、異丙烷、正丁烷、異丁烷、仲丁烷、叔丁烷；
所述C1-4 的烷氧基選自甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基；
所述- (CH2 )n-OH選自羥基、甲醇、乙醇、正丙醇、正丁醇；
所述- C1-6 的一元或者二元醇選自甲醇、乙醇、正丙醇、正丁醇、叔丁醇、1,3-丁二醇、3-甲基丁-1-醇、3-甲基戊-1-醇、4-甲基戊-1醇、3-甲基己-1醇、4-甲基己-1醇；
所述NR10 R11 -C1-4 的烷氧基選自甲胺甲氧基、乙胺甲氧基、丙胺甲氧基、丁胺甲氧基、甲胺乙氧基、乙胺乙氧基、丙胺乙氧基、丁胺乙氧基、甲胺丙氧基、乙胺丙氧基、丙胺丙氧基、丁胺丙氧基、甲胺丁氧基、乙胺丁氧基、丙胺丁氧基、丁胺丁氧基、二甲胺基甲氧基、二甲胺基乙氧基、二甲胺基丙氧基、二甲胺基丁氧基；
所述C1-4 的烷氧-C1-4 烷基選自甲氧甲基、乙氧甲基、丙氧甲基、丁氧甲基、甲氧乙基、乙氧乙基、丙氧乙基、丁氧乙基、甲氧丙基、乙氧丙基、丙氧丙基、丁氧丙基、甲氧丁基、乙氧丁基、丙氧丁基、丁氧丁基；
所述-CO-NR12 -(CH2 )n-OH選自-CO-NH-CH2 OH、-CO-N(CH3 )-CH2 OH、-CO-NH-CH2 CH2 OH、-CO-N(CH3 )-CH2 CH2 OH；
所述HOOC-C1-4 烷氧基選自HOOC-甲氧基、HOOC-乙氧基、HOOC-丙氧基、HOOC-異丙氧基、HOOC-正丁氧基、HOOC-異丁氧基、HOOC-仲丁氧基、HOOC-叔丁氧基。
作為本發明的一種優選技術方案，所述C3-12 的脂肪環選自環丙烷、環丁烷、環戊烷、環己烷、環庚烷、環辛烷、環壬烷、環癸烷、螺[3, 3]庚環、螺[3, 5]壬環、螺[4, 5]癸環；
所述C3-12 的脂肪的一個以上碳原子被0-2個N、O、S原子所替代，選自：
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、
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、
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、
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、
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。
作為本發明的一種優選技術方案，n=0、1、2、3、4、5、6。
作為本發明的一種優選技術方案，其特徵在於，
R1 選自四氮唑，三氮唑；
R2選自苯環、
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、
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、
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、
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、
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、
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；
Ar選自以下基團：
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、
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、
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、
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、
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、
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、
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、
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、
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。
作為本發明的一種優選方案，所述化合物或其藥學上可接受的鹽，選自以下化合物：
1 3
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4 5
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7 8
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53 54
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69  
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作為本發明的一種優選方案，所述藥學上可接受的鹽是指化合物與藥學上可接受的酸或鹼製備。
作為本發明的一種優選方案，所述化合物的一個以上的氫原子上被同位素氘取代。
本發明另一目的提供了一種藥物組合物，包括前述的式(I)的化合物，或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽和一種以上藥學上可接受的載體。
本發明另一目的在於提供所述的式(I)的化合物，或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽、以及含有所述化合物，或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽的藥物組合物在製備用於製備治療FXIa相關疾病的藥物用途，具體地，涉及血栓相關疾病的藥物用途。
除非另有說明，本文所用的下列術語和短語旨在具有下列含義。一個特定的術語或短語在沒有特別定義的情況下不應該被認為是不確定的或不清楚的，而應該按照普通的含義去理解。當本文中出現商品名時，意在指代其對應的商品或其活性成分。這裡所採用的術語“藥學上可接受的”，是針對那些化合物、材料、組合物和/或劑型而言，它們在可靠的醫學判斷的範圍之內，適用於與人類和動物的組織接觸使用，而沒有過多的毒性、刺激性、過敏性反應或其它問題或併發症，與合理的利益/風險比相稱。
術語“藥學上可接受的鹽”是指本發明化合物的鹽，由本發明發現的具有特定取代基的化合物與藥學上可接受的酸或堿製備。
所述“
Figure 02_image331
”為連接鍵。
除了鹽的形式，本發明所提供的化合物還存在前藥形式。本文所描述的化合物的前藥容易地在生理條件下發生化學變化從而轉化成本發明的化合物。此外，前體藥物可以在體內環境中通過化學或生化方法被轉換到本發明的化合物。
本發明的某些化合物可以以非溶劑化形式或者溶劑化形式存在，包括水合物形式。一般而言，溶劑化形式與非溶劑化的形式相當，都包含在本發明的範圍之內。
本發明的化合物可以存在特定的幾何或立體異構體形式。本發明設想所有的這類化合物，包括順式和反式異構體、(-)- 和 (+)-對對映體、(R)- 和 (S)-對映體、非對映異構體、(D)-異構體、(L)-異構體，及其外消旋混合物和其他混合物，例如對映異構體或非對映體富集的混合物，所有這些混合物都屬於本發明的範圍之內。烷基等取代基中可存在另外的不對稱碳原子。所有這些異構體以及它們的混合物，均包括在本發明的範圍之內。
可以通過的手性合成或手性試劑或者其他常規技術製備光學活性的(R)-和(S)-異構體，以及D和L異構體。如果想得到本發明某化合物的一種對映體，可以通過不對稱合成或者具有手性助劑的衍生作用來製備，其中將所得非對映體混合物分離，並且輔助基團裂開以提供純的所需對映異構體。或者，當分子中含有鹼性官能團(如氨基)或酸性官能團(如羧基)時，與適當的光學活性的酸或堿形成非對映異構體的鹽，然後通過本領域所公知的常規方法進行非對映異構體拆分，然後回收得到純的對映體。此外，對映異構體和非對映異構體的分離通常是通過使用色譜法完成的，所述色譜法採用手性固定相，並任選地與化學衍生法相結合(例如由胺生成氨基甲酸鹽)。
本發明化合物分子的原子是同位素，通過同位素衍生化通常可以延長半衰期、降低清除率、增強代謝穩定和提高體內活性等效果。並且，包括一個實施方案，其中至少一個原子被具有相同原子數(質子數)和不同質量數(質子和中子和)的原子取代。本發明化合物中包括的同位素的實例包括氫原子、碳原子、氮原子、氧原子、磷原子、硫原子、氟原子、氯原子，其分別包括2 H、3 H、13 C、14 C、15 N、17 O、18 O、31 P、32 P、35 S、18 F、36 Cl。特別的是，隨其衰退而發射輻射的放射性同位素例如3 H或14 C可用於藥物製劑或者體內化合物的局部解剖學檢驗。穩定的同位素既不隨其量衰減或變化，也不具有放射性，因此其可以安全使用。當構成本發明化合物分子的原子是同位素時，通過用包含相應同位素的試劑替代合成中所用的試劑，可以根據通用方法轉化同位素。
本發明的化合物可以在一個或多個構成該化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，可用放射性同位素標記化合物，比如氘(2 H)，碘-125(125 I)或C-14(14 C)。本發明的化合物的所有同位素組成的變換，無論放射性與否，都包括在本發明的範圍之內。
進一步地，本發明的化合物一個或多個氫原子上被同位素氘(2 H)取代，本發明化合物氘代後，具有延長半衰期、降低清除率、增強代謝穩定和提高體內活性等效果。
所述同位素衍生物的製備方法通常包括：相轉移催化方法。例如，優選的氘化方法採用相轉移催化劑(例如，四烷基銨鹽，NBu4 HSO4 )。使用相轉移催化劑交換二苯基甲烷化合物的亞甲基質子，導致比在酸(例如，甲磺酸)存在下用氘化矽烷(例如三乙基氘化甲矽烷)或用路易士酸如三氯化鋁採用氘化硼酸鈉還原而引入較高的氘。
術語“藥學上可接受的載體”是指能夠遞送本發明有效量活性物質、不干擾活性物質的生物活性並且對宿主或者患者無毒副作用的任何製劑載體或介質，代表性的載體包括水、油、蔬菜和礦物質、膏基、洗劑基質、軟膏基質等。這些基質包括懸浮劑、增粘劑、透皮促進劑等。它們的製劑為化妝品領域或局部藥物領域的技術人員所周知。關於載體的其他資訊，可以參考Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Ed., Lippincott, Williams & Wilkins (2005)，該文獻的內容通過引用的方式併入本文。
術語“賦形劑”通常是指配製有效的藥物組合物所需要載體、稀釋劑和/或介質。
針對藥物或藥理學活性劑而言，術語“有效量”或“治療有效量”是指無毒的但能達到預期效果的藥物或藥劑的足夠用量。對於本發明中的口服劑型，組合物中一種活性物質的“有效量”是指與該組合物中另一種活性物質聯用時為了達到預期效果所需要的用量。有效量的確定因人而異，取決於受體的年齡和一般情況，也取決於具體的活性物質，個案中合適的有效量可以由本領域技術人員根據常規試驗確定。
術語“活性成分”、“治療劑”，“活性物質”或“活性劑”是指一種化學實體，它可以有效地治療目標紊亂、疾病或病症。
“任選”或“任選地”指的是隨後描述的事件或狀況可能但不是必需出現的，並且該描述包括其中所述事件或狀況發生的情況以及所述事件或狀況不發生的情況。
本發明的化合物可以通過本領域技術人員所熟知的多種合成方法來製備，包括下面列舉的具體實施方式、其與其他化學合成方法的結合所形成的實施方式以及本領域技術上人員所熟知的等同替換方式，優選的實施方式包括但不限於本發明的實施例。
下面結合實施例對本發明作進一步詳細的描述，但發明的實施方式不限於此。
化合物的結構是通過核磁共振(NMR)或質譜(MS)來確定的。NMR位移(δ)以10-6(ppm)的單位給出。NMR的測定是用Bruker AVANCE-III核磁儀，測定溶劑為氘代二甲基亞碸(DMSO-d6)，氘代氯仿(CDCl3)，內標為四甲基矽烷(TMS)。
MS的測定用ISQ EC質譜儀(生產商: Thermo, 型號: ISQ EC)。
高效液相色譜法(HPLC)分析使用Thermo U3000 HPLC DAD高效液相色譜儀。
CombiFlash快速製備儀使用CombiFlash Rf+ LUMEN (TELEDYNE ISCO)。
薄層層析矽膠板使用煙臺銀龍HSGF254或GF254矽膠板，薄層色譜法(TLC)使用的矽膠板採用的規格是0.17 mm~0.23 mm，薄層層析分離純化產品採用的規格是0.4 mm~0.5 mm。
矽膠柱色譜法一般使用乳山上邦矽膠100~200目矽膠為載體。
實施例1
合成 (S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-N -(2-氧代-2,3-二氫-1H-苯並[d]咪唑-5-基)-3-苯基丙醯胺
Figure 02_image197
具體合成路線如下：
步驟A：合成 2-(5-氯-2-硝基苯基)氨基)-2-氧代乙酸
Figure 02_image334
將5-氯-2-硝基苯胺（4.0克，23.2毫摩爾）溶於二氯甲烷(30.0毫升)，加入草醯氯（7.3克，58.2毫摩爾）室溫反應一個小時隨後在冰水浴下緩慢加水，有氣泡生成並有淡黃色固體析出，加水至不再有氣泡生成，停止反應。
反應液在真空條件下旋走二氯甲烷，過濾，得淺黃色濾餅，濾餅於真空乾燥箱烘乾得5.2克淺黃色固體2-(5-氯-2-硝基苯基)氨基)-2-氧代乙酸粗品（收率：91.7%）。MS (ESI) M/Z：[M+H]+ = 244.98。
步驟B：合成 (2-((5-氯-2-硝基苯基)氨基)-2-氧代乙醯基)-L-苯丙氨酸叔丁酯
Figure 02_image336
將2-(5-氯-2-硝基苯基)氨基)-2-氧代乙酸(5.20克，21.31毫摩爾)和L-苯丙氨酸叔丁酯鹽酸鹽(6.57克，25.57毫摩爾)溶於二氯甲烷（30.0毫升）中，加入N ，N -二異丙基乙胺(8.25克，63.93毫摩爾)，加入2-(7-氧化苯並三氮唑)-N,N,N',N' -四甲基脲六氟磷酸鹽(12.15克，31.96毫摩爾)。隨後，在室溫下攪拌2小時。
向反應液中加入水（20毫升）淬滅反應。加入乙酸乙酯（150毫升），混合液用水和飽和食鹽水（30毫升×3次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/石油醚=1/10)，得到5.80克淡黃色固體(2-((5-氯-2-硝基苯基)氨基)-2-氧代乙醯基)-L-苯丙氨酸叔丁酯（收率：61.0%）。MS (ESI) M/Z：[M+H]+ = 448.12。
步驟C：合成 (S)-2-(4-(5-氯-2-硝基苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙酸叔丁酯
Figure 02_image338
將(2-((5-氯-2-硝基苯基)氨基)-2-氧代乙醯基)-L-苯丙氨酸叔丁酯(5.8克，12.97毫摩爾)溶於無水乙腈（30.0毫升），加入碳酸鉀(8.9克，64.85毫摩爾)，1,2-二溴乙烷(9.6克，51.90毫摩爾)，氮氣置換三次，升溫至100攝氏度反應16小時。
向反應液中加入乙酸乙酯（300毫升），混合液用水和飽和食鹽水（50毫升×3次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/石油醚=1/1)，得到3.0克黃色固體(S)-2-(4-(5-氯-2-硝基苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙酸叔丁酯（收率：49.0%）。MS (ESI) M/Z：[M+H]+ = 474.13。
步驟D：合成 (S)-2-(4-(2-氨基-5-氯苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙酸叔丁酯
Figure 02_image340
將(S)-2-(4-(5-氯-2-硝基苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙酸叔丁酯(3.0克，6.34毫摩爾)溶於乙酸乙酯溶液（35毫升）中，加入乾鈀碳（300毫克，10%摩爾）。置換氫氣三次，於室溫下反應5小時。
反應結束，過濾掉鈀碳，濾餅層用甲醇（10毫升×3次）洗滌，濾液減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/石油醚=1/1) ，得到1.0克淡黃色固體(S)-2-(4-(2-氨基-5-氯苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙酸叔丁酯（收率：35.7%）。MS (ESI) M/Z：[M+H]+ = 444.16。
步驟E：合成 (S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙酸叔丁酯
Figure 02_image342
將(S)-2-(4-(2-氨基-5-氯苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙酸叔丁酯(1.0克，2.26毫摩爾)溶於乙酸（15.0毫升），於冰水浴下，加入原甲酸三乙酯(1.0克，6.77毫摩爾)，疊氮化鈉(440毫克，6.77毫摩爾)，緩慢升至80攝氏度繼續反應16小時。
向反應液中加水，有類白色沉澱析出，繼續加水至無固體洗出，過濾，濾餅用水（10毫升×3次）洗滌，乾燥得523毫克類白色固體(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙酸叔丁酯（收率：46.0%）。MS (ESI) M/Z：[M+H]+ = 497.16。
步驟F：合成 (S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙酸
Figure 02_image344
將(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙酸叔丁酯(523毫克，2.26毫摩爾)溶於二氯甲烷（10.0毫升），加入三氟乙酸（2.0毫升），於室溫反應3小時。
於低溫下旋走二氯甲烷和三氟乙酸，得450毫克淡黃色固體(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙酸（收率：97.0%）。MS (ESI) M/Z：[M+H]+ = 441.10。
步驟G：合成 (S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-N-(2-氧代-2,3-二氫-1H -苯並[d]咪唑-5-基)-3-苯基丙醯胺
Figure 02_image346
將(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙酸(46毫克，0.10毫摩爾)，5-氨基-1,3-二氫-2H-苯並[d]咪唑-2-酮(17.8毫克，0.12毫摩爾)溶於N,N -二甲基甲醯胺（2.5毫升）中，加入N,N -二異丙基乙胺（65毫克，0.50毫摩爾）。隨後，向上述溶液中加入1-丙基磷酸酐（127毫克，0.40毫摩爾），室溫反應18小時。
加水淬滅反應，有固體析出，過濾，濾餅，得粗產品70毫克，粗產品用製備型高效液相色譜純化。分離條件如下，色譜柱：X select C18 19 mm * 150 mm；流動相：水（含有0.05％的三氟乙酸）和乙腈；流速：25毫升/分鐘；梯度：在7分鐘內，乙腈從5%升到100%；檢測波長：254 nm。純化後，純化得50毫克黃色固體(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-N-(2-氧代-2,3-二氫-1H -苯並[d]咪唑-5-基)-3-苯基丙醯胺（收率：54.0%）。MS (ESI) M/Z：[M+H]+ = 572.15 。1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 10.57 (d,J = 28.5 Hz, 2H), 10.13 (s, 1H), 9.77 (s, 1H), 7.94 (d,J = 2.2 Hz, 1H), 7.82 (d,J = 8.6 Hz, 1H), 7.77 (dd,J = 8.6, 2.3 Hz, 1H), 7.43 (d,J = 1.9 Hz, 1H), 7.37–7.22 (m, 5H), 7.05 (dd,J = 8.4, 1.9 Hz, 1H), 6.85 (t,J = 8.4 Hz, 1H), 5.32 (s, 1H), 4.04 (dd,J = 14.2, 7.1 Hz, 2H), 3.73 (s, 2H), 3.28 (d,J = 5.6 Hz, 1H), 3.08 (dd,J = 14.2, 10.0 Hz, 1H)。
實施例2
合成 (S)-4-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙醯胺基)苯甲酸
Figure 02_image348
步驟A： 合成 (S)-4-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙醯胺基)苯甲酸叔丁酯
Figure 02_image350
將(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙酸(83毫克，0.18毫摩爾)，4-氨基苯甲酸叔丁酯(43.4毫克，0.22毫摩爾)溶於N,N -二甲基甲醯胺（2.5毫升）中，加入N,N -二異丙基乙胺（122毫克，0.94毫摩爾）。隨後，向上述溶液中加入1-丙基磷酸酐（239毫克，0.75毫摩爾）。將室溫反應18小時。
將反應液乙酸乙酯（30毫升）稀釋，用水和飽和食鹽水（10毫升×3次）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓蒸餾。將所得殘餘物TLC板純化（乙酸乙酯/正己烷=1:1）得20毫克淡黃色固體(S)-4-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙醯胺基)苯甲酸叔丁酯（收率：17.0 %）。MS (ESI) M/Z：[M+H]+ = 616.20。
步驟B： 合成 (S)-4-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙醯胺基)苯甲酸
Figure 02_image352
將(S)-4-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙醯胺基)苯甲酸叔丁酯(20.0毫克，0.03毫摩爾)溶於二氯甲烷（3.0毫升）。隨後，向上述溶液中加入三氟乙酸（0.6毫升）。室溫反應3小時。
將反應液減壓蒸餾。將所得殘餘物用製備型高效液相色譜純化。分離條件如下，色譜柱：X select C18 19 mm * 150 mm；流動相：水（含有0.05％的三氟乙酸）和乙腈；流速：25毫升/分鐘；梯度：在7分鐘內，乙腈從5% 升到100%；檢測波長：254 nm。純化後，純化得13.7毫克黃色固體(S)-4-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙醯胺基)苯甲酸（收率：75.0%）。MS (ESI) M/Z：[M+H]+ = 572.15。
實施例3
合成 (S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-N -(3-氧代異吲哚啉-5-基)-3-苯基丙醯胺
Figure 02_image199
具體合成路線如下：
步驟A：合成 (S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-N -(3-氧代異吲哚啉-5-基)-3-苯基丙醯胺
Figure 02_image355
將(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙酸(47毫克，0.10毫摩爾)，6-氨基異吲哚啉-1-酮(17毫克，0.12毫摩爾)溶於N,N- 二甲基甲醯胺（2.0毫升）中，加入N,N -二異丙基乙胺（69毫克，0.53毫摩爾）。隨後，向上述溶液中加入1-丙基磷酸酐（136毫克，0.43毫摩爾），室溫反應18小時。
加水淬滅反應，二氯甲烷（10毫升×3次）萃取，減壓蒸餾，所得殘餘物用製備型高效液相色譜純化。分離條件如下，色譜柱：X select C18 19 mm * 150 mm；流動相：水（含有0.05％的三氟乙酸）和乙腈；流速：25毫升/分鐘；梯度：在7分鐘內，乙腈從5%升到100%；檢測波長：254 nm。純化後，純化得11.98毫克黃色固體(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-N -(3-氧代異吲哚啉-5-基)-3-苯基丙醯胺（收率：20.0%）。 MS (ESI) M/Z：[M+H]+ = 571.15。1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 10.40 (s, 1H), 9.75 (s, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.03 (d,J = 1.3 Hz, 1H), 7.93 (d,J = 2.2 Hz, 1H), 7.80 (d,J = 8.6 Hz, 1H), 7.75 (dd,J = 8.6, 2.2 Hz, 1H), 7.69 (dd,J = 8.2, 2.0 Hz, 1H), 7.52 (d,J = 8.2 Hz, 1H), 7.41–7.15 (m, 5H), 5.33 (s, 1H), 4.37–4.30 (m, 2H), 4.10 – 3.91 (m, 2H), 3.73 (s, 2H), 3.37 (dd,J = 11.0, 5.8 Hz, 1H), 3.16–3.05 (m, 1H)。
實施例4
合成 (S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-N -(3-氧代異吲哚啉-5-基)-3-苯基丙醯胺
Figure 02_image201
具體合成路線如下：
步驟A:合成 (S)-5-(3-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-叔丁酯苯基丙氧基)苯基)-3-氧代-2,3-二氫-1H -吡唑-1-羧酸叔丁酯
Figure 02_image358
將(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙酸(88毫克，0.20毫摩爾)，5-(3-氨基苯基)-3-氧代-2,3-二氫-1H -吡唑-1-羧酸叔丁酯(66毫克，0.24毫摩爾)溶於N,N -二甲基甲醯胺（2.0毫升）中，加入N,N -二異丙基乙胺（129毫克，1.0毫摩爾）。隨後，向上述溶液中加入1-丙基磷酸酐（254毫克，0.8毫摩爾），室溫反應18小時。
加水淬滅反應，加乙酸乙酯（20毫升）稀釋，水和食鹽水（10毫升×3次）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓蒸餾，所得殘餘物用製備型高效液相色譜純化。分離條件如下，色譜柱：X select C18 19 mm * 150 mm；流動相：水（含有0.05％的三氟乙酸）和乙腈；流速：25毫升/分鐘；梯度：在7分鐘內，乙腈從5% 升到100%；檢測波長：254 nm。純化後，純化得42.8毫克黃色固體(S)-5-(3-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-叔丁酯苯基丙氧基)苯基)-3-氧代-2,3-二氫-1H -吡唑-1-羧酸叔丁酯（收率：30.7%）。MS (ESI) M/Z：[M+H]+ = 698.21 。
實施例5
合成 (S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-N-(4-(5-氧代-2-5-二氫-1H -吡唑-3-基)苯基)-3-苯基丙醯胺
Figure 02_image203
具體合成路線如下：
步驟A：合成 (S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-N-(4-(5-氧代-2-5-二氫-1H -吡唑-3-基)苯基)-3-苯基丙醯胺
Figure 02_image361
將(S)-5-(3-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-叔丁酯苯基丙氧基)苯基)-3-氧代-2,3-二氫-1H -吡唑-1-羧酸叔丁酯(40.0 毫克，0.057毫摩爾)溶於二氯甲烷（3.0毫升）。隨後，向上述溶液中加入三氟乙酸（0.6毫升）。室溫反應3小時。
將反應液減壓蒸餾。將所得殘餘物用製備型高效液相色譜純化。分離條件如下，色譜柱：X select C18 19 mm * 150 mm；流動相：水（含有0.05％的三氟乙酸）和乙腈；流速：25毫升/分鐘；梯度：在7分鐘內，乙腈從5%升到100%；檢測波長：254 nm。純化後，純化得3.4毫克黃色固體(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-N -(4-(5-氧代-2-5-二氫-1H -吡唑-3-基)苯基)-3-苯基丙醯胺（收率：10.0%）。MS (ESI) M/Z：[M+H]+ = 598.16 。
實施例6
合成 (S)-3-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙醯胺基)苯甲酸
Figure 02_image363
具體合成路線如下：
步驟A：合成 (S)-3-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙醯胺基)苯甲酸叔丁酯
Figure 02_image365
將(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙酸(43毫克，0.098毫摩爾)，3-氨基苯甲酸叔丁酯(23毫克，0.117毫摩爾)溶於N,N -二甲基甲醯胺（2.0毫升）中，加入N,N -二異丙基乙胺（63毫克，0.49 毫摩爾）。隨後，向上述溶液中加入1-丙基磷酸酐（125毫克，0.392毫摩爾），室溫反應18小時。
加水淬滅反應，加乙酸乙酯（20毫升）稀釋，水和食鹽水（10毫升×3次）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓蒸餾，所得殘餘物用TLC板純化得23毫克黃色固體(S)-3-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙醯胺基)苯甲酸叔丁酯（收率：38.0%）。MS (ESI) M/Z：[M+H]+ = 616.20 。
步驟B：合成 (S)-3-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙醯胺基)苯甲酸
Figure 02_image367
將(S)-3-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙醯胺基)苯甲酸叔丁酯(23.0毫克，0.037毫摩爾)溶於二氯甲烷（3.0毫升）。隨後，向上述溶液中加入三氟乙酸（0.6毫升）。室溫反應3小時。
將反應液減壓蒸餾。將所得殘餘物用製備型高效液相色譜純化。分離條件如下，色譜柱：X select C18 19 mm * 150 mm；流動相：水（含有0.05％的三氟乙酸）和乙腈；流速：25毫升/分鐘；梯度：在7分鐘內，乙腈從5% 升到100%；檢測波長：254 nm。純化後，純化得13.5毫克黃色固體(S)-3-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙醯胺基)苯甲酸（收率：64.0%）。MS (ESI) M/Z：[M+H]+ = 560.13 。1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.99 (s, 1H), 10.40 (s, 1H), 9.75 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.93 (d,J = 2.2 Hz, 1H), 7.80 (d,J = 8.6 Hz, 2H), 7.75 (dd,J = 8.6, 2.2 Hz, 1H), 7.66 (d,J = 7.7 Hz, 1H), 7.45 (t,J = 7.9 Hz, 1H), 7.28 (dq,J = 15.6, 7.3 Hz, 5H), 5.32 (s, 1H), 4.19–3.94 (m, 2H), 3.72 (s, 2H), 3.36 (s, 1H), 3.10 (dd,J = 14.4, 10.2 Hz, 1H)。
實施例7
合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙醯胺基)-1H -苯並[d]咪唑-2-羧酸
Figure 02_image205
具體合成路線如下：
步驟A：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙醯胺基)-1H -苯並[d]咪唑-2-羧酸叔丁酯
Figure 02_image370
將(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙酸(50毫克，0.11毫摩爾)，5-氨基-1H -苯並[d]咪唑-2-羧酸叔丁酯(32毫克，0.14毫摩爾)溶於N,N -二甲基甲醯胺（2.0毫升）中，加入N,N -二異丙基乙胺（72毫克，0.56毫摩爾）。隨後，向上述溶液中加入1-丙基磷酸酐（143毫克，0.45毫摩爾），室溫反應18小時。
加水淬滅反應，加乙酸乙酯（20毫升）稀釋，水和食鹽水（10毫升×3次）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓蒸餾，所得殘餘物用TLC板純化(乙酸乙酯：正己烷=2：1)得36毫克黃色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙醯胺基)-1H -苯並[d]咪唑-2-羧酸叔丁酯（收率：48.0%）。MS (ESI) M/Z：[M+H]+ = 656.20 。
步驟B:合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙醯胺基)-1H -苯並[d]咪唑-2-羧酸
Figure 02_image372
將(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙醯胺基)-1H -苯並[d]咪唑-2-羧酸叔丁酯(36毫克，0.055毫摩爾)溶於二氯甲烷（3.0毫升）。隨後，向上述溶液中加入三氟乙酸（0.6毫升）。室溫反應3小時。
將反應液減壓蒸餾。將所得殘餘物用製備型高效液相色譜純化。分離條件如下，色譜柱：X select C18 19 mm * 150 mm；流動相：水（含有0.05％的三氟乙酸）和乙腈；流速：25毫升/分鐘；梯度：在7分鐘內，乙腈從5%升到100%；檢測波長：254 nm。純化後，純化得20毫克淺黃色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙醯胺基)-1H-苯並[d]咪唑-2-羧酸（收率：62.0%）。MS (ESI) M/Z：[M+H]+ =600.14 。1 H NMR (400 MHz, MeOD) δ 9.45 (s, 1H), 8.09 (d,J = 64.0 Hz, 3H), 7.77 (s, 1H), 7.70 (d,J = 8.1 Hz, 2H), 7.56 (s, 1H), 7.32 (ddd,J = 24.0, 15.8, 7.9 Hz, 6H), 5.42 (d,J = 24.7 Hz, 1H), 5.35 (t,J = 4.6 Hz, 1H), 4.18 (d,J = 56.4 Hz, 2H), 3.83 (s, 2H), 3.44 (dd,J = 14.2, 6.7 Hz, 1H), 3.22–3.12 (m, 1H)。
實施例8
合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image207
具體合成路線如下：
步驟A：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸叔丁酯
Figure 02_image375
將(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙酸(41毫克，0.093毫摩爾)，5-氨基-1H -吲哚-2-羧酸叔丁酯(26毫克，0.11毫摩爾)溶於N,N -二甲基甲醯胺（2.0毫升）中，加入N,N -二異丙基乙胺（60毫克，0.46毫摩爾）。隨後，向上述溶液中加入1-丙基磷酸酐（118毫克，0.37毫摩爾），室溫反應18小時。
加水淬滅反應，加乙酸乙酯（20毫升）稀釋，水和食鹽水（10毫升×3次）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓蒸餾，所得殘餘物用TLC板純化(乙酸乙酯：正己烷=3：1)得45毫克淺黃色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸叔丁酯（收率：73.0%）。MS (ESI) M/Z：[M+H]+ = 655.21。
步驟B:合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image377
將(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸叔丁酯(45毫克，0.068毫摩爾)溶於二氯甲烷（3.0毫升）。隨後，向上述溶液中加入三氟乙酸（0.6毫升）。室溫反應3小時。
將反應液減壓蒸餾。將所得殘餘物用製備型高效液相色譜純化。分離條件如下，色譜柱：X select C18 19 mm * 150 mm；流動相：水（含有0.05％的三氟乙酸）和乙腈；流速：25毫升/分鐘；梯度：在7分鐘內，乙腈從5%升到100%；檢測波長：254 nm。純化後，純化得30毫克淺黃色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸（收率：73.0%）。MS (ESI) M/Z：[M+H]+ = 599.14 。1 H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.91 (s, 1H), 11.71 (s, 1H), 10.14 (d,J = 9.5 Hz, 1H), 9.75 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.93 (d,J = 2.2 Hz, 1H), 7.80 (d,J = 8.6 Hz, 1H), 7.78–7.71 (m, 1H), 7.38–7.22 (m, 7H), 7.05 (s, 1H), 5.32 (dd,J = 12.8, 7.3 Hz, 1H), 3.97 (s, 2H), 3.71 (s, 2H), 3.52–3.34 (m, 1H), 3.09 (dd,J = 14.0, 10.6 Hz, 1H)。
實施例9
合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image209
具體合成路線如下：
步驟A：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image380
將(S)-5-(3-(4-氨基苯基)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(119毫克，0.18毫摩爾)，哌啶-1-碳醯氯(28毫克，0.19毫摩爾)溶於二氯甲烷（5.0毫升）中，加入三乙胺（53毫克，0.53毫摩爾）。室溫反應18小時。
加水淬滅反應，加乙酸乙酯（20毫升）稀釋，水和食鹽水（10毫升×3次）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓蒸餾，所得殘餘物用TLC板純化得71毫克淺黃色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸叔丁酯（收率：53.0%）。MS (ESI) M/Z：[M+H]+ = 881.34。
步驟B:合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image382
將(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(71毫克，0.08毫摩爾)溶於二氯甲烷（3.0毫升）。隨後，向上述溶液中加入三氟乙酸（0.6 毫升）。室溫反應3小時。
將反應液減壓蒸餾。將所得殘餘物用製備型高效液相色譜純化。分離條件如下，色譜柱：X select C18 19 mm * 150 mm；流動相：水（含有0.05％的三氟乙酸）和乙腈；流速：25毫升/分鐘；梯度：在7分鐘內，乙腈從5% 升到100%；檢測波長：254 nm。純化後，純化得30.5毫克類白色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸（收率：38.0%）。MS (ESI) M/Z：[M+H]+ = 725.22。1 H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.90 (s, 1H), 11.70 (s, 1H), 10.11 (s, 1H), 9.78 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.95 (d,J = 2.2 Hz, 1H), 7.82 (d,J = 8.6 Hz, 1H), 7.76 (dd,J = 8.6, 2.3 Hz, 1H), 7.36 (ddd,J = 11.7, 10.7, 5.2 Hz, 4H), 7.15 (t,J = 11.2 Hz, 2H), 7.06 (d,J = 1.7 Hz, 1H), 5.30 (dd,J = 9.8, 5.8 Hz, 1H), 4.05–3.83 (m, 2H), 3.70 (d,J = 31.6 Hz, 2H), 3.55 (s, 4H), 3.23 (dd,J = 14.2, 5.3 Hz, 1H), 3.01 (dd, J = 14.0, 10.1 Hz, 1H), 1.61–1.53 (m, 2H), 1.53–1.45 (m, 4H)。
實施例10
合成 (S)-3-氯-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image211
具體合成路線如下：
步驟A：合成 3-氯-5-硝基-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image385
將5-硝基-1H -吲哚-2-羧酸（500毫克，2.43毫摩爾），N -氯代丁二醯胺（357毫克，2.67毫摩爾）溶解於N,N -二甲基甲醯胺（4毫升），室溫攪拌4小時。
將反應液用乙酸乙酯（100毫升）稀釋，分別用水（20毫升×2次）和飽和食鹽水（20毫升），有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，所得粗品3-氯-5-硝基-1H -吲哚-2-羧酸直接用於下一步反應。LCMS: RT = 3.39 min, [M-H]- = 239.03。
步驟B：合成 3-氯-5-硝基-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image387
將粗品3-氯-5-硝基-1H -吲哚-2-羧酸（3.24毫摩爾），二碳酸二叔丁酯（3.18克，14.58毫摩爾）溶解於N,N -二甲基甲醯胺（3毫升），0攝氏度條件下加入4-二甲氨基吡啶（357毫克，2.92毫摩爾），室溫攪拌過夜。
將反應液用冰淬滅，用乙酸乙酯（100毫升）稀釋，分別用水（20毫升×2次）和飽和食鹽水（20毫升），有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，所得粗品3-氯-5-硝基-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯直接用於下一步反應。LCMS: RT = 5.27 min, [M-56-H]- = 396.11。
步驟C：合成 3-氯-5-胺基-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image389
將粗品3-氯-5-硝基-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（3.24毫摩爾）和鈀碳（60毫克）溶解於乙醇（50毫升），用氫氣球提供氫氣源，室溫條件下反應3小時。
將反應液用乙醇（100毫升）稀釋，矽藻土過濾，濾餅用乙醇（100毫升）沖洗，有機相濃縮，所得粗品用矽膠柱層析純化(石油醚：乙酸乙酯 = 8/1)。得到220毫克白色固體3-氯-5-胺基-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（三步總收率：18.6%）。LCMS: RT = 4.43 min, [M+H]+ = 367.19。
步驟D：合成 (S)-3-氯-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙醯胺)-1H -吲哚-2-羧酸叔丁酯
Figure 02_image391
氮氣保護條件下將(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙酸（47毫克，0.107毫摩爾），3-氯-5-胺基-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（79毫克，0.214毫摩爾），1-丙基磷酸酐（171毫克，0.535毫摩爾）和N,N -二異丙基乙胺（56微升，0.321毫摩爾）溶解於N,N -二甲基甲醯胺（1毫升），室溫攪拌過夜。
將反應液用乙酸乙酯（100毫升）稀釋，分別用水（20毫升×2次）和飽和食鹽水（20毫升），有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，所得粗品用矽膠柱層析純化(石油醚：乙酸乙酯 = 1/1)。得到50毫克黃色固體(S)-3-氯-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙醯胺)-1H -吲哚-2-羧酸叔丁酯（收率：68.0%）。LCMS: RT = 4.55 min, [M+H]+ = 689.39。
步驟E：合成 (S)-3-氯-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image393
將(S)-3-氯-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙醯胺)-1H -吲哚-2-羧酸叔丁酯（50毫克，0.073毫摩爾）溶解於二氯甲烷（5毫升），室溫條件下緩慢滴加三氟乙酸（1毫升），室溫條件下繼續攪拌反應1.5小時。
將反應液用旋轉蒸發儀濃縮，待用油泵進一步抽乾後用甲醇溶解，然後向溶液體系中滴加正己烷，有大量固體析出，室溫繼續攪拌1小時，過濾得7.1毫克棕色固體(S)-3-氯-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸（收率：15.5%）。LCMS：RT= 3.67 min，[M-H]- = 631.27。1 H NMR (500 MHz, DMSO) δ 13.36 (s, 1H), 11.99 (s, 1H), 10.26 (s, 1H), 9.75 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.94 (d,J = 2.2 Hz, 1H), 7.81 (d,J = 8.6 Hz, 1H), 7.76 (dd,J = 8.6, 2.2 Hz, 1H), 7.42 (s, 2H), 7.36–7.27 (m, 4H), 7.24 (t,J = 7.2 Hz, 1H), 5.35–5.30 (m, 1H), 3.11 (dd, J = 14.3, 10.2 Hz, 1H), 2.05–1.94 (m, 1H)。
實施例11
合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1-甲基-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image213
具體合成路線如下：
步驟A：合成 1-甲基-5-硝基-1H -吲哚-2-羧酸乙酯
Figure 02_image396
將5-硝基-1H -吲哚-2-羧酸乙酯(2.5克，10.7毫摩爾)和碳酸鉀(2.9克，21.4毫摩爾)溶於N,N -二甲基甲醯胺(20.0毫升)中。然後將碘甲烷(2.3克，16.0毫摩爾)加入反應液中，加熱升溫到60 ℃並恒溫攪拌4小時後，LCMS監測至反應完全，將反應液冷卻至室溫。
向反應液中加飽和氯化銨水溶液淬滅, 混合液用乙酸乙酯(40毫升×3次)萃取，合併有機相，有機相用飽和食鹽水(30毫升×3次)，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：二氯甲烷/石油醚=2/1)得到2.6克黃色固體1-甲基-5-硝基-1H -吲哚-2-羧酸乙酯(收率：98.1%)。LCMS：RT = 4.25 min, [M+H]+ = 249.02。
步驟B：合成1-甲基-5-硝基-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image398
將1-甲基-5-硝基-1H -吲哚-2-羧酸乙酯(2.0克，8.1毫摩爾)溶於四氫呋喃(60.0毫升)中，然後將氫氧化鈉溶液(2M，10.0毫升)加入反應液中，室溫下攪拌4小時後，LCMS監測至反應完全。
反應液減壓濃縮，稀鹽酸調節pH至3，析出大量固體，過濾，濾餅用水(30毫升×3次)洗滌，收集濾餅，乾燥後得到1.6克白色固體1-甲基-5-硝基-1H -吲哚-2-羧酸(收率：89.9%)。LCMS：RT = 3.85 min, [M+H]+ = 219.04。
步驟C：合成 1-甲基-5-硝基-1H -吲哚-2-羧酸叔丁酯
Figure 02_image400
將1-甲基-5-硝基-1H -吲哚-2-羧酸(440毫克，2.0毫摩爾)溶於N,N -二甲基甲醯胺(4.0毫升)中，然後將CDI(486毫克，3.0毫摩爾)加入反應液中，室溫下攪拌1小時後，將叔丁醇(371毫克，5.0毫摩爾)和1,8-二氮雜雙環[5.4.0]十一碳-7-烯(396毫克，2.6毫摩爾)加入反應液中，室溫下攪拌2小時後，LCMS監測至反應完全。
向反應液中加飽和氯化銨水溶液淬滅，混合液用乙酸乙酯(40毫升×3次)萃取，合併有機相，有機相用飽和食鹽水(30毫升×3次)，無水硫酸鈉乾燥,減壓濃縮得到402毫克黃色固體1-甲基-5-硝基-1H -吲哚-2-羧酸叔丁酯(收率：72.8%)。LCMS：RT = 4.59 min, [M+K]+ = 316.91。
步驟D：合成 1-甲基-5-氨基-1H -吲哚-2-羧酸叔丁酯
Figure 02_image402
氮氣保護下,將1-甲基-5-硝基-1H -吲哚-2-羧酸叔丁酯(402毫克，1.5毫摩爾)溶於乙醇(8.0毫升)和乙酸乙酯(4.0毫升)中，向反應液中加入鈀碳(80毫克，20%)，置換氫氣後，室溫下攪拌9小時。
反應液墊矽藻土過濾，濾餅用乙酸乙酯(20毫升×3次)洗滌。合併濾液及洗滌液，減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/石油醚=1/2)。得到317毫克黃色固體1-甲基-5-氨基-1H -吲哚-2-羧酸叔丁酯(收率：73.0%)。LCMS：RT = 2.83 min , [M+H]+ = 247.17。
步驟E：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(-4-硝基苯基)丙醯氨基)-1-甲基-1H -吲哚-2-羧酸叔丁酯
Figure 02_image404
將(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-硝基苯基)丙酸(263毫克,0.5毫摩爾)和N,N -二異丙基乙胺 (0.2毫升，1.5毫摩爾)溶於N,N -二甲基甲醯胺(3.0毫升)中。隨後，向上述溶液中加入2-(7-偶氮苯並三氮唑)-N,N,N',N' -四甲基脲六氟磷酸酯(380毫克，1.0毫摩爾)和1-甲基-5-氨基-1H -吲哚-2-羧酸叔丁酯(123.0毫克，0.5毫摩爾)。在室溫下攪拌過夜。
向反應液中加水淬滅反應。混合液用乙酸乙酯(20毫升×3次)萃取。合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(10毫升×3次)，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/石油醚=1/1)。得到230毫克黃色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(-4-硝基苯基)丙醯氨基)-1-甲基-1H -吲哚-2-羧酸叔丁酯(收率：60.0%)。LCMS：RT = 4.24 min , [M-H]- = 712.28。
步驟F：合成(S)-5-(3-(4-氨基苯基)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙醯氨基)-1-甲基-1H -吲哚-2-羧酸叔丁酯
Figure 02_image406
將(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(-4-硝基苯基)丙醯氨基)-1-甲基-1H -吲哚-2-羧酸叔丁酯(230毫克，0.3毫摩爾)溶於甲醇(8.0毫升)和冰醋酸(4.0毫升)中。隨後，向上述溶液中加入還原性鐵粉(168毫克，3.0毫摩爾)，在70 ℃下攪拌4小時。
反應液冷卻至室溫。加碳酸氫鈉中合，混合液用乙酸乙酯(20毫升×3次)萃取。合併有機相，有機相先用飽和食鹽水(10毫升×3次)，無水硫酸鈉乾燥,減壓濃縮得到205毫克黃色固體(S)-5-(3-(4-氨基苯基)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙醯氨基)-1-甲基-1H -吲哚-2-羧酸叔丁酯（收率93.0%)。LCMS：RT = 4.23 min , [M-H]- = 684.12。
步驟G：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(-4-(哌啶-1-甲醯氨基)苯基)丙醯氨基)-1-甲基-1H -吲哚-2-羧酸叔丁酯
Figure 02_image408
將(S)-5-(3-(4-氨基苯基)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙醯氨基)-1-甲基-1H -吲哚-2-羧酸叔丁酯(205毫克,0.3毫摩爾)和三乙胺(0.1毫升，0.75毫摩爾)溶於二氯甲烷(5.0毫升)中。於冰浴中向反應液中加入哌啶-1-羰基氯(53毫克，0.36毫摩爾)，在室溫下攪拌2小時。
向反應液中加入飽和碳酸氫鈉溶液(10毫升)淬滅反應。混合液用乙酸乙酯(20毫升×3次)萃取。合併有機相。有機相先用飽和食鹽水(10毫升×3次),然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/甲醇=10/1)。得到130毫克黃色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(-4-(哌啶-1-甲醯氨基)苯基)丙醯氨基)-1-甲基-1H -吲哚-2-羧酸叔丁酯(收率：38%)。LCMS：RT = 4.19 min, [M+H]+ = 795.23。
步驟H：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1-甲基-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image410
將(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(-4-(哌啶-1-甲醯氨基)苯基)丙醯氨基)-1-甲基-1H -吲哚-2-羧酸叔丁酯(90毫克，0.11毫摩爾)溶於二氯甲烷(5.0毫升)中。隨後，向上述溶液中加入三氟乙酸(1.0毫升)，在室溫下攪拌1小時。
將反應液空氣浴中減壓濃縮。將所得殘餘物用製備型高效液相色譜純化，得到29毫克白色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1-甲基-1H -吲哚-2-羧酸(收率：35.0%)。LCMS：RT = 3.66 min, [M-H]- = 737.14。1 H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.89 (s, 1H), 10.16 (s, 1H), 9.78 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.95 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.82 (d,J = 8.6 Hz, 1H), 7.76 (dd,J = 8.6, 2.3 Hz, 1H), 7.53 (d,J = 9.0 Hz, 1H), 7.45–7.38 (m, 2H), 7.18 (d,J = 6.4 Hz, 1H), 7.14 (d,J = 8.2 Hz, 1H), 5.75 (s, 1H), 5.35–5.27 (m, 1H), 4.00 (s, 2H), 3.43–3.38 (m, 3H), 3.23 (d,J = 14.1 Hz, 1H), 3.06–2.97 (m, 1H), 2.55–2.53 (m, 2H), 1.56 (d,J = 5.3 Hz, 2H), 1.48 (d,J = 4.1 Hz, 4H)。
實施例12
合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-羥基哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image215
具體合成路線如下：
步驟A：合成 哌啶-4-醇的三氟乙酸鹽
Figure 02_image413
將4-羥基哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.0克，5.0毫摩爾)溶於二氯甲烷(10.0毫升)中。隨後，向上述溶液中加入三氟乙酸(2.0毫升)，在室溫下攪拌1小時。
將反應液空氣浴中減壓濃縮，得到1.0克黃色固體哌啶-4-醇的三氟乙酸鹽粗品(收率：93.5%)。
步驟B：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-羥基哌啶-1-甲醯氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image415
室溫下，將(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((苯氧基羰基)氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(178毫克，0.2毫摩爾)和哌啶-4-醇的三氟乙酸鹽(860毫克，4.0毫摩爾)溶於四氫呋喃(6.0毫升)中。隨後，向上述溶液中N,N -二異丙基乙胺(1.0毫升，6毫摩爾)。在60 ℃反應12小時。
向反應液中加水淬滅，混合液用乙酸乙酯(30毫升×3次)萃取，合併有機相，有機相用飽和食鹽水(20毫升×3次)，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得到180毫克黃色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-羥基哌啶-1-甲醯氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯粗品(收率：100%)。LCMS：RT = 4.14 min, [M-H]- = 867.42。
步驟C：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-羥基哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image417
將(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-羥基哌啶-1-甲醯氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(180毫克，0.2毫摩爾)溶於二氯甲烷(5.0毫升)中。隨後，向上述溶液中加入三氟乙酸(1.0毫升)，在室溫下攪拌1小時。
將反應液空氣浴中減壓濃縮。將所得殘餘物用製備型高效液相色譜純化，得到27毫克黃色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-羥基哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸(收率：18.2%)。LCMS：RT = 3.16 min, [M-H]- = 739.23。1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.71 (s, 1H), 10.13 (s, 1H), 9.78 (s, 1H), 8.43 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.95 (d,J = 1.9 Hz, 1H), 7.82 (d,J = 8.6 Hz, 1H), 7.76 (dd,J = 8.6, 2.2 Hz, 1H), 7.43–7.30 (m, 3H), 7.14 (d,J = 7.9 Hz, 1H), 7.06 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 5.30 (dd,J = 9.5, 5.6 Hz, 1H), 3.82 (d,J = 13.7 Hz, 2H), 3.70–3.60 (m, 2H), 3.47 (m, 6H), 3.22 (dd,J = 14.9, 6.4 Hz, 2H), 3.08–2.96 (m, 2H), 2.54 (s, 1H), 1.73 (d,J = 8.9 Hz, 2H), 1.36 – 1.21 (m, 2H)。
實施例13
合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-(1,1-二氧代四氫-1H -噻喃-4-基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image217
具體合成路線如下：
步驟A：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-(1,1-二氧代四氫-2H -噻喃-4-基)脲基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image420
室溫下，將(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((苯氧基羰基)氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(178毫克，0.2毫摩爾)和4-氨基四氫-2H -噻喃1,1-二氧化物(371毫克，2.0毫摩爾)溶於四氫呋喃(6.0毫升)中。隨後，向上述溶液中N,N -二異丙基乙胺 (0.7毫升，4毫摩爾)。在60 ℃反應12小時。
向反應液中加水淬滅，混合液用乙酸乙酯(30毫升×3次)萃取，合併有機相，有機相用飽和食鹽水(20毫升×3次)，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得到180毫克黃色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-(1,1-二氧代四氫-2H -噻喃-4-基)脲基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(收率：95.2%)。LCMS：RT = 4.17 min, [M+H]+ = 945.28。
步驟B：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-(1,1-二氧代四氫-1H -噻喃-4-基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image422
將(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-(1,1-二氧代四氫-2H -噻喃-4-基)脲基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（180毫克，0.19毫摩爾）溶於二氯甲烷（5.0毫升）中。隨後，向上述溶液中加入三氟乙酸（1.0毫升），在室溫下攪拌1小時。
將反應液空氣浴中減壓濃縮。將所得殘餘物用製備型高效液相色譜純化，得到26毫克黃色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-(1,1-二氧代四氫-1H -噻喃-4-基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸(收率：17.2%)。LCMS：RT = 3.24 min, [M-H]- = 787.13。1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 13.05 – 12.68 (m, 1H), 11.71 (s, 1H), 10.11 (s, 1H), 9.78 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.94 (d,J = 2.3 Hz, 1H), 7.82 (d,J = 8.6 Hz, 1H), 7.76 (dd,J = 8.6, 2.3 Hz, 1H), 7.42–7.30 (m, 3H), 7.13 (d,J = 8.1 Hz, 2H), 7.06 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 6.39 (d,J = 7.5 Hz, 1H), 5.75 (s, 1H), 5.28 (dd,J = 10.2, 5.8 Hz, 1H), 3.84 (s, 2H), 3.73 (s, 2H), 3.26–3.17 (m, 2H), 3.05 (d,J = 11.8 Hz, 2H), 2.54 (s, 1H), 2.12 (s, 2H), 1.90 (dd,J = 21.0, 10.2 Hz, 2H)。
實施例14
合成 5-((2S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-羥基-1-氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸烷-8-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image219
具體合成路線如下：
步驟A：合成 1-氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸-3-醇的三氟乙酸鹽
Figure 02_image425
將3-羥基-1-氧雜-8-氮雜螺[4-]癸烷-8-羧酸叔丁酯（1.0克，5.0毫摩爾）溶於二氯甲烷(10.0毫升)中。隨後，向上述溶液中加入三氟乙酸(2.0毫升)，在室溫下攪拌1小時。
將反應液空氣浴中減壓濃縮,得到1.0克黃色固體1-氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸-3-醇的三氟乙酸鹽粗品(收率：94.8%)。
步驟B：合成5-((2S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-羥基-1-氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸烷-8-甲醯氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image427
室溫下，將(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((苯氧基羰基)氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(178毫克，0.2毫摩爾)和1-氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸-3-醇的三氟乙酸鹽(542毫克，2.0毫摩爾)溶於四氫呋喃(6.0毫升)中。隨後，向上述溶液中N,N -二異丙基乙胺 (0.7毫升，4毫摩爾)。在60 ℃反應12小時。
向反應液中加水淬滅，混合液用乙酸乙酯(30毫升×3次)萃取，合併有機相, 有機相用飽和食鹽水(20毫升×3次)，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得到190毫克黃色固體5-((2S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-羥基-1-氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸烷-8-甲醯氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(收率：100%)。LCMS：RT = 4.14 min, [M-H]- = 951.26。
步驟C：合成 5-((2S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3- 羥基-1-氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸烷-8-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H-吲哚-2-羧酸
Figure 02_image429
將5-((2S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-羥基-1-氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸烷-8-甲醯氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(190毫克,0.20毫摩爾)溶於二氯甲烷(5.0毫升)中。隨後，向上述溶液中加入三氟乙酸(1.0毫升)，在室溫下攪拌1小時。
將反應液空氣浴中減壓濃縮。將所得殘餘物用製備型高效液相色譜純化，得到26毫克黃色固體5-((2S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3- 羥基-1-氧雜-8-氮雜螺[4.5]癸烷-8-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸(收率：17.2%)。LCMS：RT = 3.24 min, [M-H]- = 787.13。1 H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.89 (s, 1H), 11.70 (s, 1H), 10.12 (s, 1H), 9.78 (s, 1H), 8.43 (s, 1H), 8.08–7.87 (m, 2H), 7.78 (dt,J = 8.6, 5.3 Hz, 2H), 7.49–7.25 (m, 3H), 7.14 (d,J = 7.9 Hz, 2H), 7.06 (s, 1H), 5.30 (dd,J = 9.7, 5.7 Hz, 1H), 4.86 (s, 1H), 4.32 (s, 1H), 3.81 (dd,J = 9.2, 4.9 Hz, 1H), 3.73 (s, 1H), 3.61–3.51 (m, 3H), 3.38 (s, 1H), 3.23 (d,J = 14.8 Hz, 1H), 3.05–2.96 (m, 1H), 1.87 (dd,J = 13.0, 6.6 Hz, 1H), 1.68 (ddd,J = 29.9, 21.5, 10.9 Hz, 3H), 1.49 (s, 2H)。
實施例15
合成(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(甲基磺醯基)哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image221
具體合成路線如下：
步驟A：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(甲基磺醯基)哌啶-1-甲醯氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image432
室溫下，將(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((苯氧基羰基)氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(178毫克，0.2毫摩爾)和4-(甲基磺醯基)哌啶(163毫克，1.0毫摩爾)溶於四氫呋喃(6.0毫升)中。隨後，向上述溶液中N,N -二異丙基乙胺(0.3毫升，2毫摩爾)。在60 ℃反應12小時。
向反應液中加水淬滅, 混合液用乙酸乙酯(30毫升×3次)萃取，合併有機相，有機相用飽和食鹽水(20毫升×3次)，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得到192毫克黃色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(甲基磺醯基)哌啶-1-甲醯氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯粗品(收率：100%)。LCMS：RT = 4.16 min, [M-H]- = 957.29。
步驟B：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(甲基磺醯基)哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image434
將(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(甲基磺醯基)哌啶-1-甲醯氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(192毫克，0.20毫摩爾)溶於二氯甲烷(5.0毫升)中。隨後，向上述溶液中加入三氟乙酸(1.0毫升)，在室溫下攪拌1小時。
將反應液空氣浴中減壓濃縮。將所得殘餘物用製備型高效液相色譜純化，得到25毫克黃色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(甲基磺醯基)哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸(收率：15.0%)。LCMS：RT = 3.24 min, [M-H]- = 801.18。1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 13.08–12.69 (m, 1H), 11.71 (s, 1H), 10.13 (s, 1H), 9.78 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.95 (d,J = 2.2 Hz, 1H), 7.82 (d,J = 8.6 Hz, 1H), 7.76 (dd,J = 8.6, 2.3 Hz, 1H), 7.39 (dd,J = 11.2, 8.7 Hz, 3H), 7.33 (dd,J = 8.9, 1.9 Hz, 1H), 7.16 (d,J = 8.5 Hz, 2H), 7.06 (d,J = 1.5 Hz, 1H), 5.30 (dd,J = 9.6, 5.9 Hz, 1H), 4.26 (d,J = 13.4 Hz, 2H), 3.74 (s, 4H), 3.29–3.23 (m, 1H), 3.22 (s, 1H), 3.03 (d,J = 9.8 Hz, 1H), 2.94 (s, 3H), 2.83 (t,J = 12.0 Hz, 2H), 2.03 (d,J = 8.5 Hz, 2H), 1.53 (d,J = 11.9 Hz, 2H)。
實施例16
合成 (S)-5-(3-(4-(4-羧基哌啶-1-甲醯氨基)苯基)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image223
具體合成路線如下：
步驟A：合成 (S)-5-(3-(4-(4-(叔丁氧基羰基)哌啶-1-甲醯胺基)苯基)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑)-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image437
室溫下，將(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((苯氧基羰基)氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(178毫克，0.2毫摩爾)和哌啶-4-羧酸叔丁酯(251毫克，1.0毫摩爾)溶於四氫呋喃(6.0毫升)中。隨後,向上述溶液中N,N -二異丙基乙胺(0.3毫升，2毫摩爾)。在60 ℃反應12小時。
向反應液中加水淬滅，混合液用乙酸乙酯(30毫升×3次)萃取，合併有機相，有機相用飽和食鹽水(20毫升×3次)，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮得到76毫克黃色固體(S)-5-(3-(4-(4-(叔丁氧基羰基)哌啶-1-甲醯胺基)苯基)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑)-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯粗品(收率：100%)。LCMS：RT = 4.57 min, [M-H]- = 979.36。
步驟B：合成(S)-5-(3-(4-(4-羧基哌啶-1-甲醯氨基)苯基)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image439
將(S)-5-(3-(4-(4-(叔丁氧基羰基)哌啶-1-甲醯胺基)苯基)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑)-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(76毫克，0.20毫摩爾)溶於二氯甲烷(5.0毫升)中。隨後，向上述溶液中加入三氟乙酸(1.0毫升)，在室溫下攪拌1小時。
將反應液空氣浴中減壓濃縮。將所得殘餘物用製備型高效液相色譜純化，得到4毫克黃色固體(S)-5-(3-(4-(4-羧基哌啶-1-甲醯氨基)苯基)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸(收率：6.4%)。LCMS：RT = 3.24 min, [M-H]- = 769.18。1 H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.81 (s, 2H), 11.71 (s, 1H), 10.12 (s, 1H), 9.78 (s, 1H), 8.45 (d,J = 4.6 Hz, 1H), 8.06–7.90 (m, 2H), 7.82 (d,J = 8.6 Hz, 1H), 7.76 (dd,J = 8.5, 2.2 Hz, 1H), 7.39 (dd,J = 13.7, 8.7 Hz, 3H), 7.33 (d,J = 8.8 Hz, 1H), 7.14 (d,J = 7.9 Hz, 2H), 7.06 (s, 1H), 5.30 (dd,J = 9.8, 5.8 Hz, 1H), 4.01 (d,J = 13.3 Hz, 2H), 3.74 (s, 2H), 3.62 (s, 1H), 3.24 (s, 2H), 3.17 (s, 1H), 3.08–2.96 (m, 1H), 2.90 (t,J = 12.2 Hz, 2H), 1.82 (d,J = 9.7 Hz, 2H), 1.57–1.40 (m, 2H)。
實施例17
合成(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-(甲基磺醯基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image225
具體合成路線如下：
步驟A：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-(甲基磺醯基)脲基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image442
室溫下，向含有(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(-4-((苯氧基羰基)氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（178毫克，0.20毫摩爾）和甲基磺醯胺（190毫克，2.0毫摩爾）的四氫呋喃（6.0毫升）中滴加N,N -二異丙基乙胺（516毫克，4.0毫摩爾），滴畢，60 °C反應過夜。
反應結束，加水淬滅，混合液用乙酸乙酯（10毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：二氯甲烷/甲醇=10/1)。得到100毫克白色固體 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-(甲基磺醯基)脲基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(收率：56.0%)。LCMS: RT = 4.20 min, [M+H]+ = 891.23。
步驟B：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-(甲基磺醯基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image444
室溫下，將(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-(甲基磺醯基)脲基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（100毫克，0.11毫摩爾）加入二氯甲烷（4.0毫升）中，滴加三氟乙酸（1.0毫升），室溫反應3小時。反應結束，蒸乾二氯甲烷並用油泵抽乾三氟乙酸，所得殘餘物用溶於二氯甲烷（1.0毫升）中，將其滴加入正己烷（10.0毫升）中，析出白色固體，抽濾，濾餅用正己烷洗滌，乾燥得到56毫克白色固體 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-(甲基磺醯基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸(收率：60.8%)。LCMS: RT = 3.27 min, [M-H]- = 733.08。
實施例18
合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-(乙基磺醯基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image227
具體合成路線如下：
步驟A：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-(乙基磺醯基)脲基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image447
室溫下，向含有(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(-4-((苯氧基羰基)氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（178毫克，0.20毫摩爾）和乙基磺醯胺（436毫克，4.0毫摩爾）的四氫呋喃（6.0毫升）中滴加N,N -二異丙基乙胺（775毫克，6.0毫摩爾），滴畢，60 °C反應過夜。
反應結束，加水淬滅，混合液用乙酸乙酯（10毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：二氯甲烷/甲醇=10/1)。得到110毫克白色固體 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-(乙基磺醯基)脲基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(收率：60.7%)。LCMS: RT = 4.24 min, [M+Na]+ = 927.14。
步驟B：合成(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-(乙基磺醯基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image449
室溫下，將(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-(乙基磺醯基)脲基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（110毫克，0.12毫摩爾）加入二氯甲烷（4.0毫升）中，滴加三氟乙酸（1.0毫升），室溫反應3小時。反應結束，蒸乾二氯甲烷並用油泵抽乾三氟乙酸，所得殘餘物用溶於二氯甲烷（1.0毫升）中，將其滴加入正己烷（10.0毫升）中，析出白色固體，抽濾，濾餅用正己烷洗滌，乾燥得到48毫克白色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-(乙基磺醯基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸(收率：53.3%)。LCMS: RT = 3.33 min, [M+H]+ = 749.03。1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.91 (s, 1H), 11.72 (s, 1H), 10.19 (s, 1H), 10.13 (s, 1H), 9.78 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.95 (d,J = 2.2 Hz, 1H), 7.82 (d,J = 8.6 Hz, 1H), 7.76 (dd,J = 8.6, 2.3 Hz, 1H), 7.38 (d,J = 8.6 Hz, 3H), 7.36–7.30 (m, 1H), 7.22 (d,J = 7.8 Hz, 2H), 7.06 (d,J = 1.5 Hz, 1H), 5.36–5.26 (m, 1H), 4.25–3.55 (m, 4H), 3.44 (dd,J = 14.6, 7.2 Hz, 2H), 3.25 (dd,J = 14.2, 5.2 Hz, 1H), 3.12–3.00 (m, 1H), 1.26 (t,J = 7.4 Hz, 3H)。
實施例19
合成5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-((4-((S)-3-羥基哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image229
具體合成路線如下：
步驟A：合成 (5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((S)-3-羥基哌啶-1-甲醯氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image452
室溫下，向含有(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(-4-((苯氧基羰基)氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（178毫克，0.20毫摩爾）和（S）-哌啶-3-醇鹽酸鹽（550毫克，4.0毫摩爾）的四氫呋喃（6.0毫升）中滴加N,N -二異丙基乙胺（1.03克，8.0毫摩爾），滴畢，60 °C反應過夜。
反應結束，加水淬滅，混合液用乙酸乙酯（10毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：二氯甲烷/甲醇=10/1)。得到93毫克白色固體 (5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((S)-3-羥基哌啶-1-甲醯氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(收率：52.0%)。LCMS: RT = 4.16 min, [M+H]+ = 867.22。
步驟B：合成5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-((4-((S)-3-羥基哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image454
室溫下，將(5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((S)-3-羥基哌啶-1-甲醯氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（93毫克，0.10毫摩爾）加入二氯甲烷（4.0毫升）中，滴加三氟乙酸（1.0毫升），室溫反應3小時。反應結束，蒸乾二氯甲烷並用油泵抽乾三氟乙酸，所得殘餘物用溶於二氯甲烷（1.0毫升）中，將其滴加入正己烷（10.0毫升）中，析出白色固體，抽濾，濾餅用正己烷洗滌，乾燥得到48毫克白色固體 5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-((4-((S)-3-羥基哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸(收率：64.8%)。LCMS: RT = 3.20 min, [M-H]- = 739.16。δ 11.73 (s, 1H), 10.14 (s, 1H), 9.79 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.95 (d,J = 2.3 Hz, 1H), 7.82 (d,J = 8.5 Hz, 1H), 7.77 (dd,J = 8.6, 2.3 Hz, 1H), 7.41 (s, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.32 (dd,J = 8.8, 1.9 Hz, 1H), 7.14 (d,J = 8.3 Hz, 2H), 7.06 (d,J = 2.1 Hz, 1H), 5.33–5.26 (m, 1H), 3.88–3.72 (m, 7H), 3.48–3.40 (m, 1H), 3.26–3.18 (m, 1H), 3.05–2.96 (m, 1H), 2.92–2.83 (m, 1H), 2.72–2.65 (m, 1H), 2.03–1.95 (m, 1H), 1.89–1.80 (m, 1H), 1.72–1.62 (m, 1H), 1.38–1.30 (m, 1H)。
實施例20
合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(3-(羥甲基)環丁基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image231
具體合成路線如下：
步驟A：合成 3-(3-氧代哌嗪-1-基)環丁烷-1-羧酸甲酯
Figure 02_image457
室溫下，向含有哌嗪-2-酮（1.00克，10.0毫摩爾）和3-氧代環丁烷-1-羧酸甲酯（1.92克，15.0毫摩爾）的甲醇（20.0毫升）溶液中加入氰基硼氫化鈉（8.7毫克，13.0毫摩爾）和乙酸（0.4 毫升），加畢，室溫反應2小時。
反應結束，減壓蒸除溶劑，所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：二氯甲烷/甲醇=10/1)。得到954毫克淡黃色油狀物 3-(3-氧代哌嗪-1-基)環丁烷-1-羧酸甲酯（收率45.0%）。LCMS: RT = 0.69 min, [M+H]+ = 213.11。
步驟B：合成4-(3-(羥甲基)環丁基)哌嗪-2-酮
Figure 02_image459
室溫下，向含有3-(3-氧代哌嗪-1-基)環丁烷-1-羧酸甲酯（848 毫克，4.0毫摩爾）的四氫呋喃/甲醇（20.0/20.0毫升）溶液中加入硼氫化鋰（88毫克，4.0毫摩爾），加畢，加熱至40 °C反應3小時。
反應結束，加水（5 毫升）淬滅，二氯甲烷萃取（30毫升×2次），無水硫酸鈉乾燥，減壓蒸除溶劑，所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：二氯甲烷/甲醇=5/1)。得到412毫克淡黃色油狀物4-(3-(羥甲基)環丁基)哌嗪-2-酮（56.0%）。LCMS: RT = 0.76 min, [M+H]+ = 185.09。
步驟C：合成 (S)-2-(4-(5-氯-2-(二烯丙基氨基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(3-(羥甲基))環丁基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯
Figure 02_image461
氮氣保護下，向含有(S)-3-(4-溴苯基)-2-(4-(5-氯-2-(二烯丙基氨基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙酸叔丁酯（602毫克，1.0毫摩爾）、4-(3-(羥甲基)環丁基)哌嗪-2-酮(184毫克，1.0毫摩爾)的甲苯（5.0毫升）溶液中加入碘化亞銅（190毫克，1.0毫摩爾），碳酸銫（656毫克，2.0毫摩爾），N1 ,N2 -二甲基乙二胺（176毫克，2.0毫摩爾），加畢，加熱至110 °C反應過夜。
反應結束，加水（5毫升）淬滅，乙酸乙酯萃取（40毫升×2次），合併有機相，用飽和食鹽水（50毫升）洗，無水硫酸鈉乾燥，減壓蒸除溶劑，所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：二氯甲烷/甲醇=30/1)。得到352毫克淡黃色油狀物 (S)-2-(4-(5-氯-2-(二烯丙基氨基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(3-(羥甲基))環丁基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯（50.0%）。LCMS: RT = 3.30 min, [M+H]+ = 706.18。
步驟D：合成 (S)-2-(4-(2-氨基-5-氯-苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(3-(羥甲基))環丁基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯
Figure 02_image463
氮氣保護下，向含有(S)-2-(4-(5-氯-2-(二烯丙基氨基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(3-(羥甲基))環丁基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯（352毫克，0.50毫摩爾）的二氯甲烷（4.0毫升）溶液中加入二甲基巴比妥酸（624毫克，4.0毫摩爾），四三苯基膦鈀（29毫克，0.025毫摩爾），加畢，加熱至40 °C反應過夜。
反應結束，用二氯甲烷（100毫升）稀釋，依次用飽和碳酸氫鈉（50毫升）、飽和食鹽水（50毫升）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓蒸除溶劑，所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：二氯甲烷/甲醇=30/1)。得到220毫克淡黃色油狀物 (S)-2-(4-(2-氨基-5-氯-苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(3-(羥甲基))環丁基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯（70.4%）。LCMS: RT = 3.16 min, [M+Na]+ = 648.23。
步驟E：合成 (S)-2-(4-(5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(3-(羥甲基)環丁基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁基酯
Figure 02_image465
氮氣保護下，向含有((S)-2-(4-(2-氨基-5-氯-苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(3-(羥甲基))環丁基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯（220 毫克，0.35毫摩爾）乙酸（1.0毫升）溶液中加入原甲酸三乙酯（311毫克，2.1毫摩爾），疊氮化鈉（114毫克，1.75毫摩爾），加畢，加熱至80 °C反應2小時。
反應結束，加亞硝酸鈉（200毫克）淬滅，乙酸乙酯萃取（40毫升×2次），合併有機相，用飽和食鹽水（50毫升）洗，無水硫酸鈉乾燥，減壓蒸除溶劑，所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：二氯甲烷/甲醇=20/1)。得到180毫克淡黃色油狀物 (S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(3-(羥甲基)環丁基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁基酯（收率75.3%）。LCMS: RT = 2.91 min, [M+H]+ = 679.16。
步驟F：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(-4-(-(3-(羥甲基)環丁基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image467
室溫下，向含有(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(3-(羥甲基)環丁基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁基酯（100毫克，0.15毫摩爾）的二氯甲烷（4.0毫升）溶液中加入三氟乙酸（1.0毫升），加畢，室溫反應1.5小時。減壓濃縮，所得粗產物直接用於下一步反應。
將上述粗產物和5-氨基-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（133毫克，0.40毫摩爾）溶於無水N,N -二甲基甲醯胺（2.0毫升），向該溶液中加入HATU（152毫克，0.40毫摩爾），二異丙基乙基胺（77毫克，0.60毫摩爾），室溫反應2小時。
反應結束，加水（10毫升）淬滅，乙酸乙酯萃取（40毫升×2次），合併有機相，依次用水（40毫升×2次）以及飽和食鹽水（50毫升）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓蒸除溶劑，所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：二氯甲烷/甲醇=30/1)。得到110毫克淡黃色油狀物(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(-4-(-(3-(羥甲基)環丁基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（收率78.2%）。LCMS: RT = 3.45 min, [M+H]+ = 937.28。
步驟G：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(3-(羥甲基)環丁基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image469
室溫下，向含有(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(-4-(-(3-(羥甲基)環丁基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（110毫克，0.12毫摩爾）的二氯甲烷（4.0毫升）溶液中加入三氟乙酸（1.0毫升），加畢，室溫反應1小時。
減壓濃縮，所得粗產物溶於二氯甲烷（1.0毫升）中，將其滴加入正己烷（10.0毫升）中，析出白色固體，抽濾，濾餅用正己烷洗滌，乾燥得到78毫克白色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(3-(羥甲基)環丁基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸三氟乙酸鹽。（收率74.5%）。LCMS: RT = 2.69 min, [M+H]+ = 781.08。1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.75 (s, 1H), 10.15 (s, 1H), 9.77 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.94 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.81 (d,J = 8.5 Hz, 1H), 7.77 (dd,J = 8.6, 2.2 Hz, 1H), 7.41–7.29 (m, 5H), 7.07 (d,J = 1.5 Hz, 1H), 5.43–5.30 (m, 1H), 3.70–3.58 (m, 13H), 3.38 (d,J = 5.1 Hz, 2H), 2.39–2.25 (m, 2H), 2.19–2.08 (m, 1H), 2.04–1.91 (m, 2H)。
實施例21
合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(四氫呋喃-3-基)甲基-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image233
具體合成路線如下：
步驟A：合成(四氫呋喃-3-基)甲基4-甲基苯磺酸酯
Figure 02_image472
室溫下，向含有（四氫呋喃-3-基）甲醇（1.00克，10.0毫摩爾）和三乙胺（3.04克，30.0毫摩爾）的二氯甲烷（20.0毫升）溶液中加入對甲基苯磺醯氯（2.86克，15.0毫摩爾），加畢，室溫反應5小時。
反應結束，用二氯甲烷（150毫升）稀釋，依次用水（80毫升）、飽和食鹽水（80毫升）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：正己烷/乙酸乙酯=4/1)。得到2.1克淡黃色油狀物(四氫呋喃-3-基)甲基4-甲基苯磺酸酯（收率81.9%）。LCMS: RT = 3.72 min, [M+H]+ = 257.07。
步驟B：合成 4-((四氫呋喃-3-基)甲基)哌嗪-2-酮
Figure 02_image474
室溫下，向含有哌嗪-2-酮（2.1克，21.0毫摩爾）和(四氫呋喃-3-基)甲基4-甲基苯磺酸酯（3.7克，14.0毫摩爾）的乙腈（50.0毫升）溶液中加入碳酸鉀（3.9克，28.0毫摩爾）和碘化鈉（105毫克，0.7毫摩爾），加畢，加熱至80 °C反應6小時。
反應結束，過濾，濾液減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：二氯甲烷/甲醇=10/1)。得到1.7克淡黃色油狀物 3-（3-氧代哌嗪-1-基）環丁烷-1-羧酸甲酯（收率66.7%）。LCMS: RT = 0.67 min, [M+H]+ = 185.13。
步驟C：合成 (S)-2-(4-(5-氯-2-(二烯丙基氨基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(四氫呋喃-3-基)甲基-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯
Figure 02_image475
氮氣保護下，向含有(S)-3-(4-溴苯基)-2-(4-(5-氯-2-(二烯丙基氨基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙酸叔丁酯（542 毫克，0.90毫摩爾）、3-(3-氧代哌嗪-1-基)環丁烷-1-羧酸甲酯(331毫克，1.8毫摩爾)的甲苯（4.5毫升）溶液中加入碘化亞銅（171毫克，0.90毫摩爾），碳酸銫（590毫克，1.8毫摩爾），N1 ,N2 -二甲基乙二胺（158毫克，1.8毫摩爾），加畢，加熱至110 °C反應過夜。
反應結束，加水（5毫升）淬滅，乙酸乙酯萃取（40毫升×2次），合併有機相，用飽和食鹽水（50毫升）洗，無水硫酸鈉乾燥，減壓蒸除溶劑，所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：二氯甲烷/甲醇=30/1)。得到400毫克淡黃色油狀物(S)-2-(4-(5-氯-2-(二烯丙基氨基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(四氫呋喃-3-基)甲基-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯（62.9%）。LCMS: RT = 3.67 min, [M+H]+ = 706.06。
步驟D：合成 (S)-2-(4-(2-氨基-5-氯苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(四氫呋喃-3-基)甲基-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯
Figure 02_image477
氮氣保護下，向含有(S)-2-(4-(5-氯-2-(二烯丙基氨基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(四氫呋喃-3-基)甲基-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯（400毫克，0.56毫摩爾）的二氯甲烷（4.0毫升）溶液中加入二甲基巴比妥酸（700毫克，4.48毫摩爾），四三苯基膦鈀（32毫克，0.027毫摩爾），加畢，加熱至40 °C反應過夜。
反應結束，用二氯甲烷（100毫升）稀釋，依次用飽和碳酸氫鈉（50毫升）、飽和食鹽水（50毫升）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓蒸除溶劑，所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：二氯甲烷/甲醇=30/1)。得到300毫克淡黃色油狀物 (S)-2-(4-(2-氨基-5-氯苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(四氫呋喃-3-基)甲基-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯（85.6%）。LCMS: RT = 3.08 min, [M+H]+ = 626.58。
步驟E：合成 (S)-2-(4-(5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(四氫呋喃-3-基)甲基-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁基酯
Figure 02_image479
氮氣保護下，向含有(S)-2-(4-(2-氨基-5-氯苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(四氫呋喃-3-基)甲基-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯（300毫克，0.48毫摩爾）乙酸（1.0毫升）溶液中加入原甲酸三乙酯（427毫克，2.88毫摩爾），疊氮化鈉（156毫克，2.4毫摩爾），加畢，加熱至80 °C反應2小時。
反應結束，加亞硝酸鈉（200毫克）淬滅，乙酸乙酯萃取（40毫升×2次），合併有機相，用飽和食鹽水（50毫升）洗，無水硫酸鈉乾燥，減壓蒸除溶劑，所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：二氯甲烷/甲醇=20/1)。得到200毫克淡黃色油狀物 (S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(四氫呋喃-3-基)甲基-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁基酯（收率61.4%）。LCMS: RT = 3.03 min, [M+H]+ = 679.32。
步驟F：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((四氫呋喃-3-基)甲基-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image481
室溫下，向含有(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(四氫呋喃-3-基)甲基-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁基酯（200毫克，0.29毫摩爾）的二氯甲烷（8.0毫升）溶液中加入三氟乙酸（2.0毫升），加畢，室溫反應2小時。減壓濃縮，所得粗產物直接用於下一步反應。LCMS: RT =1.57 min, [M-H]- = 621.11。
將上述粗產物和5-氨基-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（199毫克，0.60毫摩爾）溶於無水N,N -二甲基甲醯胺（3.0毫升），向該溶液中加入HATU（228毫克，0.60毫摩爾），二異丙基乙基胺（116毫克，0.90毫摩爾），室溫反應2小時。
反應結束，加水（10毫克）淬滅，乙酸乙酯萃取（40毫升×2次），合併有機相，依次用水（40毫升×2次）以及飽和食鹽水（50毫升）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓蒸除溶劑，所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：二氯甲烷/甲醇=50/1)。得到153毫克淡黃色油狀物 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((四氫呋喃-3-基)甲基-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（收率55.4%）。LCMS: RT = 3.76 min, [M+H]+ = 937.50。
步驟G：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(四氫呋喃-3-基)甲基-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image483
室溫下，向含有(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((四氫呋喃-3-基)甲基-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（153毫克，0.16毫摩爾）的二氯甲烷（4.0毫升）溶液中加入三氟乙酸（1.0毫升），加畢，室溫反應1小時。
減壓濃縮，所得粗產物溶於二氯甲烷（1.0毫升）中，將其滴加入正己烷（10.0毫升）中，析出白色固體，抽濾，濾餅用正己烷洗滌，乾燥得到98毫克白色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(四氫呋喃-3-基)甲基-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸三氟乙酸鹽。（收率67.2%）。LCMS: RT = 2.81 min, [M-H]- = 779.13。1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.74 (s, 1H), 10.15 (s, 1H), 9.77 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.94 (d,J = 2.2 Hz, 1H), 7.82 (d,J = 8.6 Hz, 1H), 7.77 (dd,J = 8.6, 2.2 Hz, 1H), 7.43–7.26 (m, 6H), 7.07 (d,J = 1.5 Hz, 1H), 5.46–5.30 (m, 1H), 4.23–3.52 (m, 15H), 3.45 (t,J = 8.4 Hz, 1H), 3.36 (dd,J = 14.4, 5.2 Hz, 1H), 3.14 (dd,J = 14.8, 10.0 Hz, 1H), 2.74-2.67 (m, 1H), 2.15-2.06 (m, 1H), 1.69-1.59 (m, 1H)。
實施例22
合成 (S)-5-(3-(4-(4-(羧基甲氧基)哌啶-1-甲醯氨基)苯基)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image235
具體合成路線如下：
步驟A：合成 (S)-5-(3-(4-(4-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙氧基)哌啶-1-甲醯胺基)苯基)-2-(4-(5-)氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image486
室溫下，向含有(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(-4-((苯氧基羰基)氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（100毫克，0.11毫摩爾）和叔丁基哌啶-4-基碳酸酯（277毫克，1.4毫摩爾）的四氫呋喃（6.0毫升）中滴加N,N -二異丙基乙胺（284毫克，2.2毫摩爾），滴畢，60 °C反應過夜。
反應結束，加水淬滅，混合液用乙酸乙酯（20毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（20毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：正己烷/乙酸乙酯=1/3)。得到50毫克白色固體(S)-5-(3-(4-(4-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙氧基)哌啶-1-甲醯胺基)苯基)-2-(4-(5-)氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（收率：45.0%）。LCMS: RT = 4.48 min, [M+H]+ = 1011.4。
步驟B：合成 (S)-5-(3-(4-(4-(羧基甲氧基)哌啶-1-甲醯氨基)苯基)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image488
室溫下，將(S)-5-(3-(4-(4-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙氧基)哌啶-1-甲醯胺基)苯基)-2-(4-(5-)氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（50毫克，0.05毫摩爾）加入二氯甲烷（5.0毫升）中，滴加三氟乙酸（1.0毫升），室溫反應3小時。
反應結束，蒸乾二氯甲烷並用油泵抽乾三氟乙酸，所得殘餘物用溶於二氯甲烷（1.0毫升）中，將其滴加入正己烷（10.0毫升）中，析出白色固體，抽濾，濾餅用正己烷洗滌，乾燥得到35毫克白色固體(S)-5-(3-(4-(4-(羧基甲氧基)哌啶-1-甲醯氨基)苯基)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸（收率：91.0%）。LCMS: RT = 3.25 min, [M-H]- = 797.26。1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.74 (s, 2H), 11.71 (s, 1H), 10.13 (s, 1H), 9.78 (s, 1H), 8.47 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.95 (d,J = 2.2 Hz, 1H), 7.82 (d,J = 8.6 Hz, 1H), 7.76 (dd,J = 8.6, 2.2 Hz, 1H), 7.50–7.35 (m, 3H), 7.32 (dd,J = 8.9, 1.8 Hz, 1H), 7.14 (d,J = 8.1 Hz, 2H), 7.06 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 5.30 (dd,J = 9.8, 5.8 Hz, 1H), 4.06 (s, 2H), 3.97–3.67 (m, 5H), 3.61–3.52 (m, 2H), 3.30–3.18 (m, 1H), 3.17–2.91 (m, 3H), 1.85 (dd,J = 11.2, 6.7 Hz, 2H), 1.42 (dd,J = 14.0, 6.9 Hz, 2H)。
實施例23
合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-((2-羥乙基)氨基甲醯基)哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image237
具體合成路線如下：
步驟A：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-((2-羥乙基)氨甲醯基)哌啶-1-甲醯氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image491
室溫下，向含有(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(-4-((苯氧基羰基)氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（133毫克，0.15毫摩爾）和N -(2-羥乙基)哌啶-4-甲醯胺鹽酸鹽（312毫克，1.5毫摩爾）的四氫呋喃（6.0毫升）中滴加N,N -二異丙基乙胺（387毫克，3.0毫摩爾），滴畢，60 °C反應過夜。
反應結束，加水淬滅，混合液用乙酸乙酯（20毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（20毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：DCM/MeOH=10/1)。得到55.3毫克白色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-((2-羥乙基)氨甲醯基)哌啶-1-甲醯氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(收率：38.1%)。LCMS: RT = 4.02 min, [M+H]+ = 968.23。
步驟B：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-((2-羥乙基)氨基甲醯基)哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image493
室溫下，將(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-((2-羥乙基)氨甲醯基)哌啶-1-甲醯氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（53.3毫克，0.06毫摩爾）加入二氯甲烷（4.0毫升）中，滴加三氟乙酸（1.0毫升），室溫反應3小時。
反應結束，蒸乾二氯甲烷並用油泵抽乾三氟乙酸，所得殘餘物用溶於二氯甲烷（1.0毫升）中，將其滴加入正己烷（10.0毫升）中，析出白色固體，抽濾，濾餅用正己烷洗滌，乾燥得到42.7毫克白色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-((2-羥乙基)氨基甲醯基)哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸（收率：95.7%。LCMS: RT = 3.07 min, [M+H]+ = 812.30。1 H NMR (500 MHz, DMSO) δ 10.59 (s, 1H), 9.40 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.47 (s, 1H), 6.13 (s, 1H), 5.69 (s, 1H), 5.64 (d,J = 2.2 Hz, 1H), 5.51 (d,J = 8.6 Hz, 1H), 5.49–5.43 (m, 1H), 5.09 (t,J = 7.5 Hz, 3H), 5.06 (s, 2H), 5.02 (dd,J = 9.0, 1.8 Hz, 2H), 4.84 (d,J = 7.8 Hz, 1H), 4.75 (d,J = 1.7 Hz, 1H), 3.44 (s, 1H), 2.99 (dd,J = 9.7, 5.9 Hz, 1H), 2.31 (t,J = 5.3 Hz, 3H), 1.80 (d,J = 13.8 Hz, 3H), 1.43 (s, 2H), 1.07 (dd,J = 11.8, 6.0 Hz, 1H), 0.97–0.88 (m, 1H), 0.82–0.77 (m, 2H), 0.70 (dd,J = 14.2, 9.3 Hz, 2H), 0.47 (t,J = 12.2 Hz, 3H), 0.23 (s, 1H)。
實施例24
合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-((2-羥乙基)(甲基)氨基甲醯基)哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image239
具體合成路線如下：
步驟A：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-((2-羥基乙基)(甲基)氨基甲醯基)哌啶-1-甲醯氨基)苯基)丙醯氨基)-1H-吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image496
室溫下，向含有(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(-4-((苯氧基羰基)氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（89毫克，0.1毫摩爾）和N -(2-羥乙基)-N-甲基哌啶-4-甲醯胺（300毫克，1.0毫摩爾）的四氫呋喃（6.0毫升）中滴加N,N -二異丙基乙胺（258毫克，2.0毫摩爾），滴畢，60 °C反應過夜。
反應結束，加水淬滅，混合液用乙酸乙酯（20毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（20毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：DCM/MeOH=10/1)。得到42.2毫克白色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-((2-羥基乙基)(甲基)氨基甲醯基)哌啶-1-甲醯氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（收率：43.2%）。LCMS: RT = 3.39 min, [M+H]+ = 982.38。
步驟B：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-((2-羥乙基)(甲基)氨基甲醯基)哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H-吲哚-2-羧酸
Figure 02_image498
室溫下，將(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-((2-羥基乙基)(甲基)氨基甲醯基)哌啶-1-甲醯氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（42.2毫克，0.04毫摩爾）加入二氯甲烷（4.0毫升）中，滴加三氟乙酸（1.0毫升），室溫反應3小時。
反應結束，蒸乾二氯甲烷並用油泵抽乾三氟乙酸，所得殘餘物用溶於二氯甲烷（1.0毫升）中，將其滴加入正己烷（10.0毫升）中，析出白色固體，抽濾，濾餅用正己烷洗滌，乾燥得到31.8毫克白色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-((2-羥乙基)(甲基)氨基甲醯基)哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸（收率：96.1%）。LCMS: RT = 2.75 min, [M-H]- = 826.23。1 H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.90 (s, 1H), 11.72 (s, 1H), 10.14 (s, 1H), 9.80 (s, 1H), 8.56–8.21 (m, 3H), 8.02 (s, 1H), 7.96 (t,J = 2.3 Hz, 1H), 7.84 (dd,J = 8.6, 4.5 Hz, 1H), 7.78 (dt,J = 8.6, 2.6 Hz, 1H), 7.47–7.37 (m, 3H), 7.35 (dd,J = 8.6, 2.7 Hz, 1H), 7.18 (t,J = 14.1 Hz, 2H), 7.09 (t,J = 8.4 Hz, 1H), 5.41–5.19 (m, 2H), 4.32–4.18 (m, 1H), 4.05 (dd,J = 24.7, 16.2 Hz, 3H), 3.75 (s, 2H), 3.66–3.52 (m, 2H), 2.67–2.56 (m, 3H), 2.05–1.93 (m, 2H), 1.87 (dd,J = 30.9, 12.8 Hz,2 H), 1.74–1.61 (m, 1H), 1.62–1.41 (m, 3H), 0.87 (t,J = 6.9 Hz, 1H)。
實施例25
合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-(4-羥基-2-甲基丁-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image241
具體合成路線如下：
步驟A：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-(4-羥基-2-甲基丁-2-基)脲基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image501
室溫下，向含有(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(-4-((苯氧基羰基)氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（133毫克，0.15毫摩爾）和3-氨基-3-甲基丁-1-醇（154毫克，0.75毫摩爾）的四氫呋喃（6.0毫升）中滴加N,N -二異丙基乙胺（387毫克，1.5毫摩爾），滴畢，60 °C反應過夜。
反應結束，加水淬滅，混合液用乙酸乙酯（20毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（20毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：DCM/MeOH=10/1)。得到56.6毫克白色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-(4-羥基-2-甲基丁-2-基)脲基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（收率：38.4%）。LCMS: RT = 3.39 min, [M+H]+ = 982.38。
步驟B：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3- (4-羥基-2-甲基丁-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image503
室溫下，將(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-(4-羥基-2-甲基丁-2-基)脲基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（55.6毫克，0.06毫摩爾）加入二氯甲烷（4.0毫升）中，滴加三氟乙酸（1.0毫升），室溫反應3小時。
反應結束，蒸乾二氯甲烷並用油泵抽乾三氟乙酸，所得殘餘物用溶於二氯甲烷（1.0毫升）中，將其滴加入正己烷（10.0毫升）中，析出白色固體，抽濾，濾餅用正己烷洗滌，乾燥得到43.1毫克白色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-(4-羥基-2-甲基丁-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸（收率：92.4%）。LCMS: RT = 3.28 min, [M-H]- = 741.15。1 H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.92 (s, 1H), 11.72 (s, 1H), 10.13 (s, 1H), 9.80 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.04 – 7.94 (m, 2H), 7.83 (d,J = 8.6 Hz, 1H), 7.78 (dd,J = 8.6, 2.3 Hz, 1H), 7.39 (d,J = 8.8 Hz, 1H), 7.37–7.29 (m, 2H), 7.10 (dd,J = 27.1, 4.3 Hz, 3H), 5.98 (s, 1H), 5.29 (dd,J = 9.9, 5.7 Hz, 2H), 4.38 (t,J = 4.9 Hz, 1H), 3.74 (s, 2H), 3.51 (dd,J = 12.0, 7.0 Hz, 2H), 3.27–3.15 (m, 1H), 3.01 (dd,J = 15.8, 10.4 Hz, 3H), 1.82 (t,J = 7.1 Hz, 2H), 1.27 (d,J = 13.5 Hz, 6H)。
實施例26
合成5–((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((2R，3R)-1,3-二羥基丁-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image243
具體合成路線如下：
步驟A：合成 5–((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((2S，3S)-1,3-二羥基丁-2-基)脲基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image506
室溫下，向含有(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(-4-((苯氧基羰基)氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（78毫克，0.2毫摩爾）和(2R,3S)-2-氨基丁烷-1,3-二醇（210毫克，2.0毫摩爾）的四氫呋喃（6.0毫升）中滴加N,N -二異丙基乙胺（5.6毫克，0.04毫摩爾），滴畢，60 °C反應過夜。
反應結束，加水淬滅，混合液用乙酸乙酯（20毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（20毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：DCM/MeOH=10/1)。得到65.7毫克白色固體5–((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((2S，3S)-1,3-二羥基丁-2-基)脲基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（收率：36.4%）。LCMS: RT = 4.05 min, [M+H]+ = 901.33。
步驟B：合成 5–((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((2R，3R)-1,3-二羥基丁-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image508
室溫下，將5–((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((2S，3S)-1,3-二羥基丁-2-基)脲基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（65.7毫克，0.07毫摩爾）加入二氯甲烷（4.0毫升）中，滴加三氟乙酸（1.0毫升），室溫反應3小時。
反應結束，蒸乾二氯甲烷並用油泵抽乾三氟乙酸，所得殘餘物用溶於二氯甲烷（1.0毫升）中，將其滴加入正己烷（10.0毫升）中，析出白色固體，抽濾，濾餅用正己烷洗滌，乾燥得到52.4毫克白色固體5–((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3- ((2R，3R)-1,3-二羥基丁-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸（收率：96.5%）。LCMS: RT = 3.09 min, [M+H]+ = 745.27。1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.93 (s, 2H), 11.73 (s, 1H), 10.15 (s, 1H), 9.80 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.96 (d,J = 2.3 Hz, 1H), 7.83 (d,J = 8.6 Hz, 1H), 7.77 (dd,J = 8.6, 2.3 Hz, 1H), 7.41–7.30 (m, 3H), 7.26–7.02 (m, 3H), 5.97 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 5.36–5.19 (m, 1H), 3.97 (dt,J = 14.1, 7.1 Hz, 2H), 3.39 (d,J = 11.8 Hz, 3H), 3.25–3.12 (m, 1H), 3.09–2.92 (m, 1H), 1.99 (dt,J = 7.9, 2.2 Hz, 1H), 1.24 (s, 4H), 1.06 (d,J = 6.4 Hz, 2H), 0.86 (t,J = 5.4 Hz, 1H)。
實施例27
合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-異丙基-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image245
具體合成路線如下：
步驟A：合成 (S)-2-氨基-3-(4-溴苯基)丙酸叔丁酯
Figure 02_image511
將(S)-2-氨基-3-(4-溴苯基)丙酸(10.0克，41.1毫摩爾）溶於丙酸叔丁酯(70.0毫升)的溶液中。隨後，向上述溶液中加入70%品質分數的高氯酸（6.1克，61.7毫摩爾），置換氮氣3遍。在室溫下攪拌過夜。
將反應液緩慢滴加到飽和碳酸氫鈉溶液（250毫升）淬滅反應。混合液用乙酸乙酯（200毫升×3次）萃取。合併有機相。有機相先用飽和食鹽水（100毫升×3次），然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。得到11.5克黃色油狀(S)-2-氨基-3-(4-溴苯基)丙酸叔丁酯(收率：93.50%)。LCMS：RT = 2.80 min，[M+H]+ = 300.05。
步驟B：合成 (S)-3-(4-溴苯基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸叔丁酯
Figure 02_image513
將(S)-2-氨基-3-(4-溴苯基)丙酸叔丁酯(11.50克，38.3毫摩爾）和氫氧化鈉（3.16克，76.6毫摩爾）溶於四氫呋喃（20毫升）和水（10毫升）的混合溶液中。隨後，向上述溶液中加入二碳酸二叔丁酯(10.30克,4.1毫摩爾)。在室溫下攪拌1小時。
向反應液中加入飽和氯化銨溶液（200毫升）。混合液用乙酸乙酯（100毫升×3次）萃取。合併有機相。有機相先用飽和食鹽水（50毫升×3次），然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/石油醚=1/10)。得到9.80克固體(S)-3-(4-溴苯基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸叔丁酯(收率：64.0%)。
步驟C：合成 4-異丙基哌嗪-2-酮
Figure 02_image515
將哌嗪-2-酮（11.0克，55.5毫摩爾）溶於甲醇（20.0毫升） 和乙酸（0.5毫升）的混合溶液中。隨後，向上述溶液中加入丙酮（6.78克，111.0毫摩爾）和氰基硼氫化鈉（4.19克，66.6毫摩爾）。在60 °C下攪拌過夜。
將反應液減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：甲醇/二氯甲烷=1/10)。得到3.00克白色固體4-異丙基哌嗪-2-酮(收率：38.0%)。LCMS：RT = 0.83 min，[M+H]+ = 143.11。
步驟D：合成 (S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(4-(4-異丙基-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯
Figure 02_image517
將(S)-3-(4-溴苯基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸叔丁酯（8.00克，20.0毫摩爾)和4-異丙基哌嗪-2-酮（5.68克，40.0摩爾）溶於甲苯（100毫升）的溶液中。隨後，向上述溶液中加入N,N -二甲基乙-1,2-二胺（3.50克,40.0毫摩爾），碘化亞銅（3.80克，20.0毫摩爾）和碳酸銫（13.00克，40.0毫摩爾）。在110 °C下攪拌18個小時。
向反應液中加入飽和氯化銨溶液（200毫升）。混合液用乙酸乙酯（150毫升×3次）萃取。合併有機相。有機相先用飽和食鹽水（100毫升×3次），然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/石油醚=1/10)。得到3.25克黃色固體(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(4-(4-異丙基-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯(收率：35.0%)。LCMS：RT = 3.55 min，[M+H]+ = 462.30。
步驟E：合成 (S)-2-氨基-3-(4-(4-異丙基-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯鹽酸鹽
Figure 02_image519
將(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(4-(4-異丙基-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯（4.00克，8.67毫摩爾）溶於乙酸乙酯（35.0毫升）中。隨後，向上述溶液中加入鹽酸乙酸乙酯溶液(2摩爾/升，8.6毫升，17.36毫摩爾)。在室溫下攪拌8小時。
將反應液減壓濃縮。得到2.50克固體(S)-2-氨基-3-(4-(4-異丙基-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯鹽酸鹽(收率：80.0%)。
步驟F：合成 (S)-2-(2-((5-氯-2-(二烯丙基氨基)苯基)氨基)-2-氧代乙醯氨基)-3-(4-(4-異丙基-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯
Figure 02_image521
將(S)-2-氨基-3-(4-(4-異丙基-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯鹽酸鹽(2.00克，5.5毫摩爾)和2-((5-氯-2-(二烯丙基氨基)苯基)氨基)-2-氧代乙酸（1.96克，6.6摩爾）溶於N,N -二甲基甲醯胺（20.0毫升）的溶液中。隨後，向上述溶液中加入2-(7-氧化苯並三氮唑)-N,N,N',N' -四甲基脲六氟磷酸鹽（3.20克，8.3毫摩爾），N,N -二異丙基乙胺（1.40克，11.0毫摩爾），在室溫下攪拌18個小時。
向反應液中加入飽和氯化銨溶液（100毫升）。混合液用乙酸乙酯（50毫升×3次）萃取。合併有機相。有機相先用飽和食鹽水（100毫升×3次），然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：甲醇/二氯甲烷=1/10)。得到1.80克白色固體(S)-2-(2-((5-氯-2-(二烯丙基氨基)苯基)氨基)-2-氧代乙醯氨基)-3-(4-(4-異丙基-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯(收率：50.0%)。LCMS：RT = 3.65 min，[M+H]+ = 638.30。
步驟G：合成 (S)-2-(4-(5-氯-2-(二烯丙基氨基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-異丙基-2-氧代哌嗪)-叔丁基嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯
Figure 02_image523
將(S)-2-(2-((5-氯-2-(二烯丙基氨基)苯基)氨基)-2-氧代乙醯氨基)-3-(4-(4-異丙基-2-氧代哌嗪-1-基)叔丁基基)苯基)丙酸叔丁酯（1.80克，2.8毫摩爾）和1,2-二溴乙烷（3.70克，19.7毫摩爾）溶於乙腈（20.0毫升）中。隨後，向上述溶液中加入碳酸鉀（2.70克，19.7毫摩爾）。在90 °C下攪拌過夜。
將反應液過濾，濾餅用乙腈（50毫升×3次）洗滌。濾液減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：甲醇/二氯甲烷=1/10)。得到500毫克白色油狀物(S）-2-(4-(5-氯-2-(二烯丙基氨基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-異丙基-2-氧代哌嗪)-叔丁基嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯(收率：37.0%)。LCMS：RT = 3.30 min，[M+H]+ = 664.32。
步驟H：合成 (S)-2-(4-(2-氨基-5-氯苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-異丙基-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯
Figure 02_image525
將(S)-2-(4-(5-氯-2-(二烯丙基氨基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-異丙基-2-氧代哌嗪)-1-基)苯基)丙酸叔丁酯(500毫克，0.86毫摩爾）和1,3-二甲基嘧啶-2,4,6(1H ,3H ,5H )-三酮烷(587毫克，4.30毫摩爾）溶於二氯甲烷（10.0毫升）中。隨後，向上述溶液中加入四(三苯基膦)鈀（321毫克，0.05毫摩爾）。在40 °C下攪拌過夜。
向反應液中加入飽和碳酸氫鈉溶液（20毫升）。混合液用乙酸乙酯（20毫升×3次）萃取。合併有機相。有機相先用飽和食鹽水（20毫升×3次），然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：甲醇/二氯甲烷=1/10)。得到290毫克黃色固體(S)-2-(4-(2-氨基-5-氯苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-異丙基-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯(收率：64.0%)。LCMS：RT = 2.91 min，[M+H]+ = 566.22。
步驟I：合成 (S)-2-(4-(5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-異丙基-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯
Figure 02_image527
將(S)-2-(4-(2-氨基-5-氯苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-異丙基-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯（150毫克，0.25毫摩爾）和原甲酸三乙酯（190毫克，1.28毫摩爾）溶於醋酸（5.0毫升）中。隨後，向上述溶液中加入疊氮化鈉（83毫克，1.28毫摩爾）。在70 °C下攪拌1小時。
向反應液中加入飽和碳酸氫鈉溶液（20毫升）。混合液用乙酸乙酯（10毫升×3次）萃取。合併有機相。有機相先用飽和食鹽水（10毫升×3次），然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。得到120毫克黃色固體(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-異丙基-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯(收率：73.0%)。LCMS：RT = 2.90 min，[M+H]+ = 637.24。
步驟J：合成 (S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-異丙基-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸
Figure 02_image529
將(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-異丙基-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯(120毫克，0.20毫摩爾)溶於二氯甲烷（4.0毫升）中。隨後，向上述溶液中加入三氟乙酸（1.0毫升）。在室溫下攪拌2小時。
將反應液減壓濃縮。得到100毫克黃色固體(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-異丙基-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸(收率：91.0%)。
步驟K：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-異丙基-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image531
將(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-異丙基-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸（100毫克，0.2毫摩爾）和5-氨基-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（69毫克，0.2摩爾）溶於N,N -二甲基甲醯胺（5.0毫升）的溶液中。隨後，向上述溶液中加入2-(7-氧化苯並三氮唑)-N,N,N',N' -四甲基脲六氟磷酸鹽（98毫克，0.3毫摩爾），N,N -二異丙基乙胺（44毫克，0.4毫摩爾），在室溫下攪拌18個小時。
向反應液中加入飽和氯化銨溶液（10毫升）。混合液用乙酸乙酯（10毫升×3次）萃取。合併有機相。有機相先用飽和食鹽水（10毫升×3次），然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。得到115毫克白色油狀物(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-異丙基-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(收率：75.0%)。LCMS：RT = 3.44 min，[M+H]+ =895.97。
步驟L：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-異丙基-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙醯胺基)-1H-吲哚-2-羧酸
Figure 02_image533
將(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-二叔丁酯(4-(4-異丙基-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（115毫克，0.10毫摩爾)溶於二氯甲烷（4.0毫升）中。隨後，向上述溶液中加入三氟乙酸（1.0毫升）。在室溫下攪拌2小時。
將反應液減壓濃縮。所得殘餘物用製備HPLC純化得到57.6毫克白色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-異丙基-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸(收率：60.0%)。LCMS：RT = 2.71 min，[M+H]+ = 739.40。
實施例28
合成(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(4-甲氧基環己基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙醯胺基)-1H-吲哚-2-羧酸
Figure 02_image247
具體合成路線如下：
步驟A：合成 (S)-3-(4-溴苯基)-2-(2-((5-氯-2-(二烯丙基氨基)苯基)氨基)-2-氧代乙醯氨基)丙酸叔丁酯
Figure 02_image536
將(S)-2-氨基-3-(4-溴苯基)丙酸叔丁酯(10.0克，33毫摩爾）和2-((5-氯-2-(二烯丙基氨基)苯基)氨基)-2-氧代乙酸（10.8克，36毫摩爾)溶於N,N -二甲基甲醯胺（100.0毫升）的溶液中。隨後，向上述溶液中加入2-(7-氧化苯並三氮唑)-N,N,N',N' -四甲基脲六氟磷酸鹽（19.0克，49毫摩爾），N,N -二異丙基乙胺（8.6毫克，66毫摩爾），在室溫下攪拌18個小時。
向反應液中加入飽和氯化銨溶液（200毫升）。混合液用乙酸乙酯（100毫升×3次）萃取。合併有機相。有機相先用飽和食鹽水（100毫升×3次），然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/1)。得到12克白色固體(S)-3-(4-溴苯基)-2-(2-((5-氯-2-(二烯丙基氨基)苯基)氨基)-2-氧代乙醯氨基)丙酸叔丁酯(收率：62.0%)。LCMS：RT = 3.90 min，[M+H]+ = 576.12。
步驟B：合成 (S)-3-(4-溴苯基)-2-(4-(5-氯-2-(二烯丙基氨基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙酸叔丁酯
Figure 02_image538
將(S)-3-(4-溴苯基)-2-(2-((5-氯-2-(二烯丙基氨基)苯基)氨基)-2-氧代乙醯氨基)丙酸叔丁酯（12.0克，20.8毫摩爾)溶於乙腈（100.0毫升）的溶液中。隨後，向上述溶液中加入1,2-二溴乙烷（27.0克，148.0毫摩爾），碳酸鉀（20.0克，145.0毫摩爾），在90 °C下攪拌18個小時。
將反應液冷卻到室溫，過濾。濾液減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/1)。得到3.7克無色油狀(S)-3-(4-溴苯基)-2-(4-(5-氯-2-(二烯丙基氨基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙酸叔丁酯(收率：29.5%)。LCMS：RT = 3.85 min，[M+H]+ = 602.13。
步驟C：合成 4-(4-甲基環己基)哌嗪-2-酮
Figure 02_image540
將哌嗪-2-酮(1.0克，9.9毫摩爾）溶於甲醇（10.0毫升）和乙酸（0.2毫升）的混合溶液中。隨後，向上述溶液中加入4-甲基環己-1-酮（2.6克，19.9毫摩爾）和氰基硼氫化鈉（1.3克，19.9毫摩爾）。在60 °C下攪拌過夜。
將反應液減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：甲醇/二氯甲烷=1/10)。得到780毫克白色固體4-(4-甲基環己基)哌嗪-2-酮(收率：36.0%)。LCMS：RT = 0.95 min，[M+H]+ = 213.15。
步驟D：合成 (S)-2-(4-(5-氯-2-(二烯丙基氨基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(4-甲氧基環己基))-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯
Figure 02_image542
將(S)-3-(4-溴苯基)-2-(4-(5-氯-2-(二烯丙基氨基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙酸叔丁酯（1.0克，1.66毫摩爾）和4-（4-甲基環己基）哌嗪-2-酮（704毫克，3.22摩爾）溶於甲苯（15.0毫升）的溶液中。隨後，向上述溶液中加入N,N -二甲基乙-1,2-二胺（292毫克，3.22毫摩爾），碘化亞銅（315毫克，1.66毫摩爾）和碳酸銫（1克，3.22毫摩爾）。在110 °C下攪拌18個小時。
向反應液中加入飽和氯化銨溶液（30毫升）。混合液用乙酸乙酯（15毫升×3次）萃取。合併有機相。有機相先用飽和食鹽水（10毫升×3次），然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/石油醚=1/10)。得到1.1克黃色固體(S)-2-(4-(5-氯-2-(二烯丙基氨基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(4-甲氧基環己基))-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯(收率：90.0%)。LCMS：RT = 3.44 min，[M+H]+ = 734.33。
步驟E：合成 (S)-2-(4-(2-氨基-5-氯苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(4-甲氧基環己基)-2-氧代哌嗪)-1-基)苯基)丙酸叔丁酯
Figure 02_image544
將(S)-2-(4-(5-氯-2-(二烯丙基氨基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(4-甲氧基環己基))-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯（1.1克，1.5毫摩爾）和1,3-二甲基嘧啶-2,4,6(1H ,3H ,5H )-三酮烷（1.6克，10.0毫摩爾）溶於二氯甲烷（10.0毫升）中。隨後，向上述溶液中加入四(三苯基膦)鈀（103毫克，0.06毫摩爾）。在40 °C下攪拌過夜。
向反應液中加入飽和碳酸氫鈉溶液（20毫升）。混合液用乙酸乙酯（20毫升×3次）萃取。合併有機相。有機相先用飽和食鹽水（20毫升×3次），然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：甲醇/二氯甲烷=1/10)。得到450毫克黃色固體(S)-2-(4-(2-氨基-5-氯苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-異丙基-2-氧代哌嗪-1-基)叔丁基酯基)苯基)丙酸叔丁酯(收率：45.0%)。LCMS：RT = 3.05 min，[M+H]+ = 654.30。
步驟F：合成 (S)-2-(4-(5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(4-甲氧基環己基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯
Figure 02_image546
將(S)-2-(4-(2-氨基-5-氯苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(4-甲氧基環己基)-2-氧代哌嗪)-1-基)苯基)丙酸叔丁酯（450毫克，0.68毫摩爾）和原甲酸三乙酯（713毫克，4.82毫摩爾）溶於醋酸（5.0毫升）中。隨後，向上述溶液中加入疊氮化鈉（313毫克，4.82毫摩爾）。在70 °C下攪拌1小時。
向反應液中加入飽和碳酸氫鈉溶液（40毫升）。混合液用乙酸乙酯（10毫升×3次）萃取。合併有機相。有機相先用飽和食鹽水（10毫升×3次），然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。得到330毫克黃色固體(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(4-甲氧基環己基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯(收率：71.0%)。LCMS：RT = 3.05 min，[M+H]+ = 707.31。
步驟G：合成 (S)-2-(4-(5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(4-(甲氧基環己基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸
Figure 02_image548
將(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(4-甲氧基環己基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯（330毫克，0.49毫摩爾)溶於二氯甲烷（4.0毫升）中。隨後，向上述溶液中加入三氟乙酸（1.0毫升）。在室溫下攪拌2小時。
將反應液減壓濃縮。得到280毫克黃色固體(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(4-(甲氧基環己基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸(收率：86.0%)。
步驟H：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(4-甲氧基環己基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image550
將(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(4-(甲氧基環己基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸（280毫克，0. 43毫摩爾）和5-氨基-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（157毫克0.47摩爾）溶於N,N -二甲基甲醯胺（10.0毫升）的溶液中。隨後，向上述溶液中加入2-(7-氧化苯並三氮唑)-N,N,N',N' -四甲基脲六氟磷酸鹽（245毫克，0. 64毫摩爾），N,N -二異丙基乙胺（111毫克，0.86毫摩爾），在室溫下攪拌18個小時。
向反應液中加入飽和氯化銨溶液（20毫升）。混合液用乙酸乙酯（10毫升×3次）萃取。合併有機相。有機相先用飽和食鹽水（10毫升×3次），然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。得到430毫克無色油狀物(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(4-甲氧基環己基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(收率：103.0%)。LCMS：RT = 3.57 min，[M+H]+ = 865.40。
步驟I：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4- (4-甲氧基環己基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image552
將(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(4-甲氧基環己基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（430毫克，0.44毫摩爾)溶於二氯甲烷（4.0毫升）中。隨後，向上述溶液中加入三氟乙酸（1.0毫升）。在室溫下攪拌2小時。
將反應液減壓濃縮。所得殘餘物用製備HPLC純化得到34.2毫克白色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(4-甲氧基環己基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸 (收率：10.0%)。LCMS：RT = 2.83 min，[M+H]+ = 809.28。1 H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.91 (s, 1H), 11.73 (s, 1H), 10.09 (d,J = 38.0 Hz, 2H), 9.76 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.94 (d,J = 1.7 Hz, 1H), 7.81 (d,J = 8.6 Hz, 1H), 7.77 (dd,J = 8.6, 2.2 Hz, 1H), 7.36 (dt,J = 19.8, 8.6 Hz, 6H), 7.06 (t,J = 4.0 Hz, 1H), 5.38 (s, 1H), 3.44-3.29 (m, 4H), 3.23 (t,J = 8.0 Hz, 4H), 3.13 (dt,J = 21.6, 10.9 Hz, 2H), 2.13 (d,J = 13.2 Hz, 2H), 2.04–1.80 (m, 3H), 1.65 (t,J = 51.2 Hz, 3H), 1.44 (t,J = 13.0 Hz, 2H), 1.33–1.09 (m, 2H)。
實施例29
合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(2-甲氧基乙基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image249
具體合成路線如下：
步驟A：合成 4-(2-甲氧基乙基)哌嗪-2-酮
Figure 02_image555
將哌嗪-2-酮（2.0克，20.0毫摩爾）溶於乙腈（20.0毫升）中。隨後，向上述溶液中加入1-溴-2-甲氧基乙烷（5.6克，40.0毫摩爾）和碳酸鉀（5.5克，40.0毫摩爾）。在100 °C下攪拌過夜。
將反應液減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：甲醇/二氯甲烷=1/10)。得到800毫克白色固體4-(2-甲氧基乙基)哌嗪-2-酮(收率：25.0%)。LCMS：RT = 0.90 min，[M+H]+ = 159.15。
步驟B：合成 (S)-2-(4-(5-氯-2-(二烯丙基氨基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(2-甲氧基乙基)-)2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯
Figure 02_image557
將(S)-3-(4-溴苯基)-2-(4-(5-氯-2-(二烯丙基氨基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙酸叔丁酯(1.5克，2.5毫摩爾）和4-(2-甲氧基乙基）哌嗪-2-酮（767毫克，4.98毫摩爾）溶於甲苯（15.0毫升）的溶液中。隨後，向上述溶液中加入N，N-二甲基乙-1,2-二胺（438毫克，4.98毫摩爾），碘化亞銅（473毫克，2.50毫摩爾）和碳酸銫（1.62克，4.98毫摩爾）。在110 °C下攪拌18個小時。
向反應液中加入飽和氯化銨溶液（30毫升）。混合液用乙酸乙酯（15毫升×3次）萃取。合併有機相。有機相先用飽和食鹽水（10毫升×3次），然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/石油醚=1/10)。得到700毫克黃色固體(S)-2-(4-(5-氯-2-(二烯丙基氨基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(2-甲氧基乙基)-)2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯(收率：48.0%)。LCMS：RT = 3.36 min，[M+H]+ = 680.31。
步驟C：合成 (S)-2-(4-(2-氨基-5-氯苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(2-甲氧基乙基)-2-氧代哌嗪)-1-基)苯基)丙酸叔丁酯
Figure 02_image559
將(S)-2-(4-(5-氯-2-(二烯丙基氨基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(2-甲氧基乙基)-)2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯（700毫克，1.0毫摩爾）和1,3-二甲基嘧啶-2,4,6(1H ,3H ,5H )-三酮烷（964毫克，6.0毫摩爾）溶於二氯甲烷（10.0毫升）中。隨後，向上述溶液中加入四(三苯基膦)鈀（47毫克，0.04毫摩爾）。在40 °C下攪拌過夜。
向反應液中加入飽和碳酸氫鈉溶液（20毫升）。混合液用乙酸乙酯（20毫升×3次）萃取。合併有機相。有機相先用飽和食鹽水（20毫升×3次），然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：甲醇/二氯甲烷=1/10)。得到500毫克黃色固體(S)-2-(4-(2-氨基-5-氯苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(2-甲氧基乙基)-2-氧代哌嗪)-1-基)苯基)丙酸叔丁酯(收率：80.0%)。LCMS：RT = 2.95 min，[M+H]+ = 600.15。
步驟D：合成 (S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(2-甲氧基乙基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯
Figure 02_image561
將(S)-2-(4-(2-氨基-5-氯苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(2-甲氧基乙基)-2-氧代哌嗪)-1-基)苯基）丙酸叔丁酯（500毫克，0.83毫摩爾）和原甲酸三乙酯（617毫克，4.17毫摩爾）溶於醋酸（5.0毫升）中。隨後，向上述溶液中加入疊氮化鈉（270毫克，4.17毫摩爾）。在70 °C下攪拌1小時。
向反應液中加入飽和碳酸氫鈉溶液（40毫升）。混合液用乙酸乙酯（10毫升×3次）萃取。合併有機相。有機相先用飽和食鹽水（10毫升×3次），然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。得到420毫克黃色固體(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(2-甲氧基乙基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯(收率：77.0%)。LCMS：RT = 2.95 min，[M+H]+ = 653.25。
步驟E：合成 (S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(2-(甲氧基乙基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸
Figure 02_image563
將(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(2-甲氧基乙基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯（200毫克，0.4毫摩爾)溶於二氯甲烷（4.0毫升）中。隨後，向上述溶液中加入三氟乙酸（1.0毫升）。在室溫下攪拌2小時。
將反應液減壓濃縮。得到180毫克黃色固體(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(2-(甲氧基乙基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸（收率：95.0%）。
步驟F：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(2-甲氧基乙基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image565
將(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(2-(甲氧基乙基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸（180毫克，0.30毫摩爾）和5-氨基-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（361毫克0. 36摩爾）溶於N,N -二甲基甲醯胺（10.0毫升）的溶液中。隨後，向上述溶液中加入2-(7-氧化苯並三氮唑)-N,N,N',N' -四甲基脲六氟磷酸鹽（171毫克，0. 45毫摩爾），N,N -二異丙基乙胺（77毫克，0.60毫摩爾），在室溫下攪拌18個小時。
向反應液中加入飽和氯化銨溶液（20毫升）。混合液用乙酸乙酯（10毫升×3次）萃取。合併有機相。有機相先用飽和食鹽水（10毫升×3次），然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：甲醇/二氯甲烷=1/10)。得到17毫克無色油狀物(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(2-甲氧基乙基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(收率：6.1%)。LCMS：RT = 3.49 min，[M+H]+ = 810.35。
步驟G：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(2-甲氧基乙基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image567
將(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(2-甲氧基乙基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（170毫克，0.018毫摩爾)溶於二氯甲烷（4.0毫升）中。隨後，向上述溶液中加入三氟乙酸（1.0毫升）。在室溫下攪拌2小時。
將反應液減壓濃縮。所得殘餘物用製備HPLC純化得到12毫克白色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4- (2-甲氧基乙基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸(收率：81.0%)。LCMS：RT = 2.73 min，[M+H]+ = 755.24。
實施例30
合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(2-氧代-4-(四氫-2H -吡喃-4-基)哌嗪-1-基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸化合物
Figure 02_image251
具體合成路線如下：
步驟A：合成 4-(四氫-2H -吡喃-4-基)哌嗪-2-酮
Figure 02_image570
將哌嗪-2-酮（500毫克，2.5毫摩爾)溶於甲醇（10.0毫升)和乙酸（0.2毫升）的混合溶液中。隨後，向上述溶液中加入四氫-4H -吡喃-4-酮（788毫克，5.0毫摩爾）和氰基硼氫化鈉（317毫克，5.0毫摩爾）。在60 °C下攪拌過夜。
將反應液減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：甲醇/二氯甲烷=1/10)。得到420毫克白色固體4-(4-甲基環己基)哌嗪-2-酮(收率：69.0%)。LCMS：RT = 0.96 min，[M+H]+ = 185.12。
步驟B：合成 (S)-2-(4-(5-氯-2-(二烯丙基氨基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(2-氧代-4-(四氫-2H -吡喃-4-基)哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯
Figure 02_image572
將(S)-3-(4-溴苯基)-2-(4-(5-氯-2-(二烯丙基氨基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙酸叔丁酯（1.0克，1.6毫摩爾)和4-（四氫-2H -吡喃-4-基)哌嗪-2-酮（611毫克，3.3毫摩爾）溶於甲苯（15.0毫升）的溶液中。隨後，向上述溶液中加入N,N -二甲基乙-1,2-二胺（292毫克, 3.3毫摩爾），碘化亞銅（315毫克，1.6毫摩爾）和碳酸銫（1.08克，3.3毫摩爾）。在110 °C下攪拌18個小時。
向反應液中加入飽和氯化銨溶液（30毫升）。混合液用乙酸乙酯（15毫升×3次）萃取。合併有機相。有機相先用飽和食鹽水（10毫升×3次），然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/石油醚=1/10)。得到590毫克黃色固體(S)-2-(4-(5-氯-2-(二烯丙基氨基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(2-氧代-4-(四氫-2H -吡喃-4-基)哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯(收率：50%)。LCMS：RT = 3.31 min，[M+H]+ = 706.33。
步驟C：合成 (S)-2-(4-(2-氨基-5-氯苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(2-氧代-4-(四氫-2H -吡喃-4-基)哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯
Figure 02_image574
將(S)-2-(4-(5-氯-2-(二烯丙基氨基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(2-氧代-4-(四氫-2H -吡喃-4-基)哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯（590毫克，0.83毫摩爾）和1,3-二甲基嘧啶-2,4,6(1H ,3H ,5H )-三酮烷（913毫克，5.00毫摩爾）溶於二氯甲烷（10.0毫升）中。隨後，向上述溶液中加入四(三苯基膦)鈀（57毫克，0.05毫摩爾）。在40 °C下攪拌過夜。
向反應液中加入飽和碳酸氫鈉溶液（20毫升）。混合液用乙酸乙酯（20毫升×3次）萃取。合併有機相。有機相先用飽和食鹽水（20毫升×3次），然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：甲醇/二氯甲烷=1/10)。得到450毫克黃色固體(S)-2-(4-(2-氨基-5-氯苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(2-氧代-4-(四氫-2H -吡喃-4-基)哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯(收率：86.0%)。LCMS：RT = 2.93 min，[M+H]+ = 626.30。
步驟D：合成 (S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(2-氧代-4-(四氫-2H -吡喃-4-基)哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯
Figure 02_image576
將(S)-2-(4-(2-氨基-5-氯苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(2-氧代-4-(四氫-2H -吡喃-4-基)哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯（450毫克，0.71毫摩爾)和原甲酸三乙酯（840毫克，5.00毫摩爾）溶於醋酸（5.0毫升）中。隨後，向上述溶液中加入疊氮化鈉（327毫克，5.00毫摩爾）。在70 °C下攪拌1小時。
向反應液中加入飽和碳酸氫鈉溶液（40毫升）。混合液用乙酸乙酯（10毫升×3次）萃取。合併有機相。有機相先用飽和食鹽水（10毫升×3次），然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。得到400毫克黃色固體(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(2-氧代-4-(四氫-2H -吡喃-4-基)哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯(收率：86.0%)。LCMS：RT = 2.92 min，[M+H]+ = 679.27。
步驟E：合成 (S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(2-氧代-4-(四氫-2H -吡喃-4-基)哌嗪-1-基)苯基)丙酸
Figure 02_image578
將(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(2-氧代-4-(四氫-2H -吡喃-4-基)哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯（400毫克，0.6毫摩爾）溶於二氯甲烷（4.0毫升）中。隨後，向上述溶液中加入三氟乙酸（1.0毫升）。在室溫下攪拌2小時。
將反應液減壓濃縮。得到360毫克黃色固體(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(2-氧代-4-(四氫-2H -吡喃-4-基)哌嗪-1-基)苯基)丙酸收率：93.0%)。
步驟F：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(2-氧代-4-(四氫-2H -吡喃-4-基)哌嗪-1-基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image580
將(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(2-氧代-4-(四氫-2H -吡喃-4-基)哌嗪-1-基)苯基)丙酸（360毫克，0.55毫摩爾)和5-氨基-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（202毫克0.60摩爾）溶於N,N -二甲基甲醯胺（10.0毫升）的溶液中。隨後，向上述溶液中加入2-(7-氧化苯並三氮唑)-N,N,N',N' -四甲基脲六氟磷酸鹽（315毫克，0.82毫摩爾），N,N -二異丙基乙胺（142毫克，1.10毫摩爾），在室溫下攪拌18個小時。
向反應液中加入飽和氯化銨溶液（20毫升）。混合液用乙酸乙酯（10毫升×3次）萃取。合併有機相。有機相先用飽和食鹽水（10毫升×3次），然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：甲醇/二氯甲烷=1/10)。得到380毫克無色油狀物(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(2-氧代-4-(四氫-2H -吡喃-4-基)哌嗪-1-基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(收率：71%)。LCMS：RT = 3.47 min，[M+H]+ = 837.37。
步驟G：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(2-氧代-4-(四氫-2H -吡喃-4-基)哌嗪-1-基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image582
將(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(2-氧代-4-(四氫-2H -吡喃-4-基)哌嗪-1-基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（380毫克，0.4毫摩爾）溶於二氯甲烷（4.0毫升）中。隨後，向上述溶液中加入三氟乙酸（1.0毫升）。在室溫下攪拌2小時。
將反應液減壓濃縮。所得殘餘物用製備HPLC純化得到52毫克白色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(2-氧代-4-(四氫-2H -吡喃-4-基)哌嗪-1-基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸(收率：19.0%)。LCMS：RT = 2.74 min，[M+H]+ = 781.25。1 H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.91 (s, 1H), 11.72 (s, 1H), 10.13 (s, 1H), 9.75 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.94 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 7.81 (d,J = 8.6 Hz, 1H), 7.77 (dd,J = 8.6, 2.2 Hz, 1H), 7.42–7.30 (m, 5H), 7.07 (d,J = 1.7 Hz, 1H), 5.38 (s, 1H), 3.98 (d,J = 9.5 Hz, 3H), 3.35–3.29 (m, 3H), 3.13 (dd,J = 14.4, 10.2 Hz, 2H), 2.94 (s, 3H), 2.00 (d,J = 7.5 Hz, 3H), 1.65 (s, 2H), 1.24 (s, 2H)。
實施例31
合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(2-氧代-4-(四氫-2H -吡喃-4-基)哌嗪-1-基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image253
具體合成路線如下：
步驟A：合成 4-(4-羥基環己基)哌嗪-2-酮
Figure 02_image585
將哌嗪-2-酮（1.5克，7.5毫摩爾）溶於甲醇（20.0毫升）和乙酸（0.4毫升）的混合溶液中。隨後，向上述溶液中加入4-羥基環己烷-1-酮（1.7克，15.0毫摩爾）和氰基硼氫化鈉（951毫克，15.0毫摩爾）。在60 °C下攪拌過夜。
將反應液減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：甲醇/二氯甲烷=1/10)。得到750毫克白色固體4-(4-甲基環己基)哌嗪-2-酮(收率：50.0%)。LCMS：RT = 0.82，[M+H]+ = 199.14。
步驟B：合成 (S)-2-(4-(5-氯-2-(二烯丙基氨基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(4-羥基環己基))-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯
Figure 02_image587
將(S)-3-(4-溴苯基)-2-(4-(5-氯-2-(二烯丙基氨基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙酸叔丁酯(600毫克，0.99毫摩爾)和4-(4-羥基環己基）哌嗪-2-酮（394毫克，1.99毫摩爾）溶於甲苯（15毫升）的溶液中。隨後，向上述溶液中加入N,N -二甲基乙-1,2-二胺（175毫克,1.99毫摩爾），碘化亞銅（189毫克，0.99毫摩爾）和碳酸銫（645毫克，1.99毫摩爾）。在110 °C下攪拌18個小時。
向反應液中加入飽和氯化銨溶液（30毫升）。混合液用乙酸乙酯（15毫升×3次）萃取。合併有機相。有機相先用飽和食鹽水（10毫升×3次），然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/石油醚=1/10)。得到460毫克黃色固體(S)-2-(4-(5-氯-2-(二烯丙基氨基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(4-羥基環己基))-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯(收率：64.0%)。LCMS：RT = 3.10 min，[M+H]+ = 720.34。
步驟C：合成 (S)-2-(4-(2-氨基-5-氯苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(4-羥基環己基)-2-氧代哌嗪)-1-基)苯基)丙酸叔丁酯
Figure 02_image589
將(S)-2-(4-(5-氯-2-(二烯丙基氨基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(4-羥基環己基))-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯（550毫克，0.76毫摩爾）和1,3-二甲基嘧啶-2,4,6(1H ,3H ,5H )-三酮烷（834毫克，5.30毫摩爾）溶於二氯甲烷（10.0毫升）中。隨後，向上述溶液中加入四(三苯基膦)鈀（52毫克，0.045毫摩爾）。在40 °C下攪拌過夜。
向反應液中加入飽和碳酸氫鈉溶液（20毫升）。混合液用乙酸乙酯（20毫升×3次）萃取。合併有機相。有機相先用飽和食鹽水（20毫升×3次），然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：甲醇/二氯甲烷=1/10)。得到460毫克黃色固體(S)-2-(4-(2-氨基-5-氯苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(4-羥基環己基)-2-氧代哌嗪)-1-基)苯基)丙酸叔丁酯(收率：94.0%)。LCMS：RT = 2.84 min，[M+H]+ = 640.28。
步驟D：合成 (S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(4-羥基環己基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯
Figure 02_image591
將(S)-2-(4-(2-氨基-5-氯苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(4-羥基環己基)-2-氧代哌嗪)-1-基)苯基)丙酸叔丁酯（450毫克，0.7毫摩爾）和原甲酸三乙酯（1000毫克，7.0毫摩爾）溶於醋酸（5.0毫升）中。隨後，向上述溶液中加入疊氮化鈉（456毫克，7.0毫摩爾）。在70 °C下攪拌1小時。
向反應液中加入飽和碳酸氫鈉溶液（40毫升）。混合液用乙酸乙酯（10毫升×3次）萃取。合併有機相。有機相先用飽和食鹽水（10毫升×3次），然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。得到110毫克黃色固體(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(4-羥基環己基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯(收率：22.0%)。LCMS：RT = 2.83 min，[M+H]+ = 693.28。
步驟E：合成 (S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(4-羥基環己基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸
Figure 02_image593
將(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(4-羥基環己基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯（110毫克，0.15毫摩爾）溶於二氯甲烷（4.0毫升）中。隨後，向上述溶液中加入三氟乙酸（1.0毫升）。在室溫下攪拌2小時。
將反應液減壓濃縮。得93毫克黃色固體(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(4-羥基環己基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸(收率：92.0%)。
步驟F：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(4-羥基環己基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-2-羧酸叔丁酯
Figure 02_image595
將(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(4-羥基環己基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙酸（83毫克，0.13毫摩爾）和5-氨基-1H -吲哚-2-羧酸叔丁酯（36毫克0.15摩爾）溶於N,N -二甲基甲醯胺（10.0毫升）的溶液中。隨後，向上述溶液中加入2-(7-氧化苯並三氮唑)-N,N,N',N' -四甲基脲六氟磷酸鹽（74毫克，0.19毫摩爾），N,N -二異丙基乙胺（33毫克，0.26毫摩爾），在室溫下攪拌18個小時。
向反應液中加入飽和氯化銨溶液（20毫升）。混合液用乙酸乙酯（10毫升×3次）萃取。合併有機相。有機相先用飽和食鹽水（10毫升×3次），然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：甲醇/二氯甲烷=1/10)。得到65毫克無色油狀物(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(4-羥基環己基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-2-羧酸叔丁酯(收率：59.0%)。LCMS：RT = 3.13 min，[M+H]+ = 851.33。
步驟G：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(4-羥基環己基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸化合物
Figure 02_image597
將(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(4-羥基環己基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-2-羧酸叔丁酯（65毫克，0.07毫摩爾)溶於二氯甲烷（4.0毫升）中。隨後，向上述溶液中加入三氟乙酸（1.0毫升）。在室溫下攪拌2小時。
將反應液減壓濃縮。所得殘餘物用製備HPLC純化得到50毫克白色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(4-羥基環己基)-2-氧代哌嗪-1-基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸化合物(收率：83.0%)。LCMS：RT = 2.33 min，[M+H]+ = 795.27。1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.74 (s, 1H), 10.14 (s, 1H), 9.77 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.94 (d,J = 1.8 Hz, 1H), 7.82 (d,J = 8.6 Hz, 1H), 7.78 (dd,J = 8.7, 2.2 Hz, 1H), 7.42–7.30 (m, 6H), 7.08 (d,J = 1.9 Hz, 1H), 5.44-5.36 (m, 1H), 4.12-3.13 (m, 13H), 3.13 (dd,J = 14.8, 10.4 Hz, 1H), 2.07-2.00 (m, 1H), 1.96-1.91 (m, 1H), 1.86-1.75 (m, 3H), 1.61-1.41 (m, 3H)。
實施例32
合成 5-((2S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(2-氧代-4-(四氫-2H -吡喃-3-基)哌嗪-1-基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image255
具體合成路線如下：
步驟A：合成 4-(四氫-2H -吡喃-3-基)哌嗪-2-酮
Figure 02_image600
將哌嗪-2-酮（500毫克，4.9毫摩爾）溶於甲醇（10.0毫升） 和乙酸（0.2毫升）的混合溶液中。隨後，向上述溶液中加入二氫-2H -吡喃-3(4H )-酮（1.0克，10.0毫摩爾）和氰基硼氫化鈉（627毫克，10.0毫摩爾）。在60 °C下攪拌過夜。
將反應液減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：甲醇/二氯甲烷=1/10)。得到400毫克白色固體4-(四氫-2H -吡喃-3-基)哌嗪-2-酮(收率：43.0%)。LCMS：RT = 1.04 min，[M+H]+ = 185.12。
步驟B：合成 (2S)-2-(4-(5-氯-2-(二烯丙基氨基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(2-氧代-4-(四氫)-2H -吡喃-3-基)哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯
Figure 02_image602
將(S)-3-(4-溴苯基)-2-(4-(5-氯-2-(二烯丙基氨基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙酸叔丁酯（600毫克，0.99毫摩爾）和4-(四氫-2H -吡喃-3-基)哌嗪-2-酮（370毫克，1.99毫摩爾）溶於甲苯（15.0毫升）的溶液中。隨後，向上述溶液中加入N,N -二甲基乙-1,2-二胺（175毫克，1.99毫摩爾），碘化亞銅（189毫克，0.99毫摩爾）和碳酸銫（645毫克，1.99毫摩爾）。在110 °C下攪拌18個小時。
向反應液中加入飽和氯化銨溶液（30毫升），混合液用乙酸乙酯（15毫升×3次）萃取，合併有機相。有機相先用飽和食鹽水（10毫升×3次），然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/石油醚=1/10)。得到370毫克黃色固體(2S)-2-(4-(5-氯-2-(二烯丙基氨基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(2-氧代-4-(四氫)-2H -吡喃-3-基)哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯(收率：52.0%)。LCMS：RT = 3.48 min，[M+H]+ = 706.33。
步驟C：合成 (2S)-2-(4-(2-氨基-5-氯苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(2-氧代-4-(四氫-2H -吡喃-3-基)哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯
Figure 02_image604
將(2S)-2-(4-(5-氯-2-(二烯丙基氨基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(2-氧代-4-(四氫)-2H -吡喃-3-基)哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯（370毫克，0.52毫摩爾)和1,3-二甲基嘧啶-2,4,6(1H ,3H ,5H )-三酮烷（572毫克，3.6毫摩爾)溶於二氯甲烷（10.0毫升）中。隨後，向上述溶液中加入四(三苯基膦)鈀（36毫克，0.031毫摩爾）。在40 °C下攪拌過夜。
向反應液中加入飽和碳酸氫鈉溶液（20毫升）。混合液用乙酸乙酯（20毫升×3次）萃取。合併有機相。有機相先用飽和食鹽水（20毫升×3次），然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：甲醇/二氯甲烷=1/10)。得到260毫克黃色固體(2S)-2-(4-(2-氨基-5-氯苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(2-氧代-4-(四氫-2H -吡喃-3-基)哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯(收率：79.0%)。LCMS：RT = 3.06 min，[M+H]+ = 626.27。
步驟D：合成 (2S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(2-氧代-4-(四氫-2H -吡喃-3-基)哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯
Figure 02_image606
將(2S)-2-(4-(2-氨基-5-氯苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(2-氧代-4-(四氫-2H -吡喃-3-基)哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯（260毫克，0.4毫摩爾）和原甲酸三乙酯（430毫克，2.9毫摩爾）溶於醋酸（5.0毫升）中。隨後，向上述溶液中加入疊氮化鈉（188毫克，2.9毫摩爾）。在70 °C下攪拌1小時。
向反應液中加入飽和碳酸氫鈉溶液（40毫升）。混合液用乙酸乙酯（10毫升×3次）萃取。合併有機相。有機相先用飽和食鹽水（10毫升×3次），然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。得到80毫克黃色固體(2S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(2-氧代-4-(四氫-2H -吡喃-3-基)哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯(收率：28.0%)。LCMS：RT = 3.05 min，[M+H]+ = 679.27。
步驟E：合成 (2S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(2-氧代-4-(四氫-2H -吡喃-3-基)哌嗪-1-基)苯基)丙酸
Figure 02_image608
將(2S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(2-氧代-4-(四氫-2H -吡喃-3-基)哌嗪-1-基)苯基)丙酸叔丁酯（80毫克，0.11毫摩爾）溶於二氯甲烷（4.0毫升）中。隨後，向上述溶液中加入三氟乙酸（1.0毫升）。在室溫下攪拌2小時。
將反應液減壓濃縮。得65毫克黃色固體(2S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(2-氧代-4-(四氫-2H -吡喃-3-基)哌嗪-1-基)苯基)丙酸(收率：89.0%)。
步驟F：合成 5-((2S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(2-氧代-4-(四氫-2H -吡喃-3-基)哌嗪-1-基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-2-羧酸叔丁酯
Figure 02_image610
將(2S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(2-氧代-4-(四氫-2H -吡喃-3-基)哌嗪-1-基)苯基)丙酸（65毫克，0.10毫摩爾)和5-氨基-1H-吲哚-2-羧酸叔丁酯（41毫克0.12摩爾）溶於N,N -二甲基甲醯胺（10.0毫升）的溶液中。隨後，向上述溶液中加入2-(7-氧化苯並三氮唑)-N,N,N',N' -四甲基脲六氟磷酸鹽（59毫克，0.15毫摩爾），N,N -二異丙基乙胺（27毫克，0.20摩爾），在室溫下攪拌18個小時。
向反應液中加入飽和氯化銨溶液（20毫升）。混合液用乙酸乙酯（10毫升×3次）萃取。合併有機相。有機相先用飽和食鹽水（10毫升×3次），然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：甲醇/二氯甲烷=1/10)。得到25毫克無色油狀物5-((2S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(2-氧代-4-(四氫-2H -吡喃-3-基)哌嗪-1-基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-2-羧酸叔丁酯(收率：25.7%)。LCMS：RT = 3.22 min，[M+H]+ = 837.32。
步驟G：合成 5-((2S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(2-氧代-4-(四氫-2H -吡喃-3-基)哌嗪-1-基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image612
將5-((2S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(2-氧代-4-(四氫-2H -吡喃-3-基)哌嗪-1-基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-2-羧酸叔丁酯（25毫克，0.026毫摩爾）溶於二氯甲烷（4.0毫升）中。隨後，向上述溶液中加入三氟乙酸（1.0毫升）。在室溫下攪拌2小時。
將反應液減壓濃縮。所得殘餘物用製備HPLC純化得到15毫克白色固體5-((2S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(2-氧代-4-(四氫-2H -吡喃-3-基)哌嗪-1-基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸(收率：65.0%)。LCMS：RT = 2.83 min，[M+H]+ = 781.25。1 H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.94 (s, 1H), 11.74 (s, 1H), 10.15 (s, 1H), 9.76 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.94 (d,J = 2.1 Hz, 1H), 7.81 (d,J = 8.6 Hz, 1H), 7.77 (dd,J = 8.6, 2.2 Hz, 1H), 7.41–7.27 (m, 6H), 7.07 (d,J = 1.7 Hz, 1H), 5.38 (brs, 1H), 3.97-3.13(m, 9H), 3.13 (dd,J = 14.3, 10.1 Hz, 1H), 2.54 (s, 2H), 2.08 (m, 2H), 1.99 (m, 2H), 1.76 (m, 2H), 1.60–1.38 (m, 3H)。
實施例33
合成(S)-6-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image257
具體合成路線如下：
步驟A：合成6-硝基-1H -吲哚-2-羧酸叔丁酯
Figure 02_image615
N2保護、冰浴下，向含有6-硝基-1H -吲哚-2-羧酸（200毫克，0.97毫摩爾）的醋酸叔丁酯（25.0毫升）中滴加70%的高氯酸(147毫克，1.46毫摩爾)，滴畢，室溫反應2小時。
反應結束，加乙酸乙酯稀釋，用飽和碳酸鈉調pH至9，分液，混合液用乙酸乙酯（20毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=5/1)。得到200毫克黃色油狀物6-硝基-1H -吲哚-2-羧酸叔丁酯(收率：74.0%)。LCMS: RT = 4.20 min, [M-H]- = 261.13。
步驟B：合成6-氨基-1H -吲哚-2-羧酸叔丁酯
Figure 02_image617
室溫下，將6-硝基-1H -吲哚-2-羧酸叔丁酯（200毫克，0.76毫摩爾）溶於乙酸乙酯中，加入鈀碳（20毫克），安裝氫氣球，室溫反應9小時。
反應結束，過濾鈀碳，濾餅用乙酸乙酯洗滌，濾液減壓濃縮，乾燥得46毫克6-氨基-1H -吲哚-2-羧酸叔丁酯，無需純化，直接用於下一步反應。LCMS: RT = 3.16 min, [M+H]+ = 233.19。
步驟C：合成(S)-6-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸叔丁酯
Figure 02_image619
室溫下，將(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙酸（38毫克，0.09毫摩爾）、6-氨基-1H -吲哚-2-羧酸叔丁酯（20毫克，0.09毫摩爾）和2-(7-氧化苯並三氮唑)-N,N,N',N' -四甲基脲六氟磷酸鹽(51毫克，0.13毫摩爾)加入N,N -二甲基甲醯胺（3.0毫升）中，滴加N,N -二異丙基乙胺（35毫克，0.27毫摩爾），滴畢，N2保護下，室溫反應過夜。
反應結束，加水淬滅，混合液用乙酸乙酯（20毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/1)。得到22毫克黃色固體(S)-6-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸叔丁酯(收率：37.3%)。LCMS: RT = 4.04 min, [M+H]+ = 655.39。
步驟D：合成(S)-6-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image621
室溫下，將(S)-6-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸叔丁酯（22毫克，0.03毫摩爾）加入二氯甲烷（2.0毫升）中，滴加三氟乙酸（0.5毫升），室溫反應3小時。
反應結束，蒸乾二氯甲烷並用油泵抽乾三氟乙酸，所得殘餘物用溶於二氯甲烷（1.0毫升）中，將其滴加入正己烷（10.0毫升）中，析出白色固體，抽濾，濾餅用正己烷洗滌，乾燥得到9毫克淡黃色固體(S)-6-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-苯基丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸(收率：53.0%)。LCMS: RT = 3.42 min, [M-H]- = 597.09。1 H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.87 (s, 1H), 11.69 (s, 1H), 10.28 (s, 1H), 9.77 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.95 (d,J = 2.3 Hz, 1H), 7.82 (d,J = 8.6 Hz, 1H), 7.77 (dd,J = 8.6, 2.3 Hz, 1H), 7.57 (d,J = 8.7 Hz, 1H), 7.37–7.28 (m, 3H), 7.25 (t,J = 7.2 Hz, 1H), 7.18 (dd,J = 8.8, 1.6 Hz, 1H), 7.06–7.01 (m, 1H), 5.42–5.35 (m, 1H), 5.35–5.29 (m, 1H), 3.32–3.27 (m, 2H), 3.18–3.05 (m, 2H), 2.08–1.92 (m, 2H)。
實施例34
合成(S)-N -(4-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-((4-羥基-2-氧代-1,2-二氫喹啉-6-基)氨基)-3-氧代丙基)苯基)-4-氰基哌啶-1-甲醯胺
Figure 02_image259
具體合成路線如下：
步驟A：合成(S)-3-(4-氨基苯基)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙酸叔丁酯
Figure 02_image624
室溫下，將(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-硝基苯基)丙酸叔丁酯（600毫克，1.1毫摩爾）和還原鐵粉（618毫克，11.0毫摩爾）加入冰醋酸（12.0毫升）中，100 °C反應1小時。
反應結束，反應液用飽和碳酸鈉調pH至8，墊矽藻土抽濾，濾餅用20毫升二氯甲烷洗滌，濾液用二氯甲烷（10毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/4)。得到400毫克黃色固體(S)-3-(4-氨基苯基)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙酸叔丁酯(收率：71.0%)。LCMS: RT =3.10 min, [M+H]+ = 512.14。
步驟B：合成(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((苯氧基羰基)基)氨基)苯基)丙酸叔丁酯
Figure 02_image626
N2 保護、冰浴下，向含有(S)-3-(4-氨基苯基)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙酸叔丁酯（400毫克，0.8毫摩爾）和三乙胺（326微升）的四氫呋喃（6.0毫升）中滴加氯甲酸苯酯（146微升），滴畢，室溫反應1小時。
反應結束，加水淬滅，混合液用乙酸乙酯（30毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（20毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/二氯甲烷=1/1)。得到253毫克白色固體(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((苯氧基羰基)基)氨基)苯基)丙酸叔丁酯(收率：50.0%)。LCMS: RT = 4.04 min, [M+H]+ = 632.19。
步驟C：合成(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-氰基哌啶-1-甲醯氨基)苯基)丙酸叔丁酯
Figure 02_image628
室溫下，向含有(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((苯氧基羰基)基)氨基)苯基)丙酸叔丁酯（253毫克，0.4毫摩爾）和4-氰基哌啶（442毫克，4.0毫摩爾）的四氫呋喃（10.0毫升）中滴加N,N -二異丙基乙胺（518毫克，4.0毫摩爾），滴畢，65 °C反應過夜。
反應結束，加水淬滅，混合液用乙酸乙酯（20毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/2)。得到180毫克淡黃色固體(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-氰基哌啶-1-甲醯氨基)苯基)丙酸叔丁酯(收率：69.4%)。LCMS: RT = 3.67 min。
步驟D：合成(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-氰基哌啶-1-甲醯氨基)苯基)丙酸
Figure 02_image630
室溫下，將(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-氰基哌啶-1-甲醯氨基)苯基)丙酸叔丁酯（180毫克，0.28毫摩爾）加入二氯甲烷（2.0毫升）中，滴加三氟乙酸（0.5毫升），室溫反應3小時。
反應結束，減壓濃縮得到160毫克黃色油狀物(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-氰基哌啶-1-甲醯氨基)苯基)丙酸，無需純化，直接用於下一步反應。LCMS: RT = 3.24 min, [M-H]- = 590.11。
步驟E：合成(S)-N -(4-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-((4-羥基-2-氧代-1,2-二氫喹啉-6-基)氨基)-3-氧代丙基)苯基)-4-氰基哌啶-1-甲醯胺
Figure 02_image632
室溫下，將(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-氰基哌啶-1-甲醯氨基)苯基)丙酸（160毫克，0.27毫摩爾）、6-氨基-4-羥基-2(1H )-喹啉酮（53毫克，0.30毫摩爾）和2-(7-氧化苯並三氮唑)-N,N,N',N' -四甲基脲六氟磷酸鹽(206毫克，0.54毫摩爾)加入N,N -二甲基甲醯胺（4.0毫升）中，滴加N,N -二異丙基乙胺（105毫克，0.81毫摩爾），滴畢，N2 保護下，室溫反應過夜。
反應結束，加水淬滅，混合液用乙酸乙酯（20毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：純乙酸乙酯。得到54毫克白固體(S)-N-(4-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-((4-羥基-2-氧代-1,2-二氫喹啉-6-基)氨基)-3-氧代丙基)苯基)-4-氰基哌啶-1-甲醯胺(收率：26.7%)。LCMS: RT = 3.16 min, [M+H]+ = 750.20。1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.36 (s, 1H), 11.21 (s, 1H), 10.30 (s, 1H), 9.79 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 8.16 (d,J = 1.9 Hz, 1H), 7.95 (d,J = 2.3 Hz, 1H), 7.82 (d,J = 8.7 Hz, 1H), 7.78–7.74 (m, 1H), 7.62 (dd,J = 8.9, 2.3 Hz, 1H), 7.40 (d,J = 8.5 Hz, 1H), 7.21 (d,J = 8.9 Hz, 1H), 7.14 (d,J = 9.2 Hz, 1H), 6.66 (s, 1H), 5.74 (d,J = 1.0 Hz, 1H), 5.32 (t,J = 4.8 Hz, 1H), 5.26 (dd,J = 10.2, 5.6 Hz, 1H), 3.32–3.15 (m, 4H), 3.14–2.92 (m, 4H), 2.08–1.95 (m, 3H), 1.95–1.79 (m, 2H), 1.76–1.60 (m, 2H)。
實施例35
合成5-((2S)-3-(4-(3-((1,4-二惡烷-2-基)甲基)脲基)苯基)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image261
具體合成路線如下：
步驟A：合成(S)-2-氨基-3-(4-硝基苯基)丙酸叔丁酯
Figure 02_image635
N2 保護、冰浴下，向含有(S)-2-氨基-3-(4-硝基苯基)丙酸（20.0克，95.2毫摩爾）的醋酸叔丁酯（200毫升）中滴加70%的高氯酸(8.2毫升)，滴畢，室溫反應過夜。
反應結束，加乙酸乙酯稀釋，用飽和碳酸鈉調pH至9，混合液用乙酸乙酯（150毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（100毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=5/1)。得到15.2克黃色油狀物(S)-2-氨基-3-(4-硝基苯基)丙酸丁酯(收率：60.0%)。LCMS: RT = 2.05 min。
步驟B：合成(S)-2-(2-甲氧基-2-氧代乙醯氨基)-3-(4-硝基苯基)丙酸叔丁酯
Figure 02_image637
N2 保護、冰浴下，向含有(S)-2-氨基-3-(4-硝基苯基)丙酸丁酯（15.2克，57.1毫摩爾）和三乙胺（6.9克，68.5毫摩爾）的二氯甲烷（150毫升）中滴加草醯氯單甲酯（7.7克，62.8毫摩爾），滴畢，室溫反應30分鐘。
反應結束，加水淬滅，混合液用二氯甲烷（100毫升×3次）萃取。合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（50毫升×3次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮得到13.3克淡黃色油狀物(S)-2-(2-甲氧基-2-氧代乙醯氨基)-3-(4-硝基苯基)丙酸叔丁酯，無需純化，直接用於下一步反應。LCMS: RT = 3.91 min, [M-H]- = 351.12。
步驟C：合成(S)-2-((1-(叔丁氧基)-3-(4-硝基苯基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-2-氧代乙酸
Figure 02_image639
冰浴下，向含有(S)-2-(2-甲氧基-2-氧代乙醯氨基)-3-(4-硝基苯基)丙酸叔丁酯（13.3克，37.7毫摩爾）的四氫呋喃（160毫升）中滴加氫氧化鋰（3.2克，75.4毫摩爾）水溶液（80毫升），滴畢即反應結束。
反應結束，加水淬滅，用稀鹽酸水溶液（0.5摩爾/升）調pH至4，混合液用乙酸乙酯（80毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（50毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。最後減壓濃縮得到10.2克淡黃色油狀物(S)-2-((1-(叔丁氧基)-3-(4-硝基苯基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-2-氧代乙酸，無需純化，直接用於下一步反應。LCMS: RT = 4.32 min, [M-H]- = 337.16。
步驟D：合成N,N -二烯丙基-4-氯-2-硝基苯胺
Figure 02_image641
室溫下，將5-氯-2-氟硝基苯（20.0克，113.9毫摩爾）、二烯丙基胺（16.6克，170.9毫摩爾）和碳酸鉀（32.0克，231.9毫摩爾）加入N,N -二甲基甲醯胺（200毫升）中，N2 保護下，80 °C反應3小時。
反應結束，墊無水硫酸鈉抽濾，濾餅用200毫升乙酸乙酯洗滌，濾液用乙酸乙酯（100毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（100毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮得到27.5克棕色油狀物N,N -二烯丙基-4-氯-2-硝基苯胺，無需純化，直接用於下一步反應。LCMS: RT = 4.58 min, [M+H]+ = 253.07。
步驟E：合成N1 ,N1 -二烯丙基-4-氯苯-1,2-二胺
Figure 02_image643
室溫下，將N,N -二烯丙基-4-氯-2-硝基苯胺（27.5克，108.8毫摩爾）加入乙酸乙酯中，冰浴下，分批加入氯化亞錫二水合物（122.8克，544.0毫摩爾），N2 保護下，室溫反應過夜。
反應結束，用飽和碳酸氫鈉水溶液淬滅，再加入過量碳酸氫鈉固體，調pH至弱鹼性，墊矽藻土抽濾，濾餅用300毫升乙酸乙酯洗滌，濾液用乙酸乙酯（100毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（200毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：純正己烷)。得到11.4克棕色油狀物N1 ,N1 -二烯丙基-4-氯苯-1,2-二胺(收率：47.1%)。LCMS: RT = 4.44 min, [M+H]+ = 223.22。
步驟F：合成(S)-2-(2-((5-氯-2-(二烯丙基氨基)苯基)氨基)-2-氧代乙醯氨基)-3-(4-硝基苯基)丙酸叔丁酯
Figure 02_image645
室溫下，將油狀物(S)-2-((1-(叔丁氧基)-3-(4-硝基苯基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-2-氧代乙酸（15.7克，46.4毫摩爾）、N1 ,N1 - 二烯丙基-4-氯苯-1,2-二胺（11.4克，51.2毫摩爾）和2-(7-氧化苯並三氮唑)-N,N,N',N' -四甲基脲六氟磷酸鹽(35.3克，92.8毫摩爾)加入N,N -二甲基甲醯胺（300毫升）中，冰浴下滴加N,N -二異丙基乙胺（18.0克，138.3毫摩爾），滴畢，N2 保護下，室溫反應過夜。
反應結束，加水淬滅，混合液用乙酸乙酯（200毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（100毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=5/1)。得到20.0克黃色油狀物(S)-2-(2-((5-氯-2-(二烯丙基氨基)苯基)氨基)-2-氧代乙醯氨基)-3-(4-硝基苯基)丙酸叔丁酯(收率：79.4%)。LCMS: RT = 5.21min, [M-H]- = 541.14。
步驟G：合成(S)-2-(4-(5-氯-2-(二烯丙基氨基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-硝基苯基)丙酸叔丁酯
Figure 02_image647
室溫下，將(S)-2-(2-((5-氯-2-(二烯丙基氨基)苯基)氨基)-2-氧代乙醯氨基)-3-(4-硝基苯基)丙酸叔丁酯（20.0克，36.8毫摩爾）和碳酸鉀(31.0克，224.3 毫摩爾)加入三頸瓶中，N2 保護下，用雙排針加入乙腈（250毫升），再用注射器注入1,2-二溴乙烷(42.1克，224.3毫摩爾)，100 °C反應過夜。
反應結束，墊無水硫酸鈉抽濾，濾餅用200毫升乙酸乙酯洗滌，濾液用乙酸乙酯（100毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（100毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=2/1)。得到10.5克黃色固體(S)-2-(4-(5-氯-2-(二烯丙基氨基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-硝基苯基)丙酸叔丁酯(收率：49.8%)。LCMS: RT = 4.44 min, [M+H]+ = 569.23。
步驟H：合成(S)-2-(4-(2-氨基-5-氯苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-硝基苯基)丙酸叔丁酯
Figure 02_image649
室溫下，向含有(S)-2-(4-(5-氯-2-(二烯丙基氨基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-硝基苯基)丙酸叔丁酯（10.50克，18.5毫摩爾）的二氯甲烷（150毫升）中加入1,3-二甲基巴比妥酸（17.30克，111.0毫摩爾）和四三苯基膦鈀（0.85克，0.7毫摩爾），40 °C反應過夜。
反應結束，加二氯甲烷稀釋，用飽和碳酸鈉調pH至8，混合液用二氯甲烷（100毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（50毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/1)。得到8.4克黃色固體(S)-2-(4-(2-氨基-5-氯苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-硝基苯基)丙酸叔丁酯(收率：92.9%)。LCMS: RT = 3.98 min，[M+H]+ = 489.15。
步驟I：合成(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-硝基苯基)丙酸叔丁酯
Figure 02_image651
室溫下，向含有(S)-2-(4-(2-氨基-5-氯苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-硝基苯基)丙酸叔丁酯（8.4克，17.2毫摩爾）的冰醋酸（80毫升）中加入原甲酸三乙酯（12.7克，85.9毫摩爾）和疊氮化鈉（3.9克，60.0毫摩爾），80 °C反應5小時。
反應結束，加入20毫升水，逐滴加入亞硝酸鈉（250毫克/毫升）至無氣泡產生，加80毫升乙酸乙酯分散，抽濾，濾餅用30毫升乙酸乙酯洗滌，乾燥得2.5克類白色固體(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-硝基苯基)丙酸叔丁酯。(收率：26.8%)。LCMS: RT = 4.08 min。
步驟J：合成(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-硝基苯基)丙酸
Figure 02_image653
室溫下，向含有(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-硝基苯基)丙酸叔丁酯（2.5克，4.6毫摩爾）的二氯甲烷（24.0毫升）中滴加三氟乙酸（6.0毫升），室溫反應5小時。
反應結束，減壓濃縮得到1.8克黃色固體(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-硝基苯基)丙酸，無需純化，直接用於下一步反應。LCMS: RT = 3.48 min, [M-H]- = 484.07。
步驟K：合成5-硝基-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image655
室溫下，將5-硝基吲哚-2-甲酸（8.0克，38.8毫摩爾）和二碳酸二叔丁酯（38.1克，174.6毫摩爾）加入N,N -二甲基甲醯胺（40毫升）中，冰浴下，分批加入4-二甲氨基吡啶（3.8克，31.1毫摩爾），N2 保護下，室溫反應過夜。
反應結束，加水淬滅，加入100毫升乙酸乙酯，墊矽藻土抽濾，濾餅用50毫升乙酸乙酯洗滌，濾液用乙酸乙酯（100毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（100毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮得到11.0克淡黃色油狀物5-硝基-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯，無需純化，直接用於下一步反應。LCMS: RT = 5.01 min。
步驟L：合成5-氨基-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image657
室溫下，將5-硝基-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（11.0克，30.4毫摩爾l）溶於乙醇中，加入鈀碳（1.1克），安裝氫氣球，室溫反應9小時。
反應結束，過濾鈀碳，濾餅用乙醇洗滌，濾液減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/1)。得到8.2克黃色固體5-氨基-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(收率：81.0%)。LCMS: RT = 4.09 min, , [M+H]+ = 333.20。
步驟M：合成(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(-4-硝基苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image659
室溫下，將(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-硝基苯基)丙酸（1.8克，3.7毫摩爾）、5-氨基-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（1.4克，4.2毫摩爾）和2-(7-氧化苯並三氮唑)-N,N,N',N' -四甲基脲六氟磷酸鹽(2.8克，7.4毫摩爾)加入N,N -二甲基甲醯胺（20.0毫升）中，滴加N,N -二異丙基乙胺（1.4克，11.2毫摩爾），滴畢，N2 保護下，室溫反應過夜。
反應結束，加水淬滅，混合液用乙酸乙酯（50毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（30毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/1)。得到1.3克黃色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(-4-硝基苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(收率：43.2%)。LCMS: RT = 4.45 min, [M-H]- = 798.13。
步驟N：合成(S)-5-(3-(4-氨基苯基)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基）苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image661
室溫下，將(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(-4-硝基苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（1.3克，1.6毫摩爾）和還原鐵粉（0.9克，16.1毫摩爾）加入甲醇（15.0毫升）中，滴加冰醋酸（1.0毫升），65 °C反應3小時。
反應結束，向反應液中加入10毫升乙酸乙酯稀釋，墊矽藻土抽濾，濾餅用乙酸乙酯洗滌，濾液用飽和碳酸氫鈉調pH至10，混合液用乙酸乙酯（50毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（20毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/2)。得到622毫克黃色固體(S)-5-(3-(4-氨基苯基)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基）苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(收率：50.0%)。LCMS: RT = 4.05 min, [M-H]- = 768.20。
步驟O：合成(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(-4-((苯氧基羰基)氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image663
N2 保護、冰浴下，向含有(S)-5-(3-(4-氨基苯基)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基）苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（622毫克，0.8毫摩爾）和三乙胺（336微升）的四氫呋喃（6.0毫升）中滴加氯甲酸苯酯（202微升），滴畢，室溫反應1小時。
反應結束，加水淬滅，混合液用乙酸乙酯（30毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（20毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/二氯甲烷=1/1)。得到480毫克白色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(-4-((苯氧基羰基)氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(收率：67.4%)。LCMS: RT = 4.52 min。
步驟P：合成5-((2S)-3-(4-(3-((1,4-二惡烷-2-基)甲基)脲基)苯基)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image665
室溫下，向含有(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3- (-4-((苯氧基羰基)氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（120毫克，0.14毫摩爾）和1,4-二惡烷-2-甲胺鹽酸鹽（207毫克，1.4毫摩爾）的四氫呋喃（3.0毫升）中滴加N,N -二異丙基乙胺（174毫克，1.4毫摩爾），滴畢，65 °C反應過夜。
反應結束，加水淬滅，混合液用乙酸乙酯（10毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/4)。得到50毫克白色固體5-((2S)-3-(4-(3-((1,4-二惡烷-2-基)甲基)脲基)苯基)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(收率：39.1%)。LCMS: RT = 4.19 min, [M+H]+ = 913.33。
步驟Q：合成5-((2S)-3-(4-(3-((1,4-二惡烷-2-基)甲基)脲基)苯基)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image667
室溫下，將5-((2S)-3-(4-(3-((1,4-二惡烷-2-基)甲基)脲基)苯基)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（50毫克，0.05毫摩爾）加入二氯甲烷（2.0毫升）中，滴加三氟乙酸（0.5毫升），室溫反應3小時。
反應結束，蒸乾二氯甲烷並用油泵抽乾三氟乙酸，所得殘餘物用溶於二氯甲烷（1.0毫升）中，將其滴加入正己烷（10.0毫升）中，析出白色固體，抽濾，濾餅用正己烷洗滌，乾燥得到24毫克白色固體5-((2S)-3-(4-(3-((1,4-二惡烷-2-基)甲基)脲基)苯基)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸(收率：63.4%)。LCMS: RT = 3.20 min, [M-H]- = 755.05。1 H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.95 (s, 1H), 11.75 (s, 1H), 10.16 (s, 1H), 9.81 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.97 (d,J = 2.2 Hz, 1H), 7.83 (d,J = 8.6 Hz, 1H), 7.78 (dd,J = 8.6, 2.3 Hz, 1H), 7.39 (d,J = 8.9 Hz, 1H), 7.34 (dd,J = 9.7, 2.8 Hz, 3H), 7.15 (d,J = 5.3 Hz, 2H), 7.08 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 6.23 (t,J = 5.4 Hz, 1H), 5.29 (dd,J = 10.0, 5.3 Hz, 1H), 3.81–3.69 (m, 3H), 3.67–3.58 (m, 2H), 3.58–3.49 (m, 2H), 3.49–3.42 (m, 2H), 3.28–3.19 (m, 2H), 3.09–2.97 (m, 2H), 2.12–1.91 (m, 2H)。
實施例36
合成5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((R)-4-羥基丁-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image263
具體合成路線如下：
步驟A：合成5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((R)-4-羥基丁-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image670
室溫下，向含有(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(-4-((苯氧基羰基)氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（120毫克，0.14毫摩爾）和(R)-3-氨基丁醇（121毫克，1.4毫摩爾）的四氫呋喃（3.0毫升）中滴加N,N -二異丙基乙胺（174毫克，1.4毫摩爾），滴畢，65 °C反應過夜。
反應結束，加水淬滅，混合液用乙酸乙酯（10毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/1)。得到60毫克白色固體5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((R)-4-羥基丁-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(收率：48.5%)。LCMS: RT = 4.15 min, [M-H]- = 883.52。
步驟B：合成5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((R)-4-羥基丁-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image672
室溫下，將5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((R)-4-羥基丁-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（60毫克，0.07毫摩爾）加入二氯甲烷（2.0毫升）中，滴加三氟乙酸（0.5毫升），室溫反應3小時。
反應結束，蒸乾二氯甲烷並用油泵抽乾三氟乙酸，所得殘餘物用溶於二氯甲烷（1.0毫升）中，將其滴加入正己烷（10.0毫升）中，析出白色固體，抽濾，濾餅用正己烷洗滌，乾燥得到33毫克白色固體5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((R)-4-羥基丁-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸(收率：64.7%)。LCMS: RT = 3.19 min, [M-H]- = 727.19。1 H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.92 (s, 1H), 11.72 (s, 1H), 10.13 (s, 1H), 9.80 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.97 (d,J = 2.2 Hz, 1H), 7.83 (d,J = 8.6 Hz, 1H), 7.78 (dd,J = 8.6, 2.3 Hz, 1H), 7.37 (dd,J = 24.4, 8.6 Hz, 4H), 7.14 (d,J = 8.4 Hz, 2H), 7.08 (d,J = 1.7 Hz, 1H), 6.01 (d,J = 7.7 Hz, 1H), 5.29 (dd,J = 10.0, 5.7 Hz, 1H), 3.78 (dd,J = 16.1, 8.9 Hz, 3H), 3.45 (d,J = 10.3 Hz, 4H), 3.22 (dd,J = 13.8, 6.2 Hz, 2H), 3.01 (dd,J = 14.9, 10.7 Hz, 2H), 1.10 (d,J = 6.6 Hz, 3H)。
實施例37
合成5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((S)-4-羥基丁-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image265
具體合成路線如下：
步驟A：合成5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((S)-4-羥基丁-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image675
室溫下，向含有(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(-4-((苯氧基羰基)氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（120毫克，0.14毫摩爾）和(S)-3-氨基丁醇（121毫克，1.4毫摩爾）的四氫呋喃（3.0毫升）中滴加N,N -二異丙基乙胺（174毫克，1.4毫摩爾），滴畢，65 °C反應過夜。
反應結束，加水淬滅，混合液用乙酸乙酯（10毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/1)。得到55毫克白色固體5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((S)-4-羥基丁-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(收率：44.5%)。LCMS: RT = 4.15 min, [M-H]- = 883.29。
步驟B：合成5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((S)-4-羥基丁-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image677
室溫下，將5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((S)-4-羥基丁-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（55毫克，0.06毫摩爾）加入二氯甲烷（2.0毫升）中，滴加三氟乙酸（0.5毫升），室溫反應3小時。
反應結束，蒸乾二氯甲烷並用油泵抽乾三氟乙酸，所得殘餘物用溶於二氯甲烷（1.0毫升）中，將其滴加入正己烷（10.0毫升）中，析出白色固體，抽濾，濾餅用正己烷洗滌，乾燥得到25毫克白色固體5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((S)-4-羥基丁-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸(收率：49.1%)。LCMS: RT = 3.20 min, [M-H]- = 727.15。1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.91 (s, 1H), 11.73 (s, 1H), 10.13 (s, 1H), 9.79 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.01 (d,J = 1.4 Hz, 1H), 7.96 (d,J = 2.3 Hz, 1H), 7.83 (d,J = 8.6 Hz, 1H), 7.77 (dd,J = 9.0, 1.8 Hz, 1H), 7.42–7.31 (m, 3H), 7.13 (d,J = 7.7 Hz, 2H), 7.07 (d,J = 2.2 Hz, 1H), 6.00 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 5.29 (dd,J = 9.8, 5.6 Hz, 1H), 3.77 (dd,J = 20.3, 8.9 Hz, 3H), 3.53–3.40 (m, 4H), 3.20 (d,J = 10.0 Hz, 2H), 2.98 (s, 2H), 1.09 (d,J = 6.6 Hz, 3H)。
實施例38
合成5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((S)-1-羥基-3-甲基丁-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image267
具體合成路線如下：
步驟A：合成5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((S)-1-羥基-3-甲基丁-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image680
室溫下，向含有(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(-4-((苯氧基羰基)氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（120毫克，0.14毫摩爾）和L-纈氨醇（140毫克，1.4毫摩爾）的四氫呋喃（3.0毫升）中滴加N,N -二異丙基乙胺（174毫克，1.4毫摩爾），滴畢，65 °C反應過夜。
反應結束，加水淬滅，混合液用乙酸乙酯（10毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/1)。得到65毫克白色固體5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((S)-1-羥基-3-甲基丁-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(收率：77.5%)。LCMS: RT = 4.21 min, [M-H]- = 897.28。
步驟B：合成5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((S)-1-羥基-3-甲基丁-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image682
室溫下，將5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((S)-1-羥基-3-甲基丁-2-基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（65毫克，0.07毫摩爾）加入二氯甲烷（2.0毫升）中，滴加三氟乙酸（0.5毫升），室溫反應3小時。
反應結束，蒸乾二氯甲烷並用油泵抽乾三氟乙酸，所得殘餘物用溶於二氯甲烷（1.0毫升）中，將其滴加入正己烷（10.0毫升）中，析出白色固體，抽濾，濾餅用正己烷洗滌，乾燥得到28毫克白色固體5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((S)-1-羥基-3-甲基丁-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸(收率：56.1%)。LCMS: RT = 3.29 min, [M-H]- = 741.20。1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.91 (s, 1H), 11.72 (s, 1H), 10.14 (s, 1H), 9.80 (s, 1H), 8.45 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.96 (d,J = 2.2 Hz, 1H), 7.83 (d,J = 8.6 Hz, 1H), 7.77 (dd,J = 8.6, 2.3 Hz, 1H), 7.36 (dd,J = 17.8, 8.6 Hz, 3H), 7.13 (d,J = 8.4 Hz, 2H), 7.07 (d,J = 2.3 Hz, 1H), 5.98 (d,J = 9.2 Hz, 1H), 5.28 (dd,J = 10.5, 5.9 Hz, 1H), 3.59–3.41 (m, 3H), 3.33 (s, 3H), 3.22 (dd,J = 15.2, 1.4 Hz, 2H), 3.01 (dd,J = 9.9, 7.2 Hz, 2H), 0.88 (dd, J = 11.8, 6.8 Hz, 6H)。
實施例39
合成5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((R)-1-羥基-3-甲基丁-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image269
具體合成路線如下：
步驟A：合成5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((R)-1-羥基-3-甲基丁-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image685
室溫下，向含有(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(-4-((苯氧基羰基)氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（120毫克，0.14毫摩爾）和D-纈氨醇（140毫克，1.4毫摩爾）的四氫呋喃（3.0毫升）中滴加N,N -二異丙基乙胺（174毫克，1.4毫摩爾），滴畢，65 °C反應過夜。
反應結束，加水淬滅，混合液用乙酸乙酯（10毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/1)。得到62毫克白色固體5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((R)-1-羥基-3-甲基丁-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(收率：73.9%)。LCMS: RT = 4.21 min, [M-H]- = 897.25。
步驟B：合成5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((R)-1-羥基-3-甲基丁-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image687
室溫下，將5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((R)-1-羥基-3-甲基丁-2-基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（62毫克，0.07毫摩爾）加入二氯甲烷（2.0毫升）中，滴加三氟乙酸（0.5毫升），室溫反應3小時。
反應結束，蒸乾二氯甲烷並用油泵抽乾三氟乙酸，所得殘餘物用溶於二氯甲烷（1.0毫升）中，將其滴加入正己烷（10.0毫升）中，析出白色固體，抽濾，濾餅用正己烷洗滌，乾燥得到19毫克白色固體5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((R)-1-羥基-3-甲基丁-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸(收率：38.1%)。LCMS: RT = 3.30 min, [M-H]- = 741.16。1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.93 (s, 1H), 11.72 (s, 1H), 10.13 (s, 1H), 9.80 (s, 1H), 8.44 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.96 (d,J = 2.2 Hz, 1H), 7.83 (d,J = 8.6 Hz, 1H), 7.77 (dd,J = 8.6, 2.3 Hz, 1H), 7.36 (dd,J = 18.0, 8.5 Hz, 3H), 7.13 (d,J = 8.2 Hz, 2H), 7.07 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 5.98 (d,J = 7.9 Hz, 1H), 5.28 (dd,J = 10.0, 5.1 Hz, 1H), 3.44 (dd,J = 8.6, 4.1 Hz, 3H), 3.35 (dd,J = 12.0, 6.7 Hz, 3H), 3.26–3.16 (m, 2H), 3.08–2.95 (m, 2H), 0.88 (dd,J = 11.9, 6.8 Hz, 6H)。
實施例40
合成5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((3-甲基氧雜環丁烷-3-基)甲基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image271
具體合成路線如下：
步驟A：合成 5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((3-甲基氧雜環丁烷-3-基)甲基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image690
室溫下，向含有(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(-4-((苯氧基羰基)氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（120毫克，0.14毫摩爾）和3-甲基-3-胺甲基-1-氧雜環丁烷（136毫克，1.4毫摩爾）的四氫呋喃（3.0毫升）中滴加N,N -二異丙基乙胺（174毫克，1.4毫摩爾），滴畢，65 °C反應過夜。
反應結束，加水淬滅，混合液用乙酸乙酯（10毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/2)。得到75毫克白色固體5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((3-甲基氧雜環丁烷-3-基)甲基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(收率：59.8%)。LCMS: RT = 4.20 min, [M+H]+ = 897.39。
步驟B：合成5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((3-甲基氧雜環丁烷-3-基)甲基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image692
室溫下，將5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((R)-1-羥基-3-甲基丁-2-基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（75毫克，0.08毫摩爾）加入二氯甲烷（2.0毫升）中，滴加三氟乙酸（0.5毫升），室溫反應3小時。
反應結束，蒸乾二氯甲烷並用油泵抽乾三氟乙酸，所得殘餘物用溶於二氯甲烷（1.0毫升）中，將其滴加入正己烷（10.0毫升）中，析出白色固體，抽濾，濾餅用正己烷洗滌，乾燥得到32毫克白色固體5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((3-甲基氧雜環丁烷-3-基)甲基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸(收率：54.0%)。LCMS: RT = 2.75 min, [M+H]+ = 740.95。1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.96 (s, 1H), 11.75 (s, 1H), 10.85 (s, 1H), 10.15 (s, 1H), 9.79 (s, 1H), 9.34 (s, 1H), 8.01 (d,J = 1.2 Hz, 1H), 7.95 (d,J = 2.2 Hz, 1H), 7.84 (d,J = 8.7 Hz, 1H), 7.79 (dd,J = 8.6, 2.2 Hz, 1H), 7.37 (dt,J = 10.8, 5.4 Hz, 3H), 7.28 (d,J = 8.4 Hz, 2H), 7.08 (d,J = 1.5 Hz, 1H), 5.35 (s, 1H), 5.13 (s, 1H), 4.47 (d,J = 9.1 Hz, 1H), 4.33 (d,J = 11.9 Hz, 1H), 3.42–3.26 (m, 5H), 3.12 (t,J = 11.2 Hz, 2H), 1.00 (s, 3H)。
實施例41
合成5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((R)-2-(羥甲基)嗎啉-4-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image273
具體合成路線如下：
步驟A：合成5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((R)-2-(羥基甲基)嗎啉-4-甲醯氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image695
室溫下，向含有(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(-4-((苯氧基羰基)氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（120毫克，0.14毫摩爾）和(R)-2-嗎啉甲醇鹽酸鹽（208毫克，1.4毫摩爾）的四氫呋喃（3.0毫升）中滴加N,N -二異丙基乙胺（174毫克，1.4毫摩爾），滴畢，65 °C反應過夜。
反應結束，加水淬滅，混合液用乙酸乙酯（10毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/2)。得到65毫克白色固體5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((R)-2-(羥基甲基)嗎啉-4-甲醯氨基)苯基)丙醯氨基)-1H-吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(收率：52.0%)。LCMS: RT = 4.11 min, [M-H]- =911.35 。
步驟B：合成5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((R)-2-(羥甲基)嗎啉-4-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image697
室溫下，將5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((R)-2-(羥基甲基)嗎啉-4-甲醯氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（65毫克，0.07毫摩爾）加入二氯甲烷（2.0毫升）中，滴加三氟乙酸（0.5毫升），室溫反應3小時。
反應結束，蒸乾二氯甲烷並用油泵抽乾三氟乙酸，所得殘餘物用溶於二氯甲烷（1.0毫升）中，將其滴加入正己烷（10.0毫升）中，析出白色固體，抽濾，濾餅用正己烷洗滌，乾燥得到25毫克白色固體5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((3-甲基氧雜環丁烷-3-基)甲基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸(收率：47.2%)。LCMS: RT = 3.14 min, [M+H]+ = 757.17。1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.87 (s, 1H), 11.71 (s, 1H), 10.13 (s, 1H), 9.78 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 8.03–7.98 (m, 1H), 7.95 (d,J = 2.3 Hz, 1H), 7.82 (d,J = 8.6 Hz, 1H), 7.76 (dd,J = 8.6, 2.3 Hz, 1H), 7.40 (dd,J = 14.8, 8.7 Hz, 3H), 7.32 (dd,J = 8.9, 1.9 Hz, 1H), 7.15 (d,J = 8.3 Hz, 1H), 7.06 (d,J = 1.5 Hz, 1H), 5.30 (dd,J = 9.9, 5.7 Hz, 1H), 4.05 (d,J = 12.7 Hz, 2H), 3.92 (d,J = 13.0 Hz, 2H), 3.85 (ddd,J = 10.3, 1.8, 0.9 Hz, 2H), 3.38 (dd,J = 8.9, 5.8 Hz, 4H), 3.23 (dd,J = 14.7, 3.0 Hz, 2H), 3.01 (dd,J = 16.3, 9.3 Hz, 1H), 2.88 (td,J = 12.6, 3.1 Hz, 1H), 2.68–2.56 (m, 1H)。
實施例42
合成 5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((S)-2-(羥甲基)嗎啉-4-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image275
具體合成路線如下：
步驟A：合成 5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((S)-2-(羥基甲基)嗎啉-4-甲醯氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image700
室溫下，向含有(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(-4-((苯氧基羰基)氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（120毫克，0.14毫摩爾）和(S)-2-嗎啉甲醇鹽酸鹽鹽酸鹽（208毫克，1.4毫摩爾）的四氫呋喃（3.0毫升）中滴加N,N -二異丙基乙胺（174毫克，1.4毫摩爾），滴畢，65 °C反應過夜。
反應結束，加水淬滅，混合液用乙酸乙酯（10毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/2)。得到60毫克白色固體5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((S)-2-(羥基甲基)嗎啉-4-甲醯氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(收率：47.0%)。LCMS: RT = 4.10 min, [M-H]- = 911.41。
步驟B：合成 5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((S)-2-(羥甲基)嗎啉-4-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image702
室溫下，將5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((S)-2-(羥基甲基)嗎啉-4-甲醯氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（60毫克，0.07毫摩爾）加入二氯甲烷（2.0毫升）中，滴加三氟乙酸（0.5毫升），室溫反應3小時。
反應結束，蒸乾二氯甲烷並用油泵抽乾三氟乙酸，所得殘餘物用溶於二氯甲烷（1.0毫升）中，將其滴加入正己烷（10.0毫升）中，析出白色固體，抽濾，濾餅用正己烷洗滌，乾燥得到30毫克白色固體5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((S)-2-(羥甲基)嗎啉-4-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸(收率：56.6%)。LCMS: RT = 3.15 min, [M-H]- = 755.12。1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.95 (s, 1H), 11.73 (s, 1H), 10.14 (s, 1H), 9.80 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.96 (d,J = 2.2 Hz, 1H), 7.83 (d,J = 8.7 Hz, 1H), 7.77 (dd,J = 8.6, 2.2 Hz, 1H), 7.40 (dd,J = 14.9, 8.7 Hz, 3H), 7.33 (dd,J = 8.9, 1.7 Hz, 1H), 7.16 (d,J = 7.8 Hz, 2H), 7.07 (d,J = 1.5 Hz, 1H), 5.31 (dd,J = 10.2, 5.2 Hz, 1H), 4.06 (d,J = 13.8 Hz, 2H), 3.98–3.81 (m, 3H), 3.80–3.68 (m, 2H), 3.43–3.34 (m, 4H), 3.24 (dd,J = 15.6, 7.0 Hz, 1H), 3.09–2.96 (m, 1H), 2.88 (dd,J = 17.0, 6.9 Hz, 1H), 2.74–2.57 (m, 1H)。
實施例43
合成 5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((1R,4S)-4-羥基環己基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image277
具體合成路線如下：
步驟A：合成 5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((1R,4S)-4-羥基環己基)脲基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image705
室溫下，向含有(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(-4-((苯氧基羰基)氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（120毫克，0.14毫摩爾）和反式-4-氨基環己醇（155毫克，1.4毫摩爾）的四氫呋喃（3.0毫升）中滴加N,N -二異丙基乙胺（174毫克，1.4毫摩爾），滴畢，65 °C反應過夜。
反應結束，加水淬滅，混合液用乙酸乙酯（10毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/2)。得到35毫克白色固體5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((1R,4S)-4-羥基環己基)脲基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(收率：27.4%)。LCMS: RT =4.12 min, [M-H]- = 909.22。
步驟B：合成 5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((1R,4S)-4-羥基環己基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image707
室溫下，將5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((1R,4S)-4-羥基環己基)脲基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（35毫克，0.04毫摩爾）加入二氯甲烷（2.0毫升）中，滴加三氟乙酸（0.5毫升），室溫反應3小時。
反應結束，蒸乾二氯甲烷並用油泵抽乾三氟乙酸，所得殘餘物用溶於二氯甲烷（1.0毫升）中，將其滴加入正己烷（10.0毫升）中，析出白色固體，抽濾，濾餅用正己烷洗滌，乾燥得到15毫克白色固體5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((1R,4S)-4-羥基環己基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸(收率：49.6%)。LCMS: RT = 3.18 min, [M+H]+ = 755.14。1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.93 (s, 1H), 11.72 (s, 1H), 10.13 (s, 1H), 9.79 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.01 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 7.95 (d,J = 2.2 Hz, 1H), 7.83 (d,J = 8.6 Hz, 1H), 7.77 (dd,J = 8.6, 2.3 Hz, 1H), 7.44–7.31 (m, 4H), 7.13 (d,J = 7.7 Hz, 2H), 7.07 (d,J = 1.8 Hz, 1H), 5.99 (d,J = 7.7 Hz, 1H), 5.28 (dd,J = 10.2, 5.0 Hz, 1H), 3.87–3.55 (m, 3H), 3.21 (d,J = 12.8 Hz, 2H), 3.08–2.93 (m, 1H), 1.82 (t,J = 14.3 Hz, 4H), 1.20 (dt,J = 21.9, 11.2 Hz, 4H)。
實施例44
合成 5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((2S,3S)-1-羥基-3-甲基戊-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)苯並呋喃-2-羧酸
Figure 02_image279
具體合成路線如下：
步驟A：合成 5-硝基苯並呋喃-2-羧酸叔丁酯
Figure 02_image655
室溫下，將5-硝基苯並呋喃-2-甲酸（1.8克，8.7毫摩爾）和二碳酸二叔丁酯（4.8克，22.0毫摩爾）加入N,N -二甲基甲醯胺（20毫升）中，冰浴下，分批加入4-二甲氨基吡啶（0.54克，4.4毫摩爾），N2 保護下，室溫反應過夜。
反應結束，加水淬滅，加入100毫升乙酸乙酯，墊矽藻土抽濾，濾餅用50毫升乙酸乙酯洗滌，濾液用乙酸乙酯（100毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（100毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮得到1.9克淡黃色固體5-硝基苯並呋喃-2-羧酸叔丁酯，無需純化，直接用於下一步反應。LCMS: RT = 4.34 min。
步驟B：合成 5-氨基苯並呋喃-2-羧酸叔丁酯
Figure 02_image710
室溫下，將5-硝基苯並呋喃-2-羧酸叔丁酯（1.9克，7.2毫摩爾l）溶於乙酸乙酯中，加入鈀碳（0.5克），安裝氫氣球，室溫反應9小時。
反應結束，過濾鈀碳，濾餅用甲醇洗滌，濾液減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/1)。得到1.4克棕色固體5-氨基苯並呋喃-2-羧酸叔丁酯(收率：83.4%)。LCMS: RT = 3.05 min, [M+H]+ = 234.11。
步驟C：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(-4-硝基苯基)丙醯胺基)苯並呋喃-2-羧酸叔丁酯
Figure 02_image712
室溫下，將(S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-硝基苯基)丙酸（350毫克，0.7毫摩爾）、5-氨基苯並呋喃-2-羧酸叔丁酯（185毫克，0.8毫摩爾）和2-(7-氧化苯並三氮唑)-N,N,N',N' -四甲基脲六氟磷酸鹽(411毫克，1.1毫摩爾)加入N,N -二甲基甲醯胺（5.0毫升）中，滴加N,N -二異丙基乙胺（280毫克，2.2毫摩爾），滴畢，N2 保護下，室溫反應過夜。
反應結束，加水淬滅，混合液用乙酸乙酯（30毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（20毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/1)。得到400毫克黃色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(-4-硝基苯基)丙醯胺基)苯並呋喃-2-羧酸叔丁酯(收率：41.1%)。LCMS: RT = 4.15 min, [M+H]+ = 699.11。
步驟D：合成 (S)-5-(3-(4-氨基苯基)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基）苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙醯胺基)苯並呋喃-2-羧酸叔丁酯
Figure 02_image714
室溫下，將(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(-4-硝基苯基)丙醯胺基)苯並呋喃-2-羧酸叔丁酯（400毫克，0.57毫摩爾）和還原鐵粉（320毫克，5.7毫摩爾）加入甲醇（15.0毫升）中，滴加冰醋酸（1.0毫升），65 °C反應3小時。
反應結束，向反應液中加入10毫升乙酸乙酯稀釋，墊矽藻土抽濾，濾餅用乙酸乙酯洗滌，濾液用飽和碳酸氫鈉調pH至10，混合液用乙酸乙酯（30毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/2)。得到314毫克黃色固體(S)-5-(3-(4-氨基苯基)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基）苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙醯胺基)苯並呋喃-2-羧酸叔丁酯(收率：82.1%)。LCMS: RT = 3.58 min, [M+H]+ = 671.24。
步驟E：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(-4-((苯氧基羰基)氨基)苯基)丙醯胺基)苯並呋喃-2-羧酸叔丁酯
Figure 02_image716
N2 保護、冰浴下，向含有(S)-5-(3-(4-氨基苯基)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基）苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙醯胺基)苯並呋喃-2-羧酸叔丁酯（314毫克，0.47毫摩爾）四氫呋喃（6.0毫升）中滴加氯甲酸苯酯（117微升），滴畢，室溫反應1小時。
反應結束，加水淬滅，混合液用乙酸乙酯（30毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（20毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/二氯甲烷=1/1)。得到147毫克黃色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(-4-((苯氧基羰基)氨基)苯基)丙醯胺基)苯並呋喃-2-羧酸叔丁酯(收率：39.5%)。LCMS: RT = 4.20 min, [M-H]- = 789.21。
步驟F：合成 5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((2S,3S)-1-羥基-3-甲基戊-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)苯並呋喃-2-羧酸叔丁酯
Figure 02_image718
室溫下，向含有(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(-4-((苯氧基羰基)氨基)苯基)丙醯胺基)苯並呋喃-2-羧酸叔丁酯（80毫克，0.10毫摩爾）和L-異亮氨醇（120毫克，1.0毫摩爾）的四氫呋喃（3.0毫升）中滴加N,N -二異丙基乙胺（131毫克，1.0毫摩爾），滴畢，65 °C反應過夜。
反應結束，加水淬滅，混合液用乙酸乙酯（10毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/4)。得到45毫克白色固體5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((2S,3S)-1-羥基-3-甲基戊-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)苯並呋喃-2-羧酸叔丁酯(收率：55.3%)。LCMS: RT = 3.98 min, [M+H]+ = 814.16。
步驟G：合成 5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((2S,3S)-1-羥基-3-甲基戊-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)苯並呋喃-2-羧酸
Figure 02_image720
室溫下，將5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((2S,3S)-1-羥基-3-甲基戊-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)苯並呋喃-2-羧酸叔丁酯（45毫克，0.05毫摩爾）加入二氯甲烷（2.0毫升）中，滴加三氟乙酸（0.5毫升），室溫反應3小時。
反應結束，蒸乾二氯甲烷並用油泵抽乾三氟乙酸，所得殘餘物用溶於二氯甲烷（1.0毫升）中，將其滴加入正己烷（10.0毫升）中，析出白色固體，抽濾，濾餅用正己烷洗滌，乾燥得到10毫克白色固體5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((2S,3S)-1-羥基-3-甲基戊-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)苯並呋喃-2-羧酸(收率：24.1%)。LCMS: RT = 3.58 min, [M-H]- = 756.32。1 H NMR (500 MHz, DMSO) δ 13.57 (s, 1H), 10.38 (s, 1H), 9.81 (s, 1H), 8.47 (s, 1H), 8.19 (d,J = 1.9 Hz, 1H), 7.97 (d,J = 2.2 Hz, 1H), 7.84 (d,J = 8.6 Hz, 1H), 7.78 (dd,J = 8.6, 2.3 Hz, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.68 (d,J = 9.0 Hz, 1H), 7.59–7.54 (m, 2H), 7.35 (d,J = 8.4 Hz, 2H), 7.14 (d,J = 7.2 Hz, 2H), 6.02 (d,J = 8.5 Hz, 1H), 5.30 (dd,J = 10.0, 5.6 Hz, 1H), 3.59–3.45 (m, 3H), 3.41 (dd,J = 10.5, 4.5 Hz, 3H), 3.28–3.14 (m, 2H), 3.02 (dd,J = 12.6, 9.5 Hz, 1H), 1.68–1.56 (m, 1H), 1.56–1.42 (m, 1H), 1.08 (dt,J = 23.4, 9.1 Hz, 1H), 0.87 (t,J = 6.7 Hz, 6H)。
實施例45
合成 5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4 -(3-(羥甲基)哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image281
具體合成路線如下：
步驟A：合成 5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-(羥甲基)哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image723
室溫下，向含有(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(-4-((苯氧基羰基)氨基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（200毫克，0.22毫摩爾）和3-羥甲基哌啶（260毫克，2.2毫摩爾）的四氫呋喃（5.0毫升）中滴加N,N -二異丙基乙胺（290毫克，2.2毫摩爾），滴畢，65 °C反應過夜。
反應結束，加水淬滅，混合液用乙酸乙酯（20毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/2)。得到80毫克白色固體5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-(羥甲基)哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(收率：39.9%)。LCMS: RT =3.74 min, [M-H]- = 909.22。
步驟B：合成 5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-(羥甲基)哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image725
室溫下，將5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-(羥甲基)哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（80毫克，0.09毫摩爾）加入二氯甲烷（2.0毫升）中，滴加三氟乙酸（0.5毫升），室溫反應3小時。
反應結束，蒸乾二氯甲烷並用油泵抽乾三氟乙酸，所得殘餘物用溶於二氯甲烷（1.0毫升）中，將其滴加入正己烷（10.0毫升）中，析出白色固體，抽濾，濾餅用正己烷洗滌，乾燥得到27毫克白色固體5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-(羥甲基)哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸(收率：39.7%)。LCMS: RT = 3.28 min, [M+H]+ = 755.10。1 H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.94 (s, 1H), 11.74 (s, 1H), 10.17 (s, 1H), 9.82 (s, 1H), 8.43 (s, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.97 (d,J = 2.3 Hz, 1H), 7.84 (d,J = 8.6 Hz, 1H), 7.78 (dd,J = 8.6, 2.3 Hz, 1H), 7.40 (t,J = 9.1 Hz, 3H), 7.34 (dd,J = 8.9, 1.9 Hz, 1H), 7.15 (d,J = 8.0 Hz, 2H), 7.08 (d,J = 1.5 Hz, 1H), 5.31 (dd,J = 9.8, 5.6 Hz, 1H), 4.08 (d,J = 13.9 Hz, 2H), 3.97 (d,J = 10.5 Hz, 2H), 3.39–3.19 (m, 4H), 3.08– 2.91 (m, 2H), 2.81 (t,J = 13.1 Hz, 1H), 2.12–1.94 (m, 1H), 1.74 (d,J = 12.0 Hz, 1H), 1.63 (d,J = 12.5 Hz, 1H), 1.55 (s, 1H), 1.40 (d,J = 16.4 Hz, 1H), 1.23–1.11 (m, 1H)。
實施例46
合成 5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-(4-羥基-2-甲基丁-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)苯並呋喃-2-羧酸
Figure 02_image283
具體合成路線如下：
步驟A：合成 5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-(4-羥基-2-甲基丁-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)苯並呋喃-2-羧酸叔丁酯
Figure 02_image728
室溫下，向含有(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(-4-((苯氧基羰基)氨基)苯基)丙醯胺基)苯並呋喃-2-羧酸叔丁酯（75毫克，0.09毫摩爾）和3-氨基-3-甲基-1-丁醇（98毫克，0.9毫摩爾）的四氫呋喃（3.0毫升）中滴加N,N -二異丙基乙胺（123毫克，0.9毫摩爾），滴畢，65 °C反應過夜。
反應結束，加水淬滅，混合液用乙酸乙酯（10毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/4)。得到35毫克白色固體5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-(4-羥基-2-甲基丁-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)苯並呋喃-2-羧酸叔丁酯(收率：48.6%)。LCMS: RT = 3.90 min, [M+H]+ = 798.28。
步驟B：合成 5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-(4-羥基-2-甲基丁-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)苯並呋喃-2-羧酸
Figure 02_image730
室溫下，將5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-(4-羥基-2-甲基丁-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)苯並呋喃-2-羧酸叔丁酯（35毫克，0.04毫摩爾）加入二氯甲烷（2.0毫升）中，滴加三氟乙酸（0.5毫升），室溫反應3小時。
反應結束，蒸乾二氯甲烷並用油泵抽乾三氟乙酸，所得殘餘物用溶於二氯甲烷（1.0毫升）中，將其滴加入正己烷（10.0毫升）中，析出白色固體，抽濾，濾餅用正己烷洗滌，乾燥得到7毫克白色固5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-(4-羥基-2-甲基丁-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)苯並呋喃-2-羧酸(收率：23.5%)。LCMS: RT = 3.45 min, [M-H]- = 742.12。1 H NMR (500 MHz, DMSO) δ 13.57 (s, 1H), 10.38 (s, 1H), 9.81 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.19 (d,J = 1.8 Hz, 1H), 7.97 (d,J = 2.2 Hz, 1H), 7.84 (d,J = 8.6 Hz, 1H), 7.78 (dd,J = 8.6, 2.3 Hz, 1H), 7.68 (d,J = 9.2 Hz, 2H), 7.57 (d,J = 10.9 Hz, 1H), 7.32 (d,J = 8.5 Hz, 2H), 7.13 (d,J = 6.5 Hz, 2H), 6.01 (s, 1H), 5.30 (dd,J = 10.0, 5.7 Hz, 1H), 4.39 (t,J = 5.0 Hz, 1H), 3.51 (dd,J = 11.8, 7.2 Hz, 2H), 3.23 (dd,J = 13.7, 4.9 Hz, 1H), 3.11–2.98 (m, 1H), 2.02 (dd,J = 17.3, 9.6 Hz, 1H), 1.82 (t,J = 7.3 Hz, 2H), 1.55–1.42 (m, 1H), 1.28 (s, 6H), 0.87 (t,J = 6.4 Hz, 1H)。
實施例47
合成 5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((1R,4R)-4-羥基環己基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image285
具體合成路線如下：
步驟A：合成 5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((1R,4R)-4-羥基環己基)脲基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image733
室溫下，向含有(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(-4-((苯氧基羰基)氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（120毫克，0.14毫摩爾）和順式-4-氨基環己醇（155毫克，1.4毫摩爾）的四氫呋喃（3.0毫升）中滴加N,N -二異丙基乙胺（174毫克，1.4毫摩爾），滴畢，65 °C反應過夜。
反應結束，加水淬滅，混合液用乙酸乙酯（10毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/2)。得到60毫克白色固體5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((1R,4R)-4-羥基環己基)脲基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(收率：47.0%)。LCMS: RT =4.12 min, [M-H]- = 909.22。
步驟B：合成 5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((1R,4R)-4-羥基環己基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image735
室溫下，將5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((1R,4R)-4-羥基環己基)脲基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（60毫克，0.07毫摩爾）加入二氯甲烷（2.0毫升）中，滴加三氟乙酸（0.5毫升），室溫反應3小時。
反應結束，蒸乾二氯甲烷並用油泵抽乾三氟乙酸，所得殘餘物用溶於二氯甲烷（1.0毫升）中，將其滴加入正己烷（10.0毫升）中，析出白色固體，抽濾，濾餅用正己烷洗滌，乾燥得到20毫克白色固體5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((1R,4R)-4-羥基環己基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸(收率：37.9%)。LCMS: RT = 3.21 min, [M+H]+ = 755.20。1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.92 (s, 1H), 11.73 (s, 1H), 10.13 (s, 1H), 9.80 (s, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.01 (d,J = 1.8 Hz, 1H), 7.96 (d,J = 2.3 Hz, 1H), 7.83 (d,J = 8.6 Hz, 1H), 7.77 (dd,J = 8.6, 2.3 Hz, 1H), 7.39 (d,J = 9.0 Hz, 1H), 7.33 (d,J = 8.6 Hz, 2H), 7.13 (d,J = 9.1 Hz, 2H), 7.07 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 5.28 (dd,J = 9.5, 5.6 Hz, 1H), 4.47 (s, 1H), 3.74 (s, 1H), 3.67–3.52 (m, 2H), 3.21 (dd,J = 19.3, 5.3 Hz, 2H), 3.09–2.88 (m, 2H), 1.77–1.27 (m, 8H)。
實施例48
合成 5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((S)-2-(羥甲基)吡咯烷-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image287
具體合成路線如下：
步驟A：合成 5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((S)-2-(羥甲基)吡咯烷-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image738
室溫下，向含有(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(-4-((苯氧基羰基)氨基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（120毫克，0.14毫摩爾）和L-脯氨醇（136毫克，0.14毫摩爾）的四氫呋喃（3.0毫升）中滴加N,N -二異丙基乙胺（174毫克，1.4毫摩爾），滴畢，65 °C反應過夜。
反應結束，加水淬滅，混合液用乙酸乙酯（20毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/2)。得到40毫克白色固體5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((S)-2-(羥甲基)吡咯烷-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(收率：31.8%)。LCMS: RT =3.78 min, [M-H]- = 895.31。
步驟B：合成 5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((S)-2-(羥甲基)吡咯烷-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image740
室溫下，將5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((S)-2-(羥甲基)吡咯烷-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（40毫克，0.045毫摩爾）加入二氯甲烷（2.0毫升）中，滴加三氟乙酸（0.5毫升），室溫反應3小時。
反應結束，蒸乾二氯甲烷並用油泵抽乾三氟乙酸，所得殘餘物用溶於二氯甲烷（1.0毫升）中，將其滴加入正己烷（10.0毫升）中，析出白色固體，抽濾，濾餅用正己烷洗滌，乾燥得到6毫克白色固體5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((S)-2-(羥甲基)吡咯烷-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸(收率：18.0%)。LCMS: RT = 3.28 min, [M+H]+ = 741.10。1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.94 (s, 1H), 11.73 (s, 1H), 10.16 (s, 1H), 9.80 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.96 (d,J = 2.2 Hz, 1H), 7.83 (d,J = 8.6 Hz, 1H), 7.77 (dd,J = 8.6, 2.3 Hz, 1H), 7.39 (dd,J = 8.5, 6.3 Hz, 3H), 7.33 (dd,J = 9.2, 1.6 Hz, 1H), 7.16 (d,J = 8.5 Hz, 2H), 7.07 (d,J = 1.8 Hz, 1H), 5.30 (dd,J = 10.4, 6.1 Hz, 1H), 3.94 (s, 1H), 3.82–3.75 (m, 2H), 3.56 (dd,J = 11.6, 6.2 Hz, 2H), 3.23 (dd,J = 12.3, 5.5 Hz, 1H), 3.11–3.06 (m, 1H), 3.06–2.93 (m, 1H), 2.00 (dd, J = 15.9, 9.1 Hz, 1H), 1.89 (dd,J = 18.7, 11.5 Hz, 2H), 1.77 (dd,J = 14.5, 7.3 Hz, 2H)。
實施例49
合成5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((R)-2-(羥甲基)吡咯烷-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image289
具體合成路線如下：
步驟A：合成 5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((R)-2-(羥甲基)吡咯烷-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image743
室溫下，向含有(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(-4-((苯氧基羰基)氨基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（120毫克，0.14毫摩爾）和L-脯氨醇（136毫克，0.14毫摩爾）的四氫呋喃（3.0毫升）中滴加N,N -二異丙基乙胺（174毫克，1.4毫摩爾），滴畢，65 °C反應過夜。
反應結束，加水淬滅，混合液用乙酸乙酯（20毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/2)。得到45毫克白色固體5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((R)-2-(羥甲基)吡咯烷-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(收率：35.8%)。LCMS: RT =3.78 min, [M-H]- = 895.25。
步驟B：合成 5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((R)-2-(羥甲基)吡咯烷-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image745
室溫下，將5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((S)-2-(羥甲基)吡咯烷-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（45毫克，0.05毫摩爾）加入二氯甲烷（2.0毫升）中，滴加三氟乙酸（0.5毫升），室溫反應3小時。
反應結束，蒸乾二氯甲烷並用油泵抽乾三氟乙酸，所得殘餘物用溶於二氯甲烷（1.0毫升）中，將其滴加入正己烷（10.0毫升）中，析出白色固體，抽濾，濾餅用正己烷洗滌，乾燥得到18毫克白色固體5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((R)-2-(羥甲基)吡咯烷-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸(收率：54.0%)。LCMS: RT = 3.28 min, [M+H]+ = 741.13。1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 13.04 (s, 1H), 11.74 (s, 1H), 10.16 (s, 1H), 9.80 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.96 (d,J = 2.3 Hz, 1H), 7.83 (d,J = 8.6 Hz, 1H), 7.77 (dd,J = 8.6, 2.3 Hz, 1H), 7.58–7.37 (m, 3H), 7.35 (d,J = 3.8 Hz, 1H), 7.16 (d,J = 8.3 Hz, 2H), 7.07 (d,J = 1.5 Hz, 1H), 5.30 (dd,J = 11.3, 7.1 Hz, 1H), 3.94 (s, 2H), 3.87–3.63 (m, 3H), 3.23 (dd,J = 16.8, 2.5 Hz, 2H), 3.03 (dd,J = 19.9, 8.5 Hz, 1H), 2.00 (dd,J = 14.1, 7.9 Hz, 1H), 1.88 (dd,J = 17.7, 11.3 Hz, 2H), 1.80 – 1.66 (m, 2H), 1.59–1.40 (m, 1H), 0.86 (t,J = 5.4 Hz, 1H)。
實施例50
合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基）-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-氰基哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image291
具體合成路線如下：
步驟A：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-氰基哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image748
室溫下，向含有(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((苯氧基羰基)氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（200毫克，0.22毫摩爾）和哌啶-4-甲腈（29毫克，0.27毫摩爾）的四氫呋喃（5.0毫升）中滴加N,N -二異丙基乙胺（67毫克，0.67毫摩爾），滴畢，65 °C反應過夜。
反應結束，加水淬滅，混合液用乙酸乙酯（10毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/10)。得到130毫克白色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-氰基哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(收率：64%)。LCMS: RT = 4.26 min, [M+H]+ = 906.33。1 H NMR (500 MHz, DMSO) δ 10.35 (s, 1H), 9.79 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.95 (d,J = 2.1 Hz, 1H), 7.86 (d,J = 9.0 Hz, 1H), 7.82 (d,J = 8.6 Hz, 1H), 7.77 (dd,J = 8.6, 2.1 Hz, 1H), 7.56 (dd,J = 9.1, 1.8 Hz, 1H), 7.40 (d,J = 8.4 Hz, 2H), 7.25 (s, 1H), 7.16 (t,J = 10.8 Hz, 2H), 5.31 (dd,J = 9.9, 5.7 Hz, 1H), 3.69 (dd,J = 9.5, 5.6 Hz, 3H), 3.30–3.21 (m, 4H), 3.14–2.96 (m, 3H), 1.91–1.85 (m, 2H), 1.79–1.62 (m, 3H), 1.60 (s, 9H), 1.55 (s, 9H)。
實施例51
合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-氰基哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image293
具體合成路線如下：
步驟A：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-氰基哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image751
室溫下，將(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基）-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-氰基哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（93毫克，0.1毫摩爾）加入二氯甲烷（2.5毫升）中，滴加三氟乙酸（0.5毫升），室溫反應3小時。
將反應液減壓蒸餾。將所得殘餘物用製備型高效液相色譜純化。分離條件如下，色譜柱：X select C18 19 mm * 150 mm；流動相：水（含有0.05％的三氟乙酸）和乙腈；流速：25毫升/分鐘；梯度：在7分鐘內，乙腈從5% 升到100%；檢測波長：254 nm。純化後，乾燥得到30.15毫克白色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基）-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-氰基哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(收率：39.5%)。LCMS: RT = 3.37 min, [M+H]+ = 750.08。1 H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.93 (s, 1H), 11.72 (s, 1H), 10.14 (s, 1H), 9.79 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.95 (d,J = 2.3 Hz, 1H), 7.82 (d,J = 8.6 Hz, 1H), 7.77 (dd,J = 8.6, 2.3 Hz, 1H), 7.39 (dd,J = 12.4, 8.8 Hz, 3H), 7.32 (dd,J = 8.9, 1.6 Hz, 1H), 7.15 (d,J = 6.9 Hz, 2H), 7.06 (s, 1H), 5.30 (dd,J = 9.8, 5.8 Hz, 1H), 3.69 (dd,J = 9.3, 5.6 Hz, 4H), 3.30–3.15 (m, 4H), 3.15–2.88 (m, 3H), 1.88 (dd, J = 8.2, 4.5 Hz, 2H), 1.73–1.61 (m, 2H)。
實施例52
合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(2-(二甲基氨基)乙氧基)哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image295
具體合成路線如下：
步驟A：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(2-(二甲基氨基)乙氧基)哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image754
室溫下，向含有(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((苯氧基羰基)氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（165毫克，0.18毫摩爾）和N,N -二甲基-2-（哌啶-4-基氧基）乙-1-胺（222毫克，0.56毫摩爾）的四氫呋喃（5.0毫升）中滴加N,N -二異丙基乙胺（191毫克，1.5毫摩爾），滴畢，65 °C反應過夜。
反應結束，加水淬滅，混合液用乙酸乙酯（10毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：甲醇/二氯甲烷=1/9)。得到110毫克黃色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(2-(二甲基氨基)乙氧基)哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(收率：61.5%)。LCMS: RT = 3.41 min, [M+H]+ = 968.33。
步驟B：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(2-(二甲基氨基)乙氧基)哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1-吲哚-2-羧酸
Figure 02_image756
室溫下，將(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(2-(二甲基氨基)乙氧基)哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(110毫克，0.11毫摩爾）加入二氯甲烷（2.0毫升）中，滴加三氟乙酸（0.5毫升），室溫反應3小時。
將反應液減壓蒸餾。將所得殘餘物用製備型高效液相色譜純化。分離條件如下，色譜柱：X select C18 19 mm * 150 mm；流動相：水（含有0.05％的三氟乙酸）和乙腈；流速：25毫升/分鐘；梯度：在7分鐘內，乙腈從5% 升到100%；檢測波長：254 nm。純化後，乾燥得到42毫克白色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(2-(二甲基氨基)乙氧基)哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸(收率：43.5%)。LCMS: RT = 2.77 min, [M+H]+ = 812.41。1 H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.93 (s, 1H), 11.73 (s, 1H), 10.14 (s, 1H), 9.79 (s, 1H), 9.23 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.95 (d,J = 2.2 Hz, 1H), 7.82 (d,J = 8.6 Hz, 1H), 7.77 (dd,J = 8.6, 2.3 Hz, 1H), 7.39 (dd,J = 12.9, 8.8 Hz, 3H), 7.33 (dd,J = 8.9, 1.7 Hz, 1H), 7.13 (t,J = 12.4 Hz, 2H), 7.06 (d,J = 1.7 Hz, 1H), 5.30 (dd,J = 9.7, 5.8 Hz, 1H), 3.80 (d,J = 13.5 Hz, 4H), 3.75–3.71 (m, 3H), 3.61–3.56 (m, 1H), 3.31–3.09 (m, 6H), 3.05–2.96 (m, 1H), 2.80 (d,J = 4.9 Hz, 6H), 1.87 (d,J = 9.7 Hz, 2H), 1.44 (d,J = 8.9 Hz, 2H)。
實施例53
合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-甲氧基哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image297
具體合成路線如下：
步驟A：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-甲氧基哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image759
室溫下，向含有(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((苯氧基羰基)氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（150毫克，0.17毫摩爾）和4-甲氧基哌啶（39毫克，0.34毫摩爾）的四氫呋喃（5.0毫升）中滴加N,N -二異丙基乙胺（65毫克，0.50毫摩爾），滴畢，65 °C反應過夜。
反應結束，加水淬滅，混合液用乙酸乙酯（10毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/6)。得到57毫克白色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-甲氧基哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(收率：37.2%)。LCMS: RT = 4.29 min, [M+H]+ = 911.25。
步驟B：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-甲氧基哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image760
室溫下，將(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-甲氧基哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（57.0毫克，0.07毫摩爾）加入二氯甲烷（2.0毫升）中，滴加三氟乙酸（0.5毫升），室溫反應3小時。
將反應液減壓蒸餾。將所得殘餘物用製備型高效液相色譜純化。分離條件如下，色譜柱：X select C18 19 mm * 150 mm；流動相：水（含有0.05％的三氟乙酸）和乙腈；流速：25毫升/分鐘；梯度：在7分鐘內，乙腈從5% 升到100%；檢測波長：254 nm。純化後，乾燥得到19.1毫克白色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-甲氧基哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H-吲哚-2-羧酸(收率：40.4%)。LCMS: RT = 3.33 min, [M+H]+ = 755.15。1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.92 (s, 1H), 11.72 (s, 1H), 10.14 (s, 1H), 9.78 (s, 1H), 8.46 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.94 (d,J = 2.2 Hz, 1H), 7.78 (dt,J = 8.6, 5.4 Hz, 2H), 7.49–7.26 (m, 4H), 7.09 (dd,J = 32.1, 4.9 Hz, 3H), 5.34–5.25 (m, 1H), 3.76 (d,J = 13.8 Hz, 4H), 3.25 (s, 2H), 3.09 (dd,J = 16.3, 6.6 Hz, 2H), 3.05 – 2.95 (m, 1H), 1.99 (dd,J = 14.4, 6.8 Hz, 1H), 1.81 (s, 2H), 1.37 (dd,J = 11.3, 6.7 Hz, 2H), 1.22 (s, 4H)。
實施例54
合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-甲基哌嗪-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image299
具體合成路線如下：
步驟A：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-甲基哌嗪-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image763
將(S)-5-(3-(4-氨基苯基)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(150毫克，0.19毫摩爾)，4-甲基哌嗪-1-碳醯氯(47毫克，0.29毫摩爾)溶於二氯甲烷（5.0毫升）中，加入吡啶（61毫克，0.78毫摩爾）。室溫反應18小時。
加水淬滅反應，加乙酸乙酯（20毫升）稀釋，水和食鹽水（10毫升×3次）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓蒸餾，所得殘餘物用TLC板純化得84毫克淺黃色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-甲基哌嗪-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（收率：48.3%）。LCMS: RT = 3.47 min, [M+H]+ = 896.29。
步驟B：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-甲基哌嗪-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image765
室溫下，將(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-甲基哌嗪-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（84毫克，0.09毫摩爾）加入二氯甲烷（2.0毫升）中，滴加三氟乙酸（0.5毫升），室溫反應3小時。
將反應液減壓蒸餾。將所得殘餘物用製備型高效液相色譜純化。分離條件如下，色譜柱：X select C18 19 mm * 150 mm；流動相：水（含有0.05％的三氟乙酸）和乙腈；流速：25毫升/分鐘；梯度：在7分鐘內，乙腈從5% 升到100%；檢測波長：254 nm。純化後，乾燥得到21毫克白色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-甲基哌嗪-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸(收率：28.9%)。LCMS: RT = 2.66 min, [M+H]+ = 740.20。1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.92 (s, 1H), 11.72 (s, 1H), 10.13 (s, 1H), 9.79 (s, 1H), 9.71 (s, 1H), 8.73 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.94 (d,J = 2.2 Hz, 1H), 7.78 (dt,J = 8.6, 5.4 Hz, 2H), 7.43–7.30 (m, 3H), 7.26–7.01 (m, 3H), 5.30 (dt,J = 10.4, 5.4 Hz, 1H), 4.24 (d,J = 14.3 Hz, 2H), 3.44 (d,J = 11.6 Hz, 2H), 3.22 (d,J = 10.7 Hz, 1H), 3.17–3.07 (m, 2H), 2.99 (d,J = 10.1 Hz, 3H), 2.81 (d,J = 3.7 Hz, 2H), 1.99 (dd,J = 14.5, 6.9 Hz, 1H), 1.22 (s, 4H)。
實施例55
合成 5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基）苯基）-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((R))-3-羥基哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image301
具體合成路線如下：
步驟A：合成 5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((R))-3-羥基哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image768
室溫下，向含有(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((苯氧基羰基)氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（300毫克，0.34毫摩爾）和(R)-哌啶-3-醇（92毫克，0.67毫摩爾）的四氫呋喃（10.0毫升）中滴加三乙胺（101毫克，1.01毫摩爾），滴畢，65 °C反應過夜。
反應結束，加水淬滅，混合液用乙酸乙酯（10毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：甲醇/二氯甲烷=1/10)。得到233毫克紅棕色固體5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((R))-3-羥基哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1-吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(收率：77.1%)。LCMS: RT = 3.69 min, [M+H]+ = 897.28。
步驟B：合成 5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基）苯基）-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((R))-3-羥基哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image770
室溫下，將5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((R))-3-羥基哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（233毫克，0.29毫摩爾）加入二氯甲烷（10.0毫升）中，滴加三氟乙酸（2.5毫升），室溫反應3小時。
將反應液減壓蒸餾。將所得殘餘物用製備型高效液相色譜純化。分離條件如下，色譜柱：X select C18 19 mm * 150 mm；流動相：水（含有0.05％的三氟乙酸）和乙腈；流速：25毫升/分鐘；梯度：在7分鐘內，乙腈從5% 升到100%；檢測波長：254 nm。純化後，乾燥得到76.82毫克白色固體5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H-四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((R))-3-羥基哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H-吲哚-2-羧酸(收率：39.9%)。LCMS: RT = 3.19 min, [M+H]+ = 741.21。1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.91 (s, 1H), 11.72 (s, 1H), 10.13 (s, 1H), 9.78 (s, 1H), 8.41 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.94 (d,J = 2.2 Hz, 1H), 7.81 (d,J = 8.6 Hz, 1H), 7.76 (dd,J = 8.6, 2.2 Hz, 1H), 7.39 (d,J = 8.6 Hz, 2H), 7.37–7.29 (m, 2H), 7.13 (d,J = 8.1 Hz, 2H), 7.05 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 5.29 (dd,J = 9.7, 5.7 Hz, 1H), 3.94 (d,J = 9.4 Hz, 2H), 3.77 (d,J = 13.2 Hz, 2H), 3.26–3.12 (m, 2H), 3.08–2.80 (m, 3H), 2.71–2.63 (m, 1H), 1.75 (dd,J = 77.7, 8.9 Hz, 3H), 1.40–1.25 (m, 2H)。
實施例56
合成 5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基）苯基）-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((2S，3S)-1-羥基-3-甲基戊-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image303
具體合成路線如下：
步驟A：合成 5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((2S,3S)-1-羥基-3-甲基戊-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image773
室溫下，向含有(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((苯氧基羰基)氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（150毫克，0.17毫摩爾）和(2S,3S)-2-氨基-3-甲基戊-1-醇（24毫克，0.20毫摩爾）的四氫呋喃（5.0毫升）中滴加N,N -二異丙基乙胺（65毫克，0.5毫摩爾），滴畢，65 °C反應過夜。
反應結束，加水淬滅，混合液用乙酸乙酯（10毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/3)。得到71毫克淺黃色固體5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((2S，3S)-1-羥基-3-甲基戊-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(收率：46.4%)。LCMS: RT = 4.29 min, [M+H]+ = 913.33。
步驟B：合成 5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基）苯基）-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((2S,3S)-1-羥基-3-甲基戊-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image775
室溫下，將5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((2S，3S)-1-羥基-3-甲基戊-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（71毫克，0.07毫摩爾）加入二氯甲烷（2.0毫升）中，滴加三氟乙酸（0.5毫升），室溫反應3小時。
將反應液減壓蒸餾。將所得殘餘物用製備型高效液相色譜純化。分離條件如下，色譜柱：X select C18 19 mm * 150 mm；流動相：水（含有0.05％的三氟乙酸）和乙腈；流速：25毫升/分鐘；梯度：在7分鐘內，乙腈從5% 升到100%；檢測波長：254 nm。純化後，乾燥得到76.82毫克白色固體5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基）苯基）-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((2S,3S)-1-羥基-3-甲基戊-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸(收率：48.2%)。LCMS: RT = 3.40 min, [M+H]+ = 757.35。1 H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.94 (s, 1H), 11.72 (s, 1H), 10.14 (s, 1H), 9.80 (s, 1H), 8.44 (s, 1H), 8.11–7.90 (m, 2H), 7.90–7.70 (m, 2H), 7.35 (dd,J = 22.4, 8.5 Hz, 4H), 7.27–6.98 (m, 3H), 6.01 (d,J = 8.0 Hz, 1H), 5.27 (dd,J = 9.9, 5.5 Hz, 1H), 4.64 (s, 1H), 3.74 (s, 2H), 3.46 (dd,J = 27.6, 16.8 Hz, 3H), 3.20 (d,J = 11.1 Hz, 1H), 3.05–2.93 (m, 1H), 1.63–1.42 (m, 2H), 1.23 (s, 1H), 1.14–0.98 (m, 1H), 0.85 (t,J = 6.6 Hz, 5H)。
實施例57
合成 (S)-5-(3-(4-(2-氧雜-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-甲醯氨基)苯基)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image305
具體合成路線如下：
步驟A：合成 (S)-5-(3-(4-(2-氧雜-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-甲醯氨基）苯基)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image778
室溫下，向含有(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((苯氧基羰基)氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（90毫克，0.10毫摩爾）和2-氧雜-7-氮雜螺[3.5]壬烷（38毫克，0.30毫摩爾）的四氫呋喃（2.0毫升）中滴加三乙胺（30毫克，0.30毫摩爾），滴畢，65 °C反應過夜。
反應結束，加水淬滅，混合液用乙酸乙酯（10毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/5)。得到90毫克淺黃色固體(S)-5-(3-(4-(2-氧雜-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-甲醯氨基）苯基)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(收率：96.7%)。LCMS: RT = 4.24 min, [M+H]+ = 923.28。
步驟B：合成 (S)-5-(3-(4-(2-氧雜-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-甲醯氨基)苯基)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image780
室溫下，將(S)-5-(3-(4-(2-氧雜-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-甲醯氨基）苯基)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（90毫克，0.09毫摩爾）加入二氯甲烷（2.0毫升）中，滴加三氟乙酸（0.5毫升），室溫反應3小時。
將反應液減壓蒸餾。將所得殘餘物用製備型高效液相色譜純化。分離條件如下，色譜柱：X select C18 19 mm * 150 mm；流動相：水（含有0.05％的三氟乙酸）和乙腈；流速：25毫升/分鐘；梯度：在7分鐘內，乙腈從5% 升到100%；檢測波長：254 nm。純化後，乾燥得到24毫克白色固體(S)-5-(3-(4-(2-氧雜-7-氮雜螺[3.5]壬烷-7-甲醯氨基)苯基)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸(收率：48.2%)。LCMS: RT = 3.29 min, [M+H]+ = 767.29。1 H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.94 (s, 1H), 11.73 (s, 1H), 10.14 (s, 1H), 9.80 (d,J = 5.9 Hz, 1H), 8.40 (d,J = 35.0 Hz, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.87–7.66 (m, 2H), 7.37 (ddd,J = 26.1, 8.8, 3.9 Hz, 4H), 7.23–7.11 (m, 2H), 7.07 (d,J = 12.5 Hz, 1H), 5.32–5.25 (m, 1H), 3.49 (s, 2H), 3.47–3.33 (m, 4H), 3.30 (d,J = 9.1 Hz, 2H), 3.22 (d,J = 9.3 Hz, 2H), 3.00 (s, 1H), 1.96 (d,J = 49.5 Hz, 1H), 1.60–1.18 (m, 6H)。
實施例58
合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(嗎啉-4-羰基)哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image307
具體合成路線如下：
步驟A：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(嗎啉-4-羰基)哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image783
室溫下，向含有(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((苯氧基羰基)氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（150毫克，0.12毫摩爾）和嗎啉代（哌啶-4-基）甲酮（154毫克，0.49毫摩爾）的四氫呋喃（2.0毫升）中滴加N,N -二異丙基乙胺（92毫克，0.72毫摩爾），滴畢，65 °C反應過夜。
反應結束，加水淬滅，混合液用乙酸乙酯（10毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/3)。得到100毫克白色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(嗎啉-4-羰基)哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(收率：96.7%)。LCMS: RT = 4.19 min, [M+H]+ = 994.37。
步驟B：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(嗎啉-4-羰基)哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image785
室溫下，將(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(嗎啉-4-羰基)哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（100毫克，0.1毫摩爾）加入二氯甲烷（2.0毫升）中，滴加三氟乙酸（0.5毫升），室溫反應3小時。
反應結束，蒸乾二氯甲烷並用油泵抽乾三氟乙酸，所得殘餘物用溶於二氯甲烷（1.0毫升）中，將其滴加入正己烷（10.0毫升）中，析出白色固體，抽濾，濾餅用正己烷洗滌，乾燥得到20毫克黃色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(嗎啉-4-羰基)哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸(收率：23.8%)。LCMS: RT = 3.23 min, [M+H]+ = 838.21。1 H NMR (500 MHz, DMSO) δ 13.11 (s, 1H), 11.51 (s, 1H), 10.15 (d,J = 29.0 Hz, 1H), 9.78 (s, 1H), 8.45 (s, 1H), 8.09–7.90 (m, 2H), 7.87–7.72 (m, 2H), 7.50 (t,J = 8.6 Hz, 1H), 7.45–7.31 (m, 3H), 7.29–7.01 (m, 3H), 5.68 (t,J = 7.8 Hz, 1H), 5.39–5.17 (m, 2H), 4.21–4.08 (m, 3H), 3.89–3.69 (m, 4H), 3.25–3.19 (m, 1H), 3.07–2.99 (m, 1H), 2.84 (t,J = 11.7 Hz, 3H), 2.25 (d,J = 6.8 Hz, 1H), 2.10 (d,J = 20.3 Hz, 1H), 1.99 (ddd,J = 14.3, 13.2, 6.1 Hz, 2H), 1.87 – 1.81 (m, 1H), 1.63 (d,J = 11.1 Hz, 2H)。
實施例59
合成 5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-(苯基磺醯基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image309
具體合成路線如下：
步驟A：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-(苯磺醯基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image788
將(S)-5-(3-(4-氨基苯基)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(150毫克，0.19毫摩爾)，苯磺醯異氰酸酯(39毫克，0.21毫摩爾)溶於二氯甲烷（5.0毫升）中，加入吡啶（61毫克，0.78毫摩爾）。室溫反應18小時。
加水淬滅反應，加乙酸乙酯（20毫升）稀釋，水和食鹽水（10毫升×3次）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓蒸餾，所得殘餘物用TLC板純化得100毫克淺黃色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-(苯磺醯基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（收率：54.0%）。LCMS: RT = 4.36 min, [M-H]- = 951.18。
步驟B：合成 5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-(苯基磺醯基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image790
室溫下，將(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-(苯磺醯基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（100毫克，0.10毫摩爾）加入二氯甲烷（2.0毫升）中，滴加三氟乙酸（0.5毫升），室溫反應3小時。
將反應液減壓蒸餾。將所得殘餘物用製備型高效液相色譜純化。分離條件如下，色譜柱：X select C18 19 mm * 150 mm；流動相：水（含有0.05％的三氟乙酸）和乙腈；流速：25毫升/分鐘；梯度：在7分鐘內，乙腈從5% 升到100%；檢測波長：254 nm。純化後，乾燥得到2毫克白色固體5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-(苯基磺醯基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸(收率：2.4%)。 LCMS: RT = 3.51 min, [M-H]- = 795.23。
實施例60
合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(嗎啉)-4-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image311
具體合成路線如下：
步驟A：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(嗎啉)-4-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image793
室溫下，向含有(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((苯氧基羰基)氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（150毫克，0.17毫摩爾）和嗎啉（22毫克，0.25毫摩爾）的四氫呋喃（5.0毫升）中滴加三乙胺（51毫克，0.50毫摩爾），滴畢，65 °C反應過夜。
反應結束，加水淬滅，混合液用乙酸乙酯（10毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/1)。得到88毫克白色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(嗎啉)-4-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(收率：59.5%)。LCMS: RT = 3.77 min, [M+H]+ = 883.24。
步驟B：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(嗎啉)-4-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image795
室溫下，將(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(嗎啉)-4-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（88毫克，0.1毫摩爾）加入二氯甲烷（2.0毫升）中，滴加三氟乙酸（0.5毫升），室溫反應3小時。
將反應液減壓蒸餾。將所得殘餘物用製備型高效液相色譜純化。分離條件如下，色譜柱：X select C18 19 mm * 150 mm；流動相：水（含有0.05％的三氟乙酸）和乙腈；流速：25毫升/分鐘；梯度：在7分鐘內，乙腈從5%升到100%；檢測波長：254 nm。純化後，乾燥得到26.9毫克白色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(嗎啉)-4-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸(收率：37.4%)。LCMS: RT = 3.25 min, [M+H]+ = 727.17。1 H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.92 (s, 1H), 11.72 (s, 1H), 10.14 (s, 1H), 9.77 (d,J = 23.4 Hz, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.95 (d,J = 2.2 Hz, 1H), 7.82 (d,J = 8.6 Hz, 1H), 7.77 (dd,J = 8.6, 2.2 Hz, 1H), 7.41 (d,J = 8.5 Hz, 2H), 7.37 (d,J = 8.9 Hz, 1H), 7.32 (d,J = 7.3 Hz, 1H), 7.17 (t,J = 14.2 Hz, 2H), 7.05 (s, 1H), 5.30 (dd,J = 9.8, 5.8 Hz, 1H), 3.74 (s, 2H), 3.65 – 3.54 (m, 5H), 3.44–3.39 (m, 4H), 3.29–3.17 (m, 2H), 3.06–2.98 (m, 1H)。
實施例61
合成 (S)-5-(3-(4-(4-氨基甲醯基-1-甲醯氨基）苯基）-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image313
具體合成路線如下：
步驟A：合成 (S)-5-(3-(4-(4-氨基甲醯基-1-甲醯氨基)苯基)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2，3-二氧代哌嗪-1-基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image798
室溫下，向含有(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((苯氧基羰基)氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（150毫克，0.17毫摩爾）和哌啶-4-甲醯胺（32毫克，0.25毫摩爾）的四氫呋喃（5.0毫升）中滴加N,N -二異丙基乙胺（65毫克，0.50毫摩爾），滴畢，65 °C反應過夜。
反應結束，加水淬滅，混合液用乙酸乙酯（10毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/2)。得到68毫克黃色固體(S)-5-(3-(4-(4-氨基甲醯基-1-甲醯氨基)苯基)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯 (收率：43.8%)。LCMS: RT = 4.10 min, [M+H]+ = 924.27。
步驟B：合成 (S)-5-(3-(4-(4-氨基甲醯基-1-甲醯氨基)苯基)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image800
室溫下，將(S)-5-(3-(4-(4-氨基甲醯基-1-甲醯氨基)苯基)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2，3-二氧代哌嗪-1-基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（68毫克，0.07毫摩爾）加入二氯甲烷（2.0毫升）中，滴加三氟乙酸（0.5毫升），室溫反應3小時。
將反應液減壓蒸餾。將所得殘餘物用製備型高效液相色譜純化。分離條件如下，色譜柱：X select C18 19 mm * 150 mm；流動相：水（含有0.05％的三氟乙酸）和乙腈；流速：25毫升/分鐘；梯度：在7分鐘內，乙腈從5% 升到100%；檢測波長：254 nm。純化後，乾燥得到56毫克白色固體(S)-5-(3-(4-(4-氨基甲醯基-1-甲醯氨基)苯基)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸(收率：37.4%)。LCMS: RT = 3.09 min, [M+H]+ = 768.27。1 H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.93 (s, 1H), 11.73 (s, 1H), 10.14 (s, 1H), 9.79 (s, 1H), 8.45 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.95 (d,J = 2.2 Hz, 1H), 7.82 (d,J = 8.6 Hz, 1H), 7.77 (dd,J = 8.6, 2.2 Hz, 1H), 7.36 (ddd,J = 12.5, 10.6, 5.1 Hz, 4H), 7.27 (s, 1H), 7.20–7.11 (m, 2H), 7.07 (d,J = 9.5 Hz, 1H), 6.79 (s, 1H), 5.30 (dd, J = 9.7, 5.9 Hz, 1H), 4.10 (d,J = 13.0 Hz, 3H), 3.74 (s, 1H), 3.22 (d,J = 9.4 Hz, 2H), 3.05–2.98 (m, 1H), 2.78 (t,J = 11.8 Hz, 2H), 2.29 (t,J = 11.5 Hz, 1H), 1.70 (d,J = 12.0 Hz, 3H), 1.46 (d,J = 12.2 Hz, 3H)。
實施例62
合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(甲氧基甲基)哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image315
具體合成路線如下：
步驟A：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(甲氧基甲基)哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image803
室溫下，向含有(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((苯氧基羰基)氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（150毫克，0.17毫摩爾）和4-(甲氧基甲基)哌啶（66毫克，0.51毫摩爾）的四氫呋喃（5.0毫升）中滴加N,N -二異丙基乙胺（65毫克，0.50毫摩爾），滴畢，65 °C反應過夜。
反應結束，加水淬滅，混合液用乙酸乙酯（10毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/4)。得到90毫克黃色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(甲氧基甲基)哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H-吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯 (收率：57.7%)。LCMS: RT = 3.92 min, [M+H]+ = 925.25。
步驟B：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(甲氧基甲基)哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image805
室溫下，將(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(甲氧基甲基)哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（90毫克，0.09毫摩爾）加入二氯甲烷（2.0毫升）中，滴加三氟乙酸（0.5毫升），室溫反應3小時。
將反應液減壓蒸餾。將所得殘餘物用製備型高效液相色譜純化。分離條件如下，色譜柱：X select C18 19 mm * 150 mm；流動相：水（含有0.05％的三氟乙酸）和乙腈；流速：25毫升/分鐘；梯度：在7分鐘內，乙腈從5% 升到100%；檢測波長：254 nm。純化後，乾燥得到12毫克白色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(甲氧基甲基)哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸(收率：15.9%)。LCMS: RT = 3.44 min, [M+H]+ = 769.17。1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.90 (s, 1H), 11.71 (s, 1H), 10.13 (s, 1H), 9.78 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 8.03–7.89 (m, 2H), 7.77 (dt,J = 8.6, 5.4 Hz, 2H), 7.40 (d,J = 8.5 Hz, 2H), 7.37–7.28 (m, 2H), 7.13 (d,J = 8.2 Hz, 2H), 7.05 (d,J = 1.5 Hz, 1H), 5.29 (dd,J = 9.7, 5.8 Hz, 1H), 4.10 (d,J = 13.6 Hz, 2H), 3.74 (s, 2H), 3.26 – 3.16 (m, 6H), 3.04–2.96 (m, 1H), 2.72 (dd,J = 27.3, 15.6 Hz, 3H), 2.06–1.93 (m, 1H), 1.81–1.58 (m, 4H), 1.45 (s, 1H)。
實施例63
合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(羥甲基)哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image317
具體合成路線如下：
步驟A：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(羥甲基)哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image808
室溫下，向含有(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((苯氧基羰基)氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（150毫克，0.17毫摩爾）和4-羥甲基哌啶（65毫克，0.51毫摩爾）的四氫呋喃（5.0毫升）中滴加N,N -二異丙基乙胺（65毫克，0.50毫摩爾），滴畢，65 °C反應過夜。
反應結束，加水淬滅，混合液用乙酸乙酯（10毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/1)。得到75毫克黃色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(羥甲基)哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯 (收率：49.0%)。LCMS: RT = 4.29 min, [M+H]+ = 911.35。
步驟B：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(羥甲基)哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image810
室溫下，將(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(羥甲基)哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（75.0毫克，0.08毫摩爾）加入二氯甲烷（2.0毫升）中，滴加三氟乙酸（0.5毫升），室溫反應3小時。
反應結束，蒸乾二氯甲烷並用油泵抽乾三氟乙酸，所得殘餘物用溶於二氯甲烷（1.0毫升）中，將其滴加入正己烷（10.0毫升）中，析出白色固體，抽濾，濾餅用正己烷洗滌，乾燥得到8.5毫克白色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(羥甲基)哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸(收率：13.1%)。LCMS: RT = 3.20 min, [M+H]+ = 755.31。1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.91 (s, 1H), 11.71 (s, 1H), 10.13 (s, 1H), 9.78 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.94 (d,J = 2.2 Hz, 1H), 7.77 (dt,J = 8.6, 5.4 Hz, 2H), 7.47–7.24 (m, 4H), 7.20–7.02 (m, 3H), 6.97 (s, 1H), 5.29 (dd,J = 9.7, 5.8 Hz, 1H), 4.11 (d,J = 13.0 Hz, 2H), 3.92 (s, 2H), 3.73 (s, 2H), 3.25 (d,J = 6.2 Hz, 2H), 3.13–2.85 (m, 2H), 2.71 (dd,J = 24.1, 13.0 Hz, 3H), 1.65 (d,J = 12.9 Hz, 2H), 1.55 (s, 1H), 1.05 (dd,J = 21.3, 11.9 Hz, 2H)。
實施例64
合成 5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((S))-3-(羥甲基)吡咯烷-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image319
具體合成路線如下：
步驟A：合成 5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((S))-3-(羥甲基)吡咯烷-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image813
室溫下，向含有(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((苯氧基羰基)氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（150毫克，0.17毫摩爾）和(S)-吡咯烷-3-基甲醇（34毫克，0.34毫摩爾）的四氫呋喃（5.0毫升）中滴加N,N -二異丙基乙胺（65毫克，0.50毫摩爾），滴畢，65 °C反應過夜。
反應結束，加水淬滅，混合液用乙酸乙酯（10毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/3)。得到85毫克黃色固體5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((S))-3-(羥甲基)吡咯烷-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(收率：56.3%)。LCMS: RT = 4.29 min, [M+H]+ = 897.42。
步驟B：合成 5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((S))-3-(羥甲基)吡咯烷-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image815
室溫下，將5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((S))-3-(羥甲基)吡咯烷-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（85.0毫克，0.08毫摩爾）加入二氯甲烷（2.0毫升）中，滴加三氟乙酸（0.5毫升），室溫反應3小時。
將反應液減壓蒸餾。將所得殘餘物用製備型高效液相色譜純化。分離條件如下，色譜柱：X select C18 19 mm * 150 mm；流動相：水（含有0.05％的三氟乙酸）和乙腈；流速：25毫升/分鐘；梯度：在7分鐘內，乙腈從5% 升到100%；檢測波長：254 nm。純化後，乾燥得到5.7毫克白色固體5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((S))-3-(羥甲基)吡咯烷-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸(收率：13.1%)。LCMS: RT = 3.14 min, [M-H]- = 741.25。
實施例65
合成 5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((R))-3-(羥甲基)吡咯烷-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image321
具體合成路線如下：
步驟A：合成 5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((R))-3-(羥甲基)吡咯烷-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image818
室溫下，向含有(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((苯氧基羰基)氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（180毫克，0.20毫摩爾）和(R)-吡咯烷-3-基甲醇（24毫克，0.24毫摩爾）的四氫呋喃（5.0毫升）中滴加N,N -二異丙基乙胺（65毫克，0.50毫摩爾），滴畢，65 °C反應過夜。
反應結束，加水淬滅，混合液用乙酸乙酯（10毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/3)。得到90毫克黃色固體5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((R))-3-(羥甲基)吡咯烷-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(收率：49.7%)。LCMS: RT = 4.19 min, [M+H]+ = 897.33。
步驟B：合成 5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((R))-3-(羥甲基)吡咯烷-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image820
室溫下，將5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((R))-3-(羥甲基)吡咯烷-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（90毫克，0.08毫摩爾）加入二氯甲烷（2.0毫升）中，滴加三氟乙酸（0.5毫升），室溫反應3小時。
將反應液減壓蒸餾。將所得殘餘物用製備型高效液相色譜純化。分離條件如下，色譜柱：X select C18 19 mm * 150 mm；流動相：水（含有0.05％的三氟乙酸）和乙腈；流速：25毫升/分鐘；梯度：在7分鐘內，乙腈從5% 升到100%；檢測波長：254 nm。純化後，乾燥得到56毫克淺黃色固體5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((R))-3-(羥甲基)吡咯烷-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸(收率：75.1%)。LCMS: RT = 3.16 min, [M+H]+ = 741.17。1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.93 (s, 1H), 11.71 (s, 1H), 10.13 (s, 1H), 9.78 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.94 (d,J = 2.2 Hz, 1H), 7.81 (d,J = 8.6 Hz, 1H), 7.76 (dd,J = 8.6, 2.2 Hz, 1H), 7.45 (d,J = 8.5 Hz, 2H), 7.33 (dt,J = 8.9, 5.4 Hz, 2H), 7.13 (d,J = 7.9 Hz, 2H), 7.05 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 5.29 (dd,J = 9.7, 5.8 Hz, 1H), 3.95 (s, 2H), 3.73 (s, 2H), 3.42 (dd,J = 7.0, 3.5 Hz, 5H), 3.26–3.09 (m, 3H), 3.05–2.94 (m, 1H), 2.31 (dt,J = 14.1, 7.1 Hz, 1H), 1.90 (td,J = 12.1, 7.2 Hz, 1H), 1.62 (td,J = 15.4, 7.7 Hz, 1H)。
實施例66
合成 5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((S)-1-羥基-4-甲基戊-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image323
具體合成路線如下：
步驟A：合成 5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((S)-1-羥基-4-甲基戊-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image823
室溫下，向含有(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((苯氧基羰基)氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（235毫克，0.26毫摩爾）和(S)-2-氨基-4-甲基戊-1-醇（62毫克，0.53毫摩爾）的四氫呋喃（5.0毫升）中滴加N,N -二異丙基乙胺（101毫克，0.78毫摩爾），滴畢，65 °C反應過夜。
反應結束，加水淬滅，混合液用乙酸乙酯（10毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/3)。得到68毫克黃色固體5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((S)-1-羥基-4-甲基戊-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(收率：28.2%)。LCMS: RT = 4.29 min, [M+H]+ = 913.43。
步驟B：合成 5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((S)-1-羥基-4-甲基戊-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image825
室溫下，將5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((S)-1-羥基-4-甲基戊-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（68毫克，0.07毫摩爾）加入二氯甲烷（2.0毫升）中，滴加三氟乙酸（0.5毫升），室溫反應3小時。
反應結束，蒸乾二氯甲烷並用油泵抽乾三氟乙酸，所得殘餘物用溶於二氯甲烷（1.0毫升）中，將其滴加入正己烷（10.0毫升）中，析出白色固體，抽濾，濾餅用正己烷洗滌，乾燥得到19.44毫克淺紅色固體5-((S)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(3-((S)-1-羥基-4-甲基戊-2-基)脲基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸(收率：75.1%)。 LCMS: RT = 3.40 min, [M-H]- = 757.17。1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.89 (s, 1H), 11.71 (s, 1H), 10.12 (s, 1H), 9.78 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 8.03–7.90 (m, 2H), 7.77 (dt,J = 8.6, 5.4 Hz, 2H), 7.35 (dd,J = 19.7, 8.6 Hz, 4H), 7.22–7.01 (m, 3H), 5.93 (d,J = 8.4 Hz, 1H), 5.27 (dd,J = 9.9, 5.5 Hz, 1H), 3.88 (s, 1H), 3.73–3.51 (m, 5H), 3.47–3.25 (m, 3H), 3.14 (ddd,J = 17.1, 14.8, 8.5 Hz, 2H), 3.06–2.93 (m, 1H), 1.63 (dt,J = 13.3, 6.5 Hz, 1H), 1.36–1.04 (m, 6H), 0.87 (t,J = 6.9 Hz, 6H)。
實施例67
合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(2-羥乙基)哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image325
具體合成路線如下：
步驟A：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(2-羥乙基）哌啶-1-甲醯胺基）苯基）丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image828
室溫下，向含有(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((苯氧基羰基)氨基)苯基)丙醯氨基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（150毫克，0.16毫摩爾）和2-(哌啶-4-基)乙-1-醇（65毫克，0.50毫摩爾）的四氫呋喃（5.0毫升）中滴加N,N -二異丙基乙胺（50毫克，0.50毫摩爾），滴畢，65 °C反應過夜。
反應結束，加水淬滅，混合液用乙酸乙酯（10毫升×3次）萃取，合併有機相，有機相先用飽和食鹽水（10毫升×2次）洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，最後減壓濃縮。所得殘餘物用矽膠柱層析純化(洗脫劑：乙酸乙酯/正己烷=1/2)。得到75毫克白色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(2-羥乙基）哌啶-1-甲醯胺基）苯基）丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(收率：48.1%)。LCMS: RT = 4.29 min, [M+H]+ = 925.45。
步驟B：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(2-羥乙基)哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image830
室溫下，將(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(2-羥乙基）哌啶-1-甲醯胺基）苯基）丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（75.0毫克，0.08毫摩爾）加入二氯甲烷（2.0毫升）中，滴加三氟乙酸（0.5毫升），室溫反應3小時。
將反應液減壓蒸餾。將所得殘餘物用製備型高效液相色譜純化。分離條件如下，色譜柱：X select C18 19 mm * 150 mm；流動相：水（含有0.05％的三氟乙酸）和乙腈；流速：25毫升/分鐘；梯度：在7分鐘內，乙腈從5%升到100%；檢測波長：254 nm。純化後，乾燥得到8.5毫克白色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-(4-(2-羥乙基)哌啶-1-甲醯胺基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸(收率：75.1%)。LCMS: RT = 3.23 min, [M+H]+ = 769.13。
實施例68
合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((N-乙基氨磺醯基)氨基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image327
具體合成路線如下：
步驟A：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((N-乙基氨磺醯基)氨基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯
Figure 02_image833
將(S)-5-(3-(4-氨基苯基)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(150毫克，0.23毫摩爾)，甲基氨磺醯氯(32毫克，0.23毫摩爾)溶於二氯甲烷（5.0毫升）中，加入N,N-二異丙基乙胺（58毫克，0.45毫摩爾）。室溫反應18小時。
加水淬滅反應，加乙酸乙酯（20毫升）稀釋，水和食鹽水（10毫升×3次）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓蒸餾，所得殘餘物用TLC板純化得20毫克淺黃色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((N-乙基氨磺醯基)氨基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（收率：10.1%）。LCMS: RT = 4.29 min, [M-H]- = 875.21。
步驟B：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((N-乙基氨磺醯基)氨基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image835
室溫下，將(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((N-乙基氨磺醯基)氨基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯（20.0毫克，0.02毫摩爾）加入二氯甲烷（2.0毫升）中，滴加三氟乙酸（0.5毫升），室溫反應3小時。
將反應液減壓蒸餾。將所得殘餘物用製備型高效液相色譜純化。分離條件如下，色譜柱：X select C18 19 mm * 150 mm；流動相：水（含有0.05％的三氟乙酸）和乙腈；流速：25毫升/分鐘；梯度：在7分鐘內，乙腈從5%升到100%；檢測波長：254 nm。純化後，乾燥得到15.5毫克白色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((N-乙基氨磺醯基)氨基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸(收率：94.3%)。LCMS: RT = 3.39 min, [M+H]+ = 721.12。1 H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.91 (s, 1H), 11.71 (s, 1H), 10.12 (s, 1H), 9.78 (s, 1H), 9.57 (s, 1H), 8.01–7.89 (m, 2H), 7.78 (dt,J = 8.6, 5.4 Hz, 2H), 7.41–7.26 (m, 3H), 7.15 (dd,J = 30.7, 8.5 Hz, 4H), 7.06 (t,J = 3.7 Hz, 1H), 5.30 (dd,J = 9.6, 6.0 Hz, 1H), 3.72 (s, 4H), 3.26–3.17 (m, 1H), 3.07–2.97 (m, 1H), 2.89–2.78 (m, 2H), 0.96–0.80 (m, 3H)。
實施例69
合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基）苯基）-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((N,N -二甲基氨磺醯基)氨基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image329
具體合成路線如下：
步驟A：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((N,N -二甲基氨磺醯基)氨基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁基酯
Figure 02_image838
將(S)-5-(3-(4-氨基苯基)-2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁酯(180毫克，0.23毫摩爾)，甲基氨磺醯氯(40毫克，0.28毫摩爾)溶於二氯甲烷（5.0毫升）中，加入吡啶（37毫克，0.46毫摩爾）。室溫反應2小時。
加水淬滅反應，加乙酸乙酯（20毫升）稀釋，水和食鹽水（10毫升×3次）洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓蒸餾，所得殘餘物用TLC板純化得85毫克淺黃色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((N,N -二甲基氨磺醯基)氨基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁基酯（收率41.5%）。LCMS: RT = 4.32 min, [M-H]- = 875.13。
步驟B：合成 (S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基）苯基）-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((N,N-二甲基氨磺醯基)氨基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸
Figure 02_image840
室溫下，將(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基)苯基)-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((N,N -二甲基氨磺醯基)氨基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-1,2-二羧酸二叔丁基酯（85毫克，0.09毫摩爾）加入二氯甲烷（2.0毫升）中，滴加三氟乙酸（0.5毫升），室溫反應3小時。
將反應液減壓蒸餾。將所得殘餘物用製備型高效液相色譜純化。分離條件如下，色譜柱：X select C18 19 mm * 150 mm；流動相：水（含有0.05％的三氟乙酸）和乙腈；流速：25毫升/分鐘；梯度：在7分鐘內，乙腈從5% 升到100%；檢測波長：254 nm。純化後，乾燥得到24.3毫克白色固體(S)-5-(2-(4-(5-氯-2-(1H -四唑-1-基）苯基）-2,3-二氧代哌嗪-1-基)-3-(4-((N,N -二甲基氨磺醯基)氨基)苯基)丙醯胺基)-1H -吲哚-2-羧酸(收率：34.3%)。LCMS: RT = 3.41 min, [M-H]- = 721.31。1 H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.93 (s, 1H), 11.73 (s, 1H), 10.12 (s, 1H), 9.80 (d,J = 4.7 Hz, 2H), 7.99 (s, 1H), 7.94 (d,J = 2.2 Hz, 1H), 7.79 (dt,J = 8.6, 5.4 Hz, 2H), 7.37 (d,J = 8.9 Hz, 1H), 7.31 (dd,J = 8.9, 1.8 Hz, 1H), 7.18 (dd,J = 20.2, 8.0 Hz, 4H), 7.06 (t,J = 5.2 Hz, 1H), 5.34–5.26 (m, 1H), 4.19 (s, 1H), 3.73 (s, 2H), 3.23 (dd,J = 14.4, 5.0 Hz, 1H), 3.03 (dd,J = 14.0, 10.2 Hz, 1H), 2.64 (s, 6H), 1.99 (dt,J = 12.5, 6.9 Hz, 1H)。
實施例70：吸收光法檢測本發明化合物對人凝血因數XIa抑制的生物活性
1、  實驗材料
酶：Human Factor XIa（ENZYME RESEARCH，貨號HFXIa 1111a）
底物：S-2366TM：（CHROMOGENIX，貨號82109039）
緩衝液：145 mM NaCl，5 mM KCl，1 mg/mL PEG 8000,，30 mM HEPES ，PH7.4
2、  實驗步驟
將溶於100%DMSO的10mM受試化合物用100%DMSO稀釋至1000、200、40、8、1.6、0.32、0.064、0.0128、0.00256、0.00128 μM；在96孔板中每孔加入98 μL（77.7ng/mL）的FXIa酶溶液，空白孔加入98 μL緩衝液代替，再加入2 μL不同濃度的化合物，空白和對照孔用DMSO代替， 用振盪器混勻，37 ℃孵育20 min。
最後每孔加入800 μM的底物100 μL，在405 nm處測其吸光度。
3、  資料處理
用GraphPad Prism軟體進行曲線擬合，計算IC50 值，見表一。 [表一] 本發明化合物對人FXIa抑制的IC50
實施例 hFXIa IC50 (nM)
2 131.2
8 12.1
9 7.83
10 20.5
12 14
13 2.65
14 4.76
15 3.59
19 17.7
20 15.7
21 6
23 17
25 3.65
27 6.7
28 6.33
29 16.5
30 5.04
31 1.75
32 6.9
35 3.05
36 1.25
37 2.02
38 1.77
39 3.65
40 9.6
41 17.9
43 1.41
44 4.55
45 8.92
46 16.3
47 2.4
48 29
49 11.4
51 2.46
52 19
53 15.3
54 16.6
55 12.1
56 0.98
57 9.69
60 21.2
61 4.49
62 10.8
63 2.82
64 11.6
65 11.9
66 1.25
67 4.98
68 13.2
69 19.6
結論：本發明化合物對人FXIa具有明顯的抑制活性。
實施例71：:本發明化合物對人血漿體外抗凝血作用的測定
1、  實驗材料
血漿：人血收集於含3.2%檸檬酸鈉（體積比1:9）的真空采血管中，室溫3000 rpm離心10 min，收集血漿，分裝在EP管中，-80 ℃保存。
試劑：APTT測定試劑盒（活化部分凝血活酶時間檢測定劑盒，mindray）、氯化鈣溶液。
儀器：凝血儀（mindray，C2000-A）
2、  實驗方法
取分裝的凍存人血漿室溫融化後，混合均勻。將溶於100%DMSO的10 mM受試化合物用100%DMSO稀釋至1500、750、375、187.5、93.75、46.88、23.44、11.72 μM；在1.5 mL EP管中加入98 μL人血漿，再加入2 μL不同濃度的化合物，空白組加入2 μL 100%DMSO，37 ℃水浴孵育10 min，將樣品放入凝血儀中對應的位置，進行化合物的APTT測定。
3、  資料處理
用GraphPad Prism軟體進行曲線擬合，分別計算EC1.5×和EC2×值，即1.5倍和2倍空白對照組的APTT所對應的化合物的濃度，結果見表二。 [表二] 本發明化合物對人血漿體外抗凝血作用
實施例 Human plasma
aPTT EC1.5×(μM) aPTT EC2×(μM)
2 5.87 ＞30
4 0.287 1.135
13 0.558 2.615
14 0.778 3.687
15 0.556 2.985
19 0.561 2.326
20 0.483 1.794
21 0.418 1.311
23 0.655 2.722
24 0.97 3.67
25 0.358 1.312
26 0.625 2.479
27 0.599 2.908
28 0.817 3.53
29 0.647 2.435
30 0.376 1.402
31 0.342 1.07
32 0.417 1.349
35 0.318 1.262
36 0.333 1.017
37 0.354 1.032
38 0.378 1.234
39 0.451 1.605
40 0.393 1.281
41 0.537 2.127
42 0.566 2.278
43 0.29 0.781
44 0.446 1.533
45 0.466 1.715
46 0.521 2.036
47 0.311 0.874
48 0.758 3.474
49 0.563 2.208
51 0.45 1.938
53 0.422 1.679
54 0.465 1.908
55 0.778 3.123
56 0.66 2.29
60 1.857 3.771
61 0.45 1.88
62 0.461 1.52
63 0.321 0.997
64 0.463 1.725
65 0.46 1.733
66 0.457 1.496
67 0.41 1.353
68 0.568 2.282
69 1.056 6.362
結論：從表二中可以看出本發明化合物對人血漿具有明顯的抗凝血作用。
實施例72：本發明化合物的大鼠藥代動力學特徵考察
1、  實驗材料
SD大鼠：雄性，180-250 g，購於廣東省醫學實驗動物中心。食蟹猴：雄性，4-6 kg，購於廣州春盛生物研究院有限公司。
試劑：DMSO（二甲亞碸），PEG-400（聚乙二醇400），生理鹽水，肝素，乙腈，甲酸，普萘洛爾（內標）均為市售可得。
儀器：賽默飛LC-MS（U300 UPLC，TSQ QUANTUMN ULTRA三重四級杆質譜）。
2、  實驗方法
稱取化合物溶於DMSO-PEG-400-生理鹽水（5：60：35，v/v/v）體系中，大鼠/猴靜脈或灌胃給藥後，於5 min、15 min、30 min、1 h、2 h、4 h、6 h、8 h、24 h採集靜脈血200 μL於肝素化EP管中，12000 rpm離心2 min，取血漿-80 ℃凍存待測。精密稱取一定量供試品用DMSO溶解至1 mg/mL，作為儲備液。準確吸取適量的化合物儲備液，加入乙腈稀釋製成標準系列溶液。準確吸取上述標準系列溶液各20 μL，加入空白血漿180 μL，渦旋混勻，配製成相當於血漿濃度為1、3、10、30、100、300、1000、3000和5000 ng/mL的血漿樣品，每一濃度進行雙樣本分析，建立標準曲線。取20 μL血漿，加入內標普萘洛爾（5 ng/mL）的乙腈溶液200 μL，渦旋混勻後4000 rpm離心5 min，取上清LC-MS分析。LC-MS檢測條件如下：
色譜柱：賽默飛HYPERSIL GOLD C-18 UPLC柱，100*2.1 mm，1.9 μm。
流動相：水（0.1%甲酸）-乙腈按下表進行梯度洗脫
時間（ min ） 水（含 0.1% 甲酸） 乙腈
0 90% 10%
0.6 90% 10%
1 10% 90%
2.6 10% 90%
2.61 90% 10%
4 90% 10%
3、  資料處理
LC-MS檢測血藥濃度後，採用WinNonlin 6.1軟體，非房室模型法計算藥動學參數。結果見表三、四。 [表三]本發明化合物的大鼠藥代動力學參數（iv給藥/0.5 mg/kg）
實施例 Tmax(h) AUC0-∞ (μg/L*h) T1/2 (h) CL (L/h/kg) Vd (L/kg) Cmax (μg/L)
8 0.083 277.10 0.68 1.80 1.78 525.07
13 0.083 1093.06 0.72 0.46 0.48 3123.26
14 0.083 1444.08 1.08 0.35 0.54 2703.73
15 0.083 674.62 1.45 0.77 1.74 1340.94
19 0.083 1334.72 0.52 0.38 0.29 2521.95
21 0.083 156.40 0.23 3.31 1.08 445.06
25 0.083 1260.73 0.27 0.40 0.16 3021.89
27 0.083 863.50 0.70 0.58 0.59 1041.01
28 0.083 665.52 0.80 0.75 0.88 1742.71
29 0.083 1327.67 0.73 0.38 0.39 3289.76
31 0.083 269.56 0.46 2.00 1.38 527.25
32 0.083 170.55 0.17 2.98 0.76 474.46
35 0.083 1110.29 0.36 0.45 0.24 3089.62
45 0.083 120.90 0.15 4.15 0.92 374.18
47 0.083 126.79 0.44 3.95 2.51 241.63
51 0.083 3491.04 0.64 0.16 0.15 5949.97
53 0.083 1682.59 0.72 0.30 0.31 2752.50
55 0.083 1358.78 0.42 0.37 0.22 2349.86
56 0.083 3925.34 1.10 0.13 0.21 4368.67
61 0.083 961.81 0.89 0.52 0.67 850.92
66 0.083 302.83 0.34 1.65 0.82 1087.83
[表四]本發明化合物的食蟹猴藥代動力學參數（iv給藥/1 mg/kg）
實施例 Tmax(h) T1/2 (h) Cmax (μg/L) AUC0-t (μg/L*h) Vd (L/kg) CL (L/h/kg)
25 0.083 1.54 5709.61 2057.96 1.10 0.49
31 0.083 1.23 3619.64 2128.15 0.83 0.47
43 0.083 2.50 2505.86 1265.08 2.72 0.79
55 0.083 1.08 4320 1480 0.32 0.70
35 0.083 0.71 4090 1360 0.34 0.74
21 0.083 0.79 2550 1030 0.57 0.98
47 0.083 1.38 1600 927 1.1 1.07
結論：本發明化合物在大鼠和猴靜注給藥後半衰期較短，表觀分佈容積較低，清除率偏快。靜滴給藥後能迅速達穩，藥物主要分佈在血液中，靶向性較好，且停藥後藥物能迅速從體內清除，適合開發成臨床靜滴給藥且主要靶點在血液中的藥物。
上述實施例為本發明較佳的實施方式，但本發明的實施方式並不受上述實施例的限制，其他的任何未背離本發明的精神實質與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化，均應為等效的置換方式，都包含在本發明的保護範圍之內。

Claims (14)

  1. 一種式(I)的化合物或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽：
    Figure 03_image001
    R1 選自R3 取代或者未取代的四氮唑、R3 取代或者未取代的三氮唑； R2 選自R4 取代或者未取代的苯環，其中R4 選自-NR5 -(CH2 )n-CO-(CH2 )n-NR6 R7 、-NR5 -SO2 -NR6 R7 ； Ar選自至少一個R8 取代或者未取代的以下基團：
    Figure 03_image003
    、
    Figure 03_image005
    、
    Figure 03_image007
    、
    Figure 03_image009
    、
    Figure 03_image011
    、
    Figure 03_image013
    、
    Figure 03_image015
    、
    Figure 03_image017
    ； 其中，R3 選自氫、鹵素、C1-4 的烷基、鹵素取代的C1-4 的烷基； R5 、R6 、R7 獨立的選自氫、C1-4 的烷基、C1-4 的烷氧基-C1-4 烷基、-SO2 -C1-4 烷、-SO2 -苯、-C1-6 的一元或者二元醇、
    Figure 03_image019
    、-(CH2 )n-C3-12 的脂肪環，或者其中NR5 與NR6 R7 之中的任意一個以上通過-(CH2 )n-成環；或者NR6 R7 一起構成C3-12 的脂肪環；前述C3-12 的脂肪環環上的一個以上碳原子被0-2個N、O、S原子所替代，所述脂肪環進一步被一個以上的R9 所取代； R8 選自氫、鹵素、C1-4 的烷基、羥基、-C1-4 的羧酸、-C1-4 的羧酸-C1-4 醇酯； R9 選自氫、-(CH2 )n-OH、-SO2 -C1-4烷、-(CH2 )n-COOH、-醯胺、氰基、NR10 R11 -C1-4 的烷氧基、C1-4 的烷基、C1-4 的烷氧基、C1-4 的烷氧-C1-4 烷基、-CO-嗎啉、-CO-NR12 -(CH2 )n-OH、HOOC-C1-4 烷氧基、 ； R10 、R11 、R12 獨立選自氫或C1-4 烷基； 前述n=0-6的自然數。
  2. 如請求項1所述的式(I)的化合物或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽，其中，-NR5 -(CH2 )n-CO-(CH2 )n-NR6 R7 包括
    Figure 03_image023
    、
    Figure 03_image025
    、
    Figure 03_image027
    、
    Figure 03_image029
    、
    Figure 03_image031
    、
    Figure 03_image033
    、
    Figure 03_image035
    、
    Figure 03_image037
    ，其中，R7 和R9 如上定義。
  3. 如請求項1所述的式(I)的化合物或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽，其中， 所述C1-4 的烷基選自甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基； -C1-4 的羧酸選自甲酸、乙酸、丙酸、正丁酸、異丁酸、叔丁酸； -C1-4 的羧酸-C1-4 醇酯選自甲酸甲酯、甲酸乙酯、甲酸丙酯、甲酸丁酯、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、丙酸甲酯、丙酸乙酯、丙酸丙酯、丙酸丁酯、丁酸甲酯、丁酸乙酯、丁酸丙酯、丁酸丁酯。
  4. 如請求項1所述的式(I)的化合物或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽，其中，所述鹵素選自氟、氯、溴、碘。
  5. 如請求項1所述的式(I)的化合物或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽，其中， 所述C1-4 的烷選自甲烷、乙烷、丙烷、異丙烷、正丁烷、異丁烷、仲丁烷、叔丁烷； 所述C1-4 的烷氧基選自甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基； 所述-(CH2 )n-OH選自羥基、甲醇、乙醇、正丙醇、正丁醇； 所述-C1-6 的一元或者二元醇選自甲醇、乙醇、正丙醇、正丁醇、叔丁醇、1,3-丁二醇、3-甲基丁-1-醇、3-甲基戊-1-醇、4-甲基戊-1醇、3-甲基己-1醇、4-甲基己-1醇； 所述NR10 R11 -C1-4 的烷氧基選自甲胺甲氧基、乙胺甲氧基、丙胺甲氧基、丁胺甲氧基、甲胺乙氧基、乙胺乙氧基、丙胺乙氧基、丁胺乙氧基、甲胺丙氧基、乙胺丙氧基、丙胺丙氧基、丁胺丙氧基、甲胺丁氧基、乙胺丁氧基、丙胺丁氧基、丁胺丁氧基、二甲胺基甲氧基、二甲胺基乙氧基、二甲胺基丙氧基、二甲胺基丁氧基； 所述C1-4 的烷氧-C1-4 烷基選自甲氧甲基、乙氧甲基、丙氧甲基、丁氧甲基、甲氧乙基、乙氧乙基、丙氧乙基、丁氧乙基、甲氧丙基、乙氧丙基、丙氧丙基、丁氧丙基、甲氧丁基、乙氧丁基、丙氧丁基、丁氧丁基； 所述-CO-NR12 -(CH2 )n-OH選自-CO-NH-CH2 OH、-CO-N(CH3 )-CH2 OH、-CO-NH-CH2 CH2 OH、-CO-N(CH3 )-CH2 CH2 OH； 所述HOOC-C1-4 烷氧基選自HOOC-甲氧基、HOOC-乙氧基、HOOC-丙氧基、HOOC-異丙氧基、HOOC-正丁氧基、HOOC-異丁氧基、HOOC-仲丁氧基、HOOC-叔丁氧基。
  6. 如請求項1所述的式(I)的化合物或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽，其中，所述C3-12 的脂肪環選自環丙烷、環丁烷、環戊烷、環己烷、環庚烷、環辛烷、環壬烷、環癸烷、螺[3,3]庚環、螺[3,5]壬環、螺[4,5]癸環； 所述C3-12 的脂肪的一個以上碳原子被0-2個N、O、S原子所替代，選自：
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    、
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    、
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    。
  7. 如請求項1所述的式(I)的化合物或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽，其中，n=0、1、2、3、4、5、6。
  8. 如請求項1所述的式(I)的化合物或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽，其中， R1選自四氮唑、三氮唑； R2選自苯環、
    Figure 03_image067
    、
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    、
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    、
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    ； Ar選自以下基團：
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    、
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    、
    Figure 03_image195
    。
  9. 如請求項1所述的式(I)的化合物或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽，其特徵在於，選自以下化合物：
    Figure 03_image197
    、
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    、
    Figure 03_image329
    。
  10. 如請求項1至9中任一項所述的式(I)的化合物或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽，其中，所述藥學上可接受的鹽是指所述化合物與藥學上可接受的酸或鹼製備。
  11. 如請求項1至10中任一項所述的式(I)的化合物或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽，其中：所述化合物的一個以上的氫原子上被同位素氘取代。
  12. 一種藥物組合物，其中，包括前述請求項1至11中任一項所述的式(I)的化合物或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽和一種以上藥學上可接受的載體，優選為口服或者注射給藥的藥物組合物。
  13. 一種如請求項1至11中任一項所述的式(I)的化合物或其立體異構體、互變異構體、藥學上可接受的鹽在製備用於製備治療FXIa相關疾病的藥物用途，優選血栓相關疾病的藥物用途。
  14. 一種如請求項12所述的藥物組合物在製備用於製備治療FXIa相關疾病的藥物用途，優選血栓相關疾病的藥物用途。
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