EA029516B1

EA029516B1 - Новые соединения мочевины

Info

Publication number: EA029516B1
Application number: EA201690593A
Authority: EA
Inventors: Тодд Филдс
Original assignee: Эли Лилли Энд Компани
Priority date: 2013-11-01
Filing date: 2014-10-28
Publication date: 2018-04-30
Also published as: PH12016500809A1; NO3099623T3; BR112016008704A8; KR20160060138A; ME02839B; CN105636972B; CN105636972A; CR20160146A; EP3063162B1; AU2014342612A1; PL3063162T3; AU2014342612B2; PH12016500809B1; TN2016000125A1; RS56417B1; MA38991A1; NZ717880A; DOP2016000062A; TWI657093B; TW201609784A

Abstract

В изобретении предложено соединение формулы Iили его фармацевтически приемлемая соль.

Description

изобретение относится к новым соединениям мочевины, к фармацевтическим композициям, содержащим указанные соединения, к способам применения указанных соединений для лечения физиологических расстройств и к промежуточным соединениям и способам, подходящим для синтеза указанных соединений.

Настоящее изобретение относится к области лечения диабета и других заболеваний и расстройств, связанных с гипергликемией. Диабет представляет собой группу заболеваний, которая характеризуется высокими уровнями глюкозы в крови. Диабетом страдает примерно 25 млн людей в США, и он занимает 7 место среди основных причин смерти в США согласно Национальному информационному бюллетеню по вопросам диабета от 2011 г. (Министерство здравоохранения и социального обеспечения США, центр по контролю и профилактике заболеваемости). Натрийзависимые котранспортеры глюкозы (8ОБТ) представляют собой одну из групп транспортеров, которые, как известно, отвечают за абсорбцию углеводов, таких как глюкоза. Более конкретно, 8ОБТ1 отвечает за транспорт глюкозы через мембрану щеточной каймы тонкого кишечника. Ингибирование 8ОБТ1 может приводить к снижению абсорбции глюкозы в тонком кишечнике, обеспечивая приемлемый подход к лечению диабета.

В публикации заявки на патент США № 2008/0139484 А1 описаны 1-(3-П-гликопиранозил)-3замещенные азотсодержащие гетероциклические соединения, обладающие ингибирующей активностью в отношении 8ОБТ1 и/или 8ОРТ2, которые дополнительно описаны как подходящие для предупреждения или лечения заболеваний, связанных с гипергликемией, таких как диабет. Кроме того, в патенте США № 7851617 описаны производные индола, которые представляют собой ингибиторы 8ОБТ, и дополнительно описаны как подходящие для лечения или предупреждения диабета и родственных состояний.

Существует потребность в альтернативных лекарствах и способах лечения диабета. В настоящем изобретении представлены некоторые новые ингибиторы 8ОРТ1, которые могут быть подходящими для лечения диабета.

Соответственно, в настоящем изобретении представлено соединение формулы I

НО'

Формула I

или его фармацевтически приемлемая соль.

В настоящем изобретении представлен также способ лечения диабета у пациента, включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли. В настоящем изобретении дополнительно представлен способ лечения диабета 1 типа у пациента, включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли. Кроме того, в настоящем изобретении представлен способ лечения диабета 2 типа у пациента, включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли. В настоящем изобретении представлен также способ лечения нарушенной толерантности к глюкозе (ЮТ), нарушенной гликемии натощак ^Ηθ) или метаболического синдрома у пациента, включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли.

Кроме того, в настоящем изобретении представлено соединение формулы I или его фармацевтически приемлемая соль для применения в терапии, в частности для лечения диабета. Кроме того, в настоящем изобретении представлено соединение формулы I или его фармацевтически приемлемая соль для применения при лечении диабета 1 типа. Кроме того, в настоящем изобретении представлено соединение формулы I или его фармацевтически приемлемая соль для применения при лечении диабета 2 типа. В настоящем изобретении дополнительно представлено соединение формулы I или его фармацевтически приемлемая соль для применения при лечении нарушенной толерантности к глюкозе (ЮТ), нарушенной гликемии натощак ^РО) или метаболического синдрома. В настоящем изобретении представлено также применение соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения диабета. Кроме того, в настоящем изобретении представлено применение соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения диабета 1 типа. В настоящем изобретении представлено также применение соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения диабета 2 типа. В настоящем изобретении представлено также применение соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения ЮТ, ГОС или метаболического синдрома.

В настоящем изобретении дополнительно представлена фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль и один или более фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей или вспомогательных веществ. Настоящее изобретение охватывает также новые промежуточные соединения и способы синтеза соединений формулы I.

- 1 029516

В контексте настоящего документа термины "лечение" или "лечить" включают сдерживание, замедление, остановку или обращение прогрессирования или тяжести существующего симптома или расстройства.

В контексте настоящего документа термин "пациент" относится к млекопитающему, такому как мышь, морская свинка, крыса, собака или человек. Следует понимать, что предпочтительным пациентом является человек.

В контексте настоящего документа термин "эффективное количество" относится к количеству или дозе соединения согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, которая при однократном или многократном введении пациенту обеспечивает требуемый эффект у пациента, имеющего диагноз или проходящего лечение.

Эффективное количество может быть легко определено лечащим врачом, таким как опытный специалист, с помощью известных технологий и посредством наблюдения результатов, полученных в аналогичных обстоятельствах. При определении эффективного количества для пациента лечащий врач учитывает ряд факторов, включая, но не ограничиваясь ими, вид млекопитающего; его массу, возраст и общее состояние здоровья; конкретное заболевание или расстройство, подлежащее лечению; степень или поражение, или тяжесть заболевания или расстройства; реакцию конкретного пациента; конкретное вводимое соединение; способ введения; характеристики биодоступности вводимого препарата; выбранный режим дозирования; применение сопутствующих лекарственных средств и другие релевантные обстоятельства.

Соединения формулы I, в общем случае, являются эффективными в широком диапазоне доз. Например, суточные дозы обычно входят в диапазон от примерно 0,01 до примерно 30 мг/кг массы тела. В некоторых случаях более правильными могут быть уровни доз, находящиеся ниже нижнего предела указанного диапазона, тогда как в других случаях могут быть использованы более высокие дозы, не вызывающие неблагоприятного побочного эффекта, и, следовательно, вышеуказанный диапазон доз никоим образом не предназначен для ограничения настоящего изобретения.

Соединения согласно настоящему изобретению предпочтительно составляют в фармацевтические композиции, которые вводят любым способом, обеспечивающим биодоступность соединения. Наиболее предпочтительно указанные композиции предназначены для перорального введения. Указанные фармацевтические композиции и способы их получения хорошо известны в данной области техники (см., например, Кетт§1оп: ТЬе §е1спес аиб РгасЬсе о£ РЬагтасу (Ό.Β. Тгоу, ред., 21-е изд., Липпинкотт, УбЬатк & Уйкшв, 2006).

В дополнительном аспекте настоящего изобретения соединения вводят в комбинации с одним или более терапевтическими агентами, такими как антидиабетические агенты. Введение в комбинации включает одновременное или последовательное введение. Кроме того, одновременное введение комбинации может быть в виде одной комбинированной дозы или в виде отдельных доз каждого терапевтического агента. Примеры антидиабетических агентов включают метформин; ингибитор ΌΡΡίν, такой как ситаглиптин или линаглиптин; сульфонилмочевину, такую как глимепирид; тиазолидиндион, такой как пиоглитазон; базальный инсулин, такой как гларгин; быстродействующий инсулин, такой как НиМАЬОС или ΝΟνΟΤΘΟ; агонист ОЬР-1, такой как эксенатид или лираглутид; ингибитор 8ОЬТ2, такой как дапаглифлозин или эмпаглифлозин; антагонист рецептора глюкагона, такой как ЬУ2409021; и т.п.

Соединения формулы I получают так, как показано в способах получения, примерах и на схемах, приведенных ниже. Реагенты и исходные материалы легко доступны для специалистов в данной области техники. Все заместители, если не указано иное, имеют значение, определенное выше. Следует понимать, что указанные схемы, способы получения и примеры никоим образом не предназначены для ограничения настоящего изобретения.

Примеры способов выделения включают технологию селективной кристаллизации или хиральную хроматографию (см., например, 1. Оссщех. е( а1., "Епапботегк, Расета1с5. апб РеюЬШощ". 1оЬп \УПеу апб 8оп8, 1пс., 1981, и Е.Ь. ЕЬе1 апб 8.Н. ХУПеп," §1егеосЬет181гу о£ Огдашс Сотроипбк", Убеу-Шещаепсе, 1994). Специалистам в данной области техники дополнительно следует понимать, что разделение и выделение отдельных диастереомеров или геометрических изомеров формулы I или отдельных диастереомеров или геометрических изомеров промежуточных соединений, приводящих к получению соединений формулы I, посредством хроматографии, хиральной хроматографии или селективной кристаллизации, может быть проведено в любой удобной точке синтеза.

В контексте настоящего документа "δ" относятся к сдвигу в сторону слабого поля относительно тетраметилсилана в миллионных долях; "мин" относится к минуте или минутам; "ч" относится к часам; "ТГФ" относится к тетрагидрофурану; "ЕЮАс" относится к этилацетату; "МеОН" относится к метанолу или метиловому спирту; "ЕЮН" относится к этанолу или этиловому спирту; "ТФК" относится к трифторуксусной кислоте; "ΌΡΡΑ" относится к дифенилфосфорилазиду; "НАТИ" относится к О-(7азабензотриазол-1-ил)Ш^,№,№-тетраметилурония гексафторфосфату; "СЭР¹ относится к 1,1'карбонилдиимидазолу; "ΌΌΟ" относится к 2,3-дихлор-5,6-дициано-1,4-бензохинону; "ХрЬок" относится к 2-дициклогексилфосфино-2',4',6'-триизопропилбифенилу; "МТБЭ" относится к метил-трет-бутиловому

- 2 029516

эфиру; "ВЭЖХ" относится к высокоэффективной жидкостной хроматографии; "Ас" относится к ацетильному заместителю следующей структуры:

О

и термин "ВОС" относится к трет-бутилоксикарбонильной защитной группе.

Фармацевтически приемлемые соли и общие способы их получения известны в данной области

техники. См., например, Сои1б, Р.С. "8а11 зе1есйоп £ог Ьаз1с бгидз," 1п1егпайопа1 боигпа1 о£ Рйагтасеийсз, 33: 201-217 (1986); Вазйп е! а1., "За11 8е1есйоп апб ОрОни/абов Ргосебигез £ог Рйагтасеийса1 Νον Сйетй са1 Епййез", Огдашс Ргосезз Кезеагсй апб Эеуе1ортеп1, 4: 427-435 (2000); и 8.М. Вегде, е! а1., "Рйагтасеийса1 8а11з," боигпа1 о£ Рйагтасеийса1 Зсзепсез, т. 66, № 1, январь, 1977. Специалистам в области синтеза понятно, что соединения формулы I в виде аминов представляют собой органические основания, и они могут быть легко превращены и выделены в виде фармацевтически приемлемых солей с помощью технологий и условий, известных специалистам в данной области техники.

Схема I

Способ получения 1. 4-Метилиндолин

Способ А.

Загрузили 4-метил-1Н-индол (500 г; 1,0 экв.; 3,811 моль) и уксусную кислоту (2000 мл) в колбу

- 3 029516

объемом 20 л при комнатной температуре. Охладили раствор до 0°С (внутренняя температура), а затем добавляли цианоборгидрид натрия (359,2 г; 1,5 экв.; 5,71 моль) в виде 5 равных порций, не допуская нагревание реакционной смеси выше 10°С. По завершении добавления перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 2 ч. Охладили реакционную смесь до 0°С и добавили лед (5 кг). Очень медленно добавляли предварительно охлажденный (5°С) раствор гидроксида натрия (4М) до достижения рН реакционной смеси 14. Экстрагировали реакционную смесь этилацетатом (2x10 л). Объединили органические слои и промыли водой (1x10 л) и насыщенным солевым раствором (1x10 л). Высушили над безводным сульфатом натрия, отфильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (460 г, выход 90%); масс-спектр (т/ζ): 134 (М+1).

Способ В.

Загрузили трифторуксусную кислоту (7,62 моль; 576,42 мл) в 3-горлую колбу объемом 2000 мл, оснащенную термометром, магнитной мешалкой, линией подачи азота и капельной воронкой. Установили колбу на баню изо льда/воды и охладили смесь до 13°С (внутренняя температура). Добавляли 4-метил1Н-индол (762,33 ммоль; 94,25 мл; 100,00 г) в течение 3 мин, не допуская превышения температуры реакционной смеси 25°С. Перемешивали смесь в течение примерно 1 мин после завершения добавления, оставили смесь нагреваться до температуры 20°С, затем сняли колбу с ледяной бани и перемешивали в течение 10 мин при 20°С. В реакционную смесь по каплям добавляли триэтилсилан (876,68 ммоль; 140,47 мл; 101,94 г) в течение 41 мин, оставили смесь нагреваться до температуры 25°С, затем поддерживали при температуре от 25 до 30°С, при необходимости используя баню с холодной водой. По завершении добавления перемешивали реакционную смесь в течение 80 мин. Охладили реакционную смесь до 10°С, затем вылили в смесь льда (1000 г), 5М хлористо-водородной кислоты (800 мл) и МТБЭ (2000 мл) при перемешивании. Следует отметить, что важно погасить двухфазную систему для предотвращения образования примесей. Отделили водную фазу и экстрагировали органические вещества хлористоводородной кислотой (400 мл; 2М), затем хлористо-водородной кислотой (2x200 мл; 2М). Объединили водные экстракты и охладили в ледяной воде. Добавляли 50 мас./мас.% ЫаОН до достижения рН>10, поддерживая температуру ниже 30°С. Экстрагировали водную смесь МТБЭ (1000 мл, затем 200 мл). Объединили органические экстракты, высушили над безводным сульфатом натрия, отфильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (73 г; выход 68%); масс-спектр (т/ζ): 134 (М+1).

Способ С.

Добавили раствор 4-метил-1Н-индола (114,35 ммоль; 15,00 г) в тетрагидрофуране (75,00 мл) к раствору моногидрата п-толуолсульфоновой кислоты (137,22 ммоль; 23,63 г) в воде (75,00 мл) при перемешивании при комнатной температуре. Добавили 5% платину на углероде (1ойпзоп МаИйеу, тип 103; 1,50 г) под слоем диоксида углерода. Поместили смесь в атмосферу водорода (4,2 бар) и встряхивали при комнатной температуре в течение ночи. Разбавили реакционную смесь гидроксидом натрия (2М водный раствор; 148,65 ммоль; 74,33 мл) и перемешивали с МТБЭ (150,00 мл). Отфильтровали смесь через диатомовую землю и промыли фильтр МТБЭ (50 мл). Разделили фильтрат и экстрагировали водный слой МТБЭ (100 мл). Объединили органические вещества, высушили над безводным сульфатом магния, отфильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (14,80 г; выход 97,17%); масс-спектр (т/ζ): 134 (М+1).

Способ получения 2.

[(2К,3К,48,5К,6К)-3,4,5-триацетокси-6-(4-метилиндолин-1-ил)тетрагидропиран-2-ил]метилацетат

Способ А.

Схема I, стадия А. Увлажнили ϋ-глюкозу (180,2 ммоль) водой (25 мл) и затем добавили 4метилиндолин (180,2 ммоль) в этаноле (200 мл). Продули смесь азотом и нагревали с обратным холодильником в атмосфере азота в течение ночи. Затем охладили до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. К полученному остатку добавили дихлорметан (200 мл), Ν,Νдиметиламинопиридин (9,0 ммоль) и пиридин (2,5 моль). Охладили смесь на ледяной бане и затем по каплям добавили ангидрид уксусной кислоты (1,1 моль) за 30 мин. Концентрировали смесь при пониженном давлении, разбавили остаток этилацетатом (500 мл) и промыли смесь лимонной кислотой (насыщенный водный раствор; 50 мл) в воде (500 мл). Промыли насыщенным солевым раствором (500 мл), высушили над сульфатом натрия, отфильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Доба- 4 029516

вили этанол (500 мл) и перемешивали при 50°С в течение 10 мин. Охладили смесь до комнатной температуры, а затем на бане изо льда/воды. Отфильтровали полученную смесь и высушили при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (32 г; выход 38,32%); масс-спектр (т/ζ): 464,2 (М+1).

Способ В.

Схема I, стадия А. Загрузили в трехгорлую колбу объемом 20 л раствор 4-метилиндолина (1000 г; 7,51 моль) в этаноле: воде (8000 мл:1000 мл) и добавили ϋ-глюкозу (1480 г; 8,25 моль). Нагревали смесь в течение 6 ч при 80°С. Концентрировали смесь при пониженном давлении и растворили остаток в пиридине:дихлорметане (8000 мл:8000 мл). Добавили диметиламинопиридин (91,79 г; 0,75 моль) и охладили реакционную смесь до 10°С (внутренняя температура). По каплям добавили уксусный ангидрид (9000 мл). По завершении добавления перемешивали реакционную смесь в течение 1 ч при 45°С, а затем перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Концентрировали смесь при пониженном давлении. К остатку добавили этилацетат (20 л) и воду (10 л). Отделили органический слои, а водный слой экстрагировали этилацетатом (2x10 л). Объединили органические слои и промыли насыщенным раствором лимонной кислоты (5 кг) в воде. Высушили органический слой над безводным сульфатом натрия, отфильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Кристаллизовали остаток из этанола с получением указанного в заголовке соединения (3205,5 г; выход 92,11%); масс-спектр (т/ζ): 464,2 (М+1).

Способ С.

Схема I, стадия А. Увлажнили ϋ-глюкозу (517,30 ммоль; 93,20 г) водой (66 мл) и затем добавили 4метилиндолин (65,62 г; 492,67 ммоль) в этаноле (394 мл). Продули смесь азотом и нагревали с обратным холодильником под атмосферой азота в течение ночи. Затем охладили до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. К полученному остатку добавили дихлорметан (394 мл), триэтиламин (2,82 моль; 393,72 мл) и К,К-диметил-4-пиридинамин (24,63 ммоль; 3,01 г). Охладили смесь на ледяной бане и затем по каплям добавили ангидрид уксусной кислоты (3,94 моль; 372,57 мл) за 30 мин. Концентрировали смесь при пониженном давлении, разбавили остаток этилацетатом (984 мл) и промыли смесь лимонной кислотой (насыщенный водный раствор; 50 мл) в воде (200 мл). Разделили слои и экстрагировали водный слой этилацетатом (600 мл, затем 300 мл). Объединили органические слои, промыли насыщенным солевым раствором (600 мл) и концентрировали при пониженном давлении. Добавили этанол (656 мл) и перемешивали при 50°С в течение 10 мин. Охладили смесь до комнатной температуры, а затем на бане изо льда/воды. Отфильтровали полученную смесь и высушили при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (112,2 г; выход 49,14%); масс-спектр (т/ζ): 464,2 (М+1).

Способ получения 3.

[(2К,3К,48,5К,6К)-3,4,5-триацетокси-6-(4-метилиндол-1-ил)тетрагидропиран-2-ил]метилацетат

Способ А.

Схема I, стадия В. Загрузили [(2К,3К,48,5К,6К)-3,4,5-триацетокси-6-(4-метилиндолин-1ил)тетрагидропиран-2-ил]метилацетат (60,4 ммоль) в колбу объемом 500 мл. Добавили 1,4-диоксан (250 мл) и охладили раствор до 10°С. Одной порцией добавили ΩΩΟ (63,4 ммоль). Смесь нагрели до комнатной температуры и перемешивали в течение 2 ч. Реакционную смесь отфильтровали и промыли твердое вещество 1,4-диоксаном (3 х50 мл). Концентрировали фильтрат при пониженном давлении и отфильтровали через слой силикагеля (200 г), промывая 10% ЕЮАс в дихлорметане (300 мл). Промыли насыщенным раствором бикарбоната натрия (2x200 мл), затем водой (200 мл). Высушили над безводным сульфатом натрия, отфильтровали, концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (27,5 г; выход 98,6%); масс-спектр (т/ζ): 462,5 (М+1).

Способ В.

Схема I, стадия В. Загрузили [(2К,3К,48,5К,6К)-3,4,5-триацетокси-6-(4-метилиндолин-1ил)тетрагидропиран-2-ил]метилацетат (4200 г; 9,08 моль) в колбу объемом 20 л. Добавили 1,4-диоксан (42000 мл) и охладили раствор до 10°С. Добавили ΩΩΟ (2057 г; 9,08 моль) в виде 5 равных порций, поддерживая температуру при 10°С. По завершении добавления нагрели смесь до комнатной температуры и перемешивали в течение 2 ч. Реакционную смесь отфильтровали и промыли твердое вещество 1,4диоксаном (3 раза). Концентрировали фильтрат при пониженном давлении и очистили остаток колоночной хроматографией, элюируя 0-20% этилацетата в гексане. Объединили чистые фракции с отдельной партией материала, полученного таким же образом, исходя из 2500 г [(2К,3К,48,5К,6К)-3,4,5- 5 029516

триацетокси-6-(4-метилиндолин-1-ил)тетрагидропиран-2-ил]метилацетата, и концентрировали при пониженном давлении. Растворили остаток в этилацетате (50 мл) и промыли насыщенным раствором бикарбоната натрия (2x20 л), затем водой (1x10 л). Высушили над безводным сульфатом натрия, отфильтровали, концентрировали при пониженном давлении и кристаллизовали из этанола (10 л) с получением указанного в заголовке соединения (4,632 кг; выход 69%); масс-спектр (т/ζ): 462,5 (М+1).

Способ С.

Схема I, стадия В. Растворили [(2К,3К,43,5К,6К)-3,4,5-триацетокси-6-(4-метилиндолин-1ил)тетрагидропиран-2-ил]метилацетат (112,2 г; 242,08 моль) в 1,4-диоксане (1,68 л) при комнатной температуре. Охладили смесь на бане изо льда/воды, затем частями добавляли 4,5-дихлор-3,6диоксоциклогекса-1,4-диен-1,2-дикарбонитрил (244,50 ммоль; 55,50 г), поддерживая температуру реакционной смеси ниже 15°С. По завершении добавления перемешивали смесь в течение 5 мин, затем сняли с ледяной бани и перемешивали еще 5 мин. Отфильтровали смесь и промыли твердое вещество 1,4диоксаном (561,00 мл). Концентрировали фильтрат при пониженном давлении, затем к остатку добавили этанол (561,00 мл) и перемешивали при 40°С в течение 20 мин. Охлаждали смесь в ледяной воде в течение 15 мин, отфильтровали и промыли полученное твердое вещество холодным этанолом (100 мл). Высушили твердое вещество при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (82,5 г; выход 73,9%); масс-спектр (т/ζ): 462,0 (М+1).

Способ получения 4.

[(2К,3К,43,5К,6К)-3,4,5-триацетокси-6-[3-(4-гидроксибензоил)-4-метилиндол-1-ил]тетрагидропиран-2-ил]метилацетат

Схема I, стадия С. В круглодонную колбу объемом 0,5 л, оснащенную мешалкой и продутую азотом, загрузили в следующем порядке: [(2К,3К,43,5К,6К)-3,4,5-триацетокси-6-(4-метилиндол-1ил)тетрагидропиран-2-ил]метилацетат (29,5 ммоль), дихлорметан (100 мл) и 4-бромбензоилхлорид (30,9 ммоль). Охладили смесь на ледяной бане и добавили трихлорид алюминия (88,4 ммоль). После перемешивания с охлаждением в течение 1,5 ч вылили реакционную смесь на лед и разбавили водой (100 мл) и хлороформом (100 мл). Отделили органическую фазу и промыли водный слой хлороформом (100 мл). Объединили органические слои и промыли концентрированным раствором бикарбоната натрия (200 мл) и насыщенным солевым раствором (200 мл). Высушили над сульфатом натрия, отфильтровали и концентрировали. Очистили флэш-хроматографией на силикагеле (330 г), элюируя 5-25% ЕЮАс в хлороформе, с получением указанного в заголовке соединения (7,9 г; выход 46,09%); масс-спектр (т/ζ): 582,4 (М+1), 580,4 (М-Н).

Способ получения 5.

[(2К,3К,43,5К,6К)-3,4,5-триацетокси-6-[3-[4-(3-бензилоксипропокси)бензоил]-4-метилиндол-1ил]тетрагидропиран-2-ил]метилацетат

Схема I, стадия Ώ. В круглодонную колбу объемом 0,5 л, оснащенную мешалкой и продутую азотом, загрузили в следующем порядке: [(2К,3К,43,5К,6К)-3,4,5-триацетокси-6-[3-(4-гидроксибензоил)-4метилиндол-1-ил]тетрагидропиран-2-ил]метилацетат (13,58 ммоль), ацетонитрил (250 мл) и карбонат калия (67,92 ммоль). К полученному перемешанному раствору при комнатной температуре добавили 3бромпропоксиметилбензол (27,2 ммоль) и нагревали при 60°С в течение 16 ч под азотом. Разбавили ЕЮАс (200 мл) и отфильтровали. Фильтрат концентрировали и очистили флэш-хроматографией (330 г силикагеля), элюируя 2-40% ЕЮАс в хлороформе. Концентрировали фракции, содержащие продукт, с получением указанного в заголовке соединения (9,0 г; 90,79%); масс-спектр (т/ζ): 730,4 (М+Н).

- 6 029516

Способ получения 6.

(2К,3К,48,58,6К)-2-[3-[[4-(3-бензилоксипропокси)фенил]гидроксиметил]-4-метилиндол-1-ил]-6(гидроксиметил)тетр агидр опиран- 3,4,5-триол

Схема I, стадия Е. В круглодонную колбу объемом 0,5 л, оснащенную мешалкой и продутую азотом, загрузили [(2К,3К,48,5К,6К)-3,4,5-триацетокси-6-[3-[4-(3-бензилоксипропокси)бензоил]-4метилиндол-1-ил]тетрагидропиран-2-ил]метилацетат (12,33 ммоль), ТГФ (50 мл) и этанол (100 мл). Добавили тетрагидроборат натрия (37,0 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 6 ч. Подкислили, добавляя по каплям 5н. НС1, затем разбавили водой (200 мл) и дихлорметаном (200 мл). Отделили органические вещества и промыли насыщенным солевым раствором (200 мл). Высушили над сульфатом натрия, отфильтровали и концентрировали с получением указанного в заголовке соединения в виде смеси диастереомеров достаточной чистоты для использования на следующей стадии без дополнительной очистки (7,2 г, неочищенное); масс-спектр (т/ζ): 546,4 (М+1-18).

Способ получения 7.

[(2К,3К,48,5К,6К)-3,4,5-триацетокси-6-[3-[[4-(3-бензилоксипропокси)фенил]метил]-4-метилиндол1-ил]тетрагидропиран-2-ил]метилацетат

Схема I, стадия Р. В круглодонную колбу объемом 0,5 л под азотом загрузили (2К,3К,48,58,6К)-2[3-[[4-(3-бензилоксипропокси)фенил]гидроксиметил]-4-метилиндол-1-ил]-6-(гидроксиметил)тетрагидропиран-3,4,5-триол (7,2 г, неочищенный), затем ацетонитрил (50 мл) и затем дихлорметан (100 мл). Охладили смесь до 0°С. Добавили триэтилсилан (63,87 ммоль), затем по каплям добавили эфират трифторида бора (51,10 ммоль). По завершении добавления перемешивали реакционную смесь на ледяной бане в течение 5 мин, затем погасили, добавляя по каплям раствор бикарбоната натрия (20 мл). Разбавили водой (200 мл) и ЕЮАе (500 мл). Разделили слои, промыли органическую фазу насыщенным солевым раствором (200 мл) и концентрировали при пониженном давлении. Добавили пиридин (50 мл), дихлорметан (50 мл) и Ν,Ν-диметиламинопиридин (0,41 ммоль). Охладили на ледяной бане и добавили уксусный ангидрид (127,74 ммоль). Нагрели до комнатной температуры и перемешивали в течение 16 ч. Концентрировали при пониженном давлении, затем добавили ЕЮАе (500 мл). Промыли раствором лимонной кислоты (200 мл), затем водой (200 мл) и насыщенным солевым раствором (200 мл). Высушили над сульфатом натрия, отфильтровали и концентрировали. Очистили флэш-хроматографией (330 г силикагеля), элюируя 5-5-20% ЕЮАе в дихлорметане, с получением указанного в заголовке соединения (7,5 г; 82,03%); массспектр (т/ζ): 716,3 (М+1).

- 7 029516

Способ получения 8.

[(2К,3К,48,5К,6К)-3,4,5-триацетокси-6-[3-[[4-(3-гидроксипропокси)фенил]метил]-4-метилиндол-1ил]тетрагидропиран-2-ил]метилацетат

Схема II, стадия А. В круглодонную колбу объемом 0,5 л добавили [(2К,3К,48,5К,6К)-3,4,5триацетокси-6-[3-[[4-(3-бензилоксипропокси)фенил]метил]-4-метилиндол-1-ил]тетрагидропиран-2ил]метилацетат (10,34 ммоль) и этилацетат (80 мл). К полученному раствору добавили 5% Ρά/С, предварительно увлажненный этилацетатом (20 мл). Перемешивая, вакуумировали и продували смесь водородом (3х), затем перемешивали под водородом в течение 16 ч. Отфильтровали через диатомовую землю и промыли этилацетатом (100 мл). Концентрировали фильтрат при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения достаточной чистоты для использования на следующей стадии (6,5 г); масс-спектр (т/ζ): 626,4 (М+1).

Способ получения 9.

[(2К,3К,48,5К,6К)-3,4,5-триацетокси-6-[4-метил-3-[[4-(3-метилсульфонилоксипропокси)фенил]метил]индол-1-ил]тетрагидропиран-2-ил]метилацетат

- 8 029516

Схема II, стадия В. В круглодонную колбу объемом 0,5 л добавили [(2К,3К,43,5К,6К)-3,4,5триацетокси-6-[3-[[4-(3-гидроксипропокси)фенил]метил]-4-метилиндол-1-ил]тетрагидропиран-2ил]метилацетат (6,5 г, неочищенный), дихлорметан (100 мл) и триэтиламин (25,97 ммоль). Охладили на ледяной бане и по каплям добавили метансульфонилхлорид (12,47 ммоль) за 10 мин. Нагрели до комнатной температуры и перемешивали в течение 1 ч. Разбавили дихлорметаном (100 мл) и промыли водой (200 мл) и насыщенным солевым раствором (200 мл). Высушили органические вещества над сульфатом натрия, отфильтровали и концентрировали под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения достаточной чистоты для использования на следующей стадии (7,2 г); масс-спектр (т/ζ): 704,4 (М+1).

Способ получения 10а.

1-[2-(4,9-Диазаспиро[5.5]ундекан-9-ил)-2-оксоэтил]-3-изобутилмочевина

В круглодонную колбу добавили трет-бутил-4,9-диазаспиро[5.5]ундекан-9-карбоксилата гидрохлорид (1,38 ммоль), 2-(изобутилкарбамоиламино)уксусную кислоту (1,15 ммоль), диметилформамид (3,8 мл), триэтиламин (1,72 ммоль) и НАТИ (1,26 ммоль). Перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч, затем разбавили водой (50 мл) и этилацетатом (50 мл). Промыли органическую фазу концентрированным раствором хлорида аммония (50 мл) и насыщенным солевым раствором (50 мл). Высушили органические вещества над сульфатом натрия, отфильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Очистили промежуточное соединение флэш-хроматографией (силикагелевый картридж, 40 г), элюируя 0-10% метанола в этилацетате, с получением трет-бутил-9-[2-(изобутилкарбамоиламино)ацетил]-4,9-диазаспиро[5.5]ундекан-4-карбоксилата (0,38 г, 0,93 ммоль); МС (т/ζ): 411,2 (М+Н).

К раствору трет-бутил-9-[2-(изобутилкарбамоиламино)ацетил]-4,9-диазаспиро[5.5]ундекан-4карбоксилата (0,38 г, 0,93 ммоль) в 1,4-диоксане (1,75 мл) добавили 4М НС1 в 1,4-диоксане (8,77 ммоль). Перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 5 ч, затем концентрировали при пониженном давлении. Очистили остаток, растворив его в метаноле и загрузив на ЗСХ (ионообменную) колонку. Промыли загруженную колонку метанолом (3x25 мл), затем промыли колонку 2н. аммиаком в метаноле. Объединили и концентрировали аммиачные растворы с получением указанного в заголовке соединения (0,25 г, 0,81 ммоль); МС (т/ζ): 311,0 (М+Н).

Способ получения 10Ь.

Альтернативный способ получения 1-[2-(4,9-диазаспиро[5.5]ундекан-9-ил)-2-оксоэтил]-3изобутилмочевины.

Получение бензил-2-(изобутилкарбамоиламино)ацетата

Загрузили 3-метилбутановую кислоту (106,36 г), толуол (800 мл) и триэтиламин (126,46 г) в 3горлую колбу (К1). Нагревали Р1 до 90°С. Медленно добавили раствор БРРА (289,3 г) в толуоле (400 мл) (соблюдали осторожность: выделяется Ν₂). Перемешивали содержимое К1 при 90°С в течение 30-60 мин, затем охладили до 20-30°С. В отдельную колбу (К2) загрузили бензил-2-аминоацетата гидрохлорид (200 г), триэтиламин (150,54 г) и толуол (1000 мл) и перемешивали при 20-30°С в течение 1-2 ч. Медленно, по каплям добавляли смесь из К1 в Р2 через капельную воронку при 20-30°С и перемешивали в течение 1-2 ч. Медленно добавляли реакционную смесь к воде (2000 мл) при энергичном перемешивании. Отделили органический слой, а водный слой экстрагировали ЕЮАс (2x1000 мл). Объединили органические слои и промыли 1н. раствором хлористо-водородной кислоты (1000 мл), затем 7% водным раствором №НСХ)₃ (1000 мл), затем водой (1000 мл), затем 15% солевым раствором (1000 мл). Концентрировали при пониженном давлении. Суспендировали остаток в гептане (1000 мл), затем отфильтровали твердое вещество. Высушили осадок на фильтре при пониженном давлении при температуре ниже 40°С с

- 9 029516

получением бензил-2-(изобутилкарбамоиламино)ацетата (218 г; чистота 98,1%; выход 81,5%). Получение 2-(изобутилкарбамоиламино)уксусной кислоты

Загрузили бензил-2-(изобутилкарбамоиламино)ацетат (200 г; чистота 98,1%), сухой Рй/С (20 г; 10 мас./мас.%) и изопропиловый спирт (2000 мл) в автоклав. Дегазировали под вакуумом и продували водородом три раза. Перемешивали при 60°С при 50-60 ρδί Н₂ в течение 4 ч. Охладили смесь до 20-30°С и отфильтровали через диатомовую землю и концентрировали фильтрат при пониженном давлении при 4550°С до 1/2 объема. Добавили ацетонитрил (1000 мл) и концентрировали при пониженном давлении при 45-50°С до 2/3 объема. Охладили смесь до 5-10°С и отфильтровали. Высушили осадок на фильтре при пониженном давлении при 45-50°С с получением 2-(изобутилкарбамоиламино)уксусной кислоты (112 г; чистота 95,2%; выход 82,5%).

Получение конечного, указанного в заголовке соединения.

В круглодонную колбу добавили трет-бутил-4,9-диазаспиро[5.5]ундекан-9-карбоксилата гидрохлорид (1,38 ммоль), 2-(изобутилкарбамоиламино)уксусную кислоту (1,15 ммоль), диметилформамид (3,8 мл), триэтиламин (1,72 ммоль) и ΗΆΤϋ (1,26 ммоль). Перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч, затем разбавили водой (50 мл) и этилацетатом (50 мл). Промыли органическую фазу концентрированным раствором хлорида аммония (50 мл) и насыщенным солевым раствором (50 мл). Высушили органические вещества над сульфатом натрия, отфильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Очистили промежуточное соединение флэш-хроматографией (силикагелевый картридж, 40 г), элюируя 0-10% метанола в этилацетата, с получением трет-бутил-9-[2-(изобутилкарбамоиламино)ацетил]-4,9-диазаспиро[5.5]ундекан-4-карбоксилата (0,38 г, 0,93 ммоль); МС (т/ζ): 411,2 (М+Н).

К раствору трет-бутил-9-[2-(изобутилкарбамоиламино)ацетил]-4,9-диазаспиро[5.5]ундекан-4карбоксилата (0,38 г, 0,93 ммоль) в 1,4-диоксане (1,75 мл) добавили 4М НС1 в 1,4-диоксане (8,77 ммоль). Перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 5 ч, затем концентрировали при пониженном давлении. Очистили остаток, растворив его в метаноле и загрузив на 5СХ (ионообменную) колонку. Промыли загруженную колонку метанолом (3x25 мл), затем промыли колонку 2н. аммиаком в метаноле. Объединили и концентрировали аммиачные растворы с получением конечного, указанного в заголовке соединения 1-[2-(4,9-диазаспиро[5.5]ундекан-9-ил)-2-оксоэтил]-3-изобутилмочевины (0,25 г, 0,81 ммоль); МС (т/ζ): 311,0 (М+Н).

Способ получения 10с.

Получение О4-бензил-О9-трет-бутил-4,9-диазаспиро[5.5]ундекан-4,9-дикарбоксилата

В реактор объемом 20 л с контролируемой температурой загрузили трет-бутил-4,9диазаспиро[5.5]ундекан-9-карбоксилата гидрохлорид (2,06 моль; 600,00 г), затем дихлорметан (6,00 л), затем добавили триэтиламин (4,33 моль; 604 мл). Установили температуру рубашки реактора на 0°С. По достижении температуры реакционной смеси 5°С добавляли бензилхлорформиат (2,10 моль; 311 мл) в течение примерно 20 мин, поддерживая внутреннюю температуру ниже 20°С. По завершении добавления нагрели рубашку до комнатной температуры и перемешивали смесь в течение ночи. Вылили реакционную смесь в воду (4 л) и разделили смесь. Концентрировали органические вещества при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (838 г; для расчетов в следующей реакции принята чистота 95,65% и выход 100%); масс-спектр (т/ζ): 411,2 (М+23).

Получение бензил-4,9-диазаспиро[5.5]ундекан-4-карбоксилата гидрохлорида

В реактор объемом 20 л с контролируемой температурой, рубашку которого установили на 0°С, добавили раствор О4-бензил-О9-трет-бутил-4,9-диазаспиро[5.5]ундекан-4,9-дикарбоксилата (2,06 моль; 838,00 г; чистота 95,65%) в 1,4-диоксане (19,63 моль; 1,68 л). По достижении температуры раствора 5°С добавляли хлороводород (4М в 1,4-диоксане; 10,32 моль; 2,58 л) с такой скоростью, чтобы температура не поднималась выше 20°С. По завершении добавления нагрели раствор до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Концентрировали реакционную смесь при пониженном давлении с полу- 10 029516

чением густой суспензии. Добавили МТБЭ (3,35 л) и покачивали смесь в течение 30 мин при 40°С. Оставили смесь остывать до комнатной температуры и отфильтровали осадок. Осадок промыли МТБЭ (838 мл). Оставили осадок высыхать на фильтре, затем перенесли в вакуумную печь для дополнительного высушивания с получением указанного в заголовке соединения (638 г; выход 95%); масс-спектр (т/ζ): 289 [М (свободное основание)+1].

Получение бензил-9-[2-(изобутилкарбамоиламино)ацетил]-4,9-диазаспиро[5.5]ундекан-4-карбоксилата

К 2-(изобутилкарбамоиламино)уксусной кислоте (667,05 ммоль; 116,20 г) в дихлорметане (1,16 л) частями добавили 1,1'-карбонилдиимидазол (700,40 ммоль; 113,57 г). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Смесь обозначили буквой А. В отдельный сосуд добавили бензил-4,9диазаспиро[5.5]ундекан-4-карбоксилата гидрохлорид (700,40 ммоль; 413,68 г), дихлорметан (581 мл) и триэтиламин (1,33 моль; 186 мл). Перемешали смесь. Смесь обозначили буквой В. Вылили смесь А в смесь В за 2 мин. Перемешивали полученную смесь при комнатной температуре. Через 3 ч добавили воду (1000 мл). Отделили органическую фазу и концентрировали при пониженном давлении. Добавили этилацетат (581,00 мл) и покачивали смесь в течение 20 мин при 40°С, затем охладили до комнатной температуры, затем на льду в течение 20 мин. Отфильтровали осадок и дополнительно высушили в вакуумной печи с получением указанного в заголовке соединения (137,1 г; выход 46,23%); масс-спектр (т/ζ): 445,2 (М+1). После стояния фильтрата образовался осадок. Отфильтровали осадок и дополнительно высушили в вакуумной печи с получением указанного в заголовке соединения (9,30 г; выход 3,14%).

Суспендировали бензил-9-[2-(изобутилкарбамоиламино)ацетил]-2,9-диазаспиро[5.5]ундекан-2карбоксилат (239,78 ммоль; 106,60 г) в этаноле (852,80 мл) и циклогексене (1,20 моль; 121,90 мл) и добавили 5% палладий на углероде (24 г; содержание влаги 55,4%). Нагревали смесь с обратным холодильником и перемешивали в течение 45 мин. Охладили смесь до комнатной температуры, отфильтровали через слой диатомовой земли, промывая твердое вещество этанолом, и концентрировали при пониженном давлении с получением конечного, указанного в заголовке соединения 1-[2-(4,9диазаспиро[5.5]ундекан-9-ил)-2-оксоэтил]-3-изобутилмочевины (79,2 г; чистота 94%; выход 100%); массспектр (т/ζ): 311,2 (М+1).

Пример 1а. 1-Изобутил-3-[2-[4-[3-[4-[[4-метил-1-[(2К,3К,48,58,6К)-3,4,5-тригидрокси-6-(гидроксиметил)тетрагидропиран-2-ил]индол-3 -ил] метил]фенокси] пропил] -4,9-диазаспиро[5.5]ундекан-9-ил] -2оксоэтил]мочевина

Схема II, стадия С. В круглодонную колбу объемом 0,25 л добавили [(2К,3К,48,5К,6К)-3,4,5триацетокси-6-[4-метил-3- [[4-(3 -метилсульфонилоксипропокси)фенил]метил]индол-1 -ил]тетрагидропиран-2-ил]метилацетат (7,2 г, неочищенный), 1-[2-(4,9-диазаспиро[5.5]ундекан-9-ил)-2-оксоэтил]-3изобутилмочевину (12,28 ммоль), ацетонитрил (100 мл) и диизопропилэтиламин (40,92 ммоль). Нагревали при 80°С в течение 16 ч, затем концентрировали при пониженном давлении. Добавили метанол (50 мл) и метоксид натрия (20,46 ммоль, 30% раствор в МеОН) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Погасили добавлением небольшого кусочка сухого льда. Концентрировали при пониженном давлении. Очистили обращенно-фазовой флэш-хроматографией (картридж С18, 400 г), элюируя 580% воды (с 0,1% муравьиной кислоты) в ацетонитриле (с 0,1% муравьиной кислоты) тремя порциями. Концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения в виде соли муравьиной кислоты, содержащей небольшое количество примесей. Растворили полученную соль в 7н. растворе аммиака в метаноле (20 мл), затем концентрировали с получением свободного основания. Очистили свободное основание флэш-хроматографией (силикагелевый картридж, 330 г), элюируя 5% (7н. раствора аммиака в метаноле) в дихлорметане. Концентрировали фракции, содержащие продукт, при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (1,75 г, 22,81%); МС (т/ζ): 746,6 (М+Н).

¹Н ЯМР (400,31 МГц, СО₃0О): δ 7,28 (д, I = 8,4 Гц, 1Н), 7,03 (д, I = 8,4 Гц, 2Н), 7,02 (с, 1Н), 6,97 (т, I = 8,8 Гц, 1Н), 6,69 (д, I = 7,2 Гц, 1Н), 5,37 (д, I = 9,2 Гц, 1Н), 4,15 (с, 2Н), 3,95 (т, I = 6,0 Гц, 2Н), 3,91 (д, I = 1,6 Гц, 2Н), 3,87 - 3,80 (м, 2Н), 3,65 (дд, I = 11,6, 5,6 Гц, 1Н), 3,57 - 3,38 (м, 5Н), 3,31 (ш м, 2Н), 2,90 (д,

- 11 029516

I = 6,8 Гц, 2Н), 2,46 - 2,13 (м, 8Н), 1,88 (пентет, I = 6,8 Гц, 2Н), 1,68 (септет, I = 6,8 Гц, 1Н), 1,61 - 1,28 (м, 8Н), 0,86 (д, I = 6,8, 6Н).

[(2К,3К,48,5К,6К)-3,4,5-триацетокси-6-[3-(4-бензилоксибензоил)-4-метилиндол-1-ил]тетрагидропиран-2-ил]метилацетат

- 12 029516

Схема III, стадия А. В реактор объемом 20 л с контролируемой температурой загрузили дихлорметан (7,00 л), [(2К,3К,43,5К,6К)-3,4,5-триацетокси-6-(4-метилиндол-1-ил)тетрагидропиран-2-ил]метилацетат (1,52 моль; 700,00 г) и 4-бензилоксибензоилхлорид (1,67 моль; 411,63 г). Установили рубашку реактора на -30°С, обеспечили возможность охлаждения содержимого реактора и добавили тетрахлорид олова (1,97 моль; 513,74 г) за 30 мин, поддерживая внутреннюю температуру от -5 до -10°С. По завершении добавления перемешивали смесь в течение 20 мин при температуре примерно -9°С. Вылили холодную реакционную смесь на 20 л дробленого льда. Отделили органический слой, а водный слой экстрагировали дихлорметаном. Объединили органические экстракты и концентрировали при пониженном давлении до примерно 2 л. Добавили 7 л МТБЭ и промыли хлористо-водородной кислотой (1М; 2x8 л), затем водой (8 л), затем гидрокарбонатом натрия (насыщенным водным раствором), затем насыщенным солевым раствором. Высушили над МдЗО₄, отфильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения, которое содержало ~17 мас./мас.% МТБЭ (1377 г; для расчетов в следующей реакции приняли чистоту 74% и выход 100%); масс-спектр (т/ζ): 672,2 (М+1).

Способ получения 12.

[(2К,3К,43,5К,6К)-3,4,5-триацетокси-6-[3-[(4-бензилоксифенил)гидроксиметил]-4-метилиндол-1ил] тетрагидропиран-2-ил] метилацетат

Схема III, стадия В. В реактор с контролируемой температурой, оснащенный мешалкой, загрузили гептагидрат хлорида церия(Ш) (4,55 моль; 1,12 кг) в этаноле (4,96 л) и перемешивали с получением раствора. Добавили [(2К,3К,43,5К,6К)-3,4,5-триацетокси-6-[3-(4-бензилоксибензоил)-4-метилиндол-1ил]тетрагидропиран-2-ил]метилацетат (1,52 моль; 1,38 кг) и тетрагидрофуран (7,57 л). Охладили смесь до +2°С и частями добавляли тетрагидроборат натрия (4,55 моль; 172,18 г) в течение 3 ч, при добавлении поддерживая внутреннюю температуру от 0 до +5°С. По завершении добавления перемешивали смесь при 5°С в течение 1 ч. Добавили дополнительное количество тетрагидробората натрия (687,24 ммоль; 26,00 г) и перемешивали смесь в течение 30 мин. Добавили дополнительное количество тетрагидробората натрия (0,45 экв.; 687,24 ммоль; 26,00 г) и перемешивали смесь в течение ночи. Вылили смесь в МТБЭ (5 л) и воду (10 л). Медленно добавляли хлористо-водородную кислоту (2н.) при перемешивании до достижения слабокислой реакции по рН-индикаторной бумаге. Отделили органический слой, промыли насыщенным солевым раствором, высушили над МдЗО₄, отфильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения с приемлемой чистотой для использования на следующей стадии (1547 г; для расчетов в следующей реакции приняли чистоту 66% и выход 100%); масс-спектр (т/ζ): 656,4 (М+1-18).

Способ получения 13.

[(2К,3К,43,5К,6К)-3,4,5-триацетокси-6-[3-[(4-бензилоксифенил)метил]-4-метилиндол-1ил] тетрагидропиран-2-ил] метилацетат

Схема III, стадия С. Охлаждали смесь [(2К,3К,43,5К,6К)-3,4,5-триацетокси-6-[3-[(4бензилоксифенил)гидроксиметил]-4-метилиндол-1-ил]тетрагидропиран-2-ил]метилацетата (1,52 моль; 1,55 кг) в ацетонитриле (6,19 л) и дихлорметане (6,19 л) на бане из насыщенного солевого раствора/льда до достижения внутренней температуры -5°С, затем добавили триэтилсилан (3,79 моль; 607 мл) за 2 мин. По каплям добавили эфират трифторида бора (3,79 моль; 479 мл), поддерживая внутреннюю температуру ниже +5°С. Перемешивали смесь на ледяной бане в течение 30 мин. Осторожно добавили смесь ХаНСО₃ (насыщенный водный раствор; 5 л) и воды (4 л). Отделили органическую фазу и промыли водой, затем насыщенным солевым раствором, затем высушили над МдЗО₄, отфильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением смеси указанного в заголовке соединения и соединений,

- 13 029516

не содержащих одной или более ацетильных групп. Растворили остаток в дихлорметане (1,86 л) и добавили ангидрид уксусной кислоты (7,58 моль; 716 мл) и Н,Н-диметил-4-пиридинамин (75,78 ммоль; 9,26 г). Нагрели смесь до 40°С и осторожно покачивали для облегчения растворения, затем перемешивали смесь в течение 1 ч при комнатной температуре. Концентрировали смесь при пониженном давлении и суспендировали остаток в МТБЭ (6 л) в течение ночи. Собрали твердое вещество фильтрацией и высушили в печи при 60°С при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (692,8 г; выход 70%); масс-спектр (т/ζ): 658,3 (М+1) и 680,2 (М+23).

Способ получения 14.

[(2К,3К,48,5К,6К)-3,4,5-триацетокси-6-[3-[(4-гидроксифенил)метил]-4-метилиндол-1-ил]тетрагидропиран-2-ил]метилацетат

Схема III, стадия Ό. К смеси [(2К,3К,48,5К,6К)-3,4,5-триацетокси-6-[3-[(4-бензилоксифенил)метил]4-метилиндол-1-ил]тетрагидропиран-2-ил]метилацетата (1,00 экв.; 1,05 моль; 692,80 г), метанола (85,59 моль; 3,46 л; 2,74 кг) и тетрагидрофурана (42,57 моль; 3,46 л; 3,07 кг) добавили формиат аммония (5,27 моль; 332,10 г). Продули реакционный сосуд азотом и добавили 5% палладий на углероде (69,30 г; ΙοΗηзои МайНеу, тип 87Ь, содержание влаги 57,8%) в виде суспензии в изопропиловом спирте. Нагревали смесь при 38-42°С в течение 15 мин (наблюдали умеренное образование пузырьков). Убрали нагревательную баню и перемешивали реакционную смесь в течение 15 мин при охлаждении. Отфильтровали смесь через диатомовую землю и концентрировали фильтрат при пониженном давлении. Разделили остаток между этилацетатом (7,5 л) и водой (1 л). Отделили органический слой и промыли насыщенным солевым раствором, затем высушили над МдЗО₄. Отфильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (594 г; выход 99%); масс-спектр (т/ζ): 568,2 (М+1) и 590,2 (М+23).

Способ получения 15.

[(2К,3К,4З,5К,6К)-3,4,5-триацетокси-6-[3-[[4-(3-хлорпропокси)фенил]метил]-4-метилиндол-1ил]тетрагидропиран-2-ил]метилацетат

Схема III, стадия Е. К смеси [(2К,3К,4З,5К,6К)-3,4,5-триацетокси-6-[3-[(4-гидроксифенил)метил]-4метилиндол-1-ил]тетрагидропиран-2-ил]метилацетата (150,64 ммоль; 85,50 г) и ацетонитрила (855,00 мл) добавили 1-бром-3-хлорпропан (180,76 ммоль; 17,88 мл) и карбонат калия (301,27 ммоль; 41,64 г). Поместили смесь под азот и нагревали смесь при слабой дефлегмации в течение 2 дней. Добавили дополнительное количество 1-бром-3-хлорпропана (45,19 ммоль; 4,47 мл) и продолжали нагревать смесь в течение ночи. Концентрировали смесь при пониженном давлении и разделили остаток между этилацетатом и водой. Отделили органический слой и промыли насыщенным солевым раствором, высушили над МдЗО₄, отфильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения с достаточной чистотой для следующей стадии. (124,4 г; для расчетов в следующей реакции приняли чистоту 78% и выход 100%); масс-спектр (т/ζ): 644,2/646,2 (М+1).

Способ получения 16.

[(2К,3К,4З,5К,6К)-3,4,5-триацетокси-6-[3-[[4-[3-[9-[2-(изобутилкарбамоиламино)ацетил]-4,9диазаспиро[5.5]ундекан-4-ил]пропокси]фенил]метил]-4-метилиндол-1-ил]тетрагидропиран-2ил]метилацетат

- 14 029516

Схема III, стадия Р. К перемешанному раствору [(2К,3К,48,5К,6К)-3,4,5-триацетокси-6-[3-[[4-(3хлорпропокси)фенил]метил]-4-метилиндол-1 -ил]тетрагидропиран-2-ил]метилацетата (143,38 ммоль; 118,40 г) в ацетонитриле (829 мл) добавили 1-[2-(3,8-диазаспиро[5.5]ундекан-3-ил)-2-оксоэтил]-3изобутилмочевину (143,38 ммоль; 47,35 г), карбонат калия (286,75 ммоль; 39,63 г) и йодид калия (143,38 ммоль; 23,80 г). Смесь нагревали при дефлегмации под азотом в течение ночи. Охладили реакционную смесь до комнатной температуры и добавили ангидрид уксусной кислоты (1,43 моль; 135,53 мл) и Ν,Νдиметил-4-пиридинамин (14,34 ммоль; 1,75 г). Перемешивали смесь в течение 1 ч. Концентрировали смесь при пониженном давлении и разделили остаток между водой и ЕЮАс. Отделили органический слой и промыли насыщенным солевым раствором, высушили над Мд8О₄, отфильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток объединили с другой партией, полученной таким же образом, исходя из [(2К,3К,48,5К,6К)-3,4,5-триацетокси-6-[3-[[4-(3-хлорпропокси)фенил]метил]-4-метилиндол-1ил]тетрагидропиран-2-ил]метилацетата (6,2 ммоль). Очистили колоночной флэш-хроматографией на силикагеле (1,5 кг), элюируя 99:1 смесью ЕЮАс: триэтиламина (1 объем колонки), ЕЮАс (3 объема колонки) и смесью 190:10:1 ЕЮАс:МеОН:триэтиламина (5 объемов клонки), с получением указанного в заголовке соединения (68,2 г; выход 49%); масс-спектр (т/ζ): 918,6 (М+1).

Пример 1Ь. Альтернативный способ получения 1-изобутил-3-[2-[4-[3-[4-[[4-метил-1[(2К,3К,48,58,6К)-3,4,5-тригидрокси-6-(гидроксиметил)тетрагидропиран-2-ил]индол-3-ил]метил]фенокси]пропил] -4,9-диазаспиро[5.5]ундекан-9-ил] -2-оксоэтил]мочевины

Схема III, стадия О. Охладили смесь [(2К,3К,48,5К,6К)-3,4,5-триацетокси-6-[3-[[4-[3-[9-[2(изобутилкарбамоиламино)ацетил]-4,9-диазаспиро[5.5]ундекан-4-ил]пропокси]фенил]метил]-4метилиндол-1-ил]тетрагидропиран-2-ил]метилацетата (74,28 ммоль; 68,20 г) и метанола (341,00 мл) на ледяной бане. Добавили метоксид натрия (111,43 ммоль; 6,02 г). Перемешивали смесь в течение 10 мин. Вылили смесь в воду (3,5 л), затем отфильтровали смесь. Промыли твердое вещество водой, высушили на спеченном фильтре и дополнительно высушили в вакуумной печи при 60°С с получением указанного в заголовке соединения (49,8 г, выход 89%); масс-спектр (т/ζ): 750,6 (М+1).

Анализ натрийзависимого транспортера глюкозы 1 (8ОЬТ1) и 801,+2.

кДНК, кодирующую 8ОЬТ1 человека (з1с5а1, ΝΜ_000343) и 8ОЬТ1 мышей (з1с5а1, ΝΜ_019810.4), приобрели у компании ОрепЬюзуз1етз, ЫуДгодеп и ОрепЬюзуз1етз соответственно. кДНК клонировали в рс1)\А3.1· для экспрессии у млекопитающих и стабильно трансфицировали в клетки яичников китайского хомячка (СНО)-К1, используя стандартные процедуры трансфекции млекопитающих. 8ОРТэкспрессирующий субклон каждой сверхэкспрессирующей клеточной линии выбрали на основе устойчивости к неомицину (генетицин, ПпЛгодеп) и активности в анализе поглощения ¹⁴С-а-метил-Оглюкопиранозида (¹⁴С-АМО) (см. ниже). Клетки, устойчиво экспрессирующие 8ОЬТ, поддерживали с помощью стандартных технологий клеточных культур.

Активность 8О1,Т измеряли как натрийзависимое поглощение ¹⁴С-АМО в вышеуказанных клеточных линиях, как описано далее. Сто мкл клеточной культуры, содержащей 30000 клеток, высеивали в каждую лунку 96-луночного планшета ВюСоа!, покрытого поли-О-лизином (Вес!оп О|скзоп), и выращивали при 37°С в течение ночи. Культуральную среду аспирировали и дважды промыли клетки 200 мкл реакционного буфера (140 мМ ЖС1, 2 мМ КС1, 1 мМ СаС1₂, МдС1₂ и 14 мМ ^2-гидроэтилпиперазин-№2-этансульфоновой кислоты (Нерез), рН 7,5). Избыток буфера удаляли бумажными полотенцами. В каждую лунку добавили 35 мкл реакционного буфера. В каждую лунку внесли 5 мкл 10% диметилсульфоксида (ДМСО) в реакционном буфере, содержащем различные концентрации исследуемого соединения или не содержащем соединения в качестве контрольного образца. Реакцию инициировали добавлением 10 мкл ¹⁴С-АМО в реакционном буфере до конечной концентрации 4 мкМ. Планшет инкубировали при 37°С в течение 125 мин. Реакцию остановили аспирированием реакционного буфера, а затем три раза промыли 200 мкл ледяного реакционного буфера. Аспирацию проводили вручную для обеспечения пол- 15 029516

ного удаления реакционного буфера. В каждую лунку добавили 10 мкл 0,1н. ΝαΟΗ, а затем добавили 100 мкл сцинтилляционного коктейля 8ирегт1х (РегЫиИтег). После перемешивания считывали сцинтилляционный сигнал в планшете в приборе М1егоВе1а (РегкшЕ1тег). Построили кривую зависимости ответа от дозы в десяти точках с получением эмпирической четырехпараметрической модели, используя программу АсЙУЙуВаке (ГО Ви8ше88 8о1ийои), для определения концентрации ингибитора при полумаксимальном ингибировании (1С₅₀).

Соединение примера 1 испытывали, по существу, так, как описано выше, и получили 1С₅₀ для человеческого 8СЬТ1 35,2±14,1 нМ (п=5) и 1С₅₀ для мышиного 8СЬТ1 14,9±10,4 нМ (п=5). Полученные данные демонстрируют, что соединение примера 1 ингибирует 8СЬТ1 человека и мышей ίη νΐίτο.

Понижение уровня глюкозы в пероральном тесте толерантности к глюкозе (ОСТТ).

Исследуемое соединение получали посредством добавления носителя 1% гидроксиэтилцеллюлозы, 0,25% Тиееп® 80 с 0,05% противопенного агента к предварительно взвешенному исследуемому соединению с получением раствора с концентрацией 1 мг/мл. Смесь обрабатывали ультразвуком в течение примерно 1 мин. Установили мешалку и непрерывно перемешивали полученную суспензию во время введения доз.

Для демонстрации понижения уровней глюкозы в ходе ОСТТ использовали две отдельные группы мышей С57В1/6, содержавшихся в одном боксе. Первую группу мышей испытывали в ОСТТ через 18 ч после введения соединения, вторую - через 8 ч после введения соединения. Первую группу животных взвесили и использовали массу тела для определения экспериментальных групп (п=5) в рабочем диапазоне 26-30 г. После разделения на группы мышам через пероральный зонд вводили 10 мл/кг препарата исследуемого соединения или носителя с интервалом 30 с. Затем обе группы мышей, испытываемых через в ОСТТ через 18 и 8 ч, выдерживали в течение ночи без корма для удаления избытка пищи, начиная с вечера до дня эксперимента. На следующее утро мышей, испытываемых в ОСТТ через 8 ч, взвесили и взяли образец крови (надрезав хвост) для определения уровня глюкозы. В экспериментальных группах (п=5) определяли уровни глюкозы натощак, рабочий диапазон составил 80-100 мг/дл. После разделения на группы мышам через пероральный зонд вводили соединение с интервалом 30 с. Затем указанных мышей испытывали в ОСТТ через 8 ч после введения соединения.

Начали отсчет восьми и восемнадцати часов после каждого соответствующего введения соединения, взяли базовый образец крови для измерения глюкозы (у первого животного). Затем животным сразу вводили пероральную дозу 50% декстрозы (Нозрта®), 3 г/кг. С интервалом 30 с из хвостовой вены брали образцы крови для определения глюкозы, так что образцы крови у каждого животного брали через 20, 40 и 60 мин после введения дозы декстрозы.

- 16 029516

Таблица 2

Понижение уровня глюкозы в ООТТ

Результаты перорального теста толерантности к глюкозе, среднее значение ± стандартная ошибка среднего
Однофакторный дисперсионный анализ/тест Даннетта в сравнении с носителем **р<0,01
	Носител ь через 8 часов после дозы	Пример 1,10 мг/кг через 8 часов после дозы	Носитель через 18 часов после дозы	Пример 1, 10 мг/кг через 18 часов после дозы
Глюкоза (мг/дл)
0 минут	83,3 ± 5,10	75,8 ±2,48	79 ± 1,17	79,2 ±4,51
20 минут	203,4 ± 23,3	114±3,36**	257,8 ± 19,1	121,4 ± 5,16**
40 минут	168,5 ± 6,58	131 ±6,81**	202,8 ± 5,38	127 ± 9,78**
60 минут	142,6 ± 5,58	125,8 ±7,52	154,7 ± 5,32	125 ± 7,27**
Площадь под кривой с поправкой на исходные значения	4699 ± 602	2370± 315**	6809 ±419	2258 ± 252**
Глюкоза (мг/дл)
Глюкоза, Стах	205,7 ± 22,2	132,9 ± 6,68**	261,1± 16,3	134,2 ± 6,72**
Время (минуты)
Глюкоза, Ттах 28 ± 4,9 \| 44 ± 7,48 \| 24 ± 4 44 ± 7,48

Как видно из табл. 2, соединение примера 1 обеспечивает снижение гликемических пиков при пероральном введении болюса 50% декстрозы (Нозрйа®) мышам С57В1/6 с нормальным гликемическим профилем через восемь или восемнадцать часов после введения. Пример 1 демонстрирует также снижение площади под кривой (АиС) с поправкой на исходные значения в обоих испытаниях ООТТ. Кроме того, пример 1 обеспечивает снижение средней максимальной концентрации глюкозы в плазме (С_тах) при испытании ООТТ с одновременным увеличением среднего времени достижения максимальной концентрации глюкозы (Т_тах).

1. Соединение формулы

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

или его фармацевтически приемлемая соль.
2. Соединение по п.1, которое представляет собой
3. Способ лечения диабета у пациента, включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения или его фармацевтически приемлемой соли по п. 1 или 2.
4. Способ лечения диабета 1 типа у пациента, включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения или его фармацевтически приемлемой соли по п.1 или 2.
5. Способ лечения диабета 2 типа у пациента, включающий введение пациенту, нуждающемуся в

- 17 029516

таком лечении, эффективного количества соединения или его фармацевтически приемлемой соли по п. 1 или 2.
6. Применение соединения или соли по п.1 или 2 в терапии заболеваний и расстройств, связанных с гипергликемией.
7. Применение соединения или соли по п. 1 или 2 для лечения диабета.
8. Применение по п.7, отличающееся тем, что диабет представляет собой диабет 1 типа.
9. Применение по п.7, отличающееся тем, что диабет представляет собой диабет 2 типа.
10. Фармацевтическая композиция для лечения диабета, содержащая терапевтически эффективное количество соединения или соли по п. 1 или 2 и один или более фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей или вспомогательных веществ.