TW201919610A - 水通道蛋白3表現促進用組成物及其使用 - Google Patents
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Abstract
本發明係以提供促進水通道蛋白3表現之特定組成物,及其之使用為目的。
本發明係有關含有作為有效成分之具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物之水通道蛋白3表現促進用組成物。
本發明係有關含有作為有效成分之具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物之水通道蛋白3表現促進用組成物。
Description
本發明係有關水通道蛋白3表現促進用組成物及其使用。
女性對肌膚的煩惱及美容相關的期望大多有關肌膚的保濕與滋潤,目前正蓬勃發展目標為提高肌膚滋潤度之技術的研究。
可獲得使肌膚滋潤提升的蛋白質,已知有水通道蛋白(Aquaporin,AQP)。
1992年發現AQP蛋白質,功能係作為水分可快速且大量通過之通道,目前已確認13種(AQP0-AQP12)存在於人類。該等AQP因應細胞或組織的種類特異性地分布。AQP分布在人類的幾乎所有的臟器,腎臟等大量運送水分的臟器中特別多,各自協調地運作,擔任包含產生尿液、分泌消化液、防止乾燥、進而細胞彼此間的結合等各種各樣的功能(非專利文件1)。
1992年發現AQP蛋白質,功能係作為水分可快速且大量通過之通道,目前已確認13種(AQP0-AQP12)存在於人類。該等AQP因應細胞或組織的種類特異性地分布。AQP分布在人類的幾乎所有的臟器,腎臟等大量運送水分的臟器中特別多,各自協調地運作,擔任包含產生尿液、分泌消化液、防止乾燥、進而細胞彼此間的結合等各種各樣的功能(非專利文件1)。
皮膚自表面依序為由表皮、真皮及皮下組織此3層構造構成。表皮可分為角質層、顆粒層、有棘層、基底層,角質層具有防止水分蒸散至大氣中的功能,另外,亦具有吸收外部空氣與肌膚內部的水分與保持該水分的能力。角質層中不存在水分供給源的血管,但水通道蛋白3(AQP 3)表現在細胞膜,藉由吸收細胞間隙的水分子成為水分的通道,可使水分廣泛運送至角質層各處。實際上,AQP3缺損的小鼠皮膚與野生型小鼠的皮膚相比,角質層水分量與皮膚彈性顯著低下,認為在維持肌膚滋潤上AQP3扮演著的重要角色(非專利文件2)。另外,由於遭受肌膚粗糙等創傷時對於恢復能力亦產生重大影響,至今累積的研究認為藉由增強AQP3的產生,可改善各種皮膚的問題(非專利文件2)。
目前已知皮膚上皮細胞表現AQP3,在AQP3表現量增加時,皮膚組織的含水量增加,皮膚看起來恢復年輕,皮膚彈性增加,創傷治癒能力亦提高(非專利文件3)。反之,目前有報告指出當AQP3表現缺損時,將招致皮膚組織彈性降低及乾燥,進而延遲傷口的治癒(非專利文件4)。
另外,AQP3亦具有作為甘油輸送體的功能,認為可增加角質層的甘油(非專利文件5)。
[先前技術文件]
[專利文件]
另外,AQP3亦具有作為甘油輸送體的功能,認為可增加角質層的甘油(非專利文件5)。
[先前技術文件]
[專利文件]
專利文件1:特開2013-87058號公報
[非專利文件]
[非專利文件]
非專利文件1:水與水通道蛋白生物學 2008年,佐佐木誠 編集,中山書店
非專利文件2:Roles of Aquaporin-3 in the Epidermis. Hara-Chikuma M. and Verkman AS, J Invest Dermatol (2008) 128:2145-2151
非專利文件3:Hydrating skin by stimulation biosynthesis of aquaporins. Dumas M., et al., J Drugs Dermatol. (2007) 6: s 20-4
非專利文件4:Aquaporin-3 facilites epidermal cell migration and proliferation during wound healing. Hara-Chikuma M. and Verkman AS., J Mol Med. (2008) 86:221-231
非專利文件5:Expression and function of aquaporins in human skin: Is aquaporin-3 just a glycerol transporter? Boury-Jamot M., et al., Biochim Biophys Acta (2006) 1758:1034-1042
非專利文件2:Roles of Aquaporin-3 in the Epidermis. Hara-Chikuma M. and Verkman AS, J Invest Dermatol (2008) 128:2145-2151
非專利文件3:Hydrating skin by stimulation biosynthesis of aquaporins. Dumas M., et al., J Drugs Dermatol. (2007) 6: s 20-4
非專利文件4:Aquaporin-3 facilites epidermal cell migration and proliferation during wound healing. Hara-Chikuma M. and Verkman AS., J Mol Med. (2008) 86:221-231
非專利文件5:Expression and function of aquaporins in human skin: Is aquaporin-3 just a glycerol transporter? Boury-Jamot M., et al., Biochim Biophys Acta (2006) 1758:1034-1042
[發明欲解決之課題]
例如,專利文件1中指出水通道蛋白的產生增強製劑,揭示含有以葡萄葉等植物萃取物為有效成分。然而,並未具體地特定出增強水通道蛋白產生的有效成分,僅揭示單純以植物萃取物為有效成分。
彼時,由於植物萃取物中含有各式各樣成份,先前使其含於飲食品、化妝料、醫藥品或準醫藥品等之中,係期望特定出增強水通道蛋白產生的標的成分。
彼時,由於植物萃取物中含有各式各樣成份,先前使其含於飲食品、化妝料、醫藥品或準醫藥品等之中,係期望特定出增強水通道蛋白產生的標的成分。
本發明係為了解決上述問題所進行的研究,本發明之目的係提供促進水通道蛋白3表現之特定的組成物,以及其之使用。
[解決課題之手段]
[解決課題之手段]
本發明團隊進行專心研究後結果,發現後述特定之來自葡萄的原料,可提升肌膚的滋潤度。進而,發現後述特定之來自葡萄的原料,可使皮膚上皮細胞的水通道蛋白3表現量增加,且發現來自葡萄原料所含成分中,具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體以及具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物(低聚原花青素(OPC)),可特別使水通道蛋白3的表現量增加,遂完成本發明。
亦即,本發明係有關下述(1)~(9)所述內容。
(1)一種水通道蛋白3表現促進用組成物,其係含有作為有效成分之具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物。
(2)如前述(1)之組成物,其中具有前述沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有前述沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物,係包含於來自葡萄之原料中。
(3)如前述(2)之組成物,其中前述來自葡萄之原料包含選自由:選自由葡萄的果皮、果實及種子所成群之至少1種生原料、前述生原料之發酵物、該等之萃取物及該等之加工物所成群之至少1種。
(4)如上述(1)~(3)任一項之組成物,其中具有前述沒食子醯基的黃烷-3-醇單體,係以下述式(1)所示化合物及/或以下述式(2)所示化合物。
(1)一種水通道蛋白3表現促進用組成物,其係含有作為有效成分之具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物。
(2)如前述(1)之組成物,其中具有前述沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有前述沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物,係包含於來自葡萄之原料中。
(3)如前述(2)之組成物,其中前述來自葡萄之原料包含選自由:選自由葡萄的果皮、果實及種子所成群之至少1種生原料、前述生原料之發酵物、該等之萃取物及該等之加工物所成群之至少1種。
(4)如上述(1)~(3)任一項之組成物,其中具有前述沒食子醯基的黃烷-3-醇單體,係以下述式(1)所示化合物及/或以下述式(2)所示化合物。
。
(5)如上述(1)~(4)項任一項之組成物,其中具有前述沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物,係以下述式(3)所示化合物及/或以下述式(4)所示化合物。
。
(6)如前述(1)~(5)項任一項之組成物,其係飲食品、化妝料、醫藥品或準醫藥品。
(7)如上述(1)~(6)任一項之組成物,其係可用於選自由改善肌膚滋潤度、肌膚水分補給、肌膚水分保持、肌膚保濕、緩和肌膚乾燥、改善肌膚狀態、提高肌膚屏蔽功能、預防肌膚粗糙、改善肌膚粗糙、維持肌膚功能、肌膚功能改善及促進傷口治癒所成群之1或2種以上的用途。
(8)一種使用,其係為了促進水通道蛋白3表現之使用,係使用具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物。
(9)一種使用,其係為了藉由水通道蛋白3表現促進使肌膚滋潤度提升之使用,係使用具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物。
[發明的效果]
(7)如上述(1)~(6)任一項之組成物,其係可用於選自由改善肌膚滋潤度、肌膚水分補給、肌膚水分保持、肌膚保濕、緩和肌膚乾燥、改善肌膚狀態、提高肌膚屏蔽功能、預防肌膚粗糙、改善肌膚粗糙、維持肌膚功能、肌膚功能改善及促進傷口治癒所成群之1或2種以上的用途。
(8)一種使用,其係為了促進水通道蛋白3表現之使用,係使用具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物。
(9)一種使用,其係為了藉由水通道蛋白3表現促進使肌膚滋潤度提升之使用,係使用具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物。
[發明的效果]
具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物可促進水通道蛋白3之表現。因此,含有具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物作為有效成分之本發明組成物,可使水通道蛋白3的表現量增加。進而,含有具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物作為有效成分之本發明組成物,藉由促進水通道蛋白3的表現,可提高肌膚的滋潤度。
以下,詳細說明本發明。但下述實施方式係為了說明本發明之例示,其目的並非將本發明僅限定於該實施方式之內容。本發明於未脫離其要旨之範圍,可採用各式各樣的方式實施。
本發明之組成物,係含有作為有效成分之具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物,使用於「為了促進水通道蛋白3表現」或「為了利用促進水通道蛋白3表現來提升肌膚滋潤度」。
提升肌膚滋潤用組成物係與本發明第1實施方式有關的組成物。另外,水通道蛋白3表現促進用組成物,係與本發明第2實施方式有關的組成物。
以下,說明與本發明第1實施方式有關的組成物以及與第2實施方式有關的組成物之共通的構成等。
且,於下述說明中,亦將與本發明第1實施方式有關的組成物以及與第2實施方式有關的組成物亦合併記載為「與本發明有關的組成物」。
提升肌膚滋潤用組成物係與本發明第1實施方式有關的組成物。另外,水通道蛋白3表現促進用組成物,係與本發明第2實施方式有關的組成物。
以下,說明與本發明第1實施方式有關的組成物以及與第2實施方式有關的組成物之共通的構成等。
且,於下述說明中,亦將與本發明第1實施方式有關的組成物以及與第2實施方式有關的組成物亦合併記載為「與本發明有關的組成物」。
前述具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體係以兒茶素、表兒茶素等所代表之黃烷-3-醇與沒食子醯基鍵結者,但並未特別限定其鍵結位置,例如,亦可與黃烷骨架鍵結。其中一實施方式中,本發明中具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體,係於黃烷骨架第3位置的氫氧基鍵結沒食子醯基者,亦即,亦可為黃烷骨架第3位置的氫氧基鍵結沒食子酸與酯之化合物。
前述黃烷-3-醇第3位置的氫氧基鍵結沒食子醯基之化合物,可舉出例如前述式(1)所示之化合物,以及前述式(2)所示之化合物等。
亦即,可舉出兒茶素沒食子酸酯、表兒茶素沒食子酸酯、表沒食子兒茶素沒食子酸酯、沒食子兒茶素沒食子酸酯等。其中以表兒茶素沒食子酸酯為佳。
亦即,可舉出兒茶素沒食子酸酯、表兒茶素沒食子酸酯、表沒食子兒茶素沒食子酸酯、沒食子兒茶素沒食子酸酯等。其中以表兒茶素沒食子酸酯為佳。
前述黃烷-3-醇聚合物係以黃烷-3-醇為構成單位,且黃烷-3-醇係已於4-6位置或4-8位置鍵結之2聚體以上的聚合物。黃烷-3-醇聚合物係多酚的一種,亦稱為縮和單寧之化合物。
具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物,係含有至少1個於沒食子醯基被修飾的黃烷-3-醇為構成單位之黃烷-3-醇聚合物。並未特別限制構成單位之黃烷-3-醇中沒食子醯基的鍵結位置,例如,本發明中具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物,以具有黃烷骨架第3位置的氫氧基鍵結沒食子醯基之黃烷-3-醇(黃烷骨架第3位置的氫氧基鍵結沒食子酸與酯之黃烷-3-醇)為構成單位之黃烷-3-醇聚合物為佳。
具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物,亦可為聚合度相異的2種以上聚合物之混合物。
具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物,係含有至少1個於沒食子醯基被修飾的黃烷-3-醇為構成單位之黃烷-3-醇聚合物。並未特別限制構成單位之黃烷-3-醇中沒食子醯基的鍵結位置,例如,本發明中具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物,以具有黃烷骨架第3位置的氫氧基鍵結沒食子醯基之黃烷-3-醇(黃烷骨架第3位置的氫氧基鍵結沒食子酸與酯之黃烷-3-醇)為構成單位之黃烷-3-醇聚合物為佳。
具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物,亦可為聚合度相異的2種以上聚合物之混合物。
且,前述黃烷-3-醇聚合物,構成單位之黃烷-3-醇係以已於4-8位置鍵結之2聚體以上的聚合物為佳。理由係例如就已於4-6位置鍵結之黃烷-3-醇2聚體,與已於4-8位置鍵結之黃烷-3-醇2聚體而言,由於葡萄等天然物中以已於4-8位置鍵結之黃烷-3-醇2聚體的含量較多,可確保為了促進水通道蛋白3表現之充分的量。
具有黃烷骨架第3位置的氫氧基鍵結沒食子醯基之黃烷-3-醇為構成單位的黃烷-3-醇聚合物,可舉出例如以前述式(3)所示之化合物以及以前述式(4)所示之化合物。
可使用於本發明之具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物,自適用為飲食品、化妝料、醫藥品或準醫藥品組成物之觀點,以單體至3聚體為佳。進而,以2聚體及/或3聚體更佳,2聚體最佳。理由係經口攝取時黃烷-3-醇單體以及2聚體之黃烷-3-醇聚合物可被人體吸收。另外,使用為外用劑時,考慮表現水通道蛋白3的角質細胞的吸收滲透時,以黃烷-3-醇單體、2及/或3聚體之黃烷-3-醇聚合物為佳。
雖然兒茶素、表兒茶素等黃烷-3-醇單體、2聚體及/或3聚體之黃烷-3-醇聚合物,「水通道蛋白3表現促進」或「藉由水通道蛋白3表現促進來提升肌膚的滋潤度」作用較低,但具有沒食子醯基後便提高了該作用。特別是2聚體及/或3聚體之黃烷-3-醇聚合物,藉由具有沒食子醯基,使前述作用顯著提升。因此,選自由具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體,2聚體以及3聚體之具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物所成群之至少一種,循環於血液中,可被角質細胞吸收,成為前述作用高之組成物。進而,自水通道蛋白3表現促進作用之觀點,與本發明相關之組成物以含有具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物作為有效成分為佳。
並未特別限定可使用於與本發明有關組成物之具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物,例如以(+)-catechin-(-)-epicatechin-3-O-gallate(以下亦記作C-ECG)、(-)-epicatechin-(-)-epicatechin-3-O-gallate(以下亦記作EC-ECG)等具有沒食子醯基的黃烷-3-醇2聚體、(+)-catechin-(+)-catechin-(-)-epicatechin-3-O-gallate(以下亦記作C-C-ECG)等具有沒食子醯基的黃烷-3-醇3聚體等為佳。
具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物,並未因其來源與製造方法而有所限制。例如,可使用自植物萃取之來自植物者,亦可使用利用合成法獲得者。具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體,例如可自葡萄、茶樹等植物獲得。具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物,例如可自葡萄、西洋梨、荔枝等植物獲得。例如,葡萄種子裡含有具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體以及具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物(參照文獻1:“Comparative flavan-3-ol composition of seeds from different grape varieties” Food Chemistry 53(1995) 197-201,參照文獻2:“PROCYANIDIN DIMERS AND TRIMERS FROM GRAPE SEEDS”Phytochemistry Vol. 30. No. 4, pp 1259-1264 1991,參照文獻3:“「葡萄種子多酚」功能性的應用”NEW FOOD INDUSTRY Vol. 43 No. 11(2001)別冊)。
自肌膚滋潤度提升用以及增加水通道蛋白3表現量之觀點,前述具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物,以包含於來自葡萄原料者為佳。來自葡萄原料中所包含的具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物,自安全性觀點而言相當合適。
自肌膚滋潤度提升用以及增加水通道蛋白3表現量之觀點,前述具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物,以包含於來自葡萄原料者為佳。來自葡萄原料中所包含的具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物,自安全性觀點而言相當合適。
來自葡萄之原料包含選自由:選自由葡萄的果皮、果實及種子所成群之至少1種生原料、前述生原料之發酵物、該等之萃取物及該等之加工物所成群之至少1種。來自葡萄之原料以包含選自由葡萄的果皮及/或種子、葡萄的果皮及/或種子的發酵物、該等之萃取物及該等之加工物所成群之至少1種為佳。來自葡萄的原料更佳係包含葡萄生原料之葡萄的果皮及/或種子。
與本發明有關的組成物,以含有含具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物之前述來自葡萄的原料為佳。
與本發明有關的組成物,以含有含具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物之前述來自葡萄的原料為佳。
另外,本說明書中「生原料的萃取物」係意指自生原料可獲得之一部分的成份。生原料的萃取物可舉出例如果汁(鮮榨果汁以及濃縮果汁)等。
生原料的發酵物可舉出例如葡萄酒等。
生原料的發酵物的萃取物可舉出例如對葡萄酒發酵殘渣以水或乙醇等溶媒萃取之物。
生原料的發酵物的加工物可舉出例如葡萄酒濃縮物、稀釋物、經濃縮或去除特定成分者,以自葡萄酒去除酒精成分者等為佳。
生原料的發酵物可舉出例如葡萄酒等。
生原料的發酵物的萃取物可舉出例如對葡萄酒發酵殘渣以水或乙醇等溶媒萃取之物。
生原料的發酵物的加工物可舉出例如葡萄酒濃縮物、稀釋物、經濃縮或去除特定成分者,以自葡萄酒去除酒精成分者等為佳。
前述生原料的萃取物,可利用萃取植物成分時可使用的一般的萃取方法來獲得。可適當地設定萃取方法,並未特別限制萃取條件。例如,可將選擇自前述葡萄的果皮、果實及種子所成群之至少1種生原料,於常溫、加溫或低溫下使用溶媒進行萃取。
且,進行萃取時,可粉碎生原料。
粉碎方法可舉出如專利第4892348號公報記載般,將生原料於液態氮氣中粉碎方法。
且,進行萃取時,可粉碎生原料。
粉碎方法可舉出如專利第4892348號公報記載般,將生原料於液態氮氣中粉碎方法。
前述生原料的萃取物以萃取液形態獲得時,例如,可於溶媒中加入生原料,藉由進行適當加熱、攪拌等之後萃取成分,獲得生原料的萃取物。
萃取時使用的溶媒(萃取溶媒),希望使用水、有機溶媒或該等的混合溶媒。有機溶媒可舉出例如乙醇、1,3-丁二醇(標籤名稱:BG)、1,2-戊二醇(標籤名稱:戊二醇)、丙基-1,2-二醇(標籤名稱:丙二醇)、1,3-丙二醇(標籤名稱:戊二醇)、角鯊烷等。有機溶媒可單獨使用,亦可組合2種以上。
進行萃取時可添加酸或鹼,亦可調整萃取溶媒的pH。
進行萃取時亦可適當地加壓。並未特別限制萃取溫度,例如以0~130℃為佳,20~100℃,50~100℃更佳,70~95℃最佳。另外萃取溫度設定在溶媒的沸點以下為佳。
萃取時間可因應萃取溫度等萃取條件適當地設定。
萃取時間可因應萃取溫度等萃取條件適當地設定。
萃取後,自獲得的萃取物除去萃取殘渣為佳。並未特別限定去除方法,可採用過濾、離心分離等周知的方法。
本發明中,可將藉由萃取獲得的萃取液作為來自葡萄原料使用。另外,亦可以適當的溶媒稀釋萃取液後作為來自葡萄原料使用,且亦可對該萃取液進行濃縮或乾燥步驟,製成濃縮物與乾燥物。
並未特別限制濃縮方法、乾燥方法,可使用冷凍乾燥、噴霧乾燥等周知的方法。
未特別限制萃取物的形態,可以液狀、粉末狀、膏狀的形式使用。另外,在不損及本發明效果的範圍內,可藉由再進而對萃取物進行適當的純化方法或分離方法(例如液液萃取(液液分配)、色層分析),純化活性高的劃分或進行分劃後使用。
本發明中的來自葡萄原料包含利用如上述萃取方法獲得的各種溶媒萃取物、其稀釋液、其濃縮物、其乾燥物、該等的純化劃分。
並未特別限制濃縮方法、乾燥方法,可使用冷凍乾燥、噴霧乾燥等周知的方法。
未特別限制萃取物的形態,可以液狀、粉末狀、膏狀的形式使用。另外,在不損及本發明效果的範圍內,可藉由再進而對萃取物進行適當的純化方法或分離方法(例如液液萃取(液液分配)、色層分析),純化活性高的劃分或進行分劃後使用。
本發明中的來自葡萄原料包含利用如上述萃取方法獲得的各種溶媒萃取物、其稀釋液、其濃縮物、其乾燥物、該等的純化劃分。
並未特別限制前述生原料的發酵物,例如,可使用利用酵母的發酵物。酵母可使用例如Saccharomyces cerevisiae
。
發酵條件可因應酵母種類適當地決定。
發酵條件可因應酵母種類適當地決定。
與本發明有關的組成物中,並未特別限制作為來自葡萄的原料其葡萄品種,以可做葡萄酒原料之品種為佳。可做葡萄酒原料的品種可舉出做紅葡萄酒原料的品種,做白葡萄酒原料的品種。
紅葡萄酒原料的品種,以選自梅洛(Merlot)、紅格那希(Garnacha Tintorera)、安塞羅塔(Ancellotta)、慕維得爾(Monastrell)、田帕尼優(Tempranillo)、卡本內.蘇維翁(Cabernet Sauvignon)、黑皮諾(Pinot Noir)、麝香貝利A(Muscat Bailey A)及康考特(Concord)所成群之至少1種為佳。
做白葡萄酒原料的品種,可使用夏多內(Chardonnay)、夏布利(Chablis)、甲州(Koshu),但未限定於該種類。
來自該等品種的來自葡萄原料,由於含有具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體以及具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物,顯示具有優異的肌膚滋潤度提升效果,亦顯示優異的水通道蛋白3表現量的增加效果。
紅葡萄酒原料的品種,以選自梅洛(Merlot)、紅格那希(Garnacha Tintorera)、安塞羅塔(Ancellotta)、慕維得爾(Monastrell)、田帕尼優(Tempranillo)、卡本內.蘇維翁(Cabernet Sauvignon)、黑皮諾(Pinot Noir)、麝香貝利A(Muscat Bailey A)及康考特(Concord)所成群之至少1種為佳。
做白葡萄酒原料的品種,可使用夏多內(Chardonnay)、夏布利(Chablis)、甲州(Koshu),但未限定於該種類。
來自該等品種的來自葡萄原料,由於含有具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體以及具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物,顯示具有優異的肌膚滋潤度提升效果,亦顯示優異的水通道蛋白3表現量的增加效果。
與本發明有關的組成物之有效成分之具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物,以自前述來自葡萄原料所得者為佳。自來自葡萄原料獲得具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物之方法,可舉出分劃方法等,可使用本發明所屬技術領域中一般可使用之方法。
例如,自葡萄種子萃取及純化具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物時,藉由以含水酒精萃取葡萄種子後,過濾獲得的萃取液,濃縮後去除酒精後,以管柱純化等進行純化,可獲得含有具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物之葡萄種子萃取物。所獲得的葡萄種子萃取物,進而進行純化,可提高具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物的純度。
且具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體,可自葡萄之外如來自茶樹的原料獲得,例如可藉由自綠茶葉萃取,進行純化後獲得。
且具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體,可自葡萄之外如來自茶樹的原料獲得,例如可藉由自綠茶葉萃取,進行純化後獲得。
黃烷-3-醇單體及聚合物,具有沒食子醯基,可藉由例如對該黃烷-3-醇單體及聚合物,以單寧酶處理或酸水解處理之後,生成沒食子酸而加以確認。利用前述處理生成沒食子酸的黃烷-3-醇單體及聚合物,具有沒食子醯基。
已生成沒食子酸的確認,針對黃烷-3-醇單體及聚合物,可藉由測量以單寧酶處理或酸水解處理的處理前與後之沒食子酸之量。前述處理後的黃烷-3-醇單體及聚合物中的沒食子酸量,與處理前的黃烷-3-醇單體及聚合物中的沒食子酸量相比為較多時,可說明利用前述處理生成了沒食子酸。
已生成沒食子酸的確認,針對黃烷-3-醇單體及聚合物,可藉由測量以單寧酶處理或酸水解處理的處理前與後之沒食子酸之量。前述處理後的黃烷-3-醇單體及聚合物中的沒食子酸量,與處理前的黃烷-3-醇單體及聚合物中的沒食子酸量相比為較多時,可說明利用前述處理生成了沒食子酸。
與本發明有關的組成物希望是飲食品、化妝料、醫藥品或準醫藥品。該等飲食品、化妝料、醫藥品或準醫藥品的製造方法並無特別限制,可於該等中摻混本發明中的有效成分或含其之前述來自葡萄的原料。且,與本發明有關的組成物可作為該等之飲食品、化妝料、醫藥品或準醫藥品等的原料,亦可使用為原料用組成物。
另外,與本發明有關的組成物,亦可用為選自由改善肌膚滋潤度、肌膚水分保持、肌膚水分補給、肌膚保濕、緩和肌膚乾燥、提高肌膚屏蔽功能、改善肌膚狀態、預防肌膚粗糙、改善肌膚粗糙、維持肌膚功能、肌膚功能改善及促進傷口治癒所成群之1或2以上的用途。
另外,與本發明有關的組成物,亦可用為選自由改善肌膚滋潤度、肌膚水分保持、肌膚水分補給、肌膚保濕、緩和肌膚乾燥、提高肌膚屏蔽功能、改善肌膚狀態、預防肌膚粗糙、改善肌膚粗糙、維持肌膚功能、肌膚功能改善及促進傷口治癒所成群之1或2以上的用途。
本說明書中,「飲食品」係固體、流動體及液體,以及該等之混合物,係可經口攝食之物的總稱。
飲食品之例,可舉出特定保健用食品、營養輔助食品、健康食品、功能性表示食品、幼兒用食品、乳兒用調製乳、早產兒用調製乳、老人用食品等。
飲食品之例,可舉出特定保健用食品、營養輔助食品、健康食品、功能性表示食品、幼兒用食品、乳兒用調製乳、早產兒用調製乳、老人用食品等。
特定保健用食品係意指取得健康增進法第26條第1項的許可,或同法第29條第1項的承認,對飲食生活中因特定保健目的攝取者,標示有藉由該攝取可期待該保健目的內容之食品。
營養輔助食品係指經強化特定營養成分的食品。健康食品係指健康的或對健康有益的食品,包含營養補助食品、自然食品、節食食品等。
功能性表示食品係以科學證據為基礎標示其功能性者,經向消費者署提出申請許可的食品。
幼兒用食品係為提供給至6歲為止的兒童之食品。
乳兒用調製乳係為提供給約1歲為止的兒童之調製乳。
早產兒用調製乳係為提供給早產兒自出生後至約6個月為止之調製乳。
老人用食品係與無處理的食品相比,經較易消化及吸收處理之食品。
營養輔助食品係指經強化特定營養成分的食品。健康食品係指健康的或對健康有益的食品,包含營養補助食品、自然食品、節食食品等。
功能性表示食品係以科學證據為基礎標示其功能性者,經向消費者署提出申請許可的食品。
幼兒用食品係為提供給至6歲為止的兒童之食品。
乳兒用調製乳係為提供給約1歲為止的兒童之調製乳。
早產兒用調製乳係為提供給早產兒自出生後至約6個月為止之調製乳。
老人用食品係與無處理的食品相比,經較易消化及吸收處理之食品。
另外,並未特別限制飲食品的形態,可以製成各式各樣的形態。該等形態之例可舉出例如飲料、菓子類、營養補充品等。
飲料可為酒精飲料及無酒精飲料之任一種。
無酒精飲料可舉出茶系飲料、咖啡飲料、碳酸飲料、功能性飲料、果實、蔬菜系飲料、乳性飲料、豆漿飲料、風味水等,但未限定於該例示。
進而,非酒精飲料中亦包含酒精未達1%的飲料,例如亦包含無酒精啤酒、無酒精葡萄酒、無酒精雞尾酒等。
進而,非酒精飲料中亦包含酒精未達1%的飲料,例如亦包含無酒精啤酒、無酒精葡萄酒、無酒精雞尾酒等。
茶系飲料可舉出紅茶飲料、無糖茶飲料等。
另外,無糖茶飲料可舉出綠茶飲料、烏龍茶飲料、麥茶飲料、玄米茶飲料、薏仁茶飲料、無糖的紅茶飲料等。
另外,無糖茶飲料可舉出綠茶飲料、烏龍茶飲料、麥茶飲料、玄米茶飲料、薏仁茶飲料、無糖的紅茶飲料等。
咖啡飲料可為容器包裝咖啡或萃取液狀咖啡之任一種。
碳酸飲料可舉出可樂風味飲料、透明碳酸飲料、薑汁汽水、果汁系碳酸飲料、添加乳類的碳酸飲料、無糖碳酸飲料等。
功能性飲料可舉出美容飲料、運動飲料、能量飲料、健康支援飲料、軟罐頭果凍飲料等。
果實、蔬菜系飲料可舉出果實飲料、添加果實飲料、添加低量果汁清涼飲料、含果粒果實飲料、果肉飲料等。
乳性飲料可舉出牛奶、優酪乳、乳酸菌飲料、添加乳類清涼飲料等。
豆漿飲料包含豆漿、黃豆飲料等。
並未特別限定飲料被收容的形態,可製成容器包裝飲料。容器包裝飲料的容器並無特別限制,可使用任一種形態及材質的容器,例如,可使用鋁罐、鐵合金金屬罐等金屬製容器;寶特瓶等樹脂製容器;紙盒等紙容器;玻璃瓶等玻璃製容器;木樽等木製容器等一般可使用的容器之任一種。藉由將飲料填充及密閉於該等容器,可獲得容器包裝飲料。
另外,本發明之容器包裝飲料不僅可自容器直接飲用,亦可例如填充於紙箱桶裝等儲存槽容器,或是定量包裝容器等,於飲用時藉由倒入其他容器而可提供飲用。另外,濃縮液可於提供於飲用時加以稀釋。
另外,本發明之容器包裝飲料不僅可自容器直接飲用,亦可例如填充於紙箱桶裝等儲存槽容器,或是定量包裝容器等,於飲用時藉由倒入其他容器而可提供飲用。另外,濃縮液可於提供於飲用時加以稀釋。
酒精飲料可舉出啤酒、啤酒系飲料、葡萄酒、燒酌、燒酌雞尾酒、水果酒、雞尾酒、烈酒、威士忌、白蘭地等。
啤酒系飲料包含發泡酒或第三類啤酒、添加果實與果汁的啤酒。
啤酒系飲料包含發泡酒或第三類啤酒、添加果實與果汁的啤酒。
將與本發明有關的組成物使用為飲食品時,該飲食品中亦可含有甜菊萃取物、乙醯磺胺酸鉀與三氯蔗糖等甜味料、蔗糖等糖質、蘋果酸與無水檸檬酸等有機酸、難消化性糊精等食物纖維、香料、著色料。
與本發明有關的組成物為飲食品時,可為以保持皮膚健康調整肌膚本身狀態為目的之肌膚保養用飲食品。該等飲食品的形態,可舉出例如飲料、營養補充品等。
將與本發明有關的組成物使用為化妝料時,以使用為皮膚外用組成物為佳。
使用為皮膚外用組成物時,與本發明有關的組成物,可調製為貼布劑、軟膏劑、洗臉料(洗臉用化妝料)、化妝水、面膜、按摩用乳霜、乳狀乳液、乳液、乳霜、精華液(美容液)等肌膚保養化妝料、肥皂、液體洗淨料、入浴劑、防曬乳霜、防曬油、止汗噴霧、身體乳液、身體乳霜、手部乳液等身體保養化妝料。
另外,化妝料可再含有可使用於化妝料的擔體與賦形劑。
使用為皮膚外用組成物時,與本發明有關的組成物,可調製為貼布劑、軟膏劑、洗臉料(洗臉用化妝料)、化妝水、面膜、按摩用乳霜、乳狀乳液、乳液、乳霜、精華液(美容液)等肌膚保養化妝料、肥皂、液體洗淨料、入浴劑、防曬乳霜、防曬油、止汗噴霧、身體乳液、身體乳霜、手部乳液等身體保養化妝料。
另外,化妝料可再含有可使用於化妝料的擔體與賦形劑。
將與本發明有關的組成物使用為醫藥品或準醫藥品時,醫藥品或準醫藥品的投予路徑可為經口或非經口投予之任一種。
非經口投予之例可舉出經皮、局部、經鼻、舌下、經肺、經腸、經黏膜、注射等投予。
為了經口投予之製劑劑型可舉出液劑、錠劑、散劑、丸劑、細粒劑、顆粒劑、糖衣錠、膠囊劑、懸濁劑、乳劑、糖漿劑、萃取劑、乳膠、微膠囊劑、喉錠、糖劑、頰錠、可嚼劑等。
為了非經口投予之製劑的劑型可舉出氣膠劑、注射劑、點滴、吸入劑、輸液劑、坐藥、經皮吸收劑、點鼻劑、點眼劑、貼布劑、濕布、乳霜、凝膠、乳液等。
非經口投予之例可舉出經皮、局部、經鼻、舌下、經肺、經腸、經黏膜、注射等投予。
為了經口投予之製劑劑型可舉出液劑、錠劑、散劑、丸劑、細粒劑、顆粒劑、糖衣錠、膠囊劑、懸濁劑、乳劑、糖漿劑、萃取劑、乳膠、微膠囊劑、喉錠、糖劑、頰錠、可嚼劑等。
為了非經口投予之製劑的劑型可舉出氣膠劑、注射劑、點滴、吸入劑、輸液劑、坐藥、經皮吸收劑、點鼻劑、點眼劑、貼布劑、濕布、乳霜、凝膠、乳液等。
將與本發明有關的組成物使用為醫藥品或準醫藥品時,可單獨使用與本發明有關的組成物,亦可與其他醫藥品或準醫藥品併用。
進而,將與本發明有關的組成物使用為醫藥品或準醫藥品時,該醫藥品或準醫藥品可含有選自醫藥學上許可的擔體、賦形劑、緩衝劑、結合劑、崩壞劑、滑澤劑、抗氧化劑、著色劑所成群之至少一個以上的添加劑。
進而,將與本發明有關的組成物使用為醫藥品或準醫藥品時,該醫藥品或準醫藥品可含有選自醫藥學上許可的擔體、賦形劑、緩衝劑、結合劑、崩壞劑、滑澤劑、抗氧化劑、著色劑所成群之至少一個以上的添加劑。
另外,與本發明有關的組成物,其中一例,可以製劑形態使用,但並非限定於本形態。該劑可直接作為組成物使用,亦可作為含該劑的組成物而使用。
與本發明有關的組成物中,如前所述,含有作為有效成分的具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物。另外,具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物,以包含於來自葡萄原料中為佳。於一實施方式中,與本發明有關的組成物係以含有含作為有效成分的具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物之來自葡萄之原料更佳。
進而,與本發明有關的組成物中,來自葡萄原料之含量(換算為乾燥物),以1~30重量%為佳。
進而,與本發明有關的組成物中,來自葡萄原料之含量(換算為乾燥物),以1~30重量%為佳。
與本發明有關的組成物中,含有作為有效成分之來自葡萄原料中包含之具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物更佳。
以下,將來自葡萄原料中所含之黃烷-3-醇聚合物,略記作「來自葡萄OPC」,來自葡萄原料中所含之具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物,略記作「具有沒食子醯基之來自葡萄OPC」。
以下,將來自葡萄原料中所含之黃烷-3-醇聚合物,略記作「來自葡萄OPC」,來自葡萄原料中所含之具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物,略記作「具有沒食子醯基之來自葡萄OPC」。
將與本發明有關的組成物作為飲食品、化妝料、醫藥品或準醫藥品等原料,使用為原料用組成物時,前述原料用組成物中所含來自葡萄OPC的濃度可為100ppm以上、200ppm以上、500ppm以上、1,000ppm以上或2,000ppm以上。另外,前述原料用組成物中所含來自葡萄OPC的濃度以50,000ppm以下為佳、25,000ppm以下更佳、20,000ppm以下最佳。前述原料用組成物中所含來自葡萄OPC的濃度,例如,100~50,000ppm為佳、200~25,000ppm更佳、500~20,000ppm最佳。其他的實施方式中,500~50,000ppm為佳、1,000~25,000ppm更佳、2,000~20,000ppm最佳。前述原料用組成物中所含具有沒食子醯基的來自葡萄OPC的濃度,可為1.0ppm以上、2.0ppm以上、5.0ppm以上、10.0ppm以上或20.0ppm以上。另外,前述原料用組成物中所含具有沒食子醯基的來自葡萄OPC的濃度以5,000ppm以下為佳、2,500ppm以下更佳、2,000ppm以下最佳。前述原料用組成物中所含具有沒食子醯基的來自葡萄OPC的濃度,例如,1.0~5,000ppm為佳、2.0~2,500ppm更佳、5.0~2,000ppm最佳。其他的實施方式中,5.0~5,000ppm為佳、10.0~2,500ppm更佳、20.0~2,000ppm最佳。
另外,本發明組成物為飲食品、化妝料、醫藥品或準醫藥品時,與本發明有關的組成物中所含來自葡萄OPC的濃度,以0.001mg/mL以上為佳,以0.01mg/mL以上更佳,以0.1mg/mL以上最佳。另外,與本發明有關的組成物中所含來自葡萄OPC的濃度,以100.0mg/mL以下為佳,以10.0mg/mL以下更佳。與本發明有關的組成物中所含來自葡萄OPC的濃度,組成物中以0.001~100.0mg/mL為佳,以0.01~10.0mg/mL更佳。另一實施方式中,以0.01~100.0mg/mL為佳,以0.1~10.0mg/mL更佳。與本發明有關的組成物中所含具有沒食子醯基的來自葡萄OPC的濃度,以0.00001mg/mL以上為佳,以0.0001mg/mL以上更佳,以0.001mg/mL以上最佳。另外,與本發明有關的組成物中所含具有沒食子醯基的來自葡萄OPC的濃度,以10.0mg/mL以下為佳,以1.0mg/mL以下更佳。與本發明有關的組成物中所含具有沒食子醯基的來自葡萄OPC的濃度,組成物中以0.00001~10.0mg/mL為佳,以0.0001~1.0mg/mL更佳。另一實施方式中,以0.0001~10.0mg/mL為佳,以0.001~1.0mg/mL更佳。且,來自葡萄OPC的濃度,可藉由專利第4659407號公報之方法進行測定。另外,該量可1次使用,亦可分為數次使用。另外,具有沒食子醯基的來自葡萄OPC的含量,可依循周知的方法測定,例如可使用LC-MS法等。
另外,本發明組成物為飲食品、化妝料、醫藥品或準醫藥品時,與本發明有關的組成物中所含來自葡萄OPC的濃度,以0.001mg/mL以上為佳,以0.01mg/mL以上更佳,以0.1mg/mL以上最佳。另外,與本發明有關的組成物中所含來自葡萄OPC的濃度,以100.0mg/mL以下為佳,以10.0mg/mL以下更佳。與本發明有關的組成物中所含來自葡萄OPC的濃度,組成物中以0.001~100.0mg/mL為佳,以0.01~10.0mg/mL更佳。另一實施方式中,以0.01~100.0mg/mL為佳,以0.1~10.0mg/mL更佳。與本發明有關的組成物中所含具有沒食子醯基的來自葡萄OPC的濃度,以0.00001mg/mL以上為佳,以0.0001mg/mL以上更佳,以0.001mg/mL以上最佳。另外,與本發明有關的組成物中所含具有沒食子醯基的來自葡萄OPC的濃度,以10.0mg/mL以下為佳,以1.0mg/mL以下更佳。與本發明有關的組成物中所含具有沒食子醯基的來自葡萄OPC的濃度,組成物中以0.00001~10.0mg/mL為佳,以0.0001~1.0mg/mL更佳。另一實施方式中,以0.0001~10.0mg/mL為佳,以0.001~1.0mg/mL更佳。且,來自葡萄OPC的濃度,可藉由專利第4659407號公報之方法進行測定。另外,該量可1次使用,亦可分為數次使用。另外,具有沒食子醯基的來自葡萄OPC的含量,可依循周知的方法測定,例如可使用LC-MS法等。
經口攝取與本發明有關的組成物時,每日來自葡萄OPC的攝取量以10~2000mg為佳,100~400mg更佳。且,此時,每日之具有沒食子醯基來自葡萄OPC的攝取量以0.1~200mg為佳,1.0~40.0mg更佳。
將與本發明有關的組成物使用為皮膚外用組成物等外用劑時,每日來自葡萄OPC的使用量(換算為乾燥物)以0.01~100.0mg為佳,0.1~10.0mg更佳。且,此時,每日具有沒食子醯基的來自葡萄OPC的使用量(換算為乾燥物)以0.0001~10.0mg為佳,0.001~1.0mg更佳。
另外,前述量可1次使用,亦可分為數次使用。
將與本發明有關的組成物使用為皮膚外用組成物等外用劑時,每日來自葡萄OPC的使用量(換算為乾燥物)以0.01~100.0mg為佳,0.1~10.0mg更佳。且,此時,每日具有沒食子醯基的來自葡萄OPC的使用量(換算為乾燥物)以0.0001~10.0mg為佳,0.001~1.0mg更佳。
另外,前述量可1次使用,亦可分為數次使用。
與本發明有關的組成物適於使用於人類。其中一實施方式,適於使用於希望或需要增加水通道蛋白3表現的對象,與希望或需要提高肌膚滋潤度的對象。
與本發明有關的組成物中亦可含有來自葡萄的花青素。
與本發明有關的組成物中來自葡萄的總多酚,於組成物中以含有500~50000mg/mL為佳,以1000~20000mg/mL更佳。
來自葡萄的總多酚可利用福林試劑法測定。
來自葡萄的總多酚可利用福林試劑法測定。
與本發明有關之含有具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物之組成物,可利用例如以下(1)~(3)之方法製造。
(1)將含有豐富多酚的葡萄酒調整為適當的濃度,製作為含酒精的類葡萄酒飲料,此係作為含有具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物組成物之方法。
(2)減壓濃縮含有豐富多酚的葡萄酒,藉由餾除酒精製造為無酒精的加工物,再將其調整為適當的濃度製作為無酒精飲料,此係作為含有具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物組成物之方法。
(3)粉碎葡萄生原料(例如於液態氮中粉碎),將粉碎物以含0~100%的酒精水溶液進行萃取後的萃取物,調整至適當的濃度製作為飲料,此係作為含有具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物組成物之方法。
(1)將含有豐富多酚的葡萄酒調整為適當的濃度,製作為含酒精的類葡萄酒飲料,此係作為含有具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物組成物之方法。
(2)減壓濃縮含有豐富多酚的葡萄酒,藉由餾除酒精製造為無酒精的加工物,再將其調整為適當的濃度製作為無酒精飲料,此係作為含有具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物組成物之方法。
(3)粉碎葡萄生原料(例如於液態氮中粉碎),將粉碎物以含0~100%的酒精水溶液進行萃取後的萃取物,調整至適當的濃度製作為飲料,此係作為含有具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物組成物之方法。
且,利用上述方法製造的組成物,由於除了具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物組成物此有效成分以外,尚含有其他各式各樣的成分,再進而將獲得之組成物進行劃分等,可製造來自葡萄的,高含有具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物之組成物。
(第1實施方式)
其次,與本發明第1實施方式有關的組成物,亦即作為有效成分之含有具沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物之組成物,針對前述組成物,即利用使水通道蛋白3表現增加而使肌膚滋潤度提升之肌膚滋潤度提升用組成物進行說明。
其次,與本發明第1實施方式有關的組成物,亦即作為有效成分之含有具沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物之組成物,針對前述組成物,即利用使水通道蛋白3表現增加而使肌膚滋潤度提升之肌膚滋潤度提升用組成物進行說明。
並未特別限制與本發明第1實施方式有關組成物之使用方法,可利用經口攝取吸收入體內,亦可利用塗布等適用於皮膚。
該等方法中以利用經口攝取吸收入體內之方法為佳。
該等方法中以利用經口攝取吸收入體內之方法為佳。
且,本說明書中,「肌膚的滋潤度」係指角質層中的水分被維持著的狀態。
另外,本說明書中,「使肌膚的滋潤度提升」係使角質層中的水分含量增加、防止皮膚水分蒸散、以及/或藉由增加角質層的水分吸收,防止角質層的水分降低,使角質層的水分維持在適度保持的狀態,或者,意指使角質層的含水量增加。
另外,本說明書中,「使肌膚的滋潤度提升」係使角質層中的水分含量增加、防止皮膚水分蒸散、以及/或藉由增加角質層的水分吸收,防止角質層的水分降低,使角質層的水分維持在適度保持的狀態,或者,意指使角質層的含水量增加。
與本發明第1實施方式有關的組成物,係藉由使水通道蛋白3表現增加,目的為使角質層的含水量增加、防止皮膚水分蒸散、增加角質層的水分吸收而使用為佳。
藉由使用與本發明第1實施方式有關之組成物,可提升攝取者肌膚滋潤度。
藉由使用與本發明第1實施方式有關之組成物,可提升攝取者肌膚滋潤度。
於此,說明角質層含水量測定方法之一例。下述例中揭示測定臉部部分區域含水量之方法,但測定角質層含水量之方法並未限定於下述之例,例如,亦可測定手臂角質層中的含水量。
(角質層含水量之測定方法)
將完成卸除化妝與洗臉的受驗者,移往恆溫恆濕室(溫度:21±1℃,濕度:50±5%),於安定狀態下馴化20分鐘。
接著,將眼角與鼻翼延長線相交的部位定為測定部位,每次均測定相同的位置。測定係使用Corneometer CM825(Courage+Khazaka公司製),對前述測定部位(同一位置)角質層含水量進行5次測定。
去除獲得的數值的最大值與最小值,剩下3次測定值的平均作為「角質層的含水量」。
將完成卸除化妝與洗臉的受驗者,移往恆溫恆濕室(溫度:21±1℃,濕度:50±5%),於安定狀態下馴化20分鐘。
接著,將眼角與鼻翼延長線相交的部位定為測定部位,每次均測定相同的位置。測定係使用Corneometer CM825(Courage+Khazaka公司製),對前述測定部位(同一位置)角質層含水量進行5次測定。
去除獲得的數值的最大值與最小值,剩下3次測定值的平均作為「角質層的含水量」。
另外,與本發明第1實施方式有關的組成物,可使用為選自由改善肌膚滋潤度、肌膚保濕、緩和肌膚乾燥、提高肌膚屏蔽功能、改善肌膚狀態、預防肌膚粗糙、改善肌膚粗糙、維持肌膚功能、改善肌膚功能及促進傷口治癒所成群之1或2以上的用途。
該等用途係增加角質層含水量所伴隨之作為結果所產生的效果。
增加角質層含水量效果的其中一個原因,認為係本發明組成物中所含之具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物,使皮膚上皮細胞的水通道蛋白3表現量增加所導致。
水通道蛋白3係水的輸送體,已有報告指出藉由使皮膚上皮細胞的水通道蛋白3表現量增加,增加角質層對水分的吸收,增加角質層的含水量(非專利文件2)。
另外,水通道蛋白3亦具有作為甘油輸送體之功能,認為可增加角質層中的甘油(非專利文件5)。當角質層中甘油增加時,可期待防止水分自角質層蒸散之效果。
該等用途係增加角質層含水量所伴隨之作為結果所產生的效果。
增加角質層含水量效果的其中一個原因,認為係本發明組成物中所含之具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物,使皮膚上皮細胞的水通道蛋白3表現量增加所導致。
水通道蛋白3係水的輸送體,已有報告指出藉由使皮膚上皮細胞的水通道蛋白3表現量增加,增加角質層對水分的吸收,增加角質層的含水量(非專利文件2)。
另外,水通道蛋白3亦具有作為甘油輸送體之功能,認為可增加角質層中的甘油(非專利文件5)。當角質層中甘油增加時,可期待防止水分自角質層蒸散之效果。
由於改善肌膚滋潤度、肌膚保濕及緩和肌膚乾燥均可藉由增加角質層含水量而達成,該等效果可利用前述角質層含水量測定方法進行確認。或者,前述效果,可藉由本發明第1實施方式有關組成物之使用者的實際感受,或者由皮膚科醫師等皮膚組織專門家的判斷而確認。
改善肌膚狀態、預防肌膚粗糙、改善肌膚粗糙、維持肌膚功能及改善肌膚功能均意指肌膚粗糙狀態被改善,或是預防肌膚粗糙症狀的效果。
肌膚粗糙的症狀係指選自肌膚發紅、癢、乾燥、膿泡、皮脂分泌過剩及皮脂分泌降低所成群之一個以上的症狀。
肌膚粗糙的症狀可藉由提高肌膚的保濕力(屏蔽功能),與保持肌膚滋潤而改善。
改善肌膚狀態、預防肌膚粗糙、改善肌膚粗糙、維持肌膚功能及改善肌膚功能之效果,可藉由本發明第1實施方式有關組成物之使用者的實際感受,或者由皮膚科醫師等皮膚組織專門家的判斷而確認。
肌膚粗糙的症狀係指選自肌膚發紅、癢、乾燥、膿泡、皮脂分泌過剩及皮脂分泌降低所成群之一個以上的症狀。
肌膚粗糙的症狀可藉由提高肌膚的保濕力(屏蔽功能),與保持肌膚滋潤而改善。
改善肌膚狀態、預防肌膚粗糙、改善肌膚粗糙、維持肌膚功能及改善肌膚功能之效果,可藉由本發明第1實施方式有關組成物之使用者的實際感受,或者由皮膚科醫師等皮膚組織專門家的判斷而確認。
促進傷口治癒可藉由提升傷口附近角質層皮膚上皮組織的彈性而達成,而皮膚上皮組織的彈性係藉由增加皮膚上皮組織的含水量而提升。該當效果可藉由觀察傷口治癒進程快速推進來確認。傷口治癒進程係指肉芽組織變化為瘢痕組織的進程。傷口治癒進程快速推進之狀況,可藉由本發明第1實施方式有關組成物之使用者的實際感受,或者由皮膚科醫師等皮膚組織專門家的判斷而確認。
(第2實施方式)
其次,說明與本發明第2實施方式有關的組成物,亦即,作為有效成分之含有具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物組成物,即水通道蛋白3表現促進用組成物。
其次,說明與本發明第2實施方式有關的組成物,亦即,作為有效成分之含有具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物組成物,即水通道蛋白3表現促進用組成物。
具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物,具有使水通道蛋白3的表現量,例如,皮膚上皮細胞的水通道蛋白3表現量增加之效果。因此,藉由使用含有具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物之與本發明第2實施方式有關的組成物,可促進水通道蛋白3之表現。
與本發明第2實施方式有關的組成物,較佳係使用為目的為促進皮膚上皮細胞中水通道蛋白3之表現。
與本發明第2實施方式有關的組成物,較佳係使用為目的為促進皮膚上皮細胞中水通道蛋白3之表現。
本說明書中「水通道蛋白3的表現量」係意指作為蛋白質之水通道蛋白3的表現量以及編碼水通道蛋白3之基因之表現量此二者。因此,水通道蛋白3的表現量可測定蛋白質層級以及基因層級(例如mRNA層級)之任一者均可。
水通道蛋白3係水的輸送體,已有報告指出藉由使皮膚上皮細胞的水通道蛋白3表現量增加,增加角質層對水分的吸收,增加角質層的含水量(非專利文件2)。
另外,水通道蛋白3亦具有作為甘油輸送體之功能,認為可增加角質層中的甘油(非專利文件5)。當角質層的甘油增加時,可期待防止水分自角質層蒸散之效果。
另外,水通道蛋白3亦具有作為甘油輸送體之功能,認為可增加角質層中的甘油(非專利文件5)。當角質層的甘油增加時,可期待防止水分自角質層蒸散之效果。
人類的水通道蛋白3其鹼基序列與胺基酸序列(ORF)均已周知,且其「Genbank Accession No.」係如下所述。
mRNA序列:NM_004925
mRNA序列:NM_004925
作為蛋白質的水通道蛋白3,可利用質量分析、各種色層管柱分析或各種免疫化學試驗等測定。其中,希望藉由經使用抗水通道蛋白3抗體之免疫化學試驗而檢出。
免疫化學試驗具體例可以舉出Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA)、西方墨點法、蛋白質晶片試驗、流式細胞儀等。
免疫化學試驗具體例可以舉出Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA)、西方墨點法、蛋白質晶片試驗、流式細胞儀等。
編碼水通道蛋白3的基因可藉由北方墨點法、PCR、微陣列、經使用螢光探針的活細胞影像等測定。
利用PCR測定編碼水通道蛋白3的基因時,希望使用即時定量PCR(RT-PCR)來測定。
利用PCR測定編碼水通道蛋白3的基因時,希望使用即時定量PCR(RT-PCR)來測定。
並未特別限制與本發明第2實施方式有關組成物之使用方法,可利用經口攝取吸收入體內,亦可利用塗布等使用於皮膚。
(其他的實施方式)
本發明亦包含下述方式。
為了促進皮膚上皮細胞的水通道蛋白3表現之具有前述沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物之使用,係本發明之一實施方式。
另外,使用於選自由改善肌膚滋潤度、肌膚水分補給、肌膚保濕、緩和肌膚乾燥、改善肌膚狀態、提高肌膚屏蔽功能、預防肌膚粗糙、改善肌膚粗糙、維持肌膚功能、改善肌膚功能及促進傷口治癒所成群之1或2以上的用途之與本發明有關的組成物,亦為本發明之一實施方式。
前述之具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物之藉由促進水通道蛋白3表現使肌膚滋潤度提升之使用,亦係本發明之一實施方式。前述使用,可為治療性的使用,亦可為非治療性的使用。前述使用以用於人類為佳。
且,具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物及其較佳的實施方式,係如前所述。
本發明亦包含下述方式。
為了促進皮膚上皮細胞的水通道蛋白3表現之具有前述沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物之使用,係本發明之一實施方式。
另外,使用於選自由改善肌膚滋潤度、肌膚水分補給、肌膚保濕、緩和肌膚乾燥、改善肌膚狀態、提高肌膚屏蔽功能、預防肌膚粗糙、改善肌膚粗糙、維持肌膚功能、改善肌膚功能及促進傷口治癒所成群之1或2以上的用途之與本發明有關的組成物,亦為本發明之一實施方式。
前述之具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物之藉由促進水通道蛋白3表現使肌膚滋潤度提升之使用,亦係本發明之一實施方式。前述使用,可為治療性的使用,亦可為非治療性的使用。前述使用以用於人類為佳。
且,具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物及其較佳的實施方式,係如前所述。
(實施例)
以下揭示實施例更具體說明與本發明有關之組成物,但本發明之範圍並未因該等實施例而有所限定。
以下揭示實施例更具體說明與本發明有關之組成物,但本發明之範圍並未因該等實施例而有所限定。
(實施例1)
(葡萄萃取物(來自葡萄原料)之製造方法)
對紅葡萄酒進行減壓濃縮,將去除乙醇者作為葡萄萃取物。該葡萄萃取物的OPC濃度係15,000ppm。
此處,葡萄酒等包含葡萄種子之來自葡萄原料之萃取物中,係含有具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物(前花青素B2-3’-O-沒食子酸酯(以下稱作EC-ECG),前花青素B4-3’-O-沒食子酸酯(以下稱作C-ECG)等),以及具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體(表兒茶素沒食子酸酯(以下ECG)等)(參照文獻1:”Comparative flavan-3-ol composition of seeds from different grape varieties” Food Chemistry 53 (1995) 197-201,參照文獻2:”PROCYANIDIN DIMERS AND TRIMERS FROM GRAPE SEEDS”Phytochemistry Vol. 30. No. 4, pp 1259-1264 1991,參照文獻3:”「葡萄種子多酚」功能性之應用”NEW FOOD INDUSTRY Vol. 43 No. 11(2001)別冊))。
(葡萄萃取物(來自葡萄原料)之製造方法)
對紅葡萄酒進行減壓濃縮,將去除乙醇者作為葡萄萃取物。該葡萄萃取物的OPC濃度係15,000ppm。
此處,葡萄酒等包含葡萄種子之來自葡萄原料之萃取物中,係含有具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物(前花青素B2-3’-O-沒食子酸酯(以下稱作EC-ECG),前花青素B4-3’-O-沒食子酸酯(以下稱作C-ECG)等),以及具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體(表兒茶素沒食子酸酯(以下ECG)等)(參照文獻1:”Comparative flavan-3-ol composition of seeds from different grape varieties” Food Chemistry 53 (1995) 197-201,參照文獻2:”PROCYANIDIN DIMERS AND TRIMERS FROM GRAPE SEEDS”Phytochemistry Vol. 30. No. 4, pp 1259-1264 1991,參照文獻3:”「葡萄種子多酚」功能性之應用”NEW FOOD INDUSTRY Vol. 43 No. 11(2001)別冊))。
(試驗飲料的製造方法)
依據表1所示摻混,於前述葡萄萃取物及其他物質中加入水並混合,製造與實施例1有關的組成物(試驗食品)。
依據表1所示摻混,於前述葡萄萃取物及其他物質中加入水並混合,製造與實施例1有關的組成物(試驗食品)。
(比較例1)
依據表1所示摻混,混合各物質,製造與比較例1有關的組成物(對照食品)。
依據表1所示摻混,混合各物質,製造與比較例1有關的組成物(對照食品)。
(評價皮膚的滋潤度)
利用下述方法進行人體實驗,評價與實施例1及比較例1相關組成物與肌膚滋潤度有關的效果。另外,本試驗係於充分考量赫爾辛基宣言精神而實施。
利用下述方法進行人體實驗,評價與實施例1及比較例1相關組成物與肌膚滋潤度有關的效果。另外,本試驗係於充分考量赫爾辛基宣言精神而實施。
(試驗設計)
本試驗係以單設施、安慰劑對照隨機雙盲試驗併行群間比較試驗而進行。
(UMIN試驗ID:UMIN000024478)
本試驗係以單設施、安慰劑對照隨機雙盲試驗併行群間比較試驗而進行。
(UMIN試驗ID:UMIN000024478)
(受驗者)
採用30歲以上,60歲以下之健康女性,由責任醫師或協助分擔醫師診斷,有日光性黑斑且為可判定的臉頰黑斑100位作為受驗者。
受驗者隨機分為2群,一群為試驗食品攝取群(50位),另一群為對照食品攝取群(50位)。
於進行本試驗解析過程中,確認符合放棄標準的受驗者有3例,因此將此3例除外,使用97例(試驗食品攝取群50例,對照食品攝取群47例)為解析對象。
採用30歲以上,60歲以下之健康女性,由責任醫師或協助分擔醫師診斷,有日光性黑斑且為可判定的臉頰黑斑100位作為受驗者。
受驗者隨機分為2群,一群為試驗食品攝取群(50位),另一群為對照食品攝取群(50位)。
於進行本試驗解析過程中,確認符合放棄標準的受驗者有3例,因此將此3例除外,使用97例(試驗食品攝取群50例,對照食品攝取群47例)為解析對象。
(試驗食品之攝取方式)
使試驗食品攝取群的受驗者每日1次,於任意的時間點攝取試驗食品(與實施例1有關組成物),重複12週間。
且,開始服用試驗食品至結束服用為止的攝取時間設定為1小時之內。
使對照食品攝取群的受驗者每日1次,於任意的時間點攝取對照食品(與比較例1有關組成物),重複12週間。
且,開始服用對照食品至結束服用為止的攝取時間設定為1小時之內。
使試驗食品攝取群的受驗者每日1次,於任意的時間點攝取試驗食品(與實施例1有關組成物),重複12週間。
且,開始服用試驗食品至結束服用為止的攝取時間設定為1小時之內。
使對照食品攝取群的受驗者每日1次,於任意的時間點攝取對照食品(與比較例1有關組成物),重複12週間。
且,開始服用對照食品至結束服用為止的攝取時間設定為1小時之內。
(角質層含水量之測定)
於0週、4週、8週及12週依據下述方法測定受驗者角質層含水量(AU:arbitrary unit)。
將完成卸除化妝與洗臉的受驗者,移往恆溫恆濕室(溫度:21±1℃,濕度:50±5%),於安定狀態下馴化20分鐘。
接著,將眼角與鼻翼延長線相交的部位定為測定部位,每次均測定相同的位置。
其次,使用Corneometer CM825(Courage+Khazaka公司製),對前述測定部位(同一位置)角質層的含水量進行5次測定。
去除獲得數值的最大值與最小值,剩下3次測定值的平均作為「角質層的含水量」。
結果示於圖1(a)及(b),以及表2。
圖1(a)係於肌膚滋潤度評價試驗中受驗者角質層含水量之圖。圖1(b)係於肌膚滋潤度評價試驗中受驗者角質層含水量變化量之圖。且,本試驗係使用IBM SPSS Statistics 24進行統計分析,統計學上有意義之檢定係使用t檢定,顯著水準採用5%(兩端)。
圖1(a)及(b)中的誤差線係表示標準誤差(SE),符號「*」係p值未達0.05(p<0.05)。
於0週、4週、8週及12週依據下述方法測定受驗者角質層含水量(AU:arbitrary unit)。
將完成卸除化妝與洗臉的受驗者,移往恆溫恆濕室(溫度:21±1℃,濕度:50±5%),於安定狀態下馴化20分鐘。
接著,將眼角與鼻翼延長線相交的部位定為測定部位,每次均測定相同的位置。
其次,使用Corneometer CM825(Courage+Khazaka公司製),對前述測定部位(同一位置)角質層的含水量進行5次測定。
去除獲得數值的最大值與最小值,剩下3次測定值的平均作為「角質層的含水量」。
結果示於圖1(a)及(b),以及表2。
圖1(a)係於肌膚滋潤度評價試驗中受驗者角質層含水量之圖。圖1(b)係於肌膚滋潤度評價試驗中受驗者角質層含水量變化量之圖。且,本試驗係使用IBM SPSS Statistics 24進行統計分析,統計學上有意義之檢定係使用t檢定,顯著水準採用5%(兩端)。
圖1(a)及(b)中的誤差線係表示標準誤差(SE),符號「*」係p值未達0.05(p<0.05)。
於攝取後12週試驗食品攝取群與對照食品攝取群相比,角質層的含水量係有意義的為多,且變化量的解析中於攝取後4週、8週、12週,試驗食品攝取群與對照食品攝取群相比,角質層的含水量係有意義的為多。
另外,4週、8週、12週,試驗食品攝取群的角質層含水量,較0週之試驗食品攝取群之角質層含水量為有意義的較多。
另外,4週、8週、12週,試驗食品攝取群的角質層含水量,較0週之試驗食品攝取群之角質層含水量為有意義的較多。
(實施例2-1~實施例2-8)
將表3所示品種、生產地的葡萄酒製作為與實施例2-1~實施例2-8有關的組成物。
將表3所示品種、生產地的葡萄酒製作為與實施例2-1~實施例2-8有關的組成物。
(總多酚及OPC之測定)
與實施例2-1~實施例2-8有關組成物之總多酚量係使用Folin-Ciocalteu比色法測定,OPC之量係依據專利第4659407號公報記載之方法測定。
結果示於表3。
且,如前述般葡萄酒係含有具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物(EC-ECG、C-ECG),以及具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體(ECG)。
與實施例2-1~實施例2-8有關組成物之總多酚量係使用Folin-Ciocalteu比色法測定,OPC之量係依據專利第4659407號公報記載之方法測定。
結果示於表3。
且,如前述般葡萄酒係含有具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物(EC-ECG、C-ECG),以及具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體(ECG)。
將與實施例2-1~實施例2-8有關組成物以下述方法,使其與皮膚上皮細胞作用,並測定水通道蛋白3表現量。
(水通道蛋白3表現量評價方法)
(1)調整試驗用檢體
冷凍乾燥與實施例2-1~實施例2-8有關的組成物,之後,以50%乙醇溶解,準備為試驗用檢體。
另外準備50%乙醇為控制組檢體。
另外,準備維生素A酸(retinoic acid)為正控制組檢體。維生素A酸係已周知係可使皮膚上皮細胞水通道蛋白3的表現量增加之物質。
(1)調整試驗用檢體
冷凍乾燥與實施例2-1~實施例2-8有關的組成物,之後,以50%乙醇溶解,準備為試驗用檢體。
另外準備50%乙醇為控制組檢體。
另外,準備維生素A酸(retinoic acid)為正控制組檢體。維生素A酸係已周知係可使皮膚上皮細胞水通道蛋白3的表現量增加之物質。
(2)培養皮膚上皮細胞
將正常人類表皮角質細胞(Human Epidermal Keratinocyte; NHEK(AD))置於21cm2 的細胞培養盤,利用正常人類表皮角質細胞增殖用無血清液體培養基(HuMedia-KG2; Kurabo公司製),以37℃,5%CO2 條件下進行前培養,並培養至次匯合(subconfluent)狀態。
其次,將各試驗用檢體添加至培養液。使葡萄酒在培養液中的濃度以成為原始各組成物(葡萄酒)中之1/400相當量,將各試驗用檢體添加至培養液。
添加各試驗用檢體後,以37℃,5%CO2 條件下培養24小時。
將正常人類表皮角質細胞(Human Epidermal Keratinocyte; NHEK(AD))置於21cm2 的細胞培養盤,利用正常人類表皮角質細胞增殖用無血清液體培養基(HuMedia-KG2; Kurabo公司製),以37℃,5%CO2 條件下進行前培養,並培養至次匯合(subconfluent)狀態。
其次,將各試驗用檢體添加至培養液。使葡萄酒在培養液中的濃度以成為原始各組成物(葡萄酒)中之1/400相當量,將各試驗用檢體添加至培養液。
添加各試驗用檢體後,以37℃,5%CO2 條件下培養24小時。
另外,以50%乙醇作為控制組取代各試驗用檢體,對5mL培養液添加0.0125mL。
使用維生素A酸作為正控制組取代各試驗用檢體,且使於培養液中濃度成為2μM添加維生素A酸至培養液中。
添加各作為控制組的組成物後,以37℃,5%CO2 條件下培養24小時。
使用維生素A酸作為正控制組取代各試驗用檢體,且使於培養液中濃度成為2μM添加維生素A酸至培養液中。
添加各作為控制組的組成物後,以37℃,5%CO2 條件下培養24小時。
(3)測定水通道蛋白3表現量
於前述「(2)培養皮膚上皮細胞」中進行皮膚上皮細胞的培養後,使用ISOGEN(股份有限公司日本基因製)自各培養細胞中萃取RNA。
自獲得之1μg的RNA,使用Superscript VILO Master Mix(Invitrogen公司製)進行cDNA合成。其後,使用表4所示引子(具有序列編號1及序列編號2鹼基序列的引子)進行即時定量PCR,檢出水通道蛋白3(Genbank Accession No. NM_004925)的表現。
PCR使用KOD SYBR qPCR Mix(TOYOBO公司製),反應條件係熱變性為98℃維持10秒,引子黏合為60℃維持10秒,引子延長為68℃維持30秒。
增幅過程中的螢光強度係利用定量PCR裝置StepOnePlus (Applied Biosystems公司製),監控至獲得一定螢光強度為止的循環數,並自水通道蛋白3的循環數使用標準法計算出表現量。
另外,於利用即時定量PCR檢出水通道蛋白3表現量的同時,使用表4所示引子(具有序列編號3及序列編號4鹼基序列的引子),亦測定管家基因之glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase(GAPDH)(Genbank Accession No. NM_002046)之表現量。
於前述「(2)培養皮膚上皮細胞」中進行皮膚上皮細胞的培養後,使用ISOGEN(股份有限公司日本基因製)自各培養細胞中萃取RNA。
自獲得之1μg的RNA,使用Superscript VILO Master Mix(Invitrogen公司製)進行cDNA合成。其後,使用表4所示引子(具有序列編號1及序列編號2鹼基序列的引子)進行即時定量PCR,檢出水通道蛋白3(Genbank Accession No. NM_004925)的表現。
PCR使用KOD SYBR qPCR Mix(TOYOBO公司製),反應條件係熱變性為98℃維持10秒,引子黏合為60℃維持10秒,引子延長為68℃維持30秒。
增幅過程中的螢光強度係利用定量PCR裝置StepOnePlus (Applied Biosystems公司製),監控至獲得一定螢光強度為止的循環數,並自水通道蛋白3的循環數使用標準法計算出表現量。
另外,於利用即時定量PCR檢出水通道蛋白3表現量的同時,使用表4所示引子(具有序列編號3及序列編號4鹼基序列的引子),亦測定管家基因之glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase(GAPDH)(Genbank Accession No. NM_002046)之表現量。
各培養細胞的水通道蛋白3表現量,以GAPDH表現量進行補正後,將控制組的水通道蛋白3表現量設定為1.0,計算出相對的表現量。
且本試驗中,最低標本數為3。
結果示於圖2及表5。
圖2係使用與本發明實施例2-1~實施例2-8有關組成物之水通道蛋白3表現量之測定結果圖。
本試驗係使用Excel進行統計分析,統計學有意義檢定法係使用t檢定,顯著水準為5%(兩端)。
圖2中的誤差線係標示標準誤差(SE),符號「*」係p值未達0.05(p<0.05),符號「**」係p值未達0.01(p<0.01)。
且本試驗中,最低標本數為3。
結果示於圖2及表5。
圖2係使用與本發明實施例2-1~實施例2-8有關組成物之水通道蛋白3表現量之測定結果圖。
本試驗係使用Excel進行統計分析,統計學有意義檢定法係使用t檢定,顯著水準為5%(兩端)。
圖2中的誤差線係標示標準誤差(SE),符號「*」係p值未達0.05(p<0.05),符號「**」係p值未達0.01(p<0.01)。
如圖2及表5所示般,藉由使用與實施例2-1~實施例2-8有關的組成物,增加了皮膚上皮細胞的水通道蛋白3表現量。
(分劃與實施例有關的組成物)
為了檢索可增加水通道蛋白3表現量的化合物,藉由下述方法對與上述實施例2-6有關的組成物進行分劃。
首先,取12L的與實施例2-6有關的組成物進行減壓濃縮,餾除乙醇。
其後,將餾除了乙醇之組成物,注入經以水進行平衡化後的10L的HP-2MG管柱(Supelco公司製,USA),再以20L的蒸餾水洗淨後,以30L的70%乙醇進行溶出。
對70%乙醇溶出劃分進行減壓濃縮、冷凍乾燥。
將該500mg乾燥物注入Sephadex LH-20管柱(1L, GE healthcare),再分別以4L的含有1%甲酸之10%、20%、30%、40%、50%及60%之甲醇/水進行溶出,分劃為6個劃分。50%甲醇劃分中,存在含有沒食子醯基的黃烷-3-醇2聚體(雙聚體),60%甲醇劃分中存在含有沒食子醯基的黃烷-3-醇3聚體(三聚體)。
除了以相對5mL培養液添加0.0125mL的各分劃,來取代各試驗用檢體之外,利用與前述「水通道蛋白3表現量評價方法」同樣的方法,測定皮膚上皮細胞的水通道蛋白3表現量。
且本試驗中標本數為3。
結果示於圖3及表6。
圖3係使用與實施例2-6有關組成物之劃分之水通道蛋白3表現量之測定結果圖。
本試驗係使用Excel進行統計分析,統計學有意義檢定法係使用t檢定,顯著水準為5%(兩端)。
圖3中的誤差線係標示標準誤差(SE),符號「*」係p值未達0.05(p<0.05),符號「**」係p值未達0.01 (p<0.01)。
為了檢索可增加水通道蛋白3表現量的化合物,藉由下述方法對與上述實施例2-6有關的組成物進行分劃。
首先,取12L的與實施例2-6有關的組成物進行減壓濃縮,餾除乙醇。
其後,將餾除了乙醇之組成物,注入經以水進行平衡化後的10L的HP-2MG管柱(Supelco公司製,USA),再以20L的蒸餾水洗淨後,以30L的70%乙醇進行溶出。
對70%乙醇溶出劃分進行減壓濃縮、冷凍乾燥。
將該500mg乾燥物注入Sephadex LH-20管柱(1L, GE healthcare),再分別以4L的含有1%甲酸之10%、20%、30%、40%、50%及60%之甲醇/水進行溶出,分劃為6個劃分。50%甲醇劃分中,存在含有沒食子醯基的黃烷-3-醇2聚體(雙聚體),60%甲醇劃分中存在含有沒食子醯基的黃烷-3-醇3聚體(三聚體)。
除了以相對5mL培養液添加0.0125mL的各分劃,來取代各試驗用檢體之外,利用與前述「水通道蛋白3表現量評價方法」同樣的方法,測定皮膚上皮細胞的水通道蛋白3表現量。
且本試驗中標本數為3。
結果示於圖3及表6。
圖3係使用與實施例2-6有關組成物之劃分之水通道蛋白3表現量之測定結果圖。
本試驗係使用Excel進行統計分析,統計學有意義檢定法係使用t檢定,顯著水準為5%(兩端)。
圖3中的誤差線係標示標準誤差(SE),符號「*」係p值未達0.05(p<0.05),符號「**」係p值未達0.01 (p<0.01)。
如圖3及表6所示般,具有可增加皮膚上皮細胞水通道蛋白3表現量作用的化合物,暗示大量含於20%甲醇/水之劃分以及60%甲醇/水之劃分。
<製造例1>
藉由下述方法準備用於實施例及比較例之黃烷-3-醇單體及/或聚合物。
EC-ECG、EC-CG之合成係使用遵循論文(Food chem., 2018, Takahiro Fujimaki et al 248, P61-69)所獲得之物。
前花青素B3(以下稱作C-C)、前花青素B4(以下稱作C-EC)、C-ECG及C-C-ECG之合成係以論文(Food chem., 2018, Takahiro Fujimaki et al 248, P61-69)為準,如下所述方式進行。
C-C; 將500mg的(+)-taxifolin(Extrasynthese公司製)溶解於50ml的乙醇,加入200mg的NaBH4 ,於室溫攪拌45分鐘。該溶液加入1g的(+)-catechin(C)(Sigma Aldrich公司製)溶解後,加入60ml的HCl(0.1N)攪拌1小時。反應物以逆相HPLC純化,獲得200mg的C-C,與1mg的C-C-C三聚體。
C-EC; 將500mg的(+)-taxifolin溶解於50ml的乙醇,加入200mg的NaBH4 ,於室溫攪拌45分鐘。該溶液加入1g的(-)-epicatechin(EC)(Sigma Aldrich公司製)溶解後,加入60ml的HCl(0.1N)攪拌1小時。反應物以逆相HPLC純化,獲得200mg的C-EC。
C-ECG及C-C-ECG; 將350mg的(+)-taxifolin(1.15mmol)溶解於20ml的乙醇,加入70mg的NaBH4 ,於室溫攪拌45分鐘。該溶液加入420mg的(-)-epicatechin-3-O-gallate(ECG) (0.95mmol,富士薄膜和光純藥股份有限公司製)溶解後,加入40ml的HCl(0.1N)攪拌1小時。反應物以逆相HPLC純化,獲得96mg的C-ECG,與34mg的C-C-ECG。
Procyanidin B1(以下稱作EC-C)係使用Extrasynthese公司製,Procyanidin B2(以下稱作EC-EC)係使用Tront Research Chemicals Inc.公司製,procyanidin C1(PC1)係使用Sigma Aldrich公司製。
藉由下述方法準備用於實施例及比較例之黃烷-3-醇單體及/或聚合物。
EC-ECG、EC-CG之合成係使用遵循論文(Food chem., 2018, Takahiro Fujimaki et al 248, P61-69)所獲得之物。
前花青素B3(以下稱作C-C)、前花青素B4(以下稱作C-EC)、C-ECG及C-C-ECG之合成係以論文(Food chem., 2018, Takahiro Fujimaki et al 248, P61-69)為準,如下所述方式進行。
C-C; 將500mg的(+)-taxifolin(Extrasynthese公司製)溶解於50ml的乙醇,加入200mg的NaBH4 ,於室溫攪拌45分鐘。該溶液加入1g的(+)-catechin(C)(Sigma Aldrich公司製)溶解後,加入60ml的HCl(0.1N)攪拌1小時。反應物以逆相HPLC純化,獲得200mg的C-C,與1mg的C-C-C三聚體。
C-EC; 將500mg的(+)-taxifolin溶解於50ml的乙醇,加入200mg的NaBH4 ,於室溫攪拌45分鐘。該溶液加入1g的(-)-epicatechin(EC)(Sigma Aldrich公司製)溶解後,加入60ml的HCl(0.1N)攪拌1小時。反應物以逆相HPLC純化,獲得200mg的C-EC。
C-ECG及C-C-ECG; 將350mg的(+)-taxifolin(1.15mmol)溶解於20ml的乙醇,加入70mg的NaBH4 ,於室溫攪拌45分鐘。該溶液加入420mg的(-)-epicatechin-3-O-gallate(ECG) (0.95mmol,富士薄膜和光純藥股份有限公司製)溶解後,加入40ml的HCl(0.1N)攪拌1小時。反應物以逆相HPLC純化,獲得96mg的C-ECG,與34mg的C-C-ECG。
Procyanidin B1(以下稱作EC-C)係使用Extrasynthese公司製,Procyanidin B2(以下稱作EC-EC)係使用Tront Research Chemicals Inc.公司製,procyanidin C1(PC1)係使用Sigma Aldrich公司製。
(參考例1及2,實施例3-1~3-4,比較例2-1~2-4)
針對表7所示兒茶素(C)(比較例2-1、2-2)、表兒茶素(EC)(比較例2-3、2-4)、表兒茶素沒食子酸酯(ECG)(實施例3-1、3-2)、表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)(實施例3-3、3-4),測定水通道蛋白3表現促進活性。
EGCG係使用富士薄膜和光純藥股份有限公司製。
參考例1係以細胞培養液作為控制組,參考例2(正控制組)係使用維生素A酸(RA)(Sigma Aldrich公司製)。
針對表7所示兒茶素(C)(比較例2-1、2-2)、表兒茶素(EC)(比較例2-3、2-4)、表兒茶素沒食子酸酯(ECG)(實施例3-1、3-2)、表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)(實施例3-3、3-4),測定水通道蛋白3表現促進活性。
EGCG係使用富士薄膜和光純藥股份有限公司製。
參考例1係以細胞培養液作為控制組,參考例2(正控制組)係使用維生素A酸(RA)(Sigma Aldrich公司製)。
(水通道蛋白3之表現量評價方法)
各化合物以正常人類表皮角質細胞增殖用無血清液體培養基(HuMedia-KG2;Kurabo公司製)溶解,準備為試驗用檢體。除前述之外,與前述實施例2-1~2-2同樣地評價參考例1及2,實施例3-1~3-4及比較例2-1~2-4有關的水通道蛋白3之表現量。且,實施例3-1~3-4及比較例2-1~2-4中,化合物於培養液中的濃度以成為30μM或50μM而於培養液中添加各試驗用檢體。控制組係使用培養液。
結果示於表7及圖4。
圖4係使用與參考例1及2,實施例3-1~3-4及比較例2-1~2-4有關的化合物之水通道蛋白3表現量之測定結果圖。
本試驗係使用Excel進行統計分析,統計學有意義檢定法係使用t檢定,顯著水準為5%(兩端)。
圖4中的誤差線係標示標準誤差(SE),符號「*」係p值未達0.05(p<0.05),符號「**」係p值未達0.01(p<0.01)。
各化合物以正常人類表皮角質細胞增殖用無血清液體培養基(HuMedia-KG2;Kurabo公司製)溶解,準備為試驗用檢體。除前述之外,與前述實施例2-1~2-2同樣地評價參考例1及2,實施例3-1~3-4及比較例2-1~2-4有關的水通道蛋白3之表現量。且,實施例3-1~3-4及比較例2-1~2-4中,化合物於培養液中的濃度以成為30μM或50μM而於培養液中添加各試驗用檢體。控制組係使用培養液。
結果示於表7及圖4。
圖4係使用與參考例1及2,實施例3-1~3-4及比較例2-1~2-4有關的化合物之水通道蛋白3表現量之測定結果圖。
本試驗係使用Excel進行統計分析,統計學有意義檢定法係使用t檢定,顯著水準為5%(兩端)。
圖4中的誤差線係標示標準誤差(SE),符號「*」係p值未達0.05(p<0.05),符號「**」係p值未達0.01(p<0.01)。
(參考例3及4,實施例4-1~4-4及比較例3-1~3-8)
除了使用表8所示EC-C(比較例3-1及3-2)、EC-EC(比較例3-3及3-4)、C-C(比較例3-5及3-6)及C-EC(比較例3-7及3-8)來取代兒茶素等黃烷-3-醇單體以外,與前述比較例2-1~2-4同樣地測定水通道蛋白3表現促進活性。
另外,具有沒食子醯基的黃烷-3-醇2聚體,除了使用表8所示C-ECG(PB4-GA)(實施例4-1及4-2)、EC-CG(實施例4-3及4-4)之外,與實施例3-1~3-4同樣地測定水通道蛋白3表現促進活性。
參考例3係以細胞培養液作為控制組,參考例4(正控制組)係使用維生素A酸(RA)。測定結果示於表8及圖5。
除了使用表8所示EC-C(比較例3-1及3-2)、EC-EC(比較例3-3及3-4)、C-C(比較例3-5及3-6)及C-EC(比較例3-7及3-8)來取代兒茶素等黃烷-3-醇單體以外,與前述比較例2-1~2-4同樣地測定水通道蛋白3表現促進活性。
另外,具有沒食子醯基的黃烷-3-醇2聚體,除了使用表8所示C-ECG(PB4-GA)(實施例4-1及4-2)、EC-CG(實施例4-3及4-4)之外,與實施例3-1~3-4同樣地測定水通道蛋白3表現促進活性。
參考例3係以細胞培養液作為控制組,參考例4(正控制組)係使用維生素A酸(RA)。測定結果示於表8及圖5。
(參考例5及6,實施例5-1~5-2及比較例4-1~4-4)
除了使用表9所示黃烷-3-醇3聚體(EC-EC-EC(PC1)(比較例4-1、4-2)、C-C-C(比較例4-3、4-4)作為比較例來取代兒茶素等黃烷-3-醇單體之外,與前述比較例2-1~2-4同樣地測定水通道蛋白3表現促進活性。
另外,具有沒食子醯基的黃烷-3-醇3聚體,除了使用表9所示C-C-ECG(實施例5-1、5-2)之外,與實施例3-1~3-4同樣地測定水通道蛋白3表現促進活性。
參考例5係以細胞培養液作為控制組,參考例6(正控制組)係使用維生素A酸(RA)。測定結果示於表9及圖6。
除了使用表9所示黃烷-3-醇3聚體(EC-EC-EC(PC1)(比較例4-1、4-2)、C-C-C(比較例4-3、4-4)作為比較例來取代兒茶素等黃烷-3-醇單體之外,與前述比較例2-1~2-4同樣地測定水通道蛋白3表現促進活性。
另外,具有沒食子醯基的黃烷-3-醇3聚體,除了使用表9所示C-C-ECG(實施例5-1、5-2)之外,與實施例3-1~3-4同樣地測定水通道蛋白3表現促進活性。
參考例5係以細胞培養液作為控制組,參考例6(正控制組)係使用維生素A酸(RA)。測定結果示於表9及圖6。
自上述表6~9及圖4~6結果,確認在黃烷-3-醇單體,及,2聚體以上的黃烷-3-醇聚合物,具有沒食子醯基的化合物(亦即,具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體以及具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物),具有使水通道蛋白3的表現增加之效果。
[產業上之可利用性]
[產業上之可利用性]
本發明之組成物,可使用於為了提升肌膚滋潤度,以及,為了使皮膚上皮細胞的水通道蛋白3表現量增加。
[圖1] 圖1(a)係顯示於肌膚滋潤評價試驗中受驗者角質層含水量之圖。圖1(b)係顯示於肌膚滋潤評價試驗中受驗者角質層含水量變化量之圖。
[圖2] 圖2係使用與本發明實施例2-1~實施例2-8有關組成物之水通道蛋白3表現量之測定結果圖。
[圖3] 圖3係使用與實施例2-6有關組成物之劃分之水通道蛋白3表現量之測定結果圖。
[圖4] 圖4係使用與本發明實施例3-1~實施例3-4有關組成物之水通道蛋白3表現量之測定結果圖。
[圖5] 圖5係使用與本發明實施例4-1~實施例4-4有關的組成物之水通道蛋白3表現量之測定結果圖。
[圖6] 圖6係使用與本發明實施例5-1~實施例5-2有關組成物之水通道蛋白3表現量之測定結果圖。
Claims (9)
- 一種水通道蛋白3表現促進用組成物,其係含有作為有效成分之具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物。
- 如申請專利範圍第1項之組成物,其中具有前述沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有前述沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物,係包含於來自葡萄之原料中。
- 如申請專利範圍第2項之組成物,其中前述來自葡萄之原料包含選自由:選自由葡萄的果皮、果實及種子所成群之至少1種生原料、前述生原料之發酵物、該等之萃取物及該等之加工物所成群之至少1種。
- 如申請專利範圍第1~3項任一項之組成物,其中具有前述沒食子醯基的黃烷-3-醇單體,係以下述式(1)所示化合物及/或以下述式(2)所示化合物 。
- 如申請專利範圍第1~4項任一項之組成物,其中具有前述沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物,係以下述式(3)所示化合物及/或以下述式(4)所示化合物 。
- 如申請專利範圍第1~5項任一項之組成物,其係飲食品、化妝料、醫藥品或準醫藥品。
- 如申請專利範圍第1~6項任一項之組成物,其係可用於選自由改善肌膚滋潤度、肌膚水分補給、肌膚水分保持、肌膚保濕、緩和肌膚乾燥、改善肌膚狀態、提高肌膚屏蔽功能、預防肌膚粗糙、改善肌膚粗糙、維持肌膚功能、肌膚功能改善及促進傷口治癒所成群之1或2種以上的用途。
- 一種使用,其係為了促進水通道蛋白3的表現之使用,係使用具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物。
- 一種使用,其係為了藉由水通道蛋白3的表現促進而使肌膚滋潤度提升之使用,係使用具有沒食子醯基的黃烷-3-醇單體及/或具有沒食子醯基的黃烷-3-醇聚合物。
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