TW201722982A - 一種胺己基乳糖－三氮壬烷三醋酸鍵結物之合成方法 - Google Patents

一種胺己基乳糖－三氮壬烷三醋酸鍵結物之合成方法 Download PDF

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Abstract

本發明提供了胺己基乳糖-三氮壬烷三醋酸之合成方法。合成方法包含以苯甲醯基保護乳糖與氫溴酸進行溴化反應，與疊氮保護之胺基己醇進行糖化反應而得到一前驅物，將前驅物進行兩步驟的去保護反應以得到胺己基乳糖，在三乙胺鹼性溶劑下與異硫氰酸-甲苯-三氮壬烷二醋酸-谷氨酸(NCS-benzyl-NODA GA,i.e.2,2'-(7-(1-carboxy-4-((4-isothio cyanate benzyl)amino)-4-oxobutyl)-1,4,7-triazonane-1,4-diyl)diacetic acid)鍵結得到胺己基乳糖與硫氰酸-甲苯-三氮壬烷二醋酸-谷氨酸的鍵結物。此新穎製程沒有掉醣副產物，因此可以將產率大幅提升到46%，如此可以減少為了量產重複製備的需求，且沒有原先放大製程產生的不純物，適合未來量產製程使用。

Description

一種胺己基乳糖-三氮壬烷三醋酸鍵結物之合成方法
本發明是關於胺己基乳糖-三氮壬烷三醋酸鍵結物之合成方法，特別是以苯甲醯基乳糖溴化物與疊氮基化胺己醇以AgOTf當催化劑於二氯甲烷溶劑下反應完成胺己醇醣基化反應，再以兩步驟去保護，分別是以甲醇鈉去除苯甲醯保護基團，以及以鈀-碳氫化反應去除疊氮保護基團，形成胺己基乳糖苷，接著在三乙胺鹼性溶劑下與p-NCS-benzyl-NODA-GA(2,2'-(7-(1-carboxy-4-((4-isothiocyanatobenzyl)amino)-4-oxobutyl)-1,4,7-triazonane-1,4-diyl)diacetic acid)鍵結得到胺己基乳糖與p-NCS-benzyl-NODA-GA的鍵結物。
正常肝細胞表面有一種很特殊的受體，會和末端帶有乳糖或半乳糖基的醣胜肽有很強烈的結合，利用這種特性，胺己基乳糖或胺己基半乳胺醣衍生物鍵結螯合劑已被用來做成肝細胞受體標靶造影藥物(TWI 392511)。傳統製備胺己基乳糖係參考Kartha的方法(J Carbo Chem 9,777-781,1990.)於一步驟完成溴醯氧基β-乳醣(acetobromo β-lactose)的合成，再依據Weigel等人的方法(Carbohydr Res 70,83-91,1979.)合成6-三氟醋酸胺己基β-乳醣 (6-trifluoroacetylaminohexyl β-lactoside)；簡單說明如下：β-乳醣在一燒瓶中以醋酸酐和HBr/HOAc作處理，待溴醯氧基醣形成，減少溶劑量，加乙醚做再結晶，此時會有漂亮結晶出現為溴醯氧基β-乳醣。接著6-三氟醋酸胺己醇和溴醯氧基β-乳醣，以氰化汞做為催化劑，在體積比1：1的甲苯-硝基甲烷中完成反應，產生6-三氟醋酸胺己基β-乳醣。
除去乳醣乙酰氧基上的乙酰基的方法為將化合物與10mM的sodium methoxide的純酒精溶液反應2小時，來去除乙酰氧基上的乙酰基，反應產物以酸式Dowex 50中和後，取濾液並予以蒸發乾燥。
脫去三氟醋酸根的方法則是以10%酒精及10%TEA(triethylamine)在室溫下隔夜反應完成。混合液抽乾後，剩餘物利用由含過量氫氧化鈉顆粒及濃硫酸組成的真空乾燥皿(Vacuum desiccator)乾燥。為了去除胺基的相對離子(counter ion)，將殘餘物溶解於50%酒精並通過Dowex 1(H+型)直到表層液體變為鹼性，接著經過濾後，濾液再拿去抽乾。
傳統胺己醇的糖化製備流程：必須先將乳醣乙醯化，係使用pyridine與acetic anhydride的反應條件進行製備。簡述如下： 取乳糖(1.0equiv,20.0g,58.4mmol)置於500mL反應瓶內，放入攪拌子並加入pyridine(180mL)，並將溶液移置冰浴下攪拌，再將Acetic anhydride(12equiv,88mL,87.6mmol)加入攪拌，以TLC觀察，確認反應完成後(溶液呈澄清黃色)，將溶液轉移 到萃取瓶內並加入EtOAc(500mL)，再分別以1M HCl(aq)(400mL×4),NaHCO3(aq)(200mL×2)，蒸餾水(200mL)及飽和食鹽水(200mL)除去有機相雜質。
由上可知，若要將20g的乳醣起始物以乙醯基保護，則需使用500mL的反應瓶與1L的萃取瓶，但因此乳糖乙醯化保護製程在去保護時常有掉醣的現象，使得純化困難且終產物的產率很低；若要將製程放大，則需購置十分大的玻璃器材與使用更多的溶劑，以搶救低產率之缺陷。使用如此大體積的器材與溶劑，則非所有實驗操作員皆能輕鬆操作此反應。
總之，上述傳統的方法產率約為10-15%，且常有掉醣的現象，不利後續胺己基乳糖-NCS-benzyl-NODA-GA鍵結物量產作業。
有鑑於此，為解決上述問題，本發明提供了一種胺己基乳糖-NCS-benzyl-NODA-GA鍵結物合成方法。合成方法包含以苯甲醯基保護乳糖與氫溴酸進行溴化反應，與疊氮保護之胺基己醇進行糖化反應而得到一前驅物，將前驅物進行兩步驟的去保護反應以得到胺己基乳糖，接著在三乙胺鹼性溶劑下與p-NCS-benzyl-NODA-GA鍵結得到胺己基乳糖與p-NCS-benzyl-NODA-GA的鍵結物。。
在一實施例中，氫溴酸是33%氫溴酸的醋酸溶液。
在一實施例中，苯甲醯基保護乳糖是以pyridine和benzoylchloride在冰浴環境下合成。
在一實施例中，溴化反應包含將苯甲醯基乳糖溶在無水二氯甲烷，以及在冰浴中緩慢加入氫溴酸。
在一實施例中，疊氮保護之胺己醇是以6-Bromo-1-hexanol溶在DMF與NaN3溶液於80℃反應完成。
在一實施例中，去除保護基反應包含將前驅物溶於甲醇中，以及加入催化量的甲醇鈉於60℃下的反應方法去除苯甲醯基。
在一實施例中，去除保護基反應包含將前驅物溶於1：1的甲醇與水之共溶劑，以及加入鈀-碳進行氫化方法去除疊氮基。
在一實施例中，鍵結反應所用的螯合劑為p-NCS-benzyl-NODA-GA。
根據本發明之胺己基乳糖-NCS-benzyl-NODA-GA合成方法，本發明所獲胺己基乳糖-NCS-benzyl-NODA-GA產物穩定性高，產率佳，適用於量產製程。
以上之關於本發明內容之說明及以下之實施方式之說明係用以示範與解釋本發明之原理，並且提供本發明之專利申請範圍更進一步之解釋。
第1圖是本發明一實施例所揭露之胺己基乳糖-NCS-benzyl-NODA-GA鍵結物的結構圖與製備方法流程圖。
以下在實施方式中詳細敘述本發明的詳細特徵以及優點，其 內容足以使任何熟習相關技術者了解本發明的技術內容並據以實施，且根據本說明書所揭露的內容、申請專利範圍及圖式，任何熟習相關技術者可輕易地理解本發明相關的目的及優點。以下的實施例係進一步詳細說明本發明的觀點，但非以任何觀點限制本發明的範疇。
有關本發明的特徵與實作，茲以最佳實施例詳細說明如下：首先，胺己基乳糖-NCS-benzyl-NODA-GA鍵結物的結構圖與製備方法流程圖請參閱第1圖。本發明一實施例所揭露之胺己基乳糖-NCS-benzyl-NODA-GA鍵結物合成方法，其包含以下步驟。
S01：以benzoyl chloride耦合乳糖形成化合物1苯甲醯基乳糖。
S02：以化合物1苯甲醯基乳糖以氫溴酸溴化，形成化合物2苯甲醯基乳糖溴化物。
S03：以6-bromo-1-hexanol耦合NaN3，形成化合物3 azidohexanol。
S04：用化合物2苯甲醯基乳糖溴化物與化合物3 azidohexanol，在溶劑及催化劑下進行醣基化反應，形成化合物4疊氮胺己基-苯甲醯基乳糖化合物，該催化劑為AgOTf。
S05：化合物4使用甲醇鈉去除苯甲醯基保護形成化合物5疊氮胺己基-乳糖化合物。
S06：化合物5在催化劑下進行氫化反應，去除疊氮，形成化合物6胺己基乳糖，該催化劑為10%含鈀的活性碳。
S07：化合物6在三乙胺鹼性溶劑下與 p-NCS-benzyl-NODA-GA鍵結形成化合物7胺己基乳糖-NCS-benzyl-NODA-GA鍵結物。
實施例一、以pyridine和醋酸酐實施乙醯化保護法合成胺己基乳糖
合成路徑如下式一以pyridine和醋酸酐乙醯化保護法合成胺己基乳糖之合成路徑。
首先，取乳糖(6.61g，18.35mmol)置於250mL圓底反應瓶內，放入磁石並加入吡啶(180mL)，並將此懸浮溶液移到冰浴下攪拌。然後，取醋酸酐(80mL)緩慢加入反應瓶內，並於冰浴下攪拌10分鐘。接著，將反應瓶移到室溫及氮氣下反應18小時。反應完成後，溶液由懸浮變為略淡黃色澄清。接著，加入乙酸乙酯(300mL)並將反應瓶溶液轉移到萃取瓶內，並 以1M鹽酸水溶液(150mL，三次)將有機層內吡啶萃至水層。接著，以飽和碳酸氫鈉水溶液(150mL，兩次)將有機層內的醋酸萃至水層。最後，以飽和食鹽水(100mL，一次)清洗有機層。將有機層收集於錐形瓶，並加入硫酸鎂除去有機相殘餘水份。然後，過濾移除鹽類，減壓濃縮(水浴鍋50℃)移除溶劑，並於高真空乾燥得到泡狀膠體α,β乙醯化乳醣混合物(12.38g)，產率為99%。接下來進行溴化，將上述乙醯化乳糖(1.01g,1.49mmol)置於50mL圓底反應瓶，放入磁石並加入無水二氯甲烷(16mL)。隨後，將反應瓶移至冰浴中攪拌，緩慢加入氫溴酸(33%溶於醋酸內，2.0mL)。接著，將反應瓶置於冰浴下反應10分鐘後移到室溫於氮氣下反應五小時。在反應過程中，溶液顏色由深橘色轉咖啡色。反應完畢後，加入乙酸乙酯(120mL)並轉移到萃取瓶內，有機層以飽和碳酸氫鈉(50mL，一次)移去氫溴酸與醋酸。隨後，再以水(100mL)與飽和食鹽水(50mL)各洗滌一次。將有機層收集於錐形瓶內，加入硫酸鎂除去有機相殘餘水份。過濾移除鹽類後，減壓濃縮(水浴鍋40℃)將大部分溶劑移除，此時為淡黃色油狀體。接著，加入乙醚(80mL)並劇烈搖晃均勻，白色固體產物析出，經布氏漏斗減壓過濾，以少量冰的乙醚清洗固體。收集白色固體於高真空乾燥2小時，得到溴化乙醯乳糖產物(0.79g)，產率為76%。需注意的是，此化合物不宜久放，需密封保存，製備後於一星期內應進行後續反應。
取溴化乙醯乳糖(18.75g,26.80mmol)與Cbz保護的6-胺己醇(10.08g,40.11mmol)於500mL雙頸反應瓶中，置高真空乾燥2小時，在本實施例中，是以Cbz保護6-胺己醇，透過Cbz的UV吸收而可藉由紫外燈來追蹤反應，並且Cbz只要透過氫化即可輕易移除。乾燥後一方通入氮氣，並依序 加入無水二氯甲烷(200mL)、Na2HPO4(7.2g,50.72mmol)與活化後分子篩(4Å MS，約11g)於反應瓶內。將上述反應瓶移至冰浴下攪拌，於正壓氮氣環境下，在另一反應瓶口緩慢加入AgOTf(8.37g,32.58mmol)。加料完畢後，塞上血清塞並移到室溫及氮氣下進行反應5小時。反應過程中，反應瓶內有黃色固體析出(AgBr為黃色)，隨後逐漸變成灰褐色懸浮液。反應完畢後，鋪上celite於G3抽氣漏斗並進行減壓過濾。將固體以少量乙酸乙酯(約20mL，重複3次)清洗，收集濾液並減壓濃縮移除大部分溶劑。濃縮後，加入乙酸乙酯(400mL)稀釋並轉至萃取瓶中。有機相經分別以1M HCl(150mL，洗滌兩次)，再以飽和碳酸氫鈉(150mL)、水(100mL)及飽和食鹽水(100mL)分別洗滌一次。有機層以硫酸鎂除去有機相殘餘水份、過濾並減壓濃縮移除大部分溶劑。粗產物以短矽膠管柱層析(乙酸乙酯/甲苯5：5)進行初步分離，而可獲得Cbz保護的6-胺己基乙醯化乳糖產物(3.52g)。(需注意的是，由於Cbz-6-胺己基乙醯化乳糖與溴化乙醯乳糖的管柱層析結果相當靠近，因此直接進行下一水解反應，再進行純化。)
將上述Cbz-6-胺己基乙醯化乳糖(3.52g)溶於無水甲醇(32mL)。接著，加入配製5.4M之甲醇鈉甲醇溶液(1.3mL)於室溫下反應3小時。反應完畢後，緩慢加入酸性樹酯(Dowex® 50WX8)，並以廣用pH試紙即時偵測，調整pH值接近中性範圍。接著，透過減壓過濾移去酸性樹酯，收集濾液並減壓濃縮移除溶劑。以自動快速製備級分離系統予以純化，採逆向管柱層析(RP-18)，偵測波長設定為254nm，動相則以50%甲醇/水流速每分鐘26毫升進行沖堤。待分離層析後，將產物區收集並減壓濃縮(水浴鍋溫度50℃)，以高真空進行乾燥即可得白色固體單鏈乳糖骨架產物(2.26g)，產 率為15%，進行氫化反應後可得等量胺己基乳糖，但常有掉醣副產物。
實施例二、以醋酸酐和碘實施乙醯化保護法合成胺己基乳糖
合成路徑如下式二 以醋酸酐和碘保護法合成胺己基乳糖之合成路徑。
首先，取乳糖(1.0equiv,60.0g,175.3mmol)置於500mL反應瓶內，放入攪拌子並加入Acetic anhydride(12equiv,198mL,2.10mol)。將反應瓶置於冷水中攪拌30分鐘。最後加入I2(50mg/g sugar,3g)。於氮氣與水浴下反應6小時。以TLC觀察，確認反應完成後(溶液呈深黑色)，將溶液轉移到萃取瓶內並加入EtOAc(500mL)，以飽和Na2S2O3(aq)(300mL×4)萃取，溶液由深黑轉為淡黃透明溶液。接著，收集有機層，分別以飽和NaCl(aq)(300mL)、飽和NaHCO3(aq)(300mL×4)萃取。收集有機層，加入Na2SO4除水、過 濾，減壓濃縮，在高真空下乾燥得到略帶棕色泡狀膠體乙醯化乳醣(104.0g)。接著，進行乙醯化乳醣溴化，將乙醯化乳醣(1.0equiv,90.0g,0.133mol)溶在無水CH2Cl2(500mL)置於1L圓底反應瓶中。接著，將反應瓶在冰浴中加入HBr(33% in acetic acid)(150mL)，並於冰浴下反應20分鐘後再移至室溫反應4小時。以TLC確認反應完畢後加入CH2Cl2(100mL)並轉移至萃取瓶。有機層分別以飽和NaHCO3(aq)(300mL×2)及飽和NaCl(aq)(200mL)分別萃取。收集有機層以MgSO4除水、過濾、減壓濃縮移除大部分溶劑。加入乙醚(700mL)並劇烈搖晃均勻後，白色固體產物析出。過濾，並以少量冰的乙醚清洗固體。收集白色固體置於高真空乾燥2小時，得到溴化乙醯乳糖產物(23.63g)。
接著，將溴化乙醯乳糖(1.0equiv,54.0g,77.2mmol)與Cbz胺己醇(1.5equiv,29.1g,115.8mmol)於1L反應瓶中，於高真空乾燥2小時。依序加入無水CH2Cl2(500mL)、Na2HPO4(2.0equiv,21.9g,154.4mmol)與活化後分子篩(4Å MS，約35g)於反應瓶內。接著，將反應瓶移至冰浴下攪拌30分鐘平衡。最後，於氮氣環境下，緩慢加入AgOTf(1.2equiv,23.8g,92.6mmol)。將反應移至室溫、氮氣下進行反應5小時。反應結束，將溶液以celite、G3抽氣漏斗減壓過濾。固體以少量EtOAc(50mL×3)清洗。將濾液減壓濃縮移除大部分溶劑。加入EtOAc(600mL)稀釋並轉至萃取瓶中。有機相經分別以1M HCl(300mL，洗滌兩次)，再以飽和NaHCO3(aq)(300mL)、水(100mL)、飽和NaCl(aq)(100mL)分別洗滌一次。收集有機層以MgSO4除水、過濾、減壓濃縮移除大部分溶劑。粗產物以短矽膠管柱層析(EtOAc：toluene=5：5)進行初步分離，可獲得Cbz-胺己基乙醯化乳糖(4.52g)。產 物中存在掉醣副產物。於去乙醯化後，純化困難且產率只有5%。當中也曾嘗試更換AgOTf改為Ag2CO3，但在進行糖化時則還是有掉醣的副產物產生，導致反應完純化十分困難。亦曾以帶有Benzyl與Cbz保護的胺己醇進行糖化反應，得到的單鏈benzyl-Cbz胺己基乙醯化乳醣產物在解醋酸酯保護時會有掉乳糖的現象，推測是分子構型之影響所導致的結果。因此，嘗試以不用乙醯化保護乳糖的新製程。
實施例三、以pyridine和benzoyl chloride實施苯甲醯基化保護法合成胺己基乳糖
合成路徑如下式三 以pyridine和benzoyl chloride實施苯甲醯基化保護法合成胺己基乳糖之合成路徑。
首先，取乳糖(1.0equiv,15.0g,48.8mmol)置於500mL反應 瓶內，放入攪拌子並依序加入pyridine(38.0equiv,150mL,1.86mol)、Benzoyl chloride(13.0equiv,53.0mL,64.0mol)與DMAP(dimethyl aminopyridine,0.01equiv,100mg,0.8mmol)，室溫攪拌4小時。將溶液轉移到萃取瓶內並加入EtOAc(200mL)，以飽和NaHCO3(aq)(300mL×2)萃取收集有機層。加入MgSO4除水、過濾，減壓濃縮，在高真空下乾燥得到乳白色固體(38.8g)。取苯甲醯化乳糖(1.0equiv,20.0g,17.0mmol)溶於二氯甲烷(70mL)中，加入HBr(33% in acetic acid)(17.5mL)。於室溫攪拌4小時。將溶液轉移到萃取瓶內並加入二氯甲烷(200mL)，以飽和NaHCO3(aq)(300mL×2)萃取收集有機層。加入MgSO4除水、過濾，減壓濃縮，在高真空下乾燥得到乳白色固體(18.7g)。
接著，取溴化苯甲醯化乳糖(1.0equiv,6.0g,5.3mmol)、疊氮保護胺己醇(1.5equiv,1.2mL,8.0mmol)、分子篩(1.1g)與二氯甲烷(12mL)。在-78℃下，加入AgOTf(1.5equiv,2.1g,8.2mmol)後攪拌5小時。反應結束，將溶液以celite、G3抽氣漏斗減壓過濾，固體以少量EtOAc(50mL×3)清洗。將濾液減壓濃縮移除大部分溶劑。加入EtOAc(150mL)稀釋並轉至萃取瓶中。有機相經分別以1M HCl(100mL，洗滌兩次)，再以飽和NaHCO3(aq)(100mL)、水(100mL)、飽和NaCl(aq)(100mL)分別洗滌一次。收集有機層以MgSO4除水、過濾、減壓濃縮移除大部分溶劑。粗產物以短矽膠管柱層析(EtOAc：toluene=1：9)進行初步分離，而可獲得疊氮保護胺己基苯甲醯化乳糖(3.3g)。接著，將疊氮保護胺己基苯甲醯化乳糖(3.3g)溶於甲醇(50mL)中，加入NaOMe(3mg)後，在60℃下攪拌3小時。緩慢加入酸性樹酯(Amberlite IR-120 resin(H+))，並以廣用pH試紙即時偵測，調整pH值接近中 性範圍。經減壓過濾移去酸性樹酯，收集濾液並減壓濃縮移除溶劑。加入丙酮(100mL)，經減壓過濾收集固體溶於甲醇-水(1：1,20mL)中，加入Pd/C(10mg)後於氫氣條件下攪拌5小時，經減壓過濾並減壓濃縮移除溶劑，得胺己基乳糖(1.1g)。
合成路徑如式三。本實施例之製程以乳糖作為起始物，在Pyridine與benzoyl chloride的條件下進行苯甲醯基化保護。接著。加入33%氫溴酸的醋酸溶液進行溴化反應，即可得到帶有benzoyl保護且溴化完成的化合物。在AgOTf與molecular sieve的條件下加入疊氮胺己醇進行反應，得到產物後再進行去苯甲醯基與去氫反應，即可得到單鏈胺己基乳醣。本實施例之製程不會掉醣，產率約略提升為44%，且在進行NOTA鍵結時可成功得到產物。
化合物分析數據：C18H35NO11；PR-TLC(MeOH/1% TFA=5：5)Rf=0.64；1H NMR(300MHz,CD3OD)δ 4.46(1 H,d,J=7.2Hz),4.28(1 H,d,J=7.8Hz),3.92-3.67(7 H,m),3.60-3.38(7 H,m),3.23(1 H,t,J=7.8Hz),2.78(1 H,t,J=7.8Hz),1.67-1.56(4 H,m),1.43-1.40(4 H,m)；13C NMR(75MHz,CD3OD)δ 103.93,103.05,79.56,75.91,75.33,75.26,73.64,73.60,71.39,69.53,69.11,61.33,60.76,40.30,29.68,29.35,26.25,25.55；ESI-MS：calcd for 442.22,found：m/z 442.22[M+H]+.
實施例四、6-胺己基乳糖-NOTA鍵結物合成
合成路徑如下式四 6-胺己基乳糖與NCS-benzyl-NODA GA鍵結反應。
首先，將6-胺己基乳糖(10μmol)溶於TEA/DMF(0.1mL/1mL)，再加入p-NCS-benzyl-NODA GA(20μmol,CheMatech,France.FW=521.59)，反應攪拌6小時。加入diethyl ether(30mL)析出固體，離心後倒除上清液，再加入diethyl ether(30mL)，超音波震盪5分鐘，接著離心，倒除上清液，得到固體粗產物。粗產物以自動快速製備級分離系統純化，經減壓濃縮與冷凍乾燥後得6-胺己基乳糖-NCS-benzyl-NODA GA(6μmol)，產率約為60%。
化合物分析數據：C41H66N6O18S；ESI-MS：calcd for 963.42,found：m/z 963.42[M+H]+.
實施例五、6-胺己醇Cbz保護製程
合成路徑如下式五 以Cbz保護6-胺己基製程。
首先，將6-胺已醇(8.30g,70.8mmol)與碳酸鉀(5.86g,40.2mmol)置於100mL圓底反應瓶中，放入磁石並加入水(35mL)劇烈攪拌。隨後，緩慢滴入溶於乙醚(12mL)的氯甲酸苄酯(CbzCl；12.1g,70.9mmol)。於室溫反應隔夜(約15小時，反應過程會有白色固體顆粒析出)。反應完畢後，經G3抽氣漏斗減壓過濾，並將固體分別以少量水(約20mL)與已烷(約30mL)清洗。將固體收集並以乙酸乙酯(300mL)溶解，轉至萃取瓶中並分別以1M HCl(200mL)與飽和食鹽水(200mL)各洗滌有機相一次。有機相經硫酸鎂去除殘餘水份、過濾、減壓濃縮後(水浴鍋45℃)並於高真空乾燥，獲得白色固體產物(13.3g)，產率為74%。
化合物分析數據：C14H21NO3；TLC(EtOAc/toluene=5：5)Rf=0.41；1H NMR(300MHz,CDCl3)δ 7.37-7.28(5 H,m),5.09(2 H,s),4.77(1 H,br),3.63(2 H,q,J=6.3Hz),3.20(2 H,q,J=6.6Hz),1.58-1.36(9 H,m)；ESI-MS：calcd for 252.15,found：m/z 252.16[M+H]+
實施例六、6-胺己醇以benzyl Cbz保護製程
合成路徑如下式六 以benzyl Cbz保護6-胺己醇製程。
首先，將6-Amino-1-hexanol(1.0equiv,8.30g,70.8mmol)與100mL的EtOH置於250mL的反應瓶中，在氮氣下緩慢加入benzaldehyde(1.01equiv,7.3mL,71.5mmol)，並在50℃下反應1小時~16小時(以TLC搭配ninhydrin追蹤反應，展開液為EtOAc：toluene=4：6)。當確認反應結束減壓移除溶劑。將中間物轉移至250mL雙頸瓶中加入150mL的MeOH並在冰浴攪拌10min。接著，在氮氣下緩慢的加入NaBH4(1.15equiv,3.1g,81.4mmol)。完成加藥時，將反應瓶自然回溫並反應2小時。將反應瓶剩餘的NaBH4進行quench，緩慢加入ethanol(3.3ml,56.7mmol)，再加入飽和NaHCO3(aq)(100mL)攪拌30分鐘。最後，將水層混合物加入300mL乙醚萃取2次，收集有機層並減壓濃縮至200mL。有機層加入100mL的水與NaHCO3(10.7g,127mmol)。最後，將CbzCl(1.05equiv,10.6mL,7.44mmol)緩慢的加入反應瓶中，並於室溫中反應14小時。混合液額外加入150mL的乙醚，並丟棄水層。接著，分別以1M HCl(aq)(200mL)與飽和NaCl(aq)(200mL)各萃取一次。收集有機相以MgSO4除水、過濾、減壓濃縮。外觀為黃色油狀物。
實施例七、6-胺己醇以疊氮保護製程
合成路徑如下式七 以疊氮保護6-胺己醇製程。
首先，將市售起始物6-Bromo-1-hexanol(1.0equiv,7.2g,10mL,39.9mmol)溶在40mL DMF，加入100mL圓底瓶，加入已經配置好的NaN3(3.0equiv,9.1g，120mmol)in H2O 30mL。將反應瓶置於油浴鍋並加熱到80℃，在迴流下反應24小時。反應瓶結束(溶液呈褐色或是紅褐色)後將反應瓶回到室溫。加入飽和NaCl(aq)120mL接著以n-hexane(100mL×3)進行萃取，收集有機層用Na2SO4除水、過濾，減壓濃縮抽乾。
化合物分析數據：C6H13N3O；TLC(EtOAc/Hexane=3：7)Rf=0.5；1H NMR(300MHz,CD3OD)δ 3.66-3.62(2 H,t,J=6.0Hz),3.30-3.25(2 H,t,J=6.9Hz),1.67-1.54(4 H,m),1.46-1.36(4 H,m)；13C NMR(75MHz,CD3OD)δ 62.64,51.35,32.50,28.771,26.49,25.30。
雖然已說明且描述了本發明之實施例，但是熟悉此項技術者可作各種修改及改良。並不意欲將本發明限制於如所說明之特殊形式，且所有不背離本發明之精神及範圍的修改都屬於如隨附之申請專利範圍中所界定之範圍內。
根據本發明所揭露之胺己基乳糖合成方法，本發明所獲胺己基乳糖產物穩定性高，產率佳，適用於量產製程。
綜觀上述，本發明以其整體之組合與特徵而言，既未曾見諸於同類產品中，申請前亦未公開，誠已符合專利法之法 定要件，依法提出發明專利之申請
雖然本發明之實施例揭露如上所述，然並非用以限定本發明，任何熟習相關技術者，在不脫離本發明之精神和範圍內，舉凡依本發明申請範圍所述之形狀、構造、特徵及精神當可做些許之變更，因此本發明之專利保護範圍須視本說明書所附之申請專利範圍所界定者為準。

Claims (9)

  1. 一種胺己基乳糖-三氮壬烷三醋酸鍵結物之合成方法，包含：以苯甲醯基保護乳糖與氫溴酸進行溴化反應；與疊氮保護之胺基己醇進行糖化反應而得到一前驅物；以及將該前驅物進行兩步驟的去保護反應以得到胺己基乳糖，在三乙胺鹼性溶劑下與p-NCS-benzyl-NODA-GA發生鍵結反應，得到胺己基乳糖-NCS-benzyl-NODA-GA鍵結物。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之合成方法，其中氫溴酸是33%氫溴酸的醋酸溶液。
  3. 如申請專利範圍第1項所述之合成方法，其中苯甲醯基保護乳糖是以pyridine和benzoyl chloride在冰浴環境下合成。
  4. 如申請專利範圍第1項所述之合成方法，其中該溴化反應包含：將苯甲醯基化乳糖溶在無水二氯甲烷；以及在冰浴中緩慢加入氫溴酸。
  5. 如申請專利範圍第1項所述之合成方法，其中該疊氮保護之胺己醇是以6-Bromo-1-hexanol溶在DMF與NaN3溶液於80℃反應完成。
  6. 如申請專利範圍第1項所述之合成方法，其中該去除保護基反應包含：將該前驅物溶於甲醇中；以及加入催化量的甲醇鈉於60℃下的反應方法去除苯甲醯基。
  7. 如申請專利範圍第1項所述之合成方法，其中該去除保護基反應包含：將該前驅物溶於1：1的甲醇與水之共溶劑；以及加入鈀-碳進行氫化方法去除疊氮基。
  8. 如申請專利範圍第1項所述之合成方法，其中該三氮壬烷三醋酸是p-NCS-benzyl-NODA-GA。
  9. 如申請專利範圍第1項所述之合成方法，其中該鍵結反應是以p-NCS-benzyl-NODA-GA與胺己基乳糖在三乙胺鹼性溶劑下反應6小時完成。
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