CN111529471B - 美白保湿护肤霜及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种美白保湿护肤霜，包括以下原料组成：莫狄兜兰花提取物、角鲨烷、L‑精氨酸、PEG‑7甘油椰油酸酯、传明酸、4‑羟基苯甲酸丁酯、2‑苯氧基乙醇、透明质酸钠、1,2‑丙二醇、二丙二醇、1,3‑丁二醇、鲸蜡硬脂醇、山梨糖醇、2‑羟基‑4‑甲氧基二苯甲酮、水，本发明美白保湿护肤霜具有良好的美白、保湿效果。

Description

美白保湿护肤霜及其制备方法
技术领域
本发明涉及化妆品领域，具体涉及一种美白保湿护肤霜及其制备方法。
背景技术
兰科是仅次于菊科的一个大科，是单子叶植物中的第一大科。兰花是珍贵的观赏植物，全世界大约有七百多个属、二万多个种，兰花按生态习性主要分为地生兰、气生兰、腐生兰三大类。兰花全草均可入药，其性平，味辛、甘、无毒。有养阴润肺，利水渗湿，清热解毒等功效。兰花的芳香成份芳香油，使人心旷神怡，清除宿气，解郁消闷，提神醒脑。
莫狄兜兰是兰科、兜兰属植物，在日化产品中，一般添加莫狄兜兰(PAPHIOPEDILUMMAUDIAE)花提取物作为保湿剂、收敛剂及抑菌剂，还未见将莫狄兜兰(PAPHIOPEDILUMMAUDIAE)花提取物在化妆品中用于美白肌肤的报道。
发明内容
鉴于上述现有技术的缺陷，本发明所要解决的技术问题是：(一)提供一种美白保湿护肤霜；(二)提供一种美白保湿护肤霜的制备方法。
本发明采用的具体技术方案是：
一种美白保湿护肤霜，包括以下原料组成：莫狄兜兰(PAPHIOPEDILUM MAUDIAE)花提取物、角鲨烷、L-精氨酸、PEG-7甘油椰油酸酯、传明酸、4-羟基苯甲酸丁酯、2-苯氧基乙醇、透明质酸钠、1,2-丙二醇、二丙二醇、1,3-丁二醇、鲸蜡硬脂醇、山梨糖醇、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮、水。
随着中药现代化的发展，中药材中具有美白作用的大量活性物质被发现，如酚类、黄酮类、类黄酮类、多糖类、挥发油、有机酸、三萜皂苷类等，并且可以从多种途径抑制黑色素生成及促进黑色素排出。
莫狄兜兰(PAPHIOPEDILUM MAUDIAE)花提取物，INCI名称为PAPHIOPEDILUMMAUDIAE(ORCHID)FLOWER EXTRACT，在化妆品中主要作为肌肤调理剂，起到收敛、保湿及柔润肌肤的作用，还具有一定的抑菌作用；莫狄兜兰是兰科、兜兰属植物，兰科植物提取物富含植物碱、皂素、多糖及酚酸等，据此，莫狄兜兰花提取物很有可能作为酪氨酸酶抑制剂和黑色素合成抑制剂起到美白肌肤的功效。
优选的，一种美白保湿护肤霜，包括以下重量份原料组成：莫狄兜兰(PAPHIOPEDILUM MAUDIAE)花提取物0.1-5份、角鲨烷0.01-1份、L-精氨酸0.05-2份、PEG-7甘油椰油酸酯0.1-1.5份、传明酸0.1-2份、4-羟基苯甲酸丁酯0.01-0.5份、2-苯氧基乙醇0.01-0.5份、透明质酸钠0.1-5份、1,2-丙二醇10-20份、二丙二醇1-10份、1,3-丁二醇5-20份、鲸蜡硬脂醇1-10份、山梨糖醇1-10份、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮1-5份、去离子水60-80份。
优选的，所述莫狄兜兰(PAPHIOPEDILUM MAUDIAE)花提取物采用下述方法制备而成：(1)取清洗、干燥的莫狄兜兰花，含水量为1.0-5.0wt％，粉碎后过100-300目筛；(2)将莫狄兜兰花粉末加入到蒸馏水中，所述莫狄兜兰花粉末与蒸馏水的质量比为(1-10)：105，在80-120℃加热0.5-2h，过滤后得到第一次滤液与第一次滤渣；(3)再将第一次滤渣加入到蒸馏水中，所述第一次滤渣与蒸馏水的质量比为(1-10)：80，在80-120℃加热0.5-1h，过滤后得到第二次滤液与第二次滤渣；(4)合并第一次滤液与第二次滤液，减压浓缩，真空干燥，研磨得到粉末D1；(5)将第二次滤渣放入萃取罐进行超临界萃取50-70min，萃取压力为30-50Mpa，萃取温度为50-60℃；主溶剂为CO2流体，CO2流体流量为10-20kg/h，并加入夹带剂，夹带剂流量为0.1-1g/min，得到萃取物；将萃取物离心过滤，真空干燥，研磨得到粉末D2；将粉末D1与粉末D2混合得到莫狄兜兰花提取物；
所述夹带剂的用量为第二次滤渣的3.0-5.0wt％，所述夹带剂为80-90wt％乙醇水溶液与80-90wt％丙酮水溶液按质量比(1-10):1混合。
紫花地丁的主要成分是黄酮类化合物，有芹菜素、木犀草素及糖苷化合物，菊苣苷、七叶内酯等酚性物质。据此，紫花地丁提取物具有很大可能性作为酪氨酸酶抑制剂和黑色素合成抑制剂应用于化妆品中作为美白剂。
优选的，一种美白保湿护肤霜，包括以下重量份原料组成：紫花地丁(VIOLAYEDOENSIS MAKINO)提取物0.1-5份、角鲨烷0.01-1份、L-精氨酸0.05-2份、PEG-7甘油椰油酸酯0.1-1.5份、传明酸0.1-2份、4-羟基苯甲酸丁酯0.01-0.5份、2-苯氧基乙醇0.01-0.5份、透明质酸钠0.1-5份、1,2-丙二醇10-20份、二丙二醇1-10份、1,3-丁二醇5-20份、鲸蜡硬脂醇1-10份、山梨糖醇1-10份、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮1-5份、去离子水60-80份。
优选的，上述紫花地丁提取物的提取方法，包括如下步骤：
步骤一：将紫花地丁粉末加入到蒸馏水中混合均匀，所述紫花地丁粉末与蒸馏水的质量比为(5-15):(5-10)；升温至32-52℃接种发酵菌，所述发酵菌与紫花地丁粉末的质量比为(0.5-2.0):100；在32-52℃下发酵12-72h，得到预处理的紫花地丁粉末；
步骤二：将预处理的紫花地丁粉末加入到蒸馏水中，所述预处理的紫花地丁粉末与蒸馏水的质量比为(10-25)：(100-120)，加热至95-125℃煮沸0.5-2.5h，过滤后得到滤液A1与滤渣B1；将滤渣B1加入到蒸馏水中，所述滤渣B1与蒸馏水的质量比为(5-15)：(85-105)，加热至95-125℃煮沸0.5-1.5h，过滤后得到滤液A2与滤渣B2；合并滤液A1与滤液A2，减压浓缩，真空干燥，研磨得到紫花地丁提取物。
优选的，所述发酵菌为保加利亚乳杆菌、酿酒酵母、枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌与黑曲霉中至少一种；进一步优选地，所述发酵菌为枯草芽孢杆菌与黑曲霉按质量比1:(1-5)混合。
发明人发现，如果直接对紫花地丁粉末进行提取，由于紫花地丁的细胞壁及细胞膜结构难以穿透，导致紫花地丁提取物的品质差，溶出的有机小分子活性成分少，美白效果不佳；本发明在现有技术对紫花地丁粉末直接进行提取的基础上，增加特定的发酵菌预处理紫花地丁粉末的过程，利用发酵菌破坏紫花地丁的细胞壁及细胞膜结构，使紫花地丁细胞中的有机小分子活性成分更容易溶出，方便后续的提取过程，提高紫花地丁提取物的品质，美白效果得到提高。
进一步，本发明采用枯草芽孢杆菌与黑曲霉混合协同发酵，通过菌种之间的协调互作关系，使预处理更彻底，更利于提取紫花地丁中活性成分；黑曲霉能够分泌大量高活性的纤维素酶、果胶酶、植酸酶与淀粉酶等，有效降解紫花地丁细胞壁中的果胶和纤维网状结构，大大破坏了紫花地丁的细胞壁结构；而枯草芽孢杆菌能够大量分泌高活性的碱性蛋白酶、脂肪酶与糖化酶等，进一步作用于紫花地丁的细胞膜，破坏细胞膜的磷脂双分子层结构，二者协调互作，协同增效，使预处理后的紫花地丁粉末更易于提取，得到的紫花地丁提取物中活性成分含量更高，美白功效更佳。
优选的，上述紫花地丁提取物的提取方法，包括如下步骤：
步骤一：将紫花地丁粉末加入到蒸馏水中混合均匀，所述紫花地丁粉末与蒸馏水的质量比为(5-15):(5-10)；升温至32-52℃接种发酵菌，所述发酵菌与紫花地丁粉末的质量比为(0.5-2.0):100；在32-52℃下发酵12-72h，得到预处理的紫花地丁粉末；
步骤二：将预处理的紫花地丁粉末加入到蒸馏水中，所述预处理的紫花地丁粉末与蒸馏水的质量比为(10-25)：(100-120)，加热至95-125℃煮沸0.5-2.5h，过滤后得到滤液A1与滤渣B1；将滤渣B1加入到蒸馏水中，所述滤渣B1与蒸馏水的质量比为(5-15)：(85-105)，加热至95-125℃煮沸0.5-1.5h，过滤后得到滤液A2与滤渣B2；合并滤液A1与滤液A2，减压浓缩，真空干燥，研磨得到粉末X；
步骤三：将滤渣B2放入萃取罐进行超临界萃取30-90min，萃取压力为35-50Mpa，萃取温度为45-70℃；主溶剂为CO2流体，CO2流体流量为10-18kg/h，并加入夹带剂，夹带剂流量为0.1-0.8g/min，得到萃取物；将萃取物离心过滤，真空干燥，研磨得到粉末Y；将粉末X与粉末Y混合得到紫花地丁提取物。
优选的，所述夹带剂的用量为滤渣B2的1.5-5.5wt％。
优选的，所述夹带剂为乙醇水溶液、甲醇水溶液、丙酮水溶液、乙酸乙酯中至少一种；进一步优选地，所述夹带剂为50-95wt％乙醇水溶液与50-95wt％丙酮水溶液按质量比(1-5):1。
本发明在CO2超临界萃取过程中加入了夹带剂，夹带剂能够通过与紫花地丁中有机小分子活性成分之间产生范德华力及氢键、弱络合作用等分子间作用力，使紫花地丁中活性成分更容易溶出，从而提高了紫花地丁提取物的生物活性含量，美白效果更好。
优选的，所述紫花地丁粉末的制备方法，包括如下步骤：将新采摘的带根全草紫花地丁，用水清洗1-5次后干燥，控制其含水量在1-5wt％；再将干燥好的紫花地丁进行粉碎，过100-300目筛，制得紫花地丁粉末，备用。
优选的，一种美白保湿护肤霜，包括以下重量份原料组成：紫花地丁(VIOLAYEDOENSIS MAKINO)提取物0.1-5份、莫狄兜兰(PAPHIOPEDILUM MAUDIAE)花提取物0.1-5份、角鲨烷0.01-1份、L-精氨酸0.05-2份、PEG-7甘油椰油酸酯0.1-1.5份、传明酸0.1-2份、4-羟基苯甲酸丁酯0.01-0.5份、2-苯氧基乙醇0.01-0.5份、透明质酸钠0.1-5份、1,2-丙二醇10-20份、二丙二醇1-10份、1,3-丁二醇5-20份、鲸蜡硬脂醇1-10份、山梨糖醇1-10份、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮1-5份、去离子水60-80份。
发明人经大量试验发现，采用紫花地丁提取物与莫狄兜兰花提取物二者复配作为美白剂，协同增效，进一步提高了美白效果；本发明添加特定含量的紫花地丁提取物与莫狄兜兰花提取物，使其与配方中其他活性成分协调互作，共同滋养肌肤；利用紫花地丁提取物与莫狄兜兰花提取物所具有的不同美白活性成分，相互补充，进一步加强了对酪氨酸酶催化活力的抑制，同时，更多的美白活性成分作用于酪氨酸酶，通过氢键和疏水作用力与其催化中心结合，抢先占据L-酪氨酸等底物被酪氨酸酶催化所需的中心位置，有效抑制黑色素的形成，使肌肤美白效果更好。
本发明美白保湿护肤霜的制备方法，包括以下步骤：
按原料配方将1,2-丙二醇、二丙二醇、1,3-丁二醇、鲸蜡硬脂醇、山梨糖醇、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮加入到去离子水中搅拌10-30min，设定温度80-90℃，设定转速300-500rpm；再依次加入角鲨烷、L-精氨酸、PEG-7甘油椰油酸酯、传明酸、4-羟基苯甲酸丁酯、2-苯氧基乙醇、透明质酸钠继续搅拌30-60min，设定温度80-90℃，设定转速300-500rpm；均质乳化5-30min，检验合格，出料，得到美白保湿护肤霜。
本发明的有益效果：本发明制备的紫花地丁提取物，具有良好的美白功效；一方面紫花地丁提取物中的活性成分作为还原剂拮抗了氧对酪氨酸酶的激活，使其不能正常地由脱氧模式转变为催化状态，阻止酪氨酸酶催化生成黑色素；另一方面，紫花地丁提取物中的活性成分可以进入酪氨酸酶催化中心的疏水口袋，与周围的氨基酸残基通过氢键和疏水作用力结合，抢占了L-酪氨酸等酪氨酸酶的作用底物在酪氨酸酶催化中心的位置，进一步抑制了黑色素的形成，从而达到美白肌肤的功效。
本发明采用发酵菌预处理紫花地丁粉末，破坏了紫花地丁的细胞壁及细胞膜结构，使紫花地丁细胞中的有机小分子活性成分更容易溶出，方便后续的提取过程，提高紫花地丁提取物的品质；进一步，本发明采用枯草芽孢杆菌与黑曲霉混合协同发酵，通过菌种之间的协调互作关系，使预处理更彻底，更利于提取紫花地丁中活性成分；黑曲霉能够分泌大量高活性的纤维素酶、果胶酶、植酸酶与淀粉酶等，有效降解紫花地丁细胞壁中的果胶和纤维网状结构，大大破坏了紫花地丁的细胞壁结构；而枯草芽孢杆菌能够大量分泌高活性的碱性蛋白酶、脂肪酶与糖化酶等，进一步作用于紫花地丁的细胞膜，破坏细胞膜的磷脂双分子层结构，二者协调互作，协同增效，使预处理后的紫花地丁粉末更易于提取，得到的紫花地丁提取物中活性成分含量更高，美白功效更佳。此外，本发明采用CO2超临界萃取联合水提，在超临界萃取过程中加入了适合的夹带剂，夹带剂能够通过与紫花地丁中有机小分子活性成分之间产生范德华力及氢键、弱络合作用等分子间作用力，使紫花地丁中活性成分更容易溶出，从而提高了紫花地丁提取物的生物活性含量，美白效果更好。
发明人经大量试验发现，采用紫花地丁提取物与莫狄兜兰花提取物二者复配作为美白剂，协同增效，进一步提高了美白效果；本发明添加特定含量的紫花地丁提取物与莫狄兜兰花提取物，使其与配方中其他活性成分协调互作，共同滋养肌肤；利用紫花地丁提取物与莫狄兜兰花提取物所具有的不同美白活性成分，相互补充，进一步加强了对酪氨酸酶催化活力的抑制，同时，更多的美白活性成分作用于酪氨酸酶，通过氢键和疏水作用力与其催化中心结合，抢先占据L-酪氨酸等底物被酪氨酸酶催化所需的中心位置，有效抑制黑色素的形成，使肌肤美白效果更好。
具体实施方式
本发明实施例和对比例中部分物质的具体参数如下：
PEG-7甘油椰油酸酯，CAS：68201-46-7，纯度99％，购于上海鼎芬化学科技有限公司。
角鲨烷，CAS：111-01-3，纯度99％，购于西安康诺化工有限公司。
L-精氨酸，CAS：74-79-3，纯度99％，购于无锡景耀生物科技有限公司。
传明酸，CAS：1197-18-8，纯度99.5％，购于常州市尚科医药化工材料有限公司。
4-羟基苯甲酸丁酯，CAS：94-26-8，纯度99％，购于天津希恩思生化科技有限公司。
2-苯氧基乙醇，CAS：122-99-6，纯度98％，购于上海泰坦科技股份有限公司。
透明质酸钠，CAS：9067-32-7，纯度98％，购于苏州莱惠生物技术有限公司。
二丙二醇，CAS：110-98-5，纯度99％，购于武汉拉那白医药化工有限公司。
鲸蜡硬脂醇，CAS：67762-27-0，纯度99％，购于上海鼎芬化学科技有限公司。
山梨糖醇，CAS：50-70-4，纯度99％，购于中山市庄臣化工有限公司。
2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮，CAS：131-57-7，纯度98％，购于青岛德达志成化工有限公司。
紫花地丁(VIOLA YEDOENSIS MAKINO)粉末的制备方法，包括如下步骤：将新采摘的带根全草紫花地丁，用水清洗3次后干燥，控制其含水量在3wt％；再将干燥好的紫花地丁进行粉碎，过200目筛，制得紫花地丁粉末。
若没有特别说明，本发明实施例和对比例中每种原料均采用市售的统一原料。
对比例1
一种美白保湿护肤霜，包括以下重量份原料组成：角鲨烷0.6份、L-精氨酸0.5份、PEG-7甘油椰油酸酯0.5份、传明酸0.4份、4-羟基苯甲酸丁酯0.05份、2-苯氧基乙醇0.05份、透明质酸钠1份、1,2-丙二醇13份、二丙二醇4份、1,3-丁二醇9份、鲸蜡硬脂醇5份、山梨糖醇5份、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮3份、去离子水60.6份。
美白保湿护肤霜的制备方法，包括以下步骤：
按原料配方将1,2-丙二醇、二丙二醇、1,3-丁二醇、鲸蜡硬脂醇、山梨糖醇、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮加入到去离子水中搅拌25min，设定温度88℃，设定转速300rpm；再依次加入角鲨烷、L-精氨酸、PEG-7甘油椰油酸酯、传明酸、4-羟基苯甲酸丁酯、2-苯氧基乙醇、透明质酸钠继续搅拌35min，设定温度88℃，设定转速300rpm；均质乳化10min，检验合格，出料，得到美白保湿护肤霜。
实施例1
一种美白保湿护肤霜，包括以下重量份原料组成：紫花地丁(VIOLA YEDOENSISMAKINO)提取物0.6份、角鲨烷0.6份、L-精氨酸0.5份、PEG-7甘油椰油酸酯0.5份、传明酸0.4份、4-羟基苯甲酸丁酯0.05份、2-苯氧基乙醇0.05份、透明质酸钠1份、1,2-丙二醇13份、二丙二醇4份、1,3-丁二醇9份、鲸蜡硬脂醇5份、山梨糖醇5份、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮3份、去离子水60份。
所述紫花地丁提取物的制备方法如下：
将紫花地丁粉末加入到蒸馏水中，所述紫花地丁粉末与蒸馏水的质量比为13：117，加热至100℃煮沸1.5h，过滤后得到滤液A1与滤渣B1；将滤渣B1加入到蒸馏水中，所述滤渣B1与蒸馏水的质量比为13：91，加热至100℃煮沸0.8h，过滤后得到滤液A2与滤渣B2；合并滤液A1与滤液A2，减压浓缩，真空干燥，研磨得到紫花地丁提取物。
美白保湿护肤霜的制备方法，包括以下步骤：
按原料配方将1,2-丙二醇、二丙二醇、1,3-丁二醇、鲸蜡硬脂醇、山梨糖醇、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮加入到去离子水中搅拌25min，设定温度88℃，设定转速300rpm；再依次加入紫花地丁提取物、角鲨烷、L-精氨酸、PEG-7甘油椰油酸酯、传明酸、4-羟基苯甲酸丁酯、2-苯氧基乙醇、透明质酸钠继续搅拌35min，设定温度88℃，设定转速300rpm；均质乳化10min，检验合格，出料，得到美白保湿护肤霜。
实施例2
一种美白保湿护肤霜，包括以下重量份原料组成：紫花地丁(VIOLA YEDOENSISMAKINO)提取物0.6份、角鲨烷0.6份、L-精氨酸0.5份、PEG-7甘油椰油酸酯0.5份、传明酸0.4份、4-羟基苯甲酸丁酯0.05份、2-苯氧基乙醇0.05份、透明质酸钠1份、1,2-丙二醇13份、二丙二醇4份、1,3-丁二醇9份、鲸蜡硬脂醇5份、山梨糖醇5份、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮3份、去离子水60份。
所述紫花地丁提取物的制备方法如下：
步骤一：将紫花地丁粉末加入到蒸馏水中混合均匀，所述紫花地丁粉末与蒸馏水的质量比为13:7；升温至39℃接种发酵菌，所述发酵菌与紫花地丁粉末的质量比为1.8:100；在39℃下发酵60h，得到预处理的紫花地丁粉末；
所述发酵菌为枯草芽孢杆菌与黑曲霉按质量比1:1混合；
步骤二：将预处理的紫花地丁粉末加入到蒸馏水中，所述预处理的紫花地丁粉末与蒸馏水的质量比为20：110(即紫花地丁粉末与蒸馏水的质量比为13：117)，加热至100℃煮沸1.5h，过滤后得到滤液A1与滤渣B1；将滤渣B1加入到蒸馏水中，所述滤渣B1与蒸馏水的质量比为13：91，加热至100℃煮沸0.8h，过滤后得到滤液A2与滤渣B2；合并滤液A1与滤液A2，减压浓缩，真空干燥，研磨得到紫花地丁提取物；
其中枯草芽孢杆菌有效活菌数≥100亿CFU/g，食品级，购于湖北鑫润德化工有限公司；黑曲霉有效活菌数≥50亿CFU/g，食品级，购于武汉远成共创科技有限公司。
美白保湿护肤霜的制备方法，包括以下步骤：
按原料配方将1,2-丙二醇、二丙二醇、1,3-丁二醇、鲸蜡硬脂醇、山梨糖醇、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮加入到去离子水中搅拌25min，设定温度88℃，设定转速300rpm；再依次加入紫花地丁提取物、角鲨烷、L-精氨酸、PEG-7甘油椰油酸酯、传明酸、4-羟基苯甲酸丁酯、2-苯氧基乙醇、透明质酸钠继续搅拌35min，设定温度88℃，设定转速300rpm；均质乳化10min，检验合格，出料，得到美白保湿护肤霜。
对比例2
一种美白保湿护肤霜，包括以下重量份原料组成：紫花地丁(VIOLA YEDOENSISMAKINO)提取物0.6份、角鲨烷0.6份、L-精氨酸0.5份、PEG-7甘油椰油酸酯0.5份、传明酸0.4份、4-羟基苯甲酸丁酯0.05份、2-苯氧基乙醇0.05份、透明质酸钠1份、1,2-丙二醇13份、二丙二醇4份、1,3-丁二醇9份、鲸蜡硬脂醇5份、山梨糖醇5份、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮3份、去离子水60份。
所述紫花地丁提取物的制备方法如下：
步骤一：将紫花地丁粉末加入到蒸馏水中混合均匀，所述紫花地丁粉末与蒸馏水的质量比为13:7；升温至39℃接种发酵菌，所述发酵菌与紫花地丁粉末的质量比为1.8:100；在39℃下发酵60h，得到预处理的紫花地丁粉末；
所述发酵菌为枯草芽孢杆菌；
步骤二：将预处理的紫花地丁粉末加入到蒸馏水中，所述预处理的紫花地丁粉末与蒸馏水的质量比为20：110(即紫花地丁粉末与蒸馏水的质量比为13：117)，加热至100℃煮沸1.5h，过滤后得到滤液A1与滤渣B1；将滤渣B1加入到蒸馏水中，所述滤渣B1与蒸馏水的质量比为13：91，加热至100℃煮沸0.8h，过滤后得到滤液A2与滤渣B2；合并滤液A1与滤液A2，减压浓缩，真空干燥，研磨得到紫花地丁提取物；
其中枯草芽孢杆菌有效活菌数≥100亿CFU/g，食品级，购于湖北鑫润德化工有限公司。
美白保湿护肤霜的制备方法，包括以下步骤：
按原料配方将1,2-丙二醇、二丙二醇、1,3-丁二醇、鲸蜡硬脂醇、山梨糖醇、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮加入到去离子水中搅拌25min，设定温度88℃，设定转速300rpm；再依次加入紫花地丁提取物、角鲨烷、L-精氨酸、PEG-7甘油椰油酸酯、传明酸、4-羟基苯甲酸丁酯、2-苯氧基乙醇、透明质酸钠继续搅拌35min，设定温度88℃，设定转速300rpm；均质乳化10min，检验合格，出料，得到美白保湿护肤霜。
对比例3
一种美白保湿护肤霜，包括以下重量份原料组成：紫花地丁(VIOLA YEDOENSISMAKINO)提取物0.6份、角鲨烷0.6份、L-精氨酸0.5份、PEG-7甘油椰油酸酯0.5份、传明酸0.4份、4-羟基苯甲酸丁酯0.05份、2-苯氧基乙醇0.05份、透明质酸钠1份、1,2-丙二醇13份、二丙二醇4份、1,3-丁二醇9份、鲸蜡硬脂醇5份、山梨糖醇5份、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮3份、去离子水60份。
所述紫花地丁提取物的制备方法如下：
步骤一：将紫花地丁粉末加入到蒸馏水中混合均匀，所述紫花地丁粉末与蒸馏水的质量比为13:7；升温至39℃接种发酵菌，所述发酵菌与紫花地丁粉末的质量比为1.8:100；在39℃下发酵60h，得到预处理的紫花地丁粉末；
所述发酵菌为黑曲霉；
步骤二：将预处理的紫花地丁粉末加入到蒸馏水中，所述预处理的紫花地丁粉末与蒸馏水的质量比为20：110(即紫花地丁粉末与蒸馏水的质量比为13：117)，加热至100℃煮沸1.5h，过滤后得到滤液A1与滤渣B1；将滤渣B1加入到蒸馏水中，所述滤渣B1与蒸馏水的质量比为13：91，加热至100℃煮沸0.8h，过滤后得到滤液A2与滤渣B2；合并滤液A1与滤液A2，减压浓缩，真空干燥，研磨得到紫花地丁提取物；
其中黑曲霉有效活菌数≥50亿CFU/g，食品级，购于武汉远成共创科技有限公司。
美白保湿护肤霜的制备方法，包括以下步骤：
按原料配方将1,2-丙二醇、二丙二醇、1,3-丁二醇、鲸蜡硬脂醇、山梨糖醇、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮加入到去离子水中搅拌25min，设定温度88℃，设定转速300rpm；再依次加入紫花地丁提取物、角鲨烷、L-精氨酸、PEG-7甘油椰油酸酯、传明酸、4-羟基苯甲酸丁酯、2-苯氧基乙醇、透明质酸钠继续搅拌35min，设定温度88℃，设定转速300rpm；均质乳化10min，检验合格，出料，得到美白保湿护肤霜。
实施例3
一种美白保湿护肤霜，包括以下重量份原料组成：紫花地丁(VIOLA YEDOENSISMAKINO)提取物0.6份、角鲨烷0.6份、L-精氨酸0.5份、PEG-7甘油椰油酸酯0.5份、传明酸0.4份、4-羟基苯甲酸丁酯0.05份、2-苯氧基乙醇0.05份、透明质酸钠1份、1,2-丙二醇13份、二丙二醇4份、1,3-丁二醇9份、鲸蜡硬脂醇5份、山梨糖醇5份、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮3份、去离子水60份。
所述紫花地丁提取物的制备方法如下：
步骤一：将紫花地丁粉末加入到蒸馏水中混合均匀，所述紫花地丁粉末与蒸馏水的质量比为13:7；升温至39℃接种发酵菌，所述发酵菌与紫花地丁粉末的质量比为1.8:100；在39℃下发酵60h，得到预处理的紫花地丁粉末；
所述发酵菌为枯草芽孢杆菌与黑曲霉按质量比1:1混合；
步骤二：将预处理的紫花地丁粉末加入到蒸馏水中，所述预处理的紫花地丁粉末与蒸馏水的质量比为20：110(即紫花地丁粉末与蒸馏水的质量比为13：117)，加热至100℃煮沸1.5h，过滤后得到滤液A1与滤渣B1；将滤渣B1加入到蒸馏水中，所述滤渣B1与蒸馏水的质量比为13：91，加热至100℃煮沸0.8h，过滤后得到滤液A2与滤渣B2；合并滤液A1与滤液A2，减压浓缩，真空干燥，研磨得到粉末X；
步骤三：将滤渣B2放入萃取罐进行超临界萃取65min，萃取压力为38Mpa，萃取温度为51℃；主溶剂为CO2流体，CO2流体流量为16kg/h，并加入夹带剂，夹带剂流量为0.3g/min，得到萃取物；将萃取物离心过滤，真空干燥，研磨得到粉末Y；将粉末X与粉末Y混合得到紫花地丁提取物；
所述夹带剂的用量为滤渣B2的3.6wt％，所述夹带剂为85wt％乙醇水溶液与85wt％丙酮水溶液按质量比5:1混合；
其中枯草芽孢杆菌有效活菌数≥100亿CFU/g，食品级，购于湖北鑫润德化工有限公司；黑曲霉有效活菌数≥50亿CFU/g，食品级，购于武汉远成共创科技有限公司。
美白保湿护肤霜的制备方法，包括以下步骤：
按原料配方将1,2-丙二醇、二丙二醇、1,3-丁二醇、鲸蜡硬脂醇、山梨糖醇、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮加入到去离子水中搅拌25min，设定温度88℃，设定转速300rpm；再依次加入紫花地丁提取物、角鲨烷、L-精氨酸、PEG-7甘油椰油酸酯、传明酸、4-羟基苯甲酸丁酯、2-苯氧基乙醇、透明质酸钠继续搅拌35min，设定温度88℃，设定转速300rpm；均质乳化10min，检验合格，出料，得到美白保湿护肤霜。
对比例4
一种美白保湿护肤霜，包括以下重量份原料组成：紫花地丁(VIOLA YEDOENSISMAKINO)提取物0.6份、角鲨烷0.6份、L-精氨酸0.5份、PEG-7甘油椰油酸酯0.5份、传明酸0.4份、4-羟基苯甲酸丁酯0.05份、2-苯氧基乙醇0.05份、透明质酸钠1份、1,2-丙二醇13份、二丙二醇4份、1,3-丁二醇9份、鲸蜡硬脂醇5份、山梨糖醇5份、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮3份、去离子水60份。
所述紫花地丁提取物的制备方法如下：
步骤一：将紫花地丁粉末加入到蒸馏水中混合均匀，所述紫花地丁粉末与蒸馏水的质量比为13:7；升温至39℃接种发酵菌，所述发酵菌与紫花地丁粉末的质量比为1.8:100；在39℃下发酵60h，得到预处理的紫花地丁粉末；
所述发酵菌为枯草芽孢杆菌与黑曲霉按质量比1:1混合；
步骤二：将预处理的紫花地丁粉末加入到蒸馏水中，所述预处理的紫花地丁粉末与蒸馏水的质量比为20：110(即紫花地丁粉末与蒸馏水的质量比为13：117)，加热至100℃煮沸1.5h，过滤后得到滤液A1与滤渣B1；将滤渣B1加入到蒸馏水中，所述滤渣B1与蒸馏水的质量比为13：91，加热至100℃煮沸0.8h，过滤后得到滤液A2与滤渣B2；合并滤液A1与滤液A2，减压浓缩，真空干燥，研磨得到粉末X；
步骤三：将滤渣B2放入萃取罐进行超临界萃取65min，萃取压力为38Mpa，萃取温度为51℃；CO2流体溶剂的流量为16kg/h；得到萃取物；将萃取物离心过滤，真空干燥，研磨得到粉末Y；将粉末X与粉末Y混合得到紫花地丁提取物；
其中枯草芽孢杆菌有效活菌数≥100亿CFU/g，食品级，购于湖北鑫润德化工有限公司；黑曲霉有效活菌数≥50亿CFU/g，食品级，购于武汉远成共创科技有限公司。
美白保湿护肤霜的制备方法，包括以下步骤：
按原料配方将1,2-丙二醇、二丙二醇、1,3-丁二醇、鲸蜡硬脂醇、山梨糖醇、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮加入到去离子水中搅拌25min，设定温度88℃，设定转速300rpm；再依次加入紫花地丁提取物、角鲨烷、L-精氨酸、PEG-7甘油椰油酸酯、传明酸、4-羟基苯甲酸丁酯、2-苯氧基乙醇、透明质酸钠继续搅拌35min，设定温度88℃，设定转速300rpm；均质乳化10min，检验合格，出料，得到美白保湿护肤霜。
对比例5
一种美白保湿护肤霜，包括以下重量份原料组成：紫花地丁(VIOLA YEDOENSISMAKINO)提取物0.6份、角鲨烷0.6份、L-精氨酸0.5份、PEG-7甘油椰油酸酯0.5份、传明酸0.4份、4-羟基苯甲酸丁酯0.05份、2-苯氧基乙醇0.05份、透明质酸钠1份、1,2-丙二醇13份、二丙二醇4份、1,3-丁二醇9份、鲸蜡硬脂醇5份、山梨糖醇5份、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮3份、去离子水60份。
所述紫花地丁提取物的制备方法如下：
步骤一：将紫花地丁粉末加入到蒸馏水中混合均匀，所述紫花地丁粉末与蒸馏水的质量比为13:7；升温至39℃接种发酵菌，所述发酵菌与紫花地丁粉末的质量比为1.8:100；在39℃下发酵60h，得到预处理的紫花地丁粉末；
所述发酵菌为枯草芽孢杆菌与黑曲霉按质量比1:1混合；
步骤二：将预处理的紫花地丁粉末加入到蒸馏水中，所述预处理的紫花地丁粉末与蒸馏水的质量比为20：110(即紫花地丁粉末与蒸馏水的质量比为13：117)，加热至100℃煮沸1.5h，过滤后得到滤液A1与滤渣B1；将滤渣B1加入到蒸馏水中，所述滤渣B1与蒸馏水的质量比为13：91，加热至100℃煮沸0.8h，过滤后得到滤液A2与滤渣B2；合并滤液A1与滤液A2，减压浓缩，真空干燥，研磨得到粉末X；
步骤三：将滤渣B2放入萃取罐进行超临界萃取65min，萃取压力为38Mpa，萃取温度为51℃；主溶剂为CO2流体，CO2流体流量为16kg/h，并加入夹带剂，夹带剂流量为0.3g/min，得到萃取物；将萃取物离心过滤，真空干燥，研磨得到粉末Y；将粉末X与粉末Y混合得到紫花地丁提取物；
所述夹带剂的用量为滤渣B2的3.6wt％，所述夹带剂为85wt％丙酮水溶液；
其中枯草芽孢杆菌有效活菌数≥100亿CFU/g，食品级，购于湖北鑫润德化工有限公司；黑曲霉有效活菌数≥50亿CFU/g，食品级，购于武汉远成共创科技有限公司。
美白保湿护肤霜的制备方法，包括以下步骤：
按原料配方将1,2-丙二醇、二丙二醇、1,3-丁二醇、鲸蜡硬脂醇、山梨糖醇、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮加入到去离子水中搅拌25min，设定温度88℃，设定转速300rpm；再依次加入紫花地丁提取物、角鲨烷、L-精氨酸、PEG-7甘油椰油酸酯、传明酸、4-羟基苯甲酸丁酯、2-苯氧基乙醇、透明质酸钠继续搅拌35min，设定温度88℃，设定转速300rpm；均质乳化10min，检验合格，出料，得到美白保湿护肤霜。
对比例6
一种美白保湿护肤霜，包括以下重量份原料组成：紫花地丁(VIOLA YEDOENSISMAKINO)提取物0.6份、角鲨烷0.6份、L-精氨酸0.5份、PEG-7甘油椰油酸酯0.5份、传明酸0.4份、4-羟基苯甲酸丁酯0.05份、2-苯氧基乙醇0.05份、透明质酸钠1份、1,2-丙二醇13份、二丙二醇4份、1,3-丁二醇9份、鲸蜡硬脂醇5份、山梨糖醇5份、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮3份、去离子水60份。
所述紫花地丁提取物的制备方法如下：
步骤一：将紫花地丁粉末加入到蒸馏水中混合均匀，所述紫花地丁粉末与蒸馏水的质量比为13:7；升温至39℃接种发酵菌，所述发酵菌与紫花地丁粉末的质量比为1.8:100；在39℃下发酵60h，得到预处理的紫花地丁粉末；
所述发酵菌为枯草芽孢杆菌与黑曲霉按质量比1:1混合；
步骤二：将预处理的紫花地丁粉末加入到蒸馏水中，所述预处理的紫花地丁粉末与蒸馏水的质量比为20：110(即紫花地丁粉末与蒸馏水的质量比为13：117)，加热至100℃煮沸1.5h，过滤后得到滤液A1与滤渣B1；将滤渣B1加入到蒸馏水中，所述滤渣B1与蒸馏水的质量比为13：91，加热至100℃煮沸0.8h，过滤后得到滤液A2与滤渣B2；合并滤液A1与滤液A2，减压浓缩，真空干燥，研磨得到粉末X；
步骤三：将滤渣B2放入萃取罐进行超临界萃取65min，萃取压力为38Mpa，萃取温度为51℃；主溶剂为CO2流体，CO2流体流量为16kg/h，并加入夹带剂，夹带剂流量为0.3g/min，得到萃取物；将萃取物离心过滤，真空干燥，研磨得到粉末Y；将粉末X与粉末Y混合得到紫花地丁提取物；
所述夹带剂的用量为滤渣B2的3.6wt％，所述夹带剂为85wt％乙醇水溶液；
其中枯草芽孢杆菌有效活菌数≥100亿CFU/g，食品级，购于湖北鑫润德化工有限公司；黑曲霉有效活菌数≥50亿CFU/g，食品级，购于武汉远成共创科技有限公司。
美白保湿护肤霜的制备方法，包括以下步骤：
按原料配方将1,2-丙二醇、二丙二醇、1,3-丁二醇、鲸蜡硬脂醇、山梨糖醇、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮加入到去离子水中搅拌25min，设定温度88℃，设定转速300rpm；再依次加入紫花地丁提取物、角鲨烷、L-精氨酸、PEG-7甘油椰油酸酯、传明酸、4-羟基苯甲酸丁酯、2-苯氧基乙醇、透明质酸钠继续搅拌35min，设定温度88℃，设定转速300rpm；均质乳化10min，检验合格，出料，得到美白保湿护肤霜。
实施例4
一种美白保湿护肤霜，包括以下重量份原料组成：紫花地丁(VIOLA YEDOENSISMAKINO)提取物0.3份、莫狄兜兰(PAPHIOPEDILUM MAUDIAE)花提取物0.3份、角鲨烷0.6份、L-精氨酸0.5份、PEG-7甘油椰油酸酯0.5份、传明酸0.4份、4-羟基苯甲酸丁酯0.05份、2-苯氧基乙醇0.05份、透明质酸钠1份、1,2-丙二醇13份、二丙二醇4份、1,3-丁二醇9份、鲸蜡硬脂醇5份、山梨糖醇5份、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮3份、去离子水60份。
所述紫花地丁提取物的制备方法如下：
步骤一：将紫花地丁粉末加入到蒸馏水中混合均匀，所述紫花地丁粉末与蒸馏水的质量比为13:7；升温至39℃接种发酵菌，所述发酵菌与紫花地丁粉末的质量比为1.8:100；在39℃下发酵60h，得到预处理的紫花地丁粉末；
所述发酵菌为枯草芽孢杆菌与黑曲霉按质量比1:1混合；
步骤二：将预处理的紫花地丁粉末加入到蒸馏水中，所述预处理的紫花地丁粉末与蒸馏水的质量比为20：110(即紫花地丁粉末与蒸馏水的质量比为13：117)，加热至100℃煮沸1.5h，过滤后得到滤液A1与滤渣B1；将滤渣B1加入到蒸馏水中，所述滤渣B1与蒸馏水的质量比为13：91，加热至100℃煮沸0.8h，过滤后得到滤液A2与滤渣B2；合并滤液A1与滤液A2，减压浓缩，真空干燥，研磨得到粉末X；
步骤三：将滤渣B2放入萃取罐进行超临界萃取65min，萃取压力为38Mpa，萃取温度为51℃；主溶剂为CO2流体，CO2流体流量为16kg/h，并加入夹带剂，夹带剂流量为0.3g/min，得到萃取物；将萃取物离心过滤，真空干燥，研磨得到粉末Y；将粉末X与粉末Y混合得到紫花地丁提取物；
所述夹带剂的用量为滤渣B2的3.6wt％，所述夹带剂为85wt％乙醇水溶液与85wt％丙酮水溶液按质量比5:1混合；
其中枯草芽孢杆菌有效活菌数≥100亿CFU/g，食品级，购于湖北鑫润德化工有限公司；黑曲霉有效活菌数≥50亿CFU/g，食品级，购于武汉远成共创科技有限公司。
所述莫狄兜兰(PAPHIOPEDILUM MAUDIAE)花提取物，采用下述方法制备而成：(1)取清洗、干燥的莫狄兜兰花，含水量为2.0wt％，粉碎后过100目筛；(2)将莫狄兜兰花粉末加入到蒸馏水中，所述莫狄兜兰花粉末与蒸馏水的质量比为5：105，在100℃加热1h，过滤后得到第一次滤液与第一次滤渣；(3)再将第一次滤渣加入到蒸馏水中，所述第一次滤渣与蒸馏水的质量比为5：80，在100℃加热0.5h，过滤后得到第二次滤液与第二次滤渣；(4)合并第一次滤液与第二次滤液，减压浓缩，真空干燥，研磨得到粉末D1；(5)将第二次滤渣放入萃取罐进行超临界萃取65min，萃取压力为38Mpa，萃取温度为51℃；主溶剂为CO2流体，CO2流体流量为16kg/h，并加入夹带剂，夹带剂流量为0.3g/min，得到萃取物；将萃取物离心过滤，真空干燥，研磨得到粉末D2；将粉末D1与粉末D2混合得到莫狄兜兰花提取物；所述夹带剂的用量为第二次滤渣的3.6wt％，所述夹带剂为85wt％乙醇水溶液与85wt％丙酮水溶液按质量比5:1混合。
美白保湿护肤霜的制备方法，包括以下步骤：
按原料配方将1,2-丙二醇、二丙二醇、1,3-丁二醇、鲸蜡硬脂醇、山梨糖醇、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮加入到去离子水中搅拌25min，设定温度88℃，设定转速300rpm；再依次加入紫花地丁提取物、莫狄兜兰花提取物、角鲨烷、L-精氨酸、PEG-7甘油椰油酸酯、传明酸、4-羟基苯甲酸丁酯、2-苯氧基乙醇、透明质酸钠继续搅拌35min，设定温度88℃，设定转速300rpm；均质乳化10min，检验合格，出料，得到美白保湿护肤霜。
实施例5
一种美白保湿护肤霜，包括以下重量份原料组成：莫狄兜兰(PAPHIOPEDILUMMAUDIAE)花提取物0.6份、角鲨烷0.6份、L-精氨酸0.5份、PEG-7甘油椰油酸酯0.5份、传明酸0.4份、4-羟基苯甲酸丁酯0.05份、2-苯氧基乙醇0.05份、透明质酸钠1份、1,2-丙二醇13份、二丙二醇4份、1,3-丁二醇9份、鲸蜡硬脂醇5份、山梨糖醇5份、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮3份、去离子水60份。
所述莫狄兜兰(PAPHIOPEDILUM MAUDIAE)花提取物，采用下述方法制备而成：(1)取清洗、干燥的莫狄兜兰花，含水量为2.0wt％，粉碎后过100目筛；(2)将莫狄兜兰花粉末加入到蒸馏水中，所述莫狄兜兰花粉末与蒸馏水的质量比为5：105，在100℃加热1h，过滤后得到第一次滤液与第一次滤渣；(3)再将第一次滤渣加入到蒸馏水中，所述第一次滤渣与蒸馏水的质量比为5：80，在100℃加热0.5h，过滤后得到第二次滤液与第二次滤渣；(4)合并第一次滤液与第二次滤液，减压浓缩，真空干燥，研磨得到粉末D1；(5)将第二次滤渣放入萃取罐进行超临界萃取65min，萃取压力为38Mpa，萃取温度为51℃；主溶剂为CO2流体，CO2流体流量为16kg/h，并加入夹带剂，夹带剂流量为0.3g/min，得到萃取物；将萃取物离心过滤，真空干燥，研磨得到粉末D2；将粉末D1与粉末D2混合得到莫狄兜兰花提取物；所述夹带剂的用量为第二次滤渣的3.6wt％，所述夹带剂为85wt％乙醇水溶液与85wt％丙酮水溶液按质量比5:1混合。
美白保湿护肤霜的制备方法，包括以下步骤：
按原料配方将1,2-丙二醇、二丙二醇、1,3-丁二醇、鲸蜡硬脂醇、山梨糖醇、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮加入到去离子水中搅拌25min，设定温度88℃，设定转速300rpm；再依次加入莫狄兜兰花提取物、角鲨烷、L-精氨酸、PEG-7甘油椰油酸酯、传明酸、4-羟基苯甲酸丁酯、2-苯氧基乙醇、透明质酸钠继续搅拌35min，设定温度88℃，设定转速300rpm；均质乳化10min，检验合格，出料，得到美白保湿护肤霜。
测试例1
酪氨酸酶抑制率测试：将酪氨酸酶溶于pH＝6.8的PBS缓冲液配置成120U/mL酪氨酸酶溶液；将L-酪氨酸溶于pH＝6.8的PBS缓冲液配置成1.6mol/L的L-酪氨酸溶液；将待测试样溶于pH＝6.8的PBS缓冲液配置成0.5mg/mL的待测试样溶液；取0.5mL待测试样溶液加入0.5mL酪氨酸酶溶液和1.5mL pH＝6.8的PBS缓冲液，在37℃预热12min，再加入0.5mL的L-酪氨酸溶液在37℃反应18min，在475nm处测定吸光值，同一配方测试5组，取平均值。
酪氨酸酶抑制率(％)＝[1-(A1-A2)/(A3-A4)]×100
其中，A1：L-酪氨酸、待测试样与酪氨酸酶体系的吸光值；A2：待测试样、酪氨酸酶与PBS缓冲液体系的吸光值；A3：L-酪氨酸、酪氨酸酶体系与PBS缓冲液的吸光值；A4：酪氨酸酶与PBS缓冲液体系的吸光值。
表1 酪氨酸酶抑制率测试表
Figure BDA0002559398320000181
Figure BDA0002559398320000191
本发明制备的紫花地丁提取物，具有良好的美白功效；一方面紫花地丁提取物中的活性成分作为还原剂拮抗了氧对酪氨酸酶的激活，使其不能正常地由脱氧模式转变为催化状态，阻止酪氨酸酶催化生成黑色素；另一方面，紫花地丁提取物中的活性成分可以进入酪氨酸酶催化中心的疏水口袋，与周围的氨基酸残基通过氢键和疏水作用力结合，抢占了L-酪氨酸等酪氨酸酶的作用底物在酪氨酸酶催化中心的位置，进一步抑制了黑色素的形成，从而达到美白皮肤的功效。
比较实施例1与实施例2及对比例2-3可以看出，本发明采用发酵菌预处理紫花地丁粉末，破坏了紫花地丁的细胞壁及细胞膜结构，使紫花地丁细胞中的有机小分子活性成分更容易溶出，方便后续的提取过程，提高紫花地丁提取物的品质；进一步，比较实施例2与对比例2-3可以看出，本发明采用枯草芽孢杆菌与黑曲霉混合协同发酵，通过菌种之间的协调互作关系，使预处理更彻底，更利于提取紫花地丁中活性成分；黑曲霉能够分泌大量高活性的纤维素酶、果胶酶、植酸酶与淀粉酶等，有效降解紫花地丁细胞壁中的果胶和纤维网状结构，大大破坏了紫花地丁的细胞壁结构；而枯草芽孢杆菌能够大量分泌高活性的碱性蛋白酶、脂肪酶与糖化酶等，进一步作用于紫花地丁的细胞膜，破坏细胞膜的磷脂双分子层结构，二者协调互作，协同增效，使预处理后的紫花地丁粉末更易于提取，得到的紫花地丁提取物中活性成分含量更高，美白功效更佳。
比较实施例4与实施例3及实施例5可以看出，采用紫花地丁提取物与莫狄兜兰花提取物二者复配作为美白剂，协同增效，进一步提高了美白效果；本发明添加特定含量的紫花地丁提取物与莫狄兜兰花提取物，使其与配方中其他活性成分协调互作，共同滋养肌肤；利用紫花地丁提取物与莫狄兜兰花提取物所具有的不同美白活性成分，相互补充，进一步加强了对酪氨酸酶催化活力的抑制，同时，更多的美白活性成分作用于酪氨酸酶，通过氢键和疏水作用力与其催化中心结合，抢先占据L-酪氨酸等底物被酪氨酸酶催化所需的中心位置，有效抑制黑色素的形成，使肌肤美白效果更好。
测试例2
美白试验测试：使用MELAFIND皮肤色素分析仪测试，选取20-55岁的健康受试者250个，测试过程中停用其他美白类化妆品，受试者每天早晚各使用1次待测试样，连续使用7天、21天后，同样方法测定各项指标；测试时环境温度控制在22±1℃，环境湿度控制在50±5％，重复测试5次，取平均值；空白组是测试过程中不使用待测试样及其他美白化妆品。
黑色素降低率(％)＝(D1-D2)/D1×100
其中，D1为测试开始时还未使用待测试样的黑色素含量；D2为使用待测试样后的黑色素含量。
表2 黑色素降低率测试表
Figure BDA0002559398320000201
Figure BDA0002559398320000211
与空白组相比，实施例1-4与对比例1-4及实施例5的待测试样试验结果P<0.05，具有显著性差异。本发明制备的紫花地丁提取物，具有良好的美白功效；一方面紫花地丁提取物中的活性成分作为还原剂拮抗了氧对酪氨酸酶的激活，使其不能正常地由脱氧模式转变为催化状态，阻止酪氨酸酶催化生成黑色素；另一方面，紫花地丁提取物中的活性成分可以进入酪氨酸酶催化中心的疏水口袋，与周围的氨基酸残基通过氢键和疏水作用力结合，抢占了L-酪氨酸等酪氨酸酶的作用底物在酪氨酸酶催化中心的位置，进一步抑制了黑色素的形成，从而达到美白皮肤的功效。
比较实施例1与实施例2及对比例2-3可以看出，本发明采用发酵菌预处理紫花地丁粉末，破坏了紫花地丁的细胞壁及细胞膜结构，使紫花地丁细胞中的有机小分子活性成分更容易溶出，方便后续的提取过程，提高紫花地丁提取物的品质；进一步，比较实施例2与对比例2-3可以看出，本发明采用枯草芽孢杆菌与黑曲霉混合协同发酵，通过菌种之间的协调互作关系，使预处理更彻底，更利于提取紫花地丁中活性成分；黑曲霉能够分泌大量高活性的纤维素酶、果胶酶、植酸酶与淀粉酶等，有效降解紫花地丁细胞壁中的果胶和纤维网状结构，大大破坏了紫花地丁的细胞壁结构；而枯草芽孢杆菌能够大量分泌高活性的碱性蛋白酶、脂肪酶与糖化酶等，进一步作用于紫花地丁的细胞膜，破坏细胞膜的磷脂双分子层结构，二者协调互作，协同增效，使预处理后的紫花地丁粉末更易于提取，得到的紫花地丁提取物中活性成分含量更高，美白功效更佳。此外，比较实施例3与对比例4、实施例2可以看出，本发明采用CO2超临界萃取联合水提，并在超临界萃取过程中加入了适合的夹带剂，夹带剂能够通过与紫花地丁中有机小分子活性成分之间产生范德华力及氢键、弱络合作用等分子间作用力，使紫花地丁中活性成分更容易溶出，从而提高了紫花地丁提取物的生物活性含量，美白效果更好。
以上详细描述了本发明的较佳具体实施例。应当理解，本领域的普通技术人员无需创造性劳动就可以根据本发明的构思作出诸多修改和变化。因此，凡本技术领域中技术人员依本发明的构思在现有技术的基础上通过逻辑分析、推理或者有限的实验可以得到的技术方案，皆应在由权利要求书所确定的保护范围内。

Claims (2)

1.美白保湿护肤霜，其特征在于，包括以下重量份原料组成：紫花地丁提取物0.1-5份、莫狄兜兰花提取物0.1-5份、角鲨烷0.01-1份、L-精氨酸0.05-2份、PEG-7甘油椰油酸酯0.1-1.5份、传明酸0.1-2份、4-羟基苯甲酸丁酯0.01-0.05份、2-苯氧基乙醇0.01-0.5份、透明质酸钠0.1-5份、1,2-丙二醇10-20份、二丙二醇1-10份、1,3-丁二醇5-20份、鲸蜡硬脂醇1-10份、山梨糖醇1-10份、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮1-5份、去离子水60-80份；
所述莫狄兜兰花提取物由以下方法制备而成：（1）取清洗、干燥的莫狄兜兰花，含水量为1.0-5.0wt%，粉碎后过100-300目筛；（2）将莫狄兜兰花粉末加入到蒸馏水中，所述莫狄兜兰花粉末与蒸馏水的质量比为（1-10）：105，在80-120℃加热0.5-2h，过滤后得到第一次滤液与第一次滤渣；（3）再将第一次滤渣加入到蒸馏水中，所述第一次滤渣与蒸馏水的质量比为（1-10）：80，在80-120℃加热0.5-1h，过滤后得到第二次滤液与第二次滤渣；（4）合并第一次滤液与第二次滤液，减压浓缩，真空干燥，研磨得到粉末D1；（5）将第二次滤渣放入萃取罐进行超临界萃取50-70min，萃取压力为30-50Mpa，萃取温度为50-60℃；主溶剂为CO2流体，CO2流体流量为10-20kg/h，并加入夹带剂，夹带剂流量为0.1-1g/min，得到萃取物；将萃取物离心过滤，真空干燥，研磨得到粉末D2；将粉末D1与粉末D2混合得到莫狄兜兰花提取物；所述夹带剂为85wt%乙醇水溶液与85wt%丙酮水溶液按质量比5:1混合；
所述紫花地丁提取物的提取方法包括如下步骤：
步骤一：将紫花地丁粉末加入到蒸馏水中混合均匀，所述紫花地丁粉末与蒸馏水的质量比为（5-15）:（5-10）；升温至32-52℃接种发酵菌，所述发酵菌与紫花地丁粉末的质量比为（0.5-2.0）:100；在32-52℃下发酵12-72h，得到预处理的紫花地丁粉末；所述发酵菌为枯草芽孢杆菌与黑曲霉按质量比1:1混合；
步骤二：将预处理的紫花地丁粉末加入到蒸馏水中，所述预处理的紫花地丁粉末与蒸馏水的质量比为（10-25）：（100-120），加热至95-125℃煮沸0.5-2.5h，过滤后得到滤液A1与滤渣B1；将滤渣B1加入到蒸馏水中，所述滤渣B1与蒸馏水的质量比为（5-15）：（85-105），加热至95-125℃煮沸0.5-1.5h，过滤后得到滤液A2与滤渣B2；合并滤液A1与滤液A2，减压浓缩，真空干燥，研磨得到粉末X；
步骤三：将滤渣B2放入萃取罐进行超临界萃取30-90min，萃取压力为35-50Mpa，萃取温度为45-70℃；主溶剂为CO2流体，CO2流体流量为10-18kg/h，并加入夹带剂，夹带剂流量为0.1-0.8g/min，得到萃取物；将萃取物离心过滤，真空干燥，研磨得到粉末Y；将粉末X与粉末Y混合得到紫花地丁提取物；所述夹带剂为85wt%乙醇水溶液与85wt%丙酮水溶液按质量比5:1混合。
2.根据权利要求1所述的美白保湿护肤霜的制备方法，包括下述步骤：按原料配方将1,2-丙二醇、二丙二醇、1,3-丁二醇、鲸蜡硬脂醇、山梨糖醇、2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮加入到去离子水中搅拌10-30min，设定温度80-90℃，设定转速300-500rpm；再依次加入紫花地丁提取物、莫狄兜兰花提取物、角鲨烷、L-精氨酸、PEG-7甘油椰油酸酯、传明酸、4-羟基苯甲酸丁酯、2-苯氧基乙醇、透明质酸钠继续搅拌30-60min，设定温度80-90℃，设定转速300-500rpm；均质乳化5-30min，检验合格，出料，得到美白保湿护肤霜。
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