TW202009297A - 新穎貪婪丙酸桿菌菌株以及用於預防或治療異位性皮膚炎之包含該菌株或其培養物的組合物 - Google Patents

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Abstract

本發明係關於貪婪丙酸桿菌(Cutibacterium avidum)GENSC01菌株(KCTC 13596BP)。本發明亦係關於包含該菌株或其培養物之組合物，及其用途。本發明可有效地改善、預防或治療異位性皮膚炎、痤瘡或由細粉塵導致之皮膚發炎。

Description

新穎貪婪丙酸桿菌菌株以及用於預防或治療異位性皮膚炎之包含該菌株或其培養物的組合物
本申請案主張基於2018年8月23日提交之韓國專利申請案第10-2018-0098879號之優先權益，並且該申請案中揭示之全部內容以引用方式併入本文。本發明係關於新分離、鑑別並且針對其功效來進行評價之新菌株及其培養物。另外，本發明係關於包含此新菌株或其培養物的組合物。更具體而言，本發明係關於具有各種效應諸如皮膚改善效應及其類似效應之化妝品組合物，該組合物包含新穎菌株或其培養物。
當皮膚中之發炎反應由物理刺激或化學品、細菌及其類似物引起時，該發炎反應作為抗禦皮膚破壞的作用而開始，並且牽涉到各種免疫細胞及發炎誘導細胞介素。IL-6(介白素-6)、IL-8(介白素-8)、IL-1β(介白素-β)及類似物質為代表性發炎誘導細胞介素。
例如，對於發炎細胞介素之刺激作出反應，在各種細胞諸如末梢血液單核球、組織巨噬細胞、NK細胞、纖維母細胞、血管內皮細胞、及其類似細胞中誘導IL-8表現。與增加之(例如，過度)IL-8水準相關之發炎疾病包括發炎疾病諸如發炎性角化病(例如，牛皮癬)、異位性皮膚炎、接觸性皮膚炎、及其類似疾病。
異位性皮膚炎(atopic dermatitis; AD)為伴隨有發癢之發炎皮膚病，並且其為慢性的並且其通常在嬰兒期開始。AD具有不斷發癢作為主要症狀，並且具有沒有特定原因的反覆康復及惡化之性質。儘管最近對於AD進行了許多研究，但是直到現在AD之病因還不清楚。
異位性皮膚炎中之金黃色葡萄球菌(S. aureus) 之增殖最早在二十世紀七十年代的一項研究中得到描述。在許多研究中，已報導在異位性皮膚炎患者之30%至100%病灶中發現金黃色葡萄球菌之增殖。
已知金黃色葡萄球菌作用於上皮細胞以破壞皮膚屏障功能或充當T細胞上之超抗原來誘導發炎反應。
已經報導金黃色葡萄球菌之移生及發炎代表性地誘導異位性皮膚炎及濕疹性皮膚炎之惡化並且在作為長期慢性發炎而進展時引起哮喘及食物過敏的研究。另外，已報導在針對患有皮膚疾病諸如毛囊炎、癤病、膿皰瘡、甲溝炎、臁瘡及其類似疾病之患者來培養之微生物中大量地偵測到金黃色葡萄球菌。已知金黃色葡萄球菌在臨床上與除了異位性疾病以外之各種發炎性皮膚疾病相關(1. Atopic dermatitis and the atopic march. J. Allergy Clin. Immunol.2003, 2. Antibiotic susceptibility of Staphylococcus aureus strains responsible for community-acquired skin infections. Ann Dermatol Venereol. 2008)。
因此，預期提前抑制異位性皮膚炎患者之金黃色葡萄球菌之增殖可以藉由預防疾病惡化或降低疾病之嚴重性而有積極作用。
在此項技術中，眾所周知絲聚蛋白之缺乏及絲聚蛋白基因之修飾與異位性皮膚炎之發生及進展密切相關。絲聚蛋白係包含在構成皮膚屏障之角質細胞中之保濕成分，並且係在與蛋白質諸如角蛋白、苞蛋白、兜甲蛋白、及其類似蛋白質一起形成角質層中起重要作用之蛋白質。絲聚蛋白表現量之減少引起皮膚屏障之功能及保濕之變化並且導致各種病變。具體而言，正常皮膚屏障之形成在針對外部刺激之防禦中起重要作用，並且當此功能喪失時，此情況在異位病之進展中起關鍵作用。絲聚蛋白係有效改善異位性皮膚炎之靶標，因為抗原經由皮膚之吸收係異位性皮膚炎增加中之重要因素。
此外，在一項最近研究中，已報導密連蛋白1基因(密連蛋白1，CDN1 )之表現異常以及異位性皮膚炎患者之絲聚蛋白之效應與異位性皮膚炎密切相關。藉由絲聚蛋白及密連蛋白1基因之正常表現，可能強化皮膚屏障功能並且增強皮膚之保水性及皮膚保濕效應。
另一方面，已知貪婪丙酸桿菌(Cutibacterium avidum) 為源自皮膚菌群之細菌中之一者，並且直到現在，被認為係許多感染之致病細菌(病原體)。
[技術問題]
因此，為了解決以上問題，本發明提供新穎貪婪丙酸桿菌菌株，該菌株在過去僅被認為係病原體。
本發明提供使用在過去僅被認為係病原體之新穎貪婪丙酸桿菌菌株、或其培養物來改善皮膚症狀的組合物。
本發明提供貪婪丙酸桿菌GENSC01菌株或其培養物，及包含其之組合物，並且提供貪婪丙酸桿菌GENSC01菌株或其培養物之新穎用途。
本發明提供貪婪丙酸桿菌GENSC01菌株或其培養物用於改善、治療或減輕異位性皮膚炎、痤瘡或發炎性皮膚疾病之用途。本發明提供包含貪婪丙酸桿菌GENSC01菌株或其培養物的用於改善、治療或減輕異位性皮膚炎、痤瘡、或發炎性皮膚疾病之組合物。具體而言，提供用於改善、治療或減輕由細粉塵造成之發炎性皮膚疾病的組合物。
另外，本發明藉由組合使用迷迭香酸來消除菌株之異味而用作化妝品組合物。
本發明藉由組合使用迷迭香酸而提供比金黃色葡萄球菌或痤瘡桿菌更增強抗細菌活性，並且提供由金黃色葡萄球菌或痤瘡桿菌產生之生物膜之移除活性。
本發明提供在與迷迭香酸組合使用時具有極好細胞生存力之貪婪丙酸桿菌GENSC01菌株。
本發明提供包含貪婪丙酸桿菌GENSC01菌株或其培養物的用於皮膚保濕之化妝品組合物。 [技術解決方案]
本發明之一實施例提供貪婪丙酸桿菌GENSC01菌株(登錄號KCTC 13596BP)。
本發明之一實施例提供貪婪丙酸桿菌GENSC01菌株(登錄號KCTC 13596BP)之培養物。
直到現在，貪婪丙酸桿菌被認為係導致感染性疾病之病原體。然而，引起關注地，已確認本發明之GENSC01菌株或其培養物具有皮膚狀況改善之效應，由此完成本發明。
菌株可具有對由微生物產生之生物膜進行進行移除或抑制形成之效應，並且可具有抗細菌活性。
菌株可有助於改善皮膚之保水性，並且可有助於改善皮膚保濕效應。
根據本發明之一實施例，本發明之貪婪丙酸桿菌GENSC01菌株為駐留在皮膚中之微生物，並且已經由16S rDNA序列分析及API測試來確認其為屬貪婪丙酸桿菌之新穎菌株。菌株在2018年7月24日寄存在韓國生物科學及生物技術研究所韓國菌種保存中心(KCTC)並且獲得登錄號KCTC 13596BP。
根據一實施例，本發明之一實施例之貪婪丙酸桿菌GENSC01菌株或其培養物可顯示針對金黃色葡萄球菌或痤瘡桿菌之抗細菌活性。在另一實施例中，其可具有對由金黃色葡萄球菌產生之生物膜進行移除或抑制形成之活性。
金黃色葡萄球菌之移生及感染可導致異位性皮膚炎、膿皰病、異位性皮膚炎之惡化、繼發性濕疹感染、及各種皮膚炎症。金黃色葡萄球菌之移生及感染可導致異位性皮膚炎、毛囊炎、膿皰病、蜂窩組織炎、毛囊炎性脫髮、臁瘡、乳房炎、及其類似疾病或使該等疾病惡化，但是本發明之貪婪丙酸桿菌GENSC01菌株或其培養物可抑制金黃色葡萄球菌之生長，並且抑制由金黃色葡萄球菌產生之生物膜之形成。
在一個實施例中，本發明之貪婪丙酸桿菌GENSC01菌株或其培養物可不僅展現微生物之生長之抑制效應，而且展現對由微生物產生之生物膜進行移除或抑制形成之效應。
在一個實施例中，貪婪丙酸桿菌GENSC01菌株或其培養物可具有抑制、改善或治療異位性皮膚炎、痤瘡或發炎性皮膚疾病之活性。具體而言，提供改善、治療或減輕由細粉塵導致之發炎性皮膚疾病的組合物。
在一個實施例中，本發明提供包含貪婪丙酸桿菌GENSC01菌株或其培養物作為活性成分之抗微生物組合物。
在一個實施例中，本發明提供治療、預防或改善異位性皮膚炎、痤瘡或發炎性皮膚疾病之組合物，其包含貪婪丙酸桿菌GENSC01菌株或其培養物作為活性成分。具體而言，提供改善、治療或減輕由細粉塵導致之發炎性皮膚疾病的組合物。
本發明之術語「培養物」意謂藉由在一段時間內、在能夠供應營養素以使得貪婪丙酸桿菌GENSC01菌株可生長並存活之培養基中培養菌株來獲得之包含菌株、菌株提取物、其代謝物、額外營養素及類似物質之總培養基，但是包括在培養菌株之後將菌株消除之培養液。
培養液可僅意謂除了藉由將其留置一段時間而導致下沉的底層以外，所收集之上層液體，或微生物細胞經由過濾來移除之培養液，或僅意謂經離心以移除下部沉澱物之上部液體。
培養液可藉由以常見方法來濃縮而用作濃縮物。
培養液或培養液之濃縮物可藉由以常見方法來乾燥而作為乾燥材料來提供。
除非另外提及，否則本文提及之「培養物」可包括微生物細胞之培養液、培養液之濃縮物、培養液或濃縮物之乾燥材料。在一些情況下，培養物可包含微生物細胞，並且可不包含它，並且是否包含微生物細胞不特別造成問題。
「微生物細胞」意謂本發明之菌株本身，並且包括經分離及選擇之菌株本身或藉由培養菌株而自培養液中分離之菌株。微生物細胞可藉由藉助於離心來收集底部沉下部分而獲得，或可藉由將其留置一段時間並且移除上部液體來獲得，因為由於重力而導致該細胞沉下至培養液之底層。
根據一實施例，本發明之貪婪丙酸桿菌GENSC01菌株之培養物可在用於微生物培養之培養基之中使用容易由熟習此項技術者根據目的來選擇之培養基，並且較佳地，可使用用於桿菌 培養之培養基，並且更佳地，可使用RCM(增強梭菌培養基)培養基、TSB(胰蛋白酶大豆肉湯)或BHI(腦心浸液)培養基，但是不限於此。
根據本發明之一特定實施例，本發明之貪婪丙酸桿菌GENSC01菌株之培養物可藉由藉助於在此項技術中已知之微生物培養方法(例如，靜置培養等)將本發明之菌株接種在微生物培養基中來製備。
貪婪丙酸桿菌GENSC01菌株之培養物可包括培養液或培養液之濃縮物、及其乾燥材料，並且濃縮物或乾燥材料可藉由在此項技術中已知之微生物或培養液之濃縮或乾燥方法來容易地製備。
本發明之一實施例提供包含貪婪丙酸桿菌GENSC01菌株或其培養物之組合物，並且較佳地提供化妝品組合物、食品組合物或醫藥組合物。
化妝品組合物或醫藥組合物可用作皮膚外用製劑，並且可直接塗佈至患病區域。例如，可製備成各種形式諸如軟膏、乳劑、乳狀液及其類似形式。
在其他實施例中，醫藥組合物可藉由經口或非經腸投與來吸收至體內，並且例如，可以非限制性形式諸如散劑、顆粒劑、膠囊劑、注射劑及其類似形式來投與。
化妝品組合物或醫藥組合物之形式不特別受到限制。
化妝品組合物可抑制或改善異位性皮膚炎或發炎性皮膚疾病。
化妝品組合物可抑制或改善異位性皮膚炎或發炎性皮膚疾病。發炎性皮膚疾病之實例包括發炎性角化病(例如，牛皮癬)、葡萄球菌燙傷樣皮膚症候群、接觸性皮膚炎、細菌性皮膚炎、膿皰病、異位性皮膚炎之惡化、繼發性濕疹感染、毛囊炎性脫髮、臁瘡、乳房炎、毛囊炎、及其類似疾病。
化妝品組合物可具有針對金黃色葡萄球菌或痤瘡桿菌之抗細菌活性，或具有對由金黃色葡萄球菌或痤瘡桿菌產生之生物膜進行移除或抑制形成之活性。
本發明之一實施例提供包含貪婪丙酸桿菌GENSC01菌株(KCTC 13596BP)或其培養物之抗微生物組合物。
抗微生物組合物可具有針對金黃色葡萄球菌或痤瘡桿菌之抗微生物活性。
本發明之一實施例可與迷迭香酸一起使用貪婪丙酸桿菌GENSC01菌株(KCTC 13596BP)或其培養物。
本發明之一實施例可藉由一起使用迷迭香酸來減少GENSCO1菌株或其培養物之獨特氣味。
本發明之一實施例可藉由一起使用迷迭香酸來更有效地抑制金黃色葡萄球菌之生長。
意外地，在與本發明之GENSCO1菌株一起使用時，迷迭香酸係無毒的並且具有極好抗微生物活性。
本發明之一實施例提供包含貪婪丙酸桿菌GENSC01菌株(KCTC 13596BP)或其培養物、及迷迭香酸之化妝品組合物。
出於本發明之目的，組合物可包含1 : 0.000001至1 : 0.01之重量比之貪婪丙酸桿菌GENSC01菌株或其培養物、及迷迭香酸。
因為菌株之獨特氣味得以消除，所以化妝品組合物可用於各種化妝品。
本發明之一實施例提供用於皮膚保濕之化妝品組合物，該組合物包含貪婪丙酸桿菌GENSC01菌株(KCTC 13596BP)或其培養物。化妝品組合物可進一步包含迷迭香酸。 [有利效應]
本發明確認新穎貪婪丙酸桿菌菌株及其培養物可有效地改善、抑制或治療異位性皮膚炎症狀。另外，已確認新穎貪婪丙酸桿菌菌株及其培養物可有效地改善痤瘡。本發明提供改善、治療或減輕由細粉塵導致之發炎性皮膚疾病的組合物，該組合物包含新穎貪婪丙酸桿菌菌株及其培養物。
本發明確認新穎貪婪丙酸桿菌菌株，並且發現使用該菌株或其培養物來改善皮膚症狀的效應。因此，本發明可提供具有皮膚改善功能之新穎貪婪丙酸桿菌菌株。另外，本發明提供改善、治療或減輕異位性皮膚炎及發炎性皮膚疾病之組合物，該組合物包含新穎貪婪丙酸桿菌菌株、或其培養物。此外，藉由與迷迭香酸一起使用，本發明不僅能促進其使用之協同效應，而且消除菌株之獨特氣味。
[最佳模式]
在下文，本發明藉由以下實例及其類似實例來描述以便更具體地對本發明進行描述。然而，根據本發明之實例可修改成各種其他形式，並且本發明之範圍不應被視為限於以下描述之實例。示例性地提供本發明之實例以便促進本發明之具體理解。[ 實例 1] 分離及鑑別 貪婪丙酸桿菌 GENSC01 1-1. 分離菌株
源自皮膚之細菌分離自從未患有皮膚疾病諸如異位病、牛皮癬或痤瘡及其類似疾病，或在過去6個月中不具有與該等疾病相關之治療史的成人來執行。為了收集皮膚樣品，未洗滌的臉頰及鼻翼藉由以滅菌水來濕潤之無菌拭子用力擦試。將拭子直接密封在含有增強梭菌培養基(RCM)之試管中，並且試管用氮氣填充並且在37℃下培育48至72小時。藉由用白金環來採集含有培養拭子之試管之培養基，將該培養基塗抹在RCM瓊脂板上，並且此操作重複3至4次以分離純的菌落。 1-2. 鑑別菌株 1) 使用API套組之生物鑑別
作為生化鑑別經分離之菌株之方法，使用厭氧細菌API 20A套組(biomerieux Co., France)。在37℃下在10ml之RCM液體培養基中培養24小時、然後離心之後，將培養基移除。用PBS洗滌2至3次，然後使用包含在套組中之培養基、根據製造商提供之協定OD600 =3重懸之後，以合適量分裝至API 20A套組之每個孔並且在37℃下厭氧培養24小時，然後讀取。
最終結果在鑑別程式、API網路中鑑別，並且結果展示於下表1中。作為API 20A之鑑別結果，該菌株被鑑別為丙酸 / 貪婪丙酸桿菌(= 表皮桿菌 )(Propionibacterium(=Cutibacterium)propionicum/avidum) ，並且作為API ID32之結果，該菌株顯示與貪婪丙酸桿菌相同之生化性質。 [表1] API 20A讀取結果
Figure 108120891-A0304-0001
2) 藉由經由16s rRNA基因序列來收集經鑑別及分離之菌株之1ml之純培養液並且請求Macrogen，確定16s RNA基因序列。PCR引子為16s rRNA基因之通用引子，27F(5'-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3')及1492R(5'-TACGGYTACCTTGTTACGACTT-3')，並且785F(5'-GGATTAGATACCCTGGTA-3')及907R(5'-CCGTCAATTCMTTTRAGTTT-3')用於測序。經分離之菌株之16s rRNA序列展示在第1圖及SEQ ID NO：1中，並且此菌株顯示與貪婪丙酸桿菌之99%同源性。基於以上結果，菌株被命名為「貪婪丙酸桿菌 GENSC01」菌株，並且在2018年7月24日寄存在韓國生物科學及生物技術研究所韓國菌種保存中心(Korea Research Institute of Bioscience & Biotechnology Korean Collection for Type Cultures; KCTC)並且獲得登錄號KCTC 13596BP。[ 實例 2] 貪婪丙酸桿菌 GENSC01 之溶血測試
相當多的貪婪丙酸桿菌菌株具有溶血毒性並且視菌株而定，對人體係有害的。為了確認貪婪丙酸桿菌GENSC01之安全性，確認溶血毒性之存在或不存在。將在液體培養基中純態培養之貪婪丙酸桿菌GENSC01藉由白金環來收集並且塗抹在綿羊血液瓊脂上並且在37℃下厭氧培養48小時。溶血藉由微生物細胞周圍存在透明圈來確定，並且確定貪婪丙酸桿菌GENSC01對於綿羊血液不具有溶血並且因此對於人體係無害的，如可在第2圖中發現。[ 實例 3] 製備本發明之菌株之發酵濾液
貪婪丙酸桿菌GENSC01菌株在RCM瓊脂板上在37℃下厭氧培養72小時。將在固體培養基中展示之單一菌落在10ml之RCM液體培養基中繼代培養並且在相同條件下培養。72小時後，將0.1%接種至相同液體培養基，並且在相同條件下培養72小時，並且將上清液離心並且用0.22um孔徑濾器來過濾。[ 實例 4] 量測對於生物膜 ( 經選擇之有益細菌 ) 之形成之抑制效應
將金黃色葡萄球菌菌株(金黃色葡萄球菌KCTC 1621)在滴定培養基(TSB+0.2%葡萄糖)中液體培養16至24小時。將具有0.2%葡萄糖之TSB添加在6-孔板(聚苯乙烯)上之後，將測試組以大約5~10%體積添加至每個孔。然後，將培養細菌溶液接種至每個孔以使得最終菌株濃度為2ｘ106 CFU/孔。然後，在37℃恆溫箱中靜置培養24小時。培養之後，消除培養液並且每個孔使用1~2 ml之無菌PBS洗滌兩次。洗滌之後，添加2 ml之PBS並且生物膜用刮刀刮落並且懸浮，然後量測600 nm下之吸收率。吸收率量測使用BioPhotometer D30來進行。未處理的孔用作陰性對照組並且用黃芩素(25 μm/ml)接種之孔用作陽性對照組以計算生物膜形成抑制能力。
第3圖示出在菌株之間比較的生物膜形成抑制結果。如可在第3圖中看出，可發現GENSC01菌株與其他菌株相比具有極好生物膜形成抑制能力。
換言之，與相同種類之微生物相比，本發明之GENSC01與其他菌株相比具有極好生物膜形成抑制效應。因此，與使用其他菌株相比，本發明之菌株或其培養物可展現治療、改善或預防異位性皮膚炎、痤瘡或發炎性皮膚病之極好效應。[ 實例 5] 對於 金黃色葡萄球菌 KCTC 1621 及 痤瘡桿菌 ATCC 6919 之生長抑制 ( 重疊透明區測試 )
金黃色葡萄球菌及痤瘡桿菌之生長抑制效應藉由觀察透明區之形成來確認。當此等細菌接種在瓊脂培養基上時，細菌以淺色來生長，並且因此培養基之顏色變得渾濁，並且若細菌不生長，則培養基看似透明。在實驗進行時，預期若貪婪丙酸桿菌GENSC01具有抑制細菌生長之效應，則在貪婪丙酸桿菌GENSC01周圍，金黃色葡萄球菌及痤瘡桿菌可不生長並且培養基變得透明。貪婪丙酸桿菌GENSC01培養肉湯使用白金環來收集並且藉由繪製約2.5 cm之線，在薄RCM瓊脂板中在37℃下厭氧培養72小時。確認貪婪丙酸桿菌GENSC01充分生長之後，將調整至104 cfu/ml之金黃色葡萄球菌及痤瘡桿菌菌株接種在約45℃下尚未固化之10ml RCM瓊脂中，並且在培養基硬化之前將該等菌株完全懸浮，並且藉由將該等菌株傾倒至貪婪丙酸桿菌GENSC01生長之瓊脂板上，使該瓊脂均勻地固化。在固化瓊脂板中，金黃色葡萄球菌及痤瘡桿菌分別在37℃下進一步培養厭氧約40小時及約72小時，以便觀察出現在貪婪丙酸桿菌GENSC01周圍之透明區之尺寸。作為陰性對照組，使用磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)，並且作為陽性對照組，使用三氯生，並且金黃色葡萄球菌及痤瘡桿菌分別以10mg/ml及200mg/ml之量來處理。因此，如第4圖，觀察到貪婪丙酸桿菌GENSC01周圍之透明區，並且透明性隨著與貪婪丙酸桿菌GENSC01之距離而降低，由此確認貪婪丙酸桿菌GENSC01具有抑制金黃色葡萄球菌之生長之能力。可發現在處理陰性對照組PBS時，未觀察到透明區，並且在處理作為陽性對照組之殺細菌劑三氯生時，觀察到透明區，但是與GENSC01處理相比，該透明區具有小得多的面積。結果顯示於第4圖中。
另外，如可在第5圖中發現，由於接種痤瘡桿菌，觀察到貪婪丙酸桿菌GENSC01周圍之透明區，並且透明性隨著與貪婪丙酸桿菌GENSC01之距離而降低，由此確認貪婪丙酸桿菌GENSC01具有抑制痤瘡桿菌之生長之能力。另外，可發現在處理陰性對照組PBS時，未觀察到透明區，並且在處理作為陽性對照組之殺菌劑三氯生時，觀察到透明區，但是與GENSC01處理相比，該透明區具有小得多的面積。
經由此等結果，確認本發明之貪婪丙酸桿菌GENSC01可藉由抑制導致痤瘡之細菌痤瘡桿菌來提供改善、預防或治療痤瘡之效應。[ 實例 6] 細胞毒性確認
為了評估在實例3中製備之發酵濾液之細胞毒性，進行以下實驗。將HaCaT細胞以各自5x103 細胞/孔添加至96-孔細胞培養板上持續24小時，然後在濃縮狀態下添加測試組樣品以將該樣品在5% CO2 及37℃之條件下培養48小時。48小時後，將培養細胞培養基移除，並且用0.5 mg/ml 3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2-5-二苯基四唑鎓溴化物(MTT)甲臢溶液處理細胞，並且使其反應4小時，並且在時間過去之後，將所有細胞培養基移除並且甲臢溶液藉由DMSO溶解，然後在570nm下使用SpectraMax M2來量測吸收率。然後，HaCaT細胞株之存活率藉由用O.D樣品 /O.D對照 X 100之方程式進行轉化來計算。
如可在第6圖中發現，GENSC01之處理不顯著影響HaCaT細胞株之存活率。因此，可確認GENSCO1不具有細胞毒性。
另一方面，引起關注地，在添加迷迭香酸之實驗組的情況下，確認細胞存活率可得到增加。換言之，確認藉由添加迷迭香酸，可預期細胞毒性減少之效應。[ 實例 7] 確認皮膚屏障功能增強功效
為了研究GENSCO1發酵濾液除了抑制金黃色葡萄球菌生物膜之功效以外，對於HaCaT細胞株具有皮膚屏障增強之功能，將GENSCO1之發酵濾液以細胞培養物溶液之%來處理HaCaT細胞株，然後反應24小時以確認作為RNA上之皮膚屏障功能之標記物之絲聚蛋白及密連蛋白-1之表現。7-1. 確認絲聚蛋白之表現促進功效
如第7圖中示出，確認與陽性對照組維生素A酸(RA'，1μM)相比，發酵濾液之絲聚蛋白之表現度增加。第7圖示出發酵濾液之絲聚蛋白表現促進功效。GENSC01 0.01%、0.1%及1%分別得到處理。
如第7圖可以看出，可以看出與已知具有極好絲聚蛋白表現效應之維生素A酸(陽性對照組)相比，GENSCO1具有極好絲聚蛋白表現效應。經由此舉，GENSCO1可提供異位性皮膚炎改善效應、痤瘡改善效應、皮膚屏障增強效應、及皮膚含水量保持或藉由增加絲聚蛋白表現來增加效應。7-2. 確認密連蛋白 -1 之表現促進功效
如第8圖中示出，確認與陽性對照組維生素A酸(RA'，1 μM)相比，發酵濾液之密連蛋白表現度與濃度成比例地增加。第8圖示出發酵濾液之密連蛋白表現促進功效。
如第8圖可以看出，可以看出與已知具有極好密連蛋白表現效應之維生素A酸(陽性對照組)相比，GENSCO1具有極好密連蛋白表現效應。經由此舉，GENSCO1可提供異位性皮膚炎改善效應、痤瘡改善效應、皮膚屏障增強效應、及皮膚含水量保持或藉由增加密連蛋白表現來增加效應。[ 實例 8] 確認發癢減輕功效
藉由將GENSCO1之發酵濾液以%處理HaCaT細胞株，然後反應4小時，在RNA上確認作為異位性皮膚炎之病因之一之細胞介素TSLP之表現。如第9圖中示出，確認發酵濾液之TSLP表現度得以降低。因此，確認本發明之GENSCO1培養物抑制TSLP表現並且解決皮膚發癢，由此具有改善異位性皮膚炎之效應。[ 實例 9] 迷迭香酸之去臭效應 9-1. 製備製劑
首先，藉由使用發酵濾液及迷迭香酸，製備表2中所示之製劑(比較1，樣品1至3)並且研究去臭功能。藉由57個組來執行感官測試，並且測試結果展示為基於發酵濾液(5%)來進行之後之平均值。 [表2]
Figure 108120891-A0304-0002
 9-2. 評估結果 [評估準則] 1：沒有氣味。 2：少許氣味保留。 3：氣味保留。 4：大部分氣味保留。 5：沒有變化。 [表3]
Figure 108120891-A0304-0003
如表3所示，與GENSC01發酵濾液之單一處理相比，一起處理迷迭香酸之情形可有效地移除不良氣味。[ 實例 10] 量測生物膜形成抑制效應 ( 含有迷迭香酸 )
實驗方法與實例4之方法相同，量測迷迭香酸之生物膜形成抑制能力及發酵濾液之生物膜形成抑制能力之正性組合效應。
在分別處理迷迭香酸水溶液及發酵濾液時，與未處理的組相比，展示約35%的抑制金黃色葡萄球菌菌株之生物膜形成之效應。因為作為陽性對照之黃芩素處理組展示約30%抑制能力，所以展示了迷迭香酸及發酵濾液之效應具有與陽性對照相比類似或更好抑制能力的結果。另外，在發酵濾液及迷迭香酸水溶液混合的實驗組中(含有迷迭香酸A=0.01、B=0.1、C=0.5 mg/ml)，與空白組相比，分別展示50%、57%及62%生物膜形成抑制效應。
如第10圖中示出，確認與單獨地處理迷迭香酸水溶液及發酵濾液之情形相比，可更有效地抑制金黃色葡萄球菌菌株之生物膜形成能力。[ 實例 11] 抗炎症功效評估
首先，將GENSCO1發酵濾液預處理細胞1小時，其中藉由在37℃及5% CO2 恆溫箱中培養24小時，將2ｘ105 之HaCaT人類角化細胞株分別添加至6-孔板。然後，對熱處理的痤瘡桿菌(100MOI)進行處理並且反應4小時。然後，在提取每個樣品之RNA之後，發炎反應細胞介素因子IL-6及IL-8之RNA表現藉由即時PCR來確認。1. IL-8 表現率確認
因此，如第11圖中示出，證明與誘導痤瘡桿菌之對照組相比，在分別藉由培養物濾液及迷迭香酸水溶液來處理之組中發炎反應降低。另外，展示與單一處理相比，在培養物濾液及迷迭香酸水溶液之混合組合物中不發生發炎反應。2. IL-6 表現率確認
結果展示在第12圖中。確認在GENSCO1培養物濾液、迷迭香酸水溶液及培養物濾液及迷迭香酸水溶液之混合組合物中，IL-6之表現以類似水準降低。[ 實例 12] 評估針對細粉塵之抗發炎功效
首先，藉由用細粉塵(Aldrich) 50 ug/ml處理細胞2小時來誘導發炎，其中藉由在37℃及5% CO2 恆溫箱中培養24小時，然後沖洗3次，分別將6.5ｘ105 個HaCaT人類角化細胞株添加至6-孔板。然後，在處理GENSCO1發酵濾液1小時及2小時，然後提取每個樣品之RNA之後，發炎反應細胞介素因子IL-6之RNA表現藉由即時PCR來確認。結果展示在第13圖中。確認IL-6之表現藉由GENSCO1培養物濾液來顯著降低並且在處理2小時的情況下進一步降低。 [工業適用性]
本發明提供可用作化妝品組合物之新的貪婪丙酸桿菌菌株或其培養物。
本發明之菌株或培養物可用作化妝品組合物。 [登錄號] 寄存機構：韓國生物科學及生物技術研究所 登錄號：KCTC13596BP 寄存日期：20180724
無
第1圖示出本發明之貪婪丙酸桿菌GENSC01菌株(登錄號：KCTC 13596BP)之16s rRNA序列。
第2圖示出將本發明之貪婪丙酸桿菌GENSC01菌株塗抹在綿羊血液瓊脂上並且進行培養的結果。在微生物細胞周圍未發現透明圈，並且由此可發現其對於人體係無害的，因為沒有發生溶血。
第3圖係將不同菌株之間之對生物膜形成之抑制效應彼此進行比較之結果。
第4圖示出藉由貪婪丙酸桿菌GENSC01菌株來抑制金黃色葡萄球菌KCTC 1621之生長的結果。
第5圖示出藉由貪婪丙酸桿菌GENSC01菌株來抑制痤瘡桿菌ATCC 6919之生長的結果。
第6圖示出貪婪丙酸桿菌GENSC01菌株之發酵濾液之細胞毒性測試之結果。
第7圖示出貪婪丙酸桿菌GENSC01菌株之發酵濾液促進絲聚蛋白表現之功效。
第8圖示出貪婪丙酸桿菌GENSC01菌株之發酵濾液促進密連蛋白1表現之功效。
第9圖示出貪婪丙酸桿菌GENSC01菌株之發酵濾液減少TSLP表現。
第10圖示出與單獨處理其中之每一者之情況相比，在將貪婪丙酸桿菌GENSC01菌株之發酵濾液及迷迭香酸一起處理時，示出形成生物膜之抑制效應為極好的結果。
第11圖係在將貪婪丙酸桿菌GENSC01菌株之發酵濾液及迷迭香酸分別或一起處理時，確認IL-8表現率之結果。
第12圖係在將貪婪丙酸桿菌GENSC01菌株之發酵濾液及迷迭香酸分別或一起處理時，確認IL-6表現率之結果。
第13圖係確認貪婪丙酸桿菌GENSC01菌株之發酵濾液可有效地減少由細粉塵導致之發炎的結果。
國內寄存資訊 (請依寄存機構、日期、號碼順序註記) 貪婪丙酸桿菌 Cutibacterium avidum GENSC01： 財團法人食品工業發展研究所、108年9月12日、BCRC 910934
國外寄存資訊 (請依寄存國家、機構、日期、號碼順序註記) 貪婪丙酸桿菌 Cutibacterium avidum GENSC01： 韓國、Korean Collection for Type Cultures (KCTC)、2018年7月24日、KCTC 13596BP
Figure 12_A0101_SEQ_0001
Figure 12_A0101_SEQ_0002

Claims (14)

  1. 一種貪婪丙酸桿菌(Cutibacterium avidum) GENSC01菌株 (KCTC 13596BP)。
  2. 如請求項1所述之菌株，其中該貪婪丙酸桿菌GENSC01菌株或其培養物具有針對金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)或痤瘡桿菌(Cutibacterium acnes)之抗細菌活性，或具有對由金黃色葡萄球菌或痤瘡桿菌產生之生物膜進行移除或抑制形成之活性。
  3. 如請求項1所述之菌株，其中該貪婪丙酸桿菌GENSC01菌株具有抑制、改善或治療異位性皮膚炎或發炎性皮膚疾病之活性。
  4. 如請求項3所述之菌株，其中該發炎性皮膚疾病包括由細粉塵導致之皮膚發炎。
  5. 一種用於抑制或改善異位性皮膚炎、痤瘡或發炎性皮膚疾病之化妝品組合物，其包含貪婪丙酸桿菌GENSC01菌株(KCTC 13596BP)或其培養物。
  6. 如請求項5所述之化妝品組合物，其中該發炎性皮膚疾病包括由細粉塵導致之皮膚發炎。
  7. 如請求項5所述之化妝品組合物，其中該組合物具有針對金黃色葡萄球菌或痤瘡桿菌之抗細菌活性，或具有對由金黃色葡萄球菌或痤瘡桿菌產生之生物膜進行移除或抑制形成之活性。
  8. 如請求項5所述之化妝品組合物，其中該組合物進一步包含迷迭香酸。
  9. 如請求項8所述之化妝品組合物，其中該組合物包含1 : 0.000001至1 : 0.01之重量比的該貪婪丙酸桿菌GENSC01菌株或其培養物比迷迭香酸。
  10. 一種具有針對金黃色葡萄球菌或痤瘡桿菌之抗細菌活性之抗微生物組合物，其包含貪婪丙酸桿菌GENSC01菌株(KCTC 13596BP)或其培養物。
  11. 如請求項10所述之組合物，該抗微生物組合物進一步包含迷迭香酸。
  12. 一種用於皮膚保濕之化妝品組合物，其包含貪婪丙酸桿菌GENSC01菌株(KCTC 13596BP)或其培養物。
  13. 如請求項12所述之組合物，其中該用於皮膚保濕之化妝品組合物進一步包含迷迭香酸。
  14. 一種用於抑制、改善、或治療異位性皮膚炎、痤瘡、或發炎性皮膚疾病之醫藥組合物，其包含貪婪丙酸桿菌GENSC01菌株(KCTC 13596BP)或其培養物。
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