TW201700108A - 用作美白皮膚與抗皮膚老化的蝴蝶蘭萃取物 - Google Patents

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Abstract

本發明提供一種用作美白皮膚與抗皮膚老化的蝴蝶蘭萃取物，其係由包括以下之步驟所製備：(a) 提供一蝴蝶蘭(Phalaenopsis Sogo Yukidian’V3’)之花瓣、花梗或花瓣與花梗相混合之待萃取物；(b) 將該待萃取物與95%(v/v)乙醇以1:20~1:5重量比混合形成一混合物後，靜置20~30小時以進行萃取；以及(c) 過濾該混合物，以獲得一醇溶性蝴蝶蘭萃取物溶液。藉由本發明蝴蝶蘭萃取物具有降低酪胺酸酶以及抗氧化的活性，可利用於美白皮膚並減緩皮膚的老化現象。

Description

用作美白皮膚與抗皮膚老化的蝴蝶蘭萃取物
本發明係關於一種用作美白皮膚與抗皮膚老化的蝴蝶蘭萃取物，尤其是關於一種能夠抑制酪胺酸酶活性及具抗氧化活性之蝴蝶蘭萃取物。
在現今社會物質生活愈來愈富足之情況下，現代人除了滿足實質生理上的溫飽外，對於個人外在的形象也愈來愈重視，從醫美診所如雨後春筍般地開設以及整形風潮的盛行下可窺見此潮流趨勢。然而，關於個人外在的顯現，除了身材的比例或尺寸、頭髮之多寡或髮色外，最被人用以判定年輕與否或保養適當與否之一大標準就是皮膚的健康狀況與色澤。具有美白透晰、彈性而帶有些許光澤的緊緻皮膚，一直是醫美業者所標榜的美容目標，更是消費者期待自己達成的願望。
皮膚組織實質上最重要的功能在於它是身體抵禦外來物質最重要之屏障之一，可保護身體免於細菌、病毒等致病菌與有毒物質的入侵，亦可保持人體水分與體溫維持在一定的標準。然而當皮膚暴露在陽光或其他光源之紫外線下，或是其他游離輻射或揮發性物質中時，會促使皮膚生成活性氧與自由基。當活性氧與自由基累積的數目超出個體所能承受之抗氧化能力時，就會開始與細胞內之DNA、蛋白質或脂質等產生反應，並使皮膚產生不良的變化，例如促進黑色素生成(melanogenesis)、造成皮膚的老化等 (請參見Kim YJ, Yokozawa T., Modulation of oxidative stress and melanogenesis by proanthocyanidins. Biol Pharm Bull. 2009 Jul;32(7):1155-9, 2009)。
關於黑色素(Melanin)，其係由黑色素細胞所製造，而這些細胞位於表皮層的基底細胞之間。黑色素細胞合成黑色素顆粒後，分泌釋放黑色素，使人體有不同的膚色。當皮膚被陽光/紫外線照射時(特別是受紫外線-B照射時)，角質細胞中所生成的活性氧與自由基會誘發腫瘤蛋白53(p53)表現，經過一連串的反應，促進了「酪胺酸酶」(tyrosinase) 的大量表現，大量的酪胺酸酶則加速催化細胞內的酪胺酸(tyrosine)，使其氧化為二羥基苯基丙胺酸(dihydroxyphenylalanine，簡稱DOPA)，而二羥基苯基丙胺酸再藉由酪胺酸酶催化反應成為多巴醌(dopachrome)，多巴醌最後經由氧化反應轉變為黑色素。因此，人體皮膚除原有膚色外，透過紫外光等光源之照射後，將因為黑色素之生成而使皮膚變得較黑。
另一方面，同樣因為紫外線照射時所生成的活性氧與自由基，會促進轉錄因子活化蛋白(AP1)的形成，而誘發一系列基質金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases)的表現，進而促進膠原蛋白、彈性蛋白及蛋白多醣的降解，導致皮膚變薄、萎縮、彈性組織變性、彈性變差、乾燥、粗糙、產生皺紋、雀斑、斑點等皮膚老化現象。
鑒於上述黑色素形成之作用機轉以及皮膚老化之因素，產學界莫不欲找出可控制或影響其代謝過程之化合物，以根本解決皮膚變黑與老化的問題。
目前雖然已有利用蝴蝶蘭萃取物製作美容用品的創作，但關於該些萃取物之效用仍然局限於某種效用，亦即，利用目前已知方法所萃取出之萃取物，其中之有效成分比例可能不高或不平均，因此，尚未出現能夠含有同時兼具美白抗老化，且具有極佳改善效果之萃取物成分之發明。
本發明之目的之一在於提供一種能夠抑制與黑色素生成有關之酪胺酸酶活性之蝴蝶蘭萃取物，藉由該萃取物對酪胺酸酶的抑制效果，使酪胺酸無法進行黑色素生成的代謝途徑，因而能夠避免皮膚變黑而具有美白皮膚之效果。
為了達成前述之目的，本發明實施例提供一種蝴蝶蘭萃取物，其係由包括以下之步驟所製備：(a) 提供一蝴蝶蘭(Phalaenopsis Sogo Yukidian’V3’)之花瓣、花梗或花瓣與花梗相混合之待萃取物；(b) 將該待萃取物與95%(v/v)乙醇以1:20~1:5重量比混合形成一混合物後，靜置20~30小時以進行萃取；以及(c) 過濾該混合物，以獲得一醇溶性蝴蝶蘭萃取物溶液。
在一實施例中，所述之蝴蝶蘭萃取物，其中該步驟(b)中該待萃取物與95%(v/v)乙醇的重量比較佳可為1:10。
在另一實施例中，本發明提供一種用於美白皮膚之組成物，其包括前述之蝴蝶蘭萃取物，以及載劑。
為進一步提供具有抗氧化活性之蝴蝶蘭萃取物，達到抗皮膚老化之目的，在本發明的一實施例中，提供一種能夠用作美白皮膚與抗皮膚老化的蝴蝶蘭萃取物，其係由包括以下之步驟所製備：(a) 提供一蝴蝶蘭(Phalaenopsis Sogo Yukidian’V3’)之花瓣作為待萃取物；(b) 將該待萃取物與95%(v/v)乙醇以1:20~1:5重量比混合形成一混合物後；(c) 將該混合物於55~65°C下加熱10~20分鐘後，靜置20~30小時以進行萃取；以及(d) 過濾該步驟(c)中經加熱並靜置的該混合物，以獲得一醇溶性蝴蝶蘭萃取物溶液。
在一實施例中，前述之蝴蝶蘭萃取物，其中該步驟(b)中該待萃取物與95%(v/v)乙醇的重量比較佳可為1:10。
在一實施例中，前述之蝴蝶蘭萃取物，其中該步驟(c)中該加熱時間較佳可為15分鐘。
在另一實施例中，本發明提供一種用於美白皮膚之組成物，其包括前述之蝴蝶蘭萃取物，以及載劑。其中，該組成物可具有抑制酪胺酸酶的活性。
在另一實施例中，本發明提供一種用於抗皮膚老化之組成物，其包括前述之蝴蝶蘭萃取物，以及載劑。其中，該組成物可具有抗氧化的活性。
藉由本發明實施例中蝴蝶蘭萃取物抑制酪胺酸酶的特性以及抗氧化功能，可大幅阻斷皮膚黑色素的生成，同時具有減緩皮膚老化的效果，可普遍應用於保養品或化妝品中。無論係作為美白皮膚之組成物或抗皮膚老化之組成物，除包括所述之蝴蝶蘭萃取物外，可進一步包括製造該些保養品或化妝品所需之載劑或佐劑，例如：活性劑、防腐劑、螯合劑、增稠劑、介面活性劑、染色劑，並根據其產品類型，可製備成水性溶液、水-醇溶液、油性溶液、凝膠、乳霜、乳液、軟膏、粉末，或是附著於一介質上例如面膜、貼片或貼布。
以下將配合圖式進一步說明本發明的實施方式，下述所列舉的實施例係用以闡明本發明，並非用以限定本發明之範圍，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可做些許更動與潤飾，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。
實施例1  蝴蝶蘭萃取物之製備
首先，自市面購置商品名為V3的蝴蝶蘭，其中文學名為大白花蝴蝶蘭，英文學名則為Phalaenopsis Sogo Yukidian’V3’。摘取其花瓣，並同時將花梗切斷以適當長度後，以無菌水清洗數次，再置入設定為45~60°C之烘箱進行乾燥後備用。
本實施例以下將同時進行多種萃取方式，比較並找出具有較佳效果萃取物之萃取條件。   (1) 水萃取
取前述乾燥後蝴蝶蘭花瓣或花梗部作為待萃取物，以1:10之重量比加入純水，攪拌混合後形成一混合物，將該混合物加熱至100°C反應90分鐘以進行萃取。之後將該進行萃取後之混合物以孔徑6 µm的濾紙進行過濾，取得水溶性蝴蝶蘭萃取物溶液。   (2) 水萃取後進行醇萃取
將前述(1)經水萃取後之蝴蝶蘭花瓣或花梗部再次作為待萃取物，進一步進行醇萃取。將此待萃取物以1:10之重量比加入95%(v/v)的乙醇，攪拌混合後形成一混合物，於室溫下靜置24小時進行萃取。之後將該進行萃取後之混合物以孔徑6 µm的濾紙進行過濾，取得經水萃取後之醇溶性蝴蝶蘭萃取物溶液。     (3) 醇萃取
取前述乾燥後蝴蝶蘭花瓣或花梗部作為待萃取物，以1:10之重量比加入95%(v/v)的乙醇，攪拌混合後形成一混合物，於室溫下靜置24小時進行萃取。之後將該進行萃取後之混合物以孔徑6 µm的濾紙進行過濾，取得醇溶性蝴蝶蘭萃取物溶液。   (4) 醇配合加熱萃取
取前述乾燥後蝴蝶蘭花瓣或花梗部作為待萃取物，以1:10之重量比加入95%(v/v)的乙醇，攪拌混合後形成一混合物，於60°C下加熱15分鐘後，再於室溫下靜置24小時進行萃取。之後將該進行萃取後之混合物以孔徑6 µm的濾紙進行過濾，取得醇溶性蝴蝶蘭萃取物溶液。
前述(1)~(4)萃取後之水溶性或醇溶性蝴蝶蘭萃取物溶液，以冷凍乾燥機/減壓濃縮機或其他相類之乾燥方式進行乾燥，以獲得粉末狀的蝴蝶蘭萃取物。   實施例2  體外酪胺酸酶活性試驗
將前述粉末狀之蝴蝶蘭萃取物加入ddH2 O，配置成濃度為10 %(w/v)的待測樣品溶液備用。取200 µl配製好的待測樣品溶液與800 µl 0.1 M的磷酸緩衝溶液 (pH 6.8)，注入微量管中。控制組則以等體積0.1 M磷酸緩衝溶液取代待測樣品溶液。之後，分別取100 µl 70 unit/ml 的蘑菇酪胺酸酶加入所有待測樣品溶液與控制組的微量管中，最後再加入900 µl 25mM的L-DOPA，將溶液充分混合均勻後，於37℃下反應30分鐘。反應完成後以分光光度計測定405 nm波長下的吸光值，其結果如表一所示。
若待測樣品中具有抑制酪胺酸酶的成分，則原本藉由酪胺酸酶催化L-DOPA以產生多巴醌的反應將不易進行，也就是說，多巴醌的產物會減少。因此，藉由吸光值的判定，當405 nm波長下的吸光值愈低者，表示待測樣品之抑制酪胺酸酶的能力愈強。於此，關於其抑制能力將以抑制率表示，亦即，抑制百分比愈高表示待測樣品之抑制酪胺酸酶能力愈佳。其中，抑制率(%)＝[1- (待測樣品於405 nm 的吸光值/控制組於405 nm 的吸光值) ] x 100。   表一
由表一之結果可以發現，經由水萃取之蝴蝶蘭花瓣萃取物，並不具有抑制酪胺酸酶的能力，而將該待測樣品於水萃取後再進行醇萃取所獲得之萃取物則具有高達65.00%的抑制率，對照抑制率最高之醇萃取方式(抑制率為65.38%)，可推論蝴蝶蘭萃取物中具抑制酪胺酸酶物質應係醇溶性。此外，於醇萃取過程中加入加熱步驟後，其抑制率有稍微下降至58.65%，因此，以單純經醇萃取步驟所獲得的萃取物有最高的酪胺酸酶抑制率，而於醇萃取過程中加入加熱步驟所獲得的萃取物則具有次高的酪胺酸酶抑制率。
無論是以醇萃取方式所獲得高酪胺酸酶抑制率的蝴蝶蘭萃取物(抑制率高達65.38%)，或於醇萃取過程中加入加熱步驟所獲得的蝴蝶蘭萃取物(抑制率為58.65%)，相較於目前已知其他花種花瓣之抑制率普遍低於50%之情況下，藉由本發明萃取方法所萃取出之蝴蝶蘭萃取物著實具有顯然高於預期抑制率之功效。
於醇萃取之實施例方法中，待萃取物與95%(v/v)乙醇的混合比例可為1:20~1:5之間，較佳為1:10，而其萃取時間則可在20~30小時的範圍內，以24小時為較佳。此外，在醇萃取過程中加入加熱步驟的實施例方法中，其加熱溫度可於55~65°C範圍內，較佳為60°C，加熱時間則可為10~20分鐘，較佳為15分鐘，萃取時間可為20~30小時，較佳24為小時。
另一方面，當以蝴蝶蘭的花梗進行萃取時，有著與利用花瓣萃取相近之效果趨勢。同樣地，經水萃取之蝴蝶蘭花梗萃取物，僅具有極低的抑制酪胺酸酶的能力，但將該待測樣品以醇萃取後所獲得之萃取物則具有高達61.92%的抑制率。雖然於醇萃取過程中加入加熱步驟後，其抑制率有稍微下降，但仍高達60.19%，因此，以單純經醇萃取步驟所獲得的蝴蝶蘭花梗的萃取物有最高的酪胺酸酶抑制率，而於醇萃取過程中加入加熱步驟所獲得的萃取物則具有次高的酪胺酸酶抑制率。
由以上結果可知，為獲得高酪胺酸酶抑制率的蝴蝶蘭萃取物，除可利用花瓣外亦可從花梗獲得，因此萃取時可選用花瓣、花梗或二者的混合進行萃取。   實施例3  抗氧化力試驗
關於抗氧化力之測試於本實施例中係以蝴蝶蘭萃取物清除α,α-二苯–β–味基胼基(α,α-diphenyl–β–picrylhydrazyl, DPPH) 自由基的能力評估其抗氧化能力。
取0.2 ml 不同濃度的待測樣品溶液，加入1.8 ml新鮮配製的0.1 mM DPPH甲醇溶液，振盪混合均勻後，於避光環境下置於室溫下反應30分鐘，之後以分光光度計檢測517 nm波長下的吸光值。控制組則以等體積0.1 mM DPPH乙醇溶液取代待測樣品溶液後進行前述相同之反應試驗，其結果如表二所示。
由於具抗氧化力的物質會提供氫予DPPH自由基，使氧化鏈鎖反應受到抑制，因此，供氫能力越強，吸光值會因為DPPH被還原而愈低，亦即具有較佳之抗氧化能力。於此，關於抗氧化能力將以DPPH自由基清除率表示，即清除百分比愈高表示待測樣品之供氫能力愈佳，抗氧化力也愈強。其中，清除率(scavenging effect %)＝[ 1-(待測樣品於517 nm 的吸光值/控制組於517 nm 的吸光值) ] x 100。 表二
由表二之結果可知，將蝴蝶蘭花瓣待測樣品於水萃取後再進行醇萃取所獲得之萃取物僅有25.73%的清除率，而以醇萃取方式者清除率提高為54.98%，但於醇萃取過程中加入加熱步驟的方法中，其清除率大幅提升至60.77%，因此，於醇萃取過程中加入加熱步驟所獲得的蝴蝶蘭花瓣萃取物有最高的自由基清除率，而以單純經醇萃取步驟所獲得的萃取物則具有次高的自由基清除率。
於醇萃取之實施例方法中，待萃取物與95%(v/v)乙醇的混合比例可為1:20~1:5之間，較佳為1:10，而其萃取時間則可在20~30小時的範圍內，以24小時為較佳。此外，在醇萃取過程中加入加熱步驟的實施例方法中，其加熱溫度可於55~65°C範圍內，較佳為60°C，加熱時間則可為10~20分鐘，較佳為15分鐘，萃取時間可為20~30小時，較佳24為小時。
對照表一與表二可知，若欲使蝴蝶蘭萃取物同時具有較佳之酪胺酸酶抑制率與自由基清除率，可以醇萃取方式獲得，若欲取得更高自由基清除率的萃取物，則可以醇萃取過程中加入加熱步驟的方法進行。
藉由本發明實施例經醇萃取或醇萃取過程中加入加熱步驟方法所萃取之蝴蝶蘭萃取物，因為具有極高的酪胺酸酶抑制活性，因而可抑制黑色素的形成，除可利用於美白皮膚外，也可避免皮膚進一步的變黑，而有維持皮膚膚色的功效。同時，其亦具有極佳的自由基清除率，因此具備優異的抗氧化效果，除可避免黑色素形成路徑中酪胺酸之形成而同時有減緩皮膚變黑之效果外，亦因可去除自由基，降低了轉錄因子活化蛋白(AP1)的形成與基質金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases)的表現，因而可改善皮膚變薄、萎縮、彈性組織變性、彈性變差、乾燥、粗糙、產生皺紋、雀斑、斑點等老化現象。
藉由本發明實施例所萃取之蝴蝶蘭萃取物，可普遍應用於保養品或化妝品中，作為美白皮膚之組成物或抗皮膚老化之組成物，或是將該組成物附著於一介質上例如面膜、貼片或貼布等，用於皮膚保養或美白。
無
無
無

Claims (10)

  1. 一種用作美白皮膚與抗皮膚老化的蝴蝶蘭萃取物，其係由包括以下之步驟所製備： (a) 提供一蝴蝶蘭(Phalaenopsis Sogo Yukidian’V3’)之花瓣、花梗或花瓣與花梗相混合之待萃取物； (b) 將該待萃取物與95%(v/v)乙醇以1:20~1:5重量比混合形成一混合物後，靜置20~30小時以進行萃取；以及 (c) 過濾該混合物，以獲得一醇溶性蝴蝶蘭萃取物溶液。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之蝴蝶蘭萃取物，其中該步驟(b)中該待萃取物與95%(v/v)乙醇的重量比係1:10。
  3. 一種用於美白皮膚之組成物，其包括如申請專利範圍第1或2項所述之蝴蝶蘭萃取物，以及載劑。
  4. 一種用作美白皮膚與抗皮膚老化的蝴蝶蘭萃取物，其係由包括以下之步驟所製備： (a) 提供一蝴蝶蘭(Phalaenopsis Sogo Yukidian’V3’)之花瓣作為待萃取物； (b) 將該待萃取物與95%(v/v)乙醇以1:20~1:5重量比混合形成一混合物後； (c) 將該混合物於55~65°C下加熱10~20分鐘後，靜置20~30小時以進行萃取；以及 (d) 過濾該步驟(c)中經加熱並靜置的該混合物，以獲得一醇溶性蝴蝶蘭萃取物溶液。
  5. 如申請專利範圍第4項所述之蝴蝶蘭萃取物，其中該步驟(b)中該待萃取物與95%(v/v)乙醇的重量比係1:10。
  6. 如申請專利範圍第5項所述之蝴蝶蘭萃取物，其中該步驟(c)中該加熱時間為15分鐘。
  7. 一種用於美白皮膚之組成物，其包括如申請專利範圍第4、5或6項所述之蝴蝶蘭萃取物，以及載劑。
  8. 如申請專利範圍第7項所述之用於美白皮膚之組成物，其中該組成物具有抑制酪胺酸酶的活性。
  9. 一種用於抗皮膚老化之組成物，其包括如申請專利範圍4、5或6項所述之蝴蝶蘭萃取物，以及載劑。
  10. 如申請專利範圍第9項所述之用於抗皮膚老化之組成物，其中該組成物具有抗氧化的活性。
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