TW201609784A

TW201609784A - 新穎脲化合物

Info

Publication number: TW201609784A
Application number: TW103136540A
Authority: TW
Inventors: 陶德菲爾茲
Original assignee: 美國禮來大藥廠
Priority date: 2013-11-01
Filing date: 2014-10-22
Publication date: 2016-03-16
Also published as: ES2646125T3; KR20160060138A; ME02839B; RS56417B1; SG11201602950UA; IL244896A0; CA2924516C; EP3063162B1; HRP20171514T1; HK1222661A1; IL244896B; MA38991B1; CN105636972B; MA38991A1; NZ717880A; BR112016008704A8; NO3099623T3; PH12016500809A1; AU2014342612A1; AP2016009137A0

Abstract

本發明提供一種式I之化合物： □或其醫藥上可接受之鹽。

Description

新穎脲化合物

本發明係關於新穎脲化合物，包含該等化合物之醫藥組合物，利用該等化合物治療生理性失調症之方法，以及用於合成該等化合物的中間物及方法。

本發明屬於糖尿病以及與高血糖症相關聯的其他疾病及失調症之治療的領域。糖尿病是由高水平血糖表徵的一組疾病。根據2011國家糖尿病事實表(美國衛生及公共服務部，疾病控制及預防中心)，其影響約兩千五百方美國人，也是美國第七大死因。鈉偶合之葡萄糖協同轉運蛋白(SGLT’s)是已知負責吸收碳水化合物(諸如葡萄糖)的轉運蛋白之一。更具體而言，SGLT1係負責轉運葡萄糖穿過小腸的刷狀緣膜。對SGLT1之抑制可導致葡萄糖在小腸中之吸收減少，因此提供一種治療糖尿病的有效方法。

美國專利申請公開案第2008/0139484 A1號揭示具有SGLT1及/或SGLT2抑制活性之經1-(β-D-吡喃葡萄糖基)-3-取代的含氮雜環化合物，將其進一步揭示成用於預防或治療與高血糖症相關聯的疾病(諸如，糖尿病)。此外，美國專利第7,851,617號揭示吲哚衍生物，其為SGLT抑制劑並進一步揭示成用於治療或預防糖尿病以及相關病症。

需要用於糖尿病的替代性藥物以及治療。本發明提供SGLT1之某些新穎抑制劑，其可適於治療糖尿病。

因此，本發明提供一種式I之化合物：

或其醫藥上可接受之鹽。

本發明亦提供一種治療患者之糖尿病之方法，其包括對有此治療需要之患者投與有效量之式I之化合物，或其醫藥上可接受之鹽。本發明進一步提供一種治療患者之1型糖尿病之方法，其包括對有此治療需要之患者投與有效量之式I之化合物，或其醫藥上可接受之鹽。此外，本發明提供一種治療患者之2型糖尿病之方法，其包括對有此治療需要之患者投與有效量之式I之化合物，或其醫藥上可接受之鹽。本發明亦提供一種治療患者之葡萄糖耐受性受損(IGT)、空腹血糖受損(IFG)、或代謝症候群之方法，其包括對有此治療需要之患者投與有效量之式I之化合物，或其醫藥上可接受之鹽。

此外，本發明提供一種用於治療，特定言之用於治療糖尿病之式I之化合物或其醫藥上可接受之鹽。此外，本發明提供一種用於治療1型糖尿病之式I之化合物或其醫藥上可接受之鹽。此外，本發明提供一種用於治療2型糖尿病之式I之化合物或其醫藥上可接受之鹽。本發明另外提供一種式I之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其用於治療受損葡萄糖耐受性(IGT)、受損空腹葡萄糖(IFG)、或代謝症候群。本發明亦提供式I之化合物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其用於製備用於治療糖尿病之藥物。此外，本發明亦提供式I之化合物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其用於製備用於治療1型糖尿病之藥物。本發明亦提供式I之化合物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其用於製備用於治療2型糖尿病之藥物。本發明亦提供式I之化合物或其醫藥上可接受之鹽之用途，其用於製備用於治療IGT、IFG、或代謝症候群之藥物。

本發明進一步提供一種醫藥組合物，其包含式I之化合物，或其醫藥上可接受之鹽，以及一種或多種醫藥上可接受之載劑、稀釋劑或賦型劑。本發明亦涵蓋用於合成式I之化合物之新穎中間物及製程。

如文中所用，術語「治療」或「用於治療」包含抑制、減緩、停止、或逆轉現有症狀或疾病之進程或嚴重程度。

如文中所用，術語「患者」係指哺乳動物，諸如小鼠、豚鼠、大鼠、狗、或人類。應瞭解，較佳患者係人類。

如文中所用，術語「有效量」係指本發明化合物、或其醫藥上可接收鹽之量或劑量，在對患者單或多劑量投與後，此提供患者在診斷或治療下之所需效果。

有效量可輕易地由主治診斷醫生(如技術人員)藉由使用已知技術以及藉由觀察在相似環境下得到的結果來確定。在確定針對患者之有效量時，主治診斷醫生要考慮多個因素，包括但不限於：哺乳動物種類；其大小、年齡、以及健康情況；所涉及之特定疾病或失調症；疾病或失調症所涉及程度或嚴重程度；個體患者之反應；所投與之特定化合物；投與模式；所投與製劑之生物利用率特徵；所選擇之給藥方案；伴隨藥物之使用；以及其他有關環境。

式I之化合物在寬劑量範圍內普遍有效。例如，每天劑量一般係在約0.01至約30mg/kg體重之範圍內。在一些情況中，低於上述範圍下限之劑量值可能高於適量，而在其他情況下，可使用更大劑量，而不會引起任何有害的副作用，因此，以上劑量範圍無意以任何方式限制本發明範圍。

較佳地，將本發明化合物調配成以使化合物具有生物可利用性之任何途徑投與之醫藥組合物。最佳地，該等組合物係經口投與。該等醫藥組合物以及製備其之製程在技術中係熟知的。(參見，例如， Remington：The Science and Practice of Pharmacy(D.B.Troy編輯，第21版，Lippincott,Williams & Wilkins,2006)。

在本發明之另一態樣中，本發明組合物係與一種或多種治療劑(例如抗糖尿劑)組合投與。以組合方式投與包含同時或連續投與。此外，組合的同時投與可以每種治療劑之單一組合劑量或分開劑量形式。抗糖尿病藥劑之實例包含二甲雙胍(metformin)；DPPIV抑制劑，例如西他列汀(sitagliptin)或利拉利汀(linagliptin)；磺醯脲，例如格列美脲(glimepiride)；噻唑烷二酮，例如吡格列酮(pioglitazone)；基礎胰島素，例如甘精胰島素；速效胰島素，例如HUMALOG或NOVOLOG；GLP-1激動劑，例如艾塞那肽(exenatide)或利拉魯肽(liraglutide)；SGLT2抑制劑，例如達格列淨(dapagliflozin)或艾帕列淨(empagliflozin)；胰高血糖素受體拮抗劑，例如LY2409021等。

式I之化合物係如以下製法、實例以及流程圖中所述般製備。試劑及起始物對一般技術人員而言可輕易獲得。除非另外指出，否則所有取代基係如上定義。應理解，所有流程圖、製法、以及實例無意以任何方式限制本發明範圍。

解析實例包含選擇性結晶技術或對掌性層析。(參見，例如，J.Jacques等人，「Enantiomers,Racemates,and Resolutions」，John Wileyand Sons,Inc.,1981，以及E.L.Eliel與S.H.Wilen,「Stereochemistry of Organic Compounds」，Wiley-Interscience,1994)。對於一般技術人員應進一步明瞭，式I的單獨非對映體或幾何異構體或得到式I的中間體之單獨非對映體或幾何異構體之藉由層析、對掌性層析或選擇性結晶之單離可在合成的任意適宜點發生。

如文中所用，「δ」係指四甲基矽烷低場之百萬分之一；「mins」係指分鐘；「hr」係指小時；「THF」係指四氫呋喃；「EtOAc」係指乙酸乙酯；「MeOH」係指甲醇或甲基醇；「EtOH」係指乙醇或乙基醇；「TFA」係指三氟乙酸；「DPPA」係指疊氮化磷酸二苯酯；「HATU」係指六氟磷酸O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'四甲基脲鎓；「CDI」係指1,1'-羰基二咪唑；「DDQ」係指2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌；「Xphos」係指2-二環己基膦基-2',4',6'-三異丙基聯苯；「MTBE」係指甲基第三丁基醚；「HPLC」係指高效液相層析；「Ac」係指具有以下結構之乙醯基取代基：以及術語「BOC」係指第三丁氧基羰基保護基。

醫藥上可接受之鹽以及用於製備其之常見方法在本技術中係熟知的。參見，例如，Gould,P.L.，「Salt selection for basic drugs」，International Journal of Pharmaceutics,33：201-217(1986)；Bastin等人，「Salt Selection and Optimization Procedures for Pharmaceutical New Chemical Entities」，Organic Process Research and Development,4：427-435(2000)；及S.M.Berge等人，「Pharmaceutical Salts」，Journal of Pharmaceutical Sciences，第66卷第1期，1977年1月。熟習合成技術的人員將知曉以胺形式的式I之化合物為有機鹼，並且可利用一般技術人員熟知的技術及條件，輕易地轉化成並單離為醫藥上可接受之鹽。

流程圖I

製法1

4-甲基吲哚啉。

方法A

在室溫下，將4-甲基-1H-吲哚(500g；1.0當量；3.811mol)及乙酸(2000mL)加入至20L燒瓶中。使該溶液冷卻至0℃(內部溫度)，且然後分5等份添加氰基硼氫化鈉(359.2g；1.5當量；5.71mol)，但不使反應混合物升溫至10℃以上。當添加完畢時，於室溫下攪拌該反應混合物2小時。使反應混合物冷卻到0℃並加冰(5Kg)。非常緩慢地添加預先冷卻(5℃)之氫氧化鈉溶液(4M)，以使反應混合物pH達到14。利用乙酸乙酯(2 X 10L)萃取反應混合物。合併有機層並利用水(1 X 10L)及鹽水(1 X 10L)沖洗。在無水硫酸鈉上乾燥，過濾，並在減壓下濃縮，得到標題化合物(460g，90%產率)：質譜(m/z)：134(M+1)。

方法B

將三氟乙酸(7.62mol；576.42mL)注入配備溫度計、磁力攪拌器、氮導管、及滴液漏斗之2000mL 3頸燒瓶中。將該燒瓶放入冰/水浴中並使該混合物冷卻至13℃(內部溫度)。在3分鐘內添加4-甲基-1H-吲哚(762.33mmol；94.25mL；100.00g)，不使反應混合物溫度超出25℃。添加完畢後，攪拌該混合物約1分鐘，使反應混合物溫度達到20℃，然後將燒瓶從冰浴移開並在20℃下攪拌10分鐘。在41分鐘內，將三乙基矽烷(876.68mmol；140.47mL；101.94g)滴加至反應中，使溫度升至25℃，然後如需要藉由使用冷水浴將溫度維持在25℃與30℃之間。當添加完畢後，攪拌反應混合物80分鐘。使反應混合物冷卻至10℃，然後在攪拌下，傾入冰(1000g)、5M鹽酸(800ml)及MTBE(2000ml)之混合物中。注意：重要的是驟冷成雙相系統以阻止雜質形成。分離水相並依序利用鹽酸(400ml；2M)及鹽酸(2 x 200ml；2M)萃取有機物。合併水性萃取物並在冰水中冷卻。添加50重量% NaOH以達到pH>10，維持溫度在30℃以下。利用MTBE(1000ml，然後200ml)萃取水性混合物。合併有機萃取物，在無水硫酸鈉上乾燥，過濾，並在減壓下乾燥，得到標題化合物(73g；68%產率)：質譜(m/z)：134(M+1)。

方法C

在室溫下，在攪拌下，將4-甲基-1H-吲哚(114.35mmol；15.00g) 之四氫呋喃(75.00mL)溶液加入單水合對甲苯磺酸(137.22mmol；23.63g)之水(75.00mL)溶液中。在一層二氧化碳下，添加5%碳載鉑(Johnson Matthey型103；1.50g)。將該混合物置於氫氣氛圍(4.2bar)中並在室溫下振蕩過夜。利用氫氧化鈉(2M水溶液；148.65mmol；74.33mL)稀釋反應混合物並與MTBE(150.00mL)一起攪拌。藉由矽藻土過濾混合物並利用MTBE(50mL)沖洗墊子。分離濾液並利用MTBE(100mL)萃取水溶液。合併有機萃取物，在無水硫酸鈉上乾燥，過濾，並在減壓下乾燥，得到標題化合物(14.80g；97.17%產率)：質譜(m/z)：134(M+1)。

製法2

乙酸[(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-三乙醯氧基-6-(4-甲基吲哚啉-1-基)四氫吡喃-2-基]甲酯

方法A

流程圖I，步驟A：用水(25mL)濕潤D-葡萄糖(180.2mmol)，且然後添加4-甲基吲哚啉(180.2mmol)之乙醇(200mL)溶液。利用氮氣淨化該混合物並在氮氣氛圍下，加熱至回流過夜。然後，冷卻至室溫並在減壓下濃縮。向所得殘餘物添加二氯甲烷(200mL)、N,N-二甲基胺基吡啶(9.0mmol)、及吡啶(2.5mol)。使該混合物在冰浴中冷卻，然後在30分鐘內滴加乙酸酐(1.1mol)。於減壓下濃縮混合物，利用乙酸乙酯(500mL)稀釋殘餘物，並利用檸檬酸(飽和水溶液；50mL)的水(500mL)溶液沖洗混合物。用鹽水(500mL)洗滌，在硫酸鈉上乾燥，過濾，並在減壓下濃縮。添加乙醇(500mL)並在50℃下混合10分鐘。使混合物冷卻至室溫且然後放入冰/水中。過濾所得混合物並在減壓下乾燥，得到標題化合物(32g；38.32%產率)：質譜(m/z)：464.2(M+1)。

方法B

流程圖I，步驟A：將4-甲基吲哚啉(1000g；7.51mol)在乙醇：水(8000ml：1000ml)中之溶液及D-葡萄糖(1480g；8.25mol)注入20L三頸燒瓶中。在80℃下，加熱該混合物6小時。於減壓下濃縮混合物並將殘餘物溶於吡啶：二氯甲烷(8000ml：8000ml)中。添加二甲胺基吡啶(91.79g；0.75mol)並使反應混合物冷卻至10℃(內部溫度)。滴加乙酸酐(9000ml)。添加完畢後，在45℃下攪拌反應混合物1小時，然後室溫下攪拌過夜。於減壓下濃縮混合物。將乙酸乙酯(20L)及水(10L)加入殘餘物中。分離有機層並利用乙酸乙酯(2 X 10L)萃取水層。合併有機層並利用飽和檸檬酸水溶液(5kg)沖洗。在無水硫酸鈉上乾燥有機層，過濾，並在減壓下濃縮。使殘餘物從乙醇中結晶，得到標題化合物(3205.5g；92.11%產率)：質譜(m/z)：464.2(M+1)。

方法C

流程圖I，步驟A：用水(66mL)濕潤D-葡萄糖(517.30mmol；93.20g)，然後添加4-甲基吲哚啉(65.62g；492.67mmol)之乙醇(394mL)溶液。利用氮氣淨化該混合物並在氮氣氛圍下，加熱至回流過夜。然後，冷卻至室溫並在減壓下濃縮。將二氯甲烷(394mL)、三乙胺(2.82mol；393.72mL)、及N,N-二甲基-4-吡啶胺(24.63mmol；3.01g)加入所得殘餘物中。使該混合物在冰浴中冷卻，然後在30分鐘內滴加乙酸酐(3.94mol；372.57mL)。於減壓下濃縮混合物，利用乙酸乙酯(984mL)稀釋殘餘物，並利用檸檬酸(飽和水溶液；50mL)的水(200mL)溶液沖洗混合物。分層並利用乙酸乙酯(600mL然後300mL)萃取水層。合併有機物，利用鹽水(600mL)沖洗，並在減壓下濃縮。添加乙醇(656mL)並在50℃下混合10分鐘。使混合物冷卻至室溫然後放入冰/水中。過濾所得混合物並在減壓下乾燥，得到標題化合物(112.2g；49.14%產率)：質譜(m/z)：464.2(M+1)。

製法3

乙酸[(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-三乙醯氧基-6-(4-甲基吲哚-1-基)四氫吡喃-2-基]甲酯

方法A

流程圖I，步驟B：將乙酸[(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-三乙醯氧基-6-(4-甲基吲哚-1-基)四氫吡喃-2-基]甲酯(60.4mmol)注入500mL燒瓶中。添加1,4-二噁烷(250mL)並使該溶液冷卻至10℃。以一份式添加DDQ(63.4mmol)。使混合物升溫至室溫，並攪拌2小時。過濾反應混合物並利用1,4-二噁烷沖洗固體(3 X 50mL)。於減壓下濃縮濾液並經由矽膠(200g)塞過濾，以10% EtOAc/二氯甲烷(300mL)沖洗。依序用碳酸氫鈉飽和溶液(2 X 200mL)及水(200mL)洗滌。在無水硫酸鈉上乾燥，過濾，在減壓下濃縮，得到標題化合物(27.5g，98.6%產率)：質譜(m/z)：462.5(M+1)。

方法B

流程圖I，步驟B：將乙酸[(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-三乙醯氧基-6-(4-甲基吲哚-1-基)四氫吡喃-2-基]甲酯(4200g；9.08mol)注入20L燒瓶中。添加1,4-二噁烷(42000mL)並使該溶液冷卻至10℃。分5等份添加DDQ(2057g；9.08mol)，維持溫度在10℃。添加完畢後，將混合物升溫至室溫並攪拌2小時。過濾反應混合物並利用1,4-二噁烷沖洗固體(3次)。於減壓下濃縮濾液並藉由管柱層析利用0%-20%乙酸乙酯之己烷溶液洗脫來純化殘餘物。將純溶離份與單獨一批自2500g乙酸[(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-三乙醯氧基-6-(4-甲基吲哚-1-基)四氫吡喃-2-基]甲酯開始以類似方式製得的物質合併並於減壓下濃縮。將殘餘物溶於乙酸乙酯(50L)中並依序利用碳酸氫鈉飽和溶液(2 X 20L)及水(1 X 10L)沖洗。在無水硫酸鈉上乾燥，過濾，於減壓下濃縮，並自乙醇(10L)中結晶，得到標題化合物(4.632Kg；69%產率)：質譜(m/z)：462.5(M+1)。

方法C

流程圖I，步驟B：在室溫下，將乙酸[(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-三乙醯氧基-6-(4-甲基吲哚-1-基)四氫吡喃-2-基]甲酯(112.2g；242.08mmol)溶解於1,4-二噁烷(1.68L)中。使該混合物在冰/水浴中冷卻，然後逐份添加4,5-二氯-3,6-二側氧基-環己-1,4-二烯-1,2-二甲腈(244.50mmol；55.50g)，使反應混合物溫度保持在15℃以下。當添加完畢後，攪拌該混合物5分鐘，然後從冰浴中移出並再攪拌5分鐘。過濾混合物並利用1,4-二噁烷(561.00mL)沖洗固體。於減壓下濃縮濾液，然後將乙醇(561.00mL)加入殘餘物中，並在40℃下攪拌20分鐘。使該混合物在冰水中冷卻15分鐘，過濾，並利用冷乙醇(100mL)沖洗得到的固體。於減壓下乾燥固體，得到標題化合物(82.5g；73.9%產率)：質譜(m/z)：462.0(M+1)。

製法4

乙酸[(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-三乙醯氧基-6-[3-(4-羥基苯甲醯基)-4-甲基-吲哚-1-基]四氫吡喃-2-基]甲酯

流程圖I，步驟C：向經氮氣淨化之0.5L攪拌圓底燒瓶按順序加入以下各者：乙酸[(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-三乙醯氧基-6-(4-甲基吲哚-1-基)四氫吡喃-2-基]甲酯(29.5mmol)、二氯甲烷(100mL)、及4-溴苯甲醯氯(30.9mmol)。於冰浴中冷卻該混合物及添加三氯化鋁(88.4mmol)。攪拌後，冷卻達1.5小時，將該反應混合物倒於冰上並用水(100mL)及氯仿(100mL)稀釋。分離有機相並利用氯仿(100mL)萃取水相。合併有機物並利用濃縮的碳酸氫鈉溶液(200mL)及鹽水(200mL)洗滌。於硫酸鈉上乾燥，過濾並濃縮。藉由急驟層析在矽膠(330g)上以5至25% EtOAc/氯仿洗脫來純化，得到標題化合物(7.9g；產率46.09%)：質譜(m/z)：582.4(M+1)、580.4(M-H)。

製法5

乙酸[(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-三乙醯氧基-6-[3-[4-(3-苄氧基丙氧基)苯甲醯基]-4-甲基-吲哚-1-基]四氫吡喃-2-基]甲酯

流程圖I，步驟D：向經氮氣淨化之0.5L攪拌圓底燒瓶按順序加入以下各者：乙酸[(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-三乙醯氧基-6-[3-(4-羥基苯甲醯基)-4-甲基-吲哚-1-基)四氫吡喃-2-基]甲酯(13.58mmol)、乙腈(250mL)、及碳酸鉀(67.92mmol)。在室溫下，向此經攪拌之溶液添加3-溴丙氧基甲基苯(27.2mmol)並在氮氣下在60℃下加熱16小時。用EtOAc(200mL)稀釋並過濾。濃縮濾液並藉由急驟層析(330g矽膠)以2至40% EtOAc/氯仿洗脫來純化。濃縮含有產物之溶離份，得到標題化合物(9.0g；90.79%)：質譜(m/z)：730.4(M+H)。

製法6

(2R,3R,4S,5S,6R)-2-[3-[[4-(3-苄氧基丙氧基)苯基]-羥基-甲基]-4-甲基-吲哚-1-基]-6-(羥甲基)四氫吡喃-3,4,5-三醇

流程圖I，步驟E：向經氮氣淨化之0.5L攪拌圓底燒瓶加入乙酸[(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-三乙醯氧基-6-[3-[4-(3-苄氧基丙氧基)苯甲醯基]-4-甲基-吲哚-1-基]四氫吡喃-2-基]甲酯(12.33mmol)、THF(50mL)、及乙醇(100mL)。添加四氫硼酸鈉(37.0mmol)並在室溫下攪拌6小時。藉由滴加5N HCl酸化，然後用水(200mL)及二氯甲烷(200mL)稀釋。分離有機物並利用鹽水(200mL)洗滌。在硫酸鈉上乾燥，過濾並濃縮，得到呈非對映異構體之混合物之標題化合物，其純度足以在不經進一步純化下而用於下一步驟中(7.2g粗製物)質譜(m/z)：546.4(M+1-18)。

製法7

乙酸[(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-三乙醯氧基-6-[3-[[4-(3-苄氧基丙氧基)苯基]甲基]-4-甲基-吲哚-1-基]四氫吡喃-2-基]甲酯

流程圖I，步驟F：在氮氣下，向0.5L圓底燒瓶中依序加入(2R,3R,4S,5S,6R)-2-[3-[[4-(3-苄氧基丙氧基)苯基]-羥基-甲基]-4-甲基-吲哚-1-基]-6-(羥甲基)四氫吡喃-3,4,5-三醇(7.2g，粗製物)、乙腈(50mL)、及二氯甲烷(100mL)。使該混合物冷卻至0℃。添加三乙基矽烷(63.87mmol)，接著滴加三氟化硼合乙醚(51.10mmol)。當添加完成時，在冰浴中攪拌反應混合物5分鐘，然後藉由滴加碳酸氫鈉溶液(20mL)而驟冷。用水(200mL)及EtOAc(500mL)稀釋。分離各層，利用鹽水(200mL)洗滌有機相，並在減壓下濃縮。添加吡啶(50mL)、二氯甲烷(50mL)及N,N-二甲基胺基吡啶(0.41mmol)。於冰浴中冷卻並添加乙酸酐(127.74mmol)。升溫至室溫，並攪拌16小時。於減壓下濃縮，然後添加EtOAc(500mL)。依序用檸檬酸溶液(200mL)、水(200mL)及鹽水(200mL)洗滌。於硫酸鈉上乾燥，過濾並濃縮。藉由急驟層析(330g矽膠)以5-5至20% EtOAc/二氯甲烷洗脫來純化，得到標題化合物(7.5g；82.03%)：質譜(m/z)：716.3(M+1)。

流程圖II

製法8

乙酸[(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-三乙醯氧基-6-[3-[[4-(3-羥基丙氧基)苯基]甲基]-4-甲基-吲哚-1-基]四氫吡喃-2-基]甲酯

流程圖II，步驟A：向0.5L圓底燒瓶添加乙酸[(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-三乙醯氧基-6-[3-[[4-(3-苄氧基丙氧基)苯基]甲基]-4-甲基-吲哚-1-基]四氫吡喃-2-基]甲酯(10.34mmol)及乙酸乙酯(80mL)。在用乙酸乙酯(20mL)潤濕以前，向該溶液添加5% Pd/C。在攪拌下，用氫氣(3X)真空淨化該混合物，然後在氫氣下攪拌16小時。經由矽藻土過濾並用乙酸乙酯(100mL)沖洗。在減壓下濃縮濾液，得到純度足以用於下一步驟中之標題化合物(6.5g)：質譜(m/z)：626.4(M+1)。

製法9

乙酸[(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-三乙醯氧基-6-[4-甲基-3-[[4-(3-甲磺醯基氧基丙氧基)苯基]甲基]吲哚-1-基]四氫吡喃-2-基]甲酯

流程圖II，步驟B：向0.5L圓底燒瓶添加乙酸[(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-三乙醯氧基-6-[3-[[4-(3-羥基丙氧基)苯基]甲基]-4-甲基-吲哚-1-基]四氫吡喃-2-基]甲酯(6.5g，粗製物)、二氯甲烷(100mL)及三乙胺(25.97mmol)。於冰浴中冷卻並在10分鐘內滴加甲磺醯氯(12.47mmol)。使升溫至室溫，並攪拌1小時。用二氯甲烷(100mL)稀釋並用水(200mL)及鹽水(200mL)洗滌。在硫酸鈉上乾燥有機物，過濾，並在真空下濃縮，得到純度足以用於下一步驟中之標題化合物(7.2g)：質譜(m/z)：704.4(M+1)。

製法10a

1-[2-(4,9-二氮雜螺環[5.5]十一烷-9-基)-2-側氧基-乙基]-3-異丁基-脲

將4,9-二氮雜螺環[5.5]十一烷-9-羧酸第三丁酯鹽酸鹽(1.38mmol)、2-(異丁基胺基甲醯基胺基)乙酸(1.15mmol)、二甲基甲醯胺(3.8mL)、三乙胺(1.72mmol)、及HATU(1.26mmol)加入圓底燒瓶中。在室溫下攪拌16小時，然後加水(50mL)及乙酸乙酯(50mL)稀釋。利用濃縮的氯化銨(50mL)及鹽水(50mL)沖洗有機相。在硫酸鈉上乾燥有機物，過濾，並在減壓下濃縮。藉由急驟層析(40g矽膠濾筒)利用0至10%甲醇的乙酸乙酯溶液洗脫來純化中間物，得到9-[2-(異丁基胺基甲醯基胺基)乙醯基]-4,9-二氮雜螺環[5.5]十一烷-4-羧酸第三丁酯(0.38g，0.93mmol)：MS(m/z)：411.2(M+H)。

將4M HCl的1,4-二噁烷(8.77mmol)加入9-[2-(異丁基胺基甲醯基胺基)乙醯基]-4,9-二氮雜螺環[5.5]十一烷-4-羧酸第三丁酯(0.38g，0.93mmol)的1,4-二噁烷(1.75mL)溶液中。於室溫下攪拌該反應5小時，然後於減壓下濃縮。藉由溶解於甲醇中並負載到SCX(離子交換)柱上來純化殘餘物。利用甲醇(3 X 25mL)沖洗負載柱，然後利用2N氨水的甲醇溶液沖洗管柱。合併並濃縮氨水洗出物，獲得標題化合物(0.25g，0.81mmol)：MS(m/z)：311.0(M+H)。

製法10b

1-[2-(4,9-二氮雜螺環[5.5]十一烷-9-基)-2-側氧基-乙基]-3-異丁基-脲之替代性製法。

2-(異丁基胺基甲醯基胺基)乙酸苄酯之製法

將3-甲基丁酸(106.36g)、甲苯(800ml)及三乙胺(126.46g)注入3-頸燒瓶(R1)中。將R1加熱至90℃。緩慢地添加DPPA(289.3g)之甲苯(400ml)溶液(注意：N₂釋放)。在90℃下攪拌R1 30至60分鐘，然後冷卻到20至30℃。在另一個燒瓶(R2)中，注入2-胺基乙酸苄酯鹽酸鹽(200g)、三乙胺(150.54g)、及甲苯(1000ml)並在20至30℃下攪拌1至2小時。在20至30℃下，經由另一個漏斗，將R1混合物緩慢地滴加至R2中並攪拌1至2小時。在劇烈地攪拌下，將反應混合物緩慢地加入水(2000ml)中。分離有機物並利用EtOAc(2 X 1000ml)萃取水層。合併有機層並依序利用1N鹽酸(1000ml)、7% NaHCO₃水溶液(1000ml)、水(1000ml)、15%鹽水(1000ml)沖洗。於減壓下濃縮。利用庚烷(1000ml)漿化殘餘物，然後過濾固體。於低於40℃及減壓下乾燥濾餅，得到2-(異丁基胺基甲醯基胺基)乙酸苄酯(218g；98.1%分析值；81.5%產率)。

2-(異丁基胺基甲醯基胺基)乙酸之製法。

將2-(異丁基胺基甲醯基胺基)乙酸苄酯(200g；98.1%分析值)、無水Pd/C(20g；10重量%)、及異丙醇(2000ml)注入高壓釜中。真空下除氣並利用氫氣淨化三次。在50至60psi H₂下，在60℃下攪拌4小時。使該混合物冷卻至20至30℃並藉由矽藻土過濾並在45至50℃及減壓下濃縮濾液到1至2體積。添加乙腈(1000ml)並在45至50℃及減壓下濃縮至2至3體積。使該混合物冷卻至5至10℃並過濾。於45至50℃及減壓下乾燥濾餅，得到2-(異丁基胺基甲醯基胺基)乙酸(112g；95.2%分析值；82.5%產率)。

最終標題化合物之製法。

將4M HCl的1,4-二噁烷(8.77mmol)溶液加入9-[2-(異丁基胺基甲醯基胺基)乙醯基]-4,9-二氮雜螺環[5.5]十一烷-4-羧酸第三丁酯(0.38g，0.93mmol)的1,4-二噁烷(1.75mL)溶液中。於室溫下攪拌該反應5小時，然後減壓下濃縮。藉由溶解於甲醇中並負載到SCX(離子交換)柱上來純化殘餘物。利用甲醇(3 X 25mL)沖洗負載柱，然後利用2N氨水的甲醇溶液沖洗管柱。合併並濃縮氨水洗出液，得到最終的標題化合物1-[2-(4,9-二氮雜螺環[5.5]十一烷-9-基)-2-側氧基-乙基]-3-異丁基-脲(0.25g，0.81mmol)：MS(m/z)：311.0(M+H)。

製法10c

1-[2-(4,9-二氮雜螺環[5.5]十一烷-9-基)-2-側氧基-乙基]-3-異丁基-脲之替代性製法

4,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-4,9-二羧酸O4-苄酯O9-第三丁酯之製法。

向20L溫度可控反應器依序加入4,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-羧酸第三丁酯鹽酸鹽(2.06mol；600.00g)、二氯甲烷(6.00L)、三乙胺(4.33mol；604mL)。設置該反應器之夾套至0℃。當該反應混合物之溫度達到5℃時，在約20分鐘內添加氯甲酸苄酯(2.10mol；311mL)，保持內部溫度低於20℃。當添加完成時，加熱該夾套至室溫並攪拌混合物過夜。將反應混合物倒入水(4L)中並分離該混合物。於減壓下濃縮有機物，得到標題化合物(838g；出於下一反應計算之目的，推定95.65%純度及100%產率)質譜(m/z)：411.2(M+23)。

4,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-4-甲酸苄酯鹽酸鹽之製法。

向夾套溫度設置在0℃之20L溫度可控反應器中添加含於1,4-二噁烷(19.63mol；1.68L)中之4,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-4,9-二羧酸O4-苄酯O9-第三丁酯(2.06mol；838.00g；95.65%純度)之溶液。當該溶液之溫度為5℃時，以使得溫度不會上升至20℃以上的速率添加氯化氫(4M的1,4-二噁烷溶液；10.32mol；2.58L)。當添加完成後，將該溶液加熱至室溫並攪拌過夜。於減壓下濃縮反應混合物，得到黏稠漿液。添加MTBE(3.35L)，並在40℃下攪動該混合物30分鐘。允許該混合物冷卻至室溫，並過濾沉澱物。用MTBE(838mL)洗滌沉澱物。使沉澱物在過濾器上乾燥，然後轉移至真空烘箱中以進一步乾燥，得到標題化合物(638g；95%產率)質譜(m/z)：289[M(游離鹼)+1]。

9-[2-(異丁基胺甲醯基胺基)乙醯基]-4,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-4-羧酸苄酯之製法

向含於二氯甲烷(1.16L)中之2-(異丁基胺基甲醯基胺基)乙酸(667.05mmol；116.20g)溶液分批添加1,1'-羰基二咪唑(700.40mmol；113.57g)。在室溫下攪拌混合物1小時。標記此混合物為A。在單獨的容器中添加4,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-4-羧酸苄酯鹽酸鹽(700.40mmol；413.68g)、二氯甲烷(581mL)及三乙胺(1.33mol；186 mL)。攪拌該混合物。標記此混合物為B。在2分鐘內將混合物A倒入混合物B中。於室溫下攪拌所得混合物。3小時後，添加水(1000mL)。分離有機相，並在減壓下濃縮。添加乙酸乙酯(581.00mL)，並在40℃下攪動該混合物20分鐘，隨後冷卻至室溫，隨後於冰浴中冷卻20分鐘。過濾該沉澱物，並在真空烘箱中進一步乾燥，得到標題化合物。(137.1g；46.23%產率)質譜(m/z)：445.2(M+1)。使濾液靜置後，沉澱形成。過濾該沉澱物，並在真空烘箱中進一步乾燥，得到標題化合物。(9.30g；3.14%產率)。

最終標題化合物之製法

將9-[2-(異丁基胺甲醯基胺基)乙醯基]-2,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-2-羧酸苄酯(239.78mmol；106.60g)懸浮於乙醇(852.80mL)及環己烯(1.20mol；121.90mL)中，並添加5%碳載鈀(24g；55.4%水分含量)。加熱混合物至回流，並攪拌45分鐘。使混合物冷卻至室溫，經由矽藻土墊過濾，並用乙醇洗滌固體，並在減壓下濃縮，得到最終的標題化合物1-[2-(4,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-基)-2-側氧基-乙基]-3-異丁基-脲(79.2g；94%純度；100%產率)質譜(m/z)：311.2(M+1)。

實例1a

1-異丁基-3-[2-[4-[3-[4-[[4-甲基-1-[(2R,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-三羥基-6-(羥甲基)四氫吡喃-2-基]吲哚-3-基]甲基]苯氧基]丙基]-4,9-二氮雜螺環[5.5]十一烷-9-基]-2-側氧基-乙基]脲

流程圖II，步驟C：向0.25L圓底燒瓶添加乙酸[(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-三乙醯氧基-6-[4-甲基-3-[[4-(3-甲磺醯基氧基丙氧基)苯基]甲基]吲哚-1-基]四氫吡喃-2-基]甲酯(7.2g，粗製物)、1-[2-(4,9-二氮雜螺[5.5]十一烷-9-基)-2-側氧基-乙基]-3-異丁基-脲(12.28mmol)、乙腈(100mL)及二異丙基乙胺(40.92mmol)。在80℃下加熱16小時，然後於減壓下濃縮。添加甲醇(50mL)及甲醇鈉(20.46mmol，30%的MeOH溶液)，並在室溫下攪拌1小時。藉由添加小份乾冰驟冷。於減壓下濃縮。藉由反相急驟層析(400g C18濾筒)利用5至80%水(0.1%甲酸)的乙腈溶液(0.1%甲酸)分三份洗脫來純化。於減壓下濃縮，得到呈包含少量雜質之甲酸鹽形式之標題化合物。將該鹽溶解於7N氨水的甲醇(20mL)溶液中，然後濃縮，以形成游離鹼。藉由急驟層析(330g矽膠濾筒)利用5%7N氨水的甲醇溶液/二氯甲烷洗脫來純化該游離鹼。在減壓下濃縮產物溶離份，得到標題化合物(1.75g，22.81%)：MS(m/z)：746.6(M+1)。H¹ NMR(400.31MHz,CD₃OD)：δ 7.28(d,J=8.4Hz,1H),7.03(d,J=8.4Hz,2H),7.02(s,1H),6.97(t,J=8.8Hz,1H),6.69(d,J=7.2Hz,1H),5.37(d,J=9.2Hz,1H),4.15(s,2H),3.95(t,J=6.0Hz,2H),3.91(d,J=1.6Hz,2H),3.87-3.80(m,2H),3.65(dd,J=11.6,5.6Hz,1H),3.57-3.38(m,5H),3.31(bm,2H),2.90(d,J=6.8Hz,2H),2.46-2.13(m,8H),1.88(五重峰，J=6.8Hz,2H),1.68(七重峰，J=6.8Hz,1H),1.61-1.28(m,8H),0.86(d,J=6.8,6H)。

流程圖III

製法11

乙酸[(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-三乙醯氧基-6-[3-(4-苄氧基苯甲醯基)-4-甲基-吲哚-1-基]四氫吡喃-2-基]甲酯

流程圖III，步驟A：向20L溫度可控反應器加入：二氯甲烷(7.00L)、乙酸[(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-三乙醯氧基-6-(4-甲基吲哚-1-基)四氫吡喃-2-基]甲酯(1.52mol；700.00g)及4-苄氧基苯甲醯氯(1.67mol；411.63g)。設置該反應器夾套至-30℃，使反應器內容物冷卻並在30分鐘內添加四氯化錫(1.97mol；513.74g)，保持內部溫度在-5與-10℃之間。當添加完畢時，在約-9℃下攪拌該混合物20分鐘。將該冷的反應混合物倒入20L碎冰上。分離有機層並利用二氯甲烷萃取水層。合併有機萃取物，並在減壓下濃縮至約2L。添加7L MTBE並先後利用鹽酸(1M；2X8L)及水(8L)及碳酸氫鈉(飽和水溶液)及鹽水洗滌。在MgSO₄上乾燥，過濾並於減壓下濃縮，得到標題化合物，其含有~17重量% MTBE(1377g；出於下一反應計算之目的，推定74%純度及100%產率)質譜(m/z)：672.2(M+1)。

製法12

乙酸[(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-三乙醯氧基-6-[3-[(4-苄氧基苯基)-羥基-甲基]-4-甲基-吲哚-1-基]四氫吡喃-2-基]甲酯

流程圖III，步驟B：向溫度可控攪拌反應器加入含於乙醇(4.96 L)中之七水合氯化銫(III)(4.55mol；1.12kg)並攪拌，得到溶液。添加乙酸[(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-三乙醯氧基-6-[3-(4-苄氧基苯甲醯基)-4-甲基-吲哚-1-基]四氫吡喃-2-基]甲酯(1.52mol；1.38kg)及四氫呋喃(7.57L)。將混合物冷卻至+2℃，並在3小時內逐份添加四氫硼酸鈉(4.55mol；172.18g)，在添加期間保持內部溫度在0與5℃之間。當添加完畢後，在5℃下，攪拌混合物1小時。另外添加四氫硼酸鈉(687.24mol；26.00g)並攪拌該混合物30分鐘。添加額外的四氫硼酸鈉(0.45當量；687.24mmol；26.00g)並攪拌該混合物過夜。將混合物倒入MTBE(5L)及水(10L)中。在攪拌下，緩慢添加鹽酸(2N)，直至混合物對pH試紙為略酸性。分離有機層，用鹽水洗滌，在MgSO₄上乾燥，過濾並於減壓下濃縮，得到具有用於下一步驟中之可接受純度的標題化合物(1547g；出於下一反應計算之目的，推定66%純度及100%產率)質譜(m/z)：656.4(M+1-18)。

製法13

乙酸[(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-三乙醯氧基-6-[3-[(4-苄氧基苯基)-甲基]-4-甲基-吲哚-1-基]四氫吡喃-2-基]甲酯

流程圖III，步驟C：於鹽水/冰浴中冷卻含於乙腈(6.19L)及二氯甲烷(6.19L)中之乙酸[(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-三乙醯氧基-6-[3-[(4-苄氧基苯基)-羥基-甲基]-4-甲基-吲哚-1-基]四氫吡喃-2-基]甲酯(1.52mol；1.55kg)之混合物，直至內部溫度為-5℃，然後在2分鐘內添加三乙基矽烷(3.79mol；607mL)。滴加三氟化硼合乙醚(3.79mol；479 mL)，保持內部溫度在+5℃以下。於冰浴中攪拌該混合物30分鐘。小心地添加NaHCO₃(飽和水溶液；5L)及水(4L)之混合物。分離有機相，並依序用水及鹽水洗滌，然後在MgSO₄上乾燥，過濾，並於減壓下濃縮，得到標題化合物與其中一或多個乙醯基丟失之化合物之混合物。將殘餘物溶解於二氯甲烷(1.86L)中，並添加乙酸酐(7.58mol；716mL)及N,N-二甲基-4-吡啶胺(75.78mmol；9.26g)。將混合物加熱至40℃並輕柔地攪動以助於溶解，然後在室溫下攪拌該混合物1小時。在減壓下濃縮該混合物，並使殘餘物在MTBE(6L)中形成漿液過夜。藉由過濾收集固體並在60℃烘箱中在減壓下乾燥，得到標題化合物(692.8g；70%產率)：質譜(m/z)：658.3(M+1)及680.2(M+23)。

製法14

乙酸[(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-三乙醯氧基-6-[3-[(4-羥基苯基)甲基]-4-甲基-吲哚-1-基]四氫吡喃-2-基]甲酯

流程圖III，步驟D：向乙酸[(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-三乙醯氧基-6-[3-[(4-苄氧基苯基)甲基]-4-甲基-吲哚-1-基]四氫吡喃-2-基]甲酯(1.00當量；1.05mol；692.80g)、甲醇(85.59mol；3.46L；2.74kg)、及四氫呋喃(42.57mol；3.46L；3.07kg)之混合物添加甲酸銨(5.27mol；332.10g)。利用氮氣淨化反應容器，並添加呈含於異丙醇中之漿液形式之5%碳載鈀(69.30g；Johnson Matthey型87L，57.8%水分含量)。在38至42℃下加熱混合物15分鐘(觀察到溫和鼓泡)。移除加熱浴，並攪拌該反應混合物15分鐘，同時冷卻。經由矽藻土過濾該混合物且在減壓下濃縮濾液。將殘餘物分配於乙酸乙酯(7.5L)與水(1L)之間。分離有機層並用鹽水洗滌，然後在MgSO₄上乾燥。過濾，並於減壓下濃縮，得到標題化合物(594g；99%產率)：質譜(m/z)：568.2(M+1)及590.2(M+23)。

製法15

乙酸[(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-三乙醯氧基-6-[3-[[4-(3-氯丙氧基)苯基]甲基]-4-甲基-吲哚-1-基]四氫吡喃-2-基]甲酯

流程圖III，步驟E：向乙酸[(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-三乙醯氧基-6-[3-[(4-羥基苯基)甲基]-4-甲基-吲哚-1-基]四氫吡喃-2-基]甲酯(150.64mmol；85.50g)及乙腈(855.00mL)之混合物添加1-溴-3-氯-丙烷(180.76mmol；17.88mL)及碳酸鉀(301.27mmol；41.64g)。將該混合物放置在氮氣下，並在輕輕回流下加熱該混合物2天。再添加1-溴-3-氯-丙烷(45.19mmol；4.47mL)，並繼續加熱該混合物過夜。在減壓下濃縮該混合物，並使殘餘物分配在乙酸乙酯與水之間。分離有機層，並用鹽水洗滌，在MgSO₄上乾燥，過濾並在減壓下濃縮，得到純度足以用於下一步驟中之標題化合物。(124.4g；出於下一反應計算之目的，推定78%純度及100%產率)質譜(m/z)：644.2/646.2(M+1)。

製法16

乙酸[(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-三乙醯氧基-6-[3-[[4-[3-[9-[2-(異丁基羰胺基)乙醯基]-4,9-二氮雜螺環[5.5]十一烷-4-基]丙氧基]苯基]甲基]-4-甲基-吲哚-1-基]四氫吡喃-2-基]甲酯

步驟III，步驟F：向經攪拌之含於乙腈(829mL)中之乙酸[(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-三乙醯氧基-6-[3-[[4-(3-氯丙氧基)苯基]甲基]-4-甲基-吲哚-1-基]四氫吡喃-2-基]甲酯(143.38mmol；118.40g)之溶液添加1-[2-(3,8-二氮雜螺[5.5]十一烷-3-基)-2-側氧基-乙基]-3-異丁基-脲(143.38mmol；47.35g)、碳酸鉀(286.75mmol；39.63g)及碘化鉀(143.38mmol；23.80g)。在氮氣下，於回流下加熱該混合物過夜。使該反應混合物冷卻至室溫，並添加乙酸酐(1.43mol；135.53mL)及N,N-二甲基-4-吡啶胺(14.34mmol；1.75g)。攪拌該混合物1小時。在減壓下濃縮該混合物，並使殘餘物分配在水與EtOAc之間。分離有機層，並用鹽水洗滌，在MgSO₄上乾燥，過濾，並在減壓下濃縮。將該殘餘物與另一自乙酸[(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-三乙醯氧基-6-[3-[[4-(3-氯丙氧基)苯基]甲基]-4-甲基-吲哚-1-基]四氫吡喃-2-基]甲酯(6.2mmol)開始以類似方式製得之批次合併。藉由急驟管柱層析在矽膠(1.5kg)上以99：1 EtOAc：三乙胺(1cv)、EtOAc(3cv's)及190：10：1 EtOAc：MeOH：三乙胺(5cv's)洗脫來純化，得到標題化合物(68.2g；49%產率)質譜(m/z)：918.6(M+1)。

實例1b

1-異丁基-3-[2-[4-[3-[4-[[4-甲基-1-[(2R,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-三羥基-6-(羥甲基)四氫吡喃-2-基]吲哚-3-基]甲基]苯氧基]丙基]-4,9-二氮雜螺環[5.5]十一烷-9-基]-2-側氧基-乙基]脲之替代性製法

流程圖III，步驟G：於冰浴中冷卻乙酸[(2R,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-三乙醯氧基-6-[3-[[4-[3-[9-[2-(異丁基羰胺基)乙醯基]-4,9-二氮雜螺環[5.5]十一烷-4-基]丙氧基]苯基]甲基]-4-甲基-吲哚-1-基]四氫吡喃-2-基]甲酯(74.28mmol；68.20g)與甲醇(341.00mL)之混合物。添加甲醇鈉(111.43mmol；6.02g)。攪拌該混合物10分鐘。將混合物倒入水(3.5L)中，然後過濾該混合物。用水洗滌固體，在燒結器上乾燥，並在60℃真空烘箱中以進一步乾燥，得到標題化合物(49.8g；89%產率)質譜(m/z)：750.6(M+1)。

鈉依賴型葡萄糖轉運蛋白1(SGLT1)及SGLT2分析

分別自Openbiosystems、Invitrogen及Openbiosystems購買編碼人SGLT1(slc5a1，NM_000343)及小鼠SGLT1(slc5a1，NM_019810.4)之cDNA。將cDNA選殖至pcDNA3.1+中以用於哺乳動物表現並利用標準的哺乳動物轉染步驟，穩定地轉染到中國倉鼠卵巢(CHO)-K1細胞中。根據對新黴素(Geneticin,Invitrogen)的耐抗性以及在¹⁴C-α-甲基-D-吡喃葡萄糖苷(¹⁴C-AMG)攝取分析中之活性(見下文)，選擇各過表現細胞系之SGLT-表現亞系。利用標準的細胞培養技術，維持穩定的SGLT-表現細胞。

如下所述，測定上述細胞系中鈉依賴型¹⁴C-AMG吸收量來量測SGLT活性。將100μL包含30,000細胞之培養基接種到96-孔BioCoat聚-D-離胺酸盤(Becton Dickson)之各孔中並在37℃下培養過夜。抽吸培養基並利用200μL反應緩衝液(140mM NaCl、2mM KCl、1mM CaCl₂、MgCl₂、及14mM N-2-羥乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸(Hepes)，pH 7.5)沖洗細胞兩次。讓過量的緩衝液流到紙巾上。將35μL反應緩衝液加入各孔中。將5μL含有不同濃度之測試化合物或不含化合物(作為對照)之10%二甲亞碸(DMSO)之反應緩衝液分配到各孔中。藉由添加10μL ¹⁴C-AMG之反應緩衝液以達到4μM之最終濃度來啟動反應。在37℃下培養該盤125分鐘。藉由抽吸排除反應緩衝液來終止反應，然後利用200μL冰冷反應緩衝液沖洗三次。採用人工抽吸，以確保完全移除反應緩衝液。在各孔中添加10μL 0.1N NaOH，然後添加100μL Supermix閃爍混合液(PerkinElmer)。混合後，在MicroBeta(PerkinElmer)中計數該盤中的閃爍信號。利用ActivityBase(ID Business Solution)使十種劑量反應曲缐擬合經驗四參數模型，以決定半數最大抑制率(IC₅₀)下之抑制劑濃度。

基本上如上述方式測試本文中實例1化合物，並展現35.2±14.1nM(n=5)之IC₅₀(針對人SGLT1)以及14.9±10.4nM(n=5)之IC₅₀(針對小鼠SGLT1)。這些數據證明實例1化合物體外抑制人及小鼠SGLT1。

在口服葡萄糖耐受性測試(OGTT)中之降低葡萄糖效應

試驗化合物之調配法為將1%羥乙基纖維素媒劑、0.25% Tween® 80w/消泡劑0.05%加至預先稱量之試驗化合物中，製得1mg/ml溶液。使混合物經過探針式超音波處理約1分鐘。添加攪拌棒，在整個加料期間均連續攪拌所得懸浮液。

使用兩個單獨組的單一圈養之C57Bl/6小鼠來證明在OGTT期間之葡萄糖降低。第一組小鼠在投與化合物物後18小時，接受OGTT，第二組在投與化合物後8小時接受。稱取第一組動物之體重且用於確定研究組(n=5)之體重位於26至30g之工作範圍內。分組後，經口餵食小鼠10mg/kg試驗化合物製劑或媒劑，間隔30秒。然後在測試日前之下午晚時，移開食物，使兩組18及8小時OGTT小鼠空腹過夜。第二天早上，稱重8小時OGTT小鼠並放血(經由剪尾)測葡萄糖。利用位於80至 100mg/dl之工作範圍內之禁食之葡萄糖值，確定研究組(n=5)。分組後，小鼠經口餵食化合物，間隔30秒。然後，化合物投與後8小時，該等小鼠接受OGTT。

在開始各自化合物處理後8小時及18小時，取基缐血樣以測量葡萄糖(來自第一隻動物)。然後立刻以3g/kg給與動物50%葡萄糖(Hospira®)之口服劑量。以準確的30秒間隔經尾靜脈取血樣以測葡萄糖，以在服用葡萄糖後之20、40及60分鐘，收集每隻動物之血液。

如表1所示，當對正常血糖C57Bl/6小鼠經口推注50%葡萄糖(Hospira®)，投與後8或18小時，實例1之化合物使葡萄糖波動減小。在OGTT期間，實例1亦表明經基缐調整之葡萄糖曲缐下面積(AUC)減小。此外，在OGTT期間，實例1減小血漿葡萄糖之平均最大濃度(C_最大)，但增加了葡萄糖達到最大濃度的平均時間(T_最大)。

Claims

一種下式之化合物或其醫藥上可接受之鹽，
如請求項1之化合物，其為：
一種如請求項1或請求項2之化合物於製造用於治療患者之糖尿病之藥物之用途。
一種如請求項1或請求項2之化合物於製造用於治療患者之1型糖尿病之藥物之用途。
一種如請求項1或請求項2之化合物於製造用於治療患者之2型糖尿病之藥物之用途。
如請求項1或請求項2之化合物或鹽，其用於治療。
如請求項1或請求項2之化合物或鹽，其用於治療糖尿病。
如請求項7之化合物或鹽，其中該糖尿病為1型糖尿病。
如請求項7之化合物或鹽，其中該糖尿病為2型糖尿病。
一種醫藥組合物，其包含如請求項1或請求項2之化合物或鹽，及一種或多種醫藥上可接受的載劑、稀釋劑、或賦型劑。