TW201630883A - 陽離子性脂質 - Google Patents

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Abstract

本發明提供可用於向細胞質傳遞核酸之陽離子性脂質。本發明之陽離子性脂質例如為下述式(1)所表示之化合物或其藥劑學上所容許的鹽。 □

Description

陽離子性脂質
本發明係關於新穎陽離子性脂質。本申請案係基於2014年12月26日在日本提出申請的日本專利特願2014-266548號而主張優先權，並將其內容引用到本文中。
siRNA(小干擾RNA)、miRNA(微小RNA)、shRNA(短髮夾RNA、或小髮夾RNA)表現載體、反義寡核苷酸等核酸係在活體內誘導序列特異性基因表現抑制的核酸，其作為核酸醫藥而為公眾所知。
在該等核酸醫藥中，特別是siRNA備受矚目。siRNA係包含19-23個鹼基對的雙股RNA，其會誘導稱為RNA干擾(RNA interference，RNAi)的序列特異性基因表現抑制。
siRNA雖化學性質穩定，但在治療用途中存在如下問題：容易被血漿中的RNase(核糖核酸酶，ribonuclease)分解、及當單獨存在時難以透過細胞膜等(例如，參照專利文獻1)。
針對所述問題，已知有藉由將siRNA封入到含有陽離子性脂質的微粒子內，而保護所封入的siRNA免於在血漿中發生分解，且可使siRNA透過脂溶性細胞膜(例如，參照專利文獻1)。
另外，專利文獻2-4記載了用於傳遞siRNA等核酸醫藥的陽離子性脂質，其生物降解性得到提高。
另外，含有陽離子性脂質的微粒子存在保管期間容易發生凝聚 的穩定性問題，已知有使聚乙二醇修飾脂質(PEG脂質)包含於該微粒子中而抑制凝聚的方法。此外，專利文獻5中記載了如下方法，即，藉由將特定PEG脂質PEG-DPG設為微粒子的構成成分，或製成包含該微粒子與經過脫離子化的溶劑之製劑，而改善凝聚抑制及核酸的傳遞效率。
[先前技術文獻] [專利文獻]
[專利文獻1]日本專利特表2012-530059號公報
[專利文獻2]國際公開第2011/153493號手冊
[專利文獻3]國際公開第2013/086354號手冊
[專利文獻4]國際公開第2013/158579號手冊
[專利文獻5]國際公開第2014/089239號手冊
然而，儘管最近有所進展，但業界仍然在尋求可利用於向細胞質傳遞核酸的陽離子性脂質。
本發明涉及以下的[1]至[8]。
[1]一種化合物或其藥學上所容許的鹽，該化合物係選自由下述式(1)~(11)所表示的化合物所組成之群中。
[化6]
[化11]
[2]根據[1]所述之化合物或其藥學上所容許的鹽，該化合物係選自由下述式(1)及(6)~(9)所表示的化合物所組成之群中。
[化15]
[3]根據[1]或[2]所述之化合物或其藥劑學上所容許的鹽，該化合物係以下述式(1)表示。
所述式(1)所表示的化合物為陽離子性脂質。
[4]根據[1]或[2]所述之化合物或其藥劑學上所容許的鹽，該化合物係以下述式(6)表示。
所述式(6)所表示的化合物為陽離子性脂質。
[5]根據[1]或[2]所述之化合物或其藥劑學上所容許的鹽，該化合物係以下述式(8)表示。
所述式(8)所表示的化合物為陽離子性脂質。
[6]一種脂質複合物，其含有(I)[1]至[5]中任一項所述之化合物或其藥學上所容許的鹽和(II)選自由中性脂質、聚乙二醇修飾脂質及固醇所組成之群中的至少一種脂質。
[7]一種組合物，其含有(I)[1]至[5]中任一項所述之化合物或其藥學上所容許的鹽、(II)選自由中性脂質、聚乙二醇修飾脂質及固醇所組成之群中的至少一種脂質及(III)核酸。
[8]一種組合物之製造方法，其包括如下步驟：將含有(I)[1]至[5]中任一項所述之化合物或其藥學上所容許的鹽和(II)選自由中性脂質、聚乙二醇修飾脂質及固醇所組成之群中的至少一種脂質的含極性有機溶劑的水溶液、與含有(III)核酸的水溶液進行混合，而獲得混合液之步驟；以及，使混合液中的極性有機溶劑的含量減少之步驟。
根據本發明之陽離子性脂質，可向細胞質高效率地釋放核酸。因此，本發明之陽離子性脂質具有作為用於向細胞質傳遞核酸的脂質之可利用性。
圖1係表示動物實驗(4)的結果之圖表。
圖2係表示動物實驗(5)的結果之圖表。
<陽離子性脂質>
在一個實施方式中，本發明為所述式(1)-(11)中的任一個式所表示之化合物或其藥劑學上所容許的鹽，其可用作陽離子性脂質。陽離子性脂質也可以是所述鹽的水合物或所述鹽的溶劑合物。在本說明書中，所謂陽離子性脂質係指具有脂質親和性區域和親水性區域的兩親分子，該脂質親和性區域包含一個以上的烴基，該親水性區域包含在生理pH值下會質子化的極性基。即，本發明的陽離子性脂質能夠發生質子化而形成陽離子。作為與所述陽離子成對，且本實施方式的陽離子性脂質可含有的陰離子，只要為藥劑學上所容許的陰離子，則沒有特別限定，例如可列舉：氯化物離子、溴化物離子、硝酸根離子、硫酸根離子、磷酸根離子等無機離子；醋酸根離子、草酸根離子、馬來酸根離子、富馬酸根離子、檸檬酸根離子、苯甲酸根離子、甲磺酸根離子等有機酸根離子等。
<陽離子性脂質之製造方法>
對本發明之陽離子性脂質的製造方法進行說明。下述式(12)中表示陽離子性脂質的合成流程的一個實施方式。
[化20]
所述式(12)中，R3表示碳數4-12的烷撐，R4表示碳數7-12的烷基，R8表示下述式(13)所表示的結構，R9表示下述式(14)所表示的結構。
[式(13)中，R1表示可具有由碳鏈的一部分縮合而形成的1個以上的環丙烷或者環丁烷的碳數4-10的烷基、或碳數4-10的烯基，R2表示氫原子或碳數2-8的烷基，m表示0-5的整數。]
[式(14)中，R5、R6及R7分別獨立表示氫原子或碳數1-10的烷基，n表示0-5的整數；R5及R6也可一併形成單環式雜環，R6及R7也可一併形成單環式雜環。]
在本實施方式的合成流程中，陽離子性脂質(1-7)可藉由如下方 式合成。
首先，例如將式(1-1)所表示的二羧酸二烷基酯水解，而獲得式(1-2)所表示的單酯體。此處，揭露了式(1-1)中二羧酸二烷基酯的烷基為甲基的例子，但二羧酸二烷基酯的烷基並不限定於甲基，可選擇適當的烷基。
接著，將式(1-2)所表示的化合物醯氯化，而獲得式(1-3)所表示的化合物。接著，藉由使式(1-3)所表示之化合物與格氏試劑進行反應，而獲得式(1-4)所表示之化合物。接著，藉由酯交換反應而獲得式(1-5)所表示之化合物，再將其還原，由此獲得式(1-6)所表示之化合物。接著，可藉由使式(1-6)所表示之化合物與羧酸進行縮合，而合成陽離子性脂質(1-7)。
<脂質複合物>
本發明提供一種脂質複合物，其含有(I)所述陽離子性脂質和(II)選自由中性脂質、聚乙二醇修飾脂質及固醇所組成之群中的至少一種脂質。作為本發明的一個實施方式，脂質複合物含有(I)所述陽離子性脂質、(II)選自由中性脂質、聚乙二醇修飾脂質及固醇所組成之群中的至少一種脂質及(III)核酸。本實施方式的脂質複合物能夠實現將核酸高效率地釋放到細胞質中。
關於本實施方式的脂質複合物，以脂質複合物所含有的全部脂質為基準，所述陽離子性脂質的含量為例如10-100莫耳%、例如20-90莫耳%、例如40-70莫耳%。陽離子性脂質可單獨使用1種，或者將2種以上混合使用。
作為核酸，可列舉：siRNA、miRNA、shRNA表現載體、反義寡核苷酸、核酶等。核酸也可為siRNA、miRNA。
本實施方式的脂質複合物含有例如0.01-50重量%、例如0.1-30重量%、例如1-10重量%的核酸。
本實施方式的脂質複合物含有(I)所述陽離子性脂質和(II)選自由中性脂質、聚乙二醇修飾脂質及固醇所組成之群中的至少一種脂質作為脂質成分。
作為中性脂質，可列舉：二油醯磷脂醯乙醇胺(DOPE)、棕櫚醯油醯磷脂醯膽鹼(POPC)、卵磷脂醯膽鹼(EPC)、二肉豆蔻醯磷脂醯膽鹼(DMPC)、二棕櫚醯磷脂醯膽鹼(DPPC)、二硬脂醯磷脂醯膽鹼(DSPC)、二花生醯磷脂醯膽鹼(DAPC)、二山崳醯磷脂醯膽鹼(DBPC)、二(二十四醯)磷脂醯膽鹼(DLPC)、二油醯磷脂醯膽鹼(DOPC)、鞘磷脂、神經醯胺、二油醯磷脂醯甘油(DOPG)、二棕櫚醯磷脂醯甘油(DPPG)、磷脂醯乙醇胺(POPE)、二油醯-磷脂醯乙醇胺4-(N-馬來醯亞胺甲基)-環己烷-1-羧酸酯(DOPE-mal)等。中性脂質可單獨使用1種，或者將2種以上混合使用。
本實施方式的脂質複合物中，以脂質複合物所含有的全部脂質為基準，也可含有例如0-50莫耳%、例如0-40莫耳%、例如0-30莫耳%的中性脂質。
作為聚乙二醇修飾脂質，可列舉：PEG2000-DMG(PEG2000-二肉豆蔻基甘油、PEG2000-DPG(PEG2000-二棕櫚醯甘油)、PEG2000-DSG(PEG2000-二硬脂醯甘油)、PEG5000-DMG(PEG5000-二肉豆蔻基甘油)、PEG5000-DPG(PEG5000-二棕櫚醯甘油)、PEG5000-DSG(PEG5000-二硬脂醯甘油)、PEG-cDMA(N-[(甲氧基聚(乙二醇)2000)胺基甲醯基]-1,2-二肉豆蔻基氧基丙基-3-胺)、PEG-C-DOMG(R-3-[(ω-甲氧基-聚(乙二醇)2000)胺基甲醯基)]-1,2-二肉豆蔻基氧基丙基-3-胺)、聚乙二醇(PEG)-二醯甘油(DAG)、PEG-二烷氧基丙基(DAA)、PEG-磷脂質、PEG-神經醯胺(Cer)等。
作為PEG-二烷氧基丙基，可列舉：PEG-二月桂氧基丙基、PEG-二肉豆蔻氧基丙基、PEG-二棕櫚氧基丙基、PEG-二硬脂氧基丙基 等。聚乙二醇修飾脂質可單獨使用1種，或者將2種以上混合使用。
本實施方式的脂質複合物中，以脂質複合物所含有的全部脂質為基準，也可含有例如0-30莫耳%、例如0-20莫耳%、例如0-10莫耳%的聚乙二醇修飾脂質。
作為固醇，可列舉：膽固醇、二氫膽固醇、羊毛固醇、β-穀固醇、菜油固醇、豆固醇、菜籽固醇、麥角固醇、岩藻固醇、3 β-[N-(N',N'-二甲基胺基乙基)胺基甲醯基]膽固醇(DC-Chol)等。固醇可單獨使用1種，或者將2種以上混合使用。
本實施方式的脂質複合物中，以脂質複合物所含有的全部脂質為基準，也可含有例如0-90莫耳%、例如10-80莫耳%、例如20-50莫耳%的固醇。
本實施方式的脂質複合物中的脂質成分的組合沒有特別限定，例如可列舉：所述的陽離子性脂質、中性脂質及固醇的組合，所述的陽離子性脂質、中性脂質、聚乙二醇修飾脂質及固醇的組合等。
<組合物>
在一個實施方式中，本發明提供一種組合物，其含有(I)所述陽離子性脂質、(II)選自由中性脂質、聚乙二醇修飾脂質及固醇所組成之群中的至少一種脂質及(III)核酸。本實施方式的組合物能夠實現將核酸高效率地釋放到細胞質中。本實施方式的組合物也可為包含所述脂質複合物、藥學上所容許的介質、及根據需要的其他添加劑之組合物。關於藥學上所容許的介質、其他添加劑，在下文進行說明。
本實施方式的組合物中，以組合物所含有的全部脂質為基準，含有例如10-100莫耳%、例如20-90莫耳%、例如40-70莫耳%的所述陽離子性脂質。陽離子性脂質可單獨使用1種，或者將2種以上混合使用。
作為核酸，可列舉與所述相同的核酸。本實施方式的組合物含 有例如0.01-50重量%、例如0.1-30重量%、例如1-10重量%的核酸。
本實施方式的組合物含有(I)所述陽離子性脂質和(II)選自由中性脂質、聚乙二醇修飾脂質及固醇所組成之群中的至少一種脂質作為脂質成分。
作為中性脂質，可列舉與所述相同的中性脂質。本實施方式的組合物中，以組合物所含有的全部脂質為基準，也可含有例如0-50莫耳%、例如0-40莫耳%、例如0-30莫耳%的中性脂質。
作為聚乙二醇修飾脂質，可列舉與所述相同的聚乙二醇修飾脂質。本實施方式的組合物中，以組合物所含有的全部脂質為基準，也可含有例如0-30莫耳%、例如0-20莫耳%、例如0-10莫耳%的聚乙二醇修飾脂質。
作為固醇，可列舉與所述相同的固醇。本實施方式的組合物中，以組合物所含有的全部脂質為基準，也可含有例如0-90莫耳%、例如10-80莫耳%、例如20-50莫耳%的固醇。
本實施方式的組合物中的脂質成分的組合沒有特別限定，例如可列舉：所述的陽離子性脂質、中性脂質及固醇的組合，所述的陽離子性脂質、中性脂質、聚乙二醇修飾脂質及固醇的組合等。
本實施方式的組合物中，除了所述成分以外，作為其他添加劑，也可含有：蔗糖、葡萄糖、山梨糖醇、乳糖等糖；穀胺醯胺、穀胺酸、穀胺酸鈉、組胺酸等胺基酸；檸檬酸、磷酸、醋酸、乳酸、碳酸、酒石酸等酸的鹽等。
本實施方式的組合物也可製劑化為醫藥組合物。作為醫藥組合物的劑型，例如可列舉注射劑。
本實施方式的組合物例如可為藉由冷凍乾燥等而去除了溶劑的粉末狀態，也可為液體狀態。在組合物為粉末狀態的情況下，可在使用前懸濁或溶解到藥學上所容許的介質中製成注射劑而使用。在組合 物為液體狀態的情況下，可直接使用或者懸濁或溶解到藥學上所容許的介質中製成注射劑而使用。
作為藥學上所容許的介質，可列舉：無菌水；生理鹽水；含有葡萄糖、D-山梨糖醇、D-甘露糖、D-甘露糖醇、氯化鈉等輔助藥的等滲液等。本實施方式之組合物還可含有乙醇、丙二醇、聚乙二醇等醇等溶解輔助劑，穩定劑、抗氧化劑、防腐劑等添加劑。
對患者投予組合物例如可藉由動脈內注射、靜脈內注射、皮下注射等而進行。組合物的投予量根據投予對象、對象臟器、症狀、投予方法而異。
本實施方式的組合物係形成由含有陽離子性脂質的脂質所構成的微粒子內封入了核酸的脂質複合物。脂質複合物的“平均粒徑”可藉由體積平均、數量平均、Z-平均的任一種方法算出。在本實施方式的組合物中，脂質複合物的平均粒徑(Z-平均)可為例如10-1000nm、例如30-500nm、例如30-200nm。
關於本實施方式之組合物，就抑制非特異性吸附或免疫反應的觀點而言，例如較佳的是在血液中等pH值約7.4的環境下表面幾乎無電荷。另外，就因內吞作用而被吞入到細胞內時提高內吞體膜的融合效率的觀點而言，較佳的是在低pH值環境下帶正電。
<組合物的製造方法>
在一個實施方式中，本發明提供一種組合物之製造方法，其包括步驟(a)及步驟(b)，步驟(a)係將含有(I)所述陽離子性脂質和(II)選自由中性脂質、聚乙二醇修飾脂質及固醇所組成之群中的至少一種脂質的含極性有機溶劑的水溶液、與含有(III)核酸的水溶液加以混合而獲得混合液，步驟(b)係使混合液中的極性有機溶劑的含量減少。根據本實施方式之製造方法，可製造能夠將核酸高效率地釋放到細胞質中之組合物。
藉由水溶性核酸和所述陽離子性脂質的靜電相互作用、及脂質間的疏水相互作用，可形成由脂質構成的微粒子內封入了核酸的脂質複合物。例如，藉由改變含有(I)所述陽離子性脂質和(II)選自由中性脂質、聚乙二醇修飾脂質及固醇所組成之群中的至少一種脂質的脂質成分在含極性有機溶劑的水溶液中的溶解度，可形成脂質複合物。作為極性有機溶劑，可列舉乙醇等醇。
首先，在步驟(a)中，將溶解了(I)所述陽離子性脂質和(II)選自由中性脂質、聚乙二醇修飾脂質及固醇所組成之群中的至少一種脂質的含極性有機溶劑的水溶液、與含有(III)核酸的水溶液加以混合而獲得混合液。含極性有機溶劑的水溶液中的極性有機溶劑的濃度只要在與核酸的水溶液混合後仍然滿足溶解脂質分子的條件，則沒有特別限定。
接著，在步驟(b)中，藉由向所述混合液中添加水等，而使極性有機溶劑的含量減少。由此，可形成脂質複合物。為了高效率地形成脂質複合物，較佳的是使極性有機溶劑的含量急劇降低。
根據本實施方式的組合物之製造方法，可獲得核酸被高效率地封入到微粒子內部的脂質複合物。
在封入到組合物中的核酸為核酸醫藥的情況下，可將組合物作為醫藥組合物而使用。
[實施例]
以下，列舉實施例更詳細地說明本發明，但本發明並不限定於該等實施例。另外，實施例中的化合物名係使用軟體(商品名“ChemDraw Ultra ver.12.0”、珀金埃爾默(PerkinElmer)公司製造)進行命名。
實施例中所使用的簡稱係熟習該項技術者公知的慣用簡稱。以下揭露若干簡稱。
DMF：N,N-二甲基甲醯胺
TFA：三氟醋酸
WSC：1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳二醯亞胺鹽酸鹽
DMAP：N,N-二甲基-4-胺基吡啶
THF：四氫呋喃
LC-MS：液相層析法-質譜法(liquid chromatography-mass spectrometry)
ESI-MS：電灑電離質譜法(electrospray ionization mass spectrometry)
質子核磁共振波譜的化學位移係以相對於四甲基矽烷的δ單位(ppm)進行記錄。圖案的簡稱如下。
s：單峰、d：二重峰、t：三重峰、q：四重峰、dd：雙二重峰、ddd：雙雙二重峰、dt：雙三重峰、tt：三重三重峰、m：多重峰。
<陽離子性脂質的合成>
[實施例1]
(1-甲基哌啶-4-羧酸1-((2-己基環丙基)甲氧基)-1-側氧十九烷-10-基酯(以下，有時稱為“YS-102”)的合成)
以下揭露YS-102的合成流程。
[化23]
(第1步驟：水解)
將在乙醇(868mL)中溶解有癸二酸二甲酯(200g、868.4mmol)的溶液冷卻到0℃。向該溶液中滴加氫氧化鉀(48.73g、868.4mmol)的乙醇(300mL)溶液，滴加後在0℃下攪拌12小時。反應完畢後，添加醋酸乙酯和水，藉由將未反應物萃取到有機層中而去除。利用鹽酸使水層成為酸性，添加醋酸乙酯而萃取目標物。利用水、食鹽水將有機層洗淨，並進行濃縮。對於第1步驟品單酯體(150.3g、652.6mmol、75%)，不進行純化而用於下一步驟。
(第2步驟：醯氯化)
向第1步驟品單酯體(50.0g、231.2mmol)與催化劑量的DMF(23mL)的懸濁液中滴加亞硫醯氯(41.3g、346.8mmol)。反應完畢後，在減壓下將亞硫醯氯蒸餾去除後，進行蒸餾純化，而獲得第2步驟品(25.8g、109.9mmol、48%)。
(第3步驟：與格氏試劑的反應)
使氯化鋅(2.7g、20.1mmol)溶解到THF(61mL)中，並冷卻到-78℃。向該溶液中在氮氣環境下且在-78℃下滴加1M的溴化壬基鎂(40.2mL、40.2mmol)。滴加後，升溫到0℃，在0℃下攪拌30分鐘後，投入四(三苯基膦)鈀(0.58mg、0.5mmol)，接著滴加第2步驟品(5.0g、20.1mmol)。在0℃下進一步攪拌1小時後，加入1M鹽酸水溶液進行淬滅。從反應溶液中過濾分離析出物，利用醋酸乙酯對濾液進行萃取，利用水、食鹽水將有機層洗淨後，利用無水硫酸鎂進行乾燥。藉由過濾而去除乾燥劑，將濾液在減壓下加以濃縮。藉由矽膠柱層析法進行純化，而獲得第3步驟品(5.0g、14.7mmol、73%)。
(第4步驟：酯交換)
一邊對第3步驟品(2.0g、5.9mmol)、2-壬烯醇(4.2g、29.4mmol)、四丙醇鈦(0.2g、0.6mmol)的混合液進行攪拌，一邊將外浴升溫到110℃。一邊去除所產生的餾出液一邊繼續攪拌，將不再見到餾出的時刻設為反應終點，在冷卻後添加水進行淬滅。利用醋酸乙酯對反應液進行萃取，並利用水、食鹽水進行洗淨後，利用無水硫酸鎂進行乾燥。藉由過濾而去除乾燥劑，將濾液在減壓下加以濃縮。藉由矽膠柱層析法進行純化，而獲得第4步驟品(2.6g、5.8mmol、99%)。
(第5步驟：環丙烷化)
使二乙基鋅(8.3mL、8.3mmol)溶解到二氯甲烷(15mL)中，並冷卻到0℃。向其中滴加三氟甲磺酸(0.9g、8.3mmol)，接著滴加二碘甲烷(2.2g、8.3mmol)後，在0℃下攪拌1小時。向該溶液中滴加第4步驟品(1.2g、2.8mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液，並升溫到室溫。藉由TLC(Thin Layer Chromatography，薄層層析法)確認反應，將原料消失設為終點，利用水進行淬滅。將所析出的固體過濾分離，利用醋酸乙酯對濾液進行萃取，利用水、食鹽水進行洗淨後，利用無水硫酸鎂進行乾燥。藉由過濾而去除乾燥劑，將濾液在減壓下加以濃縮。藉由 矽膠柱層析法進行純化，而獲得第4步驟品(1.2g、2.7mmol、99%)。
(第6步驟：還原)
向在乙醇(22mL)中溶解了第5步驟品(1.0g、2.2mmol)的溶液中，添加硼氫化鈉(0.08g、2.2mmol)使之反應10分鐘。反應完畢後，利用1N鹽酸進行淬滅。利用醋酸乙酯進行萃取，並利用水、食鹽水進行洗淨後，將有機層在減壓下加以濃縮。藉由矽膠柱層析法進行純化，而獲得第6步驟品(0.3g、0.7mmol、30%)。
(第7步驟：縮合)
向在二氯甲烷(7mL)中溶解了第6步驟品(0.8g、1.8mmol)的溶液中，添加WSC(0.7g、3.7mmol)、二甲基胺基吡啶(0.04g、0.4mmol)、1-甲基哌啶-4-羧酸(0.5g、3.7mmol)。在室溫下攪拌到次日後，添加水，使有機層分液。將有機層利用水洗淨5次後，利用1N氫氧化鈉水溶液洗淨1次，利用無水硫酸鎂進行乾燥。藉由過濾而去除乾燥劑，將濾液在減壓下加以濃縮。藉由矽膠柱層析法進行純化，而獲得下述式(15)所表示的YS-102(0.12g、0.2mmol、12%)。
在以下條件下利用HPLC-LC/MS(high performance liquid chromatography-liquid chromatography/mass spectrometry，高效液相層析-質譜聯用)對所獲得的化合物進行確認。層析柱：YMC-TriartC18、150-4.6mm、5μm、洗提液：MeOH(均勻溶劑)、流速：1.0mL/分鐘、執行時間：15分鐘、柱溫：45℃、檢測：UV(215 nm)、電灑電離質譜(ESI-MS)。
HPLC-LC/MS、Rt 6.24分鐘、ESI-MS(M+H)計算值577.5、測量值578.6、1H NMR(400MHz、CDCl3)δ 4.87(1H，q)、2.82(2H，d)、2.27(4H，m)、2.04(1H，m)、1.91(1H，m)、1.82(2H，m)、1.61(2H，m)、1.50(4H，m)、1.36(5H，m)、1.25(24H，m)、0.88(6H，m)
[實施例2]
(1-甲基哌啶-4-羧酸(Z)-1-(壬-2-烯-1-基氧基)-1-側氧十九烷-10-基酯(以下，有時稱為“YS-101”)的合成)
除了不進行第5步驟的方面以外，和實施例1同樣地合成下述式(16)所表示的YS-101。
HPLC-LC/MS、Rt 5.51分鐘、ESI-MS(M+H)計算值563.5、測量值564.5、1H NMR(400MHz、CDCl3)δ 5.32(2H，m)、4.87(1H，q)、4.11(1H，dd)、4.05(2H，t)、2.82(2H，d)、2.27(7H，m)、2.04(8H，m)、1.89(2H，m)、1.79(2H，m)、1.61(4H，m)、1.49(4H，m)、1.36(5H，m)、1.25(30H，m)、0.95(3H，m)、0.88(3H，m)
[實施例3]
(1-甲基哌啶-4-羧酸1-側氧-1-(十一烷-5-基氧基)十九烷-10-基酯(以下，有時稱為“YS-103”)的合成)
在第4步驟中，使用2-丁基辛烷-1-醇代替2-壬烯醇進行反應，且不進行第5步驟，除此以外，和實施例1同樣地合成下述式(2)所表示 的YS-103。
HPLC-LC/MS、Rt 7.52分鐘、ESI-MS(M+H)計算值593.5、測量值594.6、1H NMR(400MHz、CDCl3)δ 4.86(1H，q)、4.06(2H，t)、2.82(2H，d)、2.27(7H，m)、1.99(2H，m)、1.88(2H，m)、1.79(2H，m)、1.60(4H，m)、1.49(4H，m)、1.38(7H，m)、1.25(30H，m)、0.97(3H，m)、0.88(3H，m)、0.64(2H，m)、0.59(1H，m)、-0.33(1H，dd)
[實施例4]
(1-甲基哌啶-4-羧酸1-((2-丁基辛基)氧基)-1-側氧十九烷-10-基酯(以下，有時稱為“YS-119”)的合成)
以下揭露YS-119的合成流程。
[化27]
(第1步驟到第3步驟)
第1步驟到第3步驟係和所述YS-102的合成同樣地進行。
(第4步驟：酯交換)
一邊對第3步驟品(4.1g、12.0mmol)、2-丁基辛烷-1-醇(6.73g、36.12mmol)、四丙醇鈦(0.34g、1.2mmol)的混合液進行攪拌，一邊將外浴升溫到110℃。一邊去除所產生的餾出液一邊繼續攪拌，將不再見到餾出的時刻設為反應終點，在冷卻後添加水進行淬滅。利用醋酸乙酯對反應液進行萃取，利用水、食鹽水進行洗淨後，利用無水硫酸鎂進行乾燥。藉由過濾而去除乾燥劑，將濾液在減壓下加以濃縮。藉由矽膠柱層析法進行純化，而獲得第4步驟品(4.5g、9.4mmol、78%)。
(第5步驟：還原)
向在THF(18.7mL)、甲醇(18.7mL)中溶解了第4步驟品(4.5g、9.4mmol)的溶液中，添加硼氫化鈉(1.8g、46.8mmol)，使之反應一 小時。反應完畢後，利用1N鹽酸進行淬滅。利用醋酸乙酯進行萃取，利用水、食鹽水進行洗淨後，將有機層在減壓下加以濃縮。藉由矽膠柱層析法進行純化，而獲得第5步驟品(3.1g、6.42mmol、69%)。
(第6步驟：縮合)
向在二氯甲烷(8.28mL)中溶解了第5步驟品(2.0g、4.14mmol)的溶液中，添加WSC(1.59g、8.28mmol)、二甲基胺基吡啶(0.04g、0.4mmol)、1-甲基哌啶-4-羧酸(1.19g、8.28mmol)。在室溫下攪拌到次日後，添加水，使有機層分液。將有機層利用水洗淨5次後，利用1N氫氧化鈉水溶液洗淨1次，利用無水硫酸鎂進行乾燥。藉由過濾而去除乾燥劑，將濾液在減壓下加以濃縮。藉由矽膠柱層析法進行純化，而獲得式(1)所表示的YS-119(1.9g、3.1mmol、74%)。
HPLC-LC/MS、Rt 8.01分鐘、ESI-MS(M+H)計算值607.6、測量值608.6、1H NMR(400MHz、CDCl3)δ 4.87(1H，q)、3.96(2H，d)、2.81(2H，d)、2.27(6H，m)、1.98(2H，m)、1.91(2H，m)、1.82(2H，m)、1.61(4H，m)、1.49(4H，m)、1.20(46H，m)、0.86(9H，m)
[實施例5]
(1-甲基哌啶4-羧酸1-側氧-1-(十一烷-5-基氧基)十五烷-6-基酯(以下，有時稱為“YS-111”)的合成)
在第1步驟中，使用己二酸二甲酯代替癸二酸二甲酯進行反應， 在第4步驟中，使用十一烷-5-醇代替2-丁基辛烷-1-醇進行反應，除此以外，和實施例4同樣地合成下述式(17)所表示的YS-111。
HPLC-LC/MS、Rt 5.35分鐘、ESI-MS(M+H)計算值537.5、測量值538.5、1H NMR(400MHz、CDCl3)δ 4.87(2H，q)、2.81(2H，d)、2.27(6H，m)、1.98(2H，m)、1.91(2H，m)、1.82(2H，m)、1.62-1.50(10H，m)、1.24(28H，m)、0.87(9H，m)
[實施例6]
(1-甲基哌啶4-羧酸1-側氧-1-(十一烷-5-基氧基)十七烷-8-基酯(以下，有時稱為“YS-112”)的合成)
在第1步驟中，使用辛二酸二甲酯代替癸二酸二甲酯進行反應，在第4步驟中，使用十一烷-5-醇代替2-丁基辛烷-1-醇進行反應，除此以外，和實施例4同樣地合成下述式(4)所表示的YS-112。
HPLC-LC/MS、Rt 6.05分鐘、ESI-MS(M+H)計算值565.5、測量值566.5、1H NMR(400MHz、CDCl3)δ 4.87(2H，q)、2.81(2H，d)、 2.27(6H，m)、1.98(2H，m)、1.91(2H，m)、1.82(2H，m)、1.62-1.50(10H，m)、1.24(32H，m)、0.87(9H，m)
[實施例7]
(1-甲基哌啶4-羧酸21-側氧-21-(十一烷-5-基氧基)二十一烷-10-基酯(以下，有時稱為“YS-113”)的合成)
在第1步驟中，使用十二烷二酸二甲酯代替癸二酸二甲酯進行反應，在第4步驟中，使用十一烷-5-醇代替2-丁基辛烷-1-醇進行反應，除此以外，和實施例4同樣地合成下述式(5)所表示的YS-113。
HPLC-LC/MS、Rt 8.95分鐘、ESI-MS(M+H)計算值621.6、測量值622.6、1H NMR(400MHz、CDCl3)δ 4.87(2H，q)、2.81(2H，d)、2.27(6H，m)、1.98(2H，m)、1.91(2H，m)、1.82(2H，m)、1.62-1.50(10H，m)、1.24(40H，m)、0.87(9H，m)
[實施例8]
(1-甲基哌啶4-羧酸23-側氧-23-(十一烷-5-基氧基)二十三烷-10-基酯(以下，有時稱為“YS-114”)的合成)
在第1步驟中，使用十四烷二酸二甲酯代替癸二酸二甲酯進行反應，在第4步驟中，使用十一烷-5-醇代替2-丁基辛烷-1-醇進行反應，除此以外，和實施例4同樣地合成下述式(18)所表示的YS-114。
[化32]
HPLC-LC/MS、Rt 11.1分鐘、ESI-MS(M+H)計算值649.6、測量值650.6、1H NMR(400MHz、CDCl3)δ 4.87(2H，q)、2.81(2H，d)、2.27(6H，m)、1.98(2H，m)、1.91(2H，m)、1.82(2H，m)、1.62-1.50(10H，m)、1.24(44H，m)、0.87(9H，m)
[實施例9]
(1-甲基哌啶-4-羧酸1-((2-丁基辛基)氧基)-1-側氧十七烷-8-基酯(以下，有時稱為“YS-115”)的合成)
在第1步驟中，使用辛二酸二甲酯代替癸二酸二甲酯進行反應，除此以外，和實施例4同樣地合成下述式(19)所表示的YS-115。
HPLC-LC/MS、Rt 6.72分鐘、ESI-MS(M+H)計算值579.5、測量值580.7、1H NMR(400MHz、CDCl3)δ 4.87(2H，q)、3.96(2H，d)、2.81(2H，d)、2.27(6H，m)、1.98(2H，m)、1.91(2H，m)、1.82(2H，m)、1.62-1.50(10H，m)、1.24(32H，m)、0.87(9H，m)
[實施例10]
(1-甲基哌啶-4-羧酸21-((2-丁基辛基)氧基)-21-側氧二十一烷-10-基酯(以下，有時稱為“YS-116”)的合成)
在第1步驟中，使用辛二酸二甲酯代替癸二酸二甲酯進行進行反 應，除此以外，和實施例4同樣地合成下述式(20)所表示的YS-116。
HPLC-LC/MS、Rt 10.0分鐘、ESI-MS(M+H)計算值635.6、測量值636.7、1H NMR(400MHz、CDCl3)δ 4.87(2H，q)、3.96(2H，d)、2.81(2H，d)、2.27(6H，m)、1.98(2H，m)、1.91(2H，m)、1.82(2H，m)、1.62-1.50(10H，m)、1.24(40H，m)、0.87(9H，m)
[實施例11]
(1-甲基哌啶-4-羧酸1-(辛烷-3-基氧基)-1-側氧十七烷-8-基酯(以下，有時稱為“YS-117”)的合成)
在第1步驟中，使用辛二酸二甲酯代替癸二酸二甲酯進行反應，在第4步驟中，使用辛烷-3-醇代替2-丁基辛烷-1-醇進行反應，除此以外，和實施例4同樣地合成下述式(21)所表示的YS-117。
HPLC-LC/MS、Rt 4.71分鐘、ESI-MS(M+H)計算值523.5、測量值524.6、1H NMR(400MHz、CDCl3)δ 4.87(1H，q)、4.80(1H，q)、2.82(2H，d)、2.27(6H，m)、1.98(2H，m)、1.91(2H，m)、1.82(2H， m)、1.62-1.29(10H，m)、1.24(26H，m)、0.87(9H，m)
[實施例12]
(1-甲基哌啶-4-羧酸1-((S)辛烷-3-基氧基)-1-側氧十七烷-8-基酯(以下，有時稱為“YS-117S”)的合成)
在第1步驟中，使用辛二酸二甲酯代替癸二酸二甲酯進行反應，在第4步驟中，使用(S)-辛烷-3-醇代替2-丁基辛烷-1-醇進行反應，除此以外，和實施例4同樣地合成下述式(22)所表示的YS-117S。
HPLC-LC/MS、Rt 4.70分鐘、ESI-MS(M+H)計算值523.5、測量值524.6、1H NMR(400MHz、CDCl3)δ 4.87(1H，q)、4.80(1H，q)、2.82(2H，d)、2.27(6H，m)、1.98(2H，m)、1.91(2H，m)、1.82(2H，m)、1.62-1.29(10H，m)、1.24(26H，m)、0.86(9H，m)
[實施例13]
(1-甲基哌啶-4-羧酸21-(辛烷-3-基氧基)-21-側氧二十一烷-10-基酯(以下，有時稱為“YS-118”)的合成)
在第1步驟中，使用十二烷二酸二甲酯代替癸二酸二甲酯進行反應，在第4步驟中，使用辛烷-3-醇代替2-丁基辛烷-1-醇進行反應，除此以外，和實施例4同樣地合成下述式(3)所表示的YS-118。
[化37]
HPLC-LC/MS、Rt 6.55分鐘、ESI-MS(M+H)計算值579.5、測量值580.6、1H NMR(400MHz、CDCl3)δ 4.87(1H，q)、4.80(1H，q)、2.82(2H，d)、2.27(6H，m)、1.98(2H，m)、1.91(2H，m)、1.82(2H，m)、1.62-1.29(10H，m)、1.24(30H，m)、0.86(9H，m)
[實施例14]
(1-甲基哌啶-4-羧酸21-((S)-辛烷-3-基氧基)-21-側氧二十一烷-10-基酯(以下，有時稱為“YS-118S”)的合成)
在第1步驟中，使用十二烷二酸二甲酯代替癸二酸二甲酯進行反應，在第4步驟中，使用(S)-辛烷-3-醇代替2-丁基辛烷-1-醇進行反應，除此以外，和實施例4同樣地合成下述式(23)所表示的YS-118S。
HPLC-LC/MS、Rt 6.54分鐘、ESI-MS(M+H)計算值579.5、測量值580.6、1H NMR(400MHz、CDCl3)δ 4.87(1H，q)、4.80(1H，q)、2.82(2H，d)、2.27(6H，m)、1.98(2H，m)、1.91(2H，m)、1.82(2H，m)、1.62-1.29(10H，m)、1.24(30H，m)、0.86(9H，m)
[實施例15]
(1-甲基哌啶-4-羧酸1-((2-丁基辛基)氧基)-1-側氧二十烷-10-基酯 (以下，有時稱為“YS-120”)的合成)
在第3步驟中，使用溴化癸基鎂代替溴化壬基鎂進行反應，除此以外，和實施例4同樣地合成下述式(6)所表示的YS-120。
HPLC-LC/MS、Rt 8.70分鐘、ESI-MS(M+H)計算值621.6、測量值622.7、1H NMR(400MHz，CDCl3)δ 4.86(1H，ddd)、3.96(2H，d)、2.81(2H，d)、2.27(6H，m)、2.03(2H，m)、1.98(1H，d)、1.90(1H，m)、1.78(4H，m)、1.61(4H，m)、1.49(4H，m)、1.27-1.21(41H，m)、0.87(9H，m)
如下所述，如果利用所述式(6)所表示的化合物形成脂質複合物，則在保管一定時間的情況下的脂質複合物的粒徑增大得到抑制，而穩定性高。
[實施例16]
(1-甲基哌啶-4-羧酸1-((2-丁基辛基)氧基)-1-側氧二十烷-10-基酯(“YS-120”)的合成)
以下揭露YS-120的另一合成流程。
[化40]
(第1步驟到第3步驟)
第1步驟到第3步驟係和所述YS-102的合成同樣地進行。
(第4步驟：酯交換)
一邊對第3步驟品(150.0g、440.5mmol)、苄醇(142.9g、1321.4mmol)、四丙醇鈦(12.5g、44.5mmol)的混合液進行攪拌，一邊將外浴升溫到130℃。一邊去除所產生的餾出液一邊繼續攪拌，將不再見到餾出的時刻設為反應終點，在冷卻後添加水進行淬滅。利用醋酸乙酯對反應液進行萃取，利用水、食鹽水進行洗淨後，利用無水硫酸鎂 進行乾燥。藉由過濾而去除乾燥劑，將濾液在減壓下加以濃縮。藉由矽膠柱層析法進行純化，而獲得第4步驟品(146.2g、350.9mmol)。
(第5步驟：還原)
向在THF(480.0mL)、甲醇(480.0mL)中溶解了第4步驟品(100.0g、240.0mmol)的溶液中，添加硼氫化鈉(10.9g、288.0mmol)，使之反應10分鐘。反應完畢後，利用1N鹽酸進行淬滅。利用醋酸乙酯進行萃取，利用水、食鹽水進行洗淨後，將有機層在減壓下加以濃縮。藉由矽膠柱層析法進行純化，而獲得第5步驟品(70.0g、167.2mmol)。
(第6步驟：縮合)
向在THF(480.0mL)中溶解了第5步驟品(50.0g、119.4mmol)的溶液中，添加WSC(45.8g、238.9mmol)、二甲基胺基吡啶(2.92g、23.9mmol)、1-甲基哌啶-4-羧酸(34.2g、238.9mmol)。在室溫下攪拌到次日後，添加水，使有機層分液。將有機層利用水洗淨5次後，利用1N氫氧化鈉水溶液洗淨1次，利用無水硫酸鎂進行乾燥。藉由過濾而去除乾燥劑，將濾液在減壓下加以濃縮。藉由矽膠柱層析法進行純化，而獲得第6步驟品(37.2g、68.4mmol)。
(第7步驟：接觸還原)
使第6步驟品(37.2g、68.4mmol)、鈀/碳(4.9mL)懸濁在醋酸乙酯(136.8mL)中，並在氫氣環境下攪拌一晚。將反應液過濾分離，去除鈀/碳進行濃縮。藉由矽膠層析法進行純化，而獲得第7步驟品(26.8g、59.1mmol)。
(第8步驟：縮合)
向在二氯甲烷(220.0mL)中溶解了第7步驟品(20.0g、44.1mmol)的溶液中，添加WSC(8.9g、46.3mmol)、二甲基胺基吡啶(1.08g、0.4mmol)、2-丁基辛烷-1-醇(16.4g、88.2mmol)。在室溫下攪拌到次 日後，添加水，使有機層分液。將有機層利用水洗淨5次後，利用無水硫酸鎂進行乾燥。藉由過濾而去除乾燥劑，將濾液在減壓下加以濃縮。藉由矽膠柱層析法進行純化，而獲得式(6)所表示的YS-120(22.0g、35.4mmol)。
[實施例17]
(1-甲基哌啶-4-羧酸1-((2Z,5Z)-癸-2,5-二烯-1-基氧基)-1-側氧二十烷-10-基酯(以下，有時稱為“YS-121”)的合成)
在第8步驟中，使用(2Z,5Z)-癸-2,5-二烯-1-醇代替2-丁基辛烷-1-醇進行反應，除此以外，和實施例16同樣地合成下述式(24)所表示的YS-121。
ESI-MS(M+H)計算值589.5、測量值590.7、1H NMR(400MHz，CDCl3)δ 5.60(1H，m)、5.36(1H，m)、4.87(1H，tt)、4.64(1H，d)、2.86(2H，m)、2.36(3H，s)2.32(2H，t)、2.22(1H，m)、2.02(2H，m)、1.97(2H，m)、1.61(2H，m)、1.50(3H，m)、1.27(40H，m)、0.88(6H，m)
[實施例18]
(1-甲基哌啶-4-羧酸(Z)-1-((2-丁基壬-3-烯-1-基)氧基)-1-側氧二十烷-10-基酯(以下，有時稱為“YS-122”)的合成)
在第8步驟中，使用(Z)-2-丁基壬-3-烯-1-醇代替2-丁基辛烷-1-醇進行反應，除此以外，和實施例16同樣地合成下述式(25)所表示的YS-122。
ESI-MS(M+H)計算值633.6、測量值634.7、1H NMR(400MHz，CDCl3)δ 5.60(1H，m)、5.36(1H，m)、4.87(1H，tt)、4.64(1H，d)、2.86(2H，m)、2.36(3H,s)、2.32(2H，t)、2.22(1H，m)、2.02(2H，m)、1.97(2H，m)、1.61(2H，m)、1.50(3H，m)、1.27(48H，m)、0.88(6H，m)
如下所述，如果利用所述式(25)所表示的化合物形成脂質複合物，則在保管一定時間的情況下的脂質複合物的粒徑增大得到抑制，而穩定性高。
[實施例19]
(1-甲基哌啶-4-羧酸(Z)-1-側氧-1-((5-丙基壬-2-烯-1-基)氧基)二十烷-10-基酯(以下，有時稱為“YS-123”)的合成)
在第8步驟中，使用(Z)-5-丙基壬-2-烯-1-醇代替2-丁基辛烷-1-醇進行反應，除此以外，和實施例16同樣地合成下述式(26)所表示的YS-123。
ESI-MS(M+H)計算值619.6、測量值620.7、1H NMR(400MHz， CDCl3)δ 5.60(2H，m)、4.87(1H，tt)、4.61(2H，d)、2.93(2H，d)、2.42(3H，s)、2.31(2H，t)、2.29(2H，t)、2.05(4H，t)、1.93(2H，m)、1.61(2H，m)、1.50(4H，m)、1.27(43H，m)、0.88(6H，m)
如下所述，如果利用所述式(26)所表示的化合物形成脂質複合物，則在保管一定時間的情況下的脂質複合物的粒徑增大得到抑制，而穩定性高。
[實施例20]
(1-甲基哌啶-4-羧酸1-側氧-1-((3-戊基辛基)氧基)二十烷-10-基酯(以下，有時稱為“YS-124”)的合成)
在第8步驟中，使用3-戊基辛烷-1-醇代替2-丁基辛烷-1-醇進行反應，除此以外，和實施例16同樣地合成下述式(27)所表示的YS-124。
ESI-MS(M+H)計算值635.6、測量值636.7、1H NMR(400MHz，CDCl3)δ 4.87(1H，tt)、4.06(2H，m)、2.81(2H，d)、2.27(6H，m)、2.02(2H，m)、1.97(2H，m)、1.77(4H，m)、1.61(2H，m)、1.50(3H，m)、1.43(1H，m)、1.27(43H，m)、0.88(9H，m)
如下所述，如果利用所述式(27)所表示的化合物形成脂質複合物，則在保管一定時間的情況下的脂質複合物的粒徑增大得到抑制，而穩定性高。
[實施例21]
(1-甲基哌啶-4-羧酸1-((2,4-二丙基庚基)氧基)-1-側氧二十烷-10- 基酯(以下，有時稱為“YS-125”)的合成)
在第8步驟中，使用2,4-二丙基庚烷-1-醇代替2-丁基辛烷-1-醇進行反應，除此以外，和實施例16同樣地合成下述式(28)所表示的YS-125。
ESI-MS(M+H)計算值635.6、測量值636.7、1H NMR(400MHz，CDCl3)δ 4.87(1H，tt)、3.95(1H，d)、3.55(2H，t)、2.96(2H，m)、2.45(3H，s)、2.32(2H，t)、2.22(1H，m)、2.02(2H，m)、1.97(2H，m)、1.61(2H，m)、1.50(3H，m)、1.27(49H，m)、0.88(12H，m)
如下所述，如果利用所述式(28)所表示的化合物形成脂質複合物，則在保管一定時間的情況下的脂質複合物的粒徑增大得到抑制，而穩定性高。
[實施例22]
(1-甲基哌啶-4-羧酸1-((3,4-二丙基庚基)氧基)-1-側氧二十烷-10-基酯(以下，有時稱為“YS-126”)的合成)
在第8步驟中，使用3,4-二丙基庚烷-1-醇代替2-丁基辛烷-1-醇進行反應，除此以外，和實施例16同樣地合成下述式(29)所表示的YS-126。
[化46]
ESI-MS(M+H)計算值635.6、測量值636.7、1H NMR(400MHz，CDCl3)δ 4.87(1H，tt)、4.06(2H，m)、3.00(2H，m)、2.45(5H，m)、2.27(2H，t)、2.02(2H，m)、1.97(2H，m)、1.61(2H，m)、1.50(3H，m)、1.43(2H，m)、1.27(42H，m)、0.88(12H，m)
如下所述，如果利用所述式(29)所表示的化合物形成脂質複合物，則在保管一定時間的情況下的脂質複合物的粒徑增大得到抑制，而穩定性高。
[實施例23]
(1-甲基哌啶-4-羧酸1-(4-(己基雙硫基)-3-((己基雙硫基)甲基)丁氧基)-1-側氧二十烷-10-基酯(以下，有時稱為“YS-127”)的合成)
在第8步驟中，使用4-(己基雙硫基)-3-((己基雙硫基)甲基)丁烷-1-醇代替2-丁基辛烷-1-醇進行反應，除此以外，和實施例16同樣地合成下述式(30)所表示的YS-127。
ESI-MS(M+H)計算值819.5、測量值820.6、1H NMR(400MHz，CDCl3)δ 4.86(1H，tt)、4.13(2H，t)、2.81(6H，d)、2.67(2H，t)、2.29(3H，t)、2.27(3H，s)、1.99(2H，m)、1.90(2H，dd)、1.79(2H，dt)、1.68(12H，m)、1.50(6H，m)、1.42(6H，m)、1.24(29H，m)、 0.88(9H，m)
[實施例24]
(1-甲基哌啶-4-羧酸1-((6-(丁基雙硫基)-3-(3-(丁基雙硫基)丙基)己基)氧基)-1-側氧二十烷-10-基酯(以下，有時稱為“YS-128”)的合成)
在第8步驟中，使用6-(丁基雙硫基)-3-(3-(丁基雙硫基)丙基)己烷-1-醇代替2-丁基辛烷-1-醇進行反應，除此以外，和實施例16同樣地合成下述式(31)所表示的YS-128。
ESI-MS(M+H)計算值819.5、測量值821.0、1H NMR(400MHz，CDCl3)δ 4.86(1H，tt)、4.08(2H，t)、2.81(2H，d)、2.67(8H，dd)、2.29(3H，t)、2.27(3H，s)、1.99(2H，m)、1.90(2H，dd)、1.79(2H，dt)、1.68(12H，m)、1.50(6H，m)、1.42(6H，m)、1.24(37H，m)、0.92-0.88(9H，m)
[實施例25]
(1-甲基吡咯啶-3-羧酸1-((2-丁基辛基)氧基)-1-側氧二十烷-10-基酯(以下，有時稱為“YS-129”)的合成)
在第6步驟中，使用1-甲基吡咯啶-3-羧酸代替1-甲基哌啶-4-羧酸進行反應，除此以外，和實施例16同樣地合成下述式(32)所表示的YS-129。
[化49]
ESI-MS(M+H)計算值607.6、測量值608.8、1H NMR(400MHz，CDCl3)δ 4.86(1H，tt)、3.98(2H，d)、3.05(1H，tt)、2.86(1H，tt)、2.67(2H，m)、2.49(1H，tt)、2.35(3H，s)、2.29(2H，t)、2.17(2H，m)、1.72(2H，s)、1.60(3H，m)、1.50(4H，m)、1.24(44H，m)、0.92-0.88(9H，m)
[實施例26]
(1-甲基四氫吖唉-3-羧酸1-((2-丁基辛基)氧基)-1-側氧二十烷-10-基酯(以下，有時稱為“YS-131”)的合成)
在第6步驟中，使用1-甲基四氫吖唉-3-羧酸代替1-甲基哌啶-4-羧酸進行反應，除此以外，和實施例16同樣地合成下述式(33)所表示的YS-131。
ESI-MS(M+H)計算值593.4、測量值594.7、1H NMR(400MHz，CDCl3)δ 4.87(1H，tt)、3.96(2H，d)、3.57(2H，d)、3.25(2H，d)、3.23(1H，tt)、2.32(3H，s)、2.29(2H，t)、2.03(2H，m)、1.61(4H，m)、1.49(4H，m)、1.27-1.21(41H，m)、0.87(9H，m)
[實施例27]
(1-乙基哌啶-4-羧酸1-((2-丁基辛基)氧基)-1-側氧二十烷-10-基酯(以下，有時稱為“YS-132”)的合成)
在第6步驟中，使用1-乙基哌啶-4-羧酸代替1-甲基哌啶-4-羧酸進行反應，除此以外，和實施例16同樣地合成下述式(34)所表示的YS-132。
ESI-MS(M+H)計算值636.0、測量值636.7、1H NMR(400MHz，CDCl3)δ 4.87(1H，ddd)、3.96(2H，d)、2.91(2H，d)、2.40(2H，dd)、2.29(4H，m)、2.03-1.93(4H，m)、1.80(2H，m)、1.61(4H，m)、1.49(4H，m)、1.27-1.21(41H，m)、1.08(4H，t)、0.87(9H，m)
[實施例28]
(10-((4-(二甲基胺基)丁醯基)氧基)二十烷酸2-丁基辛酯(以下，有時稱為“YS-133”)的合成)
在第6步驟中，使用4-(二甲基胺基)丁酸代替1-甲基哌啶-4-羧酸進行反應，除此以外，和實施例16同樣地合成下述式(35)所表示的YS-133。
ESI-MS(M+H)計算值609.6、測量值610.7、1H NMR(400MHz，CDCl3)δ 4.86(1H，tt)、3.96(2H，d)、2.33-2.26(6H，m)、2.21(6H，s)、2.03(2H，m)、1.80(2H，m)、1.61(4H，m)、1.49(4H，m)、1.27-1.21(41H，m)、0.87(9H，m)<組合物的製備(1)>
[實施例29]
(YS-102)
使用實施例1的陽離子性脂質(YS-102)而製備組合物。作為核酸，使用包含有義股5'-GGAfUfCAfUfCfUfCAAGfUfCfUfUAfCT＊T-3'(序列編號1、T：DNA、fU，fC=2'-氟代RNA、＊=硫代磷酸酯連結子)、反義股5'-GfUAAGAfCfUfUGAGAfUGAfUfCfCT＊T-3'(序列編號2、T：DNA、fU，fC=2'-氟代RNA、＊=硫代磷酸酯連結子)的鹼基序列的抑制Factor VII(凝血因數7)基因的表現的siRNA，且該siRNA經過退火(GeneDesign股份有限公司、以下有時稱為“Factor VII siRNA”)。
將Factor VII siRNA在25mM醋酸鈉(pH值4.0)中溶解為216μg/mL，而製成siRNA稀釋液。另外，將陽離子性脂質(YS-102)、DSPC(日本精化股份有限公司)、膽固醇(日本精化股份有限公司)、MPEG2000-DMG(日油股份有限公司)以60/8.5/30/1.5(莫耳比)的比例且以總脂質濃度成為15mM的方式溶解到乙醇中，而製成脂質溶液。將siRNA稀釋液與脂質溶液分別以2.4mL/分鐘、1.29mL/分鐘的流速進行混合，進而將25mM醋酸鈉(pH值4.0)以9.25mL/分鐘的流速進行混合，由此獲得脂質複合物水溶液。將所獲得的脂質複合物水溶液供於使用透析膜(商品名“Float-A-Lyzer G2”、美國斯百全(SPECTRUM)公司、50K MWCO)的透析，將外液換成磷酸緩衝液(PBS、pH值7.5)。透析後，進行濃縮及過濾滅菌，而獲得實施例29的 組合物。
[實施例30]
(YS-101)
使用實施例2的陽離子性脂質(YS-101)代替YS-102作為陽離子性脂質，除此以外，和實施例29同樣地獲得實施例30的組合物。
[實施例31]
(YS-103)
使用實施例3的陽離子性脂質(YS-103)代替YS-102作為陽離子性脂質，除此以外，和實施例29同樣地獲得實施例31的組合物。
[參考例1]
(YS-021)
使用下述式(36)所表示的1-甲基哌啶-4-羧酸1-(2-辛基環丙基)十七烷-8-基酯(以下，有時稱為“YS-021”)代替YS-102作為陽離子性脂質，除此以外，和實施例29同樣地獲得參考例1的組合物。
<組合物之分析(1)>
針對實施例29-31及參考例1的組合物，測定siRNA向脂質複合物中的封入率。
具體而言，利用無RNA酶水(RNase Free Water)稀釋組合物，使用Quant-iT RiboGreen RNA試劑(美國英傑(Invitrogen)公司)進行測定，將所測得的siRNA濃度(A)設為脂質複合物外液中所存在的 siRNA。另外，將組合物利用1% Triton X-100進行稀釋並測定，將所測得的siRNA濃度(B)設為組合物中的總siRNA濃度。接著，根據下式(F1)算出核酸的封入率。
封入率(%)=100-(A/B)×100(F1)
另外，利用粒徑測定裝置(商品名“Zetasizer Nano ZS”、英國瑪律文(Malvern)公司製造)測定脂質複合物的平均粒徑。
表1中表示siRNA的封入率及脂質複合物的平均粒徑(Z-平均)。
<組合物之製備(2)>
[實施例32]
(YS-111)
使用實施例5的陽離子性脂質(YS-111)而製備組合物。作為核酸，使用和實施例29的組合物所使用者相同的Factor VII siRNA。
將Factor VII siRNA利用25mM醋酸鈉(pH值4.0)溶解為181μg/mL，而製成siRNA稀釋液。另外，將陽離子性脂質(YS-111)、DSPC(日本精化股份有限公司)、膽固醇(日本精化股份有限公司)、MPEG2000-DMG(日油股份有限公司)以60/8.5/30/1.5(莫耳比)的比例且以總脂質濃度成為10mM的方式溶解到乙醇中，而製成脂質溶液。將siRNA稀釋液與脂質溶液分別以2.4mL/分鐘、1.29mL/分鐘的流速進行混合，進而將25mM醋酸鈉(pH值4.0)以5.0mL/分鐘的流速進行混合，由此獲得脂質複合物水溶液。將所獲得的脂質複合物水溶液供 於使用透析膜(商品名“Float-A-Lyzer G2”、美國斯百全(SPECTRUM)公司、50K MWCO)的透析，將外液換成磷酸緩衝液(PBS、pH值7.5)。透析後，進行濃縮及過濾滅菌，而獲得實施例32的組合物。
[實施例33]
(YS-112)
使用實施例6的陽離子性脂質(YS-112)代替YS-111作為陽離子性脂質，除此以外，和實施例32同樣地獲得實施例33的組合物。
[實施例34]
(YS-113)
使用實施例7的陽離子性脂質(YS-113)代替YS-111作為陽離子性脂質，除此以外，和實施例32同樣地獲得實施例34的組合物。
[實施例35]
(YS-114)
使用實施例8的陽離子性脂質(YS-114)代替YS-111作為陽離子性脂質，除此以外，和實施例32同樣地獲得實施例35的組合物。
[實施例36]
(YS-115)
使用實施例9的陽離子性脂質(YS-115)代替YS-111作為陽離子性脂質，除此以外，和實施例32同樣地獲得實施例36的組合物。
[實施例37]
(YS-116)
使用實施例10的陽離子性脂質(YS-116)代替YS-111作為陽離子性脂質，除此以外，和實施例32同樣地獲得實施例36的組合物。
[比較例1]
(ALN-319)
使用專利文獻1中記載的下述式(32)所表示的9-((4-(二甲基胺基)丁醯基)氧基)十七烷二酸二((Z)-壬-2-烯-1-基)酯(以下，有時稱為“ALN-319”)代替YS-111作為陽離子性脂質，依據專利文獻1中記載的方法進行合成並使用，除此以外，和實施例32同樣地獲得比較例1的組合物。
<組合物之分析(2)>
和實施例29的組合物同樣地，針對實施例32-37及比較例1的組合物，測定siRNA向脂質複合物中的封入率及脂質複合物的平均粒徑。表2中表示siRNA的封入率及脂質複合物的平均粒徑(Z-平均)。
<組合物之製備(3)>
[實施例38]
(YS-117)
使用實施例11的陽離子性脂質(YS-117)而製備組合物。作為核酸，使用和實施例29的組合物所使用者相同的Factor VII siRNA。
將Factor VII siRNA利用25mM醋酸鈉(pH值4.0)溶解為108μg/mL，而製成siRNA稀釋液。另外，將陽離子性脂質(YS-111)、DSPC(日本精化股份有限公司)、膽固醇(日本精化股份有限公司)、MPEG2000-DMG(日油股份有限公司)以60/8.5/30/1.5(莫耳比)的比例且以總脂質濃度成為6mM的方式溶解到乙醇中，而製成脂質溶液。將siRNA稀釋液與脂質溶液分別以2.4mL/分鐘、1.29mL/分鐘的流速進行混合，進而將25mM醋酸鈉(pH值4.0)以9.25mL/分鐘的流速進行混合，由此獲得脂質複合物水溶液。將所獲得的脂質複合物水溶液供於使用透析膜(商品名“Float-A-Lyzer G2”、美國斯百全(SPECTRUM)公司、50K MWCO)的透析，將外液換成磷酸緩衝液(PBS、pH值7.5)。透析後，進行濃縮及過濾滅菌，而獲得實施例38的組合物。
[實施例39]
(YS-117S)
使用實施例12的陽離子性脂質(YS-117S)代替YS-117作為陽離子性脂質，除此以外，和實施例38同樣地獲得實施例39的組合物。
[實施例40]
(YS-118)
使用實施例13的陽離子性脂質(YS-118)代替YS-117作為陽離子性脂質，除此以外，和實施例38同樣地獲得實施例40的組合物。
[實施例41]
(YS-118S)
使用實施例14的陽離子性脂質(YS-118S)代替YS-117作為陽離子性脂質，除此以外，和實施例38同樣地獲得實施例41的組合物。
[實施例42]
(YS-119)
使用實施例4的陽離子性脂質(YS-119)代替YS-117作為陽離子性脂質，除此以外，和實施例38同樣地獲得實施例42的組合物。
<組合物之分析(3)>
和實施例29的組合物同樣地，針對實施例38-42的組合物，測定siRNA向脂質複合物中的封入率及脂質複合物的平均粒徑。表3中表示siRNA的封入率及脂質複合物的平均粒徑(Z-平均)。
<組合物之製備(4)>
[實施例43]
(YS-119)
使用實施例4的陽離子性脂質(YS-119)而製備組合物。作為核酸，使用和實施例29的組合物所使用者相同的Factor VII siRNA。
將Factor VII siRNA利用25mM醋酸鈉(pH值4.0)溶解為108μg/mL，而製成siRNA稀釋液。另外，將陽離子性脂質(YS-119)、DSPC(日本精化股份有限公司)、膽固醇(日本精化股份有限公司)、MPEG2000-DMG(日油股份有限公司)以60/8.5/30/1.5(莫耳比)的比例且以總脂質濃度成為6mM的方式溶解到乙醇中，而製成脂質溶液。將siRNA稀釋液與脂質溶液分別以1.80mL/分鐘、0.97mL/分鐘的流速進行混合，進而將25mM醋酸鈉(pH值4.0)以6.94mL/分鐘的流速進行混合，由此獲得脂質複合物水溶液。將所獲得的脂質複合物水溶液供於使用透析膜(商品名“Float-A-Lyzer G2”、美國斯百全 (SPECTRUM)公司、50K MWCO)的透析，將外液換成磷酸緩衝液(PBS、pH值7.5)。透析後，進行濃縮及過濾滅菌，而獲得實施例43的組合物。
[比較例2]
(ALN-319)
使用所述ALN-319代替YS-119作為陽離子性脂質，除此以外，和實施例43同樣地獲得比較例2的組合物。
<組合物之分析(4)>
和實施例29的組合物同樣地，針對實施例43及比較例2的組合物，測定siRNA向脂質複合物中的封入率及脂質複合物的平均粒徑(Z-平均)。表4中表示siRNA的封入率及脂質複合物的平均粒徑。
<組合物的製備(5)>
[實施例44]
(YS-119)
使用實施例4的陽離子性脂質(YS-119)而製備組合物。作為核酸，使用和實施例29的組合物所使用者相同的Factor VII siRNA。
將Factor VII siRNA利用25mM醋酸鈉(pH值4.0)溶解為216μg/mL，而製成siRNA稀釋液。另外，將陽離子性脂質(YS-119)、膽固醇(日本精化股份有限公司)、MPEG2000-DPG(日油股份有限公司)以60/38.5/1.5(莫耳比)的比例且以總脂質濃度成為6mM的方式溶解到乙醇中，而製成脂質溶液。將siRNA稀釋液與脂質溶液分別以3.36mL/分鐘、1.81mL/分鐘的流速進行混合，進而將25mM醋酸鈉(pH值 4.0)以12.95mL/分鐘的流速進行混合，由此獲得脂質複合物水溶液。將所獲得的脂質複合物水溶液供於使用透析膜(商品名“Float-A-Lyzer G2”、美國斯百全(SPECTRUM)公司、50K MWCO)的透析，將外液換成磷酸緩衝液(PBS、pH值7.5)。透析後，進行濃縮及過濾滅菌，而獲得實施例44的組合物。
[實施例45]
(YS-120)
使用實施例15的陽離子性脂質(YS-120)代替YS-119作為陽離子性脂質，除此以外，和實施例44同樣地獲得實施例45的組合物。
<組合物的分析(5)>
和實施例29的組合物同樣地，針對實施例44及45的組合物，測定siRNA向脂質複合物中的封入率及脂質複合物的平均粒徑(Z-平均)。表5中表示siRNA的封入率及脂質複合物的平均粒徑。
<組合物之製備(6)>
[實施例46]
(YS-120)
使用實施例16的陽離子性脂質(YS-120)而製備組合物。作為核酸，使用和實施例29的組合物所使用者相同的Factor VII siRNA。
將Factor VII siRNA利用25mM醋酸鈉(pH值4.0)溶解為450μg/mL，而製成siRNA稀釋液。另外，將陽離子性脂質(YS-120)、DSPC(日本精化股份有限公司)、膽固醇(日本精化股份有限公司)、MPEG2000-DMG(日油股份有限公司)以60/8.5/30/1.5(莫耳比)的比例 且以總脂質濃度成為40mM的方式溶解到乙醇中，而製成脂質溶液。將脂質相對於siRNA的比設為質量比0.06，將siRNA稀釋液與脂質溶液分別以4.0mL/分鐘、1.3mL/分鐘的流速進行混合，由此獲得脂質複合物水溶液。將所獲得的脂質複合物水溶液供於使用透析膜(商品名“Float-A-Lyzer G2”、美國斯百全(SPECTRUM)公司、50K MWCO)的透析，將外液換成磷酸緩衝液(PBS、pH7.4)。透析後，進行濃縮及過濾滅菌，而獲得實施例46的組合物。
[實施例47]
(YS-121)
使用實施例17的陽離子性脂質(YS-121)代替YS-120作為陽離子性脂質，除此以外，和實施例46同樣地獲得實施例47的組合物。
[實施例48]
(YS-122)
使用實施例18的陽離子性脂質(YS-122)代替YS-120作為陽離子性脂質，除此以外，和實施例46同樣地獲得實施例48的組合物。
[實施例49]
(YS-123)
使用實施例19的陽離子性脂質(YS-123)代替YS-120作為陽離子性脂質，除此以外，和實施例46同樣地獲得實施例49的組合物。
[實施例50]
(YS-124)
使用實施例20的陽離子性脂質(YS-124)代替YS-120作為陽離子性脂質，除此以外，和實施例46同樣地獲得實施例50的組合物。
[實施例51]
(YS-125)
使用實施例21的陽離子性脂質(YS-125)代替YS-120作為陽離子性 脂質，除此以外，和實施例46同樣地獲得實施例51的組合物。
[實施例52]
(YS-126)
使用實施例22的陽離子性脂質(YS-126)代替YS-120作為陽離子性脂質，除此以外，和實施例46同樣地獲得實施例52的組合物。
<組合物之分析(6)>
和實施例29的組合物同樣地，針對實施例46-52的組合物，測定siRNA向脂質複合物中的封入率及脂質複合物的平均粒徑(Z-平均)。表6中表示siRNA的封入率及脂質複合物的平均粒徑。
<組合物之分析(7)>
將實施例46-52的組合物在密閉的玻璃小瓶中在4℃下保管，和實施例29的組合物同樣地測定保管前、保管後第3個月及第6個月的粒徑(Z-平均及多分散指數)。
表7中表示實施例46-52的組合物的平均粒徑的隨時間經過而產生的變化及保管後第6個月和保管前的粒徑變化(d)。包含YS-121以外的陽離子性脂質的組合物在保管期間顯示出脂質複合物的粒徑的增大得到抑制。
<組合物之製備(7)>
[實施例53]
(YS-120)
和“組合物之製備(6)”同樣地使用實施例16的陽離子性脂質(YS-120)而製備組合物。
[實施例54]
(YS-124)
使用實施例23的陽離子性脂質(YS-127)代替YS-120作為陽離子性脂質，除此以外，和實施例53同樣地獲得實施例54的組合物。
[比較例3]
(ALN-319)
使用所述ALN-319代替YS-120作為陽離子性脂質，除此以外，和實施例53同樣地獲得比較例3的組合物。
<組合物的分析(8)>
和實施例29的組合物同樣地，針對實施例53、54及比較例3的組合物，測定siRNA向脂質複合物中的封入率及脂質複合物的平均粒徑(Z-平均)。表8中表示siRNA的封入率及脂質複合物的平均粒徑。
<組合物的分析(9)>
針對實施例53、54及比較例3的組合物，在各組合物的製備中藉由siRNA稀釋液和脂質溶液的混合而產生脂質複合物後，立即將該脂質複合物在PBS中進行透析後，在密閉的玻璃小瓶中在4℃下保管後，利用粒徑測定裝置(商品名“Zetasizer Nano ZS”、英國瑪律文(Malvern)公司製造)測定第2個月及第6個月的粒徑(Z-平均及多分散指數)。
表9中表示實施例53、54及比較例3的組合物的平均粒徑的隨時間經過而產生的變化及保管後第6個月和剛混合後的粒徑變化(d)。包含YS-120或YS-124的陽離子性脂質的組合物和比較例3的組合物相比，在保管期間中顯示出脂質複合物的粒徑的增大得到抑制。
<組合物之製備(8)>
[實施例55]
(YS-120)
和“組合物之製備(6)”同樣地使用實施例16的陽離子性脂質(YS-120)而製備組合物。
[實施例56]
(YS-127)
使用實施例23的陽離子性脂質(YS-127)代替YS-120作為陽離子性脂質，除此以外，和實施例55同樣地獲得實施例56的組合物。
[實施例57]
(YS-128)
使用實施例24的陽離子性脂質(YS-128)代替YS-120作為陽離子性脂質，除此以外，和實施例55同樣地獲得實施例57的組合物。
[實施例58]
(YS-129)
使用實施例25的陽離子性脂質(YS-129)代替YS-120作為陽離子性脂質，除此以外，和實施例55同樣地獲得實施例58的組合物。
<組合物之分析(10)>
和實施例29的組合物同樣地，針對實施例55-58的組合物，測定siRNA向脂質複合物中的封入率及脂質複合物的平均粒徑(Z-平均)。表10中表示siRNA的封入率及脂質複合物的平均粒徑。
<組合物之製備(9)>
[實施例59]
(YS-101)
和“組合物之製備(6)”同樣地使用實施例2的陽離子性脂質(YS-101)而製備組合物。
[實施例60]
(YS-131)
使用實施例26的陽離子性脂質(YS-131)代替YS-101作為陽離子性脂質，除此以外，和實施例59同樣地獲得實施例60的組合物。
[實施例61]
(YS-132)
使用實施例27的陽離子性脂質(YS-132)代替YS-101作為陽離子性脂質，除此以外，和實施例59同樣地獲得實施例61的組合物。
[實施例62]
(YS-133)
使用實施例28的陽離子性脂質(YS-133)代替YS-101作為陽離子性脂質，除此以外，和實施例59同樣地獲得實施例62的組合物。
[實施例63]
(YS-120)
使用實施例16的陽離子性脂質(YS-120)代替YS-101作為陽離子性脂質，除此以外，和實施例59同樣地獲得實施例63的組合物。
[比較例4]
(ALN-319)
使用所述ALN-319代替YS-101作為陽離子性脂質，除此以外，和實施例59同樣地獲得比較例4的組合物。
<組合物之分析(11)>
和實施例29的組合物同樣地，針對實施例59-63及比較例4的組合物，測定siRNA向脂質複合物中的封入率及脂質複合物的平均粒徑(Z-平均)。表11中表示siRNA的封入率及脂質複合物的平均粒徑。
<動物實驗(1)>
將實施例29-31及參考例1的組合物以封入到脂質複合物中的Factor VII siRNA濃度成為10μg/mL的方式利用PBS進行稀釋。將各組合物以10mL/kg的投予容量對C57/BL6小鼠(5週齡、雄性)進行尾靜脈內投予，從投予起24小時後在麻醉下實施採血及肝臟的採集。藉由離心將血漿從血液分離，利用市售的套組(商品名“BIOPHEN FVII”、HYPHEN BioMed公司)對血漿中的Factor VII蛋白質濃度進行定量。作為陰性對照，對投予了PBS的組群進行相同處理。
將PBS投予組的Factor VII蛋白質濃度設為100%，以相對值算出組合物投予組的Factor VII蛋白質濃度。另外，將肝臟均質化，利用甲醇萃取構成組合物的脂質後，藉由LC-MS對陽離子性脂質進行定量。將所投予的陽離子性脂質的量設為100%，以相對值算出肝臟中殘存的陽離子性脂質的量。將結果示於表12。
<動物實驗(2)>
將實施例32-37及比較例1的組合物與“動物實驗(1)”同樣地進行稀釋，並對C57/BL6小鼠(5週齡、雄性)進行投予，算出投予24小時後的血漿中的Factor VII蛋白質濃度的相對值及肝臟中殘存的陽離子性脂質量的相對值。將結果示於表13。
<動物實驗(3)>
將實施例38-42的組合物和“動物實驗(1)”同樣地進行稀釋，並對C57/BL6小鼠(5週齡、雄性)進行投予，算出投予24小時後的血漿中的Factor VII蛋白質濃度的相對值及肝臟中殘存的陽離子性脂質量的相對值。將結果示於表14。
<動物實驗(4)>
將實施例43及比較例2的組合物以封入到脂質複合物中的Factor VII siRNA濃度成為1μg/mL或5μg/mL的方式利用PBS進行稀釋。將各組合物以10mL/kg的投予容量對C57/BL6小鼠(5週齡、雄性)進行尾靜脈內投予，從投予起24小時後在麻醉下實施採血及肝臟的採集。藉由離心將血漿從血液分離，利用市售的套組(商品名“BIOPHEN FVII”、HYPHEN BioMed公司)對血漿中的Factor VII蛋白質濃度進行定量。作為陰性對照，對投予了PBS的組群進行相同處理。
將PBS投予組的Factor VII蛋白質濃度設為100%，以相對值算出組合物投予組的Factor VII蛋白質濃度。將結果示於表15及圖1。實施例43的組合物顯示出高於比較例2的組合物的Factor VII蛋白質的表現抑制效果。
<動物實驗(5)>
將實施例44及45的組合物以封入到脂質複合物中的Factor VII siRNA濃度成為1μg/mL或5μg/mL的方式利用PBS進行稀釋。將各組合物以10mL/kg的投予容量對C57/BL6小鼠(5週齡、雄性)進行尾靜脈內投予，從投予起24小時後在麻醉下實施採血及肝臟的採集。藉由離心將血漿從血液分離，利用市售的套組(商品名“BIOPHEN FVII”、HYPHEN BioMed公司)對血漿中的Factor VII蛋白質濃度進行定量。作為陰性對照，對投予了PBS的組群進行相同處理。
將PBS投予組的Factor VII蛋白質濃度設為100%，以相對值算出組合物投予組的Factor VII蛋白質濃度。將結果示於表16及圖2。實施例44及45的組合物均顯示出較高的Factor VII蛋白質的表現抑制效果。
<動物實驗(6)>
將實施例46-52的組合物和“動物實驗(5)”同樣地進行稀釋，並對C57/BL6小鼠(5週齡、雄性)進行投予，算出投予24小時後的血漿中的Factor VII蛋白質濃度的相對值。將結果示於表17。
<動物實驗(7)>
將實施例53、54及比較例3的組合物以封入到脂質複合物中的Factor VII siRNA濃度成為2μg/mL或10μg/mL的方式利用PBS進行稀釋。將各組合物以10mL/kg的投予容量對ICR小鼠(6週齡、雌性)進行尾靜脈內投予，從投予起24小時後在麻醉下實施採血及肝臟的採集。藉由離心將血漿從血液分離，利用市售的套組(商品名“BIOPHEN FVII”、HYPHEN BioMed公司)對血漿中的Factor VII蛋白質濃度進行定量。作為陰性對照，對投予了PBS的組群進行相同處理。
將PBS投予組的Factor VII蛋白質濃度設為100%，以相對值算出組合物投予組的Factor VII蛋白質濃度。將結果示於表18。實施例53及54的組合物顯示出高於比較例3的組合物的Factor VII蛋白質的表現抑制效果。
<動物實驗(8)>
將實施例55-58的組合物和“動物實驗(7)”同樣地進行稀釋，並對ICR小鼠(6週齡、雌性)進行投予，算出投予24小時後的血漿中的Factor VII蛋白質濃度的相對值。將結果示於表19。
<動物實驗(9)>
將實施例59-63及比較例4的組合物和“動物實驗(7)”同樣地進行稀釋，並對ICR小鼠(5週齡、雌性)進行投予，算出投予24小時後的血漿中的Factor VII蛋白質濃度的相對值。將結果示於表20。
[產業上的利用可能性]
根據本發明，可提供能夠將核酸高效率地釋放到細胞質中的陽離子性脂質。
<110> 衛材R&D管理股份有限公司相互藥工股份有限公司
<120> 陽離子性脂質、包含核酸之組合物及該組合物之製造方法
<130> PC-20381
<150> JP2014-266548
<151> 2014-12-26
<160> 4
<170> PatentIn第3.5版
<210> 1
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA有義序列
<220>
<221> 生物學特性無法用特性表關鍵字描述之序列
<222> (1)..(3)
<223> RNA
<220>
<221> 生物學特性無法用特性表關鍵字描述之序列
<222> (4)..(5)
<223> 氟代RNA
<220>
<221> 生物學特性無法用特性表關鍵字描述之序列
<222> (5)..(6)
<223> RNA
<220>
<221> 生物學特性無法用特性表關鍵字描述之序列
<222> (7)..(10)
<223> 氟代RNA
<220>
<221> 生物學特性無法用特性表關鍵字描述之序列
<222> (11)..(13)
<223> RNA
<220>
<221> 生物學特性無法用特性表關鍵字描述之序列
<222> (14)..(17)
<223> 氟代RNA
<220>
<221> 生物學特性無法用特性表關鍵字描述之序列
<222> (18)..(18)
<223> RNA
<220>
<221> 生物學特性無法用特性表關鍵字描述之序列
<222> (19)..(19)
<223> 氟代RNA
<220>
<221> 生物學特性無法用特性表關鍵字描述之序列
<222> (20)..(21)
<223> DNA
<220>
<221> 生物學特性無法用特性表關鍵字描述之序列
<222> (20)..(21)
<223> 硫代磷酸酯連結子
<400> 1
<210> 2
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反義序列
<220>
<221> 生物學特性無法用特性表關鍵字描述之序列
<222> (1)..(1)
<223> RNA
<220>
<221> 生物學特性無法用特性表關鍵字描述之序列
<222> (2)..(2)
<223> 氟代RNA
<220>
<221> 生物學特性無法用特性表關鍵字描述之序列
<222> (3)..(6)
<223> RNA
<220>
<221> 生物學特性無法用特性表關鍵字描述之序列
<222> (7)..(9)
<223> 氟代RNA
<220>
<221> 生物學特性無法用特性表關鍵字描述之序列
<222> (10)..(13)
<223> RNA
<220>
<221> 生物學特性無法用特性表關鍵字描述之序列
<222> (14)..(14)
<223> 氟代RNA
<220>
<221> 生物學特性無法用特性表關鍵字描述之序列
<222> (15)..(16)
<223> RNA
<220>
<221> 生物學特性無法用特性表關鍵字描述之序列
<222> (17)..(19)
<223> 氟代RNA
<220>
<221> 生物學特性無法用特性表關鍵字描述之序列
<222> (20)..(21)
<223> DNA
<220>
<221> 生物學特性無法用特性表關鍵字描述之序列
<222> (20)..(21)
<223> 硫代磷酸酯連結子
<400> 2
<210> 3
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA有義序列
<220>
<221> 生物學特性無法用特性表關鍵字描述之序列
<222> (4)..(4)
<223> 2'-甲氧基RNA
<220>
<221> 生物學特性無法用特性表關鍵字描述之序列
<222> (10)..(10)
<223> 2'-甲氧基RNA
<220>
<221> 生物學特性無法用特性表關鍵字描述之序列
<222> (14)..(14)
<223> 2'-甲氧基RNA
<220>
<221> 生物學特性無法用特性表關鍵字描述之序列
<222> (18)..(18)
<223> 2'-甲氧基RNA
<400> 3
<210> 4
<211> 21
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> siRNA反義序列
<220>
<221> 生物學特性無法用特性表關鍵字描述之序列
<222> (8)..(8)
<223> 2'-甲氧基RNA
<220>
<221> 生物學特性無法用特性表關鍵字描述之序列
<222> (17)..(17)
<223> 2'-甲氧基RNA
<400> 4

Claims (8)

  1. 一種化合物或其藥學上所容許之鹽，該化合物係選自由下述式(1)-(11)所表示之化合物所組成之群中， [化4] [化8]
  2. 如請求項1之化合物或其藥學上所容許之鹽，其中該化合物係選自由下述式(1)及(6)-(9)所表示之化合物所組成之群中，[化12] [化16]
  3. 如請求項1或2之化合物或其藥劑學上所容許之鹽，其中該化合物係以下述式(1)表示，
  4. 如請求項1或2之化合物或其藥劑學上所容許之鹽，其中該化合物係以下述式(6)表示，
  5. 如請求項1或2之化合物或其藥劑學上所容許之鹽，其中該化合物係以下述式(8)表示，[化19]
  6. 一種脂質複合物，其含有(I)如請求項1至5中任一項之化合物或其藥學上所容許之鹽、及(II)選自由中性脂質、聚乙二醇修飾脂質及固醇所組成之群中之至少一種脂質。
  7. 一種組合物，其含有(I)如請求項1至5中任一項之化合物或其藥學上所容許之鹽、(II)選自由中性脂質、聚乙二醇修飾脂質及固醇所組成之群中之至少一種脂質、以及(III)核酸。
  8. 一種組合物之製造方法，其包括如下步驟：將含有(I)如請求項1至5中任一項之化合物或其藥學上所容許之鹽及(II)選自由中性脂質、聚乙二醇修飾脂質及固醇所組成之群中之至少一種脂質的含極性有機溶劑之水溶液、與含有(III)核酸之水溶液進行混合而獲得混合液之步驟；及使混合液中之極性有機溶劑之含量減少之步驟。
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