TW202043477A

TW202043477A - 編碼蛋白質的核糖核酸

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Publication number: TW202043477A
Application number: TW108146645A
Authority: TW
Inventors: 弗里德里克梅茨格; 賈斯汀安東尼撒華傑; 赫維沙夫豪森
Original assignee: 瑞士商渥莎梅股份有限公司
Priority date: 2018-12-19
Filing date: 2019-12-19
Publication date: 2020-12-01
Also published as: BR112021011771A2; JP2022514863A; AU2019407921A1; PH12021551135A1; CN113454227A; MA54503A; CA3120638A1; WO2020127532A3; KR20210105382A; CL2021001571A1; SG11202105267VA; CO2021007916A2; MX2021007241A; IL284035A; PE20211342A1; US20220002364A1; WO2020127532A2; EP3898982A2

Abstract

本發明涉及包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列的一訊息核糖核酸(mRNA) 以及一轉錄單元，包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸的一表現載體或一基因治療載體。本文還公開了包含該mRNA、轉錄單元、表現載體或基因治療載體的一治療組合物，以及該治療組合物在治療一疾病或一病症中之用途。

Description

編碼蛋白質的核糖核酸

本發明涉及一種訊息核糖核酸(messenger ribonucleic acid, mRNA)，包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-9個胺基酸具有大於2的平均疏水性分數，其中該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組： i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，條件為該蛋白質不為一氧化還原酶； ii) 與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾；以及 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾。

本發明進一步涉及一種訊息核糖核酸(mRNA)，包含編碼下列之一核酸序列： i) 一蛋白質；ii) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽為腦源性神經營養因子(brain-derived neurotrophic factor, BDNF)的訊息胜肽，且其中該蛋白質不為一氧化還原酶。本發明還涉及一種轉錄單元或表現載體，包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-9個胺基酸具有大於2的平均疏水性分數，其中該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組： i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，條件為該蛋白質不為一氧化還原酶； ii) 與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾；以及 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾。本發明還涉及一種轉錄單元或表現載體，包含編碼一蛋白質以及與該蛋白質異源的一訊息胜肽的一核酸序列，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽為腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽。本發明還涉及一種治療組合物以及一種套組，包含該mRNA及/或該轉錄單元或表現載體。本發明還涉及一種mRNA、一種轉錄單元或表現載體、一種治療組合物及/或一種套組作為一藥物之用途，特別是涉及一mRNA作為一藥物之用途，該mRNA包含一核酸序列，該核酸序列編碼 i) IGF1；ii) 腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽。本發明還涉及一種mRNA以及一種其治療組合物在一治療骨骼肌損傷的方法中之用途。

過去已有不同的方法試圖增加一編碼的蛋白質的表現量及分泌量，特別是透過使用改良的體外及/或體內表現系統。現有技術中一般描述的增加表現及分泌的方法通常是基於使用含有特定啟動子與對應之調控元件的表現載體或基因匣。由於這些表現載體或基因匣通常侷限於特定的細胞系統，因此這些表現系統必須修改以適合在不同的細胞系統中使用。然後通常將這種修改過的表現載體或基因匣轉染到細胞中，且通常根據特定細胞株進行處理。因此，能夠在一目標細胞中藉由該細胞固有的系統表現該編碼的蛋白質，而不會受到對特定細胞類型具有專一性的啟動子及調控元件影響的那些核酸分子，如mRNA，會被優先考慮。在這種情況下，可以在mRNA穩定元件與增加mRNA轉譯效率的元件之間進行區分。例如，PCT專利公開號WO 02/098443描述了以一般形式穩定並針對其編碼區中的轉譯進行優化的mRNA。PCT專利公開號WO 02/098443進一步揭露了一種確定序列修飾之方法。PCT專利公開號WO 02/098443另外描述了在mRNA序列中取代腺嘌呤與尿嘧啶核苷酸以增加序列的鳥嘌呤/胞嘧啶(guanine/cytosine, G/C)含量的可能性。在這種情況下，PCT專利公開號WO 02/098443通常將序列作為此類修飾的基礎序列，其中修飾的mRNA編碼至少一種生物活性胜肽或多胜肽，其在待治療的患者中轉譯，例如，完全未轉譯或轉譯不足或轉譯有缺陷。在增加編碼蛋白表現的另一方法中，PCT專利申請公開號WO 2007/036366描述了長poly(A)序列(特別是長於120 bp)與β球蛋白基因的至少兩個3’非轉譯區之組合對於mRNA與轉譯活性的正向效果。儘管本領域取得了所有的進展，但是在無細胞系統、細胞或生物體中有效表現，特別是一編碼蛋白的有效分泌(重組表現)仍然是一個具有挑戰性的問題。

本發明提供一種訊息核糖核酸(mRNA)，包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-9個胺基酸具有大於2的平均疏水性分數，其中該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組： i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，條件為該蛋白質不為一氧化還原酶； ii) 與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾；以及 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾。

本發明進一步提供一種mRNA，包含編碼下列之一核酸序列： i) 一蛋白質；以及 ii) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽為腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽，且其中該蛋白質不為一氧化還原酶，特別是，本發明提供一種mRNA，包含編碼下列之一核酸序列： i) 一蛋白質；以及 ii) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽為腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽，且其中該蛋白質係選自由下列所組成之群組：羧肽酶；細胞激素；胞外配體與轉運蛋白；胞外基質蛋白；葡萄糖苷酶；醣基轉移酶；生長因子；生長因子結合蛋白；肝素結合蛋白；激素；水解酶；免疫球蛋白；異構酶；激酶；裂解酶；金屬酶抑制劑；金屬蛋白酶；乳蛋白；神經活性蛋白；蛋白酶；蛋白酶抑制劑；蛋白質去磷酸酶；酯酶；轉移酶；以及血管活性蛋白。

本發明進一步提供一種轉錄單元或表現載體，包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-9個胺基酸具有大於2的平均疏水性分數，其中該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組： i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，條件為該蛋白質不為一氧化還原酶； ii) 與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾；以及 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾。

本發明進一步提供一種轉錄單元或表現載體，包含一核酸序列，該核酸序列編碼一蛋白質以及與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽為腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽，且其中該蛋白質不為一氧化還原酶。本發明進一步提供一種轉錄單元或表現載體，包含一核酸序列，該核酸序列編碼一蛋白質以及與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽為腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽，其中該蛋白質係選自由下列所組成之群組：羧肽酶；細胞激素；胞外配體與轉運蛋白；胞外基質蛋白；葡萄糖苷酶；醣基轉移酶；生長因子；生長因子結合蛋白；肝素結合蛋白；激素；水解酶；免疫球蛋白；異構酶；激酶；裂解酶；金屬酶抑制劑；金屬蛋白酶；乳蛋白；神經活性蛋白；蛋白酶；蛋白酶抑制劑；蛋白質去磷酸酶；酯酶；轉移酶；以及血管活性蛋白。本發明進一步提供一種包含上述mRNA及/或轉錄單元或表現載體的治療組合物。本發明進一步提供一種套組，包含上述mRNA、轉錄單元或表現載體及/或治療組合物，以及說明書，任選包含一載體圖，任選包含一宿主細胞，任選包含用於培養一宿主細胞的一培養基，及/或任選包含用於選擇並培養一轉染的宿主細胞的一選擇培養基。本發明進一步提供上述mRNA、轉錄單元或表現載體、治療組合物或套組用於作為一藥物之用途。本發明進一步提供一種包含一核酸序列的mRNA用於作為一藥物之用途，該核酸序列編碼 i) IGF1；ii) 腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽。本發明進一步提供一mRNA或包含mRNA的一治療組合物在一治療骨骼肌損傷的方法中之用途。

本案發明人意外地發現一種訊息核糖核酸(mRNA)，其包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-9個胺基酸具有大於2的平均疏水性分數，其中該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組： i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，條件為該蛋白質不為一氧化還原酶； ii) 與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾；以及 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，相較於轉染編碼該蛋白質與其自然、同源的訊息胜肽的一mRNA的細胞所分泌的該蛋白質，轉染本發明之mRNA的細胞提供更有效的該蛋白質的分泌。特別是，本案發明人驚奇地發現，一種包含一核酸序列的mRNA，該核酸序列編碼 i) 一蛋白質；ii) 與該蛋白質異源的一腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽，相較於轉染該蛋白質的自然、同源的訊息胜肽，轉染此mRNA的細胞提供更有效的該蛋白質的分泌。當相較於包含相同蛋白質與該蛋白質的自然、同源的訊息胜肽的mRNA時，蛋白質分泌量最多高六倍。這個出乎意料的發現對於在一細胞中有效地傳遞及表現編碼一所需蛋白質的mRNA，以及獲得相較於該蛋白質的天然、同源的訊息胜肽更高的蛋白質分泌量而言非常有用。以本發明所提供的相同量的mRNA獲得的更高量的分泌蛋白對於降低需要局部施用於一組織中的治療劑量是極為有用的，進而增加其對抗潛在的mRNA相關副作用的安全期。此外，這使得該應用更適合用於控制釋放及以裝置包埋的製劑。此外，這降低了與mRNA相關的免疫原性的風險，並使該應用更適合可注射有限體積的組織或以前無法接近的組織。本案發明人還發現，可以有效地向骨骼肌遞送並表現mRNA，特別是編碼人類IGF-1的mRNA，進而允許所需多胜肽在骨骼肌中的表現，以提供該肌肉相關的功能益處。該mRNA較佳以一液體組合物存在，較佳以裸露形式存在。該液體組合物可以直接遞送至骨骼肌，例如，透過注射，而不需針對該mRNA的任何基因轉移載體或載劑，或用於增強向組織轉移的方法，如電穿孔或超音波。而且，向受傷的骨骼肌中注射mRNA顯示出加速恢復過程並導致骨骼肌功能的增強。出乎意料的是，以編碼IGF-1的mRNA治療的動物在16天之內就達到了健康範圍的功能程度。相較之下，以載體治療的對照組動物到了第28天甚至都無法完全恢復功能。

如本文所用，術語“RNA”包括編碼一胺基酸序列的RNA以及不編碼一胺基酸序列的RNA。通常，本文所用之RNA為一編碼RNA，亦即編碼一胺基酸序列的一RNA。這樣的RNA分子亦稱為mRNA (訊息RNA，messenger RNA)，且為單鏈RNA分子。因此，本文所用之術語“RNA”較佳係指mRNA。RNA可透過本領域普通技術人員已知的合成化學以及酵素學方法來製備，或透過使用重組技術來製備，或可從天然來源中分離出來，或透過其組合來製備。RNA可任選地包含非天然與自然存在的核苷修飾，例如，N¹ -甲基假尿苷在本文中亦稱為甲基假尿苷。

如本文所用，術語“mRNA”(亦即，訊息RNA)係指主要由腺苷、胞苷、尿苷，以及鳥苷作為核苷，由核苷磷酸鹽結構單元構成的聚合物，且其包含編碼一蛋白質的一編碼區。於本發明之上下文中，應將mRNA理解為意指任何多核糖核苷酸分子，如果其進入細胞，則該多核糖核酸分子適於表現一蛋白質或其片段或可轉譯為一蛋白質或其片段。應當理解的是，包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列的本發明之mRNA，係指一多核糖核酸分子，若其進入細胞，則其適於誘導該蛋白質或其片段的表現及分泌。本發明之mRNA為一人工核酸分子，亦即一人工mRNA。人工核酸分子例如人工mRNA通常可理解為非自然存在的核酸分子，如重組mRNA。重組mRNA為本發明較佳的mRNA。mRNA包含編碼一蛋白質或其片段的一核糖核苷酸序列，該蛋白質或其片段在細胞中或在細胞附近通常是必需的或有益的，特別是在骨骼肌損傷的癒合中。mRNA可包含完整蛋白質或其一功能變體的序列。因此，該完整蛋白質的mRNA的核酸序列通常包含編碼該訊息胜肽的一核酸序列以及編碼該蛋白質的一核酸序列。本發明之mRNA包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列。編碼一蛋白質的該核酸序列可任選地包含一蛋白質的原結構域，其通常位於該蛋白質的N端。該蛋白質與該訊息胜肽通常由本發明之mRNA的核酸序列以從5'到3'的以下順序編碼：i) 該訊息胜肽以及 ii) 該蛋白質，亦即該訊息胜肽的編碼區的最後一個核苷接著該蛋白質的編碼區的第一個核苷，或者在一蛋白質包含一原結構域的情況下，接著該蛋白質的該原蛋白質形式的編碼區的第一核苷。核糖核苷酸序列可編碼一作為一因子、誘導物、調節劑、刺激物或酶的蛋白質，或其一功能片段，其中該蛋白質通常為其功能對於糾正一疾病，特別是骨骼肌損傷，所必需的蛋白質。於此，功能變體應被理解為意指在細胞中可承擔在該細胞中需要其功能的蛋白質的功能的一片段。此外，mRNA還可具有其他功能區及/或3'或5'非編碼區。該3'及/或5'非編碼區可為天然地位於該蛋白質編碼序列或人工序列側翼的區域，其對該RNA的穩定化有貢獻，例如，在5'端的帽蓋(cap)及/或在3'端的polyA尾巴。本領域技術人員可透過常規實驗確定在每種情況下適合於此的序列。可以對mRNA或用於轉錄mRNA的DNA進行密碼子優化。較佳地，本發明中用於轉錄本發明之mRNA的DNA以及本發明之mRNA為密碼子優化的。通常，密碼子優化係指透過將天然序列的至少一個密碼子(例如，超過1、2、3、4、5、10、15、20、25、50或更多個密碼子)取代為在該宿主細胞的基因中更頻繁或最常用的密碼子，同時保持天然胺基酸序列，而修飾一核酸序列以在一目標宿主細胞中表現的過程。密碼子使用表很容易獲得，例如，在“密碼子使用資料庫”中，而且這些表可以多種方式進行修改。用於密碼子優化一特定序列以在一特定宿主細胞中表現的電腦演算法亦可被使用，例如Gene Forge^® (Aptagen公司，賓州)以及GeneOptimizer^® (ThermoFischer公司，麻州)為較佳的選擇。

如本文所用，術語“裸RNA (naked RNA)”係指不與任何種類的其他化合物，特別是蛋白質、胜肽、聚合物，如陽離子聚合物、脂質、微脂體、病毒載體等，複合的RNA。因此，“裸RNA”係指存在於例如在一液體組合物中以游離及未絡合形式在溶液中以分子形式分散的RNA。例如，不設想“裸RNA”與脂質及/或聚合物載體系統(例如，脂質奈米顆粒及膠束)/轉染試劑，例如DreamFect™ Gold或(分支的)聚醚醯亞胺(polyetherimide, PEI)複合。因此，包含該mRNA的組合物，例如本發明之治療組合物，例如不包含脂質及/或聚合物載體系統轉染試劑，例如DreamFect™ Gold或(分支的) PEI。

術語“核酸序列”、“核苷酸(nucleotide)序列”以及“核苷酸(nucleotide acid)序列”在本文中可互換使用，且在本文中具有相同的含義，並且較佳地係指DNA或RNA。術語“核酸序列”、“核苷酸序列”以及“核苷酸序列”較佳與術語“多核苷酸序列”同義使用。較佳地，一核酸序列係包含核苷酸單體或由核苷酸單體組成的一聚合物，該核苷酸單體透過一糖/磷酸鹽-骨架的磷酸二酯鍵彼此共價連接。術語“核酸序列”還涵蓋修飾的核酸序列，例如鹼基修飾、糖修飾或骨架修飾等的DNA或RNA。

如本文所用，術語“開放閱讀框(open reading frame, ORF)”係指幾個核苷酸三聯體的序列，其可轉譯為一胜肽或蛋白質。一開放閱讀框(ORF)較佳在其5'端包含一起始密碼子，亦即通常編碼胺基酸甲硫胺酸的三個後續核苷酸的組合(ATG)，以及一隨後的區域，其通常顯示的長度為3個核苷酸的倍數。一ORF較佳由一終止密碼子(例如，TAA、TAG、TGA)終止。通常，這是開放閱讀框的唯一終止密碼。因此，於本發明之上下文中，開放閱讀框較佳為一核酸序列，其由可以被三除盡的多個核苷酸所組成，其以一起始密碼子(例如ATG)開始並且較佳以一終止密碼子(例如，TAA、TGA，或TAG) 終止。開放閱讀框可為單離的，或者可被併入一更長的核酸序列中，例如併入一載體或一mRNA中。一開放閱讀框亦可稱為“(蛋白質)編碼區”，或較佳地，稱為“編碼序列”。

術語“訊息胜肽(signal peptide)”在本文中亦稱為訊號胜肽(signalling peptide)、前結構域、訊息序列、靶向訊息、定位訊息、定位序列、轉運胜肽、前導序列或前導胜肽，為一種短胜肽(通常長度為16-40個胺基酸)存在於注定要朝向分泌途徑的新合成蛋白質的N端。本發明之訊息胜肽長度較佳為10-50個，更佳為11-45個，甚至更佳為12-45個，最佳為13-45個，特別是14-45個，更特別是15-45個，甚至更特別是16-40個胺基酸。根據本發明之訊息胜肽位於目標蛋白質的N端或目標蛋白質的原蛋白質形式的N端。使用根據本發明之訊息胜肽，目標蛋白質可被分泌的量至少等於，較佳高於使用其天然(同源)訊息胜肽所分泌的該蛋白質的量。根據本發明之訊息胜肽通常為真核來源的，例如真核蛋白質的訊息胜肽，較佳為哺乳動物來源的，例如，哺乳動物蛋白質的訊息胜肽，更佳為人類來源的，例如，人類蛋白質的訊息胜肽。於一些具體實施例中，待修飾的異源訊息胜肽及/或同源訊息胜肽為真核蛋白質的自然存在的訊息胜肽，較佳為哺乳動物蛋白的自然存在的訊息胜肽，更佳為人類蛋白質的自然存在的訊息胜肽。

如本文所用，術語“蛋白質”係指通常包含一種或多種胜肽或多胜肽的分子。一胜肽或多胜肽通常是透過胜肽鍵連接的一胺基酸殘基鏈。一胜肽通常包含2至50個胺基酸殘基。一多胜肽通常包含超過50個胺基酸殘基。通常將一蛋白質折疊成3維形式，這可能是蛋白質發揮其生物學功能所必需的。如本文所用，術語“蛋白質”包括一蛋白質的一片段以及融合蛋白。較佳地，該蛋白質為哺乳動物的，更佳為人類來源的，亦即為人類蛋白質。較佳地，該蛋白質為通常從細胞分泌的一蛋白質，亦即在自然界中從一細胞分泌的一蛋白質。本文所指之蛋白質通常選自由下列所組成之群組：羧肽酶；細胞激素；胞外配體與轉運蛋白；胞外基質蛋白；葡萄糖苷酶；醣基轉移酶；生長因子；生長因子結合蛋白；肝素結合蛋白；激素；水解酶；免疫球蛋白；異構酶；激酶；裂解酶；金屬酶抑制劑；金屬蛋白酶；乳蛋白；神經活性蛋白；蛋白酶；蛋白酶抑制劑；蛋白質去磷酸酶；酯酶；轉移酶；以及血管活性蛋白。

羧肽酶是作為蛋白酶的一群蛋白質，其水解(切割)一蛋白質的羧基端(C端)末端的一胜肽鍵；細胞激素是一群分泌的蛋白質，可透過其表面的受體局部或全身地作為標靶細胞訊息傳遞的調節劑，其通常參與免疫反應；胞外配體與轉運蛋白為一群分泌的蛋白質，透過與其他蛋白質結合或攜帶其他蛋白質或其他分子以發揮一定的生物學功能進行作用；胞外基質蛋白為支持細胞分泌的蛋白質的集合，這些支持細胞提供結構與生化支持給周圍的細胞；葡糖苷酶為一群酵素，其涉及將複合的碳水化合物如澱粉及肝醣分解為單體；醣基轉移酶為建立天然糖苷鍵的一群酵素；生長因子為一群分泌的蛋白質，能夠刺激細胞的生長、增殖、癒合，以及細胞分化，透過其表面的受體局部或全身地作為標靶細胞訊息傳遞的調節劑，通常參與營養反應及存活或細胞穩態的訊息傳遞；生長因子結合蛋白為一群分泌蛋白，其與生長因子結合進而調節其生物學活性；肝素結合蛋白為一群分泌蛋白，其與肝素相互作用以調節其生物學功能，通常與另一種與一生長因子或激素的結合結合在一起；激素為一類訊息分子的成員，其由多細胞生物體的腺體所產生，且由循環系統分泌並轉運至靶標遠處的器官，透過與其標靶細胞上的特定受體結合來調節生理及行為；水解酶為一類酵素，透過利用水破壞化學鍵以進行生化催化分子裂解，進而將大分子分解為小分子；免疫球蛋白為一群大的Y形分泌蛋白，其主要由漿細胞所產生，並且被免疫系統用來中和病原體，例如病原細菌及病毒；異構酶是一類酵素，其將一分子從一種異構體轉化為另一種異構體，進而促進分子內重新排列，其中鍵斷裂並再形成；激酶為一類酵素，其催化磷酸基團從高能、供磷酸鹽的分子轉移到特定基質；裂解酶為一群酵素，其透過水解與氧化以外的方式催化各種化學鍵斷裂，通常形成一新的雙鍵或一新的環結構；金屬酶抑制劑為基質金屬蛋白酶(Matrix metalloproteases, MMPs)的細胞抑制劑；金屬蛋白酶為一群蛋白酶，其催化機制涉及一金屬離子；乳蛋白為分泌到牛奶中的一群蛋白質；神經活性蛋白為一群分泌的蛋白，可局部發揮作用或透過一定距離作用，以支持神經元功能、存活及生理功能；蛋白酶(亦稱為胜肽酶或蛋白酶)為透過水解胜肽鍵進行蛋白水解的一群酵素；蛋白酶抑制劑為抑制蛋白酶功能的一群蛋白質；蛋白質磷酸酶為一群酵素，從其基質蛋白的磷酸化胺基酸殘基中除去磷酸基團；酯酶為一群酵素，其與一胺基酸殘基的水發生化學反應時將酯分解為酸及醇；轉移酶為一類酵素，其催化特定功能基團(例如，甲基或糖基)從一分子(稱為供體)到另一分子(稱為受體)的轉移；血管活性蛋白為在生物學上影響血管功能的一群分泌蛋白。本文所指之羧肽酶；細胞激素；胞外配體與轉運蛋白；胞外基質蛋白；葡萄糖苷酶；醣基轉移酶；生長因子；生長因子結合蛋白；肝素結合蛋白；激素；水解酶；免疫球蛋白；異構酶；激酶；裂解酶；金屬酶抑制劑；金屬蛋白酶；乳蛋白；神經活性蛋白；蛋白酶；蛋白酶抑制劑；蛋白質去磷酸酶；酯酶；轉移酶；以及血管活性蛋白皆可在UniProt資料庫中找到。

本文具有相同含義的術語“片段”或“一序列的片段”為一全長序列，例如一核酸分子如DNA或RNA或一蛋白質，的一較短部分。因此，一片段通常包含或由與該全長序列內的相應片段相同的序列組成。於本發明之上下文中，較佳的一序列片段包含或由一連續的實體片段組成，例如對應於該片段所衍生的分子中實體連續延伸的核苷酸或胺基酸，其代表至少5%，通常至少20%，較佳至少30%，更佳至少40%，更佳至少50%，甚至更佳至少60%，甚至更佳至少70%，以及最佳至少80%的總分子(亦即全長)，從該總分子中得出該片段。

如本文所用，術語“與該蛋白質異源的訊息胜肽”係指自然存在的一訊息胜肽，其不同於該蛋白質的自然存在的一訊息胜肽，亦即，該訊息胜肽不是源自該蛋白質的相同基因。通常，與一給定的蛋白質異源的一訊息胜肽為來自另一蛋白質的一訊息胜肽，其與該給定的蛋白質無關，亦即其胺基酸序列不同於該給定的蛋白質的訊息胜肽，例如其胺基酸序列與該給定的蛋白質的訊息胜肽的差異大於50%，較佳大於60%，更佳大於70%，甚至更佳大於80%，最佳大於超過90%，尤其是超過95%。較佳地，與一給定的蛋白質異源的一訊息胜肽具有一序列，其與該給定的蛋白質的自然存在的(同源)訊息胜肽的胺基酸序列具有小於95%，較佳小於90%，更佳小於80%，甚至更佳小於70%，最佳小於60%，特別是小於50%的序列同一性。儘管異源序列可衍生自同一生物，但它們自然地(在自然界中)不存在於相同的核酸分子中，例如在相同的mRNA中。與一蛋白質異源的訊息胜肽以及與該訊息胜肽異源的蛋白質可具有相同或不同的來源，且通常具有相同的來源，較佳為真核生物的來源，更佳為同一真核生物的真核生物的來源，甚至更佳為哺乳動物來源，特別是同一哺乳動物生物的哺乳動物來源，更特別是人類來源。於實施例1中，公開了一種mRNA，該mRNA包含編碼人類BDNF訊息胜肽與人類IGF1的一核酸序列，亦即與一蛋白質異源的一訊息胜肽，其中該訊息胜肽與該蛋白質具有相同的來源，即人類來源。

如本文所用，術語“與該蛋白質同源的訊息胜肽”係指一蛋白質的自然存在的訊息胜肽。與一蛋白質同源的一訊息胜肽為在自然界中由該蛋白質的基因編碼的訊息胜肽。與一蛋白質同源的一訊息胜肽通常是真核來源的，例如一真核蛋白的自然存在的訊息胜肽，較佳為哺乳動物來源的，例如一哺乳動物蛋白的自然存在的訊息胜肽，更佳為人類來源的，例如一人類蛋白的天然訊息胜肽。

本文所用之術語“不具有自然界中一訊息胜肽的功能的自然存在的胺基酸序列”係指自然存在的一胺基酸序列，該胺基酸序列與自然界中存在的任何訊息胜肽的胺基酸序列不同。如本發明所述，該不具有自然界中一訊息胜肽的功能的自然存在的胺基酸序列，較佳介於10-50個，更佳介於11-45個，甚至更佳介於12-45個，最佳介於13-45個，特別是介於14-45個，更特別是介於15-45個，甚至更特別是介於16-40個胺基酸的長度。較佳地，本發明之該不具有自然界中一訊息胜肽的功能的自然存在的胺基酸序列為真核來源且與真核來源的任何訊息胜肽都不相同，更佳為哺乳動物來源且與任何哺乳動物來源的訊息胜肽都不相同，更佳為人類來源且與自然界中存在的任何人類來源的訊息胜肽都不相同。一不具有自然界中一訊息胜肽的功能的自然存在的胺基酸序列通常為一蛋白質編碼序列的一胺基酸序列。根據本發明，一不具有自然界中一訊息胜肽的功能的自然存在的胺基酸序列通常為真核來源的，較佳為哺乳動物來源的，更佳為人類來源的。

如本文所用，術語“自然存在的”、“自然的”以及“自然界中”具有等同的含義。

如本文所用，術語“該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-9個胺基酸”係指一訊息胜肽的胺基酸序列N端的前九個胺基酸。類似地，如本文所用，術語“該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-7個胺基酸”係指一訊息胜肽的胺基酸序列N端的前七個胺基酸；術語“該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-5個胺基酸”係指一訊息胜肽的胺基酸序列N端的前五個胺基酸。

如本文所用，術語“透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾的胺基酸序列”係指一胺基酸序列，其包括在該胺基酸序列之內的至少一個胺基酸的一胺基酸取代、插入及/或缺失。如本文所用，術語“與該蛋白質異源的訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾”係指與一蛋白質異源的一自然存在的訊息胜肽的一胺基酸序列，其包括在其自然存在的胺基酸序列之內的至少一個胺基酸的一胺基酸取代、插入及/或缺失。如本文所用，術語“與該蛋白質同源的訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾”係指與一蛋白質同源的一自然存在的訊息胜肽，其包括在其自然存在的胺基酸序列之內的至少一個胺基酸的一胺基酸取代、插入及/或缺失。術語“該自然存在的胺基酸序列透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾”係指一自然存在的胺基酸序列，其包括在其自然存在的胺基酸序列之內的至少一個胺基酸的一胺基酸取代、插入及/或缺失。本文中的“胺基酸取代”或“取代”係指以另一種胺基酸取代一親本蛋白質序列中特定位置的胺基酸。例如，取代R34K係指其中在第34個位置上的精胺酸以一離胺酸取代。針對前面的示例，34K表示第34個位置被離胺酸取代。為了本文的目的，通常用斜線分隔多個取代。例如，R34K/L78V係指包含取代R34K與L38V的雙重變體。如本文所用，“胺基酸插入”或“插入”係指在一親本蛋白質序列的一特定位置添加一胺基酸。例如，插入-34表示在第34個位置處的插入。如本文所用，“胺基酸缺失”或“缺失”係指在一親本蛋白質序列中一特定位置的一胺基酸的去除。例如，R34-表示在第34個位置上精胺酸的缺失。

較佳地，缺失的胺基酸為疏水性分數低於-0.8，較佳低於1.9的胺基酸。較佳地，取代的胺基酸為疏水分數高於被取代的胺基酸的疏水分數的胺基酸，更佳地，取代的胺基酸為疏水分數為2.8或更高的胺基酸，更佳地具有3.8以上的疏水分數。較佳地，插入的胺基酸為疏水分數為2.8以上的胺基酸，更佳為疏水分數為3.8以上的胺基酸。

通常在一給定的胺基酸序列的1至15個胺基酸之間，較佳在1至11個胺基酸之間，更佳在1至10個胺基酸之間，甚至更佳在1至9個胺基酸之間，特別是在1至8個胺基酸之間，更特別是在1至7個胺基酸之間，甚至更具體地在1至6個胺基酸之間，特別較佳地在1至5個胺基酸之間，更特別較佳地在1至4個胺基酸之間，甚至更特別較佳地在1至2個胺基酸之間插入、缺失及/或取代。通常在一給定的胺基酸序列的1至15個胺基酸之間，較佳在1至11個胺基酸之間，更佳在1至10個胺基酸之間，甚至更佳在1至9個胺基酸之間，特別是在1至8個胺基酸之間，更特別是在1至7個胺基酸之間，甚至更具體地在1至6個胺基酸之間，特別較佳地在1至5個胺基酸之間，更特別較佳地在1至4個胺基酸之間，甚至更特別較佳地在1至2個胺基酸之間插入、缺失及/或取代，通常在該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-11個胺基酸內，較佳在第1-10個胺基酸內，更佳在第1-9個胺基酸內，甚至更佳在第1-8個胺基酸內，特別是在第1-7個胺基酸內，更特別是在第1-6個胺基酸內，甚至更特別是在第1-5個胺基酸內，特別較佳在第1-4個胺基酸內，更特別較佳在第1-3個胺基酸內，甚至更特別較佳在第1-2個胺基酸內。

較佳地，該胺基酸序列任選地透過缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾。

較佳地，相較於未修飾的該訊息胜肽，該修飾的訊息胜肽的胺基酸序列N端的前九個胺基酸的平均疏水性分數增加1.0單位或更高。

如本文所用，術語“類胰島素生長因子1”、“類胰島素生長因子1 (insulin-like growth factor 1, IGF1)”或“ IGF1”通常係指不含訊息胜肽的IGF1蛋白的天然序列，並且可包含原胜肽及/或E-胜肽，較佳係指不含該訊息胜肽且不含該E-胜肽的IGF1蛋白的天然序列。如本文所用，術語“人類類胰島素生長因子1 (IGF1)”係指人類IGF1的天然序列(pro-IGF1，在Uniprot資料庫中的編號為UniProtKB-P05019，且在Genbank資料庫中的編號為NM_000618.4 ，NM_001111285.2以及NM_001111283.2，或其一片段)。編碼人類類胰島素生長因子1的天然DNA序列可被密碼子優化。人類IGF1的天然序列包含具有21個胺基酸的人類訊息胜肽(第1-63個核苷酸)，具有27個胺基酸的人類原胜肽(亦稱為原結構域)(第64-144個核苷酸)，具有70個胺基酸的成熟的人類IGF1 (第145-354個核苷酸)，以及人類IGF1的C端結構域，即所謂的E-胜肽(或E-結構域)。人類IGF1的C端結構域(所謂的E-胜肽或E-結構域)包含Ea-、Eb-或Ec-結構域，其係透過取代剪接事件所產生的。該Ea結構域包含或由35個胺基酸(105個核苷酸)組成，該Eb結構域包含或由77個胺基酸(231個核苷酸)組成，該Ec結構域包含或由40個胺基酸(120個核苷酸)組成(請參見例如，Wallis M (2009年)來自哺乳動物基因組的新穎類胰島素生長因子(IGF)前體序列：靈長類動物中IGFs與相關胜肽的分子進化。Growth Horm IGF Res 19(1):12-23. doi: 10.1016/j.ghir.2008.05.001)。如本文所用，術語“人類類胰島素生長因子1 (IGF)”通常係指不含訊息胜肽的人類IGF1蛋白的天然序列，並且可包含原胜肽及/或E-胜肽，且較佳地係指不含訊息胜肽且不含E胜肽的人類IGF1蛋白的自然序列。如本文所用，術語“人類類胰島素生長因子1 (IGF)”通常包含成熟的人類IGF1。術語“成熟蛋白質”係指在一表現並分泌該蛋白質的細胞中的內質網中合成並透過高基氏體分泌的蛋白質。術語“成熟的IGF1”係指在一表現並分泌IGF1的細胞中的內質網中合成並透過高基氏體分泌的蛋白質。術語“成熟的人類IGFI”係指在一表現並分泌人類IGF1的細胞中的內質網中合成並透過高基氏體分泌的蛋白質，且通常包含由如SEQ ID NO: 39所示之核苷酸序列編碼的胺基酸。

如本文所用，術語“胰島素(insulin, INS)”或“INS”通常係指不含訊息胜肽的胰島素的天然序列。如本文所用，術語“人類胰島素”或“人類INS”係指人類胰島素的天然序列，其在Uniprot資料庫中的編號為UniProtKB-P01308，在Genbank資料庫中的編號為NM_000207.2，NM_001185097.1，NM_001185098.1，以及NM_001291897.1，或其一片段。編碼人類胰島素的天然DNA序列可被密碼子優化。人類胰島素的天然序列包含或由具有24個胺基酸的人類訊息胜肽(第1-72個核苷酸)、具有30個胺基酸的人類胰島素B鏈(第73-163個核苷酸)、具有31個胺基酸的人類胰島素原胜肽(亦稱為連接胜肽；C-胜肽)組成；具有31個胺基酸的C胜肽)(第64-144個核苷酸)，以及人類胰島素A鏈的C端結構域包含21個胺基酸或由21個胺基酸組成(第64-144個核苷酸)。如本文所用，術語“人類胰島素”通常包括該不含該訊息胜肽的人類胰島素。

如本文所用，術語“紅血球生成素(Erythropoietin, EPO)”、“ EPO”或“ Epo”通常係指不含訊息胜肽的EPO的天然序列。本文使用之術語“人類紅血球生成素”、“人類EPO”或“人類Epo”係指人類紅血球生成素的天然序列，其在Uniprot資料庫中的編號為UniProtKB-P01588，在Genbank資料庫中的編號為NM_000799.2，或其一片段。編碼人類紅血球生成素的天然DNA序列可被密碼子優化。人類紅血球生成素的天然序列包含或由具有27個胺基酸的人類訊息胜肽(第1-81個核苷酸)組成，具有166個胺基酸的人類Epo編碼鏈(第82-579個核苷酸)。如本文所用，術語“人類紅血球生成素”通常包括該不含訊息胜肽的人類EPO。

如本文所用，術語“介白素-4 (Interleukin-4, IL4)”或“ IL4”通常係指不含訊息胜肽的IL4的天然序列。如本文所用，術語“人類介白素-4”或“人類IL4”係指人類IL4的天然序列，其在Uniprot資料庫中的編號為UniProtKB-P05112，在Genbank資料庫中的編號為NM_000589.3，以及NM_172348.2，或其一片段。編碼人類IL4的天然DNA序列可被密碼子優化。人類IL4的天然序列包含或由具有24個胺基酸的人類訊息轉導胜肽組成(第1-72個核苷酸)，具有129個胺基酸的人類IL4編碼鏈(第73-387個核苷酸)。如本文所用，術語“人類IL4”通常包括該不含訊息胜肽的人類IL4。

如本文通常所用的，術語“介白素-10”或“ IL10”係指不含訊息胜肽的IL10的天然序列。如本文所用，術語“人類介白素-10”或“人類IL10”係指人類IL10的天然序列，其在Uniprot資料庫中的編號為UniProtKB – P22301，在Genbank資料庫中的編號為NM_000572.2，或其一片段。編碼人類IL10的天然DNA序列可被密碼子優化。人類IL10的天然序列包含或由具有18個胺基酸的人類訊息胜肽(第1-54個核苷酸)組成，具有160個胺基酸的人類IL10編碼鏈(核苷酸55-534)。如本文所用，術語“人類IL10”通常包括該不含訊息胜肽的人類IL10。

如本文所用，術語“類胰島素生長因子1 (IGF1)的訊息胜肽”或“ IGF1的訊息胜肽”係指IGF1的天然訊息胜肽，其在Uniprot資料庫中的編號為P05019，在Genbank資料庫中的編號為NM_000618.4，NM_001111284.1，以及NM_001111285.2，且較佳具有如SEQ ID NO: 24所示之胺基酸序列及/或較佳由如SEQ ID NO: 25所示之DNA序列編碼。

如本文所用，術語“類胰島素生長因子2 (IGF2)的訊息胜肽”或“IGF2的訊息胜肽”係指IGF2的天然訊息胜肽，其在Uniprot資料庫中的編號為P01344，在Genbank資料庫中的編號為NM_000612.5，NM_001007139.5，NM_001127598.2，NM_001291861.2，以及NM_001291862.2，且較佳具有如SEQ ID NO: 26所示之胺基酸序列及/或較佳由如SEQ ID NO: 27所示之DNA序列編碼。

如本文所用，術語“血清白蛋白(ALB)的訊息胜肽”或“ALB (albumin)的訊息胜肽”係指ALB的天然訊息胜肽，其在Uniprot資料庫中的編號為P02768，在Genbank資料庫中的編號為NM_000477.6 且較佳具有如SEQ ID NO: 28所示之胺基酸序列及/或較佳由如SEQ ID NO: 29所示之DNA序列編碼。

如本文所用，術語“腦源性神經營養因子(BDNF)”或“BDNF訊息胜肽”係指BDNF的天然訊息胜肽，其在Uniprot資料庫中的編號為P23560，在Genbank資料庫中的編號為NM_001143805.1， NM_170731.4，NM_170734.3，NM_001143810.1，以及NM_001143809.1，且較佳具有如SEQ ID NO: 30所示之胺基酸序列及/或較佳由如SEQ ID NO: 31所示之DNA序列編碼。

如本文所用，術語“基質細胞衍生因子-1 (CXCL12)的訊息胜肽”或“ CXCL12的訊息胜肽”係指CXCL12的天然訊息胜肽，其在Uniprot資料庫中被稱為P48061，在Genbank資料庫中被稱為 NM_000609.6，NM_001033886.2，NM_001178134.1，NM_001277990.1，以及NM_199168.3，且較佳具有如SEQ ID NO: 32所示之胺基酸序列及/或較佳由如SEQ ID NO: 33所示之DNA序列編碼。

如本文所用，術語“合成的訊息胜肽1的訊息胜肽(合成的seq1)”或“合成的seq1的訊息胜肽”係指合成的訊息胜肽1，且具有如SEQ ID NO: 34所示之胺基酸序列及/或由如SEQ ID NO: 35所示之DNA序列編碼。

如本文所用，術語“合成的訊息胜肽2 (合成的seq2)的訊息胜肽”或“合成的seq2的訊息胜肽”係指合成的訊息胜肽2，且具有如SEQ ID NO: 36所示之胺基酸序列及/或由如SEQ ID NO: 37所示之DNA序列編碼。

如本文所用，術語“潛在轉化生長因子β結合蛋白2 (Latent-transforming growth factor beta-binding protein 2, LTBP2)的訊息胜肽”或“ LTBP2的訊息胜肽”係指LTBP2的天然訊息胜肽，其在Uniprot資料庫中的編號為Q14767，在Genbank資料庫中的序列號為NM_000428.2，且較佳具有如SEQ ID NO: 41所示之胺基酸序列及/或較佳由如SEQ ID NO: 42所示之DNA序列編碼。

如本文所用，術語“類胰島素生長因子結合蛋白複合物酸不穩定次單元(Insulin-like growth factor-binding protein complex acid labile subunit, IGFALS)的訊息胜肽”或“ IGFALS的訊息胜肽”係指IGFALS的天然訊息胜肽，其在Uniprot資料庫中的編號為 P35858，在Genbank資料庫中為NM_001146006.1以及NM_004970.2，且較佳具有如SEQ ID NO: 46所示之胺基酸序列及/或較佳由如SEQ ID NO: 47所示之DNA序列編碼。

如本文所用，術語“胰島素(INS)的訊息胜肽”或“ INS的訊息胜肽”係指INS的天然訊息胜肽，其在Uniprot資料庫中的編號為P1308，在Genbank資料庫中的編號為NM_001185097.1， NM_000207.2，NM_001185098.1，以及NM_001291897.1，且較佳具有如SEQ ID NO: 51所示之胺基酸序列及/或較佳由如SEQ ID NO: 52所示之DNA序列編碼。

如本文所用，術語“紅血球生成素(Epo)的訊息胜肽”或“Epo的訊息胜肽”係指Epo的天然訊息胜肽，其在Uniprot資料庫中的編號為P01588，在Genbank資料庫中的編號為NM_000799.2，且較佳具有如SEQ ID NO: 56所示之胺基酸序列及/或較佳由如SEQ ID NO: 57所示之DNA序列編碼。

如本文所用，術語“顆粒性白血球聚落刺激因子(Granulocyte colony-stimulating factor, CSF3)的訊息胜肽”或“CSF3的訊息胜肽”係指CSF3的天然訊息胜肽，其在Uniprot資料庫中的編號為P09919，在Genbank資料庫中的編號為 NM_000759.3，NM_001178147.1，NM_172219.2，以及NM_172220.2，且較佳具有如SEQ ID NO: 61所示之胺基酸序列及/或較佳由如SEQ ID NO: 62所示之DNA序列編碼。

如本文所用，術語“β神經生長因子(Beta-nerve growth factor, NGF)的訊息胜肽”或“NGF的訊息胜肽”係指NGF的天然訊息胜肽，其在Uniprot資料庫中被稱為P01138，在Genbank資料庫中的編號為NM_002506.2以及XM_006710663.3，且較佳具有如SEQ ID NO: 66所示之胺基酸序列及/或較佳由如SEQ ID NO: 67所示之DNA序列編碼。

如本文所用，術語“介白素4 (IL4)的訊息胜肽”或“ IL4的訊息胜肽”係指IL4的天然訊息胜肽，其在Uniprot資料庫中的編號為P05112，在Genbank資料庫稱為NM_000589.3以及NM_172348.2，且較佳具有如SEQ ID NO: 77所示之胺基酸序列及/或較佳由如SEQ ID NO: 78所示之DNA序列編碼。

如本文所用，術語“介白素10 (IL10)的訊息胜肽”或“IL10的訊息胜肽”係指IL10的天然訊息胜肽，其在Uniprot資料庫中的編號為P22301，在Genbank資料庫中的編號為NM_000572.2，且較佳具有如SEQ ID NO: 82所示之胺基酸序列及/或較佳由如SEQ ID NO: 83所示之DNA序列編碼。

如本文所用，術語“纖維母細胞生長因子5 (Fibroblast growth factor 5, FGF5)的訊息胜肽”或“ FGF5的訊息胜肽”係指FGF5的天然訊息胜肽，其在Uniprot資料庫中的編號為P12034，在Genbank資料庫中的編號為NM_004464.3以及NM_033143.2，且較佳具有如SEQ ID NO: 87所示之胺基酸序列及/或較佳由如SEQ ID NO: 88或SEQ ID NO: 183所示之DNA序列編碼。

如本文所用，術語“補體因子H相關蛋白2 (Complement factor H-related protein 2, FHR2)的訊息胜肽”或“FHR2的訊息胜肽”係指FHR2的天然訊息胜肽，其在Uniprot資料庫中的編號為P36980，在Genbank資料庫中的編號為NM_001312672.1以及NM_005666.3，且較佳具有如SEQ ID NO: 92所示之胺基酸序列及/或較佳由如SEQ ID NO: 93所示之DNA序列編碼。

如本文所用，術語“類胰島素生長因子結合蛋白5 (Insulin-like growth factor-binding protein 5, IBP5)的訊息胜肽”或“IBP5的訊息胜肽”係指IBP5的天然訊息胜肽，其在Uniprot資料庫中的編號為P24593，在Genbank資料庫稱為NM_001312672.1以及NM_000599.3，且較佳具有如SEQ ID NO: 97所示之胺基酸序列及/或較佳由如SEQ ID NO: 98所示之DNA序列編碼。

如本文所用，術語“神經滋養素-3 (Neurotrophin-3, NTF3)的訊息胜肽”或“NTF3的訊息胜肽”係指NTF3的天然訊息胜肽，其在Uniprot資料庫中的編號為P20783，在Genbank資料庫中的編號為NM_002527.4，XM_011520963.2，以及NM_001102654.1，且較佳具有如SEQ ID NO: 102所示之胺基酸序列及/或較佳由如SEQ ID NO: 103所示之DNA序列編碼。

如本文所用，術語“前列腺與睾丸表現的蛋白質2 (PATE2)的訊息胜肽”或“PATE2的訊息胜肽”係指PATE2的天然訊息胜肽，其在Uniprot資料庫中的編號為Q6UY27，在Genbank資料庫中的編號為NM_212555.2，且較佳具有如SEQ ID NO: 107所示之胺基酸序列及/或較佳由如SEQ ID NO: 108所示之DNA序列編碼。

如本文所用，術語“細胞外超氧化物歧化酶(Extracellular superoxide dismutase, SOD3)的訊息胜肽”或“SOD3的訊息胜肽”係指SOD3的天然訊息胜肽，其在Uniprot資料庫中的編號為P08294，在Genbank資料庫中的編號為NM_003102.2，且較佳具有如SEQ ID NO: 112所示之胺基酸序列及/或較佳由如SEQ ID NO: 113所示之DNA序列編碼。

如本文所用，術語“升糖素受體(Glucagon receptor, GL-R)的編碼序列”或“GL-R的編碼序列”係指GL-R的編碼鏈，其為在自然界中不具有一訊息胜肽功能的一自然存在的胺基酸序列，在Uniprot資料庫中的編號為P47871，在Genbank資料庫中的編號為NM_000160.4以及XM_006722277.1，且較佳具有如SEQ ID NO: 117所示之胺基酸序列及/或較佳由如SEQ ID NO: 118所示之DNA序列編碼。

如本文所用，術語“類胰島素生長因子1 (IGF1)修飾的訊息胜肽”，“IGF1的修飾訊息胜肽”或“IGF1修飾的訊息胜肽”係指IGF1的修飾訊息胜肽，其中IGF1的天然訊息胜肽在Uniprot資料庫中的編號為P05019，在Genbank資料庫中的編號為NM_000618.4，NM_001111284.1，以及NM_001111285.2，透過取代G2L/S5L/T9L/Q10L以及刪除K3-與C15-進行了修飾，且較佳具有如SEQ ID NO: 122所示之胺基酸序列及/或較佳由如SEQ ID NO: 123所示之DNA序列編碼。

如本文所用，術語“類胰島素生長因子2 (IGF2)修飾的訊息胜肽”，“IGF2的修飾訊息胜肽”或“IGF2修飾的訊息胜肽”係指IGF2的修飾訊息胜肽，其中IGF2的天然訊息胜肽在Uniprot資料庫中的編號為P01344，在Genbank資料庫中的編號為NM_000612.5，NM_001007139.5，NM_001127598.2，NM_001291861.2，以及NM_001291862.2，透過取代G2L/G6L/K7L/S8L並刪除P4-、M5-、I23-以及A24-進行修飾，較佳具有如SEQ ID NO: 127所示之胺基酸序列及/或較佳由如SEQ ID NO: 128所示之DNA序列編碼。

如本文所用，術語“基質細胞衍生因子-1 (CXCL12)修飾的訊息胜肽”，“CXCL12的修飾訊息胜肽”或“CXCL12-修飾的訊息胜肽”係指CXCL12的修飾訊息胜肽，其中天然訊息胜肽為CXCL12在Uniprot資料庫中的編號為P48061，在Genbank資料庫中的編號為NM_000609.6，NM_001033886.2，NM_001178134.1，NM_001277990.1，以及NM_199168.3，透過缺失N3-與K5-進行修飾，且較佳具有如SEQ ID NO: 132所示之胺基酸序列及/或較佳由如SEQ ID NO: 133所示之DNA序列編碼。

如本文所用，術語“介白素4 (IL-4)修飾的訊息胜肽”，“IL4的修飾訊息胜肽”或“IL4修飾的訊息胜肽”係指IL4的修飾訊息胜肽，其中IL4的天然訊息胜肽在Uniprot資料庫中的編號為P05112，在Genbank資料庫中的編號為NM_000589.3以及NM_172348.2，透過缺失G2-、T4-、S5-以及Q6-進行修飾，且較佳具有如SEQ ID NO: 166所示之胺基酸序列及/或較佳由如SEQ ID NO: 167所示之DNA序列編碼。

如本文所用，術語“介白素10 (IL-10)修飾的訊息胜肽”，“IL10的修飾訊息胜肽”或“IL10修飾的訊息胜肽”係指IL10的修飾訊息胜肽，其中IL10的天然訊息胜肽在Uniprot資料庫中的編號為P22301，在Genbank資料庫中的編號為NM_000572.2，透過取代H2V/S3L/S4L以及S8L進行修飾，且較佳具有如SEQ ID NO: 174所示之胺基酸序列及/或較佳由如SEQ ID NO: 175所示之DNA序列編碼。

如本文所用，術語“胰島素(INS)修飾的訊息胜肽”，“ INS的修飾訊息胜肽”或“ INS修飾的訊息胜肽”係指INS的修飾訊息胜肽，其中INS的天然訊息胜肽在Uniprot資料庫中的編號為P1308，在Genbank資料庫中的編號為NM_001185097.1，NM_000207.2，NM_001185098.1，以及NM_001291897.1，透過缺失M5-與R6-進行修飾，且較佳具有如SEQ ID NO: 147所示的胺基酸序列及/或較佳由如SEQ ID NO: 148或SEQ ID NO: 182所示之DNA序列編碼。

如本文所用，術語“腦源性神經營養因子(BDNF)修飾的訊息胜肽”，“ BDNF的修飾訊息胜肽”或“ BDNF修飾的訊息胜肽”係指BDNF的修飾訊息胜肽，其中BDNF的天然訊息胜肽在Uniprot資料庫中的編號為P23560，在Genbank資料庫中的編號為NM_001143805.1，NM_170731.4，NM_170734.3，NM_001143810.1，以及NM_001143809.1，透過取代T2L/T7L與S11L進行修飾，且較佳具有如SEQ ID NO: 137所示之胺基酸序列及/或較佳由如SEQ ID NO: 138所示之DNA序列編碼。

如本文所用，術語“紅血球生成素(Epo)修飾的訊息胜肽”，“Epo的修飾訊息胜肽”或“Epo修飾的訊息胜肽”係指Epo的修飾訊息胜肽，其中Epo的天然訊息胜肽在Uniprot資料庫中的編號為P01588，在Genbank資料庫中的編號為NM_000799.2，透過取代G2L/P7L/W9L以及缺失H4-、E5-與W11-進行修飾，且較佳具有如SEQ ID NO: 152所示之胺基酸序列及/或較佳由如SEQ ID NO: 153所示之DNA序列編碼。

如本文所用，術語“類胰島素生長因子1 (IGF1)原結構域修飾的”，“修飾的IGF1原結構域”或“ IGF1-原-修飾的”係指IGF1的原胜肽，其為在自然界中不具有一訊息胜肽功能的一自然存在的胺基酸序列，在Uniprot資料庫中的編號為P05019，在Genbank資料庫中的編號為NM_000618.4，NM_001111284.1，以及NM_001111285.2，透過刪除在前胜肽的N端側接的第22-31這十個胺基酸殘基(VKMHTMSSSH)進行修飾，且較佳具有如SEQ ID NO: 142所示之胺基酸序列及/或較佳由如SEQ ID NO: 143所示之DNA序列編碼。

如本文所用，術語“腸型鹼性磷酸酶(Intestinal-type alkaline phosphatase, ALPI)原結構域修飾的”，“修飾的ALPI原結構域“ ALPI-修飾的”或“ ALPI-原-修飾的”係指自然存在的ALPI的原胜肽，其為在自然界中不具有一訊息胜肽功能的一自然存在的胺基酸序列，在Uniprot資料庫中的編號為P09923，在Genbank資料庫中的編號為NM_001631.4，透過取代A504L/A505L/S511L/G517L/T518L以及刪除H506-，P507-，A509-，A510-與P513-進行修飾，且較佳具有如SEQ ID NO: 189所示之胺基酸序列及/或較佳由如SEQ ID NO: 190所示之DNA序列編碼。

如本文所用，術語“mRNA包含編碼IGF1的原胜肽的一核酸序列，以及編碼成熟的IGF1的一核酸序列，且不包含編碼IGF1的E胜肽的核酸序列”，通常係指一mRNA，其包含編碼具有27個胺基酸的人類IGF1的原胜肽(亦稱為原結構域)的一核苷酸序列，以及編碼具有70個胺基酸的成熟人類IGF1的一核苷酸序列，且其不包含編碼人類IGF1的一E胜肽(亦稱為E-結構域)的一核苷酸序列，亦即不包含編碼一Ea-、Eb-或Ec-結構域的核苷酸序列。該編碼具有27個胺基酸的人類IGF1的原胜肽(亦稱為原結構域)的核苷酸序列，以及該編碼具有70個胺基酸的成熟人類IGF1的核苷酸序列可被密碼子優化。

如本文所用，術語“載體”或“表現載體”係指自然存在或合成產生的構築體，其用於攝取、增殖、表現或傳遞在一細胞中的核酸，例如質體、小環、噬質體、黏接質體、人工染色體/微型染色體、噬菌體、病毒如桿狀病毒、反轉錄病毒、腺病毒、腺相關病毒、單純皰疹病毒、噬菌體。載體可整合到宿主細胞的基因組中，亦可作為自主複製的構築體保留在宿主細胞中。用於構築載體的方法為本領域技術人員所熟知的，且在各種出版物中有所描述。在特定的構築合適載體的技術中，包括功能與調節成分的描述，例如啟動子、增強子、終止與聚腺苷酸化訊息、選擇標記、複製起始點，以及剪接訊息，為本領域技術人員已知的。真核表現載體通常還將包含原核序列，其促進該載體在細菌中的繁殖，例如複製起始點以及用於在細菌中篩選的抗生素抗性基因，其可在轉染真核細胞之前除去。包含可將多核苷酸可操作地連接到其中的選殖位點的多種真核表現載體在本領域中為眾所周知的，且某些可商購，例如位在加州聖塔克拉拉市的Agilent Technologies公司；位在加州卡爾斯巴德市的Invitrogen公司；位在威斯康辛州麥迪遜市的Promega公司，或位在加州聖地亞哥市的Invivogen公司。

如本文所用，術語“基因治療載體”係指用於遞送一核酸序列的任何載體，例如編碼一進入細胞的基因的核酸序列。基因治療載體與基因遞送方法為本領域眾所周知的。這些方法的非限制性實例包括病毒載體遞送系統，包括DNA與RNA病毒，其在遞送至細胞後具有游離基因組或整合的基因組，非病毒載體遞送系統，包括DNA質體、裸核酸，以及與一轉運載體複合的核酸，轉座子系統(用於轉運並整合到宿主基因組中；Moriarity等人(2013年) Nucleic Acids Res 41 (8)，e92，Aronovich等人，(2011年) Hum. Mol. Genet. 20(R1), R14-R20)，反轉錄病毒調節的DNA轉移(例如，莫洛尼鼠白血病病毒、脾臟壞死病毒、反轉錄病毒，如勞斯肉瘤病毒、哈維肉瘤病毒、禽白血病病毒、長臂猿猿白血病病毒、人類免疫缺陷病毒、腺病毒、骨髓增生性肉瘤病毒，以及乳腺腫瘤病毒；參見，例如，Kay等人(1993年) Science 262，117-119，Anderson (1992年) Science 256，808-813)，以及DNA病毒調節的DNA轉移，包括腺病毒、皰疹病毒、細小病毒，以及腺相關病毒病毒(例如Ali等(1994)Gene Therapy 1，367-384)。病毒載體還包括但不限於腺相關病毒、腺病毒、慢病毒、反轉錄病毒，以及單純皰疹病毒載體。能夠整合到宿主基因組中的載體包括但不限於反轉錄病毒或慢病毒。

如本文所用，術語“轉錄單元”、“表現單位”或“表現盒”係指一載體、構築體或多核苷酸序列內的一區域，其包含一或多個待轉錄的基因，其中包含在該區段內的基因可操作地連接彼此。它們從單個啟動子轉錄，並由至少一個聚腺苷酸化訊息終止轉錄作用。結果，不同的基因至少在轉錄上連接。可從每個轉錄單元(多順反子轉錄單元)轉錄並表現一種以上的蛋白質或產物。每個轉錄單元將包含該單元中包含的任何選定的序列的轉錄及轉譯所必需的調控元件，而且每個轉錄單元可包含相同或不同的調控元件。例如，每個轉錄單元可包含相同的終止子。IRES元件或內含子可用於一轉錄單元內基因的功能性連接。一載體或多核苷酸序列可包含一個以上的轉錄單元。

如本文所用，術語“骨骼肌損傷”係指由離心肌肉收縮、伸長以及肌肉超負荷引起的骨骼肌的任何損傷及斷裂，較佳骨骼肌的斷裂。原則上，任何骨骼肌都可能受到此類傷害或斷裂的影響。較佳地，骨骼肌損傷為骨骼肌的損傷及斷裂，其中該骨骼肌係選自由下列所組成之群組：頭部、頸部、胸部、背部、腹部、骨盆、手臂、腿部以及臀部的肌肉群。

更佳地，骨骼肌損傷為損傷及斷裂，其中該骨骼肌係選自由下列所組成之群組：蹠肌、顳肌、乳突肌、胸大肌、脛骨後肌、脛骨前肌、腓腸肌、喙肱肌、橫膈肌、掌長肌、腹直肌、肛門外括約肌、肛門內括約肌、肩胛下肌、二頭肌、三頭肌、四頭肌、小腿後肌、腹股溝、腿後肌群、三角肌、大圓肌、肩迴旋肌棘上肌、肩迴旋肌棘下肌、肩迴旋肌小圓肌、肩迴旋肌肩胛下肌、股直肌、腹直肌、腹外斜肌、嚼肌、斜方肌、闊肌、胸肌、豎脊肌、髂肋肌、最長肌、棘肌、闊背肌、橫棘肌、背半棘肌、頸半棘肌、頭半棘肌、多裂肌、迴旋肌、棘間肌、橫突肌間、頭夾肌、頸夾肌、肋間肌、肋下肌、胸橫肌、提肋肌、後下鋸肌、後上鋸肌、腹橫肌、腹直肌、錐肌、睾舉肌、腰方肌、外斜肌、內斜肌。

甚至更佳地，骨骼肌損傷為損傷及斷裂，其中該骨骼肌係選自由下列所組成之群組：蹠肌、顳肌、乳突肌、胸大肌、脛骨後肌、脛骨前肌、腓腸肌、喙肱肌、橫膈肌、掌長肌、腹直肌、肛門外括約肌、肛門內括約肌、肩胛下肌、二頭肌、三頭肌、四頭肌、小腿後肌、腹股溝、腿後肌群、三角肌、大圓肌、肩迴旋肌棘上肌、肩迴旋肌棘下肌、肩迴旋肌小圓肌、肩迴旋肌肩胛下肌、股直肌、腹直肌、腹外斜肌、嚼肌、斜方肌、闊肌、胸肌。

較佳地，透過本發明之方法治療由離心肌肉收縮、伸長以及肌肉超負荷引起的骨骼肌的任何損傷及斷裂，較佳為骨骼肌的斷裂。

於第一方面，本發明提供一種訊息核糖核酸(mRNA)，包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-9個胺基酸具有大於2的平均疏水性分數，其中該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組： i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，條件為該蛋白質不為一氧化還原酶； ii) 與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾；以及 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾。

於一具體實施例中，該mRNA包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-9個胺基酸具有大於2的平均疏水性分數，其中該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組： i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，條件為該蛋白質不為一氧化還原酶，或與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，條件為該蛋白質不為一氧化還原酶； ii) 與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾；以及 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，或不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾。

於另一具體實施例中，該mRNA包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-9個胺基酸具有大於2的平均疏水性分數，其中該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組： i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，條件為該蛋白質不為一氧化還原酶； ii) 與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾；以及 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾。

於另一具體實施例中，該mRNA包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-9個胺基酸具有大於2的平均疏水性分數，其中該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組： i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，條件為該蛋白質不為一氧化還原酶； ii) 與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾；以及 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾。

於另一具體實施例中，該mRNA包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-9個胺基酸具有大於2的平均疏水性分數，其中該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組： i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，條件為該蛋白質不為一氧化還原酶； ii) 與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾；以及 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾。

於另一具體實施例中，該mRNA包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-9個胺基酸具有大於2的平均疏水性分數，其中該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組： i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，條件為該蛋白質不為一氧化還原酶；以及 ii) 與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾。

於另一具體實施例中，該mRNA包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-9個胺基酸具有大於2的平均疏水性分數，其中該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組： i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，條件為該蛋白質不為一氧化還原酶；以及 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾。

於另一具體實施例中，該mRNA包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-9個胺基酸具有大於2的平均疏水性分數，其中該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組： ii) 與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾；以及 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾。

於另一具體實施例中，該mRNA包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-9個胺基酸具有大於2的平均疏水性分數，其中該訊息胜肽為與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，條件為該蛋白質不為一氧化還原酶。

於另一具體實施例中，該mRNA包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-9個胺基酸具有大於2的平均疏水性分數，其中該訊息胜肽為與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾。

於另一具體實施例中，該mRNA包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-9個胺基酸具有大於2的平均疏水性分數，其中該訊息胜肽為不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾。

於另一具體實施例中，該mRNA包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-7個胺基酸具有一大於1.5的平均疏水性分數，其中該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組： i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，條件為該蛋白質不為一氧化還原酶； ii) 與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾；以及 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾。

於一具體實施例中，該mRNA包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-7個胺基酸具有大於1.5的平均疏水性分數，其中該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組： i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，條件為該蛋白質不為一氧化還原酶，或與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，條件為該蛋白質不為一氧化還原酶； ii) 與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾；以及 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾。

於另一具體實施例中，該mRNA包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-7個胺基酸具有大於1.5的平均疏水性分數，其中該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組： i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，條件為該蛋白質不為一氧化還原酶； ii) 與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾；以及 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾。

於另一具體實施例中，該mRNA包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-7個胺基酸具有大於1.5的平均疏水性分數，其中該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組： i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，條件為該蛋白質不為一氧化還原酶； ii) 與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾；以及 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾。

於另一具體實施例中，該mRNA包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-7個胺基酸具有大於1.5的平均疏水性分數，其中該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組： i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，條件為該蛋白質不為一氧化還原酶； ii) 與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾；以及 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾。

於另一具體實施例中，該mRNA包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-7個胺基酸具有大於1.5的平均疏水性分數，其中該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組： i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，條件為該蛋白質不為一氧化還原酶；以及 ii) 與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾。

於進一步之具體實施例中，該mRNA包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-7個胺基酸具有大於1.5的平均疏水性分數，其中該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組： i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，條件為該蛋白質不為一氧化還原酶；以及 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾。

於進一步之具體實施例中，該mRNA包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-7個胺基酸具有大於1.5的平均疏水性分數，其中該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組： ii) 與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾；以及 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾。

於進一步之具體實施例中，該mRNA包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-7個胺基酸具有大於1.5的平均疏水性分數，其中該訊息胜肽為與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，條件為該蛋白質不為一氧化還原酶。

於進一步之具體實施例中，該mRNA包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-7個胺基酸具有大於1.5的平均疏水性分數，其中該訊息胜肽為與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾。

於另一具體實施例中，該mRNA包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-7個胺基酸具有大於1.5的平均疏水性分數，其中該訊息胜肽為不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾。

於另一具體實施例中，該mRNA包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-5個胺基酸具有大於1.3的平均疏水性分數，其中該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組： i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，條件為該蛋白質不為一氧化還原酶； ii) 與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾；以及 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾。

於一具體實施例中，該mRNA包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-5個胺基酸具有大於1.3的平均疏水性分數，其中該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組： i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，條件為該蛋白質不為一氧化還原酶，或與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，條件為該蛋白質不為一氧化還原酶； ii) 與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾；以及 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，或不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾。

於另一具體實施例中，該mRNA包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-5個胺基酸具有大於1.3的平均疏水性分數，其中該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組： i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，條件為該蛋白質不為一氧化還原酶； ii) 與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾；以及 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾。

於另一具體實施例中，該mRNA包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-5個胺基酸具有大於1.3的平均疏水性分數，其中該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組： i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，條件為該蛋白質不為一氧化還原酶； ii) 與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾；以及 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾。

於另一具體實施例中，該mRNA包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-5個胺基酸具有大於1.3的平均疏水性分數，其中該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組： i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，條件為該蛋白質不為一氧化還原酶； ii) 與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾；以及 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾。

於一具體實施例中，該mRNA包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-5個胺基酸具有大於1.3的平均疏水性分數，其中該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組： i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，條件為該蛋白質不為一氧化還原酶；以及 ii) 與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾。

於進一步之具體實施例中，該mRNA包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-5個胺基酸具有大於1.3的平均疏水性分數，其中該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組： i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，條件為該蛋白質不為一氧化還原酶；以及 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾。

於進一步之具體實施例中，該mRNA包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-5個胺基酸具有大於1.3的平均疏水性分數，其中該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組： ii) 與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾；以及 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾。

於進一步之具體實施例中，該mRNA包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-5個胺基酸具有大於1.3的平均疏水性分數，其中該訊息胜肽為與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，條件為該蛋白質不為一氧化還原酶。

於進一步之具體實施例中，該mRNA包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-5個胺基酸具有大於1.3的平均疏水性分數，其中該訊息胜肽為與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾。

於另一具體實施例中，該mRNA包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-5個胺基酸具有大於1.3的平均疏水性分數，其中該訊息胜肽為不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾。

於一較佳具體實施例中，該mRNA包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽包含或由長度為16至40個胺基酸之間的一胺基酸序列組成，其中該胺基酸序列N端的第1-9個胺基酸具有大於2的平均疏水性分數，其中該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組： i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，條件為該蛋白質不為一氧化還原酶； ii) 與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾；以及 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾。

於另一較佳具體實施例中，該mRNA包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽包含或由長度為16至40個胺基酸之間的一胺基酸序列組成，其中該胺基酸序列N端的第1-9個胺基酸具有大於2的平均疏水性分數，其中該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組： i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，條件為該蛋白質不為一氧化還原酶；以及 ii) 與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾。

於另一較佳具體實施例中，該mRNA包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽包含或由長度為16至40個胺基酸之間的一胺基酸序列組成，其中該胺基酸序列N端的第1-9個胺基酸具有大於2的平均疏水性分數，其中該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組： i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，條件為該蛋白質不為一氧化還原酶；以及 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾。

於另一較佳具體實施例中，該mRNA包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽包含或由長度為16至40個胺基酸之間的一胺基酸序列組成，其中該胺基酸序列N端的第1-9個胺基酸具有大於2的平均疏水性分數，其中該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組： ii) 與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾；以及 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾。

於另一較佳具體實施例中，該mRNA包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽包含或由長度為16至40個胺基酸之間的一胺基酸序列組成，其中該胺基酸序列N端的第1-9個胺基酸具有大於2的平均疏水性分數，其中該訊息胜肽為與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，條件為該蛋白質不為一氧化還原酶。

於另一較佳具體實施例中，該mRNA包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽包含或由長度為16至40個胺基酸之間的一胺基酸序列組成，其中該胺基酸序列N端的第1-9個胺基酸具有大於2的平均疏水性分數，其中該訊息胜肽為與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾。

於另一較佳具體實施例中，該mRNA包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽包含或由長度為16至40個胺基酸之間的一胺基酸序列組成，其中該胺基酸序列N端的第1-9個胺基酸具有大於2的平均疏水性分數，其中該訊息胜肽為不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾。

於一具體實施例中，該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組： i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，條件為該蛋白質不為一氧化還原酶； ii) 與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾；以及 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而進行的修飾是在該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-11個胺基酸之內，較佳在第1-10個胺基酸之內，更佳在第1-9個胺基酸之內，甚至更佳在第1-8個胺基酸之內，特別是在第1-7個胺基酸之內，更特別是在第1-6個胺基酸之內，甚至更特別是在第1-5個胺基酸之內，特別較佳在第1-4個胺基酸之內，更特別是較佳在第1-3個胺基酸之內，甚至更特別較佳在第1-2個胺基酸之內。

術語“疏水分數”或“疏水性分數”在本文中與術語“親水性分數”同義使用，並且係指根據Kyte-Doolittle評分所計算的一胺基酸的疏水性程度(Kyte J., Doolittle R.F.; J. Mol. Biol. 157:105-132(1982年))。根據Kyte-Doolittle評分的胺基酸疏水性分數如下：

胺基酸	單字母代碼	疏水性分數
異白胺酸	I	4.5
纈胺酸	V	4.2
白胺酸	L	3.8
苯丙胺酸	F	2.8
半胱胺酸	C	2.5
甲硫胺酸	M	1.9
丙胺酸	A	1.8
甘胺酸	G	-0.4
蘇胺酸	T	-0.7
絲胺酸	S	-0.8
色胺酸	W	-0.9
酪胺酸	Y	-1.3
脯胺酸	P	-1.6
組胺酸	H	-3.2
麩胺酸	E	-3.5
麩醯胺酸	Q	-3.5
天門冬胺酸	D	-3.5
天門冬醯胺	N	-3.5
離胺酸	K	-3.9
精胺酸	R	-4.5

一胺基酸序列的“平均疏水性分數”，例如一訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-9個胺基酸的平均疏水性分數的計算係透過將根據該胺基酸序列的每個胺基酸的Kyte-Doolittle評分的疏水性分數相加，例如該N端第1-9個胺基酸的九個胺基酸的每一個的疏水性分數，再除以該胺基酸的數目，例如除以九。

於本發明之一具體實施例中，該胺基酸序列N端的第1-9個胺基酸的平均疏水性分數等於或大於2.05，較佳等於或大於2.1，更佳等於或大於2.15，甚至更佳等於或大於2.2，特別是等於或大於2.25，更特別是等於或大於2.3，甚至更特別是等於或大於2.35。於另一具體實施例中，該胺基酸序列N端的第1-9個胺基酸的平均疏水性分數為2.05至4.5之間，較佳為2.1至4.5之間，更佳為2.15至4.5之間，甚至更佳為2.2至4.5之間，特別是2.25至4.5之間，更特別是2.3至4.5之間，甚至更特別是2.35至4.5之間。於另一具體實施例中，該胺基酸序列N端的第1-9個胺基酸的平均疏水性分數在2.05至4.0之間，較佳在2.1至4.0之間，更佳在2.15至4.0之間，甚至更佳在2.2至4.0之間，尤其是在2.25至4.0之間，更特別是在2.3至4.0之間，甚至更特別是在2.35至4.0之間。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽的胺基酸序列C端的最後9個胺基酸的平均疏水性分數比該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-9個胺基酸的平均疏水性分數低至少1.0個單位，較佳低至少1.1個單位，更佳低至少1.2個單位，甚至更佳低至少1.3個單位，特別是低1.0至4個單位之間，更特別是低1.1至4個單位之間，甚至更具體地低1.2至4個單位之間，最特別地低1.3至4個單位之間。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-9個胺基酸、第2-10個胺基酸、第3-11個胺基酸、第4-12個胺基酸，以及第5-13個胺基酸各自具有一大於1.5的平均疏水性分數，較佳為一大於1.6的平均疏水性分數，更佳為一大於1.7的平均疏水性分數，甚至更佳為一大於1.8的平均疏水性分數，再更佳為一大於1.9的平均疏水性分數，特別是一在1.5至4.5之間的平均疏水性分數，更特別是一在1.6至4.5之間的平均疏水性分數，甚至更特別是一在1.7至4.5之間的平均疏水性分數，更特別是一在1.8至4.5之間的平均疏水性分數，最特別是一在1.9至4.5之間的平均疏水性分數。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第8-16個胺基酸的平均疏水性分數至少等於或低於該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第3-11個胺基酸的平均疏水性分數，較佳低至少0.4個單位，更佳低0.4至2.0個單位之間。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽包含或由長度為18至40個胺基酸之間的一胺基酸序列組成，且其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第10-18個胺基酸的平均疏水性分數比該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第3-11個胺基酸的平均疏水性分數至少低0.5個單位，較佳低0.5至3.0個單位之間。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽的胺基酸序列C端的最後9個胺基酸的平均疏水性分數比該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第3-11個胺基酸的平均疏水性分數低至少1.5個單位，較佳低1.5至3.5個單位之間。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽的胺基酸序列的任何9個連續胺基酸的平均疏水性分數不超過4.1。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽的胺基酸序列C端的最後9個胺基酸包含至少一個疏水性分數為負的胺基酸，較佳地該訊息胜肽的胺基酸序列C端的最後9個胺基酸包含一胺基酸，該胺基酸係選自由下列所組成之群組：G、Q、N、T、S、R、K、H、D、E、P、Y，以及W。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-9個胺基酸的第二個胺基酸係選自由下列所組成之群組：P、Y、W、S、T、G、A、M、C、F、L、V，以及I。

於本發明之一較佳具體實施例中，該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-9個胺基酸的第二個胺基酸係選自由下列所組成之群組：A、L、 S、T、V，以及W。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-9個胺基酸的平均極性為6.1以下，較佳平均極性為低於6.1，更佳平均極性為低於4，甚至更佳平均極性低於2，特別是平均極性在6.1至0之間，更特別是平均極性在4至0之間，甚至更特別是平均極性在2至0之間，最特別是平均極性在1至0.2之間。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-7個胺基酸的平均極性為6.1以下，較佳平均極性為低於6.1，更佳平均極性為低於4，甚至更佳平均極性低於2，特別是平均極性在6.1至0之間，更特別是平均極性在4至0之間，甚至更特別是平均極性在2至0之間，最特別是平均極性在1至0.2之間。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-5個胺基酸的平均極性為6.1以下，較佳平均極性為低於6.1，更佳平均極性為低於4，甚至更佳平均極性低於2，特別是平均極性在6.1至0之間，更特別是平均極性在4至0之間，甚至更特別是平均極性在2至0之間，最特別是平均極性在1至0.2之間。

根據Zimmerman極性指數(Zimmerman J.M., Eliezer N., Simha R.; J. Theor. Biol. 21:170-201(1968年))計算極性。一胺基酸序列的“平均極性”，例如一訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-9個胺基酸的平均極性的計算係透過將根據該胺基酸序列的每個胺基酸的Zimmerman極性指數相加，例如該N端第1-9個胺基酸的九個胺基酸的每一個的平均即興，再除以該胺基酸的數目，例如除以九。根據Zimmerman極性指數的胺基酸極性如下：

胺基酸	單字母代碼	極性
異白胺酸	I	0.13
纈胺酸	V	0.13
白胺酸	L	0.13
苯丙胺酸	F	0.35
半胱胺酸	C	1.48
甲硫胺酸	M	1.43
丙胺酸	A	0
甘胺酸	G	0
蘇胺酸	T	1.66
絲胺酸	S	1.67
色胺酸	W	2.1
酪胺酸	Y	1.61
脯胺酸	P	1.58
組胺酸	H	51.6
麩胺酸	E	49.9
麩醯胺酸	Q	3.53
天門冬胺酸	D	49.7
天門冬醯胺	N	3.38
離胺酸	K	49.5
精胺酸	R	52

本發明之一訊息胜肽的胺基酸序列的上述平均疏水性分數或平均極性可透過使用公開的網路資料庫ProtScale (http://www.expasy.org/tools/protscale.html)來計算，其在Gasteiger E.等人的論文中提到 (Gasteiger E., Hoogland C., Gattiker A., Duvaud S., Wilkins M.R., Appel R.D., Bairoch A.; ExPASy伺服器上的蛋白質鑑定及分析工具；(於) John M.Walker (編輯)：The Proteomics Protocols Handbook, Humana出版社(2005年)第571-607頁)，選擇Kyte & Doolittle評分的疏水性(“疏水性 / Kyte & Doolittle”)或Zimmerman評分的極性(“極性 / Zimmerman”)以及對應一訊息胜肽的特定窗口大小的設定(例如，9個胺基酸的窗口大小)，窗口邊緣相對權重值設置為100%，並且未進行評分標準化。可透過打開結果頁面“數值格式(詳細)”上的連結以檢索對應的數值數據。

於本發明之一具體實施例中，該mRNA包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-7個胺基酸具有一高於1.7的平均疏水性分數。於一具體實施例中，該mRNA包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-7個胺基酸具有大於1.7的平均疏水性分數，且該訊息胜肽包含或由長度為14至40個胺基酸之間的一胺基酸序列組成。

於本發明之一具體實施例中，該胺基酸序列N端的第1-7個胺基酸的平均疏水性分數等於或大於1.6，較佳等於或大於1.7，更佳等於或大於 1.75，甚至更佳等於或大於1.8，特別是等於或大於2.0，更特別是等於或大於2.1，甚至更特別是等於或大於2.2。於另一具體實施例中，該胺基酸序列N端的第1-7個胺基酸的平均疏水性分數在1.6至4.5之間，較佳在1.7至4.5之間，更佳在1.75至4.5之間，甚至更佳在1.8至4.5之間，特別是在2.0至4.5之間，更特別是在2.1至4.5之間，甚至更特別是在2.2至4.5之間。於另一具體實施例中，該胺基酸序列N端的第1-7個胺基酸的平均疏水性分數在1.6至4.0之間，較佳在1.7至4.0之間，更佳在1.75至4.0之間，甚至更佳在1.8至4.0之間，尤其是在2.0至4.0之間，更特別是在2.1至4.0之間，甚至更特別是在2.2至4.0之間。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽的胺基酸序列C端的最後七個胺基酸的平均疏水性分數等於或低於該訊息胜肽的胺基酸序列N端第1-7個胺基酸的平均疏水性分數，較佳低至少0.06單位，更佳低至少1.0單位，甚至更佳低至少1.1單位，特別是低至少1.2單位，更特別是低1.0至4個單位之間，甚至更特別是低1.0至4個單位之間，最特別是低1.2至4個單位之間。

於本發明之一具體實施例中，該該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-7個胺基酸，第2-8個胺基酸，第3-9個胺基酸，第4-10個胺基酸，以及第5-11個胺基酸具有一高於1.4的平均疏水性分數，較佳為高於1.5的平均疏水性分數，更佳為高於1.6的平均疏水性分數，甚至更佳為高於1.7的平均疏水性分數，再更佳為高於1.75的平均疏水性分數，特別是介於1.4至4.5之間的平均疏水性分數，更特別是介於1.5至4.5之間的平均疏水性分數，甚至更特別是介於1.6至4.5之間的平均疏水性分數，再更特別是介於1.7至4.5之間的平均疏水性分數，最特別是介於1.75至4.5之間的平均疏水性分數。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽的胺基酸序列C端的最後七個胺基酸的平均疏水性分數比該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第3-9個胺基酸的平均疏水性分數低至少1.0個單位，較佳低1.0至3.6個單位之間。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽的胺基酸序列的任何7個連續胺基酸的平均疏水性分數不超過4.1。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽的胺基酸序列C端的最後7個胺基酸包含至少一個疏水性分數為負的胺基酸，較佳地該訊息胜肽的胺基酸序列C端的最後7個胺基酸包含一胺基酸，該胺基酸係選自由下列所組成之群組：G、Q、N、T、S、R、K、H、D、E、P、Y，以及W。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-7個胺基酸的第二個胺基酸係選自由下列所組成之群組：P、Y、W、S、T、G、A、M、C、F、L、V，以及I。

於本發明之一較佳具體實施例中，該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-7個胺基酸的第二個胺基酸係選自由下列所組成之群組：A、L、 S、T、V，以及W。

於本發明之一具體實施例中，該mRNA包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-5個胺基酸具有大於1.3個單位的平均疏水性分數。於一具體實施例中，該mRNA包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-5個胺基酸具有大於1.3的平均疏水性分數，且該訊息胜肽包含或由長度為12至40個胺基酸之間的胺基酸序列組成。

於本發明之一具體實施例中，該胺基酸序列N端的第1-5個胺基酸的平均疏水性分數等於或大於1.0，較佳等於或大於1.1，更佳等於或大於1.2，甚至更佳等於或大於1.25，特別是等於或大於1.3，更特別是等於或大於1.35，甚至更特別是等於或大於1.38。於另一具體實施例中，該胺基酸序列N端的第1-5個胺基酸的平均疏水性分數在1至4.5之間，較佳在1.1至4.5之間，更佳在1.2至4.5之間，甚至更佳在1.25至4.5之間，特別是在1.3至4.5之間，更特別是在1.35至4.5之間，甚至更特別是在1.38至4.5之間。於另一具體實施例中，該胺基酸序列N端的第1-5個胺基酸的平均疏水性分數在1.0至4.0之間，較佳在1.1至4.0之間，更佳在1.2至4.0之間，甚至更佳在1.25至4.0之間，尤其在1.3至4.0之間，更特別是在1.35至4.0之間，甚至更特別是在1.38至4.0之間。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽的胺基酸序列C端的最後五個胺基酸的平均疏水性分數比該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-5個胺基酸的平均疏水性分數低至少0.2單位，較佳低至少0.24單位，更佳低至少1.0個單位，甚至更佳低至少1.2個單位，特別是低0.2至4個單位之間，更特別是低0.24至4個單位之間，甚至更特別是低1.0至4個單位之間，最特別是低1.2至4個單位之間。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-5個胺基酸，第2-6個胺基酸，第3-7個胺基酸，第4-8個胺基酸，以及第5-9個胺基酸具有大於1.0的平均疏水性分數，較佳為大於1.15的平均疏水性分數，更佳為大於1.2的平均疏水性分數，甚至更佳為大於1.21的平均疏水性分數，再更佳為大於1.23的平均疏水性分數，特別是在1.0至4.5之間的平均疏水性分數，更特別是在1.15至4.5之間的平均疏水性分數，甚至更特別是在1.2至4.5之間的平均疏水性分數，再更特別是在1.21至4.5之間的平均疏水性分數，最特別是在1.23至4.5之間的平均疏水性分數。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽的胺基酸序列C端的最後五個胺基酸的平均疏水性分數比該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第3-7個胺基酸的平均疏水性分數低至少1.2個單位，較佳低1.2至3.0個單位之間，更佳低1.2至4.3個單位之間。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽的胺基酸序列的任何5個連續胺基酸的平均疏水性分數不超過4.2，較佳不超過4.3。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽的胺基酸序列C端的最後5個胺基酸包含至少一個疏水性分數為負的胺基酸，較佳地該訊息胜肽的胺基酸序列C端的最後5個胺基酸包含一胺基酸，該胺基酸係選自由下列所組成之群組：G、Q、N、T、S、R、K、H、D、E、P、Y，以及W。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽為 i)與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽任選地透過插入、缺失及/或取代少於與該蛋白質異源的該訊息胜肽的胺基酸序列的胺基酸數量的50%而被修飾。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽為 i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中該修飾的訊息胜肽具有一胺基酸序列，其與未經修飾的與該蛋白質異源的該訊息胜肽的胺基酸序列具有一個，較佳為二個，更佳為三個，甚至更佳為四個，最佳為五個，特別是六個，更特別是七個，甚至更特別是八個，最特別是九或十個不同的胺基酸。

於一具體實施例中，該修飾的訊息胜肽具有一胺基酸序列，其與未經修飾的與該蛋白質異源的該訊息胜肽的胺基酸序列具有1-2個不同的胺基酸，較佳為1-3個不同的胺基酸，更佳為1-4個不同的胺基酸，甚至更佳為1-5個不同的胺基酸，最佳為1-6個不同的胺基酸，特別是1-7個不同的胺基酸，更特別是1-10個不同的胺基酸，甚至更特別是1-12個不同的胺基酸，最特別是1-15個不同的胺基酸。

於一具體實施例中，該修飾的訊息胜肽具有一胺基酸序列，其與未經修飾的與該蛋白質異源的該訊息胜肽的胺基酸序列具有在95%至50%之間，較佳在95%至60%之間，更佳在95%至70%之間，甚至更佳在95%至80%之間，最佳在95%至90%之間的序列同一性。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽為 i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，條件為該修飾的訊息胜肽具有一胺基酸序列，其與該蛋白質自然存在(同源)的訊息胜肽的胺基酸序列具有一個，較佳為二個，更佳為三個，甚至更佳為四個，最佳為五個，特別是六個，更特別是七個，甚至更特別是八個，最特別是九或十個不同的胺基酸。於一具體實施例中，與該蛋白質異源的該修飾的訊息胜肽與該蛋白質自然存在(同源)的訊息胜肽的胺基酸序列具有小於95%，較佳小於90%，更佳小於 80%，甚至更佳小於70%，最佳小於60%，特別是小於50%的序列同一性。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽為 ii) 與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-9個胺基酸的平均疏水性分數為2以下，較佳低於2。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽為 ii) 與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代少於與該蛋白質同源的該訊息胜肽的胺基酸序列的胺基酸數量的50%而被修飾。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽為 ii) 與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中與該蛋白質同源的該修飾的訊息胜肽與未經修飾的與該蛋白質同源的該訊息胜肽的胺基酸序列具有一個，較佳為二個，更佳為三個，甚至更佳為四個，最佳為五個，特別是六個，更特別是七個，甚至更特別是八至十二個，最特別是九或十五個不同的胺基酸。於一具體實施例中，與該蛋白質同源的該修飾的訊息胜肽與未經修飾的與該蛋白質同源的該訊息胜肽的胺基酸序列具有1-2個不同的胺基酸，較佳為1-3個不同的胺基酸，更佳為1-4個不同的胺基酸，甚至更佳為1-5個不同的胺基酸，最佳為1-6個不同的胺基酸，特別是1-7個不同的胺基酸，更特別是1-10個不同的胺基酸，甚至更特別是1-12個不同的胺基酸，最特別是1-15個不同的胺基酸。

於一具體實施例中，與該蛋白質同源的該修飾的訊息胜肽具有一序列，其與未經修飾的與該蛋白質同源的該訊息胜肽的胺基酸序列具有小於95%，較佳小於90%，更佳小於 80%，甚至更佳小於70%，最佳小於60%，特別是小於50%的序列同一性。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽為 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列任選地透過插入、缺失及/或取代少於該自然存在的胺基酸序列的胺基酸序列的胺基酸數量的50%而被修飾。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽為 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中該修飾的自然存在的胺基酸序列與未經修飾的該自然存在的胺基酸序列具有一個，較佳為二個，更佳為三個，甚至更佳為四個，最佳為五個，特別是六個，更特別是七個，甚至更特別是八至十二個，最特別是九或十五個不同的胺基酸。

於一具體實施例中，該經修飾的自然存在的胺基酸序列與未經修飾的該自然存在的胺基酸序列的胺基酸序列具有1-2個不同的胺基酸，較佳為1-3個不同的胺基酸，更佳為1-4個不同的胺基酸，甚至更佳為1-5個不同的胺基酸，最佳為1-6個不同的胺基酸，特別是1-7個不同的胺基酸，更特別是1-10個不同的胺基酸，甚至更特別是1-12個不同的胺基酸，最特別是1-15個不同的胺基酸。

於一具體實施例中，該修飾的自然存在的胺基酸序列具有一序列，其與未經修飾的該自然存在的胺基酸序列的胺基酸序列具有小於95%，較佳小於90%，更佳小於 80%，甚至更佳小於70%，最佳小於60%，特別是小於50%的序列同一性。

於本發明之一具體實施例中，該修飾的不具有自然界中一訊息胜肽的功能的自然存在的胺基酸序列具有一胺基酸序列，其與一自然存在的訊息胜肽的胺基酸序列相差超過50%，較佳超過60%，更佳超過70%，甚至更佳超過80%，最佳超過90%，特別是超過95%。於一具體實施例中，該修飾的不具有自然界中一訊息胜肽的功能的自然存在的胺基酸序列具有一序列，其與一自然存在的訊息胜肽的胺基酸序列具有小於100%，較佳小於95%，更佳小於 90%，甚至更佳小於80%，最佳小於70%，特別是小於60%，更特別是小於50%的序列同一性。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽為 i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組：腦源性神經營養因子(brain-derived neurotrophic factor, BDNF)的訊息胜肽、神經滋養素-3 (neurotrophin-3, NTF-3)的訊息胜肽、纖維母細胞生長因子5 (fibroblast growth factor 5, FGF5)的訊息胜肽、類胰島素生長因子結合蛋白5 (insulin-like growth factor-binding protein 5, IBP5)的訊息胜肽、前列腺與睾丸表現蛋白2 (prostate and testis expressed protein 2, PATE2)的訊息胜肽、細胞外超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD3)的訊息胜肽，以及補體因子H相關蛋白2 (factor H-related protein 2, FHR2)的訊息胜肽，或為 i) 透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾的與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組：C-X-C模體趨化因子配體12 (C-X-C Motif Chemokine Ligand 12, CXCL12)的訊息胜肽、類胰島素生長因子2 (insulin-like growth factor 2, IGF2)的訊息胜肽、胰島素(insulin, INS)的訊息胜肽，以及腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽為 i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組：如SEQ ID NO: 30所示之腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽、如SEQ ID NO: 102所示之神經滋養素-3 (NTF-3)的訊息胜肽、如SEQ ID NO: 87所示之纖維母細胞生長因子5 (FGF5)的訊息胜肽、如SEQ ID NO: 97所示之類胰島素生長因子結合蛋白5 (IBP5)的訊息胜肽、如SEQ ID NO: 107所示之前列腺與睾丸表現蛋白2 (PATE2)的訊息胜肽、如SEQ ID NO: 112所示之細胞外超氧化物歧化酶(SOD3)的訊息胜肽，以及如SEQ ID NO: 92所示之補體因子H相關蛋白2 (FHR2)的訊息胜肽，或為 i) 透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾的與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中該修飾的與該蛋白質異源的該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組：如SEQ ID NO: 132所示之C-X-C模體趨化因子配體12 (CXCL12)的修飾的訊息胜肽、如SEQ ID NO: 127所示之類胰島素生長因子2 (IGF2)的修飾的訊息胜肽、如SEQ ID NO: 147所示之胰島素(INS)的修飾的訊息胜肽，以及如SEQ ID NO: 137所示之腦源性神經營養因子(BDNF)的修飾的訊息胜肽。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽為 i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組：腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽、神經滋養素-3 (neurotrophin-3, NTF-3)的訊息胜肽、纖維母細胞生長因子5 (fibroblast growth factor 5, FGF5)的訊息胜肽、類胰島素生長因子結合蛋白5 (insulin-like growth factor-binding protein 5, IBP5)的訊息胜肽、前列腺與睾丸表現蛋白2 (prostate and testis expressed protein 2, PATE2)的訊息胜肽、細胞外超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD3)的訊息胜肽，以及補體因子H相關蛋白2 (factor H-related protein 2, FHR2)的訊息胜肽。較佳地，與該蛋白質異源的該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組：如SEQ ID NO: 30所示之腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽、如SEQ ID NO: 102所示之神經滋養素-3 (NTF-3)的訊息胜肽、如SEQ ID NO: 87所示之纖維母細胞生長因子5 (FGF5)的訊息胜肽、如SEQ ID NO: 97所示之類胰島素生長因子結合蛋白5 (IBP5)的訊息胜肽、如SEQ ID NO: 107所示之前列腺與睾丸表現蛋白2 (PATE2)的訊息胜肽、如SEQ ID NO: 112所示之細胞外超氧化物歧化酶(SOD3)的訊息胜肽，以及如SEQ ID NO: 92所示之補體因子H相關蛋白2 (FHR2)的訊息胜肽。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽為 i) 透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾的與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組：C-X-C模體趨化因子配體12 (CXCL12)的訊息胜肽、類胰島素生長因子2 (IGF2)的訊息胜肽、胰島素(INS)的訊息胜肽，以及腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽。

於本發明之較佳具體實施例中，透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾的與該蛋白質異源的該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組：如SEQ ID NO: 132所示之C-X-C模體趨化因子配體12 (CXCL12)的修飾的訊息胜肽、如SEQ ID NO: 127所示之類胰島素生長因子2 (IGF2)的修飾的訊息胜肽、如SEQ ID NO: 147所示之胰島素(INS)的修飾的訊息胜肽，以及如SEQ ID NO: 137所示之腦源性神經營養因子(BDNF)的修飾的訊息胜肽。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽為 ii) 與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組：類胰島素生長因子1 (insulin-like growth factor 1, IGF1)的訊息胜肽與IGF1、胰島素(INS)訊息胜肽與INS，紅血球生成素(erythropoietin, EPO)的訊息胜肽與EPO、介白素-4 (interleukin 4, IL-4)的訊息胜肽與IL-4、介白素-10 (IL-10)的訊息胜肽與IL-10。

於本發明之一較佳具體實施例中，透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而修飾的與該蛋白質同源的該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組：如SEQ ID NO: 122所示之類胰島素生長因子1 (IGF1)的修飾的訊息胜肽、如SEQ ID NO: 147所示之胰島素(INS)的修飾的訊息胜肽，如SEQ ID NO: 152所示之紅血球生成素(EPO)的修飾的訊息胜肽、如SEQ ID NO: 166所示之介白素-4 (IL-4)的修飾的訊息胜肽、如SEQ ID NO: 172所示之介白素-10 (IL-10)的修飾的訊息胜肽。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽為 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中該自然存在的胺基酸序列係選自由下列所組成之群組：類胰島素生長因子1 (IGF1)的原胜肽、升糖素受體(glucagon receptor, GL-R)的編碼序列，以及腸型鹼性磷酸酶(intestinal-type alkaline phosphatase, ALPI)的前胜肽。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽為 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列為升糖素受體(GL-R)的編碼序列，iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中該自然存在的胺基酸序列為類胰島素生長因子1 (IGF1)的原胜肽，或者 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中該自然存在的胺基酸序列為腸型鹼性磷酸酶(ALPI)的原胜肽。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽為 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列為升糖素受體(GL-R)的編碼序列。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽為 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中該自然存在的胺基酸序列為類胰島素生長因子1 (IGF1)的原胜肽。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽為 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中該自然存在的胺基酸序列為腸型鹼性磷酸酶(ALPI)的原胜肽。

於本發明之一較佳具體實施例中，該訊息胜肽為 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列為如SEQ ID NO: 117所示之升糖素受體(GL-R)的編碼序列，iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中該自然存在的胺基酸序列為如SEQ ID NO: 142所示之類胰島素生長因子1 (IGF1)的原胜肽，或者 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中該自然存在的胺基酸序列為如SEQ ID NO: 189所示之腸型鹼性磷酸酶(ALPI)的原胜肽。

於本發明之一較佳具體實施例中，該訊息胜肽為 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列為如SEQ ID NO: 117所示之升糖素受體(GL-R)的編碼序列。

於本發明之一較佳具體實施例中，該訊息胜肽為 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中該自然存在的胺基酸序列為如SEQ ID NO: 142所示之類胰島素生長因子1 (IGF1)的原胜肽。

於本發明之一較佳具體實施例中，該訊息胜肽為 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中該自然存在的胺基酸序列為如SEQ ID NO: 189所示之腸型鹼性磷酸酶(ALPI)的原胜肽。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽為 i)與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，條件為該蛋白質不為一氧化還原酶，且其中使用與該蛋白質異源的該訊息胜肽的該分泌蛋白質的量高於使用與該蛋白質同源的該訊息胜肽的該分泌蛋白質的量。較佳地，使用與該蛋白質異源的該訊息胜肽的該分泌蛋白質的量比使用與該蛋白質同源的該訊息胜肽的該分泌蛋白質的量高，較佳高至少1.4倍。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽為 ii) 與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中使用與該蛋白質同源的該修飾的訊息胜肽的分泌蛋白質的量高於使用與該蛋白質同源的未經修飾的訊息胜肽的分泌蛋白質的量。較佳地，使用與該蛋白質同源的該修飾的訊息胜肽的分泌蛋白質的量比使用與該蛋白質同源的未經修飾的訊息胜肽的分泌蛋白質的量高，較佳高至少1.4倍。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽為 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，且其中使用在自然界中不具有一訊息胜肽功能的該自然存在的胺基酸序列的分泌蛋白質的量高於使用與該蛋白質同源的該訊息胜肽的分泌蛋白質的量。較佳地，使用任選修飾的自然存在的胺基酸序列的分泌蛋白的量比使用與該蛋白質同源的該訊息胜肽的分泌蛋白的量高，較佳高至少1.4倍。

於本發明之一具體實施例中，其中該訊息胜肽為 i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，條件為該蛋白質不為一硫氧還蛋白，更特別是其中該蛋白質不為桿衍生的視錐細胞活性因子。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組： i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，該蛋白質係選自由下列所組成之群組：類胰島素生長因子1 (IGF1)、胰島素(INS)、紅血球生成素(EPO)、介白素4 (IL-4)，以及介白素10( IL-10)。 i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，且該蛋白質為IGF1。 ii) 與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，且該蛋白質係選自由下列所組成之群組：類胰島素生長因子1 (IGF1)、胰島素(INS)、紅血球生成素(EPO)、介白素4 (IL-4)，以及介白素10(IL-10)； iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列為升糖素受體(GL-R)的編碼序列，且該蛋白質為類胰島素生長因子1 (IGF1)；以及 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中該自然存在的胺基酸胺基酸序列為類胰島素生長因子1 (IGF1)的原胜肽，且該蛋白質為類胰島素生長因子1 (IGF1)。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽為 i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，並且該蛋白質係選自由下列所組成之群組：類胰島素生長因子1 (IGF1)、胰島素(INS)、紅血球生成素(EPO)、介白素- 4 (IL-4)，以及介白素10(IL-10)。

於本發明之一較佳具體實施例中，該訊息胜肽為 i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，且該蛋白質係選自由下列所組成之群組：如SEQ ID NO: 188所示之類胰島素生長因子1 (IGF1)、如SEQ ID NO: 185所示之胰島素(INS)、如SEQ ID NO: 184所示之紅血球生成素(EPO)、如SEQ ID NO: 186所示之介白素4 (IL-4)，以及如SEQ ID NO: 187所示之介白素10(IL-10)。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽為 i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，且該蛋白質為IGF1。

於本發明之一較佳具體實施例中，該訊息胜肽為 i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，且該蛋白質為如SEQ ID NO: 188所示之IGF1。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽為 ii) 與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，且該蛋白質係選自由下列所組成之群組：類胰島素生長因子1 (IGF1)、胰島素(INS)、紅血球生成素(EPO)、介白素4 (IL-4)，以及介白素10(IL-10)。

於本發明之一較佳具體實施例中，該訊息胜肽為 ii) 與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，且該蛋白質係選自由下列所組成之群組：如SEQ ID NO: 188所示之類胰島素生長因子1 (IGF1)、如SEQ ID NO: 185所示之胰島素(INS)、如SEQ ID NO: 184所示之紅血球生成素(EPO)、如SEQ ID NO: 186所示之介白素4 (IL-4)，以及如SEQ ID NO: 187所示之介白素10 (IL-10)。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽為 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列為升糖素受體(GL-R)的編碼序列，且該蛋白質為類胰島素生長因子1 (IGF1)。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽為 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中該自然存在的胺基酸序列為類胰島素生長因子1 (IGF1)的原胜肽，且該蛋白質為類胰島素生長因子1 (IGF1)。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽為 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中該自然存在的胺基酸序列為腸型鹼性磷酸酶(ALPI)的原胜肽，且該蛋白質為類胰島素生長因子1 (IGF1)。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽為 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列為升糖素受體(GL-R)的編碼序列，且該蛋白質為如SEQ ID NO: 188所示之類胰島素生長因子1 (IGF1)。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽為 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中該修飾的自然存在的胺基酸序列為類胰島素生長因子1 (IGF1)的修飾的原胜肽，且該蛋白質為如SEQ ID NO: 188所示之類胰島素生長因子1 (IGF1)。

於本發明之一具體實施例中，該訊息胜肽為 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中該修飾的自然存在的胺基酸序列為腸型鹼性磷酸酶(ALPI)的修飾的原胜肽，且該蛋白質為如SEQ ID NO: 188所示之類胰島素生長因子1 (IGF1)。

於本發明之一較佳具體實施例中，該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組： i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組：腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽、神經滋養素-3 (NTF-3)的訊息胜肽、纖維母細胞生長因子5 (FGF5)的訊息胜肽、類胰島素生長因子結合蛋白5 (IBP5)的訊息胜肽、前列腺與睾丸表現蛋白2 (PATE2)的訊息胜肽、細胞外超氧化物歧化酶(SOD3)的訊息胜肽，以及補體因子H相關蛋白2 (FHR2)的訊息胜肽，條件為該蛋白不為一氧化還原酶； i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組：C-X-C模體趨化因子配體12 (CXCL12)的訊息胜肽、類胰島素生長因子2 (IGF2)的訊息胜肽、胰島素(INS)的訊息胜肽、腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽，條件為該蛋白質不為一氧化還原酶； ii) 與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組：類胰島素生長因子1 (IGF1)的訊息胜肽、胰島素(INS)的訊息胜肽、紅血球生成素(EPO)的訊息胜肽、介白素4 (IL-4)的訊息胜肽，以及介白素10( IL-10)的訊息胜肽； iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列為升糖素受體(GL-R)的編碼序列； iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中該自然存在的胺基酸序列為類胰島素生長因子1 (IGF1)的原胜肽；以及 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中該自然存在的胺基酸序列為腸型鹼性磷酸酶(ALPI)的原胜肽。

於本發明之一較佳具體實施例中，該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組： i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組：腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽、神經滋養素-3 (NTF-3)的訊息胜肽、纖維母細胞生長因子5 (FGF5)的訊息胜肽、類胰島素生長因子結合蛋白5 (IBP5)的訊息胜肽、前列腺與睾丸表現蛋白2 (PATE2)的訊息胜肽、細胞外超氧化物歧化酶(SOD3)的訊息胜肽，以及補體因子H相關蛋白2 (FHR2)的訊息胜肽，且該蛋白係選自由下列所組成之群組：細胞激素、生長因子，以及激素； i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組：C-X-C模體趨化因子配體12 (CXCL12)的訊息胜肽、類胰島素生長因子2 (IGF2)的訊息胜肽、胰島素(INS)的訊息胜肽，以及腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽，且該蛋白質係選自由下列所組成之群組：細胞激素、生長因子，以及激素； ii) 與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組：類胰島素生長因子1 (IGF1)的訊息胜肽與IGF1、胰島素(INS)訊息胜肽與INS，紅血球生成素(EPO)的訊息胜肽與EPO、介白素-4 (IL-4)的訊息胜肽與IL-4、介白素-10 (IL-10)的訊息胜肽與IL-10； iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該訊息胜肽為升糖素受體(GL-R)的編碼序列，且該蛋白質係選自由下列所組成之群組：細胞激素、生長因子，以及激素，且較佳為生長因子； iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中該自然存在的胺基酸序列為類胰島素生長因子1 (IGF1)的原胜肽，且該蛋白質係選自由下列所組成之群組：細胞激素、生長因子，以及激素，且較佳為生長因子；以及 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中該自然存在的胺基酸序列為腸型鹼性磷酸酶(ALPI)的原胜肽，且該蛋白質係選自由下列所組成之群組：細胞激素、生長因子，以及激素，且較佳為生長因子。

於本發明之一較佳具體實施例中，該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組： i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組：腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽、神經滋養素-3 (NTF-3)的訊息胜肽、纖維母細胞生長因子5 (FGF5)的訊息胜肽、類胰島素生長因子結合蛋白5 (IBP5)的訊息胜肽、前列腺與睾丸表現蛋白2 (PATE2)的訊息胜肽、細胞外超氧化物歧化酶(SOD3)的訊息胜肽，以及補體因子H相關蛋白2 (FHR2)的訊息胜肽，且該蛋白質係選自由下列所組成之群組：類胰島素生長因子1 (IGF1)、胰島素(INS)、紅血球生成素(EPO)、介白素4 (IL-4)，以及介白素10(IL-10)； i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組：C-X-C模體趨化因子配體12 (CXCL12)的訊息胜肽、類胰島素生長因子2 (IGF2)的訊息胜肽、胰島素(INS)的訊息胜肽，以及腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽，且該蛋白質為類胰島素生長因子1 (IGF1)； ii) 與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組：類胰島素生長因子1 (IGF1)的訊息胜肽與IGF1、胰島素(INS)訊息胜肽與INS，紅血球生成素(EPO)的訊息胜肽與EPO、介白素-4 (IL-4)的訊息胜肽與IL-4、介白素-10 (IL-10)的訊息胜肽與IL-1； iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該訊息胜肽為升糖素受體(GL-R)的編碼序列，且該蛋白質為類胰島素生長因子1 (IGF1)； iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中該自然存在的胺基酸序列為類胰島素生長因子1 (IGF1)的原胜肽，且該蛋白質為類胰島素生長因子1 (IGF1)；以及 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中該自然存在的胺基酸序列為腸型鹼性磷酸酶(ALPI)的原胜肽，且該蛋白質為類胰島素生長因子1 (IGF1)。

於本發明之一較佳具體實施例中，該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組： i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽與該蛋白質係選自由下列所組成之群組：腦源性神經營養因子(BDNF)與IGF1、胰島素、EPO或IL-10，神經滋養素-3(NTF-3)的訊息胜肽與IGF1，纖維母細胞生長因子5 (FGF5) 的訊息胜肽與IGF1或IL4，類胰島素生長因子結合蛋白5 (IBP5)的訊息胜肽與IGF1，前列腺與睾丸表現蛋白2(PATE2)的訊息胜肽與IGF1，細胞外超氧化物歧化酶(SOD3)的訊息胜肽與IGF1，以及補體因子H相關蛋白2 (FHR2)的訊息胜肽與IGF1； i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽與該蛋白質係選自由下列所組成之群組：C-X-C模體趨化因子配體12 (CXCL12)的訊息胜肽與IGF1，類胰島素生長因子2 (IGF2)的訊息胜肽與IGF1，胰島素(INS)的訊息胜肽與IGF1，以及腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽與IGF1； ii) 與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽與該蛋白質係選自由下列所組成之群組：類胰島素生長因子1 (IGF1)的訊息胜肽與IGF1，胰島素的訊息胜肽與INS，紅血球生成素(EPO)的訊息胜肽與EPO，介白素4 (IL-4)的訊息胜肽與IL- 4，介白素10 (IL-10)的訊息胜肽與IL-10； iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該訊息胜肽為升糖素受體(GL-R)的編碼序列，且該蛋白質為類胰島素生長因子1 (IGF1)； iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中該自然存在的胺基酸序列為類胰島素生長因子1 (IGF1)的原胜肽，且該蛋白質為類胰島素生長因子1 (IGF1)；以及 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中該自然存在的胺基酸序列為腸型鹼性磷酸酶(ALPI)的原胜肽，且該蛋白質為類胰島素生長因子1 (IGF1)。

於本發明之一較佳具體實施例中，該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組： i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組：如SEQ ID NO: 30所示之腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽、如SEQ ID NO: 102所示之神經滋養素-3 (NTF-3)的訊息胜肽、如SEQ ID NO: 87所示之纖維母細胞生長因子5 (FGF5)的訊息胜肽、如SEQ ID NO: 97所示之類胰島素生長因子結合蛋白5 (IBP5)的訊息胜肽、如SEQ ID NO: 107所示之前列腺與睾丸表現蛋白2 (PATE2)的訊息胜肽、如SEQ ID NO: 112所示之細胞外超氧化物歧化酶(SOD3)的訊息胜肽，以及如SEQ ID NO: 92所示之補體因子H相關蛋白2 (FHR2)的訊息胜肽，條件為該蛋白質不為一氧化還原酶； i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組：如SEQ ID NO: 132所示之C-X-C模體趨化因子配體12 (CXCL12)的訊息胜肽、如SEQ ID NO: 127所示之類胰島素生長因子2 (IGF2)的訊息胜肽、如SEQ ID NO: 147所示之胰島素(INS)的訊息胜肽，以及如SEQ ID NO: 137所示之腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽，條件為該蛋白質不為一氧化還原酶； ii) 與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組：如SEQ ID NO: 122所示之類胰島素生長因子1 (IGF1)的修飾的訊息胜肽、如SEQ ID NO: 147所示之胰島素(INS)的修飾的訊息胜肽，如SEQ ID NO: 152所示之紅血球生成素(EPO)的修飾的訊息胜肽、如SEQ ID NO: 166所示之介白素-4 (IL-4)的修飾的訊息胜肽、如SEQ ID NO: 174所示之介白素-10 (IL-10)的修飾的訊息胜肽； iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列為如SEQ ID NO: 117所示之升糖素受體(GL-R)的編碼序列； iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中該修飾的自然存在的胺基酸序列為如SEQ ID NO: 142所示之類胰島素生長因子1 (IGF1)的修飾的原胜肽；以及 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中該修飾的自然存在的胺基酸序列為如SEQ ID NO: 189所示之腸型鹼性磷酸酶(ALPI)的修飾的原胜肽。

於本發明之一較佳具體實施例中，該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組： i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組：如SEQ ID NO: 30所示之腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽、如SEQ ID NO: 102所示之神經滋養素-3 (NTF-3)的訊息胜肽、如SEQ ID NO: 87所示之纖維母細胞生長因子5 (FGF5)的訊息胜肽、如SEQ ID NO: 97所示之類胰島素生長因子結合蛋白5 (IBP5)的訊息胜肽、如SEQ ID NO: 107所示之前列腺與睾丸表現蛋白2 (PATE2)的訊息胜肽、如SEQ ID NO: 112所示之細胞外超氧化物歧化酶(SOD3)的訊息胜肽，以及如SEQ ID NO: 92所示之補體因子H相關蛋白2 (FHR2)的訊息胜肽，且該蛋白質係選自由下列所組成之群組：細胞激素、生長因子，以及激素； i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中與該蛋白質異源的該修飾的訊息胜肽係選自由下列所組成之群組：如SEQ ID NO: 132所示之C-X-C模體趨化因子配體12 (CXCL12)的修飾的訊息胜肽、如SEQ ID NO: 127所示之類胰島素生長因子2 (IGF2)的修飾的訊息胜肽、如SEQ ID NO: 147所示之胰島素(INS)的修飾的訊息胜肽，以及如SEQ ID NO: 137所示之腦源性神經營養因子(BDNF)的修飾的訊息胜肽，且該蛋白質係選自由下列所組成之群組：細胞激素、生長因子，以及激素； ii) 與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中與該蛋白質同源的該修飾的訊息胜肽與該蛋白質係選自由下列所組成之群組：如SEQ ID NO: 122所示之類胰島素生長因子1 (IGF1)的修飾的訊息胜肽與如SEQ ID NO: 188所示之IGF1、如SEQ ID NO: 147所示之胰島素(INS)的修飾的訊息胜肽與如SEQ ID NO: 185所示之胰島素(INS)，如SEQ ID NO: 152所示之紅血球生成素(EPO)的修飾的訊息胜肽與如SEQ ID NO: 184所示之EPO、如SEQ ID NO: 166所示之介白素-4 (IL-4)的修飾的訊息胜肽與如SEQ ID NO: 186所示之IL-4、如SEQ ID NO: 174所示之介白素-10 (IL-10)的修飾的訊息胜肽與SEQ ID NO: 187所示之IL-10； iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列為如SEQ ID NO: 117所示之升糖素受體(GL-R)的編碼序列，且該蛋白質係選自由下列所組成之群組：細胞激素、生長因子，以及激素，較佳為生長因子； iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中該修飾的自然存在的胺基酸序列為如SEQ ID NO: 142所示之類胰島素生長因子1 (IGF1)的修飾的原胜肽，且該蛋白質係選自由下列所組成之群組：細胞激素、生長因子，以及激素，較佳為生長因子；以及 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中該修飾的自然存在的胺基酸序列為如SEQ ID NO: 189所示之腸型鹼性磷酸酶(ALPI)的修飾的原胜肽，且該蛋白質係選自由下列所組成之群組：細胞激素、生長因子，以及激素，較佳為生長因子。

於本發明之一較佳具體實施例中，該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組： i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組：如SEQ ID NO: 30所示之腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽、如SEQ ID NO: 102所示之神經滋養素-3 (NTF-3)的訊息胜肽、如SEQ ID NO: 87所示之纖維母細胞生長因子5 (FGF5)的訊息胜肽、如SEQ ID NO: 97所示之類胰島素生長因子結合蛋白5 (IBP5)的訊息胜肽、如SEQ ID NO: 107所示之前列腺與睾丸表現蛋白2 (PATE2)的訊息胜肽、如SEQ ID NO: 112所示之細胞外超氧化物歧化酶(SOD3)的訊息胜肽，以及如SEQ ID NO: 92所示之補體因子H相關蛋白2 (FHR2)的訊息胜肽，且該蛋白質係選自由下列所組成之群組：SEQ ID NO: 188所示之IGF1、如SEQ ID NO: 185所示之胰島素(INS)、如SEQ ID NO: 184所示之EPO、如SEQ ID NO: 186所示之IL-4，以及如SEQ ID NO: 187所示之IL-10； i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中與該蛋白質異源的該修飾的訊息胜肽係選自由下列所組成之群組：如SEQ ID NO: 132所示之C-X-C模體趨化因子配體12 (CXCL12)的修飾的訊息胜肽、如SEQ ID NO: 127所示之類胰島素生長因子2 (IGF2)的修飾的訊息胜肽、如SEQ ID NO: 147所示之胰島素(INS)的修飾的訊息胜肽，以及如SEQ ID NO: 137所示之腦源性神經營養因子(BDNF)的修飾的訊息胜肽，且該蛋白質為如SEQ ID NO: 188所示之類胰島素生長因子1 (IGF1)； ii) 與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中與該蛋白質同源的該修飾的訊息胜肽與該蛋白質係選自由下列所組成之群組：如SEQ ID NO: 122所示之類胰島素生長因子1 (IGF1)的修飾的訊息胜肽與如SEQ ID NO: 188所示之IGF1、如SEQ ID NO: 147所示之胰島素(INS)的修飾的訊息胜肽與如SEQ ID NO: 185所示之胰島素(INS)，如SEQ ID NO: 152所示之紅血球生成素(EPO)的修飾的訊息胜肽與如SEQ ID NO: 184所示之EPO、如SEQ ID NO: 166所示之介白素-4 (IL-4)的修飾的訊息胜肽與如SEQ ID NO: 186所示之IL-4、如SEQ ID NO: 174所示之介白素-10 (IL-10)的修飾的訊息胜肽與SEQ ID NO: 187所示之IL-10； iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列為如SEQ ID NO: 117所示之升糖素受體(GL-R)的編碼序列，且該蛋白質為如SEQ ID NO: 188所示之類胰島素生長因子1 (IGF1)； iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中該修飾的自然存在的胺基酸序列為如SEQ ID NO: 142所示之類胰島素生長因子1 (IGF1)的修飾的原胜肽，且該蛋白質為如SEQ ID NO: 188所示之類胰島素生長因子1 (IGF1)，以及 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中該修飾的自然存在的胺基酸序列為如SEQ ID NO: 189所示之腸型鹼性磷酸酶(ALPI)的修飾的原胜肽，且該蛋白質為如SEQ ID NO: 188所示之類胰島素生長因子1 (IGF1)。

於本發明之一特別較佳具體實施例中，包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列的該mRNA係選自由下列所組成之群組：如SEQ ID NO: 8所示之mRNA序列，如SEQ ID NO: 105所示之mRNA序列，如SEQ ID NO: 90所示之mRNA序列，如SEQ ID NO: 100所示之mRNA序列，如SEQ ID NO: 110所示之mRNA序列，如SEQ ID NO: 115所示之mRNA序列，如SEQ ID NO: 95所示之mRNA序列，如SEQ ID NO: 135所示之mRNA序列，如SEQ ID NO: 130所示之mRNA序列，如SEQ ID NO: 150所示之mRNA序列，如SEQ ID NO: 140所示之mRNA序列，如SEQ ID NO: 125所示之mRNA序列，如SEQ ID NO: 161所示之mRNA序列，如SEQ ID NO: 155所示之mRNA序列，如SEQ ID NO: 169所示之mRNA序列，如SEQ ID NO: 177所示之mRNA序列，如SEQ ID NO: 120所示之mRNA序列，如SEQ ID NO: 145所示之mRNA序列，以及如SEQ ID NO: 192所示之mRNA序列。

於另一方面，本發明提供了一種mRNA，其包含編碼 i) 一蛋白質；以及 ii) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽為腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽，且其中該蛋白質不為一氧化還原酶，特別是包含編碼以下核酸序列的一mRNA i) 一蛋白質；以及 ii) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽為腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽，且其中該蛋白質係選自由下列所組成之群組：羧肽酶；細胞激素；胞外配體與轉運蛋白；胞外基質蛋白；葡萄糖苷酶；醣基轉移酶；生長因子；生長因子結合蛋白；肝素結合蛋白；激素；水解酶；免疫球蛋白；異構酶；激酶；裂解酶；金屬酶抑制劑；金屬蛋白酶；乳蛋白；神經活性蛋白；蛋白酶；蛋白酶抑制劑；蛋白質去磷酸酶；酯酶；轉移酶；以及血管活性蛋白。

於本發明之一具體實施例中，該蛋白質為一治療性蛋白質。於本發明之一較佳具體實施例中，該蛋白質為人類來源的，亦即為一人類蛋白質。於本發明之另一較佳具體實施例中，該蛋白質係選自由下列所組成之群組：羧肽酶；細胞激素；胞外配體與轉運蛋白；胞外基質蛋白；葡萄糖苷酶；醣基轉移酶；生長因子；生長因子結合蛋白；肝素結合蛋白；激素；水解酶；免疫球蛋白；異構酶；激酶；裂解酶；金屬酶抑制劑；金屬蛋白酶；乳蛋白；神經活性蛋白；蛋白酶；蛋白酶抑制劑；蛋白質去磷酸酶；酯酶；轉移酶；以及血管活性蛋白，全部皆源自人類。於本發明之一更佳的具體實施例中，本發明之蛋白質係選自由下列所組成之群組：人類羧肽酶；人類細胞激素；人類胞外配體與轉運蛋白；人類胞外基質蛋白；人類葡萄糖苷酶；人類醣基轉移酶；人類生長因子；人類生長因子結合蛋白；人類肝素結合蛋白；人類激素；人類水解酶；人類免疫球蛋白；人類異構酶；人類激酶；人類裂解酶；人類金屬酶抑制劑；人類金屬蛋白酶；人類乳蛋白；人類神經活性蛋白；人類蛋白酶；人類蛋白酶抑制劑；人類蛋白質去磷酸酶；人類酯酶；人類轉移酶；以及人類血管活性蛋白。

於一具體實施例中，該蛋白質係選自由下列所組成之群組：羧肽酶，其中該羧肽酶係選自由下列所組成之群組：ACE、ACE2、CNDP1、CPA1、CPA2、CPA4、CPA5、CPA6、CPB1、CPB2、CPE、CPN1、CPQ、CPXM1、CPZ，以及SCPEP1；細胞激素，其中該細胞激素係選自由下列所組成之群組：BMP1、BMP10、BMP15、BMP2、BMP3、BMP4、BMP5、BMP6、BMP7、BMP8A、BMP8B、C1QTNF4、CCL1、CCL11、CCL13、CCL14、CCL15、CCL16、CCL17、CCL18、CCL19、CCL2、CCL21、CCL22、CCL23、CCL24、CCL25、CCL26、CCL27、CCL28、CCL3、CCL3L1、CCL3L3、CCL4、CCL4L、CCL4L2、CCL5、CCL7、CCL8、CD40LG、CER1、CKLF、CLCF1、CNTF、CSF1、CSF2、CSF3、CTF1、CX3CL1、CXCL1、CXCL10、CXCL11、CXCL12、CXCL13、CXCL14、CXCL16、CXCL17、CXCL2、CXCL3、CXCL5、CXCL8、CXCL9、DKK1、DKK2、DKK3、DKK4、EDA、EBI3、FAM3B、FAM3C、FASLG、FLT3LG、GDF1、GDF10、GDF11、GDF15、GDF2、GDF3、GDF5、GDF6、GDF7、GDF9、GPI、GREM1、GREM2、GRN、IFNA1、IFNA13、IFNA10、IFNA14、IFNA16、IFNA17、IFNA2、IFNA21、IFNA4、IFNA5、IFNA6、IFNA7、IFNA8、IFNB1、IFNE、IFNG、IFNK、IFNL1、IFNL2、IFNL3、IFNL4、IFNW1、IL10、IL11、IL12A、IL12B、IL13、IL15、IL16、IL17A、IL17B、IL17C、IL17D、IL17F、IL18、IL19、IL1A、IL1B、IL1F10、IL2、IL20、IL21、IL22、IL23A、IL24、IL25、IL26、IL27、IL3、IL31、IL32、IL33、IL34、IL36A、IL36B、IL36G、IL36RN、IL37、IL4、IL5、IL6、IL7、IL9、LEFTY1、LEFTY2、LIF、LTA、MIF、MSTN、NAMPT、NODAL、OSM、PF4、PF4V1、SCGB3A1、SECTM1、SLURP1、SPP1、THNSL2、THPO、TNF、TNFSF10、TNFSF11、TNFSF12、TNFSF13、TNFSF13B、TNFSF14、TNFSF15、TSLP、VSTM1、WNT1、WNT10A、WNT10B、WNT11、WNT16、WNT2、WNT2B、WNT3、WNT3A、WNT4、WNT5A、WNT5B、WNT6、WNT7A、WNT7B、WNT8A、WNT8B、WNT9A、WNT9B、XCL1，以及XCL2；胞外配體與轉運蛋白，其中該胞外配體與轉運蛋白係選自由下列所組成之群組：APCS、CHI3L1、CHI3L2、CLEC3B、DMBT1、DMKN、EDDM3A、EDDM3B、EFNA4、EMC10、ENAM、EPYC、ERVH48-1、F13B、FCN1、FCN2、GLDN、GPLD1、HEG1、ITFG1、KAZALD1、KCP、LACRT、LEG1、METRN、NOTCH2NL、NPNT、OLFM1、OLFML3、PRB2、PSAP、PSAPL1、PSG1、PSG6、PSG9、PTX3、PTX4、RBP4、RNASE10、RNASE12、RNASE13、RNASE9、RSPRY1、RTBDN、S100A12、S100A13、S100A7、S100A8、SAA2、SAA4、SCG1、SCG2、SCG3、SCGB1C1、SCGB1C2、SCGB1D1、SCGB1D2、SCGB1D4、SCGB2B2、SCGB3A2、SCGN、SCRG1、SCUBE1、SCUBE2、SCUBE3、SDCBP、SELENOP、SFTA2、SFTA3、SFTPA1、SFTPA2、SFTPC、SFTPD、SHBG、SLURP2、SMOC1、SMOC2、SMR3A、SMR3B、SNCA、SPATA20、SPATA6、SOGA1、SPARC、SPARCL1、SPATA20、SPATA6、SRPX2、SSC4D、STX1A、SUSD4、SVBP、TCN1、TCN2、TCTN1、TF、TULP3、TFF2、TFF3、THSD7A、TINAG、TINAGL1、TMEFF2、TMEM25，以及VWC2L；胞外基質蛋白，其中該胞外基質蛋白係選自由下列所組成之群組：ABI3BP、AGRN、CCBE1、CHL1、COL15A1、COL19A1、COLEC11、DMBT1、DRAXIN、EDIL3、ELN、EMID1、EMILIN1、EMILIN2、EMILIN3、EPDR1、FBLN1、FBLN2、FBLN5、FLRT1、FLRT2、FLRT3、FREM1、GLDN、IBSP、KERA、KIAA0100、KIRREL3、KRT10、LAMB2、MGP、RPTN、SBSPON、SDC1、SDC4、SEMA3A、SEMA3B、SEMA3C、SEMA3D、SEMA3E、SEMA3F、SEMA3G、SIGLEC1、SIGLEC10、SIGLEC6、SLIT1、SLIT2、SLIT3、SLITRK1、SNED1、SNORC、SPACA3、SPACA7、SPON1、SPON2、STATH、SVEP1、TECTA、TECTB、TNC、TNN、TNR，以及TNXB；葡糖苷酶，其中該葡糖苷酶係選自由下列所組成之群組：AMY1A、AMY1B、AMY1C、AMY2A、AMY2B、CEMIP、CHIA、CHIT1、FUCA2、GLB1L、GLB1L2、HPSE、HYAL1、HYAL3、KL、LYG1、LYG2、LYZL1、LYZL2、MAN2B2、SMPD1、SMPDL3B、SPACA5，以及SPACA5B；醣基轉移酶，其中該醣基轉移酶係選自由下列所組成之群組：ART5、B4GALT1、EXTL2、GALNT1、GALNT2、GLT1D1、MGAT4A、ST3GAL1、ST3GAL2、ST3GAL3、ST3GAL4、ST6GAL1，以及XYLT1；生長因子，其中該生長因子係選自由下列所組成之群組：AMH、ARTN、BTC、CDNF、CFC1、CFC1B、CHRDL1、CHRDL2、CLEC11A、CNMD、EFEMP1、EGF、EGFL6、EGFL7、EGFL8、EPGN、EREG、EYS、FGF1、FGF10、FGF16、FGF17、FGF18、FGF19、FGF2、FGF20、FGF21、FGF22、FGF23、FGF3、FGF4、FGF5、FGF6、FGF7、FGF8、FGF9、FRZB、GDNF、GFER、GKN1、HBEGF、HGF、IGF1、IGF2、INHA、INHBA、INHBB、INHBC、INHBE、INS、KITLG、MANF、MDK、MIA、NGF、NOV、NRG1、NRG2、NRG3、NRG4、NRTN、NTF3、NTF4、OGN、PDGFA、PDGFB、PDGFC、PDGFD、PGF、PROK1、PSPN、PTN、SDF1、SDF2、SFRP1、SFRP2、SFRP3、SFRP4、SFRP5、TDGF1、TFF1、TGFA、TGFB1、TGFB2、TGFB3、THBS4、TIMP1、VEGFA、VEGFB、VEGFC、VEGFD，以及WISP3；生長因子結合蛋白，其中該生長因子結合蛋白係選自由下列所組成之群組：CHRD、CYR61、ESM1、FGFBP1、FGFBP2、FGFBP3、HTRA1、GHBP、IGFALS、IGFBP1、IGFBP2、IGFBP3、IGFBP4、IGFBP5、IGFBP6、IGFBP7、LTBP1、LTBP2、LTBP3、LTBP4、SOSTDC1、NOG、TWSG1，以及WIF1；肝素結合蛋白，其中該肝素結合蛋白係選自由下列所組成之群組：ADA2、ADAMTSL5、ANGPTL3、APOB、APOE、APOH、COL5A1、COMP、CTGF、FBLN7、FN1、FSTL1、HRG、LAMC2、LIPC、LIPG、LIPH、LIPI、LPL、PCOLCE2、POSTN、RSPO1、RSPO2、RSPO3、RSPO4、SAA1、SLIT2、SOST、THBS1，以及VTN；激素，其中該激素係選自由下列所組成之群組：ADCYAP1、ADIPOQ、ADM、ADM2、ANGPTL8、APELA、APLN、AVP、C1QTNF12、C1QTNF9、CALCA、CALCB、CCK、CGA、CGB1、CGB2、CGB3、CGB5、CGB8、COPA、CORT、CRH、CSH1、CSH2、CSHL1、ENHO、EPO、ERFE、FBN1、FNDC5、FSHB、GAL、GAST、GCG、GH、GH1、GH2、GHRH、GHRL、GIP、GNRH1、GNRH2、GPHA2、GPHB5、IAPP、INS、INSL3、INSL4、INSL5、INSL6、LHB、METRNL、MLN、NPPA、NPPB、NPPC、OSTN、OXT、PMCH、PPY、PRL、PRLH、PTH、PTHLH、PYY、RETN、RETNLB、RLN1、RLN2、RLN3、SCT、SPX、SST、STC1、STC2、TG、TOR2A、TRH、TSHB、TTR、UCN、UCN2、UCN3、UTS2、UTS2B，以及VIP；水解酶，其中該水解酶係選自由下列所組成之群組：AADACL2、ABHD15、ACP7、ACPP、ADA2、ADAMTSL1、AOAH、ARSF、ARSI、ARSJ、ARSK、BTD、CHI3L2、ENPP1、ENPP2、ENPP3、ENPP5、ENTPD5、ENTPD6、GBP1、GGH、GPLD1、HPSE、LIPC、LIPF、LIPG、LIPH、LIPI、LIPK、LIPM、LIPN、LPL、PGLYRP2、PLA1A、PLA2G10、PLA2G12A、PLA2G1B、PLA2G2A、PLA2G2D、PLA2G2E、PLA2G2F、PLA2G3、PLA2G5、PLA2G7、PNLIP、PNLIPRP2、PNLIPRP3、PON1、PON3、PPT1、SMPDL3A、THEM6、THSD1，以及THSD4；免疫球蛋白，其中該免疫球蛋白係選自由下列所組成之群組：IGSF10、IGKV1-12、IGKV1-16、IGKV1-33、IGKV1-6、IGKV1D-12、IGKV1D-39、IGKV1D-8、IGKV2-30、IGKV2D-30、IGKV3-11、IGKV3D-20、IGKV5-2、IGLC1、IGLC2，以及IGLC3；異構酶，其中該異構酶係選自由下列所組成之群組：NAXE、PPIA，以及PTGDS；激酶，其中該激酶係選自由下列所組成之群組：ADCK1、ADPGK、FAM20C、ICOS，以及PKDCC；裂解酶，其中該裂解酶係選自由下列所組成之群組：PM20D1、PAM，以及CA6；金屬酶抑制劑，其中該金屬酶抑制劑係選自由下列所組成之群組：FETUB、SPOCK3、TIMP2、TIMP3、TIMP4、WFIKKN1，以及WFIKKN2；金屬蛋白酶，其中該金屬蛋白酶係選自由下列所組成之群組：ADAM12、ADAM28、ADAM9、ADAMDEC1、ADAMTS1、ADAMTS10、ADAMTS12、ADAMTS13、ADAMTS14、ADAMTS15、ADAMTS16、ADAMTS17、ADAMTS18、ADAMTS19、ADAMTS2、ADAMTS20、ADAMTS3、ADAMTS4、ADAMTS5、ADAMTS6、ADAMTS7、ADAMTS8、ADAMTS9、CLCA1、CLCA2、CLCA4、IDE、MEP1B、MMEL1、MMP1、MMP10、MMP11、MMP12、MMP13、MMP16、MMP17、MMP19、MMP2、MMP20、MMP21、MMP24、MMP25、MMP26、MMP28、MMP3、MMP7、MMP8、MMP9、PAPPA、PAPPA2、TLL1，以及TLL2；乳蛋白，其中該乳蛋白係選自由下列所組成之群組：CSN1S1、CSN2、CSN3，以及LALBA；神經活性蛋白，其中該神經活性蛋白係選自由下列所組成之群組：CARTPT、NMS、NMU、NPB、NPFF、NPS、NPVF、NPW、NPY、PCSK1N、PDYN、PENK、PNOC、POMC、PROK2、PTH2、PYY2、PYY3、QRFP、TAC1，以及TAC3；蛋白酶，其中該蛋白酶係選自由下列所組成之群組：ADAMTS6、C1R、C1RL、C2、CASP4、CELA1、CELA2A、CELA2B、CFB、CFD、CFI、CMA1、CORIN、CTRB1、CTRB2、CTSB、CTSD、DHH、F10、F11、F12、F2、F3、F7、F8、F9、FAP、FURIN、GZMA、GZMK、GZMM、HABP2、HGFAC、HTRA3、HTRA4、IHH、KLK10、KLK11、KLK12、KLK13、KLK14、KLK15、KLK3、KLK4、KLK5、KLK6、KLK7、KLK8、KLK9、KLKB1、MASP1、MASP2、MST1L、NAPSA、OVCH1、OVCH2、PCSK2、PCSK5、PCSK6、PCSK9、PGA3、PGA4、PGA5、PGC、PLAT、PLAU、PLG、PROC、PRSS1、PRSS12、PRSS2、PRSS22、PRSS23、PRSS27、PRSS29P、PRSS3、PRSS33、PRSS36、PRSS38、PRSS3P2、PRSS42、PRSS44、PRSS47、PRSS48、PRSS53、PRSS57、PRSS58、PRSS8、PRTN3、RELN、REN、TMPRSS11D、TMPRSS11E、TMPRSS2、TPSAB1、TPSB2，以及TPSD1；蛋白酶抑制劑，其中該蛋白酶抑制劑係選自由下列所組成之群組：A2M、A2ML1、AMBP、ANOS1、COL28A1、COL6A3、COL7A1、CPAMD8、CST1、CST2、CST3、CST4、CST5、CST6、CST7、CST8、CST9、CST9L、CST9LP1、CSTL1、EPPIN、GPC3、HMSD、ITIH1、ITIH2、ITIH3、ITIH4、ITIH5、ITIH6、KNG1、OPRPN、OVOS1、OVOS2、PAPLN、PI15、PI16、PI3、PZP、R3HDML、SERPINA1、SERPINA10、SERPINA11、SERPINA12、SERPINA13P、SERPINA3、SERPINA4、SERPINA5、SERPINA7、SERPINA9、SERPINB2、SERPINB5、SERPINC1、SERPINE1、SERPINE2、SERPINE3、SERPINF2、SERPING1、SERPINI1、SERPINI2、SPINK1、SPINK13、SPINK14、SPINK2、SPINK4、SPINK5、SPINK6、SPINK7、SPINK8、SPINK9、SPINT1、SPINT3、SPINT4、SPOCK1、SPOCK2、SPP2、SSPO、TFPI、TFPI2、WFDC1、WFDC10A、WFDC13、WFDC2、WFDC3、WFDC5、WFDC6，以及WFDC8；蛋白磷酸酶，其中該蛋白磷酸酶係選自由下列所組成之群組：ACP7、ACPP、PTEN，以及PTPRZ1；酯酶，其中該酯酶係選自由下列所組成之群組：BCHE、CEL、CES4A、CES5A、NOTUM，以及SIAE；轉移酶，其中該轉移酶係選自由下列所組成之群組：METTL24、FKRP、CHSY1、CHST9，以及B3GAT1；以及血管活性蛋白，其中該血管活性蛋白係選自由下列所組成之群組：AGGF1、AGT、ANGPT1、ANGPT2、ANGPTL4、ANGPTL6、EDN1、EDN2、EDN3，以及NTS。

於一較佳具體實施例中，該蛋白質係選自由下列所組成之群組：細胞激素、生長因子、生長因子結合蛋白、肝素結合蛋白、激素、神經活性蛋白，以及血管活性蛋白。

於一更佳的具體實施例中，該蛋白質係選自由下列所組成之群組：細胞激素，其中該細胞激素係選自由下列所組成之群組：BMP1、BMP10、BMP15、BMP2、BMP3、BMP4、BMP5、BMP6、BMP7、BMP8A、BMP8B、C1QTNF4、CCL1、CCL11、CCL13、CCL14、CCL15、CCL16、CCL17、CCL18、CCL19、CCL2、CCL21、CCL22、CCL23、CCL24、CCL25、CCL26、CCL27、CCL28、CCL3、CCL3L1、CCL3L3、CCL4、CCL4L、CCL4L2、CCL5、CCL7、CCL8、CD40LG、CER1、CKLF、CLCF1、CNTF、CSF1、CSF2、CSF3、CTF1、CX3CL1、CXCL1、CXCL10、CXCL11、CXCL12、CXCL13、CXCL14、CXCL16、CXCL17、CXCL2、CXCL3、CXCL5、CXCL8、CXCL9、DKK1、DKK2、DKK3、DKK4、EDA、EBI3、FAM3B、FAM3C、FASLG、FLT3LG、GDF1、GDF10、GDF11、GDF15、GDF2、GDF3、GDF5、GDF6、GDF7、GDF9、GPI、GREM1、GREM2、GRN、IFNA1、IFNA13、IFNA10、IFNA14、IFNA16、IFNA17、IFNA2、IFNA21、IFNA4、IFNA5、IFNA6、IFNA7、IFNA8、IFNB1、IFNE、IFNG、IFNK、IFNL1、IFNL2、IFNL3、IFNL4、IFNW1、IL10、IL11、IL12A、IL12B、IL13、IL15、IL16、IL17A、IL17B、IL17C、IL17D、IL17F、IL18、IL19、IL1A、IL1B、IL1F10、IL2、IL20、IL21、IL22、IL23A、IL24、IL25、IL26、IL27、IL3、IL31、IL32、IL33、IL34、IL36A、IL36B、IL36G、IL36RN、IL37、IL4、IL5、IL6、IL7、IL9、LEFTY1、LEFTY2、LIF、LTA、MIF、MSTN、NAMPT、NODAL、OSM、PF4、PF4V1、SCGB3A1、SECTM1、SLURP1、SPP1、THNSL2、THPO、TNF、TNFSF10、TNFSF11、TNFSF12、TNFSF13、TNFSF13B、TNFSF14、TNFSF15、TSLP、VSTM1、WNT1、WNT10A、WNT10B、WNT11、WNT16、WNT2、WNT2B、WNT3、WNT3A、WNT4、WNT5A、WNT5B、WNT6、WNT7A、WNT7B、WNT8A、WNT8B、WNT9A、WNT9B、XCL1，以及XCL2；生長因子，其中該生長因子係選自由下列所組成之群組：AMH、ARTN、BTC、CDNF、CFC1、CFC1B、CHRDL1、CHRDL2、CLEC11A、CNMD、EFEMP1、EGF、EGFL6、EGFL7、EGFL8、EPGN、EREG、EYS、FGF1、FGF10、FGF16、FGF17、FGF18、FGF19、FGF2、FGF20、FGF21、FGF22、FGF23、FGF3、FGF4、FGF5、FGF6、FGF7、FGF8、FGF9、FRZB、GDNF、GFER、GKN1、HBEGF、HGF、IGF1、IGF2、INHA、INHBA、INHBB、INHBC、INHBE、INS、KITLG、MANF、MDK、MIA、NGF、NOV、NRG1、NRG2、NRG3、NRG4、NRTN、NTF3、NTF4、OGN、PDGFA、PDGFB、PDGFC、PDGFD、PGF、PROK1、PSPN、PTN、SDF1、SDF2、SFRP1、SFRP2、SFRP3、SFRP4、SFRP5、TDGF1、TFF1、TGFA、TGFB1、TGFB2、TGFB3、THBS4、TIMP1、VEGFA、VEGFB、VEGFC、VEGFD，以及WISP3；生長因子結合蛋白，其中該生長因子結合蛋白係選自由下列所組成之群組：CHRD、CYR61、ESM1、FGFBP1、FGFBP2、FGFBP3、HTRA1、GHBP、IGFALS、IGFBP1、IGFBP2、IGFBP3、IGFBP4、IGFBP5、IGFBP6、IGFBP7、LTBP1、LTBP2、LTBP3、LTBP4、SOSTDC1、NOG、TWSG1，以及WIF1；肝素結合蛋白，其中該肝素結合蛋白係選自由下列所組成之群組：ADA2、ADAMTSL5、ANGPTL3、APOB、APOE、APOH、COL5A1、COMP、CTGF、FBLN7、FN1、FSTL1、HRG、LAMC2、LIPC、LIPG、LIPH、LIPI、LPL、PCOLCE2、POSTN、RSPO1、RSPO2、RSPO3、RSPO4、SAA1、SLIT2、SOST、THBS1，以及VTN；激素，其中該激素係選自由下列所組成之群組：ADCYAP1、ADIPOQ、ADM、ADM2、ANGPTL8、APELA、APLN、AVP、C1QTNF12、C1QTNF9、CALCA、CALCB、CCK、CGA、CGB1、CGB2、CGB3、CGB5、CGB8、COPA、CORT、CRH、CSH1、CSH2、CSHL1、ENHO、EPO、ERFE、FBN1、FNDC5、FSHB、GAL、GAST、GCG、GH、GH1、GH2、GHRH、GHRL、GIP、GNRH1、GNRH2、GPHA2、GPHB5、IAPP、INS、INSL3、INSL4、INSL5、INSL6、LHB、METRNL、MLN、NPPA、NPPB、NPPC、OSTN、OXT、PMCH、PPY、PRL、PRLH、PTH、PTHLH、PYY、RETN、RETNLB、RLN1、RLN2、RLN3、SCT、SPX、SST、STC1、STC2、TG、TOR2A、TRH、TSHB、TTR、UCN、UCN2、UCN3、UTS2、UTS2B，以及VIP；神經活性蛋白，其中該神經活性蛋白係選自由下列所組成之群組：CARTPT、NMS、NMU、NPB、NPFF、NPS、NPVF、NPW、NPY、PCSK1N、PDYN、PENK、PNOC、POMC、PROK2、PTH2、PYY2、PYY3、QRFP、TAC1，以及TAC3；以及血管活性蛋白，其中該血管活性蛋白係選自由下列所組成之群組：AGGF1、AGT、ANGPT1、ANGPT2、ANGPTL4、ANGPTL6、EDN1、EDN2、EDN3，以及NTS。

於一甚至更佳的具體實施例中，該蛋白質係選自由下列所組成之群組：細胞激素、生長因子、激素，以及神經活性蛋白。

於本發明之一特定的具體實施例中，該蛋白質係選自由下列所組成之群組：細胞激素，其中該細胞激素係選自由下列所組成之群組：BMP1、BMP10、BMP15、BMP2、BMP3、BMP4、BMP5、BMP6、BMP7、BMP8A、BMP8B、C1QTNF4、CCL1、CCL11、CCL13、CCL14、CCL15、CCL16、CCL17、CCL18、CCL19、CCL2、CCL21、CCL22、CCL23、CCL24、CCL25、CCL26、CCL27、CCL28、CCL3、CCL3L1、CCL3L3、CCL4、CCL4L、CCL4L2、CCL5、CCL7、CCL8、CD40LG、CER1、CKLF、CLCF1、CNTF、CSF1、CSF2、CSF3、CTF1、CX3CL1、CXCL1、CXCL10、CXCL11、CXCL12、CXCL13、CXCL14、CXCL16、CXCL17、CXCL2、CXCL3、CXCL5、CXCL8、CXCL9、DKK1、DKK2、DKK3、DKK4、EDA、EBI3、FAM3B、FAM3C、FASLG、FLT3LG、GDF1、GDF10、GDF11、GDF15、GDF2、GDF3、GDF5、GDF6、GDF7、GDF9、GPI、GREM1、GREM2、GRN、IFNA1、IFNA13、IFNA10、IFNA14、IFNA16、IFNA17、IFNA2、IFNA21、IFNA4、IFNA5、IFNA6、IFNA7、IFNA8、IFNB1、IFNE、IFNG、IFNK、IFNL1、IFNL2、IFNL3、IFNL4、IFNW1、IL10、IL11、IL12A、IL12B、IL13、IL15、IL16、IL17A、IL17B、IL17C、IL17D、IL17F、IL18、IL19、IL1A、IL1B、IL1F10、IL2、IL20、IL21、IL22、IL23A、IL24、IL25、IL26、IL27、IL3、IL31、IL32、IL33、IL34、IL36A、IL36B、IL36G、IL36RN、IL37、IL4、IL5、IL6、IL7、IL9、LEFTY1、LEFTY2、LIF、LTA、MIF、MSTN、NAMPT、NODAL、OSM、PF4、PF4V1、SCGB3A1、SECTM1、SLURP1、SPP1、THNSL2、THPO、TNF、TNFSF10、TNFSF11、TNFSF12、TNFSF13、TNFSF13B、TNFSF14、TNFSF15、TSLP、VSTM1、WNT1、WNT10A、WNT10B、WNT11、WNT16、WNT2、WNT2B、WNT3、WNT3A、WNT4、WNT5A、WNT5B、WNT6、WNT7A、WNT7B、WNT8A、WNT8B、WNT9A、WNT9B、XCL1，以及XCL2；生長因子，其中該生長因子係選自由下列所組成之群組：AMH、ARTN、BTC、CDNF、CFC1、CFC1B、CHRDL1、CHRDL2、CLEC11A、CNMD、EFEMP1、EGF、EGFL6、EGFL7、EGFL8、EPGN、EREG、EYS、FGF1、FGF10、FGF16、FGF17、FGF18、FGF19、FGF2、FGF20、FGF21、FGF22、FGF23、FGF3、FGF4、FGF5、FGF6、FGF7、FGF8、FGF9、FRZB、GDNF、GFER、GKN1、HBEGF、HGF、IGF1、IGF2、INHA、INHBA、INHBB、INHBC、INHBE、INS、KITLG、MANF、MDK、MIA、NGF、NOV、NRG1、NRG2、NRG3、NRG4、NRTN、NTF3、NTF4、OGN、PDGFA、PDGFB、PDGFC、PDGFD、PGF、PROK1、PSPN、PTN、SDF1、SDF2、SFRP1、SFRP2、SFRP3、SFRP4、SFRP5、TDGF1、TFF1、TGFA、TGFB1、TGFB2、TGFB3、THBS4、TIMP1、VEGFA、VEGFB、VEGFC、VEGFD，以及WISP3；激素，其中該激素係選自由下列所組成之群組：ADCYAP1、ADIPOQ、ADM、ADM2、ANGPTL8、APELA、APLN、AVP、C1QTNF12、C1QTNF9、CALCA、CALCB、CCK、CGA、CGB1、CGB2、CGB3、CGB5、CGB8、COPA、CORT、CRH、CSH1、CSH2、CSHL1、ENHO、EPO、ERFE、FBN1、FNDC5、FSHB、GAL、GAST、GCG、GH、GH1、GH2、GHRH、GHRL、GIP、GNRH1、GNRH2、GPHA2、GPHB5、IAPP、INS、INSL3、INSL4、INSL5、INSL6、LHB、METRNL、MLN、NPPA、NPPB、NPPC、OSTN、OXT、PMCH、PPY、PRL、PRLH、PTH、PTHLH、PYY、RETN、RETNLB、RLN1、RLN2、RLN3、SCT、SPX、SST、STC1、STC2、TG、TOR2A、TRH、TSHB、TTR、UCN、UCN2、UCN3、UTS2、UTS2B，以及VIP；以及神經活性蛋白，其中該神經活性蛋白係選自由下列所組成之群組：CARTPT、NMS、NMU、NPB、NPFF、NPS、NPVF、NPW、NPY、PCSK1N、PDYN、PENK、PNOC、POMC、PROK2、PTH2、PYY2、PYY3、QRFP、TAC1，以及TAC3。

於本發明之另一特定的具體實施例中，該蛋白質係選自由下列所組成之群組：細胞激素，其中該細胞激素係選自由下列所組成之群組：BMP-2、BMP-4、CNTF、MSTN、IFNG、IL6、SPP1；生長因子，其中該生長因子係選自由下列所組成之群組：EGF、FGF1、GDNF、IGF1、IGF2、NTF3、TGFB1；激素，其中該激素係選自由下列所組成之群組：EPO、FBN1、GH、GHRH、OSTN、UCN；以及神經活性蛋白，其中該神經活性蛋白係選自由下列所組成之群組：NPFF、NPY、PNOC、POMC。

於本發明之另一特定的具體實施例中，該蛋白質係選自由下列所組成之群組：細胞激素，其中該細胞激素係選自由下列所組成之群組：BMP-2、BMP-4、CNTF、MSTN、IFNG、IL4、IL6、IL10、SPP1；生長因子，其中該生長因子係選自由下列所組成之群組：EGF、FGF1、GDNF、IGF1、IGF2、NTF3、TGFB1；激素，其中該激素係選自由下列所組成之群組：EPO、FBN1、GH、GHRH、OSTN、UCN、INS；以及神經活性蛋白，其中該神經活性蛋白係選自由下列所組成之群組：NPFF、NPY、PNOC、POMC。

於本發明之一更具體的具體實施例中，該蛋白質係選自由生長因子所組成之群組。於本發明之一甚至更具體的具體實施例中，該蛋白質係選自由生長因子所組成之群組，其中該生長因子係選自由下列所組成之群組：AMH、ARTN、BDNF、BTC、CDNF、CFC1、CFC1B、CHRDL1、CHRDL2、CLEC11A、CNMD、EFEMP1、EGF、EGFL6、EGFL7、EGFL8、EPGN、EREG、EYS、FGF1、FGF10、FGF16、FGF17、FGF18、FGF19、FGF2、FGF20、FGF21、FGF22、FGF23、FGF3、FGF4、FGF5、FGF6、FGF7、FGF8、FGF9、FRZB、GDNF、GFER、GKN1、HBEGF、HGF、IGF1、IGF2、INHA、INHBA、INHBB、INHBC、INHBE、INS、KITLG、MANF、MDK、MIA、NGF、NOV、NRG1、NRG2、NRG3、NRG4、NRTN、NTF3、NTF4、OGN、PDGFA、PDGFB、PDGFC、PDGFD、PGF、PROK1、PSPN、PTN、SDF1、SDF2、SFRP1、SFRP2、SFRP3、SFRP4、SFRP5、TDGF1、TFF1、TGFA、TGFB1、TGFB2、TGFB3、THBS4、TIMP1、VEGFA、VEGFB、VEGFC、VEGFD，以及WISP3。

於本發明之另一甚至更具體的具體實施例中，該蛋白質係選自由生長因子所組成之群組，其中該生長因子係選自由下列所組成之群組：EGF、FGF1、GDNF、IGF1、IGF2、NTF3、TGFB1。最特別地，該蛋白質為IGF1，較佳為人類IGF1。

於本發明之一甚至更具體的具體實施例中，該蛋白質係選自由下列所組成之群組：細胞激素、生長因子，以及激素，其中較佳地，該細胞激素係選自由下列所組成之群組：BMP-2、BMP-4、CNTF、MSTN、IFNG、IL4、IL6、IL10、SPP1；該生長因子係選自由下列所組成之群組：EGF、FGF1、GDNF、IGF1、IGF2、NTF3、TGFB1；該激素係選自由下列所組成之群組：EPO、FBN1、GH、GHRH、OSTN、UCN、INS。最特別地，該蛋白質係選自由下列所組成之群組：類胰島素生長因子1 (IGF1)、胰島素(INS)、紅血球生成素(EPO)、介白素-4 (IL-4)，以及介白素10(IL-10)。

於本發明之一具體實施例中，該mRNA為裸mRNA。於一較佳具體實施例中，該mRNA包含抗逆CAP類似物，例如m7G(5')G、m7GpppG帽蓋、一內部核醣體進入位點(internal ribosome entry site, IRES)，及/或在3'端的polyA尾巴，以便特別地改善轉譯作用。該mRNA可具有本領域技術人員已知的促進轉譯的其他區域。

於本發明之一較佳具體實施例中，該mRNA包含修飾的以及未修飾的核苷酸的組合。於更佳的具體實施例中，在這樣修飾的mRNA中，1至100%，較佳10至100%，更佳50至100%，甚至更佳90至100%，最佳100%的尿苷核苷酸被修飾。含有腺苷、鳥苷，以及胞苷的核苷酸可為未修飾的或部分修飾的，且它們較佳以未修飾的形式存在。較佳地，該mRNA中修飾的尿苷核苷酸的含量在5%至25%的範圍內。於本發明之一特別較佳具體實施例中，修飾的尿苷核苷酸為N¹ -甲基假尿苷。於本發明之更特別較佳具體實施例中，該mRNA包含修飾的以及未修飾的核苷酸的組合，其中在這樣修飾的mRNA中， 1至100%，較佳10至100%，更佳50至100%，甚至更佳90至100%，最佳100%的尿苷核苷酸為N¹ -甲基假尿苷。

於本發明之一更佳的具體實施例中，該mRNA為經密碼子優化並包含修飾的以及未修飾的核苷酸的組合之mRNA。於更佳的具體實施例中，在這樣修飾的mRNA中，1至100%，較佳10至100%，更佳50至100%，甚至更佳90至100%，最佳100%的尿苷核苷酸被修飾。含有腺苷、鳥苷，以及胞苷的核苷酸可為未修飾的或部分修飾的，且它們較佳以未修飾的形式存在。較佳地，該mRNA中修飾的尿苷核苷酸的含量在5%至25%的範圍內。於本發明之一特別較佳具體實施例中，修飾的尿苷核苷酸為N¹ -甲基假尿苷。於本發明之一更特別較佳具體實施例中，該RNA為包含修飾的以及未修飾的核苷酸的組合之mRNA，其中在這樣修飾的mRNA中1-100%，較佳10-100%，更佳50-100%，甚至更佳90-100%，最佳100%的尿苷核苷酸為N¹ -甲基假尿苷。

於本發明之一較佳具體實施例中，該mRNA包含編碼作為蛋白質的人類類胰島素生長因子1 (IGF1)的一核酸序列，更佳地，該mRNA為包含編碼作為蛋白質的人類類胰島素生長因子1 (IGF1)的一核酸序列的裸mRNA。於本發明之該較佳具體實施例中，該mRNA包含編碼成熟人類IGF-1的一核酸序列。

於本發明之一更佳的具體實施例中，該mRNA包含編碼IGF1的原胜肽，較佳為人類IGF1的原胜肽的一核酸序列，以及編碼IGF1的成熟蛋白，較佳為人類IGF1的成熟蛋白的一核酸序列，且不包含編碼IGF1的一E-胜肽的核酸序列，較佳地不包含編碼一IGF1的一人類E胜肽的核酸序列。

於本發明之另一更佳的具體實施例中，該mRNA包含編碼IGF1的原胜肽，較佳為人類IGF1的原胜肽的一核酸序列，編碼IGF1的成熟蛋白，較佳為人類IGF1的成熟蛋白的一核酸序列。較佳地，該mRNA不包含編碼IGF1的E-胜肽的一核酸序列，更佳地不包含編碼IGF1的人類E-胜肽的一核酸序列。於本發明之另一更佳的具體實施例中，該mRNA包含編碼IGF1的原胜肽，較佳為人類IGF1的原胜肽的一核酸序列，編碼IGF1的成熟蛋白，較佳為人類IGF1的成熟蛋白的一核酸序列，以及編碼腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽的一核酸序列。較佳地，該mRNA不包含編碼IGF1的一E-胜肽的一核酸序列，更佳地不包含編碼IGF1的一人類E-胜肽的一核酸序列。

於本發明之一甚至更佳的具體實施例中，該mRNA包含編碼IGF1的原胜肽(亦稱為原結構域)，較佳為具有27個胺基酸的人類IGF1的一核苷酸序列，以及編碼成熟的IGF1，較佳為具有70個胺基酸的成熟人類IGF1的一核苷酸序列，以及較佳不包含編碼IGF1的一E胜肽的一核苷酸序列，較佳不包含編碼IGF1的一人類E胜肽的一核酸序列。

於本發明之另一甚至更佳的具體實施例中，該mRNA包含編碼IGF1，較佳為具有27個胺基酸的人類IGF1的原胜肽(亦稱為原結構域)的一核苷酸序列，編碼成熟的IGF1，較佳為具有70個胺基酸的成熟的人類IGF1的一核苷酸序列，以及編碼腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽的一核酸序列。較佳地，該mRNA不包含編碼IGF1的一E-胜肽的一核苷酸序列，更佳地不包含編碼IGF1的一人類E-胜肽的一核酸序列。

於本發明之一特別較佳具體實施例中，該mRNA包含編碼具有27個胺基酸的人類IGF1的原胜肽(亦稱為原結構域)的一核酸序列，以及編碼具有70個胺基酸的成熟人類IGF1的一核苷酸序列，且較佳不包含編碼人類IGF1的一E胜肽(亦稱為E結構域)的一核苷酸序列，其中編碼具有27個胺基酸的人類IGF1的原胜肽(亦稱為原結構域)的該核苷酸序列，以及編碼具有70個胺基酸的成熟人類IGF1的該核苷酸序列以及編碼該E-胜肽的該核苷酸序列在Uniprot資料庫中編號為UniProtKB-P05019，在Genbank資料庫中分別編號為NM_000618.4、NM_001111285.2，以及NM_001111283.2。

於本發明之一甚至更特別較佳具體實施例中，該mRNA包含編碼如SEQ ID NO: 38所示之具有27個胺基酸的人類IGF1的原胜肽(亦稱為原結構域)的一核酸序列，以及編碼如SEQ ID NO: 39所示之具有70個胺基酸的成熟人類IGF1的一核苷酸序列，且較佳不包含編碼人類IGF1的一E-胜肽(亦稱為E-結構域)的一核苷酸序列。

於本發明之另一甚至更佳的具體實施例中，該mRNA包含編碼如SEQ ID NO: 38所示之具有27個胺基酸的人類IGF1的原胜肽(亦稱為原結構域)的一核酸序列，編碼如SEQ ID NO: 39所示之具有70個胺基酸的成熟人類IGF1的一核苷酸序列，以及編碼腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽的一核酸序列，較佳地，編碼如SEQ ID NO: 30所示之腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽的一核苷酸序列。較佳地，該mRNA不包含編碼人類IGF1的一E-胜肽(亦稱為E-結構域)的一核苷酸序列。

於本發明之一特別較佳具體實施例中，包含編碼人類類胰島素生長因子1 (IGF1)以及腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽的一核酸序列的該mRNA包含如SEQ ID NO: 8所示之一核酸序列。

於本發明之另一特別較佳具體實施例中，包含編碼人類類胰島素生長因子1 (IGF1)以及腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽的一核酸序列的該mRNA包含轉錄自如SEQ ID NO: 7所示之DNA序列的一核酸序列。較佳地，該核酸序列係在體外轉錄自如SEQ ID NO: 7所示之DNA序列。

於本發明之更特別較佳具體實施例中，包含編碼人類類胰島素生長因子1 (IGF1)以及腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽的一核酸序列的該mRNA包含如SEQ ID NO: 8所示之一核酸序列，該核酸序列中較佳1至100%，更佳50至100%，甚至更佳90至100%，最佳100%的尿苷核苷酸為N¹ -甲基假尿苷。

於本發明之另一更特別較佳具體實施例中，包含編碼人類類胰島素生長因子1 (IGF1)以及腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽的一核酸序列的該mRNA包含轉錄自如SEQ ID NO: 7所示之DNA序列的一核酸序列，該核酸序列中較佳1至100%，更佳50至100%，甚至更佳90至100%，最佳100%的尿苷核苷酸為N¹ -甲基假尿苷。在該具體實施例中，該核苷酸序列較佳為在體外轉錄自如SEQ ID NO: 7所示之DNA序列，而僅N¹ -甲基假尿苷-5'-三磷酸酯(N¹ -甲基偽-UTP)作為尿苷核苷酸，亦即100%的N¹ -甲基偽 -UTP用於自如SEQ ID NO: 7所示之DNA序列進行轉錄。

於本發明之一較佳具體實施例中，該腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽為人類BDNF的訊息胜肽，更佳為如SEQ ID NO: 31所示之訊息胜肽，特別是由如SEQ ID NO: 30所示之核酸序列編碼的人類BDNF的訊息胜肽。

於本發明之一更佳的具體實施例中，該mRNA包含自以下5'到3'的順序編碼的一核酸序列： i) 腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽； ii) 任選地該蛋白質的一原結構域；以及 iii) 成熟的蛋白質。

於本發明之一甚至更佳的具體實施例中，該mRNA包含自以下5'到3'的順序編碼的一核酸序列： i) 腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽； ii) 任選地人類IGF的一原結構域；以及 iii) 成熟的人類IGF。

於本發明之一較佳具體實施例中，該腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽取代該蛋白質的天然訊息胜肽。

於另一方面，本發明提供一種轉錄單元、一種表現載體或一種基因治療載體，包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-9個胺基酸具有大於2的平均疏水性分數，其中該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組： i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，條件為該蛋白質不為一氧化還原酶； ii) 與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾；以及 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾。

於另一方面，本發明提供一種轉錄單元，一種表現載體或一種基因治療載體，包含編碼一蛋白質以及與該蛋白質異源的一訊息胜肽的一核酸序列，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽為腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽，且其中該蛋白質不為一氧化還原酶，較佳不為一硫氧還蛋白，更佳不為一桿衍生的視錐細胞活性因子。關於該腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽以及該蛋白質，與本文其他地方所述的相同。

於另一方面，本發明提供一種轉錄單元，一種表現載體或一種基因治療載體，包含編碼一蛋白質以及與該蛋白質異源的一訊息胜肽的一核酸序列，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽為腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽，且其中該蛋白質係選自由下列所組成之群組：羧肽酶；細胞激素；胞外配體與轉運蛋白；胞外基質蛋白；葡萄糖苷酶；醣基轉移酶；生長因子；生長因子結合蛋白；肝素結合蛋白；激素；水解酶；免疫球蛋白；異構酶；激酶；裂解酶；金屬酶抑制劑；金屬蛋白酶；乳蛋白；神經活性蛋白；蛋白酶；蛋白酶抑制劑；蛋白質去磷酸酶；酯酶；轉移酶；以及血管活性蛋白。關於該腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽以及該蛋白質，與本文其他地方所述的相同。

於另一方面，本發明提供一種治療組合物，包含如上所述之mRNA及/或該轉錄單元、該表現載體或該基因治療載體。關於該腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽以及該蛋白質，與本文其他地方所述的相同。通常，提供本發明之mRNA作為治療組合物，其較佳為一液體組合物。一液體組合物為其中該mRNA以液體形式存在於溶液中的任何組合物。於本發明之一具體實施例中，將mRNA溶解在水，或一緩衝或非緩衝水溶液中。該溶液較佳為一水溶液。因此，該液體可為水，較佳為無菌水，更佳為“注射用水” (water for injection, WFI)或任何其他緩衝或非緩衝水溶液。於本發明之一具體實施例中，液體組合物為一非緩衝溶液，較佳為一鹽溶液，更佳為一藥學上可接受的一鹽溶液，甚至更佳為一NaCl溶液，亦即鹽水。較佳地，該鹽溶液為等滲的，甚至更佳地，其顯示出一生理pH值。於本發明之較佳具體實施例中，其中包含該mRNA的溶液為一緩衝溶液。較佳地，這樣的溶液與血液等滲。原則上，可使用在生理範圍內，特別是在pH 3.0至10.5，更佳為在pH 4.0至9.0的範圍內有效緩衝的任何緩衝液。較佳的緩衝液為乙酸鹽、磷酸鹽、磷酸鹽緩衝鹽水(phosphate buffered saline, PBS)、碳酸鹽、乳酸，以及檸檬酸鹽緩衝液或林格氏液，較佳為磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)。因此，於本發明之一更佳的具體實施例中，其中包含該mRNA的溶液為磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)。

該治療組合物中的mRNA的濃度並非特別重要，且可根據需要調整。較佳地，該濃度在0.05至20.0 μg/μl的範圍內，更佳在0.1至10.0 μg/μl的範圍內，甚至更佳在0.2至5 μg/ l的範圍內，特別是在0.4至2.0 μg/μl的範圍內，更特別是在0.6至1.5 μg/μl的範圍內，甚至更特別在0.80至1.20 μg/μl的範圍內。特別較佳的範圍是0.01 μg至0.1g，較佳為0.1 μg至0.01g，更佳為0.5 μg至1mg，甚至更佳為0.5 μg至10 μg。

於另一方面，本發明提供一種套組，包含如上所述之mRNA及/或轉錄單元、表現載體或基因治療載體或治療組合物，以及說明書，任選包含一載體圖，任選包含一宿主細胞，任選包含用於培養一宿主細胞的一培養基，及/或任選包含用於選擇並培養一轉染的宿主細胞的一選擇培養基。本發明之套組可以一內容物的套組(或以其形式)提供。該套組可進一步包含本發明之治療組合物的一種或多種組成分，例如在一或多個單獨的容器中。例如，該套組可分別在例如一個、兩個或三個(或更多個)單獨的容器中包含mRNA(例如，以乾燥形式)、增溶劑以及(緩衝的或非緩衝的)水溶液。該套組還可包括使用說明書或使用小手冊。

於另一方面，本發明提供上述mRNA、轉錄單元、表現載體或基因治療載體、治療組合物或套組用於作為一藥物之用途。關於該訊息胜肽，例如該腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽以及該蛋白質，與本文其他地方所述的相同。

於另一方面，本發明提供一mRNA或包含或含有mRNA的一治療組合物在一治療骨骼肌損傷的方法中之用途。本發明還提供一mRNA或包含或含有mRNA的一治療組合物在製備用於治療一受試者的骨骼肌損傷的一藥物中之用途。

本發明還提供一種治療一受試者的一骨骼肌損傷之方法，該方法包括向該受試者施用一mRNA或包含或含有mRNA的一治療組合物。

骨骼肌損傷，如肌肉斷裂，是運動中最常見的損傷之一，其發生頻率在所有持續性損傷中佔10-55%。離心肌肉收縮、伸長以及肌肉超負荷可導致肌肉受傷。在所有與運動有關的傷害中，超過90%是由離心肌肉收縮、伸長或肌肉超負荷引起的。當一肌肉受到突然的巨大壓力，例如直接打擊時，就會發生骨骼肌損傷。在肌肉斷裂中，肌肉受到過大且離心的拉力，導致肌肉過度勞損，並因此導致其在肌腱末端(myotendinous junction, MTJ)附近斷裂。肌肉斷裂是醫生治療的最常見的主訴之一，佔所有與運動有關的傷害的大部分。腿後肌群複合體(hamstring muscle complex, HMC)的損傷通常會影響參加運動的運動員，這些運動在跑步時需要快速加速及減速，並需要離心肌肉收縮。輕度損傷可透過保守治療輕鬆解決，更具破壞性的損傷則是腿後肌群完全斷裂。腿後肌群斷裂的保守治療或手術治療取決於其分類。有輕度、中度或嚴重斷裂。雖然輕度至中度斷裂可以保守治療，但嚴重斷裂則明確指示需手術治療。保守治療由臨床表現決定，並從冷凍療法、加壓包紮、固定以及非類固醇、抗發炎藥立即開始，然後進行彈性綁帶，並在患者感到舒適後進行物理治療。超音波治療為一種被廣泛討論的治療選擇，但未發現對再生的最終結果有顯著影響。在2週內，疼痛應明顯減輕，以便可以增加物理治療以包括上述積極運動。然而，在該領域中公認外科手術並非沒有風險，因此必須仔細選擇候選方案(Järvinen TA, Järvinen TL, Kääriäinen M, Aärimaa V, Vaittinen S, Kalimo H, Järvinen M (2007年) 肌肉損傷：優化復原。Best Pract Res Clin Rheumatol 21 (2):317-331. DOI:10.1016/j.berh.2006.12.004; Horst K, Dienstknecht T, Sellei RM, Pape HC (2014年) 腿後肌群的部分斷裂：關於治療選擇的文獻回顧。Eur J Orthop Surg Traumatol 24 (3):285-9. DOI:10.1007/s00590-013-1315-x)。目前的治療選擇僅能提供人體自我的康復過程，實際上，非類固醇抗發炎藥(non-steroidal anti-inflammatory drugs, NSAIDs)可能會損害康復過程。現今沒有有效的藥物療法，未滿足的醫療需求很高。特別是，需要提供治療骨骼肌損傷的有效方法，其加速恢復過程並導致受傷肌肉的功能增強。

於本發明之較佳實施方式中，用於治療骨骼肌損傷的方法中的mRNA為編碼一生長因子的mRNA，較佳為編碼人類類胰島素生長因子1 (IGF1)的mRNA。該編碼生長因子的mRNA通常包含編碼一訊息胜肽的一核酸序列，任選地，編碼該生長因子的原胜肽的一核酸序列以及編碼成熟生長因子的一核酸序列。編碼人類IGF1的mRNA較佳包含編碼一訊息胜肽的一核酸序列，任選地編碼人類IGF1的原胜肽的一核酸序列以及編碼成熟人類IGF1的一核酸序列，甚至更佳地，編碼一訊息胜肽的一核酸序列，編碼人類IGF1的原胜肽的一核酸序列，以及編碼成熟人類IGF1的一核酸序列，且不包含編碼人類IGF1的一E-胜肽的一核酸序列。編碼一生長因子的mRNA所包含的該訊息胜肽可為與該生長因子同源的一訊息胜肽，亦即該生長因子的訊息胜肽，或者可為與該生長因子異源的一訊息胜肽，較佳為與該生長因子異源的一訊息胜肽，更佳為腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽，特別是人類BDNF的訊息胜肽。編碼人類IGF1的mRNA所包含的該訊息胜肽可為與人類IGF1同源的一訊息胜肽，亦即人類IGF1的訊息胜肽，亦可為與人類IGF1異源的一訊息胜肽，較佳為與人類IGF1異源的一訊息胜肽，且更佳為腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽，特別是人類BDNF的訊息胜肽。

因此，於本發明之一更佳的具體實施例中，用於治療骨骼肌損傷的方法中的該mRNA為編碼人類類胰島素生長因子1 (IGF1)的mRNA，其包含編碼腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽的一核酸序列，特別是人類BDNF的訊息胜肽，任選地為編碼人類IGF1的原胜肽的一核酸序列以及編碼成熟人類IGF-1的一核酸序列。於本發明之一甚至更佳的具體實施例中，用於治療骨骼肌損傷的方法中的該mRNA為編碼人類類胰島素生長因子1 (IGF1)的mRNA，其包含編碼腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽的一核酸序列，特別是人類BDNF的訊息胜肽，任選地為編碼人類IGF1的原胜肽的一核酸序列以及編碼成熟的人類IGF-1的一序列，且不包含編碼人類IGF1的一E-胜肽的一核酸序列。

因此，於另一方面，本發明提供一種mRNA，包含一核酸序列，其編碼 i) IGF1，較佳為人類IGF1；以及 ii) 腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽，較佳為人類BDNF的訊息胜肽，用於治療骨骼肌損傷的一方法中。

本發明還提供一種mRNA之用途，該mRNA包含一核酸序列，其編碼 i) IGF1，較佳為人類IGF1；以及 ii) 腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽，較佳為人類BDNF的訊息胜肽，用於製造用於治療一受試者的骨骼肌損傷的一藥物。

本發明還提供一種治療一受試者的骨骼肌損傷之方法，該方法包括對該受試者施用一mRNA，該mRNA包含一核酸序列，其編碼 i) IGF1，較佳為人類IGF1；以及 ii) 腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽，較佳為人類BDNF的訊息胜肽。

較佳地，本發明提供一種mRNA，包含一核酸序列，其編碼 i) 成熟的IGF1，較佳為成熟的人類IGF1； ii) 任選地IGF1，較佳為人類IGF1的原結構域； iii) 腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽，較佳為人類BDNF的訊息胜肽，用於治療骨骼肌損傷的一方法中。

本發明還提供一種mRNA之用途，該mRNA包含一核酸序列，其編碼 i) 成熟的IGF1，較佳為成熟的人類IGF1； ii) 任選地IGF1，較佳為人類IGF1的原結構域； iii) 腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽，較佳為人類BDNF的訊息胜肽，用於製造治療一受試者的骨骼肌損傷的一藥物。

本發明還提供一種治療一受試者的骨骼肌損傷之方法，該方法包括對該受試者施用一mRNA，該mRNA包含一核酸序列，其編碼 i) 成熟的IGF1，較佳為成熟的人類IGF1； ii) 任選地IGF1，較佳為人類IGF1的原結構域； iii) 腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽，較佳為人類BDNF的訊息胜肽。

關於用於治療骨骼肌損傷的方法中的mRNA，其包含編碼人類類胰島素生長因子1 (IGF1)以及腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽的一核酸序列，已經應用了如本所他處所述之相同的方法。於本發明之一特別較佳具體實施例中，包含編碼人類類胰島素生長因子1 (IGF1)以及腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽的一核酸序列的該mRNA包含如SEQ ID NO: 8所示之一核酸序列。於本發明之另一特別較佳具體實施例中，包含編碼人類類胰島素生長因子1 (IGF1)以及腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽的一核酸序列的該mRNA包含轉錄自如SEQ ID NO: 7所示之DNA序列的一核酸序列。較佳地，該核酸序列在體外轉錄自如SEQ ID NO: 7所示之DNA序列。

可以將mRNA及/或該治療組合物應用於細胞及組織，例如，骨骼肌，透過本領域技術人員已知的方法，較佳為透過注射，更佳透過肌內注射，通常透過使用帶針注射器來進行。原則上，任何與針頭結合的市售注射器皆可用於此目的。較佳為皮下注射針頭。針的直徑由針規指示(G；根據Stub氏針規)。通常，醫學上使用的針頭範圍從7 G (最大)至33 G (最小)。

於一些具體實施例中，可透過直接DNA轉移將該mRNA及/或治療組合物遞送至細胞(Wolff等人(1990年) Science 247, 1465-1468)。該mRNA及/或該治療組合物可在細胞膜受到輕微機械破壞後被遞送至細胞，進而暫時滲透細胞。可透過輕輕地迫使細胞透過一個小孔來進行對膜的這種輕微的機械破壞(Sharei等人，PLOS ONE (2015年) 10(4), e0118803)。於另一具體實施例中，可透過微脂體調節的DNA轉移將mRNA及/或該治療組合物遞送至一細胞(例如，Gao & Huang (1991年) Biochem. Ciophys. Res. Comm. 179, 280-285, Crystal (1995年) Nature Med. 1, 15-17, Caplen等人(1995年) Nature Med. 3, 39-46)。術語“微脂體”可涵蓋透過產生封閉的脂質雙層或聚集體而形成的各種單層及多層脂質運載體。可將該mRNA包封在一微脂體的水性內部中，散佈在該微脂體的脂質雙層中，透過與一微脂體以及該寡核苷酸均相關的連接分子與一微脂體連接，包埋在一微脂體中或與一微脂體複合。

於本發明之一具體實施例中，將該RNA或治療組合物以一治療劑，亦即一液體組合物，的形式直接給予骨骼肌(較佳透過注射)，其中該RNA以裸RNA的形式包含在其中。關於給藥方式以及組合物與其中所含的RNA的特徵，其適用與本文他處所述的相同。於一較佳具體實施例中，將本發明之液體組合物與mRNA分別直接施用至骨骼肌中。於此情況下，最佳的給藥方式為注射，即肌內注射。

原則上，於本發明之上下文中，設想儘早，亦即在骨骼肌損傷的最早可能階段分別給予該mRNA及該治療組合物。例如，該階段為一旦觀察到(一種或多種)第一症狀(例如疼痛)。然而，根據本發明，診斷之後的任何可能的時間點都是可能且值得的，因此是可以設想的。例如，在進行外科手術干預的情況下(例如在肌肉斷裂之後)，可在外科手術干預期間，但至少不久之後，分別給予該mRNA以及該治療組合物。

於一具體實施例中，分別於骨骼肌再生的發炎反應以及早期增生階段期間或甚至之前給予該mRNA與該治療組合物。例如，給藥可以在受傷後第0天至第10天，較佳在第0天至第7天。更具體而言，給藥可以在受傷後第0、1、2、3、4、5、6或7天。較佳在損傷後第1天，甚至更佳在第0天給藥。於一較佳具體實施例中，該治療組合物在該骨骼肌損傷後的發炎期之前施用。特別較佳的是在受傷後第1天給藥，並在受傷後第4天再次給藥。

根據本發明，分別例如根據待治療的損傷的過程，可至少重複一次施用該mRNA與該治療組合物，但較佳重複幾次(例如3至5次)。重複給藥可在第1、2、3、4、5、6、7、8或9天之後，較佳在第2、3、4、5、6、7天之後，更佳在第3、4或5天之後。重複給藥可為每隔幾週(例如，每1、2、3或4週)，最多每隔幾天(例如，每1、2、3、4、5或6天)，較佳為每2或3天。

本發明之mRNA或治療組合物可以一合適的劑量施用於一患者。劑量方案可由主治醫師確定，例如基於臨床因素。如醫學領域眾所周知的，任何一名患者的劑量取決於許多因素，包括該患者的身材、體表面積、年齡、所要施用的特定化合物、性別、施用時間及途徑，總體健康狀況，以及其他同時使用藥物。然而，技術人員/主治醫生容易地能夠推導(治療)有效濃度及/或所要施用的活性物質的劑量，例如在體內或體外施用。可以從例如骨骼肌中獲取相應的樣品(例如，透過合適的探針)，並可檢測活性化合物(裸RNA)，以及可以例如透過HPLC在該樣品中確定它們的相應濃度。

活性物質(例如mRNA)的典型劑量可為，例如在1 ng至幾克的範圍內，較佳在0.1 μg至1 g的範圍內，較佳在1 μg至0.1 g的範圍內，更佳在10 μg至1 mg的範圍內，甚至更佳在15 μg至0.5 mg的範圍內，且最佳在20 μg至100 μg的範圍內。特別較佳的範圍是0.01 μg至0.1 g，較佳為0.1 μg至0.01 g，更佳為0.5 μg至1 mg，甚至更佳為0.5 μg至10 μg。這特別適用於人類患者。用於(m)RNA治療時，用於表現的(m)RNA劑量應與此範圍相對應；然而，原則上也可以設想低於或高於該示例性範圍的劑量，特別是考慮到上述因素。通常，作為治療組合物的常規給藥方案應在每天每公斤體重每單位0.1 μg至10 mg單位的範圍內，較佳在1 μg至1 mg單位的範圍內，更佳在10 μg至0.1 mg單位的範圍內。再次地，這特別適用於人類患者。可透過定期評估來監控進度。劑量可以變化，但透過注射作為本發明的液體組合物的成分的(m)RNA進行給藥的較佳劑量為每次注射約10⁵ 至10¹⁵ 個拷貝的(m)RNA分子。再次地，這特別適用於人類患者。

特別地，設想將本發明的治療組合物施用於一患者，較佳施用於一人類患者/一人類。然而，本文所述之骨骼肌損傷也可在非人類動物受試者/患者中治療(或預防)，例如寵物(例如狗、貓、兔子、大鼠及小鼠)、家畜(例如牛、豬，綿羊)，馬(例如賽馬)或小馬、駱駝(例如賽駱駝)或禽類(例如雞、火雞、鸚鵡)。

特別地，包含mRNA的治療組合物在損傷、病症及/或疾病，例如骨骼肌損傷的癒合過程中具有治療活性。

於本發明之一更特別較佳具體實施例中，作為一藥物的編碼類胰島素生長因子1 (IGF1)的mRNA包含轉錄自如SEQ ID NO: 7所示之DNA序列的核酸序列。於本發明之一甚至更特別較佳具體實施例中，作為一藥物的編碼類胰島素生長因子1 (IGF1)的mRNA包含如SEQ ID NO: 8之核酸序列。

可將本發明之任何治療組合物與使用說明書或使用小手冊一起提供。使用說明書/小手冊可包括針對技術人員/主治醫師的指南，如何根據本發明來治療(或預防)本文所述的一疾病或病症(骨骼肌損傷)。特別是，該使用說明書/小手冊可分別包括關於本文所述之遞送/給藥方式以及遞送/給藥方案的指南(例如，遞送/給藥途徑、劑量方案、遞送/給藥時間、遞送/給藥頻率)。特別是，該說明書/小手冊可包括將該mRNA分別注射及/或準備注射到骨骼肌中的說明。該說明書/小手冊可進一步包含以下說明：分別準備mRNA以在骨骼肌損傷後的發炎階段期間施用。原則上，可分別包含本文其他地方分別關於遞送/給藥方式以及遞送/給藥方案的內容以作為說明書/小手冊中的相應的說明。

實施例

實施例 1

方法與材料

IGF1 的選殖以及訊息胜肽的交換

IGF1為一種在內質網中合成並透過高基氏體分泌的70個胺基酸的多胜肽，以自分泌及旁分泌方式作為細胞外生長因子。為了確保mRNA誘導的IGF1在轉染細胞中的正確表現與分泌，該mRNA序列包括人類IGF1的天然N端前-原-序列(pre-pro-IGF1)。該序列由編碼具有21個胺基酸的人類IGF1的前結構域(訊息胜肽)的序列(第1-63個核苷酸)以及編碼具有27個胺基酸的人類原結構域的序列(第64-144個核苷酸)組成。此外，該構築體包含編碼具有70個胺基酸的成熟人類IGF1的完整編碼序列的序列(第145-354個核苷酸)。在Cpd.2-7中，前結構域(訊息胜肽，第1-63個核苷酸)被IGF2、ALB、BDNF、CXCL12或合成的訊息胜肽1或2的各自前結構域交換。無C端E-結構域被加入該構築體中。總之，該選殖載體包含該人類前-原-IGF1但不含E胜肽資訊的DNA的一個副本，且被定義為Cpd.1，而Cpds.2-7則包含替代的前結構域(訊息胜肽)。圖1所示為由其前、原結構域及編碼結構域所編碼的IGF1的DNA與RNA序列。圖2所示為由IGF2前結構域及其原結構域及編碼結構域所編碼的IGF1的DNA與RNA序列。圖3所示為由ALB前結構域及其原結構域及編碼結構域所編碼的IGF1的DNA與RNA序列。圖4所示為由BDNF前結構域及其原結構域及編碼結構域所編碼的IGF1的DNA與RNA序列。圖5所示為由CXCL12前結構域及其原結構域及編碼結構域所編碼的IGF1的DNA與RNA序列。圖6所示為由合成的訊息胜肽1前結構域及其原結構域及編碼結構域所編碼的IGF1的DNA與RNA序列。圖7所示為由合成訊息胜肽2前結構域及其原結構域及編碼結構域所編碼的IGF1的DNA與RNA序列。圖8所示為帶有該Cpd.1插入片段的pVAX.A120載體(www.thermofisher.com)。圖9所示為帶有該Cpd.2插入片段的pMA-T載體(www.thermofisher.com)。圖10所示為帶有該Cpd.3插入片段的pMA-T載體。圖11所示為帶有該Cpd.4插入片段的pMA-T載體。圖12所示為帶有該Cpd.5插入片段的pMA-T載體。圖13所示為帶有該Cpd.6插入片段的pMA-RQ載體(www.thermofisher.com)。圖14所示為帶有該Cpd.6插入片段的pMA-RQ載體(www.thermofisher.com)。圖15所示為用於擴增Cpd.2-7的引子。圖16透過指出這些前結構域及載體的基因名稱、UniProt編號、DNA與胺基酸序列來總結不同前結構域的身份。對於Cpd.6與Cpd.7，由於它們是人工前域，因此不存在基因名稱。使用GeneOptimizer® (ThermoFischer公司，麻州)對Cpds.1-7的DNA及mRNA序列進行密碼子優化。

前-原-IGF1的開放閱讀框的DNA序列由GeneArt (www.thermofisher.com，ThermoFischer公司，麻州)合成，具有BamHI與EcoRI限制酶切位點，並使用相同的限制酶次選殖至pVAX1.A120載體中。整個載體的DNA序列列於圖8中。選殖的插入物與鹼基序列的方向透過幾個選殖株的Sanger定序證實。選擇成功的選殖株作為體外轉錄(in vitro transcription, IVT) mRNA產生的模板。對於替代的前結構域變體Cpd.2-Cpd.7，將pMA-T(圖9-12)與pMA-RQ(圖13-14)載體作為體外轉錄(IVT)的模板。所有體外轉錄(IVT)反應均產生具有相同polyA120尾巴的mRNA。

將 Cpd.8 中的訊息胜肽交換為 Cpd.39 mRNA

在Cpd.8-26與Cpd.39中，IGF1的前結構域(訊息胜肽，第1-63個核苷酸)(亦即Cpd.1)被LTBP2的各個前結構域(Cpd.8；Uniprot ID: Q14767)，IGFALS (Cpd.9；Uniprot ID: P35858)，INS (Cpd.10；Uniprot ID: P01308)，Epo (Cpd.11；Uniprot ID: P01588)，CSF3 (Cpd.12；Uniprot ID: P09919)，NGF (Cpd.13；Uniprot ID: P01138)，FGF5 (Cpd. 14；Uniprot ID: P12034)，FHR2 (Cpd.15；Uniprot ID: P36980)，IBP5 (Cpd.16；Uniprot ID: P24593) ，NTF3 (Cpd.17；Uniprot ID: P20783)，PATE2 (Cpd.18；Uniprot ID: Q6UY27)，SOD3 (Cpd.19；Uniprot ID: P08294)，GLR編碼序列的一部分(Cpd.20；Uniprot ID: P47871)，IGF1的修飾的前結構域序列(Cpd. 21；Uniprot ID: P05019)，IGF2的修飾的前結構域序列(Cpd. 22；Uniprot ID: P01344)，CXCL12的修飾的前結構域序列(Cpd. 23；Uniprot ID: P48061)，BDNF的修飾的前結構域序列(Cpd.24；Uniprot ID: P23560)，IGF1的修飾的原結構域序列(Cpd.25；Uniprot ID: P05019)，ALPI的修飾的原結構域序列(Cpd. 39；Uniprot ID: P09923)，以及INS的修飾的前結構域序列(Cpd. 26；Uniprot ID: P01308)。與Cpd.1類似，所有以上指定的化合物都沒有E-胜肽。使用GeneOptimizer® (ThermoFischer公司，麻州)進行Cpds.8-26與Cpd. 39的DNA與mRNA序列的密碼子優化。

Cpd.27由編碼具有27個胺基酸的人類紅血球生成素(Epo；Uniprot ID: P01588)的前結構域(訊息胜肽)的序列(第1-81個核苷酸)以及編碼具有166個胺基酸的人類紅血球生成素的編碼鏈的序列(第82-498個核苷酸)所組成。在Cpd.28與Cpd.29中，Epo的前結構域序列(訊息胜肽，第1-81個核苷酸)以Epo (Uniprot ID: P01588)的修飾的前結構域序列以及BDNF (Uniprot ID: P23560)的前結構域序列交換。使用GeneOptimizer® (ThermoFischer公司，麻州)進行Cpds.27-29的DNA與mRNA序列的密碼子優化。

Cpd.30由編碼具有24個胺基酸的人類胰島素(INS；Uniprot ID: P01308)的前結構域(訊息胜肽)的序列(第1-72個核苷酸)，以及編碼具有30個胺基酸的B鏈結構域的序列(第73-162個核苷酸)，以及編碼具有31個胺基酸的連接胜肽(C-胜肽)結構域的序列(第163-255個核苷酸)，以及編碼具有21個胺基酸的A-鏈結構域的序列(第256-330個核苷酸)組成。在Cpd.31與Cpd.32中，INS的前結構域(訊息胜肽，第1-72個核苷酸)以INS (Uniprot ID: P01308)的修飾的前結構域序列以及BDNF (Uniprot ID: P23560)的前結構域序列交換。使用GeneOptimizer® (ThermoFischer公司，麻州)進行Cpds. 30-32的DNA與mRNA序列的密碼子優化。

Cpd.33由編碼具有24個胺基酸的人類介白素4 (IL-4；Uniprot ID: P05112)的前結構域(訊息胜肽)的序列(第1-72個核苷酸)，以及由編碼具有129個胺基酸的鏈結構域的序列(第73-387個核苷酸)組成。在Cpd.34與Cpd.35中，IL-4的前結構域(訊息胜肽，第1-72個核苷酸)以IL-4 (Uniprot ID: P05112)的修飾的前結構域序列以及FGF5 (Uniprot ID: P01308)的前結構域序列交換。使用GeneOptimizer® (ThermoFischer公司，麻州)進行Cpds.33-35的DNA與mRNA序列的密碼子優化。

Cpd.36由編碼具有24個胺基酸的人類介白素10 (IL-10；Uniprot ID: P22301)的前結構域(訊息胜肽)的序列(第1-54個核苷酸)，以及編碼具有160個胺基酸的鏈結構域的序列(第55-534個核苷酸)組成。在Cpd.37與Cpd.38中，IL-10的前結構域(訊息胜肽，第1-54個核苷酸)以IL-10 (Uniprot ID: P22301)的修飾的前結構域序列以及BDNF (Uniprot ID: P23560)的前結構域序列交換。使用GeneOptimizer® (ThermoFischer公司，麻州)進行Cpds. 36-38的DNA與mRNA序列的密碼子優化。

Cpd. 1-39訊息胜肽的胺基酸序列及DNA序列，以及對應於Cpd. 1-39的RNA序列、DNA序列以及載體如下表1所示。

[ 表 1] ：Cpd. 1-39訊息胜肽的胺基酸序列及DNA序列，以及Cpd. 1-39的RNA序列、DNA序列以及載體。

Cpd 編號	訊息胜肽 (SP)	蛋白質	訊息胜肽胺基酸序列	訊息胜肽 DNA 序列	Cpd. 的 DNA 序列	Cpd. 的 RN A 序列	Cpd. 的載體的 DNA 序列	載體
1	IGF1	IGF1	SEQ ID NO: 25	SEQ ID NO: 24	SEQ ID NO: 1	SEQ ID NO: 2	SEQ ID NO: 15/SEQ ID NO: 40	pVAX.A120/pMA-T
2	IGF2	IGF1	SEQ ID NO: 27	SEQ ID NO: 26	SEQ ID NO: 3	SEQ ID NO: 4	SEQ ID NO: 16	pMA-T
3	ALB	IGF1	SEQ ID NO: 29	SEQ ID NO: 28	SEQ ID NO: 5	SEQ ID NO: 6	SEQ ID NO: 17	pMA-T
4	BDNF	IGF1	SEQ ID NO: 31	SEQ ID NO: 30	SEQ ID NO: 7	SEQ ID NO: 8	SEQ ID NO: 18	pMA-T
5	CXCL12	IGF1	SEQ ID NO: 33	SEQ ID NO: 32	SEQ ID NO: 9	SEQ ID NO: 10	SEQ ID NO: 19	pMA-T
6	合成序列1	IGF1	SEQ ID NO: 35	SEQ ID NO: 34	SEQ ID NO: 11	SEQ ID NO: 12	SEQ ID NO: 20	PMA-RQ
7	合成序列2	IGF1	SEQ ID NO: 37	SEQ ID NO: 36	SEQ ID NO: 13	SEQ ID NO: 14	SEQ ID NO: 21	PMA-RQ
8	LTBP2	IGF1	SEQ ID NO: 41	SEQ ID NO: 42	SEQ ID NO: 43	SEQ ID NO: 44	SEQ ID NO: 45	PMA-RQ
9	IGFALS	IGF1	SEQ ID NO: 46	SEQ ID NO: 47	SEQ ID NO: 48	SEQ ID NO: 49	SEQ ID NO: 50	PMA-RQ
10	INS	IGF1	SEQ ID NO: 51	SEQ ID NO: 52	SEQ ID NO: 53	SEQ ID NO: 54	SEQ ID NO: 55	PMA-RQ
11	EPO	IGF1	SEQ ID NO: 56	SEQ ID NO: 57	SEQ ID NO: 58	SEQ ID NO: 59	SEQ ID NO: 60	pMA-RQ
12	CSF3	IGF1	SEQ ID NO: 61	SEQ ID NO: 62	SEQ ID NO: 63	SEQ ID NO: 64	SEQ ID NO: 65	pMA-RQ
13	NGF	IGF1	SEQ ID NO: 66	SEQ ID NO: 67	SEQ ID NO: 68	SEQ ID NO: 69	SEQ ID NO: 70	pMA-RQ
30	INS	胰島素	SEQ ID NO: 51	SEQ ID NO: 52	SEQ ID NO: 71	SEQ ID NO: 72	SEQ ID NO: 73	pMA-RQ
27	EPO	EPO	SEQ ID NO: 56	SEQ ID NO: 57	SEQ ID NO: 74	SEQ ID NO: 75	SEQ ID NO: 76	pMA-RQ
33	IL4	IL4	SEQ ID NO: 77	SEQ ID NO: 78	SEQ ID NO: 79	SEQ ID NO: 80	SEQ ID NO: 81	pMA-RQ
36	IL10	IL10	SEQ ID NO: 81	SEQ ID NO: 83	SEQ ID NO: 84	SEQ ID NO: 85	SEQ ID NO: 86	pMA-RQ
14	FGF5	IGF1	SEQ ID NO: 87	SEQ ID NO: 88	SEQ ID NO: 89	SEQ ID NO: 90	SEQ ID NO: 91	pMA-RQ
15	FHR2	IGF1	SEQ ID NO: 92	SEQ ID NO: 93	SEQ ID NO: 94	SEQ ID NO: 95	SEQ ID NO: 96	pMA-T
16	IBP5	IGF1	SEQ ID NO: 97	SEQ ID NO: 98	SEQ ID NO: 99	SEQ ID NO: 100	SEQ ID NO: 101	pMA-RQ
17	NTF3	IGF1	SEQ ID NO: 102	SEQ ID NO: 103	SEQ ID NO: 104	SEQ ID NO: 105	SEQ ID NO: 106	pMA-RQ
18	PATE2	IGF1	SEQ ID NO: 107	SEQ ID NO: 108	SEQ ID NO: 109	SEQ ID NO: 110	SEQ ID NO: 111	pMA-T
19	SOD3	IGF1	SEQ ID NO: 112	SEQ ID NO: 113	SEQ ID NO: 114	SEQ ID NO: 115	SEQ ID NO: 116	pMA-RQ
20	GLR	IGF1	SEQ ID NO: 117	SEQ ID NO: 118	SEQ ID NO: 119	SEQ ID NO: 120	SEQ ID NO: 121	pMA-T
21	IGF1-修飾的	IGF1	SEQ ID NO: 122	SEQ ID NO: 123	SEQ ID NO: 124	SEQ ID NO: 125	SEQ ID NO: 126	pMA-T
22	IGF2-修飾的	IGF1	SEQ ID NO: 127	SEQ ID NO: 128	SEQ ID NO: 129	SEQ ID NO: 130	SEQ ID NO: 131	pMA-T
23	CXCL12-修飾的	IGF1	SEQ ID NO: 132	SEQ ID NO: 133	SEQ ID NO: 134	SEQ ID NO: 135	SEQ ID NO: 136	pMA-T
24	BDNF-修飾的	IGF1	SEQ ID NO: 137	SEQ ID NO: 138	SEQ ID NO: 139	SEQ ID NO: 140	SEQ ID NO: 141	pMA-T
25	IGF1-原-修飾的	IGF1	SEQ ID NO: 142	SEQ ID NO: 143	SEQ ID NO: 144	SEQ ID NO: 145	SEQ ID NO: 146	pMA-T
26	INS-修飾的	IGF1	SEQ ID NO: 147	SEQ ID NO: 148	SEQ ID NO: 149	SEQ ID NO: 150	SEQ ID NO: 151	pMA-T
28	Epo-修飾的	EPO	SEQ ID NO: 152	SEQ ID NO: 153	SEQ ID NO: 154	SEQ ID NO: 155	SEQ ID NO: 156	pMA-T
29	BDNF	EPO	SEQ ID NO: 30	SEQ ID NO: 31	SEQ ID NO: 157	SEQ ID NO: 158	SEQ ID NO: 159	pMA-RQ
31	INS-修飾的	INS	SEQ ID NO: 147	SEQ ID NO: 182	SEQ ID NO: 160	SEQ ID NO: 161	SEQ ID NO: 162	pMA-T
32	BDNF	INS	SEQ ID NO: 30	SEQ ID NO: 31	SEQ ID NO: 163	SEQ ID NO: 164	SEQ ID NO: 165	pMA-RQ
34	IL4-修飾的	IL4	SEQ ID NO: 166	SEQ ID NO: 167	SEQ ID NO: 168	SEQ ID NO: 169	SEQ ID NO: 170	pMA-T
35	FGF5	IL4	SEQ ID NO: 87	SEQ ID NO: 183	SEQ ID NO: 171	SEQ ID NO: 172	SEQ ID NO: 173	pMA-RQ
37	IL10-修飾的	IL10	SEQ ID NO: 174	SEQ ID NO: 175	SEQ ID NO: 176	SEQ ID NO: 177	SEQ ID NO: 178	pMA-T
38	BDNF	IL10	SEQ ID NO: 30	SEQ ID NO: 31	SEQ ID NO: 179	SEQ ID NO: 180	SEQ ID NO: 181	pMA-RQ
39	ALPI-原-修飾的	IGF1	SEQ ID NO: 189	SEQ ID NO: 190	SEQ ID NO: 191	SEQ ID NO: 192	SEQ ID NO: 193	pMA-T

Cpd.1 至 Cpd.7 mRNA 的體外轉錄 (IVT)

含有Cpd.1 (SEQ ID No.15)的pVAX.A120載體也具有一T7啟動子以及一120 bp長的poly-A尾巴，且在以體外轉錄(IVT)產生mRNA之前使用Xho I酵素將該載體線性化到poly-A尾巴的下游。對於pMA-T與pMA-RQ載體，使用同源引子對(SEQI ID Nos: 22與23)進行基於PCR的IVT-mRNA生產(圖15)。反向引子含有120 bp的poly-A，以在成熟的mRNA中包含一poly-A尾巴。在MEGAscript T7套組(www.ambion.com)中，線性化質體與PCR擴增子均作為以T7 RNA聚合酶進行IVT的模板。所有的mRNA均在5'端以抗逆CAP類似物(ARCA; [m7G(5')G])產生，並以100% N1-甲基偽-UTP (www.trilink.com)化學修飾。使用MEGAclear套組(www.ambion.com)純化體外轉錄的mRNA，並在Agilent 2100生物分析儀(www.agilent.com)中使用RNA 6000 Nano套組分析品質與濃度。

Cpd.1 以及 Cpd.8 至 Cpd.39 mRNA 的體外轉錄 (IVT)

對於編碼Cpd. 1 (SEQ ID No. 40；在次選殖到pVAX.A120載體之前)以及Cpd. 8至Cpd. 39的pMA-T與pMA-RQ載體，將同源引子對(SEQ ID Nos: 22與23)以基於PCR的IVT-mRNA產生(圖15)。反向引子含有120 bp的poly-A，以在成熟的mRNA中包含一poly-A尾巴。PCR擴增子作為MEGAscript T7套組(www.ambion.com)中由T7 RNA聚合酶進行的IVT的模板。所有mRNA均在5'端以抗逆CAP類似物(ARCA; [m7G(5')G])產生，並以100% N1-甲基偽-UTP (www.trilink.com)化學修飾。使用MEGAclear套組(www.ambion.com)純化體外轉錄的mRNA，並使用RNA瓊脂凝膠電泳分析其質量與濃度。

HEK293T 、 C2C12 以及 HepG2 細胞的體外轉染

將人類胚胎腎細胞293 (HEK293T; ATCC，CRL-1573，洛克威爾市，馬里蘭州，美國)保存在補充10% (v/v)胎牛血清(Fetal Bovine Serum, FBS) 以及青黴素-鏈黴素-兩性黴素B混合物(型號882087，Biozym公司，奧爾登多夫式，德國)的Dulbecco改良Eagle培養基(Dulbecco's Modified Eagle's medium, DMEM，www.biochrom.com)中。將細胞以7,000-20,000個細胞/孔的密度接種在96孔培養盤中，並在轉染前於37^o C在含有5% CO₂ 的潮濕環境中培養24小時。細胞在含有10% FBS且不含抗生素的DMEM生長培養基中生長，以在轉染前達到＜60%的融合度。

人類肝癌細胞株HepG2 (型號85011430，英國ECACC)在含有10%胎牛血清以及青黴素-鏈黴素-兩性黴素B混合物(型號882087，Biozym公司，奧爾登多夫式，德國)的Dulbecco改良Eagle培養基(DMEM) 於37^o C在含有5% CO₂ 的潮濕環境中培養。每2天以及每5天分別以1:2以及1:4的分流比對HepG2細胞進行繼代培養。在轉染前24小時，將細胞以20,000-40,000個細胞/孔的密度接種在一96孔培養盤中。細胞在含有10% FBS的不含抗生素的DMEM生長培養基中生長，以在轉染前達到30-40%的融合度。

小鼠成肌細胞C2C12細胞株(ATCC，CRL-1772，洛克威爾市，馬里蘭州，美國)在含有10%胎牛血清以及青黴素-鏈黴素-兩性黴素B混合物(型號882087，Biozym公司，奧爾登多夫式，德國)的Dulbecco改良Eagle培養基(DMEM)於37^o C在含有5% CO₂ 的潮濕環境中培養。每2天以及每5天分別以1:2以及1:4的分流比對C2C12細胞進行繼代培養。在轉染前24小時，將細胞以20,000個細胞/孔的密度接種在一96孔培養盤中。細胞在含有2% FBS的不含抗生素的DMEM生長培養基中生長，以在轉染前達到80-90%的融合度。

此後，依照製造商的說明使用Lipofectamine 2000 (www.invitrogen.com)以0.3 μg的不同mRNA變體轉染細胞。移除100 µl DMEM，並以50 µl Opti-MEM (www.thermofisher.com)以及50 µl mRNA與Lipofectamine 2000複合物取替。5小時後，將培養基更換為新鮮的培養基，並將培養盤於37^o C在含有5% CO₂ 的潮濕環境中作用24小時。

HSkMC 細胞的體外轉染

將HSkMC細胞以每96孔40,000個細胞的密度接種在含有SkM生長培養基(PromoCell公司，海德堡，德國)的微量滴定盤上。將細胞於37^o C恆溫箱以及5% CO₂ 的潮濕環境中陪養1天，至融合度＞ 90%。轉染當天，使用Lipofectamin 2000 (www.invitrogen.com)以2 µg的不同mRNA變體(Cpd.1或4)處理細胞。因此，移除100 µl培養基，並在OPTIMEM培養基(www.thermofisher.com)中將1 µl Lipofectamin/孔與2 µg mRNA/孔一起加入。然後將細胞置於37^o C與5% CO₂ 的濕潤氣氛中作用24小時。

IMR32 細胞的體外轉染

轉染前24小時，將人類高加索人神經母細胞瘤IMR32細胞(型號86041809，ECACC，英國)以每孔60,000個細胞的密度接種在96孔預包覆的BRAND微量滴定盤(型號782082)中，並置於補充有10% (v/v)熱滅活的胎牛血清(FBS)，L-麩醯胺酸(2 mM)以及非必需胺基酸(Non-essential Amino acids, NEAA，1x )的最低必需培養基Eagle (Minimum Essential Medium Eagle, EMEM，Bioconcept公司，型號1-31S01-I，www.bioconcept.ch)中。細胞於37^o C在含5% CO₂ 的潮濕環境中過夜生長。按照製造商的說明，使用JetMessenger (www.polyplus-transfection.com)以0.3 µg的mRNA構築體轉染細胞。簡言之，透過將0.25 µl JetMessenger試劑/0.1 µg mRNA構築體混合形成mRNA/JetMessenger複合物。在室溫下培養15分鐘後，加入10 µl JetMessenger複合物，且轉染5小時後，將轉染培養基/mRNA/JetMessenger從孔中移除並以新鮮的100 µl生長培養基替換，然後將培養盤於37^o C下在含5% CO₂ 的濕潤氣氛中培養24小時。

A549 細胞的體外轉染

人類肺癌細胞株(Sigma-Aldrich公司，布克斯市，瑞士，型號6012804)維持在補充有10% FBS (Thermofischer公司，巴塞爾市，瑞士，型號10500-064)的Dulbecco改良Eagle培養基-高葡萄糖(DMEM，Sigma-Aldrich公司，布克斯市，瑞士，型號D0822)中。轉染前24小時，將A549細胞以10,000個細胞/孔的密度接種在常規生長培養基中。之後，按照製造商的說明，使用Lipofectamine 2000 (www.invitrogen.com)以不同的mRNAs (0.3-0.6 µg)轉染細胞。移除100 μl的DMEM。每個孔中加入50 µl Opti-MEM (www.thermofisher.com)，然後再加入50 µl的在Opti-MEM中的mRNA與Lipofectamine 2000複合物。作用5小時後，將培養基更換為新鮮的生長培養基，並將培養盤於37^o C在含有5% CO₂ 的潮濕環境中作用24小時。

THP-1 細胞的體外轉染

將人類單核細胞白血病細胞株THP-1 (Sigma-Aldrich公司，布克斯市，瑞士，型號88081201)維持在補充有10% FBS以及2 mM麩醯胺酸的生長培養基(RPMI 1640)中。轉染前72小時，將THP-1細胞以30,000個細胞/孔的密度接種在96孔細胞培養盤中，並以在生長培養基中稀釋的50 nM佛波醇12-肉荳蔻酸酯13-乙酸酯(phorbol 12-myristate 13-acetate, PMA)( (Sigma-Aldrich公司，布克斯市，瑞士，型號P8139)活化。使用Lipofectamine 2000 (www.thermofisher.com)，以300-600 ng/孔的mRNA轉染細胞，移除100 µl DMEM。每個孔中加入50 µl Opti-MEM (www.thermofisher.com)，然後再加入50 µl的在Opti-MEM中的mRNA與Lipofectamine 2000複合物。5小時後，以補充有50 nM PMA的新鮮生長培養基替換該培養基，並將培養盤於37^o C在含有5% CO₂ 的潮濕環境中作用24小時。

大鼠原發性脊髓神經元

使用CO₂ 深度麻醉與頸椎脫位法犧牲懷孕14天的雌性野生Wistar大鼠(Janvier labs公司，法國)或SOD1G93A Sprague Dawley大鼠(Taconic Bioscience公司)。將大鼠胎兒從子宮中取出，立即置於冰冷的Leibovitz培養基中，該培養基中補充有2%的青黴素(10,000 U/mL)與鏈黴素(10 mg/mL) (penicillin and streptomycin, PS) 溶液以及1%的牛血清白蛋白(bovine serum albumin, BSA)。解剖脊髓並於37^o C下以0.05%胰蛋白酶-0.02%EDTA處理20分鐘。加入補充有4.5 g/l 葡萄糖、0.5 mg/mL DNAase I與II，以及10%小牛血清(fetal calf serum, FCS)的Dulbecco改良Eagle培養(DMEM)以終止解離。透過10 mL移液器尖端的三個強制通道將細胞機械解離。此外，將細胞於4^o C以515g離心10分鐘。將所得沉澱重新懸浮於限定的培養基中，該培養基由含有2% B27補充劑溶液、2 mmol/l麩醯胺酸、2% PS溶液，以及10 ng/ml腦源性神經營養因子(BDNF)的神經基礎培養基組成。將細胞以20,000個細胞/孔的密度接種於一預先包覆聚-D-離胺酸的96孔培養盤中，並於37^o C下在含有5% CO₂ 的潮濕環境中培養。每兩天更換一次培養基。培養11至12天後，按照製造商的說明使用JetMessenger (www.polyplus-transfection.com)轉染mRNA構築體(0.3 µg)。

人類分化的軟骨細胞的體外轉染

將人類關節軟骨的軟骨細胞(Sigma/Cell Applications公司，布克斯市，瑞士，型號402-05A)維持在軟骨細胞生長培養基(Sigma Aldrich公司，布克斯市，瑞士，型號411-500)中。將細胞於37^o C在含有5% CO₂ 的潮濕環境中培養。將細胞置於在分化培養基(Sigma Aldrich公司，布克斯市，瑞士，型號A411D-250)中的藻酸鹽珠粒上培養至少3週以分化細胞。為了製備藻酸鹽珠粒，每4×10⁶ 個軟骨細胞使用1 ml的1.2%無菌藻酸鹽溶液(1.2%藻酸鹽，Sigma Aldrich公司，布克斯市，瑞士，型號A-2033，在0.9% NaCl中)。將細胞重懸於相應體積的1.2%海藻酸鹽溶液中，並透過22號針頭逐滴分配到在6孔未處理的細胞培養盤中的100 mM CaCl₂ 溶液中。15分鐘後，將聚合珠粒以0.9% NaCl洗滌5次，並以分化培養基洗滌2次。軟骨細胞/藻酸鹽珠粒於37^o C在含有5% CO₂ 的潮濕環境中培養至少3週，每兩天更換一次培養基。轉染前24小時，透過以0.9% NaCl洗滌2次，並在藻酸鹽溶解緩衝液(55 mM檸檬酸鈉，150 mM NaCl，30 mM EDTA pH 6.8)中培養約5分鐘，以從藻酸鹽珠粒中釋放出分化的軟骨細胞。以0.9% NaCl洗滌細胞二次。將每孔30,000個細胞接種到在96孔TPP培養盤(Sigma Aldrich公司，布克斯市，瑞士，型號92096)的100 µl生長培養基中，並培養過夜。按照製造商的說明，使用JetMessenger (www.polyplus-transfection.com)以0.6 µg的mRNA構築體轉染細胞。加入10 µl mRNA/JetMessenger複合物，進行四重複。透過將0.25 µl JetMessenger試劑與每0.1µg mRNA構築體混合並於室溫下培養15分鐘以形成mRNA/JetMessenger複合物。轉染後5小時後，將轉染複合物(培養基/mRNA/JetMessenger)從孔中移除，並以100 µl生長培養基替換。將培養盤於37^o C在含有5% CO₂ 的潮濕環境下培養24小時。

細胞培養上清液中蛋白質含量的分析

轉染後24小時，收集轉染細胞的上清液，冷凍並於20^o C下保存，直到進行IGF1 (型號E20，Mediagnost公司，羅伊特林根市，德國)、紅血球生成素(EPO；型號BMS2035，ThermoFisher公司，巴塞爾市，瑞士)、胰島素(INS，型號RAB0327，Sigma Aldrich公司，布克斯市，瑞士)、介白素4 (IL-4，型號88-7046-22，ThermoFisher公司，巴塞爾市，瑞士)，以及介白素10 (IL-10，型號KIT 10947，北京義翹神州科技有限公司，中國)的定量分析，透過ELISA根據製造商的說明進行操作。以各自的ELISA緩衝液稀釋後，分析細胞的上清液。

數據分析

為了估算標準品或樣品中的蛋白質(IGF1、EPO、INS、IL-4、IL-10)的含量，從標準品或樣品的平均吸光度中減去空白的平均吸光度值。根據製造商的規程，使用四參數非線性回歸產生並繪製標準曲線。為了確定每個樣品中蛋白質(IGF1、EPO、INS、IL-4、IL-10)的濃度，從標準曲線內插不同蛋白質的濃度。透過與稀釋因子相乘來計算樣品的最終蛋白質濃度。所有計算均使用GraphPad Prism 8 (聖地亞哥市，美國)進行。為了表現與內源訊息胜肽構築體相比增加的倍數，將單個構築體產生的蛋白含量除以相同濃度的內源訊息胜肽構築體產生的蛋白含量。

結果

IGF1 的選殖

透過Sanger定序證實所有插入物成功選殖到pVAX.A120中。所有測試的選殖株皆得到正確方向的IGF1插入片段，序列準確度為100%。選擇陽性選殖株以用於體外轉錄(IVT)產生mRNA。

Cpds.1-39 的平均疏水性與極性

針對該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-9個胺基酸、第1-7個胺基酸，以及第1-5個胺基酸，以及C端的最後九個胺基酸的Cpds.1-39的平均疏水性，以及針對N端的第1-9個胺基酸的Cpds.1-39的平均極性如下表2-5所示。

[ 表 2] ：針對該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-18個胺基酸，以及C端的最後九個胺基酸的Cpds.1-39的平均疏水性與極性，以及針對該訊息胜肽的N端的第1-9個胺基酸的Cpds.1-39的平均極性。

Cpd. 編號	疏水性分數
第1-9個胺基酸	第2-10個胺基酸	第3-11個胺基酸	第4-12個胺基酸	第5-13個胺基酸	第6-14個胺基酸	第7-15個胺基酸
1	0.614	0.114	0.071	0.129	0.029	0.543	0.1
2	0.344	0.556	1.067	0.989	1.589	1.3	1.656
3	1.211	1.422	2.167	2.689	2.533	2.522	2.122
5	1.878	2.133	2.944	3.211	4.067	3.522	3.256
6	1.989	2.2	2.711	3.011	3.022	2.944	2.367
7	0.278	0.489	1.344	1.644	1.922	2.222	2.644
8	-1.867	-2.256	-1.8	-2.122	-1.422	-0.922	-0.989
9	0.433	0.644	0.644	0.644	1.567	2.422	2.889
10	1.111	1.322	1.544	1.322	1.844	2.056	2.756
11	0.089	0.3	0.244	0.2	0.978	1.789	1.422
12	-0.344	-0.344	-0.978	-0.511	-0.122	-0.122	0.378
13	1.767	1.478	1.767	1.867	1.867	2.056	2.156
30	1.111	1.322	1.544	1.322	1.844	2.056	2.756
27	0.089	0.3	0.244	0.2	0.978	1.789	1.422
33	0.7	0.311	0.778	0.667	1.056	1.567	2.378
36	1.278	1.489	2.311	2.822	3.333	3.056	2.589
4	2.39	2.68	2.67	2.02	1.91	1.56	1.41
14	2.46	2.56	2.96	2.44	2.18	2.29	2.37
15	2.72	3.01	3.02	2.10	2.18	1.62	1.62
16	2.96	3.17	3.12	2.90	2.68	2.61	2.61
17	2.49	2.70	2.99	2.34	2.34	1.53	1.63
18	2.56	2.81	2.70	2.66	2.66	2.62	2.02
19	2.57	2.78	2.78	2.78	2.56	2.09	2.01
20	2.678	2.667	2.744	3.211	2.967	2.5	2.5
21	3.067	3.278	3.167	2.233	2.089	1.978	1.833
22	3.5	3.711	3.711	3.133	3.022	3.022	2.8
23	3.589	3.844	4.067	3.522	3.256	3.211	3.022
34	2.167	2.378	2.378	2.156	2.011	2.389	2.522
37	3.122	3.333	3.333	3.333	3.333	3.056	2.589
31	2.244	2.233	2.456	2.456	2.756	2.756	2.233
24	3.389	3.678	3.678	3.033	2.922	2.567	2.422
28	3.267	3.478	3.478	2.922	3.067	3.067	2.778
25	2.544	2.756	2.256	2.256	2.322	1.811	1.522
38	2.39	2.68	2.67	2.02	1.91	1.56	1.41
29	2.39	2.68	2.67	2.02	1.91	1.56	1.41
32	2.39	2.68	2.67	2.02	1.91	1.56	1.41
35	2.46	2.56	2.96	2.44	2.18	2.29	2.37
26	2.244	2.233	2.456	2.456	2.756	2.756	2.233
39	3.411	3.622	3.622	3.622	3.578	3.578	3.578

[ 表 3] ：針對該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-18個胺基酸，以及C端的最後九個胺基酸的Cpds.1-39的平均疏水性與極性，以及針對該訊息胜肽的N端的第1-9個胺基酸的Cpds.1-39的平均極性(續)。

Cpd. 編號	疏水性分數	極性分數
第8-16個胺基酸	第9-17個胺基酸	第10-18個胺基酸	最後9個胺基酸	第1-9個胺基酸
1	-0.086	0.5	1	1	7.79
2	2.511	2.8	2.9	2.3	6.352
3	1.822	1.767	1.256	1.256	6.344
5	3.211	3.022	3.022	1.144	6.107
6	1.822	1.867	1.2	1.144	0.824
7	2.1	1.878	1.211	0.7	12.178
8	-1.578	-1.256	-1.267	1.356	23.538
9	2.844	2.322	2.589	0.2	11.466
10	2.756	2.233	2.367	0.133	6.548
11	2.022	2.244	2.256	1.711	12.024
12	0.378	0.889	1.489	-0.311	1.272
13	2.733	1.922	1.622	1.622	0.949
30	2.756	2.233	2.367	0.133	6.548
27	2.022	2.244	2.256	1.711	12.024
33	2.156	2.011	2.389	0.622	1.14
36	2.633	1.856	1.778	1.778	6.621
4	1.70	1.06	0.79	0.79	0.783
14	2.37	1.86	1.63	1.11	0.641
15	1.62	1.08	0.61	0.61	0.664
16	2.10	1.50	1.28	-0.04	0.43
17	1.67	0.78	0.42	0.42	0.659
18	1.46	1.40	1.43	-0.67	0.454
19	2.01	1.34	1.12	1.12	0.731
20	1.989	1.356	1.356	-0.378	0.231
21	1.622	1.511	1.511	0.656	0.436
22	2.9	2.678	2.122	1.833	0.419
23	3.022	2.467	1.656	1.144	0.26
34	1.711	1.711	1.867	0.622	0.646
37	2.633	1.856	1.778	1.778	0.56
31	2.367	1.767	0.956	0.133	0.64
24	2.211	1.567	1.3	1.3	0.443
28	2.778	2.178	2.178	1.711	0.41
25	1.3	0.944	0.722	0.722	0.599
38	1.70	1.06	0.79	0.79	0.783
29	1.70	1.06	0.79	0.79	0.783
32	1.70	1.06	0.79	0.79	0.783
35	2.37	1.86	1.63	1.11	0.641
26	2.367	1.767	0.956	0.133	0.64
39	3.111	2.889	2.6	1.556	0.26

[ 表 4] ：針對該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-13個胺基酸，以及C端的最後九個胺基酸的Cpds.1-39的平均疏水性與極性，以及針對該訊息胜肽的N端的第1-7個胺基酸的Cpds.1-39的平均極性。

Cpd. 編號	疏水性分數	極性分數
第1-7個胺基酸	第2-8個胺基酸	第3-9個胺基酸	第4-10個胺基酸	第5-11個胺基酸	第6-12個胺基酸	第7-13個胺基酸	最後9個胺基酸	第1-7個胺基酸
1	0.614	0.114	0.071	0.129	0.029	0.543	0.1	1	7.79
2	0.286	-0.1	0.229	0.129	0.957	1.229	1.829	2.157	7.724
3	1.129	0.743	1.843	2.514	2.314	2.957	2.957	0.671	7.9
5	1.271	1.6	2.643	2.986	4.086	4.086	4.029	1.029	7.814
6	1.614	1.886	2.343	3.014	3.729	3.629	2.886	0.029	0.991
7	-0.586	-0.314	0.586	1.257	1.957	2.343	3.243	0.043	15.589
8	-1.643	-2.557	-2.029	-2.029	-1.443	-1.986	-1.171	0.943	22.596
9	-0.243	0.029	0.029	0.029	0.929	2.029	2.629	-1.057	14.723
10	1.114	1.386	0.9	0.9	1.571	1.557	2.743	-0.243	8.174
11	-0.014	-0.029	-0.1	-0.157	0.171	1.214	1.4	1.886	15.16
12	-0.1	-0.486	-0.971	-0.643	-0.971	-0.686	-0.314	0.171	1.171
13	1.086	1.357	2.114	1.743	1.457	1.457	2.186	1.929	1.183
30	1.114	1.386	0.9	0.9	1.571	1.557	2.743	-0.243	8.174
27	-0.014	-0.029	-0.1	-0.157	0.171	1.214	1.4	1.886	15.16
33	0.586	0.857	0.686	-0.086	0.557	1.071	1.971	0.186	1.221
36	0.929	1.014	1.829	2.486	3.2	3.486	3.486	1.143	8.09
4	2.2	2.2	2.9	2.9	2.243	1.657	1.514	0.486	0.784
14	2.071	2.343	3	2.857	3.371	2.857	1.857	2	0.787
15	2.314	2.686	3.357	3.457	2.8	1.557	2.314	0.257	0.817
16	2.714	2.986	2.929	2.929	2.929	3.286	3.286	-0.571	0.516
17	2.157	2.529	3.043	2.943	2.657	2.071	2.8	-0.257	0.779
18	3.443	3.114	2.471	2.471	2.329	2.471	2.471	-0.3	0.347
19	2.4	2.486	2.486	2.771	2.771	2.486	2.386	0.357	0.71
20	2.643	2.629	2.629	2.943	3.329	3.329	2.729	-0.971	0.279
21	2.857	3.129	3.129	3.029	2.886	1.786	1.6	1	0.523
22	3.357	3.629	3.686	3.586	3.586	2.943	2.8	2.057	0.501
23	3.471	3.8	4.086	4.086	4.029	3.329	2.986	1.029	0.297
34	1.986	2.114	1.971	1.971	1.971	2.457	3.043	0.186	0.73
37	3.3	3.386	3.143	3.143	3.2	3.486	3.486	1.143	0.297
31	1.8	2.071	2.357	2.071	2.743	2.743	2.457	-0.243	0.786
24	3.486	3.486	3.543	3.543	3.543	2.957	2.814	0.486	0.347
28	3.114	3.386	3.386	3.329	3.514	2.857	3.143	1.886	0.49
25	2.371	2.457	2.457	2.6	2.686	2.543	2.186	0.486	0.54
38	2.2	2.2	2.9	2.9	2.243	1.657	1.514	0.486	0.784
29	2.2	2.2	2.9	2.9	2.243	1.657	1.514	0.486	0.784
32	2.2	2.2	2.9	2.9	2.243	1.657	1.514	0.486	0.784
35	2.071	2.343	3	2.857	3.371	2.857	1.857	2	0.787
26	1.8	2.071	2.357	2.071	2.743	2.743	2.457	-0.243	0.786
39	3.586	3.857	3.571	3.571	3.514	3.514	3.514	1.686	0.316

[ 表 5] ：針對該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-9個胺基酸，以及C端的最後九個胺基酸的Cpds.1-39的平均疏水性與極性，以及針對該訊息胜肽的N端的第1-5個胺基酸的Cpds.1-39的平均極性。

Cpd. 編號	疏水性分數	極性分數
第1-5個胺基酸	第2-6個胺基酸	第3-7個胺基酸	第4-8個胺基酸	第5-9個胺基酸	最後9個胺基酸	第1-5個胺基酸
1	0.26	-0.28	0.56	1.02	-0.02	0.34	10.546
2	1.26	0.8	0.1	-0.96	-0.26	2.1	0.914
3	0.12	0.3	1.98	2	1.92	-0.38	10.964
5	0.1	0.56	2.1	2.58	4.12	0.32	10.888
6	0.46	0.98	1.96	2.9	3.62	-0.18	1.336
7	-0.82	-2.1	-0.5	0.44	1.14	-0.66	11.398
8	-1.88	-3.04	-1.78	-2.36	-1.62	-0.08	21.734
9	-0.18	-0.64	-1.08	-1.08	0.18	-1.08	20.612
10	1.7	0.42	0.82	0.82	0.68	0.06	1.018
11	-0.2	-0.08	-0.32	-0.8	-0.34	1.96	20.612
12	0.7	0.18	-0.88	-0.96	-0.96	-0.88	0.602
13	1.92	1.28	1.3	1.68	1.82	1.38	1.002
30	1.7	0.42	0.82	0.82	0.68	0.06	1.018
27	-0.2	-0.08	-0.32	-0.8	-0.34	1.96	20.612
33	0.76	-0.32	0.52	0.52	0.34	-0.02	0.978
36	-0.22	0.16	1.56	2.22	2.88	0.08	11.274
4	2.46	2.84	2.84	2.32	2.4	0.38	0.74
14	1.38	1.76	2.68	2.68	3.6	1.14	1.05
15	2.56	2.02	3.04	3.18	3.18	0.36	0.784
16	2.6	2.58	2.58	2.58	2.58	-0.9	0.696
17	2.44	1.8	2.8	2.8	2.6	-0.86	0.742
18	3.3	3.68	3.68	2.76	1.86	-0.54	0.434
19	3.02	3.14	2.22	2.36	2.36	-0.22	0.364
20	2.18	2.56	2.56	3	3.4	-0.42	0.338
21	3.56	3.94	2.86	2.72	2.72	0.34	0.39
22	3.56	3.94	3.56	3.42	3.5	1.76	0.39
23	3.26	3.72	4.12	4.12	4.04	0.32	0.364
34	2.34	1.64	1.64	1.44	1.24	-0.02	0.68
37	3.1	3.48	3.4	3.14	2.88	0.08	0.364
31	2.08	2.46	1.78	1.78	2.72	0.06	0.758
24	3.36	3.74	3.74	3.22	3.3	0.38	0.434
28	3.24	3.22	3.22	3.14	3.4	1.96	0.66
25	2.2	2.18	2.18	2.12	3.14	0.26	0.73
38	2.46	2.84	2.84	2.32	2.4	0.38	0.74
29	2.46	2.84	2.84	2.32	2.4	0.38	0.74
32	2.46	2.84	2.84	2.32	2.4	0.38	0.74
35	1.38	1.76	2.68	2.68	3.6	1.14	1.05
26	2.08	2.46	1.78	1.78	2.72	0.06	0.758
39	3.5	3.88	3.88	3.88	3.4	0.6	0.39

mRNA 的體外轉錄

使用Xho I將IGF1_pVAX.A120質體線性化，並使用體外轉錄(IVT)系統產生IGF1 mRNA (Cpd.1)。類似地，使用PCR為基礎的體外轉錄(IVT)，在50-200 µg範圍內產生具有改變的前結構域(訊息胜肽，在載體pMA-T與pMA-RQ (圖16)中編碼的Cpd.2-Cpd.7)的IGF1 mRNA，以用於體外轉錄實驗。相似地，使用PCR為基礎的體外轉錄(IVT)，在50-200 µg範圍內產生具有改變的訊息胜肽的在pMA-T與pMA-RQ載體中編碼的Cpd.1 (SEQ ID No.40)與Cpd. 8-26，以用於體外轉錄實驗。除了IGF1 mRNA外，在50-200 µg範圍內產生具有內源性或改變的訊息胜肽的紅血球生成素(EPO，Cpd. 27-29)、胰島素(INS，Cpd. 30-32)、介白素4 (IL4，Cpd. 33-35)，以及介白素10 (IL10，Cpd. 36-38)，以用於體外轉錄實驗。

HEK293T 細胞的體外轉染以檢測 IGF1 分泌

將HEK293T細胞與Cpd.1-Cpd.7 mRNA培養24小時後，評估細胞培養上清液中分泌的IGF1含量(圖17)。Cpd.1能夠誘導最多達50 ng/ml的IGF1分泌。Cpd.4誘導的IGF1分泌顯著高於Cpd.1 (3.3倍，p＜0.001)。為了評估Cpd.1與Cpd.4的濃度依賴性，測試不同濃度的Cpd.1與Cpd.4 (0.02-2 µg/孔)對其誘導IGF1分泌到上清液中(圖18)。Cpd.1的EC₅₀ 為0.89 µg，Cpd.4的EC₅₀ 為0.13 µg，表示Cpd.4在誘導HEK293T細胞分泌IGF1方面的功效多6.8倍。合併圖17與18的數據，顯示Cpd.4誘導的HEK293T細胞中的IGF1分泌比Cpd.1更強且更有效，表示該訊息胜肽在這種細胞類型中促進產生的IGF1的細胞性釋出。

C2C12 細胞的體外轉染以檢測 IGF1 分泌

將C2C12細胞與Cpd.1-Cpd.7 mRNA培養24小時後，評估細胞培養上清液中分泌的IGF1含量(圖19)。Cpd.1能夠誘導最多達60 ng/ml的IGF1分泌。Cpd.4誘導的IGF1分泌顯著高於Cpd.1 (6.1倍，p＜0.001)。數據顯示Cpd.4誘導的C2C12細胞中的IGF1分泌比Cpd.1更強，表示該訊息胜肽在這種細胞類型中也促進產生的IGF1的細胞性釋出。

HSkMC 細胞的體外轉染以檢測 IGF1 分泌

將HSkMC細胞與Cpd.1或Cpd.4 mRNA培養24小時後，評估細胞培養上清液中分泌的IGF1含量(圖20)。Cpd.1能夠誘導最多達30 ng/ml的IGF1分泌。Cpd.4誘導的IGF1分泌顯著高於Cpd.1 (3.1倍，p＜0.05)。數據顯示Cpd.4誘導的初代HSkMC細胞中的IGF1分泌比Cpd.1更強，表示該訊息胜肽在這種細胞類型中也促進產生的IGF1的細胞性釋出。

HEK293T 細胞中其他 mRNA 的體外轉染以檢測 IGF1 分泌

於另一組測試中，分析Cpd.8-Cpd.26對調節HEK293T細胞IGF1分泌的潛力。與作為對照的Cpd.1以及作為測試的Cpd.8-Cpd.26的mRNA培養24小時後，評估細胞培養上清液中分泌的IGF1含量(圖22)。將Cpd.1反應標準化為1，數據表示為Cpd.1的倍數變化。相較於Cpd.1，Cpd.8、Cpd.9、Cpd.10、Cpd.11、Cpd.12，以及Cpd13顯示出IGF1的分泌減少，而Cpd.14、Cpd.15、Cpd.16、Cpd.17、Cpd.18、Cpd.19、Cpd.20、Cpd.21、Cpd.23、Cpd.24、Cpd.25，以及Cpd.26能夠誘導IGF1的分泌顯著最高達2.6倍。因此，Cpd.15與Cpd.21顯示出與Cpd.4類似的誘導作用(見圖17)。數據合計顯示Cpd.14、Cpd.15、Cpd.16、Cpd.17、Cpd.18、Cpd.19、Cpd.20、Cpd.21、Cpd.23、Cpd.24、Cpd.25，以及Cpd.26誘導的HEK293T細胞中IGF1的分泌比Cpd.1更強更有效，表示這些訊息胜肽在這種細胞類型中促進產生的IGF1的細胞性釋出。

HepG2 細胞的體外轉染以檢測 IGF1 分泌

將HepG2細胞與作為對照的Cpd.1以及作為測試的Cpd.4-Cpd.26的mRNA培養24小時後，評估細胞培養上清液中分泌的IGF1含量(圖23)。將Cpd.1反應標準化為1，數據表示為Cpd.1的倍數變化。相較於Cpd.1，Cpd.8、Cpd.9，以及Cpd.12顯示IGF1的分泌減少，而Cpd.4、Cpd.14、Cpd.15、Cpd.16、Cpd.17、Cpd.18、Cpd.19、Cpd. 20、Cpd.21、Cpd.22、Cpd.23、Cpd.24、Cpd.25，以及Cpd.26能夠誘導IGF1的分泌顯著最高達8.3倍。數據合計顯示Cpd.4、Cpd.14、Cpd.15、Cpd.16、Cpd.17、Cpd.18、Cpd.19、Cpd.20、Cpd.21、Cpd.22、Cpd.23 、Cpd.24、Cpd.25，以及Cpd.26誘導的HepG2細胞中IGF1的分泌比Cpd.1更強，表示這些訊息胜肽在這種細胞類型中促進產生的IGF1的細胞性釋出。

IMR32 神經元細胞的體外轉染以檢測 IGF1 分泌

將IMR324神經元細胞與作為對照的Cpd.1以及作為測試的Cpd.4-Cpd.24的mRNA培養24小時後，評估細胞培養上清液中分泌的IGF1含量(圖24)。將Cpd.1反應標準化為1，數據表示為Cpd.1的倍數變化。相較於Cpd.1，Cpd.4、Cpd.14、Cpd.15、Cpd.16、Cpd.17、Cpd.20、Cpd.22、Cpd.23，以及Cpd.24能夠誘導IGF1的分泌顯著最高達2.6倍。數據合計顯示Cpd.4、Cpd.14、Cpd.15、Cpd.16、Cpd.17、Cpd.20、Cpd.22、Cpd.23，以及Cpd.24誘導的IMR32神經元細胞中IGF1的分泌比Cpd.1更強，表示這些訊息胜肽在這種細胞類型中促進產生的IGF1的細胞性釋出。

人類軟骨細胞的體外轉染以檢測 IGF1 分泌

將軟骨細胞與作為對照的Cpd.1以及作為測試的Cpd.4-Cpd.25的mRNA培養24小時後，評估細胞培養上清液中分泌的IGF1含量(圖25)。將Cpd.1反應標準化為1，數據表示為Cpd.1的倍數變化。相較於Cpd.1， Cpd.4、Cpd.14、Cpd.15、Cpd.16、Cpd.20、Cpd.21、Cpd.22、Cpd.24，以及Cpd.25能夠誘導IGF1的分泌顯著最高達1.9倍。數據合計顯示Cpd.4、Cpd.14、Cpd.15、Cpd.16、Cpd.20、Cpd.21、Cpd.22、Cpd.24，以及Cpd.25誘導的軟骨細胞中IGF1的分泌比Cpd.1更強，表示這些訊息胜肽在這種細胞類型中促進產生的IGF1的細胞性釋出。

大鼠運動神經元的體外轉染以檢測 IGF1 分泌

將大鼠運動神經元或大鼠轉基因SOD1^G93A (圖26B)與作為對照的Cpd.1以及對野生型(圖26A)作為測試的Cpd.4、Cpd.14以及Cpd.17，或對轉基因SOD1^G93A 作為測試的Cpd.14及Cpd.17的mRNA培養48小時後，評估細胞培養上清液中分泌的IGF1含量(圖26A與B)。將Cpd.1反應標準化為1，數據表示為Cpd.1的倍數變化。相較於Cpd.1， Cpd.4、Cpd.14，以及Cpd.17能夠誘導野生型的IGF1分泌最高達4.3倍或誘導轉基因SOD1^G93A 的IGF1分泌最高達9.3倍。數據合計顯示Cpd.4、Cpd.14，以及Cpd.17誘導運動神經元中的IGF1分泌比Cpd.1更強，表示這些訊息胜肽在這些細胞類型中促進產生的IGF1的細胞性釋出。

HEK293T 、 HepG2 以及 A549 細胞的體外轉染以檢測 EPO 分泌

將HEK293T、HepG2或A549細胞與作為對照的Cpd.27以及作為測試的Cpd.28與Cpd.29的mRNA培養24小時後，評估細胞培養上清液中分泌的紅血球生成素(EPO)含量(圖27)。將Cpd.27反應標準化為1，數據表示為Cpd.27的倍數變化。相較於Cpd.27，Cpd.28能夠誘導HEK293T細胞(圖27A)、HepG2細胞(圖27B)，以及A549細胞(圖27C)分泌EPO的量最高達1.8倍；相較於Cpd.27，Cpd.29能夠誘導HEK293T細胞(圖27A)、HepG2細胞(圖27B)，以及A549細胞(圖27C)分泌EPO的量最高達1.4倍。數據合計顯示Cpd.28與Cpd.29誘導EPO的分泌比Cpd.27更強，表示這些訊息胜肽在這些細胞類型中促進產生的EPO的細胞性釋出。

HEK293T 細胞的體外轉染以檢測 INS 分泌

將HEK293T細胞與作為對照的Cpd.30以及作為測試的Cpd.31與Cpd.32的mRNA培養24小時後，評估細胞培養上清液中分泌的胰島素(INS)含量(圖28)。將Cpd.30反應標準化為1，數據表示為Cpd.30的倍數變化。相較於Cpd.30，Cpd.31與Cpd.32能夠誘導HEK293T細胞分泌INS的量最高達3.9倍。數據合計顯示Cpd.31與Cpd.32誘導INS的分泌比Cpd.30更強，表示這些訊息胜肽在這種細胞類型中促進產生的INS的細胞性釋出。

HEK293T 、 HepG2 、 THP-1 ，以及 A549 細胞的體外轉染以檢測 IL4 分泌

將HEK293T、HepG2、THP-1或A549細胞與作為對照的Cpd.33以及作為測試的Cpd.34與Cpd.35的mRNA培養24小時後，評估細胞培養上清液中分泌的介白素-4 (IL-4)含量(圖29)。將Cpd.33反應標準化為1，數據表示為Cpd.33的倍數變化。相較於Cpd.33，Cpd.34能夠誘導HEK293T細胞(圖29A)、HepG2細胞(圖29B)、THP-1細胞(圖29C)，以及A549細胞(圖29D)中IL4的分泌量最高達2.2倍；相較於Cpd.33，Cpd.35能夠誘導HepG2細胞(圖29B)以及THP-1細胞(圖29C)中IL4的分泌量最高達1.3倍。數據合計顯示Cpd.34與Cpd.35誘導IL4的分泌比Cpd.33更強，表示這些訊息胜肽在這些細胞類型中促進產生的IL4的細胞性釋出。

HEK293T 、 HepG2 以及 THP-1 細胞的體外轉染以檢測 IL10 分泌

將HEK293T、HepG2或THP-1細胞與作為對照的Cpd.36以及作為測試的Cpd.37與Cpd.38的mRNA培養24小時後，評估細胞培養上清液中分泌的介白素-10 (IL-10)含量(圖30)。將Cpd.36反應標準化為1，數據表示為Cpd.36的倍數變化。相較於Cpd.36，Cpd.37在HEK293T細胞(圖30A)、HepG2細胞(圖30B)，以及THP-1細胞(圖30C)中誘導IL10的分泌量最高達2.2倍；相較於Cpd.36，Cpd.38誘導THP-1細胞的IL10分泌量為1.4倍(圖30C)。數據合計顯示Cpd.37與Cpd.38誘導IL10的分泌比Cpd.36更強，表示這些訊息胜肽在這些細胞類型中促進產生的IL10的細胞性釋出。

Cpd.39 在 HepG2 與人類初代軟骨細胞中的體外轉染，以檢測 IGF1 的分泌

將HepG2或軟骨細胞與作為對照的Cpd.1以及作為測試的Cpd.39的mRNA培養24小時後，評估細胞培養上清液中分泌的IGF1含量(圖31)。將Cpd.1反應標準化為1，數據表示為Cpd.1的倍數變化。相較於Cpd.1，Cpd.39能夠誘導HepG2(圖31A)以及人類初代軟骨細胞(圖31B)分泌的IGF1量顯著最高達1.4倍。數據合計顯示Cpd.39誘導IGF1的分泌比Cpd.1更強，表示這些訊息胜肽在這些細胞類型中促進產生的IGF1的細胞性釋出。

實施例 2

為了測試在骨骼肌損傷小鼠模型中局部應用的IGF-I mRNA的功效，在第0天對8-10週齡的雄性C57BL6/J小鼠的脛骨前肌(tibialis anterior, TA)進行虎蛇毒素(notexin)誘導的肌毒性損傷。受傷後第1天，透過肌肉注射將載體或1 µg mRNA (Cpd.4)注入受傷的肌肉中，並在受傷後第4天重複進行。在損傷後第1、4、7、10、14、21以及28天測量脛骨前肌(TA)中的肌肉功能。在整個研究中還評估了對側脛骨前肌(TA)肌肉的子集，以評估脛骨前肌(TA)肌肉功能的健康對照程度。

方法與材料

IGF-1 的選殖與 IGF-1 mRNA 的體外轉錄

如實施例1中所述進行IGF-1的選殖以及IGF-1mRNA的體外轉錄。Cpd.4的密碼子優化的DNA用於選殖到pMA-T載體中，以提供如圖11所示之構築體。該構築體用於產生用於mRNA處理的體外轉錄的mRNA。

虎蛇毒素(Notexin)傷害

對每隻小鼠，製備濃度為在40 μl鹽水中0.4 μg的虎蛇毒素(Notexin) (Latoxan公司，瓦朗斯市，法國)。在一小室中誘導小鼠麻醉(約4-5%異氟烷，至有效量)，並透過鼻錐維持麻醉(約2-3%異氟烷，至有效量)。然後將小鼠保持在溫暖的(37^o C)手術台上。以脫毛膏(脫毛劑45秒，然後以水沖洗3次)準備脛骨前肌(TA)中腹部的皮膚，然後再準備三遍交替的Betadyne消毒劑以及70%酒精擦洗，以防止皮膚上的細菌污染軟組織。使用結核菌素注射器，將0.04 ml準備好的虎蛇毒素(Notexin)肌肉注射到右脛骨前肌(TA)的腹部。在該過程中，動物沒有可觀察到的疼痛，並且隨後進行了適當的抗痛治療(注射後48小時，每12小時0.05-0.1 mg/kg丁丙諾啡)。在麻醉誘導時給予第一劑鎮痛藥，以確保恢復時有鎮痛藥存在。在第一個48小時後，每周至少對動物進行兩次檢查，以確保其正常癒合並恢復正常步態。

mRNA 處理

將小鼠隨機分配至mRNA或載劑處理。如上所述，使用異氟烷麻醉小鼠，並對受傷的脛骨前肌(TA)進行肌肉內注射mRNA或載劑處理一次。

體內脛骨前肌 (TA) 功能評估

在受傷後第1、4、7、10、14、21，以及28天，用305C肌肉槓桿系統(Aurora Scientific Inc.公司，黃刀鎮，加拿大)在體內測量肌肉性能。如上所述完成小鼠的麻醉，並將小鼠置於恆溫控制的桌子上。使用壓在脛骨頭上的銷釘將膝蓋隔離，並將腳牢牢固定在電機軸上的踏板上。對於背屈肌群，透過經皮神經刺激腓神經引起收縮。透過在每次收縮之間至少增加30秒的電流來避免疲勞，確定最佳的等距抽搐扭矩。然後以增加的刺激頻率(0.2 ms脈衝，500 ms訓練持續時間)執行一系列刺激：1、10、20、40、60、80、100、150 Hz，然後以1 Hz進行最終刺激。繪製最大等軸測力。

數據分析

將數據分組並計算平均值與標準差。使用GraphPad Prism 8 (聖地亞哥市，美國)進行統計分析。使用學生氏t檢定進行比較。

結果

實施例2顯示，在由毒素(notexin)誘導的脛骨前肌(TA)損傷的小鼠模型中，在肌肉損傷後的第1天及第4天，肌內治療IGF-I mRNA導致肌肉功能的加速及完全恢復(圖21)。以1 µg Cpd.4處理的動物，到16天時達到了健康範圍的功能程度。相較之下，到第28天，以賦形劑以及較低劑量治療的小鼠對照動物甚至都沒有達到完全的功能恢復。因此，數據顯示，IGF-I mRNA治療可以加速肌肉損傷後的癒合，且可以透過完全恢復肌肉功能來潛在地預防慢性損傷。因此，令人驚訝地，在受傷後僅需要兩次劑量。

圖 1 所示為Cpd.1的DNA與RNA序列。(A ) 所示為含有其前結構域、原結構域及編碼結構域的密碼子優化的人類IGF1的DNA序列(SEQ ID NO: 1)。該前結構域(訊息胜肽)的序列以斜體字 表示，該原結構域的序列以底線表示，該IGF-I編碼結構域以粗體字 表示，該終止密碼子以 粗體字 表示。(B ) 所示為人類IGF1的前結構域、原結構域及編碼結構域的RNA序列(SEQ ID NO: 2)，其中尿苷為N1-甲基假尿苷。前結構域與原結構域在分泌時被切割。

圖 2 所示為Cpd.2的DNA與RNA序列。(A ) 所示為密碼子優化的人類IGF1的DNA序列(SEQ ID NO: 3)，包含IGF2的前結構域以及IGF1的原結構域及編碼結構域。該前結構域(訊息胜肽)的序列以斜體字 表示，該原結構域的序列以底線表示，該IGF1編碼結構域以粗體字 表示，該終止密碼子以 粗體字 表示。(B ) 所示為IGF2的前結構域以及IGF1的原結構域及編碼結構域的RNA序列(SEQ ID NO: 4)，其中尿苷為N1-甲基假尿苷。前結構域與原結構域在分泌時被切割。

圖 3 所示為Cpd.3的DNA與RNA序列。(A ) 所示為密碼子優化的人類IGF1的DNA序列(SEQ ID NO: 5)，包含ALB的前結構域以及IGF1的原結構域及編碼結構域。該前結構域(訊息胜肽)的序列以斜體字 表示，該原結構域的序列以底線表示，該IGF1編碼結構域以粗體字 表示，該終止密碼子以 粗體字 表示。(B ) 所示為ALB的前結構域以及IGF1的原結構域及編碼結構域的RNA序列(SEQ ID NO: 6)，其中尿苷為N1-甲基假尿苷。前結構域與原結構域在分泌時被切割。

圖 4 所示為Cpd.4的DNA與RNA序列。(A ) 所示為密碼子優化的人類IGF1的DNA序列(SEQ ID NO: 7)，包含BDNF的前結構域以及IGF1的原結構域及編碼結構域。該前結構域(訊息胜肽)的序列以斜體字 表示，該原結構域的序列以底線表示，該IGF1編碼結構域以粗體字 表示，該終止密碼子以 粗體字 表示。(B ) 說明了BDNF的前結構域以及IGF1的原結構域及編碼結構域的RNA序列(SEQ ID NO: 8)，其中尿苷為N1-甲基假尿苷。前結構域與原結構域在分泌時被切割。

圖 5 所示為Cpd.5的DNA與RNA序列。(A ) 所示為密碼子優化的人類IGF1的DNA序列(SEQ ID NO: 9)，包含CXCL12的前結構域以及IGF1的原結構域及編碼結構域。該前結構域(訊息胜肽)的序列以斜體字 表示，該原結構域的序列以底線表示，該IGF1編碼結構域以粗體字 表示，該終止密碼子以 粗體字 表示。(B ) 說明了CXCL12的前結構域以及IGF1的原結構域及編碼域的RNA序列(SEQ ID NO: 10)，其中尿苷為N1-甲基假尿苷。前結構域與原結構域在分泌時被切割。

圖 6 所示為Cpd.6的DNA與RNA序列。(A ) 所示為密碼子優化的人類IGF1的DNA序列(SEQ ID NO: 11)，包含合成的訊息胜肽1的前結構域以及IGF1的原結構域及編碼結構域。該前結構域(訊息胜肽)的序列以斜體字 表示，該原結構域的序列以底線表示，該IGF1編碼結構域以粗體字 表示，該終止密碼子以 粗體字 表示。(B ) 所示為合成訊息胜肽1的前結構域以及IGF1的原結構域及編碼結構域的RNA序列(SEQ ID NO: 12)，其中尿苷為N1-甲基假尿苷。前結構域與原結構域在分泌時被切割。

圖 7 所示為Cpd.7的DNA與RNA序列。(A ) 所示為密碼子優化的人類IGF1的DNA序列(SEQ ID NO: 13)，包含合成的訊息胜肽2的前結構域以及IGF1的原結構域及編碼結構域。該前結構域(訊息胜肽)的序列以斜體字 表示，該原結構域的序列以底線表示，該IGF1編碼結構域以粗體字 表示，該終止密碼子以 粗體字 表示。(B ) 所示為合成訊息胜肽2的前結構域以及IGF1的原結構域及編碼域的RNA序列(SEQ ID NO: 14)，其中尿苷為N1-甲基假尿苷。前結構域與原結構域在分泌時被切割。

圖 8 所示為帶有以 粗體字 標記的Cpd.1插入片段的載體pVAX.A120的DNA序列(SEQ ID NO: 15)。Cpd.1的開放閱讀框(open reading frames, ORFs)從其原始質體中被切下並次選殖到該載體中。

圖 9 所示為帶有以 粗體字 標記的Cpd.2插入片段的載體pMA-T的DNA序列(SEQ ID NO: 16)。Cpd.2的ORFs從其原始質體中被切下並次選殖到該載體中。

圖 10 所示為帶有以 粗體字 標記的Cpd.3插入片段的載體pMA-T的DNA序列(SEQ ID NO: 17)。Cpd.3的ORFs從其原始質體中被切下並次選殖到該載體中。

圖 11 所示為帶有以 粗體字 標記的Cpd.4插入片段的載體pMA-T的DNA序列(SEQ ID NO: 18)。Cpd.4的ORFs從其原始質體中被切下並次選殖到該載體中。

圖 12 所示為帶有以 粗體字 標記的Cpd.5插入片段的載體pMA-T的DNA序列(SEQ ID NO: 19)。Cpd.5的ORFs從其原始質體中被切下並次選殖到該載體中。

圖 13 所示為帶有以 粗體字 標記的Cpd.6插入片段的載體pMA-RQ的DNA序列(SEQ ID NO: 20)。Cpd.6的ORFs從其原始質體中被切下並次選殖到該載體中。

圖 14 所示為帶有以 粗體字 標記的Cpd.7插入片段的載體pMA-RQ的DNA序列(SEQ ID NO: 21)。Cpd.7的ORFs從其原始質體中被切下並次選殖到該載體中。

圖 15 所示為用於擴增為了mRNAs的體外轉錄(in vitro transcription, IVT)的pMA-T與pMA-RQ質體的正向引子(SEQ ID NO: 22)及反向引子(SEQ ID NO: 23)。

圖 16 所示為Cpd.1-Cpd.7訊息胜肽(SEQ ID Nos: 24-37)的基因名稱、UniProt編號、密碼子優化的DNA及胺基酸序列以及載體。注意，Cpd.6與Cpd.7的訊息胜肽為合成胜肽，與公開資料庫中的已知蛋白質序列不吻合。

圖 17 所示為以Cpd.1-Cpd.7的mRNA轉染誘導人類胚胎腎細胞(HEK293T)分泌IGF1。將HEK293T細胞各以2 µg Cp.1-Cpd.7轉染，並在24小時後使用特異性ELISA測量細胞培養上清液中分泌的IGF1。Cpd.4誘導的IGF1分泌明顯高於Cpd.1 (3.3倍)。數據表示平均值±4重複平均值的標準差。以單因子變異數分析(one-way ANOVA)與鄧尼特氏多重比較檢定評估顯著性(***，＜0.001)。

圖 18 所示為以Cpd.1或Cpd.4的mRNA轉染後HEK293T細胞中IGF1分泌誘導的濃度依賴性。以不同濃度(0、0.02、0.06、0.2、0.6或2 µg)的Cpd.1或Cpd.4轉染細胞，並在24小時後使用特異性ELISA測量細胞培養上清液中分泌的IGF1。Cpd.4誘導的IGF1分泌((EC₅₀ 0.134 µg)比Cpd.1 (EC₅₀ 0.889 µg)更有效。數據表示平均值±2重複平均值的標準差。以該二條曲線的雙因子變異數分析(two-way ANOVA)評估顯著性(***，＜0.001)。

圖 19 所示為以Cpd.1-Cpd.7的mRNA轉染誘導小鼠骨骼肌細胞(C2C12)分泌IGF1。將C2C12細胞各以2 µg Cp.1-Cpd.7轉染，並在24小時後使用特異性ELISA測量細胞培養上清液中分泌的IGF1。Cpd.4誘導的IGF1分泌顯著高於Cpd.1 (6.1倍)。數據表示平均值±4重複平均值的標準差。以單因子變異數分析(one-way ANOVA)與鄧尼特氏多重比較檢定評估顯著性(***，＜0.001)。

圖 20 所示為以Cpd.1與Cpd.4的mRNA轉染誘導人類初代骨骼肌細胞(HSkMC)分泌IGF1。將HSkMC細胞各以2 µg Cp.1或Cpd.4轉染，並在24小時後使用特異性ELISA測量細胞培養上清液中分泌的IGF1。Cpd.4誘導的IGF1分泌顯著高於Cpd.1 (3.1倍)。數據表示平均值±3重複平均值的標準差。以單因子變異數分析(one-way ANOVA)與鄧尼特氏多重比較檢定評估顯著性(**，＜0.01)。

圖 21 所示為虎蛇毒素(notexin)損傷後脛骨前肌(tibialis anterior, TA)的功能恢復。在經由肌肉注射(第0天)引起的虎蛇毒素(notexin)損傷後，在第1天與第4天透過肌肉注射進行了兩次IGF-I mRNA處理(Cpd. 4 (1 µg)) (參見箭頭指示)。對照組接受載劑溶液。在受傷後第1、4、7、10、14、21以及28天評估肌肉功能。數據表示平均值±每組及每個時間點5隻小鼠的平均值的標準差(SEM)。星號表示透過學生氏t檢定評估，Cpd.4處理組與對照組具有顯著差異(p ＜0.05)。

圖 22 所示為以Cpd.1作為對照以及以Cpd.8-Cpd.26的mRNA轉染誘導人類胚胎腎細胞(HEK293T)分泌IGF1。HEK293T細胞各以0.3 μg Cpd.1以及Cpd.8-Cpd.26轉染，並在24小時後使用特異性ELISA測量細胞培養上清液中分泌的IGF1。IGF1的分泌以Cpd.1標準化。IGF1分泌。Cpd. 8、9、10、11、12以及13顯示IGF1分泌減少，而Cpd. 14、15、16、17、18、19、20、21、23、24、25以及26誘導的IGF1分泌高於Cpd.1 (最多達2.6倍)。數據表示平均值±每種Cpd 2-11重複平均值的標準差。以學生氏t檢定評估單個Cpd與Cpd.1比較的顯著性(*，p＜0.05；**，p＜0.001；***，＜0.001)。

圖 23 所示為以Cpd.1作為對照以及以Cpd.4-Cpd.26的mRNA轉染誘導人類肝細胞(HepG2)分泌IGF1。HepG2細胞各以0.3 μg Cp.1以及Cpd.4-Cpd.26轉染，並在24小時後使用特異性ELISA測量細胞培養上清液中分泌的IGF1。IGF1的分泌以Cpd.1標準化。Cpd. 8、9以及12顯示IGF1分泌減少，而Cpd. 4、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25以及26誘導的IGF1分泌高於Cpd.1 (最多達8.3倍)。數據表示平均值±每種Cpd 2-4重複平均值的標準差。以學生氏t檢定評估單個Cpd與Cpd.1比較的顯著性(**，p＜0.001；***，＜0.001)。

圖 24 所示為以Cpd.1作為對照以及以Cpd.4-Cpd.24進行mRNA轉染誘導人類神經元細胞(IMR32)分泌IGF1。IMR32細胞各以0.3 μgCp.1以及Cpd.4-Cpd.24轉染，並在24小時後使用特異性ELISA測量細胞培養上清液中分泌的IGF1。IGF1的分泌以Cpd.1標準化。Cpd. 4、14、15、16、17、20、22、23以及24誘導的IGF1分泌高於Cpd.1 (最多達2.6倍)。數據表示平均值±每種Cpd 2-6重複平均值的標準差。以學生氏t檢定評估單個Cpd與Cpd.1比較的顯著性(*，p＜0.05；***，＜0.001)。

圖 25 所示為以Cpd.1作為對照以及以Cpd.4-Cpd.25的mRNA轉染誘導人類初代軟骨細胞分泌IGF1。軟骨細胞各以0.6 μg Cp.1以及Cpd.4-Cpd.25轉染，並在24小時後使用特異性ELISA測量細胞培養上清液中分泌的IGF1。IGF1的分泌以Cpd.1標準化。Cpd. 4、14、15、16、20、21、22、24以及25誘導的IGF1分泌高於Cpd.1 (最多達1.9倍)。數據表示平均值±每種Cpd 1-2重複平均值的標準差。以學生氏t檢定評估單個Cpd與Cpd.1比較的顯著性(*，p＜0.0；***，＜0.001)。

圖 26 所示為以Cpd.1作為對照以及以Cpd.4-Cpd.17的mRNA轉染誘導大鼠野生型(A)或SOD1G^S93A (B)初代運動神經元分泌IGF1。將大鼠野生型初代運動神經元各以0.3 μg Cp.1、Cpd.4、Cpd.14以及Cpd.17轉染，而大鼠S SOD1G^S93A 初代運動神經元各以0.3 μg Cp.1、Cpd.14以及Cpd.17轉染，並在48小時後使用特異性ELISA測量細胞培養上清液中分泌的IGF1。IGF1的分泌以Cpd.1標準化。Cpd. 4、14以及17誘導的IGF1分泌高於Cpd.1 (野生型最多達4.3倍，SOD1^S93A 最多達9.3倍)。數據表示平均值±每種Cpd 2重複平均值的標準差。以學生氏t檢定評估單個Cpd與Cpd.1比較的顯著性，顯示沒有統計學上的差異。

圖 27 所示為以Cpd.27、Cpd.28或Cpd.29的mRNA轉染誘導人類胚胎腎細胞(HEK293T，A )、人類肝細胞(HepG2，B )，以及人類肺癌細胞(A549，C )分泌紅血球生成素(erythropoietin, EPO)。細胞各以0.3-0.9 μg Cpd.27、Cpd.28或Cpd.29轉染，並在24小時後使用特異性ELISA測量細胞培養上清液中分泌的EPO。EPO的分泌以Cpd.27標準化。在所分析的所有三種細胞類型中，Cpd.28與Cpd.29誘導的EPO分泌均高於Cpd.27 (最多達1.8倍)。數據表示平均值±每種Cpd 3-8重複平均值的標準差。以學生氏t檢定評估單個Cpd與Cpd.27比較的顯著性 (*，p ＜0.05；***，＜0.001)。

圖 28 所示為以Cpd.30、Cpd.31或Cpd.32的mRNA轉染誘導人類胚胎腎細胞(HEK293T)分泌胰島素(insulin, INS)。細胞各以0.6 μg Cpd.30、Cpd.31或Cpd.32轉染，並在24小時後使用特異性ELISA測量細胞培養上清液中分泌的INS。INS的分泌以Cpd.30標準化。Cpd. 31與Cpd. 32誘導的INS分泌高於Cpd.30 (最多達3.9倍)。數據表示平均值±每種Cpd 3-5重複平均值的標準差。以學生氏t檢定評估單個Cpd與Cpd.30比較的顯著性(*，p ＜0.05；***，＜0.001)。

圖 29 所示為以Cpd.33、Cpd.34或Cpd.35的mRNA轉染誘導人類胚胎腎細胞(HEK293T，A )、人類肝細胞(HepG2，B )、人類單核細胞(THP-1，C )，以及人類肺癌細胞(A549，D )分泌介白素(interlukin 4, IL4)。細胞各以0.5-0.6 μg Cp.33、Cpd.34或Cpd.35轉染，並在24小時後使用特異性ELISA測量細胞培養上清液中分泌的IL4。IL4的分泌以Cpd.33標準化。在所分析的所有三種細胞類型中，Cpd.34與Cpd.35誘導的IL4分泌均高於Cpd.33 (最多達2.2倍)。數據表示平均值±每種Cpd 3-8重複平均值的標準差。以學生氏t檢定評估單個Cpd與Cpd.33比較的顯著性(*，p ＜0.05；***，＜0.001)。

圖 30 所示為以Cpd.36、Cpd.37或Cpd.38的mRNA轉染誘導人類胚胎腎細胞(HEK293T，A )、人類肝細胞(HepG2，B )或人類單核細胞(THP-1，C )分泌IL10。細胞各以0.3-0.6 μg Cpd.36、Cpd.37或Cpd.38轉染，並在24小時後使用特異性ELISA測量細胞培養上清液中分泌的IL10。IL10的分泌以Cpd.36標準化。在所分析的所有三種細胞類型中，Cpd.37與Cpd.38誘導的IL10分泌均高於Cpd.36 (最高達2.2倍)。數據表示平均值±每種Cpd 4-8重複平均值的標準差。以學生氏t檢定評估單個Cpd與Cpd.36比較的顯著性(**，p ＜0.01；***，＜0.001)。

圖 31 所示為以Cpd.39的mRNA轉染誘導人類肝細胞(HepG2，A )以及人類初代軟骨細胞(B )分泌IGF1。細胞各以0.3-0.6 　g Cpd.39轉染，並在24小時後使用特異性ELISA測量細胞培養上清液中分泌的IGF1。IGF1的分泌以Cpd.1標準化。在分析的所有兩種細胞類型中，Cpd.39誘導的IGF1分泌高於Cpd.1 (最多達1.4倍)。數據代表平均值±4-7重複平均值的標準差。以學生氏t檢定評估Cpd.39與Cpd.1比較的顯著性 (**，p ＜0.01 ***，＜0.001)。

Claims

一種訊息核糖核酸(messenger ribonucleic acid, mRNA)，包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸序列，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-9個胺基酸具有大於2的平均疏水性分數，其中該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組： i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，條件為該蛋白質不為一氧化還原酶； ii) 與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾；以及 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾。
如請求項1所述之mRNA，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-9個胺基酸的平均極性為6.1以下。
如請求項1或2所述之mRNA，其中該訊息胜肽的胺基酸序列C端的最後9個胺基酸的平均疏水性分數比該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-9個胺基酸的平均疏水性分數低至少1.0個單位。
如請求項1至3中任一項所述之mRNA，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-9個胺基酸、第2-10個胺基酸、第3-11個胺基酸、第4-12個胺基酸，以及第5-13個胺基酸各自具有一大於1.5的平均疏水性分數。
如請求項1至4中任一項所述之mRNA，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第8-16個胺基酸的平均疏水性分數等於或低於該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第3-11個胺基酸的平均疏水性分數。
如請求項1至4中任一項所述之mRNA，其中該訊息胜肽包含長度為18至40個胺基酸之間的一胺基酸序列，且其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第10-18個胺基酸的平均疏水性分數比該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第3-11個胺基酸的平均疏水性分數低至少0.5個單位。
如請求項1至6中任一項所述之mRNA，其中該訊息胜肽的胺基酸序列C端的最後9個胺基酸的平均疏水性分數比該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第3-11個胺基酸的平均疏水性分數低至少1.5個單位。
如請求項1至7中任一項所述之mRNA，其中該訊息胜肽的胺基酸序列的任何9個連續胺基酸的平均疏水性分數不超過4.1。
如請求項1至8中任一項所述之mRNA，其中該訊息胜肽的胺基酸序列C端的最後9個胺基酸包括至少一個疏水性分數為負的胺基酸。
如請求項9所述之mRNA，其中該至少一個疏水性分數為負的胺基酸係選自由下列所組成之群組：G、Q、N、T、S、R、K、H、D、E、P、Y，以及W。
如請求項1至10中任一項所述之mRNA，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-9個胺基酸的第二個胺基酸係選自由下列所組成之群組：P、Y、W、S、T、G、A、M、C、F、L、V，以及I。
如請求項1至10中任一項所述之mRNA，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-9個胺基酸的第二個胺基酸係選自由下列所組成之群組：A、L、 S、T、V，以及W。
如請求項1至12中任一項所述之mRNA，其中該訊息胜肽為 ii)與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中與該蛋白質同源的經修飾的該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-9個胺基酸的平均疏水性分數比未修飾的該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-9個胺基酸的平均疏水性分數高至少1.0個單位。
如請求項1至13或2至13中任一項所述之mRNA，其中該疏水性分數係根據Kyte-Doolittle評分所計算，且該極性係根據Zimmerman極性指數所計算。
如請求項1至14中任一項所述之mRNA，其中該訊息胜肽為 i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組：腦源性神經營養因子(brain-derived neurotrophic factor, BDNF)的訊息胜肽、神經滋養素-3 (neurotrophin-3, NTF-3)的訊息胜肽、纖維母細胞生長因子5 (fibroblast growth factor 5, FGF5)的訊息胜肽、類胰島素生長因子結合蛋白5 (insulin-like growth factor-binding protein 5, IBP5)的訊息胜肽、前列腺與睾丸表現蛋白2 (prostate and testis expressed protein 2, PATE2)的訊息胜肽、細胞外超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD3)的訊息胜肽，以及補體因子H相關蛋白2 (factor H-related protein 2, FHR2)的訊息胜肽。
如請求項1至14中任一項所述之mRNA，其中該訊息胜肽為 i)與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組：C-X-C模體趨化因子配體12 (C-X-C Motif Chemokine Ligand 12, CXCL12)的訊息胜肽、類胰島素生長因子2 (insulin-like growth factor 2, IGF2)的訊息胜肽、胰島素(insulin, INS)的訊息胜肽，以及腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽。
如請求項1至14中任一項所述之mRNA，其中該訊息胜肽為 ii)與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組：類胰島素生長因子1 (insulin-like growth factor 1, IGF1)的訊息胜肽與IGF1、胰島素(INS)訊息胜肽與INS，紅血球生成素(erythropoietin, EPO)的訊息胜肽與EPO、介白素-4 (interleukin 4, IL-4)的訊息胜肽與IL-4、介白素-10 (IL-10)的訊息胜肽與IL-10。
如請求項1至14中任一項所述之mRNA，其中該訊息胜肽為 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中該自然存在的胺基酸序列係選自由下列所組成之群組：類胰島素生長因子1 (IGF1)的原胜肽、升糖素受體(glucagon receptor, GL-R)的編碼序列，以及腸型鹼性磷酸酶(intestinal-type alkaline phosphatase, ALPI)的原胜肽。
如請求項1至18中任一項所述之mRNA，其中該訊息胜肽為 i)與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，且其中使用與該蛋白質異源的該訊息胜肽的分泌蛋白質的量高於使用與該蛋白質同源的該訊息胜肽的該分泌蛋白質的量。
如請求項1至18中任一項所述之mRNA，其中該訊息胜肽為 ii)與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，其中使用與該蛋白質同源的經修飾的該訊息胜肽的分泌蛋白質的量高於使用與該蛋白質同源的未經修飾的該訊息胜肽的分泌蛋白質的量。
如請求項1至18中任一項所述之mRNA，其中該訊息胜肽為 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，且其中使用在自然界中不具有一訊息胜肽功能的該自然存在的胺基酸序列的分泌蛋白質的量高於使用與該蛋白質同源的該訊息胜肽的分泌蛋白質的量。
如請求項1至21中任一項所述之mRNA，其中該訊息胜肽為 i)與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽任選地透過插入、缺失及/或取代少於與該蛋白質異源的該訊息胜肽的胺基酸序列的胺基酸數量的50%而被修飾。
如請求項1至21中任一項所述之mRNA，其中該訊息胜肽為 ii) 與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代少於與該蛋白質同源的該訊息胜肽的胺基酸序列的胺基酸數量的50%而被修飾。
如請求項1至21中任一項所述之mRNA，其中該訊息胜肽為 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列任選地透過插入、缺失及/或取代少於該自然存在的胺基酸序列的胺基酸序列的胺基酸數量的50%而被修飾。
如請求項1至24中任一項所述之mRNA，其中該蛋白質係選自由下列所組成之群組：細胞激素、生長因子，以及激素。
如請求項1至25中任一項所述之mRNA，其中該訊息胜肽為 i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，且該蛋白質係選自由下列所組成之群組：類胰島素生長因子1 (IGF1)、胰島素(INS)、紅血球生成素(EPO)、介白素4 (IL-4)，以及介白素10 (IL-10)。
如請求項1至25中任一項所述之mRNA，其中該訊息胜肽為 i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，且該蛋白質為IGF1。
如請求項1至27中任一項所述之mRNA，其中該訊息胜肽為 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，且該蛋白質為IGF1。
如請求項1至5以及7至28中任一項所述之mRNA，其中該訊息胜肽包含長度為16至40個胺基酸之間的一胺基酸序列。
一種轉錄單元、表現載體或基因治療載體，包含編碼一蛋白質與一訊息胜肽的一核酸，其中該訊息胜肽的胺基酸序列N端的第1-9個胺基酸具有大於2的平均疏水性分數，其中該訊息胜肽係選自由下列所組成之群組： i) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾，條件為該蛋白質不為一氧化還原酶； ii) 與該蛋白質同源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質同源的該訊息胜肽透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾；以及 iii) 不具有自然界中一訊息胜肽的功能的一自然存在的胺基酸序列，其中該自然存在的胺基酸序列任選地透過插入、缺失及/或取代至少一個胺基酸而被修飾。
一種治療組合物，包含如請求項1-29中任一項所述之mRNA及/或如請求項30所述之轉錄單元、表現載體或基因治療載體。
一種套組，包含如請求項1-29中任一項所述之mRNA及/或如請求項30所述之轉錄單元、表現載體或基因治療載體及/或如請求項31所述之治療組合物以及說明書，任選包含一載體圖，任選包含一宿主細胞，任選包含用於培養一宿主細胞的一培養基，及/或任選包含用於選擇並培養一轉染的宿主細胞的一選擇培養基。
一種mRNA，包含一核酸序列，其編碼 i) 一蛋白質；以及 ii) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽為腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽，且其中該蛋白質不為一氧化還原酶。
一種mRNA，包含一核酸序列，其編碼 i) 一蛋白質；以及 ii) 與該蛋白質異源的一訊息胜肽，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽為腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽，且其中該蛋白質係選自由下列所組成之群組：羧肽酶；細胞激素；胞外配體與轉運蛋白；胞外基質蛋白；葡萄糖苷酶；醣基轉移酶；生長因子；生長因子結合蛋白；肝素結合蛋白；激素；水解酶；免疫球蛋白；異構酶；激酶；裂解酶；金屬酶抑制劑；金屬蛋白酶；乳蛋白；神經活性蛋白；蛋白酶；蛋白酶抑制劑；蛋白質去磷酸酶；酯酶；轉移酶；以及血管活性蛋白。
如請求項33或34所述之mRNA，其中該蛋白質係選自由下列所組成之群組：細胞激素；生長因子；生長因子結合蛋白；肝素結合蛋白；激素；神經活性蛋白；以及血管活性蛋白。
如請求項33或34所述之mRNA，其中該蛋白質為一生長因子。
如請求項36所述之mRNA，其中該生長因子係選自由下列所組成之群組：AMH、ARTN、BTC、CDNF、CFC1、CFC1B、CHRDL1、CHRDL2、CLEC11A、CNMD、EFEMP1、EGFL6、EGFL7、EGFL8、EPGN、EREG、EYS、FGF1、FGF10、FGF16、FGF17、FGF18、FGF19、FGF2、FGF20、FGF21、FGF22、FGF23、FGF3、FGF4、FGF5、FGF6、FGF7、FGF8、FGF9、FRZB、GDNF、GFER、GKN1、HBEGF、IGF1、IGF2、INHA、INHBA、INHBB、INHBC、INHBE、KITLG、MANF、MDK、MIA、NGF、NOV、NRG1、NRG2、NRG3、NRG4、NRTN、NTF3、NTF4、OGN、PDGFA、PDGFB、PDGFC、PDGFD、PGF、PROK1、PSPN、PTN、SDF1、SDF2、SFRP1、SFRP2、SFRP3、SFRP4、SFRP5、TDGF1、TFF1、TGFA、TGFB1、TGFB2、TGFB3、THBS4、TIMP1、VEGFA、VEGFB、VEGFC、VEGFD，以及WISP3。
如請求項33或34所述之mRNA，其中該蛋白質為IGF1。
如請求項33至38中任一項所述之mRNA，其中該腦源性神經營養因子(BDNF)的該訊息胜肽包含如SEQ ID NO: 31所示之胺基酸序列。
如請求項33至39中任一項所述之mRNA，其中編碼該蛋白質的該核酸序列與編碼與該蛋白質異源的該腦源性神經營養因子(BDNF)的該訊息胜肽的該核酸序列可操作地連接。
如請求項33至40中任一項所述之mRNA，其中該mRNA包含一核酸序列，其自5’至3’依下列順序編碼： i) 該腦源性神經營養因子(BDNF)的該訊息胜肽； ii)選擇性的該蛋白質的一原結構域；以及 iii) 該成熟蛋白質；其中編碼該腦源性神經營養因子(BDNF)的該訊息胜肽的該核酸序列，編碼該蛋白質的該原結構域的選擇性之核酸序列，以及編碼該成熟蛋白質的該核酸序列可操作地連接。
如請求項33至41中任一項所述之mRNA，其中該mRNA包含編碼IGF1的該原胜肽的一核酸序列，編碼該成熟的IGF1的一核酸序列，以及編碼該腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽的一核酸序列，且不包含編碼IGF1的一E胜肽的一核酸序列。
如請求項33至42中任一項所述之mRNA，其中該腦源性神經營養因子(BDNF)的該訊息胜肽取代該蛋白質的該自然訊息胜肽。
一種轉錄單元、表現載體或基因治療載體，包含編碼一蛋白質以及與該蛋白質異源的一訊息胜肽的一核酸序列，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽為腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽，且其中該蛋白質不為一氧化還原酶。
一種轉錄單元、表現載體或基因治療載體，包含編碼一蛋白質以及與該蛋白質異源的一訊息胜肽的一核酸序列，其中與該蛋白質異源的該訊息胜肽為腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽，且其中該蛋白質係選自由下列所組成之群組：羧肽酶；細胞激素；胞外配體與轉運蛋白；胞外基質蛋白；葡萄糖苷酶；醣基轉移酶；生長因子；生長因子結合蛋白；肝素結合蛋白；激素；水解酶；免疫球蛋白；異構酶；激酶；裂解酶；金屬酶抑制劑；金屬蛋白酶；乳蛋白；神經活性蛋白；蛋白酶；蛋白酶抑制劑；蛋白質去磷酸酶；酯酶；轉移酶；以及血管活性蛋白。
一種治療組合物，包含如請求項33至43中任一項所述之mRNA及/或如請求項44或45所述之轉錄單元、表現載體或基因治療載體。
一種套組，包含如請求項33至43中任一項所述之mRNA或如請求項44或45所述之轉錄單元、表現載體或基因治療載體，及/或如請求項46所述之治療組合物以及說明書，任選包含一載體圖，任選包含一宿主細胞，任選包含用於培養一宿主細胞的一培養基，及/或任選包含用於選擇並培養一轉染的宿主細胞的一選擇培養基。
如請求項1至28或33至43中任一項所述之mRNA，如請求項30或44至45中任一項所述之轉錄單元、表現載體或基因治療載體，如請求項31或46所述之治療組合物或如請求項32或47所述之套組，其係用於作為一藥物。
如請求項1至29或如請求項38或42中任一項所述之mRNA，其係使用在一治療骨骼肌損傷的方法中。
一種mRNA，係使用於一治療骨骼肌損傷的方法中。
一種包含mRNA的治療組合物，係使用於一治療骨骼肌損傷的方法中。
如請求項50或51所述之供使用的mRNA或組合物，其中該mRNA為編碼人類類胰島素生長因子1 (IGF1)的mRNA。
如請求項52所述之供使用的mRNA或組合物，其中編碼人類IGF1的該mRNA包含編碼一訊息胜肽的一核酸序列，任選地包含編碼人類IGF1的該原胜肽的一核酸序列以及編碼該成熟人類IGF1的一核酸序列。
如請求項53所述之供使用的mRNA或組合物，其中編碼該訊息胜肽的該核酸序列編碼腦源性神經營養因子(BDNF)的訊息胜肽。