TW201741328A - 靶向組合物 - Google Patents

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理查 Ｊ 賀蘭
阿倫 Ｄ 馬汀
馬克 伍德
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帕提瓦生物療法股份有限公司
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Abstract

本發明提供包含靶向部分、核酸及視情況選用之連接基團之結合物，以及可用於製備該等結合物之合成中間物及合成方法。該等結合物可用於將治療性核酸靶向肝臟且治療肝臟疾病，包括肝炎(例如B型肝炎及D型肝炎)。

Description

靶向組合物 相關申請案之交叉引用
本專利申請案主張2016年4月11日申請之美國臨時專利申請案第62/321,034號、2016年11月3日申請之美國臨時專利申請案第62/417,156號及2016年12月22日申請之美國臨時專利申請案第62/438,310號的優先權益，該等申請案以引用的方式併入本文中。
許多疾病為肝臟所特有的，例如B型肝炎及非酒精性脂肪肝炎(nonalcoholic steatohepatitis，NASH)。因此，具有可主要靶向肝臟、腎臟、心臟、胰臟或活體內其他器官的治療組合物將為有益的。
包括siRNA之核酸可用作治療劑。
當前，需要可用於在活體內遞送(例如靶向)治療性核酸之組合物及方法。
本發明提供可用於靶向治療性核酸(例如靶向肝臟)之化合物、組合物及方法。
因此，在一態樣中，本發明提供一種式I化合物： 其中：R1為靶向配位體；L1不存在或為連接基團；L2不存在或為連接基團； R2為核酸；環A不存在、為3-20員環烷基、5-20員芳基、5-20員雜芳基或3-20員雜環烷基；各RA獨立地選自由以下組成之群：氫、羥基、CN、F、Cl、Br、I、-C1-2烷基-ORB、C1-10烷基C2-10烯基及C2-10炔基；其中該C1-10烷基C2-10烯基及C2-10炔基視情況經一或多個獨立地選自鹵基、羥基及C1-3烷氧基之基團取代；RB為氫、保護基、與固體支撐物之共價鍵或與結合於固體支撐物之連接基團之鍵；且n為0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；或其鹽。
可用siRNA分子(包括其組合)治療之疾病及病狀包括肝臟疾病，例如與脂肪積累有關或由其引起之肝臟疾病，諸如肝脂肪變性、非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)、非酒精性脂肪肝炎(NASH)、脂肪肝移植、肝炎(例如B型或D型)及/或急性肝損傷，包括暴發性及亞暴發性肝衰竭及高三酸甘油脂血症。
本發明亦提供可用於製備式I化合物之本文中揭示之合成中間物及方法。
自以下實施方式及圖，本領域技術人員將顯而易見本發明之其他目標、特徵及優點。
圖1：說明式Ie之中間化合物，其中靶向配位體/連接子結合於固相支撐物，且其中Pg1為保護基DMTr。
圖2：說明式Id之代表性化合物，其中靶向配位體結合於固相支撐物，其中核酸共價結合。
圖3：說明式Id之代表性化合物，其中靶向配位體-核酸結合物已自固相支撐物裂解且脫除保護基，得到式I化合物。
圖4：說明在C57初級肝細胞上GalNAc結合物在各種劑量下轉染24小時之後的TTR mRNA基因敲減實驗。
圖5：說明在單次皮下給與1mg/kg TTR siRNA-GalNAc結合物之後TTR蛋白質之敲減；C57小鼠(n=4)。
圖6：說明在單次皮下給與1mg/kg TTR siRNA-GalNAc結合物之後肝臟中TTR mRNA之敲減；C57小鼠(n=4)。
圖7：展示來自實例25之代表性化合物的資料。
圖8：展示來自實例25之代表性化合物的資料。
除非另外說明，否則如本文所用，以下術語具有歸於其之含義。
如本文所用，術語「小干擾RNA」或「siRNA」係指當siRNA處於與標靶基因或序列相同的細胞中時，能夠減少或抑制標靶基因或序列之表現(例如藉由介導siRNA序列之降解或抑制與siRNA序列互補之mRNA之轉譯)的雙鏈RNA(亦即雙鏈體RNA)。siRNA可與標靶基因或序列基本上或完全一致，或可包含錯配區(亦即錯配基元)。在某些實施例中，siRNA可長約19-25個(雙鏈體)核苷酸，且較佳長約20-24、21-22或21-23個(雙鏈體)核苷酸。siRNA雙鏈體可包含具有約1至約4個核苷酸或約2至約3個核苷酸之3'懸垂物及5'磷酸末端。siRNA之實例包括(但不限於)自兩個分開之成鏈分子組裝的雙鏈聚核苷酸分子，其中一條鏈為有義鏈且另一條鏈為互補反義鏈。
在某些實施例中，siRNA之一或兩個鏈上的5'及/或3'懸垂物包含1-4(例如1、2、3或4)個經修飾及/或未修飾之去氧胸苷(t或dT)核苷酸、1-4(例如1、2、3或4)個經修飾(例如2'OMe)及/或未修飾之尿苷(U)核糖核苷酸及/或1-4(例如1、2、3或4)個與標靶序列互補(例如反義鏈中之3'懸垂物)或具有其互補鏈(例如有義鏈中3'懸垂物)的經修飾(例如2'OMe)及/或未修飾之核糖核苷酸或去氧核糖核苷酸。
較佳地，siRNA係化學合成。siRNA亦可藉由用大腸桿菌核糖核酸酶III或Dicer裂解較長dsRNA(例如長度大於約25個核苷酸之dsRNA)來產生。此等酶將dsRNA加工成生物活性siRNA(參見例如Yang等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,99：9942-9947(2002)；Calegari等人，Proc. Natl.Acad.Sci.USA,99：14236(2002)；Byrom等人，Ambion TechNotes,10(1)：4-6(2003)；Kawasaki等人，Nucleic Acids Res.,31：981-987(2003)；Knight等人，Science,293：2269-2271(2001)；及Robertson等人，J.Biol.Chem.,243：82(1968))。較佳地，dsRNA長度為至少50個核苷酸至約100、200、300、400或500個核苷酸。dsRNA長度可長達1000、1500、2000、5000個核苷酸或更長。dsRNA可編碼整個基因轉錄物或部分基因轉錄物。在某些情況下，siRNA可藉由質體編碼(例如轉錄為自動摺疊成具有髮夾環之雙鏈體之序列)。
短語「抑制標靶基因之表現」係指本發明之siRNA能夠使標靶基因沉默、減少或抑制標靶基因之表現(例如DGAT2及視情況ANGPTL3表現)。為檢查基因沉默之程度，測試樣品(例如來自表現標靶基因之相關生物體之生物樣品或表現標靶基因之培養細胞之樣品)與使標靶基因沉默、減少或抑制標靶基因之表現的siRNA接觸。將測試樣品中標靶基因之表現與未接觸siRNA之對照樣品(例如來自表現標靶基因之相關生物體之生物樣品或表現標靶基因之培養細胞之樣品)中標靶基因之表現相比。對照樣品(例如表現標靶基因之樣品)可分配100%之值。在特定實施例中，當測試樣品相對於對照樣品(例如僅緩衝液、靶向不同基因之siRNA序列、加擾siRNA序列等)之值為約100%、99%、98%、97%、96%、95%、94%、93%、92%、91%、90%、89%、88%、87%、86%、85%、84%、83%、82%、81%、80%、79%、78%、77%、76%、75%、70%、65%、60%、55%、50%、45%、40%、35%、30%、25%、20%、15%、10%、5%或0%時，實現標靶基因之沉默、標靶基因之表現之抑制或減少。適合分析法包括(但不限於)使用本領域技術人員已知之技術，諸如斑點墨點法、北方墨點法、原位雜交、ELISA、免疫沈澱、酶功能以及本領域技術人員已知之表型分析法檢查蛋白質或mRNA含量。
術語「合成活化基團」係指可附接於原子以活化該原子，使得其與另一反應基團形成共價鍵的基團。應瞭解，合成活化基團之性質可視其活化之原子而定。舉例而言，當合成活化基團附接於氧原子時，合成活化基團為將活化該氧原子以與另一反應基團形成鍵(例如酯、胺基甲酸酯 或醚鍵)之基團。已知此類合成活化基團。可附接於氧原子之合成活化基團之實例包括(但不限於)乙酸酯基、丁二酸酯基、三氟甲磺酸酯基及甲磺酸酯基。當合成活化基團附接於羧酸之氧原子時，合成活化基團可為衍生自已知之偶合試劑(例如已知之醯胺偶合試劑)的基團。已知此類偶合試劑。此類偶合試劑之實例包括(但不限於)N,N'-二環己基碳化二亞胺(DCC)、羥基苯并三唑(HOBt)、N-(3-二甲基胺基丙基)-N'-乙基碳酸酯(EDC)、六氟磷酸(苯并三唑-1-基氧基)三(二甲基胺基)鏻(BOP)、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯啶基鏻(PyBOP)或六氟磷酸O-苯并三唑-1-基-N,N,N',N'-四甲基脲(HBTU)。
諸如siRNA之治療性核酸之「有效量」或「治療有效量」為足夠產生所需作用，例如與在缺乏siRNA下偵測到之正常表現水準相比，抑制標靶序列之表現的量。在特定實施例中，當相對於對照(例如僅緩衝液、靶向不同基因之siRNA序列、加擾siRNA序列等)，用siRNA獲得之值為約100%、99%、98%、97%、96%、95%、94%、93%、92%、91%、90%、89%、88%、87%、86%、85%、84%、83%、82%、81%、80%、79%、78%、77%、76%、75%、70%、65%、60%、55%、50%、45%、40%、35%、30%、25%、20%、15%、10%、5%或0%時，實現標靶基因或標靶序列之表現之抑制。用於量測標靶基因或標靶序列之表現的適合分析法包括(但不限於)使用本領域技術人員已知之技術，諸如斑點墨點法、北方墨點法、原位雜交、ELISA、免疫沈澱、酶功能以及本領域技術人員已知之表型分析法檢查蛋白質或mRNA含量。
如本文所用，術語「核酸」係指含有呈單鏈或雙鏈形式之至少兩個核苷酸(亦即去氧核糖核苷酸或核糖核苷酸)且包括DNA及RNA之聚合物。「核苷酸」含有糖去氧核糖(DNA)或核糖(RNA)、鹼基及磷酸酯基。核苷酸經由磷酸酯基連接在一起。「鹼基」包括嘌呤及嘧啶，其進一步包括天然化合物腺嘌呤、胸腺嘧啶、鳥嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶、肌苷及天然類似物，以及嘌呤及嘧啶之合成衍生物，包括(但不限於)置放諸如(但不限於)胺、醇、硫醇、羰酸酯及烷基鹵之新反應基團之修飾。核酸包括含有已知之核苷酸類似物或經修飾之主鏈殘基或鍵的核酸，其為合成、天然存在及 非天然存在的，且具有與參考核酸類似之結合性質。此類類似物及/或經修飾之殘基之實例包括(但不限於)硫代磷酸酯、胺基磷酸酯、膦酸甲酯、對掌性-膦酸甲酯、2'-O-甲基核糖核苷酸及肽-核酸(peptide-nucleic acid，PNA)。另外，核酸可包括一或多個UNA部分。
術語「核酸」包括任何寡核苷酸或聚核苷酸，其中含有至多60個核苷酸之片段一般稱為寡核苷酸，且更長片段稱為聚核苷酸。去氧核糖寡核苷酸由稱為去氧核糖之5碳糖在此糖之5'及3'碳上共價接合於磷酸酯基組成，形成交替之無分支聚合物。DNA可呈例如反義分子、質體DNA、預縮合DNA、PCR產物、載體、表現卡匣、嵌合序列、染色體DNA或此等組之衍生物及組合的形式。核糖寡核苷酸由其中5碳糖為核糖之類似重複結構組成。RNA可呈例如小干擾RNA(siRNA)、Dicer-受質dsRNA、小髮夾RNA(shRNA)、不對稱干擾RNA(aiRNA)、微RNA(miRNA)、mRNA、tRNA、rRNA、tRNA、病毒RNA(vRNA)及其組合之形式。因此，在本發明之上下文中，術語「聚核苷酸」及「寡核苷酸」係指由天然存在之鹼基、糖及糖間(主鏈)鍵組成的核苷酸或核苷單體之聚合物或寡聚物。術語「聚核苷酸」及「寡核苷酸」亦包括功能類似之包含非天然存在之單體的聚合物或寡聚物或其部分。因為諸如細胞吸收增強、免疫原性降低及在核酸酶存在下之穩定性增加的特性，所以此類經修飾或經取代之寡核苷酸經常較佳超越天然形式。
除非另有指示，否則特定核酸序列亦暗中涵蓋其保守修飾之變異體(例如簡併密碼子取代)、等位基因、直系同源物、SNP及互補序列以及明確指示之序列。特定言之，簡併密碼子取代可藉由產生其中一或多個所選(或所有)密碼子之第三個位置經混合鹼基及/或去氧肌苷殘基取代的序列來實現(Batzer等人，Nucleic Acid Res.,19：5081(1991)；Ohtsuka等人，J.Biol.Chem.,260：2605-2608(1985)；Rossolini等人，Mol.Cell.Probes,8：91-98(1994))。
在一個實施例中，核酸可為siRNA。適合siRNA以及可用於其製備之方法及中間物在國際專利申請公開案第WO 2016/054421號中報導。在一個實施例中，siRNA可選自以下表中所示之siRNA。
術語「基因」係指包含對於多肽或前驅多肽產生而言所必需之部分長度或整個長度編碼序列的核酸(例如DNA或RNA)序列。
如本文所用，「基因產物」係指諸如RNA轉錄物或多肽之 基因產物。
除非另有說明，否則如本文所用，單獨或作為另一取代基之一部分的術語「烷基」意謂具有指定碳原子數目之直鏈或支鏈烴基(亦即C1-8意謂一至八個碳)。烷基之實例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、第三丁基、異丁基、第二丁基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基及其類似基團。術語「烯基」係指具有一或多個雙鍵之不飽和烷基。類似地，術語「炔基」係指具有一或多個三鍵之不飽和烷基。此類不飽和烷基之實例包括乙烯基、2-丙烯基、巴豆基、2-異戊烯基、2-(丁二烯基)、2,4-戊二烯基、3-(1,4-戊二烯基)、乙炔基、1-丙炔基及3-丙炔基、3-丁炔基及更高碳數之同系物及異構體。
單獨或作為另一取代基之一部分的術語「伸烷基」意謂衍生自烷烴(包括直鏈及支鏈烷烴)之二價基團，例如-CH2CH2CH2CH2-及-CH(CH3)CH2CH2-。
術語「環烷基」、「碳環基」或「碳環」係指總共具有3至20個環原子數目(例如3-20員環烷基為具有3至20個環原子之環烷基，或C3-20環烷基為具有3-20個碳環原子之環烷基)，且對於3-5員環烷基而言，完全飽和或在環頂點之間具有至多一個雙鍵，且對於6員環烷基或更大環烷基而言，完全飽和或在環頂點之間具有至多兩個雙鍵的烴環系統。如本文所用，「環烷基」、「碳環基」或「碳環」亦意指二環、多環及螺環烴環系統，諸如二環[2.2.1]庚烷、蒎烷、二環[2.2.2]辛烷、金剛烷、降冰片烯、螺環C5-12烷烴等等。如本文所用，術語「烯基」、「炔基」、「環烷基」、「碳環」及「碳環基」意圖包括其單鹵化及多鹵化變體。
術語「雜環烷基」、「雜環基」或「雜環」係指總共具有3-20個環原子(例如3-20員雜環烷基為具有3-20個環原子之雜環烷基，C2-19雜環烷基為具有3-10個環原子且2-19個之間的環原子為碳的雜環烷基)，含有一個至十個選自N、O及S之雜原子的飽和或部分不飽和環系統基團，其中作為環原子，氮及硫原子視情況氧化，氮原子視情況四級銨化。除非另有說明，否則「雜環烷基」環、「雜環基」環或「雜環」可為單環、二環、螺環或多環環系統。「雜環烷基」環、「雜環基」環或「雜環」之非限制性 實例包括吡咯啶、哌啶、N-甲基哌啶、咪唑啶、吡唑啶、丁內醯胺、戊內醯胺、咪唑啶酮、乙內醯脲、二氧戊環、鄰苯二醯亞胺、哌啶、嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮、1,4-二噁烷、嗎啉、硫嗎啉、硫嗎啉-S-氧化物、硫嗎啉-S,S-氧化物、哌嗪、哌喃、吡啶酮、3-吡咯啉、硫哌喃、哌喃酮、四氫呋喃、四氫噻吩、奎寧環、托品烷、2-氮雜螺[3.3]庚烷、(1R,5S)-3-氮雜二環[3.2.1]辛烷、(1s,4s)-2-氮雜二環[2.2.2]辛烷、(1R,4R)-2-氧雜-5-氮雜二環[2.2.2]辛烷及其類似物。「雜環烷基」、「雜環基」或「雜環」基團可經由一或多個環碳或雜原子附接於分子之其餘部分。「雜環烷基」、「雜環基」或「雜環」可包括其單鹵化及多鹵化變體。
術語「烷氧基」及「烷硫基」以其習知意義使用，且係指經由氧原子(「氧基」)或硫基附接於分子其餘部分之彼等烷基，且進一步包括其單鹵化及多鹵化變體。
除非另有說明，否則單獨或作為另一取代基之一部分的術語「鹵基」或「鹵素」意謂氟、氯、溴或碘原子。術語「(鹵)烷基」意圖包括「烷基」與「鹵烷基」取代基。另外，術語「鹵烷基」意圖包括單鹵烷基及多鹵烷基。舉例而言，術語「C1-4鹵烷基」意圖包括三氟甲基、2,2,2-三氟乙基、4-氯丁基、3-溴丙基、二氟甲基及其類似基團。
術語「芳基」意謂具有6-14個碳原子之碳環芳基，無論是否與一或多個基團稠合。除非另有說明，否則芳基之實例包括苯基、萘基、聯苯基及其類似基團。
術語「雜芳基」係指含有一個至五個選自N、O及S之雜原子的芳環，其中氮及硫原子視情況氧化，且氮原子視情況四級銨化。雜芳基可經由雜原子附接於分子其餘部分。雜芳基之實例包括吡啶基、噠嗪基、吡嗪基、嘧啶基、三嗪基、喹啉基、喹噁啉基、喹唑啉基、噌啉基、酞嗪基、苯并三嗪基、嘌呤基、苯并咪唑基、苯并吡唑基、苯并三唑基、苯并噁唑基、異苯并呋喃基、異吲哚基、吲嗪基、苯并三嗪基、噻吩并吡啶基、噻吩并嘧啶基、吡唑并嘧啶基、咪唑并吡啶、苯并噻唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、喹啉基、異喹啉基、異噻唑基、吡唑基、吲唑基、喋啶基、咪唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、異噁唑基、噻二唑基、吡咯 基、噻唑基、呋喃基、噻吩基及其類似基團。
術語醣包括單醣、二醣及三醣。該術語包括葡萄糖、蔗糖、果糖、半乳糖及核糖，以及去氧糖，諸如去氧核糖，及胺基糖，諸如軟骨糖胺。醣衍生物宜如國際專利申請公開案第WO 96/34005號及第97/03995號中所述製備。醣宜經由醚鍵、硫醚鍵(例如S-醣苷)、胺氮(例如N-醣苷)或碳-碳鍵(例如C-醣苷)連接至式I化合物之其餘部分。在一個實施例中，醣宜經由醚鍵連接至式I化合物之其餘部分。在一個實施例中，術語醣包括下式之基團：
其中：X為NR3，且Y係選自-(C=O)R4、-SO2R5及-(C=O)NR6R7；或X為-(C=O)-且Y為NR8R9；R3為氫或(C1-C4)烷基；R4、R5、R6、R7、R8及R9各獨立地選自由以下組成之群：氫、(C1-C8)烷基、(C1-C8)鹵烷基、(C1-C8)烷氧基及(C3-C6)環烷基，其視情況經一或多個獨立地選自由以下組成之群的基團取代：鹵基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)鹵烷基、(C1-C4)烷氧基及(C1-C4)鹵烷氧基；R10為-OH、-NR8R9或-F；且R11為-OH、-NR8R9、-F或視情況經一或多個獨立地選自由以下組成之群的基團取代的5員雜環：鹵基、羥基、羧基、胺基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)鹵烷基、(C1-C4)烷氧基及(C1-C4)鹵烷氧基。在另一實施例中，醣可選自由以下組成之群：
在另一實施例中，醣可為：
術語「動物」包括哺乳動物物種，諸如人類、小鼠、大鼠、狗、貓、倉鼠、天竺鼠、兔、家畜及其類似物種。
產生siRNA分子
SiRNA可呈若干形式提供，包括例如一或多種分離之小干擾RNA(siRNA)雙鏈體、更長雙鏈RNA(dsRNA)或在DNA質體中自轉錄卡匣轉錄之siRNA或dsRNA。在一些實施例中，siRNA可酶促產生或藉由部分/全部有機合成產生，且經修飾之核糖核苷酸可藉由活體外酶或有機合成引入。在某些情況下，各鏈係化學製備。合成RNA分子之方法為本領域中已知，例如如Verma及Eckstein(1998)中所述或如本文中所述之化學合成方法。
用於分離RNA、合成RNA、雜交核酸、製備及篩選cDNA文庫及進行PCR之方法為本領域中所熟知(參見例如Gubler及Hoffman,Gene,25：263-269(1983)；Sambrook等人，上述；Ausubel等人，上述)，以及PCR方法(參見美國專利第4,683,195號及第4,683,202號；PCR Protocols：A Guide to Methods and Applications(Innis等人編輯，1990))。表現文庫亦為本領域技術人員熟知。揭示可用於本發明中之通用方法的其他基礎文本包 括Sambrook等人，Molecular Cloning,A Laboratory Manual(第2版1989)；Kriegler,Gene Transfer and Expression：A Laboratory Manual(1990)；及Current Protocols in Molecular Biology(Ausubel等人編輯，1994)。此等參考文獻之揭示內容以引用的方式全部併入本文中以達成所有目的。
通常，siRNA係化學合成。包含本發明之siRNA分子之寡核苷酸可使用本領域中已知之多種技術中之任一者，諸如以下中描述之技術合成：Usman等人，J.Am.Chem.Soc.,109：7845(1987)；Scaringe等人，Nucl.Acids Res.,18：5433(1990)；Wincott等人，Nucl.Acids Res.,23：2677-2684(1995)；及Wincott等人，Methods Mol.Bio.,74：59(1997)。寡核苷酸之合成使用常見核酸保護及偶合基團，諸如在5'-端之二甲氧基三苯甲基及在3'-端之亞磷醯胺。作為非限制性實例，小規模合成可在Applied Biosystems合成器上使用0.2μmol規模方案進行。或者，0.2μmol規模之合成可在來自Protogene之96孔盤合成器(Palo Alto,CA)上進行。然而，更大或更小規模之合成亦在本發明之範疇內。適合用於寡核苷酸合成之試劑、用於RNA保護基脫除之方法及用於RNA純化之方法為本領域技術人員所知。
siRNA分子可自兩個不同寡核苷酸組裝，其中一個寡核苷酸包含siRNA之有義鏈且另一個包含siRNA之反義鏈。舉例而言，各鏈可分開合成且在合成及/或脫除保護基之後藉由雜交或聯接來接合在一起。
本發明之實施例
本發明之一態樣為如發明內容中闡述之式I化合物，或其鹽。
在式I化合物之一個實施例中，R1為靶向配位體；L1不存在或為連接基團；L2不存在或為連接基團；R2為核酸；環A不存在、為3-20員環烷基、5-20員芳基、5-20員雜芳基或3-20員雜環烷基；各RA獨立地選自由以下組成之群：氫、羥基、CN、F、Cl、Br、I、-C1-2烷基-ORB及視情況經一或多個獨立地選自鹵基、羥基及C1-3烷氧基之基團 取代的C1-8烷基；RB為氫、保護基、與固體支撐物之共價鍵或與結合於固體支撐物之連接基團之鍵；且n為0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
在一個實施例中，R1為-C(H)(3-p)(L3-醣)p，其中各L3獨立地為連接基團；p為1、2或3；且醣為單醣或二醣。
在一個實施例中，醣為：
其中：X為NR3，且Y係選自-(C=O)R4、-SO2R5及-(C=O)NR6R7；或X為-(C=O)-且Y為NR8R9；R3為氫或(C1-C4)烷基；R4、R5、R6、R7、R8及R9各獨立地選自由以下組成之群：氫、(C1-C8)烷基、(C1-C8)鹵烷基、(C1-C8)烷氧基及(C3-C6)環烷基，其視情況經一或多個獨立地選自由以下組成之群的基團取代：鹵基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)鹵烷基、(C1-C4)烷氧基及(C1-C4)鹵烷氧基；R10為-OH、-NR8R9或-F；且R11為-OH、-NR8R9、-F或視情況經一或多個獨立地選自由以下組成之群的基團取代的5員雜環：鹵基、羥基、羧基、胺基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)鹵烷基、(C1-C4)烷氧基及(C1-C4)鹵烷氧基；或其鹽。
在一個實施例中，醣係選自由以下組成之群：
及其鹽。
在一個實施例中，醣為：
在一個實施例中，各L3獨立地為具有0至50個碳原子之有分支或未分支之二價飽和或不飽和烴鏈，其中該烴鏈中之該等碳原子中的一或多個(例如1、2、3或4個)視情況經-O-、-NRX-、-NRX-C(=O)-、-C(=O)-NRX-或-S-置換，且其中RX為氫或(C1-C6)烷基，且其中烴鏈視情況經一或多個(例如1、2、3或4個)選自以下之取代基取代：(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)環烷基、(C1-C6)烷醯基、(C1-C6)烷醯氧基、(C1-C6)烷氧基羰基、(C1-C6)烷基硫基、疊氮基、氰基、硝基、鹵基、羥基、側氧基(=O)、羧基、芳基、芳氧基、雜芳基及雜芳氧基。
在一個實施例中，各L3獨立地為具有1至20個碳原子之有分支或未分支之二價飽和或不飽和烴鏈，其中該烴鏈中之該等碳原子中的一或多個(例如1、2、3或4個)視情況經-O-、-NRX-、-NRX-C(=O)-、-C(=O)-NRX-或-S-置換，且其中RX為氫或(C1-C6)烷基，且其中烴鏈視情況經一或多個(例如1、2、3或4個)選自以下之取代基取代：(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)環烷基、(C1-C6)烷醯基、(C1-C6)烷醯氧基、(C1-C6)烷氧基羰基、(C1-C6)烷基硫基、疊氮基、氰基、硝基、鹵基、羥基、側氧基(=O)、羧基、芳基、 芳氧基、雜芳基及雜芳氧基。
在一個實施例中，L3為：
或其鹽。
在一個實施例中，R1為：
或其鹽。
在一個實施例中，R1為：
其中G為-NH-或-O-；RC為氫、(C1-C8)烷基、(C1-C8)鹵烷基、(C1-C8)烷氧基、(C1-C6)烷醯基、(C3-C20)環烷基、(C3-C20)雜環、芳基、雜芳基、單醣、二醣或三醣；且其中該環烷基、雜環、芳基、雜芳基及醣視情況經一或多個獨立地選自由以下組成之群之基團取代：鹵基、羧基、羥基、胺基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)鹵烷基、(C1-C4)烷氧基及(C1-C4)鹵烷氧基；或其鹽。
在一個實施例中，RC為：
在一個實施例中，R1為：
在一個實施例中，RC為：
在一個實施例中，G為-NH-。
在一個實施例中，R1為：
在一個實施例中，R1為：
其中各RD獨立地選自由以下組成之群：氫、(C1-C6)烷基、(C9-C20)烷基甲矽烷基、(RW)3Si-、(C2-C6)烯基、四氫哌喃基、(C1-C6)烷醯基、苯甲醯基、芳基(C1-C3)烷基、TMTr(三甲氧基三苯甲基)、DMTr(二甲氧基三苯甲基)、MMTr(單甲氧基三苯甲基)及Tr(三苯甲基)；且各RW獨立地選自由以下組成之群：(C1-C4)烷基及芳基。
在一個實施例中，連接基團L1及L2獨立地為具有1至50個碳原子之有分支或未分支之二價飽和或不飽和烴鏈，其中該烴鏈中之該等碳原子中的一或多個(例如1、2、3或4個)視情況經-O-、-NRX-、-NRX-C(=O)-、-C(=O)-NRX-或-S-置換，且其中RX為氫或(C1-C6)烷基，且其中烴鏈視情況經一或多個(例如1、2、3或4個)選自以下之取代基取代：(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)環烷基、(C1-C6)烷醯基、(C1-C6)烷醯氧基、(C1-C6)烷氧基羰基、(C1-C6)烷基硫基、疊氮基、氰基、硝基、鹵基、羥基、側氧基(=O)、羧基、芳基、芳氧基、雜芳基及雜芳氧基。
在一個實施例中，L1及L2獨立地為具有1至20個碳原子之有分支或未分支之二價飽和或不飽和烴鏈，其中該烴鏈中之該等碳原子中的一或多個(例如1、2、3或4個)視情況經-O-、-NRX-、-NRX-C(=O)-、-C(=O)-NRX-或-S-置換，且其中RX為氫或(C1-C6)烷基，且其中烴鏈視情況經一或多個(例如1、2、3或4個)選自以下之取代基取代：(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)環烷基、(C1-C6)烷醯基、(C1-C6)烷醯氧基、(C1-C6)烷氧基羰基、(C1-C6) 烷基硫基、疊氮基、氰基、硝基、鹵基、羥基、側氧基(=O)、羧基、芳基、芳氧基、雜芳基及雜芳氧基。
在一個實施例中，L1及L2獨立地為具有1至14個碳原子之有分支或未分支之二價飽和或不飽和烴鏈，其中該烴鏈中之該等碳原子中的一或多個(例如1、2、3或4個)視情況經-O-、-NRX-、-NRX-C(=O)-、-C(=O)-NRX-或-S-置換，且其中RX為氫或(C1-C6)烷基，且其中烴鏈視情況經一或多個(例如1、2、3或4個)選自以下之取代基取代：(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)環烷基、(C1-C6)烷醯基、(C1-C6)烷醯氧基、(C1-C6)烷氧基羰基、(C1-C6)烷基硫基、疊氮基、氰基、硝基、鹵基、羥基、側氧基(=O)、羧基、芳基、芳氧基、雜芳基及雜芳氧基。
在一個實施例中，L1經由-NH-、-O-、-S-、-(C=O)-、-(C=O)-NH-、-NH-(C=O)-、-(C=O)-O-、-NH-(C=O)-NH-或-NH-(SO2)-連接至R1。
在一個實施例中，L2經由-O-連接至R2。
在一個實施例中，L1係選自由以下組成之群：
在一個實施例中，L1係選自由以下組成之群：
及其鹽。
在一個實施例中，L2為-CH2-O-或-CH2-CH2-O-。
在一個實施例中，式I化合物具有下式Ia： 其中：各D獨立地選自由以下組成之群：及-N=；或其鹽。
在一個實施例中，式Ia化合物係選自由以下組成之群：
其中：Q1為氫且Q2為R2；或Q1為R2且Q2為氫；Z為-L1-R1；及其鹽。
在一個實施例中，式I化合物具有下式Ib： 其中：各D獨立地選自由以下組成之群：及-N=；各m獨立地為1或2；或其鹽。
在一個實施例中，式Ib化合物係選自由以下組成之群：
其中：Q1為氫且Q2為R2；或Q1為R2且Q2為氫；Z為-L1-R1；及其鹽。
在一個實施例中，式I化合物具有下式(Ic)： 其中E為-O-或-CH2-；n係選自由0、1、2、3及4組成之群；且n1及n2各獨立地選自由0、1、2及3組成之群；或其鹽。
在某些實施例中，式(Ic)化合物係選自由以下組成之群：
其中Z為-L1-R1；及其鹽。
在一個實施例中，-A-L2-R2部分為：
其中：Q1為氫且Q2為R2；或Q1為R2且Q2為氫；且各q獨立地為0、1、2、3、4或5；或其鹽。
在一個實施例中，R2為寡核苷酸。
在一個實施例中，R2為siRNA。
在一個實施例中，式(I)化合物係選自由以下組成之群：
及
及其鹽。
在一個實施例中，R1係選自由以下組成之群：
其中RS為；n為2、3或4；x為1或2。
在一個實施例中，L1係選自由以下組成之群：
在一個實施例中，L1係選自由以下組成之群：
在一個實施例中，A不存在、為苯基、吡咯啶基或環戊基。
在一個實施例中，L2為視情況經羥基取代之C1-4伸烷基-O-。
在一個實施例中，L2為-CH2O-、-CH2CH2O-或-CH(OH)CH2O-。
在一個實施例中，各RA獨立地為羥基或視情況經羥基取代之C1-8烷基。
在一個實施例中，各RA獨立地選自由以下組成之群：羥基、甲基及-CH2OH。
在一個實施例中，式I化合物具有下式(Ig)： 其中B為-N-或-CH-；L1不存在或為-NH-；L2為視情況經羥基或鹵基取代之C1-4伸烷基-O-；n為0、1或2；或其鹽。
在一個實施例中，式I化合物具有下式(Ig)： 其中B為-N-或-CH-；L1不存在或為-NH-；L2為視情況經羥基或鹵基取代之C1-4伸烷基-O-；n為0、1、2、3、4、5、6或7；或其鹽。
在一個實施例中，式I化合物具有下式(Ig)： 其中B為-N-或-CH-；L1不存在或為-NH-；L2為視情況經羥基或鹵基取代之C1-4伸烷基-O-；n為0、1、2、3或4；或其鹽。
在一個實施例中，式Ig化合物係選自由以下組成之群：
其中R'為C1-9烷基、C2-9烯基或C2-9炔基；其中該C1-9烷基、C2-9烯基或C2-9炔基視情況經鹵基或羥基取代；及其鹽。
在一個實施例中，式I化合物係選自由以下組成之群： 及其鹽。
在一個實施例中，式I化合物或其鹽係選自由以下組成之群：
或其醫藥學上可接受之鹽。
本發明之一個態樣為包含式I化合物及醫藥學上可接受之 載劑的醫藥組合物。
本發明之另一個態樣為一種將核酸遞送至動物肝臟之方法，其包括向該動物投與式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
在一個實施例中，式I化合物具有下式(Id)： 其中：R1d係選自：
及
Xd為C2-10伸烷基； Nd為0或1；R2d為核酸；且R3d為H、保護基、與固體支撐物之共價鍵或與結合於固體支撐物之連接基團之鍵。
在一個實施例中，R3d包括將式Id化合物之其餘部分接合至固體支撐物之連接基團。連接基團之性質並非關鍵，其限制條件為化合物為適合於製備其中R2d為核酸之式Id化合物之中間物。
在一個實施例中，R3d中之連接子的分子量為約20道爾頓至約1,000道爾頓。
在一個實施例中，R3d中之連接子的分子量為約20道爾頓至約500道爾頓。
在一個實施例中，R3d中之連接子將固體支撐物與式I化合物之其餘部分間隔約5埃至約40埃(包括5埃及40埃)長。
在一個實施例中，R3d中之連接子為具有2至15個碳原子之有分支或未分支之二價飽和或不飽和烴鏈，其中該等碳原子中之一或多個(例如1、2、3或4個)視情況經(-O-)或(-N(H)-)置換，且其中該鏈視情況在碳上經一或多個(例如1、2、3或4個)選自以下之取代基取代：(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)環烷基、(C1-C6)烷醯基、(C1-C6)烷醯氧基、(C1-C6)烷氧基羰基、(C1-C6)烷基硫基、疊氮基、氰基、硝基、鹵基、羥基、側氧基(=O)、羧基、芳基、芳氧基、雜芳基及雜芳氧基。
在一個實施例中，R3d中之連接子為具有2至10個碳原子之有分支或未分支之二價飽和或不飽和烴鏈，其中該等碳原子中之一或多個(例如1、2、3或4個)視情況經(-O-)或(-N(H)-)置換，且其中該鏈視情況在碳上經一或多個(例如1、2、3或4個)選自以下之取代基取代：(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)環烷基、(C1-C6)烷醯基、(C1-C6)烷醯氧基、(C1-C6)烷氧基羰基、(C1-C6)烷基硫基、疊氮基、氰基、硝基、鹵基、羥基、側氧基(=O)、羧基、芳基、芳氧基、雜芳基及雜芳氧基。
在一個實施例中，R3d中之連接子為-C(=O)CH2CH2C(=O)N(H)-。
在一個實施例中，R1d為：
在一個實施例中，R1d為：
在一個實施例中，Xd為C8伸烷基。
在一個實施例中，nd為0。
在一個實施例中，R2d為siRNA。
在一個實施例中，R3d為H。
在另一實施例中，(Id)化合物或其鹽係選自由以下組成之群：
及
及其鹽。
本發明之一個態樣為包含式(Id)化合物及醫藥學上可接受之載劑的醫藥組合物。
本發明之一個態樣為遞送至動物肝臟之核酸，其包括向該動物投與式(Id)化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
本發明亦提供可用於製備式(Id)化合物之本文中揭示之合成中間物及方法。舉例而言，本發明包括式Ie之中間化合物： 或其鹽，其中：R1d係選自：
及
Xd為C2-8伸烷基；nd為0或1；Pg1為H或合適保護基；且R3d為H、保護基、與固體支撐物之共價鍵或與結合於固體支撐物之連接基團之鍵。圖1說明式(Ie)之代表性中間化合物，其中靶向配位體/連接子結合於固相支撐物，且其中Pg1為保護基DMTr。
在一個實施例中，Pg1為TMTr(三甲氧基三苯甲基)、DMTr(二甲氧基三苯甲基)、MMTr(單甲氧基三苯甲基)或Tr(三苯甲基)。
本發明亦提供一種製備如本文中描述之式(Id)化合物之方法，其包括使對應之式(Ie)化合物經受： 其中：Xd為C2-8伸烷基；nd為0或1；Pg1為H；且R3d為與固體支撐物之共價鍵或與結合於固體支撐物之連接基團之鍵，固相核酸合成條件，得到其中R2d為核酸之對應式Id化合物。
在一個實施例中，該方法進一步包括自固體支撐物移除化合物，得到其中R3d為H之對應式Id化合物。
在一個實施例中，化合物不為：
在一個實施例中，化合物不為式Id化合物： 或其鹽，其中：R1d係選自：
及
Xd為C2-10伸烷基；Nd為0或1；R2d為核酸；且R3d為H、保護基、與固體支撐物之共價鍵或與結合於固體支撐物之連接基團之鍵。
在一個實施例中，化合物不為式Ie化合物： 或其鹽，其中：R1d係選自：
及 Xd為C2-8伸烷基；nd為0或1；Pg1為H或合適保護基；且R3d為H、保護基、與固體支撐物之共價鍵或與結合於固體支撐物之連接基團之鍵。
在一個實施例中，R3d為H。
在一個實施例中，R3d為與固體支撐物之共價鍵。
在一個實施例中，R3d為與結合於固體支撐物之連接基團之鍵，其中連接基團為具有2至15個碳原子之有分支或未分支之二價飽和或不飽和烴鏈，其中該等碳原子中之一或多個(例如1、2、3或4個)視情況經(-O-)或(-N(H)-)置換，且其中該鏈視情況在碳上經一或多個(例如1、2、3 或4個)選自以下之取代基取代：(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)環烷基、(C1-C6)烷醯基、(C1-C6)烷醯氧基、(C1-C6)烷氧基羰基、(C1-C6)烷基硫基、疊氮基、氰基、硝基、鹵基、羥基、側氧基(=O)、羧基、芳基、芳氧基、雜芳基及雜芳氧基。
在一個實施例中，R3d為與結合於固體支撐物之連接基團之鍵，其中連接基團為具有2至10個碳原子之有分支或未分支之二價飽和或不飽和烴鏈，其中該等碳原子中之一或多個(例如1、2、3或4個)視情況經(-O-)或(-N(H)-)置換，且其中該鏈視情況在碳上經一或多個(例如1、2、3或4個)選自以下之取代基取代：(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)環烷基、(C1-C6)烷醯基、(C1-C6)烷醯氧基、(C1-C6)烷氧基羰基、(C1-C6)烷基硫基、疊氮基、氰基、硝基、鹵基、羥基、側氧基(=O)、羧基、芳基、芳氧基、雜芳基及雜芳氧基。
在一個實施例中，R3d為與結合於固體支撐物之連接基團之鍵，其中連接基團為-C(=O)CH2CH2C(=O)N(H)-。
在一個實施例中，本發明提供式(I)化合物： 其中：R1為H或合成活化基團；L1不存在或為連接基團；L2不存在或為連接基團；R2為核酸；該環A不存在、為3-20員環烷基、5-20員芳基、5-20員雜芳基或3-20員雜環烷基；各RA獨立地選自由以下組成之群：氫、羥基、CN、F、Cl、Br、I、-C1-2烷基-ORB、C1-10烷基C2-10烯基及C2-10炔基；其中該C1-10烷基C2-10烯基及C2-10炔基視情況經一或多個獨立地選自鹵基、羥基及C1-3烷氧基之基團取 代；RB為氫、保護基、與固體支撐物之共價鍵或與結合於固體支撐物之連接基團之鍵；且n為0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；或其鹽。
在一個實施例中，本發明提供式(I)化合物： 其中：R1為靶向配位體；L1不存在或為連接基團；L2不存在或為連接基團；R2為H或合成活化基團；該環A不存在、為3-20員環烷基、5-20員芳基、5-20員雜芳基或3-20員雜環烷基；各RA獨立地選自由以下組成之群：氫、羥基、CN、F、Cl、Br、I、-C1-2烷基-ORB、C1-10烷基C2-10烯基及C2-10炔基；其中該C1-10烷基C2-10烯基及C2-10炔基視情況經一或多個獨立地選自鹵基、羥基及C1-3烷氧基之基團取代；RB為氫、保護基、與固體支撐物之共價鍵或與結合於固體支撐物之連接基團之鍵；且n為0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；或其鹽。
在一個實施例中，本發明提供式(Ig)化合物： 其中：B為-N-或-CH-；L2為視情況經羥基或鹵基取代之C1-4伸烷基-O-；且n為0、1、2、3、4、5、6或7；或其鹽。
在一個實施例中，本發明提供選自由以下組成之群的化合物： 其中：Q為-L1-R1；且R'為C1-9烷基、C2-9烯基或C2-9炔基；其中該C1-9烷基、C2-9烯基或C2-9炔基視情況經鹵基或羥基取代；及其鹽。
在一個實施例中，本發明提供選自由以下組成之群的化合物： 其中：Q為-L1-R1；及其鹽。
在一個實施例中，本發明提供式(Ig)化合物： 其中：B為-N-或-CH-；L1不存在或為連接基團；L2為視情況經羥基或鹵基取代之C1-4伸烷基-O-；n為0、1、2、3、4、5、6或7；R1為H或合成活化基團；且R2為H或合成活化基團；或其鹽。
在一個實施例中，本發明提供選自由以下組成之群的化合物： 其中Q為-L1-R1；L1不存在或為連接基團；R'為C1-9烷基、C2-9烯基或C2-9炔基；其中該C1-9烷基、C2-9烯基或C2-9炔基視情況經鹵基或羥基取代；R1為H或合成活化基團；且R2為H或合成活化基團；或其鹽。
在一個實施例中，本發明提供選自由以下組成之群的化合物： 其中：Q為-L1-R1；L1不存在或為連接基團；R1為H或合成活化基團；且R2為H或合成活化基團；或其鹽。
在一個實施例中，R1為H或可衍生自DCC、HOBt、EDC、BOP、PyBOP或HBTU之合成活化基團。
在一個實施例中，R2為H、乙酸酯基、三氟甲磺酸酯基、甲磺酸酯基或丁二酸酯基。
在一個實施例中，R1為可衍生自DCC、HOBt、EDC、BOP、PyBOP或HBTU之合成活化基團。
在一個實施例中，R2為乙酸酯基、三氟甲磺酸酯基、甲磺酸酯基或丁二酸酯基。
在一個實施例中，L1為具有5至20個碳原子之有分支或未分支之二價飽和或不飽和烴鏈，其中該烴鏈中之該等碳原子中的一或多個(例如1、2、3或4個)視情況經-O-、-NH-、-NH-C(=O)-、-C(=O)-NH-或-S-置換。
在一個實施例中，本發明提供式(XX)化合物： 其中：R1為靶向配位體；L1不存在或為連接基團；L2不存在或為連接基團；R2為核酸；B為二價且係選自由以下組成之群： 其中：各R'獨立地為C1-9烷基、C2-9烯基或C2-9炔基；其中該C1-9烷基、C2-9烯基或C2-9炔基視情況經鹵基或羥基取代；用*標記之化合價附接至L1或若L1不存在，則附接至R1；且用**標記之化合價附接至L2或若L2不存在，則附接至R2；或其鹽。
在一個實施例中，R1包含2-8種醣。
在一個實施例中，R1包含2-6種醣。
在一個實施例中，R1包含2-4種醣。
在一個實施例中，R1包含3-8種醣。
在一個實施例中，R1包含3-6種醣。
在一個實施例中，R1包含3-4種醣。
在一個實施例中，R1包含3種醣。
在一個實施例中，R1包含4種醣。
在一個實施例中，R1具有下式： 其中：B1為包含約1至約20個原子之三價基團且共價鍵結至L1、T1及T2；B2為包含約1至約20個原子之三價基團且共價鍵結至T1、T3及T4；B3為包含約1至約20個原子之三價基團且共價鍵結至T2、T5及T6；T1不存在或為連接基團；T2不存在或為連接基團；T3不存在或為連接基團；T4不存在或為連接基團；T5不存在或為連接基團；且T6不存在或為連接基團。
在一個實施例中，各醣獨立地選自： 其中：X為NR3，且Y係選自-(C=O)R4、-SO2R5及-(C=O)NR6R7；或X為-(C=O)-且Y為NR8R9；R3為氫或(C1-C4)烷基；R4、R5、R6、R7、R8及R9各獨立地選自由以下組成之群：氫、(C1-C8)烷基、(C1-C8)鹵烷基、(C1-C8)烷氧基及(C3-C6)環烷基，其視情況經一或多 個獨立地選自由以下組成之群的基團取代：鹵基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)鹵烷基、(C1-C4)烷氧基及(C1-C4)鹵烷氧基；R10為-OH、-NR8R9或-F；且R11為-OH、-NR8R9、-F或視情況經一或多個獨立地選自由以下組成之群的基團取代的5員雜環：鹵基、羥基、羧基、胺基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)鹵烷基、(C1-C4)烷氧基及(C1-C4)鹵烷氧基。
在一個實施例中，各醣獨立地選自由以下組成之群： 在一個實施例中，各醣獨立地為：
在一個實施例中，T1與T2之一不存在。
在一個實施例中，T1與T2兩者不存在。
在一個實施例中，T1、T2、T3、T4、T5及T6各獨立地不存在或為具有1至50個碳原子之有分支或未分支之飽和或不飽和烴鏈，其中該烴鏈中之該等碳原子中的一或多個(例如1、2、3或4個)視情況經-O-、-NRX-、-NRX-C(=O)-、-C(=O)-NRX-或-S-置換，且其中RX為氫或(C1-C6)烷基，且其中烴鏈視情況經一或多個(例如1、2、3或4個)選自以下之取代基取代：(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)環烷基、(C1-C6)烷醯基、(C1-C6)烷醯氧基、(C1-C6)烷氧基羰基、(C1-C6)烷基硫基、疊氮基、氰基、硝基、鹵基、羥基、側氧基(=O)、羧基、芳基、芳氧基、雜芳基及雜芳氧基。
在一個實施例中，T1、T2、T3、T4、T5及T6各獨立地不存在或為具有1至20個碳原子之有分支或未分支之飽和或不飽和烴鏈，其中該烴鏈中之該等碳原子中的一或多個(例如1、2、3或4個)視情況經-O-、-NRX-、-NRX-C(=O)-、-C(=O)-NRX-或-S-置換，且其中RX為氫或(C1-C6)烷基，且其中烴鏈視情況經一或多個(例如1、2、3或4個)選自以下之取代基取代：(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)環烷基、(C1-C6)烷醯基、(C1-C6)烷醯氧基、(C1-C6)烷氧基羰基、(C1-C6)烷基硫基、疊氮基、氰基、硝基、鹵基、羥基、側氧基(=O)、羧基、芳基、芳氧基、雜芳基及雜芳氧基。
在一個實施例中，T1、T2、T3、T4、T5及T6各獨立地不存在或為具有1至50個碳原子之有分支或未分支之飽和或不飽和烴鏈，或其鹽，其中該烴鏈中之該等碳原子中的一或多個(例如1、2、3或4個)視情況經-O-或-NRX-置換，且其中RX為氫或(C1-C6)烷基，且其中烴鏈視情況經一或多個(例如1、2、3或4個)選自以下之取代基取代：鹵基、羥基及側氧基(=O)。
在一個實施例中，T1、T2、T3、T4、T5及T6各獨立地不存在或為具有1至20個碳原子之有分支或未分支之飽和或不飽和烴鏈，其中該烴鏈中之該等碳原子中的一或多個(例如1、2、3或4個)視情況經-O-置換且其中烴鏈視情況經一或多個(例如1、2、3或4個)選自以下之取代基取代：鹵基、羥基及側氧基(=O)。
在一個實施例中，T1、T2、T3、T4、T5及T6各獨立地不存在或為具有1至20個碳原子之有分支或未分支之飽和或不飽和烴鏈，其中該烴鏈中之該等碳原子中的一或多個(例如1、2、3或4個)視情況經-O-置換且其中烴鏈視情況經一或多個(例如1、2、3或4個)選自以下之取代基取代：鹵基、羥基及側氧基(=O)。
在一個實施例中，T3、T4、T5及T6中之至少一者為： 其中：n=1、2、3。
在一個實施例中，T3、T4、T5及T6各獨立地選自由以下組成之群： 其中：n=1、2、3。
在一個實施例中，T1及T2中之至少一者為甘胺酸。
在一個實施例中，T1及T2各為甘胺酸。
在一個實施例中，B1為包含1至15個原子之三價基團且共價鍵結至L1、T1及T2。
在一個實施例中，B1為包含1至10個原子之三價基團且共價鍵結至L1、T1及T2。
在一個實施例中，B1包含(C1-C6)烷基。
在一個實施例中，B1包含C3-8環烷基。
在一個實施例中，B1包含甲矽烷基。
在一個實施例中，B1包含D-胺基酸或L-胺基酸。
在一個實施例中，B1包含醣。
在一個實施例中，B1包含磷酸酯基。
在一個實施例中，B1包含膦酸酯基。
在一個實施例中，B1包含芳基。
在一個實施例中，B1包含苯環。
在一個實施例中，B1為苯環。
在一個實施例中，B1為CH。
在一個實施例中，B1包含雜芳基。
在一個實施例中，B1係選自由以下組成之群：
在一個實施例中，B2為包含1至15個原子之三價基團且共 價鍵結至L1、T1及T2。
在一個實施例中，B2為包含1至10個原子之三價基團且共價鍵結至L1、T1及T2。
在一個實施例中，B2包含(C1-C6)烷基。
在一個實施例中，B2包含C3-8環烷基。
在一個實施例中，B2包含甲矽烷基。
在一個實施例中，B2包含D-胺基酸或L-胺基酸。
在一個實施例中，B2包含醣。
在一個實施例中，B2包含磷酸酯基。
在一個實施例中，B2包含膦酸酯基。
在一個實施例中，B2包含芳基。
在一個實施例中，B2包含苯環。
在一個實施例中，B2為苯環。
在一個實施例中，B2為CH。
在一個實施例中，B2包含雜芳基。
在一個實施例中，B2係選自由以下組成之群：
在一個實施例中，B3為包含1至15個原子之三價基團且共價鍵結至L1、T1及T2。
在一個實施例中，B3為包含1至10個原子之三價基團且共價鍵結至L1、T1及T2。
在一個實施例中，B3包含(C1-C6)烷基。
在一個實施例中，B3包含C3-8環烷基。
在一個實施例中，B3包含甲矽烷基。
在一個實施例中，B3包含D-胺基酸或L-胺基酸。
在一個實施例中，B3包含醣。
在一個實施例中，B3包含磷酸酯基。
在一個實施例中，B3包含膦酸酯基。
在一個實施例中，B3包含芳基。
在一個實施例中，B3包含苯環。
在一個實施例中，B3為苯環。
在一個實施例中，B3為CH。
在一個實施例中，B3包含雜芳基。
在一個實施例中，B3係選自由以下組成之群：
或其鹽。
在一個實施例中，L1及L2獨立地為具有1至50個碳原子之有分支或未分支之二價飽和或不飽和烴鏈，其中該烴鏈中之該等碳原子中的一或多個(例如1、2、3或4個)視情況經-O-、-NRX-、-NRX-C(=O)-、-C(=O)-NRX-或-S-置換，且其中RX為氫或(C1-C6)烷基，且其中烴鏈視情況經一或多個(例如1、2、3或4個)選自以下之取代基取代：(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)環烷基、(C1-C6)烷醯基、(C1-C6)烷醯氧基、(C1-C6)烷氧基羰基、(C1-C6)烷基硫基、疊氮基、氰基、硝基、鹵基、羥基、側氧基(=O)、羧基、芳基、芳氧基、雜芳基及雜芳氧基。
在一個實施例中，L1係選自由以下組成之群：
或其鹽。
在一個實施例中，L1經由選自由以下組成之群的鍵連接至B1：-O-、-S-、-(C=O)-、-(C=O)-NH-、-NH-(C=O)、-(C=O)-O-、-NH-(C=O)-NH-或-NH-(SO2)-。
在一個實施例中，L1係選自由以下組成之群：
在一個實施例中，L2經由-O-連接至R2。
在一個實施例中，L2為視情況經羥基取代之C1-4伸烷基-O-。
在一個實施例中，L2經由-O-連接至R2。
在一個實施例中，L2不存在。
在一個實施例中，本發明提供選自由以下組成之群的化合物或鹽：
及其醫藥學上可接受之鹽。
實例
本發明將藉助於特定實例更詳細地描述。以下實例出於說明性目的提供，且不意欲以任何方式限制本發明。本領域技術人員將容易識別多種非關鍵參數，該等參數可變化或修改，得到基本上相同之結果。
實例1. 合成結合物1
流程2.
流程5.
步驟1. 製備4-甲基苯磺酸2-(2-(2-(2-羥基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙酯3
使四乙二醇(934g，4.8mol)於THF(175mL)及NaOH水溶液(5M，145mL)中之溶液冷卻(0℃)且用溶於THF(605mL)中之對甲苯磺醯氯(91.4g，480mmol)處理且接著攪拌兩小時(0℃)。將反應混合物用水(3L)稀 釋且用CH2Cl2萃取(3×500mL)。將合併之萃取物用水及鹽水洗滌，接著乾燥(MgSO4)，過濾且濃縮，得到呈淺黃色油狀之4-甲基苯磺酸2-(2-(2-(2-羥基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙酯3(140g，84%)。Rf(0.57,10% MeOH-CH2Cl2)。
步驟2. 製備2-(2-(2-(2-疊氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙-1-醇4
將3(140g，403mmol)於DMF(880mL)中之溶液用疊氮化鈉(131g，2.02mol)處理且加熱(45℃)隔夜。大部分DMF在減壓下移除且殘餘物溶於CH2Cl2(500mL)中且用鹽水洗滌(3×500mL)，接著乾燥(MgSO4)，過濾且濃縮。使殘餘物通過短二氧化矽床(5% MeOH-CH2Cl2)且濃縮，得到呈黃色油狀之2-(2-(2-(2-疊氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙-1-醇4(65g，74%)。Rf(0.56,10% MeOH-CH2Cl2)。
步驟3. 製備全乙醯化半乳胺糖6
將含D-半乳胺糖鹽酸鹽5(250g，1.16mol)之吡啶(1.5L)用乙酸酐(1.25L，13.2mol)處理45分鐘。攪拌隔夜後，將反應混合物分成三個1L部分。將各1L部分傾倒至3L冰水中且混合一小時。混合後，濾出固體，合併，在液氮上冷凍且接著凍乾5天，得到呈白色固體狀之全乙醯化半乳胺糖6(369.4g，82%)。Rf(0.58,10% MeOH-CH2Cl2)。
步驟4. 製備二乙酸(3aR,5R,6R,7R,7aR)-5-(乙醯氧基甲基)-2-甲基-3a,6,7,7a-四氫-5H-哌喃并[3,2-d]噁唑-6,7-二基酯7
將全乙醯化半乳胺糖6(8.45g，21.7mmol)於CHCl3(320mL)中之溶液用TMSOTf(4.32mL，23.9mmol)逐滴處理。攪拌(1.5小時，40℃)後反應藉由添加三乙胺(5mL)來淬滅且濃縮至乾，得到呈淺黃色玻璃狀之化合物7(7.2g，定量)。產物未經進一步純化即使用。Rf(0.59,10% MeOH-CH2Cl2)。
步驟5. 製備二乙酸(2R,3R,4R,5R,6R)-5-乙醯胺基-2-(乙醯氧基甲 基)-6-(2-(2-(2-(2-疊氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)四氫-2H-哌喃-3,4-二基酯8
化合物7(7.2g，21.7mmol)及2-(2-(2-(2-疊氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙-1-醇4(2.65g，15.2mmol)自甲苯(150mL)共沸(3次)以移除痕量水。經乾燥之物質溶於1,2-二氯乙烷(150mL)中，冷卻(約5℃)且用TMSOTf(784μL，4.34mmol)處理。攪拌隔夜後，反應藉由添加三乙胺(5mL)來淬滅且濃縮。殘餘物藉由層析法(1%→5% MeOH-CH2Cl2)來純化，得到呈棕色油狀之8(7.12g，85%)。Rf(0.3,10% MeOH-CH2Cl2)。
步驟6. 製備2-(2-(2-(2-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙醯胺基-4,5-二乙醯氧基-6-(乙醯氧基甲基)四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙-1-胺鎓2,2,2-三氟乙酸鹽9
將疊氮化物8(7.12g，13mmol)於EtOAc(150mL)及三氟乙酸(2mL)中之溶液用鈀/木炭(1.5g，10% w/w濕基)處理。接著反應混合物用氫氣淨化且劇烈攪拌隔夜。在用氮氣淨化後，混合物經矽藻土過濾，用MeOH清洗。將濾液濃縮且經由層析法(5%→10%→20% MeOH-CH2Cl2)來純化，得到呈棕色油狀之9(5.8g，72%)。Rf(0.34,15% MeOH-CH2Cl2)。
步驟7. 製備4-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-4-(3-(第三丁氧基)-3-側氧基丙基)庚二酸二第三丁酯11
向4-胺基-4-(3-(第三丁氧基)-3-側氧基丙基)庚二酸二第三丁酯10(13.5g，33mmol)、25% Na2CO3(aq)(150mL)及二氯甲烷(300mL)之溶液緩慢添加氯甲酸苯甲酯(14mL，98mmol)。將溶液在室溫下劇烈攪拌隔夜 (16小時)。結束後，添加額外二氯甲烷(100mL)且分離二氯甲烷層。將水層用二氯甲烷(2×100mL)萃取。合併之二氯甲烷萃取物經硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮至乾。產物11呈無色油狀分離，無需將其進行進一步純化(15.8g，88%)。Rf(0.7,1：1 EtOAc-己烷)。
步驟8. 製備4-(((苯甲氧基)羰基)胺基)-4-(2-羧基乙基)庚二酸12
將11(15.6g，28.8mmol)於甲酸(50mL)中之溶液在室溫下攪拌2小時。溶液濃縮至乾且溶解於乙酸乙酯(約25mL)中。靜置後，產物結晶成無色固體。將固體過濾，用乙酸乙酯洗滌且空氣乾燥，得到呈無色固體狀之12(10.2g，93%)。Rf(0.1,10% MeOH-CH2Cl2)。
步驟9. 製備化合物13
將12(793mg，2.08mmol)及9(5.8g，9.36mmol)於DMF(50mL)中之溶液用BOP(3.67g，8.32mmol)處理，接著用N,N-二異丙基乙胺(4.31mL，25mmol)處理。攪拌隔夜後，混合物濃縮至乾且進行層析(1%→2%→5%→10%→15% MeOH-CH2Cl2)，得到13(5.71g[粗]，>100%-含有不影響下一步之偶合副產物)。Rf(0.45,10% MeOH-CH2Cl2)。
步驟10. 製備化合物14
化合物13(5.7g)溶於MeOH(150mL)及TFA(1.5mL)中且用鈀/木炭(1g，10% w/w濕基)處理。接著反應混合物用氫氣淨化且劇烈攪拌隔夜。在用氮氣淨化後，混合物經矽藻土過濾，用MeOH清洗。將濾液濃縮且經由層析法(5%→10%→20% MeOH-CH2Cl2)來純化，得到呈棕色 油狀之14(2.15g，兩步56%)。Rf(0.32,10% MeOH-CH2Cl2)。
步驟11. 製備(5-胺基-1,3-伸苯基)二甲醇15
將5-胺基間苯二甲酸二甲酯(20.0g，96mmol)於THF(350mL)中之溶液經一小時逐滴添加至3.75當量LiAlH4(13.6g，358mmol)於THF(440mL)中之回流混合物。將混合物在回流下再攪拌2小時，接著冷卻至室溫且藉由小心添加MeOH(27mL)、接著水(40mL)來淬滅。攪拌淬滅之混合物兩小時之後，將其過濾且濃縮至乾。殘餘物自EtOAc重結晶(2次)，得到呈微棕色-黃色結晶狀之15(10.2g，70%)。
步驟12. 製備10-((3,5-雙(羥基甲基)苯基)胺基)-10-側氧基癸酸甲酯16
將癸二酸甲酯(3.8g，17mmol)、15(2.5g，17mmol)及EEDQ(8.1g，33mmol)於2：1二氯甲烷/甲醇(200mL)中之溶液在室溫下攪拌2小時。結束後，溶液濃縮至乾。所得固體用二氯甲烷(50mL)濕磨且過濾。將固體用冷二氯甲烷清洗且空氣乾燥，得到呈無色固體狀之16(4.3g，72%)。Rf(0.33,EtOAc)。
步驟13. 製備10-((3-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-5-(羥基甲基)苯基)胺基)-10-側氧基癸酸甲酯17
向16(4.3g，12mmol)於吡啶(50mL)中之溶液添加4,4'-(氯(苯基)亞甲基)雙(甲氧基苯)(4.1g，12mmol)。將溶液在氮氣下在室溫下攪拌隔夜。結束後，溶液濃縮至乾且殘餘物藉由管柱層析法(0.5%→0.75%→1%→1.5% MeOH-CH2Cl2)來純化，得到呈黃色固體狀之17(2.9g，35%)。Rf(0.6,10% MeOH-CH2Cl2)。
步驟14. 製備10-((3-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-5-(羥基甲 基)苯基)胺基)-10-側氧基癸酸鋰18
向17(2.9g，4.3mmol)於THF(60mL)中之溶液添加水(15mL)及氫氧化鋰(112mg，4.7mmol)。將溶液在室溫下攪拌隔夜。結束後，溶液濃縮以移除THF。剩餘水溶液在液氮上速凍且凍乾隔夜，得到無色固體(2.9g，定量)。Rf(0.3,10% MeOH-CH2Cl2)。
步驟15. 製備化合物19
向14(454mg，0.67mmol)、18(1.25g，0.67mmol)及HBTU(381mg，1.0mmol)於無水DMF(25mL)中之溶液添加N,N-二異丙基乙胺(0.35mL，2.0mmol)。將溶液在室溫下攪拌隔夜。結束後，將溶液傾倒至乙酸乙酯(250mL)中且用鹽水(3×200mL)洗滌。乙酸乙酯層經硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮至乾。藉由管柱層析法(CH2Cl2中5%→7.5%→10%→15% MeOH)來純化，得到呈淺橙色泡沫狀之19(1.5g，94%)。Rf(0.25,10% MeOH-CH2Cl2)。
步驟16. 製備化合物20
將化合物19(1.5g，0.6mmol)、丁二酸酐(120mg，1.2mmol)、DMAP(220mg，1.8mmol)及三甲胺(250μL，1.8mmol)於無水CH2Cl2(50mL)中之溶液在室溫下攪拌隔夜。結束後，溶液濃縮至乾且經由短矽藻土塞過濾(CH2Cl2中100% CH2Cl2→15% MeOH)，得到呈淡米色泡沫狀之產物20(1.1g，70%)。質量m/z(ES-TOF MS)727.7[M+3H-DMTr]+,1091.1[M+2H-DMTr]。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ 8.92(br s,1H),7.78(s,1H), 7.49-7.47(m,3H),7.41(br s,1H),7.38-7.34(m,5H),7.32-7.26(m,4H),7.24-7.08(br s,3H),7.08(s,1H),6.90-6.80(m,7H),5.31(d,3H,J=2.7Hz),5.12(s,2H),5.06(dd,3H,J=11.2,3.2Hz),4.78(d,3H,J=8.5Hz),4.24-4.08(m,12H),3.95-3.88(m,7H),3.85-3.76(m,4H),3.78(s,6H),3.68-3.56(m,34H),3.54-3.44(m,8H),3.41-3.33(m,6H),2.70-2.60(m,4H),2.52-2.30(m,30H),2.24-2.16(m,8H),2.14(s,9H),2.04(s,9H),2.02-1.96(m,6H),1.98(s,9H),1.96(s,9H),1.74-1.52(m,4H),1.36-1.24(m,12H)。
步驟17. 製備結合物1
使用標準醯胺偶合化學將丁二酸酯20負載至1000Å LCAA(長鏈胺基烷基)CPG(可控多孔玻璃)上。將二異丙基碳化二亞胺(52.6μmol)、N-羥基丁二醯亞胺(0.3mg，2.6μmol)及吡啶(10μL)於無水乙腈(0.3mL)中之溶液添加至含20(20.6mg，8μmol)之無水二氯甲烷(0.2mL)。將此混合物添加至LCAA CPG(183mg)。將懸浮液在室溫下輕緩混合隔夜。20消失後(HPLC)，將反應混合物過濾且CPG用各1mL二氯甲烷、乙腈、5%乙酸酐/5% N-甲基咪唑/5%吡啶於THF中之溶液，接著THF、乙腈及二氯甲烷洗滌。CPG接著在高真空下乾燥。藉由標準DMTr分析法，藉由UV/Vis(504nm)，測得負載為25μmol/g。所得GalNAc負載之CPG固體支撐物用於使用標準程序之自動化寡核苷酸合成中。脫除核苷酸保護基，接著自固體支撐物移除(同時脫除半乳胺糖乙酸酯保護基)，得到作為代表性實例之GalNAc-寡核苷酸結合物1。
實例2：合成結合物34
流程6.
流程8.
步驟1. 製備4-(2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)乙醯胺基)-4-(3-(第三丁氧基)-3-側氧基丙基)庚二酸二第三丁酯21
將4-胺基-4-(3-(第三丁氧基)-3-側氧基丙基)庚二酸二第三丁酯(25g，60mmol)及Z-甘胺酸(18.9g，90.2mmol)於CH2Cl2(300mL)中之溶液連續用EDC(23g，120mmol)、二異丙基乙胺(32mL，180mmol)及DMAP(催化17mg)處理。攪拌(16小時)後，將反應混合物傾倒至NaHCO3(飽和水溶液)中，用CH2Cl2萃取，用鹽水洗滌，乾燥(MgSO4)，過濾且濃縮，得到呈非晶固體狀之4-(2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)乙醯胺基)-4-(3-(第三丁氧基)-3-側氧基丙基)庚二酸二第三丁酯21且未經進一步處理即使用(36g，定量)。Rf(0.85,10% MeOH-CH2Cl2)。
步驟2. 製備4-(2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)乙醯胺基)-4-(2-羧基乙基)庚 二酸22
攪拌4-(2-(((苯甲氧基)羰基)胺基)乙醯胺基)-4-(3-(第三丁氧基)-3-側氧基丙基)庚二酸二第三丁酯21(59.3mmol，36g)於純甲酸(150mL)中之溶液72小時。結束後，甲酸在減壓下移除且粗固體高真空乾燥隔夜，得到呈無色固體狀之22(15.9g，61%)。Rf(0.15,10% MeOH-CH2Cl2)。
步驟3. 製備化合物23
將22(6.2g，14.1mmol)及2-(2-(2-(2-(((2R,3R,4R,5R,6R)-3-乙醯胺基-4,5-二乙醯氧基-6-(乙醯氧基甲基)四氫-2H-哌喃-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙-1-胺鎓2,2,2-三氟乙酸鹽(35g，56.5mmol)於DMF(250mL)中之溶液用BOP(25g，56.5mmol)，接著N,N-二異丙基乙胺(29mL，170mmol)處理。攪拌隔夜後，混合物濃縮至乾且進行層析(100% CH2Cl2至15% MeOH-CH2Cl2)，得到化合物23(24.6g，89%)。Rf(0.55,15% MeOH-CH2Cl2)。
步驟4. 製備化合物24
化合物23(24.6g)溶於MeOH(200mL)及TFA(1.5mL)中且用氮氣淨化。添加鈀/木炭(1g，10% w/w濕基)且接著反應混合物用氫氣淨化且劇烈攪拌隔夜。結束後，反應用氮氣淨化，經由矽藻土過濾且用MeOH清洗。將濾液濃縮且藉由在矽膠60上，進行管柱層析法(梯度：5%→10%→20% MeOH-CH2Cl2)來純化，得到呈淺棕色黏性油狀之24(23g)。Rf(0.32,10% MeOH-CH2Cl2)。
步驟5. 製備(5-胺基-1,3-伸苯基)二甲醇26
在氮氣氛圍下使氫化鋰鋁(13.6g，358mmol)於無水四氫呋喃(450mL)中之懸浮液達至回流且用二甲基-5-胺基間苯二甲酸酯25(20g，96mmol)於無水四氫呋喃(350mL)中之溶液逐滴處理。添加結束後，將混合物加熱至回流，又歷時2小時。結束後，溶液冷卻至室溫且藉由緩慢添加MeOH(27mL)、接著水(40mL)來淬滅。攪拌2小時後，混合物過濾，濃縮且自EtOAc再結晶，得到呈灰白色結晶狀之(5-胺基-1,3-伸苯基)二甲醇26(10.2g，70%)。Rf 0.5(15% MeOH-CH2Cl2)。
步驟6. 製備3,5-雙(羥基甲基)苯甲腈27
使26(5g，33mmol)於2N鹽酸(100mL)中之溶液冷卻至0℃且用亞硝酸鈉(3.53g，36mmol)於水(50mL)中之冷溶液處理。反應混合物維持於溫度5℃下，歷時30分鐘，接著用氰化銅(I)(3.19g，35.6mmol)及氰化鈉(3.53g，72mmol)於水(50mL)中之溶液一次性處理。在室溫下攪拌隔夜後，混合物過濾，用二氯甲烷(3×100mL)萃取，濃縮且未經進一步純化即使用。獲得呈黃色固體狀之二醇3,5-雙(羥基甲基)苯甲腈27(2.19g，41%)。Rf 0.75(15% MeOH-CH2Cl2)。
步驟7. 製備3-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-5-(羥基甲基)苯甲腈28
將3,5-雙(羥基甲基)苯甲腈27(538mg，3.3mmol)於吡啶(14mL)中之溶液用4,4'-二甲氧基三苯甲基氯(1.17g，3.46mmol)處理且在室溫下攪拌隔夜。一旦結束，將混合物濃縮且分散於乙醚(25mL)中，過濾且濃縮。粗產物藉由矽膠60之管柱層析法(梯度：10%至50% EtOAc-己烷)來純化，得到呈黃色固體狀之28(725mg，47%)。Rf 0.5(1：1 EtOAc-己烷)。
步驟8. 製備(3-(胺基甲基)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)苯基)甲醇29
使28(100mg，0.22mmol)於甲基四氫呋喃(5mL)中之溶液冷卻至0℃且用氫化鋰鋁(0.64mmol=0.28mL 2.3M之MeTHF溶液)緩慢處理。攪拌一小時後，反應藉由添加甲醇(1mL)、接著水(0.3mL)來淬滅且攪拌30分鐘。混合物過濾且濃縮，得到(3-(胺基甲基)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)苯基)甲醇29(78mg，77%)。Rf 0.15(10% MeOH-CH2Cl2)。
步驟9. 製備10-((3-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-5-(羥基甲基)苯甲基)胺基)-10-側氧基癸酸甲酯30
將(3-(胺基甲基)-5-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)-甲基)苯基)甲醇29(78mg，0.17mmol)及癸二酸單甲酯(38mg，0.17mmol)於二氯甲烷(5mL)中之溶液連續用EDC(48mg，0.25mmol)、DMAP(催化5mg)及二異丙基乙胺(57μL，0.33mmol)處理。攪拌(3.5小時)後，將反應混合物傾倒至飽和碳酸氫鈉溶液(50mL)中。將碳酸氫鈉溶液用二氯甲烷(3×50mL)萃取，用鹽水(50mL)洗滌，經硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮至乾。粗物質藉由矽膠60上管柱層析法(梯度：2%至5% MeOH-CH2Cl2)來純化，得到呈黃色油狀之10-((3-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-5-(羥基甲基)苯甲基)胺基)-10-側氧基癸酸甲酯30(57mg，53%)。Rf 0.45(10% MeOH-CH2Cl2)。
步驟10. 製備10-((3-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-5-(羥基甲基)苯甲基)胺基)-10-側氧基癸酸鋰31
使化合物30(188mg，0.28mmol)溶於四氫呋喃(5mL)中且用LiOH(7mg，0.30mmol)於水(1mL)中之溶液處理。結束後，四氫呋喃真 空移除且將剩餘水性混合物冷凍且凍乾，得到呈無色固體狀之10-((3-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-5-(羥基甲基)苯甲基)胺基)-10-側氧基癸酸鋰31(180mg，99%)。Rf 0.45(10% MeOH-CH2Cl2)。
步驟11. 製備化合物32、33及34
化合物32、33及34係分別根據用於合成化合物19、20及1之相同程序製備。
實例3. 合成結合物36
步驟1. 製備結合物36
結合物36係使用與用於合成化合物34一致之程序及所有對應中間物製備。唯一例外為合成化合物6，其中丙酸酐用於代替乙酸酐。
實例4. 合成結合物42
流程10.
步驟1. 製備化合物37
向18β-甘草次酸(2.5g，5.3mmol)、(3-胺基丙基)胺基甲酸第三丁酯(1.1g，6.4mmol)及HBTU(3.0g，8.0mmol)於N,N-二甲基甲醯胺(20mL)中之溶液添加二異丙基乙胺(2.75mL，15.9mmol)。溶液在室溫下攪拌隔夜。結束後，溶液真空濃縮至乾。殘餘物藉由矽膠60上管柱層析法(梯度：2%至5% MeOH/CH2Cl2)來純化，得到呈無色固體狀之產物(2.1g，63%)。
步驟2. 製備化合物38
向37(2.1g，3.3mmol)及三乙胺(3.5mL，10mmol)於二氯甲烷(25mL)中之溶液添加乙酸酐(850μL，5.3mmol)及DMAP(5mg)。溶液在室溫下攪拌隔夜。結束後，溶液濃縮至乾且溶解於乙酸乙酯(100mL)中，用水(100mL)洗滌，經硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮至乾，得到淺棕色泡沫(1.9g，85%)。
步驟3. 製備化合物39
向38(1.5g，2.3mmol)於無水二噁烷(25mL)中之溶液添加2M氯化氫之二噁烷溶液(25mL)。溶液在室溫下攪拌隔夜，接著真空濃縮至乾，得到淡棕色固體(1.3g，96%)。
步驟4. 製備化合物40、41及42
化合物40、41及42係分別根據用於合成化合物19、20及1之相同程序製備。
實例5. 合成結合物43
流程12.
步驟1. 製備11-(2,6-雙(羥基甲基)-4-甲基苯氧基)十一烷酸甲酯44
使2,6-雙(羥基甲基)-對甲酚(2.7g，16.3mmol)、11-溴十一烷酸甲酯(5.0g，17.9mmol)及碳酸鉀(4.5g，32.6mmol)於丙酮(100mL)中之溶液回流16小時。結束後，溶液真空濃縮至乾，懸浮於乙酸乙酯(150mL)中且用水(2×100mL)及鹽水(100mL)洗滌。乙酸乙酯層經硫酸鎂乾燥，過濾且真空濃縮至乾。殘餘物藉由矽膠60上管柱層析法(梯度100% Hex→50% EtOAc/Hex)來純化，得到呈無色油狀之11-(2,6-雙(羥基甲基)-4-甲基苯氧基)十一烷酸甲酯44(1.6g，27%)。
步驟2. 製備11-(2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-6-(羥基甲基)-4-甲基苯氧基)十一烷酸甲酯45
向11-(2,6-雙(羥基甲基)-4-甲基苯氧基)十一烷酸甲酯44(1.5g，4.1mmol)於無水吡啶(20mL)中之溶液添加4,4'-二甲氧基三苯甲基氯(1.4g，4.1mmol)。溶液在室溫下攪拌隔夜。結束後，溶液真空濃縮至乾且藉由在矽膠60上，進行管柱層析法(CH2Cl2中0.5%至1% MeOH)來純化，得到呈淺黃色固體狀之11-(2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-6-(羥基甲基)-4-甲基苯氧基)十一烷酸甲酯45(1.1g，40%)。
步驟3. 製備11-(2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-6-(羥基甲基)-4-甲基苯氧基)十一烷酸鋰46
向11-(2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-6-(羥基甲基)-4-甲基苯氧基)十一烷酸甲酯45(1.1g，1.7mmol)於無水四氫呋喃(40mL)及水(10mL)中之溶液添加氫氧化鋰(44mg，1.8mmol)。溶液真空濃縮以移除所有四氫呋喃。剩餘水溶液在液氮上速凍，接著凍乾隔夜，得到呈淺粉色固體狀之11-(2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-6-(羥基甲基)-4-甲基苯氧基)十一烷酸鋰46(1.1g，94%)。
步驟4. 製備化合物47
向10(1.33g，0.66mmol)、46(0.5g，0.73mmol)、HBTU(400mg，1mmol)於N,N-二甲基甲醯胺(25mL)中之溶液添加二異丙基乙胺(0.35mL，2mmol)。溶液在室溫下攪拌隔夜(18小時)。結束後，溶劑真空移除且殘餘物藉由矽膠管柱層析法(梯度：100% CH2Cl2-CH2Cl2中5%-10%-15% MeOH)來純化，得到呈無色固體狀之47(710mg，41%)。
步驟5. 製備化合物48
向47(0.71g，0.3mmol)、三乙胺(0.4mL，3.0mmol)及聚苯乙烯-DMAP(3mmol/g負載，200mg，0.6mmol)於二氯甲烷(15mL)中之溶液添加丁二酸酐(60mg，0.6mmol)。溶液在室溫下攪拌隔夜且在結束後過 濾且真空濃縮至乾。殘餘物藉由矽膠60上管柱層析法(梯度CH2Cl2中5%至20% MeOH)來純化，得到呈淺黃色固體狀之48(570mg，70%)。1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ 7.91(m,1H),7.86-7.76(m,6H),7.45-7.40(m,2H),7.36-7.14(m,10H),7.10(s,1H),6.91(d,J=8.9Hz,4H),5.21(d,J=3.3Hz,3H),5.01(s,2H),4.97(dd,J=11.2,3.4Hz,3H),4.56(d,J=8.5Hz,3H),4.06-3.98(m,11H),3.93-3.84(m,3H),3.81-3.72(m,3H),3.74(s,6H),3.65-3.46(m,38H),3.40-3.35(m,6H),3.20-3.16(m,6H),2.56-2.44(m,4H),2.33(s,3H),2.15-2.08(m,2H),2.10(s,9H),2.04-1.96(m,6H),1.89(s,9H),1.82-1.76(m,4H),1.77(s,9H),1.54-1.34(m,4H),1.28-1.10(m,12H),
步驟6. 製備化合物49
向48(100mg，40μmol)、N-羥基丁二醯亞胺(30mg/mL乙腈溶液，50μL，13μmol)、N,N'-二異丙基碳化二亞胺(40μL，264μmol)及吡啶(50μL)於二氯甲烷(2mL)及乙腈(3mL)中之溶液添加1000Å lcaa CPG(主要合成，920mg)。溶液在室溫下在迴轉震盪器上攪拌隔夜。反應溶液之TLC分析展示僅部分消耗活化之N-羥基丁二酸酯，因此添加額外CPG(500mg)。溶液再次攪拌隔夜。結束後，CPG過濾且用二氯甲烷(25mL)、乙腈(25mL)及四氫呋喃(25mL)洗滌。CPG上未反應之胺殘基藉由添加含乙酸酐之乙腈(3mL)與含10% N-甲基咪唑/10%吡啶之四氫呋喃(3mL)的1：1溶液來乙醯化(封端)。懸浮液靜置2小時，接著過濾且用等份四氫呋喃(25mL)、乙腈(25mL)及二氯甲烷(25mL)清洗。負載之CPG 49在高真空下乾燥隔夜。使用標準DMT負載分析法(CH2Cl2中3%三氯乙酸，UV-VIS，A504)，測得配位體負載效率為22μmol/g。
步驟7. 製備結合物43
所得GalNAc負載之CPG固體支撐物49用於使用標準程序之自動化寡核苷酸合成中。脫除核苷酸保護基，接著自固體支撐物移除(同時脫除半乳胺糖乙酸酯保護基)，得到GalNAc-寡核苷酸結合物43。
實例6. 合成結合物50
流程13.
步驟1. 製備2-((2-((第三丁基二甲基甲矽烷基)氧基)乙基)胺基)乙-1-醇51
使乙醇胺(77mL，1.25mol)及(2-溴乙氧基)-第三丁基二甲基矽烷(15g，62.7mmol)於無水乙腈(200mL)中之溶液回流3小時。結束後，反應冷卻至室溫，用水(400mL)稀釋且用乙酸乙酯(3×150mL)萃取。合併之乙酸乙酯萃取物經硫酸鎂乾燥，過濾且真空濃縮至乾。殘餘物藉由經二氧化矽墊過濾，首先用50%乙酸乙酯/己烷，接著50% MeOH/EtOAc來純化，得到呈淺黃色油狀之51(14g，100%)。
步驟2. 製備2-(雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)-N-(2-((第三丁基二甲基甲矽烷基)氧基)乙基)乙-1-胺52
向2-((2-((第三丁基二甲基甲矽烷基)氧基)乙基)胺基)乙-1-醇51(14g，64mmol)及三乙胺(17.5mL，128mmol)於無水二氯甲烷(250mL)中之溶液添加4,4'-二甲氧基三苯甲基氯(24g，70mmol)。溶液在室溫下攪拌隔夜，接著真空濃縮至乾。殘餘物溶於乙酸乙酯(300mL)中且用水(250mL)及鹽水(250mL)洗滌。乙酸乙酯經硫酸鎂乾燥，過濾且真空濃縮至乾。藉由矽膠60上管柱層析法(CH2Cl2中1%至5% MeOH)來純化，得到呈淺黃色黏性油狀之52(13g，39%)。
步驟3. 製備10-((2-(雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)乙基)(2-((第三丁基二甲基甲矽烷基)氧基)乙基)胺基)-10-側氧基癸酸甲酯53
將2-(雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)-N-(2-((第三丁基二甲基甲矽烷基)氧基)乙基)乙-1-胺52(5.4g，10.3mmol)、癸二酸單甲酯(2.2g，10.3g)、HBTU(4.9g，12.9mmol)、DIPEA(5.3mL，30.9mmol)於N,N-二甲基甲醯胺(100mL)中之溶液在室溫下攪拌3小時。結束後，將溶液傾倒至水(400mL)中且用乙酸乙酯(1×500mL)萃取。乙酸乙酯萃取物用鹽水(2×250mL)洗滌，經硫酸鎂乾燥，過濾且真空濃縮至乾。藉由矽膠60上管柱層析法(己烷中10%至25%乙酸乙酯)來純化，得到呈黏性黃色油狀之53(6.5g，87%)。
步驟4. 製備10-((2-(雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)乙基)(2-羥基乙基)胺基)-10-側氧基癸酸甲酯54
向10-((2-(雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)乙基)(2-((第三丁基二甲基甲矽烷基)氧基)乙基)胺基)-10-側氧基癸酸甲酯53(2.0g，2.8mmol)及三乙胺(1mL)於無水四氫呋喃(20mL)中之溶液添加TBAF(1M THF溶液，3.4mL，3.3mmol)。溶液攪拌6小時，但藉由TLC(CH2Cl2中5% MeOH)觀測到僅部分轉化。添加額外1.7mL TBAF且溶液在室溫下攪拌隔夜。結束後，溶液真空濃縮且藉由在矽膠60上，進行管柱層析法(己烷中10%至50% EtOAc，接著100% EtOAc)來純化，得到呈黏性無色油狀之54(0.5g，29%)。
步驟5. 製備10-((2-(雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)乙基)(2-羥基乙基)胺基)-10-側氧基癸酸鋰55
向10-((2-(雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)乙基)(2-羥基乙基)胺基)-10-側氧基癸酸甲酯54(0.5g，0.83mmol)於THF(40mL)中之溶液添加水(10mL)及氫氧化鋰(24mg，1.0mmol)。溶液在室溫下攪拌隔夜，接著真空濃縮以移除THF。剩餘水溶液在液氮上速凍且凍乾，得到呈無色固體狀之55(485mg，95%)。
步驟6. 製備化合物56、57、58及50
化合物56、57、58及50係分別使用與用於合成化合物47、48、49及43之程序一致之程序製備。
實例7. 合成結合物59
步驟1. 製備(2R,5R)-5-羥基哌啶-2-甲酸甲酯61
將(2R,5R)-5-羥基哌啶-2-甲酸60(3.5g，24.1mmol)在MeOH(50mL)中攪拌。HCl(g)鼓泡穿過溶液2分鐘且反應在回流下攪拌1.5小時。反應真空濃縮，得到(2R,5R)-5-羥基哌啶-2-甲酸甲酯61，產率定量，其未經進一步純化即使用。
步驟2. 製備(2R,5R)-5-羥基哌啶-1,2-二甲酸1-(第三丁基)酯2-甲酯62
將(2R,5R)-5-羥基哌啶-2-甲酸甲酯61(24.1mmol)及TEA(7.2mL，53.02mmol)在室溫下在DCM(100mL)中攪拌。二第三丁基-二碳酸酯(5.7g，26.5mmol)分部分添加且反應攪拌2小時。將反應物用DCM(100mL)稀釋且依序用1M HCl(2×75mL)、飽和NaHCO3(2×75mL)、H2O(2×75mL)及飽和NaCl溶液(2×75mL)洗滌。分離有機物，乾燥(Na2SO4)且真空濃縮，得到(2R,5R)-5-羥基哌啶-1,2-二甲酸1-(第三丁基)酯2-甲酯62(5.53g，88%)，其未經進一步純化即使用。
步驟3. 製備(2R,5R)-5-羥基2-(羥基甲基)哌啶-1-甲酸第三丁酯63
將(2R,5R)-1-(第三丁氧基羰基)-5-羥基哌啶-2-甲酸62(5.53g，21.4mmol)在THF中在0℃下攪拌。經1小時，逐滴添加LiBH4(3.0M THF溶液)(8.9mL，27.7mmol)。使反應升溫至室溫且繼續攪拌16小時。將反應用1M NaOH淬滅，真空移除THF且水溶液用EtOAc(10×100mL)澈底萃取。將合併之有機物用H2O(50mL)、飽和NaCl溶液(2×50mL)洗滌，乾燥(Na2SO4)且真空濃縮，得到(2R,5R)-5-羥基-2-(羥基甲基)哌啶-1-甲酸第三丁酯63(2.4g，49.0%)，其未經進一步純化即使用。
步驟4. 製備(3R,6R)-6-(羥基甲基)哌啶-3-醇64
將(2R,5R)-5-羥基-2-(羥基甲基)哌啶-1-甲酸第三丁酯63(2.4g，10.4mmol)在Et2O中在室溫下攪拌。HCl(g)鼓泡45秒且反應在室溫下攪拌45分鐘。反應真空濃縮且在高真空下乾燥，得到(3R,6R)-6-(羥基甲基)哌啶-3-醇64。產物未經進一步純化即使用。
步驟5. 製備2,2,2-三氟-1-((2R,5R)-5-羥基-2-(羥基甲基)哌啶-1-基)乙-1-酮65
來自前面反應之粗(3R,6R)-6-(羥基甲基)哌啶-3-醇64在含TEA(3.5mL，25.2mmol)之MeCN(50mL)中在室溫下攪拌。添加三氟乙酸乙酯(3mL，25.2mmol)且反應在室溫下攪拌16小時，接著真空濃縮，得到2,2,2-三氟-1-((2R,5R)-5-羥基-2-(羥基甲基)哌啶-1-基)乙-1-酮65。產物未經進一步純化即使用。
步驟6. 製備1-((2R,5R)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-5-羥基哌啶-1-基)-2,2,2-三氟乙-1-酮66
來自前面反應之粗2,2,2-三氟-1-((2R,5R)-5-羥基-2-(羥基甲基)哌啶-1-基)乙-1-酮65在含TEA之DCM(50mL)中在室溫下攪拌。一次性添加4,4'-二甲氧基三苯甲基氯(DMTrCl)(3.87g，11.44mmol)且反應在室溫下攪拌3小時。將反應物用DCM(50mL)稀釋且依序用飽和NaHCO3(2×75mL)、H2O(2×75mL)及飽和NaCl溶液(2×75mL)洗滌。分離有機物，乾燥(Na2SO4)，真空濃縮且藉由管柱層析法(100%己烷-60% EtOAc/己烷)(0.1% TEA)來純化，得到1-((2R,5R)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-5-羥基哌啶-1-基)-2,2,2-三氟乙-1-酮66(3.14g，57%)。
步驟7. 製備(3R,6R)-6-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-哌啶-3-醇67
將1-((2R,5R)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-5-羥基哌啶-1-基)-2,2,2-三氟乙-1-酮66(3.14g，6.0mmol)在MeOH(50mL)中在室溫下攪拌。添加KOH(672mg，12mmol)且反應在室溫下攪拌16小時。添加額外KOH(300mg，6mmol)且繼續再攪拌24小時。反應真空濃縮，溶解於DCM(150mL)中，用H2O(4×50mL)洗滌，乾燥(Na2SO4)且真空濃縮，得到(3R,6R)-6-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)哌啶-3-醇67(2.34g，90%)，其未經進一步純化即使用。
步驟8. 製備12-((2R,5R)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)-甲氧基)甲基)-5- 羥基哌啶-1-基)-12-側氧基十二烷酸甲酯68
將(3R,6R)-6-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)哌啶-3-醇67(2.34g，5.34mmol)在DCM(75mL)中在室溫下攪拌。添加三乙胺(2.2mL，16.2mmol)、HATU(3.5g，9.2mmol)及12-甲氧基-12-側氧基十二烷酸(1.32g，5.4mmol)且反應在室溫下攪拌3小時。所得固體沈澱藉由過濾來移除，真空濃縮濾液且殘餘物藉由管柱層析法(2.5% MeOH/DCM，0.1% TEA)來純化，得到12-((2R,5R)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-5-羥基哌啶-1-基)-12-側氧基十二烷酸甲酯68，產率定量。
步驟9. 製備12-((2R,5R)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)-甲基)-5-羥基哌啶-1-基)-12-側氧基十二烷酸鋰69
將12-((2R,5R)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-5-羥基哌啶-1-基)-12-側氧基十二烷酸甲酯68(5.4mmol)及LiOH(140mg，5.94mmol)在THF：H2O(1：1，100mL)中在室溫下攪拌48小時。真空移除THF，將水溶液冷凍且凍乾，得到12-((2R,5R)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-5-羥基哌啶-1-基)-12-側氧基十二烷酸鋰69(3.2g，91%)，其未經額外純化即用於隨後反應中。
步驟10. 製備化合物70、71、72及59
化合物70、71、72及59係分別使用與用於合成化合物47、48、49及43之程序一致之程序製備。
實例8. 合成結合物142
流程17.
步驟1. 製備3,4,5-三乙醯氧基苯甲酸73
沒食子酸(20g)於吡啶(50mL)及乙酸酐(50mL)中形成溶液。溶液在室溫下攪拌隔夜，接著傾倒至冰水(1L)中。用濃鹽酸使溶液呈 酸性，有無色固體沈澱。固體經由過濾收集且用水(5×100mL)洗滌。濕固體在液氮上冷凍且凍乾，得到3,4,5-三乙醯氧基苯甲酸(26g，75%)。
步驟2. 製備三乙酸5-((2-((2-側氧基-2-苯基-1λ 2 -乙基)胺基)乙基)胺甲醯基)苯-1,2,3-三基酯74
向3,4,5-三乙醯氧基苯甲酸(10g，33.8mmol)、N-苯甲氧羰基-1,2-二胺基乙烷鹽酸鹽(5.3g，33.8mmol)及HBTU(13.5g，35.5mmol)於DMF(200mL)中之溶液添加DIPEA(17.5mL，101mmol)。溶液攪拌16小時，接著用乙酸乙酯(250mL)稀釋，用鹽水(3×200mL)洗滌，經硫酸鎂乾燥，過濾且真空濃縮至乾。粗產物藉由矽膠管柱層析法(梯度DCM中1%至5% MeOH)來純化，得到呈灰白色固體狀之三乙酸5-((2-((2-側氧基-2-苯基-1λ2-乙基)胺基)乙基)胺甲醯基)苯-1,2,3-三基酯(5.5g)。
步驟3. 製備3,4,5-三羥基-N-(2-((2-側氧基-2-苯基-1λ 2 -乙基)胺基)乙基)苯甲醯胺75
將三乙酸5-((2-((2-側氧基-2-苯基-1λ2-乙基)胺基)乙基)胺甲醯基)苯-1,2,3-三基酯(5g，1.1mmol)於1：1 MeOH/CH2Cl2(100mL)中之溶液在室溫下攪拌3天。結束後，移除溶劑，得到呈無色固體狀之3,4,5-三羥基-N-(2-((2-側氧基-2-苯基-1λ2-乙基)胺基)乙基)苯甲醯胺(4g，定量)。
步驟4. 製備2,2',2"-((5-((2-((2-側氧基-2-苯基-1λ 2 -乙基)胺基)乙基)胺甲醯基)苯-1,2,3-三基)三(氧基))三乙酸三甲酯76
將3,4,5-三羥基-N-(2-((2-側氧基-2-苯基-1λ2-乙基)胺基)乙基)苯甲醯胺(4g，11.6mmol)、溴乙酸甲酯(7.7g，46.4mmol)及碳酸鉀(9.6g，69.4mmol)於DMF(100mL)中之溶液在60℃下攪拌隔夜。結束後，溶液冷卻至室溫，用乙酸乙酯(200mL)稀釋，用水(200mL)、鹽水(3×100mL)洗滌，經硫酸鎂乾燥，過濾且真空濃縮至乾。粗產物藉由矽膠管柱層析法(梯度DCM中2%至10% MeOH)來純化，得到呈米色固體狀之2,2',2"-((5-((2-((2-側氧基-2-苯基-1λ2-乙基)胺基)乙基)胺甲醯基)苯-1,2,3-三基)三(氧基))-三乙酸三甲酯(5g，79%)
步驟5. 製備2,2',2"-((5-((2-((2-側氧基-2-苯基-1λ 2 -乙基)胺基)乙基)-胺甲醯基)苯-1,2,3-三基)三(氧基))三乙酸77
將2,2',2"-((5-((2-((2-側氧基-2-苯基-1λ2-乙基)胺基)乙基)-胺甲醯基)苯-1,2,3-三基)三(氧基))三乙酸三甲酯(5g，9.2mmol)及1M NaOH(30mL)於甲醇(100mL)中之溶液在室溫下攪拌2小時。結束後，反應濃縮以移除甲醇且用水(75mL)稀釋。混合物冷卻至0℃，用2M HCl酸化且用乙酸乙酯(5×150mL)萃取。合併之乙酸乙酯萃取物經硫酸鎂乾燥，過濾且真空濃縮至乾，得到呈無色固體狀之2,2',2"-((5-((2-((2-側氧基-2-苯基-1λ2-乙基)胺基)乙基)胺甲醯基)苯-1,2,3-三基)三(氧基))三乙酸(2.3g，50%)。
步驟6. 製備化合物78
化合物78係使用與用於化合物13之程序一致的程序，自化合物9(2.75g，4.3mmol)及77(0.5g，0.96mmol)製備。產率：600mg。
步驟7. 製備化合物79
化合物79係使用與用於化合物14之程序一致的程序，自化合物78(0.6g)製備。產率：500mg。
步驟8. 製備化合物140
化合物140係使用與用於化合物19之程序一致的程序，自化合物79(500mg，0.25mmol)及化合物18(175mg，0.25mmol)製備。產率：250mg，44%。
步驟9. 製備化合物141
化合物141係使用與用於化合物20之程序一致的程序，自化合物140(250mg，0.11mmol)製備。產率：200mg。
步驟10. 製備結合物142
結合物142係使用與用於化合物1之程序一致的程序，自化合物141(200mg)及1000A lcaa CPG(1.8g)製備。產率：1.9g，22μmol/g CPG負載。所得GalNAc負載之CPG固體支撐物用於使用標準程序之自動化寡核苷酸合成。脫除核苷酸保護基，接著自固體支撐物移除(同時脫除半乳胺糖乙酸酯保護基)，得到GalNAc-寡核苷酸結合物142。
實例9. 合成結合物145
流程19.
步驟1. 製備(3aR,6aS)-5-苯甲基-3a,6a-二甲基四氫-1H-呋喃并[3,4-c]吡咯-1,3(3aH)-二酮123
向3,4-二甲基呋喃-2,5-二酮(3g，24mmol)及N-苯甲基-1-甲氧基-N-((三甲基甲矽烷基)甲基)甲胺(7g，29.8mmol)於二氯甲烷(75mL)中之冷卻溶液(0℃)中緩慢添加三氟乙酸(75μL)。攪拌隔夜，使得當冰浴熔融時，溶液緩慢升溫至室溫。反應混合物濃縮至乾，溶於乙酸乙酯(100mL)中，用飽和碳酸氫鈉(2×100mL)洗滌，經硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮至乾。藉由矽膠管柱層析法(梯度：己烷中20%乙酸乙酯至100%乙酸乙酯)來純化，得到呈黃色油狀之(3aR,6aS)-5-苯甲基-3a,6a-二甲基四氫-1H-呋喃并[3,4-c]吡咯-1,3(3aH)-二酮(3.5g，56%)。
步驟2. 製備((3R,4S)-1-苯甲基-3,4-二甲基吡咯啶-3,4-二基)二甲醇124
分三部分向(3aR,6aS)-5-苯甲基-3a,6a-二甲基四氫-1H-呋喃并[3,4-c]吡咯-1,3(3aH)-二酮(3.5g，13.4mmol)於無水乙醚(50mL)中之冷卻(0℃)溶液緩慢添加氫化鋰鋁球粒(1.5g，40mmol)。溶液攪拌隔夜，當冰浴熔融時，緩慢升溫至室溫。結束後，反應冷卻至0℃且先後用1.5mL 5M NaOH及1.5mL水非常緩慢地淬滅。攪拌30分鐘，接著添加硫酸鎂且過濾。將濾液濃縮，得到呈無色油狀之((3R,4S)-1-苯甲基-3,4-二甲基吡咯啶-3,4-二基)二甲醇(2.7g)。
步驟3. 製備((3R,4S)-3,4-二甲基吡咯啶-3,4-二基)二甲醇125
向((3R,4S)-1-苯甲基-3,4-二甲基吡咯啶-3,4-二基)二甲醇(10g，40mmol)於甲醇(10mL)中之溶液添加10%鈀/活性碳(濕，1g)。溶液在氫氣氛圍下劇烈攪拌16小時。結束後，溶液經矽藻土過濾，且濃縮至乾，得到呈無色固體狀之((3R,4S)-3,4-二甲基吡咯啶-3,4-二基)二甲醇(5.5g，86%)。
步驟4. 製備10-((3R,4S)-3,4-雙(羥基甲基)-3,4-二甲基吡咯啶-1-基)-10-側氧基癸酸甲酯126
化合物126係使用與用於化合物17之程序一致的程序，自化合物125(1.3g，8.2mmol)及癸二酸單甲酯(1.8g，8.2mmol)製備。產率：1.8g，61%。
步驟5. 製備10-((3R,4S)-3-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-(羥基甲基)-3,4-二甲基吡咯啶-1-基)-10-側氧基癸酸甲酯127
化合物127係使用與用於化合物18之程序一致的程序，自化合物126(1.8g，5.0mmol)及4,4'-二甲氧基三苯甲基氯(1.7g，5.0mmol)製備。產率：1.4g，42%。
步驟6. 製備10-((3R,4S)-3-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-(羥基甲基)-3,4-二甲基吡咯啶-1-基)-10-側氧基癸酸鋰128
向化合物127(3.0g，4.6mmol)於THF(50mL)及水(50mL)中之溶液添加氫氧化鋰(121mg，5.0mmol)。溶液在室溫下攪拌4小時，接著濃縮以移除THF。將剩餘水溶液凍乾隔夜，得到淺粉色固體(2.9g，定量)。
步驟7. 製備化合物143
化合物143係使用與用於化合物19之程序一致的程序，自化合物128(270mg，0.42mmol)及化合物14(800mg，0.42mmol)製備。產率：900mg，87%。
步驟8. 製備化合物144
化合物144係使用與用於化合物20之程序一致的程序，自化合物143(500mg，0.2mmol)製備。產率：200mg。
步驟9. 製備結合物145
結合物145係使用與用於化合物1之程序一致的程序，自化合物144(200mg)及1000A lcaa CPG(1.8g)製備。產率：1.9g，20μmol/g CPG負載。所得GalNAc負載之CPG固體支撐物用於使用標準程序之自動化寡核苷酸合成。脫除核苷酸保護基，接著自固體支撐物移除(同時脫除半乳胺糖乙酸酯保護基)，得到GalNAc-寡核苷酸結合物145。
實例10. 合成結合物150
步驟1. 製備146-1
向十二烷二酸之單甲酯(12.2g，50.0mmol)於二氯甲烷(300mL)中之溶液添加N-羥基丁二醯亞胺(6.10g，53.0mmol)及1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC)(10.52g，55.0mmol)。將混濁混合 物在室溫下攪拌隔夜且反應變成清澈溶液。TLC指示反應結束。將有機物用飽和NH4Cl(300mL)及鹽水(100mL)洗滌。將有機層分離，經MgSO4乾燥且濃縮至乾，得到呈白色固體狀之純十二烷二酸1-(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)酯12-甲酯146-1(16.7g，97.8%)。
步驟2. 製備環戊-3-烯-1-基甲醇146-2
在0℃下在氮氣下，經5小時向氫化鋰鋁(15.2g，0.40mol)於無水乙醚(1L)中之懸浮液逐滴添加環戊-3-烯甲酸甲酯(50g，0.40mol)於乙醚(300mL)中之溶液。懸浮液在室溫下攪拌隔夜。TLC指示反應結束。反應再冷卻至0℃。逐滴添加Na2SO4飽和溶液(32mL)以淬滅反應。添加結束後，將混合物再攪拌3小時且經由矽藻土墊過濾。蒸發溶劑得到呈無色液體狀之環戊-3-烯基甲醇146-2(37.3g，95%)。
步驟3. 製備(6-氧雜雙環[3.1.0]己烷-3-基)甲醇146-3
在0℃下向環戊-3-烯基甲醇146-2(4.0g，41mmol)於二氯甲烷(150mL)中之溶液分部分添加3-氯過苯甲酸(10g，45mmol，77%純度)。反應攪拌隔夜。添加二氯甲烷(150mL)。將有機物用硫代硫酸鈉(12g於10mL水中)洗滌，接著用飽和NaHCO3(40mL)洗滌。重複此，直至所有剩餘3-氯過苯甲酸均洗去。有機物經MgSO4乾燥。蒸發溶劑，得到呈黃色油狀之順式-與反式-6-氧雜雙環[3.1.0]己烷-3-基甲醇146-3之混合物(2.6g，57%)。GC-MS：m/z 114(5)(M+),95(15),88(100),81(15)。
步驟4. 製備2-胺基-4-(羥基甲基)環戊-1-醇146-4
在0℃下向6-氧雜雙環[3.1.0]己烷-3-基甲醇146-3(2.0g，17.6mmol)於甲醇(20mL)中之溶液通氨氣10分鐘。將反應在室溫下攪拌隔夜。TLC指示反應未結束。移除甲醇且添加NH3．H2O(50mL)且此在室溫下攪拌一週。TLC證實反應結束。藉由與乙醇共沸來移除水，得到呈黃色油狀之2-胺基-4-(羥基甲基)環戊醇146-4(2.1g，91%)。
步驟5. 製備12-(2-羥基-4-(羥基甲基)環戊基胺基)-12-側氧基十二烷酸甲酯146-5
化合物146-5係使用與合成12-(2-(第三丁氧基羰基胺基)乙基胺基)-12-側氧基十二烷酸酯(3-2)中所述相同之程序，自2-胺基-4-(羥基甲 基)環戊醇146-4及十二烷二酸1-(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)酯12-甲酯146-1製備。獲得呈灰白色固體狀之12-(2-羥基-4-(羥基甲基)環戊基胺基)-12-側氧基十二烷酸甲酯146-5，產率87.4%。
步驟6. 製備化合物147
化合物147係使用與用於化合物18之程序一致的程序，自化合物146(1.4g，2.33mmol)定量製備。
步驟7. 製備化合物148
化合物148係使用與用於化合物19之程序一致的程序，自化合物147(150mg，0.23mmol)及化合物14(431mg，0.23mmol)製備。產率：460mg，84%。
步驟8. 製備化合物149
化合物149係使用與用於化合物20之程序一致的程序，自化合物148(460mg，0.19mmol)製備。產率：436mg，91%。
步驟9. 製備結合物150
化合物150係使用與用於化合物1之程序一致的程序，自化合物149(436mg)及1000A lcaa CPG(2.62g)製備。產率：2.7g，21.3μmol/g CPG負載。所得GalNAc負載之CPG固體支撐物用於使用標準程序之自動化寡核苷酸合成。脫除核苷酸保護基，接著自固體支撐物移除(同時脫除半乳胺糖乙酸酯保護基)，得到GalNAc-寡核苷酸結合物150。
實例11. 合成結合物153、158、163、168及173
流程22.
步驟1. 製備(2S,4R)-4-羥基吡咯啶-1,2-二甲酸1-(第三丁基)2-甲酯(133)
將(2S,4R)-4-羥基吡咯啶-2-甲酸甲酯(25.9g，46mmol)、BOC酸酐(65.9g，302.5mmol)及TEA(42ml，302.5mmol)在室溫下在DCM中攪拌16小時。有機物依序用1M HCl(×2)、飽和NaHCO3(×2)、H2O及鹽水洗滌，乾燥且真空濃縮，得到(2S,4R)-4-羥基吡咯啶-1,2-二甲酸1-(第三丁基)酯2-甲酯(133)(58.1g，85%)。
步驟2. 製備(4R)-4-羥基-2-甲基吡咯啶-1,2-二甲酸1-(第三丁基)酯2-甲酯(134)
在-40℃下將(2S,4R)-4-羥基吡咯啶-1,2-二甲酸1-(第三丁基)酯2-甲酯(133)(5g，20.4mmol)及MeI(12g，84.5mmol)在無水THF中攪拌。逐滴添加LDA(2.0M THF溶液)(37.5mL，75mmol)。使反應升溫至室溫且攪拌4小時，接著用飽和NH4Cl淬滅。將反應物用EtOAc萃取，用H2O及鹽水洗滌，乾燥(Na2SO4)且真空濃縮。殘餘物藉由管柱層析法50：50 EtOAc//己烷來純化，得到呈外消旋混合物形式之(4R)-4-羥基-2-甲基吡咯啶-1,2-二甲酸1-(第三丁基)酯2-甲酯(134)(3.6g，68%)
步驟3. 製備(2S,4R)-4-羥基-2-(羥基甲基)-2-甲基吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(135a)
在N2下將(4R)-4-羥基-2-甲基吡咯啶-1,2-二甲酸1-(第三丁基)酯2-甲酯(134)(19g，73.5mmol)在無水THF中攪拌。逐滴添加LiBH4溶液(48ml，96mmol)且反應在室溫下攪拌48小時。將反應用1M NaOH淬滅，THF真空移除且剩餘物用EtOAc(4×100ml)萃取。將有機物用H2O及鹽水洗滌，乾燥(Na2SO4)且真空濃縮。殘餘物藉由管柱層析法(5% MeOH/DCM)來純化，得到作為主產物之(2S,4R)-4-羥基-2-(羥基甲基)-2-甲基吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(135a)(8g，47%)。結構係根據參考文獻分配。
步驟4. 製備(3R,5S)-5-(羥基甲基)-5-甲基吡咯啶-3-醇鹽酸鹽(136)
在室溫下將(2S,4R)-4-羥基-2-(羥基甲基)-2-甲基吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(135a)(8g，34.6mmol)在EtOAc中攪拌且施加氣體HCl約兩分鐘。反應攪拌一小時，接著真空濃縮且在高真空下乾燥，以定量方式得到(3R,5S)-5-(羥基甲基)-5-甲基吡咯啶-3-醇鹽酸鹽(136)。
步驟5. 製備12-((2S,4R)-4-羥基-2-(羥基甲基)-2-甲基吡咯啶-1-基)-12-側氧基十二烷酸甲酯(137)
在室溫下將(3R,5S)-5-(羥基甲基)-5-甲基吡咯啶-3-醇鹽酸鹽(136)(7.9g，47.4mmol)、12-甲氧基-12-側氧基十二烷酸(11.5g，47.4mmol)、HBTU(36g，76mmol)及TEA(20mL，142.2mmol)在DCM中攪拌16小時。藉由過濾移除沈澱且有機物用1M HCl(×2)、飽和NaHCO3(×2)、H2O及鹽水洗滌。乾燥後，有機物真空濃縮且藉由管柱層析法(5% MeOH/DCM)來純化，得到12-((2S,4R)-4-羥基-2-(羥基甲基)-2-甲基吡咯啶-1-基)-12-側氧基十二烷酸甲酯(137)(3.1g，18.3%)。
步驟6. 製備12-((2S,4R)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-羥基-2-甲基吡咯啶-1-基)-12-側氧基十二烷酸甲酯(138)
在室溫下將12-((2S,4R)-4-羥基-2-(羥基甲基)-2-甲基吡咯啶-1-基)-12-側氧基十二烷酸甲酯(137)(3.1g，9.0mmol)、DMTr-Cl(2.8g，8.2mmol)及TEA(1.1ml，8.2mmol)在DC<中攪拌16小時。反應真空濃縮且殘餘物藉由管柱層析法(5% MeOH/DCM，0.1% TEA)來純化，得到 12-((2S,4R)-2-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-羥基-2-甲基吡咯啶-1-基)-12-側氧基十二烷酸甲酯(138)(2.7g，45.5mmol)。
步驟7. 製備化合物154-1
在0℃下在氮氣下向N-(2-羥基乙基)鄰苯二甲醯亞胺(4.80g，25.0mmol)及4,4'-二甲氧基三苯甲基氯(8.8g，26.0mmol)於二氯甲烷(200mL)中之溶液逐滴添加三乙胺(10.4mL，74.6mmol)。反應混合物在室溫下攪拌3小時。TLC指示反應結束。有機層用鹽水(100mL)洗滌，經MgSO4乾燥，且濃縮至乾。此未經純化直接用於下一反應。
步驟8. 製備化合物154-2
在室溫下將以上獲得之2-(2-(雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)乙基)異吲哚啉-1,3-二酮(154-1)及單水合肼(3.6mL，74mmol)在乙醇(100mL)中攪拌隔夜。TLC指示反應結束。沈澱濾出。蒸發濾液。殘餘物溶於乙酸乙酯(100mL)中。有機溶液用10% NaOH、水及鹽水洗滌，且經MgSO4乾燥。蒸發溶劑得到呈黃色液體狀之2-(雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)乙胺(154-2)(8.11g，兩步產率89.3%)。此未經進一步純化即用於下一反應。
步驟9. 製備化合物154-3
向L-蘇胺酸(1.19g，10.0mmol)及NaHCO3(2.3g，27mmol)於水(20mL)及二噁烷(10mL)中之溶液逐滴添加含十二烷二酸1-(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)酯12-甲酯146-1(3.1g，9.1mmol)之二噁烷(10mL)。將反 應混合物在室溫下攪拌隔夜。添加4N HCl(10mL)。沈澱藉由過濾來收集且用水(3×10mL)洗滌。固體在乾燥器中經P2O5乾燥，得到呈灰白色固體狀之(2S,3R)-3-羥基-2-(12-甲氧基-12-側氧基十二烷醯胺基)丁酸154-3(2.84g，82.2%)。LC-MS(ESI)：m/z：346(100),(M+H+)。
步驟10. 製備化合物154
在室溫下將(2S,3R)-3-羥基-2-(12-甲氧基-12-側氧基十二烷醯胺基)丁酸154-3(2.47g，7.15mmol)、2-(雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)乙胺154-2(2.60g，7.15mmol)、EDC(1.64g，8.58mmol)、1-羥基苯并三唑(HOBt)(1.16g，8.58mmol)及TEA(2.4mL，17.2mmol)在二氯甲烷(72mL)中攪拌2小時。添加水(30mL)。有機層分離且用鹽水(2×30mL)洗滌。蒸發溶劑，接著進行管柱層析法(30%乙酸乙酯/己烷-50%乙酸乙酯/己烷)，得到呈蠟狀黃色半固體狀之12-((2S,3R)-1-(2-(雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)乙基胺基)-3-羥基-1-側氧基丁烷-2-基胺基)-12-側氧基十二烷酸甲酯154(2.60g，52.6%)。1HNMR(400MHz，丙酮-d6,ppm)：δ 7.51(t,J=5.5Hz,1H),7.45-7.49(m,2H),7.28-7.36(m,6H),7.21(tt,J=7.2,1.2Hz,1H),7.08(d,J=8.1Hz,1H),6.88(dt,J=8.9,2.5Hz,4H),4.39(dd,J=8.2,3.0Hz,1H),4.20-4.27(m,1H),3.78(s,6H),3.60(s,1H),3.35-3.52(m,2H),3.07-3.16(m,2H),2.23-2.37(m,4H),1.53-1.65(m,4H),1.23-1.36(m,12H),1.10(d,J=6.4Hz,3H)。
步驟11. 製備化合物164-1
向第三丁醇鉀(14.6g，130mol)於THF(120mL)/乙醚(360mL)中之懸浮液添加溴化甲基三苯基鏻(46.6g，130mmol)。使混合物回流2小時，且接著冷卻至0℃。逐滴添加含2-甲醯基吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(13.0g，65.2mmol)之乙醚(50mL)。將反應混合物在0℃下攪拌，且接著藉由添加水(250mL)淬滅。分離有機層且將水層用乙醚(250mL)萃取。合併之萃取物經MgSO4乾燥。蒸發溶劑，接著進行管柱層析法純化(5%乙酸乙酯/己烷)，得到呈無色液體狀之3-乙烯基吡咯啶-1-甲酸第三丁酯164-1(11.5g，89.4%)。GC-MS：m/z：197(2)(M+),141(40),124(30),57(100)。
步驟12. 製備化合物164-2
向t-BuOH(140mL)及水(70mL)之混合物中饋入AD-混合物-β(47.4g)及甲烷磺醯胺(2.89g，30.4mmol)。混合物在室溫下攪拌30分鐘且接著冷卻至0℃。添加3-乙烯基吡咯啶-1-甲酸第三丁酯164-1(6.00g，30.4mmol)。反應在室溫下攪拌隔夜。使反應混合物冷卻至0℃。添加硫代硫酸鈉五水合物(96g，387mmol)且使溫度升溫至室溫。添加水(700mL)且將混合物用乙酸乙酯(500mL)萃取。萃取物用水(2×50mL)及鹽水(50mL)洗滌，且經MgSO4乾燥。蒸發溶劑，接著進行管柱層析法(2%甲醇/二氯甲烷-7%甲醇/二氯甲烷)，得到呈淡棕色油狀之3-(1,2-二羥基乙基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯164-2(5.4g，77%)。
步驟13. 製備化合物164-3
向3-(1,2-二羥基乙基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯164-2(3.1g，13.4mmol)於乙醇(10mL)中之溶液添加3N HCl(30mL，90mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌隔夜。TLC指示反應結束。將乙醇蒸發。添加甲苯且蒸發。此重複三次，得到呈棕色油狀之1-(吡咯啶-3-基)乙-1,2-二醇鹽酸鹽164-3(2.0g，89%)。LC-MS(ESI)：m/z：132(100),(M+H+，游離胺)。
步驟14 製備化合物164-4
分部分向1-(吡咯啶-3-基)乙-1,2-二醇鹽酸鹽164-2(2.0g，12mmol)於水(30mL)中之溶液添加NaHCO3(3.7g，44mmol)。接著添加二噁烷(20mL)。向以上溶液中添加含十二烷二酸1-(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)酯12-甲酯146-1(3.7g，11mmol)之二噁烷(30mL)。將反應混合物攪拌隔 夜。將此用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。合併之萃取物用0.5N HCl(50mL)及鹽水(50mL)洗滌，且經MgSO4乾燥。
步驟15. 製備化合物164
此物質係使用與合成2-(2-(雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)乙基)異吲哚啉-1,3-二酮138中所述相同之程序，自12-(3-(1,2-二羥基乙基)吡咯啶-1-基)-12-側氧基十二烷酸甲酯164-4及4,4-二甲氧基三苯甲基氯(1當量)製備。產物藉由管柱層析法(1.5%甲醇/二氯甲烷)來純化。獲得呈黃色油狀之12-(3-(2-(雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)-1-羥基乙基)吡咯啶-1-基)-12-側氧基十二烷酸甲酯164，51%產率。1HNMR(400MHz，丙酮-d6,ppm)：δ 7.49-7.54(m,2H),7.35-7.40(m,4H),7.28-7.34(m,2H),7.19-7.25(m,1H),6.86-6.91(m,4H),4.11-4.20(m,1H),3.79(s,6H),3.68-3.77(m,1H),3.60(s,3H),3.29-3.59(m,3H),3.06-3.20(m,3H),2.33-2.55(m,1H),2.29(t,J=7.4Hz,2H),2.19(t,J=7.6Hz,2H),1.65-2.0(m,2H),1.51-1.62(m,4H),1.26-1.35(m,12H)。
步驟16. 製備化合物170-1
在室溫下向2-胺基乙基胺基甲酸第三丁酯(2.88g，18.0mmol)及三乙胺(2.98g，29.4mmol)於二氯甲烷(100mL)中之溶液逐滴添加含十二烷二酸1-(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)酯12-甲酯(146-1)(5.09g，14.9mmol)之二氯甲烷(50mL)。將反應混合物攪拌隔夜且TLC指示反應結束。添加100mL鹽水且分離有機層。有機層用0.5N HCl(150mL)、鹽水(2×100mL)洗滌且經MgSO4乾燥。蒸發溶劑，得到呈白色固體狀之純12-(2-(第三 丁氧基羰基胺基)乙基胺基)-12-側氧基十二烷酸甲酯170-1(5.85g，100%)。
步驟17. 製備化合物170-2
在0℃下向12-(2-(第三丁氧基羰基胺基)乙基胺基)-12-側氧基十二烷酸酯170-1(5.55g，14.4mmol)於甲醇(100mL)中之溶液逐滴添加亞硫醯氯(3.3mL，45.5mmol)。接著將反應在室溫下攪拌隔夜。TLC指示反應結束。溶劑及揮發性有機物蒸發。接著殘餘物與庚烷共蒸發兩次，得到呈白色固體狀之12-(2-胺基乙基胺基)-12-側氧基十二烷酸甲酯鹽酸鹽170-2，定量。LC-MS(ESI)：m/z：287(100),(M+H+，游離胺)。
步驟18. 製備化合物170-3
將(-)-(S)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊環-4-甲酸甲酯(5.01g，31.2mmol)及LiOH．H2O(2.55g，60.8mmol)在THF(50mL)及水(50mL)中攪拌隔夜。TLC指示反應結束。THF蒸發且水溶液用1N HCl酸化至pH=1。將此用乙酸乙酯(5×50mL)萃取。合併之萃取物經MgSO4乾燥。蒸發溶劑，得到呈淡黃色液體狀之(S)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊環-4-甲酸170-3(2.93g，64.3%)。
步驟19. 製備化合物170-4
化合物170-4係使用與合成十二烷二酸1-(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)酯12-甲酯146-1中所述相同之程序，自(S)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊環-4-甲酸170-3及N-羥基丁二醯亞胺合成，產率86%。獲得呈白色固體狀之(S)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊環-4-甲酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯170-4，產率86%。
步驟20. 製備化合物170-5
在0℃下經4小時向12-(2-胺基乙基胺基)-12-側氧基十二烷酸甲酯鹽酸鹽170-2(14.4mmol)及(S)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊環-4-甲酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯170-4(3.80g，15.6mmol)於二氯甲烷(100mL)中之懸浮液中添加含三乙胺(6mL，43.0mmol)之二氯甲烷(25mL)。接著反應混合物在室溫下攪拌隔夜。LC-MS指示起始物質170-2完全轉化。將有機層用鹽水(50mL)、1N HCl(50mL)、鹽水(50mL)洗滌，經MgSO4乾燥且濃縮至乾，得到呈白色固體狀之(S)-12-(2-(2,2-二甲基-1,3-二氧戊環-4-甲醯胺基) 乙基胺基)-12-側氧基十二烷酸甲酯170-5(5.93g，99.3%)。
步驟21. 製備化合物170-6
向(S)-12-(2-(2,2-二甲基-1,3-二氧戊環-4-甲醯胺基)乙基胺基)-12-側氧基十二烷酸甲酯170-5(5.93g，14.3mmol)之溶液添加一滴濃硫酸。使此回流6小時，且接著冷卻至室溫。固體經由過濾收集且用冷甲醇洗滌兩次。固體在空氣中乾燥(3.32g)。自母液獲得第二批(0.42g)，得到呈白色結晶狀之(S)-12-(2-(2,3-二羥基丙醯胺基)乙基胺基)-12-側氧基十二烷酸甲酯170-6(共3.74g，69.4%)。LC-MS(ESI)：m/z：375(100),(M+H+).1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)：δ 7.79(br,2H),5.49(d,J=5.3Hz,1H),4.66(t,J=5.8Hz,1H),3.83-3.88(m,1H),3.55-3.61(m,4H),3.41-3.47(m,1H),3.05-3.15(m,4H),2.29(t,J=7.4Hz,2H),2.03(t,J=7.6Hz,2H),1.42-1.52(m,4H),1.18-1.29(m,12H)。
步驟22. 製備化合物170
在氮氣下向(S)-12-(2-(2,3-二羥基丙醯胺基)乙基胺基)-12-側氧基十二烷酸甲酯170-6(2.99g，7.99mmol)於無水吡啶(57.5mL)中之溶液一次性添加4,4'-二甲氧基三苯甲基氯(2.84g，8.38mmol)。將反應在室溫下攪拌2天。添加甲醇(5mL)以淬滅反應。蒸發吡啶。添加甲苯，且接著蒸發。此重複三次。添加水(100mL)且將此用乙酸乙酯(5×250mL)萃取。合併萃取物且經MgSO4乾燥。蒸發溶劑，接著進行管柱層析法(1%甲醇/二氯甲烷-3%甲醇/二氯甲烷)，得到呈黏性油狀之(S)-12-(2-(3-(雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)-2-羥基丙醯胺基)乙基胺基)-12-側氧基十二烷酸甲酯170(1.70g，31.4%)。1HNMR(400MHz，丙酮-d6,ppm)：δ 7.64-7.70(br,1H),7.47-7.51(m,2H),7.33-7.37(m,4H),7.26-7.32(m,2H),7.20(dt,J=7.3,2.1Hz,1H),7.11(br,1H),6.86(d,J=8.7Hz,4H),4.84(br,1H),4.21(dd,J=5.1,3.8Hz,1H),3.78(s,6H),3.60(s,1H),3.25-3.42(m,6H),2.28(t,J=7.4Hz,2H),1.48-1.62(m,4H),1.21-1.34(m,12H)。
流程26.
步驟23. 製備化合物139、155、160、165及170
化合物139、155、160、165及170係使用與用於化合物18之程序一致的程序，自化合物138、154、159、164及169製備。
步驟24. 製備結合物153、158、163、168及173
結合物153、158、163、168及173係使用與用於化合物1之程序一致的程序，自化合物139、154、159、164及169製備。
實例12. 合成結合物176
步驟1. 製備12-胺基十二烷酸甲酯132
在室溫下將12-胺基十一烷酸(131)(10g，4.64mmol)在MeOH中攪拌。逐滴添加乙醯氯(856μL，12mmol)且反應攪拌1.5小時。溶劑真空移除，殘餘物溶解於MTBE中且在冰箱中冷卻隔夜。所得沈澱藉由過濾來收集，用冰冷MTBE洗滌且在高真空下乾燥，得到12-胺基十二烷酸甲酯132。
步驟2. 製備12-(12-(10-((3R,4S)-3-((雙-(4-甲氧基苯基)-(苯基)甲氧基)甲基)-4-(羥基甲基)-3,4-二甲基吡咯啶-1-基)-10-側氧基癸醯胺基)十二烷醯胺基)十二烷酸甲酯129
在室溫下將10-((3R,4S)-3-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-(羥基甲基)-3,4-二甲基吡咯啶-1-基)-10-側氧基癸酸鋰(128)(2g，3.1 mmol)、12-胺基十二烷酸甲酯(132)(778mg，3.1mmol)、HBTU(1.2g，3.1mmol)及TEA(1.4mL，10mmol)在DCM中攪拌隔夜。沈澱藉由過濾來移除，真空濃縮濾液且殘餘物藉由管柱層析法(5% MeOH，DCM)來純化。TLC展示兩個具有一致質量之接近之跑動點，其分配為幾何異構體且彙集在一起，以定量方式得到12-(12-(10-((3R,4S)-3-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-(羥基甲基)-3,4-二甲基吡咯啶-1-基)-10-側氧基癸醯胺基)十二烷醯胺基)十二烷酸甲酯(129)。
步驟3. 製備12-(12-(10-((3R,4S)-3-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)-甲氧基)甲基)-4-(羥基甲基)-3,4-二甲基吡咯啶-1-基)-10-側氧基癸醯胺基)-十二烷醯胺基)十二烷酸鋰130
將12-(12-(10-((3R,4S)-3-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-(羥基甲基)-3,4-二甲基吡咯啶-1-基)-10-側氧基癸醯胺基)十二烷醯胺基)十二烷酸甲酯(129)(3.1mmol)在含LiOH(88mg，3.7mmol)之THF：H2O(50：50)中在室溫下攪拌隔夜。反應藉由TLC證實且THF真空移除。水溶液在液氮中冷凍且凍乾48小時，得到12-(12-(10-((3R,4S)-3-((雙(4-甲氧基苯基)(苯基)甲氧基)甲基)-4-(羥基甲基)-3,4-二甲基吡咯啶-1-基)-10-側氧基癸醯胺基)十二烷醯胺基)十二烷酸鋰130，定量。
步驟4. 製備結合物176
結合物176係使用與用於化合物1之程序一致的程序，自化合物24及130製備。
實例13. 合成結合物179
步驟1. 製備化合物80
在室溫下將化合物24(2g，0.86mmol)、N-苯甲氧羰基-L-麩胺酸(120mg，0.43mmol)、HBTU(326mg，0.86mmol)及TEA(353μL，2.6mmol)在DCM中攪拌隔夜。混合物真空濃縮且藉由管柱層析法來純化，得到化合物80(2.88g，83%)。
步驟2. 製備化合物81
化合物81係使用與用於化合物14之程序一致的程序，自化合物80(670mg，0.17mmol)製備。化合物呈粗物質用於隨後反應中且產率定量。
步驟3. 製備結合物179
結合物179係使用與用於化合物1之程序一致的程序，自化合物18及81製備。
實例14. 合成結合物182
步驟1. 製備化合物93
化合物93係使用與用於化合物89之程序一致的程序，自(2-側氧基-2-苯基-1λ2-乙基)-D-麩胺酸(2.25g，8.1mmol)及9(13g，21mmol)製備。產率：11.2g。
步驟2. 製備化合物94
化合物94係使用與用於化合物90之程序一致的程序，自化合物93(11.1g)製備。產率：10.2g。
步驟3. 製備結合物182
結合物182係使用與用於化合物1之程序一致的程序，自化合物18及94製備。
實例15. 合成結合物185及188
流程33.
步驟1. 製備4-甲基苯磺酸14-羥基-3,6,9,12-四氧雜十四烷酯82
將五乙二醇(35g，147mmol)、TEA(41mL，294mmol)及三甲胺-HCl(1.4g，14.7mmol)於CH2Cl2(600mL)中之溶液用甲苯磺醯氯(29.4g，154mmol)處理。攪拌(18小時)後，反應混合物用H2O-鹽水(1：1)洗滌，乾燥(MgSO4)，過濾，濃縮且進行層析法，得到呈淺黃色油狀之82(24.6g，43%)。Rf 0.8(10% CH3OH-CH2Cl2)。
步驟2. 14-疊氮基-3,6,9,12-四氧雜十四烷-1-醇83
14-疊氮基-3,6,9,12-四氧雜十四烷-1-醇(83)係使用與用於化合物4之程序一致的程序，自82(24.6g，62.7mmol)及疊氮化鈉(7.13g，110mmol)製備。產率：14.8g，90%。
步驟3. 製備化合物84
將GalNAc 6(12.2g，31.4mmol)及HO-PEG-N3 83(9.2g，35mmol)於1,2-二氯乙烷(150mL)中之溶液用Sc(OTf)3(771mg，1.6mmol)處理。攪拌(85℃，2小時)後，反應冷卻(室溫)，藉由添加TEA(40mL)淬滅且濃縮。粗物質進行層析法，得到呈淺黃色泡沫狀之84(11.16g，60%)。Rf 0.7(10% CH3OH-CH2Cl2)。
步驟4. 製備化合物85
將84(11.16g，18.8mmol)及Pd/C(1.1g，10%-濕載體)於EtOAc(120mL)中之溶液用TFA(4.32mL，56.5mmol)處理且用H2淨化。劇烈攪拌(4.5小時)後，反應用N2淨化，經由矽藻土過濾且濃縮。粗物質進行層析法，得到呈無色泡沫狀之85(5.77g，45%)。Rf 0.5(10% CH3OH-CH2Cl2)。
步驟5. 製備化合物95
化合物95係使用與用於化合物91之程序一致的程序，自(2-側氧基-2-苯基-1λ2-乙基)-D-麩胺酸(1.04g，3.7mmol)及化合物94(10.2g)製備。產率：7.2g。
步驟6. 製備化合物96
化合物96係使用與用於化合物92之程序一致的程序，自化合物95(11.1g)製備。產率：6.5g。
步驟7. 製備化合物97
化合物97係使用與用於化合物89之程序一致的程序，自(2-側氧基-2-苯基-1λ2-乙基)-D-麩胺酸(2g，7.1mmol)及85(12.1g，17.8mmol)製備。產率：10g，定量。
步驟8. 製備化合物98
化合物98係使用與用於化合物90之程序一致的程序，自化合物97(10g，7.2mmol)製備。產率：3.5g，36%。
步驟9. 製備化合物99
化合物99係使用與用於化合物91之程序一致的程序，自(2-側氧基-2-苯基-1λ2-乙基)-D-麩胺酸(350mg，1.25mmol)及化合物98(2.86mg，2.5mmol)定量製備。
步驟10. 製備化合物100
化合物100係使用與用於化合物92之程序一致的程序，自化合物99(3.2g，1.25mmol)定量製備。
步驟11. 製備結合物185及188
結合物185及188係使用與用於化合物1之程序一致的程序，自化合物18及96或18及100製備。
實例16. 合成結合物191、194、197及200
流程36.
流程38.
步驟1. 製備2-(2-(2-疊氮基乙氧基)乙氧基)乙-1-醇86
向2-(2-(2-氯乙氧基)乙氧基)乙-1-醇(13g，77mmol)於水(200mL)中之溶液添加疊氮化鈉(10g，154mmol)。將反應物加熱至100℃，歷時18小時。反應冷卻至室溫且傾倒至1L分液漏斗中且用二氯甲烷(3×200mL)萃取。合併之二氯甲烷萃取物經硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮至乾，得到呈無色油狀之2-(2-(2-疊氮基乙氧基)乙氧基)乙-1-醇(11.7g)。
步驟2. 製備化合物87
化合物87係使用與用於化合物84之程序一致的程序，自86(4.95g，28.3mmol)及6(10g，25.7mmol)製備。產率：10g，77%。
步驟3. 製備化合物88
化合物88係使用與用於化合物85之程序一致的程序，自87(10g，19.8mmol)製備。產率：7.63g，65%。
步驟4. 製備化合物89
將88(2g，3.38mmol)及Z-麩胺酸(427mg，1.52mmol)於CH2Cl2(50mL)中之溶液用HBTU(1.41g，3.7mmol)及亨尼格鹼(Hünig's base)(1.77mL，10.1mmol)處理。攪拌(18小時)後，混合物濃縮且進行層析法，得到呈無色泡沫狀之89(871mg，48%)。Rf 0.5(10% CH3OH-CH2Cl2)。
步驟5. 製備化合物90
將89(870mg，0.72mmol)及Pd/C(90mg，10%-濕載體)於EtOAc(10mL)中之溶液用TFA(84μL，1.1mmol)處理且用H2淨化。劇烈攪拌(2小時)後，反應物用N2淨化，經由矽藻土過濾且濃縮。粗物質未經進一步處理即使用且得到呈無色泡沫狀之90(850mg，定量)。Rf 0.25(10% CH3OH-CH2Cl2)。
步驟6. 製備化合物91
將90(850mg，0.72mmol)及Z-麩胺酸(91mg，0.32mmol)於CH2Cl2(10mL)中之溶液用HBTU(300mg，0.79mmol)及亨尼格鹼(502μL，2.9mmol)處理。攪拌(1.5小時)後，混合物用CH2Cl2稀釋且用NaHCO3(飽和水溶液)洗滌，乾燥(MgSO4)，過濾且濃縮。粗物質進行層析法，得到呈無色泡沫狀之91(590mg，76%)。Rf 0.5(10% CH3OH-CH2Cl2)。
步驟7. 製備化合物92
將91(590mg，0.25mmol)及Pd/C(100mg，10%-濕載體)於CH3OH(30mL)中之溶液用TFA(29μL，0.37mmol)處理且用H2淨化。攪拌(3小時)後，混合物用N2淨化，接著經矽藻土過濾且濃縮。粗物質未經進一步處理即使用且得到呈無色泡沫狀之92(600mg，定量)。Rf 0.1(10% CH3OH-CH2Cl2)。
步驟8. 製備化合物101
化合物101係使用與用於化合物89之程序一致的程序，自(R)-2-((2-側氧基-2-苯基-112-乙基)胺基)己二酸(2.51g，8.6mmol)及9(11g，17.2mmol)製備。產率：4.2g，37%。
步驟9. 製備化合物102
化合物102係使用與用於化合物90之程序一致的程序，自化合物101(4.2g，3.2mmol)製備。產率：2.1g，47%。
步驟10. 製備化合物103
化合物103係使用與用於化合物91之程序一致的程序，自(R)-2-((2-側氧基-2-苯基-112-乙基)胺基)己二酸(265mg，0.9mmol)及化合物102(2.1g，1.8mmol)製備。產率：(560mg，24%)。
步驟11. 製備化合物104
化合物104係使用與用於化合物92之程序一致的程序，自化合物103(560mg)定量製備。化合物未經純化即使用。
步驟12. 製備結合物191、194、197及200
結合物191、194、197及200係使用與用於化合物1之程序一致的程序，自化合物128及92、96、100或104製備。
實例17. 合成結合物203及206
步驟1. 製備化合物69b
化合物69b係使用與用於化合物69之程序一致的程序，自(2S,4R)-4-羥基吡咯啶-2-甲酸製備。
步驟2. 製備結合物203及206
結合物203及206係使用與用於化合物1之程序一致的程序，自化合物96及100製備。
實例18. 合成結合物207
流程40.
步驟1. 製備結合物209
結合物209係使用與用於化合物1之程序一致的程序，自化合物96及160製備。
實例19. 合成結合物212及215
流程42.
步驟1. 製備5-(2-((2-側氧基-2-苯基-1λ 2 -乙基)胺基)乙醯胺基)間苯二甲酸二甲酯105
將5-胺基間苯二甲酸二甲酯(5g，24mmol)、Z-Gly-OH(5g，24mmol)、EDC(5g，26.3mmol)、HOBt(3.6g，26.3mmol)、NMM(2.9mL，26.3mmol)於DMF(50mL)中之溶液在室溫下攪拌隔夜。結束後，將反應混合物用乙酸乙酯(250mL)稀釋且用1M HCl(2×100mL)、飽和碳酸氫鈉(1×100mL)及鹽水(2×100mL)每一者洗滌。經硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮至乾，得到呈無色固體狀之5-(2-((2-側氧基-2-苯基-1λ2-乙基)胺基)乙醯胺基)間苯二甲酸二甲酯(7.2g，79%)。
步驟2. 製備5-(2-((2-側氧基-2-苯基-1λ 2 -乙基)胺基)乙醯胺基)間苯二甲酸106
向5-(2-((2-側氧基-2-苯基-1λ2-乙基)胺基)乙醯胺基)間苯二甲酸甲酯(7.2g)於甲醇(25mL)及THF(25mL)中之溶液添加1M NaOH(25mL)。將溶液在室溫下攪拌2小時，接著濃縮以移除THF及MeOH。將剩餘水溶液用水(75mL)稀釋，在冰水浴上冷卻且用6M HCl酸化至pH=1。將固體過濾且用水(3×100mL)洗滌。固體凍乾，得到5-(2-((2-側氧基-2-苯基-1λ2-乙基)胺基)乙醯胺基)-間苯二甲酸(6.9g，定量)。
步驟3. 製備化合物107
化合物107係使用與用於化合物95之程序一致的程序，自5-(2-((2-側氧基-2-苯基-1λ2-乙基)胺基)乙醯胺基)間苯二甲酸106(200mg，0.54mmol)及94(1.7g，1.3mmol)製備。產率：600mg。
步驟4. 製備化合物108
化合物108係使用與用於化合物96之程序一致的程序，自化合物107(600mg)製備。產率：650mg，定量。
步驟5. 製備化合物109
化合物109係使用與用於化合物99之程序一致的程序，自5-(2-((2-側氧基-2-苯基-1λ2-乙基)胺基)乙醯胺基)間苯二甲酸106(180mg，0.48mmol)及98(1.5g，1.1mmol)製備。產率：900mg。
步驟6. 製備化合物110
化合物110係使用與用於化合物100之程序一致的程序，自化合物109(900mg)製備。產率：920mg，定量。
步驟7. 製備結合物212及215
結合物212及215係使用與用於化合物1之程序一致的程序，自化合物128及108或110製備。
實例20. 合成結合物218及221
步驟1. 製備化合物111
化合物111係使用與用於化合物89之程序一致的程序，自4-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)鄰苯二甲酸(1.13g，3.84mmol)及88(5g，8.44mmol)製備。產率：2.21g，49%。
步驟2. 製備化合物112
將111(2.21g，1.87mmol)於CH2Cl2(40mL)中之溶液用TFA(5mL)緩慢處理。攪拌(2小時)後，混合物濃縮且進行層析法，得到呈無色泡沫狀之112(1.08g，47%)。Rf 0.1(10% CH3OH-CH2Cl2)。
步驟3. 製備化合物113
化合物113係使用與用於化合物91之程序一致的程序，自化合物112(1.08g，0.88mmol)及(2-側氧基-2-苯基-1λ2-乙基)-D-麩胺酸(112mg，0.39mmol)製備。產率：600mg，62%。
步驟4. 製備化合物114
化合物114係使用與用於化合物92之程序一致的程序，自 化合物113製備。
步驟5. 製備化合物115
化合物115係使用與用於化合物93之程序一致的程序，自4-(((第三丁氧基羰基)胺基)甲基)鄰苯二甲酸(3.94g，13.3mmol)及9(18.2g，29.4mmol)製備。產率：9.02g，53%。
步驟6. 製備化合物116
化合物116係使用與用於化合物112之程序一致的程序，自化合物115(8g，6.3mmol)製備。產率：3.23g，39%。
步驟7. 製備化合物117
化合物117係使用與用於化合物95之程序一致的程序，自化合物116(3.23g，2.45mmol)及(2-側氧基-2-苯基-1λ2-乙基)-D-麩胺酸(192mg，1.1mmol)製備。產率：2.22g，34%。
步驟8. 製備化合物118
化合物118係使用與用於化合物96之程序一致的程序，自化合物117(2.22g，0.84mmol)製備。產率：2.02g，91%。
步驟9. 製備結合物218及221
結合物218及221係使用與用於化合物1之程序一致的程序，自化合物128及114或118製備。
實例21. 合成結合物224
流程45.
步驟1. 製備化合物224
結合物224係使用與用於化合物1之程序一致的程序，自化合物96及130製備。
實例22 合成結合物231
流程47
步驟1 製備化合物225
化合物225係使用與用於89之程序一致的程序，自5-(2-胺基乙醯胺基)間苯二甲酸106(560mg，1.5mmol)及9(2.24g，3.6mmol)製備。產率1.6g，80%。
步驟2 製備化合物226
化合物226以與14相同之方式製備。產率1.22g，78%。
步驟3 製備化合物227
化合物227以與89相同之方式，自Z-麩胺酸(108mg，0.38mmol)及226(1.22g，0.92mmol)製備。產率471mg，45%。
步驟4 製備化合物228
化合物228以與14相同之方式製備。產率460mg，定量。
步驟5 製備化合物229
化合物229係以與89相同之方式製備，自228(460mg，0.17mmol)及128(125mg，0.19mmol)製備。產率365mg，66%。
步驟6 製備化合物231
結合物231係使用與用於化合物1之程序一致的程序製備。
實例23. 合成結合物233
步驟1. 製備化合物232
化合物232係使用與用於化合物19之程序一致的程序，自化合物24(650mg，0.33mmol)及化合物69b(175mg，0.33mmol)製備。產率：380mg，47%。
步驟2. 製備化合物233
化合物233係使用與用於化合物1之程序一致之程序，自化合物232製備。
實例24. 合成結合物235
步驟1. 製備化合物234
化合物234係使用與用於化合物19之程序一致的程序，自化合物24(1.1g，0.55mmol)及化合物18(175mg，0.33mmol)製備。產率：685mg，51%。
步驟2. 製備化合物235
化合物235係使用與用於化合物1之程序一致之程序，自化合物234製備。
實例25. GalNAc-siTTR結合物之活體外與活體內評估
GalNAc-siTTR結合物之水合：
具有化合物1之結構的GalNAc-siTTR結合物採用如下寡核苷酸與siRNA序列，以5'至3'書寫。有義鏈：A*a*CaGuGuUCUuGcUcUaUaA(GalNAc)(SEQ ID NO：31)。反義鏈：u*U*aUaGaGcAagaAcAcUgUu*u*u(SEQ ID NO：32)。其中加劃線之大寫字母為2'-O甲基糖修飾，且小寫字母為2'-氟糖修飾。星號(*)表示硫代磷酸酯(PS)鍵。在用於研究之前，結合物在PBS中水合，且使用NanoDrop儀器進行A260量測來定量。
GalNAc-siTTR結合物之活體內比較：
使用標準程序，自C57 Bl/6雌性小鼠分離初級肝細胞。一旦分離，肝細胞於含有10% FBS之Williams培養基E(WME)中以2.75×104個細胞/孔塗鋪於96孔Primaria盤上。4小時後且對於剩餘實驗部分，培養基轉換成無FBS之WME。第二天，將90μL新鮮WME施用於細胞。siRNA結合物儲備液在PBS中製備，濃度為100μg/mL。在WME中連續稀釋(1：2)(50μL結合物稀釋液+50μL WME)。接著10μL各結合物稀釋液一式三份轉移至Primaria盤，使得在肝細胞上結合物之最終濃度為5、2.5、1.25、0.625、0.312、0156及0.078μg/mL。PBS於WME中之連續稀釋液充當陰性對照。將細胞在37℃及5% CO2下培育24小時。接著移除轉染培養基且藉由添加200μL 1xLWR(含有0.5mg/mL蛋白酶K)，使細胞溶解。將盤冷凍-解凍(60min循環，-80℃/52℃)，以幫助細胞溶解。接著使用QuantiGene 2.0分析法，根據製造商之說明書，分析所得溶解產物之小鼠TTR與GAPD mRNA含量。測定相對於GAPD mRNA標準化的TTR mRNA之相對濃度，且繪圖。用結合物處理之細胞展現標靶mRNA顯著敲減。
GalNAc-siTTR結合物之活體外比較：
磁性C57BL/6小鼠(n=4)用PBS或GalNAc-siTTR結合物(分別在PBS中稀釋至0.1mg/mL或0.2mg/mL，使得動物接受1mg/kg或2 mg/kg劑量之結合物)皮下(肩胛區)處理。在第2天、第4天、第5天、第7天、第8天、第9天、第11天、第14天、第21天(割尾)及第28天(終末)收集血液且藉由ELISA分析所得血漿之TTR蛋白。將相對於PBS對照之TTR血漿蛋白值列表(表1及2；參見圖7及8)。用結合物處理之細胞展現標靶mRNA及蛋白質顯著敲減。
<110> 帕提瓦生物療法股份有限公司
<120> 靶向組合物
<130> 08155.056TW1
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<151> 2016-04-11
<160> 32
<170> PatentIn版本3.5
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<212> RNA
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Claims (158)

  1. 一種式(I)化合物： 其中：R1為靶向配位體；L1不存在或為連接基團；L2不存在或為連接基團；R2為核酸；該環A不存在、為3-20員環烷基、5-20員芳基、5-20員雜芳基或3-20員雜環烷基；各RA獨立地選自由以下組成之群：氫、羥基、CN、F、Cl、Br、I、-C1-2烷基-ORB、C1-10烷基C2-10烯基及C2-10炔基；其中該C1-10烷基C2-10烯基及C2-10炔基視情況經一或多個獨立地選自鹵基、羥基及C1-3烷氧基之基團取代；RB為氫、保護基、與固體支撐物之共價鍵或與結合於固體支撐物之連接基團之鍵；且n為0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；或其鹽。
  2. 如申請專利範圍第1項之化合物，其中：R1為靶向配位體；L1不存在或為連接基團；L2不存在或為連接基團；R2為核酸；該環A不存在、為3-20員環烷基、5-20員芳基、5-20員雜芳基或3-20員雜環烷基；各RA獨立地選自由以下組成之群：氫、羥基、CN、F、Cl、Br、I、-C1-2烷基-ORB及視情況經一或多個獨立地選自鹵基、羥基及C1-3烷氧基之基團取代的C1-8烷基； RB為氫、保護基、與固體支撐物之共價鍵或與結合於固體支撐物之連接基團之鍵；且n為0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；或其鹽。
  3. 如申請專利範圍第2項之化合物，其中R1為-C(H)(3-p)(L3-醣)p，其中各L3獨立地為連接基團；p為1、2或3；且醣為單醣或二醣；或其鹽。
  4. 如申請專利範圍第3項之化合物，其中該醣為： 其中：X為NR3，且Y係選自-(C=O)R4、-SO2R5及-(C=O)NR6R7；或X為-(C=O)-且Y為NR8R9；R3為氫或(C1-C4)烷基；R4、R5、R6、R7、R8及R9各獨立地選自由以下組成之群：氫、(C1-C8)烷基、(C1-C8)鹵烷基、(C1-C8)烷氧基及(C3-C6)環烷基，其視情況經一或多個獨立地選自由以下組成之群的基團取代：鹵基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)鹵烷基、(C1-C4)烷氧基及(C1-C4)鹵烷氧基；R10為-OH、-NR8R9或-F；且R11為-OH、-NR8R9、-F或視情況經一或多個獨立地選自由以下組成之群的基團取代的5員雜環：鹵基、羥基、羧基、胺基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)鹵烷基、(C1-C4)烷氧基及(C1-C4)鹵烷氧基；或其鹽。
  5. 如申請專利範圍第3項或第4項之化合物，其中該醣係選自由以下組成之群： 或其鹽。
  6. 如申請專利範圍第3項至第5項中任一項之化合物，其中該醣為： 或其鹽。
  7. 如申請專利範圍第3項至第6項中任一項之化合物或其鹽，其中各L3獨立地為具有0至50個碳原子之有分支或未分支之二價飽和或不飽和烴鏈，其中該烴鏈中之該等碳原子中的一或多個(例如1、2、3或4個)視情況經-O-、-NRX-、-NRX-C(=O)-、-C(=O)-NRX-或-S-置換，且其中RX為氫或(C1-C6)烷基，且其中該烴鏈視情況經一或多個(例如1、2、3或4個)選自以下之取代基取代：(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)環烷基、(C1-C6)烷醯基、(C1-C6)烷醯氧基、(C1-C6)烷氧基羰基、(C1-C6)烷基硫基、疊氮基、氰基、硝基、鹵基、羥基、側氧基(=O)、羧基、芳基、芳氧基、雜芳基及雜芳氧基。
  8. 如申請專利範圍第3項至第7項中任一項之化合物或其鹽，其中各L3獨立地為具有1至20個碳原子之有分支或未分支之二價飽和或不飽和烴鏈，其中該烴鏈中之該等碳原子中的一或多個(例如1、2、3或4個)視情況經-O-、-NRX-、-NRX-C(=O)-、-C(=O)-NRX-或-S-置換，且其中RX為氫或(C1-C6)烷基，且其中該烴鏈視情況經一或多個(例如1、2、3或4個)選自以下之取代基取代：(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)環烷基、(C1-C6) 烷醯基、(C1-C6)烷醯氧基、(C1-C6)烷氧基羰基、(C1-C6)烷基硫基、疊氮基、氰基、硝基、鹵基、羥基、側氧基(=O)、羧基、芳基、芳氧基、雜芳基及雜芳氧基。
  9. 如申請專利範圍第3項至第8項中任一項之化合物，其中L3為： 或其鹽。
  10. 如申請專利範圍第2項至第9項中任一項之化合物，其中R1為： 或其鹽。
  11. 如申請專利範圍第2項之化合物，其中R1為： 其中：G為-NH-或-O-；RC為氫、(C1-C8)烷基、(C1-C8)鹵烷基、(C1-C8)烷氧基、(C1-C6)烷醯基、(C3-C20)環烷基、(C3-C20)雜環、芳基、雜芳基、單醣、二醣或三醣；且其中該環烷基、雜環、芳基、雜芳基及醣視情況經一或多個獨立地選自由以下組成之群之基團取代：鹵基、羧基、羥基、胺基、(C1-C4)烷 基、(C1-C4)鹵烷基、(C1-C4)烷氧基及(C1-C4)鹵烷氧基；或其鹽。
  12. 如申請專利範圍第11項之化合物，其中RC為： 或其鹽。
  13. 如申請專利範圍第2項、第11項及第12項中任一項之化合物，其中R1為： 或其鹽。
  14. 如申請專利範圍第11項之化合物或其鹽，其中RC為：
  15. 如申請專利範圍第11項至第14項中任一項之化合物或其鹽，其中G為-NH-。
  16. 如申請專利範圍第2項、第11項、第14項及第15項中任一項之化合物或其鹽，其中R1為：
  17. 如申請專利範圍第2項之化合物或其鹽，其中R1為： 其中各RD獨立地選自由以下組成之群：氫、(C1-C6)烷基、(C9-C20)烷基甲矽烷基、(RW)3Si-、(C2-C6)烯基、四氫哌喃基、(C1-C6)烷醯基、苯甲醯基、芳基(C1-C3)烷基、TMTr(三甲氧基三苯甲基)、DMTr(二甲氧基三苯甲基)、MMTr(單甲氧基三苯甲基)及Tr(三苯甲基)；且各RW獨立地選自由以下組成之群：(C1-C4)烷基及芳基。
  18. 如申請專利範圍第2項至第17項中任一項之化合物或其鹽，其中L1及L2獨立地為具有1至50個碳原子之有分支或未分支之二價飽和或不飽和烴鏈，其中該烴鏈中之該等碳原子中的一或多個(例如1、2、3或4個)視情況經-O-、-NRX-、-NRX-C(=O)-、-C(=O)-NRX-或-S-置換，且其中RX為氫或(C1-C6)烷基，且其中該烴鏈視情況經一或多個(例如1、2、3或4個)選自以下之取代基取代：(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)環烷基、(C1-C6)烷醯基、(C1-C6)烷醯氧基、(C1-C6)烷氧基羰基、(C1-C6)烷基硫基、疊氮基、氰基、硝基、鹵基、羥基、側氧基(=O)、羧基、芳基、芳氧基、雜芳基及雜芳氧基。
  19. 如申請專利範圍第2項至第18項中任一項之化合物或其鹽，其中L1及L2獨立地為具有1至20個碳原子之有分支或未分支之二價飽和或不飽和烴鏈，其中該烴鏈中之該等碳原子中的一或多個(例如1、2、3或4個)視情況經-O-、-NRX-、-NRX-C(=O)-、-C(=O)-NRX-或-S-置換，且其中RX為氫或(C1-C6)烷基，且其中該烴鏈視情況經一或多個(例如1、2、3或4個)選自以下之取代基取代：(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)環烷基、(C1-C6)烷醯基、(C1-C6)烷醯氧基、(C1-C6)烷氧基羰基、(C1-C6)烷基硫基、疊氮基、氰基、硝基、鹵基、羥基、側氧基(=O)、羧基、芳基、芳氧基、雜芳基及雜芳氧基。
  20. 如申請專利範圍第2項至第19項中任一項之化合物或其鹽，其中L1及L2獨立地為具有1至14個碳原子之有分支或未分支之二價飽和或不飽和烴鏈，其中該烴鏈中之該等碳原子中的一或多個(例如1、2、3或4個)視情況經-O-、-NRX-、-NRX-C(=O)-、-C(=O)-NRX-或-S-置換，且其中RX為氫或(C1-C6)烷基，且其中該烴鏈視情況經一或多個(例如1、2、3或4個)選自以下之取代基取代：(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)環烷基、(C1-C6)烷醯基、(C1-C6)烷醯氧基、(C1-C6)烷氧基羰基、(C1-C6)烷基硫基、疊氮基、氰基、硝基、鹵基、羥基、側氧基(=O)、羧基、芳基、芳氧基、雜芳基及雜芳氧基。
  21. 如申請專利範圍第2項至第20項中任一項之化合物或其鹽，其中L1經由-NH-、-O-、-S-、-(C=O)-、-(C=O)-NH-、-NH-(C=O)-、-(C=O)-O-、-NH-(C=O)-NH-或-NH-(SO2)-連接至R1。
  22. 如申請專利範圍第2項至第21項中任一項之化合物或其鹽，其中L2經由-O-連接至R2。
  23. 如申請專利範圍第2項至第22項中任一項之化合物或其鹽，其中L1係選自由以下組成之群：
  24. 如申請專利範圍第2項至第23項中任一項之化合物或其鹽，其中L2為-CH2-O-或-CH2-CH2-O-。
  25. 如申請專利範圍第2項之化合物，其為式(Ia)化合物： 其中：各D獨立地選自由以下組成之群：及-N=；或其鹽。
  26. 如申請專利範圍第2項或第25項之化合物或其鹽，其係選自由以下組成之群： 其中：Q1為氫且Q2為R2；或Q1為R2且Q2為氫；且Z為-L1-R1；及其鹽。
  27. 如申請專利範圍第2項之化合物或其鹽，其為式(Ib)化合物： 其中： 各D獨立地選自由以下組成之群：及-N=；且各m獨立地為1或2。
  28. 如申請專利範圍第2項或第27項之化合物或其鹽，其係選自由以下組成之群： 其中：Q1為氫且Q2為R2；或Q1為R2且Q2為氫；且Z為-L1-R1；及其鹽。
  29. 如申請專利範圍第2項之化合物或其鹽，其為式(Ic)化合物： 其中：E為-O-或-CH2-；n係選自由0、1、2、3及4組成之群；且n1及n2各獨立地選自由0、1、2及3組成之群；或其鹽。
  30. 如申請專利範圍第2項或第29項之化合物或其鹽，其係選自由以下組成之群： 其中：Z為-L1-R1；及其鹽。
  31. 如申請專利範圍第2項之化合物或其鹽，其中該-A-L2-R2部分為： 其中：Q1為氫且Q2為R2；或Q1為R2且Q2為氫；且各q獨立地為0、1、2、3、4或5。
  32. 如申請專利範圍第2項至第31項中任一項之化合物或其鹽，其中R2為寡核苷酸。
  33. 如申請專利範圍第2項至第32項中任一項之化合物或其鹽，其中R2為siRNA。
  34. 如申請專利範圍第2項之化合物或其鹽，其係選自由以下組成之群： 及 及其鹽。
  35. 如申請專利範圍第1項之化合物或其鹽，其中R1係選自由以下組成之群： 其中： RS為；n為2、3或4；且x為1或2。
  36. 如申請專利範圍第1項或第35項之化合物或其鹽，其中L1係選自由以下組成之群：
  37. 如申請專利範圍第1項、第35項及第36項中任一項之化合物或其鹽，其中A不存在、為苯基、吡咯啶基或環戊基。
  38. 如申請專利範圍第1項及第35項至第37項中任一項之化合物或其鹽，其中L2為視情況經羥基取代之C1-4伸烷基-O-。
  39. 如申請專利範圍第1項及第35項至第38項中任一項之化合物或其鹽，其中L2為-CH2O-、-CH2CH2O-或-CH(OH)CH2O-。
  40. 如申請專利範圍第1項及第35項至第39項中任一項之化合物或其鹽，其中各RA獨立地為羥基或視情況經羥基取代之C1-8烷基。
  41. 如申請專利範圍第1項及第35項至第40項中任一項之化合物或其鹽，其中各RA獨立地選自由以下組成之群：羥基、甲基及-CH2OH。
  42. 如申請專利範圍第1項之化合物或其鹽，其為式(Ig)化合物： 其中：B為-N-或-CH-；L2為視情況經羥基或鹵基取代之C1-4伸烷基-O-；且n為0、1、2、3、4、5、6或7；或其鹽。
  43. 如申請專利範圍第1項或第42項之化合物或其鹽，其係選自由以下組成之群： 其中Q為-L1-R1；且R'為C1-9烷基、C2-9烯基或C2-9炔基；其中該C1-9烷基、C2-9烯基或C2-9炔基視情況經鹵基或羥基取代；及其鹽。
  44. 如申請專利範圍第1項之化合物或其鹽，其係選自由以下組成之群： 其中Q為-L1-R1；及其鹽。
  45. 如申請專利範圍第1項之化合物或其鹽，其係選自由以下組成之群： 及其醫藥學上可接受之鹽。
  46. 一種醫藥組合物，其包含如申請專利範圍第1項至第45項中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑。
  47. 一種將核酸遞送至動物肝臟之方法，其包括向該動物投與如申請專利範圍第1項至第45項中任一項之式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
  48. 如申請專利範圍第2項之化合物或其鹽，其為式(Id)化合物： 其中：R1d係選自： 及 Xd為C2-10伸烷基；nd為0或1；R2d為核酸；且R3d為H、保護基、與固體支撐物之共價鍵或與結合於固體支撐物之連接基團之鍵；或其鹽。
  49. 如申請專利範圍第48項之化合物或其鹽，其中R1d為：
  50. 如申請專利範圍第48項之化合物或其鹽，其中R1d為：
  51. 如申請專利範圍第48項至第50項中任一項之化合物或鹽，其中Xd為C8伸烷基。
  52. 如申請專利範圍第48項至第51項中任一項之化合物或鹽，其中nd為0。
  53. 如申請專利範圍第48項至第51項中任一項之化合物或鹽，其中R2d為siRNA。
  54. 如申請專利範圍第48項至第53項中任一項之化合物或鹽，其中R3d為H。
  55. 如申請專利範圍第48項至第53項中任一項之化合物或鹽，其中R3d為與固體支撐物之共價鍵。
  56. 如申請專利範圍第48項至第53項中任一項之化合物或其鹽，其中R3d 為與結合於固體支撐物之連接基團之鍵，其中該連接基團為具有2至15個碳原子之有分支或未分支之二價飽和或不飽和烴鏈，其中該等碳原子中之一或多個(例如1、2、3或4個)視情況經(-O-)或(-N(H)-)置換，且其中該鏈視情況在碳上經一或多個(例如1、2、3或4個)選自以下之取代基取代：(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)環烷基、(C1-C6)烷醯基、(C1-C6)烷醯氧基、(C1-C6)烷氧基羰基、(C1-C6)烷基硫基、疊氮基、氰基、硝基、鹵基、羥基、側氧基(=O)、羧基、芳基、芳氧基、雜芳基及雜芳氧基。
  57. 如申請專利範圍第48項至第53項中任一項之化合物或其鹽，其中R3d為與結合於固體支撐物之連接基團之鍵，其中該連接基團為具有2至10個碳原子之有分支或未分支之二價飽和或不飽和烴鏈，其中該等碳原子中之一或多個(例如1、2、3或4個)視情況經(-O-)或(-N(H)-)置換，且其中該鏈視情況在碳上經一或多個(例如1、2、3或4個)選自以下之取代基取代：(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)環烷基、(C1-C6)烷醯基、(C1-C6)烷醯氧基、(C1-C6)烷氧基羰基、(C1-C6)烷基硫基、疊氮基、氰基、硝基、鹵基、羥基、側氧基(=O)、羧基、芳基、芳氧基、雜芳基及雜芳氧基。
  58. 如申請專利範圍第48項至第53項中任一項之化合物或其鹽，其中R3d為與結合於固體支撐物之連接基團之鍵，其中該連接基團為-C(=O)CH2CH2C(=O)N(H)-。
  59. 一種醫藥組合物，其包含如申請專利範圍第48項至第58項中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑。
  60. 一種將核酸遞送至動物肝臟之方法，其包括向該動物投與如申請專利範圍第48項至第58中任一項之式Id化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
  61. 如申請專利範圍第2項之化合物或其鹽，其為式(Ie)化合物： 其中： R1d係選自： 及 Xd為C2-8伸烷基；nd為0或1；Pg1為H或合適保護基；且R3d為H、保護基、與固體支撐物之共價鍵或與結合於固體支撐物之連接基團之鍵；或其鹽。
  62. 如申請專利範圍第61項之化合物或其鹽，其中Pg1為TMTr(三甲氧基三苯甲基)、DMTr(二甲氧基三苯甲基)、MMTr(單甲氧基三苯甲基)或Tr(三苯甲基)。
  63. 一種製備如申請專利範圍第48項之式(Id)化合物或其鹽的方法，其包 括使對應之式(Ie)化合物經受： 其中：Xd為C2-8伸烷基；nd為0或1；Pg1為H；且R3d為與固體支撐物之共價鍵或與結合於固體支撐物之連接基團之鍵，固相核酸合成條件，得到其中R2d為核酸之對應式Id化合物。
  64. 如申請專利範圍第63項之方法，其進一步包括自該固體支撐物移除該化合物，得到其中R3d為H之對應式Id化合物。
  65. 如申請專利範圍第48項之化合物或其鹽，其係選自由以下組成之群： 及其鹽。
  66. 一種式(I)化合物： 其中：R1為H或合成活化基團；L1不存在或為連接基團；L2不存在或為連接基團；R2為核酸；該環A不存在、為3-20員環烷基、5-20員芳基、5-20員雜芳基或3-20員雜環烷基；各RA獨立地選自由以下組成之群：氫、羥基、CN、F、Cl、Br、I、-C1-2烷基-ORB、C1-10烷基C2-10烯基及C2-10炔基；其中該C1-10烷基C2-10烯基及C2-10炔基視情況經一或多個獨立地選自鹵基、羥基及C1-3烷氧基之基團取代；RB為氫、保護基、與固體支撐物之共價鍵或與結合於固體支撐物之連接基團之鍵；且n為0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；或其鹽。
  67. 一種式(I)化合物： 其中：R1為靶向配位體；L1不存在或為連接基團；L2不存在或為連接基團；R2為H或合成活化基團；該環A不存在、為3-20員環烷基、5-20員芳基、5-20員雜芳基或3-20員雜環烷基；各RA獨立地選自由以下組成之群：氫、羥基、CN、F、Cl、Br、I、-C1-2烷基-ORB、C1-10烷基C2-10烯基及C2-10炔基；其中該C1-10烷基C2-10烯基及C2-10炔基視情況經一或多個獨立地選自鹵基、羥基及C1-3烷氧基之基團取代；RB為氫、保護基、與固體支撐物之共價鍵或與結合於固體支撐物之連接基團之鍵；且n為0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；或其鹽。
  68. 如申請專利範圍第65項或第66項之化合物或其鹽，其為式(Ig)化合物： 其中：B為-N-或-CH-；L2為視情況經羥基或鹵基取代之C1-4伸烷基-O-；且n為0、1、2、3、4、5、6或7；或其鹽。
  69. 如申請專利範圍第66項或第67項之化合物或其鹽，其係選自由以下組成之群： 其中：Q為-L1-R1；且R'為C1-9烷基、C2-9烯基或C2-9炔基；其中該C1-9烷基、C2-9烯基或C2-9炔基視情況經鹵基或羥基取代；及其鹽。
  70. 如申請專利範圍第66項或第67項之化合物或其鹽，其係選自由以下組成之群： 其中：Q為-L1-R1；及其鹽。
  71. 一種式(Ig)化合物： 其中：B為-N-或-CH-；L1不存在或為連接基團；L2為視情況經羥基或鹵基取代之C1-4伸烷基-O-；n為0、1、2、3、4、5、6或7；R1為H或合成活化基團；且R2為H或合成活化基團；或其鹽。
  72. 一種化合物，其係選自由以下組成之群： 其中Q為-L1-R1；L1不存在或為連接基團；R'為C1-9烷基、C2-9烯基或C2-9炔基；其中該C1-9烷基、C2-9烯基或C2-9炔基視情況經鹵基或羥基取代；R1為H或合成活化基團；且R2為H或合成活化基團；或其鹽。
  73. 一種化合物，其係選自由以下組成之群： 其中：Q為-L1-R1；L1不存在或為連接基團；R1為H或合成活化基團；且R2為H或合成活化基團；或其鹽。
  74. 如申請專利範圍第66項至第73項中任一項之化合物或其鹽，其中R1為H或可衍生自DCC、HOBt、EDC、BOP、PyBOP或HBTU之合成活化基團。
  75. 如申請專利範圍第66項至第74項中任一項之化合物或其鹽，其中R2為H、乙酸酯基、三氟甲磺酸酯基、甲磺酸酯基或丁二酸酯基。
  76. 如申請專利範圍第66項至第73項中任一項之化合物或其鹽，其中R1為可衍生自DCC、HOBt、EDC、BOP、PyBOP或HBTU之合成活化基團。
  77. 如申請專利範圍第66項至第74項中任一項之化合物或其鹽，其中R2為乙酸酯基、三氟甲磺酸酯基、甲磺酸酯基或丁二酸酯基。
  78. 如申請專利範圍第66項至第77項中任一項之化合物或其鹽，其中L1為具有5至20個碳原子之有分支或未分支之二價飽和或不飽和烴鏈，其中該烴鏈中之該等碳原子中的一或多個(例如1、2、3或4個)視情況經-O-、-NH-、-NH-C(=O)-、-C(=O)-NH-或-S-置換。
  79. 一種式(XX)化合物： 其中：R1為靶向配位體；L1不存在或為連接基團；L2不存在或為連接基團；R2為核酸；B為二價且係選自由以下組成之群： 其中：各R'獨立地為C1-9烷基、C2-9烯基或C2-9炔基；其中該C1-9烷基、C2-9烯基或C2-9炔基視情況經鹵基或羥基取代；用*標記之化合價附接至L1或若L1不存在，則附接至R1；且用**標記之化合價附接至L2或若L2不存在，則附接至R2；或其鹽。
  80. 如申請專利範圍第79項之化合物或其鹽，其中該靶向配位體R1包含2-8種醣。
  81. 如申請專利範圍第79項之化合物或其鹽，其中該靶向配位體R1包含2-4種醣。
  82. 如申請專利範圍第79項之化合物或其鹽，其中該靶向配位體R1包含3-8種醣。
  83. 如申請專利範圍第79項之化合物或其鹽，其中該靶向配位體R1包含3-6種醣。
  84. 如申請專利範圍第79項之化合物或其鹽，其中該靶向配位體R1包含3-4種醣。
  85. 如申請專利範圍第79項之化合物或其鹽，其中該靶向配位體R1包含3種醣。
  86. 如申請專利範圍第79項之化合物或其鹽，其中該靶向配位體R1包含4種醣。
  87. 如申請專利範圍第1項至第2項、第25項至第30項、第32項至第33項、第36項至第39項、第42項至第44項、第66項至第69項及第79項中任一項之化合物或其鹽，其中該靶向部分R1具有下式： 其中：B1為包含約1至約20個原子之三價基團且共價鍵結至L1、T1及T2；B2為包含約1至約20個原子之三價基團且共價鍵結至T1、T3及T4；B3為包含約1至約20個原子之三價基團且共價鍵結至T2、T5及T6；T1不存在或為連接基團；T2不存在或為連接基團；T3不存在或為連接基團； T4不存在或為連接基團；T5不存在或為連接基團；且T6不存在或為連接基團。
  88. 如申請專利範圍第87項之化合物或其鹽，其中各醣獨立地選自： 其中：X為NR3，且Y係選自-(C=O)R4、-SO2R5及-(C=O)NR6R7；或X為-(C=O)-且Y為NR8R9；R3為氫或(C1-C4)烷基；R4、R5、R6、R7、R8及R9各獨立地選自由以下組成之群：氫、(C1-C8)烷基、(C1-C8)鹵烷基、(C1-C8)烷氧基及(C3-C6)環烷基，其視情況經一或多個獨立地選自由以下組成之群的基團取代：鹵基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)鹵烷基、(C1-C4)烷氧基及(C1-C4)鹵烷氧基；R10為-OH、-NR8R9或-F；且R11為-OH、-NR8R9、-F或視情況經一或多個獨立地選自由以下組成之群的基團取代的5員雜環：鹵基、羥基、羧基、胺基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)鹵烷基、(C1-C4)烷氧基及(C1-C4)鹵烷氧基。
  89. 如申請專利範圍第87項之化合物或其鹽，其中該醣各獨立地選自由以下組成之群：
  90. 如申請專利範圍第87項之化合物或其鹽，其中各醣獨立地為：
  91. 如申請專利範圍第87項至第90項中任一項之化合物或其鹽，其中T1與T2之一不存在。
  92. 如申請專利範圍第87項至第90項中任一項之化合物或其鹽，其中T1與T2兩者不存在。
  93. 如申請專利範圍第87項至第90項中任一項之化合物或其鹽，其中T1、T2、T3、T4、T5及T6各獨立地不存在或為具有1至50個碳原子之有分支或未分支之飽和或不飽和烴鏈，其中該烴鏈中之該等碳原子中的一或多個(例如1、2、3或4個)視情況經-O-、-NRX-、-NRX-C(=O)-、-C(=O)-NRX-或-S-置換，且其中RX為氫或(C1-C6)烷基，且其中該烴鏈視情況經一或多個(例如1、2、3或4個)選自以下之取代基取代：(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)環烷基、(C1-C6)烷醯基、(C1-C6)烷醯氧基、(C1-C6)烷氧基羰基、(C1-C6)烷基硫基、疊氮基、氰基、硝基、鹵基、羥基、側氧基(=O)、羧基、芳基、芳氧基、雜芳基及雜芳氧基。
  94. 如申請專利範圍第87項至第90項中任一項之化合物或其鹽，其中T1、T2、T3、T4、T5及T6各獨立地不存在或為具有1至20個碳原子之有分支或未分支之飽和或不飽和烴鏈，其中該烴鏈中之該等碳原子中的一或多個(例如1、2、3或4個)視情況經-O-、-NRX-、-NRX-C(=O)-、-C(=O)-NRX-或-S-置換，且其中RX為氫或(C1-C6)烷基，且其中該烴鏈視情況經一或多個(例如1、2、3或4個)選自以下之取代基取代：(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)環烷基、(C1-C6)烷醯基、(C1-C6)烷醯氧基、(C1-C6)烷氧基羰基、(C1-C6)烷基硫基、疊氮基、氰基、硝基、鹵基、羥基、側氧基(=O)、羧基、芳基、芳氧基、雜芳基及雜芳氧基。
  95. 如申請專利範圍第87項至第90項中任一項之化合物或其鹽，其中T1、T2、T3、T4、T5及T6各獨立地不存在或為具有1至50個碳原子之有分支或未分支之飽和或不飽和烴鏈，或其鹽，其中該烴鏈中之該等碳 原子中的一或多個(例如1、2、3或4個)視情況經-O-或-NRX-置換，且其中RX為氫或(C1-C6)烷基，且其中該烴鏈視情況經一或多個(例如1、2、3或4個)選自以下之取代基取代：鹵基、羥基及側氧基(=O)。
  96. 如申請專利範圍第87項至第90項中任一項之化合物或其鹽，其中T1、T2、T3、T4、T5及T6各獨立地不存在或為具有1至20個碳原子之有分支或未分支之飽和或不飽和烴鏈，其中該烴鏈中之該等碳原子中的一或多個(例如1、2、3或4個)視情況經-O-置換且其中該烴鏈視情況經一或多個(例如1、2、3或4個)選自以下之取代基取代：鹵基、羥基及側氧基(=O)。
  97. 如申請專利範圍第87項至第90項中任一項之化合物或其鹽，其中T1、T2、T3、T4、T5及T6各獨立地不存在或為具有1至20個碳原子之有分支或未分支之飽和或不飽和烴鏈，其中該烴鏈中之該等碳原子中的一或多個(例如1、2、3或4個)視情況經-O-置換且其中該烴鏈視情況經一或多個(例如1、2、3或4個)選自以下之取代基取代：鹵基、羥基及側氧基(=O)。
  98. 如申請專利範圍第87項至第90項中任一項之化合物或其鹽，其中T3、T4、T5及T6中之至少一者為： 其中：n=1、2、3。
  99. 如申請專利範圍第87項至第90項中任一項之化合物或其鹽，其中T3、T4、T5及T6各獨立地選自由以下組成之群： 其中：n=1、2、3。
  100. 如申請專利範圍第87項至第90項中任一項之化合物或其鹽，其中T1及T2中之至少一者為甘胺酸。
  101. 如申請專利範圍第87項至第90項中任一項之化合物或其鹽，其中T1及T2各為甘胺酸。
  102. 如申請專利範圍第87項至第101項中任一項之化合物或其鹽，其中B1為包含1至15個原子之三價基團且共價鍵結至L1、T1及T2。
  103. 如申請專利範圍第87項至第101項中任一項之化合物或其鹽，其中B1為包含1至10個原子之三價基團且共價鍵結至L1、T1及T2。
  104. 如申請專利範圍第87項至第101項中任一項之化合物或其鹽，其中B1包含(C1-C6)烷基。
  105. 如申請專利範圍第87項至第101項中任一項之化合物或其鹽，其中B1包含C3-8環烷基。
  106. 如申請專利範圍第87項至第101項中任一項之化合物或其鹽，其中B1包含甲矽烷基。
  107. 如申請專利範圍第87項至第101項中任一項之化合物或其鹽，其中B1包含D-胺基酸或L-胺基酸。
  108. 如申請專利範圍第87項至第101項中任一項之化合物或其鹽，其中B1包含醣。
  109. 如申請專利範圍第87項至第101項中任一項之化合物或其鹽，其中B1包含磷酸酯基。
  110. 如申請專利範圍第87項至第101項中任一項之化合物或其鹽，其中B1包含膦酸酯基。
  111. 如申請專利範圍第87項至第101項中任一項之化合物或其鹽，其中B1包含芳基。
  112. 如申請專利範圍第87項至第101項中任一項之化合物或其鹽，其中B1包含苯環。
  113. 如申請專利範圍第87項至第101項中任一項之化合物或其鹽，其中B1為苯環。
  114. 如申請專利範圍第87項至第101項中任一項之化合物或其鹽，其中B1為CH。
  115. 如申請專利範圍第87項至第101項中任一項之化合物或其鹽，其中B1包含雜芳基。
  116. 如申請專利範圍第87項至第101項中任一項之化合物或其鹽，其中B1為：
  117. 如申請專利範圍第87項至第116項中任一項之化合物或其鹽，其中B2為包含1至15個原子之三價基團且共價鍵結至L1、T1及T2。
  118. 如申請專利範圍第87項至第116項中任一項之化合物或其鹽，其中B2為包含1至10個原子之三價基團且共價鍵結至L1、T1及T2。
  119. 如申請專利範圍第87項至第116項中任一項之化合物或其鹽，其中B2包含(C1-C6)烷基。
  120. 如申請專利範圍第87項至第116項中任一項之化合物或其鹽，其中B2包含C3-8環烷基。
  121. 如申請專利範圍第87項至第116項中任一項之化合物或其鹽，其中B2包含甲矽烷基。
  122. 如申請專利範圍第87項至第116項中任一項之化合物或其鹽，其中B2包含D-胺基酸或L-胺基酸。
  123. 如申請專利範圍第87項至第116項中任一項之化合物或其鹽，其中B2包含醣。
  124. 如申請專利範圍第87項至第116項中任一項之化合物或其鹽，其中B2包含磷酸酯基。
  125. 如申請專利範圍第87項至第116項中任一項之化合物或其鹽，其中B2包含膦酸酯基。
  126. 如申請專利範圍第87項至第116項中任一項之化合物或其鹽，其中B2包含芳基。
  127. 如申請專利範圍第87項至第116項中任一項之化合物或其鹽，其中B2包含苯環。
  128. 如申請專利範圍第87項至第116項中任一項之化合物或其鹽，其中B2為苯環。
  129. 如申請專利範圍第87項至第116項中任一項之化合物或其鹽，其中B2為CH。
  130. 如申請專利範圍第87項至第116項中任一項之化合物或其鹽，其中B2包含雜芳基。
  131. 如申請專利範圍第87項至第116項中任一項之化合物或其鹽，其中B2係選自由以下組成之群：
  132. 如申請專利範圍第87項至第131項中任一項之化合物或其鹽，其中B3為包含1至15個原子之三價基團且共價鍵結至L1、T1及T2。
  133. 如申請專利範圍第87項至第131項中任一項之化合物或其鹽，其中B3為包含1至10個原子之三價基團且共價鍵結至L1、T1及T2。
  134. 如申請專利範圍第87項至第131項中任一項之化合物或其鹽，其中B3包含(C1-C6)烷基。
  135. 如申請專利範圍第87項至第131項中任一項之化合物或其鹽，其中B3包含C3-8環烷基。
  136. 如申請專利範圍第87項至第131項中任一項之化合物或其鹽，其中B3包含甲矽烷基。
  137. 如申請專利範圍第87項至第131項中任一項之化合物或其鹽，其中B3包含D-胺基酸或L-胺基酸。
  138. 如申請專利範圍第87項至第131項中任一項之化合物或其鹽，其中B3包含醣。
  139. 如申請專利範圍第87項至第131項中任一項之化合物或其鹽，其中B3包含磷酸酯基。
  140. 如申請專利範圍第87項至第131項中任一項之化合物或其鹽，其中B3包含膦酸酯基。
  141. 如申請專利範圍第87項至第131項中任一項之化合物或其鹽，其中B3包含芳基。
  142. 如申請專利範圍第87項至第131項中任一項之化合物或其鹽，其中B3包含苯環。
  143. 如申請專利範圍第87項至第131項中任一項之化合物或其鹽，其中B3為苯環。
  144. 如申請專利範圍第87項至第131項中任一項之化合物或其鹽，其中B3為CH。
  145. 如申請專利範圍第87項至第131項中任一項之化合物或其鹽，其中B3包含雜芳基。
  146. 如申請專利範圍第87項至第131項中任一項之化合物或其鹽，其中B3係選自由以下組成之群： 或其鹽。
  147. 如申請專利範圍第87項至第146項中任一項之化合物或其鹽，其中L1及L2獨立地為具有1至50個碳原子之有分支或未分支之二價飽和或不飽和烴鏈，其中該烴鏈中之該等碳原子中的一或多個(例如1、2、3或4個)視情況經-O-、-NRX-、-NRX-C(=O)-、-C(=O)-NRX-或-S-置換，且其中RX為氫或(C1-C6)烷基，且其中該烴鏈視情況經一或多個選自以下之取代基取代：(C1-C6)烷氧基、(C3-C6)環烷基、(C1-C6)烷醯基、(C1-C6)烷醯氧基、(C1-C6)烷氧基羰基、(C1-C6)烷基硫基、疊氮基、氰基、硝基、鹵基、羥基、側氧基(=O)、羧基、芳基、芳氧基、雜芳基及雜芳氧基。
  148. 如申請專利範圍第87項至第146項中任一項之化合物或其鹽，L1係選自由以下組成之群： 或其鹽。
  149. 如申請專利範圍第87項至第146項中任一項之化合物或其鹽，其中L1經由選自由以下組成之群的鍵連接至B1：-O-、-S-、-(C=O)-、 -(C=O)-NH-、-NH-(C=O)、-(C=O)-O-、-NH-(C=O)-NH-或-NH-(SO2)-。
  150. 如申請專利範圍第87項至第146項中任一項之化合物或其鹽，其中L1係選自由以下組成之群：
  151. 如申請專利範圍第87項至第150項中任一項之化合物或其鹽，其中L2經由-O-連接至R2。
  152. 如申請專利範圍第87項至第150項中任一項之化合物或其鹽，其中L2為視情況經羥基取代之C1-4伸烷基-O-。
  153. 如申請專利範圍第87項至第150項中任一項之化合物或其鹽，其中L2經由-O-連接至R2。
  154. 如申請專利範圍第87項至第150項中任一項之化合物或其鹽，其中L2不存在。
  155. 如申請專利範圍第87項之化合物或其鹽，其係選自由以下組成之群： 及其醫藥學上可接受之鹽。
  156. 一種化合物，其為 或其鹽。
  157. 一種醫藥組合物，其包含如申請專利範圍第79項至第156項中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑。
  158. 一種將核酸遞送至動物肝臟之方法，其包括向該動物投與如申請專利範圍第79項至第156項中任一項之式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
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