JP7325335B2 - グルコースイソメラーゼ - Google Patents

グルコースイソメラーゼ Download PDF

Info

Publication number
JP7325335B2
JP7325335B2 JP2019560169A JP2019560169A JP7325335B2 JP 7325335 B2 JP7325335 B2 JP 7325335B2 JP 2019560169 A JP2019560169 A JP 2019560169A JP 2019560169 A JP2019560169 A JP 2019560169A JP 7325335 B2 JP7325335 B2 JP 7325335B2
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
amino acid
polypeptide
seq
acid positions
fold
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
JP2019560169A
Other languages
English (en)
Other versions
JP2020518254A (ja
Inventor
ビルギット ブルヒャー
アンドレアス フォーゲル
ハンナ マリア ドゥデク
リコ クザジャ
Original Assignee
シーレクター ゲーエムベーハー
ニュー マッターホルン リミテッド ライアビリティ カンパニー
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by シーレクター ゲーエムベーハー, ニュー マッターホルン リミテッド ライアビリティ カンパニー filed Critical シーレクター ゲーエムベーハー
Publication of JP2020518254A publication Critical patent/JP2020518254A/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP7325335B2 publication Critical patent/JP7325335B2/ja
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/90—Isomerases (5.)
    • C12N9/92—Glucose isomerase (5.3.1.5; 5.3.1.9; 5.3.1.18)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/02—Monosaccharides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/24—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of an isomerase, e.g. fructose
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y503/00—Intramolecular oxidoreductases (5.3)
    • C12Y503/01—Intramolecular oxidoreductases (5.3) interconverting aldoses and ketoses (5.3.1)
    • C12Y503/01005—Xylose isomerase (5.3.1.5)

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

発明の分野
本発明は、イソメラーゼ、好ましくはグルコースイソメラーゼ、ケトース分子またはアルドース分子を反応させるための方法、フルクトースをグルコースに変換するための方法、グルコースを生成するためのイソメラーゼの使用、グルコースイソメラーゼの活性を増加させるための方法、フルクトースに関するグルコースイソメラーゼのKM値を減少させるための方法、およびグルコースイソメラーゼの可溶性発現を増加させるための方法に関する。
発明の背景
イソメラーゼは、分子を1つの異性体から別の異性体に変換する酵素である。グルコースイソメラーゼは、アルドースからケトースへの、またはその逆の異性化を特異的に触媒する。この種類のグルコースイソメラーゼ酵素はD-キシロースアルドース-ケトース-イソメラーゼ、D-キシロースイソメラーゼ、D-キシロースケトイソメラーゼ、またはフルクトースイソメラーゼとも呼ばれる。
グルコースをフルクトースに変換しかつD-キシロースをD-キシルロースに変換するグルコースイソメラーゼは、国際生化学分子生物学連合により定義されるEC 5.3.1.5のECサブクラスに属する。
グルコースイソメラーゼにより触媒される標準的な天然の反応は、高い親和性および高い特異的活性での基質キシロースからキシルロースへの異性化である。副活性として、通常は相当に低い親和性および低い特異的活性でのグルコースからフルクトースへの変換、リボースからリブロースへの変換、アラビノースからリブロースへの変換、またはラムノースからこれまで特徴づけられていない生成物への変換が記載されている。
グルコースイソメラーゼにより触媒される反応は、可逆的平衡反応であり、反応の特定の方向に応じて基質または生成物の阻害を経ることがある。工業的に適切な量の所望の生成物を得るには、高い特異的活性で基質の変換を触媒するグルコースイソメラーゼが必要である。さらに、基質選択性およびKMなどのグルコースイソメラーゼの他の動態因子も生成物収率に関して重要な役割を果たしうる。他の関連性のある局面としては位置選択性、例えば粗抽出液成分、基質混入物、または副生成物などの他の要因による阻害、および好適な宿主中での可溶性組換え発現を挙げることができるがそれに限定されない。
工業プロセスにおいて使用される場合の野生型グルコースイソメラーゼの主要な欠点は、不完全な基質変換および不十分な生成物収率を生じさせる特異的反応平衡状態である。グルコースイソメラーゼは様々な微生物から同定された(例えばBhosale, Microbiol Reviews, 1996, 60, 280-300(非特許文献1)のレビュー論文を参照)。例えば、米国特許第6,372,476号ではストレプトマイセス属SK株のグルコースイソメラーゼ活性が記載されている。
野生型グルコースイソメラーゼは通常、例えばグルコースまたはフルクトースなどのキシロース以外の基質に関する高いKM値を示し、当該基質の変換に関する特異的に高い活性を示さず、高い最適温度を示すが、特定の工業プロセスは低温度プロファイルおよびグルコース基質またはフルクトース基質の効率的変換を必要とする。例えばSmith et al., Biochem J, 1991, 277, 255-261(非特許文献2)を参照。
したがって、技術的プロセスの要件、例えば中程度の温度および低い基質濃度、すなわちグルコース濃度またはフルクトース濃度での高い特異的活性にその反応特性が適合するグルコースイソメラーゼが求められている。さらに、発現培養物からのグルコースイソメラーゼの活性収率の向上が工業用途に有利である。特に、これらの特性のうち1つまたは複数の改善により酵素コストが低下する。
改変グルコースイソメラーゼは米国特許第5,376,536号(特許文献1)、米国特許第7,704,719号(特許文献2)、米国特許第5,340,738号(特許文献3)、米国特許第5,384,257号(特許文献4)、米国特許第5,310,665号(特許文献5)、および米国特許出願公開第2011/0318801号(特許文献6)に開示されている。Ben Hlima (J Ind Microbiol Biotechnol, 2012, 39, 537-546)(非特許文献3)では、変異F53Lおよび/またはG219Dを有するストレプトマイセス属SK株グルコースイソメラーゼの変異体が開示されている。この刊行物の野生型グルコースイソメラーゼはグルコースに関するKM値200mMを示し、この値は工業用途では高すぎる。F53L、G219D、または両変異F53L/G219Dを含む変異体はグルコースに関するいっそう高いKM値を示した。33位、34位、35位、59位、89位、90位、および/または95位における変異を有する変異体は記載されていない。変異F53Lおよび/またはD219Aを含む変異体を除けば、当技術分野において記載されているすべての変異体は、基質としてのグルコースに対するより低い特異的活性、およびより低い熱安定性を示す。これらの参考文献のいずれにも、グルコースへの変換を触媒する際にフルクトースに関するKM値に影響する変異は言及されておらず、特に、どの参考文献にも、これらの酵素のKM値低下に寄与する変異は示されていない。
上記に照らせば、先行技術の野生型グルコースイソメラーゼおよび改変グルコースイソメラーゼがいずれも、工業プロセスでの使用におけるニーズを満たしていないことは明らかである。この不十分さは、触媒反応が可逆的であること、ならびに先行技術のグルコースイソメラーゼが、低い基質濃度、および30～50℃などの中程度の温度などの典型的な反応条件で、低い酵素活性を示すことにより、生じる。フルクトースからのグルコースの工業生産に関して、野生型グルコースイソメラーゼに比べて有利なグルコースイソメラーゼ、特に、低フルクトース濃度で酵素的に活性でありかつ30～50℃などの比較的中程度の温度で高い活性を示すグルコースイソメラーゼが求められている。
したがって、本発明の目的は、フルクトースからのグルコースの工業生産における使用に好適なグルコースイソメラーゼである。
別の目的は、フルクトース濃度50mMで、野生型グルコースイソメラーゼに比べて少なくとも1.1倍、好ましくは少なくとも1.4倍、より好ましくは少なくとも1.6倍、最も好ましくは少なくとも1.7倍高い、フルクトースをグルコースに変換するための特異的活性、好ましくは特異的活性値を示す、グルコースイソメラーゼである。
さらに別の目的は、フルクトース濃度200mMで、野生型グルコースイソメラーゼに比べて少なくとも1.2倍、好ましくは少なくとも1.3倍、より好ましくは少なくとも1.4倍、最も好ましくは少なくとも1.5倍高い、フルクトースをグルコースに変換するための特異的活性、好ましくは特異的活性値を示す、グルコースイソメラーゼである。
さらに別の目的は、基礎野生型グルコースイソメラーゼに比べて改善された、フルクトースをグルコースに変換するための活性、好ましくは活性値を示し、基礎野生型グルコースイソメラーゼに比べて熱安定性の減少を示さないかまたはわずかな減少を示し、かつ少なくとも30%、好ましくは少なくとも40%、最も好ましくは少なくとも60%の残留活性値を示す、熱安定性のある突然変異グルコースイソメラーゼである。
さらに別の目的は、KM値190mM以下、好ましくはKM値170mM以下、より好ましくはKM値160mM以下、最も好ましくはKM値152mM以下を示すグルコースイソメラーゼである。
これらの問題および他の問題は、下記のおよび特許請求の範囲に記載の本発明により解決される。
米国特許第5,376,536号 米国特許第7,704,719号 米国特許第5,340,738号 米国特許第5,384,257号 米国特許第5,310,665号 米国特許出願公開第2011/0318801号
Bhosale, Microbiol Reviews, 1996, 60, 280-300 Smith et al., Biochem J, 1991, 277, 255-261 Ben Hlima (J Ind Microbiol Biotechnol, 2012, 39, 537-546)
第1の局面の第1の態様でもある、第1の局面において、本発明の基礎にある問題は、アミノ酸配列を含むポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼであって、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸配列と少なくとも95%同一および/または少なくとも95%相同であり、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列が、1つまたは複数のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、1つまたは複数のアミノ酸位置が、それぞれ独立してSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、34、35、53、59、89、90、および95からなる群より選択される、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼにより解決される。
好ましい一態様では、本発明の基礎にある問題は、アミノ酸配列を含む、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼであって、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸配列と少なくとも95%同一であり、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列が、1つまたは複数のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、1つまたは複数のアミノ酸位置が、それぞれ独立してSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置89、90、95、10、33、34、35、および59からなる群より選択される、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼにより解決される。
第1の局面のいずれか1つの他の態様の一態様でもある、第1の局面の好ましい一態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置53におけるさらなるアミノ酸置換を含む。
第1の局面の第1の態様の一態様でもある、第1の局面の第2の態様では、1つまたは複数のアミノ酸位置は、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、A33、L34、D35、F53、I59、A89、T90、およびT95からなる群より選択される。
第1の局面の第1および第2の態様の一態様でもある、第1の局面の第3の態様では、1つまたは複数のアミノ酸位置は、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、34、35、59、89、90、および95からなる群より選択される。
第1の局面の第1、第2、および第3の態様、好ましくは第1の局面の第3の態様の一態様でもある、第1の局面の第4の態様では、1つまたは複数のアミノ酸位置は、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、A33、L34、D35、I59、A89、T90、およびT95からなる群より選択される。
第1の局面の第1、第2、第3、および第4の態様の一態様でもある、第1の局面の第5の態様では、1つまたは複数のアミノ酸位置は、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、34、35、および59からなる群より選択される。
第1の局面の第1、第2、第3、第4、および第5の態様、好ましくは第1の局面の第5の態様の一態様でもある、第1の局面の第6の態様では、1つまたは複数のアミノ酸位置は、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、A33、L34、D35、およびI59からなる群より選択される。
第1の局面の第1、第2、第3、第4、第5、および第6の態様の一態様でもある、第1の局面の第7の態様では、1つまたは複数のアミノ酸位置は、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、および35からなる群より選択される。
第1の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、および第7の態様の一態様でもある、第1の局面の第8の態様では、1つまたは複数のアミノ酸位置は、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、A33、およびD35からなる群より選択される。
第1の局面の第1、第2、第3、および第4の態様の一態様でもある、第1の局面の第9の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、1つまたは複数のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、1つまたは複数のアミノ酸位置は、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、90、および95からなる群より選択され; 好ましくは、1つまたは複数のアミノ酸位置は、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、T90、およびT95からなる群より選択され; より好ましくは、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼはアミノ酸配列を含み、アミノ酸配列は、R10K、T90S、およびT95Yからなる群より選択される1つまたは複数のアミノ酸置換を含む。
第1の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、および第9の態様の一態様でもある、第1の局面の第10の態様では、1つのアミノ酸位置はSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10であり、好ましくは、1つのアミノ酸位置はSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10である。
第1の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、および第10の態様の一態様でもある、第1の局面の第11の態様では、1つまたは複数のアミノ酸位置は2つ以上のアミノ酸位置である。
第1の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、および第11の態様、好ましくは第1の局面の第11の態様の一態様でもある、第1の局面の第12の態様では、1つまたは複数のアミノ酸位置は3つ以上のアミノ酸位置である。
第1の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、および第12の態様、好ましくは第1の局面の第12の態様の一態様でもある、第1の局面の第13の態様では、1つまたは複数のアミノ酸位置は4つ以上のアミノ酸位置である。
第1の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、および第13の態様、好ましくは第1の局面の第13の態様の一態様でもある、第1の局面の第14の態様では、1つまたは複数のアミノ酸位置は5つ以上のアミノ酸位置である。
第1の局面のいずれか1つの他の態様の一態様でもある、別の好ましい態様では、1つまたは複数のアミノ酸位置は4つ以上または5つ以上のアミノ酸位置である。
第1の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、第13、および第14の態様、好ましくは第1の局面の第11、第12、第13、および第14の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第15の態様では、それぞれの任意のアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、34、35、53、59、89、90、および95からなる群より選択される。
第1の局面の第15の態様の一態様でもある、第1の局面の第16の態様では、それぞれの任意のアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、A33、L34、D35、F53、I59、A89、T90、およびT95からなる群より選択される。
第1の局面の第15の態様の一態様でもある、第1の局面の第17の態様では、それぞれの任意のアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、34、35、59、89、90、および95からなる群より選択される。
第1の局面の第17の態様の一態様でもある、第1の局面の第18の態様では、それぞれの任意のアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、A33、L34、D35、I59、A89、T90、およびT95からなる群より選択される。
第1の局面の第17の態様の一態様でもある、第1の局面の第19の態様では、それぞれの任意のアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、34、35、および59からなる群より選択される。
第1の局面の第19の態様の一態様でもある、第1の局面の第20の態様では、それぞれの任意のアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、A33、L34、D35、およびI59からなる群より選択される。
第1の局面の第19の態様の一態様でもある、第1の局面の第21の態様では、それぞれの任意のアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、および35からなる群より選択される。
第1の局面の第21の態様の一態様でもある、第1の局面の第22の態様では、それぞれの任意のアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、A33、およびD35からなる群より選択される。
第1の局面の第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、および第22の態様の一態様でもある、第1の局面の第23の態様では、2つ以上のアミノ酸位置は、2つのアミノ酸位置の対を含み、2つのアミノ酸位置の対は、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10およびA33、R10およびL34、R10およびD35、R10およびF53、R10およびI59、R10およびA89、R10およびT90、R10およびT95、A33およびL34、A33およびD35、A33およびF53、A33およびI59、A33およびA89、A33およびT90、A33およびT95、L34およびD35、L34およびF53、L34およびI59、L34およびA89、L34およびT90、L34およびT95、D35およびF53、D35およびI59、D35およびA89、D35およびT90、D35およびT95、F53およびI59、F53およびA89、F53およびT90、F53およびT95、I59およびA89、I59およびT90、I59およびT95、A89およびT90、A89およびT95、ならびにT90およびT95からなる群より選択される。
第1の局面の第23の態様の一態様でもある、第1の局面の第24の態様では、2つ以上のアミノ酸位置は、2つのアミノ酸位置の対を含み、2つのアミノ酸位置の対は、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10およびA33、R10およびL34、R10およびD35、R10およびI59、R10およびA89、R10およびT90、R10およびT95、A33およびL34、A33およびD35、A33およびI59、A33およびA89、A33およびT90、A33およびT95、L34およびD35、L34およびI59、L34およびA89、L34およびT90、L34およびT95、D35およびI59、D35およびA89、D35およびT90、D35およびT95、I59およびA89、I59およびT90、I59およびT95、A89およびT90、A89およびT95、ならびにT90およびT95からなる群より選択される。
第1の局面の第24の態様の一態様でもある、第1の局面の第25の態様では、2つ以上のアミノ酸位置は、2つのアミノ酸位置の対を含み、2つのアミノ酸位置の対は、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10およびA33、R10およびL34、R10およびD35、R10およびI59、A33およびL34、A33およびD35、A33およびI59、L34およびD35、L34およびI59、ならびにD35およびI59からなる群より選択される。
第1の局面の第25の態様の一態様でもある、第1の局面の第26の態様では、2つ以上のアミノ酸位置は、2つのアミノ酸位置の対を含み、2つのアミノ酸位置の対は、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10およびA33、R10およびD35、R10およびI59、A33およびD35、A33およびI59、ならびにD35およびI59からなる群より選択される。
第1の局面の第26の態様の一態様でもある、第1の局面の第27の態様では、2つ以上のアミノ酸位置は、2つのアミノ酸位置の対を含み、2つのアミノ酸位置の対は、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10およびA33、R10およびD35、ならびにA33およびD35からなる群より選択される。
本発明においては、特定の群より選択されるSEQ ID NO: 1の2つのアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含む、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列が、2つのアミノ酸置換の対を含むものであり、当該の対に加えて、他のアミノ酸位置における1つまたは複数のさらなる置換を含むことがあることが理解されよう。同様に、特定の群より選択されるSEQ ID NO: 1のそれぞれ3つ、4つ、または5つのアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含む、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列が、それぞれ三重、四重、または五重の置換を含むものであり、他のアミノ酸位置における1つまたは複数のさらなる置換をさらに含むことがあることが理解されるものとする。
あるいは、本明細書において、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列の当該変異体は、特定の群より選択される2つのアミノ酸位置の対を含む、2つ以上のアミノ酸位置における、アミノ酸置換を含む、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列と呼ばれることがある。同様に、特定の群より選択されるSEQ ID NO: 1のそれぞれ3つ以上、4つ以上、または5つ以上のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含む、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列が、それぞれ三重、四重、または五重のアミノ酸置換を含むものであり、他のアミノ酸位置における1つまたは複数のさらなる置換をさらに含むことがあることが理解されるものとする。
第1の局面の第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26、および第27の態様、好ましくは第1の局面の第23、第24、第25、第26、および第27の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第28の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、2つのアミノ酸位置における置換に加えて、少なくとも1つまたは複数のさらなるアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、1つまたは複数のさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、34、35、53、59、89、90、および95からなる群より選択される。
第1の局面の第28の態様の一態様でもある、第1の局面の第29の態様では、1つまたは複数のさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、A33、L34、D35、F53、I59、A89、T90、およびT95からなる群より選択される。
第1の局面の第28の態様の一態様でもある、第1の局面の第30の態様では、1つまたは複数のさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、34、35、59、89、90、および95からなる群より選択される。
第1の局面の第30の態様の一態様でもある、第1の局面の第31の態様では、1つまたは複数のさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、A33、L34、D35、I59、A89、T90、およびT95からなる群より選択される。
第1の局面の第28の態様の一態様でもある、第1の局面の第32の態様では、1つまたは複数のさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、34、35、および59からなる群より選択される。
第1の局面の第32の態様の一態様でもある、第1の局面の第33の態様では、1つまたは複数のさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、A33、L34、D35、およびI59からなる群より選択される。
第1の局面の第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、および第33の態様、好ましくは第1の局面の第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、および第33の態様のうちいずれか1つ、より好ましくは第1の局面の第28、第29、第30、第31、第32、および第33の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第34の態様では、2つ以上のアミノ酸位置は3つのアミノ酸位置を含み、3つのアミノ酸位置はSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10およびA33およびL34、R10およびA33およびD35、R10およびA33およびF53、R10およびA33およびI59、R10およびA33およびA89、R10およびA33およびT90、R10およびA33およびT95、R10およびL34およびD35、R10およびL34およびF53、R10およびL34およびI59、R10およびL34およびA89、R10およびL34およびT90、R10およびL34およびT95、R10およびD35およびF53、R10およびD35およびI59、R10およびD35およびA89、R10およびD35およびT90、R10およびD35およびT95、R10およびF53およびI59、R10およびF53およびA89、R10およびF53およびT90、R10およびF53およびT95、R10およびI59およびA89、R10およびI59およびT90、R10およびI59およびT95、R10およびA89およびT90、R10およびA89およびT95、R10およびT90およびT95、A33およびL34およびD35、A33およびL34およびF53、A33およびL34およびI59、A33およびL34およびA89、A33およびL34およびT90、A33およびL34およびT95、A33およびD35およびF53、A33およびD35およびI59、A33およびD35およびA89、A33およびD35およびT90、A33およびD35およびT95、A33およびF53およびI59、A33およびF53およびA89、A33およびF53およびT90、A33およびF53およびT95、A33およびI59およびA89、A33およびI59およびT90、A33およびI59およびT95、A33およびA89およびT90、A33およびA89およびT95、A33およびT90およびT95、L34およびD35およびF53、L34およびD35およびI59、L34およびD35およびA89、L34およびD35およびT90、L34およびD35およびT95、L34およびF53およびI59、L34およびF53およびA89、L34およびF53およびT90、L34およびF53およびT95、L34およびI59およびA89、L34およびI59およびT90、L34およびI59およびT95、L34およびA89およびT90、L34およびA89およびT95、L34およびT90およびT95、D35およびF53およびI59、D35およびF53およびA89、D35およびF53およびT90、D35およびF53およびT95、D35およびI59およびA89、D35およびI59およびT90、D35およびI59およびT95、D35およびA89およびT90、D35およびA89およびT95、D35およびT90およびT95、F53およびI59およびA89、F53およびI59およびT90、F53およびI59およびT95、F53およびA89およびT90、F53およびA89およびT95、F53およびT90およびT95、I59およびA89およびT90、I59およびA89およびT95、I59およびT90およびT95、ならびにA89およびT90およびT95からなる群より選択される。
第1の局面の第34の態様の一態様でもある、第1の局面の第35の態様では、2つ以上のアミノ酸位置は3つのアミノ酸位置を含み、3つのアミノ酸位置はSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10およびA33およびL34、R10およびA33およびD35、R10およびA33およびI59、R10およびA33およびA89、R10およびA33およびT90、R10およびA33およびT95、R10およびL34およびD35、R10およびL34およびI59、R10およびL34およびA89、R10およびL34およびT90、R10およびL34およびT95、R10およびD35およびI59、R10およびD35およびA89、R10およびD35およびT90、R10およびD35およびT95、R10およびA89およびT90、R10およびA89およびT95、R10およびT90およびT95、A33およびL34およびD35、A33およびL34およびI59、A33およびL34およびA89、A33およびL34およびT90、A33およびL34およびT95、A33およびD35およびI59、A33およびD35およびA89、A33およびD35およびT90、A33およびD35およびT95、A33およびI59およびA89、A33およびI59およびT90、A33およびI59およびT95、A33およびA89およびT90、A33およびA89およびT95、A33およびT90およびT95、L34およびD35およびI59、L34およびD35およびA89、L34およびD35およびT90、L34およびD35およびT95、L34およびI59およびA89、L34およびI59およびT90、L34およびI59およびT95、L34およびA89およびT90、L34およびA89およびT95、L34およびT90およびT95、D35およびI59およびA89、D35およびI59およびT90、D35およびI59およびT95、D35およびA89およびT90、D35およびA89およびT95、D35およびT90およびT95、I59およびA89およびT90、I59およびA89およびT95、I59およびT90およびT95、ならびにA89およびT90およびT95からなる群より選択される。
第1の局面の第35の態様の一態様でもある、第1の局面の第36の態様では、2つ以上のアミノ酸位置は3つのアミノ酸位置を含み、3つのアミノ酸位置はSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10およびA33およびL34、R10およびA33およびD35、R10およびA33およびI59、R10およびL34およびD35、R10およびL34およびI59、R10およびD35およびI59、A33およびL34およびD35、A33およびL34およびI59、A33およびD35およびI59、ならびにL34およびD35およびI59からなる群より選択される。
第1の局面の第36の態様の一態様でもある、第1の局面の第37の態様では、2つ以上のアミノ酸位置は3つのアミノ酸位置を含み、3つのアミノ酸位置はSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10およびA33およびD35、R10およびA33およびI59、ならびにR10およびD35およびI59からなる群より選択される。
第1の局面の第37の態様の一態様でもある、第1の局面の第38の態様では、2つ以上のアミノ酸位置は3つのアミノ酸位置を含み、3つのアミノ酸位置はSEQ ID NO: 1のR10およびA33およびD35、またはSEQ ID NO: 1のR10およびA33およびI59である。
第1の局面の第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、および第38の態様、好ましくは第1の局面の第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、および第38の態様のうちいずれか1つ、より好ましくは第1の局面の第34、第35、第36、第37、および第38の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第39の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、3つのアミノ酸位置における置換に加えて、少なくとも1つまたは複数のさらなるアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、1つまたは複数のさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、34、35、53、59、89、90、および95からなる群より選択される。
第1の局面の第39の態様の一態様でもある、第1の局面の第40の態様では、1つまたは複数のさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、A33、L34、D35、F53、I59、A89、T90、およびT95からなる群より選択される。
第1の局面の第39の態様の一態様でもある、第1の局面の第41の態様では、1つまたは複数のさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、34、35、59、89、90、および95からなる群より選択される。
第1の局面の第41の態様の一態様でもある、第1の局面の第42の態様では、1つまたは複数のさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、A33、L34、D35、I59、A89、T90、およびT95からなる群より選択される。
第1の局面の第39の態様の一態様でもある、第1の局面の第43の態様では、1つまたは複数のさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、34、35、および59からなる群より選択される。
第1の局面の第43の態様の一態様でもある、第1の局面の第44の態様では、1つまたは複数のさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、A33、L34、D35、およびI59からなる群より選択される。
第1の局面の第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、および第44の態様、好ましくは第1の局面の第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、および第44の態様のうちいずれか1つ、好ましくは第1の局面の第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、および第44の態様のうちいずれか1つ、より好ましくは第1の局面の第39、第40、第41、第42、第43、第44の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第45の態様では、2つ以上のアミノ酸位置は、4つのアミノ酸位置を含み、4つのアミノ酸位置は、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10およびA33およびL34およびD35、R10およびA33およびL34およびF53、R10およびA33およびL34およびI59、R10およびA33およびL34およびA89、R10およびA33およびL34およびT90、R10およびA33およびL34およびT95、R10およびA33およびD35およびF53、R10およびA33およびD35およびI59、R10およびA33およびD35およびA89、R10およびA33およびD35およびT90、R10およびA33およびD35およびT95、R10およびA33およびF53およびI59、R10およびA33およびF53およびA89、R10およびA33およびF53およびT90、R10およびA33およびF53およびT95、R10およびA33およびI59およびA89、R10およびA33およびI59およびT90、R10およびA33およびI59およびT95、R10およびA33およびA89およびT90、R10およびA33およびA89およびT95、R10およびA33およびT90およびT95、R10およびL34およびD35およびF53、R10およびL34およびD35およびI59、R10およびL34およびD35およびA89、R10およびL34およびD35およびT90、R10およびL34およびD35およびT95、R10およびL34およびF53およびI59、R10およびL34およびF53およびA89、R10およびL34およびF53およびT90、R10およびL34およびF53およびT95、R10およびL34およびI59およびA89、R10およびL34およびI59およびT90、R10およびL34およびI59およびT95、R10およびL34およびA89およびT90、R10およびL34およびA89およびT95、R10およびL34およびT90およびT95、R10およびD35およびF53およびI59、R10およびD35およびF53およびA89、R10およびD35およびF53およびT90、R10およびD35およびF53およびT95、R10およびD35およびI59およびA89、R10およびD35およびI59およびT90、R10およびD35およびI59およびT95、R10およびD35およびA89およびT90、R10およびD35およびA89およびT95、R10およびD35およびT90およびT95、R10およびF53およびI59およびA89、R10およびF53およびI59およびT90、R10およびF53およびI59およびT95、R10およびF53およびA89およびT90、R10およびF53およびA89およびT95、R10およびF53およびT90およびT95、R10およびI59およびA89およびT90、R10およびI59およびA89およびT95、R10およびI59およびT90およびT95、R10およびA89およびT90およびT95、A33およびL34およびD35およびF53、A33およびL34およびD35およびI59、A33およびL34およびD35およびA89、A33およびL34およびD35およびT90、A33およびL34およびD35およびT95、A33およびL34およびF53およびI59、A33およびL34およびF53およびA89、A33およびL34およびF53およびT90、A33およびL34およびF53およびT95、A33およびL34およびI59およびA89、A33およびL34およびI59およびT90、A33およびL34およびI59およびT95、A33およびL34およびA89およびT90、A33およびL34およびA89およびT95、A33およびL34およびT90およびT95、A33およびD35およびF53およびI59、A33およびD35およびF53およびA89、A33およびD35およびF53およびT90、A33およびD35およびF53およびT95、A33およびD35およびI59およびA89、A33およびD35およびI59およびT90、A33およびD35およびI59およびT95、A33およびD35およびA89およびT90、A33およびD35およびA89およびT95、A33およびD35およびT90およびT95、A33およびF53およびI59およびA89、A33およびF53およびI59およびT90、A33およびF53およびI59およびT95、A33およびF53およびA89およびT90、A33およびF53およびA89およびT95、A33およびF53およびT90およびT95、A33およびI59およびA89およびT90、A33およびI59およびA89およびT95、A33およびI59およびT90およびT95、A33およびA89およびT90およびT95、L34およびD35およびF53およびI59、L34およびD35およびF53およびA89、L34およびD35およびF53およびT90、L34およびD35およびF53およびT95、L34およびD35およびI59およびA89、L34およびD35およびI59およびT90、L34およびD35およびI59およびT95、L34およびD35およびA89およびT90、L34およびD35およびA89およびT95、L34およびD35およびT90およびT95、L34およびF53およびI59およびA89、L34およびF53およびI59およびT90、L34およびF53およびI59およびT95、L34およびF53およびA89およびT90、L34およびF53およびA89およびT95、L34およびF53およびT90およびT95、L34およびI59およびA89およびT90、L34およびI59およびA89およびT95、L34およびI59およびT90およびT95、L34およびA89およびT90およびT95、D35およびF53およびI59およびA89、D35およびF53およびI59およびT90、D35およびF53およびI59およびT95、D35およびF53およびA89およびT90、D35およびF53およびA89およびT95、D35およびF53およびT90およびT95、D35およびI59およびA89およびT90、D35およびI59およびA89およびT95、D35およびI59およびT90およびT95、D35およびA89およびT90およびT95、F53およびI59およびA89およびT90、F53およびI59およびA89およびT95、F53およびI59およびT90およびT95、F53およびA89およびT90およびT95、ならびにI59およびA89およびT90およびT95からなる群より選択される。
第1の局面の第45の態様の一態様でもある、第1の局面の第46の態様では、2つ以上のアミノ酸位置は、4つのアミノ酸位置を含み、4つのアミノ酸位置は、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10およびA33およびL34およびD35、R10およびA33およびL34およびI59、R10およびA33およびL34およびA89、R10およびA33およびL34およびT90、R10およびA33およびL34およびT95、R10およびA33およびD35およびI59、R10およびA33およびD35およびA89、R10およびA33およびD35およびT90、R10およびA33およびD35およびT95、R10およびA33およびI59およびA89、R10およびA33およびI59およびT90、R10およびA33およびI59およびT95、R10およびA33およびA89およびT90、R10およびA33およびA89およびT95、R10およびA33およびT90およびT95、R10およびL34およびD35およびI59、R10およびL34およびD35およびA89、R10およびL34およびD35およびT90、R10およびL34およびD35およびT95、R10およびL34およびI59およびA89、R10およびL34およびI59およびT90、R10およびL34およびI59およびT95、R10およびL34およびA89およびT90、R10およびL34およびA89およびT95、R10およびL34およびT90およびT95、R10およびD35およびI59およびA89、R10およびD35およびI59およびT90、R10およびD35およびI59およびT95、R10およびD35およびA89およびT90、R10およびD35およびA89およびT95、R10およびD35およびT90およびT95、R10およびI59およびA89およびT90、R10およびI59およびA89およびT95、R10およびI59およびT90およびT95、R10およびA89およびT90およびT95、A33およびL34およびD35およびI59、A33およびL34およびD35およびA89、A33およびL34およびD35およびT90、A33およびL34およびD35およびT95、A33およびL34およびI59およびA89、A33およびL34およびI59およびT90、A33およびL34およびI59およびT95、A33およびL34およびA89およびT90、A33およびL34およびA89およびT95、A33およびL34およびT90およびT95、A33およびD35およびI59およびA89、A33およびD35およびI59およびT90、A33およびD35およびI59およびT95、A33およびD35およびA89およびT90、A33およびD35およびA89およびT95、A33およびD35およびT90およびT95、A33およびI59およびA89およびT90、A33およびI59およびA89およびT95、A33およびI59およびT90およびT95、A33およびA89およびT90およびT95、L34およびD35およびI59およびA89、L34およびD35およびI59およびT90、L34およびD35およびI59およびT95、L34およびD35およびA89およびT90、L34およびD35およびA89およびT95、L34およびD35およびT90およびT95、L34およびI59およびA89およびT90、L34およびI59およびA89およびT95、L34およびI59およびT90およびT95、L34およびA89およびT90およびT95、ならびにI59およびA89およびT90およびT95からなる群より選択される。
第1の局面の第46の態様の一態様でもある、第1の局面の第47の態様では、2つ以上のアミノ酸位置は、4つのアミノ酸位置を含み、4つのアミノ酸位置は、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10およびA33およびL34およびD35、R10およびA33およびL34およびI59、R10およびA33およびD35およびI59からなる群より選択される。
第1の局面の第47の態様の一態様でもある、第1の局面の第48の態様では、2つ以上のアミノ酸位置は、4つのアミノ酸位置を含み、4つのアミノ酸位置は、SEQ ID NO: 1のR10およびA33およびD35およびI59である。
第1の局面の第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、および第48の態様、好ましくは第1の局面の第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、および第48の態様のうちいずれか1つ、より好ましくは第1の局面の第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、および第48の態様のうちいずれか1つ、いっそう好ましくは第1の局面の第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48の態様のうちいずれか1つ、最も好ましくは第1の局面の第45、第46、第47、および第48の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第49の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、4つのアミノ酸位置における置換に加えて、少なくとも1つまたは複数のさらなるアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、1つまたは複数のさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、34、35、53、59、89、90、および95からなる群より選択される。
第1の局面の第49の態様の一態様でもある、第1の局面の第50の態様では、1つまたは複数のさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、A33、L34、D35、F53、I59、A89、T90、およびT95からなる群より選択される。
第1の局面の第49の態様の一態様でもある、第1の局面の第51の態様では、1つまたは複数のさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、34、35、59、89、90、および95からなる群より選択される。
第1の局面の第51の態様の一態様でもある、第1の局面の第52の態様では、1つまたは複数のさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、A33、L34、D35、I59、A89、T90、およびT95からなる群より選択される。
第1の局面の第49の態様の一態様でもある、第1の局面の第53の態様では、1つまたは複数のさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、34、35、および59からなる群より選択される。
第1の局面の第53の態様の一態様でもある、第1の局面の第54の態様では、1つまたは複数のさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、A33、L34、D35、およびI59からなる群より選択される。
第1の局面の第3、第17、第30、第41、および第51の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第55の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、1つまたは複数のアミノ酸位置における置換に加えて、もう1つのさらなるアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、もう1つのさらなるアミノ酸位置はSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置53である。
第1の局面の第4、第18、第31、第42、および第52の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第56の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、1つまたは複数のアミノ酸位置における置換に加えて、もう1つのさらなるアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、もう1つのさらなるアミノ酸位置はSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置F53である。
第1の局面のいずれか1つの他の態様の一態様でもある、第1の局面の好ましい一態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、1つまたは複数のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、1つまたは複数のアミノ酸位置は、それぞれ独立してSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、34、35、59、89、90、および95からなる群より選択され、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、もう1つのさらなるアミノ酸位置であるSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置53におけるアミノ酸置換をさらに含む。
第1の局面のいずれか1つの他の態様の一態様でもある、第1の局面の好ましい一態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、1つまたは複数のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、1つまたは複数のアミノ酸位置は、それぞれ独立してSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、A33、L34、D35、I59、A89、T90、およびT95からなる群より選択され、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、もう1つのさらなるアミノ酸位置であるSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置F53におけるアミノ酸をさらに含む。
第1の局面の第5、第19、第32、第43、および第53の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第57の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、1つまたは複数のアミノ酸位置における置換に加えて、少なくとも1つまたは複数のさらなるアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、1つまたは複数のさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置53、89、90、および95からなる群より選択される。
第1の局面の第6、第20、第33、第44、および第54の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第58の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、1つまたは複数のアミノ酸位置における置換に加えて、少なくとも1つまたは複数のさらなるアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、1つまたは複数のさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置SEQ ID NO: 1 F53、A89、T90、およびT95からなる群より選択される。
第1の局面の第7および第21の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第59の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、1つまたは複数のアミノ酸位置における置換に加えて、少なくとも1つまたは複数のさらなるアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、1つまたは複数のさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置34、53、59、89、90、および95からなる群より選択される。
第1の局面の第8および第22の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第60の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、1つまたは複数のアミノ酸位置における置換に加えて、少なくとも1つまたは複数のさらなるアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、1つまたは複数のさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置L34、F53、I59、A89、T90、およびT95からなる群より選択される。
第1の局面の第9の態様の一態様でもある、第1の局面の第61の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、1つのアミノ酸位置における置換に加えて、少なくとも1つまたは複数のさらなるアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、1つまたは複数のさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置33、34、35、53、59、89、90、および95からなる群より選択される。
第1の局面の第10の態様の一態様でもある、第1の局面の第62の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、1つのアミノ酸位置における置換に加えて、少なくとも1つまたは複数のさらなるアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、1つまたは複数のさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A33、L34、D35、F53、I59、A89、T90、およびT95からなる群より選択される。
第1の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、および第62の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つ、好ましくは第1の局面の第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、および第62の態様のうちいずれか、より好ましくは第1の局面の第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、および第62の態様のうちいずれか1つ、いっそう好ましくは第1の局面の第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、および第62の態様のうちいずれか1つ、なおいっそう好ましくは第1の局面の第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、および第62の態様のうちいずれか1つ、なおいっそう好ましくは第1の局面の第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、および第62の態様のうちいずれか1つ、最も好ましくは第1の局面の第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、および第62の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第63の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 1の1つのアミノ酸位置、好ましくはSEQ ID NO: 1の2つのアミノ酸位置、好ましくはSEQ ID NO: 1の3つのアミノ酸位置、好ましくはSEQ ID NO: 1の4つのアミノ酸位置、より好ましくはSEQ ID NO: 1の5つのアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、SEQ ID NO: 1のそれぞれの任意のアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、35、53、59、89、90、および95からなる群より選択される。
第1の局面の第63の態様の一態様でもある、第1の局面の第64の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 1の2つのアミノ酸位置、好ましくはSEQ ID NO: 1の3つのアミノ酸位置、好ましくはSEQ ID NO: 1の4つのアミノ酸位置、より好ましくはSEQ ID NO: 1の5つのアミノ酸位置、最も好ましくはSEQ ID NO: 1の6つのアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、SEQ ID NO: 1のそれぞれの任意のアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、A33、D35、F53、I59、A89、T90、およびT95からなる群より選択される。
第1の局面の第63および第64の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第65の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 1の2つのアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、SEQ ID NO: 1のそれぞれの任意のアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、35、53、59、89、90、および95からなる群より選択される。
第1の局面の第63および第64の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第66の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 1の2つのアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、SEQ ID NO: 1のそれぞれの任意のアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、A33、D35、F53、I59、A89、T90、およびT95からなる群より選択される。
第1の局面の第63、第64、第65、および第66の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第67の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 1の3つのアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、SEQ ID NO: 1のそれぞれの任意のアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、35、53、59、89、90、および95からなる群より選択される。
第1の局面の第63、第64、第65、および第66の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第68の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 1の3つのアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、SEQ ID NO: 1のそれぞれの任意のアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、A33、D35、F53、I59、A89、T90、およびT95からなる群より選択される。
第1の局面の第63、第64、第65、第66、第67、および第68の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第69の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 1の4つのアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、SEQ ID NO: 1のそれぞれの任意のアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、35、53、59、89、90、および95からなる群より選択される。
第1の局面の第63、第64、第65、第66、第67、および第68の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第70の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 1の4つのアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、SEQ ID NO: 1のそれぞれの任意のアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、A33、D35、F53、I59、A89、T90、およびT95からなる群より選択される。
第1の局面の第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、および第70の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第71の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 1の5つのアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、SEQ ID NO: 1のそれぞれの任意のアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、35、53、59、89、90、および95からなる群より選択される。
第1の局面の第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、および第70の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第72の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 1の5つのアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、SEQ ID NO: 1のそれぞれの任意のアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、A33、D35、F53、I59、A89、T90、およびT95からなる群より選択される。
第1の局面の第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、および第72の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれかの一態様でもある、第1の局面の好ましい一態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 1の1つのアミノ酸位置、好ましくはSEQ ID NO: 1の2つのアミノ酸位置、好ましくはSEQ ID NO: 1の3つのアミノ酸位置、好ましくはSEQ ID NO: 1の4つのアミノ酸位置、より好ましくはSEQ ID NO: 1の5つのアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、SEQ ID NO: 1のそれぞれの任意のアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、89、90、および95からなる群より選択される。
第1の局面のいずれか1つの他の態様の一態様でもある、第1の局面の好ましい一態様では、1つのアミノ酸位置はSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置89、90、95、10、および33からなる群より選択され、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置53におけるアミノ酸置換をさらに含む。
第1の局面の第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、および第72の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれかの一態様でもある、第1の局面の好ましい一態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 1の1つのアミノ酸位置、好ましくはSEQ ID NO: 1の2つのアミノ酸位置、好ましくはSEQ ID NO: 1の3つのアミノ酸位置、好ましくはSEQ ID NO: 1の4つのアミノ酸位置、より好ましくはSEQ ID NO: 1の5つのアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、SEQ ID NO: 1のそれぞれの任意のアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、A33、A89、T90、およびT95からなる群より選択される。
第1の局面の第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、および第72の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれかの一態様でもある、第1の局面の好ましい一態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 1の1つのアミノ酸位置、好ましくはSEQ ID NO: 1の2つのアミノ酸位置、好ましくはSEQ ID NO: 1の3つのアミノ酸位置、好ましくはSEQ ID NO: 1の4つのアミノ酸位置、より好ましくはSEQ ID NO: 1の5つのアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、SEQ ID NO: 1のそれぞれの任意のアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、89、90、および95からなる群より選択され、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置35、53、および/または59からなる群より選択されるSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置における1つまたは複数のアミノ酸置換をさらに含む。
第1の局面の第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、および第72の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれかの一態様でもある、第1の局面の好ましい一態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 1の1つのアミノ酸位置、好ましくはSEQ ID NO: 1の2つのアミノ酸位置、好ましくはSEQ ID NO: 1の3つのアミノ酸位置、好ましくはSEQ ID NO: 1の4つのアミノ酸位置、より好ましくはSEQ ID NO: 1の5つのアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、SEQ ID NO: 1のそれぞれの任意のアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、A33、A89、T90、およびT95からなる群より選択され、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置D35、F53、および/またはI59からなる群より選択されるSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置における1つまたは複数のアミノ酸置換をさらに含む。
第1の局面の第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、および第72の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第73の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 1の2つ以上のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、2つのアミノ酸位置はSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10および33、10および35、10および53、10および59、10および89、10および90、10および95、33および35、33および53、33および59、33および90、33および95、35および53、35および59、35および90、35および95、53および89、53および90、53および95、59および90、89および90、89および95、ならびに90および95、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10および33、10および53、10および89、10および90、10および95、33および90、53および90、53および95、89および90、89および95、ならびに90および95からなる群より選択される。
第1の局面のいずれか1つの他の態様の一態様でもある、第1の局面の好ましい一態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 1の2つ以上のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、2つのアミノ酸位置は、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10および53、33および53、35および53、53および89、53および90、ならびに53および95からなる群より選択される。
第1の局面のいずれか1つの他の態様の一態様でもある、第1の局面の好ましい一態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 1の2つ以上のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、2つのアミノ酸位置は、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置53および90である。
第1の局面のいずれか1つの他の態様の一態様でもある、第1の局面の好ましい一態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 1の2つ以上のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、2つのアミノ酸位置は、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置53および95である。
第1の局面の第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、および第73の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第74の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10およびA33、R10およびD35、R10およびF53、R10およびI59、R10およびA89、R10およびT90、R10およびT95、A33およびD35、A33およびF53、A33およびI59、A33およびT90、A33およびT95、D35およびF53、D35およびI59、D35およびT90、D35およびT95、F53およびT90、F53およびT95、I59およびT90、A89およびT90、A89およびT95、ならびにT90およびT95、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10およびA33、R10およびF53、R10およびA89、R10およびT90、R10およびT95、A33およびT90、F53およびT90、F53およびT95、A89およびT90、A89およびT95、ならびにT90およびT95からなる群より選択されるSEQ ID NO: 1の2つのアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含む。
第1の局面の第73および第74の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第75の態様では、1つ、2つ、または3つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、34、35、53、59、89、90、および95からなる群より選択される。
第1の局面の第75の態様の一態様でもある、第1の局面の第76の態様では、1つ、2つ、または3つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、A33、L34、D35、F53、I59、A89、T90、およびT95からなる群より選択される。
第1の局面の第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、および第76の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第77の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、以下のSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置からなる群より選択されるSEQ ID NO: 1の2つのアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含む:
(i) 10および33、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置34、35、53、59、89、90、および95、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置35、53、59、90、または95からなる群より選択される; ならびに
(ii) 10および35、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置33、34、53、59、89、90、および95、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置33、53、59、または90からなる群より選択される; ならびに
(iii) 10および53、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置33、34、35、59、89、90、および95、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置33、35、90、または95からなる群より選択される; ならびに
(iv) 10および59、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置33、34、35、53、89、90、および95、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置33、35、または90からなる群より選択される; ならびに
(v) 10および89、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置33、34、35、53、59、90、および95、好ましくは90または95からなる群より選択される; ならびに
(vi) 10および90、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置33、34、35、53、59、89、および95、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置33、35、53、59、89、または95からなる群より選択される; ならびに
(vii) 10および95、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置33、34、35、53、59、89、および90、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置33、35、53、89、または90からなる群より選択される; ならびに
(viii) 33および90、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、34、35、53、59、89、および95、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、35、53、59、または95からなる群より選択される; ならびに
(ix) 33および95、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、34、35、53、59、89、および90、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、35、53、59、または90からなる群より選択される; ならびに
(x) 53および90、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、34、35、59、89、および95、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、35、または95からなる群より選択される; ならびに
(xi) 53および95、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、34、35、59、89、および90、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、35、または95からなる群より選択される; ならびに
(xii) 89および90、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、34、35、53、59、および95、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10または95からなる群より選択される; ならびに
(xiii) 89および95、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、34、35、53、59、および90、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10または90からなる群より選択される; ならびに
(xiv) 90および95、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、34、35、53、59、および89、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、35、53、または89からなる群より選択される。
第1の局面の第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、および第77の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第78の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、以下のSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置からなる群より選択されるSEQ ID NO: 1の2つのアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含む:
(i) R10およびA33、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置L34、D35、F53、I59、A89、T90、およびT95、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置D35、F53、I59、T90、またはT95からなる群より選択される; ならびに
(ii) R10およびD35、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A33、L34、F53、I59、A89、T90、およびT95、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A33、F53、I59、またはT90からなる群より選択される; ならびに
(iii) R10およびF53、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A33、L34、D35、I59、A89、T90、およびT95、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A33、D35、T90、またはT95からなる群より選択される; ならびに
(iv) R10およびI59、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A33、L34、D35、F53、A89、T90、およびT95、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A33、D35、またはT90からなる群より選択される; ならびに
(v) R10およびA89、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A33、L34、D35、F53、I59、T90、およびT95、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置T90またはT95からなる群より選択される; ならびに
(vi) R10およびT90、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A33、L34、D35、F53、I59、A89、およびT95、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A33、D35、F53、I59、A89、またはT95からなる群より選択される; ならびに
(vii) R10およびT95、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A33、L34、D35、F53、I59、A89、およびT90、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A33、D35、F53、A89、またはT90からなる群より選択される; ならびに
(viii) A33およびT90、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、L34、D35、F53、I59、A89、およびT95、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、D35、F53、I59、またはT95からなる群より選択される; ならびに
(ix) A33およびT95、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、L34、D35、F53、I59、A89、およびT90、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、D35、F53、I59、またはT90からなる群より選択される; ならびに
(x) F53およびT90、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、A33、L34、D35、I59、A89、およびT95、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、A33、D35、またはT95からなる群より選択される; ならびに
(xi) F53およびT95、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、A33、L34、D35、I59、A89、およびT90、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、A33、D35、またはT95からなる群より選択される; ならびに
(xii) A89およびT90、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、A33、L34、D35、F53、I59、およびT95、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10またはT95からなる群より選択される; ならびに
(xiii) A89およびT95、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、A33、L34、D35、F53、I59、およびT90、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10またはT90からなる群より選択される; ならびに
(xiv) T90およびT95、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つまたは3つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、A33、L34、D35、F53、I59、およびA89、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、A33、D35、F53、またはA89からなる群より選択される。
第1の局面のいずれか1つの他の態様の一態様でもある、第1の局面の好ましい一態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 1の2つ以上のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、2つのアミノ酸位置は、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10および33、10および35、10および59、10および89、10および90、10および95、33および35、33および59、33および90、33および95、35および59、35および90、35および95、59および90、89および90、89および95、ならびに90および95、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10および33、10および89、10および90、10および95、33および90、33および95、89および90、89および95、ならびに90および95からなる群より選択される。
第1の局面のいずれか1つの他の態様の一態様でもある、第1の局面の好ましい一態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、2つのアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、2つのアミノ酸位置は、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10および33、10および89、10および90、10および95、33および90、33および95、89および90、89および95、ならびに90および95からなる群より選択される。
第1の局面のいずれか1つの他の態様の一態様でもある、第1の局面の好ましい一態様では、2つ以上のアミノ酸は、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10および33、10および89、10および90、10および95、33および90、33および95、89および90、89および95、ならびに90および95からなる群より選択され、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置53におけるアミノ酸置換をさらに含む。
第1の局面のいずれか1つの他の態様の一態様でもある、第1の局面のさらに別の好ましい態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置90および95、または10および89、または89および90、または89および95の群より選択される2つのアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含む。
第1の局面のいずれか1つの他の態様の一態様でもある、第1の局面の好ましい一態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10およびA33、R10およびD35、R10およびI59、R10およびA89、R10およびT90、R10およびT95、A33およびD35、A33およびI59、A33およびT90、A33およびT95、D35およびI59、D35およびT90、D35およびT95、I59およびT90、A89およびT90、A89およびT95、ならびにT90およびT95、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10およびA33、R10およびA89、R10およびT90、R10およびT95、A33およびT90、A33およびT95、A89およびT90、A89およびT95、ならびにT90およびT95からなる群より選択されるSEQ ID NO: 1の2つのアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含む。
第1の局面のいずれか1つの他の態様の一態様でもある、第1の局面の好ましい一態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10および33、10および35、10および59、10および89、10および90、10および95、33および35、33および59、33および90、33および95、35および59、35および90、35および95、59および90、89および90、89および95、ならびに90および95、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10および33、10および89、10および90、10および95、33および90、89および90、89および95、ならびに90および95からなる群より選択されるSEQ ID NO: 1の2つのアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、もう1つのさらなるアミノ酸位置におけるアミノ酸置換をさらに含み、もう1つのさらなるアミノ酸位置はSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置53である。
第1の局面のいずれか1つの他の態様の一態様でもある、第1の局面の好ましい一態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10およびA33、R10およびD35、R10およびI59、R10およびA89、R10およびT90、R10およびT95、A33およびD35、A33およびI59、A33およびT90、A33およびT95、D35およびI59、D35およびT90、D35およびT95、I59およびT90、A89およびT90、A89およびT95、ならびにT90およびT95、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10およびA33、R10およびA89、R10およびT90、R10およびT95、A33およびT90、A89およびT90、A89およびT95、ならびにT90およびT95からなる群より選択されるSEQ ID NO: 1の2つのアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、もう1つのさらなるアミノ酸位置におけるアミノ酸置換をさらに含み、もう1つのさらなるアミノ酸位置はSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置F53である。
第1の局面の第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、および第78の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第79の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10および33および35、10および33および53、10および33および59、10および33および90、10および33および95、10および35および53、10および35および59、10および35および90、10および35および95、10および53および90、10および53および95、10および59および90、10および89および90、10および89および95、10および90および95、33および35および59、33および35および90、33および53および90、33および53および95、33および59および90、33および90および95、35および53および90、35および53および95、35および59および90、53および90および95、ならびに89および90および95、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10および33および53、10および33および90、10および33および95、10および53および90、10および53および95、10および89および90、10および89および95、10および90および95、33および53および90、33および53および95、33および90および95、53および90および95、ならびに89および90および95、より好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10および53および90、10および53および95、ならびに10および90および95からなる群より選択されるSEQ ID NO: 1の3つのアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含む。
第1の局面のいずれか1つの他の態様の一態様でもある、第1の局面の好ましい一態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは3つ以上のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、3つのアミノ酸位置はSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10および33および35、10および33および59、10および33および90、10および33および95、10および35および59、10および35および90、10および35および95、10および59および90、10および89および90、10および89および95、10および90および95、33および35および59、33および35および90、33および59および90、33および90および95、35および59および90、ならびに89および90および95からなる群より選択される。
好ましくは、3つ以上のアミノ酸位置は3つのアミノ酸位置であるSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置90、95、および10である。
より好ましくは、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、1つまたは複数のアミノ酸位置における置換に加えて、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置53におけるさらなるアミノ酸置換を含む。
第1の局面の第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、および第79の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第80の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10およびA33およびD35、R10およびA33およびF53、R10およびA33およびI59、R10およびA33およびT90、R10およびA33およびT95、R10およびD35およびF53、R10およびD35およびI59、R10およびD35およびT90、R10およびD35およびT95、R10およびF53およびT90、R10およびF53およびT95、R10およびI59およびT90、R10およびA89およびT90、R10およびA89およびT95、R10およびT90およびT95、A33およびD35およびI59、A33およびD35およびT90、A33およびF53およびT90、A33およびF53およびT95、A33およびI59およびT90、A33およびT90およびT95、D35およびF53およびT90、D35およびF53およびT95、D35およびI59およびT90、F53およびT90およびT95、ならびにA89およびT90およびT95、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10およびA33およびF53、R10およびA33およびT90、R10およびA33およびT95、R10およびF53およびT90、R10およびF53およびT95、R10およびA89およびT90、R10およびA89およびT95、R10およびT90およびT95、A33およびF53およびT90、A33およびF53およびT95、A33およびT90およびT95、F53およびT90およびT95、ならびにA89およびT90およびT95、より好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10およびF53およびT90、R10およびF53およびT95、ならびにR10およびT90およびT95からなる群より選択されるSEQ ID NO: 1の3つのアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含む。
第1の局面の第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、および第80の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第81の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列はSEQ ID: 13および/またはSEQ ID NO: 16を含む。
第1の局面の第79または第81の態様の一態様でもある、第1の局面の第82の態様では、1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、34、35、53、59、89、90、および95からなる群より選択される。
第1の局面の第82の態様の一態様でもある、第1の局面の第83の態様では、1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、A33、L34、D35、F53、I59、A89、T90、およびT95からなる群より選択される。
第1の局面の第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、および第83の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第84の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、以下のSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置からなる群より選択されるSEQ ID NO: 1の3つのアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含む:
(i) 10および33および35、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置34、53、59、89、90、および95、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置59および90からなる群より選択される; ならびに
(ii) 10および33および53、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置34、35、59、89、90、および95、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置90および95からなる群より選択される; ならびに
(iii) 10および33および59、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置34、35、53、89、90、および95、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置35および90からなる群より選択される; ならびに
(iv) 10および33および90、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置34、35、53、59、89、および95、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置35、53、および95からなる群より選択される; ならびに
(v) 10および33および95、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置34、35、53、59、89、および90、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置35、53、および90からなる群より選択される; ならびに
(vi) 10および35および53、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置33、34、59、89、90、および95、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置90または95からなる群より選択される; ならびに
(vii) 10および35および59、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置33、34、53、89、90、および95、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置33および90からなる群より選択される; ならびに
(viii) 10および35および90、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置33、34、53、59、89、および95、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置33、53、59、および95からなる群より選択される; ならびに
(ix) 10および35および95、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置33、34、53、59、89、および90、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置33、53、59、および90からなる群より選択される; ならびに
(x) 10および53および90、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置33、34、35、59、89、および95、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置33、35、および95からなる群より選択される; ならびに
(xi) 10および53および95、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置33、34、35、59、89、および90、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置33、35、および90からなる群より選択される; ならびに
(xii) 10および59および90、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置SEQ ID NO: 1 33、34、35、53、89、および95、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置33および35からなる群より選択される; ならびに
(xiii) 10および89および90、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つのさらなるSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置33、34、35、53、59、および95、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置95におけるさらなるアミノ酸置換を含む; ならびに
(xiv) 10および90および95、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置33、34、35、53、59、および89、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置33、35、53、および89からなる群より選択される; ならびに
(xv) 33および53および90、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、34、35、59、89、および95、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10および95からなる群より選択される; ならびに
(xvi) 33および53および95、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、34、35、59、89、および90、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10および90からなる群より選択される; ならびに
(xvii) 33および90および95、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、34、35、53、59、および89、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10および53からなる群より選択される; ならびに
(xviii) 53および90および95、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置SEQ ID NO: 1 10、33、34、35、59、および89、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、および35からなる群より選択される; ならびに
(xix) 89および90および95、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、34、35、53、および59、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10からなる群より選択される1つのさらなるSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含む。
第1の局面のいずれか1つの他の態様の好ましい一態様でもある、第1の局面の好ましい一態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、4つ以上のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、該4つ以上のアミノ酸位置のうち3つはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置90、95、および10であり、第4のアミノ酸位置はSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置89、33、34、35、59、および53からなる群より選択され、好ましくは、第4のアミノ酸位置はSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置89および53からなる群より選択される。
好ましい一態様では、第4のアミノ酸位置はSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置89である。
別の好ましい態様では、第4のアミノ酸位置はSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置53である。
第1の局面の第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、および第84の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第85の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、以下のSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置からなる群より選択されるSEQ ID NO: 1の3つのアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含む:
(i) R10およびA33およびD35、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置L34、F53、I59、A89、T90、およびT95、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置I59およびT90からなる群より選択される; ならびに
(ii) R10およびA33およびF53、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置L34、D35、I59、A89、T90、およびT95、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置T90およびT95からなる群より選択される; ならびに
(iii) R10およびA33およびI59、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置L34、D35、F53、A89、T90、およびT95、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置D35およびT90からなる群より選択される; ならびに
(iv) R10およびA33およびT90、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置L34、D35、F53、I59、A89、およびT95、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置D35、F53、およびT95からなる群より選択される; ならびに
(v) R10およびA33およびT95、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置L34、D35、F53、I59、A89、およびT90、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置D35、F53、およびT90からなる群より選択される; ならびに
(vi) R10およびD35およびF53、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A33、L34、I59、A89、T90、およびT95、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置T90またはT95からなる群より選択される; ならびに
(vii) R10およびD35およびI59、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A33、L34、F53、A89、T90、およびT95、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A33およびT90からなる群より選択される; ならびに
(viii) R10およびD35およびT90、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置SEQ ID NO: 1 A33、L34、F53、I59、A89、およびT95、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A33、F53、I59、およびT95からなる群より選択される; ならびに
(ix) R10およびD35およびT95、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A33、L34、F53、I59、A89、およびT90、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A33、F53、I59、およびT90からなる群より選択される; ならびに
(x) R10 およびF53およびT90、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A33、L34、D35、I59、A89、およびT95、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A33、D35、およびT95からなる群より選択される; ならびに
(xi) R10およびF53およびT95、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A33、L34、D35、I59、A89、およびT90、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A33、D35、およびT90からなる群より選択される; ならびに
(xii) R10およびI59およびT90、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A33、L34、D35、F53、A89、およびT95、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A33およびD35からなる群より選択される; ならびに
(xiii) R10およびA89およびT90、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A33、L34、D35、F53、I59、およびT95、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置T95からなる群より選択される1つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含む; ならびに
(xiv) R10およびT90およびT95、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A33、L34、D35、F53、I59、およびA89、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A33、D35、F53、およびA89からなる群より選択される; ならびに
(xv) A33およびF53およびT90、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、L34、D35、I59、A89、およびT95、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10およびT95からなる群より選択される; ならびに
(xvi) A33およびF53およびT95、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、L34、D35、I59、A89、およびT90、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10およびT90からなる群より選択される; ならびに
(xvii) A33およびT90およびT95、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、L34、D35、F53、I59、およびA89、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10およびF53からなる群より選択される; ならびに
(xviii) F53およびT90およびT95、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含み、1つまたは2つのさらなるアミノ酸位置は、独立して個々にSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、A33、L34、D35、I59、およびA89、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、A33、およびD35からなる群より選択される; ならびに
(xix) A89およびT90およびT95、ここでポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、A33、L34、D35、F53、およびI59、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10からなる群より選択される1つのさらなるアミノ酸位置におけるさらなるアミノ酸置換を含む。
第1の局面のいずれか1つの他の態様の一態様でもある、第1の局面の好ましい一態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10および33および35、10および33および59、10および33および90、10および33および95、10および35および59、10および35および90、10および35および95、10および59および90、10および89および90、10および89および95、10および90および95、33および35および59、33および35および90、33および59および90、33および90および95、35および59および90、ならびに89および90および95からなる群より選択され、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10および33および90、10および33および95、10および89および90、10および89および95、10および90および95、33および90および95、ならびに89および90および95の群より選択されるSEQ ID NO: 1の3つのアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含む。
第1の局面のいずれか1つの他の態様の一態様でもある、第1の局面の好ましい一態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10およびA33およびD35、R10およびA33およびI59、R10およびA33およびT90、R10およびA33およびT95、R10およびD35およびI59、R10およびD35およびT90、R10およびD35およびT95、R10およびI59およびT90、R10およびA89およびT90、R10およびA89およびT95、R10およびT90およびT95、A33およびD35およびI59、A33およびD35およびT90、A33およびI59およびT90、A33およびT90およびT95、D35およびI59およびT90、ならびにA89およびT90およびT95からなる群より選択され、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10およびA33およびT90、R10およびA33およびT95、R10およびA89およびT90、R10およびA89およびT95、R10およびT90およびT95、A33およびT90およびT95、ならびにA89およびT90およびT95の群より選択されるSEQ ID NO: 1の3つのアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含む。
第1の局面のいずれか1つの他の態様の一態様でもある、第1の局面の好ましい一態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10および33および35、10および33および59、10および33および90、10および33および95、10および35および59、10および35および90、10および35および95、10および59および90、10および89および90、10および89および95、10および90および95、33および35および59、33および35および90、33および59および90、33および90および95、35および59および90、ならびに89および90および95からなる群より選択され、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10および33および90、10および33および95、10および89および90、10および89および95、10および90および95、33および90および95、ならびに89および90および95の群より選択されるSEQ ID NO: 1の3つのアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、もう1つのさらなるアミノ酸位置におけるアミノ酸置換をさらに含み、もう1つのさらなるアミノ酸位置はSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置53である。
第1の局面のいずれか1つの他の態様の一態様でもある、第1の局面の好ましい一態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10およびA33およびD35、R10およびA33およびI59、R10およびA33およびT90、R10およびA33およびT95、R10およびD35およびI59、R10およびD35およびT90、R10およびD35およびT95、R10およびI59およびT90、R10およびA89およびT90、R10およびA89およびT95、R10およびT90およびT95、A33およびD35およびI59、A33およびD35およびT90、A33およびI59およびT90、A33およびT90およびT95、D35およびI59およびT90、ならびにA89およびT90およびT95からなる群より選択され、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10およびA33およびT90、R10およびA33およびT95、R10およびA89およびT90、R10およびA89およびT95、R10およびT90およびT95、A33およびT90およびT95、ならびにA89およびT90およびT95の群より選択されるSEQ ID NO: 1の3つのアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、もう1つのさらなるアミノ酸位置におけるアミノ酸置換をさらに含み、もう1つのさらなるアミノ酸位置はSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置F53である。
第1の局面の第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、および第85の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第86の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、以下からなる群より選択されるSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含む:
- 10および33および35および59;
- 10および33および35および90;
- 10および33および35および95;
- 10および33および53および90;
- 10および33および53および95;
- 10および33および59および90;
- 10および33および90および95;
- 10および35および53および90;
- 10および35および53および95;
- 10および35および59および90;
- 10および35および90および95、
- 10および53および90および95、
- 10および59および90および95、
- 10および89および90および95、
- 33および53および90および95、
- 33および89および90および95、
- 34および89および90および95、
- 35および53および90および95、
- 35および89および90および95、
- 53および89および90および95、
- 59および89および90および95、
- 10および33および35および53および90、
- 10および33および35および53および95、
- 10および33および35および59および90;
- 10および33および35および59および95、
- 10および33および35および90および95、
- 10および33および53および90および95、
- 10および33および59および90および95、
- 10および33および89および90および95、
- 10および34および89および90および95、
- 10および35および53および59および90、
- 10および35および53および59および95、
- 10および35および53および90および95、
- 10および35および59および90および95、
- 10および35および89および90および95、
- 10および53および59および90および95、
- 10および53および89および90および95、
- 10および59および89および90および95、
- 33および34および89および90および95、
- 33および35および53および90および95、
- 33および35および89および90および95、
- 33および53および89および90および95、
- 33および59および89および90および95、
- 34および35および89および90および95、
- 34および53および89および90および95、
- 34および59および89および90および95、
- 35および53および89および90および95、
- 35および59および89および90および95、
- 53および59および89および90および95、
- 10および33および35および53および59および90、
- 10および33および35および53および59および95、
- 10および33および35および53および90および95
- 10および33および35および59および90および95、
- 10および33および35および89および90および95、
- 10および33および53および89および90および95、
- 10および33および59および89および90および95、
- 10および34および35および89および90および95、
- 10および34および53および89および90および95、
- 10および34および59および89および90および95、
- 10および35および53および59および90および95、
- 10および35および53および89および90および95、
- 10および35および59および89および90および95、
- 10および53および59および89および90および95、
- 33および34および35および89および90および95、
- 33および34および53および89および90および95、
- 33および34および59および89および90および95、
- 33および35および53および89および90および95、
- 33および35および59および89および90および95、
- 33および53および59および89および90および95、
34および35および53および89および90および95、
- 34および35および59および89および90および95、
- 34および53および59および89および90および95、
- 35および53および59および89および90および95、
- 10および33および35および53および59および90および95、
- 10および33および35および53および89および90および95、
- 10および33および35および59および89および90および95、
- 10および35および53および59および89および90および95、
- 33および34および35および53および89および90および95、
- 33および34および35および59および89および90および95、
- 33および34および53および59および89および90および95、
- 33および35および53および59および89および90および95、
- 34および35および53および59および89および90および95、
- 10および33および35および53および59および89および90および95、ならびに
- 33および34および35および53および59および89および90および95。
第1の局面の第86の態様の一態様でもある、第1の局面の第87の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、以下からなる群より選択されるSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含む:
- R10およびA33およびD35およびI59、
- R10およびA33およびD35およびT90、
- R10およびA33およびD35およびT95、
- R10およびA33およびF53およびT90、
- R10およびA33およびF53およびT95、
- R10およびA33およびI59およびT90、
- R10およびA33およびT90およびT95、
- R10およびD35およびF53およびT90、
- R10およびD35およびF53およびT95、
- R10およびD35およびI59およびT90、
- R10およびD35およびT90およびT95、
- R10およびF53およびT90およびT95、
- R10およびI59およびT90およびT95、
- R10およびA89およびT90およびT95、
- A33およびF53およびT90およびT95、
- A33およびA89およびT90およびT95、
- L34およびA89およびT90およびT95、
- D35およびF53およびT90およびT95、
- D35およびA89およびT90およびT95、
- F53およびA89およびT90およびT95、
- I59およびA89およびT90およびT95、
- R10およびA33およびD35およびF53およびT90、
- R10およびA33およびD35およびF53およびT95、
- R10およびA33およびD35およびI59およびT90、
- R10およびA33およびD35およびI59およびT95、
- R10およびA33およびD35およびT90およびT95、
- R10およびA33およびF53およびT90およびT95、
- R10およびA33およびI59およびT90およびT95、
- R10およびA33およびA89およびT90およびT95、
- R10およびL34およびA89およびT90およびT95、
- R10およびD35およびF53およびI59およびT90、
- R10およびD35およびF53およびI59およびT95、
- R10およびD35およびF53およびT90およびT95、
- R10およびD35およびI59およびT90およびT95、
- R10およびD35およびA89およびT90およびT95、
- R10およびF53およびI59およびT90およびT95、
- R10およびF53およびA89およびT90およびT95、
- R10およびI59およびA89およびT90およびT95、
- A33およびL34およびA89およびT90およびT95、
- A33およびD35およびF53およびT90およびT95、
- A33およびD35およびA89およびT90およびT95、
- A33およびF53およびA89およびT90およびT95、
- A33およびI59およびA89およびT90およびT95、
- L34およびD35およびA89およびT90およびT95、
- L34およびF53およびA89およびT90およびT95、
- L34およびI59およびA89およびT90およびT95、
- D35およびF53およびA89およびT90およびT95、
- D35およびI59およびA89およびT90およびT95、
- F53およびI59およびA89およびT90およびT95、
- R10およびA33およびD35およびF53およびI59およびT90、
- R10およびA33およびD35およびF53およびI59およびT95、
- R10およびA33およびD35およびF53およびT90およびT95
- R10およびA33およびD35およびI59およびT90およびT95、
- R10およびA33およびD35およびA89およびT90およびT95、
- R10およびA33およびF53およびA89およびT90およびT95、
- R10およびA33およびI59およびA89およびT90およびT95、
- R10およびL34およびD35およびA89およびT90およびT95、
- R10およびL34およびF53およびA89およびT90およびT95、
- R10およびL34およびI59およびA89およびT90およびT95、
- R10およびD35およびF53およびI59およびT90およびT95、
- R10およびD35およびF53およびA89およびT90およびT95、
- R10およびD35およびI59およびA89およびT90およびT95、
- R10およびF53およびI59およびA89およびT90およびT95、
- A33およびL34およびD35およびA89およびT90およびT95、
- A33およびL34およびF53およびA89およびT90およびT95、
- A33およびL34およびI59およびA89およびT90およびT95、
- A33およびD35およびF53およびA89およびT90およびT95、
- A33およびD35およびI59およびA89およびT90およびT95、
- A33およびF53およびI59およびA89およびT90およびT95、
- L34およびD35およびF53およびA89およびT90およびT95、
- L34およびD35およびI59およびA89およびT90およびT95、
- L34およびF53およびI59およびA89およびT90およびT95、
- D35およびF53およびI59およびA89およびT90およびT95、
- R10およびA33およびD35およびF53およびI59およびT90およびT95、
- R10およびA33およびD35およびF53およびA89およびT90およびT95、
- R10およびA33およびD35およびI59およびA89およびT90およびT95、
- R10およびD35およびF53およびI59およびA89およびT90およびT95、
- A33およびL34およびD35およびF53およびA89およびT90およびT95、
- A33およびL34およびD35およびI59およびA89およびT90およびT95、
- A33およびL34およびF53およびI59およびA89およびT90およびT95、
- A33およびD35およびF53およびI59およびA89およびT90およびT95、
- L34およびD35およびF53およびI59およびA89およびT90およびT95、
- R10およびA33およびD35およびF53およびI59およびA89およびT90およびT95、
- A33およびL34およびD35およびF53およびI59およびA89およびT90およびT95。
第1の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、および第87の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つ、好ましくは第1の局面の第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、および第87の態様のうちいずれか1つ、好ましくは第1の局面の第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、および第87の態様のうちいずれか1つ、好ましくは第1の局面の第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、および第87の態様のうちいずれか1つ、好ましくは第1の局面の第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、および第87の態様のうちいずれか1つ、より好ましくは第1の局面の第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、および第87の態様のうちいずれか1つ、いっそう好ましくは第1の局面の第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、および第87の態様のうちいずれか1つ、最も好ましくは第1の局面の第84、第85、第86、および第87の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第88の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、以下の位置のうち1つまたは複数、好ましくはすべてにおけるアミノ酸置換を含む:
(i) SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、89、90、および95;
(ii) SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、53、90、および95; または
(iii) SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、90、および95。
第1の局面のいずれか1つの他の態様の一態様でもある、第1の局面の好ましい一態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、以下の位置のうち1つまたは複数、好ましくはすべてにおけるアミノ酸置換を含み:
(i) SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、89、90、および95;
(ii) SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、90、および95; または
(iii) SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、90、および95;
好ましくは、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼはもう1つのさらなるアミノ酸位置におけるアミノ酸置換をさらに含み、もう1つのさらなるアミノ酸位置はSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置53である。
第1の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、および第87の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つ、好ましくは第1の局面の第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、および第87の態様のうちいずれか1つ、好ましくは第1の局面の第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、および第87の態様のうちいずれか1つ、好ましくは第1の局面の第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、および第87の態様のうちいずれか1つ、好ましくは第1の局面の第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、および第87の態様のうちいずれか1つ、より好ましくは第1の局面の第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、および第87の態様のうちいずれか1つ、いっそう好ましくは第1の局面の第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、および第87の態様のうちいずれか1つ、最も好ましくは第1の局面の第84、第85、第86、および第87の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第89の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は以下の位置のうち1つまたは複数、好ましくはすべてにおけるアミノ酸置換を含む:
(i) SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、A89、T90、およびT95;
(ii) SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、A33、F53、T90、およびT95; または
(iii) SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、T90、およびT95。
第1の局面のいずれか1つの他の態様の一態様でもある、第1の局面の好ましい一態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、以下の位置のうち1つまたは複数、好ましくはすべてにおけるアミノ酸置換を含み:
(i) SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、A89、T90、およびT95;
(ii) SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、A33、T90、およびT95; または
(iii) SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、T90、およびT95;
好ましくは、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼはもう1つのさらなるアミノ酸位置におけるアミノ酸置換をさらに含み、もう1つのさらなるアミノ酸位置はSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置F53である。
第1の局面の第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、および第89の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第90の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、以下のSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置からなる群より選択されるSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含む:
(i) R10およびA33およびD35およびI59およびT90;
(ii) R10およびA33およびF53およびT90およびT95;
(iii) R10およびA33およびI59およびT90;
(iv) R10およびD35およびF53およびT90およびT95;
(v) R10およびF53およびT90;
(vi) R10およびF53およびT90およびT95;
(vii) R10およびF53およびT95; ならびに
(viii) R10およびA89およびT90およびT95。
第1の局面のいずれか1つの他の態様の一態様でもある、第1の局面の好ましい一態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、以下のSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置からなる群より選択されるSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み:
(i) R10およびA33およびD35およびI59およびT90;
(ii) R10およびA33およびT90およびT95;
(iii) R10およびA33およびI59およびT90;
(iv) R10およびD35およびT90およびT95;
(v) R10およびT90;
(vi) R10およびT90およびT95;
(vii) R10およびT95; ならびに
(viii) R10およびA89およびT90およびT95、
好ましくは、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼはもう1つのさらなるアミノ酸位置におけるアミノ酸置換をさらに含み、もう1つのさらなるアミノ酸位置はSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置F53である。
第1の局面の第90の態様の一態様でもある、第1の局面の第91の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、以下のSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置からなる群より選択されるSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含む:
(i) R10およびA33およびD35およびI59およびT90;
(ii) R10およびA33およびF53およびT90およびT95;
(iii) R10およびA33およびI59およびT90;
(iv) R10およびD35およびF53およびT90およびT95;
(v) R10およびF53およびT90およびT95; ならびに
(vi) R10およびA89およびT90およびT95。
第1の局面のいずれか1つの他の態様の一態様でもある、第1の局面の好ましい一態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、以下のSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置からなる群より選択されるSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み:
(i) R10およびA33およびD35およびI59およびT90;
(ii) R10およびA33およびT90およびT95;
(iii) R10およびA33およびI59およびT90;
(iv) R10およびD35およびT90およびT95;
(v) R10およびT90およびT95; ならびに
(vi) R10およびA89およびT90およびT95、
好ましくは、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼはもう1つのさらなるアミノ酸位置におけるアミノ酸置換をさらに含み、もう1つのさらなるアミノ酸位置はSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置F53である。
第1の局面の第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、および第91の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第92の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、以下のSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置からなる群より選択されるSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含む:
(i) R10およびA33およびD35およびI59およびT90;
(ii) R10およびA33およびF53およびT90およびT95;
(iii) R10およびD35およびF53およびT90およびT95;
(iv) R10およびF53およびT90およびT95; ならびに
(v) R10およびA89およびT90およびT95。
第1の局面のいずれか1つの他の態様の一態様でもある、第1の局面の好ましい一態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、以下のSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置からなる群より選択されるSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含む:
(i) R10およびA33およびD35およびI59およびT90;
(ii) R10およびA33およびT90およびT95;
(iii) R10およびD35およびT90およびT95;
(iv) R10およびT90およびT95; ならびに
(v) R10およびA89およびT90およびT95;
好ましくは、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼはもう1つのさらなるアミノ酸位置におけるアミノ酸置換をさらに含み、もう1つのさらなるアミノ酸位置はSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置F53である。
第1の局面の第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、および第92の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第93の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、以下のSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置からなる群より選択されるSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を単に有する:
(i) R10およびA33およびD35およびI59およびT90;
(ii) R10およびA33およびF53およびT90およびT95;
(iii) R10およびD35およびF53およびT90およびT95;
(iv) R10およびF53およびT90およびT95; ならびに
(v) R10およびA89およびT90およびT95。
第1の局面のいずれか1つの他の態様の一態様でもある、第1の局面の好ましい一態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、以下のSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置からなる群より選択されるSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を単に有し:
(i) R10およびA33およびD35およびI59およびT90;
(ii) R10およびA33およびT90およびT95;
(iii) R10およびD35およびT90およびT95;
(iv) R10およびT90およびT95; ならびに
(v) R10およびA89およびT90およびT95、
好ましくは、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼはもう1つのさらなるアミノ酸位置におけるアミノ酸置換をさらに含み、もう1つのさらなるアミノ酸位置はSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置F53である。
第1の局面の第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、および第93の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第94の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、以下のSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置からなる群より選択されるSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含む:
(i) R10およびA33およびD35およびI59およびT90; ならびに
(ii) R10およびA89およびT90およびT95。
第1の局面の第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、および第94の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第95の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、以下のSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置からなる群より選択されるSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を単に有する:
- R10およびA33およびD35およびI59;
- R10およびA33およびD35およびT90;
- R10およびA33およびD35およびT95;
- R10およびA33およびF53およびT90;
- R10およびA33およびF53およびT95;
- R10およびA33およびI59およびT90;
- R10およびA33およびT90およびT95;
- R10およびD35およびF53およびT90;
- R10およびD35およびF53およびT95;
- R10およびD35およびI59およびT90;
- R10およびD35およびT90およびT95;
- R10およびF53およびT90およびT95;
- R10およびI59およびT90およびT95;
- R10およびA89およびT90およびT95;
- A33およびF53およびT90およびT95;
- A33およびA89およびT90およびT95;
- L34およびA89およびT90およびT95;
- D35およびF53およびT90およびT95;
- D35およびA89およびT90およびT95;
- F53およびA89およびT90およびT95;
- I59およびA89およびT90およびT95;
- R10およびA33およびD35およびF53およびT90;
- R10およびA33およびD35およびF53およびT95;
- R10およびA33およびD35およびI59およびT90;
- R10およびA33およびD35およびI59およびT95;
- R10およびA33およびD35およびT90およびT95;
- R10およびA33およびF53およびT90およびT95;
- R10およびA33およびI59およびT90およびT95;
- R10およびA33およびA89およびT90およびT95;
- R10およびL34およびA89およびT90およびT95;
- R10およびD35およびF53およびI59およびT90;
- R10およびD35およびF53およびI59およびT95;
- R10およびD35およびF53およびT90およびT95;
- R10およびD35およびI59およびT90およびT95;
- R10およびD35およびA89およびT90およびT95;
- R10およびF53およびI59およびT90およびT95;
- R10およびF53およびA89およびT90およびT95;
- R10およびI59およびA89およびT90およびT95;
- A33およびL34およびA89およびT90およびT95;
- A33およびD35およびF53およびT90およびT95;
- A33およびD35およびA89およびT90およびT95;
- A33およびF53およびA89およびT90およびT95;
- A33およびI59およびA89およびT90およびT95;
- L34およびD35およびA89およびT90およびT95;
- L34およびF53およびA89およびT90およびT95;
- L34およびI59およびA89およびT90およびT95;
- D35およびF53およびA89およびT90およびT95;
- D35およびI59およびA89およびT90およびT95;
- F53およびI59およびA89およびT90およびT95;
- R10およびA33およびD35およびF53およびI59およびT90;
- R10およびA33およびD35およびF53およびI59およびT95;
- R10およびA33およびD35およびF53およびT90およびT95;
- R10およびA33およびD35およびI59およびT90およびT95;
- R10およびA33およびD35およびA89およびT90およびT95;
- R10およびA33およびF53およびA89およびT90およびT95;
- R10およびA33およびI59およびA89およびT90およびT95;
- R10およびL34およびD35およびA89およびT90およびT95;
- R10およびL34およびF53およびA89およびT90およびT95;
- R10およびL34およびI59およびA89およびT90およびT95;
- R10およびD35およびF53およびI59およびT90およびT95;
- R10およびD35およびF53およびA89およびT90およびT95;
- R10およびD35およびI59およびA89およびT90およびT95;
- R10およびF53およびI59およびA89およびT90およびT95;
- A33およびL34およびD35およびA89およびT90およびT95;
- A33およびL34およびF53およびA89およびT90およびT95;
- A33およびL34およびI59およびA89およびT90およびT95;
- A33およびD35およびF53およびA89およびT90およびT95;
- A33およびD35およびI59およびA89およびT90およびT95;
- A33およびF53およびI59およびA89およびT90およびT95;
- L34およびD35およびF53およびA89およびT90およびT95;
- L34およびD35およびI59およびA89およびT90およびT95;
- L34およびF53およびI59およびA89およびT90およびT95;
- D35およびF53およびI59およびA89およびT90およびT95;
- R10およびA33およびD35およびF53およびI59およびT90およびT95;
- R10およびA33およびD35およびF53およびA89およびT90およびT95;
- R10およびA33およびD35およびI59およびA89およびT90およびT95;
- R10およびD35およびF53およびI59およびA89およびT90およびT95;
- A33およびL34およびD35およびF53およびA89およびT90およびT95;
- A33およびL34およびD35およびI59およびA89およびT90およびT95;
- A33およびL34およびF53およびI59およびA89およびT90およびT95;
- A33およびD35およびF53およびI59およびA89およびT90およびT95;
- L34およびD35およびF53およびI59およびA89およびT90およびT95;
- R10およびA33およびD35およびF53およびI59およびA89およびT90およびT95; ならびに
- A33およびL34およびD35およびF53およびI59およびA89およびT90およびT95。
第1の局面の好ましい一態様では、第1の局面のいずれか1つの他の態様の一態様でもある、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、以下のSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置からなる群より選択されるSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を単に有し:
- R10およびA33およびT90;
- R10およびA33およびT95;
- R10およびD35およびT90;
- R10およびD35およびT95;
- R10およびT90およびT95;
- A33およびT90およびT95;
- D35およびT90およびT95;
- A89およびT90およびT95;
- R10およびA33およびD35およびT90;
- R10およびA33およびD35およびT95;
- R10およびA33およびT90およびT95;
- R10およびD35およびI59およびT90;
- R10およびD35およびI59およびT95;
- R10およびD35およびT90およびT95;
- R10およびI59およびT90およびT95;
- R10およびA89およびT90およびT95;
- A33およびD35およびT90およびT95;
- A33およびA89およびT90およびT95;
- L34およびA89およびT90およびT95;
- D35およびA89およびT90およびT95;
- I59およびA89およびT90およびT95;
- R10およびA33およびD35およびI59およびT90;
- R10およびA33およびD35およびI59およびT95;
- R10およびA33およびD35およびT90およびT95;
- R10およびA33およびA89およびT90およびT95;
- R10およびL34およびA89およびT90およびT95;
- R10およびD35およびI59およびT90およびT95;
- R10およびD35およびA89およびT90およびT95;
- R10およびI59およびA89およびT90およびT95;
- A33およびL34およびA89およびT90およびT95;
- A33およびD35およびA89およびT90およびT95;
- A33およびI59およびA89およびT90およびT95;
L34およびD35およびA89およびT90およびT95;
- L34およびI59およびA89およびT90およびT95;
- D35およびI59およびA89およびT90およびT95;
- R10およびA33およびD35およびI59およびT90およびT95;
- R10およびA33およびD35およびA89およびT90およびT95;
- R10およびD35およびI59およびA89およびT90およびT95;
- A33およびL34およびD35およびA89およびT90およびT95;
- A33およびL34およびI59およびA89およびT90およびT95;
- A33およびD35およびI59およびA89およびT90およびT95;
- L34およびD35およびI59およびA89およびT90およびT95;
- R10およびA33およびD35およびI59およびA89およびT90およびT95;
- A33およびL34およびD35およびI59およびA89およびT90およびT95、
好ましくは、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼはもう1つのさらなるアミノ酸位置におけるアミノ酸置換をさらに含み、もう1つのさらなるアミノ酸位置はSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置F53である。
第1の局面の第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、および第95の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第96の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、または23のアミノ酸配列を含む。
第1の局面の第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、および第96の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第97の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、または23のアミノ酸配列からなる。
第1の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、および第97の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第98の態様では、いずれかのアミノ酸位置における置換は個々に独立してA、R、N、D、C、Q、E、G、H、I、L、K、M、F、P、S、T、W、Y、およびVからなるアミノ酸の群より選択される。
第1の局面の第98の態様の一態様でもある、第1の局面の第99の態様では、置換はSEQ ID NO: 1 アミノ酸位置10、33、34、35、53、59、89、90、および95のうちいずれかにおける置換である。
第1の局面の第99の態様の一態様でもある、第1の局面の第100の態様では、置換はSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、A33、L34、D35、F53、I59、A89、T90、およびT95のうちいずれかにおける置換である。
第1の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、第97、第98、第99の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つ、好ましくは第1の局面の第98、第99、および第100の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第101の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは複数の置換を含み、置換は以下からなる群より選択される:
R10HまたはR10K、好ましくはR10Kである、SEQ ID NO: 1のR10位におけるアミノ酸置換;
A33I、A33L、A33V、A33G、A33N、A33M、A33C、A33S、A33Q、またはA33T、好ましくはA33IまたはA33N、最も好ましくはA33Iである、SEQ ID NO: 1のA33位におけるアミノ酸置換;
L34F、L34W、L34Y、またはL34P、好ましくはL34Fである、SEQ ID NO: 1のL34位におけるアミノ酸置換;
D35G、D35N、D35M、D35C、D35S、D35Q、またはD35T、好ましくはD35CまたはD35S、より好ましくはD35Sである、SEQ ID NO: 1のD35位におけるアミノ酸置換;
F53A、F53I、F53L、またはF53V、好ましくはF53Lである、SEQ ID NO: 1のF53位におけるアミノ酸置換;
I59F、I59W、I59Y、またはI59P、好ましくはI59Fである、SEQ ID NO: 1のI59位におけるアミノ酸置換;
A89I、A89L、またはA89V、好ましくはA89Vである、SEQ ID NO: 1のA89位におけるアミノ酸置換;
T90G、T90N、T90M、T90C、T90S、またはT90Q、好ましくはT90Sである、SEQ ID NO: 1のT90位におけるアミノ酸置換;
T95F、T95W、T95Y、T95P、T95R、T95H、またはT95K、好ましくはT95YまたはT95R、より好ましくはT95Yである、SEQ ID NO: 1のT95位におけるアミノ酸置換。
第1の局面のいずれか1つの他の態様の好ましい一態様でもある、第1の局面の好ましい一態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは複数のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、1つまたは複数のアミノ酸位置はそれぞれ独立してSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A89V、A89I、A89L、T90S、T90G、T90N、T90M、T90C、T90Q、T95Y、T95F、T95W、T95P、T95R、T95H、T95K、R10K、R10H、A33N、A33I、L34F、L34W、L34Y、L34P、D35C、D35S、I59F、I59W、I59Y、およびI59Pからなる群より選択される。
第1の局面のいずれか1つの他の態様の好ましい一態様でもある、第1の局面の好ましい一態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは複数のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、1つまたは複数のアミノ酸位置はそれぞれ独立してSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A89V、T90S、T95Y、T95R、R10K、A33N、A33I、L34F、D35C、D35S、およびI59Fからなる群より選択される。
第1の局面のいずれか1つの他の態様の好ましい一態様でもある、第1の局面の好ましい一態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは複数のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、1つまたは複数のアミノ酸位置はそれぞれ独立してSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A89V、T90S、T95Y、R10K、A33N、およびA33Iからなる群より選択される。
第1の局面のいずれか1つの他の態様の好ましい一態様でもある、第1の局面の好ましい一態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、1つまたは複数のアミノ酸位置における置換に加えて、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置F53Lにおけるさらなるアミノ酸置換を含む。
第1の局面のいずれか1つの他の態様の好ましい一態様でもある、第1の局面の好ましい一態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つまたは複数のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、1つまたは複数のアミノ酸位置はそれぞれ独立してSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A89V、T90S、T95Y、R10K、A33N、およびA33Iからなる群より選択され、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置F53Lにおけるもう1つのアミノ酸置換をさらに含む。
第1の局面のいずれか1つの他の態様の好ましい一態様でもある、第1の局面の好ましい一態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は1つのアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、1つのアミノ酸位置は、独立してSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A89V、T90S、T95Y、R10K、A33N、およびA33Iからなる群より選択され、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置F53Lにおけるもう1つのアミノ酸置換をさらに含む。
いずれかの既に記載の態様の一態様でもある、第1の局面の好ましい一態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置59、好ましくはI59位における1つの置換を含み、置換アミノ酸はA、R、N、D、C、Q、E、G、H、I、L、K、M、F、P、S、T、W、およびYからなるアミノ酸の群より選択されるが、Vではなく、好ましくはI59Vではない。
いずれかの既に記載の態様の一態様でもある、第1の局面の好ましい一態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置95、好ましくはT95位における1つの置換を含み、置換アミノ酸はV、R、N、D、C、Q、E、G、H、I、L、K、M、F、P、S、T、W、およびYからなるアミノ酸の群より選択されるが、Aではなく、好ましくはT95Aではない。
いずれかの既に記載の態様の一態様でもある、第1の局面の好ましい一態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置53、好ましくはF53位における1つの置換を含み、置換アミノ酸はA、R、N、D、C、Q、E、G、H、I、K、M、F、P、S、T、W、V、およびYからなるアミノ酸の群より選択されるが、Lではなく、好ましくはF53Lではない。
いずれかの既に記載の態様の一態様でもある、第1の局面の好ましい一態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置53、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置F53における置換を含まず、置換は好ましくはF53Lではない。
いずれかの既に記載の態様の一態様でもある、第1の局面の好ましい一態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置16、17、19、63、219、または306における1つまたは複数の置換を含まず、好ましくはSEQ ID NO: 1位置W16、H17、F19、A63、G219、またはC306における1つまたは複数の置換を含まず、より好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置W16H、A63S、A103G、G219N、G219F、G219A、およびC306Aからなる群より選択される1つまたは複数の置換を含まない。
第1の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、第97、第98、第99、第100、および第101の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第102の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列とSEQ ID NO: 1のアミノ酸配列との同一性は少なくとも95.5%、より好ましくは少なくとも96%、または少なくとも96.5%、または少なくとも97%、または少なくとも97.5%、または少なくとも98%、または少なくとも98.5%、または少なくとも99%、最も好ましくは少なくとも99.1%、または少なくとも99.2%、または少なくとも99.3%、または少なくとも99.4%、または少なくとも99.5%、または少なくとも99.6%、または少なくとも99.7%、または少なくとも99.8%、特に少なくとも99.9%、または100%である。
第1の局面のいずれか1つの他の態様の好ましい一態様でもある、第1の局面の好ましい一態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 1のアミノ酸配列と少なくとも96%同一である。
第1の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、第97、第98、第99、第100、第101、および第102の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第103の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、または23のアミノ酸配列と少なくとも95%同一である。
第1の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、第97、第98、第99、第100、第101、第102の態様のうちいずれか、または他の態様のうちいずれかの一態様でもある、第1の局面の別の好ましい態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 2、4、7、8、9、10、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、または23のアミノ酸配列と少なくとも95%同一である。
第1の局面の第103の態様またはいずれか1つの他の態様の一態様でもある、第1の局面の第104の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、または23のアミノ酸配列と少なくとも95%同一である。
第1の局面の第104の態様の一態様でもある、第1の局面の第105の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は以下と95%同一である:
(i) SEQ ID NO: 14、15、17、18、もしくは19のアミノ酸配列; および/または
(ii) SEQ ID NO: 20もしくは21のアミノ酸配列。
第1の局面の第105の態様の一態様でもある、第1の局面の第106の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は以下と95%同一である:
(i) SEQ ID NO: 14、15、17、18、もしくは19のアミノ酸配列; および/または
(ii) SEQ ID NO: 21のアミノ酸配列。
第1の局面の第106の態様の一態様でもある、第1の局面の第107の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は以下と95%同一である:
(i) SEQ ID NO: 15、17、もしくは18のアミノ酸配列、好ましくはSEQ ID NO: 17のアミノ酸配列; および/または
(ii) SEQ ID NO: 21のアミノ酸配列。
第1の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、第97、第98、第99、第100、第101、第102、第103、第104、第105、第106、および第107の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第108の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、または23のアミノ酸配列のうち2つ以上と少なくとも95%同一である。
第1の局面の第108の態様の一態様でもある、第1の局面の第109の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、または23のアミノ酸配列のうち2つ以上と少なくとも95%同一である。
第1の局面の第109の態様の一態様でもある、第1の局面の第110の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は以下のうち2つ以上と95%同一である:
(i) SEQ ID NO: 14、15、17、18、もしくは19のアミノ酸配列; および/または
(ii) SEQ ID NO: 20もしくは21のアミノ酸配列。
第1の局面の第110の態様の一態様でもある、第1の局面の第111の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は以下のうち2つ以上と95%同一である:
(i) SEQ ID NO: 14、15、17、18、もしくは19のアミノ酸配列; および/または
(ii) SEQ ID NO: 21のアミノ酸配列。
第1の局面の第111の態様の一態様でもある、第1の局面の第112の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は以下と95%同一である:
(i) SEQ ID NO: 15、17、もしくは18のアミノ酸配列のうち2つ以上、好ましくはSEQ ID NO: 17のアミノ酸配列; および/または
(ii) SEQ ID NO: 21のアミノ酸配列。
第1の局面の第98、第99、第101、第102、および第103の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第113の態様では、アミノ酸配列の同一性は少なくとも95.5%、より好ましくは少なくとも96%、または少なくとも96.5%、または少なくとも97%、または少なくとも97.5%、または少なくとも98%、または少なくとも98.5%、または少なくとも99%、最も好ましくは少なくとも99.1%、または少なくとも99.2%、または少なくとも99.3%、または少なくとも99.4%、または少なくとも99.5%、または少なくとも99.6%、または少なくとも99.7%、または少なくとも99.8%、特に少なくとも99.9%、または100%である。
第1の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、第97、第98、第99、第100、第101、第102、第103、第104、第105、第106、第107、第108、第109、第110、第111、第112、および第113の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つ、好ましくは第1の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、第97、第98、第99、第100、第101、および第102の態様のうちいずれか1つ、より好ましくは第1の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、第97、第98、第99、および第100の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第114の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列とSEQ ID NO: 1のアミノ酸配列との相同性は少なくとも95.5%、より好ましくは少なくとも96%、または少なくとも96.5%、または少なくとも97%、または少なくとも97.5%、または少なくとも98%、または少なくとも98.5%、または少なくとも99%、最も好ましくは少なくとも99.1%、または少なくとも99.2%、または少なくとも99.3%、または少なくとも99.4%、または少なくとも99.5%、または少なくとも99.6%、または少なくとも99.7%、または少なくとも99.8%、特に少なくとも99.9%、または100%である。
第1の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、第97、第98、第99、第100、第101、第102、第103、第104、第105、第106、第107、第108、第109、第110、第111、第112、第113、および第114の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第115の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、または23のアミノ酸配列と少なくとも95%相同である。
第1の局面の第115の態様の一態様でもある、第1の局面の第116の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、または23のアミノ酸配列と少なくとも95%相同である。
第1の局面の第116の態様の一態様でもある、第1の局面の第117の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は以下と95%相同である:
(i) SEQ ID NO: 14、15、17、18、もしくは19のアミノ酸配列; および/または
(ii) SEQ ID NO: 20もしくは21のアミノ酸配列。
第1の局面の第117の態様の一態様でもある、第1の局面の第118の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は以下と95%相同である:
(i) SEQ ID NO: 14、15、17、18、もしくは19のアミノ酸配列; および/または
(ii) SEQ ID NO: 21のアミノ酸配列。
第1の局面の第118の態様の一態様でもある、第1の局面の第119の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は以下と95%相同である:
(i) SEQ ID NO: 15、17、もしくは18のアミノ酸配列、好ましくはSEQ ID NO: 17のアミノ酸配列; および/または
(ii) SEQ ID NO: 21のアミノ酸配列。
第1の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、第97、第98、第99、第100、第101、第102、第103、第104、第105、第106、第107、第108、第109、第110、第111、第112、第113、第114、第115、第116、第117、第118、および第119の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第120の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、または23の2つ以上のアミノ酸配列と少なくとも95%相同である。
第1の局面の第120の態様の一態様でもある、第1の局面の第121の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、または23の2つ以上のアミノ酸配列と少なくとも95%相同である。
第1の局面の第121の態様の一態様でもある、第1の局面の第122の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は以下と95%相同である:
(i) SEQ ID NO: 14、15、17、18、もしくは19の2つ以上のアミノ酸配列; および/または
(ii) SEQ ID NO: 20もしくは21の2つ以上のアミノ酸配列。
第1の局面の第122の態様の一態様でもある、第1の局面の第123の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は以下と95%相同である:
(i) SEQ ID NO: 14、15、17、18、もしくは19の2つ以上のアミノ酸配列; および/または
(ii) SEQ ID NO: 21のアミノ酸配列。
第1の局面の第123の態様の一態様でもある、第1の局面の第124の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は以下と95%相同である:
(i) SEQ ID NO: 15、17、もしくは18の2つ以上のアミノ酸配列、好ましくはSEQ ID NO: 17のアミノ酸配列; および/または
(ii) SEQ ID NO: 21のアミノ酸配列。
第1の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、第97、第98、第99、第100、第101、第102、第103、第104、第105、第106、第107、第108、第109、第110、第111、第112、第113、第114、第115、第116、第117、第118、第119、第120、第121、第122、第123、および第124の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第125の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、または23の2つ以上のアミノ酸配列と少なくとも95%同一である。
第1の局面の第125の態様の一態様でもある、第1の局面の第126の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、または23の2つ以上のアミノ酸配列と少なくとも95%同一である。
第1の局面の第126の態様の一態様でもある、第1の局面の第127の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は以下と95%同一である:
(i) SEQ ID NO: 14、15、17、18、もしくは19の2つ以上のアミノ酸配列; および/または
(ii) SEQ ID NO: 20および21のアミノ酸配列。
第1の局面の第127の態様の一態様でもある、第1の局面の第128の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は以下と95%同一である:
(i) SEQ ID NO: 14、15、17、18、もしくは19の2つ以上のアミノ酸配列; および/または
(ii) SEQ ID NO: 21のアミノ酸配列。
第1の局面の第128の態様の一態様でもある、第1の局面の第129の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は以下と95%同一である:
(i) SEQ ID NO: 15、17、もしくは18の2つ以上のアミノ酸配列、好ましくはSEQ ID NO: 17のアミノ酸配列; および/または
(ii) SEQ ID NO: 21のアミノ酸配列。
第1の局面の第114、第115、第116、第117、第118、第119、第120、第121、第122、第123、第124、第125、第126、第127、第128、および第129の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第130の態様では、アミノ酸配列の相同性または同一性は少なくとも95.5%、より好ましくは少なくとも96%、または少なくとも96.5%、または少なくとも97%、または少なくとも97.5%、または少なくとも98%、または少なくとも98.5%、または少なくとも99%、最も好ましくは少なくとも99.1%、または少なくとも99.2%、または少なくとも99.3%、または少なくとも99.4%、または少なくとも99.5%、または少なくとも99.6%、または少なくとも99.7%、または少なくとも99.8%、特に少なくとも99.9%、または100%である。
第1の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、第97、第98、第99、第100、第101、第102、第103、第104、第105、第106、第107、第108、第109、第110、第111、第112、第113、第114、第115、第116、第117、第118、第119、第120、第121、第122、第123、第124、第125、第126、第127、第128、第129、および第130の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第131の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼはSEQ ID NO: 2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、または23のアミノ酸配列を含む。
第1の局面の第131の態様の一態様でもある、第1の局面の第132の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼはSEQ ID NO: 13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、または23のアミノ酸配列を含む。
第1の局面の第132の態様の一態様でもある、第1の局面の第133の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは以下を含む:
(i) SEQ ID NO: 14、15、17、18、もしくは19のアミノ酸配列; および/または
(ii) SEQ ID NO: 20もしくは21のアミノ酸配列。
第1の局面の第133の態様の一態様でもある、第1の局面の第134の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは以下を含む:
(i) SEQ ID NO: 14、15、17、18、もしくは19のアミノ酸配列; および/または
(ii) SEQ ID NO: 21のアミノ酸配列。
第1の局面の第134の態様の一態様でもある、第1の局面の第135の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは以下を含む:
(i) SEQ ID NO: 15、17、もしくは18のアミノ酸配列、好ましくはSEQ ID NO: 17のアミノ酸配列; および/または
(ii) SEQ ID NO: 21のアミノ酸配列。
第1の局面の第130、第131、第132、第133、第134、および第135の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第136の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼはSEQ ID NO: 2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、または23のアミノ酸配列からなる。
第1の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、第97、第98、第99、第100、第101、第102、第103、第104、第105、第106、第107、第108、第109、第110、第111、第112、第113、第114、第115、第116、第117、第118、第119、第120、第121、第122、第123、第124、第125、第126、第127、第128、第129、第130、第131、第132、第133、第134、第135、および第136の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第137の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは以下を触媒可能である:
(i) アルドース分子からケトース分子への変換、および/または
(ii) ケトース分子からアルドース分子への変換。
第1の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、第97、第98、第99、第100、第101、第102、第103、第104、第105、第106、第107、第108、第109、第110、第111、第112、第113、第114、第115、第116、第117、第118、第119、第120、第121、第122、第123、第124、第125、第126、第127、第128、第129、第130、第131、第132、第133、第134、第135、第136、および第137の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第138の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは以下を触媒可能である:
(i) アルドテトロース分子からケトテトロース分子への変換、および/または
(ii) ケトテトロース分子からアルドテトロース分子への変換、および/または
(ii) アルドペントース分子からケトペントース分子への変換、および/または
(iv) ケトペントース分子からアルドペントース分子への変換、および/または
(v) アルドヘキソース分子からケトヘキソース分子への変換、および/または
(vi) ケトヘキソース分子からアルドヘキソース分子への変換、および/または
(vii) アルドヘプトース分子からケトヘプトース分子への変換、および/または
(viii) ケトヘプトース分子からアルドヘプトース分子への変換。
第1の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、第97、第98、第99、第100、第101、第102、第103、第104、第105、第106、第107、第108、第109、第110、第111、第112、第113、第114、第115、第116、第117、第118、第119、第120、第121、第122、第123、第124、第125、第126、第127、第128、第129、第130、第131、第132、第133、第134、第135、第136、第137、および第138の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれかの一態様でもある、第1の局面の第139の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは以下を触媒可能である:
(i) アルドペントース分子からケトペントース分子への変換、および/または
(ii) ケトペントース分子からアルドペントース分子への変換、および/または
(iii) アルドヘキソース分子からケトヘキソース分子への変換、および/または
(iv) ケトヘキソース分子からアルドヘキソース分子への変換。
第1の局面の第137、第138、および第139の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第140の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは以下を触媒可能である:
(i) D-グルコース、D-キシロース、D-アラビノース、L-アラビノース、L-リボース、D-リボース、D-リキソース、D-アロース、L-ラムノース、およびD-マンノースからなる群より選択されるアルドース分子の変換; ならびに/または
(ii) D-フルクトース、D-キシルロース、D-リブロース、L-リブロース、D-プシコース、およびL-ラムヌロースからなる群より選択されるケトース分子の変換。
第1の局面の第137、第138、第139、および第140の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第141の態様では、
(i) アルドース分子は、デオキシ炭水化物、チオ炭水化物、アジド炭水化物、メチル化炭水化物、ハロゲン化炭水化物、および/またはベンジル化炭水化物からなる群より選択されるアルドース分子誘導体であり、
(ii) ケトース分子は、デオキシ炭水化物、チオ炭水化物、アジド炭水化物、メチル化炭水化物、ハロゲン化炭水化物、および/またはベンジル化炭水化物からなる群より選択されるケトース分子誘導体である。
第1の局面の第137、第138、第139、第140、および第141の態様のうちいずれか1つ、または第1の局面のいずれか1つの他の態様の一態様でもある、第1の局面の第142の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは以下を触媒可能である:
(i) フルクトースからグルコースへの変換、および/または
(ii) グルコースからフルクトースへの変換。
第1の局面の第137、第138、第139、第140、第141、および第142の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第143の態様では、変換は可逆的変換である。
第1の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、第97、第98、第99、第100、第101、第102、第103、第104、第105、第106、第107、第108、第109、第110、第111、第112、第113、第114、第115、第116、第117、第118、第119、第120、第121、第122、第123、第124、第125、第126、第127、第128、第129、第130、第131、第132、第133、第134、第135、第136、第137、第138、第139、第140、第141、第142、および第143の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第1の局面の第144の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼはEC番号EC 5.3.1.5のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼである。
本発明の基礎にある問題は、第2の局面の第1の態様でもある、第2の局面において、その任意の態様を含む、第1の局面のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼであって、(A)、(B)、(C)、(D)、(E)、および(F)からなる群より選択される少なくとも1つの特性、またはその任意の組み合わせを有する、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼにより解決され、
特性(A)は、フルクトース濃度50mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関して、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの活性、好ましくは活性値が、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対して以下の倍率で増加していることであり:
(i) 少なくとも1.1倍～最大1.6倍、好ましくは少なくとも1.2倍～最大1.6倍、より好ましくは少なくとも1.3倍～最大1.6倍、最も好ましくは少なくとも1.4倍～最大1.6倍、または
(ii) 少なくとも1.1倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.4倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.5倍～最大3.0倍、より好ましくは少なくとも1.6倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.7倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.8倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.9倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも2.0倍～最大3.0倍、より好ましくは少なくとも1.4倍～最大2.8倍、より好ましくは少なくとも1.5倍～最大2.8倍、より好ましくは少なくとも1.6倍～最大2.8倍、より好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.8倍、より好ましくは少なくとも1.8倍～最大2.8倍、より好ましくは少なくとも1.9倍～最大2.8倍、より好ましくは少なくとも2.0倍～最大2.8倍、さらに好ましくは少なくとも1.4倍～最大2.6倍、さらに好ましくは少なくとも1.5倍～最大2.6倍、より好ましくは少なくとも1.6倍～最大2.6倍、より好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.6倍、より好ましくは少なくとも1.8倍～最大2.6倍、より好ましくは少なくとも1.9倍～最大2.6倍、より好ましくは少なくとも2.0倍～最大2.6倍、最も好ましくは少なくとも1.4倍～最大2.4倍、最も好ましくは少なくとも1.5倍～最大2.4倍、最も好ましくは少なくとも1.6倍～最大2.4倍、最も好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.4倍、最も好ましくは少なくとも1.8倍～最大2.4倍、最も好ましくは少なくとも1.9倍～最大2.4倍、最も好ましくは少なくとも2.0倍～最大2.4倍、最高に好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.4倍;
特性(B)は、フルクトース濃度200mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関して、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの活性、好ましくは活性値が、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対して以下の倍率で増加していることであり:
(i) 少なくとも1.2倍～最大1.6倍、より好ましくは少なくとも1.3倍～最大1.6倍、最も好ましくは少なくとも1.4倍～最大1.6倍、および/または
(ii) 少なくとも1.2倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.3倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.4倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.5倍～最大3.0倍、より好ましくは少なくとも1.6倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.7倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.8倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.9倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも2.0倍～最大3.0倍、より好ましくは少なくとも1.3倍～最大2.5倍、より好ましくは少なくとも1.4倍～最大2.5倍、より好ましくは少なくとも1.5倍～最大2.5倍、より好ましくは少なくとも1.6倍～最大2.5倍、より好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.5倍、より好ましくは少なくとも1.8倍～最大2.5倍、より好ましくは少なくとも1.9倍～最大2.5倍、より好ましくは少なくとも2.0倍～最大2.5倍、さらに好ましくは少なくとも1.3倍～最大2.2倍、さらに好ましくは少なくとも1.4倍～最大2.2倍、さらに好ましくは少なくとも1.5倍～最大2.2倍、より好ましくは少なくとも1.6倍～最大2.2倍、より好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.2倍、より好ましくは少なくとも1.8倍～最大2.2倍、より好ましくは少なくとも1.9倍～最大2.2倍、より好ましくは少なくとも2.0倍～最大2.2倍、最も好ましくは少なくとも1.5倍～最大2.2倍;
特性(C)は、温度74℃で15分間のインキュベーション後に、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼが、以下の%である残留活性値として表される熱安定性を有することであり:
(i) 少なくとも30%～最大100%、少なくとも40%～最大100%、少なくとも50%～最大100%、少なくとも30%～最大75%、少なくとも40%～最大75%、少なくとも50%～最大75%、少なくとも30%～最大65%、少なくとも40%～最大65%、少なくとも50%～最大65%、少なくとも41%～最大64%、および/または
(ii) 少なくとも30%～最大100%、少なくとも31%～最大100%、少なくとも32%～最大100%、少なくとも33%～最大100%、少なくとも34%～最大100%、少なくとも35%～最大100%、少なくとも36%～最大100%、少なくとも37%～最大100%、少なくとも38%～最大100%、少なくとも39%～最大100%、少なくとも40%～最大100%、少なくとも41%～最大100%、少なくとも42%～最大100%、少なくとも43%～最大100%、少なくとも44%～最大100%、少なくとも45%～最大100%、少なくとも46%～最大100%、少なくとも47%～最大100%、少なくとも48%～最大100%、少なくとも49%～最大100%、少なくとも50%～最大100%、少なくとも51%～最大100%、少なくとも52%～最大100%、少なくとも53%～最大100%、少なくとも54%～最大100%、少なくとも55%～最大100%、少なくとも56%～最大100%、少なくとも57%～最大100%、少なくとも58%～最大100%、少なくとも59%～最大100%、少なくとも60%～最大100%、少なくとも61%～最大100%、少なくとも62%～最大100%、少なくとも63%～最大100%、少なくとも64%～最大100%、少なくとも65%～最大100%、少なくとも66%～最大100%、少なくとも67%～最大100%、少なくとも68%～最大100%、少なくとも69%～最大100%、少なくとも70%～最大100%、少なくとも71%～最大100%、少なくとも72%～最大100%、少なくとも73%～最大100%、少なくとも74%～最大100%、少なくとも75%～最大100%、少なくとも76%～最大100%、少なくとも77%～最大100%、少なくとも78%～最大100%、少なくとも79%～最大100%、少なくとも80%～最大100%、少なくとも30%～最大75%、少なくとも31%～最大75%、少なくとも32%～最大75%、少なくとも33%～最大75%、少なくとも34%～最大75%、少なくとも35%～最大75%、少なくとも36%～最大75%、少なくとも37%～最大75%、少なくとも38%～最大75%、少なくとも39%～最大75%、少なくとも40%～最大75%、少なくとも41%～最大75%、少なくとも42%～最大75%、少なくとも43%～最大75%、少なくとも44%～最大75%、少なくとも45%～最大75%、少なくとも46%～最大75%、少なくとも47%～最大75%、少なくとも48%～最大75%、少なくとも49%～最大75%、少なくとも50%～最大75%、少なくとも51%～最大75%、少なくとも52%～最大75%、少なくとも53%～最大75%、少なくとも54%～最大75%、少なくとも55%～最大75%、少なくとも56%～最大75%、少なくとも57%～最大75%、少なくとも58%～最大75%、少なくとも59%～最大75%、少なくとも60%～最大75%、少なくとも61%～最大75%、少なくとも62%～最大75%、少なくとも30%～最大70%、少なくとも31%～最大70%、少なくとも32%～最大70%、少なくとも33%～最大70%、少なくとも34%～最大70%、少なくとも35%～最大70%、少なくとも36%～最大70%、少なくとも37%～最大70%、少なくとも38%～最大70%、少なくとも39%～最大70%、少なくとも40%～最大70%、少なくとも41%～最大70%、少なくとも42%～最大70%、少なくとも43%～最大70%、少なくとも44%～最大70%、少なくとも45%～最大70%、少なくとも46%～最大70%、少なくとも47%～最大70%、少なくとも48%～最大70%、少なくとも49%～最大70%、少なくとも50%～最大70%、少なくとも51%～最大70%、少なくとも52%～最大70%、少なくとも53%～最大70%、少なくとも54%～最大70%、少なくとも55%～最大70%、少なくとも56%～最大70%、少なくとも57%～最大70%、少なくとも58%～最大70%、少なくとも59%～最大70%、少なくとも60%～最大70%、少なくとも61%～最大70%、少なくとも62%～最大70%、少なくとも30%～最大65%、少なくとも31%～最大65%、少なくとも32%～最大65%、少なくとも33%～最大65%、少なくとも34%～最大65%、少なくとも35%～最大65%、少なくとも36%～最大65%、少なくとも37%～最大65%、少なくとも38%～最大65%、少なくとも39%～最大65%、少なくとも40%～最大65%、少なくとも41%～最大65%、少なくとも42%～最大65%、少なくとも43%～最大65%、少なくとも44%～最大65%、少なくとも45%～最大65%、少なくとも46%～最大65%、少なくとも47%～最大65%、少なくとも48%～最大65%、少なくとも49%～最大65%、少なくとも50%～最大65%、少なくとも51%～最大65%、少なくとも52%～最大65%、少なくとも53%～最大65%、少なくとも54%～最大65%、少なくとも55%～最大65%、少なくとも56%～最大65%、少なくとも57%～最大65%、少なくとも58%～最大65%、少なくとも59%～最大65%、少なくとも60%～最大65%、少なくとも61%～最大65%、少なくとも62%～最大65%、より好ましくは少なくとも30%～最大65%、少なくとも34%～最大65%、少なくとも35%～最大65%、少なくとも38%～最大65%、少なくとも40%～最大65%、少なくとも41%～最大65%、少なくとも42%～最大65%、少なくとも46%～最大65%、少なくとも47%～最大65%、少なくとも50%～最大65%、少なくとも55%～最大65%、少なくとも59%～最大65%、少なくとも60%～最大65%、少なくとも62%～最大65%、さらに好ましくは少なくとも40%～最大65%、さらに好ましくは少なくとも60%～最大65%、最も好ましくは62%;
特性(D)は、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼが以下のKM値を有することであり:
(i) 100mM～190mM、好ましくは130mM～190mM、好ましくは160mM～190mM、より好ましくは170mM～185mM、最も好ましくは175mM～180mM; ならびに/または
(ii) 50mM～190mM、50mM～189mM、50mM～188mM、50mM～187mM、50mM～186mM、50mM～185mM、好ましくは50mM～184mM、好ましくは50mM～183mM、好ましくは50mM～182mM、好ましくは50mM～181mM、好ましくは50mM～180mM、好ましくは50mM～179mM、好ましくは50mM～178mM、好ましくは50mM～177mM、好ましくは50mM～176mM、好ましくは50mM～175mM、好ましくは50mM～174mM、好ましくは50mM～173mM、好ましくは50mM～172mM、好ましくは50mM～171mM、好ましくは50mM～170mM、好ましくは50mM～169mM、好ましくは50mM～168mM、好ましくは50mM～167mM、好ましくは50mM～166mM、好ましくは50mM～165mM、好ましくは50mM～160mM、好ましくは50mM～159mM、好ましくは50mM～158mM、好ましくは50mM～157mM、好ましくは50mM～156mM、好ましくは50mM～155mM、好ましくは50mM～154mM、好ましくは50mM～153mM、好ましくは50mM～152mM、75mM～190mM、75mM～189mM、75mM～188mM、75mM～187mM、75mM～186mM、75mM～185mM、好ましくは75mM～184mM、好ましくは75mM～183mM、好ましくは75mM～182mM、好ましくは75mM～181mM、好ましくは75mM～180mM、好ましくは75mM～179mM、好ましくは75mM～178mM、好ましくは75mM～177mM、好ましくは75mM～176mM、好ましくは75mM～175mM、好ましくは75mM～174mM、好ましくは75mM～173mM、好ましくは75mM～172mM、好ましくは75mM～171mM、好ましくは75mM～170mM、好ましくは75mM～169mM、好ましくは75mM～168mM、好ましくは75mM～167mM、好ましくは75mM～166mM、好ましくは75mM～165mM、好ましくは75mM～160mM、好ましくは75mM～159mM、好ましくは75mM～158mM、好ましくは75mM～157mM、好ましくは75mM～156mM、好ましくは75mM～155mM、好ましくは75mM～154mM、好ましくは75mM～153mM、好ましくは75mM～152mM、100mM～190mM、100mM～189mM、100mM～188mM、100mM～187mM、100mM～186mM、100mM～185mM、好ましくは100mM～184mM、好ましくは100mM～183mM、好ましくは100mM～182mM、好ましくは100mM～181mM、好ましくは100mM～180mM、好ましくは100mM～179mM、好ましくは100mM～178mM、好ましくは100mM～177mM、好ましくは100mM～176mM、好ましくは100mM～1100mM、好ましくは100mM～174mM、好ましくは100mM～173mM、好ましくは100mM～172mM、好ましくは100mM～171mM、好ましくは100mM～170mM、好ましくは100mM～169mM、好ましくは100mM～168mM、好ましくは100mM～167mM、好ましくは100mM～166mM、好ましくは100mM～165mM、好ましくは100mM～160mM、好ましくは100mM～159mM、好ましくは100mM～158mM、好ましくは100mM～157mM、好ましくは100mM～156mM、好ましくは100mM～155mM、好ましくは100mM～154mM、好ましくは100mM～153mM、好ましくは100mM～152mM、115mM～190mM、115mM～189mM、115mM～188mM、115mM～187mM、115mM～186mM、115mM～185mM、好ましくは115mM～184mM、好ましくは115mM～183mM、好ましくは115mM～182mM、好ましくは115mM～181mM、好ましくは115mM～180mM、好ましくは115mM～179mM、好ましくは115mM～178mM、好ましくは115mM～177mM、好ましくは115mM～176mM、好ましくは115mM～175mM、好ましくは115mM～174mM、好ましくは115mM～173mM、好ましくは115mM～172mM、好ましくは115mM～171mM、好ましくは115mM～170mM、好ましくは115mM～169mM、好ましくは115mM～168mM、好ましくは115mM～167mM、好ましくは115mM～166mM、好ましくは115mM～165mM、好ましくは115mM～160mM、好ましくは115mM～159mM、好ましくは115mM～158mM、好ましくは115mM～157mM、好ましくは115mM～156mM、好ましくは115mM～155mM、好ましくは115mM～154mM、好ましくは115mM～153mM、好ましくは115mM～152mM、130mM～185mM、好ましくは130mM～184mM、好ましくは130mM～183mM、好ましくは130mM～182mM、好ましくは130mM～181mM、好ましくは130mM～180mM、好ましくは130mM～179mM、好ましくは130mM～178mM、好ましくは130mM～177mM、好ましくは130mM～176mM、好ましくは130mM～175mM、好ましくは130mM～174mM、好ましくは130mM～173mM、好ましくは130mM～172mM、好ましくは130mM～171mM、好ましくは130mM～170mM、好ましくは130mM～169mM、好ましくは130mM～168mM、好ましくは130mM～167mM、好ましくは130mM～166mM、好ましくは130mM～165mM、好ましくは130mM～160mM、好ましくは130mM～159mM、好ましくは130mM～158mM、好ましくは130mM～157mM、好ましくは130mM～156mM、好ましくは130mM～155mM、好ましくは130mM～154mM、好ましくは130mM～153mM、好ましくは130mM～152mM、より好ましくは135mM～185mM、より好ましくは135mM～184mM、より好ましくは135mM～183mM、より好ましくは135mM～182mM、より好ましくは135mM～181mM、より好ましくは135mM～180mM、より好ましくは135mM～179mM、より好ましくは135mM～178mM、より好ましくは135mM～177mM、より好ましくは135mM～176mM、より好ましくは135mM～175mM、より好ましくは135mM～174mM、より好ましくは135mM～173mM、より好ましくは135mM～172mM、より好ましくは135mM～171mM、より好ましくは135mM～170mM、より好ましくは135mM～169mM、より好ましくは135mM～168mM、より好ましくは135mM～167mM、より好ましくは135mM～166mM、より好ましくは135mM～165mM、より好ましくは135mM～160mM、より好ましくは135mM～159mM、より好ましくは135mM～158mM、より好ましくは135mM～157mM、より好ましくは135mM～156mM、より好ましくは135mM～155mM、より好ましくは135mM～154mM、より好ましくは135mM～153mM、より好ましくは135mM～152mM、最も好ましくは140mM～185mM、最も好ましくは140mM～184mM、最も好ましくは140mM～183mM、最も好ましくは140mM～182mM、最も好ましくは140mM～181mM、最も好ましくは140mM～180mM、最も好ましくは140mM～179mM、最も好ましくは140mM～178mM、最も好ましくは140mM～177mM、最も好ましくは140mM～176mM、最も好ましくは140mM～175mM、最も好ましくは140mM～174mM、最も好ましくは140mM～173mM、最も好ましくは140mM～172mM、最も好ましくは140mM～171mM、最も好ましくは140mM～170mM、最も好ましくは140mM～169mM、最も好ましくは140mM～168mM、最も好ましくは140mM～167mM、最も好ましくは140mM～166mM、最も好ましくは140mM～165mM、最も好ましくは140mM～160mM、最も好ましくは140mM～159mM、最も好ましくは140mM～158mM、最も好ましくは140mM～157mM、最も好ましくは140mM～156mM、最も好ましくは140mM～155mM、最も好ましくは140mM～154mM、最も好ましくは140mM～153mM、最高に好ましくは140mM～152mM; ならびに/または
(iii) 190mM未満、189mM未満、188mM未満、187mM未満、186mM未満、185mM未満、184mM未満、183mM未満、182mM未満、181mM未満、180mM未満、179mM未満、178mM未満、177mM未満、176mM未満、175mM未満、174mM未満、173mM未満、172mM未満、171mM未満、170mM未満、169mM未満、168mM未満、167mM未満、166mM未満、165mM未満、160mM未満、159mM未満、158mM未満、157mM未満、156mM未満、155mM未満、154mM未満、153mM未満、152mM未満、好ましくは185mM未満、より好ましくは170mM未満、さらに好ましくは160mM未満、最も好ましくは155mM未満、最高に好ましくは152mMおよび152mM未満;
特性(E)は、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼが、該ポリペプチドの可溶性発現レベルと、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの可溶性発現レベルとの比として定義される可溶性発現レベルが以下であることであり:
(i) 少なくとも1.04～最大1.38、好ましくは少なくとも1.07～最大1.38、好ましくは少なくとも1.10～最大1.38、好ましくは少なくとも1.31～最大1.38、好ましくは少なくとも1.33～最大1.38、好ましくは少なくとも1.36～最大1.38、より好ましくは少なくとも1.04～最大1.36、より好ましくは少なくとも1.07～最大1.36、より好ましくは少なくとも1.10～最大1.36、より好ましくは少なくとも1.31～最大1.36、より好ましくは少なくとも1.33～最大1.36、最も好ましくは1.36; ならびに/または
(ii) 少なくとも1.04～最大1.80、好ましくは少なくとも1.07～最大1.80、好ましくは少なくとも1.10～最大1.80、好ましくは少なくとも1.31～最大1.80、好ましくは少なくとも1.33～最大1.80、好ましくは少なくとも1.36～最大1.80、好ましくは少なくとも1.38～最大1.80、好ましくは少なくとも1.43～最大1.80、より好ましくは少なくとも1.04～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.07～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.10～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.31～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.33～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.36～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.38～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.43～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.47～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.62～最大1.75、さらに好ましくは少なくとも1.04～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.07～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.10～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.31～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.33～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.36～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.38～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.43～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.47～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.62～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.04～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.07～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.10～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.31～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.33～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.36～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.38～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.43～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.47～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.62～最大1.65、最高に好ましくは少なくとも1.10～1.63、少なくとも1.38～1.63、少なくとも1.43～1.63、および/もしくは1.63;
特性(F)は、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼが、グルコース形成量として表されるフルクトースをグルコースに変換する際の触媒活性を、SEQ ID NO: 1に対して以下の倍率で増加することである:
少なくとも1.2倍～最大5倍、少なくとも1.2倍～最大4.5倍、少なくとも1.2倍～最大4倍、少なくとも1.2倍～最大3.5倍、少なくとも1.2倍～最大3.4倍、少なくとも1.2倍～最大3.3倍、少なくとも1.2倍～最大3.2倍、少なくとも1.2倍～最大3.1倍、少なくとも1.2倍～最大3倍、少なくとも1.2倍～最大2.9倍、少なくとも1.2倍～最大2.8倍、少なくとも1.2倍～最大2.7倍、少なくとも1.2倍～最大2.6倍、少なくとも1.2倍～最大2.5倍、少なくとも1.2倍～最大2.4倍、少なくとも1.2倍～最大2.3倍、少なくとも1.2倍～最大2.2倍、好ましくは少なくとも1.5倍～最大5倍、少なくとも1.5倍～最大4.5倍、少なくとも1.5倍～最大4倍、少なくとも1.5倍～最大3.5倍、少なくとも1.5倍～最大3.4倍、少なくとも1.5倍～最大3.3倍、少なくとも1.5倍～最大3.2倍、少なくとも1.5倍～最大3.1倍、少なくとも1.5倍～最大3倍、少なくとも1.5倍～最大2.9倍、少なくとも1.5倍～最大2.8倍、少なくとも1.5倍～最大2.7倍、少なくとも1.5倍～最大2.6倍、少なくとも1.5倍～最大2.5倍、少なくとも1.5倍～最大2.4倍、少なくとも1.5倍～最大2.3倍、少なくとも1.5倍～最大2.2倍、より好ましくは少なくとも1.9倍～最大5倍、少なくとも1.9倍～最大4.5倍、少なくとも1.9倍～最大4倍、少なくとも1.9倍～最大3.5倍、少なくとも1.9倍～最大3.4倍、少なくとも1.9倍～最大3.3倍、少なくとも1.9倍～最大3.2倍、少なくとも1.9倍～最大3.1倍、少なくとも1.9倍～最大3倍、少なくとも1.9倍～最大2.9倍、少なくとも1.9倍～最大2.8倍、少なくとも1.9倍～最大2.7倍、少なくとも1.9倍～最大2.6倍、少なくとも1.9倍～最大2.5倍、少なくとも1.9倍～最大2.4倍、少なくとも1.9倍～最大2.3倍、少なくとも1.9倍～最大2.2倍、さらに好ましくは少なくとも2.0倍～最大5倍、少なくとも2.0倍～最大4.5倍、少なくとも2.0倍～最大4倍、少なくとも2.0倍～最大3.5倍、少なくとも2.0倍～最大3.4倍、少なくとも2.0倍～最大3.3倍、少なくとも2.0倍～最大3.2倍、少なくとも2.0倍～最大3.1倍、少なくとも2.0倍～最大3倍、少なくとも2.0倍～最大2.9倍、少なくとも2.0倍～最大2.8倍、少なくとも2.0倍～最大2.7倍、少なくとも2.0倍～最大2.6倍、少なくとも2.0倍～最大2.5倍、少なくとも2.0倍～最大2.4倍、少なくとも2.0倍～最大2.3倍、少なくとも2.0倍～最大2.2倍、最も好ましくは少なくとも2.2倍～最大3.3倍。
第1の局面のいずれか1つの態様の好ましい一態様でもある、第2の局面の好ましい一態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは(A)、(C)、(E)、(D)、(B)、および(F)からなる群より選択される少なくとも1つの特性を有し、
- 特性(A)について、フルクトース濃度50mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの活性の、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対する増加は、フルクトース50mMでのグルコースイソメラーゼ活性に関する酵素アッセイによって検出され; かつ/または
- 特性(B)について、フルクトース濃度200mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの活性の、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対する増加は、フルクトース200mMでのグルコースイソメラーゼ活性に関する酵素アッセイによって検出され; かつ/または
- 特性(C)について、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対する、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのインキュベーション後の残留活性値は、フルクトース50mMでのグルコースイソメラーゼ活性に関する酵素アッセイによって温度74℃で15分間測定され; かつ/または
- 特性(E)について、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対する、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのグルコースイソメラーゼ可溶性発現レベルは、いずれかのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの無細胞抽出液の変性ポリアクリルアミドゲル電気泳動(SDS-PAGE)によって決定され、未処理細菌培養物体積1単位当たりのバンド強度として定量化され; かつ/または
- 特性(F)について、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのグルコース形成量の、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対する増加は、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼと濃度50mMのフルクトースとを40℃で40分間反応させた後に生成されるグルコースの量の増加として検出される。
第1の局面のいずれか1つの態様の一態様でもある、第2の局面の好ましい一態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは(A)、(C)、(E)、(D)、(B)、および(F)からなる群より選択される少なくとも1つの特性を有し、
- 特性(A)について、フルクトース濃度50mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの活性の、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対する増加は、1.4倍～最大3.0倍であり; かつ/または
- 特性(B)について、フルクトース濃度200mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの活性の、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対する増加は、1.3倍～最大3.0倍であり; かつ/または
- 特性(C)について、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのKM値は140mM～160mMであり; かつ/または
- 特性(F)について、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのグルコース形成量の、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対する増加は、2.2倍～最大3.3倍である。
第1の局面のいずれか1つの態様の好ましい一態様でもある、第2の局面の好ましい一態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは特性(A)および(D)を有し、(A)において、フルクトース濃度50mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの活性の、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対する増加は、1.2倍～最大3.0倍であり、(D)において、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのKM値は190mM未満である。
第1の局面のいずれか1つの態様の好ましい一態様でもある、第2の局面の好ましい一態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは特性(A)、(C)、および(E)を有し、(A)において、フルクトース濃度50mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの活性の、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対する増加は、1.2倍～最大3.0倍であり、(C)において、温度74℃で15分間のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのインキュベーション後の残留活性値として表される、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの熱安定性は、少なくとも30%～最大64%であり、(E)において、該ポリペプチドの可溶性発現レベルとSEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの可溶性発現レベルとの比として定義される、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの可溶性発現レベル増加は、少なくとも1.04～最大1.80である。
第1の局面のいずれか1つの態様の一態様でもある、第2の局面の好ましい一態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 1のアミノ酸配列と少なくとも95%同一であり、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは(A)、(C)、(E)、(D)、(B)、および(F)、好ましくは(A)、(C)、(D)、および(E)からなる群より選択される少なくとも1つの特性、またはその任意の組み合わせ、より好ましくは特性(A)、(C)、および(E)の組み合わせ、または(A)および(D)の組み合わせを有し、
特性(A)は、フルクトース濃度50mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する活性が、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対して、少なくとも1.1倍～最大3.0倍増加していることであり;
特性(B)は、フルクトース濃度200mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する活性が、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対して、少なくとも1.2倍～最大3.0倍増加していることであり;
特性(C)は、温度74℃で15分間のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのインキュベーション後の残留活性値として表される、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの熱安定性が、少なくとも30%～最大100%であることであり;
特性(D)は、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのKM値が190mM未満であることであり;
特性(E)は、該ポリペプチドの可溶性発現レベルとSEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの可溶性発現レベルとの比として定義される、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの可溶性発現レベルが、少なくとも1.04～最大1.80であることであり;
特性(F)は、グルコース形成量が、好ましくは少なくとも1.2倍～最大5倍、または少なくとも1.5倍～最大5倍、または少なくとも1.9倍～最大5倍、または1.9倍～最大3.5倍、または2.2倍～最大3.3倍増加していることである。
第2の局面の第1の態様または第1の局面のいずれか1つの態様の一態様でもある、第2の局面の第2の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、フルクトース濃度50mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する活性、好ましくは活性値が、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対して以下の倍率で増加している:
少なくとも1.1倍～最大1.6倍、好ましくは少なくとも1.2倍～最大1.6倍、より好ましくは少なくとも1.3倍～最大1.6倍、最も好ましくは少なくとも1.4倍～最大1.6倍、または
少なくとも1.1倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.4倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.5倍～最大3.0倍、より好ましくは少なくとも1.6倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.7倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.8倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.9倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも2.0倍～最大3.0倍、より好ましくは少なくとも1.4倍～最大2.8倍、より好ましくは少なくとも1.5倍～最大2.8倍、より好ましくは少なくとも1.6倍～最大2.8倍、より好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.8倍、より好ましくは少なくとも1.8倍～最大2.8倍、より好ましくは少なくとも1.9倍～最大2.8倍、より好ましくは少なくとも2.0倍～最大2.8倍、さらに好ましくは少なくとも1.4倍～最大2.6倍、さらに好ましくは少なくとも1.5倍～最大2.6倍、さらに好ましくは少なくとも1.6倍～最大2.6倍、より好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.6倍、より好ましくは少なくとも1.8倍～最大2.6倍、より好ましくは少なくとも1.9倍～最大2.6倍、より好ましくは少なくとも2.0倍～最大2.6倍、最も好ましくは少なくとも1.4倍～最大2.4倍、最も好ましくは少なくとも1.5倍～最大2.4倍、最も好ましくは少なくとも1.6倍～最大2.4倍、最も好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.4倍、最も好ましくは少なくとも1.8倍～最大2.4倍、最も好ましくは少なくとも1.9倍～最大2.4倍、最も好ましくは少なくとも2.0倍～最大2.4倍、最高に好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.4倍。
第2の局面の第1および第2の態様のうちいずれか1つ、または第1の局面のいずれか1つの態様の一態様でもある、第2の局面の第3の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、フルクトース濃度200mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する活性、好ましくは活性値が、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対して以下の倍率での増加している:
少なくとも1.2倍～最大1.6倍、より好ましくは少なくとも1.3倍～最大1.6倍、最も好ましくは少なくとも1.4倍～最大1.6倍、および/または
少なくとも1.2倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.3倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.4倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.5倍～最大3.0倍、より好ましくは少なくとも1.6倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.7倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.8倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.9倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも2.0倍～最大3.0倍、より好ましくは少なくとも1.3倍～最大2.5倍、より好ましくは少なくとも1.4倍～最大2.5倍、より好ましくは少なくとも1.5倍～最大2.5倍、より好ましくは少なくとも1.6倍～最大2.5倍、より好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.5倍、より好ましくは少なくとも1.8倍～最大2.5倍、より好ましくは少なくとも1.9倍～最大2.5倍、より好ましくは少なくとも2.0倍～最大2.5倍、さらに好ましくは少なくとも1.3倍～最大2.2倍、さらに好ましくは少なくとも1.4倍～最大2.2倍、さらに好ましくは少なくとも1.5倍～最大2.2倍、より好ましくは少なくとも1.6倍～最大2.2倍、より好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.2倍、より好ましくは少なくとも1.8倍～最大2.2倍、より好ましくは少なくとも1.9倍～最大2.2倍、より好ましくは少なくとも2.0倍～最大2.2倍、最も好ましくは少なくとも1.5倍～最大2.2倍。
第2の局面の第1、第2、および第3の態様のうちいずれか1つ、または第1の局面のいずれか1つの態様の一態様でもある、第2の局面の第4の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、温度74℃で15分間のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのインキュベーション後の残留活性値として表される熱安定性が、以下の%である:
少なくとも30%～最大100%、少なくとも40%～最大100%、少なくとも50%～最大100%、少なくとも30%～最大75%、少なくとも40%～最大75%、少なくとも50%～最大75%、少なくとも30%～最大65%、少なくとも40%～最大65%、少なくとも50%～最大65%、少なくとも41%～最大64%、および/または
少なくとも30%～最大100%、少なくとも31%～最大100%、少なくとも32%～最大100%、少なくとも33%～最大100%、少なくとも34%～最大100%、少なくとも35%～最大100%、少なくとも36%～最大100%、少なくとも37%～最大100%、少なくとも38%～最大100%、少なくとも39%～最大100%、少なくとも40%～最大100%、少なくとも41%～最大100%、少なくとも42%～最大100%、少なくとも43%～最大100%、少なくとも44%～最大100%、少なくとも45%～最大100%、少なくとも46%～最大100%、少なくとも47%～最大100%、少なくとも48%～最大100%、少なくとも49%～最大100%、少なくとも50%～最大100%、少なくとも51%～最大100%、少なくとも52%～最大100%、少なくとも53%～最大100%、少なくとも54%～最大100%、少なくとも55%～最大100%、少なくとも56%～最大100%、少なくとも57%～最大100%、少なくとも58%～最大100%、少なくとも59%～最大100%、少なくとも60%～最大100%、少なくとも61%～最大100%、少なくとも62%～最大100%、少なくとも63%～最大100%、少なくとも64%～最大100%、少なくとも65%～最大100%、少なくとも66%～最大100%、少なくとも67%～最大100%、少なくとも68%～最大100%、少なくとも69%～最大100%、少なくとも70%～最大100%、少なくとも71%～最大100%、少なくとも72%～最大100%、少なくとも73%～最大100%、少なくとも74%～最大100%、少なくとも75%～最大100%、少なくとも76%～最大100%、少なくとも77%～最大100%、少なくとも78%～最大100%、少なくとも79%～最大100%、少なくとも80%～最大100%、少なくとも30%～最大75%、少なくとも31%～最大75%、少なくとも32%～最大75%、少なくとも33%～最大75%、少なくとも34%～最大75%、少なくとも35%～最大75%、少なくとも36%～最大75%、少なくとも37%～最大75%、少なくとも38%～最大75%、少なくとも39%～最大75%、少なくとも40%～最大75%、少なくとも41%～最大75%、少なくとも42%～最大75%、少なくとも43%～最大75%、少なくとも44%～最大75%、少なくとも45%～最大75%、少なくとも46%～最大75%、少なくとも47%～最大75%、少なくとも48%～最大75%、少なくとも49%～最大75%、少なくとも50%～最大75%、少なくとも51%～最大75%、少なくとも52%～最大75%、少なくとも53%～最大75%、少なくとも54%～最大75%、少なくとも55%～最大75%、少なくとも56%～最大75%、少なくとも57%～最大75%、少なくとも58%～最大75%、少なくとも59%～最大75%、少なくとも60%～最大75%、少なくとも61%～最大75%、少なくとも62%～最大75%、少なくとも30%～最大70%、少なくとも31%～最大70%、少なくとも32%～最大70%、少なくとも33%～最大70%、少なくとも34%～最大70%、少なくとも35%～最大70%、少なくとも36%～最大70%、少なくとも37%～最大70%、少なくとも38%～最大70%、少なくとも39%～最大70%、少なくとも40%～最大70%、少なくとも41%～最大70%、少なくとも42%～最大70%、少なくとも43%～最大70%、少なくとも44%～最大70%、少なくとも45%～最大70%、少なくとも46%～最大70%、少なくとも47%～最大70%、少なくとも48%～最大70%、少なくとも49%～最大70%、少なくとも50%～最大70%、少なくとも51%～最大70%、少なくとも52%～最大70%、少なくとも53%～最大70%、少なくとも54%～最大70%、少なくとも55%～最大70%、少なくとも56%～最大70%、少なくとも57%～最大70%、少なくとも58%～最大70%、少なくとも59%～最大70%、少なくとも60%～最大70%、少なくとも61%～最大70%、少なくとも62%～最大70%、少なくとも30%～最大65%、少なくとも31%～最大65%、少なくとも32%～最大65%、少なくとも33%～最大65%、少なくとも34%～最大65%、少なくとも35%～最大65%、少なくとも36%～最大65%、少なくとも37%～最大65%、少なくとも38%～最大65%、少なくとも39%～最大65%、少なくとも40%～最大65%、少なくとも41%～最大65%、少なくとも42%～最大65%、少なくとも43%～最大65%、少なくとも44%～最大65%、少なくとも45%～最大65%、少なくとも46%～最大65%、少なくとも47%～最大65%、少なくとも48%～最大65%、少なくとも49%～最大65%、少なくとも50%～最大65%、少なくとも51%～最大65%、少なくとも52%～最大65%、少なくとも53%～最大65%、少なくとも54%～最大65%、少なくとも55%～最大65%、少なくとも56%～最大65%、少なくとも57%～最大65%、少なくとも58%～最大65%、少なくとも59%～最大65%、少なくとも60%～最大65%、少なくとも61%～最大65%、少なくとも62%～最大65%、より好ましくは少なくとも30%～最大65%、少なくとも34%～最大65%、少なくとも35%～最大65%、少なくとも38%～最大65%、少なくとも40%～最大65%、少なくとも41%～最大65%、少なくとも42%～最大65%、少なくとも46%～最大65%、少なくとも47%～最大65%、少なくとも50%～最大65%、少なくとも55%～最大65%、少なくとも59%～最大65%、少なくとも60%～最大65%、少なくとも62%～最大65%、さらに好ましくは少なくとも40%～最大65%、さらに好ましくは少なくとも60%～最大65%、最も好ましくは62%。
第2の局面の第1、第2、第3、および第4の態様のうちいずれか1つ、または第1の局面のいずれか1つの態様の一態様でもある、第2の局面の第5の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは以下のKm値を示す:
100mM～190mM、好ましくは130mM～190mM、好ましくは160mM～190mM、より好ましくは170mM～185mM、最も好ましくは175mM～180mM; ならびに/または
50mM～190mM、50mM～189mM、50mM～188mM、50mM～187mM、50mM～186mM、50mM～185mM、好ましくは50mM～184mM、好ましくは50mM～183mM、好ましくは50mM～182mM、好ましくは50mM～181mM、好ましくは50mM～180mM、好ましくは50mM～179mM、好ましくは50mM～178mM、好ましくは50mM～177mM、好ましくは50mM～176mM、好ましくは50mM～175mM、好ましくは50mM～174mM、好ましくは50mM～173mM、好ましくは50mM～172mM、好ましくは50mM～171mM、好ましくは50mM～170mM、好ましくは50mM～169mM、好ましくは50mM～168mM、好ましくは50mM～167mM、好ましくは50mM～166mM、好ましくは50mM～165mM、好ましくは50mM～160mM、好ましくは50mM～159mM、好ましくは50mM～158mM、好ましくは50mM～157mM、好ましくは50mM～156mM、好ましくは50mM～155mM、好ましくは50mM～154mM、好ましくは50mM～153mM、好ましくは50mM～152mM、75mM～190mM、75mM～189mM、75mM～188mM、75mM～187mM、75mM～186mM、75mM～185mM、好ましくは75mM～184mM、好ましくは75mM～183mM、好ましくは75mM～182mM、好ましくは75mM～181mM、好ましくは75mM～180mM、好ましくは75mM～179mM、好ましくは75mM～178mM、好ましくは75mM～177mM、好ましくは75mM～176mM、好ましくは75mM～175mM、好ましくは75mM～174mM、好ましくは75mM～173mM、好ましくは75mM～172mM、好ましくは75mM～171mM、好ましくは75mM～170mM、好ましくは75mM～169mM、好ましくは75mM～168mM、好ましくは75mM～167mM、好ましくは75mM～166mM、好ましくは75mM～165mM、好ましくは75mM～160mM、好ましくは75mM～159mM、好ましくは75mM～158mM、好ましくは75mM～157mM、好ましくは75mM～156mM、好ましくは75mM～155mM、好ましくは75mM～154mM、好ましくは75mM～153mM、好ましくは75mM～152mM、100mM～190mM、100mM～189mM、100mM～188mM、100mM～187mM、100mM～186mM、100mM～185mM、好ましくは100mM～184mM、好ましくは100mM～183mM、好ましくは100mM～182mM、好ましくは100mM～181mM、好ましくは100mM～180mM、好ましくは100mM～179mM、好ましくは100mM～178mM、好ましくは100mM～177mM、好ましくは100mM～176mM、好ましくは100mM～1100mM、好ましくは100mM～174mM、好ましくは100mM～173mM、好ましくは100mM～172mM、好ましくは100mM～171mM、好ましくは100mM～170mM、好ましくは100mM～169mM、好ましくは100mM～168mM、好ましくは100mM～167mM、好ましくは100mM～166mM、好ましくは100mM～165mM、好ましくは100mM～160mM、好ましくは100mM～159mM、好ましくは100mM～158mM、好ましくは100mM～157mM、好ましくは100mM～156mM、好ましくは100mM～155mM、好ましくは100mM～154mM、好ましくは100mM～153mM、好ましくは100mM～152mM、115mM～190mM、115mM～189mM、115mM～188mM、115mM～187mM、115mM～186mM、115mM～185mM、好ましくは115mM～184mM、好ましくは115mM～183mM、好ましくは115mM～182mM、好ましくは115mM～181mM、好ましくは115mM～180mM、好ましくは115mM～179mM、好ましくは115mM～178mM、好ましくは115mM～177mM、好ましくは115mM～176mM、好ましくは115mM～175mM、好ましくは115mM～174mM、好ましくは115mM～173mM、好ましくは115mM～172mM、好ましくは115mM～171mM、好ましくは115mM～170mM、好ましくは115mM～169mM、好ましくは115mM～168mM、好ましくは115mM～167mM、好ましくは115mM～166mM、好ましくは115mM～165mM、好ましくは115mM～160mM、好ましくは115mM～159mM、好ましくは115mM～158mM、好ましくは115mM～157mM、好ましくは115mM～156mM、好ましくは115mM～155mM、好ましくは115mM～154mM、好ましくは115mM～153mM、好ましくは115mM～152mM、130mM～185mM、好ましくは130mM～184mM、好ましくは130mM～183mM、好ましくは130mM～182mM、好ましくは130mM～181mM、好ましくは130mM～180mM、好ましくは130mM～179mM、好ましくは130mM～178mM、好ましくは130mM～177mM、好ましくは130mM～176mM、好ましくは130mM～175mM、好ましくは130mM～174mM、好ましくは130mM～173mM、好ましくは130mM～172mM、好ましくは130mM～171mM、好ましくは130mM～170mM、好ましくは130mM～169mM、好ましくは130mM～168mM、好ましくは130mM～167mM、好ましくは130mM～166mM、好ましくは130mM～165mM、好ましくは130mM～160mM、好ましくは130mM～159mM、好ましくは130mM～158mM、好ましくは130mM～157mM、好ましくは130mM～156mM、好ましくは130mM～155mM、好ましくは130mM～154mM、好ましくは130mM～153mM、好ましくは130mM～152mM、より好ましくは135mM～185mM、より好ましくは135mM～184mM、より好ましくは135mM～183mM、より好ましくは135mM～182mM、より好ましくは135mM～181mM、より好ましくは135mM～180mM、より好ましくは135mM～179mM、より好ましくは135mM～178mM、より好ましくは135mM～177mM、より好ましくは135mM～176mM、より好ましくは135mM～175mM、より好ましくは135mM～174mM、より好ましくは135mM～173mM、より好ましくは135mM～172mM、より好ましくは135mM～171mM、より好ましくは135mM～170mM、より好ましくは135mM～169mM、より好ましくは135mM～168mM、より好ましくは135mM～167mM、より好ましくは135mM～166mM、より好ましくは135mM～165mM、より好ましくは135mM～160mM、より好ましくは135mM～159mM、より好ましくは135mM～158mM、より好ましくは135mM～157mM、より好ましくは135mM～156mM、より好ましくは135mM～155mM、より好ましくは135mM～154mM、より好ましくは135mM～153mM、より好ましくは135mM～152mM、最も好ましくは140mM～185mM、最も好ましくは140mM～184mM、最も好ましくは140mM～183mM、最も好ましくは140mM～182mM、最も好ましくは140mM～181mM、最も好ましくは140mM～180mM、最も好ましくは140mM～179mM、最も好ましくは140mM～178mM、最も好ましくは140mM～177mM、最も好ましくは140mM～176mM、最も好ましくは140mM～175mM、最も好ましくは140mM～174mM、最も好ましくは140mM～173mM、最も好ましくは140mM～172mM、最も好ましくは140mM～171mM、最も好ましくは140mM～170mM、最も好ましくは140mM～169mM、最も好ましくは140mM～168mM、最も好ましくは140mM～167mM、最も好ましくは140mM～166mM、最も好ましくは140mM～165mM、最も好ましくは140mM～160mM、最も好ましくは140mM～159mM、最も好ましくは140mM～158mM、最も好ましくは140mM～157mM、最も好ましくは140mM～156mM、最も好ましくは140mM～155mM、最も好ましくは140mM～154mM、最も好ましくは140mM～153mM、最高に好ましくは140mM～152mM; ならびに/または
190mM未満、189mM未満、188mM未満、187mM未満、186mM未満、185mM未満、184mM未満、183mM未満、182mM未満、181mM未満、180mM未満、179mM未満、178mM未満、177mM未満、176mM未満、175mM未満、174mM未満、173mM未満、172mM未満、171mM未満、170mM未満、169mM未満、168mM未満、167mM未満、166mM未満、165mM未満、160mM未満、159mM未満、158mM未満、157mM未満、156mM未満、155mM未満、154mM未満、153mM未満、152mM未満、好ましくは185mM未満、より好ましくは170mM未満、さらに好ましくは160mM未満、最も好ましくは155mM未満、最高に好ましくは152mMおよび152mM未満。
第2の局面の第1、第2、第3、第4、および第5の態様のうちいずれか1つ、または第1の局面のいずれか1つの態様の一態様でもある、第2の局面の第6の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、該ポリペプチドの可溶性発現レベルとSEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの可溶性発現レベルとの比として定義される可溶性発現レベルが、以下である:
少なくとも1.04～最大1.38、好ましくは少なくとも1.07～最大1.38、好ましくは少なくとも1.10～最大1.38、好ましくは少なくとも1.31～最大1.38、好ましくは少なくとも1.33～最大1.38、好ましくは少なくとも1.36～最大1.38、より好ましくは少なくとも1.04～最大1.36、より好ましくは少なくとも1.07～最大1.36、より好ましくは少なくとも1.10～最大1.36、より好ましくは少なくとも1.31～最大1.36、より好ましくは少なくとも1.33～最大1.36、最も好ましくは1.36; ならびに/または
少なくとも1.04～最大1.80、好ましくは少なくとも1.07～最大1.80、好ましくは少なくとも1.10～最大1.80、好ましくは少なくとも1.31～最大1.80、好ましくは少なくとも1.33～最大1.80、好ましくは少なくとも1.36～最大1.80、好ましくは少なくとも1.38～最大1.80、好ましくは少なくとも1.43～最大1.80、より好ましくは少なくとも1.04～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.07～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.10～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.31～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.33～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.36～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.38～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.43～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.47～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.62～最大1.75、さらに好ましくは少なくとも1.04～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.07～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.10～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.31～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.33～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.36～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.38～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.43～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.47～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.62～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.04～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.07～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.10～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.31～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.33～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.36～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.38～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.43～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.47～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.62～最大1.65、最高に好ましくは少なくとも1.10～1.63、少なくとも1.38～1.63、少なくとも1.43～1.63、および/もしくは1.63。
第2の局面の第1、第2、第3、第4、および第5の態様のうちいずれか1つ、または第1の局面のいずれか1つの態様の一態様でもある、第2の局面の別の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、グルコース形成量として表される、フルクトースをグルコースに変換する際のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの触媒活性が、SEQ ID NO: 1に対して以下の倍率で増加している:
少なくとも1.2倍～最大5倍、少なくとも1.2倍～最大4.5倍、少なくとも1.2倍～最大4倍、少なくとも1.2倍～最大3.5倍、少なくとも1.2倍～最大3.4倍、少なくとも1.2倍～最大3.3倍、少なくとも1.2倍～最大3.2倍、少なくとも1.2倍～最大3.1倍、少なくとも1.2倍～最大3倍、少なくとも1.2倍～最大2.9倍、少なくとも1.2倍～最大2.8倍、少なくとも1.2倍～最大2.7倍、少なくとも1.2倍～最大2.6倍、少なくとも1.2倍～最大2.5倍、少なくとも1.2倍～最大2.4倍、少なくとも1.2倍～最大2.3倍、少なくとも1.2倍～最大2.2倍、好ましくは少なくとも1.5倍～最大5倍、少なくとも1.5倍～最大4.5倍、少なくとも1.5倍～最大4倍、少なくとも1.5倍～最大3.5倍、少なくとも1.5倍～最大3.4倍、少なくとも1.5倍～最大3.3倍、少なくとも1.5倍～最大3.2倍、少なくとも1.5倍～最大3.1倍、少なくとも1.5倍～最大3倍、少なくとも1.5倍～最大2.9倍、少なくとも1.5倍～最大2.8倍、少なくとも1.5倍～最大2.7倍、少なくとも1.5倍～最大2.6倍、少なくとも1.5倍～最大2.5倍、少なくとも1.5倍～最大2.4倍、少なくとも1.5倍～最大2.3倍、少なくとも1.5倍～最大2.2倍、より好ましくは少なくとも1.9倍～最大5倍、少なくとも1.9倍～最大4.5倍、少なくとも1.9倍～最大4倍、少なくとも1.9倍～最大3.5倍、少なくとも1.9倍～最大3.4倍、少なくとも1.9倍～最大3.3倍、少なくとも1.9倍～最大3.2倍、少なくとも1.9倍～最大3.1倍、少なくとも1.9倍～最大3倍、少なくとも1.9倍～最大2.9倍、少なくとも1.9倍～最大2.8倍、少なくとも1.9倍～最大2.7倍、少なくとも1.9倍～最大2.6倍、少なくとも1.9倍～最大2.5倍、少なくとも1.9倍～最大2.4倍、少なくとも1.9倍～最大2.3倍、少なくとも1.9倍～最大2.2倍、さらに好ましくは少なくとも2.0倍～最大5倍、少なくとも2.0倍～最大4.5倍、少なくとも2.0倍～最大4倍、少なくとも2.0倍～最大3.5倍、少なくとも2.0倍～最大3.4倍、少なくとも2.0倍～最大3.3倍、少なくとも2.0倍～最大3.2倍、少なくとも2.0倍～最大3.1倍、少なくとも2.0倍～最大3倍、少なくとも2.0倍～最大2.9倍、少なくとも2.0倍～最大2.8倍、少なくとも2.0倍～最大2.7倍、少なくとも2.0倍～最大2.6倍、少なくとも2.0倍～最大2.5倍、少なくとも2.0倍～最大2.4倍、少なくとも2.0倍～最大2.3倍、少なくとも2.0倍～最大2.2倍、最も好ましくは少なくとも2.2倍～最大3.3倍。
第2の局面の第1、第2、第3、第4、第5、および第6の態様のうちいずれか1つ、もしくは他の態様のうちいずれか、または第1の局面の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第2の局面の第7の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、第1の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、および第10の態様のうちいずれか1つのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ、好ましくは、第1の局面の第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、および第10の態様のうちいずれか1つのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ、より好ましくは、第1の局面の第5、第6、第7、第8、第9、および第10の態様のうちいずれか1つのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ、さらに好ましくは、第1の局面の第7、第8、第9、および第10の態様のうちいずれか1つのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ、最も好ましくは、第1の局面の第9および第10の態様のうちいずれか1つのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ、ならびに、第1の局面の第103、第108、第113、第114、第115、第120、第125、第130、および第131の態様のうちいずれか1つのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ、ならびに/あるいは第1の局面の第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、および第97の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ、好ましくは、第1の局面の第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、および第97の態様のうちいずれか1つのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ、より好ましくは、第1の局面の第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、および第97の態様のうちいずれか1つのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ、さらに好ましくは、第1の局面の第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、および第97の態様のうちいずれか1つのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ、最も好ましくは、第1の局面の第63および第97の態様のうちいずれか1つのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ、ならびに第1の局面の第104、第105、第106、第107、第109、第110、第111、第112、第113、第114、第116、第117、第118、第119、第121、第122、第123、第124、第126、第127、第128、第129、第130、第132、第133、第134、および第135の態様のうちいずれか1つのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼである。
第2の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、および第7の態様のうちいずれか1つ、または第1の局面のいずれか1つの態様の一態様でもあり、好ましくは第2の局面の第1の態様の一態様でもある、第2の局面の第8の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、フルクトース濃度50mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する活性、好ましくは活性値が、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対して以下の倍率で増加している:
少なくとも1.1倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.4倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.5倍～最大3.0倍、より好ましくは少なくとも1.6倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.7倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.8倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.9倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも2.0倍～最大3.0倍、より好ましくは少なくとも1.4倍～最大2.8倍、より好ましくは少なくとも1.5倍～最大2.8倍、より好ましくは少なくとも1.6倍～最大2.8倍、より好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.8倍、より好ましくは少なくとも1.8倍～最大2.8倍、より好ましくは少なくとも1.9倍～最大2.8倍、より好ましくは少なくとも2.0倍～最大2.8倍、さらに好ましくは少なくとも1.4倍～最大2.6倍、さらに好ましくは少なくとも1.5倍～最大2.6倍、より好ましくは少なくとも1.6倍～最大2.6倍、より好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.6倍、より好ましくは少なくとも1.8倍～最大2.6倍、より好ましくは少なくとも1.9倍～最大2.6倍、より好ましくは少なくとも2.0倍～最大2.6倍、最も好ましくは少なくとも1.4倍～最大2.4倍、最も好ましくは少なくとも1.5倍～最大2.4倍、最も好ましくは少なくとも1.6倍～最大2.4倍、最も好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.4倍、最も好ましくは少なくとも1.8倍～最大2.4倍、最も好ましくは少なくとも1.9倍～最大2.4倍、最も好ましくは少なくとも2.0倍～最大2.4倍、最高に好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.4倍。
第2の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、および第8の態様のうちいずれか1つ、または第1の局面のいずれか1つの態様の一態様でもある、第2の局面の第9の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、フルクトース濃度200mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する活性、好ましくは活性値が、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対して以下の倍率で増加している:
少なくとも1.2倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.3倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.4倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.5倍～最大3.0倍、より好ましくは少なくとも1.6倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.7倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.8倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.9倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも2.0倍～最大3.0倍、より好ましくは少なくとも1.3倍～最大2.5倍、より好ましくは少なくとも1.4倍～最大2.5倍、より好ましくは少なくとも1.5倍～最大2.5倍、より好ましくは少なくとも1.6倍～最大2.5倍、より好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.5倍、より好ましくは少なくとも1.8倍～最大2.5倍、より好ましくは少なくとも1.9倍～最大2.5倍、より好ましくは少なくとも2.0倍～最大2.5倍、さらに好ましくは少なくとも1.3倍～最大2.2倍、さらに好ましくは少なくとも1.4倍～最大2.2倍、さらに好ましくは少なくとも1.5倍～最大2.2倍、より好ましくは少なくとも1.6倍～最大2.2倍、より好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.2倍、より好ましくは少なくとも1.8倍～最大2.2倍、より好ましくは少なくとも1.9倍～最大2.2倍、より好ましくは少なくとも2.0倍～最大2.2倍、最高に好ましくは少なくとも1.5倍～最大2.2倍。
第2の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、および第9の態様のうちいずれか1つ、または第1の局面のいずれか1つの態様の一態様でもある、第2の局面の第10の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、温度74℃で15分間のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのインキュベーション後の残留活性値として表される熱安定性が、以下の%である:
少なくとも30%～最大100%、少なくとも31%～最大100%、少なくとも32%～最大100%、少なくとも33%～最大100%、少なくとも34%～最大100%、少なくとも35%～最大100%、少なくとも36%～最大100%、少なくとも37%～最大100%、少なくとも38%～最大100%、少なくとも39%～最大100%、少なくとも40%～最大100%、少なくとも41%～最大100%、少なくとも42%～最大100%、少なくとも43%～最大100%、少なくとも44%～最大100%、少なくとも45%～最大100%、少なくとも46%～最大100%、少なくとも47%～最大100%、少なくとも48%～最大100%、少なくとも49%～最大100%、少なくとも50%～最大100%、少なくとも51%～最大100%、少なくとも52%～最大100%、少なくとも53%～最大100%、少なくとも54%～最大100%、少なくとも55%～最大100%、少なくとも56%～最大100%、少なくとも57%～最大100%、少なくとも58%～最大100%、少なくとも59%～最大100%、少なくとも60%～最大100%、少なくとも61%～最大100%、少なくとも62%～最大100%、少なくとも63%～最大100%、少なくとも64%～最大100%、少なくとも65%～最大100%、少なくとも66%～最大100%、少なくとも67%～最大100%、少なくとも68%～最大100%、少なくとも69%～最大100%、少なくとも70%～最大100%、少なくとも71%～最大100%、少なくとも72%～最大100%、少なくとも73%～最大100%、少なくとも74%～最大100%、少なくとも75%～最大100%、少なくとも76%～最大100%、少なくとも77%～最大100%、少なくとも78%～最大100%、少なくとも79%～最大100%、少なくとも80%～最大100%、少なくとも30%～最大75%、少なくとも31%～最大75%、少なくとも32%～最大75%、少なくとも33%～最大75%、少なくとも34%～最大75%、少なくとも35%～最大75%、少なくとも36%～最大75%、少なくとも37%～最大75%、少なくとも38%～最大75%、少なくとも39%～最大75%、少なくとも40%～最大75%、少なくとも41%～最大75%、少なくとも42%～最大75%、少なくとも43%～最大75%、少なくとも44%～最大75%、少なくとも45%～最大75%、少なくとも46%～最大75%、少なくとも47%～最大75%、少なくとも48%～最大75%、少なくとも49%～最大75%、少なくとも50%～最大75%、少なくとも51%～最大75%、少なくとも52%～最大75%、少なくとも53%～最大75%、少なくとも54%～最大75%、少なくとも55%～最大75%、少なくとも56%～最大75%、少なくとも57%～最大75%、少なくとも58%～最大75%、少なくとも59%～最大75%、少なくとも60%～最大75%、少なくとも61%～最大75%、少なくとも62%～最大75%、少なくとも30%～最大70%、少なくとも31%～最大70%、少なくとも32%～最大70%、少なくとも33%～最大70%、少なくとも34%～最大70%、少なくとも35%～最大70%、少なくとも36%～最大70%、少なくとも37%～最大70%、少なくとも38%～最大70%、少なくとも39%～最大70%、少なくとも40%～最大70%、少なくとも41%～最大70%、少なくとも42%～最大70%、少なくとも43%～最大70%、少なくとも44%～最大70%、少なくとも45%～最大70%、少なくとも46%～最大70%、少なくとも47%～最大70%、少なくとも48%～最大70%、少なくとも49%～最大70%、少なくとも50%～最大70%、少なくとも51%～最大70%、少なくとも52%～最大70%、少なくとも53%～最大70%、少なくとも54%～最大70%、少なくとも55%～最大70%、少なくとも56%～最大70%、少なくとも57%～最大70%、少なくとも58%～最大70%、少なくとも59%～最大70%、少なくとも60%～最大70%、少なくとも61%～最大70%、少なくとも62%～最大70%、少なくとも30%～最大65%、少なくとも31%～最大65%、少なくとも32%～最大65%、少なくとも33%～最大65%、少なくとも34%～最大65%、少なくとも35%～最大65%、少なくとも36%～最大65%、少なくとも37%～最大65%、少なくとも38%～最大65%、少なくとも39%～最大65%、少なくとも40%～最大65%、少なくとも41%～最大65%、少なくとも42%～最大65%、少なくとも43%～最大65%、少なくとも44%～最大65%、少なくとも45%～最大65%、少なくとも46%～最大65%、少なくとも47%～最大65%、少なくとも48%～最大65%、少なくとも49%～最大65%、少なくとも50%～最大65%、少なくとも51%～最大65%、少なくとも52%～最大65%、少なくとも53%～最大65%、少なくとも54%～最大65%、少なくとも55%～最大65%、少なくとも56%～最大65%、少なくとも57%～最大65%、少なくとも58%～最大65%、少なくとも59%～最大65%、少なくとも60%～最大65%、少なくとも61%～最大65%、少なくとも62%～最大65%、より好ましくは少なくとも30%～最大65%、少なくとも34%～最大65%、少なくとも35%～最大65%、少なくとも38%～最大65%、少なくとも40%～最大65%、少なくとも41%～最大65%、少なくとも42%～最大65%、少なくとも46%～最大65%、少なくとも47%～最大65%、少なくとも50%～最大65%、少なくとも55%～最大65%、少なくとも59%～最大65%、少なくとも60%～最大65%、少なくとも62%～最大65%、さらに好ましくは少なくとも40%～最大65%、さらに好ましくは少なくとも60%～最大65%、最も好ましくは62%。
第2の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、および第10の態様のうちいずれか1つ、または第1の局面のいずれか1つの態様の一態様でもある、第2の局面の第11の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは以下のKM値を示す:
50mM～190mM、50mM～189mM、50mM～188mM、50mM～187mM、50mM～186mM、50mM～185mM、好ましくは50mM～184mM、好ましくは50mM～183mM、好ましくは50mM～182mM、好ましくは50mM～181mM、好ましくは50mM～180mM、好ましくは50mM～179mM、好ましくは50mM～178mM、好ましくは50mM～177mM、好ましくは50mM～176mM、好ましくは50mM～175mM、好ましくは50mM～174mM、好ましくは50mM～173mM、好ましくは50mM～172mM、好ましくは50mM～171mM、好ましくは50mM～170mM、好ましくは50mM～169mM、好ましくは50mM～168mM、好ましくは50mM～167mM、好ましくは50mM～166mM、好ましくは50mM～165mM、好ましくは50mM～160mM、好ましくは50mM～159mM、好ましくは50mM～158mM、好ましくは50mM～157mM、好ましくは50mM～156mM、好ましくは50mM～155mM、好ましくは50mM～154mM、好ましくは50mM～153mM、好ましくは50mM～152mM、75mM～190mM、75mM～189mM、75mM～188mM、75mM～187mM、75mM～186mM、75mM～185mM、好ましくは75mM～184mM、好ましくは75mM～183mM、好ましくは75mM～182mM、好ましくは75mM～181mM、好ましくは75mM～180mM、好ましくは75mM～179mM、好ましくは75mM～178mM、好ましくは75mM～177mM、好ましくは75mM～176mM、好ましくは75mM～175mM、好ましくは75mM～174mM、好ましくは75mM～173mM、好ましくは75mM～172mM、好ましくは75mM～171mM、好ましくは75mM～170mM、好ましくは75mM～169mM、好ましくは75mM～168mM、好ましくは75mM～167mM、好ましくは75mM～166mM、好ましくは75mM～165mM、好ましくは75mM～160mM、好ましくは75mM～159mM、好ましくは75mM～158mM、好ましくは75mM～157mM、好ましくは75mM～156mM、好ましくは75mM～155mM、好ましくは75mM～154mM、好ましくは75mM～153mM、好ましくは75mM～152mM、100mM～190mM、100mM～189mM、100mM～188mM、100mM～187mM、100mM～186mM、100mM～185mM、好ましくは100mM～184mM、好ましくは100mM～183mM、好ましくは100mM～182mM、好ましくは100mM～181mM、好ましくは100mM～180mM、好ましくは100mM～179mM、好ましくは100mM～178mM、好ましくは100mM～177mM、好ましくは100mM～176mM、好ましくは100mM～1100mM、好ましくは100mM～174mM、好ましくは100mM～173mM、好ましくは100mM～172mM、好ましくは100mM～171mM、好ましくは100mM～170mM、好ましくは100mM～169mM、好ましくは100mM～168mM、好ましくは100mM～167mM、好ましくは100mM～166mM、好ましくは100mM～165mM、好ましくは100mM～160mM、好ましくは100mM～159mM、好ましくは100mM～158mM、好ましくは100mM～157mM、好ましくは100mM～156mM、好ましくは100mM～155mM、好ましくは100mM～154mM、好ましくは100mM～153mM、好ましくは100mM～152mM、115mM～190mM、115mM～189mM、115mM～188mM、115mM～187mM、115mM～186mM、115mM～185mM、好ましくは115mM～184mM、好ましくは115mM～183mM、好ましくは115mM～182mM、好ましくは115mM～181mM、好ましくは115mM～180mM、好ましくは115mM～179mM、好ましくは115mM～178mM、好ましくは115mM～177mM、好ましくは115mM～176mM、好ましくは115mM～175mM、好ましくは115mM～174mM、好ましくは115mM～173mM、好ましくは115mM～172mM、好ましくは115mM～171mM、好ましくは115mM～170mM、好ましくは115mM～169mM、好ましくは115mM～168mM、好ましくは115mM～167mM、好ましくは115mM～166mM、好ましくは115mM～165mM、好ましくは115mM～160mM、好ましくは115mM～159mM、好ましくは115mM～158mM、好ましくは115mM～157mM、好ましくは115mM～156mM、好ましくは115mM～155mM、好ましくは115mM～154mM、好ましくは115mM～153mM、好ましくは115mM～152mM、130mM～185mM、好ましくは130mM～184mM、好ましくは130mM～183mM、好ましくは130mM～182mM、好ましくは130mM～181mM、好ましくは130mM～180mM、好ましくは130mM～179mM、好ましくは130mM～178mM、好ましくは130mM～177mM、好ましくは130mM～176mM、好ましくは130mM～175mM、好ましくは130mM～174mM、好ましくは130mM～173mM、好ましくは130mM～172mM、好ましくは130mM～171mM、好ましくは130mM～170mM、好ましくは130mM～169mM、好ましくは130mM～168mM、好ましくは130mM～167mM、好ましくは130mM～166mM、好ましくは130mM～165mM、好ましくは130mM～160mM、好ましくは130mM～159mM、好ましくは130mM～158mM、好ましくは130mM～157mM、好ましくは130mM～156mM、好ましくは130mM～155mM、好ましくは130mM～154mM、好ましくは130mM～153mM、好ましくは130mM～152mM、より好ましくは135mM～185mM、より好ましくは135mM～184mM、より好ましくは135mM～183mM、より好ましくは135mM～182mM、より好ましくは135mM～181mM、より好ましくは135mM～180mM、より好ましくは135mM～179mM、より好ましくは135mM～178mM、より好ましくは135mM～177mM、より好ましくは135mM～176mM、より好ましくは135mM～175mM、より好ましくは135mM～174mM、より好ましくは135mM～173mM、より好ましくは135mM～172mM、より好ましくは135mM～171mM、より好ましくは135mM～170mM、より好ましくは135mM～169mM、より好ましくは135mM～168mM、より好ましくは135mM～167mM、より好ましくは135mM～166mM、より好ましくは135mM～165mM、より好ましくは135mM～160mM、より好ましくは135mM～159mM、より好ましくは135mM～158mM、より好ましくは135mM～157mM、より好ましくは135mM～156mM、より好ましくは135mM～155mM、より好ましくは135mM～154mM、より好ましくは135mM～153mM、より好ましくは135mM～152mM、最も好ましくは140mM～185mM、最も好ましくは140mM～184mM、最も好ましくは140mM～183mM、最も好ましくは140mM～182mM、最も好ましくは140mM～181mM、最も好ましくは140mM～180mM、最も好ましくは140mM～179mM、最も好ましくは140mM～178mM、最も好ましくは140mM～177mM、最も好ましくは140mM～176mM、最も好ましくは140mM～175mM、最も好ましくは140mM～174mM、最も好ましくは140mM～173mM、最も好ましくは140mM～172mM、最も好ましくは140mM～171mM、最も好ましくは140mM～170mM、最も好ましくは140mM～169mM、最も好ましくは140mM～168mM、最も好ましくは140mM～167mM、最も好ましくは140mM～166mM、最も好ましくは140mM～165mM、最も好ましくは140mM～160mM、最も好ましくは140mM～159mM、最も好ましくは140mM～158mM、最も好ましくは140mM～157mM、最も好ましくは140mM～156mM、最も好ましくは140mM～155mM、最も好ましくは140mM～154mM、最も好ましくは140mM～153mM、最高に好ましくは140mM～152mM; ならびに/または
190mM未満、189mM未満、188mM未満、187mM未満、186mM未満、185mM未満、184mM未満、183mM未満、182mM未満、181mM未満、180mM未満、179mM未満、178mM未満、177mM未満、176mM未満、175mM未満、174mM未満、173mM未満、172mM未満、171mM未満、170mM未満、169mM未満、168mM未満、167mM未満、166mM未満、165mM未満、160mM未満、159mM未満、158mM未満、157mM未満、156mM未満、155mM未満、154mM未満、153mM未満、152mM未満、好ましくは185mM未満、より好ましくは170mM未満、さらに好ましくは160mM未満、最も好ましくは155mM未満、最高に好ましくは152mMおよび152mM未満。
第2の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、および第11の態様のうちいずれか1つ、または第1の局面のいずれか1つの態様の一態様でもある、第2の局面の第12の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、該ポリペプチドの可溶性発現レベルとSEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの可溶性発現レベルとの比として定義される可溶性発現レベルが、以下である:
少なくとも1.04～最大1.80、好ましくは少なくとも1.07～最大1.80、好ましくは少なくとも1.10～最大1.80、好ましくは少なくとも1.31～最大1.80、好ましくは少なくとも1.33～最大1.80、好ましくは少なくとも1.36～最大1.80、好ましくは少なくとも1.38～最大1.80、好ましくは少なくとも1.43～最大1.80、より好ましくは少なくとも1.04～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.07～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.10～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.31～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.33～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.36～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.38～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.43～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.47～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.62～最大1.75、さらに好ましくは少なくとも1.04～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.07～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.10～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.31～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.33～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.36～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.38～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.43～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.47～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.62～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.04～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.07～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.10～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.31～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.33～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.36～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.38～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.43～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.47～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.62～最大1.65、および最高に好ましくは少なくとも1.10～1.63、少なくとも1.38～1.63、少なくとも1.43～1.63、および/または1.63。
第2の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、および第11の態様のうちいずれか1つ、もしくは他の態様のうちいずれか、または第1の局面の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第2の局面の別の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、グルコース形成量として表される、フルクトースをグルコースに変換する際のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの触媒活性が、SEQ ID NO: 1に対して以下の倍率で増加している:
少なくとも1.2倍～最大5倍、少なくとも1.2倍～最大4.5倍、少なくとも1.2倍～最大4倍、少なくとも1.2倍～最大3.5倍、少なくとも1.2倍～最大3.4倍、少なくとも1.2倍～最大3.3倍、少なくとも1.2倍～最大3.2倍、少なくとも1.2倍～最大3.1倍、少なくとも1.2倍～最大3倍、少なくとも1.2倍～最大2.9倍、少なくとも1.2倍～最大2.8倍、少なくとも1.2倍～最大2.7倍、少なくとも1.2倍～最大2.6倍、少なくとも1.2倍～最大2.5倍、少なくとも1.2倍～最大2.4倍、少なくとも1.2倍～最大2.3倍、少なくとも1.2倍～最大2.2倍、好ましくは少なくとも1.5倍～最大5倍、少なくとも1.5倍～最大4.5倍、少なくとも1.5倍～最大4倍、少なくとも1.5倍～最大3.5倍、少なくとも1.5倍～最大3.4倍、少なくとも1.5倍～最大3.3倍、少なくとも1.5倍～最大3.2倍、少なくとも1.5倍～最大3.1倍、少なくとも1.5倍～最大3倍、少なくとも1.5倍～最大2.9倍、少なくとも1.5倍～最大2.8倍、少なくとも1.5倍～最大2.7倍、少なくとも1.5倍～最大2.6倍、少なくとも1.5倍～最大2.5倍、少なくとも1.5倍～最大2.4倍、少なくとも1.5倍～最大2.3倍、少なくとも1.5倍～最大2.2倍、より好ましくは少なくとも1.9倍～最大5倍、少なくとも1.9倍～最大4.5倍、少なくとも1.9倍～最大4倍、少なくとも1.9倍～最大3.5倍、少なくとも1.9倍～最大3.4倍、少なくとも1.9倍～最大3.3倍、少なくとも1.9倍～最大3.2倍、少なくとも1.9倍～最大3.1倍、少なくとも1.9倍～最大3倍、少なくとも1.9倍～最大2.9倍、少なくとも1.9倍～最大2.8倍、少なくとも1.9倍～最大2.7倍、少なくとも1.9倍～最大2.6倍、少なくとも1.9倍～最大2.5倍、少なくとも1.9倍～最大2.4倍、少なくとも1.9倍～最大2.3倍、少なくとも1.9倍～最大2.2倍、さらに好ましくは少なくとも2.0倍～最大5倍、少なくとも2.0倍～最大4.5倍、少なくとも2.0倍～最大4倍、少なくとも2.0倍～最大3.5倍、少なくとも2.0倍～最大3.4倍、少なくとも2.0倍～最大3.3倍、少なくとも2.0倍～最大3.2倍、少なくとも2.0倍～最大3.1倍、少なくとも2.0倍～最大3倍、少なくとも2.0倍～最大2.9倍、少なくとも2.0倍～最大2.8倍、少なくとも2.0倍～最大2.7倍、少なくとも2.0倍～最大2.6倍、少なくとも2.0倍～最大2.5倍、少なくとも2.0倍～最大2.4倍、少なくとも2.0倍～最大2.3倍、少なくとも2.0倍～最大2.2倍、最も好ましくは少なくとも2.2倍～最大3.3倍。
第2の局面の第8、第9、第10、第11、および第12の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第2の局面の第13の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、第1の局面の第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、および第97の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つであり、好ましくは、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、第1の局面の第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、および第97の態様のうちいずれか1つであり、より好ましくは、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、第1の局面の第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、および第97の態様のうちいずれか1つであり、さらに好ましくは、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、第1の局面の第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、および第97の態様のうちいずれか1つであり、最も好ましくは、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、第1の局面の第63および第97の態様のうちいずれか1つであり、あるいは、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、第1の局面の第104、第105、第106、第107、第109、第110、第111、第112、第113、第114、第116、第117、第118、第119、第121、第122、第123、第124、第126、第127、第128、第129、第130、第132、第133、第134、および第135の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つである。
本発明の基礎にある問題は、第3の局面の第1の態様でもある、第3の局面において、第1の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、第97、第98、第99、第100、第101、第102、第103、第104、第105、第106、第107、第108、第109、第110、第111、第112、第113、第114、第115、第116、第117、第118、第119、第120、第121、第122、第123、第124、第125、第126、第127、第128、第129、第130、第131、第132、第133、第134、第135、第136、第137、第138、第139、第140、第141、第142、第143、および第144の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ、ならびに第2の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、第13の態様のうちいずれか1つのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ、好ましくは、第1の局面の第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、および第97の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ、好ましくは、第1の局面の第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、および第97の態様のうちいずれか1つのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ、より好ましくは、第1の局面の第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、および第97の態様のうちいずれか1つのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ、さらに好ましくは、第1の局面の第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、および第97の態様のうちいずれか1つのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ、最も好ましくは、第1の局面の第63および第97の態様のうちいずれか1つのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ、あるいは第1の局面の第104、第105、第106、第107、第109、第110、第111、第112、第113、第114、第116、第117、第118、第119、第121、第122、第123、第124、第126、第127、第128、第129、第130、第132、第133、第134、および第135の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼにより解決され、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼとの比較で、以下を特徴とする:
フルクトース濃度50mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する活性、好ましくは活性値の、以下の倍率での増加: 少なくとも1.1倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.4倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.5倍～最大3.0倍、より好ましくは少なくとも1.6倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.7倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.8倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.9倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも2.0倍～最大3.0倍、より好ましくは少なくとも1.4倍～最大2.8倍、より好ましくは少なくとも1.5倍～最大2.8倍、より好ましくは少なくとも1.6倍～最大2.8倍、より好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.8倍、より好ましくは少なくとも1.8倍～最大2.8倍、より好ましくは少なくとも1.9倍～最大2.8倍、より好ましくは少なくとも2.0倍～最大2.8倍、さらに好ましくは少なくとも1.4倍～最大2.6倍、さらに好ましくは少なくとも1.5倍～最大2.6倍、より好ましくは少なくとも1.6倍～最大2.6倍、より好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.6倍、より好ましくは少なくとも1.8倍～最大2.6倍、より好ましくは少なくとも1.9倍～最大2.6倍、より好ましくは少なくとも2.0倍～最大2.6倍、最も好ましくは少なくとも1.4倍～最大2.4倍、最も好ましくは少なくとも1.5倍～最大2.4倍、最も好ましくは少なくとも1.6倍～最大2.4倍、最も好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.4倍、最も好ましくは少なくとも1.8倍～最大2.4倍、最も好ましくは少なくとも1.9倍～最大2.4倍、最も好ましくは少なくとも2.0倍～最大2.4倍、最高に好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.4倍; ならびに/あるいは
フルクトース濃度200mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する活性、好ましくは活性値の、以下の倍率での増加: 少なくとも1.2倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.3倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.4倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.5倍～最大3.0倍、より好ましくは少なくとも1.6倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.7倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.8倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.9倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも2.0倍～最大3.0倍、より好ましくは少なくとも1.3倍～最大2.5倍、より好ましくは少なくとも1.4倍～最大2.5倍、より好ましくは少なくとも1.5倍～最大2.5倍、より好ましくは少なくとも1.6倍～最大2.5倍、より好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.5倍、より好ましくは少なくとも1.8倍～最大2.5倍、より好ましくは少なくとも1.9倍～最大2.5倍、より好ましくは少なくとも2.0倍～最大2.5倍、さらに好ましくは少なくとも1.3倍～最大2.2倍、さらに好ましくは少なくとも1.4倍～最大2.2倍、さらに好ましくは少なくとも1.5倍～最大2.2倍、より好ましくは少なくとも1.6倍～最大2.2倍、より好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.2倍、より好ましくは少なくとも1.8倍～最大2.2倍、より好ましくは少なくとも1.9倍～最大2.2倍、より好ましくは少なくとも2.0倍～最大2.2倍、最高に好ましくは少なくとも1.5倍～最大2.2倍; ならびに/あるいは
温度74℃で15分間のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのインキュベーション後の残留活性値として表される熱安定性の、以下の%での増加: 少なくとも30%～最大100%、少なくとも31%～最大100%、少なくとも32%～最大100%、少なくとも33%～最大100%、少なくとも34%～最大100%、少なくとも35%～最大100%、少なくとも36%～最大100%、少なくとも37%～最大100%、少なくとも38%～最大100%、少なくとも39%～最大100%、少なくとも40%～最大100%、少なくとも41%～最大100%、少なくとも42%～最大100%、少なくとも43%～最大100%、少なくとも44%～最大100%、少なくとも45%～最大100%、少なくとも46%～最大100%、少なくとも47%～最大100%、少なくとも48%～最大100%、少なくとも49%～最大100%、少なくとも50%～最大100%、少なくとも51%～最大100%、少なくとも52%～最大100%、少なくとも53%～最大100%、少なくとも54%～最大100%、少なくとも55%～最大100%、少なくとも56%～最大100%、少なくとも57%～最大100%、少なくとも58%～最大100%、少なくとも59%～最大100%、少なくとも60%～最大100%、少なくとも61%～最大100%、少なくとも62%～最大100%、少なくとも63%～最大100%、少なくとも64%～最大100%、少なくとも65%～最大100%、少なくとも66%～最大100%、少なくとも67%～最大100%、少なくとも68%～最大100%、少なくとも69%～最大100%、少なくとも70%～最大100%、少なくとも71%～最大100%、少なくとも72%～最大100%、少なくとも73%～最大100%、少なくとも74%～最大100%、少なくとも75%～最大100%、少なくとも76%～最大100%、少なくとも77%～最大100%、少なくとも78%～最大100%、少なくとも79%～最大100%、少なくとも80%～最大100%、少なくとも30%～最大75%、少なくとも31%～最大75%、少なくとも32%～最大75%、少なくとも33%～最大75%、少なくとも34%～最大75%、少なくとも35%～最大75%、少なくとも36%～最大75%、少なくとも37%～最大75%、少なくとも38%～最大75%、少なくとも39%～最大75%、少なくとも40%～最大75%、少なくとも41%～最大75%、少なくとも42%～最大75%、少なくとも43%～最大75%、少なくとも44%～最大75%、少なくとも45%～最大75%、少なくとも46%～最大75%、少なくとも47%～最大75%、少なくとも48%～最大75%、少なくとも49%～最大75%、少なくとも50%～最大75%、少なくとも51%～最大75%、少なくとも52%～最大75%、少なくとも53%～最大75%、少なくとも54%～最大75%、少なくとも55%～最大75%、少なくとも56%～最大75%、少なくとも57%～最大75%、少なくとも58%～最大75%、少なくとも59%～最大75%、少なくとも60%～最大75%、少なくとも61%～最大75%、少なくとも62%～最大75%、少なくとも30%～最大70%、少なくとも31%～最大70%、少なくとも32%～最大70%、少なくとも33%～最大70%、少なくとも34%～最大70%、少なくとも35%～最大70%、少なくとも36%～最大70%、少なくとも37%～最大70%、少なくとも38%～最大70%、少なくとも39%～最大70%、少なくとも40%～最大70%、少なくとも41%～最大70%、少なくとも42%～最大70%、少なくとも43%～最大70%、少なくとも44%～最大70%、少なくとも45%～最大70%、少なくとも46%～最大70%、少なくとも47%～最大70%、少なくとも48%～最大70%、少なくとも49%～最大70%、少なくとも50%～最大70%、少なくとも51%～最大70%、少なくとも52%～最大70%、少なくとも53%～最大70%、少なくとも54%～最大70%、少なくとも55%～最大70%、少なくとも56%～最大70%、少なくとも57%～最大70%、少なくとも58%～最大70%、少なくとも59%～最大70%、少なくとも60%～最大70%、少なくとも61%～最大70%、少なくとも62%～最大70%、少なくとも30%～最大65%、少なくとも31%～最大65%、少なくとも32%～最大65%、少なくとも33%～最大65%、少なくとも34%～最大65%、少なくとも35%～最大65%、少なくとも36%～最大65%、少なくとも37%～最大65%、少なくとも38%～最大65%、少なくとも39%～最大65%、少なくとも40%～最大65%、少なくとも41%～最大65%、少なくとも42%～最大65%、少なくとも43%～最大65%、少なくとも44%～最大65%、少なくとも45%～最大65%、少なくとも46%～最大65%、少なくとも47%～最大65%、少なくとも48%～最大65%、少なくとも49%～最大65%、少なくとも50%～最大65%、少なくとも51%～最大65%、少なくとも52%～最大65%、少なくとも53%～最大65%、少なくとも54%～最大65%、少なくとも55%～最大65%、少なくとも56%～最大65%、少なくとも57%～最大65%、少なくとも58%～最大65%、少なくとも59%～最大65%、少なくとも60%～最大65%、少なくとも61%～最大65%、少なくとも62%～最大65%、より好ましくは少なくとも30%～最大65%、少なくとも34%～最大65%、少なくとも35%～最大65%、少なくとも38%～最大65%、少なくとも40%～最大65%、少なくとも41%～最大65%、少なくとも42%～最大65%、少なくとも46%～最大65%、少なくとも47%～最大65%、少なくとも50%～最大65%、少なくとも55%～最大65%、少なくとも59%～最大65%、少なくとも60%～最大65%、少なくとも62%～最大65%、さらに好ましくは少なくとも40%～最大65%、さらに好ましくは少なくとも60%～最大65%、最も好ましくは62%; ならびに/あるいは
KM値50mM～190mM、50mM～189mM、50mM～188mM、50mM～187mM、50mM～186mM、50mM～185mM、好ましくは50mM～184mM、好ましくは50mM～183mM、好ましくは50mM～182mM、好ましくは50mM～181mM、好ましくは50mM～180mM、好ましくは50mM～179mM、好ましくは50mM～178mM、好ましくは50mM～177mM、好ましくは50mM～176mM、好ましくは50mM～175mM、好ましくは50mM～174mM、好ましくは50mM～173mM、好ましくは50mM～172mM、好ましくは50mM～171mM、好ましくは50mM～170mM、好ましくは50mM～169mM、好ましくは50mM～168mM、好ましくは50mM～167mM、好ましくは50mM～166mM、好ましくは50mM～165mM、好ましくは50mM～160mM、好ましくは50mM～159mM、好ましくは50mM～158mM、好ましくは50mM～157mM、好ましくは50mM～156mM、好ましくは50mM～155mM、好ましくは50mM～154mM、好ましくは50mM～153mM、好ましくは50mM～152mM、75mM～190mM、75mM～189mM、75mM～188mM、75mM～187mM、75mM～186mM、75mM～185mM、好ましくは75mM～184mM、好ましくは75mM～183mM、好ましくは75mM～182mM、好ましくは75mM～181mM、好ましくは75mM～180mM、好ましくは75mM～179mM、好ましくは75mM～178mM、好ましくは75mM～177mM、好ましくは75mM～176mM、好ましくは75mM～175mM、好ましくは75mM～174mM、好ましくは75mM～173mM、好ましくは75mM～172mM、好ましくは75mM～171mM、好ましくは75mM～170mM、好ましくは75mM～169mM、好ましくは75mM～168mM、好ましくは75mM～167mM、好ましくは75mM～166mM、好ましくは75mM～165mM、好ましくは75mM～160mM、好ましくは75mM～159mM、好ましくは75mM～158mM、好ましくは75mM～157mM、好ましくは75mM～156mM、好ましくは75mM～155mM、好ましくは75mM～154mM、好ましくは75mM～153mM、好ましくは75mM～152mM、100mM～190mM、100mM～189mM、100mM～188mM、100mM～187mM、100mM～186mM、100mM～185mM、好ましくは100mM～184mM、好ましくは100mM～183mM、好ましくは100mM～182mM、好ましくは100mM～181mM、好ましくは100mM～180mM、好ましくは100mM～179mM、好ましくは100mM～178mM、好ましくは100mM～177mM、好ましくは100mM～176mM、好ましくは100mM～1100mM、好ましくは100mM～174mM、好ましくは100mM～173mM、好ましくは100mM～172mM、好ましくは100mM～171mM、好ましくは100mM～170mM、好ましくは100mM～169mM、好ましくは100mM～168mM、好ましくは100mM～167mM、好ましくは100mM～166mM、好ましくは100mM～165mM、好ましくは100mM～160mM、好ましくは100mM～159mM、好ましくは100mM～158mM、好ましくは100mM～157mM、好ましくは100mM～156mM、好ましくは100mM～155mM、好ましくは100mM～154mM、好ましくは100mM～153mM、好ましくは100mM～152mM、115mM～190mM、115mM～189mM、115mM～188mM、115mM～187mM、115mM～186mM、115mM～185mM、好ましくは115mM～184mM、好ましくは115mM～183mM、好ましくは115mM～182mM、好ましくは115mM～181mM、好ましくは115mM～180mM、好ましくは115mM～179mM、好ましくは115mM～178mM、好ましくは115mM～177mM、好ましくは115mM～176mM、好ましくは115mM～175mM、好ましくは115mM～174mM、好ましくは115mM～173mM、好ましくは115mM～172mM、好ましくは115mM～171mM、好ましくは115mM～170mM、好ましくは115mM～169mM、好ましくは115mM～168mM、好ましくは115mM～167mM、好ましくは115mM～166mM、好ましくは115mM～165mM、好ましくは115mM～160mM、好ましくは115mM～159mM、好ましくは115mM～158mM、好ましくは115mM～157mM、好ましくは115mM～156mM、好ましくは115mM～155mM、好ましくは115mM～154mM、好ましくは115mM～153mM、好ましくは115mM～152mM、130mM～185mM、好ましくは130mM～184mM、好ましくは130mM～183mM、好ましくは130mM～182mM、好ましくは130mM～181mM、好ましくは130mM～180mM、好ましくは130mM～179mM、好ましくは130mM～178mM、好ましくは130mM～177mM、好ましくは130mM～176mM、好ましくは130mM～175mM、好ましくは130mM～174mM、好ましくは130mM～173mM、好ましくは130mM～172mM、好ましくは130mM～171mM、好ましくは130mM～170mM、好ましくは130mM～169mM、好ましくは130mM～168mM、好ましくは130mM～167mM、好ましくは130mM～166mM、好ましくは130mM～165mM、好ましくは130mM～160mM、好ましくは130mM～159mM、好ましくは130mM～158mM、好ましくは130mM～157mM、好ましくは130mM～156mM、好ましくは130mM～155mM、好ましくは130mM～154mM、好ましくは130mM～153mM、好ましくは130mM～152mM、より好ましくは135mM～185mM、より好ましくは135mM～184mM、より好ましくは135mM～183mM、より好ましくは135mM～182mM、より好ましくは135mM～181mM、より好ましくは135mM～180mM、より好ましくは135mM～179mM、より好ましくは135mM～178mM、より好ましくは135mM～177mM、より好ましくは135mM～176mM、より好ましくは135mM～175mM、より好ましくは135mM～174mM、より好ましくは135mM～173mM、より好ましくは135mM～172mM、より好ましくは135mM～171mM、より好ましくは135mM～170mM、より好ましくは135mM～169mM、より好ましくは135mM～168mM、より好ましくは135mM～167mM、より好ましくは135mM～166mM、より好ましくは135mM～165mM、より好ましくは135mM～160mM、より好ましくは135mM～159mM、より好ましくは135mM～158mM、より好ましくは135mM～157mM、より好ましくは135mM～156mM、より好ましくは135mM～155mM、より好ましくは135mM～154mM、より好ましくは135mM～153mM、より好ましくは135mM～152mM、最も好ましくは140mM～185mM、最も好ましくは140mM～184mM、最も好ましくは140mM～183mM、最も好ましくは140mM～182mM、最も好ましくは140mM～181mM、最も好ましくは140mM～180mM、最も好ましくは140mM～179mM、最も好ましくは140mM～178mM、最も好ましくは140mM～177mM、最も好ましくは140mM～176mM、最も好ましくは140mM～175mM、最も好ましくは140mM～174mM、最も好ましくは140mM～173mM、最も好ましくは140mM～172mM、最も好ましくは140mM～171mM、最も好ましくは140mM～170mM、最も好ましくは140mM～169mM、最も好ましくは140mM～168mM、最も好ましくは140mM～167mM、最も好ましくは140mM～166mM、最も好ましくは140mM～165mM、最も好ましくは140mM～160mM、最も好ましくは140mM～159mM、最も好ましくは140mM～158mM、最も好ましくは140mM～157mM、最も好ましくは140mM～156mM、最も好ましくは140mM～155mM、最も好ましくは140mM～154mM、最も好ましくは140mM～153mM、最も好ましくは140mM～152mM; ならびに/または190mM未満、189mM未満、188mM未満、187mM未満、186mM未満、185mM未満、184mM未満、183mM未満、182mM未満、181mM未満、180mM未満、179mM未満、178mM未満、177mM未満、176mM未満、175mM未満、174mM未満、173mM未満、172mM未満、171mM未満、170mM未満、169mM未満、168mM未満、167mM未満、166mM未満、165mM未満、160mM未満、159mM未満、158mM未満、157mM未満、156mM未満、155mM未満、154mM未満、153mM未満、152mM未満、好ましくは185mM未満、より好ましくは170mM未満、さらに好ましくは160mM未満、最も好ましくは155mM未満、最高に好ましくは152mMおよび152mM未満; ならびに/あるいは
該ポリペプチドの可溶性発現レベルとSEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの可溶性発現レベルとの比として定義される、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの可溶性発現レベルが以下である: 少なくとも1.04～最大1.80、好ましくは少なくとも1.07～最大1.80、好ましくは少なくとも1.10～最大1.80、好ましくは少なくとも1.31～最大1.80、好ましくは少なくとも1.33～最大1.80、好ましくは少なくとも1.36～最大1.80、好ましくは少なくとも1.38～最大1.80、好ましくは少なくとも1.43～最大1.80、より好ましくは少なくとも1.04～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.07～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.10～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.31～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.33～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.36～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.38～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.43～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.47～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.62～最大1.75、さらに好ましくは少なくとも1.04～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.07～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.10～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.31～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.33～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.36～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.38～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.43～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.47～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.62～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.04～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.07～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.10～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.31～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.33～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.36～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.38～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.43～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.47～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.62～最大1.65、最高に好ましくは少なくとも1.10～1.63、少なくとも1.38～1.63、少なくとも1.43～1.63、および/または1.63; ならびに/あるいは
グルコース形成量として表される、フルクトースをグルコースに変換する際のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの触媒活性の、SEQ ID NO: 1に対する以下の倍率での増加: 少なくとも1.2倍～最大5倍、少なくとも1.2倍～最大4.5倍、少なくとも1.2倍～最大4倍、少なくとも1.2倍～最大3.5倍、少なくとも1.2倍～最大3.4倍、少なくとも1.2倍～最大3.3倍、少なくとも1.2倍～最大3.2倍、少なくとも1.2倍～最大3.1倍、少なくとも1.2倍～最大3倍、少なくとも1.2倍～最大2.9倍、少なくとも1.2倍～最大2.8倍、少なくとも1.2倍～最大2.7倍、少なくとも1.2倍～最大2.6倍、少なくとも1.2倍～最大2.5倍、少なくとも1.2倍～最大2.4倍、少なくとも1.2倍～最大2.3倍、少なくとも1.2倍～最大2.2倍、好ましくは少なくとも1.5倍～最大5倍、少なくとも1.5倍～最大4.5倍、少なくとも1.5倍～最大4倍、少なくとも1.5倍～最大3.5倍、少なくとも1.5倍～最大3.4倍、少なくとも1.5倍～最大3.3倍、少なくとも1.5倍～最大3.2倍、少なくとも1.5倍～最大3.1倍、少なくとも1.5倍～最大3倍、少なくとも1.5倍～最大2.9倍、少なくとも1.5倍～最大2.8倍、少なくとも1.5倍～最大2.7倍、少なくとも1.5倍～最大2.6倍、少なくとも1.5倍～最大2.5倍、少なくとも1.5倍～最大2.4倍、少なくとも1.5倍～最大2.3倍、少なくとも1.5倍～最大2.2倍、より好ましくは少なくとも1.9倍～最大5倍、少なくとも1.9倍～最大4.5倍、少なくとも1.9倍～最大4倍、少なくとも1.9倍～最大3.5倍、少なくとも1.9倍～最大3.4倍、少なくとも1.9倍～最大3.3倍、少なくとも1.9倍～最大3.2倍、少なくとも1.9倍～最大3.1倍、少なくとも1.9倍～最大3倍、少なくとも1.9倍～最大2.9倍、少なくとも1.9倍～最大2.8倍、少なくとも1.9倍～最大2.7倍、少なくとも1.9倍～最大2.6倍、少なくとも1.9倍～最大2.5倍、少なくとも1.9倍～最大2.4倍、少なくとも1.9倍～最大2.3倍、少なくとも1.9倍～最大2.2倍、さらに好ましくは少なくとも2.0倍～最大5倍、少なくとも2.0倍～最大4.5倍、少なくとも2.0倍～最大4倍、少なくとも2.0倍～最大3.5倍、少なくとも2.0倍～最大3.4倍、少なくとも2.0倍～最大3.3倍、少なくとも2.0倍～最大3.2倍、少なくとも2.0倍～最大3.1倍、少なくとも2.0倍～最大3倍、少なくとも2.0倍～最大2.9倍、少なくとも2.0倍～最大2.8倍、少なくとも2.0倍～最大2.7倍、少なくとも2.0倍～最大2.6倍、少なくとも2.0倍～最大2.5倍、少なくとも2.0倍～最大2.4倍、少なくとも2.0倍～最大2.3倍、少なくとも2.0倍～最大2.2倍、最も好ましくは少なくとも2.2倍～最大3.3倍。
本発明の基礎にある問題は、第4の局面の第1の態様または第1、第2、もしくは第3の局面のいずれか1つの態様の一態様でもある、第4の局面において、アミノ酸配列を含む、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼであって、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列がSEQ ID NO: 1のアミノ酸配列と少なくとも95%同一および/または少なくとも95%相同であり、(A)、(B)、(C)、(D)、(E)、および(F)からなる群より選択される少なくとも1つの特性、またはその任意の組み合わせを有する、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼにより解決され、
特性(A)は、フルクトース濃度50mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関して、活性、好ましくは活性値が、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対して、以下の倍率で増加していることであり:
(i) 少なくとも1.1倍～最大1.6倍、好ましくは少なくとも1.2倍～最大1.6倍、より好ましくは少なくとも1.3倍～最大1.6倍、最も好ましくは少なくとも1.4倍～最大1.6倍、または
(ii) 少なくとも1.1倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.4倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.5倍～最大3.0倍、より好ましくは少なくとも1.6倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.7倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.8倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.9倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも2.0倍～最大3.0倍、より好ましくは少なくとも1.4倍～最大2.8倍、より好ましくは少なくとも1.5倍～最大2.8倍、より好ましくは少なくとも1.6倍～最大2.8倍、より好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.8倍、より好ましくは少なくとも1.8倍～最大2.8倍、より好ましくは少なくとも1.9倍～最大2.8倍、より好ましくは少なくとも2.0倍～最大2.8倍、さらに好ましくは少なくとも1.4倍～最大2.6倍、さらに好ましくは少なくとも1.5倍～最大2.6倍、より好ましくは少なくとも1.6倍～最大2.6倍、より好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.6倍、より好ましくは少なくとも1.8倍～最大2.6倍、より好ましくは少なくとも1.9倍～最大2.6倍、より好ましくは少なくとも2.0倍～最大2.6倍、最も好ましくは少なくとも1.4倍～最大2.4倍、最も好ましくは少なくとも1.5倍～最大2.4倍、最も好ましくは少なくとも1.6倍～最大2.4倍、最も好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.4倍、最も好ましくは少なくとも1.8倍～最大2.4倍、最も好ましくは少なくとも1.9倍～最大2.4倍、最も好ましくは少なくとも2.0倍～最大2.4倍、最高に好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.4倍;
特性(B)は、フルクトース濃度200mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関して、活性、好ましくは活性値が、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対して、以下の倍率で増加していることであり:
(i) 少なくとも1.2倍～最大1.6倍、より好ましくは少なくとも1.3倍～最大1.6倍、最も好ましくは少なくとも1.4倍～最大1.6倍、および/または
(ii) 少なくとも1.2倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.3倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.4倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.5倍～最大3.0倍、より好ましくは少なくとも1.6倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.7倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.8倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.9倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも2.0倍～最大3.0倍、より好ましくは少なくとも1.3倍～最大2.5倍、より好ましくは少なくとも1.4倍～最大2.5倍、より好ましくは少なくとも1.5倍～最大2.5倍、より好ましくは少なくとも1.6倍～最大2.5倍、より好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.5倍、より好ましくは少なくとも1.8倍～最大2.5倍、より好ましくは少なくとも1.9倍～最大2.5倍、より好ましくは少なくとも2.0倍～最大2.5倍、さらに好ましくは少なくとも1.3倍～最大2.2倍、さらに好ましくは少なくとも1.4倍～最大2.2倍、さらに好ましくは少なくとも1.5倍～最大2.2倍、より好ましくは少なくとも1.6倍～最大2.2倍、より好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.2倍、より好ましくは少なくとも1.8倍～最大2.2倍、より好ましくは少なくとも1.9倍～最大2.2倍、より好ましくは少なくとも2.0倍～最大2.2倍、最高に好ましくは少なくとも1.5倍～最大2.2倍;
特性(C)は、温度74℃で15分間のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのインキュベーション後の残留活性値として表される、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの熱安定性が、以下の%であることであり:
(i) 少なくとも30%～最大100%、少なくとも40%～最大100%、少なくとも50%～最大100%、少なくとも30%～最大75%、少なくとも40%～最大75%、少なくとも50%～最大75%、少なくとも30%～最大65%、少なくとも40%～最大65%、少なくとも50%～最大65%、少なくとも41%～最大64%、および/または
(ii) 少なくとも30%～最大100%、少なくとも31%～最大100%、少なくとも32%～最大100%、少なくとも33%～最大100%、少なくとも34%～最大100%、少なくとも35%～最大100%、少なくとも36%～最大100%、少なくとも37%～最大100%、少なくとも38%～最大100%、少なくとも39%～最大100%、少なくとも40%～最大100%、少なくとも41%～最大100%、少なくとも42%～最大100%、少なくとも43%～最大100%、少なくとも44%～最大100%、少なくとも45%～最大100%、少なくとも46%～最大100%、少なくとも47%～最大100%、少なくとも48%～最大100%、少なくとも49%～最大100%、少なくとも50%～最大100%、少なくとも51%～最大100%、少なくとも52%～最大100%、少なくとも53%～最大100%、少なくとも54%～最大100%、少なくとも55%～最大100%、少なくとも56%～最大100%、少なくとも57%～最大100%、少なくとも58%～最大100%、少なくとも59%～最大100%、少なくとも60%～最大100%、少なくとも61%～最大100%、少なくとも62%～最大100%、少なくとも63%～最大100%、少なくとも64%～最大100%、少なくとも65%～最大100%、少なくとも66%～最大100%、少なくとも67%～最大100%、少なくとも68%～最大100%、少なくとも69%～最大100%、少なくとも70%～最大100%、少なくとも71%～最大100%、少なくとも72%～最大100%、少なくとも73%～最大100%、少なくとも74%～最大100%、少なくとも75%～最大100%、少なくとも76%～最大100%、少なくとも77%～最大100%、少なくとも78%～最大100%、少なくとも79%～最大100%、少なくとも80%～最大100%、少なくとも30%～最大75%、少なくとも31%～最大75%、少なくとも32%～最大75%、少なくとも33%～最大75%、少なくとも34%～最大75%、少なくとも35%～最大75%、少なくとも36%～最大75%、少なくとも37%～最大75%、少なくとも38%～最大75%、少なくとも39%～最大75%、少なくとも40%～最大75%、少なくとも41%～最大75%、少なくとも42%～最大75%、少なくとも43%～最大75%、少なくとも44%～最大75%、少なくとも45%～最大75%、少なくとも46%～最大75%、少なくとも47%～最大75%、少なくとも48%～最大75%、少なくとも49%～最大75%、少なくとも50%～最大75%、少なくとも51%～最大75%、少なくとも52%～最大75%、少なくとも53%～最大75%、少なくとも54%～最大75%、少なくとも55%～最大75%、少なくとも56%～最大75%、少なくとも57%～最大75%、少なくとも58%～最大75%、少なくとも59%～最大75%、少なくとも60%～最大75%、少なくとも61%～最大75%、少なくとも62%～最大75%、少なくとも30%～最大70%、少なくとも31%～最大70%、少なくとも32%～最大70%、少なくとも33%～最大70%、少なくとも34%～最大70%、少なくとも35%～最大70%、少なくとも36%～最大70%、少なくとも37%～最大70%、少なくとも38%～最大70%、少なくとも39%～最大70%、少なくとも40%～最大70%、少なくとも41%～最大70%、少なくとも42%～最大70%、少なくとも43%～最大70%、少なくとも44%～最大70%、少なくとも45%～最大70%、少なくとも46%～最大70%、少なくとも47%～最大70%、少なくとも48%～最大70%、少なくとも49%～最大70%、少なくとも50%～最大70%、少なくとも51%～最大70%、少なくとも52%～最大70%、少なくとも53%～最大70%、少なくとも54%～最大70%、少なくとも55%～最大70%、少なくとも56%～最大70%、少なくとも57%～最大70%、少なくとも58%～最大70%、少なくとも59%～最大70%、少なくとも60%～最大70%、少なくとも61%～最大70%、少なくとも62%～最大70%、少なくとも30%～最大65%、少なくとも31%～最大65%、少なくとも32%～最大65%、少なくとも33%～最大65%、少なくとも34%～最大65%、少なくとも35%～最大65%、少なくとも36%～最大65%、少なくとも37%～最大65%、少なくとも38%～最大65%、少なくとも39%～最大65%、少なくとも40%～最大65%、少なくとも41%～最大65%、少なくとも42%～最大65%、少なくとも43%～最大65%、少なくとも44%～最大65%、少なくとも45%～最大65%、少なくとも46%～最大65%、少なくとも47%～最大65%、少なくとも48%～最大65%、少なくとも49%～最大65%、少なくとも50%～最大65%、少なくとも51%～最大65%、少なくとも52%～最大65%、少なくとも53%～最大65%、少なくとも54%～最大65%、少なくとも55%～最大65%、少なくとも56%～最大65%、少なくとも57%～最大65%、少なくとも58%～最大65%、少なくとも59%～最大65%、少なくとも60%～最大65%、少なくとも61%～最大65%、少なくとも62%～最大65%、より好ましくは少なくとも30%～最大65%、少なくとも34%～最大65%、少なくとも35%～最大65%、少なくとも38%～最大65%、少なくとも40%～最大65%、少なくとも41%～最大65%、少なくとも42%～最大65%、少なくとも46%～最大65%、少なくとも47%～最大65%、少なくとも50%～最大65%、少なくとも55%～最大65%、少なくとも59%～最大65%、少なくとも60%～最大65%、少なくとも62%～最大65%、さらに好ましくは少なくとも40%～最大65%、さらに好ましくは少なくとも60%～最大65%、最も好ましくは62%;
特性(D)は、以下のKM値であり:
(i) 100mM～190mM、好ましくは130mM～190mM、好ましくは160mM～190mM、より好ましくは170mM～185mM、最も好ましくは175mM～180mM; ならびに/または
(ii) 50mM～190mM、50mM～189mM、50mM～188mM、50mM～187mM、50mM～186mM、50mM～185mM、好ましくは50mM～184mM、好ましくは50mM～183mM、好ましくは50mM～182mM、好ましくは50mM～181mM、好ましくは50mM～180mM、好ましくは50mM～179mM、好ましくは50mM～178mM、好ましくは50mM～177mM、好ましくは50mM～176mM、好ましくは50mM～175mM、好ましくは50mM～174mM、好ましくは50mM～173mM、好ましくは50mM～172mM、好ましくは50mM～171mM、好ましくは50mM～170mM、好ましくは50mM～169mM、好ましくは50mM～168mM、好ましくは50mM～167mM、好ましくは50mM～166mM、好ましくは50mM～165mM、好ましくは50mM～160mM、好ましくは50mM～159mM、好ましくは50mM～158mM、好ましくは50mM～157mM、好ましくは50mM～156mM、好ましくは50mM～155mM、好ましくは50mM～154mM、好ましくは50mM～153mM、好ましくは50mM～152mM、75mM～190mM、75mM～189mM、75mM～188mM、75mM～187mM、75mM～186mM、75mM～185mM、好ましくは75mM～184mM、好ましくは75mM～183mM、好ましくは75mM～182mM、好ましくは75mM～181mM、好ましくは75mM～180mM、好ましくは75mM～179mM、好ましくは75mM～178mM、好ましくは75mM～177mM、好ましくは75mM～176mM、好ましくは75mM～175mM、好ましくは75mM～174mM、好ましくは75mM～173mM、好ましくは75mM～172mM、好ましくは75mM～171mM、好ましくは75mM～170mM、好ましくは75mM～169mM、好ましくは75mM～168mM、好ましくは75mM～167mM、好ましくは75mM～166mM、好ましくは75mM～165mM、好ましくは75mM～160mM、好ましくは75mM～159mM、好ましくは75mM～158mM、好ましくは75mM～157mM、好ましくは75mM～156mM、好ましくは75mM～155mM、好ましくは75mM～154mM、好ましくは75mM～153mM、好ましくは75mM～152mM、100mM～190mM、100mM～189mM、100mM～188mM、100mM～187mM、100mM～186mM、100mM～185mM、好ましくは100mM～184mM、好ましくは100mM～183mM、好ましくは100mM～182mM、好ましくは100mM～181mM、好ましくは100mM～180mM、好ましくは100mM～179mM、好ましくは100mM～178mM、好ましくは100mM～177mM、好ましくは100mM～176mM、好ましくは100mM～1100mM、好ましくは100mM～174mM、好ましくは100mM～173mM、好ましくは100mM～172mM、好ましくは100mM～171mM、好ましくは100mM～170mM、好ましくは100mM～169mM、好ましくは100mM～168mM、好ましくは100mM～167mM、好ましくは100mM～166mM、好ましくは100mM～165mM、好ましくは100mM～160mM、好ましくは100mM～159mM、好ましくは100mM～158mM、好ましくは100mM～157mM、好ましくは100mM～156mM、好ましくは100mM～155mM、好ましくは100mM～154mM、好ましくは100mM～153mM、好ましくは100mM～152mM、115mM～190mM、115mM～189mM、115mM～188mM、115mM～187mM、115mM～186mM、115mM～185mM、好ましくは115mM～184mM、好ましくは115mM～183mM、好ましくは115mM～182mM、好ましくは115mM～181mM、好ましくは115mM～180mM、好ましくは115mM～179mM、好ましくは115mM～178mM、好ましくは115mM～177mM、好ましくは115mM～176mM、好ましくは115mM～175mM、好ましくは115mM～174mM、好ましくは115mM～173mM、好ましくは115mM～172mM、好ましくは115mM～171mM、好ましくは115mM～170mM、好ましくは115mM～169mM、好ましくは115mM～168mM、好ましくは115mM～167mM、好ましくは115mM～166mM、好ましくは115mM～165mM、好ましくは115mM～160mM、好ましくは115mM～159mM、好ましくは115mM～158mM、好ましくは115mM～157mM、好ましくは115mM～156mM、好ましくは115mM～155mM、好ましくは115mM～154mM、好ましくは115mM～153mM、好ましくは115mM～152mM、130mM～185mM、好ましくは130mM～184mM、好ましくは130mM～183mM、好ましくは130mM～182mM、好ましくは130mM～181mM、好ましくは130mM～180mM、好ましくは130mM～179mM、好ましくは130mM～178mM、好ましくは130mM～177mM、好ましくは130mM～176mM、好ましくは130mM～175mM、好ましくは130mM～174mM、好ましくは130mM～173mM、好ましくは130mM～172mM、好ましくは130mM～171mM、好ましくは130mM～170mM、好ましくは130mM～169mM、好ましくは130mM～168mM、好ましくは130mM～167mM、好ましくは130mM～166mM、好ましくは130mM～165mM、好ましくは130mM～160mM、好ましくは130mM～159mM、好ましくは130mM～158mM、好ましくは130mM～157mM、好ましくは130mM～156mM、好ましくは130mM～155mM、好ましくは130mM～154mM、好ましくは130mM～153mM、好ましくは130mM～152mM、より好ましくは135mM～185mM、より好ましくは135mM～184mM、より好ましくは135mM～183mM、より好ましくは135mM～182mM、より好ましくは135mM～181mM、より好ましくは135mM～180mM、より好ましくは135mM～179mM、より好ましくは135mM～178mM、より好ましくは135mM～177mM、より好ましくは135mM～176mM、より好ましくは135mM～175mM、より好ましくは135mM～174mM、より好ましくは135mM～173mM、より好ましくは135mM～172mM、より好ましくは135mM～171mM、より好ましくは135mM～170mM、より好ましくは135mM～169mM、より好ましくは135mM～168mM、より好ましくは135mM～167mM、より好ましくは135mM～166mM、より好ましくは135mM～165mM、より好ましくは135mM～160mM、より好ましくは135mM～159mM、より好ましくは135mM～158mM、より好ましくは135mM～157mM、より好ましくは135mM～156mM、より好ましくは135mM～155mM、より好ましくは135mM～154mM、より好ましくは135mM～153mM、より好ましくは135mM～152mM、最も好ましくは140mM～185mM、最も好ましくは140mM～184mM、最も好ましくは140mM～183mM、最も好ましくは140mM～182mM、最も好ましくは140mM～181mM、最も好ましくは140mM～180mM、最も好ましくは140mM～179mM、最も好ましくは140mM～178mM、最も好ましくは140mM～177mM、最も好ましくは140mM～176mM、最も好ましくは140mM～175mM、最も好ましくは140mM～174mM、最も好ましくは140mM～173mM、最も好ましくは140mM～172mM、最も好ましくは140mM～171mM、最も好ましくは140mM～170mM、最も好ましくは140mM～169mM、最も好ましくは140mM～168mM、最も好ましくは140mM～167mM、最も好ましくは140mM～166mM、最も好ましくは140mM～165mM、最も好ましくは140mM～160mM、最も好ましくは140mM～159mM、最も好ましくは140mM～158mM、最も好ましくは140mM～157mM、最も好ましくは140mM～156mM、最も好ましくは140mM～155mM、最も好ましくは140mM～154mM、最も好ましくは140mM～153mM、最高に好ましくは140mM～152mM; ならびに/または
(iii) 190mM未満、189mM未満、188mM未満、187mM未満、186mM未満、185mM未満、184mM未満、183mM未満、182mM未満、181mM未満、180mM未満、179mM未満、178mM未満、177mM未満、176mM未満、175mM未満、174mM未満、173mM未満、172mM未満、171mM未満、170mM未満、169mM未満、168mM未満、167mM未満、166mM未満、165mM未満、160mM未満、159mM未満、158mM未満、157mM未満、156mM未満、155mM未満、154mM未満、153mM未満、152mM未満、好ましくは185mM未満、より好ましくは170mM未満、さらに好ましくは160mM未満、最も好ましくは155mM未満、最高に好ましくは152mMおよび152mM未満;
特性(E)は、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼが、該ポリペプチドの可溶性発現レベルと、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの可溶性発現レベルとの比として定義される以下の可溶性発現レベルを有することであり:
(i) 少なくとも1.04～最大1.38、好ましくは少なくとも1.07～最大1.38、好ましくは少なくとも1.10～最大1.38、好ましくは少なくとも1.31～最大1.38、好ましくは少なくとも1.33～最大1.38、好ましくは少なくとも1.36～最大1.38、より好ましくは少なくとも1.04～最大1.36、より好ましくは少なくとも1.07～最大1.36、より好ましくは少なくとも1.10～最大1.36、より好ましくは少なくとも1.31～最大1.36、より好ましくは少なくとも1.33～最大1.36、最も好ましくは1.36; ならびに/または
(ii) 少なくとも1.04～最大1.80、好ましくは少なくとも1.07～最大1.80、好ましくは少なくとも1.10～最大1.80、好ましくは少なくとも1.31～最大1.80、好ましくは少なくとも1.33～最大1.80、好ましくは少なくとも1.36～最大1.80、好ましくは少なくとも1.38～最大1.80、好ましくは少なくとも1.43～最大1.80、より好ましくは少なくとも1.04～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.07～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.10～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.31～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.33～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.36～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.38～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.43～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.47～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.62～最大1.75、さらに好ましくは少なくとも1.04～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.07～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.10～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.31～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.33～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.36～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.38～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.43～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.47～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.62～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.04～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.07～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.10～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.31～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.33～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.36～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.38～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.43～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.47～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.62～最大1.65、最高に好ましくは少なくとも1.10～1.63、少なくとも1.38～1.63、少なくとも1.43～1.63、および/もしくは1.63;
特性(F)は、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの、グルコース形成量として表されるフルクトースをグルコースに変換する際の触媒活性が、SEQ ID NO: 1に対して、以下の倍率で増加していることである:
少なくとも1.2倍～最大5倍、少なくとも1.2倍～最大4.5倍、少なくとも1.2倍～最大4倍、少なくとも1.2倍～最大3.5倍、少なくとも1.2倍～最大3.4倍、少なくとも1.2倍～最大3.3倍、少なくとも1.2倍～最大3.2倍、少なくとも1.2倍～最大3.1倍、少なくとも1.2倍～最大3倍、少なくとも1.2倍～最大2.9倍、少なくとも1.2倍～最大2.8倍、少なくとも1.2倍～最大2.7倍、少なくとも1.2倍～最大2.6倍、少なくとも1.2倍～最大2.5倍、少なくとも1.2倍～最大2.4倍、少なくとも1.2倍～最大2.3倍、少なくとも1.2倍～最大2.2倍、好ましくは少なくとも1.5倍～最大5倍、少なくとも1.5倍～最大4.5倍、少なくとも1.5倍～最大4倍、少なくとも1.5倍～最大3.5倍、少なくとも1.5倍～最大3.4倍、少なくとも1.5倍～最大3.3倍、少なくとも1.5倍～最大3.2倍、少なくとも1.5倍～最大3.1倍、少なくとも1.5倍～最大3倍、少なくとも1.5倍～最大2.9倍、少なくとも1.5倍～最大2.8倍、少なくとも1.5倍～最大2.7倍、少なくとも1.5倍～最大2.6倍、少なくとも1.5倍～最大2.5倍、少なくとも1.5倍～最大2.4倍、少なくとも1.5倍～最大2.3倍、少なくとも1.5倍～最大2.2倍、より好ましくは少なくとも1.9倍～最大5倍、少なくとも1.9倍～最大4.5倍、少なくとも1.9倍～最大4倍、少なくとも1.9倍～最大3.5倍、少なくとも1.9倍～最大3.4倍、少なくとも1.9倍～最大3.3倍、少なくとも1.9倍～最大3.2倍、少なくとも1.9倍～最大3.1倍、少なくとも1.9倍～最大3倍、少なくとも1.9倍～最大2.9倍、少なくとも1.9倍～最大2.8倍、少なくとも1.9倍～最大2.7倍、少なくとも1.9倍～最大2.6倍、少なくとも1.9倍～最大2.5倍、少なくとも1.9倍～最大2.4倍、少なくとも1.9倍～最大2.3倍、少なくとも1.9倍～最大2.2倍、さらに好ましくは少なくとも2.0倍～最大5倍、少なくとも2.0倍～最大4.5倍、少なくとも2.0倍～最大4倍、少なくとも2.0倍～最大3.5倍、少なくとも2.0倍～最大3.4倍、少なくとも2.0倍～最大3.3倍、少なくとも2.0倍～最大3.2倍、少なくとも2.0倍～最大3.1倍、少なくとも2.0倍～最大3倍、少なくとも2.0倍～最大2.9倍、少なくとも2.0倍～最大2.8倍、少なくとも2.0倍～最大2.7倍、少なくとも2.0倍～最大2.6倍、少なくとも2.0倍～最大2.5倍、少なくとも2.0倍～最大2.4倍、少なくとも2.0倍～最大2.3倍、少なくとも2.0倍～最大2.2倍、最も好ましくは少なくとも2.2倍～最大3.3倍。
第4の局面の第1の態様の一態様でもある、第4の局面の第2の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、フルクトース濃度50mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する活性、好ましくは活性値が、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対して以下の倍率で増加している:
少なくとも1.1倍～最大1.6倍、好ましくは少なくとも1.2倍～最大1.6倍、より好ましくは少なくとも1.3倍～最大1.6倍、最も好ましくは少なくとも1.4倍～最大1.6倍、または
少なくとも1.1倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.4倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.5倍～最大3.0倍、より好ましくは少なくとも1.6倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.7倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.8倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.9倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも2.0倍～最大3.0倍、より好ましくは少なくとも1.4倍～最大2.8倍、より好ましくは少なくとも1.5倍～最大2.8倍、より好ましくは少なくとも1.6倍～最大2.8倍、より好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.8倍、より好ましくは少なくとも1.8倍～最大2.8倍、より好ましくは少なくとも1.9倍～最大2.8倍、より好ましくは少なくとも2.0倍～最大2.8倍、さらに好ましくは少なくとも1.4倍～最大2.6倍、さらにいっそう好ましくは少なくとも1.5倍～最大2.6倍、より好ましくは少なくとも1.6倍～最大2.6倍、より好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.6倍、より好ましくは少なくとも1.8倍～最大2.6倍、より好ましくは少なくとも1.9倍～最大2.6倍、より好ましくは少なくとも2.0倍～最大2.6倍、最も好ましくは少なくとも1.4倍～最大2.4倍、最も好ましくは少なくとも1.5倍～最大2.4倍、最も好ましくは少なくとも1.6倍～最大2.4倍、最も好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.4倍、最も好ましくは少なくとも1.8倍～最大2.4倍、最も好ましくは少なくとも1.9倍～最大2.4倍、最も好ましくは少なくとも2.0倍～最大2.4倍、最高に好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.4倍。
第4の局面の第1および第2の態様の一態様でもある、第4の局面の第3の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、フルクトース濃度200mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する活性、好ましくは活性値は、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対して以下の倍率で増加している:
少なくとも1.2倍～最大1.6倍、より好ましくは少なくとも1.3倍～最大1.6倍、最も好ましくは少なくとも1.4倍～最大1.6倍、および/または
少なくとも1.2倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.3倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.4倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.5倍～最大3.0倍、より好ましくは少なくとも1.6倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.7倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.8倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.9倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも2.0倍～最大3.0倍、より好ましくは少なくとも1.3倍～最大2.5倍、より好ましくは少なくとも1.4倍～最大2.5倍、より好ましくは少なくとも1.5倍～最大2.5倍、より好ましくは少なくとも1.6倍～最大2.5倍、より好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.5倍、より好ましくは少なくとも1.8倍～最大2.5倍、より好ましくは少なくとも1.9倍～最大2.5倍、より好ましくは少なくとも2.0倍～最大2.5倍、さらに好ましくは少なくとも1.3倍～最大2.2倍、さらに好ましくは少なくとも1.4倍～最大2.2倍、さらに好ましくは少なくとも1.5倍～最大2.2倍、より好ましくは少なくとも1.6倍～最大2.2倍、より好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.2倍、より好ましくは少なくとも1.8倍～最大2.2倍、より好ましくは少なくとも1.9倍～最大2.2倍、より好ましくは少なくとも2.0倍～最大2.2倍、最高に好ましくは少なくとも1.5倍～最大2.2倍。
第4の局面の第1、第2、および第3の態様の一態様でもある、第4の局面の第4の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、温度74℃で15分間のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのインキュベーション後の残留活性値として表される熱安定性が、以下の%である:
少なくとも30%～最大100%、少なくとも40%～最大100%、少なくとも50%～最大100%、少なくとも30%～最大75%、少なくとも40%～最大75%、少なくとも50%～最大75%、少なくとも30%～最大65%、少なくとも40%～最大65%、少なくとも50%～最大65%、少なくとも41%～最大64%、および/または
少なくとも30%～最大100%、少なくとも31%～最大100%、少なくとも32%～最大100%、少なくとも33%～最大100%、少なくとも34%～最大100%、少なくとも35%～最大100%、少なくとも36%～最大100%、少なくとも37%～最大100%、少なくとも38%～最大100%、少なくとも39%～最大100%、少なくとも40%～最大100%、少なくとも41%～最大100%、少なくとも42%～最大100%、少なくとも43%～最大100%、少なくとも44%～最大100%、少なくとも45%～最大100%、少なくとも46%～最大100%、少なくとも47%～最大100%、少なくとも48%～最大100%、少なくとも49%～最大100%、少なくとも50%～最大100%、少なくとも51%～最大100%、少なくとも52%～最大100%、少なくとも53%～最大100%、少なくとも54%～最大100%、少なくとも55%～最大100%、少なくとも56%～最大100%、少なくとも57%～最大100%、少なくとも58%～最大100%、少なくとも59%～最大100%、少なくとも60%～最大100%、少なくとも61%～最大100%、少なくとも62%～最大100%、少なくとも63%～最大100%、少なくとも64%～最大100%、少なくとも65%～最大100%、少なくとも66%～最大100%、少なくとも67%～最大100%、少なくとも68%～最大100%、少なくとも69%～最大100%、少なくとも70%～最大100%、少なくとも71%～最大100%、少なくとも72%～最大100%、少なくとも73%～最大100%、少なくとも74%～最大100%、少なくとも75%～最大100%、少なくとも76%～最大100%、少なくとも77%～最大100%、少なくとも78%～最大100%、少なくとも79%～最大100%、少なくとも80%～最大100%、少なくとも30%～最大75%、少なくとも31%～最大75%、少なくとも32%～最大75%、少なくとも33%～最大75%、少なくとも34%～最大75%、少なくとも35%～最大75%、少なくとも36%～最大75%、少なくとも37%～最大75%、少なくとも38%～最大75%、少なくとも39%～最大75%、少なくとも40%～最大75%、少なくとも41%～最大75%、少なくとも42%～最大75%、少なくとも43%～最大75%、少なくとも44%～最大75%、少なくとも45%～最大75%、少なくとも46%～最大75%、少なくとも47%～最大75%、少なくとも48%～最大75%、少なくとも49%～最大75%、少なくとも50%～最大75%、少なくとも51%～最大75%、少なくとも52%～最大75%、少なくとも53%～最大75%、少なくとも54%～最大75%、少なくとも55%～最大75%、少なくとも56%～最大75%、少なくとも57%～最大75%、少なくとも58%～最大75%、少なくとも59%～最大75%、少なくとも60%～最大75%、少なくとも61%～最大75%、少なくとも62%～最大75%、少なくとも30%～最大70%、少なくとも31%～最大70%、少なくとも32%～最大70%、少なくとも33%～最大70%、少なくとも34%～最大70%、少なくとも35%～最大70%、少なくとも36%～最大70%、少なくとも37%～最大70%、少なくとも38%～最大70%、少なくとも39%～最大70%、少なくとも40%～最大70%、少なくとも41%～最大70%、少なくとも42%～最大70%、少なくとも43%～最大70%、少なくとも44%～最大70%、少なくとも45%～最大70%、少なくとも46%～最大70%、少なくとも47%～最大70%、少なくとも48%～最大70%、少なくとも49%～最大70%、少なくとも50%～最大70%、少なくとも51%～最大70%、少なくとも52%～最大70%、少なくとも53%～最大70%、少なくとも54%～最大70%、少なくとも55%～最大70%、少なくとも56%～最大70%、少なくとも57%～最大70%、少なくとも58%～最大70%、少なくとも59%～最大70%、少なくとも60%～最大70%、少なくとも61%～最大70%、少なくとも62%～最大70%、少なくとも30%～最大65%、少なくとも31%～最大65%、少なくとも32%～最大65%、少なくとも33%～最大65%、少なくとも34%～最大65%、少なくとも35%～最大65%、少なくとも36%～最大65%、少なくとも37%～最大65%、少なくとも38%～最大65%、少なくとも39%～最大65%、少なくとも40%～最大65%、少なくとも41%～最大65%、少なくとも42%～最大65%、少なくとも43%～最大65%、少なくとも44%～最大65%、少なくとも45%～最大65%、少なくとも46%～最大65%、少なくとも47%～最大65%、少なくとも48%～最大65%、少なくとも49%～最大65%、少なくとも50%～最大65%、少なくとも51%～最大65%、少なくとも52%～最大65%、少なくとも53%～最大65%、少なくとも54%～最大65%、少なくとも55%～最大65%、少なくとも56%～最大65%、少なくとも57%～最大65%、少なくとも58%～最大65%、少なくとも59%～最大65%、少なくとも60%～最大65%、少なくとも61%～最大65%、少なくとも62%～最大65%、より好ましくは少なくとも30%～最大65%、少なくとも34%～最大65%、少なくとも35%～最大65%、少なくとも38%～最大65%、少なくとも40%～最大65%、少なくとも41%～最大65%、少なくとも42%～最大65%、少なくとも46%～最大65%、少なくとも47%～最大65%、少なくとも50%～最大65%、少なくとも55%～最大65%、少なくとも59%～最大65%、少なくとも60%～最大65%、少なくとも62%～最大65%、さらに好ましくは少なくとも40%～最大65%、さらに好ましくは少なくとも60%～最大65%、最も好ましくは62%。
第4の局面の第1、第2、第3、および第4の態様の一態様でもある、第4の局面の第5の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは以下のKm値を示す:
100mM～190mM、好ましくは130mM～190mM、好ましくは160mM～190mM、より好ましくは170mM～185mM、最も好ましくは175mM～180mM; ならびに/または
50mM～190mM、50mM～189mM、50mM～188mM、50mM～187mM、50mM～186mM、50mM～185mM、好ましくは50mM～184mM、好ましくは50mM～183mM、好ましくは50mM～182mM、好ましくは50mM～181mM、好ましくは50mM～180mM、好ましくは50mM～179mM、好ましくは50mM～178mM、好ましくは50mM～177mM、好ましくは50mM～176mM、好ましくは50mM～175mM、好ましくは50mM～174mM、好ましくは50mM～173mM、好ましくは50mM～172mM、好ましくは50mM～171mM、好ましくは50mM～170mM、好ましくは50mM～169mM、好ましくは50mM～168mM、好ましくは50mM～167mM、好ましくは50mM～166mM、好ましくは50mM～165mM、好ましくは50mM～160mM、好ましくは50mM～159mM、好ましくは50mM～158mM、好ましくは50mM～157mM、好ましくは50mM～156mM、好ましくは50mM～155mM、好ましくは50mM～154mM、好ましくは50mM～153mM、好ましくは50mM～152mM、75mM～190mM、75mM～189mM、75mM～188mM、75mM～187mM、75mM～186mM、75mM～185mM、好ましくは75mM～184mM、好ましくは75mM～183mM、好ましくは75mM～182mM、好ましくは75mM～181mM、好ましくは75mM～180mM、好ましくは75mM～179mM、好ましくは75mM～178mM、好ましくは75mM～177mM、好ましくは75mM～176mM、好ましくは75mM～175mM、好ましくは75mM～174mM、好ましくは75mM～173mM、好ましくは75mM～172mM、好ましくは75mM～171mM、好ましくは75mM～170mM、好ましくは75mM～169mM、好ましくは75mM～168mM、好ましくは75mM～167mM、好ましくは75mM～166mM、好ましくは75mM～165mM、好ましくは75mM～160mM、好ましくは75mM～159mM、好ましくは75mM～158mM、好ましくは75mM～157mM、好ましくは75mM～156mM、好ましくは75mM～155mM、好ましくは75mM～154mM、好ましくは75mM～153mM、好ましくは75mM～152mM、100mM～190mM、100mM～189mM、100mM～188mM、100mM～187mM、100mM～186mM、100mM～185mM、好ましくは100mM～184mM、好ましくは100mM～183mM、好ましくは100mM～182mM、好ましくは100mM～181mM、好ましくは100mM～180mM、好ましくは100mM～179mM、好ましくは100mM～178mM、好ましくは100mM～177mM、好ましくは100mM～176mM、好ましくは100mM～1100mM、好ましくは100mM～174mM、好ましくは100mM～173mM、好ましくは100mM～172mM、好ましくは100mM～171mM、好ましくは100mM～170mM、好ましくは100mM～169mM、好ましくは100mM～168mM、好ましくは100mM～167mM、好ましくは100mM～166mM、好ましくは100mM～165mM、好ましくは100mM～160mM、好ましくは100mM～159mM、好ましくは100mM～158mM、好ましくは100mM～157mM、好ましくは100mM～156mM、好ましくは100mM～155mM、好ましくは100mM～154mM、好ましくは100mM～153mM、好ましくは100mM～152mM、115mM～190mM、115mM～189mM、115mM～188mM、115mM～187mM、115mM～186mM、115mM～185mM、好ましくは115mM～184mM、好ましくは115mM～183mM、好ましくは115mM～182mM、好ましくは115mM～181mM、好ましくは115mM～180mM、好ましくは115mM～179mM、好ましくは115mM～178mM、好ましくは115mM～177mM、好ましくは115mM～176mM、好ましくは115mM～175mM、好ましくは115mM～174mM、好ましくは115mM～173mM、好ましくは115mM～172mM、好ましくは115mM～171mM、好ましくは115mM～170mM、好ましくは115mM～169mM、好ましくは115mM～168mM、好ましくは115mM～167mM、好ましくは115mM～166mM、好ましくは115mM～165mM、好ましくは115mM～160mM、好ましくは115mM～159mM、好ましくは115mM～158mM、好ましくは115mM～157mM、好ましくは115mM～156mM、好ましくは115mM～155mM、好ましくは115mM～154mM、好ましくは115mM～153mM、好ましくは115mM～152mM、130mM～185mM、好ましくは130mM～184mM、好ましくは130mM～183mM、好ましくは130mM～182mM、好ましくは130mM～181mM、好ましくは130mM～180mM、好ましくは130mM～179mM、好ましくは130mM～178mM、好ましくは130mM～177mM、好ましくは130mM～176mM、好ましくは130mM～175mM、好ましくは130mM～174mM、好ましくは130mM～173mM、好ましくは130mM～172mM、好ましくは130mM～171mM、好ましくは130mM～170mM、好ましくは130mM～169mM、好ましくは130mM～168mM、好ましくは130mM～167mM、好ましくは130mM～166mM、好ましくは130mM～165mM、好ましくは130mM～160mM、好ましくは130mM～159mM、好ましくは130mM～158mM、好ましくは130mM～157mM、好ましくは130mM～156mM、好ましくは130mM～155mM、好ましくは130mM～154mM、好ましくは130mM～153mM、好ましくは130mM～152mM、より好ましくは135mM～185mM、より好ましくは135mM～184mM、より好ましくは135mM～183mM、より好ましくは135mM～182mM、より好ましくは135mM～181mM、より好ましくは135mM～180mM、より好ましくは135mM～179mM、より好ましくは135mM～178mM、より好ましくは135mM～177mM、より好ましくは135mM～176mM、より好ましくは135mM～175mM、より好ましくは135mM～174mM、より好ましくは135mM～173mM、より好ましくは135mM～172mM、より好ましくは135mM～171mM、より好ましくは135mM～170mM、より好ましくは135mM～169mM、より好ましくは135mM～168mM、より好ましくは135mM～167mM、より好ましくは135mM～166mM、より好ましくは135mM～165mM、より好ましくは135mM～160mM、より好ましくは135mM～159mM、より好ましくは135mM～158mM、より好ましくは135mM～157mM、より好ましくは135mM～156mM、より好ましくは135mM～155mM、より好ましくは135mM～154mM、より好ましくは135mM～153mM、より好ましくは135mM～152mM、最も好ましくは140mM～185mM、最も好ましくは140mM～184mM、最も好ましくは140mM～183mM、最も好ましくは140mM～182mM、最も好ましくは140mM～181mM、最も好ましくは140mM～180mM、最も好ましくは140mM～179mM、最も好ましくは140mM～178mM、最も好ましくは140mM～177mM、最も好ましくは140mM～176mM、最も好ましくは140mM～175mM、最も好ましくは140mM～174mM、最も好ましくは140mM～173mM、最も好ましくは140mM～172mM、最も好ましくは140mM～171mM、最も好ましくは140mM～170mM、最も好ましくは140mM～169mM、最も好ましくは140mM～168mM、最も好ましくは140mM～167mM、最も好ましくは140mM～166mM、最も好ましくは140mM～165mM、最も好ましくは140mM～160mM、最も好ましくは140mM～159mM、最も好ましくは140mM～158mM、最も好ましくは140mM～157mM、最も好ましくは140mM～156mM、最も好ましくは140mM～155mM、最も好ましくは140mM～154mM、最も好ましくは140mM～153mM、最高に好ましくは140mM～152mM; ならびに/または
190mM未満、189mM未満、188mM未満、187mM未満、186mM未満、185mM未満、184mM未満、183mM未満、182mM未満、181mM未満、180mM未満、179mM未満、178mM未満、177mM未満、176mM未満、175mM未満、174mM未満、173mM未満、172mM未満、171mM未満、170mM未満、169mM未満、168mM未満、167mM未満、166mM未満、165mM未満、160mM未満、159mM未満、158mM未満、157mM未満、156mM未満、155mM未満、154mM未満、153mM未満、152mM未満、好ましくは185mM未満、より好ましくは170mM未満、さらに好ましくは160mM未満、最も好ましくは155mM未満、最高に好ましくは152mMおよび152mM未満。
第4の局面の第1、第2、第3、第4、および第5の態様の一態様でもある、第4の局面の第6の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、該ポリペプチドの可溶性発現レベルとSEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの可溶性発現レベルとの比として定義される可溶性発現レベルが、以下である:
少なくとも1.04～最大1.38、好ましくは少なくとも1.07～最大1.38、好ましくは少なくとも1.10～最大1.38、好ましくは少なくとも1.31～最大1.38、好ましくは少なくとも1.33～最大1.38、好ましくは少なくとも1.36～最大1.38、より好ましくは少なくとも1.04～最大1.36、より好ましくは少なくとも1.07～最大1.36、より好ましくは少なくとも1.10～最大1.36、より好ましくは少なくとも1.31～最大1.36、より好ましくは少なくとも1.33～最大1.36、最も好ましくは1.36; ならびに/または
少なくとも1.04～最大1.80、好ましくは少なくとも1.07～最大1.80、好ましくは少なくとも1.10～最大1.80、好ましくは少なくとも1.31～最大1.80、好ましくは少なくとも1.33～最大1.80、好ましくは少なくとも1.36～最大1.80、好ましくは少なくとも1.38～最大1.80、好ましくは少なくとも1.43～最大1.80、より好ましくは少なくとも1.04～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.07～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.10～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.31～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.33～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.36～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.38～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.43～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.47～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.62～最大1.75、さらに好ましくは少なくとも1.04～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.07～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.10～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.31～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.33～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.36～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.38～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.43～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.47～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.62～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.04～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.07～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.10～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.31～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.33～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.36～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.38～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.43～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.47～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.62～最大1.65、最高に好ましくは少なくとも1.10～1.63、少なくとも1.38～1.63、少なくとも1.43～1.63、および/もしくは1.63。
第4の局面の第1、第2、第3、第4、および第5の態様、またはいずれかの他の態様の一態様でもある、第4の局面の好ましい一態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、グルコース形成量として表される、フルクトースをグルコースに変換する際のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの触媒活性が、SEQ ID NO: 1に対して以下の倍率で増加している:
少なくとも1.2倍～最大5倍、少なくとも1.2倍～最大4.5倍、少なくとも1.2倍～最大4倍、少なくとも1.2倍～最大3.5倍、少なくとも1.2倍～最大3.4倍、少なくとも1.2倍～最大3.3倍、少なくとも1.2倍～最大3.2倍、少なくとも1.2倍～最大3.1倍、少なくとも1.2倍～最大3倍、少なくとも1.2倍～最大2.9倍、少なくとも1.2倍～最大2.8倍、少なくとも1.2倍～最大2.7倍、少なくとも1.2倍～最大2.6倍、少なくとも1.2倍～最大2.5倍、少なくとも1.2倍～最大2.4倍、少なくとも1.2倍～最大2.3倍、少なくとも1.2倍～最大2.2倍、好ましくは少なくとも1.5倍～最大5倍、少なくとも1.5倍～最大4.5倍、少なくとも1.5倍～最大4倍、少なくとも1.5倍～最大3.5倍、少なくとも1.5倍～最大3.4倍、少なくとも1.5倍～最大3.3倍、少なくとも1.5倍～最大3.2倍、少なくとも1.5倍～最大3.1倍、少なくとも1.5倍～最大3倍、少なくとも1.5倍～最大2.9倍、少なくとも1.5倍～最大2.8倍、少なくとも1.5倍～最大2.7倍、少なくとも1.5倍～最大2.6倍、少なくとも1.5倍～最大2.5倍、少なくとも1.5倍～最大2.4倍、少なくとも1.5倍～最大2.3倍、少なくとも1.5倍～最大2.2倍、より好ましくは少なくとも1.9倍～最大5倍、少なくとも1.9倍～最大4.5倍、少なくとも1.9倍～最大4倍、少なくとも1.9倍～最大3.5倍、少なくとも1.9倍～最大3.4倍、少なくとも1.9倍～最大3.3倍、少なくとも1.9倍～最大3.2倍、少なくとも1.9倍～最大3.1倍、少なくとも1.9倍～最大3倍、少なくとも1.9倍～最大2.9倍、少なくとも1.9倍～最大2.8倍、少なくとも1.9倍～最大2.7倍、少なくとも1.9倍～最大2.6倍、少なくとも1.9倍～最大2.5倍、少なくとも1.9倍～最大2.4倍、少なくとも1.9倍～最大2.3倍、少なくとも1.9倍～最大2.2倍、さらに好ましくは少なくとも2.0倍～最大5倍、少なくとも2.0倍～最大4.5倍、少なくとも2.0倍～最大4倍、少なくとも2.0倍～最大3.5倍、少なくとも2.0倍～最大3.4倍、少なくとも2.0倍～最大3.3倍、少なくとも2.0倍～最大3.2倍、少なくとも2.0倍～最大3.1倍、少なくとも2.0倍～最大3倍、少なくとも2.0倍～最大2.9倍、少なくとも2.0倍～最大2.8倍、少なくとも2.0倍～最大2.7倍、少なくとも2.0倍～最大2.6倍、少なくとも2.0倍～最大2.5倍、少なくとも2.0倍～最大2.4倍、少なくとも2.0倍～最大2.3倍、少なくとも2.0倍～最大2.2倍、最も好ましくは少なくとも2.2倍～最大3.3倍。
第4の局面の第1、第2、第3、第4、第5、および第6の態様の一態様でもある、第4の局面の第7の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、第1の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、および第10の態様のうちいずれか1つのそれであり、好ましくは、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、第1の局面の第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、および第10の態様のうちいずれか1つのそれであり、より好ましくは、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、第1の局面の第5、第6、第7、第8、第9、および第10の態様のうちいずれか1つのそれであり、さらに好ましくは、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、第1の局面の第7、第8、第9、および第10の態様のうちいずれか1つのそれであり、最も好ましくは、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、第1の局面の第9および第10の態様のうちいずれか1つのそれであり、かつ/あるいは、
ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、第1の局面の第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、および第95の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つのそれであり、好ましくは、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、第1の局面の第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、および第95の態様のうちいずれか1つのそれであり、より好ましくは、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、第1の局面の第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、および第95の態様のうちいずれか1つのそれであり、さらに好ましくは、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、第1の局面の第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、および第95の態様のうちいずれか1つのそれであり、最も好ましくは、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、第1の局面の第63および第95の態様のうちいずれか1つ、ならびに第1の局面の第102、第103、第104、第105、第107、第108、第109、第110、第111、第112、第114、第115、第116、第117、第119、第120、第121、第122、第124、第125、第126、第127、第128、第130、第131、第132、および第133の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つのそれである。
第4の局面の第1の態様の一態様でもある、第4の局面の第8の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、フルクトース濃度50mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する活性、好ましくは活性値の、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対する以下の倍率での増加を示し:
少なくとも1.1倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.4倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.5倍～最大3.0倍、より好ましくは少なくとも1.6倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.7倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.8倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.9倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも2.0倍～最大3.0倍、より好ましくは少なくとも1.4倍～最大2.8倍、より好ましくは少なくとも1.5倍～最大2.8倍、より好ましくは少なくとも1.6倍～最大2.8倍、より好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.8倍、より好ましくは少なくとも1.8倍～最大2.8倍、より好ましくは少なくとも1.9倍～最大2.8倍、より好ましくは少なくとも2.0倍～最大2.8倍、さらに好ましくは少なくとも1.4倍～最大2.6倍、さらに好ましくは少なくとも1.5倍～最大2.6倍、より好ましくは少なくとも1.6倍～最大2.6倍、より好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.6倍、より好ましくは少なくとも1.8倍～最大2.6倍、より好ましくは少なくとも1.9倍～最大2.6倍、より好ましくは少なくとも2.0倍～最大2.6倍、最も好ましくは少なくとも1.4倍～最大2.4倍、最も好ましくは少なくとも1.5倍～最大2.4倍、最も好ましくは少なくとも1.6倍～最大2.4倍、最も好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.4倍、最も好ましくは少なくとも1.8倍～最大2.4倍、最も好ましくは少なくとも1.9倍～最大2.4倍、最も好ましくは少なくとも2.0倍～最大2.4倍、最高に好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.4倍、
ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、第1の局面の第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、および第97の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つであり、好ましくは、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、第1の局面の第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、および第97の態様のうちいずれか1つであり、より好ましくは、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、第1の局面の第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、および第97の態様のうちいずれか1つであり、さらに好ましくは、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、第1の局面の第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、および第97の態様のうちいずれか1つであり、最も好ましくは、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、第1の局面の第63および第97の態様のうちいずれか1つ、第1の局面の第104、第105、第106、第107、第109、第110、第111、第112、第113、第114、第116、第117、第118、第119、第121、第122、第123、第124、第126、第127、第128、第129、第130、第132、第133、第134、および第135の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのうちいずれか1つである。
第4の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、および第8の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第4の局面の第9の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、フルクトース濃度200mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する活性、好ましくは活性値の、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対する以下の倍率での増加を示し:
少なくとも1.2倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.3倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.4倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.5倍～最大3.0倍、より好ましくは少なくとも1.6倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.7倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.8倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.9倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも2.0倍～最大3.0倍、より好ましくは少なくとも1.3倍～最大2.5倍、より好ましくは少なくとも1.4倍～最大2.5倍、より好ましくは少なくとも1.5倍～最大2.5倍、より好ましくは少なくとも1.6倍～最大2.5倍、より好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.5倍、より好ましくは少なくとも1.8倍～最大2.5倍、より好ましくは少なくとも1.9倍～最大2.5倍、より好ましくは少なくとも2.0倍～最大2.5倍、いっそう好ましくは少なくとも1.3倍～最大2.2倍、さらに好ましくは少なくとも1.4倍～最大2.2倍、さらに好ましくは少なくとも1.5倍～最大2.2倍、より好ましくは少なくとも1.6倍～最大2.2倍、より好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.2倍、より好ましくは少なくとも1.8倍～最大2.2倍、より好ましくは少なくとも1.9倍～最大2.2倍、より好ましくは少なくとも2.0倍～最大2.2倍、最高に好ましくは少なくとも1.5倍～最大2.2倍、
ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、第1の局面の第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、および第97の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つ、好ましくは、第1の局面の第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、および第97の態様のうちいずれか1つ、より好ましくは、第1の局面の第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、および第97の態様のうちいずれか1つ、さらに好ましくは、第1の局面の第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、および第97の態様のうちいずれか1つ、最も好ましくは、第1の局面の第63および第97の態様のうちいずれか1つ、最も好ましくは、第1の局面の第104、第105、第106、第107、第109、第110、第111、第112、第113、第114、第116、第117、第118、第119、第121、第122、第123、第124、第126、第127、第128、第129、第130、第132、第133、第134、および第135の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つである。
第4の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、および第9の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第4の局面の第10の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、温度74℃で15分間のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのインキュベーション後の残留活性値として表される熱安定性が、以下の%であり:
少なくとも30%～最大100%、少なくとも31%～最大100%、少なくとも32%～最大100%、少なくとも33%～最大100%、少なくとも34%～最大100%、少なくとも35%～最大100%、少なくとも36%～最大100%、少なくとも37%～最大100%、少なくとも38%～最大100%、少なくとも39%～最大100%、少なくとも40%～最大100%、少なくとも41%～最大100%、少なくとも42%～最大100%、少なくとも43%～最大100%、少なくとも44%～最大100%、少なくとも45%～最大100%、少なくとも46%～最大100%、少なくとも47%～最大100%、少なくとも48%～最大100%、少なくとも49%～最大100%、少なくとも50%～最大100%、少なくとも51%～最大100%、少なくとも52%～最大100%、少なくとも53%～最大100%、少なくとも54%～最大100%、少なくとも55%～最大100%、少なくとも56%～最大100%、少なくとも57%～最大100%、少なくとも58%～最大100%、少なくとも59%～最大100%、少なくとも60%～最大100%、少なくとも61%～最大100%、少なくとも62%～最大100%、少なくとも63%～最大100%、少なくとも64%～最大100%、少なくとも65%～最大100%、少なくとも66%～最大100%、少なくとも67%～最大100%、少なくとも68%～最大100%、少なくとも69%～最大100%、少なくとも70%～最大100%、少なくとも71%～最大100%、少なくとも72%～最大100%、少なくとも73%～最大100%、少なくとも74%～最大100%、少なくとも75%～最大100%、少なくとも76%～最大100%、少なくとも77%～最大100%、少なくとも78%～最大100%、少なくとも79%～最大100%、少なくとも80%～最大100%、少なくとも30%～最大75%、少なくとも31%～最大75%、少なくとも32%～最大75%、少なくとも33%～最大75%、少なくとも34%～最大75%、少なくとも35%～最大75%、少なくとも36%～最大75%、少なくとも37%～最大75%、少なくとも38%～最大75%、少なくとも39%～最大75%、少なくとも40%～最大75%、少なくとも41%～最大75%、少なくとも42%～最大75%、少なくとも43%～最大75%、少なくとも44%～最大75%、少なくとも45%～最大75%、少なくとも46%～最大75%、少なくとも47%～最大75%、少なくとも48%～最大75%、少なくとも49%～最大75%、少なくとも50%～最大75%、少なくとも51%～最大75%、少なくとも52%～最大75%、少なくとも53%～最大75%、少なくとも54%～最大75%、少なくとも55%～最大75%、少なくとも56%～最大75%、少なくとも57%～最大75%、少なくとも58%～最大75%、少なくとも59%～最大75%、少なくとも60%～最大75%、少なくとも61%～最大75%、少なくとも62%～最大75%、少なくとも30%～最大70%、少なくとも31%～最大70%、少なくとも32%～最大70%、少なくとも33%～最大70%、少なくとも34%～最大70%、少なくとも35%～最大70%、少なくとも36%～最大70%、少なくとも37%～最大70%、少なくとも38%～最大70%、少なくとも39%～最大70%、少なくとも40%～最大70%、少なくとも41%～最大70%、少なくとも42%～最大70%、少なくとも43%～最大70%、少なくとも44%～最大70%、少なくとも45%～最大70%、少なくとも46%～最大70%、少なくとも47%～最大70%、少なくとも48%～最大70%、少なくとも49%～最大70%、少なくとも50%～最大70%、少なくとも51%～最大70%、少なくとも52%～最大70%、少なくとも53%～最大70%、少なくとも54%～最大70%、少なくとも55%～最大70%、少なくとも56%～最大70%、少なくとも57%～最大70%、少なくとも58%～最大70%、少なくとも59%～最大70%、少なくとも60%～最大70%、少なくとも61%～最大70%、少なくとも62%～最大70%、少なくとも30%～最大65%、少なくとも31%～最大65%、少なくとも32%～最大65%、少なくとも33%～最大65%、少なくとも34%～最大65%、少なくとも35%～最大65%、少なくとも36%～最大65%、少なくとも37%～最大65%、少なくとも38%～最大65%、少なくとも39%～最大65%、少なくとも40%～最大65%、少なくとも41%～最大65%、少なくとも42%～最大65%、少なくとも43%～最大65%、少なくとも44%～最大65%、少なくとも45%～最大65%、少なくとも46%～最大65%、少なくとも47%～最大65%、少なくとも48%～最大65%、少なくとも49%～最大65%、少なくとも50%～最大65%、少なくとも51%～最大65%、少なくとも52%～最大65%、少なくとも53%～最大65%、少なくとも54%～最大65%、少なくとも55%～最大65%、少なくとも56%～最大65%、少なくとも57%～最大65%、少なくとも58%～最大65%、少なくとも59%～最大65%、少なくとも60%～最大65%、少なくとも61%～最大65%、少なくとも62%～最大65%、より好ましくは少なくとも30%～最大65%、少なくとも34%～最大65%、少なくとも35%～最大65%、少なくとも38%～最大65%、少なくとも40%～最大65%、少なくとも41%～最大65%、少なくとも42%～最大65%、少なくとも46%～最大65%、少なくとも47%～最大65%、少なくとも50%～最大65%、少なくとも55%～最大65%、少なくとも59%～最大65%、少なくとも60%～最大65%、少なくとも62%～最大65%、さらに好ましくは少なくとも40%～最大65%、さらに好ましくは少なくとも60%～最大65%、最も好ましくは62%、
ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、第1の局面の第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、および第97の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つであり、好ましくは、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、第1の局面の第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、および第97の態様のうちいずれか1つであり、より好ましくは、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、第1の局面の第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、および第97の態様のうちいずれか1つであり、さらに好ましくは、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、第1の局面の第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、および第97の態様のうちいずれか1つであり、最も好ましくは、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、第1の局面の第63および第97の態様のうちいずれか1つ、第1の局面の第104、第105、第106、第107、第109、第110、第111、第112、第113、第114、第116、第117、第118、第119、第121、第122、第123、第124、第126、第127、第128、第129、第130、第132、第133、第134、および第135の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのうちいずれか1つである。
第4の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、および第10の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第4の局面の第11の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは以下のKM値を示し:
50mM～190mM、50mM～189mM、50mM～188mM、50mM～187mM、50mM～186mM、50mM～185mM、好ましくは50mM～184mM、好ましくは50mM～183mM、好ましくは50mM～182mM、好ましくは50mM～181mM、好ましくは50mM～180mM、好ましくは50mM～179mM、好ましくは50mM～178mM、好ましくは50mM～177mM、好ましくは50mM～176mM、好ましくは50mM～175mM、好ましくは50mM～174mM、好ましくは50mM～173mM、好ましくは50mM～172mM、好ましくは50mM～171mM、好ましくは50mM～170mM、好ましくは50mM～169mM、好ましくは50mM～168mM、好ましくは50mM～167mM、好ましくは50mM～166mM、好ましくは50mM～165mM、好ましくは50mM～160mM、好ましくは50mM～159mM、好ましくは50mM～158mM、好ましくは50mM～157mM、好ましくは50mM～156mM、好ましくは50mM～155mM、好ましくは50mM～154mM、好ましくは50mM～153mM、好ましくは50mM～152mM、75mM～190mM、75mM～189mM、75mM～188mM、75mM～187mM、75mM～186mM、75mM～185mM、好ましくは75mM～184mM、好ましくは75mM～183mM、好ましくは75mM～182mM、好ましくは75mM～181mM、好ましくは75mM～180mM、好ましくは75mM～179mM、好ましくは75mM～178mM、好ましくは75mM～177mM、好ましくは75mM～176mM、好ましくは75mM～175mM、好ましくは75mM～174mM、好ましくは75mM～173mM、好ましくは75mM～172mM、好ましくは75mM～171mM、好ましくは75mM～170mM、好ましくは75mM～169mM、好ましくは75mM～168mM、好ましくは75mM～167mM、好ましくは75mM～166mM、好ましくは75mM～165mM、好ましくは75mM～160mM、好ましくは75mM～159mM、好ましくは75mM～158mM、好ましくは75mM～157mM、好ましくは75mM～156mM、好ましくは75mM～155mM、好ましくは75mM～154mM、好ましくは75mM～153mM、好ましくは75mM～152mM、100mM～190mM、100mM～189mM、100mM～188mM、100mM～187mM、100mM～186mM、100mM～185mM、好ましくは100mM～184mM、好ましくは100mM～183mM、好ましくは100mM～182mM、好ましくは100mM～181mM、好ましくは100mM～180mM、好ましくは100mM～179mM、好ましくは100mM～178mM、好ましくは100mM～177mM、好ましくは100mM～176mM、好ましくは100mM～1100mM、好ましくは100mM～174mM、好ましくは100mM～173mM、好ましくは100mM～172mM、好ましくは100mM～171mM、好ましくは100mM～170mM、好ましくは100mM～169mM、好ましくは100mM～168mM、好ましくは100mM～167mM、好ましくは100mM～166mM、好ましくは100mM～165mM、好ましくは100mM～160mM、好ましくは100mM～159mM、好ましくは100mM～158mM、好ましくは100mM～157mM、好ましくは100mM～156mM、好ましくは100mM～155mM、好ましくは100mM～154mM、好ましくは100mM～153mM、好ましくは100mM～152mM、115mM～190mM、115mM～189mM、115mM～188mM、115mM～187mM、115mM～186mM、115mM～185mM、好ましくは115mM～184mM、好ましくは115mM～183mM、好ましくは115mM～182mM、好ましくは115mM～181mM、好ましくは115mM～180mM、好ましくは115mM～179mM、好ましくは115mM～178mM、好ましくは115mM～177mM、好ましくは115mM～176mM、好ましくは115mM～175mM、好ましくは115mM～174mM、好ましくは115mM～173mM、好ましくは115mM～172mM、好ましくは115mM～171mM、好ましくは115mM～170mM、好ましくは115mM～169mM、好ましくは115mM～168mM、好ましくは115mM～167mM、好ましくは115mM～166mM、好ましくは115mM～165mM、好ましくは115mM～160mM、好ましくは115mM～159mM、好ましくは115mM～158mM、好ましくは115mM～157mM、好ましくは115mM～156mM、好ましくは115mM～155mM、好ましくは115mM～154mM、好ましくは115mM～153mM、好ましくは115mM～152mM、130mM～185mM、好ましくは130mM～184mM、好ましくは130mM～183mM、好ましくは130mM～182mM、好ましくは130mM～181mM、好ましくは130mM～180mM、好ましくは130mM～179mM、好ましくは130mM～178mM、好ましくは130mM～177mM、好ましくは130mM～176mM、好ましくは130mM～175mM、好ましくは130mM～174mM、好ましくは130mM～173mM、好ましくは130mM～172mM、好ましくは130mM～171mM、好ましくは130mM～170mM、好ましくは130mM～169mM、好ましくは130mM～168mM、好ましくは130mM～167mM、好ましくは130mM～166mM、好ましくは130mM～165mM、好ましくは130mM～160mM、好ましくは130mM～159mM、好ましくは130mM～158mM、好ましくは130mM～157mM、好ましくは130mM～156mM、好ましくは130mM～155mM、好ましくは130mM～154mM、好ましくは130mM～153mM、好ましくは130mM～152mM、より好ましくは135mM～185mM、より好ましくは135mM～184mM、より好ましくは135mM～183mM、より好ましくは135mM～182mM、より好ましくは135mM～181mM、より好ましくは135mM～180mM、より好ましくは135mM～179mM、より好ましくは135mM～178mM、より好ましくは135mM～177mM、より好ましくは135mM～176mM、より好ましくは135mM～175mM、より好ましくは135mM～174mM、より好ましくは135mM～173mM、より好ましくは135mM～172mM、より好ましくは135mM～171mM、より好ましくは135mM～170mM、より好ましくは135mM～169mM、より好ましくは135mM～168mM、より好ましくは135mM～167mM、より好ましくは135mM～166mM、より好ましくは135mM～165mM、より好ましくは135mM～160mM、より好ましくは135mM～159mM、より好ましくは135mM～158mM、より好ましくは135mM～157mM、より好ましくは135mM～156mM、より好ましくは135mM～155mM、より好ましくは135mM～154mM、より好ましくは135mM～153mM、より好ましくは135mM～152mM、最も好ましくは140mM～185mM、最も好ましくは140mM～184mM、最も好ましくは140mM～183mM、最も好ましくは140mM～182mM、最も好ましくは140mM～181mM、最も好ましくは140mM～180mM、最も好ましくは140mM～179mM、最も好ましくは140mM～178mM、最も好ましくは140mM～177mM、最も好ましくは140mM～176mM、最も好ましくは140mM～175mM、最も好ましくは140mM～174mM、最も好ましくは140mM～173mM、最も好ましくは140mM～172mM、最も好ましくは140mM～171mM、最も好ましくは140mM～170mM、最も好ましくは140mM～169mM、最も好ましくは140mM～168mM、最も好ましくは140mM～167mM、最も好ましくは140mM～166mM、最も好ましくは140mM～165mM、最も好ましくは140mM～160mM、最も好ましくは140mM～159mM、最も好ましくは140mM～158mM、最も好ましくは140mM～157mM、最も好ましくは140mM～156mM、最も好ましくは140mM～155mM、最も好ましくは140mM～154mM、最も好ましくは140mM～153mM、最高に好ましくは140mM～152mM; ならびに/または190mM未満、189mM未満、188mM未満、187mM未満、186mM未満、185mM未満、184mM未満、183mM未満、182mM未満、181mM未満、180mM未満、179mM未満、178mM未満、177mM未満、176mM未満、175mM未満、174mM未満、173mM未満、172mM未満、171mM未満、170mM未満、169mM未満、168mM未満、167mM未満、166mM未満、165mM未満、160mM未満、159mM未満、158mM未満、157mM未満、156mM未満、155mM未満、154mM未満、153mM未満、152mM未満、好ましくは185mM未満、より好ましくは170mM未満、さらに好ましくは160mM未満、最も好ましくは155mM未満、最高に好ましくは152mMおよび152mM未満、
ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、第1の局面の第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、および第97の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つであり、好ましくは、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、第1の局面の第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、および第97の態様のうちいずれか1つであり、より好ましくは、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、第1の局面の第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、および第97の態様のうちいずれか1つであり、さらに好ましくは、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、第1の局面の第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、および第97の態様のうちいずれか1つであり、最も好ましくは、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、第1の局面の第63および第97の態様のうちいずれか1つ、第1の局面の第104、第105、第106、第107、第109、第110、第111、第112、第113、第114、第116、第117、第118、第119、第121、第122、第123、第124、第126、第127、第128、第129、第130、第132、第133、第134、および第135の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのうちいずれか1つである。
第4の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、および第11の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第4の局面の第12の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、該ポリペプチドの可溶性発現レベルとSEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの可溶性発現レベルとの比として定義される可溶性発現レベルが、以下であり:
少なくとも1.04～最大1.80、好ましくは少なくとも1.07～最大1.80、好ましくは少なくとも1.10～最大1.80、好ましくは少なくとも1.31～最大1.80、好ましくは少なくとも1.33～最大1.80、好ましくは少なくとも1.36～最大1.80、好ましくは少なくとも1.38～最大1.80、好ましくは少なくとも1.43～最大1.80、より好ましくは少なくとも1.04～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.07～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.10～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.31～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.33～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.36～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.38～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.43～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.47～最大1.75、より好ましくは少なくとも1.62～最大1.75、さらに好ましくは少なくとも1.04～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.07～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.10～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.31～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.33～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.36～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.38～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.43～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.47～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.62～最大1.70、さらに好ましくは少なくとも1.04～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.07～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.10～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.31～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.33～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.36～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.38～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.43～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.47～最大1.65、さらに好ましくは少なくとも1.62～最大1.65、最高に好ましくは少なくとも1.10～1.63、少なくとも1.38～1.63、少なくとも1.43～1.63、および/または1.63;
ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、第1の局面の第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、および第97の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つであり、好ましくは、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、第1の局面の第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、および第97の態様のうちいずれか1つであり、より好ましくは、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、第1の局面の第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、および第97の態様のうちいずれか1つであり、さらに好ましくは、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、第1の局面の第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、および第97の態様のうちいずれか1つであり、最も好ましくは、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、第1の局面の第63および第97の態様のうちいずれか1つ、第1の局面の第104、第105、第106、第107、第109、第110、第111、第112、第113、第114、第116、第117、第118、第119、第121、第122、第123、第124、第126、第127、第128、第129、第130、第132、第133、第134、および第135の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのうちいずれか1つである。
第4の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、および第12の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第4の局面の好ましい一態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、グルコース形成量として表される、フルクトースをグルコースに変換する際のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの触媒活性の、SEQ ID NO: 1に対する以下の倍率での増加を示し:
少なくとも1.2倍～最大5倍、少なくとも1.2倍～最大4.5倍、少なくとも1.2倍～最大4倍、少なくとも1.2倍～最大3.5倍、少なくとも1.2倍～最大3.4倍、少なくとも1.2倍～最大3.3倍、少なくとも1.2倍～最大3.2倍、少なくとも1.2倍～最大3.1倍、少なくとも1.2倍～最大3倍、少なくとも1.2倍～最大2.9倍、少なくとも1.2倍～最大2.8倍、少なくとも1.2倍～最大2.7倍、少なくとも1.2倍～最大2.6倍、少なくとも1.2倍～最大2.5倍、少なくとも1.2倍～最大2.4倍、少なくとも1.2倍～最大2.3倍、少なくとも1.2倍～最大2.2倍、好ましくは少なくとも1.5倍～最大5倍、少なくとも1.5倍～最大4.5倍、少なくとも1.5倍～最大4倍、少なくとも1.5倍～最大3.5倍、少なくとも1.5倍～最大3.4倍、少なくとも1.5倍～最大3.3倍、少なくとも1.5倍～最大3.2倍、少なくとも1.5倍～最大3.1倍、少なくとも1.5倍～最大3倍、少なくとも1.5倍～最大2.9倍、少なくとも1.5倍～最大2.8倍、少なくとも1.5倍～最大2.7倍、少なくとも1.5倍～最大2.6倍、少なくとも1.5倍～最大2.5倍、少なくとも1.5倍～最大2.4倍、少なくとも1.5倍～最大2.3倍、少なくとも1.5倍～最大2.2倍、より好ましくは少なくとも1.9倍～最大5倍、少なくとも1.9倍～最大4.5倍、少なくとも1.9倍～最大4倍、少なくとも1.9倍～最大3.5倍、少なくとも1.9倍～最大3.4倍、少なくとも1.9倍～最大3.3倍、少なくとも1.9倍～最大3.2倍、少なくとも1.9倍～最大3.1倍、少なくとも1.9倍～最大3倍、少なくとも1.9倍～最大2.9倍、少なくとも1.9倍～最大2.8倍、少なくとも1.9倍～最大2.7倍、少なくとも1.9倍～最大2.6倍、少なくとも1.9倍～最大2.5倍、少なくとも1.9倍～最大2.4倍、少なくとも1.9倍～最大2.3倍、少なくとも1.9倍～最大2.2倍、さらに好ましくは少なくとも2.0倍～最大5倍、少なくとも2.0倍～最大4.5倍、少なくとも2.0倍～最大4倍、少なくとも2.0倍～最大3.5倍、少なくとも2.0倍～最大3.4倍、少なくとも2.0倍～最大3.3倍、少なくとも2.0倍～最大3.2倍、少なくとも2.0倍～最大3.1倍、少なくとも2.0倍～最大3倍、少なくとも2.0倍～最大2.9倍、少なくとも2.0倍～最大2.8倍、少なくとも2.0倍～最大2.7倍、少なくとも2.0倍～最大2.6倍、少なくとも2.0倍～最大2.5倍、少なくとも2.0倍～最大2.4倍、少なくとも2.0倍～最大2.3倍、少なくとも2.0倍～最大2.2倍、最も好ましくは少なくとも2.2倍～最大3.3倍、
ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、第1の局面の第9、第10、第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、および第97の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれかであり、好ましくは、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、第1の局面の第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、および第97の態様のうちいずれか1つであり、より好ましくは、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、第1の局面の第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、および第97の態様のうちいずれか1つであり、さらに好ましくは、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、第1の局面の第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、および第97の態様のうちいずれか1つであり、最も好ましくは、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、第1の局面の第63および第97の態様のうちいずれか1つ、第1の局面の第104、第105、第106、第107、第109、第110、第111、第112、第113、第114、第116、第117、第118、第119、第121、第122、第123、第124、第126、第127、第128、第129、第130、第132、第133、第134、および第135の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのうちいずれか1つである。
第4の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、および第12の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第4の局面の第13の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、第1の局面の第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、第97、第98、第99、第100、第101、第102、第103、第104、第105、第106、第107、第108、第109、第110、第111、第112、第113、第114、第115、第116、第117、第118、第119、第120、第121、第122、第123、第124、第125、第126、第127、第128、第129、第130、第131、第132、第133、第134、および第135の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ、好ましくは、第1の局面の第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、および第97の態様のうちいずれか1つのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ、好ましくは、第1の局面の第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、および第97の態様のうちいずれかのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ、より好ましくは、第1の局面の第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、および第97の態様のうちいずれか1つのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ、さらに好ましくは、第1の局面の第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、および第97の態様のうちいずれか1つのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ、最も好ましくは、第1の局面の第63および第97の態様のうちいずれか1つのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ、あるいは第1の局面の第104、第105、第106、第107、第109、第110、第111、第112、第113、第114、第116、第117、第118、第119、第121、第122、第123、第124、第126、第127、第128、第129、第130、第132、第133、第134、および第135の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれかのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼである。
第4の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、および第13の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第4の局面の第14の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは以下を触媒可能である:
(i) アルドース分子からケトース分子への変換、および/または
(ii) ケトース分子からアルドース分子への変換。
第4の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、第13、および第14の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第4の局面の第15の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは以下を触媒可能である:
(i) アルドテトロース分子からケトテトロース分子への変換、および/または
(ii) ケトテトロース分子からアルドテトロース分子への変換、および/または
(ii) アルドペントース分子からケトペントース分子への変換、および/または
(iv) ケトペントース分子からアルドペントース分子への変換、および/または
(v) アルドヘキソース分子からケトヘキソース分子への変換、および/または
(vi) ケトヘキソース分子からアルドヘキソース分子への変換、および/または
(vii) アルドヘプトース分子からケトヘプトース分子への変換、および/または
(viii) ケトヘプトース分子からアルドヘプトース分子への変換。
第4の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、第13、第14、および第15の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第4の局面の第16の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは以下を触媒可能である:
(i) アルドペントース分子からケトペントース分子への変換、および/または
(ii) ケトペントース分子からアルドペントース分子への変換、および/または
(iii) アルドヘキソース分子からケトヘキソース分子への変換、および/または
(iv) ケトヘキソース分子からアルドヘキソース分子への変換。
第4の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、第13、第14、第15、および第16の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第4の局面の第17の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは以下を触媒可能である:
(i) D-グルコース、D-キシロース、D-アラビノース、L-アラビノース、L-リボース、D-リボース、D-リキソース、D-アロース、L-ラムノース、およびD-マンノースからなる群より選択されるアルドース分子の変換; ならびに/または
(ii) フルクトース、D-キシルロース、D-リブロース、L-リブロース、D-プシコース、およびL-ラムヌロースからなる群より選択されるケトース分子の変換。
第4の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、第13、第14、第15、第16、および第17の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第4の局面の第18の態様では、
(i) アルドース分子は、デオキシ炭水化物、チオ炭水化物、アジド炭水化物、メチル化炭水化物、ハロゲン化炭水化物、およびベンジル化炭水化物からなる群より選択されるアルドース分子誘導体であり;
(ii) ケトース分子は、デオキシ炭水化物、チオ炭水化物、アジド炭水化物、メチル化炭水化物、ハロゲン化炭水化物、およびベンジル化炭水化物からなる群より選択されるケトース分子誘導体である。
第4の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、および第18の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第4の局面の第19の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは以下を触媒可能である:
(i) フルクトースからグルコースへの変換、および/または
(ii) グルコースからフルクトースへの変換。
第4の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、および第19の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第4の局面の第20の態様では、変換は可逆的変換である。
第4の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、および第20の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第4の局面の第21の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼはEC番号EC 5.3.1.5のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼである。
本発明の基礎にある問題は、第5の局面の第1の態様でもある、第5の局面において、フルクトースをグルコースに変換する際の活性の増加、好ましくは活性値の増加を示すグルコースイソメラーゼ変異体であって、KM値190mM未満、好ましくは170mM未満、より好ましくは160mM未満、最高に好ましくは152mM以下を示す変異体により解決される。
第5の局面の第1の態様の一態様でもある、第5の局面の第2の態様では、変異体は、フルクトース濃度50mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する活性、好ましくは活性値の、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対する少なくとも1.1倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.4倍～最大3.0倍、より好ましくは少なくとも1.6倍～最大3.0倍、さらに好ましくは少なくとも1.7倍～最大3.0倍、最高に好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.4倍の増加を示す。
第5の局面の第1および第2の態様の一態様でもある、第5の局面の第3の態様では、変異体は、フルクトース濃度200mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する活性、好ましくは活性値の、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対する少なくとも1.2倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.3倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.4倍～最大3.0倍、より好ましくは少なくとも1.5倍～最大3.0倍、最高に好ましくは少なくとも1.5倍～最大2.2倍の増加を示す。
第5の局面の第1、第2、および第3の態様の一態様でもある、第5の局面の第4の態様では、変異体は、温度74℃で15分間の変異体のインキュベーション後の、少なくとも30%、好ましくは少なくとも40%、より好ましくは少なくとも60%、最高に好ましくは62%の残留活性値として表される熱安定性を示す。
第5の局面の第1、第2、第3、および第4の態様の一態様でもある、第5の局面の第5の態様では、変異体は、該ポリペプチドの可溶性発現レベルとSEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの可溶性発現レベルとの比として定義される、少なくとも1.1、好ましくは少なくとも1.3、より好ましくは少なくとも1.4、最も好ましくは少なくとも1.6である可溶性発現レベル増加を示す。
第5の局面の第1、第2、第3、第4、および第5の態様またはいずれかの他の態様の一態様でもある、第5の局面の好ましい一態様では、変異体は、グルコース形成量として表される、フルクトースをグルコースに変換する際のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの触媒活性の、SEQ ID NO: 1に対する少なくとも1.2倍～最大5倍、好ましくは少なくとも1.5倍～最大5倍、より好ましくは少なくとも1.9倍～最大5倍、さらに好ましくは少なくとも1.9倍～最大3.5倍、最高に好ましくは少なくとも2.2倍～最大3.3倍の増加を示す。
本発明の基礎にある問題は、第6の局面の第1の態様でもある、第6の局面において、フルクトースをグルコースに変換する際の活性の増加、好ましくは活性値の増加を示すストレプトマイセス属SK株のグルコースイソメラーゼ変異体であって、Km値190mM未満、好ましくは170mM未満、より好ましくは160mM未満、最高に好ましくは152mM以下を示す変異体により解決される。
本発明の基礎にある問題は、第7の局面の第1の態様でもある、第7の局面において、SEQ ID NO: 1のアミノ酸配列を含むグルコースイソメラーゼのグルコースイソメラーゼ変異体であって、フルクトースをグルコースに変換する際の活性の増加、好ましくは活性値の増加を示し、KM値190mM未満、好ましくは170mM未満、より好ましくは160mM未満、最高に好ましくは152mM以下を示す変異体により解決される。
第6の局面の第1の態様の一態様でもある、第6の局面の第2の態様、および、第7の局面の第1の態様の一態様でもある、第7の局面の第2の局面では、
(i) SEQ ID NO: 1のポリペプチドとの比較において、変異体は、フルクトース濃度50mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する活性、好ましくは活性値の、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの活性に対する少なくとも1.1倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.4倍～最大3.0倍、より好ましくは少なくとも1.6倍～最大3.0倍、さらに好ましくは少なくとも1.7倍～最大3.0倍、最高に好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.4倍の増加を示し; かつ/あるいは
(ii) SEQ ID NO: 1のポリペプチドとの比較において、変異体は、フルクトース濃度200mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する活性、好ましくは活性値の、SEQ ID NO: 1のポリペプチドに対する少なくとも1.2倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.3倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.4倍～最大3.0倍、より好ましくは少なくとも1.5倍～最大3.0倍、最高に好ましくは少なくとも1.5倍～最大2.2倍の増加を示し; かつ/あるいは
(iii) 変異体は、温度74℃で15分間の変異体のインキュベーション後の、少なくとも30%、好ましくは少なくとも40%、より好ましくは少なくとも60%、最高に好ましくは62%の残留活性値として表される熱安定性を示し; かつ/あるいは
(iv) 変異体は、該変異体の可溶性発現レベルとSEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの可溶性発現レベルとの比として定義される、SEQ ID NO: 1のポリペプチドに対する少なくとも1.1、好ましくは少なくとも1.3、より好ましくは少なくとも1.4、最も好ましくは少なくとも1.6である可溶性発現レベル増加を示し; かつ/あるいは
(v) 変異体は、グルコース形成量として表されるフルクトースをグルコースに変換する際の触媒活性の、SEQ ID NO: 1のポリペプチドに対する少なくとも1.2倍～最大5倍、好ましくは少なくとも1.5倍～最大5倍、より好ましくは少なくとも1.9倍～最大5倍、さらに好ましくは少なくとも1.9倍～最大3.5倍、最高に好ましくは少なくとも2.2倍～最大3.3倍の増加を示す。
本発明の基礎にある問題は、第8の局面の第1の態様でもある、第8の局面において、フルクトースをグルコースに変換する際の活性の増加、好ましくは活性値の増加を示すグルコースイソメラーゼ変異体であって、フルクトース濃度50mMでフルクトースをグルコースに変換する際の活性、好ましくは活性値の、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対する少なくとも1.1倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.4倍～最大3.0倍、より好ましくは少なくとも1.6倍～最大3.0倍、さらに好ましくは少なくとも1.7倍～最大3.0倍、最高に好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.4倍の増加を示す、変異体により解決される。
第8の局面の第1の態様の一態様でもある、第8の局面の第2の態様では、変異体は、温度74℃で15分間の変異体のインキュベーション後の、少なくとも30%、好ましくは少なくとも40%、より好ましくは少なくとも60%、最高に好ましくは62%の残留活性値として表される熱安定性を示す。
第8の局面の第1および第2の態様の一態様でもある、第8の局面の第3の態様では、変異体は、該変異体の可溶性発現レベルとSEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの可溶性発現レベルとの比として定義される、少なくとも1.1、好ましくは少なくとも1.3、より好ましくは少なくとも1.4、最も好ましくは少なくとも1.6である可溶性発現レベル増加を示す。
第8の局面の第1、第2、および第3の態様の一態様でもある、第8の局面の第4の態様では、変異体はKM値190mM未満、好ましくは170mM未満、より好ましくは160mM未満、最高に好ましくは152mM以下を示す。
第8の局面の第1、第2、第3、および第4の態様の一態様でもある、第8の局面の第5の態様では、変異体は、フルクトース濃度200mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する活性、好ましくは活性値の、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対する少なくとも1.2倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.3倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.4倍～最大3.0倍、より好ましくは少なくとも1.5倍～最大3.0倍、最高に好ましくは少なくとも1.5倍～最大2.2倍の増加を示す。
第8の局面の第1、第2、第3、第4、および第5の態様の一態様でもある、第8の局面の好ましい一態様では、変異体は、グルコース形成量として表される、フルクトースをグルコースに変換する際のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの触媒活性の、SEQ ID NO: 1に対する少なくとも1.2倍～最大5倍、好ましくは少なくとも1.5倍～最大5倍、より好ましくは少なくとも1.9倍～最大5倍、さらに好ましくは少なくとも1.9倍～最大3.5倍、最高に好ましくは少なくとも2.2倍～最大3.3倍の増加を示す。
本発明の基礎にある問題は、第9の局面の第1の態様でもある、第9の局面において、フルクトースをグルコースに変換する際の活性の増加、好ましくは活性値の増加を示すストレプトマイセス属SK株のグルコースイソメラーゼ変異体であって、フルクトース濃度50mMでフルクトースをグルコースに変換する際の活性、好ましくは活性値の、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対する少なくとも1.1倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.4倍～最大3.0倍、より好ましくは少なくとも1.6倍～最大3.0倍、さらに好ましくは少なくとも1.7倍～最大3.0倍、最高に好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.4倍の増加を示す、変異体により解決される。
本発明の基礎にある問題は、第10の局面の第1の態様でもある、第10の局面において、SEQ ID NO: 1のアミノ酸配列を含むグルコースイソメラーゼのグルコースイソメラーゼ変異体であって、フルクトース濃度50mMでフルクトースをグルコースに変換する際の活性、好ましくは活性値の、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対する少なくとも1.1倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.4倍～最大3.0倍、より好ましくは少なくとも1.6倍～最大3.0倍、さらに好ましくは少なくとも1.7倍～最大3.0倍、最高に好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.4倍の増加を示す、変異体により解決される。
第9の局面の第1の態様の一態様でもある、第9の局面の第2の態様、および、第10の局面の第1の態様の一態様でもある、第10の局面の第2の態様では、
(i) 変異体は、温度74℃で15分間の変異体のインキュベーション後の、少なくとも30%、好ましくは少なくとも40%、より好ましくは少なくとも60%、最高に好ましくは62%の残留活性値として表される熱安定性を示し; かつ/あるいは
(ii) 変異体は、該変異体の可溶性発現レベルとSEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの可溶性発現レベルとの比として定義される、少なくとも1.1、好ましくは少なくとも1.3、より好ましくは少なくとも1.4、最も好ましくは少なくとも1.6である可溶性発現レベル増加を示し; かつ/あるいは
(iii) 変異体はKM値190mM未満、好ましくは170mM未満、より好ましくは160mM未満、最高に好ましくは152mM以下を示し; かつ/あるいは
(iv) 変異体は、フルクトース濃度200mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する活性、好ましくは活性値の、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対する少なくとも1.2倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.3倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.4倍～最大3.0倍、より好ましくは少なくとも1.5倍～最大3.0倍、最高に好ましくは少なくとも1.5倍～最大2.2倍の増加を示し;
(v) 変異体は、グルコース形成量として表されるフルクトースをグルコースに変換する際の触媒活性の、SEQ ID NO: 1のポリペプチドに対する少なくとも1.2倍～最大5倍、好ましくは少なくとも1.5倍～最大5倍、より好ましくは少なくとも1.9倍～最大5倍、さらに好ましくは少なくとも1.9倍～最大3.5倍、最高に好ましくは少なくとも2.2倍～最大3.3倍の増加を示す。
本発明の基礎にある問題は、第11の局面の第1の態様でもある、第11の局面において、変異体の可溶性発現レベルとSEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの可溶性発現レベルとの比として定義される、少なくとも1.1、好ましくは少なくとも1.3、より好ましくは少なくとも1.4、最も好ましくは少なくとも1.6である可溶性発現レベル増加を示す、グルコースイソメラーゼ変異体により解決される。
第11の局面の第1の態様の一態様でもある、第11の局面の第2の態様では、変異体はフルクトースをグルコースに変換する際の活性の増加、好ましくは活性値の増加を示し、変異体はフルクトース濃度50mMでフルクトースをグルコースに変換する際の活性、好ましくは活性値の、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対する少なくとも1.1倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.4倍～最大3.0倍、より好ましくは少なくとも1.6倍～最大3.0倍、さらに好ましくは少なくとも1.7倍～最大3.0倍、最高に好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.4倍の増加を示す。
第11の局面の第1および第2の態様の一態様でもある、第11の局面の第3の態様では、変異体はKM値190mM未満、好ましくは170mM未満、より好ましくは160mM未満、最高に好ましくは152mM以下を示す。
第11の局面の第1、第2、および第3の態様の一態様でもある、第11の局面の第4の態様では、変異体は、温度74℃で15分間の変異体のインキュベーション後の、少なくとも30%、好ましくは少なくとも40%、より好ましくは少なくとも60%、最高に好ましくは62%の残留活性値として表される熱安定性を示す。
第11の局面の第1、第2、第3、および第4の態様の一態様でもある、第11の局面の第5の態様では、変異体は、フルクトース濃度200mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する活性、好ましくは活性値の、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対する少なくとも1.2倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.3倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.4倍～最大3.0倍、より好ましくは少なくとも1.5倍～最大3.0倍、最高に好ましくは少なくとも1.5倍～最大2.2倍の増加を示す。
第11の局面の第1、第2、第3、第4、および第5の態様の一態様でもある、第11の局面の好ましい一態様では、変異体は、グルコース形成量として表される、フルクトースをグルコースに変換する際のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの触媒活性の、SEQ ID NO: 1に対する少なくとも1.2倍～最大5倍、好ましくは少なくとも1.5倍～最大5倍、より好ましくは少なくとも1.9倍～最大5倍、さらに好ましくは少なくとも1.9倍～最大3.5倍、最高に好ましくは少なくとも2.2倍～最大3.3倍の増加を示す。
本発明の基礎にある問題は、第12の局面の第1の態様でもある、第12の局面において、変異体の可溶性発現レベルとSEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの可溶性発現レベルとの比として定義される、少なくとも1.1、好ましくは少なくとも1.3、より好ましくは少なくとも1.4、最も好ましくは少なくとも1.6である可溶性発現レベル増加を示す、ストレプトマイセス属SK株のグルコースイソメラーゼ変異体により解決される。
本発明の基礎にある問題は、第13の局面の第1の態様でもある、第13の局面において、SEQ ID NO: 1のアミノ酸配列を含むグルコースイソメラーゼのグルコースイソメラーゼ変異体であって、該変異体の可溶性発現レベルとSEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの可溶性発現レベルとの比として定義される、少なくとも1.1、好ましくは少なくとも1.3、より好ましくは少なくとも1.4、最も好ましくは少なくとも1.6である可溶性発現レベル増加を示す、変異体により解決される。
第12の局面の第1の態様の一態様でもある、第12の局面の第2の態様、および、第13の局面の第1の態様の一態様でもある、第13の局面の第2の態様では、
(i) 変異体は、フルクトース濃度50mMでフルクトースをグルコースに変換する際の活性、好ましくは活性値の、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対する少なくとも1.1倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.4倍～最大3.0倍、より好ましくは少なくとも1.6倍～最大3.0倍、さらに好ましくは少なくとも1.7倍～最大3.0倍、最高に好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.4倍の増加を示し;
(ii) 変異体はKM値190mM未満、好ましくは170mM未満、より好ましくは160mM未満、最高に好ましくは152mM以下を示し; かつ/あるいは
(iii) 変異体は、温度74℃で15分間の変異体のインキュベーション後の、少なくとも30%、好ましくは少なくとも40%、より好ましくは少なくとも60%、最高に好ましくは62%の残留活性値として表される熱安定性を示し; かつ/あるいは
(iv) 変異体は、フルクトース濃度200mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する活性、好ましくは活性値の、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対する少なくとも1.2倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.3倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.4倍～最大3.0倍、より好ましくは少なくとも1.5倍～最大3.0倍、最高に好ましくは少なくとも1.5倍～最大2.2倍の増加を示し; かつ/あるいは
(v) 変異体は、グルコース形成量として表されるフルクトースをグルコースに変換する際の触媒活性の、SEQ ID NO: 1のポリペプチドに対する少なくとも1.2倍～最大5倍、好ましくは少なくとも1.5倍～最大5倍、より好ましくは少なくとも1.9倍～最大5倍、さらに好ましくは少なくとも1.9倍～最大3.5倍、最高に好ましくは少なくとも2.2倍～最大3.3倍の増加を示す。
第4の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、および第21の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第4の局面の第22の態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼは、第1の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、第97、第98、第99、第100、第101、第102、第103、第104、第105、第106、第107、第108、第109、第110、第111、第112、第113、第114、第115、第116、第117、第118、第119、第120、第121、第122、第123、第124、第125、第126、第127、第128、第129、第130、第131、第132、第133、第134、第135、第136、第137、第138、第139、第140、第141、第142、第143、および第144の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つを含む、第1の局面のいずれかの態様に定義される、第2の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、および第13の態様のうちいずれか1つを含む、第2の局面のいずれかの態様に定義される、好ましくは第3の局面のいずれかの態様に定義される、好ましくは第3の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、第97、第98、第99、第100、第101、第102、第103、第104、第105、第106、第107、第108、第109、第110、第111、第112、第113、第114、第115、第116、第117、第118、第119、第120、第121、第122、第123、第124、第125、第126、第127、第128、第129、第130、第131、第132、第133、第134、および第135の態様のうちいずれか1つに定義される、アミノ酸配列を含む。
第5の局面の第1、第2、第3、第4、および第5の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第5の局面の第6の態様では、第6の局面の第1および第2の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第6の局面の第3の態様では、第7の局面の第1および第2の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第7の局面の第3の態様では、第8の局面の第1、第2、第3、第4、および第5の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第8の局面の第6の態様では、第9の局面の第1および第2の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第9の局面の第3の態様では、第10の局面の第1および第2の態様の一態様でもある、第10の局面の第3の局面では、第11の局面の第1、第2、第3、第4、および第5の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第11の局面の第6の態様では、第12の局面の第1および第2の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第12の局面の第3の態様では、第13の局面の第1および第2の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第13の局面の第3の態様では、変異体は、第1の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、第97、第98、第99、第100、第101、第102、第103、第104、第105、第106、第107、第108、第109、第110、第111、第112、第113、第114、第115、第116、第117、第118、第119、第120、第121、第122、第123、第124、第125、第126、第127、第128、第129、第130、第131、第132、第133、第134、第135、第136、第137、第138、第139、第140、第141、第142、第143、および第144の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つを含む、第1の局面のいずれかの態様に定義される、第2の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、第13の態様のうちいずれか1つを含む、第2の局面のいずれかの態様に定義される、第3の局面のいずれかの態様に定義される、好ましくは第1の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、第97、第98、第99、第100、第101、第102、第103、第104、第105、第106、第107、第108、第109、第110、第111、第112、第113、第114、第115、第116、第117、第118、第119、第120、第121、第122、第123、第124、第125、第126、第127、第128、第129、第130、第131、第132、第133、第134、および第135の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つに定義される、アミノ酸配列を含む。
本発明の基礎にある問題は、第14の局面の第1の態様でもある、第14の局面において、ケトース分子をアルドース分子に変換するための方法であって、ケトース分子と、第1の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、第97、第98、第99、第100、第101、第102、第103、第104、第105、第106、第107、第108、第109、第110、第111、第112、第113、第114、第115、第116、第117、第118、第119、第120、第121、第122、第123、第124、第125、第126、第127、第128、第129、第130、第131、第132、第133、第134、第135、第136、第137、第138、第139、第140、第141、第142、第143、第144の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれか1つを含む、第1の局面のいずれかの態様に定義される、第2の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、および第13の態様のうちいずれか1つを含む、第2の局面のいずれかの態様に定義される、ならびに第3の局面のいずれかの態様に定義される、あるいは第4の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、および第22の態様のうちいずれか1つを含む、第4の局面のいずれかの態様に定義される、第5の局面の第1、第2、第3、第4、第5、および第6の態様のうちいずれか1つを含む、第5の局面のいずれかの態様に定義される、第6の局面の第1、第2、および第3の態様のうちいずれか1つを含む、第6の局面のいずれかの態様に定義される、第7の局面の第1、第2、および第3の態様のうちいずれか1つを含む、第7の局面のいずれかの態様に定義される、第8の局面の第1、第2、第3、第4、第5、および第6の態様のうちいずれか1つを含む、第8の局面のいずれかの態様に定義される、第9の局面の第1、第2、および第3の態様のうちいずれか1つを含む、第9の局面のいずれかの態様に定義される、第10の局面の第1、第2、および第3の態様のうちいずれか1つを含む、第10の局面のいずれかの態様に定義される、第11の局面の第1、第2、第3、第4、第5、および第6の態様のうちいずれか1つを含む、第11の局面のいずれかの態様に定義される、第12の局面の第1、第2、および第3の態様のうちいずれか1つを含む、第12の局面のいずれか1つに定義される、第13の局面の第1、第2、および第3の態様のうちいずれか1つを含む、第13の局面のいずれか1つに定義される、グルコースイソメラーゼとを反応させる段階を含む方法により解決される。
本発明の基礎にある問題は、第15の局面の第1の態様でもある、第15の局面において、フルクトースをグルコースに変換するための方法であって、フルクトースと、第1の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、第97、第98、第99、第100、第101、第102、第103、第104、第105、第106、第107、第108、第109、第110、第111、第112、第113、第114、第115、第116、第117、第118、第119、第120、第121、第122、第123、第124、第125、第126、第127、第128、第129、第130、第131、第132、第133、第134、第135、第136、第137、第138、第139、第140、第141、第142、第143、および第144の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれかを含む、第1の局面のいずれかの態様に定義される、第2の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、および第13の態様のうちいずれか1つを含む、第2の局面のいずれかの態様に定義される、ならびに第3の局面のいずれかの態様に定義される、あるいは第4の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、および第22の態様のうちいずれか1つを含む、第4の局面のいずれかの態様に定義される、第5の局面の第1、第2、第3、第4、第5、および第6の態様のうちいずれか1つを含む、第5の局面のいずれかの態様に定義される、第6の局面の第1、第2、および第3の態様のうちいずれか1つを含む、第6の局面のいずれかの態様に定義される、第7の局面の第1、第2、および第3の態様のうちいずれか1つを含む、第7の局面のいずれかの態様に定義される、第8の局面の第1、第2、第3、第4、第5、および第6の態様のうちいずれか1つを含む、第8の局面のいずれかの態様に定義される、第9の局面の第1、第2、および第3の態様のうちいずれか1つを含む、第9の局面のいずれかの態様に定義される、第10の局面の第1、第2、および第3の態様のうちいずれか1つを含む、第10の局面のいずれかの態様に定義される、第11の局面の第1、第2、第3、第4、第5、および第6の態様のうちいずれか1つを含む、第11の局面のいずれかの態様に定義される、第12の局面の第1、第2、および第3の態様のうちいずれか1つを含む、第12の局面のいずれか1つに定義される、第13の局面の第1、第2、および第3の態様のうちいずれか1つを含む、第13の局面のいずれか1つに定義される、グルコースイソメラーゼとを反応させる段階を含む方法により解決される。
第14の局面の第1の態様の一態様でもある、第14の局面の第2の態様、および、第15の局面の第1の態様の一態様でもある、第15の局面の第2の態様では、反応は可逆的である。
本発明の基礎にある問題は、第16の局面の第1の態様でもある、第16の局面において、
(i) KM値190mM未満、好ましくは170mM未満、より好ましくは160mM未満、最高に好ましくは152mM以下を示し; かつ/あるいは
(ii) フルクトース濃度50mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する活性、好ましくは活性値の、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対する少なくとも1.1倍～最大3.0倍、好ましくは少なくとも1.4倍～最大3.0倍、より好ましくは少なくとも1.6倍～最大3.0倍、さらに好ましくは少なくとも1.7倍～最大3.0倍、最高に好ましくは少なくとも1.7倍～最大2.4倍の増加を示し; かつ/あるいは
(iii) 温度74℃で15分間のグルコースイソメラーゼのインキュベーション後の、少なくとも30%、好ましくは少なくとも40%、より好ましくは少なくとも60%、最高に好ましくは62%の残留活性値として表される熱安定性を示し; かつ/あるいは
(iv) グルコースイソメラーゼの可溶性発現レベルとSEQ ID No: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの発現レベルとの比として定義される、少なくとも1.1、好ましくは少なくとも1.3、より好ましくは少なくとも1.4、最も好ましくは少なくとも1.6である可溶性発現レベル増加を示し; かつ/あるいは
(v) グルコース形成量として表されるフルクトースをグルコースに変換する際の触媒活性の、SEQ ID NO: 1のポリペプチドに対する少なくとも1.2倍～最大5倍、好ましくは少なくとも1.5倍～最大5倍、より好ましくは少なくとも1.9倍～最大5倍、さらに好ましくは少なくとも1.9倍～最大3.5倍、最高に好ましくは少なくとも2.2倍～最大3.3倍の増加を示す、
グルコースイソメラーゼの存在下でフルクトースを反応させる段階を含む、グルコースを調製するための方法により解決される。
第16の局面の第1の態様の一態様でもある、第16の局面の第2の態様では、グルコースイソメラーゼは突然変異グルコースホスホリラーゼである。
第16の局面の第1および第2の態様の一態様でもある、第16の局面の第3の態様では、グルコースイソメラーゼは組換え型グルコースイソメラーゼである。
第14の局面の第1および第2の態様の一態様である、第14の局面の第3の態様、第15の局面の第1および第2の態様の一態様である、第15の局面の第3の態様、ならびに、第16の局面の第1、第2、および第3の態様の一態様である、第16の局面の第4の態様では、グルコースイソメラーゼは非固定化形態で存在する。
第14の局面の第1および第2の態様の一態様である、第14の局面の第4の態様、第15の局面の第1および第2の態様の一態様である、第15の局面の第4の態様、ならびに、第16の局面の第1、第2、および第3の態様の一態様である、第16の局面の第5の態様では、グルコースイソメラーゼは固定化形態で存在する。
第14の局面の第1、第2、第3、および第4の態様の一態様である、第14の局面の第5の態様、第15の局面の第1、第2、第3、および第4の態様の一態様である、第15の局面の第5の態様、ならびに、第16の局面の第1、第2、第3、第4、および第5の態様の一態様である、第16の局面の第6の態様では、グルコースイソメラーゼは、第1の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、第97、第98、第99、第100、第101、第102、第103、第104、第105、第106、第107、第108、第109、第110、第111、第112、第113、第114、第115、第116、第117、第118、第119、第120、第121、第122、第123、第124、第125、第126、第127、第128、第129、第130、第131、第132、第133、第134、第135、第136、第137、第138、第139、第140、第141、第142、第143、第144の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれかを含む、第1の局面のいずれかの態様に定義される、第2の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、および第13の態様のうちいずれか1つを含む、第2の局面のいずれかの態様に定義される、ならびに第3の局面のいずれかの態様に定義される、あるいは第4の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、および第22の態様のうちいずれか1つを含む、第4の局面のいずれかの態様に定義される、第5の局面の第1、第2、第3、第4、第5、および第6の態様のうちいずれか1つを含む、第5の局面のいずれかの態様に定義される、第6の局面の第1、第2、および第3の態様のうちいずれか1つを含む、第6の局面のいずれかの態様に定義される、第7の局面の第1、第2、および第3の態様のうちいずれか1つを含む、第7の局面のいずれかの態様に定義される、第8の局面の第1、第2、第3、第4、第5、および第6の態様のうちいずれか1つを含む、第8の局面のいずれかの態様に定義される、第9の局面の第1、第2、および第3の態様のうちいずれか1つを含む、第9の局面のいずれかの態様に定義される、第10の局面の第1、第2、および第3の態様のうちいずれか1つを含む、第10の局面のいずれかの態様に定義される、第11の局面の第1、第2、第3、第4、第5、および第6の態様のうちいずれか1つを含む、第11の局面のいずれかの態様に定義される、第12の局面の第1、第2、および第3の態様のうちいずれか1つを含む、第12の局面のいずれか1つに定義される、第13の局面の第1、第2、および第3の態様のうちいずれか1つを含む、第13の局面のいずれか1つに定義される、グルコースイソメラーゼである。
本発明の基礎にある問題は、第17の局面の第1の態様でもある、第17の局面において、グルコースを生成するためのグルコースイソメラーゼの使用により解決され、グルコースイソメラーゼは、第1の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26、第27、第28、第29、第30、第31、第32、第33、第34、第35、第36、第37、第38、第39、第40、第41、第42、第43、第44、第45、第46、第47、第48、第49、第50、第51、第52、第53、第54、第55、第56、第57、第58、第59、第60、第61、第62、第63、第64、第65、第66、第67、第68、第69、第70、第71、第72、第73、第74、第75、第76、第77、第78、第79、第80、第81、第82、第83、第84、第85、第86、第87、第88、第89、第90、第91、第92、第93、第94、第95、第96、第97、第98、第99、第100、第101、第102、第103、第104、第105、第106、第107、第108、第109、第110、第111、第112、第113、第114、第115、第116、第117、第118、第119、第120、第121、第122、第123、第124、第125、第126、第127、第128、第129、第130、第131、第132、第133、第134、第135、第136、第137、第138、第139、第140、第141、第142、第143、第144の態様のうちいずれか1つ、または他の態様のうちいずれかを含む、第1の局面のいずれかの態様に定義の通りであり、第2の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、および第13の態様のうちいずれか1つを含む、第2の局面のいずれかの態様に定義の通りであり、かつ、第3の局面のいずれかの態様に定義の通りであり、あるいは、第4の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、第13、第14、第15、第16、第17、第18、第19、第20、第21、および第22の態様のうちいずれか1つを含む、第4の局面のいずれかの態様に定義の通りであり、第5の局面の第1、第2、第3、第4、第5、および第6の態様のうちいずれか1つを含む、第5の局面のいずれかの態様に定義の通りであり、第6の局面の第1、第2、および第3の態様のうちいずれか1つを含む、第6の局面のいずれかの態様に定義の通りであり、第7の局面の第1、第2、および第3の態様のうちいずれか1つを含む、第7の局面のいずれかの態様に定義の通りであり、第8の局面の第1、第2、第3、第4、第5、および第6の態様のうちいずれか1つを含む、第8の局面のいずれかの態様に定義の通りであり、第9の局面の第1、第2、および第3の態様のうちいずれか1つを含む、第9の局面のいずれかの態様に定義の通りであり、第10の局面の第1、第2、および第3の態様のうちいずれか1つを含む、第10の局面のいずれかの態様に定義の通りであり、第11の局面の第1、第2、第3、第4、第5、および第6の態様のうちいずれか1つを含む、第11の局面のいずれかの態様に定義の通りであり、第12の局面の第1、第2、第3、および第4の態様のうちいずれか1つを含む、第12の局面のいずれか1つに定義の通りであり、第13の局面の第1、第2、および第3の態様のうちいずれか1つを含む、第13の局面のいずれか1つに定義の通りである。
本発明の基礎にある問題は、第18の局面の第1の態様でもある、第18の局面において、フルクトース濃度50mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関するポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの活性を増加させるための方法であって、
- SEQ ID NO: 1のアミノ酸配列を含むグルコースイソメラーゼである第1のグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列と第2のグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列とを配列比較する段階、
- 第1のグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列の1つまたは複数のアミノ酸位置に対応し、第1のグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列の1つまたは複数のアミノ酸位置におけるアミノ酸残基の置換が第1のグルコースイソメラーゼの活性を増加させる、第2のグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列の1つまたは複数のアミノ酸位置を同定する段階、
- 第1のグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列の1つまたは複数のアミノ酸位置に対応し、第1のグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列の1つまたは複数のアミノ酸位置におけるアミノ酸残基の置換がフルクトース濃度50mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する第1のグルコースイソメラーゼの活性を増加させる、第2のグルコースイソメラーゼの1つまたは複数のアミノ酸位置における、アミノ酸残基を置換する段階を含む方法により解決される。
第18の局面の第1の態様の一態様でもある、第18の局面の第2の態様では、本方法は、
- 第1のグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列の1つまたは複数のアミノ酸位置に対応する第2のグルコースイソメラーゼの1つまたは複数のアミノ酸位置における置換アミノ酸残基が、フルクトース濃度50mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する第2のグルコースイソメラーゼの活性、好ましくは活性値を、フルクトース濃度50mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する第1のグルコースイソメラーゼの活性に比べて増加させるか否かを試験する段階を含む。
第18の局面の第1および第2の態様の一態様でもある、第18の局面の第3の態様では、第1のグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列の1つまたは複数のアミノ酸位置に対応する第2のグルコースイソメラーゼの1つまたは複数のアミノ酸位置におけるアミノ酸残基は、置換アミノ酸残基がフルクトース濃度50mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する第2のグルコースイソメラーゼの活性、好ましくは活性値を増加させるように置換されている。
本発明の基礎にある問題は、第19の局面の第1の態様でもある、第19の局面において、フルクトース濃度200mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関するポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの活性を増加させるための方法であって、
- SEQ ID NO: 1のアミノ酸配列を含むグルコースイソメラーゼである第1のグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列と第2のグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列とを配列比較する段階、
- 第1のグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列の1つまたは複数のアミノ酸位置に対応し、第1のグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列の1つまたは複数のアミノ酸位置におけるアミノ酸残基の置換が第1のグルコースイソメラーゼの活性を増加させる、第2のグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列の1つまたは複数のアミノ酸位置を同定する段階、
- 第1のグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列の1つまたは複数のアミノ酸位置に対応し、第1のグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列の1つまたは複数のアミノ酸位置におけるアミノ酸残基の置換がフルクトース濃度200mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する第1のグルコースイソメラーゼの活性を増加させる、第2のグルコースイソメラーゼの1つまたは複数のアミノ酸位置における、アミノ酸残基を置換する段階を含む方法により解決される。
第19の局面の第1の態様の一態様でもある、第19の局面の第2の態様では、本方法は、
- 第1のグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列の1つまたは複数のアミノ酸位置に対応する第2のグルコースイソメラーゼの1つまたは複数のアミノ酸位置における置換アミノ酸残基が、フルクトース濃度200mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する第2のグルコースイソメラーゼの活性、好ましくは活性値を、フルクトース濃度200mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する第1のグルコースイソメラーゼの活性に比べて増加させるか否かを試験する段階を含む。
第19の局面の第1および第2の態様の一態様でもある、第19の局面の第3の態様では、第1のグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列の1つまたは複数のアミノ酸位置に対応する第2のグルコースイソメラーゼの1つまたは複数のアミノ酸位置におけるアミノ酸残基は、置換アミノ酸残基がフルクトース濃度200mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する第2のグルコースイソメラーゼの活性、好ましくは活性値を増加させるように置換されている。
本発明の基礎にある問題は、第20の局面の第1の態様でもある、第20の局面において、フルクトースに関するポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのKM値を減少させるための方法であって、
- SEQ ID NO: 1のアミノ酸配列を含むグルコースイソメラーゼである第1のグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列と第2のグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列とを配列比較する段階、
- 第1のグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列の1つまたは複数のアミノ酸位置に対応し、第1のグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列の1つまたは複数のアミノ酸位置におけるアミノ酸残基の置換がフルクトースに関する第1のグルコースイソメラーゼのKM値を減少させる、第2のグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列の1つまたは複数のアミノ酸位置を同定する段階、
- 第1のグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列の1つまたは複数のアミノ酸位置に対応し、第1のグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列の1つまたは複数のアミノ酸位置におけるアミノ酸残基の置換が第1のグルコースイソメラーゼのKm値を減少させる、第2のグルコースイソメラーゼの1つまたは複数のアミノ酸位置における、アミノ酸残基を置換する段階を含む方法により解決される。
第20の局面の第1の態様の一態様でもある、第20の局面の第2の態様では、本方法は、
- 第1のグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列の1つまたは複数のアミノ酸位置に対応する第2のグルコースイソメラーゼの1つまたは複数のアミノ酸位置における置換アミノ酸残基がKM値を第1のグルコースイソメラーゼのKM値に比べて減少させるか否かを試験する段階を含む。
第20の局面の第1および第2の態様の一態様でもある、第20の局面の第3の態様では、第1のグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列の1つまたは複数のアミノ酸位置に対応する第2のグルコースイソメラーゼの1つまたは複数のアミノ酸位置におけるアミノ酸残基は、置換アミノ酸残基が第2のグルコースイソメラーゼのKM値を減少させるように置換されている。
本発明の基礎にある問題は、第21の局面の第1の態様でもある、第21の局面において、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの可溶性発現を増加させるための方法であって、
- SEQ ID NO: 1のアミノ酸配列を含むグルコースイソメラーゼである第1のグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列と第2のグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列とを配列比較する段階、
- 第1のグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列の1つまたは複数のアミノ酸位置に対応し、第1のグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列の1つまたは複数のアミノ酸位置におけるアミノ酸残基の置換が第1のグルコースイソメラーゼの可溶性発現を増加させる、第2のグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列の1つまたは複数のアミノ酸位置を同定する段階、
- 第1のグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列の1つまたは複数のアミノ酸位置に対応し、第1のグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列の1つまたは複数のアミノ酸位置におけるアミノ酸残基の置換が第1のグルコースイソメラーゼの可溶性発現を増加させる、第2のグルコースイソメラーゼの1つまたは複数のアミノ酸位置における、アミノ酸残基を置換する段階を含む方法により解決される。
第21の局面の第1の態様の一態様でもある、第21の局面の第2の態様では、本方法は、
- 第1のグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列の1つまたは複数のアミノ酸位置に対応する第2のグルコースイソメラーゼの1つまたは複数のアミノ酸位置における置換アミノ酸残基が可溶性発現を第1のグルコースイソメラーゼの可溶性発現に比べて増加させるか否かを試験する段階を含む。
第21の局面の第1および第2の態様の一態様でもある、第21の局面の第3の態様では、第1のグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列の1つまたは複数のアミノ酸位置に対応する第2のグルコースイソメラーゼの1つまたは複数のアミノ酸位置におけるアミノ酸残基は、置換アミノ酸残基が第2のグルコースイソメラーゼの可溶性発現を増加させるように置換されている。
第18の局面の第1、第2、および第3の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第18の局面の第4の態様、第19の局面の第1、第2、および第3の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第19の局面の第4の態様、第20の局面の第1、第2、および第3の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第20の局面の第4の態様、ならびに、第21の局面の第1、第2、および第3の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第21の局面の第4の態様では、第1のグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列と第2のグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列との間の相同性は少なくとも50%である。
第18の局面の第4の態様の一態様でもある、第18の局面の第5の態様、第19の局面の第4の態様の一態様でもある、第19の局面の第5の態様、第20の局面の第4の態様の一態様でもある、第20の局面の第5の態様、ならびに、第21の局面の第4の態様の一態様でもある、第21の局面の第5の態様では、相同性は少なくとも55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、または99%であり、好ましくは相同性は少なくとも55%、75%、90%、95%、98%、または99%である。
第18の局面の第1、第2、および第3の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第18の局面の第6の態様、第19の局面の第1、第2、および第3の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第19の局面の第6の態様、第20の局面の第1、第2、および第3の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第20の局面の第6の態様、ならびに、第21の局面の第1、第2、および第3の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第21の局面の第6の態様では、第1のグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列と第2のグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列との間の同一性は少なくとも50%である。
第18の局面の第6の態様の一態様でもある、第18の局面の第7の態様、第19の局面の第6の態様の一態様でもある、第19の局面の第7の態様、第20の局面の第6の態様の一態様でもある、第20の局面の第7の態様、ならびに、第21の局面の第6の態様の一態様でもある、第21の局面の第7の態様では、同一性は少なくとも55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、または99%であり、好ましくは、同一性は少なくとも55%、75%、90%、95%、98%、または99%である。
第18の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、および第7の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第18の局面の第8の態様、第19の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、および第7の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第19の局面の第8の態様、第20の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、および第7の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第20の局面の第8の態様、ならびに、第21の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、および第7の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第21の局面の第8の態様では、第1のグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列の1つまたは複数のアミノ酸位置はそれぞれ独立してSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、34、35、53、59、89、90、および95からなる群より選択され、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、34、35、59、89、90、および95からなる群より選択される。
第18の局面の第8の態様の一態様でもある、第18の局面の第9の態様、第19の局面の第8の態様の一態様でもある、第19の局面の第9の態様、第20の局面の第8の態様の一態様でもある、第20の局面の第9の態様、ならびに、第21の局面の第8の態様の一態様でもある、第21の局面の第9の態様では、第1のグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列の1つまたは複数のアミノ酸位置はそれぞれ独立してSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、A33、L34、D35、F53、I59、A89、T90、およびT95からなる群より選択され、好ましくはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10、A33、L34、D35、I59、A89、T90、およびT95からなる群より選択される。
第18の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、および第9の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第18の局面の第10の態様、第19の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、および第9の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第19の局面の第10の態様、第20の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、および第9の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第20の局面の第10の態様、ならびに、第21の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、および第9の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第21の局面の第10の態様では、置換アミノ酸残基は、
第1のグルコースイソメラーゼのSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10に対応する第2のグルコースイソメラーゼのアミノ酸位置に関してHまたはK、好ましくはKであり;
第1のグルコースイソメラーゼのSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置33に対応する第2のグルコースイソメラーゼのアミノ酸位置に関してI、L、V、G、N、M、C、S、Q、またはT、好ましくはIおよびN、最も好ましくはIであり;
第1のグルコースイソメラーゼのSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置34に対応する第2のグルコースイソメラーゼのアミノ酸位置に関してF、W、Y、またはP、好ましくはFであり;
第1のグルコースイソメラーゼのSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置35に対応する第2のグルコースイソメラーゼのアミノ酸位置に関してG、N、M、C、S、Q、またはT、好ましくはCまたはS、最も好ましくはSであり;
第1のグルコースイソメラーゼのSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置53に対応する第2のグルコースイソメラーゼのアミノ酸位置に関してA、I、L、またはV、好ましくはLであり;
第1のグルコースイソメラーゼのSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置59に対応する第2のグルコースイソメラーゼのアミノ酸位置に関してF、W、Y、またはP、好ましくはFであり;
第1のグルコースイソメラーゼのSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置89に対応する第2のグルコースイソメラーゼのアミノ酸位置に関してI、L、またはV、好ましくはVであり;
第1のグルコースイソメラーゼのSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置90に対応する第2のグルコースイソメラーゼのアミノ酸位置に関してG、N、M、C、S、またはQ、好ましくはSであり;
第1のグルコースイソメラーゼのSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置95に対応する第2のグルコースイソメラーゼのアミノ酸位置に関してF、W、Y、P、R、H、またはK、好ましくはYまたはR、最も好ましくはYである。
第18の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、および第10の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第18の局面の第11の態様、第19の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、および第10の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第19の局面の第11の態様、第20の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、および第10の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第20の局面の第11の態様、ならびに、第21の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、および第10の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第21の局面の第11の態様では、第1のグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列の1つまたは複数のアミノ酸位置に対応する第2のグルコースイソメラーゼのアミノ酸残基が第1のグルコースイソメラーゼの置換アミノ酸残基と同じである場合、第2のグルコースイソメラーゼのアミノ酸残基は置換されていない。
第18の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、および第11の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第18の局面の第12の態様、第19の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、および第11の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第19の局面の第12の態様、第20の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、および第11の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第20の局面の第12の態様、ならびに、第21の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、および第11の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第21の局面の第12の態様では、フルクトース濃度50mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関するグルコースイソメラーゼの活性の増加、好ましくは活性値の増加は、本明細書に定義される正規化活性値として表される。
第18の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、および第12の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第18の局面の第13の態様、第19の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、および第12の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第19の局面の第13の態様、第20の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、および第12の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第20の局面の第13の態様、ならびに、第21の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、および第12の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第21の局面の第13の態様では、フルクトース200mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関するポリペプチドの活性の増加、好ましくは活性値の比の増加は、本明細書に定義される正規化活性値として表される。
第18の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、および第13の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第18の局面の第14の態様、第19の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、および第13の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第19の局面の第14の態様、第20の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、および第13の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第20の局面の第14の態様、ならびに、第21の局面の第1、第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、および第13の態様のうちいずれか1つの一態様でもある、第21の局面の第14の態様では、グルコースイソメラーゼの可溶性発現増加は、本明細書に定義される可溶性発現レベルの値として表される。
[本発明1001]
アミノ酸配列を含む、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼであって、
該ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸配列と少なくとも95%同一であり、
該ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列が、1つまたは複数のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、
該1つまたは複数のアミノ酸位置が、それぞれ独立してSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置89、90、95、10、33、34、35、および59からなる群より選択される、
ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1002]
前記1つまたは複数のアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置89、90、95、10、および33からなる群より選択される、本発明1001のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1003]
前記1つまたは複数のアミノ酸位置が、2つ以上のアミノ酸位置、3つ以上のアミノ酸位置、4つ以上のアミノ酸位置、または5つ以上のアミノ酸位置である、本発明1001～1002のいずれかのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1004]
前記1つまたは複数のアミノ酸位置が、2つ以上のアミノ酸位置であり、
該2つのアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10および33、10および35、10および59、10および89、10および90、10および95、33および35、33および59、33および90、33および95、35および59、35および90、35および95、59および90、89および90、89および95、ならびに90および95からなる群より選択される、
本発明1001～1003のいずれかのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1005]
前記2つのアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10および33、10および89、10および90、10および95、33および90、33および95、89および90、89および95、ならびに90および95からなる群より選択される、本発明1004のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1006]
前記2つのアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置90および95である、本発明1005のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1007]
前記2つのアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10および89である、本発明1005のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1008]
前記2つのアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置89および90である、本発明1005のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1009]
前記2つのアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置89および95である、本発明1005のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1010]
前記1つまたは複数のアミノ酸位置が、3つ以上のアミノ酸位置であり、
該3つのアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10および33および35、10および33および59、10および33および90、10および33および95、10および35および59、10および35および90、10および35および95、10および59および90、10および89および90、10および89および95、10および90および95、33および35および59、33および35および90、33および59および90、33および90および95、35および59および90、ならびに89および90および95からなる群より選択される、
本発明1001～1009のいずれかのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1011]
前記1つまたは複数のアミノ酸位置が、3つ以上のアミノ酸位置であり、
該3つのアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置90、95、および10である、
本発明1001～1010のいずれかのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1012]
前記1つまたは複数のアミノ酸位置が、4つまたは5つのアミノ酸位置である、本発明1001～1012のいずれかのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1013]
前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列が、前記1つまたは複数のアミノ酸位置における置換に加えて、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置53におけるさらなるアミノ酸置換を含む、本発明1001～1012のいずれかのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1014]
前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置53におけるさらなるアミノ酸置換を含む、本発明1001のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1015]
前記1つまたは複数のアミノ酸位置が、2つ以上のアミノ酸位置であり、
該2つのアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10および53、33および53、35および53、53および89、53および90、ならびに53および95からなる群より選択される、
本発明1014のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1016]
前記2つのアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置53および90である、本発明1015のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1017]
前記2つのアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置53および95である、本発明1015のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1018]
前記1つまたは複数のアミノ酸位置が、1つまたは複数のアミノ酸位置であり、
該1つのアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置89、90、95、10、および33からなる群より選択され、
前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼが、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置53におけるアミノ酸置換をさらに含む、
本発明1002のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1019]
前記2つ以上のアミノ酸が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10および33、10および89、10および90、10および95、33および90、33および95、89および90、89および95、ならびに90および95からなる群より選択され、
前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼが、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置53におけるアミノ酸置換をさらに含む、
本発明1005のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1020]
前記1つまたは複数のアミノ酸位置が、4つ以上のアミノ酸位置であり、
該4つ以上のアミノ酸位置のうち3つが、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置90、95、および10であり、
第4のアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置89、33、34、35、59、および53からなる群より選択され、好ましくは、第4のアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置89および53からなる群より選択される、
本発明1012のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1021]
第4のアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置89である、本発明1020のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1022]
第4のアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置53である、本発明1020のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1023]
前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列が
- SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、53、および90; または
- SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、53、および95; または
- SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、89、90、および95; または
- SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、59、および90; または
- SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、53、90、および95; または
- SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、53、90、および95; または
- SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、35、59、および90; または
- SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、35、53、90、および95
における置換を含む、本発明1001～1022のいずれかのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1024]
前記1つまたは複数のアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のR10位におけるアミノ酸置換である場合、該置換がR10HまたはR10K、好ましくはR10Kであり;
前記1つまたは複数のアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のA33位におけるアミノ酸置換である場合、該置換がA33I、A33L、A33V、A33G、A33N、A33M、A33C、A33S、A33Q、またはA33T、好ましくはA33IまたはA33N、最も好ましくはA33Iであり;
前記1つまたは複数のアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のL34位におけるアミノ酸置換である場合、該置換がL34F、L34W、L34Y、またはL34P、好ましくはL34Fであり;
前記1つまたは複数のアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のD35位におけるアミノ酸置換である場合、該置換がD35G、D35N、D35M、D35C、D35S、D35Q、またはD35T、好ましくはD35CまたはD35S、より好ましくはD35Sであり;
前記1つまたは複数のアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のF53位におけるアミノ酸置換である場合、該置換がF53A、F53I、F53L、またはF53V、好ましくはF53Lであり;
前記1つまたは複数のアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のI59位におけるアミノ酸置換である場合、該置換がI59F、I59W、I59Y、またはI59P、好ましくはI59Fであり;
前記1つまたは複数のアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のA89位におけるアミノ酸置換である場合、該置換がA89I、A89L、またはA89V、好ましくはA89Vであり;
前記1つまたは複数のアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のT90位におけるアミノ酸置換である場合、該置換がT90G、T90N、T90M、T90C、T90S、またはT90Q、好ましくはT90Sであり;
前記1つまたは複数のアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のT95位におけるアミノ酸置換である場合、該置換がT95F、T95W、T95Y、T95P、T95R、T95H、またはT95K、好ましくはT95YまたはT95R、より好ましくはT95Yである、
本発明1001～1023のいずれかのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1025]
前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列が、1つまたは複数のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、
該1つまたは複数のアミノ酸位置が、それぞれ独立してSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A89V、A89I、A89L、T90S、T90G、T90N、T90M、T90C、T90Q、T95Y、T95F、T95W、T95P、T95R、T95H、T95K、R10K、R10H、A33N、A33I、L34F、L34W、L34Y、L34P、D35C、D35S、I59F、I59W、I59Y、およびI59Pからなる群より選択される、
本発明1001～1024のいずれかのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1026]
前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列が、1つまたは複数のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、
該1つまたは複数のアミノ酸位置が、それぞれ独立してSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A89V、T90S、T95Y、T95R、R10K、A33N、A33I、L34F、D35C、D35S、およびI59Fからなる群より選択される、
本発明1025のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1027]
前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列が、1つまたは複数のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、
該1つまたは複数のアミノ酸位置が、それぞれ独立してSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A89V、T90S、T95Y、R10K、A33N、およびA33Iからなる群より選択される、
本発明1025～1026のいずれかのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1028]
前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列が、前記1つまたは複数のアミノ酸位置における置換に加えて、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置F53Lにおけるさらなるアミノ酸置換を含む、本発明1025～1027のいずれかのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1029]
前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列が、1つまたは複数のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、
該1つまたは複数のアミノ酸位置が、それぞれ独立してSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A89V、T90S、T95Y、R10K、A33N、およびA33Iからなる群より選択され、
SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置F53Lにおけるもう1つのアミノ酸置換をさらに含む、
本発明1028のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1030]
前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列が、1つのアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、
該1つのアミノ酸位置が、独立してSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A89V、T90S、T95Y、R10K、A33N、およびA33Iからなる群より選択され、
SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置F53Lにおけるもう1つのアミノ酸置換をさらに含む、
本発明1028のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1031]
前記1つまたは複数のアミノ酸位置が、2つ以上のアミノ酸位置であり、
該2つのアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10KおよびF53L、A33IおよびF53L、A33NおよびF53L、D35CおよびF53L、D35SおよびF53L、F53LおよびA89V、F53LおよびT90S、F53LおよびT95R、ならびにF53LおよびT95Yからなる群より選択される、
本発明1028のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1032]
前記1つまたは複数のアミノ酸位置が、2つ以上のアミノ酸位置であり、
該2つのアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10KおよびA33N、R10KおよびA33I、R10KおよびA89V、R10KおよびT90S、R10KおよびT95Y、R10KおよびT95R、A33IおよびT90S、A33NおよびT90S、A33IおよびT95Y、A33NおよびT95Y、A33IおよびT95R、A33NおよびT95R、A89VおよびT90S、A89VおよびT95Y、A89VおよびT95R、T90SおよびT95R、ならびにT90SおよびT95Yからなる群より選択される、
本発明1025～1027のいずれかのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1033]
前記2つのアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置T90SおよびT95R、ならびにT90SおよびT95Yからなる群より選択される、本発明1032のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1034]
前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置F53Lにおけるさらなるアミノ酸置換を含む、本発明1033のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1035]
前記2つのアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10KおよびA89Vである、本発明1032のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1036]
前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置F53Lにおけるさらなるアミノ酸置換を含む、本発明1035のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1037]
前記2つのアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A89VおよびT90Sである、本発明1032のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1038]
前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置F53Lにおけるさらなるアミノ酸置換を含む、本発明1037のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1039]
前記2つのアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A89VおよびT95Y、ならびにA89VおよびT95Rからなる群より選択される、本発明1032のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1040]
前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置F53Lにおけるさらなるアミノ酸置換を含む、本発明1039のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1041]
前記1つまたは複数のアミノ酸位置が、4つ以上のアミノ酸位置であり、
該4つ以上のアミノ酸位置のうち3つが、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置T90S、T90G、T90N、T90M、T90C、T90Q、T95Y、T95F、T95W、T95P、T95R、T95H、T95K、R10K、およびR10Hからなる群より選択され、
第4のアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A89V、A89I、A89L、A33N、A33I、L34F、L34W、L34Y、L34P、D35C、D35S、I59F、I59W、I59Y、I59P、およびF53Lからなる群より選択される、
本発明1028～1031のいずれかのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1042]
前記1つまたは複数のアミノ酸位置が、4つ以上のアミノ酸位置であり、
該4つ以上のアミノ酸位置のうち3つが、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置T90S、T95Y、T95R、およびR10Kからなる群より選択され、
第4のアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A89V、A33N、A33I、L34F、D35C、D35S、I59F、およびF53Lからなる群より選択され、好ましくは、第4のアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A89VおよびF53Lからなる群より選択される、
本発明1041のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1043]
前記1つまたは複数のアミノ酸位置が、4つ以上のアミノ酸位置であり、
該4つ以上のアミノ酸位置のうち3つが、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置T90S、T95Y、T95R、およびR10Kからなる群より選択され、
第4のアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A89Vである、
本発明1042のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1044]
前記1つまたは複数のアミノ酸位置が、4つ以上のアミノ酸位置であり、
該4つ以上のアミノ酸位置のうち3つが、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置T90S、T95Y、T95R、およびR10Kからなる群より選択され、
第4のアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置F53Lである、
本発明1042のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1045]
前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列が
- SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10K、T90S、およびT95Y; または
- SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10K、F53L、およびT90S; または
- SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10K、F53L、およびT95Y; または
- SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10K、A89V、T90S、およびT95Y; または
- SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10K、A33I、I59F、およびT90S; または
- SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10K、A33N、I59F、およびT90S; または
- SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10K、F53L、T90S、およびT95Y; または
- SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10K、A33I、F53L、T90S、およびT95Y; または
- SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10K、A33N、F53L、T90S、およびT95Y; または
- SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10K、A33I、D35C、I59F、およびT90S; または
- SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10K、A33N、D35C、I59F、およびT90S; または
- SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10K、D35C、F53L、T90S、およびT95Y
における置換を含む、本発明1025～1044のいずれかのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1046]
前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸配列と少なくとも96%同一である、本発明1001～1045のいずれかのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1047]
前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列が、SEQ ID NO: 2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、または23のアミノ酸配列と少なくとも95%同一である、本発明1001～1046のいずれかのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1048]
前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列が、SEQ ID NO: 2、4、7、8、9、10、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、または23のアミノ酸配列と少なくとも95%同一である、本発明1001～1047のいずれかのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1049]
前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列が、SEQ ID NO: 13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、または23のアミノ酸配列と少なくとも95%同一である、本発明1001～1048のいずれかのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1050]
前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列が、SEQ ID NO: 17、18、20、または21のアミノ酸配列と少なくとも95%同一である、本発明1001～1049のいずれかのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1051]
前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列が、SEQ ID NO: 15、17、または18のアミノ酸配列と少なくとも95%同一である、本発明1001～1050のいずれかのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1052]
前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列が、SEQ ID NO: 17のアミノ酸配列と少なくとも95%同一である、本発明1001～1051のいずれかのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1053]
(i) アルドース分子からケトース分子への変換、好ましくはグルコースからフルクトースへの変換、および/または
(ii) ケトース分子からアルドース分子への変換、好ましくはフルクトースからグルコースへの変換
を触媒可能な、本発明1001～1052のいずれかのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1054]
前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼが、(A)、(C)、(E)、(D)、(B)、および(F)、好ましくは(A)、(C)、(D)、および(E)からなる群より選択される少なくとも1つの特性、またはその任意の組み合わせ、より好ましくは特性(A)、(C)、および(E)の組み合わせ、または(A)および(D)の組み合わせを有し、
特性(A)が、フルクトース濃度50mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関して、前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの活性が、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対して、少なくとも1.1倍～最大3.0倍増加していることであり;
特性(B)が、フルクトース濃度200mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関して、前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの活性が、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対して、少なくとも1.2倍～最大3.0倍増加していることであり;
特性(C)が、温度74℃で15分間の前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのインキュベーション後の残留活性値として表される、前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの熱安定性が、少なくとも30%～最大100%であることであり;
特性(D)が、前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのK M 値が190mM未満であることであり;
特性(E)が、前記ポリペプチドの可溶性発現レベルと、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの可溶性発現レベルとの比として定義される、前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの可溶性発現レベルが、少なくとも1.04～最大1.80であることであり;
特性(F)が、グルコース形成量が、好ましくは少なくとも1.2倍～最大5倍、または少なくとも1.5倍～最大5倍、または少なくとも1.9倍～最大5倍、または少なくとも1.9倍～最大3.5倍、または少なくとも2.2倍～最大3.3倍増加していることである、
本発明1001～1053のいずれかのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1055]
前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼが、(A)、(C)、(E)、(D)、(B)、および(F)からなる群より選択される少なくとも1つの特性を有し、
- 特性(A)について、フルクトース濃度50mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関して、前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの活性が、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対して増加していることが、フルクトース50mMでのグルコースイソメラーゼ活性に関する酵素アッセイによって検出され; かつ/または
- 特性(B)について、フルクトース濃度200mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関して、前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの活性が、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対して増加していることが、フルクトース200mMでのグルコースイソメラーゼ活性に関する酵素アッセイによって検出され; かつ/または
- 特性(C)について、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対する、前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのインキュベーション後の残留活性値が、フルクトース50mMでのグルコースイソメラーゼ活性に関する酵素アッセイによって、温度74℃で15分間測定され; かつ/または
- 特性(E)について、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対する、前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのグルコースイソメラーゼ可溶性発現レベルが、いずれかのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの無細胞抽出液の変性ポリアクリルアミドゲル電気泳動(SDS-PAGE)によって決定され、未処理細菌培養物体積1単位当たりのバンド強度として定量化され; かつ/または
- 特性(F)について、前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのグルコース形成量が、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対して増加していることが、該ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼと濃度50mMのフルクトースとを40℃で40分間反応させた後に生成されるグルコースの量の増加として検出される、
本発明1054のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1056]
前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼが、(A)、(C)、(E)、(D)、(B)、および(F)からなる群より選択される少なくとも1つの特性を有し、
- 特性(A)について、フルクトース濃度50mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する、前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの活性の、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対する増加が、1.4倍～最大3.0倍であり; かつ/または
- 特性(B)について、フルクトース濃度200mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する、前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの活性の、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対する増加が、1.3倍～最大3.0倍であり; かつ/または
- 特性(C)について、前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのK M 値が、140mM～160mMであり; かつ/または
- 特性(F)について、前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのグルコース形成量の、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対する増加が、2.2倍～最大3.3倍である、
本発明1054～1055のいずれかのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1057]
前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼが、特性(A)および(D)を有し、
(A)において、フルクトース濃度50mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する、前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの活性の、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対する増加が、1.2倍～最大3.0倍であり、
(D)において、前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのK M 値が、190mM未満である、
本発明1054～1056のいずれかのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1058]
前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼが、特性(A)、(C)、および(E)を有し、
(A)において、フルクトース濃度50mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する、前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの活性の、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対する増加が、1.2倍～最大3.0倍であり、
(C)において、温度74℃で15分間の前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのインキュベーション後の残留活性値として表される、前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの熱安定性が、少なくとも30%～最大64%であり、
(E)において、前記ポリペプチドの可溶性発現レベルと、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの可溶性発現レベルとの比として定義される、前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの可溶性発現レベル増加が、少なくとも1.04～最大1.80である、
本発明1054～1057のいずれかのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1059]
アミノ酸配列を含む、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼであって、
該ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸配列と少なくとも95%同一であり、
該ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼが、(A)、(C)、(E)、(D)、(B)、および(F)、好ましくは(A)、(C)、(D)、および(E)からなる群より選択される少なくとも1つの特性、またはその任意の組み合わせ、より好ましくは特性(A)、(C)、および(E)の組み合わせ、または(A)および(D)の組み合わせを有し、
特性(A)が、フルクトース濃度50mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する活性が、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対して、少なくとも1.1倍～最大3.0倍増加していることであり;
特性(B)が、フルクトース濃度200mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する活性が、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対して、少なくとも1.2倍～最大3.0倍の増加していることであり;
特性(C)が、温度74℃で15分間の前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのインキュベーション後の残留活性値として表される、前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの熱安定性が、少なくとも30%～最大100%であることであり;
特性(D)が、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのK M 値が190mM未満であることであり;
特性(E)が、前記ポリペプチドの可溶性発現レベルと、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの可溶性発現レベルとの比として定義される、前記ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの可溶性発現レベルが、少なくとも1.04～最大1.80であることであり;
特性(F)が、グルコース形成量が、好ましくは少なくとも1.2倍～最大5倍、または少なくとも1.5倍～最大5倍、または少なくとも1.9倍～最大5倍、または1.9倍～最大3.5倍、または2.2倍～最大3.3倍増加していることである、
ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1060]
(i) アルドース分子からケトース分子への変換、好ましくはグルコースからフルクトースへの変換、および/または
(ii) ケトース分子からアルドース分子への変換、好ましくはフルクトースからグルコースへの変換
を触媒可能な、本発明1059のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1061]
EC番号EC 5.3.1.5のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼである、本発明1001～1060のいずれかのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ。
[本発明1062]
SEQ ID NO: 1のアミノ酸配列を含むグルコースイソメラーゼのグルコースイソメラーゼ変異体であって、
(i) フルクトース濃度50mMでフルクトースをグルコースに変換する際の活性が、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対して、少なくとも1.1倍～最大3.0倍増加しており; かつ/または
(ii) 温度74℃で15分間の変異体のインキュベーション後の残留活性値として表される熱安定性が、少なくとも30%であり; かつ/または
(iii) 該変異体の可溶性発現レベルと、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの可溶性発現レベルとの比として定義される可溶性発現レベル増加が、少なくとも1.1であり; かつ/または
(iv) K M 値が190mM未満であり; かつ/または
(v) フルクトース濃度200mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する活性が、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対して、少なくとも1.2倍～最大3.0倍増加しており; かつ/または
(vi) グルコース形成量として表されるフルクトースをグルコースに変換する際の触媒活性が、SEQ ID NO: 1のポリペプチドに対して、少なくとも1.2倍～最大5倍増加している、
変異体。
[本発明1063]
フルクトースをグルコースに変換する際の活性が増加しているグルコースイソメラーゼ変異体であって、K M 値が、190mM未満、好ましくは170mM未満、より好ましくは160mM未満、最高に好ましくは152mM以下である、変異体。
[本発明1064]
グルコースイソメラーゼの存在下でフルクトースを反応させる段階を含む、グルコースを調製するための方法であって、
(i) フルクトース濃度50mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関して、グルコースイソメラーゼの活性が、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対して、少なくとも1.1倍～最大3.0倍増加しており; かつ/または
(ii) 温度74℃で15分間のグルコースイソメラーゼのインキュベーション後の残留活性値として表される、グルコースイソメラーゼの熱安定性が、少なくとも30%であり; かつ/または
(iii) グルコースイソメラーゼの可溶性発現レベルと、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの発現レベルとの比として定義される、グルコースイソメラーゼの可溶性発現レベル増加が、少なくとも1.1であり; かつ/または
(iv) グルコースイソメラーゼのK M 値が、190mM未満であり; または
(v) フルクトース濃度50mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関して、グルコースイソメラーゼの活性が、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対して、少なくとも1.1倍～最大3.0倍増加しており、温度74℃で15分間のグルコースイソメラーゼのインキュベーション後の残留活性値として表されるグルコースイソメラーゼの熱安定性が、少なくとも30%であり、かつグルコースイソメラーゼの可溶性発現レベルと、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの発現レベルとの比として定義される、グルコースイソメラーゼの可溶性発現レベル増加が、少なくとも1.1であり; または
(vi) グルコース形成量として表される、フルクトースをグルコースに変換する際のグルコースイソメラーゼの触媒活性が、SEQ ID NO: 1のポリペプチドに対して、少なくとも1.2倍～最大5倍増加している、
方法。
[本発明1065]
グルコースを調製するための、好ましくは、本発明1064の方法に従ってグルコースを調製するための、本発明1001～1063のいずれかのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの使用。
様々な局面および態様における本明細書に記載のグルコースイソメラーゼは、本発明のグルコースイソメラーゼと呼ばれることもある。本発明のグルコースイソメラーゼは、酵素改変により得られ、かつ、いずれも低フルクトース濃度でのフルクトースからグルコースへの変換率の改善、ならびに/または可溶性発現の増加および/もしくは熱安定性の増加を生じさせる、活性、好ましくは活性値の改善および/またはフルクトースに関するKM値の減少によって野生型グルコースイソメラーゼと区別される、野生型グルコースイソメラーゼの変異体である。
具体的には、本発明のグルコースイソメラーゼは、野生型グルコースイソメラーゼとの比較で、フルクトースからグルコースへの変換に関する活性、好ましくは活性値の改善、および/またはフルクトースに関するKM値の減少を示す、ストレプトマイセス属SK株由来の野生型グルコースイソメラーゼのグルコースイソメラーゼ変異体に関する。好ましい態様では、本発明のグルコースイソメラーゼはまた、本明細書に記載の発現系などの組換え発現系における可溶性発現の改善を示し、かつ/あるいは、野生型グルコースイソメラーゼとの比較で熱安定性の減少を示さないかまたはわずかにしか示さず、かつ/あるいは、グルコース形成量として表されるフルクトースをグルコースに変換する際の触媒活性の増加を示す。
ストレプトマイセス属SK株由来の野生型グルコースイソメラーゼは、SEQ ID NO: 1のアミノ酸配列を有するものであり、GenBankデータベースから取得した。酵素配列はBorgiら(Biochimie, 86, 561-568, 2004)により解明され、GenBank配列データベースに寄託された(NCBIアクセッション番号: CAA75672.2、1997年11月14日に最初に寄託)。
本発明は、ストレプトマイセス属SK株由来のEC番号EC 5.3.1.5のSEQ ID NO: 1の野生型グルコースイソメラーゼ酵素が、酵素改変によって、中程度の温度、好ましくは約30℃～約50℃などの温度でのフルクトースからグルコースへの変換に関して低基質濃度で高活性を示すように改善可能であるという驚くべき発見に基づく。
本発明者らは、驚くべきことに、SEQ ID NO: 1のアミノ酸配列のアミノ酸位置10、33、34、35、53、59、89、90、および95のうち1つまたはいくつかにおけるアミノ酸残基を置き換えることが、SEQ ID NO: 1のグルコースイソメラーゼの反応特性を改善するために好適であることを発見した。SEQ ID NO: 1のこれらのアミノ酸位置のうち、いずれもSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、34、35、59、89、90、および95、ならびに/またはアミノ酸位置10、33、34、35、および59、ならびに/またはアミノ酸位置10、33、および35が特に好適であり、いずれもSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、53、90、および95、ならびに/またはアミノ酸位置10、89、90、および95、ならびに/またはアミノ酸位置10、90、および95がさらに好適である。
本発明の範囲内では、本発明のグルコースイソメラーゼは所与のアミノ酸残基位置、好ましくはSEQ ID NO: 1の1つの所与のアミノ酸残基位置における1つのアミノ酸変異を含む。本発明のグルコースイソメラーゼが1つの変異のみを含む本発明の一態様では、SEQ ID NO: 1の突然変異アミノ酸残基位置はSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置53とは異なり、すなわち、本発明のグルコースイソメラーゼの突然変異アミノ酸残基はSEQ ID NO: 1のアミノ酸配列のアミノ酸位置53とは異なる。本発明のグルコースイソメラーゼが1つの変異のみを含む本発明のさらなる態様では、SEQ ID NO: 1の突然変異アミノ酸残基位置はSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置53であり、したがって突然変異アミノ酸はロイシンとは異なる。本発明のグルコースイソメラーゼが1つの変異のみを含む本発明の一態様では、SEQ ID NO: 1の突然変異アミノ酸残基位置はSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置90とは異なり、すなわち、本発明のグルコースイソメラーゼの突然変異アミノ酸残基はSEQ ID NO: 1のアミノ酸配列のアミノ酸位置90とは異なる。本発明のグルコースイソメラーゼが1つの変異のみを含む本発明のさらなる態様では、SEQ ID NO: 1の突然変異アミノ酸残基位置はSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置90であり、したがって突然変異アミノ酸はセリンとは異なる。本発明のグルコースイソメラーゼが1つの変異のみを含む本発明の一態様では、SEQ ID NO: 1の突然変異アミノ酸残基位置はSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置89とは異なり、すなわち、本発明のグルコースイソメラーゼの突然変異アミノ酸残基はSEQ ID NO: 1のアミノ酸配列のアミノ酸位置89とは異なる。本発明のグルコースイソメラーゼが1つの変異のみを含む本発明のさらなる態様では、SEQ ID NO: 1の突然変異アミノ酸残基位置はSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置89であり、したがって突然変異アミノ酸はバリンとは異なる。
本発明の範囲内では、本発明のグルコースイソメラーゼは2つ以上のアミノ酸残基位置、好ましくはSEQ ID NO: 1の2つ以上のアミノ酸残基位置におけるアミノ酸変異を含む。所与のアミノ酸残基位置における1つのアミノ酸変異のみを含む本発明のグルコースイソメラーゼと同様に、2つ以上のアミノ酸残基位置におけるアミノ酸変異を含む本発明のグルコースイソメラーゼも驚くべき予想外の効果を示す。これらの驚くべき予想外の効果は、グルコースイソメラーゼが3つまたは4つまたは5つのアミノ酸残基位置における変異を含む、本発明のグルコースイソメラーゼの態様においていっそう顕著でありうる。
本発明のグルコースイソメラーゼが2つ以上のアミノ酸残基位置、好ましくはSEQ ID NO: 1の2つ以上のアミノ酸残基位置におけるアミノ酸変異を含む、本発明の様々な局面の一態様では、本発明のグルコースイソメラーゼはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置53における変異を含むグルコースイソメラーゼとは異なり、好ましくは、本発明のグルコースイソメラーゼはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置53における変異を含むグルコースイソメラーゼとは異なり、したがって突然変異アミノ酸はロイシンとは異なる。本発明のグルコースイソメラーゼが2つ以上のアミノ酸残基位置、好ましくはSEQ ID NO: 1の2つ以上のアミノ酸残基位置におけるアミノ酸変異を含む、本発明の様々な局面の一態様では、本発明のグルコースイソメラーゼはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置90における変異を含むグルコースイソメラーゼとは異なり、好ましくは、本発明のグルコースイソメラーゼはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置90における変異を含むグルコースイソメラーゼとは異なり、したがって突然変異アミノ酸はセリンとは異なる。本発明のグルコースイソメラーゼが2つ以上のアミノ酸残基位置、好ましくはSEQ ID NO: 1の2つ以上のアミノ酸残基位置におけるアミノ酸変異を含む、本発明の様々な局面の一態様では、本発明のグルコースイソメラーゼはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置89における変異を含むグルコースイソメラーゼとは異なり、好ましくは、本発明のグルコースイソメラーゼはSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置89における変異を含むグルコースイソメラーゼとは異なり、したがって突然変異アミノ酸はバリンとは異なる。
グルコースイソメラーゼの性能を、いくつかの特性、例えば、フルクトース濃度50mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する活性、好ましくは活性値; フルクトース濃度200mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する活性、好ましくは活性値; 好ましくは74℃で15分間のインキュベーション後の残留活性値として表される熱安定性; KM値; 可溶性発現レベル; およびグルコース形成量により評価することができる。
本発明の文脈全体を通じて、グルコースイソメラーゼの性能は、これらの特性のうち1つまたは複数が実現される場合に、例えば、フルクトース濃度50mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する活性、好ましくは活性値が増加する場合に; フルクトース濃度200mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する活性、好ましくは活性値が増加する場合に; 好ましくは74℃で15分間のインキュベーション後の残留活性値として表される熱安定性が40%を超え、好ましくは60%を超える場合に; KM値が190mM未満に減少する場合に; 可溶性発現レベルが増加する場合に; かつ/またはグルコース形成量が増加する場合に、改善されるように意図されている。本発明のグルコースイソメラーゼを含むグルコースイソメラーゼの評価において使用される特徴の好ましい組み合わせは、フルクトース濃度50mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する活性、好ましくは活性値、インキュベーション後の残留活性値として表される熱安定性、および可溶性発現レベルの改善である。別の好ましい組み合わせはフルクトース濃度50mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する活性、好ましくは活性値、可溶性発現レベルの改善、およびKM値である。さらに別の好ましい組み合わせはフルクトース濃度50mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する活性、好ましくは活性値、KM値、およびインキュベーション後の残留活性値として表される熱安定性である。別の好ましい組み合わせはフルクトース濃度50mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する活性、好ましくは活性値、およびKM値である。
一態様では、背反する指示がない限り、本発明のポリペプチド、好ましくは任意のグルコースイソメラーゼにより示されるかまたは示されるべき任意の活性、酵素活性は、本明細書に定義の通りであり、本明細書にそれぞれ開示される方法およびアッセイによりそれぞれ決定される。したがって、これらの特性を決定するために使用されるアッセイは、本明細書に開示されかつ以下に記載されるアッセイであることが好ましい。本発明に関して、以下の定義がグルコースイソメラーゼに当てはまることを認識すべきであるが、本発明の範囲内では、まさに同じ定義がポリペプチド、好ましくは本発明のポリペプチドにも同様に当てはまる。また、グルコースイソメラーゼおよびGIという用語が本明細書において互換的に使用されることを認識すべきである。
グルコースイソメラーゼ活性値(本明細書においては活性値とも呼ばれる)
グルコースイソメラーゼがグルコースからフルクトースへの可逆的異性化を触媒することから、活性、好ましくは活性値を、グルコースからフルクトースへの異性化の方向またはフルクトースからグルコースへの異性化の方向で決定することができる。本発明において、グルコースイソメラーゼ活性値は、以下に記載のアッセイIまたはアッセイIIの条件でのフルクトースからグルコースへの異性化における活性値として定義される。本発明の範囲内では、グルコースイソメラーゼの任意の活性、好ましくは活性値は、一態様において触媒活性である。グルコースイソメラーゼ活性の1単位は、50mMリン酸カリウム緩衝液pH 7.0、10mM Mg2+、および40℃という特定の条件で1分以内に1マイクロモルのフルクトースからグルコースへの変換を触媒する酵素の量として定義される。
アッセイI
グルコースイソメラーゼ活性値を、以下の条件を使用する40℃でのフルクトースからのグルコースの形成をモニタリングすることでアッセイする: 50mMリン酸カリウム緩衝液pH 7、10mM Mg2+(MgCl2またはMgSO4として)、および所与のフルクトース濃度50mMまたは200mM。グルコースイソメラーゼの作用によりフルクトースから生成されるグルコースを、グルコースがヘキソキナーゼによりグルコース-6-リン酸に変換される不連続カップリングアッセイを使用して決定した。グルコース-6-リン酸およびNADPをグルコース6-リン酸脱水素酵素により6-ホスホ-グルコン酸およびNADPHに変換する。検出は、NADPHの吸光度を340nmで測定することに基づく。D-グルコース-HKキット(HK/G6P-DHフォーマット)をマイクロプレートフォーマットで使用した(製品番号K-GLUHK-110AまたはK-GLUHK-220A、アイルランド・ウィクロウのMegazyme International Irelandから入手可能)。製造者の推奨規格に従ってアッセイを行い、試料中のグルコースの量を外部標準を使用して定量化する。原則として、グルコースイソメラーゼにより生成されるグルコースは、当技術分野において公知である任意の他の好適な方法によって定量化してもよい。
アッセイII
グルコースイソメラーゼ活性値を測定するための反応を、以下の条件でのフルクトースからのグルコースの形成をモニタリングすることで行う: 50mMリン酸カリウム緩衝液pH 7、10mM MgSO4、フルクトース濃度50～1000mM、および40℃。反応液1mL当たり0.25M HCl 0.1mLを加えることで反応を停止させる。グルコースイソメラーゼの作用によりフルクトースから生成されるグルコースを、グルコースがグルコースオキシダーゼによりグルコノラクトンに変換される不連続カップリングアッセイを使用して決定する。本反応の副生成物である過酸化水素を使用して西洋ワサビペルオキシダーゼが2,2'-アジノ-ビス(3-エチルベンゾチアゾリン-6-スルホン酸(ABTS)を酸化することで、405nmで光吸収を示す着色生成物が得られる。酸反応停止反応液の10μLアリコートと、50mMリン酸カリウム緩衝液pH 6、1mM ABTS、5 U/mLグルコースオキシダーゼ、および1 U/mL西洋ワサビペルオキシダーゼを含むアッセイ混合物90μLとを混合する。30℃で60～70分間のインキュベーション後、405nmでの吸光度を測定する(エンドポイント測定)。試料中のグルコースの量を外部標準を使用して定量化する。原則として、グルコースイソメラーゼにより生成されるグルコースは、当技術分野において公知である任意の他の方法によって定量化してもよい。
グルコースイソメラーゼ体積活性値
グルコースイソメラーゼ体積活性値は、体積当たりのグルコースイソメラーゼ活性値として定義される。本発明において、体積活性値は、培養物体積、例えば細菌培養物体積1ミリリットル(1mL)から得られるグルコースイソメラーゼ単位の量として表される。
グルコースイソメラーゼ正規化活性値
グルコースイソメラーゼ正規化活性値は、特定のグルコースイソメラーゼ変異体のグルコースイソメラーゼ体積活性値をグルコースイソメラーゼ可溶性発現レベルで割ることで発現レベルに対して正規化される、該特定の変異体のグルコースイソメラーゼ体積活性値を意味するものとする。
グルコース形成量
グルコース形成量は、フルクトースからグルコースへの変換の際のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの触媒活性を示す測定値であり、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼと、フルクトース濃度50mMのフルクトースとを、溶液(50mMリン酸カリウム緩衝液pH 7)中、40℃で40分間反応させた後に生成されるグルコースの量として定義される。グルコース量を、例えばD-グルコース-HKキット(HK/G6P-DHフォーマット)(製品番号K-GLUHK-110AまたはK-GLUHK-220A、アイルランド・ウィクロウのMegazyme International Irelandから入手可能)などの市販の試験アッセイの使用により定量化する。グルコース形成量は、個々の反応において達成されるグルコース濃度(例えばグルコースmM単位の)として、または変異ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼにより生成されるグルコース量対SEQ ID NO: 1のグルコースイソメラーゼにより生成されるグルコース量の比である相対グルコース形成量として定量化可能である。
グルコースイソメラーゼ可溶性発現レベル
グルコースイソメラーゼ変異体のグルコースイソメラーゼ可溶性発現レベルは、グルコースイソメラーゼ変異体の可溶性発現レベルと、SEQ ID No: 1のアミノ酸配列を有する野生型グルコースイソメラーゼの可溶性発現レベルとの比として定義される。グルコースイソメラーゼ変異体の可溶性発現レベルは、グルコースイソメラーゼ変異体の無細胞抽出液のSDS-PAGE、および未処理細菌培養物体積1単位当たりのグルコースイソメラーゼバンド強度の定量化により決定される。当業者は、タンパク質の適切な分離を確実にしかつ正確な定量化を可能にするためにSDS-PAGEの実験条件をどのようにして選択するかを認識している。
熱安定性
熱安定性とは、所与の期間にわたる特定の高温への曝露後に不可逆的失活に抵抗する酵素の能力のことである。熱安定性を測定および記述する多くの方法が存在する。本発明において、熱安定性は、いずれかの野生型グルコースイソメラーゼ、および/または本発明のいずれかの変異もしくは突然変異グルコースイソメラーゼを特に含む野生型グルコースイソメラーゼのいずれかの変異体の以下の1つまたは複数の特性を測定および記述することで決定された。
残留活性値とは、グルコースイソメラーゼ酵素の特定の時間にわたる高温でのインキュベーション後の該酵素のグルコースイソメラーゼ活性値を、該酵素の初期グルコースイソメラーゼ活性値で割った比のことであり、パーセントとして表される。酵素の初期活性、好ましくは活性値とは、温度処理を伴わない、すなわち、20～25℃などの室温での、明確に言えばインキュベーション期間内に酵素が十分に活性なままである任意の温度でのインキュベーションを伴う、各酵素の活性、好ましくは活性値のことである。グルコースイソメラーゼの残留活性値を測定する際に、各グルコースイソメラーゼ活性を、原則として、任意の高温および任意のインキュベーション時間で任意の活性アッセイを使用することで決定することができる。本発明においては、実施例において指定されるように、本明細書に記載のアッセイIをフルクトース50mMで使用し、酵素を74℃で15分間インキュベートした。
Tm50値とは、該温度での一定時間にわたる酵素のインキュベーション後に該酵素が初期活性の50%、すなわち残留活性値50%を示す温度のことであり、該酵素の初期グルコースイソメラーゼ活性値に対するパーセントとして表される。酵素の初期活性、好ましくは活性値とは、温度処理を伴わない、すなわち、20～25℃などの室温での、明確に言えばインキュベーション期間内に酵素が十分に活性なままである任意の温度でのインキュベーションを伴う、各酵素の活性のことである。
グルコースイソメラーゼの熱安定性を測定する際に、各グルコースイソメラーゼ活性を、原則として、任意の高温および任意のインキュベーション時間で任意の活性アッセイを使用することで決定することができる。本発明においては、実施例において指定されるように、本明細書に記載のアッセイIをフルクトース200mMで使用し、酵素を65～85℃の範囲の温度で15分間インキュベートした。
本発明によれば、第1の局面において、本発明はまた、アミノ酸配列を含む、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼであって、グルコースイソメラーゼのアミノ酸配列がSEQ ID NO: 1のアミノ酸配列と少なくとも95%同一および/または少なくとも95%相同であり、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのアミノ酸配列が1つまたは複数のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、1つまたは複数のアミノ酸位置がそれぞれ独立してSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、34、35、53、59、89、90、および95からなる群より選択される、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに関する。グルコースイソメラーゼが1つまたは複数のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含む、本発明のグルコースイソメラーゼの一態様では、グルコースイソメラーゼはいずれもSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10におけるアミノ酸置換、アミノ酸位置90におけるアミノ酸置換、またはアミノ酸位置95におけるアミノ酸置換を含む。
一態様では、第1の局面のポリペプチドは、グルコースイソメラーゼ、好ましくは本明細書に開示される1つまたはいくつかの特性を有するグルコースイソメラーゼである。本発明によれば、本発明および特にそれぞれの任意の局面のグルコースイソメラーゼの開示は、本発明のポリペプチドにも同様に当てはまり、逆もまた同じである。さらに、一態様では、本発明のポリペプチドは、グルコースイソメラーゼ活性、好ましくは活性値を有するポリペプチドである。好ましくは、グルコースイソメラーゼ活性、好ましくは活性値は、本明細書に定義されるそれである。
グルコースイソメラーゼがアミノ酸配列を含み、グルコースイソメラーゼのアミノ酸配列がSEQ ID NO: 1のアミノ酸配列と少なくとも95%同一および/または少なくとも95%相同であり、グルコースイソメラーゼのアミノ酸配列が1つまたは複数のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、1つまたは複数のアミノ酸位置がSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、34、35、53、59、89、90、および95からなる群より選択されるという表現は、一態様では、グルコースイソメラーゼがSEQ ID NO: 1との少なくとも95%の相同性を示し、グルコースイソメラーゼが10、33、34、35、53、59、89、90、および95より選択される1つまたは複数のアミノ酸位置における置換を含み、各アミノ酸位置がSEQ ID NO: 1のアミノ酸配列の位置に対応する、という表現と同じ意味を有する。
「SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置」という用語は、SEQ ID NO: 1におけるアミノ酸位置を意味するように意図されている。この限りにおいて、本発明の任意の局面を好ましくは含む本発明のグルコースイソメラーゼは、突然変異グルコースイソメラーゼ、より具体的にはSEQ ID NO: 1のアミノ酸配列を有するグルコースイソメラーゼの突然変異グルコースイソメラーゼである。一態様では、本発明のグルコースイソメラーゼは、SEQ ID NO: 1のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を有するグルコースイソメラーゼである。さらなる態様では、本発明のグルコースイソメラーゼは、SEQ ID NO: 1のアミノ酸配列からなるグルコースイソメラーゼとは異なるグルコースイソメラーゼである。
好ましくは、突然変異グルコースイソメラーゼは、非突然変異グルコースイソメラーゼに対する1つまたは複数のアミノ酸残基の変化、例えば置き換え/置換または欠失を示す、グルコースイソメラーゼである。非突然変異グルコースイソメラーゼは、1個または複数の変化したアミノ酸残基においてのみ突然変異グルコースイソメラーゼのアミノ酸配列と異なるアミノ酸配列を有するグルコースイソメラーゼであることが好ましい。言い換えれば、突然変異グルコースイソメラーゼおよび基礎グルコースイソメラーゼは、同じアミノ酸骨格を共有するが、該1個または複数の変化したアミノ酸残基において異なる。好ましい一態様では、基礎グルコースイソメラーゼは野生型グルコースイソメラーゼである。
本発明の第1の局面によれば、本発明のグルコースイソメラーゼは、SEQ ID NO: 1の少なくとも1つのアミノ酸位置における少なくとも1つのアミノ酸置換を含む。本発明によれば、本発明のグルコースイソメラーゼの一態様では、アミノ酸置換はSEQ ID NO: 1の1つの特定の指示されたアミノ酸位置において行われ、したがって、場合によっては、SEQ ID NO: 1の当該位置に存在するまさにそのアミノ酸残基は、本発明のグルコースイソメラーゼに存在する種類の置換アミノ酸残基に対応せず、あるいは、ここでもまた場合によっては、SEQ ID NO: 1の当該位置に存在するまさにそのアミノ酸残基は、本発明のグルコースイソメラーゼに存在する種類の置換アミノ酸残基に対応する。置換は非保存的でも保存的でもよい。本発明において、保存的とはGからA; AからG、S; VからI、L、A、T、またはS; IからV、L、またはM; LからI、M、またはV; MからL、I、またはV; PからA、S、またはN; FからY、W、またはH; YからF、W、またはH; WからY、F、またはH; RからK、E、またはD; KからR、E、またはD; HからQ、N、またはS; DからN、E、K、R、またはQ; EからQ、D、K、R、またはN; SからTまたはA; TからS、V、またはA; CからS、T、またはA; NからD、Q、H、またはS; QからE、N、H、K、またはRへのアミノ酸の交換を意味する。
また、本発明によれば、本発明のグルコースイソメラーゼの一態様では、アミノ酸置換は、SEQ ID NO: 1のいずれかの指示されたアミノ酸位置のまさにそのアミノ酸残基が置換されるアミノ酸置換であり、したがって、場合によっては、置換アミノ酸残基のアミノ酸位置はSEQ ID NO: 1に関して指示されたアミノ酸位置というわけでは必ずしもなく、むしろ、一態様では、置換アミノ酸残基のアミノ酸位置は、SEQ ID NO: 1の対応する位置とは好ましくはアミノ酸位置1つ～5つ分、好ましくは2つ～5つ分、より好ましくは3つ～5つ分、さらに好ましくは4つ～5つ分、最も好ましくはアミノ酸位置4つ分異なる。
本発明のグルコースイソメラーゼが、1つまたは複数の指定されたアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含むことを特徴とする限り、一態様において、本発明のグルコースイソメラーゼが、1つの指示されたアミノ酸位置における1つのアミノ酸置換を有するグルコースイソメラーゼであることが理解されよう。1つまたは複数の指定されたアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含むことを特徴とする本発明のグルコースイソメラーゼの別の態様では、本発明のグルコースイソメラーゼは、2つ以上、例えば2つ、3つ、4つ、5つなどの指示されたアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を有するグルコースイソメラーゼである。後者の場合では、置換されたアミノ酸残基の数は、1から、置換されたと指示および規定されたアミノ酸残基の数までの、任意の整数である。本発明によれば、本発明のグルコースイソメラーゼは、1つのアミノ酸置換、または置換されたと指示および規定されたアミノ酸残基のそれぞれの任意の順列を含む任意の組み合わせを有するかまたは実現する、任意のグルコースイソメラーゼである。
本発明によれば、グルコースイソメラーゼは、アミノ酸位置10、33、34、35、53、59、89、90、および95のうち1つにおけるアミノ酸置換を含んでもよく、それらの任意の組み合わせおよび任意の各順列におけるアミノ酸置換を含んでもよい。したがって、一態様では、本発明のグルコースイソメラーゼは、SEQ ID NO: 1の1つの該アミノ酸位置における少なくともアミノ酸置換、SEQ ID NO: 1の少なくとも2つの該アミノ酸位置における少なくとも1つのアミノ酸置換、SEQ ID NO: 1の少なくとも3つの該アミノ酸位置における少なくとも1つのアミノ酸置換、SEQ ID NO: 1の少なくとも4つの該アミノ酸位置における少なくとも1つのアミノ酸、およびSEQ ID NO: 1の少なくとも5つの該アミノ酸位置における少なくとも1つのアミノ酸置換を含む。当該態様のうち、SEQ ID NO: 1の4つのアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含む本発明のグルコースイソメラーゼが特に好ましい。あるいは、当該態様のうち、SEQ ID NO: 1の4つ～5つのアミノ酸位置またはSEQ ID NO: 1の5つのアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含む本発明のグルコースイソメラーゼが特に好ましい。
しかし、やはり本発明の範囲内では、本発明のグルコースイソメラーゼは、グルコースイソメラーゼのアミノ酸配列が本発明のグルコースイソメラーゼの最小構造特徴および/または最小機能特徴のうち少なくとも一方を満たすことを好ましくは前提として、SEQ ID NO: 1の指示されたアミノ酸位置における上記で示された数をさらに超える置換を含む。この最小機能特徴は、グルコースイソメラーゼがアミノ酸配列を含み、グルコースイソメラーゼのアミノ酸配列がSEQ ID NO: 1のアミノ酸配列と少なくとも95%同一および/または少なくとも95%相同であり、グルコースイソメラーゼのアミノ酸配列が1つまたは複数のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、1つまたは複数のアミノ酸位置がそれぞれ独立してSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、34、35、53、59、89、90、および95からなる群より選択されるということである。この最小機能特徴は、本明細書に開示される、その任意のさらなる詳細条件を含む特性(A)、(B)、(C)、(D)、(E)、および(F)のうち1つ、または該特性の任意の組み合わせであり、特性(A)は、フルクトース濃度50mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関して、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの活性、好ましくは活性値が、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対して、少なくとも1.1倍、例えば1.1倍～1.6倍増加していることであり、特性(B)は、フルクトース濃度200mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関して、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの活性、好ましくは活性値が、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対して、少なくとも1.2倍、例えば1.2倍～1.6倍または1.2倍～3.0倍増加していることであり、特性(C)は、温度74℃で15分間のインキュベーション後の残留活性値として表される、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの熱安定性が、少なくとも30%～最大100%であることであり、特性(D)は、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのKM値が100mM～190mMまたは50mM～190mMであることであり、特性(E)は、該ポリペプチドの可溶性発現レベルと、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの可溶性発現レベルとの比として定義される、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの可溶性発現レベルが、少なくとも1.04、例えば1.04～1.38または1.04～最大1.80であることであり、特性(F)は、グルコース形成量が、好ましくは少なくとも1.2倍～最大5倍、または少なくとも1.5倍～最大5倍、または少なくとも1.9倍～最大5倍、または少なくとも1.9倍～最大3.5倍、または少なくとも2.2倍～最大3.3倍増加していることである。本発明の範囲内では、上記特性(A)、(B)、(C)、(D)、(E)、および(F)を決定するために、本明細書に開示されるアッセイを使用することができる。また、本発明の範囲内では、特性(A)、すなわち、フルクトース濃度50mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関して、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの活性、好ましくは活性値が、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対して増加していることを、フルクトース濃度50mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対する相対活性として表すことができる。そのような場合、増加に関して指示された値は、「1」に設定される基準に対する比にそれぞれ変換される。例えば、1.1倍の活性の増加、好ましくは活性値の増加は相対活性1.1:1に変換され、逆もまた同じである。同じことは、特性(B)、すなわち、フルクトース濃度200mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関して、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの活性、好ましくは活性値が、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対して増加していることにも同様に当てはまる。同じことは、特性(F)、すなわち、フルクトース濃度50mM、40℃で40分間のフルクトースからグルコースへの変換に関して、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼのグルコース形成量が、SEQ ID NO: 1のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼに対して増加していることにも同様に当てはまる。
本発明の範囲内では、本発明のグルコースイソメラーゼは、前記特性(A)、特性(B)、特性(C)、特性(D)、特性(E)、特性(F)、特性(A)および(B)、特性(A)および(C)、特性(A)および(D)、特性(A)および(E)、特性(A)および(F)、特性(B)および(C)、特性(B)および(D)、特性(B)および(E)、特性(B)および(F)、特性(C)および(D)、特性(C)および(E)、特性(C)および(F)、特性(D)および(E)、特性(D)および(F)、特性(E)および(F)、特性(A)、(B)、および(C)、特性(A)、(B)、および(D)、特性(A)、(B)、および(E)、特性(A)、(B)、および(F)、特性(B)、(C)、および(D)、特性(B)、(C)、および(E)、特性(B)、(C)、および(F)、特性(C)、(D)、および(E)、特性(C)、(D)、および(F)、特性(D)、(E)、および(F)、特性(A)、(B)、(C)、および(D)、特性(A)、(B)、(C)、および(E)、特性(A)、(B)、(C)、および(F)、特性(A)、(C)、(D)、および(E)、特性(A)、(C)、(D)、および(F)、特性(A)、(D)、(E)、および(F)、特性(B)、(C)、(D)、および(E)、特性(B)、(C)、(D)、および(F)、特性(B)、(D)、(E)、および(F)、特性(C)、(D)、(E)、および(F)、または特性(A)、(B)、(C)、(D)、および(E)、特性(A)、(B)、(C)、(D)、および(F)、特性(A)、(B)、(C)、(E)、および(F)、特性(A)、(B)、(D)、(E)、および(F)、特性(A)、(C)、(D)、(E)、および(F)を示す。本発明のグルコースイソメラーゼの好ましい態様は、特性(A)および(C)、特性(A)および(D)、または特性(A)および(E)を示すグルコースイソメラーゼであり、本発明のグルコースイソメラーゼのさらに好ましい態様は、特性(A)および(D)、または(A)、(C)、および(D)、または(A)、(C)、および(E)、または(A)、(D)、および(E)、最も好ましくは(A)および(D)、または(A)、(C)、および(E)を示すグルコースイソメラーゼである。
本発明のグルコースイソメラーゼの一態様では、グルコースイソメラーゼのアミノ酸配列は、SEQ ID NO: 1のアミノ酸配列の少なくとも2つのアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含む。本明細書においては、これらの少なくとも2つのアミノ酸位置は、2つのアミノ酸位置の対とも呼ばれる。本発明のグルコースイソメラーゼの一態様では、2つのSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置の対は、アミノ酸位置R10およびA33、R10およびL34、R10およびD35、R10およびF53、R10およびI59、R10およびA89、R10およびT90、R10およびT95、A33およびL34、A33およびD35、A33およびF53、A33およびI59、A33およびA89、A33およびT90、A33およびT95、L34およびD35、L34およびF53、L34およびI59、L34およびA89、L34およびT90、L34およびT95、D35およびF53、D35およびI59、D35およびA89、D35およびT90、D35およびT95、F53およびI59、F53およびA89、F53およびT90、F53およびT95、I59およびA89、I59およびT90、I59およびT95、A89およびT90、A89およびT95、ならびにT90およびT95からなる群より選択される。本発明のグルコースイソメラーゼのさらなる態様は、2つのアミノ酸位置の対が、本明細書に具体的に開示される2つのアミノ酸位置の対のより限定的な群を含む、より限定的な群から選択される、グルコースイソメラーゼである。本発明の範囲内では、グルコースイソメラーゼは、SEQ ID NO: 1の2つのアミノ酸位置のこれらの対のうち1つにおけるアミノ酸置換を含む。
本明細書に開示されるように、さらなる態様では、グルコースイソメラーゼは、SEQ ID NO: 1の2つのアミノ酸位置の対におけるアミノ酸置換に加えて、SEQ ID NO: 1の少なくとも1つまたは複数のさらなるアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含む。SEQ ID NO: 1のこれらの1つまたは複数のさらなるアミノ酸位置は、個々に独立して、いずれもSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、34、35、53、59、89、90、および95からなる群より選択される。本発明のグルコースイソメラーゼのさらなる態様は、1つまたは複数のさらなるアミノ酸位置が、本明細書に具体的に開示されるさらなるアミノ酸位置のより限定的な群を含む、より限定的な群から選択される、グルコースイソメラーゼである。本発明の範囲内では、グルコースイソメラーゼは、SEQ ID NO: 1の2つのアミノ酸位置のこれらの対のうち1つおよび前記さらなるアミノ酸配列のうち1つにおけるアミノ酸置換を含む。本発明によれば、本発明のグルコースイソメラーゼは、それぞれ一態様では、SEQ ID NO: 1の少なくとも3つのアミノ酸位置、すなわち2つのアミノ酸位置の対および1つの該さらなるアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を有するグルコースイソメラーゼ、SEQ ID NO: 1の少なくとも4つのアミノ酸位置、すなわち2つのアミノ酸位置の対および2つの該さらなるアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を有するグルコースイソメラーゼ、SEQ ID NO: 1の少なくとも5つのアミノ酸位置、すなわち2つのアミノ酸位置の対および3つの該さらなるアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を有するグルコースイソメラーゼ、またはSEQ ID NO: 1の少なくとも6つのアミノ酸位置、すなわち2つのアミノ酸位置の対および4つの該さらなるアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を有するグルコースイソメラーゼである。グルコースイソメラーゼが少なくとも3つのアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含む、本発明のグルコースイソメラーゼの一態様では、グルコースイソメラーゼは、いずれもSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、35、59からなる群より選択される少なくとも1つのアミノ酸位置ならびにアミノ酸位置53、89、90、および95からなる群より選択される少なくとも1つのアミノ酸位置、好ましくは、アミノ酸位置10、33、35、および59からなる群より選択される1つのアミノ酸位置ならびにアミノ酸位置53、89、90、および95からなる群より選択される2つのアミノ酸位置、最も好ましくは、いずれもSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10である1つのアミノ酸位置ならびにアミノ酸位置89、90、および95からなる群より選択される2つのアミノ酸位置における、アミノ酸置換を含む。グルコースイソメラーゼが少なくとも4つのアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含む、本発明のグルコースイソメラーゼの一態様では、グルコースイソメラーゼは、いずれもSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、35、および59からなる群より選択される少なくとも1つのアミノ酸位置ならびにアミノ酸位置53、89、90、および95からなる群より選択される少なくとも1つのアミノ酸位置、好ましくは、アミノ酸位置10、33、35、および59からなる群より選択される1つまたは3つのアミノ酸位置ならびにアミノ酸位置53、89、90、および95からなる群より選択される1つまたは3つのアミノ酸位置、最も好ましくは、いずれもSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10である1つのアミノ酸位置ならびにアミノ酸位置53、89、90、および95からなる群より選択される3つのアミノ酸位置における、アミノ酸置換を含む。グルコースイソメラーゼが少なくとも5つのアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含む、本発明のグルコースイソメラーゼの一態様では、グルコースイソメラーゼは、いずれもSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、35、および59からなる群より選択される少なくとも2つのアミノ酸位置ならびにアミノ酸位置53、89、90、および95からなる群より選択される少なくとも1つのアミノ酸位置、好ましくは、アミノ酸位置10、33、35、および59からなる群より選択される2つまたは4つのアミノ酸位置ならびにアミノ酸位置53、89、90、および95からなる群より選択される1つまたは3つのアミノ酸位置、最も好ましくは、いずれもSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10および33である2つのアミノ酸位置ならびにアミノ酸位置53、90、および95からなる群より選択される3つのアミノ酸位置における、アミノ酸置換を含む。グルコースイソメラーゼが少なくとも4つのアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含む、本発明のグルコースイソメラーゼの一態様は、いずれもSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、89、90、および95におけるアミノ酸置換を含むグルコースイソメラーゼである。グルコースイソメラーゼが少なくとも5つのアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含む、本発明のグルコースイソメラーゼの一態様は、いずれもSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、53、90、および95におけるアミノ酸置換を含むグルコースイソメラーゼである。
本明細書に開示される具体的な置換に関しては、アミノ酸置換分野における慣例に従って、置換が、置換が行われる数字のアミノ酸位置に関係するものであり、残された数字の両側にアミノ酸残基の指示が隣接し、左側のアミノ酸残基が、非置換アミノ酸配列に存在するアミノ酸残基であり、右側のアミノ酸残基が、置換アミノ酸配列に存在するアミノ酸残基であるということに留意すべきである。したがって、単に一例として、置換R10Kは、アミノ酸位置10においてアルギニン残基がリジンで置き換えられていることを示した。
本発明の範囲内では、本明細書に開示されるSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置における任意の変異は、単独でまたは任意の組み合わせで、グルコースイソメラーゼとして、より具体的にはEC 5.3.1.5のグルコースイソメラーゼとしてなお活性であるタンパク質を生じさせる変異である。好ましくは、任意の該変異は、単独でまたは任意の組み合わせで、本明細書に開示される特性(A)、(B)、(C)、(D)、(E)、および(F)のうち少なくとも1つまたは該特性の任意の組み合わせを有する、EC番号EC 5.3.1.5のグルコースイソメラーゼを生じさせる。
本発明のグルコースイソメラーゼに関して、本明細書に具体的に開示されるそれぞれの置換および変異、好ましくは、本明細書に開示されるSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置におけるそれぞれの置換および変異以外に、さらなるおよび/または異なる置換を行うことができることが理解されよう。
アミノ酸残基のポリマーの同一性および相同性をそれぞれどのようにして決定するかは公知である。本発明において、また本発明の文脈全体を通じて、相同性および同一性は同義語として理解されるべきである。同一性パーセントは以下のように計算される: 配列同一性[%] = マッチ数/L x 100。式中、Lは配列比較位置、すなわち同一性および非同一性(もしあればギャップを含む)の数である。相同性、すなわち同一性は、同一性として、BLASTP(例えばStephen F. Altschul, Thomas L. Madden, Alejandro A. Schaffer, Jinghui Zhang, Zheng Zhang, Webb Miller, and David J. Lipman (1997) "Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs", Nucleic Acids Res. 25:3389-3402; またはStephen F. Altschul, John C. Wootton, E. Michael Gertz, Richa Agarwala, Aleksandr Morgulis, Alejandro A. Schaffer, and Yi-Kuo Yu (2005) "Protein database searches using compositionally adjusted substitution matrices." FEBS J. 272:5101-5109を参照)を使用して、好ましくは以下のアルゴリズムパラメータによって計算されることが好ましい: マトリックス: BLOSUM62; ギャップコスト: 存在: 11 拡張: 1、統計的有意性閾値: 10、およびワードサイズ: 6。結果を配列に関してクエリ範囲35%超でフィルタリングする。BlastPにはNCBIホームページ(https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi?PROGRAM=blastp&PAGE_TYPE=BlastSearch&LINK_LOC=blasthome)でオンラインアクセス可能である。他のプログラム設定は、例えば以下の設定を使用して所望のように調節可能である:
- フィールド「クエリ配列を入力」: クエリ部分範囲: なし
- フィールド「検索セットを選択」: データベース: 非冗長タンパク質配列(nr); 任意的パラメータ: なし
- フィールド「プログラム選択」: アルゴリズム: blastp(タンパク質-タンパク質BLAST)
- アルゴリズムパラメータ: フィールド「一般パラメータ」: 最大標的配列: 20000; ショートクエリ: 短い入力配列についてパラメータを自動的に調節; 統計的有意性閾値: 10; ワードサイズ: 6; クエリ範囲内の最大マッチ数: 0
- アルゴリズムパラメータ: フィールド「スコアリングパラメータ」: マトリックス: BLOSUM62; ギャップコスト: 存在: 11 拡張: 1; 組成調節: 条件的組成スコアマトリックス調節
- アルゴリズムパラメータ: フィールド「フィルターおよびマスキング」: フィルター: なし; マスク: なし。
一態様では、本発明のグルコースイソメラーゼは、アルドース糖とケトース糖との相互変換を触媒する、EC 5.3.1.5に分類される酵素である。この反応は可逆的であり、したがって、本発明のグルコースイソメラーゼはグルコースをフルクトースに変換し、フルクトースをグルコースに変換する。
様々な局面の一態様によれば、本発明のグルコースイソメラーゼはアルドース分子を反応させてケトース分子にし、ケトース分子を反応させてアルドース分子にする。
様々な局面のさらなる態様によれば、本発明のグルコースイソメラーゼは、D-グルコース、D-キシロース、D-アラビノース、L-アラビノース、L-リボース、D-リボース、D-リキソース、D-アロース、L-ラムノース、およびD-マンノースからなる群より選択されるアルドース分子を反応させる。さらなる態様では、本発明のグルコースイソメラーゼは、フルクトース、D-キシルロース、D-リブロース、L-リブロース、D-プシコース、およびL-ラムヌロースからなる群より選択されるケトース分子を反応させる。好ましい一態様では、本発明のグルコースイソメラーゼはフルクトースを反応させることでD-グルコースを形成する。
本明細書に開示されるように、本発明は、本発明の第2、第3、第4、第5、第6、第7、第8、第9、第10、第11、第12、および第13の局面に従属しかつ該局面に関してそれぞれ定義される特定の機能的特性を有するポリペプチドに関する。好ましくは、ポリペプチドは、グルコースイソメラーゼ活性、好ましくは活性値を有するポリペプチドである。より好ましくは、ポリペプチドはグルコースイソメラーゼである。
本発明によれば、本発明のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ、および本発明のグルコース変異体は、フルクトースをグルコースに変換する際の活性の増加、好ましくは活性値の増加を含む、様々な機能的特徴を示す。この活性は、好ましい一態様では本明細書に定義される活性値であり、活性の増加は、好ましい一態様では活性値の増加、すなわち本明細書に定義される活性値の増加である。
当業者は、本発明のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼ、および本発明のグルコース変異体の活性の増加が、本出願においては、SEQ ID NO: 1のグルコースポリメラーゼの各活性を基準として使用する相対値として表されることを認識するであろう。したがって、SEQ ID NO: 1のグルコースポリメラーゼの各活性を「1」に設定する場合、この相対値を「倍率」または相対活性として表すことができる。したがって、ここで単に一例として示すと、本発明のポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの活性の1.1倍の増加は、相対活性1.1:1に等しい。
本発明の範囲内では、本発明のグルコースイソメラーゼは全長酵素として存在する。また、本発明の範囲内では、本発明のグルコースイソメラーゼは断片として存在する。好ましくは、断片は、本発明のグルコースイソメラーゼに関して本明細書に定義されかつそれぞれ開示されるグルコースイソメラーゼ活性、好ましくはグルコースイソメラーゼ活性値を保持する。
さらなる局面では、本発明は、本発明のグルコースイソメラーゼをコードする核酸分子に関する。本明細書に開示されるアミノ酸配列に基づいて該核酸分子を誘導することは一般に公知である。好ましくは、核酸配列は、本発明のグルコースイソメラーゼの発現に使用される発現系に依存する。本発明のグルコースイソメラーゼの発現に使用される好ましい発現系としては大腸菌(E. coli)、バチルス属(Bacillus sp.)、ピキア・パストリス(P. pastoris)、およびストレプトマイセス属(Streptomyces sp.)がある。
なおさらなる局面では、本発明は、本発明のグルコースイソメラーゼをコードする核酸分子を含むベクターに関する。好ましくは、ベクターは発現ベクターである。酵素の発現に好適なベクターは最新技術に記載されている。
さらなる局面では、本発明は、本発明のベクターを含む宿主生物に関する。酵素発現用ベクターを含む宿主として好適な宿主が記載されており、好ましくは、宿主生物は大腸菌、バチルス属、ピキア・パストリス、またはストレプトマイセス属、好ましくは大腸菌およびピキア・パストリスである。該ベクターを宿主生物に組み込む方法も公知である。
別の局面では、本発明は、グルコースイソメラーゼの発現のための方法に関する。該方法は、本発明のグルコースイソメラーゼをコードする核酸分子を含む発現ベクターを含む、本明細書に開示される宿主生物を、該核酸分子の発現を可能にする条件下で培養する段階と、該グルコースイソメラーゼを収集する段階とを含む。
別の局面では、本発明は、グルコースを調製するためのポリペプチドの使用、好ましくはグルコースイソメラーゼの使用に関する。本局面の好ましい一態様では、ポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの使用は、本明細書に記載のいずれか1つの態様に定義の通りである。好ましくは、グルコースを調製するためのポリペプチド、好ましくはグルコースイソメラーゼの使用は、本発明の方法またはそれに関して定義されるいずれか1つの態様に従う。
本発明の範囲内では、その任意の態様を含む本発明のそれぞれの任意の局面のグルコースイソメラーゼは、以下の形態のうち1つで存在する: 溶液、乾燥粉末、凍結乾燥粉末、固定化形態。
（表１）配列番号の概要
Figure 0007325335000001
当業者は、変異および突然変異という用語が、実施例の部を含む本明細書において同義的に使用されることを認識するであろう。
本発明を実施例および配列表によってさらに説明する。さらなる特徴、態様、および利点はそこから得ることができる。
実施例1
一般的方法
野生型グルコースイソメラーゼのクローニング
ストレプトマイセス属SK株由来のグルコースイソメラーゼ遺伝子は、エーバースベルク(ドイツ)のEurofins MWG Operonにより、大腸菌中での発現に関してコドン最適化され、合成された。遺伝子を発現ベクターpLE1A17およびpLE1A27(いずれもマジソン(米国)のNovagenのpRSF-1b誘導体)にクローニングした。得られたプラスミドを大腸菌BL21(DE3)細胞の形質転換に使用した。
分子生物学的方法
グルコースイソメラーゼ酵素の変異体を、最新技術において公知の標準的な部位特異的変異誘発技術により作製した(参考文献としては例えばS. Lutz, U.T. Bornscheuer, Protein Engineering Handbook, Wiley VCH, Weinheim, 2009)。
組換え型グルコースイソメラーゼの発現
培地I(5g/L酵母エキス、10g/L NaCl、10g/LトリプトンpH 7、50μg/mLカナマイシン)に組換え型グルコースイソメラーゼを接種することで終夜培養物を調製した。培養物を37℃および200rpmで終夜インキュベートした。発現培養物を得るために、培地II(4.6g/L酵母エキス、9.3g/Lペプトン、25mM Na2HPO4*12H2O、25mM KH2PO4、50mM NH4Cl2、Na2SO4、5g/Lグリセリン、0.5g/Lグルコース*1H2O、2mM MgSO4、50μg/mLカナマイシン)に新鮮な終夜培養物を、600nmでの光学濃度0.1に到達するように接種した。次に培養物を、600nmでの光学濃度0.8～1.0まで37℃で増殖させた。続いて培養物をIPTG最終濃度0.1mMで誘導し、組換え型グルコースイソメラーゼの発現を終夜30℃で達成した。
グルコースイソメラーゼ酵素調製物の調製
細胞を遠心分離により収集した後、化学酵素的溶解を行うことで、無細胞抽出液の調製を行った。このために、細胞を、50mMリン酸カリウム緩衝液pH 7、1x CelLytic(商標)B細胞溶解試薬(Sigma)、2mM Mg2+(MgCl2またはMgSO4として)、0.5mg/mLリゾチーム、および20 U/mLヌクレアーゼを含む緩衝液に懸濁させ、30℃で45分間インキュベートした。可溶性酵素を含む無細胞抽出液を、4℃で30分間3,270xgでの遠心分離によりデブリから分離した。
グルコースイソメラーゼ活性値測定
アッセイIおよびアッセイIIに記載のように、グルコースイソメラーゼの活性値をフルクトースからグルコースへの異性化の方向で決定した。
アッセイI
グルコースイソメラーゼ活性値を、以下の条件を使用する40℃でのフルクトースからのグルコースの形成をモニタリングすることでアッセイした: 50mMリン酸カリウム緩衝液pH 7、10mM Mg2+(MgCl2またはMgSO4として)、0.2mL/mL反応グルコースイソメラーゼ酵素調製物(最大収率18%に到達するように50mMリン酸カリウム緩衝液pH 7に希釈)、および所与のフルクトース濃度50mMまたは200mM。グルコースイソメラーゼの作用によりフルクトースから生成されるグルコースを、グルコースがヘキソキナーゼによりグルコース-6-リン酸に変換される不連続カップリングアッセイを使用して確定した。グルコース-6-リン酸およびNADPをグルコース6-リン酸脱水素酵素により6-ホスホ-グルコン酸およびNADPHに変換する。検出は、NADPHの吸光度を340nmで測定することに基づく。D-グルコース-HKキット(HK/G6P-DHフォーマット)をマイクロプレートフォーマットで使用した(製品番号K-GLUHK-110AまたはK-GLUHK-220A、アイルランド・ウィクロウのMegazyme International Irelandから入手可能)。製造者の推奨規格に従ってアッセイを行い、試料中のグルコースの量を外部標準を使用して定量化する。
アッセイII
グルコースイソメラーゼ活性値を測定するための反応を、以下の条件でのフルクトースからのグルコースの形成をモニタリングすることで行った: 50mMリン酸カリウム緩衝液pH 7、10mM MgSO4、0.05mL/mL反応グルコースイソメラーゼ酵素調製物(最大収率18%に到達するように50mMリン酸カリウム緩衝液pH 7に希釈)、フルクトース濃度50～1000mM、および40℃。反応液1mL当たり0.25M HCl 0.1mLを加えることで反応を停止させた。グルコースイソメラーゼの作用によりフルクトースから生成されるグルコースを、グルコースがグルコースオキシダーゼによりグルコノラクトンに変換される不連続カップリングアッセイを使用して決定した。本反応の副生成物である過酸化水素を使用して西洋ワサビペルオキシダーゼが2,2'-アジノ-ビス(3-エチルベンゾチアゾリン-6-スルホン酸(ABTS)を酸化することで、405nmで光吸収を示す着色生成物が得られた。酸反応停止反応液の10μLアリコートと、50mMリン酸カリウム緩衝液pH 6、1mM ABTS、5 U/mLグルコースオキシダーゼ、および1 U/mL西洋ワサビペルオキシダーゼを含むアッセイ混合物90μLとを混合する。30℃で60～70分間のインキュベーション後、405nmでの吸光度を測定した(エンドポイント測定)。試料中のグルコースの量を外部標準を使用して定量化する。
実施例2
フルクトース200mMおよびフルクトース50mMでのグルコースイソメラーゼ活性値の決定
グルコースイソメラーゼ酵素調製物を実験1に記載のように調製し、グルコースイソメラーゼ活性値について分析した。
上記実施例1に記載のアッセイIに従って、フルクトース異性化におけるグルコースイソメラーゼ変異体の活性値をフルクトース50mMおよび200mMで決定した。グルコースイソメラーゼ活性値を体積活性値、すなわち、細菌培養物体積1単位当たりのグルコースイソメラーゼ活性値の単位として表した。
体積活性値の変化が、グルコースイソメラーゼ変異体の可溶性発現の改変により生じたか、または該変異体の活性値の変化により生じたかを評価するために、グルコースイソメラーゼ変異体の可溶性発現を分析した。グルコースイソメラーゼ変異体の無細胞抽出液、すなわち細胞抽出液の量を細胞培養物の光学濃度に基づいて正規化し、12%アクリルアミドゲル上に添加し、SDS-PAGE中で分離し、Coomassie Brilliant Blue G-250で染色した。実験条件をSDS-PAGEについて、タンパク質の適切な分離を確実にしかつ正確な定量化を可能にするように選択した。各変異体について、各グルコースイソメラーゼ変異体に対応するバンドの強度を定量化し、SEQ ID NO: 1の野生型グルコースイソメラーゼのバンドの強度と比較した。このようにして、グルコースイソメラーゼ変異体の相対可溶性発現レベルを決定した。グルコースイソメラーゼ体積活性値を相対発現レベルで割ることで、発現レベルに対して正規化された活性値(正規化活性値)を得た。
（表２）グルコースイソメラーゼ変異体の正規化活性値および可溶性発現レベル
Figure 0007325335000002
実施例3
熱安定性: 74℃で15分間のインキュベーション後のグルコースイソメラーゼ変異体の残留活性値
熱失活および活性値測定
実施例1に記載のように調製したグルコースイソメラーゼ調製物を2つのアリコートに分割した。一方の60μLアリコートを74℃で15分間インキュベートした。変性タンパク質を4℃で10分間3,270xgでの遠心分離により分離した。上清の活性値を、実施例1に記載のフルクトース50mMによるアッセイIを使用して決定した。各グルコースイソメラーゼ変異体の他方のアリコートを、熱失活なしでの活性値について、フルクトース50mMによるアッセイIを使用して直接アッセイした。得られた残留活性を表3に列挙する。
（表３）グルコースイソメラーゼ変異体の熱安定性
Figure 0007325335000003
実施例4
グルコースイソメラーゼ変異体の変性プロファイル
グルコースイソメラーゼ変異体の変性プロファイルを、異なる温度での熱失活、続いて活性値測定を行うことで決定した。実施例1に記載のように調製したグルコースイソメラーゼ調製物をいくつかのアリコートに分割した。各グルコースイソメラーゼ変異体の60μLアリコートを65～85℃の範囲の温度で15分間インキュベートした。変性タンパク質を4℃10分間3,270xgでの遠心分離により分離した。上清の活性値をフルクトース200mMによるアッセイIを使用して決定した。各グルコースイソメラーゼ変異体の別のアリコートを、熱失活なしでの活性について、フルクトース200mMによるアッセイIを使用して直接アッセイした。得られた残留活性値を熱失活温度に対してプロットした。以下のTm50値を変性プロファイルから推定した。
（表４）50mMリン酸カリウム緩衝液pH 7中でのグルコースイソメラーゼ変異体のTm50値
Figure 0007325335000004
実施例5
KM値
グルコースイソメラーゼ変異体の活性を、本明細書に定義されるアッセイIIを使用して、フルクトース50～1000mMの範囲の異なるフルクトース濃度にて以下の条件で決定した: 10mM MgSO4、50mMリン酸カリウム緩衝液pH 7.0、40℃。得られた活性をミカエリス・メンテン式にフィッティングし、そこから所与のグルコースイソメラーゼ変異体のフルクトースに関するミカエリス定数KMを導出した。表5からわかるように、両試験変異体が示したフルクトースに関するKMは、野生型グルコースイソメラーゼよりも低かった。
（表５）グルコースイソメラーゼ変異体のKM値
Figure 0007325335000005
本明細書、特許請求の範囲、配列表、および/または図面に開示される本発明の特徴は、別々におよびその任意の組み合わせで、本発明をその様々な形態で実現するための材料でありうる。
実施例6
グルコースイソメラーゼ変異体による50mMフルクトースからのグルコース形成量
組換え型グルコースイソメラーゼの発現
培地I(5g/L酵母エキス、10g/L NaCl、10g/LトリプトンpH 7、50μg/mLカナマイシン)に組換え型グルコースイソメラーゼを接種することで終夜培養物を調製した。培養物を37℃および200rpmで終夜インキュベートした。発現培養物を得るために、培地II(4.6g/L酵母エキス、9.3g/Lペプトン、25mM Na2HPO4*12H2O、25mM KH2PO4、50mM NH4Cl2、Na2SO4、5g/Lグリセリン、0.5g/Lグルコース*1H2O、2mM MgSO4、50μg/mLカナマイシン)に新鮮な終夜培養物を、600nmでの光学濃度0.1に到達するように接種した。次に培養物を600nmでの光学濃度0.8～1.0まで37℃で増殖させた。続いて培養物をIPTG最終濃度0.1mMで誘導し、組換え型グルコースイソメラーゼの発現を終夜30℃で達成した。
無細胞抽出液の調製
細胞を遠心分離により収集した後、化学酵素的溶解を行うことで、無細胞抽出液の調製を行った。このために、発現培養物1mLからの細胞を、50mMリン酸カリウム緩衝液pH 7、1x CelLytic(商標)B細胞溶解試薬(Sigma)、2mM Mg2+(MgCl2またはMgSO4として)、0.5mg/mLリゾチーム、および20 U/mLヌクレアーゼを含む緩衝液175μLに懸濁させ、30℃で45分間インキュベートした。可溶性酵素を含む無細胞抽出液を、4℃で30分間3,270xgでの遠心分離によりデブリから分離した。
グルコース形成反応
無細胞抽出液を活性に応じて50mMリン酸カリウム緩衝液pH 7に希釈した。62.5mMフルクトース、12.5mM MgSO4、および62.5mMリン酸カリウム緩衝液pH 7を含む反応緩衝液を40℃で30分間インキュベートした。40℃反応緩衝液80μLに希釈無細胞抽出液20μLを加えて反応を開始した。反応混合物を40℃でインキュベートした。40分後、試料20μLを採取し、0.25M HCl 20μLを加えて失活させた。試料を50mMリン酸カリウム緩衝液pH 7 60μLの添加により中和し、13,000rpmで10分間遠心分離した。上清中のグルコース含有量を、D-グルコース-HKキット(HK/G6P-DHフォーマット)(製品番号K-GLUHK-110AまたはK-GLUHK-220A、アイルランド・ウィクロウのMegazyme International Irelandから入手可能)を使用して測定した。製造者の推奨規格に従ってキットをマイクロプレートフォーマットで使用し、試料中のグルコースの量を外部標準を使用して定量化する。表6は、未希釈無細胞抽出液に対して正規化されたいくつかの変異体の40分当たりのグルコース形成量を示す。変異体SEQ ID NO: 15、18、22、および23は、SEQ ID NO: 1よりも約2倍多くグルコースを生成した(表6)。SEQ ID NO: 14は、3倍超のグルコース生成増加を最も高いグルコース形成と共に示した。
（表６）グルコースイソメラーゼ変異体のグルコース形成量
Figure 0007325335000006

Claims (62)

  1. アミノ酸配列を含む、ポリペプチドであって、
    該ポリペプチドのアミノ酸配列が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸配列と少なくとも95%同一であり、
    該ポリペプチドのアミノ酸配列が、1つまたは複数のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、
    該1つまたは複数のアミノ酸位置が、それぞれ独立してSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置89、90、95、10、33、34、35、および59からなる群より選択され、
    該1つまたは複数のアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のR10位におけるアミノ酸置換である場合、該置換がR10Kであり;
    該1つまたは複数のアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のA33位におけるアミノ酸置換である場合、該置換がA33IまたはA33Nであり;
    該1つまたは複数のアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のL34位におけるアミノ酸置換である場合、該置換がL34Fであり;
    該1つまたは複数のアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のD35位におけるアミノ酸置換である場合、該置換がD35CまたはD35Sであり;
    該1つまたは複数のアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のI59位におけるアミノ酸置換である場合、該置換がI59Fであり;
    該1つまたは複数のアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のA89位におけるアミノ酸置換である場合、該置換がA89Vであり;
    該1つまたは複数のアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のT90位におけるアミノ酸置換である場合、該置換がT90Sであり;
    該1つまたは複数のアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のT95位におけるアミノ酸置換である場合、該置換がT95YまたはT95Rであり、かつ
    該ポリペプチドが、
    (i) アルドース分子からケトース分子への変換、および/または
    (ii) ケトース分子からアルドース分子への変換
    を触媒可能である、
    前記ポリペプチド。
  2. 前記1つまたは複数のアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置89、90、95、10、および33からなる群より選択される、請求項1記載のポリペプチド。
  3. 前記1つまたは複数のアミノ酸位置が、2つ以上のアミノ酸位置、3つ以上のアミノ酸位置、4つ以上のアミノ酸位置、または5つ以上のアミノ酸位置である、請求項1～2のいずれか一項記載のポリペプチド。
  4. 前記1つまたは複数のアミノ酸位置が、2つ以上のアミノ酸位置であり、
    該2つ以上のアミノ酸位置のうち2つが、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10および33、10および35、10および59、10および89、10および90、10および95、33および35、33および59、33および90、33および95、35および59、35および90、35および95、59および90、89および90、89および95、ならびに90および95からなる群より選択される、
    請求項1～3のいずれか一項記載のポリペプチド。
  5. 前記2つ以上のアミノ酸位置のうち2つが、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10および33、10および89、10および90、10および95、33および90、33および95、89および90、89および95、ならびに90および95からなる群より選択される、請求項4記載のポリペプチド。
  6. 前記2つ以上のアミノ酸位置のうち2つが、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置90および95である、請求項5記載のポリペプチド。
  7. 前記2つ以上のアミノ酸位置のうち2つが、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10および89である、請求項5記載のポリペプチド。
  8. 前記2つ以上のアミノ酸位置のうち2つが、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置89および90である、請求項5記載のポリペプチド。
  9. 前記2つ以上のアミノ酸位置のうち2つが、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置89および95である、請求項5記載のポリペプチド。
  10. 前記1つまたは複数のアミノ酸位置が、3つ以上のアミノ酸位置であり、
    該3つ以上のアミノ酸位置のうち3つが、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10および33および35、10および33および59、10および33および90、10および33および95、10および35および59、10および35および90、10および35および95、10および59および90、10および89および90、10および89および95、10および90および95、33および35および59、33および35および90、33および59および90、33および90および95、35および59および90、ならびに89および90および95からなる群より選択される、
    請求項1～9のいずれか一項記載のポリペプチド。
  11. 前記1つまたは複数のアミノ酸位置が、3つ以上のアミノ酸位置であり、
    該3つ以上のアミノ酸位置のうち3つが、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置90、95、および10である、
    請求項1～10のいずれか一項記載のポリペプチド。
  12. 前記1つまたは複数のアミノ酸位置が、4つまたは5つのアミノ酸位置である、請求項1～11のいずれか一項記載のポリペプチド。
  13. 前記ポリペプチドのアミノ酸配列が、前記1つまたは複数のアミノ酸位置のうち1つにおける置換に加えて、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置53におけるさらなるアミノ酸置換を含む、請求項1～12のいずれか一項記載のポリペプチド。
  14. 前記ポリペプチドのアミノ酸配列が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置53におけるさらなるアミノ酸置換を含む、請求項1記載のポリペプチド。
  15. 前記1つまたは複数のアミノ酸位置が、2つ以上のアミノ酸位置であり、
    該2つ以上のアミノ酸位置のうち2つが、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10および53、33および53、35および53、53および89、53および90、ならびに53および95からなる群より選択される、
    請求項14記載のポリペプチド。
  16. 前記2つ以上のアミノ酸位置のうち2つが、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置53および90である、請求項15記載のポリペプチド。
  17. 前記2つ以上のアミノ酸位置のうち2つが、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置53および95である、請求項15記載のポリペプチド。
  18. 前記1つまたは複数のアミノ酸位置が、1つまたは複数のアミノ酸位置であり、
    該1つのアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置89、90、95、10、および33からなる群より選択され、
    前記ポリペプチドが、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置53におけるアミノ酸置換をさらに含む、
    請求項2記載のポリペプチド。
  19. 前記2つ以上のアミノ酸位置のうち2つが、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10および33、10および89、10および90、10および95、33および90、33および95、89および90、89および95、ならびに90および95からなる群より選択され、
    前記ポリペプチドが、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置53におけるアミノ酸置換をさらに含む、
    請求項5記載のポリペプチド。
  20. 前記1つまたは複数のアミノ酸位置が、4つ以上のアミノ酸位置であり、
    該4つ以上のアミノ酸位置のうち3つが、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置90、95、および10であり、
    第4のアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置89、33、34、35、59、および53からなる群より選択される、
    請求項12記載のポリペプチド。
  21. 第4のアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置89である、請求項20記載のポリペプチド。
  22. 第4のアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置53である、請求項20記載のポリペプチド。
  23. 前記ポリペプチドのアミノ酸配列が
    - SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、53、および90; または
    - SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、53、および95; または
    - SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、89、90、および95; または
    - SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、59、および90; または
    - SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、53、90、および95; または
    - SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、53、90、および95; または
    - SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、33、35、59、および90; または
    - SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置10、35、53、90、および95
    における置換を含む、請求項1～22のいずれか一項記載のポリペプチド。
  24. 前記SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置53におけるアミノ酸置換がF53A、F53I、F53L、またはF53Vである、請求項13～23のいずれか一項記載のポリペプチド。
  25. 前記SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置53におけるアミノ酸置換がF53Lである、請求項24記載のポリペプチド。
  26. 前記ポリペプチドのアミノ酸配列が、1つまたは複数のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、
    該1つまたは複数のアミノ酸位置が、それぞれ独立してSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A89V、T90S、T95Y、T95R、R10K、A33N、A33I、L34F、D35C、D35S、およびI59Fからなる群より選択される、
    請求項1～25のいずれか一項記載のポリペプチド。
  27. 前記ポリペプチドのアミノ酸配列が、1つまたは複数のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、
    該1つまたは複数のアミノ酸位置が、それぞれ独立してSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A89V、T90S、T95Y、R10K、A33N、およびA33Iからなる群より選択される、
    請求項26記載のポリペプチド。
  28. 前記ポリペプチドのアミノ酸配列が、前記1つまたは複数のアミノ酸位置における置換に加えて、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置F53Lにおけるさらなるアミノ酸置換を含む、請求項26～27のいずれか一項記載のポリペプチド。
  29. 前記ポリペプチドのアミノ酸配列が、1つまたは複数のアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、
    該1つまたは複数のアミノ酸位置が、それぞれ独立してSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A89V、T90S、T95Y、R10K、A33N、およびA33Iからなる群より選択され、
    SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置F53Lにおけるもう1つのアミノ酸置換をさらに含む、
    請求項28記載のポリペプチド。
  30. 前記ポリペプチドのアミノ酸配列が、1つのアミノ酸位置におけるアミノ酸置換を含み、
    該1つのアミノ酸位置が、独立してSEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A89V、T90S、T95Y、R10K、A33N、およびA33Iからなる群より選択され、
    SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置F53Lにおけるもう1つのアミノ酸置換をさらに含む、
    請求項28記載のポリペプチド。
  31. 前記1つまたは複数のアミノ酸位置が、2つ以上のアミノ酸位置であり、
    該2つ以上のアミノ酸位置のうち2つが、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10KおよびF53L、A33IおよびF53L、A33NおよびF53L、D35CおよびF53L、D35SおよびF53L、F53LおよびA89V、F53LおよびT90S、F53LおよびT95R、ならびにF53LおよびT95Yからなる群より選択される、
    請求項28記載のポリペプチド。
  32. 前記1つまたは複数のアミノ酸位置が、2つ以上のアミノ酸位置であり、
    該2つ以上のアミノ酸位置のうち2つが、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10KおよびA33N、R10KおよびA33I、R10KおよびA89V、R10KおよびT90S、R10KおよびT95Y、R10KおよびT95R、A33IおよびT90S、A33NおよびT90S、A33IおよびT95Y、A33NおよびT95Y、A33IおよびT95R、A33NおよびT95R、A89VおよびT90S、A89VおよびT95Y、A89VおよびT95R、T90SおよびT95R、ならびにT90SおよびT95Yからなる群より選択される、
    請求項26～27のいずれか一項記載のポリペプチド。
  33. 前記2つ以上のアミノ酸位置のうち2つが、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置T90SおよびT95R、ならびにT90SおよびT95Yからなる群より選択される、請求項32記載のポリペプチド。
  34. 前記ポリペプチドのアミノ酸配列が、前記2つ以上のアミノ酸位置のうち2つのアミノ酸位置に加えて、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置F53Lにおけるさらなるアミノ酸置換を含む、請求項33記載のポリペプチド。
  35. 前記2つ以上のアミノ酸位置のうち2つが、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10KおよびA89Vである、請求項32記載のポリペプチド。
  36. 前記ポリペプチドのアミノ酸配列が、前記2つ以上のアミノ酸位置のうち2つのアミノ酸位置に加えて、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置F53Lにおけるさらなるアミノ酸置換を含む、請求項35記載のポリペプチド。
  37. 前記2つ以上のアミノ酸位置のうち2つが、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A89VおよびT90Sである、請求項32記載のポリペプチド。
  38. 前記ポリペプチドのアミノ酸配列が、前記2つ以上のアミノ酸位置のうち2つのアミノ酸位置に加えて、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置F53Lにおけるさらなるアミノ酸置換を含む、請求項37記載のポリペプチド。
  39. 前記2つ以上のアミノ酸位置のうち2つが、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A89VおよびT95Y、ならびにA89VおよびT95Rからなる群より選択される、請求項32記載のポリペプチド。
  40. 前記ポリペプチドのアミノ酸配列が、前記2つ以上のアミノ酸位置のうち2つのアミノ酸位置に加えて、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置F53Lにおけるさらなるアミノ酸置換を含む、請求項39記載のポリペプチド。
  41. 前記1つまたは複数のアミノ酸位置が、4つ以上のアミノ酸位置であり、
    該4つ以上のアミノ酸位置のうち3つが、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置T90S、T95Y、T95R、およびR10Kからなる群より選択され、
    第4のアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A89V、A33N、A33I、L34F、D35C、D35S、I59F、およびF53Lからなる群より選択される、
    請求項28～31のいずれか一項記載のポリペプチド。
  42. 前記1つまたは複数のアミノ酸位置が、4つ以上のアミノ酸位置であり、
    該4つ以上のアミノ酸位置のうち3つが、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置T90S、T95Y、T95R、およびR10Kからなる群より選択され、
    第4のアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置A89Vである、
    請求項41記載のポリペプチド。
  43. 前記1つまたは複数のアミノ酸位置が、4つ以上のアミノ酸位置であり、
    該4つ以上のアミノ酸位置のうち3つが、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置T90S、T95Y、T95R、およびR10Kからなる群より選択され、
    第4のアミノ酸位置が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置F53Lである、
    請求項41記載のポリペプチド。
  44. 前記ポリペプチドのアミノ酸配列が
    - SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10K、T90S、およびT95Y; または
    - SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10K、F53L、およびT90S; または
    - SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10K、F53L、およびT95Y; または
    - SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10K、A89V、T90S、およびT95Y; または
    - SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10K、A33I、I59F、およびT90S; または
    - SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10K、A33N、I59F、およびT90S; または
    - SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10K、F53L、T90S、およびT95Y; または
    - SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10K、A33I、F53L、T90S、およびT95Y; または
    - SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10K、A33N、F53L、T90S、およびT95Y; または
    - SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10K、A33I、D35C、I59F、およびT90S; または
    - SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10K、A33N、D35C、I59F、およびT90S; または
    - SEQ ID NO: 1のアミノ酸位置R10K、D35C、F53L、T90S、およびT95Y
    における置換を含む、請求項26～43のいずれか一項記載のポリペプチド。
  45. 前記ポリペプチドのアミノ酸配列が、SEQ ID NO: 1のアミノ酸配列と少なくとも96%同一である、請求項1～44のいずれか一項記載のポリペプチド。
  46. 前記ポリペプチドのアミノ酸配列が、SEQ ID NO: 2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、または23のアミノ酸配列と少なくとも95%同一である、請求項1～45のいずれか一項記載のポリペプチド。
  47. 前記ポリペプチドのアミノ酸配列が、SEQ ID NO: 2、4、7、8、9、10、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、または23のアミノ酸配列と少なくとも95%同一である、請求項1～46のいずれか一項記載のポリペプチド。
  48. 前記ポリペプチドのアミノ酸配列が、SEQ ID NO: 13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、または23のアミノ酸配列と少なくとも95%同一である、請求項1～47のいずれか一項記載のポリペプチド。
  49. 前記ポリペプチドのアミノ酸配列が、SEQ ID NO: 17、18、20、または21のアミノ酸配列と少なくとも95%同一である、請求項1～48のいずれか一項記載のポリペプチド。
  50. 前記ポリペプチドのアミノ酸配列が、SEQ ID NO: 15、17、または18のアミノ酸配列と少なくとも95%同一である、請求項1～49のいずれか一項記載のポリペプチド。
  51. 前記ポリペプチドのアミノ酸配列が、SEQ ID NO: 17のアミノ酸配列と少なくとも95%同一である、請求項1～50のいずれか一項記載のポリペプチド。
  52. (i)グルコースからフルクトースへの変換、および/または
    (ii)フルクトースからグルコースへの変換
    を触媒可能な、請求項1～51のいずれか一項記載のポリペプチド。
  53. 前記ポリペプチドが、(A)、(C)、(E)、(D)、(B)、および(F)からなる群より選択される少なくとも1つの特性を有し、
    特性(A)が、フルクトース濃度50mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関して、前記ポリペプチドの活性が、SEQ ID NO: 1のポリペプチドに対して、少なくとも1.1倍～最大3.0倍増加していることであり;
    特性(B)が、フルクトース濃度200mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関して、前記ポリペプチドの活性が、SEQ ID NO: 1のポリペプチドに対して、少なくとも1.2倍～最大3.0倍増加していることであり;
    特性(C)が、温度74℃で15分間の前記ポリペプチドのインキュベーション後の残留活性値として表される、前記ポリペプチドの熱安定性が、少なくとも30%～最大100%であることであり;
    特性(D)が、前記ポリペプチドのKM値が190mM未満であることであり;
    特性(E)が、前記ポリペプチドの可溶性発現レベルと、SEQ ID NO: 1のポリペプチドの可溶性発現レベルとの比として定義される、前記ポリペプチドの可溶性発現レベルが、少なくとも1.04～最大1.80であることであり;
    特性(F)が、グルコース形成量が、少なくとも1.2倍～最大5倍、または少なくとも1.5倍～最大5倍、または少なくとも1.9倍～最大5倍、または少なくとも1.9倍～最大3.5倍、または少なくとも2.2倍～最大3.3倍増加していることである、
    請求項1～52のいずれか一項記載のポリペプチド。
  54. 前記ポリペプチドが、(A)、(C)、(E)、(D)、(B)、および(F)からなる群より選択される少なくとも1つの特性を有し、
    - 特性(A)について、フルクトース濃度50mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関して、前記ポリペプチドの活性が、SEQ ID NO: 1のポリペプチドに対して増加していることが、フルクトース50mMでのグルコースイソメラーゼ活性に関する酵素アッセイによって検出され; かつ/または
    - 特性(B)について、フルクトース濃度200mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関して、前記ポリペプチドの活性が、SEQ ID NO: 1のポリペプチドに対して増加していることが、フルクトース200mMでのグルコースイソメラーゼ活性に関する酵素アッセイによって検出され; かつ/または
    - 特性(C)について、SEQ ID NO: 1のポリペプチドに対する、前記ポリペプチドのインキュベーション後の残留活性値が、フルクトース50mMでのグルコースイソメラーゼ活性に関する酵素アッセイによって、温度74℃で15分間測定され; かつ/または
    - 特性(E)について、SEQ ID NO: 1のポリペプチドに対する、前記ポリペプチドのグルコースイソメラーゼ可溶性発現レベルが、いずれかのポリペプチドの無細胞抽出液の変性ポリアクリルアミドゲル電気泳動(SDS-PAGE)によって決定され、未処理細菌培養物体積1単位当たりのバンド強度として定量化され; かつ/または
    - 特性(F)について、前記ポリペプチドのグルコース形成量が、SEQ ID NO: 1のポリペプチドに対して増加していることが、該ポリペプチドと濃度50mMのフルクトースとを40℃で40分間反応させた後に生成されるグルコースの量の増加として検出される、
    請求項53記載のポリペプチド。
  55. 前記ポリペプチドが、(A)、(C)、(E)、(D)、(B)、および(F)からなる群より選択される少なくとも1つの特性を有し、
    - 特性(A)について、フルクトース濃度50mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する、前記ポリペプチドの活性の、SEQ ID NO: 1のポリペプチドに対する増加が、1.4倍～最大3.0倍であり; かつ/または
    - 特性(B)について、フルクトース濃度200mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する、前記ポリペプチドの活性の、SEQ ID NO: 1のポリペプチドに対する増加が、1.3倍～最大3.0倍であり; かつ/または
    - 特性(C)について、前記ポリペプチドのKM値が、140mM～160mMであり; かつ/または
    - 特性(F)について、前記ポリペプチドのグルコース形成量の、SEQ ID NO: 1のポリペプチドに対する増加が、2.2倍～最大3.3倍である、
    請求項53～54のいずれか一項記載のポリペプチド。
  56. 前記ポリペプチドが、特性(A)および(D)を有し、
    (A)において、フルクトース濃度50mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する、前記ポリペプチドの活性の、SEQ ID NO: 1のポリペプチドに対する増加が、1.2倍～最大3.0倍であり、
    (D)において、前記ポリペプチドのKM値が、190mM未満である、
    請求項53～55のいずれか一項記載のポリペプチド。
  57. 前記ポリペプチドが、特性(A)、(C)、および(E)を有し、
    (A)において、フルクトース濃度50mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関する、前記ポリペプチドの活性の、SEQ ID NO: 1のポリペプチドに対する増加が、1.2倍～最大3.0倍であり、
    (C)において、温度74℃で15分間の前記ポリペプチドのインキュベーション後の残留活性値として表される、前記ポリペプチドの熱安定性が、少なくとも30%～最大64%であり、
    (E)において、前記ポリペプチドの可溶性発現レベルと、SEQ ID NO: 1のポリペプチドの可溶性発現レベルとの比として定義される、前記ポリペプチドの可溶性発現レベル増加が、少なくとも1.04～最大1.80である、
    請求項53～56のいずれか一項記載のポリペプチド。
  58. (i)グルコースからフルクトースへの変換、および/または
    (ii)フルクトースからグルコースへの変換
    を触媒可能な、請求項53～57のいずれか一項記載のポリペプチド。
  59. EC番号EC 5.3.1.5のポリペプチドである、請求項1～58のいずれか一項記載のポリペプチド。
  60. 請求項1～59のいずれか一項記載のポリペプチドの存在下でフルクトースを反応させる段階を含む、グルコースを調製するための方法であって、
    (i) フルクトース濃度50mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関して、グルコースイソメラーゼの活性が、SEQ ID NO: 1のポリペプチドに対して、少なくとも1.1倍～最大3.0倍増加しており; かつ/または
    (ii) 温度74℃で15分間のグルコースイソメラーゼのインキュベーション後の残留活性値として表される、グルコースイソメラーゼの熱安定性が、少なくとも30%であり; かつ/または
    (iii) グルコースイソメラーゼの可溶性発現レベルと、SEQ ID NO: 1のポリペプチドの発現レベルとの比として定義される、グルコースイソメラーゼの可溶性発現レベル増加が、少なくとも1.1であり; かつ/または
    (iv) グルコースイソメラーゼのKM値が、190mM未満であり; または
    (v) フルクトース濃度50mMでのフルクトースからグルコースへの変換に関して、グルコースイソメラーゼの活性が、SEQ ID NO: 1のポリペプチドに対して、少なくとも1.1倍～最大3.0倍増加しており、温度74℃で15分間のグルコースイソメラーゼのインキュベーション後の残留活性値として表されるグルコースイソメラーゼの熱安定性が、少なくとも30%であり、かつグルコースイソメラーゼの可溶性発現レベルと、SEQ ID NO: 1のポリペプチドの発現レベルとの比として定義される、グルコースイソメラーゼの可溶性発現レベル増加が、少なくとも1.1であり; または
    (vi) グルコース形成量として表される、フルクトースをグルコースに変換する際のグルコースイソメラーゼの触媒活性が、SEQ ID NO: 1のポリペプチドに対して、少なくとも1.2倍～最大5倍増加している、
    方法。
  61. グルコースを調製するための、請求項1～59のいずれか一項記載のポリペプチドの使用。
  62. 請求項60記載の方法に従ってグルコースを調製するための、請求項1～59のいずれか一項記載のポリペプチドの使用。
JP2019560169A 2017-05-05 2018-05-04 グルコースイソメラーゼ Active JP7325335B2 (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP17000785 2017-05-05
EP17000785.0 2017-05-05
PCT/EP2018/061573 WO2018202880A1 (en) 2017-05-05 2018-05-04 Glucose isomerase

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2020518254A JP2020518254A (ja) 2020-06-25
JP7325335B2 true JP7325335B2 (ja) 2023-08-14

Family

ID=58698917

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2019560169A Active JP7325335B2 (ja) 2017-05-05 2018-05-04 グルコースイソメラーゼ

Country Status (8)

Country Link
US (2) US11066659B2 (ja)
EP (1) EP3619306A1 (ja)
JP (1) JP7325335B2 (ja)
KR (1) KR20200015500A (ja)
CN (1) CN111032865B (ja)
AU (1) AU2018262815B2 (ja)
CA (1) CA3060433A1 (ja)
WO (1) WO2018202880A1 (ja)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2000333684A (ja) 1999-05-26 2000-12-05 Novo Nordisk As グルコースイソメラーゼ活性を有するポリペプチド及びそれをコードする核酸

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5376536A (en) 1988-07-15 1994-12-27 Gist-Brocades, N.V. Glucose isomerase enzymes and their use
EP0436502B1 (en) 1990-01-04 2005-11-16 Genencor International, Inc. Novel glucose isomerases with an altered pH optimum
FI102543B1 (fi) 1990-01-04 1998-12-31 Genencor Int Mutantti glukoosi-isomeraasit
CN100510067C (zh) * 1999-07-09 2009-07-08 诺维信公司 葡糖淀粉酶变体
CN1966679B (zh) 2005-11-18 2011-08-17 百瑞全球有限公司 葡萄糖异构酶突变体、其应用以及编码该突变体的dna
US8623623B2 (en) 2010-06-29 2014-01-07 E I Du Pont De Nemours And Company Xylose utilization in recombinant Zymomonas

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2000333684A (ja) 1999-05-26 2000-12-05 Novo Nordisk As グルコースイソメラーゼ活性を有するポリペプチド及びそれをコードする核酸

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Borgi M. A. et al.，Glucose isomerase of the Streptomyces sp. SK strain: purification, sequence analysis and implication of alanine 103 residue in the enzyme thermostability and acidotolerance，Biochimie，86(8)，2004年08月，pp. 561-568
Borgi M. A. et al.，Involvement of cysteine 306 and alanine 63 in the thermostability and oligomeric organization of glucose isomerase from Streptomyces sp. SK，Biologia，64(5)，2009年，pp. 845-851
Hajer B. H. et al.，Probing the role of helix α1 in the acid-tolerance and thermal stability of the Streptomyces sp. SK Glucose Isomerase by site-directed mutagenesis，J Biotechnol，173，2014年01月15日，pp. 1-6
Hlima H. B. et al.，Engineered glucose isomerase from Streptomyces sp. SK is resistant to Ca2+ inhibition and Co2+ independent，J Ind Microbiol Biotechnol，39(4)，2012年04月，pp.537-46

Also Published As

Publication number Publication date
US11674129B2 (en) 2023-06-13
US20200224187A1 (en) 2020-07-16
AU2018262815A1 (en) 2019-11-07
CN111032865B (zh) 2024-03-26
WO2018202880A1 (en) 2018-11-08
US20210317432A1 (en) 2021-10-14
AU2018262815B2 (en) 2024-06-13
CA3060433A1 (en) 2018-11-08
US11066659B2 (en) 2021-07-20
KR20200015500A (ko) 2020-02-12
JP2020518254A (ja) 2020-06-25
EP3619306A1 (en) 2020-03-11
CN111032865A (zh) 2020-04-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR100872694B1 (ko) 코리네박테리움 속 균주로부터 발현된 아라비노스이성화효소 및 그를 이용한 타가토스의 제조방법
US11021691B2 (en) Sucrose phosphorylase
US5310665A (en) Glucose isomerases having altered substrate specificity
KR101455624B1 (ko) 기능성 희귀당 사이코스의 생산능을 지닌 신규 클로스트리디움 볼티에 유래의 사이코스-3-에피머화 효소 및 이를 이용한 사이코스 생산방법
JP2024036628A (ja) トレハロースホスホリラーゼ
JP7325335B2 (ja) グルコースイソメラーゼ
KR102448351B1 (ko) 알룰로스 에피머화 효소 변이체, 이의 제조방법 및 이를 이용한 알룰로스의 제조방법
JP2023123685A (ja) トレハロースホスホリラーゼバリアントを使用するトレハロースの生産方法
Moracci et al. β-Glycosidase from Sulfolobus solfataricus
Chen et al. Cloning, expression and characterization of a glucose dehydrogenase from Bacillus sp. G3 in Escherichia coli
KR20190020597A (ko) 아밀로수크라제의 발현 시스템 및 이를 이용한 투라노스의 생산
KR20210153117A (ko) 모노옥시게나아제 돌연변이체 및 이의 응용
KR102276305B1 (ko) 신규 리비톨 탈수소효소 및 이를 이용한 d-리불로스 제조방법
KR101836889B1 (ko) 신규 폴리포스페이트-의존형 포도당인산화효소 및 이를 이용한 포도당-6-인산 제조방법
Tavakoli et al. Biochemical characterization of recombinant benzyl alcohol dehydrogenase from Rhodococcus ruber UKMP-5M
EP4028517A1 (en) Thermostable glucose isomerase variants
KR20200134180A (ko) 알파- 및 베타-1,4-글리코시드 결합을 모두 절단하는 효소의 용도
CN117757765A (zh) 一种2-木糖醇脱氢酶突变体及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20191204

RD04 Notification of resignation of power of attorney

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424

Effective date: 20210127

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20210304

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20220418

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20220712

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20220916

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20230105

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20230329

TRDD Decision of grant or rejection written
A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

Effective date: 20230705

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20230801

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Ref document number: 7325335

Country of ref document: JP

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150