CN111032865B - 葡萄糖异构酶 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及包含氨基酸序列的多肽,优选涉及包含氨基酸序列的葡萄糖异构酶,其中该多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列与SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有至少95%的同一性,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或多个氨基酸位置处包含氨基酸取代,其中该一个或多个氨基酸位置各自并且独立地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1的氨基酸位置89、90、95、0、33、34、35和59。本发明还涉及制备葡萄糖的方法,包括使用本发明的用于制备葡萄糖的多肽。
Description
技术领域
本发明涉及一种异构酶,优选葡萄糖异构酶,一种使酮糖或醛糖分子反应的方法,一种将果糖转化为葡萄糖的方法,该异构酶在生产葡萄糖中的用途,一种用于增强葡萄糖异构酶的活性的方法,一种降低针对果糖的葡萄糖异构酶的KM值的方法以及一种用于增强葡萄糖异构酶的可溶性表达(soluble expression)的方法。
背景技术
异构酶是将分子从一种异构体转化为另一种异构体的酶。葡萄糖异构酶特异性地催化醛糖异构化为酮糖,或反之亦然。这种葡萄糖异构酶也称为D-木糖醛糖-酮糖异构酶、D-木糖异构酶、D-木糖酮异构酶或果糖异构酶。
将葡萄糖转化为果糖以及将D-木糖转化为D-木酮糖的葡萄糖异构酶属于由国际生物化学与分子生物学联盟定义的EC 5.3.1.5的EC子类。
由葡萄糖异构酶催化的天然的标准反应是底物木糖以高亲和性和高特异活性异构化为木酮糖。描述了作为副活性且通常以低得多的亲和性和低特异活性进行的葡萄糖到果糖、核糖到核酮糖、阿拉伯糖到核酮糖、或鼠李糖到目前为止还未被表征的产物的转化。
葡萄糖异构酶催化的反应是可逆的平衡反应,且根据反应具体方向的不同而可能会发生底物或产物抑制作用。为了获得有工业价值的量的所需产物,需要葡萄糖异构酶以高特异活性催化底物的转化。另外,葡萄糖异构酶的其他动力学因素,例如底物选择性和KM可能对产物收率起重要作用。其他相关方面可包括但不限于区域选择性、受其他因素的抑制作用,这些因素诸如,如粗提取物成分、底物污染物或副产物以及在合适宿主中的重组可溶性表达。
当用于工业过程中时,野生型葡萄糖异构酶的主要缺点是其特异性反应平衡状态,这导致底物转化不完全和产物收率不足。从多种微生物中发现了葡萄糖异构酶(例如,参见Bhosale的综述文章,Microbiol Reviews,1996,60,280-300)。例如,US 6,372,476描述了链霉菌(Streptomyces sp.SK)的葡萄糖异构酶活性。
对于木糖之外的底物,诸如,如葡萄糖或果糖,野生型葡萄糖异构酶通常表现出高的KM值,没有表现出转化这类底物的特别高的活性以及表现出高温最适宜,而某些工业过程需要低温曲线和葡萄糖或果糖底物的有效转化。参见例如Smith等人,Biochem J,1991,277,255-261。
因此,需要一种葡萄糖异构酶,其反应特性满足技术过程的要求,例如在中等温度和低的底物(即葡萄糖或果糖)浓度下的高特异活性。另外,来自表达培养物的葡萄糖异构酶的较高活性收率对于工业应用是有利的。除此,就这些特性中的一个或多个而言的改进导致较低的酶成本。
改造的葡萄糖异构酶公开于US 5,376,536、US 7,704,719、US 5,340,738、US 5,384,257、US 5,310,665和US 2011/0318801。Ben Hlima(J Ind Microbiol Biotechnol,2012,39,537-546)公开了链霉菌(Streptomyces sp.SK)葡萄糖异构酶的变体,其具有突变F53L和/或G219D。根据该出版物,针对葡萄糖,野生型葡萄糖异构酶具有200mM的KM值,该值对于工业应用而言太高了。针对葡萄糖,包含F53L、G219D或两者的变体显示出甚至更高的KM值。没有描述在位置33、34、35、59、89、90和/或95处具有突变的变体。除了包含突变F53L和/或D219A的变体外,本领域中描述的所有变体均显示出对作为底物的葡萄糖的较低的特异活性和较低的热稳定性。这些参考文献都没有提及针对催化转化成葡萄糖的果糖,影响KM值的突变;特别是没有参考文献指出造成酶的较低KM值的突变。
鉴于以上情况,显然,现有技术中的野生型葡萄糖异构酶和改造的葡萄糖异构酶均不能满足其在工业过程中使用的需求。这种不足是由于催化反应是可逆的,并且现有技术的葡萄糖异构酶在低底物浓度和典型的反应条件例如中等温度如30-50℃下显示出低的酶活性。需要用于由果糖工业化生产葡萄糖的葡萄糖异构酶,其与野生型葡萄糖异构酶相比是有优势的,特别是需要在低果糖浓度下具有酶促活性且在相对适中的温度例如30-50℃下显示出高活性的葡萄糖异构酶。
因此,本发明的目的是一种适用在由果糖工业化生产葡萄糖中的葡萄糖异构酶。
另一个目的是与野生型葡萄糖异构酶相比,具有至少高1.1倍、优选高至少1.4倍、更优选高至少1.6倍、最优选高至少1.7倍的在50mM果糖浓度下将果糖转化为葡萄糖的更高的特异活性,优选特异活性(specific Activity)的葡萄糖异构酶。
另一个目的是与野生型葡萄糖异构酶相比,其具有至少高1.2倍、优选高至少1.3倍、更优选高至少1.4倍、最优选高至少1.5倍的在200mM果糖浓度下将果糖转化为葡萄糖的更高的特异活性,优选特异活性Activity的葡萄糖异构酶。
另一个目的是热稳定的突变葡萄糖异构酶,其中该突变葡萄糖异构酶显示出与基础的野生型葡萄糖异构酶相比的改善的将果糖转化成葡萄糖的活性,优选活性Activity,与基础的野生型葡萄糖异构酶相比没有降低的或者略有降低的热稳定性以及至少30%、优选至少40%且最优选至少60%的残留活性。
另一个目的是其KM值为190mM或更小,优选其KM值为170mM或更小,更优选其KM值为160mM或更小,且最优选其KM值为152mM和更小的葡萄糖异构酶。
这些和其他问题通过如下和权利要求中描述的本发明解决。
发明内容
在第一方面(也是第一方面的第一实施方式)中,通过包含氨基酸序列的多肽,优选葡萄糖异构酶,解决了本发明的基本问题,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列与SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有至少95%的同一性和/或至少95%的同源性,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或多个氨基酸位置处包含氨基酸取代,其中一个或多个氨基酸位置各自并且独立地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置10、33、34、35、53、59、89、90以及95。
在优选的实施方式中,通过包含氨基酸序列的多肽,优选葡萄糖异构酶,解决了本发明的基本问题,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列与SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有至少95%的同一性,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或多个氨基酸位置处包含氨基酸取代,其中一个或多个氨基酸位置各自并且独立地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置89、90、95、10、33、34、35和59。
在第一方面的优选实施方式中,其也是第一方面的其他实施方式中的任何一个的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,在SEQ ID NO:1氨基酸位置53处包含另外的氨基酸取代。
在第一方面的第二实施方式中,其也是第一方面的第一实施方式中的实施方式,一个或多个氨基酸位置选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置R10、A33、L34、D35、F53、I59、A89、T90以及T95。
在第一方面的第三实施方式中,其也是第一方面的第一和第二实施方式中的实施方式,一个或多个氨基酸位置选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置10、33、34、35、59、89、90以及95。
在第一方面的第四实施方式中,其也是第一方面的第一、第二和第三实施方式,优选第一方面的第三实施方式,中的实施方式,一个或多个氨基酸位置选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置R10、A33、L34、D35、I59、A89、T90以及T95。
在第一方面的第五实施方式中,其也是第一方面的第一、第二、第三和第四实施方式中的实施方式,一个或多个氨基酸位置选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置10、33、34、35以及59。
在第一方面的第六实施方式中,其也是第一方面的第一、第二、第三、第四和第五实施方式,优选第一方面的第五实施方式,中的实施方式,一个或多个氨基酸位置选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置R10、A33、L34、D35和I59。
在第一方面的第七实施方式中,其也是第一方面的第一、第二、第三、第四、第五和第六实施方式中的实施方式,一个或多个氨基酸位置选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置10、33和35。
在第一方面的第八实施方式中,其也是第一方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六和第七实施方式中的实施方式,一个或多个氨基酸位置选自由下列组成的组:SEQ IDNO:1氨基酸位置R10、A33和D35。
在第一方面的第九实施方式中,其也是第一方面的第一、第二、第三和第四实施方式中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,在一个或多个氨基酸位置处包含氨基酸取代,其中一个或多个氨基酸位置选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置10、90和95组成的组;优选地,一个或多个氨基酸位置选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置R10、T90和T95组成的组;更优选地,多肽,优选葡萄糖异构酶,包含氨基酸序列,其中该氨基酸序列包含一个或多个选自由R10K、T90S和T95Y组成的组的氨基酸取代。
在第一方面的第十实施方式中,其也是第一方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八和第九实施方式中的实施方式,一个氨基酸位置是SEQ ID NO:1氨基酸位置10,优选一个氨基酸位置是SEQ ID NO:1氨基酸位置R10。
在第一方面的第十一实施方式中,其也是第一方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九和第十实施方式中的实施方式,一个或多个氨基酸位置是两个或更多个的氨基酸位置。
在第一方面的第十二实施方式中,其也是第一方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十和第十一实施方式中的实施方式,优选第一方面的第十一实施方式中的实施方式,一个或多个氨基酸位置是三个或更多个氨基酸位置。
在第一方面的第十三实施方式中,其也是第一方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一和第十二实施方式中的实施方式,优选第一方面的第十二实施方式中的实施方式,一个或多个氨基酸位置是四个或更多个氨基酸位置。
在第一方面的第十四实施方式中,其也是第一方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二和第十三实施方式中的实施方式,优选第一方面的第十三实施方式,一个或多个氨基酸位置是五个或更多个氨基酸位置。
在另一个优选的实施方式中,其也是第一方面的其他实施方式中的任何一个的实施方式,一个或多个氨基酸位置是四个或更多个或五个或更多个氨基酸位置。
在第一方面的第十五实施方式中,其也是第一方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三和第十四实施方式中的实施方式,优选第一方面的第十一、第十二、第十三和第十四方面中的任一个中的实施方式,每个和任何氨基酸位置独立地且单独地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1的氨基酸位置10、33、34,35、53、59、89、90和95。
在第一方面的第十六实施方式中,其也是第一方面的第十五实施方式中的实施方式,每个和任何氨基酸位置独立地且单独地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置R10、A33、L34、D35、F53、I59、A89、T90和T95。
在第一方面的第十七实施方式中,其也是第一方面的第十五实施方式中的实施方式中,每个和任何氨基酸位置独立地且单独地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置10、33、34、35、59、89、90和95。
在第一方面的第十八实施方式中,其也是第一方面的第十七实施方式中的实施方式中,每个和任何氨基酸位置独立地且单独地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置R10、A33、L34、D35、I59、A89、T90和T95。
在第一方面的第十九实施方式中,其也是第一方面的第十七实施方式中的实施方式中,每个和任何氨基酸位置独立地且单独地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置10、33、34、35和59。
在第一方面的第二十实施方式中,其也是第一方面的第十九实施方式中的实施方式,每个和任何氨基酸位置独立地且单独地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置R10、A33、L34、D35和I59。
在第一方面的第二十一实施方式中,其也是第一方面的第十九实施方式中的实施方式,每个和任何氨基酸位置独立地且单独地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置10、33和35。
在第一方面的第二十二实施方式中,其也是第一方面的第二十一实施方式中的实施方式,每个和任何氨基酸位置独立地且单独地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置R10、A33和D35。
在第一方面的第二十三实施方式中,其也是第一方面的第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第二十、第二十一和第二十二实施方式中的实施方式,两个或更多个氨基酸位置包括成一对的两个氨基酸位置,其中成一对的两个氨基酸位置选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置R10和A33、R10和L34、R10和D35、R10和F53、R10和I59、R10和A89、R10和T90、R10和T95、A33和L34、A33和D35、A33和F53、A33和I59、A33和A89、A33和T90、A33和T95、L34和D35、L34和F53、L34和I59、L34和A89、L34和T90、L34和T95、D35和F53、D35和I59、D35和A89、D35和T90、D35和T95、F53和I59、F53和A89、F53和T90、F53和T95、I59和A89、I59和T90、I59和T95、A89和T90、A89和T95以及T90和T95。
在第一方面的第二十四实施方式中,其也是第一方面的第二十三实施方式中的实施方式,所述两个或更多个氨基酸位置包括成一对的两个氨基酸位置,其中成一对的两个氨基酸位置选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置R10和A33、R10和L34、R10和D35、R10和I59、R10和A89、R10和T90、R10和T95、A33和L34、A33和D35、A33和I59、A33和A89、A33和T90、A33和T95、L34和D35、L34和I59、L34和A89、L34和T90、L34和T95、D35和I59、D35和A89、D35和T90、D35和T95、I59和A89、I59和T90、I59和T95、A89和T90、A89和T95以及T90和T95。
在第一方面的第二十五实施方式中,其也是第一方面的第二十四实施方式中的实施方式,两个或更多个氨基酸位置包括成一对的两个氨基酸位置,其中成一对的两个氨基酸位置选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置R10和A33、R10和L34、R10和D35、R10和I59、A33和L34、A33和D35、A33和I59、L34和D35、L34和I59以及D35和I59。
在第一方面的第二十六实施方式中,其也是第一方面的第二十五实施方式中的实施方式,两个或更多个氨基酸位置包括成一对的两个氨基酸位置,其中成一对的两个氨基酸位置选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1的氨基酸位置R10和A33、R10和D35、R10和I59、A33和D35、A33和I59以及D35和I59。
在第一方面的第二十七实施方式中,其也是第一方面的第二十六实施方式中的实施方式,两个或更多个氨基酸位置包括成一对的两个氨基酸位置,其中成一对的两个氨基酸位置选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置R10和A33,R10和D35以及A33和D35组成。
为了本发明的目的,应理解在SEQ ID NO:1的选自特定组的两个氨基酸位置处包含氨基酸取代的多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列包含成一对的两个氨基酸取代,并且除了该对之外,还可以在其他氨基酸位置处包含一个或多个另外的取代。类似地,应当理解,在SEQ ID NO:1的选自特定组的三个、四个或五个氨基酸位置处分别包含氨基酸取代的多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列分别包含三、四或五倍取代,并且可以在其他氨基酸位置处另外包含一个或多个另外的取代。
可选地,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列的这种变体在本文中可以被称为在两个或更多个氨基酸位置处包含氨基酸取代的多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列,其中两个或更多个氨基酸位置包括成一对的两个氨基酸位置,其中成一对的两个氨基酸位置选自特定的组。类似地,应当理解,在SEQ ID NO:1的选自特定组的三个或更多个、四个或更多个、或五个或更多个氨基酸位置处分别包含氨基酸取代的多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列分别包含三、四或五倍氨基酸取代,并且可以在其他氨基酸位置处另外包含一个或多个另外的取代。
在第一方面的第二十八实施方式中,其也是第一方面的第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九、第20、第21、第22、第23、第24、第25、第26和第27实施方式,优选第一方面的第23、第24、第25、第26和第27实施方式中的任一个中的实施方式,除了在两个氨基酸位置处的取代之外,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在至少一个或多个另外的氨基酸位置处包含氨基酸取代,其中一个或多个另外的氨基酸位置独立地且单独地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置10、33、34、35、53、59、89、90和95。
在第一方面的第二十九实施方式中,其也是第一方面的第二十八实施方式中的实施方式,一个或多个另外的氨基酸位置独立地且单独地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置R10、A33、L34、D35、F53、I59、A89、T90和T95。
在第一方面的第三十实施方式中,其也是第一方面的第二十八实施方式中的实施方式,一个或多个另外的氨基酸位置独立地且单独地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置10、33、34、35、59、89、90和95。
在第一方面的第三十一实施方式中,其也是第一方面的第三十实施方式中的实施方式,一个或多个另外的氨基酸位置独立地且单独地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置R10、A33、L34、D35、I59、A89、T90和T95。
在第一方面的第三十二实施方式中,其也是第一方面的第二十八实施方式中的实施方式,一个或多个另外的氨基酸位置独立地且单独地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置10、33、34、35和59。
在第一方面的第三十三实施方式中,其也是第一方面的第三十二实施方式中的实施方式,一个或多个另外的氨基酸位置独立地且单独地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置R10、A33、L34、D35和I59。
在第一方面的第34实施方式中,其也是第一方面的第11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32和33实施方式,优选第一方面的第23、24、25、26、27、28、29、30、31、32和33实施方式中的任一个,更优选第一方面的第28、29、30、31、32和33实施方式中的任一个中的实施方式,两个或更多个氨基酸位置包括三个氨基酸位置,其中三个氨基酸位置选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置R10和A33和L34、R10和A33和D35、R10和A33和F53、R10和A33和I59、R10和A33和A89、R10和A33和T90、R10和A33和T95、R10和L34和D35、R10和L34和F53、R10和L34和I59、R10和L34和A89、R10和L34和T90、R10和L34和T95、R10和D35和F53、R10和D35和I59、R10和D35和A89、R10和D35和T90、R10和D35和T95、R10和F53和I59、R10和F53和A89、R10和F53和T90、R10和F53和T95、R10和I59和A89、R10和I59和T90、R10和I59和T95、R10和A89和T90、R10和A89和T95、R10和T90和T95、A33和L34和D35、A33和L34和F53、A33和L34和I59、A33和L34和A89、A33和L34和T90、A33和L34和T95、A33和D35和F53、A33和D35和I59、A33和D35和A89、A33和D35和T90、A33和D35和T95、A33和F53和I59、A33和F53和A89、A33和F53和T90、A33和F53和T95、A33和I59和A89、A33和I59和T90、A33和I59和T95、A33和A89和T90、A33和A89和T95、A33和T90和T95、L34和D35和F53、L34和D35和I59、L34和D35和A89、L34和D35和T90、L34和D35和T95、L34和F53和I59、L34和F53和A89、L34和F53和T90、L34和F53和T95、L34和I59和A89、L34和I59和T90、L34和I59和T95、L34和A89和T90、L34和A89和T95L34和T90和T95、D35和F53和I59、D35和F53和A89、D35和F53和T90、D35和F53和T95、D35和I59和A89、D35和I59和T90、D35和I59和T95、D35和A89和T90、D35和A89和T95、D35和T90和T95、F53和I59和A89、F53和I59和T90、F53和I59和T95、F53和A89和T90、F53和A89和T95、F53和T90和T95、I59和A89和T90、I59和A89和T95、I59和T90和T95以及A89和T90和T95。
在第一方面的第三十五实施方式中,其也是第一方面的第三十四实施方式中的实施方式,两个或更多个氨基酸位置包括三个氨基酸位置,其中三个氨基酸位置选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置R10和A33和L34、R10和A33和D35、R10和A33和I59、R10和A33和A89、R10和A33和T90、R10和A33和T95、R10和L34和D35、R10和L34和I59、R10和L34和A89、R10和L34和T90、R10和L34和T95、R10和D35和I59、R10和D35和A89、R10和D35和T90、R10和D35和T95、R10和A89和T90、R10和A89和T95、R10和T90和T95、A33和L34和D35、A33和L34和I59、A33和L34和A89、A33和L34和T90、A33和L34和T95、A33和D35和I59、A33和D35和A89、A33和D35和T90、A33和D35和T95、A33和I59和A89、A33和I59和T90、A33和I59和T95、A33和A89和T90、A33和A89和T95、A33和T90和T95、L34和D35和I59、L34和D35和A89、L34和D35和T90、L34和D35和T95、L34和I59和A89、L34和I59和T90、L34和I59和T95、L34和A89和T90、L34和A89和T95、L34和T90和T95、D35和I59和A89、D35和I59和T90、D35和I59和T95、D35和A89和T90、D35和A89和T95、D35和T90和T95、I59和A89和T90、I59和A89和T95、I59和T90和T95以及A89和T90和T95。
在第一方面的第三十六实施方式中,其也是第一方面的第三十五实施方式中的实施方式,两个或更多个氨基酸位置包括三个氨基酸位置,其中三个氨基酸位置选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置R10和A33和L34、R10和A33和D35、R10和A33和I59、R10和L34和D35、R10和L34和I59、R10和D35和I59、A33和L34和D35、A33L34和I59、A33和D35和I59、以及L34和D35和I59。
在第一方面的第37实施方式中,其也是第一方面的第36实施方式中的实施方式,两个或更多个氨基酸位置包括三个氨基酸位置,其中三个氨基酸位置选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置R10和A33和D35、R10和A33和I59以及R10和D35和I59。
在第一方面的第38实施方式中,也是第一方面的第37实施方式中的实施方式中,两个或更多个氨基酸位置包含三个氨基酸位置,其中三个氨基酸位置是SEQ ID NO:1的R10和A33和D35,或SEQ ID NO:1的R10和A33和I59。
在第一方面的第39实施方式中,其也是第一方面的第11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37和38实施方式,优选第一方面的第28、29、30、31、32、33、34、35、36、37和38实施方式中的任一个,更优选第一方面的第34、35、36、37和38实施方式中的任一个中的实施方式,除了在三个氨基酸位置处的取代外,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在至少一个或多个另外的氨基酸位置处包含氨基酸取代,其中一个或多个另外的氨基酸位置独立地且单独地选自由下列组成的组:SEQID NO:1氨基酸位置10、33、34、35、53、59、89、90和95。
在第一方面的第四十实施方式中,其也是第一方面的第三十九实施方式中的实施方式,一个或多个另外的氨基酸位置独立地且单独地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置R10、A33、L34、D35、F53、I59、A89、T90和T95。
在第一方面的第四十一实施方式中,其也是第一方面的第三十九实施方式中的实施方式,一个或多个另外的氨基酸位置独立地且单独地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置10、33、34、35、59、89、90和95。
在第一方面的第四十二实施方式中,其也是第一方面的第四十一实施方式中的实施方式,一个或多个另外的氨基酸位置独立地且单独地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置R10、A33、L34、D35、I59、A89、T90和T95。
在第一方面的第四十三实施方式中,其也是第一方面的第三十九实施方式中的实施方式,一个或多个另外的氨基酸位置独立地且单独地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置10、33、34、35和59。
在第一方面的第四十四实施方式中,其也是第一方面的第四十三实施方式中的实施方式,一个或多个另外的氨基酸位置独立地且单独地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置R10、A33、L34、D35和I59。
在第一方面的第45实施方式中,其也是第一方面的第11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43和44实施方式,优选第一方面的第23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43和44实施方式中的任一个,优选第一方面的第34、35、36、37、38、39、40、41、42、43和44实施方式中的任一个,更优选第一方面的第39、40、41、42、43、44实施方式中的任一个中的实施方式,两个或更多个氨基酸位置包括四个氨基酸位置、其中四个氨基酸位置选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置R10和A33和L34和D35、R10和A33和L34和F53、R10和A33和L34和I59、R10和A33和L34和A89、R10和A33和L34和T90、R10和A33和L34和T95、R10和A33和D35和F53、R10和A33和D35和I59、R10和A33和D35和A89、R10和A33和D35和T90、R10和A33和D35和T95、R10和A33和F53和I59、R10和A33和F53和A89、R10和A33和F53和T90、R10和A33和F53和T95、R10和A33和I59和A89、R10和A33和I59和T90、R10和A33和I59和T95、R10和A33和A89和T90、R10和A33和A89和T95、R10和A33和T90和T95、R10和L34和D35和F53、R10和L34和D35和I59、R10和L34和D35和A89、R10和L34和D35和T90、R10和L34和D35和T95、R10和L34和F53和I59、R10和L34F53和A89、R10和L34和F53和T90、R10和L34和F53和T95、R10和L34和I59和A89、R10和L34和I59和T90、R10和L34和I59和T95、R10和L34和A89T90、R10和L34和A89和T95、R10和L34和T90和T95、R10和D35和F53和I59、R10和D35和F53和A89、R10和D35和F53和T90、R10和D35和F53和T95、R10和D35和I59和A89、R10和D35和I59和T90、R10和D35和I59和T95、R10和D35和A89和T90、R10和D35和A89和T95、R10和D35和T90和T95、R10和F53和I59和A89、R10和F53和I59和T90、R10和F53和I59和T95、R10和F53和A89和T90、R10和F53和A89和T95、R10和F53和T90和T95、R10和I59和A89和T90、R10和I59和A89和T95、R10和I59和T90和T95、R10和A89和T90和T95、A33和L34和D35和F53、A33和L34和D35和I59、A33和L34和D35和A89、A33和L34和D35和T90、A33和L34和D35和T95、A33和L34和F53和I59、A33和L34和F53和A89、A33和L34和F53和T90、A33和L34和F53和T95、A33和L34和I59和A89、A33和L34和I59和T90、A33和L34和I59和T95、A33和L34和A89和T90、A33和L34和A89和T95、A33和L34和T90和T95、A33和D35和F53和I59、A33和D35和F53和A89、A33和D35和F53和T90、A33和D35和F53和T95、A33和D35和I59和A89、A33和D35和I59和T90、A33和D35和I59T95、A33和D35和A89和T90、A33和D35和A89和T95、A33和D35和T90和T95、A33和F53和I59和A89、A33和F53和I59和T90、A33和F53和I59和T95、A33和F53和A89和T90、A33和F53和A89和T95、A33和F53和T90和T95、A33和I59和A89和T90、A33和I59和A89和T95、A33和I59和T90和T95、A33和A89和T90和T95、L34和D35和F53和I59、L34和D35和F53和A89、L34和D35和F53和T90、L34和D35和F53和T95、L34和D35和I59和A89、L34和D35I59和T90、L34和D35和I59和T95、L34和D35和A89和T90、L34和D35和A89和T95、L34和D35和T90和T95、L34和F53和I59和A89、L34和F53和I59和T90、L34和F53和I59和T95、L34和F53和A89和T90、L34和F53和A89和T95、L34和F53和T90和T95、L34和I59和A89和T90、L34和I59和A89和T95、L34和I59和T90和T95、L34和A89和T90和T95、D35和F53和I59和A89、D35F53和I59和T90、D35和F53和I59和T95、D35和F53和A89和T90、D35和F53和A89和T95、D35和F53和T90和T95、D35和I59和A89和T90、D35和I59A89和T95、D35和I59和T90和T95、D35和A89和T90和T95、F53和I59和A89和T90、F53和I59和A89和T95、F53和I59和T90和T95、F53和A89和T90和T95以及I59和A89和T90和T95。
在第一方面的第四十六实施方式中,其也是第一方面的第四十五实施方式中的实施方式,两个或更多个氨基酸位置包括四个氨基酸位置,其中四个氨基酸位置选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置R10和A33和L34和D35、R10和A33和L34和I59、R10和A33和L34和A89、R10和A33和L34和T90、R10和A33和L34和T95、R10和A33D35和I59、R10和A33和D35和A89、R10和A33和D35和T90、R10和A33和D35和T95、R10和A33和I59和A89、R10和A33和I59和T90、R10和A33和I59T95、R10和A33和A89和T90、R10和A33和A89和T95、R10和A33和T90和T95、R10和L34和D35和I59、R10和L34和D35和A89、R10和L34和D35和T90、R10和L34和D35和T95、R10和L34和I59和A89、R10和L34和I59和T90、R10和L34和I59和T95、R10和L34和A89和T90、R10和L34和A89和T95、R10L34和T90和T95、R10和D35和I59和A89、R10和D35和I59和T90、R10和D35和I59和T95、R10和D35和A89和T90、R10和D35和A89和T95、R10和D35T90和T95、R10和I59和A89和T90、R10和I59和A89和T95、R10和I59和T90和T95、R10和A89和T90和T95、A33和L34和D35和I59、A33和L34和D35和A89、A33和L34和D35和T90、A33和L34和D35和T95、A33和L34和I59和A89、A33和L34和I59和T90、A33和L34和I59和T95、A33和L34和A89和T90、A33和L34和A89和T95、A33和L34和T90和T95、A33和D35和I59和A89、A33和D35和I59和T90、A33和D35和I59和T95、A33和D35和A89和T90、A33和D35和A89和T95、A33和D35和T90和T95、A33和I59和A89和T90、A33和I59和A89和T95、A33和I59和T90和T95、A33和A89和T90和T95、L34和D35和I59和A89、L34和D35和I59和T90、L34和D35和I59和T95、L34和D35和A89和T90、L34和D35和A89和T95、L34和D35和T90和T95、L34和I59和A89和T90、L34和I59和A89和T95、L34和I59和T90和T95、L34和A89和T90和T95以及I59和A89和T90和T95。
在第一方面的第四十七实施方式中,其也是第一方面的第四十六实施方式中的实施方式,两个或更多个氨基酸位置包括四个氨基酸位置,其中四个氨基酸位置选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置R10和A33和L34和D35、R10和A33和L34和I59以及R10和A33和D35和I59。
在第一方面的第四十八实施方式中,其也是第一方面的第四十七实施方式中的实施方式,两个或更多个氨基酸位置包括四个氨基酸位置,其中四个氨基酸位置是SEQ IDNO:1的R10和A33和D35和I59。
在第一方面的第49实施方式中,其也是第一方面的第11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47和48实施方式,优选第一方面的第23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47和48实施方式中的任一个,更优选第一方面的第34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47和48实施方式中的任一个,甚至更优选第一方面的第39、40、41、42、43、44、45、46、47、48实施方式中的任一个以及最优选第一方面的第45、46、47和48实施方式中的任一个中的实施方式,除了在四个氨基酸位置处的取代外,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在至少一个或多个另外的氨基酸位置处包含氨基酸取代,其中一个或多个另外的氨基酸位置独立地且单独地选自由下列组成的组:SEQID NO:1氨基酸位置10、33、34、35、53、59、89、90和95。
在第一方面的第50实施方式中,其也是第一方面的第49实施方式中的实施方式中,一个或多个另外的氨基酸位置独立地且单独地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置R10、A33、L34、D35、F53、I59、A89、T90和T95。
在第一方面的第51实施方式中,其也是第一方面的第49实施方式中的实施方式,一个或多个另外的氨基酸位置独立地且单独地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置10、33、34、35、59、89、90和95。
在第一方面的第五十二实施方式中,其也是第一方面的第51实施方式中的实施方式,一个或多个另外的氨基酸位置独立地且单独地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置R10、A33、L34、D35、I59、A89、T90和T95。
在第一方面的第53实施方式中,其也是第一方面的第49实施方式中的实施方式,一个或多个另外的氨基酸位置独立地且单独地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置10、33、34、35和59。
在第一方面的第54实施方式中,其也是第一方面的第53实施方式中的实施方式中,一个或多个另外的氨基酸位置独立地且单独地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置R10、A33、L34、D35和I59。
在第一方面的第55实施方式中,其也是第一方面的第3、17、30、41和51实施方式中的任一个中的实施方式,除了在一个或多个氨基酸位置处的取代之外,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或多个另外的氨基酸位置处包含氨基酸取代,其中一个或多个另外的氨基酸位置为SEQ ID NO:1氨基酸位置53。
在第一方面的第五十六实施方式中,其也是第一方面的第4、18、31、42和52实施方式中的任一个中的实施方式,除了在一个或多个氨基酸位置处的取代之外,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或多个另外的氨基酸位置处包含氨基酸取代,其中一个或多个另外的氨基酸位置为SEQ ID NO:1氨基酸位置F53。
在第一方面的优选实施方式中,其也是第一方面的其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或多个氨基酸位置处包含氨基酸取代,其中一个或多个氨基酸位置各自并且独立地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置10、33、34、35、59、89、90和95,且其中多肽,优选葡萄糖异构酶,在SEQ ID NO:1氨基酸位置53的一个或多个另外的氨基酸位置处另外包含氨基酸取代。
在第一方面的优选实施方式中,其也是第一方面的其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或多个氨基酸位置处包含氨基酸取代,其中一个或多个氨基酸位置各自并且独立地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置R10、A33、L34、D35、I59、A89、T90和T95,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,在SEQ ID NO:1氨基酸位置F53的一个或多个另外的氨基酸位置处另外包含氨基酸。
在第一方面的第57实施方式中,其也是第一方面的第5、19、32、43和53实施方式中的任一个中的实施方式,除了在一个或多个氨基酸位置处的取代之外,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在至少一个或多个另外的氨基酸位置处包含氨基酸取代,其中一个或多个另外的氨基酸位置独立地且单独地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置53、89、90和95。
在第一方面的第58实施方式中,其也是第一方面的第6、20、33、44和54实施方式中的任一个中的实施方式,除了在一个或多个氨基酸位置处的取代之外,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在至少一个或多个另外的氨基酸位置处包含氨基酸取代,其中一个或多个另外的氨基酸位置独立地且单独地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置F53、A89、T90和T95。
在第一方面的第59实施方式中,其也是第一方面的第7和21实施方式中的任一个中的实施方式,除了在一个或多个氨基酸位置处的取代外,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在至少一个或多个另外的氨基酸位置处包含氨基酸取代,其中一个或多个另外的氨基酸位置独立地且单独地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置34、53、59、89、90和95。
在第一方面的第六十实施方式中,其也是第一方面的第八和第二十二实施方式中的任一个中的实施方式,除了在一个或多个氨基酸位置处的取代之外,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在至少一个或多个另外的氨基酸位置处包含氨基酸取代,其中一个或多个另外的氨基酸位置独立地且单独地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置L34、F53、I59、A89、T90和T95。
在第一方面的第六十一实施方式中,其也是第一方面的第九实施方式中的实施方式,除了在一个氨基酸位置处的取代之外,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在至少一个或多个另外的氨基酸位置处包含氨基酸取代,其中一个或多个另外的氨基酸位置独立地且单独地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置33、34、35、53、59、89、90和95。
在第一方面的第六十二实施方式中,其也是第一方面的第十实施方式中的实施方式,除了在一个氨基酸位置处的取代之外,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在至少一个或多个另外的氨基酸位置处包含氨基酸取代,其中一个或多个另外的氨基酸位置独立地且单独地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置A33、L34、D35、F53、I59、A89、T90和T95。
在第一方面的第六十三实施方式中,其也是第一方面的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61和62实施方式中的任一个或第一方面的其他实施方式中的任一个,优选第一方面的第11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61和62实施方式中的任一个,更优选第一方面的第23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58。59、60、61和62实施方式中的任一个,甚至更优选第一方面的第34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61和62实施方式中的任一个,甚至还更优选第一方面的第39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61和62实施方式中的任一个,甚至还更优选第一方面的第45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61和62实施方式中的任一个,最优选第一方面的第49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61和62实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在SEQ ID NO:1的一个氨基酸位置,优选在SEQID NO:1的两个氨基酸位置,优选在SEQ ID NO:1的三个氨基酸位置,优选在SEQ ID NO:1的四个氨基酸位置以及更优选在SEQ ID NO:1的五个氨基酸位置处包含氨基酸取代,其中SEQID NO:1的每个和任一个氨基酸位置独立地且单独地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置10、33、35、53、59、89、90和95。
在第一方面的第六十四实施方式中,其也是第一方面的第六十三实施方式中的实施方式中,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在SEQ ID NO:1的两个氨基酸位置,优选在SEQ ID NO:1的三个氨基酸位置,优选在SEQ ID NO:1的四个氨基酸位置,更优选在SEQID NO:1的五个氨基酸位置以及最优选在SEQ ID NO:1的六个氨基酸位置处包含氨基酸取代,其中SEQ ID NO:1的每个和任一个氨基酸位置独立地且单独地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置R10、A33、D35、F53、I59、A89、T90和T95。
在第一方面的第六十五实施方式中,其也是第一方面的第六十三和第六十四实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在SEQ ID NO:1的两个氨基酸位置处包含氨基酸取代,其中SEQ ID NO:1的每个和任一个氨基酸位置独立地且单独地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置10、33、35、53、59、89、90和95。
在第一方面的第六十六实施方式中,其也是第一方面的第六十三和第六十四实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在SEQ ID NO:1的两个氨基酸位置处包含氨基酸取代,其中SEQ ID NO:1的每个和任一个氨基酸位置独立地且单独地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置R10、A33、D35、F53、I59、A89、T90和T95。
在第一方面的第六十七实施方式中,其也是第一方面的第六十三、第六十四、第六十五和第六十六实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在SEQ ID NO:1的三个氨基酸位置处包含氨基酸取代,其中SEQ ID NO:1的每个和任一个氨基酸位置独立地且单独地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置10、33、35、53、59、89、90和95。
在第一方面的第六十八实施方式中,其也是第一方面的第六十三、第六十四、第六十五和第六十六实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在SEQ ID NO:1的三个氨基酸位置处包含氨基酸取代,其中SEQ ID NO:1的每个和任一个氨基酸位置独立地且单独地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置R10、A33、D35、F53、I59、A89、T90和T95。
在第一方面的第六十九实施方式中,其也是第一方面的第63、64、65、66、67和第68实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在SEQ ID NO:1的四个氨基酸位置处包含氨基酸取代,其中SEQ ID NO:1的每个和任一个氨基酸位置独立地且单独地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置10、33、35、53、59、89、90和95。
在第一方面的第七十实施方式中,其也是第一方面的第63、64、65、66、67和第68实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在SEQ ID NO:1的四个氨基酸位置处包含氨基酸取代,其中SEQ ID NO:1的每个和任一个氨基酸位置独立地且单独地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置R10、A33、D35、F53、I59、A89、T90和T95。
在第一方面的第71实施方式中,其也是第一方面的第63、64、65、66、67、68、69和70实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在SEQ ID NO:1的五个氨基酸位置处包含氨基酸取代,其中SEQ ID NO:1的每个和任一个氨基酸位置独立地且单独地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置10、33、35、53、59、89、90和95。
在第一方面的第72实施方式中,也是第一方面的第63、64、65、66、67、68、69和70实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在SEQ ID NO:1的五个氨基酸位置处包含氨基酸取代,其中SEQ ID NO:1的每个和任一个氨基酸位置独立地且单独地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置R10、A33、D35、F53、I59、A89、T90和T95。
在第一方面的优选实施方式中,其也是第一方面的第63、64、65、66、67、68、69、70、71和72实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在SEQID NO:1的一个氨基酸位置,优选在SEQ ID NO:1的两个氨基酸位置,优选在SEQ ID NO:1的三个氨基酸位置,优选在SEQ ID NO:1的四个氨基酸位置,更优选在SEQ ID NO:1的五个氨基酸位置处包含氨基酸取代,其中SEQ ID NO:1的每个和任一个氨基酸位置独立地且单独地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置10、33、89、90和95。
在第一方面的优选实施方式中,其也是第一方面的其他实施方式中的任一个中的实施方式,一个氨基酸位置选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置89、90、95、10和33,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,在SEQ ID NO:1的氨基酸位置53处另外包含氨基酸取代。
在第一方面的优选实施方式中,其也是第一方面的第63、64、65、66、67、68、69、70、71和72实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在SEQID NO:1的一个氨基酸位置,优选在SEQ ID NO:1的两个氨基酸位置,优选在SEQ ID NO:1的三个氨基酸位置,优选在SEQ ID NO:1的四个氨基酸位置以及更优选在SEQ ID NO:1的五个氨基酸位置处包含氨基酸取代,其中SEQ ID NO:1的每个和任一个氨基酸位置独立地且单独地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1的氨基酸位置R10、A33、A89、T90和T95。
在第一方面的优选实施方式中,其也是第一方面的第63、64、65、66、67、68、69、70、71和72实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在SEQID NO:1的一个氨基酸位置,优选在SEQ ID NO:1的两个氨基酸位置,优选在SEQ ID NO:1的三个氨基酸位置,优选在SEQ ID NO:1的四个氨基酸位置以及更优选在SEQ ID NO:1的五个氨基酸位置处包含氨基酸取代,其中SEQ ID NO:1的每个和任一个氨基酸位置独立地且单独地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置10、33、89、90和95,并且其中多肽,优选葡萄糖异构酶,在选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置35、53和/或59组成的组的SEQ ID NO:1氨基酸位置处另外包含一个或多个氨基酸取代。
在第一方面的优选实施方式中,其也是第一方面的第63、64、65、66、67、68、69、70、71和72实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在SEQID NO:1的一个氨基酸位置,优选在SEQ ID NO:1的两个氨基酸位置,优选在SEQ ID NO:1的三个氨基酸位置,优选在SEQ ID NO:1的四个氨基酸位置以及更优选在SEQ ID NO:1的五个氨基酸位置处包含氨基酸取代,其中SEQ ID NO:1的每个和任一个氨基酸位置独立地且单独地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置R10、A33、A89、T90和T95,并且其中多肽,优选葡萄糖异构酶,在选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置D35、F53和/或I59组成的组的SEQID NO:1氨基酸位置处另外包含一个或多个氨基酸取代。
在第一方面的第73实施方式中,其也是第一方面的第63、64、65、66、67、68、69、70、71和72实施方式中的任一个或其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在SEQ ID NO:1的两个或更多个氨基酸位置处包含氨基酸取代,其中两个氨基酸位置选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置10和33、10和35、10和53、10和59、10和89、10和90、10和95、33和35、33和53、33和59、33和90、33和95、35和53、35和59、35和90、35和95、53和89、53和90、53和95、59和90、89和90、89和95以及90和95,优选SEQ IDNO:1氨基酸位置10和33、10和53、10和89、10和90、10和95、33和90、53和90、53和95、89和90、89和95以及90和95。
在第一方面的优选实施方式中,其也是第一方面的其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在SEQ ID NO:1的两个或更多个氨基酸位置处包含氨基酸取代,其中两个氨基酸位置选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置10和53、33和53、35和53、53和89、53和90以及53和95。
在第一方面的优选实施方式中,其也是第一方面的其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在SEQ ID NO:1的两个或更多个氨基酸位置处包含氨基酸取代,其中两个氨基酸位置是SEQ ID NO:1氨基酸位置53和90。
在第一方面的优选实施方式中,其也是第一方面的其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在SEQ ID NO:1的两个或更多个氨基酸位置处包含氨基酸取代,其中两个氨基酸位置是SEQ ID NO:1氨基酸位置53和95。
在第一方面的第74实施方式中,其也是第一方面的第63、64、65、66、67、68、69、70、71、72和73实施方式中的任一个或其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在SEQ ID NO:1的选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置R10和A33、R10和D35、R10和F53、R10和I59、R10和A89、R10和T90、R10和T95、A33和D35、A33和F53、A33和I59、A33和T90、A33和T95、D35和F53、D35I59、D35和T90、D35和T95、F53和T90、F53和T95、I59和T90、A89和T90、A89和T95、以及T90和T95组成的组,优选由SEQ ID NO:1氨基酸位置R10和A33、R10和F53、R10和A89、R10和T90、R10和T95、A33和T90、F53和T90、F53和T95、A89和T90、A89和T95以及T90和T95组成的组的两个氨基酸位置处包含氨基酸取代。
在第一方面的第75实施方式中,其也是第一方面的第73和第74实施方式中的任一个或其他实施方式中的任一个中的实施方式,一个、两个或三个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置10、33、34、35、53、59、89、90和95。
在第一方面的第76实施方式中,其也是第一方面的第75实施方式中的实施方式,一个、两个或三个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置R10、A33、L34、D35、F53、I59、A89、T90和T95。
在第一方面的第77实施方式中,其也是第一方面的第63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75和76实施方式中的任一个或其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在SEQ ID NO:1的选自由下列SEQ ID NO:1氨基酸位置组成的组的两个氨基酸位置处包含氨基酸取代:
(i)10和33,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个或三个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个或三个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置34、35、53、59、89、90和95组成的组,优选SEQID NO:1氨基酸位置35、53、59、90或95;和
(ii)10和35,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个或三个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个或三个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置33、34、53、59、89、90和95组成的组,优选SEQID NO:1氨基酸位置33、53、59或90;和
(iii)10和53,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个或三个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个或三个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置33、34、35、59、89、90和95组成的组,优选SEQ ID NO:1氨基酸位置33、35、90或95;和
(iv)10和59,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个或三个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个或三个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置33、34、35、53、89、90和95组成的组,优选SEQID NO:1氨基酸位置33、35或90;和
(v)10和89,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个或三个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个或三个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置33、34、35、53、59、90和95组成的组,优选90或95;和
(vi)10和90,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个或三个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个或三个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置33、34、35、53、59、89和95组成的组,优选SEQID NO:1氨基酸位置33、35、53、59、89或95;和
(vii)10和95,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个或三个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个或三个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置33、34、35、53、59、89和90组成的组,优选SEQ ID NO:1氨基酸位置33、35、53、89或90;和
(viii)33和90,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个或三个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个或三个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置10、34、35、53、59、89和95组成的组,优选SEQ ID NO:1氨基酸位置10、35、53、59或95;和
(ix)33和95,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个或三个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个或三个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置10、34、35、53、59、89和90组成的组,优选SEQID NO:1氨基酸位置10、35、53、59或90;和
(x)53和90,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个或三个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个或三个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置10、33、34、35、59、89和95组成的组,优选SEQID NO:1氨基酸位置10、33、35或95;和
(xi)53和95,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个或三个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个或三个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置10、33、34、35、59、89和90组成的组,优选SEQID NO:1氨基酸位置10、33、35或95;和
(xii)89和90,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个或三个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个或三个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置10、33、34、35、53、59和95组成的组,优选SEQ ID NO:1氨基酸位置10或95;和
(xiii)89和95,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个或三个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个或三个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置10、33、34、35、53、59和90组成的组,优选SEQ ID NO:1氨基酸位置10或90;和
(xiv)90和95,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个或三个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个或三个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置10、33、34、35、53、59和89组成的组,优选SEQ ID NO:1氨基酸位置10、33、35、53或89。
在第一方面的第78实施方式中,其也是第一方面的第63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76和77实施方式中的任一个或其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在SEQ ID NO:1的选自由下列SEQ ID NO:1氨基酸位置组成的组的两个氨基酸位置处包含氨基酸取代:
(i)R10和A33,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个或三个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个或三个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置L34、D35、F53、I59、A89、T90和T95组成的组,优选SEQ ID NO:1氨基酸位置D35、F53、I59、T90或T95;和
(ii)R10和D35,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个或三个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个或三个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置A33、L34、F53、I59、A89、T90和T95组成的组,优选SEQ ID NO:1氨基酸位置A33、F53、I59或T90;和
(iii)R10和F53,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个或三个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个或三个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置A33、L34、D35、I59、A89、T90和T95组成的组,优选SEQ ID NO:1氨基酸位置A33、D35、T90或T95;和
(iv)R10和I59,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个或三个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个或三个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置A33、L34、D35、F53、A89、T90和T95组成的组,优选SEQ ID NO:1氨基酸位置A33、D35或T90;和
(v)R10和A89,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个或三个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个或三个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置A33、L34、D35、F53、I59、T90和T95组成的组,优选SEQ ID NO:1氨基酸位置T90或T95;和
(vi)R10和T90,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个或三个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个或三个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置A33、L34、D35、F53、I59、A89和T95组成的组,优选SEQ ID NO:1氨基酸位置A33、D35、F53、I59、A89或T95;和
(vii)R10和T95,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个或三个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个或三个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置A33、L34、D35、F53、I59、A89和T90组成的组,优选SEQ ID NO:1氨基酸位置A33、D35、F53、A89或T90;和
(viii)A33和T90,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个或三个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个或三个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置R10、L34、D35、F53、I59、A89和T95组成的组,优选SEQ ID NO:1氨基酸位置R10、D35、F53、I59或T95;和
(ix)A33和T95,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个或三个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个或三个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置R10、L34、D35、F53、I59、A89和T90组成的组,优选SEQ ID NO:1氨基酸位置R10、D35、F53、I59或T90;和
(x)F53和T90,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个或三个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个或三个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置R10、A33、L34、D35、I59、A89和T95组成的组,优选SEQ ID NO:1氨基酸位置R10、A33、D35或T95;和
(xi)F53和T95,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个或三个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个或三个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置R10、A33、L34、D35、I59、A89和T90组成的组,优选SEQ ID NO:1氨基酸位置R10、A33、D35或T95;和
(xii)A89和T90,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个或三个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个或三个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置R10,A33、L34、D35、F53、I59和T95组成的组,优选SEQ ID NO:1氨基酸位置R10或T95;和
(xiii)A89和T95,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个或三个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个或三个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置R10,A33,L34,D35,F53,I59和T90组成的组,优选SEQ ID NO:1氨基酸位置R10或T90;和
(xiv)T90和T95,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个或三个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个或三个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置R10、A33、L34、D35、F53、I59和A89组成的组,优选SEQ ID NO:1氨基酸位置R10、A33、D35、F53或A89。
在第一方面的优选实施方式中,其也是第一方面的其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在SEQ ID NO:1的两个或更多个氨基酸位置处包含氨基酸取代,其中两个氨基酸位置选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置10和33、10和35、10和59、10和89、10和90、10和95、33和35、33和59、33和90、33和95、35和59、35和90、35和95、59和90、89和90、89和95以及90和95组成的组,优选SEQ ID NO:1氨基酸位置10和33、10和89、10和90、10和95、33和90、33和95、89和90、89和95、90和95。
在第一方面的优选实施方式中,其也是第一方面的其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在两个氨基酸位置处包含氨基酸取代,其中两个氨基酸位置选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置10和33、10和89、10和90、10和95、33和90、33和95、89和90、89和95以及90和95组成的组。
在第一方面的优选实施方式中,其也是第一方面的其他实施方式中的任一个中的实施方式,两个或更多个氨基酸选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置10和33、10和89、10和90、10和95、33和90、33和95、89和90、89和95以及90和95组成的组,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,在SEQ ID NO:1氨基酸位置53另外包含氨基酸取代。
在第一方面的又一个优选实施方式中,其也是第一方面的其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在选自SEQ ID NO:1氨基酸位置90和95、或10和89、或89和90、或89和95的组的两个氨基酸位置处包含氨基酸取代。
在第一方面的优选实施方式中,其也是第一方面的其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在SEQ ID NO:1的选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置R10和A33、R10和D35、R10和I59、R10和A89、R10和T90、R10和T95、A33和D35、A33和I59、A33和T90、A33和T95、D35和I59、D35和T90、D35和T95、I59和T90、A89和T90、A89和T95以及T90和T95组成的组,优选SEQ ID NO:1氨基酸位置R10和A33、R10和A89、R10和T90、R10和T95、A33和T90、A33和T95、A89和T90、A89和T95以及T90和T95的两个氨基酸位置处包含氨基酸取代。
在第一方面的优选实施方式中,其也是第一方面的其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在SEQ ID NO:1的选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置10和33、10和35、10和59、10和89、10和90、10和95、33和35、33和59、33和90、33和95、35和59、35和90、35和95、59和90、89和90、89和95以及90和95组成的组,优选SEQ ID NO:1氨基酸位置10和33、10和89、10和90、10和95、33和90、89和90、89和95以及90和95的两个氨基酸位置处包含氨基酸取代,并且在一个或多个另外的氨基酸位置处另外包含氨基酸取代,其中一个或多个另外的氨基酸位置是SEQ ID NO:1氨基酸位置53。
在第一方面的优选实施方式中,其也是第一方面的其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在SEQ ID NO:1的选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置R10和A33、R10和D35、R10和I59、R10和A89、R10和T90、R10和T95、A33和D35、A33和I59、A33和T90、A33和T95、D35和I59、D35和T90、D35和T95、I59和T90、A89和T90、A89和T95以及T90和T95组成的组,优选SEQ ID NO:1氨基酸位置R10和A33、R10和A89、R10和T90、R10和T95、A33和T90、A89和T90、A89和T95以及T90和T95的两个氨基酸位置处包含氨基酸取代,并且在一个或多个另外的氨基酸位置处另外包含氨基酸取代,其中一个或多个另外的氨基酸位置是SEQ ID NO:1氨基酸位置F53。
在第一方面的第79实施方式中,其也是第一方面的第63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77和78实施方式中的任一个或其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在SEQ ID NO:1的选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置10和33和35、10和33和53、10和33和59、10和33和90、10和33和95、10和35和53、10和35和59、10和35和90、10和35和95、10和53和90、10和53和95、10和59和90、10和89和90、10和89和95、10和90和95,33和35和59、33和35和90、33和53和90、33和53和95、33和59和90,33和90和95、35和53和90、35和53和95、35和59和90、53和90和95以及89和90和95组成的组,优选SEQID NO:1氨基酸10和33和53、10和33和90、10和33和95、10和53和90、10和53和95、10和89和90、10和89和95、10和90和95、33和53和90、33和53和95、33和90和95、53和90和95以及89和90和95,更优选SEQ ID NO:1氨基酸位置10和53和90、10和53和95以及10、90和95的三个氨基酸位置处包含氨基酸取代。
在第一方面的优选实施方式中,其也是第一方面的其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,在三个或更多个氨基酸位置处包含氨基酸取代,其中三个氨基酸位置选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置10和33和35、10和33和59、10和33和90、10和33和95、10和35和59、10和10 35和90、10和35和95、10和59和90、10和89和90、10和89和95、10和90和95、33和35和59、33和35和90、33和59和90、33和90和95、35和59和90以及89和90和95。
优选地,三个或更多个氨基酸位置是三个氨基酸位置SEQ ID NO:1氨基酸位置90、95和10。
更优选地,除了在一个或多个氨基酸位置处的取代之外,多肽,优选葡萄糖异构酶,在SEQ ID NO:1氨基酸位置53处包含另外的氨基酸取代。
在第一方面的第80实施方式中,其也是第一方面的第63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78和79实施方式中的任一个或其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在SEQ ID NO:1的选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置R10和A33和D35、R10和A33和F53、R10和A33和I59、R10和A33和T90、R10和A33和T95、R10和D35和F53、R10和D35和I59、R10和D35和T90、R10和D35和T95、R10和F53和T90、R10和F53和T95、R10和I59和T90、R10和A89和T90、R10和A89和T95、R10和T90和T95、A33和D35和I59、A33和D35和T90、A33和F53和T90、A33和F53和T95、A33和I59和T90、A33和T90和T95、D35和F53和T90、D35和F53和T95、D35和I59和T90、F53和T90和T95以及A89和T90和T95组成的组,优选SEQ ID NO:1氨基酸位置R10和A33和F53、R10和A33和T90、R10和A33和T95、R10和F53和T90、R10和F53和T95、R10和A89和T90、R10和A89和T95、R10和T90和T95、A33和F53和T90、A33和F53和T95、A33和T90和T95、F53和T90和T95以及A89和T90和T95,更优选SEQ ID NO:1氨基酸位置R10和F53和T90、R10和F53和T95以及R10和T90和T95的三个氨基酸位置处包含氨基酸取代。
在第一方面的第81实施方式中,其也是第一方面的第63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79和80实施方式中的任一个或其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列包含SEQ ID:13和/或SEQ ID NO:16。
在第一方面的第82实施方式中,其也是第一方面的第79或81实施方式中的实施方式,一个或两个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置10、33、34、35、53、59、89、90和95。
在第一方面的第83实施方式中,其也是第一方面的第82实施方式中的实施方式,一个或两个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置R10、A33、L34、D35、F53、I59、A89、T90和T95。
在第一方面的第84实施方式中,其也是第一方面的第63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82和83实施方式中的任一个或其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在SEQ ID NO:1的选自下列SEQID NO:1氨基酸位置的三个氨基酸位置处包含氨基酸取代:
(i)10和33和35,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置34、53、59、89、90和95组成的组,优选SEQ ID NO:1氨基酸位置59和90;和
(ii)10和33和53,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置34、35、59、89、90和95组成的组,优选SEQ ID NO:1氨基酸位置90和95;和
(iii)10和33和59,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置34、35、53、89、90和95组成的组,优选SEQ ID NO:1氨基酸位置35和90;和
(iv)10和33和90,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置34、35、53、59、89和95组成的组,优选SEQ ID NO:1氨基酸位置35、53和95;和
(v)10和33和95,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置34、35、53、59、89和90组成的组,优选SEQ ID NO:1氨基酸位置35、53和90;和
(vi)10和35和53,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置33、34、59、89、90和95组成的组,优选SEQ ID NO:1氨基酸位置90或95;和
(vii)10和35和59,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置33、34、53、89、90和95组成的组,优选SEQ ID NO:1氨基酸位置33和90;和
(viii)10和35和90,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置33、34、53、59、89和95组成的组,优选SEQ ID NO:1氨基酸位置33、53、59和95;和(ix)10和35和95,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置33、34、53、59、89和90组成的组,优选SEQ ID NO:1氨基酸位置33、53、59和90;和(x)10和53和90,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置33、34、35、59、89和95组成的组,优选SEQ ID NO:1氨基酸位置33、35和95;和
(xi)10和53和95,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置33、34、35、59、89和90组成的组,优选SEQ ID NO:1氨基酸位置33、35和90;和
(xii)10和59和90,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1的SEQ ID NO:1的33、34、35、53、89和95组成的组,优选SEQ IDNO:1氨基酸位置33和35;和
(xiii)10和89和90,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个另外的SEQ ID NO:1氨基酸位置33、34、35、53、59和95处,优选SEQ ID NO:1氨基酸位置95处包含另外的氨基酸取代;和
(xiv)10和90和95,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置33、34、35、53、59和89组成的组,优选SEQ ID NO:1氨基酸位置33、35、53和89;和(xv)33和53和90,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置10、34、35、59、89和95组成的组,优选SEQ ID NO:1氨基酸位置10和95;和
(xvi)33和53和95,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置10、34、35、59、89和90,优选SEQ ID NO:1氨基酸位置10和90;和
(xvii)33和90和95,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置10、34、35、53、59和89组成的组,优选SEQ ID NO:1氨基酸位置10和53;和
(xviii)53和90和95,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1的SEQ ID NO:1氨基酸位置10、33、34、35、59和89组成的组,优选SEQ ID NO:1氨基酸位置10、33和35;和
(xix)89和90和95,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在选自由SEQ IDNO:1氨基酸位置10、33、34、35、53和59,优选SEQ ID NO:1氨基酸位置10的一个另外的SEQID NO:1氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代。
在第一方面的优选实施方式中,其也是第一方面的其他实施方式中的任一个中的优选实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在四个或更多个氨基酸位置处包含氨基酸取代,其中四个或更多个氨基酸位置中的三个是SEQ ID NO:1氨基酸位置90、95和10,第四氨基酸位置选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置89、33、34、35、59和53组成的组,优选其中第四氨基酸位置选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置89和53组成的组。
在优选的实施方式中,第四氨基酸位置是SEQ ID NO:1氨基酸位置89。
在另一个优选的实施方式中,第四氨基酸位置是SEQ ID NO:1氨基酸位置53。
在第一方面的第85实施方式中,其也是第一方面的第63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83和84实施方式中的任一个或其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在SEQ ID NO:1的选自由下列SEQ ID NO:1氨基酸位置组成的组的三个氨基酸位置处包含氨基酸取代:
(i)R10和A33和D35,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置L34、F53、I59、A89、T90和T95组成的组,优选SEQ IDNO:1氨基酸位置I59和T90;和
(ii)R10和A33和F53,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置L34、D35、I59、A89、T90和T95组成的组,优选SEQID NO:1氨基酸位置T90和T95;和
(iii)R10和A33和I59,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置L34、D35、F53、A89、T90和T95组成的组,优选地SEQID NO:1氨基酸位置D35和T90;和
(iv)R10和A33和T90,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置L34、D35、F53、I59、A89和T95组成的组,优选SEQID NO:1氨基酸位置D35、F53和T95;和
(v)R10和A33和T95,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置L34、D35、F53、I59、A89和T90组成的组,优选SEQ IDNO:1氨基酸位置D35、F53和T90;和
(vi)R10和D35和F53,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置A33、L34、I59、A89、T90和T95组成的组,优选SEQID NO:1氨基酸位置T90或T95;和
(vii)R10和D35和I59,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置A33、L34、F53、A89、T90和T95组成的组,优选地SEQID NO:1氨基酸位置A33和T90;和
(viii)R10和D35和T90,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置A33、L34、F53、I59、A89和T95组成的组,优选SEQID NO:1的氨基酸位置A33、F53、I59和T95;和
(ix)R10和D35和T95,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置A33、L34、F53、I59、A89和T90组成的组,优选SEQID NO:1氨基酸位置A33、F53、I59和T90;和
(x)R10和F53和T90,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置A33、L34、D35、I59、A89和T95组成的组,优选SEQ IDNO:1氨基酸位置A33、D35和T95;和
(xi)R10和F53和T95,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置A33、L34、D35、I59、A89和T90组成的组,优选SEQID NO:1氨基酸位置A33、D35和T90;和
(xii)R10和I59和T90,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置A33、L34、D35、F53、A89和T95组成的组,优选SEQID NO:1氨基酸位置A33和D35;和
(xiii)R10和A89和T90,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在选自由SEQID NO:1氨基酸位置A33、L34、D35、F53、I59和T95组成的组,优选SEQ ID NO:1氨基酸位置T95的一个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代;和
(xiv)R10和T90和T95,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置A33、L34、D35、F53、I59和A89组成的组,优选SEQID NO:1氨基酸位置A33、D35、F53和A89;和
(xv)A33和F53和T90,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置R10、L34、D35、I59、A89和T95组成的组,优选SEQID NO:1氨基酸位置R10和T95;和
(xvi)A33和F53和T95,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置R10、L34、D35、I59、A89和T90组成的组,优选SEQID NO:1氨基酸位置R10和T90;和
(xvii)A33和T90和T95,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置R10、L34、D35、F53、I59和A89组成的组,优选SEQID NO:1氨基酸位置R10和F53;和
(xviii)F53和T90和T95,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或两个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代,其中一个或两个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置R10、A33、L34、D35,I59和A89组成的组,优选SEQID NO:1氨基酸位置R10、A33和D35;和
(xix)A89和T90和T95,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在选自由SEQID NO:1氨基酸位置R10、A33、L34、D35、F53和I59组成的组,优选SEQ ID NO:1氨基酸位置R10的一个另外的氨基酸位置处包含另外的氨基酸取代。
在第一方面的优选实施方式中,其也是第一方面的其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在SEQ ID NO:1的选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置10和33和35、10和33和59、10和33和90、10和33和95、10和35和59、10和35和90、10和35和95、10和59和90、10和89和90、10和89和95、10和90和95、33和35和59、33和35和90、33和59和90、33和90和95、35和59和90以及89和90和95组成的组,优选选自SEQ ID NO:1氨基酸位置10和33和90、10和33和95、10和89和90、10和89和95、10和90和95、33和90和95以及89和90和95的组的三个氨基酸位置处包含氨基酸取代。
在第一方面的优选实施方式中,其也是第一方面的其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在SEQ ID NO:1的选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置R10和A33和D35、R10和A33和I59、R10和A33和T90、R10和A33和T95、R10和D35和I59、R10和D35和T90、R10和D35和T95、R10和I59和T90、R10和A89和T90、R10和A89和T95、R10和T90和T95、A33和D35和I59、A33和D35和T90、A33和I59和T90、A33和T90和T95、D35和I59和T90以及A89和T90和T95组成的组,优选选自SEQ ID NO:1氨基酸位置R10和A33和T90、R10和A33和T95、R10和A89和T90、R10和A89和T95、R10和T90和T95、A33和T90和T95以及A89和T90和T95的组的三个氨基酸位置处包含氨基酸取代。
在第一方面的优选实施方式中,其也是第一方面的其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在SEQ ID NO:1的选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置10和33和35、10和33和59、10和33和90、10和33和95、10和35和59、10和35和90、10和35和95、10和59和90、10和89和90、10和89和95、10和90和95、33和35和59、33和35和90、33和59和90、33和90和95、35和59和90以及89和90和95组成的组,优选选自SEQ ID NO:1氨基酸位置10和33和90、10和33和95、10和89和90、10和89和95、10和90和95、33和90和95以及89和90和95的组的三个氨基酸位置处包含氨基酸取代,并且在一个或多个另外的氨基酸位置处另外包含氨基酸取代,其中一个或多个另外的氨基酸位置是SEQ ID NO:1氨基酸位置53。
在第一方面的优选实施方式中,其也是第一方面的其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在SEQ ID NO:1的选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置R10和A33和D35、R10和A33和I59、R10和A33和T90、R10和A33和T95、R10和D35和I59、R10和D35和T90、R10和D35和T95、R10和I59和T90、R10和A89和T90、R10和A89和T95、R10和T90和T95、A33和D35和I59、A33和D35和T90、A33和I59和T90、A33和T90和T95、D35和I59和T90以及A89和T90和T95组成的组,优选选自SEQ ID NO:1氨基酸位置R10和A33和T90、R10和A33和T95、R10和A89和T90、R10和A89和T95、R10和T90和T95、A33和T90和T95以及A89和T90和T95的组的三个氨基酸位置处包含氨基酸取代,并且在一个或多个另外的氨基酸位置处另外包含氨基酸取代,其中一个或多个另外的氨基酸位置是SEQ ID NO:1氨基酸位置F53。
在第一方面的第86实施方式中,其也是第一方面的第63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84和85实施方式中的任一个或其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在选自由下列组成的组的SEQ ID NO:1氨基酸位置处包含氨基酸取代:
-10和33和35和59;
-10和33和35和90;
-10和33和35和95;
-10和33和53和90;
-10和33和53和95;
-10和33和59和90;
-10和33和90和95;
-10和35和53和90;
-10和35和53和95;
-10和35和59和90;
-10和35和90和95
-10和53和90和95
-10和59和90和95,
-10和89和90和95
-33和53和90和95
-33和89和90和95
-34和89和90和95,
-35和53和90和95
-35和89和90和95,
-53和89和90和95
-59和89和90和95
-10和33和35和53和90,
-10和33和35和53和95,
-10和33和35和59和90;
-10和33和35和59和95,
-10和33和35和90和95,
-10和33和53和90和95,
-10和33和59和90和95,
-10和33和89和90和95,
-10和34和89和90和95,
-10和35和53和59和90,
-10和35和53和59和95,
-10和35和53和90和95,
-10和35和59和90和95,
-10和35和89和90和95,
-10和53和59和90和95,
-10和53和89和90和95,
-10和59和89和90和95,
-33和34和89和90和95,
-33和35和53和90和95,
-33和35和89和90和95,
-33和53和89和90和95,
-33和59和89和90和95,
-34和35和89和90和95,
-34和53和89和90和95,
-34和59和89和90和95,
-35和53和89和90和95,
-35和59和89和90和95,
-53和59和89和90和95,
-10和33和35和53和59和90,
-10和33和35和53和59和95,
-10和33和35和53和90和95
-10和33和35和59和90和95,
-10和33和35和89和90和95,
-10和33和53和89和90和95,
-10和33和59和89和90和95,
-10和34和35和89和90和95,
-10和34和53和89和90和95,
-10和34和59和89和90和95,
-10和35和53和59和90和95,
-10和35和53和89和90和95,
-10和35和59和89和90和95,
-10和53和59和89和90和95,
-33和34和35和89和90和95,
-33和34和53和89和90和95,
-33和34、59和89、90和95,
-33和35和53和89和90和95,
-33和35和59和89和90和95,
-33和53和59和89和90和95,
34和35和53和89和90和95,
-34和35和59和89和90和95,
-34和53和59和89和90和95,
-35和53和59和89和90和95,
-10和33和35和53和59和90和95,
-10和33和35和53和89和90和95,
-10和33和35和59和89和90和95,
-10和35和53和59和89和90和95,
-33和34和35和53和89和90和95,
-33和34和35和59和89和90和95,
-33和34和53和59和89和90和95,
-33和35和53和59和89和90和95,
-34和35和53和59和89和90和95,
-10和33和35和53和59和89和90和95,以及
-33和34和35和53和59和89和90和95。
在第一方面的第87实施方式中,其也是第一方面的第86实施方式中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在选自由下列组成的组的SEQ ID NO:1氨基酸位置处包含氨基酸取代:
-R10和A33和D35和I59,
-R10和A33和D35和T90,
-R10和A33和D35和T95,
-R10和A33和F53和T90,
-R10和A33和F53和T95,
-R10和A33和I59和T90,
-R10和A33和T90和T95,
-R10和D35和F53和T90,
-R10和D35和F53和T95,
-R10和D35和I59和T90,
-R10和D35和T90和T95,
-R10和F53和T90和T95,
-R10和I59和T90和T95,
-R10和A89和T90和T95,
-A33和F53和T90和T95,
-A33和A89和T90和T95,
-L34和A89和T90和T95,
-D35和F53和T90和T95,
-D35和A89和T90和T95,
-F53和A89和T90和T95,
-I59和A89和T90和T95,
-R10和A33和D35和F53和T90,
-R10和A33和D35和F53和T95,
-R10和A33和D35和I59和T90,
-R10和A33和D35和I59和T95,
-R10和A33和D35和T90和T95,
-R10和A33和F53和T90和T95,
-R10和A33和I59和T90和T95,
-R10和A33和A89和T90和T95,
-R10和L34和A89和T90和T95,
-R10和D35和F53和I59和T90,
-R10和D35和F53和I59和T95,
-R10和D35和F53和T90和T95,
-R10和D35和I59和T90和T95,
-R10和D35和A89和T90和T95,
-R10和F53和I59和T90和T95,
-R10和F53和A89和T90和T95,
-R10和I59和A89和T90和T95,
-A33和L34和A89和T90和T95,
-A33和D35和F53和T90和T95,
-A33和D35和A89和T90和T95,
-A33和F53和A89和T90和T95,
-A33和I59和A89和T90和T95,
-L34和D35和A89和T90和T95,
-L34和F53和A89和T90和T95,
-L34和I59和A89和T90和T95,
-D35和F53和A89和T90和T95,
-D35和I59和A89和T90和T95,
-F53和I59和A89和T90和T95,
-R10和A33和D35和F53和I59和T90,
-R10和A33和D35和F53和I59和T95,
-R10和A33和D35和F53和T90和T95
-R10和A33和D35和I59和T90和T95,
-R10和A33和D35和A89和T90和T95,
-R10和A33和F53和A89和T90和T95,
-R10和A33和I59和A89和T90和T95,
-R10和L34和D35和A89和T90和T95,
-R10和L34和F53和A89和T90和T95,
-R10和L34和I59和A89和T90和T95,
-R10和D35和F53和I59和T90和T95,
-R10和D35和F53和A89和T90和T95,
-R10和D35和I59和A89和T90和T95,
-R10和F53和I59和A89和T90和T95,
-A33和L34和D35和A89和T90和T95,
-A33和L34和F53和A89和T90和T95,
-A33和L34和I59和A89和T90和T95,
-A33和D35和F53和A89和T90和T95,
-A33和D35和I59和A89和T90和T95,
-A33和F53和I59和A89和T90和T95,
L34和D35和F53和A89和T90和T95,
-L34和D35和I59和A89和T90和T95,
-L34和F53和I59和A89和T90和T95,
-D35和F53和I59和A89和T90和T95,
-R10和A33和D35和F53和I59和T90和T95,
-R10和A33和D35和F53和A89和T90和T95,
-R10和A33和D35和I59和A89和T90和T95,
-R10和D35和F53和I59和A89和T90和T95,
-A33和L34和D35和F53和A89和T90和T95,
-A33和L34和D35和I59和A89和T90和T95,
-A33和L34和F53和I59和A89和T90和T95,
-A33和D35和F53和I59和A89和T90和T95,
-L34和D35和F53和I59和A89和T90和T95,
-R10和A33和D35和F53和I59和A89和T90和T95,
-A33和L34和D35和F53和I59和A89和T90和T95。
在第一方面的第88实施方式中,该实施方式也是第一方面的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86和87实施方式中的任一个或其他实施方式中的任一个,优选第一方面的第11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86和87实施方式中的任一个,优选第一方面的第34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86和87实施方式中的任一个,优选第一方面的第45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86和87实施方式中的任一个,优选第一方面的第63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86和87实施方式中的任一个,更优选第一方面的第73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86和87实施方式中的任一个,甚至更优选第一方面的第79、80、81、82、83、84、85、86和87实施方式中的任一个,最优选第一方面的第84、85、86和87实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在下列位置中的一个或多个处,优选在下列所有位置处包含氨基酸取代:
(i)SEQ ID NO:1氨基酸位置10、89、90和95;
(ii)SEQ ID NO:1氨基酸位置10、33、53、90和95;或
(iii)SEQ ID NO:1氨基酸位置10、90和95。
在第一方面的优选实施方式中,其也是第一方面的其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在下列位置中的一个或多个处,优选在下列所有位置处包含氨基酸取代:
(i)SEQ ID NO:1氨基酸位置10、89、90和95;
(ii)SEQ ID NO:1氨基酸位置10、33、90和95;或
(iii)SEQ ID NO:1氨基酸位置10、90和95;
优选地,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,在一个或多个另外的氨基酸位置处另外包含氨基酸取代,其中一个或多个另外的氨基酸位置为SEQ ID NO:1氨基酸位置53。
在第一方面的第89实施方式中,其也是第一方面的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86和87实施方式中的任一个或其他实施方式中的任一个,优选第一方面的第11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86和87实施方式中的任一个,优选第一方面的第34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86和87实施方式中的任一个,优选第一方面的第45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86和87实施方式中的任一个,优选第一方面的第63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86和87实施方式中的任一个,更优选第一方面的第73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86和87实施方式中的任一个,甚至更优选第一方面的第79、80、81、82、83、84、85、86和87实施方式中的任一个,最优选第一方面的第84、85、86和87实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在下列位置中的一个或多个处,优选在下列所有位置处包含氨基酸取代:
(i)SEQ ID NO:1氨基酸位置R10、A89、T90和T95;
(ii)SEQ ID NO:1氨基酸位置R10、A33、F53、T90和T95;或
(iii)SEQ ID NO:1氨基酸位置R10、T90和T95。
在第一方面的优选实施方式中,其也是第一方面的其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在下列位置中的一个或多个处,优选在下列所有位置处包含氨基酸取代:
(i)SEQ ID NO:1氨基酸位置R10、A89、T90和T95;
(ii)SEQ ID NO:1氨基酸位置R10、A33、T90和T95;或
(iii)SEQ ID NO:1氨基酸位置R10、T90和T95;
优选地,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,在一个或多个另外的氨基酸位置处另外包含氨基酸取代,其中一个或多个另外的氨基酸位置为SEQ ID NO:1氨基酸位置F53。
在第一方面的第90实施方式中,其也是第一方面的第63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88和89实施方式中的任一个或其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置组成的组的SEQ ID NO:1氨基酸位置处包含氨基酸取代:
(i)R10和A33和D35和I59和T90;
(ii)R10和A33和F53和T90和T95;
(iii)R10和A33和I59和T90;
(iv)R10和D35和F53和T90和T95;
(v)R10和F53和T90;
(vi)R10和F53和T90和T95;
(vii)R10和F53和T95;以及
(viii)R10和A89和T90和T95。
在第一方面的优选实施方式中,其也是第一方面的其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置组成的组的SEQ ID NO:1氨基酸位置处包含氨基酸取代:
(i)R10和A33和D35和I59和T90;
(ii)R10和A33和T90和T95;
(iii)R10和A33和I59和T90;
(iv)R10和D35和T90和T95;
(v)R10和T90;
(vi)R10和T90和T95;
(vii)R10和T95;以及
(viii)R10和A89和T90和T95,
优选地,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,在一个或多个另外的氨基酸位置处另外包含氨基酸取代,其中一个或多个另外的氨基酸位置为SEQ ID NO:1氨基酸位置F53。
在第一方面的第91实施方式中,其也是第一方面的第90实施方式中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置组成的组的SEQID NO:1氨基酸位置处包含氨基酸取代:
(i)R10和A33和D35和I59和T90;
(ii)R10和A33和F53和T90和T95;
(iii)R10和A33和I59和T90;
(iv)R10和D35和F53和T90和T95;
(v)R10和F53和T90和T95;以及
(vi)R10和A89和T90和T95。
在第一方面的优选实施方式中,其也是第一方面的其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置组成的组的SEQ ID NO:1氨基酸位置处包含氨基酸取代:
(i)R10和A33和D35和I59和T90;
(ii)R10和A33和T90和T95;
(iii)R10和A33和I59和T90;
(iv)R10和D35和T90和T95;
(v)R10和T90和T95;以及
(vi)R10和A89和T90和T95,
优选地,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,在一个或多个另外的氨基酸位置处另外包含氨基酸取代,其中一个或多个另外的氨基酸位置为SEQ ID NO:1氨基酸位置F53。
在第一方面的第92实施方式中,其也是第一方面的第63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90和91实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置组成的组的SEQ ID NO:1氨基酸位置处包含氨基酸取代:
(i)R10和A33和D35和I59和T90;
(ii)R10和A33和F53和T90和T95;
(iii)R10和D35和F53和T90和T95;
(iv)R10和F53和T90和T95;以及
(v)R10和A89和T90和T95。
在第一方面的优选实施方式中,其也是第一方面的其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置组成的组的SEQ ID NO:1氨基酸位置处包含氨基酸取代:
(i)R10和A33和D35和I59和T90;
(ii)R10和A33和T90和T95;
(iii)R10和D35和T90和T95;
(iv)R10和T90和T95;以及
(v)R10和A89和T90和T95;
优选地,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,在一个或多个另外的氨基酸位置处另外包含氨基酸取代,其中一个或多个另外的氨基酸位置为SEQ ID NO:1氨基酸位置F53。
在第一方面的第93实施方式中,其也是第一方面的第63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91和92实施方式中的任一个或其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列仅在选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置组成的组的SEQ ID NO:1氨基酸位置处带有氨基酸取代:
(i)R10和A33和D35和I59和T90;
(ii)R10和A33和F53和T90和T95;
(iii)R10和D35和F53和T90和T95;
(iv)R10和F53和T90和T95;以及
(v)R10和A89和T90和T95。
在第一方面的优选实施方式中,其也是第一方面的其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列仅在选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置组成的组的SEQ ID NO:1氨基酸位置处带有氨基酸取代:
(i)R10和A33和D35和I59和T90;
(ii)R10和A33和T90和T95;
(iii)R10和D35和T90和T95;
(iv)R10和T90和T95;以及
(v)R10和A89和T90和T95,
优选地,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,在一个或多个另外的氨基酸位置处另外包含氨基酸取代,其中一个或多个另外的氨基酸位置为SEQ ID NO:1氨基酸位置F53。
在第一方面的第94实施方式中,其也是第63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92和93实施方式中的任一个或其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置组成的组的SEQ ID NO:1氨基酸位置处包含氨基酸取代:
(i)R10和A33和D35和I59和T90;和
(ii)R10和A89和T90和T95。
在第一方面的第95实施方式中,其也是第63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93和94实施方式中的任一个或其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列仅在选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置组成的组的SEQ ID NO:1氨基酸位置处带有氨基酸取代:
-R10和A33和D35和I59;
-R10和A33和D35和T90;
-R10和A33和D35和T95;
-R10和A33和F53和T90;
-R10和A33和F53和T95;
-R10和A33和I59和T90;
-R10和A33和T90和T95;
-R10和D35和F53和T90;
-R10和D35和F53和T95;
-R10和D35和I59和T90;
-R10和D35和T90和T95;
-R10和F53和T90和T95;
-R10和I59和T90和T95;
-R10和A89和T90和T95;
-A33和F53和T90和T95;
-A33和A89和T90和T95;
-L34和A89和T90和T95;
-D35和F53和T90和T95;
-D35和A89和T90和T95;
-F53和A89和T90和T95;
-I59和A89和T90和T95;
-R10和A33和D35和F53和T90;
-R10和A33和D35和F53和T95;
-R10和A33和D35和I59和T90;
-R10和A33和D35和I59和T95;
-R10和A33和D35和T90和T95;
-R10和A33和F53和T90和T95;
-R10和A33和I59和T90和T95;
-R10和A33和A89和T90和T95;
-R10和L34和A89和T90和T95;
-R10和D35和F53和I59和T90;
-R10和D35和F53和I59和T95;
-R10和D35和F53和T90和T95;
-R10和D35和I59和T90和T95;
-R10和D35和A89和T90和T95;
-R10和F53和I59和T90和T95;
-R10和F53和A89和T90和T95;
-R10和I59和A89和T90和T95;
-A33和L34和A89和T90和T95;
-A33和D35和F53和T90和T95;
-A33和D35和A89和T90和T95;
-A33和F53和A89和T90和T95;
-A33和I59和A89和T90和T95;
-L34和D35和A89和T90和T95;
-L34和F53和A89和T90和T95;
-L34和I59和A89和T90和T95;
-D35和F53和A89和T90和T95;
-D35和I59和A89和T90和T95;
-F53和I59和A89和T90和T95;
-R10和A33和D35和F53和I59和T90;
-R10和A33和D35和F53和I59和T95;
-R10和A33和D35和F53和T90和T95;
-R10和A33和D35和I59和T90和T95;
-R10和A33和D35和A89和T90和T95;
-R10和A33和F53和A89和T90和T95;
-R10和A33和I59和A89和T90和T95;
-R10和L34和D35和A89和T90和T95;
-R10和L34和F53和A89和T90和T95;
-R10和L34和I59和A89和T90和T95;
-R10和D35和F53和I59和T90和T95;
-R10和D35和F53和A89和T90和T95;
-R10和D35和I59和A89和T90和T95;
-R10和F53和I59和A89和T90和T95;
-A33和L34和D35和A89和T90和T95;
-A33和L34和F53和A89和T90和T95;
-A33和L34和I59和A89和T90和T95;
-A33和D35和F53和A89和T90和T95;
-A33和D35和I59和A89和T90和T95;
-A33和F53和I59和A89和T90和T95;
-L34和D35和F53和A89和T90和T95;
-L34和D35和I59和A89和T90和T95;
-L34和F53和I59和A89和T90和T95;
-D35和F53和I59和A89和T90和T95;
-R10和A33和D35和F53和I59和T90和T95;
-R10和A33和D35和F53和A89和T90和T95;
-R10和A33和D35和I59和A89和T90和T95;
-R10和D35和F53和I59和A89和T90和T95;
-A33和L34和D35和F53和A89和T90和T95;
-A33和L34和D35和I59和A89和T90和T95;
-A33和L34和F53和I59和A89和T90和T95;
-A33和D35和F53和I59和A89和T90和T95;
-L34和D35和F53和I59和A89和T90和T95;
-R10和A33和D35和F53和I59和A89和T90和T95;以及
-A33和L34和D35和F53和I59和A89和T90和T95。
在第一方面的优选实施方式中,其也是第一方面的其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列仅在选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置组成的组的SEQ ID NO:1氨基酸位置处带有氨基酸取代:
-R10和A33和T90;
-R10和A33和T95;
-R10和D35和T90;
-R10和D35和T95;
-R10和T90和T95;
-A33和T90和T95;
-D35和T90和T95;
-A89和T90和T95;
-R10和A33和D35和T90;
-R10和A33和D35和T95;
-R10和A33和T90和T95;
-R10和D35和I59和T90;
-R10和D35和I59和T95;
-R10和D35和T90和T95;
-R10和I59和T90和T95;
-R10和A89和T90和T95;
-A33和D35和T90和T95;
-A33和A89和T90和T95;
-L34和A89和T90和T95;
-D35和A89和T90和T95;
-I59和A89和T90和T95;
-R10和A33和D35和I59和T90;
-R10和A33和D35和I59和T95;
-R10和A33和D35和T90和T95;
-R10和A33和A89和T90和T95;
-R10和L34和A89和T90和T95;
-R10和D35和I59和T90和T95;
-R10和D35和A89和T90和T95;
-R10和I59和A89和T90和T95;
-A33和L34和A89和T90和T95;
-A33和D35和A89和T90和T95;
-A33和I59和A89和T90和T95;
-L34和D35和A89和T90和T95;
-L34和I59和A89和T90和T95;
-D35和I59和A89和T90和T95;
-R10和A33和D35和I59和T90和T95;
-R10和A33和D35和A89和T90和T95;
-R10和D35和I59和A89和T90和T95;
-A33和L34和D35和A89和T90和T95;
-A33和L34和I59和A89和T90和T95;
-A33和D35和I59和A89和T90和T95;
-L34和D35和I59和A89和T90和T95;
-R10和A33和D35和I59和A89和T90和T95;
-A33和L34和D35和I59和A89和T90和T95,
优选地,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,在一个或多个另外的氨基酸位置处另外包含氨基酸取代,其中一个或多个另外的氨基酸位置为SEQ ID NO:1氨基酸位置F53。
在第一方面的第96实施方式中,其也是第63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94和95实施方式中的任一个或其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列包含SEQ ID NO:13、14、15、16、17、18、19、20、21、22或23的氨基酸序列。
在第一方面的第97实施方式中,其也是第63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95和96实施方式中的任一个或其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列由SEQ ID NO:13、14、15、16、17、18、19、20、21、22或23的氨基酸序列组成。
在第一方面的第98实施方式中,其也是第一方面的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96和97实施方式中的任一个或其他实施方式中的任一个,在任一个氨基酸位置处的取代均独立地并且单独地选自由A、R、N、D、C、Q、E、G、H、I、L、K、M、F、P、S、T、W、Y以及V组成的氨基酸的组。
在第一方面的第99实施方式中,其也是第一方面的第98实施方式中的实施方式,取代是SEQ ID NO:1氨基酸位置10、33、34、35、53、59、89、90和95中的任一处。
在第一方面的第100实施方式中,其也是第一方面的第99实施方式中的实施方式,取代是在SEQ ID NO:1氨基酸位置R10、A33、L34、D35、F53、I59、A89、T90和T95中的任一处。
在第一方面的第101实施方式中,其也是第一方面的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99实施方式中的任一个或其他实施方式中的任一个,优选第一方面的第98、99和100实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列包含一个或多个取代,其中该取代选自由下列组成的组:
SEQ ID NO:1的位置R10处的氨基酸取代且取代为R10H或R10K,优选R10K;
SEQ ID NO:1的A33位置处的氨基酸取代且取代是A33I、A33L、A33V、A33G、A33N、A33M、A33C、A33S、A33Q或A33T,优选为A33I或A33N,且最优选为A33I;
SEQ ID NO:1的位置L34处的氨基酸取代且取代是L34F、L34W、L34Y或L34P,优选为L34F;
SEQ ID NO:1的位置D35处的氨基酸取代且取代是D35G、D35N、D35M、D35C、D35S、D35Q或D35T,优选为D35C或D35S,且更优选为D35S;
SEQ ID NO:1的位置F53处的氨基酸取代且取代为F53A、F53I、F53L或F53V,优选为F53L;
SEQ ID NO:1的位置I59处的氨基酸取代且取代为I59F、I59W、I59Y或I59P,优选为I59F;
SEQ ID NO:1的位置A89处的氨基酸取代且取代为A89I、A89L或A89V,且优选为A89V;
SEQ ID NO:1的位置T90处的氨基酸取代且取代为T90G、T90N、T90M、T90C、T90S或T90Q,且优选为T90S;
SEQ ID NO:1的位置T95处的氨基酸取代且取代是T95F、T95W、T95Y、T95P、T95R、T95H或T95K,优选T95Y或T95R,且更优选T95Y。
在第一方面的优选实施方式中,其也是第一方面的其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或多个氨基酸位置处包含氨基酸取代,其中一个或多个氨基酸位置各自并且独立地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置A89V、A89I、A89L、T90S、T90G、T90N、T90M、T90C、T90Q、T95Y、T95F、T95W、T95P、T95R、T95H、T95K、R10K、R10H、A33N、A33I、L34F、L34W、L34Y、L34P、D35C、D35S、I59F、I59W、I59Y和I59P。
在第一方面的优选实施方式中,其也是第一方面的其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或多个氨基酸位置处包含氨基酸取代,其中一个或多个氨基酸位置各自并且独立地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置A89V、T90S、T95Y、T95R、R10K、A33N、A33I、L34F、D35C、D35S和I59F。
在第一方面的优选实施方式中,其也是第一方面的其他实施方式中的任一个中的优选实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或多个氨基酸位置处包含氨基酸取代,其中一个或多个氨基酸位置各自并且独立地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置A89V、T90S、T95Y、R10K、A33N和A33I。
在第一方面的优选实施方式中,其也是第一方面的其他实施方式中的任一个中的优选实施方式,除了在一个或多个氨基酸位置处的取代之外,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在SEQ ID NO:1氨基酸位置F53L处包含另外的氨基酸取代。
在第一方面的优选实施方式中,其也是第一方面的其他实施方式中的任一个中的优选实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或多个氨基酸位置处包含氨基酸取代,其中一个或多个氨基酸位置各自并且独立地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置A89V、T90S、T95Y、R10K、A33N和A33I,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,在SEQ IDNO:1氨基酸位置F53L处另外包含一个或多个氨基酸取代。
在第一方面的优选实施方式中,其也是第一方面的其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个氨基酸位置处包含氨基酸取代,其中一个氨基酸位置独立地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置A89V、T90S、T95Y、R10K、A33N和A33I,且在SEQ ID NO:1氨基酸位置F53L处另外包含一个或多个氨基酸取代。
在第一方面的优选实施方式中,其也是第一方面的其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在SEQ ID NO:1氨基酸位置59,优选在位置I59处,包含一个取代,其中取代的氨基酸选自由A、R、N、D、C、Q、E、G、H、I、L、K、M、F、P、S、T、W和Y组成的氨基酸的组,但不是V,优选不是I59V。
在第一方面的优选实施方式中,其也是第一方面的其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在SEQ ID NO:1氨基酸位置95,优选在位置T95处,包含一个取代,其中取代的氨基酸选自由V、R、N、D、C、Q、E、G、H、I、L、K、M、F、P、S、T、W和Y组成的氨基酸的组,但不是A,优选不是T95A。
在第一方面的优选实施方式中,其也是第一方面的其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在SEQ ID NO:1氨基酸位置53,优选在位置F53处,包含一个取代,其中取代的氨基酸选自由A、R、N、D、C、Q、E、G、H、I、K、M、F、P、S、T、W、V和Y组成的氨基酸的组,但不是L,优选不是F53L。
在第一方面的优选实施方式中,其也是第一方面的其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在SEQ ID NO:1氨基酸位置53处,优选在SEQ ID NO:1氨基酸位置F53处,不包含取代,其中取代优选不是F53L。
在第一方面的优选实施方式中,其也是第一方面的其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在SEQ ID NO:1氨基酸位置16、17、19、63、219或306处不包含一个或多个取代,优选在SEQ ID NO:1氨基酸位置W16、H17、F19、A63、G219或C306位不包含一个或多个取代,更优选在选自SEQ ID NO:1氨基酸位置W16H、A63S、A103G、G219N、G219F、G219A和C306A处不包含一个或多个取代。
在第一方面的第102实施方式中,其也是第一方面的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100和101实施方式中的任一个或其他实施方式中的任一个,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列与SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有至少95.5%,更优选至少96%、或至少96.5%、或至少97%、或至少97.5%、或至少98%、或至少98.5%、或至少99%、最优选至少99.1%、或至少99.2%、或至少99.3%、或至少99.4%、或至少99.5%、或至少99.6%、或至少99.7%、或至少99.8%且特别是至少99.9%或100%的同一性。
在第一方面的优选实施方式中,其也是第一方面的其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列与SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有至少96%的同一性。
在第一方面的第103实施方式中,其也是第一方面的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101和102实施方式中的任一个或其他实施方式中的任一个,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列与SEQ ID NO:2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22或23的氨基酸序列具有至少95%的同一性。
在第一方面的另一个优选实施方式中,其也是第一方面的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101和102实施方式中的任一个或其他实施方式中的任一个,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列与SEQ ID NO:2、4、7、8、9、10、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22或23的氨基酸序列具有至少95%的同一性。
在第一方面的第104实施方式中,其也是第一方面的第103实施方式或其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列与SEQ ID NO:13、14、15、15、16、17、18、19、20、21、22或23的氨基酸序列具有至少95%的同一性。
在第一方面的第105实施方式中,也是第一方面的第104实施方式中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列与下列具有至少与95%的同一性:
(i)SEQ ID NO:14、15、17、18或19的氨基酸序列;和/或
(ii)SEQ ID NO:20或21的氨基酸序列。
在第一方面的第106实施方式中,也是第一方面的第105实施方式中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列与下列具有至少95%的同一性。
(i)SEQ ID NO:14、15、17、18或19的氨基酸序列;和/或
(ii)SEQ ID NO:21的氨基酸序列。
在第一方面的第107实施方式中,其也是第一方面的第106实施方式中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列与下列具有至少95%的同一性。
(i)SEQ ID NO:15、17或18的氨基酸序列,优选SEQ ID NO:17的氨基酸序列;和/或
(ii)SEQ ID NO:21的氨基酸序列。
在第一方面的第108实施方式中,其也是第一方面的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106和107实施方式中的任一个或其他实施方式中的任一个,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列与SEQ ID NO:2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22或23中的两个或更多个氨基酸序列具有至少95%的同一性。
在第一方面的第109实施方式中,其也是第一方面的第108实施方式中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列与SEQ ID NO:13、14、15、16、17、18、19、20、21、22或23中的两个或更多个氨基酸序列具有至少95%的同一性。
在第一方面的第110实施方式中,其也是第一方面的第109实施方式中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列与下列中的两个或更多个具有至少95%的同一性。
(i)SEQ ID NO:14、15、17、18或19的氨基酸序列;和/或
(ii)SEQ ID NO:20或21的氨基酸序列。
在第一方面的第111实施方式中,其也是第一方面的第110实施方式中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列与下列中的两个或更多个具有至少95%的同一性。
(i)SEQ ID NO:14、15、17、18或19的氨基酸序列;和/或
(ii)SEQ ID NO:21的氨基酸序列。
在第一方面的第112实施方式中,其也是第一方面的第111实施方式中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列与下列氨基酸序列具有至少95%的同一性。
(i)SEQ ID NO:15、17或18中的两个或更多个氨基酸序列,优选SEQ ID NO:17的氨基酸序列;和/或
(ii)SEQ ID NO:21的氨基酸序列。
在第一方面的第113实施方式中,其也是第98、99、101、102和103实施方式中的任一个或第一方面的其他实施方式中的任一个中的实施方式,氨基酸序列的同一性是至少95.5%,更优选至少96%、或至少96.5%、或至少97%、或至少97.5%、或至少98%、或至少98.5%、或至少99%,最优选至少99.1%、或至少99.2%、或至少99.3%、或至少99.4%、或至少99.5%、或至少99.6%、或至少99.7%、或至少99.8%,且特别是至少99.9%或100%。
在第一方面的第114实施方式中,其也是第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112和113实施方式中的任一个或第一方面的其他实施方式中的任一个中的实施方式,优选第一方面的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101和102实施方式中的任一个,且更优选第一方面的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99和100实施方式中的任一个,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列与SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有至少95.5%,更优选至少96%、或至少96.5%、或至少97%、或至少97.5%、或至少98%、或至少98.5%、或至少99%,最优选至少99.1%、或至少99.2%、或至少99.3%、或至少99.4%、或至少99.5%、或至少99.6%、或至少99.7%、或至少99.8%,并且特别是至少99.9%或100%的同源性。
在第一方面的第115实施方式中,其也是第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113和114实施方式中的任一个或第一方面的其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列与SEQ ID NO:2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22或23的氨基酸序列具有至少95%的同源性。
在第一方面的第116实施方式中,其也是第一方面的第115实施方式中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列与SEQ ID NO:13、14、15、16、17、18、19、20、21、22或23的氨基酸序列具有至少95%的同源性。
在第一方面的第117实施方式中,其也是第一方面的第116实施方式中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列与下列具有至少95%的同源性:
(i)SEQ ID NO:14、15、17、18或19的氨基酸序列;和/或
(ii)SEQ ID NO:20或21的氨基酸序列。
在第一方面的第118实施方式中,其也是第一方面的第117实施方式中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列与下列具有至少95%的同源性:
(i)SEQ ID NO:14、15、17、18或19的氨基酸序列;和/或
(ii)SEQ ID NO:21的氨基酸序列。
在第一方面的第119实施方式中,其也是第一方面的第118实施方式中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列与下列具有至少95%的同源性。
(i)SEQ ID NO:15、17或18的氨基酸序列,优选SEQ ID NO:17的氨基酸序列;和/或
(ii)SEQ ID NO:21的氨基酸序列。
在第一方面的第120实施方式中,其也是第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118和119实施方式中的任一个或第一方面的其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列与SEQ ID NO:2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22或23中的两个或更多个氨基酸序列具有至少95%的同源性
在第一方面的第121实施方式中,其也是第一方面的第120实施方式中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列与SEQ ID NO:13、14、15、16、17、18、19、20、21、22或23中的两个或更多个氨基酸序列具有至少95%的同源性。
在第一方面的第122实施方式中,其也是第一方面的第121实施方式中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列与下列具有至少95%的同源性:
(i)SEQ ID NO:14、15、17、18或19中的两个或更多个氨基酸序列;和/或
(ii)SEQ ID NO:20或21中的两个或更多个氨基酸序列。
在第一方面的第123实施方式中,其也是第一方面的第122实施方式中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列与下列具有至少95%的同源性:
(i)SEQ ID NO:14、15、17、18或19中的两个或更多个氨基酸序列;和/或
(ii)SEQ ID NO:21的氨基酸序列。
在第一方面的第124实施方式中,其也是第一方面的第123实施方式中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列与下列具有至少95%的同源性:
(i)SEQ ID NO:15、17或18中的两个或更多个氨基酸序列,优选SEQ ID NO:17的氨基酸序列;和/或
(ii)SEQ ID NO:21的氨基酸序列。
在第一方面的第125实施方式中,其也是第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123和124实施方式中的任一个或第一方面的其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列与SEQ ID NO:2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22或23中的两个或更多个氨基酸序列具有至少95%的同一性。
在第一方面的第126实施方式中,其也是第一方面的第125实施方式中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列与SEQ ID NO:13、14、15、16、17、18、19、20、21、22或23中的两个或更多个氨基酸序列具有至少95%的同一性。
在第一方面的第127实施方式中,其也是第一方面的第126实施方式中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列与下列具有至少95%的同一性:
(i)SEQ ID NO:14、15、17、18或19中的两个或更多个氨基酸序列;和/或
(ii)SEQ ID NO:20和21的氨基酸序列。
在第一方面的第128实施方式中,其也是第一方面的第127实施方式中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列与下列具有至少95%的同一性:
(i)SEQ ID NO:14、15、17、18或19中的两个或更多个氨基酸序列;和/或
(ii)SEQ ID NO:21的氨基酸序列。
在第一方面的第129实施方式中,其也是第一方面的第128实施方式中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列与下列具有至少95%的同一性:
(i)SEQ ID NO:15、17或18中的两个或更多个氨基酸序列,优选至SEQ ID NO:17的氨基酸序列;和/或
(ii)SEQ ID NO:21的氨基酸序列。
在第一方面的第130实施方式中,其也是第一方面的第114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128和129实施方式中的任一个中的实施方式,氨基酸序列的同源性或同一性为至少95.5%,更优选为至少96%、或至少96.5%、或至少97%、或至少97.5%、或至少98%、或至少98.5%、或至少99%,最优选至少99.1%、或至少99.2%、或至少99.3%、或至少99.4%、或至少99.5%、或至少99.6%、或至少99.7%、或至少99.8%且尤其是至少99.9%或100%。
在第一方面的第131实施方式中,其也是第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128和129中的任一个或第一方面的其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,包含SEQ ID NO:2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22或23的氨基酸序列。
在第一方面的第132实施方式中,其也是第一方面的第131实施方式中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,包含SEQ ID NO:13、14、15、16、17、18、19、20、21、22或23的氨基酸序列。
在第一方面的第133实施方式中,其也是第一方面的第132实施方式中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,包含
(i)SEQ ID NO:14、15、17、18或19的氨基酸序列;和/或
(ii)SEQ ID NO:20或21的氨基酸序列。
在第一方面的第134实施方式中,其也是第一方面的第133实施方式中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,包含
(i)SEQ ID NO:14、15、17、18或19的氨基酸序列;和/或
(ii)SEQ ID NO:21的氨基酸序列。
在第一方面的第135实施方式中,其也是第一方面的第134实施方式中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,包含
(i)SEQ ID NO:15、17或18的氨基酸序列,优选SEQ ID NO:17的氨基酸序列;和/或
(ii)SEQ ID NO:21的氨基酸序列。
在第一方面的第136实施方式中,其也是第一方面的第130、131、132、133、134和135实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,由SEQ ID NO:2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22或23的氨基酸序列组成。
在第一方面的第137实施方式中,其也是第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135和136实施方式中的任一个或第一方面的其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,能够催化下列的转化:
(i)醛糖分子到酮糖分子,和/或
(ii)酮糖分子到醛糖分子。
在第一方面的第138实施方式中,其也是第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136和137实施方式中的任一个或第一方面的其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,能够催化下列的转化:
(i)丁醛糖分子到丁酮糖分子,和/或
(ii)丁酮糖分子到丁醛糖分子,和/或
(ii)戊醛糖分子与戊酮糖分子,和/或
(iv)戊酮糖分子为戊醛糖分子,和/或
(v)己醛醣分子到己酮糖分子,和/或
(vi)己酮糖分子到己醛醣分子,和/或
(vii)庚醛糖分子到庚酮糖分子,和/或
(viii)庚酮糖分子到庚醛糖分子。
在第一方面的第139实施方式中,其也是第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137和138实施方式中的任一个或第一方面的其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,能够催化下列的转化:
(i)戊醛糖分子到戊酮糖分子,和/或
(ii)戊酮糖分子到戊醛糖分子,和/或
(iii)己醛糖分子到己酮糖分子,和/或
(iv)己酮糖分子到己醛糖分子。
在第一方面的第140实施方式中,其也是第一方面的第137、138和139实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,能够催化下列的转化:
(i)醛糖分子,其选自D-葡萄糖、D-木糖、D-阿拉伯糖、L-阿拉伯糖、L-核糖、D-核糖、D-来苏糖、D-阿洛糖、L-鼠李糖和D-甘露糖;和/或
(ii)酮糖分子,其选自果糖、D-木酮糖、D-核酮糖、L-核酮糖、D-阿洛酮糖和L-鼠李酮糖。
在第一方面的第141实施方式中,其也是第一方面的第137、138、139和140实施方式中的任一个中的实施方式,
(i)醛糖分子是选自由脱氧碳水化合物、硫代碳水化合物、叠氮基碳水化合物、甲基化碳水化合物、卤化碳水化合物和/或苄基化碳水化合物组成的组的醛糖分子衍生物
(ii)酮糖分子是选自由脱氧碳水化合物、硫代碳水化合物、叠氮基碳水化合物、甲基化碳水化合物、卤化碳水化合物和/或苄基化碳水化合物组成的组的酮糖分子衍生物。
在第一方面的第142实施方式中,其也是第一方面的第137、138,139、140和141实施方式中的任一个或第一方面的其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,能够催化
(i)果糖到葡萄糖和/或
(ii)葡萄糖到果糖。
在第一方面的第143实施方式中,其也是第一方面的第137、138、139、140、141和142实施方式中的任一个中的实施方式,转换是可逆的转换。
在第一方面的第144实施方式中,其也是第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142和143实施方式中的任一个或第一方面的其他实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,是根据EC编号EC5.3.1.5的多肽,优选葡萄糖异构酶。
在第二方面(其也是第二方面的第一实施方式)中通过第一方面(包括其任意实施方式)的多肽,优选葡萄糖异构酶,解决了本发明的基本问题,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,具有选自由(A)、(B)、(C)、(D)、(E)和(F)或其任意组合组成的组的至少一个特征,
其中特征
(A)是与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,相比,多肽,优选葡萄糖异构酶,用于在50mM果糖浓度下将果糖转化为葡萄糖的增强的活性,优选增强的活性(increasedActivity),其是
(i)至少1.1倍至1.6倍,优选至少1.2倍至1.6倍,更优选至少1.3倍至1.6倍,最优选至少1.4倍至1.6倍,或
(ii)至少1.1倍至3.0倍,优选至少1.4倍至3.0倍、优选至少1.5倍至3.0倍、更优选至少1.6倍至3.0倍、优选至少1.7倍至3.0倍、优选至少1.8倍至3.0倍、优选至少1.9倍至3.0倍、优选至少2.0倍至3.0倍、更优选至少1.4倍至2.8倍、更优选至少1.5倍至2.8倍、更优选至少1.6倍至2.8倍、更优选至少1.7倍至2.8倍、更优选至少1.8倍至2.8倍、更优选至少1.9倍至2.8倍、更优选至少2.0倍至2.8倍、甚至更优选至少1.4倍至2.6倍、甚至更优选至少1.5倍至2.6倍、更优选至少1.6倍至2.6倍、更多优选至少1.7倍至2.6倍、更优选至少1倍。至少1.8倍至2.6倍、更优选至少1.9倍至2.6倍、更优选至少2.0倍至2.6倍以及最优选至少1.4倍至2.4倍、最优选至少1.5倍至2.4倍、最优选至少1.6至2.4倍、最优选至少1.7倍至2.4倍、最优选至少1.8倍至2.4倍、最优选至少1.9倍至2.4倍,以及最优选至少2.0倍至2.4倍以及最优选至少1.7倍至2.4倍;
(B)是与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,相比,多肽,优选葡萄糖异构酶,用于在200mM果糖浓度下将果糖转化为葡萄糖的增强的活性,优选增强的活性(increasedActivity),其是
(i)至少1.2倍至1.6倍,更优选至少1.3倍至1.6倍,最优选至少1.4倍至1.6倍,和/或
(ii)至少1.2倍至3.0倍、优选至少1.3倍至3.0倍、优选至少1.4倍至3.0倍、优选至少1.5倍至3.0倍、更优选至少1.6倍至3.0倍、优选至少1.7倍至3.0倍、优选至少1.8倍至3.0倍、优选至少1.9倍至3.0倍、优选至少2.0倍至3.0倍、更优选至少1.3倍至2.5倍、更优选至少1.4倍至2.5倍、更优选至少1.5倍至2.5倍、更优选至少1.6倍至2.5倍、更优选至少1.7倍至2.5倍、更优选至少1.8倍至2.5倍、更优选至少1.9倍至2.5倍、更优选至少2.0倍至2.5倍、甚至更优选至少1.3倍至2.2倍、甚至更优选至少1.4倍至2.2倍、甚至更优选至少1.5倍至2.2倍、更优选至少1.6倍至2.2倍、更优选至少1.7倍至2.2倍、更优选至少1.8倍至2.2倍数、更优选至少1.9倍至2.2倍、更优选至少2.0倍至2.2倍以及最优选至少1.5倍至2.2倍;
(C)是多肽,优选葡萄糖异构酶,的热稳定性,所述热稳定性以74℃温度下温育多肽,优选葡萄糖异构酶,15分钟后的残留活性来表达,其中该残留活性为
(i)至少30%至100%、至少40%至100%、至少50%至100%、至少30%至75%、至少40%至75%、至少50%至75%、至少30%至65%、至少40%至65%、至少50%至65%、至少41%至64%,和/或
(ii)至少30%至100%、至少31%至100%、至少32%至100%、至少33%至100%、至少34%至100%、至少35%至100%、至少36%至100%、至少37%至100%、至少38%至100%、至少39%至100%、至少40%至100%、至少41%至100%、至少42%至100%、至少43%至100%、至少44%至100%、至少45%至100%、至少46%至100%、至少47%至100%、至少48%至100%、至少49%至100%、至少50%至100%、至少51%至100%、至少52%至100%、至少53%到100%、至少54%到100%、至少55%到100%、至少56%到100%、至少57%至100%、至少58%至100%、至少59%至100%、至少60%至100%、至少61%至100%、至少62%至100%、至少63%至100%、至少64%至100%、至少65%至100%、至少66%至100%、至少67%至100%、至少68%至100%、至少69%至100%、至少70%至100%、至少71%至100%、至少72%至100%、至少73%至100%、至少74%至100%、至少75%至100%、至少76%至100%、至少77%至100%、至少78%至100%、至少79%至100%、至少80%至100%、至少30%至75%、至少31%至75%、至少32%至75%、至少33%至75%、至少34%至75%、至少35%至75%、至少36%至75%、至少37%至75%、至少38%至75%、至少39%至75%、至少40%至75%、至少41%至75%、至少42%至75%、至少43%至75%、至少44%至75%、至少45%至75%、至少46%至75%、至少47%至75%、至少48%至75%、至少49%至75%、至少50%至75%、至少51%至75%、至少52%至75%、至少53%至75%、至少54%至75%、至少55%至75%、至少56%至75%、至少57%至75%、至少58%至75%、至少59%至75%、至少60%至75%、至少61%至75%、至少62%至75%、至少30%至70%、至少31%至70%、至少32%至70%、至少33%至70%、至少34%至70%、至少35%到70%、至少36%到70%、至少37%到70%、至少38%到70%、至少39%到70%、至少40%至70%、至少41%至70%、至少42%至70%、至少43%至70%、至少44%至70%、至少45%至70%、至少46%至70%、至少47%至70%、至少48%至70%、至少49%至70%、至少50%至70%、至少51%最高70%、至少52%至70%、至少53%至70%、至少54%至70%、至少55%至70%、至少56%至70%、至少57%至70%、至少58%至70%、至少59%至70%、至少60%至70%、至少61%至70%、至少62%至70%、至少30%至65%、至少31%至65%、至少32%至65%、至少33%至65%、至少34%至65%、至少35%至65%、至少36%至65%、至少37%至65%、至少38%至65%、至少39%至65%、至少40%至65%、至少41%至65%、至少42%至65%、至少43%至65%、至少44%至65%、至少45%至65%、至少46%至65%、至少47%至65%、至少48%至65%、至少49%至65%、至少50%至65%、至少51%至65%、至少52%至65%、至少53%至65%、至少54%至65%、至少55%至65%、至少56%至65%、至少57%至65%、至少58%至65%、至少59%至65%、至少60%至65%、至少61%至65%、至少62%至65%、更优选至少30%至65%、至少34%至65%、至少35%至65%、至少38%至65%、至少40%至65%、至少41%至65%、至少42%至65%、在至少46%至65%、至少47%至65%、至少50%至65%、至少55%至65%、至少59%至65%、至少60%至65%、至少62%至65%、甚至更优选至少40%至65%、甚至更优选至少60%至65%以及最优选62%;
(D)是多肽,优选葡萄糖异构酶,的KM值,其在
(i)100mM至190mM之间,优选130mM至190mM之间,优选160mM至190mM之间,更优选170mM至185mM之间,最优选175mM至180mM之间;和/或
(ii)50mM至190mM之间、50mM至189mM之间、50mM至188mM之间、50mM至187mM之间、50mM至186mM之间、50mM至185mM之间、优选50mM至184mM之间、优选50mM至183mM之间、优选50mM至182mM之间、优选50mM至181mM之间、优选在50mM至180mM之间、优选在50mM至179mM之间、优选在50mM至178mM之间、优选在50mM至177mM之间、优选在50mM至176mM之间、优选在50mM至175mM之间、优选在50mM至174mM之间、优选在50mM至173mM之间、优选在50mM至172mM之间、优选在50mM至171mM之间、优选在50mM至170mM之间、优选在50mM至169mM之间、优选在50mM至168mM之间、优选在50mM至167mM之间、优选在50mM至166mM之间、优选在50mM至165mM之间、优选在50mM至160mM之间、优选在50mM至159mM之间、优选在50mM至158mM之间、优选在50mM至157mM之间、优选在50mM至156mM之间、优选在50mM至155mM之间、优选在50mM至154mM之间、优选在50mM至153mM之间、优选在50mM至152mM之间、75mM至190mM、75mM至189mM、75mM至188mM、75mM至187mM、75mM至186mM、75mM至185mM,优选75mM至184mM之间、优选在75mM至183mM之间、优选在75mM至182mM之间、优选在75mM至181mM之间、优选在75mM至180mM之间、优选在75mM至179mM之间、优选在75mM至178mM之间、优选在75mM至177mM之间、优选在75mM至176mM之间、优选在75mM至175mM之间、优选在75mM至174mM之间、优选在75mM至173mM之间、优选在75mM至172mM之间、优选在75mM至171mM之间、优选在75mM至170mM之间、优选在75mM至169mM之间、优选在75mM至168mM之间、优选在75mM至167mM之间、优选在75mM至166mM之间、优选在75mM至165mM之间、优选在75mM至160mM之间、优选在75mM至159mM之间、优选在75mM至158mM之间、优选在75mM至157mM之间、优选在75mM至156mM之间、优选在75mM至155mM之间、优选在75mM至154mM之间、优选在75mM至153mM之间、优选在75mM至152mM之间、100mM至190mM、100mM至189mM、100mM至188mM、100mM至187mM、100mM至186mM、100mM至185mM、优选在100mM至184mM之间、优选在100mM至183mM之间、优选在100mM至182mM之间、优选在100mM至181mM之间、优选在100mM至180mM之间、优选在100mM至179mM、优选在100mM至178mM之间、优选在100mM至177mM之间、优选在100mM至176mM之间、优选在100mM至1100mM之间、优选在100mM至174mM之间、优选在100mM至173mM之间、优选在100mM至172mM之间、优选在100mM至171mM之间、优选在100mM至170mM之间、优选在100mM至169mM之间、优选在100mM至168mM之间、优选在100mM至167mM之间、优选在100mM至166mM之间、优选在100mM至165mM之间、优选在100mM至160mM之间、优选在100mM至159mM之间、优选在100mM至158mM之间、优选在100mM至157mM之间、优选在100mM至156mM之间、优选在100mM至155mM之间、优选在100mM至154mM之间、优选在100mM至153mM之间、优选在100mM至152mM之间、115mM至190mM、115mM至189mM、115mM至188mM、115mM至187mM、115mM至186mM、115mM至185mM、优选在115mM至184mM之间、优选在115mM至183mM之间、优选在115mM至182mM之间、优选在115mM至181m之间、优选在115mM至180mM之间、优选在115mM至179mM之间、优选在115mM至178mM之间、优选在115mM至177mM之间、优选在115mM至176mM之间、优选在115mM至175mM之间、优选在115mM至174mM之间、优选在115mM至173mM之间、优选在115mM至172mM之间、优选在115mM至171mM之间、优选在115mM至170mM之间、优选在115mM至169mM之间、优选在115mM至168mM之间、优选在115mM至167mM之间、优选在115mM至166mM之间、优选在115mM至165mM之间、优选在115mM至160mM之间、优选在115mM至159mM之间、优选在115mM至158mM之间、优选在115mM至157mM之间、优选在115mM至156mM之间、优选在115mM至155mM之间、优选在115mM至154mM之间、优选在115mM至153mM之间、优选在115mM至152mM之间、130mM至185mM、优选在130mM至184mM之间、优选在130mM至183mM之间、优选在130mM至182mM之间、优选在130mM至181mM之间、优选在130mM至180mM之间、优选在130mM至179mM之间、优选在130mM至178mM之间、优选在130mM至177mM之间、优选在130mM至176mM之间、优选在130mM至175mM之间、优选在130mM至174mM之间、优选在130mM至173mM之间、优选在130mM至172mM之间、优选在130mM至171mM之间、优选在130mM至170mM之间、优选在130mM至169mM之间、优选在130mM至168mM之间、优选在130mM至167mM之间、优选在130mM至166mM之间、优选在130mM至165mM之间、优选在130mM至160mM之间、优选在130mM至159mM之间、优选在130mM至158mM之间、优选在130mM至157mM之间、优选在130mM至156mM之间、优选在130mM至155mM之间、优选在130mM至154mM之间、优选在130mM至153mM之间、优选在130mM至152mM之间,更优选在135mM至185mM之间、更优选在135mM至184mM之间、更优选在135mM至183mM之间、更优选在135mM至182mM之间、更优选在135mM至181mM之间、更优选在135mM至180mM之间、更优选在135mM至179mM之间、更优选在135mM至178mM之间、更优选在135mM至177mM之间、更优选在135mM至176mM之间、更优选在135mM至175mM之间、更优选在135mM至174mM之间、更优选在135mM至173mM之间、更优选在135mM至172mM之间、更优选在135mM至171mM之间、更优选在135mM至170mM之间、更优选在135mM至169mM之间、更优选在135mM至168mM之间、更优选在135mM至167mM之间、更优选在135mM至166mM之间、更优选在135mM至165mM之间、更优选在135mM至160mM之间、更优选在135mM至159mM之间、更优选在135mM至158mM之间、更优选在之间135mM至157mM、更优选在135mM至156mM之间、更优选在135mM至155mM之间、更优选在135mM至154mM之间、更优选在135mM至153mM之间、更优选在135mM至152mM之间,最优选在140mM至185mM之间、最优选在140mM至184mM之间、最优选在140mM至183mM之间、最优选在140mM至182mM之间、最优选在140mM至181mM之间、最优选在140mM至180mM之间、最优选在140mM至179mM之间、最优选在140mM至178mM之间、最优选在140mM至177mM之间、最优选在140mM至176mM之间、最优选在140mM至175mM之间、最优选在140mM至第174mM之间、最优选在140mM至173mM之间、最优选在140mM至172mM之间、最优选在140mM至171mM之间、最优选在140mM至170mM之间、最优选在140mM至169mM之间、最优选在140mM至168mM之间、最优选在140mM至167mM之间、最优选在140mM至166mM之间、最优选在140mM至165mM之间、最优选在140mM至160mM之间、最优选在140mM至159mM之间、最优选在140mM至158mM之间、最优选在140mM至157mM之间、最优选在140mM至156mM之间、最优选在140mM至155mM之间、最优选在140mM至154mM之间、最优选在140mM至153mM之间以及最优选在140mM至152mM之间;和/或
(iii)小于190mM、189mM、188mM、187mM、186mM、185mM、184mM、183mM、182mM、181mM、180mM、179mM、178mM、177mM、176mM、175mM、174mM、173mM、172mM、171mM、170mM、169mM、168mM、167mM、166mM、165mM、160mM、159mM、158mM、157mM、156mM、155mM、154mM、153mM、152mM,优选小于185mM,更优选小于170mM,甚至更优选小于160mM以及最优选小于155mM、最优选152mM且小于152mM;和
(E)是多肽,优选葡萄糖异构酶,的可溶性表达水平,所述可溶性表达水平定义为所述多肽的可溶性表达水平与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,的可溶性表达水平的比,其是
(i)至少1.04至1.38、优选至少1.07至1.38、优选至少1.10至1.38、优选至少1.31至1.38、优选至少1.33至1.38、优选至少1.36至1.38、更优选至少1.04至1.36、更优选至少1.07至1.36、更优选至少1.10至1.36、更优选至少1.31至1.36、更优选至少1.33至1.36以及最优选为1.36;和/或
(ii)至少1.04至1.80、优选至少1.07至1.80、优选至少1.10至1.80、优选至少1.31至1.80、优选至少1.33至1.80、优选至少1.36至1.80、优选至少1.38至1.80、优选至少1.43至1.80、更优选至少1.04至1.75、更优选至少1.07至1.75、更优选至少1.10至1.75、更优选至少1.31至1.75、更优选至少1.33至1.75、更优选至少1.36至1.75、更优选至少1.38至1.75、更优选至少1.43至多1.75、更优选至少1.47至1.75、更优选至少1.62至1.75、甚至更优选至少1.04至1.70、甚至更优选至少1.07至1.70、甚至更优选至少1.10至1.70、甚至更优选至少1.31至1.70、甚至更优选至少1.33至1.70、甚至更优选至少1.36至1.70、甚至更优选至少1.38至1.70、甚至更优选至少1.43至1.70、甚至更优选至少1.47至1.70、甚至更优选至少1.62至1.70、甚至更优选至少1.04至1.65、甚至更优选至少1.07至1.65、甚至更优选至少1.10至1.65、甚至更优选至少1.31至1.65、甚至更优选至少1.33至1.65、甚至更优选至少1.36至1.65、甚至更优选至少1.38至1.65、甚至更优选至少1.43至1.65、甚至更优选至少1.47至1.65、甚至更优选至少1.62至1.65、并且最优选至少1.10至1.63、至少1.38至1.63、至少1.43至1.63,和/或1.63;
(F)是与SEQ ID NO:1相比,多肽,优选葡萄糖异构酶,的以葡萄糖形成(GlucoseFormation)表达的将果糖转化为葡萄糖的增强的催化活性,其是
至少1.2倍至5倍、至少1.2倍至4.5倍、至少1.2倍至4倍、至少1.2倍至3.5倍、至少1.2倍至3.4倍、至少1.2倍至3.3倍、至少1.2倍至3.2倍、至少1.2倍至3.1倍、至少1.2倍3倍至3倍、至少1.2倍至2.9倍、至少1.2倍至2.8倍、至少1.2倍至2.7倍、至少1.2倍至2.6倍、至少1.2倍至2.5倍、至少1.2倍至2.4倍、至少1.2倍至2.3倍、至少1.2倍至2.2倍、优选至少1.5倍至5倍、至少1.5倍至4.5倍、至少1.5倍至4倍、至少1.5倍至3.5倍、至少1.5倍至3.4倍、至少1.5倍至3.3倍、至少1.5倍至3.2倍、至少1.5倍至3.1倍、至少1.5倍至3倍、至少1.5倍至2.9倍、至少1.5倍至2.8倍、至少1.5倍至2.7倍、至少1.5倍至2.6倍、至少1.5倍至2.5倍、至少1.5倍至2.4倍、至少1.5倍至2.3倍、至少1.5倍至2.2倍、更优选至少1.9倍至5倍、至少1.9倍至4.5倍、至少1.9倍至4倍、至少1.9倍至3.5倍、至少1.9倍至3.4倍、至少1.9至3.3倍、至少1.9倍至3.2倍、至少1.9倍至3.1倍、至少1.9倍至3倍、至少1.9倍至2.9倍、至少1.9倍至2.8倍、至少1.9倍至2.7倍、至少1.9倍至2.6倍、至少1.9倍至2.5倍、至少1.9倍至2.4倍、至少是1.9倍至2.3倍、至少1.9倍至2.2倍、更优选至少2.0倍至5倍、至少2.0倍至4.5倍、至少2.0倍至4倍、至少2.0倍至3.5倍、至少2.0倍至3.4倍、至少2.0倍至3.3倍、至少2.0倍至3.2倍、至少2.0倍至3.1倍、至少2.0倍至3倍、至少2.0倍至2.9倍、至少2.0倍至2.8倍、至少2.0倍至2.7倍、至少2.0倍至2.6倍、至少2.0倍至2.5倍、至少2.0倍至2.4倍、至少2.0倍至2.3倍、至少2.0倍至2.2倍,最优选至少2.2倍至3.3倍。
在第二方面的优选实施方式中,其也是第一方面的任一实施方式中的优选实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,具有选自由(A)、(C)、(E)、(D)、(B)和(F)组成的组的至少一个特征,其中
-对于特征(A),与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,相比,多肽,优选葡萄糖异构酶,用于在50mM果糖浓度下将果糖转化为葡萄糖的增强的活性是通过在50mM果糖下葡萄糖异构酶活性的酶法测定检测的,和/或
-对于特征(B),与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,相比,多肽,优选葡萄糖异构酶,用于在200mM果糖浓度下将果糖转化为葡萄糖的增强的活性是通过在200mM果糖下葡萄糖异构酶活性的酶法测定检测的,和/或
-对于特征(C),与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,相比,温育多肽,优选葡萄糖异构酶,后的残留活性是通过在50mM果糖下葡萄糖异构酶活性的酶法测定在74℃的温度下持续15分钟测量的;和/或
-对于特征(E),与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,相比,多肽,优选葡萄糖异构酶,的葡萄糖异构酶可溶性表达水平是通过多肽,优选葡萄糖异构酶,的无细胞提取物的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)确定的,并量化为每单位未加工细菌培养物体积的带强度,和/或
-对于特征(F),与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,相比,多肽,优选葡萄糖异构酶,的增强的葡萄糖形成被检测为在多肽,优选葡萄糖异构酶,与50mM浓度的果糖于40℃下反应40分钟后产生的葡萄糖的量的增加。
在第二方面的优选实施方式中,其也是第一方面的任一个实施方式中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,具有选自由(A)、(C)、(E)、(D)、(B)和(F)组成的组的至少一个特征,其中
-对于特征(A),与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,相比,多肽,优选葡萄糖异构酶,用于在50mM果糖浓度下将果糖转化为葡萄糖的增强的活性高1.4倍至3.0倍;和/或
-对于特征(B),与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,相比,多肽,优选葡萄糖异构酶,用于在200mM果糖浓度下将果糖转化为葡萄糖的增强的活性高1.3倍至3.0倍;和/或
-对于特征(C),多肽,优选葡萄糖异构酶,的KM值在140mM至160mM之间;和/或
-对于特征(F),与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,相比,多肽,优选葡萄糖异构酶,的增强的葡萄糖形成高2.2倍至3.3倍。
在第二方面的优选实施方式中,其也是第一方面的任一个实施方式中的优选实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,具有特征(A)和(D),其中在(A)中,与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,相比,多肽,优选葡萄糖异构酶,用于在50mM果糖浓度下将果糖转化为葡萄糖的增强的活性高1.2倍至3.0倍,且其中在(D)中,多肽,优选葡萄糖异构酶,的KM值小于190mM。
在第二方面的优选实施方式中,其也是第一方面的任一实施方式中的优选实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,具有特征(A)、(C)和(E),其中在(A)中,与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,相比,多肽,优选葡萄糖异构酶,用于在50mM果糖浓度下将果糖转化为葡萄糖的增强的活性高1.2倍至3.0倍,其中在(C)中,多肽,优选葡萄糖异构酶,的以74℃的温度下将多肽,优选葡萄糖异构酶,温育15分钟后的残留活性表达的热稳定性是至少30%至64%,并且其中在(E)中,多肽,优选葡萄糖异构酶,的增强的可溶性表达水平是至少1.04至1.80,增强的可溶性表达水平定义为多肽的可溶性表达水平与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,的可溶性表达水平的比。
在第二方面的优选实施方式中,其也是第一方面的实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列与SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有至少95%的同一性,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,具有选自(A)、(C)、(E)、(D)、(B)和(F),优选(A)、(C)、(D)和(E)或其任意组合,更优选特征(A)、(C)和(E)或(A)的组合组成的组的至少一个特征,其中特征
(A)是与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,相比,多肽,优选葡萄糖异构酶,用于在50mM果糖浓度下将果糖转化为葡萄糖的至少1.1倍至3.0倍的增强的活性;
(B)是与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,相比,多肽,优选葡萄糖异构酶,用于在200mM果糖浓度下将果糖转化为葡萄糖的至少1.2倍至3.0倍的增强的活性;
(C)是多肽,优选葡萄糖异构酶,的热稳定性,热稳定性以74℃温度下温育多肽,优选葡萄糖异构酶,15分钟后的残留活性来表达,其中残留活性是至少30%至100%;
(D)是SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,的小于190mM的KM值;
(E)是多肽,优选葡萄糖异构酶,的至少1.04至1.80的可溶性表达水平,其定义为多肽的可溶性表达水平与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,的可溶性表达水平的比;和
(F)是优选至少1.2倍至5倍,或至少1.5倍至5倍,或至少1.9倍至5倍,或1.9倍至3.5倍,或2.2倍至3.3倍的增强的葡萄糖形成。
在第二方面的第二实施方式中,其也是第二方面的第一实施方式中的或第一方面的任一实施方式中的实施方式,与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,相比,多肽,优选葡萄糖异构酶,具有下述的用于在50mM果糖浓度下将果糖转化为葡萄糖的增强的活性,优选增强的活性Activity,
至少1.1倍至1.6倍、优选至少1.2倍至1.6倍、更优选至少1.3倍至1.6倍、最优选至少1.4倍至1.6倍,或
至少1.1倍至3.0倍、优选至少1.4倍至3.0倍、优选至少1.5倍至3.0倍、更优选至少1.6倍至3.0倍、优选至少1.7倍至3.0倍、优选至少1.8倍至3.0倍、优选至少1.9倍至3.0倍、优选至少2.0倍至3.0倍、更优选至少1.4倍至2.8倍、更优选至少1.5倍至2.8倍、更优选至少1.6倍至2.8倍、更优选至少1.7倍至2.8倍、更优选至少1.8倍至2.8倍、更优选至少1.9倍至2.8倍、更优选至少2.0倍至2.8倍1倍、甚至更优选至少1.4倍至2.6倍、甚至更优选至少1.5倍至2.6倍、更优选至少1.6倍至2.6倍、更优选至少1.7倍至2.6倍、更优选至少1.8倍至2.6倍、更优选至少1.9倍至2.6倍、更优选至少2.0倍至2.6倍、最优选至少1.4倍至2.4倍、最优选至少1.5倍至2.4倍、最优选至少1.6倍至2.4倍、最优选至少1.7倍至2.4倍、最优选至少1.8倍至2.4倍、最优选至少1.9倍至2.4倍、最优选至少2.0倍至2.4倍以及最优选至少1.7倍至2.4倍-折。
在第二方面的第三实施方式中,其也是第二方面的第一和第二实施方式中的任一个或第一方面的任何实施方式中的实施方式,与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,相比,多肽,优选葡萄糖异构酶,具有下述的用于在200mM果糖浓度下将果糖转化为葡萄糖的增强的活性,优选增强的活性Activity,
至少1.2倍至1.6倍、更优选至少1.3倍至1.6倍、最优选至少1.4倍至1.6倍,和/或
至少1.2倍至3.0倍、优选至少1.3倍至3.0倍、优选至少1.4倍至3.0倍、优选至少1.5倍至3.0倍、更优选至少1.6倍至3.0倍、优选至少1.7倍至3.0倍、优选至少1.8倍至3.0倍、优选至少1.9倍至3.0倍、优选至少2.0倍至3.0倍、更优选至少1.3倍至2.5倍、更优选至少1.4倍至2.5倍、更优选至少1.5倍至2.5倍、更优选至少1.6倍至2.5倍、更优选至少1.7倍至2.5倍、更优选至少1.8倍至2.5倍、更优选至少1.9倍至2.5倍、更优选至少2.0倍至2.5倍、甚至更优选至少1.3倍至2.2倍、甚至更优选至少1.4倍至2.2倍、甚至更优选至少1.5倍至2.2倍、更优选至少1.6倍至2.2倍、更优选至少1.7倍至2.2倍、更优选至少1.8倍至2.2倍、更优选至少1.9倍至2.2倍、更优选至少2.0倍至2.2倍,并且最优选至少1.5倍至2.2倍。
在第二方面的第四实施方式中,其也是第二方面的第一、第二和第三实施方式中的任一个或第一方面的任一实施方式中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,具有以74℃的温度下将多肽,优选葡萄糖异构酶,温育15分钟后的残留活性表达的热稳定性,其中该残留活性为
至少30%至100%、至少40%至100%、至少50%至100%、至少30%至75%、至少40%至75%、至少50%至至75%、至少30%至65%、至少40%至65%、至少50%至65%、至少41%至64%,和/或
至少30%至100%、至少31%至100%、至少32%至100%、至少33%至100%、至少34%至100%、至少35%至100%、至少36%至100%、至少37%至100%、至少38%至100%、至少39%至100%、至少40%至100%、至少41%至100%、至少42%至100%、至少43%至100%、至少44%至100%、至少45%至100%、至少46%至100%、至少47%至100%、至少48%至100%、至少49%至100%、至少50%至100%、至少51%至100%、至少52%至100%、至少53%至100%、至少54%至100%、至少55%至100%、至少56%至100%、至少57%至100%、至少58%至100%、至少59%至100%、至少60%至100%、至少61%至100%、至少62%至100%、至少63%至100%、至少64%至100%、至少65%至100%、至少66%至100%、至少67%至100%、至少68%至100%、至少69%至100%、至少70%至100%、至少71%至100%、至少72%至100%、至少73%至100%、至少74%至100%、至少75%至100%、至少76%至100%、至少77%至100%、至少78%至100%、至少79%至100%、至少80%至100%、至少30%至75%、至少31%至75%、至少32%至75%、至少33%至75%、至少34%至75%、至少35%至75%、至少36%至75%、至少37%至75%、至少38%至75%、至少39%至75%、至少40%至75%、至少41%至75%、至少42%至75%、至少43%至75%、至少44%至75%、至少45%至75%、至少46%至75%、至少47%至75%、至少48%至75%、至少49%至75%、至少50%至75%、至少51%至75%、至少52%至75%、至少53%至75%、至少54%至75%、至少55%至75%、至少56%至75%、至少57%至75%、至少58%至75%、至少59%至75%、至少60%至75%、至少61%至75%、至少62%至75%、至少30%至70%、至少31%至70%、至少32%至70%、至少33%至70%、至少34%至70%、至少35%至70%、至少36%至70%、至少37%至70%、至少38%至70%、至少39%至70%、至少40%至70%、至少41%至70%、至少42%至70%、至少43%至70%、至少44%至70%、至少45%至70%、至少46%至70%、至少47%至70%、至少48%至70%、至少49%至70%、至少50%至70%、至少51%至70%、至少52%至70%、至少53%至70%、至少54%至70%、至少55%至70%、至少56%至70%、至少57%至70%、至少58%至70%、至少59%至70%、至少60%至70%、至少61%至70%、至少62%至70%、至少30%至65%、至少31%至65%、至少32%至65%、至少33%至65%、至少34%至65%、至少35%至65%、至少36%至至65%、至少37%至65%、至少38%至65%、至少39%至65%、至少40%至65%、至少41%至65%、至少42%至65%、至少43%至65%、至少44%至65%、至少45%至65%、至少46%至65%、至少47%至65%、至少48%至65%、至少49%至65%、至少50%至65%、至少51%至65%、至少52%至65%、至少53%至65%、至少54%至65%、至少55%至65%、至少56%至65%、至少57%至65%、至少58%至65%、至少59%至65%、至少60%至65%、至少61%至65%、至少62%至65%、更优选至少30%至65%、至少34%至65%、至少35%至65%、至少38%至65%、至少40%至65%、至少41%至65%、至少42%至65%、至少46%至65%、至少47%至65%、至少50%至65%、至少55%至65%、至少59%至65%、至少60%至65%、至少62%至65%、甚至更优选至少40%至65%、甚至更优选至少60%至65%、最优选62%。
在第二方面的第五实施方式中,其也是第二方面的第一、第二、第三和第四实施方式中的任一个或第一方面的任一实施方式中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,具有下述KM值
在100mM至190mM之间,优选在130mM至190mM之间,优选在160mM至190mM之间,更优选在170mM至185mM之间,并且最优选在175mM至180mM之间;和/或
在50mM至190mM之间、50mM至189mM、50mM至188mM、50mM至187mM、50mM至186mM、50mM至185mM之间、优选在50mM至184mM之间、优选在50mM至183mM之间、优选在50mM至182mM之间、优选在50mM至181之间、优选在50mM至180mM之间、优选在50mM至179mM之间、优选在50mM至178mM之间、优选在50mM至177mM之间、优选在50mM至176mM之间、优选在50mM至175mM之间、优选在50mM至174mM之间、优选在50mM至173mM之间、优选在50mM至172mM之间、优选在50mM至171mM之间、优选在50mM至170mM之间、优选在50mM至169mM之间、优选在50mM至168mM之间、优选在50mM至167mM之间、优选在50mM至166mM之间、优选在50mM至165mM之间、优选在50mM至160mM之间、优选在50mM至159mM之间、优选在50mM至158mM之间、优选在50mM至157mM之间、优选在50mM至156mM之间、优选在50mM至155mM、优选在50mM至154mM之间、优选在50mM至153mM之间、优选在50mM至152mM之间、75mM至190mM、75mM至189mM、75mM至188mM、75mM至187mM、75mM至186mM、75mM至185mM、优选在75mM至184mM之间、优选在75mM至183mM之间、优选在75mM至182mM之间、优选在75mM至181mM之间、优选在75mM至180mM之间、优选在75mM至179mM之间、优选在75mM至178mM之间、优选在75mM至177mM之间、优选在75mM至176mM之间、优选在75mM至175mM之间、优选在75mM至174mM之间、优选在75mM至173mM之间、优选在75mM至172mM之间、优选在75mM至171mM之间、优选在75mM至170mM之间、优选在75mM至169mM之间、优选在75mM至168mM之间、优选在75mM至167mM之间、优选在75mM至166mM之间、优选在75mM至165mM之间、优选在75mM至160mM之间、优选在75mM至159mM之间、优选在75mM至158mM之间、优选在75mM至157mM之间、优选在75mM至156mM之间、优选在75mM至155mM之间、优选在75mM至154mM之间、优选在75mM至153mM之间、优选在75mM至152mM之间、100mM至190mM、100mM至189mM、100mM至188mM、100mM至187mM、100mM至186mM、100mM至185mM、优选在100mM至184mM之间、优选在100mM至183mM之间、优选在100mM至182mM之间、优选在100mM至181mM之间、优选在100mM至180mM之间、优选在100mM至179mM之间、优选在100mM至178mM之间、优选在100mM至177mM之间、优选在100mM至176mM之间、优选在100mM至1100mM之间、优选在100mM至174mM之间、优选在100mM至173mM之间、优选在100mM至172mM之间、优选在100mM至171mM之间、优选在100mM至170mM之间、优选在100mM至169mM之间、优选在100mM至168mM之间、优选在100mM至167mM之间、优选在100mM至166mM之间、优选在100mM至165mM之间、优选在100mM至160mM之间、优选在100mM至159mM之间、优选在100mM至158mM之间、优选在100mM至157mM之间、优选在100mM至156mM之间、优选在100mM至155mM之间、优选在100mM至154mM之间、优选在100mM至153mM之间、优选在100mM至152mM之间、115mM至190mM、115mM至189mM、115mM至188mM、115mM至187mM、115mM至186mM、115mM至185mM、优选在115mM至184mM之间、优选在115mM至183mM之间、优选在115mM至182mM之间、优选在115mM至181mM之间、优选在115mM至180mM之间、优选在115mM至179mM之间、优选在115mM至178mM之间、优选在115mM至177mM之间、优选在115mM至176mM之间、优选在115mM至175mM之间、优选在115mM至174mM之间、优选在115mM至173mM之间、优选在115mM至172mM之间、优选在115mM至171mM之间、优选在115mM至170mM之间、优选在115mM至169mM之间、优选在115mM至168mM之间、优选地在115mM至167mM之间、优选地在115mM至166mM之间、优选在115mM至165mM之间、优选在115mM至160mM之间、优选在115mM至159mM之间、优选在115mM至158mM之间、优选在115mM至157mM之间、优选在115mM至156mM之间、优选在115mM至155mM之间、优选在115mM至154mM之间、优选在115mM至153mM之间、优选在115mM至152mM之间、130mM至185mM、优选在130mM至184mM之间、优选在130mM至183mM之间、优选在130mM至182mM之间、优选在130mM至181mM之间、优选在130mM至180mM之间、优选在130mM至179mM之间、优选在130mM至178mM之间、优选在130mM至177mM之间、优选在130mM至176mM之间、优选在130mM至175mM之间、优选在130mM至174mM之间、优选在130mM至173mM之间、优选在130mM至172mM之间、优选在130mM至171mM之间、优选在130mM至170mM之间、优选在130mM至169mM之间、优选在130mM至168mM之间、优选在130mM至167mM之间、优选在130mM至166mM之间、优选在130mM至165mM之间、优选在130mM至160mM之间、优选在130mM至159mM之间、优选在130mM至158mM之间、优选在130mM至157mM之间、优选在130mM至156mM之间、优选在130mM至155mM之间、优选在130mM至154mM之间、优选在130mM至153mM之间、优选在130mM至152mM之间、更优选在135mM至185mM之间、更优选在135mM至184mM之间、更优选在135mM至183mM之间、更优选在135mM至182mM之间、更优选在135mM至181mM之间、更优选在135mM至180mM之间、更优选在135mM至179mM之间、更优选在135mM至178mM之间、更优选在135mM至177mM之间、更优选在135mM至176mM之间、更优选在135mM至175mM之间、更优选在135mM至174mM之间、更优选在135mM至173mM之间、更优选在135mM至172mM之间、更优选在135mM至171mM之间、更优选在135mM至170mM之间、更优选在135mM至169mM之间、更优选在135mM至168mM之间、更优选在135mM之间至167mM之间、更优选在135mM至166mM之间、更优选在135mM至165mM之间、更优选在135mM至160mM之间、更优选在135mM至159mM之间、更优选在135mM至158mM之间、更优选在135mM至157mM之间、更优选在135mM至156mM之间、更优选在135mM至155mM之间、更优选在135mM至154mM之间、更优选在135mM至153mM之间、更多优选在135mM至152mM之间、最优选在140mM至185mM之间、最优选在140mM至184mM之间、最优选在140mM至183mM之间、最优选在140mM至182mM之间、最优选在140mM至181mM之间、最优选在140mM至180mM之间、最优选在140mM至179mM之间、最优选在140mM至178mM之间、最优选在140mM至177mM之间、最优选在140mM至176mM之间、最优选在140mM至175mM之间、最优选在140mM至174mM之间、最优选在140mM至173mM之间、最优选在140mM至172mM之间、最优选在140mM至171mM之间、最优选在140mM至170mM之间、最优选在140mM至169mM之间、最优选在140mM至168mM之间、最优选在140mM至167mM之间、最优选在140mM至166mM之间、最优选在140mM至165mM之间、最优选在140mM至160mM之间、最优选在140mM至159mM之间、最优选在140mM至158mM之间、最优选在140mM至157mM之间、最优选在140mM至156mM之间、最优选在140mM至155mM之间、最优选在140mM至154mM之间、最优选在140mM至153mM之间、并且最优选在140mM至152mM之间;和/或
小于190mM、189mM、188mM、187mM、186mM、185mM、184mM、183mM、182mM、181mM、180mM、179mM、178mM、177mM、176mM、175mM、174mM、173mM、173mM、172mM、171mM、170mM、169mM、168mM、167mM、166mM、165mM、160mM、159mM、158mM、157mM、156mM、155mM、154mM、153mM、152mM,优选小于185mM、更优选小于170mM、甚至更优选小于160mM、最优选小于155mM、和最优选为152mM且小于152mM。
在第二方面的第六实施方式中,其也是第二方面的第一、第二、第三、第四和第五实施方式中的任一个或第一方面的任一实施方式中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,具有下述的定义为多肽的可溶性表达水平与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,的可溶性表达水平的比的可溶性表达水平:
至少1.04至1.38、优选至少1.07至1.38、优选至少1.10至1.38、优选至少1.31至1.38、优选至少1.33至1.38、优选至少1.36至1.38、更优选至少1.04至1.36、更优选至少1.07至1.36、更优选至少1.10至1.36、更优选至少1.31至1.36、更优选至少1.33至1.36、最优选1.36;和或
至少1.04至1.80、优选至少1.07至1.80、优选至少1.10至1.80、优选至少1.31至1.80、优选至少1.33至1.80、优选至少1.36至1.80、优选至少1.38至1.80、优选至少1.43至1.80、更优选至少1.04至1.75、更优选至少1.07至1.75、更优选至少1.10至1.75、更优选至少1.31至1.75、更优选至少1.33至1.75、更优选至少1.36至1.75、更优选至少1.38至1.75、更优选至少1.43至1.75、更优选至少1.47至1.75、更优选至少1.62至1.75、甚至更优选至少1.04至1.70、甚至更优选至少1.07至1.70、甚至更优选至少1.10最高1.70、甚至更优选至少1.31至1.70、甚至更优选至少1.33至1.70、甚至更优选至少1.36至1.70、甚至更优选至少1.38至1.70、甚至更优选至少1.43至1.70、甚至更优选至少1.47至1.70、甚至更优选至少1.62至1.70、甚至更优选至少1.04至1.65、甚至更优选至少1.07至1.65、甚至更优选至少1.10至1.65、甚至更优选至少1.31至最高1.65、甚至更优选至少1.33至1.65、甚至更优选至少1.36至1.65、甚至更优选至少1.38至1.65、甚至更优选至少1.43至1.65、甚至更优选至少1.47至1.65、甚至更优选至少1.62至1.65、并且最优选至少1.10至1.63、至少1.38至1.63、至少1.43至1.63,和/或1.63。
在第二方面的另一个实施方式中,其也是第二方面的第一、第二、第三,第四和第五实施方式中的任一个或第一方面的任一实施方式中的实施方式,与SEQ ID NO:1相比,多肽,优选葡萄糖异构酶,具有下列的以葡萄糖形成表达的将果糖转化为葡萄糖的多肽,优选葡萄糖异构酶,的增强的催化活性:
至少1.2倍至5倍、至少1.2倍至4.5倍、至少1.2倍至4倍、至少1.2倍至3.5倍、至少1.2倍至3.4倍、至少1.2倍至3.3倍、至少1.2倍至3.2倍、至少1.2倍至3.1倍、至少1.2倍至3倍、至少1.2倍至2.9倍、至少1.2倍至2.8倍、至少1.2倍至2.7倍、至少1.2倍至2.6倍、至少1.2倍至2.5倍、至少1.2倍至2.4倍、至少1.2倍至2.3倍、至少1.2倍至2.2倍、优选至少1.5倍至5倍、至少1.5倍至4.5倍、至少1.5倍至4倍、至少1.5倍至3.5倍、至少1.5倍至3.4倍、至少1.5倍至3.3倍、至少1.5倍至3.2倍、至少1.5倍至3.1倍、至少1.5倍至3倍、至少1.5倍至2.9倍、至少1.5倍至2.8倍、至少1.5倍至2.7倍、至少1.5倍至2.6倍、至少1.5倍至2.5倍、至少1.5倍至2.4倍、至少1.5倍至2.3倍、至少1.5倍至2.2倍、更优选至少1.9倍至5倍、至少1.9倍至4.5倍、至少1.9倍至4倍、至少1.9倍至3.5倍、至少1.9倍至3.4倍、至少1.9至3.3倍、至少1.9倍至3.2倍、至少1.9倍至3.1倍、至少1.9倍至3倍、至少1.9倍至2.9倍、至少1.9倍至2.8倍、至少1.9倍至2.7倍、至少1.9倍至2.6倍、至少1.9倍至2.5倍、至少1.9倍至2.4倍。至少是1.9倍至2.3倍、至少1.9倍至2.2倍、更优选至少2.0倍至5倍、至少2.0倍至4.5倍、至少2.0倍至4倍、至少2.0倍至3.5倍、至少2.0倍至3.4倍、至少2.0倍至3.3倍、至少2.0倍至3.2倍、至少2.0倍至3.1倍、至少2.0倍至3倍、至少2.0倍至2.9倍、至少2.0倍至2.8倍、至少2.0倍至2.7倍、至少2.0倍至2.6倍、至少2.0倍至2.5倍、至少2.0倍至2.4倍、至少2.0倍至2.3倍、至少2.0倍至2.2倍、最优选至少2.2倍至3.3倍。
在第二方面的第七实施方式中,其也是第一、第二、第三、第四、第五和第六实施方式中的任一个或第二方面的任何其他实施方式或第一方面的任一实施方式中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,是第一方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九和第十实施方式中的任一个的多肽,优选葡萄糖异构酶,优选第一方面的第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九和第十实施方式中的任一个的多肽,优选葡萄糖异构酶,更优选第一方面的第五、第六、第七、第八、第九和第十实施方式中的任一个的多肽,优选葡萄糖异构酶,甚至更优选第一方面的第七、第八、第九和第十实施方式中的任一个的多肽,优选葡萄糖异构酶,最优选第一方面的第九和第十实施方式中的任一个的多肽,优选葡萄糖异构酶,和第一方面的第103、108、113、114、114、115、120、125、130、131和131实施方式中的任一个的多肽,优选葡萄糖异构酶,和/或第11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96和97实施方式中的任一个中的或第一方面的其他实施方式中的任一个中的多肽,优选葡萄糖异构酶,优选地,第一方面的第23、24、25、26、27、28、29、30、30 31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96和97实施方式中的任一个中的多肽,优选葡萄糖异构酶,更优选地,第一方面的第28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96和97实施方式中的任一个中的多肽,优选葡萄糖异构酶,甚至更优选第一方面的第39、40、41、42、43、44、45、46、47、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96和97的实施方式中的任一个中的多肽,优选葡萄糖异构酶,最优选第一方面的第63和97实施方式中的任一个中的多肽,优选葡萄糖异构酶,和第一方面的第104、105、106、107、109、109、110、111、112、113、114、116、117、118、119、121、122、123、124、126、127、128、129、130、132、133、134和135实施方式中的任一个中的多肽,优选葡萄糖异构酶。
在第二方面的第八实施方式中,其也是第二方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六和第七实施方式中的任一个或第一方面的实施方式中的任一个的实施方式,且优选地还是第二方面的第一实施方式中的实施方式,与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,相比,多肽,优选葡萄糖异构酶,具有下述的用于在50mM果糖浓度下将果糖转化为葡萄糖的增强的活性,优选增强的活性Activity:
至少1.1倍至3.0倍、优选至少1.4倍至3.0倍、优选至少1.5倍至3.0倍、更优选至少1.6倍至3.0倍、优选至少1.7倍至3.0倍、优选至少1.8倍至3.0倍、优选至少1.9倍至3.0倍、优选至少2.0倍至3.0倍、更优选至少1.4倍至2.8倍、更优选至少1.5倍至2.8倍、更优选至少1.6倍至2.8倍、更优选至少1.7倍至2.8倍、更优选至少1.8倍至2.8倍、更优选至少1.9倍至2.8倍、更优选至少2.0倍至2.8倍、甚至更优选至少1.4倍至2.6倍、甚至更优选至少1.5倍至2.6倍、更优选至少1.6倍至2.6倍、更优选至少1.7倍至2.6倍、更优选至少1.8倍至2.6倍、更优选至少1.9倍至2.6倍、更优选至少2.0倍至2.6倍、最优选至少1.4倍至2.4倍、最优选至少1.5倍至2.4倍、最优选至少1.6倍至2.4倍、最优选至少1.7倍至2.4倍、最优选至少1.8倍至2.4倍、最优选至少1.9倍至2.4倍、最优选至少2.0倍至2.4倍、最优选至少1.7倍至2.4倍。
在第二方面的第九实施方式中,其也是第二方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七和第八实施方式中的任一个或第一方面的实施方式中的任一个的实施方式,与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,相比,多肽,优选葡萄糖异构酶,具有下述的用于在200mM果糖浓度下将果糖转化为葡萄糖的增强的活性,优选增强的活性Activity:
至少1.2倍至3.0倍、优选至少1.3倍至3.0倍、优选至少1.4倍至3.0倍、优选至少1.5倍至3.0倍、更优选至少1.6倍至3.0倍、优选至少1.7倍至3.0倍、优选至少1.8倍至3.0倍、优选至少1.9倍至3.0倍、优选至少2.0倍至3.0倍、更优选至少1.3倍至2.5倍、更优选至少1.4倍至2.5倍、更优选至少1.5倍至2.5倍、更优选至少1.6倍至2.5倍、更优选至少1.7倍至2.5倍、更优选至少1.8倍至2.5倍、更优选至少1.9倍至2.5倍、更优选至少2.0倍至2.5倍、甚至更优选至少1.3倍至2.2倍、甚至更优选至少1.4倍至2.2倍、甚至更优选至少1.5倍至2.2倍、更优选至少1.6倍至2.2倍、更优选至少1.7倍至2.2倍、更优选至少1.8倍至2.2倍、更优选至少1.9倍至2.2倍、更优选至少2.0倍至2.2倍,并且最优选至少1.5倍至2.2倍。
在第二方面的第十实施方式中,其也是第二方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八和第九实施方式中的任一个或是第一方面的任一实施方式中的实施方式,该多肽,优选葡萄糖异构酶,具有以74℃的温度下温育多肽,优选葡萄糖异构酶,15分钟后的残留活性表达的热稳定性,其中该残留活性为至少30%至100%、至少31%至100%、至少32%至100%、至少33%至100%、至少34%至100%、至少35%至100%、至少36%至100%、至少37%至100%、至少38%至100%、至少39%至100%、至少40%至100%、至少41%至100%、至少42%至100%、至少43%至100%、至少44%至100%、至少45%至100%、至少46%至100%、至少47%至100%、至少48%至100%、至少49%至100%、至少50%至100%、至少51%至100%、至少52%至100%、至少53%至100%、至少54%至100%、至少55%至100%、至少56%至100%、至少57%至100%、至少58%至100%、至少59%至100%、至少60%至100%、至少61%至100%、至少62%至100%、至少63%至100%、至少64%至100%、至少65%至100%、至少66%至100%、至少67%至100%、至少68%至100%、至少69%至100%、至少70%至100%、至少71%至100%、至少72%至100%、至少73%至100%、至少74%至100%、至少75%至100%、至少76%至100%、至少77%至100%、至少78%至100%、至少79%至100%、至少80%至100%、至少30%至75%、至少31%至75%、至少32%至75%、至少33%至75%、至少34%至75%、至少35%至75%、至少36%至75%、至少37%至75%、至少38%至75%、至少39%至75%、至少40%至75%、至少41%至75%、至少42%至75%、至少43%至75%、至少44%至75%、至少45%至75%、至少46%至75%、至少47%至75%、至少48%至75%、至少49%至75%、至少50%至75%、至少51%至75%、至少52%至75%、至少53%至75%、至少54%至75%、至少55%至75%、至少56%至75%、至少57%至75%、至少58%至75%、至少59%至75%、至少60%至75%、至少61%至75%、至少62%至75%、至少30%至70%、至少31%至70%、至少32%至70%、至少33%至70%、至少34%至70%、至少35%至70%、至少36%至70%、至少37%至70%、至少38%至70%、至少39%至70%、至少40%至70%、至少41%至70%、至少42%至70%、至少43%至70%、至少44%至70%、至少45%至70%、至少46%至70%、至少47%至70%、至少48%至70%、至少49%至70%、至少50%至70%、至少51%至70%、至少52%至70%、至少53%至70%、至少54%至70%、至少55%至70%、至少56%至70%、至少57%至70%、至少58%至70%、至少59%至70%、至少60%至70%、至少61%至70%、至少62%至70%、至少30%至65%、至少31%至65%、至少32%至65%、至少33%至65%、至少34%至65%、至少35%至65%、至少36%至至65%、至少37%至65%、至少38%至65%、至少39%至65%、至少40%至65%、至少41%至65%、至少42%最高65%、至少43%至65%、至少44%至65%、至少45%至65%、至少46%至65%、至少47%至65%、至少48%至65%、至少49%至65%、至少50%至65%、至少51%至65%、至少52%至65%、至少53%至65%、至少54%至65%、至少55%至65%、至少56%至65%、至少57%至65%、至少58%至65%、至少59%至65%、至少60%至65%、至少61%至65%、至少62%至65%、更优选至少30%至65%、至少34%至65%、至少35%至65%、至少38%至65%、至少40%至65%、至少41%至65%、至少42%至65%、至少46%至65%、至少47%至65%、至少50%至65%、至少55%至65%、至少59%至65%、至少60%至65%、至少62%至65%、甚至更优选至少40%至65%、甚至更优选至少60%至65%、最优选62%。
在第二方面的第十一实施方式中,其也是第二方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九和第十实施方式中的任一个或第一方面的任一实施方式中的实施方式,多肽、优选葡萄糖异构酶、具有下述的KM值:
在50mM至190mM之间、50mM至189mM、50mM至188mM、50mM至187mM、50mM至186mM、50mM至185mM之间、优选在50mM至184mM之间、优选在50mM至183mM之间、优选在50mM至182mM之间、优选在50mM至181之间、优选在50mM至180mM之间、优选在50mM至179mM之间、优选在50mM至178mM之间、优选在50mM至177mM之间、优选在50mM至176mM之间、优选在50mM至175mM之间、优选在50mM至174mM之间、优选在50mM至173mM之间、优选在50mM至172mM之间、优选在50mM至171mM之间、优选在50mM至170mM之间、优选在50mM至169mM之间、优选在50mM至168mM之间、优选在50mM至167mM之间、优选在50mM至166mM之间、优选在50mM至165mM之间、优选在50mM至160mM之间、优选在50mM至159mM之间、优选在50mM至158mM之间、优选在50mM至157mM之间、优选在50mM至156mM之间、优选在50mM至155mM之间、优选在50mM至154mM之间、优选在50mM至153mM之间、优选在50mM至152mM之间、75mM至190mM、75mM至189mM、75mM至188mM、75mM至187mM、75mM至186mM、75mM至185mM之间、75mM至184mM之、优选在75mM至183mM之间、优选在75mM至182mM之间、优选在75mM至181mM之间、优选在75mM至180mM之间、优选在75mM至179mM之间、优选在75mM至178mM之间、优选在75mM至177mM之间、优选在75mM至176mM之间、优选在75mM至175mM之间、优选在75mM至174mM之间、优选在75mM至173mM之间、优选在75mM至172mM之间、优选在75mM至171mM之间、优选在之间75mM至170mM、优选地在75mM至169mM之间、优选地在75mM至168mM之间、优选地在75mM至167mM之间、优选地在75mM至166mM之间、优选地在75mM至165mM之间、优选地在75mM至160mM之间、优选地在75mM至159mM之间、优选地在75mM至158mM之间、优选在75mM至157mM之间、优选在75mM至156mM之间、优选在75mM至155mM之间、优选在75mM至154mM之间、优选在75mM至153mM之间、优选在75mM至152mM之间、100mM至190mM、在100mM至189mM、在100mM至188mM、100mM至187mM、100mM至186mM、100mM至185mM、优选在100mM至184mM之间、优选在100mM至183mM之间、优选在100mM至182mM之间、优选在100mM至181mM之间、优选在100mM至180mM之间、优选在100mM至179mM之间、优选在100mM至178mM之间、优选在100mM至177mM之间、优选在100mM至176mM之间、优选在100mM至1100mM之间、优选在100mM至174mM之间、优选在100mM至173mM之间、优选在100mM至172mM之间、优选在100mM至171mM之间、优选在100mM至170mM之间、优选在100mM至169mM之间、优选在100mM至168mM之间、优选在100mM至167mM之间、优选在100mM至166mM之间、优选在100mM至165mM之间、优选在100mM至160mM之间、优选在100mM至159mM之间、优选在100mM至158mM之间、优选在100mM至157mM之间、优选在100mM至156mM之间、优选在100mM至155mM之间、优选在100mM至154mM之间、优选在100mM至153mM之间、优选在100mM至152mM之间、115mM至190mM、115mM至189mM、115mM至188m M、115mM至187mM、115mM至186mM、115mM至185mM、优选在115mM至184mM之间、优选在115mM至183mM之间、优选在115mM至182mM之间、优选在115mM至181mM之间、优选在115mM至180mM之间、优选在115mM至179mM之间、优选在115mM至178mM之间、优选在115mM至177mM之间、优选在115mM至176mM之间、优选在115mM至175mM之间、优选在115mM至174mM之间、优选在115mM至173mM之间、优选在115mM至172mM之间、优选在115mM至171mM之间、优选在115mM至170mM之间、优选在115mM至169mM之间、优选在115mM至168mM之间、优选在115mM至167mM之间、优选在115mM至166mM之间、优选在115mM至165mM之间、优选在115mM至160mM之间、优选在115mM至159mM之间、优选在115mM至158mM之间、优选在115mM至157mM之间、优选在115mM至156mM之间、优选在115mM至155mM之间、优选在115mM至154mM之间、优选在115mM至153mM之间、优选在115mM至152mM之间、在130mM至185mM之间、优选在130mM至184mM之间、优选在130mM至183mM之间、优选在130mM至182mM之间、优选在130mM至181mM之间、优选在130mM至180mM之间、优选在130mM至179mM之间、优选在130mM至178mM之间、优选在130mM至177mM之间、优选在130mM至176mM之间、优选在130mM至175mM之间、优选在130mM至174mM之间、优选在130mM至173mM之间、优选在130mM至172mM之间、优选在130mM至171mM之间、优选在130mM至170mM之间、优选在130mM至169mM之间、优选在130mM至168mM之间、优选在130mM至167mM之间、优选在130mM至166mM之间、优选在130mM至165mM之间、优选在130mM至160mM之间、优选在130mM至159mM之间、优选在130mM至158mM之间、优选在130mM至157mM之间、优选在130mM至156mM之间、优选在130mM至155mM之间、优选在130mM至154mM之间、优选在130mM至153mM之间、优选在130mM至152mM之间、更优选在135mM至185mM之间、更优选在135mM至184mM之间、更优选在135mM至183mM之间、更多优选在135mM至182mM之间、更优选在135mM至181mM之间、更优选在135mM至180mM之间、更优选在135mM至179mM之间、更优选在135mM至178mM之间、更优选在135mM至177mM之间、更优选在135mM至176mM之间、更优选在135mM至175mM之间、更优选在135mM至174mM之间、更优选在135mM至173mM之间、更优选在135mM至172mM之间、更优选在135mM至171mM之间、更优选在135mM至170mM之间、更优选在135mM至169mM之间、更优选在135mM至168mM之间、更优选在135mM至167mM之间、更优选在135mM至166mM之间、更优选在135mM至165mM之间、更优选在135mM至160mM之间、更优选在135mM至159mM之间、更多优选在135mM至158mM之间、更优选在135mM至157mM之间、更优选在135mM至156mM之间、更优选在135mM至155mM之间、更优选在135mM至154mM之间、更优选在135mM至153mM之间、更优选在135mM至152mM之间、最优选在140mM至185mM之间、最优选在140mM至184mM之间、最优选在140mM至183mM之间、最优选在140mM至182mM之间、最优选在140mM至181mM之间、最优选在140mM至180mM之间、最优选在140mM至179mM之间、最优选在140mM至178mM之间、最优选在140mM至177mM之间、最优选在140mM至176mM之间、最优选在140mM至175mM之间、最优选在140mM至174mM之间、最优选在140mM至173mM之间、最优选在140mM至172mM之间、最优选在140mM至171mM之间、最优选在140mM至170mM之间、最优选在140mM至169mM之间、最优选在140mM至168mM之间、最优选在140mM至167mM之间、最优选在140mM至166mM之间、最优选在140mM至165mM之间、最优选在140mM至160mM之间、最优选在140mM至159mM之间、最优选在140mM至158mM之间、最优选在140mM至157mM之间、最优选在140mM至156mM之间、最优选在140mM至155mM之间、最优选在140mM至154mM之间、最优选在140mM至153mM之间、并且最优选在140mM至152mM之间;和/或
小于190mM、189mM、188mM、187mM、186mM、185mM、184mM、183mM、182mM、181mM、180mM、179mM、178mM、177mM、176mM、175mM、174mM、173mM、172mM、171mM、170mM、169mM、168mM、167mM、166mM、165mM、160mM、159mM、158mM、157mM、156mM、155mM、154mM、153mM、152mM、优选小于185mM、更优选小于170mM、甚至更优选小于160mM、最优选小于155mM,和最优选为152mM且小于152mM。
在第二方面的第十二实施方式中,其也是第二方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十和第十一个实施方式中的任一个,或第一方面的任一实施方式中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,具有下述的可溶性表达水平,其定义为多肽的可溶性表达水平与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,的可溶性表达水平的比:
至少1.04至1.80,优选至少1.07至1.80,优选至少1.10至1.80,优选至少1.31至1.80,优选至少1.33至1.80、优选至少1.36至1.80、优选至少1.38至1.80、优选至少1.43至1.80、更优选至少1.04至1.75、更优选至少1.07至1.75、更优选至少1.10至1.75、更优选至少1.31至1.75、更优选至少1.33至1.75、更优选至少1.36至1.75、更优选至少1.38至1.75、更优选至少1.43至1.75、更优选至少1.47至1.75、更优选至少1.62至1.75、甚至更优选至少1.04至1.70、甚至更优选至少1.07至1.70、甚至更优选至少1.10至1.70、甚至更优选至少1.31至1.70、甚至更优选至少1.33至1.70、甚至更优选至少1.36至1.70、甚至更优选至少1.38至1.70、甚至更优选至少1.43至1.70、甚至更优选至少1.47至1.70、甚至更优选至少1.62至1.70、甚至更优选至少1.04至1.65、甚至更优选至少1.07至1.65、甚至更优选至少1.10至1.65、甚至更优选至少1.31至1.65、甚至更优选至少1.33至1.65、甚至更优选至少1.36至1.65、甚至更优选至少1.38至1.65、甚至更优选至少1.43至1.65、甚至更优选至少1.47至1.65、甚至更优选至少1.62至1.65,并且最优选至少1.10至1.63、至少1.38至1.63、至少1.43至1.63、和/或1.63。
在第二方面的另一个实施方式中,其也是第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十和第十一中的任一个或第二方面的任何其他实施方式或第一方面的任一实施方式中的实施方式,与SEQ ID NO:1相比,多肽,优选葡萄糖异构酶,具有下列的以葡萄糖形成表达的将果糖转化为葡萄糖的多肽,优选葡萄糖异构酶,的增强的催化活性:
至少1.2倍至5倍、至少1.2倍至4.5倍、至少1.2倍至4倍、至少1.2倍至3.5倍、至少1.2倍至3.4倍、至少1.2倍至3.3倍、至少1.2倍至3.2倍、至少1.2倍至3.1倍、至少1.2倍至3倍、至少1.2倍至2.9倍、至少1.2倍至2.8倍、至少1.2倍至2.7倍、至少1.2倍至2.6倍、至少1.2倍至2.5倍、至少1.2倍至2.4倍、至少1.2倍至2.3倍、至少1.2倍至2.2倍、优选至少1.5倍至5倍、至少1.5倍至4.5倍、至少1.5倍至4倍、至少1.5倍至3.5倍、至少1.5倍至3.4倍、至少1.5倍至3.3倍、至少1.5倍至3.2倍、至少1.5倍至3.1倍、至少1.5倍至3倍、至少1.5倍至2.9倍、至少1.5倍至2.8倍、至少1.5倍至2.7倍、至少1.5倍至2.6倍、至少1.5倍至2.5倍、至少1.5倍至2.4倍、至少1.5倍至2.3倍、至少1.5倍至2.2倍、更优选至少1.9倍至5倍、至少1.9倍至4.5倍、至少1.9倍至4倍、至少1.9倍至3.5倍、至少1.9倍至3.4倍、至少1.9至3.3倍、至少1.9倍至3.2倍、至少1.9倍至3.1倍、至少1.9倍至3倍、至少1.9倍至2.9倍、至少1.9倍至2.8倍、至少1.9倍至2.7倍、至少1.9倍至2.6倍、至少1.9倍至2.5倍、至少1.9倍至2.4倍、至少是1.9倍至2.3倍、至少1.9倍至2.2倍,更优选至少2.0倍至5倍、至少2.0倍至4.5倍、至少2.0倍至4倍、至少2.0倍至3.5倍、至少2.0倍至3.4倍、至少2.0倍至3.3倍、至少2.0倍至3.2倍、至少2.0倍至3.1倍、至少2.0倍至3倍、至少2.0倍至2.9倍、至少2.0倍至2.8倍、至少2.0倍至2.7倍、至少2.0倍至2.6倍、至少2.0倍至2.5倍、至少2.0倍至2.4倍、至少2.0倍至2.3倍、至少2.0倍至2.2倍,最优选至少2.2倍至3.3倍。
在第二方面的第十三实施方式中,其也是第二方面的第八、第九、第十、第十一和第十二实施方式中任一项的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,是第11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96和97实施方式或第一方面的任何其他实施方式中的任一个,优选地,多肽,优选葡萄糖异构酶是第一方面的第23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96和97实施方式中的任一个,更优选地,多肽,优选葡萄糖异构酶,是第一方面的第28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96和97实施方式中的任一个,甚至更优选地,多肽,优选葡萄糖异构酶,是第一方面的第39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96和97实施方式中的任一个,最优选地,多肽,优选葡萄糖异构酶,是第一方面的第63和97中的任一个,或多肽,优选葡萄糖异构酶,是第104、105、106、107、109、110、111、112、113、114、116、117、118、119、121、122、123、124、126、127、128、129、130、132、133、134和135实施方式中的任一个或第一方面的任一其他实施方式中的。
在第三方面中,其也是第三方面的第一实施方式,通过第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143和144实施方式中的任一个或第一方面的任何其他实施方式中的多肽,优选葡萄糖异构酶,第二方面的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13实施方式中的任一个的多肽,优选葡萄糖异构酶,优选地,第11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96和97实施方式或第一方面的任何其他实施方式中的多肽,优选葡萄糖异构酶,优选地,第一方面的第23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96和97实施方式中的任一个的多肽,优选葡萄糖异构酶,更优选地,第一方面的第28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96和97实施方式中的任一个中的多肽,优选葡萄糖异构酶,甚至更优选地,第一方面的第39、40、41、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96和97实施方式中的任一个中的多肽,优选葡萄糖异构酶,且最优选地,第一方面的第63和97实施方式中的任一个的多肽,优选葡萄糖异构酶,或其中多肽,优选葡萄糖异构酶,是第104、105、106、107、109、110、111、112、113、114、116、117、118、119、121、122、123、124、126、127、128、129、130、132、133、134和135实施方式中的任一个,或第一方面的其他实施方式中的任一个,其中与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,相比,该多肽,优选葡萄糖异构酶的特征在于:
至少为1.1倍至3.0倍、优选至少1.4倍至3.0倍、优选为至少1.5倍至3.0倍、更优选至少1.6倍至3.0倍、优选至少1.7倍至3.0倍、优选至少1.8倍至3.0倍、优选至少1.9倍至3.0倍、优选至少2.0倍至3.0倍、更优选至少1.4倍至2.8倍、更优选至少1.5倍至2.8倍、更优选至少1.6倍至2.8倍、更优选至少1.7倍至2.8倍、更优选至少1.8倍至2.8倍、更优选至少1.9倍至2.8倍、更优选至少2.0倍至2.8倍、甚至更优选至少1.4倍至2.6倍、甚至更优选至少1.5倍至2.6倍、更优选至少1.6倍至2.6倍、更优选至少1.7倍至2.6倍、更优选至少1.8倍至2.6倍、更优选至少1.9倍至2.6倍、更优选至少2.0倍至2.6倍、最优选至少1.4倍至2.4倍、最优选至少1.5倍至2.4倍、最优选至少1.6倍至2.4倍、最优选至少1.7倍至2.4倍、最优选至少1.8倍至2.4倍、最优选至少1.9倍至2.4倍、最优选至少2.0倍至2.4倍,并且最优选至少1.7倍至2.4倍的在50mM果糖浓度下将果糖转化为葡萄糖的增强的活性,优选增强的活性Activity;和/或
至少1.2倍至3.0倍、优选至少1.3倍至3.0倍、优选至少1.4倍至3.0倍、优选至少1.5倍至3.0倍、更优选至少1.6倍至3.0倍、优选至少1.7倍至3.0倍、优选至少1.8倍至3.0倍、优选至少1.9倍至3.0倍、优选至少2.0倍至3.0倍、更优选至少1.3倍至2.5倍、更优选至少1.4倍至2.5倍、更优选至少1.5倍至2.5倍、更优选至少1.6倍至2.5倍、更优选至少1.7倍至2.5倍、更优选至少1.8至2.5倍、更优选至少1.9至2.5倍、更优选至少2.0至2.5倍、更优选至少1.3倍至2.2倍、甚至更优选至少1.4倍至2.2倍、甚至更优选至少1.5倍至2.2倍、更优选至少1.6倍至2.2倍、更优选至少1.7倍至2.2倍、更优选至少1.8倍至2.2倍、更优选至少1.9倍至2.2倍、更多优选至少2.0倍至2.2倍,并且最优选至少1.5倍至2.2倍的在200mM果糖浓度下将果糖转化为葡萄糖的增强的活性,优选增强的活性Activity;和/或;
以74℃的温度下温育多肽,优选葡萄糖异构酶,15分钟后的残留活性表达的热稳定性的提高、其中这样的残留活性是至少30%至100%、至少31%至100%、至少32%至100%、至少33%至100%、至少34%至100%、至少35%至100%、至少36%至100%、至少37%至100%、至少38%至100%、至少39%至100%、至少40%至100%、至少41%至100%、至少42%至100%、至少43%至100%、至少44%至100%、至少45%至100%、至少46%至100%、至少47%至100%、至少48%至100%、至少49%至100%、至少50%至100%、至少51%至100%、至少52%至100%、至少53%至100%、至少54%至100%、至少55%至100%、至少56%至100%、至少57%至100%、至少58%至100%、至少59%至100%、至少60%至100%、至少61%至100%、至少62%至100%、至少63%至100%、至少64%至100%、至少65%至100%、至少66%至100%、至少67%至100%、至少68%至100%、至少69%至100%、至少70%至100%、至少71%%至100%、至少72%至100%、至少73%至100%、至少74%至100%、至少75%至100%、至少76%至100%、至少77%至100%、至少78%至100%、至少79%至100%、至少80%至100%、至少30%至75%、至少31%至75%、至少32%至75%、至少33%至75%、至少34%至75%、至少35%至75%、至少36%至75%、至少37%至75%、至少38%至75%、至少39%至75%、至少40%至75%、至少41%至75%、至少42%至75%、至少43%至75%、至少44%至75%、至少45%至75%、至少46%至75%、至少47%至75%、至少48%至75%、至少49%至75%、至少50%至75%、至少51%至75%、至少52%至75%、至少53%至75%、至少54%至75%、至少55%至75%、至少56%至75%、至少57%至75%、至少58%至75%、至少59%至75%、至少60%至75%、至少61%至75%、至少62%至75%、至少30%至70%、至少31%至70%、至少32%至70%、至少33%至70%、至少34%至70%、至少35%至70%、至少36%至70%、至少37%至70%、至少38%至70%、至少39%至70%、至少40%至70%、至少41%至70%、至少42%至70%、至少43%至70%、至少44%至70%、至少45%至70%、至少46%至70%、至少47%至70%、至少48%至70%、至少49%至70%、至少50%至70%、至少51%至70%、至少52%至70%、至少53%至70%、至少54%至70%、至少55%%至70%、至少56%至70%、至少57%至70%、至少58%至70%、至少59%至70%、至少60%至70%、至少61%至70%、至少62%至70%、至少30%至65%、至少31%至65%、至少32%至65%、至少33%至65%、至少34%至65%、至少35%至65%、至少36%至65%、至少37%至65%、至少38%至65%、至少39%至65%、至少40%至65%、至少41%至65%、至少42%至65%、至少43%至65%、至少44%至65%、至少45%至65%、至少46%至65%、至少47%至65%、至少48%至65%、至少49%至65%、至少50%至65%、至少51%至65%、至少52%至65%、至少53%至65%、至少54%至65%、至少55%至65%、至少56%至65%、至少57%至65%、至少58%至65%、至少59%至65%、至少60%至65%、至少61%至65%、至少62%至65%、更优选至少30%至65%、至少34%至65%、至少35%至65%、至少38%至65%、至少40%至65%、至少41%至65%、至少42%至65%、至少46%至65%、至少47%至65%、至少50%至65%、至少55%到65%、至少59%到65%、至少60%到65%、至少62%到65%,甚至更优选至少40%到65%、甚至更优选至少60%至65%,最优选62%;和/或
KM值在50mM至190mM之间、50mM至189mM、50mM至188mM、50mM至187mM、50mM至186mM、50mM至185mM、优选在50mM至184mM之间、优选在50mM至183mM之间、优选在50mM至182mM之间、优选在50mM至181mM之间、优选在50mM至180mM之间、优选在50mM至179mM之间、优选在50mM至178mM之间、优选在50mM至177mM之间、优选在50mM至176mM之间、优选在50mM至175mM之间、优选在50mM至174mM之间、优选在50mM至173mM之间、优选在50mM至172mM之间、优选在50mM至171mM之间、优选在50mM至170mM之间、优选在50mM至169mM之间、优选在50mM至168mM之间、优选在50mM至167mM之间、优选在50mM至166mM之间、优选在50mM至165mM之间、优选在50mM至160mM之间、优选在50mM至159mM之间、优选在50mM至158mM之间、优选在50mM至157mM之间、优选在50mM至156mM之间、优选在50mM至155mM之间、优选在50mM至154mM之间、优选在50mM至153mM之间、优选在50mM至152mM之间、75mM至190mM、75mM至189mM、75mM至188mM、75mM至187mM、75mM至186mM、75mM至185、优选在75mM至184mM之间、优选在75mM至183mM之间、优选在75mM至182mM之间、优选在75mM至181mM之间、优选在75mM至180mM之间、优选在75mM至179mM之间、优选在75mM至178mM之间、优选在75mM至177mM之间、优选在75mM至176mM之间、优选在75mM至175mM之间、优选在75mM至174mM之间、优选在75mM至173mM之间、优选在75mM至172mM之间、优选在75mM至171mM之间、优选在75mM至170mM之间、优选在75mM至169mM之间、优选在75mM至168mM之间、优选在75mM至167mM之间、优选在75mM至166mM之间、优选在75mM至165mM之间、优选在75mM至160mM之间、优选在75mM至159mM之间、优选在75mM至158mM之间、优选在75mM至157mM之间、优选在75mM至156mM之间、优选在75mM至155mM之间、优选在75mM至154mM之间、优选在75mM至153mM之间、优选在75mM至152mM之间、100mM至190mM、100mM至189mM、100mM至188mM、100mM至187mM、100mM至186mM、100mM至185mM、优选在100mM至184mM之间、优选在100mM至183mM之间、优选在100mM至182mM之间、优选在100mM至181mM之间、优选在100mM至180mM之间、优选在100mM至179mM、优选地在100mM至178mM之间、优选地在100mM至177mM之间、优选地在100mM至176mM之间、优选地在100mM至1100mM之间、优选地在100mM至174mM之间、优选地在100mM至173mM之间、优选地在100mM至172mM之间、优选地在100mM至171mM之间、优选在100mM至170mM之间、优选在100mM至169mM之间、优选在100mM至168mM之间、优选在100mM至167mM之间、优选在100mM至166mM之间、优选在100mM至165mM之间、优选在100mM至160mM之间、优选在100mM至159mM之间、优选在100mM至158mM之间、优选在100mM至157mM之间、优选在100mM至156mM之间、优选在100mM至155mM之间、优选在100mM至154mM之间、优选在100mM至153mM之间、优选在100mM至152mM之间、115mM至190mM、115mM至189mM、115mM至188mM、115mM至187mM、115mM至186mM、115mM至185mM、优选在115mM至184mM之间、优选在115mM至183mM之间、优选在115mM至182mM之间、优选在115mM至181mM之间、优选在115mM至180mM之间、优选在115mM至179mM之间、优选在115mM至178mM之间、优选在115mM至177mM之间、优选在115mM至176mM之间、优选在115mM至175mM之间、优选在115mM至174mM之间、优选在115mM至173mM之间、优选在115mM至172mM之间、优选在115mM至171mM之间、优选在115mM至170mM之间、优选在115mM至169mM之间、优选在115mM至168mM之间、优选在115mM至167mM之间、优选在115mM至166mM之间、优选在115mM至165mM之间、优选在115mM至160mM之间、优选在115mM至159mM之间、优选在115mM至158mM之间、优选在115mM至157mM之间、优选在115mM至156mM之间、优选在115mM至155mM之间、优选在115mM至154mM之间、优选在115mM至153mM之间、优选在115mM至152mM之间、130mM至185mM、优选在130mM至184mM之间、优选在130mM至183mM之间、优选在130mM至182mM之间、优选在130mM至181mM之间、优选在130mM至180mM之间、优选在130mM至179mM之间、优选在130mM至178mM之间、优选在130mM至177mM之间、优选在130mM至176mM之间、优选在130mM至175mM之间、优选在130mM至174mM之间、优选在130mM至173mM之间、优选在130mM至172mM之间、优选在130mM至171mM之间、优选在130mM至170mM之间、优选在130mM至169mM之间、优选在130mM至168mM之间、优选在130mM至167mM之间、优选在130mM至166mM之间、优选在130mM至165mM之间、优选在130mM至160mM之间、优选在130mM至159mM之间、优选在130mM至158mM之间、优选在130mM至157mM之间、优选在130mM至156mM之间、优选在130mM至155mM之间、优选在130mM至154mM之间、优选在130mM至153mM之间、优选在130mM至152mM之间、更优选在135mM至185mM之间、更优选在135mM至184mM之间、更优选在135mM至183mM之间、更优选在135mM至182mM之间、更优选在135mM至181mM之间、更优选在135mM至180mM之间、更优选在135mM至179mM之间、更优选在135mM至178mM之间、更优选在135mM至177mM之间、更优选在135mM至176mM之间、更优选在135mM至175mM之间、更优选在135mM至174mM之间、更优选在135mM至173mM之间、更优选在135mM至172mM之间、更优选在135mM至171mM之间、更优选在135mM至170mM之间、更优选在135mM至169mM之间、更优选在135mM至168mM之间、更优选在135mM至167mM之间、更优选在135mM至166mM之间、更优选在135mM至165mM之间、更优选在135mM至160mM之间、更优选在135mM至159mM之间、更优选在135mM至158mM之间、更优选在135mM至157mM之间、更优选在135mM至156mM之间、更优选在135mM之间至155mM之间、更优选在135mM至154mM之间、更优选在135mM至153mM之间、更优选在135mM之间至152mM,最优选在140mM至185mM之间、最优选在140mM至184mM之间、最优选在140mM至183mM之间、最优选在140mM至182mM之间、最优选在140mM至181mM之间、最优选在140mM至180mM之间、最优选在140mM至179mM之间、最优选在140mM至178mM之间、最优选在140mM至177mM之间、最优选在140mM至176mM之间、最优选在140mM至175mM之间、最优选在140mM至174mM之间、最优选在140mM至173mM之间、最优选在140mM至172mM之间、最优选在140mM至171mM之间、最优选在140mM至170mM之间、最优选在140mM至169mM之间、最优选在140mM至168mM之间、最优选在140mM至167mM之间、最优选在140mM至166mM之间、最优选在140mM至165mM之间、最优选在140mM至160mM之间、最优选在140mM至159mM之间、最优选在140mM至158mM之间、优选在140mM至157mM之间、最优选在140mM至156mM之间、最优选在140mM至155mM之间、最优选在140mM至154mM之间,最优选在140mM至153mM之间、并且最优选在140mM至152mM之间;和/或小于190mM、189mM、188mM、187mM、186mM、185mM、184mM、183mM、182mM、181mM、180mM、179mM、178mM、177mM、176mM、175mM、174mM、173mM、172mM、171mM、170mM、169mM、168mM、167mM、166mM、165mM、160mM、159mM、158mM、157mM、156mM、155mM、154mM、153mM、152mM,优选小于185mM,更优选小于170mM,甚至更优选小于160mM,最优选小于155mM、并且最优选152mM且小于152mM;和/或
多肽,优选葡萄糖异构酶,的可溶性表达水平,其定义为多肽的可溶性表达水平与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,的可溶性表达水平的比,其至少1.04至1.80、优选至少1.07至1.80、优选至少1.10至1.80、优选至少1.31至1.80、优选至少1.33至1.80、优选至少1.36至1.80、优选至少1.38至1.80、优选至少1.43至1.80、更优选至少1.04至1.75、更优选至少1.07至1.75、更优选至少1.10至1.75、更优选至少1.31至1.75、更优选至少1.33至1.75、更优选至少1.36至1.75、更优选至少1.38至1.75、更优选至少1.43至1.75、更优选至少1.47至1.75、更优选至少1.62至1.75、甚至更优选至少1.04至1.70、甚至更优选至少1.07至1.70、甚至更优选至少1.10至1.70、甚至更优选至少1.31至1.70、甚至更优选至少1.33至1.70、甚至更优选至少1.36至1.70、甚至更优选至少1.38至1.70、甚至更优选至少1.43至1.70、甚至更优选至少1.47至1.70、甚至更优选至少1.62至1.70、甚至更优选至少1.04至1.65、甚至更优选至少1.07至1.65、甚至更优选至少1.10至1.65、甚至更优选至少1.31至1.65、甚至更优选至少1.33至1.65、甚至更优选至少1.36至1.65、甚至更优选至少1.38至1.65、甚至更优选至少1.43至1.65、甚至更优选至少1.47至1.65、甚至更优选至少1.62至1.65,最优选至少1.10至1.63、至少1.38至1.63、至少1.43至1.63,和/或1.63;和/或
与SEQ ID NO:1相比,多肽,优选葡萄糖异构酶,的以葡萄糖形成表达的将果糖转化为葡萄糖的增强的催化活性,其是至少1.2倍至5倍、至少1.2倍至4.5倍、至少1.2倍至4倍、至少1.2倍至3.5倍、至少1.2倍至3.4倍、至少1.2倍至3.3倍、至少1.2倍至3.2倍、至少1.2倍至3.1倍、至少1.2倍至3倍、至少1.2倍至2.9倍、至少1.2倍至2.8倍、至少1.2倍至2.7倍、至少1.2倍至2.6倍、至少1.2倍至2.5倍、至少1.2倍至2.4倍、至少1.2倍至2.3倍、至少1.2倍至2.2倍、优选至少1.5倍至5倍、至少1.5倍至4.5倍、至少1.5倍至4倍、至少1.5倍至3.5倍、至少1.5倍至3.4倍、至少1.5倍至3.3倍、至少1.5倍至3.2倍、至少1.5倍至3.1倍、至少1.5倍至3倍、至少1.5倍至2.9倍、至少1.5倍至2.8倍、至少1.5倍至2.7倍、至少1.5倍至2.6倍、至少1.5倍至2.5倍、至少1.5倍至2.4倍、至少1.5倍至2.3倍、至少1.5倍至2.2倍、更优选至少1.9倍至5倍、至少1.9倍至4.5倍、至少1.9倍至4倍、至少1.9倍至3.5倍、至少1.9倍至3.4倍、至少1.9倍至3.3倍、至少1.9倍至3.2倍、至少1.9倍至3.1倍、至少1.9倍至3倍、至少1.9倍至2.9倍、至少1.9倍至2.8倍、至少1.9倍至2.7倍、至少1.9倍至2.6倍、至少1.9倍至2.5倍、至少1.9倍至2.4倍、至少是1.9倍至2.3倍、至少1.9倍至2.2倍、更优选至少2.0倍至5倍、至少2.0倍至4.5倍、至少2.0倍至4倍、至少2.0倍至3.5倍、至少2.0倍至3.4倍、至少2.0倍至3.3倍、至少2.0倍至3.2倍、至少2.0倍至3.1倍、至少2.0倍至3倍、至少2.0倍至2.9倍、至少2.0倍至2.8倍、至少2.0倍至2.7倍、至少2.0倍至2.6倍、至少2.0倍至2.5倍、至少2.0倍至2.4倍、至少2.0倍至2.3倍、至少2.0倍至2.2倍,最优选至少2.2倍至3.3倍。
在第四方面中,其也是第四方面的第一实施方式或第一、第二或第三方面的实施方式中的任一个,通过包含氨基酸序列的多肽,优选葡萄糖异构酶,解决了本发明的问题,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列与SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有至少95%的同一性和/或至少95%的同源性,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,具有选自由(A)、(B)、(C)、(D)、(E)和(F)或其任意组合组成的组的至少一个特征,其中特征
(A)是与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,相比,用于在50mM果糖浓度下将果糖转化为葡萄糖的增强的活性,优选增强的活性Activity,其是
(i)至少1.1倍至1.6倍、优选至少1.2倍至1.6倍、更优选至少1.3倍至1.6倍、最优选至少1.4倍高达1.6倍,或
(ii)至少1.1倍至3.0倍、优选至少1.4倍至3.0倍、优选至少1.5倍至3.0倍、更优选至少1.6倍至3.0倍、优选至少1.7倍至3.0倍、优选至少1.8倍至3.0倍、优选至少1.9倍至3.0倍、优选至少2.0倍至3.0倍、更优选至少1.4倍至2.8倍、更优选至少1.5倍至2.8倍、更优选至少1.6倍至2.8倍、更优选至少1.7倍至2.8倍、更优选至少1.8倍至2.8倍、更优选至少1.9倍至2.8倍、更优选至少2.0倍至2.8倍、甚至更优选至少1.4倍至2.6倍、甚至更优选至少1.5倍至2.6倍、更优选至少1.6倍至2.6倍、更优选至少1.7倍至2.6倍、更优选至少1.8倍至2.6倍、更优选至少1.9倍至2.6倍、更优选至少2.0倍至2.6倍、最优选至少1.4倍至2.4倍、最优选至少1.5倍至2.4倍、最优选至少1.6倍至2.4倍、最优选至少1.7倍至2.4倍、最优选至少1.8倍至2.4倍、最优选至少1.9倍至2.4倍,最优选至少2.0倍至2.4倍,最优选至少1.7倍至2.4倍-折;
(B)是与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,相比,用于在200mM果糖浓度下将果糖转化为葡萄糖的增强的活性,优选增强的活性Activity,其是
(i)至少1.2倍至1.6倍,更优选至少1.3倍至1.6倍,最优选至少1.4倍至1.6倍,和/或
(ii)至少1.2倍至3.0倍、优选至少1.3倍至3.0倍、优选至少1.4倍至3.0倍、优选至少1.5倍至3.0倍、更优选至少1.6倍至3.0倍、优选至少1.7倍至3.0倍、优选至少1.8倍至3.0倍、优选至少1.9倍至3.0倍、优选至少2.0倍至3.0倍、更优选至少1.3倍至2.5倍、更优选至少1.4倍至2.5倍、更优选至少1.5倍至2.5倍、更优选至少1.6倍至2.5倍、更优选至少1.7倍至2.5倍、更优选至少1.8倍至2.5倍、更优选至少1.9倍至2.5倍、更优选至少2.0倍至2.5倍、甚至更优选至少1.3倍至2.2倍、甚至更优选至少1.4倍至2.2倍、甚至更优选至少1.5倍至2.2倍、更优选至少1.6倍至2.2倍、更优选至少1.7倍至2.2倍、更优选至少1.8倍至2.2倍、更优选至少1.9倍至2.2倍、更优选至少2.0倍至2.2倍,并且最优选至少1.5倍至2.2倍;
(C)是多肽,优选葡萄糖异构酶,的热稳定性,热稳定性以74℃温度下温育多肽,优选葡萄糖异构酶,15分钟后的残留活性来表达,其中残留活性是(i)至少30%至100%、至少40%至100%、至少50%至100%、至少30%至75%、至少40%至75%、至少50%至75%、至少30%至65%、至少40%至65%、至少50%至65%、至少41%至64%,和/或
(ii)至少30%至100%、至少31%至100%、至少32%至100%、至少33%至100%、至少34%至100%、至少35%至100%、至少36%至100%、至少37%至100%、至少38%至100%、至少39%至100%、至少40%至100%、至少41%至100%、至少42%至100%、至少43%至100%、至少44%至100%、至少45%至100%、至少46%至100%、至少47%至100%、至少48%至100%、至少49%至100%、至少50%至100%、至少51%至100%、至少52%到100%、至少53%到100%、至少54%到100%、至少55%到100%、至少56%到100%、至少57%至100%、至少58%至100%、至少59%至100%、至少60%至100%、至少61%至100%、至少62%至100%、至少63%至100%、至少64%至100%、至少65%至100%、至少66%至100%、至少67%至100%、至少68%至100%、至少69%至100%、至少70%至100%、至少71%至100%、至少72%至100%、至少73%至100%、至少74%至100%、至少75%至100%、至少76%至100%、至少77%至100%、至少78%至100%、至少79%至100%、至少80%至100%、至少30%至75%、至少31%至75%、至少32%至75%、至少33%至75%、至少34%至75%、至少35%至75%、至少36%至75%、至少37%至75%、至少38%至75%、至少39%至75%、至少40%至75%、至少41%至75%、至少42%至75%、至少43%至75%、至少44%至75%、至少45%至75%、至少46%至75%、至少47%至75%、至少48%至75%、至少49%至75%、至少50%至75%、至少51%至75%、至少52%至75%、至少53%至75%、至少54%至75%、至少55%至75%、至少56%75%、至少57%至75%、至少58%至75%、至少59%至75%、至少60%至75%、至少61%至75%、至少62%至75%、至少30%至70%、至少31%至70%、至少32%至70%、至少33%至70%、至少34%至70%、至少35%至70%、至少36%至70%、至少37%至70%、至少38%到70%、至少39%到70%、至少40%至70%、至少41%至70%、至少42%至70%、至少43%至70%、至少44%至70%、至少45%至70%、至少46%至70%、至少47%至70%、至少48%至70%、至少49%至70%、至少50%至70%、至少51%至70%、至少52%至70%、至少53%至70%、至少54%至70%、至少55%至70%、至少56%至70%、至少57%至70%、至少58%至70%、至少59%至70%、至少60%至70%、至少61%至70%、至少62%至至70%、至少30%至65%、至少31%至65%、至少32%至65%、至少33%至65%、至少34%至65%、至少35%至65%、至少36%至65%、至少37%至65%、至少38%至65%、至少39%至65%、至少40%至65%、至少41%至65%、至少42%至65%、至少43%至65%、至少44%至65%、至少45%至65%、至少46%至65%、至少47%至65%、至少48%至65%、至少49%至65%、至少50%至65%、至少51%至65%、至少52%至65%、至少53%至65%、至少54%至65%、至少55%至65%、至少56%至65%、至少57%至65%、至少58%至65%、至少59%至65%、至少60%至65%、至少61%至65%、至少62%至65%、更优选至少30%至65%、至少34%至65%、至少35%至65%、至少38%至65%、至少40%至65%、至少41%至65%、至少42%至65%、在至少46%至65%、至少47%至65%、至少50%至65%、至少55%至65%、至少59%至65%、至少60%至65%、至少62%至65%、甚至更优选至少至少40%至65%、甚至更优选至少60%至65%,最优选62%;
(D)是KM值
(i)100mM至190mM、优选130mM至190mM、优选160mM至190mM、更优选170mM至185mM、最优选175mM至180mM;至/或
(ii)50mM至190mM、50mM至189mM、50mM至188mM、50mM至187mM、50mM至186mM、50mM至185mM、优选50mM至184mM、优选50mM至183mM、优选50mM至182mM、优选50mM至181mM、优选在50mM至180mM之间、优选在50mM至179mM之间、优选在50mM至178mM之间、优选在50mM至177mM之间、优选在50mM至176mM之间、优选在50mM至175mM之间、优选在50mM至174mM之间、优选在50mM至173mM之间、优选在50mM至172mM之间、优选在50mM至171mM之间、优选在50mM至170mM之间、优选在50mM至169mM之间、优选在50mM至168mM之间、优选在50mM至167mM之间、优选在50mM至166mM之间、优选在50mM至165mM之间、优选在50mM至160mM之间、优选在50mM至159mM之间、优选在50mM至158mM之间、优选在50mM至157mM之间、优选在50mM至156mM之间、在50mM至155mM之间、优选在50mM至154mM之间、优选在50mM至153mM之间、优选在50mM至152mM之间、75mM至190mM、75mM至189mM、75mM至188mM、75mM至187mM、75mM至186mM、75mM至185mM之间、75mM至184mM、优选在75mM至183mM之间、优选在75mM至182mM之间、优选在75mM至181mM之间、优选在75mM至180mM之间、优选在75mM至179mM之间、优选在75mM至178mM之间、优选在75mM至177mM之间、优选在75mM至176mM之间、优选在75mM至175mM之间、优选在75mM至174mM之间、优选在75mM至173mM之间、优选在75mM至172mM之间、优选在75mM至171mM之间、优选在75mM至170mM之间、优选在75mM至169mM之间、优选在75mM至168mM之间、优选在75mM至167mM之间、优选在75mM至166mM之间、优选在75mM至165mM之间、优选在75mM至160mM之间、优选在75mM至159mM之间、优选在75mM至158mM之间、优选在75mM至157mM之间、优选在75mM至156mM之间、优选在75mM至155mM之间、优选在75mM至154mM之间、优选在75mM至153mM之间、优选在75mM至152mM之间、在100mM至190mM之间、在100mM至189mM之间、100mM至188mM、100mM至187mM、100mM至186mM、100mM至185mM、优选在100mM至184mM之间、优选在100mM至183mM之间、优选在100mM至182mM之间、优选在100mM至181mM之间、优选在100mM至180mM之间、优选在100mM至179mM、优选地在100mM至178mM之间、优选地在100mM至177mM之间、优选地在100mM至176mM之间、优选地在100mM至1100mM之间、优选地在100mM至174mM之间、优选地在100mM至173mM之间、优选地在100mM至172mM之间、优选地在100mM至171mM之间、优选在100mM至170mM之间、优选在100mM至169mM之间、优选在100mM至168mM之间、优选在100mM至167mM之间、优选在100mM至166mM之间、优选在100mM至165mM之间、优选在100mM至160mM之间、优选在100mM至159mM之间、优选在100mM至158mM之间、优选在100mM至157mM之间、优选在100mM至156mM之间、优选在100mM至155mM之间、优选在100mM至154mM之间、优选在100mM至153mM之间、优选在100mM至152mM之间、115mM至190mM、115mM至189mM、115mM至188mM、115mM至187mM、115mM至186mM、115mM至185mM、优选在115mM至184mM之间、优选在115mM至183mM之间、优选在115mM至182mM之间、优选在115mM至181mM之间、优选在115mM至180mM之间、优选在115mM至179mM之间、优选在115mM至178mM之间、优选在115mM至177mM之间、优选在115mM至176mM之间、优选地在115mM至175mM之间、优选地在115mM至174mM之间、优选地在115mM至173mM之间、优选地在115mM至172mM之间、优选地在115mM至171mM之间、优选地在115mM至170mM之间、优选地在115mM至169mM之间、优选地在115mM至168mM之间、优选在115mM至167mM之间、优选在115mM至166mM之间、优选在115mM至165mM之间、优选在115mM至160mM之间、优选在115mM至159mM之间、优选在115mM至158mM之间、优选在115mM至157mM之间、优选在115mM至156mM之间、优选在115mM至155mM之间、优选在115mM至154mM之间、优选在115mM至153mM之间、优选在115mM至152mM之间、130mM至185mM之间、优选在130mM至184mM之间、优选在130mM至183mM之间、优选在130mM至182mM之间、优选在130mM至181mM之间、优选在130mM至180mM之间、优选在130mM至179mM之间、优选在130mM至178mM之间、优选在130mM至177mM之间、优选在130mM至176mM之间、优选在130mM至175mM之间、优选在130mM至174mM之间、优选在130mM至173mM之间、优选在130mM至172mM之间、优选在130mM至171mM之间、优选在130mM至170mM之间、优选在130mM至169mM之间、优选在130mM至168mM之间、优选在130mM至167mM之间、优选在130mM至166mM之间、优选在130mM至165mM之间、优选在130mM至160mM之间、优选在130mM至159mM之间、优选在130mM至158mM之间、优选在130mM至157mM之间、优选在130mM至156mM之间、优选在130mM至155mM之间、优选在130mM至154mM之间、优选在130mM至153mM之间、优选在130mM至152mM之间、更优选在135mM至185mM之间、更优选在135mM至184mM之间、更优选在135mM至183mM之间、更优选在135mM至182mM之间、更优选在135mM至181mM之间、更优选在135mM至180mM之间、更优选在135mM至179mM之间、更优选在135mM至178mM之间、更优选在135mM至177mM之间、更优选在135mM至176mM之间、更优选在135mM至175mM之间、更优选在135mM至174mM之间、更优选在135mM至173mM之间、更优选在135mM至172mM之间、更优选在135mM至171mM之间、更优选在135mM至170mM之间、更优选在135mM至169mM之间、更优选在135mM至168mM之间、更优选在135mM至167mM之间、更优选为135mM至166mM之间、更优选为135mM至165mM之间、更优选为135mM至160mM之间、更优选在135mM至159mM之间、更优选在135mM至158mM之间、更优选在135mM至157mM之间、更优选在135mM至156mM之间、更优选在135mM至155mM之间、更优选在135mM至154mM之间、更优选在135mM至153mM之间、更优选在135mM至152mM之间、最优选在140mM至185mM之间、最优选在140mM至184mM之间、最优选在140mM至183mM之间、最优选在140mM至182mM之间、最优选在140mM至181mM之间、最优选在140mM至180mM之间、最优选在140mM至179mM之间、最优选在140mM至178mM之间、最优选在140mM至177mM之间、最优选在140mM至176mM之间、最优选在140mM至175mM之间、最优选在140mM至174mM之间、最优选在140mM至173mM之间、最优选优选在140mM至172mM之间、最优选在140mM至171mM之间、最优选在140mM至170mM之间、最优选在140mM至169mM之间、最优选在140mM至168mM之间、最优选在140mM至167mM之间、最优选在140mM至166mM之间、最优选在140mM至165mM之间、最优选在140mM至160mM之间、最优选在140mM至159mM之间、最优选在140mM至158mM之间、最优选在140mM至157mM之间、最优选在140mM至156mM之间、最优选在140mM至155mM之间、最优选在140mM至154mM之间、最优选在140mM至153mM之间,并且最优选在140mM至152mM之间;和/或
(iii)小于190mM、189mM、188mM、187mM、186mM、185mM、184mM、183mM、182mM、181mM、180mM、179mM、178mM、177mM、176mM、175mM、174mM、173mM、172mM、171mM、170mM、169mM、168mM、167mM、166mM、165mM、160mM、159mM、158mM、157mM、156mM、155mM、154mM、153mM、152mM,优选小于185mM、更优选小于170mM、甚至更优选小于160mM、最优选小于155mM、最优选152mM且小于152mM;
(E)是多肽,优选葡萄糖异构酶,的可溶性表达水平,其定义为多肽的可溶性表达水平与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,的可溶性表达水平的比:
(i)至少1.04至1.38、优选至少1.07至1.38、优选至少1.10至1.38、优选至少1.31至1.38、优选至少1.33至1.38、优选为至少1.36至1.38、更优选至少1.04至1.36、更优选至少1.07至1.36、更优选至少1.10至1.36、更优选至少1.31至1.36、更优选至少至少1.33至1.36,最优选为1.36;和或
(ii)至少1.04至1.80、优选至少1.07至1.80、优选至少1.10至1.80、优选至少1.31至1.80、优选至少1.33至1.80、优选为至少1.36至1.80、优选至少1.38至1.80、优选至少1.43至1.80、更优选至少1.04至1.75、更优选至少1.07至1.75、更优选至少1.10至1.75、更优选至少1.31至1.75、更优选至少1.33至1.75、更优选至少1.36至1.75、更优选至少1.38至1.75、更优选至少1.43至1.75、更优选至少1.47至1.75、更优选至少1.62至1.75、甚至更优选至少1.04至1.70、甚至更优选至少1.07至1.70、甚至更优选至少1.10至1.70、甚至更优选至少1.31至1.70、甚至更优选至少1.3 3至1.70、甚至更优选至少1.36至1.70、甚至更优选至少1.38至1.70、甚至更优选至少1.43至1.70、甚至更优选至少1.47至1.70、甚至更优选至少1.62至1.70、甚至更优选至少1.04至1.65、甚至更优选至少1.07至1.65、甚至更优选至少1.10至1.65、甚至更优选至少1.31至1.65、甚至更优选至少1.33至1.65、甚至更优选至少1.36至1.65、甚至更优选至少1.38至1.65、甚至更优选至少1.43至1.65、甚至更多优选至少1.47至1.65、甚至更优选至少1.62至1.65,并且最优选至少1.10至1.63、至少1.38至1.63、至少1.43至1.63,和/或1.63;和
(F)是与SEQ ID NO:1相比、多肽,优选葡萄糖异构酶,的以葡萄糖形成表达的将果糖转化为葡萄糖的增强的催化活性:
至少1.2倍至5倍、至少1.2倍至4.5倍、至少1.2倍至4倍、至少1.2倍至3.5倍、至少1.2倍至3.4倍、至少1.2倍至3.3倍、至少1.2倍至3.2倍、至少1.2倍至3.1倍、至少1.2倍至3倍、至少1.2倍至2.9倍、至少1.2倍至2.8倍、至少1.2倍至2.7倍、至少1.2倍至2.6倍、至少1.2倍至2.5倍、至少1.2倍至2.4倍、至少1.2倍至2.3倍、至少1.2倍至2.2倍、优选至少1.5倍至5倍、至少1.5倍至4.5倍、至少1.5倍至4倍、至少1.5倍至3.5倍、至少1.5倍至3.4倍、至少1.5倍至3.3倍、至少1.5倍至3.2倍、至少1.5倍至3.1倍、至少1.5倍至3倍、至少1.5倍至2.9倍、至少1.5倍至2.8倍、至少1.5倍至2.7倍、至少1.5倍至2.6倍、至少1.5倍至2.5倍、至少1.5倍至2.4倍、至少1.5倍至2.3倍、至少1.5倍至2.2倍、更优选至少1.9倍至5倍、至少1.9倍至4.5倍、至少1.9倍至4倍、至少1.9倍至3.5倍、至少1.9倍至3.4倍、至少1.9倍至3.3倍、至少1.9倍至3.2倍、至少1.9倍至3.1倍、至少1.9倍至3倍、至少1.9倍至2.9倍、至少1.9倍至2.8倍、至少1.9倍至2.7倍、至少1.9倍至2.6倍、至少1.9倍至2.5倍、至少1.9倍至2.4倍、至少是1.9倍至2.3倍、至少1.9倍至2.2倍、更优选至少2.0倍至5倍、至少2.0倍至4.5倍、至少2.0倍至4倍、至少2.0倍至3.5倍、至少2.0倍至3.4倍、至少2.0倍至3.3倍、至少2.0倍至3.2倍、至少2.0倍至3.1倍、至少2.0倍至3倍、至少2.0倍至2.9倍、至少2.0倍至2.8倍、至少2.0倍至2.7倍、至少2.0倍至2.6倍、至少2.0倍至2.5倍。至少2.0倍至2.4倍、至少2.0倍至2.3倍、至少2.0倍至2.2倍,最优选至少2.2倍至3.3倍。
在第四方面的第二实施方式中,其也是第四方面的第一实施方式中的实施方式,与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,相比,多肽,优选葡萄糖异构酶,具有下述的用于在50mM果糖浓度下将果糖转化为葡萄糖的增强的活性,优选增强的活性Activity:
至少1.1倍至1.6倍、优选至少1.2倍至1.6倍、更优选至少1.3倍至1.6倍、最优选至少1.4倍至1.6倍,或
至少1.1倍至3.0倍、优选至少1.4倍至3.0倍、优选至少1.5倍至3.0倍、更优选至少1.6倍至3.0倍、优选至少1.7倍至3.0倍、优选至少1.8倍至3.0倍、优选至少1.9倍至3.0倍、优选至少2.0倍至3.0倍、更优选至少1.4倍至2.8倍、更优选至少1.5倍至2.8倍、更优选至少1.6倍至2.8倍、更优选至少1.7倍至2.8倍、更优选至少1.8倍至2.8倍、更优选至少1.9倍至2.8倍、更优选至少2.0倍至2.8倍、甚至更优选至少1.4倍至2.6倍、甚至更优选至少1.5倍至2.6倍、更优选至少1.6倍至2.6倍、更优选至少1.7倍至2.6倍、更优选至少1.8倍至2.6倍、更优选至少1.9倍至2.6倍、更优选至少2.0倍至2.6倍、最优选至少1.4倍至2.4倍、最优选至少1.5倍至2.4倍、最优选至少1.6倍至2.4倍、最优选至少1.7倍至2.4倍、最优选至少1.8倍至2.4倍、最优选至少1.9倍至2.4倍、最优选至少2.0倍至2.4倍、最优选至少1.7倍至2.4倍。
在第四方面的第三实施方式中、其也是第四方面的第一实施方式和第二实施方式中的实施方式,与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,相比,多肽,优选葡萄糖异构酶,具有下述的用于在200mM果糖浓度下将果糖转化为葡萄糖的增强的活性,优选增强的活性Activity:
至少1.2倍至1.6倍、更优选至少1.3倍至1.6倍、最优选至少1.4倍至1.6倍,和/或
至少1.2倍至3.0倍、优选至少1.3倍至3.0倍、优选至少1.4倍至3.0倍、优选至少1.5倍至3.0倍、更优选至少1.6倍至3.0倍、优选至少1.7倍至3.0倍、优选至少1.8倍至3.0倍、优选至少1.9倍至3.0倍、优选至少2.0倍至3.0倍、更优选至少1.3倍至2.5倍、更优选至少1.4倍至2.5倍、更优选至少1.5倍至2.5倍、更优选至少1.6倍至2.5倍、更优选至少1.7倍至2.5倍、更优选至少1.8倍至2.5倍、更优选至少1.9倍至2.5倍、更优选至少2.0倍至2.5倍、甚至更优选至少1.3倍至2.2倍、甚至更优选至少1.4倍至2.2倍、甚至更优选至少1.5倍至2.2倍、更优选至少1.6倍至2.2倍、更优选至少1.7倍至2.2倍、更优选至少1.8倍至2.2倍、更优选至少1.9倍至2.2倍、更优选至少2.0倍至2.2倍,并且最优选至少1.5倍至2.2倍。
在第四方面的第四实施方式中、其也是第四方面的第一、第二和第三实施方式中的实施方式、该多肽,优选葡萄糖异构酶,具有以74℃的温度下温育多肽,优选葡萄糖异构酶,持续15分钟后的残留活性表达的热稳定性,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的残留活性为
至少30%至100%、至少40%至100%、至少50%至100%、至少30%至75%、至少40%至75%、至少50%至75%、至少30%至65%、至少40%至65%、至少50%至65%、至少41%至64%,和/或
至少30%至100%、至少31%至100%、至少32%至100%、至少33%至100%、至少34%至100%、至少35%至100%、至少36%至100%、至少37%至100%、至少38%至100%、至少39%至100%、至少40%至100%至少41%至100%、至少42%至100%、至少43%至100%、至少44%至100%、至少45%至100%、至少46%至100%、至少47%至100%、至少48%至100%、至少49%至100%、至少50%至100%、至少51%至100%、至少52%至100%、至少53%至100%、至少54%至100%、至少55%至100%、至少56%至100%、至少57%至100%、至少58%至100%、至少59%至100%、至少60%至100%、至少61%至100%、至少62%至100%、至少63%至100%、至少64%至100%、至少65%至100%、至少66%至100%、至少67%至100%、至少68%至100%、至少69%至100%、至少70%至100%、至少71%至100%、至少72%至100%、至少73%至100%、至少74%至100%、至少75%至100%、至少76%至100%、至少77%至100%、至少78%至100%、至少79%至100%、至少80%至100%、至少30%至75%、至少31%至75%、至少32%至75%、至少33%至75%、至少34%至75%、至少35%至75%、至少36%至75%、至少37%至75%、至少38%至75%、至少39%至75%、至少40%至75%、至少41%至75%、至少42%至75%、至少43%至75%、至少44%至75%、至少45%至75%、至少46%至75%、至少47%至75%、至少48%至75%、至少49%至75%、至少50%至75%、至少51%至75%、至少52%至75%、至少53%至75%、至少54%至75%、至少55%至75%、至少56%至75%、至少57%至75%、至少58%至75%、至少59%至75%、至少60%至75%、至少61%至75%、至少62%至75%、至少30%至70%、至少31%至70%、至少32%至70%、至少33%至70%、至少34%至70%、至少35%至70%、至少36%至70%、至少37%至70%、至少38%至70%、至少39%至70%、至少40%至70%、至少41%至70%、至少42%至70%、至少43%至70%、至少44%至70%、至少45%至70%、至少46%至70%、至少47%至70%、至少48%至70%、至少49%至70%、至少50%至70%、至少51%至70%、至少52%至70%、至少53%至70%、至少54%至70%、至少55%至70%、至少56%至70%、至少57%至70%、至少58%至70%、至少59%至70%、至少60%至70%、至少61%至70%、至少62%至70%、至少30%至65%、至少31%至65%、至少32%至65%、至少33%至65%、至少34%至65%、至少35%至65%、至少36%至65%、至少37%至65%、至少38%至65%、至少39%至65%、至少40%至65%、至少41%至65%、至少42%至65%、至少43%至65%、至少44%至65%、至少45%至65%、至少46%至65%、至少47%至65%、至少48%至65%、至少49%至65%、至少50%至65%、至少51%至65%、至少52%至65%、至少53%至至65%、至少54%至65%、至少55%至65%、至少56%至65%、至少57%至65%、至少58%至65%至少59%至65%、至少60%至65%、至少61%至65%、至少62%至65%、更优选至少30%至65%、至少34%至65%、至少35%至65%、至少38%至65%、至少40%至65%、至少41%至65%、至少42%至65%、至少46%至65%、至少47%至65%、至少50%至65%、至少55%至65%、至少59%至65%、至少60%至65%、至少62%至65%、甚至更优选至少40%至65%、甚至更优选至少60%至65%,最优选62%。
在第四方面的第五实施方式中,也是第四方面的第一、第二、第三和第四实施方式中的实施方式中,多肽,优选葡萄糖异构酶,具有KM值
在100mM与190mM之间、优选在130mM与190mM之间、优选在160mM与190mM之间、更优选在170mM与185mM之间、并且最优选在175mM与180mM之间;和/或
在50mM至190mM之间、50mM至189mM、50mM至188mM、50mM至187mM、50mM至186mM、50mM至185mM之间、优选在50mM至184mM之间、优选在50mM至183mM之间、优选在50mM至182mM之间、优选在50mM至181之间、优选在50mM至180mM之间、优选在50mM至179mM之间、优选在50mM至178mM之间、优选在50mM至177mM之间、优选在50mM至176mM之间、优选在50mM至175mM之间、优选在50mM至174mM之间、优选在50mM至173mM之间、优选在50mM至172mM之间、优选在50mM至171mM之间、优选在50mM至170mM之间、优选在50mM至169mM之间、优选在50mM至168mM之间、优选在50mM至167mM之间、优选在50mM至166mM之间、优选在50mM至165mM之间、优选在50mM至160mM之间、优选在50mM至159mM之间、优选在50mM至158mM之间、优选在50mM至157mM之间、优选在50mM至156mM之间、优选在10mM至156mM之间、优选在50mM至155mM之间、优选在50mM至154mM之间、优选在50mM至153mM之间、优选在50mM至152mM之间、75mM至190mM、75mM至189mM、75mM至188mM、75mM至187mM、75mM至186mM、75mM至185mM之间、优选在75mM至184mM之间、优选在75mM至183mM之间、优选在75mM至182mM之间、优选在75mM至181mM之间、优选在75mM至180mM之间、优选在75mM至179mM之间、优选在75mM至178mM之间、优选在75mM至177mM之间、优选在75mM至176mM之间、优选在75mM至175mM之间、优选在75mM至174mM之间、优选在75mM至173mM之间、优选在75mM至172mM之间、优选在75mM至171mM之间、优选在75mM至170mM之间、优选在75mM至169mM之间、优选在75mM至168mM之间、优选在75mM至167mM之间、优选在75mM至166mM之间、优选在75mM至165mM之间、优选在75mM至160mM之间、优选在75mM至159mM之间、优选在75mM至158mM之间、优选在75mM至157mM之间、优选在75mM至156mM之间、优选在75mM至155mM之间、优选在75mM至154mM之间、优选在75mM至153mM之间、优选在75mM至152mM之间、在100mM至190mM之间、在100mM至189mM之间、100mM至188mM、100mM至187mM、100mM至186mM、100mM至185mM、优选在100mM至184mM之间、优选在100mM至183mM之间、优选在100mM至182mM之间、优选在100mM至181mM之间、优选在100mM至180mM之间、优选在100mM至179mM之间、优选在100mM至178mM之间、优选在100mM至177mM之间、优选在100mM至176mM之间、优选在100mM至1100mM之间、优选在100mM至174mM之间、优选在100mM至173mM之间、优选在100mM至172mM之间、优选在100mM至171mM之间、优选在100mM至170mM之间、优选在100mM至169mM之间、优选在100mM至168mM之间、优选在100mM至167mM之间、优选在100mM至166mM之间、优选在100mM至165mM之间、优选在100mM至160mM之间、优选在100mM至159mM之间、优选在100mM至158mM之间、优选在100mM至157mM之间、优选在100mM至156mM之间、优选在100mM至155mM之间、优选在100mM之间至154mM、优选地在100mM至153mM之间、优选地在100mM至152mM之间、115mM至190mM、115mM至189mM、115mM至188mM、115mM至187mM、115mM至186mM、115mM至185mM、优选地115mM至184mM之间、优选地在115mM至183m之间,优选在115mM至182mM之间、优选在115mM至181mM之间、优选在115mM至180mM之间、优选在115mM至179mM之间、优选在115mM至178mM之间、优选在115mM至177mM之间、优选在115mM至176mM之间、优选在115mM至175mM之间、优选在115mM至174mM之间、优选在115mM至173mM之间、优选在115mM至172mM之间、优选在115mM至171mM之间、优选在115mM至170mM之间、优选在115mM至169mM之间、优选在115mM至168mM之间、优选在115mM至167mM之间、优选在115mM至166mM之间、优选在115mM至165mM之间、优选在115mM至160mM之间、优选在115mM至159mM之间、优选在115mM至158mM之间、优选在115mM至157mM之间、优选在115mM至156mM之间、优选在115mM至155mM之间、优选在115mM至154mM之间、优选在115mM至153mM之间、优选在115mM至152mM之间、在130mM至185mM之间、优选在130mM至184mM之间、优选在130mmM至183mM之间、优选在130mM至182mM之间、优选在130mM至181mM之间、优选在130mM至180mM之间、优选在130mM至179mM之间、优选在130mM至178mM之间、优选在130mM至177mM之间、优选在130mM至176mM之间、优选在130mM至175mM之间、优选在130mM至174mM之间、优选在130mM至173mM之间、优选在130mM至172mM之间、优选在130mM至171mM之间、优选在130mM至170mM之间、优选在130mM至169mM之间、优选在130mM至168mM之间、优选在130mM至167mM之间、优选在130mM至166mM之间、优选在130mM至165mM之间、优选在130mM至160mM之间、优选在130mM至159mM之间、优选在130mM至158mM之间、优选在130mM至157mM之间、优选在130mM至156mM之间、优选在130mM至155mM之间、优选在130mM至154mM之间、优选在130mM至153mM之间、优选在130mM至152mM之间、更优选在135mM至185mM之间、更优选在135mM至184mM之间、更优选在135mM至183mM之间、更优选在135mM至182mM之间、更优选在135mM至181mM之间、更优选在135mM至180mM之间、更优选在135mM至179mM之间、更优选在135mM至178mM之间、更优选在135mM至177mM之间、更优选在135mM至176mM之间、更优选在135mM至175mM之间、更优选在135mM至174mM之间、更优选在135mM至173mM之间、更优选在135mM至172mM之间、更优选在135mM之间至171mM之间、更优选在135mM至170mM之间、更优选在135mM至169mM之间、更优选135mM至168mM之间、更优选在135mM至167mM之间、更优选在135mM至166mM之间、更优选在135mM至165mM之间、更优选在135mM至160mM之间、更优选在135mM至159mM之间、更优选在135mM至158mM之间、更优选在135mM至157mM之间、更优选在135mM至156mM之间、更优选在135mM至155mM之间、更优选在135mM至154mM之间、更优选在135mM至153mM之间、更优选在135mM至152mM之间、最优选在140mM至185mM之间、最优选在140mM至184mM之间、最优选在140mM至183mM之间、最优选在140mM至182mM之间、最优选在140mM至181mM之间、最优选在140mM至180mM之间、最优选在140mM至179mM之间、最优选在140mM至178mM之间、最优选在140mM至177mM之间、最优选在140mM至176mM之间、最优选在140mM至175mM之间、最优选在140mM至174mM之间、最优选在140mM至173mM之间、最优选在140mM至172mM之间、最优选在140mM至171mM之间、最优选在140mM至170mM之间、最优选在140mM至169mM之间、最优选在140mM至168mM之间、最优选在140mM至167mM之间、优选在140mM至166mM之间、最优选在140mM至165mM之间、最优选在140mM至160mM之间、最优选在140mM至159mM之间、最优选在140mM至158mM之间、最优选在140mM至157mM之间、最优选在140mM至156mM之间、最优选在140mM至155mM之间、最优选在140mM至154mM之间、最优选在140mM至153mM之间、并且最优选在140mM至152mM之间;和/或小于190mM、189mM、188mM、187mM、186mM、185mM、184mM、183mM、182mM、181mM、180mM、179mM、178mM、177mM、176mM、175mM、174mM、173mM、172mM、171mM、170mM、169mM、168mM、167mM、166mM、165mM、160mM、159mM、158mM、157mM、156mM、155mM、154mM、153mM、152mM,优选小于185mM、更优选小于170mM,甚至更优选小于160mM、最优选小于155mM,和最优选为152mM且小于152mM。
在第四方面的第六实施方式中,其也是第四方面的第一、第二、第三,第四和第五实施方式中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,具有可溶性表达水平,其定义为多肽的可溶性表达水平和SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,的可溶性表达水平的比,其是
至少1.04至1.38、优选至少1.07至1.38、优选至少1.10至1.38、优选至少1.31至1.38、优选至少1.33至1.38、优选至少1.36至1.38、更优选至少1.04至1.36、更优选至少1.07至1.36、更优选至少1.10至1.36、更优选至少1.31至1.36、更优选至少1.33至至1.36,最优选为1.36;和/或
至少1.04至1.80、优选至少1.07至1.80、优选至少1.10至1.80、优选至少1.31至1.80、优选至少1.33至1.80、优选至少1.36至1.80、优选至少1.38至1.80、优选至少1.43至1.80、更优选至少1.04至1.75、更优选至少1.07至1.75、更优选至少1.10至1.75、更优选至少1.31至1.75、更优选至少1.33至1.75、更优选至少1.36至1.75、更优选至少1.38至1.75、更优选至少1.43至1.75、更优选至少1.47至1.75、更优选至少1.62至1.75、甚至更优选至少1.04至1.70、甚至更优选至少1.07至1.70、甚至更优选至少1.10最高1.70、甚至更优选至少1.31至1.70、甚至更优选至少1.33至1.70、甚至更优选至少1.36至1.70、甚至更优选至少1.38至1.70、甚至更优选至少1.43至1.70、甚至更优选至少1.47至1.70、甚至更优选至少1.62至1.70、甚至更优选至少1.04至1.65、甚至更优选至少1.07至1.65、甚至更优选至少1.10至1.65、甚至更优选至少1.31至1.65、甚至更优选至少1.33至1.65、甚至更优选至少1.36至1.65、甚至更优选至少1.38至1.65、甚至更优选至少1.43至1.65、甚至更优选至少1.47至1.65、甚至更优选至少1.62至1.65,并且最优选至少1.10至1.63、至少1.38至1.63、至少1.43至1.63、和/或1.63。
在第四方面的优选实施方式中,其也是第一、第二、第三、第四和第五实施方式或第四方面的任何其他实施方式中的实施方式,与SEQ ID NO:1相比,多肽,优选葡萄糖异构酶,具有以葡萄糖形成表达的将果糖转化为葡萄糖的多肽,优选葡萄糖异构酶,的增强的催化活性:
至少1.2倍至5倍、至少1.2倍至4.5倍、至少1.2倍至4倍、至少1.2倍至3.5倍、至少1.2倍至3.4倍、至少1.2倍至3.3倍、至少1.2倍至3.2倍、至少1.2倍至3.1倍、至少1.2倍至3倍、至少1.2倍至2.9倍、至少1.2倍至2.8倍、至少1.2倍至2.7倍、至少1.2倍至2.6倍、至少1.2倍至2.5倍、至少1.2倍至2.4倍、至少1.2倍至2.3倍、至少1.2倍至2.2倍、优选至少1.5倍至5倍、至少1.5倍至4.5倍、至少1.5倍至4倍、至少1.5倍至3.5倍、至少1.5倍至3.4倍、至少1.5倍至3.3倍、至少1.5倍至3.2倍、至少1.5倍至3.1倍、至少1.5倍至3倍、至少1.5倍至2.9倍、至少1.5倍至2.8倍、至少1.5倍至2.7倍、至少1.5倍至2.6倍、至少1.5倍至2.5倍、至少1.5倍至2.4倍、至少1.5倍至2.3倍、至少1.5倍至2.2倍、更优选至少1.9倍至5倍、至少1.9倍至4.5倍、至少1.9倍至4倍、至少1.9倍至3.5倍、至少1.9倍至3.4倍、至少1.9倍至3.3倍、至少1.9倍至3.2倍、至少1.9倍、最高3.1倍、至少1.9倍、最高3倍、至少1.9倍最高2.9倍、至少1.9倍至2.8倍、至少1.9倍至2.7倍、至少1.9倍至2.6倍、至少1.9倍至2.5倍、至少1.9倍至2.4倍。至少是1.9倍至2.3倍、至少1.9倍至2.2倍、更优选至少2.0倍至5倍、至少2.0倍至4.5倍、至少2.0倍至4倍、至少2.0倍至3.5倍、至少2.0倍至3.4倍、至少2.0倍至3.3倍、至少2.0倍至3.2倍、至少2.0倍至3.1倍、至少2.0倍至3倍、至少2.0倍至2.9倍、至少2.0倍至2.8倍、至少2.0倍至2.7倍、至少2.0倍至2.6倍、至少2.0倍至2.5倍。至少2.0倍至2.4倍、至少2.0倍至2.3倍、至少2.0倍至2.2倍以及最优选至少2.2倍至3.3倍,。
在第四方面的第七实施方式中,其也是第四方面的第一、第二、第三、第四、第五和第六实施方式中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,是第一方面的第1、2、3、4、5、6、7、8、9和10实施方式中的任一个中的,优选地多肽,优选葡萄糖异构酶,是第一方面的第3、4、5、6、7、8、9和10实施方式中的任一个中的,更优选地多肽,优选葡萄糖异构酶,是第一方面的第5、6、7、8、9和10实施方式中的任一个中的,甚至更优选地多肽,优选葡萄糖异构酶,是第一方面的第7、8、9和10实施方式中的任一个中的,并且最优选地多肽,优选葡萄糖异构酶,是第一方面的第9和10实施方式中的任一个中的,和/或
多肽,优选葡萄糖异构酶,是第11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94和95实施方式中的任一个或第一方面的其他实施方式中的任一个中的,优选地多肽,优选葡萄糖异构酶,是第一方面的第23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94和95实施方式中的任一个中的,更优选地多肽,优选葡萄糖异构酶,是第一方面的第28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94和95实施方式中的任一个中的,甚至更优选地多肽,优选葡萄糖异构酶是第一方面的第39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94和95实施方式中的任一个中的,以及最优选地多肽,优选葡萄糖异构酶,是第一方面的第63和95实施方式中的任一个中的,以及第102、103、104、105、107、108、109、110、111、112、114、115、116、117、119、120、121、122、124、125、126、127、128、130、131、132和133实施方式中的任一个或第一方面的其他实施方式中的任一个中的。
在第四方面的第八实施方式中,其也是第四方面的第一实施方式中的实施方式,与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,相比,多肽,优选葡萄糖异构酶,具有下述的用于在50mM果糖浓度下将果糖转化为葡萄糖的增强的活性,优选增强的活性Activity:
至少1.1倍至3.0倍、优选至少1.4倍至3.0倍、优选至少1.5倍至3.0倍、更优选至少1.6倍至3.0倍、优选至少1.7倍至3.0倍、优选至少1.8倍至3.0倍、优选至少1.9倍至3.0倍、优选至少2.0倍至3.0倍、更优选至少1.4倍至2.8倍、更优选至少1.5倍至2.8倍、更优选至少1.6倍至2.8倍、更优选至少1.7倍至2.8倍、更优选至少1.8倍至2.8倍、更优选至少1.9倍至2.8倍、更优选至少2.0倍至2.8倍、甚至更优选至少1.4倍至2.6倍、甚至更优选至少1.5倍至2.6倍、更优选至少1.6倍至2.6倍、更优选至少1.7倍至2.6倍、更优选至少1.8倍至2.6倍、更优选至少1.9倍至2.6倍、更优选至少2.0倍至2.6倍、最优选至少1.4倍至2.4倍、最优选至少1.5倍至2.4倍、最优选至少1.6倍至2.4倍、最优选至少1.7倍至2.4倍、最优选至少1.8倍至2.4倍、最优选至少1.9倍至2.4倍、最优选至少2.0倍至2.4倍,最优选至少1.7倍至2.4倍-折,
且其中多肽,优选葡萄糖异构酶,是第11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96和97实施方式中的任一个或第一方面的其他实施方式中的任一个中的,优选地多肽,优选葡萄糖异构酶是第一方面的第23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96和97实施方式中的任一个,更优选地多肽,优选葡萄糖异构酶,是第一方面的第28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96和97实施方式中的任一个,甚至更优选地多肽,优选葡萄糖异构酶,是第一方面的第39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96和97实施方式中的任一个,最优选地多肽,优选葡萄糖异构酶,是第一方面的第63和97实施方式中的任一个,是第104、105、106、107、109、110、111、112、113、114、116、117、118、119、121、122、123、124、126、127、128、129、130、132、133、134和135实施方式中的任一个或第一方面的其他实施方式中的任一个中的。
在第四方面的第九实施方式中,其也是第四方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六,第七和第八实施方式中任一个的实施方式,与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,相比,多肽,优选葡萄糖异构酶,具有下述的用于在200mM果糖浓度下将果糖转化为葡萄糖的增强的活性,优选增强的活性Activity:
至少1.2倍至3.0倍、优选至少1.3倍至3.0倍、优选至少1.4倍至3.0倍、优选至少1.5倍至3.0倍、更优选至少1.6倍至3.0倍、优选至少1.7倍至3.0倍、优选至少1.8倍至3.0倍、优选至少1.9倍至3.0倍、优选至少2.0倍至3.0倍、更优选至少1.3倍至2.5倍、更优选至少1.4倍至2.5倍、更优选至少1.5倍-高至2.5倍、更优选至少1.6倍至2.5倍、更优选至少1.7倍至2.5倍、更优选至少1.8倍至2.5倍、更优选至少1.9倍至2.5倍、更优选至少2.0倍至2.5倍、甚至更优选至少1.3倍至2.2倍、甚至更优选至少1.4倍至2.2倍、甚至更优选至少1.5倍至2.2倍、更优选至少1.6倍至2.2倍、更优选至少1.7倍至2.2倍、更优选至少1.8倍至2.2倍、更优选至少1.9倍至2.2倍,更优选至少2.0倍至2.2倍,并且最优选至少1.5倍至2.2倍,
且其中多肽,优选葡萄糖异构酶,是第11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96和97实施方式中的任一个或第一方面的其他实施方式中的任一个中的,优选地多肽,优选葡萄糖异构酶是第一方面的第23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96和97实施方式中的任一个,更优选地多肽,优选葡萄糖异构酶,是第一方面的第28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96和97实施方式中的任一个,甚至更优选地多肽,优选葡萄糖异构酶,是第一方面的第39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96和97实施方式中的任一个,以及最优选地多肽,优选葡萄糖异构酶,是第一方面的第63和97实施方式中的任一个,以及最优选是第104、105、106、107、109、110、111、112、113、114、116、117、118、119、121、122、123、124、126、127、128、129、130、132、133、134和135实施方式中的任一个或第一方面的其他实施方式中的任一个中的。
在第四方面的第十实施方式中,其也是第四方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八和第九实施方式中任一项的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,具有以74℃的温度下温育多肽,优选葡萄糖异构酶,15分钟后的残留活性表达的热稳定性,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的残留活性为至少30%至100%、至少31%至100%、至少32%至100%、至少33%至100%、至少34%至100%、至少35%至100%、至少36%至100%、至少37%至100%、至少38%至100%、至少39%至100%、至少40%至100%、至少41%至100%、至少42%至100%、至少43%至100%、至少44%至100%、至少45%至100%、至少46%至100%、至少47%至100%、至少48%至100%、至少49%至100%、至少50%至100%、至少51%至100%、至少52%至100%、至少53%至100%、至少54%至100%、至少55%至100%、至少56%至100%、至少57%至100%、至少58%至100%、至少59%至100%、至少60%至100%、至少61%至100%、至少62%至100%、至少63%至100%、至少64%至100%、至少65%至100%、至少66%至100%、至少67%至100%、至少68%至100%、至少69%至100%、至少70%至100%、至少71%至100%、至少72%至100%、至少73%至100%、至少74%至100%、至少75%至100%、至少76%至100%、至少77%至100%、至少78%至100%、至少79%至100%、至少80%至100%、至少30%至75%、至少31%至75%、至少32%至75%、至少33%至75%、至少34%至75%、至少35%至75%、至少36%至75%、至少37%至75%、至少38%至75%、至少39%至75%、至少40%至75%、至少41%至75%、至少42%至75%、至少43%至75%、至少44%至75%、至少45%至75%、至少46%至75%、至少47%至75%、至少48%至75%、至少49%至75%、至少50%至75%、至少51%至75%、至少52%至75%、至少53%至75%、至少54%至75%、至少55%至75%、至少56%至75%、至少57%至75%、至少58%至75%、至少59%至75%、至少60%至75%、至少61%至75%、至少62%至75%、至少30%至70%、至少31%至70%、至少32%至70%、至少33%至70%、至少34%至70%、至少35%至70%、至少36%至70%、至少37%至70%、至少38%至70%、至少39%至70%、至少40%至70%、至少41%至70%、至少42%至70%、至少43%至70%、至少44%至70%、至少45%至70%、至少46%至70%、至少47%至70%、至少48%至70%、至少49%至70%、至少50%至70%、至少51%至70%、至少52%至70%、至少53%至70%、至少54%至70%、至少55%至70%、至少56%至70%、至少57%至70%、至少58%至70%、至少59%至70%、至少60%至70%、至少61%至70%、至少62%至70%、至少30%至65%、至少31%至65%、至少32%至65%、至少33%至65%、至少34%至65%、至少35%至65%、至少36%至至65%、至少37%至65%、至少38%至65%、至少39%至65%、至少40%至65%、至少41%至65%、至少42%至65%、至少43%至65%、至少44%至65%、至少45%至65%、至少46%至65%、至少47%至65%、至少48%至65%、至少49%至65%、至少50%至65%、至少51%至65%、至少52%至65%、至少53%至65%、至少54%至65%、至少55%至65%、至少56%至65%、至少57%至65%、至少58%至65%、至少59%至65%、至少60%至65%、至少61%至65%、至少62%至65%、更优选至少30%至65%、至少34%至65%、至少35%至65%、至少38%至65%、至少40%至65%、至少41%至65%、至少42%至65%、至少46%至65%、至少47%至65%、至少50%至65%、至少55%至65%、至少59%至65%、至少60%至65%、至少62%至65%、甚至更优选至少至少40%至65%,甚至更优选至少60%至65%,最优选62%,
且其中多肽,优选葡萄糖异构酶,是第11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96和97实施方式中的任一个或第一方面的其他实施方式中的任一个中的,优选地多肽,优选葡萄糖异构酶是第一方面的第23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96和97实施方式中的任一个,更优选地多肽,优选葡萄糖异构酶,是第一方面的第28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96和97实施方式中的任一个,甚至更优选地多肽,优选葡萄糖异构酶,是第一方面的第39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96和97实施方式中的任一个,最优选地多肽,优选葡萄糖异构酶,是第一方面的第63和97实施方式中的任一个,是第104、105、106、107、109、110、111、112、113、114、116、117、118、119、121、122、123、124、126、127、128、129、130、132、133、134和135实施方式中的任一个或第一方面的其他实施方式中的任一个中的多肽,优选葡萄糖异构酶,中的任一个。
在第四方面的第十一实施方式中,其也是第四方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九和第十实施方式中任一项的实施方式、多肽、优选葡萄糖异构酶、具有在50mM至190mM之间、50mM至189mM、50mM至188mM、50mM至187mM、50mM至186mM、50mM至185mM之间、优选在50mM至184mM之间、优选在50mM至183mM之间、优选在50mM至182mM之间、优选在50mM至181之间、优选在50mM至180mM之间、优选在50mM至179mM之间、优选在50mM至178mM之间、优选在50mM至177mM之间、优选在50mM至176mM之间、优选在50mM至175mM之间、优选在50mM至174mM之间、优选在50mM至173mM之间、优选在50mM至172mM之间、优选在50mM至171mM之间、优选在50mM至170mM之间、优选在50mM至169mM之间、优选在50mM至168mM之间、优选在50mM至167mM之间、优选在50mM至166mM之间、优选在50mM至165mM之间、优选在50mM至160mM之间、优选在50mM至159mM之间、优选在50mM至158mM之间、优选在50mM至157mM之间、优选在50mM至156mM之间、优选在50mM至156mM之间、优选在50mM至155mM之间、优选在50mM至154mM之间、优选在50mM至153mM之间、优选在50mM至152mM之间、75mM至190mM、75mM至189mM、75mM至188mM、75mM至187mM、75mM至186mM、75mM至185mM、75mM至184mM、优选在75mM至183mM之间、优选在75mM至182mM之间、优选在75mM至181mM之间、优选在75mM至180mM之间、优选在75mM至179mM之间、优选在75mM至178mM之间、优选在75mM至177mM之间、优选在75mM至176mM之间、优选在75mM至175mM之间、优选在75mM至174mM之间、优选在75mM至173mM之间、优选在75mM至172mM之间、优选在75mM至171mM之间、优选在75mM至170mM之间、优选在75mM至169mM之间、优选在75mM至168mM之间、优选在75mM至167mM之间、优选在75mM至166mM之间、优选在75mM至165mM之间、优选在75mM至160mM之间、优选在75mM至159mM之间、优选在75mM至158mM之间、优选在75mM至157mM之间、优选在75mM至156mM之间、优选在75mM至155mM之间、优选在75mM至154mM之间、优选在75mM至153mM之间、优选在75mM至152mM之间、100mM至190mM之间、100mM至189mM、100mM至188mM、100mM至187mM、100mM至186mM、100mM至185mM、优选在100mM至184mM之间、优选在100mM至183mM之间、优选在100mM至182mM之间、优选在100mM至181mM之间、优选在100mM至180mM之间、优选在100mM至179mM之间、优选在100mM至178mM之间、优选在100mM至177mM之间、优选在100mM至176mM之间、优选在100mM至1100mM之间、优选在100mM至174mM之间、优选在100mM至173mM之间、优选在100mM至172mM之间、优选在100mM至171mM之间、优选在100mM至170mM之间、优选在100mM至169mM之间、优选在100mM至168mM之间、优选在100mM至167mM之间、优选在100mM至166mM之间、优选在100mM至165mM之间、优选在100mM至160mM之间、优选在100mM至159mM之间、优选在100mM至158mM之间、优选在100mM至157mM之间、优选在100mM至156mM之间、优选在100mM至155mM之间、优选在100mM至154mM之间、优选在100mM至153mM之间、优选在100mM至152mM之间、115mM至190mM之间、115mM至189mM、115mM至188mM、115mM至187mM、115mM至186mM、115mM至185mM、优选在115mM至184mM之间、优选在115mM至183mM之间、优选在115mM至182mM之间、优选在115mM至181mM之间、优选在115mM至180mM之间、优选在115mM至179mM之间、优选在115mM至178mM之间、优选在115mM至177mM之间、优选在115mM至176mM之间、优选在115mM至175mM之间、优选在115mM至174mM之间、优选在115mM至173mM之间、优选在115mM至172mM之间、优选在115mM至171mM之间、优选在115mM至170mM之间、优选在115mM至169mM之间、优选在115mM至168mM之间、优选在115mM至167mM之间、优选在115mM至166mM之间、优选在115mM至165mM之间、优选在115mM至160mM之间、优选在115mM至159mM之间、优选在115mM至158mM之间、优选在115mM至157mM之间、优选在115mM至156mM之间、优选在115mM至155mM之间、优选在115mM至154mM之间、优选在115mM至153mM之间、优选在115mM之间至152mM、优选在130mM至185mM、优选在130mM至184mM之间、优选在130mM至183mM之间、优选在130mM至182mM之间、优选在130mM至181mM之间、优选在130mM至180mM之间、优选在130mM至179mM之间、优选在130mM至178mM之间、优选在130mM至177mM之间、优选在130mM至176mM之间、优选在130mM至175mM之间、优选在130mM至174mM之间、优选在130mM至173mM之间、优选在130mM至172mM之间、优选在130mM至171mM之间、优选在130mM至170mM之间、优选在130mM至169mM之间、优选在130mM至168mM之间、优选在130mM至167mM之间、优选在130mM至166mM之间、优选在130mM至165mM之间、优选在130mM至160mM之间、优选在130mM至159mM之间、优选在130mM至158mM之间、优选在130mM至157mM之间、优选在130mM至156mM之间、优选在130mM至155mM之间、优选在130mM至154mM之间、优选在130mM至153mM之间、优选在130mM至152mM之间、更优选在135mM至185mM之间、更优选在135mM至184mM之间、更优选在135mM至183mM之间、更优选在135mM至182mM之间、更优选在135mM至181mM之间、更优选在135mM至180mM之间、更优选在135mM至179mM之间、更优选在135mM至178mM之间、更优选在135mM至177mM之间、更优选在135mM至176mM之间、更优选在135mM至175mM之间、更优选在135mM至174mM之间、更优选在135mM至173mM之间、更优选在135mM至172mM之间、更优选在135mM至171mM之间、更优选在135mM至170mM之间、更优选在135mM至169mM之间、更优选在135mM至168mM之间、更优选在135mM至167mM之间、更优选在135mM至166mM之间、更优选在135mM至165mM之间、更优选在135mM至160mM之间、更优选在135mM至159mM之间、更优选在135mM至158mM之间、更优选在135mM至157mM之间、更优选在135mM至156mM之间、更优选在135mM至155mM之间、更优选在135mM至154mM之间、更优选在135mM至153mM之间、更多优选在135mM至152mM之间、最优选在140mM至185mM之间、最优选在140mM至184mM之间、最优选在140mM至183mM之间、最优选在140mM至182mM之间、最优选在140mM至181mM之间、最优选在140mM至180mM之间、最优选在140mM至179mM之间、最优选在140mM至178mM之间、最优选在140mM至177mM之间、最优选140mM至176mM、最优选140mM至175mM、最优选140mM至174mM、最优选140mM至173mM、最优选在140mM至172mM之间、最优选在140mM至171mM之间、最优选在140mM至170mM之间、最优选在140mM至169mM之间、最优选在140mM至168mM之间、最优选在140mM至167mM之间、最优选在140mM至166mM之间、优选在140mM至165mM之间、最优选在140mM至160mM之间、最优选在140mM至159mM之间、最优选在140mM至158mM之间、最优选在140mM至157mM之间、最优选在140mM至156mM之间、最优选在140mM至155mM之间、最优选在140mM至154mM之间、最优选在140mM至153mM之间、并且最优选在140mM至152mM之间;和/或小于190mM、189mM、188mM、187mM、186mM、185mM、184mM、183mM、182mM、181mM、180mM、179mM、178mM、177mM、176mM、175mM、174mM、173mM、172mM、171mM、170mM、169mM、168mM、167mM、166mM、165mM、160mM、159mM、158mM、157mM、156mM、155mM、154mM、153mM、152mM,优选小于185mM、更优选小于170mM、甚至更优选小于160mM、最优选小于155mM、最好是152mM且小于152mM的KM值
且其中多肽,优选葡萄糖异构酶,是第11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96和97实施方式中的任一个或第一方面的其他实施方式中的任一个中的,优选地多肽,优选葡萄糖异构酶是第一方面的第23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96和97实施方式中的任一个,更优选地多肽,优选葡萄糖异构酶,是第一方面的第28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96和97实施方式中的任一个,甚至更优选地多肽,优选葡萄糖异构酶,是第一方面的第39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96和97实施方式中的任一个,最优选地多肽,优选葡萄糖异构酶,是第一方面的第63和97实施方式中的任一个,是第104、105、106、107、109、110、111、112、113、114、116、117、118、119、121、122、123、124、126、127、128、129、130、132、133、134和135实施方式中的任一个或第一方面的其他实施方式中的任一个中的多肽,优选葡萄糖异构酶,中的任一个。
在第四方面的第十二实施方式中,其也是第四方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十和第十一实施方式中的任一个的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,具有可溶性表达水平,其定义为多肽的可溶性表达水平与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,的可溶性表达水平的比,其是
至少1.04至1.80、优选至少1.07至1.80、优选至少1.10至1.80、优选至少1.31至1.80、优选至少1.33至1.80、优选至少1.36至1.80、优选至少1.38至1.80、优选至少1.43至1.80、更优选至少1.04至1.75、更优选至少1.07至1.75、更优选至少1.10至1.75、更优选至少1.31至1.75、更优选至少1.33至1.75、更优选至少1.36至1.75、更优选至少1.38至1.75、更优选至少1.43至1.75、更优选至少1.47至1.75、更优选至少1.62至1.75、甚至更优选至少1.04至1.70、甚至更优选至少1.07至1.70、甚至更优选至少1.10至1.70、甚至更优选至少1.31至1.70、甚至更优选至少1.33至1.70、甚至更优选至少1.36至1.70、甚至更优选至少1.38至1.70、甚至更优选至少1.43至1.70、甚至更优选至少1.47至1.70、甚至更优选至少1.62至1.70、甚至更优选至少1.04至1.65、甚至更优选至少1.07至1.65、甚至更优选至少1.10至1.65、甚至更优选至少1.31至1.65、甚至更优选至少1.33至1.65、甚至更优选至少1.36至1.65、甚至更优选至少1.38至1.65、甚至更优选至少1.43至1.65、甚至更优选至少1.47至1.65、甚至更优选至少1.62至1.65,并且最优选至少1.10至1.63、至少1.38至1.63、至少1.43至1.63,和/或1.63;
且其中多肽,优选葡萄糖异构酶,是第11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96和97实施方式中的任一个或第一方面的其他实施方式中的任一个中的,优选地多肽,优选葡萄糖异构酶是第一方面的第23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96和97实施方式中的任一个,更优选地多肽,优选葡萄糖异构酶,是第一方面的第28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96和97实施方式中的任一个,甚至更优选地多肽,优选葡萄糖异构酶,是第一方面的第39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96和97实施方式中的任一个,最优选地多肽,优选葡萄糖异构酶,是第一方面的第63和97实施方式中的任一个,是第104、105、106、107、109、110、111、112、113、114、116、117、118、119、121、122、123、124、126、127、128、129、130、132、133、134和135实施方式中的任一个或第一方面的其他实施方式中的任一个中的多肽,优选葡萄糖异构酶,中的任一个。
在第四方面的优选实施方式中,其也是第四方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一和第十二实施方式中任一项的实施方式,与SEQ IDNO:1相比,多肽,优选葡萄糖异构酶,具有以葡萄糖形成表达的将果糖转化为葡萄糖的多肽,优选葡萄糖异构酶,的增强的催化活性:
至少1.2倍至5倍、至少1.2倍至4.5倍、至少1.2倍至4倍、至少1.2倍至3.5倍、至少1.2倍至3.4倍、至少1.2倍至3.3倍、至少1.2倍至3.2倍、至少1.2倍至3.1倍、至少1.2倍至3倍、至少1.2倍至2.9倍、至少1.2倍至2.8倍、至少1.2倍至2.7倍、至少1.2倍至2.6倍、至少1.2倍至2.5倍、至少1.2倍至2.4倍、至少1.2倍至2.3倍、至少1.2倍至2.2倍、优选至少1.5倍至5倍、至少1.5倍至4.5倍、至少1.5倍至4倍、至少1.5倍至3.5倍、至少1.5倍至3.4倍、至少1.5倍至3.3倍、至少1.5倍至3.2倍、至少1.5倍至3.1倍、至少1.5倍至3倍、至少1.5倍至2.9倍、至少1.5倍至2.8倍、至少1.5倍至2.7倍、至少1.5倍至2.6倍、至少1.5倍至2.5倍、至少1.5倍至2.4倍、至少1.5倍至2.3倍、至少1.5倍至2.2倍、更优选至少1.9倍至5倍、至少1.9倍至4.5倍、至少1.9倍至4倍、至少1.9倍至3.5倍、至少1.9倍至3.4倍、至少1.9倍至3.3倍、至少1.9倍至3.2倍、至少1.9倍至3.1倍、至少1.9倍至3倍、至少1.9倍至2.9倍、至少1.9倍至2.8倍、至少1.9倍至2.7倍、至少1.9倍至2.6倍、至少1.9倍至2.5倍、至少1.9倍至2.4倍。至少是1.9倍至2.3倍、至少1.9倍至2.2倍,更优选至少2.0倍至5倍、至少2.0倍至4.5倍、至少2.0倍至4倍、至少2.0倍至3.5倍、至少2.0倍至3.4倍、至少2.0倍至3.3倍、至少2.0倍至3.2倍、至少2.0倍至3.1倍、至少2.0倍至3倍、至少2.0倍至2.9倍、至少2.0倍至2.8倍、至少2.0倍至2.7倍、至少2.0倍至2.6倍、至少2.0倍至2.5倍、至少2.0倍至2.4倍、至少2.0至2.3倍、至少2.0倍至2.2倍,最优选至少2.2倍至3.3倍,
且其中多肽,优选葡萄糖异构酶,是第9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96和97实施方式中的任一个或第一方面的其他实施方式中的任一个中的,优选地多肽,优选葡萄糖异构酶是第一方面的第23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96和97实施方式中的任一个,更优选地多肽,优选葡萄糖异构酶,是第一方面的第28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96和97实施方式中的任一个,甚至更优选地多肽,优选葡萄糖异构酶,是第一方面的第39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96和97实施方式中的任一个,最优选地多肽,优选葡萄糖异构酶,是第一方面的第63和97实施方式中的任一个,是第104、105、106、107、109、110、111、112、113、114、116、117、118、119、121、122、123、124、126、127、128、129、130、132、133、134和135实施方式中的任一个或第一方面的其他实施方式中的任一个中的多肽,优选葡萄糖异构酶,中的任一个。
在第四方面的第十三实施方式中,其也是第四方面的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12实施方式中任一项的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,是第11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134和135实施方式或第一方面的任何其他实施方式中的任一个中的,优选地第一方面的第11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96和97实施方式中的任一个中的,优选地第一方面的第23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96和97实施方式中的任一个中的,更优选地第一方面的第28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96和97实施方式中的任一个中的,甚至更优选地第一方面的第39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96和97实施方式中的任一个中的,最优选地第一方面的第63和97实施方式中的任一个中的多肽,优选葡萄糖异构酶,或其中多肽,优选葡萄糖异构酶,是第104、105、106、107、109、110、111、112、113、114、116、117、118、119、121、122、123、124、126、127、128、129、130、132、133、134和135实施方式中的任一个或第一方面的任一其他实施方式中的。
在第四方面的第十四实施方式中,其也是第四方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二和第十三实施方式中的任一个的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,能够催化下列的转化:
(i)醛糖分子到酮糖分子,和/或
(ii)酮糖分子到醛糖分子。
在第四方面的第十五实施方式中,其也是第四方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三和第十四实施方式中的任一个的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,能够催化下列的转化:
(i)丁醛糖分子到丁酮糖分子,和/或
(ii)丁酮糖分子到丁醛糖分子,和/或
(ii)戊醛糖分子与戊酮糖分子,和/或
(iv)戊酮糖分子为戊醛糖分子,和/或
(v)己醛醣分子到己酮糖分子,和/或
(vi)己酮糖分子到己醛醣分子,和/或
(vii)庚醛糖分子到庚酮糖分子,和/或
(viii)庚酮糖分子到庚醛糖分子。
在第四方面的第十六实施方式中,其也是第四方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三,第十四和第十五实施方式中的任一个的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,能够催化下列的转化。
(i)戊醛糖分子到戊酮糖分子,和/或
(ii)戊酮糖分子到戊醛糖分子,和/或
(iii)己醛糖分子到己酮糖分子,和/或
(iv)己酮糖分子到己醛糖分子。
在第四方面的第十七实施方式中,其也是第四方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十,第十一,第十二、第十三、第十四、第十五和第十六实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,能够催化下述的转化:
(i)醛糖分子,其选自D-葡萄糖、D-木糖、D-阿拉伯糖、L-阿拉伯糖、L-核糖、D-核糖、D-来苏糖、D-阿洛糖、L-鼠李糖和D-甘露糖;和/或
(ii)酮糖分子,其选自果糖、D-木酮糖、D-核酮糖、L-核酮糖、D-阿洛酮糖和L-鼠李酮糖。
在第四方面的第十八实施方式中,其也是第四方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十,第十一,第十二、第十三、第十四、第十五,第十六和第十七实施方式的任一个的实施方式,
(i)醛糖分子是选自由脱氧碳水化合物、硫代碳水化合物、叠氮基碳水化合物、甲基化碳水化合物、卤化碳水化合物和/或苄基化碳水化合物组成的组的醛糖分子衍生物
(ii)酮糖分子是选自由脱氧碳水化合物、硫代碳水化合物、叠氮基碳水化合物、甲基化碳水化合物、卤化碳水化合物和/或苄基化碳水化合物组成的组的酮糖分子衍生物。
在第四方面的第十九实施方式中,其也是第四方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十,第十一,第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七和第十八实施方式中的任一个的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,能够催化下述的转化。
(i)果糖到葡萄糖和/或
(ii)葡萄糖到果糖。
在第四方面的第二十实施方式中,其也是第四方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八和第十九实施方式中的任一个中的实施方式,该转换是可逆的转换。
在第四方面的第二十一实施方式中,其也是第四方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十,第十一、第十二、第十三、第十四、第十五、第十六、第十七、第十八、第十九和第二十实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,是根据EC编号EC 5.3.1.5的多肽,优选葡萄糖异构酶。
在第五方面(其也是第五方面的第一实施方式)中,通过具有将果糖转化为葡萄糖的增强的活性,优选增强的活性Activity,的葡萄糖异构酶变体解决了本发明的问题,其中变体具有小于190mM,优选小于170mM,更优选小于160mM且最优选152mM或更小的KM值。
在第五方面的第二实施方式中,其也是第五方面的第一实施方式中的实施方式,相比于SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,变体具有50mM果糖浓度下将果糖转化为葡萄糖的至少1.1倍至3.0倍,优选至少1.4倍至3.0倍,更优选至少1.6倍至3.0倍,甚至更优选至少1.7倍至3.0倍,最优选至少1.7倍至2.4倍的增强的活性,优选增强的活性Activity。
在第五方面的第三实施方式中,其也是第五方面的第一和第二实施方式中的实施方式,相比于SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,变体具有200mM果糖浓度下将果糖转化为葡萄糖的至少1.2倍至3.0倍,优选至少1.3倍至3.0倍,优选至少1.4倍至3倍,更优选至少1.5倍至3.0倍以及最优选至少1.5倍至2.2倍的增强的活性,优选增强的活性Activity。
在第五方面的第四实施方式中,其也是第五方面的第一、第二和第三实施方式中的实施方式,变体具有以74℃的温度下温育变体15分钟后的残留活性表达的热稳定性,其中变体具有至少30%的残留活性,优选具有至少40%的残留活性,并且更优选具有至少60%的残留活性,并且最优选具有62%的残留活性。
在第五方面的第五实施方式中,其也是第五方面的第一、第二、第三和第四实施方式中的实施方式,变体具有增强的可溶性表达水平,其定义为多肽的可溶性表达水平与SEQID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,的可溶性表达水平的比,其中可溶性表达水平至少为1.1,优选可溶性表达水平至少为1.3,更优选可溶性表达水平至少为1.4,最优选可溶性表达水平至少为1.6。
在第五方面的优选实施方式中,其还是第一、第二、第三,第四和第五或第五方面的任何其他实施方式中的实施方式,与SEQ ID NO:1相比,变体具有至少1.2倍至5倍,优选至少1.5倍至5倍,更优选至少1.9至5倍,更优选至少1.9倍至3.5倍,最优选至少2.2倍至3.3倍的以葡萄糖形成表达的将果糖转化为葡萄糖的多肽,优选葡萄糖异构酶,的增强的催化活性。
在第六方面中,其也是第六方面的第一实施方式,通过链霉菌(Streptomycessp.SK)的葡萄糖异构酶变体解决了本发明的问题,该葡萄糖异构酶变体具有将果糖转化为葡萄糖的增强的活性,优选增强的活性Activity,其中变体的KM值小于190mM,优选小于170mM,更优选小于160mM,并且最优选152mM和更小。
在第七方面中,其也是第七方面的第一实施方式,通过包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的葡萄糖异构酶的葡萄糖异构酶变体解决了本发明的问题,其中变体具有将果糖转化为葡萄糖的增强的活性,优选增强的活性Activity,其中变体的KM值小于190mM,优选小于170mM,更优选小于160mM,并且最优选152mM且更小。
在第六方面的第二实施方式中,其也是第六方面的第一实施方式中的实施方式,并且在第七方面的第二方面中,也是第七方面的第一实施方式中的实施方式,
(i)与SEQ ID NO:1的多肽相比,变体具有与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,用于在50mM果糖浓度下将果糖转化为葡萄糖的活性相比,至少1.1倍至3.0倍、优选至少1.4倍至3.0倍、更优选至少1.6倍至3.0倍、甚至更优选至少1.7倍至3.0倍,并且最优选至少1.7倍至2.4倍的用于在50mM果糖浓度下将果糖转化为葡萄糖的增强的活性,优选增强的活性Activity;和/或
(ii)与SEQ ID NO:1的多肽相比,变体具有与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,相比,至少1.2倍至3.0倍,优选至少1.3倍至3.0倍,优选至少1.4倍至3.0倍,更优选至少1.5倍至3.0倍,最优选至少1.5倍至2.2倍的用于在200mM果糖浓度下将果糖转化为葡萄糖的增强的活性,优选增强的活性Activity;和/或
(iii)其中变体具有至少30%的以74℃的温度下温育变体15分钟后的残留活性(Residual Activity)表达的热稳定性,优选具有至少40%的残留活性,并且更优选具有至少60%的残留活性,并且最优选具有62%的残留活性;和/或
(iv)与SEQ ID NO:1的多肽相比,变体具有增强的可溶性表达水平,其定义为变体的可溶性表达水平(soluble expression level)与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,的可溶性表达水平的比,其中可溶性表达水平(Soluble Expression Level)至少为1.1,优选可溶性表达水平至少为1.3,更优选可溶性表达水平至少为1.4,最优选可溶性表达水平至少为1.6;和/或
(v)与SEQ ID NO:1的多肽相比,该变体具有至少1.2倍至5倍,优选至少1.5倍至5倍,更优选至少1.9倍至5倍,再更优选至少1.9倍至3.5倍,最优选至少2.2倍至3.3倍的以葡萄糖形成表达的将果糖转化为葡萄糖的增强的催化活性。
在第八方面中,其也是第八方面的第一实施方式,通过具有将果糖转化为葡萄糖的增强的活性,优选增强的活性Activity,的葡萄糖异构酶变体解决了本发明的问题,其中与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶相比,变体具有至少1.1倍至3.0倍,优选为至少1.4倍至3.0倍,更优选至少1.6倍至3.0倍,甚至更优选至少1.7倍至3.0倍,最优选至少1.7倍至2.4倍的50mM果糖浓度下将果糖转化成葡萄糖的增强的活性,优选增强的活性Activity。
在第八方面的第二实施方式中,其也是第八方面的第一实施方式中的实施方式,变体具有以74℃的温度下温育变体15分钟后的残留活性表达的热稳定性,该变体具有至少30%的残留活性,优选具有至少40%的残留活性,并且更优选具有至少60%的残留活性,并且最优选具有62%的残留活性。
在第八方面的第三实施方式中,其也是第八方面的第一和第二实施方式中的实施方式,变体具有增强的可溶性表达水平,其定义为所述变体的可溶性表达水平与SEQ IDNO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,的可溶性表达水平的比,其中可溶性表达水平至少为1.1,优选可溶性表达水平至少为1.3,更优选可溶性表达水平至少为1.4,并且最优选可溶性表达水平为至少1.6。
在第八方面的第四实施方式中,其也是第八方面的第一、第二和第三实施方式中的实施方式,变体的KM值小于190mM,优选小于170mM,更优选小于160mM,最优选为152mM且更小。
在第八方面的第五实施方式中,其也是第八方面的第一、第二、第三和第四实施方式中的实施方式,与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,相比,所述变体具有至少1.2倍至3.0倍,优选至少1.3倍至3.0倍,优选至少1.4倍至3.0倍,更优选至少1.5倍至3.0倍,并且最优选至少1.5倍至2.2倍的200mM果糖浓度下将果糖转化成葡萄糖的增强的活性,优选增强的活性Activity。
在第八方面的优选实施方式中,其还是第八方面的第一、第二、第三,第四和第五实施方式中的实施方式,与SEQ ID NO:1相比,变体具有至少1.2倍至5倍,优选至少1.5倍至5倍,更优选至少1.9倍至5倍,更优选至少1.9倍至3.5倍,最优选至少2.2倍至3.3倍的多肽,优选葡萄糖异构酶,的以葡萄糖形成表达的将果糖转化为葡萄糖的增强的催化活性。
在第九方面中,其也是第九方面的第一实施方式,通过具有将果糖转化为葡萄糖的增强的活性,优选增强的活性Activity,的链霉菌(Streptomyces sp.SK)的葡萄糖异构酶变体解决了本发明的基础问题,其中与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,相比,变体具有至少1.1倍至3.0倍,优选至少1.4倍至3.0倍,更优选至少1.6倍至3.0倍,甚至更优选至少1.7倍至3.0倍,最优选至少1.7倍至2.4倍的50mM果糖浓度下将果糖转化成葡萄糖的增强的活性,优选增强的活性Activity。
在第十方面中,其也是第十方面的第一实施方式,通过包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的葡萄糖异构酶的葡萄糖异构酶变体解决了本发明的根本问题,其中与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,相比,变体具有至少1.1倍至3.0倍,优选至少1.4倍至3.0倍,更优选至少1.6倍至3.0倍,甚至更优选至少1.7倍至3.0倍,最优选至少1.7倍到2.4倍的50mM果糖浓度下将果糖转化成葡萄糖的增强的活性,优选增强的活性Activity。
在第九方面的第二实施方式中,其也是第九方面的第一实施方式中的实施方式,在第十方面的第二实施方式中,其也是第十方面的第一实施方式中的实施方式,
(i)具有以74℃的温度下温育变体15分钟后的残留活性表达的热稳定性,其中该变体具有至少30%残留活性,优选至少40%的残留活性,并且更优选具有至少60%的残留活性,并且最优选具有62%的残留活性;和/或
(ii)具有增强的可溶性表达水平,其定义为所述变体的可溶性表达水平与SEQ IDNO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,的可溶性表达水平的比,其中可溶性表达水平至少为1.1,优选可溶性表达水平至少为1.3,更优选可溶性表达水平至少为1.4,最优选可溶性表达水平至少为1.6;和/或
(iii)具有小于190mM,优选小于170mM,更优选小于160mM以及最优选152mM且更小的KM值;和/或
(iv)与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,相比,具有至少1.2倍至3.0倍,优选至少1.3倍至3.0倍,优选至少1.4倍至3.0倍,更优选至少1.5倍至3.0倍,并且最优选至少1.5倍至2.2倍的200mM果糖浓度下将果糖转化成葡萄糖的增强的活性,优选增强的活性Activity。
(v)与SEQ ID NO:1的多肽相比,该变体具有至少1.2倍至5倍,优选至少1.5倍至5倍,更优选至少1.9倍至5倍,再更优选至少1.9倍至3.5倍,最优选至少2.2倍至3.3倍的以葡萄糖形成表达的将果糖转化为葡萄糖的增强的催化活性。
在第十一方面中,其也是第十一方面的第一实施方式,通过具有增强的可溶性表达水平的葡萄糖异构酶变体解决了本发明的基础问题,增强的可溶性表达水平定义为变体的可溶性表达水平与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,的可溶性表达水平的比,其中可溶性表达水平至少为1.1,优选可溶性表达水平至少为1.3,更优选可溶性表达水平至少为1.4,最优选可溶性表达水平为至少1.6。
在第十一方面的第二实施方式中,其也是第十一方面的第一实施方式中的实施方式,所述变体具有将果糖转化为葡萄糖的增强的活性,优选增强的活性Activity,其中与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,相比,变体具有至少1.1倍至3.0倍,优选至少1.4倍至3.0倍,更优选至少1.6倍至3.0倍,甚至更优选至少1.7倍至3.0倍,最优选至少1.7倍至2.4倍的50mM果糖浓度下将果糖转化成葡萄糖的增强的活性,优选增强的活性Activity。
在第十一方面的第三实施方式中,其也是第十一方面的第一和第二实施方式中的实施方式,变体的KM值小于190mM,优选地小于170mM,更优选地小于160mM,并且最优选152mM且更小。
在第十一方面的第四实施方式中,其也是第十一方面的第一、第二和第三实施方式中的实施方式,变体具有以74℃的温度下温育变体15分钟后的残留活性表达的热稳定性,其中变体具有至少30%的残留活性,优选具有至少40%的残留活性,并且更优选具有至少60%的残留活性,并且最优选具有62%的残留活性。
在第十一方面的第五实施方式中,其也是第十一方面的第一、第二、第三和第四实施方式中的实施方式,与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,相比,变体具有至少1.2倍至3.0倍,优选至少1.3倍至3.0倍,优选为至少1.4倍至3.0倍,更优选至少1.5倍至3.0倍,并且最优选至少1.5倍至2.2倍的200mM果糖浓度下将果糖转化成葡萄糖的增强的活性,优选增强的活性Activity。
在第十一方面的优选实施方式中,其也是第十一方面的第一、第二、第三,第四和第五实施方式中的实施方式,与SEQ ID NO:1相比,变体具有至少1.2倍至5倍,优选至少1.5倍至5倍,更优选至少1.9倍至5倍,更优选至少1.9倍至3.5倍,最优选至少2.2倍至3.3倍的多肽,优选葡萄糖异构酶,的以葡萄糖形成表达的将果糖转化为葡萄糖的增强的催化活性。
在第十二方面中,其也是第十二方面的第一实施方式,通过具有增强的可溶性表达水平的链霉菌(Streptomyces sp.SK)的葡萄糖异构酶变体解决了本发明的问题,可溶性表达水平(Soluble Expression Level)定义为变体的可溶性表达水平与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,的可溶性表达水平的比,其中可溶性表达水平至少为1.1,优选可溶性表达水平是至少1.3,并且更优选可溶性表达水平是至少1.4,并且最优选可溶性表达水平是至少1.6。
在第十三方面中,其也是第十三方面的第一实施方式,通过包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的葡萄糖异构酶的葡萄糖异构酶变体解决了本发明的问题,其中变体具有增强的可溶性表达水平,其定义为所述变体的可溶性表达水平与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,的可溶性表达水平之比,其中可溶性表达水平至少为1.1,优选可溶性表达水平水平为至少1.3,更优选可溶性表达水平为至少1.4,最优选可溶性表达水平为至少1.6。
在第十二方面的第二实施方式中,其也是第十二方面的第一实施方式中的实施方式,在第十三方面的第二实施方式中,其也是第十三方面的第一实施方式中的实施方式,变体具有
(i)与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,相比,至少是1.1倍至3.0倍,优选至少1.4倍至3.0倍,更优选至少1.6倍至3.0倍,甚至更优选至少1.7倍至3.0倍,最优选至少1.7倍至2.4倍的用于在50mM果糖浓度下将果糖转化为葡萄糖的增强的活性,优选增强的活性Activity;
(ii)具有小于190mM,优选小于170mM,更优选小于160mM,最优选152mM和更小的KM值;和/或
(iii)具有以74℃的温度下温育变体15分钟后的残留活性表达的热稳定性,其中该变体具有至少30%的残留活性,优选具有至少40%的残留活性,并且更优选具有至少60%的残留活性,并且最优选具有62%的残留活性;和/或(iv)与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,相比,具有至少1.2倍至3.0倍,优选至少1.3倍至3.0倍,优选至少1.4倍至3.0倍,更优选至少1.5倍至3.0倍,并且最优选至少1.5倍至2.2倍的用于在200mM果糖浓度下将果糖转化为葡萄糖的增强的活性,优选增强的活性Activity;和/或
(v)与SEQ ID NO:1的多肽相比,具有至少1.2倍至5倍,优选至少1.5倍至5倍,更优选至少1.9倍至5倍,再更优选至少1.9倍至3.5倍,最优选至少2.2倍至3.3倍的以葡萄糖形成表达的将果糖转化为葡萄糖的增强的催化活性。
在第四方面的第22实施方式中,其也是第四方面的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20和21实施方式中的任一个中的实施方式,多肽,优选葡萄糖异构酶,包含如第一方面的任一实施方式中所定义的氨基酸序列,包括第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143和144实施方式中的任一个或第一方面的其他实施方式中的任一个,如第二方面的任一实施方式所定义的,包括第二方面的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12和13实施方式中的任一个,优选地如在第三方面的任一实施方式中所定义的,优选地如第三方面的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134和135实施方式中的任一个所定义的。
在第五方面的第六实施方式中,其也是第五方面的第一、第二、第三、第四和第五实施方式中的任一个中的实施方式,在第六方面的第三实施方式中,其也是第六方面的第一和第二实施方式中的任一个中的实施方式,在第七方面的第三实施方式中,其也是第七方面的第一和第二实施方式中的任一个中的实施方式,在第八方面的第六实施方式中,其也是第八方面的第一、第二、第三、第四和第五实施方式中的任一个中的实施方式,在第九方面的第三实施方式中,其也是在第九方面的第一和第二实施方式中的任一个中的实施方式,在第十方面的第三方面中,其也是第十方面的第一和第二实施方式中的实施方式,在第十一方面的第六实施方式中,其也是第十一方面的第一、第二、第三、第四和第五实施方式中的任一个中的实施方式,在第十二方面的第三实施方式中,其也是第十二方面的第一和第二实施方式中的任一个中的实施方式,在第十三方面的第三实施方式中,其也是第十三方面的第一和第二实施方式中的任一个中的实施方式,变体包含在第一方面的任何实施方式中定义的氨基酸序列,包括第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102,103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143和144实施方式中的任一个或第一方面的其他实施方式中的任一个,如第二方面的任一实施方式所定义的,包括第二方面的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13实施方式中的任一个,如第三方面的任一实施方式所定义的,优选如第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102,103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134和第135实施方式中的任一个或第一方面的其他实施方式中的任一个中所定义的。
在第十四方面中,其也是在第十四方面的第一实施方式,通过将酮糖分子转化为醛糖分子的方法解决了本发明的问题,其中该方法包括使酮糖分子与葡萄糖异构酶反应,葡萄糖异构酶如第一方面的任一实施方式中所定义的,包括第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144实施方式中的任一个或第一方面的其他实施方式中的任一个,如第二方面的任一实施方式中所定义的,包括第二方面的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12和13实施方式中的任一个,并且如第三方面的任一实施方式中所定义的,或者如第四方面的任一实施方式中所定义的,包括第四方面的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21和22实施方式中的任一个,如在第五方面的任一实施方式中所定义的,包括第五方面的第1、2、3、4、5和6实施方式中的任一个,如第六方面的任一实施方式中所定义的,包括第1、2和3实施方式中的任一个,如第七方面的任一实施方式中所定义的,包括第七方面的第一、第二和第三实施方式中的任一个,如第八方面的任一实施方式中所定义的,包括第八方面的第1、2、3、4、5和6实施方式中的任一个,如第九方面的任一实施方式所定义的,包括第九方面的第一、第二和第三实施方式中的任一个,如第十方面的任一实施方式中所定义的,包括第十方面的第一、第二和第三实施方式中的任一个,如第十一方面的任一实施方式所定义的,包括第十一方面的第一、第二、第三、第四、第五和第六实施方式中的任一个,如第十二方面的任一实施方式中所定义的,包括第十二方面的第一,第二和第三实施方式中的任一个,如第十三方面的任一实施方式所定义的,包括第十三方面的第一、第二和第三实施方式中的任一个。
在第十五方面中,其也是在第十五方面的第一实施方式,通过将果糖转化成葡萄糖的方法解决了本发明的问题,其中该方法包括使果糖与葡萄糖异构酶反应,葡萄糖异构酶如第一方面的任一实施方式中定义的,包括第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、143和144实施方式中的任一个或第一方面的其他实施方式中的任一个,如第二方面的任一实施方式中所定义的,包括第二方面的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12和第13实施方式中的任一个,并且如第三方面的任一实施方式中所定义的,或如第四方面的任一实施方式中所定义的,包括第四方面的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21和22实施方式中的任一个,如第五方面的任一实施方式中所定义的,包括如第五方面的第1、2、3、4、5和6实施方式中的任一个,如第六方面的任一实施方式中所定义的,包括第六方面的第1、2和3实施方式中的任一个,如第七方面的任一实施方式中所定义的,包括第七方面的第一、第二和第三实施方式中的任一个,如第八方面的任一实施方式中所定义的,包括第八方面的第一、第二、第三、第四、第五和第六实施方式中的任一个,如第九方面的任一实施方式中所定义的,包括第九方面的第一、第二和第三实施方式中的任一个,如第十方面的任一实施方式中所定义的,包括第十方面的第一、第二和第三实施方式中的一个,如第十一方面的任一实施方式中所定义的,包括第十一方面的第一、第二、第三、第四、第五和第六实施方式中的任一个,如第十二方面中的任一实施方式中所定义的,包括第十二方面的第一、第二和第三实施方式中的任一个,如第十三方面的任一实施方式中所定义的,包括第十三方面的第一、第二和第三实施方式中的任一个。
在第十四方面的第二实施方式中,其也是第十四方面的第一实施方式中的实施方式,且在第十五方面的第二实施方式中,其也是第十五方面的第一实施方式中的实施方式,反应是可逆的。
在第十六方面中,其也是第十六方面的第一实施方式,通过一种制备葡萄糖的方法解决了本发明的基本问题,所述方法包括在葡萄糖异构酶的存在下使果糖反应,其中所述葡萄糖异构酶
(i)的KM值小于190mM,优选小于170mM,更优选小于160mM,最优选152mM和更小,和/或
(ii)与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,相比,至少1.1倍至3.0倍,优选至少1.4倍至3.0倍,更优选至少1.6倍至3.0倍,甚至更优选至少1.7倍至3.0倍并且最优选至少1.7倍至2.4倍的用于在50mM果糖浓度下将果糖转化为葡萄糖的增强的活性,优选增强的活性Activity;和/或
(iii)具有以74℃的温度下温育葡萄糖异构酶15分钟后的残留活性表达的热稳定性,其中变体具有至少30%的残留活性,优选具有至少40%的残留活性,并且更优选具有至少60%的残留活性,并且最优选具有62%的残留活性;和/或
(iv)具有增强的可溶性表达水平,其定义为葡萄糖异构酶的可溶性表达水平与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,的表达水平的比,其中可溶性表达水平为至少1.1,优选可溶性表达水平为至少1.3,更优选可溶性表达水平为至少1.4,最优选可溶性表达水平为至少1.6;和/或
(v)与SEQ ID NO:1的多肽相比,具有至少1.2倍至5倍,优选至少1.5倍至5倍,更优选至少1.9倍至5倍,再更优选至少1.9倍至3.5倍,以及最优选至少2.2倍至3.3倍的以葡萄糖形成表达的将果糖转化为葡萄糖的增强的催化活性。
在第十六方面的第二实施方式中,其也是第十六方面的第一实施方式中的实施方式,葡萄糖异构酶是突变体葡萄糖磷酸化酶。
在第十六方面的第三实施方式中,其也是第十六方面的第一和第二实施方式中的实施方式,葡萄糖异构酶是重组葡萄糖异构酶。
在第十四方面的第三实施方式中(其是第十四方面的第一和第二实施方式中的实施方式),在第十五方面的第三实施方式中(其是第十五方面的第一和第二实施方式中的实施方式)以及在第十六方面的第四实施方式中(其是第十六方面的第一、第二和第三实施方式中的实施方式),葡萄糖异构酶以非固定形式存在。
在第十四方面的第四实施方式中(其是第十四方面的第一和第二实施方式中的实施方式),在第十五方面的第四实施方式中(其是第十五方面的第一和第二实施方式中的实施方式)以及在第十六方面的第五实施方式中(其是第十六方面的第一、第二和第三实施方式中的实施方式),葡萄糖异构酶以固定形式存在。
在第十四方面的第五实施方式中(其是第十四方面的第一、第二、第三和第四实施方式中的实施方式),在第十五方面的第五实施方式中(其是第十五方面的第一、第二、第三和第四实施方式中的实施方式)以及在第十六方面的第六实施方式中(其是第十六方面的第一、第二、第三、第四和第五实施方式中的实施方式),葡萄糖异构酶是如第一方面的任一实施方式中所定义的葡萄糖异构酶,包括第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144实施方式中的任一个或第一方面的其他实施方式中的任一个所定义的,如第二方面中的任一实施方式所定义的,包括第二方面的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13实施方式中的任一个,以及如第三方面中的任一实施方式所定义的,或如第四方面的任一实施方式所定义的,包括第四方面的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21和22实施方式中任一个,如第五方面的任一实施方式所定义的,包括第五方面的第1、2、3、4、5和6实施方式中的任一个,如第六方面的任一实施方式所定义的,包括第六方面的第1、2和3实施方式中的任一个,如第七方面的任一实施方式所定义的,包括第七方面的第1、2和3实施方式中的任一个,如第八方面的任一实施方式所定义的,包括第八方面的第1、2、3、4、5和6实施方式中的任一个,如第九方面的任一实施方式中定义的,包括第九方面的第1、2和3实施方式中的任一个,如第十方面的任一实施方式所定义的,包括第十方面的第1、2和3实施方式中的任一个,如第十一方面的任一实施方式所定义的,包括第十一方面的第1、2、3、4、5和6实施方式中的任一个,如第十二方面的任一实施方式所定义的,包括第十二方面的第1、2和3实施方式中的任一个,如第十三方面的任一实施方式所定义的,包括第十三方面的第1、2和3实施方式中的任一个。
在第十七方面中(其也是在第十七方面的第一实施方式),通过使用葡萄糖异构酶生产葡萄糖来解决本发明的基本问题,其中葡萄糖异构酶如第一方面的任一实施方式中所定义的,包括第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、144实施方式中的任一个或第一方面的其他实施方式中的任一个所定义的,如第二方面中的任一实施方式所定义的,包括第二方面的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13实施方式中的任一个,以及如第三方面中的任一实施方式所定义的,或如第四方面的任一实施方式所定义的,包括第四方面的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21和22实施方式中任一个,如第五方面的任一实施方式所定义的,包括第五方面的第1、2、3、4、5和6实施方式中的任一个,如第六方面的任一实施方式所定义的,包括第六方面的第1、2和3实施方式中的任一个,如第七方面的任一实施方式所定义的,包括第七方面的第1、2和3实施方式中的任一个,如第八方面的任一实施方式所定义的,包括第八方面的第1、2、3、4、5和6实施方式中的任一个,如第九方面的任一实施方式中定义的,包括第九方面的第1、2和3实施方式中的任一个,如第十方面的任一实施方式所定义的,包括第十方面的第1、2和3实施方式中的任一个,如第十一方面的任一实施方式所定义的,包括第十一方面的第1、2、3、4、5和6实施方式中的任一个,如第十二方面的任一实施方式所定义的,包括第十二方面的第1、2、3和4实施方式中的任一个,如第十三方面的任一实施方式所定义的,包括第十三方面的第1、2和3实施方式中的任一个。
在第十八方面中,其也是第十八方面的第一实施方式,解决了本发明的基本问题,其通过增强多肽,优选葡萄糖异构酶,的在50mM果糖浓度下将果糖转化为葡萄糖的活性的方法,其中该方法包括:
-将第一葡萄糖异构酶的氨基酸序列与第二葡萄糖异构酶的氨基酸序列比对,
-识别第二葡萄糖异构酶的氨基酸序列的、对应于第一葡萄糖异构酶的氨基酸序列的一个或多个氨基酸位置的一个或多个氨基酸位置,其中第一葡萄糖异构酶的氨基酸序列的一个或多个氨基酸位置处的氨基酸残基的取代增强了第一葡萄糖异构酶的活性,
-在第二葡萄糖异构酶的、对应于第一葡萄糖异构酶的氨基酸序列的一个或多个氨基酸位置的一个或多个氨基酸位置处取代氨基酸残基,其中第一葡萄糖异构酶的氨基酸序列的一个或多个氨基酸位置处的氨基酸残基的取代增强了第一葡萄糖异构酶的、在50mM果糖浓度下将果糖转化为葡萄糖的活性;
其中第一葡萄糖异构酶是包含根据SEQ ID NO:1的氨基酸序列的葡萄糖异构酶。
在第十八方面的第二实施方式中,其也是第十八方面的第一实施方式中的实施方式,该方法包括
-测试在第二葡萄糖异构酶的、对应于第一葡萄糖异构酶的氨基酸序列的一个或多个氨基酸位置的一个或多个氨基酸位置处的取代的氨基酸残基是否导致与第一葡萄糖异构酶的在50mM果糖浓度下将果糖转化为葡萄糖的活性相比的、第二葡萄糖异构酶的在50mM果糖浓度下将果糖转化为葡萄糖的增强的活性,优选增强的活性Activity。
在第十八方面的第三实施方式中,其也是第十八方面的第一和第二实施方式中的实施方式,在第二葡萄糖异构酶的、对应于第一葡萄糖异构酶的氨基酸序列的一个或多个氨基酸位置的一个或多个氨基酸位置处的氨基酸残基被取代,使得取代的氨基酸残基导致第二葡萄糖异构酶的、在50mM果糖浓度下将果糖转化为葡萄糖的增强的活性,优选增强的活性Activity。
在第十九方面中,其也是第十九方面的第一实施方式,解决了本发明的基本问题,其通过增强多肽,优选葡萄糖异构酶,的在200mM果糖浓度下将果糖转化为葡萄糖的活性的方法,其中该方法包括:
-将第一葡萄糖异构酶的氨基酸序列与第二葡萄糖异构酶的氨基酸序列比对,
-识别第二葡萄糖异构酶的氨基酸序列的、对应于第一葡萄糖异构酶的氨基酸序列的一个或多个氨基酸位置的一个或多个氨基酸位置,其中第一葡萄糖异构酶的氨基酸序列的一个或多个氨基酸位置处的氨基酸残基的取代增强了第一葡萄糖异构酶的活性,
-在第二葡萄糖异构酶的、对应于第一葡萄糖异构酶的氨基酸序列的一个或多个氨基酸位置的一个或多个氨基酸位置处取代氨基酸残基,其中第一葡萄糖异构酶的氨基酸序列的一个或多个氨基酸位置处的氨基酸残基的取代增强了第一葡萄糖异构酶的、在200mM果糖浓度下将果糖转化为葡萄糖的活性;
其中第一葡萄糖异构酶是包含根据SEQ ID NO:1的氨基酸序列的葡萄糖异构酶。
在第十九方面的第二实施方式中,其也是第十九方面的第一实施方式中的实施方式,该方法包括
-测试在第二葡萄糖异构酶的、对应于第一葡萄糖异构酶的氨基酸序列的一个或多个氨基酸位置的一个或多个氨基酸位置处的取代的氨基酸残基是否导致与第一葡萄糖异构酶的在200mM果糖浓度下将果糖转化为葡萄糖的活性相比的、第二葡萄糖异构酶的在200mM果糖浓度下将果糖转化为葡萄糖的增强的活性,优选增强的活性Activity。
在第十九方面的第三实施方式中,其也是第十九方面的第一和第二实施方式中的实施方式,在第二葡萄糖异构酶的、对应于第一葡萄糖异构酶的氨基酸序列的一个或多个氨基酸位置的一个或多个氨基酸位置处的氨基酸残基被取代,使得取代的氨基酸残基导致第二葡萄糖异构酶的、在200mM果糖浓度下将果糖转化为葡萄糖的增强的活性,优选增强的活性Activity。
在第二十方面中,其也是第二十方面的第一实施方式,通过用于降低多肽,优选葡萄糖异构酶,的针对果糖的KM值的方法解决了本发明的问题,其中该方法包括:
-将第一葡萄糖异构酶的氨基酸序列与第二葡萄糖异构酶的氨基酸序列比对,
-识别第二葡萄糖异构酶的氨基酸序列的、对应于第一葡萄糖异构酶的氨基酸序列的一个或多个氨基酸位置的一个或多个氨基酸位置,其中第一葡萄糖异构酶的氨基酸序列的一个或多个氨基酸位置处的氨基酸残基的取代降低了第一葡萄糖异构酶的KM值,
-在第二葡萄糖异构酶的、对应于第一葡萄糖异构酶的氨基酸序列的一个或多个氨基酸位置的一个或多个氨基酸位置处取代氨基酸残基,其中第一葡萄糖异构酶的氨基酸序列的一个或多个氨基酸位置处的氨基酸残基的取代降低了第一葡萄糖异构酶的KM值;
其中第一葡萄糖异构酶是包含根据SEQ ID NO:1的氨基酸序列的葡萄糖异构酶。
在第二十方面的第二实施方式中,其也是第二十方面的第一实施方式中的实施方式,该方法包括
-测试在第二葡萄糖异构酶的、对应于第一葡萄糖异构酶的氨基酸序列的一个或多个氨基酸位置的一个或多个氨基酸位置处的取代的氨基酸残基是否导致与第一葡萄糖异构酶的KM值相比的降低的KM值。
在第二十方面的第三实施方式中,其也是第二十方面的第一和第二实施方式中的实施方式,在第二葡萄糖异构酶的、对应于第一葡萄糖异构酶的氨基酸序列的一个或多个氨基酸位置的一个或多个氨基酸位置处的氨基酸残基被取代,使得取代的氨基酸残基导致第二葡萄糖异构酶的降低的KM值。
在第二十一方面(也是第二十一方面的第一实施方式)中,通过增强多肽(优选葡萄糖异构酶)的可溶性表达的方法解决了本发明的基本问题,其中该方法包括:
-将第一葡萄糖异构酶的氨基酸序列与第二葡萄糖异构酶的氨基酸序列比对,
-识别第二葡萄糖异构酶的氨基酸序列的、对应于第一葡萄糖异构酶的氨基酸序列的一个或多个氨基酸位置的一个或多个氨基酸位置,其中第一葡萄糖异构酶的氨基酸序列的一个或多个氨基酸位置处的氨基酸残基的取代增强了第一葡萄糖异构酶的可溶性表达,
-在第二葡萄糖异构酶的、对应于第一葡萄糖异构酶的氨基酸序列的一个或多个氨基酸位置的一个或多个氨基酸位置处取代氨基酸残基,其中第一葡萄糖异构酶的氨基酸序列的一个或多个氨基酸位置处的氨基酸残基的取代增强了第一葡萄糖异构酶的可溶性表达;
其中第一葡萄糖异构酶是包含根据SEQ ID NO:1的氨基酸序列的葡萄糖异构酶。
在第二十一方面的第二实施方式中,其也是第二十一方面的第一实施方式中的实施方式,其中该方法包括:
-测试在第二葡萄糖异构酶的、对应于第一葡萄糖异构酶的氨基酸序列的一个或多个氨基酸位置的一个或多个氨基酸位置处的取代的氨基酸残基是否导致与第一葡萄糖异构酶的可溶性表达相比的增强的可溶性表达。
在第二十一方面的第三实施方式中,其也是第二十一方面的第一和第二实施方式中的实施方式,在第二葡萄糖异构酶的、对应于第一葡萄糖异构酶的氨基酸序列的一个或多个氨基酸位置的一个或多个氨基酸位置处的氨基酸残基被取代,使得取代的氨基酸残基导致第二葡萄糖异构酶的增强的可溶性表达。
在第十八方面的第四实施方式中(其也是第十八方面的第一、第二和第三实施方式中的任一个中的实施方式),在第十九方面的第四实施方式中(其也是第十九方面的第一、第二和第三实施方式中的任一个中的实施方式),在第二十方面的第四实施方式中(其也是第二十方面的第一、第二和第三实施方式中的任一个中的实施方式),在第二十一方面的第四实施方式中(其也是第二十一方面的第1、2和3实施方式中的任一个中的实施方式),第一葡萄糖异构酶的氨基酸序列与第二葡萄糖异构酶的氨基酸序列之间的同源性是至少50%。
在第十八方面的第五实施方式中(其也是第十八方面的第四实施方式中的实施方式),在第十九方面的第五实施方式中(其也是第十九方面的第四实施方式中的实施方式),在第二十方面的第五实施方式中(其也是第二十方面的第四实施方式中的实施方式),在第二十一方面的第五实施方式中(其也是第二十一方面的第四实施方式中的实施方式),同源性是至少55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%,优选同源性至少为55%、75%、90%、95%、98%或99%。
在第十八方面的第六实施方式中(其也是第十八方面的第一、第二和第三实施方式中的任一个中的实施方式),在第十九方面的第六实施方式中(其也是第十九方面的第一、第二和第三实施方式中的任一个中的实施方式),在第二十方面的第六实施方式中(其也是第二十方面的第一、第二和第三实施方式中的任一个中的实施方式),在第二十一方面的第六实施方式中(其也是第二十一方面的第一、第二和第三实施方式中的任一个中的实施方式),第一葡萄糖异构酶的氨基酸序列与第二葡萄糖异构酶的氨基酸序列之间的同一性是至少50%。
在第十八方面的第七实施方式中(其也是第十八方面的第六实施方式中的实施方式),在第十九方面的第七实施方式中(其也是第十九方面的第六实施方式中的实施方式),在第二十方面的第七实施方式中(其也是第二十方面的第六实施方式中的实施方式),在第二十一方面的第七实施方式中(其也是第二十一方面的第六实施方式中的实施方式),同一性是至少55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%,优选同一性至少为55%、75%、90%、95%、98%或99%。
在第十八方面的第八实施方式中(其也是第十八方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六和第七实施方式中的任一个中的实施方式),在第十九方面的第八实施方式中(其也是第十九方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六和第七实施方式中的任一个中的实施方式),在第二十方面的第八实施方式中(其也是第二十方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六和第七实施方式中的任一个中的实施方式),在第二十一方面的第八实施方式中(其也是第二十一方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六和第七实施方式中的任一个中的实施方式),第一葡萄糖异构酶的氨基酸序列的一个或多个氨基酸位置各自并且独立地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置10、33、34、35、53、59、89、90和95。
在第十八方面的第九实施方式中(其也是第十八方面的第八实施方式中的实施方式),在第十九方面的第九实施方式中(其也是第十九方面的第八实施方式中的实施方式),在第二十方面的第九实施方式中(其也是第二十方面的第八实施方式中的实施方式),在第二十一方面的第九实施方式中(其也是第二十一方面的第八实施方式中的实施方式),第一葡萄糖异构酶的氨基酸序列的一个或多个氨基酸位置独立地并且单独地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置R10、A33、L34、D35、F53、I59、A89、T90和T95,并且优选地选自由下列组成的组:SEQ ID NO:1氨基酸位置R10、A33、L34、D35、I59、A89、T90和T95。
在第十八方面的第十实施方式中(其也是第十八方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八和第九实施方式中的任一个中的实施方式),在第十九方面的第十实施方式中(其也是第十九方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八和第九实施方式中的任一个中的实施方式),在第二十方面的第十实施方式中(其也是第二十方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八和第九实施方式中的任一个中的实施方式),在第二十一方面的第十实施方式中(其也是第二十一方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八和第九实施方式中的任一个中的实施方式),取代的氨基酸残基为H或K,优选K,用于第二葡萄糖异构酶的、对应于第一葡萄糖异构酶的SEQ ID NO:1的氨基酸位置10的氨基酸位置;
I、L、V、G、N、M、C、S、Q或T,优选I和N,且最优选I,用于第二葡萄糖异构酶的、对应于第一种葡萄糖异构酶的SEQ ID NO:1的氨基酸位置33的氨基酸位置;
F、W、Y或P,优选F,用于第二葡萄糖异构酶的、对应于第一种葡萄糖异构酶的SEQID NO:1的氨基酸位置34的氨基酸位置;
G、N、M、C、S、Q或T,优选C或S,最优选S,用于第二葡萄糖异构酶的、对应于第一种葡萄糖异构酶的SEQ ID NO:1的氨基酸位置35的氨基酸位置;
A、I、L或V,优选L,用于第二葡萄糖异构酶的、对应于第一种葡萄糖异构酶的SEQID NO:1的氨基酸位置53的氨基酸位置;
F、W、Y或P,并且优选F,用于第二葡萄糖异构酶的、对应于第一种葡萄糖异构酶的SEQ ID NO:1的氨基酸位置59的氨基酸位置;
I、L或V,并且优选V,用于第二葡萄糖异构酶的、对应于第一种葡萄糖异构酶的SEQID NO:1的氨基酸位置89的氨基酸位置;
G、N、M、C、S或Q,优选S,用于第二葡萄糖异构酶的、对应于第一种葡萄糖异构酶的SEQ ID NO:1的氨基酸位置90的氨基酸位置;
F、W、Y、P、R、H或K,优选Y或R,最优选Y,用于第二葡萄糖异构酶的、对应于第一种葡萄糖异构酶的SEQ ID NO:1的氨基酸位置95的氨基酸位置。
在第十八方面的第十一实施方式中(其也是第十八方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九和第十实施方式中的任一个中的实施方式),在第十九方面的第十一实施方式中(其也是第十九方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九和第十实施方式中的任一个中的实施方式),在第二十方面的第十一实施方式中(其也是第二十方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九和第十实施方式中的任一个中的实施方式),在第二十一方面的第十一实施方式中(其也是第二十一方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九和第十实施方式中的任一个中的实施方式),如果第二葡萄糖异构酶的、对应于第一葡萄糖异构酶的氨基酸序列的一个或多个氨基酸位置的氨基酸残基与第一葡萄糖异构酶的取代的氨基酸残基相同,则第二葡萄糖异构酶的氨基酸残基未被取代。
在第十八方面的第十二实施方式中(其也是第十八方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十和第十一实施方式中的任一个中的实施方式),在第十九方面的第十二实施方式中(其也是第十九方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十和第十一实施方式中的任一个中的实施方式),在第二十方面的第十二实施方式中(其也是第二十方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十和第十一实施方式中的任一个中的实施方式),在第二十一方面的第十二实施方式中(其也是第二十一方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十和第十一实施方式中的任一个中的实施方式),葡萄糖异构酶的在50mM果糖浓度下将果糖转化为葡萄糖的增强的活性(优选增强的活性Activity)以本说明书中定义的归一化活性值(NormalizedActivity value)表达。
在第十八方面的第十三实施方式中(其也是第十八方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一和第十二实施方式中的任一个中的实施方式),在第十九方面的第十三实施方式中(其也是第十九方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一和第十二实施方式中的任一个中的实施方式),在第二十方面的第十三实施方式中(其也是第二十方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一和第十二实施方式中的任一个中的实施方式),在第二十一方面的第十三实施方式中(其也是第二十一方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一和第十二实施方式中的任一个中的实施方式),多肽的在200mM果糖浓度下将果糖转化为葡萄糖的增强的活性(优选增强的活性Activity)比以本说明书中定义的归一化活性值表达。
在第十八方面的第十四实施方式中(其也是第十八方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二和第十三实施方式中的任一个中的实施方式),在第十九方面的第十四实施方式中(其也是第十九方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二和第十三实施方式中的任一个中的实施方式),在第二十方面的第十四实施方式中(其也是第二十方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二和第十三实施方式中的任一个中的实施方式),在第二十一方面的第十四实施方式中(其也是第二十一方面的第一、第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二和第十三实施方式中的任一个中的实施方式),葡萄糖异构酶的增强的可溶性表达以本说明书中定义的可溶性表达水平值来表达。
本文在其各个方面和实施方式中描述的葡萄糖异构酶也可以称为本发明的葡萄糖异构酶。本发明的葡萄糖异构酶是野生型葡萄糖异构酶的突变体,其是通过酶工程获得的,且与野生型葡萄糖异构酶相比,其特征在于增强的活性,优选活性Activity,和/或针对果糖的降低的KM值,两者都能导致低果糖浓度下果糖至葡萄糖的提高的转化率和/或增强的可溶性表达和/或增强的-热稳定性。
具体而言,本发明的葡萄糖异构酶涉及来自链霉菌(Streptomyces sp.SK)的野生型葡萄糖异构酶的葡萄糖异构酶变体,其与野生型葡萄糖异构酶相比,显示出就将果糖转化成葡萄糖而言改善的活性(优选活性Activity)和/或针对果糖的降低的KM值。在优选的实施方式中,与野生型葡萄糖异构酶相比,本发明的葡萄糖异构酶在重组表达系统例如本文的表达系统中还显示出改善的可溶性表达,和/或还显示出其热稳定性没有或仅轻微降低,和/或表现出在以葡萄糖形成表达的将果糖转化为葡萄糖的增强的催化活性。
来自链霉菌(Streptomyces sp.SK)的野生型葡萄糖异构酶具有根据SEQ ID NO:1的氨基酸序列并且取自GenBank数据库。酶序列由Borgi等人(Biochimie,86,561-568,2004)阐明,并保藏在GenBank序列数据库中(NCBI登录号:CAA75672.2,首次保藏于1997年11月14日)。
本发明基于令人惊讶的发现,即来自链霉菌(Streptomyces sp.SK)的EC编号EC5.3.1.5的SEQ ID NO:1的野生型葡萄糖异构酶可以通过酶工程被改善,以这样的方式提供低底物浓度下在中等温度优选在诸如约30℃至约50℃的温度下将果糖转化为葡萄糖的高活性。
本发明人惊奇地发现,替代SEQ ID NO:1的氨基酸序列的下列氨基酸位置中的一个或多个处的氨基酸残基适合于改善SEQ ID NO:1的10、33、34、35、53、59、89、90和95的葡萄糖异构酶的反应特性。在SEQ ID NO:1中的这些氨基酸位置中,SEQ ID NO:1氨基酸位置10、33、34、35、59、89、90和95,和/或SEQ ID NO:1氨基酸位置10、33、34、35和59,和/或SEQID NO:1氨基酸位置10、33和35,SEQ ID NO:1中的每一个是特别合适的,且尤其SEQ ID NO:1氨基酸位置10、33、53、90和95,和/或SEQ ID NO:1氨基酸位置10、89、90和95,和/或SEQ IDNO:1氨基酸位置10、90和95,SEQ ID NO:1中的每一个甚至是更合适的。
在本发明的范围内,本发明的葡萄糖异构酶在SEQ ID NO:1的给定氨基酸残基位置,优选在一个给定氨基酸残基位置处包含一个氨基酸突变。本发明的异构酶仅包含一个单一突变的实施方式中,SEQ ID NO:1的突变氨基酸残基位置与SEQ ID NO:1的氨基酸位置53不同,即本发明的葡萄糖异构酶的突变氨基酸残基与SEQ ID NO:1的氨基酸序列的氨基酸位置53不同。在本发明的葡萄糖异构酶仅包含一个单一突变的本发明的另一个实施方式中,SEQ ID NO:1的突变氨基酸残基位置是SEQ ID NO:1的氨基酸位置53,其中突变氨基酸不同于亮氨酸。在本发明的葡萄糖异构酶仅包含一个单一突变的本发明的实施方式中,SEQID NO:1的突变氨基酸残基位置不同于SEQ ID NO:1的氨基酸位置90,即本发明的葡萄糖异构酶的突变氨基酸残基与SEQ ID NO:1的氨基酸序列的氨基酸位置90不同。在本发明的葡萄糖异构酶仅包含一个单一突变的本发明的另一个实施方式中,SEQ ID NO:1的突变氨基酸残基位置是SEQ ID NO:1的氨基酸位置90,由此突变氨基酸不同于丝氨酸。在本发明的葡萄糖异构酶仅包含一个单一突变的本发明的实施方式中,SEQ ID NO:1的突变氨基酸残基位置不同于SEQ ID NO:1的氨基酸位置89,即本发明的葡萄糖异构酶的突变氨基酸残基与SEQ ID NO:1的氨基酸序列的氨基酸位置89不同。在本发明的葡萄糖异构酶仅包含一个单一突变的本发明的另一个实施方式中,SEQ ID NO:1的突变氨基酸残基位置是SEQ ID NO:1的氨基酸位置89,由此突变氨基酸不同于缬氨酸。
在本发明范围内,本发明的葡萄糖异构酶在SEQ ID NO:1的两个或更多个氨基酸残基位置,优选在两个或更多个氨基酸残基位置处包含氨基酸突变。在仅在给定的氨基酸残基位置处包含一个氨基酸突变的本发明的葡萄糖异构酶中,本发明的在两个或更多个氨基酸残基位置处包含氨基酸突变的葡萄糖异构酶显示出令人惊讶和意想不到的效果。在葡萄糖异构酶在三个或四个或五个氨基酸残基位置处包含突变的本发明的葡萄糖异构酶的那些实施方式中,这样的令人惊讶和出乎意料的效果可能甚至更加明显。
在本发明的葡萄糖异构酶在两个或更多个氨基酸残基位置,优选在SEQ ID NO:1的两个或更多个氨基酸残基位置处包含氨基酸突变的本发明的各个方面的实施方式中,本发明的葡萄糖异构酶不同于在SEQ ID NO:1的氨基酸位置53处包含突变的葡萄糖异构酶,优选地,本发明的葡萄糖异构酶与在SEQ ID NO:1的氨基酸位置53处包含突变的葡萄糖异构酶不同,由此突变氨基酸不同于亮氨酸。在本发明的葡萄糖异构酶在两个或更多个氨基酸残基位置,优选在SEQ ID NO:1的两个或更多个氨基酸残基位置处包含氨基酸突变的本发明的各个方面的实施方式中,本发明的葡萄糖异构酶不同于在SEQ ID NO:1的氨基酸位置90处包含突变的葡萄糖异构酶,优选地,本发明的葡萄糖异构酶与在SEQ ID NO:1的氨基酸位置90处包含突变的葡萄糖异构酶不同,由此突变氨基酸不同于丝氨酸。在本发明的葡萄糖异构酶在两个或更多个氨基酸残基位置,优选在SEQ ID NO:1的两个或更多个氨基酸残基位置处包含氨基酸突变的本发明的各个方面的实施方式中,本发明的葡萄糖异构酶不同于在SEQ ID NO:1的氨基酸位置89处包含突变的葡萄糖异构酶,优选地,本发明的葡萄糖异构酶与在SEQ ID NO:1的氨基酸位置89处包含突变的葡萄糖异构酶不同,由此突变氨基酸不同于缬氨酸。
葡萄糖异构酶的性能可以通过几种特征来评价,例如,在50mM果糖浓度下将果糖转化为葡萄糖的活性,优选活性Activity;在200mM果糖浓度下将果糖转化为葡萄糖的活性,优选为活性Activity;以温育,优选74℃下温育15分钟后的残留活性表达的热稳定性,KM值;可溶性表达水平;和葡萄糖形成。
在本发明的全文中,当这些特征中的一个或多个按照以下情况被实现时,葡萄糖异构酶的性能被改善,例如,50mM果糖浓度下果糖转化为葡萄糖的活性,优选活性Activity被增强;200mM果糖浓度下果糖转化为葡萄糖的活性,优选活性Activity被增强;当以温育,优选在74℃下温育15分钟后的残留活性表达的热稳定性高于40%,优选高于60%时;当KM值减小到小于190mM时;当可溶性表达水平增强时;和/或当葡萄糖形成增强时。用于评估葡萄糖异构酶(包括本发明的特征)的特征的优选组合是50mM果糖浓度下果糖转化为葡萄糖的活性,优选活性Activity,以温育后的残留活性表达的热稳定性,以及增强的可溶性表达水平。另一个优选的组合是50mM果糖浓度下果糖转化为葡萄糖的活性,优选活性Activity,增强的可溶性表达水平和KM值。又一个优选的组合是50mM果糖浓度下果糖转化为葡萄糖的活性,优选活性Activity,KM值以及以温育后的残留活性表达的热稳定性。另一种优选的组合是50mM果糖浓度下果糖转化为葡萄糖的活性,优选活性Activity,以及KM值。
在实施方式中,如果没有相反指示,则由本发明的多肽,优选任一葡萄糖异构酶,显示或将要显示的任何活性、酶活性被通过本文公开的方法和测定分别界定且分别测定。因此,用于确定这些特征的测定优选是本文公开的和下列描述的那些。与此相关的是,认为下列定义是指葡萄糖异构酶。然而,在本发明中,非常相同的定义同样适用于多肽,优选地适用于本发明的多肽。还应认识到,术语葡萄糖异构酶和GI在本文中可互换使用。
葡萄糖异构酶活性(在本文中也称为活性):当葡萄糖异构酶催化葡萄糖向果糖的可逆异构化时,可以沿葡萄糖向果糖异构化的方向或从果糖向葡萄糖异构化的方向确定活性,优选活性Activity。为了本发明的目的,葡萄糖异构酶活性定义为在如下描述的测定I或测定II的条件下的果糖向葡萄糖异构化中的活性。在本发明的范围内,在实施方式中,葡萄糖异构酶的任何活性和任一活性,优选活性Activity,都在催化活性之内。1单位的葡萄糖异构酶活性定义为在指定条件下1分钟内催化1μmol果糖转化为葡萄糖的酶的量,其中指定条件为50mM磷酸钾缓冲液pH 7.0、10mM Mg2+和40℃。
测定I:葡萄糖异构酶活性通过使用下列条件在40℃下监测从果糖形成葡萄糖来测定活性:50mM磷酸钾缓冲液pH 7、10mM Mg2+(以MgCl2或MgSO4计)和给定的50或200mM果糖浓度。使用不连续偶联测定法测定通过葡萄糖异构酶的作用从果糖产生的葡萄糖,其中通过己糖激酶将葡萄糖转化为6-磷酸葡萄糖。6-磷酸葡萄糖和NADP通过6-磷酸葡萄糖脱氢酶转化为6-磷酸-葡萄糖酸酯和NADPH。该检测基于测量340nm处NADPH的吸光度。D-GLUCOSE-HK试剂盒(HK/G6P-DH格式)以微孔板形式使用(产品编号为K-GLUHK-110A或K-GLUHK-220A,可从爱尔兰威克洛的Megazyme International Ireland获得)。根据制造商的建议进行测定,并使用外标定量样品中的葡萄糖量。原则上,由葡萄糖异构酶产生的葡萄糖也可以通过本领域已知的任何其他合适的方法来量化。
测定II:通过在下列条件下监测由果糖形成葡萄糖来进行测量葡萄糖异构酶的反应:50mM磷酸钾缓冲液pH 7、10mM MgSO4,50-1000mM果糖浓度和40℃。每毫升反应加入0.1毫升0.25M HCl淬灭反应。由果糖通过葡萄糖异构酶的作用产生的葡萄糖是使用不连续偶联测定法测定的,其中葡萄糖通过葡萄糖氧化酶转化为葡萄糖酸内酯。该反应的副产物过氧化氢被辣根过氧化物酶用来氧化2,2'-叠氮基双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)),生成有色产物,在405nm处有吸光度。将酸淬灭反应的10μL等分试样与90μL含有50mM磷酸钾缓冲液pH 6、1mM ABTS,5U/mL葡萄糖氧化酶和1U/mL辣根过氧化物酶的测定混合物混合。在30℃下温育30分钟后,测量405nm处的吸光度(终点测量)。样品中的葡萄糖量使用外标进行定量,原则上,葡萄糖异构酶产生的葡萄糖也可以通过本领域已知的任何其他方法进行量化。
葡萄糖异构酶体积活性:葡萄糖异构酶体积活性定义为每体积的葡萄糖异构酶活性。为了本发明的目的,体积活性表示为从1毫升(1mL)培养物体积,例如1毫升细菌培养物体积获得的葡萄糖异构酶单位的量。
葡萄糖异构酶归一化活性:葡萄糖异构酶归一化活性是指特异性的葡萄糖异构酶变体的葡萄糖异构酶体积活性,其通过将特异性变体的葡萄糖异构酶体积活性除以葡萄糖异构酶可溶性表达水平来被归一化为其表达水平。
葡萄糖形成:葡萄糖形成是在果糖转化为葡萄糖时,多肽,优选葡萄糖异构酶,的催化活性的指示性度量,且被定义为多肽,优选葡萄糖异构酶,与50mM果糖浓度的果糖在40℃的溶液(50mM磷酸钾缓冲液pH 7)中反应40分钟后产生的葡萄糖的量。通过使用可商购的测试测定法来定量葡萄糖的量,例如D-GLUCOSE-HK试剂盒(HK/G6P-DH格式)(产品编号K-GLUHK-110A或K-GLUHK-220A,可从Megazyme International Ireland(爱尔兰威克洛)获得。葡萄糖形成可以量化为在单个反应中获得的葡萄糖浓度(例如,以mM葡萄糖计),或者量化为由变体多肽(优选葡萄糖异构酶)产生的葡萄糖的量与由SEQ ID NO:1的葡萄糖异构酶产生的葡萄糖的量的比的相对葡萄糖形成。
葡萄糖异构酶可溶性表达水平:葡萄糖异构酶变体的葡萄糖异构酶可溶性表达水平定义为葡萄糖异构酶变体的可溶性表达水平与具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的野生型葡萄糖异构酶的可溶性表达水平的比。葡萄糖异构酶变体的可溶性表达水平通过葡萄糖异构酶变体的无细胞提取物的SDS-PAGE和每单位未处理细菌培养物体积的葡萄糖异构酶的带强度的量化来确定。本领域技术人员知道如何选择用于SDS-PAGE的实验条件,以确保蛋白质的适当分离并允许正确量化。
热稳定性:热稳定性是指酶在给定时间段内暴露于指定高温后抵抗不可逆失活的能力。有许多测量和描述热稳定性的方法。为了本发明的目的,热稳定性是通过测量和描述下述中的一个或多个特征来确定的:任一野生型葡萄糖异构酶和/或野生型葡萄糖异构酶的任何变体,包括且尤其是本发明的任何变体或突变体葡萄糖异构酶。
残留活性是
高温下温育葡萄糖异构酶一定时间后的葡萄糖异构酶的葡萄糖异构酶活性除以同一酶的初始葡萄糖异构酶活性的比,以百分比计。酶的初始活性,优选活性Activity,是未经温度处理即在室温下温育,例如在20-25℃下,并且明确地在温育期间酶完全保持活性的任何温度下,各酶的活性,优选活性Activity。在测量葡萄糖异构酶的残留活性时,原则上可以通过使用任何活性测定法,在任何高温下以及在任何温育时间中确定各葡萄糖异构酶活性。为了本发明的目的,本文描述的测定I与50mM果糖一起使用,并且如实施例中规定的,将酶在74℃下温育15分钟。
Tm 50值是在一温度下将酶温育一定时间后,该酶具有其初始活性的50%,即50%残留活性的温度,以该酶的初始葡萄糖异构酶活性的百分比计。酶的初始活性,优选活性Activity,是未经温度处理即在室温下温育,例如在20-25℃下,并且明确地在温育期间酶完全保持活性的任何温度下,各酶的活性。
在测量葡萄糖异构酶的热稳定性时,原则上可以通过使用任何活性测定法,在任何高温下以及在任何温育时间中确定各葡萄糖异构酶活性。为了本发明的目的,本文描述的测定I与200mM果糖一起使用,并且如实施例中所规定的,将酶在65-85℃的温度下温育15分钟。
据此,本发明在第一方面同样涉及包含氨基酸序列的多肽,优选葡萄糖异构酶,其中葡萄糖异构酶的氨基酸序列与SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有至少95%的同一性和/或至少95%的同源性,其中多肽,优选葡萄糖异构酶,的氨基酸序列在一个或多个氨基酸位置处包含氨基酸取代,其中一个或多个氨基酸位置各自并且独立地选自由下列组成的组:SEQID NO:1的氨基酸位置10、33、34、35、53、59、89、90和95。在本发明的葡萄糖异构酶的实施方式中,其中葡萄糖异构酶在一个或多个氨基酸位置处包含氨基酸取代,葡萄糖异构酶包含SEQ ID NO:1的氨基酸位置10处的氨基酸取代,SEQ ID NO:1的氨基酸位置90处的氨基酸取代或SEQ ID NO:1的氨基酸位置95处的氨基酸取代,SEQ ID NO:1中的每一个。
在实施方式中,第一方面的多肽是葡萄糖异构酶,优选具有本文公开的一个或多个特征的葡萄糖异构酶。据此,本发明的葡萄糖异构酶的公开内容且特别是根据每个和任一方面的公开内容均同等地适用于本发明的多肽,反之亦然。此外,在实施方式中,本发明的多肽是具有葡萄糖异构酶活性,优选活性Activity,的多肽。优选地,葡萄糖异构酶活性,优选活性Activity,是本文中定义的一种。
在实施方式中,葡萄糖异构酶包含氨基酸序列,其中葡萄糖异构酶的氨基酸序列与SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有至少95%的同一性和/或至少95%的同源性,其中葡萄糖异构酶的氨基酸序列在一个或多个氨基酸位置处包含氨基酸取代,其中一个或多个氨基酸位置选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置10、33、34、35、53、59、89、90和95组成的组的措辞具有与下列措辞相同的含义:葡萄糖异构酶与SEQ ID NO:1具有至少95%的同源性,其中葡萄糖异构酶在选自由10、33、34、35、53、59、89、90和95组成的组的一个或多个氨基酸位置处包含取代基,其中每个氨基酸位置对应于SEQ ID NO:1的氨基酸序列的位置。
术语“SEQ ID NO:1氨基酸位置”旨在指SEQ ID NO:1的氨基酸位置。就此而言,优选地包括本发明的任何方面的本发明的葡萄糖异构酶是突变葡萄糖异构酶,且更具体是具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的葡萄糖异构酶的突变葡萄糖异构酶。在实施方式中,本发明的葡萄糖异构酶是具有与SEQ ID NO:1的氨基酸序列不同的氨基酸序列的葡萄糖异构酶。在另一实施方式中,本发明的葡萄糖异构酶是不同于由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成的葡萄糖异构酶的葡萄糖异构酶。
优选地,突变葡萄糖异构酶是与非突变葡萄糖异构酶相比具有一个或多个氨基酸残基变化例如置换/取代或缺失的葡萄糖异构酶。非突变葡萄糖异构酶优选是具有氨基酸序列的葡萄糖异构酶,突变葡萄糖异构酶的氨基酸序列仅在一个或多个改变的氨基酸残基处与葡萄糖异构酶的氨基酸序列不同。换句话说,突变葡萄糖异构酶和潜在的葡萄糖异构酶共享相同的氨基酸主链,但是在一个或多个改变的氨基酸残基上不同。在一个优选的实施方式中,潜在的葡萄糖异构酶是野生型葡萄糖异构酶。
根据本发明的第一方面,本发明的葡萄糖异构酶在SEQ ID NO:1的至少一个氨基酸位置处包含至少一个氨基酸取代。据此,在本发明的葡萄糖异构酶的实施方式中,氨基酸取代是在SEQ ID NO:1的特定的、指示的氨基酸位置之一处进行的,由此,可选地,存在于SEQ ID NO:1的该位置的非常氨基酸残基不与任何存在于本发明的葡萄糖异构酶中的取代的氨基酸残基的种类有关;可替代地,并且再次可选地,存在于SEQ ID NO:1的该位置处的非常氨基酸残基与存在于本发明的葡萄糖异构酶中的取代的氨基酸残基的种类有关。取代可以是非保守或保守的。为了本发明的目的,保守的是指氨基酸G到A的交换;A到G、S;V到I、L、A、T或S;I到V、L或M;L到I、M或V;M到L、I或V;P到A、S或N;F到Y、W或H;Y到F、W或H;W到Y、F或H;R至K、E或D;K到R、E或D;H至Q、N或S;D到N、E、K、R或Q;E至Q、D、K、R或N;S到T或A;T到SV或A;C到S、T或A;N到D、Q、H或S;Q到E、N、H、K或R。
同样根据本发明,在本发明的葡萄糖异构酶的实施方式中,氨基酸取代是其中SEQID NO:1的任一所示氨基酸位置的非常氨基酸残基被取代的氨基酸取代,由此,任选地,取代的氨基酸残基的氨基酸位置不完全如参考SEQ ID NO:1所示的;相反,在实施方式中,取代的氨基酸残基的氨基酸位置与SEQ ID NO:1的相应位置不同,优选相差1至5,优选2至5,更优选3至5,甚至更优选4至5个氨基酸位置,以及最优选四个氨基酸位置。
在一定程度上,本发明的葡萄糖异构酶的特征在于在一个或多个指定的氨基酸位置处包含氨基酸取代,应理解,在一个实施方式中,本发明的葡萄糖异构酶是在所示氨基酸位置之一处具有单个氨基酸取代的葡萄糖异构酶。在本发明的葡萄糖异构酶的另一实施方式中,其特征在于在一个或多个指定的氨基酸位置处包含氨基酸取代,本发明的葡萄糖异构酶是在所示氨基酸位置中的两个或更多个,如两个、三个、四个、五个等处具有氨基酸取代的葡萄糖异构酶。在后一种情况下,被取代的氨基酸残基的数目是一个与指示和定义为被取代的氨基酸残基的数目之间的任何整数。据此,本发明的葡萄糖异构酶是具有或实现一个氨基酸取代或表示和定义为被取代的氨基酸残基的任何组合(包括每个和任何排列)的任一葡萄糖异构酶。
据此,葡萄糖异构酶可以在一个或任何组合处,并且分别在氨基酸位置10、33、34、35、53、59、89、90和95的排列处包含氨基酸取代。因此,在实施方式中,本发明的葡萄糖异构酶在SEQ ID NO:1的一个氨基酸位置处包含至少一个氨基酸取代,在SEQ ID NO:1的至少两个氨基酸位置处包含至少一个氨基酸取代,在SEQ ID NO:1的至少三个氨基酸位置处包含至少一个氨基酸取代,在SEQ ID NO:1的至少四个氨基酸位置处包含至少一个氨基酸和在SEQ ID NO:1的至少五个氨基酸位置处包含至少一个氨基酸取代。在那些实施方式中,特别优选本发明的在SEQ ID NO:1的四个氨基酸位置处包含氨基酸取代的葡萄糖异构酶。可选择地,在那些实施方式中,特别优选本发明的在SEQ ID NO:1的4至5个氨基酸位置或5个氨基酸位置处包含氨基酸取代的葡萄糖异构酶。
然而,同样在本发明内,本发明的葡萄糖异构酶在SEQ ID NO:1的所示氨基酸位置处包含甚至比以上所示取代更多,优选地,条件是葡萄糖异构酶的氨基酸序列满足本发明的葡萄糖异构酶的最小结构特征和/或最小功能特征中的至少一个。该最小结构特征是葡萄糖异构酶包含氨基酸序列,其中葡萄糖异构酶的氨基酸序列与SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有至少95%的同一性和/或至少95%同源性,其中葡萄糖异构酶的氨基酸序列在一个或多个氨基酸位置处包含氨基酸取代,其中一个或多个氨基酸位置各自并且独立地选自由SEQ ID NO:1氨基酸位置10、33、34、35、53、59、89、90和95组成的组。这种最小功能特征是特征(A)、(B)、(C)、(D)、(E)和(F),包括本文所公开的其任何进一步的规定,中的任一个的之一或任意组合,其中特征(A)是与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,相比,多肽,优选葡萄糖异构酶,的至少1.1倍,例如1.1倍至1.6倍的50mM果糖浓度下果糖转化为葡萄糖的增强的活性,优选增强的活性Activity,特征(B)是与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,相比,多肽,优选葡萄糖异构酶,的至少1.2倍,例如1.2倍至1.6倍或1.2倍至3.0倍的200mM果糖浓度下果糖转化为葡萄糖的增强的活性,优选增强的活性Activity,或特征(C)是多肽,优选葡萄糖异构酶,的热稳定性,其以74℃的温度下温育多肽15分钟后的残留活性表达,其中该残留活性为至少30%至100%,特征(D)是多肽,优选葡萄糖异构酶,的KM值,其在100mM和190mM之间或50mM和190mM之间,以及特征(E)是多肽,优选葡萄糖异构酶,的可溶性表达水平,其定义为多肽的可溶性表达水平与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,的可溶性表达水平之比,其为至少1.04,例如1.04至1.38或1.04至1.80,以及特征(F)是增强的葡萄糖形成,优选至少1.2倍至5倍,或至少1.5倍至5倍,或至少1.9倍至5倍,或至少1.9倍至3.5倍,或至少2.2倍至3.3倍。为了确定上述特征(A)、(B)、(C)、(D)、(E)和(F),在本发明内可以使用本文公开的测定法。在本发明范围内,特征(A),即与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,相比,多肽,优选葡萄糖异构酶,的50mM果糖浓度下果糖转化为葡萄糖的增强的活性,优选增强的活性Activity,可以表示为与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,相比,多肽,优选葡萄糖异构酶,的相对活性,多肽,优选葡萄糖异构酶,的50mM果糖浓度下果糖转化为葡萄糖的相对活性。在这种情况下,所指示的增加值转化为相应的比,且将参考设定为“1”。例如,1.1倍的增强的活性,优选增强的活性Activity,转化为1.1:1的相对活性,反之亦然。同样地适用于特征(B),即与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,相比,多肽,优选葡萄糖异构酶,的200mM果糖浓度下果糖转化为葡萄糖的增强的活性,优选增强的活性Activity。这同样适用于特征(F),即与SEQ ID NO:1的多肽,优选葡萄糖异构酶,相比,多肽,优选葡萄糖异构酶,的在40℃下、50mM果糖浓度下果糖转化为葡萄糖持续40分钟的增强的葡萄糖形成。
在本发明范围内、本发明的葡萄糖异构酶显示出特征(A)、特征(B)、特征(C)、特征(D)、特征(E)、特征(F)、特征(A)和(B)、特征(A)和(C)、特征(A)和(D)、特征(A)和(E)、特征(A)和(F)、特征(B)和(C)、特征(B)和(D)、特征(B)和(E)、特征(B)和(F)、特征(C)和(D)、特征(C)和(E)、特征(C)和(F)、特征(D)和(E)、特征(D)和(F)、特征(E)和(F)、特征(A)、(B)和(C)、特征(A)、(B)和(D)、特征(A)、(B)和(E)、特征(A)、(B)和(F)、特征(B)、(C)和(D)、特征(B)、(C)和(E)、特征(B)、(C)和(F)、特征(C)、(D)和(E)、特征(C)、(D)和(F)、特征(D)、(E)和(F)、
特征(A)、(B)、(C)和(D)、特征(A)、(B)、(C)和(E)、特征(A)、(B)、(C)和(F)、特征(A)、(C)、(D)和(E)、特征(A)、(C)、(D)和(F)、特征(A)、(D)、(E)和(F)、特征(B)、(C)、(D)和(E)、特征(B)、(C)、(D)和(F)、特征(B)、(D)、(E)和(F)、特征(C)、(D)、(E)和(F)或特征(A)、(B)、(C)、(D)和(E)、特征(A)、(B)、(C)、(D)和(F)、特征(A)、(B)、(C)、(E)和(F)、特征(A)、(B)、(D)、(E)和(F)、特征(A)、(C)、(D)、(E)和(F)。本发明的葡萄糖异构酶的优选实施方式是表现出特征(A)和(C),特征(A)和(D)或特征(A)和(E)的那些葡萄糖异构酶,本发明的葡萄糖异构酶的甚至更优选的实施方式是表现出特征(A)和(D),或(A)、(C)和(D),或(A)、(C)和(E)或(A)、(D)和(E),且最优选(A)和(D),或(A)、(C)和(E)的那些葡萄糖异构酶。
在本发明的葡萄糖异构酶的实施方式中,葡萄糖异构酶的氨基酸序列在SEQ IDNO:1的氨基酸序列的至少两个氨基酸位置处包含氨基酸取代。至少两个氨基酸位置在本文中也称为成一对的两个氨基酸位置。在本发明的葡萄糖异构酶的实施方式中,成一对的两个SEQ ID NO:1氨基酸位置选自由下列组成的组:氨基酸位置R10和A33、R10和L34、R10和D35、R10和F53、R10I59、R10和A89、R10和T90、R10和T95、A33和L34、A33和D35、A33和F53、A33和I59、A33和A89、A33和T90、A33和T95、L34和D35、L34和F53、L34和I59、L34和A89、L34和T90、L34和T95、D35和F53、D35和I59、D35和A89、D35和T90、D35和T95、F53和I59、F53和A89、F53和T90、F53T95、I59和A89、I59和T90、I59和T95、A89和T90、A89和T95以及T90和T95。本发明的葡萄糖异构酶的其他实施方式是其中成一对的两个氨基酸位置选自更有限的组的那些,包括本文中具体公开的成一对的两个氨基酸位置的那些更有限的组。在本发明内,葡萄糖异构酶在SEQ ID NO:1的这些成一对的两个氨基酸位置中的一对处包含氨基酸取代。
如本文所公开,在另外的实施方式中,除了在SEQ ID NO:1的成一对的两个氨基酸位置处的氨基酸取代之外,葡萄糖异构酶还包括在SEQ ID NO:1的至少一个或多个另外的氨基酸位置处的氨基酸取代。SEQ ID NO:1的这样一个或多个另外的氨基酸位置独立地并且单独地选自由氨基酸位置10、33、34、35、53、59、89、90和95组成的组。本发明的葡萄糖异构酶的另外的实施方式是其中一个或多个另外的氨基酸位置选自更有限的组,包括本文具体公开的那些更加有限的另外的氨基酸位置的组。在本发明内,葡萄糖异构酶在SEQ IDNO:1的这些成一对的两个氨基酸位置的之一处和在另外的氨基酸序列之一处包含氨基酸取代。据此,在实施方式中,本发明的葡萄糖异构酶各自是在至少三个氨基酸位置,即在SEQID NO:1的成一对的两个氨基酸位置和另外的氨基酸位置之一处具有氨基酸取代的葡萄糖异构酶,在至少四个氨基酸位置,即在SEQ ID NO:1的成一对的两个氨基酸位置和两个另外的氨基酸位置处具有氨基酸取代的葡萄糖异构酶,在至少五个氨基酸位置,即在SEQ IDNO:1的成一对的两个氨基酸位置和另外的氨基酸位置中的三个氨基酸位置处具有氨基酸取代的葡萄糖异构酶,或在至少六个氨基酸位置,即在SEQ ID NO:1的成一对的两个氨基酸位置和另外的氨基酸位置中的四个氨基酸位置处具有氨基酸取代的葡萄糖异构酶。在本发明的葡萄糖异构酶的实施方式中,其中葡萄糖异构酶在至少三个氨基酸位置处包含氨基酸取代,该葡萄糖异构酶在选自由SEQ ID NO:1的氨基酸位置10、33、35、59组成的组的至少一个氨基酸位置和选自由SEQ ID NO:1的氨基酸位置53、89、90和95组成的组的至少一个氨基酸位置处,且优选在选自由SEQ ID NO:1的氨基酸位置10、33、35和59组成的组的一个氨基酸位置和选自由SEQ ID NO:1的氨基酸位置53、89、90和95组成的组的两个氨基酸位置处,以及最优选在SEQ ID NO:1的氨基酸位置10的一个氨基酸位置和选自由SEQ ID NO:1的氨基酸位置89、90和95组成的组的两个氨基酸位置处包含氨基酸取代。在本发明的葡萄糖异构酶的实施方式中,其中葡萄糖异构酶在至少四个氨基酸位置处包含氨基酸取代,葡萄糖异构酶在选自由SEQ ID NO:1的氨基酸位置10、33、35和59组成的组的至少一个氨基酸位置和选自由SEQ ID NO:1的氨基酸位置53、89、90和95组成的组的至少一个氨基酸位置处,并且优选地在选自由SEQ ID NO:1的氨基酸位置10、33、35和59组成的组的一个或三个氨基酸位置和选自由SEQ ID NO:1的氨基酸位置53、89、90和95组成的组的一个或三个氨基酸位置处,以及最优选在SEQ ID NO:1的氨基酸位置10处的一个氨基酸位置和选自由SEQ ID NO:1的氨基酸位置53、89、90和95组成的组的三个氨基酸位置处包含氨基酸序列。在本发明的葡萄糖异构酶的实施方式中,其中葡萄糖异构酶在至少五个氨基酸位置处包含氨基酸取代,该葡萄糖异构酶在选自由SEQ ID NO:1的氨基酸位置10、33、35和59组成的组的至少两个氨基酸位置和选自由SEQ ID NO:1的氨基酸位置53、89、90和95组成的组的至少一个氨基酸位置处,且优选地,选自由SEQ ID NO:1的氨基酸位置10、33、35和59组成的组的两个或四个氨基酸位置和选自由SEQ ID NO:1的氨基酸位置53、89、90和95组成的组的一个或三个氨基酸位置处,以及最优选在SEQ ID NO:1的氨基酸位置10和33处的两个氨基酸位置和选自由SEQID NO:1的氨基酸位置53、90和95组成的组的三个氨基酸位置处包含氨基酸序列。本发明的葡萄糖异构酶的实施方式,其中葡萄糖异构酶在至少四个氨基酸位置处包含氨基酸取代,是在SEQ ID NO:1的氨基酸位置10、89、90和95处包含氨基酸序列的葡萄糖异构酶。本发明的葡萄糖异构酶的实施方式,其中葡萄糖异构酶在至少五个氨基酸位置处包含氨基酸取代,是在SEQ ID NO:1的氨基酸位置10、33、53、90和95处包含氨基酸取代的葡萄糖异构酶。
关于本文公开的具体取代,要注意的是,根据氨基酸取代领域中的常规做法,取代是指进行取代的氨基酸位置的数目,左边的数目通过氨基酸残基的指示位于两侧,且左侧的氨基酸残基是存在于未取代的氨基酸序列中的氨基酸残基,而右侧的氨基酸残基是存在于取代的氨基酸序列中的氨基酸残基。因此,并且仅出于说明性目的,取代R10K表示在氨基酸位置10处,精氨酸残基被赖氨酸取代。
在本发明范围内,如本文所公开的SEQ ID NO:1的氨基酸位置处的任何突变是这样的突变,其单独或以任何组合产生仍然具有葡萄糖异构酶活性的蛋白质,更具体是根据EC 5.3.1.5的葡萄糖异构酶。优选地,任何突变单独或以任何组合导致具有EC编号EC5.3.1.5的葡萄糖异构酶,其具有如本文所公开特征(A)、(B)、(C)、(D)、(E)和(F)中的至少一个,或此类特征的任意组合。
应当理解,与本发明的葡萄糖异构酶有关,除了分别在本文中具体公开的取代和突变之外,优选分别在本文中公开的SEQ ID NO:1的氨基酸位置处的取代和突变,可以进行进一步和/或不同的替换。
已知如何分别确定氨基酸残基的聚合物的同一性和同源性。为了本发明的目的和整个上下文,同源性和同一性应理解为同义词。同一性百分比计算为:序列同一性[%]=匹配数/L x 100,其中L是比对的位置的数目,即同一性和非同一性(包括空位,如果有的话)。同源性,即同一性优选使用BLASTP计算为同一性(例如,参见Stephen F.Altschul,ThomasL.Madden,Alejandro A.Zhanghuihang,Zheng Zhang,Webb Miller和DavidJ.Lipman(1997年,“缺口的BLAST和PSI-BLAST:新一代蛋白质数据库搜索程序”,NucleicAcids Res。25:3389-3402;或Stephen F.Altschul,John C.Wootton,E.Michael Gertz,Richia Agarwala,Aleksandr Morgulis,Alejandro A.和Yu-Kuo Yu(2005)“使用组成调整的替代矩阵搜索蛋白质数据库。”FEBS J.272:5101-5109),优选使用下列算法参数:矩阵:BLOSUM62;缺口成本(Gap Cost):存在:11扩展:1,预期阈值:10和字长:6。筛选查询覆盖率超过35%的序列的结果。BlastP可以在NCBI主页在线访问(https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi?PROGRAM=blastp&PAGE_TYPE=Blast Search&LINK_LOC=blasthome)。可以根据需要调整其他程序设置,例如使用下列设置:
-字段“输入查询序列”:查询子范围:无
-字段“选择搜索集”:数据库:非冗余蛋白质序列(nr);可选参数:无
-字段“程序选择”:算法:blastp(蛋白质-蛋白质BLAST)
-算法参数:字段“常规参数”:最大目标序列:20000;简短查询:自动调整简短输入序列的参数;预期阈值:10;字长:6;查询范围内的最大匹配:0
-算法参数:字段“评分参数”:矩阵:BLOSUM62;差距成本:存在:11扩展:1;成分调整:条件成分分数矩阵调整
-算法参数:字段“过滤器和掩码”:过滤器:无;掩码:无。
在实施方式中,本发明的葡萄糖异构酶是分类为EC 5.3.1.5的酶,其催化醛糖和酮糖的相互转化。该反应是可逆的,且因此,本发明的葡萄糖异构酶将葡萄糖转化为果糖和将果糖转化为葡萄糖。
根据各个方面的实施方式,本发明的葡萄糖异构酶使醛糖分子反应成酮糖分子,并使酮糖分子反应成醛糖分子。
根据各个方面的另一个实施方式,本发明的葡萄糖异构酶使选自D-葡萄糖、D-木糖、D-阿拉伯糖、L-阿拉伯糖、L-核糖、D-核糖、D-来苏糖、D-阿洛糖、L-鼠李糖和D-甘露糖的醛糖分子反应。在另一个实施方式中,本发明的葡萄糖异构酶使选自果糖、D-木酮糖、D-核酮糖、L-核酮糖、D-阿洛酮糖和L-鼠李酮糖的酮糖分子反应。在一个优选的实施方式中,本发明的葡萄糖异构酶与果糖反应形成D-葡萄糖。
如本文所公开的,本发明涉及具有某些功能特征的多肽,其分别根据本发明的第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二和第十三方面,并结合它们被定义。优选地,该多肽是具有葡萄糖异构酶活性,优选活性Activity的多肽。更优选地,该多肽是葡萄糖异构酶。
根据本发明,本发明的多肽,优选葡萄糖异构酶,以及本发明的葡萄糖变体在将果糖转化为葡萄糖中显示出各种功能特征,包括增强的活性,优选增强的活性Activity。在优选的实施方式中,这种活性是本文定义的活性,而在优选的实施方式中,增强的活性是增强的活性Activity,即活性的增加,活性Activity是本文中定义的。
本领域技术人员将认识到,本发明的多肽,优选葡萄糖异构酶以及本发明的葡萄糖变体的活性的增强在本申请中以相对值表示,使用SEQ ID NO:1的葡萄糖聚合酶的各活性作为参考。如果将SEQ ID NO:1的葡萄糖聚合酶的相应活性设定为“1”,则这样的相对值可以用“倍数”或相对活性来表示。因此,并且如此处仅出于说明性目的所指出的,本发明的多肽,优选葡萄糖异构酶,的1.1倍的增强的活性相当于1.1:1的相对活性。
本发明的葡萄糖异构酶以全长酶的形式存在于本发明内。也在本发明内,本发明的葡萄糖异构酶以片段形式存在。优选地,该片段保留葡萄糖异构酶活性,优选保留本文分别定义和公开的本发明葡萄糖异构酶的葡萄糖异构酶活性。
在另一方面,本发明涉及编码本发明的葡萄糖异构酶的核酸分子。基于本文公开的氨基酸序列衍生出此类核酸分子是众所周知的。优选地,核酸序列取决于用于表达本发明的葡萄糖异构酶的表达系统。用于表达本发明的葡萄糖异构酶的优选表达系统是大肠杆菌、芽孢杆菌属、巴斯德毕赤酵母和链霉菌属。
在另一方面,本发明涉及包含编码本发明的葡萄糖异构酶的核酸分子的载体。优选地,载体是表达载体。在现有技术中已经描述了用于表达酶的合适载体。
在另一方面,本发明涉及含有本发明载体的宿主生物体。已经描述了用于包含含有用于表达酶的载体的宿主的合适宿主,优选宿主生物体是大肠杆菌、芽孢杆菌,巴斯德毕赤酵母或链霉菌,优选大肠杆菌和巴斯德毕赤酵母。还已知将这种载体掺入宿主生物中的方法。
在另一方面,本发明涉及表达葡萄糖异构酶的方法。这样的方法包括在允许核酸分子表达的条件下培养说明书中公开的宿主生物,其中宿主生物包含表达载体,其中表达载体包含编码根据本发明的葡萄糖异构酶的核酸分子,并收获葡萄糖异构酶。
在另一方面,本发明涉及多肽,优选葡萄糖异构酶,用于制备葡萄糖的用途。在该方面的一个优选的实施方式中,多肽,优选葡萄糖异构酶,的使用如本文的任何实施方式中所定义的。优选地,多肽,优选葡萄糖异构酶,在制备葡萄糖中的用途是根据本发明的方法或关于其定义的任何实施方式。
在本发明范围内,本发明的每个方面和任何方面,包括其任何实施方式,的葡萄糖异构酶是以下列形式之一存在:液体溶液、干粉、冻干粉、固定形式。
表1:SEQ ID NOs概述
本领域技术人员将认识到术语“变体”和“突变体”在本文中是同义使用的,包括在实施例部分中。
通过实施例和序列表对本发明作进一步说明,从中可以得到进一步的特征、实施方式和优点。
实施例1:一般的方法
野生型葡萄糖异构酶的克隆(cloning):来自链霉菌(Streptomyces sp.SK)的葡萄糖异构酶基因进行密码子优化用于在大肠杆菌中表达,并由Ebersberg(德国)EurofinsMWG操纵子合成。将该基因克隆至表达载体pLE1A17(pRSF-1b,Novagen公司,的衍生物)中。所得的质体用于大肠杆菌BL21(DE3)细胞的转化(transformation)
分子生物学方法:葡萄糖异构酶的突变体是通过本领域已知的标准定点突变技术(site-directed mutagenesis technology)产生的(例如,参见S.Lutz,UT Bornscheuer,Protein Engineering Handbook(蛋白质工程手册),Wiley VCH,Weinheim,2009)
重组葡萄糖异构酶的表达:通过用重组葡萄糖异构酶接种培养基I(5g/L酵母提取物、10g/L NaCl、10g/L胰蛋白胨、pH 7、50μg/mL卡那霉素)来制备过夜培养物。将培养物在37℃和200rpm下温育过夜。对于表达培养,将新鲜的过夜培养物接种培养基II(4.6g/L酵母提取物、9.3g/L蛋白胨、25mM Na2HPO4*12H2O、25mM KH2PO4、50mM NH4Cl2、Na2SO4、5g/L甘油、0.5g/L葡萄糖*1H2O、2mM MgSO4、50μg/mL卡那霉素),以使其在600nm处的光密度为0.1。然后将培养物在37℃下生长,直至600nm处的光密度为0.8-1.0。随后以0.1mM IPTG终浓度诱导培养物,并在30℃下过夜实现重组葡萄糖异构酶的表达。
葡萄糖异构酶酶制剂的制备:无细胞提取物的制备是通过离心收集细胞,然后进行化学酶裂解来完成的。为此,将细胞悬浮在含有50mM磷酸钾缓冲液(pH 7)、1×CelLyticTMB细胞裂解试剂(Sigma)、2mM Mg2+(如MgCl2或MgSO4)、0.5mg/mL溶菌酶和20U/mL核酸酶的缓冲液中,并在30℃下温育45分钟。通过在3,270x g和4℃下离心30分钟,含有可溶性酶的无细胞提取物从碎片中分离出。
葡萄糖异构酶活性测量:按照测定I和测定II中的描述,在果糖至葡萄糖异构化的方向上测定葡萄糖异构酶的活性:
测定I:葡萄糖异构酶活性通过使用下列条件在40℃下监测从果糖形成葡萄糖来测定活性:50mM磷酸钾缓冲液pH 7、10mM Mg2+(以MgCl2或MgSO4计)、0.2mL/mL反应葡萄糖异构酶制剂(在50mM磷酸钾缓冲液pH 7中稀释以便达到18%的最大收率)和给定的50或200mM果糖浓度。使用不连续偶联测定法测定通过葡萄糖异构酶的作用从果糖产生的葡萄糖,其中通过己糖激酶将葡萄糖转化为6-磷酸葡萄糖。6-磷酸葡萄糖和NADP通过6-磷酸葡萄糖脱氢酶转化为6-磷酸-葡萄糖酸酯和NADPH。该检测基于测量340nm处NADPH的吸光度。D-GLUCOSE-HK试剂盒(HK/G6P-DH格式)以微孔板形式使用(产品编号为K-GLUHK-110A或K-GLUHK-220A,可从爱尔兰威克洛的Megazyme International Ireland获得)。根据制造商的建议进行测定,并使用外标定量样品中的葡萄糖量。
测定II:通过在下列条件下监测由果糖形成葡萄糖来进行测量葡萄糖异构酶的反应:50mM磷酸钾缓冲液pH 7、10mM MgSO4、0.05mL/mL反应葡萄糖异构酶制剂(在50mM磷酸钾缓冲液pH 7中稀释以便达到18%的最大收率)、50-1000mM果糖浓度和40℃。每毫升反应加入0.1毫升0.25M HCl淬灭反应。由果糖通过葡萄糖异构酶的作用产生的葡萄糖是使用不连续偶联测定法测定的,其中葡萄糖通过葡萄糖氧化酶转化为葡萄糖酸内酯。该反应的副产物过氧化氢被辣根过氧化物酶用来氧化2,2'-叠氮基双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)),生成有色产物,在405nm处有吸光度。将酸淬灭反应的10μL等分试样与90μL含有50mM磷酸钾缓冲液pH 6、1mM ABTS,5U/mL葡萄糖氧化酶和1U/mL辣根过氧化物酶的测定混合物混合。在30℃下温育60-70分钟后,测量405nm处的吸光度(终点测量)。样品中的葡萄糖量使用外标进行定量。
实施例2:用200mM果糖和50mM果糖测定葡萄糖异构酶活性
按照实验1中的描述制备葡萄糖异构酶酶制剂,并分析葡萄糖异构酶活性。
根据以上实施例1中描述的测定I,在50mM和200mM果糖下测定葡萄糖异构酶变体在果糖异构化中的活性。葡萄糖异构酶活性表示为体积活性,即每单位细菌培养物体积的葡萄糖异构酶活性的单位。
为了评估体积活性的变化是由于葡萄糖异构酶变体的可溶性表达改变还是由于其活性的变化而引起的,分析了葡萄糖异构酶变体的可溶性表达。葡萄糖异构酶变体的无细胞提取物,即基于细胞培养物的光密度归一化细胞提取物的量,加载到12%的丙烯酰胺凝胶上,在SDS-PAGE中解析并用考马斯亮蓝G-250染色。选择用于SDS-PAGE的实验条件,以确保正确分离蛋白质并进行正确定量。对于每个变体,量化对应于各个葡萄糖异构酶变体的带的强度,并将其与SEQ ID NO:1的野生型葡萄糖异构酶的带的强度比较。以这种方式,确定了葡萄糖异构酶变体的相对可溶性表达水平。将葡萄糖异构酶的体积活性除以相对表达水平,以获得归一化至表达水平的活性(归一化水平Normalized Activity)。
表2:葡萄糖异构酶变体的归一化活性和可溶性表达水平
实施例3:热稳定性:在74℃下温育15分钟后,葡萄糖异构酶变体的残留活性
热失活和活性测量:将按实施例1制备的葡萄糖异构酶制剂分成两等份。将一份60μL等分试样在74℃下温育15分钟。通过在4℃和3,270x g离心10分钟来分离变性的蛋白质。按照实施例1中的描述,使用具有50mM果糖的测定I测定上清液的活性。使用具有50mM果糖的测定I,直接测定每个葡萄糖异构酶变体的另一等份试样的活性而不进行热灭活。得到的残留活性列于表3中。
表3:葡萄糖异构酶变体的热稳定性
实施例4:葡萄糖异构酶变体的变性图
葡萄糖异构酶变体的变性图通过在不同温度下进行热灭活,然后进行活性测量来确定。将按实施例1制备的葡萄糖异构酶制剂分成几等份。每个葡萄糖异构酶变体的60μL等份试样在65-85℃的温度下温育15分钟。通过在4℃和3,270x g离心10分钟来分离变性的蛋白质。使用200mM果糖的测定I测定上清液的活性。使用200mM果糖的测定I直接测定每个葡萄糖异构酶变体的另一等份试样,而无需加热灭活。将得到的残留活性相对于热灭活温度作图。根据变性曲线估算了下列Tm50值:
表4:50mM磷酸钾缓冲液pH 7中的葡萄糖异构酶变体的Tm50值
SEQ ID NO: | Tm50值[℃] |
SEQ ID NO:1 | 78 |
SEQ ID NO:17 | 76 |
实施例5:KM值
使用本文定义的测定II,在下列条件下在50-1000mM果糖范围内的不同果糖浓度下测定葡萄糖异构酶变体的活性:10mM MgSO4、50mM磷酸钾缓冲液pH 7.0、40℃。将所得活性拟合至Michaelis-Menten方程,由此推导给定的葡萄糖异构酶变体的针对果糖的Michaelis常数KM。从表5可以看出,两个测试的变体都显示出针对果糖的KM比野生型葡萄糖异构酶低。
表5:葡萄糖异构酶变体的KM值
在说明书、权利要求书、序列表和/或附图中公开的本发明的特征可以单独地并且以它们的任何组合二者都是以其各种形式实现本发明的材料。
实施例6:由50mM果糖中的葡萄糖异构酶变体形成葡萄糖
重组葡萄糖异构酶的表达:通过用重组葡萄糖异构酶接种培养基I(5g/L酵母提取物、10g/L NaCl、10g/L胰蛋白胨、pH 7、50μg/mL卡那霉素)来制备过夜培养物。将培养物在37℃和200rpm下温育过夜。对于表达培养,将新鲜的过夜培养物接种培养基II(4.6g/L酵母提取物、9.3g/L蛋白胨、25mM Na2HPO4*12H2O,25mM KH2PO4、50mM NH4Cl2,Na2SO4、5g/L甘油,0.5g/L葡萄糖*1H2O、2mM MgSO4、50μg/mL卡那霉素),以使其在600nm处的光密度为0.1。然后将培养物在37℃下生长,直至600nm处的光密度为0.8-1.0。随后以0.1mM IPTG终浓度诱导培养,并在30℃下过夜实现重组葡萄糖异构酶的表达。
无细胞提取物的制备:无细胞提取物的制备是通过离心收集细胞,然后进行化学酶裂解来完成的。为此,将来自1mL表达培养物的细胞悬浮在含有50mM磷酸钾缓冲液(pH7)、1×CelLyticTMB细胞裂解试剂(Sigma)、2mM Mg2+(如MgCl2或MgSO4)、0.5mg/mL溶菌酶和20U/mL核酸酶的175μL缓冲液中,并在30℃下温育45分钟。通过在3,270x g和4℃下离心30分钟,含有可溶性酶的无细胞提取物从碎片中分离出。
葡萄糖形成反应:根据活性在50mM磷酸钾缓冲液pH 7中稀释无细胞提取物。将含有62.5mM果糖、12.5mM MgSO4和62.5mM磷酸钾缓冲液pH 7的反应缓冲液在40℃温育30分钟。通过将20μL的稀释的无细胞提取物添加到80μL的40℃反应缓冲液中开始反应。将反应混合物在40℃下温育。40分钟后,取出20μL样品,并加入20μL 0.25M HCl使其灭活。加入60μL 50mM磷酸钾缓冲液pH 7来中和样品,并以13,000rpm离心10分钟。使用D-GLUCOSE-HK试剂盒(HK/G6P-DH格式)(产品编号K-GLUHK-110A或K-GLUHK-220A,可从爱尔兰威克洛的Megazyme International Ireland获得)测量上清液中的葡萄糖含量。该试剂盒根据制造商的建议以微孔板的形式使用,并且样品中的葡萄糖的量使用外部标准进行定量。表6显示了每40分钟对未稀释的无细胞提取物进行归一化的几种变体的葡萄糖形成。SEQ ID NO:15、18、22和23的变体产生的葡萄糖比SEQ ID NO:1多两倍(表6)。SEQ ID NO:14显示具有最高的葡萄糖形成的高3倍以上的葡萄糖产生。
表6:葡萄糖异构酶变体的葡萄糖形成
<110> 希-莱科塔有限公司
新马特霍恩公司
<120> 葡萄糖异构酶
<130> C71106PC
<160> 23
<170> BiSSAP 1.3.6
<210> 1
<211> 388
<212> PRT
<213> 链霉菌(Streptomyces sp.SK)
<400> 1
Met Asn Tyr Gln Pro Thr Pro Glu Asp Arg Phe Thr Phe Gly Leu Trp
1 5 10 15
Thr Val Gly Trp Gln Gly Arg Asp Pro Phe Gly Asp Ala Thr Arg Pro
20 25 30
Ala Leu Asp Pro Val Glu Ala Val Gln Arg Leu Ala Glu Leu Gly Ala
35 40 45
Tyr Gly Val Thr Phe His Asp Asp Asp Leu Ile Pro Phe Gly Ala Ser
50 55 60
Asp Thr Glu Arg Glu Ala His Val Lys Arg Phe Arg Gln Ala Leu Asp
65 70 75 80
Ala Thr Gly Met Thr Val Pro Met Ala Thr Thr Asn Leu Phe Thr His
85 90 95
Pro Val Phe Lys Asp Gly Ala Phe Thr Ala Asn Asp Arg Asp Val Arg
100 105 110
Arg Tyr Ala Leu Arg Lys Thr Ile Arg Asn Ile Asp Leu Ala Val Glu
115 120 125
Leu Gly Ala Lys Val Tyr Val Ala Trp Gly Gly Arg Glu Gly Ala Glu
130 135 140
Ser Gly Ala Ala Lys Asp Val Arg Ala Ala Leu Asp Arg Met Lys Glu
145 150 155 160
Ala Phe Asp Leu Leu Gly Glu Tyr Val Thr Ser Gln Gly Tyr Asp Ile
165 170 175
Arg Phe Ala Ile Glu Pro Lys Pro Asn Glu Pro Arg Gly Asp Ile Leu
180 185 190
Leu Pro Thr Ile Gly His Ala Leu Ala Phe Ile Glu Arg Leu Glu Arg
195 200 205
Pro Glu Leu Tyr Gly Val Asn Pro Glu Val Gly His Glu Gln Met Ala
210 215 220
Gly Leu Asn Phe Pro His Gly Ile Ala Gln Ala Leu Trp Ala Gly Lys
225 230 235 240
Leu Phe His Ile Asp Leu Asn Gly Gln Ser Gly Ile Lys Tyr Asp Gln
245 250 255
Asp Leu Arg Phe Gly Ala Gly Asp Leu Arg Ala Ala Phe Trp Leu Val
260 265 270
Asp Leu Leu Glu Ser Ala Gly Trp Glu Gly Pro Arg His Phe Asp Phe
275 280 285
Lys Pro Pro Arg Thr Glu Asp Ile Asp Gly Val Trp Ala Ser Ala Ala
290 295 300
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370 375 380
Gly Ala Arg Gly
385
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<211> 388
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> SEQ ID NO: 21
<400> 21
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35 40 45
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65 70 75 80
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385
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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Gly Ala Arg Gly
385
Claims (10)
1.一种葡萄糖异构酶,其中所述葡萄糖异构酶的氨基酸序列与SEQ ID NO:2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22或23的氨基酸序列相同。
2.如权利要求1所述的葡萄糖异构酶,其中所述葡萄糖异构酶的氨基酸序列与SEQ IDNO:2、4、7、8、9、10、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22或23的氨基酸序列相同。
3.如权利要求1所述的葡萄糖异构酶,其中所述葡萄糖异构酶的氨基酸序列与SEQ IDNO:13、14、15、16、17、18、19、20、21、22或23的氨基酸序列具相同。
4.如权利要求1所述的葡萄糖异构酶,其中所述葡萄糖异构酶的氨基酸序列与SEQ IDNO:17、18、20或21的氨基酸序列相同。
5.如权利要求1所述的葡萄糖异构酶,其中所述葡萄糖异构酶的氨基酸序列与SEQ IDNO:15、17或18的氨基酸序列相同。
6.如权利要求1所述的葡萄糖异构酶,其中所述葡萄糖异构酶的氨基酸序列与SEQ IDNO:17的氨基酸序列相同。
7.如权利要求1至6中任一项所述的葡萄糖异构酶,其中所述葡萄糖异构酶能够催化果糖转化为葡萄糖。
8.一种制备葡萄糖的方法,包括在如权利要求1所述的葡萄糖异构酶的存在下使果糖反应,
(i)其中与SEQ ID NO:1的葡萄糖异构酶相比,所述葡萄糖异构酶具有至少1.1倍至3.0倍的、用于在50mM果糖浓度下将果糖转化为葡萄糖的增强的活性;和/或
(ii)其中所述葡萄糖异构酶具有以74℃的温度下温育所述葡萄糖异构酶15分钟后的残留活性表达的热稳定性,其中所述葡萄糖异构酶具有至少30%的残留活性;和/或
(iii)其中所述葡萄糖异构酶具有增强的可溶性表达水平,其定义为所述葡萄糖异构酶的可溶性表达水平与SEQ ID NO:1的葡萄糖异构酶的可溶性表达水平的比,其中所述可溶性表达水平是至少1.1;和/或
(iv)其中所述葡萄糖异构酶具有小于190mM的KM值。
9.如权利要求8所述的方法, 其中与SEQ ID NO:1的葡萄糖异构酶相比,所述葡萄糖异构酶具有至少1.1倍至3.0倍的、用于在50mM果糖浓度下将果糖转化为葡萄糖的增强的活性,并且具有以74℃的温度下温育所述葡萄糖异构酶15分钟后的残留活性表达的热稳定性,其中所述葡萄糖异构酶具有至少30%的残留活性,以及具有增强的可溶性表达水平,其定义为所述葡萄糖异构酶的可溶性表达水平与SEQ ID NO:1的葡萄糖异构酶的可溶性表达水平的比,其中所述可溶性表达水平是至少1.1。
10.如权利要求8所述的方法,其中与SEQ ID NO:1的葡萄糖异构酶相比,所述葡萄糖异构酶具有至少1.2倍至5倍的、以葡萄糖形成表达的将果糖转化为葡萄糖的增强的催化活性。
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