TW202041230A - 治療乾眼症 - Google Patents

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Abstract

本發明提供一種用於治療乾眼症的組成物及方法。

Description

治療乾眼症
本發明關於一種用於治療乾眼症的組成物及方法。
乾眼症(例如乾眼綜合症)是常見的眼病。它是有眼睛乾澀的病症。乾眼症的一些常見症狀包括例如刺激、發紅、分泌物、炎症、眼睛容易疲勞和視力模糊。在某些嚴重的情況下，可能會發生角膜疤痕。乾眼症影響了全球約5-34%的人口。在中國，它影響了至少17%的人。
乾眼症的治療通常涉及人工淚液滴眼劑。人工淚液滴眼劑的施用通常可以暫時緩解乾眼症。在大多數情況下，需要定期重新施用人工淚液滴眼劑。這可能會帶來不便，特別是如果需要過於頻繁地重新施用滴眼劑。實際上，患者在一天的過程中通常必須施用人工淚液溶液十至二十次。這樣的給藥麻煩且耗時，並且增加了眼睛對許多人工淚液中存在的防腐劑的暴露。另外，對於患有嚴重乾眼症或慢性乾眼症的患者，施用人工淚液滴眼劑通常無效。仍需要用於治療乾眼症的安全有效的療法。
【先前技術文獻】
【非專利文獻】
【非專利文獻1】Jayasekara等人，"Processing technologies for virgin coconut oil and coconut based confectionaries and beverages." Proceedings of International Coconut Summit (2007): 7-11
【非專利文獻2】ong等人"Cassiae semen: A review of its phytochemistry and pharmacology." Molecular medicine reports 16.3 (2017): 2331-2346
【非專利文獻3】Barabino等人"Animal models of dry eye: a critical assessment of opportunities and limitations," Investigative ophthalmology & visual science 45.6 (2004): 1641-1646
本發明關於一種用於治療乾眼症的組成物及方法。乾眼症的治療通常涉及人工淚液滴眼劑。人工淚液滴眼劑的施用通常可以暫時緩解乾眼症。在大多數情況下，需要定期重新施用人工淚液滴眼劑。這可能會帶來不便，特別是如果需要過於頻繁地重新施用滴眼劑。實際上，患者在一天的過程中通常必須施用人工淚液溶液十至二十次。這樣的給藥麻煩且耗時，並且增加了眼睛對許多人工淚液中存在的防腐劑的暴露。另外，對於患有嚴重乾眼症或慢性乾眼症的患者，施用人工淚液滴眼劑通常無效。仍需要用於治療乾眼症的安全有效的療法。
本公開涉及用於治療乾眼症的組成物和方法。
在一方面，本公開提供了治療乾眼症或減輕乾眼症症狀的方法。該方法涉及向有需要的受試者施用有效量的包含脫酸椰子油的藥物組成物。
在一些實施方式中，該乾眼症是乾眼綜合症。在一些實施方式中，該組成物作為滴眼劑施用於患者的眼睛。
在一些實施方式中，該組成物基本上由脫酸椰子油組成。
在一些實施方式中，通過包括以下一個或多個步驟的工藝製備施用於患者的脫酸椰子油：將椰子油與鹼性溶液(pH>8)混合，從而獲得包含水相和油相的混合物；從混合物中分離水相和油相；並從油相中收集脫酸椰子油。
在一些實施方式中，該工藝進一步包括以下一個或多個步驟：將椰子肉或椰子粉與鹼混合，從而獲得椰子肉混合物；加熱並壓製椰子肉混合物，從而獲得提取物；並從提取物中收集椰子油。
在一些實施方式中，在將藥物組成物施用於受試者之前，將人工淚液滴眼劑施用於受試者。
在一些實施方式中，該方法進一步包括以下一個或多個步驟：向受試者口服施用有效量的包含以下一種、兩種或所有成分的組成物：枸杞(寧夏枸杞(Lycium barbarum)或茄科枸杞(Lycium chinense))或枸杞提取物；黃芪(Astragalus)根或黃芪根提取物；菊花或菊花提取物。
在一些實施方式中，該方法涉及向受試者口服施用有效量的枸杞(寧夏枸杞或茄科枸杞)或枸杞提取物。
在一些實施方式中，該方法涉及向受試者口服施用有效量的 黃芪根或黃芪根提取物。
在一些實施方式中，該方法涉及向受試者口服施用有效量的菊花或菊花提取物。
在一些實施方式中，該方法進一步涉及向受試者的眼睛施用熱療法。
在一些實施方式中，該熱療法包括在受試者的眼睛上施加包含中藥組成物的熱墊。
在一些實施方式中，該中藥組成物含有決明子(Cassiae semen)和冰片。
在一些實施方式中，決明子在中藥組成物中的重量百分比為50%至90%。
在一些實施方式中，冰片在中藥組成物中的重量百分比為10%至50%。
在一方面，本公開提供了一種包含脫酸椰子油的藥物組成物。在一些實施方式中，該藥物組成物由脫酸椰子油組成。
在一些實施方式中，通過包括以下一個或多個步驟的工藝製備脫酸椰子油：提供椰子油；將椰子油與鹼性溶液(pH>8)混合，從而獲得包含水相和油相的混合物；從混合物中分離水相和油相；並從油相中收集脫酸椰子油。
在一些實施方式中，該工藝進一步包括：將椰子肉或椰子粉與鹼混合，從而獲得椰子肉混合物；加熱並壓製椰子肉混合物，從而獲得提取物；並從提取物中收集椰子油。
在一方面，本公開提供了改善受試者的人工淚液滴眼劑功效的方法。該方法涉及向受試者施用人工淚液滴眼劑；在將人工淚液滴眼劑施用於受試者後，向受試者施用有效量的包含脫酸椰子油的組成物。
在一些實施方式中，該組成物基本上由脫酸椰子油組成。
在一些實施方式中，在向受試者施用人工淚液滴眼劑後的1、2、3、4、5、6、7、8、9或10分鐘內施用包含脫酸椰子油的組成物。
在一方面，本公開提供了一種中藥組成物，其包含：
(1)枸杞(寧夏枸杞或茄科枸杞)或枸杞提取物；
(2)黃芪根或黃芪根提取物；和
(3)菊花或菊花提取物。
在一些實施方式中，(1)、(2)和(3)的比例為約1：1：1。
在一方面，本公開提供了一種包含中藥組成物的熱墊。在一些實施方式中，該中藥組成物包含決明子和冰片。
在一些實施方式中，決明子在中藥組成物中的重量百分比為50%至90%。
在一些實施方式中，冰片在中藥組成物中的重量百分比為10%至50%。
在一方面，本公開提供了製備包含脫酸椰子油的組成物的方法。該方法涉及將椰子肉或椰子粉與鹼或鹼性溶液混合，從而獲得椰子肉混合物；加熱並壓製椰子肉混合物，從而獲得提取物；並從提取物中收集椰子油。
在一些實施方式中，該方法進一步涉及從提取物中收集椰子 油後，將椰子油與鹼性溶液(pH>7)混合，從而獲得包含水相和油相的混合物；從混合物中分離水相和油相；並從油相中收集脫酸椰子油。
在一些實施方式中，該方法進一步涉及通過膜過濾來過濾脫酸椰子油，從而獲得過濾的脫酸椰子油，並將過濾的脫酸椰子油滅菌。
在一方面，本公開提供了製備包含脫酸椰子油的組成物的方法。該方法涉及將椰子油與鹼或鹼性溶液混合，從而獲得混合物；並收集脫酸椰子油。
在一些實施方式中，該方法涉及將椰子油與鹼性溶液混合；從混合物中分離水相和油相；並收集脫酸椰子油。
在一些實施方式中，該方法進一步涉及通過膜過濾來過濾脫酸椰子油，從而獲得過濾的脫酸椰子油，並將過濾的脫酸椰子油滅菌。
在一方面，本公開還涉及一種包含脫酸椰子油和環孢素的組成物。
在一方面，本公開提供了一種治療乾眼症或減輕乾眼症症狀的方法，其包含向有需要的受試者施用有效量的包含脫酸椰子油和環孢素的藥物組成物。
在一些實施方式中，該方法進一步包括向受試者施用有效量的環孢素。
除非另外定義，本文所用的所有技術和科學術語具有與本發明所屬技術領域中具有通常知識者通常所理解的相同含義。本文描述了用於本發明的方法和材料；另外，也可以使用本技術領域已知的合適方法和材料。材料、方法和示例僅是說明性的，並非旨在是限制性的。本文提及 的所有出版物、專利申請、專利、序列、數據庫條目和其它參考文獻均通過引用整體併入。如有衝突，以本說明書(包括定義)為準。
根據下面具體實施方式和圖式以及申請專利範圍，本發明的其它特徵和優點將是顯而易見的。
本公開涉及乾眼症的診斷、減輕、治癒和治療。特別地，本公開提供了用於治療乾眼症的眼科組成物。該眼科組成物可以包含脫酸椰子油、基本上由其組成或由其組成。如本文所用，術語「脫酸椰子油」是指通過用鹼處理椰子油而已至少部分脫酸的椰子油(其可以如本文所述製備或商業獲得)。脫酸過程引起椰子油化學成分的改變，從而當將脫酸椰子油施用於受試者的眼睛時，其對眼睛造成的刺激較小。如本文所用，術語「椰子油」是指收集或衍生自椰子的油組成物，或具有與衍生自椰子的油基本上相同成分的組成物。
本文所述的包含椰子油的眼科組成物可以為乾眼症提供緩解，例如長期緩解。普通椰子油(例如純椰子油)具有刺激性，不適合用作滴眼劑。可以將脫酸椰子油單獨或與人工淚液滴眼劑組合施用於受試者。當將其與人工淚液組合使用時，脫酸椰子油滴眼劑也可以大大提高人工淚液的功效。
本公開還提供了中藥茶組成物和熱療法。可以單獨使用中藥茶和熱療法，也可以將其與脫酸椰子油滴眼劑組合使用。中藥茶和熱療法可以改善脫酸椰子油滴眼劑的治療效果。
總之，本文所述的方法可以提供乾眼症症狀的快速緩解並改善人工淚液滴眼劑的效果。特別地，本文所述的方法可以提供相對長期的效果，從而消除了每天施用人工淚液滴眼劑10-20次的需要。
【圖1】顯示眼睛角膜的5個區域的示意圖。編號1-5是表示每個區域內顏色區域百分比的示例性評分。
【圖2】顯示每組中小鼠的平均體重的柱狀圖。c表示與陰性對照組相比，具有統計學顯著差異(p<0.05)。AT表示人工淚液；TA表示測試組成物。
【圖3】顯示每組中小鼠的平均淚液分泌的柱狀圖。「a」表示與年齡匹配的對照組相比，「c」表示與陰性對照組相比，「*」表示與建模前相比，具有統計學顯著差異(p<0.05)。AT表示人工淚液；TA表示測試組成物。
【圖4】顯示每組中小鼠的角膜螢光素鈉平均染色評分的柱狀圖。「a」表示與年齡匹配的對照組相比，「b」表示與模型對照組相比，「c」表示與陰性對照組相比，「*」表示與建模前相比，具有統計學顯著差異(p<0.05)。AT表示人工淚液；TA表示測試組成物。
【圖5】顯示每組中小鼠的角膜螢光素鈉染色評分比的柱狀圖。「b」表示與模型對照組相比，「c」表示與陰性對照組相比，具有統計學顯著差異(p<0.05)。AT表示人工淚液；TA表示測試組成物。
【圖6】顯示每組中小鼠的平均體重的柱狀圖。
【圖7】顯示了QC(ESL+)的總離子色譜圖。
【圖8】顯示了QC(ESL-)的總離子色譜圖。
【圖9】顯示了QC組樣品(ECL+)的示例性總離子色譜圖。
【圖10】顯示了QC組樣品(ECL-)的示例性總離子色譜圖。
【圖11】顯示了脫酸椰子油(Prco)組樣品(ECL+)的示例性總離子色譜圖。
【圖12】顯示了脫酸椰子油組樣品(ECL-)的示例性總離子色譜圖。
【圖13】顯示了脫酸椰子油(Orco)組樣品(ECL+)的示例性總離子色譜圖。
【圖14】顯示了原始椰子油組樣品(ECL-)的示例性總離子色譜圖。
【圖15】顯示了所有樣品(ESI+)的PCA評分圖。
【圖16】顯示了所有樣品(ESI-)的PCA評分圖。
【圖17】顯示了Prco和Orco組(ESI+)的PCA評分圖。
【圖18】顯示了Prco和Orco組(ESI-)的PCA評分圖。
【圖19A】顯示了Prco和Orco組(ESI+)的PLS-DA評分圖。
【圖19B】顯示了Prco和Orco組(ESI+)的擬合模型和計算參數。
【圖20A】顯示了Prco和Orco組(ESI-)的PLS-DA評分圖。
【圖20B】顯示了Prco和Orco組(ESI-)的擬合模型和計算參數。
【圖21】顯示了Prco和Orco組(ESI+)的OPLS-DA評分圖。
【圖22】顯示了Prco和Orco組(ESI-)的OPLS-DA評分圖。
【圖23】顯示了QC(ESL+)的總離子色譜圖。
【圖24】顯示了QC(ESL-)的總離子色譜圖。
【圖25】顯示了QC組(ECL+)的示例性總離子色譜圖。
【圖26】顯示了QC組(ECL-)的示例性總離子色譜圖。
【圖27】顯示了產品組(ECL+)的示例性總離子色譜圖。
【圖28】顯示了產品組(ECL-)的示例性總離子色譜圖。
【圖29】顯示了儲備溶液組(ECL+)的示例性總離子色譜圖。
【圖30】顯示了儲備溶液組(ECL-)的示例性總離子色譜圖。
【圖31】顯示了所有樣品(ESI+)的PCA評分圖。Orco是儲備溶液組；Prco是產品組；QC是QC組。
【圖32】顯示了所有樣品(ESI-)的PCA評分圖。Orco是儲備溶液組；Prco是產品組；QC是QC組。
【圖33】顯示了Prco和Orco組(ESI+)的PCA評分圖。Orco是儲備溶液組；Prco是產品組。
【圖34】顯示了Prco和Orco組(ESI-)的PCA評分圖。Orco是儲備溶液組；Prco是產品組。
【圖35A】顯示了Prco和Orco組(ESI+)的PLS-DA評分圖。Orco是儲備溶液組；Prco是產品組。
【圖35B】顯示了Prco和Orco組(ESI+)的擬合模型和計算參數。
【圖36A】顯示了Prco和Orco組(ESI-)的PLS-DA評分圖。Orco是儲備溶液組；Prco是產品組。
【圖36B】顯示了Prco和Orco組(ESI-)的擬合模型和計算參數。
【圖37】顯示了Prco和Orco組(ESI+)的OPLS-DA評分圖。Orco是儲備溶液組；Prco是產品組。
【圖38】顯示了Prco和Orco組(ESI-)的OPLS-DA評分圖。Orco 是儲備溶液組；Prco是產品組。
【圖39】顯示儲備溶液組中脂質類別(ESI+)的百分比餅圖。Orco是儲備溶液組。
【圖40】顯示產品組中脂質類別(ESI+)的百分比餅圖。Pcro是產品組。
【圖41】顯示產品組中脂質類別(ESI-)的百分比餅圖。Pcro是產品組。
【圖42】顯示儲備溶液組中脂質類別(ESI-)的百分比餅圖。Orco是儲備溶液組。
【圖43】總結了在ECL+模型下(代謝物分析)檢測到脫酸椰子油(Prco)組與原始椰子油(Orco)組之間的差異，顯示了保留時間(RT)、分子量(檢測)、名稱、分子量(預測)、△ppm、VIP、T檢驗的P值、倍數變化(log2(Prco/Orco))、Orco平均值和Prco平均值。
【圖44】總結了在ECL-模型下(代謝物分析)檢測到脫酸椰子油(Prco)組與原始椰子油(Orco)組之間的差異，顯示了保留時間(RT)、分子量(檢測)、名稱、分子量(預測)、△ppm、VIP、T檢驗的P值、倍數變化(log2(Prco/Orco))、Orco平均值和Prco平均值。
【圖45】總結了在ECL+模型下(脂質組學分析)檢測到脫酸椰子油(Prco)組與原始椰子油(Orco)組之間的差異，顯示了VIP、脂質離子、脂質組、類別、脂肪酸、FA1、FA2、FA3、計算的m/z、離子式、保留時間(RT)、Prco平均值、Orco平均值、Prco/Orco、倍數變化(log2(Prco/Orco))、T檢驗的P值。
【圖46】總結了在ECL-模型下(脂質組學分析)檢測到脫酸椰子油(Prco)組與原始椰子油(Orco)組之間的差異，顯示了VIP、脂質離子、脂質組、類別、脂肪酸、FA1、FA2、FA3、FA4、計算的m/z、離子式、保留時間(RT)、Prco平均值、Orco平均值、Prco/Orco、倍數變化(log2(Prco/Orco))、T檢驗的P值。
【圖47】顯示了眼球結構。脂質位於淚液的頂部。
【圖48】顯示了包含眼瞼和淚膜的閉合氣密結構。
【圖49】顯示了具有乾眼病的眼球結構。黑色和白色表示沒有眼淚。
【圖50A】顯示了含有以0.25%的濃度溶解在脫酸椰子油中的環孢素的玻璃管。
【圖50B】顯示了含有以2.5%的濃度溶解在DMSO中的環孢素的玻璃管。
【圖50C】顯示了含有以2.5%的濃度溶解在橄欖油中的環孢素的玻璃管。
【圖51A】顯示了含有以1：9的體積比與脫酸椰子油混合的環孢素-DMSO溶液(2.5%)的玻璃管。
【圖51B】顯示了含有以1：9的體積比與脫酸椰子油混合的環孢素-橄欖油溶液(2.5%)的玻璃管。
【圖52A】顯示了含有以1：19的體積比與脫酸椰子油混合的環孢素-DMSO溶液(5%)的玻璃管。
【圖52B】顯示了含有以1：19的體積比與脫酸椰子油混合的環孢素-橄欖油溶液(5%)的玻璃管。
【圖53A】顯示了含有溶解在脫酸椰子油中的環孢素的離心管。
【圖53B】顯示了含有溶解在脫酸椰子油中的環孢素的離心管。
【圖53C】顯示了含有溶解在DMSO/脫酸椰子油混合溶液中的環孢素的離心管。
【圖53D】顯示了含有溶解在DMSO/脫酸椰子油混合溶液中的環孢素的離心管。
本公開涉及乾眼症的診斷、減輕、治癒和治療。特別地，本公開提供了用於治療乾眼症的眼科組成物。該眼科組成物可以包含脫酸椰子油、基本上由其組成或由其組成。如本文所用，術語「脫酸椰子油」是指通過用鹼處理椰子油而已至少部分脫酸的椰子油(其可以如本文所述製備或商業獲得)。脫酸過程引起椰子油化學成分的改變，從而當將脫酸椰子油施用於受試者的眼睛時，其對眼睛造成的刺激較小。如本文所用，術語「椰子油」是指收集或衍生自椰子的油組成物，或具有與衍生自椰子的油基本上相同成分的組成物。
本文所述的包含椰子油的眼科組成物可以為乾眼症提供緩解，例如長期緩解。普通椰子油(例如純椰子油)具有刺激性，不適合用作滴眼劑。可以將脫酸椰子油單獨或與人工淚液滴眼劑組合施用於受試者。當將其與人工淚液組合使用時，脫酸椰子油滴眼劑也可以大大提高人工淚液的功效。
本公開還提供了中藥茶組成物和熱療法。可以單獨使用中藥 茶和熱療法，也可以將其與脫酸椰子油滴眼劑組合使用。中藥茶和熱療法可以改善脫酸椰子油滴眼劑的治療效果。
總之，本文所述的方法可以提供乾眼症症狀的快速緩解並改善人工淚液滴眼劑的效果。特別地，本文所述的方法可以提供相對長期的效果，從而消除了每天施用人工淚液滴眼劑10-20次的需要。
乾眼症
眼淚膜是眼睛表面上一個連續的眼淚層。保持眼睛健康、舒適和良好的視力至關重要。眼淚使眼睛的表面保持濕潤並洗去灰塵、碎屑和微生物。正常的眼淚膜通常具有三個重要組分：脂質組分、水性組分和黏液樣(黏蛋白)組分。每個眼淚組分是由眼睛上或眼睛附近的不同腺體產生的。脂質組分是由眼瞼的瞼板腺產生的。水性組分是由位於上眼瞼外側後面的淚腺產生的。黏蛋白組分是由覆蓋眼白(鞏膜)的結膜中的杯狀細胞產生的。
為了保持透明，角膜沒有血管。它的表面細胞所需的氧氣和營養以及新陳代謝的廢物都是通過眼淚運送的。眼淚可以清除正常脫落的上皮碎屑、代謝的二氧化碳和水。它從角膜緣血管輸送營養，並從空氣交換氧氣到角膜。因此，眼淚相當於角膜的血液，是健康角膜的必要基礎。
如圖47所示，該脂質組分提供了物理屏障，使得眼淚不會滴出眼睛。另外，該物理屏障可以防止眼淚蒸發。因為氧氣是脂溶性的，所以氧氣可以自由地穿過脂質層進入到眼淚中以為角膜提供新陳代謝。另外，眼淚膜和眼瞼閉合在一起可以形成閉合的氣密結構(圖48)以保護眼睛免受大氣中病原體的入侵。因此，如果淚液相當於角膜的血液，則脂質層相當於透明的血管。
這些眼淚膜組分來源中的任一個有問題都可能導致淚液不穩定和眼睛乾澀(圖49)。例如，如果瞼板腺不能產生或分泌足夠的油(瞼脂)，則眼淚膜可能蒸發太快-稱為「蒸發性乾眼」或「瞼板腺功能障礙」的病症。
乾眼症是指眼睛表面缺乏足夠的潤滑和水分，或眼淚膜功能障礙。乾眼症可以是暫時的、急性的或慢性的。慢性乾眼症包括例如乾眼綜合症、乾燥性角膜炎、乾燥性角結膜炎、功能障礙性淚液綜合症、淚性角結膜炎、蒸發性淚液缺乏、房水性淚液缺乏、瞼板腺功能障礙和LASIK誘導的神經營養性上皮病(LNE)。乾眼綜合症是由於眼睛表面慢性長期缺乏足夠的潤滑和水分而引起的。乾燥性角膜炎是指角膜乾燥和炎症。乾燥性角結膜炎是指影響角膜和結膜的乾眼。功能障礙性淚液綜合症通常是指淚液質量不足。
乾眼症的後果範圍從細微但持續的眼睛刺激到嚴重的炎症甚至是眼前表面的疤痕。乾眼症的症狀(例如乾眼綜合症)包括例如灼熱感、搔癢、疼痛感、重眼、眼睛疲勞、眼睛酸痛、乾燥感、紅眼、畏光(對光敏感)、視力模糊、炎症以及異物感。該異物感是常見的症狀。它是指沙粒或其它物體或材料在眼睛中的感覺。在某些情況下，水性眼睛也可能是乾眼綜合症的症狀。這是因為眼睛表面乾燥有時會過度刺激水性淚液組分的產生而作為保護機制。然而，這種「反射性流淚」不能在眼睛上保持足夠長的時間以糾正潜在的乾眼病症。在某些情況下，乾眼症可能影響LASIK(激光輔助原位角膜磨鑲術)和白內障手術的結果。在嚴重的情況下，視力可能會顯著受損。
當眼睛沒有產生足夠的眼淚或眼淚蒸發得太快時，就會發生乾眼。造成乾眼症的原因可能很多，包括例如使用隱形眼鏡、瞼板腺功能障礙、過敏、妊娠、乾燥綜合症、維生素A缺乏症、LASIK手術以及某些藥物(例如抗組胺藥、某些降壓藥、激素替代療法和抗抑鬱藥)。
熟練的從業人員將意識到診斷可以主要基於症狀。在某些情況下，可以進行測試以確定眼淚的數量和質量是否足夠。裂隙燈檢查通常用於診斷乾眼並記錄對眼睛的任何損害。Schirmer的測試可以測量浸入眼睛的水分含量。該測試對於確定病症的嚴重性有用。淚液破裂時間(TBUT)測試測量眼睛中眼淚破裂所需的時間。可以在將螢光素滴入結膜囊(cul-de-sac)之後確定淚液破裂時間。因此，在一些方面，本公開還提供了鑑定患有乾眼症和乾眼綜合症(例如從輕度到嚴重的乾眼症狀)的受試者的方法。
許多因素可能增加乾眼症的風險。這些因素包括例如使用計算機、隱形眼鏡佩戴、老化、更年期、空調、空氣加熱、乾旱氣候、乾燥或有風的天氣狀況、吸菸、糖尿病、甲狀腺相關疾病、狼瘡、類風濕性關節炎、乾燥綜合症、藥物(例如抗組胺藥、抗抑鬱藥、降壓藥和避孕藥)、眼瞼問題(例如眼瞼炎)、LASIK和角膜屈光手術等。
本公開提供了治療本文所述的各種乾眼症的方法和組成物。
脫酸椰子油
椰子油是一種可食用的無毒油，其是從椰子樹(Cocos nucifera)收穫的成熟椰子的仁或肉中提取的。它的特徵在於高含量的飽和脂肪。其氧化 很慢，因此抗酸敗。它在24℃下可持續長達六個月而不會變質。
椰子油是99%的脂肪(或脂質)，主要由飽和脂肪組成(占總脂肪的82%)。在某些情況下，椰子油包含以下一種或多種脂肪酸：辛酸(例如辛酸)(C8：0)、檸檬酸，十二烷酸(例如月桂酸)(C12：0)、十四烷酸(例如肉豆蔻酸)(C14：0)、十六烷酸(例如棕櫚酸)(C16：0)、十八烷基酸(C18：0)及/或十八烯酸(例如油酸)(C18：1)。在某些情況下，椰子油中約一半的飽和脂肪含量是月桂酸(例如每100克約41.8克)，而其它重要的飽和脂肪是肉豆蔻酸(例如每100克約16.7克)、棕櫚酸(例如每100克約8.6克)和辛酸(例如每100克約6.8克)。單不飽和脂肪可以是例如總組成物的約5%至10%(例如6%)，並且多不飽和脂肪可以是例如約1%至5%(例如2%)。椰子油也可以包括植物甾醇。
椰子油可以通過乾加工或濕加工提取。乾加工要求從外殼中提取肉或仁，並使用火、日光或窯乾燥以產生乾椰肉。將乾椰肉用溶劑壓製或溶解，產生椰子油和高蛋白、高纖維的搗碎物。
全濕加工使用原始椰子，而不是乾椰肉，椰子中的蛋白會產生油和水的乳液。更具挑戰性的步驟是分解乳液以回收油。這過去是通過長時間煮沸來完成的，但這會產生變色的油，而且不經濟。現代技術使用離心機和加熱預處理。儘管有許多變化和技術，但濕加工可能不如乾加工可行，因為它的產量降低了10%至15%，甚至考慮到由於乾加工造成的腐敗和害蟲損失也是如此。
初榨椰子油是指從椰子中提取的椰子油，沒有發生實質性的化學或物理變化。初榨椰子油更接近其天然形式(Jayasekara等人， "Processing technologies for virgin coconut oil and coconut based confectionaries and beverages." Proceedings of International Coconut Summit(2007)：7-11)。通常通過冷壓或冷磨具有水分含量約6%的乾椰肉提取初榨椰子油。在使用例如發酵、攪動(離心分離)和冷藏等過程後，將油與水或水分分離。在某些情況下，可以通過冷壓新鮮乾椰子肉直接提取初榨椰子油。此過程稱為微排液。
已經確定了未改性的椰子油和初榨椰子油具有刺激性，並且不適合用於眼科組成物(例如滴眼劑)中。然而，當如本文所述進行修飾時，例如通過脫酸，可以將椰子油施加到眼睛上。本公開提供了脫酸椰子油組成物，其與組成物中的未改性的椰子油和初榨椰子油不同，並且可以安全地用於眼科組成物中。脫酸椰子油可以通過本文所述的方法製備。在一些實施方式中，通過以下工藝製備脫酸椰子油，該工藝包括：將椰子油與鹼性溶液(pH>7)混合；從混合物中分離水相和油相；並從油相中收集脫酸椰子油。
儘管無意受到任何理論的束縛，但據認為脫酸過程除去了椰子油中的可溶性成分(例如游離甘油)和可溶性脂肪酸。因此，脫酸脂肪酸可能含有較高百分比的抗脫酸(或抗皂化)的脂質及/或較高百分比的不溶性脂肪酸(具有相對較長烴碳鏈(例如具有C10或更高的烴碳鏈)的脂肪酸)。當向眼睛施用脫酸椰子油時，其更穩定且不太可能引起刺激。
眼科溶液的pH較佳為6.0-8.5，更佳為7.0-8.0。pH值低於6.0容易引起眼睛刺激，而pH值高於8.5超出了生理pH範圍。在一些實施方式中，眼科溶液的pH為約7。
在一些實施方式中，眼科溶液不含任何防腐劑，例如抗微生物防腐劑(例如抗生素、山梨酸、山梨酸鈉和山梨酸酯、苯甲酸、苯甲酸鈉和苯甲酸酯、羥基苯甲酸酯及其衍生物、二氧化硫和亞硫酸鹽、亞硝酸鹽、硝酸鹽、乳酸、丙酸及/或丙酸鈉)或抗氧化劑(例如抗壞血酸、抗壞血酸鈉、丁基化羥基甲苯、丁基化羥基茴香醚、沒食子酸和沒食子酸鈉、二氧化硫和亞硫酸鹽及/或生育酚)。
在一些實施方式中，與原始椰子油相比，脫酸椰子油具有富集水準的柱頭三醇(Stigmastentriol)(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2為至少或約5、6、7、8、9、10或11)。在一些實施方式中，與原始椰子油相比，脫酸椰子油具有富集水準的麥角甾-4-烯-3-酮(Campest-4-en-3-one)(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2為至少或約4、5、6、7、8、9或10)。在一些實施方式中，與原始椰子油相比，脫酸椰子油具有富集水準的豆甾醇(Stigmasterol)(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2為至少或約3、4、5、6、7、8或9)。在一些實施方式中，與原始椰子油相比，脫酸椰子油具有富集水準的豆甾-22-烯-3,6-二酮(Stigmast-22-ene-3,6-dione)(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2為至少或約3、4、5、6、7、8或9)。在一些實施方式中，與原始椰子油相比，脫酸椰子油具有富集水準的泛醌-4(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2為至少或約3、4、5、6、7、8或9)。在一些實施方式中，與原始椰子油相比，脫酸椰子油具有富集水準的維生素D3(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2為至少或約3、4、5、6、7、8或9)。
在一些實施方式中，與原始椰子油相比，脫酸椰子油具有降低水準的3-己酸(例如該比例的log2小於或約為-7、-8、-9、-10、-11、-12或-13)。在一些實施方式中，與原始椰子油相比，脫酸椰子油具有降低水準的5，8-十四碳二烯酸(例如該比例的log2小於或約為-4、-5、-6、-7、-8、-9或-10)。在一些實施方式中，與原始椰子油相比，脫酸椰子油具有降低水準的吲哚(例如該比例的log2小於或約為-4、-5、-6、-7、-8、-9或-10)。在一些實施方式中，與原始椰子油相比，脫酸椰子油具有降低水準的異亮胺酸(例如該比例的log2小於或約為0、-1或-2)。在一些實施方式中，與原始椰子油相比，脫酸椰子油具有降低水準的纈胺酸(例如該比例的log2小於或約為0、-1、-2、-3或-4)。在一些實施方式中，與原始椰子油相比，脫酸椰子油具有降低水準的谷胺酸(例如該比例的log2小於或約為0、-1、-2、-3、-4、-5或-6)。在一些實施方式中，與原始椰子油相比，脫酸椰子油具有降低水準的β-丙胺酸(例如該比例的log2小於或約為0、-1、-2、-3、-4、-5或-6)。
在一些實施方式中，與原始椰子油相比，脫酸椰子油具有富集水準的胡椒色素酸(Piperochromenoic acid)(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2為至少或約3、4、5、6、7、8或9)。在一些實施方式中，與原始椰子油相比，脫酸椰子油具有富集水準的LysoPA(a-25：0/0：0)(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2為至少或約2、3、4、5、6、7、8或9)。在一些實施方式中，與原始椰子油相比，脫酸椰子油具有富集水準的LysoPA(24：0/0：0)(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2為至少或約3、4、5、6、7、8、9或10)。
在一些實施方式中，與原始椰子油相比，脫酸椰子油具有降低水準的蔗糖(例如該比例的log2小於或約為-5、-6、-7、-8、-9、-10或-11)。在一些實施方式中，與原始椰子油相比，脫酸椰子油具有降低水準的檸檬酸(例如該比例的log2小於或約為-4、-5、-6、-7、-8、-9、-10或-11)。在一些實施方式中，與原始椰子油相比，脫酸椰子油具有降低水準的甘露醇(例如該比例的log2小於或約為-3、-4、-5、-6、-7、-8、-9、-10或-11)。在一些實施方式中，與原始椰子油相比，脫酸椰子油具有降低水準的葡萄糖或6-磷酸葡萄糖(例如該比例的log2小於或約為-1、-2、-3、-4、-5、-6或-7)。
在一些實施方式中，脫酸椰子油包含柱頭三醇、麥角甾-4-烯-3-酮、DG(8：0/8：0/0：0)、MG(0：0/15：0/0：0)、豆甾-22-烯-3,6-二酮、豆甾醇、十六烷二酸、△8,14-甾醇、PA(8：0/8：0)、維生素D3、泛醌-4、(R)-2-羥基硬脂酸、白樺酯醇、PA(8：0/14：0)、PA(8：0/12：0)、MG(17：0/0：0/0：0)、LysoPA(18：0e/0：0)、麥角固醇、豆甾烷-3,6-二酮、維生素K1、TG(10：0/8：0/8：0)、MG(0：0/14：0/0：0)、DG(8：0/10：0/0：0)、神經酸、肉桂酸甲酯、肉桂酸，泛酸、TG(13：0/13：0/8：0)、甘諾酮、MG(18：0/0：0/0：0)、TG(12：0/12：0/8：0)、十三烷酸、亞油酸、MG(16：0/0：0/0：0)、TG(8：0/8：0/14：0)、潘胺酸(Pangamic acid)、駱駝二醇(Camelledionol)、DG(8：0/0：0/14：0)、間羥基苯丙酮酸、DG(18：1n9/0：0/20：4n3)、DG(12：0/12：0/0：0)、磷酸膽鹼、硬脂醯胺、LysoPA(24：0/0：0)、胡椒色素酸、LysoPA(a-25：0/0：0)、DG(8：0/0：0/15：0)、LysoPA(i-20：0/0：0)、PA(8：0/16：0)、2-硬脂醯甘油磷酸甘油、LysoPA(18：0e/0：0)、LysoPA(22：0/0：0)、腦酸、PA(8：0/14：0)、DG (20：4n3/0：0/20：4n3)、LysoPA(18：0/0：0)、DG(10：0/0：0/19：0)、DG(12：0/15：0/0：0)、PA(22：0/8：0)、PA(8：0/20：0)和PA(22：0/13：0)中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20個或全部。在一些實施方式中，與原始椰子油相比，這些化學物質具有更高的濃度。
在一些實施方式中，與原始椰子油相比，脫酸椰子油具有富集水準的DG(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2為至少或約0、1、2、3、4、5、6、7、8或9)。在一些實施方式中，與原始椰子油相比，脫酸椰子油具有富集水準的ChE(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2為至少或約0、1、2或3)。在一些實施方式中，與原始椰子油相比，脫酸椰子油具有富集水準的ZyE或StE(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2為至少或約0、1、2或3)。
在一些實施方式中，與原始椰子油相比，脫酸椰子油具有降低水準的LPE(例如該比例的log2小於或約為-2、-3、-4、-5、-6、-7或-8)。在一些實施方式中，與原始椰子油相比，脫酸椰子油具有降低水準的PE(例如該比例的log2小於或約為-2、-3、-4、-5、-6、-7或-8)。在一些實施方式中，與原始椰子油相比，脫酸椰子油具有降低水準的Co(例如該比例的log2小於或約為-1、-2、-3或-4)。在一些實施方式中，與原始椰子油相比，脫酸椰子油具有降低水準的LPC(例如該比例的log2小於或約為-1、-2、-3、-4、-5、-6、-7或-8)。在一些實施方式中，與原始椰子油相比，脫酸椰子油具有降低水準的CerG1(例如該比例的log2小於或約為-1、-2、-3、-4或-5)。
在一些實施方式中，與原始椰子油相比，脫酸椰子油具有富集水準的LdMePE(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2為至少或約1、2、3、4、5、6或7)。在一些實施方式中，與原始椰子油相比，脫酸椰子油具有富集水準的PAF(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2為至少或約1、2、3、4或5)。在一些實施方式中，與原始椰子油相比，脫酸椰子油具有富集水準的DGMG(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2為至少或約1、2、3、4或5)。在一些實施方式中，與原始椰子油相比，脫酸椰子油具有富集水準的MGMG(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2為至少或約1、2、3、4或5)。在一些實施方式中，與原始椰子油相比，脫酸椰子油具有富集水準的LPMe(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2為至少或約1、2、3、4、5、6或7)。
在一些實施方式中，與原始椰子油相比，脫酸椰子油具有降低水準的DGDG(例如該比例的log2小於或約為-3、-4、-5、-6、-7、-8或-9)。在一些實施方式中，與原始椰子油相比，脫酸椰子油具有降低水準的cPA(例如該比例的log2小於或約為-3、-4、-5、-6、-7、-8或-9)。在一些實施方式中，與原始椰子油相比，脫酸椰子油具有降低水準的LPI(例如該比例的log2小於或約為-2、-3、-4、-5、-6、-7或-8)。在一些實施方式中，與原始椰子油相比，脫酸椰子油具有降低水準的LPE(例如該比例的log2小於或約為-1、-2、-3、-4、-5、-6或-7)。在一些實施方式中，與原始椰子油相比，脫酸椰子油具有降低水準的PC(例如該比例的log2小於或約為-1、-2、-3、-4、-5、-6或-7)。在一些實施方式中，與原始椰子油相比，脫酸椰 子油具有降低水準的dMePE(例如該比例的log2小於或約為-1、-2、-3、-4、-5、-6或-7)。在一些實施方式中，與原始椰子油相比，脫酸椰子油具有降低水準的MGDG(例如該比例的log2小於或約為-1、-2、-3、-4、-5、-6或-7)。在一些實施方式中，與原始椰子油相比，脫酸椰子油具有降低水準的PI(例如該比例的log2小於或約為-1、-2、-3、-4、-5、-6或-7)。在一些實施方式中，與原始椰子油相比，脫酸椰子油具有降低水準的PE(例如該比例的log2小於或約為-1、-2、-3、-4或-5)。在一些實施方式中，與原始椰子油相比，脫酸椰子油具有降低水準的PG(例如該比例的log2小於或約為-1、-2、-3、-4或-5)。在一些實施方式中，與原始椰子油相比，脫酸椰子油具有降低水準的PMe(例如該比例的log2小於或約為0、-1或-2)。在一些實施方式中，與原始椰子油相比，脫酸椰子油具有降低水準的LPG(例如該比例的log2小於或約為0、-1或-2)。在一些實施方式中，與原始椰子油相比，脫酸椰子油具有降低水準的PEt(例如該比例的log2小於或約為0、-1或-2)。
在一些實施方式中，脫酸椰子油包含DG、ChE、ZyE、StE、LdMePE、PAF、DGMG、MGMG、LPMe和CL中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9個或全部。在一些實施方式中，與原始椰子油相比，這些化學物質具有更高的濃度。
在一些實施方式中，脫酸椰子油不包含(例如可檢測量的)心磷脂(CL)(18：1/18：1/18：1/20：0)或二半乳糖基二醯基甘油(DGDG)(16：0/18：1)。在一些實施方式中，本文所述的方法(例如脂質組學分析)不能從脫酸椰子油中檢測到CL(18：1/18：1/18：1/20：0)-H或DGDG(16：0/18：1) +HCOO。
環孢素
環孢素眼科溶液(或乳劑)是一種可幫助患者增加其眼睛產生淚液的自然能力的處方滴眼劑。它用於治療由炎症引起的慢性乾眼病症。環孢素還可以用於口服製劑和注射製劑，所述製劑可以用於治療各種病症，所述病症包括治療或預防移植器官排斥、牛皮癬和類風濕關節炎。口服施用或注射後，可以將環孢素吸收到血流中並全身發揮作用以抑制人體的免疫系統。然而，環孢素滴眼劑乳液的作用不同。認為環孢素作為免疫系統的部分調節劑在眼睛中局部起作用。當淋巴細胞(一種免疫系統的白細胞)死亡並在淚腺中積累時，認為淚液的產生會減少。環孢素逆轉了這種情況，增加了淚液的產生。環孢素不會立即產生作用。直到開始治療後3到6個月，才可能注意到淚液產生的增加。
由於環孢素不溶於水，因此，本文所述的組成物(例如脫酸椰子油)可用作環孢素的溶劑。在一些實施方式中，環孢素可以以約或至少0.01mg/ml(例如約或至少0.05mg/ml、0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.3mg/ml、0.4mg/ml、0.5mg/ml、0.6mg/ml、0.7mg/ml、0.8mg/ml、0.9mg/ml、1.0mg/ml、1.5mg/ml、2mg/ml、3mg/ml、4mg/ml、5mg/ml或10mg/ml)的濃度用於乾眼症治療。在一些實施方式中，該濃度為約或至少0.5mg/ml。
在一些實施方式中，環孢素的濃度為約或至少0.01%(例如約或至少0.02%、0.03%、0.04%、0.05%、0.06%、0.07%、0.08%、0.09%、0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%、0.6%、0.7%、0.8%、0.9%或1%)(重量百分比或體積百分比)。在一些實施方式中，該濃度小於0.01%、 0.02%、0.03%、0.04%、0.05%、0.06%、0.07%、0.08%、0.09%、0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%、0.6%、0.7%、0.8%、0.9%或1%)(重量百分比或體積百分比)。在一些實施方式中，該濃度為0.01%至0.1%(重量百分比或體積百分比)(例如0.05%或0.09%)。
在一些實施方式中，該溶液可另外包含DMSO及/或橄欖油。
在一些實施方式中，環孢素可以與一種或多種人工淚液(例如羧甲基纖維素、右旋糖酐、甘油、羥丙甲纖維素、聚乙二醇400(PEG 400)、聚山梨酸酯、聚乙烯醇、聚維酮或丙二醇)、潤滑劑、如本文所述的未加工椰子油樣品、如本文所述的脫酸椰子油樣品或本領域已知的任何乾眼症治療的化合物組合用於乾眼症治療。
中藥茶
本公開提供了用於治療乾眼症的中藥茶組成物。在一些實施方式中，該中藥茶組成物包含給受試者的一種或多種以下成分：
(1)枸杞(寧夏枸杞或茄科枸杞)或枸杞提取物；
(2)黃芪根或黃芪根提取物；
(3)菊花或菊花提取物。
枸杞(中文也稱為「goji」)是寧夏枸杞或茄科枸杞的果實。水果已被用作中藥的成分。
黃芪根(中文也稱為「huangqi」)是Astragalus propinquus的根。它常用於中藥。根的化學組成包括多糖和三萜類化合物(例如黃芪總皂苷)以及異黃酮(包括例如熊竹素(kumatakenin)、毛蕊異黃酮(calycosin) 和芒柄花素(formononetin)及其糖苷和丙二酸酯。
菊花(中文也稱為「juhua」)是菊科中菊花屬的開花植物。菊花可用於茶中，也可廣泛用於中藥中。
在一些實施方式中，中藥茶組成物(例如一份)可包含約或至少1克，例如約或至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、30、40或50克枸杞(例如10克)。在一些實施方式中，中藥茶組成物(例如一份)可包含約或至少1克，例如約或至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、30、40或50克黃芪根(例如10克)。在一些實施方式中，中藥茶組成物(例如一份)可包含約或至少1克，例如約或至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、30、40或50克菊花(或菊花花)(例如10克)。
在一些實施方式中，枸杞在中藥茶組成物中的重量百分比為至少或約10%，例如至少或約20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%。在一些實施方式中，該中藥茶組成物包含枸杞，並且枸杞在中藥茶組成物中的重量百分比小於10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%。
在一些實施方式中，黃芪根在中藥茶組成物中的重量百分比為約或至少10%，例如約或至少20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%。在一些實施方式中，黃芪根在中藥茶組成物中的重量百分比小於10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%。
在一些實施方式中，菊花(或菊花花)在中藥茶組成物中的 重量百分比為約或至少10%，例如約或至少20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%。在一些實施方式中，菊花(或菊花花)在中藥茶組成物中的重量百分比小於10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%。
在一些實施方式中，三種成分(1)、(2)和(3)的比例為約1：1：1、2：1：1、1：2：1、1：1：2、1：2：2、2：1：2或2：2：1。
可以根據需要將中藥茶組成物施用於受試者。受試者每天可以喝幾次中藥茶，例如每天約或至少1次(例如約或至少2、3、4、5、6、7、8、9或10次)。在一些實施方式中，受試者可以在延長的時間段內定期喝中藥茶，例如約或至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10周，或約或至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個月。在一些實施方式中，受試者可以在施用脫酸椰子油滴眼劑之前或之後喝中藥茶。
在一些實施方式中，為了方便起見，可以將中藥茶組成物放置在中藥茶具中。這些中藥茶具可以用作一次性容器(例如茶杯、茶具、K杯、茶膠囊)。中藥茶組成物的粉末可以儲存在一次性容器中。在一些實施方式中，容器填充有氮氣以增加儲存時間。氮可以防止枸杞粉末形成聚集體。可以將容器進一步密封。在一些實施方式中，中藥茶具可以用在適當的咖啡機或茶具中。
在一些實施方式中，可以使用枸杞、黃芪根或菊花的提取物。在一些實施方式中，可以將提取物製成丸劑、片劑或膠囊的形式。可以以每天1-4次，較佳每天一次或兩次的方案施用丸劑、片劑或膠囊。可以調整該給藥方案以提供最佳的治療響應。
熱療法
本文還提供了熱療法。該熱療法可單獨使用或與本文所述的其它方法(例如脫酸椰子油滴眼劑及/或中藥茶)組合使用以治療乾眼症。在一些實施方式中，使用了包含中藥組成物的熱墊。如本文所用，術語「熱墊」或「加熱墊」是指用於加熱部分身體以便提供治療效果的墊。熱墊可以具有預先形成的正方形或矩形的形狀。熱墊可以填充有藥物組成物(例如中藥組成物)。
在一些實施方式中，該中藥組成物包含決明子和冰片。
決明子(中文也稱為「Juemingzi」)是Cassia obtusifolia或Cassia tora的乾燥成熟種子，其屬於豆科的決明屬。它在韓國、日本和中國種植，通常作為炒茶食用。在中藥中，它已被用於治療高脂血症、糖尿病、阿爾茨海默氏病、急性肝損傷、炎症、畏光、頭痛、頭暈和高血壓。可以例如在ong等人"Cassiae semen：A review of its phytochemistry and pharmacology." Molecular medicine reports 16.3(2017)：2331-2346中找到決明子的詳細描述，其通過引用整體併入本文。
冰片是雙環有機化合物和萜烯衍生物。它可以在異囊菊(Heterotheca)、蒿(Artemisia)、紫珠(Callicarpa)、龍腦香(Dipterocarpaceae)、艾納香(Blumea balsamifera)和山柰(Kaempferia galanga)的幾個物種中找到。在某些情況下，冰片樹脂是指獲自龍腦樹(Dryobalanops aromatica)或艾納香(Blumea balsamifera)的樹脂。冰片的典型形式為薄的、半透明的、帶白色棱角的碎片或晶體。在中醫實踐中冰片(作為粗樹脂)可以內用和外用。
本公開提供了包含可用於治療乾眼症或減輕乾眼症的症狀的決明子及/或冰片的熱墊。
在一些實施方式中，該熱墊包含約或至少50g，例如約或至少100g、150g、200g、250g、300g、350g、400g、450g或500g的決明子(例如200g)。在一些實施方式中，該熱墊包含約或至少50g，例如約或至少60g、70g、80g、90g、100g、150g、200g、250g、300g、350g、400g、450g或500g的冰片(例如80g)。
在一些實施方式中，熱墊中的中藥組成物為約或至少50g，例如約或至少100g、150g、200g、250g、300g、350g、400g、450g或500g。在一些實施方式中，決明子在藥組成物中的重量百分比為約或至少10%，例如約或至少20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%。在一些實施方式中，冰片在中藥組成物中的重量百分比為約或至少10%，例如約或至少20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%。在一些實施方式中，決明子在中藥組成物中的重量百分比小於90%，例如小於10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%或80%。在一些實施方式中，冰片在中藥組成物中的重量百分比小於90%，例如小於10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%或80%。
在一些實施方式中，決明子與冰片的重量比為約5：1、5：2、5：3、5：4、1：1、4：5、3：5、2：5或1：5。在一些實施方式中，決明子與冰片的重量比為約4：1、3：1、2：1、1：1、1：2、1：3或1：4。
在一些實施方式中，該熱墊具有至少或約100mm3的尺寸或體積，例如至少或約200mm3、300mm3、400mm3、500mm3、600mm3、700mm3、 800mm3、900mm3或1000mm3。
在一些實施方式中，將熱墊加熱(例如在蒸鍋中)足夠的時間段(例如約或至少5分鐘、10分鐘或15分鐘)。當熱墊表面的溫度達到合適的溫度時(例如40至70℃、40至65℃、40至60℃、45至70℃、45至65℃、45至60℃、50至70℃、50至65℃或50至60℃，例如約40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59或60℃)，則可以將熱墊放置在受試者的眼睛上足夠的時間段(例如約或至少5、10、15、20、25或30分鐘)。在一些實施方式中，該熱墊足夠大以覆蓋受乾眼綜合症影響的眼睛或受試者的雙眼。
可以每天一次，每天兩次或每天三次將熱療法施用於受試者。在一些實施方式中，在早晨或晚上或兩者均將熱療法施用於患者。對於具有嚴重綜合症的患者，可以在中午左右將熱療法另外施用於患者。在一些實施方式中，每週幾次將熱療法施用於受試者，例如每週一次、每週兩次、每週三次、每週四次、每週五次、每週六次或每週七次或更多。
在一些實施方式中，可以在施用脫酸椰子油滴眼劑之前或之後將熱療法施用於患者。在一些實施方式中，該熱墊可以是柔性眼罩形式。在一些實施方式中，該熱墊的尺寸是可調節的，及/或尺寸設置成適合受試者的頭部。
在一些實施方式中，在熱療法之前或之後進行眼部按摩。熱療法及/或眼部按摩可以增加瞼板腺的脂質分泌、增加瞼板腺導管中的流速並解決瞼板腺導管的阻塞。
治療乾眼症的方法
本文所述的方法包括用於治療與乾眼症相關障礙的方法(例如乾眼綜合症、乾燥性角膜炎、乾燥性角結膜炎、功能障礙性淚液綜合症、淚性角結膜炎、蒸發性淚液缺乏或房水性淚液缺乏)。在一些實施方式中，該障礙是慢性的。在一些實施方式中，該障礙是乾眼綜合症。通常，該方法包括向需要或已確定需要這種治療的受試者施用治療有效量的本文所述的組成物(例如脫酸椰子油)。
如本文內容所用，「治療」是指減輕乾眼症的至少一種症狀。通常，該治療可導致減少刺激、乾燥感、灼熱感、搔癢或疼痛。在一些方面，本文所述的方法還可以用於增加淚液產生、改善淚液的數量及/或質量、減少眼部不適、改善眼表健康、在環境挑戰性條件(例如乾燥或多風)下保護眼表、增加眼表上一種或多種淚液蛋白的量或濃度(例如上皮生長因子、乳鐵蛋白、催淚蛋白、催乳素、促腎上腺皮質激素、亮胺酸腦啡肽、ALS2CL、ARHGEF19、KIAA1109、PLXNAL POLG、WIPI1、ZMIZ2或其它淚液蛋白質組的蛋白)或提高淚液清除。
術語「受試者」和「患者」在整個說明書中可互換使用，並且描述了向其提供根據本發明方法的治療的動物、人類或非人類。本發明考慮了獸醫和非獸醫應用。人類患者可以是成年人類或未成年人類(例如18歲以下的人類)。除人類外，患者包括但不限於小鼠、大鼠、倉鼠、豚鼠、兔子、雪貂、猫、狗和靈長類動物。包括例如非人類靈長類動物(例如猴子、黑猩猩、大猩猩等)，嚙齒動物(例如大鼠、小鼠、沙鼠、倉鼠、雪貂、兔子)，兔形體，猪類(例如猪、微型猪)，馬，犬，猫，牛和其它家養、農場和動物園的動物。
在一些實施方式中，受試者是人類。所述人類受試者可以是男性或女性(例如絕經後的女性)。在一些實施方式中，人類患者為至少或約30歲，例如至少或約35、40、45、50、55、60、65、70、75或80歲。在一些實施方式中，患者可患有乾眼症至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10或更多年。
在一些實施方式中，在通過人工淚液滴眼劑治療受試者之後施用脫酸椰子油滴眼劑。不受任何理論的束縛，認為脫酸椰子油可以形成脂質層，並且該脂質層可以防止淚膜過快地蒸發並增加潤滑。
各種人工淚液滴眼劑在本領域中是已知的。人工淚液的示例可以包括但不限於水及/或緩衝的等滲鹽溶液。在一些實施方式中，水溶液可以含有水溶性聚合物，其使溶液更加黏稠，因此不易從眼睛脫落。在一些實施方式中，人工淚液組成物可包括一種或多種以下成分：羧甲基纖維素、聚乙烯醇、羥丙基甲基纖維素(又名HPMC或羥丙甲纖維素)、羥丙基纖維素和透明質酸(又名透明質酸，HA)。在一些實施方式中，人工淚液組成物可包括一種或多種以下成分：羧甲基纖維素，右旋糖酐、甘油、羥丙甲纖維素、聚乙二醇400(PEG 400)、聚山梨酸酯、聚乙烯醇、聚維酮和丙二醇。在一些實施方式中，人工淚液組成物可包括聚乙烯醇(例如體積百分比為0.1%至1%，例如約0.5%)及/或聚維酮(例如體積百分比為0.1%至1%，例如約0.6%)。
在一些實施方式中，在向受試者施用人工淚液滴眼劑之前、期間或之後施用脫酸椰子油滴眼劑。
在一些實施方式中，在向受試者施用人工淚液滴眼劑之後的 一段時間內(例如在1、2、3、4、5、6、7、8、9或10分鐘內)施用脫酸椰子油滴眼劑。在一些實施方式中，該時間段是1至30分鐘、1至20分鐘、1至15分鐘、1至10分鐘、1至5分鐘、5至20分鐘、5至15分鐘、5至10分鐘或10至20分鐘。
在一些實施方式中，在向受試者施用環孢素之前、期間或之後施用脫酸椰子油滴眼劑。在一些實施方式中，在向受試者施用環孢素之後的一段時間內(例如在1、2、3、4、5、6、7、8、9或10分鐘內)施用脫酸椰子油滴眼劑。在一些實施方式中，該時間段是1至30分鐘、1至20分鐘、1至15分鐘、1至10分鐘、1至5分鐘、5至20分鐘、5至15分鐘、5至10分鐘或10至20分鐘。
在一些實施方式中，向受試者施用包含脫酸椰子油和環孢素的組成物。
本文所述的脫酸椰子油和組成物可以與治療乾眼症的一些其它方法(例如醫療程序)、組成物或介質組合使用。例如，可以將人工淚液、鹽水、局部類固醇、局部免疫抑制劑(例如環孢素)、地誇磷索(diquafosol)、立他司特(lifitegrast)或環孢素與脫酸椰子油一起施用給受試者。在一些實施方式中，向受試者施用抗炎藥(例如環孢素或皮質類固醇)以便減輕眼瞼炎症及/或控制角膜炎症(例如環孢素)。在一些實施方式中，可以向受試者施用抗生素。在一些實施方式中，可以向受試者的下眼瞼和眼球之間施用羥丙基纖維素(Lacrisert)插入物。該插入物可以緩慢溶解，釋放一種潤滑眼睛的物質。在一些實施方式中，可以向受試者施用刺激淚液的藥物(例如膽鹼能藥、毛果芸香鹼或西維美林(cevimeline))以幫助增加淚液的產生。 這些藥物可以丸劑、凝膠劑或滴眼劑的形式獲得。
在一些實施方式中，可以進行程序以關閉淚管而減少淚液損失。該程序可以通過部分或完全關閉淚管來完成，該淚管旨在排出淚液。在一些實施方式中，該淚管可以用微小的矽樹脂塞(點狀塞)塞住。這些塞是可移動的。在一些實施方式中，該淚管可以通過使用熱的程序(例如熱燒灼)來塞住。
在一些實施方式中，受試者可以配戴特殊的隱形眼鏡(例如鞏膜眼鏡或繃帶眼鏡)。特殊的隱形眼鏡可以保護眼睛表面並捕獲水分。在一些實施方式中，這些隱形眼鏡被本文所述的脫酸椰子油覆蓋。
在一些實施方式中，可以進行程序以疏通油腺。在一些實施方式中，該程序是LipiFlow熱脈動。在治療期間，將類似於眼罩的設備放置在患眼上方。它可以為下眼瞼提供溫和、溫暖的按摩。
在一些實施方式中，可以進行光療法或眼瞼按摩。在一些實施方式中，可以使用被稱為強脈衝光療法然後眼瞼按摩的技術來治療嚴重的乾眼症。
在一些實施方式中，除了本文所述的藥物組成物的施用外，還可以進行眼瞼縫合術。眼瞼縫合術程序可以減少瞼裂(眼瞼分離)，從而導致減少淚液蒸發。
在一些實施方式中，本文所述的方法不引起對受試者的刺激。
在一些實施方式中，本文所述的方法可以使Schirmer測試評分提高至少10%，例如至少20%、30%、40%、50%、60%、70%、80 %或90%。例如，在Schirmer測試中，某些患者在5分鐘後潤濕度
Figure 109100670-A0202-12-0036-113
15mm。
在一些實施方式中，本文所述的方法可以使淚液分泌增加至少10%，例如至少20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%。在一些實施方式中，本文所述的方法可以將角膜螢光素鈉染色評分降低了至少10%，例如至少20%、30%、40%或50%。
製備脫酸椰子油的方法
本公開提供了製備包含脫酸椰子油的組成物的方法。該方法可以涉及一個或多個以下步驟：將椰子肉、椰子乾或椰子粉與鹼混合；加熱並壓製椰子肉混合物，從而獲得提取物；從提取物中收集椰子油；將椰子油與鹼性溶液(pH>7)混合，從而獲得包含水相和油相的混合物；從混合物中分離水相和油相；及/或從油相中收集脫酸椰子油。
椰子肉、椰子乾或椰子粉容易獲得並且可以商業獲得。在一些實施方式中，椰子肉、椰子乾或椰子粉是乾燥的椰子肉、椰子乾或椰子粉。在一些實施方式中，所述方法還涉及由椰子生產椰子肉、椰子乾或椰子粉。生產椰子肉、椰子乾或椰子粉的方法是所屬技術領域中已知的。例如，這些方法可以涉及除去椰子的殼，將殼弄碎及/或乾燥。椰乾可以通過煙乾燥、日光乾燥或窯爐乾燥製成。在日光乾燥期間，將一半的堅果瀝乾水分，然後將剩下的肉面朝天。然後可以將它們清洗以除去產生黴菌的污染物。幾天後，可以輕鬆地從外殼上除去肉，過三至五天(總共最多七天)後即可完成乾燥過程。日光乾燥通常與窯爐乾燥結合，暴露在陽光下八小時意味著在窯爐中花費的時間可以減少一天，而且殼暴露於窯爐中的熱空氣更容易除去殘留的水分。這個過程也可以逆轉，在窯爐中部分乾燥椰乾， 並在日光下完成該過程。
在一些實施方式中，該方法可涉及通過膜過濾過濾脫酸椰子油，從而獲得過濾的脫酸椰子油。在某些情況下，可以例如使用本領域已知的熱滅菌方法對過濾的脫酸椰子油滅菌。
在製備脫酸椰子油的一些實施方式中，將椰子肉或椰子粉在合適的乾燥機(例如太陽能乾燥機、強制乾燥盤式乾燥機或真空乾燥機)中乾燥。
在一些實施方式中，收集椰子肉或椰子粉，並將其與鹼(例如碳酸鈉粉)混合。在一些實施方式中，所述鹼是乾燥的粉末。在一些實施方式中，所述鹼是水溶液。所述鹼可以是NaOH、KOH、Mg(OH)2、Ca(OH)2、Na2CO3、NaHCO3、Na2CO3、K2CO3或KHCO3。在一些實施方式中，可將椰子肉或椰子粉與化學化合物混合，其中，如果將化合物與水混合，它將產生鹼性水溶液。在一些實施方式中，該化學化合物是CaO。
然後在適當的設備中將混合物加熱至適當的溫度(例如約60℃至90℃、70℃至80℃或70℃至75℃)。在一些實施方式中，溫度為約或至少60℃，例如約或至少61℃、62℃、63℃、64℃、65℃、66℃、67℃、68℃、69℃、70℃、71℃、72℃、73℃、74℃、75℃、76℃、77℃、78℃、79℃、80℃、81℃、82℃、83℃、84℃、85℃、86℃、87℃、88℃、89℃、90℃、91℃、92℃、93℃、94℃或95℃。在一些實施方式中，溫度低於65℃、66℃、67℃、68℃、69℃、70℃、71℃、72℃、73℃、74℃、75℃、76℃、77℃、78℃、79℃、80℃、81℃、82℃、83℃、84℃、85℃、86℃、87℃、88℃、89℃、90℃、91℃、92℃、93℃、94℃或95℃。所 屬技術領域中具有通常知識者將理解，可以使用任何合適的設備，例如加熱設備，例如帶有蒸氣夾套的水壺。
然後，通過例如壓榨機、手壓機、螺桿式油壓機、液壓機或液壓千斤頂式油壓機對加熱的椰子肉或椰子粉進行壓製。
然後將提取物冷卻(例如冷卻至室溫，或冷卻至約或低於20℃，例如冷卻至約或低於19℃、18℃、17℃、16℃、15℃、14℃、13℃、12℃、11℃、10℃、9℃、8℃、7℃、6℃、5℃、4℃、3℃、2℃或1℃)。在一些實施方式中，將提取物冷卻至約或至少10℃的溫度，例如約或至少9℃、8℃、7℃、6℃、5℃、4℃、3℃、2℃、1℃或0℃。在冷卻期間，將水相和油相分離。所屬技術領域中具有通常知識者將理解，可以使用任何主動或被動冷卻方法進行冷卻，例如冷藏或使混合物冷卻至環境溫度。可以從油相中收集椰子油。在一些實施方式中，將溫度冷卻至椰子油的熔點以下(例如約20℃、19℃、18℃、17℃、16℃、15℃、14℃、13℃、12℃、11℃、10℃)。然後將椰子油固化，以促進從提取物中收集椰子油。在一些實施方式中，該冷卻過程可以在冰箱、冷卻室或冷卻設備中進行。
在一些實施方式中，將椰子油用鹼溶液處理。鹼水溶液可以是例如NaOH、KOH、Mg(OH)2、Ca(OH)2、Na2CO3、NaHCO3、Na2CO3、K2CO3或KHCO3或其任何組合的水溶液。在一些實施方式中，該溶液的pH可以是例如7.5至11、7.5至10、7.5至9、8至11、8至10、8至9或9至11。在一些實施方式中，該水溶液是飽和溶液(例如在室溫下、標準條件下或20℃或25℃下)。在一些實施方式中，該溶液是碳酸氫鈉的飽和溶液。鹼溶液的量應足以與所有可自由與鹼反應的酸反應。在一些實施方式中， 提取物與碳酸氫鈉溶液的重量比等於或小於約1：1，例如等於或小於約1：1.1，1：1.2，1：1.3，1：1.4，1：1.5，1：1.6，1：1.7，1：1.8，1：1.9，1：2，1：3，1：4或1：5。
在一些實施方式中，起始原料是常規椰子油(例如可商購獲得的椰子油、初榨椰子油、未處理的椰子油)。常規椰子油可用鹼(例如NaOH、KOH、Mg(OH)2、Ca(OH)2、Na2CO3、NaHCO3、Na2CO3、K2CO3或KHCO3)或本文所述的鹼性溶液(例如NaOH、KOH、Mg(OH)2、Ca(OH)2，Na2CO3、NaHCO3、Na2CO3、K2CO3或KHCO3的水溶液或其任何組合)處理和如上所述及/或本文其它地方所述進行加工。
然後將混合物冷卻(例如冷卻至室溫)或冷卻至低於20℃、19℃、18℃、17℃、16℃、15℃、14℃、13℃、12℃、11℃、10℃、9℃、8℃、7℃、6℃、5℃、4℃、3℃、2℃或1℃的溫度。在一些實施方式中，將提取物冷卻至高於10℃、9℃、8℃、7℃、6℃、5℃、4℃、3℃、2℃、1℃或0℃的溫度。在一些實施方式中，將溫度冷卻至脫酸椰子油的熔點以下(例如約20℃、19℃、18℃、17℃、16℃、15℃、14℃、13℃、12℃、11℃、10℃)。在一些實施方式中，將椰子油固化，以促進收集。在一些實施方式中，該冷卻過程可以在冰箱、冷卻室或冷卻設備中進行。
在一些實施方式中，然後可以收集椰子油並例如在壓力下通過膜過濾。在一些實施方式中，過濾器尺寸為至少或約5nm，例如至少或約6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20nm。在一些實施方式中，過濾器尺寸小於5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20nm。在一些實施方式中，過濾器尺寸為10至15nm、 5至20nm或10至20nm。在一些實施方式中，壓力大於1kg/cm2(1kg/cm2=98.0665kPa)。在一些實施方式中，壓力小於2kg/cm2、小於3kg/cm2或4kg/cm2。
可以將過濾的椰子油滅菌(例如在大於100℃、110℃、120℃、130℃、140℃或150℃的溫度下或在約134℃的溫度下)。在一些實施方式中，該溫度小於100℃、110℃、120℃、130℃、140℃或150℃。所屬技術領域中具有通常知識者將理解，可以利用任何本技術領域中已知的滅菌方法。
在一些實施方式中，該方法增加了柱頭三醇的量(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2為至少或約5、6、7、8、9、10或11)。在一些實施方式中，該方法增加了麥角甾-4-烯-3-酮的量(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2為至少或約4、5、6、7、8、9或10)。在一些實施方式中，該方法增加了豆甾醇的量(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2為至少或約3、4、5、6、7、8或9)。在一些實施方式中，該方法增加了豆甾-22-烯-3,6-二酮的量(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2為至少或約3、4、5、6、7、8或9)。在一些實施方式中，該方法增加了泛醌-4的量(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2為至少或約3、4、5、6、7、8或9)。在一些實施方式中，該方法增加了維生素D3的量(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2為至少或約3、4、5、6、7、8或9)。
在一些實施方式中，該方法減少了3-己酸(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2小於或約-7、-8、-9、-10、-11、-12或-13)。 在一些實施方式中，該方法減少了5，8-十四碳二烯酸(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2小於或約-4、-5、-6、-7、-8、-9或-10)。在一些實施方式中，該方法減少了吲哚(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2小於或約-4、-5、-6、-7、-8、-9或-10)。在一些實施方式中，該方法減少了異亮胺酸(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2小於或約0、-1或-2)。在一些實施方式中，該方法減少了纈胺酸(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2小於或約0、-1、-2、-3或-4)。在一些實施方式中，該方法減少了谷胺酸(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2小於或約0、-1、-2、-3、-4、-5或-6)。在一些實施方式中，該方法減少了β-丙胺酸(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2小於或約0、-1、-2、-3、-4、-5或-6)。
在一些實施方式中，該方法增加了胡椒色素酸的量(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2為至少或約3、4、5、6、7、8或9)。在一些實施方式中，該方法增加了LysoPA(a-25：0/0：0)的量(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2為至少或約2、3、4、5、6、7、8或9)。在一些實施方式中，該方法增加了LysoPA(24：0/0：0)的量(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2為至少或約4、5、6、7、8、9或10)。
在一些實施方式中，該方法減少了蔗糖(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2小於或約5、-6、-7、-8、-9、-10或-11)。在一些實施方式中，該方法減少了檸檬酸(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2小於或約-4、-5、-6、-7、-8、-9、-10或-11)。在一些實施 方式中，該方法減少了甘露醇(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2小於或約-3、-4、-5、-6、-7、-8、-9、-10或-11)。在一些實施方式中，該方法減少了葡萄糖(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2小於或約-1、-2、-3、-4、-5、-6或-7)。
在一些實施方式中，該方法增加了DG的量(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2為至少或約0、1、2、3、4、5、6、7、8或9)。在一些實施方式中，該方法增加了ChE的量(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2為至少或約0、1、2或3)。在一些實施方式中，該方法增加了ZyE的量(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2為至少或約0、1、2或3)。
在一些實施方式中，該方法減少了LPE(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2小於或約-2、-3、-4、-5、-6、-7或-8)。在一些實施方式中，該方法減少了PE(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2小於或約-2、-3、-4、-5、-6、-7或-8)。在一些實施方式中，該方法減少了Co(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2小於或約-1、-2、-3或-4)。在一些實施方式中，該方法減少了LPC(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2小於或約-1、-2、-3、-4、-5、-6、-7或-8)。在一些實施方式中，該方法減少了CerG1(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2小於或約-1、-2、-3、-4或-5)。
在一些實施方式中，該方法增加了LdMePE的量(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2為至少或約1、2、3、4、5、6或7)。在一些實施方式中，該方法增加了PAF的量(例如脫酸椰子油和原 始椰子油之間的比例的log2為至少或約1、2、3、4或5)。在一些實施方式中，該方法增加了DGMG的量(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2為至少或約1、2、3、4或5)。在一些實施方式中，該方法增加了MGMG的量(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2為至少或約1、2、3、4或5)。在一些實施方式中，該方法增加了LPMe的量(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2為至少或約1、2、3、4、5、6或7)。
在一些實施方式中，該方法減少了DGDG(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2小於或約-3、-4、-5、-6、-7、-8或-9)。在一些實施方式中，該方法減少了cPA(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2小於或約-3、-4、-5、-6、-7、-8或-9)。在一些實施方式中，該方法減少了LPI(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2小於或約-2、-3、-4、-5、-6、-7或-8)。在一些實施方式中，該方法減少了LPE(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2小於或約-1、-2、-3、-4、-5、-6或-7)。在一些實施方式中，該方法減少了PC(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2小於或約-1、-2、-3、-4、-5、-6或-7)。在一些實施方式中，該方法減少了dMePE(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2小於或約-1、-2、-3、-4、-5、-6或-7)。在一些實施方式中，該方法減少了MGDG(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2小於或約-1、-2、-3、-4、-5、-6或-7)。在一些實施方式中，該方法減少了PI(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2小於或約-1、-2、-3、-4、-5、-6或-7)。在一些實施方式中，該方法減少了PE(例如脫酸椰子油和原 始椰子油之間的比例的log2小於或約-1、-2、-3、-4或-5)。在一些實施方式中，該方法減少了PG(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2小於或約-1、-2、-3、-4或-5)。在一些實施方式中，該方法減少了PMe(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2小於或約0、-1或-2)。在一些實施方式中，該方法減少LPG(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2小於或約0、-1或-2)。在一些實施方式中，該方法減少PEt(例如脫酸椰子油和原始椰子油之間的比例的log2小於或約0、-1或-2)。
劑量
「有效量」是足以產生有益或期望結果的量。例如，治療量是達到期望的治療效果的量。該量可以與預防有效量相同或不同，該預防有效量是預防疾病或疾病症狀發作所必需的量。可以以一種或多種施用、應用或劑量施用有效量。可以以每天一次或多次至每週一次或多次給藥該組成物(例如脫酸椰子油或中藥茶)；包括隔天一次。通常知識者將理解，某些因素可影響有效治療受試者所需的劑量和時間，包括但不限於疾病或障礙的嚴重程度、先前的治療、受試者的總體健康及/或年齡以及存在的其它疾病。此外，用治療有效量的本文所述的治療性化合物對受試者的治療可包括單一治療或一系列治療。
治療性組成物的劑量、毒性和治療功效可以通過實驗動物中的標準藥學程序來確定，例如用於確定LD50(對50%群體致死的劑量)和ED50(對50%群體有效治療的劑量)。毒性和治療效果之間的劑量比例是治療指數，可以表示為LD50/ED50比例。
獲自細胞培養測定法和動物研究的數據可用於制定用於人 類的劑量範圍。這類化合物的劑量較佳在循環濃度的範圍內，該循環濃度包括幾乎沒有或沒有毒性的ED50。該劑量可以在此範圍內變化，這取決於所採用的劑型和所利用的給藥途徑。
然而，所屬技術領域中具有通常知識者將理解，任何特定患者的具體劑量水準將取決於多種因素。這些因素包括患者的年齡、體重、總體健康、性別和飲食。其它因素包括施用的時間和途徑、排泄率、藥物組合以及接受療法的特定疾病的類型和嚴重程度。
在本文所述的障礙治療中，脫酸椰子油的合適劑量水準可以是每次施用約1至10滴、1至9滴、1至8滴、1至7滴、1至6滴、1至5滴、1至4滴、1至3滴、1至2滴、2至5滴、3至5滴或2至3滴。例如，可以向受試者施用1、2、3、4、5、6、7、8、9、10(例如1或2)滴脫酸椰子油。每滴可以是例如0.1至1ml、0.1至0.9ml、0.1至0.8ml、0.1至0.7ml、0.1至0.6ml、0.1至0.5ml、0.1至0.4ml、0.1至0.3ml、0.1至0.2ml、0.2至1ml、0.2至0.8ml、0.2至0.7ml、0.3至1ml、0.3至0.8ml、0.3至0.7ml、0.4至1ml、0.4至0.9ml、0.4至0.8ml、0.4至0.7ml、0.4至0.6ml、0.1至0.5ml、0.5至1ml或0.1至1ml。在一些實施方式中，每滴為約0.05ml。可以每天約或至少1次向受試者施用脫酸椰子油，例如每天至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12次，或每1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12小時約或至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12次。在一些實施方式中，可以每天向受試者施用少於3、4、5、6、7、8、9、10、11或12次脫酸椰子油。在一些實施方式中，可以每天向受試者施用1至10次、1至9次、1至8次、1至7次、1至6次、1至5次、1至4次、1至3次、 1至2次、2至5次、3至5次或2至3次脫酸椰子油。
在一些實施方式中，每4、5、6、7、8、9或10小時向受試者施用脫酸椰子油滴眼劑。在一些實施方式中，脫酸椰子油滴眼劑的治療效果(例如緩解乾眼症的症狀)可以持續例如1至12小時、1至11小時、1至10小時、1至9小時、1至8小時、1至7小時、1至6小時、1至5小時、1至4小時、1至3小時、1至2小時、2至12小時、2至11小時、2至10小時、2至9小時、2至8小時、2至7小時、2至6小時、2至5小時、3至12小時、3至10小時、3至8小時、3至6小時或4至6小時。在一些實施方式中，該治療效果可以持續約或約或至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12小時、1天、2天、3天、4天或5天(例如約或至少6小時、12小時或1天)。
在一些實施方式中，治療期的長度在2天至1年之間，包括例如約或至少2天、3天、4天、5天、6天、7天、10天、12天、15天、20天、28天、5週、6週、7週或8週。
在一些實施方式中，向受試者每天施用兩次本文所述的組成物。在一些實施方式中，對於每次施用，向一隻眼睛施用約或至少10uL。
藥物組成物和施用方法
本文所述的方法包括包含脫酸椰子油作為活性成分的眼科組成物或包含本文所述的中藥茶活性劑的組成物的用途。
該組成物可以包括藥學上可接受的載體。如本文所用，語言「藥學上可接受的載體」包括與藥物施用相容的鹽水、溶劑、分散介質、包衣、抗菌劑及抗真菌劑、等滲劑及延遲吸收劑等。
口服組成物(例如包含本文所述的中藥茶活性劑的組成物)通常包括惰性稀釋劑或可食用載體。為了口服治療的目的，可將活性劑與賦形劑結合並以片劑、錠劑或膠囊(例如明膠膠囊)的形式使用。也可以使用流體載體製備口服組成物以用作漱口水。藥學上相容的黏合劑及/或佐劑材料可以作為組成物的一部分包括在內。片劑、丸劑、膠囊、錠劑等可含有以下任何成分或類似性質的化合物：黏合劑，例如微晶纖維素、黃芪膠或明膠；賦形劑，例如澱粉或乳糖；崩解劑，例如海藻酸、初凝膠(Primogel)或玉米澱粉；潤滑劑，例如硬脂酸鎂或Sterote；助流劑，例如膠體二氧化矽；甜味劑，例如蔗糖或糖精；或調味劑，例如薄荷、水楊酸甲酯或橙色調味劑。
在一些實施方式中，將活性劑與載體一起製備，該載體將保護治療性化合物免受從體內快速消除。可以使用可生物降解的生物相容性聚合物，例如乙烯乙酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、膠原蛋白、聚原酸酯和聚乳酸。這樣的製劑可以使用標準技術來製備，或者可以商購獲得。
在一些實施方式中，以霧化形式製備活性劑。因此，可以將脫酸椰子油作為噴霧劑施用於受試者。在一些實施方式中，可以將脫酸椰子油添加到接觸物中。因此，當受試者配戴接觸物時，將脫酸椰子油施用於受試者。
在一些實施方式中，該藥物組成物由或基本上由脫酸椰子油組成。在一些實施方式中，該藥物組成物可任選地具有除脫酸椰子油以外的各種成分，例如糖、電解質、胺基酸、維生素、脂質和藥物添加劑。這些成分的示例包括糖，例如葡萄糖、麥芽糖等，寡糖，甘露醇和糖醇例如 山梨糖醇；電解質，例如氯化鈉、磷酸氫鈉、氯化鉀、硫酸鎂和氯化鈣；胺基酸，例如甘胺酸和丙胺酸；維生素，例如鹽酸硫胺素、核黃素磷酸鈉、鹽酸吡哆醇、烟醯胺、葉酸、生物素、維生素A、L-抗壞血酸和α-糖基抗壞血酸及其衍生物。這些成分可以根據需要以適當的組合進行配合。
在一些實施方式中，該藥物組成物可以包括防腐劑，例如對羥基苯甲酸甲酯、脫氫乙酸鈉和苯扎氯銨；和穩定劑，例如依地酸鈉和亞硫酸氫鈉；緩衝劑，例如硼砂、硼酸和碳酸氫鈉；增稠劑，例如甲基纖維素、羧甲基纖維素、軟骨素硫酸、聚乙烯醇和支鏈澱粉；和溶解改進劑，例如聚山梨酯80。
在一些實施方式中，該組成物可以另外包括一種或多種以下成分：羧甲基纖維素、聚乙烯醇、羥丙基甲基纖維素(又名HPMC或羥丙甲纖維素)、羥丙基纖維素和透明質酸(又名透明質酸，HA)。在一些實施方式中，該組成物可以另外包括一種或多種以下成分：羧甲基纖維素，右旋糖酐、甘油、羥丙甲纖維素、聚乙二醇400(PEG 400)、聚山梨酸酯、聚乙烯醇、聚維酮和丙二醇。
所屬技術領域中具有通常知識者將理解，可用於治療乾眼症的其它組成物可包括在本文所述的藥物組成物或治療中。例如，人工淚液、鹽水、類固醇、免疫抑制劑(例如環孢素)、地誇磷索、立他司特或環孢素可以包括在藥物組成物中，或者可以與包含脫酸椰子油的藥物組成物一起施用於受試者。
該藥物組成物可以與給藥說明書一起包括在容器、包裝或分配器中。在一些實施方式中，試劑盒還包括人工淚液。
【實施例】
在以下實施例中進一步描述了本發明，這些實施例不限制申請專利範圍所述的本發明的範圍。
實施例1：椰子油提取和脫酸
收集椰子肉或椰子粉，並將其與碳酸鈉粉混合。然後將混合物加熱至約70℃，然後螺旋壓製。然後將提取物冷卻至約5℃。將水相和油相分離。收集椰子油。然後將椰子油與碳酸氫鈉飽和溶液混合(提取物與碳酸氫鈉溶液的重量比約為1：1.1)。然後將混合物冷卻至約5℃。然後收集椰子油，然後在不大於4kg/cm2(約392.266kPa)的壓力下通過13nm膜過濾進行過濾。然後將過濾的椰子油在約134℃下滅菌，並儲存以備將來使用。
碳酸鈉粉和碳酸氫鈉飽和溶液均用於使椰子油脫酸。為了比較目的，還在沒有脫酸過程下製備了一些椰子油。
實施例2：在人類受試者中測試脫酸椰子油滴眼劑
安全性
在他們同意後，在十名受試者中對脫酸椰子油滴眼劑進行了測試。其中，四名是健康受試者，且六名患有乾眼綜合症。包括四個健康受試者在內的所有受試者均未經歷任何刺激或不適。僅在某些情況下，立即將脫酸椰子油施加在眼睛上後，一些患者會在短時間內經歷輕度視力模糊(例如在強光下看到彩色條)。條的圖案類似於肥皂泡上的條，這是由薄膜干涉引起的。輕度視力模糊通常會在幾小時或僅幾天內解決。在患有乾眼綜合症的受試者中，將脫酸椰子油滴眼劑長時間施用於受試者。沒有觀察到不良 反應。結果至少表明了脫酸椰子油通常是安全的，並且對人類無毒。
為了比較目的，還對至少兩個人類受試者進行了未脫酸椰子油測試。該椰子油立即引起刺激、發紅和水泡。結果表明了未脫酸椰子油不適合用作滴眼劑。
此外，椰子油(冷壓製)購自海之野公司(中國海南省)。在不加熱且不脫酸處理下提取椰子油。椰子油也被稱為初榨椰子油。在一名人類受試者中進行了椰子油(冷壓製)測試。椰子油(冷壓製)立即引起強烈的眼睛刺激。結果表明了椰子油(冷壓製)不能用作滴眼劑。
以上結果表明了常規椰子油對眼睛有刺激，不適合用作滴眼劑，脫酸過程可有效除去刺激。
功效
在他們同意後，對六名有乾眼綜合症患者進行了脫酸椰子油滴眼劑治療。六例中所有症狀均得到減輕。這些病例將在下面更詳細地描述：
病例1：一名52歲的男性患者在2007年接受了手術以預防倒睫。手術後，患者開始有雙眼乾燥的感覺。2012年，確定了瞼板腺尺寸已縮小了三分之二，並且該患者被診斷為患有乾眼綜合症。瞼板腺可能在2007年的手術期間受損。該患者每年經歷幾次乾眼綜合症的症狀。該患者有乾燥、疼痛和嚴重搔癢的感覺，並且不能進行正常的日常功能，包括例如使用手機或計算機。其它症狀包括頭痛、失眠、對光和風敏感以及睜眼困難。給患者開了人工淚液滴眼劑的處方。然而，該治療無效。患者的生活質量受到嚴重影響。
在2017年，用脫酸椰子油滴眼劑對該患者進行了治療。將 脫酸椰子油滴眼劑與人工淚液滴眼劑一起施用。
首先向患者施用人工淚液滴眼劑，然後再施用脫酸椰子油滴眼劑。1年的治療後，患者的右眼已完全恢復。左眼症狀尚未完全恢復，但觀察到明顯的改善。特別地，在治療後立即解決了某些症狀，包括例如極度搔癢、頭痛、失眠、對光和風敏感。在雲南省第二人民醫院眼科的後續檢查中，確定了發現患者的右眼正常，並且該患者的左眼被診斷為僅患有輕度乾眼綜合症。
病例2：該女性患者為47歲。在用脫酸椰子油滴眼劑進行治療前，她患有乾眼綜合症至少5年。乾眼綜合症引起極大的不適，這種疾病嚴重影響了她的工作表現。通過各種治療對該患者進行了治療(包括人工淚液滴眼劑)，但其症狀並沒有改善。2018年初，用脫酸椰子油滴眼劑對她進行了治療(每天施用一次，一次施用一滴滴眼劑)。將脫酸椰子油滴眼劑與人工淚液滴眼劑一起施用。治療立即減輕了她的疼痛。她繼續使用脫酸椰子油滴眼劑。在治療期間解決了乾燥和疼痛的感覺。
病例3：該患者是一名56歲的女性。在用脫酸椰子油滴眼劑進行治療前，她患有乾眼綜合症至少6年。她還被診斷出慢性角結膜炎。她的症狀包括眼睛乾燥和發紅。2018年初，用脫酸椰子油滴眼劑對她進行了治療。將脫酸椰子油滴眼劑與人工淚液滴眼劑一起施用。該治療減輕了乾眼綜合症的症狀。眼睛發紅被解決。
病例4：該患者是一名52歲的女性。她患有中度乾眼綜合症多年。用脫酸椰子油滴眼劑和人工淚液滴眼劑一起治療後，乾眼綜合症的症狀被解決。
病例5：該患者是一名年齡超過70歲的女性。她患有嚴重乾眼綜合症幾年。用脫酸椰子油滴眼劑和人工淚液滴眼劑一起治療後，她的症狀被解決。
病例6：該患者是一名年齡超過60歲的男性。他患有乾眼綜合症幾年。用脫酸椰子油滴眼劑和人工淚液滴眼劑一起治療後，他的症狀也被解決。
由於所有這些病例都患有慢性乾眼綜合症數年，因此，用脫酸椰子油滴劑治療前後的結果表明了脫酸椰子油滴劑可有效治療乾眼症。
實施例3：中藥茶和中藥茶具的製備方法
將枸杞、黃芪根和菊花清洗、乾燥並通過加熱滅菌。然後將混合物研磨成粉末，並儲存在容器中。
為了製備用作一次性容器(例如茶杯、K杯、茶膠囊)的中藥茶具，將粉末儲存在一次性容器中，然後容器填充有氮氣以增加儲存時間。然後將容器密封，並可以用在適當的咖啡機或茶具中。
實施例4：熱墊的製備方法
將約200g決明子和約80g冰片添加到尺寸為22cm×11cm的棉袋中。在使用前，將該袋在蒸鍋中加熱足夠長的時間(例如約10分鐘)。不要將袋浸入到蒸鍋中的水中。加熱後，在室溫下將該袋放在容器上。當溫度下降到約46℃時，可以將該袋作為熱墊放置在人類患者的眼睛上。
實施例5：在人類受試者中測試中藥茶和熱墊
該患者患有乾眼綜合症多年，並且正在用脫酸椰子油治療較長時間。
在用脫酸椰子油施用患者期間，患者還服用了中藥茶治療乾 眼症。將枸杞(約10g)、黃芪根(約10g)和菊花(約10g)與約2杯熱水混合。將其冷卻至合適的溫度後，然後每天至少向患者口服施用一次中藥茶。
該患者每週還使用包含決明子和冰片的熱墊接受幾次熱療法。
通過比較中藥茶治療和熱療法前後的症狀，確定了中藥茶和熱療法顯著改善了脫酸椰子油滴眼劑的功效。
實施例6：在用於乾眼綜合症的動物模型中測試脫酸椰子油滴眼劑
可以將乾眼綜合症的動物模型分為4組。用人工淚液滴眼劑治療第一組。用脫酸椰子油滴眼劑治療第二組。用脫酸椰子油滴眼劑和人工淚液滴眼劑治療第三組。第四組不接受任何治療，並用作對照組。
動物模型可以是本技術領域已知的用於乾眼綜合症的任何動物模型。用於乾眼綜合症的許多動物模型是本技術領域已知的，並且例如描述於Barabino等人"Animal models of dry eye：a critical assessment of opportunities and limitations," Investigative ophthalmology & visual science 45.6(2004)：1641-1646中，其通過引用整體併入本文。
在該實施例中，該動物模型可以是兔子模型。由於與小鼠相比，兔子的眼表暴露較大，因此在兔子中可以更輕鬆地進行標準乾眼臨床測試，例如淚液破裂時間和眼表的螢光素或玫瑰紅染色。通過向與獲自對側切除腺體的上皮細胞一起增殖培養的淚腺自體外周血淋巴細胞注射可以誘導類似於舍格倫綜合症的兔子自身免疫性疾病。注射會引起淚液產生和 穩定性的持續下降。
在第一組中，每天兩次向動物的眼睛施用人工淚液滴眼劑。在第二組中，每天兩次向動物的眼睛施用脫酸椰子油滴眼劑。在第三組中，首先向動物的眼睛施用人工淚液滴眼劑，然後向動物的眼睛施用脫酸椰子油滴眼劑。一天進行兩次施用。
Schirmer測試可用於確定乾眼綜合症是否有任何改善。Schirmer測試確定了眼睛是否產生足夠的淚液使其保持濕潤。它使用插入眼中的紙條幾分鐘以測量淚液的產生。確切程序可能會有所不同。大多數情況下，該測試包括在下眼瞼(下穹窿)內放置一小條濾紙。閉眼5分鐘。然後取出紙並測量水分含量。有時，在濾紙之前將局部麻醉劑放置到眼睛中以防止由於濾紙的刺激而流淚。麻醉劑的使用可確保僅測量基礎淚液的分泌。
預期脫酸椰子油滴眼劑以及脫酸椰子油滴眼劑和人工淚液滴眼劑的組合可以減輕乾眼綜合症的症狀。
實施例7：在臨床試驗中測試脫酸椰子油滴眼劑
可以將患有乾眼綜合症的人類患者分為5組。用人工淚液滴眼劑治療第一組。用脫酸椰子油滴眼劑治療第二組。用脫酸椰子油滴眼劑和人工淚液滴眼劑治療第三組。對於第四組，除了用脫酸椰子油滴眼劑和人工淚液滴眼劑組合治療外，第四組還接受了中藥茶治療和熱療法。第五組不進行任何治療，並用作對照組。
在第一組中，每天兩次向受試者的眼睛施用人工淚液滴眼劑。在第二組中，每天兩次向受試者的眼睛施用脫酸椰子油滴眼劑。在第三組 中，首先向受試者的眼睛施用人工淚液滴眼劑，然後每天兩次向受試者物的眼睛施用脫酸椰子油滴眼劑。第四組的程序與第三組相同，除了第四組的受試者也進行了中藥茶和熱療法治療。臨床試驗可以持續2至6週。
記錄對治療的響應。在某些情況下，可以使用Schirmer測試來提供乾眼綜合症的客觀評估。在Schirmer測試中，5分鐘後紙濕潤
Figure 109100670-A0202-12-0055-114
15mm表示正常、5分鐘後紙濕潤14-9mm表示輕度乾眼綜合症、5分鐘後紙濕潤8-4mm表示中度乾眼綜合症且5分鐘後紙濕潤<4mm表示嚴重乾眼綜合症。
預期脫酸椰子油滴眼劑以及脫酸椰子油滴眼劑和人工淚液滴眼劑的組合可以減輕乾眼綜合症的症狀，並且中藥茶和熱療法可以進一步提高脫酸椰子油滴眼劑的功效。
實施例8：小鼠乾眼症的初步功效研究
進行實驗以確定脫酸椰子油組成物的功效。Biodecs001是本文所述的脫酸椰子油，並用於以下實驗中。
在以下實施例中使用以下材料。
C57BL/6SLAC小鼠購自Shanghai Slack有限公司。
氫溴酸東莨菪鹼購自Sigma-Aldrich(批號：SLBD0119V)。
環孢素滴眼劑獲自雲南生物科技有限公司(Yunnan Biotech Biotechnology Co.,Ltd)。
聚乙烯醇滴眼劑(人工淚液)購自JOINN實驗室(蘇州)公司，並由湖北遠大日常光明藥業有限公司製造(Hubei Yuanda Everyday Bright Eyes Pharmaceutical Co.,Ltd，批號：190103)。
氯化鈉注射液購自石家莊市第四醫藥有限公司(Shijiazhuang No.4 Pharmaceutical Co.,Ltd，批號：1805303204)。
小鼠飼料購自北京科奧謝利飼料有限公司(Beijing Keaoxieli Feed Co.,Ltd，批號：19043323、19073113)。
8.1 實驗設計
選擇了59隻健康的雌性C57BL/6SLAC小鼠進行實驗。根據第-1天(研究期前一天)的體重，將健康且具有正常眼睛的小鼠隨機分為年齡匹配的對照組(每組8隻動物)和測試組(51隻動物)。根據第5天的右眼角膜螢光素鈉染色評分，將40隻具有類似右眼角膜螢光素鈉染色評分和淚液分泌的小鼠分為5組(每組8隻動物)。給每隻小鼠唯一的動物編號。小鼠的分組和治療計劃如下表所示：
表1
Figure 109100670-A0202-12-0056-1
Figure 109100670-A0202-12-0057-2
在表1中，「-」表示未處理。「▼」是指每組的第一個和最後一個動物分批參與本研究。「*」是指首先向第4組小鼠眼睛給予環孢素，在20分鐘後添加人工淚液，並且在一分鐘後添加測試組成物。「#」是指首先向第5組小鼠眼睛給予人工淚液，在一分鐘後添加測試組成物。
通過局部滴注將測試/對照組成物以每天兩次的頻率(相隔約8小時)連續12天(10μL/眼睛/次)給藥於右眼。用移液管吸取10μL包括人工淚液或環孢素滴眼劑的測試/對照組成物，然後滴在小鼠暴露的角膜上。至少10秒鐘後，輕輕閉上眼瞼。用無菌紗布輕輕擦去所有溢出的液體。本研究選擇的應用、劑量水準、給藥頻率和持續時間基於相關參考訊息。
在研究期間(第1天至第17天)，每天觀察一次所有組的所有動物。通過籠子觀察動物的死亡或瀕死、精神狀態、行為活動、進食和糞便性狀。在接收時，隔離期結束和最後一次眼科檢查結束時獲得所有組中所有動物的體重。
在第-1天(研究期的前一天)、第5天、第9天、第13天和第17天，通過以下方法測量所有組中所有動物右眼的淚液分泌。用乾淨的無牙鑷子夾住酚紅棉線，並固定在小鼠的下眼瞼結膜囊中間30秒。在顯微鏡下，用尺子測量棉線染色的長度，並拍攝照片。
在第-1天、第5天、第9天、第13天和第17天，如下對所有組的所有動物右眼進行角膜螢光素鈉染色測試。檢查時所有動物都醒 著。檢查者在不通知動物身份的下描述了每隻動物的結果，並且另一人記錄了檢查結果。將螢光素鈉溶液(1.5μL，0.5%)浸入動物的結膜囊中約1.5分鐘後，每10秒用1.25ml鹽水清洗小鼠的結膜囊3次，然後每次都用紙擦拭動物眼睛周圍的液體。角膜染色後約5分鐘，觀察眼表並用帶有鈷藍濾光片的裂隙燈顯微鏡拍照，並通過改進的NEI螢光染色分級法對角膜染色含量進行分級。根據該方法，將眼睛的角膜分為5個區域，每個區域的染色評分最高為4。「0」表示相應區域顏色不清楚，「1」表示虛線顏色區域為相應區域的1%到25%，「2」、「3」、「4」表示百分比分別為26%~50%、51%~75%、76%~100%。每隻眼睛的總評分高達20(圖1)。可以計算出每隻眼睛的角膜染色總評分。
根據方案，在研究期間，如果動物患有嚴重的眼部異常或彌留之際，可通過過量吸入二氧化碳和胸腔張開使其安樂死。此實驗中沒有動物出現不可逆的體徵，也沒有對動物實施安樂死。最後一次檢查後，通過過量吸入二氧化碳使所有存活的動物安樂死。
對於所有組在不同時間點的淚液量和角膜螢光素鈉染色總評分，使用SPSS軟體計算平均值和標準差，並通過以下統計程序分析每個時間點的組差異：進行了Levene檢驗以檢驗方差均勻性。如果結果顯示出無顯著性(p>0.05)，則進行單向方差分析(ANOVA)。如果單向方差分析顯示出顯著性(p
Figure 109100670-A0202-12-0058-115
0.05)，則進行Dunnett檢驗而進行多次比較。如果單向方差分析顯示出無顯著性(p>0.05)，則不再進行統計檢驗。在p
Figure 109100670-A0202-12-0058-116
0.05的方差異質性的情況下，進行Kruskal-Wallis非參數檢驗。如果Kruskal-Wallis非參數檢驗顯示出顯著性(p
Figure 109100670-A0202-12-0058-117
0.05)，則進一步進行Mann-Whitney檢驗以 進行多次比較。使用獨立樣本T檢驗的統計方法比較了組動物的建模前後。
8.2 結果(臨床觀察)
在研究期間(第1至17天)，在給藥期間所有組均未見動物死亡，也未見異常臨床體徵(眼部體徵除外)。建模後第4天(治療前)，發現臨時編號3的動物死亡。在第5天(也在治療前)，在角膜染色檢查後發現臨時編號59的動物死亡。在這種情況下，將屍體作為醫療廢物處理，不進行活檢。
第13至17天測試組成物組的8隻處理眼睛中4隻(動物1921281-1921284)和第16至17天另外4隻處理眼睛(動物1921285-1921288)中觀察到眼部區域的毛髮稀疏。第13至17天8隻處理眼睛中4隻(動物1921273-1921276)和第16至17天另外4隻處理眼睛(動物1921277-1921280)中還注意到眼部區域的毛髮稀疏，測試組成物組的發生率和時間相同。觀察到第12至17天環孢素+人工淚液+測試組成物組中8隻處理眼睛中4隻(動物1921269-1921272)和第13至17天另外4隻處理眼睛(動物1921265~1921268)的眼瞼腫脹、眼部區域毛髮減少、有或沒有眼周皮膚發紅。除上述體徵外，上述三組和年齡匹配的對照組、模型對照組和陰性對照組中未處理的眼睛均無異常眼體徵。
在測試組成物組的所有經處理眼睛中均觀察到眼周毛髮稀疏，但在與測試組成物組相同的給藥頻率、週期和體積的陰性對照組中經處理眼睛中未觀察到眼周毛髮稀疏，因此，認為該異常是由於過量的測試組成物溢出到眼周區域，這表明了測試組成物可能刺激眼周皮膚，因此應考慮劑量以防止溢出。由於人工淚液+測試組成物組中所有經處理眼睛中眼 周毛髮稀疏與測試組成物組的發生率和時間相同，因此單獨給予人工淚液可能不會對眼周皮膚產生影響。在環孢素+人工淚液+測試組成物組中的經處理眼睛中注意到眼周脫毛、眼瞼腫脹、毛髮稀疏或有或沒有眼周皮膚發紅，而在其餘6組中未觀察到。因此，這可能與過量的環孢素或環孢素和測試組成物兩者向眼周皮膚的溢出有關，表明了環孢素對眼周皮膚和眼瞼有顯著的刺激性。
8.3 結果(體重)
體重總結在圖2中。在測試前(第-1天)，所有組的所有動物的體重均顯示出無統計學顯著差異(p>0.05)。
在觀察期結束時(第17天)，與第-1天相比，所有組的所有動物的體重均減輕，這可能是由於測試的小鼠都是退休的種鼠，這些種鼠都是高齡的，並且在進入研究時改變了飼料(動物在購買前吃繁殖飼料，在購買後吃維持飼料)。此外，與時間匹配的陰性對照組相比，在第17天，環孢素+人工淚液+測試組成物組的動物體重顯著減少(p<0.05)，這可能是由於環孢素引起的刺激相關問題。其它組的其餘動物的體重顯示出無顯著差異(p>0.05)。
8.4 結果(淚液分泌)
淚液分泌的數據總結於圖3中。測試前(第-1天)，所有組的所有動物右眼的淚液分泌體積均顯示出無統計學差異(p>0.05)。
在建模處理後和測試組成物處理前(第5天)，除了與第-1天相比，年齡匹配的對照組的右眼淚液分泌體積顯示出無顯著差異，其餘組的右眼淚液分泌體積顯示出顯著差異(p<0.05)，這表明了低環境濕度和 東莨菪鹼成功誘導了淚液分泌量的減少，並且在所有建模組之間均未觀察到顯著差異(p>0.05)。
治療後，各組動物淚液分泌的具體結果如下：
年齡匹配的對照組：第9天、第13天、第17天的右眼淚液分泌分別為10.81±2.36mm、8.75±2.52mm、9.13±1.58mm。
模型對照組：第9天、第13天、第17天的右眼淚液分泌分別為3.44±1.59mm、4.00±1.07mm和4.38±2.57mm，這顯著低於年齡匹配的對照組對應天數的右眼淚液分泌(p<0.05)。結果表明了低環境濕度和東莨菪鹼誘導了淚液分泌的減少，在整個研究期間均維持穩定。
陰性對照組：第9天、第13天、第17天的右眼淚液分泌分別為3.38±1.51mm、3.13±1.92mm和3.38±1.94mm，這均顯著低於年齡匹配的對照組對應天數的右眼淚液分泌(p<0.05)。另外，與對應天的建模對照組相比，該結果顯示出無統計學差異，這表明了生理鹽水對小鼠淚液分泌沒有影響。
測試組成物組(測試物組或TA組)：第9天、第13天、第17天的右眼淚液分泌分別為3.94±2.43mm、6.25±1.98mm和4.31±3.26mm，第9天和第13天的結果均高於對應天的模型對照組和陰性對照組的結果，其中與陰性對照組相比，第13天的結果有統計學顯著差異(p<0.05)，但當與建模對照組和陰性對照組相比時，第17天的結果顯示出無統計學顯著差異(p>0.05)。該結果表明了在給藥的第8天(第13天)單獨使用測試組成物可有效地改善小鼠的淚液分泌至某種程度。
人工淚液+測試組成物組(AT+TA組)：第9天、第13天、 第17天的右眼淚液分泌分別為4.81±2.24mm、4.88±1.48mm、3.31±1.53mm。第9天和第13天的結果高於對應天的建模對照組和陰性對照組的結果，而第17天的結果則低於對應天的模型對照組和陰性對照組的結果，無統計學顯著差異(p>0.05)。
環孢素+人工淚液+測試組成物組(環孢素+AT+TA組)：第9天、第13天、第17天的右眼淚液分泌分別為5.13±1.81mm、5.63±1.36mm和3.81±1.33mm。其中，第9天和第13天的結果高於對應天的模型對照組和陰性對照組，其中，與陰性對照組相比，第13天的結果有顯著差異(p<0.05)，並且與對應天的模型對照組和陰性對照組相比，第17天的結果顯示出無統計學顯著差異(p>0.05)。結果表明了在第8個給藥日(第13天)，將三種藥物組合治療可以在某種程度上增加小鼠的淚液分泌。與測試組成物組相比，該組在右眼對應時間點之間顯示出無顯著差異(p>0.05)。
8.5 結果(角膜螢光素鈉染色測試)
角膜螢光素鈉的染色評分總結於圖4中，且染色評分總結於圖5中。建模前(第-1天)，所有組的所有動物右眼的角膜螢光素鈉染色評分均顯示出無統計學顯著差異(p>0.05)。
建模後和治療前(第5天)，除了與第-1天相比，年齡匹配的對照組的右眼染色評分顯示出無顯著差異外，其餘對應組的右眼染色評分顯示出顯著增加(p<0.05)，這表明了低環境濕度和東莨菪鹼成功誘導了小鼠角膜螢光素鈉染色評分的增加，並加劇了小鼠角膜上皮的丟失。除了陰性對照組的染色評分顯著低於人工淚液+測試組成物組(AT+TA組)的染色評分外，其餘建模組均顯示出無顯著的組間差異(p>0.05)。為了減少治 療前組間差異對以下分析的影響，在特定組中，將每個治療後結果除以第5天(治療前)的結果，並計算評分值。該值可以表明治療前和治療後結果的相對比例。如圖5所示，未發現顯著差異(p>0.05)，而每組的平均評分值均為1。
治療後，角膜螢光素鈉染色評分的細節以及計算的評分值如下：
年齡匹配的對照組：第9天、第13天、第17天的右眼染色評分分別為11.4±4.1、13.6±3.4和11.6±3.1，而在給藥期間比較治療前後的平均評分值在1.0-1.2之間波動。
模型對照組：第9天、第13天、第17天的右眼染色評分分別為17.3±2.3、17.1±2.7和18.0±1.7，而比較治療前後的平均評分值在0.9-1.0之間波動。與特定天的年齡匹配的對照組相比，染色評分顯著增加(p<0.05)，這表明了低環境濕度和東莨菪鹼成功誘導了小鼠角膜染色評分的增加，該評分在整個治療期間均維持穩定。
陰性對照組：第9天、第13天、第17天的右眼染色評分分別為19.9±0.4、18.3±2.1和18.0±2.2。與建模組相比，第9天的評分顯示出顯著增加，但第13天和第17天的評分顯示出無統計學差異(p>0.05)。第9天差異的原因尚不清楚，這可能源自系統誤差。然而，考慮到第13天和第17天的數據，鹽溶液被認為對小鼠角膜螢光素鈉染色評分沒有顯著影響。在給藥期間比較治療前後的平均評分值在1.0-1.1之間波動。
測試組成物組(測試物組)：第9天、第13天、第17天的右眼染色評分分別為17.0±2.9、18.4±2.3和17.5±2.8。比較治療前後的染色 平均評分值在0.9-1.0之間波動。第9天的染色評分和評分值均低於模型對照組和陰性對照組的染色評分和評分值。僅與陰性對照組比較，發現了統計學差異顯著(p<0.05)。在其餘時間點，當與對應天的模型和陰性對照組相比時，觀察到無顯著差異(p>0.05)。結果表明了通過在給藥第4天(第9天)單獨使用測試組成物，小鼠螢光染色評分顯示出某種降低作用。
人工淚液+測試組成物組(人工淚液+測試物組)：第9天、第13天、第17天的右眼染色評分分別為18.9±1.4、19.4±0.9和18.0±4.5，而比較治療前後的平均評分值為約1.0。第9天染色評分顯著低於陰性對照組(p<0.05)，但與陰性對照組相比，平均評分值顯示出無顯著差異(p>0.05)。另外，該評分和評分值均高於模型對照組的評分和評分值。第13天染色評分顯著高於模型對照組，但該評分值與模型對照組無顯著差異(p>0.05)。在其餘時間點，與對應時間點的模型對照組、陰性對照組和測試組成物組相比，該組顯示出無統計學差異(p>0.05)。
環孢素+人工淚液+測試組成物組(環孢素+AT+TA組)：第9天、第13天、第17天的右眼染色評分分別為14.8±6.2、17.9±2.1、16.5±2.7，而比較治療前後的評分值在約0.8-0.9之間波動。第9天的染色評分和平均評分值均低於模型對照組、陰性對照組、測試組成物組和人工淚液+測試組成物組的染色評分和平均評分值，但僅與陰性對照組有顯著差異(p<0.05)。與對應時間點的建模組相比，其餘時間點顯示出無顯著差異(p>0.05)。結果顯示出通過組合三種藥物該治療可以降低小鼠角膜染色評分。
8.6 結論
淚液分泌量：在研究期間，與時間匹配的年齡匹配的對照組相比，第5 天、第9天、第13天、第17天的模型對照組和陰性對照組的淚液分泌具有統計學顯著下降(p<0.05)。與時間匹配的陰性對照組相比，第13天的測試組成物組和環孢素+人工淚液+測試組成物組顯示出淚液量的增加，這具有統計學顯著性(p<0.05)。
角膜螢光素鈉染色評分：在研究期間，第5天、第9天、第13天、第17天的模型對照組和陰性對照組的角膜螢光素鈉染色評分顯示出顯著高於時間匹配的年齡匹配的對照組(p<0.05)。第9天的測試組成物組、人工淚液+測試組成物組和環孢素+人工淚液+測試組成物組的角膜螢光素鈉染色評分顯示出顯著低於時間匹配的陰性對照組(p<0.05)。
一般臨床觀察：在研究期間，未確認與測試組成物有關的動物死亡，年齡匹配的對照組、模型對照組和陰性對照組的所有動物均未顯示出異常臨床體徵，其它組的其餘動物均顯示出除眼部體徵外的無異常體徵。測試組成物組和人工淚液+測試組成物組的所有動物均顯示出經治療眼睛的眼周區域周圍的毛髮減少，這可能是由於過量的測試組成物溢出到眼周區域，這從第12天或第16天開始，一直持續到觀察期結束。環孢素+人工淚液+測試組成物組的所有動物均顯示出經治療眼睛的眼瞼腫脹、眼部區域周圍脫毛、眼部區域有或沒有皮膚發紅，這可能是由於過量的環孢素或環孢素和測試組成物兩者溢出到眼周區域，這從第12天或第13天一直持續到觀察結束。以上動物中所有未經治療的眼睛均未顯示出異常臨床體徵。
結論：在本研究的情況下，單獨使用測試組成物Biodecs001或與人工淚液、環孢素滴眼劑組合使用(每天兩次，每隻眼睛每劑量10μL， 連續12天)可增加淚液分泌並減少由乾燥應力某種程度上誘導乾眼小鼠模型的角膜螢光素鈉染色評分。
實施例9：紐西蘭白兔14天滴注Biodecs001的眼睛刺激性研究
9.1 實驗設計
在以下實施例中使用以下材料。
紐西蘭白兔(SPF級)購自東方育種有限公司(Dongfang Breeding Co.,Ltd.)。兔子生長繁殖飼料購自北京科奧謝利飼料有限公司(Beijing Keaoxieli Feed Co.,Ltd.)和邳州小河科技發展有限公司(Pizhou Xiaohe Technology Development Co.,Ltd.)(批號：19044111、20190325)。
在第一次給藥(第-1天)之前的24小時內，對所有健康動物施用裂隙燈顯微鏡檢查和螢光素鈉檢查；排除任何具有眼睛刺激、眼部缺陷或已存在傷害的動物。選擇眼睛正常且體重類似的十二隻動物進行實驗。
通過計算機產生的隨機化程序，根據第一次給藥(第-1天)前24小時內測量的體重，將十二隻動物隨機分配到各個治療組中，如表2所示。
表2 組分配
Figure 109100670-A0202-12-0066-3
在表2中，「-」是指未用任何組成物治療的動物的右眼。「*」 是指首先給予人工淚液，然後對第3組的動物給予測試組成物。
通過局部施用將組成物以每天一次的頻率連續14天(50μL/眼睛/次)給藥於左眼。用移液管吸取50μL的測試/對照組成物，並通過拉出動物的下眼瞼將100μL組成物滴入結膜囊中。然後，輕輕閉上下眼瞼，並保持10秒。本研究選擇的應用、劑量水準、給藥頻率和持續時間基於相關參考訊息和指導要求以支持隨後的毒性研究及/或臨床試驗。
每天觀察所有組的所有動物。在14天給藥期間，每天兩次(早晨第一次滴注之前和下午一次滴注之前)觀察所有動物，在第-1天(實驗前24小時內)和非給藥期間，每天一次觀察所有動物。觀察包括死亡率、發病率、行為、呼吸、分泌、排泄、疼痛及/或困擾(例如反復用抓撓或眼睛摩擦、過度眨眼和過度流淚)等體徵。
在第-1天、第7天、第14天和第17天獲得所有組的所有動物的體重。
在盲檢查者的條件下，由經驗豐富的檢查者用裂隙燈顯微鏡檢查所有組的所有動物處於意識狀態的雙眼。將動物隨機帶給檢查者，檢查者在不知道動物ID下給每隻動物分級，而其它人則負責記錄分級。檢查時間點是：第-1天(24小時內)、在第1天至第14天以及第14天最終滴注後的1、2、4、24、48、72小時內施用之前，進行了以下檢查。
A.裂隙燈檢查：用裂隙燈觀察角膜、虹膜、結膜、浮腫和眼部分泌物，並根據眼睛刺激響應評分進行評分(如表3所示)。
B.螢光素鈉檢查：在檢查A後，在潮濕的螢光素鈉試紙上觀察到角膜上皮隨螢光素染色變化。如表4所述，根據改良的 MacDonald-Shadduck評分系統對角膜染色(%面積)進行評分。在檢查期間未發現其它異常眼部症狀。
表3 改良的Draize眼刺激評分系統
Figure 109100670-A0202-12-0068-5
Figure 109100670-A0202-12-0069-6
表4 改良的MacDonald-Shadduck評分系統
Figure 109100670-A0202-12-0069-7
根據方案，滴注後具有以下任一種眼睛病變的動物應被安樂死：1)包括葡萄球菌的穿孔或嚴重角膜潰瘍；2)眼前房的血液；3)4級角膜混濁；4)缺乏持續72小時的光反射(2級虹膜響應)。
在彌留之際安樂死之前應獲得體重。根據AVMA動物安樂死指南：2013版(美國獸醫醫學協會，2013)，可以通過肌內注射Zoletil50(8mg/kg，50mg/mL)和鹽酸賽拉嗪注射液(5mg/kg，100mg/mL)對兔子進行安樂死，然後進行股動脉放血和胸腔張開法。
研究中沒有動物具有不可逆的症狀，因此，沒有對動物進行安樂死。在第18天，將所有存活的動物轉移回飼養群體。
對於不同時間點所有組的體重，使用軟體SPSS計算平均值和標準差，並通過以下統計學程序分析每個時間點的組差異：進行了Levene檢驗以檢驗方差均勻性。如果結果顯示出無顯著性(p>0.05)，則進行單向方差分析(ANOVA)。如果ANOVA顯示出顯著性(p
Figure 109100670-A0202-12-0070-118
0.05)，則進行Dunnett檢驗而進行多次比較。ANOVA顯示出無顯著性(p>0.05)，則統計檢驗結束。在p
Figure 109100670-A0202-12-0070-119
0.05的方差異質性的情況下，進行Kruskal-Wallis非參數檢驗。如果Kruskal-Wallis非參數檢驗顯示出顯著性(p
Figure 109100670-A0202-12-0070-120
0.05)，則進一步進行Mann-Whitney檢驗以進行多次比較。
在每個檢查時間點將每隻動物的每隻眼睛的治療相關眼部反應總分級評分(角膜、虹膜、結膜、水腫和分泌物)相加，計算每個時間點的組平均評分(GAS)，最終基於表5中所述的方法將眼睛刺激分類。
表5 眼睛刺激評分標準
Figure 109100670-A0202-12-0070-8
結合日常觀察、病變的性質和嚴重程度及其可逆性或缺乏可逆性，評估了測試組成物/載體的治療相關的眼睛刺激效果。
9.2 結果(臨床觀察)
在整個研究過程中，沒有注意到任何動物的死亡率和異常臨床體徵。
9.3 結果(體重)
體重總結於圖6中。在第-1、7、14和17天，注意到所有3組之間的體重無統計學顯著差異(p>0.05)。
9.4 結果(眼科觀察-裂隙燈檢查)
在整個研究過程中，每組所有動物的兩隻眼睛的眼睛刺激評分均為零。根據眼睛刺激評分標準，將每個檢查時間點每組所有動物的眼睛刺激分類為無刺激。
9.5 結果(眼科觀察-螢光素鈉檢查)
角膜螢光素鈉的染色評分總結於表6-12中。
在14天給藥期間和非給藥觀察期間，觀察鹽水組、測試組成物組和人工淚液+測試組成物組的一些動物的單側或雙側眼角膜的螢光素鈉染色，並且染色評分大部分為1，第3天測試組成物組中只有1隻左眼評分為2。並且在觀察結束時，所有眼睛的角膜螢光染色評分為0。3組之間的眼角膜螢光染色評分無統計學差異(p>0.05)，除了第9天鹽水組的左眼評分明顯高於測試組成物組和人工淚液+測試組成物組的左眼評分外(鹽水組：1.00±0.00分，測試組成物組：0.25±0.50分，人工淚液+測試組成物組，0.00±0.00；p<0.05)。上述組之間的角膜染色差異缺乏時間響應關係，並且被認為與測試組成物的使用或人工淚液和測試組成物的組合使用無關。
表6 角膜螢光素鈉染色評分總結(第-1天至第2天)
Figure 109100670-A0202-12-0071-9
Figure 109100670-A0202-12-0072-10
表7 角膜螢光素鈉染色評分總結(第3天至第5天)
Figure 109100670-A0202-12-0072-11
表8 角膜螢光素鈉染色評分總結(第6天至第8天)
Figure 109100670-A0202-12-0072-12
 備注：「n」是指動物眼睛的數量。
表9 角膜螢光素鈉染色評分總結(第9天至第11天)
Figure 109100670-A0202-12-0073-13
表10 角膜螢光素鈉染色評分總結(第12天至第14天)
Figure 109100670-A0202-12-0073-14
表11 角膜螢光素鈉染色評分總結(第14天)
Figure 109100670-A0202-12-0073-15
Figure 109100670-A0202-12-0074-16
表12 角膜螢光素鈉染色評分總結(第15天至第17天)
Figure 109100670-A0202-12-0074-17
9.6 結論
在整個研究過程中，沒有注意到任何動物的死亡率和異常臨床體徵。在第-1、7、14和17天，注意到所有3組之間的體重無統計學顯著差異。
在整個研究過程中，每組所有動物的兩隻眼睛的眼睛刺激評分均為零。根據眼睛刺激評分標準，將每個檢查時間點每組所有動物的眼 睛刺激分類為無刺激。在研究期間，觀察所有3組的某些動物的單側或雙側眼角膜的螢光素鈉染色。染色評分大部分為1，並且沒有時間響應關係，因此，角膜染色體徵被認為與Biodecs001滴眼劑的使用或人工淚液和Biodecs001滴眼劑的組合使用無關。
在該研究的條件下，每天一次連續14天向紐西蘭白兔局部施用Biodecs001，單獨或人工淚液滴注後，沒有引起眼睛刺激。
實施例10：椰子油樣品的代謝物分析
10.1 樣品製備、儀器參數和數據分析
通過帶有正離子和負離子模型的LC-MS對總共20個椰子油樣品(分為兩組：未加工椰子油組和脫酸椰子油組)進行了測試，並根據測試數據在組之間進行了比較。該分析主要被設計用於分析小而極性的代謝物，例如胺基酸、核酸、糖和小有機酸，這些代謝物通常是初級代謝的一部分。
將樣品(100μL)轉移到1.5mL離心管中，然後將300μL甲醇和10μL二氯苯丙胺酸(2.8mg/mL)添加到管中。接下來，將管渦旋30秒並在-20℃下培養1小時。接下來，將管在12000RPM(4℃)下離心15分鐘。離心後，將200μL上清液轉移到小瓶中進行檢查。
使用LC-MS儀器平臺(Thermo，Ultimate 3000LC，Q Exactive)和色譜柱HypergoldC18(100x2.1mm 1.9μm)在以下條件下進行色譜分離：柱溫：40℃；流速：0.35mL/min；流動相A：水+5%乙腈+0.1%甲酸；流動相B：乙腈+0.1%甲酸；進樣量：10μL；自動進樣器溫度：4℃。流動相梯度洗脫程序如表13所示。
表13 流動相梯度洗脫程序
Figure 109100670-A0202-12-0076-18
使用以下參數進行質譜分析：
ESI+：加熱器溫度300℃；鞘層氣體流速(Sheath Gas Flow rate)，45arb；輔助氣體流速，15arb；掃氣流速，1arb；噴霧電壓，3.0KV；毛細管溫度，350℃；S鏡頭射頻電平(S-Lens RF Level)，30%。ESI-：加熱器溫度300℃；鞘層氣體流速，45arb；輔助氣體流速，15arb；掃氣流速，1arb；噴霧電壓，3.2KV；毛細管溫度，350℃；S鏡頭射頻電平，60%。掃描模型：全掃描(m/z70~1050)和數據相關的二階質譜掃描(dd-ms2，TopN=10)；解析度：70000(MS1)和17500(MS2)。碰撞模型：高能碰撞解離(HCD)。
通過進行特徵提取對數據進行分析，並使用化合物發現軟體(Thermo)進行預處理，然後通過excel 2010軟體將其歸一化並編輯為二維數據矩陣，包括分子量、保留時間(RT)和峰強度。使用SIMCA-P軟體(Umetrics AB,Umea,Sweden)將編輯後的數據進行多變量分析(MVA)。
10.2 色譜圖
如圖7-8所示，將QC樣品的總離子色譜圖(TIC)重疊，這表明了儀器的保留時間重現性良好並且儀器穩定，因此儀器分析和數據結果具有較高的可靠性。分別列出了每組樣品的TIC樣品(圖9-14)。
QC樣品是樣品提取後不同樣品和相等樣品的混合物。在檢 測到一定數量的樣品後進樣QC樣品。可以通過QC色譜圖重疊來研究儀器的穩定性。(ESI+)代表了正離子檢測模型，即在檢測過程中，質量分析器僅掃描正離子並過濾掉負離子，以便獲得正離子訊息；(ESI-)代表了負離子檢測模型，即在檢測過程期間，質量分析器僅掃描負電荷離子並過濾掉正電荷離子，以便獲得負電荷離子訊息。
10.3 所有樣品的PCA分析
對樣品進行主成分分析以反映樣品組之間的總體差異以及樣品之間變異程度的組大小。在使用SMICA-P軟體進行分析前，對數據集進行了歸一化以便獲得更直觀、更可靠的結果。歸一化的目的是使可變標度(數字功能，例如均值和標準差)處於相同水準。這可以防止某些成分過高或過低的訊號掩蓋其它差異。
為了區分兩組之間是否存在差異，使用PCA建模方法分析了樣品。在該分析中，在正模型下獲得了總共3個主成分，累積R2X=0.715和Q2=0.605。在負模型下獲得了總共2個主成分，累積R2X=0.565和Q2=0.467。在ESL+和ESL-模型下的PCA評分圖分別如圖15和圖16所示。
對Prco組(脫酸椰子油組)和Orco組(原始椰子油組)進行主成分分析。在該分析中，在正模型下獲得了總共2個主成分，累積R2X=0.718和Q2=0.605。在負模型下獲得了總共2個主成分，累積R2X=0.587和Q2=0.461。在ESL+和ESL-模型下的PCA評分圖分別如圖17和圖18所示。
10.4 PLS-DA分析
為了獲得導致該顯著差異的成分訊息，使用了監督的多維統計方法或 偏最小二乘判別分析(PLS-DA)對兩組樣品進行統計分析。
模型參數如下：在正模型下，存在兩個主成分，R2X=0.713，R2Y=0.988和Q2=0.97。在負模型下，存在兩個主成分，R2X=0.502，R2Y=0.917，Q2=0.919(圖19A-19B、20A-20B)。
確定模型質量的主要參數是R2Y(其代表了模型的解釋率)和Q2(其代表了模型的預測率)。另外，對模型進行了評估以觀察模型是否「過度擬合」。根據模型參數，該模型可以可靠地解釋兩組之間的差異並搜索不同的物質，並且在分類驗證圖中的模型沒有「過度擬合」。
模型的「過度擬合」反映了建模的準確性。如果模型不是「過度擬合」，則表明了該模型可以很好地描述樣品，並可用於發現生物標記。
10.5 OPLS-DA分析
此外，使用監督方法OPLS-DA。因此，在正模型下獲得了一個主成分和一個正交成分，R2X=0.713，R2Y=0.988和Q2=0.973。在負模型下獲得了一個主成分和一個正交成分，R2X=0.502，R2Y=0.979和Q2=0.945。模型參數R2Y代表了模型解釋率，且Q2代表了模型預測率。它們的評分如圖21-22所示。
10.6 組之間的差異成分
通過使用化合物發現器進行定性分析，最後獲得了不同成分訊息。之後，將VIP(投影中的變量重要性)值和t檢驗組合以尋找成分的差異表達。VIP值大於1且p值小於0.05的成分被認為差異。
10.7 總結
在正模型下，與相同量的原始椰子油樣品相比，產品中3-己酸、5,8- 十四碳二烯酸和吲哚的含量顯著降低(倍數變化<-7)。順式9-棕櫚油酸、PA(10：0/21：0)和硬脂醯胺具有相對穩定的變化；麥角甾-4-烯-3-酮和柱頭三醇含量顯著增加(倍數變化>7)。一般地，類固醇脂質(豆甾醇、豆甾-22-烯-3,6-二酮、柱頭三醇)和維生素(泛醌-4、維生素D3)增加。加工後胺基酸(異亮胺酸、纈胺酸、谷胺酸、β-丙胺酸)減少。
在負模型下，蔗糖、檸檬酸的含量降低約7倍，並且胡椒色素酸、LysoPA(a-25：0/0：0)和LysoPA(24：0/0：0)的濃度顯著增加。一般地，產品中的蔗糖、甘露醇、蔗糖-6-葡萄糖和葡萄糖均低於原始椰子油樣品(詳情參見圖43-44)。
實施例11：樣品的脂質組學分析
11.1 樣品製備、儀器參數和數據分析
通過帶有正離子和負離子模型的LC-MS對總共20個椰子油樣品(分為兩組：產品組(脫酸椰子油)和儲備溶液組(原始椰子油))進行了測試，並根據測試數據在組之間進行了比較。
將樣品溶解於25℃水浴鍋中，並轉移到10mL離心管中。接下來，將1.5mL氯仿/甲醇(2/1，v/v)溶液添加到100μL樣品中並渦旋1分鐘。接下來，將有機相(800μL)轉移到乾淨的試管中，用氮氣(N2)乾燥，然後用200μL異丙醇/甲醇(1/1，v/v)溶解1分鐘。接下來，將濃度為125μg/mL的10μL LPC(12：0)和濃度為125μg/mL的10μL TG內標物添加到管中並渦旋30秒。接下來，將來自管的上清液(200μL)轉移到小瓶中進行檢查。
使用LC-MS儀器平臺(Thermo，Ultimate 3000LC，Q Exactive) 和色譜柱Hyper Gold C18(100x2.1mm 1.9μm)在以下條件下進行色譜分離：柱溫：50℃；流速：0.3mL/min；流動相組成A：ACN：水(60：40，V/V)，包括10mmol/L乙酸銨，B：ACN：異丙醇(10：90，V/V)，包括10mmol/L乙酸銨；進樣量：5μL；自動進樣器溫度10℃。
流動相梯度洗脫程序如表14所示。
表14 流動相梯度洗脫程序
Figure 109100670-A0202-12-0080-19
使用以下參數進行質譜分析：ESI+：鞘層氣體速度：35arb；輔助氣體速度：15arb；吹掃速度：1arb；電噴霧電壓：3000V；毛細管溫度：350℃；氣化溫度：350℃。S鏡頭射頻電平，50%。ESI-：鞘層氣體速度：35arb；輔助氣體速度：15arb；吹掃速度：1arb；電噴霧電壓：2800V；毛細管溫度：350℃；氣化溫度：350℃；S鏡頭射頻電平，50%。掃描模型：全掃描((ESI+：m/z250~1500；ESI-：m/z200~1500)和數據相關的二階質譜掃描(dd-ms2，TopN=10)；解析度：70000(MS1)和17500(MS2)。碰撞模型：高能碰撞解離(HCD)。
通過特徵提取對數據進行分析，並使用脂質搜索軟體(Thermo)進行預處理，然後通過excel 2010軟體將其歸一化並編輯為二維數據矩陣，包括脂質，類別，脂肪酸鏈(脂肪酸、FA1、FA2、FA3)，CalcMz，離子式，保留時間(RT)和峰強度。使用SIMCA-P軟體(Umetrics AB,Umea, Sweden)通過多變量分析(MVA)分析編輯後的數據。
11.2 色譜圖
如圖23-24所示，將QC樣品的總離子色譜圖(TIC)重疊，這表明儀器的保留時間重現性良好並且儀器穩定，因此儀器分析和數據結果具有較高的可靠性。分別列出了每組樣品的TIC樣品(圖25-30)和QC樣品。
QC是樣品提取後不同樣品和相等樣品的混合物。分析一定數量的樣品後，進樣少量的QC。可以通過QC色譜圖重疊來監測儀器的可靠性。ESI+代表了正離子檢測模型，即在檢測過程中，質量分析器僅掃描正離子並過濾掉負離子，以便獲得正離子訊息。ESI-代表了負離子檢測模型，即在檢測過程期間，質量分析器僅掃描負電荷離子並過濾掉正電荷離子，以便獲得負電荷離子訊息。
11.3 所有樣品的PCA分析
進行主成分分析(PCA)以分析樣品組之間的總體差異以及樣品之間的變異。在使用SMICA-P軟體進行PCA分析前，對數據集進行了歸一化以便獲得更可靠的結果。
為了區分兩組之間是否存在差異，我們使用PCA建模方法以分析樣品。在該分析中，在正模型下獲得了總共2個主成分，累積R2X=0.316和Q2=0.198。在負模型下獲得了總共3個主成分，累積R2X=0.605和Q2=0.32。在ESL+和ESL-模型下的PCA評分圖分別如圖31和圖32所示。
對Prco組(產品組)和Orco組(原始椰子油組)進行主成分分析。在該分析中，在正模型下獲得了總共2個主成分，累積R2X=0.355 和Q2=0.16。在負模型下獲得了總共3個主成分，累積R2X=0.644和Q2=0.347。在ESL+和ESL-模型下的PCA評分圖分別如圖33和圖34所示。
11.4 PLS-DA分析
為了獲得導致該顯著差異的成分訊息，使用了監督的多維統計方法或偏最小二乘判別分析(PLS-DA)。
模型參數如下：在正模型下，存在兩個主成分，R2X=0.344，R2Y=0.998和Q2=0.962。在負模型下，R2X=0.478，R2Y=0.973，Q2=0.889(圖35A-35B且36A-36B)。
確定模型質量的主要參數是R2Y(其代表了模型的解釋率)和Q2(其代表了模型的預測率)。另外，還評價了模型是否「過度擬合」。根據模型參數，該模型可以可靠地解釋兩組之間的差異並搜索不同的物質，並且在驗證圖中的模型沒有「過度擬合」。
模型的「過度擬合」反映了模型構建的準確性。如果模型不是「過度擬合」，則表明了該模型可以很好地描述樣品，並可用於發現最相關的生物標記。
11.5 OPLS-DA分析
此外，使用監督方法OPLS-DA。因此，在正模型下獲得了一個主成分和一個正交成分，R2X=0.344，R2Y=0.998和Q2=0.962。在負模型下獲得了一個主成分和一個正交成分，R2X=0.478，R2Y=0.973和Q2=0.875。模型參數R2Y代表了模型解釋率，且Q2代表了模型預測率。它們的評分如圖37-38所示。
11.6 組間脂質差異
通過脂質搜索進行定性分析，並且最後獲得不同成分訊息，包括不同脂質的類型、每個不同脂質分子鏈長的變化以及不飽和鍵的數量。之後，將VIP值和t檢驗組合以尋找脂質成分的差異表達。VIP值大於1且p值小於0.05的脂質被認為差異脂質。不同成分的數據如圖45-46所示。
11.7 總結
在該項目中，產品樣品中的ESI+處檢測到12類脂質，分別為cer(神經醯胺，0.00256864604914964%)、CerG1(簡單Glc系列，0.000121562094094825%)、ChE(膽固醇酯，0.000027195581262643%)、Co(輔酶，0.000165799851752065%)、DG(甘油二酸酯，0.204618368597593%)、LPC(溶血磷脂醯膽鹼，0.000691245372867429%)、LPE(溶血磷脂醯乙醇胺，4.39688799919827E-06%)、PE(磷脂醯乙醇胺，0.0000221371777288954%)、So(鞘胺醇，0.00800073222443555%)、StE(豆甾基酯，6.13493501356116E-06%)、TG(甘油三酸酯，99.7836547325718%)、ZyE(酵母基(zymosteryl)，0.000119048656356883%)。在Orco樣品中檢測到11類脂質，分別為cer(神經醯胺，0.00305724291322289%)、CerG1(簡單Glc系列，0.000296999634909488%)、ChE(膽固醇酯，0.000007562648073146%)、Co(輔酶，0.00106715223387679%)、DG(甘油二酸酯，0.102091925929773%)、LPC(溶血磷脂醯膽鹼，0.00192954289175979%)、LPE(溶血磷脂醯乙醇胺，0.000206199217706794%)、PE(磷脂醯乙醇胺，0.000994781308036394%)、So(鞘胺醇，0.00778245724664204%)、TG(甘油三酸酯，99.8825339050066%)、ZyE(酵母基(zymosteryl)，0.0000322309694142598%)。 在Orco樣品中檢測到11類脂質，分別是cer(神經醯胺，0.00305724291322289%)、CerG1(簡單Glc系列，0.000296999634909488%)、ChE(膽固醇酯，0.000007562648073146%)、Co(輔酶，0.00106715223387679%)、DG(甘油二酸酯，0.102091925929773%)、LPC(溶血磷脂醯膽鹼，0.00192954289175979%)、LPE(溶血磷脂醯乙醇胺，0.000206199217706794%)、PE(磷脂醯乙醇胺，0.000994781308036394%)、So(鞘胺醇，0.00778245724664204%)、TG(甘油三酸酯，99.8825339050066%)、ZyE(酵母基(zymosteryl)，0.0000322309694142598%)。
在ESI模型下，檢測到21類脂質，分別為DGDG(二半乳糖基二醯基甘油，0.00337850020676684%)、DGMG(二半乳糖基單醯基甘油，0.283485348778992%)、LPC(溶血磷脂醯膽鹼，0.278254986476203%)、LPE(溶血磷脂醯乙醇胺，0.00556230615677608%)、LPG(溶血磷脂醯甘油，0.00243740463723581%)、LPI(溶血磷脂醯肌醇，0.00152071252159812%)、LPMe(溶血磷脂醯甲醇，0.0246170259125403%)、LdMePE(溶血二甲基磷脂醯乙醇胺，0.0246170259125403%)、MGDG(單半乳糖基二醯基甘油，0.119679045099086%)、MGMG(單半乳糖基單醯基甘油，2.12694214959191%)、OAHFA((O-醯基)-1-羥基脂肪酸，0.815004998839083%)、PA(磷脂酸，21.2775572879869%)、PAF(血小板活化因子，52.3844436814582%)、PC(磷脂醯膽鹼，0.996419719716529%)、PE(磷脂醯乙醇胺，0.769816735887086%)、PEt(磷脂醯乙醇，5.23724828345888%)、PG(磷脂醯甘油，0.150818577744567%)、PI(磷脂醯肌醇，0.224349306155231%)、PMe(磷脂醯乙醇，4.04027226374681 %)、cPA(環狀磷脂酸，0.00012119001517959%)、dMePE(二甲基磷脂醯乙醇胺，0.009913724165893%)。
在Orco樣品中，檢測到22類脂質，分別為CL(心磷脂，0.0205841044276305%)、DGDG(二半乳糖基二醯基甘油，0.291159900494563%)、DGMG(二半乳糖基單醯基甘油，0.0960936390316132%)、LPC(溶血磷脂醯膽鹼，0.303192132840516%)、LPE(溶血磷脂醯乙醇胺，0.104579947187398%)、LPG(溶血磷脂醯甘油，0.00534666996716351%)、LPI(溶血磷脂醯肌醇，0.0443782066618173%)、LPMe(溶血磷脂醯甲醇，0.00138869574447737%)、LdMePE(溶血二甲基磷脂醯乙醇胺，4.15813005466302%)、MGDG(單半乳糖基二醯基甘油，1.57435383259576%)、MGMG(單半乳糖基單醯基甘油，0.662589282973412%)、OAHFA((O-醯基)-1-羥基脂肪酸，0.864712469689971%)、PA(磷脂酸，26.935329672718%)、PAF(血小板活化因子，18.8938270646209%)、PC(磷脂醯膽鹼，14.5455100823086%)、PE(磷脂醯乙醇胺，7.08341135985417%)、PEt(磷脂醯乙醇，10.8236884649902%)、PG(磷脂醯甘油，0.934358404427319%)、PI(磷脂醯肌醇，2.67410886686788%)、PMe(磷脂醯乙醇，9.83226175604876%)、cPA(環狀磷脂酸，0.00785180275211569%)、dMePE(二甲基磷脂醯乙醇胺，0.143143589134811%)。
在ESI+模型下，經加工後，Orco樣品中的5類脂質(LPE、PE、Co、LPC、CerG1)的百分比下降；同時3種脂質(Cer、TG、So)保持穩定；而4類脂質(DG、ChEZyE和StE)顯著增加。在ESI模型下，經 加工後，Orco樣品中的13類脂質(DGDG、cPA、LPI、LPE、PC、dMePE、MGDG、PI、PE、PG、PMe、LPG和PEt)的百分比下降；同時3種脂質(PA、LPC和OAHFA)保持穩定；而6類脂質(LdMePE、PAF、DGMG、MGMG、LPMe和CL)顯著增加。
在ESI+和ESI-模型下，產品樣品(脫酸椰子油)中脂質類別的百分比如表15-16和圖39-42所示。在ESI+和ESI-模型下，每種脂質類別的詳細列表如圖45-46所示。
表15 產品樣品中脂質類別的百分比(ESI+)
Figure 109100670-A0202-12-0086-20
表16 產品樣品中脂質類別的百分比(ESI-)
Figure 109100670-A0202-12-0086-21
Figure 109100670-A0202-12-0087-22
還對人瞼板樣品(眼瞼樣品)進行了分析。在ESI+模型下，檢測到產品樣品和眼瞼樣品中的11類脂質，分別為DG(甘油二酸酯)、TG(甘油三酸酯)、So(鞘胺醇)、LPC(溶血磷脂醯膽鹼)、Cer(神經醯胺)、ZyE(酵母基)、LPE(溶血磷脂醯乙醇胺)、CerG1(簡單Glc系列)、ChE(膽固醇酯)、PE(磷脂醯乙醇胺)和StE(豆甾基酯)。在ESI-模型下，檢測到產品樣品和眼瞼樣品中的22類脂質，分別為PE(磷脂醯乙醇胺)、PEt(磷脂醯乙醇)、MGMG(單半乳糖基單醯基甘油)、cPA(環狀磷脂酸)、PE(磷脂醯乙醇胺)、PI(磷脂醯肌醇)、DGDG(二半乳糖基二醯基甘油)、MGDG(單半乳糖基二醯基甘油)、LdMePE(溶血二甲基磷脂醯乙醇胺)、LPE(溶血磷脂醯乙醇胺)、LPI(溶血磷脂醯肌醇)、LPC(溶血磷脂醯膽鹼)、LPMe(溶血磷脂醯甲醇)、LPG(溶血磷脂醯甘油)、PG(磷脂醯甘油)、OAHFA((O-醯基)-1-羥基脂肪酸)、PA(磷脂酸)、dMePE(二甲基磷脂醯乙醇胺)、PC(磷脂醯膽鹼)、DGMG(二半乳糖基單醯基甘油)、PMe (磷脂醯乙醇)和PAF(血小板活化因子)。
實施例12：環孢素溶解度測試
測試了環孢素在不同有機溶劑中的溶解度。實驗如下進行。
將環孢素(3.0mg，白色固體粉末)添加到1.2mL脫酸椰子油中。在42℃水浴溫育後，將白色固體粉末溶解為渾濁液體。接下來，通過搖動將溶液混合，然後置於42℃水浴10分鐘，隨後超聲處理15分鐘。如圖50A所示，將環孢素溶解於樣品中。
將環孢素(25mg)添加到1.0mL DMSO(清澈透明液體)中。通過搖動將溶液混合，隨後超聲處理15分鐘。如圖50B所示，將環孢素以2.5%的濃度溶解於DMSO中，成為清澈透明液體。另外，將環孢素(50mg)添加到1.0mL DMSO(清澈透明液體)中。通過搖動將溶液混合，隨後超聲處理15分鐘。因此，將環孢素以5%的濃度溶解於DMSO中，成為清澈透明液體。
將環孢素(25mg)添加到1.0mL橄欖油(黃色透明液體)中。通過搖動將溶液混合，隨後超聲處理15分鐘。如圖50C所示，將環孢素以2.5%的濃度溶解於橄欖油中，成為清澈透明液體。另外，將環孢素(50mg)添加到1.0mL橄欖油(黃色透明液體)中。通過搖動將溶液混合，隨後超聲處理15分鐘。因此，將環孢素以5%的濃度溶解於橄欖油中，成為清澈透明液體。
將環孢素-DMSO溶液(100μl，如上所述為2.5%)添加到900μl脫酸椰子油中。通過搖動將溶液混合，隨後42℃水浴10分鐘溫育。如圖51A所示，所獲得的溶液為清澈透明的。另外，將環孢素-DMSO溶液 (50μl，如上所述為5%)添加到950μl脫酸椰子油中。通過搖動將溶液混合，隨後42℃水浴10分鐘溫育。如圖52A所示，所獲得的溶液為清澈透明的。
將環孢素-橄欖油溶液(100μl，如上所述為2.5%)添加到900μl脫酸椰子油中。通過搖動將溶液混合，隨後42℃水浴10分鐘溫育。如圖51B所示，所獲得的溶液為清澈透明的。另外，將環孢素-DMSO溶液(50μl，如上所述為5%)添加到950μl脫酸椰子油中。通過搖動將溶液混合，隨後42℃水浴20分鐘溫育。如圖52B所示，所獲得的溶液為清澈透明的。
將環孢素(125mg)添加到5ml脫酸的椰子油中。通過搖動將溶液混合，然後42℃水浴10分鐘溫育，隨後超聲處理15分鐘。接下來，用0.22μm的PVDF過濾器對超聲處理的溶液進行滅菌，並且在50ml的無菌離心管中將2.5ml的過濾器滅菌的溶液與22.5ml的脫酸椰子油混合。如圖53A-53B所示，所獲得的溶液為淺黃色透明的。
將環孢素(125mg)添加到5ml的混合溶液中，該混合溶液含有體積比為1：19的DMSO和脫酸椰子油(250μl DMSO與4.75ml脫酸椰子油混合)。通過搖動將溶液混合，然後42℃水浴10分鐘溫育，隨後超聲處理15分鐘。接下來，用0.22μm的PVDF過濾器對超聲處理的溶液進行滅菌，並且在50ml的無菌離心管中將2.5ml的過濾器滅菌的溶液與22.5ml的脫酸椰子油混合。如圖53C-53D所示，所獲得的溶液為淺黃色透明的。
以上實驗表明了環孢素可以溶解於脫酸椰子油中。
其它實施方式
應當理解，雖然已經結合本發明的具體實施方式描述了本發明，但是前面的描述旨在說明而不是限制本發明的範圍，本發明的範圍由所附申請專利範圍的範圍限定。其它方面、優點和修改均在以下申請專利範圍的範圍內。
優先權要求
本申請要求於2019年1月8日提交的PCT/CN2019/070856的權益。前述的全部內容通過引用併入本文。

Claims (38)

  1. 一種治療乾眼症或減輕乾眼症症狀的方法，其特徵係其包括：
    向有需要的受試者施用有效量的包含脫酸椰子油的藥物組成物。
  2. 如申請專利範圍第1項所記載之方法，其中，前述乾眼症是乾眼綜合症。
  3. 如申請專利範圍第1或2項所記載之方法，其中，前述組成物作為滴眼劑施用於患者的眼睛。
  4. 如申請專利範圍第1至3項中任一項所記載之方法，其中，前述組成物基本上由脫酸椰子油組成。
  5. 如申請專利範圍第1至4項中任一項所記載之方法，其中，藉由包括以下步驟的工藝製備向患者施用的前述脫酸椰子油：
    提供椰子油；
    將前述椰子油與鹼性溶液(pH>8)混合，從而獲得包含水相和油相的混合物；
    從前述混合物中分離前述水相和前述油相；和
    從前述油相中收集脫酸椰子油。
  6. 如申請專利範圍第5項所記載之方法，其中，前述工藝進一步包括：
    將椰子肉或椰子粉與鹼混合，從而獲得椰子肉混合物；
    加熱並壓製前述椰子肉混合物，從而獲得提取物；和
    從前述提取物中收集椰子油。
  7. 如申請專利範圍第1至6項中任一項所記載之方法，其中，在將前述藥物組成物施用於前述受試者之前，將人工淚液滴眼劑施用於前述受試者。
  8. 如申請專利範圍第1至7項中任一項所記載之方法，其中，前述方法進一步包括：
    向前述受試者口服施用有效量的包含一種、兩種或所有以下成分的組成物：
    (1)枸杞(寧夏枸杞或茄科枸杞)或枸杞提取物；
    (2)黃芪根或黃芪根提取物；
    (3)菊花或菊花提取物。
  9. 如申請專利範圍第8項所記載之方法，其中，前述方法包括：
    向前述受試者口服施用有效量的枸杞(寧夏枸杞或茄科枸杞)或枸杞提取物。
  10. 如申請專利範圍第8項所記載之方法，其中，前述方法進一步包括：
    向前述受試者口服施用有效量的黃芪根或黃芪根提取物。
  11. 如申請專利範圍第8項所記載之方法，其中，前述方法進一步包括：
    向前述受試者口服施用有效量的菊花或菊花提取物。
  12. 如申請專利範圍第1至11項中任一項所記載之方法，其中，前述方法進一步包括：
    對前述受試者的眼睛施用熱療法。
  13. 如申請專利範圍第12項所記載之方法，其中，前述熱療法包括：
    在前述受試者的眼睛上施加包含中藥組成物的熱墊。
  14. 如申請專利範圍第12或13項所記載之方法，其中，前述中藥組成物包含決明子和冰片。
  15. 如申請專利範圍第14項所記載之方法，其中，前述決明子在前述中藥組 成物中的重量百分比為50%至90%。
  16. 如申請專利範圍第14項所記載之方法，其中，前述冰片在前述中藥組成物中的重量百分比為10%至50%。
  17. 一種包含脫酸椰子油的藥物組成物。
  18. 如申請專利範圍第17項所記載之組成物，其中，前述藥物組成物由脫酸椰子油組成。
  19. 如申請專利範圍第17或18項所記載之方法，其中，藉由包括以下步驟的工藝製備前述脫酸椰子油：
    提供椰子油；
    將前述椰子油與鹼性溶液(pH>8)混合，從而獲得包含水相和油相的混合物；
    從前述混合物中分離前述水相和前述油相；和
    從前述油相中收集脫酸椰子油。
  20. 如申請專利範圍第19項所記載之方法，其中，前述工藝進一步包括：
    將椰子肉或椰子粉與鹼混合，從而獲得椰子肉混合物；
    加熱並壓製前述椰子肉混合物，從而獲得提取物；和
    從前述提取物中收集椰子油。
  21. 一種改善受試者的人工淚液滴眼劑功效的方法，其特徵係前述方法包括：
    向前述受試者施用前述人工淚液滴眼劑；和
    在向前述受試者施用前述人工淚液滴眼劑後，向前述受試者施用有效量 的包含脫酸椰子油的組成物。
  22. 如申請專利範圍第21項所記載之方法，其中，前述組成物基本上由脫酸 椰子油組成。
  23. 如申請專利範圍第21或22項所記載之方法，其中，在向前述受試者施用前述人工淚液滴眼劑後的1、2、3、4、5、6、7、8、9或10分鐘內施用前述包含脫酸椰子油的組成物。
  24. 一種中藥組成物，其特徵係其包含：
    (1)枸杞(寧夏枸杞或茄科枸杞)或枸杞提取物；
    (2)黃芪根或黃芪根提取物；和
    (3)菊花或菊花提取物。
  25. 如申請專利範圍第24項所記載之中藥組成物，其中，(1)、(2)和(3)的比例為約1：1：1。
  26. 一種包含中藥組成物的熱墊，其特徵係前述中藥組成物包含決明子和冰片。
  27. 如申請專利範圍第26項所記載之熱墊，其中，前述決明子在前述中藥組成物中的重量百分比為50%至90%。
  28. 如申請專利範圍第26項所記載之熱墊，其中，前述冰片在前述中藥組成物中的重量百分比為10%至50%。
  29. 一種製備包含脫酸椰子油的組成物的方法，其特徵係前述方法包括：
    將椰子肉或椰子粉與鹼或鹼性溶液混合，從而獲得椰子肉混合物；
    加熱並壓製前述椰子肉混合物，從而獲得提取物；和
    從前述提取物中收集椰子油。
  30. 如申請專利範圍第29項所記載之方法，其中，前述方法進一步包括：
    從前述提取物中收集椰子油後，將前述椰子油與鹼性溶液(pH>7)混合， 從而獲得包含水相和油相的混合物；
    從前述混合物中分離前述水相和前述油相；和
    從前述油相中收集脫酸椰子油。
  31. 如申請專利範圍第31項所記載之方法，其中，前述方法進一步包括：
    通過膜過濾過濾前述脫酸椰子油，從而獲得過濾的脫酸椰子油；和
    將前述過濾的脫酸椰子油滅菌。
  32. 一種製備包含脫酸椰子油的組成物的方法，其特徵係前述方法包括：
    將椰子油與鹼或鹼性溶液混合，從而獲得混合物；和
    收集脫酸椰子油。
  33. 如申請專利範圍第32項所記載之方法，其中，前述方法包括：
    將椰子油與鹼性溶液混合；
    從前述混合物中分離水相和油相；和
    收集脫酸椰子油。
  34. 如申請專利範圍第33項所記載之方法，其中，前述方法進一步包括：
    通過膜過濾過濾前述脫酸椰子油，從而獲得過濾的脫酸椰子油；和
    將前述過濾的脫酸椰子油滅菌。
  35. 一種包含脫酸椰子油和環孢素的組成物。
  36. 如申請專利範圍第35項所記載之組成物，其中，前述環孢素具有0.05%的濃度。
  37. 一種治療乾眼症或減輕乾眼症症狀的方法，其特徵係其方法包括：
    向有需要的受試者施用有效量的包含脫酸椰子油和環孢素的藥物組成物。
  38. 如申請專利範圍第1至14項中任一項所記載之方法，其中，其進一步包括向前述受試者施用有效量的環孢素。
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