TW202111383A

TW202111383A - 細胞觀察裝置

Info

Publication number: TW202111383A
Application number: TW109116623A
Authority: TW
Inventors: 谷口進吾; 寺井陽平; 竹內晴紀; 一井淳; 神垣敏雄
Original assignee: 日商昕芙旎雅股份有限公司
Priority date: 2019-09-03
Filing date: 2020-05-20
Publication date: 2021-03-16
Also published as: WO2021044767A1; JP2021036820A

Abstract

[課題]提供一種可以抑制照明光對於細胞造成損傷之細胞觀察裝置。 [技術內容]本發明，是具備：可將培養細胞的容器支撐的支撐部、及將被照射在容器的照明光射出的照射部、及可將由容器反射的照明光或是透過了容器的照明光的光量檢出的檢出部，照明光，是平行光，檢出部及被支撐於支撐部的容器，是被配置於照明光的光軸上。

Description

細胞觀察裝置

本發明，是有關於可觀察被培養的細胞用的細胞觀察裝置。

以往，已知可觀察被培養的細胞的觀察裝置(參照專利文獻1)。具體而言，此觀察裝置，是如第8圖所示，具備：將培養細胞X的容器S載置的載台910、及被配置於載台910的上方的反射構件920、及被配置於載台910的下方的攝影光學系930、及透過載台910朝上方射出照明光的光源部940。

載台910，是具有朝水平方向擴大的透明的玻璃板911，容器S是被載置在玻璃板911。被載置在此玻璃板911的容器S，是例如，培養皿，整體是透明。

反射構件920，是在被載置於玻璃板911的容器S的上方中配置成反射面921是朝水平方向擴大。

攝影光學系930，是具有將從上方透過載台910的玻璃板911的光加以集光的對物透鏡931。

光源部940，是具備：在攝影光學系930的對物透鏡931的周圍，在圓周方向及徑方向隔有間隔而配置的複數LED光源941。在此光源部940中，各LED光源941是射出照明光L，照明光L是從下朝向上方透過玻璃板911及容器S的底S1之後，由反射構件920的反射面921反射，從斜上方透過細胞X、容器S的底S1、及玻璃板911而入射至對物透鏡931。

在如此結構的觀察裝置900中，被照射在細胞X的照明光L之中，透過了細胞X的照明光L是從上朝向下透過容器S的底S1及玻璃板911，而入射至對物透鏡931，並藉由無圖示的攝像元件而被攝影。 [先前技術文獻] [專利文獻]

[專利文獻1] 日本專利第6251454號公報

[發明所欲解決之問題]

在以上的觀察裝置900中，來自複數LED光源941的照明光L是集中在細胞X，藉由起因於此集中的熱等而具有對於細胞X造成損傷的情況。

在此，本發明的課題是提供一種細胞觀察裝置，可以抑制照明光對於細胞造成損傷。 [用以解決問題之技術手段]

本發明的細胞觀察裝置，是具備：可將培養細胞的容器支撐的支撐部、及將朝前述容器照射的照明光射出的照射部、及可檢出在前述容器中反射的照明光或是透過了前述容器的照明光的光量的檢出部，前述照明光，是平行光，前述檢出部及被支撐於前述支撐部的前述容器，是被配置於前述照明光的光軸上。

如此，在檢出部及容器(細胞)是被配置在光軸上的狀態下，被照射在容器的照明光因為是平行光，所以可防止照明光集中照射在細胞，由此，可抑制起因於照明光的集中的熱等對於細胞造成損傷地觀察細胞。

在前述細胞觀察裝置中，也可以具備與前述檢出部連接的判斷部，前述照射部，是以入射至前述容器時的前述照明光的光軸是前述細胞對於前述容器的培養面成為垂直的方式射出前述照明光，前述判斷部，是依據前述檢出部所檢出的光量來判斷前述細胞的緣。

藉由使照明光(平行光)對於培養面垂直地入射，使光容易在沿著培養面擴大的細胞的緣發生散亂(例如參照第3圖的箭頭α)，由此，在檢出部被檢出的光量是與其他的部位(細胞的緣部以外的部位和無細胞的培養面等)相比因為減少，所以可以檢出沿著細胞或是培養面的複數細胞的塊的形狀。

且在前述細胞觀察裝置中，也可以具備與前述檢出部連接的判斷部，前述照射部，是以入射至前述容器時的前述照明光的光軸是前述細胞對於前述容器的培養面成為垂直的方式射出前述照明光，前述判斷部，是依據前述檢出部所檢出的光量來判斷前述細胞對於前述培養面的抵接狀態。

從培養面剝離(分離)的細胞和細胞的部位，因為是對於培養面傾斜的部位較多，所以藉由使照明光(平行光)對於培養面垂直地入射，光就容易在從培養面剝離的細胞和細胞的部位發生散亂，由此，在檢出部被檢出的光量是與其他的部位(與培養面接觸的細胞或是細胞的部位)相比因為減少，所以判斷部可以依據檢出部所檢出的光量，檢出細胞對於培養面的抵接狀態，即，細胞是否與培養面接觸。

且在前述細胞觀察裝置中，前述照射部及前述檢出部，是對於前述支撐部被配置於相同側，前述照射部或是前述檢出部，是具有以入射至前述容器時的照明光的光軸及由前述容器反射時的照明光的光軸成為一致的方式從前述容器將前述照射部側或是前述檢出部側的照明光的光路折曲的光學元件，前述檢出部，是將由前述容器反射的照明光檢出也可以。

依據這種結構的話，因為照射部及檢出部是對於支撐部被配置於相同側，所以照射部及檢出部對於支撐部的配置側的相反側的容器等的配置空間的限制可被抑制。 [發明的效果]

從以上，依據本發明的話，可以提供一種細胞觀察裝置，可以抑制照明光對於細胞造成損傷。

以下，對於本發明的一實施方式，一邊參照第1圖~第3圖一邊說明。

本實施方式的細胞觀察裝置，是用於觀察透明或是略透明的細胞。具體而言，細胞觀察裝置，是如第1圖所示，具備：可將培養細胞X的容器F支撐的支撐部2、及將朝容器F照射的照明光L1射出的照射部3、及可將由容器F反射的照明光(以下，只稱為「反射光」)L2的光量檢出的檢出部4。且，本實施方式的細胞觀察裝置1，是具備與檢出部4連接的判斷部5。此細胞觀察裝置1，也具備與判斷部5連接的顯示部6。

支撐部2，是將培養觀察對象的細胞X用的容器F支撐在規定的位置。本實施方式的支撐部2，是上面21朝水平方向擴大的構件，容器F是被載置在此上面21。且，支撐部2，是具有：朝上下方向貫通且被照射在容器F的照明光L1可通過的孔22。本實施方式的支撐部2的孔22，是圓形。

在被載置在此支撐部2的容器F中所培養的細胞X，是將容器F的底壁(與支撐部2的上面21相面對的壁)F1的上面作為培養面F2成長。具體而言，細胞X，是以在密合在培養面F2的狀態下沿著該培養面F2擴大的方式成長。

本實施方式的容器F，是例如，培養瓶，以底壁F1塞住支撐部2的孔22的方式被載置在該支撐部2。此時，被載置於支撐部2的容器F，是位於照明光L1的光軸上。且，容器F的培養面F2，是與支撐部2的上面21平行。且，在容器F中至少底壁F1，是具有透光性。本實施方式的容器F，是透明。

照射部3，是作為被照射在容器F的照明光L1射出平行光。此照射部3，是被配置於比支撐部2更下方，以通過支撐部2的孔22的方式朝向上方射出照明光L1。更詳細的話，照射部3，是以照明光L1的光軸通過孔22的中心的方式垂直朝上方地射出照明光L1。由此，被照射在容器F時(入射時)的照明光L1的光軸，是成為對於細胞X的培養面F2垂直。

具體而言，照射部3，是包含：光源31、及從光源31至被支撐於支撐部2的容器F為止將照明光L1導光的照射光學系32。

光源31，是作為照明光L1射出平行光。本實施方式的光源31，是朝向水平方向射出照明光L1。此光源31，是例如，LED(發光二極管、light emitting diode)。

照射光學系32，是包含至少一個光學元件。此照射光學系32，是將光源31射出的照明光L1以平行光的狀態直到容器F為止導光。本實施方式的照射光學系32，是由一個光學元件321所構成。此光學元件321，是被配置於支撐部2的下方，以入射至容器F的照明光L1的光軸及由容器F反射的反射光L2的光軸成為一致的方式將照明光L1的光路折曲。本實施方式的光學元件321，是光分配器，更詳細的話是半反射鏡，被配置於支撐部2的孔22的下方，將從光源31朝水平方向被射出的照明光L1的光路朝向上方(孔22)折曲90°。在本實施方式的細胞觀察裝置1中，藉由此光學元件321，而使：從光學元件321至容器F為止的照明光L1的光軸、及從容器F至光學元件321為止的反射光L2的光軸，成為一致的狀態。

檢出部4，是藉由讓反射光L2入射，而可將該反射光L2的光量檢出。此檢出部4，是被配置於反射光L2的光軸上。本實施方式的檢出部4，是具有攝像元件(圖示省略)的照相機，將對應攝像元件所受光的反射光L2的檢出結果訊號輸出。此檢出部(照相機)4，可以將焦點距離變更。

判斷部5，是依據來自檢出部4的檢出結果訊號運算處理，判斷細胞X的緣X1。詳細的話，如以下。

容器F的底壁F1的下面F3及培養基M的表面M1，是與培養面(底壁F1的上面)F2平行或是大致平行。因此，照明光L1是對於培養面F2從垂直方向入射的話，因為沿著培養面F2擴大的細胞X的緣X1是對於培養面F2具有角度，所以在該緣X1中，如第2圖及第3圖所示，入射的照明光L11會發生散亂(參照第3圖的箭頭α)。由此，由細胞X的緣X1或是其附近反射的反射光L21的光量，是與由其他的部位(例如無細胞X的培養面F2和細胞X的中心側的部位等)反射的反射光(入射至前述其他的部位的照明光L12的反射光)L22的光量相比，變小。在此，判斷部5，是依據檢出部4對應攝像元件所受光的反射光L21、L22而輸出的檢出結果訊號，將此光量較小的部位判斷為細胞X的緣X1。由此，判斷部5，可把握(界定)細胞X的形(輪廓形狀)。

且判斷部5，也可以將依據收訊到的檢出結果訊號的畫像顯示於顯示部6。在此顯示部6中，因為由緣X1或是其附近被反射的反射光L21的光量是比由其他的部位被反射的反射光L22的光量更小，所以細胞X的緣X1是較黑(暗)地顯示，由此，即使目視也可以確認細胞X的形。

在如以上結構的細胞觀察裝置1中，如以下地觀察在容器F中被培養的細胞X。

首先，容器F是被配置於支撐部2。此時，以成為培養面F2的觀察對象的領域與孔22重疊的方式被載置在支撐部2的上面21。

接著，照明光L1是從照射部3照射於容器F。具體而言，在照射部3中，從光源31朝水平方向被射出的照明光L1，是藉由光學元件321(照射光學系32)而朝向被支撐於支撐部2的容器F被反射。由此，照明光L1是從照射部3朝對於容器F垂直向上地被射出。

從照射部3被射出的照明光L1，是通過支撐部2的孔22到達容器F，由該容器F(詳細的話，容器F的底壁F1的下面F3和上面(培養面)F2、培養基M的表面M1、細胞X的緣X1、細胞X的中心側的部位等)被反射的反射光L21、L22是朝向垂直下方。且，此反射光L21、L22(詳細的話，反射光L21、L22的一部分)，是通過光學元件321，入射至檢出部4。

在檢出部4中，將攝像元件所受光的反射光L21、L22轉換成電氣訊號，作為檢出結果訊號輸出。此時，檢出部(照相機)4的焦點位置，是容器F的培養面F2。

判斷部5，是依據從檢出部4被輸入的檢出結果訊號判斷細胞X的緣X1，並且在顯示部6顯示由攝像元件被攝影的像。

依據以上的細胞觀察裝置1的話，在光軸上配置檢出部4及容器F(細胞X)的狀態下被照射在容器F的照明光L1因為是平行光，所以可防止照明光L1集中照射在細胞X。由此，成為可抑制起因於照明光L1的集中的熱等對於細胞造成損傷地觀察細胞X。

且在本實施方式的細胞觀察裝置1中，因為可抑制當觀察細胞X時照明光L1對於該細胞X造成損傷，所以可長時間觀察。

且在本實施方式的細胞觀察裝置1中，以照射部3入射至容器F時的照明光L1的光軸是對於細胞X的培養面F2成為垂直的方式射出照明光L1，判斷部5，是依據檢出部4所檢出的光量判斷細胞X的緣X1。如此，藉由使照明光(平行光)L1對於培養面F2垂直地入射，使容易在沿著培養面F2擴大的細胞X的緣X1或是其附近光發生散亂(例如參照第3圖的箭頭α)，由此，在檢出部4被檢出的光量是與其他的部位(細胞X的緣X1以外的中心側的部位和無細胞X的培養面F2等)相比減少。因此，可以界定沿著細胞X或是培養面F2的複數細胞X的塊的形狀(輪廓形狀)。

且在本實施方式的細胞觀察裝置1中，照射部3及檢出部4是對於支撐部2被配置於相同側(在本實施方式的例中，為下側)。因此，在照射部3及檢出部4對於支撐部2的配置側的相反側(在本實施方式的例中，為上側)中的容器F等的配置空間的限制是被抑制。

且本發明的細胞觀察裝置，不限定於上述實施方式，在不脫離本發明的實質的範圍內當然可加上各種變更。例如，可以在某實施方式的結構追加其他的實施方式的結構，且，可以將某實施方式的結構的一部分置換成其他的實施方式的結構。進一步，可以將某實施方式的結構的一部分削除。

在上述實施方式的細胞觀察裝置1中，成為觀察對象的細胞X，不限定於透明或是略透明。即，成為觀察對象的細胞X是有顏色也可以。藉由使用照相機等的攝影機器作為檢出部4，細胞觀察裝置1也可以觀察有顏色的細胞X。

且在上述實施方式的照射部3中，光源31是射出平行光，但是不限定於此結構。照射部3，也可以具有：射出擴散光的光源31、及將從光源31被射出的擴散光藉由1或是複數光學元件(透鏡等)而成為平行光的照射光學系32，的結構。即，照射部3，其從該照射部3被射出的照明光L1也可以是平行光的結構。

且上述實施方式的照射部3，是從支撐部2的下側朝向上方射出照明光L1，但是不限定於此結構。照射部3，也可以是從支撐部2的上側朝向下方射出照明光L1的結構。

且上述實施方式的照射部3，是具有：光源31、及照射光學系32，但是不限定於此結構。例如，如第4圖所示，照射部3，也可以只有射出平行光的光源31的結構。在此結構中，照射部3及檢出部4是對於支撐部2被配置於相同側的情況時，檢出部4，是具備：具有攝像元件的攝影機(照相機等)41、及具有至少一個光學元件(包含光學元件321)且從容器F至攝影機41為止將反射光L2導光的攝影光學系42。且，第4圖所示的攝影光學系42，是只由光學元件321所構成。

且上述實施方式的照射部3，是對於容器F的培養面F2從垂直方向將照明光L1照射，但是不限定於此結構。照射部3，是作為照明光L1射出平行光的結構的話，也可以是從對於培養面F2傾斜的方向將照明光L1照射的結構。藉由這種結構，也與上述實施方式的細胞觀察裝置1同樣，因為可防止照明光L1集中照射在細胞X，所以可以抑制起因於照明光L1的集中的熱等對於細胞X造成損傷地觀察細胞X。

且在上述實施方式的細胞觀察裝置1中，將照明光L1的光路折曲的光學元件321，是為了使入射至容器F的照明光L1的光軸、及由容器F被反射的反射光L2的光軸一致，而採用光分配器(半反射鏡)，但是不限定於此結構。光學元件321，也可以是分色鏡。即，光學元件321，是藉由將照明光L1或是反射光L2的光路變更(折曲等)而使朝容器F的入射光的光軸及來自容器F的反射光的光軸一致的結構即可。

且上述實施方式的檢出部4，是可將觀察對象的細胞X攝像的結構，但是不限定於此結構。檢出部4，是可將反射光L21、L22的光量檢出的結構即可。

且在上述實施方式的細胞觀察裝置1中，照射部3及檢出部4是對於支撐部2被配置於相同側，但是不限定於此結構。如第5圖所示，照射部3及檢出部4也可以對於支撐部2被配置於彼此相反側，換言之，也可以將支撐部2配置於照射部3及檢出部4之間。即，在細胞觀察裝置1中，在照射部3射出的平行光的光軸上配置：檢出部4、及被支撐於支撐部2的容器F即可。依據這種結構的話，與上述實施方式的細胞觀察裝置1同樣，因為照明光L1(平行光)是被照射在細胞X，可防止照明光L1集中照射在細胞X，所以可以抑制起因於照明光L1的集中的熱等對於細胞X造成損傷地觀察細胞X。且，此結構的情況，透過了容器F(詳細的話，細胞X和培養基M等)的照明光(透過光)L3是入射至檢出部4中。

且支撐部2的具體的結構，不被限定。例如，上述實施方式的支撐部2，是藉由使容器F被載置在上面21而將該容器F支撐，但是不限定於此結構。支撐部2，也可以是將容器F保持等的結構。且，支撐部2，也可以是無孔22的結構，例如，被配置有上述實施方式的孔22的部位是具有透明等的透光性的結構。即，支撐部2，是可將容器F支撐於規定的位置且可將照明光L1照射在容器F的結構即可。

且上述實施方式的支撐部2的孔22，是圓形，但是不限定於此結構。孔22，也可以是矩形狀和多角形、橢圓等。且，孔22的大小(圓形的情況時為內徑)也不被限定(參照第4圖)。即，孔22，是照明光L1(反射光L2、透過光L3)可以通過且細胞X的觀察可以進行的形狀及大小即可。

且在上述實施方式的細胞觀察裝置1中，判斷部5可依據檢出部4檢出的反射光L2的光量來判斷細胞X的緣X1，但是不限定於此結構。判斷部5，也可以依據檢出部4所檢出的反射光L2的光量來判斷細胞X對於培養面F2的抵接狀態的結構。詳細的話，如以下。

觀察對象的細胞X，是藉由密合在培養面F2，而以沿著該培養面F2擴大的方式成長。但是，細胞X的整體或是其一部分是成為從培養面F2被剝離的狀態的話，細胞X因為無法有效成長，所以要求可觀察容器F內的各細胞X有無從培養面F2剝離(各細胞X對於培養面F2的抵接狀態)。

在此，從培養面F2被剝離的細胞X和被剝離的部位(細胞X從培養面F2剝離的部位)，因為多是對於培養面F2具有角度(傾斜)的部位，所以藉由使照明光(平行光)L1對於培養面F2垂直地入射，在從培養面F2被剝離的細胞X和被剝離的部位中光的散亂會產生，從被剝離的細胞X和被剝離的部位的反射光L21的光量是比來自其他的部位的反射光L22的光量更小。具體而言，與培養面F2接觸的細胞X若多的話，如第6圖所示，檢出部4所檢出的反射光L2的光量小的部位(領域)會減少，遠離培養面F2(剝離)的細胞X若多的話，如第7圖所示，檢出部4所檢出的反射光L2的光量小的部位(領域:在第7圖中，暗的領域)會變多。

在此，判斷部5可依據檢出部4所檢出的反射光L2的光量，來把握細胞X對於培養面F2的抵接狀態，即，細胞X是否與培養面F2接觸(即有無從培養面F2剝離)。即，判斷部5，是將在檢出部4被檢出的光量與來自其他的部位(與培養面F2接觸的細胞X或是細胞X的部位)的反射光L22相比較小的領域，判斷為從培養面F2剝離的細胞X和其一部分。

且判斷部5是判斷細胞X的緣X1及細胞X對於培養面F2的抵接狀態的雙方的情況時，也可以藉由光量比其他的部位小的部位的面積和形狀等，來判別細胞X的緣X1及細胞X從培養面F2剝離的結構。

且在上述實施方式的細胞觀察裝置1中，檢出部4是將焦點對焦於培養面F2並攝像(檢出反射光L2)，但是也可以將焦點對焦在其他的位置並攝像。且，檢出部4，也可以使用由複數焦點位置進行攝像(將反射光L2檢出)的結果由判斷部5判斷細胞X的狀態。

且上述實施方式的細胞觀察裝置1，是具備判斷部5，但是不限定於此結構。細胞觀察裝置1，是不具備判斷部5的結構也可以。即，也可以是在泛用的PC等組入可以依據檢出結果訊號判斷細胞X的緣X1和對於培養面F2的抵接狀態的程式，並將該PC等與細胞觀察裝置1連接的結構。

且上述實施方式的細胞觀察裝置1，是具備顯示部6，但是不限定於此結構。細胞觀察裝置1，也可以是不具備顯示部6的結構。即，將作為顯示部的泛用的監視器等與細胞觀察裝置1連接的結構也可以。

1:細胞觀察裝置 2:支撐部 21:上面 22:孔 3:照射部 31:光源 32:照射光學系 321:光學元件 4:檢出部 41:攝影機 42:攝影光學系 5:判斷部 6:顯示部 900:觀察裝置 910:載台 911:玻璃板 920:反射構件 921:反射面 930:攝影光學系 931:對物透鏡 940:光源部 941:LED光源 F:容器 F1:底壁 F2:培養面 F3:下面 L1,L11,L12:照明光 L2,L21,L22:反射光(由容器反射的照明光) L3:透過光(透過了容器的照明光) M:培養基 M1:表面 S:容器 S1:底 X:細胞 X1:細胞的緣

[第1圖]第1圖，是本實施方式的細胞觀察裝置的結構圖。 [第2圖]第2圖，是顯示培養細胞的容器的圖。 [第3圖]第3圖，是說明第2圖的III-III位置中的照明光的反射狀態用的圖。 [第4圖]第4圖，是別的實施方式的細胞觀察裝置的結構圖。 [第5圖]第5圖，是別的實施方式的細胞觀察裝置的結構圖。 [第6圖]第6圖，是顯示與培養面接觸的細胞為多的狀態的照片。 [第7圖]第7圖，是顯示遠離培養面的細胞為多的狀態的照片。 [第8圖]第8圖，是習知的觀察裝置的結構圖。

1:細胞觀察裝置

2:支撐部

3:照射部

4:檢出部

5:判斷部

6:顯示部

21:上面

22:孔

31:光源

32:照射光學系

321:光學元件

F:容器

F1:底壁

F2:培養面

F3:下面

L1:照明光

L2:反射光(由容器反射的照明光)

M:培養基

M1:表面

X:細胞

X1:細胞的緣

Claims

一種細胞觀察裝置，具備：可將培養細胞的容器支撐的支撐部、及將朝前述容器照射的照明光射出的照射部、及可檢出在前述容器中反射的照明光或是透過了前述容器的照明光的光量的檢出部，前述照明光，是平行光，前述檢出部及被支撐於前述支撐部的前述容器，是被配置於前述照明光的光軸上。
如請求項1的細胞觀察裝置，其中，具備與前述檢出部連接的判斷部，前述照射部，是以入射至前述容器時的前述照明光的光軸是前述細胞對於前述容器的培養面成為垂直的方式射出前述照明光，前述判斷部，是依據前述檢出部所檢出的光量判斷前述細胞的緣。
如請求項1的細胞觀察裝置，其中，具備與前述檢出部連接的判斷部，前述照射部，是以入射至前述容器時的前述照明光的光軸是前述細胞對於前述容器的培養面成為垂直的方式射出前述照明光，前述判斷部，是依據前述檢出部所檢出的光量來判斷前述細胞對於前述培養面的抵接狀態。
如請求項1至3中任一項的細胞觀察裝置，其中，前述照射部及前述檢出部，是對於前述支撐部被配置於相同側，前述照射部或是前述檢出部，是具有以入射至前述容器時的照明光的光軸及由前述容器反射時的照明光的光軸成為一致的方式從前述容器將前述照射部側或是前述檢出部側的照明光的光路折曲的光學元件，前述檢出部，是檢出由前述容器反射的照明光。