腸內菌叢改善用組成物
[0002] 本發明係關於用於促進腸內菌叢改善之組成物，詳細而言，係關於用於促進柔嫩梭菌屬菌的產生之組成物，其包含源自可可之消化管調和物質(luminacoid)而成。
[0003] 柔嫩梭菌屬(Faecalibacterium)菌係隸屬於梭菌群(Clostridium cluster IV，C. leptum subgroup)，在人類、人類以外之哺乳類(豬、小鼠、子牛等)、家禽中皆可檢測到。柔嫩梭菌屬菌為主要附著於大腸上皮黏膜上所分泌之黏液層之短鏈脂肪酸產生菌(主要產生酪酸作為一次代謝產物)(非專利文獻1)。此外，由於柔嫩梭菌屬菌顯示出控制性T細胞(Treg)之誘導能力，因而已被發現抗炎症／抗過敏作用(非專利文獻2)。再者，柔嫩梭菌屬菌在人類的腸內菌叢中之佔有率高達數％，暗示柔嫩梭菌屬菌的減少與一般認為起因於腸內菌共生平衡失調(Dysbiosis)之疾病(克隆氏症(Crohn's disease)等)相關之可能性(非專利文獻3)。 [0004] 可可豆係貯藏蛋白質、脂質作為發芽所需之胺基酸源、能量源，此外，就細胞壁的構造物質而言豐富地包含食物纖維。此等亦包含在屬於自可可豆調製而得之糕點原料之可可塊中。相較於以往已清楚知道多醣類、木質素等食物纖維係顯示出整腸、膽固醇排泄等機能性，最近得知顯示出蛋白酶耐性之一部分蛋白質(難消化性蛋白質)會顯示出便秘的緩解等與食物纖維、難消化性糊精等類似的生理機能(非專利文獻4)。然而，並未獲得有關源自可可豆之消化管調和物質之詳細的見解。在另一方面，已報導若使小鼠攝取自可可豆以鹼萃取及酸沉澱調製而得之蛋白質部分，則糞便量增大(專利文獻1)。 [先前技術文獻] [專利文獻] [0005] [專利文獻1] 國際公開第2012/133792號 [非專利文獻] [0006] [非專利文獻1] Int J Syst Evol Microbiol. 2002, 52(6): 2141-2146 [非專利文獻2] Curr Opin Microbiol. 2013, 16(3): 255-261 [非專利文獻3] Proc Natl Acad Sci U S A 2008, 105 (43):16731-16736 [非專利文獻4] J Nutr Sci Vitaminol. 2002, 48(1): 1-5
[0007] 本發明之目的為提供新穎的柔嫩梭菌屬菌之產生促進用組成物及柔嫩梭菌屬菌之產生促進劑。 [0008] 本發明者等人此次發現以高濃度含有源自可可豆之消化管調和物質之油脂加工組成物使人類腸內菌叢中之柔嫩梭菌屬菌的佔有率(％)顯著地增加。本發明係基於此見解而成。 [0009] 根據本發明，係提供以下發明。 [1] 一種用於促進柔嫩梭菌屬菌的產生之組成物(以下，有時稱為「本發明之組成物」)及柔嫩梭菌屬菌之產生促進劑(以下，有時稱為「本發明之用劑」)，其包含源自可可之消化管調和物質而成。 [1-1] 如前述[1]所記載之柔嫩梭菌屬菌之產生促進用組成物及柔嫩梭菌屬菌之產生促進劑，其中，源自可可之消化管調和物質為源自可可豆之消化管調和物質。 [1-2] 如前述[1]或[1-1]所記載之柔嫩梭菌屬菌之產生促進用組成物及柔嫩梭菌屬菌之產生促進劑，其包含源自可可之消化管調和物質0.5g以上而成。 [2] 如前述[1]、[1-1]或[1-2]所記載之柔嫩梭菌屬菌之產生促進用組成物及柔嫩梭菌屬菌之產生促進劑，其包含有效於促進柔嫩梭菌屬菌的產生之1日份攝取量的源自可可之消化管調和物質而成。 [3] 如前述[2]所記載之柔嫩梭菌屬菌之產生促進用組成物及柔嫩梭菌屬菌之產生促進劑，其係按1日份有效攝取量進行包裝而成。 [4] 如前述[2]或[3]所記載之柔嫩梭菌屬菌之產生促進用組成物及柔嫩梭菌屬菌之產生促進劑，其中，有效於促進柔嫩梭菌屬菌的產生之1日份攝取量為0.5～11.9g[源自可可之消化管調和物質量]。 [5] 如前述[1]、[1-1]、[1-2]及[2]～[4]中任一項所記載之柔嫩梭菌屬菌之產生促進用組成物及柔嫩梭菌屬菌之產生促進劑，其中，源自可可之消化管調和物質被攝取2週以上。 [5-1] 如前述[1]、[1-1]、[1-2]及[2]～[5]中任一項所記載之柔嫩梭菌屬菌之產生促進用組成物及柔嫩梭菌屬菌之產生促進劑，其中，源自可可之消化管調和物質以每1日0.5～11.9g被攝取1週以上。 [6] 如前述[1]、[1-1]、[1-2]、[2]～[5]及[5-1]中任一項所記載之柔嫩梭菌屬菌之產生促進用組成物及柔嫩梭菌屬菌之產生促進劑，其係呈油脂加工組成物的形態。 [7] 如前述[1]、[1-1]、[1-2]、[2]～[5]、[5-1]及[6]中任一項所記載之組成物，其係用於治療、預防或改善可藉由產生柔嫩梭菌屬菌而加以治療、預防或改善之疾患或症狀。 [8] 一種柔嫩梭菌屬菌之產生促進方法，其包含攝取有效量的源自可可之消化管調和物質而成。 [9] 如前述[8]所記載之柔嫩梭菌屬菌之產生促進方法，其包含以有效於促進柔嫩梭菌屬菌的產生之1日份攝取量攝取源自可可之消化管調和物質1週以上而成。 [10] 如前述[9]所記載之柔嫩梭菌屬菌之產生促進方法，其中，有效於促進柔嫩梭菌屬菌的產生之1日份攝取量為0.5～11.9g(源自可可之消化管調和物質)。 [11] 如前述[8]～[10]中任一項所記載之柔嫩梭菌屬菌之產生促進方法，其中，以油脂加工組成物的形態攝取源自可可之消化管調和物質。 [12] 一種可藉由產生柔嫩梭菌屬菌而加以治療、預防或改善之疾患或症狀之治療、預防或改善方法，其包含攝取或投予有效量的源自可可之消化管調和物質而成。 [13] 一種源自可可之消化管調和物質之用途，其係用於製造柔嫩梭菌屬菌之產生促進劑；用於製造可藉由產生柔嫩梭菌屬菌而加以治療、預防或改善之疾患或症狀之治療劑、預防劑或改善劑；作為柔嫩梭菌屬菌之產生促進劑；或者作為可藉由產生柔嫩梭菌屬菌而加以治療、預防或改善之疾患或症狀之治療劑、預防劑或改善劑。 [14] 一種源自可可之消化管調和物質，其係用於促進柔嫩梭菌屬菌的產生；或者用於治療、預防或改善可藉由產生柔嫩梭菌屬菌而加以治療、預防或改善之疾患或症狀。 [0010] 由於本發明之組成物及用劑係利用已長年用作食品的原料之可可中所包含之成分，因而本發明之組成物及用劑就即便長期服用，副作用亦少，安全性高之方面而言實屬有利。
[0012] 在本發明中，「源自可可之消化管調和物質」係意味可可中所包含之消化管調和物質，典型地為源自可可豆之消化管調和物質。從而，在本發明中，可使用自可可的植物體或其加工品萃取(包含粗萃取)或精製(包含粗精製)而得之可可的消化管調和物質作為本發明之有效成分。 [0013] 在此處，所謂的「消化管調和物質」，係在小腸未被消化吸收而到達至大腸之所有食品成分的總稱，可分類成非澱粉性消化管調和物質及澱粉性消化管調和物質。非澱粉性消化管調和物質可分類成難消化性蛋白質(抗性蛋白(resistant protein)，RP)、食物纖維、寡醣、糖醇、其他。食物纖維可進一步分類成木質素及多醣類。在多醣類中，有植物性多醣類、動物性多醣類、微生物性多醣類、化學修飾性多醣類。澱粉性消化管調和物質有難消化性澱粉、難消化性糊精。作為源自可可之消化管調和物質，可列舉難消化性蛋白質及食物纖維。 [0014] 在本發明中，作為可成為源自可可之消化管調和物質的原料之可可的植物體或其加工品，可列舉可可樹皮、可可葉、可可豆、可可殼、可可塊、脫脂可可塊、可可亞粉等植物體的各種部位或可可豆加工品。可可塊為將可可豆磨碎而得之物，脫脂可可塊可藉由自可可塊中去除油脂而獲得。油脂之去除方法並無特別限制，可依照壓榨等公知的方法施行。若將脫脂可可塊進行粉碎，即成為可可亞粉。此外，在以可可的植物體或其加工品作為原料施行萃取之情況，由萃取效率之觀點而言，較佳係使用經施行磨碎、粉碎等微粒化處理之可可塊或可可亞粉。另外，在可可的植物體中，亦可意圖地或非意圖地包含可可的植物體以外之物。此外，在以可可的植物體或其加工品作為原料施行萃取時，亦可意圖地或非意圖地包含可可的植物體以外之物。再者，在可可塊或可可亞粉中，亦可意圖地或非意圖地包含可可的植物體以外之物。 [0015] 以可可的植物體或其加工品作為原料之萃取方法係屬公知，舉例而言，可依照日本專利特開 2009-183229號公報或日本專利特開2011-93807號公報之記載調製含有源自可可之消化管調和物質之組成物。萃取溶媒並無特別限定，較佳係使用水或鹼性水溶液。此外，以可可的植物體或其加工品作為原料之精製方法可使用合成吸附劑、離子交換樹脂、超過濾、活性白土處理等公知的方法，並無特別限定。 [0016] 在本發明中，源自可可之消化管調和物質含量係藉由難消化性蛋白質含量及食物纖維含量予以求出。難消化性蛋白質含量可藉由實施例所記載之難消化性蛋白質之萃取方法進行萃取後，藉由Kjeldahl法(蛋白質定量之公定法)予以定量。此外，藉由施行實施例所記載之人工消化試驗，可確認蛋白質為難消化性蛋白質。此外，食物纖維含量可藉由酵素-重量法(依據AOAC International之公定法，AOAC Method 985.29，別名：Prosky法)予以定量。 [0017] 由於源自可可之消化管調和物質可以可可的植物體當作原料來進行調製，故本發明之組成物及用劑亦可包含源自可可之消化管調和物質以外之源自可可豆之成分。作為該種成分，可列舉多酚、可可鹼、咖啡因、胺基酸類、胜肽、脂肪酸等。此外，本發明之組成物及用劑亦可包含非源自可可之成分。 [0018] 本發明之組成物及用劑可單獨以源自可可之消化管調和物質進行提供，或者亦可將源自可可之消化管調和物質與其他成分混合來進行提供。本發明之組成物及用劑中之源自可可之消化管調和物質的摻和量可因應其目的、用途、形態、劑型、症狀、體重等而任意決定，本發明並不限定於此。舉例而言，本發明之組成物及用劑中之源自可可之消化管調和物質的含量就固形份中之乾燥質量比例而言可設為2％以上，較佳係可設為2～90質量％，更佳係2～50質量％，又更佳係5～35質量％，再佳係10～21質量％。在本發明中，可將本發明之用劑定為由源自可可之消化管調和物質所組成者，並將本發明之組成物定為包含源自可可之消化管調和物質及其他成分而成者。 [0019] 如後述實施例所示，源自可可之消化管調和物質具有腸內菌叢改善促進作用，具體而言，柔嫩梭菌屬菌之產生促進作用。從而，源自可可之消化管調和物質(特定而言，源自可可豆之消化管調和物質)可使用作為腸內菌叢改善促進劑及柔嫩梭菌屬菌之產生促進劑，同時可使用於腸內菌叢改善促進方法及柔嫩梭菌屬菌之產生促進方法中。此外，源自可可之消化管調和物質(特定而言，源自可可豆之消化管調和物質)亦可使用作為用於促進腸內菌叢改善之組成物及用於促進柔嫩梭菌屬菌的產生之組成物。 [0020] 在此處，所謂的「促進柔嫩梭菌屬菌的產生」，係意味促進柔嫩梭菌屬菌的表現或增殖，促進柔嫩梭菌屬菌的產生的程度可以腸內細菌之佔有率當作指標來進行評估(參照實施例)。具體而言，在柔嫩梭菌屬菌於源自可可之消化管調和物質(特定而言，源自可可豆之消化管調和物質)的攝取或投予後之腸內細菌中所佔之比例超過攝取或投予前之腸內菌叢中之柔嫩梭菌屬菌之情況，較佳係在約1.1倍以上之情況，更佳係在約1.2倍以上之情況，又更佳係在約1.3倍以上，再佳係1.4倍以上，特佳係1.5倍以上，再特佳係1.6倍以上，再特佳係1.8倍以上，最佳係2倍以上之情況，可判定為促進柔嫩梭菌屬菌的產生。 [0021] 本發明之柔嫩梭菌屬菌之產生促進方法可藉由使人類或非人類動物攝取或被投予有效量的源自可可之消化管調和物質而實施。 [0022] 另外，本發明中之源自可可之消化管調和物質之用途可為在人類及非人類動物以及源自此等之試料中之用途，可意圖為治療性用途及非治療性用途之任何者。在此處，所謂的「非治療性」係意味不包含對人類進行手術、治療或診斷之行為(即，對人類之醫療行為)，具體而言，係意味不包含醫師或接受醫師之指示者對人類施行手術、治療或診斷之方法。 [0023] 在本發明中，可將源自可可之消化管調和物質使用於治療、預防或改善促進柔嫩梭菌屬菌的產生有效於其治療、預防或改善之疾患及症狀。 [0024] 作為可藉由促進柔嫩梭菌屬菌的產生而加以治療、預防或改善之疾患及症狀，可列舉炎症性疾患(例如潰瘍性大腸炎或克隆氏症等炎症性腸疾患)、過敏性疾患(例如食品過敏、花粉症、氣喘、過敏性鼻炎、藥物過敏、異位性皮膚炎、塵蟎過敏)及一般認為起因於腸內菌共生平衡失調(Dysbiosis)之疾病(例如克隆氏症、大腸癌、炎症性腸疾患、過敏性腸症候群、小腸細菌異常增殖症(SIBO)、偽膜性大腸炎(艱難梭菌(Clostridium difficile)腸炎)、抗菌藥起因性下痢、酒精性脂肪性肝炎(ASH)或非酒精性脂肪性肝炎(NASH)等肝臟疾患、肥胖、第2型糖尿病、過敏疾患、自閉症等精神疾患、多發性硬化症)。如後述實施例所示，源自可可豆之消化管調和物質可促進柔嫩梭菌屬菌的產生，迄今為止已顯示出柔嫩梭菌屬菌的增加牽涉到抗炎症／抗過敏作用，柔嫩梭菌屬菌的減少與一般認為起因於腸內菌共生平衡失調(Dysbiosis)之疾病(克隆氏症等)相關(非專利文獻2及3以及Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2013, 105(43): 16731-16736)。從而，源自可可之消化管調和物質可使用作為炎症性疾患、過敏性疾患及一般認為起因於腸內菌共生平衡失調(Dysbiosis)之疾病(克隆氏症等)之治療用、預防用或改善用組成物或者治療劑、預防劑或改善劑，同時可使用於炎症性疾患、過敏性疾患及一般認為起因於腸內菌共生平衡失調(Dysbiosis)之疾病(克隆氏症等)之治療方法、預防方法及改善方法中。 [0025] 本發明之組成物及用劑、本發明之治療劑、預防劑及改善劑以及本發明之治療用、預防用及改善用組成物可以醫藥品、醫藥部外品、飲食品、飼料等的形態進行提供，並可依照下述記載實施。此外，本發明之柔嫩梭菌屬菌之產生促進方法以及本發明之治療方法、預防方法及改善方法可依照下述記載實施。在本發明之治療用、預防用及改善用組成物係以醫藥品作為目的之情況，此等可作為治療用醫藥組成物、預防用醫藥組成物及改善用醫藥組成物。 [0026] 在使人類及非人類動物被投予或攝取屬於本發明之有效成分之源自可可之消化管調和物質之情況，可使用經提高源自可可豆之消化管調和物質的含有率之組成物，由於此種組成物幾乎不含源自可可豆之脂肪份，幾乎沒有苦味及澀味，故有用於作為各種飲食品、醫藥品、醫藥部外品、飼料、化成品等的素材。 [0027] 屬於本發明之有效成分之源自可可之消化管調和物質可經口投予至人類及非人類動物。作為經口劑，可列舉顆粒劑、散劑、錠劑(包含糖衣錠)、丸劑、膠囊劑、糖漿劑、乳劑、懸浮劑。此等製劑可藉由該領域中通常施行之手法，使用藥學上可容許的載體進行製劑化。作為藥學上可容許的載體，可列舉賦形劑、黏合劑、稀釋劑、添加劑、香料、緩衝劑、增黏劑、著色劑、安定劑、乳化劑、分散劑、懸浮化劑、防腐劑等。 [0028] 屬於本發明之有效成分之源自可可之消化管調和物質亦能夠因應本發明之組成物及用劑的形狀對人類及非人類動物進行經管投予、經鼻管投予、點滴、栓劑等經口投予以外之向體內投予。舉例而言，藉由製成包含源自可可之消化管調和物質之具有黏性之液狀組成物或包含源自可可之消化管調和物質之半固形狀組成物，即便對於咀嚼或吞嚥的機能降低而無法進行經口攝取或經口投予之人類及非人類動物，亦可進行投予。藉由以經口攝取以外攝取或投予本發明之組成物及用劑，即便咀嚼或吞嚥的機能因年齡增長等而降低，亦可期待促進柔嫩梭菌屬菌的產生，可期待治療、預防及改善此等人類及非人類動物的炎症性疾患、過敏性疾患、一般認為起因於腸內菌共生平衡失調(Dysbiosis)之疾病(克隆氏症等)。 [0029] 可使人類及非人類動物經口攝取屬於本發明之有效成分之源自可可之消化管調和物質。在經口攝取源自可可之消化管調和物質之情況，源自可可之消化管調和物質可呈經單離、精製或粗精製之形態，亦可呈包含源自可可之消化管調和物質之食品或食品的原料的形態。此外，在使人類及非人類動物經口攝取源自可可之消化管調和物質時，可自常溫狀態、溫熱狀態、冷涼狀態等中任意選擇。 [0030] 在將屬於本發明之有效成分之源自可可之消化管調和物質提供作為食品之情況，可在食品中依原樣含有源自可可之消化管調和物質，該食品為含有有效量的源自可可之消化管調和物質之食品。在此處，所謂的「含有有效量的」源自可可之消化管調和物質，係指在攝取各個食品中通常食用之量之情況，以如後述之範圍攝取到源自可可之消化管調和物質之含有量。此外，所謂的「食品」，係以包含健康食品、機能性食品、保健機能食品(例如特定保健用食品、營養機能食品、機能性標示食品)、特別用途食品(例如幼兒用食品、妊產婦用食品、病者用食品)之意義使用。「食品」的形態並無特別限定，舉例而言，可為飲料的形態，亦可為半液體或凝膠狀的形態，亦可為固形狀的形態。 [0031] 由於源自可可之消化管調和物質具有柔嫩梭菌屬菌之產生促進作用，故可含在日常攝取之食品或作為補充劑而攝取之食品中而提供。作為本發明所提供之食品，其形態或形狀並無特別限制，較佳可列舉以可可豆作為主原料之食品，更佳為油脂加工組成物，又更佳為巧克力及可可亞等油脂加工食品。 [0032] 如前述，為了效率良好地攝取源自可可豆之消化管調和物質，可將經濃縮之源自可可豆之消化管調和物質組成物使用於本發明中。從而，以可可豆作為主原料之食品及補充劑係例如較佳為以高濃度包含源自可可豆之消化管調和物質者，更佳為以高濃度包含源自可可豆之消化管調和物質之油脂加工組成物，又更佳為以高濃度包含源自可可豆之消化管調和物質之油脂加工食品(具體而言，巧克力及可可亞)。 [0033] 在此處，食品及補充劑中之源自可可豆之消化管調和物質的含有量在能夠攝取源自可可豆之消化管調和物質之前提下，並無特別限定，由有效率攝取源自可可豆之消化管調和物質之觀點而言，油脂加工組成物中之含有量係組成物之每固形份，例如可設為2～90質量％，較佳為2～50質量％，更佳為5～35質量％，又更佳為10～21質量％。此外，食品及補充劑中之源自可可豆之消化管調和物質的含有量在能夠攝取源自可可豆之消化管調和物質之前提下，並無特別限定，由有效率攝取源自可可豆之消化管調和物質之觀點而言，油脂加工組成物中之含有量係組成物之每25g固形份，例如較佳為0.5～11.9g，更佳為1.4～8.8g，再佳為2.6～5.2g。 [0034] 在此處，食品及補充劑中之源自可可豆之食物纖維的含有量在能夠攝取源自可可豆之難消化性蛋白質之前提下，並無特別限定，由有效率攝取源自可可豆之食物纖維之觀點而言，油脂加工組成物中之含有量係組成物之每固形份，例如可設為1～40質量％，較佳為4～28質量％，更佳為6～20質量％，又更佳為8～16質量％。此外，食品及補充劑中之源自可可豆之食物纖維的含有量在能夠攝取源自可可豆之難消化性蛋白質之前提下，並無特別限定，由有效率攝取源自可可豆之食物纖維之觀點而言，油脂加工組成物中之含有量係組成物之每25g固形份，例如較佳為0.3～9.4g，更佳為1.0～7.0g，再佳為2.0～4.0g。 [0035] 在此處，食品及補充劑中之源自可可豆之難消化性蛋白質的含有量在能夠攝取源自可可豆之難消化性蛋白質之前提下，並無特別限定，由有效率攝取源自可可豆之難消化性蛋白質之觀點而言，油脂加工組成物中之含有量係組成物之每固形份，例如可設為0.5～15質量％，較佳為1～10質量％，更佳為1.5～8質量％，又更佳為2～5質量％。此外，食品及補充劑中之源自可可豆之難消化性蛋白質的含有量在能夠攝取源自可可豆之難消化性蛋白質之前提下，並無特別限定，由有效率攝取源自可可豆之難消化性蛋白質之觀點而言，油脂加工組成物中之含有量係組成物之每25g固形份，例如較佳為0.2～2.5g，更佳為0.4～1.8g，再佳為0.6～1.2g。 [0036] 作為本發明所提供之食品，諸如巧克力或可可亞般以可可豆作為主原料之食品當然不用說，只要是可含有源自可可之消化管調和物質之食品，即無特別限定。可列舉例如麵包類、甜餅乾類、麵類、鹹餅乾、營養補給棒等澱粉系食品；硬糖類、口香糖類、軟糖、點心等各種糕點類；牛乳、加工乳、冰淇淋類、發酵乳(優酪乳等)、乳飲料、乳酪類、奶油類、鮮奶油類等乳及乳製品；布丁、果凍、巴伐利亞奶凍、慕斯等甜點類；非酒精飲料、酒精飲料等飲料類；火腿、香腸等畜肉加工品；魚板、竹輪、魚肉香腸等魚肉加工品；果醬、果泥等果實加工品；油糊(roux)、醬汁等調味料類等。源自可可豆之消化管調和物質可因應各食品的特性、目的，在適當製造步驟之階段適宜進行摻和。 [0037] 由於本發明之醫藥品及食品係利用自古以來被重用為食品之可可中所包含之成分，因而可對有此需要之哺乳動物(例如人類、小鼠、大鼠、兔、犬、貓、牛、馬、豬、猿猴等)安全地使用。源自可可之消化管調和物質(特定而言，源自可可豆之消化管調和物質)的投予量或攝取量可依接受者的性別、年齡及體重、症狀、投予時間、劑型、投予途徑以及組合藥劑等而決定。舉例而言，在作為醫藥經口投予源自可可之消化管調和物質(特定而言，源自可可豆之消化管調和物質)之情況，可以成人每1日成為0.5～11.9g，較佳為1.4～8.8g，更佳為2.6～5.2g的範圍之方式進行投予。此外，在作為食品攝取源自可可之消化管調和物質(特定而言，源自可可豆之消化管調和物質)之情況，可以成人每1日成為0.5～11.9g，較佳為1.4～8.8g，更佳為2.6～5.2g的範圍之方式進行投予。 [0038] 本發明之組成物及用劑並不限制與其他可經口攝取之組成物併用。舉例而言，藉由與可期待抗炎症／抗過敏作用、一般認為起因於腸內菌共生平衡失調(Dysbiosis)之疾病(克隆氏症等)之預防、治療或改善效果之素材或組成物併用，可進一步提高柔嫩梭菌屬菌之產生促進效果。 [0039] 本發明之組成物及用劑可以包含有效於促進柔嫩梭菌屬菌的產生之1日份攝取量的源自可可之消化管調和物質而成之組成物進行提供。在此情況，本發明之組成物及用劑可以可攝取1日份有效攝取量之方式進行包裝，在可攝取1日份有效攝取量之前提下，包裝形態可為單一包裝，亦可為複數包裝。在以包裝形態進行提供之情況，較宜在包裝上有關於攝取量之記載或一同提供有該記載之文件，以便可攝取1日份有效攝取量。此外，在以複數包裝提供1日份有效攝取量之情況，在攝取的方便上，亦可以套組提供一日份有效攝取量的複數包裝。 [0040] 用於提供本發明之組成物及用劑之包裝形態只要是規定出一定量之形態，即無特別限定，可列舉例如包裝紙、袋、軟包、紙容器、罐、瓶、膠囊等能夠收容之容器等。 [0041] 本發明之組成物及用劑係為了更充分地發揮其效果，較佳係連續地投予或攝取1週以上，投予及攝取期更佳為1～2週，特佳為1～4週。在此處，所謂的「連續地」，係意味持續每日投予或攝取。在以包裝形態提供本發明之組成物及用劑之情況，為了進行連續攝取，亦可以套組提供一定期間(例如1週)的有效攝取量。 [0042] 根據本發明之另一面，係提供腸內菌叢改善促進方法及柔嫩梭菌屬菌之產生促進方法，其包含使人類或非人類動物攝取或被投予有效量的源自可可之消化管調和物質而成。本發明之促進方法可依照關於本發明之組成物及用劑之記載實施。 [0043] 根據本發明之又一面，係提供可藉由促進柔嫩梭菌屬菌的產生而加以治療、預防或改善之疾患或症狀之治療、預防或改善方法，其包含使人類或非人類動物攝取或被投予有效量的源自可可之消化管調和物質而成。本發明之治療、預防或改善方法可依照關於本發明之組成物及用劑之記載實施。 [0044] 根據本發明之又另一面，係提供源自可可之消化管調和物質之用途，其係用於製造腸內菌叢改善促進劑或柔嫩梭菌屬菌之產生促進劑；以及源自可可之消化管調和物質之用途，其係作為腸內菌叢改善促進劑或柔嫩梭菌屬菌之產生促進劑。根據本發明，復提供源自可可之消化管調和物質之用途，其係用於製造可藉由促進柔嫩梭菌屬菌的產生而加以治療、預防或改善之疾患或症狀之治療劑、預防劑或改善劑；源自可可之消化管調和物質之用途，其係作為可藉由促進柔嫩梭菌屬菌的產生而加以治療、預防或改善之疾患或症狀之治療劑、預防劑或改善劑。本發明之用途可依照關於本發明之組成物及用劑之記載實施。 [0045] 根據本發明之又另一面，係提供源自可可之消化管調和物質，其係用於促進腸內菌叢改善，或者用於促進柔嫩梭菌屬菌的產生。根據本發明，復提供源自可可之消化管調和物質，其係用於治療、預防或改善可藉由促進柔嫩梭菌屬菌的產生而加以治療、預防或改善之疾患或症狀。上述源自可可之消化管調和物質可依照關於本發明之組成物及用劑之記載實施。 [實施例] [0046] 基於以下之例更具體地說明本發明，但本發明並不限定於此等例。 [0047] ＜試驗例1：源自可可豆之消化管調和物質所引發之柔嫩梭菌屬菌之產生促進效果的檢討(1)＞ 為了驗證源自可可豆之消化管調和物質對柔嫩梭菌屬菌的產生所施予之影響，施行以下試驗。 [0048] 將在20歲以上且未滿50歲的健康日本人女性中藉由篩選所挑選出之40名作為被驗者，施行評估者盲檢並行組間比較試驗。除去在中途中斷試驗之9名，而獲得試驗食品組16名、對照食品組15名之結果。試驗期間中，施行進食限制及其他限制(進食限制及其他限制的詳情示於下)。 [0049] 篩選係在攝取開始7日前(第-7日，-1W)，實施生活習慣問卷調查(年齡、既往病歷、併發症、食物過敏的有無、醫藥品或健康食品之攝取狀況、飲酒等的確認)、自覺問卷調查(關於整腸之自覺症狀的調查)、理學檢查(身高、體重、血壓、脈搏數、BMI)，挑選出滿足依據排便的狀態(排便次數、便性、便量)、年齡、飲食習慣(可可製品、納豆、乳製品等之日常攝取狀況)之排除基準(排除基準的詳情示於下)且排便次數為每週平均4次以下之40名。 [0050] ＜篩選中之排除基準＞ 自篩選對象中排除以下者。 ・目前患有某些慢性疾患，正接受藥物治療者 ・對巧克力、牛乳、大豆具有過敏者 ・具有乳糖不耐症者 ・在篩選前3個月間，每週4次以上攝取可可製品者 ・在篩選前3個月間，每週4次以上攝取納豆者 ・在篩選前3個月間，每週4次以上攝取優酪乳、乳酸菌飲料、整腸劑等含有乳酸菌之食品者 ・在日常中服用／攝取有影響到本試驗結果之可能性之醫藥品、醫藥部外品、補充劑、健康食品、特定保健用食品(特保)者，或預定在試驗中服用／攝取者 ・在篩選前1個月間，參加其他臨床試驗及評論員試驗者，或者預定在本臨床試驗同意後參加其他臨床試驗者 ・妊娠者，預定、希望在試驗期間中妊娠者 ・授乳中者 ・多量飲用酒精者(以純酒精換算，1日平均超過60g以上之飲酒者) ・其他作為被驗者經判斷為不適當者 [0051] ＜試驗期間中之進食限制及其他限制＞ 對於被驗者，試驗期間中使其度過如通常的生活，同時指導其遵守下列限制事項。 ＜關於進食、飲物及嗜好品之事項＞ ・關於進食，並未大幅改變迄今為止之飲食生活(進食量、進食內容)，忌大幅脫離日常範圍之過度節食或過食。惟，自篩選起至攝取2週後之採便終了為止，禁止攝取納豆。 ・關於飲料的攝取，綠茶或咖啡等、攝取量或次數並無限制，但忌大幅改變迄今為止之攝取的程度(量、種類等)。 ・關於零食，原則上自由，但使其不超過通常攝取之量。惟，自篩選起至攝取2週後之採便終了為止，禁止攝取包含試驗食品以外之可可之飲食品。 ・關於酒精的攝取，原則上並無限制，但忌大幅改變迄今為止之酒精攝取的程度(量、種類等)。 ・自篩選時起至攝取2週後之採便終了為止，禁止使用或攝取有對本試驗帶來影響之可能性之醫藥品(包含一般用醫藥品)、醫藥部外品、補充劑、特定保健用食品或健康食品。含有抗生物質、瀉劑、便秘藥、整腸劑、包含具有改善便秘或下痢、消化不良之作用之芍藥、黃柏、大黃、大棗、桂皮、人蔘等之漢方處方(桂枝加芍藥大黃湯、人蔘湯、五苓散料、半夏瀉心湯、加味逍遙散、大柴胡湯、乙字湯、桃核承氣湯、防風通聖散)及生藥(芍藥、黃柏、大黃、大棗、桂皮、人蔘等)之醫藥品(包含一般用醫藥品)、醫藥部外品、補充劑、特定保健用食品(特保)或健康食品係符合。 ・試驗期間中，每日記錄生活日誌。 ・自篩選時起至攝取2週後之採便終了為止，盡可能忌大幅的生活變化。 [0052] 關於試驗食品，連續2週攝取市售的高量含有源自可可豆之消化管調和物質之油脂加工組成物(「巧克力效果可可72％」明治股份有限公司)每日各25g(1片5g的油脂加工組成物共5片)。由於上述油脂加工組成物係每1片包含可可多酚127mg(總多酚量)，因而被驗者1日中所攝取之可可多酚成為635mg。此外，由於上述油脂加工組成物係每1片包含食物纖維0.6g、難消化性蛋白質0.18g，因而被驗者1日中所攝取之食物纖維量成為3.0g，難消化性蛋白質量成為0.88g。即，被驗者1日中所攝取之源自可可豆之消化管調和物質量成為3.88g。關於對照食品，連續2週攝取市售的巧克力(「白巧克力」明治股份有限公司)每日各25g(1片4.2g的油脂加工組成物共6片)。對照食品不含多酚、食物纖維、難消化性蛋白質。 [0053] 此外，在試驗食品中，1日中所攝取之1～4聚體的多酚的含量為76mg。作為主要成分明細，係兒茶素(單聚體)10.4mg、表兒茶素(單聚體)27.8mg、原花青素B2(2聚體)15.8mg、原花青素B5(2聚體)4.4mg、原花青素C1(3聚體)9.6mg、桂皮鞣質A2(4聚體)7.1mg。另外，針對各成分，係使用HPLC進行測定。管柱係使用Deverosil-ODS-HG5(4.6mm×250mm，φ5μ，野村化學股份有限公司製)。溶離液係由A液及B液所構成，A液係使用0.1％三氟醋酸水溶液，B液係使用0.1％三氟醋酸／乙腈溶液。通向管柱之溶離液的流速係設為0.8ml／分鐘，梯度條件係將B液於溶離液整體中所佔之比例在開始時點設為10％，在開始5分鐘後設為10％，在開始35分鐘後設為25％，在開始40分鐘後設為100％，在開始45分鐘後設為100％。樣品注入量為10μL，以表兒茶素作為標準品，將各成分以表兒茶素當量進行定量。此外，多酚含量係藉由普魯士藍法予以測定。具體而言，依照Martin L. Price and Larry G. Butler, J. Agric Food Chem. 1977, 25(6): 1268-1273所記載之方法，以市售的表兒茶素作為標準物質算出多酚含量。 [0054] 此外，在試驗食品中，1日中所攝取之食物纖維的含量為3.0g。具體而言，藉由屬於(依據AOAC International之公定法)之酵素-重量法予以算出。 [0055] 此外，在試驗食品中，1日中所攝取之難消化性蛋白質的含量為0.88g。具體而言，藉由凱氏定氮法(蛋白質定量之公定法)算出依照下述難消化性蛋白質之萃取方法所萃取而得之蛋白質量。此外，藉由下述人工消化試驗，確認所萃取而得之蛋白質為難消化性蛋白質。 [0056] ＜難消化性蛋白質之萃取方法＞ 將巧克力以隔水煮進行熔解，添加巧克力5倍量的己烷並攪拌3小時。以10,000rpm、4℃離心10分離，回收沉澱。將所回收之沉澱懸浮於初始巧克力量3倍量的己烷中並攪拌1小時。以10,000rpm、4℃離心10分離，將沉澱風乾一晚(稱為巧克力粉)。將前述巧克力粉懸浮於20倍量的去離子水中，攪拌10分鐘左右。確認pH值，以NaOH調整成pH12。再次攪拌10分鐘後，確認pH值，以NaOH調整成pH12。加溫至50℃，一到達便確認pH值，以NaOH調整成pH12。加溫至70℃，一到達便萃取30分鐘。以10,000rpm、10分鐘、室溫進行離心，回收上清液。在所獲得之上清液中添加磷酸而將pH調整成2.0，於4℃靜置一晚。以10,000rpm、10分鐘、室溫進行離心，回收沉澱。在沉澱中加入原料(巧克力粉重量)5倍量的去離子水而進行懸浮，以10,000rpm、10分鐘、25℃進行離心並去除上清液。實施洗淨2次。回收沉澱並於80℃減壓乾燥72小時。 [0057] ＜人工消化試驗＞ (1)胃蛋白酶消化 在被驗樣品中加入水而製成10％後，以鹽酸將pH調整成2.0。於其中添加採取量1/100的胃蛋白酶(163-00642，和光純藥工業公司)並於37℃使其進行反應4小時。 [0058] (2)胰酶消化 將上述(1)之反應物以氫氧化鈉將pH調整成8～10，添加採取量1/50的胰酶(163-00142，和光純藥工業公司)並於37℃使其進行反應16小時。酵素反應終了後，於100℃加熱5分鐘而終止酵素反應。此外，(1)、(2)皆與檢體同時地處理經加入與酵素添加量等量(重量)的水來代替酵素並與酵素處理同樣地操作其他者而得之空白區。 [0059] (3)未消化物(殘渣)的回收 將上述(2)之反應物以鹽酸將pH調整成2.0，以10,000rpm、10分鐘、4℃進行離心，回收沉澱。在所回收之沉澱物中加入試料採取量5倍量的水而將沉澱物溶解／洗淨並再度施行離心分離(10,000rpm、10分鐘、4℃)。施行此操作合計2次。 [0060] (4)乾燥 所回收之沉澱係予以凍結乾燥。此時，測定在凍結乾燥前後之重量(以下，作為殘渣回收量)。另外，成分量係以凱氏定氮法予以求出。藉由以下計算式算出消化率。 [0061][0062] 結果，含有難消化性蛋白質之物中之蛋白質的消化率為20％，同時實施試驗之酪蛋白為99.3％。 [0063] 由以上可確認萃取自巧克力之蛋白質屬難消化性。 [0064] ＜評估及結果＞ 將攝取開始日設為第1日，在攝取開始7日前(第-7日，-1W)至攝取最終日(第14日，2W)之間，施行利用生活日誌(試驗食品攝取的確認、自覺症狀的記錄、自攝取開始日7日前起之排便狀況(排便次數、便性、便量)、性周期等、醫藥品的服用狀況等的記錄)之記錄。在攝取開始7日前(第-7日，-1W)及攝取最終日(第14日，2W)，施行生活習慣問卷調查、自覺問卷調查、理學檢查(身高、體重、血壓、脈搏數、BMI)、採便。此外，施行便中菌叢分析(利用Nagashima法之便中菌叢的T-RFLP分析)、便中雙歧桿菌屬菌數及總菌數的定量／雙歧桿菌屬菌佔有率的測定(即時PCR法)、便的全面性菌叢分析(利用DGGE法、次世代擴增子定序法：總體基因體(metagenome)分析之被驗者腸內菌叢(屬級)的評估)。所獲得之數據係以平均值±標準誤差表示。統計分析係如以下施行。便色／便量等的組間比較：「獨立樣品的t檢定」(分析軟體：「IBM SPSS Statistics 23」)。排便次數的組間比較：「Mann-Whitney的U檢定」(分析軟體：「IBM SPSS Statistics 23」)。全面性菌叢分析的組間比較：使用Excel統計(SSRI)，將對照食品組與試驗食品組之比較以t-test進行評估(顯著水準係設為未滿5％)。 [0065] 排便次數在試驗食品組中係顯示出顯著的經時性增加，同時相對於第-7日～第-1日(-1W～0W)而言，第0日～第7日(0W～1W)、第8日～第14日(1W～2W)皆有顯著差異(危險率(p值)未滿5％)。相較於對照食品組而言，在試驗食品組中可看出明顯的排便次數增加(圖1)。 [0066] 便性係藉由便色及排便量進行評估。便色係藉由5階段的便色評分進行評估。具體而言，便色評分值係設為1：黃色～黃褐色、2：褐色、3：茶褐色、4：暗褐色、5：黑褐色～黑色(參照腸內細菌學雜誌. 2004, 18(2); 107-115)，為了以目視進行比色，將標記有上述5階段的便色評分值及名稱且彩色印刷有所對應之便色之便色標度交給被驗者，令被驗者本身觀測便的顏色。其結果，試驗食品組之攝取14日後之便色評分值相較於對照食品組之便色評分值而言顯示出顯著較低的值(圖2)。即，在便色上，在試驗食品攝取組中在攝取14日後可見到改善傾向，而在對照食品攝取組中，則幾乎未見到變化(圖2)。針對便量，求出第0日～第7日(0W～1W)或第8日～第14日(1W～2W)為止之各1週的總排便量相對於第-7日～第-1日(-1W～0W)之攝取前1週的總排便量(前)之比。其結果，可見到試驗食品組之便量經時性增加之傾向(數據未顯示)。 [0067] 由圖1及圖2之結果，可確認藉由攝取源自可可豆之消化管調和物質，排便次數、排便量增加，便色有所改善。 [0068] 此外，藉由MiSeq系統(Illumina公司製)實施使用次世代擴增子定序法(參照Proc Natl Acad Sci U S A. 2011, 108(Suppl 1): 4516-4522)之總體基因體分析。構成菌叢之各菌的分類係依照16SrDNA序列資訊施行(參照Nucl Acids Res. 2007, 35:18. e120)。其結果，在被驗者腸內菌叢(屬級)中，將腸內菌叢總菌數設為100％之情況之柔嫩梭菌屬菌的佔有率在試驗食品攝取組中係相較於攝取前(第0日)而言，在攝取後(第14日)顯著地增加(圖3)。即，可確認排便次數的增加、排便量的增加、便色的改善係由柔嫩梭菌屬菌的增加所引發。 [0069] 由以上結果，可確認源自可可豆之消化管調和物質促進柔嫩梭菌屬菌的產生。從而，顯示出源自可可豆之消化管調和物質具有炎症性疾患、過敏疾患、一般認為起因於腸內菌共生平衡失調(Dysbiosis)之疾病(克隆氏症等)等可藉由促進柔嫩梭菌屬菌的產生而加以改善之疾患或病狀之改善效果。 [0070] ＜試驗例2：源自可可豆之消化管調和物質所引發之柔嫩梭菌屬菌之產生促進效果的檢討(2)＞ 為了驗證源自可可豆之消化管調和物質對柔嫩梭菌屬菌的產生所施予之影響，使用萃取自巧克力之消化管調和物質施行以下試驗。 [0071] (1)消化管調和物質的調製 將市售的高量含有源自可可豆之消化管調和物質之油脂加工組成物(「巧克力效果可可72％」明治股份有限公司)1603g以隔水煮進行熔解，添加巧克力5倍量的己烷(8L)後，藉由攪拌3小時而進行脫脂。離心分離後(10000rpm、10分鐘、4℃)，去除上清液並回收沉澱物。在沉澱物中添加巧克力3倍量的己烷(4.8L)後，攪拌1小時。離心分離後，去除上清液並回收沉澱物後，使其在通風櫥內乾燥一晚。藉由將經乾燥之沉澱物以研磨混合機進行粉碎而獲得巧克力粉981g。 [0072] 將依上述方式所獲得之巧克力粉(981g)懸浮於20倍量水(19.6L)中，使用8N NaOH調整成pH12.0後，加溫至70℃並施行萃取30分鐘。離心分離後(10000rpm、10分鐘、25℃)，回收上清液。 [0073] 將所回收之上清液以磷酸調整成pH2.0，於4℃靜置一晚。離心分離後(10000rpm、10分鐘、25℃)，去除上清液並回收沉澱物。 [0074] 在沉澱物中加入巧克力粉5倍量的水(4.9L)並施行水洗，離心分離後(10000rpm、10分鐘、25℃)，倒棄上清液。重複進行水洗2次並使所獲得之沉澱物於80℃以減壓乾燥機乾燥6小時，獲得含有可可蛋白質之物129g(蛋白質：46.6％、食物纖維：43.3％)。由於所獲得之含有可可蛋白質之物中所包含之蛋白質及食物纖維屬難消化性，因而含有可可蛋白質之物相當於源自可可豆之消化管調和物質。 [0075] (2)試驗方法 試驗係對使其攝取已摻和上述(1)所調製之源自可可豆之消化管調和物質(含有可可蛋白質之物)之飼料(試驗飼料)之試驗飼料組，以及使其攝取未摻和源自可可豆之消化管調和物質之飼料(對照飼料)之對照飼料組共2組施行。作為試驗飼料，係使用將AIN93G的5％纖維素份置換成5％含有可可蛋白質之物而得之飼料。作為對照飼料，係使用將AIN93G中之屬於不溶性食物纖維之5％纖維素份置換成5％玉米澱粉而得之飼料。自AIN93G中去除纖維素份而得之飼料係使用Oriental酵母工業公司製者。 [0076] 將12隻BALB/cA小鼠(雌性，6週齡，日本CLEA公司)以對照飼料預備飼育1週後，以平均體重成為同等之方式施行分組。分組係使各組成為6隻。 [0077] 自試驗開始時起自由攝取各飼料及水。每週施行2次體重測定及攝餌量測定。此外，回收試驗開始後第11～13日之2日份的糞便，凍結乾燥後，測定乾燥重量。 [0078] 在試驗開始後第14日在異氟烷麻醉下自腹部下行大靜脈施行全採血。採取盲腸內容物後，測定重量並於-80℃保存。此外，盲腸內短鏈脂肪酸濃度的測定係在以下測定機器及條件下施行。 測定機器：島津有機酸分析系統 管柱：Shim-Pack SCR-102(H)，300mm×8mm ID，以2根直列使用 保護管柱：Shim-Pack SCR-102(H)，50mm×6mm ID 溶離液：5mmol/L對甲苯磺酸 反應液：5mmol/L對甲苯磺酸、100μmol/L EDTA、20mmol/L Bis-Tris 流速：0.8mL/分鐘 烤箱溫度：45℃ 檢測器：導電度檢測器CDD-10A 參照文獻：Advances in Microbiology. 2015, 5(7):531-540及Benef Microbes. 2016 Jun, 7(3):337-344 [0079] 所獲得之數據係以平均值±標準誤差表示。統計分析係使用Excel統計(SSRI)，將對照飼料組與試驗飼料組之比較以t-test進行評估。顯著水準係設為未滿5％。另外，針對試驗開始時及終了時之體重及總攝餌量，在各組間皆無顯著差異(數據未顯示)。 [0080] (3)結果 分別地，試驗開始後第11～13日之乾燥糞便重量係示於圖4，解剖時之盲腸內容物重量係示於圖5。此外，盲腸內之短鏈脂肪酸量(酪酸、丙酸、醋酸)係示於圖6A、圖6B及圖6C。 [0081] 如圖4所示，相較於對照飼料組而言，在試驗飼料組中可看出糞便重量的顯著增加。此結果顯示出試驗例1中之「巧克力效果可可72％」的攝取所引發之通便改善效果之有效成分為含有可可蛋白質之物(消化管調和物質)。 [0082] 此外，如圖5所示，相較於對照飼料組而言，在試驗飼料組中可看出盲腸內容物重量的顯著增加。再者，如圖6A、圖6B及圖6C所示，相較於對照飼料組而言，在試驗飼料組中可看出盲腸內之短鏈脂肪酸量的顯著增加。由此顯示出含有可可蛋白質之物(消化管調和物質)係除了由便的體積增大效果所引發之糞便量增加以外，尚具有由盲腸內之短鏈脂肪酸的產生所引發之糞便量增加效果。由於盲腸內之短鏈脂肪酸係由柔嫩梭菌屬菌所產生，在柔嫩梭菌屬菌的佔有率之變化量與人類糞便中之短鏈脂肪酸濃度之變化量之間可見到強烈正相關(參照例如Brit J Nutr. 2010, 104(5): 693-700)，因而若與試驗例1之結果合併，則顯示出含有可可蛋白質之物(消化管調和物質)具有促進柔嫩梭菌屬菌的產生，促進腸內菌叢的改善之效果。 [0083] ＜試驗例3：源自可可豆之消化管調和物質所引發之柔嫩梭菌屬菌之產生促進效果的檢討(3)＞ 為了驗證源自可可豆之消化管調和物質對糞便中之短鏈脂肪酸的產生所施予之影響，施行以下試驗。 [0084] 自20歲以上且未滿50歲的健康日本人女性中藉由篩選挑選出被驗者，施行評估者盲檢並行組間比較試驗(試驗食品組、對照食品組，各30名)。試驗期間中，施行進食限制及其他限制。針對試驗期間中之進食限制及其他限制以及關於進食、飲物及嗜好品之事項，係採用與試驗例1所記載之基準相同的基準。 [0085] 篩選係在攝取開始7日前(第-7日，-1W)，實施生活習慣問卷調查(年齡、既往病歷、併發症、食物過敏的有無、醫藥品或健康食品之攝取狀況、飲酒等的確認)、自覺問卷調查(關於整腸之自覺症狀的調查)、理學檢查(身高、體重、血壓、脈搏數、BMI)，挑選出滿足依據排便的狀態(排便次數、便性、便量)、年齡、飲食習慣(可可製品、納豆、含有乳酸菌之食品等之日常攝取狀況)之規定的排除基準且排便次數為每週平均4次之60名。篩選中之排除基準係採用與試驗例1所記載之基準相同的基準。 [0086] 試驗食品及對照食品係使用依與試驗例1所記載之順序同樣的順序進行調製並進行評估而得者。 [0087] 評估係如以下施行。將攝取開始日設為第1日，在攝取開始7日前(第-7日，-1W)至攝取最終日(第14日，2W)之間，施行利用生活日誌(試驗食品攝取的確認、自覺症狀的記錄、自攝取開始日7日前起之排便狀況(排便次數、便性、便量)、性周期等、醫藥品的服用狀況等的記錄)之記錄。在攝取開始7日前(第-7日，-1W)及攝取最終日(第14日，2W)，實施生活習慣問卷調查、自覺問卷調查、理學檢查(身高、體重、血壓、脈搏數、BMI)、採便。 [0088] 此外，測定便中之短鏈脂肪酸濃度。便中短鏈脂肪酸濃度係使用試驗例2所記載之測定機器，依照試驗例2所記載之條件進行測定。其結果，可確認藉由攝取試驗食品，便中短鏈脂肪酸濃度增大(數據未顯示)。由於大腸內之短鏈脂肪酸係由柔嫩梭菌屬菌所產生，在柔嫩梭菌屬菌的佔有率之變化量與人類糞便中之短鏈脂肪酸濃度之變化量之間可見到強烈正相關(參照例如Brit J Nutr. 2010, 104(5): 693-700)，因而若與試驗例1之結果合併，則在本試驗例中亦顯示出含有可可蛋白質之物(消化管調和物質)具有促進柔嫩梭菌屬菌的產生，促進腸內菌叢的改善之效果。
[0011] [圖1] 針對試驗食品組及對照食品組示出試驗例1中之排便次數的推移之圖。 [圖2] 針對試驗食品組及對照食品組示出試驗例1中之便色的推移之圖。 [圖3] 針對試驗食品組及對照食品組示出試驗例1中之攝取後相對於攝取前之柔嫩梭菌屬菌在腸內菌叢總菌數之佔有率的變化之圖。 [圖4] 針對試驗飼料組及對照飼料組示出試驗例2中之試驗開始後第11～13日之乾燥糞便重量之圖。 [圖5] 針對試驗飼料組及對照飼料組示出試驗例2中之解剖時之盲腸內容物重量之圖。 [圖6A] 針對試驗飼料組及對照飼料組示出試驗例2中之盲腸內短鏈脂肪酸量(酪酸)之圖。 [圖6B] 針對試驗飼料組及對照飼料組示出試驗例2中之盲腸內短鏈脂肪酸量(丙酸)之圖。 [圖6C] 針對試驗飼料組及對照飼料組示出試驗例2中之盲腸內短鏈脂肪酸量(醋酸)之圖。