TW202003020A - 癌症疫苗組合物及其使用方法 - Google Patents

Abstract

本發明提供一種包含不活化癌細胞及佐劑之癌症疫苗組合物，其中該等不活化癌細胞不能複製。亦提供一種產生癌症疫苗組合物之方法，該方法包含使癌細胞與光(例如UV光)在光敏劑(例如核黃素)存在下接觸。

Description

癌症疫苗組合物及其使用方法

本發明大體上係關於抑制腫瘤生長及促進抗腫瘤免疫反應之組合物及方法。更特定言之，本發明係關於活化抗腫瘤之免疫系統之反應的癌症疫苗組合物及方法。本發明亦關於產生癌細胞疫苗之方法。

癌症免疫療法涉及組合物及方法引發及增強抗癌細胞或易患癌症之感染之個體之自身免疫系統的用途。癌症疫苗藉由觸發免疫系統建立對抗原(例如通常為蛋白質、肽或碳水化合物)之反應而起作用，該抗原以非致癌形式引入至身體中且觸發身體以賦予免疫性或獲得長期的「記憶」免疫反應。在建立免疫系統反應後，免疫系統暴露於此抗原(例如呈癌性腫瘤形式)引起快速且穩定之免疫反應。

癌症免疫療法之一個難題為臨床反應通常在一個患者至另一患者之間顯著不同。一些患者可具有顯著且持久之反應，而其他患者不產生明顯臨床益處。因此，此項技術中需要可以可靠且有效地刺激免疫系統作為癌症免疫治療劑之組合物。

本文提供一種癌症疫苗組合物，該組合物包含不活化癌細胞，其中該等不活化癌細胞不能複製。癌細胞可分離自或源於罹患一或多種類型之癌症之患者。

亦提供一種治療有需要之患者之癌症之方法，該方法包含向該患者投與本發明之癌症疫苗。

亦提供一種產生癌症疫苗組合物之方法，該方法包含在光敏劑(例如，核黃素)存在下用光(例如，UV光)處理癌症細胞。

亦提供用於治療癌症之方法之癌症疫苗組合物。

亦提供用作治療癌症之藥物之癌症疫苗組合物及該癌症疫苗組合物在製造治療癌症之藥物中之用途。以下更詳細地描述此等及其他態樣。

相關申請案之交叉參考

本申請案主張2018年11月5日申請之美國臨時申請案第62/755,741號、2018年6月21日申請之美國臨時申請案第62/688,051號及2018年3月21日申請之美國臨時申請案第62/645,975號之優先權，其各者出於所有目的以全文引用之方式併入本文中。

本文提供一種使用UV光及核黃素使細胞不活化且預防其複製之方法。此化學方法對細胞中存在之DNA/RNA具有特異性。因此，細胞DNA及/或RNA經修飾，同時在過程中使蛋白質(包括細胞表面抗原、酶等)不接觸。藉由預防複製過程同時保留細胞抗原及表型，經處理癌細胞製劑可用作疫苗組合物。抗原以其天然狀態存在於疫苗組合物之細胞上之事實可能將免疫反應增強至高於用意欲引發相同反應之單抗原或蛋白質調配物觀測到的程度。不活化全細胞與佐劑之組合進一步增強此免疫作用。

此技術可以自體或同種異體方式使用，亦即使用自患者分離之腫瘤細胞、癌症乾細胞製劑或在培養系統中生長之細胞等。在向患者投與時，全細胞疫苗減小腫瘤生長、減少癌轉移及延長存活時間。

因此，本文所述之技術提供分離、製備及向患者投與癌細胞疫苗之快速方法，從而在可與使用標準化學療法藥物匹敵之患者中產生反應。

除非另外定義，否則本文所用之所有技術及科學術語均具有與一般熟習本發明所屬領域者通常所理解相同的含義。本文實施方式中使用之術語僅出於描述特定實施例之目的，且並不意欲為限制性的。 定義

以下術語用於本文之描述及隨附申請專利範圍中：

除非上下文另外明確指示，否則單數形式「一(a/an)」以及「該(the)」亦意欲包括複數形式。

此外，如本文所用之術語「約」在提及可量測值(諸如量、劑量、時間、溫度及其類似者)時意謂涵蓋指定量之± 20%、± 10%、± 5%、± 1%、± 0.5%或甚至± 0.1%之變化形式。

亦如本文所用，「及/或」係指且涵蓋相關聯之所列項目中之一或多者的任何及所有可能組合，以及組合在替代方案(「或」)中加以解釋時缺乏。

除非上下文另外指示，否則尤其意欲本文所述之各種特徵可以任何組合使用。

如本文所用，術語「減小(reduce/reduces/reduction)」及類似術語意謂減少至少約10%、約15%、約20%、約25%、約35%、約50%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%、約97%或更多。

如本文所用，術語「增強(enhance/enhances/enhancement)」及類似術語指示增加至少約10%、約15%、約20%、約25%、約50%、約75%、約100%、約150%、約200%、約300%、約400%、約500%或更多。

術語「處理(treat/treating/treatment of)」(及其文法變化形式)意謂患者之病況之嚴重程度有所降低、至少部分地改善或穩定，及/或實現至少一種臨床症狀之一定緩解、減輕、減少或穩定，及/或疾病或病症之進展有延遲。

術語「預防(prevent/preventing/prevention)」(及其文法變化形式)係指相對於將在不存在本發明之方法下出現之疾病、病症及/或臨床症狀及/或嚴重程度，預防及/或延遲患者之疾病、病症及/或臨床症狀發作及/或疾病、病症及/或臨床症狀之發作之嚴重程度降低。預防可為完全的，例如完全不存在疾病、病症及/或臨床症狀。預防亦可為部分的，使得患者之疾病、病症及/或臨床症狀出現及/或發作嚴重程度小於將在不存在本發明之情況下出現之疾病、病症及/或臨床症狀及/或嚴重程度。

如本文所用之「治療有效量」係指在向患者投與以治療疾病或疾病之臨床症狀中之至少一種時足以影響疾病或其症狀之該治療的量。「治療有效量」可視例如疾病及/或疾病之症狀、疾病及/或疾病或病症之症狀之嚴重程度、所治療之患者之年齡、體重及/或健康狀況及開處方醫師之判斷而不同。任何給定情況下之適當量對於熟習此項技術者可為確定的或能夠藉由常規實驗確定。 癌症疫苗組合物

本文提供癌症疫苗組合物。該等組合物包含以下、基本上由以下組成或由以下組成：視情況與佐劑組合之不活化癌細胞。該等癌細胞藉由修飾其DNA及/或RNA，使其無能力複製而不活化。細胞DNA及/或RNA之修飾不殺死細胞，亦即癌症疫苗存活，複製不活化疫苗。由於維持細胞活力，所以疫苗向患者之免疫系統呈遞活的抗原靶。周邊接種刺激針對原發腫瘤及癌轉移之免疫反應。

在一些實施例中，癌症疫苗包含癌細胞、基本上由癌細胞組成或由癌細胞組成，該等癌細胞使用光化學方法不活化以使腫瘤細胞DNA及/或RNA複製不活化同時保留蛋白質結構及表型。在一些實施例中，癌細胞疫苗中之癌細胞之DNA及/或RNA包含經修飾之鹼基。舉例而言，在一些實施例中，疫苗中之癌細胞之DNA可包含經修飾之鳥嘌呤鹼基，諸如經氧化鳥嘌呤鹼基。

在一些實施例中，癌細胞為自體癌細胞。如本文所用，「自體」係指自投與疫苗之同一患者移除或源於該患者之細胞。在一些實施例中，癌細胞為同種異體細胞。如本文所用，「同種異體」係指自並非投與疫苗之患者之供體移除或源於該供體之細胞。

在一些實施例中，癌細胞來自罹患一或多種類型之癌症之患者。舉例而言，癌細胞可分離自或源於罹患癌症之患者。癌症可為實體腫瘤或液體腫瘤。癌細胞可分離自或源於原發腫瘤或轉移性腫瘤。癌症可為I期、II期、III期或IV期。在一些實施例中，癌細胞可源於罹患以下之患者：乳癌、肺癌、肝癌、膀胱癌、婦科癌症、腦癌、胃癌、前列腺癌、皮膚癌、甲狀腺癌、胰臟癌、結腸癌或血癌。在一些實施例中，皮膚癌為黑色素瘤。在一些實施例中，血癌為白血病、淋巴瘤或骨髓瘤。在一些實施例中，白血病為急性淋巴球性白血病或急性骨髓白血病。在一些實施例中，淋巴瘤為霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkin’s Lymphoma)或非霍奇金氏淋巴瘤。在一些實施例中，骨髓瘤為多發性骨髓瘤。

在一些實施例中，癌細胞源於永生化癌細胞株。如本文所用，「癌細胞株」係指源於癌症樣品之經轉型細胞株。通常，癌細胞株能夠在外植至適當宿主中後產生腫瘤。癌細胞株通常在離體保留與其源於之癌症相同之特性，包括例如分化缺失、接觸抑制缺失，且將在離體經歷基本上不受限制的細胞分裂。癌細胞株可包括已經基因修飾以例如表現使細胞由抗原呈遞細胞更好地識別的蛋白質之細胞株。

在一些實施例中，癌細胞為癌症乾細胞。

在一些實施例中，細胞源於非癌性但異常生長，亦即良性腫瘤或生長。

在一些實施例中，癌症疫苗包含以下、基本上由以下組成或由以下組成：白血細胞(例如，腫瘤相關巨噬細胞)、腫瘤相關內皮細胞、腫瘤相關纖維母細胞或任何其他腫瘤微環境中存在之細胞類型。

在一些實施例中，癌症疫苗組合物進一步包含佐劑。佐劑之作用為該等免疫反應。在一些實施例中，佐劑修飾單核球功能。

適合佐劑之實例包括皂素調配物、病毒顆粒、病毒樣粒子、腸內細菌脂多糖(LPS)之無毒衍生物、免疫刺激寡核苷酸(例如，含有CpG基元之免疫刺激寡核苷酸)、含有礦物質之組合物、油-乳液、聚合物、微胞形成佐劑(例如，脂質體)、免疫刺激錯合物基質(例如，ISCOMATRIX)、粒子、角鯊烯、磷酸酯、陽離子脂質體-DNA錯合物(CLDC)、DDA、DNA佐劑、γ胰島素、ADP核糖化毒素、ADP核糖化毒素之解毒化衍生物、弗氏完全佐劑(Freund’s complete adjuvant)、弗氏不完全佐劑、胞壁醯二肽、單磷醯基脂質A (MPL)、聚IC、CpG寡去氧核苷酸(ODN)、咪喹莫特(imiquimod)、佐劑系統AS01、佐劑系統AS02、佐劑系統AS03、MF59^® 及鋁或鋁鹽(例如，礬、磷酸鋁、氫氧化鋁)。其他適合佐劑包括TLR促效劑、NOD促效劑及脂質-DNA促效劑錯合物。

在一些實施例中，癌症疫苗組合物進一步包含一或多種促效劑或拮抗劑。

在一些實施例中，促效劑包含鐸樣受體(TLR)促效劑。在一些實施例中，TLR促效劑為TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9、TLR10、TLR11或TLR12之促效劑。在特定實施例中，促效劑為TLR3及/或TLR9促效劑。

在一些實施例中，拮抗劑為C-C趨化因子受體類型2 (CCR2)拮抗劑。

在一些實施例中，拮抗劑為血管收縮素受體阻斷劑(ARB)，諸如氯沙坦、替米沙坦(telmisartan)、依貝沙坦(irbesartan)、阿齊沙坦(azilsartan)、坎地沙坦(candesartan)、依普羅沙坦(eprosartan)、奧美沙坦(olmesartan)或纈沙坦(valsartan)。在一些實施例中，ARB以約5與約100 mg/kg之間、例如約5、約10、約15、約20、約25、約30、約35、約40、約45、約50、約55、約60、約65、約70、約75、約80、約85、約90、約95或約100 mg/kg之劑量投與。

在一些實施例中，癌症疫苗包含TLR促效劑、CCR2拮抗劑及ARB中之至少一種(亦即，一種、兩種或全部三種)。

在一些實施例中，促效劑或拮抗劑(例如，TLR3及/或TLR9促效劑)含於脂質體內或與脂質體偶聯。脂質體為由兩性脂質構成之球形自封閉小泡。脂質體可為具有一個脂質雙層膜之單層或具有兩個或更多個同心配置之雙層之多層。適合脂質體之選定平均粒度直徑可為約200-500 nm。製備脂質體及在其中囊封治療劑之各種方法有充分記載(參見例如美國專利第3,932,657號、第4,311,712號及第5,013,556號，其所有以引用之方式併入本文中)。已知方法包括如美國專利第4,235,871號中所述之逆相蒸發方法，其以引用之方式併入本文中。

用於形成本文所述之脂質體之脂質包括具有兩個烴鏈(通常為醯基鏈)及極性頭部基團之小泡形成脂質。此類別中包括磷脂，諸如磷脂醯膽鹼(PC)、磷脂醯乙醇胺(PE)、磷脂酸(PA)、磷脂醯肌醇(PI)及鞘磷脂(SM)，其中兩個烴鏈之長度通常介於約14-22個碳原子之間，且兩個烴鏈具有不同程度之不飽和度。脂質及比例之選擇可變化以實現所需程度之流動性或剛性，從而控制經包覆試劑之釋放速率。在使用超過一種類型之脂質時，可使用適合量之相對不飽和脂質(諸如PC)以形成穩定脂質體。在一個實施例中，至少45-50莫耳%之用於形成脂質體之脂質為PC。

脂質體亦可包括用諸如聚乙二醇(PEG)之親水性聚合物衍生之脂質。適合親水性聚合物包括聚乙烯吡咯啶酮、聚乙烯甲基醚、聚甲基噁唑啉、聚乙基噁唑啉、聚羥基丙基噁唑啉、聚羥基丙基甲基丙烯醯胺、聚甲基丙烯醯胺、聚二甲基丙烯醯胺、聚羥基丙基甲基丙烯酸脂、聚羥基乙基丙烯酸酯、羥甲基纖維素、羥乙基纖維素、聚乙二醇、聚天冬醯胺及親水性肽序列。製備用親水性聚合物衍生之脂質之方法為已知的(參見例如，美國專利第5,395,619號，其以引用之方式併入本文中)。

在一些實施例中，癌症疫苗包含陽離子脂質體-DNA錯合物(CLDC)。

在一些實施例中，癌症疫苗進一步包含光敏劑，諸如核黃素(維生素B2)。在一些實施例中，癌症疫苗實質上不含光敏劑。

在一些實施例中，癌症疫苗組合物進一步包含載劑。在一些實施例中，細胞及/或光敏劑懸浮於載劑中。在一些實施例中，載劑包含生理食鹽水(例如，0.9%氯化鈉)、右旋糖食鹽水(例如，含右旋糖5%之0.9%氯化鈉)、磷酸鹽緩衝食鹽水(例如，137 mmol/L NaCl、2.7 mmol/L KCl、10 mmol/L Na₂ HPO₄ 、2 mmol/L KH₂ PO₄ )。

在一些實施例中，癌症疫苗組合物進一步包含一或多種熟習此項技術者熟知之額外醫藥學上可接受之成分，包括但不限於醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑、賦形劑、佐劑、填充劑、緩衝劑、防腐劑、抗氧化劑、潤滑劑、穩定劑、增溶劑、、界面活性劑(例如，濕潤劑)、掩蔽劑、著色劑、調味劑及甜味劑。適合之載劑、稀釋劑、賦形劑等可見於標準醫藥學文本中。參見例如Handbook of Pharmaceutical Additives ,第2版(M. Ash及I. Ash編), 2001 (Synapse Information Resources, Inc., Endicott, New York, USA)、Remington ' s Pharmaceutical Sciences ,第20版出版Lippincott, Williams & Wilkins, 2000；及Handbook of Pharmaceutical Excipients ,第2版, 1994。 產生癌細胞疫苗之方法

本文所述之癌細胞疫苗在預防細胞複製過程同時保留抗原蛋白質結構之選擇性過程中使用無害化學劑產生。更特定言之，癌細胞疫苗藉由組合應用光敏劑及光以使癌細胞複製不足同時保留經處理細胞及蛋白質之其他生物功能來產生。用於產生及使用癌細胞疫苗之例示性流程顯示於圖 20 中。下文詳細描述產生本發明之癌症疫苗之方法。

首先，提供癌細胞。癌細胞可為自體的，亦即移除自或源於經疫苗接種之個體。在一些實施例中，癌細胞可為同種異體的。癌細胞亦可源於癌細胞株。

在一些實施例中，癌細胞為癌症乾細胞。在一些實施例中，癌症疫苗包含以下、基本上由以下組成或由以下組成：白血細胞(例如，腫瘤相關巨噬細胞)、腫瘤相關內皮細胞、腫瘤相關纖維母細胞或任何其他腫瘤微環境中存在之細胞類型。

在一些實施例中，癌細胞在不活化期間以單細胞懸浮液形式提供。在一些實施例中，細胞在不活化期間懸浮於培養基中。可使用之例示性培養基包括但不限於RPMI1640、MEM、DMEM、IMDM、DMEM-F12、Opti-MEM、Ham’s F12、Media 199或其組合。

隨後，使用光化學技術使癌細胞不活化。此使用可用作電子轉移劑之光敏劑實現。在DNA或RNA構築體中應用可置於接近於鳥嘌呤鹼基之激發態的光敏劑使得選擇性修飾(例如氧化、交聯、片段化、脫胺)此等鹼基。因為電子化學反應僅可在短距離內發生，所以感光劑必須與核酸結合或締合(亦即插入)以進行所需化學反應。

在一些實施例中，光敏劑為黃素(flavin)，例如核黃素(維生素B2)、黃素單核苷酸或黃素腺嘌呤二核苷酸。在一些實施例中，光敏劑為三級脂族胺(例如，1,4-二氮雜二環(2,2,2)辛烷)、哌嗪(例如，N-2-羥基乙基哌嗪-N'-2-乙磺酸及1,4-二甲基哌嗪)、胺基酸(例如，酪胺酸、色胺酸、組胺酸、甲硫胺酸)、酶(例如，超氧化歧化酶)或乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraacetic acid；EDTA)。在一些實施例中，光敏劑為核黃素。

將細胞添加至含有光敏劑(例如，核黃素)之溶液中，或將光敏劑添加至含有細胞之溶液(例如，培養基中之細胞之單細胞懸浮液)中。

在一些實施例中，在不活化期間使用之光敏劑之濃度為約10 µM至約100 µM，諸如約10 µM、約15 µM、約20 µM、約25 µM、約30 µM、約35 µM、約40 µM、約45 µM、約50 µM、約55 µM、約60 µM、約65 µM、約70 µM、約75 µM、約80 µM、約85 µM、約90 µM、約95 µM或約100 µM。在一些實施例中，溶液以約1 µM至約50 µM，諸如約2 µM、約3 µM、約4 µM、約5 µM、約6 µM、約7 µM、約8 µM、約9 µM、約10 µM、約15 µM、約20 µM、約25 µM、約30 µM、約35 µM、約40 µM、約45 µM或約50 µM之濃度含有光敏劑。在一些實施例中，光敏劑濃度低於約10 µM，諸如低於約9 µM、約8 µM、約7 µM、約6 µM、約5 µM、約4 µM、約3 µM、約2 µM或約1 µM。

含有光敏劑及細胞(視情況，在培養基中)之溶液隨後經歷光處理。光處理可包含用可見光、紫外光及/或紅外光之處理。光處理藉由修飾此等核酸之鹼基使癌細胞中之DNA及/或RNA不活化。在一些實施例中，鳥嘌呤鹼基經選擇性修飾。在一些實施例中，鳥嘌呤鹼基經選擇性氧化。經氧化鳥嘌呤鹼基無法藉由天然酶及細胞修復機制修復。因此，不可能將恢復細胞複製能力之形式的誘導變化之逆轉。

在一些實施例中，光處理包含用紫外(UV)光之處理、基本上由用紫外(UV)光之處理組成或由用紫外(UV)光之處理組成。UV光可為UV-A、UV-B或UV-C光。UV光之波長可為170至400 nm，包括其間所有範圍及子範圍。舉例而言，在一些實施例中，UV光之波長為315至400 nm、310至320 nm、280至360 nm、280至315 nm或180至280 nm。UV光可由此項技術中已知之UV光源提供，諸如Mirasol^® PRT Illumination裝置(TerumoBCT, Lakewood, Colorado)。在一些實施例中，細胞可同時用多個波長之光處理。

在特定實施例中，當核黃素用作光敏劑時，使用波長為310至320 nm之UV光。本發明人已確定此波長防止核黃素在自由溶液中反應，此導致產生非所需氧自由基。在此等波長下，核黃素在插入時將與核酸選擇性反應。

UV光之劑量可視正在處理之溶液之體積而變化。舉例而言，對於約170至370 ml之體積之溶液，UV光之劑量可介於200-400焦耳之間(例如，300焦耳)。如熟習此項技術者將理解，若待處理之體積高於或低於此範圍，則劑量可上調或下調。

在一些實施例中，UV光之劑量可為約200焦耳至約600焦耳，例如約200、約225、約250、約275、約300、約325、約350、約375、約400、約425、約450、約475、約500、約525、約550、約575或約600焦耳。在一些實施例中，用於照明之癌細胞製劑之體積可為約200 ml至約600 ml，例如約200、約225、約250、約275、約300、約325、約350、約375、約400、約425、約450、約475、約500、約525、約550、約575或約600 ml。在一些實施例中，UV光之劑量可為約0.5 J/ml至約3.0 J/ml。舉例而言，UV光之劑量可為約0.5、約0.6、約0.7、約0.8、約0.9、約1.0、約1.1、約1.2、約1.3、約1.4、約1.5、約1.6、約1.7、約1.8、約1.9、約2.0、約2.1、約2.2、約2.3、約2.4、約2.5、約2.6、約2.7、約2.8、約2.9或約3.0焦耳/毫升。

細胞可用UV光處理約1分鐘至約60分鐘，例如約1、約2、約3、約4、約5、約6、約7、約8、約9、約10、約15、約20、約25、約30、約35、約40、約45、約50、約55或約60分鐘。在一些實施例中，細胞用UV光處理約1分鐘至約10分鐘、約1分鐘至約5分鐘或約1分鐘至約3分鐘。

在一些實施例中，在使細胞經歷光處理之前，癌細胞在含有光敏劑(例如，核黃素)之溶液中預培育維持一段預定時間。

在一些實施例中，細胞在光處理後不經歷任何額外純化或修飾步驟。在其他實施例中，在光處理後分離及/或洗滌癌細胞。舉例而言，在光處理後可粒化且視情況洗滌細胞。粒化及/或洗滌細胞可實質上自組合物移除光敏劑(例如，核黃素)。在一些實施例中，在光處理後濃縮癌細胞。

在一些實施例中，在光處理後將癌細胞再懸浮或與一或多種如上文所述之額外醫藥學上可接受之成分組合。在一些實施例中，在光處理後將癌細胞再懸浮於包含佐劑之溶液中。

在一些實施例中，在光處理後1、2、3、4、5、6、7、8、9或10天細胞保持有活力。在一些實施例中，在光處理後1、2、3、4、5、6、7、8、9或10天細胞死亡(例如，藉由細胞凋亡機制)。

使用此方法產生之細胞不能複製過程，但實質上維持及保持在處理下原始、天然細胞或抗原之抗原及抗原決定基概況。在一些實施例中，不活化過程實質上不改變癌細胞之代謝過程、表型或結構。舉例而言，在一些實施例中，不活化過程實質上不改變癌細胞中之細胞表面標記物表現。在一些實施例中，不活化過程實質上不改變諸如細胞中之EpCAM、CD38、CD34、CD117、CD44、CD24、Sca1、HLA、Glut1、MHC I類、PDL-L1、CD45、gp70、GFP及/或CD90之細胞表面標記物之表現量。在一些實施例中，不活化過程不損害細胞之細胞膜及細胞核膜完整性。

細胞無能力複製之事實保護免受疾病(癌症)之天然形式或造成腫瘤病灶形成之體內經改變之細胞組合物的影響。因此，因為化學反應之特異性保持抗原概況及細胞完整性，且維持蛋白質結構處於其天然狀態，因此由此方法產生之不活化細胞為抗原呈遞提供經改善之來源。 治療方法

本文所述之癌細胞疫苗組合物可用作疫苗劑或刺激劑，其用於免疫系統引發及識別在癌症患者中促進免疫反應。此靶向療法與傳統治療(諸如化學療法或輻射)相比產生較少副作用。值得注意地，由於疫苗之癌細胞維持正常表型，因此其誘導非所需副作用之潛力極低或不存在。

在一些實施例中，可向患者投與癌細胞疫苗以治療或預防患者之癌症。待治療或預防之癌症可為實體腫瘤或液體腫瘤。舉例而言，待治療或預防之癌症可為乳癌、肺癌、肝癌、膀胱癌、婦科癌症、腦癌、胃癌、前列腺癌、皮膚癌、甲狀腺癌、胰臟癌、結腸癌或血癌。在一些實施例中，皮膚癌為黑色素瘤。在一些實施例中，血癌為白血病、淋巴瘤或骨髓瘤。在一些實施例中，白血病為急性淋巴球性白血病或急性骨髓白血病。在一些實施例中，淋巴瘤為霍奇金氏淋巴瘤或非霍奇金氏淋巴瘤。在一些實施例中，骨髓瘤為多發性骨髓瘤。

在一些實施例中，可向患者投與疫苗以治療或預防患者之非癌性但異常生長，亦即良性腫瘤或生長。儘管大多數良性腫瘤/生長可用手術治療，但一些良性腫瘤在不可能手術及/或輻射可能不足夠的位置。可治療之非癌性生長之實例包括但不限於腺瘤、纖維瘤、神經瘤、血管瘤、皮脂溢性角化症、黑色丘疹性皮膚病及皮脂腺增生。

在一些實施例中，在投與癌症疫苗之前評估患者之免疫功能及免疫狀態。該等評估可包括(但不限於)DTH皮膚測試、血液測試、淋巴結抽吸測試、腫瘤組織測試，及/或患者是否免疫無能之測定、B細胞反應性等。在一些實施例中，在投與癌症疫苗之前不評估患者之免疫功能及免疫狀態。

在一些實施例中，患者可具免疫活性。在其他實施例中，患者可為免疫功能低下的。視情況，疫苗可與基因測試組合使用以定量免疫有反應者或免疫無反應者之程度。

熟習此項技術者應瞭解，癌症疫苗組合物中之適當細胞數目可在患者與患者間不同。在一些實施例中，癌症疫苗包含約1×10³ 、約1×10⁴ 、約1×10⁵ 、約1×10⁶ 、約1×10⁷ 、約1×10⁸ 、約1×10⁹ 或約1×10¹⁰ 個細胞。在一些實施例中，癌症疫苗包含約1×10⁵ 至約1×10⁸ 個細胞。

在一些實施例中，每次投與向患者投與約1×10⁵ 至約1×10⁸ 個細胞。舉例而言，每次投與可向患者投與約1×10⁵ 、約5×10⁵ 、約1×10⁶ 、約5×10⁶ 、約1×10⁷ 、約5×10⁷ 或約1×10⁸ 個細胞。在一些實施例中，投與劑量為分次劑量，其中投與之細胞總數分為2、3、4 、5、6、7、8、9或10個子劑量。可在患者身體之不同位置在周邊向患者投與一或多個子劑量。各子劑量可在大約相同時間投與，或子劑量之投與可錯開。舉例而言，可在15分鐘、20分鐘、30分鐘、45分鐘、1小時或3小時之間隔投與子劑量。

在一些實施例中，向患者投與癌症疫苗一次或超過一次。在一些實施例中，向患者投與癌症疫苗一次、兩次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次或十次。

癌症疫苗可每天、約每3天、約每7天、約每十四天、約每月一次或約每年一次向患者投與。在一些實施例中，癌症疫苗至少每週一次、至少每兩週一次或至少每六個月一次投與。在一些實施例中，癌症疫一年投與一次、兩次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十二次、十五次、二十次或二十五次。

在一些實施例中，向患者投與第一癌症疫苗及第二癌症疫苗。在一些實施例中，第二癌症疫苗在第一疫苗後投與以增強免疫反應。在一些實施例中，在投與第一疫苗與第二疫苗之間監測患者中之免疫反應及/或腫瘤生長。在一些實施例中，在投與第一疫苗後判定患者尚未顯現令人滿意的免疫反應時，或在投與第一疫苗後判定腫瘤繼續生長或轉移時投與第二癌症疫苗。在一些實施例中，第一癌症疫苗及第二疫苗包含分離自或源於第一腫瘤提取物之細胞。舉例而言，自患者移除之腫瘤可用於產生第一及第二疫苗，且在投與第一疫苗後，儲存第二疫苗以用於稍後使用。在一些實施例中，第一疫苗及第二疫苗包含分離自或源於分開的腫瘤提取物之細胞。舉例而言，自患者移除之腫瘤可用於產生第一疫苗，且在腫瘤重現或轉移後，復發性腫瘤或轉移性腫瘤經移除且用於產生第二疫苗。

癌症疫苗可經肌肉內、黏膜內、鼻內、皮下、瘤內、皮內、經皮、陰道內、腹膜內、直腸內、關節內或淋巴內、經口或靜脈內遞送至患者。在一些實施例中，投與可藉由舌下、頰內、器官內(例如，脾內)或吸入途徑。對於靜脈內、皮膚或皮下注射或在腫瘤部位處注射，癌細胞疫苗可呈非經腸可接受之水溶液形式，其具有適合之pH、等滲性及穩定性。熟習此項技術者充分能夠使用例如等張媒劑(諸如氯化鈉注射液、林格氏注射液(Ringer's Injection)、乳酸化林格氏注射液)製備適合溶液。視需要，可包括防腐劑、穩定劑、緩衝劑、抗氧化劑及/或其他添加劑。

在一些實施例中，疫苗在周邊向患者投與。在一些實施例中，多個等分試樣之癌症疫苗在不同位置在周邊向患者投與。

在一些實施例中，癌症疫苗與疫苗增強劑同時或依序(在其之前或之後)投與。在一些實施例中，疫苗增強劑為血管收縮素受體阻斷劑(ARB)或β阻斷劑(BB)。例示性疫苗增強劑包括氯沙坦、替米沙坦、依貝沙坦、阿齊沙坦、坎地沙坦、依普羅沙坦、奧美沙坦、纈沙坦、普萘洛爾(propranolol)、醋丁洛爾(acebutolol)、阿替洛爾(atenolol)、倍他洛爾(betaxolol)、比索洛爾(bisoprolol)、卡替洛爾(carteolol)、卡維地洛(carvedilol)、艾司洛爾(esmolol)、拉貝洛爾(labetalol)、美托洛爾(metoprolol)、納多洛爾(nadolol)、奈必洛爾(nebivolol)、噴布洛爾(penbutolol)、品多洛爾(pindolol)、普萘洛爾、索他洛爾(sotalol)、噻嗎洛爾(timolol)。在一些實施例中，疫苗增強劑選自由氯沙坦及普萘洛爾組成之群。在一些實施例中，疫苗增強劑為氯沙坦。在一些實施例中，疫苗增強劑為普萘洛爾。

在一些實施例中，本文所述之疫苗接種方案包含投與包含不活化、活的癌細胞之癌細胞疫苗組合物及包含附接至脂質體之TLR3及/或TLR9促效劑之有效佐劑，且亦包含連續或同時投與疫苗增強劑(例如，氯沙坦)，其在疫苗接種時或左右給出且減少補充免疫抑制骨髓細胞。

在一些實施例中，本文所述之疫苗接種方案包含向有需要之患者投與包含不活化、活的癌細胞之癌細胞疫苗組合物。可在疫苗接種時視情況投與佐劑。在一些實施例中，佐劑在疫苗接種後投與以增強免疫反應，例如在疫苗接種後約6小時、約12小時、約24小時、約36小時、約48小時、約60小時或約72小時。在一些實施例中，佐劑包含脂質體，例如CLDC。在一些實施例中，諸如氯沙坦之疫苗增強劑可在疫苗接種時或左右投與。在一些實施例中，諸如氯沙坦之疫苗增強劑可在疫苗接種後投與，例如疫苗接種後約6小時、約12小時、約24小時、約36小時、約48小時、約60小時或約72小時。在一些實施例中，諸如氯沙坦之疫苗增強劑可每天向患者投與達治療上有效之天數，視情況開始於投與疫苗之日。在一些實施例中，疫苗增強劑(例如，氯沙坦)以約5與約100 mg/kg之間，例如約5、約10、約15、約20、約25、約30、約35、約40、約45、約50、約55、約60、約65、約70、約75、約80、約85、約90、約95或約100 mg/kg之劑量投與。

在一些實施例中，與未經疫苗接種之患者之腫瘤生長相比，處理將腫瘤生長或再生減小了至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或100%。在一些實施例中，與未經疫苗接種之患者相比，處理將患者之存活期延長了至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或100%。在一些實施例中，與未經疫苗接種之患者相比，處理將癌轉移之發生率減小了至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或100%。

癌細胞疫苗可能引發患者之免疫反應。在一些實施例中，免疫反應可包括以下中之一或多者：(i)上調免疫球蛋白(例如，IgG、IgM)，(ii) T細胞活化(例如，匹配多種癌症新抗原之多種T細胞產生)，(iii)調整先天性免疫細胞(例如，骨髓細胞)，及(iv)復活「已耗盡」T細胞群體。

適合之患者包括禽類及哺乳動物。如本文所用之術語「禽類」包括但不限於雞、鴨、鵝、鵪鶉、火雞、野雞、鸚鵡、長尾鸚鵡及其類似者。如本文所用之術語「哺乳動物」包括但不限於人類、非人類靈長類動物、牛、綿羊、山羊、馬、貓、犬、兔等。人類個體包括新生兒、嬰兒、青少年、成年人及老年個體。術語「個體」及「患者」在本文中可互換地使用。

癌細胞疫苗可向患有預先存在之病況之患者投與，例如將預防用其他療法(諸如輻射、化學療法或手術切除)治療之預先存在之病況。 組合療法

可視待治療之病況而定同時或依序地單獨或與其他治療/療法組合投與癌細胞疫苗。治療及療法之實例包括但不限於化學療法(投與活性劑，包括例如，諸如化學治療劑之藥物)；手術；及輻射療法。治療及療法之其他實例包括基於免疫之療法，諸如抗體療法、授受細胞療法(ACT)及基於疫苗之療法。在一些實施例中，本文所述之癌細胞疫苗可在另一治療/療法後投與以消除任何殘留的腫瘤細胞。

在一些實施例中，癌症疫苗可與以下療法中之一或多者組合投與：檢查點抑制劑(例如，PD-1或PDL-1抑制劑)、抗體療法、基因工程化之樹突狀細胞或基因工程化之T細胞(例如，CAR-T細胞)。

在一些實施例中，癌症疫苗可單獨或與化學治療劑組合投與。「化學治療劑」為與作用機制無關之適用於治療癌症的化合物。化學治療劑之類別包括但不限於：烷基化劑、抗代謝物、紡錘體毒素植物鹼、細胞毒性/抗腫瘤抗生素、拓樸異構酶抑制劑、抗體、光敏劑及激酶抑制劑。化學治療劑包括「靶向療法」及習知化學療法中所用之化合物。

適合之化學治療劑之實例包括：埃羅替尼(erlotinib) (TARCEVA®，Genentech/OSI Pharm.)、多西他賽(docetaxel) (TAXOTERE®，Sanofi-Aventis)、5-FU (氟尿嘧啶(fluorouracil)、5-氟尿嘧啶、CAS號51-21-8)、吉西他濱(gemcitabine) (GEMZAR®，Lilly)、PD-0325901 (CAS號391210-10-9，Pfizer)、順鉑(cisplatin) (順式二胺、二氯鉑(II)、CAS號15663-27-1)、卡鉑(carboplatin) (CAS號41575-94-4)、太平洋紫杉醇(paclitaxel) (TAXOL®，Bristol-Myers Squibb Oncology，Princeton，N.J.)、曲妥珠單抗(trastuzumab) (HERCEPTIN®，Genentech)、替莫唑胺(temozolomide) (4-甲基-5-側氧基-2,3,4,6,8-五氮雜二環[4.3.0] 壬-2,7,9-三烯- 9-甲醯胺，CAS號85622-93-1，TEMODAR®，TEMODAL®，Schering Plough)、他莫昔芬(tamoxifen) ((Z )-2-[4-(1,2-二苯基丁-1-烯基)苯氧基]-N ,N -二甲基乙胺，NOLVADEX®，ISTUBAL®，VALODEX®)及多柔比星(doxorubicin) (ADRIAMYCIN®)、Akti-1/2、HPPD及雷帕黴素(rapamycin)。

化學治療劑之更多實例包括：奧沙利鉑(oxaliplatin) (ELOXATIN®，Sanofi)、硼替佐米(bortezomib) (VELCADE®，Millennium Pharm.)、紓癌特(sutent) (SUNITINIB®，SU11248，Pfizer)、來曲唑(letrozole) (FEMARA®，Novartis)、甲磺酸伊馬替尼(imatinib mesylate) (GLEEVEC®，Novartis)、XL-518 (Mek抑制劑，Exelixis，WO 2007/044515)、ARRY-886 (Mek抑制劑，AZD6244，Array BioPharma，Astra Zeneca)、SF-1126 (PI3K抑制劑，Semafore Pharmaceuticals)、BEZ-235 (PI3K抑制劑，Novartis)、XL-147 (PI3K抑制劑，Exelixis)、PTK787/ZK 222584 (Novartis)、氟維司群(fulvestrant) (FASLODEX®，AstraZeneca)、甲醯四氫葉酸(leucovorin) (醛葉酸(folinic acid))、雷帕黴素(rapamycin) (西羅莫司(sirolimus)，RAPAMUNE®，Wyeth)、拉帕替尼(lapatinib) (TYKERB®，GSK572016，Glaxo Smith Kline)、洛那法尼(lonafarnib) (SARASAR™，SCH 66336，Schering Plough)、索拉非尼(sorafenib) (NEXAVAR®，BAY43-9006，Bayer Labs)、吉非替尼(gefitinib) (IRESSA®，AstraZeneca)、伊立替康(irinotecan) (CAMPTOSAR®，CPT-11，Pfizer)、替吡法尼(tipifarnib) (ZARNESTRA™，Johnson & Johnson)、ABRAXANE™ (無克列莫佛(Cremophor))、太平洋紫杉醇之白蛋白工程化之奈米粒子調配物(American Pharmaceutical Partners，Schaumberg，Il)、凡德他尼(vandetanib) (rINN，ZD6474，ZACTIMA®，AstraZeneca)、苯丁酸氮芥(chloranmbucil)、AG1478、AG1571 (SU 5271；Sugen)、坦羅莫司(temsirolimus) (TORISEL®，Wyeth)、帕佐泮尼(pazopanib) (GlaxoSmithKline)、堪佛司非米德(canfosfamide) (TELCYTA®，Telik)、噻替派(thiotepa)及環磷醯胺(CYTOXAN®，NEOSAR®)；磺酸烷基酯，諸如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)及哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶(aziridine)，諸如苯唑多巴(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、米特多巴(meturedopa)及尤利多巴(uredopa)；乙烯亞胺及甲基三聚氰胺，包括六甲蜜胺(altretamine)、三伸乙基三聚氰胺、三伸乙基磷醯胺、三伸乙基-噻替派及三羥甲基三聚氰胺；多聚乙醯(acetogenin) (尤其布拉他辛(bullatacin)及布拉他辛酮(bullatacinone))；喜樹鹼(camptothecin) (包括合成類似物拓朴替康(topotecan))；苔蘚蟲素(bryostatin)；海洋抑素(callystatin)；CC-1065 (包括其阿多來新(adozelesin)、卡折來新(carzelesin)及比折來新(bizelesin)合成類似物)；念珠藻環肽(cryptophycin) (尤其克瑞托欣(cryptophycin) 1及克瑞托欣8)；海兔毒素(dolastatin)；多卡黴素(duocarmycin) (包括合成類似物KW-2189及CB1-TM1)；艾榴塞洛素(eleutherobin)；盤克斯塔叮(pancratistatin)；匍枝珊瑚醇(sarcodictyin)；海綿抑制素(spongistatin)；氮芥(nitrogen mustard)，諸如氯芥苯丁酸(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、氯磷醯胺(chlorophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、異環磷醯胺(ifosfamide)、氮芥(mechlorethamine)、氮芥氧化物鹽酸鹽、美法侖(melphalan)、新氮芥(novembichin)、苯芥膽甾醇(phenesterine)、潑尼氮芥(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥(uracil mustard)；亞硝基脲，諸如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)及雷莫司汀(ranimnustine)；抗生素，諸如烯二炔抗生素(例如，卡奇黴素(calicheamicin)卡奇黴素γ1I、卡奇黴素ωI1 (Angew Chem . Intl . 編 Engl . (1994) 33:183-186)；達米辛(dynemicin)、達米辛A；雙膦酸鹽，諸如氯屈膦酸鹽(clodronate)；埃斯培拉黴素(esperamicin)；以及新抑癌蛋白(neocarzinostatin)發色團及相關色蛋白烯二炔抗生素發色團)、阿克拉黴素(aclacinomysin)、放線菌素(actinomycin)、安麯黴素(authramycin)、偶氮絲胺酸(azaserine)、博來黴素(bleomycin)、放線菌素C (cactinomycin)、卡拉比辛(carabicin)、洋紅黴素(carminomycin)、嗜癌菌素(carzinophilin)、色黴素(chromomycinis)、放線菌素D (dactinomycin)、道諾黴素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-重氮-5-側氧基-L-正白胺酸、N-嗎啉基-多柔比星、氰基-N-嗎啉基-多柔比星、2-吡咯啉基-多柔比星及去氧小紅莓(deoxydoxorubicin))、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、艾達黴素(idarubicin)、奈莫柔比星(nemorubicin)、麻西羅黴素(marcellomycin)、絲裂黴素(mitomycins) (諸如絲裂黴素C)、黴酚酸(mycophenolic acid)、諾加黴素(nogalamycin)、橄欖黴素(olivomycin)、培洛黴素(peplomycin)、泊非羅黴素(porfiromycin)、嘌呤黴素(puromycin)、奎那黴素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黑菌素(streptonigrin)、鏈佐星(streptozocin)、殺結核菌素(tubercidin)、烏苯美司(ubenimex)、淨司他丁(zinostatin)、左柔比星(zorubicin)；抗代謝物，諸如甲胺喋呤(methotrexate)及5-氟尿嘧啶(5-FU)；葉酸類似物，諸如迪諾特寧(denopterin)、甲胺喋呤(methotrexate)、蝶羅呤(pteropterin)、曲美沙特(trimetrexate)；嘌呤類似物，諸如氟達拉賓(fludarabine)、6-巰基嘌呤、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鳥嘌呤(thioguanine)；嘧啶類似物，諸如安西他濱(ancitabine)、阿紮胞苷(azacitidine)、6-氮尿苷、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、雙去氧尿苷、去氧氟尿苷、依諾他濱(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)；雄激素，諸如卡魯睾酮(calusterone)、丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate)、環硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睪內酯(testolactone)；抗腎上腺，諸如胺麩精(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；葉酸補充劑，諸如亞葉酸(frolinic acid)；乙醯葡醛酯(aceglatone)；醛磷醯胺醣苷；胺基乙醯丙酸；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；貝斯布西(bestrabucil)；比山群(bisantrene)；艾達曲克(edatraxate)；得弗伐胺(defofamine)；地美可辛(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；艾弗鳥胺酸(elfornithine)；依利醋銨(elliptinium acetate)；埃坡黴素(epothilone)；依託格魯(etoglucid)；硝酸鎵；羥基脲；蘑菇多醣(lentinan)；氯尼達明(lonidainine)；類美登素(maytansinoid)，諸如美登素(maytansine)及安絲菌素(ansamitocin)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫比達摩(mopidanmol)；二胺硝吖啶(nitraerine)；噴司他丁(pentostatin)；苯來美特(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；鬼臼酸(podophyllinic acid)；2-乙基醯肼；丙卡巴肼(procarbazine)；PSK®多醣錯合物(JHS Natural Products，Eugene，OR)；雷佐生(razoxane)；根瘤菌素(rhizoxin)；西索菲蘭(sizofiran)；螺旋鍺(spirogermanium)；細交鏈孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亞胺醌(triaziquone)；2,2’,2”-三氯三乙胺；單端孢黴烯(trichothecene) (尤其T-2毒素，弗納庫林(verracurin) A，桿孢菌素(roridin) A及胺癸叮(anguidine))；尿烷(urethan)；長春地辛(vindesine)；達卡巴嗪(dacarbazine)；甘露醇氮芥(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴衛矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；加西托星(gacytosine)；阿拉伯糖苷(arabinoside) (「Ara-C」)；環磷醯胺；噻替派；6-硫代鳥嘌呤；巰基嘌呤；甲胺喋呤；鉑類似物，諸如順鉑及卡鉑；長春鹼(vinblastine)；依託泊苷(etoposide) (VP-16)；異環磷醯胺(ifosfamide)；米托蒽醌(mitoxantrone)；長春新鹼(vincristine)；長春瑞濱(vinorelbine) (NAVELBINE®)；諾安托(novantrone)；替尼泊苷(teniposide)；依達曲沙(edatrexate)；柔紅黴素(daunomycin)；胺基喋呤(aminopterin)；卡培他濱(capecitabine) (XELODA®，Roche)；伊班膦酸鹽(ibandronate)；CPT-11；拓樸異構酶抑制劑RFS 2000；二氟甲基鳥胺酸(difluoromethylornithine) (DMFO)；類視黃素(retinoid)，諸如視黃酸；及以上中之任一者之醫藥學上可接受之鹽、酸及衍生物。

「化學治療劑」之定義中亦包括：(i)起調節或抑制腫瘤上之激素作用的抗激素劑，諸如抗雌激素及選擇性雌激素受體調節劑(SERM)，包括(例如)他莫昔芬(包括NOLVADEX®；檸檬酸他莫昔芬)、雷洛昔芬(raloxifene)、曲洛昔芬(droloxifene)、4-羥基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、那洛昔芬(keoxifene)、LY117018、奧那司酮(onapristone)及FARESTON® (檸檬酸托瑞米芬(toremifine citrate))；(ii)調節腎上腺中之雌激素產生、抑制酶芳香酶之芳香酶抑制劑，諸如4(5)-咪唑、胺格魯米特、MEGASE® (乙酸甲地孕酮(megestrol acetate))、AROMASIN® (依西美坦(exemestane)；Pfizer)、福美斯坦(formestanie)、法屈唑(fadrozole)、RIVISOR® (伏羅唑(vorozole))、FEMARA® (來曲唑；Novartis)及ARIMIDEX® (阿那曲唑(anastrozole)；AstraZeneca)；(iii)抗雄激素，諸如氟他胺(flutamide)、尼魯胺(nilutamide)、比卡魯胺(bicalutamide)、亮丙瑞林(leuprolide)及戈舍瑞林(goserelin)；以及曲沙他濱(troxacitabine) (1,3-二氧戊環核苷胞嘧啶類似物)；(iv)蛋白激酶抑制劑，諸如MEK抑制劑(WO 2007/044515)；(v)脂質激酶抑制劑；(vi)反義寡核苷酸，尤其抑制異常細胞增殖中所牽涉之傳訊路徑中之基因表現的反義寡核苷酸，例如PKC-α，Raf及H-Ras，諸如奧利默森(oblimersen) (GENASENSE®，Genta Inc.)；(vii)核糖核酸酶，諸如VEGF表現抑制劑(例如ANGIOZYME®)及HER2表現抑制劑；(viii)疫苗，諸如基因療法疫苗，例如ALLOVECTIN®、LEUVECTIN®及VAXID®；PROLEUKIN® rIL-2；拓樸異構酶1抑制劑，諸如LURTOTECAN®；ABARELIX® rmRH；(ix)抗血管生成劑，諸如貝伐單抗(bevacizumab) (AVASTIN®，Genentech)；及以上中之任一者之醫藥學上可接受之鹽、酸及衍生物。

「化學治療劑」之定義中亦包括治療性抗體，諸如阿侖單抗(坎帕斯)、貝伐單抗(AVASTIN®，Genentech)；西妥昔單抗(cetuximab) (ERBITUX®，Imclone)；帕尼單抗(VECTIBIX®，Amgen)、利妥昔單抗(RITUXAN®，Genentech/Biogen Idec)、奧伐組單抗(ofatumumab) (ARZERRA®，GSK)、帕妥珠單抗(pertuzumab) (PERJETA^TM ，OMNITARG™，2C4，Genentech)、曲妥珠單抗(HERCEPTIN®，Genentech)、托西莫單抗(tositumomab) (Bexxar，Corixia)及抗體藥物結合物，吉妥珠單抗奧唑米星(gemtuzumab ozogamicin) (MYLOTARG®，Wyeth)。

具有治療性潛能作為化學治療劑與本發明之疫苗組合的人類化單株抗體包括：阿侖單抗、阿泊珠單抗(apolizumab)、阿塞珠單抗(aselizumab)、阿利珠單抗(atlizumab)、貝頻珠單抗(bapineuzumab)、貝伐單抗、比伐珠單抗美坦辛(bivatuzumab mertansine)、坎妥珠單抗美坦辛(cantuzumab mertansine)、西利珠單抗(cedelizumab)、賽妥珠單抗(certolizumab pegol)、西弗絲妥珠單抗(cidfusituzumab)、西地妥珠單抗(cidtuzumab)、達利珠單抗(daclizumab)、艾庫組單抗(eculizumab)、艾法珠單抗(efalizumab)、依帕珠單抗(epratuzumab)、厄利珠單抗(erlizumab)、泛維珠單抗(felvizumab)、芳妥珠單抗(fontolizumab)、吉妥珠單抗奧唑米星、伊諾妥珠單抗奧唑米星(inotuzumab ozogamicin)、伊派利單抗(ipilimumab)、拉貝珠單抗(labetuzumab)、林妥珠單抗(lintuzumab)、馬妥珠單抗(matuzumab)、美泊利珠單抗(mepolizumab)、莫維珠單抗(motavizumab)、莫托珠單抗(motovizumab)、那他珠單抗(natalizumab)、尼妥珠單抗(nimotuzumab)、諾維珠單抗(nolovizumab)、努維珠單抗(numavizumab)、奧克珠單抗(ocrelizumab)、奧馬珠單抗(omalizumab)、帕利珠單抗(palivizumab)、帕考珠單抗(pascolizumab)、派弗西妥珠單抗(pecfusituzumab)、派妥珠單抗(pectuzumab)、帕妥珠單抗、培克珠單抗(pexelizumab)、來利珠單抗(ralivizumab)、蘭比珠單抗(ranibizumab)、瑞利維珠單抗(reslivizumab)、瑞利珠單抗(reslizumab)、來西維珠單抗(resyvizumab)、羅維珠單抗(rovelizumab)、盧利珠單抗(ruplizumab)、西羅珠單抗(sibrotuzumab)、希普利珠單抗(siplizumab)、索土珠單抗(sontuzumab)、他珠單抗四西坦(tacatuzumab tetraxetan)、他西珠單抗(tadocizumab)、他利珠單抗(talizumab)、特菲巴珠單抗(tefibazumab)、妥珠單抗(tocilizumab)、托利珠單抗(toralizumab)、曲妥珠單抗、土庫珠單抗西莫白介素(tucotuzumab celmoleukin)、土庫西妥珠單抗(tucusituzumab)、恩維珠單抗(umavizumab)、烏珠單抗(urtoxazumab)及維西珠單抗(visilizumab)。 本發明之編號實施例

1. 一種癌症疫苗組合物，該組合物包含不活化癌細胞，其中該等不活化癌細胞不能複製。

2. 如實施例1之癌症疫苗組合物，其中該等癌細胞來自罹患一或多種類型之癌症之患者。

3. 如實施例2之癌症疫苗組合物，其中該患者罹患以下中之一或多者：乳癌、肺癌、肝癌、膀胱癌、婦科癌症、腦癌、胃癌、前列腺癌、皮膚癌、甲狀腺癌、胰臟癌、結腸癌及血癌。

4. 如實施例3之癌症疫苗組合物，其中該皮膚癌為黑色素瘤。

5. 如實施例3之癌症疫苗組合物，其中該血癌為白血病、淋巴瘤或骨髓瘤。

6. 如實施例5之癌症疫苗組合物，其中該白血病為急性淋巴球性白血病或急性骨髓白血病。

7. 如實施例5之癌症疫苗組合物，其中該淋巴瘤為霍奇金氏淋巴瘤或非霍奇金氏淋巴瘤。

8. 如實施例5之癌症疫苗組合物，其中該骨髓瘤為多發性骨髓瘤。

9. 如實施例2之癌症疫苗組合物，其中該患者罹患良性腫瘤。

10. 如實施例2之癌症疫苗組合物，其中該癌症為轉移性癌症。

11. 如實施例1至10中任一項之癌症疫苗組合物，其中該等癌細胞源於永生化細胞株。

12. 如實施例1至11中任一項之癌症疫苗組合物，其中該等癌細胞為自體的。

13. 如實施例1至11中任一項之癌症疫苗組合物，其中該等細胞為同種異體的。

14. 如實施例1至13中任一項之癌症疫苗組合物，其中該組合物包含約1×10⁵ 至約1×10⁸ 個癌細胞。

15. 如實施例1至14中任一項之癌症疫苗組合物，其中該等癌細胞之DNA包含經修飾之鳥嘌呤鹼基。

16. 如實施例1至15中任一項之癌症疫苗組合物，其中該組合物進一步包含佐劑。

17. 如實施例16之癌症疫苗組合物，其中該佐劑修飾單核球功能。

18. 如實施例16之癌症疫苗組合物，其中該佐劑包含氫氧化鋁。

19. 如實施例16之癌症疫苗組合物，其中該佐劑包含CLDC。

20. 如實施例16之癌症疫苗組合物，其中該佐劑包含聚IC、CpG寡去氧核苷酸(ODN)或咪喹莫特。

21. 如實施例16之癌症疫苗組合物，其中該佐劑包含脂質體。

22. 如實施例21之癌症疫苗組合物，其中該等脂質體與促效劑結合。

23. 如實施例22之癌症疫苗組合物，其中該促效劑為TLR3及TLR9中之至少一者之促效劑。

24. 如實施例1至23中任一項之癌症疫苗組合物，其中該組合物進一步包含醫藥學上可接受之載劑。

25. 如實施例24之癌症疫苗組合物，其中該醫藥學上可接受之載劑為生理食鹽水、右旋糖食鹽水或磷酸鹽緩衝食鹽水。

26. 如實施例1至25中任一項之癌症疫苗組合物，其中該等癌細胞使用光處理不活化。

27. 如實施例26之癌症疫苗組合物，其中該光處理持續約1分鐘至約3分鐘。

28. 如實施例26或27之癌症疫苗組合物，其中該光處理實質上不改變該等癌細胞上之抗原蛋白質之結構。

29. 如實施例26至28中任一項之癌症疫苗組合物，其中該光處理改變該等癌細胞之DNA。

30. 如實施例29之癌症疫苗組合物，其中該光處理選擇性氧化該等癌細胞之DNA中之鳥嘌呤鹼基。

31. 如實施例26至30中任一項之癌症疫苗組合物，其中該光處理實質上不改變該等癌細胞之代謝過程、表型或結構。

32. 如實施例26至31中任一項之癌症疫苗組合物，其中該光處理實質上不改變該等癌細胞中之表面標記物表現或活性。

33. 如實施例32之癌症疫苗組合物，其中該光處理不改變該等細胞中之EpCAM、CD38、CD34、CD117、CD44、CD24、Sca1、HLA、Glut1、MHC I類、PDL-L1、CD45、gp70、GFP或CD90之表現量。

34. 如實施例26至33中任一項之癌症疫苗組合物，其中該光處理不損害該等細胞之細胞膜或細胞核膜完整性。

35. 如實施例26至34中任一項之癌症疫苗組合物，其中該光處理包含用UV光之處理。

36. 如實施例35之癌症疫苗組合物，其中該UV光之波長為170至400 nm。

37. 如實施例35之癌症疫苗組合物，其中該UV光之波長為315至400 nm。

38. 如實施例35之癌症疫苗組合物，其中該UV光之波長為310至320 nm。

39. 如實施例35之癌症疫苗組合物，其中該UV光之波長為280至360 nm。

40. 如實施例35之癌症疫苗組合物，其中該UV光之波長為280至315 nm。

41. 如實施例35之癌症疫苗組合物，其中該UV光之波長為180至280 nm。

42. 如實施例35之癌症疫苗組合物，其中該UV光之波長為170至200 nm。

43. 如實施例35至42中任一項之癌症疫苗組合物，其中該UV光之劑量為約200焦耳至約600焦耳。

44. 如實施例43之癌症疫苗組合物，其中該UV光之劑量為約200焦耳至400焦耳。

45. 如實施例44之癌症疫苗組合物，其中該UV光之劑量為約300焦耳。

46. 如實施例26至45中任一項之癌症疫苗組合物，其中該光處理藉由使該等癌細胞與光在光敏劑存在下接觸執行。

47. 如實施例46之癌症疫苗組合物，其中該光敏劑之濃度為約1 µM至約50 µM。

48. 如實施例46或47之癌症疫苗組合物，其中該光敏劑之濃度低於約10 µM。

49. 如實施例46至48中任一項之癌症疫苗組合物，其中該光敏劑為核黃素。

50. 一種治療有需要之患者之癌症之方法，該方法包含向該患者投與如實施例1至49中任一項之癌症疫苗組合物。

51. 如實施例50之方法，其中該癌症疫苗組合物與疫苗增強劑同時或依序投與。

52. 如實施例51之方法，其中該疫苗增強劑為血管收縮素受體阻斷劑(ARB)或β阻斷劑(BB)。

53. 如實施例51或52之方法，其中該疫苗增強劑為氯沙坦。

54. 如實施例53之方法，其中該氯沙坦之劑量在約5與約100 mg/kg之間。

55. 如實施例54之方法，其中該氯沙坦之劑量為約60 mg/kg。

56. 如實施例51或52之方法，其中該疫苗增強劑為普萘洛爾。

57. 如實施例50至56中任一項之方法，其中該癌症疫苗組合物向該患者投與一次。

58. 如實施例50至56中任一項之方法，其中該癌症疫苗組合物向該患者投與超過一次。

59. 如實施例58之方法，其中該癌症疫苗組合物向該患者投與2、3、4、5、6、7、8、9或10次。

60. 如實施例58或59之方法，其中該癌症疫苗組合物向該患者每7天投與至少一次。

61. 如實施例58或59之方法，其中該癌症疫苗組合物向該患者每14天投與至少一次。

62. 如實施例58或59之方法，其中該癌症疫苗組合物向該患者每6個月投與至少一次。

63. 如實施例50至62中任一項之方法，其中該癌症疫苗組合物藉由選自以下之途徑投與：皮下、肌肉內、靜脈內、鼻內、舌下、頰內、吸入、皮內、瘤內、器官內、經口及腹膜內。

64. 如實施例63之方法，其中該癌症疫苗組合物藉由皮下注射投與。

65. 如實施例63之方法，其中該癌症疫苗組合物藉由靜脈內注射投與。

66. 如實施例63之方法，其中該癌症疫苗組合物藉由肌肉內注射投與。

67. 如實施例50至62中任一項之方法，其中該患者具免疫活性。

68. 如實施例50至62中任一項之方法，其中該患者為免疫功能低下的。

69. 如實施例50至68中任一項之方法，其中與未經疫苗接種之患者之腫瘤生長相比，該處理將腫瘤生長減小了至少10%。

70. 如實施例69之方法，其中與未經疫苗接種之患者之腫瘤生長相比，該處理將腫瘤生長減小了至少20%。

71. 如實施例70之方法，其中與未經疫苗接種之患者之腫瘤生長相比，該處理將腫瘤生長減小了至少50%。

72. 如實施例50至71中任一項之方法，其中與未經疫苗接種之患者相比，該處理將該患者之存活期延長了至少10%。

73. 如實施例72之方法，其中與未經疫苗接種之患者相比，該處理將該患者之存活期延長了至少20%。

74. 如實施例73之方法，其中與未經疫苗接種之患者相比，該處理將該患者之存活期延長了至少50%。

75. 如實施例50至74中任一項之方法，其中該處理上調該患者之IgG及/或IgM。

76. 如實施例50至75中任一項之方法，其中該處理活化該患者之T細胞。

77. 如實施例50至76中任一項之方法，其中該癌症為乳癌、肺癌、肝癌、膀胱癌、婦科癌症、腦癌、胃癌、前列腺癌、皮膚癌、甲狀腺癌、胰臟癌、結腸癌或血癌。

78. 如實施例77之方法，其中該皮膚癌為黑色素瘤。

79. 如實施例77之方法，其中該血癌為白血病、淋巴瘤或骨髓瘤。

80. 如實施例79之方法，其中該白血病為急性淋巴球性白血病或急性骨髓白血病。

81. 如實施例79之方法，其中該淋巴瘤為霍奇金氏淋巴瘤或非霍奇金氏淋巴瘤。

82. 如實施例79之方法，其中該骨髓瘤為多發性骨髓瘤。

83. 如實施例50至82中任一項之方法，其中該癌症為轉移性癌症。

84. 如實施例50至83中任一項之方法，其中該癌症疫苗組合物與一或多種額外療法組合向該患者投與。

85. 如實施例84之方法，其中該等一或多種額外療法選自由以下組成之群：檢查點抑制劑、抗體療法、基因工程化之樹突狀細胞、基因工程化之T細胞及化學療法。

86. 一種產生癌症疫苗之方法，該方法包含使癌細胞與UV光在核黃素存在下接觸。

87. 如實施例86之方法，其中該UV光改變該等癌細胞之DNA。

88. 如實施例87之方法，其中該UV光選擇性氧化該等癌細胞之DNA中之鳥嘌呤鹼基。

89. 如實施例86之方法，其中該光處理實質上不改變該等癌細胞上之該等抗原蛋白質之結構。

90. 如實施例86至89中任一項之方法，其中該UV光實質上不改變該等癌細胞之代謝過程、表型或結構。

91. 如實施例86至90中任一項之方法，其中該UV光實質上不改變該等癌細胞中之表面標記物表現或活性。

92. 如實施例91之方法，其中該UV光實質上不改變該等細胞中之EpCAM、CD38、CD34、CD117、CD44、CD24、Sca1、HLA、Glut1、MHC I類、PDL-L1、CD45、gp70、GFP及/或CD90之表現量。

93. 如實施例86至92中任一項之方法，其中該不活化不損害該等細胞之細胞膜及細胞核膜完整性。

94. 如實施例86至93中任一項之方法，其中該等癌細胞在核黃素存在下與UV光接觸約1分鐘至約3分鐘。

95. 如實施例86至94中任一項之方法，其中該UV光之波長為170至400 nm。

96. 如實施例86至94中任一項之方法，其中該UV光之波長為315至400 nm。

97. 如實施例86至94中任一項之方法，其中該UV光之波長為310至320 nm。

98. 如實施例86至94中任一項之方法，其中該UV光之波長為280至360 nm。

99. 如實施例86至94中任一項之方法，其中該UV光之波長為280至315 nm。

100. 如實施例86至94中任一項之方法，其中該UV光之波長為180至280 nm。

101. 如實施例86至94中任一項之方法，其中該UV光之波長為170至200 nm。

102. 如實施例86至101中任一項之方法，其中該UV光之劑量為約200焦耳至約600焦耳。

103. 如實施例102之方法，其中該UV光之劑量為約200焦耳至約400焦耳。

104. 如實施例103之方法，其中該UV光之劑量為約300焦耳。

105. 如實施例86至104中任一項之方法，其中該等癌細胞在單細胞懸浮液中。

106. 如實施例105之方法，其中該核黃素添加至該單細胞懸浮液中。

107. 如實施例86至106中任一項之方法，其中在使該等細胞與該UV光接觸之前，該等癌細胞在含有核黃素之溶液中預培育。

108. 如實施例107之方法，其中該溶液包含10至100 µM之核黃素。

109. 如實施例107之方法，其中該溶液包含約1 µM至約50 µM之核黃素。

110. 如實施例107之方法，其中該溶液包含低於約10 µM之核黃素。

111. 如實施例1至49中任一項之癌症疫苗組合物，其用作藥物。

112. 如實施例1至49中任一項之癌症疫苗組合物，其用作治療癌症之藥物。

113. 如實施例1至49中任一項之癌症疫苗組合物，其用於治療癌症之方法。

114. 一種如實施例1至49中任一項之癌症疫苗組合物之用途，其用於製造治療癌症之藥物。

115. 如實施例111至113中任一項之癌症疫苗組合物或如實施例114之用途，其中該癌症為乳癌、肺癌、肝癌、膀胱癌、婦科癌症、腦癌、胃癌、前列腺癌、皮膚癌、甲狀腺癌、胰臟癌、結腸癌或血癌。

116. 如實施例115之癌症疫苗組合物或用途，其中該皮膚癌為黑色素瘤。

117. 如實施例115之癌症疫苗組合物或用途，其中該血癌為白血病、淋巴瘤或骨髓瘤。

118. 如實施例117之癌症疫苗組合物或用途，其中該白血病為急性淋巴球性白血病或急性骨髓白血病。

119. 如實施例117之癌症疫苗組合物或用途，其中該淋巴瘤為霍奇金氏淋巴瘤或非霍奇金氏淋巴瘤。

120. 如實施例117之癌症疫苗組合物或用途，其中該骨髓瘤為多發性骨髓瘤。

121. 如實施例111至113中任一項之癌症疫苗組合物或如實施例114之用途，其中該癌症為轉移性癌症。 實例

僅出於說明之目的在本文中包括之以下實例並不意欲限制性限制性的。 實例1.使源於腫瘤細胞株之腫瘤細胞不活化

在核黃素存在下使用UV光處理使CAMA細胞(人類乳腺腫瘤株)不活化。細胞使用Mirasol^® PRT Illumination裝置在10% (190焦耳)、20% (380焦耳)、30% (570焦耳)、40% (760焦耳)、50% (950焦耳)或100% (1896焦耳)照明強度下處理。包括不用UV光處理之細胞(存活)作為對照組。增殖(圖 1 )、活力( 圖 2 )、細胞表面標記物表現(圖 3 、圖 4 、圖 5 )、凋亡蛋白酶活性(圖 6 )及細胞膜及細胞核膜完整性在處理之後當天(第0天)及2、4、6及8天檢查。

如圖 1 中所示，用核黃素/UV光處理使細胞無法在培養物中複製。即使以低至190-380焦耳(10-20%照明強度)之劑量，在處理當天立即看見此作用。即使細胞已不活化，在處理之後細胞實質上仍有活力(圖 3 )。特定言之，細胞保持完整及代謝功能(圖 4 )。四天後，與藉由細胞凋亡機制之細胞死亡一致，凋亡蛋白酶-3之濃度顯著增加(圖 6)。因此，在處理之後，細胞不再隨時間增殖且緩慢死亡。

在自低至190-380焦耳(10-20%照明強度)至高達1896焦耳(100%照明強度)之劑量處理之後，細胞表面標記物表現(EpCAM及CD38)維持在相對恆定程度(圖 3 、圖 5 )。細胞活力與表面標記物表現正相關(圖 7 )。此指示在UV處理、甚至在廣泛範圍之UV劑量處理之後，細胞維持產生免疫反應所需之細胞表面抗原。

此資料建立用於製備不活化細胞而不損害刺激抗體產生所需之細胞表面標記物蛋白質之動態治療範圍。 實例2.疫苗安全性：自體腫瘤細胞不活化且注入健康測試小鼠中

將PyMT腫瘤細胞注入野生型C57Bl6小鼠中。在腫瘤生長之後，收集腫瘤組織以產生癌細胞疫苗。將自七隻C57Bl6小鼠收集之總計2×10⁸ 個PyMT離體腫瘤細胞再懸浮於包含(i) 265 ml之補充有20%胎牛血清及麩醯胺酸(無抗生素)之DMEM培養基及(ii) 35 ml之核黃素之溶液中。細胞用總計300焦耳劑量之UV光處理。

將1×10⁶ 個經處理之細胞置放於培養基中且在最佳條件下培育。在培養物中一個月之後未觀測到生長或增殖之跡象，與經處理細胞之複製潛能之100%不活化一致。

另外，總計10隻C57/Bl6小鼠皮下注射1×10⁶ 個不活化細胞。在一週、兩週及三週後投與另外劑量(總共4劑量，各劑量1×10⁶ 個細胞)。在第一次注射後監測動物160天。在160天監測時間段期間，在任何測試個體中未觀測到腫瘤，且未觀測到注射之副作用，與細胞之完全不活化一致。

最後，8隻免疫缺陷型NOD/SCID小鼠在側腹注射1×10⁶ 個不活化PyMT細胞。在注射後監測動物5個月。在此監測時間期間未觀測到腫瘤生長。

綜合而言，此等資料表明注射的細胞製劑無安全性問題。 實例3.疫苗功效：將不活化腫瘤細胞注入患有乳癌之測試小鼠中抑制腫瘤生長

C57Bl/6小鼠在乳腺脂肪墊注射有2.5×10⁵ 個有活力的PyMT細胞。三天後，小鼠用食鹽水(對照組，n=10)、具有不活化腫瘤細胞之疫苗(n=10)或先前研究之溶胞物疫苗(陽性對照物，n=6)處理。疫苗包含與CLDC佐劑系統(脂質+TLR促效劑)共混之每隻小鼠1×10⁶ 個不活化細胞，且在麻醉下皮下投與至兩個前肢中(通常100-110微升/肢)。小鼠亦藉由腹膜內注射一天一次持續三天接受氯沙坦(60 mg/kg)，在給出疫苗當天開始總計三次劑量。最後，在給出疫苗之後24小時，小鼠接受CLDC佐劑輔助劑(100 µl，腹膜內(i.p.))。每週重複疫苗接種，總計5次疫苗/氯沙坦/CLDC輔助劑循環。使用測徑規(長度×寬度)量測隨時間之腫瘤生長。亦監測在注射後2個月時段內可見之死亡率之程度。

圖 8 顯示與接受不活化全細胞疫苗之腫瘤生長曲線及接受溶胞物疫苗(4T1球形溶胞物Vax)之腫瘤生長曲線相比的食鹽水注射(對照組，無疫苗)之腫瘤生長曲線。對於不活化全細胞疫苗組對比未處理對照組，在注射後第23天開始，觀測到腫瘤細胞生長之統計學上顯著之減少(在第23天p = 0.02且在第25天p ＜ 0.0001)。

圖 9 顯示總存活率。在此實驗中，在最長腫瘤直徑超過15 mm時將小鼠安樂死。與經鹽水處理之對照組相比，接受不活化全細胞疫苗之小鼠具有顯著延長之存活時間(p=0.0038)。與26天時之對照組相比，接受不活化全細胞疫苗之小鼠的總中值存活時間為34天(增加約30%)。

圖 14 顯示倍增時間。與對照小鼠相比，用不活化全細胞疫苗處理之小鼠中腫瘤生長之倍增時間顯著更大(p=0.01)。 實例4.疫苗功效：將不活化腫瘤細胞注入患有侵襲性乳癌之測試小鼠中減少肺癌轉移，限制腫瘤再生且增大存活率

4T1乳腺癌為高度致瘤性及侵襲性的可移植腫瘤細胞株，且不同於大多數腫瘤模型，其可自發地自乳腺中之原發腫瘤轉移至包括淋巴結、血液、肝、肺、大腦及骨骼之多個遠距離部位。Balb/c小鼠在乳腺脂肪墊注射有1×10⁶ 個4T1螢光素酶腫瘤細胞。注射後11天(當平均腫瘤面積為52 mm² 時)，量測原發腫瘤且隨後以手術方式移除。一隻小鼠在手術期間死亡。剩餘21隻小鼠根據手術前腫瘤尺寸分組，使得平均腫瘤尺寸相等(圖 10 )。測定以下組：PBS (「對照組」)，n = 5隻小鼠；佐劑，n = 8隻小鼠；不活化全細胞疫苗，n = 8隻小鼠。

在4℃下將以手術方式移除之腫瘤組織隨後置放於培養基中隔夜。第二天，絞碎腫瘤組織且隨後用膠原蛋白酶處理。過濾細胞以移除組織碎片且隨後定量。使用一部分細胞形成第一疫苗。小鼠一週經疫苗接種有不活化4T1腫瘤細胞(1.7×10⁶ 個細胞)+佐劑一次，在疫苗接種之後24小時用佐劑增強，且在給出疫苗當天開始，提供3次60 mg/kg之每日劑量之氯沙坦。每週重複此循環。

使用IVIS機器在常規基礎上對小鼠進行成像以偵測轉移性疾病發展。小鼠注射有100 µl螢光素，隨後在10分鐘後置於IVIS上。使用基於IVIS之軟體計算光子通量數量且在各組之間進行比較(圖 11A - B )。

在手術移除原發腫瘤之後24小時初始，小鼠每週僅用PBS (對照)、用陽離子脂質體-DNA錯合物(CLDC)及氯沙坦(佐劑)，或用不活化全細胞疫苗(佐劑+疫苗)處理。在i.p.注射100 µl之螢光素之後，使用IVIS成像定量肺中之轉移性疾病(圖 19 )。如圖 11A 中所示，與經佐劑處理之小鼠(第14天，p = 0.0157)相比且與對照小鼠及經佐劑處理之小鼠(在第16天分別為p = 0.0119及p = 0.0021)相比，用疫苗處理之小鼠的所量測轉移性負荷顯著降低。圖 11B 顯示在各組中之個別小鼠隨時間之光子通量資料。

在一些小鼠中，由於不完全切除而存在原發腫瘤之再生。記載手術後第17天原發性再生之小鼠的數目(圖 12 )。有趣的係，與其他處理組相比，用不活化全細胞疫苗處理之較少小鼠具有其原發腫瘤之再生。在對照組中，60%小鼠具有原發腫瘤之再生，佐劑組中僅有63%，且不活化全細胞疫苗組中僅有38%。

亦測試疫苗對存活率之影響。當小鼠顯示發病跡象(體重減少10%或更多，活動能力差、癲癇發作等)時，將小鼠安樂死，且評估手術後天數(圖 13 )。與對照小鼠之18天及在手術移除原發腫瘤後僅用佐劑之小鼠之17.5天相比，用不活化全細胞疫苗處理之小鼠的中值存活時間為24天。因此，用疫苗處理將中值存活期增加了約6天。所有小鼠最終在所有組中均死於轉移性疾病。4T1轉移性模型極具侵襲性，且通常對多種習知療法無反應，因此任何觀測到之作用為值得注意的。 實例5.在不同小鼠腫瘤模型(LLC)中測試不活化全細胞疫苗之功效

為了測試不活化全細胞疫苗在不同小鼠腫瘤模型中之功效，健康B6小鼠注射有路易肺癌瘤(LLC)細胞。當原發腫瘤生長時，切除其且用300 J使腫瘤細胞不活化。另19隻B6小鼠在側腹皮下注射有5×10⁵ 個LLC細胞。在腫瘤細胞注射之後三天，小鼠接受其第一次疫苗，每次疫苗每個小鼠1.7×10⁶ 個不活化細胞。其亦接受CLDC佐劑，包括氯沙坦及24小時後疫苗CLDC輔助劑。小鼠每週接受其疫苗，總計三次疫苗。在第19天使小鼠全部處死且收集腫瘤組織且針對免疫細胞染色。

如圖 15 中所示，在不活化全細胞疫苗處理之小鼠中腫瘤生長顯著降低/延遲(第13天p = 0.02且第19天p = 0.001)。疫苗處理組中之兩隻小鼠在第19天不具有腫瘤(完全反應=20%)。不過不顯著，經疫苗處理之小鼠中具有腫瘤之小鼠的最終腫瘤重量減少(p = 0.0547)。腫瘤倍增時間亦未顯著降低，但在經疫苗處理之小鼠中減少(p = 0.0570)。在腫瘤中，經疫苗接種之小鼠中CD4+CD25+ T細胞(p = 0.004，推定免疫抑制T調節細胞)顯著減少以及表現GITR之CD4+ T細胞(p = 0.02)、T調節細胞之另一標記物(圖 16A )減少。相關地，在經疫苗接種之小鼠腫瘤中，表現免疫抑制蛋白質Lag3 (p = 0.01)及Tim3 (p = 0.05)之CD8+ T細胞顯著減少(圖 16B )，且表現蛋白質Lag3 (p = 0.005)及Tim3 (p = 0.02)之CD4+ T細胞顯著減少(圖 16C )。 實例6.判定離體犬類腫瘤組織係否含有維持蛋白質表面表現之腫瘤細胞

兩個腫瘤組織以手術方式自經歷治療之患有自發性癌症的狗獲得。一個組織來自肛門腺癌(ASA)且另一個來自甲狀腺癌瘤(TC)。組織經膠原蛋白酶消化且所獲得之單細胞懸浮液在-80℃下冷凍於多個小瓶中。腫瘤細胞隨後解凍且一組細胞用作對照細胞且另一個用作不活化細胞。使用300 J使犬類細胞不活化。所用細胞數目小於預先用於使腫瘤細胞不活化之細胞數目。其花1分鐘及38秒使每一組細胞不活化。隨後針對犬類CD44、CD90、PD-L1及CD45表現對腫瘤細胞進行染色。CD45用於門輸出所有造血細胞(圖 25A - D )。對CD45陰性細胞(包括腫瘤細胞、纖維母細胞、內皮細胞及其他細胞類型)進行對「腫瘤」細胞之分析。

對於ASA，不活化1小時後，15%之細胞表現CD44 (與20%之對照組相比)，1%表現CD90 (與0.3%相比)，且7.7%表現PD-L1 (與3.1%相比)。對於TC，在不活化之後，7.1%表現CD44 (與6.8%之對照細胞相比)，0.6%表現CD90 (與0.4%相比)，且0%表現PD-L1 (與0.2%相比)。將剩餘細胞置放於4℃下48小時且隨後再次染色。在48小時之後，對於ASA：CD44 = 10% (11%對照組)，CD90 = 2% (3.2%對照組)，PD-L1 = 9.5% (3%對照組)。對於TC：CD44 = 5.8% (8.9%對照組)，CD90 = 3.1% (3.2%對照組)，且PD-L1 = 3% (2.9%對照組)。

另外其他腫瘤組織片自經歷手術之兩隻不同狗獲得。一者為GI質量且另一者為肺質量。腫瘤組織使用膠原蛋白酶消化，洗滌且隨後進行應變以製造單細胞懸浮液。隨後將細胞全部冷凍在細胞冷凍培養基中。隨後，將細胞解凍且使用UV+RF (UV光+核黃素)方案使一半細胞不活化。另一半保持在冰上。隨後針對犬類MHC I類、CD44類、CD90及PD-L1之表面表現將細胞染色(圖 26 )。

綜合而言，此等資料指示表面標記物在不活化之後維持在離體犬類腫瘤細胞上。 實例7.測試不同佐劑以產生針對不活化腫瘤細胞之顯著細胞及體液性免疫反應

健康Balb/c小鼠用PBS或不活化細胞單獨進行疫苗接種，或用CLDC佐劑系統(在疫苗接種之前局部咪喹莫特施加至皮膚(2 mg/kg))或與CpG ODN (每次疫苗50 µg)摻合的不活化4T1疫苗(用於實例4中所述之轉移性小鼠腫瘤研究)疫苗接種。在小鼠接近足部之左前肢及右前肢兩者中，以相同體積s.c.給出疫苗。小鼠接受每次疫苗每隻小鼠1.7×10⁶ 個細胞。在第1天且隨後再次在第14天給出疫苗。在給出輔助劑疫苗8天後將小鼠安樂死，且收集脾臟及血液。將脾臟細胞與不活化4T1細胞一起培養(以防止複製)且在72小時之後量測IFNg產量(圖 17 )。脾臟細胞以25個脾臟細胞比1個不活化4T1細胞之比率培養。

如圖 17 中所示，就IFNg產量而言，CLDC佐劑系統具有最佳回憶反應。此後為CpG ODN。單獨疫苗亦在4隻小鼠中之3隻中產生一定含量之IFNg，但與對照相比無顯著差異。 實例8.進一步測試佐劑以產生針對不活化腫瘤細胞之顯著細胞及體液性免疫反應

健康Balb/c小鼠用PBS、不活化細胞單獨進行疫苗接種，或用CLDC佐劑系統(在疫苗接種之前局部咪喹莫特施加至皮膚(2 mg/kg))或與CpG ODN (每次疫苗50 µg)摻合的不活化4T1疫苗(用於實例4中所述之轉移性小鼠腫瘤研究)疫苗接種。在小鼠接近足部之左前肢及右前肢兩者中，以相同體積皮下給出疫苗。小鼠接受每次疫苗每隻小鼠1.7×10⁶ 個細胞。在第1天且隨後再次在第14天給出疫苗。在給出輔助劑疫苗8天後將小鼠安樂死，且收集脾臟及血液。藉由用1:500或1:1000稀釋度之細胞培育血清，用螢光化標記之驢抗小鼠二級抗體染色，隨後減去背景染色(以1:500及1:1000之正常小鼠血清)，針對IgG抗體結合之存活4T1腫瘤細胞篩選來自此等小鼠之血清。

如圖 18 中所示，未經疫苗接種及不活化之全細胞疫苗單獨不產生對4T1腫瘤細胞具有特異性之任何IgG。咪喹莫特利用5隻具有極高染色之小鼠中之3隻產生不同量。CpG ODN以1:1000稀釋度在染色中產生可靠且顯著提高。以1:500稀釋度偵測到相比於背景並沒有非常多的染色。 實例9.表面抗原之保存

小鼠肺癌瘤株LLC維持不活化後表面抗原之表現(圖21A - 21B )。LLC細胞用核黃素(RF，50 µM)及UV光(300 J)處理且針對CD34、CD117、CD44及CD90之表面表現進行染色。所有4種抗原均維持在細胞表面上。亦評估小鼠乳癌細胞株4T1在UV+RF不活化前後CD44、Sca1及EpCAM之表面標記物表現(圖 22 )。

小鼠黑色素瘤腫瘤細胞株B16用綠色螢光蛋白轉染，注入C57Bl6小鼠中，自小鼠移除，製成單細胞懸浮液，且隨後在UV+RF不活化前及後且在γ照射(100Gy)後針對GFP+腫瘤細胞之表現進行分析。細胞不活化之任一形式均不會藉由離體腫瘤組織中之腫瘤細胞不利地影響GFP之表現(圖 23 )。

最後，用UV+RF使小鼠結腸癌細胞株CT26不活化，且隨後針對已知腫瘤相關抗原gp70之表面表現進行分析(圖 24A - 24B )。UV+RF不活化增加CT26細胞上之gp70之表現。

另外，人類肝癌細胞株HepG2在UV+RF不活化(300 J，圖 27 )之後不活化及針對人類HLA及GLUT1表現進行染色且在黏附細胞計數器上成像。

由所有此等研究獲得之結果指示可在不顯著修飾細胞表面上之細胞特異性抗原的情況下進行不活化。另外，此等標記物在形態上完整細胞中處理後維持長時間儲存，且已注意到源於所有三種所測試物種(小鼠、犬類及人類)之細胞中的此等觀測結果。 實例10.藉由不活化細胞觸發之免疫系統。

自具有4T1腫瘤生長但未接受任何療法之小鼠移除脾臟細胞，且將其置放於培養物中，以研究與UV+RF不活化之4T1細胞株衍生之細胞相比之存活4T1細胞株衍生之細胞的T細胞免疫反應(圖 28 )。以1×10⁶ 個細胞/孔接種脾臟細胞，隨後與腫瘤細胞(活的或不活化的)以4×10⁵ 個細胞/孔共培養72小時。在培養48小時之後添加增殖染料EdU。隨後收集脾臟細胞且針對CD4+及CD8+ T細胞之增殖進行染色。當細胞與UV+RF不活化之4T1腫瘤細胞共培養時，CD4+及CD8+ T細胞之增殖顯著增加。 實例11：藥物動力學：離體及活體內腫瘤細胞之增殖及持久性

為測試不活化過程之安全性及功效，自B6小鼠上之實體腫瘤移除PyMT腫瘤細胞且使用UV光(300 J)不活化。將1.5×10⁶ 個「有活力的」不活化PyMT細胞s.c.注入5隻健康B6小鼠中。在第7、14及21天重複此過程，總計4次劑量。在初始不活化腫瘤細胞注射後約160天將小鼠安樂死且進行解剖。未注意到腫瘤生長之跡象。為測試不活化細胞在免疫缺陷型小鼠中之安全性，8隻NOD/SCID小鼠在右側腹s.c.注射有1×10⁶ 個不活化PyMT細胞。此後監測小鼠。在研究期間，三隻小鼠可能由於不相關原因(可能為病毒或細菌感染)而死亡。對一隻進行屍檢且未注意到腫瘤，對另2隻進行皮膚分析且未注意到腫瘤。腫瘤細胞注射後252天將小鼠安樂死，且剩餘5隻小鼠中未注意到腫瘤。

亦評估在不活化後培養物中之細胞增殖(圖 29 )。將4T1細胞注入Balb/c小鼠之脂肪墊中，且監測腫瘤生長直至腫瘤直徑達至約10 mm。移除組織，使用膠原蛋白酶消化，洗滌且用UV+Rf不活化，且隨後在37℃下培養24及72小時。在不活化後24及72小時時未注意到4T1細胞之增殖。此亦與非不活化離體腫瘤細胞(其增殖一些)且與4T1腫瘤細胞株(其增殖)進行比較。使用人類肝癌細胞株、HepG2及人類結腸癌細胞株CRL-2577進行類似研究(圖 30 )。用標記新形成之DNA的Click-iT EdU進行增殖測試。使用黏附細胞細胞計數器，將經標記之新DNA的螢光與總DNA染色進行比較。此測試鑑別出多種成千上萬個複製細胞，其在CRL-2577之活對照組中總計20-35%之高EdU細胞，且在標記更長之HepG2群體中總計大約75%。

儘管已參考不同申請案、方法及組合物描述所揭示教示，但應瞭解，在不背離本文中之教示及下文申請專利範圍情況下可進行不同變化及修改。提供前述實例以更好地說明所揭示之教示，且不意欲限制本文中呈現之教示之範疇。儘管已在此等例示性實施例方面描述本發明教示，但熟習此項技術者將容易理解在無不當實驗情況下此等例示性實施例之大量變化及修改為可能的。所有該等變化及修改在當前教示之範疇內。

本文中所引用之全部參考文獻(包括專利、專利申請案、論文、教科書、GenBank™或其他寄存編號及其類似者)及其中引用之參考文獻就其尚未引用的程度而言係以全文引用之方式併入本文中。在所併入文獻及類似材料中之一或多者(包括但不限於定義之術語、術語用法、所描述之技術或其類似者)與本申請案不同或矛盾的情況下，以本申請案為準。

前述描述及實例詳述本發明的某些具體實施例，且描述本發明人預期之最佳模式。然而，將瞭解，無論以文字呈現之前述內容如何詳細，本發明可以許多方式實踐，且本發明應根據所附申請專利範圍及其任何等效物解釋。

圖 1 說明在處理當天(第0天)及處理後第2、4、6及8天，用核黃素及UV光處理後CAMA細胞之增殖。細胞使用Mirasol^® PRT Illumination裝置以10%、20%、30%、40%、50%或100%照明強度處理。包括不用UV光處理之細胞(存活)作為對照組。

圖 2 顯示在用核黃素及UV光處理之後CAMA細胞之活力。

圖 3 顯示在用核黃素及UV光處理之後表面標記物EpCAM在CAMA細胞中之表現。

圖 4 提供在用核黃素及UV光(20%照明強度)處理後，在不同時間間隔下比較CAMA細胞上之表面標記物表現之螢光顯微影像。

圖 5 顯示在用不同劑量之UV光處理之後，活細胞群體內之表面標記EpCAM (前列條)及CD38 (後列條)之相對表現。

圖 6 顯示在用核黃素及UV光處理之後CAMA細胞中之凋亡蛋白酶-3濃度。

圖 7 描繪在用核黃素及UV光處理之後CAMA細胞之表面標記物表現與活力之間的相關性。

圖 8 顯示攜帶PyMT乳癌腫瘤之小鼠的腫瘤生長曲線，與接受不活化全細胞疫苗之小鼠及接受溶胞物疫苗(4T1球形溶胞物Vax，如WO 2016/161309中所描述，其以全文引用之方式併入本文中)之小鼠相比，該等乳癌腫瘤用食鹽水(對照物，無疫苗)注射。結果指示對於不活化全細胞疫苗組對比未處理對照組，在注射後第23天開始，觀測到腫瘤細胞生長之統計學上顯著之減少(在第23天p = 0.02且在第25天p ＜ 0.001)。

圖 9 顯示攜帶PyMT腫瘤之小鼠的經疫苗接種(不活化全細胞疫苗)對比未處理/食鹽水(對照)組之總存活率。與經鹽水處理之對照組相比，接受不活化全細胞疫苗之小鼠具有顯著延長之存活時間(p = 0.009，Mantel-Cox對數等級測試)。

圖 10 顯示在手術移除之前小鼠中4T1腫瘤之尺寸。手術後，將小鼠配置於3個所示組中，使得各組具有類似平均腫瘤尺寸(p = 0.9)且擴散。PBS (「對照組」)，n = 5隻小鼠；佐劑，n = 8隻小鼠；不活化全細胞疫苗，n = 8隻小鼠。

圖 11A 及圖 11B 顯示實驗結果，其中在手術移除原發腫瘤之後24小時開始，用PBS (對照)、用氯沙坦及陽離子脂質體-DNA錯合物CLDC) (佐劑)或用不活化全細胞疫苗(佐劑+疫苗)每週處理小鼠。在i.p.注射100 µl之螢光素之後，使用IVIS成像定量肺中之轉移性疾病。如圖 11A 中所示，與經佐劑處理之小鼠(第14天，p = 0.0157)相比且與對照小鼠及經佐劑處理之小鼠(在第16天分別為p = 0.0119及p = 0.0021)相比，用疫苗處理之小鼠的所量測轉移性負荷顯著降低。圖 11B 顯示在各組中之個別小鼠隨時間之光子通量資料。

圖 12 顯示由於不同處理組中之原發腫瘤之不完全移除，原發腫瘤之再生頻率。

圖 13 為存活率曲線，其顯示接受不活化全細胞疫苗之組中，小鼠之存活率提高。當瀕死(亦即體重減輕＞ 10%、癲癇、活動能力降低、外觀不整潔等)時將小鼠安樂死。對照及佐劑組之中值存活率為17.5天，而不活化全細胞疫苗處理組為24天。此存活率差異並非統計學上顯著的(p = 0.1)，但鑒於4T1腫瘤之侵襲性性質為生物學上相關的。

圖 14 為顯示如實例3中所述之腫瘤尺寸之倍增時間的圖。用不活化全細胞疫苗處理之小鼠之倍增時間較大(p = 0.01)。

圖 15 為顯示腫瘤注射攜帶皮下路易斯肺癌腫瘤(LLC)且用PBS對照組或不活化LLC疫苗處理之小鼠後3、5、7、10、13及19天時之腫瘤生長區域的圖。腫瘤細胞注射後13天(p = 0.02)及19天(p = 0.001)經不活化LLC疫苗接種之小鼠中之腫瘤生長顯著減少。

圖 16A - C 為顯示自來自LLC研究之對照及經疫苗接種小鼠獲得之腫瘤中之T細胞亞型的圖。圖 16A 顯示作為CD4+CD25+ (假定為T調節性T細胞)或CD8+CD25+之T細胞的百分比。經疫苗接種小鼠中之CD4+CD25+ T細胞顯著減少。圖 16B 顯示表現免疫抑制蛋白質PD-1、Lag3或Tim3之CD8+ T細胞的百分比。圖 16C 顯示表現免疫抑制蛋白質PD-1、Lag3或Tim3之CD4+ T細胞的百分比。對於圖16A-C中所顯示之每一資料集，對照組顯示於左側且疫苗顯示於右側。

圖 17 顯示在自健康未處理B6小鼠分離脾臟細胞之後產生IFNg (pg/ml)，該等小鼠用各種免疫佐劑與不活化全細胞疫苗(源於4T1小鼠腫瘤細胞)疫苗接種且增強。隨後用不活化4T1腫瘤細胞離體再刺激脾臟細胞72小時且經由ELISA量測IFNg。CLDC佐劑系統產生最佳IFNg反應。

圖 18 顯示血清IgG抗體在1:1000稀釋度下之平均螢光強度(MFI)，該等抗體源於圖17中所示之小鼠血液，結合於活的4T1細胞。所有疫苗/佐劑系統均產生顯著高於單獨的對照或不活化細胞之結合。

圖 19 顯示實驗結果，其中在小鼠注射有隨後以手術方式移除且用於產生不活化全細胞疫苗的4T1乳腺腫瘤細胞之後使用IVIS成像定量肺中之轉移性疾病。右圖中所示之小鼠用不活化全細胞疫苗處理，且左圖中所示之小鼠未給予任何疫苗。亦提供用於發光之比例尺。在類似時間點，對於肺癌轉移，62%之接受疫苗接種之小鼠為陰性的，其中80%之未經處理之小鼠在腫瘤細胞移除後第16天罹患肺腫瘤。

圖 20 描繪使用UV光及核黃素使細胞不活化、製備疫苗組合物及治療有需要之患者的例示性流程。

圖 21A - 21B 顯示在UV+Rf (UV光+核黃素)不活化之後小鼠LLC細胞之細胞表面染色。

圖 22 顯示在UV+Rf不活化之後小鼠4T1乳癌細胞之表面染色。

圖 23A - D 顯示在離體藉由UV+RF或γ輻射不活化之後小鼠黑色素瘤GFP+B16腫瘤細胞之GFP表現。

圖 24A - B 顯示小鼠腫瘤相關抗原gp70在小鼠結腸癌CT26腫瘤細胞之UV+Rf不活化之後的表現。

圖 25A - D 顯示在UV+Rf不活化之後1小時及48小時時不活化離體犬類腫瘤組織之表面蛋白質染色。在不活化之後細胞在4℃下維持48小時。

圖 26A - D 顯示兩種額外離體犬類腫瘤組織之UV+RF不活化。

圖 27 顯示表面標記物GLUT1之不活化人類肝癌細胞HepG2之染色。不活化細胞顯示於左圖中，且活細胞顯示於右圖中。以下圖表顯示當HepG2細胞針對表面標記物GLUT1及HLA1染色時抗體陽性及抗體陰性細胞的百分比。

圖 28A - B 顯示不接受處理之攜帶4T1-腫瘤之小鼠之脾臟的T細胞增殖。當與不活化4T1腫瘤細胞一起培養時，T細胞離體增殖。

圖 29 顯示不活化4T1小鼠乳癌細胞在培養物中在不活化之後的不同時間點之增殖缺乏。

圖 30 顯示不活化人類肝癌細胞HepG2 (左圖)之增殖缺乏及HepG2及人類結腸癌細胞CRL-2577 (右圖)之增殖缺乏的資料。

Claims (121)

1. 一種癌症疫苗組合物，該組合物包含不活化癌細胞，其中該等不活化癌細胞不能複製。
2. 如請求項1之癌症疫苗組合物，其中該等癌細胞來自罹患一或多種類型之癌症之患者。
3. 如請求項2之癌症疫苗組合物，其中該患者罹患以下中之一或多者：乳癌、肺癌、肝癌、膀胱癌、婦科癌症、腦癌、胃癌、前列腺癌、皮膚癌、甲狀腺癌、胰臟癌、結腸癌及血癌。
4. 如請求項3之癌症疫苗組合物，其中該皮膚癌為黑色素瘤。
5. 如請求項3之癌症疫苗組合物，其中該血癌為白血病、淋巴瘤或骨髓瘤。
6. 如請求項5之癌症疫苗組合物，其中該白血病為急性淋巴球性白血病或急性骨髓白血病。
7. 如請求項5之癌症疫苗組合物，其中該淋巴瘤為霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkin’s Lymphoma)或非霍奇金氏淋巴瘤。
8. 如請求項5之癌症疫苗組合物，其中該骨髓瘤為多發性骨髓瘤。
9. 如請求項2之癌症疫苗組合物，其中該患者罹患良性腫瘤。
10. 如請求項2之癌症疫苗組合物，其中該癌症為轉移性癌症。
11. 如請求項1至10中任一項之癌症疫苗組合物，其中該等癌細胞源於永生化(immortalized)細胞株。
12. 如請求項1至11中任一項之癌症疫苗組合物，其中該等癌細胞為自體的。
13. 如請求項1至11中任一項之癌症疫苗組合物，其中該等細胞為同種異體的。
14. 如請求項1至13中任一項之癌症疫苗組合物，其中該組合物包含約1×10⁵ 至約1×10⁸ 個癌細胞。
15. 如請求項1至14中任一項之癌症疫苗組合物，其中該等癌細胞之DNA包含經修飾之鳥嘌呤鹼基。
16. 如請求項1至15中任一項之癌症疫苗組合物，其中該組合物進一步包含佐劑。
17. 如請求項16之癌症疫苗組合物，其中該佐劑修改單核球功能。
18. 如請求項16之癌症疫苗組合物，其中該佐劑包含氫氧化鋁。
19. 如請求項16之癌症疫苗組合物，其中該佐劑包含CLDC。
20. 如請求項16之癌症疫苗組合物，其中該佐劑包含聚IC、CpG寡去氧核苷酸(ODN)，或咪喹莫特(imiquimod)。
21. 如請求項16之癌症疫苗組合物，其中該佐劑包含脂質體。
22. 如請求項21之癌症疫苗組合物，其中該等脂質體與促效劑結合。
23. 如請求項22之癌症疫苗組合物，其中該促效劑為TLR3及TLR9中之至少一者之促效劑。
24. 如請求項1至23中任一項之癌症疫苗組合物，其中該組合物進一步包含醫藥學上可接受之載劑。
25. 如請求項24之癌症疫苗組合物，其中該醫藥學上可接受之載劑為生理食鹽水(normal saline)、右旋糖食鹽水或磷酸鹽緩衝食鹽水。
26. 如請求項1至25中任一項之癌症疫苗組合物，其中該等癌細胞使用光處理不活化。
27. 如請求項26之癌症疫苗組合物，其中該光處理持續約1分鐘至約3分鐘。
28. 如請求項26或27之癌症疫苗組合物，其中該光處理實質上不改變該等癌細胞上之抗原蛋白質之結構。
29. 如請求項26至28中任一項之癌症疫苗組合物，其中該光處理改變該等癌細胞之DNA。
30. 如請求項29之癌症疫苗組合物，其中該光處理選擇性氧化該等癌細胞之DNA中之鳥嘌呤鹼基。
31. 如請求項26至30中任一項之癌症疫苗組合物，其中該光處理實質上不改變該等癌細胞之代謝過程、表型或結構。
32. 如請求項26至31中任一項之癌症疫苗組合物，其中該光處理實質上不改變該等癌細胞中之表面標記物表現或活性。
33. 如請求項32之癌症疫苗組合物，其中該光處理不改變該等細胞中之EpCAM、CD38、CD34、CD117、CD44、CD24、Sca1、HLA、Glut1、MHC I類、PDL-L1、CD45、gp70、GFP或CD90之表現量。
34. 如請求項26至33中任一項之癌症疫苗組合物，其中該光處理不損害該等細胞之細胞膜或細胞核膜完整性。
35. 如請求項26至34中任一項之癌症疫苗組合物，其中該光處理包含用UV光處理。
36. 如請求項35之癌症疫苗組合物，其中該UV光之波長為170至400 nm。
37. 如請求項35之癌症疫苗組合物，其中該UV光之波長為315至400 nm。
38. 如請求項35之癌症疫苗組合物，其中該UV光之波長為310至320 nm。
39. 如請求項35之癌症疫苗組合物，其中該UV光之波長為280至360 nm。
40. 如請求項35之癌症疫苗組合物，其中該UV光之波長為280至315 nm。
41. 如請求項35之癌症疫苗組合物，其中該UV光之波長為180至280 nm。
42. 如請求項35之癌症疫苗組合物，其中該UV光之波長為170至200 nm。
43. 如請求項35至42中任一項之癌症疫苗組合物，其中該UV光之劑量為約200焦耳(Joules)至約600焦耳。
44. 如請求項43之癌症疫苗組合物，其中該UV光之劑量為約200焦耳至400焦耳。
45. 如請求項44之癌症疫苗組合物，其中該UV光之劑量為約300焦耳。
46. 如請求項26至45中任一項之癌症疫苗組合物，其中該光處理係藉由使該等癌細胞與光在光敏劑存在下接觸執行。
47. 如請求項46之癌症疫苗組合物，其中該光敏劑之濃度為約1 µM至約50 µM。
48. 如請求項46或47之癌症疫苗組合物，其中該光敏劑之濃度低於約10 µM。
49. 如請求項46至48中任一項之癌症疫苗組合物，其中該光敏劑為核黃素。
50. 一種治療有需要之患者之癌症之方法，該方法包含向該患者投與如請求項1至49中任一項之癌症疫苗組合物。
51. 如請求項50之方法，其中該癌症疫苗組合物與疫苗增強劑同時或依序投與。
52. 如請求項51之方法，其中該疫苗增強劑為血管收縮素受體阻斷劑(ARB)或β阻斷劑(BB)。
53. 如請求項51或52之方法，其中該疫苗增強劑為氯沙坦(losartan)。
54. 如請求項53之方法，其中該氯沙坦之劑量在約5與約100 mg/kg之間。
55. 如請求項54之方法，其中該氯沙坦之劑量為約60 mg/kg。
56. 如請求項51或52之方法，其中該疫苗增強劑為普萘洛爾(propranolol)。
57. 如請求項50至56中任一項之方法，其中該癌症疫苗組合物向該患者投與一次。
58. 如請求項50至56中任一項之方法，其中該癌症疫苗組合物向該患者投與超過一次。
59. 如請求項58之方法，其中該癌症疫苗組合物向該患者投與2、3、4、5、6、7、8、9或10次。
60. 如請求項58或59之方法，其中該癌症疫苗組合物投與該患者每7天至少一次。
61. 如請求項58或59之方法，其中該癌症疫苗組合物投與該患者每14天至少一次。
62. 如請求項58或59之方法，其中該癌症疫苗組合物投與該患者每6個月至少一次。
63. 如請求項50至62中任一項之方法，其中該癌症疫苗組合物藉由選自以下之途徑投與：皮下、肌肉內、靜脈內、鼻內、舌下、頰內、吸入、皮內、瘤內、器官內、經口及腹膜內。
64. 如請求項63之方法，其中該癌症疫苗組合物藉由皮下注射投與。
65. 如請求項63之方法，其中該癌症疫苗組合物藉由靜脈內注射投與。
66. 如請求項63之方法，其中該癌症疫苗組合物藉由肌肉內注射投與。
67. 如請求項50至62中任一項之方法，其中該患者具免疫活性(immuno-competent)。
68. 如請求項50至62中任一項之方法，其中該患者為免疫功能低下(immunocompromised)。
69. 如請求項50至68中任一項之方法，其中與未經疫苗接種之患者之腫瘤生長相比，該處理使腫瘤生長減小至少10%。
70. 如請求項69之方法，其中與未經疫苗接種之患者之腫瘤生長相比，該處理使腫瘤生長減小至少20%。
71. 如請求項70之方法，其中與未經疫苗接種之患者之腫瘤生長相比，該處理使腫瘤生長減小至少50%。
72. 如請求項50至71中任一項之方法，其中與未經疫苗接種之患者相比，該處理使該患者之存活期延長至少10%。
73. 如請求項72之方法，其中與未經疫苗接種之患者相比，該處理使該患者之存活期延長至少20%。
74. 如請求項73之方法，其中與未經疫苗接種之患者相比，該處理使該患者之存活期延長至少50%。
75. 如請求項50至74中任一項之方法，其中該處理上調該患者中之IgG及/或IgM。
76. 如請求項50至75中任一項之方法，其中該處理活化該患者中之T細胞。
77. 如請求項50至76中任一項之方法，其中該癌症為乳癌、肺癌、肝癌、膀胱癌、婦科癌症、腦癌、胃癌、前列腺癌、皮膚癌、甲狀腺癌、胰臟癌、結腸癌或血癌。
78. 如請求項77之方法，其中該皮膚癌為黑色素瘤。
79. 如請求項77之方法，其中該血癌為白血病、淋巴瘤或骨髓瘤。
80. 如請求項79之方法，其中該白血病為急性淋巴球性白血病或急性骨髓白血病。
81. 如請求項79之方法，其中該淋巴瘤為霍奇金氏淋巴瘤或非霍奇金氏淋巴瘤。
82. 如請求項79之方法，其中該骨髓瘤為多發性骨髓瘤。
83. 如請求項50至82中任一項之方法，其中該癌症為轉移性癌症。
84. 如請求項50至83中任一項之方法，其中該癌症疫苗組合物與一或多種額外療法組合投與該患者。
85. 如請求項84之方法，其中該一或多種額外療法選自由以下組成之群：檢查點抑制劑、抗體療法、基因工程改造之樹突狀細胞、基因工程改造之T細胞，及化學療法。
86. 一種產生癌症疫苗之方法，該方法包含使癌細胞與UV光在核黃素存在下接觸。
87. 如請求項86之方法，其中該UV光改變該等癌細胞之DNA。
88. 如請求項87之方法，其中該UV光選擇性氧化該等癌細胞之DNA中之鳥嘌呤鹼基。
89. 如請求項86之方法，其中該光處理實質上不改變該等癌細胞上之該等抗原蛋白質之結構。
90. 如請求項86至89中任一項之方法，其中該UV光實質上不改變該等癌細胞之代謝過程、表型或結構。
91. 如請求項86至90中任一項之方法，其中該UV光實質上不改變該等癌細胞中之表面標記物表現或活性。
92. 如請求項91之方法，其中該UV光實質上不改變該等細胞中之EpCAM、CD38、CD34、CD117、CD44、CD24、Sca1、HLA、Glut1、MHC I類、PDL-L1、CD45、gp70、GFP及/或CD90之表現量。
93. 如請求項86至92中任一項之方法，其中該不活化不損害該等細胞之細胞膜及細胞核膜完整性。
94. 如請求項86至93中任一項之方法，其中該等癌細胞在核黃素存在下與UV光接觸約1分鐘至約3分鐘。
95. 如請求項86至94中任一項之方法，其中該UV光之波長為170至400 nm。
96. 如請求項86至94中任一項之方法，其中該UV光之波長為315至400 nm。
97. 如請求項86至94中任一項之方法，其中該UV光之波長為310至320 nm。
98. 如請求項86至94中任一項之方法，其中該UV光之波長為280至360 nm。
99. 如請求項86至94中任一項之方法，其中該UV光之波長為280至315 nm。
100. 如請求項86至94中任一項之方法，其中該UV光之波長為180至280 nm。
101. 如請求項86至94中任一項之方法，其中該UV光之波長為170至200 nm。
102. 如請求項86至101中任一項之方法，其中該UV光之劑量為約200焦耳至約600焦耳。
103. 如請求項102之方法，其中該UV光之劑量為約200焦耳至約400焦耳。
104. 如請求項103之方法，其中該UV光之劑量為約300焦耳。
105. 如請求項86至104中任一項之方法，其中該等癌細胞係於單細胞懸浮液中。
106. 如請求項105之方法，其中將該核黃素添加至該單細胞懸浮液中。
107. 如請求項86至106中任一項之方法，其中在該等癌細胞與該UV光接觸之前，將該等癌細胞在含有核黃素之溶液中預培育。
108. 如請求項107之方法，其中該溶液包含10至100 µM之核黃素。
109. 如請求項107之方法，其中該溶液包含約1 µM至約50 µM之核黃素。
110. 如請求項107之方法，其中該溶液包含低於約10 µM之核黃素。
111. 如請求項1至49中任一項之癌症疫苗組合物，其用作藥劑。
112. 如請求項1至49中任一項之癌症疫苗組合物，其用作治療癌症之藥劑。
113. 如請求項1至49中任一項之癌症疫苗組合物，其用於治療癌症之方法。
114. 一種如請求項1至49中任一項之癌症疫苗組合物之用途，其用於製造治療癌症之藥劑。
115. 如請求項111至113中任一項之癌症疫苗組合物或如請求項114之用途，其中該癌症為乳癌、肺癌、肝癌、膀胱癌、婦科癌症、腦癌、胃癌、前列腺癌、皮膚癌、甲狀腺癌、胰臟癌、結腸癌或血癌。
116. 如請求項115之癌症疫苗組合物或用途，其中該皮膚癌為黑色素瘤。
117. 如請求項115之癌症疫苗組合物或用途，其中該血癌為白血病、淋巴瘤或骨髓瘤。
118. 如請求項117之癌症疫苗組合物或用途，其中該白血病為急性淋巴球性白血病或急性骨髓白血病。
119. 如請求項117之癌症疫苗組合物或用途，其中該淋巴瘤為霍奇金氏淋巴瘤或非霍奇金氏淋巴瘤。
120. 如請求項117之癌症疫苗組合物或用途，其中該骨髓瘤為多發性骨髓瘤。
121. 如請求項111至113中任一項之癌症疫苗組合物或如請求項114之用途，其中該癌症為轉移性癌症。

Images