在一態樣中，本發明係關於(a) RAD001或其醫藥上可接受之鹽；(b) BEZ235或其醫藥上可接受之鹽；或(c)其組合。在另一態樣中，本發明提供促進及/或增強個體之免疫反應之方法，其包含藉由同時、分開或依序投與向該個體投與有效量之(a) RAD001或其醫藥上可接受之鹽；(b) BEZ235或其醫藥上可接受之鹽；或(c)其組合。 除非另有明確說明，否則本文中所使用之一般術語定義為以下含義： 除非另有說明，否則術語「包含(comprising)」及「包括(including)」在本文中係以其開放性且非限制性之意義使用。 除非本文中另有指示或上下文明顯矛盾，否則在闡述本發明之上下文(尤其在下文申請專利範圍之上下文)中之術語「一(a及an)」及「該(the)」及類似指示物均應解釋為涵蓋單數及複數二者。倘若化合物、鹽及諸如此類以複數形式使用，則此亦指單一化合物、鹽或諸如此類。 術語「組合」或「醫藥組合」在本文中定義為指用於組合投與之呈一種劑量單位形式之固定組合、非固定組合或多個部分的套組，其中RAD001或其醫藥上可接受之鹽及BEZ235或其醫藥上可接受之鹽可同時獨立地投與或在時間間隔內分開投與，該等時間間隔容許該等組合配偶體顯示協作(例如協同)效應。 術語「固定組合」意指將活性成分或治療劑(例如RAD001及BEZ235)以單一實體或劑型之形式同時投與患者。 術語「非固定組合」意指將活性成分或治療劑(例如RAD001及BEZ235)作為分開實體或劑型皆同時、並行或依序(無具體時間限制)投與患者，其中此投與在有需要之個體(例如，哺乳動物或人類)之體內提供該兩種化合物之治療有效含量。 術語「醫藥組合物」在本文中定義為指欲投與個體(例如，哺乳動物或人類)以治療影響該個體之具體疾病或病狀的含有至少一種治療劑之混合物或溶液。 術語「醫藥上可接受」在本文中定義為指在合理的醫學判斷範圍內適於與個體(例如哺乳動物或人類)之組織接觸，無過度毒性、刺激性、過敏反應及其他問題併發症，與合理益處/風險比相稱之彼等化合物、生物劑、材料、組合物及/或劑型。 如本文中所使用之術語「組合投與」定義為涵蓋向單一個體(例如，哺乳動物或人類)投與所選擇之治療劑，且意欲包括其中該等藥劑無需以相同投與途經或同時投與之治療方案。 如本文中所使用之術語「治療(treating或treatment)」包含減輕、減少或緩解個體之至少一種症狀或影響疾病、病狀及/或病症進展延遲之治療。舉例而言，治療可係降低病症之一或若干種症狀或完全根除病症。在本發明之含義內，術語「治療」亦表示阻止、延遲發作(亦即，疾病之臨床表現前之時期)及/或降低疾病發生或惡化之風險。 如本文中所使用之術語「聯合治療活性」或「聯合治療效應」意指治療劑可分開(以按時間順序交錯之方式，例如以順序特定方式)給與，使得欲治療之溫血動物(例如，人類)仍顯示相互作用(例如協同相互作用(聯合治療效應))。無論何種情形均尤其可藉由跟蹤血液濃度來測定，此顯示該兩種治療劑至少在某些時間間隔期間均存在於欲治療人類之血液中。 治療劑之「有效量」、「醫藥上有效量」或「治療有效量」係免疫反應之促進及/或增強足以提供相對於基線臨床上可觀察到的徵象及症狀之可觀察到的改良之量。 如本文中所使用之術語「協同效應」係指兩種藥劑(例如(a) RAD001或其醫藥上可接受之鹽及(b) BEZ235或其醫藥上可接受之鹽)產生效應(例如促進及/或增強個體之免疫反應)之作用，該效應大於所投與每一藥物自身之效應的簡單相加。可使用(例如)適宜方法計算協同效應，該等方法係(例如) Sigmoid-Emax方程(Holford, N. H. G.及Scheiner, L. B., Clin. Pharmacokinet. 6: 429-453 (1981))、Loewe加性方程(Loewe, S.及Muischnek, H., Arch. Exp. Pathol Pharmacol. 114: 313-326 (1926))及中值效應方程(Chou, T. C.及Talalay, P., Adv. Enzyme Regul. 22: 27-55 (1984))。可將上文所提及之每一方程施加實驗數據以產生相應圖表來幫助評價藥物組合之效應。與以上所提及之方程相關之相應圖表分別係濃度-效應曲線、等效線圖曲線及組合指數曲線。 如本文中所使用之術語「個體」或「患者」包括動物，其能夠促進及/或增強免疫反應及/或患有年齡相關病狀。個體之實例包括哺乳動物，例如人類、狗、牛、馬、豬、綿羊、山羊、貓、小鼠、兔、大鼠及轉基因非人類動物。在一些實施例中，個體係人類，例如罹患年齡相關病狀、處於罹患年齡相關病狀風險或潛在可能罹患年齡相關病狀之人類。 術語「約」或「大約」應具有在既定值或範圍之10%內、例如在5%內之含義。 在免疫反應之情形下術語「促進」或「增強」係指免疫反應增加，尤其例如免疫細胞靶向及/或殺死癌細胞、靶向及/或殺死病原體及受病原體感染之細胞之能力以及疫苗接種後之保護性免疫增加。在一些實施例中，保護性免疫係指存在足夠的免疫反應(例如抗體效價)以保護免於表現相同抗原之病原體之後續感染或保護免於新的病原體之感染。 術語「免疫衰老(immunosenescence或immunosenescent)」係指免疫功能降低，從而導致(例如)尤其對癌症、疫苗接種、傳染性病原體之免疫反應受損。其涉及宿主對感染之反應能力及尤其因疫苗接種所產生之長期免疫記憶二者。此免疫缺失普遍存在，且發現於長壽命及短壽命物種二者中，其隨物種年齡相對於預期壽命而非時序時間而變化。其視為老年人發病率及死亡率頻率增加之主要促成因素。免疫衰老並非隨機的惡化現象，而係其似乎反向地重複進化模式，且受免疫衰老影響之大部分參數似乎處於遺傳控制之下。有時亦可將免疫衰老設想為不可避免地暴露於各種抗原(例如病毒及細菌)之連續攻擊之結果。 免疫衰老係導致許多病理上顯著之健康問題(例如，在老年群體中)之多因素病狀。諸如造血幹細胞之功能下降、PD1+淋巴球增加、吞噬細胞、巨噬細胞、樹突細胞、單核球、T細胞、B細胞及NK細胞之功能下降及先天性細胞介導之免疫或體液性免疫下降之年齡依賴性生物學變化促成免疫衰老之發生。在一態樣中，可藉由量測免疫細胞中之端粒長度來量測個體之免疫衰老(例如，參見US 5,741,677)。免疫衰老亦可藉由在個體中記錄以下各項來測定：原始CD4及/或CD8 T細胞低於正常之數量、早期祖B細胞及前B細胞之減少、T及B細胞庫之減少、表現PD1之T細胞數量之增加(例如PD-1陰性T細胞之低於正常之數量)、CD8+CD28neg T細胞之增加、CD57+及/或KLRG1+ CD8+ T細胞之增加、LAG-3陽性T細胞數量之增加、T細胞表面醣蛋白之變化、抗體醣基化之變化、細胞內或在免疫細胞之表面上所表現蛋白質之醣基化之變化、表現ICOS、CTLA-4、Tim-3及/或LAG-3之CD4 T細胞之增加或衰老個體中對疫苗接種之反應降低。 術語「受損之免疫反應」係指其中個體尤其對(例如)癌症、疫苗接種、病原體感染不具有適當免疫反應之狀態。在一些實施例中，預測具有受損之免疫反應之個體在預防性疫苗接種後未獲得保護性抗體效價值，或其中個體在治療性疫苗接種後細胞介導之免疫或疾病負擔不下降。若個體之先天性免疫反應基因之表現受損，則該個體亦可具有受損之免疫反應。若個體係已知具有降低之免疫功能或具有降低之免疫功能史之群體成員，例如老年人、經歷化學療法治療之個體、無脾個體、免疫受損個體或患有HIV/AIDS之個體，則該個體亦可具有受損之免疫反應。本文中所闡述之方法容許藉由投與低的增強免疫劑量之mTOR抑制劑(例如，別位mTOR抑制劑(例如RAD001))來治療受損之免疫反應。 術語「低的增強免疫劑量」在與mTOR抑制劑(例如別位mTOR抑制劑，例如RAD001或雷帕黴素(rapamycin)，或催化性mTOR抑制劑)結合使用時係指部分地但非完全抑制mTOR活性之mTOR抑制劑之劑量，例如如藉由抑制P70 S6激酶活性所量測。例如藉由抑制P70 S6激酶評估mTOR活性之方法論述於本文中。該劑量不足以產生完全免疫阻抑，但足以增強免疫反應。在實施例中，低的增強免疫劑量之mTOR抑制劑會使PD-1陽性T細胞之數量或百分比降低及/或使PD-1陰性T細胞之數量或百分比增加或使PD-1陰性T細胞/PD-1陽性T細胞之比率增加。在實施例中，低的增強免疫劑量之mTOR抑制劑會使原始T細胞之數量增加。在實施例中，低的增強免疫劑量之mTOR抑制劑會產生以下中之一或多者： 血球中干擾素誘導之基因表現增加 表現標記物LAG-3、CTLA-4、ICOS或Tim-3之T細胞百分比降低； 以下標記物中之一或多者在(例如)記憶T細胞(例如，記憶T細胞前體)上之表現增加：CD62L高、CD127高、CD27+及BCL2； KLRG1或CD57在(例如)原始或記憶T細胞(例如，記憶T細胞前體)上之表現降低；且 記憶T細胞前體之數量增加，該等記憶T細胞前體係例如具有以下特徵中之任一者或該等特徵之組合之細胞：CD62L高增加、CD127高增加、CD27+增加、KLRG1降低及BCL2增加； 其中例如與未經治療之個體相比，上文所闡述之任一變化例如至少瞬時出現。 在實施例中，mTOR抑制劑之劑量與以下程度之mTOR抑制相關或提供以下程度之mTOR抑制：至少5%但不超過90%、至少10%但不超過90%、至少15%但不超過90%、至少20%但不超過90%、至少30%但不超過90%、至少40%但不超過90%、至少50%但不超過90%、至少60%但不超過90%或至少70%但不超過90%。 在實施例中，mTOR抑制劑之劑量與以下程度之mTOR抑制相關或提供以下程度之mTOR抑制：至少5%但不超過80%、至少10%但不超過80%、至少15%但不超過80%、至少20%但不超過80%、至少30%但不超過80%、至少40%但不超過80%、至少50%但不超過80%或至少60%但不超過80%。 在實施例中，mTOR抑制劑之劑量與以下程度之mTOR抑制相關或提供以下程度之mTOR抑制：至少5%但不超過70%、至少10%但不超過70%、至少15%但不超過70%、至少20%但不超過70%、至少30%但不超過70%、至少40%但不超過70%或至少50%但不超過70%。 在實施例中，mTOR抑制劑之劑量與以下程度之mTOR抑制相關或提供以下程度之mTOR抑制：至少5%但不超過60%、至少10%但不超過60%、至少15%但不超過60%、至少20%但不超過60%、至少30%但不超過60%或至少40%但不超過60%。 在實施例中，mTOR抑制劑之劑量與以下程度之mTOR抑制相關或提供以下程度之mTOR抑制：至少5%但不超過50%、至少10%但不超過50%、至少15%但不超過50%、至少20%但不超過50%、至少30%但不超過50%或至少40%但不超過50%。 在實施例中，mTOR抑制劑之劑量與以下程度之mTOR抑制相關或提供以下程度之mTOR抑制：至少5%但不超過40%、至少10%但不超過40%、至少15%但不超過40%、至少20%但不超過40%、至少30%但不超過40%或至少35%但不超過40%。 在實施例中，mTOR抑制劑之劑量與以下程度之mTOR抑制相關或提供以下程度之mTOR抑制：至少5%但不超過30%、至少10%但不超過30%、至少15%但不超過30%、至少20%但不超過30%或至少25%但不超過30%。 在實施例中，mTOR抑制劑之劑量與以下程度之mTOR抑制相關或提供以下程度之mTOR抑制：至少1%、2%、3%、4或5%但不超過20%、至少1%、2%、3%、4%或5%但不超過30%、至少1%、2%、3%、4%或5%但不超過35%、至少1%、2%、3%、4%或5%但不超過40%或至少1%、2%、3%、4%或5%但不超過45%。 在實施例中，mTOR抑制劑之劑量與以下程度之mTOR抑制相關或提供以下程度之mTOR抑制：至少1%、2%、3%、4%或5%但不超過90%。 如本文中所論述，mTOR抑制之程度可表示為P70 S6K抑制之程度，例如mTOR抑制之程度可藉由P70 S6K活性之降低量、例如藉由P70 S6K受質之磷酸化降低來確定。mTOR抑制之程度可藉由本文中所闡述之方法來評估，例如藉由佈雷(Boulay)分析。 在免疫反應之情形下，術語「促進」或「增強」係指免疫反應之增加，尤其例如免疫細胞靶向及/或殺死癌細胞、靶向及/或殺死病原體及受病原體感染之細胞之能力以及疫苗接種後保護性免疫增加。在一些實施例中，保護性免疫係指存在足夠的免疫反應(例如抗體效價)以保護免於表現相同抗原之病原體之後續感染。
mTOR 抑制劑
如本文中所使用，術語「mTOR抑制劑」係指抑制細胞中之mTOR激酶之化合物或配體或其醫藥上可接受之鹽。在實施例中，mTOR抑制劑係別位抑制劑。在實施例中，mTOR抑制劑係催化性抑制劑。 別位mTOR抑制劑包括中性三環化合物雷帕黴素(西羅莫司(sirolimus))；雷帕黴素相關化合物，其為與雷帕黴素具有結構及功能相似性之化合物，包括(例如)抑制mTOR活性之雷帕黴素衍生物、雷帕黴素類似物(亦稱為雷帕黴素類似物(rapalog))及其他巨環內酯化合物。 雷帕黴素係由吸水鏈黴菌(
Streptomyces hygroscopicus
)產生之已知巨環內酯抗生素，其具有式A中所顯示之結構。
(A)
例如，參見McAlpine, J.B.等人，J. Antibiotics (1991) 44: 688；Schreiber, S.L.等人，J. Am. Chem. Soc. (1991) 113: 7433；美國專利第3,929,992號。針對雷帕黴素提出各種編號方案。為避免混淆，當在本文中命名特定雷帕黴素類似物時，關於雷帕黴素之名稱係使用式A之編號方案給出。 可用於本發明中之雷帕黴素類似物係(例如) O-取代類似物，其中雷帕黴素之環己基環上之羥基由OR
1
替代，其中R
1
係羥基烷基、羥基烷氧基烷基、醯基胺基烷基或胺基烷基；例如RAD001，亦稱為依維莫司(everolimus)，如US 5,665,772及WO94/09010中所闡述，該等專利之內容係以引用的方式併入。其他適宜雷帕黴素類似物包括在26或28位置處經取代之彼等。雷帕黴素類似物可係上文所提及類似物之差向異構物，具體而言在位置40、28或26中經取代之類似物之差向異構物，且可視情況進一步氫化，例如如US 6,015,815、WO95/14023及WO99/15530中所闡述，該等專利之內容係以引用的方式併入，例如ABT578 (亦稱為咗他莫司(zotarolimus))或US 7,091,213、WO98/02441及WO01/14387中所闡述之雷帕黴素類似物，該等專利之內容係以引用的方式併入，例如AP23573，亦稱為瑞達福羅莫司(ridaforolimus)。 來自US 5,665,772之適用於本發明之雷帕黴素類似物之實例包括(但不限於) 40-O-苄基-雷帕黴素、40-O-(4’-羥基甲基)苄基-雷帕黴素、40-O-[4’-(1,2-二羥基乙基)]苄基-雷帕黴素、40-O-烯丙基-雷帕黴素、40-O-[3’-(2,2-二甲基-1,3-二氧戊環-4(S)-基)-丙-2’-烯-1’-基]-雷帕黴素、(2’E,4’S)-40-O-(4’,5’-二羥基戊-2’-烯-1’-基)-雷帕黴素、40-O-(2-羥基)乙氧基羰基甲基-雷帕黴素、40-O-(2-羥基)乙基-雷帕黴素、40-O-(3-羥基)丙基-雷帕黴素、40-O-(6-羥基)己基-雷帕黴素、40-O-[2-(2-羥基)乙氧基]乙基-雷帕黴素、40-O-[(3S)-2,2-二甲基二氧戊環-3-基]甲基-雷帕黴素、40-O-[(2S)-2,3-二羥基丙-1-基]-雷帕黴素、40-O-(2-乙醯氧基)乙基-雷帕黴素、40-O-(2-菸醯基氧基)乙基-雷帕黴素、40-O-[2-(N-嗎啉基)乙醯氧基]乙基-雷帕黴素、40-O-(2-N-咪唑基乙醯氧基)乙基-雷帕黴素、40-O-[2-(N-甲基-N’-六氫吡嗪基)乙醯氧基]乙基-雷帕黴素、39-O-去甲基-39,40-O,O-伸乙基-雷帕黴素、(26R)-26-二氫-40-O-(2-羥基)乙基-雷帕黴素、40-O-(2-胺基乙基)-雷帕黴素、40-O-(2-乙醯胺基乙基)-雷帕黴素、40-O-(2-菸鹼醯胺基乙基)-雷帕黴素、40-O-(2-(N-甲基-咪唑并-2’-基乙氧基甲醯氨基(carbethoxamido))乙基)-雷帕黴素、40-O-(2-乙氧基羰基胺基乙基)-雷帕黴素、40-O-(2-甲苯基磺醯胺基乙基)-雷帕黴素及40-O-[2-(4’,5’-二羰乙氧基-1’,2’,3’-三唑-1’-基)-乙基]-雷帕黴素。 可用於本發明中之其他雷帕黴素類似物係其中雷帕黴素之環己基環上之羥基及/或28位置處之羥基經羥基酯基團替代之類似物，例如於US RE44,768中發現之雷帕黴素類似物，例如替西羅莫司(temsirolimus)。 可用於本發明中之其他雷帕黴素類似物包括以下彼等：其中16位置處之甲氧基經另一取代基、例如(視情況經羥基取代)炔基氧基、苄基、鄰甲氧基苄基或氯苄基替代及/或其中39位置處之甲氧基與39碳一起缺失，以使得雷帕黴素之環己基環變成缺少39位甲氧基之環戊基環；例如如WO95/16691及WO96/41807中所闡述，該等專利之內容係以引用的方式併入。該等類似物可進一步經修飾，使得雷帕黴素之40位置處之羥基經烷基化及/或32-羰基經還原。 來自WO95/16691之雷帕黴素類似物包括(但不限於) 16-去甲氧基-16-(戊-2-炔基)氧基-雷帕黴素、16-去甲氧基-16-(丁-2-炔基)氧基-雷帕黴素、16-去甲氧基-16-(炔丙基)氧基-雷帕黴素、16-去甲氧基-16-(4-羥基-丁-2-炔基)氧基-雷帕黴素、16-去甲氧基-16-苄基氧基-40-O-(2-羥基乙基)-雷帕黴素、16-去甲氧基-16-苄基氧基-雷帕黴素、16-去甲氧基-16-鄰甲氧基苄基-雷帕黴素、16-去甲氧基-40-O-(2-甲氧基乙基)-16-戊-2-炔基)氧基-雷帕黴素、39-去甲氧基-40-去氧-39-甲醯基-42-去甲-雷帕黴素、39-去甲氧基-40-去氧-39-羥基甲基-42-去甲-雷帕黴素、39-去甲氧基-40-去氧-39-羧基-42-去甲-雷帕黴素、39-去甲氧基-40-去氧-39-(4-甲基-六氫吡嗪-1-基)羰基-42-去甲-雷帕黴素、39-去甲氧基-40-去氧-39-(嗎啉-4-基)羰基-42-去甲-雷帕黴素、39-去甲氧基-40-去氧-39-[N-甲基、N-(2-吡啶-2-基-乙基)]胺甲醯基-42-去甲-雷帕黴素及39-去甲氧基-40-去氧-39-(對甲苯磺醯基亞肼基甲基)-42-去甲-雷帕黴素。 來自WO96/41807之雷帕黴素類似物包括(但不限於) 32-去側氧基-雷帕黴素、16-O-戊-2-炔基-32-去側氧基-雷帕黴素、16-O-戊-2-炔基-32-去側氧基-40-O-(2-羥基-乙基)-雷帕黴素、16-O-戊-2-炔基-32-(S)-二氫-40-O-(2-羥基乙基)-雷帕黴素、32(S)-二氫-40-O-(2-甲氧基)乙基-雷帕黴素及32(S)-二氫-40-O-(2-羥基乙基)-雷帕黴素。 另一適宜雷帕黴素類似物係如US 2005/0101624中所闡述之優米莫司(umirolimus)，該專利之內容係以引用的方式併入。 在哺乳動物細胞中，雷帕黴素(mTOR)激酶之靶標作為描述為mTORC1複合體或mTORC2複合體之多蛋白複合體存在，其感測營養物及能量之可用性並整合來自生長因子及應力信號傳導之輸入。mTORC1複合體對別位mTOR抑制劑(例如雷帕黴素)敏感，係由mTOR、GβL及mTOR之調控性相關蛋白質(raptor)構成，且結合至肽基-脯胺醯基異構酶FKBP12蛋白(FK506結合蛋白1A，12 kDa)。相比之下，mTORC2複合體係由mTOR、GβL及mTOR之雷帕黴素不敏感伴侶蛋白(rictor)構成，且在活體外不結合至FKBP12蛋白。 已顯示mTORC1複合體參與蛋白質轉譯控制，其作為生長因子及營養物敏感裝置用於生長及增殖調控。mTORC1經由兩種關鍵下游受質來調控蛋白質轉譯：P70 S6激酶，其進而使核糖體蛋白質P70 S6磷酸化，及真核轉譯起始因子4E結合蛋白1 (4EBP1)，其在調節eIF4E調控之帽依賴性(cap-dependent)轉譯中起關鍵作用。mTORC1複合體調控因應細胞之能量及營養物穩態之細胞生長，且mTORC1在眾多種人類癌症中普遍失調。mTORC2之功能涉及經由使Akt磷酸化來調控細胞存活及調節肌動蛋白細胞骨架動力學。 mTORC1複合體對別位mTOR抑制劑(例如雷帕黴素及衍生物)敏感，在很大程度上係由於雷帕黴素之作用模式所致，該作用模式涉及與FKBP12形成細胞內複合體並結合至mTOR之FKBP12-雷帕黴素結合(FRB)結構域。此導致mTORC1之構形變化，據信該構形變化改變並弱化與其支架蛋白raptor之相互作用，進而阻礙受質(例如P70 S6K1)接近mTOR及磷酸化。雷帕黴素及雷帕黴素類似物(rapalogue，例如RAD001)因抑制與良性及惡性增殖病症二者相關之mTOR超活化已獲得臨床相關性。 RAD001 (亦稱為依維莫司(Afinitor®))具有化學名稱(1R,9S,12S,15R,16E,18R,19R,21R,23S,24E,26E,28E,30S,32S,35R)-1,18-二羥基-12-{(1R)-2-[(1S,3R,4R)-4-(2-羥基乙氧基)-3-甲氧基環己基]-1-甲基乙基}-19,30-二甲氧基-15,17,21,23,29,35-六甲基-11,36-二氧雜-4-氮雜-三環[30.3.1.04,9]三十六-16,24,26,28-四烯-2,3,10,14,20-戊酮及以下化學結構
。 依維莫司係經FDA批准用於治療晚期腎癌之藥物且在腫瘤學中之若干其他III期臨床試驗中處於研究中。臨床前研究已顯示，依維莫司能夠同時在活體外及活體內抑制眾多種腫瘤細胞系之增殖，此大概係藉助阻抑雷帕黴素敏感性mTORC1功能所致。作為雷帕黴素之衍生物，依維莫司係高效抑制mTORC1功能之一部分(即P70 S6激酶(P70 S6K)及下游P70 S6K受質P70 S6)之別位mTOR抑制劑。諸如依維莫司(及其他雷帕黴素類似物)之別位mTOR抑制劑對抑制mTORC2路徑或其產生之Akt 信號傳導之活化具有極少效應或不具效應。別位mTOR抑制劑之其他實例包括西羅莫司(雷帕黴素，AY-22989)、40-[3-羥基-2-(羥基甲基)-2-甲基丙酸酯]-雷帕黴素(亦稱為替西羅莫司或CCI-779)及瑞達福羅莫司(AP-23573/MK-8669)。別位mTOR抑制劑之其他實例包括咗他莫司(ABT578)及優米莫司。 替代地或另外地，已發現催化性ATP競爭性mTOR抑制劑直接靶向mTOR激酶結構域且靶向mTORC1及mTORC2二者。該等化合物亦係較此等別位mTOR抑制劑(如雷帕黴素)更完全之mTORC1抑制劑，此乃因其調節抗雷帕黴素mTORC1輸出，例如4EBP1-T37/46磷酸化及帽依賴性轉譯。 BEZ235係催化性mTOR抑制劑，具有化學名稱2-甲基-2-[4-(3-甲基-2-側氧基-8-喹啉-3-基-2,3-二氫-咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基)-苯基]-丙腈及以下化學結構
。 BEZ235亦可以其單甲苯磺酸鹽形式使用。BEZ235之合成闡述於WO2006/122806中，其內容係以引用的方式併入本文中。 作為催化性mTOR抑制劑，BEZ235能夠停止mTORC1複合體之完整功能，包括雷帕黴素敏感(P70 S6K之磷酸化及後續P70 S6之磷酸化)及雷帕黴素不敏感(4EBP1之磷酸化)功能二者。根據所使用之藥物濃度，BEZ235具有微分效應，其中在極低濃度(小於或等於10 nmol/L)下mTORC1抑制佔優，在低濃度(小於200 nmol/L)下mTORC1及mTORC2抑制佔優，但在相對較高之濃度(大約500 nmol/L)下則具有雙重PI3K/ mTOR抑制。 藉由代碼、通用名或商品名來標識之活性成分之結構可自標準綱要「The Merck Index」之現行版本或自(例如)國際專利(例如IMS World Publications)之數據庫獲得。其相應內容係以引用的方式併入本文中。 在一些實施例中，本發明提供組合，其包含(a) RAD001或其醫藥上可接受之鹽，及(b) BEZ235或其醫藥上可接受之鹽，其用於同時、分開或依序用於增強或促進個體之免疫反應。 在一些實施例中，RAD001係呈中性形式。在一些實施例中，BEZ235係單甲苯磺酸鹽。在一些實施例中，RAD001係以0.01 - 0.2 mg之劑量範圍、例如0.1 mg投與。在一些實施例中，BEZ235係以1 - 20 mg之劑量範圍、例如10 mg投與。 在一些實施例中，該(等)化合物或其組合係呈立即釋放劑型。在一些實施例中，該(等)化合物或其組合每週投與一次。在一些實施例中，該(等)化合物或其組合每天投與一次。 在一些實施例中，個體為免疫受損個體。在一些實施例中，個體為HIV+或患有AIDS。在一些實施例中，個體患有傳染病。 在一些實施例中，個體具有受損之免疫反應。在一些實施例中，個體為免疫衰老個體。在一些實施例中，個體患有年齡相關病狀，例如免疫衰老。 在本發明之一個實施例中，本發明提供醫藥組合物，其包含(a) RAD001或其醫藥上可接受之鹽；(b) BEZ235或其醫藥上可接受之鹽；或(c)其組合以及至少一種醫藥上可接受之載劑。
治療方法
在一態樣中，本發明提供一種方法，其包含向患者投與以下各項之步驟：(a)低劑量之RAD001或其醫藥上可接受之鹽；(b)低劑量之BEZ235或其醫藥上可接受之鹽；或(c)其組合，其中較未投與RAD001或其醫藥上可接受之鹽、BEZ235或其醫藥上可接受之鹽或其組合之患者，該患者經歷較少之由感染所致之疾病。 在一些實施例中，患者之先天性免疫增強。 在一些實施例中，抗原特異性免疫未增強。 在一些實施例中，至少一種干擾素誘導基因(ISG)上調。 在一些實施例中，感染係尿道感染。 在一些實施例中，感染係牙齒或牙齦之感染。 在一些實施例中，感染係呼吸道感染。 在一些實施例中，感染係病毒性感染。 在一些實施例中，患者係老年人。 在一些實施例中，患者至少65歲。 在一些實施例中，患者至少75歲。 在一些實施例中，患者至少85歲。 在一些實施例中，將低劑量之RAD001或其醫藥上可接受之鹽、低劑量之BEZ235或其醫藥上可接受之鹽或其組合投與患者長達約連續6週；長達約連續8週；長達約連續10週；長達約連續12週；長達約連續16週；長達約連續20週；長達約連續6個月；長達約1年；或作為長期治療之一部分(無期限)。 在一些實施例中，將低劑量之BEZ235或其醫藥上可接受之鹽投與患者長達約連續3週；長達約連續6週；長達約連續8週；長達約連續10週；長達約連續12週；長達約連續16週；長達約連續20週；長達約連續24週；或長達約連續6個月。 在一些實施例中，在投與RAD001或其醫藥上可接受之鹽、BEZ235或其醫藥上可接受之鹽或其組合之後約1天直至約1年，患者繼續經歷較少由感染所致之疾病。 在一些實施例中，在投與RAD001或其醫藥上可接受之鹽、BEZ235或其醫藥上可接受之鹽或其組合之後至少1個月且直至約1年，患者繼續經歷較少由感染所致之疾病。 在一些實施例中，在投與RAD001或其醫藥上可接受之鹽、BEZ235或其醫藥上可接受之鹽或其組合之後至少3個月且直至約1年，患者繼續經歷較少由感染所致之疾病。 在一些實施例中，在投與RAD001或其醫藥上可接受之鹽、BEZ235或其醫藥上可接受之鹽或其組合之後至少6個月，患者繼續經歷較少由感染所致之疾病。 在一些實施例中，向患者投與低劑量之BEZ235或其醫藥上可接受之鹽作為單一療法。 在一些實施例中，向患者投與低劑量之RAD001或其醫藥上可接受之鹽作為單一療法。 在一些實施例中，向患者投與低劑量之RAD001或其醫藥上可接受之鹽及低劑量之BEZ235或其醫藥上可接受之鹽二者作為組合療法。 在一些實施例中，接受低劑量之BEZ235或其醫藥上可接受之鹽之患者的藥物動力學AUC可變性低於接受較高劑量之BEZ235或其醫藥上可接受之鹽之患者。 在一些實施例中，RAD001或其醫藥上可接受之鹽係呈中性形式。 在一些實施例中，BEZ235或其醫藥上可接受之鹽係單甲苯磺酸鹽。 在一些實施例中，方法包含投與0.01 - 0.2 mg之RAD001或其醫藥上可接受之鹽。 在一些實施例中，方法包含投與1 - 50 mg之BEZ235或其醫藥上可接受之鹽。 在一些實施例中，個體為免疫受損。 在一些實施例中，個體具有受損之免疫反應。 在一些實施例中，個體為免疫衰老。 在一態樣中，本發明提供上調至少一種干擾素誘導基因(ISG)之方法，其包含向患者投與(a)低劑量之RAD001或其醫藥上可接受之鹽；(b)低劑量之BEZ235或其醫藥上可接受之鹽；或(c)其組合。 在一態樣中，本發明提供上調至少一種參與細胞外基質重塑之蛋白質之方法，其包含向患者投與(a)低劑量之RAD001或其醫藥上可接受之鹽；(b)低劑量之BEZ235或其醫藥上可接受之鹽；或(c)其組合。 在一些實施例中，在治療後至少1天、約1週、約3週、約4週、約5週、約6週、約8週、約10週、約12週、約16週、約20週、約24週或約6個月中，參與細胞外基質重塑之蛋白質顯著上調。 在一些實施例中，本發明提供治療與異常細胞外基質重塑相關之疾病或病狀之方法，其包含向患者投與(a)低劑量之RAD001或其醫藥上可接受之鹽；(b)低劑量之BEZ235或其醫藥上可接受之鹽；或(c)其組合。 在一些實施例中，該與異常細胞外基質重塑相關之疾病或病狀係選自心臟衰竭(例如射血分數保留性心臟衰竭)、慢性腎衰竭、腎小球腎病、皮膚老化、NASH、肝纖維化/硬化、肺纖維化(包括特發性肺纖維化)、老化相關之肌腱功能障礙/變硬、關節炎(包括骨關節炎)、肌少症、骨髓纖維化、骨髓發育不良、老化相關之血腦障壁功能障礙、糖尿病腎病變、動脈粥樣硬化或傷口癒合。 在一些實施例中，本發明提供促進或增強個體之免疫反應之方法，其包含向該個體投與(a) RAD001或其醫藥上可接受之鹽；(b) BEZ235或其醫藥上可接受之鹽；或(c)其組合，其量對促進或增強免疫反應治療有效或聯合地治療有效。 在一些實施例中，本發明提供治療個體之年齡相關病狀之方法，其包含向該個體投與(a) RAD001或其醫藥上可接受之鹽；(b) BEZ235或其醫藥上可接受之鹽；或(c)其組合，其量對治療、預防或改善年齡相關病狀(例如免疫衰老)治療有效或聯合地治療有效。 在一些實施例中，本發明提供(a) RAD001或其醫藥上可接受之鹽；(b) BEZ235或其醫藥上可接受之鹽；或(c)其組合之用途，其用於製備用於促進或增強免疫反應之藥劑。 在一些實施例中，本發明提供(a) RAD001或其醫藥上可接受之鹽；(b) BEZ235或其醫藥上可接受之鹽；或(c)其組合之用途，其用於製備用於治療年齡相關病狀(例如免疫衰老)之藥劑。 在一些實施例中，本發明提供商業包裝，其包含RAD001或其醫藥上可接受之鹽，及關於同時、分開或依序與BEZ235或其醫藥上可接受之鹽用於促進或增強免疫反應之說明書。 在一些實施例中，本發明提供商業包裝，其包含RAD001或其醫藥上可接受之鹽，及關於同時、分開或依序與BEZ235或其醫藥上可接受之鹽用於治療年齡相關病狀之說明書。 在一些實施例中，使用組合之益處在於，在組合使用時，可使用較低劑量之(a) RAD001或其醫藥上可接受之鹽；及(b) BEZ235或其醫藥上可接受之鹽，例如，不僅劑量需求通常較小，且應用頻率亦較低，或展現使用較大劑量或僅使用組合配偶體之一時所觀察到副作用之發生率減少。此符合欲治療患者之期望及需要。 藉由已確立之測試模型可顯示，投與(a) RAD001或其醫藥上可接受之鹽；(b) BEZ235或其醫藥上可接受之鹽；或(c)其組合產生本文之前所闡釋之有益效應。熟習此項技術者完全能夠選擇相關測試模型來證明此等有益效應。化合物或組合之藥理學活性可(例如)在如業內所已知或如下文所闡述之臨床研究或活體內或活體外測試程序中展示。 在一態樣中，本發明提供醫藥組合物，其包含對促進及/或增強個體之免疫反應聯合地治療有效之量的(a) RAD001或其醫藥上可接受之鹽；及(b) BEZ235或其醫藥上可接受之鹽。在此組合物中，組合配偶體(a)及(b)係藉由任何適宜途徑以單一調配物或單位劑型投與。該單位劑型亦可為固定組合。 在另一態樣中，本發明提供醫藥組合物，其分開包含對促進及/或增強個體之免疫反應聯合地治療有效之量的(a) RAD001或其醫藥上可接受之鹽；及(b) BEZ235或其醫藥上可接受之鹽，其以並行但分開的方式投與或以依序方式投與。 包含(a) RAD001或其醫藥上可接受之鹽；及(b) BEZ235或其醫藥上可接受之鹽之用於分開投與組合配偶體或用於以固定組合(亦即單一蓋倫製劑(galenical)組合物)投與之醫藥組合物可以業內已知之方式來製備，且係適於經腸(例如經口或經直腸)及/或非經腸投與個體且包含治療有效量之至少一種單獨的組合配偶體(例如如上文所指示)或與一或多種醫藥上可接受之載劑組合之彼等。 新穎醫藥組合物可含有約0.1%至約99.9% (例如約1%至約60%)之活性成分。 在一些實施例中，根據先前實施例中之任一實施例，個體至少65歲。 在一些實施例中，個體患有鬱血性心臟衰竭。 在一些實施例中，個體患有糖尿病。 在一些實施例中，個體患有慢性腎衰竭。 在一些實施例中，個體為現時吸煙者。 在一些實施例中，個體患有COPD。 慢性阻塞性肺病(COPD)係一種肺部疾病，其特徵在於肺部氣流慢性阻塞，其干擾正常呼吸且不完全可逆。較熟悉之術語「慢性支氣管炎」及「肺氣腫」不再使用，但現已納入COPD診斷中。COPD不僅僅係「吸煙者咳嗽」，但係診斷不足、威脅生命之肺部疾病。COPD診斷係由稱為肺活量測定法之簡單測試來確認，該測試量測人可呼吸之深度及空氣可進入肺及自肺出去之速度。任何具有咳嗽、咳痰(sputum production)或呼吸困難(呼吸困難或費力)之症狀及/或具有暴露於該疾病之風險因素史之患者均應考慮此一診斷。在不能利用肺活量測定法之情形下，應使用所有可用之工具進行COPD診斷。臨床症狀及徵象(例如異常呼吸短促及強制呼氣時間增加)可用於輔助診斷。低峰流量與COPD一致，但可能並非COPD所特有，此乃因其可由其他肺部疾病及由測試期間差的表現所引起。慢性咳嗽及咳痰往往在氣流受限發生之前多年產生，但並非所有患有咳嗽及咳痰之個體均會繼續發展為COPD。 在一些實施例中，個體居住在護理院設施中。 在一些實施例中，個體居住在輔助生活設施中。 在一些實施例中，個體居住在專業護理設施中。 在一些實施例中，個體居住在康復設施中。 在一些實施例中，個體需要協助進行一或多種日常生活活動。 日常生活活動(ADL)係人們往往每天都會做而無需協助之常規活動。有六種基本的ADL：進食、沐浴、穿衣、如廁、移動(走路)及大小便控制。個體進行ADL之能力對於確定何種類型之長期護理(例如養老院護理或家庭護理)及覆蓋個體需求(亦即醫療保險、醫療補助或長期護理保險)係重要的。 ADL (日常生活活動)：吾人在日常生活中所通常做的事情，包括吾人為自我照護所進行之任何日常活動，例如烹飪、飲食、沐浴、穿衣、打扮、工作、家政及休閒。進行ADL之能力或無能力可用作許多病症中有能力/失能之極實際之量測。 在一些實施例中，個體患有運動失能。 運動失能或運動受損係指一個人使用其一或多個肢體之能力受損，或走路、抓握或抬舉物體所需之力量減少。可利用輪椅、拐杖或步行器之使用來幫助運動。運動受損可由多種因素引起，例如老化相關之肌少症、疾病、事故或先天性病症，且可係肌肉、神經肌肉或矯形外科損傷之結果。 用於經腸或非經腸投與之包含所揭示化合物或組合(包括固定組合或非固定組合)之醫藥組合物係(例如)呈單位劑型之彼等，例如糖衣錠劑、錠劑、膠囊或栓劑或安瓿。若未另外指示，否則該等醫藥組合物係以業內已知之方式來製備，例如藉助各種習用混合、粉碎、造粒、糖包衣、溶解、凍乾製程或熟習此項技術者容易明瞭之製作技術來製備。應瞭解，每一劑型之個別劑量內所含之組合配偶體之單位含量本身無需構成有效量，此乃因必需有效量可藉由投與複數個劑量單位來達成。應進一步瞭解，用於非經腸投與之組合配偶體之單位含量可含有較高劑量量之組合配偶體，其在投與之前稀釋至有效劑量量。 含有藥劑組合或藥劑組合之個別藥劑之單位劑型可呈包封於膠囊(例如明膠膠囊)內之微錠劑形式。為此，可使用用於醫藥調配物中之明膠膠囊，例如稱為CAPSUGEL
TM
之硬明膠膠囊(可自Pfizer獲得)。 本發明之單位劑型可視情況進一步包含用於醫藥之其他習用載劑或賦形劑。此等載劑之實例包括(但不限於)崩解劑、黏合劑、潤滑劑、助流劑、穩定劑及填充劑、稀釋劑、著色劑、矯味劑及防腐劑。熟習此項技術者可根據劑型之具體期望性質藉由常規實驗且在無任何過重負擔下選擇上文所提及載劑中之一或多者。所使用之每一載劑之量可在業內習用範圍內有所變化。以下均以引用的方式併入本文中之參考文獻揭示用於調配口服劑型之技術及賦形劑。參見
The Handbook of Pharmaceutical Excipients ，
第4版，Rowe等人編輯，American Pharmaceuticals Association (2003)；及
Remington: the Science and Practice of Pharmacy
，第20版，Gennaro編輯，Lippincott Williams & Wilkins (2003)。 該等可選其他習用載劑可藉由在熔融造粒之前或期間將一或多種習用載劑併入至初始混合物中或藉由將一或多種習用載劑與顆粒組合於口服劑型中來併入至口服劑型中。在後一實施例中，經組合混合物可經進一步摻和，例如藉助V形摻和器摻和，且隨後壓縮或模製成錠劑(例如單片錠劑)，藉由膠囊囊封，或填充至藥囊中。 醫藥上可接受之崩解劑之實例包括(但不限於)澱粉；黏土；纖維素；海藻酸鹽；樹膠；交聯聚合物，例如交聯聚乙烯基吡咯啶酮或交聚維酮(crospovidone)(例如來自International Specialty Products (Wayne, NJ)之POLYPLASDONE XL
TM
)；交聯羧甲基纖維素鈉或交聯羧甲纖維素鈉(例如，來自FMC之AC-DI-SOL
TM
)；及交聯羧甲基纖維素鈣；大豆多醣；及瓜爾膠(guar gum)。崩解劑可以組合物之約0重量%至約10重量%之量存在。在一個實施例中，崩解劑以組合物之約0.1重量%至約5重量%之量存在。 醫藥上可接受之黏合劑之實例包括(但不限於)澱粉；纖維素及其衍生物，例如微晶纖維素，例如，來自FMC (Philadelphia, PA)之AVICEL PH
TM
、來自Dow Chemical Corp. (Midland, MI)之羥丙基纖維素、羥乙基纖維素及羥丙基甲基纖維素METHOCEL
TM
；蔗糖；右旋糖；玉米糖漿；多醣；及明膠。黏合劑可以組合物之約0重量%至約50重量% (例如，2重量%至20重量%)之量存在。 醫藥上可接受之潤滑劑及醫藥上可接受之助流劑之實例包括(但不限於)膠體二氧化矽、三矽酸鎂、澱粉、滑石、磷酸三鈣、硬脂酸鎂、硬脂酸鋁、硬脂酸鈣、碳酸鎂、氧化鎂、聚乙二醇、粉狀纖維素及微晶纖維素。潤滑劑可以組合物之約0重量%至約10重量%之量存在。在一個實施例中，潤滑劑可以組合物之約0.1重量%至約1.5重量%之量存在。助流劑可以約0.1重量%至約10重量%之量存在。 醫藥上可接受之填充劑及醫藥上可接受之稀釋劑之實例包括(但不限於)粉糖(confectioner’s sugar)、可壓縮糖、葡聚糖結合劑、糊精、右旋糖、乳糖、甘露醇、微晶纖維素、粉狀纖維素、山梨醇、蔗糖及滑石。填充劑及/或稀釋劑可(例如)以組合物之約0重量%至約80重量%之量存在。 產生效能而無毒性之一或多種治療劑之最佳比率、個別及組合劑量以及濃度係基於治療劑對靶向位點之可用性之動力學，且係使用熟習此項技術者所已知之方法來確定。 根據本發明，治療有效量之(a) RAD001或其醫藥上可接受之鹽；(b) BEZ235或其醫藥上可接受之鹽；或(c)其組合中之每一者可同時或依序且以任何順序來投與，且該等組分可分開或作為固定組合來投與。舉例而言，在一態樣中，本發明提供預防或治療感染或年齡相關疾病之方法，其根據本發明可包含同時或以任何順序依序以聯合治療有效量、在一些實施例中以協同有效量(例如，以對應於本文中所闡述量之每日或間歇劑量)(i)投與呈游離形式或醫藥上可接受之鹽形式之第一藥劑(a)及(ii)投與呈游離形式或醫藥上可接受之鹽形式之藥劑(b)。個別治療劑可在療程期間在不同時間分開投與或以分開或單一組合形式並行投與。此外，術語「投與」亦涵蓋使用治療劑之前藥，該前藥於活體內轉化成治療劑。因此，本發明應理解為涵蓋所有此等同時或交替治療之方案且術語「投與」應相應地理解。 每一治療劑或其組合之有效劑量可端視所採用之具體治療劑或醫藥組合物、投與模式、所治療之病狀及所治療病狀之嚴重程度有所變化。因此，劑量方案係根據多種因素(包括投與途徑及患者之腎及肝功能)來選擇。熟習此項技術之臨床醫師或醫師可容易地確定緩解、對抗或阻止該病狀進展所需單一活性成分之有效量並開出處方。 在其中組合使用兩種治療劑之實施例中，各治療劑之有效劑量可要求一種治療劑之投與較組合中之另一治療劑更頻繁。因此，為容許適當投用，經包裝之醫藥產品可含有一或多種含有化合物之組合之劑型，及一或多種含有治療劑之組合中之一者但無該組合之其他治療劑之劑型。 當治療劑之組合、例如(a) RAD001或其醫藥上可接受之鹽；及(b) BEZ235或其醫藥上可接受之鹽之組合係以如作為單一藥物銷售之形式施加時，若本文中未另外提及，則其劑量及投與模式可根據各別銷售藥物之包裝插頁上所提供之資訊而定。 在一些實施例中，RAD001 (例如其游離形式)係以每日及/或每週約0.01 mg至約1 mg範圍內之劑量經口投與。在一些實施例中，RAD001、具體而言其游離形式之劑量係以每日0.1 mg之劑量經口投與成人。 在一些實施例中，BEZ235或其醫藥上可接受之鹽(例如其對甲苯磺酸鹽)係以每日約1 mg至約20 mg或每日及/或每週約1 mg至約50 mg範圍內之劑量經口投與。在一些實施例中，BEZ235或其醫藥上可接受之鹽(例如其對甲苯磺酸鹽)之劑量係以每日約10 mg之劑量投與(例如經口)成人，例如65歲或更年長之人。在一些實施例中，BEZ235或其醫藥上可接受之鹽之劑量係約2 mg至約19 mg、約3 mg至約17 mg、約4 mg至約16 mg、約5 mg至約15 mg、約6 mg至約14 mg、約7 mg至約13 mg、約8 mg至約12 mg或約9 mg至約11 mg。在一些實施例中，BEZ235或其醫藥上可接受之鹽之劑量係約1 mg、約2 mg、約3 mg、約4 mg、約5 mg、約6 mg、約7 mg、約8 mg、約9 mg、約10 mg、約11 mg、約12 mg、約13 mg、約14 mg、約15 mg、約16 mg、約17 mg、約18 mg、約19 mg、約20 mg、約25 mg、約30 mg、約35 mg、約40 mg、約45 mg或約50 mg。在一些實施例中，BEZ235係作為其對甲苯磺酸鹽經口投與。在一些實施例中，BEZ235或其醫藥上可接受之鹽係每天兩次、每天一次、每兩天一次、每三天一次、每四天一次、每五天一次、每六天一次、一週一次、每兩週一次、每三週一次、每四週一次、一月一次、每兩個月一次、每三個月一次、每四個月一次、每六個月一次或每年一次投與。 可根據經驗使用已知方法針對每一個體確定每一治療劑用於促進及/或增強個體之免疫反應及/或治療個體之年齡相關病狀之最佳劑量，且此將取決於多種因素，包括(但不限於)疾病進展之程度；個體之年齡、體重、總體健康狀況、性別及飲食；投與時間及途徑；及個體正在服用之其他藥劑。最佳劑量可使用業內所熟知之常規測試及程序來確定。 可與載劑材料組合以產生單一劑型之每一治療劑之量將端視所治療個體及具體投與模式而有所變化。在一些實施例中，含有如本文中所闡述之治療劑組合之單位劑型將含有通常在單獨投與該等治療劑時所投與量之該組合之每一藥劑。 劑量頻率可端視所使用之治療劑及欲治療之具體病狀而有所變化。一般而言，較佳使用足以提供有效療法之最低劑量。通常可使用適於所治療病狀之分析來監測患者之治療有效性，該等分析應為熟習此項技術者所熟悉。 在一態樣中，本發明提供促進及/或增強個體之免疫反應之方法，其包含向有需要之個體投與(a) RAD001或其醫藥上可接受之鹽；(b) BEZ235或其醫藥上可接受之鹽；或(c)其組合，其量對促進及/或增強個體之免疫反應治療有效或聯合地治療有效。 在另一態樣中，本發明提供治療個體之年齡相關病狀之方法，其包含向有需要之個體投與一定量之(a) RAD001或其醫藥上可接受之鹽；(b) BEZ235或其醫藥上可接受之鹽；或(c)其組合，其量對治療年齡相關病狀(例如免疫衰老)治療有效或聯合地治療有效。 在另一態樣中，本發明提供促進及/或增強個體之免疫反應之方法，其包含向有需要之個體投與BEZ235或其醫藥上可接受之鹽，其量治療有效地促進及/或增強個體之免疫反應(例如先天性免疫反應)。 在另一態樣中，本發明提供治療個體之年齡相關病狀之方法，其包含向有需要之個體投與一定量之BEZ235或其醫藥上可接受之鹽，其量對治療年齡相關病狀(例如免疫衰老)治療有效。 在另一態樣中，本發明提供(a) RAD001或其醫藥上可接受之鹽；(b) BEZ235或其醫藥上可接受之鹽；或(c)其組合之用途，其用於增強及/或促進免疫反應及/或用於製備用於增強及/或促進免疫反應之藥劑。 在另一態樣中，本發明提供 (a) RAD001或其醫藥上可接受之鹽；(b) BEZ235或其醫藥上可接受之鹽；或(c)其組合之用途，其用於治療年齡相關病狀及/或用於製備用於治療年齡相關病狀(例如免疫衰老)之藥劑。 在另一態樣中，本發明提供BEZ235或其醫藥上可接受之鹽之用途，其用於增強及/或促進免疫反應及/或用於製備用於增強及/或促進免疫反應(例如先天性免疫反應)之藥劑。 在另一態樣中，本發明提供BEZ235或其醫藥上可接受之鹽之用途，其用於治療年齡相關病狀及/或用於製備用於治療年齡相關病狀(例如免疫衰老)之藥劑。 在一態樣中，本發明提供商業包裝，其包含以下各項作為活性成分：(a) RAD001或其醫藥上可接受之鹽；(b) BEZ235或其醫藥上可接受之鹽；或(c)其組合，以及關於其同時、分開或依序用於增強及/或治療免疫反應之說明書。 在另一態樣中，本發明提供商業包裝，其包含以下各項作為活性成分：(a) RAD001或其醫藥上可接受之鹽；(b) BEZ235或其醫藥上可接受之鹽；或(c)其組合，以及關於其同時、分開或依序用於治療年齡相關病狀(例如免疫衰老)之說明書。 在一態樣中，本發明提供商業包裝，其包含RAD001或其醫藥上可接受之鹽，以及關於同時、分開或依序與BEZ235或其醫藥上可接受之鹽用於增強及/或促進免疫反應之說明書。 在另一態樣中，本發明提供商業包裝，其包含RAD001或其醫藥上可接受之鹽，以及關於同時、分開或依序與BEZ235或其醫藥上可接受之鹽用於治療年齡相關病狀(例如免疫衰老)之說明書。 在另一態樣中，本發明提供商業包裝，其包含BEZ235或其醫藥上可接受之鹽，以及關於同時、分開或依序與RAD001或其醫藥上可接受之鹽用於增強及/或促進免疫反應(例如先天性免疫反應)之說明書。 在另一態樣中，本發明提供商業包裝，其包含BEZ235或其醫藥上可接受之鹽，以及關於同時、分開或依序與RAD001或其醫藥上可接受之鹽用於治療年齡相關病狀(例如免疫衰老)之說明書。 在另一態樣中，本發明提供商業包裝，其包含BEZ235或其醫藥上可接受之鹽，以及關於用於增強及/或促進免疫反應(例如先天性免疫反應)之說明書。 在另一態樣中，本發明提供商業包裝，其包含BEZ235或其醫藥上可接受之鹽，以及關於用於治療年齡相關病狀(例如免疫衰老)之說明書。
致病性感染
在另一態樣中，本文中所提供之方法可用於治療或預防個體由病原體所致之感染。在一些實施例中，個體為免疫缺陷。在一些實施例中，個體為免疫衰老。在一些實施例中，病原體係病毒病原體，例如病毒病原體，例如HIV、引發腦膜炎之病毒、引發腦炎之病毒、A型肝炎、B型肝炎、C型肝炎、狂犬病病毒、脊髓灰白質炎病毒、流行性感冒病毒、副流行性感冒病毒、腺病毒、鼻病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒、風疹、百日咳、乳頭瘤病毒、黃熱病毒、呼吸道融合病毒、小病毒、諾瓦克病毒(Norwalk virus)、屈公病病毒(chikungunya virus)、出血熱病毒、包括伊波拉病毒(Ebola virus)、登革熱病毒(dengue virus)、茲卡病毒(Zika virus)，及疱疹病毒，例如，水痘、巨細胞病毒及艾司坦-巴爾病毒(Epstein-Barr virus)。在一些實施例中，感染係病毒感染，例如慢性病毒感染。在一些實施例中，慢性病毒感染係選自A型肝炎、B型肝炎、C型肝炎、艾司坦-巴爾病毒、HIV、巨細胞病毒、1型單純疱疹病毒、2型單純疱疹病毒、人類乳頭瘤病毒、腺病毒及卡波西氏肉瘤(Kaposi’s Sarcoma)相關之疱疹病毒。在一些實施例中，慢性病毒感染包含HIV。 舉例而言，Lichterfeld及同事觀察到HIV特異性CD8+ T細胞顯示降低之端粒長度，且在抑制PD-1時端粒長度及端粒酶活性增加(參見例如Lichterfeld, M等人，(2008) Blood 112(9):3679- 3687)。在另一實例中，PD-1在C型肝炎(HVC)特異性CD8+細胞毒性T淋巴球中顯著上調(參見例如Golden-Mason, L (2007) J. Virol. 81(17): 9249-9258)。 在一些實施例中，病毒性感染包含病毒性呼吸道感染。在一些實施例中，病毒性呼吸道感染係病毒性上呼吸道感染。在一些實施例中，病毒性呼吸道感染係病毒性下呼吸道感染。在一些實施例中，病毒性呼吸道感染係由以下所引起：鼻病毒、冠狀病毒、流行性感冒病毒、呼吸道融合病毒(RSV)、腺病毒、間質肺炎病毒、腸病毒、博卡病毒(bocavirus)、副黏液病毒及/或副流行性感冒病毒。在一些實施例中，病毒性呼吸道感染係肺炎。在一些實施例中，病毒性呼吸道感染包括肺膿瘍。在一些實施例中，病毒性呼吸道感染包括支氣管炎。 在一些實施例中，病原體係細菌病原體，例如選自以下之細菌病原體：腦膜炎球菌屬(Meningococcus)、嗜血桿菌屬(Haemophilus)、肺炎球菌屬(Pneumococcus)、葡萄球菌屬(Staphylococcus)、鏈球菌屬(Streptococcus)、奈瑟菌屬(Neisseria)、莫拉菌屬(Moraxella)、大腸桿菌(Escherichia coli)、克雷伯氏菌屬(Klebsiella)、假單胞菌屬(Pseudomonas)、腸桿菌屬(Enterobacter)、變形桿菌屬(Proteus)、沙雷氏菌屬(Serratia)、軍團菌屬(Legionella)、沙門桿菌屬(Salmonella)、志賀桿菌屬(Shigella)、不動桿菌屬(Acinetobacter)、李氏菌屬(Listeria)、披衣菌屬(Chlamydia)及分枝桿菌屬(Mycobacterium)等。 在一些實施例中，病原體係寄生蟲病原體，例如弓蟲屬(Toxoplasma)、利士曼原蟲屬(Leishmania)及瘧疾、克氏錐蟲(T. cruzii)、蠕蟲(Helminth)，例如住血吸蟲屬(Schistosoma)。 在一些實施例中，病原體係酵母或真菌病原體，例如念珠菌屬(Candida)、隱球菌屬(Cryptococcus)、球孢子菌屬(Coccidioides)、芽生菌屬(Blastomyces)、麴菌屬(aspergillus)或毛黴菌屬(mucormycetes)。
衰老及其他病症
在另一態樣中，本文中所提供之方法可用於治療個體之衰老。如本文中所使用，術語「衰老」意欲包括所有類型之衰老。在一些實施例中，衰老包含免疫缺失，例如免疫衰老。免疫衰老包括隨著年齡增長對感染之免疫反應降低，且係源自T細胞譜系中之胸腺退化，導致T細胞產生及輸出減少(例如，參見Shimatani, K等人，(2009) PNAS 106 (37):15807-15812)。在一些實施例中，存在由PD-1之持續表現所定義之真正年齡依賴性CD4+或CD8+ T細胞群體之群體增加，其抑制T細胞對抗原之反應(例如，參見Shimatani, K等人，(2009) PNAS 106 (37):15807-15812；Nunes, C等人，(2012) Clinical Cancer Research 18(3):678-687)。在一些實施例中，衰老包含細胞衰老，其中細胞不再分裂。在一些實施例中，年齡相關之免疫衰老包含由造血幹細胞產生之天然淋巴球減少(Chen, Science Signalling, ra75, 2009)。細胞衰老與每一細胞分裂時發生之端粒逐漸縮短或p16之細胞內表現相關。在一些實施例中，衰老包含嗜中性球、淋巴球、NK細胞、巨噬細胞及/或樹突細胞之功能之年齡相關性降低(例如，參見Boraschi D等人，(2013) Sci Transl Med 5(185):ps8；Kumar R及Burns EA. (2008) Expert Rev. Vaccines 7(4): 467-479。
例示
以下實例說明上文所闡述之本發明；然而，其並不意欲以任何方式限制本發明之範圍。本發明之醫藥化合物、組合及組合物之有益效應亦可藉由熟習此項相關技術者原本已知之其他測試模型來測定。
實例 1 ：支持以下主張之數據： BEZ235 不增強抗原特異性免疫，但會藉由經由上調干擾素誘導之基因 (ISG) 來增強先天性免疫而降低感染率
總共264名≥ 65歲之無不穩定醫學病狀之老年人志願者入選隨機化雙盲安慰劑對照試驗。將個體隨機分配至接受安慰劑或四種口服mTOR抑制劑投用方案中之一者：每日0.5 mg RAD001，每日0.1 mg RAD001，每日10 mg BEZ235或每日0.1 mg RAD001及10 mg BEZ235之組合。利用研究藥物將個體治療6週，且在2週無藥物間隔之後，給予2014年之季節性流行性感冒疫苗(Fluvax
®
, CSL Biotherapies)。在基線時及流行性感冒疫苗接種後4週所收集之血清中量測對流行性感冒疫苗中之3種流行性感冒毒株之血球凝集抑制(HI)抗體效價。血清HI效價係在Quest Diagnostics量測。然後在無研究藥物下再追蹤個體9個月。本研究之主要終點為相對於安慰劑，對3種流行性感冒疫苗株中之至少2種之血球凝集抑制(HI)幾何平均效價(GMT)比率(疫苗接種後4週之GMT /基線時之GMT)增加1.2倍。選擇此終點係由於由MF-59疫苗佐劑所誘導之流行性感冒GMT比率增加大約1.2倍係與流行性感冒疾病(1)之減少相關。 僅低劑量RAD001 (每日0.1 mg)及BEZ235 (每日10 mg)之組合符合本研究之主要終點，且使得3/3個流行性感冒疫苗株中之流行性感冒GMT比率出現統計學上顯著大於1.2倍之增加(圖1)。RAD001單一療法(每日0.1 mg或0.5 mg)使得僅1/3之流行性感冒疫苗株中之流行性感冒GMT比率之增加統計學上顯著大於1.2倍。BEZ235單一療法並未使得對3種流行性感冒疫苗株中之任一者之流行性感冒GMT比率增加。該等結果表明，低劑量之別位(RAD001)及催化性(BEZ235) mTOR抑制劑之組合較RAD001或BEZ235單一療法在流行性感冒疫苗接種反應方面產生較大之改良。 作為免疫功能之額外評價，每一治療組中之總體感染率係藉由以下方式來評價：使個體在日誌中記錄在起始研究藥物治療後一年期間，其所經歷之任何感染，研究人員在每次研究就診時審查該日誌。相對於安慰劑，在RAD001 0.1 mg + 10 mg BEZ235組合及在BEZ235單一療法治療組中之個體中，每人每年之感染數顯著減少(表1)。另外，BEZ235單一療法及RAD001 + BEZ235治療組中之尿道感染(表2)及牙齒及牙齦感染(表3)率低於安慰劑組或RAD001單一療法治療組。
表 1 ： BEZ235 在單獨或與 RAD001 組合時在研究藥物投與後一年內與感染率之顯著下降相關 表 2 ： BEZ235 在單獨或與 RAD001 組合時在研究藥物投與後一年內與患有尿道感染之個體百分比之下降相關 表 3 ： BEZ235 在單獨或與 RAD001 組合時在研究藥物投與後一年內與牙齒或牙齦感染率之下降相關
亦檢查個體在經研究藥物治療之6週期間之感染率。在研究藥物治療之6週期間所發生之主要感染係呼吸道感染。在個體經研究藥物治療之6週期間，BEZ235及RAD001 + BEZ235二者均使得呼吸道感染之發病率及嚴重程度降低(圖2)。 為探索低劑量BEZ235單一療法之組合或RAD001 + BEZ235組合療法降低老年人之感染率之可能機制，在基線時及在安慰劑、BEZ235或RAD001 + BEZ235治療6週後自個體獲得之全血中實施RNAseq基因表現剖析。全血之RNAseq分析揭示與干擾素信號傳導相關之路徑之高度顯著富集(圖3)。在所富集路徑中表現上調最高之一些基因包括1型干擾素誘導之基因(ISG)的子組，其在對病毒之免疫反應中起關鍵作用 (表4) (2)。該等發現表明，藉由低劑量BEZ235及/或BEZ235 + RAD001組合療法上調免疫系統及干擾素誘導之基因之子組增強免疫功能且藉此降低老年人之感染率。
藉由 RNASeq 之基因表現剖析
將外周靜脈血樣品收集至PAXgene血液RNA管中。自PAXgene收集之血液純化總RNA，且使用Agilent 2100 Bioanalyzer (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA)評價經分離RNA之品質及產率。使用具有Ribo-Zero球蛋白之Illumina TruSeq鏈式總RNA套組自RNA製備RNA-Seq庫。此套組一步完成核糖體RNA及球蛋白mRNA之去除。使用Illumina HiSeq2500平臺以雙末端模式來讀取2×76個鹼基對(bp)之長度對所獲得之庫進行定序。使用製造商之軟體處理來自該儀器之影像以產生FASTQ序列文件。 藉由在FASTQ文件上運行FastQC (0.10版)來評價讀取品質。定序讀序顯示優良品質，對於所有鹼基位置，平均Phred得分均高於30。將每個樣品平均100百萬個76 bp雙末端讀序定位至智人(Homo sapiens)基因體(GRCh38版)上，且使用RefSeq UCSC進行人類基因及轉錄物注釋。使用內部基因量化途徑來測定定位至每一基因之計數數目(Schuierer, S.及Roma, G. The exon quantification pipeline (EQP): a comprehensive approach to the quantification of gene, exon and junction expression from RNA-seq data.
Nucleic acids research
(2016))。平均而言，總讀序之88%定位至基因體或轉錄物，且經比對讀序之30%定位至表現序列。將具有少於8百萬個表現讀序之樣品以及三個展示鏈失衡之樣品自進一步分析移除。
RNASeq 差異基因表現分析
在任何治療/時間條件下平均表現每百萬少於一個計數之任何基因視為檢測不到的，且自進一步分析移除。然後使用位於limma包中之voom正規化程序在R Statistical Computing軟體(v3.1.3)中對剩餘基因之計數數據進行正規化(Law, CW, Chen, Y, Shi, W,及Smyth, GK (2014)。Voom: precision weights unlock linear model analysis tools for RNA-seq read counts. Genome Biology 15, R29.)。 在評估數據之技術品質時，使用R中之prcomp函數實施主要組分分析。此分析指示，第一主要組分反映樣品處理之多個方面(RNA提取批次、mRNA之產率等)。因此，納入此主要組分之值作為對後續分析中之技術變量之調整。 對於每一基因而言，使用SAS v9.3軟體將以下線性混合模型擬合至經voom正規化之表現數據，針對相關共變量(年齡、性別及BMI)以及PC1進行調整。 proc mixed data=exprsData anovaf; class SubjID Day Trt Gender; model log2exprs = Day Trt Day*Trt PC1 Age Gender Bmi / solution DDFM=KenwardRoger; repeated Day / type=un subject =SubjID; by gene; 其中log2exprs係指經voom正規化之表現量度；Day係指取樣(投用前或投用後)之時間點；Trt係指個體之治療組；PC1係指該樣品之PC1值；Age係指個體之年齡；Gender係指個體之性別；Bmi係指個體之身體質量指數；且SubjID係指個體之ID。使用SAS估算語句來獲得差異表現倍數變化及p值。此分析產生每一治療臂(BEZ、RAD+BEZ及安慰劑)之基因表現反應特性。該等基因表現特性係由每一治療之治療後對治療前之倍數變化及p值組成。
RNASeq 基因表現路徑富集分析
對於此分析，尋找在每一治療反應特性內之所界定生物學路徑中基因之上調或下調偏斜。典型路徑(c2.cp.v5.0.entrez.gmt)係自典型特性資料庫(http://software.broadinstitute.org/gsea/msigdb/)下載。特性之定義係如「RNASeq Differential Expression Analysis」部分中所闡述。對於每一路徑及治療反應特性，如先前所闡述實施加權KS測試(Subramanian等人，Gene set enrichment analysis: A knowledge-based approach for interpreting genome-wide expression profiles. Proc. Nat. Acad. Sci. 第102卷. 第43期. 15545-15550 2005)，且在圖3中所得-log10 (p值)繪製為隨路徑中之基因的平均倍數變化而變。
RNASeq 基因表現 - 上調基因之指定
若使用離群值檢測之杜凱(Tukey)法，基因之倍數變化經測定為離群值，則視該等基因上調。特定而言，上調基因符合以下準則：log2(FC治療後對治療前)大於Q3 + 1.5*(Q3-Q1)，其中Q3係每一治療之log2(FC)之上(亦即第三)四分位數且Q1係下(亦即第一)四分位數。
表 4 ： BEZ235 單一療法及 BEZ235 + RAD001 組合療法同類群組中之上調路徑基因
BEZ235單一療法並不改良對流行性感冒疫苗接種之反應但卻降低感染率之發現係完全意外的。流行性感冒疫苗接種反應係抗原特異性適應性免疫之讀出。因此，該等發現表明，不像RAD001，BEZ235並不改良對特定抗原之免疫反應。相反，BEZ235以及BEZ235 + RAD001之組合可藉由經由上調ISG表現改良對多種病原體之非抗原特異性先天性免疫反應來降低感染率。
實例 2 ： 對於改良老年人之疫苗接種反應 ( 老化相關之終點 ) ， RAD001 + BEZ235 可具有大於 RAD001 或 BEZ235 單一療法之效能，此乃因較單一療法，該組合產生更具選擇性及完全之 TORC1 抑制
衰老可能由於包括mTOR路徑之一離散集細胞信號傳導路徑之擾動造成。mTOR經由兩種複合體發信號：TORC1及TORC2。mTOR抑制對臨床前物種衰老之許多有益效應可係由TORC1之抑制介導的(3,4)。相比之下，TORC2抑制與高血糖症、高膽固醇血症及雄性小鼠之壽命減少相關(4,5)。另外，若干種長壽動物模型具有增加而非減少之TORC2活性(6)。因此，TORC1特異性抑制對於治療人類老化相關之病狀(例如免疫功能下降)可最佳。雷帕黴素類似物(例如RAD001)係一類別位mTOR抑制劑，其始終僅抑制TORC1複合體下游之S6K節點(7)。例如在每日投用10 mg BEZ235 (大約10-20 nM)之老年個體血清中所達成之低濃度之BEZ235亦始終僅抑制TORC1下游之S6K節點(8)。在較高劑量下，BEZ235完全抑制TORC1，但亦抑制TORC2 (8,9)。然而，低劑量之催化性抑制劑與低劑量之RAD001之組合協同抑制TORC1下游之大多數(若非全部)節點，而不抑制TORC2活性(8,10)。本發明之臨床發現表明，較低劑量RAD001或BEZ235單一療法，利用低劑量RAD001及BEZ235之組合所達成之更完全且更具選擇性之TORC1抑制與老年個體之流行性感冒疫苗反應增強更佳相關。對於其他老化相關之病狀，由於低劑量RAD001及BEZ235之組合之更完全且更具選擇性之TORC1抑制，該組合亦可具有優於RAD001及/或BEZ235單一療法之效能。
實例 3 ：經由低程度上調干擾素誘導之基因 (ISG) 之子組， BEZ235 或 BEZ235 + RAD001 可用於安全地增強老年人之免疫功能並降低感染率
在BEZ235單一療法或RAD001 + BEZ235組合治療之後，全血中ISG上調幅度較小(1-9%)。ISG表現之低程度增加可足以增強老年人之免疫功能並降低感染率，同時避免經干擾素治療之ISG誘導增加極多之患者發生不期望之不良事件(11)。因此，據信，低程度ISG誘導避免經干擾素療法治療之患者中與高程度ISG誘導相關之安全性及耐受性問題。
實例 4 ： BEZ235 或 BEZ235 + RAD001 之 6 週 療程使得在藥物中斷之後免疫功能持續改良
不管在治療6週之後研究藥物中斷之事實，BEZ235單一療法及RAD001 + BEZ235之組合使得一年內之總體感染率顯著降低。結果表明，mTOR抑制劑療法可使得在藥物中斷之後免疫功能持續改良數月。亦已顯示mTOR抑制劑雷帕黴素之短療程延長小鼠之壽命，此支持短暫mTOR抑制之有益效應在藥物中斷之後持續數月之觀點(12,13)。
實例 5 ： BEZ235 之 PK 可變性可經由低劑量投與來減輕
BEZ235係開發為針對腫瘤學適應症之雙重PI3K-mTOR催化性抑制劑。然而，用於腫瘤學適應症之高劑量之BEZ235 (直至每日1200 mg之最大耐受劑量)與不可接受之高患者間可變性(AUCtau，ss百分比變動係數(%CV) = 113%)相關。PK可變性可部分地歸因於BEZ235在pH 3以上之低溶解性。然而，每日10 mg BEZ235之患者間可變性係可接受的(AUClast,ss %CV = 39%)，此可能係由於低劑量之BEZ235能夠在胃的低pH下完全吸收。圖4中顯示每日10 mg以上劑量增加BEZ235之PK可變性。
實例 6 ： BEZ235 在單獨或與 RAD001 組合時可經由上調細胞外基質重塑蛋白而具有廣泛的抗衰老效應
細胞外基質重塑係一組不同抗衰老干預之共同潛在機制(14)。該等發現表明，細胞外基質缺乏更新促進衰老，且促進細胞外基質重塑之藥劑可對老化相關之病狀具有有益效應。血清蛋白質體學表明，BEZ235單一療法或BEZ235 + RAD001組合療法促進細胞外基質重塑。在基線時或在經安慰劑、每日10 mg BEZ235或每日10 mg BEZ235 +每日0.1 mg RAD001之組合治療6週之後自老年個體獲得血清樣品。6週之BEZ235單一療法或BEZ235 + RAD001之組合二者使得參與細胞外基質分解/重塑之蛋白質之表現高度顯著上調(BEZ235之neglog10 p值為14.34，且BEZ235 + RAD001組合為13.32)，但安慰劑則不(圖5)。該等發現表明，BEZ235單一療法或BEZ235 + RAD001之組合可藉由刺激細胞外基質之重塑而具有廣泛的抗衰老效應。BEZ235單一療法或BEZ235 + RAD001之組合可尤其有效地治療老化相關之病狀，該等病狀與組織之細胞外基質中的老化相關之異常有關，包括心臟衰竭、慢性腎衰竭及皮膚老化。
實例 7 ： BEZ235 在單獨或與 RAD001 組合時可降低老年個體之呼吸道感染 (RTI) 。
在美國，在85歲及以上之人中，肺炎及流行性感冒係第5大引起死亡之原因(National Vital Statistics Report, Deaths, Final Data for 2014, 2016)。此外，呼吸道病毒(目前對其無有效治療)引起此群體中之大部分社區獲得性肺炎(Jain等人，2015)。另外，在美國，在≥ 85歲之人中，每年有7%因RTI去急診室(Goto等人，2016)。最後，因RTI之住院增加≥ 85歲之個體進入護理院之風險。在美國，85-95歲之人中僅10%居住在護理院，但≥85歲之住院個體中有36%出院至護理院(The Older Population 2010 US Census Briefs, National Center for Health Statistics Data Brief 2015)。 對於≥ 65歲伴有諸如慢性阻塞性肺病(COPD)、氣喘、慢性支氣管炎、2型糖尿病(T2DM)、鬱血性心臟衰竭(CHF)及現時吸煙之潛在風險因素之老年個體而言，RTI之預防亦係未符合之醫學需要。舉例而言，RTI係COPD及氣喘惡化之最常見原因(Nicholson等人，BMJ, 2003；Sethi等人，2008)。RTI亦係16%之患有鬱血性心臟衰竭之住院患者之潛在原因(Chin及Goldman，1997)。患有T2DM之患者下呼吸道感染之風險亦增加(Muller等人，2005)，且具有增加之因肺炎而住院之風險(Kornum等人，2008)。現時吸煙亦增加發生社區獲得性肺炎之風險(Almirall等人，1999)。最後，先前患有肺炎之老年個體肺炎復發之風險增加(Hedlund等人，1992)。 因此，本研究之目的係評估單獨之BEZ235或與RAD001組合以支持用於進一步研發之劑量選擇，從而降低處於RTI相關之發病率或死亡率風險增加之老年個體之RTI發生率之效能、耐受性及安全性。 本發明將測定低劑量mTOR抑制劑是否降低高風險老年群體中RTI之發生率及嚴重程度，該等老年群體係界定為年齡≥ 85歲或年齡≥ 65歲之現時吸煙者、患有潛在COPD、氣喘、慢性支氣管炎、CHF及/或T2DM及/或在過去的12個月內曾因RTI住院或去急診室之群體。
目標及相關終點 表 5. 目標及相關 終 點 研究設計
此係一項24週隨機化、盲化、安慰劑對照、平行組、劑量發現2階段適應性設計研究，以評價與安慰劑相比，兩種劑量之BEZ235在單獨或與RAD001組合時在無不穩定醫學病狀之老年個體中之安全性、耐受性及效能。若個體呼吸道感染之風險增加，則可納入該等個體，如藉由≥85歲或≥ 65歲且係現時吸煙者或患有潛在COPD、氣喘、慢性支氣管炎、T2DM或CHF及/或在過去一年中曾因RTI住院或在急診室中進行評估所界定。本研究將由6週篩選期、4週導入期、16週治療期及8週隨訪期構成。
研究期：
對於每一個體，本研究之總計劃持續時間係自隨機化至最後一次追蹤訪視至多24週(圖3-1)；研究治療進行16週。
篩選期：
在篩選就診(在基線/隨機化之前最多6週)期間，將基於納入/排除準則來評價個體參與試驗之合格性。
導入期：
在導入期(在基線/隨機化之前最多4週)期間，在篩選就診期間符合合格性準則之個體將入選本研究，且將進入診所並經歷手握力測試及6分鐘步行測試(6MWT)，以便使該等個體熟悉此測試並藉此降低在基線就診時之測試可變性。在6 MWT之前及之後個體亦將進行呼吸困難問卷。另外，在導入期期間，個體將經歷基線超音波心動描記術以評價心臟功能。
盲化治療 期：
第1部分(在南半球或北半球進行)
治療期 (16 週 ) ：
在基線就診(第3次就診)時，將以1:1:1之比率將合格個體隨機化至3個治療組中之1組 (1) 每日5 mg BEZ235 (2) 每日10 mg BEZ235 (3) 每日匹配安慰劑 個體將用研究藥物治療16週。每一治療組將招募大約56名個體，總計有大約168名個體入選。假定有大約10%之退出率，此使得大約150名個體完成本研究之第1部分(每一臂中大約50名個體)。若退出率高於10%，則替補者可入選。 在基線就診時，個體將經歷臨床評估且抽血進行基線安全性評價、EAST (IgE含量)及生物標記物評價。尚未接受其季節性流行性感冒疫苗之個體將抽血測定流行性感冒效價。個體在基線就診時亦將經歷握力、6MWT且在6 MWT之前及之後完成呼吸困難問卷。然後將在診所裡給予個體其第一劑研究藥物，並使個體將研究藥物帶回家。亦使個體在基線就診後將日誌帶回家。將指導個體在日誌中記錄每天在家投與之研究藥劑膠囊之時間及次數。亦將指導個體在日誌中記錄就診之間所出現的任何感染症狀。最後，亦將使個體將較短之威斯康辛上呼吸道症狀調查(WURSS-21)帶回家，若其發生上呼吸道感染之症狀，則將指導其每日填寫直至其症狀解決為止。 在個體服用研究藥物1週之後，個體與站點之間應該打電話以確認第一週之研究藥物耐受性良好。若在第一週之研究藥物治療期間不耐受研究藥物，則研究人員可在與resTORbio醫療監測者討論之後中斷研究藥物。 假如研究藥物繼續耐受良好，則將利用研究藥物治療個體16週，在此期間其將在前8週內每2週(第2週、第4週、第6週及第8週就診)返回至診所，且然後在最後8週內每4週(第12週及第16週就診)進行臨床評估並抽血以進行安全性評價。亦將在第4週、第6週及第8週就診時抽血以進行PK評價。將在基線時及在第6週、第16週及第24週就診時抽血以進行生物標記物評價。在研究期間站點將藉由電話或在現場就診時每週兩次聯絡個體以確認個體按指示服用研究藥物且研究藥物繼續耐受良好。站點亦將在每次聯絡期間進行呼吸道感染問卷，並通知發生2種或更多種呼吸道感染症狀或1種或多種非呼吸道感染症狀之個體儘快前來進行未排定的就診以便可由研究人員對其進行評估。 研究人員將對因感染症狀前來站點進行未排定就診之個體進行評估，該等研究人員將如研究操作手冊(Study Operations Manual)中所闡述在感染研究人員工作單(Infection Investigator Worksheet)中捕獲感染之相關徵象及症狀。具有RTI症狀之個體將在診所採集鼻咽拭子。若個體不能或不願返回站點進行未排定的就診，則研究人員可給個體打電話且藉由電話來完成感染研究人員工作單，且在個體前來進行其下次就診時獲得鼻咽拭子。針對所有感染將提供適當醫療照護。需要額外醫療照護之個體應轉介至其健康照護提供者或醫院(若指示)。 在研究期間接受季節性流行性感冒疫苗作為其日常健康照護之一部分之個體在其流行性感冒疫苗接種之後大約4週將被邀請返回站點以進行未排定的就診以抽血測定流行性感冒效價。 在16週之研究藥物治療之後，將對個體進行採血以用於安全性實驗室及生物標記物評價，且在第16週就診時將經歷重複握力評價、6MWT及在6MWT之前及之後完成呼吸困難問卷。在完成16週之研究藥物治療之後，個體亦將進行重複超音波心動圖。
治療後隨訪期 (8 週 ) ：
在其最後一劑研究藥物之後，將對所有個體隨訪8週，在此期間其將被告知繼續在其日誌中記錄所發生之任何感染。站點將繼續每週兩次給個體打電話且進行每週兩次聯絡用於呼吸道症狀問卷。將通知發生2種或更多種呼吸道感染症狀或1種或多種非呼吸道感染症狀之個體儘快前來進行未排定的就診以便可如上文所闡述由研究人員對其進行評估。具有呼吸道感染症狀之個體將取鼻咽拭子以用於呼吸道病毒PCR。其他細節提供於研究操作手冊中。 在第24週研究就診結束時，個體將經歷完整的體檢並進行採血以用於安全性實驗室及生物標記物評價，且將經歷重複握力評價、6MWT且將在6MWT之前及之後完成呼吸困難問卷。 在第24週就診時或之後，研究人員將審查個體之醫療記錄以確定是否發生未在研究資料庫中捕獲到之其他感染。關於未捕獲到的感染之資訊將記錄在適當研究人員感染工作單(Investigator Infection Worksheet)上。 發生視為與研究藥物相關且在隨訪期結束時未得以解決或穩定化之醫學上重要的實驗室異常或醫學上重要的AE之患者將超出所計劃之治療後隨訪期進行隨訪，直至該等事件得以解決或穩定化為止。若在研究完成時，該等事件未得以解決，則應在資料庫中將其捕獲為「正在進行中」。
期中分析 (IA) ：
當第1部分中隨機化之至少120名個體已完成第16週就診時，將實施IA。知情之數據監測委員會(Data Monitoring Committee，DMC)將審查IA結果並就本研究提出建議。在期中分析時可能的決定係： -是否因徒勞無益而停止研究BEZ235單一療法投用臂，或在第2部分中繼續使用1或2個BEZ235治療臂； -是否基於第1部分期間之呼吸道感染率來調整研究； -是否基於來自第1部分之安全性數據及呼吸道感染率數據改變治療之持續時間；及/或 -是否需要額外PK取樣及/或PK取樣方案是否可簡化。
第 2 部分 ( 在與第 1 部分相反之半球進行
)：在第2部分中，在篩選就診期間符合合格性準則之310名至430名之間的個體將入選本研究。該等個體將隨機化至安慰劑、0劑、1劑或2劑來自第1部分之BEZ235及5 mg或10 mg BEZ235 +RAD001 0.1 mg。在第2部分中之篩選期、導入期、治療期及治療後隨訪期期間將應用與第1部分中之彼等相同之程序。
圖 3-1 研究設計 ： 表 1. 第 1 部分 表 2. 第 2 部分 研究設計之原理：
本研究設計為以無偏方式獲得效能、耐受性及安全性數據且確定所研究藥物之劑量-反應特徵之標準隨機化、盲化安慰劑對照、平行組研究。納入導入期以獲得基線超音波心動圖及使個體熟悉6MWT及手握力評價。第1部分及第2部分中之16週治療視為足以使得每一半球中的冬季感冒及流感季節期間之RTI臨床上有意義降低。最後8週之研究將提供關於個體在中斷研究藥物治療之後RTI之降低是否持續之資訊。將在第4週、第6週及第8週就診時獲得所有個體之PK樣品，以在研究藥物達到穩定狀態程度時能夠表徵PK。
研究群體：
來自由Novartis進行之兩個先前臨床試驗(CRAD002X2202及CBEZ235Y2201)之數據表明，利用低劑量之BEZ235及/或RAD001治療≥65歲之老年個體6週係安全的且降低RTI之發生率。BEZ235在單獨或與RAD001組合時之風險/益處可對處於RTI相關之發病率及死亡率風險增加之老年個體係最有利的。因此，在本研究中，將招募視為處於RTI相關之發病率及死亡率風險增加之老年個體，如藉由具有以下條件中之一者所界定： - 年齡＞= 85 - 年齡＞= 65歲，患有： - 氣喘 - COPD Gold I類或II類 o 支氣管擴張劑後預計FEV
1
/FVC ＜0.70且FEV
1
≥ 50% - 慢性支氣管炎 - T2DM - CHF紐約心臟學會(CHF New York Heart Association)功能分類I-II o 無症狀或輕微症狀(呼吸短促及/或心絞痛)及在平常活動中具有輕微侷限性 - 現時吸煙者 - 在之前12個月期間因RTI一或多次急診室就診或住院
其他納入準則 ：
女性必須為絕經後的。若女性已具有12個月之天然(自發)閉經且具有適宜臨床表現(例如年齡適當、血管舒張症狀史)或在至少六週前已進行手術性雙側卵巢切除術(含或不含子宮切除術)、總子宮切除術或輸卵管結紮，則認為其為絕經後且無生育潛能。在單獨卵巢切除術之情形下，僅在藉由隨訪激素含量評價確認女性生殖狀況時認為其無生育潛能。 配偶具有生育潛能之性活躍男性個體必須願意在服用研究藥物期間及在停止研究藥物後1週內戴保險套，且在此時期期間不應使人受孕。為防止藥物經由精液遞送，切除輸精管之男性亦需要使用保險套。 在篩選及基線時，將在個體休息至少三(3)分鐘之後以坐姿評價生命徵象(收縮壓及舒張壓、脈搏率及呼吸率)。坐姿生命徵象應在以下範圍內： ● 口腔或鼓室體溫在35.0-37.5℃之間 ● 收縮壓90-160 mm Hg ● 舒張壓50-95 mm Hg ● 脈搏率40 - 95 bpm 若生命徵象在該等範圍以外，則研究人員可獲得至多兩次讀數，因此至多做出連續3次評價。至少最後一組讀數必須在以上所提供之範圍內，以使個體具有資格。 個體必須至少40 kg重。 個體必須能夠與研究人員交流良好，且理解並依從本研究之要求。 研究結果可使用不同方法來量化。舉例而言，可藉由查看如藉由感染總數除以個體總數所計算的在特定時期期間之感染率來量化結果。或者，可藉由查看在特定時期期間患有一或多種感染之個體百分比來量化研究結果。
主要終點：
本研究之主要終點係在16週之研究藥物治療期間經歷一或多次RTI之個體百分比之降低，此乃因RTI在老年人中造成顯著之發病率及死亡率(Millett等人，2013)。
次要終點：
作為次要終點，將評價在24週內(研究藥物治療16週，之後為8週之無研究藥物治療)經歷一或多次RTI之個體百分比以測定老年個體在研究藥物中斷之後呼吸道感染率是否繼續降低。 由於在老年人中大多數呼吸道感染係由病毒引起(Jain等人，2015)，因此將在個體接受研究藥物之16週期間評價BEZ235在單獨或與RAD001組合時對實驗室確認之病毒性呼吸道感染發生率之效應(如藉由鼻咽拭子之呼吸道病毒PCR所測定)。 作為額外之次要終點，將評估BEZ235在單獨給予或與RAD001組合時之藥物動力學(PK)。
探索終點：
作為探索終點，將在特定老年人子組中探索BEZ235在單獨或與RAD001組合時對RTI發生率之效應以測定效能是否在子組之間有所變化。 將亦探索與安慰劑相比，自基線至第16週或第24週BEZ235在單獨或與RAD001組合時對所有感染之發生率以及UTI發生率之效應，此乃因在臨床試驗CBEZ235Y2201中，利用每日10 mg BEZ235或10 mg BEZ235加上每日0.1 mg RAD001之組合治療6週之老年個體在研究藥物投與後一年內所有感染率顯著下降且UTI率下降。 作為額外之探索終點，將使用WURSS-21調查評價與安慰劑相比，BEZ235在單獨或與RAD001組合時對上呼吸道症狀之持續時間及/或嚴重程度之效應。 CBEZ235Y2201之結果指示，當老年志願者在接受流行性感冒疫苗之前兩週接受6週療程之低劑量BEZ235與RAD001之組合時，其對流行性感冒疫苗接種之反應增強。因此，作為探索終點，將在研究期間接受流行性感冒疫苗作為其日常健康照護之一部分之個體中評價與安慰劑相比，BEZ235在單獨或與RAD001組合時對對流行性感冒疫苗接種之反應之效應。 BEZ235在單獨或與RAD001組合時之mTOR抑制可具有抗衰老效應，而不僅僅改良免疫功能且降低感染率。在先前臨床試驗中，利用每日10 mg BEZ235及0.1 mg RAD001之組合治療6週之個體子組自發地報告在服用研究藥物期間能量增加，但用安慰劑治療之個體則不。另外，已注意到與經安慰劑治療之對照相比，經mTOR抑制劑雷帕黴素治療之老年小鼠身體活動及/或握力增加(Flynn等人，2013)。因此，作為額外之探索終點，將評價BEZ235在單獨或與RAD001組合時是否增加握力及/或耐力，如藉由6MWT所評價。 亦已報導mTOR抑制劑改良老年小鼠之心臟功能(Flynn等人，2013)。因此，作為額外之探索終點，將測定與安慰劑相比，BEZ235在單獨或與RAD001組合時是否改良心臟功能，如藉由相對於基線，第16週時之超音波心動描記術所評價。 作為最終探索終點，將評價BEZ235在單獨或與RAD001組合時對全血中基因表現及對血清蛋白質體學之效應，以進一步闡明BEZ235在單獨或與RAD001組合時可改良免疫功能及/或影響衰老生物學之機制。
劑量 / 方案之原理、投與途徑及治療之持續時間：
在Novartis臨床研究CBEZ235Y2201中，在老年個體接受研究藥物治療之6週期間，所有mTOR抑制劑投用方案(每日10 mg BEZ235、每日0.5 mg或0.1 mg RAD001及每日10 mg BEZ235加上每日0.1 mg RAD001)均耐受良好，且使呼吸道感染發生率降低50-60%之間。另外，每日10 mg BEZ235及0.1 mg RAD001之組合顯著改良對流行性感冒疫苗接種之反應。在本研究中，將擴展該等發現並確定每一半球中在呼吸道感染率最高時之冬季感冒及流感季節期間，當老年個體治療更長之16週持續時間時，BEZ235在單獨或與RAD001組合時是否降低呼吸道感染之發生率。亦將藉由比較每日5 mg BEZ235對每日10 mg BEZ235之安全性及效能來研究BEZ235之最低有效劑量值。選擇每日10 mg BEZ235作為本研究中之劑量，此乃因其在臨床研究CBEZ235Y2201中與呼吸道感染及總感染二者之降低均相關。藉由建模及模擬預測每日5 mg BEZ235僅使S6K磷酸化抑制10%，且因此可係次治療劑且可確立本研究中之最低有效劑量。將測試每日10 mg以上BEZ235直至兩次10 mg BEZ235之劑量，此乃因在先前臨床研究中BEZ235之PK可變性在25 mg及以上之劑量下較高。因此，本文中所涵蓋之某些投用方案包含一天兩次投與(例如) 10 mg BEZ235。在一些此等實施例中，投用方案包含一天兩次投與(例如)單獨之10 mg BEZ235 (即，無RAD001)或與RAD001之組合，例如與每日劑量為0.1 mg之RAD001組合。在一些實施例中，本文中所涵蓋之投用方案包含每日投與約0.015 mg至約0.1 mg範圍內之量之RAD001。在一些此等實施例中，組合投與約0.015 mg至約0.1 mg範圍內之量之RAD001與一定量之BEZ235。
參考文獻
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所列舉實施例
在第一實施例中，本發明係一種方法，其包含向患者投與以下各項之步驟：(a)低劑量之RAD001或其醫藥上可接受之鹽；(b)低劑量之BEZ235或其醫藥上可接受之鹽；或(c)其組合，其中較未投與RAD001或其醫藥上可接受之鹽、BEZ235或其醫藥上可接受之鹽或其組合之患者，該患者經歷較少由感染所致之疾病。 在第二實施例中，本發明係如第一實施例之方法，其中該患者之先天性免疫增強。 在第三實施例中，本發明係如第一或第二實施例之方法，其中抗原特異性免疫未增強。 在第四實施例中，本發明係如第二實施例之方法，其中至少一種干擾素誘導基因(ISG)上調。 在第五實施例中，本發明係如第一至第四實施例中任一實施例之方法，其中該感染係尿道感染；或牙齒或牙齦之感染。 在第六實施例中，本發明係如第一至第四實施例中任一實施例之方法，其中該感染係呼吸道感染。 在第七實施例中，本發明係如第一至第四實施例中任一實施例之方法，其中該感染係病毒性感染。 在第八實施例中，本發明係如第一至第七實施例中任一實施例之方法，其中該該患者係老年人。 在第九實施例中，本發明係如第一至第八實施例中任一實施例之方法，其中該患者至少65歲。 在第十實施例中，本發明係如第一至第九實施例中任一實施例之方法，其中該患者至少75歲；或至少85歲。 在第十一實施例中，本發明係如第一至第十實施例中任一實施例之方法，其中向該患者投與該低劑量之RAD001或其醫藥上可接受之鹽、該低劑量之BEZ235或其醫藥上可接受之鹽或其組合長達約連續6週。 在第十二實施例中，本發明係如第十一實施例之方法，其中在投與該RAD001或其醫藥上可接受之鹽、該BEZ235或其醫藥上可接受之鹽或其組合之後約1天直至約1年，該患者繼續經歷較少由感染所致之疾病。 在第十三實施例中，本發明係如第十一實施例之方法，其中在投與該RAD001或其醫藥上可接受之鹽、該BEZ235或其醫藥上可接受之鹽或其組合之後至少1個月且直至約1年，該患者繼續經歷較少由感染所致之疾病。 在第十四實施例中，本發明係如第十一實施例之方法，其中在投與該RAD001或其醫藥上可接受之鹽、該BEZ235或其醫藥上可接受之鹽或其組合之後至少3個月且直至約1年，該患者繼續經歷較少由感染所致之疾病。 在第十五實施例中，本發明係如第十一實施例之方法，其中在投與該RAD001或其醫藥上可接受之鹽、該BEZ235或其醫藥上可接受之鹽或其組合之後至少6個月，該患者繼續經歷較少由感染所致之疾病。 在第十六實施例中，本發明係如第一至第十五實施例中任一實施例之方法，其中向該患者投與該低劑量之BEZ235或其醫藥上可接受之鹽作為單一療法。 在第十七實施例中，本發明係如第一至第十五實施例中任一實施例之方法，其中向該患者投與該低劑量之RAD001或其醫藥上可接受之鹽作為單一療法。 在第十八實施例中，本發明係如第一至第十五實施例中任一實施例之方法，其中向該患者投與該低劑量之RAD001或其醫藥上可接受之鹽及該低劑量之BEZ235或其醫藥上可接受之鹽二者作為組合療法。 在第十九實施例中，本發明係如第一至第十六或第十八實施例中任一實施例之方法，其中接受該低劑量之BEZ235或其醫藥上可接受之鹽之患者的藥物動力學AUC可變性低於接受較高劑量之BEZ235或其醫藥上可接受之鹽之患者。 在第二十實施例中，本發明係如第一至第十五、第十七或第十八實施例中任一實施例之方法，其中RAD001或其醫藥上可接受之鹽係呈中性形式。 在第二十一實施例中，本發明係如第一至第十六或第十八實施例中任一實施例之方法，其中BEZ235或其醫藥上可接受之鹽係單甲苯磺酸鹽。 在第二十二實施例中，本發明係如第一至第十五或第十七至第二十一實施例中任一實施例之方法，其包含投與0.01 - 0.2 mg之RAD001或其醫藥上可接受之鹽。 在第二十三實施例中，本發明係如第一至第十六或第十八至第二十二實施例中任一實施例之方法，其包含投與1 - 50 mg之BEZ235或其醫藥上可接受之鹽。 在第二十四實施例中，本發明係如第一至第二十三實施例中任一實施例之方法，其中該該個體為免疫受損。 在第二十五實施例中，本發明係如第一至第二十四實施例中任一實施例之方法，其中該個體具有受損之免疫反應。 在第二十六實施例中，本發明係如第一直至二十五實施例中任一實施例之方法，其中該個體為免疫衰老。 在第二十七實施例中，本發明係上調至少一種干擾素誘導基因(ISG)之方法，其包含向患者投與(a)低劑量之RAD001或其醫藥上可接受之鹽；(b)低劑量之BEZ235或其醫藥上可接受之鹽；或(c)其組合。 在第二十八實施例中，本發明係上調至少一種參與細胞外基質重塑之蛋白質之方法，其包含向患者投與(a)低劑量之RAD001或其醫藥上可接受之鹽；(b)低劑量之BEZ235或其醫藥上可接受之鹽；或(c)其組合。 在第二十九實施例中，本發明係如第二十八實施例之方法，其中在治療至少約1週；至少約2週；至少約3週；或至少約6週後，參與細胞外基質重塑之該蛋白質顯著上調。 在第三十實施例中，本發明係治療與異常細胞外基質重塑相關之疾病或病狀之方法，其包含向患者投與(a)低劑量之RAD001或其醫藥上可接受之鹽；(b)低劑量之BEZ235或其醫藥上可接受之鹽；或(c)其組合。 在第三十一實施例中，本發明係如第三十實施例之方法，其中該與異常細胞外基質重塑相關之疾病或病狀係選自心臟衰竭、射血分數保留性心臟衰竭、慢性腎衰竭、腎小球腎病、皮膚老化、NASH、肝纖維化/硬化、包括特發性肺纖維化在內之肺纖維化、老化相關之肌腱功能障礙/變硬、包括骨關節炎在內之關節炎、肌少症、骨髓纖維化、骨髓發育不良、老化相關之血腦障壁功能障礙、糖尿病腎病變、動脈粥樣硬化或傷口癒合。