TW202042829A

TW202042829A - 銀杏癒傷組織的萃取物用於提升Ｔｇｍ１基因、ＫＲＴ基因、ＡＱＰ３基因、ＦＬＧ－Ｆ基因、ＧＢＡ基因、ＨＡＳ基因、ＣＣＴ基因、Ｐｉｎｋ１基因、Ａｔｇ基因、ＳＩＲＴ１基因、ＮＡＤＳＹＮ基因、ＭＲＰＳ５基因或Ｕｂｌ－５基因的表現量、提升皮膚的保濕能力及抗老化之用途、用於誘導及增殖銀杏癒傷組織的方法、及用於培養銀杏癒傷組織的培養基

Info

Publication number: TW202042829A
Application number: TW108137533A
Authority: TW
Inventors: 林詠翔; 陳世禔
Original assignee: 大江生醫股份有限公司
Priority date: 2019-05-16
Filing date: 2019-10-17
Publication date: 2020-12-01
Also published as: CN111939182A; TWI777096B

Abstract

本發明提供一種銀杏癒傷組織的萃取物用於提升Tgm1基因、KRT基因、AQP3基因、FLG-F基因、GBA基因、HAS基因、CCT基因、Pink1基因、Atg基因、SIRT1基因、NADSYN基因、MRPS5基因或Ubl-5基因的表現量、提升皮膚的保濕能力及抗老化之用途。本發明亦提供一種用於誘導及增殖銀杏癒傷組織的方法、及用於培養銀杏癒傷組織的培養基。

Description

銀杏癒傷組織的萃取物用於提升Tgm1基因、KRT基因、 AQP3基因、FLG-F基因、GBA基因、HAS基因、CCT基因、Pink1基因、Atg基因、SIRT1基因、NADSYN基因、MRPS5基因或Ubl-5基因的表現量、提升皮膚的保濕能力及抗老化之用途、用於誘導及增殖銀杏癒傷組織的方法、及用於培養銀杏癒傷組織的培養基

本發明是有關於一種銀杏(Ginkgo biloba)癒傷組織的萃取物用於提升Tgm1基因、KRT基因、AQP3基因、FLG-F基因、GBA基因、HAS基因、CCT基因、Pink1基因、Atg基因、SIRT1基因、NADSYN基因、MRPS5基因或Ubl-5基因的表現量、提升皮膚的保濕能力及抗老化之用途、用於誘導及增殖銀杏癒傷組織的方法、及用於培養銀杏癒傷組織的培養基。

皮膚組織是由表皮、真皮及皮下組織所構成，其中真皮含有大量膠原蛋白及玻尿酸，而與皮膚之保水性及彈力息息相關。人類皮膚會隨著年紀、生理因素或環境因素，而有老化、膚質粗糙或產生皺紋等現象，如正常年輕人的皮膚都具一定的彈性和張力，當表情肌鬆弛後，皮膚會很快復原，使皺紋消失；但進入中年後，皮膚開始明顯老化，皮膚變薄、變硬、乾燥、張力降低；真皮膠原蛋白減少、彈力纖維變性、斷裂，使皮膚的張力和彈性降低，因此，當表情肌鬆弛後，皮膚不能很快復原，久之則使皺紋成形；且隨年齡的增大，皮膚和皮下組織更加鬆弛，加上面部支持組織的萎縮或缺失，以及肌肉的鬆軟，皮膚會在重力的作用下發生滑墜，形成更深的皺紋。而肌膚粗糙係由於乾燥、紫外線、清潔劑或化學物質等刺激性物質等外在重要因素，或激素平衡之紊亂等內在重要因素而產生之肌膚困擾，並伴隨角質層屏障功能之下降、角質層水分量之下降、表皮代謝回轉之亢進、鱗屑之產生而角質粗糙化等現象。因此皮膚上的細胞若失去彈性及保濕功能，會引起皮膚褶皺、乾燥及失去光澤等現象。

近年來，人類對於皮膚保濕(moisturizing)的需求與日俱增，因為一旦提升皮膚的保濕能力，就能夠達到抗老化的效用。然而，目前常見用來提升皮膚保濕能力的方式大多為利用塗抹於皮膚表面的化妝品、保養品，或口服宣稱具有提升皮膚保濕效用的健康食品。然而，習知的化妝品、保養品及健康食品大多由化學成分所製成，長期使用不但對人體健康有害無益，且這些產品往往價格昂貴，並非為一般使用者所能負擔。

此外，自古人類總夢想著追求青春永駐、長生不老之道，近年來隨著醫學及生物科技的發展與進步，不但可藉由前端的醫學技術來對抗疾病，許多訴求能抗老的產品也陸續地研發問世，近年來抗老化的風潮慢慢地向全球蔓延開來，以日本為例，高達七成以上民眾具有抗老化意識，而台灣民眾對於抗老化的關心也持續升高，此股抗老化趨勢將帶動抗老化相關產品市場銷售，預期全球市場也將持續擴張。

另一方面，粒線體(mitochondria)亦被稱為細胞的發電站，因為它是細胞內合成三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)(一種傳遞能量的分子)的主要場所，為細胞的各項活動提供了化學能量。粒線體若損壞，對細胞以及生物個體的影響甚鉅。粒線體在合成ATP的過程中會產生很多的自由基，自由基的活性極強，會與體內任何物質發生強烈的氧化反應而破壞其正常功能。自由基日積月累地傷害粒線體內的酵素與DNA，漸漸地使其功能下降進而使各器官組織的功能衰退。因此，如何提升細胞的粒線體活性，進而達到抗老化之效用，成為本領域的重要課題。

為了解決上述問題，本領域的技術人員亟需研發出具有提升皮膚的保濕能力及抗老化效用的新穎醫藥品、食品產品或保養品以造福有此需求的廣大族群。

有鑑於此，本發明之目的為提供一種銀杏(Ginkgo biloba)癒傷組織的萃取物用於製備一提升轉穀胺醯胺酶1(transglutaminase 1,Tgm1)基因、角蛋白(keratin,KRT)基因、水通道蛋白3(aquaporin 3,AQP3)基因、絲聚蛋白(filaggrin,FLG-F)基因、葡糖神經醯胺酶(Glucosylceramidase,GBA)基因、玻尿酸合成酶(hyaluronan synthase,HAS)基因、含有T-複合物蛋白質1次單元α(TCP1)複合物的伴隨蛋白(chaperonin containing T-complex protein 1 subunit alpha(TCP1)complex,CCT)基因、第一型PTEN誘發激酶(PTEN-induced kinase 1,Pink1)基因、自噬-相關蛋白質(Autophagy-related,Atg)基因、沉默調節蛋白1(Sirtuin 1,SIRT1)基因、榖胺醯胺-依賴型NAD(+)合成酶(Glutamine-dependent NAD(+)synthetase,NADSYN)基因、粒線體核醣體蛋白質S5(mitochondrial ribosomal protein S5,MRPS5)基因或泛素樣蛋白質5(Ubiquitin-like protein 5,Ubl-5)基因的表現量之組成物的用途，其中該銀杏癒傷組織的萃取物是以水、醇類、含水醇類或其組合作為一萃取溶劑對該銀杏癒傷組織進行萃取而製得。

在本發明的一實施例中，該KRT基因是KRT1基因、KRT10基因或KRT14基因。

在本發明的一實施例中，該HAS基因是HAS2基因或HAS3基因。

在本發明的一實施例中，該CCT基因是含有TCP1次單元2的伴隨蛋白(chaperonin containing TCP1 subunit 2,CCT2)基因、含有TCP1次單元5的伴隨蛋白(chaperonin containing TCP1 subunit 5,CCT5)基因、含有TCP1次單元6A的伴隨蛋白(chaperonin containing TCP1 subunit 6A,CCT6A)基因、含有TCP1次單元7的伴隨蛋白(chaperonin containing TCP1 subunit 7,CCT7)基因、或含有TCP1次單元8的伴隨蛋白(chaperonin containing TCP1 subunit 8,CCT8)基因。

在本發明的一實施例中，該Atg基因是Atg1基因或Atg8基因。

本發明之另一目的為提供一種銀杏(Ginkgo biloba)癒傷組織的萃取物用於製備一提升皮膚的保濕能力及抗老化之組成物的用途，其中該銀杏癒傷組織的萃取物是以水、醇類、含水醇類或其組合作為一萃取溶劑對該銀杏癒傷組織進行萃取而製得。

在本發明的一實施例中，該銀杏癒傷組織是經由一添加甲基茉莉花酸(methyl jasmonic acid,MeJA)的培養基培養而得。

在本發明的一實施例中，該銀杏癒傷組織的萃取物之有效濃度為至少0.25%(v/v)。

在本發明的一實施例中，該組成物是一醫藥品、一食品產品或一保養品。

本發明之另一目的為提供一種用於培養一銀杏癒傷組織的方法，包含使用一添加甲基茉莉花酸(methyl jasmonic acid,MeJA)的培養基來培養該銀杏癒傷組織，其中該甲基茉莉花酸的濃度為至少0.1mM。

綜上所述，本發明銀杏癒傷組織的萃取物之功效在於：可藉由提升Tgm1基因、KRT基因、AQP3基因、FLG-F基因、GBA基因、HAS基因、CCT基因、Pink1基因、Atg基因、SIRT1基因、NADSYN基因、MRPS5基因或Ubl-5基因的表現量來達到提升皮膚的保濕能力及抗老化的功效，且人體實驗也證實有效。另一方面，本發明利用培養過程中的甲基茉莉花酸之添加讓多酚、黃酮等效性物質大量生成，用於保濕抗老，使本發明銀杏癒傷組織的萃取物更有利於產業利用。

以下將進一步說明本發明的實施方式，下述所列舉的實施例係用以闡明本發明，並非用以限定本發明之範圍，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可做些許更動與潤飾，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。

圖1A是本發明銀杏癒傷組織的萃取物在提升總多酚含量上的功效之數據圖。

圖1B是本發明銀杏癒傷組織的萃取物在提升總黃酮含量上的功效之數據圖。

圖2是本發明銀杏癒傷組織的萃取物在作用6或24小時之時提升與皮膚細胞保濕相關的Tgm1、KRT1、KRT10、KRT14、AQP3、FLG-F、GBA、HAS2及HAS3基因表現上的功效之數據圖，其中*表示與對照組比較，p<0.05；**表示與對照組比較，p<0.01；***表示與對照組比較，p<0.001。

圖3是本發明銀杏癒傷組織的萃取物在促進角質細胞分泌玻尿酸上的功效之數據圖，其中***表示與對照組比較，p<0.001。

圖4A是本發明銀杏癒傷組織的萃取物在作用48小時之時提升與抗老化相關的CCT2、CCT5、CCT6A、CCT7、CCT8及Pink1基因表現上的功效之數據圖，其中*表示與對照組比較，p<0.05；**表示與對照組比較，p<0.01；***表示與對照組比較，p<0.001。

圖4B是本發明銀杏癒傷組織的萃取物在作用24或48小時之時提升與抗老化相關的Atg1、Atg8、SIRT1、NADSYN、MRPS5及Ubl-5基因表現上的功效之數據圖，其中*表示與對照組比較，p<0.05；**表示與對照組比較，p<0.01；***表示與對照組比較，p<0.001。

圖5是本發明銀杏癒傷組織的萃取物在降低細紋生成上的功效之數據圖及照片，其中*表示與對照組比較，p<0.05。

圖6是本發明銀杏癒傷組織的萃取物在增加肌膚保水度上的功效之數據圖。

圖7是本發明銀杏癒傷組織的萃取物在改善臉部泛紅上的功效之數據圖及影像圖。

定義

本文中所使用數值為近似值，所有實驗數據皆表示在20%的範圍內，較佳為在10%的範圍內，最佳為在5%的範圍內。

依據本發明，銀杏(Ginkgo biloba)別名為公孫樹或鴨腳樹，為銀杏科(Ginkgoaceae)銀杏屬(Ginkgo)的落葉喬木。銀杏原產於中國南方，期存在歷史可追溯至2億年前，為銀杏門中唯一現存物種，而被稱為植物界中的活化石。銀杏的枝幹浴火不死，逢難再生。二戰後荒木不生的長崎、廣島，也是銀杏率先冒出新芽，顯示其強韌的生命。銀杏是適應性極佳，抗逆力十分強大的樹種，在極端環境下能生成特殊物質抵禦逆境，因此能耐寒、耐熱且不容易受害蟲或病菌感染。

依據本發明，癒傷組織(callus)是植物原始尚未分化的狀態，來自於莖與根的頂端分生組織(apical meristem)或是體細胞(somatic cell)。癒傷組織具有超基因(epigentic)作用與全能分化能力(totipotent)能夠分化成植物胚胎細胞進而形成新的植株，並有幫助細胞代謝新生、延緩老化與賦予活力等功效。近代利用植物組織培養方法，已經成功發展出一套屬於植物癒傷組織增殖的技術，然而對於不同品種的植株尚須經由詳盡實驗找出適合的培養配方，方能產出有利用價值的植物癒傷組織，提供產業利用。

如本文中所使用的，用語「銀杏癒傷組織的萃取物」及「銀杏幹細胞」可交換使用。

如本文中所使用的，用語「抗老化(anti-aging)」意指預防、減緩人類皮膚外觀之老化現象，例如：皺紋的產生及失去彈性等。評量實現此目的之程度將根據熟悉此項技藝者已知之諸多因素來決定，諸如消費者的全身狀態、年齡、性別等。

依據本發明，醫藥品可利用熟習此技藝者所詳知的技術而被製造成一適合於非經腸道地(parenterally)、口服地(orally)或局部地(topically)投藥的劑型，這包括，但不限於：注射品(injection)[例如，無菌的水性溶液(sterile aqueous solution)或分散液(dispersion)]、無菌的粉末(sterile powder)、錠劑(tablet)、片劑(troche)、口含錠(lozenge)、丸劑(pill)、膠囊(capsule)、分散性粉末(dispersible powder)或細顆粒(granule)、溶液、懸浮液(suspension)、乳劑(emulsion)、糖漿(syrup)、酏劑(elixir)、濃漿(slurry)、外部製劑(external preparation)以及類似之物。

依據本發明，醫藥品可進一步包含有一被廣泛地使用於藥物製造技術之醫藥上可接受的載劑(pharmaceutically acceptable carrier)。例如，該醫藥上可接受的載劑可包含一或多種選自於下列的試劑：溶劑(solvent)、緩衝液(buffer)、乳化劑(emulsifier)、懸浮劑(suspending agent)、分解劑(decomposer)、崩解劑(disintegrating agent)、分散劑(dispersing agent)、黏結劑(binding agent)、賦形劑(excipient)、安定劑(stabilizing agent)、螯合劑(chelating agent)、稀釋劑(diluent)、膠凝劑(gelling agent)、防腐劑(preservative)、潤濕劑(wetting agent)、潤滑劑(lubricant)、吸收延遲劑(absorption delaying agent)、脂質體(liposome)以及類似之物。有關這些試劑的選用與數量是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。

依據本發明，該醫藥上可接受的載劑包含有一選自於由下列所構成之群組中的溶劑：水、生理鹽水(normal saline)、磷酸鹽緩衝生理鹽水(phosphate buffered saline,PBS)、含有醇的水性溶液(aqueous solution containing alcohol)以及它們的組合。

依據本發明，該醫藥品可以一選自於由下列所構成之群組中的非經腸道途徑(parenteral routes)來投藥：腹膜內注射(intraperitoneal injection)、皮下注射(subcutaneous injection)、表皮內注射(intraepidermal injection)、皮內注射(intradermal injection)、肌肉內注射(intramuscular injection)、靜脈內注射(intravenous injection)以及病灶內注射(intralesional injection)。

依據本發明，醫藥品可利用熟習此技藝者所詳知的技術而被製造成一適合於局部地施用於皮膚上的外部製劑(external preparation)，這包括，但不限於：乳劑(emulsion)、凝膠(gel)、軟膏(ointment)、乳霜(cream)、貼片(patch)、擦劑(liniment)、粉末(powder)、氣溶膠(aerosol)、噴霧(spray)、乳液(lotion)、乳漿(serum)、糊劑(paste)、泡沫(foam)、滴劑(drop)、懸浮液(suspension)、油膏(salve)以及繃帶(bandage)。

依據本發明，該外部製劑是藉由將本發明的醫藥品與一為熟習此項技藝者所詳知的基底(base)相混合而被製備。

依據本發明，該基底可包含有一或多種選自於下列的添加劑(additives)：水、醇(alcohols)、甘醇(glycol)、碳氫化合物(hydrocarbons)[諸如石油膠(petroleum,jelly)以及白凡士林(white petrolatum)]、蠟(wax)[諸如石蠟(paraffin)以及黃蠟(yellow wax)]、保存劑(preserving agents)、抗氧化劑(antioxidants)、界面活性劑(surfactants)、吸收增強劑(absorption enhancers)、安定劑(stabilizing agents)、膠凝劑(gelling agents)[諸如卡波普^®974P(carbopol^®974P)、微結晶纖維素(microcrystalline cellulose)以及羧基甲基纖維素(carboxymethylcellulose)]、活性劑(active agents)、保濕劑(humectants)、氣味吸收劑(odor absorbers)、香料(fragrances)、pH調整劑(pH adjusting agents)、螯合劑(chelating agents)、乳化劑(emulsifiers)、閉塞劑(occlusive agents)、軟化劑(emollients)、增稠劑(thickeners)、助溶劑(solubilizing agents)、滲透增強劑(penetration enhancers)、抗刺激劑(anti-irritants)、著色劑(colorants)以及推進劑(propellants)等。有關這些添加劑的選用與數量是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。

依據本發明，保養品可進一步包含有一被廣泛地使用於保養品製造技術之可接受的佐劑(acceptable adjuvant)。例如，該可接受的佐劑可包含有一或多種選自於下列的試劑：溶劑、膠凝劑、活性劑、防腐劑、抗氧化劑、遮蔽劑(screening agent)、螯合劑、界面活性劑、染色試劑(coloring agent)、增稠劑(thickening agent)、填料(filler)、香料以及氣味吸收劑。有關這些試劑的選用與數量是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。

依據本發明，保養品可利用熟習此技藝者所詳知的技術而被製造成一適合於護膚(skincare)或化妝(makeup)的形式，這包括，但不限於：水性溶液(aqueous solution)、水-醇溶液(aqueous-alcohol solution)或油性溶液(oily solution)、呈水包油型(oil-in-water type)、油包水型(water-in-oil type)或複合型之乳劑、凝膠、軟膏、乳霜、面膜(mask)、貼片、貼布(pack)、擦劑、粉末、氣溶膠、噴霧、乳液、乳漿、糊劑、泡沫、分散液、滴劑、慕斯(mousse)、防曬油(sunblock)、化妝水(tonic water)、粉底(foundation)、卸妝產品(makeup remover products)、肥皂(soap)以及其他身體清潔產品(body cleansing products)等。

依據本發明，保養品亦可與一或多種選自於下列之已知活性的外用劑(external use agents)一起合併使用：美白劑(whitening agents)[諸如維生素A酸(tretinoin)、兒茶素(catechin)、麴酸、熊果苷以及維生素C]、保濕劑、抗發炎劑(anti-inflammatory agents)、殺菌劑(bactericides)、紫外線吸收劑(ultraviolet absorbers)、植物萃取物(plant extracts)[諸如蘆薈萃取物(aloe extract)]、皮膚營養劑(skin nutrients)、麻醉劑(anesthetics)、抗痘劑(anti-acne agents)、止癢劑(antipruritics)、止痛劑(analgesics)、抗皮膚炎劑(antidermatitis agents)、抗過角化劑(antihyperkeratolytic agents)、抗乾皮膚劑(anti-dry skin agents)、抗汗劑(antipsoriatic agents)、抗老化劑(antiaging agents)、抗皺劑(antiwrinkle agents)、抗皮脂溢出劑(antiseborrheic agents)、傷口治療劑(wound-healing agents)、皮質類固醇(corticosteroids)以及激素(hormones)。有關這些外用劑的選用與數量是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。

依據本發明，食品產品可被當作食品添加物(food additive)，藉由習知方法於原料製備時添加，或是於食品的製作過程中添加，而與任一種可食性材料配製成供人類與非人類動物攝食的食品產品。

依據本發明，食品產品的種類包括但不限於：飲料(beverages)、發酵食品(fermented foods)、烘培產品(bakery products)、健康食品(health foods)以及膳食補充品(dietary supplements)。

實施例1. 銀杏癒傷組織的萃取物之製備

首先，取一銀杏的芽作為培植體，並將銀杏進行滅菌處理以除去植物表面的微生物，可以任意方式使銀杏產生傷口，舉例而言，可以割劃、撕裂或剪切之方式，獲得帶有傷口的銀杏，並於該傷口上形成一癒傷組織。

將甲基茉莉花酸(methyl jasmonic acid,MeJA)溶於二甲基亞碸配成0.1微莫耳的分子量備用。接著，將5mL的甲基茉莉花酸溶液(濃度為0.1mM)均勻地滴在包含銀杏癒傷組織的培養基(MS培養基(Murashige and Skoog)，添加0.5mg/L的1-萘乙酸(1-Naphthaleneacetic acid，NAA)、0.1mg/L的6-苄氨基腺嘌呤(6-Benzylaminopurine)、3%蔗糖與0.8%瓊脂，調整pH值至5.8)上，培養後一周採收備用。之後，將經培養的銀杏癒傷組織採收後供後續萃取用。接著，對採收後的銀杏癒傷組織進行均質處理，然後以水、醇類、含水醇類或其組合，其中水為最佳溶劑作為一萃取溶劑對經均質處理的銀杏癒傷組織進行萃取20分鐘，經均質處理的銀杏癒傷組織與萃取溶劑的體積比例0.8~1.2：8~12(較佳1：10)，且萃取的溫度介於30℃至50℃。之後，冷卻至室溫，然後以400網目(mesh)的濾網對得到的產物過濾而得到本發明銀杏癒傷組織的萃取物。

實施例2. 經由添加甲基茉莉花酸的培養基培養而得之銀杏癒傷組織的萃取物在提升總多酚及總黃酮含量上的效用評估

首先，製備標準溶液，將10g的沒食子酸(gallic acid)溶於水中並添加10mL的體積至量瓶中。接著，分別配製0μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL、80μg/mL及100μg/mL的標準溶液，接而取100μL的各個標準溶液至具有10mL體積的離心管。之後，添加500μL的佛蕭酚試劑(Folin-Ciocalteu’s phenol reagent)、混合並直立放置3分鐘，接而添加400μL的7.5%碳酸鈉(sodiμM carbonate)、混合並直立放置30分鐘。接著，將200μL的各個反應溶液轉移至96-孔盤中，於750nm下測量吸光值。

另外，將實施例1所得到的銀杏癒傷組織的萃取物作為實驗組，將未添加甲基茉莉花酸培養的銀杏癒傷組織作為比較組。將實驗組及比較組分別以水予以稀釋並取100mL的體積至微量離心管中。之後，添加500μL的佛蕭酚試劑、混合並直立放置3分鐘，接而添加400μL的7.5%碳酸鈉、混合並直立放置30分鐘。接著，將200μL的各組反應溶液轉移至96-孔盤中，於750nm下測量吸光值。總多酚含量的結果顯示於圖1A。

圖1A是本發明銀杏癒傷組織的萃取物在提升總多酚含量上的功效之數據圖。由圖1A可見，與比較組相較之下，實驗組的總多酚含量有顯著的提升1.6倍。本實施例的結果顯示，本發明經由添加甲基茉莉花酸的培養基培養而得之銀杏癒傷組織的萃取物可有效提升總多酚含量。

另外，總黃酮含量檢測的實驗流程如下：檢測總黃酮含量以芸香素(rutin)(ChromaDex ASB-00018440)當量作為總黃酮相對含量的表示。準備材料包含有10%硝酸鋁(Aluminum nitrat)(水溶液)(Alfa Aesar 12360)、5%檸檬酸鈉 (sodium nitrite)(水溶液)(Sigma 31443)、4%氫氧化鈉(sodium hydroxide)(水溶液)(Macron 7708-10)及200μg/mL芸香素(甲醇溶液)。

取上述芸香素標準液0、200μL、400μL、600μL、800μL、1000μL及1200μL分別加入試管中，分別依序加入1200μL、1000μL、800μL、600μL、400μL、200μL及0μL的水，震盪均勻混合；取200μL各濃度之芸香素溶液；分別加入200μL之5%檸檬酸鈉，混合均勻後靜置6分鐘；加入200μL之10%硝酸鋁，混合均勻後靜置6分鐘；再加入2mL之4%氫氧化鈉混合均勻後，再加入1.4mL H₂O混合均勻；取200μL上述反應液於96孔反應盤中，以分光光度計於500nm偵測吸光值，並繪製標準曲線。

將實施例1所得到的銀杏癒傷組織的萃取物作為實驗組，將未添加甲基茉莉花酸培養的銀杏癒傷組織作為比較組。實驗組或比較組經適當之稀釋後，取200μL之實驗組或比較組樣品置於試管中；加入200μL 5%檸檬酸鈉，混合均勻後靜置6分鐘；加入200μL 10%硝酸鋁，混合均勻後靜置6分鐘；加入2mL 4%氫氧化鈉混合均勻後，再加入1.4mL H₂O混合均勻；取200μL上述反應液於96孔反應盤中，以分光光度計於500nm偵測吸光值。總黃酮含量的結果顯示於圖1B。

圖1B是本發明銀杏癒傷組織的萃取物在提升總黃酮含量上的功效之數據圖。由圖1B可見，與比較組相較之下，實驗組的總黃酮含量有顯著提升2.3倍。本實施例的結果顯示，本發明經由添加甲基茉莉花酸的培養基培養而得之銀杏癒傷組織的萃取物可有效提升總黃酮含量。

實施例3. 銀杏癒傷組織的萃取物在提升皮膚的保濕能力上的效用評估

本實施例藉由探討銀杏癒傷組織的萃取物可否藉由提升與皮膚細胞保濕相關的基因表現來達到提升皮膚的保濕能力之功效。

於角質細胞專用之無血清培養基(Keratinocyte-SFM；購自Thermo，產品編號：17005042)中培養人類表皮角質細胞(HPEK-50；購自CELLnTEC)於6-孔盤，2mL培養基的細胞濃度為1×10⁵細胞/孔。

之後，將細胞分成3組，其中包括1個對照組及2個實驗組(亦即實驗組1與2)。將銀杏癒傷組織的萃取物以培養基稀釋為具有0.25%(v/v)及0.5%(v/v)濃度的稀釋液，繼而分別將0.25%稀釋液添加至實驗組1的細胞中，及將0.5%稀釋液添加至實驗組2的細胞中，至於對照組的細胞(即HPEK-50)則僅添加培養基。接著，於培養箱中培養各組細胞6或24小時，接而收取各組細胞培養物並拿來進行基因表現分析。

在本實施例中，用來分析與皮膚細胞保濕相關的基因包括轉穀胺醯胺酶1(transglutaminase 1,Tgm1)基因、角蛋白1(keratin 1,KRT1)基因、KRT10基因、KRT14基因、水通道蛋白3(aquaporin 3,AQP3)基因、絲聚蛋白(filaggrin,FLG-F)基因、葡糖神經醯胺酶(Glucosylceramidase,GBA)基因、玻尿酸合成酶2(hyaluronan synthase 2,HAS2)基因及HAS3基因。

以RNA萃取套組(Geneaid)對上面所得到的各組細胞培養物進行RNA的萃取。對由此所得到的各組RNA取2,000ng並以SuperScript^® III反轉錄酶(Invitrogen)將萃取出的RNA反轉錄為cDNA。接著，以cDNA作為模版，並且使用用來擴增標的基因的引子對，包括Tgm1、KRT1、KRT10、KRT14、AQP3、FLG-F、GBA、HAS2、HAS3及TBP(作為內部對照組)，它們的核苷酸序列顯示於下表1，在StepOne Plus即時PCR系統(ABI)中利用KAPA CYBR FAST qPCR套組(2x)(KAPA Biosystems)來進行定量即時PCR，俾以對標的基因進行擴增及定量。PCR產物的熔化曲線是在定量即時PCR反應期間進行確認。

標的基因的相對表現量是推導自方程式2^-△△Ct，並利用TBP基因(作為內部對照組)及基準基因的循環閾值及藉由標準差來計算相對倍數變化，其中△Ct=Ct_{目標基因/基準基因}-Ct_TBP，△△Ct=△Ct_目標基因-△Ct_基準基因，倍數變化=2^-△△Ct _平均值。以對照組的標的基因表現量作為1的比較基準。各組之間的統計學顯著差異是藉由單尾史徒登氏t-檢定來決定。本實施例的結果顯示於圖2。

圖2是本發明銀杏癒傷組織的萃取物在作用6或24小時之時提升與皮膚細胞保濕相關的Tgm1、KRT1、KRT10、KRT14、AQP3、FLG-F、GBA、HAS2及HAS3基因表現上的功效之數據圖。由圖2可見，無論是Tgm1基因、KRT14基因、FLG-F基因、GBA基因、HAS2基因或HAS3基因，與對照組(即HPEK mock)相較之下，實驗組1及實驗組2在作用6或24小時之時的基因相對表現量有顯著的提升。就KRT1基因而言，與對照組相較之下，除實驗組2作用6小時之外，實驗組1在作用6及24小時之時及實驗組2在作用24小時之時的基因相對表現量有顯著的提升。就KRT10基因而言，與對照組相較之下，除實驗組2作用24小時之外，實驗組1在作用6及24小時之時及實驗組2在作用6小時之時的基因相對表現量有顯著的提升。就AQP3基因而言，與對照組相較之下，除實驗組2作用24小時之外，實驗組1在作用6及24小時之時及實驗組2在作用6小時之時的基因相對表現量有顯著的提升。本實施例的結果顯示，本發明銀杏癒傷組織的萃取物可藉由提升與皮膚細胞保濕相關的Tgm1、KRT1、KRT10、KRT14、AQP3、FLG-F、GBA、HAS2及HAS3基因表現來維持角質細胞排列，使皮膚角質組織完整，增加肌膚保水度，提升角質細胞合成玻尿酸，有效為肌膚鎖住水分，填補皮膚角質層的細胞間隙間的脂質，達到提升皮膚的保濕能力之功效。

實施例4. 銀杏癒傷組織的萃取物在促進角質細胞分泌玻尿酸上的效用評估

本實施例進一步測試本發明銀杏癒傷組織的萃取物對促進角質細胞分泌玻尿酸之效果，由於已知角質細胞會分泌玻尿酸等物質作為細胞間質，以維持表皮層屏障之完整，及防止皮膚水分散失及形成完整防護，因此。首先於96孔培養盤中，每孔加入200μL之角質細胞專用之無血清培養基(Keratinocyte-SFM；購自Thermo，產品編號：17005042)並植入1x10⁴個人類表皮角質細胞(HPEK-50；購自CELLnTEC)/孔，然後於37℃培養過夜。

之後，將細胞分成3組，其中包括1個對照組及2個實驗組(亦即實驗組1與2)。將銀杏癒傷組織的萃取物以培養基稀釋為具有0.5%(v/v)及1%(v/v)濃度的稀釋液，繼而分別將0.5%稀釋液添加至實驗組1的細胞中，及將1% 稀釋液添加至實驗組2的細胞中，至於對照組的細胞則不作任何處理。於37℃培養24小時，時間到後在不擾動貼附細胞的情況下，每孔收集100μL之培養基。

接著，利用人類玻尿酸(Human Hyaluronic Acid,HA又稱人類透明質酸)之ELISA分析檢測試劑套組(購自Cusabio Biotech公司，中國，編號CSB-E04805h)進行分析。首先於在底部覆蓋一層人類透明質酸捕捉抗體之96孔培養盤中，加入100μL之各孔收集之培養基，或溶於含1%牛血清白蛋白之磷酸鹽緩衝溶液的標準品，於37℃下與捕捉抗體進行結合2小時，時間到後將液體移除，並直接於每孔中加入100μL之偵測抗體(生物素抗體(biotin-antibody)(1X))，然後於37℃下偵測捕捉抗體1小時。接著，吸出每個孔並清洗，重複該過程兩次，總共清洗三次。之後，使用多通道移液器(multi-channel pipette)以清洗緩衝液(200μL)填充每個孔進行清洗，並靜置2分鐘，然後在每個步驟完全除去液體對於良好的性能是必不可少的。最後一次清洗後，透過抽吸或傾析(decanting)除去任何剩餘的清洗緩衝液。翻轉培養盤並用乾淨的紙巾擦乾。之後，每孔加入100μL之辣根過氧化酵素-卵白素(HRP-avidin)於37℃下作用1小時，然後重複抽吸/清洗程序5次。接著，加入90μL之TMB受質呈色溶液，於37℃下作用15~30分鐘並且避光，再於每孔加入50μL之終止溶液以中止反應，輕輕敲打培養盤以確保充分混合，最後以酵素免疫分析儀(BioTek)測量其5分鐘內於450nm之吸光值。再以Excel軟體進行史徒登氏t-檢定以決定變異係數與是否在統計上具有顯著差異。實驗結果顯示於圖3。

圖3是本發明銀杏癒傷組織的萃取物在促進角質細胞分泌玻尿酸上的功效之數據圖。由圖3可見，與對照組相較之下，實驗組1及實驗組2的玻尿酸生成量皆有顯著提升，其中實驗組1提升30.8%，實驗組2提升27.5%。本實施例的結果顯示，本發明銀杏癒傷組織的萃取物可有效促進角質細胞分泌玻尿酸，能有效使皮膚角質層結構完整並提升皮膚屏障功能，並使皮膚保水力提升。

實施例5. 銀杏癒傷組織的萃取物在抗老化上的效用評估

本實施例藉由探討銀杏癒傷組織的萃取物可否藉由提升與抗老化相關的基因表現來達到抗老化之功效。

首先，以添加有10%胎牛血清(FBS)(Gibco)及1%青黴素(penicillin)/鏈黴素(streptomycin)(Gibco)的杜貝可氏改良的依格氏培養基(Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium,DMEM)培養人類骨髓神經母細胞瘤SHSY-5Y(TCC^® CRL-2266^TM)於6-孔盤，2mL培養基的細胞濃度為1×10⁵細胞/孔。

之後，將細胞分成3組，其中包括1個對照組及2個實驗組(亦即實驗組1與2)。將銀杏癒傷組織的萃取物以培養基稀釋為具有0.5%(v/v)及1%(v/v)濃度的稀釋液，繼而分別將0.5%稀釋液添加至實驗組1的細胞中，及將1%稀釋液添加至實驗組2的細胞中，至於對照組的細胞則添加培養基。接著，於培養箱中培養各組細胞24或48小時，接而收取各組細胞培養物並拿來進行基因表現分析。

在本實施例中，用來分析與抗老化相關的基因包括含有TCP1次單元2的伴隨蛋白(chaperonin containing TCP1 subunit 2,CCT2)基因、含有TCP1次單元5的伴隨蛋白(chaperonin containing TCP1 subunit 5,CCT5)基因、含有TCP1次單元6A的伴隨蛋白(chaperonin containing TCP1 subunit 6A,CCT6A)基因、含有TCP1次單元7的伴隨蛋白(chaperonin containing TCP1 subunit 7,CCT7)基因、含有TCP1次單元8的伴隨蛋白(chaperonin containing TCP1 subunit 8,CCT8)基因、第一型PTEN誘發激酶(PTEN-induced kinase 1,Pink1)基因、自噬-相關蛋白質1(Autophagy-related 1,Atg1)基因、自噬-相關蛋白質8(Autophagy-related 8,Atg8)基因、沉默調節蛋白1(Sirtuin 1,SIRT1)基因、榖胺醯胺-依賴型NAD(+)合成酶(Glutamine-dependent NAD(+)synthetase,NADSYN)基因、粒線體核醣體蛋白質S5(mitochondrial ribosomal protein S5,MRPS5)基因及泛素樣蛋白質5(Ubiquitin-like protein 5,Ubl-5)基因，其中NADSYN基因協助合成NAD，提供粒線體能量來源，維持活力；SIRT1基因協助粒線體修護受損DNA，減緩老化；Atg1基因為使粒線體回春相關的基因，回春抗老；Atg8基因清除突變DNA使粒線體回春，恢復青春活力；MRPS5基因協助粒線體蛋白合成，提供能量來源；CCT2、CCT5、CCT6A、CCT7及CCT8基因使老熟細胞逆齡回年輕細胞；Pink1基因使老化粒線體回復年輕狀態；Ubl-5基因回復粒線體活性，動物實驗證實使年老的小鼠回復年輕時的狀態。

以RNA萃取套組(Geneaid)對上面所得到的各組細胞培養物進行RNA的萃取。對由此所得到的各組RNA取2,000ng並以SuperScript^® III反轉錄酶(Invitrogen)將萃取出的RNA反轉錄為cDNA。接著，以cDNA作為模版，並且使用用來擴增標的基因的引子對，包括CCT2、CCT5、CCT6A、CCT7、CCT8、Pink1、Atg1、Atg8、SIRT1、NADSYN、MRPS5、Ubl-5及GAPDH(作為內部對照組)，它們的核苷酸序列顯示於下表2，在StepOne Plus即時PCR系統(ABI)中利用KAPA CYBR FAST qPCR套組(2x)(KAPA Biosystems)來進行定量即時PCR，俾以對標的基因進行擴增及定量。PCR產物的熔化曲線是在定量即時PCR反應期間進行確認。

標的基因的相對表現量是推導自方程式2^-△△Ct，並利用GAPDH基因(作為內部對照組)及基準基因的循環閾值及藉由標準差來計算相對倍數變化，其中△Ct=Ct_{目標基因/基準基因}-Ct_GAPDH，△△Ct=△Ct_目標基因-△Ct_基準基因，倍數變化=2^-△△Ct _平均值。以對照組的標的基因表現量作為1的比較基準。各組之間的統計學顯著差異是藉由單尾史徒登氏t-檢定來決定。本實施例的結果顯示於圖4A及圖4B。

圖4A是本發明銀杏癒傷組織的萃取物在作用48小時之時提升與抗老化相關的CCT2、CCT5、CCT6A、CCT7、CCT8及Pink1基因表現上的功效之數據圖。由圖4A可見，無論是CCT2、CCT5、CCT6A、CCT8或Pink1基因，與對照組相較之下，實驗組1及實驗組2在作用48小時之時的基因相對表現量有顯著的提升。就CCT7基因而言，與對照組相較之下，除實驗組2作用48小時之外，實驗組1在作用48小時之時的基因相對表現量有顯著的提升。

圖4B是本發明銀杏癒傷組織的萃取物在作用24或48小時之時提升與抗老化相關的Atg1、Atg8、SIRT1、NADSYN、MRPS5及Ubl-5基因表現上的功效之數據圖。由圖4B可見，無論是Atg1、SIRT1或MRPS5基因，與對照組相較之下，實驗組1及實驗組2在作用24或48小時之時的基因相對表現量有顯著的提升。就Atg8基因而言，與對照組相較之下，除實驗組1作用24小時之外，實驗組1在作用48小時之時及實驗組2在作用24小時或48之時的基因相對表現量有顯著的提升。就NADSYN基因而言，與對照組相較之下，除實驗組1作用48小時之外，實驗組1在作用24小時之時及實驗組2在作用24小時或48之時的基因相對表現量有顯著的提升。就Ubl-5基因而言，與對照組相較之下，除實驗組1作用24小時之外，實驗組1在作用48小時之時及實驗組2在作用24小時或48之時的基因相對表現量有顯著的提升。本實施例的結果顯示，本發明銀杏癒傷組織的萃取物可藉由提升與抗老化相關的CCT2、CCT5、CCT6A、CCT7、CCT8、Pink1、Atg1、Atg8、SIRT1、NADSYN、MRPS5及Ubl-5基因表現來多方位提升粒線體活性，強化肌膚活力源頭，達到抗老化的功效。

實施例6. 銀杏癒傷組織的萃取物的人體功效測試

在本實施例中，藉由使用實施例1所製得之銀杏癒傷組織的萃取物來檢測其是否具有改善人體肌膚的功效。

首先，募集8位受試者，並將每位受試者的左臉使用作為對照組，及將右臉使用作為實驗組，其中每日早晚清潔臉部後，將安慰劑塗抹於對照組肌膚，及將1%銀杏癒傷組織的萃取物作為銀杏幹細胞精華液塗抹於實驗組肌膚，以指腹稍加按摩促進吸收，並於使用前(第0週)及使用後第4週或15分鐘進行檢測。檢測項目包括肌膚皺紋、肌膚含水量及肌膚泛紅，肌膚皺紋及肌膚含水量是於使用後第4週檢測，肌膚泛紅是於使用後15分鐘檢測，並以VISIA Complexion分析系統(VISIA Complexion Analysis System)(Canfield scientific,USA)進行檢測。本實施例的結果顯示於圖5至圖7。

圖5是本發明銀杏癒傷組織的萃取物在降低細紋生成上的功效之數據圖及照片。圖6是本發明銀杏癒傷組織的萃取物在增加肌膚保水度上的功效之數據圖。圖7是本發明銀杏癒傷組織的萃取物在改善臉部泛紅上的功效之數據圖及影像圖。由圖5可見，與第0週相較之下，實驗組的肌膚細紋會隨著時間增加而有顯著的降低，對照組則無；與第0週比較，實驗組在使用後第4週的肌膚細紋降低13%。由圖6可見，與第0週相較之下，實驗組的肌膚保水度會隨著時間增加而有提升的情形，其中與第0週比較，實驗組在使用後第4週的肌膚保水度提升13.3%。由圖7可見，與使用前相較之下，實驗組的臉部泛紅在使用後15分鐘即有改善，對照組則無；與使用前比較，實驗組在使用後15分鐘的肌膚泛紅改善10.3%。本實施例的結果顯示，本發明銀杏癒傷組織的萃取物具有改善人體肌膚以達到保濕及抗老化的功效。

綜上所述，本發明銀杏癒傷組織的萃取物可藉由提升Tgm1基因、KRT基因、AQP3基因、FLG-F基因、GBA基因、HAS基因、CCT基因、Pink1基因、Atg基因、SIRT1基因、NADSYN基因、MRPS5基因或Ubl-5基因的表現量來達到提升皮膚的保濕能力及抗老化的功效，且人體實驗也證實有效。另一方面，本發明利用培養過程中的甲基茉莉花酸的添加讓多酚、黃酮等效性物質大量生成，用於保濕抗老，使本發明銀杏癒傷組織的萃取物更有利於產業利用。

以上所述僅為舉例性，而非為限制性者。任何未脫離本發明之精神與範疇，而對其進行之等效修改或變更，均應包含於後附之申請專利範圍中。

<110> 大江生醫股份有限公司

<120> 銀杏癒傷組織的萃取物用於提升Tgm1基因、KRT基因、AQP3基因、FLG-F基因、GBA基因、HAS基因、CCT基因、Pink1基因、Atg基因、SIRT1基因、NADSYN基因、MRPS5基因或Ubl-5基因的表現量、提升皮膚的保濕能力及抗老化之用途、用於誘導及增殖銀杏癒傷組織的方法、及用於培養銀杏癒傷組織的培養基

<130> 108B0203-I1

<160> 46

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 1

<210> 2

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 2

<210> 3

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 3

<210> 4

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 4

<210> 5

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 5

<210> 6

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 6

<210> 7

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 7

<210> 8

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 8

<210> 9

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 9

<210> 10

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 10

<210> 11

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 11

<210> 12

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 12

<210> 13

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 13

<210> 14

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 14

<210> 15

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 15

<210> 16

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 16

<210> 17

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 17

<210> 18

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 18

<210> 19

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 19

<210> 20

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 20

<210> 21

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 21

<210> 22

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 22

<210> 23

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 23

<210> 24

<211> 17

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 24

<210> 25

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 25

<210> 26

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 26

<210> 27

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 27

<210> 28

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 28

<210> 29

<211> 17

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 29

<210> 30

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 30

<210> 31

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 31

<210> 32

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 32

<210> 33

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 33

<210> 34

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 34

<210> 35

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 35

<210> 36

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 36

<210> 37

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 37

<210> 38

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 38

<210> 39

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 39

<210> 40

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 40

<210> 41

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 41

<210> 42

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 42

<210> 43

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 43

<210> 44

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 44

<210> 45

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 45

<210> 46

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成引子

<400> 46

Claims

一種銀杏(Ginkgo biloba)癒傷組織的萃取物用於製備一提升轉穀胺醯胺酶1(transglutaminase 1,Tgm1)基因、角蛋白(keratin,KRT)基因、水通道蛋白3(aquaporin 3,AQP3)基因、絲聚蛋白(filaggrin,FLG-F)基因、葡糖神經醯胺酶(Glucosylceramidase,GBA)基因、玻尿酸合成酶(hyaluronan synthase,HAS)基因、含有T-複合物蛋白質1次單元α(TCP1)複合物的伴隨蛋白(chaperonin containing T-complex protein 1 subunit alpha(TCP1)complex,CCT)基因、第一型PTEN誘發激酶(PTEN-induced kinase 1,Pink1)基因、自噬-相關蛋白質(Autophagy-related,Atg)基因、沉默調節蛋白1(Sirtuin 1,SIRT1)基因、榖胺醯胺-依賴型NAD(+)合成酶(Glutamine-dependent NAD(+)synthetase,NADSYN)基因、粒線體核醣體蛋白質S5(mitochondrial ribosomal protein S5,MRPS5)基因或泛素樣蛋白質5(Ubiquitin-like protein 5,Ubl-5)基因的表現量之組成物的用途，其中該銀杏癒傷組織的萃取物是以水、醇類、含水醇類或其組合作為一萃取溶劑對該銀杏癒傷組織進行萃取而製得。
如申請專利範圍第1項所述的用途，其中該KRT基因是KRT1基因、KRT10基因或KRT14基因。
如申請專利範圍第1項所述的用途，其中該HAS基因是HAS2基因或HAS3基因。
如申請專利範圍第1項所述的用途，其中該CCT基因是含有TCP1次單元2的伴隨蛋白(chaperonin containing TCP1 subunit 2,CCT2)基因、含有TCP1次單元5的伴隨蛋白(chaperonin containing TCP1 subunit 5,CCT5)基因、含有TCP1次單元6A的伴隨蛋白(chaperonin containing TCP1 subunit 6A,CCT6A)基因、含有TCP1次單元7的伴隨蛋白(chaperonin containing TCP1 subunit 7,CCT7)基因、或含有TCP1次單元8的伴隨蛋白(chaperonin containing TCP1 subunit 8,CCT8)基因。
如申請專利範圍第1項所述的用途，其中該Atg基因是Atg1基因或Atg8基因。
一種銀杏(Ginkgo biloba)癒傷組織的萃取物用於製備一提升皮膚的保濕能力及抗老化之組成物的用途，其中該銀杏癒傷組織的萃取物是以水、醇類、含水醇類或其組合作為一萃取溶劑對該銀杏癒傷組織進行萃取而製得。
如申請專利範圍第1項或第6項所述的用途，其中該銀杏癒傷組織是經由一添加甲基茉莉花酸(methyl jasmonic acid,MeJA)的培養基培養而得。
如申請專利範圍第1項或第6項所述的用途，其中該銀杏癒傷組織的萃取物之有效濃度為至少0.25%(v/v)。
如申請專利範圍第1項或第6項所述的用途，其中該組成物是一醫藥品、一食品產品或一保養品。
一種用於培養一銀杏癒傷組織的方法，包含使用一添加甲基茉莉花酸(methyl jasmonic acid,MeJA)的培養基來培養該銀杏癒傷組織，其中該甲基茉莉花酸的濃度為至少0.1mM。