TW201819627A - 海藻糖磷酸化酶 - Google Patents

Abstract

本發明涉及一種包含一胺基酸序列的海藻糖磷酸化酶，其中該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列與SEQ ID NO: 1的胺基酸序列具有至少80%同一性及/或至少80%同源性，其中該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列在一個或多個胺基酸位置處包含一胺基酸取代，其中該一個或多個胺基酸位置選自由以下胺基酸位置所組成之群組：SEQ ID NO: 1的位置712、383、10、114、118、192、197、220、225、304、306、318、323、339、349、357、459、476、481、484、487、488、506、511、526、530、532、533、537、550、556、564、590、649、667、703以及705。

Description

海藻糖磷酸化酶

本發明涉及一磷酸化酶，一使一葡糖基單醣與α-D-葡萄糖-1-磷酸反應之方法，一將葡萄糖與α-D-葡萄糖-1-磷酸鹽轉化為海藻糖與無機磷酸鹽之方法，以及該磷酸化酶用於生產海藻糖之用途。

磷酸化酶是催化將來自一無機磷酸鹽之磷酸基團添加至一受體分子的酶。催化海藻糖的可逆磷酸化裂解之磷酸化酶在本領域中是已知的，並被稱為海藻糖磷酸化酶。 海藻糖磷酸化酶可基於其所催化之反應的機制來加以區分。

第一組海藻糖磷酸化酶使用無機磷酸鹽作為一進入葡萄糖與α-D-葡萄糖1-磷酸(aG1P)的葡糖基受體，以催化具有變旋異構組態淨保留的海藻糖之磷酸裂解，因此被歸類為保留磷酸化酶。這種第一組海藻糖磷酸化酶已被國際生物化學暨分子生物學聯盟(International Union of Biochemistry and Molecular Biology)指定為EC號為EC 2.4.1.231，並已經從各種真核生物真菌中進行功能鑑定。

第二組海藻糖磷酸化酶為將EC號為EC 2.4.1.64的海藻糖磷酸化酶翻轉並催化海藻糖之磷酸裂解，並將構型轉化為葡萄糖與β-D-葡萄糖-1-磷酸鹽。因此這些磷酸化酶具有不同於EC 2.4.1.231的海藻糖磷酸化酶之反應機制。

具體地，本發明涉及EC號為EC 2.4.1.231的某些磷酸化酶，其能夠在其它反應中將葡萄糖與α-D-葡萄糖-1磷酸(“aG1P”)轉化為海藻糖，或能夠在無機磷酸鹽的存在下將海藻糖磷酸解切割為葡萄糖與aG1P。

海藻糖磷酸化酶的工業用途源於這樣的事實，亦即其生物化學特徵的反應，即催化海藻糖的磷酸裂解，是可逆的。因此，海藻糖磷酸化酶特別適用於催化葡萄糖與aG1P將其轉化為海藻糖與無機磷酸鹽。

由海藻糖磷酸化酶催化的反應是可逆的(平衡反應)，且可能經歷基質或產物抑制，取決於該反應的具體方向。為了獲得一所需產物工業上相關的量，需要海藻糖磷酸化酶催化具有高比活性之基質的轉化。此外，海藻糖磷酸化酶的其他動力學因子，例如基質選擇性與K_M 可能對產品收獲率具有重要作用。其它相關方面可以包括但不限於區域選擇性，由其他因素(例如，粗萃取物組成分、基質污染物或副產物)造成的抑制，以及在合適宿主中的重組可溶性表現。

野生型海藻糖磷酸化酶的主要缺點為，即使在25°C至40°C之間的中等溫度下溶液中的酶活性也會迅速喪失，這明顯限制了它們的應用。對於工業應用而言，在高於30°C的溫度下幾天之內的高穩定性，或者甚至高於40°C的高溫穩定性都是需要的。對於熱不穩定的酶來說，反應時間長，在整個加工過程中需要更大量的酶，通常透過重覆添加酶來進行。例如，來自秀珍菇(Pleurotus ostreatus )的海藻糖磷酸化酶在25°C下顯示約1.3小時的半衰期以及在約41°C下3分鐘的半衰期(Schwarz等人，J Biotechnol 129, 140-150 (2007)，Han等人，Protein Expression and Purification 30, 194-202 (2003))。來自裂褶菌(Schizophyllum commune )以及舞菇(Grifola frondosa )的海藻糖磷酸化酶則稍微穩定些，分別在30°C下的半衰期為4.8小時，在37°C下的半衰期為1小時(Schwarz等人，J Biotechnol 129, 140-150 (2007))。

本領域應用了各種策略來解決這些缺點。例如，添加海藻糖、甘油以及聚乙二醇(polyethylene glycol, PEG)顯示增加海藻糖磷酸化酶的穩定性(Klimacek等人，Biotechnology Techniques 13：243-248, 1999，Eis等人，Biochem J 341, 385-393 (1999)，Schwarz等人，J Biotechnol 129, 140-150 (2007))。透過添加20%的PEG4000達到了最佳穩定化，這導致來自裂褶菌的海藻糖磷酸化酶在30°C、40°C以及50°C下的半衰期分別為4.5天、2.2小時以及6分鐘(Klimacek等人，Biotechnology Techniques 13：243-248, 1999，Eis等人，Biochem J 341, 385-393 (1999))。雖然添加PEG 4000改善了酶的穩定性，但是在40°C或40°C以上的應用仍然不足，且需要數小時至數天的處理時間進行這樣的改進。PEG 4000的存在可能進一步干擾透過酶促反應獲得之產物的工業規模成本結構以及下游加工要求。

來自裂褶菌的海藻糖磷酸化酶的半衰期也可透過分別在30°C、40°C以及50°C固定化22天、3.3天以及2小時來改善(Klimacek等人，Biotechnology Techniques 13：243-248, 1999)。然而，由於昂貴的載體及製造成本，固定化會導致較高的酶生產成本，且只有當酶可以回收並重新使用多個循環時，在工業應用方面才是有效的。此外，固定化限制了酶促反應產物的過程及下游加工的選擇。

因此，在25°C至35°C的溫度下進行以海藻糖磷酸化酶之合成反應並不令人驚訝 (Schwarz等人，J of Biotechnology 129 140-150 (2007)，Saito等人，Appl Microbiol Biotechnol 50:193-198 (1998)，Saito等人，Appl Microbiol Biotechnol 64: 4340-4345 (1998))。

改進酶的性能及其在工業過程中之適用性的另一種方法為酶工程。該技術涉及開發具有改進性能的起始酶之變體(回顧文獻請參見，例如S. Lutz，U.T. Bornscheuer, Protein Engineering Handbook, Wiley VCH, Weinheim, 2009)。其中磷酸化酶透過酶工程改善。例如，美國專利申請公開號US 2013-0029384揭露了具有改善的熱穩定性之屬於糖基水解酶家族13的蔗糖磷酸化酶之變體。EC號為EC 2.4.1.231的海藻糖磷酸化酶的變體迄今僅限於用於闡明所述之海藻糖磷酸化酶的反應機理之變體。基於這樣的變體，Goedl等人(Biochem J 397；491-500；2006)發現在來自裂褶菌(Shizophyllum commune )的海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置D379、H403、R507以及K512的取代導致活性降低。具有以下單一突變D379N、H403A、R507A以及K512A之一的變體顯示出海藻糖磷酸分解活性降低。Goedl等人(FEBS J 275； 903-913, 2008)更具體地發現來自裂褶菌(Shizophyllum commune )的海藻糖磷酸化酶突變R507A以及K512A對野生型海藻糖磷酸化酶的催化效率(kcat/K_M )有影響。

由於現有技術中可獲得的野生型海藻糖磷酸化酶在各方面都令人不滿意，且試圖有效地提高海藻糖磷酸化酶的工業應用性，如本領域所描述的那樣不成功，因此需要與野生型海藻糖磷酸化酶相比具有優勢之海藻糖磷酸化酶，特別是在工業生產海藻糖的高溫製程穩定性方面有優勢者。

因此，本發明的基礎問題為提供適用於工業生產海藻糖之海藻糖磷酸化酶。

本發明之另一問題為提供熱穩定之海藻糖磷酸化酶，且於52°C作用15分鐘後顯示出30%至90%或55%至100%的殘餘活性，而不需要酶的固定化或添加除了蔗糖以外之任何穩定劑(例如，PEG或甘油)。

本發明之另一問題為提供一種熱穩定的海藻糖磷酸化酶，並且於45°C顯示3小時至9天或更長的半衰期，而不需要酶的固定化或添加除了蔗糖以外之任何穩定劑(例如，PEG或甘油)。

本發明之另一問題為提供具有介於0.65和1.0之間的100/500-比率的海藻糖磷酸化酶。

另一問題為提供允許將葡萄糖與α-D-葡萄糖-1-磷酸鹽轉化為海藻糖與無機磷酸鹽之方法。

所附之申請專利範圍獨立項解決了這些及其他的問題。較佳實施例可以由所附之申請專利範圍附屬項中獲得。

更具體地，於第一方面，其也是第一方面的第一個具體實施例，中的這些及其它問題係透過包含一胺基酸序列的一多胜肽解決，該多胜肽較佳為海藻糖磷酸化酶，其中該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列與SEQ ID NO: 1的胺基酸序列具有至少80%同一性及/或至少80%同源性，其中該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列包含在一個或多個胺基酸位置處的一胺基酸取代，其中該一個或多個胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：712、383、10、114、118、192、197、220、225、304、306、318、323、339、349、357、459、476、481、484、487、488、506、511、526、530、532、533、537、550、556、564、590、649、667、703以及705。較佳地，該一個或多個胺基酸位置係各自並獨立地選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：712、383、10、114、118、192、197、220、225、304、306、318、323、339、349、357、459、476、481、484、487、488、506、511、526、530、532、533、537、550、556、564、590、649、667、703以及705。甚至更佳地，該一個或多個胺基酸位置係各自並獨立地選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：712、383、114、118、192、197、220、225、304、306、318、323、339、349、357、459、476、481、484、487、488、506、511、526、530、532、533、537、550、556、564、590、667、703以及705。如在本發明之上下文中令人驚訝地發現的，一個或多個這些位置的突變導致與SEQ ID NO: 1的野生型序列相比的改善特徵，例如，該酶的熱穩定性提高導致於52°C作用15分鐘後的殘餘活性為至少22%，這是與由SEQ ID NO: 1的野生型胺基酸序列編碼的海藻糖磷酸化酶的19%相比。

於第一方面之第二具體實施例中，其也是該第一方面之第一具體實施例的一具體實施例，該一個或多個胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：L712、P383、V10、L114、I118、S192、S197、Y220、N225、A304、D306、P318、T323、L339、F349、G357、A459、Q476、E481、A484、Q487、K488、A506、A511、R526、E530、G532、D533、D537、V550、S556、T564、D590、A649、R667、A703以及K705。

於第一方面之第三具體實施例中，其也是該第一方面之第一及第二具體實施例的一具體實施例，該一個或多個胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：712、383、10、114、118、220、225、304、318、323、349、357、481、487、488、506、511、550、556、564、590、649、703以及705。

於第一方面之第四具體實施例中，其也是該第一方面之第一、第二及第三具體實施例的一具體實施例，該一個或多個胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：L712、P383、V10、L114、I118、Y220、N225、A304、P318、T323、F349、G357、E481、Q487、K488、A506、A511、V550、S556、T564、D590、A649、A703以及K705。

於第一方面之第五具體實施例中，其也是該第一方面之第一、第二、第三及第四具體實施例的一具體實施例，該一個或多個胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：712、383、114、118、225、304、323、349、357、487、550、556、564、590以及649。

於第一方面之第六具體實施例中，其也是該第一方面之第一、第二、第三、第四及第五具體實施例的一具體實施例，較佳為第一方面之第五具體實施例，該一個或多個胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：L712、P383、L114、I118、N225、A304、T323、F349、G357、Q487、V550、S556、T564、D590以及A649。

於第一方面之另一具體實施例中，其也是該第一方面之前述的任一具體實施例的一具體實施例，該一個或多個胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：383、225、304、323、487、550、556、564、590以及705。

於第一方面之另一具體實施例中，其也是該第一方面之前述的任一具體實施例的一具體實施例，該一個或多個胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：383、225、304、487、556、590以及705。

於第一方面之另一具體實施例中，其也是該第一方面之前述的任一具體實施例的一具體實施例，該一個或多個胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：383、225、304、487、556以及590。

於第一方面之另一具體實施例中，其也是該第一方面之前述的任一具體實施例的一具體實施例，該一個或多個胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：383、556以及590。

於第一方面之另一具體實施例中，其也是該第一方面之前述的任一具體實施例的一具體實施例，該一個或多個胺基酸位置係選自由SEQ ID NO: 1的胺基酸位置383與590所組成之群組。

於第一方面之另一具體實施例中，其也是該第一方面之前述的任一具體實施例的一具體實施例，該一個或多個胺基酸位置係為SEQ ID NO: 1的胺基酸位置383。

於第一方面之另一具體實施例中，其也是該第一方面之前述的任一具體實施例的一具體實施例，該一個或多個胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：P383、N225、A304、T323、Q487、V550、S556、T564、D590以及N705。

於第一方面之另一具體實施例中，其也是該第一方面之前述的任一具體實施例的一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列包含根據SEQ ID NO: 2、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109，較佳為根據SEQ ID NO: 2、84、85、87、88、89、91、92、93、94、95、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、109的任何之一，更佳為根據SEQ ID NO: 84、85、87、88、89、91、92、93、94、95、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、109的任何之一，同等較佳為根據SEQ ID NO: 87、89、91、97、98、99、100、101、102、103、104、109的任何之一，甚至更佳為根據SEQ ID NO: 87、91、97、98、99、100、101、102、103、104、109的任何之一，以及最佳為根據SEQ ID NO: 87、97、98、99、100、101、102、103、104的任何之一的一胺基酸序列。

於第一方面之第七具體實施例中，其也是該第一方面之第一、第二、第三、第四、第五及第六具體實施例或前述的任何其他的一具體實施例，該一個或多個胺基酸位置為二個或更多個胺基酸位置。

於第一方面之第八具體實施例中，其也是該第一方面之第一、第二、第三、第四、第五、第六及第七具體實施例或前述的任何其他的一具體實施例，較佳為第一方面之第七實施例，該一個或多個胺基酸位置為三個或更多個胺基酸位置。

於第一方面之第九具體實施例中，其也是該第一方面之第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七及第八具體實施例或前述的任何其他的一具體實施例，較佳為第一方面之第八實施例，該一個或多個胺基酸位置為四個或更多個胺基酸位置。

於第一方面之第十具體實施例中，其也是該第一方面之第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八及第九具體實施例或前述的任何其他的一具體實施例，較佳為第一方面之第九實施例，該一個或多個胺基酸位置為五個或更多個胺基酸位置。

於第一方面之第十一具體實施例中，其也是該第一方面之第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九及第十具體實施例或前述的任何其他的一具體實施例，較佳為第一方面之第十實施例，該一個或多個胺基酸位置為六個或更多個胺基酸位置。

於第一方面之第十二具體實施例中，其也是該第一方面之第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十及第十一具體實施例或前述的任何其他的一具體實施例，較佳為第一方面之第十一實施例，該一個或多個胺基酸位置為七個或更多個胺基酸位置。

於第一方面之第十三具體實施例中，其也是該第一方面之第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一及第十二具體實施例或前述的任何其他的一具體實施例，較佳為第一方面之第十二實施例，該一個或多個胺基酸位置為八個或更多個胺基酸位置。

於第一方面之第十四具體實施例中，其也是該第一方面之第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二及第十三具體實施例或前述的任何其他的一具體實施例，較佳為第一方面之第十三實施例，該一個或多個胺基酸位置為九個或更多個胺基酸位置。

於第一方面之第十五具體實施例中，其也是該第一方面之第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三及第十四具體實施例或前述的任何其他的一具體實施例，較佳為第一方面之第十四實施例，該一個或多個胺基酸位置為十個或更多個胺基酸位置。

於第一方面之第十六具體實施例中，其也是該第一方面之第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四及第十五具體實施例或前述的任何其他的一具體實施例，較佳為第一方面之第十五實施例，該一個或多個胺基酸位置為十一個或更多個胺基酸位置。

於第一方面之第十七具體實施例中，其也是該第一方面之第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五及第十六具體實施例或前述的任何其他的一具體實施例，較佳為第一方面之第十六實施例，該一個或多個胺基酸位置為十二個或更多個胺基酸位置。

於第一方面之第十八具體實施例中，其也是該第一方面之第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六及第十七具體實施例或前述的任何其他的一具體實施例，較佳為第一方面之第十七實施例，該一個或多個胺基酸位置為十三個或更多個胺基酸位置。

於第一方面之第十九具體實施例中，其也是該第一方面之第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七及第十八具體實施例或前述的任何其他的一具體實施例，較佳為第一方面之第十八實施例，該一個或多個胺基酸位置為十四個或更多個胺基酸位置。

於第一方面之第二十具體實施例中，其也是該第一方面之第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八及第十九具體實施例或前述的任何其他的一具體實施例，較佳為第一方面之第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八及第十九實施例，每個及任何該胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：712、383、10、114、118、192、197、220、225、304、306、318、323、339、349、357、459、476、481、484、487、488、506、511、526、530、532、533、537、550、556、564、590、649、667、703以及705，較佳地每個及任何該胺基酸位置係獨立並各別地選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：712、383、10、114、118、192、197、220、225、304、306、318、323、339、349、357、459、476、481、484、487、488、506、511、526、530、532、533、537、550、556、564、590、649、667、703以及705。

於第一方面之第二十一具體實施例中，其也是該第一方面之第二十實施例的一實施例，每個及任何該胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：L712、P383、V10、L114、I118、S192、S197、Y220、N225、A304、D306、P318、T323、L339、F349、G357、A459、Q476、E481、A484、Q487、K488、A506、A511、R526、E530、G532、D533、D537、V550、S556、T564、D590、A649、R667、A703以及K705，較佳地每個及任何胺基酸位置係各自且獨立地選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：L712、P383、V10、L114、I118、S192、S197、Y220、N225、A304、D306、P318、T323、L339、F349、G357、A459、Q476、E481、A484、Q487、K488、A506、A511、R526、E530、G532、D533、D537、V550、S556、T564、D590、A649、R667、A703以及K705。

於第一方面之第二十二具體實施例中，其也是該第一方面之第二十實施例的一實施例，每個及任何該胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：712、383、10、114、118、220、225、304、318、323、349、357、481、487、488、506、511、550、556、564、590、649、703以及705，較佳地每個及任何胺基酸位置係各自且獨立地選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：712、383、10、114、118、220、225、304、318、323、349、357、481、487、488、506、511、550、556、564、590、649、703以及705。

於第一方面之第二十三具體實施例中，其也是該第一方面之第二十二實施例的一實施例，每個及任何該胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：L712、P383、V10、L114、I118、Y220、N225、A304、P318、T323、F349、G357、E481、Q487、K488、A506、A511、V550、S556、T564、D590、A649、A703以及K705，較佳地每個及任何胺基酸位置係各自且獨立地選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：L712、P383、V10、L114、I118、Y220、N225、A304、P318、T323、F349、G357、E481、Q487、K488、A506、A511、V550、S556、T564、D590、A649、A703以及K705。

於第一方面之第二十四具體實施例中，其也是該第一方面之第二十二實施例的一實施例，每個及任何該胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：712、383、114、118、225、304、323、349、357、487、550、556、564、590以及649，較佳地每個及任何胺基酸位置係各自且獨立地選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：712、383、114、118、225、304、323、349、357、487、550、556、564、590以及649。

於第一方面之第二十五具體實施例中，其也是該第一方面之第二十四實施例的一實施例，每個及任何該胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：L712、P383、L114、I118、N225、A304、T323、F349、G357、Q487、V550、S556、T564、D590以及A649，較佳地每個及任何胺基酸位置係各自且獨立地選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：L712、P383、L114、I118、N225、A304、T323、F349、G357、Q487、V550、S556、T564、D590以及A649。

於第一方面之第二十六具體實施例中，其也是該第一方面之第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、第二十三、第二十四及第二十五具體實施例的一具體實施例，該二個或多個胺基酸位置包含一對二個胺基酸位置，其中該對二個胺基酸位置係選自由下列所組成之群組：10與114、10與118、10與220、10與225、10與304、10與323、10與349、10與357、10與383、10與487、10與506、10與550、10與556、10與564、10與590、10與649、10與705、10與712、114與118、114與220、114與225、114與304、114與323、114與349、114與357、114與383、114與487、114與506、114與550、114與556、114與564、114與590、114與649、114與705、114與712、118與220、118與225、118與304、118與323、118與349、118與357、118與383、118與487、118與506、118與550、118與556、118與564、118與590、118與649、L118與705、118與712、220與225、220與304、220與323、220與349、220與357、220與383、220與487、220與506、220與550、220與556、220與564、220與590、220與649、220與705、220與712、225與304、225與323、225and 349、225與357、225與383、225與487、225與506、225與550、225與556、225與564、225與590、225與649、225與705、225與712、304與323、304與349、304與357、304與383、304與487、304與506、304與550、304與556、304與564、304與590、304與649、304與705、304與712、323與349、323與357、323與383、323與487、323與506、323與550、323與556、323與564、323與590、323與649、323與705、323與712、349與357、349與383、349與487、349與506、349與550、349與556、349與564、349與590、349與649、349與705、349與712、357與383、357與487、357與506、357與550、357與556、357與564、357與590、357與649、357與705、357與712、383與487、383與506、383與550、383與556、383與564、383與590、383與649、383與705、383與712、487與506、487與550、487與556、487與564、487與590、487與649、487與705、487與712、506與550、506與556、506與564、506與590、506與649、506與705、506與712、550與556、550與564、550與590、550與649、550與705、550與712、556與564、556與590、556與649、556與705、556與712、564與590、564與649、564與705、564與712、590與649、590與705、590與712、649與712、649與705，以及705與712，較佳地，該對二個胺基酸位置係選自由下列所組成之群組：V10與L114、V10與I118、V10與Y220、V10與N225、V10與A304、V10與T323、V10與F349、V10與G357、V10與P383、V10與Q487、V10與A506、V10與V550、V10與S556、V10與T564、V10與D590、V10與A649、V10與K705、V10與L712、L114與I118、L114與Y220、L114與N225、L114與A304、L114與T323、V10與F349、L114與G357、L114與P383、L114與Q487、L114與A506、L114與V550、L114與S556、L114與T564、L114與D590、L114與A649、L114與K705、L114與L712、I118與Y220、I118與N225、I118與A304、I118與T323、I118與F349、I118與G357、I118與P383、I118與Q487、I118與A506、I118與V550、I118與S556、I118與T564、I118與D590、118與A649、L118與K705、I118與L712、Y220與N225、Y220與A304、Y220與T323、Y220與F349、Y220與G357、Y220與P383、Y220與Q487、Y220與A506、Y220與V550、Y220與S556、Y220與T564、Y220與D590、Y220與A649、Y220與K705、Y220與L712、N225與A304、N225與T323、N225與F349、N225與G357、N225與P383、N225與Q487、N225與A506、N225與V550、N225與S556、N225與T564、N225與D590、N225與A649、N225與K705、N225與L712、A304與T323、A304與F349、A304與G357、A304與P383、A304與Q487、A304與A506、A304與V550、A304與S556、A304與T564、A304與D590、A304與A649、A304與K705、A304與L712、T323與F349、T323與G357、T323與P383、T323與Q487、T323與A506、T323與V550、T323與S556、T323與T564、T323與D590、T323與A649、T323與K705、T323與L712、F349與G357、F349與P383、F349與Q487、F349與A506、F349與V550、F349與S556、F349與T564、F349與D590、F349與A649、F349與K705、F349與L712、G357與P383、G357與Q487、G357與A506、G357與V550、G357與S556、G357與T564、G357與D590、G357與A649、G357與K705、G357與L712、P383與Q487、P383與A506、P383與V550、P383與S556、P383與T564、P383與D590、P383與A649、P383與K705、P383與L712、Q487與A506、Q487與V550、Q487與S556、Q487與T564、Q487與D590、Q487與A649、Q487與K705、Q487與L712、A506與V550、A506與S556、A506與T564、A506與D590、A506與A649、A506與K705、A506與L712、V550與S556、V550與T564、V550與D590、V550與A649、V550與K705、V550與L712、S556與T564、S556與D590、S556與A649、S556與K705、S556與L712、T564與D590、T564與A649、T564與K705、T564與L712、D590與A649、D590與K705、D590與L712、A649與L712、A649與K705，以及K705與L712。

於第一方面之第二十七具體實施例中，其也是該第一方面之第二十六具體實施例的一具體實施例，該對二個胺基酸位置係選自由下列所組成之群組：10與114、10與220、10與383、10與506、10與705、10與712、114與118、114與220、114與225、114與304、114與225、114與349、114與357、114與383、114與487、114與506、114與550、114與556、114與564、114與590、114與649、114與705、114與712、118與225、118與304、118與323、118與349、118與357、118與383、118與487、118與550、118與556、118與564、118與590、118與649、118與712、220與383、220與506、220與705、220與712、225與304、225與323、225與349、225與357、225與383、225與487、225與550、225與556、225與564、225與590、225與649、225與712、304與323、304與349、304與357、304與383、304與487、304與550、304與556、304與564、304與590、304與649、304與712、323與349、323與357、323與383、323與487、323與550、323與556、323與564、323與590、323與649、323與712、349與357、349與383、349與487、349與550、349與556、349與564、349與590、349與649、349與712、357與383、357與487、357與550、357與556、357與564、357與590、357與649、357與705、357與712、383與487、383與506、383與550、383與556、383與564、383與590、383與649、383與705、383與712、487與550、487與556、487與564、487與590、487與649、487與712、506與705、506與712、550與556、550與564、550與590、550與649、550與712、556與564、556與590、556與649、556與712、564與590、564與649、564與712、590與649、590與712、649與712、705與712，且較佳地該對二個胺基酸位置係選自由下列所組成之群組：V10與L114、V10與Y220、V10與P383、V10與A506、V10與K705、V10與L712、L114與I118、L114與Y220、L114與N225、L114與A304、L114與T323、L114與F349、L114與G357、L114與P383、L114與Q487、L114與A506、L114與V550、L114與S556、L114與T564、L114與D590、L114與A649、L114與K705、L114與L712、I118與N225、I118與A304、I118與T323、I118與F349、I118與G357、I118與P383、I118與Q487、I118與V550、I118與S556、I118與T564、I118與D590、118與A649、I118與L712、Y220與P383、Y220與A506、Y220與K705、Y220與L712、N225與A304、N225與T323、N225與F349、N225與G357、N225與P383、N225與Q487、N225與V550、N225與S556、N225與T564、N225與D590、N225與A649、N225與L712、A304與T323、A304與F349、A304與G357、A304與P383、A304與Q487、A304與V550、A304與S556、A304與T564、A304與D590、A304與A649、A304與L712、T323與F349、T323與G357、T323與P383、T323與Q487、T323與V550、T323與S556、T323與T564、T323與D590、T323與A649、T323與L712、F349與G357、F349與P383、F349與Q487、F349與V550、F349與S556、F349與T564、F349與D590、F349與A649、F349與L712、G357與P383、G357與Q487、G357與V550、G357與S556、G357與T564、G357與D590、G357與A649、G357與K705、G357與L712、P383與Q487、P383與A506、P383與V550、P383與S556、P383與T564、P383與D590、P383與A649、P383與K705、P383與L712、Q487與V550、Q487與S556、Q487與T564、Q487與D590、Q487與A649、Q487與L712、A506與K705、A506與L712、V550與S556、V550與T564、V550與D590、V550與A649、V550與L712、S556與T564、S556與D590、S556與A649、S556與L712、T564與D590、T564與A649、T564與L712、D590與A649、D590與L712、A649與L712、K705與L712。

於第一方面之第二十八具體實施例中，其也是該第一方面之第二十七具體實施例的一具體實施例，該對二個胺基酸位置係選自由下列所組成之群組：10與114、10與712、114與118、114與304、114與357、114與383、114與590、114與712、118與304、118與357、118與383、118與556、118與564、118與590、118與712、225與304、225與383、225與487、225與550、225與556、225與590、304與323、304與357、304與383、304與487、304與556、304與564、304與590、304與712、323與357、323與487、323與556、323與564、323與590、323與649、349與383、349與590、357與383、357與590、357與705、357與712、383與487、383與550、383與556、383與564、383與590、383與649、383與712、487與564、487與590、487與649、550與590、556與564、556與590、556與649、564與590、564與712、590與649、590與712、and 649與712，且較佳地該對二個胺基酸位置係選自由下列所組成之群組：V10與L114、V10與L712、L114與I118、L114與A304、L114與G357、L114與P383、L114與D590、L114與L712、I118與A304、I118與G357、I118與P383、I118與S556、I118與T564、I118與D590、I118與L712、N225與A304、N225與P383、N225與Q487、N225與V550、N225與S556、N225與D590、A304與T323、A304與G357、A304與P383、A304與Q487、A304與S556、A304與T564、A304與D590、A304與L712、T323與G357、T323與Q487、T323與S556、T323與T564、T323與D590、T323與A649、F349與P383、F349與D590、G357與P383、G357與D590、G357與K705、G357與L712、P383與Q487、P383與V550、P383與S556、P383與T564、P383與D590、P383與A649、P383與L712、Q487與T564、Q487與D590、Q487與A649、V550與D590、S556與T564、S556與D590、S556與A649、T564與D590、T564與L712、D590與A649、D590與L712，以及A649與L712。

於第一方面之第二十九具體實施例中，其也是該第一方面之第二十八具體實施例的一具體實施例，該對二個胺基酸位置係選自由下列所組成之群組：114與118、114與304、114與357、114與383、114與590、114與712、118與304、118與357、118與383、118與556、118與564、118與590、118與712、225與304、225與383、225與487、225與550、225與556、225與590、304與323、304與357、304與383、304與487、304與556、304與564、304與590、304與712、323與357、323與487、323與556、323與564、323與590、323與649、349與383、349與590、357與383、357與590、357與705、357與712、383與487、383與550、383與556、383與564、383與590、383與649、383與712、487與564、487與590、487與649、550與590、556與564、556與590、556與649、564與590、564與712、590與649、590與712，以及649與712，且較佳地該對二個胺基酸位置係選自由下列所組成之群組：L114與I118、L114與A304、L114與G357、L114與P383、L114與D590、L114與L712、I118與A304、I118與G357、I118與P383、I118與S556、I118與T564、I118與D590、I118與L712、N225與A304、N225與P383、N225與Q487、N225與V550、N225與S556、N225與D590、A304與T323、A304與G357、A304與P383、A304與Q487、A304與S556、A304與T564、A304與D590、A304與L712、T323與G357、T323與Q487、T323與S556、T323與T564、T323與D590、T323與A649、F349與P383、F349與D590、G357與P383、G357與D590、G357與K705、G357與L712、P383與Q487、P383與V550、P383與S556、P383與T564、P383與D590、P383與A649、P383與L712、Q487與T564、Q487與D590、Q487與A649、V550與D590、S556與T564、S556與D590、S556與A649、T564與D590、T564與L712、D590與A649、D590與L712，以及A649與L712。

於第一方面之另一較佳具體實施例中，其也是該第一方面之任何其他的前述具體實施例的一具體實施例，該對二個胺基酸位置係選自由下列所組成之群組：114與118、114與304、114與357、114與383、114與590、114與712、118與304、118與357、118與383、118與556、118與564、118與590、118與712、225與304、225與383、225與487、225與550、225與556、225與590、304與323、304與357、304與383、304與487、304與556、304與564、304與590、304與712、323與357、323與487、323與556、323與564、323與590、349與383、349與590、357與383、357與590、357與705、357與712、383與487、383與550、383與556、383與564、383與590、383與712、487與564、487與590、550與590、556與564、556與590、564與590、564與712，以及590與712，且較佳地該對二個胺基酸位置係選自由下列所組成之群組：L114與I118、L114與A304、L114與G357、L114與P383、L114與D590、L114與L712、I118與A304、I118與G357、I118與P383、I118與S556、I118與T564、I118與D590、I118與L712、N225與A304、N225與P383、N225與Q487、N225與V550、N225與S556、N225與D590、A304與T323、A304與G357、A304與P383、A304與Q487、A304與S556、A304與T564、A304與D590、A304與L712、T323與G357、T323與Q487、T323與S556、T323與T564、T323與D590、F349與P383、F349與D590、G357與P383、G357與D590、G357與K705、G357與L712、P383與Q487、P383與V550、P383與S556、P383與T564、P383與D590、P383與L712、Q487與T564、Q487與D590、V550與D590、S556與T564、S556與D590、T564與D590、T564與L712，以及D590與L712。

於第一方面之第三十具體實施例中，其也是該第一方面之第二十九具體實施例的一具體實施例，該對二個胺基酸位置係選自由下列所組成之群組：118與383、118與556、118與564、118與590、225與304、225與383、225與487、225與550、225與556、225與590、304與323、304與383、304與487、304與556、304與564、304與590、323與357、323與487、323與556、323與564、323與590、323與649、349與383、349與590、357與383、357與590、383與487、383與550、383與556、383與564、383與590、383與649、383與712、487與564、487與590、487與649、550與590、556與564、556與590、556與649、564與590、564與712、590與649、590與712、649與712，以及705與712，且較佳地該對二個胺基酸位置係選自由下列所組成之群組：I118與P383、I118與S556、I118與T564、I118與D590、N225與A304、N225與P383、N225與Q487、N225與V550、N225與S556、N225與D590、A304與T323、A304與P383、A304與Q487、A304與S556、A304與T564、A304與D590、T323與G357、T323與Q487、T323與S556、T323與T564、T323與D590、T323與A649、F349與P383、F349與D590、G357與P383、G357與D590、P383與Q487、P383與V550、P383與S556、P383與T564、P383與D590、P383與A649、P383與L712、Q487與T564、Q487與D590、Q487與A649、V550與D590、S556與T564、S556與D590、S556與A649、T564與D590、T564與L712、D590與A649、D590與L712、A649與L712，以及K705與L712。

於第一方面之另一較佳具體實施例中，其也是該第一方面之任何其他的前述具體實施例的一具體實施例，該對二個胺基酸位置係選自由下列所組成之群組：118與383、118與556、118與564、118與590、225與304、225與383、225與487、225與550、225與556、225與590、304與323、304與383、304與487、304與556、304與564、304與590、323與357、323與487、323與556、323與564、323與590、349與383、349與590、357與383、357與590、383與487、383與550、383與556、383與564、383與590、383與712、487與564、487與590、550與590、556與564、556與590、564與590、564與712、590與712，以及705與712且較佳地該對二個胺基酸位置係選自由下列所組成之群組：I118與P383、I118與S556、I118與T564、I118與D590、N225與A304、N225與P383、N225與Q487、N225與V550、N225與S556、N225與D590、A304與T323、A304與P383、A304與Q487、A304與S556、A304與T564、A304與D590、T323與G357、T323與Q487、T323與S556、T323與T564、T323與D590、F349與P383、F349與D590、G357與P383、G357與D590、P383與Q487、P383與V550、P383與S556、P383與T564、P383與D590、P383與L712、Q487與T564、Q487與D590、V550與D590、S556與T564、S556與D590、T564與D590、T564與L712、D590與L712，以及K705與L712。

於第一方面之第三十一具體實施例中，其也是該第一方面之第二十九具體實施例的一具體實施例，該對二個胺基酸位置係選自由下列所組成之群組：114與118、114與383、114與712、118與383、118與556、118與590、118與712、225與304、225與383、225與550、225與590、304與383、304與556、304與590、323與556、323與590、323與649、349與383、349與590、357與383、357與590、383與487、383與550、383與556、383與564、383與590、383與649、 383與712、556與564、556與590、564與590、564與712、590與649，以及590與712，且較佳地該對二個胺基酸位置係選自由下列所組成之群組：L114與I118、L114與P383、L114與L712、I118與P383、I118與S556、I118與D590、I118與L712、N225與A304、N225與P383、N225與V550、N225與D590、A304與P383、A304與S556、A304與D590、T323與S556、T323與D590、T323與A649、F349與P383、F349與D590、G357與P383、G357與D590、P383與Q487、P383與V550、P383與S556、P383與T564、P383與D590、P383與A649、 P383與L712、S556與T564、S556與D590、T564與D590、T564與L712、D590與A649，以及D590與L712。

於第一方面之另一較佳具體實施例中，其也是該第一方面之任何其他的前述具體實施例的一具體實施例，該對二個胺基酸位置係選自由下列所組成之群組：114與118、114與383、114與712、118與383、118與556、118與590、118與712、225與304、225與383、225與550、225與590、304與383、304與556、304與590、323與556、323與590、349與383、349與590、357與383、357與590、383與487、383與550、383與556、383與564、383與590、 383與712、556與564、556與590、564與590、564與712，以及590與712且較佳地該對二個胺基酸位置係選自由下列所組成之群組：L114與I118、L114與P383、L114與L712、I118與P383、I118與S556、I118與D590、I118與L712、N225與A304、N225與P383、N225與V550、N225與D590、A304與P383、A304與S556、A304與D590、T323與S556、T323與D590、F349與P383、F349與D590、G357與P383、G357與D590、P383與Q487、P383與V550、P383與S556、P383與T564、P383與D590、 P383與L712、S556與T564、S556與D590、T564與D590、T564與L712，以及D590與L712。

於第一方面之第三十二具體實施例中，其也是該第一方面之第二十九具體實施例的一具體實施例，該對二個胺基酸位置係選自由下列所組成之群組：114與118、114與304、114與357、114與383、114與590、114與712、118與304、118與357、118與383、118與556、118與590、118與712、225與383、304與357、304與383、304與590、304與712、323與590、349與383、349與590、357與383、357與590、357與705、357與712、383與487、383與550、383與556、383與564、383與590、383與649、383與712、556與590、564與590、590與649，以及590與712，且較佳地該對二個胺基酸位置係選自由下列所組成之群組：L114與I118、L114與A304、L114與G357、L114與P383、L114與D590、L114與L712、I118與A304、I118與G357、I118與P383、I118與S556、I118與D590、I118與L712、N225與P383、A304與G357、A304與P383、A304與D590、A304與L712、T323與D590、F349與P383、F349與D590、G357與P383、G357與D590、G357與K705、G357與L712、P383與Q487、P383與V550、P383與S556、P383與T564、P383與D590、P383與A649、P383與L712、S556與D590、T564與D590、D590與A649，以及D590與L712。

於第一方面之另一較佳具體實施例中，其也是該第一方面之任何其他的前述具體實施例的一具體實施例，該對二個胺基酸位置係選自由下列所組成之群組：114與118、114與304、114與357、114與383、114與590、114與712、118與304、118與357、118與383、118與556、118與590、118與712、225與383、304與357、304與383、304與590、304與712、323與590、349與383、349與590、357與383、357與590、357與705、357與712、383與487、383與550、383與556、383與564、383與590、383與712、556與590、564與590，以及590與712，且較佳地該對二個胺基酸位置係選自由下列所組成之群組：L114與I118、L114與A304、L114與G357、L114與P383、L114與D590、L114與L712、I118與A304、I118與G357、I118與P383、I118與S556、I118與D590、I118與L712、N225與P383、A304與G357、A304與P383、A304與D590、A304與L712、T323與D590、F349與P383、F349與D590、G357與P383、G357與D590、G357與K705、G357與L712、P383與Q487、P383與V550、P383與S556、P383與T564、P383與D590、P383與L712、S556與D590、T564與D590，以及D590與L712。

於第一方面之另一較佳具體實施例中，其也是該第一方面之任何其他的前述具體實施例的一具體實施例，該對二個胺基酸位置係選自由下列所組成之群組：118與383、118與590、225與383、225與590、304與383、304與590、323與590、349與383、349與590、357與383、357與590、383與487、383與550、383與556、383與564、383與590、383與649、383與712、487與590、550與590、556與590、564與590、590與649、590與712，且較佳地該對二個胺基酸位置係選自由下列所組成之群組：I118與P383、I118與D590、N225與P383、N225與D590、A304與P383、A304與D590、T323與D590、F349與P383、F349與D590、G357與P383、G357與D590、P383與Q487、P383與V550、P383與S556、P383與T564、P383與D590、P383與A649、P383與L712、Q487與D590、V550與D590、S556與D590、T564與D590、D590與A649、D590與L712。

於第一方面之第三十三具體實施例中，其也是該第一方面之第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、第二十三、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第三十、第三十一及第三十二具體實施例或前述的任何其他的一具體實施例，較佳為第一方面之第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第三十、第三十一及第三十二實施例或前述的任何其他的具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列在至少一個或多個另外的胺基酸位置上包含一胺基酸取代，其中該一個或多個另外的胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：712、383、10、114、118、192、197、220、225、304、306、318、323、339、349、357、459、476、481、484、487、488、506、511、526、530、532、533、537、550、556、564、590、649、667、703以及705，較佳地，除了在二個胺基酸位置處的取代之外，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列在至少一個或多個另外的胺基酸位置處包含一胺基酸取代，其中該一個或多個另外的胺基酸位置係獨立且各別選自胺基酸位置選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組712、383、10、114、118、192、197、220、225、304、306、318、323、339、349、357、459、476、481、484、487、488、506、511、526、530、532、533、537、550、556、564、590、649、667、703以及705。

於第一方面之第三十四具體實施例中，其也是該第一方面之第三十三具體實施例的一具體實施例，該一個或多個另外的胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 1之胺基酸位置所組成之群組：L712、P383、V10、L114、I118、S192、S197、Y220、N225、A304、D306、P318、T323、L339、F349、G357、A459、Q476、E481、A484、Q487、K488、A506、A511、R526、E530、G532、D533、D537、V550、S556、T564、D590、A649、R667、A703與K705，較佳地該一個或多個另外的胺基酸位置係獨立並各別地選自由下列SEQ ID NO: 1之胺基酸位置所組成之群組：L712、P383、V10、L114、I118、S192、S197、Y220、N225、A304、D306、P318、T323、L339、F349、G357、A459、Q476、E481、A484、Q487、K488、A506、A511、R526、E530、G532、D533、D537、V550、S556、T564、D590、A649、R667、A703以及K705。

於第一方面之第三十五具體實施例中，其也是該第一方面之第三十三具體實施例的一具體實施例，該一個或多個另外的胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 1之胺基酸位置所組成之群組：712、383、10、114、118、220、225、304、318、323、349、357、481、487、488、506、511、550、556、564、590、649、703以及705，較佳地該一個或多個另外的胺基酸位置係獨立並各別地選自由下列SEQ ID NO: 1之胺基酸位置所組成之群組：712、383、10、114、118、220、225、304、318、323、349、357、481、487、488、506、511、550、556、564、590、649、703以及705。

於第一方面之第三十六具體實施例中，其也是該第一方面之第三十五具體實施例的一具體實施例，該一個或多個另外的胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 1之胺基酸位置所組成之群組：L712、P383、V10、L114、I118、Y220、N225、A304、P318、T323、F349、G357、E481、Q487、K488、A506、A511、V550、S556、T564、D590、A649、A703以及K705，較佳地該一個或多個另外的胺基酸位置係獨立並各別地選自由下列SEQ ID NO: 1之胺基酸位置所組成之群組：L712、P383、V10、L114、I118、Y220、N225、A304、P318、T323、F349、G357、E481、Q487、K488、A506、A511、V550、S556、T564、D590、A649、A703以及K705。

於第一方面之第三十七具體實施例中，其也是該第一方面之第三十三具體實施例的一具體實施例，該一個或多個另外的胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 1之胺基酸位置所組成之群組：712、383、10、114、118、225、304、323、349、357、487、550、556、564、590以及649，較佳地該一個或多個另外的胺基酸位置係獨立並各別地選自由下列SEQ ID NO: 1之胺基酸位置所組成之群組：712、383、10、114、118、225、304、323、349、357、487、550、556、564、590以及649。

於第一方面之第三十八具體實施例中，其也是該第一方面之第三十七具體實施例的一具體實施例，該一個或多個另外的胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 1之胺基酸位置所組成之群組：L712、P383、V10、L114、I118、N225、A304、T323、F349、G357、Q487、V550、S556、T564、D590以及A649，較佳地該一個或多個另外的胺基酸位置係獨立並各別地選自由下列SEQ ID NO: 1之胺基酸位置所組成之群組：L712、P383、V10、L114、I118、N225、A304、T323、F349、G357、Q487、V550、S556、T564、D590以及A649。

於第一方面之第三十九具體實施例中，其也是該第一方面之第三十三具體實施例的一具體實施例，該一個或多個另外的胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 1之胺基酸位置所組成之群組：712、383、114、118、225、304、323、349、357、487、550、556、564、590以及649，較佳地該一個或多個另外的胺基酸位置係獨立並各別地選自由下列SEQ ID NO: 1之胺基酸位置所組成之群組：712、383、114、118、225、304、323、349、357、487、550、556、564、590以及649。

於第一方面之第四十具體實施例中，其也是該第一方面之第三十九具體實施例的一具體實施例，該一個或多個另外的胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 1之胺基酸位置所組成之群組：L712、P383、L114、I118、N225、A304、T323、F349、G357、Q487、V550、S556、T564、D590以及A649，較佳地該一個或多個另外的胺基酸位置係獨立並各別地選自由下列SEQ ID NO: 1之胺基酸位置所組成之群組：L712、P383、L114、I118、N225、A304、T323、F349、G357、Q487、V550、S556、T564、D590以及A649。

於第一方面之第四十一具體實施例中，其也是該第一方面之第三十三具體實施例的一具體實施例，該一個或多個另外的胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 1之胺基酸位置所組成之群組：712、383、114、118、225、304、357、487、556，以及590，較佳地該一個或多個另外的胺基酸位置係獨立並各別地選自由下列SEQ ID NO: 1之胺基酸位置所組成之群組：712、383、114、118、225、304、357、487、556，以及590。

於第一方面之第四十二具體實施例中，其也是該第一方面之第四十一具體實施例的一具體實施例，該一個或多個另外的胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 1之胺基酸位置所組成之群組：L712、P383、L114、I118、N225、A304、G357、Q487、S556，以及D590，較佳地該一個或多個另外的胺基酸位置係獨立並各別地選自由下列SEQ ID NO: 1之胺基酸位置所組成之群組：L712、P383、L114、I118、N225、A304、G357、Q487、S556，以及D590。

於第一方面之另一較佳具體實施例中，其也是第一方面的任何其他前述具體實施例之一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列包含在SEQ ID NO: 1的胺基酸位置383，以及590處的一胺基酸取代，較佳為在SEQ ID NO: 1的胺基酸位置P383，以及D590處，且其中該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列在SEQ ID NO: 1的下列胺基酸位置處包含進一步的胺基酸取代 (i) 114、118、304、357，以及712、較佳為L114、I118、A304、G357，以及L712，或 (ii) 114、118、304、357、550、556，以及712、較佳為L114、I118、A304、G357、V550、S556，以及L712，或 (iii) 114、118、225、304、357、487、564，以及712、較佳為L114、I118、N225、A304、G357、Q487、T564，以及L712，或 (iv) 114、118、304、323、357、550、564，以及712、較佳為L114、I118、A304、T323、G357、V550、T564，以及L712，或 (v) 114、118、225、304、323、357、487，以及712、較佳為L114、I118、N225、A304、T323、G357、Q487，以及L712，或 (vi) 114、118、225、304、357、487、550、556，以及712、較佳為L114、I118、N225、A304、G357、Q487、V550、S556，以及L712，或 (vii) 114、118、225、304、357、487、550、564，以及712、較佳為L114、I118、N225、A304、G357、Q487、V550、T564，以及L712，或 (viii) 114、118、225、304、357、550、556、564，以及712、較佳為L114、I118、N225、A304、G357、V550、S556、T564，以及L712，或 (ix) 114、118、225、304、357、550、564，以及712、較佳為L114、I118、N225、A304、G357、V550、T564，以及L712，或 (x) 114、118、304、323、357、550、556、564，以及712、較佳為L114、I118、A304、T323、G357、V550、S556、T564，以及L712，或 (xi) 114、118、304、323、357、487、550、649，以及712、較佳為L114、I118、A304、T323、G357、Q487、V550、A649，以及L712，或 (xii) 114、118、225、304、357、487、550、556、564，以及712、較佳為L114、I118、N225、A304、G357、Q487、V550、S556、T564，以及L712，或 (xiii) 114、118、225、304、357、550、556、564、649，以及712、較佳為L114、I118、N225、A304、G357、V550、S556、T564、A649，以及L712，或 (xiv) 114、118、225、304、323、357、487、550、564，以及712、較佳為L114、I118、N225、A304、T323、G357、Q487、V550、T564，以及L712，或 (xv) 114、118、225、304、323、357、487、550、649，以及712、較佳為L114、I118、N225、A304、T323、G357、Q487、V550、A649，以及L712，或 (xvi) 114、118、225、304、323、357、487、550、556，以及712、較佳為L114、I118、N225、A304、T323、G357、Q487、V550、S556，以及L712，或 (xvii) 114、118、225、304、323、357、550、556、564，以及712、較佳為L114、I118、N225、A304、T323、G357、V550、S556、T564，以及L712，或 (xviii) 114、118、304、323、349、357、487、550、649，以及712、較佳為L114、I118、A304、T323、F349、G357、Q487、V550、A649，以及L712，或 (xix) 114、118、304、323、357、487、550、556、564，以及712、較佳為L114、I118、A304、T323、G357、Q487、V550、S556、T564，以及L712，或 (xx) 114、118、304、357、487、550、556、564、649，以及712、較佳為L114、I118、A304、G357、Q487、V550、S556、T564、A649，以及L712，或 (xxi) 114、118、225、304、323、349、357、550、556、649，以及712、較佳為L114、I118、N225、A304、T323、F349、G357、V550、S556、A649，以及L712，或 (xxii) 114、118、225、304、323、357、487、550、556、649，以及712、較佳為L114、I118、N225、A304、T323、G357、Q487、V550、S556、A649，以及L712，或 (xxiii) 114、118、225、304、349、357、487、550、556、564，以及712、較佳為L114、I118、N225、A304、F349、G357、Q487、V550、S556、T564，以及L712，或 (xxiv) 114、118、225、304、349、357、487、550、564、649，以及712、較佳為L114、I118、N225、A304、F349、G357、Q487、V550、T564、A649，以及L712，或 (xxv) 114、118、225、304、323、349、357、487、550、556、564、649，以及712、較佳為L114、I118、N225、A304、T323、F349、G357、Q487、V550、S556、T564、A649，以及L712，或 (xxvi) 114、118、225、304、357、487、550、556、564、649，以及712、較佳為L114、I118、N225、A304、G357、Q487、V550、S556、T564、A649，以及L712，或 (xxvii) 114、118、304、323、357、487、550、556、564、649，以及712、較佳為L114、I118、A304、T323、G357、Q487、V550、S556、T564、A649，以及L712，或 (xxviii) 114、118、225、304、323、357、487、550、556、564、649，以及712、較佳為L114、I118、N225、A304、T323、G357、Q487、V550、S556、T564、A649，以及L712，或 (xxix) 114、118、225、304、323、349、357、487、550、556、564、649，以及712、較佳為L114、I118、N225、A304、T323、F349、G357、Q487、V550、S556、T564、A649，以及L712，或 (xxx) 114、225、304、323、357、487、550、556、564、649，以及712、較佳為L114、N225、A304、T323、G357、Q487、V550、S556、T564、A649，以及L712，或 (xxxi) 114、118、225、323、357、487、550、556、564、649，以及712、較佳為L114、I118、N225、T323、G357、Q487、V550、S556、T564、A649，以及L712，或 (xxxii) 114、118、225、304、323、349、487、550、556、564、649，以及712、較佳為L114、I118、N225、A304、T323、F349、Q487、V550、S556、T564、A649，以及L712，或 (xxxiii) 114、118、225、304、323、349、357、487、550、556、564，以及649、較佳為L114、I118、N225、A304、T323、F349、G357、Q487、V550、S556、T564，以及A649.

於第一方面之另一較佳具體實施例，其也是第一方面的任何其他前述具體實施例之一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列在選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組處包含一個或多個另外的胺基酸取代：712、10、114、118、192、197、220、225、304、306、318、323、339、349、357、459、476、481、484、487、488、506、511、526、530、532、533、537、550、556、564、649、667、703以及705，較佳係選自由下列SEQ ID NO: 1的位置所組成之群組：L712、V10、L114、I118、S192、S197、Y220、N225、A304、D306、P318、T323、L339、F349、G357、A459、Q476、E481、A484、Q487、K488、A506、A511、R526、E530、G532、D533、D537、V550、S556、T564、A649、R667、A703以及K705。

於第一方面之另一較佳具體實施例，其也是第一方面的任何其他前述具體實施例之一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列在SEQ ID NO: 1的三個胺基酸位置處包含一胺基酸取代，較佳在SEQ ID NO: 1的四個胺基酸位置處，更佳在SEQ ID NO: 1的五個胺基酸位置處，且最佳在SEQ ID NO: 1的六個胺基酸位置處，其中SEQ ID NO: 1的每個及任何胺基酸位置係選自由712、383、114、118、225、304、357、487、556，以及590組成之群組。

於第一方面之另一較佳具體實施例，其也是第一方面的任何其他前述具體實施例之一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列在SEQ ID NO: 1的三個胺基酸位置處包含一胺基酸取代，較佳在SEQ ID NO: 1的四個胺基酸位置處，更佳在SEQ ID NO: 1的五個胺基酸位置處，且最佳在SEQ ID NO: 1的六個胺基酸位置處，其中SEQ ID NO: 1的每個及任何胺基酸位置係選自由L712、P383、L114、I118、N225、A304、G357、Q487、S556，以及D590組成之群組。

於第一方面之第四十三具體實施例中，其也是該第一方面之第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、第二十三、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第三十、第三十一、第三十二、第三十三、第三十四、第三十五、第三十六、第三十七、第三十八、第三十九、第四十、第四十一及第四十二具體實施例或前述的任何其他的一具體實施例，較佳為第一方面之第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第三十、第三十一、第三十二、第三十三、第三十四、第三十五、第三十六、第三十七、第三十八、第三十九、第四十、第四十一及第四十二實施例或前述的任何其他的具體實施例，更佳為第一方面之第二十九、第三十、第三十一、第三十二、第三十三、第三十四、第三十五、第三十六、第三十七、第三十八、第三十九、第四十、第四十一及第四十二實施例或前述的任何其他的具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列在SEQ ID NO: 1的三個胺基酸位置處包含一胺基酸取代，較佳在SEQ ID NO: 1的四個胺基酸位置處，更佳在SEQ ID NO: 1的五個胺基酸位置處，且最佳在SEQ ID NO: 1的六個胺基酸位置處，其中SEQ ID NO: 1的每個及任何胺基酸位置係選自由712、383、114、118、304以及357組成之群組。

於第一方面之第四十四具體實施例中，其也是該第一方面之第四十三具體實施例之一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列在SEQ ID NO: 1的三個胺基酸位置處包含一胺基酸取代，較佳在SEQ ID NO: 1的四個胺基酸位置處，更佳在SEQ ID NO: 1的五個胺基酸位置處，且最佳在SEQ ID NO: 1的六個胺基酸位置處，其中SEQ ID NO: 1的每個及任何胺基酸位置係選自由L712、P383、L114、I118、A304以及G357組成之群組。

於第一方面之第四十五具體實施例中，其也是該第一方面之第四十三及第四十四具體實施例之一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列在SEQ ID NO: 1的四個胺基酸位置處包含一胺基酸取代，其中SEQ ID NO: 1的每個及任何胺基酸位置係選自由712、383、114、118、304以及357組成之群組。

於第一方面之第四十六具體實施例中，其也是該第一方面之第四十三及第四十四具體實施例之一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列在SEQ ID NO: 1的四個胺基酸位置處包含一胺基酸取代，其中SEQ ID NO: 1的每個及任何胺基酸位置係選自由L712、P383、L114、I118、A304以及G357組成之群組。

於第一方面之第四十七具體實施例中，其也是該第一方面之第四十三、第四十四、第四十五及第四十六具體實施例之一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列在SEQ ID NO: 1的五個胺基酸位置處包含一胺基酸取代，其中SEQ ID NO: 1的每個及任何胺基酸位置係選自由712、383、114、118、304以及357組成之群組。

於第一方面之第四十八具體實施例中，其也是該第一方面之第四十三、第四十四、第四十五及第四十六具體實施例之一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列在SEQ ID NO: 1的五個胺基酸位置處包含一胺基酸取代，其中SEQ ID NO: 1的每個及任何胺基酸位置係選自由L712、P383、L114、I118、A304以及G357組成之群組。

於第一方面之第四十九具體實施例中，其也是該第一方面之第四十三、第四十四、第四十五、第四十六、第四十七及第四十八具體實施例之一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列在SEQ ID NO: 1的六個胺基酸位置處包含一胺基酸取代，其中SEQ ID NO: 1的每個及任何胺基酸位置係選自由712、383、114、118、304以及357組成之群組。

於第一方面之第五十具體實施例中，其也是該第一方面之第四十三、第四十四、第四十五、第四十六、第四十七及第四十八具體實施例之一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列在SEQ ID NO: 1的六個胺基酸位置處包含一胺基酸取代，其中SEQ ID NO: 1的每個及任何胺基酸位置係選自由L712、P383、L114、I118、A304以及G357組成之群組。

於第一方面之另一較佳具體實施例，其也是第一方面的任何其他前述具體實施例之一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列在SEQ ID NO: 1的三個胺基酸位置處包含一胺基酸取代，較佳在SEQ ID NO: 1的四個胺基酸位置處，更佳在SEQ ID NO: 1的五個胺基酸位置處，且最佳在SEQ ID NO: 1的六個胺基酸位置處，其中SEQ ID NO: 1的每個及任何胺基酸位置係選自由712、383、118、225、304、349、357、487、556、564，以及590組成之群組。

於第一方面之另一較佳具體實施例，其也是第一方面的任何其他前述具體實施例之一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列在SEQ ID NO: 1的三個胺基酸位置處包含一胺基酸取代，較佳在SEQ ID NO: 1的四個胺基酸位置處，更佳在SEQ ID NO: 1的五個胺基酸位置處，且最佳在SEQ ID NO: 1的六個胺基酸位置處，其中SEQ ID NO: 1的每個及任何胺基酸位置係選自由712、383、225、304、349、556，以及590組成之群組。

於第一方面之另一較佳具體實施例，其也是第一方面的任何其他前述具體實施例之一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列在SEQ ID NO: 1的三個胺基酸位置處包含一胺基酸取代，較佳在SEQ ID NO: 1的四個胺基酸位置處，更佳在SEQ ID NO: 1的五個胺基酸位置處，其中SEQ ID NO: 1的每個及任何胺基酸位置係選自由383、225、304、556，以及590組成之群組。

於第一方面之另一較佳具體實施例，其也是第一方面的任何其他前述具體實施例之一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列在SEQ ID NO: 1的三個胺基酸位置處包含一胺基酸取代，其中SEQ ID NO: 1的每個及任何胺基酸位置係選自由383、556，以及590組成之群組。

於第一方面之另一較佳具體實施例，其也是第一方面的任何其他前述具體實施例之一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列在SEQ ID NO: 1的三個胺基酸位置處包含一胺基酸取代，較佳在SEQ ID NO: 1的四個胺基酸位置處，更佳在SEQ ID NO: 1的五個胺基酸位置處，且最佳在SEQ ID NO: 1的六個胺基酸位置處，其中SEQ ID NO: 1的每個及任何胺基酸位置係選自由L712、P383、I118、N225、A304、F349、G357、Q487、S556、T564，以及D590組成之群組。

於第一方面之第五十一具體實施例中，其也是該第一方面之第三十三、第三十四、第三十五、第三十六、第三十七、第三十八、第三十九、第四十、第四十一、第四十二、第四十三、第四十四、第四十五、第四十六、第四十七、第四十八、第四十九、第五十具體實施例或前述的任何其他的一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列包含 (a) 一胺基酸取代，係在SEQ ID NO: 1的四個胺基酸位置712、383、114與118，及/或SEQ ID NO: 1的位置383、487、556，以及590，及/或SEQ ID NO: 1的位置 383、225、556，以及590；或 (b) 一胺基酸取代，係在SEQ ID NO: 1的五個胺基酸位置712、383、114、118與304，及/或SEQ ID NO: 1的位置712、383、114、118與357，及/或SEQ ID NO: 1的位置383、225、304、556，以及590，及/或SEQ ID NO: 1的位置383、225、487、556，以及590；或 (c) 一胺基酸取代，係在SEQ ID NO: 1的六個胺基酸位置712、383、114、118、304與357，及/或SEQ ID NO: 1的位置383、225、304、487、556，以及590；或 (d) 一胺基酸取代，係在SEQ ID NO: 1的三個胺基酸位置383、556，以及590。

於第一方面之第五十二具體實施例中，其也是該第一方面之第三十三、第三十四、第三十五、第三十六、第三十七、第三十八、第三十九、第四十、第四十一、第四十二、第四十三、第四十四、第四十五、第四十六、第四十七、第四十八、第四十九、第五十具體實施例或前述的任何其他的一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列包含 (a) 一胺基酸取代，係在SEQ ID NO: 1的四個胺基酸位置712、383、114與118，及/或SEQ ID NO: 1的位置383、487、556，以及590，及/或SEQ ID NO: 1的位置 383、225、556，以及590，且較佳為在SEQ ID NO: 1的四個胺基酸位置L712、P383、L114與I118，及/或SEQ ID NO: 1的位置P383、Q487、S556，以及D590，及/或SEQ ID NO: 1的位置P383、N225、S556，以及D590；或 (b) 一胺基酸取代，係在SEQ ID NO: 1的五個胺基酸位置712、383、114、I118與304，及/或SEQ ID NO: 1的位置712、383、114、118與357，及/或SEQ ID NO: 1的位置383、225、304、556，以及590，及/或SEQ ID NO: 1的位置383、225、487、556，以及590，且較佳為在SEQ ID NO: 1的五個胺基酸位置L712、P383、L114、I118與A304，及/或SEQ ID NO: 1的位置L712、P383、L114、I118與G357，及/或SEQ ID NO: 1的位置P383、N225、A304、S556，以及D590，及/或SEQ ID NO: 1的位置P383、N225、Q487、S556，以及D590；或 (c) 一胺基酸取代，係在SEQ ID NO: 1的六個胺基酸位置712、383、114、118、304與357，及/或SEQ ID NO: 1的位置383、225、304、487、556，以及590，且較佳為在SEQ ID NO: 1的六個胺基酸位置L712、P383、L114、I118、A304與G357，及/或SEQ ID NO: 1的位置P383、N225、A304、Q487、S556，以及D590；或 (d) 一胺基酸取代，係在SEQ ID NO: 1的三個胺基酸位置383、556，以及590，且較佳為在SEQ ID NO: 1的三個胺基酸位置P383、S556，以及D590。

於第一方面之第五十三具體實施例中，其也是該第一方面之第四十三、第四十四、第四十五、第四十六、第四十七、第四十八、第四十九、第五十、第五十一及第五十二具體實施例或前述的任何其他的一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列包含如SEQ ID NO: 14所示之胺基酸序列。

於第一方面之第五十四具體實施例中，其也是該第一方面之第四十三、第四十四、第四十五、第四十六、第四十七、第四十八、第四十九、第五十、第五十一及第五十二具體實施例或前述的任何其他的一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列由如SEQ ID NO: 14所示之胺基酸序列組成。

於第一方面之另一較佳具體實施例中，其也是第一方面的任何其他前述具體實施例之一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列在一個或多個另外的胺基酸位置處包含一胺基酸取代，其中該一個或多個另外的胺基酸位置係獨立且各別地選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：10、114、118、192、197、220、225、304、306、318、323、339、349、357、383、459、476、481、484、487、488、506、511、526、530、532、 533、537、550、556、564、590、649、667、703、705以及712。

於第一方面之另一較佳具體實施例中，其也是第一方面的任何其他前述具體實施例之一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列在一個或多個另外的胺基酸位置處包含一胺基酸取代，其中該一個或多個另外的胺基酸位置係獨立且各別地選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：V10、L114、I118、S192、S197、Y220、N225、A304、D306、P318、T323、L339、F349、G357、A459、Q476、E481、A484、Q487、K488、A506、A511、R526、E530、G532、D533、D537、V550、S556、T564、D590、A649、R667、A703、K705，以及L712。

於第一方面之第五十五具體實施例中，其也是該第一方面之第四十三、第四十四、第四十五、第四十六、第四十七、第四十八、第四十九、第五十、第五十一、第五十二、第五十三及第五十四具體實施例或前述的任何其他的一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列在一個或多個另外的胺基酸位置上包含一胺基酸取代，其中該一個或多個另外的胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：10、192、197、220、225、304、306、318、323、339、349、357、459、476、481、484、487、488、506、511、526、530、532、 533、537、550、556、564、590、649、667、703以及705，較佳地該一個或多個另外的胺基酸位置係獨立且各別地選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：10、192、197、220、225、304、306、318、323、339、349、357、459、476、481、484、487、488、506、511、526、530、532、 533、537、550、556、564、590、649、667、703以及705。

於第一方面之第五十六具體實施例中，其也是該第一方面之第五十五具體實施例之一具體實施例，該一個或多個另外的胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：V10、S192、S197、Y220、N225、A304、D306、P318、T323、L339、F349、G357、A459、Q476、E481、A484、Q487、K488、A506、A511、R526、E530、G532、D533、D537、V550、S556、T564、D590、A649、R667、A703以及K705，較佳地該一個或多個另外的胺基酸位置係獨立且各別地選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：V10、S192、S197、Y220、N225、A304、D306、P318、T323、L339、F349、G357、A459、Q476、E481、A484、Q487、K488、A506、A511、R526、E530、G532、D533、D537、V550、S556、T564、D590、A649、R667、A703以及K705。

於第一方面之第五十七具體實施例中，其也是該第一方面之第五十五具體實施例之一具體實施例，該一個或多個另外的胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：10、220、225、304、318、323、349、357、481、487、488、506、511、550、556、564、590、649、703以及705，較佳地該一個或多個另外的胺基酸位置係獨立且各別地選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：10、220、225、304、318、323、349、357、481、487、488、506、511、550、556、564、590、649、703以及705。

於第一方面之第五十八具體實施例中，其也是該第一方面之第五十七具體實施例之一具體實施例，該一個或多個另外的胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：V10、Y220、N225、A304、P318、T323、F349、G357、E481、Q487、K488、A506、A511、V550、S556、T564、D590、A649、A703以及K705，較佳地該一個或多個另外的胺基酸位置係獨立且各別地選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：V10、Y220、N225、A304、P318、T323、F349、G357、E481、Q487、K488、A506、A511、V550、S556、T564、D590、A649、A703以及K705。

於第一方面之第五十九具體實施例中，其也是該第一方面之第五十五具體實施例之一具體實施例，該一個或多個另外的胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：10、225、304、323、349、357、487、550、556、564、590以及649，較佳地該一個或多個另外的胺基酸位置係獨立且各別地選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：10、225、304、323、349、357、487、550、556、564、590以及649。

於第一方面之第六十具體實施例中，其也是該第一方面之第五十九具體實施例之一具體實施例，該一個或多個另外的胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：V10、N225、A304、T323、F349、G357、Q487、V550、S556、T564、D590以及A649，較佳地該一個或多個另外的胺基酸位置係獨立且各別地選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：V10、N225、A304、T323、F349、G357、Q487、V550、S556、T564、D590以及A649。

於第一方面之第六十一具體實施例中，其也是該第一方面之第五十五具體實施例之一具體實施例，該一個或多個另外的胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：225、304、323、349、357、487、550、556、564、590以及649，較佳地該一個或多個另外的胺基酸位置係獨立且各別地選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：225、304、323、349、357、487、550、556、564、590以及649。

於第一方面之第六十二具體實施例中，其也是該第一方面之第六十一具體實施例之一具體實施例，該一個或多個另外的胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：N225、A304、T323、F349、G357、Q487、V550、S556、T564、D590以及A649，較佳地該一個或多個另外的胺基酸位置係獨立且各別地選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：N225、A304、T323、F349、G357、Q487、V550、S556、T564、D590以及A649。

於第一方面之第六十三具體實施例中，其也是該第一方面之第五十五具體實施例之一具體實施例，該一個或多個另外的胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：304、357以及590，較佳地該一個或多個另外的胺基酸位置係獨立且各別地選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：304、357以及590。

於第一方面之第六十四具體實施例中，其也是該第一方面之第六十三具體實施例之一具體實施例，該一個或多個另外的胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：A304、G357以及D590，較佳地該一個或多個另外的胺基酸位置係獨立且各別地選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：A304、G357以及D590。

於第一方面之第六十五具體實施例中，其也是該第一方面之第五十五、第五十六、第五十七、第五十八、第五十九、第六十、第六十一、第六十二、第六十三及第六十四具體實施例或前述的任何其他的一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列包含如SEQ ID NO: 44所示之一胺基酸序列。

於第一方面之第六十六具體實施例中，其也是該第一方面之第六十五具體實施例之一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列係由如SEQ ID NO: 44所示之一胺基酸序列所組成。

於第一方面之另一較佳具體實施例中，其也是第一方面的任何其他前述具體實施例之一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列在一個或多個另外的胺基酸位置上包含一胺基酸取代，其中該一個或多個另外的胺基酸位置係各別並獨立地選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：10、114、118、192、197、220、225、304、306、318、323、339、349、357、383、459、476、481、484、487、488、506、511、526、530、532、 533、537、550、556、564、590、649、667、703、705以及712。

於第一方面之另一較佳具體實施例中，其也是第一方面的任何其他前述具體實施例之一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列在一個或多個另外的胺基酸位置上包含一胺基酸取代，其中該一個或多個另外的胺基酸位置係各別並獨立地選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：V10、L114、I118、S192、S197、Y220、N225、A304、D306、P318、T323、L339、F349、G357、A459、Q476、E481、A484、Q487、K488、A506、A511、R526、E530、G532、D533、D537、V550、S556、T564、D590、A649、R667、A703、K705，以及L712。

於第一方面之第六十五具體實施例中，其也是該第一方面之第五十五、第五十六、第五十七、第五十八、第五十九、第六十、第六十一、第六十二、第六十三及第六十四具體實施例或前述的任何其他的一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列在一個或多個另外的胺基酸位置上包含一胺基酸取代，其中該一個或多個另外的胺基酸位置係各別並獨立地選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：10、192、197、220、225、306、318、323、339、349、459、476、481、484、487、488、506、511、526、530、532、533、537、550、556、564、649、667、703以及705，較佳地該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列在一個或多個更進一步的胺基酸位置上包含一胺基酸取代，其中該一個或多個更進一步的胺基酸位置係各別並獨立地選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：10、192、197、220、225、306、318、323、339、349、459、476、481、484、487、488、506、511、526、530、532、533、537、550、556、564、649、667、703以及705。

於第一方面之第六十八具體實施例中，其也是該第一方面之第六十七具體實施例之一具體實施例，該一個或多個更進一步的胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：V10、S192、S197、Y220、N225、D306、P318、T323、L339、F349、A459、Q476、E481、A484、Q487、K488、A506、A511、R526、E530、G532、D533、D537、V550、S556、T564、A649、R667、A703以及K705，較佳地該一個或多個更進一步的胺基酸位置係各別並獨立地選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：V10、S192、S197、Y220、N225、D306、P318、T323、L339、F349、A459、Q476、E481、A484、Q487、K488、A506、A511、R526、E530、G532、D533、D537、V550、S556、T564、A649、R667、A703以及K705。

於第一方面之第六十九具體實施例中，其也是該第一方面之第六十七具體實施例之一具體實施例，該一個或多個更進一步的胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：10、 220、225、318、323、349、481、487、488、506、511、550、556、564、649、703以及705，較佳地該一個或多個更進一步的胺基酸位置係各別並獨立地選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：10、 220、225、318、323、349、481、487、488、506、511、550、556、564、649、703以及705。

於第一方面之第七十具體實施例中，其也是該第一方面之第六十九具體實施例之一具體實施例，該一個或多個更進一步的胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：V10、Y220、N225、P318、T323、F349、E481、Q487、K488、A506、A511、V550、S556、T564、A649、A703以及K705，較佳地該一個或多個更進一步的胺基酸位置係各別並獨立地選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：V10、Y220、N225、P318、T323、F349、E481、Q487、K488、A506、A511、V550、S556、T564、A649、A703以及K705。

於第一方面之第七十一具體實施例中，其也是該第一方面之第六十七具體實施例之一具體實施例，該一個或多個更進一步的胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：10、225、323、349、487、550、556、564以及649，較佳地該一個或多個更進一步的胺基酸位置係各別並獨立地選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：10、225、323、349、487、550、556、564以及649。

於第一方面之第七十二具體實施例中，其也是該第一方面之第七十一具體實施例之一具體實施例，該一個或多個更進一步的胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：V10、N225、T323、F349、Q487、V550、S556、T564以及A649，較佳地該一個或多個更進一步的胺基酸位置係各別並獨立地選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：V10、N225、T323、F349、Q487、V550、S556、T564以及A649。

於第一方面之第七十三具體實施例中，其也是該第一方面之第六十七具體實施例之一具體實施例，該一個或多個更進一步的胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：225、323、349、487、550、556、564以及649，較佳地該一個或多個更進一步的胺基酸位置係各別並獨立地選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：225、323、349、487、550、556、564以及649。

於第一方面之第七十四具體實施例中，其也是該第一方面之第七十三具體實施例之一具體實施例，該一個或多個更進一步的胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：N225、T323、F349、Q487、V550、S556、T564以及A649，較佳地該一個或多個更進一步的胺基酸位置係各別並獨立地選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：N225、T323、F349、Q487、V550、S556、T564以及A649。

於第一方面之第七十五具體實施例中，其也是該第一方面之第六十七、第六十八、第六十九、第七十、第七十一、第七十二、第七十三及第七十四具體實施例或前述的任何其他的一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列在SEQ ID NO: 1的胺基酸位置 處包含一胺基酸取代，較佳為在SEQ ID NO: 1的胺基酸位置 處，且該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列在下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置處包含另外的胺基酸取代： (i) 550與556、較佳為V550與S556，或 (ii) 225、487與564、較佳為N225、Q487與T564，或 (iii) 323、550與564、較佳為T323、V550與T564，或 (iv) 225、323與487、較佳為N225、T323與Q487，或 (v) 225、487、550與556、較佳為N225、Q487、V550與S556，或 (vi) 225、487、550與564、較佳為N225、Q487、V550與T564，或 (vii) 225、550、556與564、較佳為N225、V550、S556與T564，或 (viii) 225、550、564與649、較佳為N225、V550、T564、A649，或 (ix) 323、550、556與564、較佳為T323、V550、S556、T564，或 (x) 323、487、550與649、較佳為T323、Q487、V550與A649，或 (xii) 225、487、550、556與564、較佳為N225、Q487、V550、S556與T564，或 (xiii) 225、550、556、564與649、較佳為N225、V550、S556、T564與A649，或 (xiv) 225、323、487、550與564、較佳為N225、T323、Q487、V550、T564，或 (xv) 225、323、487、550與649、較佳為N225、T323、Q487、V550與A649，或 (xvi) 225、323、487、550與556、較佳為N225、T323、Q487、V550與S556，或 (xvii) 225、323、550、556、564、較佳為N225、T323、V550、S556、T564，或 (xviii) 323、349、487、550與649、較佳為T323、F349、Q487、V550與A649，或 (ixx) 323、487、550、556與564、較佳為T323、Q487、V550、S556與T564，或 (xx) 487、550、556、564與649、較佳為Q487、V550、S556、T564與A649，或 (xxi) 225、323、349、550、556與649、較佳為N225、T323、F349、V550、S556與A649，或 (xxii) 225、323、487、550、556、649、較佳為N225、T323、Q487、V550、S556與A649，或 (xxiiii) 225、349、487、550、556與564、較佳為N225、F349、Q487、V550、S556與T564、and/or (xxiv) 225、349、487、550、564與649、較佳為N225、F349、Q487、V550、T564、A649，或 (xxv) 225、487、550、556、564與649、較佳為N225、Q487、V550、S556、T564與A649，或 (xxvi) 323、487、550、556、564與649、較佳為T323、Q487、V550、S556、T564與A649，或 (xxvii) 225、323、487、550、556、564與649、較佳為N225、T323、Q487、V550、S556、T564與A649。

於第一方面之第七十六具體實施例中，其也是該第一方面之第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、第二十三、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第三十、第三十一、第三十二、第三十三、第三十四、第三十五、第三十六、第三十七、第三十八、第三十九、第四十、第四十一、第四十二、第四十三、第四十四、第四十五、第四十六、第四十七、第四十八、第四十九、第五十、第五十一、第五十二、第五十三、第五十四、第五十五、第五十六、第五十七、第五十八、第五十九、第六十、第六十一、第六十二、第六十三、第六十四、第六十五、第六十六、第六十七、第六十八、第六十九、第七十、第七十一、第七十二、第七十三、第七十四及第七十五具體實施例或前述的任何其他的一具體實施例，在該任何胺基酸位置的取代係選自由胺基酸A、R、N、D、C、Q、E、G、H、I、L、K、M、F、P、S、T、W、Y，以及V所組成之群組，較佳地在該任何胺基酸位置的取代係各別且獨立地選自由胺基酸A、R、N、D、C、Q、E、G、H、I、L、K、M、F、P、S、T、W、Y，以及V所組成之群組。

於第一方面之第七十七具體實施例中，其也是該第一方面之第七十六具體實施例之一具體實施例，該取代係位於任何下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置：712、383、10、114、118、192、197、220、225、304、306、318、323、339、349、357、459、476、481、484、487、488、506、511、526、530、532、533、537、550、556、564、590、649、667、703與705。

於第一方面之第七十八具體實施例中，其也是該第一方面之第七十七具體實施例之一具體實施例，該取代係位於任何下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置：L712、P383、V10、L114、I118、S192、S197、Y220、N225、A304、D306、P318、T323、L339、F349、G357、A459、Q476、E481、A484、Q487、K488、A506、A511、R526、E530、G532、D533、D537、V550、S556、T564、D590、A649、R667、A703與K705。

於第一方面之第七十九具體實施例中，其也是該第一方面之第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、第二十三、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第三十、第三十一、第三十二、第三十三、第三十四、第三十五、第三十六、第三十七、第三十八、第三十九、第四十、第四十一、第四十二、第四十三、第四十四、第四十五、第四十六、第四十七、第四十八、第四十九、第五十、第五十一、第五十二、第五十三、第五十四、第五十五、第五十六、第五十七、第五十八、第五十九、第六十、第六十一、第六十二、第六十三、第六十四、第六十五、第六十六、第六十七、第六十八、第六十九、第七十、第七十一、第七十二、第七十三、第七十四、第七十五、第七十六、第七十七及第七十八具體實施例或前述的任何其他的一具體實施例，較佳為該第一方面之第七十六、第七十七及第七十八具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列包含一個或多個取代，其中該取代係選自由下列所組成之群組： 在SEQ ID NO: 1的V10位置處的一個胺基酸取代，該取代為V10R、V10H或V10K，較佳為V10R； 在SEQ ID NO: 1的L114位置處的一個胺基酸取代，該取代為L114A、L114G、L114I、L114M、L114P或L114V，較佳為L114I； 在SEQ ID NO: 1的I118位置處的一個胺基酸取代，該取代為I118A、I118G、I118L、I118M、I118P或I118V，較佳為I118V； 在SEQ ID NO: 1的S192位置處的一個胺基酸取代，該取代為S192A、S192G、S192I、S192L、S192M、S192P或S192V，較佳為S192V； 在SEQ ID NO: 1的S197位置處的一個胺基酸取代，該取代為S197A、S197G、S197I、S197L、S197M、S197P或S197V，較佳為S197G； 在SEQ ID NO: 1的Y220位置處的一個胺基酸取代，該取代為Y220F或Y220W，較佳為Y220F； 在SEQ ID NO: 1的N225位置處的一個胺基酸取代，該取代為N225A、N225G、N225I、N225L、N225M、N225P或N225V，較佳為N225I、N225L、N225M或N225V，以及更佳為N225V； 在SEQ ID NO: 1的A304位置處的一個胺基酸取代，該取代為A304G、A304I、A304L、A304M、A304P或A304V，較佳為A304I或A304L，以及更佳為A304I； 在SEQ ID NO: 1的D306位置處的一個胺基酸取代，該取代為D306R、D306H或D306K，較佳為D306H； 在SEQ ID NO: 1的P318位置處的一個胺基酸取代，該取代為P318R、P318H或P318K，較佳為P318H； 在SEQ ID NO: 1的T323位置處的一個胺基酸取代，該取代為T323A、T323G、T323I、T323L、T323M、T323P，或T323V，較佳為T323I或T323V，以及更佳為T323I； 在SEQ ID NO: 1的L339位置處的一個胺基酸取代，該取代為L339A、L339G、L339I、L339L、L339M、L339P或L339V，較佳為L339I； 在SEQ ID NO: 1的F349位置處的一個胺基酸取代，該取代為F349W或F349Y，較佳為F349Y； 在SEQ ID NO: 1的G357位置處的一個胺基酸取代，該取代為G357A、G357I、G357L、G357M、G357P或G357V，較佳為G357A； 在SEQ ID NO: 1的P383位置處的一個胺基酸取代，該取代為P383A、P383G、P383I、P383L、P383M、P383V、P383N、P383C、P383Q、P383S或P383T，較佳為P383A、P383G、P383M、P383V、P383N、P383C、P383Q、P383S或P383T，更佳為P383G、P383V、P383C或P383S，或P383T，甚至更佳為P383V或P383T，以及最佳為P383V； 在SEQ ID NO: 1的A459位置處的一個胺基酸取代，該取代為A459N、A459C、A459Q或A459S、A459T，較佳為A459S； 在SEQ ID NO: 1的Q476位置處的一個胺基酸取代，該取代為Q476A、Q476G、Q476I、Q476L、Q476M、Q476P或Q476V，較佳為Q476G； 在SEQ ID NO: 1的E481位置處的一個胺基酸取代，該取代為E481A、E481G、E481I、E481L、E481M、E481P或E481V，較佳為E481I； 在SEQ ID NO: 1的A484位置處的一個胺基酸取代，該取代為A484N、A484C、A484Q、A484S或A484T，較佳為A484S； 在SEQ ID NO: 1的Q487位置處的一個胺基酸取代，該取代為Q487A、Q487G、Q487I、Q487L、Q487M、Q487P或Q487V，較佳為Q487A、Q487G、Q487L、Q487M或Q487V，更佳為Q487A； 在SEQ ID NO: 1的K488位置處的一個胺基酸取代，該取代為K488A、K488G、K488I、K488L、K488M、K488P或K488V，較佳為K488A； 在SEQ ID NO: 1的A506位置處的一個胺基酸取代，該取代為A506N、A506C、A506Q、A506S 或A506T，較佳為A506S； 在SEQ ID NO: 1的A511位置處的一個胺基酸取代，該取代為A511N、A511C、A511Q、A511S或A511T，較佳為A511S； 在SEQ ID NO: 1的R526位置處的一個胺基酸取代，該取代為R526D或R526E 較佳為R526E； 在SEQ ID NO: 1的E530位置處的一個胺基酸取代，該取代為E530A、E530G、E530I、E530L、E530M、E530P、E530V，較佳為E530V； 在SEQ ID NO: 1的G532位置處的一個胺基酸取代，該取代為G532R、G532H或G532K，較佳為G532R； 在SEQ ID NO: 1的D533位置處的一個胺基酸取代，該取代為D533A、D533G、D533I、D533L、D533M、D533P或D533V，較佳為D533G； 在SEQ ID NO: 1的D537位置處的一個胺基酸取代，該取代為D537A、D537G、D537I、D537L、D537M、D537P或D537V，較佳為D537M； 在SEQ ID NO: 1的V550位置處的一個胺基酸取代，該取代為V550A、V550G、V550I、V550L、V550M或V550P，較佳為V550I或V550P，以及更佳為V550I； 在SEQ ID NO: 1的S556位置處的一個胺基酸取代，該取代為S556N、S556C、S556Q或S556T，較佳為S556T； 在SEQ ID NO: 1的T564位置處的一個胺基酸取代，該取代為T564D或T564E，較佳為T564E； 在SEQ ID NO: 1的D590位置處的一個胺基酸取代，該取代為D590N、D590C、D590Q、D590S、D590T、D590A、D590G、D590I、D590L、D590M、D590P或D590V，較佳為D590N、D590G或D590A，以及更佳為D590N； 在SEQ ID NO: 1的A649位置處的一個胺基酸取代，該取代為A649D或A649E，較佳為A649E； 在SEQ ID NO: 1的R667位置處的一個胺基酸取代，該取代為R667D、R667E、R667R、R667H或R667K，較佳為R667E或R667K、更佳為R667E； 在SEQ ID NO: 1的A703位置處的一個胺基酸取代，該取代為A703D或A703E，較佳為A703E；以及 在SEQ ID NO: 1的K705位置處的一個胺基酸取代，該取代為K705N、K705C、K705Q、K705S或K705T，較佳為K705N； 在SEQ ID NO: 1的L712位置處的一個胺基酸取代，該取代為L712A、L712G、L712I、L712M、L712P或L712V，較佳為L712M。

於第一方面之另一較佳具體實施例中，其也是第一方面的任何其他前述具體實施例之一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶包含一個或多個取代，其中該取代係選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：L712M、P383G、P383V、P383C、P383S、P383T、V10R、L114I、I118V、S192V、S197G、Y220F、N225I、N225L、N225M、N225V、A304L、A304I、D306H、P318H、T323I、T323V、L339I、F349Y、G357A、A459S、Q476G、E481I、A484S、487A、Q487G、Q487L、Q487M、Q487V、K488A、A506S、A511S、R526E、E530V、G532R、D533G、D537M、V550I、V550P、S556T、T564E、D590N、D590G、D590A、A649E、R667E、R667K、A703E，以及K705N，較佳地選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：P383G、P383V、P383C、P383S、P383T、V10R、L114I、S192V、S197G、N225I、N225L、N225M、N225V、A304L、A304I、D306H、P318H、T323I、T323V、L339I、F349Y、G357A、A459S、Q476G、E481I、A484SQ487G、Q487L、Q487M、Q487V、K488A、A506S、A511S、R526E、E530V、G532R、D533G、D537M、V550I、V550P、S556T、T564E、D590G、D590A、A649E、R667E、R667K、A703E，以及K705N。

於第一方面之第八十具體實施例中，其也是該第一方面之第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、第二十三、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第三十、第三十一、第三十二、第三十三、第三十四、第三十五、第三十六、第三十七、第三十八、第三十九、第四十、第四十一、第四十二、第四十三、第四十四、第四十五、第四十六、第四十七、第四十八、第四十九、第五十、第五十一、第五十二、第五十三、第五十四、第五十五、第五十六、第五十七、第五十八、第五十九、第六十、第六十一、第六十二、第六十三、第六十四、第六十五、第六十六、第六十七、第六十八、第六十九、第七十、第七十一、第七十二、第七十三、第七十四、第七十五、第七十六、第七十七、第七十八及第七十九具體實施例或前述的任何其他的一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列與SEQ ID NO: 1的胺基酸序列具至少81%、或至少82%、或至少83%、或至少84%、或至少85%、仍然更佳為至少86%、或至少87%、或至少88%、或至少89%、或至少90%、甚至更佳為至少91%、或至少92%、或至少93%、或至少94%、或至少95%、以及最佳為至少96%、或至少97%、或至少98%、或至少99%、至少99.1%、或至少99.2%、或至少99.3%、或至少99.4%、或至少99.5%、或至少99.6%、或至少99.7%、或至少99.8%、以及尤其是至少99.9%，或100%的同一性。

於第一方面之第八十一具體實施例中，其也是該第一方面之第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、第二十三、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第三十、第三十一、第三十二、第三十三、第三十四、第三十五、第三十六、第三十七、第三十八、第三十九、第四十、第四十一、第四十二、第四十三、第四十四、第四十五、第四十六、第四十七、第四十八、第四十九、第五十、第五十一、第五十二、第五十三、第五十四、第五十五、第五十六、第五十七、第五十八、第五十九、第六十、第六十一、第六十二、第六十三、第六十四、第六十五、第六十六、第六十七、第六十八、第六十九、第七十、第七十一、第七十二、第七十三、第七十四、第七十五、第七十六、第七十七、第七十八、第七十九及第八十具體實施例或前述的任何其他的一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列與SEQ ID NO: 2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159，或190的胺基酸序列具有至少85%的同一性。

於第一方面之第八十二具體實施例中，其也是該第一方面之第八十一具體實施例的一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列與SEQ ID NO: 2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、87、88、89、91、93、94、95、97、98、101、103、104、105、107、109、110、111、113、114、115、117、119、121、123、125、128、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、146、147、149、150、151、152、154、155、156、157、158、159，或190的胺基酸序列具有至少85%的同一性。

於第一方面之另一較佳具體實施例中，其也是第一方面的任何其他前述具體實施例之一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列與SEQ ID NO: 11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、155、156、157，或190的胺基酸序列具有至少85%的同一性。

於第一方面之第八十三具體實施例中，其也是該第一方面之第八十二具體實施例的一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列與SEQ ID NO: 3、7、9、10、12、13、15、20、29、44、45、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、98、104、110、113、115、121、125、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、147、152、154、155、156、157、158、159，或190的胺基酸序列具有至少85%的同一性。

於第一方面之另一較佳具體實施例中，其也是第一方面的任何其他前述具體實施例之一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列與SEQ ID NO: 44、45、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79，或190的胺基酸序列具有至少85%的同一性。

於第一方面之第八十四具體實施例中，其也是該第一方面之第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、第二十三、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第三十、第三十一、第三十二、第三十三、第三十四、第三十五、第三十六、第三十七、第三十八、第三十九、第四十、第四十一、第四十二、第四十三、第四十四、第四十五、第四十六、第四十七、第四十八、第四十九、第五十、第五十一、第五十二、第五十三、第五十四、第五十五、第五十六、第五十七、第五十八、第五十九、第六十、第六十一、第六十二、第六十三、第六十四、第六十五、第六十六、第六十七、第六十八、第六十九、第七十、第七十一、第七十二、第七十三、第七十四、第七十五、第七十六、第七十七、第七十八、第七十九、第八十、第八十一、第八十二及第八十三具體實施例或前述的任何其他的一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列與SEQ ID NO: 2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78 79、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159，或190的二個或多個胺基酸序列具有至少85%的同一性。

於第一方面之第八十五具體實施例中，其也是該第一方面之第八十四具體實施例的一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列與SEQ ID NO: 2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、87、88、89、91、93、94、95、97、98、101、103、104、105、107、109、110、111、113、114、115、117、119、121、123、125、128、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、146、147、149、150、151、152、154、155、156、157、158、159，或190 的二個或多個胺基酸序列具有至少85%的同一性。

於第一方面之另一較佳具體實施例中，其也是第一方面的任何其他前述具體實施例的一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列與SEQ ID NO: 11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、155、156、157，或190的二個或多個胺基酸序列具有至少85%的同一性。

於第一方面之第八十六具體實施例中，其也是該第一方面之第八十五具體實施例的一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列與SEQ ID NO: 3、7、9、10、12、13、15、20、29、44、45、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、98、104、110、113、115、121、125、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、147、152、154、155、156、157、158、159，或190的二個或多個胺基酸序列具有至少85%的同一性。

於第一方面之另一較佳具體實施例中，其也是第一方面的任何其他前述具體實施例之一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列與SEQ ID NO: 44、45、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79，或190的二個或多個胺基酸序列具有至少85%的同一性。

於第一方面之第八十七具體實施例中，其也是該第一方面之第八十、第八十一、第八十二、第八十三、第八十四、第八十五及第八十六具體實施例或前述的任何其他的一具體實施例，該胺基酸序列的同一性為至少86%、或至少87%、或至少88%、或至少89%、或至少90%、更佳為至少91%、或至少92%、或至少93%、或至少94%、或至少95%、以及最佳為至少96%、或至少97%、或至少98%、或至少99%、至少99.1%、或至少99.2%、或至少99.3%、或至少99.4%、或至少99.5%、或至少99.6%、或至少99.7%、或至少99.8%、以及尤其至少99.9%，或100%。

於第一方面之第八十八具體實施例中，其也是該第一方面之第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、第二十三、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第三十、第三十一、第三十二、第三十三、第三十四、第三十五、第三十六、第三十七、第三十八、第三十九、第四十、第四十一、第四十二、第四十三、第四十四、第四十五、第四十六、第四十七、第四十八、第四十九、第五十、第五十一、第五十二、第五十三、第五十四、第五十五、第五十六、第五十七、第五十八、第五十九、第六十、第六十一、第六十二、第六十三、第六十四、第六十五、第六十六、第六十七、第六十八、第六十九、第七十、第七十一、第七十二、第七十三、第七十四、第七十五、第七十六、第七十七、第七十八、第七十九、第八十、第八十一、第八十二、第八十三、第八十四、第八十五、第八十六及第八十七具體實施例或前述的任何其他的一具體實施例，較佳為該第一方面之第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、第二十三、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第三十、第三十一、第三十二、第三十三、第三十四、第三十五、第三十六、第三十七、第三十八、第三十九、第四十、第四十一、第四十二、第四十三、第四十四、第四十五、第四十六、第四十七、第四十八、第四十九、第五十、第五十一、第五十二、第五十三、第五十四、第五十五、第五十六、第五十七、第五十八、第五十九、第六十、第六十一、第六十二、第六十三、第六十四、第六十五、第六十六、第六十七、第六十八、第六十九、第七十、第七十一、第七十二、第七十三、第七十四、第七十五、第七十六、第七十七、第七十八及第七十九具體實施例或前述的任何其他的一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列與SEQ ID NO: 1的胺基酸序列具有至少81%、或至少82%、或至少83%、或至少84%、或至少85%、仍然更佳為至少86%、或至少87%、或至少88%、或至少89%、或至少90%、更佳為至少91%、或至少92%、或至少93%、或至少94%、或至少95%、以及最佳為至少96%、或至少97%、或至少98%、或至少99%、至少99.1%、或至少99.2%、或至少99.3%、或至少99.4%、或至少99.5%、或至少99.6%、或至少99.7%、或至少99.8%、以及尤其至少99.9%，或100%的同源性。

於第一方面之第八十九具體實施例中，其也是該第一方面之第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、第二十三、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第三十、第三十一、第三十二、第三十三、第三十四、第三十五、第三十六、第三十七、第三十八、第三十九、第四十、第四十一、第四十二、第四十三、第四十四、第四十五、第四十六、第四十七、第四十八、第四十九、第五十、第五十一、第五十二、第五十三、第五十四、第五十五、第五十六、第五十七、第五十八、第五十九、第六十、第六十一、第六十二、第六十三、第六十四、第六十五、第六十六、第六十七、第六十八、第六十九、第七十、第七十一、第七十二、第七十三、第七十四、第七十五、第七十六、第七十七、第七十八、第七十九、第八十、第八十一、第八十二、第八十三、第八十四、第八十五、第八十六、第八十七及第八十八具體實施例或前述的任何其他的一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列與SEQ ID NO: 2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158，或159的胺基酸序列具有至少85%的同源性。

於第一方面之第九十具體實施例中，其也是該第一方面之第八十九具體實施例的一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列與SEQ ID NO: 2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、87、88、89、91、93、94、95、97、98、101、103、104、105、107、109、110、111、113、114、115、117、119、121、123、125、128、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、146、147、149、150、151、152、154、155、156、157、158、159，或190的胺基酸序列具有至少85%的同源性。

於第一方面之另一較佳具體實施例中，其也是第一方面的任何其他前述具體實施例之一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列與SEQ ID NO: 11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、155、156、157，或190的胺基酸序列具有至少85%的同源性。

於第一方面之第九十一具體實施例中，其也是該第一方面之第九十具體實施例的一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列與SEQ ID NO: 3、7、9、10、12、13、15、20、29、44、45、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、98、104、110、113、115、121、125、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、147、152、154、155、156、157、158、159，或190的胺基酸序列具有至少85%的同源性。

於第一方面之另一較佳具體實施例中，其也是第一方面的任何其他前述具體實施例之一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列與SEQ ID NO: 44、45、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79，或190的胺基酸序列具有至少85%的同源性。

於第一方面之第九十二具體實施例中，其也是該第一方面之第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、第二十三、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第三十、第三十一、第三十二、第三十三、第三十四、第三十五、第三十六、第三十七、第三十八、第三十九、第四十、第四十一、第四十二、第四十三、第四十四、第四十五、第四十六、第四十七、第四十八、第四十九、第五十、第五十一、第五十二、第五十三、第五十四、第五十五、第五十六、第五十七、第五十八、第五十九、第六十、第六十一、第六十二、第六十三、第六十四、第六十五、第六十六、第六十七、第六十八、第六十九、第七十、第七十一、第七十二、第七十三、第七十四、第七十五、第七十六、第七十七、第七十八、第七十九、第八十、第八十一、第八十二、第八十三、第八十四、第八十五、第八十六、第八十七、第八十八、第八十九、第九十及第九十一具體實施例或前述的任何其他的一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列與SEQ ID NO: 2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78 79、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159，或190的二個或多個胺基酸序列具有至少85%的同源性。

於第一方面之第九十三具體實施例中，其也是該第一方面之第九十二具體實施例的一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列與SEQ ID NO: 2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、87、88、89、91、93、94、95、97、98、101、103、104、105、107、109、110、111、113、114、115、117、119、121、123、125、128、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、146、147、149、150、151、152、154、155、156、157、158、159，或190的二個或多個胺基酸序列具有至少85%的同源性。

於第一方面之另一較佳具體實施例中，其也是第一方面的任何其他前述具體實施例之一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列與SEQ ID NO: 11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、155、156、157，或190的二個或多個胺基酸序列具有至少85%的同源性。

於第一方面之第九十四具體實施例中，其也是該第一方面之第九十三具體實施例的一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列與SEQ ID NO: 3、7、9、10、12、13、15、20、29、44、45、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、98、104、110、113、115、121、125、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、147、152、154、155、156、157、158、159，或190的二個或多個胺基酸序列具有至少85%的同一性。

於第一方面之另一較佳具體實施例中，其也是第一方面的任何其他前述具體實施例之一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列與SEQ ID NO: 44、45、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79，或190的二個或多個胺基酸序列具有至少85%的同一性。

於第一方面之第九十五具體實施例中，其也是該第一方面之第八十八、第八十九、第九十、第九十一、第九十二、第九十三及第九十四具體實施例或前述的任何其他的一具體實施例，該胺基酸序列的同源性為至少86%、或至少87%、或至少88%、或至少89%、或至少90%、更佳至少91%、或至少92%、或至少93%、或至少94%、或至少95%、最佳至少96%、或至少97%、或至少98%、或至少99%、至少99.1%或至少99.2% 或者至少99.3%、或者至少99.4%、或者至少99.5%、或者至少99.6%、或者至少99.7%、或者至少99.8%，並且尤其是至少99.9%或者100%。

於第一方面之第九十六具體實施例中，其也是該第一方面之第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、第二十三、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第三十、第三十一、第三十二、第三十三、第三十四、第三十五、第三十六、第三十七、第三十八、第三十九、第四十、第四十一、第四十二、第四十三、第四十四、第四十五、第四十六、第四十七、第四十八、第四十九、第五十、第五十一、第五十二、第五十三、第五十四、第五十五、第五十六、第五十七、第五十八、第五十九、第六十、第六十一、第六十二、第六十三、第六十四、第六十五、第六十六、第六十七、第六十八、第六十九、第七十、第七十一、第七十二、第七十三、第七十四、第七十五、第七十六、第七十七、第七十八、第七十九、第八十、第八十一、第八十二、第八十三、第八十四、第八十五、第八十六、第八十七、第八十八、第八十九、第九十、第九十一、第九十二、第九十三、第九十四及第九十五具體實施例或前述的任何其他的一具體實施例，本發明之基礎問題透過一多胜肽，較佳為一多胜肽，來解決，其中該多胜肽包含如SEQ ID NO: 2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159，或190所示之一胺基酸序列。於一較佳具體實施例中，該多胜肽為一海藻糖磷酸化酶。無論何時在本公開中，其係指該第一方面及其任何具體實施例之多胜肽及海藻糖磷酸化酶，這樣的第一方面包括其任何的子方面，包括其任何之具體實施例。

於第一方面之第九十七具體實施例中，其也是該第一方面之第九十六具體實施例的一具體實施例，該多胜肽包含或由如下列所示之一胺基酸序列組成：2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、87、88、89、91、93、94、95、97、98、101、103、104、105、107、109、110、111、113、114、115、117、119、121、123、125、128、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、146、147、149、150、151、152、154、155、156、157、158、159，或190。

於第一方面之第九十八具體實施例中，其也是該第一方面之第九十七具體實施例的一具體實施例，該多胜肽，較佳為該海藻糖磷酸化酶，包含或由如下列所示之一胺基酸序列組成：3、7、9、10、12、13、15、20、29、44、45、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、98、104、110、113、115、121、125、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、147、152、154、155、156、157、158、159，或190。

於第一方面之第九十九具體實施例中，其也是該第一方面之第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、第二十三、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第三十、第三十一、第三十二、第三十三、第三十四、第三十五、第三十六、第三十七、第三十八、第三十九、第四十、第四十一、第四十二、第四十三、第四十四、第四十五、第四十六、第四十七、第四十八、第四十九、第五十、第五十一、第五十二、第五十三、第五十四、第五十五、第五十六、第五十七、第五十八、第五十九、第六十、第六十一、第六十二、第六十三、第六十四、第六十五、第六十六、第六十七、第六十八、第六十九、第七十、第七十一、第七十二、第七十三、第七十四、第七十五、第七十六、第七十七、第七十八、第七十九、第八十、第八十一、第八十二、第八十三、第八十四、第八十五、第八十六、第八十七、第八十八、第八十九、第九十、第九十一、第九十二、第九十三、第九十四、第九十五、第九十六、第九十七及第九十八具體實施例或前述的任何其他的一具體實施例，該多胜肽，較佳為該海藻糖磷酸化酶，能夠催化糖基單醣與α-D-葡萄糖-1磷酸鹽之反應。

於第一方面之第一百具體實施例中，其也是該第一方面之第九十九具體實施例的一具體實施例，該多胜肽，較佳為該海藻糖磷酸化酶，能夠催化 葡萄糖與α-D-葡萄糖-1磷酸鹽轉化為海藻糖與無機磷酸鹽 及/或 海藻糖與無機磷酸鹽轉化為葡萄糖與α-D-葡萄糖-1磷酸鹽。

於第一方面之第一百零一具體實施例中，其也是該第一方面之第九十九及第一百具體實施例的一具體實施例，該轉化為一可逆之轉化。

於第一方面之第一百零二具體實施例中，其也是該第一方面之第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、第二十三、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第三十、第三十一、第三十二、第三十三、第三十四、第三十五、第三十六、第三十七、第三十八、第三十九、第四十、第四十一、第四十二、第四十三、第四十四、第四十五、第四十六、第四十七、第四十八、第四十九、第五十、第五十一、第五十二、第五十三、第五十四、第五十五、第五十六、第五十七、第五十八、第五十九、第六十、第六十一、第六十二、第六十三、第六十四、第六十五、第六十六、第六十七、第六十八、第六十九、第七十、第七十一、第七十二、第七十三、第七十四、第七十五、第七十六、第七十七、第七十八、第七十九、第八十、第八十一、第八十二、第八十三、第八十四、第八十五、第八十六、第八十七、第八十八、第八十九、第九十、第九十一、第九十二、第九十三、第九十四、第九十五、第九十六、第九十七、第九十八、第九十九、第一百及第一百零一具體實施例或前述的任何其他的一具體實施例，該多胜肽，較佳為該海藻糖磷酸化酶，係為一如EC號為EC 2.4.1.231所示之海藻糖磷酸化酶。

於第一方面之第一百零三具體實施例中，其也是該第一方面之第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、第二十三、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第三十、第三十一、第三十二、第三十三、第三十四、第三十五、第三十六、第三十七、第三十八、第三十九、第四十、第四十一、第四十二、第四十三、第四十四、第四十五、第四十六、第四十七、第四十八、第四十九、第五十、第五十一、第五十二、第五十三、第五十四、第五十五、第五十六、第五十七、第五十八、第五十九、第六十、第六十一、第六十二、第六十三、第六十四、第六十五、第六十六、第六十七、第六十八、第六十九、第七十、第七十一、第七十二、第七十三、第七十四、第七十五、第七十六、第七十七、第七十八、第七十九、第八十、第八十一、第八十二、第八十三、第八十四、第八十五、第八十六、第八十七、第八十八、第八十九、第九十、第九十一、第九十二、第九十三、第九十四、第九十五、第九十六、第九十七、第九十八、第九十九、第一百、第一百零一及第一百零二具體實施例或前述的任何其他的一具體實施例，該多胜肽，較佳為該海藻糖磷酸化酶，具有特徵(A)、(B)、(C)、(D)與(E)中的至少一個，或其任何組合， 其中特徵(A)為於52°C作用15分鐘後的熱穩定性，由一具有以下百分比的殘餘活性所定義： i) 30%至90%，較佳為39%至90%，更佳為42%至90%，更佳為54%至90%，更佳為55%至90%，甚至更佳為63%至90%，甚至更佳為64%至90%，甚至更佳為68%至90%，最佳為64%至86%，及/或， ii) 30%至90%，較佳為31%至90%，較佳為32%至90%，較佳為33%至90%，較佳為34%至90%，較佳為35%至90%，較佳為36%至90%，較佳為37%至90%，較佳為38%至90%，較佳為39%至90%，更佳為40%至90%，更佳為41%至90%，較佳為42%至90%，更佳為43%至90%，更佳為44%至90%，更佳為45%至90%，更佳為46%至90%，更佳為47%至90%，更佳為48%至90%，更佳為49%至90%，進一步較佳為50%至90%，進一步較佳為51%至90%，進一步較佳為52%至90% ，甚至更佳為53%至90%，甚至更佳為54%至90%，甚至更佳為55%至90%，甚至更佳為60%至90%，甚至更佳為61%至90%，甚至更佳為65%至90%，甚至更佳為70%至90%，甚至更佳為75%至90%，且最佳為72%至81%，及/或 iii) 55%至100%，較佳為60%至100%，較佳為70%至100%，較佳為75%至100%，較佳為76%至100%，較佳為77%至100%，較佳為78%至100%，較佳為79%至100%，更佳為80%至100%，更佳為81%至100%，更佳為82%至100%，更佳為83%至100%，更佳為84%至100%，更佳為85%至100%，更佳為86%至100%，更佳為87%至100%，更佳為88%至100%，更佳為89至100%，進一步較佳為90%至100%，進一步較佳為91%至100%，進一步較佳為92%至100%，進一步較佳為93%至100%，進一步較佳為94%至100%，進一步較佳為95%至100%，進一步較佳為96%至100%，進一步較佳為97%至100%，進一步較佳為98%至100%，特別較佳為99%至100%，且最佳為100% 以及 其中特徵(B)為於52°C作用15分鐘後的熱穩定性，其特徵在於 i) 至少52°C的Tm30值，及/或 ii) 至少52°C的Tm50值； 以及 其中特徵(C)為以以下為特徵的熱穩定性 i) 一介於以下溫度之間的Tm30 值：52°C至90°C，較佳為52°C至80°C，較佳為52.5°C至80°C，較佳為53°C至80°C，較佳為53.5°C至80°C，更佳為54°C至80°C，較佳為54.5°C至80°C，甚至更佳為55°C至80°C，較佳為55.5°C 80°C，較佳為56°C至80°C，較佳為56.5°C至80°C，較佳為57°C至80°C，較佳為57.5°C至80°C，較佳為58°C至80°C，較佳為58.5°C至80°C，甚至更佳為52°C至70°C，甚至更佳為52.5°C至70°C，甚至更佳為53°C至70°C，甚至更佳為53.5°C至70°C，甚至更佳為54°C至70°C，甚至更佳為54.5°C至70°C，甚至更佳為55°C至70°C，甚至更佳為55.5°C至70°C，甚至更佳為56°C至70°C，更佳為56.5°C至70°C，甚至更佳為57°C至70°C，甚至更佳為57.5°C至70°C，甚至更佳為58°C至70°C，甚至更佳為58.5°C至70°C，甚至更佳為52°C至65°C，甚至更佳為52.5°C至65°C，甚至更佳為53°C至65°C，甚至更佳為53.5°C至65°C，甚至更佳為54°C至65°C，甚至更佳為54.5°C，甚至更佳為55°C至65°C，甚至更佳為55.5°C至65°C，甚至更佳為56°C至65°C，甚至更佳為56.5°C至65°C，甚至更佳為57°C至65°C，甚至更佳為57.5°C至65°C，甚至更佳為58°C至65°C，甚至更佳為58.5°C至65°C，甚至更佳為52°C至60°C，甚至更佳為52.5°C至60°C，甚至更佳為53°C至60°C，甚至更佳為53.5°C至60°C，甚至更佳為54°C至60°C，甚至更佳為54.5°C至60°C，甚至更佳為55°C至60°C，甚至更佳為55.5°C至60°C，甚至更佳為56°C至60°C，甚至更佳為56.5°C至60°C，甚至更佳為57°C至60°C，甚至更佳為57.5°C至60°C，甚至更佳為58°C至60°C，甚至更佳為58.5°C至60°C，最佳為53.5°C至58.5°C，及/或 ii) 一介於以下溫度之間的Tm50 值：52°C至90°C，較佳為52°C至80°C，較佳為52.5°C至80°C，較佳為53°C至80°C，較佳為53.5°C至80°C，更佳為54°C至80°C，較佳為54.5°C至80°C，甚至更佳為55°C至80°C，較佳為55.5°C至80°C，較佳為56°C至80°C，較佳為56.5°C至80°C，較佳為57°C至80°C，較佳為57.5°C至80°C，甚至更佳為52°C至70°C，甚至更佳為52.5°C至70°C，甚至更佳為53°C至70°C，甚至更佳為53.5°C至70°C，甚至更佳為54°C至70°C，甚至更佳為54.5°C至70°C，甚至更佳為55°C至70°C，甚至更佳為55.5°C至70°C，甚至更佳為56°C至70°C，甚至更佳為56.5°C至70°C，更佳為57°C至70°C，甚至更佳為57.5°C至70°C，甚至更佳為52°C至65°C，甚至更佳為52.5°C至70°C，更佳為53°C至65°C，甚至更佳為53.5°C至65°C，甚至更佳為54°C至65°C，甚至更佳為54.5°C至65°C，甚至更佳為55°C至65°C，甚至更佳為55.5°C至65°C，甚至更佳為56°C至65°C，甚至更佳56.5°C至65°C，甚至更佳57°C至65°C，甚至更佳57.5°C至65°C，甚至更佳52°C至60°C，甚至更佳為52.5°C至60°C，甚至更佳為53°C至60°C，甚至更佳為53.5°C至60°C，甚至更佳為54°C至60°C，甚至更佳為54.5°C至60°C，甚至更佳為55°C至60°C，甚至更佳為55.5°C至60°C，甚至更佳為56°C至60°C，甚至更佳為56.5°C至60°C，甚至更佳為57°C至60°C，甚至更佳為57.5°C至60°C，最佳為52°C至57.5°C 以及 其中特徵(D)為以以下為特徵的熱穩定性 i) 一製程穩定性 ，其特徵在於45°C的半衰期為3小時至9天或更多，較佳為24小時至9天或更多，較佳為39小時至9天或更多，較佳為2天至9天或更多，更佳為4天至9天或更多，更佳為5.5天至9天或更多，更佳為至少7天至9天或更多，更佳為至少9天或更多，且最佳為9天； ii) 一製程穩定性 ，其特徵在於45°C半衰期為24小時至9天或更多，更佳為39小時至9天或更多，更佳為2天至9天或更多，更佳為4天至9天或更多，更佳為5.5天至9天或更多，更佳為7天至9天或更多，甚至更佳為至少9天或更多，且最佳為9天； iii) 一製程穩定性 ，其特徵在於45°C半衰期為4天至9天或更多，較佳為5.5天至9天或更多，更佳為7天至9天或更多，甚至更佳為至少9天或更多，且最佳為9天； 以及 其中特徵(E)為以介於下列範圍之100/500-比率表示的相對活性 i) 0.65至1.0，較佳為0.7至1.0，較佳為0.75至1.0，較佳為0.8至1.0，較佳為0.85至1.0，較佳為0.9至1.0，較佳為0.95至1.0，以及更佳為至少0.7至1.0； ii) 0.65至1.0之間，較佳為0.7至1.0之間，較佳為0.75至1.0之間，較佳為0.8至1.0之間，較佳為0.85至1.0之間，較佳為0.9至1.0之間，較佳為0.95至1.0之間；且更佳為0.8至1.0之間； 其中該100/500-比率被定義為 [100 mM葡萄糖與100 mM α-葡萄糖-1磷酸鹽的海藻糖活性] / [500 mM葡萄糖與100 mM α-葡萄糖-1-磷酸鹽的海藻糖活性] 的比率。

於第一方面之第一百零四具體實施例中，其也是該第一方面之第一百零三具體實施例的一具體實施例，該多胜肽，較佳為該海藻糖磷酸化酶，於52°C作用15分鐘後具有熱穩定性，該熱穩定性由具有介於以下之間之百分比的殘餘活性所定義 30%至90%，較佳為39%至90%，更佳為42%至90%，更佳為54%至90%，更佳為55%至90%，且甚至更佳為63%至90%，甚至更佳為64%〜90%，甚至更佳為68%至90%，且最佳為64%至86%；及/或 30%至90%，較佳為31%至90%，較佳為32%至90%，較佳為33%至90%，較佳為34%至90%，較佳為35%至90%，較佳為36 %至90%，較佳為37%至90%，較佳為38%至90%，較佳為39%至90%，更佳為40%至90%，更佳為41%至90%，更佳為42%至90%，更佳為43%至90%，更佳為44%至90%，更佳為45%至90%，更佳為46%至90%，更佳為47%至90% ，更佳為48%至90%，更佳為49%至90%，甚至更佳為50%至90%，甚至更佳為51%至90%，甚至更佳為52%至90%，甚至更佳為53%至90%，甚至更佳為54%至90%，甚至更佳為55%至90%，甚至更佳為60%至90%，甚至更佳為61%至90%，甚至更佳為65%至90%，甚至更佳為70%至90%，甚至更佳為75%至90%，且最佳為72%至81%，及/或 55%至100%，較佳為60%至100%，較佳為70%至100%，較佳為75%至100%，較佳為76%至100%，較佳為77%至100%，較佳為78至100%，更佳為79至100%，更佳為80至100%，更佳為81至100%，更佳為82至100%，更佳為83至100% ，較佳為84%至100%，更佳為85%至100%，更佳為86%至100%，更佳為87%至100%，更佳為88%至100%，更佳為89%至100%，甚至更佳為90%至100%，甚至更佳為91%至100%，甚至更佳為92%至100%，甚至更佳為93%至100%，甚至更佳為94%至100%，甚至更佳為95%至100%，甚至更佳為96%至100%，甚至更佳為97%至100%，甚至更佳為98%至100%，甚至更佳為99%至100%，且最佳為100%。

於第一方面之第一百零五具體實施例中，其也是該第一方面之第一百零三及第一百零四具體實施例的一具體實施例，該多胜肽，較佳為該海藻糖磷酸化酶，具有由至少52°C的Tm30-值所定義之熱穩定性。

於第一方面之第一百零六具體實施例中，其也是該第一方面之第一百零三、第一百零四及第一百零五具體實施例的一具體實施例，該多胜肽，較佳為該海藻糖磷酸化酶，於45°C的半衰期為3小時至9天或更多，較佳為24小時至9天或更多，較佳為39小時至9天或更多，較佳為2天至9天或更多，更佳為4天至9天或更多，更佳為5.5天至9天或更多，更佳為7天至9天或更多，甚至更佳為至少9天或更多，最佳為9天。

於第一方面之第一百零七具體實施例中，其也是該第一方面之第一百零三、第一百零四、第一百零五及第一百零六具體實施例的一具體實施例，該多胜肽，較佳為該海藻糖磷酸化酶，具有相對活性，其表現為100/500比率在0.65至1.0之間，較佳為0.7至1.0之間，較佳為0.75至1.0之間，較佳為0.8至1.0之間，較佳為0.85至1.0之間，較佳為0.9至1.0之間，較佳為0.95至1.0之間，且更佳為0.7至1.0之間。

於第一方面之第一百零八具體實施例中，其也是該第一方面之第一百零三、第一百零四、第一百零五、第一百零六及第一百零七具體實施例的一具體實施例，其中該多胜肽為該第一方面之第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第三十、第三十三、第三十四、第四十一、第四十二、第四十三、第四十四、第四十五、第四十六、第五十五、第六十七、第六十八、第七十五、第七十六、第七十七、第七十八、第七十九、第八十、第八十一、第八十四、第八十八、第八十九、第九十二、第九十九、第一百及第一百零二具體實施例或前述的任何其他的一具體實施例之任何一個，較佳為該第一方面之第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第三十、第三十三、第五十五、第六十七、第六十八、第七十五、第七十六、第七十七、第七十八、第七十九、第八十、第八十一、第八十四、第八十八、第八十九、第九十二、第九十九、第一百及第一百零二具體實施例之任何一個。

於第一方面之第一百零九具體實施例中，其也是該第一方面之第一百零三具體實施例的一具體實施例，該多胜肽，較佳為該海藻糖磷酸化酶，於52°C作用15分鐘後具有熱穩定性，該熱穩定性係由介於以下範圍之間的殘餘活性所定義： 30%至90%，較佳為31%至90%，較佳為32%至90%，較佳為33%至90%，較佳為34%至90%，較佳為35%至90%，較佳為36 %至90%，較佳為37%至90%，較佳為38%至90%，較佳為39%至90%，更佳為40%至90%，更佳為41%至90%，更佳為42%至90%，更佳為43%至90%，更佳為44%至90%，更佳為45%至90%，更佳為46%至90%，更佳為47%至90% ，更佳為48%至90%，更佳為49%至90%，甚至更佳為50%至90%，甚至更佳為51%至90%，甚至更佳為52%至90%，甚至更佳為更佳為53%至90%，甚至更佳為54%至90%，甚至更佳為55%至90%，甚至更佳為60%〜90%，甚至更佳為61%至90%，更佳為65%至90%，甚至更佳為70%至90%，甚至更佳為75%至90%，最佳為72%至81%，及/或 55%至100%，較佳為60%至100%，較佳為70%至100%，較佳為75%至100%，較佳為76%至100%，較佳為77%至100%，較佳為78%至100%，更佳為79至100%，更佳為80%至100%，更佳為81%至100%，更佳為82%至100%，更佳為83%至100%，較佳為84%至100%，更佳為85%至100%，更佳為86%至100%，更佳為87%至100%，更佳為88%至100%，更佳為89%至100%，甚至更佳為90%%至100%，甚至更佳為91%至100%，甚至更佳為92%至100%，甚至更佳為93%至100%，甚至更佳為94%至100% ，甚至更佳為95%至100%，甚至更佳為96%至100%，甚至更佳為97%至100%，甚至更佳為98%至100%，甚至更佳為99%至100%，且最佳為100%。

於第一方面之第一百一十具體實施例中，其也是該第一方面之第一百零三、第一百零四、第一百零五、第一百零六、第一百零七、第一百零八及第一百零九具體實施例的一具體實施例，該多胜肽，較佳為該海藻糖磷酸化酶，具有熱穩定性，該熱穩定性的特徵在於至少52°C的Tm30值及/或至少52°C的Tm50值。

於第一方面之第一百一十一具體實施例中，其也是該第一方面之第一百零三、第一百零四、第一百零五、第一百零六、第一百零七、第一百零八、第一百零九及第一百一十具體實施例的一具體實施例，該多胜肽，較佳為該海藻糖磷酸化酶，具有於45°C的半衰期1天至9天，更佳為2天至9天，更佳為4天至9天，更佳為5.5天至9天，更佳為7天至9天，最佳為9天。

於第一方面之第一百一十二具體實施例中，其也是該第一方面之第一百零三、第一百零四、第一百零五、第一百零六、第一百零七、第一百零八、第一百零九、第一百一十及第一百一十一具體實施例的一具體實施例，該多胜肽，較佳為該海藻糖磷酸化酶，具有相對活性表示為介於0.65至1.0，較佳為0.7至1.0，較佳為0.75至1.0，較佳為0.8至1.0，較佳為0.85至1.0，較佳為0.9至1.0，較佳為0.95至1.0之間，更佳為0.7至1.0之間的100/500比率。

於第一方面之第一百一十三具體實施例中，其也是該第一方面之第一百零九、第一百一十、第一百一十一及第一百一十二具體實施例的一具體實施例，該多胜肽，較佳為該海藻糖磷酸化酶，係為該第一方面之第二十七、第二十八、第二十九、第三十一、第三十五、第三十六、第四十一、第四十二、第四十三、第四十四、第四十五、第四十六、第五十七、第六十九、第七十、第七十五、第七十六、第七十七、第七十八、第七十九、第八十、第八十二、第八十四、第八十八、第九十、第九十三、第九十九、第一百及第一百零二具體實施例或前述的任何其他的一具體實施例之任何一個，較佳為該第一方面之第二十七、第二十八、第二十九、第三十一、第三十五、第三十六、第五十七、第六十九、第七十、第七十五、第七十六、第七十七、第七十八、第七十九、第八十、第八十二、第八十四、第八十八、第九十、第九十三、第九十九、第一百及第一百零二具體實施例之任何一個。

於第一方面之第一百一十四具體實施例中，其也是該第一方面之第一百一十三具體實施例的一具體實施例，該多胜肽，較佳為該海藻糖磷酸化酶，於52°C作用15分鐘後具有熱穩定性，該熱穩定性由介於以下百分比之間的殘餘活性所定義：55%至100%，較佳為60%至100%，較佳為70%至100%，較佳為75%至100%，較佳為76%至100%，較佳為77%至100% ，較佳為78%至100%，較佳為79%至100%，更佳為80%至100%，更佳為81%至100%，更佳為82%至100%，更佳為83%至100%，更佳為84%至100%，更佳為85%至100%，更佳為86%至100%，更佳為87%至100%，更佳為88%至100%，甚至更佳為89%至100%，甚至更佳為90%至100%，甚至更佳為91%至100%，甚至更佳為92%至100%，甚至更佳為93%至100%，甚至更佳為94%至100%，甚至更佳為95%至100%，甚至更佳為96%至100%，甚至更佳為97%至100%，甚至更佳為98% 至100%，甚至更佳為99%至100%，最佳為100%。

於第一方面之第一百一十五具體實施例中，其也是該第一方面之第一百零三、第一百零四、第一百零五、第一百零六、第一百零七、第一百零八、第一百零九、第一百一十、第一百一十一、第一百一十二、第一百一十三及第一百一十四具體實施例的一具體實施例，該多胜肽，較佳為該海藻糖磷酸化酶，具有熱穩定性，該熱穩定性的特徵在於至少52°C的Tm30值及/或至少52°C的Tm50值，且其較佳之特徵在於至少52°C的Tm30值及至少52°C的Tm50值。

於第一方面之第一百一十六具體實施例中，其也是該第一方面之第一百零三、第一百零四、第一百零五、第一百零六、第一百零七、第一百零八、第一百零九、第一百一十、第一百一十一、第一百一十二、第一百一十三、第一百一十四及第一百一十五具體實施例的一具體實施例，該多胜肽，較佳為該海藻糖磷酸化酶，具有熱穩定性，該熱穩定性之特徵在於： i) 介於以下溫度之間的的Tm30值：52°C至90°C，較佳為52°C至80°C，較佳為52.5°C至80°C，較佳為53°C至80°C，較佳為53.5°C至80°C，更佳為54°C至80°C，較佳為54.5°C至80°C，甚至更佳為55°C至80°C，較佳為55.5°C至80°C，較佳為56°C至80°C，較佳為56.5°C至80°C，較佳為57°C至80°C，較佳為57.5°C至80°C，較佳為58°C至80°C，較佳為58.5°C至80°C，甚至更佳為52°C至70°C，甚至更佳為52.5°C至70°C，甚至更佳為53°C至70°C，甚至更佳為53.5°C至70°C，更佳為54°C至70°C，甚至更佳為54.5°C至70°C，甚至更佳為55°C至70°C，甚至更佳為55.5°C至70°C，甚至更佳為56.5°C至70°C，甚至更佳為57°C至70°C，甚至更佳為57.5°C至70°C，甚至更佳為57.5°C至70°C，甚至更佳為58°C至70°C，甚至更佳為58.5°C至70°C，甚至更佳為52°C至65°C，更佳為52.5°C至65°C，甚至更佳為53°C至65°C，甚至更佳為53.5°C至65°C，甚至更佳為54°C至65°C，甚至更佳為54.5°C至65°C，甚至更佳為55°C至65°C，更佳為55.5°C至65°C，甚至更佳為56°C至65°C，甚至更佳為56.5°C至65°C，甚至更佳為57°C至65°C，甚至更佳為57.5°C至65°C，甚至更佳為58°C至65°C，甚至更佳為58.5°C至65°C，甚至更佳為52°C至65°C，甚至更佳為52.5°C至60°C，甚至更佳為53°C至60°C，甚至更佳為53.5°C至60°C，甚至更佳為54°C至60°C，甚至更佳為54.5°C至60°C，甚至更佳為55°C至60°C，甚至更佳為55.5°C至60°C，甚至更佳為56°C至60°C，更佳為56.5°C至60°C，甚至更佳為57°C至60°C，甚至更佳為57.5°C至60°C，甚至更佳為58°C至60°C，甚至更佳為58.5°C至60°C，最佳為53.5°C至58.5°C，及/或 ii) 介於以下溫度之間的的Tm50值：52°C至90°C，較佳為52°C至80°C，較佳為52.5°C至80°C，較佳為53°C至80°C，較佳為53.5°C至80°C，更佳為54°C至80°C，較佳為54.5°C至80°C，甚至更佳為55°C至80°C，較佳為55.5°C至80°C，較佳為56°C至80°C，較佳為56.5°C至80°C，較佳為57°C至80°C，較佳為57.5°C至80°C，甚至更佳為52°C至70°C，甚至更佳為52.5°C至70°C，甚至更佳為53°C至70°C，甚至更佳為53.5°C至70°C，甚至更佳為54°C至70°C，甚至更佳為54.5°C至70°C，甚至更佳為55°C至70°C，甚至更佳為55.5°C至70°C，甚至更佳為56°C至70°C，甚至更佳為56.5°C至70°C，甚至更佳為57°C至70°C，甚至更佳為57.5°C至70°C，甚至更佳為52°C至65°C，甚至更佳為52.5°C至70°C，更佳為53°C至65°C，甚至更佳為53.5°C至65°C，甚至更佳為54°C至65°C，甚至更佳為55°C至65°C，甚至更佳為55.5°C至65°C，甚至更佳為56°C至65°C，甚至更佳為56.5°C至65°C，甚至更佳為57°C至65°C，甚至更佳為57.5°C至65°C，甚至更佳為52°C至60°C，甚至更佳為52.5°C至60°C，甚至更佳為53°C至60°C，甚至更佳為53.5°C至60°C，甚至更佳為54°C之間至60°C，甚至更佳為54.5°C至60°C，甚至更佳為55°C至60°C，甚至更佳為55.5°C至60°C，甚至更佳為56°C至60°C，甚至更佳為56.5°C至60°C，甚至更佳為57°C至60°C，甚至更佳為57.5°C至60°C，且最佳為52°C至57.5°C。

於第一方面之第一百一十七具體實施例中，其也是該第一方面之第一百零三、第一百零四、第一百零五、第一百零六、第一百零七、第一百零八、第一百零九、第一百一十、第一百一十一、第一百一十二、第一百一十三、第一百一十四、第一百一十五及第一百一十六具體實施例的一具體實施例，其中該多胜肽，較佳為該海藻糖磷酸化酶，於45°C下的半衰期為4天至9天或更多，較佳為5.5天至9天或更多，更佳為7天至9天或 更多，甚至更佳為至少9天或更多，最佳為9天。

於第一方面之第一百一十八具體實施例中，其也是該第一方面之第一百零三、第一百零四、第一百零五、第一百零六、第一百零七、第一百零八、第一百零九、第一百一十、第一百一十一、第一百一十二、第一百一十三、第一百一十四、第一百一十五、第一百一十六及第一百一十七具體實施例的一具體實施例，該多胜肽，較佳為該海藻糖磷酸化酶，具有一相對活性，該相對活性表示為介於0.65-1.0之間的100/500比率，較佳為0.7至1.0，較佳為0.75至1.0，較佳為0.8至1.0，較佳為0.85至1.0，較佳為0.9至1.0，較佳為0.95至1.0，更佳為0.8至1.0。

於第一方面之第一百一十九具體實施例中，其也是該第一方面之第一百零四、第一百零五、第一百零六、第一百零七具體實施例的一具體實施例，其中該多胜肽，較佳為該海藻糖磷酸化酶，係為該第一方面之第二十八、第二十九、第三十二、第三十七、第三十八、第三十九、第四十、第四十一、第四十二、第四十三、第四十四、第四十五、第四十六、第五十九、第六十、第六十一、第六十二、第七十一、第七十二、第七十三、第七十四、第七十五、第七十六、第七十七、第七十八、第七十九、第八十、第八十二、第八十四、第八十八、第九十一、第九十四、第九十九、第一百及第一百零二具體實施例或前述的任何其他的一具體實施例之任何一個，較佳為該第一方面之第二十八、第二十九、第三十二、第三十七、第三十八、第三十九、第四十、第五十九、第六十、第六十一、第六十二、第七十一、第七十二、第七十三、第七十四、第七十五、第七十六、第七十七、第七十八、第七十九、第八十、第八十二、第八十四、第八十八、第九十一、第九十四、第九十九、第一百及第一百零二具體實施例之任何一個。

於第一方面之第一百二十具體實施例中，其也是該第一方面之第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一、第二十二、第二十三、第二十四、第二十五、第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第三十、第三十一、第三十二、第三十三、第三十四、第三十五、第三十六、第三十七、第三十八、第三十九、第四十、第四十一、第四十二、第四十三、第四十四、第四十五、第四十六、第四十七、第四十八、第四十九、第五十、第五十一、第五十二、第五十三、第五十四、第五十五、第五十六、第五十七、第五十八、第五十九、第六十、第六十一、第六十二、第六十三、第六十四、第六十五、第六十六、第六十七、第六十八、第六十九、第七十、第七十一、第七十二、第七十三、第七十四、第七十五、第七十六、第七十七、第七十八、第七十九、第八十、第八十一、第八十二、第八十三、第八十四、第八十五、第八十六、第八十七、第八十八、第八十九、第九十、第九十一、第九十二、第九十三、第九十四、第九十五、第九十六、第九十七、第九十八、第九十九、第一百、第一百零一、第一百零二、第一百零三、第一百零四、第一百零五、第一百零六、第一百零七、第一百零八、第一百零九、第一百一十、第一百一十一、第一百一十二、第一百一十三、第一百一十四、第一百一十五、第一百一十六、第一百一十七、第一百一十八及第一百一十九具體實施例或前述的任何其他的一具體實施例，較佳為該第一方面之第二十八、第二十九、第三十二、第三十七、第三十八、第三十九、第四十、第四十一、第四十二、第四十三、第四十四、第四十五、第四十六、第五十九、第六十、第六十一、第六十二、第七十一、第七十二、第七十三、第七十四、第七十五、第七十六、第七十七、第七十八、第七十九、第八十、第八十二、第八十四、第八十八、第九十一、第九十四、第九十九、第一百及第一百零二具體實施例，更佳為該第一方面之第二十九、第三十二、第三十七、第三十八、第三十九、第四十、第五十九、第六十、第六十一、第六十二、第七十一、第七十二、第七十三、第七十四、第七十五、第七十六、第七十七、第七十八、第七十九、第八十、第八十二、第八十四、第八十八、第九十一、第九十四、第九十九、第一百及第一百零二具體實施例，其中該多胜肽，較佳為該海藻糖磷酸化酶，相較於SEQ ID NO: 1的海藻糖磷酸化酶，其特徵在於熱穩定性的提高，由此該熱穩定性的提高為 i) 將Tm30 值 增加至少2°C至40.5°C，較佳為2°C至30.5°C，較佳為至少2.5°C至30.5°C，較佳為至少3°C至30.5°C，較佳為至少3.5°C至30.5°C，較佳為至少4°C至30.5°C，較佳為至少4.5°C至30.5°C，較佳為至少5°C至30.5°C，較佳為至少5.5°C至30.5°C，較佳為至少6°C至30.5°C，較佳為至少6.5°C至30.5°C，較佳為至少7°C至30.5°C，較佳為至少7.5°C至30.5°C，較佳為至少8°C至30.5°C，較佳為至少8.5°C至30.5°C，較佳為至少9°C至30.5°C，更佳為2°C至20.5°C，更佳為至少2.5°C至20.5°C，更佳為至少3°C至20.5°C，更佳為至少3.5°C至20.5°C，更佳為至少4°C至20.5°C，更佳為至少4.5°C至20.5°C，更佳為至少5°C至20.5°C，更佳為至少5.5°C至20.5°C，更佳為至少6°C至20.5°C，更佳為至少6.5°C至20.5°C，更佳為至少7°C至20.5°C，更佳為至少7.5°C至20.5°C，更佳為至少8°C至20.5°C，更佳為至少8.5°C至20.5°C，更佳為至少9°C至20.5°C，甚至更佳為2°C至15.5°C，甚至更佳為至少2.5°C至15.5°C，甚至更佳為至少3°C至15.5°C，甚至更佳為至少3.5°C至15.5°C，甚至更佳為至少4°C至15.5°C，甚至更佳為至少4.5°C至15.5°C，甚至更佳為至少5°C至15.5°C，甚至更佳為至少5.5°C至15.5°C，甚至更佳為至少6°C至15.5°C，甚至更佳為至少6.5°C至15.5°C，甚至更佳為至少7°C至15.5°C，甚至更佳為至少7.5°C至15.5°C，甚至更佳為至少8°C至15.5°C，甚至更佳為至少8.5°C至15.5°C，甚至更佳為至少9°C至15.5°C，甚至更佳為2°C至10.5°C，甚至更佳為至少2.5°C至10.5°C，甚至更佳為至少3°C至10.5°C，甚至更佳為至少3.5°C至10.5°C，甚至更佳為至少4°C至10.5°C，甚至更佳為至少4.5°C至10.5°C，甚至更佳為至少5°C至10.5°C，甚至更佳為至少5.5°C至10.5°C，甚至更佳為至少6°C至10.5°C，甚至更佳為至少6.5°C至10.5°C，甚至更佳為至少7°C至10.5°C，甚至更佳為至少7.5°C至10.5°C，甚至更佳為至少8°C至10.5°C，甚至更佳為至少8.5°C至10.5°C，甚至更佳為至少9°C至10.5°C，最佳為至少4°C至9°C；及/或 ii) 將Tm50 值 增加至少2°C至42.5°C，較佳為2°C至32.5°C，較佳為至少2.5°C至32.5°C，較佳為至少3°C至32.5°C，較佳為至少3.5°C至32.5°C，較佳為至少4°C至32.5°C，較佳為至少4.5°C至32.5°C，較佳為至少5°C至32.5°C，較佳為至少5.5°C至32.5°C，較佳為至少6°C至32.5°C，較佳為至少6.5°C至32.5°C，較佳為至少7°C至32.5°C，較佳為至少7.5°C至32.5°C，較佳為至少8°C至32.5°C，較佳為至少8.5°C至32.5°C，較佳為至少9°C至32.5°C，較佳為至少9.5°C至32.5°C，較佳為至少10°C至32.5°C，更佳為2°C至22.5°C，更佳為至少2.5°C至22.5°C，更佳為至少3°C至22.5°C，更佳為至少3.5°C至22.5°C，更佳為至少4°C至22.5°C，更佳為至少4.5°C至22.5°C，更佳為至少5°C至22.5°C，更佳為至少5.5°C至22.5°C，更佳為至少6°C至22.5°C，更佳為至少6.5°C至22.5°C，更佳為至少7°C至22.5°C，更佳為至少7.5°C至22.5°C，更佳為至少8°C至22.5°C，更佳為至少8.5°C至22.5°C，更佳為至少9°C至22.5°C，更佳為至少9.5°C至22.5°C，更佳為至少10°C至22.5°C，甚至更佳為2°C至17.5°C，甚至更佳為至少2.5°C至17.5°C，甚至更佳為至少3°C至17.5°C，甚至更佳為至少3.5°C至17.5°C，甚至更佳為至少4°C至17.5°C，甚至更佳為至少4.5°C至17.5°C，甚至更佳為至少5°C至17.5°C，甚至更佳為至少5.5°C至17.5°C，甚至更佳為至少6°C至17.5°C，甚至更佳為至少6.5°C至17.5°C，甚至更佳為至少7°C至17.5°C，甚至更佳為至少7.5°C至17.5°C，甚至更佳為至少8°C至17.5°C，甚至更佳為至少8.5°C至17.5°C，甚至更佳為至少9°C至17.5°C，甚至更佳為至少9.5°C至17.5°C，甚至更佳為至少10°C至17.5°C，更佳為2°C至12.5°C，甚至更佳為至少2.5°C至12.5°C，甚至更佳為至少3°C至12.5°C，甚至更佳為至少3.5°C至12.5°C，甚至更佳為至少4°C至12.5°C，甚至更佳為至少4.5°C至12.5°C，甚至更佳為至少5°C至12.5°C，甚至更佳為至少5.5°C至12.5°C，甚至更佳為至少6°C至12.5°C，甚至更佳為至少6.5°C至12.5°C，甚至更佳為至少7°C至12.5°C，甚至更佳為至少7.5°C至12.5°C，甚至更佳為至少8°C至12.5°C，甚至更佳為至少8.5°C至12.5°C，甚至更佳為至少9°C至12.5°C，甚至更佳為至少9.5°C至12.5°C，甚至更佳為至少10°C至12.5°C，且最佳為至少4°C至9°C；及/或 iii) 改進的製程穩定性，其特徵在於45°C下半衰期延長 i) 至少3倍至216倍或更多，較佳為至少24倍至216倍或更多，較佳為至少39倍至216倍或更多，較佳為至少48倍至216倍或更多，較佳為至少96倍至216倍或更多，較佳為至少132倍至216倍或更多，更佳為至少216倍或更多倍，最佳為216倍； ii) 至少24倍至216倍或更多，較佳為至少39倍至216倍或更多，較佳為至少48倍至216倍或更多，較佳為至少96倍至216倍或更多，較佳為至少132倍至216倍或更多，更佳為至少216倍或更多，最佳為216倍； iii) 至少96倍至216倍或更多，較佳為至少132倍至216倍或更多，更佳為至少216倍或更多，最佳為216倍。

更具體地，於第二方面，其也是第二方面的第一個體實施例，透過包含一胺基酸序列的一多胜肽，較佳為海藻糖磷酸化酶，解決了這些及其它問題，其中該多胜肽，較佳海藻糖磷酸化酶，的該胺基酸序列與SEQ ID NO: 1的胺基酸序列具有至少80%同一性及/或至少80%同源性，其中該多胜肽，較佳海藻糖磷酸化酶，具有特徵(A)、(B)、(C)、(D)與(E)中的至少一個或其任何組合， 其中特徵(A)為於52°C作用15分鐘後的熱穩定性，其由一介於以下範圍之間的殘留活性所定義 i) 30%至90%，較佳為39%至90%，更佳為42%至90%，更佳為54%至90%，更佳為55%至90%，甚至更佳為63% %至90%，甚至更佳為64%至90%，甚至更佳為68%至90%，最佳為64%至86%，及/或 ii) 30%至90%，較佳為31%至90%，較佳為32%至90%，較佳為33%至90%，較佳為34%至90%，較佳為35%至90%，較佳為36%至90%，較佳為37%至90%，較佳為38%至90%，較佳為39%至90%，更佳為40%至90%，更佳為41%至90% ，較佳為42%至90%，更佳為43%至90%，更佳為44%至90%，更佳為45%至90%，更佳為46%至90%，更佳為47%至90%，更佳為48%至90%，更佳為49%至90%，甚至更佳為50%至90%，甚至更佳為51%至90%，甚至更佳為52%至90% ，甚至更佳為53%至90%，甚至更佳為54%至90%，甚至更佳為55%至90%，甚至更佳為60%至90%，甚至更佳為61%至90%，甚至更佳為65%至90%，甚至更佳為70%至90%，甚至更佳為75%至90%，最佳為72%至81%，及/或 iii) 55%至100%，較佳為60%至100%，較佳為70%至100%，較佳為75%至100%，較佳為76%至100%，較佳為77%至100%，較佳為78%至100%，較佳為79%至100%，更佳為80%至100%，更佳為81%至100%，更佳為82%至100%，更佳為83%至100% ，更佳為84%至100%，更佳為85%至100%，更佳為86%至100%，更佳為87%至100%，更佳為88%至100%，更佳為89%至100%，甚至更佳為90%至100%，甚至更佳為91%至100%，甚至更佳為92%至100%，甚至更佳為93%至100%，甚至更佳為94%至100%，甚至更佳為95%至100%，甚至更佳為96%至100%，甚至更佳為97%至100%，甚至更佳為98%至100%，尤其較佳為99%至100%，最佳為100%，以及 其中特徵(B)為於52°C作用15分鐘後的熱穩定性，其特徵在於 i) 至少52°C的Tm30值，及/或 ii) 至少52°C的Tm50值， 以及 特徵(C)為以以下為特徵的熱穩定性 i) 介於以下溫度之間的Tm30值：52°C至90°C，較佳為52°C至80°C，較佳為52.5°C至80°C，較佳為53°C至80°C，較佳為53.5°C至80°C，更佳為54°C至80°C，較佳為54.5°C至80°C，甚至更佳為55°C至80°C，較佳為55.5°C 80°C，較佳為56°C至80°C，較佳為56.5°C至80°C，較佳為57°C至80°C，較佳為57.5°C至80°C，較佳為58°C至80°C，較佳為58.5°C至80°C，甚至更佳為52°C至70°C，甚至更佳為52.5°C至70°C，甚至更佳為53°C至70°C，甚至更佳為53.5°C至70°C，甚至更佳為54°C至70°C，甚至更佳為54.5°C至70°C，甚至更佳為55°C至70°C，甚至更佳為55.5°C至70°C，甚至更佳為56°C至70°C，更佳為56.5°C至70°C，甚至更佳為57°C至70°C，甚至更佳為57.5°C至70°C，甚至更佳為58°C至70°C，甚至更佳為58.5°C至70°C，甚至更佳為52°C至65°C，甚至更佳為52.5°C至65°C，甚至更佳為53°C至65°C，甚至更佳為53.5°C至65°C，甚至更佳為54°C至65°C，甚至更佳為54.5°C至65°C，甚至更佳為55°C至65°C，甚至更佳為55.5°C至65°C，甚至更佳為56°C至65°C，甚至更佳為56°C至65°C ，甚至更佳為5°C至65°C，甚至更佳為57°C至65°C，甚至更佳為57.5°C至65°C，甚至更佳為58°C至65°C，甚至更佳為58.5°C至65°C，甚至更佳為52°C至65°C，甚至更佳為52.5°C至60°C，甚至更佳為53°C至60°C，甚至更佳為53.5°C至60°C，甚至更佳為54°C至60°C，甚至更佳為54.5°C至60°C，甚至更加為55°C至60°C，甚至更佳為55.5°C至60°C，甚至更佳為56°C至60°C，甚至更佳為56.5°C至60°C，甚至更佳為57°C至60°C，甚至更佳為57.5°C至60°C之間，甚至更佳為58°C至60°C，甚至更佳為58.5°C至60°C，最佳為53.5°C至58.5°C，及/或 i) 介於以下溫度之間的Tm50值：52°C至90°C，較佳為52°C至80°C，較佳為52.5°C至80°C，較佳為53°C至80°C，較佳為53.5°C至80°C，更佳為在54°C至80°C，較佳為54.5°C至80°C，甚至更佳為55°C至80°C，較佳為55.5°C至80°C，較佳為56°C至80°C，較佳為56.5°C至80°C，較佳為57°C至80°C，較佳為57.5°C至80°C，甚至更佳為52°C至70°C，甚至更佳為52.5°C至70°C，甚至更佳為53°C至70°C，甚至更佳為53.5°C至70°C，更佳為54°C至70°C，甚至更佳為54.5°C至70°C，甚至更加更佳為55°C至70°C，甚至更佳為55.5°C至70°C，甚至更佳為56°C至70°C，甚至更佳為56.5°至70°C，更佳為57°C至70°C，甚至更佳為57.5°C至70°C，甚至更佳為52°C至65°C，甚至更佳為60°C至70°C，較佳為52.5°C至65°C，甚至更佳為53°C至55°C，甚至更佳為53.5°C至65°C，更加較佳為54°C至65°C，甚至更佳為在54.5°C至65°C，甚至更佳為55°C至65°C，甚至更佳為55.5°C至65°C，甚至更佳為56°C至65°C，甚至更佳為56.5°C至65°C，甚至更佳為57°C至65°C，甚至更佳為57.5°C至65°C，甚至更佳為52°C至65°C，更佳為52.5°C至60°C，甚至更佳為53°C至60°C，甚至更佳為53.5°C至60°C，甚至更佳為54°C至60°C，甚至更佳為54.5°C至60°C，甚至更佳為55°C至60°C，甚至更佳為55.5°C至60°C，甚至更佳為56°C至60°C，甚至更佳為56.5°C至60°C，甚至更佳為57°C至60°C，甚至更佳為57.5°C至60°C，最佳為52°C至57.5°C； 以及 特徵(D)為以以下為特徵的熱穩定性 i) 一製程穩定性 ，其特徵在於45°C的半衰期為3小時至9天或更多，較佳為24小時至9天或更多，較佳為39小時至9天或更多，較佳為2天至9天或更多，更佳為4天至9天或更多，更佳為5.5天至9天或更多，更佳為至少7天至9天或更多，再更佳為至少9天或更多，且最佳為9天； ii) 一製程穩定性 ，其特徵在於45°C的半衰期為24小時至9天或更多，更佳為39小時至9天或更多，更佳為2天至9天或更多，更佳為4天至9天或更多，更佳為5.5天至9天或更多，更佳為7天至9天或更多，甚至更佳為至少9天或更多，且最佳為9天； iii) 一製程穩定性 ，其特徵在於45°C的半衰期為4天至9天或更多，較佳為5.5天至9天或更多，更佳為7天至9天或更多，甚至更佳為至少9天或更多，且最佳為9天； 以及 其中特徵(E)為相對活性，表示為介於以下數值之間的100/500-比率， (i) 0.65至1.0，較佳為0.7至1.0，較佳為0.75至1.0，較佳為0.8至1.0，較佳為0.85至1.0，較佳為0.9至1.0，較佳為0.95至1.0，且更佳為至少0.7至1.0； (ii) 0.65至1.0，較佳為0.7至1.0，較佳為0.75至1.0，較佳為0.8至1.0，較佳為0.85至1.0，較佳為0.9至1.0，較佳為0.95至1.0，更佳為0.8至1.0之間；其中100/500比率被定義為 [100 mM葡萄糖與100 mM α-葡萄糖-1磷酸鹽的海藻糖活性] / [500 mM葡萄糖與100 mM α-葡萄糖-1-磷酸鹽的海藻糖活性] 的比率。

於第二方面之第二具體實施例中，其也是該第二方面之第一具體實施例的一具體實施例，該多胜肽，較佳為海藻糖磷酸化酶，於52°C作用15分鐘後具有熱穩定性，該熱穩定性係由一介於以下百分比之間的殘餘活性所定義： 為30%至90%，較佳為39%至90%，更佳為42%至90%，更佳為54%至90%，更佳為55%至90%，且甚至更佳為63%至90%，甚至較佳為64%至90%，甚至較佳為68%至90%，最佳為64%至86%，及/或 30%至90%，較佳為31%至90%，較佳為32%至90%，較佳為33%至90%，較佳為34%至90%，較佳為35%至90%，較佳為36 %至90%，較佳為37%至90%，較佳為38%至90%，較佳為39%至90%，更佳為40%至90%，更佳為41%至90%，更佳為42%至90%，更佳為43%至90%，更佳為44%至90%，更佳為45%至90%，更佳為46%至90%，更佳為47%至90% ，更佳為48%至90%，更佳為49%至90%，甚至更佳為50%至90%，甚至更佳為51%至90%，甚至更佳為52%至90%，甚至更佳為更佳為53%至90%，甚至較佳為54%至90%，甚至較佳為55%至90%，甚至較佳為60%至90%，甚至較佳為61%至90%，更佳為65%至90%，甚至更佳為70%至90%，甚至更佳為75%至90%，最佳為72%至81%，及/或 55%至100%，較佳為60%至100%，較佳為70%至100%，較佳為75%至100%，較佳為76%至100%，較佳為77%至100%，較佳為78%至100%，較佳為80%至100%，更佳為79%至100%，更佳為80%至100%，更佳為81%至100%，更佳為82%至100%，更佳為83%至100%，較佳為84%至100%，更佳為85%至100%，更佳為86%至100%，更佳為87%至100%，更佳為88%至100%，更佳為89%至100%，甚至較佳為90%至100%，甚至較佳為91%至100%，甚至較佳為92%至100%，甚至較佳為93%至100%，甚至較佳為94%至100% ，甚至較佳為95%至100%，甚至較佳為96%至100%，甚至較佳為97%至100%，甚至較佳為98%至100%，甚至較佳為99%至100%，最佳為100%。

於第二方面之第三具體實施例中，其也是第二個方面的第一及第二具體實施例一之具體實施例，其中該多胜肽，較佳為海藻糖磷酸化酶，具有熱穩定性，其特徵在於至少52°C的Tm30值。

於第二方面之第四具體實施例中，其也是第二個方面的第一、第二及第三具體實施例之一具體實施例，其中該多胜肽，較佳為海藻糖磷酸化酶，於45°C下的半衰期為3小時至 9天或更多，較佳為24小時至9天或更多，較佳為39小時至9天或更多，較佳為2天至9天或更多，更佳為4天至9天或更多，更佳為5.5天至9天或更多，更佳為7天至9天或更多，甚至更佳為至少9天或更多，最佳為9天。

於第二方面之第五具體實施例中，其也是第二個方面的第一、第二、第三及第四具體實施例之一具體實施例，其中該多胜肽，較佳為海藻糖磷酸化酶，具有以100/500-比率表示之相對活性，該100/500-比率介於0.65至1.0之間，較佳為0.7至1.0，較佳為0.75至1.0，較佳為0.8至1.0，較佳為0.85至1.0，較佳為0.9至1.0，較佳為0.95至1.0，更佳為0.7至1.0。

於第二方面之第六具體實施例中，其也是第二個方面的第一、第二、第三、第四及第五具體實施例之一具體實施例，其中該多胜肽，較佳為海藻糖磷酸化酶，係定義如在該第一方面之第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第三十、第三十三、第三十四、第四十一、第四十二、第四十三、第四十四、第四十五、第四十六、第五十五、第六十七、第六十八、第七十五、第七十六、第七十七、第七十八、第七十九、第八十、第八十一、第八十四、第八十八、第八十九、第九十二、第九十九、第一百及第一百零二具體實施例中的任何一個所述，較佳定義如在該第一方面之第二十六、第二十七、第二十八、第二十九、第三十、第三十三、第三十四、第五十五、第六十七、第六十八、第七十五、第七十六、第七十七、第七十八、第七十九、第八十、第八十一、第八十四、第八十八、第八十九、第九十二、第九十九、第一百及第一百零二具體實施例中的任何一個所述。

於第二方面之第七具體實施例中，其也是第二個方面的第一、第二、第三、第四、第五及第六具體實施例之一具體實施例，其中該多胜肽，較佳為海藻糖磷酸化酶，於52°C作用15分鐘後具有以殘餘活性所定義之熱穩定性，該殘餘活性為 30%至90%，較佳為31%至90%，較佳為32%至90%，較佳為33%至90%，較佳為34%至90%，較佳為35%至90%，較佳為36%至90%，較佳為37%至90%，較佳為38%至90%，較佳為39%至90%，更佳為40%至90%，更佳為41%至90%，更佳為42%至90%，更佳為43%至90%，更佳為44%至90%，更佳為45%至90%，更佳為46%至90%，更佳為47%至90% ，更佳為48%至90%，更佳為49%至90%，甚至更佳為50%至90%，甚至更佳為51%至90%，甚至更佳為52%至90%，甚至更佳為更佳為53%至90%，甚至更佳為54%至90%，甚至更佳為55%至90%，甚至更佳為60%至90%，甚至更佳為61%至90%，更佳為65%至90%，甚至更佳為70%至90%，甚至更佳為75%至90%，最佳為72%至81%；及/或 55%至100%，較佳為60%至100%，較佳為70%至100%，較佳為75%至100%，較佳為76%至100%，較佳為77%至100%，較佳為78%至100%，更佳為79%至100%，更佳為80%至100%，更佳為81%至100%，更佳為82%至100%，更佳為83%至100%，較佳為84%至100%，更佳為85%至100%，更佳為86%至100%，更佳為87%至100%，更佳為88%至100%，更佳為89%至100%，甚至更佳為90%至100%，甚至更佳為91%至100%，甚至更佳為92%至100%，甚至更佳為93%至100%，甚至更佳為94%至100% ，甚至更佳為95%至100%，甚至更佳為96%至100%，甚至更佳為97%至100%，甚至更佳為98%至100%，甚至更佳為99%至100%，最佳為100%； 且其中該海藻糖磷酸化酶係定義如在該第一方面之第一至第一百二十具體實施例或其任何其他具體實施例之任何一個所述，較佳為如該第一方面之第二十七、第二十八、第二十九、第三十一、第三十五、第三十六、第四十一、第四十二、第四十三、第四十四、第四十五、第四十六、第五十七、第六十九、第七十、第七十五、第七十六、第七十七、第七十八、第七十九、第八十、第八十二、第八十四、第八十八、第九十、第九十三、第九十九、第一百及第一百零二具體實施例中的任何一個所述，更佳定義如在該第一方面之第二十七、第二十八、第二十九、第三十一、第三十五、第三十六、第五十七、第六十九、第七十、第七十五、第七十六、第七十七、第七十八、第七十九、第八十、第八十二、第八十四、第八十八、第九十、第九十三、第九十九、第一百及第一百零二具體實施例中的任何一個所述。

於第二方面之第八具體實施例中，其也是第二個方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六及第七具體實施例之一具體實施例，其中該多胜肽，較佳為海藻糖磷酸化酶，具有以至少為52°C的Tm30值及/或至少為52°C的Tm50值為特徵的熱穩定性；且其中該海藻糖磷酸化酶係定義如在該第一方面之第一至第一百二十具體實施例或其任何其他具體實施例之任何一個所述，較佳為如該第一方面之第二十七、第二十八、第二十九、第三十一、第三十五、第三十六、第四十一、第四十二、第四十三、第四十四、第四十五、第四十六、第五十七、第六十九、第七十、第七十五、第七十六、第七十七、第七十八、第七十九、第八十、第八十二、第八十四、第八十八、第九十、第九十三、第九十九、第一百及第一百零二具體實施例中的任何一個所述，更佳定義如在該第一方面之第二十七、第二十八、第二十九、第三十一、第三十五、第三十六、第五十七、第六十九、第七十、第七十五、第七十六、第七十七、第七十八、第七十九、第八十、第八十二、第八十四、第八十八、第九十、第九十三、第九十九、第一百及第一百零二具體實施例中的任何一個所述。

於第二方面之第九具體實施例中，其也是第二個方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七及第八具體實施例之一具體實施例，其中該多胜肽，較佳為海藻糖磷酸化酶，具有於45°C下之半衰期1天至9天或更多，更佳為2天至9天或更多，更佳為4天至9天或更多，更佳為5.5天至9天或更多，更佳為7天至9天或更多，甚至更佳為9天或更多，最佳為9天；且其中該多胜肽，較佳海藻糖磷酸化酶，係定義如在該第一方面之第一至第一百二十具體實施例或其任何其他具體實施例之任何一個所述，較佳為如該第一方面之第二十七、第二十八、第二十九、第三十一、第三十五、第三十六、第四十一、第四十二、第四十三、第四十四、第四十五、第四十六、第五十七、第六十九、第七十、第七十五、第七十六、第七十七、第七十八、第七十九、第八十、第八十二、第八十四、第八十八、第九十、第九十三、第九十九、第一百及第一百零二具體實施例中的任何一個所述，更佳定義如在該第一方面之第二十七、第二十八、第二十九、第三十一、第三十五、第三十六、第五十七、第六十九、第七十、第七十五、第七十六、第七十七、第七十八、第七十九、第八十、第八十二、第八十四、第八十八、第九十、第九十三、第九十九、第一百及第一百零二具體實施例中的任何一個所述。

於第二方面之第十具體實施例中，其也是第二個方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八及第九具體實施例之一具體實施例，其中該多胜肽，較佳為海藻糖磷酸化酶，具有以100/500-比率表示之相對活性，該100/500-比率介於0.65至1.0之間，較佳為0.7至1.0，較佳為0.75至1.0，較佳為0.8至1.0，較佳為0.85至1.0，較佳為0.9至1.0，較佳為0.95至1.0，更佳為0.7至1.0，且其中該海藻糖磷酸化酶，係定義如在該第一方面之第一至第一百二十具體實施例或其任何其他具體實施例之任何一個所述，較佳為如該第一方面之第二十七、第二十八、第二十九、第三十一、第三十五、第三十六、第四十一、第四十二、第四十三、第四十四、第四十五、第四十六、第五十七、第六十九、第七十、第七十五、第七十六、第七十七、第七十八、第七十九、第八十、第八十二、第八十四、第八十八、第九十、第九十三、第九十九、第一百及第一百零二具體實施例中的任何一個所述，更佳定義如在該第一方面之第二十七、第二十八、第二十九、第三十一、第三十五、第三十六、第五十七、第六十九、第七十、第七十五、第七十六、第七十七、第七十八、第七十九、第八十、第八十二、第八十四、第八十八、第九十、第九十三、第九十九、第一百及第一百零二具體實施例中的任何一個所述。

於第二方面之第十一具體實施例中，其也是第二個方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九及第十具體實施例之一具體實施例，其中該多胜肽，較佳為海藻糖磷酸化酶，於52°C作用15分鐘後具有以一殘餘活性定義之熱穩定性，該殘餘活性為55%至100%，較佳為60%至100%，較佳為70%至100%，較佳為75%至100%，較佳為76%至100%，較佳為77%至100%，較佳為78%至100%，較佳為79%至100%，更佳為80%至100%，更佳為81%至100%，更佳為82%至100% ，較佳為83%至100%，更佳為84%至100%，更佳為85%至100%，更佳為86%至100%，更佳為87%至100%，更佳為88%至100%，更佳為89%至100%，甚至更佳為90%至100%，甚至更佳為91%至100%，甚至更佳為92%至100%，更佳為93%至100%，甚至更佳為94%至100%，甚至更佳為95%至100%，甚至更佳為96%至100%，甚至更佳為97%至100%，更佳為98%至100%，甚至更佳為99%至100%，最佳為100%；且其中該海藻糖磷酸化酶，係定義如在該第一方面之第一至第一百二十具體實施例或其任何其他具體實施例之任何一個所述，較佳為如該第一方面之第二十八、第二十九、第三十二、第三十七、第三十八、第三十九、第四十、第四十一、第四十二、第四十三、第四十四、第四十五、第四十六、第五十九、第六十、第六十一、第六十二、第七十一、第七十二、第七十三、第七十四、第七十五、第七十六、第七十七、第七十八、第七十九、第八十、第八十二、第八十四、第八十八、第九十一、第九十四、第九十九、第一百及第一百零二具體實施例中的任何一個所述，更佳定義如在該第一方面之第二十八、第二十九、第三十二、第三十七、第三十八、第三十九、第四十、第五十九、第六十、第六十一、第六十二、第七十一、第七十二、第七十三、第七十四、第七十五、第七十六、第七十七、第七十八、第七十九、第八十、第八十二、第八十四、第八十八、第九十一、第九十四、第九十九、第一百及第一百零二具體實施例中的任何一個所述。

於第二方面之第十二具體實施例中，其也是第二個方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十及第十一具體實施例之一具體實施例，其中該多胜肽，較佳為海藻糖磷酸化酶，具有以至少為52°C的Tm30值及/或至少為52°C的Tm50值為特徵的熱穩定性，且其較佳為特徵在於至少52°C的Tm30值與至少52°C的Tm50值；且其中該海藻糖磷酸化酶，係定義如在該第一方面之第一至第一百二十具體實施例或其任何其他具體實施例之任何一個所述，較佳為如該第一方面之第二十八、第二十九、第三十二、第三十七、第三十八、第三十九、第四十、第四十一、第四十二、第四十三、第四十四、第四十五、第四十六、第五十九、第六十、第六十一、第六十二、第七十一、第七十二、第七十三、第七十四、第七十五、第七十六、第七十七、第七十八、第七十九、第八十、第八十二、第八十四、第八十八、第九十一、第九十四、第九十九、第一百及第一百零二具體實施例中的任何一個所述，更佳定義如在該第一方面之第二十八、第二十九、第三十二、第三十七、第三十八、第三十九、第四十、第五十九、第六十、第六十一、第六十二、第七十一、第七十二、第七十三、第七十四、第七十五、第七十六、第七十七、第七十八、第七十九、第八十、第八十二、第八十四、第八十八、第九十一、第九十四、第九十九、第一百及第一百零二具體實施例中的任何一個所述。

於第二方面之第十三具體實施例中，其也是第二個方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一及第十二具體實施例之一具體實施例，其中該多胜肽，較佳為海藻糖磷酸化酶，具有熱穩定性，其特徵在於 i) 一Tm30值，介於52°C至90°C之間，較佳為52°C至80°C，較佳為52.5°C至80°C，較佳為53°C至80°C，較佳為53.5°C至80°C，更佳為54°C至80°C，較佳為54.5°C至80°C，甚至更佳為55°C至80°C，較佳為55.5°C至80°C，較佳為56°C至80°C，較佳為56.5°C至80°C，較佳為57°C至80°C，較佳為57.5°C至80°C，較佳為58°C至80°C，較佳為58.5°C至80°C，甚至更佳為52°C至70°C，甚至更佳為52.5°C至70°C，甚至更佳為53°C至70°C，甚至更佳為53.5°C至70°C，更佳為54°C至70°C，甚至更佳為54.5°C至70°C，甚至更佳為55°C至70°C，甚至更佳為55.5°C至70°C，甚至更佳為56.5°C至70°C，甚至更佳為57°C至70°C，甚至更佳為57.5°C至70°C，甚至更佳為57.5°C至70°C，甚至更佳為58°C至70°C，甚至更佳為58.5°C至70°C，甚至更佳為52°C至65°C，更佳為52.5°C至65°C，甚至更佳為53°C至65°C，甚至更佳為53.5°C至65°C，甚至更佳為54°C至65°C，甚至更佳為54.5°C至65°C，甚至更佳為55°C至65°C，更佳為55.5°C至65°C，甚至更佳為56°C至65°C，甚至更佳為56.5°C至65°C，甚至更佳為57°C至65°C，甚至更佳為57.5°C至65°C，甚至更佳為58°C至65°C，甚至更佳為58.5°C至65°C，甚至更佳為52°C至65°C，甚至更佳為52.5°C至60°C，甚至更佳為53°C至60°C，甚至更佳為53.5°C至60°C，甚至更佳為54°C至60°C，甚至更佳為54.5°C至60°C，甚至更佳為55°C至60°C，甚至更佳為55.5°C至60°C，甚至更佳為56°C至65°C，更佳為56.5°C至60°C，甚至更佳為57°C至60°C，甚至更佳為57.5°C至60°C，甚至更佳為58°C至60°C，甚至更佳為58.5°C至60°C，最佳為53.5°C至58.5°C，及/或 ii) 一Tm50值，介於52°C至90°C之間，較佳為52°C至80°C，較佳為52.5°C至80°C，較佳為53°C至80°C，較佳為53.5°C至80°C，更佳為54°C至80°C，較佳為54.5°C至80°C，甚至更佳為55°C至80°C，較佳為55.5°C至80°C，較佳為56°C至80°C，較佳為56.5°C至80°C，較佳為57°C至80°C，較佳為57.5°C至80°C，甚至更佳為52°C至70°C，甚至更佳為52.5°C至70°C，甚至更佳為53°C至70°C，甚至更佳為53.5°C至70°C，甚至更佳為54°C至70°C，甚至更佳為54.5°C至70°C，甚至更佳為55°C至70°C，甚至更佳為55.5°C至70°C，甚至更佳為56°C至70°C，甚至更佳為56.5°C至70°C，甚至更佳為57°C至70°C，甚至更佳為57.5°C至70°C，甚至更佳為52°C至65°C，甚至更佳為52.5°C至65°C，更佳為53°C至65°C，甚至更佳為53.5°C至65°C，甚至更佳為54°C至65°C，甚至更佳為55°C至65°C，甚至更佳為55.5°C至65°C，甚至更佳為56°C至65°C，甚至更佳為56.5°C至65°C，甚至更佳為57°C至65°C，甚至更佳為57.5°C至65°C，甚至更佳為52°C至60°C，甚至更佳為52.5°C至60°C，甚至更佳為53°C至60°C，甚至更佳為53.5°C至60°C，甚至更佳為54°C至60°C，甚至更佳為54.5°C至60°C，甚至更佳為55°C至60°C，甚至更佳為55.5°C至60°C，甚至更佳為56°C至60°C，甚至更佳為56.5°C至60°C，更佳為57°C至60°C，甚至更佳為57.5°C至60°C，且最佳為52°C至57.5°C；且其中該海藻糖磷酸化酶，係定義如在該第一方面之第一至第一百二十具體實施例或其任何其他具體實施例之任何一個所述，較佳為如該第一方面之第二十八、第二十九、第三十二、第三十七、第三十八、第三十九、第四十、第四十一、第四十二、第四十三、第四十四、第四十五、第四十六、第五十九、第六十、第六十一、第六十二、第七十一、第七十二、第七十三、第七十四、第七十五、第七十六、第七十七、第七十八、第七十九、第八十、第八十二、第八十四、第八十八、第九十一、第九十四、第九十九、第一百及第一百零二具體實施例中的任何一個所述，更佳定義如在該第一方面之第二十八、第二十九、第三十二、第三十七、第三十八、第三十九、第四十、第五十九、第六十、第六十一、第六十二、第七十一、第七十二、第七十三、第七十四、第七十五、第七十六、第七十七、第七十八、第七十九、第八十、第八十二、第八十四、第八十八、第九十一、第九十四、第九十九、第一百及第一百零二具體實施例中的任何一個所述。

於第二方面之第十四具體實施例中，其也是第二個方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二及第十三具體實施例之一具體實施例，其中該多胜肽，較佳為海藻糖磷酸化酶，具有於45°C下半衰期為4天至9天或更多，較佳為5.5天至9天或更多，更佳為7天至9天或更多，甚至更佳為9天或更多，且最佳為9天；且其中該多胜肽，較佳為海藻糖磷酸化酶，係定義如在該第一方面之第一至第一百二十具體實施例或其任何其他具體實施例之任何一個所述，較佳為如該第一方面之第二十八、第二十九、第三十二、第三十七、第三十八、第三十九、第四十、第四十一、第四十二、第四十三、第四十四、第四十五、第四十六、第五十九、第六十、第六十一、第六十二、第七十一、第七十二、第七十三、第七十四、第七十五、第七十六、第七十七、第七十八、第七十九、第八十、第八十二、第八十四、第八十八、第九十一、第九十四、第九十九、第一百及第一百零二具體實施例中的任何一個所述，更佳定義如在該第一方面之第二十八、第二十九、第三十二、第三十七、第三十八、第三十九、第四十、第五十九、第六十、第六十一、第六十二、第七十一、第七十二、第七十三、第七十四、第七十五、第七十六、第七十七、第七十八、第七十九、第八十、第八十二、第八十四、第八十八、第九十一、第九十四、第九十九、第一百及第一百零二具體實施例中的任何一個所述。

於第二方面之第十五具體實施例中，其也是第二個方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三及第十四具體實施例之一具體實施例，其中該多胜肽，較佳為海藻糖磷酸化酶，具有以100/500- 比率 表示之相對活性，該100/500-比率介於0.65至1.0之間，較佳為0.7至1.0，較佳為0.75至1.0，較佳為0.8至1.0，較佳為0.85至1.0，較佳為0.9至1.0，較佳為0.95至1.0，更佳為0.8至1.0；且其中該海藻糖磷酸化酶，係定義如在該第一方面之第一至第一百二十具體實施例或其任何其他具體實施例之任何一個所述，較佳為如該第一方面之第二十八、第二十九、第三十二、第三十七、第三十八、第三十九、第四十、第四十一、第四十二、第四十三、第四十四、第四十五、第四十六、第五十九、第六十、第六十一、第六十二、第七十一、第七十二、第七十三、第七十四、第七十五、第七十六、第七十七、第七十八、第七十九、第八十、第八十二、第八十四、第八十八、第九十一、第九十四、第九十九、第一百及第一百零二具體實施例中的任何一個所述，更佳定義如在該第一方面之第二十八、第二十九、第三十二、第三十七、第三十八、第三十九、第四十、第五十九、第六十、第六十一、第六十二、第七十一、第七十二、第七十三、第七十四、第七十五、第七十六、第七十七、第七十八、第七十九、第八十、第八十二、第八十四、第八十八、第九十一、第九十四、第九十九、第一百及第一百零二具體實施例中的任何一個所述。

於第二方面之第十六具體實施例中，其也是第二個方面的第一、第二、第三、第四、第五及第六具體實施例之一具體實施例，其中該多胜肽，較佳為海藻糖磷酸化酶，相較於SEQ ID NO: 1的海藻糖磷酸化酶，其熱穩定性增加，由此熱穩定性增加為 i) 該Tm30 值 增加至少2°C至40.5°C，較佳為2°C至30.5°C，較佳為至少2.5°C至30.5°C，較佳為至少3°C至30.5°C，較佳為至少3.5°C至30.5°C，較佳為至少4°C至30.5°C，較佳為至少4.5°C至30.5°C，較佳為至少5°C至30.5°C，較佳為至少5.5°C至30.5°C，較佳為至少6°C至30.5°C，較佳為至少6.5°C至30.5°C，較佳為至少7°C至30.5°C，較佳為至少7.5°C至30.5°C，較佳為至少8°C至30.5°C，較佳為至少8.5°C至30.5°C，較佳為至少9°C至30.5°C，更佳為2°C至20.5°C，更佳為至少2.5°C至20.5°C，更佳為至少3°C至20.5°C，更佳為至少3.5°C至20.5°C，更佳為至少4°C至20.5°C，更佳為至少4.5°C至20.5°C，更佳為至少5°C至20.5°C，更佳為至少5.5°C至20.5°C，更佳為至少6°C至20.5°C，更佳為至少6.5°C至20.5°C，更佳為至少7°C至20.5°C，更佳為至少7.5°C至20.5°C，更佳為至少8°C至20.5°C，更佳為至少8.5°C至20.5°C，更佳為至少9°C至20.5°C，甚至更佳為2°C至15.5°C，甚至更佳為至少2.5°C至15.5°C，甚至更佳為至少3°C至15.5°C，甚至更佳為至少3.5°C至15.5°C，甚至更佳為至少4°C至15.5°C，甚至更佳為至少4.5°C至15.5°C，甚至更佳為至少5°C至15.5°C，甚至更佳為至少5.5°C至15.5°C，甚至更佳為至少5°C至15.5°C，較佳為至少6°C至15.5°C，甚至更佳為至少6.5°C至15.5°C，甚至更佳為至少7°C至15.5°C，甚至更佳為至少7.5°C至15.5°C，甚至更佳為至少8°C至15.5°C，甚至更佳為至少8.5°C至15.5°C，甚至更佳為至少9°C至15.5°C，甚至更佳為2°C至10.5°C，甚至更佳為至少2.5°C至10.5°C，甚至更佳為至少3°C至10.5°C，甚至更佳為至少3.5°C至10.5°C，甚至更佳為至少4°C至10.5°C，甚至更佳為至少4.5°C至10.5°C，甚至更佳為至少5°C至10.5°C，甚至更佳為至少5.5°C至10.5°C，甚至更佳為至少6°C至10.5°C，甚至更佳為至少6.5°C至10.5°C，甚至更佳為至少7°C至10.5°C，甚至更佳為至少7.5°C至10.5°C，甚至更佳為至少7.5°C至最高10.5°C，更佳為至少8°C至10.5°C，甚至更佳為至少8.5°C至10.5°C，甚至更佳為至少9°C至10.5°C，最佳為至少4°C至9°C； ii) 該Tm50 值 增加至少2°C至42.5°C，較佳為2°C至32.5°C，較佳為至少2.5°C至32.5°C，較佳為至少3°C至32.5°C，較佳為至少3.5°C至32.5°C，較佳為至少4°C至32.5°C，較佳為至少4.5°C至32.5°C，較佳為至少5°C至32.5°C，較佳為至少5.5°C至32.5°C，較佳為至少6°C至32.5°C，較佳為至少6.5°C至32.5°C，較佳為至少7°C至32.5°C，較佳為至少7.5°C至32.5°C，較佳為至少8°C至32.5°C，較佳為至少8.5°C至32.5°C，較佳為至少9°C至32.5°C，較佳為至少9.5°C至32.5°C，較佳為至少10°C至32.5°C，更佳為2°C至22.5°C，更佳為至少2.5°C至22.5°C，更佳為至少3°C至22.5°C，更佳為至少3.5°C至22.5°C，更佳為至少4°C至22.5°C，更佳為至少4.5°C至22.5°C，更佳為至少5°C至22.5°C，更佳為至少5.5°C至22.5°C，更佳為至少6°C至22.5°C，更佳為至少6.5°C至22.5°C，更佳為至少7°C至22.5°C，更佳為至少7.5°C至22.5°C，更佳為至少8°C至22.5°C，更佳為至少8.5°C至22.5°C，更佳為至少9°C至22.5°C，更佳為至少9.5°C至22.5°C，更佳為至少10°C至22.5°C，甚至更佳為2°C至17.5°C，甚至更佳為至少2.5°C至17.5°C，甚至更佳為至少3°C至17.5°C，甚至更佳為至少3.5°C至17.5°C，甚至更佳為至少4°C至17.5°C，甚至更佳為至少4.5°C至17.5°C，甚至更佳為至少5°C至17.5°C，甚至更佳為5.5°C至17.5°C，甚至更佳為6°C至17.5°C，甚至更佳為6.5°C至17.5°C，甚至更佳為至少7°C至17.5°C，甚至更佳為至少7.5°C至17.5°C，甚至更佳為至少8°C至17.5°C，甚至更佳為至少8.5°C至17.5°C，甚至更佳為至少9°C至17.5°C，甚至更佳為至少9.5°C至17.5°C，甚至更佳為至少10°C至17.5°C，甚至更佳為2°C至12.5°C，甚至更佳為2.5°C至12.5°C，甚至更佳為3°C至12.5°C，甚至更佳為至少3.5°C至12.5°C，甚至更佳為至少4°C至12.5°C，甚至更佳為至少4.5°C至12.5°C，甚至更佳為至少5°C至12.5°C，甚至更佳為至少5.5°C至12.5°C，甚至更佳為至少6°C至12.5°C，甚至更佳為至少6.5°C至12.5°C，甚至更佳為至少7°C至12.5°C，甚至更佳為至少7.5°C至12.5°C，甚至更佳為至少8°C至12.5°C，甚至更佳為至少8.5°C至12.5°C，甚至更佳為至少9°C至12.5°C，甚至更佳為至少9.5°C至12.5°C，甚至更佳為至少10°C至12.5°C，最佳為至少4°C至9°C； iii) 改進的製程穩定性 ，其特徵在於45°C下半衰期延長 i) 至少3倍至216倍或更多，較佳為至少24倍至216倍或更多，較佳為至少39倍至216倍或更多，較佳為至少48倍至216倍或更多，較佳為至少96倍至216倍或更多，較佳為至少132倍至216倍或更多，甚至更佳為至少216倍或更多，最佳為216倍； ii) 至少24倍至216倍或更多，較佳為至少39倍至216倍或更多，較佳為至少48倍至216倍或更多，較佳為至少96疊至216倍或更多，較佳為至少132倍至216倍或更多，甚至更佳為至少216倍或更多，最佳為216倍； iii) 至少96倍至216倍或更多，較佳為至少132倍至216倍或更多，甚至更佳為至少216倍或更多，最佳為216倍。

於第二方面之第十七具體實施例中，其也是第二個方面的第十六具體實施例之一具體實施例，該多胜肽，較佳為該海藻糖磷酸化酶，係為一多胜肽，較佳為一海藻糖磷酸化酶，係定義如在該第一方面之第一至第一百二十具體實施例或其任何其他具體實施例之任何一個所述，較佳為如該第一方面之第二十七、第二十八、第二十九、第三十一、第三十五、第三十六、第四十一、第四十二、第四十三、第四十四、第四十五、第四十六、第五十七、第六十九、第七十、第七十五、第七十六、第七十七、第七十八、第七十九、第八十、第八十二、第八十四、第八十八、第九十、第九十三、第九十九、第一百及第一百零二具體實施例中的任何一個所述，更佳定義如在該第一方面之第二十七、第二十八、第二十九、第三十一、第三十五、第三十六、第五十七、第六十九、第七十、第七十五、第七十六、第七十七、第七十八、第七十九、第八十、第八十二、第八十四、第八十八、第九十、第九十三、第九十九、第一百及第一百零二具體實施例中的任何一個所述。

於第二方面之第十八具體實施例中，其也是第二個方面的第十六具體實施例之一具體實施例，其中該多胜肽，較佳為海藻糖磷酸化酶，係為一多胜肽，較佳為一海藻糖磷酸化酶，係定義如在該第一方面之第一至第一百二十具體實施例或其任何其他具體實施例之任何一個所述，較佳為如該第一方面之第二十八、第二十九、第三十二、第三十七、第三十八、第三十九、第四十、第四十一、第四十二、第四十三、第四十四、第四十五、第四十六、第五十九、第六十、第六十一、第六十二、第七十一、第七十二、第七十三、第七十四、第七十五、第七十六、第七十七、第七十八、第七十九、第八十、第八十二、第八十四、第八十八、第九十一、第九十四、第九十九、第一百及第一百零二具體實施例中的任何一個所述，更佳定義如在該第一方面之第二十八、第二十九、第三十二、第三十七、第三十八、第三十九、第四十、第五十九、第六十、第六十一、第六十二、第七十一、第七十二、第七十三、第七十四、第七十五、第七十六、第七十七、第七十八、第七十九、第八十、第八十二、第八十四、第八十八、第九十一、第九十四、第九十九、第一百及第一百零二具體實施例中的任何一個所述。

於第二方面之第十九具體實施例中，其也是第二個方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七及第十八具體實施例之一具體實施例，其中該多胜肽，較佳為海藻糖磷酸化酶，係為一多胜肽，較佳為一海藻糖磷酸化酶，係定義如在該第一方面之第一至第一百二十具體實施例或其任何其他具體實施例之任何一個所述，較佳為如該第一方面之第二十八、第二十九、第三十二、第三十七、第三十八、第三十九、第四十、第四十一、第四十二、第四十三、第四十四、第四十五、第四十六、第五十九、第六十、第六十一、第六十二、第七十一、第七十二、第七十三、第七十四、第七十五、第七十六、第七十七、第七十八、第七十九、第八十、第八十二、第八十四、第八十八、第九十一、第九十四、第九十九、第一百及第一百零二具體實施例中的任何一個所述，更佳定義如在該第一方面之第二十八、第二十九、第三十二、第三十七、第三十八、第三十九、第四十、第五十九、第六十、第六十一、第六十二、第七十一、第七十二、第七十三、第七十四、第七十五、第七十六、第七十七、第七十八、第七十九、第八十、第八十二、第八十四、第八十八、第九十一、第九十四、第九十九、第一百及第一百零二具體實施例中的任何一個所述，其中該多胜肽，較佳為該海藻糖磷酸化酶，能夠催化葡糖基單醣與α-D-葡萄糖-1磷酸鹽的反應。

於第二方面之第二十具體實施例中，其也是第二個方面的第十九具體實施例之一具體實施例，其中該多胜肽，較佳為海藻糖磷酸化酶，能夠催化 葡萄糖與α-D-葡萄糖-1磷酸鹽轉化為海藻糖與無機磷酸鹽 及/或 海藻糖與無機磷酸鹽轉化為葡萄糖與α-D-葡萄糖-1磷酸鹽。

於第二方面之第二十一具體實施例中，其也是第二個方面的第十九及第二十具體實施例之一具體實施例，該轉化為可逆之轉化。

於第二方面之第二十二具體實施例中，其也是第二個方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十及第二十一具體實施例之一具體實施例，該多胜肽，較佳為海藻糖磷酸化酶，係根據EC號為EC 2.4.1.231之海藻糖磷酸化酶。

更具體地，於第三方面，其也是第三方面之第一具體實施例，透過一熱穩定之海藻糖磷酸化酶變體解決了這些與其它問題，其中該變體在含有1M蔗糖的緩衝液中於52°C作用15分鐘後保留其初始活性的至少30%，且該初始活性係於室溫下作用15分鐘後所測定。

於第三方面之第二具體實施例中，其也是第三個方面的第一具體實施例之一具體實施例，該變體在含有1 M蔗糖的緩衝液中於52°C下作用15分鐘後保留其初始活性的至少50%，且該初始活性係在室溫下作用15分鐘後測定。

更具體地，於第四方面，其也是第四方面之第一具體實施例，透過一海藻糖磷酸化酶的熱穩定變體來解決這些及其它問題，該變體係衍生自屬於擔子菌門(Basidomycota)的一生物體，較佳來自屬於傘菌綱(Agaricomycetes)的一生物體，且更佳來自屬於由裂摺菌屬(Schizophyllum)、側耳屬(Pleurotus)、奇果菌屬(Grifola)、蘑菇屬(Agaricus)、栓菌屬(Trametes)、革蓋菌屬(Coriolus)、栓菌屬(Trametes)、附毛菌屬(Trichaptum)，以及摺孔菌屬(Lenzites)所組成之群組的屬的一生物體，且最佳來自裂摺菌(Schizophyllum commune )，或來自舞菇(Grifola frondosa )的一生物體，其中該變體於52°C作用15分鐘後具有至少30%的殘餘活性，且其初始活性係在室溫作用15分鐘後測定。

於本發明第四方面之第一具體實施例之一較佳具體實施例中，該海藻糖磷酸化酶的熱穩定變體於52°C作用15分鐘後具有至少30%的殘餘活性，其中初始活性係在室溫作用15分鐘後測定，且其中該海藻糖磷酸化酶係為一來自裂褶菌之海藻糖磷酸化酶的變體。

於本發明第四方面之第一具體實施例之另一較佳具體實施例中，該海藻糖磷酸化酶的熱穩定變體於52°C作用15分鐘後具有至少30%的殘餘活性，且其中該初始活性係在室溫作用15分鐘後測定，且其中該海藻糖磷酸化酶係為一來自舞菇之海藻糖磷酸化酶的變體。

更具體而言，於一第十四方面，其也是該第十四個方面之第一具體實施例，透過一包含一胺基酸序列的多胜肽來解決這些及其它問題，該多胜肽較佳為一海藻糖磷酸化酶，其中該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列與SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160，較佳SEQ ID NO: 160，的胺基酸序列具有至少85%同一性及/或至少86%同源性，其中該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列在一個或多個胺基酸位置處包含一胺基酸取代，其中該一個或多個胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160，較佳SEQ ID NO: 160，的胺基酸位置所組成之群組：108、112、221、300、319、345、379、483、544、550、558、584、643，以及707，且其較佳係選自由下列SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160，較佳SEQ ID NO: 160，的胺基酸位置所組成之群組：108、112、221、300、319、379、483、544、550，以及558，且其更佳係選自由下列SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160，較佳SEQ ID NO: 160，的胺基酸位置所組成之群組：108、221、319、379、483、550，以及558。

於該第十四方面之第二具體實施例，其也是該第十四個方面之第一具體實施例之一具體實施例，該一個或多個胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 160的胺基酸位置所組成之群組：L108、V112、N221、A300、T319、F345、P379、V483、V544、S550、Q558、N584、A643，以及L707，其較佳係選自由下列SEQ ID NO: 160的胺基酸位置所組成之群組：L108、V112、N221、A300、T319、P379、V483、V544、S550，以及Q558，且其更加係選自由下列SEQ ID NO: 160的胺基酸位置所組成之群組：L108、V221、T319、P379、V483、S550，以及Q558。

於該第十四方面之第三具體實施例，其也是該第十四個方面之第一具體實施例之一具體實施例，該一個或多個胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 81的胺基酸位置所組成之群組：L108、V112、N221、A300、T319、F345、P379、I483、V544、S550、Q558、N584、A643，以及L707，其較佳係選自由下列SEQ ID NO: 81的胺基酸位置所組成之群組：L108、V112、N221、A300、T319、P379、I483、V544、S550，以及Q558，且其更加係選自由下列SEQ ID NO: 81的胺基酸位置所組成之群組：L108、V221、T319、P379、I483、S550，以及558。

於該第十四方面之第四具體實施例，其也是該第十四個方面之任何其他具體實施例之一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列在一個或多個胺基酸位置處包含一胺基酸取代，其中該一個或多個胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160，較佳SEQ ID NO: 160，的胺基酸位置所組成之群組：108、112、221、300、319、345、379、483、544、550、558、584、643，以及707。如在本發明的上下文中令人驚訝地發現的，一個或多個這些位置的突變增加了該酶的熱穩定性，導致於52.5°C作用15分鐘後的殘餘活性至少為12%，與由SEQ ID NO: 160的野生型胺基酸序列編碼的海藻糖磷酸化酶的9%殘餘活性相比。

於該第十四方面之第五具體實施例，其也是該第十四個方面之任何其他具體實施例之一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列在一個或多個胺基酸位置處包含一胺基酸取代，其中該一個或多個胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160，較佳SEQ ID NO: 160，的胺基酸位置所組成之群組：108、112、221、300、319、379、483、544、550，以及558。如在本發明的上下文中令人驚訝地發現的，一個或多個這些位置的突變增加了該酶的熱穩定性，導致於52.5°C作用15分鐘後的殘餘活性至少為30%，與由SEQ ID NO: 160的野生型胺基酸序列編碼的海藻糖磷酸化酶的9%殘餘活性相比。

於該第十四方面之第六具體實施例，其也是該第十四個方面之第一具體實施例之一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列在一個或多個胺基酸位置處包含一胺基酸取代，其中該一個或多個胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160，較佳SEQ ID NO: 160，的胺基酸位置所組成之群組：108、221、319、379、483、550，以及558。如在本發明的上下文中令人驚訝地發現的，一個或多個這些位置的突變增加了該酶的熱穩定性，導致於52.5°C作用15分鐘後的殘餘活性至少為50%，與由SEQ ID NO: 160的野生型胺基酸序列編碼的海藻糖磷酸化酶的9%殘餘活性相比。

於該第十四方面之第七具體實施例，其也是該第十四個方面之前述的任何具體實施例之一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列包含一胺基酸序列，其係根據SEQ ID NO: 161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188，以及189的任一個，較佳為根據SEQ ID NO: 163、165、166、168、171、173、176、177、178、179、180、184、185、186、187、188，以及189的任一個，更佳為根據SEQ ID NO: 176、178、180、185，以及188的任一個。

於該第十四方面之第八具體實施例，其也是該第十四個方面之前述的任何具體實施例之一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列係由一胺基酸序列組成，其係根據SEQ ID NO: 161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188，以及189的任一個，較佳為根據SEQ ID NO: 163、165、166、168、171、173、176、177、178、179、180、184、185、186、187、188，以及189的任一個，更佳為根據SEQ ID NO: 176、178、180、185，以及188的任一個。

於該第十四方面之第九具體實施例，其也是該第十四個方面之前述的任何具體實施例之一具體實施例，該一個或多個胺基酸位置為二個或更多個胺基酸位置。

於該第十四方面之第十具體實施例，其也是該第十四個方面之前述的任何具體實施例之一具體實施例，該一個或多個胺基酸位置為三個或更多個胺基酸位置。

於該第十四方面之第十一具體實施例，其也是該第十四個方面之前述的任何具體實施例之一具體實施例，該一個或多個胺基酸位置為四個或更多個胺基酸位置。

於該第十四方面之第十二具體實施例，其也是該第十四個方面之前述的任何具體實施例之一具體實施例，該二個或更多個胺基酸位置包含一二個胺基酸對位置，其中該二個胺基酸對位置係選自由下列SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160，較佳SEQ ID NO: 160，的胺基酸位置所組成之群組：108與112、108與221、108與300、108與319、108與345、108與379、108與483、108與544、108與550、108與558、108與584、108與643、108與707、112與221、112與300、112與319、112與345、112與379、112與483、112與544、112與550、112與558、112與584、112與643、112與707、221與300、221與319、221與345、221與379、221與483、221與544、221與550、221與558、221與584、221與643、221與707、300與319、300與345、300與379、300與483、300與544、300與550、300與558、300與584、300與643、300與707、319與345、319與379、319與483、319與544、319與550、319與558、319與584、319與643、319與707、345與379、345與483、345與544、345與550、345與558、345與584、345與643、345與707、379與483、379與544、379與550、379與558、379與584、379與643、379與707、483與544、483與550、483與558、483與584、483與643、483與707、544與550、544與558、544與584、544與643、544與707、550與558、550與584、550與643、550與707、558與584、558與643、558與707、584與643、584與707，以及643與707，較佳為選自由下列胺基酸位置所組成之群組：L108與V112、L108與N221、L108與A300、L108與T319、L108與F345、L108與P379、L108與分別為SEQ ID NO: 160的V483或SEQ ID NO: 81的I483、L108與V544、L108與S550、L108與Q558、L108與N584、L108與A643、L108與L707、V112與N221、V112與A300、V112與T319、V112與F345、V112與P379、V112與分別為SEQ ID NO: 160的V483或SEQ ID NO: 81的I483、V112與V544、V112與S550、V112與Q558、V112與N584、V112與A643、V112與L707、N221與A300、N221與T319、N221與F345、N221與P379、N221與分別為SEQ ID NO: 160的V483或SEQ ID NO: 81的I483、N221與V544、N221與S550、N221與Q558、N221與N584、N221與A643、N221與L707、A300與T319、A300與F345、A300與P379、A300與分別為SEQ ID NO: 160的V483或SEQ ID NO: 81的I483、A300與V544、A300與S550、A300與Q558、A300與N584、A300與A643、A300與L707、T319與F345、T319與P379、T319與SEQ ID NO: 160的V483或SEQ ID NO: 81的I483、T319與V544、T319與S550、T319與Q558、T319與N584、T319與A643、T319與L707、F345與P379、F345與分別為SEQ ID NO: 160的V483或SEQ ID NO: 81的I483、F345與V544、F345與S550、F345與Q558、F345與N584、F345與A643、F345與L707、P379與分別為SEQ ID NO: 160的V483或SEQ ID NO: 81的I483、P379與V544、P379與S550、P379與Q558、P379與N584、P379與A643、P379與L707、分別為SEQ ID NO: 160的V483或SEQ ID NO: 81的I483與V544、分別為SEQ ID NO: 160的V483或SEQ ID NO: 81的I483與S550、分別為SEQ ID NO: 160的V483或SEQ ID NO: 81的I483與Q558、分別為SEQ ID NO: 160的V483或SEQ ID NO: 81的I483與N584、分別為SEQ ID NO: 160的V483或SEQ ID NO: 81的I483與A643、分別為SEQ ID NO: 160的V483或SEQ ID NO: 81的I483與L707、V544與S550、V544與Q558、V544與N584、V544與A643、V544與L707、S550與Q558、S550與N584、S550與A643、S550與L707、Q558與N584、Q558與A643、Q558與L707、N584與A643、N584與L707，以及A643與L707。

於該第十四方面之第十三具體實施例，其也是該第十四個方面之前述的任何具體實施例之一具體實施例，該二個胺基酸對位置係選自由下列胺基酸位置所組成之群組：L108與V112、L108與N221、L108與A300、L108與T319、L108與P379、L108與分別為SEQ ID NO: 160的V483或SEQ ID NO: 81的I483、L108與V544、L108與S550、L108與Q558、V112與N221、V112與A300、V112與T319、V112與P379、V112與分別為SEQ ID NO: 160的V483或SEQ ID NO: 81的I483、V112與V544、V112與S550、V112與Q558、N221與A300、N221與T319、N221與P379、N221與分別為SEQ ID NO: 160的V483或SEQ ID NO: 81的I483、N221與V544、N221與S550、N221與Q558、A300與T319、A300與P379、A300與分別為SEQ ID NO: 160的V483或SEQ ID NO: 81的I483、A300與V544、A300與S550、A300與Q558、T319與P379、T319與分別為SEQ ID NO: 160的V483或SEQ ID NO: 81的I483、T319與V544、T319與S550、T319與Q558、P379與分別為SEQ ID NO: 160的V483或SEQ ID NO: 81的I483、P379與V544、P379與S550、P379與Q558、分別為SEQ ID NO: 160的V483或SEQ ID NO: 81的I483與V544、分別為SEQ ID NO: 160的V483或SEQ ID NO: 81的I483與S550、分別為SEQ ID NO: 160的V483或SEQ ID NO: 81的I483與Q558、V544與S550、V544與Q558，以及S550與Q558。

於該第十四方面之第十四具體實施例，其也是該第十四個方面之前述的任何具體實施例之一具體實施例，該二個胺基酸對位置係選自由下列胺基酸位置所組成之群組：L108與T319、L108與P379、L108與分別為SEQ ID NO: 160的V483或SEQ ID NO: 81的I483、L108與S550、L108與Q558、N221與T319、N221與P379、N221與分別為SEQ ID NO: 160的V483或SEQ ID NO: 81的I483、N221與V544、N221與S550、N221與Q558、T319與P379、T319與分別為SEQ ID NO: 160的V483或SEQ ID NO: 81的I483、T319與V544、T319與S550、T319與Q558、P379與分別為SEQ ID NO: 160的V483或SEQ ID NO: 81的I483、P379與V544、P379與S550、P379與Q558、分別為SEQ ID NO: 160的V483或SEQ ID NO: 81的I483與V544、分別為SEQ ID NO: 160的V483或SEQ ID NO: 81的I483與S550、分別為SEQ ID NO: 160的V483或SEQ ID NO: 81的I483與Q558，以及S550與Q558。

於該第十四方面之第十五具體實施例，其也是該第十四個方面之前述的任何具體實施例之一具體實施例，除了在該二個胺基酸位置處的取代之外，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列包含在至少一個或多個另外的胺基酸位置處的一胺基酸取代，其中該一個或多個另外的胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160，較佳SEQ ID NO: 160，的胺基酸位置所組成之群組：108、112、221、300、319、345、379、483、544、550、558、584、643，以及707，較佳為除了在該二個胺基酸位置處的取代之外，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列包含在至少一個或多個另外的胺基酸位置處的一胺基酸取代，其中該一個或多個另外的胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160，較佳SEQ ID NO: 160，的胺基酸位置所組成之群組：108、112、221、300、319、379、483、544、550，以及558，更佳為除了在該二個胺基酸位置處的取代之外，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列包含在至少一個或多個另外的胺基酸位置處的一胺基酸取代，其中該一個或多個另外的胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160，較佳SEQ ID NO: 160，的胺基酸位置所組成之群組：108、221、319、379、483、550，以及558。

於該第十四方面之第十六具體實施例，其也是該第十四個方面之另一具體實施例之一具體實施例，該一個或多個另外的胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160，較佳SEQ ID NO: 160，的胺基酸位置所組成之群組：L108、V112、N221、A300、T319、F345、P379，分別為SEQ ID NO: 160的V483或SEQ ID NO: 81的I483、V544、S550、Q558、N584、A643，以及L707，較佳為除了在該二個胺基酸位置處的取代之外，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列包含在至少一個或多個另外的胺基酸位置處的一胺基酸取代，其中該一個或多個另外的胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160，較佳SEQ ID NO: 160，的胺基酸位置所組成之群組：L108、V112、N221、A300、T319、P379，分別為SEQ ID NO: 160的V483或SEQ ID NO: 81的I483、V544、S550，以及Q558，更佳為除了在該二個胺基酸位置處的取代之外，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列包含在至少一個或多個另外的胺基酸位置處的一胺基酸取代，其中該一個或多個另外的胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160，較佳SEQ ID NO: 160，的胺基酸位置所組成之群組：L108、V221、T319、P379，分別為SEQ ID NO: 160的V483或SEQ ID NO: 81的I483、S550，以及Q558。

於該第十四方面之第十七具體實施例，其也是該第十四個方面之前述的任何具體實施例之一具體實施例，在該胺基酸位置處的任何取代係選自由A、R、N、D、C、Q、E、G、H、I、L、K、M、F、P、S、T、W、Y，以及V所組成之群組，較佳為在該胺基酸位置上的任何取代係各別且獨立地選自由A、R、N、D、C、Q、E、G、H、I、L、K、M、F、P、S、T、W、Y，以及V所組成之群組。

於該第十四方面之第十八具體實施例，其也是該第十四個方面之第十二具體實施例或該第十四方面之前述具體實施例的任何其他之一具體實施例，該取代係位於SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160，較佳SEQ ID NO: 160，的以下任何一胺基酸位置：160 108、112、221、300、319、345、379、483、544、550、558、584、643，以及707。

於該第十四方面之第十九具體實施例，其也是該第十四個方面之第十三具體實施例或該第十四方面之前述具體實施例的任何其他之一具體實施例，該取代係位於SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160，較佳SEQ ID NO: 160，的以下任何一胺基酸位置：L108、V112、N221、A300、T319、F345、P379、V483、V544、S550、Q558、N584、A643，以及L707。

於該第十四方面之第二十具體實施例，其也是該第十四個方面之前述具體實施例的任何其他之一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列包含一個或多個取代，其中該取代選自由下列所組成之群組： 在SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160，較佳SEQ ID NO: 160，的第L108個位置處的一個胺基酸取代，該取代為L108A、L108G、L108I、L108M、L108P或L108V，較佳為L108I； 在SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160，較佳SEQ ID NO: 160，的第V112個位置處的一個胺基酸取代，該取代為V112A、V112G、V112L、V112M、V112P或V112I，較佳為V112I； 在SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160，較佳SEQ ID NO: 160，的第N221個位置處的一個胺基酸取代，該取代為N221A、N221G、N221I、N221L、N221M、N221P或N221V，較佳為N221I、N221L、N221M或N221V，以及更佳為N221V； 在SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160，較佳SEQ ID NO: 160，的第A300個位置處的一個胺基酸取代，該取代為A300G、A300I、A300L、A300M、A300P或A300V，較佳為A300I或A300L，以及更佳為A300I； 在SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160，較佳SEQ ID NO: 160，的第T319個位置處的一個胺基酸取代，該取代為T319A、T319G、T319I、T319L、T319M、T319P，或T319V，較佳為T319I或T319V，以及更佳為T319I； 在SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160，較佳SEQ ID NO: 160，的第P379個位置處的一個胺基酸取代，該取代為P379A、P379G、P379I、P379L、P379M、P379V、P379N、P379C、P379Q、P379S或P379T，較佳為P379A、P379G、P379M、P379V、P379N、P379C、P379Q、P379S或P379T、更佳為P379G、P379V、P379C或P379S，或P379T、even 更佳為P379V或P379T，以及最佳為P379V； 在SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160，較佳SEQ ID NO: 160，的第I483個位置處的一個胺基酸取代，該取代為I483A、I483G、I483I、I483L、I483M、I483P或I483V，較佳為I483A、I483G、I483L、I483M或I483V、更佳為I483A； 在SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160，較佳SEQ ID NO: 160，的第Q483個位置處的一個胺基酸取代，該取代為Q483A、Q483G、Q483I、Q483L、Q483M、Q483P或Q483V，較佳為Q483A、Q483G、Q483L、Q483M或Q483V、更佳為Q483A； 在SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160，較佳SEQ ID NO: 160，的第V544個位置處的一個胺基酸取代，該取代為V544A、V544G、V544I、V544L、V544M或V544P，較佳為V544I或V544P，以及更佳為V544I； 在SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160，較佳SEQ ID NO: 160，的第S550個位置處的一個胺基酸取代，該取代為S550N、S550C、S550Q或S550T，較佳為S550T； 在SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160，較佳SEQ ID NO: 160，的第Q558個位置處的一個胺基酸取代，該取代為Q558D或Q558E，較佳為Q558E； 在SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160，較佳SEQ ID NO: 160，的第D558個位置處的一個胺基酸取代，該取代為D558N、D558C、D558Q、D558S、D558T、D558A、D558G、D558I、D558L、D558M、D558P或D558V，較佳為D558N、D558G或D558A，以及更佳為D558N； 在SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160，較佳SEQ ID NO: 160，的第A643個位置處的一個胺基酸取代，該取代為A643D或A643E，較佳為A643E； 在SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160，較佳SEQ ID NO: 160，的第L707個位置處的一個胺基酸取代，該取代為L707A、L707G、L707I、L707M、L707P或L707V，較佳為L707M。

於該第十四方面之第二十一具體實施例，其也是該第十四個方面之前述具體實施例的任何其他之一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列與SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160，較佳SEQ ID NO: 160，的胺基酸序列具有以下同一性：至少85%，還更佳為至少86%，或至少87%，或至少88%，或至少89%，或至少90%、甚至更佳為至少91%，或至少92%，或至少93%，或至少94%，或至少95%，以及最佳為至少96%，或至少97%，或至少98%，或至少99%、至少99.1%，或至少99.2%，或至少99.3%，或至少99.4%，或至少99.5%，或至少99.6%，或至少99.7%，或至少99.8%，以及尤其至少99.9%，或100%。

於該第十四方面之第二十二具體實施例，其也是該第十四個方面之前述具體實施例的任何其他之一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列與下列胺基酸序列具有至少85%同一性：SEQ ID NO: 161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189，較佳為根據SEQ ID NO: 163、165、166、168、171、173、176、177、178、179、180、184、185、186、187、188、189、2、84、85、87、88、89、91、92、93、94、95、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、109的任何之一，更佳為根據SEQ ID NO: 176、178、180、185、188的任何之一。

於該第十四方面之第二十三具體實施例，其也是該第十四個方面之第十七具體實施例或該第十四方面之前述具體實施例的任何其他之一具體實施例，該胺基酸序列的同一性為至少86%，或至少87%，或至少88%，或至少89%，或至少90%、更佳為至少91%，或至少92%，或至少93%，或至少94%，或至少95%，以及最佳為至少96%，或至少97%，或至少98%，或至少99%、至少99.1%，或至少99.2%，或至少99.3%，或至少99.4%，或至少99.5%，或至少99.6%，或至少99.7%，或至少99.8%，以及尤其是至少99.9%，或100%。

於該第十四方面之第二十四具體實施例，其也是該第十四個方面之前述具體實施例的任何其他之一具體實施例，該多胜肽，較佳為海藻糖磷酸化酶，能夠催化一糖基單醣與α-D 葡萄糖-1磷酸鹽之反應。

於該第十四方面之第二十五具體實施例，其也是該第十四個方面之第十九具體實施例之一具體實施例，該多胜肽，較佳為海藻糖磷酸化酶能夠催化 葡萄糖與α-D-葡萄糖-1磷酸鹽轉化為海藻糖與無機磷酸鹽 及/或 將海藻糖與無機磷酸鹽轉化為葡萄糖與α-D-葡萄糖-1磷酸鹽。

於該第十四方面之第二十六具體實施例，其也是該第十四個方面之第十九及第二十具體實施例之一具體實施例，該轉化為一可逆之轉化。

於該第十四方面之第二十七具體實施例，其也是該第十四個方面之前述具體實施例的任何其他之一具體實施例，該多胜肽，較佳為海藻糖磷酸化酶，係一根據EC號為EC 2.4.1.231之海藻糖磷酸化酶。

於該第十四方面之第二十八具體實施例，其也是該第十四個方面之前述具體實施例的任何其他之一具體實施例，該多胜肽，較佳為海藻糖磷酸化酶，其特徵在於於52.5°C作用15分鐘後的熱穩定性，其係由一殘餘活性所定義，該殘餘活性為15%至100%，較佳為30%至100%，更佳為50%至100%，最佳為70%至100%。

更具體而言，於第十五方面，其也是該第十五個方面之第一具體實施例，透過包含一胺基酸序列的多胜肽，較佳為海藻糖磷酸化酶，解決了這些及其他問題，其中該多胜肽，較佳為海藻糖磷酸化酶，的胺基酸序列與SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160，較佳為SEQ ID NO: 160，的胺基酸序列具有至少85%同一性及/或至少85%同源性，其中該多胜肽，較佳為海藻糖磷酸化酶，其特徵在於於52.5°C作用15分鐘後的熱穩定性，其係由一殘餘活性所定義，該殘餘活性為15%至100%，較佳為30%至100%，更佳為50%至100%，最佳為70%至100%。

於該第十五方面之第二具體實施例，其也是該第十五個方面之第一具體實施例之一具體實施例，該多胜肽，較佳為海藻糖磷酸化酶，係如該第十四方面之任一具體實施例所定義。

於該第十五方面之第二具體實施例的一較佳具體實施例，該多胜肽，較佳為海藻糖磷酸化酶，係如該第十四方面之任一具體實施例，較佳為第十四方面的第五個具體實施例所定義。

於該第十五方面之第二具體實施例的一較佳具體實施例，該多胜肽，較佳為海藻糖磷酸化酶，係如該第十四方面之任一具體實施例，較佳為第十四方面的第六個具體實施例所定義。 於該第十五方面的第三個具體實施例，其也是第十四及第十五個方面的任何其它具體實施例之一具體實施例，該多胜肽，較佳為海藻糖磷酸化酶，的特徵在於於52.5°C作用15分鐘後的熱穩定性，其係由一殘餘活性所定義，該殘餘活性為30%至100%，較佳為50%至100%，最佳為70%至100%。

於該第十五方面之第三具體實施例的一較佳具體實施例，該多胜肽，較佳為海藻糖磷酸化酶，係如該第十四方面之任一具體實施例，較佳為第十四方面的第五個具體實施例所定義。

於該第十五方面之第三具體實施例的一較佳具體實施例，該多胜肽，較佳為海藻糖磷酸化酶，係如該第十四方面之任一具體實施例，較佳為第十四方面的第六個具體實施例所定義。

於該第十五方面之第四具體實施例，其也是該第十四及第十五方面之任何其他的具體實施例之一具體實施例，其中該多胜肽，較佳為海藻糖磷酸化酶，其中該多胜肽，較佳為海藻糖磷酸化酶，能夠催化一葡糖基單醣與α- D-葡萄糖-1磷酸鹽的反應。

於該第十五方面之第五具體實施例，其也是該第十四及第十五方面之任何的具體實施例之一具體實施例，該多胜肽，較佳為海藻糖磷酸化酶，能夠催化 葡萄糖與α-D-葡萄糖-1磷酸鹽轉化為海藻糖與無機磷酸鹽 及/或 將海藻糖與無機磷酸鹽轉化為葡萄糖與α-D-葡萄糖-1磷酸鹽。

於該第十五方面之第六具體實施例，其也是該第十五方面之第四及第六具體實施例或該第十四及第十五方面之任何的具體實施例之一具體實施例，該轉化為一可逆之轉化。

於該第十五方面之第七具體實施例，其也是該第十四及第十五方面之任何的具體實施例之一具體實施例，該多胜肽，較佳為海藻糖磷酸化酶，為一根據EC號為EC 2.4.1.231之海藻糖磷酸化酶。

更具體而言，於一第五方面，其也是該第五方面之第一具體實施例，透過包含SEQ ID NO: 1，或SEQ ID NO: 160或SEQ ID NO: 81的胺基酸序列的海藻糖磷酸化酶的熱穩定變體，解決了這些和其他問題，其中該變體於52°C作用15分鐘後具有至少30%的殘餘活性，且初始活性係在室溫作用15分鐘後測定。

於本發明之第五方面的第一具體實施例之一較佳具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的熱穩定變體包含SEQ ID NO: 1的胺基酸序列，其中該變體於52°C作用15分鐘後具有至少30%的殘餘活性，且初始活性係在室溫下作用15分鐘後測定。

於本發明之第五方面的第一具體實施例之另一較佳具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的熱穩定變體包含SEQ ID NO: 160的胺基酸序列，其中該變體於52°C作用15分鐘後具有至少30%的殘餘活性，且初始活性係在室溫下作用15分鐘後測定。

於本發明之第五方面的第一具體實施例之一較佳具體實施例，該海藻糖磷酸化酶的熱穩定變體包含SEQ ID NO: 81的胺基酸序列，其中該變體於52°C作用15分鐘後具有至少30%的殘餘活性，且初始活性係在室溫下作用15分鐘後測定。

於第四方面及第五方面的一第二具體實施例，其也是該第四方面之第一具體實施例的具體實施例以及該第五方面的第一具體實施例，以及也是該第四方面及該第五方面之前述的具體實施例的任何其他之一具體實施例，該變體在含有1M蔗糖的緩衝液中於52°C作用15分鐘後具有至少50%的殘餘活性，且初始活性係在室溫下作用15分鐘後測定。

於該第二方面之第二十三具體實施例，其也是該第三方面之一第三具體實施例，該第四方面之一第三具體實施例，以及該第五方面之一第三具體實施例，以及該第十五方面之另一具體實施例，或該第二、第三、第四、第五或第十五方面之前述的任一具體實施例，該多胜肽，較佳為海藻糖磷酸化酶，包含 (i) 如該第一方面之第一至一百二十具體實施例或任何其他具體實施例中任一個所定義之胺基酸序列，較佳如本發明第一方面之第一至九十八具體實施例之任一項所定義 及/或 (ii) 如本發明第十四方面之任一個具體實施例中所定義的胺基酸序列 及/或 (iii) 如本發明第十三方面之任一具體實施例中所定義的胺基酸序列。

更具體而言，於一第十六方面，該方面也是該第十六方面之第一具體實施例，且其也是本發明之所有方面之一較佳具體實施例，以及本發明之所有方面的任何所有的具體實施例，且特別是如本文所述之本發明的第一、第二、第三、第四、第五、第十三、第十四，及第十五方面的任何具體實施例中，這些和其他問題係由該多胜肽解決，其中該多胜肽，較佳為海藻糖磷酸化酶，係為該多胜肽的酶促活性片段，較佳為本發明之海藻糖磷酸化酶的酶促活性片段，如在任何方面或在本文所述及/或如上所述之方面的任何較佳具體實施例中所定義。

於該第十六方面之一較佳具體實施例，其也是該第十六方面之前述具體實施例的任何一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶係為該多胜肽的酶促活性片段，較佳為本發明之海藻糖磷酸化酶的酶促活性片段，具有一至少400個至750個胺基酸，或至少450個至750個胺基酸，或至少500個至750個胺基酸，或至少550個至750個胺基酸，或至少600個至750個胺基酸，或至少650個至750個胺基酸，或至少700個至750個胺基酸，或至少700個至730個胺基酸的長度。

於該第十六方面之一較佳具體實施例，其也是該第十六方面之前述具體實施例的任何一具體實施例，該多胜肽係為該多胜肽的酶促活性片段，較佳為本發明之海藻糖磷酸化酶的酶促活性片段，其中該海藻糖磷酸化酶為

(i) 在其N-端截短至少1至37個胺基酸，至少1至87個胺基酸，至少1至137個胺基酸，至少1至187個胺基酸 ，至少1至237個胺基酸，至少1至287個胺基酸，至少1至337個胺基酸；及/或

(ii) 在其C-端截短至少1至ˇ37個胺基酸，至少1至87個胺基酸，至少1至137個胺基酸，至少1至187個胺基酸 酸，至少1至237個胺基酸，至少1至287個胺基酸，至少1至337個胺基酸；及/或

(iii) 在一個或多個內部位置截短，其中每個或多個內部位置攜帶刪除1、2、3、4、5、6、7、8、9、10，或至少10至15、至少15至20、至少20至25、至少25至30、至少30至35、至少35至40、至少40至45，或至少45至50個胺基酸。

於該第十六方面之一較佳具體實施例，其也是該第十六方面之前述具體實施例的任何一具體實施例，該多胜肽，較佳為本發明之海藻糖磷酸化酶，為該多胜肽，較佳為本發明之海藻糖磷酸化酶，的酶促活性片段，根據本文及/或上下文定義的任何具體實施例，其保留海藻糖磷酸化酶活性。

更具體而言，於一第六方面，其也是該第六方面之第一具體實施例，這些及其他問題透過一種用於以下之反應的方法解決： 葡糖基單醣與α-D-葡萄糖-1磷酸鹽的反應方法 其中該方法包括 以本文公開之本發明的第一、第二、第三、第四、第五、第十三、第十四、第十五及第十六方面之任何具體實施例中所定義的海藻糖磷酸化酶 使葡糖基單醣與α-D-葡萄糖-1磷酸鹽反應。

更具體而言，於一第七方面，其也是該第七方面之第一具體實施例，透過一種方法解決這些及其他問題，該方法係用於將葡萄糖與α-D-葡萄糖-1磷酸鹽轉化為海藻糖與無機磷酸鹽，其中該方法包括以如本文所揭露之本發明的第一、第二、第三、第四、第五、第十三、第十四、第十五及第十六方面的任何具體實施例中所定義之海藻糖磷酸化酶，使葡萄糖與α-D-葡萄糖-1磷酸鹽產生反應。

更具體而言，於一第八方面，其也是該第八方面之第一具體實施例，透過一種方法解決這些及其他問題，該方法係用於將海藻糖與無機磷酸鹽轉化為葡萄糖與α-D-葡萄糖-1磷酸鹽，其中該方法包括以如本文所揭露之本發明的第一、第二、第三、第四、第五、第十三、第十四、第十五及第十六方面的任何具體實施例中所定義之海藻糖磷酸化酶，使海藻糖與無機磷酸鹽反應為葡萄糖與α-D-葡萄糖-1磷酸鹽。

於該第六方面之一第二具體實施例，以及該第七方面之一第二具體實施例，以及在該第八方面的一第二方面，其也是該第六方面之第一具體實施例，以及該第七方面之第一具體實施例，以及該第八方面之第一具體實施例的具體實施例，該轉化為一可逆之轉化。

更具體而言，於一第九方面，其也是該第九方面之第一具體實施例，透過一種用於製備海藻糖之方法解決這些及其他問題，該方法包括使葡萄糖與α-D-葡萄糖-1磷酸鹽在一海藻糖磷酸化酶存在下於至少40°C的溫度下進行反應，其中該海藻糖磷酸化酶 (i) 與未經熱處理之海藻糖磷酸化酶的活性相比，在含有1M蔗糖的緩衝液中於52°C作用15分鐘後保留其活性的至少30%，及/或 (ii) 與未經熱處理之海藻糖磷酸化酶的活性相比，在含有1M蔗糖的緩衝液中於52°C作用15分鐘後保留其活性的至少50%，及/或 (iii) 在100 mM葡萄糖下的活性與在500 mM葡萄糖下的活性的比率至少為0.65。

於該第九方面之一第二具體實施例，其也是該第九方面之第一具體實施例之一具體實施例，該反應係於40至55°C下進行。

於該第九方面之一第三具體實施例，其也是該第九方面之第一具體實施例之一具體實施例，該反應係於45至55°C下進行。

於該第九方面之一第四具體實施例，其也是該第九方面之第一、第二及第三具體實施例之一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶為一熱穩定之海藻糖磷酸化酶。

於該第九方面之一第五具體實施例，其也是該第九方面之第一、第二、第三及第四具體實施例之一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶為一突變之海藻糖磷酸化酶。

於該第九方面之一第六具體實施例，其也是該第九方面之第一、第二、第三、第四及第五具體實施例之一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶為一重組之海藻糖磷酸化酶。

於該第九方面之一第七具體實施例，其也是該第九方面之第一、第二、第三、第四、第五及第六具體實施例之一具體實施例，該活性係以如本文所述，更具體而言係如第[0371]及[0372]段所述者決定。

於該第六方面之另一具體實施例，其也是該第六方面之每個及任一個具體實施例之一具體實施例，於該第七方面之另一具體實施例，其也是該第七方面之每個及任一個具體實施例之一具體實施例，於該第八方面之另一具體實施例，其也是該第八方面之每個及任一個具體實施例之一具體實施例，以及於該第九方面之另一具體實施例，其也是該第九方面之每個及任一個具體實施例之一具體實施例，其中在該反應中唯一含有的穩定劑為蔗糖。

於該第六方面之另一具體實施例，其也是該第六方面之每個及任一個具體實施例之一具體實施例，於該第七方面之另一具體實施例，其也是該第七方面之每個及任一個具體實施例之一具體實施例，於該第八方面之另一具體實施例，其也是該第八方面之每個及任一個具體實施例之一具體實施例，以及於該第九方面之另一具體實施例，其也是該第九方面之每個及任一個具體實施例之一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶以非-固定化形式存在。

於該第六方面之另一具體實施例，其也是該第六方面之每個及任一個具體實施例之一具體實施例，於該第七方面之另一具體實施例，其也是該第七方面之每個及任一個具體實施例之一具體實施例，於該第八方面之另一具體實施例，其也是該第八方面之每個及任一個具體實施例之一具體實施例，以及於該第九方面之另一具體實施例，其也是該第九方面之每個及任一個具體實施例之一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶為一在如本文所述之該第一、第二、第三、第四、第五、第十三、第十四第十五，及第十六方面之任何具體實施例之一，包括其任何之具體實施例，所定義之海藻糖磷酸化酶。

更具體而言，於一第十方面，其也是該第十方面之第一具體實施例，透過使用如本文所述之該第一、第二、第三、第四、第五、第十三、第十四、第十五及第十六個方面之任何具體實施例之一的用於生產海藻糖的一海藻糖磷酸化酶解決了這些及其他問題。

更具體而言，於一第十一方面，其也是該第十一方面之第一具體實施例，係透過一方法解決了這些及其他問題，該方法係用於提高一海藻糖磷酸化酶的熱穩定性，其中該方法包括： - 比對一第一海藻糖磷酸化酶的一胺基酸序列與一第二海藻糖磷酸化酶的一胺基酸序列， - 鑑定對應於該第一海藻糖磷酸化酶的該胺基酸序列的一個或多個胺基酸位置的該第二海藻糖磷酸化酶的該胺基酸序列的一個或多個胺基酸位置，其中在該第一海藻糖磷酸化酶的該胺基酸序列的一個或多個胺基酸位置的一胺基酸殘基取代提高了該第一海藻糖磷酸化酶的熱穩定性， - 取代對應於該第一海藻糖磷酸化酶的該胺基酸序列的一個或多個胺基酸位置的在該第二海藻糖磷酸化酶的一個或多個胺基酸位置處的一胺基酸殘基，其中在該第一海藻糖磷酸化酶的該胺基酸序列的一個或多個胺基酸位置的一胺基酸殘基的取代提高了該第一海藻糖磷酸化酶的熱穩定性， 其中該第一海藻糖磷酸化酶為包含根據SEQ ID NO: 1或根據SEQ ID NO: 160的胺基酸序列，較佳根據SEQ ID NO: 1的胺基酸序列之海藻糖磷酸化酶。

於該第 十一方面之第二具體實施例，其也是該第十一方面之第一具體實施例之一具體實施例，該方法還包括 - 測試該第二海藻糖磷酸化酶的該一個或多個胺基酸位置處的取代的胺基酸殘基是否對應於該第一海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列的一個或多個胺基酸位置，導致與該第一海藻糖磷酸化酶的熱穩定性相比，該第二海藻糖磷酸化酶的熱穩定性增加，較佳為熱穩定性係以如本文描述中所定義之方式確定。

於該第十一方面之第三具體實施例，其也是該第十一方面之第一及第二具體實施例之一具體實施例， 對應於該第一海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列的一個或多個胺基酸位置的該第二海藻糖磷酸化酶的一個或多個胺基酸位置處的胺基酸殘基被取代，使得取代的胺基酸殘基導致該第二海藻糖磷酸化酶的熱穩定性增加。

於該第十一方面之第四具體實施例，其也是該第十一方面之第一、第二及第三具體實施例之一具體實施例，該第一海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列與該第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列的同源性為至少50%。

於該第十一方面之第五具體實施例，其也是該第十一方面之第四具體實施例之一具體實施例，該同源性為至少51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70、%、72%、73 % 、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%，較佳為該同源性為至少55%、60%、63%、65%、68%、70%、75%、77%或80%。

於該第十一方面之第六具體實施例，其也是該第十一方面之第一、第二及第三具體實施例之一具體實施例，該第一海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列與該第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列的同一性為至少50%。

於該第十一方面之第七具體實施例，其也是該第十一方面之第六具體實施例之一具體實施例，該同一性為至少51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70、%、72%、73 %、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%，較佳為至少55%、60%、63%、65%、68%、70%、75%、77%或80%，更佳為至少68%、73 %、75 %、76 %、77%或78%。

於該第十一方面之第八具體實施例，其也是該第十一方面之第一、第二、第三、第四、第五、第六及第七具體實施例之一具體實施例，該第一海藻糖磷酸化酶之胺基酸序列的一個或多個胺基酸位置為：

(A) 係選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：712、383、10、114、118、192、197、220、225、304、306、318、323、339、349、357、459、476、481、484、487、488、506、511、526、530、532、533、537、550、556、564、590、649、667、703與705，較佳為該第一海藻糖磷酸化酶之胺基酸序列的一個或多個胺基酸位置係各別且獨立地選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：712、383、10、114、118、192、197、220、225、304、306、318、323、339、349、357、459、476、481、484、487、488、506、511、526、530、532、533、537、550、556、564、590、649、667、703與705，較佳為選自由下列胺基酸位置所組成之群組：712、383、114、118、225、304、323、349、357、487、550、556、564、590與649，更佳為選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：712、383、114、118、225、304、323、349、487、550、556、564、590，以及649，甚至更佳為選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：383、114、118、225、304、323、487、550、556，以及564，以及甚至更佳為選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：383、114、225、323、487、556，以及564，或

(B) 係選自由下列SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160，較佳為SEQ ID NO: 160，的胺基酸位置所組成之群組：108、112、221、300、319、345、379、483、544、550、558、584、643，以及707，較佳為該第一海藻糖磷酸化酶之胺基酸序列的一個或多個胺基酸位置係各別且獨立地選自由下列SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160，較佳為SEQ ID NO: 160，的胺基酸位置所組成之群組：108、112、221、300、319、345、379、483、544、550、558、584、643，以及707，更佳為選自由下列SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160，較佳為SEQ ID NO: 160，的胺基酸位置所組成之群組：108、221、319、379、483、550，以及558。

於該第十一方面之第九具體實施例，其也是該第十一方面之第八具體實施例之一具體實施例，該第一海藻糖磷酸化酶之胺基酸序列的一個或多個胺基酸位置為：

(A) 係選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：L712、P383、V10、L114、I118、S192、S197、Y220、N225、A304、D306、P318、T323、L339、F349、G357、A459、Q476、E481、A484、Q487、K488、A506、A511、R526、E530、G532、D533、D537、V550、S556、T564、D590、A649、R667、A703與K705，較佳為該第一海藻糖磷酸化酶之胺基酸序列的一個或多個胺基酸位置係各別且獨立地選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：L712、P383、V10、L114、I118、S192、S197、Y220、N225、A304、D306、P318、T323、L339、F349、G357、A459、Q476、E481、A484、Q487、K488、A506、A511、R526、E530、G532、D533、D537、V550、S556、T564、D590、A649、R667、A703與K705，較佳為選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：L712、P383、L114、I118、N225、A304、T323、F349、Q487、V550、S556、T564、D590，以及A649，更佳為選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：P383、L114、I118、N225、A304、T323、Q487、V550、S556，以及T564，且甚至更佳為選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：P383、L114、N225、A323、Q487、S556，以及T564。

(B) 係選自由下列SEQ ID NO: 160的胺基酸位置所組成之群組：L108、V112、N221、A300、T319、F345、P379、V483、V544、S550、Q558、N584、A643，以及L707，較佳為該第一海藻糖磷酸化酶之胺基酸序列的一個或多個胺基酸位置係各別且獨立地選自由下列SEQ ID NO: 160的胺基酸位置所組成之群組：L108、V112、N221、A300、T319、F345、P379、V483、V544、S550、Q558、N584、A643，以及L707，較佳為選自由下列SEQ ID NO: 160的胺基酸位置所組成之群組：L108、V112、N221、A300、T319、P379、V483、V544、S550，以及Q558，更佳為選自由下列SEQ ID NO: 160的胺基酸位置所組成之群組：L108、V221、T319、P379、V483、S550，以及Q558。

(C) 係選自由下列SEQ ID NO: 81的胺基酸位置所組成之群組：L108、V112、N221、A300、T319、F345、P379、I483、V544、S550、Q558、N584、A643，以及L707，較佳為該第一海藻糖磷酸化酶之胺基酸序列的一個或多個胺基酸位置係各別且獨立地選自由下列SEQ ID NO: 81的胺基酸位置所組成之群組：L108、V112、N221、A300、T319、F345、P379、I483、V544、S550、Q558、N584、A643，以及L707，較佳為選自由下列SEQ ID NO: 81的胺基酸位置所組成之群組：L108、V112、N221、A300、T319、P379、I483、V544、S550，以及Q558，更佳為選自由下列SEQ ID NO: 81的胺基酸位置所組成之群組：L108、V221、T319、P379、I483、S550，以及Q558。

於該第十一方面之第十具體實施例，其也是該第十一方面之第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八及第九具體實施例之一具體實施例，該取代的胺基酸殘基為 (A) 針對SEQ ID NO: 1： A、G、I、M、P、V，較佳為M，代表對應於該第一海藻糖磷酸化酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置712的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； A、G、I、L、M、V、N、C、Q、S、T，較佳為A、G、M、V、N、C、Q、S、T、更佳為G、V、S或T，甚至更佳為V或T，以及最佳為V，代表對應於該第一海藻糖磷酸酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置383的第二海藻糖磷酸酶的胺基酸位置； R、H或K，較佳為R，代表對應於該第一海藻糖磷酸酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置10的第二海藻糖磷酸酶的胺基酸位置； A、G、I、M、P、V，較佳為I，代表對應於第一海藻糖磷酸化酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置114的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； A、G、I、L、M、P、V，較佳為V，代表對應於第一海藻糖磷酸化酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置118的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； A、G、I、L、M、P、V，較佳為V，代表對應於第一海藻糖磷酸化酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置192的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； A、G、I、L、M、P、V，較佳為G，代表與第一海藻糖磷酸化酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置197對應的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； F、W，較佳為F，代表對應於第一海藻糖磷酸酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置220的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； A、G、I、L、M、P、V，較佳為I、L、M或V，以及最佳為V，代表對應於SEQ ID NO: 1的胺基酸位置225的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置第一個海藻糖磷酸化酶； G、I、L、M、P、V，較佳為I或L，以及更佳為I，代表對應於第一海藻糖磷酸酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置304的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； R、H、K，較佳為H，代表對應於第一海藻糖磷酸酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置306的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； R、H、K，較佳為H，代表對應於第一海藻糖磷酸酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置318的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； A、G、I、L、M、P、V，較佳為I或V、更佳為I，代表對應於第一海藻糖磷酸酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置323的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； A、G、I、L、M、P、V，較佳為I，代表對應於第一海藻糖磷酸化酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置339的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； W或Y，較佳為Y，代表對應於第一海藻糖磷酸酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置349的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； A、I、L、M、P、V，較佳為A，代表對應於第一海藻糖磷酸化酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置357的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； N、C、Q、S、T，較佳為S，代表對應於第一海藻糖磷酸酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置459的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； A、G、I、L、M、P、V，較佳為G，代表對應於第一海藻糖磷酸化酶的SEQ ID NO: 1的第476位胺基酸的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； A、G、I、L、M、P、V，較佳為I，代表對應於第一海藻糖磷酸化酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置481的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； N、C、Q、S、T，較佳為S，代表對應於第一海藻糖磷酸化酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置484的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； A、G、I、L、M、P、V，較佳為A、M、G、V或L、更佳為A，代表對應於第一海藻糖磷酸化酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置487的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； A、G、I、L、M、P、V，較佳為A，代表對應於第一海藻糖磷酸化酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置488的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； N、C、Q、S、T，較佳為S，代表對應於第一海藻糖磷酸化酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置506的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； N、C、Q、S、T，較佳為S，代表對應於第一海藻糖磷酸酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置511的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； D或E，較佳E，代表對應於第一海藻糖磷酸化酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置526所對應的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； A、G、I、L、M、P、V，較佳為V，代表對應於第一海藻糖磷酸化酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置530的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； R、H、K，較佳為R，代表對應於第一海藻糖磷酸化酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置532對應的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； A、G、I、L、M、P、V，較佳為G，代表對應於第一海藻糖磷酸化酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置533對應的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； A、G、I、L、M、P、V，較佳為M，代表對應於第一海藻糖磷酸化酶的SEQ ID NO: 1的第537位胺基酸的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； A、G、I、L、M、P，較佳為I或P、更佳為I，代表對應於第一海藻糖磷酸化酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置550的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； N、C、Q、T，較佳為T，代表對應於第一海藻糖磷酸化酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置556的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； D，E，較佳E，代表對應於第一海藻糖磷酸酶的SEQ ID NO: 1的第564位胺基酸的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； N、C、Q、S、T、A、G、I、L、M、P、V，較佳為N或A、更佳為N，代表對應於第一海藻糖磷酸酶的SEQ ID NO: 1的第590位胺基酸的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； D、E，較佳為E，代表對應於第一海藻糖磷酸化酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置649的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； D、E、R、H、K，較佳為E或K、更佳為E，代表對應於第一海藻糖磷酸酶的SEQ ID NO: 1的第667位胺基酸的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； D、E，較佳為E，代表對應於第一海藻糖磷酸化酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置703的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置；以及 N、C、Q、S、T，較佳為N，代表對應於第一海藻糖磷酸化酶的SEQ ID NO: 1的第705位胺基酸的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置；或者 (B) 針對SEQ ID NO: 81與SEQ ID NO: 160： 在SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160，較佳為SEQ ID NO: 160，的位置L108處的一個胺基酸取代，該取代為L108A、L108G、L108I、L108M、L108P或L108V，較佳為L108I； 在SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160，較佳為SEQ ID NO: 160，的位置V112處的一個胺基酸取代，該取代為V112A、V112G、V112L、V112M、V112P或V112I，較佳為V112I； 在SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160，較佳為SEQ ID NO: 160，的位置N221處的一個胺基酸取代，該取代為N221A、N221G、N221I、N221L、N221M、N221P或N221V，較佳為N221I、N221L、N221M或N221V，以及更佳為N221V； 在SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160，較佳為SEQ ID NO: 160，的位置A300處的一個胺基酸取代，該取代為A300G、A300I、A300L、A300M、A300P或A300V，較佳為A300I或A300L，以及更佳為A300I 在SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160，較佳為SEQ ID NO: 160，的位置T319處的一個胺基酸取代，該取代為T319A、T319G、T319I、T319L、T319M、T319P，或T319V，較佳為T319I或T319V，以及更佳為T319I； 在SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160，較佳為SEQ ID NO: 160，的位置P379處的一個胺基酸取代，該取代為P379A、P379G、P379I、P379L、P379M、P379V、P379N、P379C、P379Q、P379S或P379T，較佳為P379A、P379G、P379M、P379V、P379N、P379C、P379Q、P379S或P379T、更佳為P379G、P379V、P379C或P379S，或P379T，甚至更佳為P379V或P379T，以及最佳為P379V； 在SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160，較佳為SEQ ID NO: 160，的位置I483處的一個胺基酸取代，該取代為I483A、I483G、I483I、I483L、I483M、I483P或I483V，較佳為I483A、I483G、I483L、I483M或I483V，更佳為I483A； 在SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160，較佳為SEQ ID NO: 160，的位置Q483處的一個胺基酸取代，該取代為Q483A、Q483G、Q483I、Q483L、Q483M、Q483P或Q483V，較佳為Q483A、Q483G、Q483L、Q483M或Q483V、更佳為Q483A； 在SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160，較佳為SEQ ID NO: 160，的位置V544處的一個胺基酸取代，該取代為V544A、V544G、V544I、V544L、V544M或V544P，較佳為V544I或V544P，以及更佳為V544I； 在SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160，較佳為SEQ ID NO: 160，的位置S550處的一個胺基酸取代，該取代為S550N、S550C、S550Q或S550T，較佳為S550T； 在SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160，較佳為SEQ ID NO: 160，的位置Q558處的一個胺基酸取代，該取代為Q558D或Q558E，較佳為Q558E； 在SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160，較佳為SEQ ID NO: 160，的位置D558處的一個胺基酸取代，該取代為D558N、D558C、D558Q、D558S、D558T、D558A、D558G、D558I、D558L、D558M、D558P或D558V，較佳為D558N、D558G或D558A，以及更佳為D558N； 在SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160，較佳為SEQ ID NO: 160，的位置A643處的一個胺基酸取代，該取代為A643D或A643E，較佳為A643E； 在SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160，較佳為SEQ ID NO: 160，的位置L707處的一個胺基酸取代，該取代為L707A、L707G、L707I、L707M、L707P或L707V，較佳為L707M。

於第十一方面的第十一具體實施例中，其也是第十一方面之第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九及第十具體實施例的一具體實施例，若該對應於該第一海藻糖磷酸化酶胺基酸序列的一個或多個胺基酸位置的該第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸殘基與該第一海藻糖磷酸化酶的取代的胺基酸殘基相同，則該第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸殘基未被取代。

於第十一方面的第十二具體實施例中，其也是第十一方面之第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十及第十一具體實施例的一具體實施例，熱穩定性係表示為Tm30值或Tm50值，如在說明書中所定義的，更具體地如第[0367]與[0368]段中所公開的。

更具體而言，於一第十二方面，其也是該第十二方面的第一具體實施例，透過用於增加海藻糖磷酸化酶的表現為100/500比率的相對活性之方法解決了這些及其他問題，其中該方法包括： - 比對一第一海藻糖磷酸化酶的一胺基酸序列與一第二海藻糖磷酸化酶的一胺基酸序列， - 鑑定對應於該第一海藻糖磷酸化酶的該胺基酸序列的一個或多個胺基酸位置的該第二海藻糖磷酸化酶的該胺基酸序列的一個或多個胺基酸位置，其中在該第一海藻糖磷酸化酶的該胺基酸序列的一個或多個胺基酸位置的一胺基酸殘基取代增加該第一海藻糖磷酸化酶的100/500比率， - 取代對應於該第一海藻糖磷酸化酶的該胺基酸序列的一個或多個胺基酸位置的在該第二海藻糖磷酸化酶的一個或多個胺基酸位置處的一胺基酸殘基，其中在該第一海藻糖磷酸化酶的該胺基酸序列的一個或多個胺基酸位置的一胺基酸殘基的取代增加該第一海藻糖磷酸化酶的100/500比活性； 其中該第一海藻糖磷酸化酶為包含根據SEQ ID NO: 1的胺基酸序列之海藻糖磷酸化酶。

於第十二方面的第二具體實施例中，其也是第十二方面之第一具體實施例的一具體實施例，該方法包括 - 檢測對應於該第一海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列的一個或多個胺基酸位置的該第二海藻糖磷酸化酶的一個或多個胺基酸位置處的取代的胺基酸殘基是否導致，相較於該第一海藻糖磷酸化酶的活性，該第二海藻糖磷酸化酶的活性增加。

於第十二方面的第三具體實施例中，其也是第十二方面之第一及第二具體實施例的一具體實施例，對應於該第一海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列的一個或多個胺基酸位置的該第二海藻糖磷酸化酶的一個或多個胺基酸位置處的胺基酸殘基被取代，使得該取代的胺基酸殘基導致該第二海藻糖磷酸化酶的活性增加。

於第十二方面的第四具體實施例中，其也是第十二方面之第一、第二及第三具體實施例的一具體實施例，該第一海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列與該第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列的同源性為至少50%。

於第十二方面的第五具體實施例中，其也是第十二方面之第四具體實施例的一具體實施例，該同源性為至少55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70、%、72%、73 %、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%，較佳為該同源性為至少55%、60%、65%、70%、75%或80%。

於第十二方面的第六具體實施例中，其也是第十二方面之第一、第二及第三具體實施例的一具體實施例，該第一海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列與該第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列的同一性為至少50%。

於第十二方面的第七具體實施例中，其也是第十二方面之第六具體實施例的一具體實施例，該同一性為至少55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70、%、72%、73 %、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%，較佳為該同一性為至少55%、60%、65%、70%、75%或80%，以及更佳為該同一性為至少73 %、75 %、76 %，或78%.。

於第十二方面的第八具體實施例中，其也是第十二方面之第一、第二、第三、第四、第五、第六及第七具體實施例的一具體實施例，該第一海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列的一個或多個胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：712、383、10、114、118、192、197、220、225、304、306、318、323、339、349、357、459、476、481、484、487、488、506、511、526、530、532、533、537、550、556、564、590、649、667、703與705，較佳為該第一海藻糖磷酸化酶之胺基酸序列的一個或多個胺基酸位置係各別且獨立地選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：712、383、10、114、118、192、197、220、225、304、306、318、323、339、349、357、459、476、481、484、487、488、506、511、526、530、532、533、537、550、556、564、590、649、667、703與705，且甚至更佳為選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：712、383、114、118、225、304、323、349、357、487、550、556、564、590與649。

於第十二方面的第九具體實施例中，其也是第十二方面之第八具體實施例的一具體實施例，該第一海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列的一個或多個胺基酸位置係選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：L712、P383、V10、L114、I118、S192、S197、Y220、N225、A304、D306、P318、T323、L339、F349、G357、A459、Q476、E481、A484、Q487、K488、A506、A511、R526、E530、G532、D533、D537、V550、S556、T564、D590、A649、R667、A703與K705，較佳為該第一海藻糖磷酸化酶之胺基酸序列的一個或多個胺基酸位置係各別且獨立地選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：L712、P383、V10、L114、I118、S192、S197、Y220、N225、A304、D306、P318、T323、L339、F349、G357、A459、Q476、E481、A484、Q487、K488、A506、A511、R526、E530、G532、D533、D537、V550、S556、T564、D590、A649、R667、A703與K705。

於第十二方面的第十具體實施例中，其也是第十二方面之第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八及第九具體實施例的一具體實施例，該取代的胺基酸殘基為 A、G、I、M、P、V，較佳為M，代表對應於該第一海藻糖磷酸化酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置712的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； A、G、I、L、M、V、N、C、Q、S、T，較佳為A、G、M、V、N、C、Q、S、T、更佳為G、V、C、S或T，甚至更佳為V或T，以及最佳為V，代表對應於該第一海藻糖磷酸酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置383的第二海藻糖磷酸酶的胺基酸位置； R、H或K，較佳為R，代表對應於該第一海藻糖磷酸酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置10的第二海藻糖磷酸酶的胺基酸位置； A、G、I、M、P、V，較佳為I，代表對應於第一海藻糖磷酸化酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置114的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； A、G、I、L、M、P、V，較佳為V，代表對應於第一海藻糖磷酸化酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置118的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； A、G、I、L、M、P、V，較佳為V，代表對應於第一海藻糖磷酸化酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置192的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； A、G、I、L、M、P、V，較佳為G，代表與第一海藻糖磷酸化酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置197對應的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； F、W，較佳為F，代表對應於第一海藻糖磷酸酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置220的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； A、G、I、L、M、P、V，較佳為I、L、M或V，以及最佳為V，代表對應於SEQ ID NO: 1的胺基酸位置225的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置第一個海藻糖磷酸化酶； G、I、L、M、P、V，較佳為I或L，以及更佳為I，代表對應於第一海藻糖磷酸酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置304的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； R、H、K，較佳為H，代表對應於第一海藻糖磷酸酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置306的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； R、H、K，較佳為H，代表對應於第一海藻糖磷酸酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置318的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； A、G、I、L、M、P、V，較佳為I或V、更佳為I，代表對應於第一海藻糖磷酸酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置323的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； A、G、I、L、M、P、V，較佳為I，代表對應於第一海藻糖磷酸化酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置339的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； W或Y，較佳為Y，代表對應於第一海藻糖磷酸酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置349的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； A、I、L、M、P、V，較佳為A，代表對應於第一海藻糖磷酸化酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置357的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； N、C、Q、S、T，較佳為S，代表對應於第一海藻糖磷酸酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置459的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； A、G、I、L、M、P、V，較佳為G，代表對應於第一海藻糖磷酸化酶的SEQ ID NO: 1的第476位胺基酸的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； A、G、I、L、M、P、V，較佳為I，代表對應於第一海藻糖磷酸化酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置481的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； N、C、Q、S、T，較佳為S，代表對應於第一海藻糖磷酸化酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置484的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； A、G、I、L、M、P、V，較佳為A、G、V或L、更佳為A，代表對應於第一海藻糖磷酸化酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置487的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； A、G、I、L、M、P、V，較佳為A，代表對應於第一海藻糖磷酸化酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置488的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； N、C、Q、S、T，較佳為S，代表對應於第一海藻糖磷酸化酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置506的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； N、C、Q、S、T，較佳為S，代表對應於第一海藻糖磷酸酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置511的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； D或E，較佳E，代表對應於第一海藻糖磷酸化酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置526所對應的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； A、G、I、L、M、P、V，較佳為V，代表對應於第一海藻糖磷酸化酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置530的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； R、H、K，較佳為R，代表對應於第一海藻糖磷酸化酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置532對應的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； A、G、I、L、M、P、V，較佳為G，代表對應於第一海藻糖磷酸化酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置533對應的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； A、G、I、L、M、P、V，較佳為M，代表對應於第一海藻糖磷酸化酶的SEQ ID NO: 1的第537位胺基酸的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； A、G、I、L、M、P，較佳為I或P、更佳為I，代表對應於第一海藻糖磷酸化酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置550的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； N、C、Q、T，較佳為T，代表對應於第一海藻糖磷酸化酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置556的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； D，E，較佳E，代表對應於第一海藻糖磷酸酶的SEQ ID NO: 1的第564位胺基酸的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； N、C、Q、S、T、A、G、I、L、M、P、V，較佳為N、G或A、更佳為N，代表對應於第一海藻糖磷酸酶的SEQ ID NO: 1的第590位胺基酸的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； D、E，較佳為E，代表對應於第一海藻糖磷酸化酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置649的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； D、E、R、H、K，較佳為E或K、更佳為E，代表對應於第一海藻糖磷酸酶的SEQ ID NO: 1的第667位胺基酸的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置； D、E，較佳為E，代表對應於第一海藻糖磷酸化酶的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置703的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置；以及 N、C、Q、S、T，較佳為N，代表對應於第一海藻糖磷酸化酶的SEQ ID NO: 1的第705位胺基酸的第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸位置。

於第十二方面的第十一具體實施例中，其也是第十二方面之第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九及第十具體實施例的一具體實施例，若對應於該第一海藻糖磷酸化酶胺基酸序列的一個或多個胺基酸位置的該第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸殘基與該第一海藻糖磷酸化酶的取代的胺基酸殘基相同，則該第二海藻糖磷酸化酶的胺基酸殘基不被取代。

於第十二方面的第十二具體實施例中，其也是第十二方面之第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十及第十一具體實施例的一具體實施例，海藻糖磷酸化酶的活性為如本說明書中所定義之磷酸解活性與合成活性。

更具體而言，於一第十三方面，也是該第十三方面的第一具體實施例，透過具有海藻糖磷酸化酶活性的一多胜肽解決了這些及其他問題，其中該多胜肽包含一胺基酸序列，其中該胺基酸序列與SEQ ID NO: 1的胺基酸序列具有至少20%同源性，其中該多胜肽在選自由胺基酸位置712、383、114、118、225、304、323、349、357、487、550、556、564、590與649所組成之群組中的二個或多個位置包含有一胺基酸取代，其中 在胺基酸位置712處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：712A、712G、712I、712M、712P或712V，較佳為712M， 在胺基酸位置383處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：383A、383G、383I、383L、383M、383V、383N、383C、383Q、383S或383T，較佳為383A、383G、383M、383V、383N、383C、383Q、383S或383T，更佳為383G、383V、383C、383S或383T，甚至更佳為383V或383T，以及最佳為383V， 在胺基酸位置114處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：114A、114G、114I、114M、114P或114V，較佳為114I， 在胺基酸位置118處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：118A、118G、118I、118L、118M、118P或118V，較佳為118V， 在胺基酸位置225處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：225A、225G、225I、225L、225M、225P或225V，較佳為225I、225L、225M或225V，以及更佳為225V， 在胺基酸位置304處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：304G、304I、304L、304M、304P或304V，較佳為304I或304L，以及更佳為304I， 在胺基酸位置323處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：323A、323G、323I、323L、323M、323P，或323V，較佳為323I或323V，以及更佳為323I， 在胺基酸位置349處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：349W或349Y，較佳為349Y， 在胺基酸位置357處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：357A、357I、357L、357M、357P或357V，較佳為357A， 在胺基酸位置487處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：487A、487G、487I、487L、487M、487P或487V，較佳為487A、487M、487G、487L或487V、更佳為487A， 在胺基酸位置550處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：550A、550G、550I、550L、550M或550P，較佳為550I或550P，以及更佳為550I， 在胺基酸位置556處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：556N、556C、556Q或S556T，較佳為556T， 在胺基酸位置564處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：564D或564E，較佳為564E， 在胺基酸位置590處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：590N、590C、590Q、590S、590T、590A、590G、590I、590L、590M、590P或590V，較佳為590N、590G或590A，更佳為590N，以及 在胺基酸位置649處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：649D或649E，較佳為649E； 其中該胺基酸編號係指SEQ ID NO: 1中的比對位置。 在本發明的第十三方面的一較佳具體實施例中，其也是該第十三方面的任何其他前述具體實施例之一具體實施例，該多胜肽為一具有海藻糖磷酸化酶活性的多胜肽，其中該多胜肽包含一胺基酸序列，其係與SEQ ID NO: 1的胺基酸序列具有至少77%同源性，其中該多胜肽在選自由胺基酸位置383、114、225、304、323、349、357、550、556、564與649處所組合之群組的二個或更多個包含一胺基酸取代，其中， 在胺基酸位置383處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：383A、383G、383I、383L、383M、383V、383N、383C、383Q、383S或383T，較佳為383A、383G、383M、383V、383N、383C、383Q、383S或383T、更佳為383G、383V、383C、383S或383T，甚至更佳為383V或383T，以及最佳為383V， 在胺基酸位置114處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：114A、114G、114I、114M、114P或114V，較佳為114I， 在胺基酸位置225處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：225A、225G、225I、225L、225M、225P或225V，較佳為225I、225L、225M或225V，以及更佳為225V， 在胺基酸位置304處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：304G、304I、304L、304M、304P或304V，較佳為304I或304L，以及更佳為304I， 在胺基酸位置323處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：323A、323G、323I、323L、323M、323P，或323V，較佳為323I或323V，以及更佳為323I， 在胺基酸位置349處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：349W或349Y，較佳為349Y， 在胺基酸位置357處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：357A、357I、357L、357M、357P或357V，較佳為357A， 在胺基酸位置550處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：550A、550G、550I、550L、550M或550P，較佳為550I或550P，以及更佳為550I， 在胺基酸位置556處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：556N、556C、556Q或S556T，較佳為556T， 在胺基酸位置564處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：564D或564E，較佳為564E，以及 在胺基酸位置649處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：649D或649E，較佳為649E， 其中該胺基酸編號係指SEQ ID NO: 1中的比對位置。 在本發明的第十三方面之另一較佳具體實施例中，其也是該第十三方面的任何其他前述具體實施例之一具體實施例，該多胜肽在選自胺基酸位置712、118、487與590處包含至少一個另外的胺基酸取代，其中： 在胺基酸位置712處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：712A、712G、712I、712M、712P或712V，較佳為712M， 在胺基酸位置118處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：118A、118G、118I、118L、118M、118P或118V，較佳為118V， 在胺基酸位置487處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：487A、487G、487I、487L、487M、487P或487V，較佳為487A、487G、487L、487M或487V，更佳為487A，以及 在胺基酸位置590處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：590N、590C、590Q、590S、590T、590A、590G、590I、590L、590M、590P或590V，較佳為590N、590G或590A，更佳為590N， 其中該胺基酸編號係指SEQ ID NO: 1中的比對位置。 在本發明的第十三方面之另一較佳具體實施例中，其也是該第十三方面的任何其他前述具體實施例之一具體實施例，該多胜肽為一具有海藻糖磷酸化酶活性的多胜肽，其中該多胜肽包含一胺基酸序列，其係與SEQ ID NO: 1的胺基酸序列具有至少68%同源性，其中該多胜肽在選自由胺基酸位置383、114、225、304、323、349、357、550、556與564處所組合之群組的二個或更多個包含一胺基酸取代，其中， 在胺基酸位置383處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：383A、383G、383I、383L、383M、383V、383N、383C、383Q、383S或383T，較佳為383A、383G、383M、383V、383N、383C、383Q、383S或383T，更佳為383G、383V、383C、383S或383T，甚至更佳為383V或383T，以及最佳為383V， 在胺基酸位置114處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：114A、114G、114I、114M、114P或114V，較佳為114I， 在胺基酸位置225處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：225A、225G、225I、225L、225M、225P或225V，較佳為225I、225L、225M或225V，以及更佳為225V， 在胺基酸位置304處的胺基酸取代為304I， 在胺基酸位置323處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：323A、323G、323I、323L、323M、323P，或323V，較佳為323I或323V，以及更佳為323I， 在胺基酸位置349處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：349W或349Y，較佳為349Y， 在胺基酸位置357處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：357A、357I、357L、357M、357P或357V，較佳為357A， 在胺基酸位置550處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：550A、550G、550I、550L、550M或550P，較佳為550I或550P，以及更佳為550I， 在胺基酸位置556處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：556N、556C、556Q或S556T，較佳為556T，以及 在胺基酸位置564處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：564D或564E，較佳為564E， 其中該胺基酸編號係指SEQ ID NO: 1中的比對位置。 在本發明的第十三方面之另一較佳具體實施例中，其也是該第十三方面的任何其他前述具體實施例之一具體實施例，本發明的多胜肽在選自由胺基酸位置712、118、487、590與649處所組成之群組中的至少一個包含至少一個另外的胺基酸取代，其中 在胺基酸位置712處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：712A、712G、712I、712M、712P或712V，較佳為712M， 在胺基酸位置118處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：118A、118G、118I、118L、118M、118P或118V，較佳為118V， 在胺基酸位置487處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：487A、487G、487I、487L、487M、487P或487V，較佳為487A、487G、487L、487M或487V，更佳為487A， 在胺基酸位置590處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：590N、590C、590Q、590S、590T、590A、590G、590I、590L、590M、590P或590V，較佳為590N、590G或590A，更佳為590N，以及 在胺基酸位置649處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：649D或649E，較佳為649E， 其中該胺基酸編號係指SEQ ID NO: 1中的比對位置。 在本發明的第十三方面之另一較佳具體實施例中，其也是該第十三方面的任何其他前述具體實施例之一具體實施例，該多胜肽為一具有海藻糖磷酸化酶活性的多胜肽，其中該多胜肽包含一胺基酸序列，其係與SEQ ID NO: 1的胺基酸序列具有至少63%同源性，其中該多胜肽在選自由胺基酸位置383、114、225、304、323、349、357、556與564處所組合之群組的二個或更多個包含一胺基酸取代，其中， 在胺基酸位置383處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：383A、383G、383I、383L、383M、383V、383N、383C、383Q、383S或383T，較佳為383A、383G、383M、383V、383N、383C、383Q、383S或383T、更佳為383G、383V、383C、383S或383T，甚至更佳為383V或383T，以及最佳為383V， 在胺基酸位置114處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：114A、114G、114I、114M、114P或114V，較佳為114I， 在胺基酸位置225處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：225A、225G、225I、225L、225M、225P或225V，較佳為225I、225L、225M或225V，以及更佳為225V， 在胺基酸位置304處的胺基酸取代為304I， 在胺基酸位置323處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：323A、323G、323I、323L、323M、323P，或323V，較佳為323I或323V，以及更佳為323I， 在胺基酸位置349處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：349W或349Y，較佳為349Y， 在胺基酸位置357處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：357A、357I、357L、357M、357P或357V，較佳為357A， 在胺基酸位置556處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：556N、556C、556Q或S556T，較佳為556T，以及 在胺基酸位置564處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：564D或564E，較佳為564E， 其中該胺基酸編號係指SEQ ID NO: 1中的比對位置。 在本發明的第十三方面之另一較佳具體實施例中，其也是該第十三方面的任何其他前述具體實施例之一具體實施例，本發明的多胜肽在選自由胺基酸位置712、118、487、550、590與649處所組成之群組中的至少一個包含至少一個另外的胺基酸取代，其中 在胺基酸位置712處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：712A、712G、712I、712M、712P或712V，較佳為712M， 在胺基酸位置118處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：118A、118G、118I、118L、118M、118P或118V，較佳為118V， 在胺基酸位置487處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：487A、487G、487I、487L、487M、487P或487V，較佳為487A、487G、487L、487M或487V，更佳為487A， 在胺基酸位置550處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：550A、550G、550I、550L、550M或550P，較佳為550I或550P，以及更佳為550I， 在胺基酸位置590處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：590N、590C、590Q、590S、590T、590A、590G、590I、590L、590M、590P或590V，較佳為590N、590G或590A，更佳為590N，以及 在胺基酸位置649處的胺基酸取代係選自由下列取代所組成之群組：649D或649E，較佳為649E， 其中該胺基酸編號係指SEQ ID NO: 1中的比對位置。

於第十三方面的第二具體實施例中，其也是第十三方面之第一具體實施例或第十三個方面的任何其他具體實施例的的一具體實施例，該胺基酸序列與SEQ ID NO: 1的胺基酸序列具有至少50%同源性。

於第十三方面的第三具體實施例中，其也是第十三方面之第二具體實施例或第十三個方面的任何其他具體實施例的的一具體實施例，該胺基酸序列與SEQ ID NO: 1的胺基酸序列具有至少51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%或80%的同源性。

於第十三方面的第四具體實施例中，其也是第十三方面之第一、第二及第三具體實施例或第十三個方面的任何其他具體實施例的的一具體實施例，該胺基酸序列在選自由胺基酸位置712、383、114、118、225、304、323、349、357、487、550、556、564、590與649所組成之群組的二、三、四、五、六、七、八、九、十、十一、十二、十三、十四或十五個處包含一胺基酸取代。

於第十三方面的另一較佳具體實施例中，其也是第十三方面之第一、第二、第三及第四具體實施例或第十三個方面的任何其他具體實施例的的一具體實施例，該具有海藻糖磷酸化酶活性的多胜肽為一野生型海藻糖磷酸化酶及/或來自一野生型海藻糖磷酸化酶的變異體，該變體係衍生自屬於擔子菌門(Basidomycota)的一生物體，較佳來自屬於傘菌綱(Agaricomycetes)的一生物體，且更佳來自屬於由裂摺菌屬(Schizophyllum)、側耳屬(Pleurotus)、奇果菌屬(Grifola)、蘑菇屬(Agaricus)、栓菌屬(Trametes)、革蓋菌屬(Coriolus)、栓菌屬(Trametes)、附毛菌屬(Trichaptum)，以及摺孔菌屬(Lenzites)所組成之群組的屬的一生物體。於第十三方面的另一較佳具體實施例中，其也是第十三方面之第一、第二、第三及第四具體實施例或第十三個方面的任何其他具體實施例的的一具體實施例，該海藻糖磷酸化酶活性以如本文所公開，更具體地如在第[0371]與[0372]段中所公開的方法測定。

應該理解的是，在本文各個方面及具體實施例中所述的海藻糖磷酸化酶也可以稱為本發明之海藻糖磷酸化酶。

本發明基於令人驚訝的發現，即EC編號為EC 2.4.1.231的海藻糖磷酸化酶，其也被稱為“TP”，可透過酶工程改進。作為這種酶工程的起點，使用具有根據如SEQ ID NO: 1所示之胺基酸序列的海藻糖磷酸化酶。該具有根據SEQ ID NO: 1的胺基酸序列的海藻糖磷酸化酶可由Eis等人描述的從裂摺菌(Shizophyllum commune )製備(FEBS Letters 440, 440-443 (1998))。UniProt: D8PWQ7 (GenBank：EFJ00254.1)公開了一各別的裂摺菌(Shizophyllum commune )分離株H4-8的野生型蛋白質序列(99.1%同一性)。該序列在SEQ ID NO: 1的7個位置上與SEQ ID NO: 1不同，其中該分離物H4-8在與SEQ ID NO: 1的位置10同源的位置上帶有離胺酸(lysine)胺基酸殘基，在與SEQ ID NO: 1的位置32同源的位置上帶有絲胺酸(serine)胺基酸殘基，在與SEQ ID NO: 1的位置374同源的位置上帶有纈胺酸(valine)胺基酸殘基，在與SEQ ID NO: 1的位置535同源的位置上帶有麩胺酸(glutamic acid)胺基酸殘基，在與SEQ ID NO: 1的位置536同源的位置上帶有脯胺酸(proline)胺基酸殘基，在與SEQ ID NO: 1的位置616同源的位置上帶有異白胺酸(isoleucine)胺基酸殘基，以及在與SEQ ID NO: 1的位置649同源的位置上帶有纈胺酸(valine)胺基酸殘基。UniProt: A0A151VW19 (GenBank: KYQ39707.1)公開了來自生物體鴻禧菇(Hypsizygus marmoreus )的海藻糖磷酸化酶的野生型蛋白質序列，其與SEQ ID NO: 1具有77.9%的同一性。除了裂摺菌(Shizophyllum commune )TP之外，其他源於真菌的TP已被描述，例如環柄香菇(Lentinus sajor-caju ) (73.2%同源性)、秀珍菇(Pleurotus ostreatus ) (75.8%同源性)，或舞菇(Grifola frondosa ) (76.7%同源性)。針對舞菇(Grifola frondosa )，已經描述了源自不同分離株的蛋白質序列，其中包括序列SEQ ID NO: 160 (UniProtKB/Swiss-Prot: 登錄號: O75003.1)以及SEQ ID NO: 81 (Genbank登錄號: ADM15725.1)。

本案發明人已驚訝地發現，在SEQ ID NO: 1的胺基酸序列的一個或幾個下列胺基酸位置替換胺基酸殘基，適合於改進SEQ ID NO: 1的海藻糖磷酸化酶的反應特徵：712、383、10、114、118、192、197、220、225、304、306、318、323、339、349、357、459、476、481、484、487、488、506、511、526、530、532、533、537、550、556、564、590、649、667、703與705。於這些SEQ ID NO: 1的胺基酸位置中，胺基酸位置712、383、10、114、118、220、225、304、318、323、349、357、481、487、488、506、511、550、556、564、590、649、703與705為特別合適的，且SEQ ID NO: 1中的胺基酸位置712、383、114、118、225、304、323、349、357、487、550、556、564、590與649中的每一個甚至更為合適。

據此，本發明於第一方面涉及包含一胺基酸序列的一多胜肽，其中該海藻糖磷酸酶的胺基酸序列與SEQ ID NO: 1的胺基酸序列具有至少80%同一性及/或至少80%同源性，其中該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列包含在一個或多個胺基酸位置處的一胺基酸取代，其中該一個或多個胺基酸位置係各自且獨立地選自由下列SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：712、383、10、114、118、192、197、220、225、304、306、318、323、339、349、357、459、476、481、484、487、488、506、511、526、530、532、533、537、550、556、564、590、649、667、703與705。

在一較佳具體實施例中，SEQ ID NO: 1的胺基酸序列為一多胜肽的胺基酸序列，其中較佳地該多胜肽為一海藻糖磷酸化酶。

據此，本發明於第一方面同樣涉及包含一胺基酸序列的海藻糖磷酸化酶，其中該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列與SEQ ID NO: 1的胺基酸序列具有至少80%同一性及/或至少80%同源性，其中該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列包含在一個或多個胺基酸位置處的一胺基酸取代，其中該一個或多個胺基酸位置係選自由以下的胺基酸位置所組成之群組：712、383、10、114、118、192、197、220、225、304、306、318、323、339、349、357、459、476、481、484、487、488、506、511、526、530、532、533、537、550、556、564、590、649、667、703與705。

於一具體實施例中，該第一方面的多胜肽為一海藻糖磷酸化酶，較佳為一具有本文所公開之一個或多個特徵的海藻糖磷酸化酶。據此，本發明之海藻糖磷酸化酶的公開內容，特別是根據每一個及任何方面，同樣適用於本發明的多胜肽，反之亦然。此外，於一具體實施例中，本發明之多胜肽為具有海藻糖磷酸化酶活性的一多胜肽。較佳地，海藻糖活性為本文定義的活性。

一包含一胺基酸序列的海藻糖磷酸化酶之措辭，其中該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列與SEQ ID NO: 1的胺基酸序列具有至少80%同一性及/或至少80%同源性，其中該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列包含在一個或多個胺基酸位置處的胺基酸取代，其中該一個或多個胺基酸位置係選自由以下胺基酸位置所組成之群組：712、383、10、114、118、192、197、220、225、304、306、318、323、339、349、357、459、476、481、484、487、488、506、511、526、530、532、533、537、550、556、564、590、649、667、703與705，以及，於一具體實施例中，與該措辭一海藻糖磷酸化酶與SEQ ID NO: 1具有至少80%同源性具有相同含義，其中該海藻糖磷酸化酶在選自以下一個或多個位置處具有一取代：712、383、10、114、118、192、197、220、225、304、306、318、323、339、349、357、459、476、481、484、487、488、506、511、526、530、532、533、537、550、556、564、590、649、667、703與705，其中每個位置對應SEQ ID NO: 1的胺基酸序列的一個位置。

迄今為止，本發明之海藻糖磷酸化酶，較佳包括本發明的任何方面，為一突變的海藻糖磷酸化酶，更具體為具有SEQ ID NO: 1的胺基酸序列的一海藻糖磷酸化酶之突變的海藻糖磷酸化酶。於一具體實施例中，本發明之海藻糖磷酸化酶為一具有與SEQ ID NO: 1的胺基酸序列不同的胺基酸序列之海藻糖磷酸化酶。於另一具體實施例中，本發明的海藻糖磷酸化酶為一海藻糖磷酸化酶，其不同於由SEQ ID NO: 1的胺基酸序列組成的海藻糖磷酸化酶。

根據本發明之第一方面，本發明之海藻糖磷酸化酶在SEQ ID NO: 1的至少一個胺基酸位置上包含至少一個胺基酸取代。值得注意的是，原則上，這種取代的胺基酸位置及取代的胺基酸的種類都是重要的。據此，於本發明的海藻糖磷酸化酶的一個具體實施例中，該胺基酸取代在SEQ ID NO: 1的特定的指定胺基酸位置之一處進行，其中，任選地，存在於SEQ ID NO: 1的這種位置上的胺基酸殘基對本發明之海藻糖磷酸化酶中存在的取代胺基酸殘基的種類沒有任何影響；或者，任選地，存在於SEQ ID NO: 1的這種位置上的非常胺基酸殘基與存在於本發明的海藻糖磷酸化酶中的取代的胺基酸殘基的種類有關。替代可能是非保守或保守的。為了本發明之目的，保守意指將胺基酸G換為A；A換為G、S；V換為I、L、A、T、S；I換為V、L、M；L換為I、M、V；M換為L、I、V；P換為A、S、N；F換為Y、W、H；Y換為F、W、H；W換為Y、F、H；R換為K、E、D；K換為R、E、D；H換為Q、N、S；D換為N、E、K、R、Q；E換為Q、D、K、R、N；S換為T、A；T換為S、V、A；C換為S、T、A；N換為D、Q、H、S；Q換為E、N、H、K、R。

還據此，於本發明之海藻糖磷酸化酶的一個具體實施例中，該胺基酸取代為其中SEQ ID NO: 1的任何所示胺基酸位置的非常胺基酸殘基被取代之胺基酸取代，任選地，取代的胺基酸殘基的胺基酸位置不完全如參照SEQ ID NO: 1所示的那樣；相反地，於一具體實施例中，取代的胺基酸殘基的胺基酸位置與SEQ ID NO: 1的相應位置不同，較佳為1至5個，較佳為1至3個，更佳為1至2個，最佳為1個胺基酸位置。

就本發明之海藻糖磷酸化酶的特徵在於包含在一個或多個特定胺基酸位置處的胺基酸取代而言，應當理解的是，本發明之海藻糖磷酸化酶係為在一個所示的胺基酸位置之一具有單一取代的海藻糖磷酸化酶；然而，也應該理解的是，如此描述的本發明之海藻糖磷酸化酶也包括其中多於一個胺基酸殘基被取代的那些海藻糖磷酸化酶，例如二個、三個等胺基酸殘基。在後一種情況下，被取代的胺基酸殘基的數目為介於1及指定及定義為被取代的胺基酸殘基數目之間的任何整數。據此，本發明之海藻糖磷酸化酶為任何具有或實現一胺基酸取代，或具有或實現指定及定義為被取代的胺基酸殘基的任何組合，實際上為每個及任何的排列，的海藻糖磷酸化酶。

據此，該海藻糖磷酸化酶可以包含一胺基酸取代，所述胺基酸取代分別在胺基酸位置712、383、10、114、118、192、197、220、225、304、306、318、323、339、349、357、459、476、481、484、487、488、506、511、526、530、532、533、537、550、556、564、590、649、667、703與705的一個或任何組合處。因此，於一具體實施例中，本發明之海藻糖磷酸化酶在SEQ ID NO: 1的該胺基酸位置的一個上包含至少一個胺基酸取代，在SEQ ID NO: 1的該胺基酸位置的至少二個上包含至少一個胺基酸取代，在SEQ ID NO: 1的該胺基酸位置的至少三個上包含至少一個胺基酸取代，在SEQ ID NO: 1的該胺基酸位置的至少四個上包含至少一個胺基酸取代，在SEQ ID NO: 1的該胺基酸位置的至少五個上包含至少一個胺基酸取代，在SEQ ID NO: 1的該胺基酸位置的至少六個上包含至少一個胺基酸取代，在SEQ ID NO: 1的該胺基酸位置的至少七個上包含至少一個胺基酸取代，在SEQ ID NO: 1的該胺基酸位置的至少八個上包含至少一個胺基酸取代，在SEQ ID NO: 1的該胺基酸位置的至少九個上包含至少一個胺基酸取代，在SEQ ID NO: 1的該胺基酸位置的至少十個上包含至少一個胺基酸取代，在SEQ ID NO: 1的該胺基酸位置的至少十一個上包含至少一個胺基酸取代，在SEQ ID NO: 1的該胺基酸位置的至少十二個上包含至少一個胺基酸取代，在SEQ ID NO: 1的該胺基酸位置的至少十三個上包含至少一個胺基酸取代，在SEQ ID NO: 1的該胺基酸位置的至少十四個上包含至少一個胺基酸取代。

然而，也在本發明之範圍內的是本發明之海藻糖磷酸化酶在SEQ ID NO: 1所示的胺基酸位置處包含甚至多於上述取代，較佳為在該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列符合本發明之海藻糖磷酸化酶的最小結構特徵及/或最小功能特徵中的至少一個的條件下。這樣的最小結構特徵為該海藻糖磷酸化酶包含一胺基酸序列，其中該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列與SEQ ID NO: 1的胺基酸序具有列至少80%同一性及/或至少80%同源性，其中該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列包含在一個或多個胺基酸位置處的一胺基酸取代，其中該一個或多個胺基酸位置各自且獨立地選自由以下SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：712、383、10、114、118、192、197、220、225、304、306、318、323、339、349、357、459、476、481、484、487、488、506、511、526、530、532、533、537、550、556、564、590、649、667、703與705。這樣的最小功能特徵為包括本文公開的任何其他的說明書的特徵(A)、(B)、(C)、(D)與(E)中的至少一個或其任何組合，其中特徵(A)為於52°C作用15分鐘後的熱穩定性，其由 (i) 至少30%至90%；或 (ii) 至少55%至100%的剩餘活性定義，特徵(B)為於52°C作用15分鐘後的熱穩定性，其特徵在於(i) Tm30值至少為52°C及/或Tm50值至少為52°C，特徵(C)為以52°C至90°C之間的Tm30值及/或52°C至90°C之間的Tm50值為特徵的熱穩定性，特徵(D)為以以下為特徵的熱穩定性：(i) 於45°C半衰期為至少3小時至9天的製程穩定性，(ii) 於45°C半衰期為24小時至9天的製程穩定性，及/或於45°C半衰期為4天至9天的製程穩定性，以及特徵(E)為相對活性，表示為介於0.65和1.0之間的100/500-比率，其中該100/500-比率被定義為[100 mM葡萄糖與100 mM α-葡萄糖-1磷酸鹽的海藻糖活性] / [500 mM葡萄糖與100 mM α-葡萄糖-1-磷酸鹽的海藻糖活性] 的比率。在本發明中，本發明之海藻糖磷酸化酶展現特徵(A)、特徵(B)、特徵(C)、特徵(D)、特徵(E)、特徵(A)及(B)、特徵(A)及(C)、特徵(A)及(D)、特徵(A)及(E)、特徵(B)及(C)、特徵(B)及(D)、特徵(B)及(E)、特徵(C)及(D)、特徵(C)及(E)、特徵(D)及(E)、特徵(A)、(B)及(C)、特徵(A)、(B)及(D)、特徵(A)、(B)及(E)、特徵(B)、(C)及(D)、特徵(B)、(C)及(E)、特徵(C)、(D)及(E)、特徵(A)、(B)、(C)及(D)、特徵(A)、(B)、(C)及(E)、特徵(B)、(C)、(D)及(E)、特徵(A)、(C)、(D)及(E)，或特徵(A)、(B)、(C)、(D)及(E)。

在本發明之海藻糖磷酸化酶的一具體實施例中，該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列在SEQ ID NO: 1的胺基酸序列的至少二個胺基酸位置處包含一胺基酸取代。這些至少二個胺基酸位置在本文中也稱為二個胺基酸對位置。在本發明之海藻糖磷酸化酶的一具體實施例中，該二個胺基酸對位置係選自由下列所組成之群組：V10與L114、V10與I118、V10與Y220、V10與N225、V10與A304、V10與T323、V10與F349、V10與G357、V10與P383、V10與Q487、V10與A506、V10與V550、V10與S556、V10與T564、V10與D590、V10與A649、V10與K705、V10與L712、L114與I118、L114與Y220、L114與N225、L114與A304、L114與T323、V10與F349、L114與G357、L114與P383、L114與Q487、L114與A506、L114與V550、L114與S556、L114與T564、L114與D590、L114與A649、L114與K705、L114與L712、I118 an Y220、I118與N225、I118與A304、I118與T323、V10與F349、I118與G357、I118與P383、I118與Q487、I118與A506、I118與V550、I118與S556、I118與T564、I118與D590、118與A649、L118與K705、I118與L712、Y220與N225、Y220與A304、Y220與T323、V10與F349、Y220與G357、Y220與P383、Y220與Q487、Y220與A506、Y220與V550、Y220與S556、Y220與T564、Y220與D590、Y220與A649、Y220與K705、Y220與L712、N225與A304、N225與T323、V10與F349、N225與G357、N225與P383、N225與Q487、N225與A506、N225與V550、N225與S556、N225與T564、N225與D590、N225與A649、N225與K705、N225與L712、A304與T323、V10與F349、A304與G357、A304與P383、A304與Q487、A304與A506、A304與V550、A304與S556、A304與T564、A304與D590、A304與A649、A304與K705、A304與L712、T323與F349、T323與G357、T323與P383、T323與Q487、T323與A506、T323與V550、T323與S556、T323與T564、T323與D590、T323與A649、T323與K705、T323與L712、F349與G357、F349與P383、F349與Q487、F349與A506、F349與V550、F349與S556、F349與T564、F349與D590、F349與A649、F349與K705、F349與L712、G357與P383、G357與Q487、G357與A506、G357與V550、G357與S556、G357與T564、G357與D590、G357與A649、G357與K705、G357與L712、P383與Q487、P383與A506、P383與V550、P383與S556、P383與T564、P383與D590、P383與A649、P383與K705、P383與L712、Q487與A506、Q487與V550、Q487與S556、Q487與T564、Q487與D590、Q487與A649、Q487與K705、Q487與L712、A506與V550、A506與S556、A506與T564、A506與D590、A506與A649、A506與K705、A506與L712、V550與S556、V550與T564、V550與D590、V550與A649、V550與K705、V550與L712、S556與T564、S556與D590、S556與A649、S556與K705、S556與L712、T564與D590、T564與A649、T564與K705、T564與L712、D590與A649、D590與K705、D590與L712、A649與L712、A649與K705，以及K705與L712。本發明之海藻糖磷酸化酶的另外的具體實施例為其中該二個胺基酸對位置係選自更有限的群組，包括本文具體公開的二個胺基酸對位置的更有限群組的那些。在本發明的範圍內，一海藻糖磷酸化酶在SEQ ID NO: 1的這二對胺基酸對位置之一處包含一胺基酸取代。

如本文所公開的，於另一具體實施例中，該海藻糖磷酸化酶除了在SEQ ID NO: 1的二個胺基酸對位置的胺基酸取代之外，還包含在SEQ ID NO: 1的至少一個或多個另外的胺基酸位置處的一胺基酸取代。SEQ ID NO: 1的這樣的一個或多個另外的胺基酸位置係各別且獨立地選自以下SEQ ID NO: 1的每個胺基酸位置所組成之群組：712、383、10、114、118、192、197、220、225、304、306、318、323、339、349、357、459、476、481、484、487、488、506、511、526、530、532、533、537、550、556、564、590、649、667、703與705。本發明之海藻糖磷酸化酶的其他具體實施例為其中一個或多個另外的胺基酸位置，係選自於一更受限制的群組的那些，包括那些如本文具體公開之另外的胺基酸位置的更有限的群組。在本發明之範圍內，一海藻糖磷酸化酶在SEQ ID NO: 1的二個胺基酸對位置的這些對之一處以及在該另外的胺基酸序列之一處包含一胺基酸取代。據此，本發明的海藻糖磷酸化酶各別在一具體實施例中為，在至少三個胺基酸位置，亦即在SEQ ID NO: 1的該二個胺基酸對位置與一個該另外的胺基酸位置處，具有一胺基酸取代之海藻糖磷酸化酶，在至少四個胺基酸位置，亦即在SEQ ID NO: 1的該二個胺基酸對位置與二個該另外的胺基酸位置處，具有一胺基酸取代之海藻糖磷酸化酶，在至少五個胺基酸位置，亦即在SEQ ID NO: 1的該二個胺基酸對位置與三個該另外的胺基酸位置處，具有一胺基酸取代之海藻糖磷酸化酶，或在至少六個胺基酸位置，亦即在SEQ ID NO: 1的該二個胺基酸對位置與四個該另外的胺基酸位置處，具有一胺基酸取代之海藻糖磷酸化酶。本發明之海藻糖磷酸的一具體實施例，其中該海藻糖磷酸化酶在至少四個胺基酸位置上包含一胺基酸取代，為在SEQ ID NO: 1的每個胺基酸位置712、383、114及118處包含一胺基酸取代的海藻糖磷酸化酶。本發明之海藻糖磷酸的一具體實施例，其中該海藻糖磷酸化酶在至少五個胺基酸位置上包含一胺基酸取代，為在SEQ ID NO: 1的每個胺基酸位置712、383、114、118與304處，及/或在SEQ ID NO: 1的每個胺基酸位置712、383、114、118與357處包含一胺基酸取代的海藻糖磷酸化酶。本發明之海藻糖磷酸的一具體實施例，其中該海藻糖磷酸化酶在至少六個胺基酸位置上包含一胺基酸取代，為在SEQ ID NO: 1的每個胺基酸位置712、383、114、118、304與357處包含一胺基酸取代的海藻糖磷酸化酶。

於又一具體實施例中，該海藻糖磷酸化酶除了包含在SEQ ID NO: 1的二個胺基酸對位置上的該胺基酸取代以及在SEQ ID NO: 1的至少另外一個胺基酸位置上的該胺基酸取代，並帶有SEQ ID NO: 1的一個或多個另外的胺基酸位置，較佳為本文公開的SEQ ID NO: 1的一個、二個、三個或四個胺基酸位置之外，仍可包含在SEQ ID NO: 1的更進一步的一個或多個胺基酸位置上的一胺基酸取代。 SEQ ID NO: 1的這種一個或多個更進一步的胺基酸位置係各別並獨立地選自由下列SEQ IS NO: 1的每個胺基酸位置所組成之群組：10、192、197、220、225、306、318、323、339、349、459、476、481、484、487、488、506、511、526、530、532、 533、537、550、556、564、649、667、703與705。本發明之海藻糖磷酸化酶的另外的具體實施例為該一個或多個更進一步的胺基酸位置係選自一更有限的群組的那些，包括本文中具體公開的另外的胺基酸位置的更有限的群組。

關於本文公開的具體取代，應該注意的是，根據胺基酸取代領域中的常規做法，取代係指進行取代的胺基酸位置的編號，其中左側的數字在兩側由胺基酸殘基指示，其左側的胺基酸殘基是存在於未取代的胺基酸序列中的胺基酸殘基，而右側的胺基酸殘基是存在於取代的胺基酸序列中的胺基酸殘基。因此，僅為了說明之目的，取代V10R表示在胺基酸位置10，纈胺酸殘基被精胺酸所取代。

在本發明之範圍內，如本文所公開之SEQ ID NO: 1的胺基酸位置處的任何突變係以單獨或以任何組合之形式，產生仍為海藻糖磷酸化酶活性的蛋白質，更具體而言，係以根據EC 2.4.1.213之海藻糖磷酸化酶。較佳地，在EC號為EC 2.4.1.213的海藻糖磷酸化酶中的任何該突變結果，不論是單獨或任何組合，如本文所公開，具有特徵(A)、(B)、(C)、(D)與(E)中的至少一個，或這樣的特徵的任何組合。

應當理解的是，除了本文具體公開的取代之外，本發明之海藻糖磷酸化酶較佳為如本文所公開的SEQ ID NO: 1的胺基酸位置上的該取代，進一步及/或不同的取代是可以被製造的。較佳地，這樣的進一步取代在與SEQ ID NO: 1的胺基酸位置D379、H403、R507與K512不同的位置處進行，該位置被描述為正確的反應催化所必需的。

已知如何分別確定胺基酸殘基的聚合物的同一性及同源性。同源性較佳係使用BLASTP (參見，例如，Stephen F. Altschul, Thomas L. Madden, Alejandro A. Schäffer, Jinghui Zhang, Zheng Zhang, Webb Miller，以及David J. Lipman (1997年) "Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs", Nucleic Acids Res. 25:3389-3402；或 Stephen F. Altschul, John C. Wootton, E. Michael Gertz, Richa Agarwala, Aleksandr Morgulis, Alejandro A. Schäffer，以及Yi-Kuo Yu (2005年) “Protein database searches using compositionally adjusted substitution matrices.” FEBS J. 272:5101-5109)。

於一具體實施例中，本發明之海藻糖為一分類為EC2.4.1.231的磷酸化酶，其催化海藻糖的磷酸鹽裂解，並使用無機磷酸鹽作為葡糖基受體，將端基異構構象淨保留在葡萄糖與α-D-葡萄糖-1磷酸鹽(aG1P)。這樣的反應是可逆的，因此，本發明之海藻糖磷酸化酶將葡萄糖與α-D-葡萄糖-1磷酸鹽(aG1P)轉化為海藻糖與無機磷酸鹽。海藻糖為二糖α-D-吡喃葡萄糖基α-D-吡喃葡萄糖苷(α,α-海藻糖)，其特徵在於具有如IUPAC定義的分子結構為任何物理形式的(2R,3S,4S,5R,6R)-2-(羥甲基)-6-[(2R,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-三羥基-6-(羥基甲基)氧雜環戊烷-2-基]氧基噁唑-3,4,5-三醇。

於又一具體實施例中，基於胺基酸序列的相似性，本發明之海藻糖磷酸化酶在碳水化合物-活性酶資料庫中被歸類為糖基轉移酶家族GT4的成員(CAZy，Lombard等人(2014年) Nucleic Acids Res 42: D490-D495，http://www.cazy.org/)。

於一具體實施例中，本發明之海藻糖磷酸化酶與葡糖基單醣及α-D-葡萄糖-1磷酸鹽反應。於一較佳具體實施例中，該葡糖基單醣為葡萄糖，其中反應產物較佳為海藻糖。

於又一具體實施例中，本發明之海藻糖磷酸化酶與不同於葡萄糖的單醣反應。這種不同於葡萄糖的單醣較佳為選自D-甘露糖、2-去氧D-葡萄糖、2-氟D-葡萄糖2-去氧-2-氟-D-葡萄糖、5-硫代-D-葡萄糖與2-酮-D-葡萄糖，其係被描述為適合用於被分類為EP 2.4.1.231的磷酸化酶之單醣，參閱，例如，(Schwarz等人，J Biotechnol 129, 140-150 (2007年), Nidetzky 2001等人，Biochem J (2001年) 360, 727-736)。

於又一具體實施例中，本發明之海藻糖磷酸化酶不與β-D-葡萄糖-1-磷酸鹽、α-D-半乳糖1-磷酸鹽、α-D-甘露糖1-磷酸鹽，或α-木糖1-磷酸鹽反應而作為取代αG1P的替代糖基供體(Schwarz等人，J Biotechnol 129, 140-150 (2007年)，Saito等人，Appl Microbiol Biotechnol 64: 4340-4345 (1998年))。

根據另一具體實施例，本發明之海藻糖磷酸化酶較佳為分類為EC 2.4.1.231的磷酸化酶，不磷酸裂解其他二糖，例如α,β-海藻糖、β,β-海藻糖、蔗糖、纖維二糖、乳糖、麥芽糖、異麥芽酮糖、異麥芽糖、乳果糖或蜜二糖(參見，例如，Schwarz等人，J Biotechnol 129, 140-150 (2007年)，Eis等人，FEBS Letters 440 (1998年) 440-443，Saito等人，Appl Microbiol Biotechnol 64: 4340-4345 (1998年))。

於第二方面，本發明涉及一具有某些功能特徵的多胜肽。較佳地，該多胜肽為具有海藻糖磷酸化酶活性的多胜肽。更佳地，該多胜肽為一海藻糖磷酸化酶。

於第二方面之一較佳具體實施例中，其也是第二方面的任何先前具體實施例的一具體實施例，並且也是本發明之另一方面，該多胜肽包含一胺基酸序列，其中該胺基酸序列的多胜肽，較佳為海藻糖磷酸化酶的多胜肽，係與SEQ ID NO: 1的胺基酸序列具有至少80%同一性及/或至少80%同源性，其中該多胜肽，較佳為海藻糖磷酸化酶，具有特徵(A)、(B)、(C)、(D)與(E)中的至少一個或其任何組合，特徵(A)為於52°C作用15分鐘後的熱穩定性，其係由一殘餘活性所定義，特徵(B)為於52°C作用15分鐘後的熱穩定性，由此這種熱穩定性由最小Tm30值及/或最小Tm50值所定義，其中Tm30值與Tm50值如本文所定義，特徵(C)為由一特定溫度範圍內的Tm30值及/或Tm50值所定義之熱穩定性，特徵(D)為熱穩定性，其中熱穩定性由製程穩定性定義，製程穩定性定義為半衰期，較佳為海藻糖磷酸化酶活性於45°C一段時間的半衰期，特徵(E)為相對活性表示為100/500比率。

於第二方面之另一較佳具體實施例中，其也是第二方面的任何前述具體實施例的一具體實施例，並且也是本發明之另一方面，本發明涉及一熱穩定的海藻糖磷酸化酶變體，其中在含有1 M蔗糖的緩衝液中於52°C作用15分鐘後保留其初始活性的至少30%，且在室溫作用15分鐘後測定其初始活性。較佳地，這樣的海藻糖變體為一熱穩定的海藻糖磷酸化酶變體，更佳為根據本發明之第一方面的海藻糖磷酸化酶。

於第二方面之另一較佳具體實施例中，其也是第二方面的任何前述具體實施例的一具體實施例，並且也是本發明之另一方面，本發明涉及一來自裂褶菌(Schizophyllum commune )的海藻糖磷酸化酶之熱穩定變體，其中該變體於52°C作用15分鐘後具有至少30%的殘餘活性。較佳地，這樣的海藻糖變體為一熱穩定的海藻糖磷酸化酶變體，更佳為根據本發明之第一方面的海藻糖磷酸化酶。

於第二方面之另一較佳具體實施例中，其也是第二方面的任何前述具體實施例的一具體實施例，並且也是本發明之另一方面，本發明涉及一包含SEQ ID NO: 1胺基酸序列之海藻糖磷酸化酶的變體，其中該變體於52°C作用15分鐘後具有至少30%的殘餘活性。較佳地，這樣的海藻糖變體為一熱穩定的海藻糖磷酸化酶變體，更佳為根據本發明之第一方面的海藻糖磷酸化酶。

於第二方面之另一較佳具體實施例中，其也是第二方面的任何前述具體實施例的一具體實施例，並且也是本發明之另一方面，本發明涉及一來自舞菇(Grifola frondosa )之海藻糖磷酸化酶的熱穩定變體，其中該變體於52°C作用15分鐘後具有至少30%的殘餘活性。較佳地，這樣的海藻糖變體為一熱穩定的海藻糖磷酸化酶變體，更佳為根據本發明之第十四方面的海藻糖磷酸化酶。

於第二方面之另一較佳具體實施例中，其也是第二方面的任何先前具體實施例的一具體實施例，並且也是本發明之另一方面，本發明涉及一多胜肽，較佳為海藻糖酸化酶的多胜肽，其為一如本文所述的任何方面或任何較佳具體實施例中所定之多胜肽的酶促活性片段，較佳海藻糖磷酸化酶的片段，更佳為根據本發明之第一、第三、第四、第五，或第十四方面之海藻糖磷酸化酶。

於第二方面之另一較佳具體實施例中，其也是第二方面的任何前述具體實施例的一具體實施例，並且也是本發明之另一方面，本發明涉及一具有海藻糖磷酸化酶活性的多胜肽，其中該多胜肽包含一胺基酸序列，其中該胺基酸序列與SEQ ID NO: 1的胺基酸序列具有至少20%的同源性，其中該多胜肽包含選自下列胺基酸位置的二個或更多個：712A、712G、712I、712M、712P或712V、較佳為712M、383A、383G、383I、383L、383M、383V、383N、383C、383Q、383S或383T、較佳為383V或383S、最佳為383V、114A、114G、114I、114M、114P或114V、較佳為114I、118A、118G、118I、118L、118M、118P或118V、較佳為118V、225A、225G、225I、225L、225M、225P或225V、較佳為225V、304G、304I、304L、304M、304P或304V、較佳為304I 323A、323G、323I、323L、323M、323P、或323V、較佳為323I、349W或349Y、較佳為349Y、357A、357I、357L、357M、357P或357V、較佳為357A、487A、487G、487I、487L、487M、487P或487V、較佳為487A、487G、487L或487V、更佳為487A、550A、550G、550I、550L、550M或550P、較佳為550I、556N、556C、556Q或S556T、較佳為556T、564D或564E、較佳為564E、590N、590C、590Q、590S、590T、590A、590G、590I、590L、590M、590P或590V、較佳為590N或590A、更佳為590N、and 649D或649E、較佳為649E，編號係指SEQ ID NO: 1中的比對位置。

本領域技術人員將理解如何鑑定對應於SEQ ID NO: 1中的上述位置的任何海藻糖磷酸酶的野生型序列的胺基酸位置。為了澄清，且不限制ㄋ本發明的公開內容，圖3顯示了SEQ ID NO: 1與本領域已知的幾種野生型海藻糖磷酸化酶的完全比對。此外，表5顯示了另外的野生型海藻糖磷酸化酶的序列位置中的編號及胺基酸，其對應於SEQ ID NO: 1的位置114、118、225、304、323、349、383、487、550、556、564、590、649，以及712。

於另一較佳具體實施例中，其亦為該第二方面之任何先前具體實施例的一具體實施例，本發明涉及根據下表的多胜肽A₁ -A₁₀ 至N₁ -N₁₀ (具有表示位置數目的列與代表同源性百分比的排)，其中具有根據本發明之具有與SEQ ID NO: 1不同的同源性的具有海藻糖磷酸化酶活性之多胜肽包含選自以下胺基酸位置之不同數目的組合：712A、712G、712I、712M、712P或712V、較佳為712M、383A、383G、383I、383L、383M、383V、383N、383C、383Q、383S或383T、較佳為383V或383S、最佳為383V、114A、114G、114I、114M、114P或114V、較佳為114I、118A、118G、118I、118L、118M、118P或118V、較佳為118V、225A、225G、225I、225L、225M、225P或225V、較佳為225V、304G、304I、304L、304M、304P或304V、較佳為304I 323A、323G、323I、323L、323M、323P、或323V、較佳為323I、349W或349Y、較佳為349Y、357A、357I、357L、357M、357P或357V、較佳為357A、487A、487G、487I、487L、487M、487P或487V、較佳為487A、487G、487L或487V、更佳為487A、550A、550G、550I、550L、550M或550P、較佳為550I、556N、556C、556Q或S556T、較佳為556T、564D或564E、較佳為564E、590N、590C、590Q、590S、590T、590A、590G、590I、590L、590M、590P或590V、較佳為590N或590A、更佳為590N、and 649D或649E、較佳為649E，編號係指SEQ ID NO: 1中的比對位置。例如位置712M/118V的組合描述了在與SEQ ID NO: 1的位置712對齊的位置具有甲硫胺酸，以及在與SE​​Q ID NO: 1的位置118對齊的位置處具有纈胺酸之多胜肽。

表1

例如，D₄ 係指多胜肽與SEQ ID NO: 1具有至少50%的同源性，並且在選自712A、712G、712I、712M、712P或712V、較佳為712M、383A、383G、383I、383L、383M、383V、383N、383C、383Q、383S或383T、較佳為383V或383S、最佳為383V、114A、114G、114I、114M、114P或114V、較佳為114I、118A、118G、118I、118L、118M、118P或118V、較佳為118V、225A、225G、225I、225L、225M、225P或225V、較佳為225V、304G、304I、304L、304M、304P或304V、較佳為304I 323A、323G、323I、323L、323M、323P、or 323V、較佳為323I、349W或349Y、較佳為349Y、357A、357I、357L、357M、357P或357V、較佳為357A、487A、487G、487I、487L、487M、487P或487V、較佳為487A、487G、487L或487V、更佳為487A、550A、550G、550I、550L、550M或550P、較佳為550I、556N、556C、556Q或S556T、較佳為556T、564D或564E、較佳為564E、590N、590C、590Q、590S、590T、590A、590G、590I、590L、590M、590P或590V、較佳為590N或590A、更佳為590N、以及649D或649E、較佳為649E的5個位置包含取代。

於另一較佳具體實施例中，其亦為該第二方面之任何先前具體實施例的一具體實施例，本發明涉及具有海藻糖磷酸化酶活性的多胜肽，其中該多胜肽包含一胺基酸序列，其中該胺基酸序列與SEQ ID NO: 1的胺基酸序列具有至少77%的同源性，其中該多胜肽在選自胺基酸位置383、114、225、304、323、349、357、550、556、564以及649的二個或多個處包含一胺基酸取代，其中該胺基酸編號係指在SEQ ID NO: 1中的比對位置。

於另一較佳具體實施例中，其亦為該第二方面之任何先前具體實施例的一具體實施例，本發明涉及具有海藻糖磷酸化酶活性的多胜肽，其中該胺基酸序列與SEQ ID NO: 1的胺基酸序列具有至少68%的同源性，其中該多胜肽在選自胺基酸位置383、114、225、304、323、349、357、550、556以及564的二個或多個處包含一胺基酸取代，其中該胺基酸編號係指在SEQ ID NO: 1中的比對位置。

於另一較佳具體實施例中，其亦為該第二方面之任何先前具體實施例的一具體實施例，本發明涉及具有海藻糖磷酸化酶活性的多胜肽，其中該多胜肽包含一胺基酸序列，其中該胺基酸序列與SEQ ID NO: 1的胺基酸序列具有至少63%的同源性，其中該多胜肽在選自胺基酸位置383、114、225、304、323、349、357、556以及564的二個或多個處包含一胺基酸取代，其中該胺基酸編號係指在SEQ ID NO: 1中的比對位置。

於另一較佳具體實施例中，其亦為該第二方面之任何先前具體實施例的一具體實施例，本發明涉及具有海藻糖磷酸化酶活性的多胜肽，其中胺基酸序列與SEQ ID NO: 1的胺基酸序列至少具有50%同源性。

於另一較佳具體實施例中，本發明涉及具有海藻糖磷酸化酶活性之多胜肽，其中胺基酸序列與SEQ ID NO: 1的胺基酸序列具有至少51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%或80%的同源性。

還將理解的是，該多胜肽且較佳為該第一方面之海藻糖磷酸化酶以及其任何具體實施例的多胜肽可為該第二方面之一具體實施例以及其任何具體實施例的多胜肽。還應理解的是，該多胜肽且較佳為該第二方面之海藻糖磷酸化酶以及其任何具體實施例的多胜肽可為該第一方面之一具體實施例以及其任何具體實施例的多胜肽。

於第六方面，本發明涉及一種使葡糖基單醣與α-D-葡萄糖-1-磷酸鹽反應之方法，其中該方法包括使葡糖基單醣與α-D-葡萄糖-1磷酸鹽與本發明之一海藻糖磷酸化酶反應，較佳為根據第一及/或第二方面之海藻糖磷酸化酶。

於第七方面，本發明涉及將葡萄糖與α-D-葡萄糖-1磷酸轉化為海藻糖與無機磷酸鹽之方法，其中該方法包括以本發明之一海藻糖磷酸化酶，較佳為根據第一及/或第二方面之海藻糖磷酸化酶，使葡萄糖與α-D-葡萄糖-1-磷酸海藻糖反應為海藻糖及無機磷酸鹽。

於第八方面，本發明涉及將海藻糖與無機磷酸鹽轉化為葡萄糖與α-D-葡萄糖-1-磷酸之方法，且其中該方法包括以本發明之一海藻糖磷酸化酶，較佳為根據第一及/或第二方面之海藻糖磷酸化酶，使海藻糖及無機磷酸鹽反應為葡萄糖與α-D-葡萄糖-1磷酸鹽。

於第九方面，本發明涉及根據第一及/或第二方面之海藻糖磷酸化酶用於生產海藻糖之用途。

於第十方面，本發明涉及一種製備海藻糖之方法，包括在一海藻糖磷酸化酶存在下，在至少40°C的溫度下使葡萄糖與α-D-葡萄糖-1磷酸鹽反應，其中該海藻糖磷酸化酶 (i) 在含有1M蔗糖的一緩衝液中於52°C下作用15分鐘，與沒有熱處理的活性相比，保留至少30%的活性；及/或(ii) 在100 mM葡萄糖下的活性與在500 mM葡萄糖下的活性之比率至少為0.65。

於一具體實施例中，該海藻糖磷酸化酶為根據第一及/或第二方面之海藻糖磷酸化酶。

於第十一方面，本發明涉及一種提高一海藻糖磷酸化酶之熱穩定性的方法，其中該方法包括： - 比對一第一海藻糖磷酸化酶的一胺基酸序列與一第二海藻糖磷酸化酶的一胺基酸序列， - 鑑定對應於該第一海藻糖磷酸化酶的該胺基酸序列的一個或多個胺基酸位置的該第二海藻糖磷酸化酶的該胺基酸序列的一個或多個胺基酸位置，其中在該第一海藻糖磷酸化酶的該胺基酸序列的一個或多個胺基酸位置的一胺基酸殘基取代提高了該第一海藻糖磷酸化酶的熱穩定性， - 取代對應於該第一海藻糖磷酸化酶的該胺基酸序列的一個或多個胺基酸位置的在該第二海藻糖磷酸化酶的一個或多個胺基酸位置處的一胺基酸殘基，其中在該第一海藻糖磷酸化酶的該胺基酸序列的一個或多個胺基酸位置的一胺基酸殘基的取代提高了該第一海藻糖磷酸化酶的熱穩定性， 其中該第一海藻糖磷酸化酶為包含根據SEQ ID NO: 1的胺基酸序列之海藻糖磷酸化酶。

在本發明範圍內，本發明之海藻糖磷酸化酶係以全長酶之形式存在。本發明之海藻糖磷酸化酶作為片段存在也在本發明之範圍內。較佳地，所述片段保留海藻糖磷酸化酶活性，較佳為如本文分別對本發明之海藻糖磷酸化酶所定義及分別公開的海藻糖磷酸化酶活性。

於另一方面，本發明涉及編碼本發明之海藻糖磷酸化酶的核酸分子。通常已知基於本文公開的胺基酸序列衍生此類核酸分子。較佳地，核酸序列取決於用於表現本發明之海藻糖磷酸化酶的表現系統。用於表現本發明之海藻糖磷酸化酶的較佳表現系統為大腸桿菌(E. coli )、芽孢桿菌(Bacillus sp )、巴斯德畢赤酵母菌(P. pastoris )及真菌表現系統如麴菌屬(Aspergillus sp. )。

於另一方面，本發明涉及含有編碼本發明之海藻糖磷酸化酶之核酸分子的載體。較佳地，該載體是表現載體。適用於表現酶的合適載體已經在現有技術中被描述。

於另一方面，本發明涉及含有本發明載體之宿主生物體。已經描述了含有用於表現酶的載體之合適宿主，且較佳地，該宿主生物體為大腸桿菌(E. coli )、芽孢桿菌(Bacillus sp )、巴斯德畢赤酵母菌(P. pastoris )或真菌表現系統如麴菌屬(Aspergillus sp. )，較佳為大腸桿菌及巴斯德畢赤酵母菌。將這種載體整合到該宿主生物體中的方法也是已知的。

於另一方面，本發明涉及用於表現海藻糖磷酸化酶之方法。所述方法包括培養如該說明書中所揭露之宿主生物體，其中該宿主生物體包含一表現載體，其中該表現載體包含一編碼根據本發明之海藻糖磷酸化酶的核酸分子，在允許所述核酸分子表現的條件下進行培養，並收穫該海藻糖磷酸化酶。

在本發明的每個及任何方面，包括其任何具體實施例，的具體實施例中，使用如本文所公開之分析I測定Tm30值。

在本發明的每個及任何方面，包括其任何具體實施例，的具體實施例中，使用如本文所公開之分析II測定Tm30值。

在本發明的每個及任何方面，包括其任何具體實施例，的具體實施例中，使用如本文所公開之分析I測定Tm50值。

在本發明的每個及任何方面，包括其任何具體實施例，的具體實施例中，使用如本文所公開之分析II測定Tm50值。

在本發明的範圍內，本發明的每個及任何方面，包括其任何具體實施例，的海藻糖磷酸化酶以下列形式之一存在：液體溶液、乾燥粉末、冷凍乾燥的粉末、以一固定之形式。

在本發明的每個及任何方面，包括其任何實施例，的實施例中，適用以下定義。

定義熱穩定性： 熱穩定性為酶在給定的時間段內暴露於特定的高溫後抵抗不可逆不活化的能力。計算在升高的溫度下作用一定時間的酶的殘餘活性作為酶活性與未在高溫下作用的酶樣品之相對關係。原則上可以使用任何活性測定來確定酶活性。為了本發明之目的，如下所述之分析1或分析2已經按照實施例中的規定使用。

測量與描述熱穩定性有許多方法。為了本發明之目的，透過測量及描述一個或多個以下特徵來確定熱穩定性：

Tm30 值 ：就本發明之目的而言，Tm30值是在含有1 M蔗糖的緩衝液中在該溫度下作用15分鐘後，酶具有其初始活性的30%的溫度。初始活性為沒有溫度處理的各種酶的活性，即在室溫下作用15分鐘。原則上可以使用任何活性測定來確定酶活性；為了本發明之目的，已經使用如下所述之分析1或分析2，如實施例中所指定的。

Tm50 值 ：對於本發明之目的而言，Tm50值為在含有1 M蔗糖的緩衝液中在該溫度下作用15分鐘後酶具有其初始活性的50%時的溫度。初始活性為沒有溫度處理的各種酶的活性，即在室溫下作用15分鐘。原則上可以使用任何活性測定來確定酶活性；為了本發明之目的，已經使用如下所述之分析1或分析2，如實施例中所指定的。

製程穩定性 / 半衰期 ：對於本發明之目的而言，如實施例中所示，分別在40或45°C下，在具有1 M蔗糖的50 mM磷酸鉀緩衝液p H7中測定長期穩定性。半衰期定義為在t = 0分鐘時酶具有50%活性的期間。原則上可以使用任何活性測定來確定酶活性；為了本發明之目的，已經使用如下所述之分析1或分析2，如實施例中所指定的。

磷酸解活性與合成活性之定義： 由於TP催化海藻糖的可逆磷酸化裂解，因此可以在海藻糖磷酸解或合成的方向上測定活性。為了本發明之目的，將磷酸解活性定義為在如下所述之分析1的條件下，在無機磷酸鹽存在下將海藻糖切割成αG1P與葡萄糖的活性。合成活性定義為在如下所述之分析2的條件下由αG1P與葡萄糖合成海藻糖之活性。在本發明內，任何活性與該海藻糖磷酸化酶的任何活性於一具體實施例中為催化活性。

分析I：使用連續偶聯分析於30°C下常規測定磷酸解活性，其中由海藻糖產生的aG1P透過磷葡萄糖變位酶轉化為葡萄糖-6-磷酸鹽。透過葡萄糖-6-磷酸脫氫酶將葡萄糖-6-磷酸鹽與NADP轉化為6-磷酸葡萄糖酸與NADPH。檢測係基於在340 nm波長處測量NADPH的吸光度。測定溶液含有：75 mM的磷酸鉀緩衝液pH 7、2.5 mM的NADP、10 μM葡萄糖-1,6-二磷酸鹽、10 mM MgCl₂ 、225 mM海藻糖、3 U/mL的磷葡萄糖變位酶與3.4 U/mL葡萄糖-6-磷酸脫氫酶。

分析II：使用以下條件於40°C下常規測定合成活性：50 mM鈉MES緩衝液pH 7、100 mM aG1P與100或500 mM葡萄糖濃度，如給出的濃度。反應程序係透過基於在酸性條件下與鉬酸鹽的錯合物形成之測定來測量釋放之磷酸鹽而不連續地測定。鉬酸鹽錯合物被硫酸亞鐵還原並產生藍色，在750 nm波長處以分光光度法分析。為了分析，將250 μL樣品與250 μL 0.5M HCl與500 μL鉬酸鹽試劑(73.2 g/L Fe(II)SO₄ *7H₂ O及10 g/L鉬酸銨*4H₂ O於3.5% 硫酸中)。在室溫作用15-30分鐘後，在750 nm波長處測量吸光度。樣品中無機磷酸鹽的量以外部標準品量化。

定義S/P比率：就本發明而言，S/P比率定義為如實施例中所述，使用500 mM葡萄糖分別以分析1與分析2測量之磷酸解活性與合成活性之間的比率。

定義 100/500 比率： 就本發明而言，根據分析 2 ，100/500比率係為使用100 mM葡萄糖的TP變體的活性與使用500 mM葡萄糖與100 mM aG1P的TP變體的活性之間的比率。 與野生型酶相比，酶變體的100/500比率的增加表示葡萄糖的K_M 值降低。

於一具體實施例中，若無相反之說明，透過該多胜肽被展示或將被展示的，且較佳為任何海藻糖磷酸化酶的，本發明之酶活性、磷酸解活性以及合成活性由本文所述之方法及分析所各別定義及各別確定。

表2：序列編號的概述：野生型海藻糖磷酸化酶

表3：序列編號的概述：SEQ ID NO: 1的海藻糖磷酸化酶的變體

表4：序列編號的概述：SEQ ID NO: 160的變體海藻糖磷酸化酶

表5：在與不同野生型TP的SEQ ID NO: 1比對後，在SEQ ID NO: 1的位置114、118、225、304、323、349、383、487、550、556、564、590、649、712處的胺基酸及對應位置(該比對係以Clustal omega (Goujon M, McWilliam H, Li W, Valentin F, Squizzato S, Paern J, Lopez R Nucleic acids research 2010 Jul, 38 Suppl: W695-9)進行)。

實施例 實施例 1 ：一般方法

野生型TP之選殖：來自裂褶菌(S. communune )的海藻糖磷酸化酶基因針對在大腸桿菌中表現進行密碼子優化，並由Eurofins MWG操縱子合成。將該基因選殖至表現載體pLE1A17 (pRSF-1b，Novagen公司，的衍生物)中。所得之質體用於大腸桿菌BL21(DE3)細胞之轉型作用。

分子生物學方法：透過本領域已知之標準點突變技術創造TP酶之突變體。

重組TP之表現：透過接種培養基I (4.6 g/L酵母萃取物、9.3 g/L蛋白腖、25 mM Na₂ HPO₄ *12H₂ O、25 mM KH₂ PO₄ 、50 mM NH₄ Cl₂ 、Na₂ SO₄ 、5 g/L甘油、0.5 g/L葡萄糖*1H₂ O、2 mM MgSO₄ 、50 μg/mL康黴素)與新鮮的過夜培養物常規表現重組TPs。培養物在37°C下生長至在600 nm波長的光密度為0.6-0.8。以終濃度為0.1 mM的IPTG誘導培養物。表現在24-25°C過夜進行。

TP酶製劑之製備：使用其它地方所述習知的方法製備無細胞萃取物。透過離心收穫細胞並懸浮於含有50 mM磷酸鉀 – pH 7、2 mM MgCl₂ 、0.5 mg/mL溶菌酶與20 U/mL核酸酶的緩衝液中。有時加入1M蔗糖作為穩定劑。透過超音波處理或反覆冷凍/解凍循環達到細胞破碎。含有可溶性酶的無細胞萃取物透過離心由碎片中分離出來。

活性測量：如分析I與分析II中所述，可以在海藻糖切割(磷酸解活性)與合成(合成的活性)的方向上測定海藻糖磷酸化酶的活性：

分析I：使用連續偶聯分析於30°C下常規測定磷酸解活性，其中由海藻糖產生的aG1P透過磷葡萄糖變位酶轉化為葡萄糖-6-磷酸鹽。透過葡萄糖-6-磷酸脫氫酶將葡萄糖-6-磷酸鹽與NADP轉化為6-磷酸葡萄糖酸與NADPH。檢測係基於在340 nm波長處測量NADPH的吸光度。測定溶液含有：75 mM的磷酸鉀緩衝液pH 7、2.5 mM的NADP、10 μM葡萄糖-1,6-二磷酸鹽、10 mM MgCl₂ 、225 mM海藻糖、3 U/mL的磷葡萄糖變位酶與3.4 U/mL葡萄糖-6-磷酸脫氫酶。

分析II：使用以下條件於40°C下常規測定合成活性：50 mM鈉MES緩衝液pH 7、100 mM aG1P與100或500 mM葡萄糖濃度，如給出的濃度。反應程序係透過基於在酸性條件下與鉬酸鹽的錯合物形成之測定來測量釋放之磷酸鹽而不連續地測定。鉬酸鹽錯合物被硫酸亞鐵還原並產生藍色，在750 nm波長處以分光光度法分析。為了分析，將250 μL樣品與250 μL 0.5M HCl與500 μL鉬酸鹽試劑(73.2 g/L Fe(II)SO₄ *7H₂ O及10 g/L鉬酸銨*4H₂ O於3.5% 硫酸中)。在室溫作用15-30分鐘後，在750 nm波長處測量吸光度。樣品中無機磷酸鹽的量以外部標準品量化。 實施例 2 ：蔗糖對熱穩定性之影響

重組TPs的表現：透過接種培養基I (4.6 g/L酵母萃取物、9.3 g/L蛋白腖、25 mM Na₂ HPO₄ *12H₂ O、25 mM KH₂ PO₄ 、50 mM NH₄ Cl₂ 、Na₂ SO₄ 、5 g/L甘油、0.5 g/L葡萄糖*1H₂ O、2 mM MgSO₄ 、50 μg/mL康黴素) 與新鮮的過夜培養物，在搖瓶中表現野生型酶SEQ ID NO: 1。在對數期以0.1 mM IPTG誘導培養物，並在24-25°C下表現過夜。

TP酶製劑之製備：為了製備不含蔗糖的細胞萃取物，透過離心收穫細胞並懸浮於含有50 mM磷酸鉀緩衝液pH 7、2 mM MgCl₂ 、0.5 mg/mL溶菌酶以及20 U/mL核酸酶。以超音波破碎細胞。含有可溶性酶的無細胞萃取物係透過離心從碎片中分離出來。為了製備以蔗糖作為穩定劑的細胞萃取物，透過離心收集細胞並懸浮於含有100 mM磷酸鉀 – pH 7、2 mM MgCl₂ 、0.5 mg/mL溶菌酶以及20 U/mL核酸酶的緩衝液中。以超音波破碎細胞。透過離心將含有可溶性酶的無細胞萃取物與碎片分離，並以2 M蔗糖溶液以1:2倍數稀釋。

變性圖譜之測定：將50 μL具有及不具有1 M蔗糖之酶製劑的等分試樣於36至53.7°C的溫度範圍下作用15分鐘。透過離心分離變性的蛋白質。所得之上清液以及未經熱不活化步驟的細胞萃取物的活性以分析I測定。圖1為具有及不具有1 M蔗糖作為穩定劑的SEQ ID NO: 1的變性圖譜，顯示與未經熱不活化之酶製劑相比之所獲得的殘餘活性。添加1 M蔗糖導致Tm50從大約40°C增加至47.5°C。因此選擇1M蔗糖作為TP的穩定劑。 實施例 3 ：於 52°C 作用 15 分鐘後 TP 變體之殘餘活性

重組TPs的表現：透過接種培養基I (4.6 g/L酵母萃取物、9.3 g/L蛋白腖、25 mM Na₂ HPO₄ *12H₂ O、25 mM KH₂ PO₄ 、50 mM NH₄ Cl₂ 、Na₂ SO₄ 、5 g/L甘油、0.5 g/L葡萄糖*1H₂ O、2 mM MgSO₄ 、50 μg/mL康黴素) 與新鮮的過夜培養物，在深孔盤中表現重組TP。培養物於37°C下生長至在600 nm波長下的光密度為0.6-0.8。以終濃度為0.1 mM IPTG誘導培養物。於24-25°C表現過夜。

TP酶製劑之製備：透過離心收穫細胞並懸浮於100 mM磷酸鉀緩衝液pH7、2 mM MgCl₂ 、0.5 mg/mL溶菌酶與20 U/mL核酸酶中。細胞透過反覆的冷凍/解凍循環被破壞。含有可溶性酶的無細胞萃取物透過離心從碎片中分離出來。無細胞萃取物以2M蔗糖溶液以1:2倍數稀釋。

熱不活化與活性測量：將每種TP的50 μL等分試樣於52°C作用15分鐘。透過離心分離變性的蛋白質。使用以500 mM葡萄糖的分析II測定上清液的活性。使用以500 mM葡萄糖的分析II直接測定每個TP的另一等分試樣的活性而不進行熱不活化。所得殘餘活性列於表6中。所有變體顯示比野生型酶具有更高的殘餘活性，這表示與野生型相比，它們具有改善的熱穩定性。

表6：於52°C下作用15分鐘後TP變體之殘餘活性 實施例 4 ： TP 變體的 100/500 比率

如實施例2所述製備TP-變體的細胞萃取物。分別使用以500 mM葡萄糖的分析II以及以100 mM葡萄糖的分析II來測定活性，並計算每個變體的100/500比率。表7中列出了所得到的100/500比率。可以看出，除了改善的熱穩定性之外，一些變體顯示出與野生型相比也具有更高的100/500比率。這是改善葡萄糖Km值的一個指標。

表7：TP變體之100/500比率 實施例 5 ： TP 變體的變性圖譜

選擇在實施例3中顯示出高度熱穩定性改進的14種TP變體以用於測定其Tm30-與Tm50-值。如實施例2中所述，在含有1 M蔗糖的50 mM磷酸鉀緩衝液pH7中測定變性圖譜。從變性圖譜外推以下Tm30-與Tm-50-值：

表8：在含有1M蔗糖的50 mM磷酸鉀緩衝液pH 7中的TP-變體之Tm30-與Tm50-值 實施例 6 ： S/P 比率

選擇野生型酶與23個TP-變體以用於測定S/P比率。如實施例2中所述製備細胞萃取物。以海藻糖磷酸解(分析I)與海藻糖合成(分析II，500mM葡萄糖)的方向測定活性。野生型酶的合成與磷酸解活性比率(S/P比率)為0.3，表示該酶在海藻糖切割的方向上顯示出較高的反應速率。測試的TP變體都顯現出S/P比率高於0.3。與野生型酶相比，SEQ ID NO: 42與SEQ ID NO: 53顯現出最高的改善，其S/P比率高3倍以上。

表9：S/P比率 實施例 7 ：於 45°C 下的製程穩定性

野生型酶與TP變體SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 44、SEQ ID NO: 62、SEQ ID NO: 64、SEQ ID NO: 65以及SEQ ID NO: 78的製程穩定性於45°C下，在含有1 M蔗糖的50 mM磷酸鉀緩衝液pH 7中測定。如實施例2中所述製備細胞萃取物。將樣品於45°C作用16天。隨時間採集樣品，並使用分析I測量活性。結果顯示在圖2中SEQ ID NO: 1在前3個小時內顯現出快速的活性喪失，且其半衰期約1小時。正如從Tm50值預期的那樣，新的變體顯現出極大改進的製程穩定性。 SEQ ID NO: 62、SEQ ID NO: 65以及SEQ ID NO: 78的半衰期顯現出最高的改善，具有約8.8天的半衰期。與野生型酶相比，這構成了超過200倍的改善。 實施例 8 ：替代的 TP 酶

鑑定具有海藻糖磷酸化酶活性的替代野生型酶的可能性是將已知的海藻糖磷酸化酶與保藏在序列資料庫如GenBank中的序列進行比較。為了鑑定替代的TP酶，將SEQ ID NO: 1針對GenBank (NCBI)的不含重複性的資訊的資料庫進行了序列比對(blast)。替代的海藻糖磷酸化酶可以選自與SEQ ID：1具有高度序列相似性的資料庫序列，例如來自簇生垂幕菇(Hypholoma sublateritium ) FD-334 SS-4 (GenBank登錄號：KJA27491.1)的推定的海藻糖磷酸化酶或以功能性為特徵的海藻糖磷酸化酶，例如，來自環柄香菇(Lentinus sajor-caju )的酶(Genbank登錄號：Q9UV63.1)、舞菇(Grifola frondosa )的酶(Genbank登錄號：O75003.1或ADM15725.1)或秀珍菇的酶(Genbank登錄號：KDQ33172.1)。這四種酶的序列與圖3中的SEQ ID NO: 1進行比對。

使用實施例1中描述的方法創造替代的野生型海藻糖磷酸化酶的變體。該變體在對應於SEQ ID NO: 1中的位置L114、I118、G357、P383、N225、A304、T323、S556、T564、A649以及L712含有一個或多個突變。如實施例3所述測試變體的熱穩定性。熱不活化步驟在相應的野生型作用15分鐘後保留約20%殘餘活性的溫度下進行。預期新的變體將顯現出與實施例3中的變體相似的改進。可在對應於SEQ ID NO: 1中的位置L114、I118、G357、P383、N225、A304、T323、F349、Q487、V550、S556、T564、A649以及L712添加更多的突變。預期加入這些突變中的一個或多個將導致熱穩定性的進一步改善。

表10：於52.5°C作用15分鐘後的殘餘活性

本發明進一步透過圖式、實施例以及序列表說明，來自其中的進一步特徵、具體實施例及優點可以被擷取，其中

圖1為顯示在存在與不存在1M蔗糖加入穩定劑的情況下，對於SEQ ID NO: 1的野生型海藻糖磷酸化酶，作為溫度函數的殘餘活性百分比之圖；以及

圖2為顯示對於SEQ ID NO: 1的野生型海藻糖磷酸化酶與本發明之各種海藻糖磷酸化酶，作為時間函數的殘餘活性百分比之圖；以及

圖3所示為來自舞菇(Grifola frondosa )的野生型TPs (UniProtKB/Swiss-Prot：登錄號：O75003.1以及Genebank登錄號：ADM15725.1)，來自秀珍菇(Pleurotus ostreatus )的野生型TPs (Genurbank登錄號：KDQ33172.1 )，來自環柄香菇(Lentinus sajor-caju ) (別名：鳳尾菇(Pleurotus sajor-caju ))的野生型TPs (Genebank登錄號：Q9UV63.1)。使用Clustal omega (Goujon M, McWilliam H, Li W, Valentin F, Squizzato S, Paern J, Lopez R Nucleic acids research 2010 Jul, 38 Suppl: W695-9)進行序列比對。

在說明書、申請專利範圍、序列表及/或圖式中公開之本發明的特徵可為單獨地並且以其任何組合用於以其各種形式實現本發明之材料。

Claims (51)

1. 一種包含一胺基酸序列之海藻糖磷酸化酶，其中該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列與SEQ ID NO: 1的胺基酸序列具有至少80%同一性及/或至少80%同源性，其中該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列在一個或多個胺基酸位置處包含一胺基酸取代，其中該一個或多個胺基酸位置選自由以下SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：712、383、10、114、118、192、197、220、225、304、306、318、323、339、349、357、459、476、481、484、487、488、506、511、526、530、532、533、537、550、556、564、590、649、667、703，以及705。
2. 如申請專利範圍第1項之海藻糖磷酸化酶，其中該一個或多個胺基酸位置選自由以下SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：712、383、114、118、192、197、220、225、304、306、318、323、339、349、357、459、476、481、484、487、488、506、511、526、530、532、533、537、550、556、564、590、667、703，以及705。
3. 如前述申請專利範圍任一項之海藻糖磷酸化酶，其中該一個或多個胺基酸位置選自由以下SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：383、225、304、323、487、550、556、564、590，以及705。
4. 如前述申請專利範圍任一項之海藻糖磷酸化酶，其中該一個或多個胺基酸位置在SEQ ID NO: 1的第383個胺基酸位置處。
5. 如前述申請專利範圍任一項之海藻糖磷酸化酶，其中該一個或多個胺基酸位置選自由以下SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：L712M、P383G、P383V、P383C、P383S、P383T、V10R、L114I、I118V、S192V、S197G、Y220F、N225I、N225L、N225M、N225V、A304L、A304I、D306H、P318H、T323I、T323V、L339I、F349Y、G357A、A459S、Q476G、E481I、A484S、487A、Q487G、Q487L、Q487M、Q487V、K488A、A506S、A511S、R526E、E530V、G532R、D533G、D537M、V550I、V550P、S556T、T564E、D590N、D590G、D590A、A649E、R667E、R667K、A703E，以及K705N。
6. 如前述申請專利範圍任一項之海藻糖磷酸化酶，其中該一個或多個胺基酸位置選自由以下SEQ ID NO: 1的胺基酸位置所組成之群組：P383G、P383V、P383C、P383S、P383T、V10R、L114I、S192V、S197G、N225I、N225L、N225M、N225V、A304L、A304I、D306H、P318H、T323I、T323V、L339I、F349Y、G357A、A459S、Q476G、E481I、A484S、Q487G、Q487L、Q487M、Q487V、K488A、A506S、A511S、R526E、E530V、G532R、D533G、D537M、V550I、V550P、S556T、T564E、D590G、D590A、A649E、R667E、R667K、A703E，以及K705N。
7. 如前述申請專利範圍任一項之海藻糖磷酸化酶，其中該海藻糖磷酸化酶在二個或更多個胺基酸位置處包含胺基酸取代，其中該二個或更多個胺基酸位置選自由以下所組成之群組：10與114、10與712、114與118、114與304、114與357、114與383、114與590、114與712、118與304、118與357、118與383、118與556、118與564、118與590、118與712、225與304、225與383、225與487、225與550、225與556、225與590、304與323、304與357、304與383、304與487、304與556、304與564、304與590、304與712、323與357、323與487、323與556、323與564、323與590、323與649、349與383、349與590、357與383、357與590、357與705、357與712、383與487、383與550、383與556、383與564、383與590、383與649、383與712、487與564、487與590、487與649、550與590、556與564、556與590、556與649、564與590、564與712、590與649、590與712，以及649與712。
8. 如前述申請專利範圍任一項之海藻糖磷酸化酶，其中該海藻糖磷酸化酶在二個或更多個胺基酸位置處包含胺基酸取代，其中該二個或更多個胺基酸位置選自由以下所組成之群組：118與383、118與556、118與564、118與590、225與304、225與383、225與487、225與550、225與556、225與590、304與323、304與383、304與487、304與556、304與564、304與590、323與357、323與487、323與556、323與564、323與590、323與649、349與383、349與590、357與383、357與590、383與487、383與550、383與556、383與564、383與590、383與649、383與712、487與564、487與590、487與649、550與590、556與564、556與590、556與649、564與590、564與712、590與649、590與712、649與712，以及705與712。
9. 如前述申請專利範圍任一項之海藻糖磷酸化酶，其中該海藻糖磷酸化酶在二個或更多個胺基酸位置處包含胺基酸取代，其中該二個或更多個胺基酸位置選自由以下所組成之群組：118與383、118與590、225與383、225與590、304與383、304與590、323與590、349與383、349與590、357與383、357與590、383與487、383與550、383與556、383與564、383與590、383與649、383與712、487與590、550與590、556與590、564與590、590與649、590與712。
10. 如前述申請專利範圍任一項之海藻糖磷酸化酶，其中該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列包含一個或多個取代，其中該一個或多個取代選自由以下所組成之群組： 在SEQ ID NO: 1的第712個位置處的一個胺基酸取代，該取代為L712A、L712G、L712I、L712M、L712P或L712V，較佳為L712M； 在SEQ ID NO: 1的第383個位置處的一個胺基酸取代，該取代為P383A、P383G、P383I、P383L、P383M、P383V、P383N、P383C、P383Q、P383S或P383T，較佳為P383A、P383G、P383M、P383V、P383N、P383C、P383Q、P383S或P383T，更佳為P383G、P383V、P383C或P383S、或P383T，甚至更佳為P383V或P383T，以及最佳為P383V； 在SEQ ID NO: 1的第10個位置處的一個胺基酸取代，該取代為V10R、V10H或 V10K，較佳為V10R； 在SEQ ID NO: 1的第114個位置處的一個胺基酸取代，該取代為L114A、L114G、L114I、L114M、L114P或L114V，較佳為 L114I； 在SEQ ID NO: 1的第118個位置處的一個胺基酸取代，該取代為I118A、I118G、I118L、I118M、I118P或I118V，較佳為I118V； 在SEQ ID NO: 1的第192個位置處的一個胺基酸取代，該取代為S192A、S192G、S192I、S192L、S192M、S192P或S192V，較佳為S192V； 在SEQ ID NO: 1的第197個位置處的一個胺基酸取代，該取代為S197A、S197G、S197I、S197L、S197M、S197P 或 S197V，較佳為S197G； 在SEQ ID NO: 1的第220個位置處的一個胺基酸取代，該取代為Y220F 或 Y220W，較佳為Y220F； 在SEQ ID NO: 1的第225個位置處的一個胺基酸取代，該取代為N225A、N225G、N225I、N225L、N225M、N225P或N225V，較佳為N225I、N225L、N225M或N225V、且更佳為N225V； 在SEQ ID NO: 1的第304個位置處的一個胺基酸取代，該取代為A304G、A304I、A304L、A304M、A304P或A304V，較佳為A304I或A304L，且更佳為A304I； 在SEQ ID NO: 1的第306個位置處的一個胺基酸取代，該取代為D306R、D306H 或D306K，較佳為D306H； 在SEQ ID NO: 1的第318個位置處的一個胺基酸取代，該取代為P318R、P318H或P318K，較佳為P318H； 在SEQ ID NO: 1的第323個位置處的一個胺基酸取代，該取代為T323A、T323G、T323I、T323L、T323M、T323P，或 T323V，較佳為 T323I 或 T323V，且更佳為T323I； 在SEQ ID NO: 1的第339個位置處的一個胺基酸取代，該取代為L339A、L339G、L339I、L339M、L339P或L339V，較佳為L339I； 在SEQ ID NO: 1的第349個位置處的一個胺基酸取代，該取代為F349W或F349Y，較佳為F349Y； 在SEQ ID NO: 1的第357個位置處的一個胺基酸取代，該取代為G357A、G357I、G357L、G357M、G357P或G357V，較佳為G357A； 在SEQ ID NO: 1的第459個位置處的一個胺基酸取代，該取代為A459N、A459C、A459Q或A459S、A459T，較佳為A459S； 在SEQ ID NO: 1的第476個位置處的一個胺基酸取代，該取代為Q476A、Q476G、Q476I、Q476L、Q476M、Q476P或Q476V，較佳為Q476G； 在SEQ ID NO: 1的第481個位置處的一個胺基酸取代，該取代為E481A、E481G、E481I、E481L、E481M、E481P或E481V，較佳為E481I； 在SEQ ID NO: 1的第484個位置處的一個胺基酸取代，該取代為A484N、A484C、A484Q、A484S或A484T，較佳為A484S； 在SEQ ID NO: 1的第487個位置處的一個胺基酸取代，該取代為Q487A、Q487G、Q487I、Q487L、Q487M、Q487P或Q487V，較佳為Q487A、Q487G、Q487L、Q487M或Q487V，更佳為Q487A； 在SEQ ID NO: 1的第488個位置處的一個胺基酸取代，該取代為K488A、K488G、K488I、K488L、K488M、K488P或K488V，較佳為K488A； 在SEQ ID NO: 1的第506個位置處的一個胺基酸取代，該取代為A506N、A506C、A506Q、A506S 或A506T，較佳為A506S； 在SEQ ID NO: 1的第511個位置處的一個胺基酸取代，該取代為A511N、A511C、A511Q、A511S或A511T，較佳為A511S； 在SEQ ID NO: 1的第526個位置處的一個胺基酸取代，該取代為R526D或R526E，較佳為R526E； 在SEQ ID NO: 1的第530個位置處的一個胺基酸取代，該取代為E530A、E530G、E530I、E530L、E530M、E530P、E530V，較佳為E530V； 在SEQ ID NO: 1的第532個位置處的一個胺基酸取代，該取代為G532R、G532H或G532K，較佳為G532R； 在SEQ ID NO: 1的第533個位置處的一個胺基酸取代，該取代為D533A、D533G、D533I、D533L、D533M、D533P或D533V，較佳為D533G； 在SEQ ID NO: 1的第537個位置處的一個胺基酸取代，該取代為D537A、D537G、D537I、D537L、D537M、D537P或D537V，較佳為D537M； 在SEQ ID NO: 1的第550個位置處的一個胺基酸取代，該取代為V550A、V550G、V550I、V550L、V550M or、V550P，較佳為V550I或V550P，且更佳為V550I； 在SEQ ID NO: 1的第556個位置處的一個胺基酸取代，該取代為S556N、S556C、S556Q或S556T，較佳為S556T； 在SEQ ID NO: 1的第564個位置處的一個胺基酸取代，該取代為T564D或T564E，較佳為T564E； 在SEQ ID NO: 1的第590個位置處的一個胺基酸取代，該取代為D590N、D590C、D590Q、D590S、D590T、D590A、D590G、D590I、D590L、D590M、D590P或D590V，較佳為D590N、D590G或D590A，且更佳為D590N； 在SEQ ID NO: 1的第649個位置處的一個胺基酸取代，該取代為A649D或A649E，較佳為A649E； 在SEQ ID NO: 1的第667個位置處的一個胺基酸取代，該取代為R667D、R667E、R667R、R667H或R667K，較佳為R667E或R667K，更佳為R667E； 在SEQ ID NO: 1的第703個位置處的一個胺基酸取代，該取代為A703D或A703E，較佳為A703E；以及 在SEQ ID NO: 1的第705個位置處的一個胺基酸取代，該取代為K705N、K705C、K705Q、K705S或K705T，較佳為K705N。
11. 如前述申請專利範圍任一項之海藻糖磷酸化酶，其中該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列包含 (a) 在SEQ ID NO: 1的三個胺基酸位置383、556和590處的一胺基酸取代； (b) 在SEQ ID NO: 1的四個胺基酸位置712、383、114和118處的一胺基酸取代；及/或SEQ ID NO: 1的位置383、487、556和590處；及/或SEQ ID NO: 1的位置383、225、556和590處； (c) 在SEQ ID NO: 1的五個胺基酸位置712、383、114、I188和304處的一胺基酸取代；及/或SEQ ID NO: 1的位置712、383、114、118和357；及/或SEQ ID NO: 1的位置383、225、304、556和590；及/或SEQ ID NO: 1的位置383、225、487、556和590； (d) 在SEQ ID NO: 1的六個胺基酸位置712、383、114、118、304和357處的一胺基酸取代；及/或SEQ ID NO: 1的位置383、225、304、487、556和590。
12. 如前述申請專利範圍任一項之海藻糖磷酸化酶，其中該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列與SEQ ID NO: 1的胺基酸序列之同一性為至少81%，或至少82%，或至少83 %，或至少84%，或至少85%，更佳至少86%，或至少87%，或至少88%，或至少89%，或至少90%，更佳至少91%，或至少92%，或至少93%，或至少94%，或至少95%，最佳至少96%，或至少97%，或至少98%，或至少99%，至少99.1%，或至少99.2%，或至少99.3%，或至少99.4%，或至少99.5%，或至少99.6%，或至少99.7%，或至少99.8% ，且特別是至少99.9%或100%。
13. 如前述申請專利範圍任一項之海藻糖磷酸化酶，其中該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列包含或由下列任一胺基酸序列所組成：SEQ ID NO: 2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、87、88、89、91、93、94、95、97、98、101、103、104、105、107、109、110、111、113、114、115、117、119、121、123、125、128、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、146、147、149、150、151、152、154、155、156、157、158、159，或 190，較佳其中該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列包含或由SEQ ID NO: 14的胺基酸序列所組成。
14. 如前述申請專利範圍任一項之海藻糖磷酸化酶，其中該海藻糖磷酸化酶能夠催化 葡萄糖與α-D-葡萄糖-1磷酸鹽轉化為海藻糖與無機磷酸鹽 及/或 海藻糖與無機磷酸鹽轉化為葡萄糖與α-D-葡萄糖-1磷酸鹽。
15. 如前述申請專利範圍任一項之海藻糖磷酸化酶，其中該海藻糖磷酸化酶具有特徵(A)、(B)、(C)、(D)與(E)中的至少一個或其任何組合， 其中， 特徵(A)為於52°C作用15分鐘後的熱穩定性，其由30%至100%的殘餘活性所定義； 特徵(B)為於52°C作用15分鐘後的熱穩定性，其特徵在於 i) 至少52°C的Tm30值，及/或 ii) 至少52°C的Tm50值； 特徵(C)為以以下為特徵的熱穩定性 i) 於52°C和90°C之間的Tm30值及/或 ii) 於52°C和90°C之間的Tm50值；以及 特徵(D)為以以下為特徵的熱穩定性 i) 於45°C半衰期為3小時至9天或更長的製程穩定性；或 ii) 於45°C半衰期為24小時至9天或更長的製程穩定性，或 iii) 於45°C半衰期為4天至9天或更長的製程穩定性；以及 特徵(E)為相對活性，表示為介於0.65和1.0之間的100/500-比率，其中 該100/500-比率被定義為 [100 mM葡萄糖與100 mM α-葡萄糖-1磷酸鹽的海藻糖活性] / [500 mM葡萄糖與100 mM α-葡萄糖-1-磷酸鹽的海藻糖活性] 的比率。
16. 一種包含一胺基酸序列之海藻糖磷酸化酶，其中該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列與SEQ ID NO: 1的胺基酸序列具有至少80%同一性及/或至少80%同源性，其中該海藻糖磷酸化酶具有特徵(A)、(B)、(C)、(D)與(E)中的至少一個或其任意組合，其中 特徵(A)為於52°C作用15分鐘後的熱穩定性，其由30%至100%的殘餘活性所定義； 特徵(B)為於52°C作用15分鐘後的熱穩定性，其特徵在於 i) 至少52°C的Tm30值，及/或 ii) 至少52°C的Tm50值； 特徵(C)為以以下為特徵的熱穩定性 i) 於52°C和90°C之間的Tm30值及/或 ii) 於52°C和90°C之間的Tm50值；以及 特徵(D)為以以下為特徵的熱穩定性 i) 於45°C半衰期為3小時至9天或更長的製程穩定性，或 ii) 於45°C半衰期為24小時至9天或更長的製程穩定性，或 iii) 於45°C半衰期為4天至9天或更長的製程穩定性；以及 特徵(E)為相對活性，表示為介於0.65和1.0之間的100/500-比率，其中 該100/500-比率被定義為 [100 mM葡萄糖與100 mM α-葡萄糖-1磷酸鹽的海藻糖活性] / [500 mM葡萄糖與100 mM α-葡萄糖-1-磷酸鹽的海藻糖活性] 的比率。
17. 如申請專利範圍第16項之海藻糖磷酸化酶，其中該海藻糖磷酸化酶為一如申請專利範圍第1至15項中任一項所定義之海藻糖磷酸化酶。
18. 一種包含一胺基酸序列之海藻糖磷酸化酶，其中該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列與SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160的胺基酸序列具有至少85%同一性及/或至少86%同源性，其中該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列在一個或多個胺基酸位置處包含胺基酸取代，其中該一個或多個胺基酸位置選自由以下SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160的胺基酸位置所組成之群組：位置108、112、221、300、319、345、379、483、544、550、558、584、643，以及707。
19. 如申請專利範圍第18項之海藻糖磷酸化酶，包含一胺基酸序列，其中該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列與SEQ ID NO: 160的胺基酸序列具有至少85%同一性及/或至少86%同源性，其中該一個或多個胺基酸位置選自由以下 SEQ ID NO: 160的胺基酸位置所組成之群組：L108、V112、N221、A300、T319、F345、P379、V483、V544、S550、Q558、N584、A643，以及L707。
20. 如申請專利範圍第18項之海藻糖磷酸化酶，包含一胺基酸序列，其中該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列與SEQ ID NO: 81的胺基酸序列具有至少85%同一性及/或至少86%同源性，其中該一個或多個胺基酸位置選自由以下 SEQ ID NO: 81的胺基酸位置所組成之群組：L108、V112、N221、A300、T319、F345、P379、I483、V544、S550、Q558、N584、A643，以及 L707。
21. 如申請專利範圍第18至20項任一項之海藻糖磷酸化酶，其中該海藻糖磷酸化酶在二個或更多個胺基酸位置處包含一胺基酸取代，其中該二個胺基酸位置對選自由下列所組成之群組：108與112、108與221、108與300、108與319、108與345、108與379、108與483、108與544、108與550、108與558、108與584、108與643、108與707、112與221、112與300、112與319、112與345、112與379、112與483、112與544、112與550、112與558、112與584、112與643、112與707、221與300、221與319、221與345、221與379、221與483、221與544、221與550、221與558、221與584、221與643、221與707、300與319、300與345、300與379、300與483、300與544、300與550、300與558、300與584、300與643、300與707、319與345、319與379、319與483、319與544、319與550、319與558、319與584、319與643、319與707、345與379、345與483、345與544、345與550、345與558、345與584、345與643、345與707、379與483、379與544、379與550、379與558、379與584、379與643、379與707、483與544、483與550、483與558、483與584、483與643、483與707、544與550、544與558、544與584、544與643、544與707、550與558、550與584、550與643、550與707、558與584、558與643、558與707、584與643、584與707，以及 643與707。
22. 如申請專利範圍第18至21項任一項之海藻糖磷酸化酶，其中該海藻糖磷酸化酶在二個或更多個胺基酸處包含胺基酸取代，其中該二個胺基酸位置對選自由下列所組成之群組： (i) SEQ ID NO:160的L108與T319、L108與P379、L108與V483、L108與S550、L108與Q558、N221與T319、N221與P379、N221與V483、N221與V544、N221與S550、N221與Q558、T319與P379、T319與V483、T319與V544、T319與S550、T319與Q558、P379與V483 、P379與V544、P379與S550、P379與Q558、V483與V544、V483與S550、V483與Q558，以及S550與Q558； (ii) SEQ ID NO:81的L108與T319、L108與P379、L108與I483、L108與S550、L108與Q558、N221與T319、N221與P379、N221與I483、N221與V544、N221與S550、N221與Q558、T319與P379、T319與I483、T319與V544、T319與S550、T319與Q558、P379與I483、P379與V544、P379與S550、P379與Q558、I483與V544、I483與S550、I483與Q558，以及S550與Q558。
23. 如申請專利範圍第18至22項任一項之海藻糖磷酸化酶，其中該一個或多個取代選自由以下組成之群組： 在SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160的位置L108處的一個胺基酸取代，該取代為L108A、L108G、L108I、L108M、L108P或L108V，較佳為L108I； 在SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160的位置V112處的一個胺基酸取代，該取代為V112A、V112G、V112L、V112M、V112P或V112I，較佳為V112I； 在SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160的位置N221處的一個胺基酸取代，該取代為取代為N221A、N221G、N221I、N221L、N221M、N221P或N221V，較佳為N221I、N221L、N221M或N221V，更佳為N221V； 在SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160的位置A300處的一個胺基酸取代，該取代為A300G、A300I、A300L、A300M、A300P或A300V，較佳為A300I或A300L，且更佳為A300I； 在SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160的位置T319處的一個胺基酸取代，該取代為T319A、T319G、T319I、T319L、T319M、T319P或T319V，較佳為T319I或T319V，更佳為T319I； 在SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160的位置P379處的一個胺基酸取代，該取代為P379A、P379G、P379I、P379L、P379M、P379V、P379N、P379C、P379Q、P379S 或P379T，較佳為 P379A、P379G、P379M、P379V、P379N、P379C、P379Q、P379S 或 P379T，更佳為 P379G、P379V、P379C 或 P379S， 或 P379T，甚至更佳為 P379V 或 P379T，且最佳為 P379V； 在SEQ ID NO: 81的位置I483處的一個胺基酸取代，該取代為I483A、I483G、I483I、I483L、I483M、I483P或I483V，較佳為I483A、I483G、I483L、I483M或I483V，更佳為I483A； 在SEQ ID NO: 160的位置Q483處的一個胺基酸取代，該取代為Q483A、Q483G、Q483I、Q483L、Q483M、Q483P或Q483V，較佳為Q483A、Q483G、Q483L、Q483M或Q483V，更佳為Q483A； 在SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160的位置V544處的一個胺基酸取代，該取代為V544A、V544G、V544I、V544L、V544M或V544P，較佳為V544I或V544P，更佳為V544I； 在SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160的位置S550處的一個胺基酸取代，該取代為S550N、S550C、S550Q或S550T，較佳為S550T； 在SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160的位置Q558處的一個胺基酸取代，該取代為Q558D或Q558E​​，較佳為Q558E​​； 在SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160的位置D558處的一個胺基酸取代，該取代為 D558N、D558C、D558Q、D558S、D558T、D558A、D558G、D558I、D558L、D558M、D558P或D558V，較佳為D558N 、D558G或D558A，更佳為D558N； 在SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160的位置A643處的一個胺基酸取代，該取代為A643D或A643E，較佳為A643E； 在SEQ ID NO: 81或SEQ ID NO: 160的位置L707處的一個胺基酸取代，該取代為L707A、L707G、L707I、L707M、L707P或L707V，較佳為L707M。
24. 如申請專利範圍第18至23項任一項之海藻糖磷酸化酶，其中該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列包含根據SEQ ID NO: 161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189的任一胺基酸序列，較佳為根據SEQ ID NO: 163、165、166、168、171、173、176、177、178、179、180、184、185、186、187、188、189的任一胺基酸序列，更佳為根據SEQ ID NO: 176、178、180、185、188的任一胺基酸序列。
25. 一種包含一胺基酸序列之海藻糖磷酸化酶，其中該海藻糖磷酸化酶的胺基酸序列與SEQ ID NO: 160或SEQ ID NO: 81的胺基酸序列具有至少80%同一性及/或至少85%同源性，較佳為SEQ ID NO: 160，其中該海藻糖磷酸化酶具有特徵(A)、(B)、(C)、(D)與(E)中的至少一個或其任何組合，其中 特徵(A)為於52°C作用15分鐘後的熱穩定性，其由30%至100%的殘餘活性所定義； 特徵(B)為於52°C作用15分鐘後的熱穩定性，其特徵在於 i) 至少52°C的Tm30值，及/或 ii) 至少52°C的Tm50值； 特徵(C)為以以下為特徵的熱穩定性 i) 於52°C和90°C之間的Tm30值及/或 ii) 於52°C和90°C之間的Tm50值；以及 特徵(D)為以以下為特徵的熱穩定性 i) 於45°C半衰期為3小時至9天或更長的製程穩定性；或 ii) 於45°C半衰期為24小時至9天或更長的製程穩定性，或 iii) 於45°C半衰期為4天至9天或更長的製程穩定性；以及 特徵(E)為相對活性，表示為介於0.65和1.0之間的100/500-比率，其中 該100/500-比率被定義為 [100 mM葡萄糖與100 mM α-葡萄糖-1磷酸鹽的海藻糖活性] / [500 mM葡萄糖與100 mM α-葡萄糖-1-磷酸鹽的海藻糖活性] 的比率。
26. 如申請專利範圍第25項之海藻糖磷酸化酶，其中該海藻糖磷酸化酶為一如申請專利範圍第18至24項任一項所定義之海藻糖磷酸化酶。
27. 一種海藻糖磷酸化酶變體，其中該變體包含一胺基酸序列，其中該胺基酸序列與SEQ ID NO: 1的胺基酸序列具有至少20%同源性，其中該變體包含二個或更多個、三個或更多個、四個更多、五個或更多、六個或更多個，較佳七個或更多個選自以下所組成之群組的胺基酸位置 712A、712G、712I、712M、712P或712V，較佳為712M，以及 383A、383G、383I、383L、383M、383V、383N、383C、383Q、383S或383T，較佳為383A、383G、383M、383V、383N、383C、383Q、383S或383T，更佳為383G、383V、383C、383S或383T，甚至更佳為383V或383T，最佳為383V，以及 114A、114G、114I、114M、114P或114V，較佳為114I，以及 118為118A、118G、118I、118L、118M、118P或118V，較佳為118V，以及 225A、225G、225I、225L、225M、225P或225V，較佳為225I、225L、225M或225V，更佳為225V，以及 304G、304I、304L、304M、304P或304V，較佳為304I或304L，更佳為304I，以及 323A、323G、323I、323L、323M、323P或323V，較佳為323I或323V，更佳為323I， 349W或349Y，較佳為349Y，以及 357A、357I、357L、357M、357P或357V，較佳為357A，以及 487A、487G、487I、487L、487M、487P或487V，較佳為487A、487M、487G、487L或487V，更佳為487A，以及 550A、550G、550I、550L、550M或550P，較佳為550I或550P，更佳為550I，以及 556N、556C、556Q或S556T，較佳為556T，以及 564D或564E，較佳為564E，以及 590N、590C、590Q、590S、590T、590A、590G、590I、590L、590M、590P或590V，較佳為590N、590G或590A，更佳為590N， 649D或649E，較佳為649E 編號係指SEQ ID NO: 1中的比對位置。
28. 如申請專利範圍第27項之海藻糖磷酸化酶變體，其中該變體包含一胺基酸序列，其中該胺基酸序列與SEQ ID NO: 1的胺基酸序列具有至少77%同源性，其中該多胜肽在二個或更多的選自由胺基酸位置383、114、225、304、323、349、357、550、556、564以及649所組成之群組的胺基酸位置上包含一胺基酸取代，其中該胺基酸編號係指SEQ ID NO: 1中的比對位置。
29. 如申請專利範圍第28項之海藻糖磷酸化酶變體，其中該變體包含一胺基酸序列，其中該胺基酸序列與SEQ ID NO: 1的胺基酸序列具有至少77%同源性，其中該多胜肽在二個或更多的選自由胺基酸位置383V、383T、114I、225I、225L、225M、225V、304I、304L、323I、323V、349Y、357A、550I、550P、556T、564E以及649E所組成之群組的胺基酸位置上包含一胺基酸取代，其中該胺基酸編號係指SEQ ID NO: 1中的比對位置。
30. 如申請專利範圍第28至29項任一項之海藻糖磷酸化酶變體，其中該變體在選自胺基酸位置712、118、487以及590，較佳選自胺基酸位置712M、118V、487A、487G、487L、487M、487V以及590N，的胺基酸位置處包含至少一個另外的胺基酸取代， 其中該胺基酸編號係指SEQ ID NO: 1中的比對位置。
31. 如申請專利範圍第27項之海藻糖磷酸化酶變體，其中該變體包含一胺基酸序列，其中該胺基酸序列與SEQ ID NO: 1的胺基酸序列具有至少68%同源性，其中該多胜肽在二個或更多的選自由胺基酸位置383、114、225、304、323、349、357、550、556，以及564所組成之群組的胺基酸位置上包含一胺基酸取代，其中該胺基酸編號係指SEQ ID NO: 1中的比對位置。
32. 如申請專利範圍第31項之海藻糖磷酸化酶變體，其中該變體包含一胺基酸序列，其中該胺基酸序列與SEQ ID NO: 1的胺基酸序列具有至少68%同源性，其中該多胜肽在二個或更多的選自由胺基酸位置383V、383T、114I、225I、225L、225M、225V、304I、304L、323I、323V、349Y、357A、550I、550P、556T，以及 564E所組成之群組的胺基酸位置上包含一胺基酸取代，其中該胺基酸編號係指SEQ ID NO: 1中的比對位置。
33. 如申請專利範圍第31至32項任一項之海藻糖磷酸化酶變體，其中該變體在選自胺基酸位置712、118、487、590，以及649，較佳選自胺基酸位置712M、118V、487A、487G、487L、487M、487V、590N，以及649E，的胺基酸位置處包含至少一個另外的胺基酸取代， 其中該胺基酸編號係指SEQ ID NO: 1中的比對位置。
34. 如申請專利範圍第27項之海藻糖磷酸化酶變體，其中該變體包含一胺基酸序列，其中該胺基酸序列與SEQ ID NO: 1的胺基酸序列具有至少63%同源性，其中該多胜肽在二個或更多的選自由胺基酸位置383、114、225、304、323、349、357、556，以及564所組成之群組的胺基酸位置上包含一胺基酸取代，其中該胺基酸編號係指SEQ ID NO: 1中的比對位置。
35. 如申請專利範圍第34項之海藻糖磷酸化酶變體，其中該變體包含一胺基酸序列，其中該胺基酸序列與SEQ ID NO: 1的胺基酸序列具有至少63%同源性，其中該多胜肽在二個或更多的選自由胺基酸位置383V、383T、114I、225I、225L、225M、225V、304I、304L、323I、323V、349Y、357A、556T，以及564E所組成之群組的胺基酸位置上包含一胺基酸取代，其中該胺基酸編號係指SEQ ID NO: 1中的比對位置。
36. 如申請專利範圍第34至35項任一項之海藻糖磷酸化酶變體，其中該變體在選自胺基酸位置712、118、487、550、590，以及649，較佳選自胺基酸位置712M、118V、487A、487G、487L、487M、487V、550I、550P、590N，以及649E，的胺基酸位置處包含至少一個另外的胺基酸取代， 其中該胺基酸編號係指SEQ ID NO: 1中的比對位置。
37. 一種熱穩定的海藻糖磷酸化酶變體，其中該變體在含有1M蔗糖的一緩衝液中於52°C作用15分鐘後保留其初始活性的至少30%，且該初始活性係在室溫下作用15分鐘後測定，及/或其中在含有1M蔗糖的一緩衝液中於52°C作用15分鐘後，該變體保留其初始活性的至少50%，且該初始活性係在室溫作用15分鐘後測定。
38. 如申請專利範圍第37項之熱穩定海藻糖磷酸化酶變體，其中該海藻糖磷酸化酶為一如申請專利範圍第1至36項中任一項所定義之海藻糖磷酸化酶。
39. 一種來自裂褶菌(Schizophyllum commune )或舞菇(Grifola frondosa )的海藻糖磷酸化酶之熱穩定變體，其中該變體在含有1M蔗糖的一緩衝液中於52°C作用15分鐘後具有至少30%的殘餘活性，較佳其中該變體在含有1M蔗糖的一緩衝液中於52°C作用15分鐘後，其具有初始活性的至少50%的殘餘活性，且該初始活性係在室溫作用15分鐘後測定。
40. 如申請專利範圍第39項之來自裂褶菌(Schizophyllum commune )的海藻糖磷酸化酶之熱穩定變體，其中該海藻糖磷酸化酶為一如申請專利範圍第1至17項及第37至38項中任一項所定義之海藻糖磷酸化酶。
41. 該來自舞菇(Grifola frondosa )的海藻糖磷酸化酶之熱穩定變體，其中該海藻糖磷酸化酶為一如申請專利範圍第18至26項及第37至38項中任一項所定義之海藻糖磷酸化酶。
42. 一種海藻糖磷酸化酶之熱穩定變體，包含一選自由SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 160或SEQ ID NO: 81所組成之群組的胺基酸序列，其中該變體在含有1M蔗糖的一緩衝液中於52°C作用15分鐘後具有至少30%的殘餘活性，較佳其中該變體具有在含有1M蔗糖的一緩衝液中於52°C作用15分鐘後，其初始活性的至少50%的殘餘活性，且該初始活性係在室溫作用15分鐘後測定。
43. 如申請專利範圍第42項之海藻糖磷酸化酶之熱穩定變體，其中該海藻糖磷酸化酶為一如申請專利範圍第1至41項中任一項所定義之海藻糖磷酸化酶，較佳為申請專利範圍第1至26項中任一項所定義。
44. 一種使葡糖基單醣與α-D-葡萄糖-1-磷酸鹽反應之方法， 其中該方法包括使葡糖基單醣與α-D-葡萄糖-1磷酸鹽與一如申請專利範圍第1至43項中任一項所定義之海藻糖磷酸化酶反應。
45. 一種製備海藻糖之方法，包括在一海藻糖磷酸化酶存在下，在至少40°C的溫度下使葡萄糖與α-D-葡萄糖-1磷酸鹽反應，其中該海藻糖磷酸化酶 (i) 在含有1M蔗糖的一緩衝液中於52°C下作用15分鐘，與沒有熱處理的活性相比，保留至少30%的活性；及/或 (ii) 在含有1M蔗糖的一緩衝液中於52°C下作用15分鐘，與沒有熱處理的活性相比，保留至少50%的活性；及/或 (iii) 在100 mM葡萄糖下的活性與在500 mM葡萄糖下的活性之比率至少為0.65。
46. 如申請專利範圍第44項之方法，其中該海藻糖磷酸化酶為如申請專利範圍第1至43項中任一項之海藻糖磷酸化酶變體。
47. 一種提高海藻糖磷酸化酶的熱穩定性之方法，其中該方法包括： - 比對一第一海藻糖磷酸化酶的一胺基酸序列與一第二海藻糖磷酸化酶的一胺基酸序列， - 鑑定對應於該第一海藻糖磷酸化酶的該胺基酸序列的一個或多個胺基酸位置的該第二海藻糖磷酸化酶的該胺基酸序列的一個或多個胺基酸位置，其中在該第一海藻糖磷酸化酶的該胺基酸序列的一個或多個胺基酸位置的一胺基酸殘基取代提高了該第一海藻糖磷酸化酶的熱穩定性， - 取代對應於該第一海藻糖磷酸化酶的該胺基酸序列的一個或多個胺基酸位置的在該第二海藻糖磷酸化酶的一個或多個胺基酸位置處的一胺基酸殘基，其中在該第一海藻糖磷酸化酶的該胺基酸序列的一個或多個胺基酸位置的一胺基酸殘基的取代提高了該第一海藻糖磷酸化酶的熱穩定性， 其中該第一海藻糖磷酸化酶為包含根據SEQ ID NO: 1的胺基酸序列之海藻糖磷酸化酶。
48. 該提高海藻糖磷酸化酶的熱穩定性之方法，其中在該第二海藻糖磷酸化酶中一胺基酸殘基的取代在對應於SEQ ID NO: 1的712、383、10、114、118、192、197、220、225、304、306、318、323、339、349、357、459、476、481、484、487、488、506、511、526、530、532、533、537、550、556、564、590、649、667、703，以及705，較佳對應於SEQ ID NO: 1的712、383、114、118、225、304、323、349、357、487、550、556、564、590，以及649，的一個或多個胺基酸位置處進行。
49. 一種提高一海藻糖磷酸化酶的表示為100/500-比率的相對活性之方法，其中該方法包括： - 比對一第一海藻糖磷酸化酶的一胺基酸序列與一第二海藻糖磷酸化酶的一胺基酸序列， - 鑑定對應於該第一海藻糖磷酸化酶的該胺基酸序列的一個或多個胺基酸位置的該第二海藻糖磷酸化酶的該胺基酸序列的一個或多個胺基酸位置，其中在該第一海藻糖磷酸化酶的該胺基酸序列的一個或多個胺基酸位置的一胺基酸殘基的取代提高了該第一海藻糖磷酸化酶的表示為100/500-比率的相對活性， - 取代對應於該第一海藻糖磷酸化酶的該胺基酸序列的一個或多個胺基酸位置的在該第二海藻糖磷酸化酶的一個或多個胺基酸位置處的胺基酸殘基，其中在該第一海藻糖磷酸化酶的該胺基酸序列的一個或多個胺基酸位置的一胺基酸殘基的取代提高了該第一海藻糖磷酸化酶的表示為100/500-比率的相對活性； 其中該第一海藻糖磷酸化酶為包含根據SEQ ID NO: 1的胺基酸序列之海藻糖磷酸化酶。
50. 該提高一海藻糖磷酸化酶的表示為100/500-比率的相對活性之方法，其中在該第二海藻糖磷酸化酶中的胺基酸殘基的取代在對應於SEQ ID NO: 1的712、383、10、114、118、192、197、220、225、304、306、318、323、339、349、357、459、476、481、484、487、488、506、511、526、530、532、533、537、550、556、564、590、649、667、703，以及705，較佳對應於SEQ ID NO: 1的712、383、114、118、225、304、323、349、357、487、550、556、564、590，以及649，的一個或多個胺基酸位置處進行。
51. 如申請專利範圍第1至43項任一項之一海藻糖磷酸化酶用於生產海藻糖，較佳用於生產如申請專利範圍第44至46項任一項之海藻糖之用途。