TW201808340A - Ｖｃｐ抑制劑和溶瘤病毒在製備抗腫瘤藥物中的應用 - Google Patents

Ｖｃｐ抑制劑和溶瘤病毒在製備抗腫瘤藥物中的應用 Download PDF

Info

Publication number
TW201808340A
TW201808340A TW106128179A TW106128179A TW201808340A TW 201808340 A TW201808340 A TW 201808340A TW 106128179 A TW106128179 A TW 106128179A TW 106128179 A TW106128179 A TW 106128179A TW 201808340 A TW201808340 A TW 201808340A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
virus
vcp
cancer
tumor
protein
Prior art date
Application number
TW106128179A
Other languages
English (en)
Other versions
TWI701044B (zh
Inventor
顏光美
張海鵬
林園
林穗珍
蔡靜
龔守芳
胡駿
肖曉
李凱
梁劍開
譚亞倩
朱文博
銀巍
Original Assignee
大陸商廣州威溶特醫藥科技有限公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 大陸商廣州威溶特醫藥科技有限公司 filed Critical 大陸商廣州威溶特醫藥科技有限公司
Publication of TW201808340A publication Critical patent/TW201808340A/zh
Application granted granted Critical
Publication of TWI701044B publication Critical patent/TWI701044B/zh

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/4164—1,3-Diazoles
    • A61K31/4178—1,3-Diazoles not condensed 1,3-diazoles and containing further heterocyclic rings, e.g. pilocarpine, nitrofurantoin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4439—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. omeprazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/76—Viruses; Subviral particles; Bacteriophages
    • A61K35/768—Oncolytic viruses not provided for in groups A61K35/761 - A61K35/766
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/70—Web, sheet or filament bases ; Films; Fibres of the matrix type containing drug
    • A61K9/7023—Transdermal patches and similar drug-containing composite devices, e.g. cataplasms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/7105—Natural ribonucleic acids, i.e. containing only riboses attached to adenine, guanine, cytosine or uracil and having 3'-5' phosphodiester links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • A61K38/1774—Immunoglobulin superfamily (e.g. CD2, CD4, CD8, ICAM molecules, B7 molecules, Fc-receptors, MHC-molecules)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/36011—Togaviridae
    • C12N2770/36111—Alphavirus, e.g. Sindbis virus, VEE, EEE, WEE, Semliki
    • C12N2770/36132—Use of virus as therapeutic agent, other than vaccine, e.g. as cytolytic agent

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

本發明屬於生物醫藥領域，涉及纈絡胺酸蛋白質(valosin-containing protein，VCP)抑制劑和溶瘤病毒在製備抗腫瘤藥物的應用。本發明首次發現VCP抑制劑可以用於製備溶瘤病毒抗腫瘤增效劑。本發明同時涉及一種包含VCP抑制劑以及溶瘤病毒的藥物組合物，包含VCP抑制劑及溶瘤病毒的藥品套組，以及VCP抑制劑與溶瘤病毒在治療腫瘤，特別是對所述溶瘤病毒不敏感的腫瘤中的用途。本發明還涉及一種抗腫瘤用藥系統，其特徵在於包括VCP表現水準檢測試劑以及溶瘤病毒。

Description

VCP抑制劑和溶瘤病毒在製備抗腫瘤藥物中的應用
本發明屬於生物醫藥領域，涉及VCP蛋白抑制劑與溶瘤病毒的聯合在製備抗腫瘤藥物中的應用。
溶瘤病毒(oncolytic virus)是一類選擇性的感染並殺傷腫瘤細胞，而不損傷正常細胞的可複製病毒。溶瘤病毒療法(oncolytic virotherapy)是一種創新的腫瘤靶向治療策略，它利用天然的或經基因工程改造的病毒選擇性的感染腫瘤細胞，並在腫瘤細胞中複製，達到靶向性溶解、殺傷腫瘤細胞的作用，但是對正常細胞沒有損傷、或者損傷較小。
M1病毒(Alphavirus M1)屬於甲病毒屬(Alphavirus)，其在製備抗腫瘤藥物方面具有潛在的應用效果。例如中國發明專利申請號：201410425510.3公開了M1病毒能選擇性引起腫瘤細胞死亡而不影響正常細胞存活，其在抗腫瘤方面具有非常好的應用前景。然而，不同腫瘤對M1病毒的敏感性不一，對於某些腫瘤，M1病毒單獨用藥時，溶瘤作用還不夠理想。例如中國發明專利申請號：201410425510.3所記載的(其所討論的溶瘤病毒如M1病毒以及其對不同腫瘤的作用效果/水準/方法等均透過引用的方式合併於此)，M1作為抗腫瘤藥物使用時，對於結直腸癌、肝癌、膀 胱癌和乳腺癌的效果不如胰腺癌、鼻咽癌、前列腺癌和黑色素瘤明顯；而膠質瘤、子宮頸癌、肺癌則更其次；而胃癌則最不顯著。
篩選增加溶瘤病毒腫瘤治療效果的化合物有望增加溶瘤病毒的抗瘤譜及抗瘤強度。發明人此前申請的中國專利申請號：201510990705.7中，將大黃酚及其衍生生物作為溶瘤病毒的抗瘤增效劑，二者組合可以將腫瘤細胞的存活率降低至39.6%，但其抗癌強度存在很大的進步空間，此外，這種聯合應用的作用機制尚不明確。
本發明的目的之一在於提供一種纈絡胺酸蛋白質(VCP)抑制劑在製備溶瘤病毒抗瘤增效劑方面的應用。
本發明的另一個目的在於提供一種抗瘤藥物組合物，其可以使得溶瘤病毒發揮更好的抗瘤效果。
本發明的另一個目的在於提供一種針對溶瘤病毒不敏感的腫瘤，安全有效的溶瘤病毒增效藥物。
本發明的另一個目的在於提供一種個性化的用藥系統和方法。
發明人透過研究、篩選發現，VCP抑制劑可以增強溶瘤病毒的溶瘤效果。
VCP抑制劑是一種物質(例如化合物、胺基酸序列或核苷酸序列)或是一種能夠剔除或影響Bcl-xL基因表現或降低Bcl-xL蛋白量或 蛋白活性的工具。本領域的技術人員能夠修飾、替換和/或改變這些抑制化合物、序列或基因工具。如果透過上述方式獲得的物質具有抑制Bcl-xL的作用，那麼該物質就屬於本發明所述的Bcl-xL抑制劑，並且屬於本發明中上述物質、化合物和工具的同質替換。
所述的VCP抑制劑為抑制VCP蛋白活性的物質、或降解VCP蛋白的物質、或降低VCP蛋白水準的基因工具。
纈絡胺酸蛋白質(valosin containing protein，VCP)，又稱P97，是一種細胞內廣泛表現的ATP酶，它作為內質網壓力相關降解路徑的重要組成元件，負責識別和呈遞泛素化蛋白，並將這些蛋白轉運至蛋白酶體進行降解，以保證細胞內蛋白質穩態。已有多篇文獻報導(文獻1，2)VCP在腫瘤細胞中高表現，抑制VCP能夠顯著的誘導腫瘤細胞死亡。
發明人透過用VCP干擾片段(SiRNA)抑制這個基因的表現，降低相應蛋白的表現量，結果發現，單獨干擾VCP和未干擾並未引起細胞形態病變，同時單獨應用M1病毒也不引起細胞形態病變，只有干擾VCP聯合應用M1病毒組引起了顯著細胞形態病變。
進一步地，發明人的進一步實驗驗證了透過抑制VCP可以顯著增強溶瘤病毒的溶瘤效應。發明人採用了抑制VCP活性的化合物Eeyarestatin I、NMS-873或CB-5083協同溶瘤病毒(例如M1病毒)作用於腫瘤細胞，實驗結果發現，Eeyarestatin I、NMS-873或CB-5083或其組合，均可以協同溶瘤病毒增強抗腫瘤效應。
本發明首次發現，VCP抑制劑可以作為溶瘤病毒的抗瘤增效劑/抗藥逆轉劑。
抗藥逆轉劑是指，當採用一些溶瘤病毒作為抗腫瘤藥物用於治療腫瘤時，存在著一些腫瘤對溶瘤病毒並不太敏感，或者說這些腫瘤對溶瘤病毒具有抗性，此時，可以採用與VCP(作為抗藥逆轉劑)聯用溶瘤病毒的方式，以逆轉腫瘤對所述溶瘤病毒的抗性。
本發明提供了VCP抑制劑在製備溶瘤病毒抗瘤增效劑/抗藥逆轉劑方面的應用。
所述的VCP抑制劑包括但不限於Eeyarestatin I(式1)、NMS-873(式2)、CB-5083(式3)等抑制VCP蛋白活性的化合物。化合物的獲取方式可選但不限於：自己化學分離或合成或者從商業路徑購買。
在本發明優選的實施例中，VCP蛋白抑制劑為Eeyarestatin I、CB-5083或它們的組合。
VCP抑制劑還包括針對VCP基因表現抑制工具，包括但不限於RNA干擾(RNAi)、微RNA(microRNA)以及基因編輯或剔除等工具手段。
VCP抑制劑可包括一些小的抑制核酸分子，例如短干擾RNA(siRNA)、雙鏈RNA(dsRNA)、微RNA(microRNA，miRNA)、核糖酶、以及小髮夾RNA(shRNA)，這些都能減弱或消除VCP蛋白的表現。
這些小的抑制核酸分子可能包括第一、第二鏈，二者雜交彼此形成一個或多個雙鏈區，每條鏈大約18~28個核苷酸的長度，大約18~23個核苷酸的長度，或者18、19、20、21、22個核苷酸的長度。另外，單鏈 也可能包含能夠相互雜交形成雙鏈的區域，例如在shRNA分子中。
這些小的抑制核酸分子在保持這種減弱或消除VCP的表現的能力時，可能包括修飾性核苷酸。修飾性核苷酸可用於改善體外或體內特性，如穩定性、活性和/或生物利用度。舉個例子，這種小的抑制性核酸分子可以包括修飾的核苷酸，其含量為siRNA分子中核苷酸總數的百分比，如至少約5%、10%、15%、20%，25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。這些修飾性核苷酸可能含有去氧核苷酸、2’-甲基核苷酸、2’-去氧-2’-氟核苷酸、4’-三核苷酸、鎖核酸(LNA)核苷酸和/或2’-O-甲氧乙基核苷酸等。小的抑制核酸分子，如短干擾RNA(siRNA)，也可能含有5’-和/或3’-帽結構，以此來防止核酸外切酶對其降解。
在一些實施例中，VCP抑制劑可以是與SEQ ID Nos：1-2中核酸序列具有至少90%、至少91%、至少93%、至少94%、至少95%、至少92%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%序列同一性的核酸。
siVCP#1：SEQ ID No：1：GGAGGTAGATATTGGAATT
siVCP#2：SEQ ID No：2：GGCCAAAGCCATTGCTAAT
在一些實施例中，小抑制核酸分子組成的雙鏈核酸含有兩端鈍、或懸垂的核苷酸。其他核苷酸可能包括會導致錯位、凸起、迴圈、或擺動鹼基對的核苷酸。小抑制核酸分子可以設計配方以便施用，例如，透 過脂質體包裹，或摻入其他載體(如可生物降解聚合物水凝膠，或環糊精)。
在本發明優選的實施例中，VCP抑制劑為VCP的干擾RNA片段，或是抗VCP的抗體。在一些實施例中，VCP抑制劑是有效的，旨在針對於或者靶向於，生產或使用，或者是特異於VCP(NCBI Gene ID：7415)。在另外一些實施例中，VCP抑制劑是有效的，旨在針對於或者靶向於，生產或使用，或是特異於VCP(NCBI Gene ID：7415)變異體。VCP蛋白變異體可以是與VCP(NCBI Gene ID：7415)胺基酸序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%序列同一性的蛋白。在一些實施例中，VCP蛋白抑制劑即為一種抗體。該抗體可能是單克隆抗體、多克隆抗體、多價抗體、多特異性抗體(例如：雙特異性抗體)、和/或連接在VCP上的抗體片段。該抗體可以是嵌合抗體、人源化抗體、CDR移植抗體或人型抗體。抗體片段可以是，例如，Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、Fd、單鏈Fv(scFv)、具二硫鍵的Fv(sdFv)、或VL、VH結構域。抗體可能是一個共軛的形式，例如，結合一個標籤、一個可檢測標記，或一種細胞毒性劑。抗體可能是同型IgG(例如：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)、IgA、IgM、IgE或IgD。
在本發明另一優選的實施例中，VCP蛋白抑制劑為VCP的干擾RNA片段。
所述的溶瘤病毒選自M1病毒、蓋塔病毒、腺病毒、牛痘病毒、麻疹病毒、水泡口炎病毒、和單純性皰疹病毒中的一種或多種；優選 M1病毒、蓋塔病毒或者它們的組合。
本發明所說的溶瘤病毒(甲病毒(例如M1病毒、蓋塔病毒等)、腺病毒、牛痘病毒、麻疹病毒、水泡口炎病毒、和單純性皰疹病毒等)可以尤其地指目前已有的溶瘤病毒，但也不排除一些可能發生的自然變異或者進行了突變(自然突變、強制性突變、或選擇性突變)、基因修飾、序列增加或刪除或部分替換的病毒。這裡所述的溶瘤病毒包括已經進行了上述改變的病毒。最好是上述改變並不影響所說的溶瘤病毒發揮本發明所述的作用。所說的VCP抑制劑為能起到敲低或影響VCP基因表現或者降低VCP蛋白量或蛋白活性的物質(例如化合物、或胺基酸序列、核苷酸序列等)或工具等。本領域技術人員可以對其抑制化合物或者基因工具進行修飾、替換、改變等，但只要起到上述抑制VCP的作用的，則屬於本發明的VCP抑制劑，屬於上述物質、化合物或工具等的同質替換。
例如，溶瘤病毒可以是基因資料庫登錄碼EF011023(Genbank Accession No.EF011023)的M1病毒，或者是基因序列與基因資料庫登錄碼EF011023(Genbank Accession No.EF011023)的M1病毒具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或者至少99%序列同一性的病毒。
在一些實施例中，溶瘤病毒是保藏編號CCTCC V201423(保藏於中國典型培養物保藏中心，保藏日期：2014年7月17日)的M1病毒。溶瘤病毒也可以是與保藏編號CCTCC V201423的M1病毒具有至少80%、 至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或者至少99%序列同一性的病毒。
例如，溶瘤病毒可以是基因資料庫登錄碼EU015062(Genbank Accession No.EU015062)的蓋塔病毒，也可以是與基因資料庫登錄碼EU015062(Genbank Accession No.EU015062)的蓋塔病毒具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、在至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或者至少99%序列同一性的病毒。
單個溶瘤病毒株也可以施用。在其他實施方案中，也可使用多種菌株和/或類型的溶瘤病毒。
本發明還提供一種用於治療腫瘤的藥物組合物，其包含VCP抑制劑以及溶瘤病毒。本發明還提供用於治療腫瘤的藥品套組，其包含VCP抑制劑，以及溶瘤病毒。藥品套組區別於組合物的地方在於，VCP抑制劑不同於溶瘤病毒的劑型，而是獨立包裝(例如：藥丸、或膠囊、或藥片或安瓿瓶中，含有VCP抑制劑；另外的藥丸、或膠囊、或藥片或安瓿瓶中，含有溶瘤病毒)。在一些實施例中，溶瘤病毒、VCP抑制劑，以及溶瘤病毒和VCP抑制劑的組合，也可含一種或多種佐劑。所述的佐劑是指在藥物組成中，可輔助藥物療效的成分。藥品套組也可以包含獨立包裝的VCP抑制劑，以及獨立包裝的溶瘤病毒。藥物套組中VCP抑制劑，以及溶瘤病毒的施用，可以是同時施用或者是以任意的前後順序施用，例如在溶瘤病毒之前施用VCP抑制劑，或者在溶瘤病毒之後施用VCP抑制劑，或者兩者 同時施用。在各種實施例中，患者可以是哺乳動物。在一些實施例中，哺乳動物可以是人。
所述的VCP抑制劑包括但不限於Eeyarestatin I(式1)、NMS-873(式2)、CB-5083(式3)等這一類的抑制VCP蛋白活性的化合物。或者針對VCP基因表現抑制工具，包括但不限於RNA干擾(RNAi)microRNA以及基因編輯或剔除等工具手段。優選Eeyarestatin I、CB-5083或它們的組合。
所述的溶瘤病毒選自M1病毒、蓋塔病毒、腺病毒、牛痘病毒、麻疹病毒、水泡口炎病毒、和單純性皰疹病毒中的一種或多種；優選M1病毒和蓋塔病毒的至少一種。
在組合物或藥品套組中，Eeyarestatin I或NMS-873或CB-5083與溶瘤病毒的配比可選地為：0.01~200mg：103~109PFU；優選0.1~200mg：104~109PFU；進一步優選0.1~100mg：105~109PFU。
優選使用劑量為：Eeyarestatin I或NMS-873或CB-5083使用範圍為0.01mg/kg至200mg/kg，同時溶瘤病毒使用滴度為感染複數(MOI)從103至109(PFU/kg)；在一些實施例中，溶瘤病毒的使用滴度為MOI 103~104、或104~105、或105~106、或106~107、或107~108、或108~109PFU/kg。優選Eeyarestatin I或NMS-873或CB-5083使用範圍為0.1mg/kg至200mg/kg，同時溶瘤病毒使用滴度為MOI從104至109(PFU/kg)；更優選Eeyarestatin I或NMS-873或CB-5083使用範圍為0.1mg/kg至100mg/kg，同時溶瘤病毒使用滴度為MOI從105至109(PFU/kg)。
可選地，所述溶瘤病毒選自M1病毒、蓋塔病毒、腺病毒、牛痘病毒、麻疹病毒、水泡口炎病毒和單純性皰疹病毒。優選地，所述溶瘤病毒為M1病毒和蓋塔病毒中的至少一種。M1病毒屬於蓋塔相似病毒，據報導在已發現的相關病毒中，這兩者的同源性高達97.8%(Wen et al.Virus Genes.2007；35(3)：597-603)。可以預期兩者將具有較為相似的性質。
在一個實施方式中，所述腫瘤為實體瘤或血液瘤。在一個實施方式中，所述實體瘤為肝癌、結直腸癌、膀胱癌、乳腺癌、子宮頸癌、前列腺癌、膠質瘤、黑色素瘤、胰腺癌、鼻咽癌、肺癌、或胃癌。在優選的實施方式中，所述腫瘤為對溶瘤病毒不敏感的腫瘤。在更優選的實施方式中，所述腫瘤為對M1溶瘤病毒不敏感的腫瘤。
作為可選的實施方案，本發明所提供的Eeyarestatin I或NMS-873或CB-5083或其組合可以是注射劑、片劑、膠囊、貼劑、試劑盒等。作為優選的實施方案，本發明的增效藥物是注射劑；優選地，可採用靜脈注射。
另外，本發明還發現，降低VCP蛋白水準，可顯著增加溶瘤病毒處理後腫瘤細胞的存活率(實施例4)；在不對VCP水準(活性水準)予以干預的情況下，發現VCP的表現與Eeyarestatin I聯合溶瘤病毒的抗腫瘤效應呈正相關(實施例5)，VCP表現水準的高低會對Eeyarestatin I聯合溶瘤病毒抗腫瘤效應產生關聯性的影響，VCP可以作為VCP抑制劑與溶瘤病毒聯用的生物標記物。Eeyarestatin I/M1病毒聯合抗腫瘤效應的有效性，與腫瘤VCP表現水準密切相關，VCP在多種腫瘤細胞中高表現，Eeyarestatin I聯合溶瘤病毒抗腫瘤可選擇性地治療VCP高表現的腫瘤/個體。
因此，為了進一步提高所述溶瘤病毒作為抗腫瘤藥物治療的有效率，在治療方案的選擇中，可以首先判斷患者腫瘤的VCP表現情況，再針對性地給予溶瘤病毒的治療方案，以此來提高治療方案的有效性，避免無效給藥所造成的時間上的拖延和藥物濫用。例如，在給藥前先測定患者腫瘤VCP表現情況，如果是VCP低表現或VCP陰性的腫瘤，可直接給以溶瘤病毒治療；如果是VCP正常表現/VCP高表現腫瘤，則可在溶瘤病毒給藥前或同時或之後給予VCP抑制劑(例如VCP表現或功能抑制劑，VCP干擾片段，或者VCP抗體等)，以提高腫瘤對溶瘤病毒的敏感性，提高治療有效性。腫瘤VCP表現量的高低直接影響到溶瘤治療的有效性。VCP表現量越低的腫瘤越有利於溶瘤病毒的治療效果。判斷某個體/腫瘤是否適於利用所述溶瘤病毒直接進行治療，可先檢測腫瘤VCP的表現水準。
因此本發明提供了一種抗腫瘤用藥系統，包括VCP檢測試劑或檢測系統，以及溶瘤病毒；所述的溶瘤病毒選自甲病毒、腺病毒、牛痘病毒、麻疹病毒、水泡口炎病毒、和單純性皰疹病毒中的一種或多種。
該用藥系統是指，例如，一種含有用於測定腫瘤組織中VCP水準的VCP檢測試劑，以及一種含有溶瘤病毒的抗腫瘤藥物，更優選地是含有溶瘤病毒即VCP檢測試劑的抗腫瘤藥物。該用藥系統可以透過先測定個體腫瘤的VCP表現水準，然後再決定以溶瘤病毒、或溶瘤病毒+VCP聯合治療，從而為個體提供精準的治療方案。
如果個體的腫瘤細胞的VCP為高表現，則應當選擇溶瘤病 毒+VCP的治療方案，因為，如本發明所述，與VCP相對低表現的個體相比，這樣的聯合治療方案將帶來大大提升的治療效果。例如，其能引起更高的腫瘤細胞死亡率，和/或更強的抑制腫瘤組織的能力。
VCP檢測試劑或檢測系統可以是任意的可用於對VCP表現水準進行的試劑/系統。本領域技術人員可以透過常規的基因或蛋白量檢測分析手段進行選擇，具體方法包括但不限於西方墨點法(Western Blot)(參考實施例4)、免疫組織化學染色法、三明治免疫分析法(ELISA)、即時聚合酶鏈鎖反應(QRT-PCR)。
腫瘤VCP表現量的高低直接影響到VCP抑制劑聯合溶瘤病毒治療的有效性。VCP表現量越高的腫瘤越適用以下治療方案：VCP抑制劑聯合溶瘤病毒的聯合療法。判斷某個體/腫瘤是否適於利用VCP抑制劑聯合溶瘤病毒進行治療，可先檢測腫瘤VCP的表現水準。
判斷VCP表現水準高低可以優選但不限於以下方式：
VCP低或高表現是指兩組(個)樣本之間VCP的mRNA或者蛋白質數量比較後得出的結論，如果一組(個)樣本比另外一組(個)VCP的mRNA或者蛋白質數量少或多稱為該樣本VCP低或高表現；VCP陰性是指樣本完全不表現VCP的mRNA或蛋白。用於VCP的mRNA和蛋白質的數量比較的樣本可以是腫瘤細胞和正常細胞、腫瘤組織與癌旁非瘤組織，或者溶瘤病毒治療有效與無效的腫瘤(文獻3)。
作為一種可選的方式，腫瘤的VCP高、低或陰性表現均指 腫瘤組織與相應癌旁非瘤組織比較，VCP的mRNA和蛋白質的數量多、少或者無表現。
若腫瘤組織的VCP的mRNA或蛋白質均一化表現量比相應癌旁非瘤組織少(即腫瘤組織較癌旁非瘤組織的VCP均一化表現量比值<1)，則屬於VCP低表現，此時將可能不適合以VCP及溶瘤病毒來聯用治療。
若腫瘤組織的VCP的mRNA或蛋白質均一化表現量比相應癌旁非瘤組織高(即腫瘤組織較癌旁非瘤組織的VCP均一化表現量比值>1)，則屬於VCP高表現，適於利用VCP抑制劑聯合溶瘤病毒進行治療(聯合療法)。對於以下治療對象，聯合療法將更為必要：腫瘤組織較癌旁非瘤組織的VCP相對表現量即均一化表現量比值>1.5的腫瘤，尤其是>2，尤其是>2.5，尤其是>3，尤其是>3.5，尤其是>4。這些腫瘤組織與相應癌旁非瘤組織包括但不限於病理穿刺手術或外科切除手術來源組織樣本。
VCP的mRNA或蛋白檢測方法包括但不限於即時聚合酶鏈鎖反應(QRT-PCR)、北方墨點法(Northern Blot)、西方墨點法(Western Blot)、免疫組織化學、三明治免疫分析法(ELISA)等。為準確判定不同樣本之間VCP的mRNA或蛋白數量的差異，首先計算出每一個樣本VCP的mRNA或蛋白的均一化表現量。均一化表現量是指每個樣本的VCP的mRNA或蛋白值和樣本內參VCP的RNA或蛋白平相除，進行均一化處理得出該樣本VCP均一化表現量。在不同檢測方法中內參可以不同，其共同特徵是在不同細胞或組織樣本中內參表現量一致，這樣經過均一化處理的不同樣本的VCP表現量才具備可比性，用於判斷樣本之間VCP的mRNA 或蛋白的數量差異。
優選地，所述的甲病毒選自M1病毒和蓋塔病毒中的至少一種；優選地，所述的腫瘤為實體瘤或血液瘤；更優選地，所述的實體瘤為肝癌、結直腸癌、膀胱癌、乳腺癌、子宮頸癌、前列腺癌、膠質瘤、黑色素瘤、胰腺癌、鼻咽癌、肺癌或胃癌。
同時本發明還提供了一種抗腫瘤藥物，包括溶瘤病毒，所述溶瘤病毒選自甲病毒、腺病毒、牛痘病毒、麻疹病毒、水泡口炎病毒、和單純性皰疹病毒中的一種或多種，並且，其尤其針對於VCP陰性或VCP低表現腫瘤；優選地，所述的甲病毒選自M1病毒和蓋塔病毒中的至少一種；更優選地，所述的腫瘤為VCP高表現的腫瘤時，採用聯合療法；所述的腫瘤為VCP陰性或低表現的腫瘤時，採用M1病毒單獨治療。
更優選地，所述的腫瘤為肝癌、結直腸癌、膀胱癌、乳腺癌、子宮頸癌、前列腺癌、膠質瘤、黑色素瘤、胰腺癌、鼻咽癌、肺癌或胃癌。
本發明所採用的用藥系統將可以個人化地提高溶瘤病毒的用藥有效性。
作為本發明進一步優選的實施方案：
本發明發現了VCP抑制劑，尤其是Eeyarestatin I和CB-5083可以增加溶瘤病毒的抗腫瘤效應，以提高溶瘤病毒作為抗腫瘤藥物時的治療有效性。細胞學實驗證明M1病毒分別和Eeyarestatin I、CB-5083聯合應用，可顯著引起腫瘤細胞的形態學病變，從而顯著增強對腫瘤細胞的抑制 作用。
我們聯合Eeyarestatin I或CB-5083和M1病毒作用於人肝細胞癌Hep3B株，出人意料的發現抗病毒化合物Eeyarestatin I或CB-5083和M1病毒聯合應用時，顯著增加腫瘤細胞形態病變，顯著降低腫瘤細胞存活率。例如在本發明的一個實施例中，當M1病毒(MOI=0.001)單獨處理肝癌細胞時(無VCP抑制劑參與)，腫瘤細胞存活率為83.0%，而當以5μM的Eeyarestatin I或CB-5083與同樣MOI的M1病毒聯用時，腫瘤細胞存活率大幅下降至21.6%。與單用M1病毒的抗腫瘤效果相比，Eeyarestatin I與M1聯用時，溶瘤效果顯著提升。
發明人以前的專利(中國專利申請號：CN 201510990705.7)中，以大黃酚及其衍生物作為M1病毒的抗癌增效劑，經試驗發現，50μM的大黃酚與(MOI=0.001)M1病毒聯用後，腫瘤細胞的存活率下降至39.6%，而本發明發現，將5μM的Eeyarestatin I或CB-5083與M1病毒聯用後，腫瘤細胞的存活率顯著下降至21.6%。與大黃酚及其衍生物相比，本發明的M1抗腫瘤增效劑顯著提高了腫瘤的殺傷率，同時，Eeyarestatin I或CB-5083在藥物有效劑量上僅為大黃酚的十分之一，並且作用快速，用時為大黃酚的三分之二(大黃酚處理72小時，Eeyarestatin I處理48小時)，具備顯著優越性。
本發明發現，Eeyarestatin I或CB-5083與溶瘤病毒聯合應用處理腫瘤細胞，對腫瘤細胞殺傷作用顯著優於單用相同濃度的Eeyarestatin I或CB-5083，例如當同樣例如以5μM的Eeyarestatin I處理腫瘤細胞時，腫 瘤細胞存活率仍高達87.2%，當M1病毒單獨處理肝癌細胞時，腫瘤細胞的存活率仍達到83%，而當以5μM的Eeyarestatin I與M1病毒聯用時，腫瘤細胞存活率大幅下降至21.6%。可見，Eeyarestatin I與M1聯用時大幅提升的溶瘤效果，是得益於Eeyarestatin I與M1病毒之間的協同性機制，並非簡單地透過Eeyarestatin I的抗腫瘤機制發揮作用。
圖1為Eeyarestatin I與M1病毒顯著增加人肝細胞癌株形態學病變。
圖2為Eeyarestatin I/CB-5083與M1病毒聯合處理顯著降低人肝細胞癌株存活率；其中，圖2a為Eeyarestatin I與M1病毒聯合處理顯著降低人肝細胞癌株Hep3B存活率；圖2b為CB-5083與M1病毒聯合處理顯著降低人肝細胞癌株Hep3B存活率。
圖3為敲低VCP可以增強溶瘤病毒M1在肝癌細胞上的溶瘤效應；其中，圖3a為VCP蛋白敲低的效率；圖3b為敲低VCP顯著增加人肝細胞癌株形態學病變；圖3c為敲低VCP增強溶瘤病毒M1在兩株肝癌細胞上的溶瘤效應。
圖4為VCP的蛋白表現與VCP抑制劑和M1病毒聯合療法的抗癌效應呈正相關；其中，圖4a為在多種肝癌細胞和正常細胞中，VCP的蛋白表現量；圖4b、4d為Eeyarestatin I與M1病毒聯合使用對多種肝癌細胞和正常細胞上的存活率影響；圖4c為Eeyarestatin I與M1病毒聯合使 用與VCP蛋白表現的相關性分析。
圖5為VCP抑制劑協同M1病毒透過誘導不可逆內質網壓力引起腫瘤細胞凋亡；其中，圖5a為VCP抑制劑協同M1病毒能夠抑制IRE1-XBP1路徑；圖5b為VCP抑制劑協同M1病毒能夠促進內質網壓力介導的細胞凋亡。
圖6為Eeyarestatin I與M1病毒聯合處理顯著抑制人肝細胞癌株移植瘤生長；其中，圖6a和6b為Eeyarestatin I與M1病毒聯合處理顯著抑制人肝細胞癌株Hep3B移植瘤生長；圖6c和6d為Eeyarestatin I與M1病毒聯合處理顯著抑制人肝細胞癌株Huh 7移植瘤生長。
圖標說明：
EerI：Eeyarestatin I處理組。CB-5083：CB-5083處理組。M1+EerI：M1病毒與Eeyarestatin I聯用處理組。M1+CB-5083：M1病毒與CB-5083聯用處理組。
以下實施方式是對本發明作進一步說明，但本發明的實施方式不局限於以下的實施例介紹，凡依照本發明的原理或理念所作的等同的變化或變通都應視為本發明保護的範疇。
在沒有特別指明的情況下，本發明採用的材料及實驗方法為常規材料及方法。
除非另外定義，本文所使用的所有技術術語和科學術語具有 與本專利技術所屬普通技術人員通常理解的含義相同的含義。除非本文另行明確規定，文中指示物前冠詞包括多個指示物的情況。同樣，“或”一詞意在包括“和”，除非文中另有明確說明。還應理解，本文提供的核酸或多肽的資訊，例如鹼基對大小、胺基酸大小、分子量或分子品質，均為近似值，且僅供於描述。“大概”、“約”、“大約”、“左右”等詞，本領域常規技術人員可以根據記載的內容及參數等，理解為對所述物件/數值的修改，如有需要進一步的解釋以助於理解，可以理解為例如5%範圍的變化。儘管與本文描述相似或相同的方法或材料也可用於實踐或檢驗本發明公開的內容，但在下文中描述了適當的方法和材料。文中“包括”意即“包含、含有”；“例如”在本文中表示一個非限制性的例子。文中記載的序列同一性百分比，可理解為，某DNA、RNA或蛋白中，其核酸或胺基酸殘基與所述的參考序列中所一致的百分比。
如有衝突，本說明書(包括對術語的解釋)將予以控制。此外，本文所有的材料、方法和實例均為說明性的而非限制性的。
實施例1 Eeyarestatin I與M1病毒顯著增加人肝癌細胞株形態學病變
材料：
人肝細胞癌Hep3B(購於ATCC)，M1病毒(CCTCC V201423)，高糖DMEM培養基(購於Corning)，倒置相差顯微鏡。
方法：
(a)細胞的培養：人肝細胞癌Hep3B生長在含10%胎牛血清(FBS)、100U/ml青黴素及0.1mg/ml鏈黴素的DMEM完全培養基(Dulbecco's Modified Eagle's medium)中；所有細胞株均置於5% CO2，37℃的恒溫密閉式孵箱(相對濕度95%)內培養傳代，倒置顯微鏡觀察生長情況。大約2~3天傳代一次，取處於對數生長期的細胞用於正式實驗。
(b)細胞處理和形態學觀察：選擇對數生長期細胞，DMEM完全培養液(含10%胎牛血清、1%青鏈黴素雙抗溶液(Life Technologies))製成細胞懸液，細胞以2.5×104/孔的密度接種在24孔培養盤內。用Eeyarestatin I(5μM)單獨處理、M1病毒(MOI=0.001)感染細胞、M1病毒(MOI=0.001)聯合Eeyarestatin I(5μM)處理細胞，以不加M1病毒和Eeyarestatin I為對照，48小時後在倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態學的變化。
結果：
如圖1所示，相差顯微鏡下觀察細胞形態，對照組Hep3B細胞是單層貼壁生長，並且細胞緊密排列，表型一致，並且分別單獨使用Eeyarestatin I(5μM)或M1病毒(MOI=0.001)處理48小時後，細胞形態沒有顯著改變。而Eeyarestatin I(5μM)與M1病毒(MOI=0.001)聯合處理細胞48小時後，與對照組以及各單獨處理組比較，聯合處理組細胞數目明顯減少，並且細胞的形態發生了明顯改變，胞體收縮成球狀，折光率明顯增強，呈死亡病變樣。
實施例2 Eeyarestatin I或CB-5083與M1病毒聯合處理顯 著降低人肝癌細胞株存活率
材料：
人肝細胞癌Hep3B，M1病毒，高糖DMEM培養基，自動酵素免疫分析儀。
細胞、病毒、試劑來源如同實施例1。
方法：
接種細胞、給藥處理：選擇對數生長期細胞，DMEM完全培養液(含10%胎牛血清、青鏈黴素雙抗溶液(Life Technologies))製成細胞懸液，以每孔4×103/孔的密度接種在96孔培養盤內。12小時後見細胞完全貼壁，實驗分無藥物與病毒處理的對照組、單獨Eeyarestatin I或者CB-5083組，M1單獨感染組和Eeyarestatin I/M1聯用組或者CB-5083/M1聯用組。所用劑量為：所用劑量為：M1病毒(MOI=0.001)感染細胞；Eeyarestatin I或CB-5083設不同的劑量梯度(EerI(0、0.625、1.25、2.5、5、10μM)或CB-5083(0、0.125、0.25、0.5、1、2μM))。
MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide)與細胞內的琥珀酸脫氫酶反應：培養至48小時，每孔加入甲基偶氮唑藍(MTT)20μl(5mg/ml)，繼續孵育4小時，此時鏡檢可觀察到活細胞內形成的顆粒狀藍紫色甲臢結晶。
溶解甲臢顆粒：小心吸去上清液，加DMSO 100μl/孔溶解形成的結晶，在微型振盪器上震盪5min，然後在酵素免疫分析儀上用波長 570nm檢測各孔的光密度(OD值)。每組實驗重複3次。細胞存活率=(藥物處理組OD值/對照組OD值)×100%。
用origin 8軟體進行非線性曲線擬合，以藥物劑量為橫坐標，相對細胞存活率為縱坐標繪製兩條量效曲線，即Eeyarestatin I或CB-5083單用的量效曲線以及Eeyarestatin I或CB-5083與M1病毒聯用的量效曲線，計算兩條曲線的曲線下面積差值，即圖中曲線下的面積差異(Differnence in Area Under the Curve，DAUC)，該差值越大說明藥物協同越顯著。各種不同處理後細胞的存活率除以無藥物與病毒處理的對照組存活率作為相對細胞存活率，並以倍數表示。單因子變異數分析(One way ANOVA)統計，表明具有統計學差異時，以*表示P<0.05、**表示P<0.01。
結果：
如圖2a所示，M1病毒(MOI=0.001)單獨處理對腫瘤細胞Hep3B具有較小的存活率抑制作用，腫瘤細胞相對細胞存活率達到83.0%，5μM的Eeyarestatin I處理組腫瘤細胞相對細胞存活率仍高達87.2%，然而，當同樣的5μM的Eeyarestatin I與M1病毒(MOI=0.001)聯用(Eeyarestatin I+M1)時，腫瘤細胞相對細胞存活率大幅下降至21.6%。與單用處理比較，濃度0.625μM至10μM的Eeyarestatin I分別與M1病毒(MOI=0.001)聯合應用都顯著降低腫瘤細胞Hep3B存活率。
如圖2b顯示，與單用相應濃度CB-5083處理比較，0.125μM至2μM CB-5083分別聯合溶瘤病毒M1(MOI=0.001)顯著降低腫瘤細胞Hep3B存活率。在細胞水準說明了VCP抑制劑可以增強M1病毒的溶 瘤效應。
實施例3 敲低VCP表現水準可以增強溶瘤病毒M1在肝癌細胞上的溶瘤效應
材料：
M1病毒、人肝細胞癌Hep3B、人肝癌細胞Huh 7(購於ATCC)、VCP干擾片段(SiRNA)(購於Ribobio,SEQ ID Nos：1-2)、MTT(甲基偶氮唑藍)(購於MPbio)、LipofectamineTM RNAiMAX(invertrogen，USA)。
西方墨點法(Western bolt)：細胞總蛋白抽提液(M-PER® Mammalian Protein Extraction Reagent，Thermo)、VCP抗體(CST，USA)、GAPDH抗體(CST，USA)；細胞、病毒來源如同實施例1。
方法：
選擇對數生長期細胞，DMEM完全培養液(10%胎牛血清、青鏈黴素雙抗溶液(Life Technologies)製成細胞懸液，細胞以1×105/孔的密度接種在6孔盤內。24小時後，加入RNAiMAX包裹的SiRNA片段。48小時後，感染M1病毒。感染48小時後，處理樣本。
(a)每孔加入MTT 20μl(5mg/ml)，4小時後檢測吸光度值，計算細胞存活率，siVCP實驗組以12.5μM VCP RNA干擾片段處理，siNC對照組以VCP亂碼干擾片段處理。
(b)抽提蛋白質樣本，西方墨點法(Western blot)檢測 VCP蛋白表現，內參是GAPDH。
(c)試驗重複3次，資料以平均值±標準差表示；與各自對照組比較進行學生t檢驗(students’t test)統計，**表示P<0.01。
結果：
如圖3a所示，以VCP RNA干擾片段處理人肝癌細胞Hep3B和Huh 7後，VCP蛋白表現量顯著下降。
如圖3b所示，相差顯微鏡下觀察細胞形態，對照組(NTi)以及各干擾VCP處理組(VCPi#1和VCPi#2組)的Hep3B和Huh 7是單層貼壁生長，並且細胞緊密排列，表型一致，細胞形態沒有顯著改變。而各干擾VCP處理(VCPi#1和VCPi#2)並感染M1病毒(MOI=0.001)的聯合處理組Hep3B和Huh 7細胞數目明顯減少，並且細胞的形態發生了明顯改變，胞體收縮成球狀，折光率明顯增強，呈死亡病變樣。
如圖3c所示，與單獨干擾VCP處理組(VCPi#1和VCPi#2組)比較，各干擾VCP處理(VCPi#1和VCPi#2)並感染M1病毒(MOI=0.001)的聯合處理組Hep3B和Huh 7細胞存活率顯著下降，具有統計學差異。Hep3B和Huh 7在感染M1病毒(MOI=0.001)後，顯著引起敲低VCP水準後的肝癌Hep3B細胞(VCPi#1和VCPi#2組)存活率降低為22.5%和22.1%，Huh 7細胞(VCPi#1和VCPi#2組)存活率降低為31.8%和40.8%；以上結果表明敲低VCP可以增強溶瘤病毒M1在肝癌細胞上的溶瘤效應。
實施例4 VCP的蛋白表現與VCP抑制劑和M1病毒聯合 療法的抗癌效應呈正相關
材料：M1病毒、人肝細胞癌Hep3B、人肝癌細胞Huh 7、人肝癌細胞Sk-Hep-1(購於ATCC)、人肝癌細胞SNU-387(購於ATCC)、人肝癌細胞SNU-449(購於ATCC)、人肝癌細胞SNU-182(購於ATCC)、人肝癌細PLC(購於ATCC)、人正常肝細胞L02(購於ATCC)、人原代分離正常肝細胞HH(購於ScienCell Research Laboratories)、西方墨點法(Western blot)：細胞總蛋白抽提液(M-PER® Mammalian Protein Extraction Reagent，Thermo)、VCP抗體(CST，USA)、GAPDH抗體(CST，USA)；細胞、病毒來源如同實施例1。
方法：選擇對數生長期細胞，DMEM完全培養液(10%胎牛血清、青鏈黴素雙抗溶液(Life Technologies))製成細胞懸液，細胞以1×106/孔的密度接種在60mm細胞培養皿內，培養24小時。
1.西方墨點法(Western blot)檢測VCP蛋白表現。
(a)抽提細胞總蛋白、定量，進行西方墨點法(Western Blot)實驗(電泳、轉膜、阻斷、孵育一抗和二抗、顯影)。
(b)透過成像儀軟體Image Lab 2.0軟體對VCP和內參GAPDH條帶灰度掃描，檢測條帶灰度，計算VCP均一化蛋白表現量按照以下公式進行：VCP均一化蛋白表現量=VCP條帶灰度/內參條帶灰度。
(c)相對VCP蛋白表現=不同細胞的VCP均一化蛋白表現量/HH細胞的VCP均一化蛋白表現量。
2.非線性擬合曲線發繪製M1病毒單用和Eeyarestatin I聯合M1病毒的量效曲線。
接種細胞、給藥處理：選擇對數生長期細胞，DMEM完全培養液(含10%胎牛血清、青鏈黴素雙抗溶液(Life Technologies))製成細胞懸液，以每孔4×103/孔的密度接種在96孔培養盤內。12小時後見細胞完全貼壁，實驗分對照組，單獨Eeyarestatin I組，M1感染組和Eeyarestatin I/M1聯用組。所用劑量為：Eeyarestatin I(5μM)；M1病毒設不同的劑量梯度。
MTT與細胞內的琥珀酸脫氫酶反應：培養至72小時，每孔加入MTT 20μl(5mg/ml)，繼續孵育4小時，此時鏡檢可觀察到、活細胞內形成的顆粒狀藍紫色甲臢結晶。
溶解甲臢顆粒：小心吸去上清液，加DMSO 100μl/孔溶解形成的結晶，在微型振盪器上震盪5分鐘，然後在酵素免疫分析儀上用波長570nm檢測各孔的光密度(OD值)。每組實驗重複3次。細胞存活率=(藥物處理組OD值/對照組OD值)×100%。
用origin 8軟體進行非線性曲線擬合，繪製兩條量效曲線：1：Eeyarestatin I單用；2：Eeyarestatin I與M1病毒聯用，計算兩條曲線的曲線下面積差值，並以倍數表示(Eeyarestatin I單用曲線下面積-Eeyarestatin I與M1病毒聯用曲線下面積/Eeyarestatin I與M1病毒聯用曲線下面積)，即相對曲線下面積差異倍數。圖4b中DAUC表示不同細胞中相對曲線下面積差異倍數，該數值越大說明藥物協同越顯著。
相對曲線下面積與相對VCP表現採用皮爾遜(pearson)相關性分析法計算，r表示相關係數，r值越接近於1說明正相關性越強。
結果：
如圖4a所示，西方墨點法(Western blot)圖片底部顯示不同細胞相對VCP蛋白表現值，表明VCP的蛋白表現水準在不同細胞中不一樣。其中，人肝癌細胞Hep3B和Huh 7的VCP表現量是人原代正常細胞HH的7倍以上；人肝癌細胞Sk-Hep-1、SNU-387、SNU-449、SNU-182的VCP表現量是人原代正常細胞HH的3倍以上；人肝癌細胞PLC的VCP表現量是人原代正常細胞HH的2倍。
如圖4b和4d所示，透過繪製兩條量效曲線，採用origin 8軟體非線性擬合表明，在腫瘤細胞中相對曲線下面積的差值(DAUC)倍數顯著高於正常細胞，這表明，Eeyarestatin I與M1病毒聯用在VCP高表現的腫瘤細胞中引起顯著的殺傷作用，但是對VCP低表現的正常細胞存活率無顯著影響。
圖4c所示，透過皮爾遜(pearson)相關性分析方法統計，發現VCP的表現與Eeyarestatin I/M1病毒聯合療法的效應呈正相關。因此VCP的蛋白表現與VCP抑制劑和M1病毒聯合療法的抗癌效應呈正相關，表明VCP可以作為VCP抑制劑與M1病毒聯用的生物標記物。
實施例5 VCP抑制劑協同M1溶瘤病毒透過誘導不可逆內質網壓力引起腫瘤細胞凋亡
材料：
M1病毒，人肝癌細胞Hep3B，單克隆抗體(IRE1(3294s，Cell Signaling Technology)，XBP1(S)(12782s，Cell Signaling Technology)，BiP(3177s，Cell Signaling Technology)，p-PERK(sc-32577，Santa Cruz Biotechnology)，p-eIF2α(3398s，Cell Signaling Technology)，ATF6(sc-22799，Santa Cruz Biotechnology)，poly-ub(3933s，Cell Signaling Technology)，GAPDH(AP0060；Bioworld)，caspase-12(ab62484，Abcam)，CHOP(2895s，Cell Signaling Technology)，p-JNK(9255s，Cell Signaling Technology)；細胞、病毒來源如同實施例1。
方法：
選擇對數生長期細胞，DMEM完全培養液調製成細胞懸液，細胞以1×106的密度接種在60mm培養皿內。12小時後見細胞完全貼壁，實驗分對照組，單獨Eeyarestatin I組，M1感染組和Eeyarestatin I/M1聯用組。所用劑量為：所用劑量為：M1病毒(MOI=0.001)感染細胞；Eeyarestatin I(5μM)。
藥物處理設定時間後，收集蛋白質樣本，進行西方墨點法(Western blot)檢測內質網壓力標誌(marker)(IRE1，XBP1(S)，BiP，p-PERK，p-eIF2α，ATF6，poly-ub)；內質網壓力相關凋亡路徑啟動情況(caspase-12，CHOP，p-JNK)。
結果：
單獨使用Eeyarestatin I(5μM)能夠上調內質網壓力相關的未折疊蛋白反應路徑(unfold protein response)，如圖5a所示，Eeyarestatin I(5μM)能夠誘導升高IRE1，XBP1(S)，p-PERK，p-eIF2α等內質網壓力相關的標誌物。而單獨使用溶瘤病毒M1(MOI=0.001)能夠抑制IRE1，XBP1(S)，同時不影響其他路徑。我們觀察到當Eeyarestatin I(5μM)與M1病毒聯合使用時，M1病毒能夠阻斷由Eeyarestatin I引起的IRE1、XBP1路徑的上調，從而促進劇烈的內質網壓力，啟動caspase-12和JNK路徑(圖5b)，誘導細胞的凋亡。
實施例6 Eeyarestatin I與M1病毒聯合應用顯著抑制人肝細胞癌株移植瘤生長。
材料：
M1病毒、人肝癌細胞株Hep3B、人肝癌細胞株Huh 7、4周齡雌性BALB/c裸鼠(來源於南京大學模式動物研究中心(Model animal research center of Nanjing University))。
方法：
本實驗採用隨機的、單盲的設計。將5×106 Hep 3B或者Huh 7細胞注入到4周齡BALB/c裸鼠背側皮下。
當腫瘤大小達到50mm3時分組，包括不處理的對照組、單獨應用Eeyarestatin I組(腹腔注射2mg/kg/d)、單獨應用M1感染組(尾靜脈注射M1病毒5×105PFU/次)和Eeyarestatin I/M1聯用組(相同方式給予 相同劑量的Eeyarestatin I和M1病毒)，連續注射6次。每兩天測量腫瘤的長寬和體重，腫瘤的體積依據公式(長×寬2/2)。測量腫瘤體積後進行單因子變異數分析(One way ANOVA)統計，***表示p<0.001。
結果：
在人肝癌細胞株Hep3B、人肝癌細胞株Huh 7兩種腫瘤細胞移植瘤動物體內，病理解剖測定腫瘤體積表明，和對照組比較，單獨應用Eeyarestatin I組和單獨M1感染組只能引起腫瘤體積輕微的縮小，Eeyarestatin I/M1聯用組能引起腫瘤體積顯著地縮小(圖6b和6d)，在實驗終點，人肝癌細胞株Hep3B模型中對照組腫瘤體積是1463.6mm2，單獨應用Eeyarestatin I組和單獨M1感染組腫瘤體積是1189.7mm2和1117.5mm2，而Eeyarestatin I/M1聯用組腫瘤體積是404.3mm2。人肝癌細胞株Huh 7模型中對照組腫瘤體積是401.6mm2，單獨應用Eeyarestatin I組和單獨M1感染組腫瘤體積是279.5mm2和346.2mm2，而Eeyarestatin I/M1聯用組腫瘤體積是128.3。運用單因子變異數分析(One way ANOVA)統計表明差異具備統計學意義(圖6a和6c)。
本發明所記載的實施方式僅為闡釋性例子，本發明的實施方式並不受上述的限制，其他的任何未背離本發明的精神實質與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化，均應為等同的置換方式，都包含在本發明的保護範圍之內。
文獻：
1. S. Yamamoto, Y. Tomita, S. Nakamori, Y. Hoshida, H. Nagano, K. Dono, K. Umeshita, M. Sakon, M. Monden, K. Aozasa, Elevated expression of valosin-containing protein (p97) in hepatocellular carcinoma is correlated with increased incidence of tumor recurrence. J Clin Oncol 21, 447-452 (2003).
2. Y. Tsujimoto, Y. Tomita, Y. Hoshida, T. Kono, T. Oka, S. Yamamoto, N. Nonomura, A. Okuyama, K. Aozasa, Elevated expression of valosin-containing protein (p97) is associated with poor prognosis of prostate cancer. Clin Cancer Res 10, 3007-3012 (2004).
3. K. Li, H. Zhang, J. Qiu, Y. Lin, J. Liang, X. Xiao, L. Fu, F. Wang, J. Cai, Y. Tan, W. Zhu, W. Yin, B. Lu, F. Xing, L. Tang, M. Yan, J. Mai, Y. Li, W. Chen, P. Qiu, X. Su, G. Gao, P. W. Tai, J. Hu, G. Yan, Activation of Cyclic Adenosine Monophosphate Pathway Increases the Sensitivity of Cancer Cells to the Oncolytic Virus M1. Mol Ther 24, 156-165 (2016).
<110> 廣州威溶特醫藥科技有限公司
<120> VCP抑制劑和溶瘤病毒在製備抗腫瘤藥物中的應用
<130> 2919-WHD-TW
<160> 2
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
<210> 2
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2

Claims (11)

  1. 一種纈絡胺酸蛋白質(VCP)抑制劑用於製備溶瘤病毒抗腫瘤增效劑或抗藥逆轉劑的用途。
  2. 如申請專利範圍第1項所述的用途，其中所述的溶瘤病毒係選自甲病毒、腺病毒、牛痘病毒、麻疹病毒、水泡口炎病毒、和單純性皰疹病毒中的一種或多種；優選地，所述的甲病毒係選自M1病毒和蓋塔病毒中的至少一種；優選地，所述的甲病毒是與中國典型培養物保藏中心(CCTCC)的保藏號為CCTCC V201423的M1病毒的序列具有至少97.8%序列同一性的病毒；更優選地，所述的甲病毒是與中國典型培養物保藏中心(CCTCC)的保藏號為CCTCC V201423的M1病毒的序列具有100%序列同一性的病毒。
  3. 如申請專利範圍第1項所述的用途，其中所述的VCP抑制劑為抑制VCP蛋白活性的物質、降解VCP蛋白的物質或降低VCP蛋白水平的基因工具；優選地，所述的抑制VCP蛋白活性的物質選自化合物，更優選地，所述化合物選自Eeyarestatin I、NMS-873和CB-5083中的一種或多種；或者優選地，所述的降低VCP蛋白水平的基因工具為RNA干擾、微RNA(microRNA)、基因編輯或基因剔除材料；更優選地，所述的VCP抑制劑為腫瘤靶向VCP抑制劑。
  4. 一種藥物組合物或藥品套組，包含：(a)纈絡胺酸蛋白質(VCP)抑制劑；以及(b)溶瘤病毒；優選地，所述的VCP抑制劑為抑制VCP蛋白活性的物質、或降解VCP蛋白的物質、或降低VCP蛋白水平的基因工具；優選地，所述的抑制VCP蛋白活性的物質選自化合物，更優選地，所述化合物選自Eeyarestatin I、NMS-873和CB-5083中的一種或多種；或者優先地，所述的降低VCP蛋白水準的基因工具為RNA干擾、微RNA(microRNA)、基因編輯或基因剔除材料；更優選地，所述的VCP抑制劑為腫瘤靶向VCP抑制劑；優選地，所述的溶瘤病毒選自甲病毒、腺病毒、牛痘病毒、麻疹病毒、水泡口炎病毒、和單純性皰疹病毒中的一種或多種；優選地，所述的甲病毒選自M1病毒和蓋塔病毒中的至少一種；優選地，所述的甲病毒是與中國典型培養物保藏中心(CCTCC)的保藏號為CCTCC V201423的M1病毒的序列具有至少97.8%序列同一性的病毒；更優選地，所述的甲病毒是與中國典型培養物保藏中心(CCTCC)的保藏號為CCTCC V201423的M1病毒的序列具有100%序列同一性的病毒；優選地，所述的組合物或藥品套組是用於治療腫瘤的組合物或藥品套組。
  5. 如申請專利範圍第4項所述的藥品套組，其中所述的VCP抑制劑與所述的溶瘤病毒被分開包裝。
  6. 一種纈絡胺酸蛋白質(VCP)抑制劑及溶瘤病毒的組合用於製備治療腫瘤藥物的用途；優選地，所述的溶瘤病毒選自甲病毒、腺病毒、牛痘病毒、麻疹病毒、水泡口炎病毒、和單純性皰疹病毒中的一種或多種；優選地，所述的甲病毒選自M1病毒和蓋塔病毒中的至少一種；優選地，所述的VCP抑制劑為抑制VCP蛋白活性的物質、降解VCP蛋白的物質或降低VCP蛋白水平的基因工具；優選地，所述的抑制VCP蛋白活性的物質選自化合物，更優選地，所述化合物選自Eeyarestatin I、NMS-873和CB-5083中的一種或其組合；或者優選地，所述的降低VCP蛋白水準的基因工具為RNA干擾、微RNA(microRNA)、基因編輯或基因剔除材料；更優選地，所述的VCP抑制劑為腫瘤靶向VCP抑制劑。
  7. 如申請專利範圍第1-5項中任一項所述的用途、組合物或藥品套組，其中所述的VCP蛋白抑制劑為Eeyarestatin I、NMS-873、CB-5083或其組合。
  8. 如申請專利範圍第1-5項中任一項所述的用途、組合物或藥品套組，其中所述的腫瘤為實體瘤或血液瘤；優選地，所述的實體瘤為肝癌、結直 腸癌、膀胱癌、乳腺癌、子宮頸癌、前列腺癌、膠質瘤、黑色素瘤、胰腺癌、鼻咽癌、肺癌或胃癌；或者優選地，所述的腫瘤為對溶瘤病毒不敏感的腫瘤；或者所述的腫瘤為VCP高表現的腫瘤；更優選地，所述腫瘤為對溶瘤病毒不敏感的肝癌、結直腸癌、膀胱癌、乳腺癌、子宮頸癌、前列腺癌、膠質瘤、黑色素瘤、胰腺癌、鼻咽癌、肺癌或胃癌；或者所述的腫瘤為VCP高表現的肝癌、結直腸癌、膀胱癌、乳腺癌、子宮頸癌、前列腺癌、膠質瘤、黑色素瘤、胰腺癌、鼻咽癌、肺癌或胃癌。
  9. 如申請專利範圍第3或4項中任一項所述的組合物或藥品套組，其中所述的Eeyarestatin I、NMS-873或CB-5083與溶瘤病毒的配比為：0.01~200mg：103~109PFU；優選0.1~200mg：104~109PFU；進一步優選0.1~100mg：105~109PFU；進一步優選地，使用劑量為：Eeyarestatin I、NMS-873或CB-5083使用範圍為0.01mg/kg至200mg/kg，同時溶瘤病毒使用滴度為感染複數(MOI)從103至109(PFU/kg)；優選Eeyarestatin I、NMS-873或CB-5083使用範圍為0.1mg/kg至200mg/kg，同時溶瘤病毒使用滴度為MOI從104至109(PFU/kg)；更優選Eeyarestatin I、NMS-873或CB-5083使用範圍為0.1mg/kg至100mg/kg，同時溶瘤病毒使用滴度為MOI從105至109(PFU/kg)。
  10. 如申請專利範圍第3項所述的藥物組合物，其進一步包含藥學上可接受的載體；所述載體優選地選自凍乾粉針、注射劑、片劑、膠囊、試劑盒或貼劑。
  11. 一種抗腫瘤用藥系統，包括纈絡胺酸蛋白質(VCP)檢測試劑或檢測系統，以及溶瘤病毒；所述的溶瘤病毒選自甲病毒、腺病毒、牛痘病毒、麻疹病毒、水泡口炎病毒、和單純性皰疹病毒中的一種或多種；優選地，所述的甲病毒選自M1病毒和蓋塔病毒中的至少一種；優選地，所述的腫瘤為實體瘤或血液瘤；更優選地，所述的實體瘤為肝癌、結直腸癌、膀胱癌、乳腺癌、子宮頸癌、前列腺癌、膠質瘤、黑色素瘤、胰腺癌、鼻咽癌、肺癌或胃癌。
TW106128179A 2016-08-18 2017-08-18 Ｖｃｐ抑制劑和溶瘤病毒在製備抗腫瘤藥物中的應用 TWI701044B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
??201610688100.7 2016-08-18
CN201610688100.7 2016-08-18
CN201610688100.7A CN106177961B (zh) 2016-08-18 2016-08-18 Vcp抑制剂和溶瘤病毒在制备抗肿瘤药物中的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
TW201808340A true TW201808340A (zh) 2018-03-16
TWI701044B TWI701044B (zh) 2020-08-11

Family

ID=57522921

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW106128179A TWI701044B (zh) 2016-08-18 2017-08-18 Ｖｃｐ抑制劑和溶瘤病毒在製備抗腫瘤藥物中的應用

Country Status (6)

Country Link
US (1) US11234968B2 (zh)
EP (1) EP3500307B1 (zh)
JP (1) JP6980762B2 (zh)
CN (2) CN106177961B (zh)
TW (1) TWI701044B (zh)
WO (1) WO2018033126A1 (zh)

Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106177961B (zh) 2016-08-18 2018-03-13 广州威溶特医药科技有限公司 Vcp抑制剂和溶瘤病毒在制备抗肿瘤药物中的应用
CN108261426B (zh) 2017-01-04 2019-04-05 杭州康万达医药科技有限公司 药物组合物及其在治疗肿瘤和/或癌症的药物中的应用
CN109985244A (zh) * 2017-12-29 2019-07-09 广州威溶特医药科技有限公司 E3连接酶抑制剂和溶瘤病毒在制备抗肿瘤药物的应用
CN109985240A (zh) * 2017-12-29 2019-07-09 广州威溶特医药科技有限公司 Parp抑制剂和溶瘤病毒在制备抗肿瘤药物的应用
CN109985241A (zh) * 2017-12-29 2019-07-09 广州威溶特医药科技有限公司 Cdk抑制剂和溶瘤病毒在制备抗肿瘤药物的应用
CN108018289B (zh) * 2018-01-12 2020-07-14 厦门大学 一种抑制WSSV早期感染的基因Cq-VCP及其制备与应用
CN114668848A (zh) * 2018-07-25 2022-06-28 广州威溶特医药科技有限公司 溶瘤病毒在制备抗肿瘤药物增效剂或耐药逆转剂方面的应用
CN112011570B (zh) * 2019-05-31 2023-04-18 北京合生基因科技有限公司 特异杀伤肿瘤细胞的溶瘤病毒系统及其应用
JP7457037B2 (ja) * 2019-05-31 2024-03-27 広州威溶特医薬科技有限公司 Ｍ１ウイルス変異体及びその使用
CN111632146B (zh) * 2020-05-29 2021-09-28 中山大学 Oat抑制剂和溶瘤病毒在制备抗肿瘤药物中的应用
KR102598433B1 (ko) * 2021-01-28 2023-11-06 충북대학교 산학협력단 RepID 억제제를 유효성분으로 포함하는 p97 표적 항암제 민감성 증진용 약제학적 조성물
CN113368246B (zh) * 2021-05-12 2023-05-26 中山大学 一种增效的抗肿瘤药物
CN113952341A (zh) * 2021-10-21 2022-01-21 中国人民解放军海军军医大学 小分子化合物CB-5083在制备抗SARS-CoV-2药物中的应用

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009052617A1 (en) 2007-10-22 2009-04-30 Oncolytics Biotech Inc. Treatment regime for proliferative disorders
CA2697169A1 (en) * 2009-03-18 2010-09-18 David Stojdl Compositions and methods for augmenting activity of oncolytic viruses
WO2011069039A1 (en) * 2009-12-04 2011-06-09 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Hydrazone and diacyl hydrazine compounds and methods of use
CN107456463B (zh) 2014-08-26 2022-10-14 广州威溶特医药科技有限公司 甲病毒在制备抗肿瘤药物方面的应用
CN105456302B (zh) * 2015-12-23 2019-09-24 广州威溶特医药科技有限公司 大黄酚或其衍生物和溶瘤病毒在制备抗肿瘤药物的应用
CN106177961B (zh) 2016-08-18 2018-03-13 广州威溶特医药科技有限公司 Vcp抑制剂和溶瘤病毒在制备抗肿瘤药物中的应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN106177961B (zh) 2018-03-13
JP2019524840A (ja) 2019-09-05
TWI701044B (zh) 2020-08-11
US20190167641A1 (en) 2019-06-06
CN108606982B (zh) 2020-02-04
EP3500307A1 (en) 2019-06-26
WO2018033126A1 (en) 2018-02-22
US11234968B2 (en) 2022-02-01
JP6980762B2 (ja) 2021-12-15
EP3500307A4 (en) 2019-08-21
CN106177961A (zh) 2016-12-07
CN108606982A (zh) 2018-10-02
EP3500307B1 (en) 2021-03-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TWI701044B (zh) Ｖｃｐ抑制劑和溶瘤病毒在製備抗腫瘤藥物中的應用
TWI609690B (zh) 甲病毒在製備抗腫瘤藥物方面的應用
TWI707695B (zh) Ｉａｐ抑制劑和溶瘤病毒在製備抗腫瘤藥物中的應用
Zhao et al. Downregulation of MCT1 inhibits tumor growth, metastasis and enhances chemotherapeutic efficacy in osteosarcoma through regulation of the NF-κB pathway
JP6980763B2 (ja) 抗腫瘍薬の調製におけるＢｃｌ−ｘＬ阻害剤及び腫瘍溶解性ウイルスの使用
Yui et al. Mesenchymal mode of migration participates in pulmonary metastasis of mouse osteosarcoma LM8
Tian et al. HYD-PEP06 suppresses hepatocellular carcinoma metastasis, epithelial–mesenchymal transition and cancer stem cell-like properties by inhibiting PI3K/AKT and WNT/β-catenin signaling activation
Wang et al. Overexpression of serine/threonine‑protein kinase-1 in pancreatic cancer tissue: Serine/threonine-protein kinase-1 knockdown increases the chemosensitivity of pancreatic cancer cells
TW201929882A (zh) Ｅ３連接酶抑制劑和溶瘤病毒在用於製備抗腫瘤藥物的用途
Yang et al. SAHA and/or MG132 reverse the aggressive phenotypes of glioma cells: An in vitro and vivo study
Li et al. METTL3 antagonizes 5‑FU chemotherapy and confers drug resistance in colorectal carcinoma
CN107847553A (zh) 治疗具有tp53的半合子缺失的癌症的方法
TWI722357B (zh) 極光激酶抑制劑和α病毒用於製備抗腫瘤藥物之用途
Ting et al. Withaferin A targeting both cancer stem cells and metastatic cancer stem cells in the UP-LN1 carcinoma cell model
Chen et al. miR‐135a targets SMAD2 to promote osteosarcoma proliferation and migration
TWI691333B (zh) Ｃｄｋ抑制劑和溶瘤病毒在製備抗腫瘤藥物的用途
CN111635946B (zh) 一种诊治胶质瘤的分子生物标志物及其应用
Yu et al. FAM111B knockdown attenuates tumorigenesis of ovarian cancer via the down regulation of MYC
Xiong et al. [C. sub. 18][H. sub. 17] N [O. sub. 6] and Its Combination with Scutellarin Suppress the Proliferation and Induce the Apoptosis of Human Glioma Cells via Upregulation of Fas-Associated Factor 1 Expression
KR20200118931A (ko) 저산소 환경에서 유발되는 암의 전이 억제용 조성물
Graham Examination of 4-hydroxy tamoxifen-and BH3 mimetic-induced cell death pathways in glioblastoma and malignant peripheral nerve sheath tumor cells
JP2008230977A (ja) ニチジンを成分とする抗癌剤、および該抗癌剤の感受性増強剤