TW201729827A - 用於癌症治療之肽及擬肽與t細胞活化劑及/或查核點抑制劑之組合 - Google Patents
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Abstract
本發明提供可用於治療細胞增殖病症(例如與良性及惡性腫瘤細胞相關之彼等)之化合物(包括肽及擬肽),及有及沒有肽及擬肽之T細胞活化劑及/或免疫查核點抑制劑之組合。本發明化合物及組合可用於抑制細胞生長,例如治療腫瘤或癌症。
Description
本發明係關於單獨及與活化T細胞或為查核點抑制劑之治療組合具有抗細胞增殖活性之化合物(包括肽及擬肽)。因此,本發明化合物可用於抑制細胞增殖及因此治療細胞增殖病症(包括癌症)。
細胞週期包含S期(DNA複製)、M期(有絲分裂)及在S期與M期之間之兩個間隔期(G1及G2期)。細胞週期中之查核點確保準確進展,例如監測DNA完整性之狀態、DNA複製、細胞大小及周圍環境(Maller,J.L.Curr.Opin.Cell Biol.,3:26(1991))。對於多細胞生物體而言維持基因體之完整性尤為重要,且存在多個監測基因體之狀態之查核點。尤其係分別在DNA複製及有絲分裂之前存在之G1查核點及G2查核點。在進入s期前校正DNA損害係至關重要的,乃因在受損DNA經複製後,其通常引起突變(Hartwell,L.Cell,71:543(1992))。前進穿過G1及G2查核點而不修復廣泛的DNA損害可誘導細胞凋亡及/或劇變。
大多數癌細胞均攜載G1查核點相關性蛋白質(例如p53、Rb、MDM-2、p16INK4及p19ARF)之異常(Levine,A.J.Cell,88:323(1997))。或
者,突變可導致致癌基因產物(例如Ras、MDM-2及週期蛋白D)過表現及/或過活化,從而降低G1查核點之嚴格度。除該等突變以外,過量生長因子信號傳導可由生長因子之過表現造成且可降低G1查核點之嚴格度。與功能型突變之喪失及獲得一起,生長因子受體或下游信號轉導分子之連續活化可因使G1查核點無效而引起細胞轉化。經廢除G1查核點促成較高突變率及在癌細胞中觀察到之許多突變。因此,大多數癌細胞依賴於G2查核點來抵抗過度DNA損害而存活(O’Connor及Fan,Prog.Cell Cycle Res.,2:165(1996))。
相信在DNA損害後促進細胞週期G2停滯之機制在自酵母至人類之物種中係保守的。在受損DNA存在下,Cdc2/週期蛋白B激酶由於Cdc2激酶上蘇胺酸-14及酪胺酸-15殘基之抑制性磷酸化而保持無活性或週期蛋白B之蛋白質含量降低。在有絲分裂開始時,雙重磷酸酶Cdc25去除該等抑制性磷酸酯且藉此活化Cdc2/週期蛋白B激酶。Cdc2/週期蛋白B之活化等效於M期開始。
在裂殖酵母中,蛋白激酶Chk1係因應受損DNA之細胞週期停滯所必需的。Chk1激酶在若干rad基因產物之下游起作用且藉由DNA損害後之磷酸化而改質。已知出芽酵母之激酶Rad53及裂殖酵母之Cds1傳導來自未複製DNA之信號。在Chk1與Cds1之間似乎存在一些冗餘性,因為Chk1及Cds1之消除最終導致受損DNA誘導之G2停滯中斷。有趣地,Chk1及Cds1二者均磷酸化Cdc25且促進Rad24結合至Cdc25,從而使Cdc25隔絕至胞質液且防止Cdc2/週期蛋白B活化。因此,Cdc25似乎係該等激酶之共同靶標,暗指此分子係G2查核點中不可或缺的因子。
在人類中,hChk1(裂殖酵母Chk1之人類同系物)及Chk2/HuCds1(出
芽酵母Rad53及裂殖酵母Cds1之人類同系物)因應DNA損害而在絲胺酸-216(關鍵調節位點)處磷酸化Cdc25C。此磷酸化為小酸性蛋白質14-3-3(裂殖酵母之Rad24及Rad25之人類同系物)產生結合位點。此磷酸化之調節作用可由以下事實明確指示:在Cdc25C上絲胺酸-216取代為丙胺酸中斷人類細胞中之細胞週期G2停滯。然而,並未完全瞭解G2查核點之機制。
腫瘤微環境亦在預防或促進癌症細胞生長、侵襲、轉移及抗腫瘤免疫性中起作用,其影響患者預後。曾經預期對抗癌細胞之巨噬細胞已指示在腫瘤發展中起抑制及促進作用。具有古典抗腫瘤表型之巨噬細胞稱作M1,其具有促發炎性,且具有促腫瘤及消炎類型之彼等稱作M2,且在此類別內具有至少三種主要亞型(Martinez及Gordon,F1000Prime Reports 6:13(2014))。
嗜中性球細胞外陷阱(NET)連同白血球一起代表腫瘤微環境之另一要素。儘管NET之形成對於嗜中性球對抗侵襲性微生物係有用的,但該等NET可在癌症患者中促成深層靜脈血栓形成(DVT)(Martinnod及Wanger,Blood(2013))及腫瘤細胞轉移(Cools-Lartigue,J.等人,J.Clin.Invest.(2013))。因此,NET可不利地影響患者存活。DVT在癌症患者中較為常見且潛在地致死,且白血球增多症(其導致高WBC)係主要風險因素(Pabinger,I.等人,Blood 122:12(2013);Blix,K.等人,PLOS One 4:8(2013);Wang,T.F.等人,Thromb.Res.133(1):25(2014))。
本發明提供具有一或多種如下活性之化合物之組合之方法及用途:抑制細胞增殖,刺激細胞凋亡或劇變,或廢除細胞之細胞週期G2查核點;或治療(例如)特徵在於細胞增殖病症之不合意細胞增殖或存活。舉例而言,
本發明提供如下方法及用途:抑制細胞增殖;廢除細胞之細胞週期G2查核點;增加細胞對核酸損害劑或治療之敏感性;增加對細胞之核酸損害。
在一個實施例中,在哺乳動物中用於增加過度增殖細胞之核酸損害或用於預防或治療細胞增殖病症之方法或用途包括向哺乳動物投與T細胞活化劑及免疫查核點抑制劑。
在另一實施例中,用於增加過度增殖細胞之核酸損害或用於預防或治療哺乳動物(例如,人類)之細胞增殖病症之方法或用途,包括向哺乳動物投與T細胞活化劑及/或免疫查核點抑制劑及肽化合物,其中該肽化合物包含以下序列中之任一者:A)包含表示為P1-P6之殘基且具有結構P1、P2、P3、P4、P5、P6或P6、P5、P4、P3、P2、P1之肽;其中P1係Cha、Nal(2)、(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)、佔據類似側鏈空間之胺基酸,或在側鏈中具有一或兩個芳香族、六氫吡啶、吡嗪、嘧啶、六氫吡嗪、嗎啉或嘧啶基團或一個吲哚、并環戊二烯、茚、萘、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、吲哚啉、唍、喹喏啉、喹唑啉基團之任一胺基酸;其中P2係Cha、Nal(2)、(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)、Bpa、Phe4NO2、佔據類似側鏈空間之胺基酸,或在側鏈中具有一或兩個芳香族、六氫吡啶、吡嗪、嘧啶、六氫吡嗪、嗎啉或嘧啶基團或一個吲哚、并環戊二烯、茚、萘、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、吲哚啉、唍、喹喏啉或喹唑啉基團之任一胺基酸;其中P3、P4、P5係任一胺基酸,或其中P3、P4、P5中之一或多者係簡單碳鏈,使得P2與P6之間之距離與當P3、P4、P5中之每一者係胺基酸時之距離大約相同;其中P6係Bpa、Phe4NO2、任一種胺基酸及Tyr、任一種胺基酸及Phe、任一胺基酸或不存在;B)或A)之肽,其中具有簡單碳鏈之胺基酸係11-胺基十一酸、10-胺基癸酸、9-胺基壬酸、8-胺基辛酸、
7-胺基庚酸、6-胺基己酸或具有一或多個不飽和碳鍵之類似結構,及/或其中該任一種胺基酸係Ser,及/或其中P4係Trp,及/或其中佔據類似側鏈空間之該胺基酸係Tyr或Phe;或包含表示為P1-P12之殘基之肽,其具有任一以下結構:P1、P2、P3、P4、P5、P6;P6、P5、P4、P3、P2、P1;P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11、P12;P1、P2、P3、P4、P5、P6、P12、P11、P10、P9、P8、P7;P6、P5、P4、P3、P2、P1、P7、P8、P9、P10、P11、P12;P6、P5、P4、P3、P2、P1、P12、P11、P10、P9、P8、P7;P7、P8、P9、P10、P11、P12、P1、P2、P3、P4、P5、P6;P7、P8、P9、P10、P11、P12、P6、P5、P4、P3、P2、P1;P12、P11、P10、P9、P8、P7、P1、P2、P3、P4、P5、P6;P12、P11、P10、P9、P8、P7、P6、P5、P4、P3、P2、P1;P12、P11、P6、P9、P8、P7、P2、P1;P12、P11、P10、P6、P9、P4、P7、P2、P1;P1、P2、P7、P8、P9、P6、P11、P12;或P1、P2、P7、P4、P9、P6、P10、P11、P12;其中P1係Cha、Nal(2)、(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)、Bpa、Phe4NO2、佔據類似側鏈空間之胺基酸(例如d-Tyr或l-Tyr、d-Phe或l-Phe),或在側鏈中具有一或兩個芳香族、六氫吡啶、吡嗪、嘧啶、六氫吡嗪、嗎啉或嘧啶基團或一個吲哚、并環戊二烯、茚、萘、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、吲哚啉、唍、喹喏啉或喹唑啉基團之任一胺基酸;其中P2係Cha、Nal(2)、(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)或佔據類似側鏈空間之胺基酸,或在側鏈中具有一或兩個芳香族、六氫吡啶、吡嗪、嘧啶、六氫吡嗪、嗎啉或嘧啶基團或一個吲哚、并環戊二烯、茚、萘、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、吲哚啉、烷、喹喏啉、喹唑啉基團之任一胺基酸;其中P3、P4、
P5係任一胺基酸,或其中P3、P4、P5中之一或多者係簡單碳鏈,使得P2與P6之間之距離與當P3、P4、P5中之每一者係胺基酸時之距離大約相同;其中P6係Bpa、Phe4NO2、任一種胺基酸及Tyr、任一種胺基酸及Phe;且其中P7、P8、P9、P10、P11、P12中之至少三者係鹼性胺基酸,且其餘為任一胺基酸或不存在;或C)之肽,其中具有簡單碳鏈之胺基酸係11-胺基十一酸、10-胺基癸酸、9-胺基壬酸、8-胺基辛酸、7-胺基庚酸、6-胺基己酸或具有一或多個不飽和碳鍵之類似結構,及/或,其中該任一種胺基酸係Ser,及/或,其中P4係Trp,及/或,其中佔據類似側鏈空間之該胺基酸係Tyr或Phe;或包含表示為P1-P12之殘基之肽,其具有任一以下結構:P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11、P12;P12、P11、P10、P9、P8、P7、P6、P5、P4、P3、P2、P1;P12、P11、P10、P6、P9、P4、P7、P2、P1;或P1、P2、P7、P4、P9、P6、P10、P11、P12;其中P1係Cha、Nal(2)、(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)、Bpa、Phe4NO2、佔據類似側鏈空間之胺基酸,或在側鏈中具有一或兩個芳香族、六氫吡啶、吡嗪、嘧啶、六氫吡嗪、嗎啉或嘧啶基團或一個吲哚、并環戊二烯、茚、萘、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、吲哚啉、唍、喹喏啉或喹唑啉基團之任一胺基酸;其中P2係Cha、Nal(2)、(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)、佔據類似側鏈空間之胺基酸,或在側鏈中具有一或兩個芳香族、六氫吡啶、吡嗪、嘧啶、六氫吡嗪、嗎啉或嘧啶基團或一個吲哚、并環戊二烯、茚、萘、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、吲哚啉、唍、喹喏啉、喹唑啉基團之任一胺基酸;其中P3、P4、P5係任一胺基酸,或其中P3、P4、P5中之一或多者係簡單碳鏈,使得P2與P6之間之距離與當P3、P4、P5中之每一者係胺基酸時之距離大約相同;其中P6係Bpa、
Phe4NO2、任一種胺基酸及Tyr、任一種胺基酸及Phe、任一胺基酸或不存在;且其中P7、P8、P9、P10、P11、P12中之至少三者係鹼性胺基酸,且其餘為任一胺基酸或不存在;或E)之肽,其中具有簡單碳鏈之胺基酸係胺基十一酸或8-胺基辛酸,及/或,其中該任一種胺基酸係Ser,及/或,其中佔據類似側鏈空間之該胺基酸係Tyr或Phe;或包含表示為P1-P12之殘基之肽,其具有任一以下結構:P1、P2、P3、P4、P5、P6或P6、P5、P4、P3、P2、P1,其中P1係Cha、Nal(2)、(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)、Bpa、Phe4NO2、Tyr或Phe;其中P2係Cha、Nal(2)、(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)、Bpa、Phe4NO2、Tyr或Phe;其中P3係Ser、Arg、Cys、Pro或Asn;其中P4係Trp;其中P5係Ser、Arg或Asn;或其中P3、P4、P5係單一胺基十一酸或單一8-胺基辛酸;且其中P6係Bpa、Phe4NO2、(Ser-Tyr)或(Ser-Phe);或包含表示為P1-P12之殘基之肽,其具有任一以下結構:P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11、P12;P1、P2、P3、P4、P5、P6、P12、P11、P10、P9、P8、P7;P6、P5、P4、P3、P2、P1、P7、P8、P9、P10、P11、P12;P6、P5、P4、P3、P2、P1、P12、P11、P10、P9、P8、P7;P7、P8、P9、P10、P11、P12、P1、P2、P3、P4、P5、P6;P7、P8、P9、P10、P11、P12、P6、P5、P4、P3、P2、P1;P12、P11、P10、P9、P8、P7、P1、P2、P3、P4、P5、P6;P12、P11、P10、P9、P8、P7、P6、P5、P4、P3、P2、P1;P12、P11、P6、P9、P8、P7、P2、P1;P12、P11、P10、P6、P9、P4、P7、P2、P1;P1、P2、P7、P8、P9、P6、P11、P12;或P1、P2、P7、P4、P9、P6、P10、P11、P12;其中P1係Cha、Nal(2)、(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)、
Bpa、Phe4NO2、Tyr或Phe;其中P2係Cha、Nal(2)、(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)、Bpa、Phe4NO2、Tyr或Phe;其中P3係Ser、Arg、Cys、Pro或Asn;其中P4係Trp;其中P5係Ser、Arg或Asn;或其中P3、P4、P5係單一胺基十一酸或單一8-胺基辛酸;其中P6係Bpa、Phe4NO2、(d-Ser-d-Tyr)或(d-Ser-d-Phe);且其中P7、P8、P9、P10、P11、P12中之至少三者係Arg或Lys,且其餘為任一胺基酸或不存在;或包含表示為P1-P12之殘基之肽,其具有任一以下結構:P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11、P12;P12、P11、P10、P9、P8、P7、P6、P5、P4、P3、P2、P1;P12、P11、P10、P6、P9、P4、P7、P2、P1;或P1、P2、P7、P4、P9、P6、P10、P11、P12;其中P1係Cha或Nal(2);其中P2係(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3);其中P3係Ser;其中P4係Trp;其中P5係Ser或Asn;其中P6係Bpa、Phe4NO2、(Ser-Tyr)或(Ser-Phe);且其中P7、P8、P9、P10、P11、P12中之至少三者係Arg,且其餘為任一胺基酸或不存在;或包含表示為P1-P12之殘基之肽,其具有任一以下結構:P1、P2、P3、P4、P5、P6或P6、P5、P4、P3、P2、P1;其中P1係Cha或Nal(2);其中P2係(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)或(Phe-4CF3);其中P3係Ser;其中P4係Trp;其中P5係Ser;且其中P6係Bpa或(Ser-Tyr);或包含表示為P1-P12之殘基之肽,其具有任一以下結構:P1、P2、P3、P4、P5、P6;P6、P5、P4、P3、P2、P1;P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11、P12;P1、P2、P3、P4、P5、P6、P12、P11、P10、P9、P8、P7;P6、P5、P4、P3、P2、P1、P7、P8、P9、P10、P11、P12;P6、P5、P4、P3、P2、P1、P12、P11、P10、P9、
P8、P7;P7、P8、P9、P10、P11、P12、P1、P2、P3、P4、P5、P6;P7、P8、P9、P10、P11、P12、P6、P5、P4、P3、P2、P1;P12、P11、P10、P9、P8、P7、P1、P2、P3、P4、P5、P6;P12、P11、P10、P9、P8、P7、P6、P5、P4、P3、P2、P1;P12、P11、P6、P9、P8、P7、P2、P1;P12、P11、P10、P6、P9、P4、P7、P2、P1;P1、P2、P7、P8、P9、P6、P11、P12;或P1、P2、P7、P4、P9、P6、P10、P11、P12;其中P1係Cha或Nal(2);其中P2係(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)或(Phe-4CF3);其中P3係任一胺基酸;其中P4係d-Trp或l-Trp;其中P5係任一胺基酸;其中P6係Bpa或(Ser-Tyr);其中P7係Arg;其中P8係Arg;其中P9係Arg;其中P10係Gln或Arg;其中P11係Arg;且其中P12係d-Arg或l-Arg,或K)之肽,其中該任一胺基酸係Ser或Pro;或包含表示為P1-P12之殘基之肽,其具有任一以下結構:P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11、P12;P12、P11、P10、P9、P8、P7、P6、P5、P4、P3、P2、P1;P12、P11、P10、P6、P9、P4、P7、P2、P1;或P1、P2、P7、P4、P9、P6、P10、P11、P12;其中P1係Cha或Nal(2);其中P2係(Phe-2,3,4,5,6-F);其中P3係Ser;其中P4係Trp;其中P5係Ser;其中P6係Bpa或(Ser-Tyr);其中P7係Arg;其中P8係Arg;其中P9係Arg;其中P10係Gln或Arg;其中P11係Arg;且其中P12係Arg;或其前藥或其醫藥上可接受之鹽,藉此增加過度增殖細胞之核酸損害或預防或治療細胞增殖病症。
在特定實施例中,方法或用途採用包括任一以下序列之肽化合物:(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)
(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg);(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha);(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg);(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha);(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg);(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa);(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg);(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa);(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa);(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg);(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha);(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg);
(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha);(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg);(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Trp)(d-Arg)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha);(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Arg)(d-Trp)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg);(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Trp)(d-Arg)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha);(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Arg)(d-Trp)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg);(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha);或(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)。
在其他具體實施例中,方法或用途採用包括任一以下序列或由其組成之肽化合物:(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(SEQIDNO:1);(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)或(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)。
在再具體實施例中,方法或用途採用T細胞活化劑。T細胞活化劑之非限制性實例包括靶向CD28(細胞分化抗原28,亦稱為Tp44、T細胞特異性
表面醣蛋白、CD28抗原、CD28分子)、OX40(腫瘤壞死因子受體超家族成員4、TNFRSF4,亦稱為OX40L受體、OX40抗原、TXGP1L)、GITR(糖皮質激素誘導之腫瘤壞死因子受體)、CD137(亦稱為4-1BB)、CD27(亦稱為TNFRSF7、Tp55)及HVEM(皰疹病毒侵入介體,亦稱為CD270、TNFRSF14)之藥劑。
代表性T細胞活化劑包括結合至該等靶標之配體,例如,CD28、OX40、GITR、CD137、CD27及HVEM配體。代表性T細胞活化劑亦包括結合至該等靶標之抗體,例如,抗CD28、抗OX40、抗GITR、抗CD137、抗CD27及抗HVEM抗體。
在再其他具體實施例中,方法或用途採用免疫查核點抑制劑。免疫查核點抑制劑之非限制性實例包括靶向CTLA-4(細胞毒性T淋巴球相關性蛋白質4,亦稱為CD152)、PD1(程式性細胞死亡1,亦稱為CD279、SLEB2、HPD-1、HSLE1)、PDL1(程式化死亡-配體1,亦稱為CD274、B7-H1(B7同系物1)、程式性細胞死亡1配體1、PDCD1配體1)、PDL2(程式性細胞死亡1配體2)、VISTA(T細胞活化之V結構域Ig抑制劑,亦稱為B7-H5、Gi24、Dies1及SISP1)、TIM3(T細胞免疫球蛋白及黏蛋白結構域3)、LAG-3(淋巴球活化基因3,亦稱為CD223)或BTLA(B-淋巴球及T-淋巴球弱化子,亦稱為CD272)之藥劑。
代表性免疫查核點抑制劑包括結合至該等靶標之配體,例如,CTLA-4、PD1、PDL1、PDL2、VISTA、TIM3、LAG-3及BTLA配體。代表性免疫查核點抑制劑亦包括結合至該等靶標之抗體,例如,抗CTLA-4、抗PD1、抗PDL1、抗PDL2、抗VISTA、抗TIM3、抗LAG-3及抗BTLA抗體。
在其他具體實施例中,方法或用途係在以下哺乳動物上實踐:具有在正常範圍內之白血球計數之哺乳動物;具有小於約11,000個白血球/微升(wbc/μl)血液之白血球計數之哺乳動物;具有介於約4,000個至約11,000個白血球/微升(wbc/μl)血液之間之白血球計數之哺乳動物;具有小於約10,000個白血球/微升(wbc/μl)血液之白血球計數之哺乳動物;具有小於約9,000個白血球/微升(wbc/μl)血液之白血球計數之哺乳動物;具有介於約4,000個至約9,000個白血球/微升(wbc/μl)血液之間之白血球計數之哺乳動物;具有小於約8,000個白血球/微升(wbc/μl)血液之白血球計數之哺乳動物;具有小於約7,000個白血球/微升(wbc/μl)血液之白血球計數之哺乳動物;或具有小於每一臨床實驗室白血球/微升(wbc/μl)血液之正常值上限之白血球計數之哺乳動物。
方法及用途在醫藥調配物中包括肽化合物。方法及用途亦在醫藥調配物中包括T細胞活化劑及/或免疫查核點抑制劑。本發明方法及用途亦包括藉由任一途徑投與。在特定實施例中,肽化合物係以局部、區域性或全身方式投與。
方法及用途包括肽化合物之醫藥上可接受之鹽。在具體態樣中,醫藥上可接受之鹽係以下各項中之任一者或其組合:乙酸鹽、磺酸鹽、硫酸鹽、焦硫酸鹽、硫酸氫鹽、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、磷酸鹽、磷酸氫鹽、磷酸二氫鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、丙酸鹽、癸酸鹽、辛酸鹽、丙烯酸鹽、甲酸鹽、異丁酸鹽、己酸鹽、庚酸鹽、丙炔酸鹽、草酸鹽、丙二酸鹽、琥珀酸鹽、辛二酸鹽、癸二酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、丁炔-1,4-二酸鹽、己炔-1,6-二酸鹽、苯甲酸鹽、氯苯甲酸鹽、苯甲酸甲酯、二硝基苯甲酸鹽、羥基苯甲酸鹽、甲氧基苯甲酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、
二甲苯磺酸鹽、苯基乙酸鹽、苯基丙酸鹽、苯基丁酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、γ-羥基丁酸鹽、羥乙酸鹽、酒石酸鹽、甲烷-磺酸鹽、丙烷磺酸鹽、萘-1-磺酸鹽、萘-2-磺酸鹽及杏仁酸鹽。
方法及用途包括肽化合物包括6至10個、10至15個、15至20個、20至25個、25至30個、30至40個、40至50個、50至75個、75至100個、100至150個、150至200個或200至300個胺基酸殘基長度或由其組成。
方法及用途包括肽化合物包括與其附接或偶聯之細胞穿透分子或由其組成。在具體非限制性態樣中,細胞穿透分子係藉由共價鍵或肽或非肽連接體接合至肽化合物。在其他具體非限制性態樣中,細胞穿透肽包含極性/帶電胺基酸及非極性、疏水胺基酸之替代型式。在再其他具體非限制性態樣中,細胞穿透肽包含多陽離子或兩親性α-螺旋結構。在再其他具體非限制性態樣中,細胞穿透肽包含聚-精胺酸(Arg)序列(例如,肽包括(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)或由其組成)。
在再其他具體態樣中,肽化合物及/或細胞穿透肽及/或T細胞活化劑及/或免疫查核點抑制劑包括L-異構物或D-異構物胺基酸或L-異構物及D-異構物胺基酸之混合物或由其組成。
在其他具體實施例中,方法或用途包括投與T細胞活化劑及肽化合物。在其他具體實施例中,方法或用途包括投與免疫查核點抑制劑及肽化合物。在其他具體實施例中,方法或用途包括投與T細胞活化劑及免疫查核點抑制劑及肽化合物。
在其他具體實施例中,方法或用途包括投與核酸損害劑、核酸損害治療、抗增殖劑或抗增殖治療。非限制性核酸損害劑、核酸損害治療、抗增殖劑或抗增殖治療包括手術切除、放射療法、離子化或化學放射療法、化
學療法、免疫療法、局部或區域性熱(發熱)療法、疫苗接種、烷基化劑、抗代謝物、植物提取物、植物鹼、亞硝基脲、激素或核苷或核苷酸類似物或由其組成。
在再其他具體實施例中,方法或用途進一步包括在投與T細胞活化劑之前、與此同時或在此之後投與肽化合物或由其組成。在再其他具體實施例中,方法或用途進一步包括在投與免疫查核點抑制劑之前、與此同時或在此之後投與肽化合物或由其組成。在再其他具體實施例中,方法或用途進一步包括與T細胞活化劑組合投與肽化合物或由其組成。在再其他具體實施例中,方法或用途進一步包括與免疫查核點抑制劑組合投與肽化合物或由其組成。在再其他具體實施例中,方法或用途進一步包括與T細胞活化劑及免疫查核點抑制劑組合投與肽化合物或由其組成。
在具體態樣中,肽化合物係在投與T細胞活化劑及/或免疫查核點抑制劑之前或之後小於48小時投與;肽化合物係在投與T細胞活化劑及/或免疫查核點抑制劑之前或之後不到24小時投與;肽化合物係在投與T細胞活化劑及/或免疫查核點抑制劑之前或之後不到12小時投與;肽化合物係在投與T細胞活化劑及/或免疫查核點抑制劑之前或之後不到6小時投與;肽化合物係在投與T細胞活化劑及/或免疫查核點抑制劑之前或之後不到4小時投與,肽化合物係在投與T細胞活化劑及/或免疫查核點抑制劑之前或之後不到2小時投與;肽化合物係在投與T細胞活化劑及/或免疫查核點抑制劑之前或之後不到1小時投與。
在再其他具體實施例中,方法或用途進一步包括在投與核酸損害劑、核酸損害治療、抗增殖劑或抗增殖治療之前、與此同時或在此之後投與肽化合物、T細胞活化劑及/或免疫查核點抑制劑或由其組成。在具體態樣中,
肽化合物、T細胞活化劑及/或免疫查核點抑制劑係在投與核酸損害劑、核酸損害治療、抗增殖劑或抗增殖治療之前或之後不到48小時投與;肽化合物、T細胞活化劑及/或免疫查核點抑制劑係在投與核酸損害劑、核酸損害治療、抗增殖劑或抗增殖治療之前或之後不到24小時投與;肽化合物、T細胞活化劑及/或免疫查核點抑制劑係在投與核酸損害劑、核酸損害治療、抗增殖劑或抗增殖治療之前或之後不到12小時投與;肽化合物、T細胞活化劑及/或免疫查核點抑制劑係在投與核酸損害劑、核酸損害治療、抗增殖劑或抗增殖治療之前或之後不到6小時投與;肽化合物、T細胞活化劑及/或免疫查核點抑制劑係在投與核酸損害劑、核酸損害治療、抗增殖劑或抗增殖治療之前或之後不到4小時投與;肽化合物、T細胞活化劑及/或免疫查核點抑制劑係在投與核酸損害劑、核酸損害治療、抗增殖劑或抗增殖治療之前或之後不到2小時投與;肽化合物、T細胞活化劑及/或免疫查核點抑制劑係在投與核酸損害劑、核酸損害治療、抗增殖劑或抗增殖治療之前或之後不到1小時投與。
核酸損害劑或抗增殖劑之非限制性實例包括藥物。核酸損害劑或抗增殖劑之非限制性實例包括含鉑藥物,例如順鉑(cis-platin)、卡鉑(carboplatin)、奈達鉑(nedaplatin)、米他鉑(mitaplatin)、沙鉑(satraplatin)、匹鉑(picoplatin)、三鉑(triplatin)、米利鉑(miriplatin)或奧沙利鉑(oxaliplatin)。
更具體而言,方法及用途包括投與以下各項或由其組成:含鉑藥物順鉑、卡鉑、奧沙利鉑、培美曲塞(pemetrexed)、吉西他濱(gemcitabine)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、蝴蝶黴素(rebeccamycin)、阿德力黴素(adriamycin,ADR)、博來黴素(bleomycin,Bleo)、派來黴素(pepleomycin)、順鉑、順
鉑或順式-二氯二胺鉑(II)(CDDP)、奧沙利鉑或喜樹鹼(camptothecin,CPT)、環磷醯胺、硫唑嘌呤、環孢素A(cyclosporin A)、普賴蘇濃(prednisolone)、美法侖(melphalan)、氮芥苯丁酸(chlorambucil)、甲基二(氯乙基)胺、白消安(busulphan)、胺甲喋呤(methotrexate)、6-巰嘌呤、硫鳥嘌呤、5-氟尿嘧啶、胞嘧啶阿拉伯糖苷(cytosine arabinoside)、AZT、5-氮胞苷(5-AZC)或5-氮胞苷相關化合物、放線菌素D(actinomycin D)、光輝黴素(mithramycin)、絲裂黴素C(mitomycin C)、卡莫司汀(carmustine)、洛莫司汀(lomustine)、司莫司汀(semustine)、鏈佐黴素(streptozotocin)、羥基脲、順鉑、米托坦(mitotane)、丙卡巴肼(procarbazine)、達卡巴嗪(dacarbazine)、紫杉烷(taxane)、長春鹼(vinblastine)、長春新鹼(vincristine)、多柔比星(doxorubicin)、二溴甘露醇、輻射或放射性同位素。輻射之具體非限制性實例包括UV輻射、IR輻射、X射線或α輻射、β輻射或γ-輻射。放射性同位素之具體非限制性實例包括I131、I125、Sr89、Sm153、Y90或Lu177。
本發明方法及用途可應用於細胞增殖或過度增殖病症或不合意之細胞增殖。在具體實施例中,細胞增殖病症包含腫瘤或癌症。在更具體實施例中,細胞增殖病症包含轉移性腫瘤或癌症。
腫瘤或癌症之具體非限制性實例包括肺腫瘤或癌症,例如小細胞或非小細胞肺癌或腺癌、鱗狀細胞癌或大細胞癌。腫瘤或癌症之其他具體非限制性實例包括癌、肉瘤、淋巴瘤、白血病、腺瘤、腺癌、黑色素瘤、神經膠質瘤、神經膠母細胞瘤、腦脊髓膜瘤、神經胚細胞瘤、視網膜母細胞瘤、星細胞瘤、少突膠質細胞瘤、間皮瘤、網狀內皮、淋巴或造血性贅瘤形成、腫瘤、癌症或惡性病。腫瘤或癌症之其他具體非限制性實例係肺、甲狀腺、
頭或頸、鼻咽、喉、鼻或鼻竇、腦、脊柱、乳房、腎上腺、垂體、甲狀腺、淋巴、胃腸(口腔、食管、胃、十二指腸、迴腸、空腸(小腸)、結腸、直腸)、生殖泌尿道(子宮、卵巢、子宮頸、子宮內膜、膀胱、睪丸、陰莖、前列腺)、腎、胰臟、肝、骨、骨髓、淋巴、血液、肌肉或皮膚之贅瘤形成、腫瘤或癌症。腫瘤或癌症之再其他具體非限制性實例包括乳癌、前列腺癌、胰臟癌、胃癌、胸膜間皮瘤、結腸癌、直腸癌、大腸癌、小腸癌、食管癌、十二指腸癌、舌癌、咽癌、唾液腺癌、腦瘤、神經鞘瘤、肝癌、腎癌、膽管癌、子宮內膜癌、子宮頸癌、子宮體癌、卵巢癌、膀胱癌、尿道癌、皮膚癌、血管瘤、惡性淋巴瘤、惡性黑色素瘤、甲狀腺癌、副甲狀腺癌、鼻癌、鼻竇癌、聽覺器官癌、口底癌、喉癌、腮腺癌、頜下癌、骨腫瘤、血管纖維瘤、視網膜肉瘤、陰莖癌、睪丸腫瘤、小兒實體癌、卡波西氏肉瘤、上頜竇腫瘤、纖維性組織細胞瘤、平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤、淋巴瘤、多發性骨髓瘤或白血病。
肉瘤之具體非限制性實例包括淋巴肉瘤、脂肪肉瘤、骨肉瘤、軟骨肉瘤、平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤或纖維肉瘤。造血性腫瘤、癌症或惡性病之具體非限制性實例包括骨髓瘤、淋巴瘤或白血病。
本發明方法及用途包括投與有效治療腫瘤或癌症之量之肽化合物。在具體態樣中,方法或用途抑制或減少腫瘤或癌症之復發、生長、進展、惡化或轉移;使得贅瘤、腫瘤、癌症或惡性細胞團塊、細胞之體積、大小或數量部分地或完全地破壞,刺激、誘導或增加贅瘤、腫瘤、癌症或惡性細胞壞死、細胞溶解或細胞凋亡,減少贅瘤形成、腫瘤、癌症或惡性病體積大小、細胞團塊,抑制或預防贅瘤形成、腫瘤、癌症或惡性病體積、團塊、大小或細胞數量進展或增加或延長壽命;使得減少或降低與贅瘤形成、腫
瘤、癌症或惡性病相關或由其造成之不利症狀或併發症之嚴重性、持續時間或頻率;或方法使得減少或降低疼痛、不適、噁心、虛弱或嗜睡,或使得精力、食欲增加,活動力或心理幸福感改良。
在其他具體態樣中,方法或用途在贅瘤形成、腫瘤、癌症或惡性病中刺激、誘導或增加CD8(=CD45+CD8+)T細胞群體。在贅瘤形成、腫瘤、癌症或惡性病中經刺激、經誘導或有所增加之T細胞群體可為CD8(=CD45+CD8+)T細胞之存活及/或浸潤提高之結果。
在其他具體態樣中,方法或用途在贅瘤形成、腫瘤、癌症或惡性病中減少或降低M2巨噬細胞(=F4/80+CD206+)群體。在贅瘤形成、腫瘤、癌症或惡性病中減少或降低之M2巨噬細胞(=F4/80+CD206+)群體可為M2巨噬細胞(=F4/80+CD206+)之存活及/或浸潤減少之結果。
此外,提供套組,其包括肽化合物、T細胞活化劑及/或免疫查核點抑制劑視情況以及核酸損害治療(例如,核酸損害劑)或抗增殖劑。在一個實施例中,套組包括肽化合物及用於實踐本發明方法之說明書。在另一實施例中,套組包括肽化合物、T細胞活化劑及/或免疫查核點抑制劑及用於實踐本發明方法之說明書。在另一實施例中,套組包括肽化合物、免疫查核點抑制劑及/或T細胞活化劑及用於實踐本發明方法之說明書。在另一實施例中,套組包括肽化合物、T細胞活化劑及/或免疫查核點抑制劑及用於實踐本發明方法之說明書。在再其他實施例中,套組包括肽化合物、T細胞活化劑及免疫查核點抑制劑及用於實踐本發明方法之說明書。
圖1顯示在用於對抗博來黴素處理之Jurkat細胞時每一化合物之劑量反應曲線。X軸指示劑量且Y軸指示治療後之G2/M細胞%。
圖2顯示在用於對抗秋水仙鹼處理之Jurkat細胞時每一化合物之劑量反應曲線。X軸指示劑量且Y軸指示治療後之G2/M細胞%。
圖3A及3B經(A)博來黴素(Bleo)或(B)阿德力黴素(ADR)以及各種劑量之化合物處理之人類胰臟癌源性細胞系MIAPaCa2。對所收穫細胞之DNA進行染色並利用流式細胞術加以分析。sub-G1細胞群體之%指示為死細胞。
圖4A至4C係G2查核點廢除劑(l-Gly)(l-Arg)(l-Lys)(l-Lys)(l-Arg)(l-Arg)(l-Gln)(l-Arg)(l-Arg)(l-Cha)(l-Phe-2,3,4,5,6-F)(l-Arg)(l-Ser)(l-Pro)(l-Ser)(l-Tyr)(l-Tyr)(SEQ ID NO:78)之結構活性關係之示意圖:(A)在博來黴素處理之Jurkat細胞中針對l-Cha之胺基酸取代之G2查核點廢除活性按以下順序指示:[l-Cha=l-Nal(2)]>[l-Ala(3-Bzt)=l-Nal(1)=l-Trp=l-Dph]>[l-Ala(tBu)=Cys(tBu)=Leu];(B)在秋水仙鹼處理之Jurkat細胞中針對l-Cha之胺基酸取代之M期查核點廢除活性及/或非特異性毒性之順序:[Ala(3-Bzt)=l-Nal(1)=l-Dph]>[l-Cha=l-Nal(2)];(C)針對l-Phe-2,3,4,5,6-F之胺基酸取代之G2查核點廢除活性按以下順序指示:l-(Phe-2,3,4,5,6-F)=l-(Phe-3,4,5-F)=l-(Phe-4CF3)]>[l-(Phe-3Br,4Cl,5Br)=l-(Phe-4Cl)=l-Tyr]。
圖5顯示各個富精胺酸序列之G2廢除活性。將所指示肽與或不與博來黴素一起添加至Jurkat細胞中。G2/M細胞%係在Y軸上指示。X軸係如下:1,單獨博來黴素;2,0.2μg/ml;3,0.39μg/ml;4,0.78μg/ml;5,1.56μg/ml;6,3.125μg/ml;7,6.25μg/ml;8,12.5μg/ml;9,25μg/ml;及10,50μg/ml。肽序列係如下:rrrqrrkkr,
(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Lys)(d-Lys)(d-Arg)(SEQ ID NO:79);CBP501,(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(SEQ ID NO:80);no TAT,(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(SEQ ID NO:81);rqrr,(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(SEQ ID NO:82);rrqrr,(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(SEQ ID NO:83);rrrq,(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(SEQ ID NO:84);及rrrqr,(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(SEQ ID NO:85)。
圖6顯示各種無(d-Bpa)之肽之G2廢除活性。將所指示肽與或不與博來黴素一起添加至Jurkat細胞中。G2/M細胞%係在Y軸上指示。X軸係如下:1,單獨博來黴素;2,0.2μg/ml;3,0.39μg/ml;4,0.78μg/ml;5,1.56μg/ml;6,3.125μg/ml;7,6.25μg/ml;8,12.5μg/ml;9,25μg/ml;及10,50μg/ml。肽序列係如下:CBP0,(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(SEQ ID NO:86);CBP451,(d-Tyr)(d-Ser)(d-Pro)(l-Trp)(l-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(SEQ ID NO:87);CBP452,(d-Tyr)(d-Ser)(l-Pro)(l-Trp)(l-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(SEQ ID NO:88);
及CBP501,(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(SEQ ID NO:80)。
圖7顯示各個富精胺酸及富離胺酸之肽序列之G2廢除活性。將所指示肽添加至上述Jurkat細胞中並計算G2/M細胞%(Y軸)。肽序列係如下:CBP603,(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe4NO2)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(SEQ ID NO:89);CBP607,(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(SEQ ID NO:90);CBP608,(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(SEQ ID NO91:);及CBP609,(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Lys)(d-Lys)(d-Lys)(d-Lys)(d-Lys)(d-Lys)(SEQ ID NO:92)。
圖8顯示序列之富精胺酸部分之位置可改變。將所指示肽添加至上述Jurkat細胞中且計算G2/M細胞%(Y軸)。肽序列係如下:CBP501,(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(SEQ ID NO:80);CBP510,(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa)(SEQ ID NO:93);CBP511,(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(SEQ ID NO:94);及CBP512,(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)
(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa)(SEQ ID NO:95)。
圖9顯示若干經研究經取代肽序列之結構。G2廢除活性在陰影較淺之取代下增加(*),M期查核點廢除活性及/或非特異性毒性在陰影較深之取代下增加(**)且與其餘取代保持大約相同。
圖10顯示在Scid小鼠中利用CBP501及順鉑治療之後對腫瘤生長(人類胰臟癌)之抑制。第0天指示治療開始。對於每一治療組具有標準偏差之平均腫瘤大小在Y軸上指示且治療開始後之天數在X軸上指示。
圖11顯示上述具有激酶抑制序列區及基於HIV-TAT轉導序列之序列區之肽之G2廢除活性。G2/M細胞%係在Y軸上指示。X軸係如下:1,單獨博來黴素;2,0.2μg/ml;3,0.39μg/ml;4,0.78μg/ml;5,1.56μg/ml;6,3.125μg/ml;7,6.25μg/ml;8,12.5μg/ml;9,25μg/ml;及10,50μg/ml。肽序列係如下:CBP501,(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(SEQ ID NO:80);CBP700,(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(SEQ ID NO:96);CBP701,(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Trp)(d-Arg)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(SEQ ID NO:97);CBP702,(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Trp)(d-Arg)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(SEQ ID NO:98);CBP703,(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(SEQ ID NO:99)。
圖12顯示在肽之G2廢除活性與M廢除活性及/或非特異性毒性之間之
比較,其中博來黴素用於G2廢除分析且秋水仙鹼用於M廢除活性及/或非特異性毒性。將所指示肽與博來黴素或秋水仙鹼一起添加至Jurkat細胞中。G2/M細胞%係在Y軸上指示。X軸係如下:1,單獨博來黴素或秋水仙鹼;2,0.2μg/ml;3,0.39μg/ml;4,0.78μg/ml;5,1.56μg/ml;6,3.125μg/ml;7,6.25μg/ml;8,12.5μg/ml;9,25μg/ml;及10,50μg/ml。肽序列係如下:CBP501,(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)。
圖13顯示CBP501((d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg))之分子結構。
圖14顯示在所有經治療患者中關於基線WBC之整體存活之卡普蘭-邁耶分析(Kaplan-Meyer analysis):在所有經治療患者中關於基線WBC之卡普蘭-邁耶存活曲線、中值OS及危險比。危險比隨截止含量降低而改良,且在WBC 8000/μl下之峰值作為截止含量。
圖15顯示在ICON招募之患者中關於基線WBC之整體存活之卡普蘭-邁耶分析:在ICON招募患者中關於基線WBC之卡普蘭-邁耶存活曲線、中值OS及危險比。危險比隨截止含量降低而改良,且WBC 8000/μl下之峰值作為截止含量,且在A組與B組之間之差異在峰值下係統計顯著的。
圖16顯示在各組顯示之所有經治療群體中篩選時,關於WBC(>8000或<8000)之卡普蘭-邁耶存活曲線、中值OS、患者數量、危險比及對數秩(Mantel-Cox)測試之p值。
圖17顯示藉由利用CBP501治療活化嗜中性球而增加之NET形成。
圖18顯示在活體內藉由CBP501而增加之凝血酶/抗凝血酶複合物。
圖19A-19B顯示在活體外CBP501抑制之M1及M2巨噬細胞之吞噬作用。
圖20顯示來自小鼠巨噬細胞系(RAW264.7)之TNF釋放之抑制。
圖21A-21C顯示CBP501可增強CT26 WT細胞中CDDP對細胞週期期分佈之效應。利用多個劑量之CDDP(X軸,ug/ml)與多個劑量之CBP501(0.0625μM、0.125μM、0.25μM、0.5μM及1μM)之組合將CT26WT細胞(鼠類結腸直腸細胞系)處理3小時,隨後用PBS洗滌並更換培養基。兩天後,藉由BD FACSCalibur藉由碘化丙啶染色來分析細胞週期期分佈(Y軸)及細胞死亡。
圖22A及22B顯示CBP501可增強CDDP誘導之eIF2-α磷酸化。利用10-20μM CDDP與0.5μM CBP501之組合將CT26WT細胞處理45min,隨後用PBS洗滌並添加新鮮培養基。一天後,收集細胞並藉由免疫印漬使用抗磷酸化eIF2-α之特定抗體進行分析(n=8)(圖2A)並對相對磷酸化eIF2-α之量進行定量(圖2B)。藉由司徒登氏t測試(student’s t-test)比較試樣。與未經處理之細胞相比較,*P<0.05,**P<0.01,且與單獨的相應CDDP相比較,†P<0.05,††P<0.01。
圖23顯示CBP501可增加CDDP誘導之細胞表面鈣網蛋白暴露。利用10-20μM CDDP與0.5μM CBP501之組合將CT26WT細胞處理45min,隨後用PBS洗滌並添加新鮮培養基。2天後,收集細胞並藉由FACS利用特定鈣網蛋白抗體及碘化丙啶進行分析(n=3)。藉由司徒登氏t測試比較試樣。與未經處理之細胞相比較,*P<0.05,**P<0.01,且與單獨的相應CDDP相比較,†P<0.05,††P<0.01。
圖24顯示CBP501可加強CDDP誘導之HMGB1分泌。利用20μM
CDDP與0.5μM CBP501之組合將CT26WT細胞處理45min,隨後用PBS洗滌並添加新鮮培養基。在處理後24小時、48小時及72小時收集分泌至培養基中之HMGB1(n=3)。藉由HMGB1 ELISA套組II執行經分泌HMGB1之定量。藉由司徒登氏t測試比較試樣。與未經處理之對照細胞相比較,*P<0.05,**P<0.01,且與單獨的相應CDDP相比較,†P<0.05,††P<0.01。
圖25顯示CBP501可增強CDDP之抗腫瘤活性,且CDDP加CBP501可加強抗PD-1抗體之抗腫瘤活性。利用CBP501、CDDP及抗PD1抗體治療CT26WT s.c.同基因小鼠腫瘤模型。繪製腫瘤相對大小對開始治療後之天數之圖形。在第1天腫瘤之中值大小為0.1cm3(n=6)。箭頭表示治療天數(藍色箭頭/對於7.5mg/kg CBP501第1天、第2天、第8天、第9天、第15天及第16天,紅色箭頭/對於5mg/kg CDDP第2天、第9天及第16天及粉色箭頭/對於200ug抗PD1第3天、第10天及第17天)。在第23天在第2組中觀察到1隻小鼠死亡,在第26天在第5組中觀察到1隻小鼠死亡,且在第28天在第5組中觀察到1隻小鼠死亡。
圖26顯示在異體同質異種移植物模型小鼠中腫瘤生長受到CBP501、順鉑及抗PD1抗體中之每一者及CBP501、順鉑及抗PD1抗體之組合之抑制。
圖27顯示異種移植物研究中之體重變化及個別腫瘤之生長。
圖28顯示在異體同質異種移植物小鼠模型中腫瘤生長受到CBP501、順鉑及抗PDL1抗體中之每一者及其組合之抑制。
圖29顯示異種移植物研究中之體重變化及個別腫瘤之生長。
圖30顯示在異體同質異種移植物小鼠模型中腫瘤生長受到CBP501、卡鉑及抗PD1抗體中之每一者及其組合之抑制。
圖31顯示異種移植物研究中之體重變化及個別腫瘤之生長。
圖32顯示對腫瘤浸潤性淋巴球(TIL)之分析。
此申請案主張在2015年10月23日提出申請之美國臨時專利申請案第62/245,899號及在2016年6月3日提出申請之美國臨時專利申請案第62/345,416號之優先權。上述申請案之全部內容(包括所有文本、表格及附圖)係以引用方式併入本文中。
本發明提供化合物之組合,及單獨化合物及化合物之各種組合之方法及用途。一種該組合、方法或用途包括如本文所闡述之T細胞活化劑及肽或擬肽。另一該組合、方法或用途包括如本文所闡述之免疫查核點抑制劑及肽或擬肽。又一該組合、方法或用途包括如本文所闡述之T細胞活化劑及免疫查核點抑制劑。再一該組合、方法或用途包括如本文所闡述之T細胞活化劑及免疫查核點抑制劑及肽或擬肽。因此,本發明化合物之組合、及化合物單獨及於各種組合中之方法及用途可用於治療特徵在於不合意或不期望細胞增殖(例如良性及惡性腫瘤細胞)之細胞增殖病症或生理病況。
組合包括抑制細胞增殖之肽及擬肽。肽及擬肽抑制細胞增殖之能力似乎至少部分地由廢除細胞週期G2查核點引起。由於細胞可藉由抑制G2查核點因應核酸損害而被誘導進入細胞週期G2查核點以容許細胞在發生DNA複製及細胞分裂前修復損害,故本發明肽及擬肽可使細胞對核酸損害劑及治療方案敏感。累積足夠核酸損害之細胞將由於G2查核點中斷而無法完全修復受損核酸。該等細胞將展現降低之增殖(例如,由未修復之對於存活關鍵之基因之突變引起)且最後經歷細胞凋亡。
具有正常G1之細胞較不易於累積受損核酸,乃因核酸修復亦可在G1期間進行。因此,正常細胞對本發明化合物之影響較不敏感。然而,具有受損或經中斷細胞週期G1查核點之細胞較可能累積受損核酸,乃因G1查核點受損或中斷使得該等細胞較不可能完全修復受損核酸。因此,利用中斷G2查核點之本發明肽或擬肽處理G1受損或中斷之細胞使得該等細胞甚至更不可能完全修復受損核酸。因此,G1受損或中斷之細胞對該等本發明肽及擬肽特別敏感。因此,本發明化合物(包括肽及擬肽)一般可用於抑制或預防細胞增殖且具體而言抑制具有受損或中斷之G1查核點之細胞之增殖。
具有受損或中斷之G1細胞週期查核點之細胞包括(但不限於)快速增殖之細胞。特徵在於細胞生長較快、細胞生長不合意或細胞存活而非經歷細胞凋亡之細胞增殖病症及生理病況通常具有受損或中斷之G1細胞週期查核點。因此,在本發明肽及擬肽抑制增殖或刺激細胞凋亡之能力似乎至少部分地由中斷G2細胞週期查核點引起時,因G1查核點受損或中斷而快速或不合意增殖之細胞係特別有吸引力的靶標。
CBP501係細胞週期G2查核點抑制性肽TAT-S216A(Suganuma,M.等人Cancer Res.59:5887(1999))。採用基於細胞週期表型之篩選方法來最佳化TAT-S216A以因應DNA損害劑而在細胞週期G2期減少癌細胞之累積,而不影響正常細胞之細胞週期表型(Sha,S.等人Mol.Cancer Ther.6:147(2007))。發現CBP501可使CBP501敏感性腫瘤細胞中鉑濃度及鉑-DNA加成物形成增加,且或者或除G2查核點抑制/中斷以外可經由攜製鈣蛋白抑制起作用(Mine,N.等人Mol.Cancer Ther.10:1929(2011))。
本發明化合物(包括肽及擬肽)本身可在不利用損害核酸或具有抗增殖活性之其他治療下抑制細胞增殖,乃因在細胞分裂時中斷G2查核點將可能
引起核酸損害累積。因此,可利用單獨的本發明化合物或與核酸損害治療(例如,化學藥劑或治療方案)之組合處理異常或不合意增殖或存活之細胞,以抑制或預防細胞增殖或刺激細胞凋亡/劇變。
與無論細胞係正常的抑或異常的(例如,癌細胞)均快速靶向增殖細胞之習用抗細胞增殖劑不同,本發明化合物優先靶向具有受損或中斷之細胞週期G1查核點之細胞。舉例而言,CBP501不影響HUVEC細胞之生長(例如,參見表3)。CBP501亦不影響由秋水仙鹼誘導之M期細胞週期停滯及/或非特異性毒性(例如,參見圖12)。因此,本發明化合物較不可能產生過量與習用抗細胞增殖治療劑相關之不合意副作用,例如骨髓抑制、噁心、食欲缺乏、腹瀉及掉發。另外,由於絕大多數癌細胞具有受損或中斷之細胞週期G1查核點,故癌細胞對廢除細胞週期G2查核點之本發明化合物之敏感性將增加。那麼正常細胞較不受影響亦意味著包括肽及擬肽之本發明化合物可以較大量使用。
根據本發明,提供具有抗細胞增殖活性及/或廢除G2細胞週期查核點之化合物(包括肽及擬肽)。肽或擬肽包括抑制細胞之增殖或刺激細胞之細胞凋亡之序列。肽或擬肽亦包括廢除細胞週期G2查核點之序列。在一個實施例中,鄰接肽或擬肽序列包括以下結構:P1、P2、P3、P4、P5、P6(SEQ ID NO:1)或P6、P5、P4、P3、P2、P1(SEQ ID NO:2);其中P1係d-Cha或l-Cha、d-Nal(2)或l-Nal(2)、d-(Phe-2,3,4,5,6-F)或l-(Phe-2,3,4,5,6-F)、d-(Phe-3,4,5F)或l-(Phe-3,4,5F)、d-(Phe-4CF3)或l-(Phe-4CF3)、佔據類似側鏈空間之胺基酸(例如,d-Tyr或l-Tyr、d-Phe或l-Phe),或在側鏈中具有一或兩個芳香族、六氫吡啶、吡嗪、嘧啶、六氫吡嗪、嗎啉或嘧啶基團或一個吲哚、并環戊二烯、茚、萘基團、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、吲哚
啉、唍、喹喏啉、喹唑啉基團之任一胺基酸;P2係d-Cha或l-Cha、d-Nal(2)或l-Nal(2)、d-(Phe-2,3,4,5,6-F)或l-(Phe-2,3,4,5,6-F)、d-(Phe-3,4,5F)或l-(Phe-3,4,5F)、d-(Phe-4CF3)或l-(Phe-4CF3)、d-Bpa或l-Bpa、d-Phe或l-Phe4NO2、佔據類似側鏈空間之胺基酸(例如d-Tyr或l-Tyr、d-Phe或l-Phe),或在側鏈中具有一或兩個芳香族、六氫吡啶、吡嗪、嘧啶、六氫吡嗪、嗎啉或嘧啶基團或一個吲哚、并環戊二烯、茚、萘、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、吲哚啉、烷、喹喏啉或喹唑啉基團之任一胺基酸;P3、P4、P5係任一胺基酸或P3、P4、P5中之一或多者係簡單碳鏈,使得P2與P6之間之距離與當P3、P4、P5中之每一者係胺基酸時之距離大約相同(d-Trp或l-Trp係P4處之實例;P6係d-Bpa或l-Bpa、d-Phe或l-Phe4NO2、任一胺基酸及d-Tyr或l-Tyr(例如,d-Ser-d-Tyr)、任一胺基酸及d-Phe或l-Phe(例如,d-Ser-d-Phe)、任一胺基酸,或不存在。在各個態樣中,具有簡單碳鏈之胺基酸係d-11-胺基十一酸或l-11-胺基十一酸、d-10-胺基癸酸或l-10-胺基癸酸、d-9-胺基壬酸或l-9-胺基壬酸、d-8-胺基辛酸或l-8-胺基辛酸、d-7-胺基庚酸或l-7-胺基庚酸、d-6-胺基己酸或l-6-胺基己酸或具有一或多個不飽和碳鍵之類似結構。
在另一實施例中,鄰接肽或擬肽序列包括以下結構:P1、P2、P3、P4、P5、P6(SEQ ID NO:3);P6、P5、P4、P3、P2、P1(SEQ ID NO:4);P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11、P12(SEQ ID NO:5);P1、P2、P3、P4、P5、P6、P12、P11、P10、P9、P8、P7(SEQ ID NO:6);P6、P5、P4、P3、P2、P1、P7、P8、P9、P10、P11、P12(SEQ ID NO:7);P6、P5、P4、P3、P2、P1、P12、P11、P10、P9、P8、P7(SEQ ID NO:8);P7、P8、P9、P10、P11、P12、P1、P2、P3、P4、P5、P6(SEQ ID NO:9);
P7、P8、P9、P10、P11、P12、P6、P5、P4、P3、P2、P1(SEQ ID NO:10);P12、P11、P10、P9、P8、P7、P1、P2、P3、P4、P5、P6(SEQ ID NO:11);P12、P11、P10、P9、P8、P7、P6、P5、P4、P3、P2、P1(SEQ ID NO:12);P12、P11、P6、P9、P8、P7、P2、P1(SEQ ID NO:13);P12、P11、P10、P6、P9、P4、P7、P2、P1(SEQ ID NO:14);P1、P2、P7、P8、P9、P6、P11、P12(SEQ ID NO:15);或P1、P2、P7、P4、P9、P6、P10、P11、P12(SEQ ID NO:16);其中P1係d-Cha或l-Cha、d-Nal(2)或l-Nal(2)、d-(Phe-2,3,4,5,6-F)或l-(Phe-2,3,4,5,6-F)、d-(Phe-3,4,5F)或l-(Phe-3,4,5F)、d-(Phe-4CF3)或l-(Phe-4CF3)、d-Bpa或l-Bpa、d-Phe或l-Phe4NO2、佔據類似側鏈空間之胺基酸(例如d-Tyr或l-Tyr、d-Phe或l-Phe),或在側鏈中具有一或兩個芳香族、六氫吡啶、吡嗪、嘧啶、六氫吡嗪、嗎啉或嘧啶基團或一個吲哚、并環戊二烯、茚、萘、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、吲哚啉、唍、喹喏啉或喹唑啉基團之任一胺基酸;P2係d-Cha或l-Cha、d-Nal(2)或l-Nal(2)、d-(Phe-2,3,4,5,6-F)或l-(Phe-2,3,4,5,6-F)、d-(Phe-3,4,5F)或l-(Phe-3,4,5F)、d-(Phe-4CF3)或l-(Phe-4CF3)或佔據類似側鏈空間之胺基酸(例如d-Tyr或l-Tyr、d-Phe或l-Phe)或在側鏈中具有一或兩個芳香族、六氫吡啶、吡嗪、嘧啶、六氫吡嗪、嗎啉或嘧啶基團、或一個吲哚、并環戊二烯、茚、萘基團、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、吲哚啉、唍、喹喏啉、喹唑啉基團之任一胺基酸;P3、P4、P5係任一胺基酸或P3、P4、P5中之一或多者係簡單碳鏈,使得P2與P6之間之距離與當P3、P4、P5中之每一者係胺基酸時之距離大約相同(d-Trp或l-Trp係P4處之實例);P6係d-Bpa或l-Bpa、d-Phe或l-Phe4NO2、任一胺基酸及d-Tyr或l-Tyr(例如,d-Ser-d-Tyr)、任一胺基酸及d-Phe或
l-Phe(例如,d-Ser-d-Phe),且P7、P8、P9、P10、P11、P12中之至少三者係鹼性胺基酸,且其餘為任一胺基酸或不存在。在各個態樣中,具有簡單碳鏈之胺基酸係d-11-胺基十一酸或l-11-胺基十一酸、d-10-胺基癸酸或l-10-胺基癸酸、d-9-胺基壬酸或l-9-胺基壬酸,d-8-胺基辛酸或l-8-胺基辛酸、d-7-胺基庚酸或l-7-胺基庚酸、d-6-胺基己酸或l-6-胺基己酸或具有一或多個不飽和碳鍵之類似結構。
在另一實施例中,鄰接肽或擬肽序列包括以下結構:P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11、P12(SEQ ID NO:17);P12、P11、P10、P9、P8、P7、P6、P5、P4、P3、P2、P1(SEQ ID NO:18);P12、P11、P10、P6、P9、P4、P7、P2、P1(SEQ ID NO:19);或P1、P2、P7、P4、P9、P6、P10、P11、P12(SEQ ID NO:20);其中P1係d-Cha或l-Cha、d-Nal(2)或l-Nal(2)、d-(Phe-2,3,4,5,6-F)或l-(Phe-2,3,4,5,6-F)、d-(Phe-3,4,5F)或l-(Phe-3,4,5F)、d-(Phe-4CF3)或l-(Phe-4CF3)、d-Bpa或l-Bpa、d-Phe或l-Phe4NO2、佔據類似側鏈空間之胺基酸(例如d-Tyr或l-Tyr、d-Phe或l-Phe),或在側鏈中具有一或兩個芳香族、六氫吡啶、吡嗪、嘧啶、六氫吡嗪、嗎啉或嘧啶基團或一個吲哚、并環戊二烯、茚、萘、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、吲哚啉、唍、喹喏啉或喹唑啉基團之任一胺基酸;P2係d-Cha或l-Cha、d-Nal(2)或l-Nal(2)、d-(Phe-2,3,4,5,6-F)或l-(Phe-2,3,4,5,6-F)、d-(Phe-3,4,5F)或l-(Phe-3,4,5F)、d-(Phe-4CF3)或l-(Phe-4CF3)、佔據類似側鏈空間之胺基酸(例如d-Tyr或l-Tyr、d-Phe或l-Phe)或在側鏈中具有一或兩個芳香族、六氫吡啶、吡嗪、嘧啶、六氫吡嗪、嗎啉或嘧啶基團或一個吲哚、并環戊二烯、茚、萘、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、吲哚啉、唍、喹喏啉、喹唑啉基團之任一胺基酸;P3、P4、
P5係任一胺基酸或P3、P4、P5中之一或多者係簡單碳鏈,使得P2與P6之間之距離與當P3、P4、P5中之每一者係胺基酸時之距離大約相同(d-Trp或l-Trp係P4處之實例);P6係d-Bpa或l-Bpa、d-Phe或l-Phe4NO2、任一胺基酸及d-Tyr或l-Tyr(例如,d-Ser-d-Tyr)、任一胺基酸及d-Phe或l-Phe(例如,d-Ser-d-Phe)、任一胺基酸,或不存在;且P7、P8、P9、P10、P11、P12中之至少三者係鹼性胺基酸,且其餘為任一胺基酸或不存在。在各個態樣中,具有簡單碳鏈之胺基酸係d-胺基十一酸或l-胺基十一酸或d-8-胺基辛酸或l-8-胺基辛酸。
在另一實施例中,鄰接肽或擬肽序列包括以下結構:P1、P2、P3、P4、P5、P6(SEQ ID NO:21)或P6、P5、P4、P3、P2、P1(SEQ ID NO:22);其中P1係d-Cha或l-Cha、d-Nal(2)或l-Nal(2)、d-(Phe-2,3,4,5,6-F)或l-(Phe-2,3,4,5,6-F)、d-(Phe-3,4,5F)或l-(Phe-3,4,5F)、d-(Phe-4CF3)或l-(Phe-4CF3)、d-Bpa或l-Bpa、d-Phe或l-Phe4NO2、d-Tyr或l-Tyr或d-Phe或l-Phe;P2係d-Cha或l-Cha、d-Nal(2)或l-Nal(2)、d-(Phe-2,3,4,5,6-F)或l-(Phe-2,3,4,5,6-F)、d-(Phe-3,4,5F)或l-(Phe-3,4,5F)、d-(Phe-4CF3)或l-(Phe-4CF3)、d-Bpa或l-Bpa、d-Phe或l-Phe4NO2、d-Tyr或l-Tyr或d-Phe或l-Phe;P3係d-絲胺酸或l-絲胺酸、d-精胺酸或l-精胺酸、d-半胱胺酸或l-半胱胺酸、d-脯胺酸或l-脯胺酸或d-天冬醯胺或l-天冬醯胺;P4係d-色胺酸或l-色胺酸;且P5係d-絲胺酸或l-絲胺酸、d-精胺酸或l-精胺酸,或d-天冬醯胺或l-天冬醯胺;或P3、P4、P5係單一d-胺基十一酸或l-胺基十一酸或單一d-8-胺基辛酸或l-8-胺基辛酸;P6係d-Bpa或l-Bpa、d-Phe或l-Phe4NO2、(d-Ser-d-Tyr)或(d-Ser-d-Phe)。
在另一實施例中,鄰接肽或擬肽序列包括以下結構:P1、P2、P3、
P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11、P12(SEQ ID NO:23);P1、P2、P3、P4、P5、P6、P12、P11、P10、P9、P8、P7(SEQ ID NO:24);P6、P5、P4、P3、P2、P1、P7、P8、P9、P10、P11、P12(SEQ ID NO:25);P6、P5、P4、P3、P2、P1、P12、P11、P10、P9、P8、P7(SEQ ID NO:26);P7、P8、P9、P10、P11、P12、P1、P2、P3、P4、P5、P6(SEQ ID NO:27);P7、P8、P9、P10、P11、P12、P6、P5、P4、P3、P2、P1(SEQ ID NO:28);P12、P11、P10、P9、P8、P7、P1、P2、P3、P4、P5、P6(SEQ ID NO:29);P12、P11、P10、P9、P8、P7、P6、P5、P4、P3、P2、P1(SEQ ID NO:30);P12、P11、P6、P9、P8、P7、P2、P1(SEQ ID NO:31);P12、P11、P10、P6、P9、P4、P7、P2、P1(SEQ ID NO:32);P1、P2、P7、P8、P9、P6、P11、P12(SEQ ID NO:33);或P1、P2、P7、P4、P9、P6、P10、P11、P12(SEQ ID NO:34);其中P1係d-Cha或l-Cha、Nal(2)、d-(Phe-2,3,4,5,6-F)或l-(Phe-2,3,4,5,6-F)、d-(Phe-3,4,5F)或l-(Phe-3,4,5F)、d-(Phe-4CF3)或l-(Phe-4CF3)、d-Bpa或l-Bpa、d-Phe或l-Phe4NO2、d-Tyr或l-Tyr或d-Phe或l-Phe;P2係d-Cha或l-Cha、d-Nal(2)或l-Nal(2)、d-(Phe-2,3,4,5,6-F)或l-(Phe-2,3,4,5,6-F)、d-(Phe-3,4,5F)或l-(Phe-3,4,5F)、d-(Phe-4CF3)或l-(Phe-4CF3)、d-Bpa或l-Bpa、d-Phe或l-Phe4NO2、d-Tyr或l-Tyr或d-Phe或l-Phe;P3係d-絲胺酸或l-絲胺酸、d-精胺酸或l-精胺酸、d-半胱胺酸或l-半胱胺酸、d-脯胺酸或l-脯胺酸,或d-天冬醯胺或l-天冬醯胺;P4係d-色胺酸或l-色胺酸;P5係d-絲胺酸或l-絲胺酸、d-精胺酸或l-精胺酸,或d-天冬醯胺或l-天冬醯胺;或P3、P4、P5係單一d-胺基十一酸或l-胺基十一酸或單一d-8-胺基辛酸或l-8-胺基辛酸;P6係d-Bpa或l-Bpa、d-Phe或l-Phe4NO2、(d-Ser-d-Tyr)或(d-Ser-d-Phe);且P7、P8、P9、P10、P11、
P12中之至少三者係d-Arg或l-Arg或d-Lys或l-Lys,且其餘為任一胺基酸或不存在。
在另一實施例中,鄰接肽或擬肽序列包括以下結構:P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11、P12(SEQ ID NO:35);P12、P11、P 10、P9、P8、P7、P6、P5、P4、P3、P2、P1(SEQ ID NO:36);P12、P11、P10、P6、P9、P4、P7、P2、P1(SEQ ID NO:37);或P1、P2、P7、P4、P9、P6、P10、P11、P12(SEQ ID NO:38);其中P1係d-Cha或l-Cha,或d-Nal(2)或l-Nal(2);P2係d-(Phe-2,3,4,5,6-F)或l-(Phe-2,3,4,5,6-F)、d-(Phe-3,4,5F)或l-(Phe-3,4,5F)、d-(Phe-4CF3)或l-(Phe-4CF3);及P7、P8、P9、P10、P11、P12中之至少三者係d-Arg或l-Arg,且其餘為任一胺基酸或不存在;P3係d-絲胺酸或l-絲胺酸;P4係d-色胺酸或l-色胺酸;P5係d-絲胺酸或l-絲胺酸或d-天冬醯胺或l-天冬醯胺;P6係d-Bpa或l-Bpa、d-Phe或l-Phe4NO2、(d-或l-Ser-d-Tyr或l-Tyr)或(d-或l-Ser-d-Phe或l-Phe)。
在又一實施例中,鄰接肽或擬肽序列包括以下結構:P1、P2、P3、P4、P5、P6(SEQ ID NO:39)或P6、P5、P4、P3、P2、P1(SEQ ID NO:40);其中P1係d-Cha或l-Cha,或d-Nal(2)或l-Nal(2);P2係(d-Phe-2,3,4,5,6-F或l-Phe-2,3,4,5,6-F)、(d-Phe-3,4,5F或l-Phe-3,4,5F)或(d-Phe-4CF3或l-Phe-4CF3);P3係d-Ser或l-Ser;P4係d-Trp或l-Trp;P5係d-Ser或l-Ser;P6係d-Bpa或l-Bpa,或(d-或l-Ser-d-Tyr或l-Tyr)。
在另一實施例中,鄰接肽或擬肽序列包括以下結構:P1、P2、P3、P4、P5、P6(SEQ ID NO:41);P6、P5、P4、P3、P2、P1(SEQ ID NO:42);P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11、P12(SEQ ID NO:43);
P1、P2、P3、P4、P5、P6、P12、P11、P10、P9、P8、P7(SEQ ID NO:44);P6、P5、P4、P3、P2、P1、P7、P8、P9、P10、P11、P12(SEQ ID NO:45);P6、P5、P4、P3、P2、P1、P12、P11、P10、P9、P8、P7(SEQ ID NO:46);P7、P8、P9、P10、P11、P12、P1、P2、P3、P4、P5、P6(SEQ ID NO:47);P7、P8、P9、P10、P11、P12、P6、P5、P4、P3、P2、P1(SEQ ID NO:48);P12、P11、P10、P9、P8、P7、P1、P2、P3、P4、P5、P6(SEQ ID NO:49);P12、P11、P10、P9、P8、P7、P6、P5、P4、P3、P2、P1(SEQ ID NO:50);P12、P11、P6、P9、P8、P7、P2、P1(SEQ ID NO:51);P12、P11、P10、P6、P9、P4、P7、P2、P1(SEQ ID NO:52);P1、P2、P7、P8、P9、P6、P11、P12(SEQ ID NO:53);或P1、P2、P7、P4、P9、P6、P10、P11、P12(SEQ ID NO:54);其中P1係d-Cha或l-Cha,或d-Nal(2)或l-Nal(2);P2係(d-Phe-2,3,4,5,6-F或l-Phe-2,3,4,5,6-F)、(d-Phe-3,4,5F或l-Phe-3,4,5F)或(d-Phe-4CF3或l-Phe-4CF3);P3係任一胺基酸(例如,d-Ser或l-Ser,或d-Pro或l-Pro);P4係d-Trp或l-Trp;P5係任一胺基酸(例如,d-Ser或l-Ser);P7係d-Arg或l-Arg;P8係d-Arg或l-Arg;P9係d-Arg或l-Arg;P10係d-Gln或l-Gln或d-Arg或l-Arg;P11係d-Arg或l-Arg;P12係d-Arg或l-Arg;P6係d-Bpa或l-Bpa或(d-或l-Ser-d-Tyr或l-Tyr)。
在另一實施例中,鄰接肽或擬肽序列包括以下結構:P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11、P12(SEQ ID NO:55);P12、P11、P10、P9、P8、P7、P6、P5、P4、P3、P2、P1(SEQ ID NO:56);P12、P11、P10、P6、P9、P4、P7、P2、P1(SEQ ID NO:57);或P1、P2、P7、P4、P9、P6、P10、P11、P12(SEQ ID NO:58);其中P1係d-Cha或l-Cha或d-Nal(2)或l-Nal(2);P2係(d-Phe-2,3,4,5,6-F或l-Phe-2,3,4,5,6-F);P3
係d-Ser或l-Ser;P4係d-Trp或l-Trp;P5係d-Ser或l-Ser;P7係d-Arg或l-Arg;P8係d-Arg或l-Arg;P9係d-Arg或l-Arg;P10係d-Gln或l-Gln或d-Arg或l-Arg;P11係d-Arg或l-Arg;P12係d-Arg或l-Arg;P6係d-Bpa或l-Bpa或(d-或l-Ser-d-Tyr或l-Tyr)。
在再其他實施例中,鄰接肽或擬肽序列包括以下結構:(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(SEQ ID NO:99);(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(SEQ ID NO:100);(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(SEQ ID NO:59);(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(SEQ ID NO:60);(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(SEQ ID NO:61);(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa)(SEQ ID NO:62);(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(SEQ ID NO:63);(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa)(SEQ ID NO:64);(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa)(SEQ ID NO:65);(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)
(d-Arg)(SEQ ID NO:66);(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(SEQ ID NO:67);(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(SEQ ID NO:68);(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(SEQ ID NO:69);(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(SEQ ID NO:70);(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Trp)(d-Arg)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(SEQ ID NO:71);(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Arg)(d-Trp)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(SEQ ID NO:72);(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Trp)(d-Arg)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(SEQ ID NO:73);(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Arg)(d-Trp)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(SEQ ID NO:74);(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(SEQ ID NO:75);或(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(SEQ ID NO:76)。
在再其他實施例中,鄰接肽或擬肽序列包括以下結構:(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(SEQ ID NO:77)。
本發明肽及擬肽視情況含有poly-lys及/或arg序列以便輔助穿過細胞膜。由於其他胺基酸序列(例如,HIV tat,細胞表面受體/蛋白質等之配體)能穿過膜且其他分子可用於促進G2廢除性肽及擬肽(例如,脂質體、膠束
及其他脂質分子、病毒及其他載體、電穿孔等)(包括可選的poly-lys及/或poly-arg序列)進入細胞。因此,在其他實施例中,肽及擬肽不具有輔助細胞進入之poly-lys及/或arg序列。舉例而言,在兩個具體實施例中,輔助細胞膜穿過之具有poly-lys/arg序列之最小序列包括P6、P5、P4、P3、P2、P1,例如d-Bpa、d-Ser、d-Trp、d-Ser、d-Phe-2,3,4,5,6F、d-Cha(SEQ ID NO:101);及d-Tyr、d-Ser、d-Pro、d-Trp、d-Ser、d-Phe-2,3,4,5,6F、d-Cha(SEQ ID NO:102)。在兩個其他具體實施例中,輔助細胞膜穿過之沒有poly-lys/arg序列之最小序列包括(例如)d-Bpa、d-Cys、d-Trp、d-Ser、d-Phe-2,3,4,5,6F、d-Cha、d-Cys(SEQ ID NO:103);及d-Tyr、d-Cys、d-Pro、d-Trp、d-Ser、d-Phe-2,3,4,5,6F、d-Cha、d-Cys(SEQ ID NO:104);Cys殘基視情況經環化。
如所論述,本發明化合物單獨具有抗細胞增殖活性或G2廢除活性。可藉由將該等本發明化合物與其他藥劑(例如T細胞活化劑及/或免疫查核點抑制劑)組合來增加抗細胞增殖活性。可在方法或組合組合物中將T細胞活化劑與肽及擬肽組合。或者,可在方法或組合組合物中將免疫查核點抑制劑與肽及擬肽組合。此外,可在方法或組合組合物中將T細胞活化劑及免疫查核點抑制劑與肽及擬肽組合。因此,本發明進一步提供包括本發明化合物(例如,肽或擬肽序列)及T細胞活化劑及/或免疫查核點抑制劑之組合物,以及該等組合(例如本發明化合物(例如,肽或擬肽序列)單獨或與T細胞活化劑及/或免疫查核點抑制劑組合投與)之方法及用途。
活化劑通常係降低、減少或抑制靶標分子之一或多種活性之「拮抗劑」。拮抗劑可藉由使由配體活化之細胞失能或殺死該等細胞及/或藉由在配體結合至受體後干擾受體或配體結合或活化或信號轉導,而干擾配體至
受體或受體至配體之結合。拮抗劑可能但不一定完全阻斷相互作用或可實質上降低、減少或抑制該等相互作用。
T細胞活化劑之靶標之具體實例包括CD28、OX40、GITR、CD137、CD27及HVEM。T細胞活化劑包括(但不限於)結合至CD28、OX40、GITR、CD137、CD27及/或HVEM之配體及抗體。
抗CD28抗體之特定非限制性實例係TGN1412(Chia-Huey Lin等人,(2004-11-16)Blood(ASH Annual Meeting Abstracts)104(11):Abstract 2519;Suntharalingam等人,(2006)N Engl J Med 355:1018-1028)。
OX40抗體之特定非限制性實例包括MEDI6469、MEDI0562及MEDI6383(國際專利申請案PCT/US2015/023434、國際公開案WO/2015/153514)。OX40配體之特定非限制性實例係OX40L(美國專利第7291331號)
抗GITR抗體之特定非限制性實例包括TRX518(GITR,Inc.,先前由Tolerx研發)(Tolerx Inc.,(2007)Expert Opin Ther Patents 17:567-575;Ascierto PA等人,(2010);亦參見WO/2006/105021及WO/2009/009116。
抗CD137(41BB)抗體之特定非限制性實例包括烏瑞魯單抗(Urelumab)(BMS-663513)(Bristol-Myers Squibb)(Logan,T.等人,(2008),Journal of Immunotherapy,第31卷,第9期,第956頁)及PF-05082566(PF-2566,Pfizer)(例如,如PCT/IB2011/053761(WO/2012/032433)中所闡述)。
抗CD27抗體之特定非限制性實例係CDX-1127(Varlilumab,Celldex Therapeutics)(Vitale LA等人(2012)Clin Cancer Res.18(14):3812-21)。
抗HVEM抗體之特定非限制性實例係可自闡述於美國專利第8349320
號中之雜交瘤獲得之單株抗體(以編號CNCM 1-4752儲存於Collection Nationale de Cultures de Microorganismes,Institut Pasteur,25 rue du Docteur Roux,75724 Paris Cedex 15,France處)。
免疫查核點抑制劑之靶標之具體實例包括CTLA-4、PD1、PD-L1、PDL2、VISTA、TIM3、LAG-3及BTLA。免疫查核點抑制劑包括(但不限於)結合至CTLA-4、PD1、PD-L1、PDL2、VISTA、TIM3、LAG-3及/或BTLA之配體及抗體。
抗PD-1抗體及相關分子之特定非限制性實例包括尼沃魯單抗(Nivolumab)(BMS-936558/MDX-1106/ONO-4538)(Brahmer JR等人,(2010)J Clin Oncol.28(19):3167-75);蘭布魯珠單抗(Lambrolizumab)(別名:MK3475(Merck));派姆單抗(Pembrolizumab)(Keytruda)(美國專利第8952136號);匹利珠單抗(Pidilizumab)(CT-011,CureTech)(Westin JR等人,(2014)Lancet Oncol.15(1):69-77);AMP-514(MedImmune/AZ,別名:MEDI0680)(WO/2012/145493);及AMP-224(GSK,別名:B7-DCIg(在WO2010/027827及WO2011/066342中闡述之PDL2-Fc融合可溶性受體))。
PD-1拮抗劑分子之特定非限制性實例包括AUNP12(Aurigene及Pierre Fabre Pharmaceuticals;美國專利公開案第US20110318373號)。
抗PD-L1抗體之特定非限制性實例包括BMS-936559(Bristol-Myers Squibb)(WO/2007/005874);MPDL3280A(Genentech)(RG7446;WO/2010/077634);MedI-4736(Medimmune,先前Pfizer),MSB0010718C(EMD Serono)(WO/2013/79174);及MDX-1105(WO/2007/005874)。
抗CTLA-4抗體之特定非限制性實例包括伊匹單抗
(Ipilimumab)(Bristol-Myers Squibb,Yervoy®)(國際申請案第PCT/US1999/28739號(作為WO/2000/32231公開)、美國專利第5811097號、第5855887號、第6051227號,、及第6207156號));及曲美目單抗(Tremelimumab)(先前為CP-675,206)(Medimmune,先前Pfizer)(Calabrò L等人,(2013)Lancet Oncol.14(11):1104-11;及Camacho,LH等人,(2004)Journal Of Clinical Oncology,增刊(S),第22卷,第14期,第164S-164S頁)。
抗LAG-3抗體之特定非限制性實例包括BMS-986016(Bristol-Myers Squibb)(WO/2010/19570,WO/2014/08218);IMP-731或IMP-321(WO/2008/132601,WO/2009/44273);及如(國際專利申請案第PCT/US2015/020474,(WO/2015/138920))中所闡述之其他抗LAG3抗體。
抗TIM3抗體之特定非限制性實例闡述於美國專利第8841418號及美國專利公開案第20150086574號中。
抗VISTA(B7-H5)抗體之特定非限制性實例闡述於WO 2014190356中。
抗BTLA抗體之特定非限制性實例闡述於WO2008076560、US8563694、US20120064096、US20100172900中。
術語「抗體」係指經由重鏈及輕鏈可變結構域(分別表示為VH及VL)結合至另一分子(抗原)之蛋白質。「抗體」係指任一多株或單株免疫球蛋白分子或其混合物(例如IgM、IgG、IgA、IgE、IgD)。抗體屬任一抗體類別或亞類。IgG之實例性亞類係IgG1、IgG2、IgG3及IgG4。
術語「單株」在提及抗體使用時係指基於單一純系(包括任一真核、原核或噬菌體純系)、自其獲得或源於其之抗體。因此,「單株」抗體在本文係在結構上而非在產生其之方法上來定義。
抗體包括κ輕鏈或λ輕鏈序列(如在天然抗體中之全長)、其混合物(即,κ及λ鏈序列之融合)及其子序列/片段。天然抗體分子含有兩條κ及兩條λ輕鏈。κ輕鏈與λ輕鏈之間之主要差異在於恆定區之序列。
包括重(H)鏈及/或輕(L)鏈或重(H)鏈或輕(L)鏈之片段或由其組成之抗體可包括單一H鏈或L鏈或單一H鏈或L鏈片段,或複數條(2條、3條、4條或更多條)重(H)鏈及/或輕(L)鏈,或重(H)鏈及/或輕(L)鏈之複數個片段。抗體或片段可能但不需要包括2條重(H)鏈及2條輕(L)鏈。抗體或其片段可與其他抗體、其片段、重(H)鏈、輕(L)鏈或不同於抗體重(H)鏈或輕(L)鏈之多肽一起為寡聚(更高階或價)形式,例如三聚體、四聚體、五聚體、六聚體、七聚體及等等。
術語「融合」或「嵌合體」及其語法變化形式在用於提及序列時意味著該序列含有一或多個基於兩種或更多種不同蛋白質、源於其或自其獲得或分離之部分。亦即例如,序列之一部分可基於或來自一種具體蛋白質,且序列之另一部分可基於或來自不同的具體蛋白質。因此,融合或嵌合多肽係其中多肽之不同部分具有不同蛋白質起源之分子。
抗體包括包括哺乳動物、人類、人類化及靈長類化序列。術語「人類」在提及抗體時意味著胺基酸序列係完全人類的。因此,「人類抗體」係指具有人類免疫球蛋白胺基酸序列(亦即特異性結合至靶標之人類重鏈及輕鏈可變及恆定區)之抗體。亦即,所有抗體胺基酸皆為人類的或可能或確實存在於人類抗體中。
可藉由利用可能或確實存於人類抗體中之胺基酸殘基取代非人類胺基酸殘基將為非人類抗體之抗體製成完全人類抗體。胺基酸殘基存在於人類抗體中,CDR區圖及人類抗體共有殘基為業內已知(例如,參見Kabat,
Sequences of Proteins of Immunological Interest,第4版US Department of Health and Human Services.Public Health Service(1987);及Chothia及Lesk J.Mol.Biol.186:651(1987))。基於22個已知人類VH III序列之調查之人類VH亞組III之共有序列及基於30個已知人類κ I序列之調查之人類VL κ鏈亞組I之共有序列闡述於Padlan Mol.Immunol.31:169(1994)及Padlan Mol.Immunol.28:489(1991)中。因此,人類抗體包括其中一或多個胺基酸殘基經存於另一人類抗體中之一或多個胺基酸取代之抗體。
術語「人類化」在用於提及抗體時,意味著該抗體之胺基酸序列具有帶有一或多個特異性結合至受體人類免疫球蛋白分子之期望靶標之決定區(CDR)之非人類胺基酸殘基(例如,小鼠、大鼠、山羊、兔、非人類靈長類動物等),及一或多個在Fv框架區(FR)中且位於CDR兩側之胺基酸殘基之人類胺基酸殘基。免疫球蛋白之人類框架區殘基可經相應的非人類殘基替代。因此,人類框架區中之殘基可經來自非人類CDR供體抗體之相應殘基取代以改變、通常改良(例如)抗原親和性或特異性。另外,人類化抗體可包括在人類抗體及供體CDR或框架序列中皆未發現之殘基。舉例而言,可預測在人類抗體或供體非人類抗體中未發現之特定位置處之框架取代可改良該位置處人類抗體之結合親和性或特異性。
基於分子建模之抗體框架及CDR取代為業內已知,例如藉由對CDR及框架殘基之相互作用建模以鑑別於抗原結合而言重要之框架殘基,並進行序列比較以鑑別特定位置處之不尋常的框架殘基(例如,參見美國專利第5,585,089號;及Riechmann等人,Nature 332:323(1988))。稱作「靈長類化」之抗體在如本文所使用之「人類化」之含義內,只是受體人類免疫球蛋白分子及框架區胺基酸殘基可為除任一人類殘基以外之任一靈長類動物
胺基酸殘基(例如,人猿、長臂猿、大猩猩、黑猩猩、獼猴)。
抗體可使用業內已知之各種技術來人類化,包括(例如)CDR移植(EP 239,400;W091/09967;美國專利第5,225,539號;第5,530,101號;及第5,585,089號)、鑲飾或表面重修(EP 592,106;EP 519,596;Padlan,Molecular lmmunol.28:489(1991);Studnicka等人,Protein Engineering 7:805(1994);Roguska.等人,Proc.Nat’l.Acad.Sci.USA 91:969(1994))及鏈改組(美國專利第5,565,332號)。可使用人類共有序列(Padlan,Mol.Immunol.31:169(1994);及Padlan,Mol.Immunol.28:489(1991))來人類化抗體(Carter等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89:4285(1992);及Presta等人,J.Immunol.151:2623(1993))。
產生嵌合抗體之方法為業內已知(例如,Morrison,Science 229:1202(1985);Oi等人,BioTechniques 4:214(1986);Gillies等人,J.Immunol.Methods 125:191(1989);及美國專利第5,807,715號;第4,816,567號;及第4,816,397號)。用一個物種之抗體之可變結構域取代另一物種之可變結構域之嵌合抗體闡述於例如以下文獻中:Munro,Nature 312:597(1984);Neuberger等人,Nature 312:604(1984);Sharon等人,Nature 309:364(1984);Morrison等人,Proc.Nat’l.Acad.Sci.USA 81:6851(1984);Boulianne等人,Nature 312:643(1984);Capon等人,Nature 337:525(1989);及Traunecker等人,Nature 339:68(1989)。
抗體包括結合至CD28、OX40、GITR、CD137、CD27、HVEM、CTLA-4、PD1、PD-L1、PDL2、VISTA、TIM3、LAG-3及/或BTLA中之一或多者雙特異性抗體。如本文所用術語「雙特異性」及其語法變化形式在提及抗體使用時意味著該抗體結合至兩個不同靶標。當靶標具有不同胺
基酸序列時,將其視為係不同的。
抗體包括子序列及片段,其係指參考抗體之功能片段或子序列,例如抗體之一或多個胺基酸缺失。抗體子序列之非限制性實例包括Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、Fd、單鏈Fv(scFv)、二硫鍵連接之Fvs(sdFv)、VL、VH、雙價抗體((VL-VH)2或(VH-VL)2)、三價抗體(三價)、四價抗體(四價)、微小抗體((scFV-CH3)2)、IgGdeltaCH2、scFv-Fc或(scFv)2-Fc片段。在具體態樣中,Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、Fd、單鏈Fv(scFv)、二硫鍵連接之Fvs(sdFv)、VL、VH、雙價抗體((VL-VH)2或(VH-VL)2)、三價抗體(三價)、四價抗體(四價)、微小抗體((scFV-CH3)2)、IgGdeltaCH2、scFv-Fc或(scFv)2-Fc子序列。
「功能子序列」或「功能片段」在提及抗體時係指保留一或多種功能或活性之至少一部分作為完整參考抗體(例如結合至靶標(例如CD28、OX40、GITR、CD137、CD27、HVEM、CTLA-4、PD1、PD-L1、PDL2、VISTA、TIM3、LAG-3及/或BTLA)之抗體)之抗體部分。
抗體子序列(包括單鏈抗體)可包括單獨的重鏈或輕鏈可變區(例如,CDR1、CDR2或CDR3)之全部或一部分或其與以下各項中之一或多者之全部或一部分的組合:鉸鏈區、CH1、CH2及CH3結構域。亦包括重鏈或輕鏈可變區(例如,CDR1、CDR2或CDR3)與鉸鏈區、CH1、CH2及CH3結構域之任一組合之抗原-結合子序列。
亦可藉由將本發明化合物與其他藥劑(例如直接或間接造成核酸損害之治療劑)組合來進一步增加抗細胞增殖活性。亦可藉由將該等本發明化合物與抑制細胞增殖之治療劑(無論治療是否損害核酸)組合來增加抗細胞增殖活性。因此,本發明進一步提供包括本發明化合物(例如,肽或擬肽序列)及核酸損害劑之組合物及包括本發明化合物(例如,肽或擬肽序列)及抗增
殖劑之組合物。
如本文所用,術語「廢除細胞週期G2查核點」、「中斷細胞週期G2查核點」、「損害細胞週期G2查核點」及其語法變化形式意味著抑制細胞以在G2查核點處使細胞週期停滯。細胞週期G2查核點經廢除之細胞展現細胞處於G2查核點之時長減少,其可在完全不存在G2查核點至在適當條件下G2查核點之持續時間減少數分鐘、數小時、數天、數週或更長之範圍內。因此,與本發明化合物接觸之細胞之G2查核點之時間長度短於在不存在該化合物下細胞通常可具有之時間長度。舉例而言,G2查核點時間長度之減少可意味著在G2中保持某一時間(例如4小時)之細胞在與本發明化合物接觸時在G2中保持小於4小時,例如3.5小時、3小時、2.5小時、2小時、1小時或更短。
如本文所用術語「細胞凋亡」係指程式性細胞死亡,及細胞生理學之相關變化,例如核酸片段化、半胱天冬酶活化等,如內頁所瞭解。術語「劇變」意指由有絲分裂過程中之錯誤引起之細胞死亡。在劇變中,存在更少特徵在於細胞凋亡(例如半胱天冬酶活化、染色體凝縮等)之特徵。
如本文所用,術語「肽」、「多肽」及「蛋白質」可互換使用且係指兩種或更多種胺基酸藉由醯胺鍵或非醯胺等效物共價連接。本發明之肽可具有任一長度。舉例而言,肽可具有約5至100個或更多個殘基,例如長度為5至12個、12至15個、15至18個、18至25個、25至50個、50至75個、75至100個或更多個殘基。本發明之肽包括l-異構物及d-異構物及l-異構物及d-異構物之組合。肽可包括通常與蛋白質之轉譯後處理相關之修飾,例如,環化(例如,二硫鍵或醯胺鍵)、磷酸化、醣基化、羧基化、泛蛋白化、肉豆蔻基化或脂質化。
本文所揭示之肽進一步包括具有胺基酸結構及功能類似物之化合物,例如,具有合成或非天然胺基酸或胺基酸類似物之擬肽,只要該模擬物具有一或多種功能或活性即可。因此,本發明化合物包括「模擬物」及「擬肽」形式。
如本文所用,術語「模擬物」及「擬肽」係指具有與本發明肽實質上相同之結構及/或功能特徵之合成型化學化合物。模擬物可完全由合成、非天然胺基酸類似物組成,或可為包括一或多種天然肽胺基酸及一或多種非天然胺基酸類似物之嵌合分子。模擬物亦可納入任一數量之天然胺基酸保守取代,只要該等取代不破壞模擬物之活性即可。與為保守變體之本發明多肽一樣,可使用常規測試來確定模擬物是否具有必要活性,例如其具有可檢測到之細胞週期G2查核點廢除性活性。在投與個體或在細胞上接觸時,可檢測到的中斷G2細胞週期查核點之模擬物因此可具有G2查核點廢除活性。
肽模擬物組合物可含有通常來自三種結構基團之非天然結構組份之任一組合:a)除天然醯胺鍵(「肽鍵」)鍵聯以外之殘基鍵聯基團;b)代替天然胺基酸殘基之非天然殘基;或c)誘導二級結構模擬(亦即誘導或穩定二級結構,例如β轉折、γ轉角、β褶疊、α螺旋構象及諸如此類)之殘基。舉例而言,當殘基中之一或多者藉由除醯胺鍵以外之化學方式接合時,多肽可表徵為模擬物。個別擬肽殘基可藉由醯胺鍵、非天然及非醯胺化學鍵其他化學鍵或偶合方式(包括(例如)戊二醛、N-羥基琥珀醯亞胺酯、雙功能馬來醯亞胺、N,N’-二環己基碳二亞胺(DCC)或N,N’-二異丙基碳二亞胺(DIC))接合。替代醯胺鍵之連接基團包括(例如)酮基亞甲基(例如,用-C(=O)-NH-替代-C(=O)-CH2-)、胺基亞甲基(CH2-NH)、伸乙基、烯烴(CH=CH)、醚
(CH2-O)、硫醚(CH2-S)、四唑(CN4-)、噻唑、反式醯胺、硫醯胺或酯(例如,參見Spatola(1983)之Chemistry and Biochemistry of Amino Acids,Peptides and Proteins,第7卷,第267頁至第357頁,「Peptide and Backbone Modifications,」Marcel Decker,NY)。
如所論述,肽可因替代天然胺基酸殘基含有一或多個非天然殘基而表徵為模擬物。非天然殘基為業內已知。可用作天然胺基酸殘基之模擬物之非天然殘基之具體非限制性實例係芳香族胺基酸之模擬物,該等芳香族胺基酸包括(例如)D-萘基丙胺酸或L-萘基丙胺酸;D-苯基甘胺酸或L-苯基甘胺酸;D-2-噻吩基丙胺酸或L-2-噻吩基丙胺酸;D-1、-2、3-或4-芘基丙胺酸或L-1、-2、3-或4-芘基丙胺酸;D-3-噻吩基丙胺酸或L-3-噻吩基丙胺酸;D-(2-吡啶基)-丙胺酸或L-(2-吡啶基)-丙胺酸;D-(3-吡啶基)-丙胺酸或L-(3-吡啶基)-丙胺酸;D-(2-吡嗪基)-丙胺酸或L-(2-吡嗪基)-丙胺酸;D-(4-異丙基)-苯基甘胺酸或L-(4-異丙基)-苯基甘胺酸;D-(三氟甲基)-苯基甘胺酸;D-(三氟甲基)-苯丙胺酸;D-對-氟-苯丙胺酸;D-對-聯苯苯丙胺酸或L-對-聯苯苯丙胺酸;K-對-甲氧基-聯苯苯丙胺酸或L-對-甲氧基-聯苯苯丙胺酸;D-2-吲哚(烷基)丙胺酸或L-2-吲哚(烷基)丙胺酸;及D-烷基丙胺酸或L-烷基丙胺酸,其中烷基可經甲基、乙基、丙基、己基、丁基、戊基、異丙基、異丁基、第二異丁基(sec-isotyl)、異戊基或非酸性胺基酸取代或未經取代。可用於替代天然芳香族環之非天然胺基酸之芳香族環包括(例如)噻唑基、噻吩基、吡唑基、苯并咪唑基、萘基、呋喃基、吡咯基及吡啶基芳香族環。
可藉由利用同時維持負電荷之非羧酸酯胺基酸、(膦醯基)丙胺酸及硫酸化蘇胺酸取代來生成酸性胺基酸之模擬物。亦可藉由與碳二亞胺
(R’-N-C-N-R’)(包括(例如)1-環己基-3-(2-嗎啉基-(4-乙基)碳二亞胺或1-乙基-3-(4-氮陽離子-4,4-二甲基戊基)碳二亞胺)反應來選擇性地修飾羧基側基(例如,天冬胺醯基或麩胺醯基)。亦可藉由與銨離子反應將天冬胺醯基或麩胺醯基轉化為天冬醯胺基及麩醯胺基。
可藉由(例如)除離胺酸及精胺酸以外利用胺基酸鳥胺酸、瓜胺酸或(胍基)-乙酸或(胍基)烷基-乙酸(其中烷基可經甲基、乙基、丙基、己基、丁基、戊基、異丙基、異丁基、第二異丁基、異戊基取代或未經取代)或非酸性胺基酸取代來生成鹼性胺基酸之模擬物。可用腈衍生物(例如,含有CN-部分替代COOH)取代天冬醯胺或麩醯胺酸。可使天冬醯胺基及麩醯胺基殘基脫氮基成為相應的天冬胺醯基或麩胺醯基殘基。
可藉由使精胺醯基與一或多種試劑(包括(例如)苯基乙二醛、2,3-丁二酮、1,2-環己烷二酮或寧海準(ninhydrin))視情況在鹼性條件下反應來生成精胺酸模擬物。可藉由使酪胺醯基與芳香族重氮化合物或四硝基甲烷反應生成酪胺酸殘基模擬物。可分別使用N-乙醯基咪唑及四硝基甲烷形成O-乙醯基酪胺醯基物質及3-硝基衍生物。
可藉由使離胺醯基與琥珀酸酐或其他羧酸酸酐反應生成(且可改變胺基末端殘基)離胺酸模擬物。亦可藉由與亞胺酸酯(例如甲基吡啶亞胺酸甲酯、磷酸吡哆醛、吡哆醛、氯硼氫化物、三硝基苯磺酸、O-甲基異脲、2,4-戊烷二酮)反應及轉醯胺基酶催化之與乙醛酸鹽之反應來生成離胺酸及其他含α胺基之殘基模擬物。
可藉由與甲硫胺酸亞碸反應生成甲硫胺酸模擬物。脯胺酸模擬物包括(例如)六氫吡啶羧酸、噻唑啶羧酸、3-羥基脯胺酸或4-羥基脯胺酸、去氫脯胺酸、3-甲基脯胺酸或4-甲基脯胺酸及3,3,-二甲基脯胺酸。可藉由使組胺
醯基與二乙基焦碳酸酯或對溴苯甲醯甲基溴化物反應生成組胺酸模擬物。其他模擬物包括(例如)藉由以下生成之彼等:脯胺酸及離胺酸之羥基化;絲胺醯基或蘇胺醯基殘基之羥基之磷酸化;離胺酸、精胺酸及組胺酸之α-胺基之甲基化;N-末端胺之乙醯化;主鏈醯胺殘基之甲基化或利用N-甲基胺基酸取代;或C-末端羧基之醯胺化。
一或多個殘基亦可由具有相反手性之胺基酸(或擬肽殘基)替代。因此,L-構形(端視化學實體之結構,其亦可稱作R或S)中天然存在之任一胺基酸可經相同但具有相反手性之胺基酸或模擬物(其稱作D-胺基酸,但其可另外稱作R形式或S形式)替代。
本發明肽及擬肽進一步包括本文所闡述序列之經修飾形式,條件係該經修飾形式保留未經修飾或參考肽或擬肽之功能之至少一部分。舉例而言,經修飾肽或擬肽將保留細胞增殖抑制或G2廢除活性之至少一部分,但相對於參考肽或擬肽其可具有增加或降低之細胞增殖抑制或G2廢除活性。
經修飾肽及擬肽之一或多個胺基酸殘基可經另一殘基取代,添加至序列中或自序列缺失。在一個實施例中,經修飾肽或擬肽具有一或多個胺基酸取代、添加或缺失(例如,1至3個、3至5個、5至10個或更多個)。在一態樣中,取代係利用側鏈佔據與參考胺基酸或模擬物(正經取代之胺基酸或模擬物)類似之空間之胺基酸或模擬物進行。在再一態樣中,取代係利用在結構上與人類殘基類似之非人類胺基酸進行。在具體態樣中,取代係保守胺基酸取代。
如本文所用術語「類似空間」意指佔據在大小方面與參考部分類似之三維空間之化學部分。通常,佔據類似空間之部分之大小將與參考部分類似。「佔據類似側鏈空間」之胺基酸或模擬物之側鏈所佔三維空間之大小
與參考胺基酸或模擬物類似。d-(Phe-2,3,4,5,6-F)、l-(Phe-2,3,4,5,6-F)、d-(Phe-3,4,5F)、l-(Phe-3,4,5F)、d-(Phe-4CF3)或l-(Phe-4CF3)之特定實例係(l或d-Phe-2R1,3R2,4R3,5R4,6R5),其中R1、R2、R3、R4、R5可為氯化物、溴化物、氟化物、碘化物、氫、氧化氫或不存在。對於小分子(例如具有約1埃(Angstrom)大小之氟化物),類似空間可缺少一部分。
術語「保守取代」意味著一個胺基酸經生物上、化學上或結構上類似之殘基替代。在生物上類似意味著取代與生物活性(例如抗細胞增殖或G2廢除活性)相容。在結構上類似意味著胺基酸具有帶有類似長度(例如丙胺酸、甘胺酸及絲胺酸)或具有類似大小之側鏈。化學類似性意味著殘基具有相同電荷或均具有親水性或疏水性。具體實例包括一個疏水殘基(例如異白胺酸、纈胺酸、白胺酸或甲硫胺酸)取代另一者,或一個極性殘基取代另一者,例如精胺酸取代離胺酸,麩胺酸取代天冬胺酸,或麩醯胺酸取代天冬醯胺,絲胺酸取代蘇胺酸,及諸如此類。
因此,本發明肽及擬肽包括具有與表1中所述肽及擬肽之序列不一致之序列的肽及擬肽。在一個實施例中,肽或擬肽之序列與表1中所闡述之序列具有50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或更大一致性。在一態樣中,一致性係在序列之定義區域(例如胺基或羧基末端3至5個殘基)方面。
可使用業內已知之任一方法產生及分離本發明化合物(包括肽及擬肽)。可使用業內已知之化學方法完整或部分地合成肽(例如,參見Caruthers(1980)Nucleic Acids Res.Symp.Ser.215-223;Horn(1980)Nucleic Acids Res.Symp.Ser.225-232;及Banga,A.K.,Therapeutic Peptides and Proteins,Formulation,Processing and Delivery Systems(1995)
Technomic Publishing Co.,Lancaster,PA)。可使用各種固相技術實施肽合成(例如,參見Roberge(1995)Science 269:202;Merrifield(1997)Methods Enzymol.289:3-13)且可使用(例如)ABI 431A Peptide Synthesizer(Perkin Elmer)根據製造商之說明書達成自動化合成。
可使用業內已知之各種程序及方法合成納入個別合成殘基及多肽之模擬物(例如,參見Organic Syntheses Collective Volumes,Gilman等人(編輯)John Wiley & Sons,Inc.,NY)。亦可使用組合方法合成肽及肽模擬物。生成肽及擬肽文庫之技術已為人熟知,且包括(例如)多針(multipin)、茶包(tea bag)及分開-結合-混合(split-couple-mix)技術(例如參見al-Obeidi(1998)Mol.Biotechnol.9:205-223;Hruby(1997)Curr.Opin.Chem.Biol.1:114-119;Ostergaard(1997)Mol.Divers.3:17-27;及Ostresh(1996)Methods Enzymol.267:220-234)。可藉由化學修飾方法進一步產生經修飾肽(例如參見,Belousov(1997)Nucleic Acids Res.25:3440-3444;Frenkel(1995)Free Radic.Biol.Med.19:373-380;及Blommers(1994)Biochemistry 33:7886-7896)。
肽亦可合成且可作為具有一或多個與其連接之其他結構域之融合蛋白表現,用於產生更具免疫原性之肽,更易於分離以重組方式合成之肽,或鑑別及分離抗體或表現抗體之B細胞。有利於檢測及純化之結構域包括(例如)容許在經固定金屬上純化之金屬螯合肽,例如多組胺酸束及組胺酸-色胺酸模組;容許在經固定免疫球蛋白上純化之蛋白質A結構域;及用於FLAGS擴散/親和純化系統(Immunex Corp,Seattle WA)中之結構域。可使用在純化結構域與肽之間納入可裂解連接體序列(例如Xa因子或腸激酶(Invitrogen,San Diego CA))來促進肽純化。舉例而言,表現載體可包括與
6個組胺酸殘基連接之編碼肽之核酸序列,隨後硫氧還蛋白及腸激酶裂解位點(例如,參見Williams(1995)Biochemistry 34:1787-1797;Dobeli(1998)Protein Expr.Purif.12:404-14)。組胺酸殘基有利於檢測及純化融合蛋白,同時腸激酶裂解位點提供自融合蛋白之其餘部分純化肽之方式。涉及編碼融合蛋白之載體及應用融合蛋白之技術在業內已知(例如,參見Kroll(1993)DNA Cell.Biol.,12:441-53)。
本發明進一步提供編碼本發明肽之核酸。在特定實施例中,核酸編碼具有約8至12個、12至15個、15至18個、15至20個、18至25個、20至25個、25至35個、25至50個或50至100個胺基酸之長度或長度更大之本發明肽序列。
術語「核酸」及「多核苷酸」在本文可互換使用,其係指核酸之所有形式,包括去氧核糖核酸(DNA)及核糖核酸(RNA)。核酸可為雙鏈的、單鏈的或三螺旋的、線性的或環狀的。核酸包括基因體DNA、cDNA及反義DNA 。RNA核酸可為經剪接或未剪接之mRNA、rRNA、tRNA或反義RNA(例如,RNAi)。本發明之核酸包括天然核酸、合成核酸以及核苷酸類似物及衍生物。該等經改變或經修飾多核苷酸包括提供(例如)核酸酶抗性之類似物。核酸長度亦可小於所例示之肽序列。舉例而言,肽序列中之任一者之子序列可編碼具有抗增殖或G2廢除活性之肽。
核酸可使用各種熟知之標準選殖及化學合成方法中之任一者來產生且可藉由熟習此項技術者已知之定點誘變或其他重組體技術進行故意改變。可藉助測序、凝膠電泳及諸如此類測定多核苷酸之純度。
可將本發明之核酸插入其中核酸之表現可受「表現控制元件」(稱作「表現盒」之組合)影響或調控之核酸構築體中。術語「表現控制元件」意
指調控或影響與其可操作連接之核酸序列之表現之一或多個序列元件。可操作連接至核酸序列之表現控制元件控制轉錄及(若適當)核酸序列之轉譯。
術語「可操作連接」係指其中如此闡述之組份之關係允許該等組份以其預期方式起作用之功能並列。通常,表現控制元件在基因之5’端或3’端並列但亦可為內含子。啟動子通常位於編碼序列之5’。「啟動子」意指足以引導轉錄之最小序列元件。
表現控制元件在蛋白質編碼基因之前方包括啟動子、增強子、轉錄終止子、基因沉默子、起始密碼子(例如,ATG)。表現控制元件活化組成型轉錄、可誘導轉錄(即,需要外部信號用於活化)或抑制轉錄(即,信號關閉轉錄;去除信號可活化轉錄)。表現盒亦可包括足以使基因表現對於特定細胞類型或組織可控制之控制元件(即,組織特異性控制元件)。
可將本發明之核酸插入質體中用於繁殖至宿主細胞中及用於後續遺傳操縱。質體係可在宿主細胞中穩定繁殖之核酸;質體視情況含有表現控制元件以便驅動宿主細胞中核酸編碼肽之表現。術語「載體」在本文中與質體同義使用且亦可包括用於在宿主細胞中表現之表現控制元件。質體及載體通常至少含有用於在細胞中繁殖之複製起點及啟動子。質體及載體因此可用於遺傳操縱肽編碼核酸、產生肽及在(例如)宿主細胞或整個生物體中表現肽。
因此,肽可在以下各項中表現:使用組成型啟動子(例如T7)或可誘導啟動子(例如噬菌體□之pL、plac、ptrp、ptac(ptrp-lac雜交啟動子))之細菌系統;使用組成型啟動子(例如ADH或LEU2)或可誘導啟動子(例如GAL)之酵母系統(例如,參見Ausubel等人編輯之Current Protocols in Molecular Biology,第2卷,第13章,Greene Publish.Assoc.& Wiley Interscience,1988;Grant等人,Methods in Enzymology,153:516(1987),Wu及Grossman編輯;Bitter Methods in Enzymology,152:673(1987),Berger及Kimmel編輯,Acad.Press,N.Y.;及Strathern等人,The Molecular Biology of the Yeast Saccharomyces(1982)編輯Cold Spring Harbor Press,第I卷及第II卷;R.Rothstein之DNA Cloning,A Practical Approach,第11卷,第3章,D.M.Glover編輯,IRL Press,Wash.,D.C.,1986);使用組成型或可誘導啟動子(例如蛻皮激素)之昆蟲細胞系統;及使用組成型啟動子(例如SV40、RSV)或源於哺乳動物細胞之基因體(例如金屬硫蛋白IIA啟動子、熱激啟動子)或源於哺乳動物病毒(例如腺病毒晚期啟動子)或可誘導小鼠乳房腫瘤病毒長末端重複之可誘導啟動子之哺乳動物細胞系統。肽表現系統進一步包括經設計用於活體內使用之載體,包括腺病毒載體(美國專利第5,700,470號及第5,731,172號)、腺相關載體(美國專利第5,604,090號)、單純皰疹病毒載體(美國專利第5,501,979號)及反轉錄病毒載體(美國專利第5,624,820號、第5,693,508號及第5,674,703號及WIPO公開案WO92/05266及WO92/14829)。基因療法中亦已採用牛乳頭瘤病毒(BPV)(美國專利第5,719,054號)。該等基因療法載體亦包括基於CMV之載體(美國專利第5,561,063號)。
因此,本發明亦提供插入宿主細胞中編碼本發明肽之核酸。在一個實施例中,宿主細胞係原核細胞。在另一實施例中,宿主細胞係真核細胞。在各個態樣中,真核細胞係酵母或哺乳動物(例如,人類、靈長類動物等)細胞。
如本文所用,「宿主細胞」係引入可繁殖、轉錄或編碼所表現肽之核
酸之細胞。該術語亦包括個體宿主細胞之任一後代。
宿主細胞包括(但不限於)微生物(例如細菌或酵母);及植物、昆蟲及哺乳動物細胞。舉例而言,本發明提供經重組體噬菌體核酸、質體核酸或黏粒核酸表現載體轉化之細菌;經重組體酵母表現載體轉化之酵母;經重組體病毒表現載體(例如,花椰菜嵌紋病毒CaMV;菸草嵌紋病毒TMV)感染或經重組體質體表現載體(例如,Ti質體)轉化之植物細胞系統;經重組體病毒表現載體(例如,桿狀病毒)感染之昆蟲細胞系統;或經重組體病毒表現載體(例如,反轉錄病毒、腺病毒、牛痘病毒)感染之動物細胞系統,或經改造用於穩定表現之經轉化動物細胞系統。
表現載體亦可含有編碼賦予抗選擇性壓力或可鑑別標記物(例如,□-半乳糖苷酶)之抗性之可選標記物之核酸,藉此容許具有載體之細胞鑑別、生長及擴增。或者,可選標記物可在第二載體上,該第二載體與含有本發明多核苷酸之第一載體共轉染至宿主細胞中。可使用眾多選擇系統,包括(但不限於)單純皰疹病毒胸苷激酶基因(Wigler等人,Cell 11:223(1977))、次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖基轉移酶基因(Szybalska等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 48:2026(1962)),且腺嘌呤磷酸核糖基轉移酶(Lowy等人,Cell 22:817(1980))基因,其可分別用於tk細胞、hgprt細胞或aprt細胞中。可使用抗代謝物抗性作為針對以下基因進行選擇之基礎:dhfr,其賦予抗胺甲喋呤之抗性(O'Hare等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 78:1527(1981));apt基因,其賦予抗黴酚酸(mycophenolic acid)之抗性(Mulligan等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 78:2072(1981));新黴素(neomycin)基因,其賦予抗胺基醣苷G-418之抗性(Colberre-Garapin等人,J.Mol.Biol.150:1(1981));及潮黴素(hygromycin)基因,其賦予抗潮黴素之抗性
(Santerre等人,Gene 30:147(1984))。其他可選擇基因包括trpB,其容許細胞利用吲哚代替色胺酸;hisD,其容許細胞利用組胺醇代替組胺酸(Hartman等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:8047(1988));及ODC(鳥胺酸去羧酶),其賦予對鳥胺酸去羧酶抑制劑2-(二氟甲基)-DL-鳥胺酸DFMO之抗性(McConlogue(1987):Current Communications in Molecular Biology,Cold Spring Harbor Laboratory)。
如本文所用,術語「核酸損害治療」及「核酸損害劑」意指直接或間接損害核酸(例如,DNA、cDNA、基因體DNA、mRNA、tRNA或rRNA)之任一治療方案。該等藥劑之特定實例包括烷基化劑、亞硝基脲、抗代謝物、植物鹼、植物提取物及放射性同位素。藥劑之特定實例亦包括核酸損害性藥物,例如,5-氟尿嘧啶(5-FU)、卡培他濱(capecitabine)、S-1(替加氟(Tegafur)、5-氯-2,4-二羥基吡啶及氧嗪酸(oxonic acid))、5-乙炔基尿嘧啶、阿拉伯糖基胞嘧啶(阿糖胞苷)、5-氮胞苷(5-AC)、2’,2’-二氟-2’-去氧胞苷(dFdC)、嘌呤抗代謝物(巰嘌呤、硫唑嘌呤、硫鳥嘌呤)、鹽酸吉西他濱(gemcitabine hydrochloride)(健擇)、噴司他汀(pentostatin)、別嘌呤醇、2-氟-阿拉伯糖基-腺嘌呤(2F-ara-A)、羥基脲、硫芥(雙氯乙基二硫化物)、甲基二(氯乙基)胺、美法侖、氮芥苯丁酸、環磷醯胺、異環磷醯胺、噻替派(thiotepa)、AZQ、絲裂黴素C、環氧乳醇、二溴衛矛醇、磺酸烷基酯(白消安)、亞硝基脲(BCNU,CCNU,4-甲基CCNU或ACNU)、丙卡巴肼、達卡巴嗪(decarbazine)、蝴蝶黴素、蒽環抗生素(例如多柔比星(阿德力黴素;ADR)、道諾黴素(西如比星(Cerubicine))、伊達比星(idarubicin)(去甲氧柔紅黴素(Idamycin))及泛艾黴素(epirubicin)(艾倫斯(Ellence)))、蒽環抗生素類似物(例如米托蒽醌(mitoxantrone))、放線菌素D、非插層拓樸異構
酶抑制劑(例如表鬼臼毒素(依託泊苷(etoposide)=VP16、替尼泊苷(teniposide)=VM-26))、足葉草黴素(podophylotoxin)、博來黴素(Bleo)、派來黴素、與核酸形成加合物之化合物(包括鉑衍生物(例如,順鉑(CDDP)、順鉑之反式類似物、卡鉑、異丙鉑(iproplatin)、四鉑(tetraplatin)及奧沙利鉑))、喜樹鹼、托泊替康(topotecan)、伊立替康(irinotecan)(CPT-11)及SN-38。核酸損害治療之特定實例包括輻射(例如,紫外(UV)輻射、紅外(IR)輻射或α輻射、β輻射或γ-輻射)及環境衝擊(例如,發熱)。
如本文所用,術語「抗增殖治療」及「抗增殖劑」意指無論該治療或藥劑是否損害核酸均直接或間接抑制細胞、病毒、細菌或其他單細胞性或多細胞性生物體之增殖之任一治療方案。抗增殖劑之具體實例係抗腫瘤及抗病毒藥物,其抑制細胞增殖或病毒增殖或複製。特定實例尤其包括環磷醯胺、硫唑嘌呤、環孢素A、普賴蘇濃、美法侖、氮芥苯丁酸、甲基二(氯乙基)胺、白消安、胺甲喋呤、6-巰嘌呤、硫鳥嘌呤、胞嘧啶阿拉伯糖苷、紫杉醇、長春鹼、長春新鹼、多柔比星、放線菌素D、光輝黴素、卡莫司汀、洛莫司汀、司莫司汀、鏈佐黴素、羥基脲、順鉑、米托坦、丙卡巴肼、達卡巴嗪及二溴甘露醇。造成核酸複製錯誤或抑制核酸複製之抗增殖劑,例如核苷及核苷酸類似物(例如,AZT或5-AZC)。
本發明肽及擬肽亦可加強微管穩定劑或去穩定劑(例如長春花生物鹼(長春鹼=VLB、長春新鹼=VCR、長春瑞濱(vinorelbine)=VRLB、長春氟寧(vinflunine)=VFL)及紫杉烷(太平洋紫杉醇(paclitaxel)及多西他賽(docetaxel)=泰索帝(taxotare)))之抗細胞增殖活性。因此,該等藥劑可進一步包括在本發明之組合物中並用於本發明之方法中。
可利用本發明化合物處理之細胞包括期望在活體外、離體或活體內抑
制或預防其增殖之任一細胞。具體靶細胞展現短於正常細胞週期之G1查核點時間或具有受損之細胞週期G1查核點,使得細胞在經過足夠時間以完成核酸修復之前離開G1查核點。因此,候選者細胞包括無論細胞係正常的抑或異常的均快速增殖之細胞。特定實例係良性細胞或腫瘤性細胞、轉移細胞或非轉移細胞。其他候選者細胞可藉由量測其增殖速率或細胞留在G1期之時間長度來鑑別。候選者細胞亦可藉由使測試細胞與單獨的本發明化合物或其與核酸損害治療之組合接觸及確定經接觸細胞是否展現降低之增殖或增加之細胞死亡或細胞凋亡/劇變來鑑別。
因此,本發明化合物及T細胞活化劑及/或免疫查核點抑制劑可用於抑制活體外、離體及活體內細胞增殖。因此,患有特徵在於細胞增殖或細胞存活異常或不合意或不期望或者細胞分化異常或有缺陷之病症或生理病況或具有患該病症或生理病況之風險的個體可利用單獨的本發明化合物或其與T細胞活化劑及/或免疫查核點抑制劑之組合來治療。
因此,根據本發明,提供抑制細胞增殖之方法、增加細胞對核酸損害劑或治療之敏感性之方法及增加對活體外、離體及活體內細胞之核酸損害之方法。在一個實施例中,方法包括使細胞(例如,經培養細胞或存於個體中之細胞)與足以抑制細胞增殖之量的本發明肽或擬肽及T細胞活化劑接觸。在另一實施例中,方法包括使細胞(例如,經培養細胞或存於個體中之細胞)與足以抑制細胞增殖之量之本發明肽或擬肽及免疫查核點抑制劑接觸。在另一實施例中,方法包括使細胞(例如,經培養細胞或存於個體中之細胞)與足以抑制細胞增殖之量之本發明肽或擬肽及T細胞活化劑及免疫查核點抑制劑接觸。
在另一實施例中,方法包括使細胞與足以增加細胞對核酸損害劑或治
療之敏感性之量之本發明肽或擬肽及/或T細胞活化劑及/或免疫查核點抑制劑接觸。在另一實施例中,方法包括使細胞與足以增加細胞之核酸損害之量之本發明肽或擬肽及/或T細胞活化劑及/或免疫查核點抑制劑接觸。在各個態樣中,方法進一步包括使細胞與核酸損害劑接觸或使細胞暴露於核酸損害治療。
本發明進一步提供治療個體之細胞增殖病症或分化病症之方法,該增殖病症或分化病症包括特徵在於細胞增殖或細胞存活不合意或不期望之病況、特徵在於細胞凋亡有缺陷或異常之病況、特徵在於細胞存活異常或有缺陷之病況以及特徵在於細胞分化異常或不充分之病況。在一個實施例中,方法包括向患有細胞增殖病症或具有患細胞增殖病症之風險之個體投與可有效治療細胞增殖病症之量之本發明肽或擬肽及/或T細胞活化劑及/或免疫查核點抑制劑。在一態樣中,該量足以改良個體之病況。在具體態樣中,改良包括至少一部分靶細胞(例如,異常增殖之細胞)改良、細胞增殖減少、細胞數量減少、抑制細胞數量增加、細胞凋亡增加或存活減少。在又一態樣中,在投與抑制細胞增殖之治療之前、與此同時或在此之後將本發明化合物投與個體。在其他具體態樣中,細胞增殖病症之細胞之至少一部分位於血液、乳房、肺、甲狀腺、頭或頸、腦、淋巴、胃腸道、生殖泌尿道、腎、胰臟、肝、骨、肌肉或皮膚中。
在另一實施例中,方法包括向個體投與一定量之化合物及/或T細胞活化劑及/或免疫查核點抑制劑以治療實體腫瘤。在另一實施例中,方法包括向個體投與一定量之化合物及/或T細胞活化劑及/或免疫查核點抑制劑以治療液體腫瘤。在各個態樣中,在T細胞活化劑或免疫查核點抑制劑或另一抗腫瘤療法之前、與此同時或在此之後利用本發明化合物投與具有腫瘤
之個體。
如本文所用,術語「增殖病症」及「增殖病況」意指特徵在於(例如,細胞、病毒、細菌、真菌等)增殖異常或不合意之任一病理學或非病理學生理病況。術語「細胞增殖病症」及「細胞增殖病況」意指特徵在於細胞增殖異常或不合意之任一病理學或非病理學生理病況,以及包括特徵在於細胞增殖或細胞存活不合意或不期望(例如,由細胞凋亡有缺陷引起)之病況、特徵在於細胞凋亡有缺陷或異常或有缺陷之病況以及特徵在於細胞存活異常或不合意或不期望之病況。術語「分化病症」意指特徵在於分化異常或有缺陷之任一病理學或非病理學生理病況。
適於治療之增殖或分化病症包括特徵在於細胞數量、細胞生長或細胞存活異常或不合意之疾病及非病理學生理病況(良性及贅瘤性)。因此,該等病症或病況可構成疾病狀態且包括所有類型之癌性生長或致癌過程、轉移性組織或惡性轉化之細胞、組織或器官,或可為非病理學的,亦即偏離正常但通常與疾病不相關。可根據本發明治療之非病理學病況之特定實例係來自創傷修復且引起結瘢之組織再生長。
包含增殖或分化病症之細胞可聚集成細胞團塊或分散。術語「實體腫瘤」係指通常聚集在一起且形成團塊之贅瘤形成或轉移。具體實例包括內臟腫瘤,例如胃癌或結腸癌、肝細胞瘤、腎癌、肺及腦之腫瘤/癌症。「液體腫瘤」係指造血系統之贅瘤形成(例如淋巴瘤、骨髓瘤及白血病)或實際上擴散之贅瘤形成,因為其通常不形成實體團塊。白血病之具體實例包括急性及慢性淋巴母細胞性、成髓細胞性及多發性骨髓瘤。
該等病症包括實際上可影響任一細胞或組織類型之贅瘤或癌症,例如癌、肉瘤、黑色素瘤、轉移病症或造血性贅瘤性病症。轉移性腫瘤可源自
多種原發性腫瘤類型,包括(但不限於)乳房、肺、甲狀腺、頭頸、腦、淋巴樣、胃腸(口腔、食管、胃、小腸、結腸、直腸)、生殖泌尿道(子宮、卵巢、子宮頸、膀胱、睪丸、陰莖、前列腺)、腎、胰臟、肝、骨、肌肉、皮膚等。
癌係指上皮或內分泌組織之惡性病,且包括呼吸系統癌、胃腸系統癌、生殖泌尿系統癌、睪丸癌、乳房癌、前列腺癌、內分泌系統癌及黑色素瘤。實例性癌包括自子宮頸、肺、前列腺、乳房、頭頸、結腸、肝及卵巢形成之彼等。術語亦包括癌肉瘤,例如其包括由癌性及肉瘤性組織組成之惡性腫瘤。腺癌包括腺組織之癌,或其中腫瘤形成腺樣結構之癌。
肉瘤係指間葉細胞起源性惡性腫瘤。實例性肉瘤包括(例如)淋巴肉瘤、脂肪肉瘤、骨肉瘤及纖維肉瘤。
如本文所用術語「造血性增殖病症」意指涉及造血起源性增生/贅瘤細胞(例如由骨髓樣、淋巴樣或類紅血球譜系或其前體細胞引起)之疾病。通常,疾病由分化不良型急性白血病(例如成紅血球白血病及急性巨核細胞白血病)引起。其他實例性骨髓樣病症包括(但不限於)急性前骨髓性白血病(APML)、急性骨髓性白血病(AML)及慢性骨髓性白血病(CML);淋巴樣惡性病包括(但不限於)急性淋巴母細胞性白血病(ALL),其包括B譜系ALL及T譜系ALL、慢性淋巴球性白血病(CLL)、前淋巴球性白血病(PLL)、毛細胞白血病(HLL)及華氏巨球蛋白血症(Waldenstrom’s macroglobulinemia,WM)。其他惡性淋巴瘤包括(但不限於)非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma)及其變體、外周T細胞淋巴瘤、成人T細胞白血病/淋巴瘤(ATL)、皮膚T細胞淋巴瘤(CTCL)、大顆粒淋巴球性白血病(LGF)、霍奇金氏病及裡-斯病(Reed-Sternberg disease)。
與本發明化合物組合使用之治療包括如本文所揭示或業內已知之任一抗增殖、核酸損害或抗腫瘤治療。舉例而言,抗細胞增殖或抗腫瘤治療可包含輻射治療或手術切除視情況與藥物治療之組合。治療可包含投與化學物質(例如放射性同位素、藥物(例如化學治療劑))或遺傳療法(例如抗致癌基因(例如,Rb、DCC、p53等)、顯性負性致癌基因或致癌基因之反義基因)。該等化合物可在其他治療方案之前、與其同時或在其之後投與。舉例而言,可在開始抗細胞增殖療法之前將本發明化合物及/或T細胞活化劑及/或免疫查核點抑制劑投與抗細胞增殖療法(例如,放射療法、化學療法、基因療法、手術切除等)之候選者個體。因此,本發明提供預防性治療方法。
術語「個體」係指動物,通常係哺乳動物,例如靈長類動物(人類、人猿、長臂猿、黑猩猩、紅毛猩猩、獼猴)、家畜(狗及貓)、農場動物(馬、牛、山羊、綿羊、豬)及實驗動物(小鼠、大鼠、兔、天竺鼠)。個體包括動物疾病模型(例如,具有腫瘤之小鼠)。
適於治療之個體包括目前正經歷之彼等或為增殖或分化病症之治療或(例如抗腫瘤療法)之候選者。其他候選者個體包括(例如)具有發生細胞增殖病症之風險之個體。因此,本發明方法可用於治療具有發生細胞增殖病症之風險單尚未展現該病症之明顯症狀之個體。具有風險之個體可經鑑別為具有發生細胞增殖病症之遺傳傾向性或家族史。舉例而言,具有經活化致癌基因或具有腫瘤抑制基因之突變或缺失之個體係候選者個體。因此,具有風險之個體可使用針對遺傳損傷存在之常規遺傳篩選或詢問個體之家族史以確立其具有該病症之風險來鑑別。具有風險之個體之具體實例可為具有家族史或指示癌症傾向性之其他遺傳特徵者,在該遺傳特徵中贅瘤性或抗藥性贅瘤細胞表現CD40。遺傳疾病之具體特定實例係視網膜母細胞
瘤,其係由Rb腫瘤抑制基因之缺陷造成的。
所投與量通常為「有效量」或「充足量」,其為足以產生期望影響之量。因此,有效量包括以下各項中之一或多者:減少細胞增殖、減少細胞數量、抑制增殖增加、抑制細胞數量增加、增加細胞凋亡,或減少包含增殖細胞之細胞之至少一部分(例如,靶細胞之至少一部分)之存活。因此,例如,倘若期望抑制細胞增殖,則有效量將為可檢測到的減少細胞增殖或增殖細胞數量或增加細胞凋亡或減少細胞存活之量。因此,該量可足以減少靶細胞數量、穩定靶細胞數量或抑制靶細胞數量之增加。舉例而言,倘若病症包含實體腫瘤,則減小腫瘤大小、穩定腫瘤大小或預防腫瘤、腫瘤之至少一部分進一步生長(例如抑制5%至10%之細胞或10%至20%或更多細胞(包含腫瘤團塊)之生長)係令人滿意的臨床終點。倘若病症包含液體腫瘤,則減少腫瘤細胞之數量、穩定腫瘤細胞數量或抑制腫瘤細胞之至少亞群體之腫瘤細胞數量進一步增加(例如抑制5%至10%之細胞或10%至20%或更多之細胞生長)係令人滿意的臨床終點。
另外,視為有效之量可預防或抑制病況或病症之進展。舉例而言,某些腫瘤在其進展時變得愈來愈具有攻擊性,包括進展至轉移形式。因此,亦視為有效之量可使得減少或預防腫瘤變得愈來愈具有攻擊性或轉移。因此,抑制或預防病症或病況之惡化(亦即穩定病況)係另一令人滿意的臨床終點。
檢查含有液體腫瘤之生物試樣(例如,血液或組織試樣)可確立腫瘤細胞團塊或數量是否減少,或是否抑制腫瘤細胞增殖。對於實體腫瘤而言,侵襲及非侵襲成像方法可確定腫瘤大小之減小或腫瘤大小增加之抑制。受體陽性腫瘤之受體計數之降低可用於評價腫瘤細胞增殖之減少或抑制。產
激素腫瘤(例如乳癌、睪丸癌或卵巢癌)之激素之量可用於評價腫瘤增殖之減少或抑制。
有效量亦可客觀或主觀地減少或降低與病症或病況相關之症狀之嚴重性或頻次。舉例而言,減少疼痛、噁心或其他不適或增加食欲或主觀幸福感之本發明化合物之量係令人滿意的臨床終點。
有效量亦包括減少用另一方案治療之量(例如,劑量)或頻次,此被認為係令人滿意的臨床終點。舉例而言,利用本發明化合物與T細胞活化劑及/或免疫查核點抑制劑之組合治療之癌症患者可能需要更少的核酸損害治療以便抑制癌症細胞增殖。在此實例中,有效量可包括與在不利用本發明化合物治療下投與之劑量頻率或相比可減少投與個體之核酸損害劑之劑量頻率或量之量。
可改良個體之病況或治療益處之本發明方法之持續時間可能相對較短,例如改良可持續若干小時、若干天或若干週,或延長更長的時間段,例如數月或數年。有效量無需完全消除病況或病症之任何或所有症狀。因此,當個體之病況在短的或長的時間段內存在主觀或客觀改良(如使用上述準則中之任一者或業內已知適於確定病症或病況之狀態之其他準則所確定)時,可達成有效量之令人滿意的臨床終點。如本文所闡述或業內已知可有效提供一或多個有益效應之量稱作個體之個體病況或「治療益處」之「改良」。
本發明化合物、T細胞活化劑及免疫查核點抑制劑之有效量可基於動物研究或視情況在人類臨床試驗中來確定。熟習此項技術者將瞭解各種因素均可影響治療具體個體所需要之劑量及時限,包括(例如)個體之整體健康狀況、年齡或性別、病症或病況之嚴重性或狀態、先前治療、對不合意
副作用之敏感性、期望之臨床結果及其他病症或病況之存在。該等因素可影響提供足以達成治療益處之量所需要之劑量及時限。劑量方案亦考慮藥物動力學,亦即,醫藥組合物之吸收率、生物利用度、代謝及清除率(例如,參見Egleton(1997)「Bioavailability and transport of peptides and peptide drugs into the brain」Peptides 18:1431-1439;及Langer(1990)Science 249:1527-1533)。另外,劑量或治療方案可針對個體進行特別調整或基於藥物基因體數據進行修改。
因此,化合物、T細胞活化劑及免疫查核點抑制劑可根據達成期望效應之任一方案或途徑,單獨地或作為醫藥組合物以全身方式、以區域方式(例如,針對器官或組織,例如藉由注射至門靜脈中用於治療肝之細胞增殖病症)或以局部方式(例如,直接至腫瘤團塊中)進行投與。化合物及醫藥組合物可作為單一劑量或多個劑量每天(例如,以低劑量)或間歇性地(例如,每隔一天、一週一次等,以較高劑量)進行投與。化合物、T細胞活化劑及免疫查核點抑制劑及醫藥組合物可經由吸入(例如,氣管內)、以經口、靜脈內、動脈內、血管內、鞘內、腹膜內、肌內、皮下、腔內、經皮(例如,局部)、經黏膜(例如,經頰、經膀胱、經陰道、經子宮、經直腸或經鼻)方式藉由多次投與、持續釋放(例如,隨時間逐步灌注)或單次濃注來投與。用於投與藥物之可植入裝置(包括微製作裝置)已為人熟知且亦可用於將本發明化合物遞送至個體。
以靜脈內方式(IV)投與之化合物、T細胞活化劑及免疫查核點抑制劑在若干小時(通常1小時、3小時或6小時)內可為約0.01mg/hr至約1.0mg/hr,其可在間歇週期下重複一或多個週。特別是在將藥物投與隔離位點且不進入血液流中(例如進入體腔中或進入器官之腔(例如腦脊髓液(CSF))
中)時,可使用相當高的劑量(例如,高達約10mg/ml)。
因此本發明進一步提供醫藥組合物。該等醫藥組合物可用於在活體內或離體投與個體,及用於例如利用本發明化合物、T細胞活化劑及免疫查核點抑制劑來治療個體。
如本文所用術語「醫藥上可接受之」及「生理上可接受」包括與醫藥投與相容之溶劑(水性或非水性)、溶液、乳液、分散介質、塗覆劑、等滲劑及吸收促進劑或延遲劑。因此「醫藥組合物」或「醫藥調配物」係指適於在個體中醫藥使用之組合物。醫藥組合物及調配物包括一定量之本發明化合物(例如,有效量之肽或擬肽)、編碼其之核酸、載體或本發明之細胞及醫藥上或生理上可接受之載劑。
醫藥組合物可經調配與具體投與途徑(全身或局部)相容。因此,醫藥組合物包括適於藉由各種途徑投與之載劑、稀釋劑或賦形劑。
調配物或腸內(經口)投與可含於錠劑(包衣或未包衣)、膠囊(硬的或軟的)、微球體、乳液、粉末、顆粒、晶體、懸浮液、糖漿或酏劑中。可使用習用非毒性固體載劑來製備固體調配物,該等載劑包括(例如)醫藥級別之甘露醇、乳糖、澱粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、滑石粉、纖維素、葡萄糖、蔗糖、碳酸鎂。亦可將補充性活性化合物(例如,防腐劑、抗細菌劑、抗病毒及抗真菌劑)納入調配物中。液體調配物亦可用於腸內投與。載劑可選自各種油,包括石油、動物油、植物油或合成油,例如,花生油、大豆油、礦物油、芝麻油。適宜醫藥賦形劑包括(例如)澱粉、纖維素、滑石粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、水稻、麵粉、白堊、矽膠、硬脂酸鎂、硬脂酸鈉、單硬脂酸甘油酯、氯化鈉、脫脂奶粉、甘油、丙二醇、水、乙醇。
用於腸內、非經腸或經黏膜遞送之醫藥組合物包括(例如)水、鹽水、
磷酸鹽緩衝鹽水、漢克氏溶液(Hank's solution)、林格氏溶液(Ringer's solution)、右旋糖/鹽水及葡萄糖溶液。調配物可含有輔助物質以接近生理條件,例如緩衝劑、張力調節劑、潤濕劑、清潔劑及諸如此類。添加劑亦可包括其他活性成份(例如殺菌劑或穩定劑)。舉例而言,溶液可含有乙酸鈉、乳酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、去水山梨醇單月桂酸酯或三乙醇胺油酸酯。其他非經腸調配物及方法闡述於以下文獻中:Bai(1997)J.Neuroimmunol.80:65-75;Warren(1997)J.Neurol.Sci.152:31-38;及Tonegawa(1997)J.Exp.Med.186:507-515。非經腸製劑可封裝在由玻璃或塑膠製得之安瓿、拋棄式注射器或多劑量小瓶中。
用於真皮內或皮下投與之醫藥組合物可包括無菌稀釋劑,例如水、鹽水溶液、不揮發油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成溶劑;抗細菌劑,例如苄醇或對羥苯甲酸甲酯;抗氧化劑,例如抗壞血酸、麩胱甘肽或亞硫酸氫鈉;螯合劑,例如乙二胺四乙酸;緩衝液,例如乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽;及調節張力之藥劑,例如氯化鈉或右旋糖。
用於注射之醫藥組合物包括水溶液(其中具有水可溶性)或分散液及用於即時製備無菌可注射溶液或分散液之無菌粉末。對於靜脈內投與,適宜載劑包括生理鹽水、抑菌水、克列莫佛ELTM(Cremophor ELTM)(BASF,Parsippany,NJ)或磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)。載劑可為溶劑或分散介質,其含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇及液體聚乙二醇及諸如此類)及其適宜混合物。可(例如)藉由使用塗層(例如卵磷脂)、在分散液情形下藉由維持所需粒徑,及藉由使用表面活性劑來維持流動性。抗細菌劑及抗真菌劑包括(例如)對羥苯甲酸鹽、氯丁醇、酚、抗壞血酸及硫柳汞。等滲劑(例如,糖、多元醇(例如甘露醇、山梨醇)、氯化鈉)可包括在組合物中。可包
裝所得溶液以供按原樣使用,或可將其凍乾,稍後可將凍乾製劑在投與前與無菌溶液合併。
醫藥上可接受之載劑可含有穩定、增加或延遲吸收或清除之化合物。該等化合物包括(例如)碳水化合物,例如葡萄糖、蔗糖或聚葡萄糖;低分子量蛋白質;降低肽之清除率或水解之組合物;或賦形劑或其他穩定劑及/或緩衝液。延遲吸收之藥劑包括(例如)單硬脂酸鋁及明膠。亦可使用清潔劑來穩定或增加或降低醫藥組合物之吸收,包括脂質體載劑。為保護免受消化,可將化合物、T細胞活化劑及/或免疫查核點抑制劑與組合物複合以使得其耐受酸性及酶性水解,或可將化合物、T細胞活化劑及/或免疫查核點抑制劑在抗性適當之載劑(例如脂質體)中複合。保護化合物、T細胞活化劑及免疫查核點抑制劑免受消化之方式已為業內習知(例如,參見Fix(1996)Pharm Res.13:1760-1764;Samanen(1996)J.Pharm.Pharmacol.48:119-135;及美國專利5,391,377,其闡述用於經口遞送治療劑之脂質組合物)。
對於經黏膜或經皮投與,在調配物中使用適於待滲透屏障之滲透劑。該等滲透劑通常為業內已知,且包括(例如)經黏膜投與、清潔劑、膽汁鹽及梭鏈孢酸衍生物。經黏膜投與可藉助鼻噴霧劑或栓劑進行(例如,參見Sayani(1996)「Systemic delivery of peptides and proteins across absorptive mucosae」Crit.Rev.Ther.Drug Carrier Syst.13:85-184)。為進行經皮投與,可將活性化合物調配成如業內通常已知之軟膏劑、油膏、凝膠或乳霜。亦可使用貼劑達成經皮遞送系統。
為進行吸入遞送,可將醫藥調配物以氣溶膠或霧劑之形式投與。對於氣溶膠投與,調配物可以微細形式與表面活性劑及推進劑一起供應。在另
一實施例中,將調配物遞送至呼吸組織之裝置係調配物在其中蒸發者。業內已知之其他遞送系統包括乾粉氣溶膠、液體遞送系統、吸入器、噴氣式霧化器及推進劑系統(例如,參見Patton(1998)Biotechniques 16:141-143;Dura Pharmaceuticals,San Diego,CA;Aradigm,Hayward,CA;Aerogen,Santa Clara,CA;及Inhale Therapeutic Systems,San Carlos,CA)。
可使用生物可降解之生物相容聚合物,例如乙烯乙酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、膠原、聚原酸酯及聚乳酸。製備該等調配物之方法為熟習此項技術者已知。材料亦可在商業上自Alza Corporation and Nova Pharmaceuticals,Inc獲得。亦可使用脂質體懸浮液(包括使用抗體或病毒外殼蛋白靶向細胞或組織之脂質體)作為醫藥上可接受之載劑。該等可根據業內已知之方法來製備,例如,如以下各項中所闡述:美國專利第4,235,871號;第4,501,728號;第4,522,811號;第4,837,028號;第6,110,490號;第6,096,716號;第5,283,185號;第5,279,833號;Akimaru(1995)Cytokines Mol.Ther.1:197-210;Alving(1995)Immunol.Rev.145:5-31;及Szoka(1980)Ann.Rev.Biophys.Bioeng.9:467)。能夠持續遞送小分子(包括肽)之生物可降解微球體或膠囊或其他生物可降解聚合物構形已為業內習知(例如,參見Putney(1998)Nat.Biotechnol.16:153-157)。可將化合物、T細胞活化劑及免疫查核點抑制劑納入膠束內(例如,參見Suntres(1994)J.Pharm.Pharmacol.46:23-28;Woodle(1992)Pharm.Res.9:260-265)。肽可附接至脂質單層或雙層之表面。舉例而言,肽可附接至含有醯肼-PEG-(二硬脂醯基磷脂醯基)乙醇胺之脂質體(例如,參見Zalipsky(1995)Bioconjug.Chem.6:705-708)。或者,可使用脂質膜(例如平面脂質膜)或
完整細胞(例如紅血球)之細胞膜中之任一形式。含有脂質體及脂質之調配物可藉由任何方式來遞送,包括(例如)靜脈內、經皮(例如,參見Vutla(1996)J.Pharm.Sci.85:5-8)、經黏膜或經口投與。
醫藥上可接受之調配物可納入約1%至99.9%之活性成份(例如,肽或擬肽、T細胞活化劑或免疫查核點抑制劑)。醫藥組合物可藉由習用熟知滅菌技術來滅菌,或可經無菌過濾。
其他醫藥調配物及遞送系統為業內已知且可用於本發明之方法及組合物中(例如,參見Remington’s Pharmaceutical Sciences(1990)第18版,Mack Publishing Co.,Easton,PA;The Merck Index(1996)第12版,Merck Publishing Group,Whitehouse,NJ;Pharmaceutical Principles of Solid Dosage Forms,Technonic Publishing Co.,Inc.,Lancaster,Pa.,(1993);及Poznansky等人,Drug Delivery Systems,R.L.Juliano編輯,Oxford,N.Y.(1980),第253頁至第315頁)
醫藥調配物可以單位劑量形式調配以便於投與且達成劑量均勻性。如本文所用「單位劑型」係指用於投與欲治療個體之物理上離散之單位劑量;每一單元均含有產生期望效應之預定量之化合物與醫藥載劑或賦形劑之組合。
本文使用以下縮寫:
Cha:環己基-丙胺酸
Phe-2,3,4,5,6-F:氟化物在苯丙胺酸之苯基殘基上之位置2,3,4,5,6處
F:氟化物
Bpa:苯甲醯基-苯丙胺酸
Nal(2):2-萘基-丙胺醯基
Ala(3-Bzt):(3-苯并噻吩基)-丙胺酸
Nal(1):1-萘基-丙胺醯基
Dph:二苯基-丙胺酸
Ala(tBu):第三丁基-丙胺醯基
Cys(tBu):第三丁基-半胱胺酸
Phe-3,4,5-F:氟化物在苯丙胺酸之苯基上之位置3,4,5處
Phe-4CF3:CF3在苯丙胺酸之苯基殘基上之位置4處
Phe-3Br,4Cl,5Br:溴化物在苯丙胺酸之苯基上之位置3處,氯化物在位置4處,且溴化物在位置5處
Phe-4Cl:氯化物在苯丙胺酸之苯基上之位置4處
分別P1、P2、P3、P4、P5、P6等,及(P1、P2、P3、P4、P5、P6等);及P7、P8、P9、P10、P11、P12等,及(P7、P8、P9、P10、P11、P12等):P1、P2、P3、P4、P5、P6等之鄰接序列;及P7、P8、P9、P10、P11、P12。
除非另有定義,否則本文所用之所有技術及科學術語皆具有與熟習本發明所屬領域技術者通常所理解之含義相同的含義。儘管在本發明之實踐或測試中可使用類似或等效於本文所述之方法及材料的方法及材料,但本文闡述適宜方法及材料。
本文所引用之所有公開案、專利及其他參考文獻之全部內容皆以引用方式併入。倘若出現衝突,則以本說明書(包括定義)為準。
除非上下文另外明確指出,否則本文所用單數形式「一(a、an)」、「該」及「係(is)」包括複數個指示物。因此,例如,對「化合物」之提及包括複數種化合物,且對「殘基」或「胺基酸」之提及包括提及一或多種殘基及
胺基酸。
已闡述眾多本發明實施例。然而,將理解,可在不背離本發明之精神及範圍之情況下作出各種修改。因此,以下實例意欲闡釋但並非限制在申請專利範圍中闡述之本發明之範圍。
此實例闡述材料及若干方法。此實例亦闡述經分析肽/擬肽之序列。
化學品及試劑 博來黴素係購自Wako Pure Chemical Co.(Osaka,Japan),且將其溶解於蒸餾水中至10mg/ml。碘化丙啶(PI)及阿德力黴素係購自Sigma(St.Louis,MO)。
細胞培養 在37℃/5% CO2下在補充有10%胎牛血清(IBL:Immuno-Biological Laboratories,Gunma,Japan)之RPMI 1640(Sigma)中培養人類T細胞白血病源性細胞系Jurkat。在37℃/5% CO2下在具有10%胎牛血清之DMEM中培養人類胰臟癌源性細胞系MIAPaCa2。
細胞週期分析 藉由如Kawabe(1997)Nature 385:454-458所闡述之流式細胞術分析經博來黴素或阿德力黴素處理之細胞之細胞週期狀態。簡言之,在4℃下再懸浮200萬個細胞並在200μl克裡尚氏溶液(Krishan’s solution)(0.1%檸檬酸鈉、50μg/ml PI、20μg/ml RNase A及0.5% NP-40)中培育1hr,並藉由流式細胞術FACScanTM(Beckton Dickinson,Mountain View,CA)利用程式CELLQuestTM(Beckton Dickinson)進行分析。
此實例闡述指示各種肽之G2廢除活性及各種序列排列對活性之效應(包括降低序列長度之效應)之數據。
使用人類白血病源性Jurkat細胞系實施G2查核點廢除之流式細胞術分析。簡言之,利用各種劑量之肽/擬肽及40μg/ml博來黴素將經培養細胞處理24hr。利用碘化丙啶對細胞之DNA進行染色並藉由流式細胞術進行分析。該等結果概述於表2中。
在用於對抗博來黴素處理之Jurkat細胞時每一肽/擬肽之劑量反應曲線顯示於圖1、5、6、7、8、11及12中;Y軸指示處理後24hr之G2/M Jurkat細胞%。
使用經秋水仙鹼(5μg/ml或0.5μg/ml)及各種劑量之肽/擬肽處理24hr之人類T細胞白血病Jurkat細胞系實施化合物對M期查核點廢除之流式細胞術分析(圖12)。對細胞之DNA進行染色並藉由如上文所闡述之流式細胞術進行分析。結果亦概述於表2中。
當用於對抗秋水仙鹼處理之Jurkat細胞時每一肽/擬肽之劑量反應曲線顯示於圖2及14中;Y軸指示處理後24hr之G2/M Jurkat細胞%。
表2. 誘導G2查核點廢除或副作用之化合物之劑量
第1欄:(代號)
第2欄:在單獨使用時出現副作用(μM)
第3欄:G2廢除劑量(μM)
第4欄:在與秋水仙鹼一起使用時出現副作用(μM)
「在單獨使用時出現副作用」指示產生Jurkat細胞週期紊亂之肽/擬肽劑量,亦即,出現顯著量之SubG1細胞(死亡細胞)或每一者之DNA含量變化大於平時之細胞。舉例而言,在FACS分析中G1細胞通常展現尖峰,但在處理後,當經細胞週期受到擾亂時,峰變得更寬且更低,指示不正確細胞週期進展或細胞死亡之開始。「G2廢除劑量」指示在與40μg/ml博來黴素一起處理24小時後產生可檢測到之G2查核點廢除活性之肽/擬肽劑量。「在與秋水仙鹼一起使用時出現副作用」指示在與5μg/ml秋水仙鹼一起處理24小時後產生Jurkat細胞週期紊亂之肽/擬肽劑量。
在各種細胞系中研究與順鉑組合時CBP501之G2查核點廢除活性。簡
言之,將順鉑(3μg/ml)及CBP501(0.4μM、2μM及10μM)同時添加至細胞培養物中,將該細胞培養物在37℃以及5% CO2下培育3hr。吸出培養基,添加不含該等化合物之新鮮培養基並將細胞再培育45hr。使用胰蛋白酶-EDTA溶液收穫細胞(包括浮游細胞),與克裡尚氏溶液一起培育,並如先前所闡述藉由流式細胞術分析DNA含量。該等結果概述於表3中。除HUVEC以外,陰影突顯表示G2群體顯著喪失且subG1群體有所增加之細胞系,指示CBP501可引起G2查核點廢除及對順鉑之敏化。至少高達50μM之CBP501未敏化HUVEC細胞(其為具有正常G1查核點之細胞)之觀察結果指示CBP501對G2查核點係特異的而非非特異的。
研究不同劑量之各種化合物對經博來黴素(Bleo)或阿德力黴素(ADR)處理之人類胰臟癌源性細胞系MIAPaCa2之G2查核點廢除活性。簡言之,
將細胞與化合物及博來黴素(10μg/ml)或阿德力黴素(1μg/ml)一起培育3小時。更換培養基並再培育21小時。藉由碘化丙啶對所收穫細胞之DNA進行染色並如先前所闡述利用流式細胞術分析。在圖3中,sub-G1細胞群體之%指示為死亡細胞。結果指示CBP501可以劑量依賴性方式使MIAPaCa2細胞對博來黴素及阿德力黴素敏感。
圖4A及4C係利用其中一個胺基酸殘基與另一者不同之肽對實施之G2查核點廢除活性之概述。如上文所闡述使用博來黴素處理之Jurkat細胞分析該等肽之G2查核點廢除活性。圖4B係利用其中一個胺基酸殘基與另一者不同之肽對實施之M查核點廢除活性及/或非特異性毒性分析之概述。如上文所闡述使用秋水仙鹼處理之Jurkat細胞分析該等肽之M查核點廢除活性及/或非特異性毒性。
研究不同劑量之各種富精胺酸序列對經博來黴素處理之細胞之G2查核點廢除活性。簡言之,將肽以0.2μg/ml、0.39μg/ml、0.78μg/ml、1.56μg/ml、3.125μg/ml、6.25μg/ml、12.5μg/ml、25μg/ml及50μg/ml添加至具有博來黴素(40μg/ml)之Jurkat細胞培養基中。隨後在24小時後收穫細胞,利用克裡尚氏溶液染色,並如先前所闡述利用流式細胞術分析。在圖5中繪製G2/M細胞%(Y軸)對肽劑量(X軸)之圖形。該等數據指示與具有更少或更大數量殘基之序列相比,「(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(SEQ ID NO:137)」富鹼性殘基序列係最好的序列。
研究不同劑量之不含(D-Bpa)之肽對經博來黴素處理之細胞之G2查核點廢除活性。簡言之,將肽以0.2μg/ml、0.39μg/ml、0.78μg/ml、1.56μg/ml、3.125μg/ml、6.25μg/ml、12.5μg/ml、25μg/ml及50μg/ml添加至具有博來黴素(40μg/ml)之Jurkat細胞培養基中。隨後收穫細胞並如先前所闡述利用
流式細胞術分析。在圖6中繪製G2/M細胞%(Y軸)對肽劑量(X軸)之圖形。此結果指示序列(Tyr)(Ser)(Pro)(Trp)(Ser)(Phe-2,3,4,5,6F)(Cha)(SEQ ID NO:138)與序列(Bpa)(Ser)(Trp)(Ser)(Phe-2,3,4,5,6F)(Cha)(SEQ ID NO:139)具有相當的G2查核點廢除活性。
研究不同劑量之富精胺酸及富離胺酸序列對經博來黴素處理之細胞之G2查核點廢除活性。簡言之,將肽以指示劑量(X軸)添加至具有博來黴素(40μg/ml)之Jurkat細胞培養基中。隨後收穫細胞並如先前所闡述利用流式細胞術進行分析。在圖7中繪製G2/M細胞%(Y軸)對肽劑量之圖形。結果指示Arg序列似乎提供較富鹼性胺基酸序列之Lys序列更好之活性且Gln並非序列之功能所必需的。
研究富精胺酸區之位置有所變化之序列之G2查核點廢除活性。簡言之,將肽以所指示劑量(X軸)添加至具有博來黴素(40μg/ml)之Jurkat細胞培養基中並保持24小時。隨後收穫細胞並如先前所闡述利用流式細胞術進行分析。在圖8中繪製G2/M細胞%(Y軸)對肽劑量之圖形。
數據指示肽之G2廢除活性不因改變富精胺酸區之位置而顯著改變。另外,CBP501可溶於水,而CBP511不可溶於水。此差異對具體藥物遞送系統可能有利,乃因一些系統優選水不溶性化合物。
圖9圖解說明利用其中僅一個胺基酸殘基在各對之間有所不同之各種肽對實施之分析之概述。使用如所闡述之博來黴素處理之Jurkat細胞分析該等肽之G2查核點廢除活性。
每一胺基酸之大小、電荷及疏水性決定序列如何有效地適合於靶分子。肽或擬肽之側鏈可自由移動,因此即使具有一或兩個不利側鏈,肽或擬肽亦可適合靶分子之袋或槽。該概述指示每一側鏈均具有較佳大小,其
表明每一側鏈之靶蛋白質之結合區(袋或槽)之大小。舉例而言,具有環結構(例如苯、吲哚及環己烷)之側鏈決定G2廢除或M廢除及/或非特異性毒性之強度;參見圖9及圖4,其中大於5員之環結構影響G2廢除活性(在P1及P2處具有中等大小可增加G2廢除活性,而過大之結構(P1、P5及P6)增加M廢除及/或非特異性毒性)。
沒有環結構之側鏈似乎沒有作用。因此,為獲得較佳活性,P1、P2、P4及P6處之環結構之大小應適當,且期望在P3及P5處沒有環結構或小於6員之環結構。P1、P2及P6之適當環來自1員至6員環,兩個環藉助融合而具有5個或6個成員。對於P4,大小適當之環係兩個環之融合,該兩個環中之每一者均為5員或6員的。因此,對於P1,Cha或Nal(2)似乎最適合;對於P2,Phe-2,3,4,5,6F、Phe-3,4,5F或Phe-CF3似乎最好。該等側鏈之大小指示在此區發生相互作用之靶分子中存在兩個袋或單一較大袋。對於P3及P5,諸如Ser或Pro等小側鏈係可接受的且諸如Arg等較大側鏈亦可接受,指示在靶分子之此區中不存在袋,因此側鏈可能僅與靶標相對。然而,環結構可能使得肽或擬肽能夠與另一分子(即,不同於靶分子)發生相互作用,此又可增加副作用。對於P6,Bpa或Ser-Tyr似乎好於單獨Tyr或較小側鏈,指示較深槽水平地位於靶標中。基於P4之殘基之大小,在靶標中亦可存在用於P4之淺且較寬之袋。
如所闡述使用Jurkat及博來黴素分析以下肽。肽之序列為如下:CBP501,(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(SEQ ID NO:80);CBP700,(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(SEQ ID NO:96);CBP701,(d-Arg)(d-Arg)
(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Trp)(d-Arg)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(SEQ ID NO:97);CBP702,(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Trp)(d-Arg)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(SEQ ID NO:98);及CBP703,(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(SEQ ID NO:99)。結果指示CBP700、701、702、703儘管短於其他例示之肽,但其保留與具有顯著G2查核點廢除活性之其他肽相當之G2查核點廢除活性(圖11)。
在由CBP501引起之G2查核點廢除活性與非特異性毒性(M查核點廢除)之間實施比較。簡言之,對於G2查核點廢除活性及非特異性毒性分別利用40μg/ml博來黴素或0.5μg/ml秋水仙鹼處理Jurkat細胞。如先前所闡述藉由流式細胞術分析每一經處理細胞中之DNA量。數據指示G2查核點係以CBP501劑量依賴性方式廢除,同時在高達50μM之肽下不存在非特異性毒性,如藉由未變化之M期停滯之細胞之百分比所確定(圖12)。
此實例闡述各種肽之肽/擬肽激酶抑制活性及血清穩定性分析。
由於兩種激酶Chk1及Chk2對於G2查核點機制至關重要,故實施兩種酶之激酶抑制分析。使用「PepTag(R)Non-Radioactive Protein Kinase Assays」,Promega,根據公司之方案實施活體外激酶抑制分析,只是使用經純化CHK2激酶替代PKC。經純化PKC係購自Upstate Biotechnology,Inc。該等結果顯示於表4A中。
活體外激酶抑制分析係由CycLex,Co.Ltd.,Nagano,Japan實施。簡言之,使用具有組胺酸標籤之桿狀病毒源性重組體人類全長Chk1或融合有GST之大腸桿菌(E.Coli)源性重組體人類全長Chk2作為激酶。使用大腸桿菌源性重組體GST-Cdc25C(胺基酸167-267)作為受質。反應條件為20mM Hepes-KOH(pH7.5)、1mM DTT、80μg/ml BSA、10mM MgCl2及50mM ATP,在30℃下,保持60min。利用酶聯免疫分析藉由抗Cdc25C-磷酸化S216抗體檢測GST-Cdc25C上絲胺酸216之磷酸化。該等結果顯示於表4B中。
數據指示在高於G2廢除劑量之劑量下發生Chk1及Chk2激酶抑制(由CBP500、501、505、506、603引起之G2廢除之IC50皆小於1μM)。該等結果表明該等肽除抑制Chk1/2分子以外亦具有作用機制。或者,肽可能累積在細胞內使得其在細胞內之濃度大於在周圍培養基中之濃度。
在小鼠及人類血清中實施血清分析來確定肽之穩定性。簡言之,在37℃下將肽(10mM或2.5mM)與剛剛製備之人類血清一起培育1hr。在37℃下將CBP501(10mM)與剛剛製備之小鼠血清一起培育1hr。用有或沒有肽及博來黴素(40μg/ml)之血清處理Jurkat細胞並培育24hr。如先前所闡述藉由流式細胞術測定G2期細胞之群體。>藉由比較經處理血清之G2細胞%及利用培養基處理之肽、博來黴素及Jurkat細胞產生之標準曲線(表5A)測定血
清處理之肽之殘餘G2查核點廢除活性。在利用乙醇處理去保護之後利用HPLC測定殘餘CBP501量(表5B)。數據指示,具有d型胺基酸之肽(例如CBP501及CBP603)在血清中較具有l型胺基酸之肽(例如CBP413)更穩定。
此實例闡述CBP501對經培養細胞之抗細胞增殖活性。此實例亦闡述證實肽/擬肽之活體內活性之數據。
為證實化合物之抗細胞增殖活性,單獨及組合利用CBP501(10μmM)、順鉑(1μg/ml、3μg/ml或9μg/ml)及奧沙利鉑(1μg/ml、3μg/ml或9μg/ml)處理經培養MIAPaCa2人類胰臟癌細胞。簡言之,將細胞以300個細胞/孔平鋪於6孔板中,培育過夜,並利用化合物處理3小時。更換培養基並再培養10天。隨後利用70%甲醇固定細胞,利用0.1%結晶紫染色並進行可視化。群落形成分析結果指示CBP501可使順鉑及奧沙利鉑對抗MIAPaCa2細胞之細胞毒性活性增強。
使用正常人類臍內皮細胞(HUVEC)實施類似研究。由於正常細胞不形成結腸,故將其以3000個細胞/孔而非300個細胞/孔進行平鋪。結果指示肽本身不擾亂正常細胞之生長,且肽亦不加強順鉑及奧沙利鉑對細胞之細胞毒性活性。因此,與對核酸損害治療敏感之高增殖細胞(例如癌細胞)相反,
肽似乎不展現對抗經受核酸損害處理之正常細胞之顯著G2廢除活性。結果指示肽在敏化增殖細胞而非抵抗核酸損害治療之正常細胞中具有特異性。
實施阿爾瑪藍分析以分析與及不與順鉑一起之CBP501之生長抑制活性。簡言之,以一式兩份方式使MIAPaCa2細胞在96孔板中以2500個細胞/孔暴露於1μM、3μM、10μM、30μM、100μM順鉑或0.22μM、0.67μM、2μM、6μM及18μM有或沒有10μM順鉑之CBP501達3小時。更換培養基並再培育24小時、48小時或72小時。在培育後,將20μl 90%阿爾瑪藍試劑添加至每一孔中並再保持6小時用於藉由螢光強度檢測細胞存活率。使用具有激發530nm及發射590nm之Spectrafluor Plus板讀取器量測螢光強度。計算IC50(表6)。
此研究指示以莫耳劑量計單獨CBP501對細胞生長之抑制好於順鉑。CBP501在與接近癌症治療所用順鉑之劑量之10μM順鉑組合時可以遠遠更低之劑量抑制細胞生長。此外,CBP501之生長抑制活性長於順鉑;在使用CBP501時72小時時之IC50遠遠好於順鉑。
藉由在腹膜內注射CBP501(40mg/kg)之後的1hr、3hr及6hr對小鼠血清中CBP501進行定量來測定CBP501之活體內半衰期。在利用乙醇處理對自經注射小鼠吸出之小鼠血清進行去保護之後,利用HPLC測定殘餘完整CBP501量(表7)。
為測定對肽之耐受性,利用CBP501(5mg/kg、8mg/kg或10mg/kg)將十隻小鼠之群組靜脈內注射一次或利用CBP501(50mg/kg、80mg/kg或100mg/kg)將其腹膜內注射一次。觀察經注射小鼠一週之存活(表8)。
為研究化合物之活體內效能,在scid小鼠中皮下植入MIAPaCa2人類胰臟癌細胞。當原發性腫瘤之大小變成0.1cm3(第0天)或更大(例如直徑為7mm或8mm)時開始治療。以單獨或組合方式腹膜內投與CDDP(3mg/kg)及CBP 501(10mg/kg或40mg/kg)。一週三次使用測徑器量測腫瘤大小,且使用以下公式計算體積:重量(mg)=[寬度(mm)2×長度(mm)]/2。繪製每一治療組之平均腫瘤大小對開始治療後的天數的圖形(n=4)(圖10)。
結果指示單獨CBP501治療可抑制活體內人類胰臟癌細胞之生長。結果進一步指示,CBP501可增加順鉑之抗腫瘤活性。
此實例包括肺癌及使用CBP501之研究之闡述。
肺癌係西方國家成人癌症死亡之主要原因。在USA中,2009年診斷出219,440例新病例且159,390例死亡係由此疾病造成,佔所有癌症死亡之約29%(例如,參見American cancer society,Cancer Facts & Figures 2009)。所有新肺癌病例之百分之八十七(87%)皆係非小細胞肺癌(NSCLC)組織
學,其中存在三種主要類型:腺癌、鱗狀細胞(表皮樣)癌及大細胞癌(American cancer society,Cancer Facts & Figures 2009)。儘管手術技術及組合療法有所改良,但診斷患有NSCLC之患者之預後仍然較差。對於在早期在疾病仍係局部的時檢測出來之病例,五年存活率為47%,但大多數NSCLC患者(68%)(例如,參見AJCC Cancer Staging Manual.Fleming ID編輯,Philadelphia:Lippincott-Raven;2002)經診斷患有需要化學療法之晚期疾病(III期)或轉移疾病(IV期)。患有III期疾病之彼等患者之5年存活率為8.4%且患有IV期者為1.6%,其中大多數患者患有晚期NSCLC,在2年內死於疾病(例如,參見American cancer society,Cancer Facts & Figures2009;AJCC Cancer Staging Manual.,Fleming ID編輯,Philadelphia:Lippincott-Raven;2002)。亟需引入可使患者存活及生活品質顯著改良之新療法。
具有良好體能狀態之患有晚期(IIIb或IV)NSCLC之患者可獲益於化學療法(例如,參見Souquet,PJ.等人,Lancet 342:19-21,1993;Marino,P.等人,Chest 106:861-865,1994;Marino,P.等人,Cancer 76:593-601,1995;Helsing,M.等人,Eur J Cancer 34:1036-1044,1998;Cullen,MH.等人,J Clin Oncol 17:3188-3194,1999;Pfister,DG.等人,J Clin Oncol 22:330-353,2004)。在與單一藥劑或不存在化學療法比較時,化學療法雙聯體已顯示可改良存活(例如,參見Bunn,PA.等人,J Clin Oncol 20:23S-33S,2002)。在晚期NSCLC中目前推薦之一線化學療法方案包括鉑化合物(順鉑[CDDP]或卡鉑)與吉西他濱、長春瑞濱或紫杉烷(太平洋紫杉醇或多西他賽)、伊立替康、依託泊苷、長春鹼及/或培美曲塞之組合作為參考方案(Pfister,DG.等人,J Clin Oncol 22:330-353,2004)。
隨機化試驗已顯示儘管方案在毒性、便利性及成本方面略微不同,但各種鉑雙聯體組合皆具有類似效能。結果發現總體反應率(ORR)在17%與32%之間,中值存活時間為7個月至10個月,且1年存活率為30%至45%(例如,參見Scagliotti,G.等人,Semin Oncol 32:S5-S8,2005;Schiller,JH.等人,N Engl J Med 346:92-98,2002;Scagliotti,G.等人,J Clin Oncol 20:4285-4291,2002;Kelly,K.等人,J Clin Oncol 19:3210-3218,2001;Fossella,F.等人,J Clin Oncol 21:3016-3024,2003)。
三聯體化學療法之大多數情況迄今尚未進一步延長存活,而是增加了毒性。然而,卡鉑+太平洋紫杉醇+貝伐珠單抗(bevacizumab)之最近研究顯示一些存活益處(例如,參見Sandler,A.等人,N Engl J Med 355:2542-2550,2006),表明增添具有非重疊毒性之靶向劑可改良雙聯體化學療法。正藉助使用預測抗腫瘤活性之分子標記物積極嘗試最佳化化學療法之益處。預測NSCLC中化學治療劑效能之基因正開始出現(例如,參見Bepler,G.等人,ASCO Educational Book:350-352,2008;Sommers,K.等人,Proc Am Soc Clin Oncol 26 2008)。其中尤其值得注意的是諸如ERCC1、BRCA1/2、RRM1及TS等標記物(表9)。
此實例包括指示某些人類患者亞群體有利地響應肽及化學治療(核酸損害)劑之組合之數據之闡述。意外地,該等數據顯示針對在利用CBP501治療前每立方毫米血液具有小於10,000個白血球(WBC)計數之非鱗狀非小細胞肺癌(NSCLC)之臨床研究之患者群體之亞組可受益於CBP501之投與。
CBP501係完全由D-胺基酸組成之合成型十二肽(圖13)。其係TAT-S216A之演進型式,在基於DNA含量流式細胞術之分析中,該TAT-S216A針對其因應DNA損害劑之治療而減少G2(4N)細胞之累積之活性經最佳化。
已在總共78名患者中執行兩個I期劑量範圍及藥物動力學研究來研究CBP501:CBP501之單一療法研究,其係在第1天、第8天及第15天作為60min的i.v.輸注投與,每4週重複一次;及每3週投與一次之與順鉑組合之療法研究(例如,參見Shapiro,GI.等人,ClinCancer Res.5月15日;17(10):3431-42,2011)。
I期單一藥劑研究(CBP04-01):此係首次用於人體之單一藥劑I期劑量遞增試驗,其探索在患有晚期實體腫瘤之患者群體中每28天進行三次注射(第1天至第8天至第15天)之方案。總共投與68個週期,每名患者之中值週期數均為2(範圍1至8)。兩名患者達成7個週期之穩定疾病治療,一名診斷為患有胰臟癌且另一名診斷為患有卵巢癌。大多數患者(87%)由於疾病進展中斷了研究。沒有患者由於毒性而中斷(例如,參見Shapiro,GI.等人,ClinCancer Res.5月15日;17(10):3431-42,2011)。
CBP501與順鉑(CBP06-01)之組合之I期研究:此I期研究之主要目標
係確定CBP501及順鉑在每21天一次組合投與時之MTD及RD。首先以1小時之輸注投與CBP501,隨後在開始治療後2小時投與順鉑。亦根據針對I期單一藥劑研究研發之同一方案給予患者針對過敏反應之預防性治療(氯雷他定(loratadine)、地塞米松(dexamethasone)、雷尼替丁(ranitidine)及苯海拉明(diphenhydramine))。
在三個US中心中總共治療48名患者且總共投與182個週期,每名患者之中值週期數均為4(範圍1至13)。在3.6mg/m2至36.4mg/m2之劑量範圍內探索CBP501。所研究之最高劑量量為CBP501 36.4mg/m2及順鉑75mg/m2。在此劑量量下,2/6的患者經歷過敏反應,此係由研究者來判斷,且此可作為劑量限制(3級)。MTD視為稍低於該劑量限制之劑量量,其為CBP501 24.3mg/m2及順鉑75mg/m2。在若干患者中均記錄到活性之提示(例如,參見Shapiro,GI.等人,ClinCancer Res.5月15日;17(10):3431-42,2011)。
順鉑(順式-二氨絡二氯鉑)(無機鉑配位錯合物)優先在DNA之鳥嘌呤及腺嘌呤殘基之N7位置處反應以形成各種單功能及雙功能加合物。該等加合物因阻止需要使兩個DNA鏈分離之各種細胞過程(例如複製及轉錄)而促成藥物之細胞毒性。
順鉑由於其充分抵抗睪丸癌及卵巢癌之抗贅瘤活性而已在臨床上針對各種腫瘤得到評價。由於順鉑之批准,其一直以來為關鍵化學治療劑且已單獨或與其他抗贅瘤劑組合廣泛使用。亦已知順鉑可在呈現其他腫瘤類型(例如肺癌、膀胱癌及頭頸癌)之患者中賦予實質姑息性效應,且其包括在該等疾病所使用之大多數化學療法方案中。
培美曲塞二鈉係具有獨特的6-5經稠合吡咯并[2,3-d]嘧啶核之結構上
新穎之抗葉酸劑,且其抑制參與合成細胞生長及分裂所必需受質(例如胸腺嘧啶核苷酸合酶、二氫葉酸還原酶及甘胺醯胺核糖核苷酸甲醯基轉移酶)之葉酸依賴性酶之功能(例如,參見Taylor,EC.等人,J Med Chem 35:4450-4454,1992;Schultz,RM.等人,Anticancer Res 19:437-443,1999)。
已在臨床試驗中在眾多種腫瘤類型(包括肺、乳房、結腸、胸膜、胰臟、胃、膀胱、頭頸及子宮頸)中證實培美曲塞具有活性。培美曲塞與順鉑之組合係在2004年2月4日由FDA批准用於治療患有MPM之患者,該患者之疾病不可切除或換言之其不為治癒性手術之候選者。
在患有NSCLC之化學療法初治患者之II期研究中,培美曲塞與順鉑或卡鉑之組合所產生效能結果與其他鉑雙聯體相當(例如,參見Scagliotti,G.等人,Clincancer Res 11:690-696,2005;Zinner R.等人,Cancer 104:2449-2456,2005;Manegold,C.等人,Ann Oncol 11:435-440,2000;Shepherd,FA.等人,Cancer 92:595-600,2001)。另外,培美曲塞具有優良安全性概況及便利投與時間表。
最近隨機化之III期研究在非劣性設計試驗中比較在每3週經順鉑加吉西他濱或順鉑加培美曲塞治療長達六個週期之1725名患有III期或IV期NSCLC之化學療法初治患者之間的整體存活(OS)(例如,參見Scagliotti,G.等人,J Clin Oncol 26:3543-3551,2008;Pimentel,F.等人,Proc Am Soc Clin Oncol 26(第I部分/共II部分):448s,2008,(增刊15S)(摘要)#448s)。順鉑加培美曲塞之OS並不次於順鉑加吉西他濱(兩種治療之中值存活均為10.3個月)。在患有腺癌(n=847;分別12.6個月及10.9個月)及大細胞癌組織學(n=153;分別10.4個月及6.7個月)之患者中,順鉑加培美曲塞之OS在
統計學上優於順鉑/吉西他濱。對於順鉑加培美曲塞,3級或4級嗜中性球減少症、貧血及血小板減少症、發熱性嗜中性球減少症及脫髪之比率顯著低於順鉑/吉西他濱治療組,但3級或4級噁心更為普遍。
臨床研究設計:開放標籤、多中心、II期隨機化、兩組的比較研究。該方案評估有或沒有CBP501之全劑量順鉑及培美曲塞。將患者以1:1比率隨機化至培美曲塞、順鉑及CBP501(A組)或培美曲塞及順鉑(B組)。根據疾病之基線狀態(IIIb對IV)、腦轉移之存在及患者對於貝伐珠單抗療法是否合格對隨機化進行分層。
研究者/試驗位置:在USA、俄羅斯(Russia)、加拿大(Canada)、巴西(Brazil)、阿根廷(Argentina)及秘魯(Peru)中接近40個中心。
主要:為在患有局部晚期(具有惡性胸膜滲出液或心包滲出液之IIIB期)或轉移(IV期)非鱗狀NSCLC之患者中比較有或沒有CBP501之順鉑及培美曲塞之效能、無進展存活。
次要:為描述研究方案之安全性概況及除無進展存活以外之效能參數(例如整體存活)。
1.在開始任何研究特異性程序之前獲得簽名知情同意書。
2.在組織學上或細胞學上證實非鱗狀非小細胞肺癌(NSCLC)之診斷,不適於根治性切除術,具有胸膜或心包滲出液之IIIB期或IV期,該研究群體未接受先前化學療法或其他全身性治療。
3.根據實體腫瘤中之反應評估準則(RECIST),存在至少一個一維可量測之病灶。
4.男性或女性患者為至少18歲。
5. ECOG體能狀態(PS):0至1。
6.預期壽命>3個月。
7.若在研究藥劑之第一劑量之前完成3週,則容許先前局部放射療法。
8.對於用於疼痛控制之現有骨病灶,容許伴隨的姑息性放射療法。
9.若在研究藥劑之第一劑量之前至少4週實施先前手術,則先前手術係容許的,且患者應完全恢復。
10.器官功能充足,包括以下:
骨髓:白血球(WBC)計數4×109/L,絕對嗜中性球計數(ANC)1.5×109/L,血小板計數100×109/L,血紅素9g/dL肝:膽紅素1.5×正常值上限(ULN),天冬胺酸胺基轉移酶(AST/SGOT)及丙胺酸胺基轉移酶(ALT/SGPT)2.5×ULN(或若存在肝轉移,則5×ULN),INR1.5×ULN,白蛋白3.0g/dL。
腎:血清肌酸酐1.5mg/dL或肌酸酐清除率45mL/min(根據Cockroft-Gault公式計算)。
11.具有生育潛能之女性患者必須具有陰性懷孕測試,且在研究之前的4週及研究藥物最後劑量後的4個月使用如研究者批准之至少一種形式之避孕。出於此研究之目的,生育潛能定義為:「除處於絕經後至少一年或以手術方式不育者以外之所有女性患者」。
12.在研究期間及研究藥物最後劑量後的4個月,男性患者必須使用研
究者批准之一種形式之障壁避孕。
13.能夠與治療及隨訪合作。
1.在進入研究之前實施放射療法之骨髓超過30%。
2.腫瘤試樣中存在神經內分泌特徵。
3.先前治療利用化學療法、新穎生物療法(小分子、抗體)、免疫療法。
4.不存在可量測病灶。
5.在研究者看來,存在持續或活動性感染、症狀性鬱血性心臟衰竭、不穩定性心絞痛、症狀性或控制不佳之心律不整、不受控之血栓或出血性病症或任何其他嚴重的不受控醫學病症。
6.在進入研究5年內存在另一惡性病之任一先前歷史(除治癒之皮膚基底細胞癌或治癒之子宮頸原位癌以外)。
7.存在可妨礙患者順從性之任一顯著中樞神經系統(CNS)或精神異常。
8.存在外周神經病變>1級(根據NCI-CTCAE版本3)之證據。
9.在進入研究前的28天內利用任一其他研究藥劑治療,或參與另一臨床試驗。
10.懷孕或哺乳患者或具有分娩潛能之任一患者未使用充足避孕。
11.存在已知之HIV、HBV、HCV感染。
12.存在症狀性腦轉移。具有腦轉移之患者必須:在完成確定性療法後在局部療法(手術或輻射)後至少2週內具有穩定神經狀態,且在進入研究前已中斷皮質類固醇之使用達1週。
不存在可能混淆神經及其他AE之評估之神經功能障礙。
13.無法或不願意服用葉酸、維生素B12或皮質類固醇。
14.阿斯匹林(aspirin)或除劑量1.3克/天之阿斯匹林外之其他非類固醇消炎劑不能中斷達5天時段(對於諸如吡羅昔康(piroxicam)之長效藥劑為8天時段)。
15.存在顯著重量損失(在前6週期間重量損失10%體重)。
16.存在臨床上顯著的(藉由體檢)第三空間體液聚集物,例如腹水或胸膜滲出液,其在進入研究前無法藉由引流或其他程序得到控制。
總共治療195名患者,其中利用CBP501、順鉑及培美曲塞(A組)治療97名患者且利用培美曲塞及順鉑(B組)治療98名患者。
調配物:用於注射之CBP501係含有包含CBP501肽乙酸鹽(肽基單元)之無菌凍乾粉之單一劑量小瓶(20mg)中提供。為進行投與,在5%右旋糖注射液(USP)中重構小瓶內容物,並將其添加至具有5%右旋糖注射液(USP)之100mL i.v.袋中。
培美曲塞:使用培美曲塞之市售調配物,其中在20mL注射用0.9%氯化鈉溶液中進行重構,然後將其稀釋至100mL。
順鉑:使用順鉑之市售調配物且在250mL用於投與之生理鹽水中稀釋。
每3週在同一天(第1天)投與CBP501、培美曲塞及順鉑,並保持最多六個週期。將週期視為3週(21天)。
1.以1小時之i.v.輸注投與CBP501 25mg/m2。
2.在CBP501輸注之後立即以10分鐘之i.v.輸注投與培美曲塞500mg/m2。
3.在培美曲塞輸注之後立即以1小時之i.v.輸注投與順鉑75mg/m2。
1.以10分鐘之i.v.輸注投與培美曲塞500mg/m2。
2.在培美曲塞輸注之後立即以1小時之i.v.輸注投與順鉑75mg/m2。
每一組合均經由中樞或外周靜脈通路來投與。
1.維生素補充物:每天指導所有患者服用低劑量口服葉酸製劑或具有葉酸之多種維生素劑。在培美曲塞之第一劑量之前的7天時段期間必須已服用至少5個葉酸日劑量,且在整個療程期間及培美曲塞之最後劑量之後的21天應繼續投藥。所建議之葉酸劑量在350μg至1000μg之範圍內。患者亦必須在培美曲塞第一劑量之前的一週期間接受一次(1)維生素B12之肌內注射且此後每3個週期接受一次。後續的維生素B12注射可在培美曲塞之同一天給予。維生素B12之劑量為1000μg。
2.在治療投與日之前及之後,每天兩次經口投與4mg地塞米松。
3.預防性止吐治療:根據標準治療中心方案由5HT3拮抗劑+類固醇組成。視需要給予患者其他口服止吐劑。
˙在沒有心血管損害之患者中建議以下水份(hydration)方案。在研究者中心常規投與之類似方案可能已實施:
1.患者接受總共1.5公升至2.0公升具有20mEq KCl/公升及1g
MgSO4/公升之水份(5%右旋糖或½生理鹽水),此係以500mL/小時運行。
2.在患者接受1小時之水合物輸注之後,藉由IV推注投與12.5g甘露醇。
3.然後經1小時輸注順鉑輸注(以1mg/mL在生理鹽水中混合),同時繼續水份輸注。
4.若有必要維持尿排出量在水份之持續時間內為250mL/小時,則投與額外甘露醇(12.5-50.0g,藉由IV推注)。
˙對於經CBP501(A組)治療之患者,推薦其接受以下預防性方案以降低由組織胺釋放引起之症狀之發病率及嚴重性:
1.在每一CBP501輸注前,投與苯海拉明(DPH)50mg IV及雷尼替丁50mg IV(或另一組織胺H2拮抗劑)。
2.在投與CBP501之前(第-1天)、在投與CBP501當天(第0天)及在投與CBP501之後(第1天)PO投與氯雷他定(10mg)。
除非早期觀察到以下各項中之任一者,否則患者將接受最多留個週期之研究治療:
˙疾病進展
˙不可接受之毒性
˙撤銷同意
˙嚴重違反方案
˙治療延遲>2週(在潛在或感知到的患者益處之情形下除外)
在治療中斷後,患者每8週進行隨訪直至疾病進展或開始其他全身性抗癌療法為止,且然後每6個月進行隨訪直至死亡為止。
在執行任何研究特異性篩選程序之前,研究者向患者充分解釋研究之目的及方法以及任何預期效應及不利反應。為患者提供資訊表且給予其充足時間及機會來諮詢試驗之詳情並決定是否參與。患者及其論述知情同意書之人簽署同意書並註明其日期。
研究者解釋患者可完全自由的拒絕進入研究或在任一時間及出於任一原因退出該研究。類似地,研究者及/或贊助商可出於安全性或投與原因而在任一時間自由領回患者。根據目前CFR(21,部分312D、50及56)及ICH(ICH E6 1997)GCP指南及Declaration of Helsinki,1964(如2004年在東京(Tokyo)所闡明)解釋保護患者之人權所必需之任何其他要求。
集中管控至治療組之患者隨機化及分配。
使用Cox比例危險模型來估計2個治療組之間PFS之危險比(HR)。該模型包括治療組因素以及隨機化分層因素。探索以下共變量:年齡、性別、種族(高加索人(Caucasian)/非高加索人)、先前手術/程序(是/否)、先前放射療法(是/否)、x射線詮釋(正常/異常)、ECG詮釋(正常/異常)、骨掃描(正常/異常)及診斷時間。若可產生更好模型擬合,則可藉由指定2類或若干類值將任何連續變量(例如年齡及診斷至研究治療之時間)轉化為類別變量。使用逐步回歸演算法使用以下準則輸入探索性變量:變量必須在0.25位準下顯著以輸入模型中且在0.15位準下顯著以保持於模型中。對於最終模型,連同95% CI一起提供危險比之點估計值。
針對在篩選時WBC<10000μL之患者執行亞組分析。利用軟體
GraphPad Prism 5以及所分析之每一患者之原始數據實施額外亞組分析。
不探索其他共變量之關於無進展存活(PFS)之Cox比例危險模型分析指示A組(利用CBP501之組)之危險高於B組(HR=1.20[0.88,1.65]),但其在統計學上不顯著(P=0.25)。探索其他共變量之相同模型亦指示A組之危險高於B組(HR=1.21[0.85,1.73]),但其在統計學上不顯著(P=0.30)。
對於在篩選時WBC<10000/μL之患者,不探索其他共變量之Cox比例危險模型分析指示A組之危險高於B組(HR=1.04[0.73,1.49]),但其在統計學上不顯著(P=0.81)。探索其他共變量之相同模型亦指示A組之危險高於B組(HR=1.06[0.71,1.59]),但其在統計學上不顯著(P=0.78)。
應注意當在兩種分析(表A、表B)中,分析限於在篩選時WBC<10000/μL之患者時,A組中PFS之危險比有所改良。
在不探索及探索其他共變量之情形下,A組之危險均低於B組
(HR=0.96及0.77)。該差異在統計學上不顯著(P=0.82及0.25)。
對於在經治療群體中在篩選時WBC<10000/μL之患者上之OS,在不探索及探索其他共變量之情況下,A組之危險低於B組(HR=0.80及0.69);該差異在統計上不顯著(P=0.32及0.16)。
應注意在所有分析(表C、表D)中當分析限於在篩選時WBC<10000/μL之患者時,A組中OS之危險比有所改良。
圖14顯示在所有經治療患者中關於篩選(基線)時之WBC之卡普蘭-邁耶存活曲線、中值OS及危險比。危險比隨截止含量降低而改良且在WBC 8000/μl下之峰值作為截止含量。
參考圖17,在利用Hetasep(Stemcell technol.)去除紅血球之後,利用EasySep富嗜中性球套組(Stemcell technol.)自人類末梢血純化嗜中性球。將經純化嗜中性球(1×106個細胞/孔,24孔板)與或不與1μM CBP501一起培養15分鐘(藉由添加EDTA終止反應),且與1nM PMA、3μM或10μM
A23187或100ng/ml或1000ng/ml LPS一起再培養4小時。將各孔洗滌兩次並與DNase一起培育15min並收集上清液,與彈性蛋白酶受質一起培育2小時,且然後加以分析以檢測彈性蛋白酶活性。
參考圖18,在注射苯海拉明之前的30分鐘利用或不用2.5ug/ml、5ug/ml或10ug/ml LPS靜脈內注射8週齡之C57BL/6小鼠。在注射苯海拉明之後的30分鐘注射CBP501(7.5mg/kg)。利用ELISA對自在注射CBP501或模擬物後3小時抽取之血液分離之血漿中之凝血酶/抗凝血酶複合物進行定量。該等數據係自四隻動物在每一條件下獲得的。
參考圖19,藉由用0.32μM PMA刺激人類末梢血單核細胞並在PMA刺激48小時後去除所有懸浮細胞而獲得巨噬細胞。與50ng/ml IFN-γ、10ng/ml LPS一起進一步培育細胞以獲得M1表型,且與20ng/ml IL-4一起培育以獲得M2巨噬細胞。兩種治療均利用或不利用CBP501。藉由使用螢光標記之珠粒及流式細胞術監測吞噬活性。
參考圖20,將巨噬細胞系RAW264.7與或不與0.1μM或1μM CBP501一起培育3至6小時,且然後與或不與10ng/ml或1000ng/ml LPS再培育4小時。藉由ELISA量測所釋放之TNF。
CBP501顯示在臨床前(Sha,S.等人Mol.Cancer Ther.6:147(2007))及I期臨床研究(Shapiro,G.I.等人Clin.Cancer Res.(2011))中作為有效抗腫瘤劑之潛能。CBP501可在兩種作用機制下操作,該等作用機制係例如經由細胞週期G2查核點廢除(Sha,S.等人Mol.Cancer Ther.6:147(2007))及腫瘤細胞中之鉑濃度或藉助攜鈣蛋白抑制(Mine,N.等人Mol.Cancer Ther.10:1929(2011))。
如本文所證實,藉助非鱗狀非小細胞肺癌患者之II期臨床研究之患者
群體上之亞組分析意外地發現,在篩選時具有高白血球計數(WBC)之患者群組與具有正常或低WBC之患者群組之間之存活的差異具有統計顯著性(p<0.0001)。
另外,如本文結果指示,當患者因由巨噬細胞引起NET之清除率/吞噬作用而發炎時,CBP501除直接作用於腫瘤細胞以外亦可藉由抑制攜鈣蛋白及增加嗜中性球細胞外陷阱(NET)而作用於腫瘤微環境(例如巨噬細胞)。此可增加具有深層靜脈血栓形成(DVT)及轉移之機會,且因此潛在地不利地影響患者存活。反之,抑制患者之M2型巨噬細胞可防止巨噬細胞對腫瘤生長、血管生成、轉移及腫瘤免疫逃避之積極作用,所有彼等皆促進腫瘤轉移,從而可縮短患者之存活。
與此觀察一致,已證實藉由活體外CBP501治療增加之經活化嗜中性球之NET形成及LPS刺激之小鼠中增加之凝血酶/抗凝血酶複合物形成。亦已指示藉由CBP501可抑制M1型及M2型巨噬細胞之細胞介素分泌及吞噬作用。
儘管臨床研究已指示CBP501係藉由增強順鉑對抗腫瘤細胞之細胞毒性起作用,但本文結果證實藉由對非鱗狀NSCLC患者之II期研究進行之亞組分析之意外發現,指示在臨床研究之篩選時具有高白血球計數(WBC)之患者群組存活較短,且具有正常或低WBC之其他患者群組因應利用CBP501之方案而存活較長,且該差異高度具有統計顯著性,且藉由對數秩(Mantel-Cox)測試的在關於整體存活之卡普蘭-邁耶曲線上計算之p值小於0.0001。
因此意外地發現在治療前具有正常或低WBC之患者得益於CBP501治療,而具有高WBC之患者可能受到該相同治療的不利影響。CBP501對
攜鈣蛋白之抑制活性表明對各種微環境細胞(例如巨噬細胞、白血球及淋巴球)之效應可抑制或調節該等細胞之活性,此可能由於(例如)藉由僅抑制巨噬細胞(若CBP501抑制M1型巨噬細胞,則其可不利地影響患者存活,且若CBP501抑制M2巨噬細胞,則其可延長患者存活)而促進雙向結果。
已報導攜鈣蛋白抑制劑可抑制巨噬細胞(Horwitz,S.B.等人J.Cell Biol.91:798(1981);Takenawa,T.等人Biochem J.15:208(1982);Westra,J.等人BMC Musculoskelet.Disord.30:11(2010))、白血球(Naccache,P.H.等人Biochem.Biophys.Res.Commun.97(1):62(1980);Takeshige,K.等人Biochem.Biophys.Res.Commun.99(2):484(1981);Jones,H.P.等人Biochem Biophys.Acta.714(1):152(1982);Jones,H.P.等人Methods Enzymol.015:389(1984);Verploegen,S.等人Eur.J.Biochem.269(18)4625(2002))及淋巴球(Salisbury,J.L.等人Nature 12:294(1981);Boubali,S.等人Mol.Immunol.52(2):51(2012))之多個功能。具有高WBC之患者將傾向於具有M1巨噬細胞(此乃因其為促發炎類型)且具有正常或低WBC且具有腫瘤之患者將傾向於具有M2巨噬細胞(Hao,N.等人Clin.Dev.Immunol.(2012))。另外,已知具有高WBC之患者更易於具有深層靜脈血栓形成(DVT)(Pabinger,I.等人,Blood 122:12(2013);Blix,K.等人,PLOS One 4:8(2013);Wang,T.F.等人,Thromb.Res.133(1):25(2014)),此係顯著數量癌症患者之死亡原因。彼等患者傾向於具有更多NET,且NET促進腫瘤轉移(Cools-Lartigue,J.等人J.Clin.Invest.(2013)),此係許多癌症患者(包括患有肺癌之彼等)之短預後之一個原因。
在此實例中,當在所有經治療群體中分析存活益處時,自將CBP501添加至標準方案(培美曲塞加順鉑)未檢測到統計顯著之存活益處。然而,
藉由亞組分析意外地鑑別出,添加CBP501可為在針對臨床試驗篩選時顯示正常或低白血球(WBC)計數之人群提供益處。WBC之正常值因地點及國家而異。正常上限WBC可為8000/μl至11000/μl。
令人驚奇地,具有正常範圍之WBC之患者可得益於CBP501,且在篩選時具有高WBC之彼等較經順鉑及培美曲塞治療之患者更差,但在與對照組順鉑及培美曲塞治療之群體比較時,兩個差異在統計學上均不顯著。
儘管並不明瞭CBP501之此潛在雙向作用之確切原因,但CBP501對攜鈣蛋白之抑制作用指示各種微環境細胞(例如巨噬細胞、白血球及淋巴球)中攜鈣蛋白之抑制抑制或調節該等細胞之活性,此由於以下原因而促進雙向結果:例如,若CBP501抑制M1型巨噬細胞,則其可因抑制巨噬細胞之抗腫瘤活性及/或抑制NET之清除率而不利地影響患者存活,乃因NET促進血栓形成及轉移,且若CBP501抑制促腫瘤M2巨噬細胞,則其可延長患者存活。另外,已知順鉑可使巨噬細胞自M1型變為M2型(Dijkgraaf,E.M.等人Cancer Res.15:73(8):2480(2013)),且已知化學療法本身可促進腫瘤轉移(Haas,M.J.SciBX 1-3(2011)),因此在化學療法開始時存在CBP501可對腫瘤轉移具有顯著影響。已知攜鈣蛋白抑制劑能夠抑制巨噬細胞(Horwitz,S.B.等人J.Cell Biol.91:798(1981);Takenawa,T.等人Biochem J.15:208(1982);Westra,J.等人BMC Musculoskelet.Disord.30:11(2010))、白血球(Naccache,P.H.等人Biochem.Biophys.Res.Commun.97(1):62(1980);Takeshige,K.等人Biochem.Biophys.Res.Commun.99(2):484(1981);Jones,H.P.等人Biochem Biophys.Acta.714(1):152(1982);Jones,H.P.等人Methods Enzymol.015:389(1984);Verploegen,S.等人Eur.J.Biochem.269(18)4625(2002))及淋巴球(Salisbury,J.L.等
人Nature 12:294(1981);Boubali,S.等人Mol.Immunol.52(2):51(2012))之多個功能。具有高WBC之患者將傾向於具有更多M1巨噬細胞(此乃因其係促發炎的),且具有正常或低WBC且具有腫瘤之患者將傾向於具有M2巨噬細胞(Hao,N.等人Clin.Dev.Immunol.(2012))。另外,具有高WBC之患者將傾向於具有更多NET。若CBP501阻止NET之吞噬作用,則患者具有DVT及轉移之風險可能更大,此二者均可縮短存活時間。
或者,攜鈣蛋白參與白血球之正常功能(Horwitz,S.B.等人J.Cell Biol.91:798(1981);Takenawa,T.等人Biochem J.15:208(1982);Westra,J.等人BMC Musculoskelet.Disord.30:11(2010);Naccache,P.H.等人Biochem.Biophys.Res.Commun.97(1):62(1980);Takeshige,K.等人Biochem.Biophys.Res.Commun.99(2):484(1981);Jones,H.P.等人Biochem Biophys.Acta.714(1):152(1982);Jones,H.P.等人Methods Enzymol.015:389(1984);Verploegen,S.等人Eur.J.Biochem.269(18)4625(2002);Salisbury,J.L.等人Nature 12:294(1981);Boubali,S.等人Mol.Immunol.52(2):51(2012);Hao,N.等人Clin.Dev.Immunol.(2012))。當非常需要該等WBC時(例如當患者罹患使白血球計數增加之活動性感染時之情形),CBP501可因可危害WBC之功能而干擾及抵消其對整體存活之有益活性。
攜鈣蛋白抑制亦可藉由作用於淋巴球影響抗癌免疫性,因為已表明攜鈣蛋白可誘導T細胞無反應性(Boubali,S.等人Mol.Immunol.52(2):51(2012))。
治療前或基線WBC計數已經指示為經基於鉑之療法治療之NSCLC患者之預後因素(Teramukai,S.等人Eur.J.Cancer(45(11:1950(2009);Kim,
J.W.等人cancer Res.Trest.45:4):325(2013))。CBP501可藉由調節順鉑之活性而增強此效應。由於每名患者將在治療前獲得WBC計數之實驗室分析作為普遍批准之標準程序,故可基於WBC計數選擇患者。
CBP501對攜鈣蛋白之抑制亦可獨立於鉑濃度而直接抑制腫瘤遷移及轉移,因為攜鈣蛋白已顯示在遷移中起重要作用(Wang,H.等人Nat.Commun.4:1354(2013))。
此實例包括用於治療癌症之CBP501組合之闡述。
CBP501係已針對患有惡性胸膜間皮瘤及非小細胞肺癌(NSCLC)之患者完成兩項II期臨床試驗之抗癌症藥物。CBP501經闡述為獨特G2查核點靶向劑(1)且為順鉑(CDDP)攝取之增強劑(2)。
CDDP係已知之最有效化學治療劑之一,其顯示抵抗眾多種實體腫瘤之臨床活性。據信主要作用模式為共價結合至DNA而引起特徵性生物效應,此最終活化細胞凋亡程式(3)。CDDP之抗腫瘤活性可能不限於其抑制腫瘤細胞之有絲分裂之能力,且亦包括重要的免疫調節效應。De Biasi等人概述了CDDP誘導之抗腫瘤免疫調節之四種主要機制,該等機制為1)I類MHC上調,2)招募及增殖效應細胞,3)上調細胞毒性效應物之溶解活性,及4)藉由系統地檢查相關臨床前文獻,下調免疫抑制微環境(4)。
免疫原性細胞死亡(ICD)係功能上獨特之細胞凋亡形式,其可使免疫活性宿主足以調用抵抗死亡細胞相關性抗原之適應性免疫反應。若干藥物包括各種化學治療劑(例如多柔比星、泛艾黴素、伊達比星、米托蒽醌、博來黴素、硼替佐米(bortezomib)、環磷醯胺及奧沙利鉑),其為ICD誘導物(5)。ICD需要三種特徵標誌,包括細胞表面鈣網蛋白暴露及ATP釋放及高
遷移率族蛋白B1(high-mobility group box 1 protein,HMGB1)(6)。據報導CDDP為相對較差之ICD誘導物(7)。最近,Aranda等人報導CDDP與維生素B6前體吡哆醇之組合引起ICD(包括ER應力反應及細胞表面鈣網蛋白暴露)(8)。吡哆醇之一個功能係以PDXK依賴性方式加強CDDP之細胞內累積(9)。儘管吡哆醇與CBP501之間之作用機制看似不同,但CDDP累積之增加係類似的。
癌細胞藉由各種方式逃避免疫監督,包括使用免疫查核點,其藉由在T細胞上結合抑制性受體(例如CTLA-4或PD-1)而防止細胞毒性T細胞攻擊腫瘤細胞(10)。對免疫查核點抑制劑(例如抗PD1抗體及抗CTLA4抗體)之反應可能令人驚歎;然而,許多患者對該等抗體沒有反應。
如本文所揭示,CBP501加強CDDP誘導之ICD指示物之出現。CBP501亦與抗PD-1抗體組合在免疫活性小鼠模型中促進抗腫瘤效應。
此實例包括材料及方法之闡述。
為進行細胞週期分析,利用克裡尚氏緩衝液(0.1%檸檬酸鈉,50Ag/mL碘化丙啶,20Ag/mL RNase A,0.5% NP40)對藉由胰蛋白酶/EDTA(Gibco)收集之細胞進行染色,隨後使用FACSCalibur(Becton Dickinson)實施流式細胞術。
利用CDDP(10μM或20μM)及0.5μM CBP501將CT26WT(CRL-2638,ATCC)(CBP501敏感性細胞品系)活體外處理0.75小時。在更換為新鮮的不含藥物之培養基後,將細胞培育24小時、48小時或72小時用
於磷酸化eIF2-α之免疫印漬分析,用於藉由FACS進行鈣網蛋白分析,或用於HMGB1 ELISA。
藉由在4℃下與緩衝液[NaCl(100mM),Tris-HCl(50mM,pH 8.0),DTT(1mM),NP40(0.5w/v%),含有PhosSTOP磷酸酶抑制劑混合劑及完全蛋白酶抑制劑混合劑錠劑(Roche Life Science),每一者均稀釋至製造商之指定濃度]一起培育30分鐘來溶解細胞並進行離心(15,000rpm,4℃,20分鐘)。對上清液(全細胞溶解物)實施電泳(SDS-PAGE),並藉由電印漬將其自凝膠轉移至聚偏氟乙烯(PVDF)膜(Millipore)上。在室溫下利用1%於T-TBS中之Block Ace阻斷1小時後,在4℃下將PVDF膜與一級抗體一起培育過夜。第二天,用T-TBS洗滌膜並在室溫下與二級抗體-HRP偶聯物一起培育1小時。在利用T-TBS洗滌PVDF膜後,利用Immobilon Western HRP檢測受質(Millipore)將蛋白質可視化。利用Luminescent Image Analyzer LAS-4000系統(Fujifilm)記錄影像,並利用Multi Gauge軟體(Fujifilm)對譜帶強度進行定量。
收集細胞並利用PBS洗滌,隨後利用含有0.25% PFA之PBS固定5分鐘。利用冰冷的PBS將經固定細胞洗滌兩次並在冰上用利用含有2% FBS(1/200)之PBS稀釋之抗鈣網蛋白抗體(abcam)處理30分鐘。用含有2% FBS洗滌液之PBS將一級抗體移除兩次,並在RT下用利用含有2% FBS(1/500)之PBS稀釋之alexa488偶聯之二級抗體處理30分鐘。用PBS將二級抗體移除兩次並在冰上利用碘化丙啶(1ug/ml)處理5分鐘以上,隨後使用FACSCalibur進行FACS分析。
藉由HMGB1 ELISA套組II(SINO-TEST CORPORATION,kanagawa,Japan)根據製造商之說明書對分泌至培養基之HMGB1進行定量。
此實例包括使用單獨CBP501及其各種組合之活體內研究之闡述。
所有動物研究皆根據由CanBas Co.Ltd之動物護養機構委員會批准之方案來執行。利用CT26WT之懸浮液(5×105個細胞)在側腹對六週齡雌性Balb/c小鼠(Charles River Laboratories Japan Inc.)實施皮下接種。一週後,將小鼠分配至7個群組中(6隻小鼠/組),並利用3種單獨抗癌劑或其不同組合之3個投藥週期進行治療[CDDP:5mg/kg×1/週,CBP501:7.5mg/kg×3/週,抗mPD1抗體(RMP1-14):200ug×1/週]。在每一5%葡萄糖(CBP501之媒劑)或CBP501治療前的30min利用10mg/kg苯海拉明預治療小鼠。利用以下公式計算腫瘤體積(每週利用一對測徑器量測三次):體積(mm3)=[寬度(mm)]2×長度(mm)/2。藉由繪製腫瘤大小之平均值+/- SE之圖形生成治療後之生長曲線。
在CBP501敏感性人類癌細胞系中,與CBP501組合之CDDP較單獨CDDP可使CDDP之細胞內累積加強約大1.5倍至3倍。在CBP501敏感性鼠類細胞CT26WT中,CDDP與CBP501組合之治療在改變細胞週期期分佈方面較單獨CDDP強約2倍,此在許多情形下與細胞內鉑含量大致相關(圖21)。
據報導eIF2-α中絲胺酸51之磷酸化(磷酸化eIF2-α)為ER應力之標記物,相信其係細胞表面鈣網蛋白暴露所必需的(11)。吾人分析CBP501抵抗CDDP誘導之磷酸化eIF2-α及細胞表面鈣網蛋白暴露之效應。
CDDP治療以劑量依賴性方式上調eIF2-α之磷酸化,且CBP501可強化此(圖22)。在鈣網蛋白暴露於細胞表面中亦證實了CBP501之正面效應(圖23)。此外,CDDP與CBP501之組合所引起之HMGB1釋放較單獨CDDP約大2倍(圖24)。該等結果指示,CBP501可加強CDDP誘導之ICD。
基於CBP501之此新穎活性,亦使用具有s.c.CT26WT之BALB/c分析與活體內PD-1阻斷抗體組合之治療(圖25)。當腫瘤大小達到約100mm3時開始治療。
與媒劑治療之小鼠相比,CDDP治療之小鼠顯示腫瘤生長降低52.7%。與媒劑治療之小鼠相比,CBP501+CDDP顯示腫瘤生長另外降低63.1%。與媒劑治療之小鼠相比,單獨抗mPD-1抗體之治療顯示腫瘤生長略降低25.2%。然而,與媒劑治療之小鼠相比,抗mPD-1+CDDP或抗mPD-1+CDDP+CBP501之組合治療顯示腫瘤生長分別顯著降低69.3%及78.7%。
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此實例包括針對CBP501與順鉑之組合及抗PD1及CBP501與順鉑及抗PD-L1之組合之兩項異種移植物研究之闡述。
將CT26WT細胞(5×105)皮下接種於8至9週齡雌性Balb/c小鼠之右側腹中。7天或8天後,基於腫瘤大小將小鼠隨機化,且在第1天開始組合療法。
每週將腫瘤大小及體重量測兩次或三次。利用數位卡尺計算腫瘤大小,且利用以下公式計算體積:體積(mm3)=[寬度(mm)]2×長度(mm)/2。繪製腫瘤之相對大小對開始治療後之天數之圖形。
在第1天及第8天以15分鐘間隔,腹膜內投與具有皮下CT26WT腫瘤之小鼠(n=6)苯海拉明(10mg/kg),隨後靜脈內注射媒劑(鹽水)或CDDP(4mg/kg)或CDDP(4mg/kg)與CBP501(6mg/kg)之混合物。在第2天、第4天、第9天及第11天腹膜內投與包括抗PD-1(RMP1-14)及抗PD-L1(純系10F.9G2)之抗體(200μg/小鼠)或鹽水。
在第1天及第8天以15分鐘間隔,腹膜內投與具有皮下CT26WT腫瘤之小鼠(n=9)苯海拉明(10mg/kg),隨後靜脈內注射媒劑(鹽水)或卡鉑(50mg/kg)或卡鉑(50mg/kg)與CBP501(6mg/kg)之混合物。在第4天、第11天及第16天腹膜內投與四百微克抗PD-L1(純系10F.9G2)或鹽水。
此實例包括腫瘤浸潤性淋巴球(TIL)之分析之闡述。
將CT26WT皮下接種至雌性Ba1b/c小鼠之左腹側中。7天至8天後,藉由腫瘤大小將小鼠隨機化至6個群組(3至4隻小鼠/組),並利用媒劑、CDDP(4mg/kg i.v.)、Combo(CDDP 4mg/kg i.v.+CBP501 6mg/kg i.v.)、抗PD1(400ug/小鼠i.p.)、抗PD1加CDDP或抗PD-1加Combo進行治療。在第1天及第8天注射CDDP及CBP501,且在第2天、第5天及第8天注射抗PD1。然後在第11天自小鼠提取腫瘤,並利用三元酶混合物(膠原酶、玻尿酸酶及DNase)消化,以獲得單一細胞懸浮物。利用FcR阻斷劑處理細胞並利用用
於多色流式細胞術分析之特定抗體進行染色,包括CD4、CD8、CD45、CD11b、Ly6G、Ly6C、F4/80、II類MHC及CD206。定量數據(圖32)顯示為平均值+SEM(n=3-4隻小鼠/組)。如與來自媒劑治療或PD-1治療之腫瘤之細胞相比,*:p<0.05,**:p<0.01,n.s.:不顯著(不成對之雙側司徒登氏t測試)。
上述數據證實CBP501在與CDDP組合時意欲增加CD8(=CD45+CD8+)(殺死腫瘤細胞之效應物T細胞群體)在腫瘤位點處之浸潤。當與CDDP及抗PD1抗體組合時,所達到值係統計顯著的。此結果與在小鼠異種移植物模型中觀察到之腫瘤生長抑制一致。
上述數據亦證實CBP501在與CDDP或CDDP加抗PD1抗體組合時可以統計顯著程度減少支持腫瘤生長及免疫逃逸之M2巨噬細胞(=F4/80+CD206+)。此結果亦與在小鼠異種移植物模型中觀察到之腫瘤生長抑制一致。
<110> 日商坎巴斯有限公司
河邊 拓己
<120> 用於癌症治療之肽及擬肽與T細胞活化劑及/或查核點抑制劑之組合
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<223> 人工序列之闡述:合成肽序列
<220>
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之闡述:合成肽序列
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<213> 人工序列
<220>
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<220>
<221> MISC_FEATURE
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<223> 人工序列之闡述:合成肽序列
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列之闡述:合成肽序列
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<221> MISC_FEATURE
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之闡述:合成肽序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<220>
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<221> MISC_FEATURE
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<223> Xaa可為任一天然胺基酸
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之闡述:合成肽序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<212> PRT
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<220>
<223> 人工序列之闡述:合成肽序列
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之闡述:合成肽序列
<400> 113
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之闡述:合成肽序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<220>
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<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之闡述:合成肽序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa可為任一天然胺基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之闡述:合成肽序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa可為任一天然胺基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之闡述:合成肽序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa可為任一天然胺基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
<223> Xaa係環己基-丙胺酸
<400> 119
<210> 120
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之闡述:合成肽序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa可為任一天然胺基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa係環己基-丙胺酸
<400> 120
<210> 121
<400> 121 000
<210> 122
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之闡述:合成肽序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa係環己基-丙胺酸
<400> 122
<210> 123
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之闡述:合成肽序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)..(7)
<223> Xaa係環己基-丙胺酸
<400> 123
<210> 124
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之闡述:合成肽序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa係苯甲醯基-苯丙胺酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)..(7)
<223> Xaa係環己基-丙胺酸
<400> 124
<210> 125
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之闡述:合成肽序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa係苯甲醯基-苯丙胺酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa可為任一天然胺基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
<223> Xaa係環己基-丙胺酸
<400> 125
<210> 126
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之闡述:合成肽序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa係苯甲醯基-苯丙胺酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa可為任一天然胺基酸
<400> 126
<210> 127
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之闡述:合成肽序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa係苯甲醯基-苯丙胺酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)..(7)
<223> Xaa係環己基-丙胺酸
<400> 127
<210> 128
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之闡述:合成肽序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa係苯甲醯基-苯丙胺酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)..(7)
<223> Xaa係環己基-丙胺酸
<400> 128
<210> 129
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之闡述:合成肽序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa係苯甲醯基-苯丙胺酸
<400> 129
<210> 130
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之闡述:合成肽序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa係苯甲醯基-苯丙胺酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> Xaa係苯甲醯基-苯丙胺酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> Xaa係環己基-丙胺酸
<400> 130
<210> 131
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之闡述:合成肽序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa係苯甲醯基-苯丙胺酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa可為任一天然胺基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3)..(3)
<223> Xaa係苯甲醯基-苯丙胺酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (4)..(4)
<223> Xaa係環己基-丙胺酸
<400> 131
<210> 132
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之闡述:合成肽序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa係苯甲醯基-苯丙胺酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> Xaa係環己基-丙胺酸
<400> 132
<210> 133
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之闡述:合成肽序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa係苯甲醯基-苯丙胺酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> Xaa係2-萘基-丙胺醯基
<400> 133
<210> 134
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之闡述:合成肽序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> Xaa係環己基-丙胺酸
<400> 134
<210> 135
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之闡述:合成肽序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa係苯甲醯基-苯丙胺酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> Xaa係環己基-丙胺酸
<400> 135
<210> 136
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之闡述:合成肽序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)..(7)
<223> Xaa係環己基-丙胺酸
<400> 136
<210> 137
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之闡述:合成肽序列
<400> 137
<210> 138
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之闡述:合成肽序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)..(7)
<223> Xaa係環己基-丙胺酸
<400> 138
<210> 139
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之闡述:合成肽序列
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa係苯甲醯基-苯丙胺酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (6)..(6)
<223> Xaa係環己基-丙胺酸
<400> 139
Claims (71)
- 一種T細胞活化劑及免疫查核點抑制劑之組合之用途,其係用於製備在哺乳動物中增加過度增殖細胞之核酸損害或預防或治療細胞增殖病症之藥劑。
- 一種T細胞活化劑及/或免疫查核點抑制劑之用途,其係用於製備在哺乳動物中增加過度增殖細胞之核酸損害或預防或治療細胞增殖病症之藥劑,其中該藥劑用於與肽化合物併用,且其中該肽化合物包含以下序列中之任一者:A)包含表示為P1-P6之殘基之肽,其具有以下結構:P1、P2、P3、P4、P5、P6或P6、P5、P4、P3、P2、P1;其中P1係Cha、Nal(2)、(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)、佔據類似側鏈空間之胺基酸,或在側鏈中具有一或兩個芳香族、六氫吡啶、吡嗪、嘧啶、六氫吡嗪、嗎啉或嘧啶基團或一個吲哚、并環戊二烯、茚、萘、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、吲哚啉、唍、喹喏啉、喹唑啉基團之任一胺基酸;其中P2係Cha、Nal(2)、(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)、Bpa、Phe4NO2、佔據類似側鏈空間之胺基酸,或在側鏈中具有一或兩個芳香族、六氫吡啶、吡嗪、嘧啶、六氫吡嗪、嗎啉或嘧啶基團或一個吲哚、并環戊二烯、茚、萘、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、吲哚啉、唍、喹喏啉或喹唑啉基團之任一胺基酸; 其中P3、P4、P5係任一胺基酸,或其中P3、P4、P5中之一或多者係簡單碳鏈,使得P2與P6之間之距離與當P3、P4、P5中之每一者係胺基酸時之距離大約相同;其中P6係Bpa、Phe4NO2、任一種胺基酸及Tyr、任一種胺基酸及Phe、任一胺基酸或不存在;或B)A)之肽,其中具有簡單碳鏈之胺基酸係11-胺基十一酸、10-胺基癸酸、9-胺基壬酸、8-胺基辛酸、7-胺基庚酸、6-胺基己酸或具有一或多個不飽和碳鍵之類似結構,及/或其中該任一種胺基酸係Ser,及/或其中P4係Trp,及/或其中佔據類似側鏈空間之該胺基酸係Tyr或Phe;或C)包含表示為P1-P12之殘基之肽,其具有任一以下結構:P1、P2、P3、P4、P5、P6;P6、P5、P4、P3、P2、P1;P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11、P12;P1、P2、P3、P4、P5、P6、P12、P11、P10、P9、P8、P7;P6、P5、P4、P3、P2、P1、P7、P8、P9、P10、P11、P12;P6、P5、P4、P3、P2、P1、P12、P11、P10、P9、P8、P7;P7、P8、P9、P10、P11、P12、P1、P2、P3、P4、P5、P6;P7、P8、P9、P10、P11、P12、P6、P5、P4、P3、P2、P1;P12、P11、P10、P9、P8、P7、P1、P2、P3、P4、P5、P6;P12、P11、P10、P9、P8、P7、P6、P5、P4、P3、P2、P1;P12、P11、P6、P9、P8、P7、P2、P1;P12、P11、P10、P6、P9、P4、P7、P2、P1;P1、P2、P7、P8、P9、P6、P11、P12;或P1、P2、P7、P4、P9、P6、P10、P11、P12; 其中P1係Cha、Nal(2)、(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)、Bpa、Phe4NO2、佔據類似側鏈空間之胺基酸(例如d-Tyr或l-Tyr、d-Phe或l-Phe),或在側鏈中具有一或兩個芳香族、六氫吡啶、吡嗪、嘧啶、六氫吡嗪、嗎啉或嘧啶基團或一個吲哚、并環戊二烯、茚、萘、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、吲哚啉、唍、喹喏啉或喹唑啉基團之任一胺基酸;其中P2係Cha、Nal(2)、(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)或佔據類似側鏈空間之胺基酸,或在側鏈中具有一或兩個芳香族、六氫吡啶、吡嗪、嘧啶、六氫吡嗪、嗎啉或嘧啶基團或一個吲哚、并環戊二烯、茚、萘、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、吲哚啉、唍、喹喏啉、喹唑啉基團之任一胺基酸;其中P3、P4、P5係任一胺基酸,或其中P3、P4、P5中之一或多者係簡單碳鏈,使得P2與P6之間之距離與當P3、P4、P5中之每一者係胺基酸時之距離大約相同;其中P6係Bpa、Phe4NO2、任一種胺基酸及Tyr、任一種胺基酸及Phe;且其中P7、P8、P9、P10、P11、P12中之至少三者係鹼性胺基酸,且其餘為任一胺基酸或不存在;或D)C)之肽,其中具有簡單碳鏈之胺基酸係11-胺基十一酸、10-胺基癸酸、9-胺基壬酸、8-胺基辛酸、7-胺基庚酸、6-胺基己酸或具有一或多個不飽和碳鍵之類似結構,及/或,其中該任一種胺基酸係Ser,及/或,其中P4係Trp,及/或, 其中佔據類似側鏈空間之該胺基酸係Tyr或Phe;或E)包含表示為P1-P12之殘基之肽,其具有任一以下結構:P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11、P12;P12、P11、P10、P9、P8、P7、P6、P5、P4、P3、P2、P1;P12、P11、P10、P6、P9、P4、P7、P2、P1;或P1、P2、P7、P4、P9、P6、P10、P11、P12;其中P1係Cha、Nal(2)、(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)、Bpa、Phe4NO2、佔據類似側鏈空間之胺基酸,或在側鏈中具有一或兩個芳香族、六氫吡啶、吡嗪、嘧啶、六氫吡嗪、嗎啉或嘧啶基團或一個吲哚、并環戊二烯、茚、萘、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、吲哚啉、唍、喹喏啉或喹唑啉基團之任一胺基酸;其中P2係Cha、Nal(2)、(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)、佔據類似側鏈空間之胺基酸,或在側鏈中具有一或兩個芳香族、六氫吡啶、吡嗪、嘧啶、六氫吡嗪、嗎啉或嘧啶基團或一個吲哚、并環戊二烯、茚、萘、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、吲哚啉、唍、喹喏啉、喹唑啉基團之任一胺基酸;其中P3、P4、P5係任一胺基酸,或其中P3、P4、P5中之一或多者係簡單碳鏈,使得P2與P6之間之距離與當P3、P4、P5中之每一者係胺基酸時之距離大約相同;其中P6係Bpa、Phe4NO2、任一種胺基酸及Tyr、任一種胺基酸及Phe、任一胺基酸或不存在;及其中P7、P8、P9、P10、P11、P12中之至少三者係鹼性胺基 酸,且其餘為任一胺基酸或不存在;或F)E)之肽,其中具有簡單碳鏈之胺基酸係胺基十一酸或8-胺基辛酸,及/或,其中該任一種胺基酸係Ser,及/或,其中佔據類似側鏈空間之該胺基酸係Tyr或Phe;或G)包含表示為P1-P12之殘基之肽,其具有任一以下結構:P1、P2、P3、P4、P5、P6或P6、P5、P4、P3、P2、P1,其中P1係Cha、Nal(2)、(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)、Bpa、Phe4NO2、Tyr或Phe;其中P2係Cha、Nal(2)、(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)、Bpa、Phe4NO2、Tyr或Phe;其中P3係Ser、Arg、Cys、Pro或Asn;其中P4係Trp;其中P5係Ser、Arg或Asn;或其中P3、P4、P5係單一胺基十一酸或單一8-胺基辛酸;且其中P6係Bpa、Phe4NO2、(Ser-Tyr)或(Ser-Phe);或H)包含表示為P1-P12之殘基之肽,其具有任一以下結構:P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11、P12;P1、P2、P3、P4、P5、P6、P12、P11、P10、P9、P8、P7;P6、P5、P4、P3、P2、P1、P7、P8、P9、P10、P11、P12;P6、P5、P4、P3、P2、P1、P12、P11、P10、P9、P8、P7;P7、P8、P9、P10、P11、P12、P1、P2、P3、P4、P5、P6;P7、P8、P9、P10、P11、P12、P6、P5、P4、P3、P2、P1;P12、P11、P10、P9、P8、P7、P1、 P2、P3、P4、P5、P6;P12、P11、P10、P9、P8、P7、P6、P5、P4、P3、P2、P1;P12、P11、P6、P9、P8、P7、P2、P1;P12、P11、P10、P6、P9、P4、P7、P2、P1;P1、P2、P7、P8、P9、P6、P11、P12;或P1、P2、P7、P4、P9、P6、P10、P11、P12;其中P1係Cha、Nal(2)、(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)、Bpa、Phe4NO2、Tyr或Phe;其中P2係Cha、Nal(2)、(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)、Bpa、Phe4NO2、Tyr或Phe;其中P3係Ser、Arg、Cys、Pro或Asn;其中P4係Trp;其中P5係Ser、Arg或Asn;或其中P3、P4、P5係單一胺基十一酸或單一8-胺基辛酸;其中P6係Bpa、Phe4NO2、(d-Ser-d-Tyr)或(d-Ser-d-Phe);及其中P7、P8、P9、P10、P11、P12中之至少三者係Arg或Lys,且其餘為任一胺基酸或不存在;或I)包含表示為P1-P12之殘基之肽,其具有任一以下結構:P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11、P12;P12、P11、P10、P9、P8、P7、P6、P5、P4、P3、P2、P1;P12、P11、P10、P6、P9、P4、P7、P2、P1;或P1、P2、P7、P4、P9、P6、P10、P11、P12;其中P1係Cha或Nal(2);其中P2係(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3);其中P3係Ser; 其中P4係Trp;其中P5係Ser或Asn;其中P6係Bpa、Phe4NO2、(Ser-Tyr)或(Ser-Phe);且其中P7、P8、P9、P10、P11、P12中之至少三者係Arg,且其餘為任一胺基酸或不存在;或J)包含表示為P1-P12之殘基之肽,其具有任一以下結構:P1、P2、P3、P4、P5、P6或P6、P5、P4、P3、P2、P1;其中P1係Cha或Nal(2);其中P2係(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)或(Phe-4CF3);其中P3係Ser;其中P4係Trp;其中P5係Ser;且其中P6係Bpa或(Ser-Tyr);或K)包含表示為P1-P12之殘基之肽,其具有任一以下結構:P1、P2、P3、P4、P5、P6;P6、P5、P4、P3、P2、P1;P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11、P12;P1、P2、P3、P4、P5、P6、P12、P11、P10、P9、P8、P7;P6、P5、P4、P3、P2、P1、P7、P8、P9、P10、P11、P12;P6、P5、P4、P3、P2、P1、P12、P11、P10、P9、P8、P7;P7、P8、P9、P10、P11、P12、P1、P2、P3、P4、P5、P6;P7、P8、P9、P10、P11、P12、P6、P5、P4、P3、P2、P1;P12、P11、P10、P9、P8、P7、P1、P2、P3、P4、P5、P6;P12、P11、P10、P9、P8、P7、P6、P5、P4、P3、P2、P1;P12、P11、P6、P9、P8、P7、P2、P1;P12、P11、 P10、P6、P9、P4、P7、P2、P1;P1、P2、P7、P8、P9、P6、P11、P12;或P1、P2、P7、P4、P9、P6、P10、P11、P12;其中P1係Cha或Nal(2);其中P2係(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)或(Phe-4CF3);其中P3係任一胺基酸;其中P4係d-Trp或l-Trp;其中P5係任一胺基酸;其中P6係Bpa或(Ser-Tyr);其中P7係Arg;其中P8係Arg;其中P9係Arg;其中P10係Gln或Arg;其中P11係Arg;及其中P12係d-Arg或l-Arg,或L)K)之肽,其中該任一胺基酸係Ser或Pro;或M)包含表示為P1-P12之殘基之肽,其具有任一以下結構:P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11、P12;P12、P11、P10、P9、P8、P7、P6、P5、P4、P3、P2、P1;P12、P11、P10、P6、P9、P4、P7、P2、P1;或P1、P2、P7、P4、P9、P6、P10、P11、P12;其中P1係Cha或Nal(2);其中P2係(Phe-2,3,4,5,6-F);其中P3係Ser; 其中P4係Trp;其中P5係Ser;其中P6係Bpa或(Ser-Tyr);其中P7係Arg;其中P8係Arg;其中P9係Arg;其中P10係Gln或Arg;其中P11係Arg;及其中P12係Arg;或其前藥或其醫藥上可接受之鹽。
- 如請求項2之用途,其中該肽化合物包含任一以下序列:(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg);(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha);(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(SEQ ID NO:59);(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha);(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg);(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa);(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg) (d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg);(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa)(SEQ ID NO:64);(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa);(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg);(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha);(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg);(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(SEQ ID NO:69);(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg);(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Trp)(d-Arg)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha);(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Arg)(d-Trp)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg);(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Trp)(d-Arg)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha);(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Arg)(d-Trp)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg);(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha);或(d-Cha)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)。
- 如請求項2之用途,其中該肽化合物包含:(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(SEQIDNO:1)。
- 如請求項1至3中任一項之用途,其中該T細胞活化劑靶向CD28、OX40、GITR、CD137、CD27或HVEM。
- 如請求項1至4中任一項之用途,其中該T細胞活化劑包含抗CD28、抗OX40、抗GITR、抗CD137、抗CD27或抗HVEM抗體。
- 如請求項1至4中任一項之用途,其中該免疫查核點抑制劑靶向CTLA-4、PDI、PD-L1、PDL2、VISTA、TIM3、LAG-3或BTLA。
- 如請求項1至4中任一項之用途,其中該免疫查核點抑制劑包含抗CTLA-4、抗PD1、抗PD-L1、抗PDL2、抗VISTA、抗TIM3、抗LAG-3或抗BTLA抗體。
- 如請求項6之用途,其中該抗體包含結合至CD28、OX40、GITR、CD137、CD27、HVEM、CTLA-4、PD1、PD-L1、PDL2、VISTA、TIM3、LAG-3或BTLA之子序列。
- 如請求項6之用途,其中該抗體包含結合至以下各項中之一或多者之雙特異性抗體:CD28、OX40、GITR、CD137、CD27、HVEM、CTLA-4、PD1、PD-L1、PDL2、VISTA、TIM3、LAG-3及BTLA。
- 如請求項9之用途,其中該抗體或子序列包含哺乳動物抗體。
- 如請求項9之用途,其中該抗體或子序列包含結合至以下之人類、人類化、靈長類化或嵌合抗體:CD28、OX40、GITR、CD137、CD27、HVEM、CTLA-4、PD1、PD-L1、PDL2、VISTA、TIM3、LAG-3或BTLA。
- 如請求項9之用途,其中該抗體或子序列包含Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、Fd、單鏈Fv(scFv)、二硫鍵連接之Fvs(sdFv)、VL、VH、駱駝Ig、V-NAR、VHH、三特異性(Fab3)、雙特異性(Fab2)、雙價抗體((VL-VH)2或(VH-VL)2)、三價抗體(三價)、四價抗體(四價)、微小抗體((scFV-CH3)2)、雙特異性單鏈Fv(雙-scFv)、IgGdeltaCH2、scFv-Fc、(scFv)2-Fc、親和體、適配體、高親和性多聚物(avimer)或奈米抗體(nanobody)。
- 如請求項1至4中任一項之用途,其中該哺乳動物具有在正常範圍內之白血球計數。
- 如請求項1至4中任一項之用途,其中該哺乳動物具有小於約11,000個白血球/微升(wbc/μl)血液之白血球計數。
- 如請求項1至4中任一項之用途,其中該哺乳動物具有在約4,000個至約11,000個白血球/微升(wbc/μl)血液之間之白血球計數。
- 如請求項1至4中任一項之用途,其中該哺乳動物具有小於約10,000個白血球/微升(wbc/μl)血液之白血球計數。
- 如請求項1至4中任一項之用途,其中該哺乳動物具有小於約9,000個白血球/微升(wbc/μl)血液之白血球計數。
- 如請求項1至4中任一項之用途,其中該哺乳動物具有在約4,000個至約9,000個白血球/微升(wbc/μl)血液之間之白血球計數。
- 如請求項1至4中任一項之用途,其中該哺乳動物具有小於約8,000個白血球/微升(wbc/μl)血液之白血球計數。
- 如請求項1至4中任一項之用途,其中該哺乳動物具有小於約7,000個白血球/微升(wbc/μl)血液之白血球計數。
- 如請求項1至4中任一項之用途,其中該哺乳動物具有小於每一臨床實驗室白血球/微升(wbc/μl)血液之正常值上限之白血球計數。
- 如請求項1至4中任一項之用途,其中該肽化合物、該T細胞活化劑及/或該免疫查核點抑制劑構成醫藥調配物。
- 如請求項2至4中任一項之用途,其中該其醫藥上可接受之鹽係選自乙酸鹽、磺酸鹽、硫酸鹽、焦硫酸鹽、硫酸氫鹽、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、磷酸鹽、磷酸氫鹽、磷酸二氫鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、丙酸鹽、癸酸鹽、辛酸鹽、丙烯酸鹽、甲酸鹽、異丁酸鹽、己酸 鹽、庚酸鹽、丙炔酸鹽、草酸鹽、丙二酸鹽、琥珀酸鹽、辛二酸鹽、癸二酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、丁炔-1,4-二酸鹽、己炔-1,6-二酸鹽、苯甲酸鹽、氯苯甲酸鹽、苯甲酸甲酯、二硝基苯甲酸鹽、羥基苯甲酸鹽、甲氧基苯甲酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、二甲苯磺酸鹽、苯基乙酸鹽、苯基丙酸鹽、苯基丁酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、γ-羥基丁酸鹽、羥乙酸鹽、酒石酸鹽、甲烷-磺酸鹽、丙烷磺酸鹽、萘-1-磺酸鹽、萘-2-磺酸鹽及杏仁酸鹽。
- 如請求項1至4中任一項之用途,其中該肽化合物之長度為6至10個、10至15個、15至20個、20至25個、25至30個、30至40個、40至50個、50至75個、75至100個、100至150個、150至200個或200至300個胺基酸殘基。
- 如請求項1至4中任一項之用途,其中該肽化合物進一步包含與其附接或偶聯之細胞穿透分子。
- 如請求項26之用途,其中該細胞穿透分子係藉由共價鍵或肽或非肽連接體接合至該肽化合物。
- 如請求項26之用途,其中該細胞穿透肽包含極性/帶電胺基酸及非極性、疏水胺基酸之替代型式。
- 如請求項26之用途,其中該細胞穿透肽包含多陽離子或兩親性α-螺旋結構。
- 如請求項26之用途,其中該肽化合物包含L-異構物或D-異構物胺基酸或L-異構物及D-異構物胺基酸之混合物。
- 如請求項26之用途,其中該肽化合物及/或該細胞穿透肽包含L-異構物或D-異構物胺基酸或L-異構物及D-異構物胺基酸之混合物。
- 如請求項26之用途,其中該細胞穿透肽包含聚-精胺酸(Arg)序列。
- 如請求項26之用途,其中該細胞穿透肽包含(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)或由其組成。
- 如請求項2至4中任一項之用途,其中該藥劑係用於在該肽化合物投與之前、與其一起或在其之後投與。
- 如請求項2至4中任一項之用途,其中該藥劑係作為與該肽化合物之組合投與。
- 如請求項2至4中任一項之用途,其中該藥劑係用於在該肽化合物投與之前或之後不到48小時投與。
- 如請求項2至4中任一項之用途,其中該藥劑係用於在該肽化合物投與之前或之後不到24小時投與。
- 如請求項2至4中任一項之用途,其中該藥劑係用於在該肽化合物投與之前或之後不到12小時投與。
- 如請求項2至4中任一項之用途,其中該藥劑係用於在該肽化合物投與之前或之後不到6小時投與。
- 如請求項2至4中任一項之用途,其中該藥劑係用於在該肽化合物投與之前或之後不到4小時投與。
- 如請求項2至4中任一項之用途,其中該藥劑係用於在該肽化合物投與之前或之後不到2小時投與。
- 如請求項2至4中任一項之用途,其中該藥劑係用於在該肽化合物投與之前或之後不到1小時投與。
- 如請求項1至4中任一項之用途,其中該藥劑係用於與核酸損害劑、核酸損害治療、抗增殖劑或抗增殖治療共同投與。
- 如請求項43之用途,其中該核酸損害劑、核酸損害治療、抗增殖劑或抗增殖治療包含手術切除、放射療法、離子化或化學放射療法、化學療法、免疫療法、局部或區域性熱(發熱)療法、疫苗接種、烷基化劑、抗代謝物、植物提取物、植物鹼、亞硝基脲、激素或核苷或核苷酸類似物。
- 如請求項43之用途,其中該核酸損害劑或抗增殖劑包含藥物。
- 如請求項43之用途,其中該核酸損害劑或抗增殖劑包含含鉑藥物。
- 如請求項43之用途,其中該核酸損害劑或抗增殖劑包含順鉑(cis-platin)、卡鉑(carboplatin)、奈達鉑(nedaplatin)、米他鉑(mitaplatin)、沙鉑(satraplatin)、匹鉑(picoplatin)、三鉑(triplatin)、米利鉑(miriplatin)或奧沙利鉑(oxaliplatin)。
- 如請求項1至4及30中任一項之用途,其中該藥劑係用於與含鉑藥物、順鉑、卡鉑、奧沙利鉑、培美曲塞(pemetrexed)、吉西他濱(gemcitabine)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、蝴蝶黴素(rebeccamycin)、阿德力黴素(adriamycin,ADR)、博來黴素(bleomycin,Bleo)、派來黴素(pepleomycin)、順鉑、順鉑或順式-二氯二胺鉑(II)(CDDP)、奧沙利鉑、或喜樹鹼(camptothecin,CPT)、環磷醯胺、硫唑嘌呤、環孢素A(cyclosporin A)、普賴蘇濃(prednisolone)、美法侖(melphalan)、氮芥苯丁酸(chlorambucil)、甲基二(氯乙基)胺、白消安(busulphan)、胺甲喋呤(methotrexate)、6-巰嘌呤、硫鳥嘌呤、5-氟尿嘧啶、胞嘧啶阿拉伯糖苷(cytosine arabinoside)、AZT、5-氮胞苷(5-AZC)或5-氮胞苷相關化合物、放線菌素D(actinomycin D)、光輝黴素(mithramycin)、絲裂黴素C(mitomycin C)、卡莫司汀(carmustine)、洛莫司汀(lomustine)、司莫司汀(semustine)、鏈佐黴素(streptozotocin)、羥基脲、順鉑、米托坦(mitotane)、丙卡巴肼(procarbazine)、達卡巴嗪(dacarbazine)、紫杉烷(taxane)、長春鹼(vinblastine)、長春新鹼 (vincristine)、多柔比星(doxorubicin)、二溴甘露醇、輻射或放射性同位素共同投與。
- 如請求項48之用途,其中該輻射包含UV輻射、IR輻射、X射線或α輻射、β輻射或γ輻射。
- 如請求項48之用途,其中該放射性同位素包含I131、I125、Sr89、Sm153、Y90或Lu177。
- 如請求項1至4中任一項之用途,其中該細胞增殖病症包含腫瘤或癌症。
- 如請求項51之用途,其中該細胞增殖病症包含轉移性腫瘤或癌症。
- 如請求項51之用途,其中該腫瘤或癌症包含肺腫瘤或癌症。
- 如請求項53之用途,其中該肺腫瘤或癌症包含小細胞或非小細胞肺癌。
- 如請求項53之用途,其中該肺腫瘤或癌症包含腺癌、鱗狀細胞癌或大細胞癌。
- 如請求項51之用途,其中該腫瘤或癌症包含癌、肉瘤、淋巴瘤、白血 病、腺瘤、腺癌、黑色素瘤、神經膠質瘤、神經膠母細胞瘤、腦脊髓膜瘤、神經胚細胞瘤、視網膜母細胞瘤、星細胞瘤、少突膠質細胞瘤、間皮瘤、網狀內皮、淋巴或造血性贅瘤形成、腫瘤、癌症或惡性病。
- 如請求項56之用途,其中該肉瘤包含淋巴肉瘤、脂肪肉瘤、骨肉瘤、軟骨肉瘤、平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤或纖維肉瘤。
- 如請求項56之用途,其中該造血性贅瘤形成、腫瘤、癌症或惡性病包含骨髓瘤、淋巴瘤或白血病。
- 如請求項51之用途,其中該腫瘤或癌症包含肺、甲狀腺、頭或頸、鼻咽、喉、鼻或鼻竇、腦、脊柱、乳房、腎上腺、垂體、甲狀腺、淋巴、胃腸(口腔、食管、胃、十二指腸、迴腸、空腸(小腸)、結腸、直腸)、生殖泌尿道(子宮、卵巢、子宮頸、子宮內膜、膀胱、睪丸、陰莖、前列腺)、腎、胰臟、肝、骨、骨髓、淋巴、血液、肌肉或皮膚之贅瘤形成、腫瘤或癌症。
- 如請求項51之用途,其中該腫瘤或癌症包含乳癌、前列腺癌、胰臟癌、胃癌、胸膜間皮瘤、結腸癌、直腸癌、大腸癌、小腸癌、食道癌、十二指腸癌、舌癌、咽癌、唾液腺癌、腦瘤、神經鞘瘤、肝癌、腎癌、膽管癌、子宮內膜癌、子宮頸癌、子宮體癌、卵巢癌、膀胱癌、尿道癌、皮膚癌、血管瘤、惡性淋巴瘤、惡性黑色素瘤、甲狀腺癌、副甲狀腺癌、鼻癌、鼻竇癌、聽覺器官癌、口底癌、喉癌、腮腺癌、頜下癌、骨腫瘤、血管纖維瘤、視網膜肉瘤、陰莖癌、睪丸腫瘤、小兒實體癌、卡波西氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)、上頜竇腫瘤、纖維性組織細胞瘤、平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤、淋巴瘤、多發性骨髓瘤或白血病。
- 如請求項1至4及30中任一項之用途,其中該哺乳動物係人類。
- 如請求項2至4及30中任一項之用途,其中該肽化合物包含:(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)或(d-Arg)(d-Arg)(d-Arg)(d-Gln)(d-Arg)(d-Arg)(d-Bpa)(d-Ser)(d-Trp)(d-Ser)(d-Phe-2,3,4,5,6-F)(d-Cha)。
- 如請求項2至4及30中任一項之用途,其中該所投與肽化合物之量可有效治療該腫瘤或癌症。
- 如請求項1至4及30中任一項之用途,其中該藥劑係用於抑制或減少該腫瘤或癌症之復發、生長、進展、惡化或轉移。
- 如請求項1至4及30中任一項之用途,其中該藥劑係用於部分地或完全地破壞贅瘤、腫瘤、癌症或惡性細胞團塊、細胞之體積、大小或數量,刺激、誘導或增加贅瘤、腫瘤、癌症或惡性細胞壞死、細胞溶解或細胞凋亡,降低贅瘤形成、腫瘤、癌症或惡性病體積大小、細胞團塊,抑制或預防贅瘤形成、腫瘤、癌症或惡性病體積、團塊、大小或細胞數量之進展或增加,或延長壽命。
- 如請求項1至4及30中任一項之用途,其中該藥劑係用於減少或降低與該贅瘤形成、腫瘤、癌症或惡性病相關或由其造成之不利症狀或併發症之嚴重性、持續時間或頻率。
- 如請求項1至4及30中任一項之用途,其中該藥劑係用於減少或降低疼痛、不適、噁心、虛弱或嗜睡,或改良精力、食欲增加,活動力或心理幸福感。
- 如請求項1至4及30中任一項之用途,其中該藥劑係用於在該贅瘤形成、腫瘤、癌症或惡性病中刺激、誘導或增加CD8(=CD45+CD8+)T細胞群體。
- 如請求項1至4及30中任一項之用途,其中該藥劑係用於在該贅瘤形成、腫瘤、癌症或惡性病中減少或降低M2巨噬細胞(=F4/80+CD206+)群體。
- 一種T細胞活化劑及免疫查核點抑制劑之組合。
- 一種T細胞活化劑及/或免疫查核點抑制劑及肽化合物之組合,其中該肽化合物包含以下序列中之任一者:A)包含表示為P1-P6之殘基之肽,其具有以下結構:P1、P2、P3、P4、P5、P6或P6、P5、P4、P3、P2、P1; 其中P1係Cha、Nal(2)、(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)、佔據類似側鏈空間之胺基酸,或在側鏈中具有一或兩個芳香族、六氫吡啶、吡嗪、嘧啶、六氫吡嗪、嗎啉或嘧啶基團或一個吲哚、并環戊二烯、茚、萘、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、吲哚啉、唍、喹喏啉、喹唑啉基團之任一胺基酸;其中P2係Cha、Nal(2)、(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)、Bpa、Phe4NO2、佔據類似側鏈空間之胺基酸,或在側鏈中具有一或兩個芳香族、六氫吡啶、吡嗪、嘧啶、六氫吡嗪、嗎啉或嘧啶基團或一個吲哚、并環戊二烯、茚、萘、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、吲哚啉、唍、喹喏啉或喹唑啉基團之任一胺基酸;其中P3、P4、P5係任一胺基酸,或其中P3、P4、P5中之一或多者係簡單碳鏈,使得P2與P6之間之距離與當P3、P4、P5中之每一者係胺基酸時之距離大約相同;其中P6係Bpa、Phe4NO2、任一種胺基酸及Tyr、任一種胺基酸及Phe、任一胺基酸或不存在;或B)A)之肽,其中具有簡單碳鏈之胺基酸係11-胺基十一酸、10-胺基癸酸、9-胺基壬酸、8-胺基辛酸、7-胺基庚酸、6-胺基己酸或具有一或多個不飽和碳鍵之類似結構,及/或其中該任一種胺基酸係Ser,及/或其中P4係Trp,及/或其中佔據類似側鏈空間之該胺基酸係Tyr或Phe;或C)包含表示為P1-P12之殘基之肽,其具有任一以下結構:P1、P2、P3、P4、P5、P6;P6、P5、P4、P3、P2、P1;P1、P2、P3、P4、 P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11、P12;P1、P2、P3、P4、P5、P6、P12、P11、P10、P9、P8、P7;P6、P5、P4、P3、P2、P1、P7、P8、P9、P10、P11、P12;P6、P5、P4、P3、P2、P1、P12、P11、P10、P9、P8、P7;P7、P8、P9、P10、P11、P12、P1、P2、P3、P4、P5、P6;P7、P8、P9、P10、P11、P12、P6、P5、P4、P3、P2、P1;P12、P11、P10、P9、P8、P7、P1、P2、P3、P4、P5、P6;P12、P11、P10、P9、P8、P7、P6、P5、P4、P3、P2、P1;P12、P11、P6、P9、P8、P7、P2、P1;P12、P11、P10、P6、P9、P4、P7、P2、P1;P1、P2、P7、P8、P9、P6、P11、P12;或P1、P2、P7、P4、P9、P6、P10、P11、P12;其中P1係Cha、Nal(2)、(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)、Bpa、Phe4NO2、佔據類似側鏈空間之胺基酸(例如d-Tyr或l-Tyr、d-Phe或l-Phe),或在側鏈中具有一或兩個芳香族、六氫吡啶、吡嗪、嘧啶、六氫吡嗪、嗎啉或嘧啶基團或一個吲哚、并環戊二烯、茚、萘、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、吲哚啉、唍、喹喏啉或喹唑啉基團之任一胺基酸;其中P2係Cha、Nal(2)、(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)或佔據類似側鏈空間之胺基酸,或在側鏈中具有一或兩個芳香族、六氫吡啶、吡嗪、嘧啶、六氫吡嗪、嗎啉或嘧啶基團或一個吲哚、并環戊二烯、茚、萘、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、吲哚啉、唍、喹喏啉、喹唑啉基團之任一胺基酸;其中P3、P4、P5係任一胺基酸,或其中P3、P4、P5中之一或多者係簡單碳鏈,使得P2與P6之間之距離與當P3、P4、P5中之每一 者係胺基酸時之距離大約相同;其中P6係Bpa、Phe4NO2、任一種胺基酸及Tyr、任一種胺基酸及Phe;且其中P7、P8、P9、P10、P11、P12中之至少三者係鹼性胺基酸,且其餘為任一胺基酸或不存在;或D)C)之肽,其中具有簡單碳鏈之胺基酸係11-胺基十一酸、10-胺基癸酸、9-胺基壬酸、8-胺基辛酸、7-胺基庚酸、6-胺基己酸或具有一或多個不飽和碳鍵之類似結構,及/或,其中該任一種胺基酸係Ser,及/或,其中P4係Trp,及/或,其中佔據類似側鏈空間之該胺基酸係Tyr或Phe;或E)包含表示為P1-P12之殘基之肽,其具有任一以下結構:P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11、P12;P12、P11、P10、P9、P8、P7、P6、P5、P4、P3、P2、P1;P12、P11、P10、P6、P9、P4、P7、P2、P1;或P1、P2、P7、P4、P9、P6、P10、P11、P12;其中P1係Cha、Nal(2)、(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)、Bpa、Phe4NO2、佔據類似側鏈空間之胺基酸,或在側鏈中具有一或兩個芳香族、六氫吡啶、吡嗪、嘧啶、六氫吡嗪、嗎啉或嘧啶基團或一個吲哚、并環戊二烯、茚、萘、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、吲哚啉、唍、喹喏啉或喹唑啉基團之任一胺基酸;其中P2係Cha、Nal(2)、(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)、佔據類似側鏈空間之胺基酸,或在側鏈中具有一或兩個芳香族、六氫吡啶、吡嗪、嘧啶、六氫吡嗪、嗎啉或嘧啶基團或 一個吲哚、并環戊二烯、茚、萘、苯并呋喃、苯并噻吩、喹啉、吲哚啉、唍、喹喏啉、喹唑啉基團之任一胺基酸;其中P3、P4、P5係任一胺基酸,或其中P3、P4、P5中之一或多者係簡單碳鏈,使得P2與P6之間之距離與當P3、P4、P5中之每一者係胺基酸時之距離大約相同;其中P6係Bpa、Phe4NO2、任一種胺基酸及Thr、任一種胺基酸及Phe、任一胺基酸或不存在;及其中P7、P8、P9、P10、P11、P12中之至少三者係鹼性胺基酸,且其餘為任一胺基酸或不存在;或F)E)之肽,其中具有簡單碳鏈之胺基酸係胺基十一酸或8-胺基辛酸,及/或,其中該任一種胺基酸係Ser,及/或,其中佔據類似側鏈空間之該胺基酸係Tyr或Phe;或G)包含表示為P1-P12之殘基之肽,其具有任一以下結構:P1、P2、P3、P4、P5、P6或P6、P5、P4、P3、P2、P1,其中P1係Cha、Nal(2)、(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)、Bpa、Phe4NO2、Tyr或Phe;其中P2係Cha、Nal(2)、(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)、Bpa、Phe4NO2、Tyr或Phe;其中P3係ser、Arg、Cys、Pro或Asn;其中P4係Trp;其中P5係Ser、Arg或Asn;或其中P3、P4、P5係單一胺基十一酸或單一8-胺基辛酸;且 其中P6係Bpa、Phe4NO2、(Ser-Tyr)或(Ser-Phe);或H)包含表示為P1-P12之殘基之肽,其具有任一以下結構:P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11、P12;P1、P2、P3、P4、P5、P6、P12、P11、P10、P9、P8、P7;P6、P5、P4、P3、P2、P1、P7、P8、P9、P10、P11、P12;P6、P5、P4、P3、P2、P1、P12、P11、P10、P9、P8、P7;P7、P8、P9、P10、P11、P12、P1、P2、P3、P4、P5、P6;P7、P8、P9、P10、P11、P12、P6、P5、P4、P3、P2、P1;P12、P11、P10、P9、P8、P7、P1、P2、P3、P4、P5、P6;P12、P11、P10、P9、P8、P7、P6、P5、P4、P3、P2、P1;P12、P11、P6、P9、P8、P7、P2、P1;P12、P11、P10、P6、P9、P4、P7、P2、P1;P1、P2、P7、P8、P9、P6、P11、P12;或P1、P2、P7、P4、P9、P6、P10、P11、P12;其中P1係Cha、Nal(2)、(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)、Bpa、Phe4NO2、Tyr或Phe;其中P2係Cha、Nal(2)、(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3)、Bpa、Phe4NO2、Tyr或Phe;其中P3係Ser、Arg、Cys、Pro或Asn;其中P4係Trp;其中P5係Ser、Arg或Asn;或其中P3、P4、P5係單一胺基十一酸或單一8-胺基辛酸;其中P6係Bpa、Phe4NO2、(d-Ser-d-Tyr)或(d-Ser-d-Phe);及其中P7、P8、P9、P10、P11、P12中之至少三者係Arg或Lys,且其餘為任一胺基酸或不存在;或 I)包含表示為P1-P12之殘基之肽,其具有任一以下結構:P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11、P12;P12、P11、P10、P9、P8、P7、P6、P5、P4、P3、P2、P1;P12、P11、P10、P6、P9、P4、P7、P2、P1;或P1、P2、P7、P4、P9、P6、P10、P11、P12;其中P1係Cha或Nal(2);其中P2係(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)、(Phe-4CF3);其中P3係Ser;其中P4係Trp;其中P5係Ser或Asn;其中P6係Bpa、Phe4NO2、(Ser-Tyr)或(Ser-Phe);且其中P7、P8、P9、P10、P11、P12中之至少三者係Arg,且其餘為任一胺基酸或不存在;或J)包含表示為P1-P12之殘基之肽,其具有任一以下結構:P1、P2、P3、P4、P5、P6或P6、P5、P4、P3、P2、P1;其中P1係Cha或Nal(2);其中P2係(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)或(Phe-4CF3);其中P3係Ser;其中P4係Trp;其中P5係Ser;且其中P6係Bpa或(Ser-Tyr);或K)包含表示為P1-P12之殘基之肽,其具有任一以下結構:P1、P2、P3、P4、P5、P6;P6、P5、P4、P3、P2、P1;P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11、P12;P1、P2、P3、P4、P5、P6、 P12、P11、P10、P9、P8、P7;P6、P5、P4、P3、P2、P1、P7、P8、P9、P10、P11、P12;P6、P5、P4、P3、P2、P1、P12、P11、P10、P9、P8、P7;P7、P8、P9、P10、P11、P12、P1、P2、P3、P4、P5、P6;P7、P8、P9、P10、P11、P12、P6、P5、P4、P3、P2、P1;P12、P11、P10、P9、P8、P7、P1、P2、P3、P4、P5、P6;P12、P11、P10、P9、P8、P7、P6、P5、P4、P3、P2、P1;P12、P11、P6、P9、P8、P7、P2、P1;P12、P11、P10、P6、P9、P4、P7、P2、P1;P1、P2、P7、P8、P9、P6、P11、P12;或P1、P2、P7、P4、P9、P6、P10、P11、P12;其中P1係Cha或Nal(2);其中P2係(Phe-2,3,4,5,6-F)、(Phe-3,4,5F)或(Phe-4CF3);其中P3係任一胺基酸;其中P4係d-Trp或l-Trp;其中P5係任一胺基酸;其中P6係Bpa或(Ser-Tyr);其中P7係Arg;其中P8係Arg;其中P9係Arg;其中P10係Gln或Arg;其中P11係Arg;及其中P12係d-Arg或l-Arg,或L)K)之肽,其中該任一胺基酸係Ser或Pro;或M)包含表示為P1-P12之殘基之肽,其具有任一以下結構:P1、P2、 P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9、P10、P11、P12;P12、P11、P10、P9、P8、P7、P6、P5、P4、P3、P2、P1;P12、P11、P10、P6、P9、P4、P7、P2、P1;或P1、P2、P7、P4、P9、P6、P10、P11、P12;其中P1係Cha或Nal(2);其中P2係(Phe-2,3,4,5,6-F);其中P3係Ser;其中P4係Trp;其中P5係Ser;其中P6係Bpa或(Ser-Tyr);其中P7係Arg;其中P8係Arg;其中P9係Arg;其中P10係Gln或Arg;其中P11係Arg;及其中P12係Arg;或其前藥或其醫藥上可接受之鹽。
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