TW202100133A

TW202100133A - 口腔照護產品

Info

Publication number: TW202100133A
Application number: TW109106472A
Authority: TW
Inventors: 洛倫佐埃米利亞諾波奇
Original assignee: 義大利商庫拉賽普特ＡＤＳ公司
Priority date: 2019-03-01
Filing date: 2020-02-27
Publication date: 2021-01-01
Also published as: RS63853B1; EP3930663B1; MD3930663T2; PT3930663T; AR118218A1; PL3930663T3; SI3930663T1; JOP20210210A1; UA127726C2; IL285497B2; SG11202108777SA; LT3930663T; MA55078B1; HUE061087T2; AU2020230945A1; IL285497B1; US20220117868A1; CL2021002237A1; CA3130899A1; IT201900003009A1

Abstract

本發明係關於包含洛赫西定和DNA鈉鹽的口腔照護產品，諸如漱口水、牙周凝膠或牙膏。該口腔照護產品具有抗細菌效果，可有效對抗牙齦炎、細菌斑和牙周炎，並具有癒合和抗炎活性，且其還可抵抗氧化壓力，從而限制口腔黏膜刺激的發生和發展並促進口腔黏膜的營養作用。

Description

口腔照護產品

本發明係關於基於洛赫西定（chlorhexidine）和DNA鈉鹽的口腔照護產品，諸如漱口水、牙周凝膠或牙膏，其防止牙齒上菌斑的形成，且同時限制口腔黏膜刺激的發生和發展，從而促進口腔黏膜的營養作用。

基於洛赫西定的口腔照護產品，諸如漱口水，由於這種活性組分是強效抗細菌劑（因其能夠穿透細菌外膜並使其內部蛋白質凝固），因此已為人所知好段時間。洛赫西定還具有強烈的抗菌斑活性。含有不同洛赫西定濃度的溶液也用於預防術後併發症。

然而，已知長期使用基於洛赫西定的口腔照護產品可例如引起口腔黏膜的刺激，從長遠來看可使口腔黏膜的正確營養作用惡化。

事實上，本案申請人發現到儘管洛赫西定在治療牙齦炎、細菌斑和牙周炎中的有益效果是已知的，但由於意識到該活性組分對口腔黏膜引起的副作用，因此對洛赫西定在這些治療中的應用，特別是在長期治療中的應用有所保留。

因此，本發明的目的是提供新的口腔照護產品，其包含洛赫西定，能有效對抗牙齦炎、細菌斑和牙周炎，且具有癒合和抗炎活性，且還能對抗氧化壓力，從而限制由使用洛赫西定引起的刺激和口腔黏膜的細胞結構的改變的發生和發展，並因此促進口腔黏膜本身的營養作用。

根據本發明，本案申請人意外發現可藉由組合使用洛赫西定與DNA鈉鹽來實現這些所欲特性。

因此，本發明係關於包含洛赫西定和DNA鈉鹽的口腔照護產品。

確實已令人意外地發現，DNA鈉鹽與洛赫西定的組合不僅抵抗後者對口腔黏膜的刺激作用、發揮對後者的保護作用並對口腔中可能的傷口發揮癒合作用，並且限制了長期使用基於洛赫西定的口腔照護產品的副作用，包括細胞結構的改變，其包括液泡形成、細胞核退化和細胞間隙擴張。

由於DNA鈉鹽和洛赫西定的特殊組合，因此根據本發明的口腔照護產品具有能夠克服僅基於洛赫西定的口腔照護產品的應用和功能限制的一系列性質，從而擴大應用可能性且補救其長期使用的一些副作用。

事實上，根據本發明的口腔照護產品能夠在細胞等級上將有效的保護作用與洛赫西定的副作用相關聯，從而限制口腔黏膜的細胞結構的改變的發生和發展，具有有效對抗牙齦炎、細菌斑和牙周炎的抗細菌作用以及能夠抵抗氧化壓力的癒合和抗炎活性，且限制口腔黏膜的刺激的發生和發展，從而促進口腔黏膜的營養作用。這些特徵使其使用特別有利，甚至在長期使用時也是如此，而不會在口腔黏膜上發生洛赫西定的細胞等級的刺激作用和副作用。

本案申請人特別注意到，基於洛赫西定的口腔照護產品的應用和功能限制之一在於副作用的發生，尤其是在長期使用的情況下，該等副作用除了刺激口腔黏膜之外，還涉及該黏膜的細胞結構等級的改變，包括液泡形成、細胞核退化和細胞間隙擴張。

因此，本案申請人意外發現，DNA鈉鹽與洛赫西定的組合不僅抵抗其對口腔黏膜的刺激作用、發揮對其的保護作用和對口腔可能傷口發揮癒合作用，並且限制長期使用該活性成分的副作用，包括細胞結構的改變，其包括液泡形成、細胞核退化和細胞間隙擴張。

這使得本案申請人定義和開發新的口腔照護產品，其包含洛赫西定，因此能有效抗牙齦炎、細菌斑和牙周炎，同時不會發生或嚴重限制長期使用該活性組分的副作用，包括口腔黏膜的細胞結構的刺激甚至改變，其包括液泡形成、細胞核退化和細胞間隙擴張。

在其較佳的具體實例中，該口腔照護產品選自由漱口水、牙周凝膠和牙膏所組成的群。

在其較佳的具體實例中，根據本發明的口腔照護產品是漱口水，其包含相對於該漱口水之總體積0.01重量%至0.30重量%的洛赫西定、0.01重量%至0.2重量%的DNA鈉鹽、0.1重量%至0.5重量%的至少一種鹼金屬或鹼土金屬的偏二亞硫酸鹽、0.1重量%至1.0重量%的抗壞血酸、0.05重量%至1重量%的至少一種聚乙烯吡咯啶酮-乙酸乙烯酯共聚物。

在另一方面，本發明係關於DNA鈉鹽，其用於治療口腔黏膜病狀的方法中，其中該病狀涉及該口腔黏膜的細胞結構的改變，該細胞結構的改變選自由液泡形成、細胞核退化和細胞間隙擴張所組成的群。

事實上，已令人意外地發現，DNA鈉鹽對口腔黏膜的細胞結構發揮保護作用，且能夠抵抗其改變的發生和發展，該等改變包括液泡形成、細胞核退化和細胞間隙擴張。

這使得任何病因的口腔黏膜的細胞改變能例如藉由限制活性組分（諸如洛赫西定）治療的副作用得到治療性干預，其中該等活性組分對口腔黏膜的細胞結構特別具有攻擊性。

有鑒於上述應用和基於洛赫西定的口腔照護產品的功能限制，本案申請人已發現到洛赫西定副作用的治療構成特別有價值的創新方面。

在其另一方面，本發明還因此係關於DNA鈉鹽，其用於治療經歷以洛赫西定治療的患者中的洛赫西定副作用的方法，其中該等副作用涉及該患者的口腔黏膜的細胞結構的改變，該細胞結構的改變選自由液泡形成、細胞核退化和細胞間隙擴張所組成的群。

本發明可以其一或多個方面或一或多個下方報導的較佳特性呈現，其較佳可根據應用要求將彼此組合。

在本說明書的上下文和以下請求項中，除非另外指明，否則所有表示數量、參數、百分比等的數值大小在每種情況下皆認為其前面有「約」乙詞。此外，所有數值大小的範圍包括最大數值和最小數值所有可能的組合和所有可能的中間範圍，以及下方指出的那些。

在本發明的範圍內，已識別兩種物質（洛赫西定和DNA鈉鹽）的組合，其組合的抗細菌、癒合和抗炎以及氧化壓力對比特性使其用作口腔照護產品的活性組分，能特別有效對抗牙齦炎、細菌斑和牙周炎，同時限制由使用洛赫西定引起的刺激和口腔黏膜的細胞結構的改變的發生和發展，並因此促進口腔黏膜本身的營養作用口腔黏膜的細胞結構。

更特別地，本發明係關於包含洛赫西定和DNA鈉鹽的口腔照護產品。

在本發明中，當如下表達使用時： - 「相對於漱口水之總體積…重量%」是指存在於100毫升(mL)漱口水中給定組分的克數； - 除非另有說明，否則「洛赫西定」是指化合物1，1’-六亞甲基雙[5-(對氯苯基)雙胍]、其鹽或錯合物； - 「DNA鈉鹽」是指去氧核糖核酸的鈉鹽，例如可藉由從雄性鱘魚性腺組織中提取天然去氧核糖核酸，隨後經純化、解聚並以鈉離子中和而獲得。

不希望受特定理論的束縛，咸信DNA鈉鹽與洛赫西定的組合不僅抵抗後者對口腔黏膜的刺激作用、對口腔黏膜發揮保護作用並對口腔中可能的傷口發揮癒合作用，並且限制了長期使用基於洛赫西定的口腔照護產品的副作用，包括細胞結構的改變，其包括液泡形成、細胞核退化和細胞間隙擴張。

因此，本案申請人意外發現，DNA鈉鹽與洛赫西定的組合不僅抵抗其對口腔黏膜的刺激作用、對口腔黏膜發揮保護作用和對口腔可能傷口的癒合作用，並且限制長期使用該活性成分的副作用，包括細胞結構改變，其包括液泡形成、細胞核退化和細胞間隙擴張。

這使得本案申請人定義和開發新的包含洛赫西定的口腔照護產品，因此能有效抗牙齦炎、細菌斑和牙周炎，同時不會發生或嚴重限制長期使用該活性組分的副作用，包括口腔黏膜的細胞結構的刺激甚至改變，包括液泡形成、細胞核退化和細胞間隙擴張。

由於DNA鈉鹽和洛赫西定的特定組合，根據本發明的口腔照護產品因此具有能夠克服僅基於洛赫西定的口腔照護產品的應用和功能限制的一系列性質，從而擴大應用可能性且補救其長期使用的一些副作用。

事實上，根據本發明的口腔照護產品能夠在細胞等級上將有效的保護作用與洛赫西定的副作用相關聯，從而限制口腔黏膜的細胞結構的改變的發生和發展，與有效對抗牙齦炎、細菌斑和牙周炎的抗細菌作用以及能夠抵抗氧化壓力的癒合和抗炎活性組合，且限制口腔黏膜的刺激的發生和發展，從而促進口腔黏膜的營養作用。這些特性使其使用特別有利，甚至在長期使用時也是如此，而不會在口腔黏膜上發生洛赫西定的細胞等級的刺激作用和副作用。

在其第一個較佳的具體實例中，根據本發明的口腔照護產品是包含洛赫西定和DNA鈉鹽的漱口水。

根據本發明的漱口水包含洛赫西定。較佳地，漱口水中洛赫西定的量相對於漱口水之總體積在0.01重量%至0.30重量%，更佳在0.05重量%至0.30重量%，甚至更佳在0.09重量%至0.20重量%的範圍內。

在根據本發明的漱口水中，洛赫西定還可有利地以鹽和錯合物的形式存在。較佳地，根據本發明的漱口水包含呈鹽或錯合物形式的洛赫西定。作為洛赫西定鹽，例如，洛赫西定二葡糖酸鹽或洛赫西定二乙酸鹽可用於根據本發明的漱口水中。較佳地，根據本發明的漱口水包含呈洛赫西定二葡糖酸鹽形式的洛赫西定。

根據本發明的漱口水包含DNA鈉鹽。

較佳地，在漱口水中，DNA鈉鹽的量相對於漱口水之總體積在0.01重量%至0.2重量%，更佳在0.05重量%至0.1重量%的範圍內。

適用於本發明目的DNA鈉鹽是可商購的，例如以Kalinat aw Powder（Kalichem）的名稱銷售。事實上，已證明該DNA鈉鹽的量對於抵抗洛赫西定對口腔黏膜的刺激作用是最佳的、對口腔黏膜發揮保護作用，並對口腔的可能傷口發揮癒合作用，因此也促進口腔黏膜本身的正確營養作用。

較佳地，根據本發明的漱口水包含至少一種鹼金屬或鹼土金屬的偏二亞硫酸鹽。

至少一種鹼金屬或鹼土金屬的偏二亞硫酸鹽的存在能抵抗牙齒上深色色素沉著的缺點（此為洛赫西定的副作用）。

較佳地，該至少一種鹼金屬或鹼土金屬的偏二亞硫酸鹽選自由偏二亞硫酸鈉、偏二亞硫酸鉀及偏二亞硫酸鈣所組成的群。更佳地，根據本發明的漱口水包含偏二亞硫酸鈉。

較佳地，在根據本發明的漱口水中，相對於漱口水之總體積，該至少一種鹼金屬或鹼土金屬的偏二亞硫酸鹽的量在0.1重量%至0.5重量%，更佳在0.15重量%至0.3重量%的範圍內。

較佳地，根據本發明的漱口水包含抗壞血酸。

較佳地，在根據本發明的漱口水中，抗壞血酸的量在相對於漱口水之總體積的0.1重量%至1.0重量%的範圍內。

抗壞血酸的存在能抵抗牙齒上深色色素沉著的缺點（此為洛赫西定的副作用）。

較佳地，根據本發明的漱口水包含抗壞血酸和至少一種鹼金屬或鹼土金屬的偏二亞硫酸鹽，甚至更佳地相對於漱口水之總體積包含0.1重量%至0.5重量%的至少一種鹼金屬或鹼土金屬的偏二亞硫酸鹽和0.1重量%至1.0重量%的抗壞血酸。

事實證明，該等量的該等組分的組合對於抵抗洛赫西定對牙齒上的深色色素沉著的副作用是最佳的。

較佳地，根據本發明的漱口水包含檸檬酸三鈉。

較佳地，在根據本發明的漱口水中，檸檬酸三鈉的量相對於漱口水之總體積在0.8重量%至2.0重量%，更佳在0.8重量%至1.2重量%的範圍內。

該等量的檸檬酸三鈉的存在有利於將漱口水的pH調節至其使用的最佳值。

在一個較佳的具體實例中，根據本發明的漱口水包含抗壞血酸和檸檬酸三鈉。更佳地，根據本發明的漱口水包含相對於漱口水之總體積0.1重量%至1重量%的抗壞血酸，以及相對於漱口水之總體積總體積0.8重量%至2.0重量%的檸檬酸三鈉。

事實上，已令人意外地發現，抗壞血酸和檸檬酸三鈉的該組合能穩定根據本發明的漱口水的調配物。

較佳地，根據本發明的漱口水包含至少一種聚乙烯吡咯啶酮-乙酸乙烯酯共聚物。適用於本發明目的聚乙烯吡咯啶酮-乙酸乙烯酯共聚物是可商購的，例如以Luviskol®（BASF SE）的名稱銷售的那些聚乙烯吡咯啶酮-乙酸乙烯酯共聚物。

該至少一種聚乙烯吡咯啶酮-乙酸乙烯酯共聚物有利於在本發明的漱口水中發揮成膜和抗菌斑作用。

較佳地，在根據本發明的漱口水中，該至少一種聚乙烯吡咯啶酮-乙酸乙烯酯共聚物的量相對於漱口水之總體積在0.05重量%至1重量%，更佳在0.3重量%至1重量%的範圍內。

在其較佳的具體實例中，根據本發明的口腔照護產品是漱口水，其包含相對於該漱口水之總體積0.01重量%至0.30重量%的洛赫西定、0.01重量%至0.2重量%更佳0.01重量%至0.1重量%的DNA鈉鹽、0.1重量%至0.5重量%的至少一種鹼金屬或鹼土金屬的偏二亞硫酸鹽、0.1重量%至1.0重量%的抗壞血酸、0.05重量%至1重量%更佳0.3重量%至1重量%的至少一種聚乙烯吡咯啶酮-乙酸乙烯酯共聚物。

根據本發明的漱口水可含有一或多種所屬技術領域已知的用於口腔照護溶液的其他可能的成分。

特別地，根據本發明的漱口水可進一步包含一或多種選自由甜味劑、調味劑、潤濕劑、防腐劑、乳化劑、pH調節劑、食品著色劑所組成的群的添加劑。

作為甜味劑，根據本發明的漱口水可例如包含木糖醇、糖精鈉、乙醯磺胺酸鉀、蔗糖素、甜菊萃取物。

作為調味劑，根據本發明的漱口水可例如包含薄荷、薄荷醇、茴香腦、綠薄荷、肉桂、丁香、桉樹油。

作為潤濕劑，根據本發明的漱口水可例如包含丙二醇、山梨醇、甘油。

作為防腐劑，根據本發明的漱口水可例如包含苯甲酸鈉、甲基異噻唑啉酮。

作為助溶表面活性劑，根據本發明的漱口水可例如包含氫化蓖麻油PEG 40、泊洛沙姆（Poloxamer）407。

作為pH調節劑，根據本發明的漱口水可例如包含檸檬酸鈉、檸檬酸。

作為著色劑，根據本發明的漱口水可例如包含CI 19140、CIU 42090、CI 17200。

根據本發明的漱口水可方便地以已知的方式製備成在合適的溶劑介質（較佳水）中呈溶液或懸浮液的形式。

根據較佳的具體實例，根據本發明的漱口水包含以下組分： 1. 水 2. 木糖醇 3. 丙二醇 4. 氫化蓖麻油PEG 40 5. 抗壞血酸 6. 洛赫西定二葡糖酸鹽 7. 聚乙烯吡咯啶酮-乙酸乙烯酯共聚物 8. DNA鈉鹽 9. 調味劑 10. 泊洛沙姆407 11. 偏二亞硫酸鈉 12. 檸檬酸鈉 13. 檸檬酸 14. C.I. 42090 15. C.I. 17200

在另一個較佳的具體實例中，根據本發明的口腔照護產品是包含洛赫西定和DNA鈉鹽的牙周凝膠。

根據較佳的具體實例，根據本發明的牙周凝膠包含以下組分： 1. 水 2. 丙二醇 3. 羥乙基纖維素 4. 聚乙烯吡咯啶酮-乙酸乙烯酯共聚物 5. 氫化蓖麻油PEG 40 6. 洛赫西定二葡糖酸鹽 7. 乙酸鈉 8. DNA鈉鹽 9. 薄荷醇 10. 薄荷油 11. 乙酸 12. 偏二亞硫酸鈉 13. 抗壞血酸

較佳地，相對於牙周凝膠之總體積，根據本發明的牙周凝膠包含0.5重量%至1.0重量%的洛赫西定。

較佳地，根據本發明的牙周凝膠包含DNA鈉鹽，其量相對於牙周凝膠的總重量最多為0.3重量%，更佳為0.01重量%至0.3重量%。

在又一個較佳的具體實例中，根據本發明的口腔照護產品是包含洛赫西定和DNA鈉鹽的牙膏。

根據較佳的具體實例，根據本發明的牙膏包含以下組分： 1. 山梨醇 2. 水 3. 矽石（水合矽石） 4. 甘油 5. 木糖醇 6. 椰油醯胺丙基甜菜鹼 7. 聚乙烯吡咯啶酮-乙酸乙烯酯共聚物 8. 氫化蓖麻油PEG 40 9. 調味劑 10. 洛赫西定二葡糖酸鹽 11. 羧甲基纖維素 12. 抗壞血酸 13. 偏二亞硫酸鈉 14. DNA鈉鹽 15. 糖精鈉 16. 苯甲酸鈉 17. 檸檬酸鈉

較佳地，相對於牙膏之總體積，根據本發明的牙膏包含0.05重量%至0.2重量%的洛赫西定。

較佳地，至少一種無機氟化物可任選地存在於根據本發明的牙膏中。

較佳地，在根據本發明的牙膏中，DNA鈉鹽的量在相對於牙膏之總體積的0.01重量%至0.05重量%的範圍內。

在另一個方面，本發明還係關於根據本發明的口腔照護產品作為口腔黏膜的抗刺激劑的用途。

在另一個方面，本發明還係關於根據本發明的口腔照護產品作為口腔黏膜的癒合劑的用途。

較佳地，該口腔黏膜包含牙周組織。

事實上，已發現到由於DNA鈉鹽與洛赫西定的組合，因此根據本發明的口腔照護產品能抵抗後者對口腔黏膜的刺激作用、對口腔黏膜發揮保護作用，並對口腔的可能傷口發揮癒合作用。

還發現到DNA鈉鹽與洛赫西定的組合還限制長期使用基於洛赫西定的口腔照護產品的副作用，包括細胞結構的改變，其包括液泡形成、細胞核退化和細胞間隙擴張，從而排除該等產品的應用和功能限制中的其中一者。

因此，較佳地，本發明還係關於根據本發明的口腔照護產品在用於治療至少一種選自由牙齦炎、細菌斑和牙周炎所組成的群的病狀的方法中的用途。

此外，已令人意外地發現，根據本發明的口腔照護產品在植入物周圍黏膜炎的治療中同樣有效。因此，在其另一個方面，本發明還係關於根據本發明的口腔照護產品在用於治療植入物周圍黏膜炎的方法中的用途。

在其另一個方面，本發明係關於DNA鈉鹽的用途，其用於治療口腔黏膜病狀的方法中，其中該病狀涉及該口腔黏膜的細胞結構的改變，該細胞結構的改變選自由液泡形成、細胞核退化和細胞間隙擴張所組成的群。

較佳地，該口腔黏膜包含牙周組織。

本案申請人還發現到，該DNA鈉鹽的保護作用使得任何病因的口腔黏膜的細胞改變例如藉由限制活性組分（諸如洛赫西定）治療的副作用能得到治療性干預，其中該等活性組分對口腔黏膜的細胞結構特別具有攻擊性。

在其另一方面，本發明因此還係關於DNA鈉鹽，其用於治療經歷以洛赫西定治療的患者中的洛赫西定副作用的方法，其中該等副作用涉及該患者的口腔黏膜的細胞結構的改變，該細胞結構的改變選自由液泡形成、細胞核退化和細胞間隙擴張所組成的群。

較佳地，該口腔黏膜包含牙周組織。實驗部分

現在藉由一些實施例描述本發明，這些實施例被認為是用於非限制性地說明本發明的目的。實施例 1 材料和方法

所用的所有試劑、培養基和一次性材料均獲自Merck（E.Merck AG，Darmstadt，Germany）。0.5cm²的重建人類口腔上皮細胞（其後稱為「ROE」）樣本（SkinEthic HOE ™/人類口腔上皮細胞）獲自EPISKIN（EPISKIN，Lyon Cedex 7，France）。DNA鈉鹽（其後稱為「NaDNA」，Kalinat® AW）獲自KALICHEM （Kalichem，Brescia，Italy）。

測試以下不含防腐劑的漱口水溶液： A. 含有相對於漱口水之總體積0.2重量%的洛赫西定的漱口水（正控制組）； B. 含有相對於漱口水之總體積的0.2重量%的洛赫西定和0.01重量%的NaDNA的漱口水（測試組)； C. 含有相對於漱口水之總體積0.01重量%的NaDNA的漱口水； D. 磷酸鹽緩衝鹽溶液（PBS，負控制組）。重建的人類口腔上皮細胞（ROE）

使用32個ROE樣本。在無菌空氣流的存在下在排氣罩中打開ROE樣本。將樣本置於含有瓊脂糖營養物培養基的24孔運輸板中。從運輸板取出樣本並除去瓊脂糖。接著將樣本置於具有營養培養基（RPMI 1640培養基，補充有20%的胎牛血清、1%的L-穀醯胺和1%的青黴素/鏈黴素）的6孔板中。在測試前，將培養板在5%和100%的相對濕度下、CO₂ 環境中、37°C下培養整夜。生物反應器

在兩個可商購獲得的滴流量生物反應器（DFR 110；BioSurface Technologies，Bozeman，MT，USA）中進行測試，該等滴流量生物反應器適於能將含有樣本的托盤定位在流量槽的底部上，且能將ROE樣本浸沒在周圍的循環培養基中。這使得能以連續的流速使用營養培養基。

在實驗開始前，使用具有過氧化氫氣體電漿技術（Sterrad，ASP，Irvine，CA，USA）的化學滅菌器對所有含有試管和樣本的生物反應器的托盤進行滅菌。藉由將最高溫度限制在45°C，從而避免由整個系統的熱量所造成的損害。滅菌後，將生物反應器裝配在無菌罩內。測試步驟

圖1示出用於實驗的系統的未按比例的橫截面示意圖，其以舉例的方式示出兩個生物反應器中的其中一個。

系統1包括蠕動泵11、滴流量型反應器10和含有樣本的流量槽14、15和16。滴流量型反應器10配備有流動腔室21、入口12和排放口13。流動腔室21配置以容納流動介質20。

使用無菌解剖刀和鑷子從ROE樣本的載體上切下ROE樣本，並放置在各含有四個孔的八個聚四氟乙烯（PTFE）的流量槽14、15和16中的生物反應器內、將ROE樣本固定並將其表面暴露於包含營養培養基（培養基RPMI 1640，補充有20%胎牛血清、1%的L-穀醯胺和1%青黴素/鏈黴素）的流動培養基20。所有托盤都固定在兩個平行操作的生物反應器10的每個流動腔室21的底部，並立即接種新的營養培養基。接著將生物反應器轉移到培養器中，並在37°C、5%的CO₂ 和100%的相對濕度下操作。接著開啟電腦控制的多通道蠕動泵11（RP-1，Rainin，Emeryville，CA，USA）、設定在9.6ml/h的流速，並用以提供通過流量槽包含營養培養基的恆定流量的流通介質20。在圖1中，箭頭17、18和19示意性地指示流動介質20的流動方向。蠕動泵11藉反應器10的入口12將流動介質20供給到兩個生物反應器10的流動腔室21中，接著藉由排放口13排放出流動介質20。

24小時後，將泵11停止，並分別以漱口水溶液A、B、C和D處理四個流量槽14、15和16，每個流量槽（10ml）以一種溶液處理。在每個流量槽中，藉由將生物反應器10傾斜25分鐘來對兩個樣本處理5分鐘，而對另外兩個處理30分鐘，使得溶液完全覆蓋兩個較低的樣本，接著將其放回水平位置，保持5分鐘，從而覆蓋所有4個樣本。剩餘的四個流量槽14、15和16首先用3%的H₂ O₂ 溶液處理1分鐘以誘導高氧化壓力和細胞損傷，接著以無菌PBS徹底沖洗樣本1分鐘，並以如前所述測試的漱口水溶液處理流量槽14、15和16。再次地，在每個流量槽中，以漱口水溶液對兩個樣本處理5分鐘，而對另外兩個處理30分鐘。

其後，重新啟動泵11以清洗漱口水溶液60分鐘，接著從流量槽14、15和16中取出所有ROE樣本，並立即使用無菌解剖刀和鑷子切成4等份，且以如下操作。樣本的評估

在成像穿透（TEM）中，使用光學顯微鏡和電子顯微鏡對每種處理的ROE樣本進行MTT存活率測試（n = 4）、共焦雷射掃描顯微鏡成像（CLSM）（n = 2）和組織學評估(n = 2)。 MTT存活率測試

以MTT存活率測試對細胞存活進行評估。進行如下劑量：藉由將5mg/ml的溴化3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯四唑溴化物（MTT）溶解在無菌PBS中以及將0.3mg/ml的N-甲基吩

硫酸甲酯鹽（PMS）溶解在無菌PBS中來製備兩種起始儲備溶液。將溶液在2°C下的避光小瓶中儲存到實驗當天為止，接著以1:1:8的比例（分別為MTT儲備溶液、無菌PMS和PBS儲備溶液）混合製備新的測量溶液（FMS）。藉由將10%（v/v）的十二烷基硫酸鈉和50%（v/v）的二甲基甲醯胺溶解在蒸餾水中製備溶解溶液（LS）。將經MTT測試的ROE樣本置於24孔無菌平底板的孔內。其後，將1ml的FMS吸移到每個孔中，並將平板在37°C和光照條件下培養1小時。在培養期間，電子通過細胞膜的傳輸，以及在較小程度上，細胞氧化物還原系統將MTT黃鹽轉變為不溶的紫甲䐶。中間電子受體（PMS）促進轉變。接著藉由抽吸輕輕地從孔中除去未反應的FMS，並藉由向每孔中加入1ml的LS來溶解甲䐶晶體，接著在環境光條件下進一步培養1小時。接著從每個孔中除去總共100微升的懸浮液，並以分光光度計（Genesys 10-S，Thermo Spectronic，Rochester，NY，USA）測量光密度（在550nm波長下）。 CLSM觀測

如Brambilla E，Ionescu A，Mazzoni A，Cadenaro M，Gagliani M，Ferraroni M，Tay F，Pashley D，Breschi L. (2014) Hydrophilicity of dentin bonding systems influences in vitro Streptococcus mutans biofilm formation. Dent Mater. 30(8): 926-35中所述，使用Live/Dead染色進行CLSM成像。簡而言之，使用LIVE/DEAD®存活率顯微鏡檢試劑盒（Invitrogen Ltd.，Paisley，UK）對經CLSM觀測的ROE樣本進行染色。使用CLSM (Eclipse Ti2 inverted CLSM，Nikon，Tokyo，Japan)觀測到螢光染色的活細胞。對於每個ROE樣本，記錄四個隨機選擇的影像堆疊部分。使用乾式平光複消色差物鏡20x (NA 0.75)透鏡獲得共焦影像，並使用Nikon專用軟體進行數位化，其解析度為1024×1024像素，變焦因數為1.0。對於影像堆疊的每個部分，使用Drishti 3D軟體獲得3D渲染重建，如Lindhe J，Heyden G，Svanberg G，Löe H，Rindom Schiøtt C. (1970)中所述。局部施用洛赫西定對倉鼠口腔黏膜的影響如J. Periodont. Res. 5(3): 177-182中所述。組織學評估

將經組織學分析的ROE樣本整夜固定在新鮮製備的Karnovsky溶液（2.0%的多聚甲醛、2.0%的戊二醛在0.1M的二甲胂酸鈉緩衝液中）中。

在緩衝液中清洗後，以2%的OsO₄ 和2%的乙酸鈾醯對樣本進行染色。接著將樣本在丙酮溶液中脫水，並加入Epon-Araldite樹脂（Fluka，Italy）。製備不同實驗組的所有樣本（0.5微米的經甲苯胺藍染色的橫截面），接著以光學顯微鏡（Pro Plus Imaging software）在1500x的最終放大倍數下和以TEM （Zeiss microscope EM10）進行觀測。結果 MTT測試

預先檢查MTT存活率測試資料集的分布常態（Shapiro-Wilk測試）和等分散性（Levene測試）。由於即使在對數轉換後資料也非常態分佈，因此使用Wilcoxon測試進行非參數分析（p＜0.05）。

在不同處理時間下以溶液A、B、C和D對ROE細胞獲得的結果示於圖2中。圖3示出在以3體積%的H₂ O₂ 溶液處理1分鐘及隨後以溶液A、B、C和D不同處理時間後，對ROE細胞進行MTT存活率測試的結果。

如圖2所示，在以漱口水溶液處理5分鐘後，與溶液B相比，觀測到以溶液C處理的樣本存活率顯著降低。相對於負控制組（溶液D），並未發現到溶液存活率有顯著變化。以漱口水溶液處理ROE樣本30分鐘導致溶液C相對於含洛赫西定的溶液的存活率顯著降低。以3體積%H₂ O₂ 處理（圖3）導致存活率總體下降。以溶液A處理5分鐘後的樣本示出比以溶液B處理後的樣本明顯更高的存活率，但在處理30分鐘後，這兩種溶液之間的差異明顯降低，且明顯大於以溶液C和D處理的樣本。此外，溶液C比溶液D引起明顯更高的存活率，表明NaDNA對細胞存活率具有明顯且正向的活性。 CLSM觀測

在以漱口水溶液處理5分鐘後獲得的共焦顯微重建，示出各組之間無差異。處理30分鐘後樣本的重建示於圖4（以溶液A、B、C和D處理30分鐘後的樣本）和圖5（以H₂ O₂ 處理1分鐘後，再以溶液A、B、C和D處理30分鐘後的樣本）。

以溶液A處理的樣本，以及以溶液B處理的樣本，在較小程度上，即使在暴露於過氧化氫的樣本中也示出良好的細胞結構保存。負控制組樣本（D）示出表面上存在死細胞，且在以過氧化氫處理後，可在表面上識別出幾乎完全由死細胞組成的層。在經或非經過氧化氫處理的情況下，僅以NaDNA處理的樣本（溶液C）示出比負控制組低得多的死細胞量。組織學評估

以漱口水溶液處理5分鐘後獲得的ROE組織切片（0.5μm）示出各組之間無差異。處理30分鐘後樣本的截面示於圖6（以溶液A、B、C和D處理30分鐘後的樣本）和圖7（以H₂ O₂ 處理1分鐘後，再以溶液A、B、C和D處理後的樣本）。

考慮到圖6的樣本，負控制組（D）示出完整的組織結構保留。以溶液A和較小程度的溶液B處理的樣本示出細胞結構的改變，諸如最外層和基底層中液泡形成、細胞核退化和細胞間隙初始擴張。這些改變可能是歸因於洛赫西定的活性。事實上，相對於僅含洛赫西定的漱口水（溶液A），向洛赫西定漱口水（溶液B）中加入NaDNA示出細胞結構更小強度的改變。以溶液C處理的樣本示出相同的變化，但限於第一細胞層。如所預期的，以過氧化氫處理（請參見圖7）示出對ROE細胞的廣泛損傷，諸如顯著液泡形成、細胞核退化和細胞間隙變寬。這些改變在以負控制組(D)和以溶液A（僅含洛赫西定）處理的樣本中更明顯。在以溶液B處理的樣本中，在最內層中可發現到一些沒有表現出退化跡象的細胞，其中這些細胞可能更受保護而不受過氧化氫產生的活性氧物質的影響，且其中NaDNA發揮細胞損傷最小化的作用。以漱口水C（僅含NaDNA）處理的樣本示出最小的細胞退化跡象。

總之，由於氧化壓力和暴露於僅含洛赫西定的漱口溶液，因此NaDNA對細胞退化表現出明顯的保護作用。實施例 2

本實驗的目的是在植入物周圍黏膜炎存在下，即在沒有支持骨和病狀囊的損失(＜3mm)而在探診植入物周圍時存在出血的情況下，測試根據本發明呈凝膠形式的口腔照護產品的有效性。患者的選擇

按照赫爾辛基宣言（Declaration of Helsinki）的標準並根據良好臨床實踐的原則，遵照Chieti和Pescara的生物醫學研究倫理委員會的批准進行研究。因此，為了評估細菌斑和發炎的控制特性，在醫學、口腔和生物技術科學部門招募了具有植入物周圍黏膜炎的患者。

根據赫爾辛基宣言中所陳述的用於進行科學研究的原則，並根據以下納入標準，招募選擇用於研究的患者： •健康良好的患者因此不存在以下：相關的全身性疾病，諸如主要是糖尿病、免疫性疾病、血液學疾病；腫瘤；嚴重的感染性疾病，諸如HIV或具有肝衰竭的症候及/或症狀的病毒性肝炎；認知困難；智力困難；運動缺陷； •超過18歲； •藉由明確知情同意書而參與實驗；

選擇存在受黏膜炎影響的植入物的候選者，定義為： •在植入物周圍的支撐骨沒有損失的情況下在探診時存在出血； •缺乏植入物移動性； •在植入物周圍存在至少2mm的角質化牙齦； •除了最多三個元件的單個牙冠或牙橋之外，不存在植入物修復； •不存在明顯的負荷過多或咬合創傷的跡象。

排除原則如下： •在植入手術過程後非完全無齒（若手術後沒有天然元件，則不可能測定菌斑、出血變數）； •非吸煙者或輕度吸煙者（每天少於10支香煙）； •良好的口腔照護，具有低菌斑和出血指數等級，且在其他牙齒元件上沒有牙周損害（FMPS和FMBS≤25%）； •對洛赫西定二葡糖酸鹽或裝置調配物和安慰劑的其他組分過敏的患者。主要評估指數的選擇

主要目的：菌斑指數得分：在評估的表面上記錄菌斑的存在/不存在。次要評估指數的選擇

臨床參數的記錄 -在探診時滲出（「BOP」）：記錄探診時出血的存在/不存在。 -牙齦指數（Loe & Silence1963）：根據以下標準記錄牙周組織的健康： 0 =正常牙齦； 1 =輕度發炎-輕微水腫和顏色變化，在探診時不存在出血； 2 =中度發炎-發紅的水腫組織和探診時出血； 3 =嚴重發炎-顯著發紅、水腫、潰瘍和出血傾向。統計分析

進行描述性資料分析，其中以平均值和標準差表示定量變數。為了比較兩組在定量變數方面的差異，使用學生T檢驗。顯著水準設定為5%。藉由Kilmogorov Smirnoff檢驗（p值＞0.05）和藉由以14天的反應變數評估圖來評估常態分布。實驗階段

測試了以下凝膠： E. 含有0.2重量%的洛赫西定和0.01重量%的NaDNA的凝膠； F. 與凝膠E相同組成的「安慰劑」凝膠，但不含有洛赫西定和NaDNA；

樣本量為24名患者，兩組之間的登記比為1:1（每個實驗組12名患者）。

在記錄臨床變數和口腔照護療程之後，每個患者會接受匿名凝膠管、注射器和塗藥器噴嘴以用於塗藥（每天3次，持續14天）。接受凝膠E（含有0.2重量%的洛赫西定和0.01重量%的NaDNA）的患者被識別為A組；接受凝膠F （「安慰劑」凝膠）的患者被識別為B組。

後續追蹤期間要記錄值的檢查設置如下： •基線（時間0，「T0」） •手術後14天（時間1，「T1」）

在T0期中，根據臨床方案收集菌斑指數、探診時出血和牙齦指數而產生牙周記錄。

所有患者皆完成T0和T1臨床研究階段。因此，指導受試者進行正確的家庭口腔照護操作並在14天後重新評估。在T1期中，根據臨床方案收集菌斑指數、探診時出血和牙齦指數而產生牙周記錄。在研究期間並無記錄到副作用。此外，在施用凝膠E或凝膠F後並無產生不需要的作用或副作用。結果主要評估指數

時間T0時，A組（凝膠E）的基線相對於檢測到的菌斑指數為2.4±0.4，B組（凝膠F）為2.2±0.5 (p＞0.05)。治療2周後（T1），A組（凝膠E）的測定的菌斑指數為0.5±0.4，B組（凝膠F）為1.7±1.9 (p＜0.05)。次要評估指數

時間T0時，A組（凝膠E）的基線相對於檢測到的BOP為57.1%±15.2%，B組（凝膠F）為55.3%±11.7% (p＞0.05)。治療2周後（T1），A組（凝膠E）的測定的BOP為14.3%±6.6%，B組（凝膠F）為45.4%±9.8% (p＜0.05)。

在不同實驗時間測量的相對於牙齦指數的資料：基線時和治療兩周後的T1時的結果示於表1。表1

	A組（凝膠E）	B組（凝膠F）	P值
牙齦指數T0	2.21±0.51	2.35±0.67	p＞0.05
牙齦指數T1	0.82±0.53	1.62±0.74	p＜0.05

結論

實驗時間T1時，在A組（凝膠E）和B組（凝膠F）之間出現了關於初始菌斑評分參數的統計學上顯著性差異。關於探診時出血和牙齦指數的次要指數，治療的益處也是明顯的，由此評估參數的統計學上顯著差異有利於A組，從而證實根據本發明的口腔照護產品在治療植入物周圍黏膜炎中的有效性。實施例 3

此實驗的目的是臨床評估兩週後根據本發明的口腔照護產品（以漱口水形式）在對患有牙周病的患者其口腔的軟組織上的牙菌斑的抗微生物和控制特性。患者的選擇

按照赫爾辛基宣言的標準並根據良好臨床實踐的原則，遵照Chieti和Pescara的生物醫學研究倫理委員會的批准進行實驗。因此，為了評估細菌斑和發炎的控制特性，在醫學、口腔和生物技術科學部門招募了具有牙周病的患者。

根據以下納入標準招募患者： •具有大於或等於20個元件的探診＞3mm的慢性牙周炎患者； •非吸煙者或中度吸煙者（每天少於10支香煙）；

排除標準如下： •具有矯正設備的患者； •對漱口水不耐受或過敏； •吸煙和酒精消耗； •經歷放射療法/化學療法少於5年的患者； •免疫受損患者； •全身性、腎或心血管疾病； •懷孕、哺乳婦女或進行抗生素和抗炎治療的患者。主要評估指數的選擇

全口菌斑評分（FMPS）：記錄每顆牙齒4個部位中存在/不存在菌斑，並計算相對於表面的百分比次要評估指數的選擇

全口出血評分（FMBS）：記錄每顆牙齒在4個部位進行探診時存在/不存在出血，並計算相對於表面的百分比。

牙齦指數（Loe & Silence1963）：根據以下標準記錄牙周組織的健康： 0 =正常牙齦； 1 =輕度發炎-輕微水腫和顏色變化，在探診時不存在出血； 2 =中度發炎-發紅的水腫組織和探診時出血； 3 =嚴重發炎-顯著發紅、水腫、潰瘍和出血傾向。

記錄任何併發症、不良事件和脫牙。統計分析

藉由Kolmogorov-Smirnov檢驗評估在不同實驗時間例如基線、1周和2周時FMPS、FMBS和GI資料相對於實驗組的分佈。研究資料的顯著性藉由學生T檢驗評估（p＜0.05）。實驗處理

測試以下漱口水： G：含有0.2重量%的洛赫西定和0.01重量%的NaDNA的漱口水； H：組成與凝膠E相同的「安慰劑」漱口水，但不含有洛赫西定和NaDNA；

樣本量為54名患者，兩組之間的登記比為1:1（每個實驗組27名患者）。

接受漱口水G（含有0.2重量%的洛赫西定和0.01重量%的NaDNA）的患者被識別為A組；接受漱口水H（「安慰劑」漱口水）的患者被識別為B組。研究階段

實驗階段V1。篩選檢查以評估患者合格性和研究納入。批准知情同意書和口腔照護說明。

實驗階段V2（基線）。牙周記錄，記錄全口菌斑評分（FMPS）和全口出血評分（FMBS）和牙齦指數（GI）。將給患者與指定的研究組（A或B）相關的漱口水包裝，並以10ml漱口。方案包括每天（飯後早晨和晚上）共三次居家漱口，並治療持續2周。

實驗階段V3（1周）對照，記錄以下FMPS、FMBS和GI指數。

實驗階段V4（2周）對照，記錄FMPS、FMBS、GI，並整理以除去可能形成的斑點。結果主要評估指數

時間V2時，發現到A組（漱口水G）的基線相對於FMPS的檢測結果為52.7±9.2，B組（漱口水H）的基線為58.2±6.1（p＞0.05）。治療1周（V3）時，發現到A組的FMPS測量值為13.3±5.6，B組為18.7±4.3（p＜0.05）。最後，治療2周（V4）時，發現到A組的FMPS測量值為14.2±4.1，B組為20.3±5.2（p＜0.05）。次要評估指數

時間V2時，發現到A組的FMBS測量值為46.7±8.7，B組的FMBS測量值為49.2±6.2（p＞0.05）。治療1周（V3）時，發現到A組的FMPS測量值為12.7±4.2，B組為18.5±5.9（p＜0.05）。最後，治療2周（V4）時，發現到A組的FMBS測量值為13.1±3.2，B組為19.8±4.9（p＜0.05）。

在不同實驗時間測量的相對於牙齦指數的資料：基線時、1周時和2周時的結果呈現於表2。表2

	A組（漱口水G）	B組（漱口水H）	P值
牙齦指數V2（基線）	2.85±0.47	2.71±0.51	p＞0.05
牙齦指數V3 （1周）	1.14±0.55	1.75±0.49	p＜0.05
牙齦指數V4 （2周）	1.09±0.44	1.96±0.39	p＜0.05

結論

實驗時間V3時，A組和B組之間在主要參數FMPS方面已出現統計學上顯著性差異。這一證據在處理兩周後得到證實，其中A組的平均FMPS水平保持低於20%。在這點上，治療的益處相對於FMBS的次級指數和牙齦指數也很明顯，這些指數示出有利於A組的臨床參數的統計學上顯著變化，這證明了可由根據本發明的口腔照護產品在接受治療的受試者的牙齦組織上引起有益效果。

在圖式中： [圖1]示出根據實施例1的用於實驗的系統的未按比例的橫截面示意圖； [圖2]示出在不同處理時間下以根據實施例1的溶液A、B、C和D對ROE細胞進行MTT存活率測試的結果； [圖3]示出在以3體積%的H₂ O₂ 溶液處理1分鐘及隨後以根據實施例1的溶液A、B、C和D處理不同時間後，對ROE細胞進行MTT存活率測試的結果； [圖4]示出分別以根據實施例1的溶液A、B、C和D處理30分鐘後ROE樣本之CLSM觀測結果的3D渲染重建及最大強度的投影； [圖5]示出以3體積%的H₂ O₂ 溶液處理1分鐘隨後分別以根據實施例1的溶液A、B、C和D處理30分鐘後ROE樣本之CLSM觀測結果的3D渲染重建和最大強度的投影； [圖6]示出分別以根據實施例1的溶液A、B、C和D處理30分鐘後ROE樣本的切片；及 [圖7]示出以3體積%的H₂ O₂ 溶液處理1分鐘隨後分別以根據實施例1的溶液A、B、C和D處理30分鐘後ROE樣本的切片。

Claims

一種口腔照護產品，其包含洛赫西定（chlorhexidine）和DNA鈉鹽。
如請求項1之口腔照護產品，其選自由漱口水、牙周凝膠和牙膏所組成的群。
如請求項2之口腔照護產品，其中該產品是漱口水，且洛赫西定的量相對於該漱口水之總體積在0.01重量%至0.30重量%的範圍內。
如請求項2或3之口腔照護產品，其中該產品是漱口水，且洛赫西定呈鹽或錯合物的形式。
如請求項2至4中任一項之口腔照護產品，其中該產品是漱口水，且DNA鈉鹽的量相對於該漱口水之總體積在0.01重量%至0.2重量%的範圍內。
如請求項2至5中任一項之口腔照護產品，其中該產品是包含至少一種鹼金屬或鹼土金屬的偏二亞硫酸鹽的漱口水。
如請求項2至6中任一項之口腔照護產品，其中該產品是包含抗壞血酸的漱口水。
如請求項2至7中任一項之口腔照護產品，其中該產品是包含至少一種聚乙烯吡咯啶酮-乙酸乙烯酯共聚物的漱口水。
如請求項2至8中任一項之口腔照護產品，其中該產品是包含檸檬酸三鈉的漱口水。
如請求項2至9中任一項之口腔照護產品，其中該產品是漱口水，其包含相對於該漱口水之總體積0.01重量%至0.30重量%的洛赫西定、0.01重量%至0.2重量%的DNA鈉鹽、0.1重量%至0.5重量%的至少一種鹼金屬或鹼土金屬的偏二亞硫酸鹽、0.1重量%至1.0重量%的抗壞血酸、0.05重量%至1重量%的至少一種聚乙烯吡咯啶酮-乙酸乙烯酯共聚物。
如請求項2之口腔照護產品，其中該產品是牙周凝膠，其包含相對於該牙周凝膠之總體積0.5重量%至1.0重量%的洛赫西定。
如請求項2或11之口腔照護產品，其中該產品是牙周凝膠，其包含相對於該牙周凝膠的總重量至多0.3重量%的量的DNA鈉鹽。
如請求項2之口腔照護產品，其中該產品是牙膏，其包含相對於該牙膏之總體積0.05重量%至0.2重量%的洛赫西定。
如請求項2或13之口腔照護產品，其中該產品是牙膏，其包含相對於該牙膏之總體積0.01重量%至0.05重量%的量的DNA鈉鹽。
如請求項1至14中任一項之口腔照護產品，其用作口腔黏膜抗刺激劑。
如請求項1至14中任一項之口腔照護產品，其用作口腔黏膜癒合劑。
如請求項1至14中任一項之口腔照護產品，其用於治療至少一種選自由牙齦炎、細菌斑和牙周炎所組成的群的病狀的方法中。
如請求項1至14中任一項之口腔照護產品，其用於治療植入物周圍黏膜炎的方法中。
一種DNA鈉鹽，其用於治療口腔黏膜病狀的方法中，其中該病狀涉及該口腔黏膜的細胞結構的改變，該細胞結構的改變選自由液泡形成、細胞核退化和細胞間隙擴張所組成的群。
一種DNA鈉鹽，其用於治療經歷洛赫西定治療的患者中的洛赫西定副作用的方法，其中該等副作用涉及該患者的口腔黏膜的細胞結構的改變，該細胞結構的改變選自由液泡形成、細胞核退化和細胞間隙擴張所組成的群。