TW202027734A

TW202027734A - 預防及／或治療失智症之組合物

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Publication number: TW202027734A
Application number: TW108111508A
Authority: TW
Inventors: 許悅郎
Original assignee: 許悅郎
Priority date: 2019-04-01
Filing date: 2019-04-01
Publication date: 2020-08-01
Also published as: US20200306252A1; CN111759828A

Abstract

一種組合物，其係包含一第一成分與一第二成分，其中，該第一成分係黃嘌呤（xanthine）及其衍生物之至少一者，該第二成分係二苯基庚烷類（diarylheptanoid）、二苯基庚烷類之衍生物、兒茶素（catechin）、兒茶素之酯類、類黃酮（flavonoid）、及異類黃酮（isoflavonoid）之至少一者，且該第一成分係視需要與該第二成分以結合成一加合物（adduct）之形式存在。該組合物係可用於治療及／或預防失智症。

Description

預防及／或治療失智症之組合物

本發明係關於一種組合物，其係包含一第一成分以及一第二成分，其中該第一成分係黃嘌呤（xanthine）及其衍生物之至少一者，該第二成分係二苯基庚烷類（diarylheptanoid）、二苯基庚烷類之衍生物、兒茶素（catechin）、兒茶素之酯類、類黃酮（flavonoid）、及異類黃酮（isoflavonoid）之至少一者，且該第一成分係視需要與該第二成分以結合成一加合物（adduct）之形式存在。本發明亦關於該組合物於治療及／或預防失智症的應用，包括使用該組合物於製備一用於治療及／或預防失智症之藥劑的用途、以及使用該組合物於治療及／或預防失智症的方法。

失智症，是一種包含各種腦部功能退化跟障礙的症候群。罹患失智症的患者會出現語言能力、空間感、計算力、判斷力、抽象思考能力、注意力等各方面的功能退化，同時可能出現干擾行為、個性改變、妄想或幻覺等症狀。前述症狀會隨著病程發展而漸趨嚴重，並逐漸影響患者的日常生活與人際關係，患者於後期甚至無法獨立生活而需要照護者全天候陪伴。因此，失智症不僅是患者本身的疾病問題，更會使照護者身心承受巨大的壓力。隨著全球人口老化，罹患失智症的人數不斷增加，高昂的社會照護成本亦是不容忽視的課題。

失智症可大分為以下四種類型：退化性、血管性、混合型（退化性及血管性並存）以及可逆型。其中，僅可逆型失智症是因其他疾病所引起之暫時性失智症，可隨病因的消失而治癒。退化性失智症則包括阿茲海默症（Alzheimer’s Disease）、額顳葉型失智症（Frontotemporal lobe degeneration）、路易氏體失智症（Dementia with Lewy Bodies）、帕金森氏症（Parkinson's disease）等，其中路易氏體失智症與帕金森氏症具有相似的病理機制（例如：路易氏體的不正常沉積），且臨床特徵非常相似。其他與失智症相關的病理機制則包括：β-類澱粉蛋白沉積、τ蛋白磷酸化、血液及腦部功能障礙、病毒感染等。由於目前尚未了解導致失智症的確切機制，故業界難以設計出有效治療失智症的藥物。

目前針對失智症所開發的藥物包括NMDA受體拮抗劑（例如：憶必佳（memantine））、以及乙醯膽鹼酶抑制劑（例如：愛憶欣（donepezil）、憶思能（rivastigmine）、佳能憶（galantamine）），然而，前述藥物都只能針對單一神經傳導物質進行調控，治療失智症的效果並不顯著，至多僅能稍微延緩失智症的進程。因此，臨床上亟需一種可針對失智症繁雜的病理機制的綜合手段，以有效減輕或反轉失智症的症狀。

除了上述化學合成藥物以外，業者對於失智症的治療，亦朝向植物萃取物的方向進行研究，並發現部分萃取自植物的化合物具有發展成治療及／或預防失智症之藥物的潛力。其中，薑黃素雖因在細胞實驗中具有保護神經細胞及降低β-類澱粉蛋白沉積的效果而被視為潛力化合物，然而，後續對失智症患者所進行的臨床實驗結果卻顯示，薑黃素並無法有效改善失智症患者的症狀（此可參見Goozee等人的文獻：Examining the potential clinical value of curcumin in the prevention and diagnosis of Alzheimer’s disease, 115, 449-465，該文獻全文併於此處以供參考）。究其原因在於，薑黃素因無法有效通過血腦障壁（blood-brain barrier，BBB），故其生物利用性（bioavailability）不佳。

本案發明人研究發現，黃嘌呤及其衍生物具有攜帶其他成分通過血腦障壁的功能。因此，本發明提供一種包含一第一成分與一第二成分之組合物，其中，該第一成分係黃嘌呤及其衍生物之至少一者，該第二成分係二苯基庚烷類、二苯基庚烷類之衍生物、兒茶素、兒茶素之酯類、類黃酮、及異類黃酮之至少一者，且該第一成分係視需要與該第二成分以結合成一加合物之形式存在。本發明透過上述第一成分與第二成分之併用，其中的第一成分可以攜帶第二成分通過血腦障壁，從而達到預防及／或治療失智症的效果。另一方面，透過一次投予多種不同化合物，可同時針對多種造成失智症的病理機制予以治療，以提升預防及／或治療失智症之效益。

本發明之一目的，在於提供一種組合物，其係包含一第一成分以及一第二成分，其中，該第一成分係黃嘌呤（xanthine）及其衍生物之至少一者，該第二成分係二苯基庚烷類（diarylheptanoid）、二苯基庚烷類之衍生物、兒茶素（catechin）、兒茶素之酯類、類黃酮（flavonoid）、及異類黃酮（isoflavonoid）之至少一者，且該第一成分係視需要與該第二成分以結合成一加合物之形式存在。

一般而言，以該第一成分及該第二成分之總重量計，該第一成分佔0.025至25重量百分比。較佳地，以該第一成分及該第二成分之總重量計，該第一成分佔0.05至10重量百分比。更佳地，以該第一成分及該第二成分之總重量計，該第一成分佔0.1至5重量百分比。其中，若第一成分與第二成分結合成一加合物，則前述重量百分比係指以來自第一成分之部分的重量為分子，加合物之重量為分母，計算所得之百分比。又，若僅一部分第一成分與第二成分結合成加合物，則該第一成分重量百分比係指以加合物中來自第一成分之部分以及未與第二成分結合之第一成分之總量為分子，第一成分、第二成分以及加合物之總量為分母，計算所得之百分比。

較佳地，根據本發明所提供之組合物中的第一成分係以下之至少一者：咖啡因（caffeine）、胺茶鹼（aminophylline）、異丁基-1-甲基黄嘌呤（3-Isobutyl-1-methylxanthine，IBMX）、副黄嘌呤（paraxanthine）、配妥西菲林（pentoxifylline）、可可鹼（theobromine）、及茶鹼（theophylline）。

於根據本發明所提供之組合物中，在作為第二成分之物料中，該二苯基庚烷類較佳係薑黃素（curcumin），該二苯基庚烷類的衍生物較佳係類薑黃素（curcuminoid）、去甲氧薑黃素（demethoxycurcumin）、及去二甲氧薑黃素（bisdemethoxycurcumin）之至少一者，該兒茶素之酯類較佳係表沒食子兒茶素沒食子酸酯（epigallocatechin gallate，EGCG），該類黃酮較佳係芹菜素（apigenin）、花青素（anthocyanin）、蔥醌（anthraquinone）、槲皮素（quercetin）、及木犀草素（luteolin）之至少一者，以及該異類黃酮較佳係染料木黃酮（genistein）、黃豆甘原（daidzein）、及甘胺黃酮（glycitein）之至少一者。

較佳地，根據本發明所提供之組合物更包含一第三成分，其係以下之至少一者：類胡蘿蔔素（carotenoid）、玉米黃素（zeaxanthin）、番茄紅素（lycopene）、胡蘿蔔素（carotene）、藏花酸（carotenoid crocetin）、類胡蘿蔔酸（carotenoid acid）、及ω-3脂肪酸（ω-3 fatty acid）。

本發明之另一目的，在於提供一種使用上述組合物於製備一用於治療及／或預防失智症之藥劑的用途。較佳地，該失智症係以下之至少一者：阿茲海默症、及帕金森氏症。

本發明之又一目的，在於提供一種治療及／或預防失智症的方法，其係包含對一有需要之個體投予一有效量之上述組合物。較佳地，該失智症係以下之至少一者：阿茲海默症、及帕金森氏症。

本發明之詳細技術內容及部分具體實施態樣，將描述於以下內容中，以供本發明所屬領域具通常知識者據以明瞭本發明之特徵。

以下將描述根據本發明之部分具體實施態樣；惟，在不背離本發明精神下，本發明尚可以多種不同形式之態樣來實踐，不應將本發明保護範圍解釋為限於說明書所具體陳述者或後附申請專利範圍所界定者。

除非文中有另外說明，於本說明書中（尤其是在後述專利申請範圍中）所使用之「一」、「該」及類似用語應理解為包含單數及複數形式；所謂「預防」係指抑制或防止一具體病況的發作、或維持敏感個體之良好健康狀態或建立該個體對疾病的耐受性；所謂「治療」，不應被解釋為治療一個體直至完全恢復，而應包括將一個體之疾病進展或症狀維持在一實質上靜態之程度、增加一個體之恢復速率、改善一具體病況的嚴重性、或提高一患者之生命品質；所謂「個體」係指人類或非人的哺乳動物。

本說明書中所使用之數值範圍（例如5至100）應理解為亦包含在該範圍中的所有有理數以及在該範圍中之任何有理數所組成的範圍，因此，本說明書中所使用之數值範圍係包含介於所列舉之最低值與最高值之間之數值的所有可能組合。

如上述，本案發明人經研究發現，黃嘌呤及其衍生物具有攜帶其他成分通過血腦障壁的功能，故將黃嘌呤及其衍生物與治療或預防失智症之潛力化合物併用，可改善該等潛力化合物的生物利用性。

因此，本發明係關於一種組合物，其係包含一第一成分與一第二成分，其中該第一成分係黃嘌呤（xanthine）及其衍生物之至少一者，該第二成分係二苯基庚烷類（diarylheptanoid）、二苯基庚烷類之衍生物、兒茶素（catechin）、兒茶素之酯類、類黃酮（flavonoid）、及異類黃酮（isoflavonoid）之至少一者，且該第一成分係視需要與該第二成分以結合成一加合物之形式存在。本發明亦關於該組合物於治療及／或預防失智症的應用，包括使用該組合物於製備一用於治療及／或預防失智症之藥劑的用途、以及使用該組合物於治療及／或預防失智症的方法。

於本發明組合物中，作為第一成分的黃嘌呤衍生物可以是甲基黃嘌呤，包含：咖啡因、胺茶鹼、異丁基-1-甲基黄嘌呤、副黄嘌呤、配妥西菲林、可可鹼、及茶鹼。

於本發明組合物中作為第二成分之二苯基庚烷類可以是線性二苯基庚烷類、或環狀二苯基庚烷類，其中，該線性二苯基庚烷類之具體態樣例如薑黃素，該二苯基庚烷類衍生物之具體態樣例如類薑黃素、去甲氧薑黃素、去二甲氧薑黃素、及其他薑黃素衍生物。

於本發明組合物中作為第二成分之兒茶素及其酯類係可自植物萃取而得，舉例言之，但不以此為限，可自茶（綠茶或紅茶）、蘋果皮、梅子、洋蔥、榛子、刺槐豆等萃取而得。較佳地，該作為本發明組合物第二成分之兒茶素之酯類係表沒食子兒茶素沒食子酸酯。

於本發明組合物中作為第二成分之類黃酮可以是植物或真菌的二級代謝物（即，生物類黃酮），且在結構上具有二個苯環及一個雜環。舉例言之，該類黃酮可以是花黃素（anthoxanthin）、黃酮醇（flavonol）、黃素酮（flavone）、黃烷酮（flavanone）、黃耆甲苷（astragaloside）第I至IV型、黃烷（flavan）、黃烷醇（flavanol）、花青素（anthocyanin）、花色素（anthocyanidin）、新黃酮類（neoflavonoid）、其衍生物、其酯類、或前述之組合。於本發明之部分具體實施態樣中，係以下之至少一者作為本發明組合物之第二成分中的類黃酮：芹菜素、花青素、蔥醌、槲皮素、及木犀草素。此外，於本發明組合物中作為第二成分之異類黃酮的具體態樣可以為例如：染料木黃酮、黃豆甘原、及甘胺黃酮。

於本發明一具體實施態樣中，係以咖啡因作為第一成分，且以EGCG、花青素、及薑黃素作為第二成分。於本發明另一具體實施態樣中，係以咖啡因作為第一成分，且以EGCG、蔥醌、及薑黃素作為第二成分。

於本發明組合物中，第一成分與第二成分之含量配比並無特別限制。一般而言，以第一成分及第二成分之總重量計，第一成分佔0.025至25重量百分比，較佳為0.05至10重量百分比，更佳為0.1至5重量百分比。於本發明一具體實施態樣中，以第一成分及第二成分之總重量計，第一成分佔0.5重量百分比。

該根據本發明所提供之組合物，可視需要更包含一第三成分，或與含該第三成分之藥物或食品併用，以進一步加強該組合物之功效、或增加製劑配方的運用靈活性與調配度，只要該第三成分對第一成分及第二成分之效益沒有不利的影響即可。其中，該第三成分之例子包括，但不限於，類胡蘿蔔素、玉米黃素、番茄紅素、胡蘿蔔素、藏花酸、類胡蘿蔔酸、及ω-3脂肪酸，可自植物萃取而得，且該植物的例子包括，但不限於，番紅花及其類似物（例如：藏紅花）、豆類、芹菜、藍莓、咖啡豆、黑巧克力、南瓜子、青花菜、各種堅果、柑橘及其家族。

於本發明組合物中，第一成分較佳係與第二成分結合成一加合物，以確保該第二成分可有效通過血腦障壁，完整發揮其治療及／或預防失智症的功效。其中，第一成分與第二成分係透過氫鍵而結合，因此，該加合物係含有第一成分與第二成分的所有原子。第一成分的例子包括黃嘌呤及其衍生物，第二成分的例子包括二苯基庚烷類、二苯基庚烷類之衍生物、兒茶素、兒茶素之酯類、類黃酮、及異類黃酮，但不以此為限，只要第一成分與第二成分各別具有可形成氫鍵之基團（例如：OH及N）即可。

舉例言之，但不以此為限，於本發明組合物中，當第一成分與第二成分以加合物之形式存在時，該第一成分可以為咖啡因，該第二成分則為迷迭香酸、山奈酚、槲皮素、氯化飛燕草素、與芹菜素之至少一者。於本發明一具體實施態樣中，係以咖啡因作為第一成分、且以迷迭香酸作為第二成分而結合成一加合物。於本發明另一具體實施態樣中，係以咖啡因作為第一成分、且以山奈酚作為第二成分而結合成一加合物。於本發明又一具體實施態樣中，係以咖啡因作為第一成分、且以槲皮素作為第二成分而結合成一加合物。於本發明再一具體實施態樣中，係以咖啡因作為第一成分、且以氯化飛燕草素作為第二成分而結合成一加合物。於本發明再一具體實施態樣中，係以咖啡因作為第一成分、且以芹菜素作為第二成分而結合成一加合物。

於本發明之部分具體實施態樣中，可透過先將選定之第一成分與第二成分溶於溶劑中，其後再將溶劑自反應混合物中移除以提供一用於本發明組合物之加合物。其中，該溶劑之例子包括，但不限於，甲苯、二硫化碳、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、及水。視需要地，可於移除混合物中之溶劑之前進行加熱、迴流等操作，以促進加合物之形成。

根據本發明所提供之組合物係可用於治療及／或預防失智症，包含退化性失智症、血管性失智症、混合型失智症以及可逆型失智症。其中，退化性失智症的例子包括，但不限於，阿茲海默症、帕金森氏症、額顳葉型失智症、及路易氏體失智症。

根據本發明所提供之組合物可以是一醫藥組合物或一食品組合物。其中，該醫藥組合物可呈任何合宜的形式，並無特殊限制，端視所欲之用途而呈對應之合宜劑型。舉例言之，但不以此為限，該根據本發明所提供之組合物可呈一經口服、經直腸、經皮、經眼部、經呼吸道、經皮下、經肌肉、或經靜脈投藥之劑型，以施用至有需要之個體。

根據本發明所提供之醫藥組合物可經由全身或局部投藥，且可透過各種藥物傳遞系統（drug delivery system，DDS）進行傳遞，包括口服藥物傳遞系統（oral drug delivery system）、直腸藥物傳遞系統（rectal drug delivery system）、經皮藥物傳遞系統（transdermal drug delivery system）、眼部藥物傳遞系統（ophthalmic drug delivery system）、吸入性藥物傳遞系統（inhalation drug delivery system）等。本發明所提供之組合物亦可以輸注、注射、植入、或手術的方式進行投藥。舉例言之，但不以此為限，該根據本發明所提供之醫藥組合物可以藉由微脂體（liposome）、微膠囊（microcapsule）、奈米微粒（nanoparticle）、微針（microneedle）等系統進行傳遞，以達到提高生物利用率、控制藥物釋放速度、針對病灶精準投藥、減少藥物副作用等效果。

視使用形式及用途而定，可選用合宜之載劑以提供該醫藥組合物，其中，該載劑的例子包括，但不限於，賦形劑、稀釋劑、輔助劑、安定劑、吸收延遲劑、崩散劑、增溶劑、乳化劑、抗氧化劑、黏合劑、結合劑、增黏劑、分散劑、懸浮化劑、潤滑劑、及吸濕劑。

以適於口服之劑型為例，可於根據本發明所提供之醫藥組合物中含有任何不會不利影響活性成分（即，第一成分及第二成分）之所欲效益之醫藥上可接受載劑，例如：水、食鹽水、葡萄糖（dextrose）、甘油、乙醇或其類似物、纖維素、澱粉、糖膨潤土（sugar bentonite）、油（例如橄欖油、蓖麻油、棉籽油、花生油、玉米油、及胚芽油）、聚乙二醇、及前述之組合。可利用任何合宜之方法，將該組合物以適於口服投藥的劑型提供，例如：錠劑（例如糖衣錠）、丸劑、膠囊劑、粉劑、顆粒劑、散劑、流浸膏劑、溶液劑、糖漿劑、懸液劑、酊劑等。

有關經直腸投藥之醫藥組合物，亦可於其中含有任何不會不利影響活性成分（即，第一成分及第二成分）之所欲效益之醫藥上可接受載劑，例如：乳糖、玉米澱粉、滑石、纖維素、粉狀蔗糖、硬脂酸鎂、甘露糖醇、輕矽酐、碳酸鎂、碳酸鈣、L-半胱氨酸、澱粉、蔗糖、明膠、阿拉伯樹膠粉末、甲基纖維素、羧甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、支鏈澱粉、糊精、及前述之組合。可利用任何合宜之方法，將該醫藥組合物以適於直腸投藥的劑型提供，例如：膠囊劑、錠劑、溶液劑、栓劑等。

有關經皮投藥之醫藥組合物，亦可於其中含有任何不會不利影響活性成分（即，第一成分及第二成分）之所欲效益之醫藥上可接受載劑，例如：水、礦物油、丙二醇、聚氧化乙烯、液體石蠟脂、去水山梨醇單硬脂酸酯、及聚山梨醇酯60。可利用任何合宜之方法，將該醫藥組合物以適於經皮投藥的劑型提供，例如乳液（例如按摩乳液）、乳霜（例如按摩霜）、油狀物（例如按摩油）、凝膠（例如水凝膠）、膏狀物（例如分散膏、軟膏）、洗劑、噴霧劑、及貼片（例如微針貼片）等形式提供，但不以此為限。

有關經眼部投藥之醫藥組合物，亦可於其中含有任何不會不利影響活性成分（即，第一成分及第二成分）之所欲效益之醫藥上可接受載劑，例如：界面活性劑、黏度調節劑、滲透壓調節劑、緩衝劑、及水。可利用任何合宜之方法，將該醫藥組合物以適於經眼部投藥的劑型提供，例如乳劑、油劑、凝膠、軟膏、溶液劑、懸浮劑等形式提供，但不以此為限。

有關經呼吸道投藥之醫藥組合物，亦可於其中含有任何不會不利影響活性成分（即，第一成分及第二成分）之所欲效益之醫藥上可接受載劑，例如：糖類、醇類、氨基酸類、磷脂類、界面活性物質、環糊精類、高分子物質（例如：聚乳酸甘醇酸（poly-lactide-co-glycolide，PLGA））、助流劑、抗氧化劑、檸檬酸及其鹽、及磷酸鹽。視需要地，可使用任何合宜之方法將該醫藥組合物氣霧化，以利該組合物進入呼吸道中。舉例言之，但不以此為限，該醫藥組合物可經由霧化器（nebulizer）、噴霧器而施用。

至於適於皮下、肌肉、腹腔、或靜脈內注射之針劑或點滴劑型，則可於該醫藥組合物中含有一或多種例如等張溶液、鹽類緩衝液（如磷酸鹽緩衝液或檸檬酸鹽緩衝液）、增溶劑、乳化劑、5%糖溶液、二甲基乙醯胺（dimethyl acetamide，DMA）、聚乙二醇100（PEG100）、PEG200、PEG300、PEG400、苯甲酸苄酯（benzyl benzoate）、苯甲醇（benzyl alcohol）、聚氧乙烯蓖麻油（cremophor）、N-甲基吡咯烷酮（N-Methyl-2-pyrrolidone）、以及其他載劑等成分，以靜脈輸注液、乳劑靜脈輸注液、乾粉注射劑、懸液注射劑、或乾粉懸液注射劑等劑型提供該醫藥組合物。或者，將該醫藥組合物製備成一注射前固體，以可溶於其他溶液或懸浮液中之劑型、或可乳化之劑型提供該注射前固體，並於投予至有需要之個體之前，將該注射前固體溶於其他溶液或懸浮液中或將其乳化，以提供所欲之注射劑。

至於適於皮下植入、或組織間植入之劑型，則可於本發明所提供之醫藥組合物中另含有一或多種例如賦形劑、安定劑、緩衝劑、以及其他載劑等成分，以例如晶片（wafer）、錠劑、丸劑、膠囊等劑型提供，從而得以將該醫藥組合物植入一個體中。

根據本發明所提供之組合物係可以一日一次、一日多次、或數日一次等不同頻率施用，端視投予個體之需求、年齡、體重、健康況狀、及施用目的而異。可以任何合宜的用量施用本發明所提供之組合物，端視投予個體之需求而異。舉例言之，當以口服方式施用至一個體以治療及／或預防失智症時，以第二成分計，為每天37.5毫克至50克，較佳為每天300毫克至50克。惟，對於失智情形較嚴重之患者而言，其用量可視實際需要而酌增。此外，亦可視實際應用需求，調整第一成分及第二成分於該組合物中的含量。

視需要地，可於根據本發明所提供之醫藥組合物或食品組合物中另含有合宜用量之添加劑，例如可提高該組合物於服用時的口適感及視覺感受之調味劑、調色劑、著色劑等，以及可改善該組合物的穩定性及儲存性之緩衝劑、保存劑、防腐劑、抗菌劑、抗真菌劑等。此外，該組合物可視需要另含一或多種其他活性成分，以進一步加強組合物之功效或增加製劑配方的運用靈活性與調配度，只要該其他活性成分對本發明活性成分（即，第一成分及第二成分）之效益沒有不利的影響即可。

根據本發明所提供之食品組合物可以是健康食品、保健食品、機能性食品、營養補充食品或特殊營養食品，且可製成例如乳製品、肉類加工品、麵包類、麵食品、餅乾、口含錠、膠囊、果汁類、茶類、運動飲料、營養飲料等產品，但不以此為限。

根據本發明所提供之健康食品、保健食品、機能性食品、營養補充食品及特殊營養食品係可以一日一次、一日多次、或數日一次等不同頻率食用，端視投予個體之年齡、體重、及健康狀況而異。亦可針對特定族群調整根據本發明所提供之健康食品、保健食品、機能性食品、營養補充食品及特殊營養食品中第一組分及第二組分的含量，較佳為調整至每日應服用的量。舉例言之，以第二成分之總重量計，若一個體之建議攝取量為每日總量為500毫克之第二成分，又該保健食品每份含總量為250毫克之第二成分，則該個體每日可食用二份該保健食品。

可於根據本發明所提供之健康食品、保健食品、機能性食品、營養補充食品及／或特殊營養食品之外包裝標示建議使用量、特定族群（例如失智症患者、癌症患者、孕婦等）的使用標準及條件、或與其他食品或醫藥共同服用的建議事項，以利使用者在無醫師、藥師或相關執事人員指導下可在家自行服用而無安全疑慮。

如上述，本發明亦提供一種治療及／或預防失智症的方法，其係包含對一有需要之個體投予一有效量之上述組合物。前述該有需要之個體係指，罹患失智症、及／或有罹患失智症之高風險的個體。於前述方法中，所採用之組合物之投予態樣、投予途徑、投予形式、施用頻率、以及相關應用，亦如上述之說明。

本發明亦提供一種使用上述組合物於製備一用於治療及／或預防失智症之藥劑的用途。於前述用途中，所採用之組合物之投予態樣、投予途徑、投予形式、施用頻率、以及相關應用，亦如上述之說明。

實施例

[ 製備實施例 ]

A. 動物模式之建立

將SD（Sprague-Dawley）雄性大鼠（年齡：2-4個月；體重：300-500克）分為五組，分別以如下條件進行處理： (1) 「控制」組（正常大鼠；即，非失智症之大鼠，共4隻）：飼養於透明鼠籠（容積：43x23x20立方公分；溫度：25±1˚C；晝夜時間：各12小時，分別於早上6點及晚上6點亮燈及暗燈；不限制飲水及飲食）中，歷時8週。 (2) 「FAB」組（失智症模式大鼠，共7隻）：(i) 將大鼠麻醉後固定於立體定位儀上；(ii) 將大鼠頭骨上方的皮膚及肌肉剪開；(iii) 以頭骨十字縫作為定位點，並依據大鼠腦部定位圖譜（Paxions and Watson, 1988）將Brain infusion kit 2（購自Alzet）的注射針植入側腦室（區域座標：前／後：-1毫米、側：1毫米、深度：4.5毫米）；(iv) 將填充有FAB溶液（包含：15微莫耳／升之Aβ_1-42 蛋白、1毫莫耳／升之硫酸亞鐵（FeSO₄ ）、及12毫莫耳／升之丁硫氨酸-亞碸亞胺（buthionine sulfoximine，BSO））的Osmotic pump（購自Alzet）連接上注射針，並縫合於大鼠背部的皮下位置；(v) 將大鼠飼養於透明鼠籠中，歷時8週，期間持續灌流FAB溶液。 (3) 「配方1」組（共3隻）：比照「FAB」組之步驟進行，但於步驟(v)之第2週開始，每天以腹腔注射的方式，對大鼠額外投予500毫克／公斤體重之配方1組合物（含有：10重量%薑黃素、10重量%EGCG、5重量%芹菜素、以及75重量%N-甲基吡咯烷酮（N-Methyl-2-pyrrolidone）溶液）。 (4) 「配方2」組（共5隻）：比照「FAB」組之步驟進行，但於步驟(v)之第2週開始，每天以腹腔注射的方式，對大鼠額外投予500毫克／公斤體重之配方2組合物（含有：5重量%薑黃素、10重量%EGCG、5重量%花青素、0.1重量%咖啡因、以及79.9重量%N-甲基吡咯烷酮溶液）。 (5) 「配方3」組（共4隻）：比照「FAB」組之步驟進行，但於步驟(v)之第2週開始，每2天以腹腔注射的方式，對大鼠額外投予大鼠500毫克／公斤體重之配方3組合物（含有：5重量%薑黃素、10重量%EGCG、5重量%蔥醌、0.1重量%咖啡因、以及79.9重量%N-甲基吡咯烷酮溶液）。

B. 樣品採集

將[製備實施例A]所提供之各組大鼠麻醉（腹腔注射0.5毫升／100克體重之7%水合氯醛（7% chloral hydrate））後固定於木板上，並以下述步驟處理，以提供後續實驗所需之樣品： (a) 以心臟採血的方式抽取3-6毫升的血液； (b) 將腹腔、橫膈膜及胸腔剪開，暴露出心臟後，將灌流管插入左心室並進入升主動脈、將右心耳剪開以釋放血液，再以生理食鹽水替換血液； (c) 以2%三氯甲醛（paraformaldehyde，溶於0.1M之磷酸鹽緩衝液（Phosphate Buffer，PB），pH值7.3）進行灌流，以固定組織； (d) 待組織固定完成，將頭骨剪開並取出大腦組織；以及 (e) 將前述大腦組織放入添加有0.1M PB緩衝液之培養皿中，再以震盪切片機（vibratome，TPI，St. Louis, Missouri）以冠狀切片方式取出如下組織(1)-(4)：組織(1)：自注射點位置起1000微米之腦組織厚切片（包含內側中隔核（medial septal nucleus））；組織(2)：自大腦海馬迴前端起1500微米之腦組織厚切片（包含海馬迴）；組織(3)：自切下組織(2)之位置再切2片350微米的腦組織切片；以及組織(4)：剩餘組織。

[ 動物實驗 ]

實施例 1 ：本發明組合物對海馬迴中 CA1 區域之 A β_1-42 蛋白沉積的影響

已知失智症患者腦中會有大量的Aβ_1-42 蛋白沉積，這些不正常的蛋白沉積會導致腦部神經訊息的傳導被破壞，進而造成患者認知功能及記憶功能的損傷。為了解本發明組合物是否可以有效降低Aβ_1-42 蛋白的沉積，係進行以下實驗。

（ 1-1 ）切片處理

取[製備實施例B]所提供之各組大鼠的組織(2)（包括「控制」組、「FAB」組、「配方1」組、「配方2」組及「配方3」組），以4%三氯甲醛（溶於0.1M之磷酸鹽緩衝液）溶液固定1天後，浸泡於30%蔗糖溶液（溶於0.1M之磷酸鹽緩衝液）中，並以冷凍切片機將其連續切片成30微米厚之切片。

（ 1-2 ）染色處理

將（1-1）所提供之切片移入含有10% NGS（normal horse serum）及0.1% Triton之0.1M PBS中，反應1小時後，將切片移入含有兔抗-Aβ_1-42 抗體（rabbit anti-Aβ_1-42 antibody）（1：100）及1% NGS的PBS中，置於4˚C下反應20小時。其後，切片以0.1M PBS清洗3次，並置入含有山羊抗-兔抗體（goat anti-rabbit antibody）（1：200）及1% NGS的PBS中，於室溫下反應1小時後，再以PBS清洗3次。

（ 1-3 ）呈色處理

將（1-2）所提供之切片移入含有0.05% DAB（3,3-diaminobenzidine tetrahydrochloride，購自Sigma, St. louis, Missouri）及0.01% H₂ O₂ 之0.05M Tris緩衝液（pH 7.4）中，置於室溫下反應至DAB呈色物質出現。接著，切片以0.05M Tris緩衝液清洗1次，並以0.1M PBS清洗2次。

（ 1-4 ）封片及觀察

將（1-3）所提供之切片依序貼於載玻片上，陰乾後依序以85%、95%、以及100%（體積／體積）酒精脫水、再以二甲苯透明化。接著，以Permount及蓋玻片進行封片。最後，以10倍目鏡、40倍物鏡觀察，並拍攝3片隨機切片之右腦。結果示於圖1A至1E、並以圖1F顯示將圖1A至圖1E之結果量化後的長條圖。

（ 1-5 ）結果分析

由圖1A至1F可知，相較於「控制組」，「FAB」組之海馬迴中CA1區域的Aβ_1-42 蛋白沉積密度較高，顯示FAB溶液會增加Aβ_1-42 蛋白之沉積，誘發失智症。另一方面，相較於「FAB」組，「配方1」組之海馬迴中CA1區域的Aβ_1-42 蛋白沉積密度不僅沒有降低，甚至增加。然而，相較於「FAB」組，「配方2」組及「配方3」組之海馬迴中CA1區域的Aβ_1-42 蛋白沉積密度則明顯較低。

前述結果顯示，本發明含有第一成分及第二成分之組合物（例如「配方2」及「配方3」）確實可有效降低失智症模式大鼠之Aβ_1-42 蛋白沉積密度，幫助恢復腦部神經訊息傳導，有助於失智症患者之認知功能及記憶功能的恢復。

實施例 2 ：本發明組合物對海馬迴中 CA1 區域之小神經膠質細胞密度的影響

已知小神經膠質細胞係巨噬細胞的一種，其負責在中樞神經系統中進行吞噬作用，清除病原體或受損的神經元。由於失智症患者的腦部有許多受損的神經元與不正常的蛋白質堆積，因此，小神經膠質細胞會持續聚集並處於活化的狀態，而釋放促發炎物質。然而，過量的促發炎物質亦會造成神經元受損，加劇失智症的症狀。為了解本發明組合物是否可以有效抑制小神經膠質細胞的聚集與活化，係進行以下實驗。

（ 2-1 ）切片處理

取[製備實施例B]所提供之各組大鼠的組織(2)（包括「控制」組、「FAB」組、「配方1」組、「配方2」組及「配方3」組），比照（1-1）之方式進行處理。

（ 2-2 ）染色處理

將（2-1）所提供之切片移入含有10% NRS（Normal rabbit serum）及0.1% Triton之0.1M PBS中，反應1小時後，將切片移入含有山羊抗-Ibal抗體（goat anti-Ibal antibody）（1：1000）及1% NRS之PBS中，並置於4˚C下反應18小時。其後，切片以0.1M PBS清洗3次，並置入含有兔抗-山羊抗體（rabbit anti-goat antibody）（1：200）及1% NRS之PBS中，於室溫下反應1小時後，再以PBS清洗3次。接著，將切片移入含有抗生物素蛋白-生物素-辣根過氧化物酶複合物（Avidin-Biotin-HRP complex；購自：Vector, Burlingame, California）之0.1 M PBS中，反應1小時。

（ 2-3 ）呈色處理

取（2-2）所提供之切片，比照（1-3）之方式進行呈色處理。

（ 2-4 ）封片及觀察

將（2-3）所提供之切片依序貼於載玻片上，陰乾後依序以85%、95%、以及100%（體積／體積）酒精脫水、再以二甲苯透明化。接著，以Permount及蓋玻片進行封片。最後，以10倍目鏡、20倍物鏡觀察，並拍攝3片隨機切片之右腦海馬迴CA1顆粒層。結果示於圖2A至2E、並以圖2F顯示將圖2A至圖2E之結果量化後的長條圖。。

（ 2-5 ）結果分析

由圖2A至2F可知，相較於「控制」組，「FAB」組之海馬迴中CA1區域的小神經膠質細胞密度較高。另一方面，相較於「FAB」組，「配方1」組之海馬迴中CA1區域的小神經膠質細胞的密度不僅沒有降低，甚至增加。然而，相較於「FAB」組，「配方2」組及「配方3」組之海馬迴中CA1區域的小神經膠質細胞密度則明顯較低。

前述結果顯示，本發明含有第一成分及第二成分之組合物（例如「配方2」及「配方3」）確實可有效抑制失智症模式大鼠之小神經膠質細胞的聚集與活化，故可防止失智症患者的神經元繼續受損，減緩失智症患者的症狀。

實施例 3 ：本發明組合物對海馬迴中 CA1 區域之錐狀神經細胞之存活率 的影響

已知海馬迴與記憶的儲存密切相關，海馬迴CA1區域之錐狀神經細胞的退化或死亡，容易導致失智症的發生。一般咸信，若可提升錐狀神經細胞的存活率，將有助於延緩失智症的發病。為了解本發明組合物是否可以有效提升海馬迴CA1區域之錐狀神經細胞的存活率，係進行以下實驗。

（ 3-1 ）切片處理

取[製備實施例B]所提供之各組大鼠的組織(4)（包括「控制」組、「FAB」組、「配方1」組、「配方2」組及「配方3」組），比照（1-1）之方式進行處理。

（ 3-2 ）染色處理

委託台灣中興大學獸醫系診斷中心，對（3-1）所提供之切片進行H&E染色處理。結果示於圖3A至3E、並以圖3F顯示將圖3A至圖3E之結果量化後的長條圖。

（ 3-3 ）結果分析

由圖3A至3F可知，相較於「控制」組，「FAB」組之海馬迴中CA1區域的錐狀神經細胞的存活率較低。然而，相較於「FAB」組，「配方2」組之海馬迴中CA1區域的錐狀神經細胞的存活率明顯較高，「配方1」組及「配方3」組則無明顯差異。

前述結果顯示，本發明含有第一成分及第二成分之組合物（例如「配方2」）確實可有效提升失智症模式大鼠之錐狀神經細胞的存活率，有助於延緩失智症的發病。

實施例 4 ：本發明組合物對海馬迴中 CA1 區域之錐狀神經細胞之遠端頂端樹突的樹突棘密度 的影響

已知樹突是神經細胞負責接收訊息的構造，樹突上的樹突棘密度越高，訊息的接收越順暢。當樹突棘密度降低，將導致認知功能及記憶功能下降。為了解本發明組合物是否可以有效提升樹突棘的密度，係進行以下實驗。

（ 4-1 ）細胞內染料注射（ 可參見Chen等人之文獻，The effect of epidural compression on cerebral cortex: a rat model.J Neurotrauma .2003 Aug; 20(8): 767-780.）

取[製備實施例B]所提供之各組大鼠的組織(3)（包括「控制」組、「FAB」組、「配方1」組、「配方2」組及「配方3」組），置於含有10^-7 M DAPI（4,6-diamidino-2-phenyl-indole，購自：Sigma, St. louis, Missouri）之0.1M PB緩衝液中，反應30分鐘。接著，將組織置於直徑2公分之承載槽內、並以中間有方形洞的濾紙壓住組織。然後，以含有DAPI之0.1M PB緩衝液浸潤該組織，再將承載槽置於正立螢光顯微鏡（固定載物檯，購自：Olympus, Tokyo, Japan）下。以20倍目鏡觀察切片，可觀察到因DAPI染色而發出藍色螢光的細胞核（390-420, FT425, LP450）。

以外徑／內徑為1.0／0.75毫米之硼矽玻璃管（購自：WPI, Florida）及玻璃電極製作器（型號：P87/PC、購自：Sutter, San Rafael, California）拉製玻璃電極。將LY染料（Lucifer yellow，購自：Sigma, St. louis, Missouri）填充入玻璃電極中，填充長度1公分。將填有染料的電極架上水壓式三軸向微距操作器（3-axial hydraulic micromanipulator，購自：Narishige, Tokyo, Japan）的銀絲電極，再將電極連接至微量電流控制器（Axoclamp，購自：Axon, Foster city, California）。

在螢光顯微鏡下，將玻璃電極利用三軸向微距操作器刺入體感覺運動皮質第五層及海馬迴CA1錐體神經細胞的細胞體。利用微量負電流將染料注入細胞內，直至整個細胞的樹突末端都充滿染料為止。為避免震動，用於前述操作的整套儀器係固定於防震桌上。完成染色的組織以4%三氯甲醛（溶於0.1M PB緩衝液中）溶液固定一天以上。

（ 4-2 ）切片處理

取（4-1）所提供之組織，依序以下列不同濃度的蔗糖（溶於0.1M PB緩衝液中）溶液浸泡：5%蔗糖溶液（20分鐘）；20%蔗糖與10%甘油溶液（20分鐘）；20%蔗糖與10%甘油溶液（20分鐘）。待組織下沉後，以冷凍切片機進一步將組織切成60微米厚之連續切片。

（ 4-3 ）染色處理

將（4-2）所提供之切片移入含有2%牛血清蛋白（Bovine serum albumin，購自：Sigma, St. louis, Missouri）的0.1M PBS中反應1小時。接著，將切片移入含有生物素化之兔抗LY（biotinylated rabbit anti-LY）抗體（1：400，購自：Molecular Probes, Eugene, Oregon）及2%牛血清蛋白的PBS中，於4˚C下反應18小時。其後，切片以0.1M PBS沖洗3次（每次10分鐘），再置入含有生物素蛋白-生物素-辣根過氧化物酶複合物的0.1M PBS中反應1小時。然後，以0.1M PBS沖洗切片2次（每次10分鐘）、以0.05M Tris緩衝液沖洗切片1次（每次10分鐘）。

（ 4-4 ）呈色處理

取（4-3）所提供之切片，比照（1-3）之方式進行呈色處理。

（ 4-5 ）封片及觀察

將（4-4）所提供之切片依序貼於載玻片上，陰乾後依序以85%、95%、以及100%（體積／體積）酒精脫水、再以二甲苯透明化。接著，以Permount及蓋玻片進行封片。最後，以100倍之油鏡觀察各組切片、並隨機拍攝15個樹突片段，並以10微米為一單位計算海馬迴CA1的椎體細胞遠端頂端樹突的樹突棘密度。結果示於圖4A至4E、並以圖4F顯示將圖4A至圖4E之結果量化後的長條圖。

（ 4-6 ）結果分析

由圖4A至4F可知，相較於「控制」組，「FAB」組之海馬迴中CA1區域椎體細胞的遠端頂端樹突的樹突棘密度較低。另一方面，「配方1」組、「配方2」組及「配方3」組之海馬迴中CA1區域椎體細胞的遠端頂端樹突的樹突棘密度皆高於「FAB」組。

前述結果顯示，本發明含有第一成分及第二成分之組合物（例如「配方2」及「配方3」）確實可有效提升失智症模式大鼠椎體細胞之遠端頂端樹突的樹突棘密度，有助於失智症患者之認知功能及記憶功能的恢復。

實施例 5 ：本發明組合物對於內側中隔核中膽鹼性神經元數量 的影響

已知膽鹼性神經元負責分泌腦中重要的神經傳導物質，乙醯膽鹼。當膽鹼性神經元數量減少，乙醯膽鹼的分泌量隨之下降，造成記憶功能衰退，從而導致失智症的發生。一般咸信，若可提升內側中隔核中膽鹼性神經元的數量，將有助於防止記憶功能衰退。為了解本發明組合物是否可以有效提升膽鹼性神經元的數量，係進行以下實驗。

（ 5-1 ）切片處理

取[製備實施例B]所提供之各組大鼠的組織(1)（包括「控制」組、「FAB」組、「配方2」組及「配方3」組），比照（1-1）之方式進行處理。

（ 5-2 ）染色處理

將（5-1）所提供切片移入含有10% NHS（Normal horse serum）及0.1% Triton之0.1M PBS中，反應1小時後，將切片移入含有山羊抗-ChAT抗體（goat anti-ChAT antibody）（1：100）及1% NHS之PBS中，並置於4˚C下反應18小時。其後，切片以0.1M PBS清洗3次，再置入含有兔抗-山羊抗體（rabbit anti-goat antibody）（1：200）及1% NHS之PBS中，於室溫下反應1小時後，再以PBS清洗3次。

（ 5-3 ）呈色處理

取（5-2）所提供之切片，比照（1-3）之方式進行呈色處理。

（ 5-4 ）封片及觀察

將（5-3）所提供之切片依序貼於載玻片上，陰乾後依序以85%、95%、以及100%（體積／體積）酒精脫水、再以二甲苯透明化。接著，以Permount及蓋玻片進行封片。最後，以10倍目鏡、10倍物鏡觀察，並拍攝3片隨機切片之右腦。結果示於圖5A至5D、並以圖5E顯示將圖5A至圖5D之結果量化後的長條圖。

（ 5-5 ）結果分析

由圖5A至5E可知，相較於「控制」組，「FAB」組的內側中隔核中膽鹼性神經元數量明顯較低。然而，相較於「FAB」組，「配方2」組及「配方3」組的內側中隔核中膽鹼性神經元數量皆明顯較高。

前述結果顯示，本發明含有第一成分及第二成分之組合物（例如「配方2」及「配方3」）確實可有效提升失智症模式大鼠內側中隔核中膽鹼性神經元的數量，有助於防止失智症患者的記憶功能衰退。

[ 人體實驗 ]

實施例 6 ：本發明組合物對失智症患者的影響

（ 6-1 ）患者 #1

表1係行為評估-神經精神量表（NPI-Q），評估者係針對患者的行為以及精神狀態進行評估（共有12個項目，且依嚴重性及發生頻率進行評分）。評估-神經精神量表（NPI-Q）的得分可作為失智程度的分類標準，其中，得分為10分以下屬於「正常」、得分為10至40屬於「輕度至中度失智症」、得分為40分以上則屬於「中度至重度失智症」。

使一阿茲海默症患者每天服用2顆膠囊（每顆膠囊中含有400毫克之本發明組合物，成分及比例分別為：薑黃素=24.9重量%、EGCG=49.7重量%、花青素=24.9重量%、咖啡因=0.5重量%），持續三個月。分別於實驗開始時（即，尚未服藥前）、實驗開始一個月（即，持續服藥一個月）、及實驗結束時（即，持續服藥三個月）紀錄該患者的NPI-Q分數。結果示於下表1。

表1

	妄想	幻覺	激動／攻擊行為	憂鬱／情緒不佳	焦慮	怡然自得／欣快感	冷漠／毫不在意	言行失控	暴躁易怒／情緒易變	異常動作	夜晚行為問題	食慾／飲食障礙	總分
服藥前	2	0	0	4	0	0	12	0	0	0	12	12	42
服藥一個月	0	0	0	0	0	0	12	0	0	0	12	12	36
服藥三個月	0	0	0	1	0	0	0	0	0	0	8	0	9

由表1可知，相較於尚未服藥時，服用本發明組合物一個月即可有效改善患者的行為以及精神狀態。持續服用本發明組合物三個月更可將患者的NPI-Q分數降低至低於10分（即，可視為「正常」）。前述結果顯示，本發明含有第一成分及第二成分之組合物確實可有效治療及／或預防失智症。

（ 6-2 ）患者 #2

使一阿茲海默症患者每天服用2顆膠囊（每顆膠囊中含有400毫克之本發明組合物，成分及比例分別為：薑黃素=24.9重量%、EGCG=49.7重量%、花青素=24.9重量%、咖啡因=0.5重量%），持續五個月。分別於實驗開始時（即，尚未服藥）、及實驗結束時（即，持續服藥五個月）紀錄該患者於以下評估的得分：認知功能評估量表（Mini-Mental State Examination，MMSE）、簡易心智狀態問卷（Short Portable Mental State Questionnaire，SPMSQ）、行為功能評估量表（Behavior Test）、情緒狀態評估量表（Geriatric Depression Scale，GDS）、巴氏量表（Barthel index）、工具性日常生活活動量表（Instrumental Activities of Daily Living，IADL）。結果示於下表2。

表2

量表分數	MMSE	SPMSQ	行為功能評估量表	GDS	巴氏量表	IADL
尚未服藥	18	3	0	4	100	82.5%
服藥五個月	18	2	0	4	100	77.5%

其中，SPMSQ的評估項目包含定向感、個人基本資料、遠程記憶力及計算力等（總計10題；每答錯一題，分數增加1分）。IADL則係用於評估較複雜、需要較高能力的生活料理事項（包括購物、洗衣、處理財務等；每項雖皆可分為3至5等級，但得分則僅以「1」或「0」計算，例如：會洗所有的個人衣物、與只會洗小件衣物雖被分為不同等級，但皆視為具有洗衣能力，故得分皆為「1」）。為使最後所呈現之IADL分數能更精確反應患者的狀況，係以完全不具有獨立生活之能力（即，每項生活料理事項皆被分為最高等級）之患者作為100%，評估受試者之IADL百分比，百分比越低表示受試者越具有獨立生活之能力。

由表2可知，受試者持續服用本發明組合物五個月後，其SPMSQ分數及IADL百分比皆明顯下降。前述結果顯示，患者持續服用本發明組合物五個月即可於記憶力、獨立生活之能力等不同面向獲得有效改善。

[ 加合物合成 ]

實施例 7 ：第一成分與第二成分結合成一加合物

（ 7-1 ）第一成分：咖啡因／第二成分：迷迭香酸（ Rosemaric acid ）

於室溫下，將0.1毫莫耳（milimol）之迷迭香酸（溶於甲苯中）與較其稍微多一些（較迷迭香酸多出10%（莫耳數／莫耳數））之咖啡因混合，其後將所獲得之混合物置於含有2至3毫升甲苯之10毫升圓形燒瓶中，再將該燒瓶置於迴流裝置下，加熱至60˚C，反應1小時（於此期間，定時自混合物中抽取一小部分進行薄層層析法（Thin layer chromatography）檢測），以獲得透過氫鍵結合而形成的咖啡因迷迭香酸鹽（Caffeinium rosemarinate）加合物。前述加合反應之示意如下：

咖啡因迷迭香酸加合物。

反應結束後，待混合物冷卻至室溫，將其分成兩份，分別進行以下二種操作，以分離出所形成之咖啡因迷迭香酸鹽加合物。其中一份以冷凍乾燥法去除溶劑，接著，將所獲得之固體加入石油醚（light petroleum ether）中搖晃混合，以去除過量咖啡因，最後，進行離心並於50˚C下乾燥至恆重。另一份以石油醚進行稀釋，並取出沉澱於下方之鹽類，接著，將所獲得之固體加入石油醚中搖晃混合，以去除過量咖啡因，最後，進行離心並於50˚C下乾燥至恆重。

（ 7-2 ）第一成分：咖啡因／第二成分：山奈酚（ Kaempferol ）

於室溫下，將0.1毫莫耳（milimol）之山奈酚（溶於甲苯中）與較其稍微多一些（較山奈酚多出10%（莫耳數／莫耳數））之咖啡因混合，其後將所獲得之混合物置於含有2至3毫升甲苯之10毫升圓形燒瓶中，再將該燒瓶置於迴流裝置下，加熱至60˚C，反應1小時（於此期間，定時自混合物中抽取一小部分進行薄層層析法檢測），以獲得透過氫鍵結合而形成之山奈酚-咖啡因加合物。前述加合反應之示意如下：

咖啡因山奈酚加合物。

反應結束後，待混合物冷卻至室溫，對其進行以下操作，以分離出上述反應所形成之加合物。以冷凍乾燥法去除大部分的溶劑，接著，將剩餘的混合物以製備型薄層層析法進行純化，以去除過量之咖啡因。將起始點上的層帶（band）刮除，並以甲苯清洗，最後，進行過濾及離心並於50˚C下乾燥至恆重。

（ 7-3 ）第一成分：咖啡因／第二成分：槲皮素（ Quercetin ）

在氮氣氛圍、室溫下，將槲皮素（101.46毫克，0.3毫莫耳）、咖啡因（58.23毫克，0.3毫莫耳）與2毫升之甲醇混合攪拌，歷時12小時，以獲得一混合物。將固體過濾出後，置於真空且150˚C之環境下乾燥3小時，即可獲得透過氫鍵結合之槲皮素-咖啡因加合物「QUECAF」（熔點：245.95˚C）。前述加合反應之示意如下：

咖啡因槲皮素加合物。

以Gold S53 UV-VIS光譜儀（spectrometer），對槲皮素及上述槲皮素-咖啡因加合物進行測量，以獲得二者之UV-VIS圖譜，結果示於圖6。如圖6所示，相較於槲皮素（紅線），槲皮素-咖啡因加合物（藍線）在250奈米及300奈米波長處的吸光度皆較低。

（ 7-4 ）第一成分：咖啡因／第二成分：氯化飛燕草素（ Delphinidin chloride ）

在氮氣氛圍、室溫下，將氯化飛燕草素（66.3毫克，0.1毫莫耳）、咖啡因（19.4毫克，0.1毫莫耳）與1毫升之水混合攪拌，歷時16小時，以獲得一混合物。以冷凍乾燥法去除溶劑後，即可獲得透過氫鍵結合之「氯化飛燕草素-咖啡因加合物（Delphinidin chloride-caffeine adduct）」（須避光儲存）。前述加合反應之示意如下：

咖啡因飛燕草素加合物。

（ 7-5 ）第一成分：咖啡因／第二成分：芹菜素（ Apigenin ）

在氮氣氛圍、室溫下，將芹菜素（81.07毫克，0.3毫莫耳）、咖啡因（58.23毫克，0.3毫莫耳）與2毫升之甲醇混合攪拌，歷時12小時，以獲得一混合物。將固體過濾出後，置於真空且150˚C之環境下乾燥3小時，即可獲得透過氫鍵結合之芹菜素-咖啡因加合物「Apigenin-caffeine adduct」。前述加合反應之示意如下：

咖啡因芹菜素加合物。

以Gold S53 UV-VIS光譜儀（spectrometer），對芹菜素及上述芹菜素-咖啡因加合物進行測量，以獲得二者之UV-VIS圖譜，結果示於圖7。如圖7所示，相較於芹菜素（紅線），芹菜素-咖啡因加合物（藍線）在250奈米及300奈米波長處的吸光度皆較低。

於前述實施例中所提及之百分比（%），除非特別註明，否則係表示重量／體積（w/v）百分比。舉例言之，30%蔗糖溶液係指體積為100毫升之溶液（包含溶質及溶劑）中含有30克之蔗糖。

上述動物實驗結果顯示，本發明含有第一成分及第二成分之組合物（其中，該第一分子與第二分子視需要可以結合成一加合物）確實可有效降低Aβ_1-42 蛋白沉積密度、抑制小神經膠質細胞的聚集與活化、提升錐狀神經細胞的存活率、提升椎體細胞遠端頂端樹突的樹突棘密度、提升內側中隔核中膽鹼性神經元的數量，故具有防止神經元受損、幫助恢復腦部神經訊息傳導、防止失智症患者的記憶功能衰退、幫助恢復認知及記憶功能、減緩失智症患者的症狀、及延緩失智症的發病的功效。此外，人體實驗結果顯示，本發明含有第一成分及第二成分之組合物可有效改善失智症患者的行為以及精神狀態、以及改善患者的記憶力及獨立生活之能力。因此，本發明組合物可用於治療及／或預防失智症。

圖1A至圖1F係顯示本發明組合物對海馬迴中CA1區域之Aβ_1-42 蛋白沉積的影響，其中，圖1A係未經處理的SD大鼠，即「控制」組；圖1B係以FAB（ferrous amyloid buthionine）溶液灌流處理的SD大鼠，即「FAB」組；圖1C係以FAB溶液灌流處理，並以包含薑黃素、表沒食子兒茶素沒食子酸酯及芹菜素之組合物進行腹腔注射的SD大鼠，即「配方1」組；圖1D係以FAB溶液灌流處理，並以包含薑黃素、表沒食子兒茶素沒食子酸酯、花青素及咖啡因之組合物進行腹腔注射的SD大鼠，即「配方2」組；圖1E係以FAB溶液灌流處理，並以包含薑黃素、表沒食子兒茶素沒食子酸酯、蔥醌及咖啡因之組合物進行腹腔注射的SD大鼠，即「配方3」組；圖1F顯示將圖1A至圖1E之結果量化後的長條圖（比例尺：50微米；*表示與控制組有顯著差異，p＜0.05；#表示與FAB組有顯著差異，p＜0.05）。

圖2A至圖2F係顯示本發明組合物對海馬迴中CA1區域之小神經膠質細胞密度的影響，其中圖2A至圖2E係分別顯示上述「控制」組、「FAB」組、「配方1」組、「配方2」組及「配方3」組之結果的照片圖，圖2F顯示將圖2A至圖2E之結果量化後之的長條圖（比例尺：100微米；*表示與控制組有顯著差異，p＜0.05）。

圖3A至圖3F係顯示本發明組合物對海馬迴中CA1區域之錐狀神經細胞之存活率的影響，其中圖3A至圖3E係分別顯示上述「控制」組、「FAB」組、「配方1」組、「配方2」組及「配方3」組之結果的照片圖，圖3F顯示將圖3A至圖3E之結果量化後之長條圖（比例尺：100微米；*表示與控制組有顯著差異，p＜0.05；#表示與FAB組有顯著差異，p＜0.05）。

圖4A至圖4F係顯示本發明組合物對海馬迴中CA1區域之錐狀神經細胞之遠端頂端樹突（distal apical dendrite）的樹突棘（dendritic spine）密度的影響，其中圖4A至圖4E係分別顯示上述「控制」組、「FAB」組、「配方1」組、「配方2」組及「配方3」組之結果的照片圖，圖4F顯示將圖4A至圖4E之結果量化後之長條圖（比例尺：10微米；*表示與控制組有顯著差異，p＜0.05；#表示與FAB組有顯著差異，p＜0.05）。

圖5A至圖5E係顯示本發明組合物對內側中隔核（medial septal nucleus）中膽鹼性神經元數量的影響，其中圖5A至圖5D係分別顯示上述「控制」組、「FAB」組、「配方2」組及「配方3」組之結果的照片圖，圖5E顯示將圖5A至圖5D之結果量化後之長條圖（比例尺：200微米；*表示與控制組有顯著差異，p＜0.05；#表示與FAB組有顯著差異，p＜0.05）。

圖6係顯示槲皮素及本發明槲皮素-咖啡因加合物之UV-VIS圖譜，其中紅線為槲皮素之圖譜、藍線為槲皮素-咖啡因加合物之圖譜。

圖7係顯示芹菜素及本發明芹菜素-咖啡因加合物之UV-VIS圖譜，其中紅線為芹菜素之圖譜、藍線為芹菜素-咖啡因加合物之圖譜。

Claims

一種組合物，其係包含一第一成分與一第二成分，其中，該第一成分係黃嘌呤（xanthine）及其衍生物之至少一者，該第二成分係二苯基庚烷類（diarylheptanoid）、二苯基庚烷類之衍生物、兒茶素（catechin）、兒茶素之酯類、類黃酮（flavonoid）、及異類黃酮（isoflavonoid）之至少一者，且該第一成分係視需要與該第二成分以結合成一加合物之形式存在。
如請求項1之組合物，其中該第一成分係以下之至少一者：咖啡因（caffeine）、胺茶鹼（aminophylline）、異丁基-1-甲基黄嘌呤（3-Isobutyl-1-methylxanthine，IBMX）、副黄嘌呤（paraxanthine）、配妥西菲林（pentoxifylline）、可可鹼（theobromine）、及茶鹼（theophylline）。
如請求項1之組合物，其中該二苯基庚烷類係薑黃素（curcumin）。
如請求項1之組合物，其中該二苯基庚烷類之衍生物係以下之至少一者：類薑黃素（curcuminoid）、去甲氧薑黃素（demethoxycurcumin）、及去二甲氧薑黃素（bisdemethoxycurcumin）。
如請求項1之組合物，其中該兒茶素之酯類係表沒食子兒茶素沒食子酸酯（epigallocatechin gallate，EGCG）。
如請求項1之組合物，其中該類黃酮係以下之至少一者：芹菜素（apigenin）、花青素（anthocyanin）、蔥醌（anthraquinone）、槲皮素（quercetin）、木犀草素（luteolin）。
如請求項1之組合物，其中該異類黃酮係以下之至少一者：染料木黃酮（genistein）、黃豆甘原（daidzein）、及甘胺黃酮（glycitein）。
如請求項1之組合物，其係更包含一第三成分，其係以下之至少一者：類胡蘿蔔素（carotenoid）、玉米黃素（zeaxanthin）、番茄紅素（lycopene）、胡蘿蔔素（carotene）、藏花酸（carotenoid crocetin）、類胡蘿蔔酸（carotenoid acid）、及ω-3脂肪酸。
如請求項1之組合物，其中以該第一成分及該第二成分之總重量計，該第一成分佔0.025至25重量百分比。
一種使用如請求項1至9中任一項之組合物於製備一用於治療及／或預防失智症之藥劑的用途。
如請求項10之用途，其中該失智症係以下之至少一者：阿茲海默症、及帕金森氏症。